CN114073775A - 用于跨血脑屏障递送的组合治疗 - Google Patents

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田梅梅
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Abstract

提供了涉及包含免疫球蛋白Fc区的多肽和靶向中枢神经系统(CNS)的抗体或Fc融合多肽缀合物的共同给药的组合物和方法，以改善缀合物跨血脑屏障(BBB)的药代动力学和/或递送。还提供了治疗CNS适应症和疾病以及具有CNS组分的适应症和疾病的方法。

Description

用于跨血脑屏障递送的组合治疗
序列表
与本申请相关的序列表在下列表中提供。
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年8月13日递交的第63/065,492号美国临时申请的权益，其通过引用整体并入本文。
本申请涉及2019年6月22日递交的第62/865,166号美国临时专利申请、2018年5月27日递交的第US 62/677,008号美国临时专利申请、2017年5月15日递交的第62/506,316号美国临时专利申请，以及2016年5月12日递交的第62/335,285号美国临时专利申请，其中的每项都通用引用整体并入本文。
背景技术
技术领域
本发明的实施方案涉及用于包含免疫球蛋白Fc区的多肽和靶向中枢神经系统(CNS)的抗体或Fc融合多肽缀合物的共同给药的组合物和方法，例如，以改善药代动力学和/或递送缀合物跨血脑屏障(BBB)并进入中枢神经系统(CNS)的组织中。
相关领域的描述
克服将治疗或诊断剂递送到脑特定区域的困难代表了对许多中枢神经系统(CNS)病症的治疗或诊断，包括脑的那些的重大挑战。在其神经保护作用中，血脑屏障(BBB)发挥功能来阻碍将许多潜在的重要诊断和治疗剂递送至脑。
可能对诊断和治疗有效的治疗分子和基因不会以足够的量穿过BBB。据报道，全部治疗分子中超过95％不能穿过血脑屏障。
因此，需要有利于治疗剂和其他分子跨血脑屏障的组合物和方法，例如以有效治疗中枢神经系统(CNS)的某些疾病如癌症，特别是已经转移到CNS的那些。本发明解决了这些需求并提供了其他相关的优点。
发明概述
本发明的实施方案包括药物组合物，其包含：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含连接至(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽的血脑屏障(BBB)运输部分。
在某些实施方案中，(a)是抗体，其任选地不同于部分(b)的抗体。在某些实施方案中，(a)的抗体的可变区实质上不结合人抗原。
在某些实施方案中，(a)包含人类免疫球蛋白Fc区。在某些实施方案中，人类免疫球蛋白Fc区包含来自表A1的序列、由来自表A1的序列组成，或基本上由来自表A1的序列组成，包括其组合、变体和片段。在某些实施方案中，人类免疫球蛋白Fc区包含来源于人IgA1、人IgA2、人IgD、人IgE、人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgM的Fc区、由所述Fc区组成，或基本上由所述Fc区组成，任选地如表A1中的序列所定义的。
在某些实施方案中，(b)是包含Fc区或Fc区的一部分的人IgA1抗体、人IgA2抗体、人IgD抗体、人IgE抗体、人IgG1抗体、人IgG2抗体、人IgG3抗体、人IgG4抗体或人IgM抗体，或以上的片段。
在某些实施方案中，BBB运输部分选自以下中的一种或多种：p97(黑素转铁蛋白)多肽、受体相关蛋白(RAP)、抑肽酶肽或其类似物、蛋白传导域(PTD)、人低密度脂蛋白受体(hLDLR)结合肽或其类似物、结合BBB相关受体的抗体或天然配体，和谷胱甘肽(GSH)。
在某些实施方案中，p97多肽包含表B1或表B2中的序列或其活性变体或片段、由表B1或表B2中的序列或其活性变体或片段组成，或者基本上由表B1或B2中的序列或其活性变体或片段组成。在具体的实施方案中，p97多肽包含DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)，或是可溶性的人p97多肽。
在某些实施方案中，RAP包含表B3中的序列或其活性变体或片段，或由表B3中的序列或其活性变体或片段组成。在某些实施方案中，抑肽酶肽包含表B4中的序列或其活性变体或片段，或由表B3中的序列或其活性变体或片段组成。在某些实施方案中，PTD包含表B5中的序列或活性变体或片段，或由表B5中的序列或活性变体或片段组成。在某些实施方案中，hLDLR结合肽包含表B6中的序列或活性变体或片段，或由表B6中的序列或活性变体或片段组成。在某些实施方案中，BBB相关受体选自以下中的一种或多种：胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦素受体、脂蛋白受体如脂蛋白受体相关的蛋白(LRP-1)受体、胰岛素样生长因子(IGF)受体如IGF1R和IGF2R、低密度脂蛋白受体、白喉毒素受体和TMEM 30A(翻转酶)。在某些实施方案中，BBB相关受体配体选自以下中的一种或多种：胰岛素、转铁蛋白和转铁蛋白片段、乳铁蛋白和乳铁蛋白片段、载脂蛋白A(Apo A)、载脂蛋白B(Apo B)、载脂蛋白E(ApoE)和白喉毒素(包括其无毒性的突变体如CRM45和CRM197)。
在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段包含免疫球蛋白Fc区。在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合以下中的一种或多种：人Her2/neu、Her1/EGFR、TNF-α、B7H3抗原、CD20、VEGF、CD52、CD33、CTLA-4、肌腱蛋白、alpha-4(α4)整合素、IL-23、淀粉样蛋白-β如Aβ(1-42)、亨廷顿蛋白、CD25、神经生长因子(NGF)、TrkA或α-突触核蛋白。在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合细胞表面受体。在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合细胞表面受体的配体。
在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合癌症相关抗原。在某些实施方案中，癌症相关抗原或癌症抗原选自以下中的一种或多种：人Her2/neu、Her1/EGF受体(EGFR)、Her3、A33抗原、B7H3、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受体)、C242抗原、5T4、IL-6、IL-13、血管内皮生长因子VEGF(例如，VEGF-A)VEGFR-1、VEGFR-2、CD30、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD152、CD200、CD221、CCR4、HLA-DR、CTLA-4、NPC-1C、肌腱蛋白、波形蛋白、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、甲胎蛋白、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碳酸酐酶9(CA-IX)、癌胚抗原(CEA)、整合素αvβ3、整合素α5β1、叶酸受体1、跨膜糖蛋白NMB、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、糖蛋白75、TAG-72、MUC1、MUC16(或CA-125)、磷脂酰丝氨酸、前列腺特异性膜抗原(PMSA)、NR-LU-13抗原、TRAIL-R1、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B或TRAIL-R2)、SLAM家族成员7(SLAMF7)、EGP40泛癌抗原、B细胞活化因子(BAFF)、血小板来源的生长因子受体、糖蛋白EpCAM(17-1A)、程序性死亡-1、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、前列腺酸性磷酸酶、Lewis-Y抗原、GD2(神经外胚层来源的肿瘤上表达的唾液酸神经节苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)和间皮素。
在某些实施方案中，抗体选自：曲妥珠单抗(trastuzumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、达利珠单抗(daclizumab)、他尼珠单抗(tanezumab)、3F8、8H9、阿巴伏单抗(abagovomab)、阿德木单抗(adecatumumab)、阿夫土珠单抗(afutuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、(培化)阿珠单抗(alacizumab(pegol))、阿麦妥昔(amatuximab)、阿泊珠单抗(apolizumab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝妥莫单抗(bectumomab)、贝利木单抗(belimumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、莫-比伐珠单抗(bivatuzumab(mertansine))、贝伦妥单抗-维多汀(brentuximab vedotin)、莫-坎妥珠单抗(cantuzumab(mertansine))、拉-坎妥珠单抗(cantuzumab(ravtansine))、卡罗单抗-喷地肽(capromab(pendetide))、卡妥索单抗(catumaxomab)、泊-西他珠单抗(citatuzumab(bogatox))、西妥木单抗(cixutumumab)、clivatuzumab(tetraxetan)、可那木单抗(conatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、达洛珠单抗(dalotuzumab)、地莫单抗、drozitumab、依美昔单抗(ecromeximab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依洛珠单抗(elotuzumab)、enavatuzumab、恩司昔单抗(ensituximab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄马索单抗(ertumaxomab)、埃达珠单抗(etaracizumab)、法勒珠单抗(farletuzumab)、FBTA05、芬妥木单抗(figitumumab)、flanvotumab、加利昔单抗(galiximab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、ganitumab、吉妥珠单抗-奥佐米星(Gemtuzumab(ozogamicin))、吉瑞昔单抗(girentuximab)、格莱木单抗-维多汀(glembatumumab(vedotin))、替-伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、icrucumab、伊戈伏单抗(igovomab)、拉-英达西单抗(indatuximab ravtansine)、英妥木单抗(intetumumab)、伊珠单抗-奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)、伊匹木单抗(ipilimumab)(MDX-101)、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、来沙木单抗(lexatumumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、莫-洛伏珠单抗(lorvotuzumab(mertansine))、鲁卡木单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫加珠单抗(mogamulizumab)、moxetumomab(pasudotox)、他那可单抗(nacolomab(tafenatox))、他那莫单抗(naptumomab(estafenatox))、narnatumab、奈昔木单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nivolumab、
Figure BDA0003210674900000051
(具有或没有放射性碘)、NR-LU-10、奥法木单抗(ofatumumab)、olaratumab、奥纳珠单抗(onartuzumab)、莫奥珠单抗(oportuzumab(monatox))、奥戈伏单抗(oregovomab)、帕尼单抗(panitumumab)、帕曲土单抗(patritumab)、pemtumomab、培妥珠单抗(pertuzumab)、普立木单抗(pritumumab)、雷妥莫单抗(racotumomab)、radretumab、雷莫芦单抗(ramucirumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、罗妥木单抗(robatumumab)、奥马珠单抗(samalizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、tabalumab、帕-他莫单抗(taplitumomab(paptox))、替妥莫单抗(tenatumomab)、替妥木单抗(teprotumumab)、TGN1412、替西木单抗(ticilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、替加珠单抗(tigatuzumab)、TNX-650、托西莫单抗(tositumomab)、TRBS07、西莫白介素单抗(tucotuzumab(celmoleukin))、ublituximab、乌瑞鲁单抗(urelumab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、伏洛昔单抗(volociximab)、伏妥昔单抗(votumumab)和扎芦木单抗(zalutumumab)，以及以上的片段、变体和衍生物。
在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合与至少一种神经系统病症相关的抗原。在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合与疼痛相关的抗原。在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合与自身免疫性病症，任选地神经系统或CNS的自身免疫性病症相关的抗原。在某些实施方案中，抗原选自以下中的一种或多种：alpha-4(α4)整合素、CD20、CD52、IL-12、IL-23、IL-12和IL-23的p40亚基，和轴突再生长和髓鞘再生抑制剂Nogo-A和LINGO、IL-23、淀粉样蛋白-β，任选地Aβ(1-42)、亨廷顿蛋白、CD25、神经生长因子(NGF)、神经营养性酪氨酸激酶1型受体(TrkA；NGF的高亲和力催化受体)，和α-突触核蛋白。
在某些实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合促炎性细胞因子或趋化因子或其受体。在某些实施方案中，促炎性细胞因子或趋化因子选自：TNF-α、TNF-β、FasL、CD27L、CD30L、CD40L、Ox40L、4-1BBL、TRAIL、TWEAK和Apo3L、IL-1α、IL-1β、IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IFN-α/β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、LIF、CCL5、GROα、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CXCL2和CCL2。
在某些实施方案中，抗体是阿达木单抗
Figure BDA0003210674900000061
赛妥珠单抗
Figure BDA0003210674900000062
戈利木单抗
Figure BDA0003210674900000063
英夫利昔单抗
Figure BDA0003210674900000064
D2E7、CDP 571或CDP 870，或以上的抗原结合片段或变体。
在某些实施方案中，受体选自TNF受体(TNFR)、IL-1受体(IL-1R)和IL-6受体(IL-6R)。
在某些实施方案中，Fc融合多肽选自依那西普、阿巴西普、阿柏西普、阿法西普、贝拉西普、利纳西普和雷米斯汀。
在某些实施方案中，药物组合物实质上不含内毒素。
还包括治疗有需要的对象的方法，包括向对象给予：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含连接至(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽的血脑屏障(BBB)运输部分。
在某些实施方案中，(a)和(b)经全身，任选地静脉内给药。在某些实施方案中，(a)和(b)单独给药，并且任选地按本文中所述定义。在某些实施方案中，(a)在(b)前给药。
在某些实施方案中，(a)在(b)前约、至少约或不多于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、220、240、260、280或300分钟给药。
在某些实施方案中，(a)在(b)前约、至少约或不多于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、24、30、36、42、48、60、72、84或96小时给药。
在某些实施方案中，(a)和(b)一起给药，任选地作为如本文中所述的药物组合物。
在某些实施方案中，相对于单独的(a)的全身给药，(a)和(b)的全身给药增加了递送(a)跨BBB并进入CNS的组织中。
某些实施方案包括用于治疗中枢神经系统(CNS)，任选地脑的癌症的方法。某些实施方案包括用于治疗CNS，任选地脑的原发性癌症的方法。某些实施方案包括用于治疗CNS，任选地脑的转移性癌症的方法。某些实施方案包括用于治疗胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、成神经细胞瘤或原始神经外胚层肿瘤(成神经管细胞瘤)的方法。在一些实施方案中，胶质瘤是星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤或脉络丛乳头状瘤。某些实施方案包括用于治疗多形性胶质母细胞瘤的方法。在一些实施方案中，多形性胶质母细胞瘤是巨细胞胶质母细胞瘤或胶质肉瘤。
某些实施方案包括用于治疗中枢神经系统(CNS)的退行性或自身免疫性病症的方法。在一些实施方案中，CNS的退行性或自身免疫性病症是阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病或多发性硬化(MS)。
某些实施方案包括用于治疗疼痛的方法。在一些实施方案中，疼痛是急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛和/或中枢性疼痛。
某些实施方案包括用于治疗炎性病况的方法。在一些实施方案中，炎性病况具有中枢神经系统组分。在一些实施方案中，炎性病况是以下中的一种或多种：脑膜炎、脊髓炎、脑脊髓炎、蛛网膜炎、肉状瘤病、肉芽肿瘤、药物引起的炎症、阿尔兹海默病、中风、HIV-痴呆、脑炎、寄生虫感染、炎性脱髓鞘病、CD8+T细胞介导的CNS自身免疫病、帕金森病、重症肌无力、运动神经病变、格林巴利综合征、自身免疫性神经病变、兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征、副癌性神经疾病、副癌性小脑萎缩、非副癌性僵人综合征、渐进性小脑萎缩、拉斯马森脑炎、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、西登哈姆氏舞蹈病、抽动秽语综合征、自身免疫性多内分泌病、免疫异常神经病变、获得性神经性肌强直、多发性关节硬化症、视神经炎、中风、外伤性脑损伤(TBI)、椎管狭窄症、急性脊髓损伤和脊髓压迫症。
在特定的实施方案中，炎性病况与中枢神经系统的感染相关。在一些实施方案中，感染是由以下中的一种或多种引起的细菌感染：B组链球菌(例如，亚型III)、肺炎链球菌(例如，血清型6、9、14、18和23)、大肠杆菌(例如，携带K1抗原)、单核细胞增生利斯特菌(例如，血清型IVb)、奈瑟球菌感染如脑膜炎奈瑟氏菌(脑膜炎球菌)、葡萄球菌感染、嗜血杆菌感染如流感嗜血杆菌B型、克雷伯菌、结核分枝杆菌、梅毒螺旋体或伯氏疏螺旋体。
在一些实施方案中，感染是由以下中的一种或多种引起的病毒感染：肠病毒、单纯疱疹病毒1型或2型、人T淋巴细胞病毒、水痘带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)或淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)。
在一些实施方案中，炎性病况与CNS的癌症，任选地恶性脑膜炎相关。
还包括患者护理试剂盒，其包括：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含连接至(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽的血脑屏障(BBB)运输部分。
在一些实施方案中，(a)和(b)在单独的药物组合物中，并且任选地按本文中所述定义。在一些实施方案中，(a)和(b)在同一组合物中，任选地作为本文中所述的药物组合物。
作为非限制性实例，本申请提供了以下实施方案：
实施方案1.药物组合物，其包含：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含与(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或者(ii)治疗性Fc融合多肽连接的血脑屏障(BBB)运输部分。
实施方案2.如实施方案1所述的药物组合物，其中(a)是抗体，其任选地不同于部分(b)的抗体。
实施方案3.如实施方案2所述的药物组合物，其中(a)的抗体的可变区与人抗原没有实质性的结合。
实施方案4.如实施方案1或2所述的药物组合物，其中(a)包含人类免疫球蛋白Fc区。
实施方案5.如实施方案4所述的药物组合物，其中所述人类免疫球蛋白Fc区包含以下、由以下组成或者基本上由以下组成：来自表A1的序列，包括其组合、变体和片段。
实施方案6.如实施方案4或5所述的药物组合物，其中所述人类免疫球蛋白Fc区包含以下、由以下组成或者基本上由以下组成：来源于人IgA1、人IgA2、人IgD、人IgE、人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgM的Fc区，其任选地如表A1中的序列所定义。
实施方案7.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中(b)是包含Fc区或Fc区的一部分的人IgA1抗体、人IgA2抗体、人IgD抗体、人IgE抗体、人IgG1抗体、人IgG2抗体、人IgG3抗体、人IgG4抗体或人IgM抗体，或以上的片段。
实施方案8.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中所述BBB运输部分选自以下中的一种或多种：p97(黑素转铁蛋白)多肽、受体相关蛋白(RAP)、抑肽酶肽或其类似物、蛋白传导域(PTD)、人低密度脂蛋白受体(hLDLR)结合肽或其类似物、结合BBB相关受体的抗体或天然配体，和谷胱甘肽(GSH)。
实施方案9.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述p97多肽包含表B1或B2中的序列或其活性变体或片段、由表B1或表B2中的序列或其活性变体或片段组成，或者基本上由表B1或表B2中的序列或其活性变体或片段组成。
实施方案10.如实施方案9所述的药物组合物，其中所述p97多肽包含DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)，或者是可溶的人p97多肽。
实施方案11.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述RAP包含表B3中的序列或其活性变体或片段，或者由表B3中的序列或其活性变体或片段组成。
实施方案12.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述抑肽酶肽包含表B4中的序列或其活性变体或片段，或由表B4中的序列或其活性变体或片段组成。
实施方案13.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述PTD包含表B5中的序列或活性变体或片段，或者由表B5中的序列或活性变体或片段组成。
实施方案14.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述hLDLR结合肽包含表B6中的序列或活性变体或片段，或者由表B6中的序列或活性变体或片段组成。
实施方案15.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述BBB相关受体选自以下中的一种或多种：胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦素受体、脂蛋白受体如脂蛋白受体相关的蛋白(LRP-1)受体、胰岛素样生长因子(IGF)受体如IGF1R和IGF2R、低密度脂蛋白受体、白喉毒素受体和TMEM 30A(翻转酶)。
实施方案16.如实施方案8所述的药物组合物，其中所述BBB相关受体配体选自以下中的一种或多种：胰岛素、转铁蛋白和转铁蛋白片段、乳铁蛋白和乳铁蛋白片段、载脂蛋白A(Apo A)、载脂蛋白B(Apo B)、载脂蛋白E(Apo E)和白喉毒素(包括其无毒性的突变体如CRM45和CRM197)。
实施方案17.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段包含免疫球蛋白Fc区。
实施方案18.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合以下中的一种或多种：人Her2/neu、Her1/EGFR、TNF-α、B7H3抗原、CD20、VEGF、CD52、CD33、CTLA-4、肌腱蛋白、alpha-4(α4)整合素、IL-23、淀粉样蛋白-β如Aβ(1-42)、亨廷顿蛋白、CD25、神经生长因子(NGF)、TrkA或α-突触核蛋白。
实施方案19.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合细胞表面受体。
实施方案20.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合细胞表面受体的配体。
实施方案21.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合癌症相关抗原。
实施方案22.如实施方案21所述的药物组合物，其中所述癌症相关抗原或癌症抗原选自以下中的一种或多种：人Her2/neu、Her1/EGF受体(EGFR)、Her3、A33抗原、B7H3、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受体)、C242抗原、5T4、IL-6、IL-13、血管内皮生长因子VEGF(例如，VEGF-A)VEGFR-1、VEGFR-2、CD30、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD152、CD200、CD221、CCR4、HLA-DR、CTLA-4、NPC-1C、肌腱蛋白、波形蛋白、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、甲胎蛋白、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碳酸酐酶9(CA-IX)、癌胚抗原(CEA)、整合素αvβ3、整合素α5β1、叶酸受体1、跨膜糖蛋白NMB、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、糖蛋白75、TAG-72、MUC1、MUC16(或CA-125)、磷脂酰丝氨酸、前列腺特异性膜抗原(PMSA)、NR-LU-13抗原、TRAIL-R1、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B或TRAIL-R2)、SLAM家族成员7(SLAMF7)、EGP40泛癌抗原、B细胞活化因子(BAFF)、血小板来源的生长因子受体、糖蛋白EpCAM(17-1A)、程序性死亡-1、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、前列腺酸性磷酸酶、Lewis-Y抗原、GD2(肿瘤上表达的神经外胚层来源的唾液酸神经节苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)和间皮素。
实施方案23.如实施方案22所述的药物组合物，其中所述抗体选自：曲妥珠单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、他尼珠单抗、3F8、8H9、阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿夫土珠单抗、阿仑单抗、(培化)阿珠单抗、阿麦妥昔、阿泊珠单抗、巴维昔单抗、贝妥莫单抗、贝利木单抗、贝伐单抗、比伐珠单抗(mertansine)、贝伦妥单抗-维多汀、坎妥珠单抗(mertansine)、坎妥珠单抗(ravtansine)、卡罗单抗(pendetide)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西他珠单抗(bogatox)、西妥木单抗、clivatuzumab(tetraxetan)、可那木单抗、达西珠单抗、达洛珠单抗、地莫单抗、drozitumab、依美昔单抗、依决洛单抗、依洛珠单抗、enavatuzumab、恩司昔单抗、依帕珠单抗、厄马索单抗、埃达珠单抗、法勒珠单抗、FBTA05、芬妥木单抗、flanvotumab、加利昔单抗、吉妥珠单抗、ganitumab、吉妥珠单抗(ozogamicin)、吉瑞昔单抗、格莱木单抗(vedotin)、替-伊莫单抗、icrucumab、伊戈伏单抗、拉-英达西单抗、英妥木单抗、伊珠单抗-奥佐米星、伊匹木单抗(MDX-101)、伊妥木单抗、拉贝珠单抗、来沙木单抗、林妥珠单抗、洛伏珠单抗(mertansine)、鲁卡木单抗、鲁昔单抗、马帕木单抗、马妥珠单抗、米拉珠单抗、米妥莫单抗、莫加珠单抗、moxetumomab(pasudotox)、那可单抗(tafenatox)、他那莫单抗(estafenatox)、narnatumab、奈昔木单抗、尼妥珠单抗、nivolumab、
Figure BDA0003210674900000121
(具有或没有放射性碘)、NR-LU-10、奥法木单抗、olaratumab、奥纳珠单抗、奥珠单抗(monatox)、奥戈伏单抗、帕尼单抗、帕曲土单抗、pemtumomab、培妥珠单抗、普立木单抗、雷妥莫单抗、radretumab、雷莫芦单抗、利妥木单抗、利妥昔单抗、罗妥木单抗、奥马珠单抗、西罗珠单抗、司妥昔单抗、tabalumab、他莫单抗(paptox)、替妥莫单抗、替妥木单抗、TGN1412、替西木单抗、曲美木单抗、替加珠单抗、TNX-650、托西莫单抗、TRBS07、西莫白介素单抗(celmoleukin)、ublituximab、乌瑞鲁单抗、维妥珠单抗、伏洛昔单抗、伏妥昔单抗和扎芦木单抗，以及以上的片段、变体和衍生物。
实施方案24.如实施方案1-20中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合与至少一种神经系统病症相关的抗原。
实施方案25.如实施方案1-20中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合与疼痛相关的抗原。
实施方案26.如实施方案1-20中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合与自身免疫性病症，任选地神经系统或CNS的自身免疫性病症相关的抗原。
实施方案27.如实施方案24-26中任一项所述的药物组合物，其中所述抗原选自以下中的一种或多种：alpha-4(α4)整合素、CD20、CD52、IL-12、IL-23、IL-12和IL-23的p40亚基，和轴突再生长和髓鞘再生抑制剂Nogo-A和LINGO、IL-23、淀粉样蛋白-β，任选地Aβ(1-42)、亨廷顿蛋白、CD25、神经生长因子(NGF)、神经营养性酪氨酸激酶1型受体(TrkA；NGF的高亲和力催化受体)，以及α-突触核蛋白。
实施方案28.如实施方案1-20中任一项所述的药物组合物，其中(b)的抗体或抗原结合片段特异性地结合促炎性细胞因子或趋化因子，或其受体。
实施方案29.如实施方案28所述的药物组合物，其中所述促炎性细胞因子或趋化因子选自：TNF-α、TNF-β、FasL、CD27L、CD30L、CD40L、Ox40L、4-1BBL、TRAIL、TWEAK和Apo3L、IL-1α、IL-1β、IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IFN-α/β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、LIF、CCL5、GROα、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CXCL2和CCL2。
实施方案30.如实施方案29所述的药物组合物，其中所述抗体是阿达木单抗
Figure BDA0003210674900000131
赛妥珠单抗
Figure BDA0003210674900000132
戈利木单抗
Figure BDA0003210674900000133
英夫利昔单抗
Figure BDA0003210674900000134
D2E7、CDP 571或CDP 870，或以上的抗原结合片段或变体。
实施方案31.如实施方案28所述的药物组合物，其中所述受体选自：TNF受体(TNFR)、IL-1受体(IL-1R)和IL-6受体(IL-6R)。
实施方案32.如实施方案1-16中任一项所述的药物组合物，其中所述Fc融合多肽选自：依那西普、阿巴西普、阿柏西普、阿法西普、贝拉西普、利纳西普和雷米斯汀。
实施方案33.如前述实施方案中任一项所述的药物组合物，其实质上不含内毒素。
实施方案34.(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区和(b)缀合物，其包含与(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽连接的血脑屏障(BBB)运输部分在制备用于治疗以下的药物中的用途：
中枢神经系统(CNS)，任选地脑的癌症；或
中枢神经系统(CNS)的退行性或自身免疫性病症；或
疼痛；或
炎性病况。
实施方案35.如实施方案34所述的用途，其中(a)和(b)被配制为经全身给药，任选地经静脉内给药。
实施方案36.如实施方案34或35所述的用途，其中(a)和(b)单独给药，并且任选地根据实施方案1-33中的任一项定义。
实施方案37.如实施方案36所述的用途，其中(a)在(b)前给药。
实施方案38.如实施方案37所述的用途，其中(a)在(b)前约、至少约，或不多于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、220、240、260、280或300分钟给药。
实施方案39.如实施方案37所述的用途，(a)在(b)前约、至少约，或不多于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、24、30、36、42、48、60、72、84或96小时给药。
实施方案40.如实施方案34或35所述的用途，其中(a)和(b)一起给药，任选地作为根据实施方案1-33中任一项的药物组合物。
实施方案41.如实施方案34-40中任一项所述的用途，其中相对于单独的(a)的全身给药，(a)和(b)的全身给药增加了递送(a)跨BBB并进入CNS组织。
实施方案42.如实施方案34所述的用途，其中所述药物用于治疗CNS，任选地脑的原发性癌症。
实施方案43.如实施方案34所述的用途，其中所述药物用于治疗CNS，任选地脑的转移性癌症。
实施方案44.如实施方案34所述的用途，其中所述药物用于治疗胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、成神经细胞瘤或原始神经外胚层肿瘤(成神经管细胞瘤)。
实施方案45.如实施方案44所述的用途，其中所述胶质瘤是星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤或脉络丛乳头状瘤。
实施方案46.如实施方案34所述的用途，其中所述药物用于治疗多形性胶质母细胞瘤。
实施方案47.如实施方案46所述的用途，其中所述多形性胶质母细胞瘤是巨细胞胶质母细胞瘤或胶质肉瘤。
实施方案48.如实施方案34所述的用途，其中CNS的退行性或自身免疫性病症是阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病或多发性硬化(MS)。
实施方案49.如实施方案34所述的用途，其中所述疼痛是急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛和/或中枢性疼痛。
实施方案50.如实施方案34所述的用途，其中所述炎性病况具有中枢神经系统组分。
实施方案51.如实施方案34或50所述的用途，其中所述炎性病况是以下中的一种或多种：脑膜炎、脊髓炎、脑脊髓炎、蛛网膜炎、肉状瘤病、肉芽肿瘤、药物引起的炎症、阿尔兹海默病、中风、HIV-痴呆、脑炎、寄生虫感染、炎性脱髓鞘病、CD8+T细胞介导的CNS自身免疫病、帕金森病、重症肌无力、运动神经病变、格林巴利综合征、自身免疫性神经病变、兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征、副癌性神经疾病、副癌性小脑萎缩、非副癌性僵人综合征、渐进性小脑萎缩、拉斯马森脑炎、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、西登哈姆氏舞蹈病、抽动秽语综合征、自身免疫性多内分泌病、免疫异常神经病变、获得性神经性肌强直、多发性关节硬化症、视神经炎、中风、外伤性脑损伤(TBI)、椎管狭窄症、急性脊髓损伤和脊髓压迫症。
实施方案52.如实施方案51所述的用途，其中所述炎性病况与中枢神经系统感染相关。
实施方案53.如实施方案52所述的用途，其中所述感染是由以下一种或多种引起的细菌感染：B组链球菌(例如，亚型III)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)(例如，血清型6、9、14、18和23)、大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，携带K1抗原)、单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes)(例如，血清型IVb)、奈瑟球菌感染如脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)(脑膜炎球菌)、葡萄球菌感染、嗜血杆菌感染如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)B型、克雷伯菌、结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)或伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)。
实施方案54.如实施方案52所述的用途，其中所述感染是由以下一种或多种引起的病毒感染：肠病毒、单纯疱疹病毒1型或2型、人T淋巴细胞病毒、水痘带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)或淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)。
实施方案55.如实施方案50所述的用途，其中所述炎性病况与CNS癌症，任选地恶性脑膜炎相关。
实施方案56.患者护理试剂盒，其包括：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含与(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽连接的血脑屏障(BBB)运输部分。
实施方案57.如实施方案56所述的患者护理试剂盒，其中(a)和(b)在单独的药物组合物中，并且任选地根据实施方案1-33中的任一项定义。
实施方案58.如实施方案56所述的患者护理试剂盒，其中(a)和(b)在同一组合物中，任选地作为根据实施方案1-33中任一项的药物组合物。
发明详述
本发明的实施方案部分基于以下理论：可以通过与包含免疫球蛋白Fc区的单独的多肽一起共同给药，来改善包含BBB运输部分的抗体或基于Fc融合多肽的缀合物的中枢神经系统(CNS)靶向。据信后者将例如结合对象中的系统性Fc受体或配体，并从而改变(例如，减少)缀合物的Fc区与对象中的Fc受体/配体之间的相互作用。预期这将增强BBB运输部分促进跨BBB递送缀合物的能力，例如，通过将缀合物的Fc区与其配体之间的相互作用最小化，并有利于缀合物的BBB运输部分与其BBB相关受体或配体之间的相互作用。
除非明确指出相反，否则本发明的实施将采用本领域技术范围内的分子生物学和重组DNA技术的常规方法，为了说明的目的，下文描述了其中的许多方法。这样的技术在文献中有完整解释。参见，例如，Sambrook,et al.,Molecular Cloning:A LaboratoryManual(第3版,2000)；DNA Cloning:A Practical Approach,卷I&II(D.Glover,ed.)；Oligonucleotide Synthesis(N.Gait,ed.,1984)；Oligonucleotide Synthesis:Methodsand Applications(P.Herdewijn,ed.,2004)；Nucleic Acid Hybridization(B.Hames&S.Higgins,eds.,1985)；Nucleic Acid Hybridization:Modern Applications(Buzdin和Lukyanov,eds.,2009)；Transcription and Translation(B.Hames&S.Higgins,eds.,1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney,ed.,1986)；Freshney,R.I.(2005)Culture ofAnimal Cells,a Manual of Basic Technique,5th Ed.Hoboken NJ,John Wiley&Sons；B.Perbal,A Practical Guide to Molecular Cloning(第3版2010)；Farrell,R.,RNAMethodologies:A Laboratory Guide for Isolation and Characterization(第3版2005)。
在本文中引用的所有出版物、专利和专利申请均通过引用整体并入本文中。
定义
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属的领域中普通技术人员通常理解的相同的意义。尽管可以在本发明的实践和测试使用与本文所述的那些相似的或等同的任何方法和材料，但是描述了优选的方法和材料。出于本发明的目的，下列术语定义如下。
本文所用的冠词“a”和“an”指的是一个或多于一个(即至少一个)冠词的语法对象。例如，“一个元件(an element)”意指一个元件或多于一个元件。
通过“约”意指相对于参考数量、水平、数值、数字、频率、百分比、维度、尺寸、量、重量或长度，数量、水平、数值、数字、频率、百分比、维度、尺寸、量、重量或长度的改变达到30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。
本文所用的术语“氨基酸”意图指天然存在的和非天然存在的氨基酸以及氨基酸类似物和模拟物。天然存在的氨基酸包括蛋白生物合成期间利用的20种(L)-氨基酸以及其他氨基酸，诸如例如4-羟脯氨酸、羟赖氨酸、锁链素、异锁链素、同型半胱氨酸、瓜氨酸和鸟氨酸。非天然存在的氨基酸包括，例如，(D)-氨基酸、正亮氨酸、正缬氨酸、对氟苯丙氨酸、乙硫氨基酪酸等，它们为本领域中技术人员已知。氨基酸类似物包括天然存在的和非天然存在的氨基酸的修饰形式。此类修饰可以包括，例如，氨基酸上化学基团和部分的取代或置换，或通过氨基酸的衍生化。氨基酸模拟物包括，例如，表现出参考氨基酸的功能相似的特性如电荷和电荷间距特征的有机结构。例如，模拟精氨酸(Arg或R)的有机结构将具有带正电荷的部分，其位于相似的分子间距中并且具有与天然存在的Arg氨基酸的侧链的e氨基相同的迁移率程度。模拟物还包括受约束的结构以便维持氨基酸的或氨基酸官能团的最佳的间距和电荷相互作用。本领域技术人员已知或可以确定什么样的结构组成功能等同的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则应理解的是，词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将被理解为意指包括所述的步骤或元件或步骤或元件的组，但不除外任何其他的步骤或元件或步骤或元件的组。通过“由…组成”意指包括，并且限于，短语“由…组成”后的任何元件。因此，短语“由…组成”表明所列的元件为必需的或强制性的，并且可能不存在其他元件。通过“基本上由…组成”意指包括短语后所列的任何元件，并且限于不干扰或不贡献于本公开内容中所指明的所列元件的活性或作用的其他元件。因此，短语“基本上由…组成”表明所列元件为必需的或强制性的，但是其他元件是任选的，并且可以存在或不存在，这取决于它们是否在实质上影响所列元件的活性或作用。
如本文所述，术语“缀合物”意图指由于试剂或其他分子，例如具有生物活性的分子与BBB部分的共价或非共价附接或连接而形成的实体。缀合多肽的一个实例为“融合蛋白”或“融合多肽”，即，通过连接最初编码分别的多肽的两个或更多个编码序列而产生的多肽；连接的编码序列的翻译产生单个融合多肽，通常带有源于分别的多肽中每一个的功能特性。
术语“不含内毒素”或“实质上不含内毒素”通常涉及包含至多痕量(例如，对对象无临床不利生理影响的量)的内毒素，并且优选地不可检测量的内毒素的组合物、溶剂和/或容器。内毒素是与某些微生物相关的毒素，如细菌，通常是革兰氏阴性菌，尽管内毒素可能存在于革兰氏阳性菌，如单核细胞增生利斯特菌中。最普遍的内毒素是在各种革兰氏阴性菌的外膜中发现的脂多糖(LPS)或脂寡糖(LOS)，并且它们代表了这些细菌引起疾病的能力中的核心致病特征。人体内少量的内毒素可能会导致发烧、血压降低，以及炎症和凝血激活，及其他不利的生理影响。
因此，在药物生产中，往往需要从药物产品和/或药物容器中去除大部分或全部痕量的内毒素，因为即使少量也可能对人造成不良影响。为此目的可以使用除热原烤箱，因为分解大多数内毒素通常需要超过300℃的温度。例如，基于初级包装材料如注射器或小瓶，250℃的玻璃温度和30分钟的保持时间的组合通常足以实现内毒素水平降低3个对数。预期了去除内毒素的其他方法，包括例如色谱法和过滤方法，如本文所述和本领域已知的。
可以使用本领域已知的常规技术检测内毒素。例如，鲎变形细胞溶解物测定法(Limulus Amoebocyte Lysate assay)利用来自鲎的血液，是检测内毒素存在的非常灵敏的测定法。在该测试中，非常低水平的LPS会导致鲎溶解物的可检测的凝结，这是由于强大的酶级联反应放大了该反应。也可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)对内毒素进行定量。为了实质上不含内毒素，内毒素水平可能低于约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.08、0.09、0.1、0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9或10EU/mg的活性化合物。通常，1ng脂多糖(LPS)对应于约1-10EU。
本文所使用的术语“功能”和“功能性的”等是指生物、酶促或治疗功能。
“同源性”指的是相同的或组成保守取代的氨基酸的百分比数。可使用序列比较程序如GAP(Deveraux et al.,Nucleic Acids Research.12,387-395,1984)测定同源性，通过引用将该文献并入本文中。以这种方式，可以通过将缺口插入到比对中来比较与本文所述的那些相似的或实质上不同长度的序列，这样的缺口例如通过GAP所用的比较算法来确定。
通过“分离的”意指物质实质上或基本上不含在其自然态正常伴随其的组分。例如，本文所用的“分离的肽”或“分离的多肽”等包括肽或多肽分子从它的天然细胞环境以及与细胞的其他组分的关联的体外分离和/或纯化；即其与体内物质没有显著地关联。
本文所用的术语“连接”、“连接子”、“连接子部分”或“L”指的是可以用于将BBB部分与目标试剂分开或将第一试剂与另一试剂分开的连接子，例如其中两种或更多种试剂连接而形成缀合物。连接子可为生理学上稳定的或可包括可释放的连接子，如可酶促降解的连接子(例如可蛋白水解裂解的连接子)。在某些方面，连接子可为肽连接子，例如，作为蛋白的一部分。在一些方面，连接子可为非肽连接子或非蛋白连接子。在一些方面，连接子可为颗粒，如纳米颗粒。
“脂质纳米颗粒”或“固体脂质纳米颗粒”是指一个或多个平均直径在约10至约1000纳米之间的球形纳米颗粒，并且其包含可溶解亲脂性分子的固体脂质核心基质。脂质核心通过表面活性剂(例如，乳化剂)稳定，并且可以包含一种或多种甘油三酯(例如，三硬脂酸甘油酯)、甘油二酯(例如，甘油二硬脂酸酯(glycerol bahenate))、甘油单酯(例如，单硬脂酸甘油酯)、脂肪酸(例如，硬脂酸)、类固醇(例如，胆固醇)和蜡(例如，鲸蜡醇棕榈酸酯)，包括以上的组合。脂质纳米颗粒在例如Petrilli et al.,Curr PharmBiotechnol.15:847-55,2014；和第6,217,912号；第6,881,421号；第7,402,573号；第7,404,969号；第7,550,441号；第7,727,969号；第8,003,621号；第8,691,750号；第8,871,509号；第9,017,726号；第9,173,853号；第9,220,779号；第9,227,917号；和9,278,130号美国专利中有描述，其通过引用整体并入本文中。
术语“调节”和“改变”包括通常相对于对照“增加”、“增强”或“刺激”以及“降低”或“减少”通常统计学上显著的或生理学上显著的量或程度。“增加的”、“刺激的”或“增强的”量通常为“统计学上显著的”量，并且可包括是没有组合物或对照组合物、样品或测试对象所产生的量的1.1、1.2、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30或更多倍(例如500、1000倍)(包括所有整数和整数之间的且大于1的小数，例如1.5、1.6、1.7、1.8等)的增加。“降低的”或“减少的”量通常为“统计学上显著的”量，并且可包括没有组合物或对照组合物所产生的量的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％降低，包括其间的所有整数。作为一个非限制性实例，对照可以比较相对于给予单独的缀合物，在与包含Fc区的多肽组合给予缀合物后缀合物的活性，如跨血脑屏障运输/递送缀合物的量或速率、分配缀合物至中枢神经系统组织的速率和/或水平，和/或血浆、中枢神经系统组织或任何其他系统或周围非中枢神经系统组织中缀合物的Cmax。本文描述了比较和“统计学上显著的”量的其他实例，或者其将对本领域技术人员是显而易见的。
在某些实施方案中，组合物中任何给定试剂(例如，缀合物、不含Fc区的多肽)的“纯度”可以特别地定义。例如，某些组合物可包含至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％纯的试剂，包括其间的所有小数，纯度例如可通过高压液相色谱(HPLC)测量，但不限于此，HPLC是生物化学和分析化学中常用的柱色谱法的熟知形式，用以分离、鉴定和定量化合物。
术语“多肽”和“蛋白”在本文可互换使用，指的是氨基酸残基的聚合物及其变体和合成类似物。因此，这些术语适用于一个或多个氨基酸残基为合成的、非天然存在的氨基酸，如对应的天然存在的氨基酸的化学类似物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物。本文所述的多肽不限于特定长度的产物；因此，肽、寡肽和蛋白都包括在多肽的定义内，并且这些术语在本文可互换地使用，除非另有明确指示。本文所述的多肽也可包含表达后修饰，如糖基化、乙酰化、磷酸化等，以及本领域中已知的其他修饰，包括天然存在的和非天然存在的。多肽可为整个蛋白，或整个蛋白的子序列、片段、变体或衍生物。
“生理学上可裂解的”或“可水解的”或“可降解的”键为在生理条件下与水发生反应(即，被水解)的键。键在水中水解的倾向性不仅取决于连接两个中心原子的键的通常类型，而且取决于连接于这些中心原子的取代基。合适的水解不稳定的或弱的连接包括但不限于：羧酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧醚、亚胺、原酸酯、硫酯、硫醇酯、碳酸酯和腙、肽和寡核苷酸。
“可释放的连接子”包括但不限于生理学上可裂解的连接子和可酶促降解的连接子。因此，“可释放的连接子”为在生理条件下可经自发性水解或通过一些其他机制(例如酶催化的、酸催化的、碱催化的等)裂解的连接子。例如，“可释放的连接子”可以涉及具有质子的碱提取(例如可电离的氢原子，Hα)作为驱动力的消除反应。出于本文的目的，“可释放的连接子”与“可降解的连接子”是同义的。“可酶促降解的连接”包括可被一种或多种酶，例如肽酶或蛋白酶降解的连接，例如氨基酸序列。在特定的实施方案中，可释放的连接子在pH7.4、25℃，例如生理pH、人体温度(例如体内)，具有约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约12小时、约18小时、约24小时、约36小时、约48小时、约72小时或约96小时或更少的半衰期。
术语“参考序列”一般指的是与其他序列比较的核酸编码序列或氨基酸序列。本文所述的所有多肽和多核苷酸序列都包括为参考序列，包括按名称所述的那些序列和序列表中描述的那些序列。
本文所用的，术语“序列同一性”或例如包含“与…具有50％同一性的序列”，指的是在比较窗中按照逐个核苷酸或逐个氨基酸的方式序列相同的程度。因此，可通过以下方式计算“序列同一性百分比”：在比较窗中比较两条最佳比对的序列，确定相同的核酸碱基(例如A、T、C、G、I)或相同的氨基酸残基(例如Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)在两条序列中存在的位置数以产生匹配的位置数，将匹配的位置数除以比较窗中总的位置数(即窗口大小)，并且将结果乘以100来产生序列同一性的百分比。包括与本文所述的任意参考序列(参见例如序列表)具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸和多肽，通常其中多肽变体保持参考多肽的至少一种生物学活性。
用于描述两个或更多个多核苷酸或多肽之间的序列关系的术语包括“参考序列”、“比较窗”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“实质上的同一性”。“参考序列”的长度为至少12个单体单元，但经常为15-18个单体单元，并且通常为至少25个单体单元，单体单元包括核苷酸和氨基酸残基。因为两个多核苷酸中的每一个可包含(1)两个多核苷酸之间相似的序列(即，完整多核苷酸序列的仅一部分)，和(2)两个多核苷酸之间相异的序列，因此通常通过在“比较窗”中比较两个多核苷酸的序列以鉴定和比较序列相似性的局部区域来进行两个(或更多个)多核苷酸之间的序列比较。“比较窗”指的是至少6个连续位置，通常约50至约100个，更通常约100至约150个连续位置的概念区段，在比较窗中，在最佳地比对两条序列后，比较序列和相同数目的连续位置的参考序列。比较窗可包含与用于两条序列的最佳比对的与参考序列(其不包含添加或缺失)相比约20％或更少的添加或缺失(即缺口)。可通过计算机实现的算法(Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0,Genetics Computer Group,575Science Drive Madison,WI,USA中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或通过肉眼检查和通过各种任意所选的方法所产生的最佳比对(即，导致比较窗中最高的同源性百分比)进行用于比对比较窗的最佳序列比对。也可参考BLAST程序家族，如例如Altschul et al.,Nucl.Acids Res.25:3389,1997所公开的。序列分析的详细讨论也可以在Ausubel et al.,“Current Protocols in Molecular Biology,”John Wiley&Sons Inc,1994-1998,第15章的19.3部分中找到。
通过“统计学上显著的”意指偶然发生可能性较低的结果。可以通过本领域中已知的任何方法确定统计学显著性。常用的显著性测定包括p值，其为零假设正确时所观察到的事件发生的频率或可能性。如果所获得的p值小于显著性水平，则拒绝零假设。在简单情况下，显著性水平定义为0.05或更小的p值。
术语“溶解度”指的是蛋白溶解于液体溶剂中并形成均质溶液的特性。溶解度通常表示为浓度，按照每单位体积的溶剂中溶质的量(溶质(g)/溶剂(kg)、g/dL(100mL)、mg/ml等)、摩尔浓度、重量摩尔浓度、摩尔分数或其他相似的浓度描述。可以溶解于每溶剂量的溶质的最大平衡量为该溶质于特定条件，包括温度、压力、pH和溶剂性质下，在该溶剂中的溶解度。在某些实施方案中，在生理pH或其他pH，例如在pH 5.0、pH 6.0、pH 7.0或pH 7.4测量溶解度。在某些实施方案中，在水或生理缓冲液如PBS或NaCl(有或无NaP)中测量溶解度。在具体的实施方案中，在相对较低的pH(例如pH 6.0)和相对较高的盐(例如500mM NaCl和10mM NaP)下测量溶解度。在某些实施方案中，在诸如血液或血清的生物流体(溶剂)中测量溶解度。在某些实施方案中，温度可以为约室温(例如约20、21、22、23、24、25℃)或约体温(～37℃)。在某些实施方案中，在室温或约37℃，缀合物、多肽或基于多肽的缀合物具有至少约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25或30mg/ml的溶解度。
本文所用的“对象”包括表现出症状或处于表现出症状的风险中的任何动物，可以用本发明的缀合物对其进行治疗或诊断。合适的对象(患者)包括实验动物(如小鼠、大鼠、兔或豚鼠)、家畜和牲畜或宠物(如猫或狗)。包括非人的灵长类动物，并且优选人类患者。
“实质上”或“基本上”意指几乎完全或全部地，例如，某一给定量的95％、96％、97％、98％、99％或更大。
“实质上不含”指的是给定量的几乎完全或完全地缺乏，例如少于某一给定量的约10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或更小。例如，某些组合物可“实质上不含”细胞蛋白、膜、核酸、内毒素或其他污染物。
如本文所用，术语“治疗有效量”、“治疗剂量”、“预防有效量”或“诊断有效量”是给药后引发所需生物反应所需的试剂(例如，缀合物、包含Fc区的多肽)的量。
本文所用的“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括任何对疾病或病况的症状或病理学的任何期望的效应，并且可包括治疗的疾病或病况的一种或多种可测量的标志物的甚至微小的变化或改善。“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”并不一定表明疾病或病况或其相关的症状的完全根除或治愈。接受该治疗的对象为任何有需要的对象。临床改善的示例性标志物对本领域中技术人员将是显而易见的。
术语“野生型”指的是当从天然存在的来源分离时具有该基因或基因产物的特征的基因或基因产物。野生型基因或基因产物(例如多肽)为在群体中最为频繁观察到的基因或基因产物，并且因此任意设计该基因的“正常”或“野生型”形式。
包含Fc区的多肽
某些方法和组合物采用或包含至少一种“包含免疫球蛋白Fc区的多肽”或Fc区的一部分(也称为“包含Fc区的多肽”)。包含Fc区的多肽的一般实例包括包含Fc区或其一部分的抗体，例如完整抗体及其片段。包含Fc区的多肽还可以包含异源序列，例如非免疫球蛋白多肽序列。
在特定的实施方案中，“包含Fc区的多肽”是包含Fc区或Fc区的一部分的抗体或其片段。在一些实施方案中，抗体不同于缀合物的抗体。例如，在一些情况下，抗体或其片段的可变区结合与缀合物的抗体不同的抗原。在一些实施方案中，抗体或其片段不实质性或特异性地结合人抗原。在一些实施方案中，抗体或其片段结合非人抗原。在某些实施方案中，抗体是人抗体或人源化的抗体。
多肽，例如抗体的“Fc区”通常来源于免疫球蛋白(Ig)分子的重链。典型的Ig分子由两条重链和两条轻链组成。重链可分成至少3个功能区：Fd区、Fc区(片段可结晶区)和铰链区，后者仅可在IgG、IgA和IgD免疫球蛋白中找到。Fd区包含重链的可变(VH)和恒定(CH1)域，并且与轻链的可变(VL)和恒定(CL)域一起形成抗原结合片段或Fab区。
IgG、IgA和IgD免疫球蛋白的Fc区包含重链恒定域2和3，分别称为CH2和CH3区；并且IgE和IgM免疫球蛋白的Fc区包含重链恒定域2、3和4，分别称为CH2、CH3和CH4区。Fc区主要负责免疫球蛋白效应子功能，其包括例如补体固定和结合效应子细胞的同源Fc受体。
铰链区(发现于IgG、IgA和IgD中)充当柔性间隔子，允许Fab部分在空间中相对于Fc区自由移动。与恒定区相反，铰链区在结构上是多样的，序列和长度在免疫球蛋白类别和子类之间都不同。铰链区还可以包含一个或多个糖基化位点，其包括许多结构上不同类型的用于碳水化合物附接的位点。例如，IgA1在铰链区的17个氨基酸片段内包含5个糖基化位点，赋予铰链区多肽对肠蛋白酶的显著抗性。CH2域的铰链近端区中的残基还可能影响免疫球蛋白与其分别的Fc受体之间的相互作用的特异性(参见，例如，Shin et al.,Intern.Rev.Immunol.10:177-186,1993)。
因此，如本文所用的术语“Fc区”或“Fc片段”或“Fc”指的是包含来自一种或多种所选免疫球蛋白，包括其片段和变体和组合的一个或多个CH2区、CH3区和/或CH4区的多肽。“Fc区”还可以包括免疫球蛋白的重链恒定区的一个或多个铰链区。在一些实施方案中，Fc区不包含免疫球蛋白的一个或多个CH1、CL、VL和/或VH区。
多肽的Fc区可以来源于任何一种或多种免疫球蛋白类别的CH2区、CH3区、CH4区和/或铰链区，包括但不限于IgA、IgD、IgE、IgG、IgM，包括其亚类和组合。在一些实施方案中，Fc区来源于IgA免疫球蛋白，包括亚类IgA1和/或IgA2。在某些实施方案中，Fc区来源于IgD免疫球蛋白。在特定的实施方案中，Fc区来源于IgE免疫球蛋白。在一些实施方案中，Fc区来源于IgG免疫球蛋白，包括亚类IgG1、IgG2、IgG2、IgG3和/或IgG4。在某些实施方案中，Fc区来源于IgM免疫球蛋白。
某些Fc区显示出对一种或多种Fc受体(FcRs)的特异性结合。Fc受体类别的实例包括Fcγ受体(FcγR)、Fcα受体(FcαR)、Fcε受体(FcεR)，以及新生儿Fc受体(FcRn)。例如，相对于FcαRs、FcεRs和/或FcRn，某些Fc区具有增加的与一种或多种FcγRs的结合(或对…的亲和力)。在一些实施方案中，相对于一种或多种FcγRs、FcεRs和/或FcRn，Fc区具有增加的与FcαRs的结合。在其他实施方案中，相对于一种或多种FcγRs、FcαRs,和/FcRn，Fc区具有增加的与FcεRs(例如，FcαRI)的结合。在特定的实施方案中，相对于一种或多种FcγRs、FcαRs和/或FcεRs，Fc区具有增加的与FcRn的结合。
FcγRs的实例包括FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb。FcγRI(CD64)表达于巨噬细胞和树突状细胞上，并且在吞噬、呼吸爆发、细胞因子刺激和树突状细胞内吞运输中发挥作用。FcγRI的表达被GM-CSF和γ-干扰素(γ-IFN)上调，并且被白细胞介素4(IL-4)下调。FcγRIIa表达于多形核白细胞(PMN)、巨噬细胞、树突状细胞和肥大细胞上。FcγRIIa在吞噬作用、呼吸爆发和细胞因子刺激中发挥作用。FcγRIIa的表达被GM-CSF和γ-IFN上调，并被IL-4降低。FcγIIb表达于B细胞、PMN、巨噬细胞和肥大细胞上。FcγIIb抑制基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)介导的反应，并因此是一种抑制性受体。FcγRIIc的表达被静脉内免疫球蛋白(IVIG)和IL-4上调，并被γ-IFN降低。FcγRIIc表达于NK细胞上。FcγRIIIa表达于自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、肥大细胞和血小板上。该受体参与吞噬作用、呼吸爆发、细胞因子刺激、血小板聚集和脱颗粒，以及NK介导的ADCC。FcγRIII的表达被C5a、TGF-β和γ-IFN上调，并被IL-4下调。FcγRIIIb是表达于PMN上的GPI连接的受体。
相对于FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa和/或FcγRIIIb，某些Fc区具有增加的与FcγRI的结合。相对于FcγRI、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa和/或FcγRIIIb，一些实施方案具有增加的与FcγRIIa的结合。相对于FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa和/或FcγRIIIb，特定的Fc区具有增加的与FcγRIIb的结合。相对于FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa和/或FcγRIIIb，某些Fc区具有增加的与FcγRIIc的结合。相对于FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc和/或FcγRIIIb，一些Fc区具有增加的与FcγRIIIa的结合。相对于FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc和/或FcγRIIIa，特定的Fc区具有增加的与FcγRIIIb的结合。
FcαRs包括FcαRI(CD89)。FcαRI发现于中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、某些巨噬细胞(例如库普弗细胞)和某些树突状细胞的表面上。FcαRI由两个细胞外Ig样结构域组成，是免疫球蛋白超家族和多链免疫识别受体(MIRR)家族的成员，并通过与两条FcRγ信号链结合而发信号。
FcεRs包括FcεRI和FcεRII。高亲和力受体FcεRI是免疫球蛋白超家族的一个成员，表达于表皮朗格汉斯细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞上，并且在控制过敏反应中起主要作用。FcεRI也在抗原呈递细胞上表达，并调节促炎性细胞因子的产生。低亲和力受体FcεRII(CD23)是一种C型凝集素，可用作膜结合或可溶的受体。FcεRII调节B细胞的生长和分化，并阻断嗜酸性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的IgE结合。相对于FcεRII，某些Fc区具有增加的与FcεRI的结合。相对于FcεRI，其他Fc区具有增加的与FcεRII的结合。
Fc区可以来源于任何动物的免疫球蛋白分子，包括脊椎动物如哺乳动物如牛、山羊、猪、狗、小鼠、兔、仓鼠、大鼠、豚鼠、非人的灵长类和人。在一些实施方案中，包含Fc区的多肽包含人类免疫球蛋白Fc区，其任选地包含或不包含免疫球蛋白的可变区或结合区。来自示例性的野生型人IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgM免疫球蛋白的CH2、CH3、CH4和铰链区的氨基酸序列提供在下表A1中。
Figure BDA0003210674900000281
Figure BDA0003210674900000291
Figure BDA0003210674900000301
因此，包含Fc区的多肽可以包含表A1的一种或多种人Fc区氨基酸序列、由表A1的一种或多种人Fc区氨基酸序列组成，或基本上由表A1的一种或多种人Fc区氨基酸序列组成，包括其变体、片段、同源物、直系同源物、旁系同源物和组合。某些说明性的实施方案包括长度大小范围为约20-50、20-100、20-150、20-200、20-250、20-300、20-400、50-100、50-150、50-200、50-250、50-300、50-400、100-150、100-200、100-250、100-300、100-350、100-400、200-250、200-300、200-350、or 200-400、200-500、200-600、200-700、200-800、200-900或200-1000、200-1500、200-2000、200-2500或200-3000个氨基酸或更多的包含Fc区的多肽，并且任选地包含表A1中的任何一种或多种序列、由表A1中的任何一种或多种序列组成，或基本上由表A1中的任何一种或多种序列组成。某些实施方案包括长度为约或多达约50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、300、350、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000个氨基酸或更多的Fc区，其任选地包含表A1中的任何一种或多种序列、由表A1中的任何一种或多种序列组成，或基本上由表A1中的任何一种或多种序列组成。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgA1序列、由表A1中所示的人IgA1序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgA1序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合及其变体和片段。
一些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgA2序列、由表A1中所示的人IgA2序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgA2序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合及其变体和片段。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgD序列、由表A1中所示的人IgD序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgD序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgE序列、由表A1中所示的人IgE序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgE序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
某些Fc区包含表A1中所示的人IgG1序列、由表A1中所示的人IgG1序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgG1序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgG2序列、由表A1中所示的人IgG2序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgG2序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgG3序列、由表A1中所示的人IgG3序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgG3序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgG4序列、由表A1中所示的人IgG4序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgG4序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
某些包含Fc区的多肽包含表A1中所示的人IgM序列、由表A1中所示的人IgM序列组成，或基本上由表A1中所示的人IgM序列组成，以N端至C端的任何顺序阅读，包括其组合，以及这些序列和组合的变体和片段。
如上所述，某些实施方案采用变体、片段、杂合体和/或以其他方式修饰的形式的本文所述和本领域已知的Fc区。本文描述了多肽变体和片段。
靶向CNS的缀合物
本文所述的缀合物包含：(i)“血脑屏障(BBB)运输部分”，即相对于单独的试剂，增加跨BBB递送缀合的试剂的组分，和(ii)试剂，即抗体或其抗原结合片段，或治疗性Fc融合多肽。在一些实施方案中，BBB部分和试剂经由(iii)至少一个连接子共价附接。BBB运输部分可以共价、非共价或操作性地偶联至目标试剂，如治疗性抗体、治疗性Fc融合多肽)，以形成缀合物或靶向CNS的缀合物。在一些实施方案中，BBB运输部分是多肽或肽序列。示例性的BBB运输肽部分或序列描述如下，并且包括p97(黑素转铁蛋白)多肽、基于抑肽酶的肽序列等。参见，例如Gabathuler,Neurobiology of Disease.37:48-57,2010；和Gabathuler,Therapeutic Delivery.1:571-586,2010。
1.BBB部分
某些缀合物或靶向CNS的缀合物包含至少一个BBB部分。BBB部分的实例包括p97(黑素转铁蛋白)多肽、受体相关蛋白(RAP)、抑肽酶肽或其类似物、蛋白传导域(PTD)、人低密度脂蛋白受体(hLDLR)结合肽或其类似物、结合BBB相关受体的抗体或天然配体，以及谷胱甘肽(GSH)。
p97多肽。
在某些实施方案中，BBB运输部分是p97(黑素转铁蛋白)多肽或序列，例如人p97多肽。在一些实施方案中，本发明的组合物和/或缀合物中使用的p97多肽序列包含选自表B1或表B2的人p97黑素转铁蛋白序列、基本上由选自表B1或表B2的人p97黑素转铁蛋白序列组成，或由选自表B1或表B2的人p97黑素转铁蛋白序列组成。还包括其活性变体和片段。
在一些实施方案中，p97多肽序列包含沿其长度与选自表B1或表B2的人p97序列或其片段具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或同源性的序列。
在特定的实施方案中，p97多肽序列包含选自表B1或表B2的人p97序列的片段。在某些实施方案中，p97多肽片段长度为约、至少约或多达约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730或更多个氨基酸，包括其间的所有整数和范围，并且其可以包含选自表B1或表B2的参考p97序列的序列的全部或一部分，如SEQ ID NO:1。
在某些实施方案中，p97多肽片段长度为约5-700、5-600、5-500、5-400、5-300、5-200、5-100、5-50、5-40、5-30、5-25、5-20、5-15、5-10、10-700、10-600、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、10-40、10-30、10-25、10-20、10-15、20-700、20-600、20-500、20-400、20-300、20-200、20-100、20-50、20-40、20-30、20-25、30-700、30-600、30-500、30-400、30-300、30-200、30-100、30-50、30-40、40-700、40-600、40-500、40-400、40-300、40-200、40-100、40-50、50-700、50-600、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、60-700、60-600、60-500、60-400、60-300、60-200、60-100、60-70、70-700、70-600、70-500、70-400、70-300、70-200、70-100、70-80、80-700、80-600、80-500、80-400、80-300、80-200、80-100、80-90、90-700、90-600、90-500、90-400、90-300、90-200、90-100、100-700、100-600、100-500、100-400、100-300、100-250、100-200、100-150、200-700、200-600、200-500、200-400、200-300或200-250个氨基酸，并且包含选自表B1或表B2的参考p97序列的全部或一部分，如SEQID NO:1。
在某些实施方案中，目标p97多肽序列包括p97氨基酸序列、p97的子序列和/或变体，它们对于跨血脑屏障运输目标试剂并进入中枢神经系统(CNS)中是有效的。在特定的实施方案中，变体或片段包含人p97的N-lobe(SEQ ID NO:1的残基20-361)，或其活性片段或变体。在具体的方面，变体或片段包含完整的和功能性的Fe3+结合位点。
在一些实施方案中，p97多肽是p97多肽可溶性形式(参见Yang et al.,Prot ExpPurif.34:28-48,2004)，或其活性片段或变体。在一些方面，可溶的p97多肽具有全部或部分疏水结构域(SEQ ID NO:1的残基710-738)的缺失，其单独或组合全部或部分信号肽的缺失(SEQ ID NO:1的残基1-19)。在具体的方面，可溶的p97多肽包含SEQ ID NO:1的残基20-709、20-710、20-711或20-712，或由其组成，包括其变体和片段。
在具体的实施方案中，p97多肽包含DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)或其活性片段或变体、由DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)或其活性片段或变体组成，或基本上由DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)或其活性片段或变体组成。
在某些实施方案中，例如，采用脂质体p97多肽序列的那些是p97多肽的脂质可溶形式。例如，这些和相关实施方案中的某些包括p97多肽，其包含疏水结构域的全部或部分，任选地具有或不具有信号肽。
在一些实施方案中，p97多肽，例如，DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)，具有一个或多个末端(例如，N端、C端)半胱氨酸和/或酪氨酸，其可被添加以分别用于缀合和碘化。
p97多肽和片段的具体实例提供于下表B1中。
Figure BDA0003210674900000341
Figure BDA0003210674900000351
在某些实施方案中，DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)p97多肽的变体可以基于来自其他生物体的p97序列的序列，如下表B2中所示。相对于人序列的变体氨基酸加有下划线。
Figure BDA0003210674900000352
Figure BDA0003210674900000361
Figure BDA0003210674900000371
因此，在某些实施方案中，p97肽包含表B2中的序列、由表B2中的序列组成，或基本上由表B2中的序列组成。在具体的方面，p97肽保留DSSHAFTLDELR(SEQ ID NO:14)肽的C端处的短的α-螺旋(LDEL(SEQ ID NO:278))。
参考p97多肽和其他参考多肽的另外的变体和片段在本文中有更详细的描述。
受体相关蛋白(RAP)。
在一些实施方案中，BBB运输部分包含RAP序列或其活性变体或片段或类似物，或由RAP序列或其活性变体或片段或类似物组成。成熟RAP的氨基酸序列(w/o信号序列)在下表B3中示出。
Figure BDA0003210674900000381
在某些实施方案中，RAP片段长度为约、至少约或多达约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310或320或更多个氨基酸，包括其间的所有整数和范围，并且其可以包含SEQ ID NO:20中所示RAP序列的全部或一部分。
RAPs，包括RAP变体的其他实例例如第2009/0269346号；第2009/0281024号；第2010/0028370号；第2010/0183581号；第2010/0210517号；第2011/0142763号美国申请；和第7,560,431号；第7,569,544号；第7,700,554号；第7,829,537号；第7,977,317号；和第8,440,629号美国专利中所述，其中的每项都通过引用整体并入本文中。参考RAP序列和其他参考多肽的另外的变体和片段在下文中有更详细的描述。
抑肽酶和相关的序列。
在一些实施方案中，BBB运输部分包含抑肽酶多肽或肽、抑肽酶相关的多肽或肽或其活性变体或片段或类似物，或由抑肽酶多肽或肽、抑肽酶相关的多肽或肽或其活性变体或片段或类似物组成。特别的实例包括SEQ ID NO:21中所示的抑肽酶序列的约15-58个连续的氨基酸的抑肽酶片段；或SEQ ID NO:21的约、至少约或多达约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58个连续的氨基酸的片段。
示例性的抑肽酶肽/类似物的序列提供在下表B4中。
Figure BDA0003210674900000391
Figure BDA0003210674900000401
Figure BDA0003210674900000411
Figure BDA0003210674900000421
某些实施方案采用抑肽酶肽包被的脂质体或纳米颗粒。靶向基于抑肽酶的BBB的肽的另外的实例描述于例如第2006/0189515号；第2008/0299039号；第2010/0297120号；第2011/0171128号；和第2012/0277158号美国申请；第7,902,156号和第7,557,182号美国专利；和第WO 2006/086870号和第WO 2004/060403号PCT公开中，其中的每项都通过引用整体并入本文中。参考抑肽酶和抑肽酶相关的多肽及相关的参考多肽的另外的变体和片段在下文中有更详细的描述。
蛋白传导域(PTDs)。
在某些实施方案中，BBB运输部分包含吸收介导的蛋白传导域(PTD)或由其组成。PTDs通常是位于允许较大分子跨细胞膜运输的转录因子上的氨基酸序列。PTDs的特定实例包括TAT(例如，HIV-1TAT)、Antennapedia的同源域、SynB肽(例如，SynB1、SynB3、SynB5)、渗透素、聚精氨酸等。TAT的残基37-48(核心结构域)与LRP结构域II、II和IV结合，并且残基49-57促进跨细胞膜的吸收性内吞作用。TAT(LAI/Bru菌株)、渗透素和SynB(PG-1)肽的氨基酸序列显示在下表B5中。
Figure BDA0003210674900000422
Figure BDA0003210674900000431
参考PTD序列和其他参考多肽的另外的变体和片段在下文中有更详细的描述。
hLDLR结合肽。
在某些实施方案中，BBB运输部分是结合人低密度脂蛋白受体(hLDLR)的肽。LDLR是包含三个区的839个氨基酸的跨膜蛋白：胞外区(1-768)、跨膜区(768-790)和胞质区(790-839)。胞外区分成两个亚区：LDL结合亚区(1-322)和LDL结合区外的亚区(322-768)(参见WO2007/014992)。某些hLDLR结合肽长度为约、至少约或多达约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个氨基酸。这样的肽可以包含下表B6中显示的一种或多种示例性的hLDLR结合肽的序列。
Figure BDA0003210674900000432
Figure BDA0003210674900000441
Figure BDA0003210674900000451
hLDLR结合肽可以是线性的或环形的肽，由天然和/或非天然氨基酸组成。hLDLR结合肽的另外的实例描述于例如第2011/0230416号和第2013/0108548号美国申请中，其中的每一项都通过引用整体并入本文中。
BBB运输抗体/配体。
在一些实施方案中，BBB运输部分包含免疫球蛋白分子如单克隆抗体或其一部分(例如，抗原结合片段、ScFv、Fab、sdAb)，或由免疫球蛋白分子如单克隆抗体或其一部分(例如，抗原结合片段、ScFv、Fab、sdAb)组成，后者结合或特异性地结合BBB相关受体，即介导跨BBB运输的受体。在其他实施方案中，BBB运输部分是BBB相关受体的天然配体(或其片段的变体)。
通常，BBB相关受体是通过受体介导的转包吞作用促进跨BBB转移营养物、激素、胰岛素和其他物质的特定运输蛋白。BBB相关受体的实例包括胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦素受体、脂蛋白受体如脂蛋白受体相关的蛋白(LRP-1)受体、胰岛素样生长因子(IGF)受体如IGF1R和IGF2R、低密度脂蛋白受体、白喉毒素受体和TMEM 30A(翻转酶)。
因此，某些BBB运输部分包括结合或特异性地结合胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦素受体、脂蛋白受体如脂蛋白受体相关的蛋白(LRP-1)受体、胰岛素样生长因子(IGF)受体如IGF1R和IGF2R、低密度脂蛋白受体、白喉毒素受体或TMEM 30A(翻转酶)的免疫球蛋白分子，如单克隆抗体或其一部分(例如，抗原结合片段、ScFv、Fab、sdAb)。
BBB运输抗体的具体实例描述于例如第2008/0152645号；第2008/0170994号；第2008/0171055号；第2009/0053219号；第2009/0156498号；第2011/0110935号；和第2013/0142794号美国申请；和第7,741,446号；第8,053,569号；第8,124,095号；第8,142,781号；第8,486,399号；和第8,497,246号美国专利；和第WO 2013/081706号；第WO 2011/088409号；第WO 2011/044542号；第WO 2010/108048号；第WO 2009/070597号；第WO 2009/018122号；第WO 2008/022349号；和第WO 2007/044323号PCT公开中，其中的每一项都通过引用整体并入本文中。
BBB相关受体配体的配体的实例包括胰岛素、转铁蛋白和转铁蛋白片段、乳铁蛋白和乳铁蛋白片段、载脂蛋白A (Apo A)、载脂蛋白B(Apo B)、载脂蛋白E(Apo E)、黑素转铁蛋白(同上)、RAP和RAP片段(同上)、白喉毒素(包括其无毒性的突变体如CRM45和CRM197)，以及本文描述的和本领域已知的其他类型。因此，某些BBB运输部分包含前述BBB相关受体配体中的一种或多种，或尤其组成。
谷胱甘肽(GSH)。
在某些实施方案中，BBB运输部分包含谷胱甘肽(GSH)或由谷胱甘肽(GSH)组成。GSH是一种三肽，在胺半胱氨酸的氨基(通过正常的肽键附接到甘氨酸)和谷氨酸侧链的羧基之间有一个γ肽键。
在一些实施方案中，GSH部分可操作地连接(例如，非共价地连接)至抗体或Fc融合多肽，例如，作为载体系统如脂质体的一部分。载体可以包括纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、固液纳米颗粒、聚合物胶束、脂质体、微乳液和/或基于液体的纳米颗粒。脂质体可包含至少一种卵磷脂如大豆卵磷脂和氢化卵磷脂如氢化大豆卵磷脂。在一些方面，脂质体可包含胆固醇、水可溶的维生素E和/或十八胺，例如以增加血清抗性或电荷量。在特定的实施方案中，脂质体的摩尔组合物比例可以是0.5％-100％的卵磷脂或氢化卵磷脂、0.005％-75％的胆固醇或水可溶的维生素E、0.001％-25％的十八胺。
具体实例包括载体，其包含抗体或Fc融合多肽(如本文所述)和谷胱甘肽，其中谷胱甘肽与聚乙二醇共价结合，任选地，其中聚乙二醇与维生素E或磷脂共价结合，并将维生素E或磷脂嵌入载体中，使谷胱甘肽在载体(例如，GSH-PEG包被的脂质体)的外表面上。示例性的基于GSH的缀合物和载体系统描述于例如第2007/0141133号；第2008/0095836号；和第2009/0123531号美国申请；和第7,446,096号；第7,700,564号；第7,704,956号；和第8,067,380号美国专利中，其中的每项都通过引用整体并入本文中。
2A.抗体
在某些实施方案中，缀合物包含抗体或其抗原结合片段作为试剂。本发明的缀合物或组合物中使用的抗体基本上可以为任何类型。特定的实例包括治疗和诊断抗体。如本领域熟知的，抗体是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个表位识别位点特异性结合靶标，如碳水化合物、多肽、直至、多肽等的免疫球蛋白分子。在特定的实施方案中，(b)的抗体或抗原结合片段包含免疫球蛋白Fc区，并且任选地其治疗活性的至少一部分依赖于该Fc区。
如本文所用，术语“抗体”不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，还包括其片段(如dAb、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(ScFv)、其合成变体、天然存在的变体、包含具有所需特异性的抗原结合片段的抗体部分的融合蛋白、人源化的抗体、嵌合抗体，以及包含具有所需特异性的抗原结合位点或片段(表位识别位点)的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型。
如本文所用的术语“抗原结合片段”是指包含结合目标抗原的免疫球蛋白重链和/或轻链的至少一个CDR的多肽片段。就此而言，本文中描述的抗体的抗原结合片段可以包含来自结合治疗性或诊断性靶标的抗体的VH和VL序列的1、2、3、4、5或所有6个CDRs。
术语“抗原”是指能被选择性结合剂如抗体结合，且另外还能用于动物中以产生能结合该抗原的表位的抗体的分子或分子部分。抗原可以具有一个或多个表位。
术语“表位”包括能特异性结合免疫球蛋白或T细胞受体的任何决定子，优选多肽决定子。表位是被抗体结合的抗原区域。在某些实施方案中，表位决定子包括诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基等分子的化学活性表面组群，并且在某些实施方案中可以具有特定三维结构特性和/或特定电荷特性。关于抗原的一级结构，表位可以是连续的或非连续的。
如果分子如抗体与特定的细胞或物质的反应或结合比与其它细胞或物质的反应或结合更频繁、更迅速、持续时间更长和/或亲和力更强，则可说该分子如抗体表现出“特异性结合”或“优先结合”。如果抗体与靶标的结合比与其它物质的结合的亲和力更强、亲和性更强、更容易和/或持续时间更长，则抗体与该靶标“特异性结合”或“优先结合”。例如，与特定抗原表位特异性结合或优先结合的抗体是指，相比与其它表位的结合，抗体与该特定表位的结合的亲和力更强、亲和性更强、更容易和/或持续时间更长。通过阅读该定义也可理解，例如，与第一靶标特异性或优先结合的抗体(或一部分或表位)，可能或可能不会与第二靶标特异性或优先结合。由此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(尽管其可能包括)专一性结合。通常但不一定，提到结合意指优先结合。
免疫结合通常指在免疫球蛋白分子和对该免疫球蛋白具有特异性的抗原之间发生的非共价相互作用类型，例如通过示例性但非限制性的方式来说，由于静电、离子、亲水和/或疏水吸引或排斥、空间力、氢键、范德瓦耳斯力和其他相互作用。免疫结合相互作用的强度或亲和力可以用相互作用的解离常数(Kd)的形式表达，其中较小的Kd表示较大的亲和力。可以使用本领域熟知的方法定量所选多肽的免疫结合性能。一种此类方法需要测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速率，其中那些速率取决于复合物伴侣的浓度、相互作用的亲和力和在两个方向上同等影响所述速率的几何参数。因此，可以通过计算结合和解离的浓度和实际速率测定“结合速率常数”(Kon)和“解离速率常数”(Koff)。Koff/Kon比率使得能够消除所有与亲和力不相关的参数，并因此等于解离常数Kd。
可使用本领域熟知的方法来量化所选抗体和多肽的免疫结合特性(参见Davieset al.,Annual Rev.Biochem.59:439-473,1990)。在一些实施方案中，当平衡解离常数为约≤10-7或10-8M时，抗体或其它多肽被说成能够与抗原或其表位特异性结合。在一些实施方案中，抗体的平衡解离常数可以是约≤10-9M或≤10-10M。在某些示例性实施方案中，抗体或其它多肽具有的与本文描述的抗原或靶标(其与之特异性结合)的亲和力(Kd)为至少约0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40或50nM。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段特异性地结合细胞表面受体。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段特异性地结合细胞表面受体的配体。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合癌症相关抗原。在一些情况下，抗原与中枢神经系统(CNS)的癌症，即神经性癌症相关。在一些情况下，抗原与CNS的转移性癌症，即转移性脑癌相关。示例性的癌症抗原包括细胞表面蛋白如细胞表面受体。还作为癌症相关抗原包括的是结合这样的细胞表面蛋白或受体的配体。在具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段特异性地结合胞内癌症抗原。在一些实施方案中，与癌症抗原相关的癌症是以下中的一种或多种：乳腺癌、转移性脑癌、前列腺癌、胃肠道癌症、肺癌、卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、鳞状细胞癌、CNS或脑癌、黑素瘤、非黑素瘤癌症、甲状腺癌、子宫内膜癌、上皮细胞瘤、骨癌或造血系统癌症。
示例性的癌症相关抗原包括但不限于：Her2/neu、B7H3、CD20、Her1/EGF受体、VEGF受体、PDGF受体、CD30、CD52、CD33、CTLA-4和肌腱蛋白。癌症相关抗原另外的实例是B7H3抗原(参见Chen et al.,Curr.Cancer Drug Targets.8:404-413,2008)。在具体的实施方案中，抗体是8H9单克隆抗体(参见，例如，Modak et al.,Cancer Res.61:4048-54,2001)，或其抗原结合片段。在特定的实施方案中，癌症相关抗原或癌症抗原包括以下中的一种或多种：人Her2/neu、Her1/EGF受体(EGFR)、Her3、A33抗原、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受体)、C242抗原、5T4、IL-6、IL-13、血管内皮生长因子VEGF(例如，VEGF-A)VEGFR-1、VEGFR-2、CD30、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD152、CD200、CD221、CCR4、HLA-DR、CTLA-4、NPC-1C、肌腱蛋白、波形蛋白、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、甲胎蛋白、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碳酸酐酶9(CA-IX)、癌胚抗原(CEA)、整合素αvβ3、整合素α5β1、叶酸受体1、跨膜糖蛋白NMB、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、糖蛋白75、TAG-72、MUC1、MUC16(或CA-125)、磷脂酰丝氨酸、前列腺特异性膜抗原(PMSA)、NR-LU-13抗原、TRAIL-R1、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B或TRAIL-R2)、SLAM家族成员7(SLAMF7)、EGP40泛癌抗原、B细胞活化因子(BAFF)、血小板来源的生长因子受体、糖蛋白EpCAM(17-1A)、程序性死亡-1、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、前列腺酸性磷酸酶、Lewis-Y抗原、GD2(神经外胚层来源的肿瘤上表达的唾液酸神经节苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)，和/或间皮素。
在具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段或其他多肽特异性地结合人Her2/neu蛋白。基本上任何抗Her2/neu抗体、抗原结合片段或其他Her2/neu特异性结合试剂可用于产生本发明的缀合物。示例性的抗Her2/neu抗体描述于例如第5,677,171号；第5,720,937号；第5,720,954号；第5,725,856号；第5,770,195号；第5,772,997号；第6,165,464号；第6,387,371号；和第6,399,063美国专利中，其内容通过引用整体并入本文中。
在具体的实施方案中，用于缀合物中的抗Her2/neu抗体是曲妥珠单抗
Figure BDA0003210674900000511
或其片段或变体或衍生物，如本文所述。
Figure BDA0003210674900000512
是批准用于治疗人乳腺癌的Her2/neu特异性单克隆抗体。在某些实施方案中，Her2/neu结合抗原结合片段包含Her2/neu抗体的一个或多个CDRs。就此而言，在一些情况下已表明可以进行仅转移抗体的VHCDR3，同时仍然保留所需的特异性结合(Barbas et al.,PNAS.92:2529-2533,1995)。也参见McLane et al.,PNAS USA.92:5214-5218,1995；和Barbas et al.,J.Am.Chem.Soc.116:2161-2162,1994。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或其他多肽特异性地结合人Her1/EGFR(表皮生长因子受体)。基本上任何抗Her1/EGFR抗体、抗原结合片段或其他Her1-EGFR特异性结合试剂都可以用于产生本发明的缀合物。示例性的抗Her1/EGFR抗体描述于例如第5,844,093号；第7,132,511号；第7,247,301号；第7,595,378号；第7,723,484号；第7,939,072号；和第7,960,516号美国专利中，其内容通过引用整体并入本文中。
在具体的实施方案中，用于本发明的缀合物中的抗Her1/EGFR抗体是西妥昔单抗
Figure BDA0003210674900000513
或其片段或衍生物，如本文中所述。在某些实施方案中，抗Her1/EGFR结合片段包含Her1/EGFR抗体如西妥昔单抗的一个或多个CDRs。西妥昔单抗被批准用于治疗头颈癌和结直肠癌。西妥昔单抗由具有人IgG1重链和κ链恒定(骨架)区的人EGFR的N端部分特异性的225种鼠EGFR单克隆抗体的Fv(可变的；抗原结合)区组成。
在某些实施方案中，抗体是选自以下的治疗性抗体：曲妥珠单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、他尼珠单抗、3F8、8H9、阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿夫土珠单抗(afutuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、(培化)阿珠单抗(alacizumab(pegol))、阿麦妥昔(amatuximab)、阿泊珠单抗(apolizumab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝妥莫单抗(bectumomab)、贝利木单抗(belimumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、莫-比伐珠单抗(bivatuzumab(mertansine))、贝伦妥单抗-维多汀(brentuximab vedotin)、莫-坎妥珠单抗(cantuzumab(mertansine))、拉-坎妥珠单抗(cantuzumab(ravtansine))、卡罗单抗-喷地肽(capromab(pendetide))、卡妥索单抗(catumaxomab)、泊-西他珠单抗(citatuzumab(bogatox))、西妥木单抗(cixutumumab)、clivatuzumab(tetraxetan)、可那木单抗(conatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、达洛珠单抗(dalotuzumab)、地莫单抗、drozitumab、依美昔单抗(ecromeximab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依洛珠单抗(elotuzumab)、enavatuzumab、恩司昔单抗(ensituximab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄马索单抗(ertumaxomab)、埃达珠单抗(etaracizumab)、法勒珠单抗(farletuzumab)、FBTA05、芬妥木单抗(figitumumab)、flanvotumab、加利昔单抗(galiximab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、ganitumab、吉妥珠单抗-奥佐米星(Gemtuzumab(ozogamicin))、吉瑞昔单抗(girentuximab)、格莱木单抗-维多汀(glembatumumab(vedotin))、替-伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、icrucumab、伊戈伏单抗(igovomab)、拉-英达西单抗(indatuximab ravtansine)、英妥木单抗(intetumumab)、伊珠单抗-奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)、伊匹木单抗(ipilimumab)(MDX-101)、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、来沙木单抗(lexatumumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、莫-洛伏珠单抗(lorvotuzumab(mertansine))、鲁卡木单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫加珠单抗(mogamulizumab)、moxetumomab(pasudotox)、他那可单抗(nacolomab(tafenatox))、他那莫单抗(naptumomab(estafenatox))、narnatumab、奈昔木单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nivolumab、
Figure BDA0003210674900000521
(具有或没有放射性碘)、NR-LU-10、奥法木单抗(ofatumumab)、olaratumab、奥纳珠单抗(onartuzumab)、莫奥珠单抗(oportuzumab(monatox))、奥戈伏单抗(oregovomab)、帕尼单抗(panitumumab)、帕曲土单抗(patritumab)、pemtumomab、培妥珠单抗(pertuzumab)、普立木单抗(pritumumab)、雷妥莫单抗(racotumomab)、radretumab、雷莫芦单抗(ramucirumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、罗妥木单抗(robatumumab)、奥马珠单抗(samalizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、tabalumab、帕-他莫单抗(taplitumomab(paptox))、替妥莫单抗(tenatumomab)、替妥木单抗(teprotumumab)、TGN1412、替西木单抗(ticilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、替加珠单抗(tigatuzumab)、TNX-650、托西莫单抗(tositumomab)、TRBS07、西莫白介素单抗(tucotuzumab(celmoleukin))、ublituximab、乌瑞鲁单抗(urelumab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、伏洛昔单抗(volociximab)、伏妥昔单抗(votumumab)和扎芦木单抗(zalutumumab)。还包括以上的片段、变体和衍生物。
在某些实施方案中，抗体特异性地结合与神经病(例如，神经炎性病况)相关的宿主蛋白或抗原，包括任何一种或多种神经炎性和/或自身免疫性相关抗原。在特定的实施方案中，抗体特异性地结合宿主蛋白或与神经炎性病况相关的抗原。在一些方面，宿主蛋白或抗原是细胞表面受体或其他细胞表面蛋白。在一些实施方案中，抗原是细胞表面受体或其他细胞表面蛋白的配体。在某些实施方案中，抗原是胞内蛋白。在特定的实施方案中，宿主蛋白或抗原是人蛋白。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合与(例如，治疗)至少一种神经系统病症相关的抗原，包括周围和/或中枢神经系统(CNS)病症的病症。在某些实施方案中，抗体或其他多肽特异性地结合与(例如，治疗)疼痛相关的抗原，包括急性疼痛、慢性疼痛和神经性疼痛。在一些实施方案中，抗体特异性地结合与(例如，治疗)自身免疫性病症相关的抗原，包括神经系统或CNS的自身免疫性病症。
神经系统、疼痛和/或自身免疫性相关抗原的实例包括但不限于alpha-4(α4)整合素、肿瘤坏死因子(TNF)、IL-12、IL-23、IL-12和IL-23的p40亚基、CD20、CD52、淀粉样蛋白-β(例如，Aβ(1-42))、亨廷顿蛋白、CD25(即IL-2受体的α链)、神经生长因子(NGF)、神经营养性酪氨酸激酶1型受体(TrkA；NGF的高亲和力催化受体)和α-突触核蛋白。在一些实施方案中，抗体特异性地结合以下中的至少一种：白介素-2(IL-2)受体、α4整合素、CD20、CD52、IL-12、IL-23、IL-12和IL-23的p40亚基，或轴突再生长和髓鞘再生抑制剂Nogo-A和LINGO。这些靶标已被考虑用于治疗多种神经系统、疼痛和/或自身免疫性病症，如多发性硬化(α4整合素、IL-23、CD25、CD20、CD52、IL-12、IL-23、IL-12和IL-23的p40亚基、Nogo-A、LINGO-1)、阿尔茨海默病(Aβ、TNF)、亨廷顿病(亨廷顿蛋白)、帕金森病(α-突触核蛋白)和疼痛(NGF和TrkA)。
IL-2受体。在一些方面，抗体特异性地结合IL-2受体(IL-2R)。IL-2R是表达于某些免疫细胞，如淋巴细胞表明上的异源三聚体蛋白，其结合并响应于细胞因子IL-2。IL-2R具有3个非共价结合的亚基：α(CD25)、β(CD122)和γ(CD132)。α和β亚基结合IL-2，并且β和γ亚基一起促进所述结合后的信号传导。IL-2R的β和γ亚基是I型细胞因子受体家族的成员。
因此，在某些方面，抗体特异性地结合IL-2受体(CD25)的α亚基，并任选地降低IL2与CD25之间的相互作用。在一些方面，抗体特异性地结合IL-2受体(CD122)的β亚基，并任选地降低IL-2和CD122之间的相互作用，和/或降低由于IL-2与IL-2R结合所产生的信号传导。在特定方面，抗体特异性地结合IL-2受体(CD132)的γ亚基，并任选地降低由于IL-2与IL-2R结合所产生的信号传导。在具体的方面，抗体是达利珠单抗，或特异性地结合CD25的其变体或片段，如本文中所述。
Alpha-4整合素。
在某些方面，抗体特异性地结合α4整合素。Alpha-4整合素(或CD49d)是整合素二聚物极晚期抗原4(VLA-4，或整合素α4β1)的一种组分，其他的组分是β-1整合素(CD29，或整合素β-1)。与其他整合素α链不同，α4整合素既不包含I域，也不进行二硫键连接的裂解。α4整合素还与β7链相关。在一些方面，抗体是那他珠单抗或特异性地结合α4整合素的其变体或片段，如本文中所述。
CD20。
在一些方面，抗体特异性地结合CD20。CD20是表达于所有B细胞表面上的活化的糖基化磷酸蛋白，在前B期(CD45R+、CD117+)开始且浓度逐渐增加直到成熟。因此，在一些实施方案中，抗体特异性地结合对象中的或体外的CD20+B细胞。在具体的实施方案中，抗体特异性地结合CD20，并且对CD20+B细胞具有以下一种或多种效应：(a)介导针对B细胞的抗体依赖性额细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性的细胞毒性(CDC)，(b)增加MHC II、LFA-1和/或LFA-3(淋巴细胞功能相关抗原)的表达，(c)增加CD23的脱落，(d)下调B细胞受体，(e)诱导B细胞的凋亡，或(e)前述的任意组合。在具体的实施方案中，抗体是利妥昔单抗、托西妥珠单抗、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)或奥法木单抗、TRU-015或维妥珠单抗(veltuzumab)，或特异性地结合CD20的其变体或片段，如本文中所述。
CD52。
在一些方面，抗体特异性地结合CD52。CD52是表达于成熟的淋巴细胞、单核细胞和某些树突状细胞子集上的糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的抗原。在具体的实施方案中，抗体是阿仑单抗，或特异性地结合CD52的其变体或片段，如本文中所述。
IL-12。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合白介素12(IL-12)。IL-12是一种由树突状细胞、巨噬细胞和人B淋巴母细胞(NC-37)响应抗原刺激产生的白细胞介素。它是一种异二聚体细胞因子，由两个单独的基因IL-12A(p35)和IL-12B(p40)编码。
IL-12参与了幼稚T细胞向Th0细胞的分化，Th0细胞将进一步发育成Th1细胞或Th2细胞。它被称为T细胞刺激因子，可以刺激T细胞的生长和功能。它刺激从T细胞和自然杀伤(NK)细胞产生干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，并减少IL-4介导的IFN-γ抑制。IL-12还介导NK细胞和CD8+细胞毒T淋巴细胞的细胞毒活性的增强。IL-12与自身免疫有关，据信这是由于其在诱导Th1免疫反应中的作用所致。因此，某些实施方案包括特异性地结合IL-12A (p35)、IL-12B(p40)或二者的抗体，并且其任选地降低或拮抗IL-12的一种或上述生物活性，包括其在诱导Th1免疫反应中的作用，如本文中所述。
IL-23。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合白介素-23(IL-23)。IL-23是一种异二聚体细胞因子，由两个亚基p40和p19(IL-23α亚基)组成。与IL-6和TGF-β1结合，IL-23刺激幼稚CD4+T细胞分化为Th17细胞，其与经典的Th1和Th2细胞不同。Th17细胞产生IL-17，其为一种促炎性细胞因子，可增强T细胞引发并刺激促炎分子如IL-1、IL-6、TNF-α、NOS-2和趋化化因子的产生，导致炎症。缺失p40或p19或IL-23受体亚基(IL-23R和IL12R-β1)的敲除小鼠发展出较轻的多发性硬化和炎性肠病症状。因此，某些实施方案包括特异性地结合p40、p19或二者的抗体，并且其任选地降低或拮抗IL-23的一种或上述生物活性，包括其在产生Th17细胞中的作用，如本文中所述。
IL-12和IL-23的p40亚基。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合IL-12的p40亚基(即IL-12β亚基)和IL-23。p40(即自然杀伤细胞刺激因子2、细胞毒性淋巴细胞成熟因子2)是IL-12和IL-23的共有亚基。在多发性硬化(MS)患者的中枢神经系统中观察到基因的过度表达，表明该细胞因子在该疾病的发病机制中发挥作用。因此，某些实施方案涉及与p40特异性地结合的抗体，并且其任选地降低或拮抗IL-12和IL-23的一种或多种上述活性。在具体的实施方案中，抗p40抗体是优特克单抗(CNTO 1275)，或特异性地结合IL-12和IL-23的p40亚基的其变体或片段，如本文中所述。
Nogo-A。
Nogo-A是网状内皮素-4(或神经突生长抑制剂；Nogo)和轴突再生长和髓鞘再生抑制剂的拼接同种型。某些实施方案包括特异性地结合Nogo-A的抗体，并且其任选地降低或拮抗其作为轴突再生长和髓鞘再生抑制剂的活性，即它们增加对象中的轴突再生长和髓鞘再生，如本文中所述。
LINGO-1。
LINGO-1是介导轴突生长的抑制的NgR1/p75/LINGO-1和NgR1/TAJ(TROY)/LINGO-1信号传导复合物的CNS特异性蛋白和功能组分。这些受体复合物经由RhoA活化介导Nogo的轴突生长抑制效应、髓磷脂相关的糖蛋白(MAG)和少突细胞-髓磷脂糖蛋白(OMgp)。某些实施方案包括特异性地结合LINGO-1的抗体或其抗原结合片段，并且其任选地降低或拮抗其作为轴突再生长和髓鞘再生抑制剂的活性，即它们增加对象中的轴突再生长和髓鞘再生。
在某些实施方案中，抗体特异性地结合与一种或多种类型的疼痛或疼痛相关抗原相关的宿主蛋白或抗原。在一些方面，宿主蛋白或抗原是细胞表面受体或其他细胞表面蛋白。在一些实施方案中，抗原是细胞表面受体或其他细胞表面蛋白的配体。在某些实施方案中，抗原是胞内蛋白。在特定的实施方案中，宿主蛋白或抗原是人蛋白。示例性的疼痛相关抗原包括神经生长因子(NGF)和神经营养性酪氨酸激酶1型受体(TrkA)。
神经生长因子。
NGF是一种分泌蛋白，有助于某些神经元的生长、维持和存活，并且对交感神经和感觉神经元的存活至关重要。NGF形成一个半胱氨酸结结构，由相互缠绕并通过二硫键连接的β链组成。大多数结构是二聚体。NGF与至少两类受体相互作用：p75 LNGFR(低亲和力神经生长因子受体)神经营养因子受体(p75(NTR))和TrkA，后者为一种跨膜酪氨酸激酶。两种受体都与神经退行性病症相关。
NGF也被证明是疼痛，包括炎症和神经性疼痛的主要介导物。例如，炎症和神经性疼痛的临床前动物模型显示NGF水平增加，而NGF的隔离减轻了相关的痛觉过敏(参见Watson et al.,BioDrugs.22:349-59,2008)。因此，某些实施方案包括特异性地结合NGF的抗体，并且其任选地减少其与TrkA、p75(NTR)或二者的结合，如本文中所述。通过参考与TrkA的配体结合域复合的NGF的晶体结构，可以促进与TrkA相互作用的NGF表位的鉴定(参见Wiesmann et al.,Nature.401:184-188,1999)。在一些实施方案中，抗体是他尼珠单抗，或特异性地结合NGF，并任选地减少NGF与TrkA之间的结合的其变体或片段，如本文中所述。
TrkA。
高亲和力神经生长因子受体(神经营养性酪氨酸激酶1型受体；TRK1转换酪氨酸激酶蛋白；TrkA)是一种膜结合的受体激酶，其在与NGF结合后，将自身和MAPK途径的成员磷酸化。通过NGF活化TrkA与疼痛相关，包括炎症和神经性疼痛。实际上，针对TrkA受体的中和抗体可能在炎症和慢性疼痛中显示出强效的镇痛作用(参见Ugolini et al.,PNAS USA.104:2985-2990,2007)。
TrkA由胞外NGF结合域和胞内酪氨酸激酶域组成。因此，某些实施方案包括如下抗体，其特异性地TrkA的结合胞外NGF结合域，并且其任选地降低TrkA和NGF之间的相互作用，如本文中所述。通过参考与TrkA的配体结合域复合的NGF的晶体结构，可以促进与NGF相互作用的TrkA表位的鉴定(参见Wiesmann et al.,同上)。其他实施方案包括抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合胞内酪氨酸激酶结构域，并且任选地抑制TrkA的激酶活性，例如，其自身磷酸化和/或其MAPK途径的成员的磷酸化。在具体的实施方案中，抗体是MNAC13或特异性地结合TrkA的其变体或片段，如本文中所述。
在一些实施方案中，抗体特异性地结合促炎性分子，例如促炎性细胞因子或趋化因子。在这些和相关的实施方案中，缀合物可用于治疗多种炎性病况，如本文中所述。促炎性分子的实例包括肿瘤坏死因子(TNF)如TNF-α和TNF-β、TNF超家族分子如FasL、CD27L、CD30L、CD40L、Ox40L、4-1BBL、TRAIL、TWEAK和Apo3L、白介素-1(IL-1)，包括IL-1α和IL-1β、IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IFN-α/β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、LIF、CCL5、GROα、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CXCL2、CCL2等。在一些实施方案中，抗体特异性地结合一种或多种上述促炎性分子的受体，如TNF受体(TNFR)、IL-1受体(IL-1R)或IL-6受体(IL-6R)等。
在具体的实施方案中，如上所述，抗体特异性地结合TNF-α或TNF-β。在特定的实施方案中，抗TNF抗体是阿达木单抗
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赛妥珠单抗
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戈利木单抗
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或英夫利昔单抗
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D2E7、CDP 571或CDP 870，如本文中所述。包含抗TNF抗体的缀合物可用于例如治疗多种炎性病况，如本文中所述。这样的缀合物也可用于治疗多种神经性病况或病症如阿尔茨海默病、中风、外伤性脑损伤(TBI)、椎管狭窄症、急性脊髓损伤和脊髓压迫症(参见第6,015,557号；第6,177,077号；第6,419,934号；第6,419,944号；第6,537,549号；第6,982,089号；和第7,214,658号美国专利)。
在具体的实施方案中，抗体特异性地结合IL-1α或IL-1β。在特定的实施方案中，抗IL-1抗体是卡那单抗或gevokizumab，或特异性地结合IL-1β的变体或片段，如本文中所述。在本文所述的其他炎性病况中，包含抗IL-1抗体的缀合物可用于治疗冷吡啉相关周期性综合征(CAPS)，包括家族性感冒自身炎症综合征、Muckle–Wells综合征和新生儿发病多系统炎症性疾病。
可以通过本领域普通技术人员已知的多种技术中的任一种来制备抗体。参见，例如，Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,1988。可以例如使用Kohler和Milstein,Eur.J.Immunol.6:511-519,1976的技术，以及对其的改进制备目标多肽特异性的单克隆抗体。还包括利用转基因动物如小鼠的方法以表达人抗体。参见例如，Neuberger et al.,Nature Biotechnology 14:826,1996；Lonberg etal.,Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101,1994；和Lonberg et al.,Internal Review of Immunology 13:65-93,1995。特定的实例包括
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的
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平台(参见例如，第6,596,541号美国专利)。
还可以通过使用噬菌体展示文库或酵母展示文库产生或鉴定抗体(参见，例如，第7,244,592号美国专利；Chao et al.,Nature Protocols.1:755-768,2006)。可用文库的非限制性实例包括克隆的或合成的文库，如人组合抗体文库(HuCAL)，其中人抗体部件库的结构多样性以7个重链和7个轻链可变区基因表示。这些基因的组合在主库中产生出49个骨架。通过在这些骨架上叠加高变异基因盒(CDRs＝互补性决定区)，巨大的人抗体部件库可以得到复制。还包括用人供体来源的编码轻链可变区的片段、重链CDR-3、编码重链CDR-1中多样性的合成DNA和编码重链CDR-2中多样性的合成DNA设计的人文库。适合使用的其他文库对本领域技术人员显而易见。
在某些实施方案中，如本文所述，抗体和其抗原结合片段包括在重链和轻链骨架区(FR)集之间分别插入的重链和轻链CDR集，骨架区集为CDRs提供支撑，并且限定了CDRs相对于彼此的空间关系。本文使用的术语“CDR集”指重链或轻链V区的三个高度可变区。从重链或轻链的N端出发，这些区域分别被表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。因此，抗原结合位点包括6个CDRs，其包含来自每一重链和轻链V区的CDR集。包含单个CDR(例如CDR1、CDR2或CDR3)的多肽在本文指“分子识别单元”。对许多抗原-抗体复合体的晶体学分析表明，CDRs的氨基酸残基与结合的抗原形成广泛接触，其中最广泛的抗原接触是与重链CDR3。因此，所述分子识别单元主要负责抗原结合位点的特异性。
本文使用的术语“FR集”指四个侧面的氨基酸序列，其为重链或轻链V区的CDR集的CDRs的骨架。一些FR残基可与结合的抗原接触；然而FRs主要负责将V区折叠成为抗原结合位点，特别地，FR残基与CDRs直接相邻。在FRs内，某些氨基酸残基和某些结构特征是十分高度保守的。就此而言，所有V区序列都包含约90个氨基酸残基的内部二硫键环。当V区折叠成为结合位点时，CDRs展现为突出的环基序，其形成抗原结合表面。通常认为，不管精确的CDR氨基酸序列如何，存在影响CDR环成为某种“经典”结构的折叠形状的FRs的保守结构区。此外，已知某些FR残基可参与非共价的域间接触，这可稳定抗体重链和轻链的相互作用。
可通过参考Kabat,E.A.et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest.第4版.US Department of Health and Human Services.1987及其更新来确定免疫球蛋白可变域的结构和位置。
在某些实施方案中，抗体是单克隆抗体。“单克隆抗体”指均质性抗体群，其中所述单克隆抗体包含涉及抗原表位选择性结合的氨基酸(天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸)。单克隆抗体是高度特异性的，其针对单一抗原表位。术语“单克隆抗体”不仅包含完整的单克隆抗体和全长的单克隆抗体，也包括其片段(如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、单链(ScFv)、其变体、包含抗原结合部分的融合蛋白、人源化单克隆抗体、嵌合单克隆抗体以及包含具有所需特异性和与表位结合的能力的抗原结合片段(表位识别位点)的免疫球蛋白分子的任何其它修饰构型。并不意图限制关于抗体的来源或其制备方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物)。该术语包括上文描述的在“抗体”定义之下的完整免疫球蛋白以及片段等。
在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是人源化的。这些实施方案指通常使用重组技术制备的嵌合分子，其具有来源于来自非人物种的免疫球蛋白的抗原结合位点，并且该分子的其余免疫球蛋白结构基于人免疫球蛋白的结构和/或序列。抗原结合位点可以包含融合到恒定区上的完整可变区或仅包含可变域内接枝到合适骨架区上的CDRs。表位结合位点可以为野生型或通过一个或多个氨基酸取代来修饰。这消除了作为人个体内的免疫原的恒定区，但保留了对外来可变区起免疫反应的可能性(LoBuglio et al.,PNAS USA86:4220-4224,1989；Queen et al.,PNAS USA.86:10029-10033,1988；Riechmann et al.,Nature.332:323-327,1988)。抗体人源化的示例性方法包括第7,462,697号美国专利中描述的方法。
另一方法不仅专注于提供源自人的恒定区，还专注于修饰可变区以便将它们改造为尽可能接近人形式。已知重链和轻链的可变区都含有3个互补性决定区(CDRs)，其对考虑中的表位的响应不同并决定结合能力，其侧接有在给定物种中相对保守并推测为CDRs提供支架的4个骨架区(FRs)。当针对特定表位制备非人抗体时，可以通过接枝源自存在于待修饰的人抗体中FRs上的非人抗体的CDRs来“改造”或“人源化”可变区。Sato et al.,CancerRes.53:851-856,1993；Riechmann et al.,Nature 332:323-327,1988；Verhoeyen etal.,Science 239:1534-1536,1988；Kettleborough et al.,Protein Engineering.4:773-3783,1991；Maeda et al.,Human Antibodies Hybridoma 2:124-134,1991；Gormanet al.,PNAS USA.88:4181-4185,1991；Tempest et al.,Bio/Technology 9:266-271,1991；Co et al.,PNAS USA.88:2869-2873,1991；Carter et al.,PNAS USA.89:4285-4289,1992；和Co et al.,J Immunol.148:1149-1154,1992已报导了将该方法应用于不同抗体。在一些实施方案中，人源化的抗体保留了所有CDR序列(例如，含有来自小鼠抗体的所有6个CDRs的人源化小鼠抗体)。在其他实施方案中，人源化抗体具有一个或多个CDRs(1、2、3、4、5、6个)，其针对原始抗体进行了改造，其也称为“来源于”一种或多种来自原始抗体的CDRs的一个或多个CDRs。
2B.Fc融合多肽
在某些实施方案中，缀合物包含Fc融合多肽作为试剂。通常，Fc融合多肽是治疗性Fc融合多肽，任选地现有的和/或商业批准的Fc融合多肽。Fc融合多肽的特定实例包括阿巴西普、阿柏西普、阿法西普、贝拉西普、依那西普、利纳西普和雷米斯汀。
阿巴西普阻断抗原呈递细胞(APCs)上的CD80或CD86与T细胞上的CD28之间的相互作用，从而抑制T细胞活化。它目前在美国被批准用于治疗类风湿性关节炎。阿巴西普由融合至人IgG1 Fc的人细胞毒性T淋巴细胞相关分子4(CTLA-4)的胞外结构域(ECD)组成。因此，某些缀合物包含与阿巴西普相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
阿柏西普结合所有形式的VEGF-A，以及胎盘生长因子，从而抑制血管生成。它目前在美国批准用于治疗湿性黄斑变性和转移性结直肠癌。阿柏西普由融合至人IgG1 Fc的VEGF受体1和2的ECDs组成。因此，某些缀合物包含与阿柏西普相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
阿法西普与CD2结合，阻断APCs上的淋巴细胞功能相关抗原(LFA)与T细胞上的CD2之间的相互作用，从而抑制T细胞活化。它在美国被批准用于治疗斑块状银屑病。阿法西普是由融合至人IgG1 Fc的淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3)的第一个ECD组成。因此，某些缀合物包含与阿法西普相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
贝拉西普阻断APCs上CD80或CD86与T细胞上CD28之间的相互作用，从而抑制T细胞活化。它在美国被批准用于预防接受肾移植的成人中的器官排斥。贝拉西普由融合至人IgG1 Fc的CTLA-4的ECD组成，并且与阿巴西普在CTLA-4区中相差两个氨基酸取代(L104E、A29Y)。某些缀合物包含与贝拉西普相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
依那西普结合膜结合的且为可溶形式的TNF，从而降低炎症细胞因子的浓度。它在美国被批准用于治疗类风湿性关节炎。依那西普由融合至人IgG1 Fc的肿瘤坏死因子(TNF)受体II的75kDa可溶的ECD组成。某些缀合物包含与依那西普相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
利纳西普结合IL-1，从而阻止其与内源性细胞表面受体的相互作用。它在美国被批准用于治疗斑块状银屑病。利纳西普由两条链组成，每条链包含融合至IL-1RI ECD的N端、融合至人IgG1 Fc的IL-1R辅助蛋白配体结合区的C端。因此，某些缀合物包含与利纳西普相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
雷米斯汀结合并折磨TPO受体。它在美国被批准用于治疗血小板减少症。雷米斯汀由融合至非糖基化人IgG1 Fc的C端的肽血小板生成素(TPO)模拟物组成。它是在大肠杆菌中重组产生的，并且由于缺乏糖基化，其Fc功能被最小化。因此，某些缀合物包含与雷米斯汀相连的BBB运输部分，或其活性片段或变体。
3.连接子
如上所述，某些缀合物可采用一个或多个任选的连接基团。本文所用的术语“键”、“连接子”、“连接子部分”或“L”是指可用于分离BBB部分与试剂，或分离第一试剂与另一试剂或标记(荧光标记)的连接子，例如其中两种或更多种试剂连接形成缀合物。连接子可以是生理学上稳定的，或者可包括可释放的连接子，如不稳定的连接子或酶可降解的连接子(例如，蛋白水解可裂解连接子)。在某些方面，连接子可以是肽连接子。在一些方面，连接子可以是非肽连接子或非蛋白质连接子。在一些方面，连接子可以是颗粒，如纳米颗粒。
连接子可以为电中性的或可携带正电荷或负电荷。可逆或不稳定连接子含有可逆或不稳定键。连接子可任选地包括增加两个连接的原子之间的距离的间隔子。间隔子可进一步增加连接子的柔性和/或长度。间隔子可包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基；其各自可含有一个或多个杂原子、杂环、氨基酸、核苷酸和糖。
不稳定键为除了能够在不断裂或裂解同一分子中的其它共价键的条件下选择性断裂或裂解的到氢原子的共价键以外的共价键。更具体地，不稳定键为在适当条件下比同一分子中的其它非不稳定共价键更不稳定(热力学上)或更快速裂解(动力学上)的共价键。分子内不稳定键的裂解可导致形成两个分子。对于本领域的技术人员，一般根据键裂解的半衰期(t1/2)(一半键裂解所需的时间)论述键的裂解或不稳定性。因此，不稳定键涵盖可比其它键结分子更快速地选择性裂解的键。
适当条件可通过不稳定键的类型决定并且在有机化学中是熟知的。不稳定键可能对pH值、氧化性或还原性或条件或试剂、温度、盐浓度、存在的酶(如酯酶，包括核酸酶和蛋白酶)，或存在的添加试剂是敏感的。例如，对于pH不稳定的键，增加的或降低的pH是适当的条件。
在一些实施方案中，连接子为经建构以含有烷基、芳基和/或氨基酸主链，并且含有酰胺、醚、酯、腙、二硫键或其任何组合的有机部分。含有氨基酸、醚和酰胺结合组分的键在生理pH(在血清中通常为7.4)的条件下是稳定的。如上所述，还包括含有酯或腙并且在血清pH下稳定的键，但其在暴露于溶酶体pH时水解释放siRNA分子。还包括二硫键，至少部分因为其对还原性裂解敏感。另外，氨基酸连接子可以设计成对所需目标器官中或例如溶酶体中的特定酶裂解敏感。示例性的连接子描述于Blattler et al.(19S5)Biochem.24:1517-1524；King et al(1986)Biochem.25:5774-5779；Srinivasachar and Nevill(1989)Biochem.28:2501-2509以及别处中。
在一些实施方案中，连接子的长度为约1至约30个原子，或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个原子，包括其间的全部范围。在某些实施方案中，连接子长度为约1-30个原子，碳链原子可被独立地选自O、N或S的杂原子取代。在一些实施方案中，1-4或5-15个C原子被独立地选自O、N、S的杂原子取代。
在某些实施方案中，连接子包含选自以下的结构，或由选自以下的结构组成：—O—、—NH—、—S—、—C(O)—、C(O)—NH、NH—C(O)—NH、O—C(O)—NH、—C(S)—、—CH2—、—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—CH2—、—O—CH2—、—CH2—O—、—O—CH2—CH2—、—CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—O—、—O—CH2—CH2—CH2—、—CH2—O—CH2—CH2—、—CH2—CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—CH2—O—、—O—CH2—CH2—CH2—CH2—、—CH2—O—CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—O—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—CH2—CH2—O—、—C(O)—NH—CH2—、—C(O)—NH—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—、—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—、—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—、—NH—C(O)—CH2—、—CH2—NH—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—、—NH—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—NH—C(O)—CH2—CH2、—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—CH2、—C(O)—NH—CH2—、—C(O)—NH—CH2—CH2—、—O—C(O)—NH—CH2—、—O—C(O)—NH—CH2—CH2—、—NH—CH2—、—NH—CH2—CH2—、—CH2—NH—CH2—、—CH2—CH2—NH—CH2—、—C(O)—CH2—、—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—C(O)—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—、二价环烷基、—N(R6)—，R6为H或选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基的有机基团。
在一些实施方案中，连接子包含可释放连接子。在一些实施方案中，可释放连接子选自：羧酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧基烷基醚、亚胺、原酸酯、硫酯、硫醇酯、碳酸盐和腙。在某些实施方案中，连接子含有当递送到溶酶体环境后发生水解的部分(例如在溶酶体pH下或当与溶酶体酶接触后容易发生水解)。
在一些实施方案中，连接子包含稳定连接子。在一些实施方案中，稳定的键选自：丁二酰亚胺、丙酸、羧基甲醇化物键、醚、氨基甲酸酯、酰胺、胺、碳酰二胺、酰亚胺、脂肪族C-C键和硫醚。
在一些实施方案中，连接子包含诸如聚乙二醇或聚丙二醇的聚合物或由其组成。如本文所用，术语“PEG”、“聚乙二醇”和“聚(乙二醇)”可互换并且打算涵盖任何水溶性聚(氧化乙烯)衍生物。PEG为在许多水溶液和有机溶剂中具有良好溶解度的熟知的聚合物，其显示低毒性、缺乏免疫原性，并且澄清、无色、无臭和稳定。如本文所述，可使用其它水溶性聚合物获得类似产品，包括但不限于；聚乙烯醇、其它聚(氧化烯)如聚(丙二醇)等、聚(乙氧基化多元醇)如聚(乙氧基化丙三醇)等、羧甲基纤维素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚1,3-二氧杂环戊烷、聚1,3,6-三噁烷、乙烯/顺丁烯二酸酐和聚氨基酸。本领域技术人员将能够基于所需剂量、循环时间、蛋白分解抗性和其它考虑因素选择所需的聚合物。
通常，根据本文所述的缀合物使用的PEGs包含以下结构“-(OCH2CH2)n-”，其中(n)为约1-4000、约20-1400，或约20-800。在特定的实施方案中，视是否已置换末端氧而定，PEG还包括“-O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-”和“-(OCH2CH2)n-O-”。术语“PEG”包括具有多个末端或“封端”基团的结构。术语“PEG”还包括聚合物，其含有大部分(也就是说大于50％)的-OCH2CH2-重复亚基。关于特定形式，PEG可采取多种不同分子量，以及诸如“分支的”、“线性的”、“分叉的”、“多官能的”PEG分子的结构或几何结构。
用于将这样的聚合物缀合到活性部分的代表性聚合物试剂和方法描述于Harris,J.M.和Zalipsky,S.,Eds,Poly(ethylene glycol),Chemistry and BiologicalApplications,ACS,Washington,1997；Veronese,F.,和J.M.Harris,Eds.,Peptide andProtein PEGylation,Advanced Drug Delivery Reviews,54(4)；453-609(2002)；Zalipsky,S.,et al.,“Use of Functionalized Poly Ethylene Glycols)forModification of Polypeptides”,Polyethylene Glycol Chemistry:Biotechnical andBiomedical Applications,J.M.Harris,编,Plenus Press,New York(1992)；Zalipsky(1995)Advanced Drug Reviews 16:157-182；和Roberts et al.,Adv.Drug DeliveryReviews,54,459-476(2002)中。
多种PEG衍生物都可商购获得并且适用于制备本发明的PEG缀合物。例如，NOF公司的
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系列提供了许多PEG衍生物，包括甲氧基聚乙二醇和经活化的PEG衍生物，如琥珀酰亚胺酯、甲氧基-PEG胺、马来酰亚胺和羧酸，用于通过多种方法偶合到多肽和多核苷酸，并且Nektar Therapeutics的先进聚乙二醇化技术(Advanced PEGylation)还提供了不同的PEG偶合技术来提高疗法的安全性和功效。用于形成缀合物的另外的PEGs包括可从Polypure(Norway)、QuantaBioDesign LTD(Ohio)JenKem Technology、NanocsCorporation和Sunbio,Inc(South Korea)获得的那些。适用于形成缀合物的其它PEG试剂和缀合方法描述于例如Pasut et al.,Expert Opin.Ther.Patents.14(6)859-893,2004中。
直链或支链PEG聚合物和其衍生物或缀合物的制备描述于例如第4,904,584号；第5,428,128号；第5,621,039号；第5,622,986号；第5,643,575号；第5,728,560号；第5,730,990号；第5,738,846号；第5,811,076号；第5,824,701号；第5,840,900号；第5,880,131号；第5,900,402号；第5,902,588号；第5,919,455号；第5,951,974号；第5,965,119号；第5,965,566号；第5,969,040号；第5,981,709号；第6,011,042号；第6,042,822号；第6,113,906号；第6,127,355号；第6,132,713号；第6,177,087号；第6,180,095号；第6,448,369号；第6,495,659号；第6.602,498号；第6,858,736号；第6,828,401号；第7,026,440号；第7,608,678号；第7,655,747号；第7,786,221号；第7,872,072号；以及第7,910,661号美国专利中，其中的每项通过应用整体并入本文中。
在一些实施方案中，连接基团为亲水性的，例如以提高缀合物在体液中的溶解度。在一些实施方案中，一个或多个BBB部分和试剂通过包含氨基酸或肽、脂质或糖残基的连接子连接。在一些实施方案中，一个或多个BBB部分和试剂在以合成方式或通过转译后修饰引入的基团处连接。
示例性的缀合方法
可以使用标准的化学、生物化学和/或分子学技术进行BBB部分与目标试剂的缀合或偶联。实际上，如何按照本公开内容、使用可获得的领域公认的方法制造缀合物是显而易见的。当然，通常优选的是当偶联本技术采用的缀合物的主要组分并且所得的连接化学不会实质上破坏所需的缀合物的个别组分的功能或活性时。
所用的特定偶联化学方法将取决于生物活性剂(例如小分子、多肽)的结构、潜在存在的生物活性剂中多官能团、是否需要保护/去保护步骤、试剂的化学稳定性等，并且可由本领域中技术人员容易地确定。例如，用于制备本发明的缀合物的示例性偶联化学方法可发现于Wong(1991),“Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking”,CRCPress,Boca Raton,Fla.；和Brinkley“A Brief Survey of Methods for PreparingProtein Conjugates with Dyes,Haptens,and Crosslinking Reagents,”Bioconjug.Chem.,3:2013,1992中。优选地，缀合物的结合能力和/或活性实质上不会由于所用的缀合技术而减少，例如，相对于未缀合的试剂或未缀合的BBB部分。
在某些实施方案中，BBB部分可与目标试剂直接地或间接地偶联。当每一个都拥有能够与另一个发生反应的取代基时，BBB部分和目标试剂之间的直接反应是可能的。例如，一个上的亲核基团如氨基或巯基可能能够与另一个上的含有羰基的基团如酸酐或酰基卤或含有良好脱离基团(例如卤化物)的烷基发生反应。
可选地，经由连接子，包括非肽连接子和肽连接子间接地偶联BBB部分和目标其他试剂是可取的。连接子基团也可起间隔子的作用，以将目标试剂与BBB部分隔开，以避免干扰结合能力、靶向能力或其他功能。连接子基团也可用于增加试剂上取代基的化学反应性，并因此增加偶联效率。化学反应性的增加也可促进试剂或试剂上的官能团的利用，这在其他情况是不可能的。也可用可释放的或稳定的连接子的选择来改变缀合物和附接的目标试剂的药代动力学。示例性的连接基团包括，例如二硫键基团、硫醚基团、酸不稳定基团、光不稳定基团、肽酶不稳定基团和酯酶不稳定基团。在其他示例性实施方案中，缀合物包括连接基团，如第5,208,020号美国专利或欧洲专利0 425 235 B1和Chari et al.,CancerResearch.52:127-131,1992中公开的那些基团。下文描述了另外的示例性连接子。
在一些实施方案中，将多于一个BBB部分与试剂偶联是可取的，或反之亦然。例如，在某些实施方案中，多个BBB部分与一种试剂偶联，或可选地，一个或多个BBB部分与多种试剂缀合。BBB部分可以是相同的或不同的。不管特定实施方案如何，可以不同的方式制备包含多个BBB部分的缀合物。例如，多于一个BBB部分可与试剂偶联，或可以使用提供用于附接的多个位点的连接子。可以用多种已知的异源双功能交联策略中的任一种来制备本发明的缀合物。应理解的是，通过控制缀合/交联程序期间所用材料的化学计量学可以实现这些实施方案中的许多项。
在某些示例性实施方案中，包含琥珀酰亚胺酯官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成酰胺键；包含氧羰基咪唑官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成氨基甲酸酯键；包含对硝基苯基碳酸酯官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成氨基甲酸酯键；包含三氯苯基碳酸酯官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成氨基甲酸酯键；包含硫酯官能团的试剂与包含N端氨基的BBB部分之间的反应形成酰胺键；包含丙醛官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键。
在一些示例性实施方案中，包含丁醛官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；包含乙缩醛官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；包含哌啶酮官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；包含甲基酮官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；包含三氟乙基磺酸酯官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；包含马来酰亚胺官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；包含醛官能团的试剂与包含氨基的BBB部分之间的反应形成仲胺键；以及包含肼官能团的试剂与包含羧酸基团的BBB部分之间的反应形成仲胺键。
在特定示例性实施方案中，包含马来酰亚胺官能团的试剂与包含硫醇基的BBB部分之间的反应形成硫醚键；包含乙烯砜官能团的试剂与包含硫醇基的BBB部分之间的反应形成硫醚键；包含硫醇官能团的试剂与包含硫醇基的BBB部分之间的反应形成二硫键；包含邻二硫吡啶官能团的试剂与包含硫醇基的BBB部分之间的反应形成二硫键；并且包含碘乙酰胺官能团的试剂与包含硫醇基的BBB部分之间的反应形成硫醚键。
在具体的实施方案中，胺-巯基交联剂用于制备缀合物。在一个优选的实施方案中，例如，交联剂为琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)(Thermo Scientific)，其为在中长环己烷稳定的间隔臂(8.3埃)的相对端包含NHS-酯和马来酰亚胺反应基的巯基交联剂。SMCC为不可裂解的和膜可通透性交联剂，可以用于产生用于与BBB部分后续反应的巯基反应性、马来酰亚胺活化的试剂(例如多肽、抗体)。在pH 7-9，NHS酯与伯胺反应形成稳定的酰胺键。在pH 6.5-7.5，马来酰亚胺与巯基反应形成稳定的硫醚键。因此，SMCC的胺反应性NHS酯与试剂的伯胺快速交联，并且得到的巯基反应性马来酰亚胺基然后可用于与BBB部分的半胱氨酸残基反应，而产生具体的目标缀合物。
在某些具体的实施方案中，修饰BBB部分，使其包含暴露的巯基以便促进交联，例如促进与马来酰亚胺活化的试剂的交联。在更具体的实施方案中，用修饰伯胺以添加受保护的硫醇巯基的试剂修饰BBB部分。在甚至更具体的实施方案中，试剂N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)(Thermo Scientific)用于产生硫醇化的BBB部分。
在其他具体的实施方案中，在合适的条件下，马来酰亚胺活化的试剂与硫醇化的BBB部分反应而产生缀合物。应理解的是，通过操纵SMCC、SATA、试剂和BBB部分在这些反应中的比率，可能产生具有不同的化学计量学、分子量和特性的缀合物。
在其他示例性的实施方案中，使用双功能蛋白偶联剂来制备缀合物，如N-马来酰亚胺基-3-(2-吡啶联硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯、亚胺基硫烷(IT)、亚胺酸酯的双功能衍生物(如二甲基己二亚酰胺化物HCL)、活化酯类(如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(如戊二醛)、双偶氮化合物(如双(对偶氮基苯甲酰)己二胺)、双重氮衍生物(如双-(对重氮苯甲酰)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)，以及双活性的氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。特定的偶联剂包括N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)(Carlsson et al.,Biochem.J.173:723-737[1978])和N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶硫代)戊酸酯(SPP)，而提供二硫键。
本文公开的具体的交联策略仅是可用在产生本发明的缀合物的许多合适的缀合策略实例中的少数。对本领域中技术人员显而易见的是，各种其他双功能的或多功能的试剂，包括同功能和异功能的(如Pierce Chemical Co.,Rockford,IL的目录表中所述的那些)，可用作连接子基团。例如，可通过氨基、羧基、巯基或氧化糖残基实现偶联。有许多参考文献描述了此类方法，例如Rodwell et al的第4,671,958号美国专利。
也可以通过多种“点击化学”技术制备缀合物，包括模块化的、宽范围的、给出非常高产率的、主要产生可以通过非色谱法去除的无害副产品，以及可以为立体定向的但未必为对映选择性的反应(见Kolb et al.,Angew Chem Int Ed Engl.40:2004-2021,2001)。具体实例包括用叠氮化物和炔烃的Huisgen1,3-双极环加成作用，也称为“叠氮化物-炔烃的环加成作用”反应的缀合技术(参见Kolb et al.,Angew Chem Int Ed Engl.40:2004-2021,2001)。特定实例包括采用叠氮化物和炔烃的Huisgen 1,3-双极环加成作用，也称为“叠氮化物-炔烃的环加成”反应的缀合技术(参见Hein et al.,Pharm Res.25:2216-2230,2008)。叠氮化物-炔烃的环加成反应的非限制性实例包括铜催化的叠氮化物-炔烃的环加成(CuAAC)反应和钌催化的叠氮化物-炔烃的环加成(RuAAC)反应。
CuAAC在宽的温度范围内工作，对水性条件不敏感，且pH范围为4-12，并且耐受广泛的官能团(参见Himo et al.,J Am Chem Soc.127:210-216,2005)。例如，可以使用抗坏血酸钠作为还原剂从Cu(I)盐或Cu(II)盐产生活性Cu(I)催化剂。该反应形成1,4-取代的产物，使其成为区域特异的(参见Hein et al.,同上)。
RuAAC利用五甲基环戊二烯基氯化钌[Cp*RuCl]复合物，所述复合物能够催化叠氮化物到末端炔烃的环加成作用，区域选择性导向1,5-双取代的1,2,3-三唑(参见Rasmussenet al.,Org.Lett.9:5337-5339,2007)。此外，并且与CuAAC相反，RuAAC也可以与内部的炔烃一起使用以提供完全取代的1,2,3-三唑。
因此，某些实施方案包括含至少一个带有叠氮化物侧链或炔烃侧链的非天然氨基酸的BBB部分或多肽试剂，所述非天然氨基酸包括内部的和末端的非天然氨基酸(例如N端、C端)。通过包含叠氮化物侧链或炔烃侧链的非天然氨基酸的体内或体外(例如无细胞系统)合并可以形成这些多肽中的某些。示例性的体内技术包括细胞培养技术，例如，使用修饰的大肠杆菌(参见Travis和Schultz,The Journal of Biological Chemistry.285:11039-44,2010；以及Deiters和Schultz,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.15:1521-1524,2005)，并且示例性的体外技术包括无细胞系统(参见Bundy,Bioconjug Chem.21:255-63,2010)。
在缀合物为融合多肽的情况下，通常可以使用标准技术制备融合多肽。然而，优选地，如本文所述的和领域中已知的，融合多肽在表达系统中表达为重组多肽。本发明的融合多肽可以包含一个或多个拷贝的多肽序列并且可包含一个或多个拷贝的基于多肽的目标试剂(例如抗体或其抗原结合片段)，以任何所希望的布置存在。
对融合蛋白而言，编码BBB部分、多肽试剂(例如抗体)和任选的肽连接子组分的DNA序列可单独组装，然后连接到适当的表达载体中。在利用或不利用肽连接子的情况下，编码一个多肽组分的DNA序列的3’端被连接到编码其他多肽组分的DNA序列的5’端，使得序列的阅读框是同向的。将连接好的DNA序列可操作地连接于合适的转录或翻译调节元件。负责DNA表达的调控元件仅位于编码第一多肽的DNA序列的5’端。类似地，终止翻译所需的终止密码子和转录终止信号只存在于编码最C端多肽的DNA序列的3’端。这允许翻译为保持两种组分多肽的生物学活性的单个融合多肽。
相似的技术，主要是调控元件如启动子、终止密码子和转录终止信号的布置，可以用于非融合蛋白的重组产生，例如BBB部分多肽和多肽试剂(例如抗体试剂)，用于产生非融合缀合物。
本发明的多核苷酸和融合多核苷酸可以包含一个或多个拷贝的编码BBB部分多肽序列的核酸，和/或可包含一个或多个拷贝的编码多肽试剂的核酸。
在一些实施方案中，将编码BBB部分多肽、多肽试剂和/或其融合体的核酸直接地引入宿主细胞中，并且在足以诱导所编码的多肽表达的条件下孵育细胞。可使用本领域技术人员熟知的标准技术并结合本文提供的多肽和核酸序列，制备本公开的多肽序列。
因此，根据某些有关的实施方案，提供了包含编码本文所述的多肽的多核苷酸或融合多核苷酸的重组宿主细胞。通过在适当的条件下培养包含多核苷酸的重组宿主细胞，可便利地实现BBB部分多肽、多肽试剂或其融合体在宿主细胞中的表达。通过表达产生后，可使用任何合适的技术分离和/或纯化多肽，然后按照希望使用。
用于在各种不同的宿主细胞中克隆和表达多肽的系统为熟知的。合适的宿主细胞包括细菌、哺乳动物细胞、酵母和杆状病毒系统。本领域中可获得的用于异源多肽表达的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾细胞、HEK-293细胞、NSO小鼠黑素瘤细胞和许多其他的细胞。通常优选的细菌宿主为大肠杆菌。在本领域中已完善地建立了在诸如大肠杆菌的原核细胞中表达多肽。例如综述可参见Pluckthun,A.Bio/Technology.9:545-551(1991)。培养物中真核细胞中的表达对本领域中技术人员也是可获得的，作为用于多肽的重组产生的一个选择(参见Ref,Curr.Opinion Biotech.4:573-576,1993；和Trill et al.,Curr.Opinion Biotech.6:553-560,1995。
可以选择或构建包含适当的调控序列的合适的载体，调控序列包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、标记基因和其他适合的序列。视情况而定，载体可为质粒、病毒，例如噬菌体或噬菌粒。更多的细节，例如参见Molecular Cloning:aLaboratory Manual:第2版,Sambrook et al.,1989,Cold Spring Harbor LaboratoryPress。许多已知的用于核酸操作的技术和方案，例如核酸构建体的制备、诱变、测序、DNA引入细胞中和基因表达，以及蛋白质分析，在Current Protocols in Molecular Biology,第二版,Ausubel et al.编,John Wiley&Sons,199，或其后续的更新版中有详细的描述。
术语“宿主细胞”用于指这样的细胞，其中已被引入或能够被引入编码一种或多种本文所述的多肽的核酸序列，并且进一步表达或能够表达选定的目标基因，如编码任何本文所述的多肽的基因。该术语包括亲代细胞的后代，无论后代在形态学或基因组成上与初始亲本是否相同，只要存在选定的基因即可。可以针对某些特征选择宿主细胞，例如甲酰甘氨酸产生酶(FGE)的表达，用于使硫酸酯酶基序中的半胱氨酸或丝氨酸残基转换为甲酰甘氨酸(FGly)残基，或氨酰tRNA合成酶的表达，其可以将非天然氨基酸，包括带有叠氮化物侧链、炔烃侧链或其他所希望的侧链的非天然氨基酸掺入多肽中，以促进缀合。
因此，还考虑到了包括将此类核酸引入到宿主细胞中的方法。核酸的引入可采用任何可获得的技术。对真核细胞而言，合适的技术可包括磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖、电穿孔、脂质体介导的转染和使用逆转录病毒或其他病毒的转导，例如牛痘病毒或用于昆虫细胞的杆状病毒。对细菌细胞而言，合适的技术可包括氯化钙转化、电穿孔和使用噬菌体的转染。引入之后，可以引起或允许核酸表达，例如，通过在用于基因表达的条件下培养宿主细胞。在一个实施方案中，核酸被整合到宿主细胞的基因组(例如染色体)中。根据标准的技术，通过包含促进与基因组重组的序列可促进整合。
在某些实施方案中，本发明还提供了下述方法，其包括在表达系统中使用本文所述的核酸构建体以表达特定的多肽，如BBB部分多肽、多肽试剂或其融合蛋白，如本文中所述。
多肽变体和片段
某些实施方案包括本文所述参考多肽的变体和/或片段，无论是通过名称还是通过参考序列标识符描述。包括多肽的变体和片段，其包含免疫球蛋白Fc区(包含Fc区的多肽)、BBB部分、抗体及其抗原结合片段，以及治疗性Fc融合多肽。这些多肽的野生型或最普遍或商业上使用的序列是本领域已知的，并且可以用作本文所述的变体和片段的比较。
本文所用的术语多肽“变体”为与本文具体公开的多肽的区别通常在于一个或多个取代、缺失、添加和/或插入的多肽。变体多肽具有生物活性，即，它们继续拥有参照多肽的酶活性或结合活性。此类变体可源于，例如遗传多态性和/或人工操作。
在许多情况下，生物活性变体将包含一个或多个保守型取代。“保守型取代”为将一个氨基酸取代为另一具有类似特性的氨基酸的取代，从而肽化学领域的技术人员能预料多肽的二级结构和水学性质实质上不会发生改变。如上文所述，可在本发明的多核苷酸和多肽的结构中进行修饰并且仍然获得编码具有所希望的特征的变体或衍生多肽的功能分子。当希望改变多肽的氨基酸序列来产生等同的或甚至改善的本发明的多肽的变体或一部分时，本领域技术人员将通常根据下表A改变编码DNA序列的一个或多个密码子。
Figure BDA0003210674900000741
Figure BDA0003210674900000751
例如，在蛋白结构中，某些氨基酸可被取代为其他氨基酸而不产生具有例如抗体的抗原结合区或底物分子上的结合位点的结构的可检测出的相互作用结合能力的损失。因为蛋白的相互作用能力和性质限定了蛋白的生物学功能活性，因此可以在蛋白序列和它的基础DNA编码序列中进行一定的氨基酸序列取代，并仍获得具有相似特性的蛋白。因此，考虑到了可在所公开的组合物的肽序列或编码所述的肽的对应的DNA序列中进行各种改变而不产生可检测出的其效用的损失。
在进行此类改变中，可考虑氨基酸的亲水指数。氨基酸的亲水指数在赋予蛋白相互作用的生物功能中的重要性在本领域被广泛理解(Kyte&Doolittle,1982，通过引用并入本文中)。所接受的事实是，氨基酸的相对亲水特征有助于所得蛋白的二级结构，其进而又限定了蛋白质与其他分子，例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等的相互作用。基于氨基酸的疏水性和电荷特征，每一氨基酸已被指定亲水指数(Kyte&Doolittle,1982)。这些值为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸(+2.5)；蛋氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(–0.4)；苏氨酸(–0.7)；丝氨酸(–0.8)；色氨酸(–0.9)；酪氨酸(–1.3)；脯氨酸(–1.6)；组氨酸(–3.2)；谷氨酸(–3.5)；谷氨酰胺(–3.5)；天冬氨酸(–3.5)；天冬酰胺(–3.5)；赖氨酸(–3.9)；和精氨酸(–4.5)。本领域中已知，某些氨基酸可被具有相似的亲水指数或评分的其他氨基酸取代，并且仍然能产生具有相似的生物学活性的蛋白，即，仍然获得生物学功能性等同的蛋白。在进行此类改变中，优选亲水指数为±2以内的氨基酸的取代，特别优选亲水指数为±1以内的氨基酸的取代，并且甚至更特别优选亲水指数为±0.5以内的氨基酸的取代。
本领域中还应理解，基于亲水性可有效地进行相似的氨基酸的取代。美国专利4,554,101(明确地通过引用整体并入本文中)公开了，由于受蛋白邻近的氨基酸的亲水性的支配，蛋白的最大局部平均亲水性与蛋白的生物学特性相关。如在美国专利4,554,101中详述的，下列的亲水性值已被分配给氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(–0.4)；脯氨酸(–0.5±1)；丙氨酸(–0.5)；组氨酸(–0.5)；半胱氨酸(–1.0)；蛋氨酸(–1.3)；缬氨酸(–1.5)；亮氨酸(–1.8)；异亮氨酸(–1.8)；酪氨酸(–2.3)；苯丙氨酸(–2.5)；色氨酸(–3.4)。应理解的是，氨基酸可以被取代为具有相似的亲水性值的另一氨基酸，而仍然获得生物学等同蛋白，并且尤其是免疫学上等同蛋白。在此类改变中，优选亲水性值为±2以内的氨基酸的取代，特别优选亲水性值为±1以内的氨基酸的取代，并且甚至更特别优选亲水性值为±0.5以内的氨基酸的取代。
如上文所述，因此，氨基酸取代通常基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑上述的各种特征的示例性取代为本领域中技术人员所熟知并且包括：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
氨基酸取代还可基于残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两性性质的相似性。例如，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；并且具有相似亲水性值的、带有不带电荷的极性头部基团的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸；甘氨酸和丙氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；以及丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。可代表保守型改变的其他氨基酸组包括：(1)ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr；(2)cys、ser、tyr、thr；(3)val、ile、leu、met、ala、phe；(4)lys、arg、his；和(5)phe、tyr、trp、his。
变体也可以或可选地含有非保守型改变。在优选的实施方案中，变体多肽与天然序列的区别在于少于约10、9、8、7、6、5、4、3、2个氨基酸或甚至1个氨基酸的取代、缺失或添加。变体也可以(或可选地)通过例如对多肽的免疫原性、二级结构、酶活性和/或水性具有很小影响的氨基酸的缺失或添加来进行修饰。
在某些实施方案中，多肽序列长度为约、至少约或多达约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700.700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更多个连续的氨基酸，包括其间的所有整数，并且其可包含参考序列(例如参见序列表)的全部或一部分。
在其他具体的实施方案中，多肽序列由约或不多于约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更多个连续的氨基酸组成，包括其间的所有整数，并且其可包含参考序列(例如参见序列表)的全部或一部分。
在其他具体的实施方案中，多肽序列为约10-1000、10-900、10-800、10-700、10-600、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、10-40、10-30、10-20、20-1000、20-900、20-800、20-700、20-600、20-500、20-400、20-300、20-200、20-100、20-50、20-40、20-30、50-1000、50-900、50-800、50-700、50-600、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、100-1000、100-900、100-800、100-700、100-600、100-500、100-400、100-300、100-200、200-1000、200-900、200-800、200-700、200-600、200-500、200-400或200-300个连续的氨基酸，包括其间的所有范围，并且包含参考序列的全部或一部分。在某些实施方案中，任何参考多肽的C端或N端区可被截短约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或800或更多个氨基酸，或者约10-50、20-50、50-100、100-150、150-200、200-250、250-300、300-350、350-400、400-450、450-500、500-550、550-600、600-650、650-700、700-750、750-800或更多个氨基酸，包括其间的所有整数和范围(例如，101、102、103、104、105)，只要截短的多肽保留参考多肽的结合特性和/或活性。通常，生物活性片段就有不低于其所来源的生物活性参考多肽的活性的约1％、约5％、约10％、约25％或约50％的活性。
通常，变体将显示与参考多肽序列至少约30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的相似性或序列同一性或序列同源性。此外，考虑到了与天然或亲本序列的不同之处在于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多个氨基酸的添加(例如，C端添加、N端添加、二者)、缺失、截短、插入或取代的序列，但其保留了亲本或参考多肽序列的特性或活性。
在一些实施方案中，变体多肽与参照序列的区别在于至少一个，但少于50、40、30、20、15、10、8、6、5、4、3或2个氨基酸残基。在其他实施方案中，变体多肽与参照序列的区别在于至少1％，但少于20％、15％、10％或5％的残基。(如果该比较需要比对，那么序列应以最大的相似性进行比对。来自缺失或插入的“循环”输出序列或错配被认为是差异。)
序列之间的序列相似性或序列同一性(这两个术语在本文可互换地使用)的计算按如下进行。为测定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的来比对序列(例如缺口可被引入第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个以用于最佳比对，并且可以出于比较的目的无视非同源的序列)。在某些实施方案中，出于比较目的比对的参考序列的长度为参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，且甚至更优选至少70％、80％、90％、100％。然后比较对应的氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与在第二序列中对应的位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则该位置处的分子是相同的。
考虑需要被引入以用于两条序列的最佳比对的缺口数目和每个缺口的长度，两条序列之间同一性百分比为所述序列所共有的相同位置数的函数。
使用数学算法可以完成序列的比较和两条序列之间同一性百分比的确定。在优选的实施方案中，使用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48:444-453,1970)算法测定两条氨基酸序列之间的同一性百分比，所述算法已被合并到GCG软件包中的GAP程序中，其使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。在又一优选的实施方案中，使用GCG软件包中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的缺口权重和1、2、3、4、5或6的长度权重，确定两条核苷酸序列之间的同一性百分比。特别优选的参数集(和除非另有说明应该使用的那些)为Blossum 62评分矩阵，缺口罚分为12，缺口延长罚分为4，且移码缺口罚分为5。
可以使用E.Meyers和W.Miller(Cabios.4:11-17,1989)的算法确定两条氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比，所述算法被并入ALIGN程序(2.0版)中，使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分为12，且缺口为罚分4。
本文所述的核酸和蛋白序列可以用作“查询序列”，以进行针对公共数据库的检索，例如，用于鉴定其他家族成员或有关的序列。可以使用Altschul,et al.,(1990、J.Mol.Biol,215:403-10)的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行此类检索。可以用NBLAST程序、评分＝100、字长＝12进行BLAST核苷酸检索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序、评分＝50、字长＝3进行BLAST蛋白检索，以获得与本发明的蛋白分子同源的氨基酸序列。为获得用于比较目的的缺口比对，可以利用Altschul,et al.,(Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997)中所述的缺口BLAST。当利用BLAST和缺口BLAST程序时，可以使用各自程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。
在一个实施方案中，如上文所示，可以使用BLAST比对工具评估多核苷酸和/或多肽。局部比对简单地由一对序列节段组成，其中之一来自每一被比较的序列。Smith-Waterman或Sellers算法的修改可以找到通过延长或修剪不能提高评分的所有节段对，称为高评分节段对(HSPs)。BLAST比对的结果包括统计学度量，以指示能够仅从偶然预期BLAST评分的可能性。
从与每一比对的序列有关的缺口和取代数目计算初始评分S，其中较高的相似性评分指示更为显著的比对。通过查阅表(参见PAM、BLOSUM)给出取代评分。
缺口评分通常计算为缺口开放罚分G和缺口延长罚分L之和。对长度n的缺口而言，缺口成本为G+Ln。缺口成本、G和L的选择是根据经验的，但是通常为G选择高值(10-15)，例如11，且为L选择低值(1-2)，例如1。
二进制评分S’来源于初始比对评分S，其中考虑所用的评分系统的统计学性质。二进制评分被相对于评分系统标准化，因此它们可以用于比较来自不同检索的比对评分。术语“二进制评分”和“相似性评分”可互换地使用。二进制评分给出了比对的好坏程度的指示；评分越高，比对越好。
E值或期望值描述了具有相似评分的序列偶然出现在数据库中的可能性。其为等同于或优于S的、预期在数据库检索中偶然出现的不同比对的数目的预测。E值越小，比对越显著。例如，具有e-117的E值的比对意味着具有相似评分的序列非常不可能只是偶然出现。另外，用于比对随机的氨基酸对的预期评分被要求是负的，否则长的比对将倾向于具有高评分，无论比对的节段是否相关。另外，BLAST算法使用适当的替代矩阵、核苷酸或氨基酸，并且对于缺口比对使用缺口创建和延长罚分。例如，通常使用BLOSUM62矩阵、11的缺口存在罚分和1的缺口延长罚分进行多肽序列的BLAST比对和比较。
在一个实施方案中，报道了来自使用BLOSUM62矩阵、11的缺口存在罚分和1的缺口延长罚分进行的BLAST分析的序列相似性评分。
在一个特定的实施方案中，本文提供的序列同一性/相似性评分指的是使用GAP第10版(GCG,Accelrys,San Diego,Calif.)，使用下列的参数所获得的值：核苷酸序列的同一性％和相似性％，使用50的GAP权重和3的长度权重和nwsgapdna.cmp评分矩阵；氨基酸序列的同一性％和相似性％，使用8的GAP权重和2的长度权重和BLOSUM62评分矩阵(Henikoff和Henikoff,PNAS USA.89:10915-10919,1992)。GAP使用Needleman和Wunsch算法(J MolBiol.48:443-453,1970)，以找到使匹配的数目最大而缺口数目最小的两条完整的序列的比对。
在一个特定的实施方案中，变体多肽包含可最佳地与参考多肽序列(例如，参见表或序列表)比对以产生以下BLAST二进制评分或序列相似性评分的氨基酸序列：至少约50、60、70、80、90、100、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更大，包括其间的所有整数和范围，其中BLAST比对使用BLOSUM62矩阵、11的缺口存在罚分和1的缺口延伸罚分。
如上文所示，可以以不同的方式改变参考多肽，包括氨基酸取代、缺失、截短、添加和插入。此类操作的方法通常为本领域已知的。例如，可以通过DNA突变制备参考多肽的氨基酸序列变体。用于诱变和核苷酸序列改变的方法为本领域熟知的。例如，参见Kunkel(PNAS USA.82:488-492,1985)；Kunkel et al.,(Methods in Enzymol.154:367-382,1987)、第4,873,192号美国专利、Watson,J.D.et al.,(“Molecular Biology of theGene,”第4版,Benjamin/Cummings,Menlo Park,Calif.,1987)和其中引用的参考文献。作为不影响目标蛋白的生物学活性的合适的氨基酸取代的指导可在Dayhoff et al.,(1978)Atlas of Protein Sequence and Structure(Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.)中找到。
用于筛选通过此类修饰所产生的组合文库的基因产物的方法和用于筛选具有所选特性的基因产物的cDNA文库的方法为本领域已知的。此类方法可适于通过参考多肽的组合诱变所产生的基因文库的快速筛选。举例来说，递归整体诱变(REM)是增强文库中功能突变体的频率的技术，其可以与筛选测定组合使用从而鉴定多肽变体(Arkin和Yourvan,PNASUSA 89:7811-7815,1992；Delgrave et al.,Protein Engineering.6:327-331,1993)。
使用方法和药物组合物
某些实施方案包括治疗有需要的对象的方法，包括向对象给予：(a)包含免疫球蛋白Fc区的多肽，和(b)本文所述的缀合物。还包括将缀合物递送至对象的神经系统(例如，中枢神经系统组织)的方法，例如，增强跨对象的BBB递送缀合物试剂的方法。在某些实施方案中，给药是全身给药，例如静脉内给药。在特定的实施方案中，缀合物包含连接至(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽的血脑屏障(BBB)运输部分。
在某些实施方案中，(a)和(b)单独给药，例如作为单独的药物组合物，如本文中所述。在一些实施方案中，(a)和(b)同时或大约同时给药。在一些实施方案中，(a)在(b)前约、至少约或不多于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、220、240、260、280或300分钟给药。在一些实施方案中，(a)在(b)前约、至少约或不多于约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、24、30、36、42、48、60、72、84或96小时给药。
在特定的实施方案中，(a)和(b)一起给药，例如作为包含(a)和(b)的药物组合物，如本文中所述。
在具体的实施方案中，相对于单独的(a)的全身给药，(a)和(b)的全身给药增加跨BBB递送(a)并进入CNS的组织中。
在某些实施方案中，相对于例如通过给予单独的缀合物进行递送，方法或组合物增加了缀合物至CNS组织的递送速率和/或水平(量)。在特定的实施方案中，相对于单独的缀合物的给药，这被增加约或至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000％或更多。
在一些情况下，对象患有与中枢神经系统(CNS)相关的或具有CNS组分的疾病、病症或病况。在某些情况下，相对于周围组织增加的跨血脑屏障递送缀合物至CNS组织可以改善治疗，例如通过增加CNS中缀合物的组织浓度，和/或通过减少与暴露缀合物至周围组织/器官相关的副作用。
在一些实施方案中，方法和组合物可用于治疗各种癌症，包括中枢神经系统(CNS)的癌症，或神经性癌症。在一些情况下，神经性癌症是转移性脑癌。可以转移到脑的癌症的实例包括但不限于乳腺癌、肺癌、泌尿生殖道癌、胃肠道癌(例如，结直肠癌、胰腺癌)、骨肉瘤、黑素瘤、头颈癌、前列腺癌(例如，前列腺腺癌)和淋巴瘤。因此，某些实施方案包括用于治疗、抑制或预防癌症转移的方法(例如，以给药后以统计学上显著的方式抑制、预防或延迟癌症转移的量，即相对于本领域技术人员已知的适当对照)。在特定的实施方案中，对象患有尚未转移到中枢神经系统的癌症，包括上述癌症中的一种或多种，以及本领域已知的其他癌症。
还包括用于治疗中枢神经系统(CNS)，任选地脑的癌症的方法，其中有需要的对象患有这样的癌症或存在发展出这样的病况的风险。在一些实施方案中，癌症是CNS的原发性癌症，如脑的原发性癌症。例如，所述方法可用于治疗胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤或原始神经外胚层肿瘤(成神经管细胞瘤)。在一些实施方案中，胶质瘤是星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤或脉络丛乳头状瘤。在某些实施方案中，原发性CNS或脑癌症是多形性胶质母细胞瘤，如巨细胞胶质母细胞瘤或胶质肉瘤。
在特定的实施方案中，癌症是CNS的转移性癌症，例如已转移到脑的癌症。这样的癌症的实例包括但不限于乳腺癌、肺癌、泌尿生殖道癌、胃肠道癌(例如，结直肠癌、胰腺癌)、骨肉瘤、黑素瘤、头颈癌、前列腺癌(例如，前列腺腺癌)和淋巴瘤。因此，某些实施方案包括用于通过向患者给予治疗有效量的本文公开的缀合物(例如，以给药后以统计学上显著的方式抑制、预防或延迟癌症转移的量，即相对于本领域技术人员已知的适当对照)来治疗、抑制或预防癌症转移的方法。在特定的实施方案中，对象患有尚未转移到中枢神经系统的癌症，包括上述癌症中的一种或多种，以及本领域已知的其他癌症。
在特定的实施方案中，癌症(细胞)表达或过表达以下中的一种或多种：Her2/neu、B7H3、CD20、Her1/EGF受体、VEGF受体、PDGF受体、CD30、CD52、CD33、CTLA-4或肌腱蛋白。
还包括治疗其他癌症，包括乳腺癌、前列腺癌、胃肠道癌、肺癌、卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、鳞状细胞癌、黑素瘤、非黑素瘤癌症、甲状腺癌、子宫内膜癌、上皮细胞瘤、骨癌或造血系统癌症。因此，在某些实施方案中，癌症通过缀合物过表达进行治疗，或者与癌症抗原，如人Her2/neu、Her1/EGF受体(EGFR)、Her3、A33抗原、B7H3、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受体)、C242抗原、5T4、IL-6、IL-13、血管内皮生长因子VEGF(例如，VEGF-A)VEGFR-1、VEGFR-2、CD30、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD152、CD200、CD221、CCR4、HLA-DR、CTLA-4、NPC-1C、肌腱蛋白、波形蛋白、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、甲胎蛋白、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碳酸酐酶9(CA-IX)、癌胚抗原(CEA)、整合素αvβ3、整合素α5β1、叶酸受体1、跨膜糖蛋白NMB、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、糖蛋白75、TAG-72、MUC1、MUC16(或CA-125)、磷脂酰丝氨酸、前列腺特异性膜抗原(PMSA)、NR-LU-13抗原、TRAIL-R1、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B或TRAIL-R2)、SLAM家族成员7(SLAMF7)、EGP40泛癌抗原、B细胞活化因子(BAFF)、血小板来源的生长因子受体、糖蛋白EpCAM(17-1A)、程序性死亡-1、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、前列腺酸性磷酸酶、Lewis-Y抗原、GD2(神经外胚层来源的肿瘤上表达的唾液酸神经节苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)，和/或间皮素相关。
在具体的实施方案中，对象患有表达Her2/neu的癌症，如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、侵入性子宫癌或转移性癌症，如转移性CNS癌症，并且BBB部分缀合至曲妥珠单抗上。在其他具体的实施方案中，使用8H9单克隆抗体缀合物来治疗神经性癌症，如转移性脑癌。
用于治疗包括CNS癌症在内的癌症的方法和组合物可与其他治疗方法结合。例如，该方法和组合物可以在其他治疗干预之前、期间或之后采用或给予至对象，包括对症护理、放疗、手术、移植、免疫治疗、激素治疗、光动力治疗、抗生素治疗，或以上的任何组合。对症护理包括给予皮质类固醇以减少脑水肿、头痛、认知功能障碍和呕吐，以及给予抗惊厥药以减少癫痫发作。放疗包括全脑照射、分次放疗和放射外科手术，如立体定向放射外科手术，其可进一步与传统手术相结合。
某些实施方案涉及治疗有需要的对象中的炎症或炎性病况，包括CNS的炎性病况和/或具有CNS组分的那些的方法。“炎症”通常是指组织对有害刺激，如病原体、受损细胞(例如，伤口)和刺激物的生物学反应。术语“炎症反应”是指实现和调节炎症的具体机制，包括(仅通过说明的方式)免疫细胞活化或迁移、细胞因子产生、血管舒张，包括激肽释放、纤维蛋白溶解和凝结，以及本文所述的和本领域已知的其他机制。理想情况下，炎症是身体的一种保护性尝试，旨在消除有害刺激并启动受影响组织的愈合过程。在没有炎症的情况下，伤口和感染将永远不会愈合，从而造成组织逐渐破坏将威胁生存的情况。另一方面，过度或慢性炎症可能与多种疾病，如花粉症、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎，以及本文所述和本领域已知的其他疾病相关。
方法和组合物可调节急性炎症、慢性炎症，或二者。根据对象的需要，某些实施方案涉及减轻急性炎症或炎症反应，并且某些实施方案涉及减轻慢性炎症或慢性炎症反应。
慢性炎症的临床征象取决于疾病的持续、炎性病灶、起因和受影响的解剖区域。(参见，例如，Kumar et al.,Robbins Basic Pathology-8th Ed.,2009Elsevier,London；Miller,LM,Pathology Lecture Notes,Atlantic Veterinary College,Charlottetown,PEI,Canada)。慢性炎症与多种病理学病况或疾病有关，除本文描述的和本领域已知的其它疾病外，包括，例如过敏、阿尔兹海默病、贫血、主动脉瓣狭窄、关节炎如风湿性关节炎和骨关节炎、癌症、充血性心力衰竭、纤维肌痛、纤维化、心脏病、肾功能衰竭、狼疮、胰腺炎、中风、手术并发症、炎性肺部疾病、炎性肠病、动脉粥样硬化和牛皮癣。因此，可将缀合物用于治疗或管理慢性炎症，调节个体慢性炎症反应中的任意一种或多种，或治疗与慢性炎症有关的任何一种或多种疾病或病况。
在某些实施方案中，方法和组合物减轻了局部炎症、全身性炎症或二者。在某些实施方案中，方法和组合物可减轻或维持(即防止进一步增强)局部炎症或局部炎症反应。在某些实施方案中，缀合物可减轻或维持(即防止进一步增强)全身性炎症或全身性炎症反应。
在某些实施方案中，炎症或炎症反应的调节可与一种或多种组织或器官相关。此类组织或器官的非限制性实例包括：皮肤(如真皮、表皮、皮下层)、毛囊、神经系统(例如，脑、脊髓、周围神经、脑膜，包括硬脑膜、蛛网膜和软脑膜)、听觉系统或平衡器官(例如，内耳、中耳、外耳)、呼吸系统(例如，鼻、气管、肺)、胃食管组织、胃肠道系统(例如，口、食管、胃、小肠、大肠、直肠)、血管系统(例如，心脏、血管和动脉)、肝脏、胆囊、淋巴/免疫系统(例如，淋巴结、淋巴滤泡、脾脏、胸腺、骨髓)、泌尿生殖系统(例如，肾脏、输尿管、膀胱、尿道、子宫颈、输卵管、卵巢、子宫、外阴、前列腺、尿道球腺、附睾、前列腺、精裹、睾丸)、肌肉骨骼系统(例如，骨骼肌、平滑肌、骨、软骨、腱、韧带)、脂肪组织、乳房以及内分泌系统(例如，下丘脑、脑垂体、甲状腺、胰腺、肾上腺)。因此，可将方法和组合物用于调节与这些组织或器官中任一种有关的炎症，如治疗与这些组织或器官的炎症有关的病况或疾病。
在特定的实施方案中，炎性病况具有神经系统或中枢神经系统组分，包括脑、脊髓和/或脑膜的炎症。在特定的实施方案中，脑膜炎(例如细菌性、病毒性)、脑炎(例如由感染或自身免疫性炎症如急性播散性脑脊髓炎引起的)、肉状瘤病、与肿瘤形成有关的非转移性疾病中的CNS炎性病况。神经系统或CNS有关的炎症病况的特定实例包括但不限于：脑膜炎(即覆盖脑和脊髓的保护性膜的炎症)、脊髓炎、脑脊髓炎(例如，肌痛性脑脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、脑脊髓炎传播或多发性硬化、自身免疫性脑脊髓炎)、蛛网膜炎(即蛛网膜炎症，其是包围和保护中枢神经系统神经的一种膜)、肉芽肿瘤、药物引起的炎症或脑膜炎、神经退行性疾病如阿尔茨海默病、中风、HIV-痴呆、脑炎如病毒性脑炎和细菌性脑炎、寄生虫感染、炎性脱髓鞘病症以及自身免疫性病症如CD8+T细胞介导的CNS自身免疫性疾病。另外的实例包括帕金森病、重症肌无力、运动神经病变、格林巴利综合征、自身免疫性神经病变、兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征、副癌性神经疾病、副癌性小脑萎缩、非副癌性僵人综合征、渐进性小脑萎缩、拉斯马森脑炎、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、西登哈姆氏舞蹈病、抽动秽语综合征、自身免疫性多内分泌病、免疫异常神经病变、获得性神经性肌强直、多发性关节硬化症、视神经炎、僵人综合征、中风、外伤性脑损伤(TBI)、椎管狭窄症、急性脊髓损伤和脊髓压迫症。
如上所示，还包括治疗与神经系统或CNS感染相关的炎症。与神经系统炎症相关的细菌感染的具体实例包括但不限于：链球菌感染如B组链球菌(例如，亚型III)和肺炎链球菌(例如，血清型6、9、14、18和23)、大肠杆菌(例如，携带K1抗原)、单核细胞增生利斯特菌(例如，血清型IVb)、萘瑟球菌感染如脑膜炎奈瑟氏菌(脑膜炎球菌)、葡萄球菌感染、嗜血杆菌感染如流感嗜血杆菌B型、克雷伯菌和结核分枝杆菌。也包括由葡萄球菌和假单胞菌以及其它的革兰氏阴性细菌引起的感染，主要涉及头盖骨创伤，这使得鼻腔中的细菌可能进入脑膜空间中，或在装有脑部分流装置或相关装置(例如，体外脑室引流、Ommaya囊)的人中。与神经系统炎症相关的病毒感染的具体实例包括但不限于：肠病毒、单纯疱疹病毒1型和2型、人T淋巴细胞病毒、水痘带状疱疹病毒(水痘和带状疱疹)、腮腺炎病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)。由螺旋体如梅毒螺旋体(梅毒)和伯氏疏螺旋体(莱姆病)、寄生虫如疟疾(如脑型疟疾)、真菌如新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)，以及变形虫如福氏纳格里阿米巴原虫(Naegleria fowleri)引起的感染也可导致脑膜炎。
脑膜炎或其它形式的神经系统炎症可能还与癌症向脑膜的扩散(恶性脑膜炎)、某些药物如非甾体抗炎药、抗生素和静脉免疫球蛋白、肉状瘤病(或神经肉状瘤病)、结缔组织病症如系统性红斑狼疮，以及某些形式的血管炎(血管壁的炎症病况)如贝西氏病有关。表皮样囊肿和皮样囊肿可通过向蛛网膜下腔中释放刺激性物质而引起脑膜炎。因此，可将缀合物用于治疗或管理这些病况中的任何一种或多种。
一些实施方案包括治疗中枢神经系统(CNS)的退行性或自身免疫性病症的方法。在一些情况下，CNS的退行性或自身免疫性病症是阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病或多发性硬化(MS)。
在某些情况下，对象正在经历一种或多种类型的疼痛，并且给予缀合物以治疗或减轻疼痛。疼痛的一般实例包括急性疼痛和慢性疼痛。在一些情况下，疼痛具有至少一种CNS组分。疼痛的具体实例包括伤害性疼痛、神经性疼痛、突破性疼痛、突发性疼痛、幻觉疼痛、炎性疼痛，包括关节炎疼痛，或以上的任意组合。
在特定情况下，疼痛为伤害性疼痛，任选地内脏、深部躯体或浅表躯体疼痛。伤害性疼痛通常是由对接近或超过有害强度的刺激(伤害感受器)产生反应的外周神经纤维受到刺激引起的，并且可根据伤害性刺激的方式进行分类；例如，“热”(例如，热或冷)、“机械”(例如，粉碎、撕裂、切割)和“化学”。内脏结构对拉伸、缺血和炎症高度敏感，但对其他刺激如灼烧和切割相对不敏感。内脏疼痛通常是弥漫性的，难以定位，并且有时被称为具有远处或浅表结构。内脏疼痛可伴有恶心和呕吐，并且有时被描述为恶心、深沉、挤压和沉闷。深部躯体疼痛通常由刺激韧带、肌腱、骨骼、血管、筋膜和肌肉中的伤害感受器引起，并且特征通常为钝痛、疼痛或定位不明确的疼痛。实例包括扭伤和骨折。浅表性疼痛主要是由皮肤或其他浅表组织中伤害感受器的激活引起的，并且尖锐、界限清楚和定位清楚。产生浅表躯体疼痛的伤害的实例包括伤口和烧伤。
神经性疼痛是由影响躯体感觉系统的损伤或疾病引起的。它可能与称为感觉迟钝的异常感觉，以及由通常非疼痛性刺激(异常性疼痛)产生的疼痛有关。神经性疼痛可能具有连续和/或发作性(阵发性)组分，后者可与电击相比。神经性疼痛的共同特征包括烧灼感或冰凉感、“针刺”感、麻木感和瘙痒感。神经性疼痛可起因于周围神经系统或中枢神经系统(例如，脑、脊髓)的病症。神经性疼痛可表征为周围神经性疼痛、中枢神经性疼痛或混合的(周围和中枢)神经性疼痛。
中枢神经性疼痛发现于脊髓损伤、多发性硬化和中风中。神经性疼痛的另外的原因包括糖尿病性神经病、带状疱疹感染、HIV相关的神经病、营养缺乏、毒素、恶性肿瘤的远程表现、免疫介导的病症和神经躯干的物理创伤。神经性疼痛也与癌症有关，主要作为癌症或肿瘤对周围或中枢神经神经的直接结果(例如，被肿瘤挤压)，或作为化疗、辐射损伤或外科手术的副作用。
在一些情况下，疼痛是突破性疼痛。突破性疼痛是指在短时间段内突然发生的疼痛，并且通过对象的正常疼痛管理方案无法缓解。这在癌症患者中很常见，他们通常有由药物控制的疼痛背景水平，但他们的疼痛会定期“突破”药物治疗。因此，在某些情况下，对象正在服用疼痛药物，并且任选地是具有癌症疼痛，例如神经性癌症疼痛的对象。
在某些情况下，疼痛是意外疼痛，即一种由活动引起的疼痛。实例包括移动关节炎或受伤的关节，以及拉伸伤口。
在具体的情况下，疼痛是骨关节炎、腰痛疼痛(或腰痛)，包括急性、亚急性和慢性腰痛疼痛(CLBP)、骨癌疼痛或间质性膀胱炎。
骨关节炎(OA)，也称为退行性关节炎或退行性关节病或骨关节病，是一组涉及关节退化的机械异常，包括关节软骨和软骨下骨。OA的症状可能包括关节疼痛、压痛、僵硬、锁定，且有时还包括积液。OA可能由多种原因引发，包括遗传性、发育性、代谢性和机械性原因，其中大多数会导致软骨损失。当骨表面受软骨保护不良时，骨骼可能会暴露并受损。由于疼痛继发运动减少，局部肌肉可能萎缩，并且韧带可能变得越来越松弛。特定实例包括膝骨关节炎和髋骨关节炎。
间质性膀胱炎，或膀胱疼痛综合征，是一种慢性、经常使膀胱严重衰弱的疾病。其原因不明，表现为例如膀胱相关疼痛、排尿相关疼痛(排尿困难)、尿频(例如，每10分钟一次)、尿急和/或膀胱和/或骨盆压力。
某些方法和组合物包括用于治疗疼痛的其他联合疗法。例如，可向患有疼痛的对象进一步给予一种或多种疼痛药物，包括镇痛药和麻醉药。示例性镇痛剂包括但不限于扑热息痛/对乙酰氨基酚；非甾体抗炎药(NSAIDS)如水杨酸盐(例如，阿司匹林)、丙酸衍生物(例如，布洛芬、萘普生)、乙酸衍生物(例如，消炎痛)、烯醇酸衍生物、芬那酸衍生物和选择性COX-2抑制剂；阿片类/阿片样药物和吗啡类药物如吗啡、丁丙诺啡、可待因、羟考酮、羟吗啡酮、氢可酮、二氢吗啡、双氢可待因、左啡诺、美沙酮、右丙氧芬、喷他佐辛、右旋吗酰胺、美吡利啶(或哌替啶)、曲马朵、那可丁、纳布啡、pentacozine、帕帕非林、papaveretum、阿芬太尼、芬太尼、瑞芬太尼、舒芬太尼和埃托啡；以及其他试剂，如氟吡汀、卡马西平、加巴喷丁和普瑞巴林，包括上述的任何组合。
用于鉴定患有本文所述的一种或多种疾病或病况的对象的方法是本领域已知的。
对于体内用途，例如，为了治疗人的疾病或测试，通常在给药前将(a)包含免疫球蛋白Fc区的多肽(即，包含Fc区的多肽)和/或(b)本文所述的缀合物掺入一种或多种药物或治疗组合物中。在某些实施方案中，药物或治疗组合物包括(a)和/或(b)中的一种或多种，如本文中所述，任选地与至少一种药学上可接受的或生理上可接受的载体或赋形剂结合。
为了制备药物组合物，将有效的或所需量的一种或多种含有Fc区的多肽和/或缀合物与本领域技术人员已知的适用于特定模式的给药的任何药物载体或赋形剂混合。药物载体可以是液体、半液体或固体。用于肠胃外、皮内、皮下或局部应用的溶液或悬浮液可包括例如无菌稀释剂(如水)、盐水溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水；PBS)、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂(如苯甲醇和对羟基苯甲酸甲酯)；抗氧化剂(如抗坏血酸和亚硫酸氢钠)和螯合剂(如乙二胺四乙酸(EDTA))；缓冲剂(如醋酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐)。如果通过静脉内给药(例如，通过IV输注)，则适合的载体包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，以及含有增稠剂和增溶剂的溶液，如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇及以上的混合物。
本文描述的含有Fc区的多肽和/或缀合物，以纯形式或以合适的药物组合物的形式给药，可以经由任何可接受的用于提供类似效用的试剂的给药方式来进行。可通过将含有Fc区的多肽和/或缀合物与适当的生理上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合来制备药物组合物，并可配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂，如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球和气雾剂。另外，其他药物活性成分(包括本文别处描述的其他小分子)和/或合适的赋形剂如盐、缓冲剂和稳定剂可以但不必存在于组合物内。
可以通过多种不同途径实现给药，包括口服、肠胃外、鼻、静脉内、皮内、皮下或局部。优选的给药方式取决于待治疗或预防的病况的性质。特定的实施方案包括全身给药，例如，通过静脉内(IV)输注。
载体可以包括，例如药学可接受的载体、赋形剂或稳定剂，其在所用的剂量和浓度下对其暴露的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理可接受的载体是水性pH缓冲溶液。生理可接受的载体的实例包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(低于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它的碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或葡聚糖；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨醇；形成盐的抗衡离子，如钠；和/或非离子型表面活性剂，如聚山梨酸酯20(TWEENTM)聚乙二醇(PEG)和泊洛沙姆(PLURONICSTM)等。
在某些缀合组合物，BBB部分和试剂分别单独或作为预先存在的缀合物与颗粒结合或被包封于颗粒内，例如，纳米颗粒、珠子、脂质制剂、脂质颗粒或脂质体，例如，免疫脂质体。例如，在特定的实施方案中，将BBB部分结合于颗粒的表面，并且将试剂结合于颗粒的表面和/或包封于颗粒内。在这些和相关实施方案的一些中，仅经由颗粒本身(例如，纳米颗粒、脂质体)将BBB部分与试剂互相共价连接或可操作地连接，并且不以任何其它方式互相共价相连；即它们单独与同一颗粒结合。在其它实施方案中，BBB部分和试剂首先如本文中所述互相共价缀合或非共价缀合(例如，经由连接子分子)，然后与颗粒结合或包封于颗粒内(例如，脂质体、纳米颗粒)。在具体的实施方案中，颗粒为脂质体，且组合物包含一个或多个BBB部分、一种或多种试剂，以及任选地一种或多种包含Fc区的多肽，和脂质的混合物，以形成脂质体(例如，具有表面活性剂性质的磷脂、混合的脂质链)。在一些方面，BBB部分和试剂分别与脂质/脂质体混合物混合，从而脂质体结构的形成将BBB部分和试剂可操作地连接，而不需要共价缀合。在其它方面，首先如本文中所述，将BBB部分和试剂互相共价或非共价缀合，然后将其与脂质混合以形成脂质体。可将BBB部分、试剂或缀合物包封进通过例如凝聚技术或界面聚合(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)制备的微胶囊中，包封进胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳液中。此类技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16版,Oslo,A.,Ed.,(1980)中。颗粒或脂质体还可包括其它的治疗剂或诊断剂，如细胞毒性剂。
治疗的精确剂量和持续时间是被治疗疾病的函数，并且可使用已知的测试方案或通过在本领域已知的模型系统中对组合物进行测试并由此推断来根据经验确定。也可进行受控的临床试验。也可根据即将缓解的病况严重性来改变剂量。通常配制和给予药物组合物来在将非期望的副作用最小化的同时发挥治疗有效性作用。组合物可以给药一次，或者可将其分成许多更小剂量，从而以一定的时间间隔给药。对于任何特定的对象，可根据个体需要随时间调节具体的剂量方案。
因此，这些和相关药物组合物的典型给药途径包括但不限于：口服、给药、经皮、吸入、肠胃外、舌下、口腔、直肠、阴道和鼻内。本文使用的术语肠胃外包括皮下注射、静脉注射、肌内注射、胸骨内注射或输注技术。配制根据本发明的某些实施方案的药物组合物，使得在向患者给予所述组合物后，其中含有的活性成分是生物可利用的。向对象或患者给予的组合物可以采用一个或多个剂量单位的形式，其中例如片剂可以是单个计量单位，并且本文描述的气雾剂形式的包含Fc区的多肽和/或缀合物的容器可含有多个计量单位。制备此种剂型的实际方法是已知的，或者对本领域那些技术人员将是显而易见的；例如，参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,20th Edition(PhiladelphiaCollege of Pharmacy and Science,2000)。为治疗目标疾病或病况，给予的组合物将通常含有治疗有效量的本文描述的缀合物。
药物组合物可以是固体或液体形式。在一个实施方案中，载体是微粒，以使组合物为例如片剂或散剂形式。载体可以是液体，其中组合物为例如口服油剂、可注射液体或气雾剂，其可用于例如吸入给药。当旨在用于口服给药时，药物组合物优选为固体或液体形式，其中半固体、半液体、悬液和凝胶形式也作为固体或液体形式包括于本文所考虑的形式中。
作为用于口服给药的固体组合物，可将药物组合物制备为粉剂、颗粒、压缩片、丸剂、胶囊、口香糖、圆片(wafer)等。此类固体组合物通常含有一种或多种惰性稀释剂或可食用载体。另外，也可存在下述中的一种或多种：粘合剂如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、黄芪胶或明胶；赋形剂如淀粉、乳糖或葡聚糖；崩解剂如海藻酸、海藻酸钠、初生凝胶(Primogel)、玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁或氢化植物油(Sterotex)；助流剂如胶态二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；调味剂如薄荷、水杨酸甲脂或橙香精；和着色剂。当药物组合物是胶囊形式，例如明胶胶囊时，除上述类型的材料外，它还可以包含液体载体如聚乙二醇和油。
药物组合物可以是液体形式，例如酏剂、糖浆、溶液、乳剂或悬液。作为两个实例，液体可用于口服给药或通过注射递送。当旨在用于口服给药时，优选除当前化合物外，组合物还包含甜味剂、防腐剂、染料/着色剂或增味剂中的一种或多种。在旨在通过注射给药的组合物中，可包括下述的一种或多种：表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲液、稳定剂和等张剂。
液体药物组合物，不管它们是溶液、悬液或是其它相似的形式，可以包括下述佐剂中的一种或多种：用于注射的无菌稀释剂如水、盐溶液，优选生理盐水、林格氏溶液、等张氯化钠、固定油如合成的单甘酯或双甘酯，其可用作溶剂或悬浮介质、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它的溶剂；抗菌剂如苯甲醇或苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。可将肠胃外制剂封闭于玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。生理盐水是优选的佐剂。优选地，可注射的药物组合物是无菌的。
旨在用于肠胃外给药或口服给药的液体药物组合物应含有一定量的缀合物和/或包含Fc区的多肽，以便获得合适的剂量。通常，该量是组合物中至少0.01％的目标试剂。当旨在用于口服给药时，该量可在组合物重量的0.1％至约70％之间变化。某些口服的药物组合物含有约4％至约75％的目标试剂。在某些实施方案中，制备根据本发明的药物组合物和制剂，以使在被稀释前肠胃外剂量单元含有按重量计0.01％至10％的目标试剂。
药物组合物可能旨在用于局部给药，在这种情况下，载体可以适合地包括溶液、乳剂、油膏或凝胶基质。基质例如可包含下述中的一种或多种：凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂如水和醇，以及乳化剂和稳定剂。在用于局部给药的药物组合物中可以存在增稠剂。如果旨在用于经皮给药，则所述组合物可以包括透皮贴剂或离子电渗疗法装置。
药物组合物可能旨在用于直肠给药，例如以栓剂的形式，其将在直肠中融化并释放药物。用于直肠给药的组合物可以包含油性基质作为合适的非刺激性赋形剂。此种基质包括但不限于：羊毛脂、可可油和聚乙二醇。
药物组合物可以包括不同的材料，这些材料可对固体或液体剂量单位的外形进行修饰。例如，组合物可以包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常是惰性的，并且可选自例如糖、虫胶和其它肠溶性的包衣剂。可选地，可将活性成分包裹在明胶胶囊中。固体或液体形式的药物组合物可以包括与缀合物或试剂结合的试剂，并因此有助于化合物的递送。可发挥这一能力的合适试剂包括单克隆或多克隆抗体、一种或多种蛋白或脂质体。
药物组合物可基本上由可作为气雾剂给药的剂量单位构成。使用术语气雾剂以表示从胶体性质的系统到由加压包组成的系统范围内的各种系统。可以通过液化的气体或加压的气体，或者通过将活性成分分散的合适的泵系统来进行递送。可以在单相、双相或三相系统中递送气雾剂以递送活性成分。气雾剂的递送包括必需的容器、活化剂、阀门、子容器等，其一起可以形成试剂盒。本领域普通技术人员不需过度实验即可确定优选的气雾剂。
可将本文所述的组合物与载体一起制备，所述载体可保护包含Fc区的多肽和/或缀合物不被身体快速清除，如随时间释放的制剂或包衣。此类载体包括控释制剂，诸如但不限于：植入物和微型胶囊递送系统和生物可降解、生物相容性聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚乳酸以及本领域普通技术人员已知的其它物质。
可通过药物领域已知的方法来制备药物组合物。例如，旨在通过注射给药的药物组合物可以包含一种或多种盐、缓冲剂和/或稳定剂，利用无菌蒸馏水以便形成溶液。可加入表面活性剂以促进形成均匀的溶液或悬液。表面活性剂是与包含Fc区的多肽和/或缀合物非共价相互作用，以促进其在水递送系统中的溶解或均匀悬浮的化合物。
可给予治疗有效量的组合物，治疗有效量可根据多种因素变化，这些因素包括：采用的具体化合物的活性；化合物的代谢稳定性和作用时间长度；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；给药模式和给药时间；排泄速率；药物组合；特定病症或病况的严重性；以及正在接受治疗的对象。通常，治疗有效日剂量为(对于70kg哺乳动物)约0.001mg/kg(即～0.07mg)至约100mg/kg(即～7.0g)；优选地治疗有效剂量为(对于70kg哺乳动物)约0.01mg/kg(即～0.7mg)至约50mg/kg(即～3.5g)；更优选地，治疗有效剂量为(对于70kg哺乳动物)约1mg/kg(即～70mg)至约25mg/kg(即～1.75g)。
如本文中所述，本文所述的组合物可与一种或多种其它治疗剂同时给药，或在其它治疗剂给药之前或之后给药。例如，在一个实施方案中，将包含Fc区的多肽和/或缀合物与抗炎剂一起给药。抗炎剂或药物包括但不限于：类固醇和糖皮质激素(包括倍他米松、布地奈德、地塞米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、强的松、去炎松)；非甾体类抗炎药(NSAIDS)，包括阿司匹林、布洛芬、萘普生、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、来氟米特、抗TNF药、环磷酰胺和霉酚酸酯。
此类联合疗法可包括给予单一药物剂量制剂，其含有本发明的化合物(即，缀合物、含有Fc区的多肽)和一种或多种另外的活性剂，以及给予包含本发明的缀合物和于其自己的单独的药物剂量制剂中的每种活性剂的组合物。例如，可以在单一口服剂量组合物如片剂或胶囊中向患者一起给予如本文中所述的缀合物和/或包含Fc区的多肽和任选地另一种活性剂，或者每种试剂在单独的口服剂量制剂中给药。类似地，可以在单一肠胃外剂量组合物中，如在盐水溶液或其他生理上可接受的溶液中向患者一起给予如本文中所述的缀合物和/或包含Fc区的多肽和任选地另一种活性剂，或者每种试剂在单独的肠胃外剂量制剂中给药。当使用单独的剂量制剂时，包含缀合物和一种或多种另外的活性剂的组合物可以基本上同时给药，即同时给药，或在分别错开的时间给药，即依次和以任何顺序给药；联合治疗被理解为包括所有这些方案。
还包括试剂盒，例如患者护理试剂盒，其包含填充了一种或多种治疗组合物、包含Fc区的多肽和/或本文所述的缀合物的一个或多个容器。在一些实施方案中，试剂盒包括如何使用此类组合物，例如用于治疗一种或多种疾病的书面说明。
因此，某些实施方案包括患者护理试剂盒，其包含：(a)包含免疫球蛋白Fc区的多肽；和(b)缀合物，如本文中所述。在一些试剂盒中，(a)和(b)在单独的组合物中，并且任选地按本文中所述定义。在一些试剂盒中个，(a)和(b)在同一组合物中，任选地作为如本文中所述的药物或治疗组合物。
本文的试剂盒还可以包括一种或多种另外的治疗剂或治疗的适应症适合或需要的其他组分。如果需要，另外的治疗剂可以包含在第二个容器中。另外的治疗剂的实例包括但不限于抗炎剂、抗菌剂、抗病毒剂等。
本文的试剂盒还可包括一个或多个注射器(例如，可注射的注射器)或促进期望的递送模式所必需的或所需的其他组分(例如，支架、可植入的部件库等)。
可以组合本文所述的各种实施方案，以提供其他的实施方案。本说明书中所涉及的和/或申请数据表中所列举的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利出版物，均通过引用整体并入本文中。如有必要，可修改实施方案的方面，以采用不同专利、申请和出版物的构思来提供其他的实施方案。
根据上文的详述，可对实施方案做出这些和其他的改变。通常，在以下权利要求中，所用的术语不应当解释为将权利要求限制于说明书和权利要求中所公开的具体实施方案，而应当解释为包括所有可能的实施方案，以及授予权利的此类权利要求的等同物的完整范围。因此，权利要求并不受公开内容的限制。
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Met Arg Gly Pro Ser Gly Ala Leu Trp Leu Leu Leu Ala Leu Arg Thr
1 5 10 15
Val Leu Gly Gly Met Glu Val Arg Trp Cys Ala Thr Ser Asp Pro Glu
20 25 30
Gln His Lys Cys Gly Asn Met Ser Glu Ala Phe Arg Glu Ala Gly Ile
35 40 45
Gln Pro Ser Leu Leu Cys Val Arg Gly Thr Ser Ala Asp His Cys Val
50 55 60
Gln Leu Ile Ala Ala Gln Glu Ala Asp Ala Ile Thr Leu Asp Gly Gly
65 70 75 80
Ala Ile Tyr Glu Ala Gly Lys Glu His Gly Leu Lys Pro Val Val Gly
85 90 95
Glu Val Tyr Asp Gln Glu Val Gly Thr Ser Tyr Tyr Ala Val Ala Val
100 105 110
Val Arg Arg Ser Ser His Val Thr Ile Asp Thr Leu Lys Gly Val Lys
115 120 125
Ser Cys His Thr Gly Ile Asn Arg Thr Val Gly Trp Asn Val Pro Val
130 135 140
Gly Tyr Leu Val Glu Ser Gly Arg Leu Ser Val Met Gly Cys Asp Val
145 150 155 160
Leu Lys Ala Val Ser Asp Tyr Phe Gly Gly Ser Cys Val Pro Gly Ala
165 170 175
Gly Glu Thr Ser Tyr Ser Glu Ser Leu Cys Arg Leu Cys Arg Gly Asp
180 185 190
Ser Ser Gly Glu Gly Val Cys Asp Lys Ser Pro Leu Glu Arg Tyr Tyr
195 200 205
Asp Tyr Ser Gly Ala Phe Arg Cys Leu Ala Glu Gly Ala Gly Asp Val
210 215 220
Ala Phe Val Lys His Ser Thr Val Leu Glu Asn Thr Asp Gly Lys Thr
225 230 235 240
Leu Pro Ser Trp Gly Gln Ala Leu Leu Ser Gln Asp Phe Glu Leu Leu
245 250 255
Cys Arg Asp Gly Ser Arg Ala Asp Val Thr Glu Trp Arg Gln Cys His
260 265 270
Leu Ala Arg Val Pro Ala His Ala Val Val Val Arg Ala Asp Thr Asp
275 280 285
Gly Gly Leu Ile Phe Arg Leu Leu Asn Glu Gly Gln Arg Leu Phe Ser
290 295 300
His Glu Gly Ser Ser Phe Gln Met Phe Ser Ser Glu Ala Tyr Gly Gln
305 310 315 320
Lys Asp Leu Leu Phe Lys Asp Ser Thr Ser Glu Leu Val Pro Ile Ala
325 330 335
Thr Gln Thr Tyr Glu Ala Trp Leu Gly His Glu Tyr Leu His Ala Met
340 345 350
Lys Gly Leu Leu Cys Asp Pro Asn Arg Leu Pro Pro Tyr Leu Arg Trp
355 360 365
Cys Val Leu Ser Thr Pro Glu Ile Gln Lys Cys Gly Asp Met Ala Val
370 375 380
Ala Phe Arg Arg Gln Arg Leu Lys Pro Glu Ile Gln Cys Val Ser Ala
385 390 395 400
Lys Ser Pro Gln His Cys Met Glu Arg Ile Gln Ala Glu Gln Val Asp
405 410 415
Ala Val Thr Leu Ser Gly Glu Asp Ile Tyr Thr Ala Gly Lys Thr Tyr
420 425 430
Gly Leu Val Pro Ala Ala Gly Glu His Tyr Ala Pro Glu Asp Ser Ser
435 440 445
Asn Ser Tyr Tyr Val Val Ala Val Val Arg Arg Asp Ser Ser His Ala
450 455 460
Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg Gly Lys Arg Ser Cys His Ala Gly Phe
465 470 475 480
Gly Ser Pro Ala Gly Trp Asp Val Pro Val Gly Ala Leu Ile Gln Arg
485 490 495
Gly Phe Ile Arg Pro Lys Asp Cys Asp Val Leu Thr Ala Val Ser Glu
500 505 510
Phe Phe Asn Ala Ser Cys Val Pro Val Asn Asn Pro Lys Asn Tyr Pro
515 520 525
Ser Ser Leu Cys Ala Leu Cys Val Gly Asp Glu Gln Gly Arg Asn Lys
530 535 540
Cys Val Gly Asn Ser Gln Glu Arg Tyr Tyr Gly Tyr Arg Gly Ala Phe
545 550 555 560
Arg Cys Leu Val Glu Asn Ala Gly Asp Val Ala Phe Val Arg His Thr
565 570 575
Thr Val Phe Asp Asn Thr Asn Gly His Asn Ser Glu Pro Trp Ala Ala
580 585 590
Glu Leu Arg Ser Glu Asp Tyr Glu Leu Leu Cys Pro Asn Gly Ala Arg
595 600 605
Ala Glu Val Ser Gln Phe Ala Ala Cys Asn Leu Ala Gln Ile Pro Pro
610 615 620
His Ala Val Met Val Arg Pro Asp Thr Asn Ile Phe Thr Val Tyr Gly
625 630 635 640
Leu Leu Asp Lys Ala Gln Asp Leu Phe Gly Asp Asp His Asn Lys Asn
645 650 655
Gly Phe Lys Met Phe Asp Ser Ser Asn Tyr His Gly Gln Asp Leu Leu
660 665 670
Phe Lys Asp Ala Thr Val Arg Ala Val Pro Val Gly Glu Lys Thr Thr
675 680 685
Tyr Arg Gly Trp Leu Gly Leu Asp Tyr Val Ala Ala Leu Glu Gly Met
690 695 700
Ser Ser Gln Gln Cys Ser Gly Ala Ala Ala Pro Ala Pro Gly Ala Pro
705 710 715 720
Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Ala Leu Ala Ala Arg Leu Leu Pro Pro
725 730 735
Ala Leu
<210> 2
<211> 692
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 2
Gly Met Glu Val Arg Trp Cys Ala Thr Ser Asp Pro Glu Gln His Lys
1 5 10 15
Cys Gly Asn Met Ser Glu Ala Phe Arg Glu Ala Gly Ile Gln Pro Ser
20 25 30
Leu Leu Cys Val Arg Gly Thr Ser Ala Asp His Cys Val Gln Leu Ile
35 40 45
Ala Ala Gln Glu Ala Asp Ala Ile Thr Leu Asp Gly Gly Ala Ile Tyr
50 55 60
Glu Ala Gly Lys Glu His Gly Leu Lys Pro Val Val Gly Glu Val Tyr
65 70 75 80
Asp Gln Glu Val Gly Thr Ser Tyr Tyr Ala Val Ala Val Val Arg Arg
85 90 95
Ser Ser His Val Thr Ile Asp Thr Leu Lys Gly Val Lys Ser Cys His
100 105 110
Thr Gly Ile Asn Arg Thr Val Gly Trp Asn Val Pro Val Gly Tyr Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Arg Leu Ser Val Met Gly Cys Asp Val Leu Lys Ala
130 135 140
Val Ser Asp Tyr Phe Gly Gly Ser Cys Val Pro Gly Ala Gly Glu Thr
145 150 155 160
Ser Tyr Ser Glu Ser Leu Cys Arg Leu Cys Arg Gly Asp Ser Ser Gly
165 170 175
Glu Gly Val Cys Asp Lys Ser Pro Leu Glu Arg Tyr Tyr Asp Tyr Ser
180 185 190
Gly Ala Phe Arg Cys Leu Ala Glu Gly Ala Gly Asp Val Ala Phe Val
195 200 205
Lys His Ser Thr Val Leu Glu Asn Thr Asp Gly Lys Thr Leu Pro Ser
210 215 220
Trp Gly Gln Ala Leu Leu Ser Gln Asp Phe Glu Leu Leu Cys Arg Asp
225 230 235 240
Gly Ser Arg Ala Asp Val Thr Glu Trp Arg Gln Cys His Leu Ala Arg
245 250 255
Val Pro Ala His Ala Val Val Val Arg Ala Asp Thr Asp Gly Gly Leu
260 265 270
Ile Phe Arg Leu Leu Asn Glu Gly Gln Arg Leu Phe Ser His Glu Gly
275 280 285
Ser Ser Phe Gln Met Phe Ser Ser Glu Ala Tyr Gly Gln Lys Asp Leu
290 295 300
Leu Phe Lys Asp Ser Thr Ser Glu Leu Val Pro Ile Ala Thr Gln Thr
305 310 315 320
Tyr Glu Ala Trp Leu Gly His Glu Tyr Leu His Ala Met Lys Gly Leu
325 330 335
Leu Cys Asp Pro Asn Arg Leu Pro Pro Tyr Leu Arg Trp Cys Val Leu
340 345 350
Ser Thr Pro Glu Ile Gln Lys Cys Gly Asp Met Ala Val Ala Phe Arg
355 360 365
Arg Gln Arg Leu Lys Pro Glu Ile Gln Cys Val Ser Ala Lys Ser Pro
370 375 380
Gln His Cys Met Glu Arg Ile Gln Ala Glu Gln Val Asp Ala Val Thr
385 390 395 400
Leu Ser Gly Glu Asp Ile Tyr Thr Ala Gly Lys Thr Tyr Gly Leu Val
405 410 415
Pro Ala Ala Gly Glu His Tyr Ala Pro Glu Asp Ser Ser Asn Ser Tyr
420 425 430
Tyr Val Val Ala Val Val Arg Arg Asp Ser Ser His Ala Phe Thr Leu
435 440 445
Asp Glu Leu Arg Gly Lys Arg Ser Cys His Ala Gly Phe Gly Ser Pro
450 455 460
Ala Gly Trp Asp Val Pro Val Gly Ala Leu Ile Gln Arg Gly Phe Ile
465 470 475 480
Arg Pro Lys Asp Cys Asp Val Leu Thr Ala Val Ser Glu Phe Phe Asn
485 490 495
Ala Ser Cys Val Pro Val Asn Asn Pro Lys Asn Tyr Pro Ser Ser Leu
500 505 510
Cys Ala Leu Cys Val Gly Asp Glu Gln Gly Arg Asn Lys Cys Val Gly
515 520 525
Asn Ser Gln Glu Arg Tyr Tyr Gly Tyr Arg Gly Ala Phe Arg Cys Leu
530 535 540
Val Glu Asn Ala Gly Asp Val Ala Phe Val Arg His Thr Thr Val Phe
545 550 555 560
Asp Asn Thr Asn Gly His Asn Ser Glu Pro Trp Ala Ala Glu Leu Arg
565 570 575
Ser Glu Asp Tyr Glu Leu Leu Cys Pro Asn Gly Ala Arg Ala Glu Val
580 585 590
Ser Gln Phe Ala Ala Cys Asn Leu Ala Gln Ile Pro Pro His Ala Val
595 600 605
Met Val Arg Pro Asp Thr Asn Ile Phe Thr Val Tyr Gly Leu Leu Asp
610 615 620
Lys Ala Gln Asp Leu Phe Gly Asp Asp His Asn Lys Asn Gly Phe Lys
625 630 635 640
Met Phe Asp Ser Ser Asn Tyr His Gly Gln Asp Leu Leu Phe Lys Asp
645 650 655
Ala Thr Val Arg Ala Val Pro Val Gly Glu Lys Thr Thr Tyr Arg Gly
660 665 670
Trp Leu Gly Leu Asp Tyr Val Ala Ala Leu Glu Gly Met Ser Ser Gln
675 680 685
Gln Cys Ser Gly
690
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 3
Trp Cys Ala Thr Ser Asp Pro Glu Gln His Lys
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 4
Arg Ser Ser His Val Thr Ile Asp Thr Leu Lys
1 5 10
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 5
Ser Ser His Val Thr Ile Asp Thr Leu Lys Gly Val Lys
1 5 10
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 6
Leu Cys Arg Gly Asp Ser Ser Gly Glu Gly Val Cys Asp Lys
1 5 10
<210> 7
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 7
Gly Asp Ser Ser Gly Glu Gly Val Cys Asp Lys Ser Pro Leu Glu Arg
1 5 10 15
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 8
Tyr Tyr Asp Tyr Ser Gly Ala Phe Arg
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 9
Ala Asp Val Thr Glu Trp Arg
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 10
Val Pro Ala His Ala Val Val Val Arg
1 5
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 11
Ala Asp Thr Asp Gly Gly Leu Ile Phe Arg
1 5 10
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 12
Cys Gly Asp Met Ala Val Ala Phe Arg
1 5
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 13
Leu Lys Pro Glu Ile Gln Cys Val Ser Ala Lys
1 5 10
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 14
Asp Ser Ser His Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 15
Ser Glu Asp Tyr Glu Leu Leu Cys Pro Asn Gly Ala Arg
1 5 10
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 16
Ala Gln Asp Leu Phe Gly Asp Asp His Asn Lys Asn Gly Phe Lys
1 5 10 15
<210> 17
<211> 40
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 17
Phe Ser Ser Glu Ala Tyr Gly Gln Lys Asp Leu Leu Phe Lys Asp Ser
1 5 10 15
Thr Ser Glu Leu Val Pro Ile Ala Thr Gln Thr Tyr Glu Ala Trp Leu
20 25 30
Gly His Glu Tyr Leu His Ala Met
35 40
<210> 18
<211> 221
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 18
Glu Arg Ile Gln Ala Glu Gln Val Asp Ala Val Thr Leu Ser Gly Glu
1 5 10 15
Asp Ile Tyr Thr Ala Gly Lys Thr Tyr Gly Leu Val Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Glu His Tyr Ala Pro Glu Asp Ser Ser Asn Ser Tyr Tyr Val Val Ala
35 40 45
Val Val Arg Arg Asp Ser Ser His Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
50 55 60
Gly Lys Arg Ser Cys His Ala Gly Phe Gly Ser Pro Ala Gly Trp Asp
65 70 75 80
Val Pro Val Gly Ala Leu Ile Gln Arg Gly Phe Ile Arg Pro Lys Asp
85 90 95
Cys Asp Val Leu Thr Ala Val Ser Glu Phe Phe Asn Ala Ser Cys Val
100 105 110
Pro Val Asn Asn Pro Lys Asn Tyr Pro Ser Ser Leu Cys Ala Leu Cys
115 120 125
Val Gly Asp Glu Gln Gly Arg Asn Lys Cys Val Gly Asn Ser Gln Glu
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Tyr Arg Gly Ala Phe Arg Cys Leu Val Glu Asn Ala
145 150 155 160
Gly Asp Val Ala Phe Val Arg His Thr Thr Val Phe Asp Asn Thr Asn
165 170 175
Gly His Asn Ser Glu Pro Trp Ala Ala Glu Leu Arg Ser Glu Asp Tyr
180 185 190
Glu Leu Leu Cys Pro Asn Gly Ala Arg Ala Glu Val Ser Gln Phe Ala
195 200 205
Ala Cys Asn Leu Ala Gln Ile Pro Pro His Ala Val Met
210 215 220
<210> 19
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 19
Val Arg Pro Asp Thr Asn Ile Phe Thr Val Tyr Gly Leu Leu Asp Lys
1 5 10 15
Ala Gln Asp Leu Phe Gly Asp Asp His Asn Lys Asn Gly Phe Lys Met
20 25 30
<210> 20
<211> 323
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 20
Tyr Ser Arg Glu Lys Asn Gln Pro Lys Pro Ser Pro Lys Arg Glu Ser
1 5 10 15
Gly Glu Glu Phe Arg Met Glu Lys Leu Asn Gln Leu Trp Glu Lys Ala
20 25 30
Gln Arg Leu His Leu Pro Pro Val Arg Leu Ala Glu Leu His Ala Asp
35 40 45
Leu Lys Ile Gln Glu Arg Asp Glu Leu Ala Trp Lys Lys Leu Lys Leu
50 55 60
Asp Gly Leu Asp Glu Asp Gly Glu Lys Glu Ala Arg Leu Ile Arg Asn
65 70 75 80
Leu Asn Val Ile Leu Ala Lys Tyr Gly Leu Asp Gly Lys Lys Asp Ala
85 90 95
Arg Gln Val Thr Ser Asn Ser Leu Ser Gly Thr Gln Glu Asp Gly Leu
100 105 110
Asp Asp Pro Arg Leu Glu Lys Leu Trp His Lys Ala Lys Thr Ser Gly
115 120 125
Lys Phe Ser Gly Glu Glu Leu Asp Lys Leu Trp Arg Glu Phe Leu His
130 135 140
His Lys Glu Lys Val His Glu Tyr Asn Val Leu Leu Glu Thr Leu Ser
145 150 155 160
Arg Thr Glu Glu Ile His Glu Asn Val Ile Ser Pro Ser Asp Leu Ser
165 170 175
Asp Ile Lys Gly Ser Val Leu His Ser Arg His Thr Glu Leu Lys Glu
180 185 190
Lys Leu Arg Ser Ile Asn Gln Gly Leu Asp Arg Leu Arg Arg Val Ser
195 200 205
His Gln Gly Tyr Ser Thr Glu Ala Glu Phe Glu Glu Pro Arg Val Ile
210 215 220
Asp Leu Trp Asp Leu Ala Gln Ser Ala Asn Leu Thr Asp Lys Glu Leu
225 230 235 240
Glu Ala Phe Arg Glu Glu Leu Lys His Phe Glu Ala Lys Ile Glu Lys
245 250 255
His Asn His Tyr Gln Lys Gln Leu Glu Ile Ala His Glu Lys Leu Arg
260 265 270
His Ala Glu Ser Val Gly Asp Gly Glu Arg Val Ser Arg Ser Arg Glu
275 280 285
Lys His Ala Leu Leu Glu Gly Arg Thr Lys Glu Leu Gly Tyr Thr Val
290 295 300
Lys Lys His Leu Gln Asp Leu Ser Gly Arg Ile Ser Arg Ala Arg His
305 310 315 320
Asn Glu Leu
<210> 21
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 21
Arg Pro Asp Phe Cys Leu Glu Pro Pro Tyr Thr Gly Pro Cys Lys Ala
1 5 10 15
Arg Ile Ile Arg Tyr Phe Tyr Asn Ala Lys Ala Gly Leu Cys Gln Thr
20 25 30
Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Ser Ala
35 40 45
Glu Asp Cys Met Arg Thr Cys Gly Gly Ala
50 55
<210> 22
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 22
Thr Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp
<210> 23
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 23
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 24
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 24
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 25
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 25
Thr Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 26
Thr Phe Gln Tyr Gly Gly Cys Met Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Thr
1 5 10 15
Glu Lys Glu
<210> 27
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 27
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Arg Asn Asn Phe Asp Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 28
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 28
Ser Phe Tyr Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Lys Asn Asn Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Glu Glu Glu
<210> 29
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 29
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 30
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 30
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 31
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 31
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Lys Asn Asn Tyr Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 32
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 32
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Lys Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 33
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 33
Thr Phe Gln Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 34
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 34
Thr Phe Gln Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Lys Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 35
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 35
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 36
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 36
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Leu Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 37
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 37
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Lys Lys Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 38
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 38
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Gly Asn Asn Tyr Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 39
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 39
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 40
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 40
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 41
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 41
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Lys Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu
<210> 42
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 42
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Asp
<210> 43
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 43
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Asp Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 44
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 44
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Lys Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 45
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 45
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Ala Asn Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 46
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 46
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Lys Lys Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 47
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 47
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Arg Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 48
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 48
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 49
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 49
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Asn Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 50
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 50
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Gly Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 51
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 51
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Arg Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 52
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 52
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 53
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 53
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Gly Asn Asn Phe Lys Ser
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 54
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 54
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Lys Asn Asn Phe Asp Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 55
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 55
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Glu Lys Glu
<210> 56
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 56
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Gly Asn Asn Phe Asp Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 57
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 57
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Gly Asn Asn Phe Asp Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 58
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 58
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 59
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 59
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Lys Gly Asn Asn Tyr Val Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 60
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 60
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Lys Gly Asn Asn Phe Leu Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 61
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 61
Ser Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Lys Asn Asn Phe Leu Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 62
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 62
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Lys Asn Asn Phe Val Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 63
Leu Gly Asn Lys Asn Asn Tyr Val Arg Glu Lys Tyr
1 5 10
<210> 64
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 64
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Gly Asn Asn Phe Leu Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 65
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 65
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Arg Asn Asn Phe Leu Thr
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 66
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 66
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Gly Asn Asn Phe Lys Ser
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 67
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 67
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Lys Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 68
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 68
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 69
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 69
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Asp
<210> 70
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 70
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 71
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 71
Ser Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Met Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 72
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 72
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Gly Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 73
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 73
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 74
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 74
Ser Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 75
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 75
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Leu Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 76
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 76
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Gly Asn Asn Phe Val Thr
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 77
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 77
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Lys Gly Asn Asn Phe Val Ser
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 78
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 78
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Arg Asn Asn Phe Asp Arg
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 79
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 79
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Arg Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 80
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 80
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Lys Asn Asn Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 81
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 81
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Arg Asn Asn Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 82
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 82
Pro Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Asn Arg Asn Asn Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 83
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 83
Met Arg Pro Asp Phe Cys Leu Glu Pro Pro Tyr Thr Gly Pro Cys Val
1 5 10 15
Ala Arg Ile
<210> 84
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 84
Ala Arg Ile Ile Arg Tyr Phe Tyr Asn Ala Lys Ala Gly Leu Cys Gln
1 5 10 15
Thr Phe Val Tyr Gly
20
<210> 85
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 85
Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Tyr Lys Ser Ala Glu Asp
1 5 10 15
Cys Met Arg Thr Cys Gly
20
<210> 86
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 86
Pro Asp Phe Cys Leu Glu Pro Pro Tyr Thr Gly Pro Cys Val Ala Arg
1 5 10 15
Ile Ile Arg Tyr Phe Tyr
20
<210> 87
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 87
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 88
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 88
Lys Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 89
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 89
Thr Phe Tyr Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Tyr Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 90
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 90
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 91
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 91
Cys Thr Phe Phe Tyr Gly Cys Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys
1 5 10 15
Thr Glu Glu Tyr
20
<210> 92
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 92
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Cys
20
<210> 93
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 93
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Lys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 94
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 94
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Lys Arg Tyr
<210> 95
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 95
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Lys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Glu Tyr
<210> 96
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 96
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Lys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Gly Tyr
<210> 97
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 97
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Lys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Glu Lys Tyr
<210> 98
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 98
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Lys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 99
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 99
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 100
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 100
Thr Phe Phe Tyr Gly Cys Gly Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 101
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 101
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Arg Cys Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 102
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 102
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Gly Asn Asn Phe Asp Thr
1 5 10 15
Glu Glu Glu Gln
20
<210> 103
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 103
Thr Phe Gln Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 104
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 104
Tyr Asn Lys Glu Phe Gly Thr Phe Asn Thr Lys Gly Cys Glu Arg Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Phe
<210> 105
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 105
Arg Phe Lys Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Glu
<210> 106
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 106
Arg Phe Lys Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Lys Asn Asn Phe Leu Arg
1 5 10 15
Leu Lys Tyr
<210> 107
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 107
Arg Phe Lys Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Lys Asn Asn Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Leu Lys Tyr
<210> 108
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 108
Lys Thr Lys Arg Lys Arg Lys Lys Gln Arg Val Lys Ile Ala Tyr Glu
1 5 10 15
Glu Ile Phe Lys Asn Tyr
20
<210> 109
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 109
Lys Thr Lys Arg Lys Arg Lys Lys Gln Arg Val Lys Ile Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 110
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 110
Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 111
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 111
Arg Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe
1 5 10
<210> 112
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 112
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
<210> 113
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 113
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 114
<211> 59
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 114
Met Arg Pro Asp Phe Cys Leu Glu Pro Pro Tyr Thr Gly Pro Cys Val
1 5 10 15
Ala Arg Ile Ile Arg Tyr Phe Tyr Asn Ala Lys Ala Gly Leu Cys Gln
20 25 30
Thr Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Ser
35 40 45
Ala Glu Asp Cys Met Arg Thr Cys Gly Gly Ala
50 55
<210> 115
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 115
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Lys Glu Tyr
<210> 116
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 116
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Tyr
<210> 117
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 117
Asn Ala Lys Ala Gly Leu Cys Gln Thr Phe Val Tyr Gly Gly Cys Leu
1 5 10 15
Ala Lys Arg Asn Asn Phe Glu Ser Ala Glu Asp Cys Met Arg Thr Cys
20 25 30
Gly Gly Ala
35
<210> 118
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 118
Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Ser Ala Glu Asp
1 5 10 15
Cys Met Arg Thr Cys Gly Gly Ala
20
<210> 119
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 119
Gly Leu Cys Gln Thr Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn
1 5 10 15
Asn Phe Lys Ser Ala Glu
20
<210> 120
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 120
Leu Cys Gln Thr Phe Val Tyr Gly Gly Cys Glu Ala Lys Arg Asn Asn
1 5 10 15
Phe Lys Ser Ala
20
<210> 121
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 121
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 122
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 122
Arg Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 123
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 123
Arg Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 124
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 124
Arg Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Arg Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 125
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 125
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Arg Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 126
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 126
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Arg Arg Asn Asn Phe Arg Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 127
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 127
Cys Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys
1 5 10 15
Thr Glu Glu Tyr
20
<210> 128
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 128
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Cys
20
<210> 129
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 129
Cys Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Arg Arg Asn Asn Phe Arg
1 5 10 15
Thr Glu Glu Tyr
20
<210> 130
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 130
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Arg Arg Asn Asn Phe Arg Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Cys
20
<210> 131
<211> 86
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 131
Met Glu Pro Val Asp Pro Arg Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser
1 5 10 15
Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe
20 25 30
His Cys Gln Val Cys Phe Thr Thr Lys Ala Leu Gly Ile Ser Tyr Gly
35 40 45
Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln Gly Ser Gln Thr
50 55 60
His Gln Val Ser Leu Ser Lys Gln Pro Thr Ser Gln Pro Arg Gly Asp
65 70 75 80
Pro Thr Gly Pro Lys Glu
85
<210> 132
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 132
Phe Thr Thr Lys Ala Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg
1 5 10 15
Gln Arg Arg Arg
20
<210> 133
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 133
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
<210> 134
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 134
Arg Gly Gly Arg Leu Cys Tyr Cys Arg Arg Arg Phe Cys Val Cys Val
1 5 10 15
Gly Arg
<210> 135
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 135
Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr
1 5 10 15
Gly Arg Ala
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 136
Arg Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe
1 5 10
<210> 137
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 137
Arg Gly Gly Arg Leu Ala Tyr Leu Arg Arg Arg Trp Ala Val Leu Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 138
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 138
His Leu Asp Cys Met Pro Arg Gly Cys Phe Arg Asn
1 5 10
<210> 139
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 139
Ala Cys Gln Val Lys Ser Met Pro Arg Cys
1 5 10
<210> 140
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 140
Ala Cys Thr Thr Pro Met Pro Arg Leu Cys
1 5 10
<210> 141
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 141
Ala Cys Lys Ala Pro Gln Met Pro Arg Cys
1 5 10
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 142
Ala Cys Leu Asn Pro Ser Met Pro Arg Cys
1 5 10
<210> 143
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 143
Ala Cys Leu Val Ser Ser Met Pro Arg Cys
1 5 10
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 144
Ala Cys Leu Gln Pro Met Pro Arg Leu Cys
1 5 10
<210> 145
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 145
Ala Cys Pro Val Ser Ser Met Pro Arg Cys
1 5 10
<210> 146
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 146
Ala Cys Gln Ser Pro Met Pro Arg Leu Cys
1 5 10
<210> 147
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 147
Ala Cys Leu Thr Pro Met Pro Arg Leu Cys
1 5 10
<210> 148
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 148
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 149
Ala Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Ala
1 5 10
<210> 150
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 150
Ala Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 151
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 151
Asp Ala Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 152
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 152
Asp Ser Ala Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 153
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 153
Asp Ser Gly Ala Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 154
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 154
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Ala Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 155
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 155
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Ala Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 156
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 156
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Ala Cys Asp Pro Arg
1 5 10 15
<210> 157
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 157
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Ala Pro Arg
1 5 10 15
<210> 158
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 158
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Ala Arg
1 5 10 15
<210> 159
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 159
Asp Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Ala
1 5 10 15
<210> 160
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 160
Ser Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10
<210> 161
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 161
Gly Leu Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys Asp Pro Arg
1 5 10
<210> 162
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 162
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 163
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 163
Cys Met Pro Arg Ala Arg Gly Cys
1 5
<210> 164
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 164
Cys Met Pro Arg Leu Ala Gly Cys
1 5
<210> 165
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 165
Cys Met Pro Arg Leu Arg Ala Cys
1 5
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 166
Cys Met Pro Arg Leu Lys Gly Cys
1 5
<210> 167
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<400> 167
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 168
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> D-Leu
<400> 168
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 169
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> D-Arg
<400> 169
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 170
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> D-Cys
<400> 170
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 171
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> D-Cys
<400> 171
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Sar
<400> 172
Cys Met Pro Arg Leu Arg Xaa Cys
1 5
<210> 173
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<400> 173
Cys Met Pro Arg Lys Arg Gly Cys
1 5
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<400> 174
Cys Met Pro Arg Leu Arg Cys
1 5
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<400> 175
Cys Met Pro Arg Leu Cys Arg
1 5
<210> 176
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<400> 176
Cys Met Pro Arg Cys Leu Arg Gly
1 5
<210> 177
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 177
Cys Met Pro Arg Gly Cys
1 5
<210> 178
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Pen
<400> 178
Xaa Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 179
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Pen
<400> 179
Xaa Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 180
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 180
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Xaa
1 5
<210> 181
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 181
Xaa Met Pro Arg Leu Arg Gly Xaa
1 5
<210> 182
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 182
Xaa Met Pro Arg Leu Arg Gly Xaa
1 5
<210> 183
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> D-Pen
<400> 183
Xaa Met Pro Arg Leu Arg Gly Xaa
1 5
<210> 184
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Mpa
<400> 184
Xaa Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 185
Met Thr Val Met Pro Thr Gly Leu Trp Asn Pro Leu Ile Pro Ser
1 5 10 15
<210> 186
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 186
Ser Ala Ser Trp Phe Ala Val Pro Ile Pro Pro Leu Arg Leu Glu
1 5 10 15
<210> 187
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 187
Met Thr Pro Met Ser Thr Pro Arg Met Leu Pro Val Tyr Val Ala
1 5 10 15
<210> 188
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 188
Met Thr Ala Thr His Leu Ser Thr Leu Phe Gln Pro Leu Thr Tyr
1 5 10 15
<210> 189
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 189
Met Ser Pro Ile Pro Pro Ala Ala Ser Thr Trp Ala Asn Thr Leu
1 5 10 15
<210> 190
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 190
Met Thr Ala Asn Pro Leu Gln Asn Ala Pro Gly Pro Leu Ser Leu
1 5 10 15
<210> 191
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 191
Met Gln Thr Ala Pro Pro Pro Pro Leu Thr Arg Val Gln Trp Ser
1 5 10 15
<210> 192
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 192
Gly Thr Pro Arg Met His Ile Pro Leu Asn Val Asp His Leu Pro
1 5 10 15
<210> 193
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 193
Leu Thr Leu Pro Pro Ile Ser Gly Leu Ser Ser Tyr Pro Leu Pro
1 5 10 15
<210> 194
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 194
Thr Pro Ser Ala His Ala Met Ala Leu Gln Ser Leu Ser Val Gly
1 5 10 15
<210> 195
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 195
Leu Thr Leu Pro Pro Ile Ser Gly Leu Ser Ser Tyr Pro Leu Pro
1 5 10 15
<210> 196
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 196
Met Gly Thr Leu Asn Ala Pro Thr Ala Tyr Pro Gln Asp Ser Leu
1 5 10 15
<210> 197
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 197
Leu Thr Asn Pro Pro Ala Tyr Leu Pro Gln Asn Thr Asp Pro His
1 5 10 15
<210> 198
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 198
Met Gly Leu Pro Leu Pro Tyr Ile Gln Thr Ile Leu His Thr Pro
1 5 10 15
<210> 199
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 199
Ser Ala Ala Leu Ile Ala Met Ser Ser Phe Lys Ser Ile Thr Ala
1 5 10 15
<210> 200
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 200
Ser Gly Phe Ala Phe Ala Arg Ser Val Pro Thr Glu Ser Arg Arg
1 5 10 15
<210> 201
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 201
Met Thr Ser Pro Tyr Met Ser Leu Pro Pro Ser Thr Asp Asp
1 5 10
<210> 202
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 202
Leu Thr Asn Pro Pro Ala Tyr Leu Pro Gln Asn Thr Asp Pro His
1 5 10 15
<210> 203
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 半胱氨酸 (Cys) 或其类似物或等排体
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 脯氨酸 (Pro) 或其类似物或等排体
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Ala或Arg
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> 甘氨酸 (gly) 或其类似物或等排体
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> 半胱氨酸 (Cys) 或其类似物或等排体
<400> 203
Xaa Met Xaa Arg Leu Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 204
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cys, D-Cys, Pen, 或D-Pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pro, Pip或Thz
<400> 204
Xaa Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 205
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pip
<400> 205
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pip
<400> 206
Xaa Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 207
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pip
<400> 207
Xaa Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 208
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Thz
<400> 208
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 209
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Thz
<400> 209
Xaa Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 210
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Pen
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Thz
<400> 210
Xaa Met Xaa Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 211
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Thz
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Sar
<400> 211
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Xaa Cys
1 5
<210> 212
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Thz
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 212
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Gly Xaa
1 5
<210> 213
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Thz
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Sar
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 213
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Xaa Xaa
1 5
<210> 214
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pip
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Sar
<400> 214
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Xaa Cys
1 5
<210> 215
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pip
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 215
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Gly Xaa
1 5
<210> 216
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Pip
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Sar
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pen
<400> 216
Cys Met Xaa Arg Leu Arg Xaa Xaa
1 5
<210> 217
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> hArg
<400> 217
Cys Met Pro Xaa Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 218
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Agb
<400> 218
Cys Met Pro Xaa Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 219
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Agp
<400> 219
Cys Met Pro Xaa Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cit
<400> 220
Cys Met Pro Xaa Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 221
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cit
<400> 221
Cys Met Pro Arg Leu Xaa Gly Cys
1 5
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Arg(NO2)
<400> 222
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 223
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D-Cys
<400> 223
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 224
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 224
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 225
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 225
Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro
1 5 10 15
Ser Pro Ser
<210> 226
<211> 101
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 226
Cys Cys His Pro Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu
1 5 10 15
Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg
20 25 30
Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser
35 40 45
Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val
50 55 60
Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala
85 90 95
Thr Leu Ser Lys Ser
100
<210> 227
<211> 131
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 227
Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly
20 25 30
Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser
50 55 60
Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala
65 70 75 80
Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly
100 105 110
Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly
115 120 125
Thr Cys Tyr
130
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 228
Val Pro Pro Pro Pro Pro
1 5
<210> 229
<211> 101
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 229
Cys Cys His Pro Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu
1 5 10 15
Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg
20 25 30
Asp Ala Ser Gly Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser
35 40 45
Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val
50 55 60
Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Thr Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala
85 90 95
Asn Ile Thr Lys Ser
100
<210> 230
<211> 131
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 230
Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly
20 25 30
Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser
50 55 60
Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala
65 70 75 80
Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly
100 105 110
Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly
115 120 125
Thr Cys Tyr
130
<210> 231
<211> 58
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 231
Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala Gln Pro Gln
1 5 10 15
Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala Thr Thr Arg
20 25 30
Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu
35 40 45
Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro
50 55
<210> 232
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 232
Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro
1 5 10 15
Ala Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe
20 25 30
Val Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala
35 40 45
Gly Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His
50 55 60
Ser Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser
65 70 75 80
Leu Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser
85 90 95
Leu Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro
100 105
<210> 233
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 233
Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser
1 5 10 15
Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe
20 25 30
Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val
35 40 45
Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Arg Ser
50 55 60
Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser
65 70 75 80
Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg
85 90 95
Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp
100 105 110
His Gly Pro Met Lys
115
<210> 234
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 234
Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser
1 5 10 15
Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys
20 25 30
Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu
35 40 45
Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln
50 55 60
Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys
65 70 75 80
His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly
85 90 95
His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala
100 105
<210> 235
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 235
Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro
1 5 10 15
Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val
20 25 30
Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala
35 40 45
Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg
50 55 60
Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp
65 70 75 80
Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu
85 90 95
Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser
100 105
<210> 236
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 236
Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp
1 5 10 15
Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe
20 25 30
Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu
35 40 45
Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser
50 55 60
Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu
65 70 75 80
Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro
85 90 95
Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys
100 105 110
<210> 237
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 237
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 238
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 （Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 238
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 239
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 239
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 240
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 240
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 241
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 241
Met Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
100 105 110
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Pro Gly Lys
225
<210> 242
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 242
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 243
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 243
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
1 5 10 15
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
20 25 30
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
35 40 45
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
50 55 60
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
65 70 75 80
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
85 90 95
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
100 105
<210> 244
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 244
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 245
<211> 62
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 245
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
35 40 45
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 246
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 246
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
100 105 110
<210> 247
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 247
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 248
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 248
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 249
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 249
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 250
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 250
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 251
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 251
Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg
1 5 10 15
Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala
20 25 30
Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly
35 40 45
Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala
50 55 60
Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp
85 90 95
His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro
100 105 110
<210> 252
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 252
Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala
1 5 10 15
Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp
20 25 30
Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly
35 40 45
Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala
50 55 60
Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn
65 70 75 80
Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys
100 105
<210> 253
<211> 131
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 253
Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg
1 5 10 15
Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr
20 25 30
Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln
35 40 45
Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu
65 70 75 80
Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly
100 105 110
Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly
115 120 125
Thr Cys Tyr
130
<210> 254
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 254
Asp Ser Ser Asp Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 255
<211> 12
<212> PRT
<213> 小耳大婴猴 (Otolemur garnettii)
<400> 255
Asp Ser Ser His Ser Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 256
<211> 12
<212> PRT
<213> 十三线地松鼠 (Ictidomys tridecemlineatus)
<400> 256
Asp Ser Ser Tyr Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 257
<211> 12
<212> PRT
<213> 白犀牛 (Ceratotherium simum)
<400> 257
Asn Ser Ser His Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 258
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 258
Asn Ser Ser Tyr Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 259
<211> 12
<212> PRT
<213> 美国鼠兔 (Ochotona princeps)
<400> 259
Asp Ser Ser Tyr Ala Phe Pro Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 260
<211> 12
<212> PRT
<213> 北树鼩 (Tupaia belangeri)
<400> 260
Asp Ser Thr His Ala Phe Thr Val Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 261
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 261
Asp Ser Ser Tyr Ser Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 262
<211> 12
<212> PRT
<213> 虎鲸 (Orcinus orca)
<400> 262
Asn Ser Ser Asn Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 263
<211> 12
<212> PRT
<213> 九带犰狳 (Dasypus novemcinctus)
<400> 263
Asp Ser Ser Tyr Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Trp
1 5 10
<210> 264
<211> 12
<212> PRT
<213> 太平洋海象 (Odobenus rosmarus)
<400> 264
Asn Ser Ser Ser Ala Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 265
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：欧洲杯梗孢序列
<400> 265
Ala Thr Ser His Ala Ile Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 266
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 266
Asn Ser Ser Tyr Ala Phe Thr Met Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 267
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 267
Asp Arg Ser Tyr Ser Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 268
<211> 12
<212> PRT
<213> 穴兔 (Oryctolagus cuniculus)
<400> 268
Asp Ser Ala Tyr Ala Phe Thr Val Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 269
<211> 12
<212> PRT
<213> 八齿鼠 (Octodon degus)
<400> 269
Asp Ser Ser Ser Ala Phe Asn Leu Asn Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 270
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 270
Asn Ser Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 271
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠 (Cavia porcellus)
<400> 271
Asp Ser Ser Ser Ala Phe Ser Leu Asn Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 272
<211> 12
<212> PRT
<213> 灰短尾负鼠 (Monodelphis domestica)
<400> 272
Asn Ser Ser Tyr Ser Phe Thr Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 273
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 273
Asn Ser Ser Tyr Ala Phe Thr Val Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 274
<211> 12
<212> PRT
<213> 星鼻鼹 (Condylura cristata)
<400> 274
Asn Ser Ser Tyr Ala Phe Ser Leu Asp Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 275
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 275
Ser Ala Ser Asp Leu Thr Trp Asp Asn Leu Lys
1 5 10
<210> 276
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 276
Ser Asp Thr Ser Leu Thr Trp Asn Ser Val Lys
1 5 10
<210> 277
<211> 12
<212> PRT
<213> 绒毛丝鼠 (Chinchilla lanigera)
<400> 277
Asp Ser Ser Ser Ala Phe Thr Leu Asn Glu Leu Arg
1 5 10
<210> 278
<211> 4
<212> PRT
<213> 未知 (Unknown)
<220>
<221>
<222>
<223> 未知的描述：各种生物名称
<400> 278
Leu Asp Glu Leu
1

Claims (3)

1.药物组合物，其包含：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含与(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或者(ii)治疗性Fc融合多肽连接的血脑屏障(BBB)运输部分。
2.(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区和(b)缀合物，其包含与(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽连接的血脑屏障(BBB)运输部分在制备用于治疗以下的药物中的用途：
中枢神经系统(CNS)，任选地脑的癌症；或
中枢神经系统(CNS)的退行性或自身免疫性病症；或
疼痛；或
炎性病况。
3.患者护理试剂盒，其包括：
(a)多肽，其包含免疫球蛋白Fc区；和
(b)缀合物，其包含与(i)治疗性抗体或其抗原结合片段，或(ii)治疗性Fc融合多肽连接的血脑屏障(BBB)运输部分。
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