CN111182916A - Glp-2融合多肽及用于治疗及预防胃肠病状的用途 - Google Patents

Glp-2融合多肽及用于治疗及预防胃肠病状的用途 Download PDF

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Abstract

描述GLP‑2与免疫球蛋白的Fc区的融合蛋白。所述GLP‑2及所述Fc区由包括氨基酸的连接子分隔。所述融合蛋白在体内存留及保持活性的时段长于GLP‑2自身。揭示使用所述融合蛋白治疗及预防肠外瘘、对胃肠道的辐射损伤、阻塞性黄疸及短肠综合症的方法。

Description

GLP-2融合多肽及用于治疗及预防胃肠病状的用途
相关申请案的交叉引用
本申请案要求保护2017年8月22日申请的美国临时申请案第62/548,601号、2018年1月24日申请的美国临时申请案第62/621,144号以及2018年4月18日申请的美国临时申请案第62/659,394号的优先权，所述临时申请案中的每一者的揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明揭示哺乳动物GLP-2融合多肽及蛋白质以及其作为治疗剂的用途。
背景技术
胰高血糖素原的转译后处理产生胰高血糖素样肽-2(GLP-2)，其为33氨基酸促肠生长肽激素。GLP-2用以减缓胃排空，减少胃分泌物且增加肠道血流量。GLP-2还至少通过促进腺管细胞来增殖刺激大肠及小肠的生长及绒毛长度以便增加粘膜上皮的表面积。
这些效果表明GLP-2可用于治疗各种胃肠道病状。GLP-2在小肠中所展现的特殊及有利效果已引起人们对GLP-2用于治疗肠道疾病或损伤的广泛关注(辛克莱(Sinclair)及杜拉克(Drucker)，生理学(Physiology)2005:357-65)。此外，已在大量肠损伤的临床前模型中证实GLP-2预防或减少粘膜上皮损伤，包含化学疗法诱发的粘膜炎、缺血-再灌注损伤、硫酸葡聚糖诱发的结肠炎及发炎性肠病的基因模型(辛克莱及杜拉克，生理学2005:357-65)。
然而，向人类患者投与GLP-2自身未展示出前景。GLP-2半衰期短，此限制其用作治疗剂，因为GLP-2由二肽基肽酶IV(DPP-IV)快速活体内裂解，获得基本失活的肽。GLP-2治疗剂替度鲁肽(Teduglutide)由于用甘氨酸取代丙氨酸-2而具有显著延长的半衰期。然而，因为替度鲁肽在健康患者中的半衰期为约2小时且在SBS患者中为1.3小时，所以需要每日给药。
替度鲁肽已在治疗短肠综合症SBS)中展示出治疗前景，所述短肠综合症通常由于病状而手术切除一些或大多数小肠而引起，所述病状诸如克罗恩氏病(Crohn's disease)、肠系膜梗塞、肠扭结、创伤、先天异常及因粘附或辐射所致的多发性狭窄。手术切除还可包含切除所有或一部分结肠。SBS患者患有各种营养物(例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水)的吸收障碍，其可导致营养不良、脱水及体重减轻。一些患者可经由暴食维持其蛋白质及能量平衡，然而甚至更加罕见的是，患者可维持流体及电解质需求以变得独立于非经肠流体。
GLP-2可在治疗患有肠外瘘(ECF)的患者中展示前景，所述肠外瘘是胃分泌物绕过小肠经由瘘管到达表皮的病状(Arebi,N.等人，结肠直肠手术临床期刊(Clin.ColonRectal Surg.),2004年5月,17(2):89-98)。ECF可自发性从克罗恩氏病及腹内癌症出现，或作为克罗恩氏病或放射线疗法的并发症。ECF至少由于感染、流体损耗及营养不良而具有高发病率及死亡率。
抗DDP-IV GLP-2类似物在减少辐射诱发的细胞凋亡中展示前景(Gu,J.等人，控释期刊(J.Controlled Release),2017)。细胞凋亡在辐射诱发的小肠粘膜损伤中出现。在小鼠中，GLP-2还促进辐射后的CCD-18Co细胞存活，保护免于遭受辐射诱发的GI毒性，下调辐射诱发的发炎反应，且减少辐射后对肠的结构损伤。
GLP-2还可在治疗患有阻塞性黄疸的患者中展示前景，所述阻塞性黄疸是肠屏障功能受损的病状(Chen,J.等人，世界胃肠病学杂志(World J.Gastroenterol.),2015年1月,21(2):484-490)。在大鼠中，GLP-2降低血清胆红素的含量且防止对肠道粘膜的结构损伤。
需要研发GLP-2的改善形式以治疗胃肠道病状，所述病状包含SBS、ECF及由辐射损伤或阻塞性黄疸引起的病变。改善形式在体内保持较长时段的活性，使得所需给药频率较少。
发明内容
本文中描述GLP-2肽体。肽体一般是GLP-2与Fc区或白蛋白之间的融合蛋白。药物动力学数据表明，GLP-2肽体可在体内存留的时间长于GLP-2或甚至替度鲁肽或Gattex。
在一个方面中，提供选自以下的类胰高血糖素肽(GLP-2)肽体：
a)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:1)，
b)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:4)，
c)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:7)，
d)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:10)，
e)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:13)，
f)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:16)，
g)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:19)，
h)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:22)或其药学上可接受的盐，
i)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:25)
j)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:28)，及
k)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:30)；
或其药学上可接受的盐。
在上文方面中，以上序列(SEQ ID NO:1、7、13、16、19、22及25)中的任一者均可进一步包括C端处的赖氨酸(K)。
在一些实施例中，GLP-2肽体由GLP-2前驱体多肽加工制得，所述GLP-2前驱体多肽包括与GLP-2直接连接的信号肽，以及在GLP-2与IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中的任一者的Fc区之间的连接子。多肽上的信号肽可促进GLP-2肽体从用于产生GLP-2肽体的哺乳动物宿主细胞分泌，分泌之后信号肽自GLP-2肽体裂解。可使用任何数目的信号肽。信号肽可具有以下序列：METPAQLLFLLLWLPDTTG。
在一些实施例中，GLP-2前驱体多肽包括选自以下的信号肽：
a)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:2)，
b)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:5)，
c)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:8)，
d)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:11)，
e)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:14)，
f)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:17)，
g)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:20)，
h)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:23)或其药学上可接受的盐，
i)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ IDNO:26)
j)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:29)及
k)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:30)；
或其药学上可接受的盐。
以上GLP-2前驱体多肽序列(SEQ ID NOS:2、8、14、17、20、23及26)中的任一者可进一步包括C端处的赖氨酸(K)。
Fc区可为具有LALA突变的IgG1。包括信号肽的GLP-2前驱体多肽可具有下式：
信号肽—GLP-2[A2G]—连接子—IgG1(LALA)
在一些实施例中，本文中所述的医药组合物进一步包括载剂或药学上可接受的赋形剂。在一些实施例中，医药组合物经调配为适用于通过注射或输液投与的液体。在一些实施例中，医药组合物经调配以用于GLP-2肽体的持续释放、缓释、延迟释放或缓慢释放，所述GLP-2肽体例如包括SEQ ID NO:1的GLP-2肽体或包括氨基酸序列SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。在一些实施例中，以10至200mg/mL的浓度投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ IDNO:1或7的GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:28或SEQ IDNO:30，且以10至1000mg/mL或50至500mg/mL的浓度投与。
在另一方面中，提供包括编码本文中所述的GLP-2肽体的序列的聚核苷酸。序列可为阐述于SEQ ID NO:3、9、15、18、21、24或27中者。在一些实施例中，聚核苷酸包括编码GLP-2肽体的序列，所述GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1。在一些实施例中，聚核苷酸包括序列SEQ ID NO:3。在一些实施例中，聚核苷酸包括编码GLP-2肽体的序列，所述GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7。在一些实施例中，聚核苷酸包括序列SEQ ID NO:9。在一些实施例中，提供载体，其包括本文所揭示的聚核苷酸中的任一者。在载体中，聚核苷酸可以可操作地连接于启动子。
在另一方面中，提供包括聚核苷酸的宿主细胞。在一些实施例中，宿主细胞是中国仓鼠卵巢细胞。在一些实施例中，宿主细胞以足以达到分批补料细胞培养规模的水平表达GLP-2肽体。
在另一方面中，提供一种用于治疗患有肠外瘘(ECF)的患者的方法，其包括使用可有效促进ECF的闭合、愈合及/或修复的给药方案利用GLP-2肽体(例如包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体)治疗患者。可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括SEQID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ IDNO:1。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7。在一些实施例中，所述方法可有效促进所述患者的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效减少所述患者中胃分泌物的体积。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。
在一些实施例中，皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至0.5mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。可替代地，可每三周或每月一次投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。
在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在另一方面中，提供一种用于治疗患有阻塞性黄疸的患者的方法，其包括使用可有效治疗阻塞性黄疸的给药方案，利用GLP-2肽体，例如包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体治疗患者。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7。在一些实施例中，血清胆红素的含量与所述治疗之前血清胆红素的含量相比有所降低。在一些实施例中，血清胆红素的含量与所述治疗之前血清胆红素的含量相比有所降低。在一些实施例中，所述方法可有效促进所述患者的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效减少所述患者体内胃分泌物的体积。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能且降低细菌易位穿过所述患者的小肠的速率。
在一些实施例中，皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗、改善或保护避免对胃肠道的辐射损伤，及/或其效果的方法，其包括投与GLP-2肽体，例如包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。给药方案可有效治疗或预防对患者的胃肠道的辐射损伤。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7。在一些实施例中，辐射损伤位于小肠。在一些实施例中，所述方法可有效减少胃肠道细胞的细胞凋亡。在一些实施例中，可在以辐射或放射线疗法治疗患者之前、与其同时或在其之后投与GLP-2肽体。
在一些实施例中，所述方法可有效减少胃肠道细胞的细胞凋亡。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能。
在一些实施例中，皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg、0.2至1.4mg/kg、或0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗、改善或预防对胃肠道的辐射诱发的肠炎，及/或其效果的方法，其包括投与GLP-2肽体，例如包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7。在一些实施例中，所述方法可有效减少胃肠道细胞的细胞凋亡。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能。
在一些实施例中，皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间、或每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间、或每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在另一方面中，提供一种用于治疗呈现结肠与残余小肠连续性的患有短肠综合症的患者的方法，其包括使用可有效治疗短肠综合症的给药方案，利用GLP-2肽体，例如包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体治疗患者。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7。在一些实施例中，残余小肠的长度为至少25cm。在一些实施例中，残余小肠的长度为至少50cm。在一些实施例中，残余小肠的长度为至少75cm。在一些实施例中，以药剂形式投与GLP-2肽体以促进呈现至少约25％结肠与残余小肠连续性的短肠综合症患者中的肠道吸收。
在一些实施例中，所述方法可有效促进所述患者的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、氨基酸、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能。在一些实施例中，所述方法可有效降低粪便湿重，增加尿液湿重，增加穿过小肠的能量吸收，及/或增加穿过小肠的水吸收。能量吸收可包含增加多肽、氨基酸、碳水化合物及脂肪酸中的一或多者的吸收。在一些实施例中，患者依赖于不经肠营养。
在一些实施例中，皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间、或每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，根据每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且根据每2至14天一次在0.02至3.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:7且根据每7至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间、或每周一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与GLP-2肽体。在一些实施例中，GLP-2肽体包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或7且GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
在本文中所述的方面及实施例中的任一者中，可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。可根据每2至14天一次、每5-8天一次、或每周一次(QW)在0.02至3.0mg/kg、0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg、0.02至0.05mg/kg、0.03至0.04mg/kg、0.05至0.10mg/kg、0.10至0.15mg/kg、0.2至0.3mg/kg、0.3至0.4mg/kg、0.4至0.5mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.7至1.0mg/kg、0.9至1.2mg/kg、1.0至1.5mg/kg、1.2至1.8mg/kg、1.5至2.0mg/kg、1.7至2.5mg/kg、或2.0至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与包括SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7的GLP-2肽体。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每周(QW)或每两周在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
可替代地，可根据每三周或每月一次在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。可根据每5-8天、或每周(QW)在0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg之间的给药方案皮下投与GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)，诸如用于维护用途。可以10至200mg/mL、10至180mg/mL、20至160mg/mL、25至150mg/mL、30至125mg/mL、50至100mg/mL、60至90mg/mL、约75mg/mL、75mg/mL、10至20mg/mL、15至25mg/mL、12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL、约15mg/mL或15mg/mL的浓度投与包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。
附图说明
图1A展示氨基酸序列SEQ ID NO:1。GLP-2[A2G]序列带下划线且连接子加粗。连接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之后。GLP-2肽体B264具有阐述于SEQ ID NO:1中的氨基酸序列。
图1B展示氨基酸序列SEQ ID NO:2，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:1的N端的信号肽序列。
图1C展示编码SEQ ID NO:2的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:3。
图1D展示核苷酸序列SEQ ID NO:3及氨基酸序列SEQ ID NO:2两者。
图1E展示氨基酸序列SEQ ID NO:4。GLP-2[A2G]序列带下划线且连接子加粗。连接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之后。GLP-2肽体B具有阐述于SEQ ID NO:4中的氨基酸序列。
图1F展示氨基酸序列SEQ ID NO:5，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:4的N端的信号肽序列。
图1G展示编码SEQ ID NO:5的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:6。
图1H展示核苷酸序列SEQ ID NO:6及氨基酸序列SEQ ID NO:5两者。
图2A展示氨基酸序列SEQ ID NO:7。GLP-2[A2G]序列带下划线且连接子加粗。连接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之后。GLP-2肽体K274具有阐述于SEQ ID NO:7中的氨基酸序列。
图2B展示氨基酸序列SEQ ID NO:8，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:7的N端的信号肽序列。
图2C展示编码SEQ ID NO:8的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:9。
图2D展示核苷酸序列SEQ ID NO:9及氨基酸序列SEQ ID NO:8两者。
图2E展示氨基酸序列SEQ ID NO:10。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。连接子序列及IgG1 Fc序列在GLP-2序列之后。GLP-2肽体K具有阐述于SEQ ID NO:10中的氨基酸序列。
图2F展示氨基酸序列SEQ ID NO:11，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:10的N端的信号肽序列。
图2G展示编码SEQ ID NO:11的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:12。
图2H展示核苷酸序列SEQ ID NO:12及氨基酸序列SEQ ID NO:11两者。
图3A展示氨基酸序列SEQ ID NO:13，其中GLP-2[A2G]与IgG1的Fc区之间不存在连接子。GLP-2序列带下划线。GLP-2肽体A具有阐述于SEQ ID NO:13中的氨基酸序列。
图3B展示氨基酸序列SEQ ID NO:14，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:13的N端的信号肽序列。
图3C展示编码SEQ ID NO:14的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:15。
图3D展示核苷酸序列SEQ ID NO:15及氨基酸序列SEQ ID NO:14两者。
图4A展示氨基酸序列SEQ ID NO:16。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。GLP-2肽体E具有阐述于SEQ ID NO:16中的氨基酸序列。
图4B展示氨基酸序列SEQ ID NO:17，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:16的N端的信号肽序列。
图4C展示编码SEQ ID NO:17的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:18。
图4D展示核苷酸序列SEQ ID NO:18及氨基酸序列SEQ ID NO:17两者。
图5A展示氨基酸序列SEQ ID NO:19。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。GLP-2肽体J具有阐述于SEQ ID NO:19中的氨基酸序列。
图5B展示氨基酸序列SEQ ID NO:20，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:19的N端的信号肽序列。
图5C展示编码SEQ ID NO:20的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:21。
图5D展示核苷酸序列SEQ ID NO:21及氨基酸序列SEQ ID NO:20两者。
图6A展示氨基酸序列SEQ ID NO:22。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。GLP-2肽体L具有阐述于SEQ ID NO:22中的氨基酸序列。
图6B展示氨基酸序列SEQ ID NO:23，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:22的N端的信号肽序列。
图6C展示编码SEQ ID NO:23的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:24。
图6D展示核苷酸序列SEQ ID NO:24及氨基酸序列SEQ ID NO:23两者。
图7A展示氨基酸序列SEQ ID NO:25。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。GLP-2肽体M具有阐述于SEQ ID NO:25中的氨基酸序列。
图7B展示氨基酸序列SEQ ID NO:26，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:25的N端的信号肽序列。
图7C展示编码SEQ ID NO:25的GLP-2肽体的核苷酸序列SEQ ID NO:27。
图7D展示核苷酸序列SEQ ID NO:27及氨基酸序列SEQ ID NO:25两者。
图7E展示氨基酸序列SEQ ID NO:28，其为GLP-2、连接子及人类血清白蛋白的氨基酸25-609之间的融合蛋白。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。GLP-2肽体O具有阐述于SEQID NO:28中的氨基酸序列。
图7F展示氨基酸序列SEQ ID NO:29，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:28的N端的信号肽序列。
图7G展示氨基酸序列SEQ ID NO:30，其为GLP-2、还为GLP-2序列的连接子及人类血清白蛋白的氨基酸25-609之间的融合蛋白。GLP-2序列带下划线且连接子加粗。GLP-2肽体P具有阐述于SEQ ID NO:30中的氨基酸序列。
图7H展示氨基酸序列SEQ ID NO:31，其具有融合至氨基酸序列SEQ ID NO:30的N端的信号肽序列。
图8A至8D展示GLP-2肽体B264、K及K274的SEC-MALS分析(8A及8C-8D)、EM分析(8B)的结果。
图9A至9B展示GLP-2肽体K的AUC分析。
图9C展示GLP-2肽体B264及K274的微尺度热泳(MST)分析的结果。
图9D展示GLP-2肽体及色氨酸残基的模型，在纳米差示扫描荧光测定法(NanoDSF)下对色氨酸残基的荧光进行分析。
图9E及9F展示GLP-2肽体B及K的纳米差示扫描荧光测定法(NanoDSF)分析的结果。
图10A展示CD1小鼠中GLP-2肽体K274的药物动力学分析的预测及观测结果。图10B及10C展示GLP-2肽体K与GLP-2肽体K274之间的药物动力学参数的比较。
图11A至11C展示以瓜氨酸作为生物标记分析的食蟹猕猴中的替度鲁肽、GLP-2肽体B及GLP-2肽体K的药物动力学研究结果。
图12A至12C展示利用对体重归一化的小肠及结肠重量作为端点的GLP-2肽体K274的药物动力学平台研究的结果。
图13A及13B展示在GLP-2肽体K274给药结束之后小肠重量变化的持久性。图13C展示相比于单独的媒剂，经GLP-2肽体K274处理的肠道细胞的绒毛及腺管中的细胞生长的Ki67标记物的染色。图13D展示剂量反应及清除实验，其测量相对于所投与的GLP-2肽体K274的量的Ki67标记物阳性。图13E-G展示对绒毛长度的GLP-2肽体K274效果的组织学研究结果。
图14A至14C展示经媒剂处理及经GLP-2[A2G]处理的肠道细胞的绒毛及腺管中的细胞生长的Ki67标记物分析的结果。图14D-H展示对绒毛长度及腺管深度的GLP-2[A2G]效果的组织学研究结果。
图15A至15E展示在GLP-2肽体B264的给药以后对小肠重量的效果。
图16展示对于GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274两者，小肠重量的相对变化。
图17A展示相比于经GLP-2[A2G]处理的细胞，经GLP-2肽体B264处理的肠道细胞的绒毛及腺管中的细胞生长的Ki67标记物的染色。图17B展示剂量反应及清除实验，其测量相对于所投与的GLP-2肽体B264的量的Ki67标记物阳性。图17C至17G展示GLP-2[A2G]及GLP-2肽体B264中的每一者对绒毛长度及腺管深度的效果的组织学研究结果。
图18展示在各种剂量下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。
图19展示在给药方案结束之后，在清除期期间的各时间点处GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。GLP-2肽体K274所展现的持久性比GLP-2肽体B264更长。
图20A展示历经14天Q3D给药方案GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274浓度之间的比较。图20B展示小鼠中的GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274的药物动力学数据的概述。图20C展示在各种剂量下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。图20D展示在各种浓度下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。图20E展示在各种剂量下对小肠重量的GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274效果之间的比较。
图21展示在投与GLP-2肽体K274且用橄榄油食团刺激的小鼠中的三酸甘油酯耐受性测试结果。相比于未用GLP-2肽体K274处理的小鼠，用GLP-2肽体K274处理的那些小鼠的血流中的餐后三酸甘油酯浓度显著较高，如由此指示，GLP-2肽体K274改善橄榄油中的脂肪酸的吸收。
定义
除非另外规定，否则本文所使用的技术及科学术语具有与本发明所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。以下术语及其它术语的额外定义贯穿本说明书阐述。
术语“一(a/an)”及“所述”不表示数量的限制，而是表示存在“至少一个”所提项。
如本申请案中所使用，术语“约”及“大致”等效使用。在存在或不存在约/大致的情况下用于本申请案的任何数值旨在涵盖相关领域的一般技术人员所了解的任何正常波动。如本文所用，如应用于所关注的一或多个值的术语“大约”或“约”指代类似于所陈述参考值的值。在某些实施例中，除非另有说明或另外自上下文显而易见，否则术语“大约”或“约”指代在任一方向(大于或小于)上处于所述参考值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小百分比之内的一系列值(但此类数字将超出可能值的100％的情况除外)。
如本文所用，术语“载剂”及“稀释剂”指代适用于医药调配物制备的药学上可接受(例如对于向人类投与安全且无毒)的载剂或稀释物质。示范性稀释剂包含无菌水、抑菌注射用水(BWFI)、pH值缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲生理盐水)、无菌生理盐水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。
如本文所用，术语“融合蛋白”或“嵌合蛋白”指代经由连接两种或更多种最初分离的蛋白质或其部分产生的蛋白质。在一些实施例中，连接子或间隔子将存在于各蛋白质之间。
如本文所用，术语“半衰期”是如在时段起点所测量，某一数量(诸如蛋白质浓度或活性)降至其值的一半所需的时间。
“GLP-2肽体”、“GLP-2肽体部分”或“GLP-2肽体片段”及/或“GLP-2肽体变异体”及类似者可具有、模仿或模拟至少一种GLP-2肽的至少一种生物活性，诸如但不限于活体外、原位及/或优选地活体内配位体结合。举例来说，适合的GLP-2肽体、特定部分或变异体还可调节、增加、修饰、活化至少一种GLP-2受体信号传导或其它可测量或可检测活性。GLP-2肽体可具有与蛋白质配位体(例如GLP-2受体)的适合的亲和力结合且任选地具有低毒性。GLP-2肽体可用于持续延长的时段治疗患者，具有良好至极佳的症状缓解及低毒性。
如本文所用，术语“提高”、“增加”或“减少”或语法同等物指示相对于基线测量的值，诸如同一个体中在起始本文所述的治疗前的测量或对照受试者(或多个对照受试者)中在不存在本文所述的治疗下的测量。“对照受试者”是罹患与所治疗受试者相同的疾病形式，年龄与所治疗受试者相同的受试者。
如本文所用，术语“活体外”指代事件发生在人工环境中，例如试管或反应容器中、细胞培养物中等，而非多细胞生物体内。
如本文所用，术语“活体内”指代事件发生在多细胞生物体内，诸如人类及非人类动物内。在基于细胞的系统的情况下，所述术语可用于指在活细胞(相较于例如活体外系统)内发生的事件。
如本文所用，术语“连接子”指代在融合蛋白中除出现在天然蛋白质中的特定位置处的氨基酸序列以外的氨基酸序列且一般设计成可挠性的或经设计以在两个蛋白质部分之间插入结构，诸如α-螺旋体。连接子还称为间隔子。连接子或间隔子就其自身来说通常不具有生物功能。
如本文所用，片语“药学上可接受”指代分子实体及组合物一般视为生理学上可耐受的。
如本文所用的术语“多肽”指代经由肽键连接在一起的氨基酸的连续链。所述术语用以指代任何长度的氨基酸链，但所属领域的一般技术人员应了解，所述术语不限于超长链且可指包括经由肽键连接在一起的两个氨基酸的最小链。如所属领域的技术人员已知，多肽可经处理及/或修饰。如本文所用，术语“多肽”及“肽”可互换地使用。术语“多肽”还可指代蛋白质。
如本文所用，术语“预防(prevent/prevention)”当与疾病、病症及/或病状的出现结合使用时指代降低罹患疾病、病症及/或病状的风险。参见“风险”的定义。
如本文所用，术语“受试者”指代人类或任何非人类动物(例如小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。人类包含产前及产后形式。在许多实施例中，受试者为人类。受试者可以是患者，其为指呈递给医疗提供者以诊断或治疗疾病的人类。术语“受试者”在本文中可与“个体”或“患者”可互换地使用。受试者可罹患或易患疾病或病症但可能会或可能不会显示所述疾病或病症的症状。
如本文所用，术语“基本上”指代展现所关注的特征或特性的全部或接近全部界限或程度的定性病状。生物技术中的一般技术人员所了解，生物及化学现象很少(若曾有)进行完全及/或继续进行完整或很少实现或避免绝对结果。因而本文中使用术语“基本上”以获得许多生物及化学现象中所固有的完整性的潜在缺乏。
如本文所用，治疗剂的术语“治疗有效量”意味着当向患有或易患疾病、病症及/或病状的受试者投与时足以治疗、诊断、预防所述疾病、病症及/或病状的症状及/或延迟所述疾病、病症及/或病状的症状发作的量。所属领域的一般技术人员应了解，通常经由包括至少一个单位剂量的给药方案投与治疗有效量。
如本文所用，术语“治疗(treat/treatment/treating)”指代任何用于部分或完全缓解、改善、减轻、抑制、预防特定疾病、病症及/或病状的一或多个症状或特征、延迟其发作、降低其严重程度及/或降低其发病率的方法。向未展示疾病的征象或仅展示疾病的早期征象的受试者投与治疗，以降低罹患与所述疾病相关的病变的风险。
具体实施方式
在以下部分中详细描述本发明的各种方面。所述部分的用途不旨在限制本发明。各部分可适用于本发明的任何方面。
本文中所述的各种GLP-2肽体包括在GLP-2序列与Fc、或Fc变异序列之间的连接子。可替代地，可使用白蛋白序列代替Fc或Fc变异序列。连接子通过允许肽体具有替代取向及结合特性来提供结构挠性。连接子优选由肽键连接在一起的氨基酸构成。这些氨基酸中的一些可经糖基化，如所属领域的技术人员所熟知。氨基酸可选自甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷胺酰胺及赖氨酸。甚至更优选地，连接子由大部分无空间位阻的氨基酸(诸如甘氨酸、丝氨酸及丙氨酸)构成。
GLP-2序列可与Fc域，或白蛋白域直接地或间接地连接。在一个实施例中，连接子具有序列GGGGG(例如在包括序列SEQ ID NO:1的GLP-2肽体中)。
在另一实施例中，连接子具有序列GGGGSGGGGSGGGGS(例如在包括序列SEQ ID NO:7的GLP-2肽体中)。
在另一实施例中，连接子具有序列GGGGGGSGGGGSGGGGSA(例如在包括序列SEQ IDNO:16的GLP-2肽体中)。
在另一实施例中，连接子具有序列GAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAP(例如在包括序列SEQ ID NO:19的GLP-2肽体中)。
在另一实施例中，连接子具有序列GGGGGGG(例如在包括序列SEQ ID NO:22的GLP-2肽体中)。
在另一实施例中，连接子具有序列GGGGSGGGGS(例如在包括序列SEQ ID NO:25的GLP-2肽体中)。
适合的连接子或间隔子还包含具有与以上示范性连接子至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同源或一致的氨基酸序列的那些。适合于与一些实施例一起使用的额外连接子可发现于2012年3月2日申请的US2012/0232021中，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
在各种实施例中，GLP-2[A2G]序列用于GLP-2。在GLP-2[A2G]序列中，在位置2处存在甘氨酸而非丙氨酸。
在一个实施例中，GLP-2肽体具有下式：
GLP-2[A2G]—连接子—白蛋白(25-609)
连接子具有序列GGGGGGSGGGGSGGGGSA(例如在包括序列SEQ ID NO:28的GLP-2肽体中)。
在另一实施例中，GLP-2肽体具有下式：
(GLP-2[A2G])2—白蛋白(25-609)
在一个方面中，提供选自以下的类胰高血糖素肽(GLP-2)肽体：
a)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:1)，
b)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:7)，
c)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:13)，
d)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:16)，
e)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:19)，
f)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:22)，
g)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:25)，
h)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:28)及
k)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:30)；
在一些实施例中，GLP-2肽体包括以下氨基酸序列：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:1)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，GLP-2肽体包括以下氨基酸序列：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:7)，或其药学上可接受的盐。
预期Fc域与FcRn受体之间改善的结合导致血清半衰期延长。因此，在一些实施例中，适合的Fc域包括一或多个导致与FcRn的结合改善的氨基酸突变。实现与FcRn的结合改善的Fc域内的各种突变为所属领域中已知且可适用于实践本发明。在一些实施例中，适合的Fc域包括位于对应于人类IgG1的Thr 250、Met 252、Ser 254、Thr 256、Thr 307、Glu380、Met 428、His 433及/或Asn 434的一或多个位置处的一或多个突变。
本发明的GLP-2肽体相比于已知蛋白质可提供至少一个适合特性，诸如但不限于以下中的至少一者：增加的半衰期、提高的活性、更高的特异活性、提高的亲合力、增加或减小的去除率、选择或更加适合的活性亚群、较小的免疫原性、至少一个所需治疗效果的提高的质量或持续时间、较少的副作用及类似者。
通常，适合的GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体的活体内半衰期或大于约2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、或48小时。在一些实施例中，重组GLP-2肽体的活体内半衰期在2与48小时之间、在2与44小时之间、在2与40小时之间、在3与36小时之间、在3与32小时之间、在3与28小时之间、在4与24小时之间、在4与20小时之间、在6与18小时之间、在6与15小时之间、及在6与12小时之间。
GLP-2肽体或其特定部分或变异体可通过至少一种细胞系、混合细胞系、永生化细胞或永生化及/或培养细胞的克隆群制得。可使用适合方法制备产生蛋白质的永生化细胞。优选地，至少一种GLP-2肽体或特定部分或变异体通过提供核酸或载体来生成，所述核酸或载体包括DNA衍生的经功能重排的至少一种人类免疫球蛋白基因座或具有与经功能重排的至少一种人类免疫球蛋白基因座基本上相似的序列，或其可经历功能重排，且进一步包括如本文所述的肽体结构。
GLP-2肽体可以广泛范围的亲和力(KD)结合人类蛋白质配位体。在一优选实施例中，本发明的至少一种人类GLP-2肽体可任选地以高亲和力结合至少一种蛋白质配位体。举例来说，本发明的至少一种GLP-2肽体可以等于或小于约10-7M的KD、或更优选地以等于或小于约0.1至9.9(或其中的任何范围或值)×10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12或10-13M或其中的任何范围或值的KD结合至少一种蛋白质配位体。
GLP-2肽体对至少一种蛋白质配位体的亲和力或亲合力可使用任何适合的方法(例如如用于测定抗体-抗原结合亲和力或亲合力)以实验方式测定。(参见例如库比贾尼斯(Kuby,Janis)，免疫学(Immunology)，W.H.弗里曼公司(W.H.Freeman and Company)：纽约(1992))。若在不同条件(例如盐浓度及pH值)下测量，则特定的GLP-2肽体-配位体相互作用的所测量亲和力可有所变化。因此，亲和力及其它配位体结合参数(例如KD、Ka、Kd)优选用GLP-2肽体及配位体的标准化溶液及标准化缓冲液(例如本文中所述或所属领域中已知的缓冲液)进行测量。
在C端处可能存在或可能不存在赖氨酸(K)。包括多肽序列SEQ ID NO:1、7、13、16、19、22及25的GLP-2肽体缺乏C端赖氨酸。确切地说，氨基酸序列SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:7缺乏C端赖氨酸。同时，在本文中所述的任一实施例或方面中，可将赖氨酸添加至C端。举例来说，氨基酸序列SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:10在C端处具有赖氨酸。
在本文中所述的任何实施例或方面中，GLP-2肽体由GLP-2前驱体多肽加工制得，所述GLP-2前驱体多肽包括直接与GLP-2连接的信号肽以及在GLP-2与IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中的任一者的Fc区之间的连接子。Fc区可为具有LALA突变的IgG1。GLP-2前驱体多肽可具有下式：
信号肽—GLP-2[A2G]—连接子—IgG1(LALA)
LALA指代抗体中的L234A及L235A(EU编号)突变。LALA突变存在于本文所揭示的以下多肽序列中，例如SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22及25。LALA突变可极大地减少与Fcγ-R的结合且继而防止GLP-2肽体造成非所需抗体效应功能。参见Leabman,M.K.等人,“改变的FcγR结合对食歇猕猴中的抗体药物动力学的影响(Effects of altered Fc gammaRbinding on antibody pharmacokinetics in cynomolgus monkeys)”mAbs 5(6):2013。
部分地或优选基本上提供至少一种GLP-2生物活性的GLP-2肽体或其特定部分或变体可结合GLP-2配位体且借此提供至少一种活性，所述活性经由GLP-2与至少一种配位体(诸如GLP-2受体)的结合，或经由其它蛋白质依赖性或介导机制以其它方式介导。如本文所用，术语“GLP-2肽体活性”指代视分析而定，GLP-2肽体可调节或产生相比于野生型GLP-2肽或GLP-2[A2G]肽约20-10,000％的至少一种GLP-2依赖性活性，优选相比于野生型GLP-2肽或GLP-2[A2G]肽至少约60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000％或更多的至少一种GLP-2依赖性活性。
GLP-2肽体或特定部分或变异体提供至少一种蛋白质依赖性活性的能力优选通过如本文所述及/或如所属领域中已知的至少一种适合的蛋白质生物分析评估。本发明的人类GLP-2肽体或特定部分或变异体可类似于任何类别(IgG、IgA、IgM等)或同型且可包括κ或λ轻链的至少一部分。在一个实施例中，人类GLP-2肽体或特定部分或变异体包括子类，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的至少一者的IgG重链CH2及CH3。
本发明的至少一种GLP-2肽体或特定部分或变异体结合至少一种配位体、次单元、片段、部分或其任何组合。本发明的至少一种GLP-2肽体、特定部分或变异体的至少一种GLP-2肽、变异体或衍生物可任选地结合配位体的至少一种特定抗原决定基。结合抗原决定基可包括至少1至3个氨基酸的至少一种氨基酸序列与蛋白质配位体(诸如GLP-2受体或其部分)的序列的连续氨基酸的整个特定部分的任何组合。
本发明还涉及肽体、配位体结合片段及免疫球蛋白链，所述免疫球蛋白链包括与本文中所述的氨基酸序列基本上相同的序列中的氨基酸。优选地，所述肽体或其配位体结合片段可以高亲和力(例如小于或等于约10-7M的KD)结合人类GLP-2配位体，诸如受体。与本文中所述的序列基本上相同的氨基酸序列包含包括保守氨基酸取代，以及氨基酸缺失及/或插入的序列。保守性氨基酸取代指代第一氨基酸由第二氨基酸置换，所述第二氨基酸具有与第一氨基酸的化学及/或物理特性类似的化学及/或物理特性(例如电荷、结构、极性、疏水性/亲水性)。保守性取代包含一种氨基酸由以下群组内的另一种氨基酸置换：赖氨酸(K)、精氨酸(R)及组氨酸(H)；天冬氨酸(D)及谷氨酸(E)；天冬酰胺(N)、谷酰氨酸(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、酪氨酸(Y)、K、R、H、D及E；丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、白氨酸(L)、异白氨酸(I)、脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)及甘氨酸(G)；F、W及Y；C、S及T。
如熟练人员将了解，本发明包含本发明的至少一种生物学活性GLP-2肽体或特定部分或变异体。在一些实施例中，生物学活性GLP-2肽体或特定部分或变异体的特异活性为天然(非合成)、内源性或相关及已知的嵌入或稠合蛋白或特定部分或变异体的特异活性的至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％或15％。
核酸
在另一方面中，提供包括编码本文中所述的GLP-2肽体的序列的聚核苷酸。所述序列可具有与SEQ ID NO:3、9、15、18、21、24或27中的任一者70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性。在一些实施例中，聚核苷酸可包括其它非编码序列。聚核苷酸可进一步包括特定片段、变异体或其共同序列，或包括这些序列中的至少一者的寄存载体。核酸分子可呈通过克隆或以合成方法制备而获得的RNA(诸如mRNA、hnRNA、tRNA或任何其它形式)形式或DNA(包含但不限于cDNA及基因组DNA)形式。DNA可为三股、双股或单股或其任何组合。DNA或RNA的至少一个股的任何部分可为编码股，还称为有义股，或其可为非编码股，还称为反义股。
在一些实施例中，编码转基因的核酸可经修饰以提供编码的GLP-2肽体的增加表达，其还称为密码子优化。举例来说，编码转基因的核酸可通过改变编码序列的开放阅读框架来修饰。如本文所用，术语“开放阅读框架”与“ORF”同义且意味着可能能够编码蛋白质或蛋白质的一部分的任何核苷酸序列。开放阅读框架通常以起始密码子(在标准编码中表示为，例如RNA分子的AUG及DNA分子中的ATG)开始且以密码子三联体读段直到框架以终止密码子(在标准编码中表示为，例如RNA分子的UAA、UGA或UAG及DNA分子中的TAA、TGA或TAG)结束。如本文所用，术语“密码子”意味着在蛋白质合成期间指定特定氨基酸的核酸分子中的三个核苷酸的序列；还称为三联体或密码子三联体。举例来说，在标准遗传密码中的64种可能的密码子中，两种密码子GAA及GAG编码氨基酸谷胺酰胺而密码子AAA及AAG指定氨基酸赖氨酸。在标准遗传密码中，三种密码子是终止密码子，其不指定氨基酸。如本文所用，术语“同义密码子”意味着编码单一氨基酸的密码子中的任一者及全部。除了甲硫氨酸及色氨酸，氨基酸均由两种至六种同义密码子编码。举例来说，在标准遗传密码中，编码氨基酸丙氨酸的四种同义密码子是GCA、GCC、GCG及GCU，指定谷胺酰胺的两种同义密码子是GAA及GAG且编码赖氨酸的两种同义密码子是AAA及AAG。
可使用标准密码子优化方法修饰编码GLP-2肽体的开放阅读框架的核酸。针对密码子优化的各种商业演算法是可获得的且可用以实践本发明。通常，密码子优化不改变编码的氨基酸序列。
核苷酸变化可改变开放阅读框架内的同义密码子以便符合在经选择以表达GLP-2肽体的特定异源细胞中所发现的内源性密码子使用。可替代地或另外，核苷酸变化可改变开放阅读框架内的G+C含量以更优选地符合在存在于异源宿主细胞中的内源性核酸序列中所发现的开放阅读框架的平均G+C含量。核苷酸变化还可改变在GLP-2肽体序列内发现的聚单核苷酸区域或内部调节或结构位点。因此，设想多种经修饰或经优化核苷酸序列，其包含但不限于在原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞及哺乳动物细胞中提供GLP-2肽体的增加表达的核酸序列。
如本文中所指示，聚核苷酸可进一步包含额外序列，诸如至少一种信号前导子或融合肽的编码序列，具有或不具有前述额外编码序列，诸如至少一种内含子，以及额外的非编码序列，包含但不限于非编码5'及3'序列，诸如经转录的非转译序列，其在转录、mRNA加工中起作用，其包含剪接及聚腺苷酸化信号(例如-mRNA的核糖体结合及稳定性)；编码额外氨基酸的额外编码序列，诸如提供额外官能基的那些。因此，编码GLP-2肽体或特定部分或变异体的序列可与标记物序列融合，所述标记物序列诸如编码肽的序列，所述肽促进包括GLP-2肽体片段或部分的融合GLP-2肽体或特定部分或变异体的纯化。
核酸可进一步包括除了本发明的聚核苷酸之外的序列。举例来说，可将包括一或多个核酸内切酶限制位点的多克隆位点插入至核酸中以帮助聚核苷酸的分离。此外，可嵌入可转译序列以帮助本发明的所转译聚核苷酸的分离。举例来说，六组氨酸标记物序列提供一种纯化本发明的蛋白质的适宜手段。本发明的核酸(编码序列除外)任选地用于克隆及/或表达本发明的聚核苷酸的载体、转接子或连接子。
转基因的编码区可包含一或多个沉默突变以最优化针对特定细胞类型的密码子使用。举例来说，GLP-2肽体的密码子可经优化以在脊椎动物细胞中表达。在一些实施例中，GLP-2肽体的密码子可经优化以在哺乳动物细胞中表达。在一些实施例中，GLP-2肽体的密码子可经优化以在人类细胞中表达。在一些实施例中，GLP-2肽体的密码子可经优化以在CHO细胞中表达。
编码如本申请案中所述的GLP-2肽体的核酸序列可以分子形式克隆(嵌入)至适合载体以用于在宿主细胞中繁殖或表达。举例来说，将包括可有效从宿主细胞分泌GLP-2肽体的信号肽的GLP-2肽体序列插入至适合载体中，诸如选自SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29及31的序列。可使用各种表达载体实践本发明，包含但不限于原核表达载体；酵母菌表达载体；昆虫表达载体及哺乳动物表达载体。适用于本发明的示范性载体包含但不限于基于病毒的载体(例如基于AAV的载体、基于逆转录病毒的载体、基于质粒的载体)。在一些实施例中，可将编码GLP-2肽体的核酸序列插入至适合载体中。在一些实施例中，可将编码GLP-2肽体的核酸序列插入至适合载体中。通常，将编码GLP-2肽体的核酸可操作地连接于各种调节序列或元件。
可将各种调节序列或元件并入适用于本发明的表达载体中。示范性调节序列或元件包含但不限于启动子、增强子、抑制因子(repressors/suppressors)、5'未转译(或非编码)的序列、内含子、3'未转译的(或非编码)序列。
如本文所用，“启动子”或“启动子序列”是能够结合细胞中的RNA聚合酶(例如直接或经由其它结合蛋白质或物质的启动子)且引发编码序列转录的DNA调节区。启动子序列一般在其3'端通过转录起始位点结合且向上游(5'方向)延伸以包含在任何含量下起始转录所需的最小数目的碱基或元件。启动子可可操作地与表达控制序列缔合或可操作地连接于表达控制序列，所述表达控制序列包含增强子及抑制因子序列或具有待表达的核酸。在一些实施例中，启动子可为诱导性的。在一些实施例中，诱导型启动子可为单向或双向的。在一些实施例中，启动子可为组成型启动子。在一些实施例中，启动子可为杂交启动子，其中含有转录调节区的序列获自一个来源且含有转录起始区的序列获自第二来源。用于将控制元件连接至转基因内的编码序列的系统为所属领域中所熟知(一般分子生物及重组DNA技术描述于桑布鲁克(Sambrook)、弗里奇(Fritsch)及马尼亚蒂斯(Maniatis),分子克隆实验指南(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第二版，冷泉港实验室出版社(ColdSpring Harbor Laboratory Press)，纽约冷泉港，1989中，其以引用的方式并入本文中)。适用于插入转基因以在多种生长及诱导条件下于各种宿主细胞中表达的商业载体还为所属领域中所熟知。
在一些实施例中，可使用特异性启动子控制哺乳动物宿主细胞中的转基因表达，诸如但不限于SRa-启动子(塔克布(Takebe)等人，分子与细胞生物学(Molec.andCell.Bio.)8:466-472(1988))、人类CMV即刻早期启动子(巴沙特(Boshart)等人，细胞(Cell)41:521-530(1985)；福肯(Foecking)等人，基因(Gene)45:101-105(1986))、人类CMV启动子、人类CMV5启动子、小鼠CMV即刻早期启动子、EF1-α启动子、用于肝脏特异性表达的杂交CMV启动子(例如通过使CMV即刻早期启动子与人类α-1-抗胰蛋白酶(HAT)或白蛋白(HAL)启动子的转录启动子元件共轭制得)、或用于肝癌特异性表达的启动子(例如其中人类白蛋白(HAL；约1000bp)或人类α-1-抗胰蛋白酶(HAT，约2000bp)的转录启动子元件与人类α-1-微球蛋白及二库宁(bikunin)前驱体基因(AMBP)的145长增强子元件组合；HAL-AMBP及HAT-AMBP)、SV40早期启动子区域(贝努瓦(Benoist)等人，自然(Nature)290:304-310(1981))、花旗松毒蛾(Orgyia pseudotsugata)即刻早期启动子、疱疹胸苷激酶启动子(瓦格纳(Wagner)等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)78:1441-1445(1981))；或金属硫蛋白基因的调节序列(布林斯特(Brinster)等人，自然296:39-42(1982))。在一些实施例中，哺乳动物启动子为组成型启动子，诸如但不限于次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPTR)启动子、腺苷脱胺酶启动子、丙酮酸激酶启动子、β肌动蛋白启动子以及所属领域的一般技术人员已知的其它组成型启动子。
在一些实施例中，可使用特异性启动子控制在原核宿主细胞中的转基因表达，诸如但不限于β-内酰胺酶启动子(维拉科马罗夫(Villa-Komaroff)等人，美国国家科学院院刊75:3727-3731(1978))；tac启动子(黛博拉(DeBoer)等人，美国国家科学院院刊80:21-25(1983))；T7启动子、T3启动子、M13启动子或M16启动子；在酵母菌宿主细胞中的转基因表达，诸如但不限于GAL1、GAL4或GAL10启动子、ADH(醇脱氢酶)启动子、PGK(磷酸甘油激酶)启动子、碱性磷酸酶启动子、甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶III(TDH3)启动子、甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶II(TDH2)启动子、甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶I(TDH1)启动子、丙酮酸激酶(PYK)、烯醇酶(ENO)或丙糖磷酸异构酶(TPI)。
在一些实施例中，启动子可为病毒启动子，其中许多能够在数种宿主细胞类型(包含哺乳动物细胞)中调节转基因的表达。已证实驱动真核细胞中的编码序列的组成性表达的病毒启动子包含例如猴病毒启动子、单纯疱疹病毒启动子、乳头瘤病毒启动子、腺病毒启动子、人类免疫缺陷病毒(HIV)启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、莫洛尼小鼠白血病病毒及其它反转录病毒的长末端重复序列(LTR)、单纯疱疹病毒以及所属领域的一般技术人员已知的其它病毒启动子的胸苷激酶启动子。
在一些实施例中，表达载体的基因控制元件还可包含分别参与转录及转译起始的5'非转录及5'非转译序列，诸如TATA盒、封端序列、CAAT序列、Kozak序列及类似者。增强子元件可任选地用于增加待表达的多肽或蛋白质的表达量。已证实在哺乳动物细胞中起作用的增强子元件的实例包含SV40早期基因增强子，如戴克尔马(Dijkema)等人，欧洲分子生物学杂志(EMBO J.)(1985)4:761所描述及衍生自劳斯肉瘤病毒(RSV)的长末端重复序列(LTR)的增强子/启动子，如戈尔曼(Gorman)等人，美国国家科学院院刊(1982b)79:6777中所描述及人类巨细胞病毒，如巴沙特等人，细胞(1985)41:521中所描述。表达载体的基因控制元件将还包含参与转录及转译终止的3'非转录及3'非转译序列。分别诸如用于从启动子转录的mRNA的3'末端的稳定及加工的聚聚腺苷酸化(polyA)信号。示范性polyA信号包含例如兔β血球蛋白polyA信号、牛生长激素polyA信号、鸡β血球蛋白终止子/polyA信号及SV40晚期polyA区域。
表达载体将优选地但任选地包含至少一种可选标记。在一些实施例中，可选标记为核酸序列，其编码可操作地连接于一或多个基因调节元件的抗性基因，以赋予宿主细胞在细胞毒性化学物质及/或药物存在下生长时维持存活性的能力。在一些实施例中，可使用可选试剂维持宿主细胞内表达载体的保持性。在一些实施例中，可使用可选试剂防止表达载体内转基因序列的修饰(即甲基化)及/或静默。在一些实施例中，使用可选试剂维持宿主细胞内载体的游离型表达。在一些实施例中，使用可选试剂促进转基因序列稳定整合至宿主细胞基因组中。在一些实施例中，试剂及/或抗性基因可包含但不限于用于真核宿主细胞的甲氨喋呤(MTX)、二氢叶酸还原酶(DHFR，美国专利第4,399,216号；第4,634,665号；第4,656,134号；第4,956,288号；第5,149,636号；第5,179,017号)、安比西林(ampicillin)、新霉素(G418)、博来霉素(zeomycin)、霉酚酸或谷酰胺合成酶(GS，美国专利第5,122,464号；第5,770,359号；第5,827,739号)；用于原核宿主细胞的四环素、安比西林、卡那霉素或氯霉素；及用于酵母菌宿主细胞的URA3、LEU2、HIS3、LYS2、HIS4、ADE8、CUP1或TRP1。
表达载体可经转染、经转型或经转导至宿主细胞。如本文所用，术语“转染”、“转型”及“转导”皆指代将外源性核酸序列引入宿主细胞。在一些实施例中，将含有编码GLP-2肽体的核酸序列的表达载体同时转染、转型或转导至宿主细胞。在一些实施例中，将含有编码GLP-2肽体的核酸序列的表达载体依序转染、转型或转导至宿主细胞。
为所属领域中所熟知的转型、转染及转导方法的实例包含脂质体递送，即霍利尼尔逊(Hawley-Nelson)，焦点(Focus)15:73(1193)的LipofectamineTM(Gibco BRL)方法、电穿孔、格雷厄姆(Graham)及范德尔博(van der Erb)，病毒学(Virology),52:456-457(1978)的CaPO4递送方法、DEAE-右旋糖苷药用递送、显微注射、基因枪颗粒递送、凝聚胺介导的递送、阳离子介导的脂质递送、转导及病毒感染，诸如例如逆转录病毒、慢病毒、腺病毒腺相关病毒及杆状病毒(昆虫细胞)。
在引入细胞内部之后，可将表达载体稳定整合于基因组中或以染色体外构筑体的形式存在。载体还可经扩增且多个副本可存在或整合于基因组中。在一些实施例中，本发明的细胞可含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多个编码GLP-2肽体的核酸的副本。在一些实施例中，本发明的细胞可含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多个编码GLP-2肽体的核酸的副本。
宿主细胞
在另一方面中，提供一种宿主细胞，其包括本文中所述的聚核苷酸，例如允许在宿主细胞中表达GLP-2肽体的聚核苷酸。宿主细胞可为中国仓鼠卵巢细胞。可替代地，宿主细胞可为哺乳动物细胞，非限制性实例包含BALB/c小鼠骨髓瘤细胞系(NSO/l，ECACC No:85110503)；人类视网膜母细胞(PER.C6，库赛尔(CruCell)，荷兰莱顿)；由SV40转型的猴肾CV1细胞系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人类胚胎肾细胞系(经亚克隆以在悬浮培养物中生长的HEK293或293细胞，格雷厄姆等人，普通病毒学杂志(J.Gen Virol.),36:59,1977)；人类纤维肉瘤细胞系(例如HT1080)；婴儿仓鼠肾细胞(BHK21，ATCC CCL10)；中国仓鼠卵巢细胞(CHO，乌尔劳布(Urlaub)及蔡辛(Chasin)，美国国家科学院院刊，77:4216,1980)，包含CHOEBNA(Daramola O.等人，生物技术进展(Biotechnol.Prog.),2014,30(1):132-41)及CHOGS(Fan L.等人，生物技术与生物工程(Biotechnol.Bioeng).2012,109(4):1007-15)；小鼠塞特利氏细胞(TM4，马瑟(Mather)，生殖生物学(Biol.Reprod.),23:243-251,1980)；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1 587)；人类子宫颈癌细胞(HeLa，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL1442)；人类肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人类肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(马瑟等人，纽约科学院年鉴(AnnalsN.Y.Acad.Sci.),383:44-68,1982)；MRC 5细胞；FS4细胞；及人类肝癌细胞系(Hep G2)。
聚核苷酸可处于表达质体中。表达质体可具有任何数目的所属领域的一般技术人员已知的复制起点。可通过所属领域的一般技术人员已知的任何数目的方式将聚核苷酸或表达质体引入宿主细胞中。举例来说，可使用流式电穿孔系统，诸如MaxCyte
Figure BDA0002432722530000321
MaxCyte
Figure BDA0002432722530000322
或MaxCyte
Figure BDA0002432722530000323
转染系统将聚核苷酸或表达质体引入宿主细胞中。
在各种实施例中，宿主细胞表达聚核苷酸。宿主细胞可呈足以实现分批补料细胞培养规模或其它大规模的含量表达GLP-2肽体。大规模制备重组GLP-2肽体的替代方法包含滚瓶培养及生物反应器分批培养。在一些实施例中，重组GLP-2肽体蛋白通过在悬浮中培养的细胞制得。在一些实施例中，重组GLP-2肽体蛋白通过粘附细胞制得。
制造
重组GLP-2肽体可通过任何可用手段制得。举例来说，重组GLP-2肽体可通过利用经工程改造以表达编码重组GLP-2肽体的核酸的宿主细胞系统以重组方式制得。可替代地或另外，重组GLP-2肽体可通过活化内源基因制得。可替代地或另外，重组GLP-2肽体可部分或完全通过化学合成制备。可替代地，重组GLP-2肽体可通过mRNA治疗剂活体内制得。
在一些实施例中，重组GLP-2肽体在哺乳动物细胞中制得。可根据本发明使用的哺乳动物细胞的非限制性实例包含BALB/c小鼠骨髓瘤细胞系(NSO/1，ECACC No:85110503)；人类视网膜母细胞(PER.C6，库赛尔，荷兰莱顿)；由SV40转型的猴肾CV1细胞系(COS-7，ATCCCRL 1651)；人类胚胎肾细胞系(经亚克隆以在悬浮培养物中生长的HEK293或293细胞，格雷厄姆等人，普通病毒学杂志，36:59,1977)；人类纤维肉瘤细胞系(例如HT1080)；婴儿仓鼠肾细胞(BHK21，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞+/-DHFR(CHO，乌尔劳布及蔡辛，美国国家科学院院刊，77:4216,1980)，包含CHO EBNA(Daramola O.等人，生物技术进展，2014,30(1):132-41)及CHO GS(Fan L.等人，生物技术与生物工程，2012,109(4):1007-15)；小鼠塞特利氏细胞(TM4，马瑟，生殖生物学，23:243-251,1980)；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1 587)；人类子宫颈癌细胞(HeLa，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人类肺细胞(W138，ATCCCCL 75)；人类肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(马瑟等人，纽约科学院年鉴，383:44-68,1982)；MRC 5细胞；FS4细胞；及人类肝癌细胞系(Hep G2)。
在一些实施例中，重组GLP-2肽体由人类细胞产生。在一些实施例中，重组GLP-2肽体由CHO细胞或HT1080细胞产生。
在某些实施例中，基于在经选择以用于培养细胞的特定条件下的某些优选属性或生长选择宿主细胞以用于产生细胞系。所属领域的技术人员应了解，所述属性可基于已确定株的已知特征及/或特点(即经表征的市售细胞系)或经由经验评估确定。在一些实施例中，可针对其在细胞饲养层上生长的能力选择细胞系。在一些实施例中，可针对其在悬浮液中生长的能力选择细胞系。在一些实施例中，可针对其作为细胞的粘附单层生长的能力选择细胞系。在一些实施例中，所述细胞可用于任何组织培养物容器或任何经适合粘附基质处理的容器。在一些实施例中，适合的粘附基质选自由以下组成的群组：胶原蛋白(例如胶原蛋白I、II、II或IV)、明胶、纤维结合蛋白、层粘连蛋白、玻璃连结蛋白、血纤维蛋白原、BDMatrigelTM、基底膜基质、硫酸皮肤素蛋白聚糖、聚-D-赖氨酸及/或其组合。在一些实施例中，可选择且在特定生长条件下修饰粘附宿主细胞以在悬浮液中生长。修饰粘附细胞以在悬浮液中生长的所述方法为所属领域中已知的。举例来说，可通过随时间推移自生长介质逐渐移除动物血清来调节细胞以在悬浮培养物中生长。
通常，经工程改造以表达重组GLP-2肽体的细胞可包括转基因，所述转基因编码本文中所述的重组GLP-2肽体。应了解，编码重组GLP-2肽体的核酸可含有调节序列、基因控制序列、启动子、非编码序列及/或用于表达重组GLP-2肽体的其它合适序列。通常，编码区与这些核酸组分中的一或多者可操作地连接。
在一些实施例中，重组GLP-2肽体通过mRNA治疗剂活体内制得。制备编码GLP-2肽体的mRNA且向需要GLP-2肽体的患者投与。mRNA可包括对应于DNA序列SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27及30的序列。可使用各种投与途径，诸如注射、肺内喷雾及皮下电穿孔。mRNA可囊封于病毒载体或非病毒载体中。示范性非病毒载体包含脂质体、阳离子聚合物及分散体系(cubosome)。
回收及纯化
可使用从细胞纯化GLP-2肽体的各种手段。可使用各种方法纯化或分离根据本文中所述的各种方法制得的GLP-2肽体。在一些实施例中，表达酶分泌于培养基中且因此可移除细胞及其它固体，如例如通过离心或过滤，如纯化方法中的第一步骤。可替代地或另外，表达酶结合于宿主细胞的表面。在此实施例中，表达多肽或蛋白质的宿主细胞经溶解以用于纯化。哺乳动物宿主细胞的溶解可通过所属领域的一般技术人员熟知的任何数目的手段来实现，包含通过玻璃珠进行物理破坏及暴露于高pH值条件。
GLP-2肽体可经分离且通过标准方法纯化，包含但不限于色谱(例如离子交换、亲和力、尺寸排阻及羟基磷灰石色谱)、凝胶过滤、离心、或不同溶解性、乙醇沉淀或通过用于蛋白质纯化的任何其它可用技术。参见例如斯科普斯(Scopes)，蛋白质纯化原理与实践(Protein Purification Principles and Practice)第2版,Springer-Verlag,New York,1987；Higgins,S.J.及Hames,B.D.(编)，蛋白质表达的实用途径(Protein Expression:APractical Approach)，牛津大学出版社(Oxford Univ Press),1999；及Deutscher,M.P.、Simon,M.I.、Abelson,J.N.(编)，蛋白质纯化指南：酶学方法(Guide to ProteinPurification:Methods in Enzymology)(酶学方法系列(Methods in EnzymologySeries)，第182卷)，美国学术出版社(Academic Press),1997，其皆以引用的方式并入本文中。尤其对于免疫亲和色谱法，蛋白质可通过将其结合于包括抗体的亲和柱分离，体针对彼蛋白质培养所述抗且将其贴附于静止支撑件。可替代地，可通过标准重组技术将亲和标签，诸如流感外壳序列、聚组氨酸或谷胱甘肽-S-转移酶附着至蛋白质以允许通过传递经过合适亲和柱轻易纯化。可在任何或全部阶段添加蛋白酶抑制剂，诸如苯甲基磺酰基氟化物(PMSF)、抗纤维蛋白溶酶肽、胃酶抑素或抑肽酶，以减少或消除在纯化过程期间多肽或蛋白质的降解。当必须溶解细胞以便分离及纯化表达多肽或蛋白质时，尤其需要蛋白酶抑制剂。
可通过熟知方法从重组细胞培养物回收及纯化GLP-2肽体或特定部分或变异体，所述方法包含但不限于蛋白A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水相互作用色谱、亲和性色谱法、混合模式色谱(例如MEP HypercelTM)、羟磷灰石色谱及凝集素色谱。还可采用高效液相色谱法(“HPLC”)以供纯化。参见例如科利根(Colligan),最新免疫学实验指南(Current Protocols in Immunology)或最新蛋白质科学实验指南(Current Protocols in Protein Science)，约翰威利父子出版公司(JohnWiley&Sons)，纽约(1997-2003)。
本发明的肽体或特定部分或变异体包含天然纯化的产物、化学合成程序的产物及通过重组技术从真核宿主(包含例如酵母菌、高等植物、昆虫及哺乳动物细胞)制得的产物。视重组制备程序中所采用的宿主而定，本发明的GLP-2肽体或特定部分或变异体可经糖基化或可未经糖基化，经糖基化优选。
调配物
在一些实施例中，本文中所述的医药组合物进一步包括载剂。适合的可接受载剂包含但不限于水、盐溶液(例如NaCl)、盐水、缓冲盐水、醇、甘油、乙醇、阿拉伯胶(gumarabic)、植物油、苯甲醇、聚乙二醇、明胶、碳水化合物(诸如乳糖、直链淀粉或淀粉)、糖(诸如甘露糖醇、蔗糖或其它)、右旋糖、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、香料油、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等以及其组合。医药制剂可视需要与辅助剂(例如稀释剂、缓冲液、亲油性溶剂、防腐剂、佐剂、润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲液、着色、调味及/或芳族物质及类似者)混合，所述辅助剂不会有害地与活性化合物反应或干扰其活性。在一些实施例中，使用适合于静脉内投与的水溶性载剂。
药学上可接受的助剂是优选的。制备所述无菌溶液的非限制性实例及方法为所属领域中所熟知，诸如但限于格纳罗(Gennaro)编,雷明登氏药学全书(Remington'sPharmaceutical Sciences),第18版，麦克出版公司(Mack Publishing Co.)(Easton,Pa.)1990。可常规地选择药学上可接受的载剂，其适用于GLP-2肽体组合物的投与模式、溶解度及/或稳定性，还为所属领域中已知或如本文所述。举例来说，可在弱酸性或生理pH下使用无菌盐水及磷酸盐缓冲盐水。pH缓冲剂可为磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)、N-三(羟基甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、碳酸氢铵、二乙醇胺、组氨酸(其为优选的缓冲液)、精氨酸、赖氨酸或乙酸盐或其混合物。优选的缓冲液范围为pH 4至8、pH6.5至8，更优选地pH 7至7.5。可将防腐剂提供于医药组合物中，所述防腐剂诸如对甲酚、间甲酚及邻甲酚、对羟基苯甲酸甲酯及对羟基苯甲酸丙酯、苯酚、苄醇、苯甲酸钠、苯甲酸、苯甲酸苄酯、山梨酸、丙酸、对羟基苯甲酸的酯。可将防止氧化、脱酰胺、异构化、外消旋、环化、肽水解的稳定剂提供于医药组合物中，所述稳定剂诸如抗坏血酸、甲硫氨酸、色氨酸、EDTA、天冬酰胺、赖氨酸、精氨酸、谷酰胺及甘氨酸。可将防止聚集、原纤维化及沉淀的稳定剂提供于医药组合物中，所述稳定剂诸如十二烷基硫酸钠、聚乙二醇、羧甲基纤维素、环糊精。可将用于溶解或防止聚集的有机改质剂(诸如乙醇、乙酸或乙酸酯及其盐)提供于医药组合物中。可将等渗制造者提供于医药组合物中，所述等渗制造者诸如盐，例如氯化钠或最佳碳水化合物，例如右旋糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、蔗糖或其混合物。
适用于本发明组合物的医药赋形剂包含但不限于蛋白质、肽、氨基酸、脂质及碳水化合物(例如糖，包含单糖、二糖、三糖、四糖及寡糖；衍生糖，诸如醛糖醇、醛糖酸、酯化糖及类似者；及多糖或糖聚合物)，其可单独地或以组合形式存在，单独或以组合形式构成1至99.99重量或体积％。示范性蛋白质赋形剂包含血清白蛋白，诸如人类血清白蛋白(HSA)、重组人类白蛋白(rHA)、明胶、酪蛋白及类似者。还可起缓冲能力作用的代表性氨基酸/GLP-2肽体或特定部分或变异体组分包含丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、白氨酸、异白氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜糖及类似者。一个优选的氨基酸为甘氨酸。
可使用碳水化合物赋形剂，例如单糖，诸如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖及类似者；双糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖及类似者；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糊精、聚葡萄糖、淀粉及类似者；及醛糖醇，诸如甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇(葡萄糖醇)、肌醇及类似者。
GLP-2肽体组合物还可包含缓冲液或pH调节剂；通常，缓冲液是由有机酸或碱制备的盐。示范性缓冲液包含有机酸盐，诸如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、丁二酸、乙酸或邻苯二甲酸的盐；三羟甲基氨基甲烷(Tris)、缓血酸胺盐酸盐或磷酸盐缓冲液。
另外，本发明的GLP-2肽体或特定部分或变异体组合物可包含聚合赋形剂/添加剂(诸如聚乙烯吡咯烷酮)、聚蔗糖(聚合糖)、葡萄糖结合剂(例如环糊精，诸如2-羟丙基-β-环糊精)、聚乙二醇、调味剂、抗微生物剂、甜味剂、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性剂(例如聚山梨醇酯，诸如“TWEEN 20”及“TWEEN 80”)、脂质(例如磷脂、脂肪酸)、类固醇(例如胆固醇)及螯合剂(例如EDTA)。
适用于根据本发明的GLP-2肽体组合物的这些及其它已知的医药赋形剂及/或添加剂为所属领域中已知的，例如如“雷明登：药学科学与实践(Remington:The Science&Practice of Pharmacy)”,第21版,Williams&Williams,(2005)及“医师案头参考(Physician's Desk Reference)”，第71版,Medical Economics,Montvale,N.J.(2017)”中所列，其全文以引用的方式并入本文中。优选的载剂或赋形剂材料是碳水化合物(例如糖类及醛糖醇)及缓冲液(例如柠檬酸盐)或聚合剂。
医药组合物可调配为适用于通过静脉内或皮下注射或输液投与的液体。液体可包括一或多种溶剂。示范性溶剂包含但不限于水；醇，诸如乙醇及异丙醇；植物油；聚乙二醇；丙二醇；及甘油或混合物及其组合。可使用适用于静脉内投与的水溶性载剂。举例来说，在一些实施例中，用于静脉内投与的组合物通常是无菌等张缓冲剂水溶液。必要时，组合物还可包含助溶剂及局部麻醉剂用于减轻注射部位的疼痛。一般来说，所述成分单独提供或以单位剂型混合在一起，例如呈于指示活性剂量的气密密封容器(诸如安瓿或药囊)中的干燥冻干粉末或无水浓缩物形式。当通过输液投与组合物时，可用含有无菌医药级水、盐水或右旋糖/水的输液瓶分配组合物。当通过注射投与组合物时，可提供注射用无菌水或盐水的安瓿，使得所述成分可在投与前混合。
如上文所提及，调配物可优选包含含有盐水或选择盐的适合缓冲液，以及可选防腐溶液及含有防腐剂的调配物以及适用于医药或兽医用途的多用途防腐调配物，其包括药学上可接受的调配物中的至少一种GLP-2肽体或特定部分或变异体。防腐调配物含有至少一种已知防腐剂或任选地选自由以下组成的群组：水性稀释剂中的至少一种苯酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苄醇、苯汞基亚硝酸酯、苯氧基乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化镁(例如六水合物)、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基、乙基、丙基、丁基及类似者)、苯扎氯铵、苄索氯铵、脱氢乙酸钠及硫柳汞或其混合物。可使用如所属领域中已知的任何适合浓度或混合物，诸如0.001至5％，或其中的任何范围或值，诸如但不限于0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9，或其中的任何范围或值。非限制性实例不包含防腐剂，包含0.1至2％间甲酚(例如0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0％)、0.1至3％苄醇(例如0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5％)、0.001至0.5％硫柳汞(例如0.005、0.01)、0.001至2.0％苯酚(例如0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0％)、0.0005至1.0％对羟基苯甲酸烷基酯(例如0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0％)及类似者。
GLP-2肽体可经调配用于非经肠投与且可含有无菌水或盐水、聚伸烷基二醇(诸如聚乙二醇)、植物来源的油、氢化萘及类似者作为常见赋形剂。可根据已知方法通过使用合适的乳化剂或加湿器及悬浮剂制备用于注射的水性或油性悬浮液。用于注射试剂的可为无毒的可非经口投与的稀释剂，诸如水溶液或无菌可注射溶液或于溶剂中的悬浮液。作为可用的媒剂或溶剂，允许使用水、林格氏溶液、等张盐水等；作为一般溶剂或悬浮溶剂，可使用无菌非挥发性油。出于这些目的，可使用任何种类的非挥发性油及脂肪酸，包含天然或合成或半合成脂肪油或脂肪酸；天然或合成或半合成单或二或三甘油酯。非经肠投与为所属领域中已知且包含但不限于以下常规手段：注射、如美国专利第5,851,198号中所描述的气体加压的无针注射装置及如美国专利第5,839,446号中所描述的激光穿孔器装置。
医药组合物可为缓释调配物。医药组合物还可经调配以用于持续释放、缓释、延迟释放或缓慢释放GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。可向可注射调配物提供缓释，还称为控制释放及持续释放。微球体、纳米球、植入物、药物储槽及聚合物可与本文中所述的化合物、方法及调配物中的任一者组合使用以提供缓释分布。
可以10至100mg/mL的浓度调配GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。浓度可为约10mg/mL、约11mg/mL、约12mg/mL、约13mg/mL、约14mg/mL、约15mg/mL、约16mg/mL、约17mg/mL、约18mg/mL、约19mg/mL、约20mg/mL、约21mg/mL、约22mg/mL、约23mg/mL、约24mg/mL、约25mg/mL、约26mg/mL、约28mg/mL、约30mg/mL、约32mg/mL、约34mg/mL、约36mg/mL、约38mg/mL、约40mg/mL、约42mg/mL、约44mg/mL、约46mg/mL、约48mg/mL、约50mg/mL、约55mg/mL、约60mg/mL、约65mg/mL、约70mg/mL、约75mg/mL、约80mg/mL、约85mg/mL、约90mg/mL、约95mg/mL、约99mg/mL，其中“约”意味着低于提及值0.5mg/mL至高于提及值0.5mg/mL。浓度可为10至15mg/mL、11至16mg/mL、12至17mg/mL、13至18mg/mL、14至19mg/mL、15至20mg/mL、16至21mg/mL、17至22mg/mL、18至23mg/mL、19至24mg/mL、20至25mg/mL、25至30mg/mL、30至35mg/mL、35至40mg/mL、40至45mg/mL、45至50mg/mL、50至55mg/mL、55至60mg/mL、60至65mg/mL、65至70mg/mL、70至75mg/mL、75至80mg/mL、80至85mg/mL、85至90mg/mL或90至100mg/mL。浓度可为12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL或14.5至15.5mg/mL、或15mg/mL。
包括GLP-2肽体的调配物及组合物可任选地进一步包括有效量的至少一种化合物或蛋白质，其选自以下中的至少一者：糖尿病或胰岛素代谢相关药物、抗感染药物、心脏血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药物、自主神经系统(ANS)药物、呼吸道药物、胃肠道(GI)药物、激素药物、用于流体或电解质平衡的药物、血液学药物、抗肿瘤药物、免疫调节药物、眼用、耳用或鼻用药物、局部药物、营养药物或类似者。所述药物为所属领域中所熟知，所属领域包含调配物、适应症、本文中所呈现的各者的给药及投与(参见例如药物护理手册2001(Nursing 2001Handbook of Drugs),第21版,Springhouse Corp.,Springhouse,Pa.,2001；健康专业药物指南2001(Health Professional's Drug Guide2001)，编辑香农(Shannon)、威尔逊(Wilson)、斯唐(Stang),Prentice-Hall,Inc,Upper Saddle River,NJ；药物治疗手册(Pharmacotherapy Handbook)，威尔斯(Wells)等人编,Appleton&Lange,Stamford,CT，其各自以全文引用的方式并入本文中)。
GLP-2肽体还可经调配为缓慢释放植入装置以用于GLP-2肽体的延长或持续投与。所述持续释放调配物可呈安置在身体外部的贴片剂形式。持续释放调配物的实例包含生物相容的聚合物的复合物，诸如聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、甲基纤维素、玻尿酸、唾液酸、硅酸盐、胶原蛋白、脂质体及类似者。当需要提供高局部浓度的GLP-2肽体时，持续释放调配物可引起特定关注。
GLP-2肽体组合物及调配物可以澄清溶液或以双小瓶形式提供于患者，所述双小瓶包括冻干的经重构的至少一种GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7)或特定部分或变异体的小瓶以及含有水性稀释剂的第二小瓶。单溶液小瓶或需要复原的双小瓶可多次重复使用且可满足患者治疗的单一或多次循环且因此提供比目前可用的治疗方案更加适宜的治疗方案。
GLP-2肽体组合物及调配物可通过向药店、诊所或其它所述机构及设施提供澄清溶液或双小瓶来向患者间接提供，所述双小瓶包括冻干经的经重构的至少一种GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)或特定部分或变异体的小瓶以及含有水性稀释剂的第二小瓶。在此情况下澄清溶液可为至多一升或甚至更大尺寸，其提供较大储集器，可一或多次从所述储集器取回较小部分的GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:7)或特定部分或变异体溶液以传递至较小小瓶且由药房或诊所提供于其客户及/或患者。所述产品可包含封装材料。除了监管机构所需的信息以外，封装材料还可提供可使用产品所依据的条件。封装材料可向患者提供说明书以在水性稀释剂中重组GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)或特定部分或变异体以形成溶液且经2至24小时或更久的时段使用所述溶液用于两小瓶，湿润/干燥产品。
治疗
在另一方面中，提供一种用于治疗患有肠外瘘(ECF)的患者的方法，其包括使用可有效促进ECF的闭合、愈合及/或修复的给药方案利用包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQID NO:7的GLP-2肽体治疗患者。GLP-2肽体可尤其有效治疗ECF，因为其半衰期比GLP-2或替度鲁肽更长。较长的半衰期提供频率较低的给药及较低的波峰/波谷比值。
高死亡率及发病率起因于ECF。另外，ECF可因具有腹内程序发生。对肠壁的损伤引起ECF的最大风险。参见Galie,K.L.等人,“术后肠外瘘：何时再手术及何时成功(Postoperative Enterocutaneous Fistula:When to Reoperate and How to Succeed)”结肠直肠手术临床期刊，2006,19:237-246；Arebi,N.等人,“高输出瘘(High-OutputFistula)”，结肠直肠手术临床期刊，2004,17(2):89-98。不希望受理论所束缚，ECF是胃肠道与皮肤之间的开口。大量流体、营养物及胃肠道流体可在未由小肠充分吸收的情况下离开胃肠道。胃分泌物的减少及营养物吸收的改善可改善ECF预后。
在一些实施例中，所述方法可有效促进患者的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效减少患者中胃分泌物的体积。GLP-2肽体可诸如通过经由瘘管迁移来有效减少达到皮肤的胃肠道分泌物的量。将GLP-2活化较长的时间段可减少胃分泌及流体经由瘘管的排出，进而更加迅速地促进恢复且允许瘘管更加迅速地愈合。此外，在替度鲁肽治疗之后，已观测到胶原蛋白表达增加及金属蛋白酶表达减少。参见Costa,B.P.等人,“替度鲁肽在肠吻合术的动物模型上对纤维化形成的基因调节的作用(Teduglutide effects on gene regulation of fibrogenesis on an animal model ofintestinal anastomosis)”外科研究杂志(Journal of Surgical Research),2017年8月(216)；87-98。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管深度。
可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7的GLP-2肽体。在各种实施例中，根据给药方案进行多次投与。如本文所用，术语“Q2D”意味着每两天投与，“Q3D”意味着每三天投与等，“QW”意味着每周投与。“BID”意味着一天两次投与。举例来说，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每两周一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三周一次、或每月一次进行给药。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每2至14天一次、每5至8天一次、或每周(QW)一次在0.02至3.0mg/kg、0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg、0.02至0.05mg/kg、0.03至0.04mg/kg、0.05至0.10mg/kg、0.10至0.15mg/kg、0.2至0.3mg/kg、0.3至0.4mg/kg、0.4至0.5mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.7至1.0mg/kg、0.9至1.2mg/kg、1.0至1.5mg/kg、1.2至1.8mg/kg、1.5至2.0mg/kg、1.7至2.5mg/kg、或2.0至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每周(QW)或每两周在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
可替代地，可每三周或每月一次投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每三周或每月一次在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
作为替代方案，GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每5至8天、或每周(QW)在0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg之间的给药方案皮下投与以用于维护用途。包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体可以10至100mg/mL、10至90mg/mL、20至80mg/mL、25至75mg/mL、30至70mg/mL、50至100mg/mL、60至90mg/mL、约75mg/mL、75mg/mL、10至20mg/mL、15至25mg/mL、12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL、约15mg/mL或15mg/mL的浓度投与。
可历经六个月至一年进行上文给药方案以治疗ECF。可在初始给药方案之后每月一次投与GLP-2肽体以用于维护及防止复发。
如本文所用，术语“皮下组织”定义为紧接在皮肤下方的松散不规则结缔组织的层。举例来说，可通过将组合物注射于包含但不限于以下各者的区域中进行皮下投与：大腿区、腹部区、臀部区或肩胛区。出于所述目的，可使用注射器注射调配物。然而，可利用用于调配物投与的其它装置，诸如注射装置(例如Inject-easeTM及GenjectTM装置)；注射器笔(诸如GenPenTM)；无针装置(例如MediJectorTM及BioJectorTM)；及皮下贴片剂递送系统。在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体，或含有其的医药组合物。
在各种实施例中，治疗ECF的上文方法与治疗ECF的已知方法结合使用。示范性已知方法包含不经肠营养、防止败血症的抗生素投与、连接于瘘管的外部开口的造口术装置、深坑引流管、瘘管给养、维生素补充、矿物质补充、使用H2阻断剂或质子泵抑制剂抑制酸、组织黏合剂胶的投与及纤维蛋白胶的投与。
在另一方面中，提供一种用于治疗患有阻塞性黄疸的患者的方法，其包括使用可有效治疗阻塞性黄疸的给药方案，利用GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQID NO:7的GLP-2肽体治疗患者。当阻断胆汁向肠流动且保留在血流中时，出现阻塞性黄疸。胆石可导致阻塞性黄疸。患有阻塞性黄疸的患者中的肠屏障功能可受损或降低，其可导致穿过小肠的细菌易位。本文中所述的GLP-2肽体可防止在阻塞性黄疸发作期间对肠屏障功能的损伤。
可使用可有效治疗阻塞性黄疸的给药方案。可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。在各种实施例中，根据给药方案进行多次投与。如本文所用，术语“Q2D”意味着每两天投与，“Q3D”意味着每三天投与等，“QW”意味着每周投与。“BID”意味着一天两次投与。举例来说，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每两周一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三周一次、或每月一次进行给药。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每2至14天一次、每5至8天一次、或每周(QW)一次在0.02至3.0mg/kg、0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg、0.02至0.05mg/kg、0.03至0.04mg/kg、0.05至0.10mg/kg、0.10至0.15mg/kg、0.2至0.3mg/kg、0.3至0.4mg/kg、0.4至0.5mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.7至1.0mg/kg、0.9至1.2mg/kg、1.0至1.5mg/kg、1.2至1.8mg/kg、1.5至2.0mg/kg、1.7至2.5mg/kg、或2.0至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每周(QW)或每两周在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
可替代地，可每三周或每月一次投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每5至8天或每周(QW)在0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg之间的给药方案皮下投与以用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQID NO:7)可以10至100mg/mL、10至90mg/mL、20至80mg/mL、25至75mg/mL、30至70mg/mL、50至100mg/mL、60至90mg/mL、约75mg/mL、75mg/mL、10至20mg/mL、15至25mg/mL、12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL、约15mg/mL或15mg/mL的浓度投与。
举例来说，可通过将组合物注射于包含但不限于以下各者的区域中进行皮下投与：大腿区、腹部区、臀部区或肩胛区。出于所述目的，可使用注射器注射调配物。然而，可利用用于调配物投与的其它装置，诸如注射装置(例如Inject-easeTM及GenjectTM装置)；注射器笔(诸如GenPenTM)；无针装置(例如MediJectorTM及BioJectorTM)；及皮下贴片剂递送系统。在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7)或含有其的医药组合物。
在一些实施例中，血清胆红素的含量与所述治疗之前血清胆红素的含量相比有所降低。血清胆红素反映黄疸程度且是在患有阻塞性黄疸的患者中所见的皮肤及眼睛中的黄色来源。在一些实施例中，所述方法可有效促进患者中的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善患者中的肠屏障功能且降低细菌易位穿过患者小肠的速率。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗、改善或保护避免对胃肠道的辐射损伤，及/或其效果的方法，其包括投与例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体。可使用可有效治疗或预防对患者胃肠道的辐射损伤的给药方案。辐射损伤可处于小肠中。在一些实施例中，所述方法可有效减少胃肠道细胞的细胞凋亡。
对小肠的辐射损伤可导致细胞损伤，所述细胞损伤足以引起以下效果中的一或多者：降低肠屏障功能、减少小肠对水及其它营养物的吸收、对不经肠营养的依赖增加。半衰期显著长于GLP-2或替度鲁肽的GLP-2肽体可逆转这些效果。不希望受理论所束缚，GLP-2可通过促进所述细胞(例如CCD-18Co细胞)中的Akt磷酸化防止小肠中的细胞经历细胞凋亡。可替代地，GLP-2肽体可经由其GLP-2活性降低半胱天冬酶-3的含量。半胱天冬酶3是辐射触发的因子。GLP-2肽体还可抑制还由辐射触发的Bcl-2降解。
可在以辐射或放射线疗法治疗患者之前、或与其同时投与GLP-2肽体。可在以辐射或放射线疗法治疗患者之后投与GLP-2肽体。可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2。在各种实施例中，根据给药方案进行多次投与。如本文所用，术语“Q2D”意味着每两天投与，“Q3D”意味着每三天投与等，“QW”意味着每周投与。“BID”意味着一天两次投与。举例来说，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每两周一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三周一次、或每月一次进行给药。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每2至10天一次、每5至8天一次、或每周(QW)一次在0.02至3.0mg/kg、0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg、0.02至0.05mg/kg、0.03至0.04mg/kg、0.05至0.10mg/kg、0.10至0.15mg/kg、0.2至0.3mg/kg、0.3至0.4mg/kg、0.4至0.5mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.7至1.0mg/kg、0.9至1.2mg/kg、1.0至1.5mg/kg、1.2至1.8mg/kg、1.5至2.0mg/kg、1.7至2.5mg/kg、或2.0至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每周(QW)或每两周(Q2W)在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
可替代地，可每三周或每月一次投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每三周或每月一次在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每5至8天或每周(QW)在0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg之间的给药方案皮下投与以用于维护用途。包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体可以10至100mg/mL、10至90mg/mL、20至80mg/mL、25至75mg/mL、30至70mg/mL、50至100mg/mL、60至90mg/mL、约75mg/mL、75mg/mL、10至20mg/mL、15至25mg/mL、12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL、约15mg/mL或15mg/mL的浓度投与。
可历经六个月至一年进行以上给药方案。可在初始给药方案之后每月一次投与GLP-2肽体以用于维护。
举例来说，可通过将组合物注射于包含但不限于以下各者的区域中进行皮下投与：大腿区、腹部区、臀部区或肩胛区。出于所述目的，可使用注射器注射调配物。然而，可利用用于调配物投与的其它装置，例如注射装置(例如Inject-easeTM及GenjectTM装置)；注射笔(诸如GenPenTM)；无针装置(例如MediJectorTM及BioJectorTM)；及皮下贴片剂递送系统。在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7)或含有其的医药组合物。
在一些实施例中，所述方法可有效促进患者中的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物为(例如)多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善患者中的肠屏障功能。这些效果都可弥补在小肠及肠中出现的任何辐射诱发的细胞损伤。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗、改善或预防对胃肠道的辐射诱发的肠炎及/或其效应的方法，其包括投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7的GLP-2肽体。可使用可有效治疗或预防患者中的辐射诱发的肠炎的给药方案。
出于如上文关于对胃肠道的辐射诱发的损伤所论述的相似原因，可通过GLP-2肽体逆转辐射诱发的肠炎。
可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7的GLP-2肽体。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每2至14天一次、每5至8天一次、或每周(QW)一次在0.02至3.0mg/kg、0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg、0.02至0.05mg/kg、0.03至0.04mg/kg、0.05至0.10mg/kg、0.10至0.15mg/kg、0.2至0.3mg/kg、0.3至0.4mg/kg、0.4至0.5mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.7至1.0mg/kg、0.9至1.2mg/kg、1.0至1.5mg/kg、1.2至1.8mg/kg、1.5至2.0mg/kg、1.7至2.5mg/kg、或2.0至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每周(QW)或每两周(Q2W)在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
可替代地，可每三周或每月一次投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每三周或每月一次在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每5至8天或每周(QW)在0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg之间的给药方案皮下投与以用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可以10至100mg/mL、10至90mg/mL、20至80mg/mL、25至75mg/mL、30至70mg/mL、50至100mg/mL、60至90mg/mL、约75mg/mL、75mg/mL、10至20mg/mL、15至25mg/mL、12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL、约15mg/mL或15mg/mL的浓度投与。
举例来说，可通过将组合物注射于包含但不限于以下各者的区域中进行皮下投与：大腿区、腹部区、臀部区或肩胛区。出于所述目的，可使用注射器注射调配物。然而，可利用用于调配物投与的其它装置，诸如注射装置(例如Inject-easeTM及GenjectTM装置)；注射器笔(诸如GenPenTM)；无针装置(例如MediJectorTM及BioJectorTM)；及皮下贴片剂递送系统。在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:7的GLP-2肽体，或含有其的医药组合物。
在一些实施例中，所述方法可有效促进患者中的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管深度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管组织。在一些实施例中，所述方法可有效改善患者中的肠屏障功能。
在另一方面中，提供一种用于治疗呈现结肠与残余小肠连续性的患有短肠综合症的患者的方法，其包括使用可有效治疗短肠综合症的给药方案，利用GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的GLP-2肽体治疗患者。在一些实施例中，以药剂形式投与GLP-2肽体以促进呈现至少约25％结肠与残余小肠连续性的短肠综合症患者中的肠道吸收。在一些实施例中，残余小肠的长度为至少25cm、至少50cm、至少75cm、至少100cm、或至少125cm。在一些实施例中，所述方法可有效促进患者中的肠道吸收。在一些实施例中，所述方法可有效促进营养物的肠道吸收，所述营养物例如多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质及水。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的绒毛高度。在一些实施例中，所述方法可有效增加患者小肠中的腺管深度。在一些实施例中，患者依赖于不经肠营养。所述方法可有效降低粪便湿重，增加尿液湿重，增加穿过小肠的能量吸收(例如多肽、碳水化合物、脂肪酸的一或多者的吸收)，增加穿过小肠的水吸收，减少不经肠营养支持，或消除对不经肠营养的需求。
可使用可有效治疗具有结肠连续性的短肠综合症的给药方案。可经皮下或经静脉内投与GLP-2肽体，其包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7。在各种实施例中，根据给药方案进行多次投与。如本文所用，术语“Q2D”意味着每两天投与，“Q3D”意味着每三天投与等，“QW”意味着每周投与。“BID”意味着一天两次投与。举例来说，可BID、每天一次(QD)、Q2D、Q3D、Q4D、Q5D、Q6D、QW、每8天一次、每9天一次、每10天一次、每11天一次、每12天一次、每13天一次、每两周一次、每15天一次、每16天一次、或每17天一次、每三周一次、或每月一次进行给药。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每2至14天一次、每5至8天一次、或每周(QW)一次在0.02至3.0mg/kg、0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg、0.02至0.05mg/kg、0.03至0.04mg/kg、0.05至0.10mg/kg、0.10至0.15mg/kg、0.2至0.3mg/kg、0.3至0.4mg/kg、0.4至0.5mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.7至1.0mg/kg、0.9至1.2mg/kg、1.0至1.5mg/kg、1.2至1.8mg/kg、1.5至2.0mg/kg、1.7至2.5mg/kg、或2.0至3.0mg/kg之间的给药方案皮下投与。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每周(QW)或每两周(Q2W)在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
可替代地，可每三周或每月一次投与GLP-2肽体，诸如用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:7)可根据每三周或每月一次在0.2至1.4mg/kg、0.3至1.0mg/kg、0.4至0.9mg/kg、0.5至0.8mg/kg、0.3至0.7mg/kg、0.6至1.0mg/kg、0.2至0.4mg/kg、0.3至0.5mg/kg、0.4至0.6mg/kg、0.5至0.7mg/kg、0.6至0.8mg/kg、0.7至0.9mg/kg、0.8至1.0mg/kg、0.9至1.1mg/kg、1.0至1.2mg/kg、1.1至1.3mg/kg及1.2至1.4mg/kg之间的给药方案皮下投与。
GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可根据每5至8天或每周(QW)在0.02至0.5mg/kg、0.04至0.45mg/kg、0.08至0.4mg/kg、0.10至0.35mg/kg、0.20至0.30mg/kg之间的给药方案皮下投与以用于维护用途。GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)可以10至100mg/mL、10至90mg/mL、20至80mg/mL、25至75mg/mL、30至70mg/mL、50至100mg/mL、60至90mg/mL、约75mg/mL、75mg/mL、10至20mg/mL、15至25mg/mL、12至18mg/mL、13至17mg/mL、14至16mg/mL、约15mg/mL或15mg/mL的浓度投与。
在一些实施例中，皮下投与GLP-2肽体，例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQID NO:7的GLP-2肽体，或含有其的医药组合物。举例来说，可通过将组合物注射于包含但不限于以下的区域中进行皮下投与：大腿区、腹部区、臀部区或肩胛区。在一些实施例中，经静脉内投与GLP-2肽体(例如包括氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7)，或含有其的医药组合物。
类似于上文，可使用GLP-2肽体通过投与有效量的如本文所述的GLP-2类似物或其盐来治疗患有胃肠病症的个体，包含食道的上胃肠道。胃及肠道相关病症包含任何病因的溃疡(例如胃蛋白酶溃疡、药物诱发的溃疡、与感染或其它病原体相关的溃疡)、消化病状、吸收障碍综合症、短肠综合症、盲管综合症、发炎性肠病、脂肪痢(例如由谷质诱发的肠病或乳糜泻引起)、热带性口疮、低丙球蛋白血症口疮、肠炎、溃疡性结肠炎、小肠损伤及化学疗法诱发的腹泻/粘膜炎(CID)。用GLP-2肽体治疗的候选者是以下个体：其将受益于小肠质量增加及正常小肠粘膜结构及功能的效果及/或维护。可用GLP-2肽体治疗的特定病状包含各种形式的口疮，其包含：脂肪痢，其由对来自小麦的α-麦胶蛋白的有毒反应引起，可为谷质诱发的肠病或乳糜泻的结果，且由小肠绒毛的显著损失标示；热带性口疮，其由感染引起且通过绒毛的部分平整标示；低丙球蛋白血症口疮，其通常在患有常见可变免疫缺乏或低γ球蛋白血症的患者中观测到且通过绒毛高度的显著降低来标示。GLP-2肽体治疗的治疗功效可通过以下监测：用以检验绒毛形态的肠活检；营养物吸收的生物化学评估；患者重量增加；或与这些病状相关的症状的改善。
还可投与GLP-2肽体以在化学疗法期间预防或治疗对胃肠道的损伤。对小肠粘膜的化学疗法诱发的损伤临床上常称为胃肠道粘膜炎且特征在于小肠的吸收性及屏障损伤。癌症化学疗法之后所引起的胃肠道粘膜炎是尽管逐渐缓和，但一旦确定即基本上不可治疗的日益增加的问题。利用常用细胞抑制癌症药物5-FU及伊立替康进行的研究已证实，利用这些药物进行的有效化学疗法显著影响小肠的结构完整性及功能。GLP-2肽体的投与可逆转对小肠的损伤且保存其结构完整性及功能。
在以上治疗方法的各种实施例中，待投与的特定剂量或量可例如视以下变化：所需结果的性质及/或程度、投与途径及/或时机的特点、及/或一或多个特征(例如体重、年龄、个人病史、基因特征、生活方式参数、心脏缺陷的严重程度及/或心脏缺陷的风险水平等，或其组合)。所述剂量或量可由一般技术人员测定。在一些实施例中，根据标准临床技术测定合适剂量或量。可替代地或另外，在一些实施例中，经由使用一或多种活体外或活体内分析帮助鉴别期望或最佳的待投与的剂量范围或量来测定合适剂量或量。
在上文治疗方法的各种实施例中，以治疗有效量投与GLP-2肽体。一般来说，治疗有效量足以实现对受试者有意义的益处(例如防治、治疗、调节、治愈、预防及/或改善潜在疾病或病状)。一般来说，向有需要的受试者投与的治疗剂(例如GLP-2肽体)的量将视受试者的特征而定。所述特征包含受试者的病状、疾病严重程度、一般健康、年龄、性别及体重。所属领域的一般技术人员将能够轻易根据这些及其它相关因素测定合适剂量。另外，可任选地采用客观及主观分析两者鉴别最佳的剂量范围。在一些特定实施例中，待投与的合适剂量或量可自衍生自活体外或动物模式测试系统的剂量反应曲线外推得出。
在以上治疗方法的各种实施例中，通常在可包括多个单位剂量的给药方案中投与治疗有效量。对于任何特定治疗蛋白，治疗有效量(及/或有效给药方案内的合适单位剂量)可例如根据投与途径，与其它医药剂的组合变化。此外，对于任何特定患者的特定治疗有效量(及/或单位剂量)可视多种因素而定，所述因素包含：所治疗的病状及病症的严重程度；所采用的特定医药剂的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康、性别及饮食；投与时间、投与途径及/或所采用的特定融合蛋白的分泌或代谢速率；治疗持续时间；及如医疗技术中所熟知的类似因素。
在以上治疗方法的各种实施例中，GLP-2肽体与一或多种已知治疗剂组合投与。在一些实施例中，根据其标准或经批准给药方案及/或计划表投与已知治疗剂。在一些实施例中，根据与其标准或经批准给药方案及/或计划表相比改变的方案投与已知治疗剂。在一些实施例中，此类改变方案与标准或经批准给药方案的不同的处在于一或多种单位剂量的量改变(例如减少或增加)及/或给药频率改变(例如单位剂量之间的一或多种时间间隔增加，使得频率降低，或减少，使得频率升高)。
对于ECF，可与GLP-2肽体组合投与的示范性治疗剂包含皮质类固醇、抗生素及酸减少剂。对于阻塞性黄疸，可与GLP-2肽体组合投与的示范性治疗剂包含皮质类固醇及抗生素。
在以上治疗方法的各种实施例中，可一起投与多种不同GLP-2肽体。另外，可与Gattex、替度鲁肽或GLP-2肽同时投与GLP-2肽体。
实例
还借助于以下实例描述及说明本发明。然而，说明书中任何地方的这些及其它实例的使用仅为说明性的且决不限制本发明或任何例示术语的范围及意义。同样地，本发明不限于本文所述的任何尤其优选的实施例。实际上，本发明的许多修改及变体在所属领域的技术人员阅读本说明书时对其可显而易见，且所述变体可在不背离本发明的精神或范围情况下进行。本发明仅受随附权利要求书的项目以及那些权利要求书所授权的等效物的完整范围限制。
实例1：GLP-2肽体的分子量及FcRn结合
与Fc新生受体(FcRN)的结合允许分子的再循环且导致Fc融合蛋白的活体内血清半衰期延长。再循环发生时，分子被动摄入细胞且核内体的pH值较低。这导致分子的Fc部分与FcRN结合。当FcRN再循环回至细胞表面时，pH值随后为中性且将蛋白质释放回至血清。
与FcRN的胞外域的结合是使用Biacore系统通过表面电浆子共振(surfaceplasmon resonance；SPR)测量。在以下条件下经由CM5晶片与FcRn的胺偶合实现利用FcRn进行的直接固着：
i)在乙酸盐缓冲液pH 5.0中将hFcRn(自身表达及纯化)稀释至5μg/mL。
ii)在PBS pH 7.0中以500RU的目标将5μg/mL FcRn固定于CM5晶片上
iii)最终响应454RU
iv)操作缓冲液：PBS-P+，pH调节至5.5
使用以下方案进行动力学结合研究。在PBS-P+至50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39、0nM中稀释样本。参数设置如下：
i)在流动速率30μL/min下缔合及解离300s
ii)在60μL/min下用25mM Tris，150mM NaCl pH 8.0再生40s
在pH 5.5及pH 7.4下进行对GLP-2肽体与Fc新生受体(FcRN)的结合的测量。以白蛋白代替Fc的GLP-2肽体O具有显著较高的KD。结果展示于下表1中。
表1
<u>GLP肽体</u> <u>MW</u> <u>pH 5.5下的FcRN K<sub>D</sub></u> <u>pH 7.4下的FcRN K<sub>D</sub></u>
A 58.4 1.38 在测试范围中无结合。
B 48.97 1.70 在测试范围中无结合。
E 60.66 2.04 在测试范围中无结合。
J 65.75 2.90 在测试范围中无结合。
K 60.29 1.95 在测试范围中无结合。
L 59.19 1.72 在测试范围中无结合。
M 59.65 1.81 在测试范围中无结合。
O 71.36 1373 在测试范围中无结合。
实例2：蛋白质稳定性分析
GLP-2肽体中的每一者是通过以纳米示差扫描荧光测定法(NanoDSF)测定熔融温度来测试。NanoDSF是采用温度斜线，历经一系列温度对蛋白质稳定性进行的测量。色氨酸的稳定性是通过荧光测量，如350nm下的荧光与330nm下的荧光的比所反映。根据分析，测定一或多个熔融温度。因为处于某一状态的蛋白质应理解为具有某一熔融温度，所以所观测到的熔融温度的数目反映不同状态的数目。GLP-2肽体A、B、E、J、K、L及M具有两种状态，如下表2中所展示。
进行SEC-MALS分析以测定始态(主峰)及其分子量。如下表2中所展示，GLP-2肽体A、B、E、J、K、L、M及O(Fc融合体)以指示二聚体的分子量洗脱。GLP-2肽体O(白蛋白融合体)以指示单体的分子量洗脱。
表2
Figure BDA0002432722530000511
Figure BDA0002432722530000521
实例3：GLP-2肽体的活体外效能
使用来自DiscoverX的cAMP HunterTM eXpress GLP2R CHO-K1 GPCR分析活体外分析GLP-2肽体的EC50。cAMP HunterTM分析是基于酶片段互补(enzyme fragmentcomplementation；EFC)。在EFC分析中，酶供体与cAMP融合。因GLP2R活化所致的增加的胞内cAMP与ED-cAMP竞争抗体。非结合ED-cAMP补充酶受体以形成活性β半乳糖，其接着产生发光信号。
所使用的CHO-K1细胞过度表达人类GLP-2R(基因库寄存编号NM004246.1)。使用肽GLP-2[A2G]作为对照组。使用表3中列出的GLP-2[A2G]肽及GLP-2肽体的各种稀释液治疗细胞。经由测量培养基中的cAMP浓度分析其活性。进行S形曲线拟合以达到EC50值，如下表3中所展示。
表3
<u>GLP肽体/肽</u> <u>EC50(nM)</u> <u>R<sup>2</sup></u>
GLP-2[A2G] 0.59 0.99
A 128.3 0.99
B 8.27 0.99
E 2.43 0.99
J 3.23 0.99
K 2.87 0.99
L 6.16 0.98
M 4.51 0.97
O白蛋白融合体 10.55 0.98
P白蛋白融合体 150.9 0.99
GLP-2肽体的EC50值显著大于GLP-2[A2G]的EC50值。然而，一些GLP-2肽体，诸如GLP-2肽体K的活体外效能仅略微降低，其中活性仅降低约五倍。GLP-2肽体K的活体外活性为GLP-2[A2G]的20％。GLP-2肽体E的活体外活性为GLP-2[A2G]的24％。GLP-2肽体E的活体外活性为GLP-2[A2G]的18％。GLP-2肽体B的活体外活性为GLP-2[A2G]的7％。
随后如下文所论述进行药物动力学研究，以分析GLP-2肽体活体内活性的时长。
实例4：大鼠药物动力学研究-静脉内给药
在大鼠中，测量
Figure BDA0002432722530000522
(具有A2G突变的GLP-2肽)的四个药物动力学参数：CL、Vc、Vt及Q。还测量GLP-2肽体A、B、E、J、K、L、M、O及P的相同药物动力学参数。数据展示于表4中。经由颈静脉或尾部静脉导管静脉内注射雄性史泊格多利大白鼠(3只动物/组)。以1mg/ml的剂量注射单一剂量的测试物品。以1mg/ml的浓度在PBS pH 7.4中调配测试物品。在给药后0.083、0.167、0.33、0.5、1、2、6、24、48、72、120、168、240及336小时采取血液样本。将血液样本收集于肝素化试管中且在收集10分钟内在2000×g下离心5分钟。将100μL血浆转移至含有2μL 50mM PMSF的1.5ml Eppendorf试管。在混合之后，在-80℃下冷冻血浆样本直到分析。
表4
<u>GLP肽体/肽</u> <u>CL(mL/天/kg)</u> <u>Vc(mL/kg)</u> <u>Vt(mL/kg)</u> <u>Q(mL/天/kg)</u>
Gattex 33,391(10％) 2,235(10％) NA(<0.1) NA(<0.1)
A 57(7.1％) 43(17.8％) 79(16％) 58(15％)
B 48(11％) 31(17％) 76(18％) 58(18％)
E 72(31％) 21(15％) 41(15％) 69(25％)
J 57.8(6％) 37.6(12％) 22(14％) 15.6(15％)
K 53.7(4％) 42.2(4％) 46.4(13％) 61(22％)
L 67.3(9％) 37.8(7％) 538(6.1％) 19(10％)
M 38.3(71％) 12(9％) 29.4(7％) 183(8.3％)
O 130(18％) 43.2(9％) 54(14％) 1380(22％)
P 170(23％) 38.4(11％) 43.9(21％) 707(13％)
实例5：大鼠药物动力学研究-皮下给药
在大鼠中，测量
Figure BDA0002432722530000531
(具有A2G突变的GLP-2肽)的四个药物动力学参数：CL、Vc、Vt及Q。还测量GLP-2肽体A、B、E、J、K、L、M、O及P的相同药物动力学参数。数据展示于表5中。雄性史泊格多利大白鼠(3动物/组)经受皮下注射至动物的肩胛内区域中。以1mg/ml的剂量注射单一剂量的测试物品。以1mg/ml的浓度在PBS pH 7.4中调配测试物品。在给药后0.083、0.167、0.33、0.5、1、2、6、24、48、72、120、168、240及336小时采取血液样本。将血液样本收集于肝素化试管中且在收集10分钟内在2000×g下离心5分钟。将100μL血浆转移至含有2μL 50mM PMSF的1.5ml Eppendorf试管。在混合之后，在-80℃下冷冻血浆样本直到分析。进行Meso Scale Discovery(MSD)ELISA以分析GLP-2肽体的浓度。
使用抗人类IgG1 Fc抗体或抗人类白蛋白抗体开发夹心免疫检定以捕获肽体及sulfotag标记的抗GLP-2抗体以用于检测。
表5
Figure BDA0002432722530000532
Figure BDA0002432722530000541
实例5：GLP-2肽体B264的表达及纯化
GLP-2肽体B264编码序列经克隆至质粒中以在CHO宿主细胞系中表达。使用具有21cm床及400mL树脂的MAb Select
Figure BDA0002432722530000542
纯化GLP-2肽体B264。使用平衡缓冲液及洗涤缓冲液作为DPBS。对于洗脱液，使用pH 3.0下的100mM甘氨酸。中和缓冲液为pH 9.0下的1MTris-HCl，每45mL洗脱液使用1.45mL。
随后使用Akta蛋白质纯化系统进行纯化。使用5管柱体积的DPBS用于平衡。以35毫升/分钟的速率装载6L样本。使用10管柱体积的DPBS洗涤管柱。使用5-10管柱体积的100mM甘氨酸pH 3.0在用pH 9.0下的1.45mL 1M Tris-HCl中和的45mL馏分中进行洗脱。于4℃下在搅拌隔夜同时合并洗脱馏分且以70mL样本/2.5L dPBS对PBS pH 7.4Fisher(从10×PBS稀释)进行渗析。
通过Nanodrop、Bradford及BCA中的每一者分析总蛋白质。GLP肽体B264的最终浓度在170mL总体积中为11mg/mL。总产率为1.87克。内毒素含量为1.72EU/mL或约0.15EU/mg。
随后使用SEC-MALS及NanoDSF进行稳定性分析。对于SEC-MALS，使用Sepax ZenixC-150管柱。移动相缓冲液为1×PBS，最终浓度为400mM NaCl。流动速率为0.8毫升/分钟。注射20微克总蛋白质。对于NanoDSF，使用10微升样本，不进行样本的归一化。数据展示于下表6中。
表6
Figure BDA0002432722530000543
实例6：GLP-2肽体K274的表达及纯化
GLP-2肽体K274编码序列经克隆至质粒中以在CHO宿主细胞系中表达。使用具有17cm床及300mL树脂的MAb Select
Figure BDA0002432722530000552
纯化GLP-2肽体K274。使用平衡缓冲液及洗涤缓冲液作为DPBS。对于洗脱液，使用pH 3.0下的100mM甘氨酸。中和缓冲液为pH 9.0下的1MTris-HCl，每45mL洗脱液使用1.45mL。
随后使用Akta蛋白质纯化系统进行纯化。使用5管柱体积的DPBS用于平衡。以35毫升/分钟的速率装载6L样本。使用10管柱体积的DPBS洗涤管柱。使用5-10管柱体积的100mM甘氨酸pH 3.0在用pH 9.0下的1.45mL 1M Tris-HCl中和的45mL馏分中进行洗脱。
于4℃下在搅拌隔夜同时合并洗脱馏分且以70mL样本/2.5L dPBS对PBS pH 7.4Fisher(从10×PBS稀释)进行渗析。
通过Nanodrop、Bradford及BCA中的每一者分析总蛋白质。GLP肽体B264的最终浓度在170mL总体积中为11mg/mL。总产率为1.87克。
随后使用SEC-MALS及NanoDSF进行稳定性分析。对于SEC-MALS，使用Sepax ZenixC-150管柱。移动相缓冲液为1×PBS，最终浓度为400mM NaCl。流动速率为0.8毫升/分钟。注射20微克总蛋白质。对于NanoDSF，使用10微升样本，不进行样本的归一化。结果展示于下表7中。
表7
Figure BDA0002432722530000551
实例7：GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274的二聚体/单体分析
GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274的SEC-MALS分析展示约140,000g/mol的分子量，其对应于二聚体的尺寸。AUC及EM分析证实存在二聚体。GLP-2肽体B264的单体的预期分子量为58,970且GLP-2肽体K274的预期分子量为60,290。SEC-MALS分析结果显示于图8A中，对应于二聚体的波峰在约7分钟处出现且对应于单体的波峰在约8分钟处出现。观测到SEC的稀释效果位于单体/二聚体转变范围内。
二聚体GLP-2-Fc(GLP-2肽体B)的EM分析结果显示于图8B中。在4℃下在浓度降低及时间增加下出现更多二聚体，如关于GLP-2肽体K在图8C及8D中展示。针对GLP-2肽体K的AUC及SEC分析结果显示于图9A及9B中。图9A展示沉降系数(SEC)分布概况的重迭图。样本处于1至8μM范围，然而，在SEC分析期间，使样本在管柱上稀释使得其属于单体-二聚体转变范围。另外，注射4μL 11.3mg/mL样本进行SEC分析且各自沉降分级，在Nanodrop所测量的A280证实SEC上的样本浓度属于单体-二聚体转变范围。为概述上文，在AUC及SEC-MALS分析中观测到GLP-2-Fc呈二聚体形式。根据SEC-MALS，单体/二聚体比值基于浓度改变。
进行微尺度热泳(MST)及纳米差示扫描荧光测定法(NanoDSF)以表征二聚体-单体转变。使用MST测定单体/二聚体平衡解离常数Kd。MST为基于分子的热驱动扩散而NanoDSF为基于Trp荧光且常用于热稳定性Tm。针对GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274两者进行MST，如图9C中所示。GLP-2肽体B264的Kd为159±31nM。GLP-2肽体K274的Kd在PBS中为159±29nM且在具有0.4M NaCl的PBS中为159±32nM。此外，利用MST获得的替度鲁肽的Kd为24±3μM。
在NanoDSF分析中，使用室温且靶向可能在GLP-2-Fc从缔合期间经历构形变化的GLP-2中的一种色氨酸。参见图9D。仅来自蛋白质的色氨酸荧光对信号有贡献。若色氨酸隐藏或稳定，则波峰在330nm处且若色氨酸暴露或具有可挠性，则波峰在350nm处。对于GLP-2肽体B，在室温下观测到GLP-2肽体的各种稀释液在0.8至0.85之间的比值。结果展示于图9E中。从展示于图9F中的结果的S型拟合曲线，GLP-2肽体B的Kd为1043±154nM。此外，利用nanoDSF获得的替度鲁肽的Kd为77±14μM。
实例8：GLP-2肽体K274的小鼠药物动力学数据
在CD1小鼠中进行药物动力学分析。缔合常数(ka)为3.04天-1，CL/F为81.3毫升/天/公斤且Vc为213mL/kg。小鼠分成若干组，历经14天时段，一组每三天(Q3D)投与0.45mg/kg，另一组投与1.5mg/kg Q3D，另一组投与4.5mg/kg Q3D，且另一组投与15mg/kg Q3D。在停止给药之后，在3天、9天、14天及21天之后测量浓度。结果展示于图10A中。
实例9：GLP-2肽体K(具有C端赖氨酸)及GLP-2肽体K274(无C端赖氨酸)的药物动力学的可比较性
向六只雄性史泊格多利大白鼠的组皮下投与1mg/kg总GLP-2肽体K蛋白质。向另一组六只雄性史泊格多利大白鼠的组经静脉内投与1mg/kg总GLP-2肽体K274蛋白质。向第三组五只雄性史泊格多利大白鼠的组经皮下投与1mg/kg总GLP-2肽体B蛋白质。向第四组五只雄性史泊格多利大白鼠的组经皮下投与1mg/kg总GLP-2肽体B264蛋白质。
对于全部以上组，给药前及在给药后以下时间点采取血浆样本：5分钟(第1天)、10分钟(第1天)、20分钟(第1天)、30分钟(第1天)、1小时(第1天)、2小时(第1天)、6小时(第1天)、24小时(第2天)、48小时(第3天)、72小时(第4天)、120小时(第6天)、168小时(第8天)、240小时(第11天)及336小时(第15天)。
展示药物动力学数据的表位于图10B中，所述药物动力学数据比较静脉内投与的GLP-2肽体K及GLP-2肽体K274。展示药物动力学数据的表位于图10C中，所述药物动力学数据比较皮下投与的GLP-2肽体K及GL-2肽体K274。数据展示GLP-2肽体K与GLP-2肽体K274自药物动力学观点来看相同。
实例10：利用替度鲁肽、GLP-2肽体B及GLP-2肽体K进行的食蟹猕猴药物动力学研究
在以瓜氨酸作为GLP-2浓度的生物标记分析的食蟹猕猴中形成替度鲁肽、GLP-2肽体B及GLP-2肽体K的药物动力学研究。在研究中，在第1天向6只雄性食蟹猕猴的组皮下投与12.5nmol/kg替度鲁肽。随后对于一个2只猴子的组，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天静脉内投与25nmol/kg GLP-2肽体B。对于另一个3只猴子的组，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天皮下投与25nmol/kg GLP-2肽体。对于猴子的另一组，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天静脉内(2只猴子)及皮下(3只猴子)投与5nmol/kg GLP-2肽体K。对于猴子的另一组，在第7天、第21天、第28天、第35天及第42天皮下(3只猴子)及静脉内(2只猴子)投与25nmol/kgGLP-2肽体K。
皮下替度鲁肽的结果显示于图11A中。缔合常数(ka)为9.67天-1(SD＝1.3，13％)，CL/F为7,400毫升/天/公斤(SD＝580，8％)且Vc为218mL/kg(SD＝39，18％)。
静脉内及皮下GLP-2肽体B的结果显示于图11B中。对于0.75mg/kg的静脉内剂量的单次剂量药物动力学(SDPK)，CL为9.5毫升/天/公斤(SD＝3.2，33％)，Vc为17.1mL/kg(SD＝3.3，19％)，Vt为27.6mL/kg(SD＝7.2，26％)，且Q为26.7毫升/天/公斤(SD＝2.3，24％)。对于0.75mg/kg的静脉内剂量的多次剂量药物动力学(MDPK)，CL为10.0毫升/天/公斤(SD＝3.3，33％)，Vc为18.7mL/kg(SD＝3.8，21％)，Vt为32.9mL/kg(SD＝7.7，23％)，且Q为28.9毫升/天/公斤(SD＝7.6，26％)。对于SDPK(皮下，0.75mg/kg)，缔合常数(ka)为1.52天-1(SD＝0.37，24％)，CL/F为17.7毫升/天/公斤(SD＝14，80％)且Vc为92.4mL/kg(SD＝32，35％)。对于MDPK(皮下，0.75mg/kg)，缔合常数(ka)为1.59天-1(SD＝0.23，16％)，CL/F为17.7毫升/天/公斤(SD＝4.2，24％)且Vc为94.0mL/kg(SD＝30，32％)。
静脉内及皮下GLP肽体K的结果显示于图11C中。对于SDPK(静脉内，0.75mg/kg)，CL为17.2毫升/天/公斤(SD＝1.2，7％)，Vc为32.3mL/kg(SD＝1.0，3％)，Vt为32.9mL/kg(SD＝12，37％)，且Q为29.1毫升/天/公斤(SD＝2.3，8％)。对于MDPK(静脉内，0.75mg/kg)，CL为19.3毫升/天/公斤(SD＝1.5，8％)，Vc为36.5mL/kg(SD＝2.0，5％)，Vt为33.9mL/kg(SD＝5.1，15％)，且Q为27.0毫升/天/公斤(SD＝9.5，23％)。对于SDPK(皮下，0.75mg/kg)，缔合常数(ka)为1.56天-1(SD＝0.49，31％)，CL/F为33.0毫升/天/公斤(SD＝6.7，20％)且Vc为107mL/kg(SD＝16，15％)。对于MDPK(皮下，0.75mg/kg)，缔合常数(ka)为1.70天-1(SD＝0.45，26％)，CL/F为32.4毫升/天/公斤(SD＝5.8，18％)且Vc为111mL/kg(SD＝20，17％)。
尽管从食蟹猕猴PK数据预计每周一次(QW)30μg/kg的剂量，但剂量应高于十倍(300μg/kg)以调节活体内效能的差异。下表展示对人类的静脉内及皮下参数的预计结果，CL的指数等于0.85，食蟹猕猴体重等于3.5kg，且人体体重等于70kg。
表8
<u>化合物</u> <u>ka(天<sup>-1</sup>)</u> <u>CL(mL/天/kg)</u> <u>Vc(mL/kg)</u> <u>Vt(mL/kg)</u> <u>Q(mL/天/kg)</u> <u>F(％)</u>
GLP-2肽体B 2.43 39.2(25.0) 49.4 42.5 24.1(15.4) 98(60)
GLP-2肽体K 1.40 24.2(15.4) 38.5 36.1 56.4(36.0) 86(60)
对于1.5mL皮下注射，浓度将为15mg/mL。对于2.0mL皮下注射，浓度将为10mg/mL。
实例11：利用GLP-2肽体K274进行的药效学平台研究
在雌性CD-1小鼠中分析各种剂量的GLP-2肽体K274以评估药效学平台，原始端点为小肠体重相对于总体重的测量结果及绒毛长度的组织学研究。形成各自具有六只雌性的八个组。在两个组中，Q3D仅投与媒剂以作为阴性对照。在四个组中，历经14天Q3D投与以下剂量：0.45mg/kg、1.5mg/kg、4.5mg/kg及15mg/kg。在一个额外组中，历时14天Q3D投与4.5mg/kg，研究在第18天之后四天终止。在另一额外组中，历时14天Q3D投与4.5mg/kg，研究在第21天之后七天终止。各组概述于下表9中。
表9
Figure BDA0002432722530000581
Figure BDA0002432722530000591
对于原始端点，以克为单位的小肠体重显示于图12A中，对体重归一化的小肠体重显示于图12B中，且对体重归一化的结肠体重显示于图12C中。4.5mg/kg的剂量具有最大效果。
另外，对体重归一化的小肠体重增加的效果在给药后保持至少五天，如图13A中所示。图13B是描绘对于媒剂及GLP-2肽体K274两者的小肠体重的百分比变化的曲线图。
对于组织学研究，制备4微米石蜡切片以用于H&E及Ki67染色。在全载片扫描之后，使用显像器获取绒毛长度测量，腺管深度测量及Ki67分析。Ki67染色结果显示于图13C中。利用Ki67阳性百分比进行的剂量-反应研究及清除研究结果显示于图13D中。
展示经媒剂处理及经15mg/kgGLP-2肽体K274治疗(历经14天Q3D)的绒毛长度的组织学载片描绘于图13E中。测量上文不同组的以微米为单位的绒毛长度，结果显示于图13F中。测量上文不同组的以微米为单位的腺管深度，结果显示于图13G中。
实例12：利用GLP-2[A2G]进行的药效学平台研究
在组织学研究中于CD-1小鼠中分析GLP-2[A2G]肽以评估绒毛长度及腺管深度。使用肽合成器制备此研究中使用的GLP-2[A2G]肽。形成各自具有六只雌性的八个组。在两个组中，一天两次(BID)仅投与媒剂以作为阴性对照。在六个组中，历经15天BID投与以下剂量：0.0125mg/kg、0.025mg/kg、0.050mg/kg、0.100mg/kg、0.250mg/kg及0.500mg/kg。在一个额外组中，历时14天BID投与0.500mg/kg，研究在第16天之后两天终止。在另一额外组中，历时14天BID投与0.500mg/kg，研究在第18天之后两天终止。在又一额外组中，历时10天BID投与0.500mg/kg，研究在第21天之后两天终止。各组概括于下表10中。
表10
Figure BDA0002432722530000592
Figure BDA0002432722530000601
对于组织学研究，制备4微米石蜡切片以用于H&E及Ki67染色。在全载片扫描之后，使用显像器获取绒毛长度测量，腺管深度测量及Ki67分析。Ki67染色显示于图14A中。利用Ki67阳性百分比进行的剂量-反应研究的结果显示于图14B中。
图14C展示历经15天BID投与媒剂、0.05mg/kg GLP-2[A2G]及0.5mg/kg GLP-2[A2G]的剂量的雄性中的Ki67阳性程度，以及历经15天以相同方式投与的雄性及雌性之间的比较。
展示经媒剂处理及经0.5mg/kg GLP-2[A2G]治疗(历经14天BID)的绒毛长度的组织学载片描绘于图14D中。测量上文不同组的以微米为单位的绒毛长度，结果显示于图14E中。图14F展示历经15天BID投与媒剂、0.05mg/kg GLP-2[A2G]及0.5mg/kg GLP-2[A2G]的剂量的雄性中的绒毛长度，以及历经15天以相同方式投与的雄性及雌性之间的比较。
测量上文不同组的以微米为单位的腺管深度，结果显示于图14G中。图14H展示历经15天BID投与媒剂、0.05mg/kg GLP-2[A2G]及0.5mg/kg GLP-2[A2G]的剂量的雄性中的腺管深度，以及历经15天以相同方式投与的雄性及雌性之间的比较。
实例13：利用GLP-2[A2G]、GLP肽体B264及GLP肽体K274进行的剂量-反应研究
分析使用肽合成器制备的各种剂量的GLP-2[A2G]肽以评估药物动力学及药力学，原始端点为以克为单位的绝对小肠体重及呈总体重的百分比形式的相对小肠体重的测量。形成各自具有六只雌性的三个组，如下表11中所展示：
表11
<u>组</u> <u>测试试剂</u> <u>剂量(mg/kg/天)</u> <u>给药频率</u> <u>研究持续时间</u>
1 媒剂1 n/a BID 14天
2 GLP-2[A2G] 0.050 BID 14天
3 GLP-2[A2G] 0.500 BID 14天
分析各种剂量的GLP-2肽体B264以评估药物动力学及药力学，原始端点为以克为单位的绝对小肠体重及呈总体重的百分比形式的相对小肠体重的测量。形成各自具有六只雌性CD-1小鼠的八个组。在两个组中，每三天(Q3D)仅投与媒剂作为阴性对照。这些组中的一者的研究持续时间为14天且另一组的研究持续时间为21天。在四个额外组中，历经14天Q3D投与以下剂量：0.45mg/kg、1.5mg/kg、4.5mg/kg、15mg/kg。在一个额外组中，历时14天Q3D投与4.5mg/kg，研究持续时间为18天。在一个额外组中，历时14天Q3D投与4.5mg/kg，研究持续时间为21天。这些全部组概括于下表12中。
表12
<u>组</u> <u>测试试剂</u> <u>剂量(mg/kg)</u> <u>给药频率</u> <u>研究持续时间</u>
1 媒剂1 n/a 每3天1次 14天
2 媒剂2 n/a 每3天1次 21天
3 GLP肽体B264 0.45 每3天1次 14天
4 GLP肽体B264 1.5 每3天1次 14天
5 GLP肽体B264 4.5 每3天1次 14天
6 GLP肽体B264 15 每3天1次 14天
7 GLP肽体B264 4.5 仅14天每3天1次 18天
8 GLP肽体B264 4.5 仅14天每3天1次 21天
对于以上GLP-2[A2G]及GLP-2肽体B264组的原始端点，以克为单位的小肠体重显示于图15A中且对体重归一化的小肠体重显示于图15B中。在第15天时间点，图15C展示呈体重百分比形式的小肠体重。在X轴上，剂量以mg/kg列出。
图15D是展示在第15天肠重量相对于对照的百分比变化的曲线图。
对于以上第1组、第2组、第5组、第7组及第8组，进行小肠体重相比于总体重的分析。结果展示于图15E中。在关于GLP-2肽体B264的图15E中，“媒剂2，给药后2d”对应于第14天的第1组，“给药后2d”对应于第14天的第5组，“给药后4d”对应于第18天的第7组，“给药后8d”对应于第20天的第8组，且“媒剂2，给药后8d”对应于第20天的第2组。
图16概括相对于对照及清除，GLP-2肽体K274及GLP-2肽体B264两者的小肠体重的相对变化。
实例14：GLP-2肽体B264中的绒毛长度及腺管深度的组织学研究
分析各种剂量的GLP-2肽体B264以评估药效学平台，原始端点为小肠体重相对于总体重的测量及绒毛长度的组织学研究。形成各自具有六只雌性CD-1小鼠的11个组。各组概括于下表13中。
表13
Figure BDA0002432722530000611
Figure BDA0002432722530000621
对于组织学，制备四微米石蜡切片以用于H&E及Ki67染色。在全载片扫描之后，使用显像器测量绒毛长度及腺管深度，且分析Ki67。对Ki67的抗体是
Figure BDA0002432722530000622
所出售的兔抗体，目录号ab 616667。以1:100的工作浓度使用抗体且使用
Figure BDA0002432722530000623
试剂盒。Ki67染色结果显示于图17A中。利用Ki67阳性百分比进行的剂量-反应研究及清除研究结果显示于图17B中。
媒剂与经0.5mg/kg/天GLP-2[A2G]治疗的组之间的比较显示于图17C中。媒剂与经15mg/kg GLP-2肽体B264治疗的组之间的比较显示于图17D中。测量上文第1组及第2组(GLP-2[A2G])的以微米为单位的绒毛长度，结果显示于图17E中。测量以上第1至3组(媒剂及GLP-2[A2G])的以微米为单位的绒毛长度，结果显示于图17E中。测量以上第4组及第6至9组(媒剂及GLP-2肽体B264)的以微米为单位的绒毛长度，结果显示于图17F中。测量以上第4组、第5组及第9-11组(媒剂及GLP-2肽体B264)的以微米为单位的绒毛长度，结果显示于图17G中。
图18中展示在各种剂量下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。图19展示在历经14天的Q3D给药方案结束之后在清除期期间各种时间点下的4.5mg/kgGLP-2肽体B264及4.5mg/kg GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。清除期结束之后的第一天为第15天，第二天为第16天等。清除期的第2天对应第15天。清除期的第5天对应第18天。清除期的第8天对应第21天。D15、D18及D21对应于测量绒毛长度的第15天、第18天及第21天。
实例15：小鼠药物动力学及药力学测试数据的概述
图20A展示历经14天Q3D给药方案GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274浓度之间的比较。实线是预测浓度且圆点表示各种观测到的浓度。
图20B展示小鼠中的GLP-2肽体B264及GLP-2肽体K274的药物动力学数据的概述。
图20C展示在各种剂量下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。图20D展示在各种浓度下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的绒毛长度的比较。
图20E展示在各种剂量下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的比较，原始端点为呈体重百分比形式的小肠重量。图20F展示在各种浓度下GLP-2肽体B264与GLP-2肽体K274之间的比较，原始端点为呈体重百分比形式的小肠重量。
实例16：GLP-2肽体K274促进膳食脂肪吸收
在小鼠中进行脂肪耐受性分析以评估GLP-2肽体K274促进膳食脂肪吸收的能力。膳食脂肪经水解为游离脂肪酸及甘油酯，其经由肠道绒毛传输且由肠上皮细胞吸收。肠上皮细胞合成三酸甘油酯，其随后进入血流。所述餐后三酸甘油酯在摄入富脂肪餐食约3小时之后在血流中达到峰值。
假设在短肠综合症的小鼠模型中，GLP-2肽体K274通过提高肠道绒毛的长度将改善脂肪酸的吸收。对波峰餐后三酸甘油酯的增加的分析允许检测所述增加的吸收。
将雌性小鼠分成各自具有30只小鼠的两个组。利用4.5mg/kg K274肽体(治疗组)或媒剂(对照组)历时总计13天每3天治疗两组。在开始治疗之后的第14天，将两组中的小鼠禁食6小时，之后投与10mL/kg橄榄油食团。将治疗及对照组中的小鼠分成各自具有6只动物的6个子组。分别在0min、15min、30min、1小时、2小时或3小时之后从6个小鼠/亚组获取100μL血液样本。将所述血液收集至K2EDTA试管且离心以获得血浆。使用TRIGB分析试剂盒在Cobas C311仪器(Roche)测量血浆三酸甘油酯浓度。
数据展示于图21中。血流中的餐后三酸甘油酯浓度在用GLP-2肽体K274治疗的小鼠中显著较高，表明GLP-2肽体K274提高脂肪酸的吸收。
***
本发明的范围不受本文所述的特定实施例限制。实际上，根据前文描述及附图，除本文所述的修改之外，本发明的各种修改对所属领域的技术人员来说将变得显而易见。所述修改旨在属于所附权利要求书的范围内。应进一步理解，全部值经估算且提供以用于描述。
贯穿本申请案列举专利、专利申请案、公开案、产品描述及协议，以上各者的揭示内容出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。
序列表
<110> 夏尔-NPS医药品有限公司
C·潘(Pan, Clark)
A·诺顿(Norton, Angela)
B·施特拉克-洛格(Strack-Logue, Bettina)
K·孙(Sun, Kefeng)
<120> GLP-2融合多肽及用于治疗及预防胃肠病症的用途
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<150> US 62/548,601
<151> 2017-08-22
<150> US 62/621,144
<151> 2018-01-24
<150> US 62/659,394
<151> 2018-04-18
<160> 31
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
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<212> PRT
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<220>
<223> 智人
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gaagtgcata acgcgaaaac caaaccgcgc gaagaacagt ataacagcac ctatcgcgtg 420
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<223> 智人
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<223> 智人
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gcgccggaag cggcgggcgg cccgagcgtg tttctgtttc cgccgaaacc gaaagatacc 420
ctgatgatta gccgcacccc ggaagtgacc tgcgtggtgg tggatgtgag ccatgaagat 480
ccggaagtga aatttaactg gtatgtggat ggcgtggaag tgcataacgc gaaaaccaaa 540
ccgcgcgaag aacagtataa cagcacctat cgcgtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat 600
caggattggc tgaacggcaa agaatataaa tgcaaagtga gcaacaaagc gctgccggcg 660
ccgattgaaa aaaccattag caaagcgaaa ggccagccgc gcgaaccgca ggtgtatacc 720
ctgccgccga gccgcgatga actgaccaaa aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaaa 780
ggcttttatc cgagcgatat tgcggtggaa tgggaaagca acggccagcc ggaaaacaac 840
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Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
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Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> 智人
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Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
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130 135 140
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
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Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
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gatggcagct tttttctgta tagcaaactg accgtggata aaagccgctg gcagcagggc 780
aacgtgttta gctgcagcgt gatgcatgaa gcgctgcata accattatac ccagaaaagc 840
ctgagcctga gcccgggc 858
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<213> 人工序列
<220>
<223> 智人
<400> 25
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
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<213> 人工序列
<220>
<223> 智人
<400> 26
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
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Ile Leu Asp Asn Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln
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<213> 人工序列
<220>
<223> 智人
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Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys
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405 410 415
Lys Thr Tyr Lys Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro
420 425 430
His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu
435 440 445
Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu
450 455 460
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465 470 475 480
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485 490 495
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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<223> 智人
<400> 31
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr
20 25 30
Ile Leu Asp Asn Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln
35 40 45
Thr Lys Ile Thr Asp His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn
50 55 60
Thr Ile Leu Asp Asn Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile
65 70 75 80
Gln Thr Lys Ile Thr Asp Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg
85 90 95
Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala
100 105 110
Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu
115 120 125
Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser
130 135 140
Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu
145 150 155 160
Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys
165 170 175
Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys
180 185 190
Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val
195 200 205
Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr
210 215 220
Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln
245 250 255
Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg
260 265 270
Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser
275 280 285
Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg
290 295 300
Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu
305 310 315 320
Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu
325 330 335
Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu
340 345 350
Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro
355 360 365
Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met
370 375 380
Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp
385 390 395 400
Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe
405 410 415
Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu
420 425 430
Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Lys Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala
435 440 445
Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys
450 455 460
Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu
465 470 475 480
Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg
485 490 495
Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val
500 505 510
Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu
515 520 525
Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn
530 535 540
Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr
545 550 555 560
Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala
565 570 575
Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr
580 585 590
Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln
595 600 605
Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys
610 615 620
Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe
625 630 635 640
Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu
645 650 655
Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Arg Ala Ala Leu Gly Leu
660 665 670

Claims (106)

1.一种类胰高血糖素肽GLP-2肽体，其选自由以下组成的群组，
a)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:1)，
b)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:4)，
c)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:7)，
d)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
GDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:10)，
e)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:13)，
f)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:16)，
g)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:19)，
h)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:22)，
i)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:25)及
j)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:28)；或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的GLP-2肽体，其中所述GLP-2肽体包括以下氨基酸序列：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:1)，或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的GLP-2肽体，其中所述GLP-2肽体包括以下氨基酸序列：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:7)，或其药学上可接受的盐。
4.一种医药组合物，其包括根据权利要求1所述的GLP-2肽体和载剂或药学上可接受的赋形剂。
5.一种医药组合物，其包含根据权利要求2所述的GLP-2肽体和载剂或药学上可接受的赋形剂。
6.一种医药组合物，其包括根据权利要求3所述的GLP-2肽体和载剂或药学上可接受的赋形剂。
7.根据权利要求4到6中任一权利要求所述的医药组合物，其调配为适用于通过注射或输液投与的液体。
8.根据权利要求4到6中任一权利要求所述的医药组合物，其经调配以用于所述GLP-2肽体的持续释放、缓释、延迟释放或缓慢释放。
9.根据权利要求1到8中任一权利要求所述的医药组合物，其中所述投与的GLP-2肽体的浓度为10到200mg/mL。
10.根据权利要求1到8中任一权利要求所述的医药组合物，其中所述投与的GLP-2肽体的浓度为10到25mg/mL。
11.一种聚核苷酸，其包括编码GLP-2前驱体多肽的序列，所述GLP-2前驱体多肽选自由以下组成的群组：
a)包括以下氨基酸序列的GLP-2肽体：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:2)，
b)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:5)，
c)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ IDNO:8)，
d)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:11)，
e)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:14)，
f)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:17)，
g)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPGGGGGAAAAAGGGGGGAPDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:20)，
h)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:23)，
i)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:26)以及
j)包括以下氨基酸序列的GLP-2前驱体多肽：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGGSGGGGSGGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(SEQ ID NO:29)。
12.一种聚核苷酸，其包括编码GLP-2前驱体多肽的序列，所述GLP-2前驱体多肽包括以下氨基酸序列：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:1)。
13.根据权利要求12所述的聚核苷酸，其中编码所述GLP-2肽体的所述序列包括SEQ IDNO:3的聚核苷酸序列。
14.一种聚核苷酸，其包括编码GLP-2前驱体多肽的序列，所述GLP-2前驱体多肽包括以下氨基酸序列：
METPAQLLFLLLLWLPDTTGHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITDGGGGSGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ IDNO:8)。
15.根据权利要求14所述的聚核苷酸，其中编码所述GLP-2前驱体多肽的所述序列包括SEQ ID NO:9的聚核苷酸序列。
16.一种载体，其包括根据权利要求11到14中任一权利要求所述的聚核苷酸。
17.一种宿主细胞，其包括根据权利要求11到14中任一权利要求所述的聚核苷酸。
18.根据权利要求17所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为中国仓鼠卵巢细胞。
19.根据权利要求18所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞以足以达到分批补料细胞培养规模的水平表达根据权利要求1所述的GLP-2肽体。
20.一种用于治疗患有肠外瘘ECF的患者的方法，其包括使用可有效促进所述ECF的闭合、愈合及/或修复的给药方案利用根据权利要求1所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
21.一种用于治疗患有肠外瘘ECF的患者的方法，其包括使用可有效促进所述ECF的闭合、愈合及/或修复的给药方案利用根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
22.根据权利要求20或权利要求21所述的方法，其中所述方法可有效促进所述患者的肠道吸收。
23.根据权利要求20或权利要求21所述的方法，其中所述方法可有效减少所述患者中胃分泌物的体积。
24.根据权利要求20或权利要求21所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。
25.根据权利要求20或权利要求21所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。
26.根据权利要求20到25中任一权利要求所述的方法，其中经皮下投与所述GLP-2肽体。
27.根据权利要求26所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与所述GLP-2肽体。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
29.根据权利要求26所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
31.根据权利要求20到25中任一权利要求所述的方法，其中经静脉内投与所述GLP-2肽体。
32.根据权利要求31所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与所述GLP-2肽体。
33.根据权利要求30所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
34.根据权利要求31所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
36.一种用于治疗患有阻塞性黄疸的患者的方法，其包括使用可有效治疗所述阻塞性黄疸的给药方案利用根据权利要求1所述的GLP-2肽体来治疗所述患者。
37.一种用于治疗患有阻塞性黄疸的患者的方法，其包括使用可有效治疗所述阻塞性黄疸的给药方案利用根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体来治疗所述患者。
38.根据权利要求36或权利要求37所述的方法，其中血清胆红素的含量与所述治疗之前血清胆红素的含量相比有所降低。
39.根据权利要求36或权利要求37所述的方法，其中所述方法可有效促进所述患者的肠道吸收。
40.根据权利要求36或权利要求37所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。
41.根据权利要求36或权利要求37所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。
42.根据权利要求36或权利要求37所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。
43.根据权利要求36或权利要求37所述的方法，其中所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能且降低细菌易位穿过所述患者的小肠的速率。
44.根据权利要求36到43中任一权利要求所述的方法，其中经皮下投与所述GLP-2肽体。
45.根据权利要求44所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与所述GLP-2肽体。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为0.3至1.0mg/mL。
47.根据权利要求44所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与所述GLP-2肽体。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
49.根据权利要求36到43中任一权利要求所述的方法，其中经静脉内投与所述GLP-2肽体。
50.根据权利要求49所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与所述GLP-2肽体。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为0.3至1.0mg/mL。
52.根据权利要求47所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
54.一种用于治疗或预防对患者的胃肠道的辐射损伤的方法，其包括使用可有效治疗或预防对所述患者的所述胃肠道的辐射损伤的给药方案利用根据权利要求1所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
55.一种用于治疗或预防对患者的胃肠道的辐射损伤的方法，其包括使用可有效治疗或预防对所述患者的所述胃肠道的辐射损伤的给药方案利用根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
56.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述辐射损伤在所述小肠中。
57.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述方法可有效减少所述胃肠道的细胞中的细胞凋亡。
58.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。
59.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。
60.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。
61.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能。
62.根据权利要求54到61中任一权利要求所述的方法，其中经皮下投与所述GLP-2肽体。
63.根据权利要求62所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与所述GLP-2肽体。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
65.根据权利要求62所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
67.根据权利要求54到61中任一权利要求所述的方法，其中经静脉内投与所述GLP-2肽体。
68.根据权利要求65所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与所述GLP-2肽体。
69.根据权利要求66所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
70.根据权利要求65所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
71.根据权利要求66所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
72.一种用于治疗或预防患者中的辐射诱发的肠炎的方法，其包括使用可有效治疗或预防所述患者中的辐射诱发的肠炎的给药方案利用根据权利要求1所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
73.一种用于治疗或预防患者中的辐射诱发的肠炎的方法，其包括使用可有效治疗或预防对所述患者的胃肠道的辐射损伤的给药方案利用根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
74.根据权利要求72或权利要求73所述的方法，其中所述方法可有效减少所述胃肠道的细胞中的细胞凋亡。
75.根据权利要求72或权利要求73所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。
76.根据权利要求72或权利要求73所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。
77.根据权利要求72或权利要求73所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管组织。
78.根据权利要求72或权利要求73所述的方法，其中所述方法可有效改善所述患者中的肠屏障功能。
79.根据权利要求72到78中任一权利要求所述的方法，其中经皮下投与所述GLP-2肽体。
80.根据权利要求79所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与所述GLP-2肽体。
81.根据权利要求80所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
82.根据权利要求79所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
84.根据权利要求72到78中任一权利要求所述的方法，其中经静脉内投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
85.根据权利要求82所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与所述GLP-2肽体。
86.根据权利要求83所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
87.根据权利要求82所述的方法，其中根据每5至8天一次在0.3至1.0mg/kg之间的给药方案经静脉内投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
88.根据权利要求83所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
89.一种用于治疗呈现结肠与残余小肠连续性的患有短肠综合症的患者的方法，其包括使用可有效治疗所述短肠综合症的给药方案利用根据权利要求1所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
90.一种用于治疗呈现结肠与残余小肠连续性的患有短肠综合症的患者的方法，其包括使用可有效治疗所述短肠综合症的给药方案利用根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体治疗所述患者。
91.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述残余小肠的长度为至少25cm、至少50cm或至少75cm。
92.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述方法可有效促进所述患者的肠道吸收。
93.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的绒毛高度。
94.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述方法可有效增加所述患者的小肠中的腺管深度。
95.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述方法可有效降低粪便湿重，增加尿液湿重，增加穿过所述小肠的能量吸收，或增加穿过所述小肠的水吸收。
96.根据权利要求89或权利要求90所述的方法，其中所述患者依赖于不经肠营养。
97.根据权利要求87到96中任一权利要求所述的方法，其中经皮下投与所述GLP-2肽体。
98.根据权利要求97所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与所述GLP-2肽体。
99.根据权利要求98所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
100.根据权利要求97所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经皮下投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
102.根据权利要求87到96中任一权利要求所述的方法，其中经静脉内投与所述GLP-2肽体。
103.根据权利要求102所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与所述GLP-2肽体。
104.根据权利要求103所述的方法，其中所述所投与的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
105.根据权利要求100所述的方法，其中根据每2至14天一次在0.2至1.4mg/kg之间的给药方案经静脉内投与根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体。
106.根据权利要求105所述的方法，其中所述所投与的根据权利要求2或权利要求3所述的GLP-2肽体的浓度为10至200mg/mL。
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