TW201920242A - Glp-2融合多肽及用於治療及預防胃腸病症之用途 - Google Patents

Glp-2融合多肽及用於治療及預防胃腸病症之用途 Download PDF

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安琪拉 諾頓
羅格 貝蒂娜 史塔克
孫可豐
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Abstract

本發明描述GLP-2與免疫球蛋白之Fc區的融合蛋白。該GLP-2及該等Fc區由胺基酸所構成之連接子分隔。該等融合蛋白在體內存留及保持活性之時段長於GLP-2自身。本發明揭示使用該等融合蛋白治療及預防腸外腸皮瘻管、對胃腸道之輻射損傷、阻塞性黃疸及短腸症候群的方法。

Description

GLP-2融合多肽及用於治療及預防胃腸病症之用途
本發明揭示哺乳動物GLP-2融合多肽及蛋白質以及其作為治療劑之用途。
升糖素原之翻譯後處理產生升糖素樣肽-2 (GLP-2)，其係33胺基酸促腸生長肽激素。GLP-2用以減緩胃排空，減少胃分泌物且增加腸道血流量。GLP-2亦至少藉由促進腺管細胞來增殖刺激大腸及小腸之生長及絨毛長度以便增加黏膜上皮之表面積。
此等效果表明GLP-2可用於治療各種胃腸道病症。GLP-2在小腸中所展現之特殊及有利效果已引起人們對GLP-2用於治療腸道疾病或損傷之廣泛關注(Sinclair及Drucker, Physiology 2005: 357-65)。此外，已在大量腸損傷之臨床前模型中證實GLP-2預防或減少黏膜上皮損傷，包括化學療法誘發之黏膜炎、缺血-再灌注損傷、硫酸葡聚糖誘發之結腸炎及發炎性腸病之基因模型(Sinclair及Drucker, Physiology 2005:357-65)。
然而，向人類患者投與GLP-2自身未展示出前景。GLP-2半衰期短，此限制其用作治療劑，因為GLP-2由二肽基肽酶IV (DPP-IV)快速活體內裂解，獲得基本失活之肽。GLP-2治療劑替度魯肽由於用甘胺酸取代丙胺酸-2而具有顯著延長之半衰期。然而，因為替度魯肽在健康患者中之半衰期為約2小時且在SBS患者中為1.3小時，所以需要每日給藥。
替度魯肽已在治療短腸症候群(short bowel syndrome；SBS)中展示出治療前景，該短腸症候群通常由於病症而手術切除一些或大多數小腸而引起，該等病症諸如克羅恩氏病(Crohn's disease)、腸系膜梗塞、腸扭結、創傷、先天異常及因黏附或輻射所致之多發性狹窄。手術切除亦可包括切除所有或一部分結腸。SBS患者患有各種營養物(例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水)之吸收障礙，其可導致營養不良、脫水及體重減輕。一些患者可經由暴食維持其蛋白質及能量平衡，然而甚至更加罕見的係，患者可維持流體及電解質需求以變得獨立於非經腸流體。
GLP-2可在治療患有腸皮瘻管(ECF)之患者中展示前景，該腸皮瘻管係胃分泌物繞過小腸經由瘻管到達表皮之病症(Arebi, N.等人, Clin. Colon Rectal Surg., 2004年5月, 17(2):89-98)。ECF可自發性自克羅恩氏病及腹內癌症出現，或作為克羅恩氏病或放射線療法之併發症。ECF至少由於感染、流體損耗及營養不良而具有高發病率及死亡率。
抗DDP-IV GLP-2類似物在減少輻射誘發之細胞凋亡中展示前景(Gu, J.等人, J. Controlled Release, 2017)。細胞凋亡在輻射誘發之小腸黏膜損傷中出現。在小鼠中，GLP-2亦促進輻射後之CCD-18Co細胞存活，保護免於遭受輻射誘發之GI毒性，下調輻射誘發之發炎反應，且減少輻射後對腸之結構損傷。
GLP-2亦可在治療患有阻塞性黃疸之患者中展示前景，該阻塞性黃疸係腸屏障功能受損之病症(Chen, J.等人, World J. Gastroenterol., 2015年1月, 21(2):484-490)。在大鼠中，GLP-2降低血清膽紅素之含量且防止對腸道黏膜之結構損傷。
需要研發GLP-2之改善形式以治療胃腸道病症，該等病症包括SBS、ECF及由輻射損傷或阻塞性黃疸引起之病變。改善形式在體內保持較長時段之活性，使得所需給藥頻率較少。
本文中描述GLP-2肽體。肽體一般係GLP-2與Fc區或白蛋白之間的融合蛋白。藥物動力學資料表明，GLP-2肽體可在體內存留之時間長於GLP-2或甚至替度魯肽或Gattex。
在一個態樣中，提供選自以下之類升糖素肽(GLP-2)肽體：
a)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1)，
b)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)，
c)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 7)，
d)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 10)，
e)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 13)，
f)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 16)，
g)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 19)，
h)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 22)或其醫藥學上可接受之鹽，
i)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 25)
j)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 28)，及
k)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 30)； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在上文態樣中，以上序列(SEQ ID NO: 1、7、13、16、19、22及25)中之任一者均可進一步包含C端處之離胺酸(K)。
在一些實施例中，GLP-2肽體由GLP-2前驅體多肽加工製得，該GLP-2前驅體多肽包含與GLP-2直接連接之信號肽，以及在GLP-2與IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中之任一者之Fc區之間的連接子。多肽上之信號肽可促進GLP-2肽體自用於產生GLP-2肽體之哺乳動物宿主細胞分泌，分泌之後信號肽自GLP-2肽體裂解。可使用任何數目之信號肽。信號肽可具有以下序列：METPAQLLFLLLWLPDTTG。
在一些實施例中，GLP-2前驅體多肽包含係選自以下之信號肽：
a)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 2)，
b)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 5)，
c)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 8)，
d)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 11)，
e)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 14)，
f)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 17)，
g)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 20)，
h)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 23)或其醫藥學上可接受之鹽，
i)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 26)
j)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 29)及
k)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 30)； 或其醫藥學上可接受之鹽。
以上GLP-2前驅體多肽序列(SEQ ID NOS: 2、8、14、17、20、23及26)中之任一者可進一步包含C端處之離胺酸(K)。
Fc區可為具有LALA突變之IgG1。包含信號肽之GLP-2前驅體多肽可具有下式： 信號肽—GLP-2[A2G]—連接子—IgG1(LALA)
在一些實施例中，本文中所述之醫藥組合物進一步包含載劑或醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物經調配為適用於藉由注射或輸液投藥之液體。在一些實施例中，醫藥組合物經調配以用於GLP-2肽體之持續釋放、緩釋、延遲釋放或緩慢釋放，該GLP-2肽體例如包含SEQ ID NO: 1之GLP-2肽體或包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。在一些實施例中，以10至200 mg/mL之濃度投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7之GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 30，且以10至1000 mg/mL或50至500 mg/mL之濃度投與。
在另一態樣中，提供包含編碼本文中所述之GLP-2肽體之序列的聚核苷酸。序列可為闡述於SEQ ID NO: 3、9、15、18、21、24或27中者。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼GLP-2肽體之序列，該GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，聚核苷酸包含序列SEQ ID NO: 3。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼GLP-2肽體之序列，該GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，聚核苷酸包含序列SEQ ID NO: 9。在一些實施例中，提供載體，其包含本文所揭示之聚核苷酸中之任一者。在載體中，聚核苷酸可以可操作地連接於啟動子。
在另一態樣中，提供包含聚核苷酸之宿主細胞。在一些實施例中，宿主細胞係中國倉鼠卵巢細胞。在一些實施例中，宿主細胞以足以實現分批補料細胞培養規模之水準表達GLP-2肽體。
在另一態樣中，提供一種用於治療患有腸皮瘻管(ECF)之患者之方法，其包含使用可有效促進ECF之閉合、癒合及/或修復之給藥方案利用GLP-2肽體(例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體)治療患者。可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，該方法可有效促進該患者之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效減少該患者中胃分泌物之體積。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管深度。
在一些實施例中，皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至0.5 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。可替代地，可每三週或每月一次投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。
在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在另一態樣中，提供一種用於治療患有阻塞性黃疸之患者之方法，其包含使用可有效治療阻塞性黃疸之給藥方案，利用GLP-2肽體，例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體治療患者。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，血清膽紅素之含量與該治療之前血清膽紅素之含量相比有所降低。在一些實施例中，血清膽紅素之含量與該治療之前血清膽紅素之含量相比有所降低。在一些實施例中，該方法可有效促進該患者之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效減少該患者體內胃分泌物之體積。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善該患者中之腸屏障功能且降低細菌易位穿過該患者之小腸的速率。
在一些實施例中，皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療、改善或保護避免對胃腸道之輻射損傷，及/或其效果之方法，其包含投與GLP-2肽體，例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。給藥方案可有效治療或預防對患者之胃腸道之輻射損傷。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，輻射損傷位於小腸。在一些實施例中，該方法可有效減少胃腸道細胞之細胞凋亡。在一些實施例中，可在以輻射或放射線療法治療患者之前、與其同時或在其之後投與GLP-2肽體。
在一些實施例中，該方法可有效減少胃腸道細胞之細胞凋亡。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善該患者中之腸屏障功能。
在一些實施例中，皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg、0.2至1.4 mg/kg、或0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療、改善或預防對胃腸道之輻射誘發之腸炎，及/或其效果的方法，其包含投與GLP-2肽體，例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，該方法可有效減少胃腸道細胞之細胞凋亡。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善該患者中之腸屏障功能。
在一些實施例中，皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間、或每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間、或每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在另一態樣中，提供一種用於治療呈現結腸與殘餘小腸連續性之患有短腸症候群之患者的方法，其包含使用可有效治療短腸症候群之給藥方案，利用GLP-2肽體，例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體治療患者。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，殘餘小腸之長度為至少25 cm。在一些實施例中，殘餘小腸之長度為至少50 cm。在一些實施例中，殘餘小腸之長度為至少75 cm。在一些實施例中，以藥劑形式投與GLP-2肽體以促進呈現至少約25%結腸與殘餘小腸連續性之短腸症候群患者中的腸道吸收。
在一些實施例中，該方法可有效促進該患者之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、胺基酸、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加該患者之小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善該患者中之腸屏障功能。在一些實施例中，該方法可有效降低糞便濕重，增加尿液濕重，增加穿過小腸之能量吸收，及/或增加穿過小腸之水吸收。能量吸收可包括增加多肽、胺基酸、碳水化合物及脂肪酸中之一或多者之吸收。在一些實施例中，患者依賴於不經腸營養。
在一些實施例中，皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間、或每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，根據每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，所投與之GLP-2肽體的濃度為10至200 mg/mL。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且根據每2-14天一次在0.02至3.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7且根據每7-14天一次在0.2至1.4 mg/kg之間、或每週一次在0.3至1.0 mg/kg之間的給藥方案靜脈內投與GLP-2肽體。在一些實施例中，GLP-2肽體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或7且GLP-2肽體之濃度為10至200 mg/mL。
在本文中所述之態樣及實施例中之任一者中，可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。可根據每2-14天一次、每5-8天一次、或每週一次(QW)在0.02至3.0 mg/kg、0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg、0.02至0.05 mg/kg、0.03至0.04 mg/kg、0.05至0.10 mg/kg、0.10至0.15 mg/kg、0.2至0.3 mg/kg、0.3至0.4 mg/kg、0.4至0.5 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.7至1.0 mg/kg、0.9至1.2 mg/kg、1.0至1.5 mg/kg、1.2至1.8 mg/kg、1.5至2.0 mg/kg、1.7至2.5 mg/kg、或2.0至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每週(QW)或每兩週在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
可替代地，可根據每三週或每月一次在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。可根據每5-8天、或每週(QW)在0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg之間的給藥方案皮下投與GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)，諸如用於維護用途。可以10至200 mg/mL、10至180 mg/mL、20至160 mg/mL、25至150 mg/mL、30至125 mg/mL、50至100 mg/mL、60至90 mg/mL、約75 mg/mL、75 mg/mL、10至20 mg/mL、15至25 mg/mL、12至18 mg/mL、13-17 mg/mL、14-16 mg/mL、約15 mg/mL或15 mg/mL之濃度投與包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。
定義
除非另外規定，否則本文所使用之技術及科學術語具有與本發明所屬領域之一般熟習此項技術者通常所理解相同之含義。以下術語及其他術語之額外定義貫穿本說明書闡述。
術語「一(a/an)」及「該」不表示數量之限制，而係表示存在「至少一個」所提項。
如本申請案中所使用，術語「約」及「大致」等效使用。在存在或不存在約/大致之情況下用於本申請案之任何數值意欲涵蓋相關領域之一般技術者所瞭解的任何正常波動。如本文所用，如應用於所關注之一或多個值之術語「大約」或「約」係指類似於所陳述參考值之值。在某些實施例中，除非另有說明或另外自上下文顯而易見，否則術語「大約」或「約」係指在任一方向(大於或小於)上處於所述參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小百分比之內的一系列值(但此類數字將超出可能值之100%的情況除外)。
如本文所用，術語「載劑」及「稀釋劑」係指適用於醫藥調配物製備之醫藥學上可接受(例如對於向人類投與安全且無毒)之載劑或稀釋物質。例示性稀釋劑包括無菌水、抑菌注射用水(BWFI)、pH值緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理鹽水)、無菌生理鹽水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。
如本文所用，術語「融合蛋白」或「嵌合蛋白」係指經由連接兩種或更多種最初分離之蛋白質或其部分產生的蛋白質。在一些實施例中，連接子或間隔子將存在於各蛋白質之間。
如本文所用，術語「半衰期」係如在時段起點所量測，某一數量(諸如蛋白質濃度或活性)降至其值之一半所需的時間。
「GLP-2肽體」、「GLP-2肽體部分」或「GLP-2肽體片段」及/或「GLP-2肽體變異體」及類似者可具有、模仿或模擬至少一種GLP-2肽之至少一種生物活性，諸如但不限於活體外、原位及/或較佳地活體內配位體結合。舉例而言，適合之GLP-2肽體、特定部分或變異體亦可調節、增加、修飾、活化至少一種GLP-2受體信號傳導或其他可量測或可偵測活性。GLP-2肽體可具有與蛋白質配位體(例如GLP-2受體)之適合的親和力結合且視情況具有低毒性。GLP-2肽體可用於持續延長之時段治療患者，具有良好至極佳之症狀緩解及低毒性。
如本文所用，術語「提高」、「增加」或「減少」或語法同等物指示相對於基線量測之值，諸如同一個體中在起始本文所述之治療前的量測或對照受試者(或多個對照受試者)中在不存在本文所述之治療下的量測。「對照受試者」係罹患與所治療受試者相同之疾病形式，年齡與所治療受試者相同之受試者。
如本文所用，術語「活體外」係指事件發生在人工環境中，例如試管或反應容器中、細胞培養物中等，而非多細胞生物體內。
如本文所用，術語「活體內」係指事件發生在多細胞生物體內，諸如人類及非人類動物內。在基於細胞之系統的情況下，該術語可用於指在活細胞(相較於例如活體外系統)內發生之事件。
如本文所用，術語「連接子」係指在融合蛋白中除出現在天然蛋白質中之特定位置處之胺基酸序列以外的胺基酸序列且一般設計成可撓性的或經設計以在兩個蛋白質部分之間插入結構，諸如α-螺旋體。連接子亦稱為間隔子。連接子或間隔子就其自身而言通常不具有生物功能。
如本文所用，片語「醫藥學上可接受」係指分子實體及組合物一般視為生理學上可耐受的。
如本文所用之術語「多肽」係指經由肽鍵連接在一起之胺基酸之連續鏈。該術語用以指代任何長度之胺基酸鏈，但一般熟習此項技術者應瞭解，該術語不限於超長鏈且可指包含經由肽鍵連接在一起之兩個胺基酸之最小鏈。如熟習此項技術者已知，多肽可經處理及/或修飾。如本文所用，術語「多肽」及「肽」可互換地使用。術語「多肽」亦可指代蛋白質。
如本文所用，術語「預防(prevent/prevention)」當與疾病、病狀及/或病症之出現結合使用時係指降低罹患疾病、病狀及/或病症之風險。參見「風險」之定義。
如本文所用，術語「受試者」係指人類或任何非人類動物(例如小鼠、大鼠、兔、狗、貓、牛、豬、綿羊、馬或靈長類動物)。人類包括產前及產後形式。在許多實施例中，受試者係人類。受試者可以係患者，其係指呈遞給醫療提供者以診斷或治療疾病之人類。術語「受試者」在本文中可與「個體」或「患者」可互換地使用。受試者可罹患或易患疾病或病狀但可能會或可能不會顯示該疾病或病狀之症狀。
如本文所用，術語「實質上」係指展現所關注之特徵或特性之全部或接近全部界限或程度的定性病症。生物技術中之一般技術者所瞭解，生物及化學現象很少(若曾有)進行完全及/或繼續進行完整或很少達成或避免絕對結果。因而本文中使用術語「實質上」以獲得許多生物及化學現象中所固有的完整性之潛在缺乏。
如本文所用，治療劑之術語「治療有效量」意謂當向患有或易患疾病、病狀及/或病症之受試者投與時足以治療、診斷、預防該疾病、病狀及/或病症之症狀及/或延遲該疾病、病狀及/或病症之症狀發作的量。一般熟習此項技術者應瞭解，通常經由包含至少一個單位劑量之給藥方案投與治療有效量。
如本文所用，術語「治療(treat/treatment/treating)」係指任何用於部分或完全緩解、改善、減輕、抑制、預防特定疾病、病狀及/或病症之一或多個症狀或特徵、延遲其發作、降低其嚴重程度及/或降低其發病率之方法。向未展示疾病之徵象或僅展示疾病之早期徵象之受試者投與治療，以降低罹患與該疾病相關之病變之風險。
在以下部分中詳細描述本發明之各種態樣。該等部分之用途不意欲限制本發明。各部分可適用於本發明之任何態樣。
本文中所述之各種GLP-2肽體包含在GLP-2序列與Fc、或Fc變異序列之間的連接子。可替代地，可使用白蛋白序列代替Fc或Fc變異序列。連接子藉由允許肽體具有替代取向及結合特性來提供結構撓性。連接子較佳由肽鍵連接在一起之胺基酸構成。此等胺基酸中之一些可經糖基化，如熟習此項技術者所熟知。胺基酸可選自甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、谷胺醯胺及離胺酸。甚至更佳地，連接子由大部分無空間位阻之胺基酸（諸如甘胺酸、絲胺酸及丙胺酸）構成。
GLP-2序列可與Fc域，或白蛋白域直接地或間接地連接。在一個實施例中，連接子具有序列GGGGG (例如在包含序列SEQ ID NO: 1之GLP-2肽體中)。 在另一實施例中，連接子具有序列GGGGSGGGGSGGGGS (例如在包含序列SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體中)。
在另一實施例中，連接子具有序列GGGGGGSGGGGSGGGGSA (例如在包含序列SEQ ID NO: 16之GLP-2肽體中)。
在另一實施例中，連接子具有序列GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP (例如在包含序列SEQ ID NO: 19之GLP-2肽體中)。
在另一實施例中，連接子具有序列GGGGGGG (例如在包含序列SEQ ID NO: 22之GLP-2肽體中)。
在另一實施例中，連接子具有序列GGGGSGGGGS (例如在包含序列SEQ ID NO: 25之GLP-2肽體中)。
適合之連接子或間隔子亦包括具有與以上例示性連接子至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同源或一致之胺基酸序列的彼等。適合於與一些實施例一起使用之額外連接子可發現於2012年3月2日申請之US2012/0232021中，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。
在各種實施例中，GLP-2[A2G]序列用於GLP-2。在GLP-2[A2G]序列中，在位置2處存在甘胺酸而非丙胺酸。
在一個實施例中，GLP-2肽體具有下式： GLP-2[A2G]—連接子—白蛋白(25-609)
連接子具有序列GGGGGGSGGGGSGGGGSA (例如在包含序列SEQ ID NO: 28之GLP-2肽體中)。
在另一實施例中，GLP-2肽體具有下式： (GLP-2[A2G])2 —白蛋白(25-609)
在一個態樣中，提供選自以下之類升糖素肽(GLP-2)肽體： a)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1)， b)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 7)， c)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 13)， d)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 16)， e)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 19)， f)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 22)， g)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 25)， h)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 28)及 k)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 30)；
在一些實施例中，GLP-2肽體包含以下胺基酸序列：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，GLP-2肽體包含以下胺基酸序列：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 7)，或其醫藥學上可接受之鹽。
預期Fc域與FcRn受體之間改善之結合導致血清半衰期延長。因此，在一些實施例中，適合之Fc域包含一或多個導致與FcRn之結合改善之胺基酸突變。實現與FcRn之結合改善之Fc域內的各種突變為此項技術中已知且可適用於實踐本發明。在一些實施例中，適合之Fc域包含位於對應於人類IgG1之Thr 250、Met 252、Ser 254、Thr 256、Thr 307、Glu 380、Met 428、His 433及/或Asn 434之一或多個位置處的一或多個突變。
本發明之GLP-2肽體相比於已知蛋白質可提供至少一個適合特性，諸如但不限於以下中之至少一者：增加之半衰期、提高之活性、更高之特異活性、提高之親合力、增加或減小之去除率、選擇或更加適合之活性亞群、較小之免疫原性、至少一個所需治療效果之提高之品質或持續時間、較少之副作用及類似者。
通常，適合之GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體的活體內半衰期為大於約2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、26小時、28小時、30小時、32小時、34小時、36小時、38小時、40小時、42小時、44小時、46小時、或48小時。在一些實施例中，重組GLP-2肽體之活體內半衰期在2與48小時之間、在2與44小時之間、在2與40小時之間、在3與36小時之間、在3與32小時之間、在3與28小時之間、在4與24小時之間、在4與20小時之間、在6與18小時之間、在6與15小時之間、及在6與12小時之間。
GLP-2肽體或其特定部分或變異體可藉由至少一種細胞株、混合細胞株、永生化細胞或永生化及/或培養細胞之純系群製得。可使用適合方法製備產生蛋白質之永生化細胞。較佳地，至少一種GLP-2肽體或特定部分或變異體藉由提供核酸或載體來生成，該等核酸或載體包含DNA衍生之經功能重排之至少一種人類免疫球蛋白基因座或具有與經功能重排之至少一種人類免疫球蛋白基因座實質上相似之序列，或其可經歷功能重排，且進一步包含如本文所述之肽體結構。
GLP-2肽體可以廣泛範圍之親和力(KD )結合人類蛋白質配位體。在一較佳實施例中，本發明之至少一種人類GLP-2肽體可視情況以高親和力結合至少一種蛋白質配位體。舉例而言，本發明之至少一種GLP-2肽體可以等於或小於約10− 7 M之KD 、或更佳地以等於或小於約0.1-9.9 (或其中任何範圍或值)×10− 7 、10− 8 、10− 9 、10− 10 、10− 11 、10− 12 或10− 13 M或其中任何範圍或值之KD 結合至少一種蛋白質配位體。
GLP-2肽體對至少一種蛋白質配位體之親和力或親合力可使用任何適合之方法(例如如用於測定抗體-抗原結合親和力或親合力)以實驗方式測定。(參見例如Kuby, JanisImmunology , W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992))。若在不同條件，例如鹽濃度及pH值下量測，則特定的GLP-2肽體-配位體相互作用之所量測親和力可變化。因此，親和力及其他配位體結合參數(例如KD 、Ka 、Kd )較佳用GLP-2肽體及配位體之標準化溶液，及標準化緩衝液，諸如本文中所述或此項技術中已知之緩衝液進行量測。
在C端處可能存在或可能不存在離胺酸(K)。包含多肽序列SEQ ID NO: 1、7、13、16、19、22及25之GLP-2肽體缺乏C端離胺酸。特定言之，胺基酸序列SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 7缺乏C端離胺酸。同時，在本文中所述之任一實施例或態樣中，可將離胺酸添加至C端。舉例而言，胺基酸序列SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 10在C端處具有離胺酸。
在本文中所述之任何實施例或態樣中，GLP-2肽體由GLP-2前驅體多肽加工製得，該GLP-2前驅體多肽包含直接與GLP-2連接之信號肽，以及在GLP-2與IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中之任一者之Fc區之間的連接子。Fc區可為具有LALA突變之IgG1。GLP-2前驅體多肽可具有下式： 信號肽—GLP-2[A2G]—連接子—IgG1(LALA)
LALA係指抗體中之L234A及L235A (EU編號)突變。LALA突變存在於本文所揭示之以下多肽序列中，例如SEQ ID NO: 1、4、7、10、13、16、19、22及25。LALA突變可極大地減少與Fc γ-R之結合且繼而防止GLP-2肽體造成非所需抗體效應功能。參見Leabman, M.K.等人, 「Effects of altered Fc gammaR binding on antibody pharmacokinetics in cynomolgus monkeys」 mAbs 5(6):2013。
部分地或較佳實質上提供至少一種GLP-2生物活性之GLP-2肽體或其特定部分或變體可結合GLP-2配位體且藉此提供至少一種活性，該活性經由GLP-2與至少一種配位體(諸如GLP-2受體)之結合，或經由其他蛋白質依賴性或介導機制以其他方式介導。如本文所用，術語「GLP-2肽體活性」係指視分析而定，GLP-2肽體可調節或產生相比於野生型GLP-2肽或GLP-2[A2G]肽約20-10,000%之至少一種GLP-2依賴性活性，較佳相比於野生型GLP-2肽或GLP-2[A2G]肽至少約60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000%或更多之至少一種GLP-2依賴性活性。
GLP-2肽體或特定部分或變異體提供至少一種蛋白質依賴性活性之能力較佳藉由如本文所述及/或如此項技術中已知之至少一種適合之蛋白質生物分析評估。本發明之人類GLP-2肽體或特定部分或變異體可類似於任何類別(IgG、IgA、IgM等)或同型且可包含κ或λ輕鏈之至少一部分。在一個實施例中，人類GLP-2肽體或特定部分或變異體包含子類，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中之至少一者之IgG重鏈CH2及CH3。
本發明之至少一種GLP-2肽體或特定部分或變異體結合至少一種配位體、次單元、片段、部分或其任何組合。本發明之至少一種GLP-2肽體、特定部分或變異體之至少一種GLP-2肽、變異體或衍生物可視情況結合配位體之至少一種特定抗原決定基。結合抗原決定基可包含至少1-3個胺基酸之至少一種胺基酸序列與蛋白質配位體(諸如GLP-2受體或其部分)之序列之連續胺基酸的整個特定部分之任何組合。
本發明亦係關於肽體、配位體結合片段及免疫球蛋白鏈，該等免疫球蛋白鏈包含與本文中所述之胺基酸序列實質上相同之序列中的胺基酸。較佳地，該等肽體或其配位體結合片段可以高親和力(例如小於或等於約10− 7 M之KD )結合人類GLP-2配位體，諸如受體。與本文中所述之序列實質上相同之胺基酸序列包括包含保守胺基酸取代，以及胺基酸缺失及/或插入之序列。保守性胺基酸取代係指第一胺基酸由第二胺基酸置換，該第二胺基酸具有與第一胺基酸之化學及/或物理特性類似之化學及/或物理特性(例如電荷、結構、極性、疏水性/親水性)。保守性取代包括一種胺基酸由以下群組內之另一種胺基酸置換：離胺酸(K)、精胺酸(R)及組胺酸(H)；天冬胺酸(D)及麩胺酸(E)；天冬醯胺(N)、麩醯胺酸(Q)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、酪胺酸(Y)、K、R、H、D及E；丙胺酸(A)、纈胺酸(V)、白胺酸(L)、異白胺酸(I)、脯胺酸(P)、苯丙胺酸(F)、色胺酸(W)、甲硫胺酸(M)、半胱胺酸(C)及甘胺酸(G)；F、W及Y；C、S及T。
如熟練人員將瞭解，本發明包括本發明之至少一種生物學活性GLP-2肽體或特定部分或變異體。在一些實施例中，生物學活性GLP-2肽體或特定部分或變異體之特異活性為天然(非合成)、內源性或相關及已知之嵌入或稠合蛋白或特定部分或變異體之特異活性的至少2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%或15%。核酸
在另一態樣中，提供包含編碼本文中所述之GLP-2肽體之序列的聚核苷酸。該序列可具有與SEQ ID NO: 3、9、15、18、21、24或27中之任一者70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一致性。在一些實施例中，聚核苷酸可包含其他非編碼序列。聚核苷酸可進一步包含特定片段、變異體或其共同序列，或包含此等序列中之至少一者之寄存載體。核酸分子可呈藉由選殖或以合成方法製備而獲得之RNA (諸如mRNA、hnRNA、tRNA或任何其他形式)形式或DNA (包括但不限於cDNA及基因組DNA)形式。DNA可為三股、雙股或單股或其任何組合。DNA或RNA之至少一個股的任何部分可為編碼股，亦稱為有義股，或其可為非編碼股，亦稱為反義股。
在一些實施例中，編碼轉基因之核酸可經修飾以提供編碼之GLP-2肽體之增加表現，其亦稱為密碼子優化。舉例而言，編碼轉基因之核酸可藉由改變編碼序列之開放閱讀框架來修飾。如本文所用，術語「開放閱讀框架」與「ORF」同義且意謂可能能夠編碼蛋白質或蛋白質之一部分的任何核苷酸序列。開放閱讀框架通常以起始密碼子(在標準編碼中表示為，例如RNA分子之AUG及DNA分子中之ATG)開始且以密碼子三聯體讀段直至框架以終止密碼子(在標準編碼中表示為，例如RNA分子之UAA、UGA或UAG及DNA分子中之TAA、TGA或TAG)結束。如本文所用，術語「密碼子」意謂在蛋白質合成期間指定特定胺基酸之核酸分子中之三個核苷酸的序列；亦稱為三聯體或密碼子三聯體。舉例而言，在標準遺傳密碼中之64種可能的密碼子中，兩種密碼子GAA及GAG編碼胺基酸谷胺醯胺而密碼子AAA及AAG指定胺基酸離胺酸。在標準遺傳密碼中，三種密碼子係終止密碼子，其不指定胺基酸。如本文所用，術語「同義密碼子」意謂編碼單一胺基酸之密碼子中之任一者及全部。除了甲硫胺酸及色胺酸，胺基酸均由兩種至六種同義密碼子編碼。舉例而言，在標準遺傳密碼中，編碼胺基酸丙胺酸之四種同義密碼子係GCA、GCC、GCG及GCU，指定谷胺醯胺之兩種同義密碼子係GAA及GAG且編碼離胺酸之兩種同義密碼子係AAA及AAG。
可使用標準密碼子優化方法修飾編碼GLP-2肽體之開放閱讀框架的核酸。針對密碼子優化之各種商業演算法係可獲得的且可用以實踐本發明。通常，密碼子優化不改變編碼之胺基酸序列。
核苷酸變化可改變開放閱讀框架內之同義密碼子以便符合在經選擇以表現GLP-2肽體之特定異源細胞中所發現之內源性密碼子使用。可替代地或另外，核苷酸變化可改變開放閱讀框架內之G+C含量以更佳地符合在存在於異源宿主細胞中之內源性核酸序列中所發現之開放閱讀框架的平均G+C含量。核苷酸變化亦可改變在GLP-2肽體序列內發現之聚單核苷酸區域或內部調節或結構位點。因此，設想多種經修飾或經優化核苷酸序列，其包括但不限於在原核細胞、酵母細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞中提供GLP-2肽體之增加表現之核酸序列。
如本文中所指示，聚核苷酸可進一步包括額外序列，諸如至少一種信號前導子或融合肽之編碼序列，具有或不具有前述額外編碼序列，諸如至少一種內含子，以及額外的非編碼序列，包括但不限於非編碼5'及3'序列，諸如經轉錄之非翻譯序列，其在轉錄、mRNA加工中起作用，其包括剪接及聚腺苷酸化信號(例如-mRNA之核糖體結合及穩定性)；編碼額外胺基酸之額外編碼序列，諸如提供額外官能基之彼等。因此，編碼GLP-2肽體或特定部分或變異體之序列可與標記物序列融合，該標記物序列諸如編碼肽之序列，該肽促進包含GLP-2肽體片段或部分之融合GLP-2肽體或特定部分或變異體之純化。
核酸可進一步包含除了本發明之聚核苷酸之外的序列。舉例而言，可將包含一或多個核酸內切酶限制位點之多選殖位點插入至核酸中以幫助聚核苷酸之分離。此外，可嵌入可翻譯序列以幫助本發明之所翻譯聚核苷酸之分離。舉例而言，六組胺酸標記物序列提供一種純化本發明之蛋白質之適宜手段。本發明之核酸-編碼序列除外-視情況係用於選殖及/或表現本發明之聚核苷酸之載體、轉接子或連接子。
轉基因之編碼區可包括一或多個沉默突變以最優化針對特定細胞類型之密碼子使用。舉例而言，GLP-2肽體之密碼子可經優化以在脊椎動物細胞中表現。在一些實施例中，GLP-2肽體之密碼子可經優化以在哺乳動物細胞中表現。在一些實施例中，GLP-2肽體之密碼子可經優化以在人類細胞中表現。在一些實施例中，GLP-2肽體之密碼子可經優化以在CHO細胞中表現。
編碼如本申請案中所述之GLP-2肽體之核酸序列可以分子形式選殖(嵌入)至適合載體以用於在宿主細胞中繁殖或表現。舉例而言，將包含可有效自宿主細胞分泌GLP-2肽體之信號肽之GLP-2肽體序列插入至適合載體中，諸如選自SEQ ID NO: 2、5、8、11、14、17、20、23、26、29及31之序列。可使用各種表現載體實踐本發明，包括但不限於原核表現載體；酵母菌表現載體；昆蟲表現載體及哺乳動物表現載體。適用於本發明之例示性載體包括但不限於基於病毒之載體(例如基於AAV之載體、基於逆轉錄病毒之載體、基於質粒之載體)。在一些實施例中，可將編碼GLP-2肽體之核酸序列插入至適合載體中。在一些實施例中，可將編碼GLP-2肽體之核酸序列插入至適合載體中。通常，將編碼GLP-2肽體之核酸可操作地連接於各種調節序列或元件。
可將各種調節序列或元件併入適用於本發明之表現載體中。例示性調節序列或元件包括但不限於啟動子、增強子、抑制因子(repressors/suppressors)、5'未翻譯(或非編碼)之序列、內含子、3'未翻譯之(或非編碼)序列。
如本文所用，「啟動子」或「啟動子序列」係能夠結合細胞中之RNA聚合酶(例如直接或經由其他結合蛋白質或物質之啟動子)且引發編碼序列轉錄之DNA調節區。啟動子序列一般在其3'端藉由轉錄起始位點結合且向上游(5'方向)延伸以包括在任何含量下起始轉錄所需之最小數目之鹼基或元件。啟動子可可操作地與表現控制序列締合或可操作地連接於表現控制序列，該等表現控制序列包括增強子及抑制因子序列或具有待表現之核酸。在一些實施例中，啟動子可為誘導性的。在一些實施例中，誘導型啟動子可為單向或雙向的。在一些實施例中，啟動子可為組成型啟動子。在一些實施例中，啟動子可為雜交啟動子，其中含有轉錄調節區之序列獲自一個來源且含有轉錄起始區之序列獲自第二來源。用於將控制元件連接至轉基因內之編碼序列的系統為此項技術中所熟知(一般分子生物及重組DNA技術描述於Sambrook, Fritsch, and Maniatis,Molecular Cloning : A Laboratory Manual , 第二版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1989中，其以引用之方式併入本文中)。適用於插入轉基因以在多種生長及誘導條件下於各種宿主細胞中表現之商業載體亦為此項技術中所熟知。
在一些實施例中，可使用特異性啟動子控制哺乳動物宿主細胞中之轉基因表現，諸如但不限於SRa-啟動子(Takebe等人, Molec. and Cell. Bio. 8:466-472 (1988))、人類CMV即刻早期啟動子(Boshart等人, Cell 41:521-530 (1985)；Foecking等人, Gene 45:101-105 (1986))、人類CMV啟動子、人類CMV5啟動子、小鼠CMV即刻早期啟動子、EF1-α啟動子、用於肝臟特異性表現之雜交CMV啟動子(例如藉由使CMV即刻早期啟動子與人類α-1-抗胰蛋白酶(HAT)或白蛋白(HAL)啟動子之轉錄啟動子元件共軛製得)、或用於肝癌特異性表現之啟動子(例如其中人類白蛋白(HAL；約1000 bp)或人類α-1-抗胰蛋白酶(HAT，約2000 bp)之轉錄啟動子元件與人類α-1-微球蛋白及bikunin前驅體基因(AMBP)之145長增強子元件組合；HAL-AMBP及HAT-AMBP)、SV40早期啟動子區域(Benoist等人, Nature 290:304-310 (1981))、花旗松毒蛾(Orgyia pseudotsugata )即刻早期啟動子、疱疹胸苷激酶啟動子(Wagner等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1441-1445 (1981))；或金屬硫蛋白基因之調節序列(Brinster等人, Nature 296:39-42 (1982))。在一些實施例中，哺乳動物啟動子係組成型啟動子，諸如但不限於次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPTR)啟動子、腺苷脫胺酶啟動子、丙酮酸激酶啟動子、β肌動蛋白啟動子以及一般熟習此項技術者已知之其他組成型啟動子。
在一些實施例中，可使用特異性啟動子控制在原核宿主細胞中之轉基因表現，諸如但不限於β-內醯胺酶啟動子(Villa-Komaroff等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:3727-3731 (1978))；tac啟動子(DeBoer等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:21-25 (1983))；T7啟動子、T3啟動子、M13啟動子或M16啟動子；在酵母菌宿主細胞中之轉基因表現，諸如但不限於GAL1、GAL4或GAL10啟動子、ADH (醇脫氫酶)啟動子、PGK (磷酸甘油激酶)啟動子、鹼性磷酸酶啟動子、甘油醛-3-磷酸酯脫氫酶III (TDH3)啟動子、甘油醛-3-磷酸酯脫氫酶II (TDH2)啟動子、甘油醛-3-磷酸酯脫氫酶I (TDH1)啟動子、丙酮酸激酶(PYK)、烯醇酶(ENO)或丙醣磷酸異構酶(TPI)。
在一些實施例中，啟動子可係病毒啟動子，其中許多能夠在數種宿主細胞類型(包括哺乳動物細胞)中調節轉基因之表現。已證實驅動真核細胞中之編碼序列之組成性表現的病毒啟動子包括例如猴病毒啟動子、單純疱疹病毒啟動子、乳頭瘤病毒啟動子、腺病毒啟動子、人類免疫缺陷病毒(HIV)啟動子、勞斯肉瘤病毒啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、莫洛尼小鼠白血病病毒及其他反轉錄病毒之長末端重複序列(LTR)、單純疱疹病毒以及一般熟習此項技術者已知之其他病毒啟動子之胸苷激酶啟動子。
在一些實施例中，表現載體之基因控制元件亦可包括分別參與轉錄及翻譯起始之5'非轉錄及5'非翻譯序列，諸如TATA盒、封端序列、CAAT序列、Kozak序列及類似者。增強子元件可視情況用於增加待表現之多肽或蛋白質之表現量。已證實在哺乳動物細胞中起作用之增強子元件之實例包括SV40早期基因增強子，如Dijkema等人, EMBO J. (1985) 4: 761所描述及衍生自勞斯肉瘤病毒(RSV)之長末端重複序列(LTR)之增強子/啟動子，如Gorman等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1982b) 79:6777中所描述及人類巨細胞病毒，如Boshart等人, Cell (1985) 41:521中所描述。表現載體之基因控制元件將亦分別包括參與轉錄及翻譯終止之3'非轉錄及3'非翻譯序列，諸如用於自啟動子轉錄之mRNA之3'末端的穩定及加工之聚聚腺苷酸化(polyA)信號。例示性polyA信號包括例如兔β血球蛋白polyA信號、牛生長激素polyA信號、雞β血球蛋白終止子/polyA信號及SV40晚期polyA區域。
表現載體將較佳地但視情況包括至少一種可選標記。在一些實施例中，可選標記係核酸序列，其編碼可操作地連接於一或多個基因調節元件之抗性基因，以賦予宿主細胞在細胞毒性化學物質及/或藥物存在下生長時維持存活性之能力。在一些實施例中，可使用可選試劑維持宿主細胞內表現載體之保持性。在一些實施例中，可使用可選試劑防止表現載體內轉基因序列之修飾(亦即甲基化)及/或靜默。在一些實施例中，使用可選試劑維持宿主細胞內載體之游離型表現。在一些實施例中，使用可選試劑促進轉基因序列穩定整合至宿主細胞基因組中。在一些實施例中，試劑及/或抗性基因可包括但不限於用於真核宿主細胞之甲胺喋呤(MTX)、二氫葉酸還原酶(DHFR，美國專利第4,399,216號；第4,634,665號；第4,656,134號；第4,956,288號；第5,149,636號；第5,179,017號)、安比西林(ampicillin)、新黴素(G418)、博來黴素(zeomycin)、黴酚酸或麩醯胺合成酶(GS，美國專利第5,122,464號；第5,770,359號；第5,827,739號)；用於原核宿主細胞之四環素、安比西林、卡那黴素或氯黴素；及用於酵母菌宿主細胞之URA3、LEU2、HIS3、LYS2、HIS4、ADE8、CUP1或TRP1。
表現載體可經轉染、經轉型或經轉導至宿主細胞。如本文所用，術語「轉染」、「轉型」及「轉導」皆指代將外源性核酸序列引入宿主細胞。在一些實施例中，將含有編碼GLP-2肽體之核酸序列之表現載體同時轉染、轉型或轉導至宿主細胞。在一些實施例中，將含有編碼GLP-2肽體之核酸序列之表現載體依序轉染、轉型或轉導至宿主細胞。
為此項技術中所熟知之轉型、轉染及轉導方法之實例包括脂質體遞送，亦即Hawley-Nelson, Focus 15:73 (1193)之Lipofectamine™ (Gibco BRL)方法、電穿孔、Graham及van der Erb,Virology , 52:456-457 (1978)之CaPO4 遞送方法、DEAE-右旋糖苷藥用遞送、顯微注射、基因槍顆粒遞送、凝聚胺介導之遞送、陽離子介導之脂質遞送、轉導及病毒感染，諸如例如逆轉錄病毒、慢病毒、腺病毒腺相關病毒及桿狀病毒(昆蟲細胞)。
在引入細胞內部之後，可將表現載體穩定整合於基因組中或以染色體外構築體之形式存在。載體亦可經擴增且多個複本可存在或整合於基因組中。在一些實施例中，本發明之細胞可含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多個編碼GLP-2肽體之核酸之複本。在一些實施例中，本發明之細胞可含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多個編碼GLP-2肽體之核酸之複本。宿主細胞
在另一態樣中，提供一種宿主細胞，其包含本文中所述之聚核苷酸，例如允許在宿主細胞中表現GLP-2肽體之彼等。宿主細胞可係中國倉鼠卵巢細胞。可替代地，宿主細胞可係哺乳動物細胞，非限制性實例包括BALB/c小鼠骨髓瘤系(NSO/l，ECACC No: 85110503)；人類視網膜母細胞(PER.C6，CruCell, Leiden, The Netherlands)；由SV40轉型之猴腎CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人類胚胎腎系(經次選殖以在懸浮培養物中生長之HEK293或293細胞，Graham等人, J. Gen Virol., 36:59, 1977)；人類纖維肉瘤細胞株(例如HT1080)；嬰兒倉鼠腎細胞(BHK21，ATCC CCL 10)；中國倉鼠卵巢細胞(CHO，Urlaub及Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216, 1980)，包括CHO EBNA (Daramola O.等人, Biotechnol. Prog., 2014, 30(1):132-41)及CHO GS (Fan L.等人, Biotechnol. Bioeng. 2012, 109(4):1007-15)；小鼠塞特利氏細胞(TM4，Mather, Biol. Reprod., 23:243-251, 1980)；猴腎細胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1 587)；人類子宮頸癌細胞(HeLa，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI細胞(Mather等人, Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68, 1982)；MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝癌系(Hep G2)。
聚核苷酸可處於表現質體中。表現質體可具有任何數目之一般熟習此項技術者已知之複製起點。可藉由一般熟習此項技術者已知之任何數目之方式將聚核苷酸或表現質體引入宿主細胞中。舉例而言，可使用流式電穿孔系統，諸如MaxCyte GT®、MaxCyte VLX®或MaxCyte STX®轉染系統將聚核苷酸或表現質體引入宿主細胞中。
在各種實施例中，宿主細胞表現聚核苷酸。宿主細胞可呈足以實現分批補料細胞培養規模或其他大規模之含量表現GLP-2肽體。大規模製備重組GLP-2肽體之替代方法包括滾瓶培養及生物反應器分批培養。在一些實施例中，重組GLP-2肽體蛋白係藉由在懸浮中培養之細胞製得。在一些實施例中，重組GLP-2肽體蛋白係藉由黏附細胞製得。製備
重組GLP-2肽體可藉由任何可用手段製得。舉例而言，重組GLP-2肽體可藉由利用經工程改造以表現編碼重組GLP-2肽體之核酸之宿主細胞系統以重組方式製得。可替代地或另外，重組GLP-2肽體可藉由活化內源基因製得。可替代地或另外，重組GLP-2肽體可部分或完全藉由化學合成製備。可替代地，重組GLP-2肽體可藉由mRNA治療劑活體內製得。
在一些實施例中，重組GLP-2肽體係在哺乳動物細胞中製得。可根據本發明使用之哺乳動物細胞之非限制性實例包括BALB/c小鼠骨髓瘤系(NSO/1，ECACC No: 85110503)；人類視網膜母細胞(PER.C6，CruCell, Leiden, The Netherlands)；由SV40轉型之猴腎CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人類胚胎腎系(經次選殖以在懸浮培養物中生長之HEK293或293細胞，Graham等人, J. Gen Virol., 36:59, 1977)；人類纖維肉瘤細胞株(例如HT1080)；嬰兒倉鼠腎細胞(BHK21，ATCC CCL 10)；中國倉鼠卵巢細胞+/−DHFR (CHO，Urlaub及Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216, 1980)，包括CHO EBNA (Daramola O.等人, Biotechnol. Prog., 2014, 30(1):132-41)及CHO GS (Fan L.等人, Biotechnol. Bioeng. 2012, 109(4):1007-15)；小鼠塞特利氏細胞(TM4，Mather, Biol. Reprod., 23:243-251, 1980)；猴腎細胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1 587)；人類子宮頸癌細胞(HeLa，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI細胞(Mather等人, Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68, 1982)；MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝癌系(Hep G2)。
在一些實施例中，重組GLP-2肽體係由人類細胞產生。在一些實施例中，重組GLP-2肽體係由CHO細胞或HT1080細胞產生。
在某些實施例中，基於在經選擇以用於培養細胞之特定條件下之某些較佳屬性或生長選擇宿主細胞以用於產生細胞株。熟習此項技術者應瞭解，該等屬性可基於已確定株之已知特徵及/或特點(亦即經表徵之市售細胞株)或經由經驗評估確定。在一些實施例中，可針對其在細胞飼養層上生長之能力選擇細胞株。在一些實施例中，可針對其在懸浮液中生長之能力選擇細胞株。在一些實施例中，可針對其作為細胞之黏附單層生長之能力選擇細胞株。在一些實施例中，該等細胞可用於任何組織培養物容器或任何經適合黏附基質處理之容器。在一些實施例中，適合之黏附基質係選自由以下組成之群：膠原蛋白(例如膠原蛋白I、II、III或IV)、明膠、纖維結合蛋白、層黏連蛋白、玻璃連結蛋白、血纖維蛋白原、BD Matrigel™、基底膜基質、硫酸皮膚素蛋白聚糖、聚-D-離胺酸及/或其組合。在一些實施例中，可選擇且在特定生長條件下修飾黏附宿主細胞以在懸浮液中生長。修飾黏附細胞以在懸浮液中生長之該等方法為此項技術中已知的。舉例而言，可藉由隨時間推移自生長介質逐漸移除動物血清來調節細胞以在懸浮培養物中生長。
通常，經工程改造以表現重組GLP-2肽體之細胞可包含轉基因，該轉基因編碼本文中所述之重組GLP-2肽體。應瞭解，編碼重組GLP-2肽體之核酸可含有調節序列、基因控制序列、啟動子、非編碼序列及/或用於表現重組GLP-2肽體之其他合適序列。通常，編碼區與此等核酸組分中之一或多者可操作地連接。
在一些實施例中，重組GLP-2肽體係藉由mRNA治療劑活體內製得。製備編碼GLP-2肽體之mRNA且向需要GLP-2肽體之患者投與。mRNA可包含對應於DNA序列SEQ ID NO: 3、6、9、12、15、18、21、24、27及30之序列。可使用各種投藥途徑，諸如注射、肺內噴霧及皮下電穿孔。mRNA可囊封於病毒載體或非病毒載體中。例示性非病毒載體包括脂質體、陽離子聚合物及分散體系。回收及純化
可使用自細胞純化GLP-2肽體之各種手段。可使用各種方法純化或分離根據本文中所述之各種方法製得之GLP-2肽體。在一些實施例中，表現酶分泌於培養基中且因此可移除細胞及其他固體，如例如藉由離心或過濾，如純化方法中之第一步驟。可替代地或另外，表現酶結合於宿主細胞之表面。在此實施例中，表現多肽或蛋白質之宿主細胞經溶解以用於純化。哺乳動物宿主細胞之溶解可藉由一般熟習此項技術者熟知之任何數目之手段來達成，包括藉由玻璃珠進行物理破壞及暴露於高pH值條件。
GLP-2肽體可經分離且藉由標準方法純化，包括但不限於層析(例如離子交換、親和力、尺寸排阻及羥基磷灰石層析）、凝膠過濾、離心、或不同溶解性、乙醇沈澱或藉由用於蛋白質純化之任何其他可用技術。參見例如Scopes, Protein Purification Principles and Practice 第2版, Springer-Verlag, New York, 1987；Higgins, S. J.及Hames, B. D. (編), Protein Expression: A Practical Approach, Oxford Univ Press, 1999；及Deutscher, M. P., Simon, M. I., Abelson, J. N. (編), Guide to Protein Purification: Methods in Enzymology (Methods in Enzymology Series, 第182卷), Academic Press, 1997，其皆以引用之方式併入本文中。尤其對於免疫親和層析法，蛋白質可藉由將其結合於包含抗體之親和柱分離，體針對彼蛋白質培養該等抗且將其貼附於靜止支撐件。可替代地，可藉由標準重組技術將親和標籤，諸如流感外殼序列、聚組胺酸或谷胱甘肽-S-轉移酶附著至蛋白質以允許藉由傳遞經過合適親和柱輕易純化。可在任何或全部階段添加蛋白酶抑制劑，諸如苯甲基磺醯基氟化物(PMSF)、抗纖維蛋白溶酶肽、胃酶抑素或抑肽酶，以減少或消除在純化過程期間多肽或蛋白質之降解。當必須溶解細胞以便分離及純化表現多肽或蛋白質時，尤其需要蛋白酶抑制劑。
可藉由熟知方法自重組細胞培養物回收及純化GLP-2肽體或特定部分或變異體，該等方法包括但不限於蛋白A純化、硫酸銨或乙醇沈澱、酸提取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水相互作用層析、親和性層析法、混合模式層析(例如MEP HypercelTM )、羥磷灰石層析及凝集素層析。亦可採用高效液相層析法(「HPLC」)以供純化。參見例如Colligan, Current Protocols in Immunology, or Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y. (1997-2003)。
本發明之肽體或特定部分或變異體包括天然純化之產物、化學合成程序之產物及藉由重組技術自真核宿主(包括例如酵母菌、高等植物、昆蟲及哺乳動物細胞)製得之產物。視重組製備程序中所採用之宿主而定，本發明之GLP-2肽體或特定部分或變異體可經糖基化或可未經糖基化，經糖基化較佳。調配物
在一些實施例中，本文中所述之醫藥組合物進一步包含載劑。適合之可接受載劑包括但不限於水、鹽溶液(例如NaCl)、鹽水、緩衝鹽水、醇、甘油、乙醇、阿拉伯膠(gum arabic)、植物油、苯甲醇、聚乙二醇、明膠、碳水化合物(諸如乳糖、直鏈澱粉或澱粉)、糖(諸如甘露糖醇、蔗糖或其他)、右旋糖、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、香料油、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮等以及其組合。醫藥製劑可視需要與輔助劑(例如稀釋劑、緩衝液、親油性溶劑、防腐劑、佐劑、潤滑劑、防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽、緩衝液、著色、調味及/或芳族物質及類似者)混合，該等輔助劑不有害地與活性化合物反應或干擾其活性。在一些實施例中，使用適合於靜脈內投藥之水溶性載劑。
醫藥學上可接受之助劑係較佳的。製備該等無菌溶液之非限制性實例及方法為此項技術中所熟知，諸如但不限於Gennaro編,Remington ' s Pharmaceutical Sciences , 第18版, Mack Publishing Co. (Easton, Pa.) 1990。可常規地選擇醫藥學上可接受之載劑，其適用於GLP-2肽體組合物之投藥模式、溶解度及/或穩定性，亦為此項技術中已知或如本文所述。舉例而言，可在弱酸性或生理pH下使用無菌鹽水及磷酸鹽緩衝鹽水。pH緩衝劑可為磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、參(羥甲基)胺基甲烷(TRIS)、N-參(羥基甲基)甲基-3-胺基丙磺酸(TAPS)、碳酸氫銨、二乙醇胺、組胺酸(其為較佳的緩衝液)、精胺酸、離胺酸或乙酸鹽或其混合物。較佳之緩衝液範圍係pH 4-8、pH 6.5-8，更佳地pH 7-7.5。可將防腐劑提供於醫藥組合物中，該等防腐劑諸如對甲酚、間甲酚及鄰甲酚、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、苯酚、苄醇、苯甲酸鈉、苯甲酸、苯甲酸苄酯、山梨酸、丙酸、對羥基苯甲酸之酯。可將防止氧化、脫醯胺、異構化、外消旋、環化、肽水解之穩定劑提供於醫藥組合物中，該等穩定劑諸如抗壞血酸、甲硫胺酸、色胺酸、EDTA、天冬醯胺、離胺酸、精胺酸、麩醯胺及甘胺酸。可將防止聚集、原纖維化及沈澱之穩定劑提供於醫藥組合物中，該等穩定劑諸如十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇、羧甲基纖維素、環糊精。可將用於溶解或防止聚集之有機改質劑(諸如乙醇、乙酸或乙酸酯及其鹽)提供於醫藥組合物中。可將等滲製造者提供於醫藥組合物中，該等等滲製造者諸如鹽，例如氯化鈉或最佳碳水化合物，例如右旋糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、蔗糖或其混合物。
適用於本發明組合物之醫藥賦形劑包括但不限於蛋白質、肽、胺基酸、脂質及碳水化合物(例如糖，包括單醣、二-、三-、四-及寡醣；衍生糖，諸如醛醣醇、醛糖酸、酯化糖及類似者；及多醣或糖聚合物)，其可單獨或組合存在，單獨或呈1-99.99重量或體積%組合形式包含。例示性蛋白質賦形劑包括血清白蛋白，諸如人類血清白蛋白(human serum albumin；HSA)、重組人類白蛋白(recombinant human albumin；rHA)、明膠、酪蛋白及類似者。亦可起緩衝能力作用之代表性胺基酸/GLP-2肽體或特定部分或變異體組分包括丙胺酸、甘胺酸、精胺酸、甜菜鹼、組胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、離胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、阿斯巴甜糖及類似者。一個較佳之胺基酸係甘胺酸。
可使用碳水化合物賦形劑，例如單醣，諸如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖及類似者；雙醣，諸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖及類似者；多醣，諸如棉子糖、松三糖、麥芽糊精、聚葡萄糖、澱粉及類似者；及醛醣醇，諸如甘露糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇(葡萄糖醇)、肌醇及類似者。
GLP-2肽體組合物亦可包括緩衝液或pH調節劑；通常，緩衝液係由有機酸或鹼製備之鹽。例示性緩衝液包括有機酸鹽，諸如檸檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、丁二酸、乙酸或鄰苯二甲酸之鹽；Tris、緩血酸胺鹽酸鹽或磷酸鹽緩衝液。
另外，本發明之GLP-2肽體或特定部分或變異體組合物可包括聚合賦形劑/添加劑(諸如聚乙烯吡咯啶酮)、聚蔗糖(聚合糖)、葡萄糖結合劑(例如環糊精，諸如2-羥丙基-β-環糊精)、聚乙二醇、調味劑、抗微生物劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、界面活性劑(例如聚山梨醇酯，諸如「TWEEN 20」及「TWEEN 80」)、脂質(例如磷脂、脂肪酸)、類固醇(例如膽固醇)及螯合劑(例如EDTA)。
適用於根據本發明之GLP-2肽體組合物之此等及其他已知的醫藥賦形劑及/或添加劑為此項技術中已知的，例如如「Remington: The Science & Practice of Pharmacy」, 第21版, Williams & Williams, (2005)及「Physician's Desk Reference」, 第71版, Medical Economics, Montvale, N.J. (2017)」中所列，其全文以引用之方式併入本文中。較佳之載劑或賦形劑材料係碳水化合物(例如醣類及醛醣醇)及緩衝液(例如檸檬酸鹽)或聚合劑。
醫藥組合物可調配為適用於藉由靜脈內或皮下注射或輸液投藥之液體。液體可包含一或多種溶劑。例示性溶劑包括但不限於水；醇，諸如乙醇及異丙醇；植物油；聚乙二醇；丙二醇；及甘油或混合物及其組合。可使用適用於靜脈內投藥之水溶性載劑。舉例而言，在一些實施例中，用於靜脈內投藥之組合物通常係無菌等張緩衝劑水溶液。必要時，組合物亦可包括助溶劑及局部麻醉劑用於減輕注射部位的疼痛。一般而言，該等成分係單獨提供或以單位劑型混合在一起，例如呈於指示活性劑量之氣密密封容器(諸如安瓿或藥囊)中之乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式。當藉由輸液投與組合物時，可用含有無菌醫藥級水、鹽水或右旋糖/水之輸液瓶分配組合物。當藉由注射投與組合物時，可提供注射用無菌水或鹽水之安瓿，使得該等成分可在投與前混合。
如上文所提及，調配物可較佳包括含有鹽水或選擇鹽之適合緩衝液，以及視情況選用之防腐溶液及含有防腐劑之調配物以及適用於醫藥或獸醫用途之多用途防腐調配物，其包含醫藥學上可接受之調配物中之至少一種GLP-2肽體或特定部分或變異體。防腐調配物含有至少一種已知防腐劑或視情況選自由以下組成之群：水性稀釋劑中之至少一種苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苄醇、苯汞基亞硝酸酯、苯氧基乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化鎂(例如六水合物)、對羥基苯甲酸烷基酯(甲基、乙基、丙基、丁基及類似者)、苯紮氯銨、苄索氯銨、脫氫乙酸鈉及硫柳汞或其混合物。可使用如此項技術中已知之任何適合濃度或混合物，諸如0.001-5%，或其中之任何範圍或值，諸如但不限於0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9，或其中之任何範圍或值。非限制性實例不包括防腐劑，包括0.1-2%間甲酚(例如0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0%)、0.1-3%苄醇(例如0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5%)、0.001-0.5%硫柳汞(例如0.005、0.01)、0.001-2.0%苯酚(例如0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0%)、0.0005-1.0%對羥基苯甲酸烷基酯(例如0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0%)及類似者。
GLP-2肽體可經調配用於非經腸投藥且可含有無菌水或鹽水、聚伸烷基二醇(諸如聚乙二醇)、植物來源之油、氫化萘及類似者作為常見賦形劑。可根據已知方法藉由使用合適的乳化劑或加濕器及懸浮劑製備用於注射之水性或油性懸浮液。用於注射試劑之可係無毒的可非經口投與之稀釋劑，諸如水溶液或無菌可注射溶液或於溶劑中之懸浮液。作為可用的媒劑或溶劑，允許使用水、林格氏溶液、等張鹽水等；作為一般溶劑或懸浮溶劑，可使用無菌非揮發性油。出於此等目的，可使用任何種類之非揮發性油及脂肪酸，包括天然或合成或半合成脂肪油或脂肪酸；天然或合成或半合成單或二或三甘油酯。非經腸投藥為此項技術中已知且包括但不限於以下習知手段：注射、如美國專利第5,851,198號中所描述之氣體加壓之無針注射裝置及如美國專利第5,839,446號中所描述之雷射穿孔器裝置。
醫藥組合物可係緩釋調配物。醫藥組合物亦可經調配以用於持續釋放、緩釋、延遲釋放或緩慢釋放GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。可向可注射調配物提供緩釋，亦稱為控制釋放及持續釋放。微球體、奈米球、植入物、儲存物及聚合物可與本文中所述之化合物、方法及調配物中之任一者組合使用以提供緩釋分佈。
可以10至100 mg/mL之濃度調配GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。濃度可為約10 mg/mL、約11 mg/mL、約12 mg/mL、約13 mg/mL、約14 mg/mL、約15 mg/mL、約16 mg/mL、約17 mg/mL、約18 mg/mL、約19 mg/mL、約20 mg/mL、約21 mg/mL、約22 mg/mL、約23 mg/mL、約24 mg/mL、約25 mg/mL、約26 mg/mL、約28 mg/mL、約30 mg/mL、約32 mg/mL、約34 mg/mL、約36 mg/mL、約38 mg/mL、約40 mg/mL、約42 mg/mL、約44 mg/mL、約46 mg/mL、約48 mg/mL、約50 mg/mL、約55 mg/mL、約60 mg/mL、約65 mg/mL、約70 mg/mL、約75 mg/mL、約80 mg/mL、約85 mg/mL、約90 mg/mL、約95 mg/mL、約99 mg/mL，其中「約」意謂低於提及值0.5 mg/mL至高於提及值0.5 mg/mL。濃度可為10至15 mg/mL、11至16 mg/mL、12至17 mg/mL、13至18 mg/mL、14至19 mg/mL、15至20 mg/mL、16至21 mg/mL、17至22 mg/mL、18至23 mg/mL、19至24 mg/mL、20至25 mg/mL、25至30 mg/mL、30至35 mg/mL、35至40 mg/mL、40至45 mg/mL、45至50 mg/mL、50至55 mg/mL、55至60 mg/mL、60至65 mg/mL、65至70 mg/mL、70至75 mg/mL、75至80 mg/mL、80至85 mg/mL、85至90 mg/mL或90至100 mg/mL。濃度可為12至18 mg/mL、13至17 mg/mL、14至16 mg/mL或14.5至15.5 mg/mL、或15 mg/mL。
包含GLP-2肽體之調配物及組合物可視情況進一步包含有效量之選自以下中之至少一者的至少一種化合物或蛋白質：糖尿病或胰島素代謝相關藥物、抗感染藥物、心臟血管(CV)系統藥物、中樞神經系統(CNS)藥物、自主神經系統(ANS)藥物、呼吸道藥物、胃腸道(GI)藥物、激素藥物、用於流體或電解質平衡之藥物、血液學藥物、抗腫瘤藥物、免疫調節藥物、眼用、耳用或鼻用藥物、局部藥物、營養藥物或類似者。該等藥物為此項技術中所熟知，此項技術包括調配物、適應症、本文中所呈現之各者之給藥及投藥(參見例如Nursing 2001 Handbook of Drugs, 第21版, Springhouse Corp., Springhouse, Pa., 2001；Health Professional's Drug Guide 2001編, Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ；Pharmacotherapy Handbook, Wells等人編, Appleton & Lange, Stamford, CT，其各自以全文引用之方式併入本文中)。
GLP-2肽體亦可經調配為緩慢釋放植入裝置以用於GLP-2肽體之延長或持續投藥。該等持續釋放調配物可呈安置在身體外部之貼片劑形式。持續釋放調配物之實例包括生物相容之聚合物之複合物，諸如聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、甲基纖維素、玻尿酸、唾液酸、矽酸鹽、膠原蛋白、脂質體及類似者。當需要提供高局部濃度之GLP-2肽體時，持續釋放調配物可引起特定關注。
GLP-2肽體組合物及調配物可以澄清溶液或以雙小瓶形式提供於患者，該等雙小瓶包含凍乾之經重構之至少一種GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)或特定部分或變異體的小瓶以及含有水性稀釋劑之第二小瓶。單溶液小瓶或需要復原之雙小瓶可多次重複使用且可滿足患者治療之單一或多次循環且因此提供比目前可用之治療方案更加適宜之治療方案。
GLP-2肽體組合物及調配物可藉由向藥店、診所或其他該等機構及設施提供澄清溶液或雙小瓶來向患者間接提供，該等雙小瓶包含凍乾經之經重構之至少一種GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)或特定部分或變異體的小瓶以及含有水性稀釋劑之第二小瓶。在此情況下澄清溶液可為至多一公升或甚至更大尺寸，其提供較大儲集器，可一或多次自該儲集器取回較小部分之GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)或特定部分或變異體溶液以傳遞至較小小瓶且由藥房或診所提供於其客戶及/或患者。該等產品可包括封裝材料。除了監管機構所需之資訊以外，封裝材料亦可提供可使用產品所處之條件。封裝材料可向患者提供說明書以在水性稀釋劑中重組GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)或特定部分或變異體以形成溶液且經2-24小時或更久之時段使用該溶液用於兩小瓶，濕潤/乾燥產品。治療
在另一態樣中，提供一種用於治療患有腸皮瘻管(ECF)之患者之方法，其包含使用可有效促進ECF之閉合、癒合及/或修復之給藥方案利用包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體治療患者。GLP-2肽體可尤其有效治療ECF，因為其半衰期比GLP-2或替度魯肽更長。較長之半衰期提供頻率較低之給藥及較低之波峰/波谷比值。
高死亡率及發病率起因於ECF。另外，ECF可因具有腹內程序發生。對腸壁之損傷引起ECF之最大風險。參見Galie, K.L.等人, 「Postoperative Enterocutaneous Fistula: When to Reoperate and How to Succeed」 Clin. Colon Rectal Surg., 2006, 19:237-246；Arebi, N.等人, 「High-Output Fistula」 Clinics in Colon and Rectal Surgery, 2004, 17(2):89-98。不希望受理論所束縛，ECF係胃腸道與皮膚之間的開口。大量流體、營養物及胃腸道流體可在未由小腸充分吸收之情況下離開胃腸道。胃分泌物之減少及營養物吸收之改善可改善ECF預後。
在一些實施例中，該方法可有效促進患者之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效減少患者中胃分泌物之體積。GLP-2肽體可諸如藉由經由瘻管遷移來有效減少達到皮膚之胃腸道分泌物之量。將GLP-2活化較長之時間段可減少胃分泌及流體經由瘻管之排出，進而更加迅速地促進恢復且允許瘻管更加迅速地癒合。此外，在替度魯肽治療之後，已觀測到膠原蛋白表現增加及金屬蛋白酶表現減少。參見Costa, B.P.等人, “Teduglutide effects on gene regulation of fibrogenesis on an animal model of intestinal anastomosis” Journal of Surgical Research, 2017年8月 (216); 87-98。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管深度。
可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。在各種實施例中，根據給藥方案進行多次投藥。如本文所用，術語「Q2D」意謂每兩天投藥，「Q3D」意謂每三天投藥等，「QW」意謂每週投藥。「BID」意謂一天兩次投藥。舉例而言，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每兩週一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三週一次、或每月一次進行給藥。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每2-14天一次、每5-8天一次、或每週(QW)一次在0.02至3.0 mg/kg、0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg、0.02至0.05 mg/kg、0.03至0.04 mg/kg、0.05至0.10 mg/kg、0.10至0.15 mg/kg、0.2至0.3 mg/kg、0.3至0.4 mg/kg、0.4至0.5 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.7至1.0 mg/kg、0.9至1.2 mg/kg、1.0至1.5 mg/kg、1.2至1.8 mg/kg、1.5至2.0 mg/kg、1.7至2.5 mg/kg、或2.0至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每週(QW)或每兩週在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
可替代地，可每三週或每月一次投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每三週或每月一次在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
作為替代方案，GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每5-8天、或每週(QW)在0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg之間的給藥方案皮下投與以用於維護用途。包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體可以10至100 mg/mL、10至90 mg/mL、20至80 mg/mL、25至75 mg/mL、30至70 mg/mL、50至100 mg/mL、60至90 mg/mL、約75 mg/mL、75 mg/mL、10至20 mg/mL、15至25 mg/mL、12至18 mg/mL、13-17 mg/mL、14-16 mg/mL、約15 mg/mL或15 mg/mL之濃度投與。
可歷經六個月至一年進行上文給藥方案以治療ECF。可在初始給藥方案之後每月一次投與GLP-2肽體以用於維護及防止復發。
如本文所用，術語「皮下組織」定義為緊接在皮膚下方之鬆散不規則結締組織之層。舉例而言，可藉由將組合物注射於包括但不限於以下各者之區域中進行皮下投藥：大腿區、腹部區、臀部區或肩胛區。出於該等目的，可使用注射器注射調配物。然而，可利用用於調配物投藥之其他裝置，諸如注射裝置(例如Inject-ease™及Genject™裝置)；注射器筆(諸如GenPen™)；無針裝置(例如MediJector™及BioJector™)；及皮下貼片劑遞送系統。在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體，或含有其之醫藥組合物。
在各種實施例中，治療ECF之上文方法與治療ECF之已知方法結合使用。例示性已知方法包括不經腸營養、防止敗血症之抗生素投藥、連接於瘻管之外部開口之造口術裝置、深坑引流管、瘻管給養、維生素補充、礦物質補充、使用H2阻斷劑或質子泵抑制劑抑制酸、組織黏合劑膠之投藥及纖維蛋白膠之投藥。
在另一態樣中，提供一種用於治療患有阻塞性黃疸之患者之方法，其包含使用可有效治療阻塞性黃疸之給藥方案，利用GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體治療患者。當阻斷膽汁向腸流動且保留在血流中時，出現阻塞性黃疸。膽石可導致阻塞性黃疸。患有阻塞性黃疸之患者中之腸屏障功能可受損或降低，其可導致穿過小腸之細菌易位。本文中所述之GLP-2肽體可防止在阻塞性黃疸發作期間對腸屏障功能之損傷。
可使用可有效治療阻塞性黃疸之給藥方案。可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。在各種實施例中，根據給藥方案進行多次投藥。如本文所用，術語「Q2D」意謂每兩天投藥，「Q3D」意謂每三天投藥等，「QW」意謂每週投藥。「BID」意謂一天兩次投藥。舉例而言，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每兩週一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三週一次、或每月一次進行給藥。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每2-14天一次、每5-8天一次、或每週(QW)一次在0.02至3.0 mg/kg、0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg、0.02至0.05 mg/kg、0.03至0.04 mg/kg、0.05至0.10 mg/kg、0.10至0.15 mg/kg、0.2至0.3 mg/kg、0.3至0.4 mg/kg、0.4至0.5 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.7至1.0 mg/kg、0.9至1.2 mg/kg、1.0至1.5 mg/kg、1.2至1.8 mg/kg、1.5至2.0 mg/kg、1.7至2.5 mg/kg、或2.0至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每週(QW)或每兩週在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
可替代地，可每三週或每月一次投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每5-8天或每週(QW)在0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg之間的給藥方案皮下投與以用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可以10至100 mg/mL、10至90 mg/mL、20至80 mg/mL、25至75 mg/mL、30至70 mg/mL、50至100 mg/mL、60至90 mg/mL、約75 mg/mL、75 mg/mL、10至20 mg/mL、15至25 mg/mL、12至18 mg/mL、13-17 mg/mL、14-16 mg/mL、約15 mg/mL或15 mg/mL之濃度投與。
舉例而言，可藉由將組合物注射於包括但不限於以下各者之區域中進行皮下投藥：大腿區、腹部區、臀部區或肩胛區。出於該等目的，可使用注射器注射調配物。然而，可利用用於調配物投藥之其他裝置，諸如注射裝置(例如Inject-ease™及Genject™裝置)；注射器筆(諸如GenPen™)；無針裝置(例如MediJector™及BioJector™)；及皮下貼片劑遞送系統。在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)或含有其之醫藥組合物。
在一些實施例中，血清膽紅素之含量與該治療之前血清膽紅素之含量相比有所降低。血清膽紅素反映黃疸程度且係在患有阻塞性黃疸之患者中所見之皮膚及眼睛中的黃色來源。在一些實施例中，該方法可有效促進患者中之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善患者中之腸屏障功能且降低細菌易位穿過患者小腸之速率。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療、改善或保護避免對胃腸道之輻射損傷，及/或其效果之方法，其包含投與例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。可使用可有效治療或預防對患者胃腸道之輻射損傷的給藥方案。輻射損傷可處於小腸中。在一些實施例中，該方法可有效減少胃腸道細胞之細胞凋亡。
對小腸之輻射損傷可導致細胞損傷，該細胞損傷足以引起以下效果中之一或多者：降低腸屏障功能、減少小腸對水及其他營養物之吸收、對不經腸營養之依賴增加。半衰期顯著長於GLP-2或替度魯肽之GLP-2肽體可逆轉此等效果。不希望受理論所束縛，GLP-2可藉由促進該等細胞(例如CCD-18Co細胞)中之Akt磷酸化防止小腸中之細胞經歷細胞凋亡。可替代地，GLP-2肽體可經由其GLP-2活性降低半胱天冬酶-3之含量。半胱天冬酶3係輻射觸發之因子。GLP-2肽體亦可抑制亦由輻射觸發之Bcl-2降解。
可在以輻射或放射線療法治療患者之前、或與其同時投與GLP-2肽體。可在以輻射或放射線療法治療患者之後投與GLP-2肽體。可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2。在各種實施例中，根據給藥方案進行多次投藥。如本文所用，術語「Q2D」意謂每兩天投藥，「Q3D」意謂每三天投藥等，「QW」意謂每週投藥。「BID」意謂一天兩次投藥。舉例而言，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每兩週一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三週一次、或每月一次進行給藥。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每2-10天一次、每5-8天一次、或每週(QW)一次在0.02至3.0 mg/kg、0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg、0.02至0.05 mg/kg、0.03至0.04 mg/kg、0.05至0.10 mg/kg、0.10至0.15 mg/kg、0.2至0.3 mg/kg、0.3至0.4 mg/kg、0.4至0.5 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.7至1.0 mg/kg、0.9至1.2 mg/kg、1.0至1.5 mg/kg、1.2至1.8 mg/kg、1.5至2.0 mg/kg、1.7至2.5 mg/kg、或2.0至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每週(QW)或每兩週(Q2W)在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
可替代地，可每三週或每月一次投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每三週或每月一次在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每5-8天或每週(QW)在0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg之間的給藥方案皮下投與以用於維護用途。包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體可以10至100 mg/mL、10至90 mg/mL、20至80 mg/mL、25至75 mg/mL、30至70 mg/mL、50至100 mg/mL、60至90 mg/mL、約75 mg/mL、75 mg/mL、10至20 mg/mL、15至25 mg/mL、12至18 mg/mL、13-17 mg/mL、14-16 mg/mL、約15 mg/mL或15 mg/mL之濃度投與。
可歷經六個月至一年進行以上給藥方案。可在初始給藥方案該每月一次投與GLP-2肽體以用於維護。
舉例而言，可藉由將組合物注射於包括但不限於以下各者之區域中進行皮下投藥：大腿區、腹部區、臀部區或肩胛區。出於該等目的，可使用注射器注射調配物。然而，可利用用於調配物投藥之其他裝置，諸如注射裝置(例如Inject-ease™及Genject™裝置)；注射器筆(諸如GenPen™)；無針裝置(例如MediJector™及BioJector™)；及皮下貼片劑遞送系統。在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)或含有其之醫藥組合物。
在一些實施例中，該方法可有效促進患者中之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善患者中之腸屏障功能。此等效果皆可彌補在小腸及腸中出現之任何輻射誘發之細胞損傷。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療、改善或預防對胃腸道之輻射誘發之腸炎，及/或其效果的方法，其包含投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。可使用可有效治療或預防患者中之輻射誘發之腸炎的給藥方案。
出於如上文關於對胃腸道之輻射誘發之損傷所論述的相似原因，可藉由GLP-2肽體逆轉輻射誘發之腸炎。
可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每2-14天一次、每5-8天一次、或每週(QW)一次在0.02至3.0 mg/kg、0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg、0.02至0.05 mg/kg、0.03至0.04 mg/kg、0.05至0.10 mg/kg、0.10至0.15 mg/kg、0.2至0.3 mg/kg、0.3至0.4 mg/kg、0.4至0.5 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.7至1.0 mg/kg、0.9至1.2 mg/kg、1.0至1.5 mg/kg、1.2至1.8 mg/kg、1.5至2.0 mg/kg、1.7至2.5 mg/kg、或2.0至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每週(QW)或每兩週(Q2W)在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
可替代地，可每三週或每月一次投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每三週或每月一次在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每5-8天或每週(QW)在0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg之間的給藥方案皮下投與以用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可以10至100 mg/mL、10至90 mg/mL、20至80 mg/mL、25至75 mg/mL、30至70 mg/mL、50至100 mg/mL、60至90 mg/mL、約75 mg/mL、75 mg/mL、10至20 mg/mL、15至25 mg/mL、12至18 mg/mL、13-17 mg/mL、14-16 mg/mL、約15 mg/mL或15 mg/mL之濃度投與。
舉例而言，可藉由將組合物注射於包括但不限於以下各者之區域中進行皮下投藥：大腿區、腹部區、臀部區或肩胛區。出於該等目的，可使用注射器注射調配物。然而，可利用用於調配物投藥之其他裝置，諸如注射裝置(例如Inject-ease™及Genject™裝置)；注射器筆(諸如GenPen™)；無針裝置(例如MediJector™及BioJector™)；及皮下貼片劑遞送系統。在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體，或含有其之醫藥組合物。
在一些實施例中，該方法可有效促進患者中之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管深度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管組織。在一些實施例中，該方法可有效改善患者中之腸屏障功能。
在另一態樣中，提供一種用於治療呈現結腸與殘餘小腸連續性之患有短腸症候群之患者的方法，其包含使用可有效治療短腸症候群之給藥方案，利用GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體治療患者。在一些實施例中，以藥劑形式投與GLP-2肽體以促進呈現至少約25%結腸與殘餘小腸連續性之短腸症候群患者中的腸道吸收。在一些實施例中，殘餘小腸之長度為至少25 cm、至少50 cm、至少75 cm、至少100 cm、或至少125 cm。在一些實施例中，該方法可有效促進患者中之腸道吸收。在一些實施例中，該方法可有效促進營養物之腸道吸收，該等營養物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質及水。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之絨毛高度。在一些實施例中，該方法可有效增加患者小腸中之腺管深度。在一些實施例中，患者依賴於不經腸營養。該方法可有效降低糞便濕重，增加尿液濕重，增加穿過小腸之能量吸收(例如多肽、碳水化合物、脂肪酸之一或多者之吸收)，增加穿過小腸之水吸收，減少不經腸營養支持，或消除對不經腸營養之需求。
可使用可有效治療具有結腸連續性之短腸症候群的給藥方案。可皮下或靜脈內投與GLP-2肽體，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7。在各種實施例中，根據給藥方案進行多次投藥。如本文所用，術語「Q2D」意謂每兩天投藥，「Q3D」意謂每三天投藥等，「QW」意謂每週投藥。「BID」意謂一天兩次投藥。舉例而言，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每兩週一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三週一次、或每月一次進行給藥。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每2-14天一次、每5-8天一次、或每週(QW)一次在0.02至3.0 mg/kg、0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg、0.02至0.05 mg/kg、0.03至0.04 mg/kg、0.05至0.10 mg/kg、0.10至0.15 mg/kg、0.2至0.3 mg/kg、0.3至0.4 mg/kg、0.4至0.5 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.7至1.0 mg/kg、0.9至1.2 mg/kg、1.0至1.5 mg/kg、1.2至1.8 mg/kg、1.5至2.0 mg/kg、1.7至2.5 mg/kg、或2.0至3.0 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每週(QW)或每兩週(Q2W)在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
可替代地，可每三週或每月一次投與GLP-2肽體，諸如用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7)可根據每三週或每月一次在0.2至1.4 mg/kg、0.3至1.0 mg/kg、0.4至0.9 mg/kg、0.5至0.8 mg/kg、0.3至0.7 mg/kg、0.6至1.0 mg/kg、0.2至0.4 mg/kg、0.3至0.5 mg/kg、0.4至0.6 mg/kg、0.5至0.7 mg/kg、0.6至0.8 mg/kg、0.7至0.9 mg/kg、0.8至1.0 mg/kg、0.9至1.1 mg/kg、1.0至1.2 mg/kg、1.1至1.3 mg/kg及1.2至1.4 mg/kg之間的給藥方案皮下投與。
GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可根據每5-8天或每週(QW)在0.02至0.5 mg/kg、0.04至0.45 mg/kg、0.08至0.4 mg/kg、0.10至0.35 mg/kg、0.20至0.30 mg/kg之間的給藥方案皮下投與以用於維護用途。GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)可以10至100 mg/mL、10至90 mg/mL、20至80 mg/mL、25至75 mg/mL、30至70 mg/mL、50至100 mg/mL、60至90 mg/mL、約75 mg/mL、75 mg/mL、10至20 mg/mL、15至25 mg/mL、12至18 mg/mL、13-17 mg/mL、14-16 mg/mL、約15 mg/mL或15 mg/mL之濃度投與。
在一些實施例中，皮下投與GLP-2肽體，例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7之GLP-2肽體，或含有其之醫藥組合物。舉例而言，可藉由將組合物注射於包括但不限於以下各者之區域中進行皮下投藥：大腿區、腹部區、臀部區或肩胛區。在一些實施例中，靜脈內投與GLP-2肽體(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7)，或含有其之醫藥組合物。
類似於上文，可使用GLP-2肽體藉由投與有效量之如本文所述之GLP-2類似物或其鹽來治療患有胃腸病狀之個體，包括食道之上胃腸道。胃及腸道相關病狀包括任何病因之潰瘍(例如胃蛋白酶潰瘍、藥物誘發之潰瘍、與感染或其他病原體相關之潰瘍)、消化病症、吸收障礙症候群、短腸症候群、盲管症候群、發炎性腸病、脂肪痢(例如由麩質誘發之腸病或乳糜瀉引起)、熱帶性口瘡、低丙球蛋白血症口瘡、腸炎、潰瘍性結腸炎、小腸損傷及化學療法誘發之腹瀉/黏膜炎(CID)。用GLP-2肽體治療之候選者係以下個體：其將受益於小腸質量增加及正常小腸黏膜結構及功能之效果及/或維護。可用GLP-2肽體治療之特定病症包括各種形式之口瘡，其包括：脂肪痢，其由對來自小麥的α-麥膠蛋白之有毒反應引起，可係麩質誘發之腸病或乳糜瀉的結果，且由小腸絨毛之顯著損失標示；熱帶性口瘡，其由感染引起且藉由絨毛之部分平整標示；低丙球蛋白血症口瘡，其通常在患有常見可變免疫缺乏或低γ球蛋白血症之患者中觀測到且藉由絨毛高度之顯著降低來標示。GLP-2肽體治療之治療功效可藉由以下各者監測：用以檢驗絨毛形態之腸活檢；營養物吸收之生物化學評估；患者重量增加；或與此等病症相關之症狀之改善。
亦可投與GLP-2肽體以在化學療法期間預防或治療對胃腸道之損傷。對小腸黏膜之化學療法誘發之損傷臨床上常稱為胃腸道黏膜炎且特徵在於小腸之吸收性及屏障損傷。癌症化學療法之後所引起之胃腸道黏膜炎係儘管逐漸緩和，但一旦確定即基本上不可治療之日益增加的問題。利用常用細胞抑制癌症藥物5-FU及伊立替康進行之研究已證實，利用此等藥物進行之有效化學療法顯著影響小腸之結構完整性及功能。GLP-2肽體之投藥可逆轉對小腸之損傷且保存其結構完整性及功能。
在以上治療方法之各種實施例中，待投與之特定劑量或量可例如視以下各者變化：所需結果之性質及/或程度、投藥途徑及/或時機之特點、及/或一或多個特徵(例如體重、年齡、個人病史、基因特徵、生活方式參數、心臟缺陷之嚴重程度及/或心臟缺陷之風險水準等，或其組合)。該等劑量或量可由一般技術者測定。在一些實施例中，根據標準臨床技術測定合適劑量或量。可替代地或另外，在一些實施例中，經由使用一或多種活體外或活體內分析幫助鑑別期望或最佳的待投與之劑量範圍或量來測定合適劑量或量。
在上文治療方法之各種實施例中，以治療有效量投與GLP-2肽體。一般而言，治療有效量足以實現對受試者有意義之益處(例如防治、治療、調節、治癒、預防及/或改善潛在疾病或病症)。一般而言，向有需要之受試者投與之治療劑(例如GLP-2肽體)的量將視受試者之特徵而定。該等特徵包括受試者之病症、疾病嚴重程度、一般健康、年齡、性別及體重。一般熟習此項技術者將能夠輕易根據此等及其他相關因素測定合適劑量。另外，可視情況採用客觀及主觀分析兩者鑑別最佳的劑量範圍。在一些特定實施例中，待投與之合適劑量或量可自衍生自活體外或動物模式測試系統之劑量反應曲線外推得出。
在以上治療方法之各種實施例中，通常在可包含多個單位劑量之給藥方案中投與治療有效量。對於任何特定治療蛋白，治療有效量(及/或有效給藥方案內之合適單位劑量)可例如根據投藥途徑，與其他醫藥劑之組合變化。此外，對於任何特定患者之特定治療有效量(及/或單位劑量)可視多種因素而定，該等因素包括：所治療之病症及病狀之嚴重程度；所採用之特定醫藥劑之活性；所採用之特定組合物；患者之年齡、體重、一般健康、性別及飲食；投藥時間、投藥途徑及/或所採用之特定融合蛋白之分泌或代謝速率；治療持續時間；及如醫療技術中所熟知之類似因素。
在以上治療方法之各種實施例中，GLP-2肽體與一或多種已知治療劑組合投與。在一些實施例中，根據其標準或經批准給藥方案及/或計劃表投與已知治療劑。在一些實施例中，根據與其標準或經批准給藥方案及/或計劃表相比改變之方案投與已知治療劑。在一些實施例中，此類改變方案與標準或經批准給藥方案的不同之處在於一或多種單位劑量之量改變(例如減少或增加)及/或給藥頻率改變(例如單位劑量之間的一或多種時間間隔增加，使得頻率降低，或減少，使得頻率升高)。
對於ECF，可與GLP-2肽體組合投與之例示性治療劑包括皮質類固醇、抗生素及酸減少劑。對於阻塞性黃疸，可與GLP-2肽體組合投與之例示性治療劑包括皮質類固醇及抗生素。
在以上治療方法之各種實施例中，可一起投與多種不同GLP-2肽體。另外，可與Gattex、替度魯肽或GLP-2肽同時投與GLP-2肽體。實例
亦藉助於以下實例描述及說明本發明。然而，說明書中任何地方之此等及其他實例的使用僅為說明性的且決不限制本發明或任何例示術語之範疇及意義。同樣地，本發明不限於本文所述之任何尤其較佳之實施例。實際上，本發明之許多修改及變體在熟習此項技術者閱讀本說明書時對其可顯而易見，且該等變體可在不背離本發明之精神或範疇情況下進行。本發明僅受隨附申請專利範圍之項目以及彼等申請專利範圍所授權之等效物之完整範疇限制。實例 1 ： GLP - 2 肽體之分子量及 FcRn 結合
與Fc新生受體(FcRN)之結合允許分子之再循環且導致Fc融合蛋白之活體內血清半衰期延長。再循環發生時，分子被動攝入細胞且核內體之pH值較低。彼導致分子之Fc部分與FcRN結合。當FcRN再循環回至細胞表面時，pH值隨後為中性且將蛋白質釋放回至血清。
與FcRN之胞外域之結合係使用Biacore系統藉由表面電漿子共振(surface plasmon resonance；SPR)量測。在以下條件下經由CM5晶片與FcRn之胺偶合實現利用FcRn進行之直接固著： i) 在乙酸鹽緩衝液pH 5.0中將hFcRn (自身表現及純化)稀釋至5 μg/mL。 ii) 在PBS pH 7.0中以500 RU之目標將5 mg/mL FcRn固定於CM5晶片上 iii) 最終響應454 RU iv) 操作緩衝液：PBS-P+，pH調節至5.5
使用以下方案進行動力學結合研究。在PBS-P+至50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39、0 nM中稀釋樣品。參數設定如下： i) 在流動速率30 μL/min下締合及解離300 s ii) 在60 mL/min下用25 mM Tris，150 mM NaCl pH 8.0再生40 s
在pH 5.5及pH 7.4下進行對GLP-2肽體與Fc新生受體(FcRN)之結合的量測。以白蛋白代替Fc之GLP-2肽體O具有顯著較高之KD 。結果展示於下表1中。表 1 實例 2 ：蛋白質穩定性分析
GLP-2肽體中之每一者係藉由以奈米示差掃描螢光測定法(NanoDSF)測定熔融溫度來測試。NanoDSF係採用溫度斜線，歷經一系列溫度對蛋白質穩定性進行之量測。色胺酸之穩定性係藉由螢光量測，如350 nm下之螢光與330 nm下之螢光之比所反映。自分析，測定一或多個熔融溫度。因為處於某一狀態之蛋白質應理解為具有某一熔融溫度，所以所觀測到之熔融溫度之數目反映不同狀態之數目。GLP-2肽體A、B、E、J、K、L及M具有兩種狀態，如下表2中所展示。
進行SEC-MALS分析以測定始態(主峰)及其分子量。如下表2中所展示，GLP-2肽體A、B、E、J、K、L、M及O (Fc融合體)以指示二聚體之分子量溶離。GLP-2肽體O (白蛋白融合體)以指示單體之分子量溶離。表 2 實例 3 ： GLP - 2 肽體之活體外效能
使用來自DiscoverX之cAMP HunterTM eXpress GLP2R CHO-K1 GPCR分析活體外分析GLP-2肽體之EC50。cAMP HunterTM 分析係基於酶片段互補(enzyme fragment complementation；EFC)。在EFC分析中，酶供體與cAMP融合。因GLP2R活化所致之增加之胞內cAMP與ED-cAMP競爭抗體。非結合ED-cAMP補充酶受體以形成活性β半乳糖，其接著產生發光信號。
所使用之CHO-K1細胞株係過度表現人類GLP-2R (基因銀行寄存編號NM004246.1)。使用肽GLP-2[A2G]作為對照組。使用表3中列出之GLP-2[A2G]肽及GLP-2肽體之各種稀釋液治療細胞。經由量測培養基中之cAMP濃度分析其活性。進行S形曲線擬合以達到EC50值，如下表3中所展示。表 3
GLP-2肽體之EC50值顯著大於GLP-2[A2G]之EC50值。然而，一些GLP-2肽體，諸如GLP-2肽體K之活體外效能僅略微降低，其中活性僅降低約五倍。GLP-2肽體K之活體外活性為GLP-2[A2G]之20%。GLP-2肽體E之活體外活性為GLP-2[A2G]之24%。GLP-2肽體E之活體外活性為GLP-2[A2G]之18%。GLP-2肽體B之活體外活性為GLP-2[A2G]之7%。
隨後如下文所論述進行藥物動力學研究，以分析GLP-2肽體活體內活性之時長。實例 4 ：大鼠藥物動力學研究 - 靜脈內給藥
在大鼠中，量測Gattex® (具有A2G突變之GLP-2肽)之四個藥物動力學參數：CL、Vc、Vt及Q。亦量測GLP-2肽體A、B、E、J、K、L、M、O及P之相同藥物動力學參數。資料展示於表4中。經由頸靜脈或尾部靜脈導管靜脈內注射雄性史泊格多利大白鼠(3隻動物/組)。以1 mg/ml之劑量注射單一劑量之測試物品。以1 mg/ml之濃度在PBS pH 7.4中調配測試物品。在給藥後0.083、0.167、0.33、0.5、1、2、6、24、48、72、120、168、240及336小時採取血液樣品。將血液樣品收集於肝素化試管中且在收集10分鐘內在2000×g下離心5分鐘。將100 µL血漿轉移至含有2 mL 50mM PMSF之1.5 ml Eppendorf試管。在混合之後，在-80℃下冷凍血漿樣品直至分析。表 4 實例 5 ：大鼠藥物動力學研究 - 皮下給藥
在大鼠中，量測Gattex® (具有A2G突變之GLP-2肽)之四個藥物動力學參數：CL、Vc、Vt及Q。亦量測GLP-2肽體A、B、E、J、K、L、M、O及P之相同藥物動力學參數。資料展示於表5中。雄性史泊格多利大白鼠(3動物/組)經受皮下注射至動物之肩胛內區域中。以1 mg/ml之劑量注射單一劑量之測試物品。以1 mg/ml之濃度在PBS pH 7.4中調配測試物品。在給藥後0.083、0.167、0.33、0.5、1、2、6、24、48、72、120、168、240及336小時採取血液樣品。將血液樣品收集於肝素化試管中且在收集10分鐘內在2000×g下離心5分鐘。將100 µL血漿轉移至含有2 mL 50mM PMSF之1.5 ml Eppendorf試管。在混合之後，在-80℃下冷凍血漿樣品直至分析。進行Meso Scale Discovery (MSD) ELISA以分析GLP-2肽體之濃度。
使用抗人類IgG1 Fc抗體或抗人類白蛋白抗體開發夾心免疫檢定以捕獲肽體及sulfotag標記之抗GLP-2抗體以用於偵測。表 5 實例 5 ： GLP - 2 肽體 B264 之表現及純化
GLP-2肽體B264編碼序列經選殖至質粒中以在CHO宿主細胞株中表現。使用具有21 cm床及400 mL樹脂之MAb Select Sure®純化GLP-2肽體B264。使用平衡緩衝液及洗滌緩衝液作為DPBS。對於溶離液，使用pH 3.0下之100 mM甘胺酸。中和緩衝液係pH 9.0下之1 M Tris-HCl，每45 mL溶離液使用1.45 mL。
隨後使用Akta蛋白質純化系統進行純化。使用5管柱體積之DPBS用於平衡。以35毫升/分鐘之速率裝載6 L樣品。使用10管柱體積之DPBS洗滌管柱。使用5-10管柱體積之100 mM甘胺酸pH 3.0在用pH 9.0下之1.45 mL 1 M Tris-HCl中和之45 mL餾分中進行溶離。於4℃下在攪拌隔夜同時合併溶離餾分且以70 mL樣品/2.5 L dPBS對PBS pH 7.4 Fisher (自10×PBS稀釋)進行滲析。
藉由Nanodrop、Bradford及BCA中之每一者分析總蛋白質。GLP肽體B264之最終濃度在170 mL總體積中係11 mg/mL。總產率係1.87公克。內毒素含量係1.72 EU/mL或約0.15 EU/mg。
隨後使用SEC-MALS及NanoDSF進行穩定性分析。對於SEC-MALS，使用Sepax Zenix C-150管柱。移動相緩衝液係1×PBS，最終濃度為400 mM NaCl。流動速率係0.8毫升/分鐘。注射20微克總蛋白質。對於NanoDSF，使用10微升樣品，不進行樣品之正規化。資料展示於下表6中。表 6 實例 6 ： GLP - 2 肽體 K274 之表現及純化
GLP-2肽體K274編碼序列經選殖至質粒中以在CHO宿主細胞株中表現。使用具有17 cm床及300 mL樹脂之MAb Select Sure®純化GLP-2肽體K274。使用平衡緩衝液及洗滌緩衝液作為DPBS。對於溶離液，使用pH 3.0下之100 mM甘胺酸。中和緩衝液係pH 9.0下之1 M Tris-HCl，每45 mL溶離液使用1.45 mL。
隨後使用Akta蛋白質純化系統進行純化。使用5管柱體積之DPBS用於平衡。以35毫升/分鐘之速率裝載6 L樣品。使用10管柱體積之DPBS洗滌管柱。使用5-10管柱體積之100 mM甘胺酸pH 3.0在用pH 9.0下之1.45 mL 1 M Tris-HCl中和之45 mL餾分中進行溶離。
於4℃下在攪拌隔夜同時合併溶離餾分且以70 mL樣品/2.5 L dPBS對PBS pH 7.4 Fisher (自10×PBS稀釋)進行滲析。
藉由Nanodrop、Bradford及BCA中之每一者分析總蛋白質。GLP肽體B264之最終濃度在170 mL總體積中係11 mg/mL。總產率係1.87公克。
隨後使用SEC-MALS及NanoDSF進行穩定性分析。對於SEC-MALS，使用Sepax Zenix C-150管柱。移動相緩衝液係1×PBS，最終濃度為400 mM NaCl。流動速率係0.8毫升/分鐘。注射20微克總蛋白質。對於NanoDSF，使用10微升樣品，不進行樣品之正規化。結果展示於下表7中。表 7 實例 7 ： GLP - 2 肽體 B264 及 GLP - 2 肽體 K274 之二聚體 / 單體分析
GLP-2肽體B264及GLP-2肽體K274之SEC-MALS分析展示約140,000 g/mol之分子量，其對應於二聚體之尺寸。AUC及EM分析證實存在二聚體。GLP-2肽體B264之單體之預期分子量係58,970且GLP-2肽體K274之預期分子量係60,290。SEC-MALS分析結果顯示於圖8A中，對應於二聚體之波峰在約7分鐘處出現且對應於單體之波峰在約8分鐘處出現。觀測到SEC之稀釋效果位於單體/二聚體轉變範圍內。
二聚體GLP-2-Fc (GLP-2肽體B)之EM分析結果顯示於圖8B中。在4℃下在濃度降低及時間增加下出現更多二聚體，如關於GLP-2肽體K在圖8C及8D中展示。針對GLP-2肽體K之AUC及SEC分析結果顯示於圖9A及9B中。圖9A展示沈降係數(SEC)分佈概況之重疊圖。樣品處於1-8 µM範圍，然而，在SEC分析期間，使樣品在管柱上稀釋使得其屬於單體-二聚體轉變範圍。另外，注射4 µL 11.3 mg/mL樣品進行SEC分析且各自沈降分級，在Nanodrop所量測之A280證實SEC上之樣品濃度屬於單體-二聚體轉變範圍。為概述上文，在AUC及SEC-MALS分析中觀測到GLP-2-Fc呈二聚體形式。根據SEC-MALS，單體/二聚體比值基於濃度改變。
進行微尺度熱泳(MST)及奈米差示掃描螢光測定法(NanoDSF)以表徵二聚體-單體轉變。使用MST測定單體/二聚體平衡解離常數Kd。MST係基於分子之熱驅動擴散而NanoDSF係基於Trp螢光且常用於熱穩定性Tm。針對GLP-2肽體B264及GLP-2肽體K274兩者進行MST，如圖9C中所示。GLP-2肽體B264之Kd係159 ± 31 nM。GLP-2肽體K274之Kd在PBS中係159 ± 29 nM且在具有0.4 M NaCl之PBS中係159 ± 32 nM。此外，利用MST獲得之替度魯肽之Kd係24 ± 3 µM。
在NanoDSF分析中，使用室溫且靶向可能在GLP-2-Fc自締合期間經歷構形變化之GLP-2中之一種色胺酸。參見圖9D。僅來自蛋白質之色胺酸螢光促進信號。若色胺酸隱藏或穩定，則波峰在330 nm處且若色胺酸暴露或具有可撓性，則波峰在350 nm處。對於GLP-2肽體B，在室溫下觀測到GLP-2肽體之各種稀釋液在0.8至0.85之間的比值。結果展示於圖9E中。自展示於圖9F中之結果之S型擬合曲線，GLP-2肽體B之Kd為1043 ± 154 nM。此外，利用nanoDSF獲得之替度魯肽之Kd係77 ± 14 µM。實例 8 ： GLP - 2 肽體 K274 之小鼠藥物動力學資料
在CD1小鼠中進行藥物動力學分析。締合常數(ka)係3.04天- 1 ，CL/F係81.3毫升/天/公斤且Vc 係213 mL/kg。小鼠分成若干組，歷經14天時段，一組每三天(Q3D)投與0.45 mg/kg，另一組投與1.5 mg/kg Q3D，另一組投與4.5 mg/kg Q3D，且另一組投與15 mg/kg Q3D。在停止給藥之後，在3天、9天、14天及21天之後量測濃度。結果展示於圖10A中。實例 9 ： GLP - 2 肽體 K ( 具有 C 端離胺酸 ) 及 GLP - 2 肽體 K274 ( 無 C 端離胺酸 ) 之藥物動力學之可比較性
向六隻雄性史泊格多利大白鼠之組皮下投與1 mg/kg 總GLP-2肽體K蛋白質。向另一組六隻雄性史泊格多利大白鼠之組靜脈內投與1 mg/kg總GLP-2肽體K274蛋白質。向第三組五隻雄性史泊格多利大白鼠之組皮下投與1 mg/kg總GLP-2肽體B蛋白質。向第四組五隻雄性史泊格多利大白鼠之組皮下投與1 mg/kg總GLP-2肽體B264蛋白質。
對於全部以上組，給藥前及在給藥後以下時間點採取血漿樣品：5分鐘(第1天)、10分鐘(第1天)、20分鐘(第1天)、30分鐘(第1天)、1小時(第1天)、2小時(第1天)、6小時(第1天)、24小時(第2天)、48小時(第3天)、72小時(第4天)、120小時(第6天)、168小時(第8天)、240小時(第11天)及336小時(第15天)。
展示藥物動力學資料之表位於圖10B中，該藥物動力學資料比較靜脈內投與之GLP-2肽體K及GLP-2肽體K274。展示藥物動力學資料之表位於圖10C中，該藥物動力學資料比較皮下投與之GLP-2肽體K及GL-2肽體K274。資料展示GLP-2肽體K與GLP-2肽體K274自藥物動力學觀點來看相同。實例 10 ： 利用替度魯肽、 GLP - 2 肽體 B 及 GLP - 2 肽體 K 進行之食蟹獼猴藥物動力學研究
在以瓜胺酸作為GLP-2濃度之生物標記分析之食蟹獼猴中形成替度魯肽、GLP-2肽體B及GLP-2肽體K的藥物動力學研究。在研究中，在第1天向6隻雄性食蟹獼猴之組皮下投與12.5 nmol/kg替度魯肽。隨後對於一個2隻猴子之組，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天靜脈內投與25 nmol/kg GLP-2肽體B。對於另一個3隻猴子之組，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天皮下投與25 nmol/kg GLP-2肽體。對於猴子之另一組，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天靜脈內(2隻猴子)及皮下(3隻猴子)投與5 nmol/kg GLP-2肽體K。對於猴子之另一組，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天皮下(3隻猴子)及靜脈內(2隻猴子)投與25 nmol/kgGLP-2肽體K。
皮下替度魯肽之結果顯示於圖11A中。締合常數(ka)係9.67天- 1 (SD=1.3，13%)，CL/F係7,400毫升/天/公斤(SD=580，8%)且Vc 係218 mL/kg (SD=39，18%)。
靜脈內及皮下GLP-2肽體B之結果顯示於圖11B中。對於0.75 mg/kg之靜脈內劑量之單次劑量藥物動力學(SDPK)，CL係9.5毫升/天/公斤(SD=3.2，33%)，Vc 係17.1 mL/kg (SD=3.3，19%)，Vt 係27.6 mL/kg (SD=7.2，26%)，且Q係26.7毫升/天/公斤(SD=2.3，24%)。對於0.75 mg/kg之靜脈內劑量之多次劑量藥物動力學(MDPK)，CL係10.0毫升/天/公斤(SD=3.3，33%)，Vc 係18.7 mL/kg (SD=3.8，21%)，Vt 係32.9 mL/kg (SD=7.7，23%)，且Q係28.9毫升/天/公斤(SD=7.6，26%)。對於SDPK (皮下，0.75 mg/kg)，締合常數(ka)係1.52天- 1 (SD=0.37，24%)，CL/F係17.7毫升/天/公斤(SD=14，80%)且Vc 係92.4 mL/kg (SD=32，35%)。對於MDPK (皮下，0.75 mg/kg)，締合常數(ka)係1.59天- 1 (SD=0.23，16%)，CL/F係17.7毫升/天/公斤(SD=4.2，24%)且Vc 係94.0 mL/kg (SD=30，32%)。
靜脈內及皮下GLP肽體K之結果顯示於圖11C中。對於SDPK (靜脈內，0.75 mg/kg)，CL係17.2毫升/天/公斤(SD=1.2，7%)，Vc 係32.3 mL/kg (SD=1.0，3%)，Vt 係32.9 mL/kg (SD=12，37%)，且Q係29.1毫升/天/公斤(SD=2.3，8%)。對於MDPK (靜脈內，0.75 mg/kg)，CL係19.3毫升/天/公斤(SD=1.5，8%)，Vc 係36.5 mL/kg (SD=2.0，5%)，Vt 係33.9 mL/kg (SD=5.1，15%)，且Q係27.0毫升/天/公斤(SD=9.5，23%)。對於SDPK (皮下，0.75 mg/kg)，締合常數(ka)係1.56天- 1 (SD=0.49，31%)，CL/F係33.0毫升/天/公斤(SD=6.7，20%)且Vc 係107 mL/kg (SD=16，15%)。對於MDPK (皮下，0.75 mg/kg)，締合常數(ka)係1.70天- 1 (SD=0.45，26%)，CL/F係32.4毫升/天/公斤(SD=5.8，18%)且Vc 係111 mL/kg (SD=20，17%)。
儘管自食蟹獼猴PK資料預計每週一次(QW)30 µg/kg之劑量，但劑量應高於十倍(300 µg/kg)以調節活體內效能之差異。下表展示對人類之靜脈內及皮下參數之預計結果，CL之指數等於0.85，食蟹獼猴體重等於3.5 kg，且人體體重等於70 kg。表 8
對於1.5 mL皮下注射，濃度將係15 mg/mL。對於2.0 mL皮下注射，濃度將係10 mg/mL。實例 11 ：利用 GLP - 2 肽體 K274 進行之藥效學平台研究
在雌性CD-1小鼠中分析各種劑量之GLP-2肽體K274以評估藥效學平台，原始端點為小腸體重相對於總體重之量測結果及絨毛長度之組織學研究。形成各自具有六隻雌性之八個組。在兩個組中，Q3D僅投與媒劑以作為陰性對照。在四個組中，歷經14天Q3D投與以下劑量：0.45 mg/kg、1.5 mg/kg、4.5 mg/kg及15 mg/kg。在一個額外組中，歷時14天Q3D投與4.5 mg/kg，研究在第18天之後四天終止。在另一額外組中，歷時14天Q3D投與4.5 mg/kg，研究在第21天之後七天終止。各組概述於下表9中。表 9
對於原始端點，以公克為單位之小腸體重顯示於圖12A中，對體重正規化之小腸體重顯示於圖12B中，且對體重正規化之結腸體重顯示於圖12C中。4.5 mg/kg之劑量具有最大效果。
另外，對體重正規化之小腸體重增加之效果在給藥後保持至少五天，如圖13A中所示。圖13B係描繪對於媒劑及GLP-2肽體K274兩者之小腸體重之百分比變化。
對於組織學研究，製備4微米石蠟切片以用於H&E及Ki67染色。在全載片掃描之後，使用顯像器獲取絨毛長度量測，腺管深度量測及Ki67分析。Ki67染色結果顯示於圖13C中。利用Ki67陽性百分比進行之劑量-反應研究及清除研究結果顯示於圖13D中。
展示經媒劑處理及經15 mg/kgGLP-2肽體K274治療(歷經14天Q3D)之絨毛長度之組織學載片描繪於圖13E中。量測上文不同組之以微米為單位之絨毛長度，結果顯示於圖13F中。量測上文不同組之以微米為單位之腺管深度，結果顯示於圖13G中。實例 12 ： 利用 GLP - 2 [ A2G ] 進行之藥效學平台研究
在組織學研究中於CD-1小鼠中分析GLP-2[A2G]肽以評估絨毛長度及腺管深度。使用肽合成器製備此研究中使用之GLP-2[A2G]肽。形成各自具有六隻雌性之八個組。在兩個組中，一天兩次(BID)僅投與媒劑以作為陰性對照。在六個組中，歷經15天BID投與以下劑量：0.0125 mg/kg、0.025 mg/kg、0.050 mg/kg、0.100 mg/kg、0.250 mg/kg及0.500 mg/kg。在一個額外組中，歷時14天BID投與0.500 mg/kg，研究在第16天之後兩天終止。在另一額外組中，歷時14天BID投與0.500 mg/kg，研究在第18天之後兩天終止。在又一額外組中，歷時10天BID投與0.500 mg/kg，研究在第21天之後兩天終止。各組概括於下表10中。
表 10
對於組織學研究，製備4微米石蠟切片以用於H&E及Ki67染色。在全載片掃描之後，使用顯像器獲取絨毛長度量測，腺管深度量測及Ki67分析。Ki67染色顯示於圖14A中。利用Ki67陽性百分比進行之劑量-反應研究的結果顯示於圖14B中。
圖14C展示歷經15天BID投與媒劑、0.05 mg/kg GLP-2[A2G]及0.5 mg/kg GLP-2[A2G]之劑量之雄性中的Ki67陽性程度，以及歷經15天以相同方式投與之雄性及雌性之間的比較。
展示經媒劑處理及經0.5 mg/kg GLP-2[A2G]治療(歷經14天BID)之絨毛長度之組織學載片描繪於圖14D中。量測上文不同組之以微米為單位之絨毛長度，結果顯示於圖14E中。圖14F展示歷經15天BID投與媒劑、0.05 mg/kg GLP-2[A2G]及0.5 mg/kg GLP-2[A2G]之劑量之雄性中的絨毛長度，以及歷經15天以相同方式投與之雄性及雌性之間的比較。
量測上文不同組之以微米為單位之腺管深度，結果顯示於圖14G中。圖14H展示歷經15天BID投與媒劑、0.05 mg/kg GLP-2[A2G]及0.5 mg/kg GLP-2[A2G]之劑量之雄性中的腺管深度，以及歷經15天以相同方式投與之雄性及雌性之間的比較。實例 13 ： 利用 GLP - 2 [ A2G ] 、 GLP 肽體 B264 及 GLP 肽體 K274 進行之劑量 - 反應研究
分析使用肽合成器製備之各種劑量之GLP-2[A2G]肽以評估藥物動力學及藥力學，原始端點為以公克為單位之絕對小腸體重及呈總體重之百分比形式之相對小腸體重之量測。形成各自具有六隻雌性之三個組，如下表11中所展示：表 11
分析各種劑量之GLP-2肽體B264以評估藥物動力學及藥力學，原始端點為以公克為單位之絕對小腸體重及呈總體重之百分比形式之相對小腸體重之量測。形成各自具有六隻雌性CD-1小鼠之八個組。在兩個組中，每三天(Q3D)僅投與媒劑作為陰性對照。此等組中之一者之研究持續時間係14天且另一組之研究持續時間係21天。在四個額外組中，歷經14天Q3D投與以下劑量：0.45 mg/kg、1.5 mg/kg、4.5 mg/kg、15 mg/kg。在一個額外組中，歷時14天Q3D投與4.5 mg/kg，研究持續時間為18天。在一個額外組中，歷時14天Q3D投與4.5 mg/kg，研究持續時間為21天。此等全部組概括於下表12中。表 12
對於以上GLP-2[A2G]及GLP-2肽體B264組之原始端點，以公克為單位之小腸體重顯示於圖15A中且對體重正規化之小腸體重顯示於圖15B中。在第15天時間點，圖15C展示呈體重百分比形式之小腸體重。在X軸上，劑量以mg/kg列出。
圖15D係展示在第15天腸重量相對於對照之百分比變化的圖示。
對於以上第1組、第2組、第5組、第7組及第8組，進行小腸體重相比於總體重之分析。結果展示於圖15E中。在關於GLP-2肽體B264之圖15E中，「媒劑2，給藥後2 d」對應於第14天之第1組，「給藥後2 d」對應於第14天之第5組，「給藥後4 d」對應於第18天之第7組，「給藥後8 d」對應於第20天之第8組，且「媒劑2，給藥後8 d」對應於第20天之第2組。
圖16概括相對於對照及清除，GLP-2肽體K274及GLP-2肽體B264兩者之小腸體重之相對變化。實例 14 ： GLP - 2 肽體 B264 中之絨毛長度及腺管深度之組織學研究
分析各種劑量之GLP-2肽體B264以評估藥效學平台，原始端點為小腸體重相對於總體重之量測及絨毛長度之組織學研究。形成各自具有六隻雌性CD-1小鼠之11個組。各組概括於下表13中。表 13
對於組織學，製備四微米石蠟切片以用於H&E及Ki67染色。在全載片掃描之後，使用顯像器量測絨毛長度及腺管深度，且分析Ki67。對Ki67之抗體係Adcam®所出售之兔抗體，目錄號ab 616667。以1:100之工作濃度使用抗體且使用Leica®Refine套組。Ki67染色結果顯示於圖17A中。利用Ki67陽性百分比進行之劑量-反應研究及清除研究結果顯示於圖17B中。
媒劑與經0.5 mg/kg/天GLP-2[A2G]治療之組之間的比較顯示於圖17C中。媒劑與經15 mg/kg GLP-2肽體B264治療之組之間的比較顯示於圖17D中。量測上文第1組及第2組(GLP-2[A2G])之以微米為單位之絨毛長度，結果顯示於圖17E中。量測以上第1-3組(媒劑及GLP-2[A2G])之以微米為單位之絨毛長度，結果顯示於圖17E中。量測以上第4組及第6-9組(媒劑及GLP-2肽體B264)之以微米為單位之絨毛長度，結果顯示於圖17F中。量測以上第4組、第5組及第9-11組(媒劑及GLP-2肽體B264)之以微米為單位之絨毛長度，結果顯示於圖17G中。
圖18中展示在各種劑量下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。圖19展示在歷經14天之Q3D給藥方案結束之後在清除期期間各種時間點下之4.5 mg/kg GLP-2肽體B264及4.5 mg/kg GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。清除期結束之後的第一天係第15天，第二天係第16天等。清除期之第2天對應第15天。清除期之第5天對應第18天。清除期之第8天對應第21天。D15、D18及D21對應於量測絨毛長度之第15天、第18天及第21天。實例 15 ：小鼠藥物動力學及藥力學測試資料之概述
圖20A展示歷經14天Q3D給藥方案GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274濃度之間的比較。實線係預測濃度且圓點表示各種觀測到之濃度。
圖20B展示小鼠中之GLP-2肽體B264及GLP-2肽體K274之藥物動力學資料的概述。
圖20C展示在各種劑量下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。圖20D展示在各種濃度下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。
圖20E展示在各種劑量下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的比較，原始端點為呈體重百分比形式之小腸重量。圖20F展示在各種濃度下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的比較，原始端點為呈體重百分比形式之小腸重量。實例 16 ： GLP - 2 肽體 K274 促進膳食脂肪吸收
在小鼠中進行脂肪耐受性分析以評估GLP-2肽體K274促進膳食脂肪吸收之能力。膳食脂肪經水解為游離脂肪酸及甘油酯，其經由腸道絨毛傳輸且由腸上皮細胞吸收。腸上皮細胞合成三酸甘油酯，其隨後進入血流。該等餐後三酸甘油酯在攝入富脂肪餐食約3小時之後在血流中達到峰值。
假設在短腸症候群之小鼠模型中，GLP-2肽體K274藉由提高腸道絨毛之長度將改善脂肪酸之吸收。對波峰餐後三酸甘油酯之增加之分析允許偵測該等增加之吸收。
將雌性小鼠分成各自具有30隻小鼠之兩個組。利用4.5 mg/kg K274肽體(治療組)或媒劑(對照組)歷時總計13天每3天治療兩組。在開始治療之後的第14天，將兩組中之小鼠禁食6小時，之後投與10 mL/kg橄欖油食團。將治療及對照組中之小鼠分成各自具有6隻動物之6個子組。分別在0 min、15 min、30 min、1小時、2小時或3小時之後自6個小鼠/亞組獲取100 µL血液樣品。將該血液收集至K2 EDTA試管且離心以獲得血漿。使用TRIGB分析套組在Cobas C311儀器(Roche)量測血漿三酸甘油酯濃度。
資料展示於圖21中。血流中之餐後三酸甘油酯濃度在用GLP-2肽體K274治療之小鼠中顯著較高，表明GLP-2肽體K274提高脂肪酸之吸收。
本發明之範疇不受本文所述之特定實施例限制。實際上，根據前文描述及附圖，除本文所述之修改之外，本發明之各種修改對熟習此項技術者而言將變得顯而易見。該等修改意欲屬於所附申請專利範圍之範疇內。應進一步理解，全部值經估算且提供以用於描述。
貫穿本申請案列舉專利、專利申請案、公開案、產品描述及協定，以上各者之揭示內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。
本專利申請案檔案含有至少一個彩製圖式。在申請且支付必要費用後，專利局將提供具有彩色圖式之本專利申請申請案之複本。
圖1A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 1。GLP-2[A2G]序列帶下劃線且連接子加粗。連接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之後。GLP-2肽體B264具有闡述於SEQ ID NO: 1中之胺基酸序列。
圖1B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 2，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 1之N端的信號肽序列。
圖1C展示編碼SEQ ID NO: 2之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 3。
圖1D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 3及胺基酸序列SEQ ID NO: 2兩者。
圖1E展示胺基酸序列SEQ ID NO: 4。GLP-2[A2G]序列帶下劃線且連接子加粗。連接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之後。GLP-2肽體B具有闡述於SEQ ID NO: 4中之胺基酸序列。
圖1F展示胺基酸序列SEQ ID NO: 5，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 4之N端的信號肽序列。
圖1G展示編碼SEQ ID NO: 5之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 6。
圖1H核苷酸序列SEQ ID NO: 6及胺基酸序列SEQ ID NO: 5兩者。
圖2A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 7。GLP-2[A2G]序列帶下劃線且連接子加粗。連接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之後。GLP-2肽體K274具有闡述於SEQ ID NO: 7中之胺基酸序列。
圖2B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 8，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 7之N端的信號肽序列。
圖2C展示編碼SEQ ID NO: 8之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 9。
圖2D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 9及胺基酸序列SEQ ID NO: 8兩者。
圖2E展示胺基酸序列SEQ ID NO: 10。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。連接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之後。GLP-2肽體K具有闡述於SEQ ID NO: 10中之胺基酸序列。
圖2F展示胺基酸序列SEQ ID NO: 11，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 10之N端的信號肽序列。
圖2G展示編碼SEQ ID NO: 11之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 12。
圖2H展示核苷酸序列SEQ ID NO: 12及胺基酸序列SEQ ID NO: 11兩者。
圖3A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 13，其中GLP-2[A2G]與IgG1之Fc區之間不存在連接子。GLP-2序列帶下劃線。GLP-2肽體A具有闡述於SEQ ID NO: 13中之胺基酸序列。
圖3B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 14，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 13之N端的信號肽序列。
圖3C展示編碼SEQ ID NO: 14之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 15。
圖3D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 15及胺基酸序列SEQ ID NO: 14兩者。
圖4A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 16。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。GLP-2肽體E具有闡述於SEQ ID NO: 16中之胺基酸序列。
圖4B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 17，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 16之N端的信號肽序列。
圖4C展示編碼SEQ ID NO: 17之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 18。
圖4D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 18及胺基酸序列SEQ ID NO: 17兩者。
圖5A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 19。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。GLP-2肽體J具有闡述於SEQ ID NO: 19中之胺基酸序列。
圖5B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 20，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 19之N端的信號肽序列。
圖5C展示編碼SEQ ID NO: 20之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 21。
圖5D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 21及胺基酸序列SEQ ID NO: 20兩者。
圖6A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 22。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。GLP-2肽體L具有闡述於SEQ ID NO: 22中之胺基酸序列。
圖6B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 23，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 22之N端的信號肽序列。
圖6C展示編碼SEQ ID NO: 23之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 24。
圖6D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 24及胺基酸序列SEQ ID NO: 23兩者。
圖7A展示胺基酸序列SEQ ID NO: 25。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。GLP-2肽體M具有闡述於SEQ ID NO: 25中之胺基酸序列。
圖7B展示胺基酸序列SEQ ID NO: 26，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 25之N端的信號肽序列。
圖7C展示編碼SEQ ID NO: 25之GLP-2肽體之核苷酸序列SEQ ID NO: 27。
圖7D展示核苷酸序列SEQ ID NO: 27及胺基酸序列SEQ ID NO: 25兩者。
圖7E展示胺基酸序列SEQ ID NO: 28，其係GLP-2、連接子及人類血清白蛋白之胺基酸25-609之間的融合蛋白。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。GLP-2肽體O具有闡述於SEQ ID NO: 28中之胺基酸序列。
圖7F展示胺基酸序列SEQ ID NO: 29，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 28之N端的信號肽序列。
圖7G展示胺基酸序列SEQ ID NO: 30，其係GLP-2、亦為GLP-2序列之連接子及人類血清白蛋白之胺基酸25-609之間的融合蛋白。GLP-2序列帶下劃線且連接子加粗。GLP-2肽體P具有闡述於SEQ ID NO: 30中之胺基酸序列。
圖7H展示胺基酸序列SEQ ID NO: 31，其具有融合至胺基酸序列SEQ ID NO: 30之N端的信號肽序列。
圖8A-8D展示GLP-2肽體B264、K及K274之SEC-MALS分析(8A及8C-8D)、EM分析(8B)之結果。
圖9A-9B展示GLP-2肽體K之AUC分析。
圖9C展示GLP-2肽體B264及K274之微尺度熱泳(MST)分析之結果。
圖9D展示GLP-2肽體及色胺酸殘基之模型，在奈米差示掃描螢光測定法(NanoDSF)下對色胺酸殘基之螢光進行分析。
圖9E及9F展示GLP-2肽體B及K之奈米差示掃描螢光測定法(NanoDSF)分析之結果。
圖10A展示CD1小鼠中GLP-2肽體K274之藥物動力學分析之預測及觀測結果。圖10B及10C展示GLP-2肽體K與GLP-2肽體K274之間的藥物動力學參數之比較。
圖11A-11C展示以瓜胺酸作為生物標記分析之食蟹獼猴中之替度魯肽、GLP-2肽體B及GLP-2肽體K的藥物動力學研究結果。
圖12A-12C展示利用對體重正規化之小腸及結腸重量作為端點之GLP-2肽體K274的藥物動力學平台研究之結果。
圖13A及13B展示在GLP-2肽體K274給藥結束之後小腸重量變化之持久性。圖13C展示相比於單獨的媒劑，經GLP-2肽體K274處理之腸道細胞之絨毛及腺管中的細胞生長之Ki67標記物之染色。圖13D展示劑量反應及清除實驗，其量測相對於所投與之GLP-2肽體K274之量的Ki67標記物陽性。圖13E-G展示對絨毛長度之GLP-2肽體K274效果之組織學研究結果。
圖14A-14C展示經媒劑處理及經GLP-2[A2G]處理之腸道細胞之絨毛及腺管中的細胞生長之Ki67標記物分析之結果。圖14D-H展示對絨毛長度及腺管深度之GLP-2[A2G]效果之組織學研究結果。
圖15A-15E展示在GLP-2肽體B264之給藥以後對小腸重量之效果。
圖16展示對於GLP-2肽體B264及GLP-2肽體K274兩者，小腸重量之相對變化。
圖17A展示相比於經GLP-2[A2G]處理之細胞，經GLP-2肽體B264處理之腸道細胞之絨毛及腺管中的細胞生長之Ki67標記物之染色。圖17B展示劑量反應及清除實驗，其量測相對於所投與之GLP-2肽體B264之量的Ki67標記物陽性。圖17C-17G展示GLP-2[A2G]及GLP-2肽體B264中之每一者對絨毛長度及腺管深度之效果的組織學研究結果。
圖18展示在各種劑量下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。
圖19展示在給藥方案結束之後，在清除期期間之各時間點處GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。GLP-2肽體K274所展現之持久性比GLP-2肽體B264更長。
圖20A展示歷經14天Q3D給藥方案GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274濃度之間的比較。圖20B展示小鼠中之GLP-2肽體B264及GLP-2肽體K274之藥物動力學資料的概述。圖20C展示在各種劑量下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。圖20D展示在各種濃度下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的絨毛長度之比較。圖20E展示在各種劑量下對小腸重量之GLP-2肽體B264及GLP-2肽體K274效果之間的比較。圖20F展示在各種濃度下GLP-2肽體B264與GLP-2肽體K274之間的比較，原始端點為呈體重百分比形式之小腸重量。
圖21展示在投與GLP-2肽體K274且用橄欖油食團刺激之小鼠中的三酸甘油酯耐受性測試結果。相比於未用GLP-2肽體K274處理之小鼠，用GLP-2肽體K274處理之彼等小鼠之血流中的餐後三酸甘油酯濃度顯著較高，如由此指示，GLP-2肽體K274改善橄欖油中之脂肪酸之吸收。

Claims (10)

  1. 一種類升糖素肽(GLP-2)肽體，其選自由以下組成之群， a)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1)， b)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)， c)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 7)， d)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體： GDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 10)， e)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 13)， f)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 16)， g)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 19)， h)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 22)， i)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 25)及 j)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 28)；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之GLP-2肽體，其中該GLP-2肽體包含以下胺基酸序列：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1)，或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 如請求項1之GLP-2肽體，其中該GLP-2肽體包含以下胺基酸序列：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 7)，或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至3中任一項之GLP-2肽體。
  5. 一種聚核苷酸，其包含編碼GLP-2前驅體多肽之序列，該GLP-2前驅體多肽選自由以下組成之群： a)包含以下胺基酸序列之GLP-2肽體：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 2)， b)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 5)， c)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 8)， d)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽： METPAQLLFLLLLWLPDTTGGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 11)， e)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 14)， f)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 17)， g)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 20)， h)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 23)， i)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 26)以及 j)包含以下胺基酸序列之GLP-2前驅體多肽：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL (SEQ ID NO: 29)。
  6. 一種聚核苷酸，其包含編碼GLP-2前驅體多肽之序列，該GLP-2前驅體多肽包含以下胺基酸序列： METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1)。
  7. 如請求項6之聚核苷酸，其中編碼該GLP-2肽體之該序列包含SEQ ID NO: 3之聚核苷酸序列。
  8. 一種聚核苷酸，其包含編碼GLP-2前驅體多肽之序列，該GLP-2前驅體多肽包含以下胺基酸序列：METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 8)。
  9. 如請求項8之聚核苷酸，其中編碼該GLP-2前驅體多肽之該序列包含SEQ ID NO: 9之聚核苷酸序列。
  10. 一種載體，其包含如請求項8之聚核苷酸。
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