JP2020533334A - アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤および組成物 - Google Patents

アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤および組成物 Download PDF

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Abstract

本開示は、ＲＮＡｉ剤、例えばアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３、ａｐｏＣ−ＩＩＩ、ＡＰＯＣ−ＩＩＩ、およびＡＰＯ Ｃ−ＩＩＩとも呼ばれる）遺伝子発現を阻害することができる二本鎖ＲＮＡｉ剤、およびＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物に関する。本明細書に開示される前記ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、肝細胞を含む細胞への送達を容易にするためにＮ−アセチル−ガラクトサミンを含むリガンドを含む標的化リガンドにコンジュゲートされ得る。必要に応じて１つまたは複数のさらなる治療剤と共に、１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物もまた、記載される。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏでの送達は、ＡＰＯＣ３遺伝子発現の阻害を提供し、対象においてより低いトリグリセリドおよび／またはコレステロールレベルをもたらし得る。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／７２０，４３４号、２０１８年３月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／６４３，９２７号、および２０１７年９月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／５５６，８１８号に基づく優先権を主張し、そのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含有し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＡＳＣＩＩのコピーは、３０６５５＿ＳｅｑＬｉｓｔという名称であり、１９５ｋｂのサイズである。
発明の分野
本開示は、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ遺伝子発現の阻害のためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、およびその使用方法に関する。
ヒトアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ遺伝子によってコードされるアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３、ａｐｏＣ−ＩＩＩ、ＡＰＯＣ−ＩＩＩ、およびＡＰＯ Ｃ−ＩＩＩとも呼ばれる）は、高トリグリセリド血症と関連する疾患の処置の有望な標的であることが最近明らかになっている。血清中トリグリセリド（ＴＧ）レベルの上昇は、心血管疾患の独立した危険因子として、およびアテローム性動脈硬化症の発症の寄与因子として識別されている。重度の高トリグリセリド血症を有する個体（しばしば＞１０００ｍｇ／ｄＬ）は、再発性膵炎のリスクもある。トリグリセリドは、ＴＧ−ｒｉｃｈリポタンパク質として公知である超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）およびカイロミクロン粒子の主成分として血液中で主に輸送される。リポタンパク質は、疎水性のトリアシルグリセロールおよびコレステリルエステルコア、ならびにリン脂質、コレステロール、およびアポタンパク質の親水性外層で構成される。ＡＰＯＣ３は、これらのアポタンパク質の１つである。
ＡＰＯＣ３は、主に肝臓で合成され、ＴＧ−ｒｉｃｈリポタンパク質の産生、代謝、および血漿からのクリアランスにおいて重要な役割を果たす。いくつかの機能獲得多型が、高トリグリセリド血症の発症の寄与因子であると仮定されているＡＰＯＣ３遺伝子のプロモーター領域において識別されている（例えば、Ｗａｎｇ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ３ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｓｔｒｏｋｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ， １１ ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ｅ０１６３９１０ （２０１６）； Ｌｉ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ３ ｇｅｎｅ ｖａｒｉａｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ： Ａ ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ ９ Ｍｅｔａ Ｇｅｎｅ １０４−１０９ （２０１６）を参照されたい）。肝臓においてＡＰＯＣ３合成が増加すると、ＴＧ−ｒｉｃｈＶＬＤＬの分泌が促進される。さらに、過剰なＡＰＯＣ３は、リポタンパク質リパーゼおよび肝リパーゼの活性を阻害し、ＴＧ−ｒｉｃｈリポタンパク質の異化を遅らせることによって血清中ＴＧレベルをさらに増加させる。さらに、ＡＰＯＣ３の上昇はまた、ＴＧ−ｒｉｃｈリポタンパク質およびその残遺粒子が肝受容体に結合するのを妨害することによって、それらの肝クリアランスも遅らせる。いくつかの大きい遺伝子解析研究により、ＡＰＯＣ３の機能喪失突然変異を有する個体が、低レベルのトリグリセリドを示し、心血管疾患の発生率の低下を示すことが報告されている（例えば、Ｂｅｒｎｅｌｏｔ Ｍｏｅｎｓ， Ｓ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡｐｏＣＩＩＩ： ｔｈｅ ｎｅｘｔ ＰＣＳＫ９？ ２５ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｌｉｐｉｄｏｌ ４１８−４２２ （２０１４）； Ｓａｌｅｈｅｅｎ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ ｋｎｏｃｋｏｕｔｓ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｃｏｈｏｒｔ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｏｎｓａｎｇｕｉｎｉｔｙ， ５４４ Ｎａｔｕｒｅ ２３５−２３９ （２０１７）を参照されたい）。
現在、高トリグリセリド血症はしばしば、中等度の症例ではフィブレートによって、またはスタチンと組み合わせて処置される；しかし、ほとんどの症例では、血清中ＴＧの低下はわずかである。さらに、非常に重度の高トリグリセリド血症の一遺伝子性原因を有する患者（例えば、家族性カイロミクロン血症症候群の患者）では、疾患を引き起こす突然変異が機能障害リポタンパク質リパーゼをもたらし、標準治療に対して最適に応答するためには機能的なリポタンパク質リパーゼが必要であることから、利用可能な治療剤はしばしば無効である。ＡＰＯＣ３が役割を果たし得る疾患、例えば高トリグリセリド血症誘発膵炎、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、家族性カイロミクロン血症症候群、家族性部分型リポジストロフィー、肥満、高脂血症、高トリグリセリド血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、ならびに他の代謝関連障害および疾患の処置のために実質的なＴＧ低下効果を提供することができる有効な治療剤が必要である。ある特定の他のＡＰＯＣ３特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｅｉｌｅｒ ｅｔ ａｌ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０１１１２３Ａ１号において、ＡＰＯＣ３遺伝子発現の発現を阻害することが示されている。しかし、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以前に開示されておらず、公知でもなく、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現の非常に強力かつ効率的な阻害を提供する。
国際公開第２０１６／０１１１２３号
Ｗａｎｇ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ３ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｓｔｒｏｋｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ， １１ ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ｅ０１６３９１０ （２０１６） Ｌｉ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ３ ｇｅｎｅ ｖａｒｉａｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ： Ａ ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ ９ Ｍｅｔａ Ｇｅｎｅ １０４−１０９ （２０１６） Ｂｅｒｎｅｌｏｔ Ｍｏｅｎｓ， Ｓ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡｐｏＣＩＩＩ： ｔｈｅ ｎｅｘｔ ＰＣＳＫ９？ ２５ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｌｉｐｉｄｏｌ ４１８−４２２ （２０１４） Ｓａｌｅｈｅｅｎ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ ｋｎｏｃｋｏｕｔｓ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｃｏｈｏｒｔ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｏｎｓａｎｇｕｉｎｉｔｙ， ５４４ Ｎａｔｕｒｅ ２３５−２３９ （２０１７）
要旨
ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を選択的かつ効率的に阻害することができる新規ＡＰＯＣ３ ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（本明細書において、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉトリガー、またはトリガーとも呼ばれる）が必要である。さらに、特に、トリグリセリド（ＴＧ）レベルの上昇と関連する疾患の処置のために、新規ＡＰＯＣ３特異的ＲＮＡｉ剤を含む組成物が必要である。
一般に、本開示は、ＡＰＯＣ３遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、ならびにＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための方法を特徴とする。本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させるかまたは阻害し、それによって、対象、例えば、ヒトもしくは動物対象におけるＴＧレベルおよび／またはコレステロールレベルを低下させることができる。
記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、限定されるものではないが、肥満、高脂血症、高トリグリセリド血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、高トリグリセリド血症誘発膵炎、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、家族性カイロミクロン血症症候群、家族性部分型リポジストロフィー、ならびに他の代謝関連障害および疾患を含む、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇と関連する症状および疾患の治療的処置（予防的および防止的処置を含む）のための方法に使用することができる。本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３遺伝子発現を選択的に低下させることができ、それによって特に、対象におけるＴＧレベルおよび／またはコレステロールレベルの低下をもたらすことができる。本明細書に開示される方法は、皮下注射または静脈内投与などの、当業界で公知の任意の好適な方法を使用する、対象、例えば、ヒトまたは動物対象への１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の投与を含む。
一態様では、本開示は、ヒトＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を特徴とする。また、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害することができるＲＮＡｉ剤を含むか、またはそれからなる組成物であって、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含むか、またはそれからなり、組成物が少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、組成物も本明細書で記載される。開示されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数を含む本明細書に記載の組成物は、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができる。１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を、ＴＧレベルの上昇、コレステロールの上昇および／またはＡＰＯＣ３発現の増強と関連する症状および疾患の処置（予防的処置または阻害を含む）のために、ヒトまたは動物対象などの対象に投与することができる。
本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）およびアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに部分的に、実質的に、または完全に相補的であってもよい。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖の長さは、それぞれ、１６〜３０ヌクレオチド長であってもよい。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、独立に１７〜２６ヌクレオチド長である。センスおよびアンチセンス鎖は、同じ長さであるか、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、独立に２１〜２６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、独立に２１〜２４ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよび／またはアンチセンス鎖は、独立に１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３を発現する細胞への送達の際に、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで１つまたは複数のＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する。
本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ中の同じ数のヌクレオチドのコアストレッチ配列（本明細書では「コアストレッチ」または「コア配列」とも呼ばれる）に対して少なくとも８５％の同一性を有する少なくとも１６個の連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは１７ヌクレオチド長である。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ中の同じ数のヌクレオチドのコアストレッチおよび対応するセンス鎖中の同じ数のヌクレオチドのコアストレッチと少なくとも８５％の相補性を有する少なくとも１６個の連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの配列または対応するセンス鎖と少なくとも８５％の相補性を有するアンチセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１７ヌクレオチド長である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表１に開示される配列のいずれかの配列を有するＡＰＯＣ３遺伝子の部分を標的とする。
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の中に含まれ得るＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖の例を、表３、４、および５に提供する。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤二本鎖の例を、表３および６に提供する。本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖からなるか、またはその中に含まれている１９ヌクレオチドのコアストレッチ配列の例を、表２に提供する。
別の態様では、本開示は、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、哺乳動物などの対象中の肝臓の細胞にｉｎ ｖｉｖｏで送達するための方法を特徴とする。また、そのような方法における使用のための組成物も本明細書に記載される。１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、当業界で公知の任意のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して標的細胞または組織に送達することができる。核酸送達法としては、限定されるものではないが、リポソームへの封入、イオントフォレシス、またはヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生体接着性ミクロスフェア、タンパク質性ベクター、またはＤｙｎａｍｉｃ Ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅ（商標）（ＤＰＣ）などの他のビヒクルへの組込みが挙げられる（例えば、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、およびＷＯ２０１２／０８３１８５を参照されたい）。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドなどの標的化基に共有結合により連結することによって、または標的化基にコンジュゲートすることによって、標的細胞または組織に送達される。一部の実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、ガラクトースまたはガラクトース誘導体クラスターを含む、からなる、またはから本質的になる。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ガラクトース誘導体Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドに連結されている。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体を含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体である。一部の実施形態では、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、受容体媒介エンドサイトーシスまたは他の手段のいずれかによって、肝臓の細胞、特に肝細胞により選択的に内在化される。ＲＮＡｉ剤を送達するのに有用な標的化基の例は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０および同第ＷＯ２０１７／１５６０１２に開示されており、それぞれの内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
標的化基を、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’または５’末端に連結することができる。一部の実施形態では、標的化基を、センス鎖の３’または５’末端に連結する。一部の実施形態では、標的化基を、センス鎖の５’末端に連結する。一部の実施形態では、標的化基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖および／またはアンチセンス鎖上のヌクレオチドに内部的に連結される。一部の実施形態では、標的化基を、リンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結する。
リンカーを含む、または含まない、標的化基を、表２、３、４および５に開示されるセンスおよび／またはアンチセンス鎖のいずれかの５’または３’末端に連結することができる。標的化基を含む、または含まない、リンカーを、表２、３、４および５に開示されるセンスおよび／またはアンチセンス鎖のいずれかの５’または３’末端に結合することができる。
一部の実施形態では、表６に開示される二本鎖配列を有する１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、本明細書に記載される。
さらなる態様では、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる（すなわち、第２、第３の、など）治療剤と組み合わせた、１つまたは複数の記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物が本明細書に記載される。一部の実施形態では、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる（すなわち、第２、第３の、など）治療剤と組み合わせた、１つまたは複数の記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、薬学的に許容される担体または希釈剤中で製剤化することができる。一部の実施形態では、これらの組成物を、哺乳動物などの対象に投与することができる。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、異なるヌクレオチド配列を有する少なくとも２つのＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の組合せまたはカクテルを含む。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それぞれ別々に、かつ独立に、標的化基に連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アシアロ糖タンパク質受容体を標的とする１つまたは複数の部分を含む標的化リガンドを含むか、またはそれからなる標的化基にそれぞれ連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数のガラクトース誘導体を含む標的化リガンドを含むか、またはそれからなる標的化基にそれぞれ連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドを含むか、またはそれからなる標的化基にそれぞれ連結されている。
別の態様では、本開示は、対象におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、対象または対象の細胞に、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害することができるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の所定量を投与するステップを含み、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が表２、表３、または表４のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの配列を含む、方法を特徴とする。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤をｉｎ ｖｉｖｏで肝臓の細胞、特に肝細胞に送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、対象または対象の細胞に、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害することができるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の所定量を投与するステップを含み、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖が表２、表３、または表５のセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの配列を含む、方法が本明細書に開示される。また、そのような方法における使用のための組成物も本明細書に記載される。
さらなる態様では、本開示は、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（防止的または予防的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２、３、または４中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法を特徴とする。一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（防止的または予防的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２、３、または５中の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖を有するＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。また、そのような方法における使用のための組成物も本明細書に記載される。
ＡＰＯＣ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される病的状態（例えば、状態または疾患）を有する、または病的状態を発症するリスクがあるヒト対象を処置する方法であって、対象に、治療有効量のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および／またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤含有組成物を投与するステップを含む方法も記載される。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および／またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤含有組成物によって対象を処置する方法は、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる（すなわち、第２の、第３の、など）治療剤または処置を投与する１つまたは複数のステップと組み合わせることができる。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤およびさらなる治療剤を、単一の組成物で投与することができ、またはそれらを別々に投与することができる。さらなる治療剤は、別のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤（例えば、ＡＰＯＣ３遺伝子内の異なる配列を標的とするＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤）であってもよい。さらなる治療剤は、低分子薬物、抗体、抗体断片、および／またはアプタマーであってもよい。一部の実施形態では、１つまたは複数のさらなる治療剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、またはシンバスタチンなどのスタチンである。
一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、必要に応じて１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わせ、ここで１つまたは複数のさらなる治療剤は、ＲＮＡｉ剤とは別の投与剤形で別々に投与される（例えば、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、皮下注射によって投与されるが、処置の投薬レジメンの方法に関係するさらなる治療剤は経口投与される）。一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする対象に皮下注射を介して投与され、１つまたは複数の必要に応じたさらなる治療剤は経口投与され、それらは共に、ＴＧおよび／またはコレステロールレベルの上昇と関連する疾患および状態の処置レジメンを提供する。一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする対象に、皮下注射を介して投与され、１つまたは複数の必要に応じたさらなる治療剤は、別の皮下注射を介して投与される。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および１つまたは複数のさらなる治療剤を、単一の投与剤形に組み合わせる（例えば、皮下注射のための単一の組成物に製剤化された「カクテル」）。１つまたは複数のさらなる治療剤を含む、または含まない、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、１つまたは複数の賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を形成させることができる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞または対象に、表２、３、または５の配列のいずれかの配列を含む、からなる、またはから本質的になるセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、表５中の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖および表４中の配列のいずれかの配列を含む、からなる、またはから本質的になるアンチセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
一部の実施形態では、細胞または対象におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞または対象に、表５中の配列のいずれかの核酸塩基配列を含むセンス鎖および表４中の配列のいずれかの核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。他の実施形態では、ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、対象に、表５中の改変配列のいずれかの改変配列からなるセンス鎖および表４中の改変配列のいずれかの改変配列からなるアンチセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓の細胞、特に肝細胞に送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド（すなわち、アシアロ糖タンパク質受容体に対して親和性を有する化合物を含むリガンド）である。一部の実施形態では、標的化基は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、細胞におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表６に記載される二本鎖の二本鎖構造を有する１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患、障害、または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表１中の配列を有するＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの部分と少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を含む治療有効量のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２、３、または４中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖、およびアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２、３、または５中の配列のいずれかを含むセンス鎖を含む治療有効量のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２、３、または５中の配列のいずれかを含むセンス鎖、およびセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２、３、または４中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含む治療有効量のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
一部の実施形態では、細胞におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞に、表１中の配列を有するＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの部分と少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、細胞におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞に、表２、３、または４中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖、およびアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２、３、または５中の配列のいずれかを含むセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、細胞におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、表２、３、または５中の配列のいずれかを含むセンス鎖、およびセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２、３、または４中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
一部の実施形態では、細胞におけるＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、方法が、表６に記載の二本鎖の二本鎖構造を有するＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を投与するステップを含む、組成物が、本明細書に開示される。
一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートまたは連結されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドに連結されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３遺伝子上の特定の位置（配列番号１）を標的とするように設計される。本明細書で定義される場合、アンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基を、遺伝子と塩基対形成する場合に遺伝子上の位置から１９ヌクレオチド下流にある（３’末端に向かって）位置と整列させる場合、遺伝子上の所与の位置のＡＰＯＣ３遺伝子を標的とするように設計される。例えば、本明細書の表１および２に例示されるように、４３８位のＡＰＯＣ３遺伝子を標的とするように設計されるアンチセンス鎖配列は、遺伝子と塩基対形成する場合、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基が、ＡＰＯＣ３遺伝子の４５６位と整列することが必要である。
本明細書で提供される場合、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の１位（５’→３’）の核酸塩基が遺伝子と相補的であることを必要としないが、但し、少なくとも１６個の連続するヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたってアンチセンス鎖と遺伝子との少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の相補性）が存在することを条件とする。例えば、ＡＰＯＣ３遺伝子の４３８位を標的とするように設計される本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤については、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の５’末端核酸塩基は、遺伝子の４５６位と整列しなければならない；しかしながら、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基は、ＡＰＯＣ３遺伝子の４５６位と相補的であってもよいが、相補的である必要はなく、但し、少なくとも１６個の連続するヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたってアンチセンス鎖と遺伝子との少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の相補性）が存在することを条件とする。特に、本明細書に開示される様々な例によって示されるように、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖による遺伝子の特定の結合部位（例えば、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が４３８位、５０６位、４３２位、または他の位置のＡＰＯＣ３遺伝子を標的とするように設計されるかどうか）は、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤によって達成される阻害レベルにとって重要な因子である。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の使用は、ＴＧおよび／もしくはコレステロールレベルの上昇、ならびに／またはＡＰＯＣ３発現の増強もしくは上昇と関連する疾患／障害の治療的（予防的を含む）処置のための方法を提供する。記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉を媒介して、ＡＰＯＣ３の産生にとって必要な１つまたは複数の遺伝子の発現を阻害する。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を使用して、肥満、高脂血症、高トリグリセリド血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、高トリグリセリド血症媒介性膵炎、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、家族性カイロミクロン血症症候群、家族性部分型リポジストロフィー、ならびに他の代謝関連障害および疾患を含む、様々な疾患または障害を処置または防止することもできる。さらに、肝臓の細胞への、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏでの送達のための組成物が記載される。
１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、局部または全身処置が望まれるかどうかに応じて、いくつかの方法で投与することができる。投与は、限定されるものではないが、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、真皮下（例えば、埋込みデバイスによる）、および実質内投与であってもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下注射によって投与される。
一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートまたは連結されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドに連結されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それぞれが本明細書において表７で定義される、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する１つまたは複数の標的化基を含み得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それぞれが本明細書において表７で定義される、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有するセンス鎖の５’末端で１つの標的化基を含む。
記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および／またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、ＴＧレベルの上昇によって引き起こされる疾患または状態の治療的処置のための方法において使用することができる。そのような方法は、対象、例えばヒトまたは動物対象への、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の投与を含む。一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数は、薬学的に許容される担体または希釈剤中で哺乳動物などの対象に投与される。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の開示されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物に組み入れることができる。一部の実施形態では、開示されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む本明細書に開示される組成物は、医薬組成物である。
一部の実施形態では、１つまたは複数の開示されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物は、１つまたは複数のさらなる治療剤または処置をさらに含み得る。
一部の実施形態では、１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載の組成物は、キット、容器、パック、ディスペンサー、予め充填された注射筒、またはバイアル中に包装される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、非経口投与される。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号３は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号２）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図１Ａ〜１Ｉを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号２）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＧＵ（配列番号５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＧＵ（配列番号５）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＧＵ（配列番号５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号５は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＧｆｓｕ（配列番号４）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図１Ａ〜１Ｉを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＧｆｓｕ（配列番号４）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓｃｕｇａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号６）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図１Ａ〜１Ｉを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓｃｕｇａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号６）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号８は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓＵｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｇＣｆｕＵｆｕＡｆｕＵｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓＵｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｇＣｆｕＵｆｕＡｆｕＵｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＧＧＧ（配列番号１０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＧＧＧ（配列番号１０）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＧＧＧ（配列番号１０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１０は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆｇＧｆｓｇ（配列番号９）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆｇＧｆｓｇ（配列番号９）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＡＧＣ（配列番号１２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＡＧＣ（配列番号１２）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＡＧＣ（配列番号１２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１２は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆａＧｆｓｃ（配列番号１１）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆａＧｆｓｃ（配列番号１１）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＧＣＣ（配列番号１４）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＧＣＣ（配列番号１４）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＧＣＣ（配列番号１４）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１４は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＧｆａＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｇｃｓｃ（配列番号１３）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＧｆａＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｇｃｓｃ（配列番号１３）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡＧＵＩＡ（配列番号１６）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す）一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡＧＵＩＡ（配列番号１６）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＧＵ（配列番号５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡＧＵＩＡ（配列番号１８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。（Ｉは、イノシンヌクレオチドを表す。）一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＧＵ（配列番号５）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡＧＵＩＡ（配列番号１８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡＧＵＧＡ（配列番号２１）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＣＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡＧＵＧＡ（配列番号２１）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＡＡＵＡＡＡＧＣＵＧＧＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号２３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＡＡＵＡＡＡＧＣＵＧＧＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号２３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＡＡＵＡＡＡＩＣＵＧＧＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号２５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＣＣＡＧＣＵＵＵＡＵＵＧＧＣ（配列番号８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＡＡＵＡＡＡＩＣＵＧＧＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号２５）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＧＧＧ（配列番号１０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＣＣＣＵＡＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵ（配列番号２７）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＧＧＧ（配列番号１０）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＣＣＣＵＡＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵ（配列番号２７）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＡＧＣ（配列番号１２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＵＡＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵ（配列番号２９）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＵＡＡＧＣ（配列番号１２）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＵＡＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵ（配列番号２９）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＧＣＣ（配列番号１４）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＧＣＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡ（配列番号３１）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＧＡＡＵＡＣＵＧＵＣＣＣＵＵＵＧＣＣ（配列番号１４）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＧＣＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＵＡＵＵＣＵＣＡ（配列番号３１）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇａｇｇｇａｃａＧｆＵｆＡｆｕｕｃｕｃａｇｕｉａ（配列番号１５）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇａｇｇｇａｃａＧｆＵｆＡｆｕｕｃｕｃａｇｕｉａ（配列番号１５）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＧｆｓｕ（配列番号４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｃｇｇｇａｃａＧｆＵｆＡｆｕｕｃｕｃａｇｕｉａ（配列番号１７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＧｆｓｕ（配列番号４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｃｇｇｇａｃａＧｆＵｆＡｆｕｕｃｕｃａｇｕｉａ（配列番号１７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓｃｕｇａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇａｇｇｇａｃａＧｆｕＡｆｕＵｆｃｕｃａｇｕｉａ（配列番号１９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓｃｕｇａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇａｇｇｇａｃａＧｆｕＡｆｕＵｆｃｕｃａｇｕｉａ（配列番号１９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇａｇｇｇａｃａＧｆＵｆＡｆｕｕｃｕｃａｇｕｇａ（配列番号２０）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＣｆｕＧｆａｇａａｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇａｇｇｇａｃａＧｆＵｆＡｆｕｕｃｕｃａｇｕｇａ（配列番号２０）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓＵｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｇＣｆｕＵｆｕＡｆｕＵｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃａａｕａａＡｆＧｆＣｆｕｇｇａｃａａｇａａ（配列番号２２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓＵｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｇＣｆｕＵｆｕＡｆｕＵｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃａａｕａａＡｆＧｆＣｆｕｇｇａｃａａｇａａ（配列番号２２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓＵｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｇＣｆｕＵｆｕＡｆｕＵｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃａａｕａａＡｆＩｆＣｆｕｇｇａｃａａｇａａ（配列番号２４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｉｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓＵｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｇＣｆｕＵｆｕＡｆｕＵｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃａａｕａａＡｆＩｆＣｆｕｇｇａｃａａｇａａ（配列番号２４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆｇＧｆｓｇ（配列番号９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｃｃｕａａａａＧｆＧｆＧｆａｃａｇｕａｕｕｃｕ（配列番号２６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆｇＧｆｓｇ（配列番号９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｃｃｕａａａａＧｆＧｆＧｆａｃａｇｕａｕｕｃｕ（配列番号２６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆａＧｆｓｃ（配列番号１１）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｕａａａａＧｆＧｆＧｆａｃａｇｕａｕｕｃｕ（配列番号２８）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＧｆｓａｓＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｕＡｆａＧｆｓｃ（配列番号１１）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｕａａａａＧｆＧｆＧｆａｃａｇｕａｕｕｃｕ（配列番号２８）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＧｆａＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｇｃｓｃ（配列番号１３）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｇｃａａａｇｇＧｆＡｆＣｆａｇｕａｕｕｃｕｃａ（配列番号３０）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＧｆａＡｆｕＡｆｃＵｆｇＵｆｃＣｆｃＵｆｕＵｆｇｃｓｃ（配列番号１３）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｇｃａａａｇｇＧｆＡｆＣｆａｇｕａｕｕｃｕｃａ（配列番号３０）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖とセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含み、それぞれのアンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の１〜２１位に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、センス鎖上のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；センス鎖のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
（ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｉｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
（ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｉｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）の１つからなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５７、配列番号５８、または配列番号１０６はそれぞれ、アンチセンス鎖のヌクレオチド１〜１９位（５’→３’）に位置する。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それぞれが、（５’→３’）：
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、それぞれが、（５’→３’）：
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」は、それぞれ独立に改変されていてもよいか、または改変されていなくてもよい、連結されたヌクレオシドのポリマーを意味する。
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ剤」（「ＲＮＡｉトリガー」とも呼ばれる）は、配列特異的様式で標的ｍＲＮＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物の翻訳物を分解する、または阻害することができる（例えば、適切な条件下で分解する、または阻害する）ＲＮＡまたはＲＮＡ様（例えば、化学的に改変されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含有する組成物を意味する。本明細書で使用される場合、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉機構（すなわち、哺乳動物細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体もしくはＲＩＳＣ）との相互作用によってＲＮＡ干渉を誘導すること）によって、または任意の代替的な機構もしくは経路によって動作することができる。ＲＮＡｉ剤は、本明細書でその用語が使用される場合、主にＲＮＡ干渉機構によって動作すると考えられるが、開示されるＲＮＡｉ剤は、いかなる特定の経路または作用機構によっても束縛されず、それに限定もされない。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、限定されるものではないが、短い（または小さい）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびダイサー基質を含む。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、標的化されるｍＲＮＡ（すなわち、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ）と少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ剤は、１つもしくは複数の改変ヌクレオチドおよび／または１つもしくは複数の非ホスホジエステル結合を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、所与の遺伝子の発現に言及する場合の用語「サイレンシングする」、「減少させる」、「阻害する」、「下方調節する」、または「ノックダウンする」とは、遺伝子が転写される細胞、細胞群、組織、臓器、または対象中で、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベルまたはｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド、タンパク質、もしくはタンパク質サブユニットのレベルにより測定された場合、遺伝子の発現が、細胞、細胞群、組織、臓器、または対象が本明細書に記載のＲＮＡｉ剤で処置される場合に、そのように処置されていない第２の細胞、細胞群、組織、臓器、または対象と比較して減少することを意味する。
本明細書で使用される場合、用語「配列」および「ヌクレオチド配列」とは、標準的な命名法を使用して文字の連続と共に記載される、核酸塩基またはヌクレオチドの連続または順序を意味する。
本明細書で使用される場合、「塩基」、「ヌクレオチド塩基」または「核酸塩基」は、ヌクレオチドの成分である複素環ピリミジンまたはプリン化合物であり、一次プリン塩基アデニンおよびグアニン、ならびに一次ピリミジン塩基シトシン、チミン、およびウラシルを含む。核酸塩基は、限定されるものではないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、無差別塩基、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基を含むようにさらに改変することができる（例えば、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ， Ｐ． ｅｄ． Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ， ２００８を参照されたい）。そのような改変核酸塩基（改変核酸塩基を含むホスホロアミダイト化合物を含む）の合成は、当業界で公知である。
本明細書で使用される場合、また、別途指摘しない限り、第２の核酸塩基またはヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖または一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）との関連で第１の核酸塩基またはヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤センス鎖または標的ｍＲＮＡ）を記述するために使用される場合の用語「相補的」とは、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと、ある特定の標準的な条件下でハイブリダイズし（哺乳動物の生理学的条件（またはｉｎ ｖｉｔｒｏの類似する条件）下で塩基対水素結合を形成し）、二本鎖または二重らせん構造を形成する能力を意味する。相補配列は、ワトソン−クリック塩基対または非ワトソン−クリック塩基対を含み、少なくとも上記のハイブリダイゼーション要件が満たされる程度で、天然または改変ヌクレオチドまたはヌクレオチド模倣体を含む。配列同一性または相補性は、改変とは無関係である。例えば、本明細書で定義される、ａおよびＡｆは、同一性または相補性を決定する目的では、Ｕ（またはＴ）と相補的であり、Ａと同一である。
本明細書で使用される場合、「完璧に相補的」または「完全に相補的」とは、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全部（１００％）が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、「部分的に相補的」とは、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全部ではないが、少なくとも７０％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、「実質的に相補的」とは、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全部ではないが、少なくとも８５％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、用語「相補的」、「完全に相補的」、「部分的に相補的」および「実質的に相補的」は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖とＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの配列との間の核酸塩基またはヌクレオチドの一致に関して使用される。
本明細書で使用される場合、核酸配列に適用される用語「実質的に同一」または「実質的な同一性」は、ヌクレオチド配列（またはヌクレオチド配列の一部）が、参照配列と比較して、少なくとも約８５％の配列同一性またはそれより高い、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有することを意味する。配列同一性のパーセンテージは、２つの最適に整列された配列を、比較ウィンドウにわたって比較することによって決定される。パーセンテージは、同じ型の核酸塩基が両配列内に存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を、比較ウィンドウ中の位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。本明細書に開示される発明は、本明細書に開示されるものと実質的に同一のヌクレオチド配列を包含する。
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置」などは、対象における疾患の１つまたは複数の症状の数、重症度、および／または頻度からの緩和またはその軽減を提供するために取られる方法またはステップを意味する。本明細書で使用される場合、「処置する」および「処置」は、防止的処置、管理、予防的処置、ならびに／または対象における疾患の１つもしくは複数の症状の数、重症度、および／もしくは頻度の阻害もしくは減少を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、ＲＮＡｉ剤に言及する場合の語句「細胞中に導入すること」は、ＲＮＡｉ剤を細胞中に機能的に送達することを意味する。語句「機能的送達」は、ＲＮＡｉ剤が、予想される生物活性、例えば、遺伝子発現の配列特異的阻害を有することを可能とする様式で、ＲＮＡｉ剤を細胞中に送達することを意味する。
別途記述しない限り、本明細書で使用される記号
の使用は、任意の基または複数の基を、本明細書に記載の発明の範囲に従ってそれに連結することができることを意味する。
本明細書で使用される場合、用語「異性体」とは、同一の分子式を有するが、性質またはその原子の結合の配列または空間中のその原子の配置が異なる化合物を指す。空間中のその原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像ではない立体異性体は、「ジアステレオ異性体」と呼ばれ、重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は、「エナンチオマー」または時には光学異性体と呼ばれる。４個の非同一の置換基に結合した炭素原子は、「キラル中心」と呼ばれる。
本明細書で使用される場合、特定のコンフォメーションを有するものとして構造中で具体的に識別されない限り、非対称中心が存在し、かくして、エナンチオマー、ジアステレオマー、または他の立体異性配置を生じるそれぞれの構造について、本明細書に開示されるそれぞれの構造は、その光学的に純粋な形態およびラセミ形態を含む、全てのそのような可能な異性体を表すことが意図される。例えば、本明細書に開示される構造は、ジアステレオマーの混合物および単一の立体異性体を包含することが意図される。
本明細書の特許請求の範囲で使用される場合、語句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、特許請求の範囲で特定されない任意の要素、ステップ、または成分を除外する。本明細書の特許請求の範囲で使用される場合、語句「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、特許請求の範囲を、特定された材料またはステップおよび特許請求された発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響しないものに限定する。
当業者であれば、本明細書に開示される化合物および組成物が、その化合物または組成物が置かれる環境に応じて、プロトン化または脱プロトン化された状態のある特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）を有してもよいことを容易に理解および認識するであろう。したがって、本明細書で使用される場合、本明細書に開示される構造は、例えば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨなどのある特定の官能基がプロトン化または脱プロトン化されていてもよいことを想定する。本明細書の開示は、当業者であれば容易に理解するように、開示される化合物および組成物を、環境（ｐＨなど）に基づくそれらのプロトン化の状態に関係なく包含することが意図される。
本明細書で使用される場合、２つの化合物または分子の間の接続に言及する場合の用語「連結された」または「コンジュゲートされた」は、２つの化合物または分子が共有結合によって繋がれていることを意味する。記述しない限り、本明細書で使用される用語「連結された」および「コンジュゲートされた」は、任意の介在する原子または原子群を用いる、または用いない、第１の化合物と第２の化合物との間の接続を指してもよい。
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、語句「限定されるものではないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味するように本明細書で使用され、それと互換的に使用される。用語「または」は、文脈が別途明確に示さない限り、用語「および／または」を意味するように本明細書で使用され、それと互換的に使用される。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似するか、または等価である方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料を以下で説明する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定を意図するものではない。
本発明の他の目的、特徴、態様、および利点は、以下の詳細な説明、添付の図面、および特許請求の範囲から明らかとなる。
図１Ａは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２５１（表４〜６を参照されたい）の改変センスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ａは、配列番号２および５０１を開示する。
図１Ａ〜１Ｉにおいては、以下の省略形が使用される：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチドであり（ｉに関しては、核酸塩基は、ヒポキサンチン（すなわち、イノシンヌクレオチドの塩基）である）；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｉｆ、およびＵｆは、２’−フルオロ改変ヌクレオチドであり（Ｉに関しては、核酸塩基は、ヒポキサンチン（すなわち、イノシンヌクレオチドの塩基）である）；ｐは、ホスホジエステル結合であり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；ｉｎｖＡｂは、反転脱塩基（デオキシリボース）残基であり（表７を参照されたい）；（ＮＡＧ３７）ｓは、表７に示す構造を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドである。
図１Ｂは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６（表４〜６を参照されたい）の改変センスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｂは、配列番号４および５７２を開示する。
図１Ｃは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５７６９（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｃは、配列番号６および５５７を開示する。
図１Ｄは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１６９（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｄは、配列番号２および４８２を開示する。
図１Ｅは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２０（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｅは、配列番号７および４９４を開示する。
図１Ｆは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５５４７（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｆは、配列番号７および５４５を開示する。
図１Ｇは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２９９（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｇは、配列番号９および５２１を開示する。
図１Ｈは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２３（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ｈは、配列番号１１および４９７を開示する。
図１Ｉは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表７を参照されたい）を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１７１（表４〜６を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図１Ａは、配列番号１３および４８３を開示する。
図２Ａ〜２Ｄは、遊離の酸として示される、センス鎖の５’末端でコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ構造を有する）を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２５１の化学構造表示である。 同上。 同上。 同上。
図３Ａ〜３Ｄは、ナトリウム塩として示される、センス鎖の５’末端でコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ構造を有する）を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２５１の化学構造表示である。 同上。 同上。 同上。
図４Ａ〜４Ｄは、遊離の酸として示される、センス鎖の５’末端でコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ構造を有する）を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６の化学構造表示である。 同上。 同上。 同上。
図５Ａ〜５Ｄは、ナトリウム塩として示される、センス鎖の５’末端でコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ構造を有する）を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６の化学構造表示である。 同上。 同上。 同上。
図６Ａ〜６Ｄは、遊離の酸として示される、センス鎖の５’末端でコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ構造を有する）を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２０の化学構造表示である。 同上。 同上。 同上。
図７Ａ〜７Ｄは、ナトリウム塩として示される、センス鎖の５’末端でコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ構造を有する）を含むＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２０の化学構造表示である。 同上。 同上。 同上。
詳細な説明
ＲＮＡｉ剤
ＡＰＯＣ３遺伝子（本明細書においてＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉトリガーとも呼ばれる）の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤が、本明細書に記載される。それぞれのＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、１６〜３０ヌクレオチド長であってもよい。センスおよびアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ独立に１７〜２７ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ独立に１７〜２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は、それぞれ２１〜２６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ２１〜２４ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖は、約１９ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は、約２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖は、約２１ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は、約２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖は２３ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、それぞれ２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ独立に１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの二本鎖の長さを有する。
一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の完璧な、実質的な、または部分的な相補性の領域は、１６〜２６（例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６）ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖の５’末端に、またはその近傍に存在する（例えば、この領域は、完璧に、実質的に、または部分的に相補的ではない０、１、２、３、または４個のヌクレオチドによって、アンチセンス鎖の５’末端から分離していてもよい）。
センス鎖およびアンチセンス鎖はそれぞれ、１６〜２３ヌクレオチド長であるコアストレッチ（本明細書では「コア配列」または「コアストレッチ配列」とも呼ばれる）を含有する。アンチセンス鎖コアストレッチは、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ標的中に存在するヌクレオチド配列（例えば、標的配列と呼ばれることもある）と１００％（完璧に）相補的であるか、または少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖中のコアストレッチ配列と１００％（完璧に）相補的であるか、または少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、かくして、センス鎖コアストレッチ配列は、典型的には、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ標的中に存在するヌクレオチド配列（標的配列）と完璧に同一であるか、または少なくとも約８５％同一である。センス鎖コアストレッチ配列は、対応するアンチセンスコア配列と同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を形成するために使用されるセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の例を、表２、３、４、および５に提供する。表２、４、および５中のセンス鎖およびアンチセンス鎖配列を含むＲＮＡｉ剤二本鎖の例を、表６に示す。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、アニーリングして二本鎖を形成する。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに部分的に、実質的に、または完全に相補的であってもよい。相補的二本鎖領域内で、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンスコアストレッチ配列と少なくとも８５％相補的であるか、または１００％相補的である。一部の実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の対応する１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチドの配列と少なくとも８５％または１００％相補的である、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチドの配列を含有する（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンスコアストレッチ配列は、少なくとも８５％塩基対形成する、または１００％塩基対形成する少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチドの領域を有する）。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、または表４中のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表３、または表５中のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。
センス鎖および／またはアンチセンス鎖は、必要に応じて、また、独立に、コアストレッチ配列の３’末端、５’末端、または３’と５’末端の両方に、追加の１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチド（伸長）を含有してもよい。存在する場合、アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ中の対応する配列と相補的であっても、なくてもよい。存在する場合、アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ中の対応する配列と同一であっても、なくてもよい。存在する場合、アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、対応するセンス鎖の追加のヌクレオチドと相補的であっても、なくてもよい。
本明細書で使用される場合、伸長は、センス鎖コアストレッチ配列および／またはアンチセンス鎖コアストレッチ配列の５’および／または３’末端に１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチドを含む。センス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖中の、コアストレッチ配列ヌクレオチドまたは伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドと相補的であっても、なくてもよい。逆に、アンチセンス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖中の、コアストレッチヌクレオチドまたは伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドと相補的であっても、なくてもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、３’および５’伸長を含有する。一部の実施形態では、一方の鎖の３’伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、他方の鎖の１つまたは複数の５’伸長ヌクレオチドと塩基対を形成する。他の実施形態では、一方の鎖の３’伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、他方の鎖の１つまたは複数の５’伸長ヌクレオチドと塩基対を形成しない。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、３’伸長を有するアンチセンス鎖および５’伸長を有するセンス鎖を有する。一部の実施形態では、伸長ヌクレオチドは、対形成せず、突出部を形成する。本明細書で使用される場合、「突出部」とは、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤のハイブリダイズした、または二本鎖を形成した部分の一部を形成しないセンス鎖またはアンチセンス鎖の末端に位置する１つまたは複数の対形成しないヌクレオチドのストレッチを指す。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１、２、または３ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、ウラシルもしくはチミジンヌクレオチドまたは対応するＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端は、脱塩基残基（Ａｂ）を含み、これは「脱塩基部位」または「脱塩基ヌクレオチド」とも呼ぶことができる。脱塩基残基（Ａｂ）は、糖部分の１’位の核酸塩基を欠くヌクレオチドまたはヌクレオシドである（例えば、米国特許第５，９９８，２０３号を参照されたい）。一部の実施形態では、ＡｂまたはＡｂＡｂを、アンチセンス鎖の３’末端に付加することができる。
一部の実施形態では、センス鎖またはアンチセンス鎖は、本明細書で使用される場合、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の鎖の１つまたは複数の末端に組み込むことができる非ヌクレオチド化合物または他の部分であり、一部の例では、例えば、エキソヌクレアーゼ分解に対する保護などのある特定の有益な特性を有するＲＮＡｉ剤を提供することができる、「末端キャップ」を含んでもよい。一部の実施形態では、反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）は、末端のキャップに付加される（表７６を参照されたい）。（例えば、Ｆ． Ｃｚａｕｄｅｒｎａ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２００３， ３１（１１）， ２７０５−１６を参照されたい）。末端キャップは、当業界で一般に公知であり、例えば、反転脱塩基残基、および末端Ｃ３、Ｃ６、またはＣ１２基などの炭素鎖を含む。一部の実施形態では、末端キャップは、センス鎖の５’末端、３’末端、または５’と３’末端の両方に存在する。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、または５ヌクレオチド長の３’伸長を有するセンス鎖を含む。一部の実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、アデノシン、ウラシル、またはチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、またはＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ配列中のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、３’センス鎖伸長は、限定されるものではないが、以下の配列：Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴ（それぞれ５’から３’に向かって列挙される）の１つを含むか、またはそれからなる。
一部の実施形態では、センス鎖の３’末端は、追加の脱塩基残基または反転脱塩基末端キャップを含んでもよい。一部の実施形態では、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、またはＡｂを、センス鎖の３’末端に付加する。
一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の３’末端に付加する。一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基または反転脱塩基部位を、標的化リガンドと、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端または複数の末端での、またはその近傍での１つまたは複数の反転脱塩基残基または反転脱塩基部位の含有は、ＲＮＡｉ剤の活性または他の望ましい特性の増強を可能にする。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチド長の５’伸長を有するセンス鎖を含む。一部の実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、ウラシルまたはアデノシンヌクレオチドまたはＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ配列中のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、センス鎖５’伸長は、限定されるものではないが、以下の配列：ＣＡ、ＡＵＡＧＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、ＵＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、ＵＣＡ、ＵＡＵ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ５’から３’に向かって列挙される）の１つである。センス鎖は、３’伸長および／または５’伸長を有してもよい。
一部の実施形態では、センス鎖の５’末端は、１つまたは複数の追加の脱塩基残基（例えば、（Ａｂ）または（ＡｂＡｂ））を含んでもよい。一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の５’末端に付加する。一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基を、標的化リガンドと、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入することができる。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端または複数の末端での、またはその近傍での１つまたは複数の反転脱塩基残基の含有は、ＲＮＡｉ剤の活性または他の望ましい特性の増強を可能にすることができる。一部の実施形態では、脱塩基（デオキシリボース）残基を、リビトール（脱塩基リボース）残基と置き換えることができる。
一部の実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の３’末端またはアンチセンス鎖配列の３’末端は、反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ（表７を参照されたい））を含んでもよい。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を形成する際に使用される配列の例を、表２、３、４、および５に提供する。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、３、または４中の配列のいずれかの配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表４中の改変配列のいずれか１つを含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または４中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１７、２〜１５、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、２〜２１、１〜２２、２〜２２、１〜２３、２〜２３、１〜２４、または２〜２４の配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または５中の配列のいずれかの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または５中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１８、１〜１９、１〜２０、１〜２１、１〜２２、１〜２３、１〜２４、１〜２５、１〜２６、２〜１９、２〜２０、２〜２１、２〜２２、２〜２３、２〜２４、３〜２０、３〜２１、３〜２２、３〜２３、３〜２４、４〜２１、４〜２２、４〜２３、４〜２４、５〜２２、５〜２３または５〜２４の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表５中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチドを含有する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチドを含有する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両方の末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も、平滑末端ではない。本明細書で使用される場合、「平滑末端」とは、２つのアニーリングした鎖の末端ヌクレオチドが相補的である（相補的塩基対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、フレイド末端（ｆｒａｙｅｄ ｅｎｄ）を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、フレイド末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両方の末端は、フレイド末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も、フレイド末端ではない。本明細書で使用される場合、フレイド末端とは、２つのアニーリングした鎖の末端ヌクレオチドが対を形成する（すなわち、突出部を形成しない）が、相補的ではない（すなわち、非相補的対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤の一方の鎖の末端の１つまたは複数の対形成しないヌクレオチドは、突出部を形成する。対形成しないヌクレオチドは、センス鎖またはアンチセンス鎖にあり、３’または５’突出部を作出してもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端とフレイド末端、平滑末端と５’突出末端、平滑末端と３’突出末端、フレイド末端と５’突出末端、フレイド末端と３’突出末端、２つの５’突出末端、２つの３’突出末端、５’突出末端と３’突出末端、２つのフレイド末端、または２つの平滑末端を含有する。典型的には、存在する場合、突出部は、センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の３’末端に位置する。
改変ヌクレオチドは、様々なポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド構築物において使用される場合、細胞中の化合物の血清安定性を同時に増加させながら、これらの化合物の活性を保持することができ、また、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド構築物の投与時にヒトにおけるインターフェロン活性を活性化する可能性を最小化することもできる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ナトリウム塩として調製される。当業界で周知であるそのような形態は、本明細書に開示される発明の範囲内にある。
改変ヌクレオチド
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の改変ヌクレオチドを含有する。本明細書で使用される場合、「改変ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’−ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。一部の実施形態では、ヌクレオチドの少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）が改変ヌクレオチドである。本明細書で使用される場合、改変ヌクレオチドは、限定されるものではないが、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣体、脱塩基ヌクレオチド（本明細書ではＡｂと表される）、２’−改変ヌクレオチド、３’−３’結合（反転）ヌクレオチド（本明細書ではｉｎｖｄＮ、ｉｎｖＮ、ｉｎｖｎと表される）、改変核酸塩基を含むヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基アナログ、本明細書ではＮＵＮＡまたはＮＵＮＡと表される）、ロックドヌクレオチド（本明細書ではＮＬＮＡまたはＮＬＮＡと表される）、３’−Ｏ−メトキシ（２’ヌクレオシド間結合）ヌクレオチド（本明細書では３’−ＯＭｅｎと表される）、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド（本明細書ではＮｆＡＮＡまたはＮｆＡＮＡと表される）、５’−Ｍｅ、２’−フルオロヌクレオチド（本明細書では５Ｍｅ−Ｎｆと表される）、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホン酸デオキシリボヌクレオチド（本明細書ではｖｐｄＮと表される）、ビニルホスホン酸含有ヌクレオチド、およびシクロプロピルホスホン酸含有ヌクレオチド（ｃＰｒｐＮ）を含んでもよい。２’−改変ヌクレオチド（すなわち、５員糖環の２’位にヒドロキシル基以外の基を有するヌクレオチド）としては、限定されるものではないが、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド（本明細書では、ヌクレオチド配列中で小文字の「ｎ」と表される）、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド（本明細書では、２’−フルオロヌクレオチドとも呼ばれ、本明細書ではＮｆと表される）、２’−デオキシヌクレオチド（本明細書ではｄＮと表される）、２’−メトキシエチル（２’−Ｏ−２−メトキシルエチル）ヌクレオチド（本明細書では２’−ＭＯＥとも呼ばれ、本明細書ではＮＭと表される）、２’−アミノヌクレオチド、および２’−アルキルヌクレオチドが挙げられる。所与の化合物中の全ての位置が均一に改変される必要はない。逆に、１つより多い改変を、単一のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に、またはさらにはその単一のヌクレオチドに組み込むことができる。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖を、当業界で公知の方法によって合成および／または改変することができる。あるヌクレオチドでの改変は、別のヌクレオチドでの改変とは無関係である。
改変核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンならびにＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン（例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、または５−プロピニルシトシン）、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−アルキル（例えば、６−メチル、６−エチル、６−イソプロピル、または６−ｎ−ブチル）誘導体、アデニンおよびグアニンの２−アルキル（例えば、２−メチル、２−エチル、２−イソプロピル、または２−ｎ−ブチル）および他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、シトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−スルフヒドリル、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルならびに他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ（例えば、５−ブロモ）、５−トリフルオロメチル、ならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、ならびに３−デアザアデニンなどの、合成および天然の核酸塩基を含む。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである。本明細書で使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全部が改変ヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤は、リボヌクレオチド（すなわち、非改変）であるセンス鎖とアンチセンス鎖の両方において４個の、またはそれより少ない（すなわち、０、１、２、３または４個）ヌクレオチドを有するＲＮＡｉ剤である。本明細書で使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全部が改変ヌクレオチドであるセンス鎖は、非改変リボヌクレオチドであるセンス鎖において２個の、またはそれより少ない（すなわち、０、１または２個）ヌクレオチドを有するセンス鎖である。本明細書で使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全部が改変ヌクレオチドであるアンチセンス鎖は、非改変リボヌクレオチドであるセンス鎖において２個の、またはそれより少ない（すなわち、０、１または２個）ヌクレオチドを有するアンチセンス鎖である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数のヌクレオチドは、非改変リボヌクレオチドである。
改変ヌクレオシド間結合
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数のヌクレオチドは、非標準的な結合または骨格（すなわち、改変ヌクレオシド間結合または改変骨格）によって連結されている。改変ヌクレオシド間結合または骨格としては、限定されるものではないが、ホスホロチオエート基（本明細書では、小文字の「ｓ」と表される）、キラルホスホロチオエート、チオホスホン酸、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、アルキルホスホン酸（例えば、メチルホスホン酸または３’−アルキレンホスホン酸）、キラルホスホン酸、ホスフィン酸、ホスホロアミデート（例えば、３’−アミノホスホロアミデート、アミノアルキルホスホロアミデート、またはチオノホスホロアミデート）、チオノアルキル−ホスホン酸、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ結合、通常の３’−５’結合を有するボラノリン酸、ボラノリン酸の２’−５’結合アナログ、またはヌクレオシド単位の隣接する対が３’−５’から５’−３’に、または２’−５’から５’−２’に連結された反転極性を有するボラノリン酸が挙げられる。一部の実施形態では、改変ヌクレオシド間結合または骨格は、リン原子を欠く。リン原子を欠く改変ヌクレオシド間結合としては、限定されるものではないが、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環式糖間結合が挙げられる。一部の実施形態では、改変ヌクレオシド間骨格としては、限定されるものではないが、シロキサン骨格、スルフィド骨格、スルホキシド骨格、スルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファミン酸骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホン酸およびスルホンアミド骨格、アミド骨格、ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分を有する他の骨格が挙げられる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、４、５、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、またはセンス鎖とアンチセンス鎖は両方とも独立に、１、２、３、４、５、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含有してもよい。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、またはセンス鎖とアンチセンス鎖は両方とも独立に、１、２、３、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含有してもよい。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、少なくとも２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有する。一部の実施形態では、少なくとも２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の３’末端から１〜３位のヌクレオチド間にある。一部の実施形態では、１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の５’末端にあり、別のホスホロチオエート結合は、センス鎖の３’末端にある。一部の実施形態では、２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合が、センス鎖の５’末端に位置し、別のホスホロチオエート結合が、センス鎖の３’末端にある。一部の実施形態では、センス鎖は、ヌクレオチド間にいかなるホスホロチオエートヌクレオシド間結合も含まないが、５’および３’末端の両方の末端ヌクレオチド間に１、２、または３個のホスホロチオエート結合、および必要に応じて存在する反転脱塩基残基末端キャップを含有する。一部の実施形態では、標的化リガンドは、ホスホロチオエート結合を介してセンス鎖に連結されている。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有する。一部の実施形態では、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜３位のヌクレオチドの間、および５’末端から１９〜２１、２０〜２２、２１〜２３、２２〜２４、２３〜２５、または２４〜２６位のヌクレオチドの間にある。一部の実施形態では、３個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜４位の間に位置し、第４のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から２０〜２１位に位置する。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に少なくとも３個または４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有する。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の改変ヌクレオチドおよび１つまたは複数の改変ヌクレオシド間結合を含有する。一部の実施形態では、２’−改変ヌクレオシドは、改変ヌクレオシド間結合と組み合わされる。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表１に示されるＡＰＯＣ３遺伝子の位置の、またはその近傍のＡＰＯＣ３遺伝子を標的とする。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表１に開示される標的ＡＰＯＣ３の１９マーの配列と完全に、実質的に、または少なくとも部分的に相補的であるコアストレッチ配列を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の１９位が、表１に開示される１９マーの標的配列の１位と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の１位が、表１に開示される１９マーの標的配列の１９位と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の２位が、表１に開示される１９マーの標的配列の１８位と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の２位から１８位までが、表１に開示される１９マーの標的配列の１８位から２位までに位置するそれぞれの相補的塩基のそれぞれと塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。
本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３遺伝子と完璧に相補的であってもよく、またはＡＰＯＣ３遺伝子と非相補的であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、またはｄＴである。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａ塩基対を形成する。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２、表３、または表４中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉのセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２、表３、または表５中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７、１〜１８、または２〜１８のヌクレオチドの配列を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）（５’末端→３’末端に）表２、表３、または表４中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含むアンチセンス鎖、および（ｉｉ）（５’末端→３’末端に）表２、表３、または表５中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７または１〜１８のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、以下の表２に示される１９マーのコアヌクレオチド配列を含む。
表２中のヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、改変ヌクレオチドまたは非改変ヌクレオチドであってもよい。一部の実施形態では、表２中のヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなるセンスおよびアンチセンス鎖配列を有するＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２中のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２中のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。
本明細書で使用される場合、表２中に開示された配列中に列挙されたそれぞれのＮは、ありとあらゆる核酸塩基（改変と非改変ヌクレオチドの両方に見出されるものを含む）から独立に選択することができる。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドと相補的である核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドと相補的ではない核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドと同じである核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドとは異なる核酸塩基を有する。
ある特定の改変ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖、ならびにその基礎となる非改変核酸塩基配列を、表３および４に提供する。ある特定の改変ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびその基礎となる非改変核酸塩基配列を、表３および５に提供する。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の形成において、表３、４、および５ならびに上記の表２に列挙される基礎となる塩基配列のそれぞれにおけるヌクレオチドのそれぞれは、改変ヌクレオチドであってもよい。
本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖とセンス鎖とをアニーリングさせることによって形成される。２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補的な領域を有するという条件で、表２、表３、または表５に列挙される配列を含有するセンス鎖を、表２、表３、または表４に列挙される配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズさせることができる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、または表４中の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、表４、または表５中の配列のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖の核酸塩基配列を有する二本鎖を含むか、またはそれからなる。
改変ヌクレオチドを含有するアンチセンス鎖の例を、表４に提供する。改変ヌクレオチドを含有するセンス鎖の例を、表５に提供する。改変ヌクレオチドを含有するアンチセンス鎖およびセンス鎖のさらなる例を、表３に提供する。
表３、４、および５で使用される場合、改変ヌクレオチド、標的化基、および連結基を示すために、以下の表記を使用する：
当業者であれば、配列によって別途指摘されない限り（例えば、ホスホロチオエート結合「ｓ」によるなど）、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、ヌクレオチドモノマーは５’−３’−ホスホジエステル結合によって相互に連結されていることを容易に理解する。当業者であれば、明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図１Ａ〜１Ｉを参照されたい）。さらに、当業者であれば、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端の末端ヌクレオチドは、典型的には、ｅｘ ｖｉｖｏでリン酸部分の代わりに所与のモノマーのそれぞれの３’位にヒドロキシル（−ＯＨ）基を有することを容易に理解する。さらに、当業者であれば容易に理解および認識するように、本明細書に示されるホスホロチオエート化学構造は、典型的には硫黄原子上のアニオンを示すが、本明細書に開示される発明は、全てのホスホロチオエート互変異性体および／またはジアステレオマー（例えば、硫黄原子が二重結合を有し、アニオンが酸素原子である場合）を包含する。本明細書で別途明示的に指摘されない限り、当業者のそのような理解は、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤およびＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の組成物を説明する時に使用される。
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤と共に使用される標的化基および連結基のある特定の例は、以下の表７に提供される。より具体的には、標的化基および連結基は以下：（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓを含み、その化学構造を以下の表７に提供する。それぞれのセンス鎖および／またはアンチセンス鎖は、本明細書に列挙される任意の標的化基または連結基、ならびに配列の５’および／または３’末端にコンジュゲートされた他の標的化または連結基を有してもよい。
本明細書に記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖とセンス鎖とをアニーリングさせることによって形成される。２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補的な領域を有するという条件で、表２、表３、または表５に列挙される配列を含有するセンス鎖を、表２、表３、または表４に列挙される配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズさせることができる。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表４中のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表５中のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、または表４中の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、または表４中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１７、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、２〜２１、１〜２２、２〜２２、１〜２３、２〜２３、１〜２４、または２〜２４、１〜２５、２〜２５、１〜１６、または２〜１６の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表４中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表３、または表５中の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表３、または表５中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１７、２〜１７、３〜１７、４〜１７、１〜１８、２〜１８、３〜１８、４〜１８、１〜１９、２〜１９、３〜１９、４〜１９、１〜２０、２〜２０、３〜２０、４〜２０、１〜２１、２〜２１、３〜２１、４〜２１、１〜２２、２〜２２、３〜２２、４〜２２、１〜２３、２〜２３、３〜２３、４〜２３、１〜２４、２〜２４、３〜２４、４〜２４、１〜２５、２〜２５、３〜２５、４〜２５、１〜２６、２〜２６、３〜２６、または４〜２６の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表５中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表３中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３遺伝子と完璧に相補的であってもよく、またはＡＰＯＣ３遺伝子と非相補的であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、もしくはｄＴ（またはその改変バージョン）である。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａ塩基対を形成する。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２または表４中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉのセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２または表５中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７または１〜１８のヌクレオチドの配列を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）（５’末端→３’末端に）表２、表３、または表４中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含むアンチセンス鎖、および（ｉｉ）（５’末端→３’末端に）表２、表３、または表５中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７または１〜１８のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖を含む。
２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補的な領域を有するという条件で、表２、表３、または表５に列挙される配列を含有するセンス鎖を、表２、表３、または表４に列挙される配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズさせることができる。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表５中の改変配列のいずれかの改変配列からなるセンス鎖、および表４中の改変配列のいずれかの改変配列からなるアンチセンス鎖を有する。代表的な配列対を、表３および表６に示される二本鎖ＩＤ番号によって例示する。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかを含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかからなる。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列、ならびに標的化基および／または連結基を含み、ここで、標的化基および／または連結基は、センス鎖またはアンチセンス鎖に共有結合により連結（すなわち、コンジュゲート）されている。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖改変ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖改変ヌクレオチド配列ならびに標的化基および／または連結基を含み、ここで、標的化基および／または連結基は、センス鎖またはアンチセンス鎖に共有結合により連結されている。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、または表６のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、または表６のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓからなる群から選択される標的化基をさらに含む。一部の実施形態では、標的化基は表７に定義されるように（ＮＡＧ２５）または（ＮＡＧ２５）ｓである。他の実施形態では、標的化基は表７に定義されるように（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓである。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、または表６の二本鎖のいずれかのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかの改変ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は表２、表３、または表６の二本鎖のいずれかのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかの改変ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基を含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、または表６の二本鎖のいずれかを含む。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、または表６の二本鎖のいずれかからなる。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３遺伝子を発現する細胞への送達の際に、ｉｎ ｖｉｖｏで１つまたは複数のＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害またはノックダウンする。
標的化基、連結基、および送達ビヒクル
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、限定されるものではないが、標的化基、連結基、送達ポリマー、または送達ビヒクルを含む１つまたは複数の非ヌクレオチド基にコンジュゲートされている。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤の標的化、送達、または結合を増強することができる。標的化基および連結基の例を、表７に提供する。非ヌクレオチド基は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のいずれかの３’および／または５’末端に共有結合により連結されていてもよい。一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’および／または５’末端に連結された非ヌクレオチド基を含有する。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端に連結されている。非ヌクレオチド基は、リンカー／連結基を介してＲＮＡｉ剤に直接的または間接的に連結されていてもよい。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、不安定、切断性、または可逆性結合またはリンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結されている。
一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、それが結合されているＲＮＡｉ剤またはコンジュゲートの薬物動態または生体分布特性を増強して、ＲＮＡｉ剤またはコンジュゲートの細胞または組織特異的分布および細胞特異的取込みを改善する。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。
標的化基または標的化部分は、それが結合されているコンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の薬物動態または生体分布特性を増強して、コンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の細胞特異的分布および細胞特異的取込みを改善することができる。標的化基は、それが指向する標的について一価、二価、三価、四価であり得るか、またはより高い価数を有してもよい。代表的な標的化基としては、限定されるものではないが、細胞表面分子に対する親和性を有する化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、および細胞表面分子に対する親和性を有する抗体模倣体が挙げられる。一部の実施形態では、標的化基は、ＰＥＧリンカー、または一部の例では、リンカーとして働くことができる、１つ、２つ、もしくは３つの脱塩基性および／もしくはリビトール（脱塩基性リボース）残基などのリンカーを使用してＲＮＡｉ剤に連結されている。一部の実施形態では、標的化基は、ガラクトース誘導体クラスターを含む。
５’末端でアミン基などの反応基を有する、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を合成することができる。その後、反応基を使用して、当業界で典型的な方法を使用して標的化基に結合することができる。
一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。本明細書で使用される場合、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、肝細胞上で高度に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体に対して親和性を有する化合物を含有するリガンドである。一部の実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つまたは複数のガラクトース誘導体を含む、またはそれからなる。本明細書で使用される場合、用語ガラクトース誘導体は、ガラクトース、およびガラクトースの親和性と等しいまたはそれより高い、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有するガラクトースの誘導体の両方を含む。ガラクトース誘導体には、限定されるものではないが、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイル−ガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイルガラクトース−アミン（例えば、Ｓ．Ｔ． Ｉｏｂｓｔ ａｎｄ Ｋ． Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ， Ｊ．Ｂ．Ｃ．， １９９６， ２７１， ６６８６を参照されたい）が挙げられる。オリゴヌクレオチドおよび他の分子の肝臓へのｉｎ ｖｉｖｏ標的化にとって有用であるガラクトース誘導体、およびガラクトース誘導体のクラスターは、当業界で公知である（例えば、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｔｅ， １９８０， Ｃｅｌｌ， ２２， ６１１−６２０； Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．， １９８２， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５７， ９３９−９４５を参照されたい）。
ガラクトース誘導体は、肝細胞の表面上に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体へのその結合を通して、分子をｉｎ ｖｉｖｏで肝細胞に標的化するために使用されている。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドのアシアロ糖タンパク質受容体への結合は、肝細胞への細胞特異的標的化、および分子の肝細胞へのエンドサイトーシスを容易にする。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、単量体（例えば、単一のガラクトース誘導体を有する）または多量体（例えば、複数のガラクトース誘導体を有する）であり得る。ガラクトース誘導体またはガラクトース誘導体クラスターを、当業界で公知の方法を使用してＲＮＡｉ剤のセンスまたはアンチセンス鎖の３’または５’末端に結合することができる。ガラクトース誘導体クラスターなどの標的化基の調製は、例えば、その両方の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０、およびＡｒｒｏｗｈｅａｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／１５６０１２に記載されている。
本明細書で使用される場合、ガラクトース誘導体クラスターは、２から４個の末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ−１炭素を通して分子に結合する。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体三量体（３アンテナ性（ｔｒｉ−ａｎｔｅｎｎａｒｙ）ガラクトース誘導体または三価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、３つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体（４アンテナ性（ｔｅｔｒａ−ａｎｔｅｎｎａｒｙ）ガラクトース誘導体または四価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、４個のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
本明細書で使用される場合、ガラクトース誘導体三量体は、それぞれが中央の分岐点に連結された３個のガラクトース誘導体を含有する。本明細書で使用される場合、ガラクトース誘導体四量体は、それぞれが中央の分岐点に連結された４個のガラクトース誘導体を含有する。ガラクトース誘導体は、糖類のＣ−１炭素を通して中央の分岐点に結合することができる。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体は、リンカーまたはスペーサーを介して分岐点に連結されている。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、ＰＥＧ基などのフレキシブルな親水性スペーサーである（例えば、米国特許第５，８８５，９６８号；Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５ Ｖｏｌ． ３９ ｐ． １５３８−１５４６を参照されたい）。一部の実施形態では、ＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサーである。分岐点は、３個のガラクトース誘導体の結合を可能にし、ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合をさらに可能にする任意の低分子であり得る。分岐点基の例は、ジリシンまたはジグルタメートである。ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合は、リンカーまたはスペーサーを通して起こり得る。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、限定されるものではないが、ＰＥＧスペーサーなどのフレキシブルな親水性スペーサーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、環状基などの堅固なリンカーを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体を含み、これは、例えばＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得る。
本開示の実施形態は、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、肝臓の細胞にｉｎ ｖｉｖｏで送達するための医薬組成物を含む。そのような医薬組成物は、例えばガラクトース誘導体クラスターにコンジュゲートされたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含み得る。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、例えばＮ−アセチル−ガラクトサミン三量体であり得るガラクトース誘導体三量体、または例えばＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得るガラクトース誘導体四量体を含む。
標的化基は、限定されるものではないが、表７に定義されるように（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、および（ＮＡＧ３９）ｓを含む。ガラクトースクラスター標的化リガンドを含む他の標的化基は、当業界で公知である。
一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤にコンジュゲートする。連結基は、標的化基、または送達ポリマー、または送達ビヒクルへの薬剤の共有結合による連結を容易にする。連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’または５’末端に連結することができる。一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖に連結する。一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’または３’末端にコンジュゲートする。一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端にコンジュゲートする。連結基の例としては、限定されるものではないが、第一級アミンおよびアルキン、アルキル基、脱塩基ヌクレオチド、リビトール（脱塩基リボース）、ならびに／またはＰＥＧ基などの反応基が挙げられる。
リンカーまたは連結基は、目的の一方の化学基（ＲＮＡｉ剤など）またはセグメントを、目的の別の化学基（標的化基または送達ポリマーなど）またはセグメントに、１つまたは複数の共有結合を介して連結する２個の原子間の接続である。不安定な連結は、不安定な結合を含有する。連結は、必要に応じて、繋がれている２つの原子間の距離を増加させるスペーサーを含み得る。スペーサーは、連結に可撓性および／または長さをさらに加えることができる。スペーサーとしては、限定されるものではないが、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、およびアラルキニル基が挙げられ、それぞれ、１つまたは複数のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド、およびサッカリドを含んでもよい。スペーサー基は、当業界で周知であり、前記一覧は、記載の範囲を限定することを意図しない。
表２、３、４、または５に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ヌクレオチド配列のいずれかは、改変であるか、非改変であるかによらず、３’または５’標的化基または連結基を含有し得る。３’もしくは５’標的化基、または連結基を含有する、表４または５に列挙される、またはそうでなければ本明細書に記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤配列のいずれかは、あるいは、３’または５’標的化基も、連結基も含有しないか、または限定されるものではないが、表７に示されるものを含む、異なる３’もしくは５’標的化基、または連結基を含有し得る。表２、表３、または表６に列挙されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤二本鎖のいずれかは、改変されていようと、改変されていなかろうと、限定されるものではないが、表７に示されるものを含む標的化基または連結基をさらに含み得、標的化基または連結基を、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤二本鎖のセンス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの３’または５’末端に結合することができる。
標的化基および連結基の例を、表７に提供する。表５は、５’または３’末端に連結された標的化基または連結基を有するＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤センス鎖のいくつかの実施形態を提供する。
表７の上記の構造のそれぞれにおいて、ＮＡＧは、上記の構造および本明細書に提供される説明を考慮して、結合されると当業者であれば理解するＮ−アセチル−ガラクトサミンまたは別のガラクトース誘導体を含む。例えば、一部の実施形態では、表７に提供される構造におけるＮＡＧは、以下の構造
によって表される。
それぞれの（ＮＡＧｘ）を、リン酸基（（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３０）、および（ＮＡＧ３１）の場合）、またはホスホロチオエート基（（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）ｓ、または（ＮＡＧ３７）ｓの場合）、または別の連結基を介してＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に結合してもよい。
当業界で公知の他の連結基を使用してもよい。
一部の実施形態では、送達ビヒクルを使用して、ＲＮＡｉ剤を細胞または組織に送達することができる。送達ビヒクルは、ＲＮＡｉ剤の細胞または組織への送達を改善する化合物である。送達ビヒクルは、限定されるものではないが、両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆的に改変されたポリマーもしくはペプチド、または可逆的に改変された膜活性ポリアミンなどのポリマーを含んでもよく、またはそれからなってもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤を、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣまたは当業界で利用可能な他の送達系と組み合わせることができる。ＲＮＡｉ剤を、標的化基、脂質（限定されるものではないが、コレステロールおよびコレステリル誘導体を含む）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例えば、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、およびＷＯ２０１２／０８３１８５、ＷＯ２０１３／０３２８２９、ＷＯ２０１３／１５８１４１を参照されたい）、または当業界で利用可能な他の送達系に化学的にコンジュゲートすることもできる。
医薬組成物および製剤
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、医薬組成物または製剤として調製することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む。これらの医薬組成物は、標的細胞、細胞群、組織、または生物中での標的ｍＲＮＡの発現の阻害において特に有用である。医薬組成物を使用して、標的ｍＲＮＡのレベルの低下、または標的遺伝子の発現の阻害から利益を得る疾患または障害を有する対象を処置することができる。医薬組成物を使用して、標的ｍＲＮＡのレベルの低下、または標的遺伝子の発現の阻害から利益を得る疾患、障害または状態を発症するリスクがある対象を処置することができる。一実施形態では、方法は、本明細書に記載の標的化リガンドに連結されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、処置しようとする対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤（ビヒクル、担体、希釈剤、および／または送達ポリマーを含む）を、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加することによって、ヒトを含む対象へのｉｎ ｖｉｖｏでの送達にとって好適な医薬製剤を形成する。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物および本明細書に開示される方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与することによって対象中のＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの発現を阻害することを含め、細胞、細胞群、細胞群、組織、または対象における標的ｍＲＮＡのレベルを低下させ得る。一部の実施形態では、対象は、標的細胞または組織において標的遺伝子の病原性の上方調節を有すると以前に識別されたことがある。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む記載される医薬組成物は、対象におけるＴＧレベルの上昇および／またはＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの過剰発現と関連する臨床所見を処置または管理するために使用される。一部の実施形態では、治療（予防を含む）有効量の医薬組成物の１つまたは複数を、そのような処置（症状、疾患、または障害の防止または管理を含む）を必要とする対象に投与する。一部の実施形態では、開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のいずれかの投与を使用して、対象における疾患の症状の数、重症度、および／または頻度を減少させることができる。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む記載される医薬組成物を使用して、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの発現の低下または阻害から利益を得る疾患または障害を有する対象における少なくとも１つの症状を処置することができる。一部の実施形態では、対象に、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む治療有効量の１つまたは複数の医薬組成物を投与することによって症状を処置する。他の実施形態では、対象に、予防有効量の１つまたは複数のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与することによって、少なくとも１つの症状を防止する。
投与経路は、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が身体と接触する経路である。一般に、哺乳動物の処置のために薬物およびオリゴヌクレオチドおよび核酸を投与する方法は、当業界で周知であり、本明細書に記載の組成物の投与に適用することができる。本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、特定の経路に対して適切に調整された調製物中で、任意の好適な経路によって投与することができる。かくして、本明細書に記載される医薬組成物を、注射によって、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、または腹腔内的に投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下注射を介して投与される。
本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、当業界で公知のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞、細胞群、組織、または対象に送達することができる。一般に、核酸分子を送達するための当業界で認識される任意の好適な方法（ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで）を、本明細書に記載の組成物と共に使用するために適合させることができる。例えば、送達は、局部投与（例えば、直接的注射、埋込み、もしくは局所投与）、全身投与、または頭蓋内（例えば、脳室内、実質内および髄腔内）、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）、経鼻、経口、直腸、もしくは局所（頬および舌下を含む）投与を含む、皮下、静脈内、腹腔内、もしくは非経口経路によるものであってもよい。一部の実施形態では、組成物は、皮下または静脈内注入または注射を介して投与される。
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。本明細書に記載の医薬組成物は、対象への投与のために製剤化される。
本明細書で使用される場合、医薬組成物または医薬は、薬理学的に有効な量の記載される治療化合物の少なくとも１つ、および１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。薬学的に許容される賦形剤（賦形剤）は、薬物送達系に意図的に含まれる医薬品有効成分（ＡＰＩ、治療生成物、例えば、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、意図される投薬量で治療効果を発揮しないか、または発揮することを意図されない。賦形剤は、ａ）製造中の薬物送達系のプロセシングを補助する、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティ、もしくは患者許容性を保護する、支援する、もしくは増強する、ｃ）生成物の識別を援助する、および／またはｄ）保存もしくは使用中のＡＰＩの送達の全体的な安全性、有効性の任意の他の属性を増強するように作用し得る。薬学的に許容される賦形剤は、不活性物質であっても、またはなくてもよい。
賦形剤としては、限定されるものではないが、吸収促進剤、接着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色料、送達増強剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香料、流動促進剤、保湿剤、潤滑剤、油、ポリマー、保存剤、塩水、塩、溶媒、糖、懸濁化剤、持続放出マトリックス、甘味料、増粘剤、等張剤、ビヒクル、撥水剤、および湿潤剤が挙げられる。
注入可能な使用にとって好適な医薬組成物としては、滅菌水性溶液（水溶性の場合）または分散体および滅菌注射溶液または分散体の即興的調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与については、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。好適な担体は、製造および保存の条件下で安定であるべきであり、細菌および菌類などの微生物の汚染作用に対して保存するべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、ならびにその好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒体であってもよい。例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散体の場合、必要とされる粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、および塩化ナトリウムを組成物中に含有させることが好ましい。組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含有させることによって、注射可能組成物の長期的吸収をもたらすことができる。
必要に応じて、上に列挙された成分の１つまたは組合せと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を組み込んだ後、滅菌濾過を行うことによって、滅菌注射溶液を調製することができる。一般に、分散体は、活性化合物を、基本分散媒体および上に列挙されたものに由来する必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、活性成分と、その予め滅菌濾過された溶液に由来する任意のさらなる所望の成分との粉末を生成する、真空乾燥および凍結乾燥を含む。
関節内投与にとって好適な製剤は、微結晶形態、例えば、水性微結晶性懸濁液の形態にあってもよい薬物の滅菌水性調製物の形態にあってもよい。リポソーム製剤または生分解性ポリマー系を使用して、関節内と眼内投与の両方のための薬物を提供することもできる。
埋込み体およびマイクロカプセル送達系を含む、制御放出製剤などの、身体からの迅速な除去に対して化合物を保護する担体を用いて、活性化合物を調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者には明らかであろう。リポソーム懸濁液を、薬学的に許容される担体として使用することもできる。これらを、当業者には公知の、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載の方法に従って調製することができる。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、投与の容易性および投薬量の均一性のために単位剤形で組成物に製剤化することができる。単位剤形とは、処置しようとする対象のための単一の投薬量として適した物理的に個別の単位を指す；それぞれの単位は、必要とされる薬学的担体と関連する所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形のための明細は、活性化合物の独特の特徴および達成しようとする治療効果、ならびに個体の処置のためのそのような活性化合物を組み合わせる当業界において固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
医薬組成物は、医薬組成物中に一般的に見出される他の追加成分を含有してもよい。そのような追加成分としては、限定されるものではないが、かゆみ止め薬、収斂剤、局部麻酔剤、鎮痛剤、抗ヒスタミン剤、または抗炎症剤（例えば、アセトアミノフェン、ＮＳＡＩＤ、ジフェンヒドラミンなど）が挙げられる。また、本明細書で定義されるＲＮＡｉ剤を発現する、または含む細胞、組織、または単離された臓器を、「医薬組成物」として使用することができることも想定される。本明細書で使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療有効量」または単に「有効量」とは、薬理学的、治療的、または防止的結果をもたらすＲＮＡｉ剤の量を指す。
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を投与するステップに加えて、第２の治療剤または処置を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の治療剤は、別のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤（例えば、ＡＰＯＣ３標的内の異なる配列を標的とするＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤）である。他の実施形態では、第２の治療剤は、低分子薬物、抗体、抗体断片、またはアプタマーであってもよい。
一般に、活性化合物の有効量は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば、約１．０〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲にある。一部の実施形態では、活性化合物の有効量は、約０．２５〜約５ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲にある。一部の実施形態では、活性成分の有効量は、約０．５〜約４ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲にある。投与される量はまた、患者の全体的な健康状態、送達される化合物の相対的な生物学的効能、薬物の製剤、製剤中の賦形剤の存在および種類、ならびに投与経路などの変数に依存する可能性もある。また、一部の例では、投与される初期投薬量を、所望の血中レベルもしくは組織レベルを迅速に達成するために、上の上限レベルを超えて増加させてもよく、または一部の例では、初期投薬量は、最適投薬量よりも小さくてもよいと理解されるべきである。
疾患の処置のため、または疾患の処置のための医薬もしくは組成物の形成のために、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載の医薬組成物を、賦形剤と、または限定されるものではないが、第２の、もしくは他のＲＮＡｉ剤、低分子薬物、抗体、抗体断片、ペプチド、および／またはアプタマーを含む、第２の治療剤もしくは処置と組み合わせることができる。
薬学的に許容される賦形剤またはアジュバントに添加される場合、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、キット、容器、パック、またはディスペンサー中に包装することができる。本明細書に記載の医薬組成物は、予め充填された注射筒またはバイアル中に包装されてもよい。
処置の方法および発現の阻害
本明細書に開示されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を使用して、化合物の投与から利益を得る疾患または障害を有する対象（例えば、ヒトまたは他の哺乳動物）を処置することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの発現の低下および／または阻害から利益を得る疾患または障害を有する対象（例えば、ヒト）、例えば肥満、高脂血症、高トリグリセリド血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、高トリグリセリド血症媒介性膵炎、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、家族性カイロミクロン血症症候群、家族性部分型リポジストロフィー、ならびに／または他の代謝関連障害および疾患と診断されている、またはそれらと関連する症状を発症するリスクがある対象を処置することができる。
対象は、治療有効量の任意の１つまたは複数のＲＮＡｉ剤を投与される。対象は、ヒト、患者、またはヒト患者であってもよい。対象は、成人、青年、小児、または幼児であってもよい。本明細書に記載の医薬組成物の投与は、ヒトまたは動物に対するものであってもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＰＯＣ３関連疾患または障害を有する対象を処置する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＰＯＣ３遺伝子発現の低下および／または阻害から利益を得る対象を処置する。一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＰＯＣ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される少なくとも１つの症状または病的状態を処置する（予防的を含む）。対象は、治療有効量の記載されるＲＮＡｉ剤のいずれかの１つまたは複数を投与される。一部の実施形態では、対象は、予防的有効量の記載されるＲＮＡｉ剤のいずれかの１つまたは複数を投与され、それによって少なくとも１つの症状が防止される。
ある特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者において、ＡＰＯＣ３発現によって少なくとも一部媒介される疾患、障害、状態、または病状の処置のための方法であって、患者に、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のいずれかを投与するステップを含む、方法を提供する。
一部の実施形態では、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＰＯＣ３関連疾患または障害を有する対象の臨床所見を処置または管理する。対象は、治療有効量の本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤含有組成物の１つまたは複数を投与される。一部の実施形態では、方法は、処置される対象に、本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を投与するステップを含む。
一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が投与される対象のＡＰＯＣ３遺伝子の遺伝子発現レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルは、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。対象中の遺伝子発現レベル、タンパク質レベル、および／またはｍＲＮＡレベルは、対象の細胞、細胞群、および／または組織において低下する。
一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が投与された対象のＡＰＯＣ３のタンパク質レベルは、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％より多く低下する。対象中のタンパク質レベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液中で低下する。
一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が投与されている対象におけるトリグリセリド（ＴＧ）レベルは、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与する前の対象、またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。対象におけるＴＧレベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液において低下し得る。
一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が投与されている対象における総コレステロールレベルは、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与する前の対象、またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。一部の実施形態では、記載されるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤が投与されている対象における低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールレベルは、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与する前の対象、またはＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を投与されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。対象における総コレステロールレベルおよび／またはＬＤＬコレステロールレベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液において低下し得る。
遺伝子発現、ｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３タンパク質レベル、ＴＧレベル、コレステロールレベル、およびＬＤＬコレステロールレベルの低下は、当業界で公知の任意の方法によって評価することができる。本明細書で使用される場合、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルの低下または減少は、本明細書において集合的にＡＰＯＣ３の低下もしくは減少、またはＡＰＯＣ３の発現の阻害もしくは低下もしくはノックダウンと呼ばれる。本明細書に記載の実施例は、ＡＰＯＣ３遺伝子発現の阻害を評価するための公知の方法を例示する。
細胞、組織、臓器、および非ヒト生物
本明細書に記載のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つを含む細胞、組織、臓器、および非ヒト生物が企図される。細胞、組織、臓器、または非ヒト生物は、ＲＮＡｉ剤を細胞、組織、臓器または非ヒト生物に送達することによって作製される。
上記に提供された実施形態および項目を、ここで、以下の非限定的な実施例を用いて例示する。
（実施例１）
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の合成
上記で表３および表６に示されたＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤二本鎖を、以下の一般手順に従って合成した。
Ａ．合成。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖を、オリゴヌクレオチド合成において使用される固相上でホスホロアミダイト技術に従って合成した。規模に応じて、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、ＭｅｒＭａｄｅ１２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、またはＯＰ Ｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のいずれかを使用した。合成を、制御細孔ガラス（ＣＰＧ、５００Åまたは６００Å、Ｐｒｉｍｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡから取得）製の固相支持体上で実施した。全てのＲＮＡおよび２’−改変ＲＮＡホスホロアミダイトを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ、ＵＳＡ）から購入した。具体的には、以下の２’−Ｏ−メチルホスホロアミダイトを使用した：（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ６−（ベンゾイル）−２’−Ｏ−メチル−アデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−Ｎ４−（アセチル）−２’−Ｏ−メチル−シチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノ）ホスホロアミダイト、（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−（イソブチリル）−２’−Ｏ−メチル−グアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、および５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト。２’−デオキシ−２’−フルオロ−ホスホロアミダイトは、２’−Ｏ−メチルアミダイトと同じ保護基を担持していた。５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−イノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｖｉｒｇｉｎｉａ）またはＨｏｎｇｅｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。反転脱塩基（３’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシリボース−５’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’，３’−ｓｅｃｏ−ウリジン、２’−ベンゾイル−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホロアミダイトもまた、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃまたはＨｏｎｇｅｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２，Ｎ６−（フェノキシアセテート）−２’−Ｏ−メチル−ジアミノプリン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓまたはＨｏｎｇｅｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。
標的化リガンド含有ホスホロアミダイトを、無水ジクロロメタンまたは無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、他の全てのアミダイトを、無水アセトニトリル（５０ｍＭ）または無水ジメチルホルムアミドに溶解し、分子ふるい（３Å）を添加した。５−ベンジルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中の２５０ｍＭ）または５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中の２５０ｍＭ）を、アクチベーター溶液として使用した。カップリング時間は、１２分（ＲＮＡ）、１５分（標的化リガンド）、９０秒（２’ＯＭｅ）、および６０秒（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート結合を導入するために、無水アセトニトリル中の３−フェニル１，２，４−ジチアゾリン−５−オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ．、Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ、ＭＡ、ＵＳＡから取得）の１００ｍＭ溶液を使用した。標的化リガンドが存在しない「裸の」ＲＮＡｉ剤であると具体的に特定されている場合を除き、以下の実施例において合成および試験したＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤二本鎖のそれぞれは、表７に表す標的化リガンド化学構造における「ＮＡＧ」としてＮ−アセチル−ガラクトサミンを利用した。
Ｂ．支持体に結合したオリゴマーの切断および脱保護。固相合成の最終化の後、乾燥した固相支持体を、水中の４０重量％メチルアミンと２８％の水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）の１：１容量の溶液で、３０℃で１．５時間処理した。溶液を蒸発させ、固体残渣を水中で復元させた（以下を参照されたい）。
Ｃ．精製。ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＱ−５ＰＷ、１３μｍカラムおよびＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ−８システムを使用する陰イオン交換ＨＰＬＣにより、粗オリゴマーを精製した。緩衝液Ａは、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ９．０であり、２０％アセトニトリルを含有し、緩衝液Ｂは、１．５Ｍ塩化ナトリウムを添加した緩衝液Ａと同じものであった。２６０ｎｍでのＵＶトレースを記録した。適切な画分をプールした後、濾過ＤＩ水または１００ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ６．７の泳動緩衝液および２０％アセトニトリルを用いて、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５ ｆｉｎｅを充填したＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＸＫ ２６／４０カラムを使用するサイズ排除ＨＰＬＣ上で泳動した。
Ｄ．アニーリング。１×リン酸緩衝生理食塩水（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｅｌｌｇｒｏ）中で等モルのＲＮＡ溶液（センスおよびアンチセンス）を合わせることによって相補鎖を混合して、ＲＮＡｉ剤を形成させた。一部のＲＮＡｉ剤を凍結乾燥し、−１５〜−２５℃で保存した。１×リン酸緩衝生理食塩水中でＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計上で溶液の吸光度を測定することにより、二本鎖濃度を決定した。次いで、２６０ｎｍでの溶液の吸光度に、変換係数および希釈係数を乗じ、二本鎖濃度を決定した。別途記述しない限り、変換係数は全て、０．０３７ｍｇ／（ｍＬ・ｃｍ）であった。一部の実験に関して、変換係数は、実験によって決定された吸光係数から計算した。
（実施例２）
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験
上記の表３に示す候補配列二本鎖を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、実施例１に記載の手順に従って調製した。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｔｒｏでの評価を、ヒト肝細胞癌細胞株であるＨｕＨ７細胞のトランスフェクションによって実施した。細胞を、９６ウェルフォーマットで約７，５００個の細胞／ウェルで播種し、表３に示す６５個のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤二本鎖のそれぞれを、ＬｉｐｏＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）トランスフェクション試薬を使用して、３つの濃度（１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭ）でトランスフェクトした。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれの相対的発現を、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの発現レベルを内因性の対照と比較することによってｑＲＴ−ＰＣＲによって決定し、表８に示すように、無処置ＨｕＨ７細胞に対して正規化した（ΔΔＣＴ解析）。このように、二本鎖ＩＤ番号５６＿１に関して、１ｎＭでの平均相対的発現０．１２６は、８７．４％のＡＰＯＣ３遺伝子ノックダウンを示す。
（実施例３）
ＡＰＯＣ３−ＳＥＡＰマウスモデル
６〜８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６アルビノマウスに、尾静脈へのハイドロダイナミックインジェクションにより、プラスミドをｉｎ ｖｉｖｏで一過性にトランスフェクトし、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤または対照の投与の少なくとも１５日前に投与した。プラスミドは、ＳＥＡＰ（分泌型ヒト胎盤アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子の３’ＵＴＲに挿入されたＡＰＯＣ３ ｃＤＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿００００４０．１（配列番号１））を含有する。動物の体重の１０％の総容積のリンゲル液中にＡＰＯＣ３ ｃＤＮＡ配列を含有するプラスミド５０μｇを、尾静脈を介してマウスに注射し、ＡＰＯＣ３−ＳＥＡＰモデルマウスを作製した。溶液を、以前に記載されたように（Ｚｈａｎｇ Ｇ ｅｔ ａｌ．， ”Ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｆｏｒｅｉｇｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｆｔｅｒ ｔａｉｌ ｖｅｉｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｋｅｄ ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ．” Ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １９９９ Ｖｏｌ． １０， ｐ１７３５−１７３７．）、２７ゲージ針を通して５〜７秒で注射した。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤によるＡＰＯＣ３の発現の阻害によって、ＳＥＡＰ発現の同時の阻害が起こり、これを測定する。−１日目に、血清中のＳＥＡＰ発現レベルを、Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ（商標）ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって測定し、マウスを平均ＳＥＡＰレベルに従って群分けした。
解析：ＳＥＡＰレベルを、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の投与前および投与後の両方の様々な時点で測定してもよい。
ｉ）血清の収集：マウスを２〜３％イソフルランによって麻酔し、血液試料を、顎下領域から血清分離チューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ ＡＧ ＆ Ｃｏ．、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に収集した。血液を周囲温度で２０分間凝固させた。チューブを８，０００×ｇで３分間遠心分離し、血清を分離して４℃で保存した。
ｉｉ）血清中ＳＥＡＰレベル：血清を収集し、Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ（商標）ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって、製造元の説明書に従って測定した。このモデルに関するＡＰＯＣ３発現の、処置に関連しない低下を説明するために、各動物の血清中ＳＥＡＰレベルを、食塩水を注射したマウスの対照群に対して正規化した。第１に、各動物のある時点のＳＥＡＰレベルを、その動物における処置前の発現レベル（−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、食塩水対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現を対照群に対して正規化した。あるいは、本明細書に記載した一部の実施例では、各動物の血清中ＳＥＡＰレベルを、処置前のレベルのみに対して正規化することによって評価した。
（実施例４）
ＡＰＯＣ３−ＳＥＡＰマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
上記の実施例３に記載のＡＰＯＣ３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目、各マウスに、５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤、３ｍｇ／ｋｇのＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のいずれかを含有する２００μｌ、または対照として使用するＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を含まないリン酸緩衝食塩水２００μｌの単回皮下投与を、以下の表９に従って行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、本明細書の二本鎖構造に記載される改変配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基を含む標的化リガンド（三座リガンド）にセンス鎖の５’末端でコンジュゲートされた改変ヌクレオチドを含んだ（ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を収集し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上記の実施例３に記載の手順に従って決定した。実験からのデータを、以下の表１０に示し、平均ＳＥＡＰは、ＳＥＡＰの正規化された平均値を反映する。
投与群のそれぞれ（すなわち、群Ｂ〜Ｍ）におけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、全ての測定した時点で食塩水対照（群Ａ）と比較してＳＥＡＰの実質的な低下を示した。例えば、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４８１５は、５．０ｍｇ／ｋｇの単回注射後２２日目に、ＳＥＡＰの約９７．４％の低下（０．０２６）を示した。
（実施例５）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデル
ある特定の他のＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏでの効果を評価（ａｓｓｅｓｓ）および評価（ｅｖａｌｕａｔｅ）するために、ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスを購入し、使用した（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、００６９０７−Ｂ６；ＣＢＡ−Ｔｇ（ＡＰＯＣ３）３７０７Ｂｒｅｓ／Ｊ）。ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスに関して、血清中のヒトＡＰＯＣ３タンパク質レベルを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
正規化のために、ある時点での各動物のＡＰＯＣ３レベルを、その動物における処置前の発現レベルで除算し、「投与前に対して正規化した」発現比を決定した。本明細書に報告した一部の実施例では、次いで個々の動物に関する「投与前に対して正規化した」比を、ビヒクル対照群の全てのマウスの平均の「投与前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現もまた、ビヒクル対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
ＡＰＯＣ３レベルを、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤の投与前および投与後の両方の様々な時間に測定してもよい。本明細書において別途指摘しない限り、マウスを２〜３％イソフルランによって麻酔し、顎下領域から血液試料を血清分離チューブに収集した（Ｓａｒｓｔｅｄｔ ＡＧ＆Ｃｏ．、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。血液を周囲温度で２０分間凝固させた。チューブを８，０００×ｇで３分間遠心分離し、血清を分離して４℃で保存した。
（実施例６）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
上記の実施例５に記載のＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデルを使用した。１日目に、各マウスに、以下の表１１に示す投薬群を含む、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）に溶解したそれぞれのＲＮＡｉ剤または対照（Ｄ５Ｗ）の２００μｌの単回皮下投与を行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれを、本明細書に記載の改変配列およびＮＡＧ構造を有する、３つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンド（すなわち、三座ＮＡＧリガンド）にコンジュゲートした（実施例６で使用したＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。−１日目（４時間絶食後の投与前採血）を含む８、１５、２２、および２９日目にマウスから血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。ＡＰＯＣ３発現レベルを、上記の実施例５に記載の手順に従って決定した。データを、以下の表１２に示し、平均ＡＰＯＣ３は、血清中で発現されたＡＰＯＣ３タンパク質の正規化された平均値を反映する。
投与群のそれぞれ（すなわち、群Ｂ〜Ｍ）におけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、測定した時点で対照（群Ａ）と比較してＡＰＯＣ３の低下を示した。例えば、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２３は、１日目の単回２．０ｍｇ／ｋｇ用量後、１５日目に約９４％の低下（０．０６２）を示した。
（実施例７）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
上記の実施例５に記載のＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデルを使用した。１日目に、各マウスに、以下の表１３に示す投薬群に従って、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）に溶解したそれぞれのＲＮＡｉ剤または対照（Ｄ５Ｗ）の２００μｌの単回皮下投与を行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、本明細書の二本鎖構造に記載される改変配列を有する、３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基を含む標的化リガンド（三座リガンド）にセンス鎖の５’末端でコンジュゲートされた改変ヌクレオチドを含んだ（ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。−１日目（４時間絶食後の投与前採血）を含む８、１５、２２、および２９日目にマウスから血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。ＡＰＯＣ３発現レベルを、上記の実施例５に記載の手順に従って決定した。実験の８日目のデータを、以下の表１４に示し、平均ＡＰＯＣ３は、血清中で発現されたＡＰＯＣ３タンパク質の正規化された平均値を反映する。
投薬群（すなわち、群２〜１１）のそれぞれにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、８日目および１５日目で対照（群１）と比較してＡＰＯＣ３タンパク質レベルの低下を示した。特に、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２５１およびＡＤ０５１６９（それぞれが、ＡＰＯＣ３遺伝子（すなわち、配列番号１）の４３８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を有する）、ならびにＡＰＯＣ３ ＲＮＡ剤ＡＤ０５２２０（ＡＰＯＣ３遺伝子の５０６位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を有する）は特に強力な阻害効果を示した（例えば、上記の表１４の群４、７、および１１を参照されたい）。
（実施例８）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
上記の実施例５に記載のＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデルを使用した。１日目に、各マウスに、以下の表１３に示す投薬群に従って、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）に溶解したそれぞれのＲＮＡｉ剤または対照（Ｄ５Ｗ）の２００μｌの単回皮下投与を行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、本明細書の二本鎖構造に記載される改変配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基を含む標的化リガンド（三座リガンド）にセンス鎖の５’末端でコンジュゲートされた改変ヌクレオチドを含んだ（ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験したが（ｎ＝３）、例外として群１（Ｄ５Ｗビヒクル）では４匹のマウスを試験した（ｎ＝４）。−１日目（４時間絶食後の投与前採血）、８、および１５、２２、および２９日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。ＡＰＯＣ３発現レベルを、上記の実施例５に記載の手順に従って決定した。血清中のトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および総コレステロールもまた、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
各動物のＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＰＯＣ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、ビヒクル対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をビヒクル対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。実験のデータを以下の表１６〜２０に示す。
投薬群（すなわち、群２〜１６）のそれぞれにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、対照（群１）と比較してＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、およびＬＤＬレベルの低下を示した。例えば、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２５１の単回０．５ｍｇ／ｋｇ用量（群７）は、２２日目でＡＰＯＣ３タンパク質レベルの約８６％低下（０．１３８）、トリグリセリドレベルの約７０％低下（０．２９４）、総コレステロールレベルの約４７％低下（０．５３３）、およびＬＤＬレベルの約３１％低下（０．６８８）を示した。さらに、予想されたように、ＡＤ０５２５１の投与は、２２日目でＨＤＬレベルの増加を示した（例えば、上記の表１９を参照されたい）。
（実施例９）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ用量反応試験
上記の実施例５に記載のＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデルを使用した。１日目に、各マウスに、以下の表２１に示す投薬群に従って、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）に溶解したそれぞれのＲＮＡｉ剤または対照（Ｄ５Ｗ）の２００μｌの単回皮下投与を行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基を含む標的化リガンド（三座リガンド）にセンス鎖の５’末端でコンジュゲートされた改変ヌクレオチドを含んだ（ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群４匹のマウスを試験した。−１日目（４時間絶食後の投与前採血）、ならびに８、１５、２２、２９、および３６日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＰＯＣ３発現レベル、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および総コレステロールを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
各動物のＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＰＯＣ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「投与前に対して正規化した」発現比を決定した。実験からのデータを以下の表２２〜２６に示す。
試験したＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、ＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、およびＬＤＬレベルの低下に関して用量反応を示した。
（実施例１０）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ用量反応試験
上記の実施例５に記載のＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデルを使用した。１日目に、各マウスに、以下の表２７に示す投薬群に従って、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）に溶解したそれぞれのＲＮＡｉ剤または対照ビヒクル（Ｄ５Ｗ）の２００μｌの単回皮下投与を行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、本明細書の二本鎖構造に記載される改変配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基を含む標的化リガンド（三座リガンド）にセンス鎖の５’末端でコンジュゲートされた改変ヌクレオチドを含んだ（ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
実施例１０で試験したＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３遺伝子（すなわち、配列番号１）上の異なる位置を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含んだ。より具体的には、群２〜４（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８９１、ＡＤ０５８９２、およびＡＤ０５８９３）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の２４８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群５（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８９４）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の２６３位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群６〜７（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８９５およびＡＤ０５８９６）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の４２２位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群８（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８９７）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の２４６位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群９〜１０（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８８９およびＡＤ０５８９０）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の１６８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；および群１１〜２２（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６、ＡＤ０５８７７、ＡＤ０５８７８、ＡＤ０５８７８、ＡＤ０５８８０、ＡＤ０５８８２、ＡＤ０５８８４、ＡＤ０５８８５、ＡＤ０５８８６、ＡＤ０５８８７、ＡＤ０５８８８、およびＡＤ０５７６９）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の４３８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。−１日目（４時間絶食後の投与前採血）、および８、１５日目に血清を収集した。比較的高い阻害活性を示したある特定のＲＮＡｉ剤を投与したマウス、およびビヒクル対照を投与したマウスに関して、２２および２９日目にさらなる血清試料を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＰＯＣ３発現レベル、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および総コレステロールを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
各動物のＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＰＯＣ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「投与前に対して正規化した」発現比を決定した。実験からのデータを以下の表２８〜３２に示す。
上記の表２８〜３２に示すように、群２〜１０のＲＮＡｉ剤（すなわち、２４８、２６３、４２２、２４６、および１６８位でＡＰＯＣ３遺伝子を標的とするように設計されたアンチセンス鎖を有するＲＮＡｉ剤）は、特に、全てがＡＰＯＣ３遺伝子の４３８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む群１１〜２２のＲＮＡｉ剤と比較すると、比較的限定的な阻害効果を示した。さらに、ＡＰＯＣ３遺伝子の４３８位を標的とする配列を含むそれらのＲＮＡｉ剤の中で、群１１（ＡＤ０５８７６）および群２２（ＡＤ０５７６９）は、ＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリド、および総コレステロールレベルに関して最高レベルの阻害効果を示した。
（実施例１１）
ＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
上記の実施例５に記載のＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスモデルを使用した。１日目に、各マウスに、以下の表３３に示す投薬群に従って、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）に溶解したそれぞれのＲＮＡｉ剤または対照ビヒクル（Ｄ５Ｗ）の２００μｌの単回皮下投与を行った。
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、本明細書の二本鎖構造に記載される改変配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基を含む標的化リガンド（三座リガンド）にセンス鎖の５’末端でコンジュゲートされた改変ヌクレオチドを含んだ（ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤に関する特定の改変および構造情報に関しては、表４、５、６、および７を参照されたい）。
実施例１１で試験したＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤は、ＡＰＯＣ３遺伝子（すなわち、配列番号１）上の異なる位置を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含んだ。より具体的には、群２（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２６０）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の５８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群３（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２１）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の２４６位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群４〜７（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２３、ＡＤ０５２９９、ＡＤ０５２８３、およびＡＤ０５２８４）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の４３２位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群８〜１２（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１６７、ＡＤ０５１６８、ＡＤ０５１７１、ＡＤ０５２５８、およびＡＤ０５２５９）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の４３４位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；群１３〜１５（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５１６９、ＡＤ０５２３９、およびＡＤ０５２５１）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の４３８位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ；および群１６（すなわち、ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５２２０）は、ＡＰＯＣ３遺伝子の５０６位を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列を含んだ。
首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。−１日目（４時間絶食後の投与前採血）、および８、１５日目に血清を収集した。比較的高い阻害活性を示したある特定のＲＮＡｉ剤を投与したマウス、およびビヒクル対照を投与したマウスに関して、２２および２９日目にさらなる血清試料を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＰＯＣ３発現レベル、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および総コレステロールを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
各動物のＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＰＯＣ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「投与前に対して正規化した」発現比を決定した。実験からのデータを以下の表３４〜３８に示す。
（実施例１２）
カニクイザルにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（本明細書において「ｃｙｎｏｓ」とも呼ばれる）に、食塩水中で製剤化した３．０ｍｇ／ｋｇのＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６を含有する０．３ｍＬ／ｋｇ（容積約２〜３ｍＬ、動物の体重に応じて）の単回皮下注射液を投与した。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６は、表４、５、６、および７に示すように、改変ヌクレオチドおよびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされた三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ）を含んだ。
２匹のカニクイザルを試験した（ｎ＝２）。−８（投与前）、２９、および５０日目に、肝生検を採取した。サルの１匹に関しては、１５日目に追加の肝生検試料を採取した。
それぞれの生検の収集日に、サルを麻酔し、超音波誘導肝生検を実施して、約１ｍｍ×４ｍｍサイズの肝組織試料２個または３個を摘出した。次いで、生検試料をホモジナイズし、カニクイザルの肝臓におけるＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡレベルをＲＴ−ｑＰＣＲによって測定した。次いで、得られた値を投与前（この場合、−８日目）のＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡ測定値に対して正規化した。得られたｍＲＮＡデータを、以下の表３９および４０に反映する。
ＡＤ０５８７６を投与したカニクイザルはいずれも、全ての測定した時点で処置前の測定値と比較して肝臓特異的ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの有意な低下を示した。２９日目に、例えば第１のカニクイザルは、ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの約８７．５％の低下（０．１２５）を有したが、第２のカニクイザルは、投与前レベルと比較して約８８．８％の低下（０．１１２）を有した。
（実施例１３）
高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）飼料を与えたアカゲザルにおけるＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験
ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６を、高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）飼料を与えたアカゲザルにおいてさらに評価した。アカゲザルに、投薬前３７日間ＨＦＣＳ飼料を与えた。これらの動物は、ＨＦＣＳ飼料によって１８０ｍｇ／ｄＬより多くの血漿中トリグリセリドの増加を生じることが公知であった。１日目および再度２９日目に、４匹のアカゲザルに、食塩水中で製剤化した４．０ｍｇ／ｋｇのＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６を含有する皮下注射液を投与した（ｎ＝４）。さらに２匹のアカゲザルに通常の食塩水対照を投与した。ＡＰＯＣ３ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８７６は、表４、５、６、および７に示すように、改変ヌクレオチドを含有し、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んだ。
飼料を与えたおよび絶食時の血液試料の両方を分析のために採取し、絶食時血清試料を、−８（投与前）、８、および１５日目に分析した。各収集前、サルを一晩絶食させた。血清中のＡＰＯＣ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
各動物のＡＰＯＣ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＰＯＣ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−８日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表４１〜４５に示す。
４．０ｍｇ／ｋｇの投薬レベルのＡＤ０５８７６を投与したアカゲザルは、測定した時点のそれぞれで処置前の測定値と比較してＡＰＯＣ３タンパク質の低下を示した。さらに、トリグリセリドレベルおよび総コレステロールレベルの両方の実質的な低下もまた示される。例えば、１匹の動物では、トリグリセリドは２２日目で約８９％低下し、上記の表４２に示すように、平均トリグリセリドレベルは、２２日目に約６０％低下した（０．３９５）。さらに、平均ＨＤＬレベルは、２２日目に約４７％増加し（表４４（１．４６５）を参照されたい）、１匹の動物は、ＨＤＬレベルの２．２倍増加を有した。
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と共に説明してきたが、前記説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される、本発明の範囲を例示することを意図するものであり、それを限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (63)

  1. ＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
    表２、表３、または表４に提供される配列のいずれか１つと０または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖；および
    前記アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
    を含む、ＲＮＡｉ剤。
  2. 前記アンチセンス鎖が、表２、表３、または表４に提供される配列のいずれか１つのヌクレオチド２〜１８を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  3. 前記センス鎖が、表２、表３、または表５に提供されるセンス鎖配列のいずれか１つと０または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖の１７個の連続するヌクレオチドにわたって少なくとも８５％の相補性の領域を有する、請求項１または請求項２に記載のＲＮＡｉ剤。
  4. 前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１個のヌクレオチドが、改変ヌクレオチドであるか、または改変ヌクレオシド間結合を含む、請求項１から３のいずれかに記載のＲＮＡｉ剤。
  5. 前記ＲＮＡｉ剤の前記センスおよび／またはアンチセンス鎖の前記ヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項１から３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  6. 前記改変ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体、ロックドヌクレオチド、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド、２’−メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、反転ヌクレオチド、反転２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、反転２’−デオキシヌクレオチド、２’−アミノ改変ヌクレオチド、２’−アルキル改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホン酸デオキシリボヌクレオチド、シクロプロピルホスホン酸デオキシリボヌクレオチド、および３’−Ｏ−メチルヌクレオチドからなる群から選択される、請求項４または５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  7. 前記改変ヌクレオチドの全部または実質的に全部が、２’−Ｏ−メチルヌクレオチドまたは２’−フルオロヌクレオチドのいずれかである、請求項５に記載のＲＮＡｉ剤。
  8. 前記アンチセンス鎖が、表３または表４に提供される改変アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  9. 前記アンチセンス鎖が、表４に提供される改変アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項８に記載のＲＮＡｉ剤。
  10. 前記センス鎖が、表３または表５に提供される改変センス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  11. 前記アンチセンス鎖が、表４に提供される改変配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、表５に提供される改変配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  12. 標的化リガンドに連結されている、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  13. 前記標的化リガンドが、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項１２に記載のＲＮＡｉ剤。
  14. 前記標的化リガンドが、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓからなる群から選択される構造を含む、請求項１２または請求項１３に記載のＲＮＡｉ剤。
  15. 前記標的化リガンドが、（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓの構造を含む、請求項１４に記載のＲＮＡｉ剤。
  16. 前記標的化リガンドが前記センス鎖にコンジュゲートされている、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  17. 前記標的化リガンドが、前記センス鎖の５’末端にコンジュゲートされている、請求項１６に記載のＲＮＡｉ剤。
  18. 前記センス鎖が、１８〜３０ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、１８〜３０ヌクレオチド長である、請求項１から１７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  19. 前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、それぞれ１８〜２７ヌクレオチド長である、請求項１８に記載のＲＮＡｉ剤。
  20. 前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、それぞれ１８〜２４ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のＲＮＡｉ剤。
  21. 前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、それぞれ２１ヌクレオチド長である、請求項２０に記載のＲＮＡｉ剤。
  22. ２個の平滑末端を有する、請求項２１に記載のＲＮＡｉ剤。
  23. 前記センス鎖が、１つまたは２つの末端キャップを含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  24. 前記センス鎖が、１つまたは２つの反転脱塩基残基を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  25. 表３または表６の二本鎖のいずれか１つの構造を有する二本鎖を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  26. 以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  27. 前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    （ここで、Ｉはイノシンヌクレオチドを表す）
    の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含む、請求項２６に記載のＲＮＡｉ剤。
  28. 前記アンチセンス鎖および前記センス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項２６または２７に記載のＲＮＡｉ剤。
  29. 前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端に反転脱塩基残基をさらに含む、請求項２６から２８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  30. 前記ＲＮＡｉ剤の前記センス鎖が標的化リガンドに連結されている、請求項２６から２９のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  31. 前記標的化リガンドが、アシアロ糖タンパク質受容体に対して親和性を有する、請求項３０に記載のＲＮＡｉ剤。
  32. 前記標的化リガンドが、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項３１に記載のＲＮＡｉ剤。
  33. 以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    （ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）
    の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列を含む、からなる、またはから本質的になるアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖上のヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  34. 前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    （ここで、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｉｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）
    の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列を含む、からなる、またはから本質的になる、請求項３３に記載のＲＮＡｉ剤。
  35. 前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端および／または５’末端に反転脱塩基残基をさらに含む、請求項３３または請求項３４に記載のＲＮＡｉ剤。
  36. 前記ＲＮＡｉ剤の前記センス鎖が、標的化リガンドに連結されている、請求項３３から３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  37. 前記標的化リガンドが、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する、請求項３６に記載のＲＮＡｉ剤。
  38. 前記標的化リガンドがＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項３７に記載のＲＮＡｉ剤。
  39. ＡＤ０５２５１（配列番号２および５０１）；ＡＤ０５８７６（配列番号４および５７２）；ＡＤ０５７６９（配列番号６および５５７）；ＡＤ０５１６９（配列番号２および４８２）；ＡＤ０５２２０（配列番号７および４９４）；ＡＤ０５５４７（配列番号７および５４５）；ＡＤ０５２９９（配列番号９および５２１）；ＡＤ０５２２３（配列番号１１および４９７）；およびＡＤ０５１７１（配列番号１３および４８３）からなる群から選択される二本鎖構造を有する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  40. ＡＤ０５２５１（配列番号２および５０１）およびＡＤ０５８７６（配列番号４および５７２）からなる群から選択される二本鎖構造を有する、請求項３９に記載のＲＮＡｉ剤。
  41. 薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項１から４０のいずれかに記載のＲＮＡｉ剤を含む組成物。
  42. 前記ＲＮＡｉ剤が標的化リガンドにコンジュゲートされている、請求項４１に記載の組成物。
  43. 前記標的化リガンドが、ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項４２に記載の組成物。
  44. 前記標的化リガンドが、表７の標的化リガンドから選択される、請求項４３に記載の組成物。
  45. ＡＰＯＣ３の発現を阻害するための第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項４１から４４のいずれか一項に記載の組成物。
  46. １つまたは複数のさらなる治療剤をさらに含む、請求項４１から４４のいずれか一項に記載の組成物。
  47. 細胞中でのＡＰＯＣ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞中に、請求項１から４０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物の有効量を導入するステップを含む、方法。
  48. 前記細胞が対象内にある、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記対象がヒト対象である、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記ＡＰＯＣ３遺伝子発現が少なくとも約３０％阻害される、請求項４７から４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. ＡＰＯＣ３関連疾患または障害を処置する方法であって、それを必要とするヒト対象に、治療有効量の請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
  52. 前記疾患が、心血管代謝疾患である、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記疾患が、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、高トリグリセリド血症誘発膵炎、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、家族性カイロミクロン血症症候群、または家族性部分型リポジストロフィーである、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ＲＮＡｉ剤が、約０．０５ｍｇ／ｋｇヒト対象体重〜約５．０ｍｇ／ｋｇヒト対象体重の用量で投与される、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記ＲＮＡｉ剤が、２つまたはそれより多い用量で投与される、請求項５１から５３のいずれかに記載の方法。
  56. 用量が、皮下注射によって投与される、請求項５１から５３のいずれかに記載の方法。
  57. 対象におけるトリグリセリドレベルを低下させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
  58. 対象におけるコレステロールレベルを低下させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
  59. 対象における低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルを低下させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
  60. ＡＰＯＣ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、または症状の処置のための、請求項１から４０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤の使用。
  61. ＡＰＯＣ３遺伝子発現、トリグリセリドレベルの上昇、またはコレステロールレベルの上昇によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、または症状の処置のための、請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  62. ＡＰＯＣ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、または症状の処置のための医薬の製造のための、請求項４１から４６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  63. 前記疾患が、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、高トリグリセリド血症誘発膵炎、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、家族性カイロミクロン血症症候群、または家族性部分型リポジストロフィーである、請求項６０から６３のいずれか一項に記載の使用。
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