JP2020531030A - Ｇｌｐ−２融合ポリペプチドならびに消化管の状態を処置および予防するための使用 - Google Patents

Ｇｌｐ−２融合ポリペプチドならびに消化管の状態を処置および予防するための使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2020531030A
JP2020531030A JP2020511529A JP2020511529A JP2020531030A JP 2020531030 A JP2020531030 A JP 2020531030A JP 2020511529 A JP2020511529 A JP 2020511529A JP 2020511529 A JP2020511529 A JP 2020511529A JP 2020531030 A JP2020531030 A JP 2020531030A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
glp
peptibody
seq
patient
administered
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2020511529A
Other languages
English (en)
Other versions
JP7249492B2 (ja
JP2020531030A5 (ja
Inventor
パン，クラーク
ノートン，アンジェラ
シュトラック−ローグ，ベッティーナ
スゥン，カァフォン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shire NPS Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
NPS Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by NPS Pharmaceuticals Inc filed Critical NPS Pharmaceuticals Inc
Publication of JP2020531030A publication Critical patent/JP2020531030A/ja
Publication of JP2020531030A5 publication Critical patent/JP2020531030A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7249492B2 publication Critical patent/JP7249492B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Abstract

ＧＬＰ−２と免疫グロブリンのＦｃ領域との融合タンパク質が記載されている。ＧＬＰ−２とＦｃ領域は、アミノ酸から構成されるリンカーによって分離されている。融合タンパク質は、体内でＧＬＰ−２そのものよりも長時間存続しかつ活性であり続ける。融合タンパク質を使用して、腸管皮膚瘻、消化管に対する放射線障害、閉塞性黄疸、および短腸症候群を処置および予防する方法が開示されている。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、各々の開示が全体として参照により本明細書に援用される２０１７年８月２２日出願の米国仮出願第６２／５４８，６０１号、２０１８年１月２４日出願の米国仮出願第６２／６２１，１４４号、および２０１８年４月１８日出願の米国仮出願第６２／６５９，３９４号に基づく優先権を主張する。
哺乳動物ＧＬＰ−２融合ポリペプチドおよびタンパク質、ならびに治療薬としてのこれらの使用が開示されている。
プログルカゴンの翻訳後プロセシングは、３３アミノ酸の腸栄養性（Intestinotrophic）ペプチドホルモンであるグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）を生じる。ＧＬＰ−２は、胃内容排出を遅延させ、胃液分泌を低減し、腸血流を増大させるように作用する。ＧＬＰ−２はまた、粘膜上皮の表面積を増大させるように、少なくとも陰窩細胞の増殖および絨毛の長さを増強することによって、大腸および小腸の成長も刺激する。
これらの作用は、ＧＬＰ−２を使用して広範な様々な消化管の状態を処置することができることを示唆している。小腸におけるＧＬＰ−２の実証された具体的かつ有益な作用によって、腸の疾患または損傷の処置におけるＧＬＰ−２の使用に関してより関心が高まっている（非特許文献１）。さらに、ＧＬＰ−２は、化学療法誘発性粘膜炎、虚血再灌流傷害、デキストラン硫酸塩誘発性大腸炎、および炎症性腸疾患の遺伝モデルを含む、腸損傷の多数の前臨床モデルにおいて粘膜上皮損傷を予防または軽減することが示されている（非特許文献１）。
しかしながら、ＧＬＰ−２そのものをヒト患者に投与することは、見込みを示していない。ＧＬＰ−２は半減期が短く、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）によるＧＬＰ−２の迅速なインビボ切断により本質的に不活性なペプチドが生成されるため、治療薬としてのその使用が制限される。ＧＬＰ−２治療薬であるテデュグルチドは、アラニン−２のグリシンでの置換により、半減期が実質的に延長されている。しかしながら、テデュグルチドの半減期は、健常患者でおよそ２時間、ＳＢＳ患者では１．３時間であるため、毎日の投薬が必要とされる。
テデュグルチドは、クローン病、腸間膜梗塞、捻転、外傷、先天性奇形、および癒着または放射線による複数の狭窄などの状態のための小腸の一部または大部分の外科的切除の結果として通常生じる短腸症候群（ＳＢＳ）の処置において、治療上の見込みを示している。外科的切除には、結腸全体または一部の切除も含まれ得る。ＳＢＳ患者は、栄養不良、脱水および体重減少をもたらし得るさまざまな栄養素（例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水）の吸収不全に苦しんでいる。一部の患者は、過食によりタンパク質とエネルギーのバランスを維持できるが、患者が水分と電解質の要件を維持して非経口輸液から独立できることは非常に稀である。
ＧＬＰ−２は、胃分泌物が瘻を介して皮膚へと小腸を迂回する状態である腸管皮膚瘻（ＥＣＦ）を患う患者の処置において見込みを示す可能性がある（非特許文献２）。ＥＣＦは、クローン病および腹腔内がんから、またはクローン病もしくは放射線療法に由来する合併症として自然に発症する可能性がある。ＥＣＦは、少なくとも感染、水分喪失、および栄養不良のため、罹病率および死亡率が高い。
ＤＤＰ−ＩＶ耐性ＧＬＰ−２類似体は、放射線誘発性アポトーシスの低減に見込みを示した（非特許文献３）。放射線誘発性小腸粘膜障害でアポトーシスが生じる。マウスにおいて、ＧＬＰ−２はまた、放射線後のＣＣＤ−１８Ｃｏ細胞の生存も促進し、放射線誘発性消化管（ＧＩ）毒性に対して保護し、放射線誘発性炎症反応を下方調節し、放射線照射後の腸に対する構造的損傷を低減させた。
ＧＬＰ−２はまた、腸管バリア機能が損傷された状態である閉塞性黄疸の患者の処置においても見込みを示し得る（非特許文献４）。ラットにおいて、ＧＬＰ−２は、血清ビリルビンのレベルを低下させ、腸粘膜に対する構造的損傷を防いだ。
Ｓｉｎｃｌａｉｒ ａｎｄ Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２００５：３５７−６５ Ａｒｅｂｉ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｏｌｏｎ Ｒｅｃｔａｌ Ｓｕｒｇ．，Ｍａｙ ２００４，１７（２）：８９−９８ Ｇｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０１７ Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１５，２１（２）：４８４−４９０
ＳＢＳ、ＥＣＦ、および放射線障害または閉塞性黄疸から生じる病状を含む、消化管の状態を処置するために、ＧＬＰ−２の改善された形態を開発する必要性がある。改善された形態は、より少ない投薬頻度が必要とされるように、体内でより長い期間活性を維持する。
ＧＬＰ−２ペプチボディを本明細書に記載する。このペプチボディは概して、ＧＬＰ−２とＦｃ領域またはアルブミンのいずれかとの融合タンパク質である。薬物動態データは、ＧＬＰ−２ペプチボディが、ＧＬＰ−２またはテデュグルチドもしくはＧａｔｔｅｘよりも長く体内で存続できることを示唆している。
一態様において、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−２）ペプチボディであって、
ａ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｂ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｃ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｄ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｅ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｆ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｇ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｈ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、またはその薬学的に許容される塩、
ｉ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｊ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、および
ｋ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
から選択されるＧＬＰ−２ペプチボディ、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
上記の態様において、上記配列（配列番号１、７、１３、１６、１９、２２および２５）のうちのいずれかは、Ｃ末端にリジン（Ｋ）をさらに含むことができる。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、ＧＬＰ−２とＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のうちのいずれかのＦｃ領域との間のリンカーと共に、ＧＬＰ−２と直接連結したシグナルペプチドを含む、ＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドからプロセシングされる。このポリペプチド上のシグナルペプチドは、ＧＬＰ−２ペプチボディを産生するのに使用される哺乳動物宿主細胞からのＧＬＰ−２ペプチボディの分泌を促進することができ、シグナルペプチドは分泌後にＧＬＰ−２ペプチボディから切断される。任意の数のシグナルペプチドを使用することができる。このシグナルペプチドは、次の配列：ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ：を有することができる。
一部の実施形態において、シグナルペプチドを含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドは、
ａ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｂ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｃ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｄ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｅ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｆ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｇ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｈ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩、
ｉ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
ｊ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、および
ｋ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
あるいはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
上記のＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド配列（配列番号２、８、１４、１７、２０、２３および２６）のうちのいずれも、Ｃ末端にリジン（Ｋ）をさらに含むことができる。
Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ突然変異を有するＩｇＧ１であってもよい。シグナルペプチドを含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドは、次式を有することができる：
シグナルペプチド−ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］−リンカー−ＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）
一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、担体またはその薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、注射または注入による投与に適した液体として製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディの持続放出(sustained release)、延長放出（extended release）、遅延放出(delayed release)または徐放(slow release)のために製剤化される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度で投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号２８または配列番号３０のアミノ酸配列を含み、１０〜１０００ｍｇ／ｍＬまたは５０〜５００ｍｇ／ｍＬの濃度で投与される。
別の態様において、本明細書に記載のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列を含むポリヌクレオチドを提供する。この配列は、配列番号３、９、１５、１８、２１、２４または２７に示される配列であってよい。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列を含む。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号３の配列を含む。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列を含む。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号９の配列を含む。一部の実施形態において、本明細書に開示するポリヌクレオチドのうちのいずれかを含むベクターを提供する。このベクターにおいて、ポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されていてよい。
別の態様において、ポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。一部の実施形態において、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は、ＧＬＰ−２ペプチボディを、流加回分細胞培養規模に十分なレベルで発現する。
別の態様において、腸管皮膚瘻（ＥＣＦ）患者を処置するための方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを用いて、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディで前記ＥＣＦ患者を処置することを含む方法を提供する。ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与または静脈内投与され得る。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、この方法は、前記患者による腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者における胃分泌の量を低減するのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、３週間に１回または１か月に１回、維持目的などのために投与され得る。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０の投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様において、閉塞性黄疸患者を処置するための方法であって、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、血清ビリルビンのレベルは、該処置の前の血清ビリルビンのレベルと比較して低減している。一部の実施形態において、血清ビリルビンのレベルは、該処置の前の血清ビリルビンのレベルと比較して低減している。一部の実施形態において、この方法は、前記患者による腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者における胃分泌の量を低減するのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化（crypt organization）を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、前記患者における腸管バリア機能を改善し、前記患者の小腸を横切るバクテリアルトランスロケーションの発生率（the rate of bacteria translocation）を低減するのに有効である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０の投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０の投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様において、本発明は、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１あるいは配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディを投与することを含む、消化管（gastrointestinal tract）に対する放射線障害および／またはその影響を処置し、改善し、あるいは放射線障害および／またはその影響から保護するための方法を提供する。投薬レジメンは、患者の消化管に対する放射線障害を処置するまたは予防するのに有効である。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは配列番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、放射線障害は小腸におけるものである。一部の実施形態において、この方法は、消化管の細胞におけるアポトーシスを低減するのに有効である。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、患者を放射線または放射線療法で処置する前、間、または後に投与してよい。
一部の実施形態において、この方法は、消化管の細胞におけるアポトーシスを低減するのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者における腸管バリア機能を改善するのに有効である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、または０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様において、本発明は、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディを投与することを含む、消化管に対する放射線誘発性腸炎、および／またはその影響を処置し、改善し、または予防するための方法を提供する。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、この方法は、消化管の細胞におけるアポトーシスを低減するのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者における腸管バリア機能を改善するのに有効である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの、または週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの、または週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様において、残存小腸とつながった結腸を呈する短腸症候群の患者を処置するための方法であって、短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、残存小腸は長さが少なくとも２５ｃｍである。一部の実施形態において、残存小腸は長さが少なくとも５０ｃｍである。一部の実施形態において、残存小腸は長さが少なくとも７５ｃｍである。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、残存小腸とつながった少なくとも２５％の結腸を呈する短腸症候群患者における腸管吸収を高めるための薬剤として投与される。
一部の実施形態において、この方法は、前記患者における腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、前記患者における腸管バリア機能を改善するのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、糞便湿重量を低下させ、尿湿重量を増大させ、小腸を横切るエネルギー吸収を増大させ、および／または小腸を横切る水の吸収を増大させるのに有効である。エネルギー吸収には、ポリペプチド、アミノ酸、炭水化物および脂肪酸のうちの１つ以上の吸収増大を含むことができる。一部の実施形態において、患者は、非経口栄養に依存している。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの、または週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、７〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの、または週に１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、配列番号１または７のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
本明細書に記載の態様および実施形態のいずれかにおいて、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下または静脈内に投与されてもよい。配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜１４日ごとに、５〜８日ごとに、または毎週（ＱＷ）１回、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３〜０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．２〜１．８ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、１．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与されてもよい。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、毎週（ＱＷ）または２週ごとに、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与されてもよい。
あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、３週ごとにまたは１か月ごとに、維持目的などのために、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸を含む）は、５〜８日ごとに、または毎週（ＱＷ）、維持目的などのために、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与されてもよい配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜２００ｍｇ／ｍＬ、１０〜１８０ｍｇ／ｍＬ、２０〜１６０ｍｇ／ｍＬ、２５〜１５０ｍｇ／ｍＬ、３０〜１２５ｍｇ／ｍＬ、５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ、１５〜２５ｍｇ／ｍＬ、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与されてもよい。
配列番号１のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付されており、リンカーは太字である。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列が、ＧＬＰ−２配列に続いている。ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号１のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号２のアミノ酸配列を示す。 配列番号２のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号３のヌクレオチド配列を示す。 配列番号３のヌクレオチドおよび配列番号２のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号４のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付されており、リンカーは太字である。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列が、ＧＬＰ−２配列に続いている。ＧＬＰ−２ペプチボディＢは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号４のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号５のアミノ酸配列を示す。 配列番号５のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号６のヌクレオチド配列を示す。 配列番号６のヌクレオチド配列および配列番号５のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号７のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付されており、リンカーは太字である。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列が、ＧＬＰ−２配列に続いている。ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号７のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号８のアミノ酸配列を示す。 配列番号８のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号９のヌクレオチド配列を示す。 配列番号９のヌクレオチド配列および配列番号８のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号１０のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列が、ＧＬＰ−２配列に続いている。ＧＬＰ−２ペプチボディＫは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号１０のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号１１のアミノ酸配列を示す。 配列番号１１のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号１２のヌクレオチド配列を示す。 配列番号１２のヌクレオチド配列および配列番号１１のアミノ酸配列の両方を示す。 ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］とＩｇＧ１のＦｃ領域との間にリンカーがない配列番号１３のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されている。ＧＬＰ−２ペプチボディＡは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号１３のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号１４のアミノ酸配列を示す。 配列番号１４のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号１５のヌクレオチド配列を示す。 配列番号１５のヌクレオチド配列および配列番号１４のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号１６のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。ＧＬＰ−２ペプチボディＥは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号１６のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号１７のアミノ酸配列を示す。 配列番号１７のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号１８のヌクレオチド配列を示す。 配列番号１８のヌクレオチド配列および配列番号１７のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号１９のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。ＧＬＰ−２ペプチボディＪは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号１９のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号２０のアミノ酸配列を示す。 配列番号２０のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号２１のヌクレオチド配列を示す。 配列番号２１のヌクレオチド配列および配列番号２０のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号２２のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。ＧＬＰ−２ペプチボディＬは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号２２のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号２３のアミノ酸配列を示す。 配列番号２３のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号２４のヌクレオチド配列を示す。 配列番号２４のヌクレオチド配列および配列番号２３のアミノ酸配列の両方を示す。 配列番号２５のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。ＧＬＰ−２ペプチボディＭは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号２５に示されるアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号２６のアミノ酸配列を示す。 配列番号２５のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列番号２７のヌクレオチド配列を示す。 配列番号２７のヌクレオチド配列および配列番号２５のアミノ酸配列の両方を示す。 ＧＬＰ−２と、リンカーと、ヒト血清アルブミンのアミノ酸２５〜６０９との間の融合タンパク質である配列番号２８のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。ＧＬＰ−２ペプチボディＯは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号２８のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号２９のアミノ酸配列を示す。 ＧＬＰ−２と、ＧＬＰ−２配列でもあるリンカーと、ヒト血清アルブミンのアミノ酸２５〜６０９との間の融合タンパク質である配列番号３０のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ−２配列に下線が付されており、リンカーは太字である。ＧＬＰ−２ペプチボディＰは、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有する。 配列番号３０のアミノ酸配列のＮ末端に融合したシグナルペプチド配列を有する配列番号３１のアミノ酸配列を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４、Ｋ、およびＫ２７４のＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４、Ｋ、およびＫ２７４のＥＭ分析の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４、Ｋ、およびＫ２７４のＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４、Ｋ、およびＫ２７４のＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫの曲線下面積の解析を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫの曲線下面積の解析を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＫ２７４のマイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）分析の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディのモデルおよびナノ示差走査蛍光定量法（ＮａｎｏＤＳＦ）の下で蛍光を分析するトリプトファン残基を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢおよびＫのナノ示差走査蛍光定量法（ＮａｎｏＤＳＦ）分析の結果を示す ＧＬＰ−２ペプチボディＢおよびＫのナノ示差走査蛍光定量法（ＮａｎｏＤＳＦ）分析の結果を示す。 ＣＤ１マウスにおけるＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の薬物動態解析の予測および観察された結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫとＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との薬物動態パラメータの比較を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫとＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との薬物動態パラメータの比較を示す。 バイオマーカーとして分析されるシトルリンを用いた、カニクイザルにおけるテデュグルチド、ＧＬＰ−２ペプチボディＢおよびＧＬＰ−２ペプチボディＫの薬物動態試験の結果を示す。 バイオマーカーとして分析されるシトルリンを用いた、カニクイザルにおけるテデュグルチド、ＧＬＰ−２ペプチボディＢおよびＧＬＰ−２ペプチボディＫの薬物動態試験の結果を示す。 バイオマーカーとして分析されるシトルリンを用いた、カニクイザルにおけるテデュグルチド、ＧＬＰ−２ペプチボディＢおよびＧＬＰ−２ペプチボディＫの薬物動態試験の結果を示す。 エンドポイントとしての、小腸および結腸の重量が体重に対して正規化された、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の薬物動態平坦試験の結果を示す。 エンドポイントとしての、小腸および結腸の重量が体重に対して正規化された、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の薬物動態平坦試験の結果を示す。 エンドポイントとしての、小腸および結腸の重量が体重に対して正規化された、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の薬物動態平坦試験の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の投薬が終了した後の小腸重量の変化の持続性を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の投薬が終了した後の小腸重量の変化の持続性を示す。 ビヒクル単独と比較したときの、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４処理した小腸細胞の絨毛および陰窩における細胞成長のＫｉ６７マーカーの染色を示す。 投与されたＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の量に関する、Ｋｉ６７マーカー陽性を測定した用量応答およびウォッシュアウト実験を示す。 絨毛長に及ぼすＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長に及ぼすＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長に及ぼすＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の組織学的検査の結果を示す。 ビヒクル処理およびＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］処理した小腸細胞の絨毛および陰窩における細胞成長のＫｉ６７マーカーアッセイの結果を示す。 ビヒクル処理およびＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］処理した小腸細胞の絨毛および陰窩における細胞成長のＫｉ６７マーカーアッセイの結果を示す。 ビヒクル処理およびＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］処理した小腸細胞の絨毛および陰窩における細胞成長のＫｉ６７マーカーアッセイの結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の効果の組織学的検査の結果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の投与後の小腸重量の効果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の投与後の小腸重量の効果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の投与後の小腸重量の効果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の投与後の小腸重量の効果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の投与後の小腸重量の効果を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の両方についての小腸重量における相対的な変化を示す。 図１７Ａは、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］処理した細胞と比較したときの、ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４処理した小腸細胞の絨毛および陰窩における細胞成長のＫｉ６７マーカーの染色を示す。 は、投与されるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の量に関する、Ｋｉ６７マーカー陽性を測定する用量応答およびウォッシュアウト実験を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の各々の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の各々の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の各々の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の各々の効果の組織学的検査の結果を示す。 絨毛長および陰窩の深さに及ぼすＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の各々の効果の組織学的検査の結果を示す。 様々な用量でのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との絨毛長の比較を示す。 投薬レジメンが終了した後のウォッシュアウト中の様々な時点におけるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との絨毛長の比較を示す。ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４は、ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４よりも持続性を呈する。 １４日間の３日ごとの投薬レジメンにわたるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との比較を示す。 マウスにおけるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４に関する薬物動態データの要約を示す。 様々な用量におけるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との絨毛長の比較を示す。 様々な濃度におけるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との絨毛長の比較を示す。 様々な用量における小腸重量に及ぼすＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との比較を示す。 様々な用量における小腸重量に及ぼすＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との比較を示す。 ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４を投与したマウスおよびオリーブ油ボーラスを負荷したマウスにおけるトリグリセリド耐性試験の結果を示す。ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４は、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４で処置していないマウスと比較して、そのように処置したマウスの血流中の有意に高い食後トリグリセリド濃度によって示されるように、オリーブ油中の脂肪酸の吸収を改善した。
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって普通理解されるのと同じ意味を有する。以下の用語および他の用語についてのさらなる定義は、本明細書の至るところで明らかにされている。
「ａ、」「ａｎ、」および「ｔｈｅ」という用語は、量の限定を示すのではなく、むしろ、参照項目の「少なく１つ」の存在を示す。
本出願で使用する場合、「約」および「およそ」という用語は、等価物として使用される。約／およそのついているまたはついていない、本出願において使用されるいかなる数字も、関連する技術分野の当業者によって認識される任意の通常のゆらぎを網羅するよう表される。本明細書で使用する場合、関心対象の１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記述される参照値と類似している値を指す。特定の実施形態において、「およそ」または「約」という用語は、別段に記載されていないかまたは別段に文脈から明白ではない限り、記載された参照値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）で２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満の範囲内に収まる値の範囲を指す（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用する場合、「担体」および「希釈剤」という用語は、薬学的製剤の調製に有用な薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与にとって安全かつ非毒性である）担体または希釈物質を指す。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝塩類溶液）、滅菌塩類溶液、リンガー液またはデキストロース溶液が挙げられる。
本明細書で使用する場合、「融合タンパク質」または「キメラタンパク質」という用語は、２つ以上の本来別個のタンパク質、またはその部分の接合を経て作製されたタンパク質を指す。一部の実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、各タンパク質の間に存在することになる。
本明細書で使用する場合、「半減期」という用語は、タンパク質の濃度または活性などの量が、期間の開始時に測定される値の半分に低下するのに必要な時間である。
「ＧＬＰ−２ペプチボディ」、「ＧＬＰ−２ペプチボディ部分」、または「ＧＬＰ−２ペプチボディ断片」および／または「ＧＬＰ−２ペプチボディ変異体」などは、少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチドのインビトロ、インサイチュ、および／または好ましくはインビボでのリガンド結合などであるがこれらに限定されない少なくとも１つの生物活性を有する、模倣する、またはシミュレートすることができる。例えば、適切なＧＬＰ−２ペプチボディ、特定部分、または変異体はまた、少なくとも１つのＧＬＰ−２受容体シグナル伝達または他の測定可能なもしくは検出可能な活性を調節、増大、修正、活性化することができる。ＧＬＰ−２ペプチボディは、例えばＧＬＰ−２受容体などのタンパク質リガンドへの適切な親和性−結合を有することができ、場合により、低い毒性を有することができる。ＧＬＰ−２ペプチボディは、優れた症状軽減および低い毒性により、長期間患者を処置するために使用することができる。
本明細書で使用する場合、「改善する」、「増大する」もしくは「低減する」という用語、または文法上の等価物は、本明細書に記載の処置の開始前の同じ個体における測定、または本明細書に記載の処置を受けない対照対象（または複数の対照対象）における測定など、ベースライン測定に対する値を示す。「対照対象」とは、処置中の対象とほぼ同じ年齢である、処置中の対象と同じ形態の疾患を患う対象である。
本明細書で使用する場合、「インビトロ」は、多細胞生物内ではなく、人工的な環境、例えば、試験管または反応容器内、細胞培養などにおいて生じる事象を指す。
本明細書で使用する場合、「インビボ」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物などの多細胞生物内で生じる事象を指す。細胞に基づく系の文脈で、この用語は、生細胞内で生じる事象を指すために使用されてもよい（例えば、インビトロの系とは対照的に）。
本明細書で使用する場合、「リンカー」という用語は、融合タンパク質において、天然タンパク質における特定の位置に出現するアミノ酸配列以外のアミノ酸配列を指し、一般に、柔軟性を有するように、または２つのタンパク質間にαヘリックスなどの構造を挿入するように設計される。リンカーはスペーサーとも称される。リンカーまたはスペーサーは、典型的にはそれ自体では生物機能を有さない。
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という語句は、一般に生理学的に許容可能とみなされる分子実体および組成物を指す。
本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して互いに結合したアミノ酸の連続鎖を指す。この用語は、任意の長さのアミノ酸を指すために使用されるが、当業者は、この用語が、長い鎖に限定されず、ペプチド結合を介して互いに結合した２つのアミノ酸を含む最小の鎖を指すことができることを理解するであろう。当業者に知られているように、ポリペプチドは、プロセシングを受けたりおよび／または修飾されてもよい。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」および「ペプチド」という用語は、相互交換可能に使用される。「ポリペプチド」という用語は、タンパク質を指すこともできる。
本明細書で使用する場合、「予防する」または「予防」という用語は、疾患、障害、および／または状態の発生と関連して使用されるとき、その疾患、障害、および／または状態を発症するリスクを低減することを指す。「リスク」の定義を参照されたい。
本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長類）を指す。ヒトには、出生前および出生後の形態が含まれる。多くの実施形態において、対象はヒトである。対象は患者であってよく、患者とは、疾患の診断または処置のために医療提供者に対して提示されるヒトを指す。「対象」という用語は、本明細書で「個体」または「患者」と相互交換可能に使用される。対象は、疾患または障害を患っている可能性があるまたは罹患しやすいが、疾患または障害の症状を示していてもまたは示していなくてもよい。
本明細書で使用する場合、「実質的に」という用語は、関心対象の特徴または特性の全部またはほぼ全部の程度または度合いを示す定性的な状態を指す。生物学の分野の当業者は、生物学的現象および化学的現象が、完了に至るおよび／または完全に進む、または絶対的な結果を達成するもしくは回避することは、たとえあるとしても、めったにないことを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的現象および化学的現象に固有の潜在的な完全性の欠如を捕捉するために本明細書で使用される。
本明細書で使用する場合、治療薬の「治療有効量」という用語は、疾患、障害、および／または状態に罹患しているまたは罹患しやすい対象に投与した場合に、疾患、障害、および／または状態の症状（複数可）を処置し、診断し、予防し、および／またはその発症を遅延させるのに十分な量を意味する。治療有効量は、典型的には、少なくとも１つの単位用量を含む投薬レジメンを介して投与されることが、当業者によって認識されるであろう。
本明細書で使用する場合、「処置する(treat)」、「処置(treatment)」、あるいは「処置すること(treating)」という用語は、特定の疾患、障害、および／または状態の１つ以上の症状または特徴を部分的にあるいは完全に軽減、改善、緩和、抑制、予防し、その発症を遅延させ、その重症度を低減し、および／またはその発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。処置は、疾患に関連する病状を発症するリスクを低下させる目的のために、疾患の徴候を呈していないおよび／または疾患の初期の徴候のみを呈している対象に施してもよい。
本発明の様々な態様を以下のセクションで詳細に説明する。セクションの使用は、本発明を限定することを意図していない。各セクションは、本発明のあらゆる態様に適用することができる。
本発明に記載の様々なＧＬＰ−２ペプチボディは、ＧＬＰ−２配列とＦｃまたはＦｃ変異体配列との間にリンカーを含む。あるいは、ＦｃまたはＦｃ変異体配列の代わりにアルブミン配列を使用することができる。リンカーは、ペプチボディに代替的な配向および結合特性を持たせることにより、構造的柔軟性を提供する。リンカーは、好ましくは、ペプチド結合によって互いに結合したアミノ酸で構成される。これらアミノ酸のうちの一部は、当業者によく理解されているように、グリコシル化されていてもよい。アミノ酸は、グリシン、アラニン、セリン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、およびリジンから選択され得る。さらにより好ましくは、リンカーは、グリシン、セリン、およびアラニンなどの立体障害のないアミノ酸の大部分で構成されている。
ＧＬＰ−２配列は、Ｆｃドメインまたはアルブミンドメインに直接または間接的に結連結されていてよい。一実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＧを有する（例えば、配列番号１の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
別の実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳを有する（例えば、配列番号７の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
別の実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡを有する（例えば、配列番号１６の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
別の実施形態において、リンカーは、配列ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰを有する（例えば、配列番号１９の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
別の実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＧＧＧを有する（例えば、配列番号２２の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
別の実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳを有する（例えば、配列番号２５の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
適切なリンカーまたはスペーサーには、上記の例示的リンカーと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上相同または同一であるアミノ酸配列を有するものも含まれる。一部の実施形態での使用に適したさらなるリンカーは、２０１２年３月２日出願の米国特許出願公開第２０１２／０２３２０２１号に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
様々な実施形態において、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］配列がＧＬＰ−２のために使用される。ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］配列では、アラニンの代わりに位置２にグリシンがある。
一実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは次式を有する：
ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］−リンカー−アルブミン（２５〜６０９）
リンカーは、配列ＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡを有する（例えば、配列番号２８の配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディにおいて）。
別の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは次式を有する：
（ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］）２−アルブミン（２５〜６０９）
一態様において、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−２）ペプチボディであって、
ａ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｂ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｃ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｄ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｅ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｆ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｇ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
ｈ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、および
ｋ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
から選択されるＧＬＰ−２ペプチボディを提供する。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との間の改善された結合が、血清半減期の延長をもたらすと考えられる。したがって、一部の実施形態において、適切なＦｃドメインは、ＦｃＲｎに対する改善された結合をもたらす１つ以上のアミノ酸突然変異を含む。ＦｃＲｎに対する改善された結合をもたらすＦｃドメイン内の様々な突然変異は、当技術分野で既知であり、本発明を実施するために適合させることができる。一部の実施形態において、適切なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、および／またはＡｓｎ４３４に対応する１つ以上の位置に１つ以上の突然変異を含む。
本発明のＧＬＰ−２ペプチボディは、半減期の延長、活性の増大、より特異的な活性、結合力の増大、解離速度の増大または低下、選択されたまたはより適切なサブセットの活性、より低い免疫原性、少なくとも１つの所望の治療効果の質または持続時間の増大、より低い副作用などのうちの少なくとも１つなどだがこれに限定されない、既知のタンパク質と比較して少なくとも１つの適切な特性を提供することができる。
典型的には、適切なＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、約２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、３８時間、４０時間、４２時間、４４時間、４６時間、または４８時間以上のインビボでの半減期を有する。一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、２〜４８時間、２〜４４時間、２〜４０時間、３〜３６時間、３〜３２時間、３〜２８時間、４〜２４時間、４〜２０時間、６〜１８時間、６〜１５時間、および６〜１２時間のインビボでの半減期を有する。
ＧＬＰ−２ペプチボディ、またはその特定部分もしくは変異体は、少なくとも１つの細胞株、混合細胞株、不死化細胞あるいは不死化細胞および／または培養細胞のクローン集団によって産生されてもよい。不死化したタンパク質産生細胞は、適切な方法を用いて作製することができる。好ましくは、少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディ、または特定部分もしくは変異体は、機能的に再配置されたまたは機能的再配置を受けることができかつ本明細書に記載のペプチボディ構造をさらに含む少なくとも１つのヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するまたは実質的に類似の配列を有するＤＮＡを含む、核酸またはベクターを提供することによって作製される。
ＧＬＰ−２ペプチボディは、広範囲の親和性（ＫＤ）でヒトタンパク質リガンドに結合することができる。好ましい実施形態において、本発明の少なくとも１つのヒトＧＬＰ−２ペプチボディは、任意選択で、高親和性で少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。例えば、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディは、約１０−７Ｍ以下のＫＤで、またはより好ましくは約０．１〜９．９（またはその中の任意の範囲もしくは値）×１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、もしくは１０−１３Ｍ、またはその中の任意の範囲もしくは値以下のＫＤで、少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。
少なくとも１つのタンパク質リガンドに対するＧＬＰ−２ペプチボディの親和性または結合力は、例えば、抗体−抗原結合親和性または結合力を決定するために使用されるような任意の適切な方法を用いて実験で決定することができる。（例えば、Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２））。特定のＧＬＰ−２ペプチボディ−リガンド相互作用の測定された親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度およびｐＨ）の下で測定される場合、変化する可能性がある。したがって、親和性および他のリガンド結合パラメータ（例えば、ＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくは、ＧＬＰ−２ペプチボディおよびリガンドの標準化された溶液、ならびに本明細書に説明するかまたは当技術分野で既知の緩衝液などの標準化された緩衝液を用いて行われる。
Ｃ末端にリジン（Ｋ）はあってもなくてもよい。配列番号１、７、１３、１６、１９、２２および２５のポリペプチド配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、Ｃ末端リジンを欠いている。特に、配列番号１および配列番号７のアミノ酸配列は、Ｃ末端リジンを欠いている。同時に、本明細書に記載の実施形態または態様のうちのいずれかにおいて、リジンをＣ末端に付加することができる。例えば、配列番号４および配列番号１０のアミノ酸配列は、Ｃ末端にリジンを有する。
本明細書に記載のいかなる実施形態または態様においても、ＧＬＰ−２ペプチボディは、ＧＬＰ−２と直接結合したシグナルペプチドを含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドからプロセシングされ、リンカーは、ＧＬＰ−２とＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のうちのいずれかのＦｃ領域との間にある。Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ突然変異を有するＩｇＧ１であり得る。ＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドは、次式を有し得る：
シグナルペプチド−ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］−リンカー−ＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）
ＬＡＬＡは、抗体におけるＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（ＥＵ番号付け）突然変異を指す。ＬＡＬＡ突然変異は、本明細書に開示する次のポリペプチド配列、例えば、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２および２５において存在する。ＬＡＬＡ突然変異は、Ｆｃγ−Ｒへの結合を大いに低減することができ、ＧＬＰ−２ペプチボディが望ましくない抗体エフェクター機能を生じることことを防ぐ。Ｌｅａｂｍａｎ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｌｔｅｒｅｄ Ｆｃ ｇａｍｍａＲ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙｓ”ｍＡｂｓ ５（６）：２０１３を参照されたい。
少なくとも１つのＧＬＰ−２の生物活性を部分的にまたは好ましくは実質的に提供するＧＬＰ−２ペプチボディ、またはその特定部分もしくは変異体は、ＧＬＰ−２リガンドに結合することができ、それにより、ＧＬＰ−２受容体などの少なくとも１つのリガンドへのＧＬＰ−２の結合により媒介される、または他のタンパク質依存性もしくはタンパク質仲介性の機序により媒介される少なくとも１つの活性を提供することができる。本明細書で使用する場合、「ＧＬＰ−２ペプチボディ活性」という用語は、アッセイに応じて、野生型ＧＬＰ−２ペプチドまたはＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］ペプチドと比較して約２０〜１０，０００％、好ましくは野生型ＧＬＰ−２ペプチドまたはＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］ペプチドと比較して、少なくとも約６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００％またはそれ以上、少なくとも１つのＧＬＰ−２依存性活性を調節または引き起こすことができるＧＬＰ−２ペプチボディを指す。
少なくとも１つのタンパク質依存性活性を提供するＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体の能力は、好ましくは、本明細書に記載のように、および／または当技術分野で既知のように、少なくとも１つの適切なタンパク質生物学的アッセイによって好ましく評価される。本発明のヒトＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体は、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭなど）またはアイソタイプに類似していてよく、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖の少なくとも一部を含むことができる。一実施形態において、ヒトＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体は、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のうちの少なくとも１つのＩｇＧ重鎖ＣＨ２およびＣＨ３を含む。
本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体は、少なくとも１つのリガンド、サブユニット、断片、部分またはこれらの任意の組合せに結合する。本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体の少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチド、変異体または誘導体は、任意選択で、リガンドの少なくとも１つの特定エピトープに結合することができる。結合エピトープは、ＧＬＰ−２受容体またはその部分などのタンパク質リガンドの配列の連続アミノ酸の特定部分全体に対し、少なくとも１〜３個のアミノ酸からなる少なくとも１つのアミノ酸配列の任意の組合せを含むことができる。
本発明はまた、本明細書に記載のアミノ酸配列と実質的に同じ配列のアミノ酸を含むペプチボディ、リガンド結合断片、および免疫グロブリン鎖に関する。好ましくは、このようなペプチボディまたはそのリガンド結合断片は、受容体などのヒトＧＬＰ−２リガンドに高親和性（例えば、約１０−７Ｍ以下のＫＤ）で結合することができる。本明細書に記載の配列と実質的に同じアミノ酸配列には、保存的アミノ酸置換、ならびにアミノ酸の欠失および／または挿入を含む配列が含まれる。保存的アミノ酸置換は、第１のアミノ酸と同様の化学的および／または物理的特性（例えば、荷電、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸による第１のアミノ酸の置換を指す。保存的置換には、次のグループ内での１つのアミノ酸の別のアミノ酸による置換が含まれる：リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
当業者が認識するように、本発明は、本発明の少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体を含む。一部の実施形態において、生物活性ＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体は、天然の（非合成の）、内在性のまたは関連する、および既知の挿入されたまたは融合したタンパク質または特定部分もしくは変異体の比活性の少なくとも２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、または１５％の比活性を有する。
核酸
別の態様において、本明細書に記載のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする配列を含むポリヌクレオチドを提供する。この配列は、配列番号３、９、１５、１８、２１、２４または２７のうちのいずれかと７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有していてもよい。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、さらなる非コード配列を含むことができる。このポリヌクレオチドは、その特定断片、変異体もしくはコンセンサス配列、またはこれらの配列のうちの少なくとも１つを含む寄託されたベクターをさらに含むことができる。この核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくは任意の他の形態などのＲＮＡの形態、あるいはクローニングによって得られたもしくは合成で製造されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ、またはこれらの任意の組合せを含むがそれらに限定されないＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖、もしくは一本鎖、またはこれらの任意の組合せであり得る。ＤＮＡまたはＲＮＡのうちの少なくとも１つの鎖の任意の部分は、センス鎖としても知られるコード鎖であるか、またはアンチセンス鎖とも称される非コード鎖であり得る。
一部の実施形態において、導入遺伝子をコードする核酸を修飾して、コードされるＧＬＰ−２ペプチボディの発現上昇を提供することができ、これはコドンの最適化とも称される。例えば、導入遺伝子をコードする核酸は、コード配列のオープンリーディングフレームを変化させることによって修飾してもよい。本明細書で使用する場合、「オープンリーディングフレーム」という用語は、「ＯＲＦ」と同義であり、タンパク質またはタンパク質の一部を潜在的にコードすることができる任意のヌクレオチド配列を意味する。オープンリーディングフレームは通常、開始コドン（標準的なコードでは、例えば、ＲＮＡ分子の場合ＡＵＧ、ＤＮＡ分子の場合はＡＴＧとして表される）で始まり、終止コドン（標準的なコードでは、例えば、ＲＮＡ分子の場合ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ、ＤＮＡ分子の場合はＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧとして表される）でフレームが終止するまでコドントリプレットで読み取られる。本明細書で使用する場合、「コドン」という用語は、トリプレットまたはコドントリプレットとも称され、タンパク質合成中に特定のアミノ酸を指定する核酸分子中の３つのヌクレオチドからなる配列を意味する。例えば、標準的な遺伝暗号における６４個の可能なコドンのうち、２つのコドンＧＡＡおよびＧＡＧは、アミノ酸グルタミンをコードするが、コドンＡＡＡおよびＡＡＧはアミノ酸リジンを指定する。標準的な遺伝暗号において、３つのコドンは終止コドンであり、アミノ酸を指定しない。本明細書で使用する場合、「同義コドン」という用語は、単一のアミノ酸をコードするあらゆるおよびすべてのコドンを意味する。メチオニンおよびトリプトファンを除き、アミノ酸は２〜６個の同義コドンによってコードされる。例えば、標準的な遺伝暗号において、アミノ酸アラニンについてコードする４つの同義コドンはＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵであり、グルタミンを指定する２つの同義コドンはＧＡＡおよびＧＡＧであり、リジンを指定する２つの同義コドンはＡＡＡおよびＡＡＧである。
ＧＬＰ−２ペプチボディのオープンリーディングフレームをコードする核酸は、標準的なコドン最適化法を用いて修飾されてもよい。コドン最適化のための様々な市販のアルゴリズムが利用可能であり、本発明を実施するために使用することができる。典型的には、コドン最適化は、コードされるアミノ酸を変化させない。
ヌクレオチドの変化は、ＧＬＰ−２ペプチボディを発現するために選択される特定の異種細胞において認められる内在性コドンの使用と一致させるために、オープンリーディングフレーム内の同義コドンを変更することができる。あるいはまたは加えて、ヌクレオチドの変化は、異種宿主細胞内に存在する内在性核酸において認められるオープンリーディングフレームの平均Ｇ＋Ｃ含有量をより良好に一致させるために、オープンリーディングフレーム内のＧ＋Ｃ含有量を変化させることができる。ヌクレオチドの変化はまた、ＧＬＰ−２ペプチボディ配列内で認められるポリモノヌクレオチド領域または内部調節部位もしくは構造部位を変化させることができる。したがって、原核細胞、酵母細胞、昆虫細胞内での、および哺乳動物細胞内でのＧＬＰ−２ペプチボディの発現上昇を提供する核酸配列を含むがこれらに限定されない、様々な修飾されたまたは最適化されたヌクレオチド配列が想定される。
本明細書で指摘されるように、ポリヌクレオチドはさらに、少なくとも１つのイントロンなど、前記の追加のコード配列の有無にかかわらず、少なくとも１つのシグナルリーダーペプチドまたはシグナル融合ペプチドのコード配列などの追加の配列を、転写、スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含むｍＲＮＡプロセシング（例えば、ｍＲＮＡのリボソーム結合および安定性）において役割を担う転写された非翻訳配列などの非コード５’および３’配列を含むがこれらに限定されない追加の非コード配列と共に含んでいてよく；また追加の機能性を提供するアミノ酸などの追加のアミノ酸をコードする追加のコード配列を含んでいてもよい。したがって、ＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体をコードする配列を、ＧＬＰ−２ペプチボディの断片または部分を含む融合したＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体の精製を容易にするペプチドをコードする配列など、マーカー配列と融合させることができる。
核酸はさらに、本発明のポリヌクレオチドに加えて配列を含むことができる。例えば、１つ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含むマルチクローニングサイトを核酸内に挿入して、ポリヌクレオチドの単離を支援することができる。また、転写可能な配列を挿入して、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を支援することができる。例えば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための簡便な手段を提供する。コード配列以外の本発明の核酸は、任意選択で、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプター、またはリンカーである。
導入遺伝子のコード領域には、特定の細胞タイプのためのコドン使用頻度を最適化するために、１つ以上のサイレント突然変異が含まれている場合がある。例えば、ＧＬＰ−２ペプチボディのコドンは、脊椎動物細胞での発現のために最適化することができる。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディのコドンは、哺乳動物細胞での発現のために最適化することができる。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディのコドンは、ヒト細胞での発現のために最適化することができる。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディのコドンは、ＣＨＯ細胞での発現のために最適化することができる。
本出願に記載のＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸配列を、宿主細胞における増殖または発現に適したベクターに分子クローニング（挿入）することができる。例えば、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９および３１から選択される配列など、宿主細胞からＧＬＰ−２ペプチボディを分泌させるのに有効なシグナルペプチドを含むＧＬＰ−２ペプチボディ配列を、適切なベクター内に挿入する。原核発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクターおよび哺乳動物発現ベクターを含むがこれらに限定されない広範な様々な発現ベクターを使用して、本発明を実施することができる。本発明に適した例示的なベクターとしては、ウイルス系ベクター（例えば、アデノ随伴ウイルス系ベクター、レトロウイルス系ベクター、プラスミド系ベクター）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸配列を適切なベクター内に挿入することができる。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸配列を適切なベクター内に挿入することができる。典型的には、ＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸配列は、様々な調節配列または調節要素に作動可能に連結される。
様々な調節配列または調節要素を、本発明に適した発現ベクター内に組み込むことができる。例示的な調節配列または調節要素としては、プロモーター、エンハンサー、リプレッサーまたはサプレッサー、５’非翻訳（または非コード）配列、イントロン、３’非翻訳（または非コード）配列が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する場合、「プロモーター」または「プロモーター配列」とは、細胞内でＲＮＡポリメラーゼに（例えば、直接的にまたは他のプロモーター結合タンパク質もしくはプロモーター結合物質を介して）結合して、コード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は、一般に、その３’末端において転写開始部位が結合し、任意のレベルで転写を開始するのに必要な最小限の数の塩基または要素を含むように上流（５’方向）に伸長する。プロモーターは、エンハンサー配列およびリプレッサー配列を含む発現制御配列とまたは発現される核酸と作動可能に関連または作動可能に連結することができる。一部の実施形態において、プロモーターは誘導性であり得る。一部の実施形態において、誘導性プロモーターは、一方向性または双方向性であり得る。一部の実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターであり得る。一部の実施形態において、プロモーターは、転写調節領域を含有する配列が１つの供給源から得られ、転写開始領域を含む配列が第２の供給源から得られる、ハイブリッドプロモーターであり得る。導入遺伝子内のコード配列に制御要素を連結するためのシステムは、当技術分野で周知である（一般的な分子生物学的技術および組換えＤＮＡ技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ，ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９において説明されており、これは参照により本明細書に援用される）。様々な成長条件および誘導条件の下での様々な宿主細胞内での発現のための導入遺伝子に適した市販のベクターも、当技術分野で周知である。
一部の実施形態において、ＳＲａ−プロモーター（Ｔａｋｅｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．ａｎｄ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．８：４６６−４７２（１９８８））、ヒトサイトメガロウイルス最初期プロモーター（Ｂｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５）、Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ４５：１０１−１０５（１９８６））、ヒトサイトメガロウイルスプロモーター、ヒトサイトメガロウイルス５プロモーター、マウスサイトメガロウイルス最初期プロモーター、ＥＦ１−α−プロモーター、肝臓特異的発現のためのハイブリッドサイトメガロウイルスプロモーター（例えば、サイトメガロウイルス最初期プロモーターをヒトα−１−アンチトリプシン（ＨＡＴ）またはアルブミン（ＨＡＬ）のいずれかのプロモーターの転写プロモーター要素と結合させることによって作製）、または肝細胞がん特異的発現のためのプロモーター（例えば、ヒトアルブミン（ＨＡＬ）（約１０００ｂｐ）またはヒトα−１−アンチトリプシン（ＨＡＴ）（約２０００ｂｐ）のいずれかのヒトアルブミンの転写プロモーター要素は、ヒトα−１−ミクログロブリンおよびビンキュリン前駆体遺伝子（ＡＭＢＰ）の１４５長エンハンサー要素と結合している（ＨＡＬ−ＡＭＢＰおよびＨＡＴ−ＡＭＢＰ））；ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔ ａｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４−３１０（１９８１））、Ｏｒｇｙｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ最初期プロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ ａｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１−１４４５（１９８１））、またはメタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２（１９８２））などだがこれらに限定されない特異的プロモーターを使用して、哺乳動物宿主細胞における導入遺伝子の発現を制御するために使用されてもよい。一部の実施形態において、哺乳動物プロモーターとは、ａがヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＴＲ）プロモーター、アデノシンデアミナーゼプロモーター、ピルビン酸キナーゼプロモーター、ベータ−アクチンプロモーター、および当業者に既知の他の構成的プロモーターなどだがこれらに限定されない構成的プロモーターであることとする。
一部の実施形態において、特異的プロモーターを使用して、β−ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋｏｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７−３７３１（１９７８））、ｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１−２５（１９８３））、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、Ｍ１３プロモーターまたはＭ１６プロモーターなどだがこれらに限定されない原核細胞宿主における、ＧＡＬ１、ＧＡＬ４もしくはＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ（アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＩＩＩ（ＴＤＨ３）プロモーター、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＩＩ（ＴＤＨ２）プロモーター、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＩ（ＴＤＨ１）プロモーター、ピルビン酸キナーゼ（ＰＹＫ）、エノラーゼ（ＥＮＯ）、またはトリオ−スリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）などだがこれらに限定されない原核宿主細胞における導入遺伝子の発現を制御することができる。
一部の実施形態において、プロモーターは、ウイルスプロモーターであってよく、このうちの多くは哺乳動物細胞を含むいくつかの宿主細胞型における導入遺伝子の発現を調節することができる。真核細胞におけるコード配列の構成発現を駆動することが示されてきたウイルスプロモーターには、例えば、シミアンウイルスプロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、パピローマウイルスプロモーター、アデノウイルスプロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルスおよび他のレトロウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターならびに当業者に既知の他のウイルスプロモーターが含まれる。
一部の実施形態において、発現ベクターの遺伝子制御要素にはまた、ＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列、コザック配列およびこれらに類するものなど、それぞれ転写および翻訳の開始で関与する５’非転写配列および５’非翻訳配列が含まれ得る。エンハンサー要素は、場合により、発現することになっているポリペプチドまたはタンパク質の発現レベルを上昇させるために使用することができる。哺乳動物細胞において機能することが示されてきたエンハンサー要素の例としては、Ｄｉｊｋｅｍａ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．（１９８５）４：７６１において説明されるようなＳＶ４０初期遺伝子エンハンサーおよびＧｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８２ｂ）７９：６７７７において説明されるようなラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）から得られるエンハンサー／プロモーター、ならびにＢｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９８５）４１：５２１において説明されるようなヒトサイトメガロウイルスが挙げられる。発現ベクターの遺伝子制御要素にはまた、転写および翻訳の終止で関与する３’非転写配列および３’非翻訳配列が含まれることになる。それぞれ、プロモーターから転写されるｍＲＮＡの３’末端の安定化およびプロセシングのためのポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなどである。例示的なポリＡシグナルとしては、例えば、ウサギベータグロビンポリＡシグナル、ウシ成長ホルモンポリＡシグナル、ニワトリベータグロビン終結因子／ポリＡシグナル、およびＳＶ４０後期ポリＡ領域が挙げられる。
発現ベクターには好ましくは、だが場合により、少なくとも１つの選択可能なマーカーが含まれることになる。一部の実施形態において、選択可能なメーカーとは、細胞毒性のある化学物質および／または薬剤の存在下で成長するときに生存可能性を維持する能力を宿主細胞に授けるよう、１つ以上の遺伝子調節要素に作動可能に連結された抵抗遺伝子をコードする核酸配列である。一部の実施形態において、選択可能な作用因子は、宿主細胞内で発現ベクターの保持を維持するために使用することができる。一部の実施形態において、選択可能な作用因子は、発現ベクター内での導入遺伝子配列の修飾（すなわち、メチル化）および／またはサイレンシングを防止することとするために使用され得る。一部の実施形態において、選択可能な作用因子は、宿主細胞内でのベクターのエピソーム発現を維持するために使用される。一部の実施形態において、選択可能な作用因子は、宿主細胞ゲノム内への導入遺伝子配列の安定した組込みを促進するために使用される。一部の実施形態において、作用因子および／または耐性遺伝子には、真核宿主細胞のためのメトトレキサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、第４，６５６，１３４号、第４，９５６，２８８号、第５，１４９，６３６号、第５，１７９，０１７号、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ゼオマイシン、ミコフェノール酸、またはグルタミンシンテターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号、第５，７７０，３５９号、第５，８２７，７３９号）；原核宿主細胞のためのテトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシンまたはクロラムペニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｅｎｉｃｈｏｌ）；および酵母宿主細胞のためのＵＲＡ３、ＬＥＵ２、ＨＩＳ３、ＬＹＳ２、ＨＩＳ４、ＡＤＥ８、ＣＵＰ１またはＴＲＰ１が含まれることができるが、これらに限定されない。
発現ベクターは、宿主細胞内に移入され得るか、転換され得るか、または導入され得る。本明細書で使用する場合、「移入」、「転換」および「導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）」という用語はすべて、宿主細胞内への外来性核酸配列の導入（ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）を指す。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディについてコードする核酸配列を含有する発現ベクターは、宿主細胞内に同時に移入されるか、転換されるか、または導入される。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディについてコードする核酸配列を含有する発現ベクターは、宿主細胞に順次移入されるか、転換されるか、または導入される。
当技術分野で周知である転換方法、移入方法、および導入方法の例としては、リポソーム送達、すなわち、Ｈａｗｌｅｙ−Ｎｅｌｓｏｎ，Ｆｏｃｕｓ １５：７３（１１９３）のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）法、電気穿孔法、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｒｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６−４５７（１９７８）のＣａＰＯ４送達方法、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性送達、微量注射、微粒子銃粒子送達、ポリブレン媒介性送達、カチオン媒介性脂質送達、導入、ならびに、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルスアデノ随伴ウイルスおよびバキュロウイルス（昆虫細胞）などのウイルス感染が挙げられる。
細胞内にいったん導入されると、発現ベクターは、ゲノム内に安定して組み込まれ得るか、または染色体外コンストラクトとして存在し得る。ベクターはまた、増幅され、複数のコピーがゲノム内に存在し得るかまたはゲノム内に組み込まれ得る。一部の実施形態において、本発明の細胞は、ＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０またはそれより多数のコピーを含有し得る。一部の実施形態において、本発明の細胞は、ＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０またはそれより多数のコピーを含有し得る。
宿主細胞
別の態様において、本明細書に記載のポリヌクレオチド、例えば、宿主細胞においてＧＬＰ−２ペプチボディの発現を可能にするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞であり得る。あるいは、宿主細胞は、哺乳動物細胞であることができ、非限定例としては、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／ｌ、ＥＣＡＣＣ第８５１１０５０３番）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６，ＣｒｕＣｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎ＣＶ１株（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎株（懸濁培養物中での成長のためにサブクローニングされたＨＥＫ２９３細胞または２９３細胞，Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９，１９７７）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ２１，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６，１９８０）、ＣＨＯ ＥＢＮＡ（Ｄａｒａｍｏｌａ Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，２０１４，３０（１）：１３２−４１）およびＣＨＯ ＧＳ（Ｆａｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．２０１２，１０９（４）：１００７−１５を含む；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１，１９８０）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１ ５８７）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨｅＬａ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；スイギュウラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；マウス乳がん（ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４−６８，１９８２）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ならびにヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられる。
ポリヌクレオチドは、発現プラスミド内にあり得る。発現プラスミドは、当業者に既知の任意の数の複製起点を有し得る。ポリヌクレオチドまたは発現プラスミドは、当業者に既知の任意の数の方法によって宿主細胞内に導入され得る。例えば、ＭａｘＣｙｔｅ ＧＴ（登録商標）、ＭａｘＣｙｔｅ ＶＬＸ（登録商標）、またはＭａｘＣｙｔｅ ＳＴＸ（登録商標）トランスフェクションシステムなどのフロー電気穿孔システムを使用して、宿主細胞内にポリヌクレオチドまたは発現プラスミドを導入することができる。
様々な実施形態において、宿主細胞は、ポリヌクレオチドを発現する。宿主細胞は、流加回分細胞培養規模または他の大きな規模にとって十分なレベルでＧＬＰ−２ペプチボディを発現することができる。大規模での組換えＧＬＰ−２ペプチボディを産生する代替法には、ローラボトル培養およびバイオリアクタ回分培養が含まれる。一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディタンパク質は、懸濁培養された細胞によって産生される。一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディタンパク質は、接着性細胞によって産生される。
製造
組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、任意の利用可能な手段によって製造されてもよい。例えば、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、組換えＧＬＰ−２ペプチボディコード核酸を発現するよう操作された宿主細胞系を利用することによって組換え産生されてもよい。あるいはまたは加えて、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、内在性遺伝子を活性化することによって製造されてもよい。あるいはまたは加えて、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、化学合成によって部分的にまたは完全に調製されてもよい。あるいは、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、ｍＲＮＡ治療薬によってインビボで製造されてもよい。
一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、哺乳動物細胞において産生される。本発明に従って使用されてもよい哺乳動物細胞の非限定例としては、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／１，ＥＣＡＣＣ第８５１１０５０３番）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６，ＣｒｕＣｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎株（ＨＥＫ２９３細胞または懸濁培養中での成長のためにサブクローニングされた２９３細胞，Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９，１９７７）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ２１，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞±ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６，１９８０）、ＣＨＯ ＥＢＮＡ（Ｄａｒａｍｏｌａ Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，２０１４，３０（１）：１３２−４１）およびＣＨＯ ＧＳ（Ｆａｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．２０１２，１０９（４）：１００７−１５を含む；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１，１９８０）；マウス腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１ ５８７）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨｅＬａ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；スイギュウラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；マウス乳がん（ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４−６８，１９８２）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ならびにヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられる。
一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、ヒト細胞から産生される。一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、ＣＨＯ細胞またはＨＴ１０８０細胞から産生される。
ある実施形態において、宿主細胞は、細胞を培養するために選択された特定の条件下でのある特定の好ましい属性または成長に基づいて細胞株を作製するために選択される。このような属性が、確立された株（すなわち、特徴づけられた市販の細胞株）の既知の特徴および／または形質に基づいて、あるいは経験的な査定を経て確認されることができることは、当業者によって認識されることになる。一部の実施形態において、細胞株は、細胞のフィーダー層上で成長する能力について選択されることができる。一部の実施形態において、細胞株は、懸濁物中で成長する能力について選択されることができる。一部の実施形態において、細胞株は、細胞の接着単層として成長する能力について選択されることができる。一部の実施形態において、このような細胞は、任意の組織培養容器または適切な接着基質で処理された任意の容器と共に使用されることができる。一部の実施形態において、適切な接着基質は、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ、ＩＩ、ＩＩ、またはＩＶ）、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、ＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）、基底膜マトリックス、デルマタンスルファートプロテオグリカン、ポリ−Ｄ−リジンおよび／またはこれらの組合せからなる群より選択される。一部の実施形態において、接着性宿主細胞は、懸濁物中で成長する特異的成長条件下で選択および改変されることができる。懸濁物中で成長されることに対する接着性細胞を改変するこのような方法は、当技術分野で既知である。例えば、細胞は、動物血清を成長培地から経時的に漸次取り出すことによって、懸濁培養物中で成長するよう整えられることができる。
典型的には、組換えＧＬＰ−２ペプチボディを発現するよう操作された細胞は、本明細書に記載の組換えＧＬＰ−２ペプチボディをコードする導入遺伝子を含むことができる。組換えＧＬＰ−２ペプチボディをコードする核酸が、調節配列、遺伝子制御配列、プロモーター、非コード配列および／または組換えＧＬＰ−２ペプチボディを発現するための他の適切な配列を含有することができることは認識されるべきである。典型的には、コード領域は、これらの核酸構成要素のうちの１つ以上と作動可能に連結される。
一部の実施形態において、組換えＧＬＰ−２ペプチボディは、ｍＲＮＡ治療薬によってインビボで産生される。ＧＬＰ−２ペプチボディをコードするｍＲＮＡを調製して、ＧＬＰ−２ペプチボディを必要とする患者に投与する。ｍＲＮＡは、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７および３０のＤＮＡ配列に対応する配列を含むことができる。注射、肺内への噴霧、および皮膚下での電気穿孔法など、様々な投与経路を使用することができる。ｍＲＮＡは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクター内に封入されることができる。例示的な非ウイルスベクターとしては、リポソーム、カチオン性ポリマー、およびキューボソーム（ｃｕｂｏｓｏｍｅ）が挙げられる。
回収および精製
細胞からＧＬＰ−２ペプチボディを精製するための様々な手段を使用することができる。様々な方法を使用して、本明細書に記載の様々な方法によって製造されたＧＬＰ−２ペプチボディを精製または単離することができる。一部の実施形態において、発現した酵素を培地中に分泌させ、したがって、細胞および他の固体を、精製過程における第１の工程として、例えば、遠心分離または濾過によるなどして取り出すことができる。あるいはまたは加えて、発現した酵素は、宿主細胞の表面に結合する。この実施形態において、ポリペプチドまたはタンパク質を発現する宿主細胞は、精製のために溶解される。哺乳動物宿主細胞の溶解は、ガラスビーズによる物理的破壊および高ｐＨ条件への曝露を含む、当業者に周知の任意の数の手段によって達成することができる。
ＧＬＰ−２ペプチボディは、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、サイズ排除、およびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー）、ゲル濾過、遠心分離、もしくは示差溶解度、エタノール沈殿を含むがこれらに限定されない標準的な方法によって、またはタンパク質の生成のための任意の他の利用可能な技術によって、単離および精製されることができる。例えば、すべてが参照により本明細書に援用されるＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７、Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．ａｎｄ Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．（ｅｄｓ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ Ｐｒｅｓｓ，１９９９、およびＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．Ｐ．，Ｓｉｍｏｎ，Ｍ．Ｉ．，Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．（ｅｄｓ．），Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌ １８２），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９７を参照されたい。特にイムノアフィニティークロマトグラフィーについては、タンパク質は、該タンパク質に対して生じて静止支持体に固定された抗体を含むアフィニティーカラムに該タンパク質を結合させることによって単離することができる。あるいは、インフルエンザコート配列、ポリヒスチジン、またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼなどのアフィニティータグを、標準的な組換え技術によってタンパク質に付着させることができ、適切なアフィニティーカラムの通過によって容易な精製が可能となる。フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ロイペプチン、ペプスタチンまたはアプロチニンなどのプロテアーゼ阻害剤は、精製過程中のポリペプチドまたはタンパク質の分解を低減または除去するためにあらゆるまたはすべての段階で添加され得る。プロテアーゼ阻害剤は、細胞が、発現したポリペプチドまたはタンパク質を単離および精製するために溶解されなければならないときに特に所望される。
ＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体は、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウム沈殿またはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、混合様式のクロマトグラフィー（例えば、ＭＥＰ Ｈｙｐｅｒｃｅｌ（商標））、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない周知の方法によって組換え細胞培養物から取り出されおよび精製されることができる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）も精製のために採用されることができる。例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．（１９９７−２００３）を参照されたい。
本発明のペプチボディまたは特定部分もしくは変異体には、天然に精製される産物、化学合成手段の産物、ならびに組換え技術によって、例えば、酵母細胞、より高次の植物の細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む真核宿主から産生される産物が含まれる。組換え産生手順において採用される宿主に応じて、本発明のＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体は、グリコシル化されることができ、または非グリコシル化されることができるが、グリコシル化されるのが好ましい。
製剤
一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、担体をさらに含む。適切な許容される担体には、水、塩溶液（例えば、ＮａＣｌ）、塩類溶液、緩衝塩類溶液、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロースまたはデンプンなどの炭水化物、マンニトール、スクロースまたはその他などの糖、デキストロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、およびこれらの組合せが含まれるが、それらに限定されない。薬学的調製物は、所望の場合、活性化合物と有害に反応せず、または活性化合物の活性に干渉しない助剤（例えば、希釈剤、緩衝剤、親油性溶剤、防腐剤、アジュバント、潤滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝剤、着色物質、香味物質および／または芳香物質など）と混合されることができる。一部の実施形態において、静脈内投与に適した水溶性担体が使用される。
薬学的に許容される助剤が好ましい。このような滅菌溶液の非限定例および該滅菌溶液を調製する方法は、当技術分野で周知であり、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）１９９０などだがこれに限定されない。当技術分野で周知のようにまたは本明細書に説明するように、ＧＬＰ−２ペプチボディ組成物の投与様式、溶解度および／または安定性に適した薬学的に許容される担体は、しばしば選択されることができる。例えば、わずかに酸性のまたは生理学的なｐＨの滅菌塩類溶液およびリン酸緩衝塩類溶液を使用することができる。ｐＨ緩衝剤は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、トリス／ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、絨毯酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ヒスチジンであってよく、好ましい緩衝液は、アルギニン、リジン、もしくは酢酸塩またはこれらの混合物である。好ましい緩衝液範囲は、ｐＨ４〜８、ｐＨ６．５〜８、より好ましくはｐＨ７〜７．５である。パラ、メタ、およびオルト−クレゾール、メチルパラベンおよびプロピルパラベン、フェノール、ベンジルアルコール、安息香酸ナトリウム、安息香酸、安息香酸ベンジル、ソルビン酸、プロパン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルなどの防腐剤は、医薬組成物中に提供され得る。安定剤、保存酸化、脱アミド、異性化、ラセミ化、環化、例えば、アスコルビン酸などのペプチド加水分解、メチオニン、トリプトファン、ＥＤＴＡ、アスパラギン、リジン、アルギニン、グルタミンおよびグリシンは、医薬組成物中に提供され得る。ドデシル硫酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、シクロデキストリンなど、凝集、フィブリル化、および沈殿を防止する安定剤は、医薬組成物中に提供され得る。エタノール、酢酸または酢酸塩およびこれらの塩など、可溶化のためのまたは凝集を防止するための有機改質剤は、医薬組成物中に提供され得る。塩、例えば、塩化ナトリウムなどの等張性メーカー、または最も好ましい炭水化物、例えば、デキストロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、スクロースもしくはこれらの混合物は、医薬組成物中に提供され得る。
本組成物において有用な薬学的賦形剤および助剤には、単独でまたは１〜９９．９９重量％もしくは１〜９９．９９体積％の組合せで含む、単一でもしくは組合せで存在することができるタンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖を含む糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化した糖およびこれらに類するものなどの誘導体化した糖；ならびに多糖または糖ポリマー）が含まれるが、これらに限定されない。例示的なタンパク質賦形剤としては、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの血清アルブミン、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼイン、およびこれらに類するものが挙げられる。緩衝能において機能することもできる代表的なアミノ酸／ＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム、およびこれらに類するものが含まれる。１つの好ましいアミノ酸はグリシンである。
炭水化物賦形剤、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース、およびこれらに類するものなどの単糖；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース、およびこれらに類するものなどの二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン、およびこれらに類するものなどの多糖；ならびにマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトール、およびこれらに類するものなどのアルジトールを使用することができる。
ＧＬＰ−２ペプチボディ組成物にはまた、緩衝剤またはｐＨ調整剤が含まれることができ、典型的には、緩衝剤は、有機酸または有機塩基から調製される塩である。例示的な緩衝剤としては、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩などの有機酸の塩；トリス、トロメタミンヒドロクロリド、またはリン酸緩衝液が挙げられる。
追加として、本発明のＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体の組成物には、ポリビニルピロリドン、フィコール（糖ポリマー）、デキストラート（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、香料、抗菌薬、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０」および「ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０」などのポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）などのポリマー賦形剤／助剤が含まれることができる。
本発明によるＧＬＰ−２ペプチボディ組成物における使用に適したこれらのおよび追加の既知の薬学的賦形剤および／または助剤は、例えば、その開示が参照により本明細書に完全に援用される「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（２００５）において、および「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」，７１ｓｔ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（２０１７）において列挙されるように、当技術分野で既知である。好ましい担体または賦形剤の材料は、炭水化物（例えば、糖類およびアルジトール）および緩衝剤（例えば、クエン酸塩）または高分子剤である。
医薬組成物は、静脈内または皮下への注射または注入による投与に適した液剤として製剤化され得る。液剤は、１つ以上の溶剤を含み得る。例示的な溶剤としては、水；エタノールおよびイソプロピルアルコールなどのアルコール；植物油；ポリエチレングリコール；プロピレングリコール；ならびにグリセリンまたはこれらの混合物および組合せが挙げられるが、それらに限定されない。静脈内投与に適した水溶性担体が使用され得る。例えば、一部の実施形態において、静脈内投与のための組成物は典型的には、滅菌等張性水性緩衝剤中の液剤である。必要な場合、組成物にはまた、可溶化剤、および注射部位における疼痛を緩和するための局所麻酔薬が含まれ得る。概して、成分は、別個にまたは単位剤形において一緒に混合されて、例えば、活性薬の量を示すアンプルまたはサシェなどの気密性容器内の乾燥凍結粉末または水非含有濃縮物として供給される。組成物が注入によって投与されることになる場合、滅菌済みの薬学的等級の水、塩類溶液またはデキストロース／水を含有する注入ボトルを用いて、該組成物を分配することができる。組成物が注入によって投与される場合、注射用の水または塩類溶液のアンプルは、成分を投与に先立って混合できるように提供してもよい。
上記のように、製剤には好ましくは、薬学的に許容される製剤中に少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディまたは特定部分もしくは変異体を含む、塩類溶液または選択された塩を含有する適切な緩衝剤、ならびに薬学的用途または獣医学用途に適した保存剤をおよび多用途の保存された製剤を含有する任意の保存された液剤および製剤が含まれることができる。保存された製剤は、水溶性希釈剤中に少なくとも１つの既知の保存剤を含有し、または少なくとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル、およびこれらに類するもの）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはこれらの混合物からなる群より場合により選択される。任意の適切な濃度または混合物は、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４．、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその中の任意の範囲もしくは値などだがこれらに限定されない、０．００１〜５％またはその中の任意の範囲もしくは値など、当技術分野で既知のとおり使用することができる。非限定例としては、保存剤なし、０．１〜２％ｍ−クレゾール（例えば、０．２、０．３．０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１．、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン（複数可）（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）、およびこれらに類するものが挙げられる。
ＧＬＰ−２ペプチボディは、非経口投与のために製剤化することができ、共通の賦形剤として、滅菌した水または塩類溶液、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレンおよびこれらに類するものを含有することができる。注射用の水性懸濁剤または油性懸濁剤は、既知の方法により、適切な乳化剤もしくは湿潤剤および懸濁剤を使用することによって調製することができる。注射用薬剤は、溶剤中の水溶液または滅菌した注射用の溶剤もしくは懸濁剤など、非毒性、非経口投与可能な希釈剤であることができる。使用可能なビヒクルまたは溶剤として、水、リンガー液、等張性塩類溶液などが許容され、通常の溶剤または懸濁溶剤として、滅菌済みの不揮発性油を使用することができる。これらの目的のために、天然のまたは合成のまたは半合成の脂肪油または脂肪酸；天然のまたは合成のまたは半合成のモノグリセリドまたはジグリセリドまたはトリグリセリドを含む、任意の種類の不揮発性油および脂肪酸を使用することができる。非経口投与は、当技術分野で既知であり、従来の注射手段、米国特許第５，８５１，１９８号において説明されるようなガス圧無針注射装置、および米国特許第５，８３９，４４６号において説明されるようなレーザー穿孔装置を含むがこれらに限定されない。
医薬組成物は、延長放出製剤であり得る。医薬組成物はまた、例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディの持続放出、延長放出、遅延放出または徐放のために製剤化され得る。徐放および持続放出としても既知の延長放出は、注射用製剤に提供することができる。ミクロスフェア、ナノフェア、インプラント、デポー、およびポリマーは、本明細書に記載の化合物、方法、および製剤のうちのいずれかと併用して、延長放出特性を提供することができる。
例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤化され得る。濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４２ｍｇ／ｍＬ、約４４ｍｇ／ｍＬ、約４６ｍｇ／ｍＬ、約４８ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約９９ｍｇ／ｍＬであってよく、「約」は、参照される値を０．５ｍｇ／ｍＬ下回る値から参照される値を０．５ｍｇ／ｍＬ上回る値までを意味する。濃度は、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ、１１〜１６ｍｇ／ｍＬ、１２〜１７ｍｇ／ｍＬ、１３〜１８ｍｇ／ｍＬ、１４〜１９ｍｇ／ｍＬ、１５〜２０ｍｇ／ｍＬ、１６〜２１ｍｇ／ｍＬ、１７〜２２ｍｇ／ｍＬ、１８〜２３ｍｇ／ｍＬ、１９〜２４ｍｇ／ｍＬ、２０〜２５ｍｇ／ｍＬ、２５〜３０ｍｇ／ｍＬ、３０〜３５ｍｇ／ｍＬ、３５〜４０ｍｇ／ｍＬ、４０〜４５ｍｇ／ｍＬ、４５〜５０ｍｇ／ｍＬ、５０〜５５ｍｇ／ｍＬ、５５〜６０ｍｇ／ｍＬ、６０〜６５ｍｇ／ｍＬ、６５〜７０ｍｇ／ｍＬ、７０〜７５ｍｇ／ｍＬ、７５〜８０ｍｇ／ｍＬ、８０〜８５ｍｇ／ｍＬ、８５〜９０ｍｇ／ｍＬ、または９０〜１００ｍｇ／ｍＬであり得る。濃度は、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬまたは１４．５〜１５．５ｍｇ／ｍＬ、または１５ｍｇ／ｍＬであり得る。
ＧＬＰ−２ペプチボディを含む製剤および組成物は、糖尿病薬もしくはインスリン代謝関連薬のうちの少なくとも１つ、感染防止薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、呼吸器薬、消化（ＧＩ）管薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質のバランスのための薬剤、血液薬、抗腫瘍薬（antineoplactic）、免疫調節薬、点眼薬、点耳薬もしくは点鼻薬、局所薬、栄養薬またはこれらに類するものから選択される有効量の少なくとも１つの化合物またはタンパク質を場合によりさらに含む。本明細書に各々提示されるものについての製剤、適応、投薬および投与を含むこのような薬剤は、当技術分野で周知である（例えば、各々が参照により本明細書に完全に援用されるＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ，Ｐａ．，２００１、Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ Ｄｒｕｇ Ｇｕｉｄｅ ２００１，ｅｄ．，Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＪ、Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴを参照されたい）。
ＧＬＰ−２ペプチボディはまた、ＧＬＰ−２ペプチボディの長期投与または持続投与のための徐放性移植デバイスとして製剤化され得る。このような持続放出製剤は、身体上に外部から置かれたパッチの形態であり得る。持続放出製剤の例としては、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、メチルセルロース、ヒアルロン酸、シアル酸、ケイ酸塩、コラーゲン、リポソームおよびこれらに類するものなどの生体適合性ポリマーの複合体が挙げられる。持続放出製剤は、高い局所濃度のＧＬＰ−２ペプチボディを提供することが望ましいときに、特に関心対象である。
ＧＬＰ−２ペプチボディの組成物および製剤は、患者に透明な液剤として、あるいは再構成される凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくは変異体のバイアルと、水性希釈剤を含有する第２のバイアルとを備えた、二重バイアルとして提供することができる。単一の液剤バイアルまたは再構成を要する二重バイアルのいずれかは、複数回再利用することができ、患者の処置の単回周期または複数回周期のために十分であることができ、したがって現に利用可能なものよりも簡便な処置レジメンを提供する。
ＧＬＰ−２ペプチボディの組成物および製剤は、薬局、診療所、または他のこのような施設および設備に、透明な液剤、または凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくは変異体のバイアルを、水性希釈剤を含有する第２のバイアルと共に備えた、二重バイアルを提供することによって、患者に間接的に提供することができる。この場合の透明な溶液は、１リットルまでまたはそれ以上の大きさであってもよく、大きな貯蔵器を提供し、それからＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくは変異体の液剤の少ない部分を１回または複数回取り出してより小さなバイアルに移し、薬局または診療所によって利用者および／または患者に提供することができる。このような製品は、包装材料を含むことができる。包装材料は、規制当局が必要とする情報に加えて、製品を使用することができる条件を提供することができる。包装材料は、説明を患者に提供して、水性希釈剤中でＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくは変異体を再構成して液剤を形成し、２バイアル湿潤／乾燥製品について２〜２４時間以上の時間にわたって液剤を使用することができる。
処置
別の態様において、腸管皮膚瘻（ＥＣＦ）の患者を処置するための方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを用いて、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む方法を提供する。ＧＬＰ−２ペプチボディは、ＧＬＰ−２またはテデュグルチドよりも半減期が長いので、ＥＣＦを処置するのに特に有効であり得る。半減期が長ければ長いほど、投薬頻度はより少なく、ピーク対トラフ比（peak-to-trough ratio)はより低くなる。
ＥＣＦから高い死亡率および罹病率が生じる。さらに、ＥＣＦは、腹腔内処置を受けることから生じる可能性がある。腸壁への損傷は、ＥＣＦの最大のリスクを抱える。Ｇａｌｉｅ，Ｋ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，“Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｅｎｔｅｒｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｆｉｓｔｕｌａ：Ｗｈｅｎ ｔｏ Ｒｅｏｐｅｒａｔｅ ａｎｄ Ｈｏｗ ｔｏ Ｓｕｃｃｅｅｄ”Ｃｌｉｎ．Ｃｏｌｏｎ Ｒｅｃｔａｌ Ｓｕｒｇ．，２００６，１９：２３７−２４６、Ａｒｅｂｉ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，“Ｈｉｇｈ−Ｏｕｔｐｕｔ Ｆｉｓｔｕｌａ”Ｃｌｉｎｉｃｓ ｉｎ Ｃｏｌｏｎ ａｎｄ Ｒｅｃｔａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ，２００４，１７（２）：８９−９８を参照されたい。理論によって拘束されることを望むものではないが、ＥＣＦとは、消化管と皮膚との間の開口部である。かなりの量の流体、栄養素、および消化液が、小腸による適切な吸収がないまま、消化管から出る可能性がある。胃液分泌の低減および栄養素の吸収の改善は、ＥＣＦの予後を改善することができる。
一部の実施形態において、この方法は、患者による腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の胃液分泌量を低減するのに有効である。ＧＬＰ−２ペプチボディは、瘻を通って移動するなどして、皮膚に到達する消化管分泌物の量を低減するのに有効であり得る。より長期間のＧＬＰ−２の活性化は、胃液分泌および瘻を通る流体流出を低減させることができ、それにより回復をより迅速に促進させ、瘻をより迅速に治癒させることができる。また、コラーゲンの発現上昇およびメタロプロテアーゼの発現低下は、テデュグルチド処置の後に観察されてきた。Ｃｏｓｔａ，Ｂ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，“Ｔｅｄｕｇｌｕｔｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｇｅｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｎ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１７（２１６）；８７−９８を参照されたい。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸の絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸の陰窩の深さを増大させるのに有効である。
例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与または静脈内投与され得る。様々な実施形態において、複数回投与が投薬レジメンに従い実行される。本明細書で使用する場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日ごとの投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日ごとの投与を意味する、などである。「ＱＷ」は、毎週の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、２週間に１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、３週ごとに１回、または毎月１回行うことができる。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、２〜１４日ごとに１回、５〜８日ごとに１回、または毎週（ＱＷ）、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３〜０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．２〜１．８ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、１．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、毎週（ＱＷ）または２週ごとに、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、維持目的などのために、３週ごとにまたは１か月に１回投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、３週ごとにまたは１か月に１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
代替として、ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために５〜８日ごとにまたは毎週（ＱＷ）、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、２５〜７５ｍｇ／ｍＬ、３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ、１５〜２５ｍｇ／ｍＬ、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
上記の投薬レジメンは、ＥＣＦを処置するために６か月〜１年にわたって実施され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディは、再発を予防するために、維持のための初回投薬レジメン後に１か月に１回投与することができる。
本明細書で使用する場合、「皮下組織」という用語は、皮膚のすぐ下の緩く不規則な結合組織の層として定義される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部を含むがこれらに限定されない部位に組成物を注射することによって実施され得る。このような目的のために、製剤は、注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置が利用可能である。一部の実施形態において、例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、またはそれを含有する医薬組成物が静脈内投与される。
様々な実施形態において、ＥＣＦを処置する上記の方法は、ＥＣＦを処置する既知の方法と併用される。例示的な既知の方法としては、非経口栄養、敗血症を予防するための抗生物質投与、瘻の外側開口部に取り付けられるオストミー器具、サンプドレーン、瘻孔灌注法（fistuloclysis）、ビタミン補充療法、ミネラル補充療法、酸を抑制するためのＨ２ブロッカーまたはプロトンポンプ阻害薬の使用、ヒストアクリル糊の投与、およびフィブリン糊の投与が挙げられる。
別の態様において、閉塞性黄疸患者を処置するための方法であって、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、例えば配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む方法を提供する。閉塞性黄疸は、小腸への胆汁の流れが遮断され、血流中に留まるときに生じる。胆石は、閉塞性黄疸を発症することができる。腸管バリア機能は、閉塞性黄疸患者において損傷を受けるかまたは低減され、その結果として小腸を横切るバクテリアルトランスロケーションが引き起こされ得る。本明細書に記載のＧＬＰ−２ペプチボディは、閉塞性黄疸の発症中の腸管バリア機能に対する損傷を予防することができる。
閉塞性黄疸を処置するのに有効である投薬レジメンが使用され得る。例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与または静脈内投与され得る。様々な実施形態において、複数回投与が投薬レジメンに従い実施される。本明細書で使用する場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日ごとの投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日ごとの投与を意味する、などである。「ＱＷ」は、毎週の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、２週ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、または１７日ごとに１回、３週ごとに１回、または毎月１回行うことができる。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、２〜１４日ごとに１回、５〜８日ごとに１回、または毎週（ＱＷ）、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３〜０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．２〜１．８ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、１．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、毎週（ＱＷ）または２週ごとに０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは。３週ごとにまたは１か月に１回、維持目的などのために投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、５〜８日ごとに、または毎週（ＱＷ）、維持目的のために、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、２５〜７５ｍｇ／ｍＬ、３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ、１５〜２５ｍｇ／ｍＬ、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部を含むがこれらに限定されない部位に組成物を注射することによって実施され得る。このような目的のために、製剤は、注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置が利用可能である。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含有する医薬組成物が静脈内投与される。
一部の実施形態において、血清ビリルビンのレベルは、該処置の前の血清ビリルビンのレベルと比較して低減している。血清ビリルビンは、黄疸の程度を反映しており、閉塞性黄疸患者の皮膚および眼が黄色であることの原因である。一部の実施形態において、この方法は、患者の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、患者における腸管バリア機能を改善し、患者の小腸を横切るバクテリアルトランスロケーションの発生率を低減するのに有効である。
別の態様において、本発明は、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば、配列番号１あるいは配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディを投与することを含む、消化管に対する放射線障害および／またはその影響を処置し、改善し、または防ぐための方法を提供する。患者の消化管に対する放射線障害を処置するまたは予防するのに有効な投薬レジメンが使用され得る。放射線障害は小腸におけるものであり得る。一部の実施形態において、この方法は、消化管の細胞におけるアポトーシスを低減するのに有効である。
小腸に対する放射線障害は、次の作用：腸管バリア機能の低下、小腸による水および他の栄養素の吸収の低減、非経口栄養への依存性の増大：のうちの１つ以上を生じるのに十分な細胞障害をもたらし得る。ＧＬＰ−２またはテデュグルチドよりも半減期が実質的に長いＧＬＰ−２ペプチボディは、これらの作用を逆転させ得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、ＧＬＰ−２は、小腸における細胞、例えば、ＣＣＤ−１８Ｃｏ細胞におけるＡｋｔリン酸化を促進することによって、このような細胞がアポトーシスを受けるのを防ぐことができる。あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、そのＧＬＰ−２活性を介して、カスパーゼ−３のレベルを低下させる。カスパーゼ３は、放射線によって惹起される因子である。ＧＬＰ−２ペプチボディはまた、これもまた放射線によって惹起されるＢｃｌ−２分解も阻害し得る。
ＧＬＰ−２ペプチボディは、患者が放射線または放射線療法を用いて処置される前または間に投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディは、患者が放射線または放射線療法を用いて処置された後に投与され得る。例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与または静脈内投与され得る。様々な実施形態において、複数回投与が、投薬レジメンに従い実施される。本明細書で使用する場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は２日ごとの投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日ごとの投与を意味するなどである。「ＱＷ」は、毎週の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、２週ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、３週ごとに１回、または毎月１回行うことができる。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、２〜１０日ごとに１回、５〜８日ごとに１回、または毎週（ＱＷ）、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３〜０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．２〜１．８ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、１．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、毎週（ＱＷ）または２週ごとに（Ｑ２Ｗ）、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、維持目的などのために、３週ごとにまたは１か月に１回投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、３週ごとにまたは１か月に１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために、５〜８日ごとにまたは毎週（ＱＷ）、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、２５〜７５ｍｇ／ｍＬ、３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ、１５〜２５ｍｇ／ｍＬ、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
上記の投薬レジメンは、６か月〜１年にわたって行われ得る。ＧＬＰ−２ペプチボディは、維持目的のために、初回投薬後１か月に１回投与することができる。
例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部を含むがこれらに限定されない部位に組成物を注射することによって実施され得る。このような目的のために、製剤は、注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置が利用可能である。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含有する医薬組成物が静脈内投与される。
一部の実施形態において、この方法は、患者における腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者における腸管バリア機能を改善するのに有効である。これらの作用はすべて、小腸および腸において生じる任意の放射線誘発性細胞損傷を補償し得る。
別の態様において、本発明は、ＧＬＰ−２ペプチボディ、例えば配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディを投与することを含む、消化管に対する放射線誘発性腸炎、および／またはその作用を処置し、改善し、または予防するための方法を提供する。患者における放射線誘発性腸炎を処置するまたは予防するのに有効な投薬レジメンが使用され得る。
放射線誘発性腸炎は、消化管に対する放射線誘発性損傷に関して先に考察したのと同様の理由のため、ＧＬＰ−２ペプチボディによって逆転し得る。
例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは、皮下投与または静脈内投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、２〜１４日ごとに１回、５〜８日ごとに１回、または毎週（ＱＷ）、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３〜０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．２〜１．８ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、１．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、毎週（ＱＷ）または２週ごとに（Ｑ２Ｗ）、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、維持目的などのために、３週ごとにまたは１か月に１回投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、３週ごとにまたは１か月に１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために、５〜８日ごとにまたは毎週（ＱＷ）、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、２５〜７５ｍｇ／ｍＬ、３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ、１５〜２５ｍｇ／ｍＬ、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部を含むがこれらに限定されない部位に組成物を注射することによって実施され得る。このような目的のために、製剤は、注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置が利用可能である。一部の実施形態において、例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、またはそれを含有する医薬組成物が静脈内投与される。
一部の実施形態において、この方法は、患者の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、患者における腸管バリア機能を改善し、患者の小腸を横切るバクテリアルトランスロケーションの発生率を低減するのに有効である。
別の態様において、短腸症候群の患者を処置するための方法であって、短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、例えば配列番号１または配列番号７を含むＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、残存小腸とつながった少なくとも２５％の結腸を呈する短腸症候群患者における腸管吸収を高めるための薬剤として投与される。一部の実施形態において、残存小腸は、長さが少なくとも２５ｃｍ、少なくとも５０ｃｍ、少なくとも７５ｃｍ、少なくとも１００ｃｍ、または少なくとも１２５ｃｍである。一部の実施形態において、この方法は、患者における腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である。一部の実施形態において、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である。一部の実施形態において、患者は、非経口栄養に依存している。この方法は、糞便湿重量を減少させ、尿湿重量を増加させ、小腸を横切るエネルギー吸収（例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸のうちのより多数のうちの１つの吸収）を増大させ、小腸を横切る水の吸収を増大させ、非経口栄養支援を低減させ、または非経口栄養に対する必要性を排除するのに有効である
結腸連続性を伴う短腸症候群を処置するのに有効である投薬レジメンが使用され得る。配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディは皮下投与または静脈内投与され得る。様々な実施形態において、複数回投与が、投薬レジメンに従い実施される。本明細書で使用する場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日ごとの投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日ごとの投与を意味する、などである。「ＱＷ」は、毎週の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、２週間に１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、３週ごとに１回、または毎月１回行うことができる。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、２〜１４日ごとに１回、５〜８日ごとに１回、または毎週（ＱＷ）、０．０２〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．０２〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３〜０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．２〜１．８ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ、１．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または２．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、毎週（ＱＷ）または２週ごとに、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ−２ペプチボディは、維持目的などのために、３週ごとにまたは１か月に１回投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、３週ごとにまたは１か月に１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５〜０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７〜０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８〜１．０ｍｇ／ｋｇ、０．９〜１．１ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１．２ｍｇ／ｋｇ、１．１〜１．３ｍｇ／ｋｇ、および１．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。
ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために５〜８日ごとにまたは毎週（ＱＷ）、０．０２〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０４〜０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．０８〜０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１０〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２０〜０．３０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与され得る。ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、２５〜７５ｍｇ／ｍＬ、３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、５０〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ、１５〜２５ｍｇ／ｍＬ、１２〜１８ｍｇ／ｍＬ、１３〜１７ｍｇ／ｍＬ、１４〜１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
一部の実施形態において、例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、またはそれを含有する医薬組成物が皮下投与される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部を含むがこれらに限定されない部位に組成物を注射することによって実施され得る。一部の実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含有する医薬組成物が静脈内投与される。
先と同様、ＧＬＰ−２ペプチボディは、本明細書に記載の有効量のＧＬＰ−２類似体またはその塩を投与することによって、食道の上部消化管を含む消化管障害を患う個体を処置するために使用され得る。胃および腸関連障害には、あらゆる病因の潰瘍（例えば、消化性潰瘍、薬剤誘発性潰瘍、感染または他の病原体に関連する潰瘍）、消化不良、吸収不良症候群、短腸症候群、ダグラス窩症候群、炎症性腸疾患、セリアックスプルー（例えば、グルテン誘発性腸疾患またはセリアック病から生じる）、熱帯性スプルー、低ガンマグロブリン血性スプルー、腸炎、潰瘍性大腸炎、小腸障害、および化学療法誘発性下痢／粘膜炎（ＣＩＤ）が含まれる。小腸の量の増加ならびに正常な小腸粘膜の構造および機能の結果および／または維持から利益を得るであろう個体は、ＧＬＰ−２ペプチボディによる処置を受ける候補である。ＧＬＰ−２ペプチボディで処置され得る特定の状態には、熱からのα−グリアジンに対する毒性反応から生じ，グルテン誘発性腸疾患またはセリアック病の結果であり得、小腸の絨毛の顕著な喪失によって特徴づけられるセリアックスプルー；感染が原因であり、絨毛の部分的な平坦化により特徴付られる熱帯性スプルー；分類不能型免疫不全症または低ガンマグロブリン血症を患う患者において一般に観察され、絨毛高における有意な低下により特徴付けられる低ガンマグロブリン血性スプルーを含む、様々な形態のスプルーが含まれる。ＧＬＰ−２ペプチボディ処置の治療有効性は、絨毛の形態学的特性を検討するための腸生検によって、栄養吸収の生化学的評価によって、患者の体重増加によって、またはこれらの状態に関連する症状の改善によって監視することができる。
ＧＬＰ−２ペプチボディは、化学療法中の消化管に対する障害を予防または処置するために投与することもできる。小腸粘膜に対する化学療法誘発性障害は、臨床的に消化管粘膜炎と称されることが多く、小腸の吸収障害およびバリア障害を特徴とする。がん化学療法後の消化管粘膜炎は、徐々に緩和するが、いったん確立されると本質的に処置不可能な深刻化する問題である。一般的に使用される細胞増殖抑制性がん薬５−ＦＵおよびイリノテカンを用いて実施された試験では、これら薬剤による有効な化学療法が主に小腸の構造の完全性および機能に影響を及ぼすことを実証した。ＧＬＰ−２ペプチボディの投与により、小腸に対する障害を逆転させ、その構造の完全性および機能を保存することができる。
上記の処置方法の様々な実施形態において、投与されるべき詳しい用量または量は、例えば、所望される結果の性質および／または程度、投与の詳しい経路および／またはタイミング、および／または１つ以上の特徴（例えば、体重、年齢、個体歴、遺伝的特徴、生活様式パラメータ、心臓欠損の重症度および／または心臓欠損のリスクのレベルなど、あるいはこれらの組合せ）に応じて変わり得る。このような用量または量は、当業者によって決定することができる。一部の実施形態において、適切な用量または量は、標準的な臨床技術に従って決定される。あるいはまたは加えて、一部の実施形態において、適切な用量または量は、投与されるべき所望のまたは最適な投薬範囲または量を特定するのを助けるために、１つ以上のインビトロまたはインビボでのアッセイの使用を通して決定される。
上記の処置方法の様々な実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、治療有効量で投与される。一般に、治療有効量は、対象に有意な利益（例えば、基礎疾患または状態の予防、処置、調節、治癒、防止および／または改善）を達成するのに十分である。一般に、治療薬（例えば、ＧＬＰ−２ペプチボディ）を必要とする対象に投与される治療薬の量は、対象の特徴によることになる。このような特徴には、対象の状態、疾患重症度、全身レベルの健康状態、年齢、性別および体重が含まれる。当業者は、これらのおよび他の関連因子に応じて適切な投薬量を容易に決定できる。さらに、客観的および主観的アッセイの両方を任意選択で用いて最適な投薬量範囲を特定してもよい。いくつかの特定の実施形態において、投与されるべき適切な用量または量は、インビトロまたは動物モデルの試験システムから得られる用量応答曲線から外挿され得る。
上記の処置方法の様々な実施形態において、治療有効量は通常、複数の単位用量を含み得る投薬レジメンで投与される。任意の特定治療用タンパク質について、治療有効量（および／または有効な投薬レジメン内での適切な単位用量）は、例えば、投与経路、他の医薬品との組合せに応じて変動し得る。また、任意の特定患者に対する具体的な治療有効量（および／または単位用量）は、処置中の障害および障害の重症度；使用される具体的な医薬品の活性；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全身レベルの健康状態、性別および食事；投与回数、投与経路、および／または用いられる具体的な融合タンパク質の排泄もしくは代謝の速度；処置の持続時間；ならびに、医学分野において周知の同様の因子を含む様々な因子に依存し得る。
上記の処置方法の様々な実施形態において、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１つ以上の既知の治療薬と組み合わせて投与される。一部の実施形態において、既知の治療薬（複数可）は、その標準的なまたは承認された投薬レジメンおよび／または投薬スケジュールに従って投与される。一部の実施形態において、既知の治療薬（複数可）は、その標準的なまたは承認された投薬レジメンおよび／または投薬スケジュールと比較して変更されたレジメンに従って投与される。一部の実施形態において、このような変更されたレジメンは、１つ以上の単位用量が量において変更される（例えば、低減または増加される）、および／または投薬が頻度において変更される（例えば、単位用量間の１つ以上の間隔が開いて、結果として頻度がより低くなる、または間隔が小さくなって、結果としてより高い頻度になる）という点において、標準的なまたは承認された投薬レジメンとは異なる。
ＥＣＦについて、ＧＬＰ−２ペプチボディと併用投与され得る例示的な治療薬として、コルチコステロイド、抗生物質および胃酸抑制剤（acid reducer）が挙げられる。閉塞性黄疸について、ＧＬＰ−２ペプチボディと併用投与され得る例示的な治療薬として、コルチコステロイドおよび抗生物質が挙げられる。
上記の処置方法の様々な実施形態において、複数の異なるＧＬＰ−２ペプチボディを一緒に投与してもよい。さらに、ＧＬＰ−２ペプチボディを、Ｇａｔｔｅｘ、テデュグルチドまたはＧＬＰ−２ペプチドと同時に投与してもよい。
本発明はまた、以下の例として説明および実証される。しかしながら、本明細書におけるいかなるところでもこれらのおよび他の例の使用は、実例となるに過ぎず、いかなる方法においても本発明の範囲および意味またはいかなる例証的な点も制限するものではない。同様に、本発明は、本明細書に記載のいかなる詳しい好ましい実施形態にも限定されない。実際、本発明の多くの改変および変化は、本明細書を読む際に当業者に明らかであり、このような変化は、趣旨においても範囲においても本発明から逸脱することなくなされることができる。本発明はそれゆえ、添付の特許請求の範囲が権利を付与される等価物の全範囲と共に、該特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるものとする。
実施例１：ＧＬＰ−２ペプチボディの分子量およびＦｃＲｎ結合
Ｆｃ新生児受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合により、分子のリサイクルが可能となり、Ｆｃ融合タンパク質のインビボでの血清半減期が延長される。分子が細胞内へと受動的に取り込まれ、エンドソームのｐＨがより低い場合にリサイクルが生じる。それによって、ＦｃＲｎに対する分子のＦｃ部分の結合がもたらされる。ＦｃＲｎがリサイクルして細胞表面に戻ると、ｐＨは中性であり、タンパク質は血清中に放出されて戻される。
ＦｃＲｎの細胞外ドメインに対する結合を、ビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ）システムを用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。ＦｃＲｎを用いた直接固定化は、以下の条件下でＣＭ５チップとＦｃＲｎとのアミンカップリングを介して達成した。
ｉ）ｈＦｃＲｎ（実験室内で発現および精製）を酢酸緩衝液ｐＨ５．０中に希釈して５μｇ／ｍＬとする。
ｉｉ）ＰＢＳ ｐＨ７．０中で５００ＲＵを目標にＣＭ５チップ上に５μｇ／ｍＬのＦｃＲｎを固定化する。
ｉｉｉ）最終応答４５４ＲＵ
ｉｖ）ランニング緩衝液：ＰＢＳ−Ｐ＋、ｐＨを５．５に調整した
動的結合試験を、次のプロトコルを用いて実施した。試料をＰＢＳ−Ｐ＋で５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６、０．７８、０．３９、０ｎＭに希釈した。パラメータを次のとおり設定した。
ｉ）流量３０μＬ／分で３００秒、結合および解離
ｉｉ）２５ｍＭトリス、１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ８．０を６０μＬ／分で４０秒間用いて再生
Ｆｃ新生児受容体（ＦｃＲｎ）に対するＧＬＰ−２ペプチボディの結合の測定を、ｐＨ５．５およびｐＨ７．４で行った。Ｆｃの代わりにアルブミンを有するＧＬＰ−２ペプチボディＯは、実質的により高いＫＤを有する。結果を以下の表１に示す。
実施例２タンパク質安定性分析
ＧＬＰ−２ペプチボディの各々を、ナノ示差走査蛍光定量法（ＮａｎｏＤＳＦ）を用いて融点を決定することによって試験した。ＮａｎｏＤＳＦは、温度傾斜を用いた、ある範囲の温度にわたるタンパク質安定性の測定である。トリプトファンの安定性は、３３０ｎｍでの蛍光に対する３５０ｎｍでの蛍光の比に反映されるように、蛍光によって測定される。このアッセイから、１つ以上の融点を決定する。ある特定の状態におけるタンパク質は融点を有すると理解されるため、観察される融点の数は、異なる状態の数を反映する。ＧＬＰ−２ペプチボディＡ、Ｂ、Ｅ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、およびＭは、以下の表２に示すように、２つの状態を有する。
ＳＥＣ−ＭＡＬＳアッセイを実施して、主要状態（主ピーク）およびその分子量を決定した。以下の表２に示すように、ＧＬＰ−２ペプチボディＡ、Ｂ、Ｅ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、およびＯ（Ｆｃ融合体）は、二量体を示す分子量で溶出した。ＧＬＰ−２ペプチボディＯ（アルブミン融合体）は、単量体を示す分子量で溶出した。
実施例３：ＧＬＰ−２ペプチボディのインビトロ効力
ＧＬＰ−２ペプチボディのＥＣ５０を、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ製のｃＡＭＰ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ｅＸｐｒｅｓｓ ＧＬＰ２Ｒ ＣＨＯ−Ｋ１ ＧＰＣＲアッセイを用いてインビトロで評価した。ｃＡＭＰ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）アッセイは、酵素断片相補性（ＥＦＣ）に基づいている。ＥＦＣアッセイでは、酵素ドナーをｃＡＭＰに融合させる。ＧＬＰ２Ｒ活性化による細胞内ｃＡＭＰの上昇は、抗体のＥＤ−ｃＡＭＰと競合する。未結合のＥＤ−ｃＡＭＰは、酵素アクセプターを補完して、活性なβガラクトシダーゼを形成し、それがその後に発光シグナルを生じる。
使用したＣＨＯ−Ｋ１細胞株は、ヒトＧＬＰ−２Ｒを過剰発現している（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ００４２４６．１）。ペプチドＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］を対照として用いた。表３に列挙するＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］ペプチドおよびＧＬＰ−２ペプチボディの様々な希釈物で細胞を処理した。これらの活性を、培地中のｃＡＭＰ濃度の測定により分析した。シグモイドカーブフィッティング（Ｓ字状曲線の当てはめ）を行って、以下の表３に示すように、ＥＣ５０値に達した。
ＧＬＰペプチボディのＥＣ５０値は、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］のＥＣ５０よりもかなり大高かった。しかしながら、インビトロでの効力は、活性の低減が約５倍に過ぎないＧＬＰ−２ペプチボディＫなど、一部のＧＬＰ−２ペプチボディではわずかに低下しただけである。ＧＬＰ−２ペプチボディＫは、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］のインビトロ活性の２０％を有する。ＧＬＰ−２ペプチボディＥは、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］のインビトロ活性の２４％を有する。ＧＬＰ−２ペプチボディＥは、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］のインビトロ活性の１８％を有する。ＧＬＰ−２ペプチボディＢは、ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］のインビトロ活性の７％を有する。
次に、薬物動態試験を以下に記載するように実施して、どれだけ長くＧＬＰ−２ペプチボディがインビボで活性を有するかについてアッセイした。
実施例４：ラット薬物動態試験−静脈内投与
ラットにおいて、Ｇａｔｔｅｘ（登録商標）（Ａ２Ｇ突然変異を有するＧＬＰ−２ペプチド）について４つの薬物動態パラメータ：ＣＬ、Ｖｃ、ＶｔおよびＱを測定した。ＧＬＰ−２ペプチボディＡ、Ｂ、Ｅ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＯおよびＰについても同じ薬物動態パラメータを測定した。データを表４に示す。雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１群あたり３匹）に、顎静脈または尾静脈カテーテルを介して静脈内注射した。単回投与の検査品を１ｍｇ／ｍｌの用量レベルで注射した。検査品をＰＢＳ ｐＨ７．４中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化した。血液試料を投与の０．０８３、０．１６７、０．３３、０．５、１、２、６、２４、４８、７２、１２０、１６８、２４０、および３３６時間後に採取した。ヘパリン処理したチューブに血液試料を収集し、収集の１０分以内に２０００×ｇで５分間遠心分離した。１００μＬの血漿を、２μＬの５０ｍＭ ＰＭＳＦを含有する１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに移した。混合後、血漿試料を分析まで−８０°Ｃで凍結した。
実施例５：ラット薬物動態試験−皮下投与
ラットにおいて、Ｇａｔｔｅｘ（登録商標）（Ａ２Ｇ突然変異を有するＧＬＰ−２ペプチド）について４つの薬物動態パラメータ：ＣＬ、Ｖｃ、ＶｔおよびＱを測定した。ＧＬＰ−２ペプチボディＡ、Ｂ、Ｅ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＯおよびＰについても同じ薬物動態パラメータを測定した。データを表５に示す。雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１群あたり３匹）の肩甲内部に皮下注射した。単回投与の検査品を１ｍｇ／ｍｌの投与レベルで注射した。検査品をＰＢＳ ｐＨ７．４中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化した。血液試料を投与の０．０８３、０．１６７、０．３３、０．５、１、２、６、２４、４８、７２、１２０、１６８、２４０、および３３６時間後に採取した。ヘパリン処理したチューブ内に血液試料を収集し、収集の１０分以内に２０００×ｇで５分間遠心分離した。１００μＬの血漿を、２μＬの５０ｍＭ ＰＭＳＦを含有する１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移した。混合後、血漿試料を分析まで−８０°Ｃで凍結した。Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）ＥＬＩＳＡを実施してＧＬＰ−２ペプチボディの濃度をアッセイした。
サンドイッチイムノアッセイは、ペプチボディの捕捉用の抗ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ抗体または抗ヒトアルブミン抗体のいずれかと、検出用のスルホタグ標識抗ＧＬＰ−２抗体とを用いて開発された。
実施例５：ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の発現および精製
ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４のコード配列を、ＣＨＯ宿主細胞株での発現のためにプラスミドにクローニングした。ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４を、２１ｃｍのベッドと４００ｍＬの樹脂とを有するＭＡｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（登録商標）カラムを用いて精製した。ＤＰＢＳを平衡化緩衝液および洗浄緩衝液の両方として使用した。溶出にはｐＨ３．０の１００ｍＭグリシンを使用した。中和緩衝液はｐＨ９．０の１Ｍトリス−ＨＣｌであり、４５ｍＬの溶出あたり１．４５ｍＬを使用した。
次に、Ａｋｔａタンパク質精製システムを精製に使用した。５カラム体積のＤＰＢＳを平衡化に使用した。６Ｌの試料を１分間あたり３５ｍＬの流速でロードした。カラムを１０カラム体積のＤＰＢＳで洗浄した。５〜１０カラム体積の１００ｍＭグリシンｐＨ３．０を用いて溶出を行い、４５ｍＬ画分を１．４５ｍＬのｐＨ９．０の１Ｍトリス−ＨＣｌで中和した。溶出画分を合わせて、４°Ｃで一晩撹拌しながら、２．５ＬのＤＰＢＳあたり７０ｍＬの試料で、ＰＢＳ ｐＨ７．４ Ｆｉｓｈｅｒ（１０×ＰＢＳから希釈）に対して透析した。
総タンパク質をＮａｎｏｄｒｏｐ、ＢｒａｄｆｏｒｄおよびＢＣＡの各々によって分析した。ＧＬＰペプチボディＢ２６４の最終濃度は、１７０ｍＬの総体積中１１ｍｇ／ｍＬであった。総収量は１．８７グラムであった。エンドトキシンレベルは、１．７２ＥＵ／ｍＬまたは約０．１５ＥＵ／ｍｇであった。
次に、ＳＥＣ−ＭＡＬＳおよびＮａｎｏＤＳＦを用いて安定性分析を実施した。ＳＥＣ−ＭＡＬＳには、Ｓｅｐａｘ Ｚｅｎｉｘ Ｃ−１５０カラムを使用した。移動相緩衝液は、最終濃度４００ｍＭ ＮａＣｌの１×ＰＢＳであった。流速は、１分あたり０．８ｍＬであった。２０マイクログラムの総タンパク質を注入した。ＮａｎｏＤＳＦでは、試料の正規化は行わないで、１０マイクロリットルの試料を使用した。データを以下の表６に示す。
実施例６：ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の発現および精製
ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４のコード配列を、ＣＨＯ宿主細胞株での発現のためにプラスミドにクローンニングした。ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４を、１７ｃｍのベッドと３００ｍＬの樹脂とを有するＭＡｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（登録商標）カラムを用いて精製した。ＤＰＢＳを平衡化緩衝液および洗浄緩衝液の両方として使用した。溶出にはｐＨ３．０の１００ｍＭグリシンを使用した。中和緩衝液はｐＨ９．０の１Ｍトリス−ＨＣｌであり、４５ｍＬの溶出あたり１．４５ｍＬを使用した。
次に、Ａｋｔａタンパク質精製システムを精製に使用した。５カラム体積のＤＰＢＳを平衡化に使用した。６Ｌの試料を１分あたり３５ｍＬの流速でロードした。カラムを１０カラム体積のＤＰＢＳで洗浄した。５〜１０カラム体積の１００ｍＭグリシンｐＨ３．０を用いて溶出を行い、４５ｍＬの画分を１．４５ｍＬのｐＨ９．０の１Ｍトリス−ＨＣｌで中和した。
溶出画分を合わせて、４°Ｃで一晩撹拌しながら、２．５ＬのｄＰＢＳあたり７０ｍＬの試料で、ＰＢＳ ｐＨ７．４ Ｆｉｓｈｅｒ（１０×ＰＢＳから希釈）に対して透析した。
総タンパク質をＮａｎｏｄｒｏｐ、ＢｒａｄｆｏｒｄおよびＢＣＡの各々によって分析した。ＧＬＰペプチボディＢ２６４の最終濃度は、１７０ｍＬの総体積中１１ｍｇ／ｍＬであった。総収量は１．８７グラムであった。
次に、ＳＥＣ−ＭＡＬＳおよびＮａｎｏＤＳＦを用いて安定性分析を実施した。ＳＥＣ−ＭＡＬＳにには、Ｓｅｐａｘ Ｚｅｎｉｘ Ｃ−１５０カラムを使用した。移動相緩衝液は、最終濃度４００ｍＭ ＮａＣｌの１×ＰＢＳであった。流速は、１分あたり０．８ｍＬであった。２０マイクログラムの総タンパク質を注入した。ＮａｎｏＤＳＦでは、試料の正規化は行わないで、１０マイクロリットルの試料を使用した。結果を以下の表７に示す。
実施例７：ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の二量体／単量体の分析
ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４のＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析は、約１４０，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を示したが、これは、二量体の大きさに相当する。ＡＵＣおよびＥＭの分析により、二量体が存在することを確認した。ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の単量体の予想分子量は５８，９７０であり、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の予想分子量は６０，２９０である。ＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析の結果を図８Ａに示す。二量体に相当するピークは約７分に現れ、単量体に相当するピークは約８分に現れる。ＳＥＣの希釈効果は、単量体／二量体遷移範囲にあることが観察された。
二量体ＧＬＰ−２−Ｆｃ（ＧＬＰ−２ペプチボディＢ）のＥＭ分析の結果を図８Ｂに示す。ＧＬＰ−２ペプチボディＫに関して図８Ｃおよび図８Ｄに示すように、より多くの二量体が、濃度を低下させて４°Ｃで時間を長くすると出現した。ＧＬＰ−２ペプチボディＫのＡＵＣおよびＳＥＣ分析の結果を図９Ａおよび図９Ｂに示す。図９Ａは、沈降係数（ＳＥＣ）分布プロファイルの重ね合わせを示す。試料は１〜８μＭの範囲であるが、ＳＥＣ分析中、試料はカラム上で希釈されて、単量体−二量体遷移範囲内に入る。さらに、４μＬの１１．３ｍｇ／ｍＬの試料をＳＥＣ分析のために注入し、各液滴を分画し、Ａ２８０をＮａｎｏｄｒｏｐで測定して、ＳＥＣの試料濃度が単量体−二量体遷移範囲に入ることを示した。上記を要約すると、ＧＬＰ−２−Ｆｃは、ＡＵＣおよびＳＥＣ−ＭＡＬＳアッセイにおいて二量体として観察された。単量体／二量体比は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによると、濃度に基づき変化した
マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）およびナノ示差走査蛍光定量法（ＮａｎｏＤＳＦ）を実施して、二量体−単量体遷移を特徴づけた。ＭＳＴを使用して、単量体／二量体平衡解離定数Ｋｄを決定した。ＭＳＴは、分子の熱駆動拡散に基づいているのに対し、ＮａｎｏＤＳＦは、Ｔｒｐ蛍光に基づいており、熱安定性Ｔｍに一般的に使用される。図９Ｃに示すように、ＭＳＴをＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の両方について実施した。ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４のＫｄは、１５９±３１ｎＭであった。ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４のＫｄは、ＰＢＳ中で１５９±２９ｎＭ、０．４Ｍ ＮａＣｌ含有ＰＢＳ中で１５９±３２ｎＭであった。また、テデュグルチドのＫｄは、ＭＳＴを用いると２４±３μＭである。
ＮａｎｏＤＳＦアッセイでは、室温が使用され、ＧＬＰ−２−Ｆｃ自己会合中に潜在的に立体構造変化を受けるＧＬＰ−２中の１つのトリプトファンが標的とされる。図９Ｄを参照されたい。タンパク質からのトリプトファン蛍光のみがシグナルに寄与する。トリプトファンが埋没しているかまたは安定している場合、ピークは３３０ｎｍにあり、トリプトファンが露出しているかまたは柔軟性に富む場合、ピークは３５０ｎｍにある。ＧＬＰ−２ペプチボディＢに関して、様々な希釈のＧＬＰ−２ペプチボディについて室温で０．８〜０．８５の比が観察された。結果を図９Ｅに示す。図９Ｆに示す結果のシグモイドフィットプロットから、ＧＬＰ−２ペプチボディは、１０４３±１５４ｎＭのＫｄを有する。また、テデュグルチドのＫｄは、ＮａｎｏＤＳＦで７７±１４μＭである。
実施例８：ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４についてのマウス薬物動態データ
薬物動態分析をＣＤ１マウスで実施した。解離定数（ｋａ）は３．０４日−１であり、ＣＬ／Ｆは８１．３ｍＬ／日／ｋｇであり、Ｖｃは２１３ｍＬ／ｋｇである。マウスを群分けし、１４日の期間にわたって、１つの群には０．４５ｍｇ／ｋｇを３日ごとに（Ｑ３Ｄ）投与し、別の群には１．５ｍｇ／ｋｇをＱ３Ｄで投与し、別の群には４．５ｍｇ／ｋｇをＱ３Ｄで投与し、別の群には１５ｍｇ／ｋｇをＱ３Ｄで投与した。投薬を中止した後、濃度を３、９、１４、および２１日後に測定した。結果を図１０Ａに示す。
実施例９：ＧＬＰ−２ペプチボディＫ（Ｃ末端リジンを有する）およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４（Ｃ末端リジンを有さない）の薬物動態の比較
１ｍｇ／ｋｇの総ＧＬＰ−２ペプチボディＫタンパク質を、６匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットからなる１つの群に皮下投与した。１ｍｇ／ｋｇの総ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４タンパク質を、６匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットからなる別の群に静脈内投与した。１ｍｇ／ｋｇの総ＧＬＰ−２ペプチボディＢタンパク質を、５匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットからなる第３の群に皮下投与した。１ｍｇ／ｋｇの総ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４タンパク質を、５匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットからなる第４の群に皮下投与した。
上記のすべての群について、血漿試料を、投与前および投与後の次の時点：５分（１日目）、１０分（１日目）、２０分（１日目）、３０分（１日目）、１時間（１日目）、２時間（１日目）、６時間（１日目）、２４時間（２日目）、４８時間（３日目）、７２時間（４日目）、１２０時間（６日目）、１６８時間（８日目）、２４０時間（１１日目）、および３３６時間（１５日目）に採取した。
静脈内投与したＧＬＰ−２ペプチボディＫおよびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４を比較する薬物動態データを示す表を図１０Ｂに示す。皮下投与したＧＬＰ−２ペプチボディＫおよびＧＬ−２ペプチボディＫ２７４を比較する薬物動態データを示す表を図１０Ｃに示す。データは、ＧＬＰ−２ペプチボディＫとＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４が薬物動態の観点から同一であることを示す。
実施例１０：テデュグルチド、ＧＬＰ−２ペプチボディＢ、およびＧＬＰ−２ペプチボディＫを用いたカニクイザルの薬物動態研究
テデュグルチド、ＧＬＰ−２ペプチボディＢおよびＧＬＰ−２ペプチボディＫの薬物動態研究を、ＧＬＰ−２濃度のバイオマーカーとしてアッセイされるシトルリンを用いて、カニクイザルにおいて作製した。本研究では、６匹の雄カニクイザルの群に１日目に１２．５ｎｍｏｌ／ｋｇのテデュグルチドを皮下投与した。次に、２匹のサルからなる１セットについて、２５ｎｍｏｌ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＢを７日目、２１日目、２８日目、３５日目、および４２日目に静脈内投与した。３匹のサルからなる別のセットについては、２５ｎｍｏｌ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＢを７日目、２１日目、２８日目、３５日目、および４２日目に皮下投与した。別のサルのセットについては、５ｎｍｏｌ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＫを７日目、２１日目、２８日目、３５日目、および４２日目に静脈内投与（２匹のサル）および皮下投与（３匹のサル）した。別のサルのセットについては、２５ｎｍｏｌ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＫを７日目、２１日目、２８日目、３５日目、および４２日目に皮下投与（３匹のサル）および静脈内投与（２匹のサル）した。
皮下テデュグルチドについての結果を図１１Ａに示す。結合定数（ｋａ）は９．６７日−１（ＳＤ＝１．３、１３％）であり、ＣＬ／Ｆは７，４００ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝５８０、８％）であり、Ｖｃは２１８ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝３９、１８％）である。
静脈内および皮下ＧＬＰ−２ペプチボディＢについての結果を図１１Ｂに示す。０．７５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与の単回投与薬物動態（ＳＤＰＫ）について、ＣＬは９．５ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝３．２、３３％）であり、Ｖｃは１７．１ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝３．３、１９％）であり、Ｖｔは２７．６ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝７．２、２６％）であり、Ｑは２６．７ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝２．３、２４％）である。０．７５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与の複数回投与薬物動態（ＭＤＰＫ）について、ＣＬは１０．０ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝３．３、３３％）であり、Ｖｃは１８．７ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝３．８、２１％）であり、Ｖｔは３２．９ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝７．７、２３％）であり、Ｑは２８．９ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝７．６、２６％）である。ＳＤＰＫ（皮下、０．７５ｍｇ／ｋｇ）について、結合定数（ｋａ）は１．５２日−１（ＳＤ＝０．３７、２４％）であり、ＣＬ／Ｆは１７．７ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝１４、８０％）であり、Ｖｃは９２．４ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝３２、３５％）である。ＭＤＰＫ（皮下、０．７５ｍｇ／ｋｇ）について、結合定数（ｋａ）は１．５９日−１（ＳＤ＝０．２３、１６％）であり、ＣＬ／Ｆは１７．７ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝４．２、２４％）であり、Ｖｃは９４．０ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝３０、３２％）である。
静脈内および皮下ＧＬＰペプチボディＫについての結果を図１１Ｃに示す。ＳＤＰＫ（静脈内、０．７５ｍｇ／ｋｇ）について、ＣＬは１７．２ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝１．２、７％）であり、Ｖｃは３２．３ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝１．０、３％）であり、Ｖｔは３２．９ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝１２、３７％）であり、Ｑは２９．１ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝２．３、８％）である。ＭＤＰＫ（静脈内、０．７５ｍｇ／ｋｇ）について、ＣＬは１９．３ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝１．５、８％）であり、Ｖｃは３６．５ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝２．０、５％）であり、Ｖｔは３３．９ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝５．１、１５％）であり、Ｑは２７．０ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝９．５、２３％）である。ＳＤＰＫ（皮下、０．７５ｍｇ／ｋｇ）について、結合定数（ｋａ）は１．５６日−１（ＳＤ＝０．４９、３１％）であり、ＣＬ／Ｆは３３．０ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝６．７、２０％）であり、Ｖｃは１０７ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝１６、１５％）である。ＭＤＰＫ（皮下、０．７５ｍｇ／ｋｇ）について、結合定数（ｋａ）は１．７０日−１（ＳＤ＝０．４５、２６％）であり、ＣＬ／Ｆは３２．４ｍＬ／日／ｋｇ（ＳＤ＝５．８、１８％）であり、Ｖｃは１１１ｍＬ／ｋｇ（ＳＤ＝２０、１７％）である。
週１回（ＱＷ）で３０μｇ／ｋｇの用量がカニクイザル薬物動態データから見積もられるが、インビボでの効力の違いを調整するために、用量を１０倍高く（３００μｇ／ｋｇ）すべきである。次の表は、ＣＬに関する指数が０．８５に等しく、カニクイザルの体重が３．５ｋｇに等しく、ヒトの体重が７０ｋｇに等しい場合の、ヒトの静脈内および皮下パラメータの予測を示す。
１．５ｍＬの皮下注射の場合、濃度は１５ｍｇ／ｍＬになるあろう。２．０ｍＬの皮下注射の場合、濃度は１０ｍｇ／ｍＬになるであろう。
実施例１１：ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４を用いた薬力学的プラトー研究
主要評価項目として総体重に対する小腸重量の測定値および絨毛長の組織学的検査を用いて、様々な用量のＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４を雌のＣＤ−１マウスで分析して薬力学的プラトーを評価した。各６匹の雌個体からなる８つの群を形成した。２つの群において、陰性対照としてビヒクルのみをＱ３Ｄで投与した。４つの群では、次の用量を１４日間にわたりＱ３Ｄで投与した：０．４５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、および１５ｍｇ／ｋｇ。１つのさらなる群では、４．５ｍｇ／ｋｇを１４日間Ｑ３Ｄで投与し、この試験は４日後の１８日目に終了した。別のさらなる群では、４．５ｍｇ／ｋｇを１４日間Ｑ３Ｄで投与し、この試験は７日後の２１日目に終了した。それら群を以下の表９に要約する。
主要評価項目について、小腸重量（ｇ）を図１２Ａに示し、体重に対して正規化された小腸重量を図１２Ｂに示し、体重に対して正規化された結腸重量を図１２Ｃに示す。４．５ｍｇ／ｋｇの用量が最大の効果を有していた。
さらに、体重に対して正規化された小腸重量の増加に対する効果は、図１３Ａに示すように、投薬後少なくとも５日間持続した。図１３Ｂは、ビヒクルおよびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の両方についての小腸重量の変化率（％）を図示するグラフである。
組織学的検査について、４ミクロンのパラフィン切片をヘマトキシリン＆エオシン染色およびＫｉ６７染色のために調製した。スライド全体をスキャンした後、イメージスコープを用いて、絨毛長の測定、陰窩の深さの測定、およびＫｉ６７の分析を行った。Ｋｉ６７染色の結果を図１３Ｃに示す。Ｋｉ６７陽性率（％）を用いて、用量応答試験およびウォッシュアウト試験の結果を図１３Ｄに示す。
ビヒクル処置したものおよび１５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４で処置したもの（１４日にわたるＱ３Ｄ）における絨毛長を示す組織学的スライドを図１３Ｅに示す。絨毛長（μｍ）を上記のさまざまな群について測定し、結果を図１３Ｆに示した。陰窩の深さ（μｍ）を上記の４つの群について測定し、結果を図１３Ｇに示した。
実施例１２：ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］を用いた薬力学的プラトー研究
ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］ペプチドをＣＤ−１マウスでの組織学的検査において分析して、絨毛長および陰窩の深さを評価した。本試験で使用するＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］ペプチドは、ペプチド合成装置を用いて調製した。各々６匹の雌個体からなる８つの群を形成した。２つの群では、陰性対照としてビヒクルのみを１日２回（ＢＩＤ）投与した。６つの群では、次の用量を１５日間にわたりＢＩＤで投与した：０．０１２５ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０５０ｍｇ／ｋｇ、０．１００ｍｇ／ｋｇ、０．２５０ｍｇ／ｋｇおよび０．５００ｍｇ／ｋｇ。１つのさらなる群では、０．５００ｍｇ／ｋｇを１４日間ＢＩＤで投与し、この試験は２日後の１６日目に終了した。別のさらなる群において、０．５００ｍｇ／ｋｇを１４日間ＢＩＤで投与し、この試験は２日後の１８日目に終了した。別のさらなる群では、０．５００ｍｇ／ｋｇを１０日間ＢＩＤで投与し、この試験は２日後の２１日目に終了した。それら群を以下の表１０に要約する。
組織学的検査について、４ミクロンのパラフィン切片をヘマトキシリン＆エオシン染色およびＫｉ６７染色のために調製した。スライド全体をスキャンした後、イメージスコープを用いて、絨毛長の測定、陰窩の深さの測定、およびＫｉ６７の分析を行った。Ｋｉ６７染色の結果を図１４Ａに示す。Ｋｉ６７陽性率（％）を用いて、用量応答試験の結果を図１４Ｂに示す。
図１４Ｃは、ビヒクル、０．０５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］および０．５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の用量を１５日にわたりＢＩＤで投与した雄でのＫｉ６７陽性の程度を、１５日にわたり同じものを投与した雌雄間の比較と共に示す。
ビヒクル処置したものおよび０．５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］で処置したもの（１４日にわたるＢＩＤ）における絨毛長を示す組織学的スライドを図１４Ｄに示す。絨毛長（μｍ）を上記のさまざまな群について測定し、結果を図１４Ｅに示した。図１４Ｆは、ビヒクル、０．０５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］および０．５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の用量を１５日にわたりＢＩＤで投与した雄における絨毛長（μｍ）を、１５日にわたり同じものを投与した雌雄間の比較と共に示す。
陰窩の深さ（μｍ）を上記のさまざまな群について測定し、結果を図１４Ｇに示した。図１４Ｈは、ビヒクル、０．０５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］および０．５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］の用量を１５日にわたりＢＩＤで投与した雄における陰窩の深さを、１５日間にわたり同じものを投与した雌雄間での比較と共に示す。
実施例１３：ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］、ＧＬＰペプチボディＢ２６４およびＧＬＰペプチボディＫ２７４を用いた用量応答試験
主要評価項目として絶対的小腸重量（ｇ）の測定値および総体重に対する百分率としての相対的小腸重量を用いて、ペプチド合成装置を用いて調製した様々な用量のＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］ペプチドを分析して薬物動態特性および薬力学的特性を評価した。各６匹の雌個体からなる３つの群を以下の表１１に示すように形成した：
主要評価項目として絶対的小腸重量（ｇ）の測定値、および総体重に対する百分率としての相対的小腸重量を用いて、様々な用量のＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４を分析して、薬物動態特性および薬力学的特性を評価した。各６匹の雌ＣＤ−１マウスからなる８つの群を形成した。２つの群では、陰性対照としてビヒクルのみを３日ごとに（Ｑ３Ｄ）投与した。試験期間は、これらの群のうちの１つについては１４日間、その他の群については２１日間とした。４つのさらなる群では、以下の用量を１４日にわたりＱ３Ｄで投与した：０．４５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ。１つのさらなる群では、４．５ｍｇ／ｋｇを１４日間Ｑ３Ｄで投与し、試験期間を１８日間とした。１つのさらなる群では、４．５ｍｇ／ｋｇを１４日間Ｑ３Ｄで投与し、試験期間を２１日間とした。これらの群の全てを以下の表１２に要約する。
上記のＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４群の主要評価項目について、小腸重量（ｇ）を図１５Ａに示し、体重に対して正規化された小腸重量を図１５Ｂに示す。図１５Ｃは、１５日目の時点での小腸重量を体重に対する百分率として示す。Ｘ軸には用量（ｍｇ／ｋｇ）を列挙する。
図１５Ｄは、１５日目における対照に対する腸重量の変化率（％）を示すグラフである。
上記の群１、２、５、７について、総体重と比較した小腸重量の分析を行った。結果を図１５Ｅに示す。ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４に関する図１５Ｅにおいて、「ビヒクル２、投与２日後」は、１４日目の群１に相当し、「投与２日後」は、１４日目の群５に相当し、「投与４日後」は、１８日目の群７に相当し、「投与８日後」は、２０日目の群８に相当し、「ビヒクル２、投与８日後」は、２０日目の群２に相当する。
図１６は、対照に対するＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４およびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の両方についての小腸重量の相対的変化、およびウォッシュアウトを要約する。
実施例１４：ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４における絨毛長および陰窩の深さの組織学的検査
主要評価項目として総体重に対する小腸重量の測定値および絨毛長の組織学的検査を用いて、ＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４の様々な用量を分析して、薬力学的プラトーを評価した。各６匹の雌ＣＤ−１マウスからなる１１の群を形成した。それら群を以下の表１３に要約する。
組織学的検査について、４ミクロンのパラフィン切片をヘマトキシリン＆エオシン染色およびＫｉ６７ ＩＨＣ染色のために調製した。スライド全体をスキャンした後、イメージスコープを使用して、絨毛長および陰窩の深さを測定し、Ｋｉ６７を分析した。Ｋｉ６７に対する抗体は、Ａｄｃａｍ（登録商標）によって販売されているウサギ抗体であり、カタログ番号ａｂ６１６６６７である。抗体は、１：１００の作業濃度で使用し、Ｌｅｉｃａ（登録商標）Ｒｅｆｉｎｅ Ｋｉｔを用いて検出した。Ｋｉ６７染色結果を図１７Ａに示す。Ｋｉ６７陽性率（％）を用いて、用量応答試験およびウォッシュアウト試験の結果を図１７Ｂに示す。
ビヒクルと０．５ｍｇ／ｋｇ／日のＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］処置群との比較を図１７Ｃに示す。ビヒクルと１５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４処置群との比較を図１７Ｄに示す。絨毛長（μｍ）を上記の群１および群２（ＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］）について測定し、結果を図１７Ｅに示した。絨毛長（μｍ）を上記の群１〜３（ビヒクルおよびＧＬＰ−２［Ａ２Ｇ］）について測定し、結果を図１７Ｅに示した。絨毛長（μｍ）を上記の群４および群６〜群９（ビヒクルおよびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４）について測定し、結果を図１７Ｆに示した。絨毛長（μｍ）を上記の群４、５、および９〜１１（ビヒクルおよびＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４）について測定し、結果を図１７Ｇに示した。
様々な用量でのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との絨毛長の比較を図１８に示す。図１９は、１４日間にわたるＱ３Ｄ投薬レジメンが終了した後のウォッシュアウト期の間の様々な時点での４．５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４と４．５ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との絨毛長の比較を示す。ウォッシュアウト期が終了した後の初日は１５日目であり、２日目は１６日目などである。ウォッシュアウト期の２日目は１５日目に一致する。ウォッシュアウト期の５日目は１８日目に一致する。ウォッシュアウト期の８日目は２１日目に一致する。Ｄ１５（１５日後）、Ｄ１８（１８日後）、およびＤ２１（２１日後）は、絨毛長が測定された１５日目、１８日目、および２１日目に相当する。
実施例１５：マウス薬物動態試験および薬力学試験のデータの要約
図２０Ａは、１４日間のＱ３Ｄ投薬レジメンにわたるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の濃度の比較を示す。実線は予想濃度であり、点線は様々な観察濃度を表す。
図２０Ｂは、マウスにおけるＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４およびＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の薬物動態データの要約を示す。
図２０Ｃは、様々な用量でのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との間の絨毛長の比較を示す。図２０Ｄは、様々な濃度でのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４との間の絨毛長の比較を示す。
図２０Ｅは、体重に対する百分率としての小腸重量を主要評価項目として用いて、様々な用量でのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の比較を示す。図２０Ｆは、体重に対する百分率としての小腸重量を主要評価項目として用いて、様々な濃度でのＧＬＰ−２ペプチボディＢ２６４とＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４の比較を示す。
実施例１６：ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４は、食餌性脂肪吸収を高める
マウスで脂肪耐性アッセイを実施し、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４が食餌性脂肪の吸収を促進する能力を評価した。食餌性脂肪は、遊離脂肪酸およびグリセリドに加水分解され、腸絨毛を介して輸送され、腸細胞に吸収される。腸細胞はトリグリセリドを合成し、それが血流に入る。このような食後のトリグリセリドは、高脂肪食の摂取後約３時間で血流中でピークとなる。
ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４は、絨毛長を長くすることによって、短腸症候群のマウスモデルにおける脂肪酸の吸収を改善すると仮定される。食後のトリグリセリドのピークの上昇を分析すると、そのような吸収の増加の検出が可能となる。
雌マウスをそれぞれ３０匹ずつの２つの群に分けた。両群を４．５ｍｇ／ｋｇのＫ２７４ペプチボディ（処置群）またはビヒクル（対照群）のいずれかで、３日ごとに合計１３日間処置した。処置開始後１４日目に、両群におけるマウスを６時間絶食させた後、１０ｍＬ／ｋｇのオリーブ油ボーラスを投与した。処置群および対照群におけるマウスを各６匹の動物からなる６つの下位群に分けた。下位群ごとに６匹のマウスのそれぞれから、０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、または３時間後に１００μＬの血液試料を採取した。血液をＫ２ＥＤＴＡチューブに収集し、遠心分離して血漿を得た。ＴＲＩＧＢ分析キットを用いて、Ｃｏｂａｓ Ｃ３１１機（Ｒｏｃｈｅ）で血漿トリグリセリド濃度を測定した。
データを図２１に示す。血流中の食後トリグリセリド濃度は、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４で処置したマウスで有意に高く、ＧＬＰ−２ペプチボディＫ２７４が脂肪酸の吸収を改善することを示した。
本発明は、本明細書に記載の具体的な実施形態によって範囲を限定されるべきではない。実際、本明細書に記載の具体的な実施形態に加えて、本発明の様々な改変が、上述の明細書および添付の図面から、当業者に明らかとなることになる。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に収まるよう企図されている。すべての値が近似値であり、説明のために提供されることは、さらに理解されるべきである。
特許、特許出願、刊行物、製品の説明、およびプロトコルは、本出願全体を通して引用されており、その開示は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (106)

  1. グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−２）ペプチボディであって、
    ａ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｂ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｃ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｄ）ＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｅ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｆ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｇ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｈ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    ｉ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、および
    ｊ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２ペプチボディ、
    またはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される、ＧＬＰ−２ペプチボディ。
  2. ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディ。
  3. ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディ。
  4. 請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディと、担体または薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  5. 請求項２に記載のＧＬＰ−２ペプチボディと、担体または薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  6. 請求項３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディと、担体または薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  7. 注射または注入による投与に適した液体として製剤化された、請求項４〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  8. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディの持続放出、延長放出、遅延放出または徐放のために製剤化された、請求項４〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  9. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  10. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  11. ポリヌクレオチドであって、
    ａ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｂ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｃ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｄ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｅ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｆ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｇ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｈ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    ｉ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、および
    ｊ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチド、
    からなる群より選択されるＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。
  12. ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。
  13. 前記ＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドをコードする配列が、配列番号３のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載のポリヌクレオチド。
  14. ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。
  15. 前記ＧＬＰ−２前駆体ポリペプチドをコードする配列が、配列番号９のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
  16. 請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  17. 請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
  18. 前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項１７に記載の宿主細胞。
  19. 前記宿主細胞が、流加回分細胞培養規模に十分なレベルで請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディを発現する、請求項１８に記載の宿主細胞。
  20. 腸管皮膚瘻（ＥＣＦ）患者を処置するための方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  21. 腸管皮膚瘻（ＥＣＦ）患者を処置するための方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  22. 前記患者による腸管吸収を高めるのに有効である、請求項２０または２１に記載の方法。
  23. 前記患者における胃液分泌の量を低減するのに有効である、請求項２０または２１に記載の方法。
  24. 前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である、請求項２０または２１に記載の方法。
  25. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である、請求項２０または２１に記載の方法。
  26. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが皮下投与される、請求項２０〜２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項２７に記載の方法。
  29. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項２６に記載の方法。
  30. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが静脈内投与される、請求項２０〜２５のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項３０に記載の方法。
  34. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項３１に記載の方法。
  35. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項３４に記載の方法。
  36. 閉塞性黄疸患者を処置するための方法であって、前記閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  37. 閉塞性黄疸患者を処置するための方法であって、前記閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  38. 血清ビリルビンのレベルが、前記処置の前の血清ビリルビンのレベルと比較して低減される、請求項３６または３７に記載の方法。
  39. 前記患者における腸管吸収を高めるのに有効である、請求項３６または３７に記載の方法。
  40. 前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である、請求項３６または３７に記載の方法。
  41. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である、請求項３６または３７に記載の方法。
  42. 前記患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である、請求項３６または３７に記載の方法。
  43. 前記患者における腸管バリア機能を改善し、前記患者の小腸を横切るバクテリアルトランスロケーションの発生率を低減するのに有効である、請求項３６または３７に記載の方法。
  44. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが皮下投与される、請求項３６〜４３のいずれか１項に記載の方法。
  45. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが０．３〜１．０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項４４に記載の方法。
  48. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが静脈内投与される、請求項３６〜４３のいずれか１項に記載の方法。
  50. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが０．３〜１．０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項５０に記載の方法。
  52. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項４７に記載の方法。
  53. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項５２に記載の方法。
  54. 患者の消化管に対する放射線障害を処置または予防するための方法であって、前記患者の消化管に対する放射線障害を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  55. 患者の消化管に対する放射線障害を処置または予防するための方法であって、前記患者の消化管に対する放射線障害を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  56. 前記放射線障害が小腸におけるものである、請求項５４または５５に記載の方法。
  57. 消化管の細胞におけるアポトーシスを低減するのに有効である、請求項５４または５５に記載の方法。
  58. 前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である、請求項５４または５５に記載の方法。
  59. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である、請求項５４または５５に記載の方法。
  60. 前記患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である、請求項５４または５５に記載の方法。
  61. 前記患者における腸管バリア機能を改善するのに有効である、請求項５４または５５に記載の方法。
  62. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが皮下投与される、請求項５４〜６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項６３に記載の方法。
  65. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項６２に記載の方法。
  66. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが静脈内投与される、請求項５４〜６１のいずれか１項に記載の方法。
  68. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項６５に記載の方法。
  69. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項６６に記載の方法。
  70. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項６５に記載の方法。
  71. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項６６に記載の方法。
  72. 患者における放射線誘発性腸炎を処置または予防するための方法であって、前記患者における放射線誘発性腸炎を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  73. 患者における放射線誘発性腸炎を処置または予防するための方法であって、患者の消化管に対する放射線障害を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  74. 前記消化管の細胞におけるアポトーシスを低減するのに有効である、請求項７２または７３に記載の方法。
  75. 前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である、請求項７２または７３に記載の方法。
  76. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である、請求項７２または７３に記載の方法。
  77. 前記患者の小腸における陰窩の組織化を増大させるのに有効である、請求項７２または７３に記載の方法。
  78. 前記患者における腸管バリア機能を改善するのに有効である、請求項７２または７３に記載の方法。
  79. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが皮下投与される、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の方法。
  80. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８０に記載の方法。
  82. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項７９に記載の方法。
  83. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８２に記載の方法。
  84. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが静脈内投与される、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の方法。
  85. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項８２に記載の方法。
  86. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８３に記載の方法。
  87. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、５〜８日ごとに１回、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項８２に記載の方法。
  88. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８３に記載の方法。
  89. 残存小腸とつながった結腸を呈する短腸症候群の患者を処置するための方法であって、前記短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項１に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  90. 残存小腸とつながった結腸を呈する短腸症候群の患者を処置するための方法であって、前記短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを用いて、請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  91. 前記残存小腸は、長さが少なくとも２５ｃｍ、少なくとも５０ｃｍ、または少なくとも７５ｃｍである、請求項８９または９０に記載の方法。
  92. 前記患者における腸管吸収を高めるのに有効である、請求項８９または９０に記載の方法。
  93. 前記患者の小腸における絨毛高を増大させるのに有効である、請求項８９または９０に記載の方法。
  94. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増大させるのに有効である、請求項８９または９０に記載の方法。
  95. 糞便湿重量を低下させる、尿湿重量を増大させる、小腸を横切るエネルギー吸収を増大させる、または小腸を横切る水の吸収を増大させるのに有効である、請求項８９または９０に記載の方法。
  96. 前記患者が非経口栄養に依存している、請求項８９または９０に記載の方法。
  97. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが皮下投与される、請求項８７〜９６のいずれか１項に記載の方法。
  98. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項９８に記載の方法。
  100. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い皮下投与される、請求項９７に記載の方法。
  101. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１００に記載の方法。
  102. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが静脈内投与される、請求項８７〜９６のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記ＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記投与されるＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１０３に記載の方法。
  105. 請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが、２〜１４日ごとに１回、０．２〜１．４ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従い静脈内投与される、請求項１００に記載の方法。
  106. 前記投与される請求項２または３に記載のＧＬＰ−２ペプチボディが１０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１０５に記載の方法。
JP2020511529A 2017-08-22 2018-08-21 Ｇｌｐ－２融合ポリペプチドならびに消化管の状態を処置および予防するための使用 Active JP7249492B2 (ja)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762548601P 2017-08-22 2017-08-22
US62/548,601 2017-08-22
US201862621144P 2018-01-24 2018-01-24
US62/621,144 2018-01-24
US201862659394P 2018-04-18 2018-04-18
US62/659,394 2018-04-18
PCT/US2018/047171 WO2019040399A1 (en) 2017-08-22 2018-08-21 GLP-2 FUSION POLYPEPTIDES AND USES THEREOF FOR TREATING AND PREVENTING GASTROINTESTINAL DISORDERS

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2020531030A true JP2020531030A (ja) 2020-11-05
JP2020531030A5 JP2020531030A5 (ja) 2021-07-26
JP7249492B2 JP7249492B2 (ja) 2023-03-31

Family

ID=65440156

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020511529A Active JP7249492B2 (ja) 2017-08-22 2018-08-21 Ｇｌｐ－２融合ポリペプチドならびに消化管の状態を処置および予防するための使用

Country Status (9)

Country Link
US (2) US20200199192A1 (ja)
EP (1) EP3672621A4 (ja)
JP (1) JP7249492B2 (ja)
CN (1) CN111182916A (ja)
AU (1) AU2018321841A1 (ja)
BR (1) BR112020003736A2 (ja)
CA (1) CA3071966A1 (ja)
TW (1) TW201920242A (ja)
WO (1) WO2019040399A1 (ja)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020086741A1 (en) * 2018-10-24 2020-04-30 Shire-Nps Pharmaceuticals, Inc. Glp-2 fusion polypeptides and uses for treating and preventing gastrointestinal conditions
BR112022006546A2 (pt) 2019-10-07 2022-08-30 Kallyope Inc Agonistas de gpr119
EP4126004A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 Zealand Pharma A/S Agonist combination
AU2021275038A1 (en) 2020-05-19 2022-12-22 Kallyope, Inc. AMPK activators
WO2021263040A1 (en) * 2020-06-26 2021-12-30 Shire-Nps Pharmaceuticals, Inc. Stable peptibody formulations
CN116390925A (zh) 2020-06-26 2023-07-04 卡尔优普公司 Ampk活化剂
WO2023168405A2 (en) * 2022-03-03 2023-09-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Viral vectors encoding glp-2 receptor agonist fusions and uses thereof in treating short bowel syndrome

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009510999A (ja) * 2005-07-29 2009-03-19 エーエムプロテイン コーポレイション キメラ治療剤
JP2010502195A (ja) * 2006-08-31 2010-01-28 セントカー・インコーポレーテツド Ｇｌｐ−２ミメティボディ、ポリペプチド、組成物、方法および用途
JP2014526254A (ja) * 2011-09-12 2014-10-06 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド グルカゴン様ペプチド−２組成物およびその作製法および使用法
JP2015503554A (ja) * 2011-12-30 2015-02-02 ハンミ サイエンス カンパニー リミテッドＨａｎｍｉ Ｓｃｉｅｎｃｅｃｏ．，Ｌｔｄ． 免疫グロブリンフラグメントを用いた部位特異的ｇｌｐ−２薬物結合体
WO2016108654A1 (ko) * 2014-12-31 2016-07-07 주식회사 제넥신 Glp 및 면역글로불린 하이브리드 fc 융합 폴리펩타이드 및 이의 용도

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5149636A (en) 1982-03-15 1992-09-22 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4956288A (en) 1988-04-22 1990-09-11 Biogen, Inc. Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA
US5643252A (en) 1992-10-28 1997-07-01 Venisect, Inc. Laser perforator
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
JP2009514508A (ja) * 2005-10-24 2009-04-09 セントカー・インコーポレーテツド Ｇｌｐ−２ミメティボディ、ポリペプチド、組成物、方法および用途
US8580922B2 (en) 2011-03-04 2013-11-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Peptide linkers for polypeptide compositions and methods for using same
JP2017504598A (ja) * 2013-12-20 2017-02-09 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション 脂質化インクレチン受容体リガンドヒト免疫グロブリンｆｃ−領域融合ポリペプチド
CN107987170B (zh) * 2016-10-27 2018-12-18 浙江道尔生物科技有限公司 一种用于治疗肠道疾病的融合蛋白
CN111629745A (zh) * 2017-11-06 2020-09-04 夏尔-Nps医药品有限公司 用于在手术前、期间或之后投与的glp-2类似物和肽体(peptibodies)

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009510999A (ja) * 2005-07-29 2009-03-19 エーエムプロテイン コーポレイション キメラ治療剤
JP2010502195A (ja) * 2006-08-31 2010-01-28 セントカー・インコーポレーテツド Ｇｌｐ−２ミメティボディ、ポリペプチド、組成物、方法および用途
JP2014526254A (ja) * 2011-09-12 2014-10-06 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド グルカゴン様ペプチド−２組成物およびその作製法および使用法
JP2015503554A (ja) * 2011-12-30 2015-02-02 ハンミ サイエンス カンパニー リミテッドＨａｎｍｉ Ｓｃｉｅｎｃｅｃｏ．，Ｌｔｄ． 免疫グロブリンフラグメントを用いた部位特異的ｇｌｐ−２薬物結合体
WO2016108654A1 (ko) * 2014-12-31 2016-07-07 주식회사 제넥신 Glp 및 면역글로불린 하이브리드 fc 융합 폴리펩타이드 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
TW201920242A (zh) 2019-06-01
US20230031280A1 (en) 2023-02-02
CA3071966A1 (en) 2019-02-28
BR112020003736A2 (pt) 2020-09-08
AU2018321841A1 (en) 2020-02-20
CN111182916A (zh) 2020-05-19
EP3672621A4 (en) 2021-11-24
WO2019040399A1 (en) 2019-02-28
JP7249492B2 (ja) 2023-03-31
EP3672621A1 (en) 2020-07-01
US20200199192A1 (en) 2020-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7249492B2 (ja) Ｇｌｐ－２融合ポリペプチドならびに消化管の状態を処置および予防するための使用
JP6722175B2 (ja) 代謝障害を処置するための組成物及びその使用方法
JP2022046520A (ja) ＩＬ－２２ポリペプチド及びＩＬ－２２Ｆｃ融合タンパク質並びに使用方法
TW201617364A (zh) 用於治療代謝異常之組成物及方法
JP7349995B2 (ja) ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び使用方法
CN103945871A (zh) 用于治疗代谢疾病的融合蛋白
TWI724392B (zh) 生長分化因子15促效劑化合物及其使用方法
CN103649127A (zh) 用于代谢病症和疾病治疗的组合物、应用和方法
TW201420606A (zh) 同源二聚體蛋白
US20210070829A1 (en) Multi-domain active protein for treating metabolic diseases
ES2932861T3 (es) Composiciones de IL-22 Fc y procedimientos de uso
CN106573072A (zh) 降低血清胆固醇的方法
WO2020228360A1 (zh) 一种治疗代谢疾病的融合蛋白
AU2017358289A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating hepatitis, hepatic fibrosis, and hepatic cirrhosis comprising fusion proteins
US20180280474A1 (en) Treatment of bile acid disorders
CN114341195A (zh) 治疗性融合蛋白
JP2022512688A (ja) Ｇｌｐ－２融合ポリペプチドならびに消化管の状態の処置および予防のための使用
TWI835773B (zh) 組合物及使用方法
CN109328071A (zh) Gm-csf变体和使用方法
JP2023509189A (ja) Ｒｓｐｏ１タンパク質およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20200228

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210527

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210527

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20220316

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220407

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220624

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220822

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220930

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230126

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712

Effective date: 20230220

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230220

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7249492

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350