JP2022512688A - Ｇｌｐ－２融合ポリペプチドならびに消化管の状態の処置および予防のための使用 - Google Patents

Ｇｌｐ－２融合ポリペプチドならびに消化管の状態の処置および予防のための使用 Download PDF

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Abstract

ＧＬＰ－２と免疫グロブリンのＦｃ領域との融合タンパク質が記載されている。ＧＬＰ－２とＦｃ領域は、アミノ酸で構成されるリンカーにより隔てられている。融合タンパク質を使用して、消化管皮膚瘻、消化管への放射線損傷、閉塞性黄疸、および短腸症候群を処置および予防する方法が開示されている。

Description

関連出願の相互参照
この出願は、２０１８年１０月２４日に出願された米国仮出願第６２／７５０，００１号の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
哺乳類のＧＬＰ－２融合ポリペプチドおよびタンパク質、ならびにそれらの治療薬としての使用について開示する。
プログルカゴンの翻訳後プロセシングは、３３アミノ酸の腸栄養性（intestinotrophic）ペプチドホルモンであるグルカゴン様ペプチド－２（ＧＬＰ－２）を生成する。ＧＬＰ－２は、胃内容排出を遅らせ、胃液分泌を減少させ、腸の血流を増加させるように作用する。ＧＬＰ－２はまた、少なくとも陰窩細胞の増殖および絨毛の長さを高めて粘膜上皮の表面積を増加させることにより、大腸および小腸の成長を刺激する。
これらの作用は、ＧＬＰ－２を使用して様々な消化管の状態（gastrointestinal condition）を処置できることを示唆する。小腸におけるＧＬＰ－２の実証された特異的かつ有益な効果は、腸の疾患または傷害の処置におけるＧＬＰ－２の使用について関心をかなり高めた（非特許文献１）。さらに、ＧＬＰ－２は、化学療法誘発性粘膜炎、虚血再灌流障害、デキストラン硫酸塩誘発性大腸炎、および炎症性腸疾患の遺伝モデルを含む、腸傷害の多数の前臨床モデルにおいて粘膜上皮損傷を予防または軽減することが示されている（非特許文献１）。
しかしながら、ＧＬＰ－２そのものをヒト患者に投与することは有望ではない。ＧＬＰ－２は半減期が短く、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）によるＧＬＰ－２の迅速なｉｎ ｖｉｖｏ切断により本質的に不活性なペプチドが生成されるため、治療薬としてのその使用が制限される。ＧＬＰ－２治療薬であるテデュグルチドは、アラニン－２がグリシンに置換されているため、半減期が大幅に延長されている。しかしながら、テデュグルチドの半減期は、健康な患者でおよそ２時間、ＳＢＳ患者では１．３時間であるため、毎日の投薬が必要である。
テデュグルチドは、クローン病、腸間膜梗塞、捻転、外傷、先天性異常、および癒着または放射線による多発性狭窄などの状態のための小腸の一部または大部分の外科的切除の結果として通常生じる短腸症候群（ＳＢＳ）の処置において、治療上の見込みを示す。外科的切除には、結腸全体または一部の切除も含まれ得る。ＳＢＳ患者は、栄養不良、脱水および体重減少をもたらし得るさまざまな栄養素（例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水）の吸収不良に苦しむ。一部の患者は、過食によりタンパク質とエネルギーのバランスを維持できるが、患者が水分と電解質の要件を維持して非経口輸液から独立できることは非常に稀である。
ＧＬＰ－２は、胃分泌物が瘻孔を介して皮膚へと小腸を迂回する状態である消化管皮膚瘻（ＥＣＦ）の患者の処置に有望であり得る（非特許文献２）。ＥＣＦは、クローン病および腹腔内がんから自然に発症するか、またはクローン病もしくは放射線療法の合併症として発症する可能性がある。ＥＣＦは、少なくとも感染、水分喪失、および栄養不良のため、高い罹病率および死亡率を示す。
ＤＤＰ－ＩＶ耐性ＧＬＰ－２アナログは、放射線誘発性アポトーシスの低減に有望であることが示された（非特許文献３）。アポトーシスは、放射線誘発性の小腸粘膜損傷で生じる。マウスにおいて、ＧＬＰ－２はまた、放射線照射後のＣＣＤ－１８Ｃｏ細胞の生存も促進し、放射線誘発性消化管（ＧＩ）毒性に対して保護し、放射線誘発性炎症反応を下方制御し、放射線照射後の腸に対する構造的損傷を低減させた。
ＧＬＰ－２はまた、腸管バリア機能が損傷された状態である閉塞性黄疸の患者の処置にも有望であり得る（非特許文献４）。ラットにおいて、ＧＬＰ－２は、血清ビリルビンのレベルを低下させ、腸粘膜に対する構造的損傷を防いだ。
ＳＢＳ、ＥＣＦ、および放射線損傷または閉塞性黄疸から生じる病状を含む、消化管の状態を処置するために、ＧＬＰ－２の改善された形態を開発する必要がある。改善された形態は、必要とされる投薬頻度が少なくなるように、体内でより長い期間活性を維持する。
Sinclair and Drucker, Physiology 2005: 357-65 Arebi, N. et al., Clin. Colon Rectal Surg., May 2004, 17(2):89-98 Gu, J. et al., J. Controlled Release, 2017 Chen, J. et al., World J. Gastroenterol., January 2015, 21(2):484-490
ＧＬＰ－２ペプチボディが本明細書に記載される。ペプチボディは一般に、ＧＬＰ－２とＦｃ領域との融合タンパク質である。ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＧＬＰ－２、またはテデュグルチドもしくはＧＡＴＴＥＸよりも長く体内に存続し得る。
一態様では、以下のものまたはそれらの薬学的に許容される塩から選択される、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ－２）ペプチボディが提供される：
ａ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
ｂ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
ｃ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、および
ｄ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ。
いくつかの実施形態において、上記の配列（配列番号１、４、７、および１０）のいずれかは、Ｃ末端にリジン（Ｋ）をさらに含み得る。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＧＬＰ－２とＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のいずれかのＦｃ領域との間のリンカー、ならびにＧＬＰ－２と直接連結されたシグナルペプチドを含む、ＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドからプロセシングされる。ポリペプチド上のシグナルペプチドは、ＧＬＰ－２ペプチボディを産生するために使用される哺乳動物宿主細胞からのＧＬＰ－２ペプチボディの分泌を促進することができ、シグナルペプチドは分泌後にＧＬＰ－２ペプチボディから切断される。任意の数のシグナルペプチドを使用することができる。シグナルペプチドは、以下の配列を有し得る：ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号１３）。
いくつかの実施形態において、シグナルペプチドを含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドは、
ａ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、
ｂ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、
ｃ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、
ｄ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、
またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
上記のＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド配列（配列番号２、５、８、および１１）のいずれかは、Ｃ末端にリジン（Ｋ）をさらに含み得る。
Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ変異を有するＩｇＧ１であってもよい。シグナルペプチドを含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドは、次式を有することができる：

シグナルペプチド－ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］－リンカー－ＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）
一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、担体または薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、注射または注入による投与に適した液体（または液剤）として処方される。一部の実施形態において、医薬組成物は、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）の持続放出(sustained release)、延長放出（extended release）、遅延放出(delayed release)または徐放(slow release)のために処方される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度で投与される。
別の態様では、本明細書に記載のＧＬＰ－２ペプチボディをコードする配列を含むポリヌクレオチドが提供される。その配列は、配列番号３、６、９、または１２に示される配列であり得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ前駆体をコードする配列を含む。ＧＬＰ－２ペプチボディをコードするヌクレオチド配列は、配列番号３のポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ前駆体をコードする配列を含む。ＧＬＰ－２ペプチボディをコードするヌクレオチド配列は、配列番号６のポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ前駆体をコードする配列を含む。ＧＬＰ－２ペプチボディをコードするヌクレオチド配列は、配列番号９のポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ前駆体をコードする配列を含む。ＧＬＰ－２ペプチボディをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２のポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるポリヌクレオチドのいずれかを含むベクターが提供される。ベクターにおいて、ポリヌクレオチドはプロモーターに作動可能に連結され得る。
別の態様では、ポリヌクレオチドを含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、流加細胞培養（fed-batch cell culture）規模に十分なレベルでＧＬＰ－２ペプチボディを発現する。
別の態様では、消化管皮膚瘻（ＥＣＦ）を有する患者を処置する方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを使用して、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）で患者を処置することを含む方法が提供される。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）は、皮下または静脈内に投与され得る。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者による腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の胃液分泌の量を減らすのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与することができる。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、７～１４日に１回、０．２～２．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、週１回、０．３～２．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様では、閉塞性黄疸を有する患者を処置する方法であって、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）で患者を処置することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、血清ビリルビンのレベルは、前記処置前の血清ビリルビンのレベルと比較して低減される。いくつかの実施形態において、血清ビリルビンのレベルは、前記処置前の血清ビリルビンのレベルと比較して低減される。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者による腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の胃液分泌の量を減らすのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化（crypt organization）を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の腸管バリア機能を改善し、前記患者の小腸からのバクテリアルトランスロケーションの発生率（the rate of bacteria translocation）を低下させるのに有効である。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与することができる。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様では、本発明は、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）を投与することを含む、消化管（gastrointestinal tract）への放射線損傷および／またはその影響を処置し、改善し、あるいは放射線損傷および／またはその影響から保護する方法を提供する。投薬レジメンは、患者の消化管への放射線損傷を処置または予防するのに有効である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、放射線損傷は小腸にある。いくつかの実施形態において、この方法は、消化管の細胞のアポトーシスを減少させるのに有効である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、患者が放射線または放射線療法で処置される前、最中、または後に投与され得る。
いくつかの実施形態において、この方法は、消化管の細胞のアポトーシスを減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与することができる。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様では、本発明は、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）を投与することを含む、消化管への放射線誘発性腸炎および／またはその影響を処置し、改善し、または予防する方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、この方法は、消化管の細胞のアポトーシスを減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与することができる。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
別の態様では、残存小腸に連続する結腸を呈する短腸症候群の患者を処置する方法であって、短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）で患者を処置することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、残存小腸は、少なくとも２５ｃｍの長さを有する。いくつかの実施形態では、残存小腸は少なくとも５０ｃｍの長さを有する。いくつかの実施形態では、残存小腸は少なくとも７５ｃｍの長さを有する。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、残存小腸に連続する少なくとも約２５％の結腸を呈する短腸症候群患者における腸管吸収を高めるための薬剤として投与される。
いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の腸管吸収を高めるに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、アミノ酸、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、前記患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、糞便の湿重量を減少させ、尿の湿重量を増加させ、小腸からのエネルギー吸収を増加させ、および／または小腸からの水の吸収を増加させるのに有効である。エネルギー吸収には、ポリペプチド、アミノ酸、炭水化物、および脂肪酸のうちの１つまたは複数の吸収の増加が含まれ得る。いくつかの実施形態では、患者は非経口栄養に依存している。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含み、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与することができる。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは静脈内投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される。いくつかの実施形態において、投与されるＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である。
本明細書に記載の態様および実施形態のいずれかにおいて、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディ）は、皮下または静脈内に投与され得る。配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、２～１４日に１回、５～８日に１回、または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンに従って皮下投与することができる。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、週１回（ＱＷ）または２週に１回、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って投与することができる。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、維持目的などのために、５～８日毎または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。配列番号１、４、７または１０を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～２００ｍｇ／ｍＬ、１０～１８０ｍｇ／ｍＬ、２０～１６０ｍｇ／ｍＬ、２５～１５０ｍｇ／ｍＬ、３０～１２５ｍｇ／ｍＬ、５０～１００ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
図１Ａは配列番号１のアミノ酸配列を示す。図１Ｂは、配列番号１のアミノ酸配列の５’側にシグナル配列を含む、配列番号２のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付され、リンカーは太字で示される。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列がＧＬＰ－２配列に続く。 配列番号２のアミノ酸配列をコードする配列番号３のヌクレオチド配列を示す。 図３Ａは、配列番号４のアミノ酸配列を示す。図３Ｂは、配列番号４のアミノ酸配列の５’側にシグナル配列を含む、配列番号５のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付され、リンカーは太字で示される。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列がＧＬＰ－２配列に続く。 配列番号５のアミノ酸配列をコードする配列番号６のヌクレオチド配列を示す。 図５Ａは、配列番号７のアミノ酸配列を示す。図５Ｂは、配列番号７のアミノ酸配列の５’側にシグナル配列を含む、配列番号８のアミノ酸配列を示す。ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付され、リンカーは太字で示される。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列がＧＬＰ－２配列に続く。 配列番号８のアミノ酸配列をコードする配列番号９のヌクレオチド配列を示す。 図７Ａは、配列番号１０のアミノ酸配列を示す。図７Ｂは、配列番号１０のアミノ酸配列の５’側にシグナル配列を含む、配列番号１１のアミノ酸配列を示す。Ｃ末端にアルギニン残基が付加されたＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］配列に下線が付され、リンカーは太字で示される。リンカー配列およびＩｇＧ１ Ｆｃ配列がＧＬＰ－２配列に続く。 配列番号１１のアミノ酸配列をコードする配列番号１２のヌクレオチド配列を示す。
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。以下の用語およびその他の用語の追加の定義は、明細書全体に記載されている。
「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という用語は、数量の限定を示すのではなく、参照されるアイテムの「少なくとも１つ」の存在を示す。
この出願で使用されているように、「約」および「おおよそ」という用語は同等のものとして使用される。本出願で使用される任意の数字は、約／おおよその有無にかかわらず、関連技術の当業者によって認められる通常の変動をカバーすることが意図されている。本明細書で使用される場合、「おおよそ」または「約」という用語は、目的の１つまたは複数の値に適用される場合、記載される参照値と同様の値を指す。特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別途明記されていない限り、または文脈から明白でない限り、記載された参照値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）で２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれら未満の範囲内にある値の範囲を指す（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用される場合、「担体」および「希釈剤」という用語は、医薬製剤の調製に有用な薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与に安全かつ非毒性である）担体または希釈物質を指す。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が含まれる。
本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」および「キメラタンパク質」という用語は、２つ以上の本来別々のタンパク質またはその一部の結合によって作製されたタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、リンカーまたはスペーサーが各タンパク質の間に存在し得る。
本明細書で使用される場合、「半減期」という用語は、タンパク質の濃度または活性などの量が、期間の開始時に測定された値の半分に低下するのに必要な時間である。
「ＧＬＰ－２ペプチボディ」、「ＧＬＰ－２ペプチボディ部分」、または「ＧＬＰ－２ペプチボディフラグメント」および／または「ＧＬＰ－２ペプチボディバリアント」などは、少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチドの、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、および／または好ましくはｉｎ ｖｉｖｏでのリガンド結合などであるがこれらに限定されない少なくとも１つの生物学的活性を有する、模倣する、またはシミュレートすることができる。例えば、適切なＧＬＰ－２ペプチボディ、特定部分、またはバリアントはまた、少なくとも１つのＧＬＰ－２受容体シグナル伝達または他の測定可能なもしくは検出可能な活性を調節、増大、修飾、活性化することができる。ＧＬＰ－２ペプチボディは、例えばＧＬＰ－２受容体などのタンパク質リガンドへの適切なアフィニティ結合を有することができ、場合により、低毒性であり得る。ＧＬＰ－２ペプチボディは、症状の良好ないし優れた軽減、ならびに低毒性で、長期間患者を処置するために使用することができる。
本明細書で使用される場合、用語「改善する」、「増加する」もしくは「減少する」、または文法的同等物は、本明細書に記載の処置の開始前の同じ個体における測定値、または本明細書に記載の処置を受けない対照対象（または複数の対照対象）における測定値など、ベースライン測定値に対する値を表す。「対照対象」とは、処置対象とほぼ同じ年齢の、処置対象と同じ形態の疾患を患う対象である。
本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、多細胞生物内ではなく、例えば、試験管または反応容器内や、細胞培養におけるなど、人工的な環境で生じる事象を指す。
本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物などの多細胞生物内で生じる事象を指す。細胞ベースの系の文脈では、この用語は、（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏの系とは対照的に）生きている細胞内で生じる事象を指すために使用され得る。
本明細書で使用する場合、「リンカー」という用語は、融合タンパク質において、天然タンパク質の特定の位置に出現するもの以外のアミノ酸配列を指し、一般に、柔軟性を有するように、または２つのタンパク質間にαヘリックスなどの構造を挿入するように設計される。リンカーはスペーサーとも称される。リンカーまたはスペーサーは、典型的にはそれ自体では生物学的機能を有さない。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という句は、一般に生理学的に許容可能と見なされる分子実体および組成物を指す。
本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して一緒に連結されたアミノ酸の連続鎖を指す。この用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を指すために使用されるが、当業者は、この用語が長い鎖に限定されず、ペプチド結合を介して互いに連結された２つのアミノ酸を含む最小鎖を指すことができることを理解するであろう。当業者に知られているように、ポリペプチドは、プロセシングおよび／または修飾され得る。本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」および「ペプチド」という用語は交換可能に使用される。「ポリペプチド」という用語は、タンパク質を指すこともある。
本明細書で使用される場合、「予防する」および「予防」という用語は、疾患、障害、および／または状態の発生に関連して使用される場合、その疾患、障害、および／または状態を発症するリスクを低減することを指す。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長類）を指す。ヒトには、出生前および出生後の形態が含まれる。多くの実施形態において、対象はヒトである。対象は患者であってよく、患者は疾患の診断または処置のために医療提供者を訪れるヒトを指す。「対象」という用語は、本明細書で「個体」または「患者」と交換可能に使用される。対象は、疾患または障害を患っているまたは罹患しやすい可能性があるが、疾患または障害の症状を示していてもまたは示していなくてもよい。
本明細書で使用する場合、「実質的に」という用語は、関心対象の特徴または特性の全体的またはほぼ全体的な程度または度合いを示す定性的な状態を指す。生物学の分野の当業者は、生物学的現象および化学的現象が、完了に至るおよび／または完全に進む、または絶対的な結果を達成するもしくは回避することは、たとえあるとしても、めったにないことを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的現象および化学的現象に固有の潜在的な完全性の欠如を捉えるために本明細書で使用される。
本明細書で使用される場合、治療薬の「治療有効量」は、疾患、障害、および／または状態に罹患している、または罹患しやすい対象に投与された場合に、疾患、障害、および／または状態の症状（複数可）を処置し、診断し、予防し、および／またはその発症を遅延させるのに十分な量を意味する。治療有効量は、典型的には、少なくとも１つの単位用量を含む投薬レジメンを介して投与されることが当業者によって理解されるであろう。
本明細書で使用する場合、「処置する(treat)」、「処置(treatment)」、および「処置すること(treating)」という用語は、特定の疾患、障害、および／または状態の１つまたは複数の症状または特徴を部分的にまたは完全に軽減、改善、緩和、抑制、予防する、その発症を遅延させ、その重症度を軽減し、および／またはその発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。処置は、疾患に関連する病状を発症するリスクを低下させる目的のために、疾患の徴候を示していないおよび／または疾患の初期の徴候のみを示す対象に施してもよい。
本発明の様々な態様を以下のセクションで詳細に説明する。セクションの使用は、本発明を限定することを意図していない。各セクションは、本発明の任意の態様に適用することができる。
発明の詳細な説明
本明細書に記載の様々なＧＬＰ－２ペプチボディは、ＧＬＰ－２配列とＦｃまたはＦｃバリアント配列との間にリンカーを含む。あるいは、ＦｃまたはＦｃバリアント配列の代わりにアルブミン配列を使用することができる。リンカーは、ペプチボディが代替の配向および結合特性を持つことを可能にすることにより、構造の柔軟性を提供する。リンカーは、好ましくは、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸から構成される。当業者によく理解されているように、これらのアミノ酸のいくつかはグリコシル化されていてもよい。アミノ酸は、グリシン、アラニン、セリン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、およびリジンから選択され得る。さらにより好ましくは、リンカーは、大部分（majority）がグリシン、セリン、およびアラニンなどの立体障害のないアミノ酸で構成される。
ＧＬＰ－２配列は、Ｆｃドメインまたはアルブミンドメインに直接的または間接的に連結され得る。一実施形態では、リンカーは、例えば配列番号１の配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディにおいて、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１４）の配列を有する。別の実施形態において、リンカーは、例えば配列番号４の配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディにおいて、ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ（配列番号１５）の配列を有する。別の実施形態において、リンカーは、例えば配列番号７の配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディにおいて、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１６）の配列を有する。別の実施形態において、リンカーは、例えば配列番号１０の配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディにおいて、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）の配列を有する。
適切なリンカーまたはスペーサーには、上記の例示的リンカーと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上相同または同一であるアミノ酸配列を有するものも含まれる。いくつかの実施形態での使用に適した追加のリンカーは、２０１２年３月２日に出願された米国特許出願第２０１２／０２３２０２１号に見ることができ、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
様々な実施形態において、ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］配列がＧＬＰ－２に使用される。ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］配列では、アラニンの代わりに位置２にグリシンがある。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］は、Ｃ末端にアルギニンを含む。
一態様では、以下から選択されるグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ－２）ペプチボディが提供される：
ａ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
ｂ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
ｃ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、および
ｄ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との間の結合の改善は、血清半減期の延長をもたらすと考えられる。したがって、いくつかの実施形態では、適切なＦｃドメインは、ＦｃＲｎへの改善された結合をもたらす１つまたは複数のアミノ酸変異を含む。ＦｃＲｎへの改善された結合をもたらすＦｃドメイン内の様々な変異が当技術分野で知られており、本発明を実施するために適合させることができる。いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、および／またはＡｓｎ４３４に対応する１つまたは複数の位置に１つまたは複数の変異を含む。
本発明のＧＬＰ－２ペプチボディは、例えば、半減期の延長、活性の増大、より特異的な活性、アビディティ（avidity）の増大、オフレート（off rate）の上昇または低下、選択されたまたはより適切な活性のサブセット、より低い免疫原性、少なくとも１つの所望の治療効果の質または持続時間の増大、より少ない副作用などのうちの少なくとも１つであるがこれらに限定されない、既知のタンパク質と比較して少なくとも１つの適切な特性を提供することができる。
典型的には、適切なＧＬＰ－２ペプチボディ、例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、約２時間以上、３時間以上、４時間以上、６時間以上、８時間以上、１０時間以上、１２時間以上、１４時間以上、１６時間以上、１８時間以上、２０時間以上、２２時間以上、２４時間以上、２６時間以上、２８時間以上、３０時間以上、３２時間以上、３４時間以上、３６時間以上、３８時間以上、４０時間以上、４２時間以上、４４時間以上、４６時間以上、または４８時間以上のｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を有する。一部の実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、２～４８時間の間、２～４４時間の間、２～４０時間の間、３～３６時間の間、３～３２時間の間、３～２８時間の間、４～２４時間の間、４～２０時間の間、６～１８時間の間、６～１５時間の間、または６～１２時間の間のｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を有する。
ＧＬＰ－２ペプチボディ、またはその特定部分もしくはバリアントは、少なくとも１つの細胞株、混合細胞株、不死化細胞、または不死化細胞および／または培養細胞のクローン集団によって産生され得る。不死化されたタンパク質産生細胞は、適切な方法を使用して作製することができる。好ましくは、少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディ、または特定部分もしくはバリアントは、機能的に再構成されるまたは機能的再構成を受けることができる少なくとも１つのヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するまたはそれと実質的に類似の配列を有するＤＮＡを含み、かつ本明細書に記載のペプチボディ構造をさらに含む、核酸またはベクターを提供することによって作製される。
ＧＬＰ－２ペプチボディは、広範囲のアフィニティ（ＫＤ）でヒトタンパク質リガンドに結合することができる。好ましい実施形態において、本発明の少なくとも１つのヒトＧＬＰ－２ペプチボディは、任意選択で、高アフィニティで少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。例えば、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディは、約１０－７Ｍ以下のＫＤで、またはより好ましくは約０．１～９．９（またはその中の任意の範囲もしくは値）×１０－７、１０－８、１０－９、１０－１０、１０－１１、１０－１２、もしくは１０－１３Ｍ、またはその中の任意の範囲もしくは値以下のＫＤで、少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。
少なくとも１つのタンパク質リガンドに対するＧＬＰ－２ペプチボディのアフィニティまたはアビディティは、例えば、抗体－抗原結合アフィニティまたはアビディティを決定するために使用されるような任意の適切な方法を用いて実験で決定することができる。（例えば、Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992)を参照されたい）。特定のＧＬＰ－２ペプチボディ－リガンド相互作用の測定されたアフィニティは、異なる条件（例えば、塩濃度およびｐＨ）の下で測定した場合、変化する可能性がある。したがって、アフィニティおよび他のリガンド結合パラメータ（例えば、ＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくは、ＧＬＰ－２ペプチボディおよびリガンドの標準化された溶液、ならびに本明細書に記載されているまたは当技術分野で既知の緩衝液などの標準化された緩衝液を用いて行われる。
Ｃ末端にリジン（Ｋ）があってもなくてもよい。配列番号１、４、７、および１０のポリペプチド配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、Ｃ末端リジンを欠いている。同時に、本明細書に記載の実施形態または態様のいずれかにおいて、リジンをＣ末端に付加することができる。
本明細書に記載の任意の実施形態または態様において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＧＬＰ－２とＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のいずれかのＦｃ領域との間のリンカー、ならびにＧＬＰ－２と直接連結したシグナルペプチドを含む、ＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドからプロセシングされる。Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ変異を有するＩｇＧ１であり得る。ＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドは次式を有し得る：

シグナルペプチド－ＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］－リンカー－ＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）
ＬＡＬＡは、抗体におけるＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（ＥＵナンバリング）変異を指す。ＬＡＬＡ変異は、本明細書に開示される次のポリペプチド配列、例えば、配列番号１、４、７、および１０に存在する。ＬＡＬＡ変異は、Ｆｃγ－Ｒへの結合を大幅に低減することができ、ＧＬＰ－２ペプチボディが望ましくない抗体エフェクター機能を生じることを防ぐ。Leabman, M.K. et al., “Effects of altered Fc gammaR binding on antibody pharmacokinetics in cynomolgus monkeys” mAbs 5(6):2013を参照されたい。
少なくとも１つのＧＬＰ－２の生物学的活性を部分的にまたは好ましくは実質的に提供するＧＬＰ－２ペプチボディ、またはその特定部分もしくはバリアントは、ＧＬＰ－２リガンドに結合することができ、それにより、ＧＬＰ－２受容体などの少なくとも１つのリガンドへのＧＬＰ－２の結合により媒介される、または他のタンパク質依存性もしくはタンパク質仲介性の機序により媒介される、少なくとも１つの活性を提供することができる。本明細書で使用される場合、「ＧＬＰ－２ペプチボディ活性」という用語は、アッセイに応じて、野生型ＧＬＰ－２ペプチドまたはＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］ペプチドと比較して、約２０～１０，０００％、好ましくは野生型ＧＬＰ－２ペプチドまたはＧＬＰ－２［Ａ２Ｇ］ペプチドと比較して、少なくとも約６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００％、またはそれ以上、少なくとも１つのＧＬＰ－２依存性活性を調節または引き起こすことができるＧＬＰ－２ペプチボディを指す。
少なくとも１つのタンパク質依存性活性を提供するＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントの能力は、好ましくは、本明細書に記載のように、および／または当技術分野で既知のように、少なくとも１つの適切なタンパク質生物学的アッセイによって評価される。本発明のヒトＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントは、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭなど）またはアイソタイプに類似していてよく、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖の少なくとも一部を含むことができる。一実施形態において、ヒトＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のうちの少なくとも１つのもののＩｇＧ重鎖ＣＨ２およびＣＨ３を含む。
本発明の少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントは、少なくとも１つのリガンド、サブユニット、フラグメント、部分またはそれらの任意の組合せに結合する。本発明の少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントの少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチド、バリアントもしくは誘導体は、任意選択で、リガンドの少なくとも１つの特定エピトープに結合することができる。結合エピトープは、ＧＬＰ－２受容体またはその部分などのタンパク質リガンドの配列の連続アミノ酸の特定部分全体に対する少なくとも１～３個のアミノ酸からなる少なくとも１つのアミノ酸配列の任意の組合せを含むことができる。
本発明はまた、本明細書に記載のアミノ酸配列と実質的に同じ配列のアミノ酸を含むペプチボディ、リガンド結合フラグメント、および免疫グロブリン鎖に関する。好ましくは、このようなペプチボディまたはそのリガンド結合フラグメントは、受容体などのヒトＧＬＰ－２リガンドに高アフィニティ（例えば、約１０－７Ｍ以下のＫＤ）で結合することができる。本明細書に記載の配列と実質的に同じアミノ酸配列には、保存的アミノ酸置換、ならびにアミノ酸の欠失および／または挿入を含む配列が含まれる。保存的アミノ酸置換は、第１のアミノ酸と同様の化学的および／または物理的特性（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸による第１のアミノ酸の置換を指す。保存的置換には、次のグループ内での１つのアミノ酸の別のアミノ酸による置換が含まれる：リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
当業者が理解するように、本発明は、本発明の少なくとも１つの生物学的に活性なＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントを含む。一部の実施形態において、生物学的に活性なＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントは、天然の（非合成の）、内因性のまたは関連する、既知の挿入もしくは融合タンパク質または特定部分もしくはバリアントの比活性の少なくとも２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、または１５％の比活性を有する。
核酸
別の態様において、本明細書に記載のＧＬＰ－２ペプチボディをコードする配列を含むポリヌクレオチドが提供される。この配列は、配列番号３、６、９、または１２のいずれかと７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有し得る。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、さらなる非コード配列を含むことができる。このポリヌクレオチドは、その特定フラグメント、バリアントもしくはコンセンサス配列、またはこれらの配列のうちの少なくとも１つを含む寄託されたベクターをさらに含むことができる。この核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくは任意の他の形態などのＲＮＡの形態、あるいはクローニングによって得られたもしくは合成で製造されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ、またはこれらの任意の組合せを含むがそれらに限定されないＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖、もしくは一本鎖、またはこれらの任意の組合せであり得る。ＤＮＡまたはＲＮＡのうちの少なくとも１つの鎖の任意の部分は、センス鎖としても知られるコード鎖であるか、またはアンチセンス鎖としても知られる非コード鎖であり得る。
一部の実施形態において、導入遺伝子をコードする核酸を修飾して、コードされるＧＬＰ－２ペプチボディの発現上昇を提供することができ、これはコドンの最適化とも称される。例えば、コード配列のオープンリーディングフレームを改変することによって、導入遺伝子をコードする核酸を修飾することができる。本明細書で使用する場合、「オープンリーディングフレーム」という用語は、「ＯＲＦ」と同義であり、タンパク質またはタンパク質の一部を潜在的にコードすることができる任意のヌクレオチド配列を意味する。オープンリーディングフレームは通常、開始コドン（標準的なコードでは、例えば、ＲＮＡ分子の場合ＡＵＧ、ＤＮＡ分子の場合はＡＴＧとして表される）で始まり、終止コドン（標準的なコードでは、例えば、ＲＮＡ分子の場合ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ、ＤＮＡ分子の場合はＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧとして表される）でフレームが終止するまでコドントリプレットで読み取られる。本明細書で使用する場合、「コドン」という用語は、トリプレットまたはコドントリプレットとも称され、タンパク質合成中に特定のアミノ酸を指定する核酸分子中の３つのヌクレオチドからなる配列を意味する。例えば、標準的な遺伝暗号における６４個の可能なコドンのうち、２つのコドンＧＡＡおよびＧＡＧはアミノ酸グルタミンをコードするが、コドンＡＡＡおよびＡＡＧはアミノ酸リジンを指定する。標準的な遺伝暗号において、３つのコドンは終止コドンであり、アミノ酸を指定しない。本明細書で使用される場合、「同義コドン」という用語は、単一のアミノ酸をコードする任意のおよびすべてのコドンを意味する。メチオニンおよびトリプトファンを除いて、アミノ酸は２～６個の同義コドンによってコードされる。例えば、標準的な遺伝暗号において、アミノ酸アラニンをコードする４つの同義コドンはＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵであり、グルタミンを指定する２つの同義コドンはＧＡＡおよびＧＡＧであり、リジンを指定する２つの同義コドンはＡＡＡおよびＡＡＧである。
ＧＬＰ－２ペプチボディのオープンリーディングフレームをコードする核酸は、標準的なコドン最適化法を用いて修飾することができる。コドン最適化のための様々な市販のアルゴリズムが利用可能であり、本発明を実施するために使用することができる。典型的には、コドン最適化は、コードされるアミノ酸を変化させない。
ヌクレオチドの変化は、ＧＬＰ－２ペプチボディを発現するために選択された特定の異種細胞において認められる内因性コドンの使用と一致させるために、オープンリーディングフレーム内の同義コドンを変更してよい。あるいはまたは加えて、ヌクレオチドの変化は、異種宿主細胞内に存在する内因性核酸に見られるオープンリーディングフレームの平均Ｇ＋Ｃ含有量にうまく一致させるために、オープンリーディングフレーム内のＧ＋Ｃ含有量を変化させることができる。ヌクレオチドの変化はまた、ＧＬＰ－２ペプチボディ配列内に見られるポリモノヌクレオチド領域または内部調節部位もしくは構造部位を変化させることができる。したがって、原核細胞、酵母細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞でのＧＬＰ－２ペプチボディの発現上昇を提供する核酸配列を含むがこれらに限定されない、様々な修飾されたまたは最適化されたヌクレオチド配列が想定される。
本明細書で指摘されるように、ポリヌクレオチドはさらに、少なくとも１つのイントロンなどの前述の追加のコード配列の有無にかかわらず、少なくとも１つのシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配列などの追加の配列を、転写、スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含むｍＲＮＡプロセシング（例えば、ｍＲＮＡのリボソーム結合および安定性）において役割を担う転写された非翻訳配列などの非コード５’および３’配列を含むがこれらに限定されない追加の非コード配列；追加の機能性を提供するアミノ酸などの追加のアミノ酸をコードする追加のコード配列；と共に含み得る。したがって、ＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントをコードする配列をマーカー配列に融合させることができ、マーカー配列は、例えば、融合されたＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアント（ＧＬＰ－２ペプチボディのフラグメントまたは部分を含む）の精製を容易にするペプチドをコードする配列である。
核酸は、本発明のポリヌクレオチドに加えて配列をさらに含むことができる。例えば、１つまたは複数のエンドヌクレアーゼ制限部位を含むマルチクローニング部位を核酸内に挿入して、ポリヌクレオチドの単離を支援することができる。また、翻訳可能な配列を挿入して、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を支援することができる。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための便利な手段を提供する。コード配列以外の本発明の核酸は、任意選択で、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプター、またはリンカーである。
導入遺伝子のコード領域は、特定の細胞タイプのためにコドン使用頻度を最適化するために、１つまたは複数のサイレント変異を含み得る。例えば、ＧＬＰ－２ペプチボディのコドンは、脊椎動物細胞での発現のために最適化され得る。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディのコドンは、哺乳動物細胞での発現のために最適化され得る。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディのコドンは、ヒト細胞での発現のために最適化され得る。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディのコドンは、ＣＨＯ細胞での発現のために最適化され得る。
本出願に記載されるＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸配列は、宿主細胞における増殖または発現に適切なベクターに分子クローニング（挿入）され得る。例えば、配列番号２、５、８、および１１から選択される配列など、宿主細胞からＧＬＰ－２ペプチボディを分泌させるのに有効なシグナルペプチドを含むＧＬＰ－２ペプチボディ配列が適切なベクターに挿入される。原核生物発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクターおよび哺乳動物発現ベクターを含むがこれらに限定されない多種多様な発現ベクターを使用して、本発明を実施することができる。本発明に適した例示的なベクターには、ウイルスベースのベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベースのベクター、レトロウイルスベースのベクター、プラスミドベースのベクター）が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸配列は、適切なベクターに挿入され得る。一部の実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸配列は適切なベクターに挿入され得る。典型的には、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸配列は、様々な調節配列または調節エレメントに作動可能に連結される。
様々な調節配列またはエレメントを、本発明に適した発現ベクターに組み込むことができる。例示的な調節配列またはエレメントには、プロモーター、エンハンサー、リプレッサーまたはサプレッサー、５’非翻訳（または非コード）配列、イントロン、３’非翻訳（または非コード）配列が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「プロモーター」または「プロモーター配列」は、細胞内でＲＮＡポリメラーゼに結合し（例えば、直接的にまたは他のプロモーター結合タンパク質もしくは物質を介して）、コード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は、一般に、その３’末端で転写開始部位に結合し、任意のレベルで転写を開始するのに必要な最小限の数の塩基またはエレメントを含むように上流（５’方向）に延在する。プロモーターは、エンハンサー配列およびリプレッサー配列を含む発現制御配列とまたは発現される核酸と作動可能に関連または作動可能に連結され得る。一部の実施形態において、プロモーターは誘導性であり得る。一部の実施形態において、誘導性プロモーターは、一方向性または双方向性であり得る。一部の実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターであり得る。一部の実施形態において、プロモーターは、転写調節領域を含む配列が１つの供給源から得られ、転写開始領域を含む配列が第２の供給源から得られる、ハイブリッドプロモーターであり得る。導入遺伝子内のコード配列に制御エレメントを連結するためのシステムは、当技術分野でよく知られている（一般的な分子生物学的および組換えＤＮＡ技術は、Sambrook, Fritsch, and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1989に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる）。様々な成長条件および誘導条件下において様々な宿主細胞で発現させるために導入遺伝子を挿入するのに適した市販のベクターも、当技術分野でよく知られている。
一部の実施形態において、ＳＲａ－プロモーター（Takebe et al., Molec. and Cell. Bio. 8:466-472 (1988)）、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター（Boshart et al., Cell 41:521-530 (1985); Foecking et al., Gene 45:101-105 (1986)）、ヒトＣＭＶプロモーター、ヒトＣＭＶ５プロモーター、マウスＣＭＶ最初期プロモーター、ＥＦ１－α－プロモーター、肝臓特異的発現のためのハイブリッドＣＭＶプロモーター（例えば、ＣＭＶ最初期プロモーターをヒトα－１－アンチトリプシン（ＨＡＴ）またはアルブミン（ＨＡＬ）のいずれかのプロモーターの転写プロモーターエレメントと結合させることによって作製）、または肝細胞がん特異的発現のためのプロモーター（例えば、ヒトアルブミン（ＨＡＬ；約１０００ｂｐ）またはヒトα－１－アンチトリプシン（ＨＡＴ；約２０００ｂｐ）のいずれかの転写プロモーターエレメントが、ヒトα－１－ミクログロブリンおよびビンキュリン前駆体遺伝子（ＡＭＢＰ）の１４５長エンハンサーエレメントと結合している；ＨＡＬ－ＡＭＢＰおよびＨＡＴ－ＡＭＢＰ）；ＳＶ４０初期プロモーター領域（Benoist at al., Nature 290:304-310 (1981)）、Ｏｒｇｙｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ最初期プロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Wagner at al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1441-1445 (1981)）；またはメタロチオネイン遺伝子の調節配列（Brinster et al., Nature 296:39-42 (1982)）などだがこれらに限定されない特異的プロモーターを使用して、哺乳動物宿主細胞での導入遺伝子の発現を制御することができる。一部の実施形態において、哺乳動物プロモーターは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＴＲ）プロモーター、アデノシンデアミナーゼプロモーター、ピルビン酸キナーゼプロモーター、ベータアクチンプロモーター、および当業者に既知の他の構成的プロモーターなどであるがこれらに限定されない構成的プロモーターである。
いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼプロモーター（Villa-Komaroff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:3727-3731 (1978)）、ｔａｃプロモーター（DeBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:21-25 (1983)）、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、Ｍ１３プロモーターまたはＭ１６プロモーターなどであるがこれらに限定されない特定のプロモーターを使用して、原核細胞宿主における導入遺伝子の発現を制御することができ；またＧＡＬ１、ＧＡＬ４もしくはＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ（アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼＩＩＩ（ＴＤＨ３）プロモーター、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼＩＩ（ＴＤＨ２）プロモーター、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼＩ（ＴＤＨ１）プロモーター、ピルビン酸キナーゼ（ＰＹＫ）、エノラーゼ（ＥＮＯ）、またはトリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）などであるがこれらに限定されない特定のプロモーターを使用して、酵母宿主細胞における導入遺伝子の発現を制御することができる。
いくつかの実施形態において、プロモーターは、ウイルスプロモーターであってよく、その多くは、哺乳動物細胞を含むいくつかの宿主細胞タイプにおける導入遺伝子の発現を調節することができる。真核細胞においてコード配列の構成的発現を駆動することが示されているウイルスプロモーターには、例えば、シミアンウイルスプロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、パピローマウイルスプロモーター、アデノウイルスプロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルスおよび他のレトロウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター、ならびに当業者に既知の他のウイルスプロモーターが含まれる。
いくつかの実施形態において、発現ベクターの遺伝子制御エレメントにはまた、ＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列、コザック配列など、それぞれ転写および翻訳の開始に関与する５’非転写配列および５’非翻訳配列が含まれ得る。エンハンサーエレメントは、場合により、発現されるポリペプチドまたはタンパク質の発現レベルを高めるために使用することができる。哺乳動物細胞で機能することが示されているエンハンサーエレメントの例には、Dijkema et al., EMBO J. (1985) 4: 761に記載されているＳＶ４０初期遺伝子エンハンサーおよびGorman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1982b) 79:6777に記載されているラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）に由来するエンハンサー／プロモーター、ならびにBoshart et al., Cell (1985) 41:521に記載されているヒトサイトメガロウイルスが含まれる。発現ベクターの遺伝子制御エレメントには、転写および翻訳の終結に関与する３’非転写配列および３’非翻訳配列も含まれる。それぞれ、プロモーターから転写されたｍＲＮＡの３’末端の安定化およびプロセシングのためのポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなどである。例示的なポリＡシグナルには、例えば、ウサギベータグロビンポリＡシグナル、ウシ成長ホルモンポリＡシグナル、ニワトリベータグロビンターミネーター／ポリＡシグナル、およびＳＶ４０後期ポリＡ領域が含まれる。
発現ベクターは、好ましくは、しかし任意選択で、少なくとも１つの選択可能なマーカーを含む。いくつかの実施形態において、選択可能なマーカーは、細胞毒性の化学物質および／または薬剤の存在下で成長させたときに生存性を維持する能力を宿主細胞に与えるように、１つまたは複数の遺伝子調節エレメントに作動可能に連結された耐性遺伝子をコードする核酸配列である。一部の実施形態において、選択可能な薬剤は、宿主細胞内での発現ベクターの保持を維持するために使用することができる。一部の実施形態において、選択可能な薬剤は、発現ベクター内での導入遺伝子配列の修飾（すなわち、メチル化）および／またはサイレンシングを防止するために使用され得る。一部の実施形態において、選択可能な薬剤は、宿主細胞内でのベクターのエピソーム発現を維持するために使用される。一部の実施形態において、選択可能な薬剤は、宿主細胞ゲノム内への導入遺伝子配列の安定した組み込みを促進するために使用される。一部の実施形態において、薬剤および／または耐性遺伝子には、真核宿主細胞のための、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、同第４，６５６，１３４号、同第４，９５６，２８８号、同第５，１４９，６３６号、同第５，１７９，０１７号）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ゼオマイシン、ミコフェノール酸、またはグルタミンシンテターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，７７０，３５９号、同第５，８２７，７３９号）；原核宿主細胞のための、テトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシンまたはクロラムペニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｅｎｉｃｈｏｌ）；および酵母宿主細胞のための、ＵＲＡ３、ＬＥＵ２、ＨＩＳ３、ＬＹＳ２、ＨＩＳ４、ＡＤＥ８、ＣＵＰ１またはＴＲＰ１が含まれ得るが、これらに限定されない。
発現ベクターは、宿主細胞にトランスフェクト、形質転換、または形質導入され得る。本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」、「形質転換」および「形質導入」という用語はすべて、宿主細胞への外因性核酸配列の導入を指す。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸配列を含む発現ベクターは、同時に、宿主細胞にトランスフェクト、形質転換、または形質導入される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸配列を含む発現ベクターは、順次に、宿主細胞にトランスフェクト、形質転換、または形質導入される。
当技術分野で周知の形質転換、トランスフェクションおよび形質導入の方法の例には、リポソーム送達、すなわち、Ｈａｗｌｅｙ－Ｎｅｌｓｏｎ，Ｆｏｃｕｓ １５：７３（１１９３）のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）法、エレクトロポレーション、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｒｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６－４５７（１９７８）のＣａＰＯ４送達方法、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性送達、マイクロインジェクション、パーティクル・ガン法（biolistic particle delivery）、ポリブレン媒介性送達、カチオン媒介性脂質送達、形質導入、ならびに、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスおよびバキュロウイルス（昆虫細胞）などのウイルス感染が含まれる。
細胞内にいったん導入されると、発現ベクターはゲノム内に安定して組み込まれるか、または染色体外構築物として存在し得る。ベクターはまた、増幅され、複数のコピーがゲノム内に存在するかまたはゲノムに組み込まれ得る。一部の実施形態において、本発明の細胞は、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０またはそれ以上のコピーを含み得る。一部の実施形態において、本発明の細胞は、ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０またはそれ以上のコピーを含み得る。
宿主細胞
別の態様では、本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、宿主細胞においてＧＬＰ－２ペプチボディの発現を可能にするポリヌクレオチド）を含む、宿主細胞が提供される。宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞であり得る。あるいは、宿主細胞は、哺乳動物細胞であってよく、非限定例には、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／１、ＥＣＡＣＣ番号：８５１１０５０３）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６，ＣｒｕＣｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ－７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎細胞株（ＨＥＫ２９３細胞、または懸濁培養での成長のためにサブクローニングされた２９３細胞、Graham et al., J. Gen Virol., 36:59, 1977）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ２１、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；ＣＨＯ ＥＢＮＡ（Daramola O. et al., Biotechnol. Prog., 2014, 30(1):132-41）およびＣＨＯ ＧＳ（Fan L. et al., Biotechnol. Bioeng. 2012, 109(4):1007-15）を含む、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ、Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216, 1980）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod., 23:243-251, 1980）；サル腎臓細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１ ５８７）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68, 1982）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）が含まれる。
ポリヌクレオチドは、発現プラスミド内にあってよい。発現プラスミドは、当業者に既知の任意の数の複製起点を有し得る。ポリヌクレオチドまたは発現プラスミドは、当業者に既知の任意の数の方法によって宿主細胞に導入され得る。例えば、ＭａｘＣｙｔｅ ＧＴ（登録商標）、ＭａｘＣｙｔｅ ＶＬＸ（登録商標）、またはＭａｘＣｙｔｅ ＳＴＸ（登録商標）トランスフェクションシステムなどのフローエレクトロポレーションシステムを使用して、ポリヌクレオチドまたは発現プラスミドを宿主細胞に導入することができる。
様々な実施形態において、宿主細胞はポリヌクレオチドを発現する。宿主細胞は、流加細胞培養規模または他の大きな規模にとって十分なレベルでＧＬＰ－２ペプチボディを発現し得る。大規模で組換えＧＬＰ－２ペプチボディを生成するための代替方法には、ローラーボトル培養およびバイオリアクターバッチ培養が含まれる。いくつかの実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディタンパク質は、懸濁培養（または浮遊培養）された細胞によって産生される。いくつかの実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディタンパク質は、接着性細胞によって産生される。
製造
組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、任意の利用可能な手段によって製造され得る。例えば、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、組換えＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸を発現するように操作された宿主細胞系を利用することによって組換え的に産生され得る。あるいはまたはさらに、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、内因性遺伝子を活性化することによって産生され得る。あるいはまたはさらに、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、化学合成によって部分的または完全に調製され得る。あるいは、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、ｍＲＮＡ治療薬によってｉｎ ｖｉｖｏで産生され得る。
いくつかの実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、哺乳動物細胞において産生される。本発明に従って使用され得る哺乳動物細胞の非限定的な例には、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／１、ＥＣＡＣＣ番号：８５１１０５０３）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６，ＣｒｕＣｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎細胞株（ＨＥＫ２９３細胞、または懸濁培養での成長のためにサブクローニングされた２９３細胞、Graham et al., J. Gen Virol., 36:59, 1977）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ２１，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；ＣＨＯ ＥＢＮＡ（Daramola O. et al., Biotechnol. Prog., 2014, 30(1):132-41）およびＣＨＯ ＧＳ（Fan L. et al., Biotechnol. Bioeng. 2012, 109(4):1007-15）を含む、チャイニーズハムスター卵巣細胞＋／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216, 1980）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod., 23:243-251, 1980）；マウス腎臓細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１ ５８７）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68, 1982）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）が含まれる。
いくつかの実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、ヒト細胞から産生される。いくつかの実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、ＣＨＯ細胞またはＨＴ１０８０細胞から産生される。
特定の実施形態において、宿主細胞は、細胞を培養するために選択される特定の条件下での特定の好ましい属性または増殖に基づいて細胞株を作製するために選択される。そのような属性は、確立された株（すなわち、特徴付けられた市販の細胞株）の既知の特徴および／または特性に基づいて、あるいは経験的評価を通して、確認できることが当業者に理解されるであろう。いくつかの実施形態において、細胞株は、細胞のフィーダー層上で増殖するその能力について選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞株は、懸濁液中で増殖するその能力について選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞株は、細胞の接着単層として増殖するその能力について選択され得る。いくつかの実施形態において、そのような細胞は、任意の組織培養容器または適切な接着基質で処理された任意の容器で使用することができる。いくつかの実施形態において、適切な接着基質は、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ、ＩＩ、ＩＩ、またはＩＶ）、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、ＢＤマトリゲル（商標）、基底膜マトリックス、デルマタン硫酸プロテオグリカン、ポリ－Ｄ－リジンおよび／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、接着性宿主細胞は、懸濁液中で増殖するように特定の成長条件下で選択および改変され得る。懸濁状態で増殖するように接着性細胞を改変するそのような方法は、当技術分野で知られている。例えば、細胞は、経時的に動物血清を増殖培地から徐々に除去することにより、懸濁培養で増殖するように調整され得る。
典型的には、組換えＧＬＰ－２ペプチボディを発現するように操作（または改変）された細胞は、本明細書に記載の組換えＧＬＰ－２ペプチボディをコードする導入遺伝子を含み得る。組換えＧＬＰ－２ペプチボディをコードする核酸は、調節配列、遺伝子制御配列、プロモーター、非コード配列、および／または組換えＧＬＰ－２ペプチボディを発現するための他の適切な配列を含み得ることを理解されたい。典型的には、コード領域は、これらの核酸構成要素の１つまたは複数と作動可能に連結される。
いくつかの実施形態において、組換えＧＬＰ－２ペプチボディは、ｍＲＮＡ治療薬によってｉｎ ｖｉｖｏで産生される。ＧＬＰ－２ペプチボディをコードするｍＲＮＡが調製され、ＧＬＰ－２ペプチボディを必要とする患者に投与される。ｍＲＮＡは、配列番号３、６、９、および１２のＤＮＡ配列に対応する配列を含むことができる。注射、肺への噴霧、および皮下へのエレクトロポレーションなど、さまざまな投与経路を使用することができる。ｍＲＮＡは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクター内に封入され得る。例示的な非ウイルスベクターには、リポソーム、カチオン性ポリマーおよびキュボソームが含まれる。
回収および精製
細胞からＧＬＰ－２ペプチボディを精製するための様々な手段を使用することができる。様々な方法を使用して、本明細書に記載の様々な方法に従って製造されたＧＬＰ－２ペプチボディを精製または単離することができる。いくつかの実施形態において、発現された酵素は培地中に分泌され、したがって、細胞および他の固形物は、例えば、精製プロセスの最初のステップとして、遠心分離または濾過によって除去され得る。あるいはまたはさらに、発現された酵素は宿主細胞の表面に結合している。この実施形態では、ポリペプチドまたはタンパク質を発現する宿主細胞は精製のために溶解される。哺乳動物宿主細胞の溶解は、ガラスビーズによる物理的破壊および高ｐＨ条件への曝露を含む、任意の数の当業者に周知の手段によって達成することができる。
ＧＬＰ－２ペプチボディは、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティ、サイズ排除、およびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー）、ゲル濾過、遠心分離、または溶解度差（differential solubility）、エタノール沈殿を含むがこれらに限定されない標準的な方法によって、またはタンパク質の精製に利用できるその他の技術によって、単離および精製することができる。たとえば、参照によってそれらのすべてが本明細書に組み込まれる、Scopes, Protein Purification Principles and Practice 2nd Edition, Springer-Verlag, New York, 1987; Higgins, S. J. and Hames, B. D. (eds.), Protein Expression: A Practical Approach, Oxford Univ Press, 1999; and Deutscher, M. P., Simon, M. I., Abelson, J. N. (eds.), Guide to Protein Purification: Methods in Enzymology (Methods in Enzymology Series, Vol 182), Academic Press, 1997を参照されたい。特にイムノアフィニティークロマトグラフィーの場合、タンパク質は、そのタンパク質に対して産生された抗体を固定支持体に固定したアフィニティーカラムに結合させることによって単離され得る。あるいは、インフルエンザコート配列、ポリヒスチジン、またはグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼなどのアフィニティータグを標準的な組換え技術によってタンパク質に取り付けて、適切なアフィニティーカラムを通過させることにより容易に精製できるようにすることができる。フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ロイペプチン、ペプスタチンまたはアプロチニンなどのプロテアーゼ阻害剤が、精製プロセス中のポリペプチドまたはタンパク質の分解を低減または排除するために任意のまたはすべての段階で添加され得る。プロテアーゼ阻害剤は、発現されたポリペプチドまたはタンパク質を単離および精製するために細胞を溶解しなければならない場合に特に望ましい。
ＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントは、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、混合様式のクロマトグラフィー（例えば、ＭＥＰ Ｈｙｐｅｒｃｅｌ（商標））、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない周知の方法によって、組換え細胞培養物から回収および精製することができる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）も精製に使用することができる。例えば、Colligan, Current Protocols in Immunology, or Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y. (1997-2003)を参照されたい。
本発明のペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントには、天然に精製された産物、化学合成手順の生成物、および例えば酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む真核生物宿主から組換え技術によって産生された生成物が含まれる。組換え産生手順で使用される宿主に応じて、本発明のＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分またはバリアントは、グリコシル化され得るかまたは非グリコシル化され得るが、グリコシル化されることが好ましい。
製剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、担体をさらに含む。適切な許容可能な担体には、水、塩溶液（例えば、ＮａＣｌ）、生理食塩水、緩衝生理食塩水、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアガム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロースまたはデンプンなどの炭水化物；マンニトール、スクロースまたはその他のものなどの糖、デキストロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、ならびにこれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。医薬製剤は、必要に応じて、活性化合物と有害に反応せずまた活性化合物の活性に干渉しない助剤（例えば、希釈剤、緩衝剤、親油性溶剤、防腐剤、アジュバント、潤滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝剤、着色物質、香味物質および／または芳香物質など）と混合され得る。一部の実施形態において、静脈内投与に適した水溶性担体が使用される。
薬学的に許容される助剤が好ましい。このような滅菌溶液およびそれを調製する方法は、Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (Easton, Pa.) 1990などに記載されているように当技術分野で周知であるが、これらに限定されない。当技術分野で周知のようにまたは本明細書に記載されているように、ＧＬＰ－２ペプチボディ組成物の投与方法、溶解性および／または安定性に適した薬学的に許容される担体は、規定通りに選択することができる。例えば、わずかに酸性のまたは生理学的ｐＨの滅菌生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水が使用され得る。ｐＨ緩衝剤は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、重炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、好ましい緩衝液であるヒスチジン、アルギニン、リジン、もしくは酢酸塩またはこれらの混合物であり得る。好ましい緩衝範囲は、ｐＨ４～８、ｐＨ６．５～８、より好ましくはｐＨ７～７．５である。パラ－、メタ－、およびオルト－クレゾール、メチルパラベンおよびプロピルパラベン、フェノール、ベンジルアルコール、安息香酸ナトリウム、安息香酸、安息香酸ベンジル、ソルビン酸、プロパン酸、ｐ－ヒドロキシ安息香酸のエステルなどの防腐剤が、医薬組成物中に提供され得る。例えばアスコルビン酸、メチオニン、トリプトファン、ＥＤＴＡ、アスパラギン、リジン、アルギニン、グルタミンおよびグリシンなどの、酸化、脱アミド化、異性化、ラセミ化、環化、ペプチド加水分解を防止する安定剤が医薬組成物中に提供され得る。ドデシル硫酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、シクロデキストリンなどの、凝集、フィブリル化、および沈殿を防止する安定剤が医薬組成物中に提供され得る。エタノール、酢酸または酢酸塩およびこれらの塩など、可溶化のためまたは凝集を防止するための有機改質剤が、医薬組成物中に提供され得る。塩（例えば、塩化ナトリウム）、または最も好ましい炭水化物（例えば、デキストロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、スクロースもしくはこれらの混合物）などの等張化剤（isotonicity maker）が医薬組成物中に提供され得る。
本組成物において有用な医薬賦形剤および添加剤には、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖を含む糖類；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖などの誘導体化された糖類；ならびに多糖類または糖ポリマー）が含まれるが、これらに限定されず、これらは、単独でまたは組み合わせて存在することができ、単独でまたは組み合わせて、１～９９．９９重量％または体積％を構成することができる。例示的なタンパク質賦形剤には、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの血清アルブミン、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどが含まれる。緩衝能でも機能することができる代表的なアミノ酸／ＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアント成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが含まれる。１つの好ましいアミノ酸はグリシンである。
炭水化物賦形剤、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ－マンノース、ソルボースなどの単糖類；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖類；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖類；ならびにマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのアルジトールを使用することができる。
ＧＬＰ－２ペプチボディ組成物はまた、緩衝液またはｐＨ調整剤を含むことができ；典型的には、緩衝液は、有機酸または有機塩基から調製された塩である。例示的な緩衝液には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩などの有機酸塩；トリス、トロメタミン塩酸塩、またはリン酸緩衝液が含まれる。
さらに、本発明のＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントの組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（糖ポリマー）、デキストラート（例えば、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンなどのシクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、香味料、抗菌剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０」および「ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０」などのポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）などのポリマー賦形剤／添加剤を含むことができる。
本発明によるＧＬＰ－２ペプチボディ組成物での使用に適したこれらおよび追加の既知の医薬賦形剤および／または添加剤は、例えば、“Remington: The Science & Practice of Pharmacy”, 21st ed., Williams & Williams, (2005)、および“Physician's Desk Reference”, 71st ed., Medical Economics, Montvale, N.J. (2017)に列挙されているように当技術分野で知られており、これらの開示は参照により完全に本明細書に組み込まれる。好ましい担体または賦形剤の材料は、炭水化物（例えば、糖類およびアルジトール）および緩衝剤（例えば、クエン酸塩）またはポリマー物質である。
医薬組成物は、静脈内または皮下への注射または注入による投与に適した液体として処方され得る。液体は、１つまたは複数の溶媒を含み得る。例示的な溶媒には、水；エタノールおよびイソプロピルアルコールなどのアルコール；植物油；ポリエチレングリコール；プロピレングリコール；およびグリセリン；またはこれらの混合物および組み合せが含まれるが、これらに限定されない。静脈内投与に適した水溶性担体が使用され得る。例えば、一部の実施形態において、静脈内投与のための組成物は、典型的には、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤、および注射部位における疼痛を緩和するための局所麻酔薬を含み得る。一般に、成分は、単位剤形で別個にまたは一緒に混合されて、例えば、活性薬の量を示すアンプルまたはサシェなどの気密容器内の乾燥凍結粉末または水非含有濃縮物として供給される。組成物が注入によって投与される場合、無菌の医薬品グレードの水、生理食塩水またはデキストロース／水を含む注入ボトルを用いて組成物を分配することができる。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分を混合できるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
上記のように、製剤には、好ましくは、薬学的に許容される製剤中に少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディまたは特定部分もしくはバリアントを含む、生理食塩水または選択された塩を含有する適切な緩衝液、ならびに保存剤を含む任意選択の保存された溶液および製剤、ならびに薬学または獣医学用途に適した多用途の保存された製剤が含まれ得る。保存された製剤は、水溶性希釈剤中に少なくとも１つの既知の保存剤を含み、任意選択で保存剤は、少なくとも１つのフェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはこれらの混合物からなる群より選択される。当技術分野で既知のように、任意の適切な濃度または混合物を使用することができ、それは、０．００１～５％またはその中の任意の範囲もしくは値などであり、例えば、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４．、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその中の任意の範囲もしくは値などであるが、これらに限定されない。非限定的な例には、保存剤なし、０．１～２％のｍ－クレゾール（例えば、０．２、０．３．０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１～３％のベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１．、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１～０．５％のチメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１～２．０％のフェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５～１．０％のアルキルパラベン（複数可）（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などが含まれる。
ＧＬＰ－２ペプチボディは、非経口投与用に処方することができ、一般的な賦形剤として、滅菌水または生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物由来の油、硬化ナフタレンなどを含むことができる。注射用の水性または油性懸濁液は、既知の方法に従って、適切な乳化剤または湿潤剤および懸濁剤を使用することによって調製することができる。注射用剤は、水溶液、または溶媒中の滅菌注射溶液もしくは懸濁液などの、非毒性の非経口投与可能な希釈剤であり得る。使用可能なビヒクルまたは溶媒として、水、リンゲル液、等張生理食塩水などが許容され；通常の溶剤または懸濁溶剤として、滅菌不揮発性油を使用することができる。これらの目的のために、天然または合成または半合成の脂肪油または脂肪酸；天然または合成または半合成のモノグリセリドまたはジグリセリドまたはトリグリセリドを含む、任意の種類の不揮発性油および脂肪酸を使用することができる。非経口投与は、当技術分野で既知であり、従来の注射手段、米国特許第５，８５１，１９８号に記載されているガス圧無針注射装置、および米国特許第５，８３９，４４６号に記載されているレーザー穿孔装置が含まれるが、これらに限定されない。
医薬組成物は、延長放出製剤（または徐放製剤）であり得る。医薬組成物はまた、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７、または１０のアミノ酸配列を含む）の持続放出、延長放出、遅延放出または徐放のために処方され得る。制御放出および持続放出としても知られる延長放出を注射用製剤に提供することができる。ミクロスフェア、ナノスフェア、インプラント、デポー、およびポリマーを、本明細書に記載の化合物、方法、および製剤のいずれかと組み合わせて使用して、延長放出（または徐放）プロファイルを提供することができる。
ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７、または１０のアミノ酸配列を含む）は、１０～１００ｍｇ／ｍＬの濃度で処方することができる。その濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４２ｍｇ／ｍＬ、約４４ｍｇ／ｍＬ、約４６ｍｇ／ｍＬ、約４８ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約９９ｍｇ／ｍＬであってよく、「約」は、参照値を０．５ｍｇ／ｍＬ下回る値から参照値を０．５ｍｇ／ｍＬ上回る値までを意味する。濃度は、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１１～１６ｍｇ／ｍＬ、１２～１７ｍｇ／ｍＬ、１３～１８ｍｇ／ｍＬ、１４～１９ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、１６～２１ｍｇ／ｍＬ、１７～２２ｍｇ／ｍＬ、１８～２３ｍｇ／ｍＬ、１９～２４ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、２５～３０ｍｇ／ｍＬ、３０～３５ｍｇ／ｍＬ、３５～４０ｍｇ／ｍＬ、４０～４５ｍｇ／ｍＬ、４５～５０ｍｇ／ｍＬ、５０～５５ｍｇ／ｍＬ、５５～６０ｍｇ／ｍＬ、６０～６５ｍｇ／ｍＬ、６５～７０ｍｇ／ｍＬ、７０～７５ｍｇ／ｍＬ、７５～８０ｍｇ／ｍＬ、８０～８５ｍｇ／ｍＬ、８５～９０ｍｇ／ｍＬ、または９０～１００ｍｇ／ｍＬであり得る。濃度は、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬまたは１４．５～１５．５ｍｇ／ｍＬ、または１５ｍｇ／ｍＬであり得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディを含む製剤および組成物は、任意選択で、糖尿病またはインスリン代謝関連薬、感染防止薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、呼吸器薬、消化（ＧＩ）管薬、ホルモン薬、体液または電解質バランスのための薬剤、血液薬、抗腫瘍薬、免疫調節薬、眼科薬、耳鼻科薬、局所薬、栄養薬などのうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つの化合物またはタンパク質の有効量をさらに含み得る。そのような薬物は、各々の製剤、適応症、投薬および投与を含めて、当技術分野で周知である（例えば、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhouse, Pa., 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CTを参照されたい)。
ＧＬＰ－２ペプチボディはまた、ＧＬＰ－２ペプチボディの長期または持続投与のための徐放性移植デバイスとして処方され得る。そのような持続放出製剤は、体の外部に配置されたパッチの形態であり得る。持続放出製剤の例には、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、メチルセルロース、ヒアルロン酸、シアル酸、ケイ酸塩、コラーゲン、リポソームなどの生体適合性ポリマーの複合材料が含まれる。持続放出製剤は、ＧＬＰ－２ペプチボディの高い局所濃度を提供することが望ましい場合に特に興味深いものとなり得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディの組成物および製剤は、透明な溶液として、あるいは、再構成される凍結乾燥された少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくはバリアントのバイアルと、水性希釈剤を含有する第２のバイアルとを含むデュアルバイアルとして、患者に提供することができる。単一溶液バイアルまたは再構成を要するデュアルバイアルは、複数回再利用することができ、患者の単回または複数回サイクルの処置に十分であり、したがって現在利用可能なものよりも便利な処置レジメンを提供する。
ＧＬＰ－２ペプチボディの組成物および製剤は、薬局、診療所、または他のそのような施設および設備に、透明な溶液、あるいは再構成される凍結乾燥された少なくとも１つのＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくはバリアントのバイアルと、水性希釈剤を含有する第２のバイアルとを含むデュアルバイアルを提供することにより、患者に間接的に提供することができる。この場合の透明な溶液は、最大１リットルまたはそれ以上のサイズであってもよく、大きなリザーバを提供し、そこからＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくはバリアントの溶液のより少ない部分を１回または複数回取り出してより小さなバイアルに移し、薬局または診療所から顧客および／または患者に提供することができる。このような製品は、包装材料を含むことができる。包装材料は、規制当局が要求する情報に加えて、製品を使用することができる条件を提供することができる。包装材料は、２バイアルウェット／ドライ製品について、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）または特定部分もしくはバリアントを水性希釈剤で再構成して溶液を形成し、その溶液を２～２４時間またはそれ以上の時間にわたり使用するように患者に指示を提供することができる。
処置
別の態様では、消化管皮膚瘻（ＥＣＦ）の患者を処置する方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを使用して、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディで患者を処置することを含む方法が提供される。一実施形態において、本明細書に記載の組成物は、ＥＣＦを処置する方法で使用するためのものであり、その方法はＧＬＰ－２ペプチボディを投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンに従って投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＥＣＦを処置するための医薬の製造に使用するためのものである。ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＧＬＰ－２またはテデュグルチドよりも半減期が長いため、ＥＣＦの処置に特に有効であり得る。半減期が長いほど、投薬頻度が少なくなり、ピーク対トラフ比（peak-to-trough ratio）が低くなる。
ＥＣＦから高い死亡率および罹病率が生じる。さらに、ＥＣＦは腹腔内処置を行うことで生じ得る。腸壁への損傷は、ＥＣＦの最大のリスクを伴う。Galie, K.L. et al., “Postoperative Enterocutaneous Fistula: When to Reoperate and How to Succeed” Clin. Colon Rectal Surg., 2006, 19:237-246; Arebi, N. et al., “High-Output Fistula” Clinics in Colon and Rectal Surgery, 2004, 17(2):89-98を参照されたい。理論に縛られることを望まないが、ＥＣＦは消化管と皮膚との間の開口部である。かなりの量の流体、栄養素、および胃腸液が、小腸による適切な吸収がないまま消化管から出る可能性がある。胃液分泌の減少と栄養素の吸収の改善は、ＥＣＦの予後を改善することができる。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者による腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の胃液分泌の量を減らすのに有効である。ＧＬＰ－２ペプチボディは、瘻孔を通って移動するなどして皮膚に到達する胃腸分泌物の量を減らすのに有効であり得る。ＧＬＰ－２の長期間の活性化は、胃液分泌および瘻孔からの体液の排出を減らし、それによって回復をより迅速に促進させ、瘻孔をより迅速に治癒させることができる。また、テデュグルチド処置の後、コラーゲン発現の増加およびメタロプロテアーゼ発現の減少が観察されている。Costa, B.P. et al., “Teduglutide effects on gene regulation of fibrogenesis on an animal model of intestinal anastomosis” Journal of Surgical Research, August 2017 (216): 87-98を参照されたい。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。
ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、皮下または静脈内に投与され得る。様々な実施形態において、投薬レジメンに従って複数回投与が行われる。本明細書で使用される場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日毎の投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日毎の投与を意味する。「ＱＷ」は週１回の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、１１日に１回、１２日に１回、１３日に１回、２週に１回、１５日に１回、１６日に１回、または１７日に１回、３週に１回、または月１回行うことができる。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、２～１４日に１回、５～８日に１回、または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、３週間毎または月１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
別の方法として、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために、５～８日毎、または週１回（ＱＷ）、０．０２～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１０～９０ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、５０～１００ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、または１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
上記の投薬レジメンは、ＥＣＦを処置するために６ヶ月～１年にわたって実施され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持のためおよび再発防止のために、最初の投薬レジメンの後に月１回投与され得る。
本明細書で使用される場合、「皮下組織」という用語は、皮膚のすぐ下の緩い不規則な結合組織の層として定義される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲骨を含むがこれらに限定されない領域に組成物を注射することによって実施することができる。そのような目的のために、製剤は注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ－ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置も利用可能である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含む医薬組成物は、静脈内投与される。
様々な実施形態において、ＥＣＦを処置する上記の方法は、ＥＣＦを処置する既知の方法と併せて使用される。例示的な既知の方法には、非経口栄養、敗血症を予防するための抗生物質投与、瘻孔の外部開口部に取り付けられるオストミー器具、サンプドレーン、経瘻孔栄養法（fistuloclysis）、ビタミン補給、ミネラル補給、酸を抑制するためのＨ２ブロッカーまたはプロトンポンプ阻害剤の使用、ヒストアクリル糊の投与、およびフィブリン糊の投与が含まれる。
別の態様において、閉塞性黄疸の患者を処置する方法であって、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）で患者を処置することを含む方法が提供される。一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、閉塞性黄疸を処置する方法で使用するためのものであり、その方法はＧＬＰ－２ペプチボディを投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンに従って投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、閉塞性黄疸を処置するための医薬の製造に使用するためのものである。閉塞性黄疸は、腸への胆汁の流れが遮断され、血流に留まる場合に生じる。胆石は閉塞性黄疸を引き起こす可能性がある。閉塞性黄疸の患者では、腸管バリア機能が損傷または低下する可能性があり、その結果、小腸からのバクテリアルトランスロケーションが引き起こされ得る。本明細書に記載のＧＬＰ－２ペプチボディは、閉塞性黄疸のエピソード中の腸管バリア機能への損傷を防ぐ可能性がある。
閉塞性黄疸を処置するのに有効である投薬レジメンが使用され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、皮下投与または静脈内投与され得る。様々な実施形態において、投薬レジメンに従って複数回投与が行われる。本明細書で使用する場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日毎（２日に１回）の投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日毎（３日に１回）の投与を意味する。「ＱＷ」は、週１回の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、１１日に１回、１２日に１回、１３日に１回、２週に１回、１５日に１回、１６日に１回、または１７日に１回、３週に１回、または月１回、行われ得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、２～１４日に１回、５～８日に１回、または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために、５～８日毎または週１回（ＱＷ）、０．０２～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。ＧＬＰ～２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１０～９０ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、５０～１００ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲骨を含むがこれらに限定されない領域に組成物を注射することによって実施することができる。そのような目的のために、製剤は注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ－ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置も利用可能である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含む医薬組成物は、静脈内投与される。
いくつかの実施形態において、血清ビリルビンのレベルは、前記処置前の血清ビリルビンのレベルと比較して低下する。血清ビリルビンは黄疸の程度を反映しており、閉塞性黄疸の患者に見られる皮膚や眼が黄色であることの原因である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管バリア機能を改善し、患者の小腸からのバクテリアルトランスロケーションの発生率を低下させるのに有効である。
別の態様では、本発明は、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）を投与することを含む、消化管への放射線損傷、および／またはその影響を処置、改善または予防する方法を提供する。患者の消化管への放射線損傷を処置または予防するのに有効な投薬レジメンが使用され得る。一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、消化管への放射線損傷を処置する方法で使用するためのものであり、この方法は、ＧＬＰ－２ペプチボディを投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、消化管への放射線損傷を処置するのに有効な投薬レジメンに従って投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、消化管への放射線損傷を処置するための医薬の製造に使用するためのものである。放射線損傷は小腸にあってよい。いくつかの実施形態において、この方法は、消化管の細胞のアポトーシスを減少させるのに有効である。
小腸への放射線損傷は、次の影響：腸管バリア機能の低下、小腸による水および他の栄養素の吸収の減少、非経口栄養への依存の増加：のうちの１つまたは複数を生じるのに十分な細胞損傷をもたらし得る。ＧＬＰ－２またはテデュグルチドよりも実質的に長い半減期を有するＧＬＰ－２ペプチボディは、これらの影響を逆転させ得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、ＧＬＰ－２は、小腸の細胞、例えば、ＣＣＤ－１８Ｃｏ細胞におけるＡｋｔリン酸化を促進することによって、小腸の細胞がアポトーシスを起こすのを防ぐことができる。あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、そのＧＬＰ－２活性を介して、カスパーゼ－３のレベルを低下させ得る。カスパーゼ３は、放射線によって惹起される因子である。ＧＬＰ－２ペプチボディはまた、これもまた放射線によって惹起されるＢｃｌ－２分解も阻害し得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディは、患者が放射線または放射線療法で処置される前または処置中に投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディは、患者が放射線または放射線療法で処置された後に投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、皮下または静脈内に投与され得る。様々な実施形態において、投薬レジメンに従って複数回投与が行われる。本明細書で使用される場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日毎（２日に１回）の投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日毎（３日に１回）の投与を意味する。「ＱＷ」は週１回の投与を意味する。「ＢＩＤ」は、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、１１日に１回、１２日に１回、１３日に１回、２週に１回、１５日に１回、１６日に１回、または１７日に１回、３週に１回、または月１回、行われ得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、２～１０日に１回、５～８日に１回、または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、３週毎または月１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、維持目的のために、５～８日毎または週１回（ＱＷ）、０．０２～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１０～９０ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、５０～１００ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
上記の投薬レジメンは、６ヶ月～１年にわたって行われ得る。ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的のために、最初の投薬レジメンの後に月１回投与され得る。
例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲骨を含むがこれらに限定されない領域に組成物を注射することによって実施することができる。そのような目的のために、製剤は注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ－ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置も利用可能である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含む医薬組成物は、静脈内投与される。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である。これらの効果はすべて、小腸および腸において生じる任意の放射線誘発性細胞損傷を補う可能性がある。
別の態様において、本発明は、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）を投与することを含む、消化管に対する放射線誘発性腸炎、および／またはその影響を処置、改善または予防する方法を提供する。患者における放射線誘発性腸炎を処置または予防するのに有効な投薬レジメンが使用され得る。一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、放射線誘発性腸炎を処置する方法で使用するためのものであり、この方法は、ＧＬＰ－２ペプチボディを投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、放射線誘発性腸炎を処置するのに有効な投薬レジメンに従って投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、放射線誘発性腸炎を処置するための医薬の製造に使用するためのものである。
放射線誘発性腸炎は、消化管への放射線誘発性損傷に関して上記で論じたのと同様の理由で、ＧＬＰ－２ペプチボディによって逆転され得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、皮下または静脈内に投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、２～１４日に１回、５～８日に１回、または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、３週間毎または月１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、維持目的で、５～８日毎または週１回（ＱＷ）、０．０２～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１０～９０ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、５０～１００ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲骨を含むがこれらに限定されない領域に組成物を注射することによって実施することができる。そのような目的のために、製剤は注射器を用いて注射され得る。しかしながら、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ－ｅａｓｅ（商標）装置およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）、注射ペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）、無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））、および皮下パッチ送達システムなど、製剤の投与のための他の装置も利用可能である。いくつかの実施形態において、例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、またはそれを含む医薬組成物は、静脈内投与される。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である。
別の態様では、残存小腸に連続する結腸を呈する短腸症候群の患者を処置する方法であって、短腸症候群の処置に有効な投薬レジメンを使用して、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）で患者を処置することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、残存小腸に連続する少なくとも約２５％の結腸を呈する短腸症候群の患者における腸管吸収を高めるための医薬として投与される。いくつかの実施形態では、残存小腸は、少なくとも２５ｃｍ、少なくとも５０ｃｍ、少なくとも７５ｃｍ、少なくとも１００ｃｍ、または少なくとも１２５ｃｍの長さを有する。一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、残存小腸に連続する結腸を呈する短腸症候群を処置する方法で使用するためのものであり、この方法は、短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンに従ってＧＬＰ－２ペプチボディを投与することを含む。別の実施形態では、ＧＬＰ－２ペプチボディは、残存小腸に連続する結腸を呈する短腸症候群を処置するための医薬の製造に使用するためのものである。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態において、この方法は、栄養素、例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、および水の腸管吸収を高めるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、この方法は、患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、患者は非経口栄養に依存している。この方法は、糞便の湿重量を減らし、尿の湿重量を増加させ、小腸からのエネルギー吸収を増加させ（例えば、ポリペプチド、炭水化物、脂肪酸のうちの１つまたは複数の吸収）、小腸からの水分吸収を増加させ、非経口栄養支援を減らし、または非経口栄養の必要性を排除するのに有効である。
結腸連続性を有する短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンが使用され得る。配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディは、皮下または静脈内に投与され得る。様々な実施形態において、投薬レジメンに従って複数回投与が行われる。本明細書で使用される場合、「Ｑ２Ｄ」という用語は、２日毎（２日に１回）の投与を意味し、「Ｑ３Ｄ」は、３日毎（３日に１回）の投与を意味する。「ＱＷ」は週１回の投与を意味する。「ＢＩＤ」とは、１日２回の投与を意味する。投薬は、例えば、ＢＩＤ、１日１回（ＱＤ）、Ｑ２Ｄ、Ｑ３Ｄ、Ｑ４Ｄ、Ｑ５Ｄ、Ｑ６Ｄ、ＱＷ、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、１１日に１回、１２日に１回、１３日に１回、２週に１回、１５日に１回、１６日に１回、または１７日に１回、３週に１回、または月１回、行われ得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、２～１４日に１回、５～８日に１回、または週１回（ＱＷ）、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
あるいは、ＧＬＰ－２ペプチボディは、維持目的などのために、３週間毎または月１回投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、３週間毎または月１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．７～１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、１．２～２．２ｍｇ／ｋｇ、１．５～２．５ｍｇ／ｋｇ、１．７～２．７ｍｇ／ｋｇ、２．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、２．５～３．５ｍｇ／ｋｇ、３．０～４．０ｍｇ／ｋｇ、３．５～４．５ｍｇ／ｋｇ、または４．０～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。
ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）は、維持目的で、５～８日毎または週１回（ＱＷ）、０．０２～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０４～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０５～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．０７～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１０～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．４～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５～１．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与され得る。ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１または配列番号７のアミノ酸配列を含む）は、１０～１００ｍｇ／ｍＬ、１０～９０ｍｇ／ｍＬ、２０～８０ｍｇ／ｍＬ、２５～７５ｍｇ／ｍＬ、３０～７０ｍｇ／ｍＬ、５０～１００ｍｇ／ｍＬ、６０～９０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１２～１８ｍｇ／ｍＬ、１３～１７ｍｇ／ｍＬ、１４～１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬまたは１５ｍｇ／ｍＬの濃度で投与され得る。
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含む医薬組成物は、皮下投与される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲骨を含むがこれらに限定されない領域に組成物を注射することによって実施することができる。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディ（例えば、配列番号１、４、７または１０のアミノ酸配列を含む）、またはそれを含む医薬組成物は、静脈内投与される。
上記と同様に、ＧＬＰ－２ペプチボディは、有効量の本明細書に記載のＧＬＰ－２アナログまたはその塩を投与することにより、食道の上部消化管を含む、消化管障害を患う個体を処置するために使用され得る。胃および腸に関連する障害には、あらゆる病因の潰瘍（例えば、消化性潰瘍、薬物誘発性潰瘍、感染症または他の病原体に関連する潰瘍）、消化不良、吸収不良症候群、短腸症候群、盲管症候群（cul-de-sac syndrome）、炎症性腸疾患、セリアックスプルー（例えば、グルテン誘発性腸疾患またはセリアック病から生じる）、熱帯性スプルー、低ガンマグロブリン血症性スプルー、腸炎、潰瘍性大腸炎、小腸損傷および化学療法誘発性下痢／粘膜炎（ＣＩＤ）が含まれる。小腸の質量の増加、ならびに正常な小腸粘膜の構造および機能の結果および／または維持から利益を得る個体は、ＧＬＰ－２ペプチボディによる処置の候補である。ＧＬＰ－２ペプチボディで処置され得る特定の状態には、熱によるα－グリアジンに対する毒性反応から生じ，グルテン誘発性腸疾患またはセリアック病の結果であり得、さらには小腸における絨毛の著しい喪失によって特徴づけられるセリアックスプルー；感染の結果生じ、絨毛の部分的な平坦化を特徴とする熱帯性スプルー；分類不能型免疫不全症または低ガンマグロブリン血症を患う患者において一般に観察され、絨毛の高さの有意な減少を特徴とする低ガンマグロブリン血性スプルーを含む、様々な形態のスプルーが含まれる。ＧＬＰ－２ペプチボディ処置の治療有効性は、絨毛の形態学的特性を検討するための腸生検によって、栄養吸収の生化学的評価によって、患者の体重増加によって、またはこれらの状態に関連する症状の改善によって、監視することができる。
化学療法中の消化管への損傷を予防または処置するために、ＧＬＰ－２ペプチボディを投与してもよい。小腸粘膜への化学療法誘発性損傷は、臨床的にしばしば消化管粘膜炎と呼ばれ、小腸の吸収およびバリア障害を特徴とする。がん化学療法後の消化管粘膜炎は、徐々に緩和するものの、一度確立されると本質的に処置不可能な深刻化する問題である。一般的に使用される細胞増殖抑制性抗がん剤５－ＦＵおよびイリノテカンを用いて実施された研究は、これらの薬剤による有効な化学療法が主に小腸の構造的完全性および機能に影響を及ぼすことを実証した。ＧＬＰ－２ペプチボディの投与は、小腸への損傷を逆転させ、その構造的完全性および機能を保護し得る。
上記の処置方法の様々な実施形態において、投与される特定の用量または量は、例えば、所望の結果の性質および／または程度、投与の経路および／またはタイミングの詳細、および／または１つまたは複数の特徴（例えば、体重、年齢、個体歴、遺伝的特徴、生活様式パラメータ、心臓欠陥の重症度および／または心臓欠陥のリスクのレベルなど、またはそれらの組み合わせ）に応じて変化し得る。そのような用量または量は、当業者により特定され得る。いくつかの実施形態において、適切な用量または量は、標準的な臨床技術に従って決定される。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態において、適切な用量または量は、投与される望ましいまたは最適な用量範囲または量を特定するのを助けるために１つまたは複数のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して決定される。
上記の処置方法の様々な実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、治療有効量で投与される。一般に、治療有効量は、対象に有意な利益（例えば、基礎疾患または状態の予防、処置、調節、治癒、防止および／または改善）を達成するのに十分である。一般に、必要とする対象に投与される治療薬（例えば、ＧＬＰ－２ペプチボディ）の量は、対象の特徴に依存するであろう。そのような特徴には、対象の状態、疾患の重症度、全体的な健康状態、年齢、性別、および体重が含まれる。当業者は、これらおよび他の関連因子に応じて適切な投薬量を容易に決定することができるであろう。さらに、客観的および主観的アッセイの両方を任意選択で使用して、最適な投薬量範囲を特定することができる。いくつかの特定の実施形態において、投与される適切な用量または量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデルの試験システムから得られた用量反応曲線から外挿され得る。
上記の処置方法の様々な実施形態において、治療有効量は一般に、複数の単位用量を含み得る投薬レジメンで投与される。任意の特定の治療タンパク質について、治療有効量（および／または有効な投薬レジメン内での適切な単位用量）は、例えば、投与経路や、他の薬剤との組み合わせに応じて変化し得る。また、任意の特定患者に対する具体的な治療有効量（および／または単位用量）は、処置される障害および障害の重症度；使用される具体的な医薬品の活性；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別および食事；用いられる具体的な融合タンパク質の投与回数、投与経路、および／または排泄もしくは代謝の速度；処置の持続期間；ならびに医学分野において周知の同様の因子を含む、様々な因子に依存し得る。
上記の処置方法の様々な実施形態において、ＧＬＰ－２ペプチボディは、１つまたは複数の既知の治療薬と組み合わせて投与される。一部の実施形態において、既知の治療薬（複数可）は、その標準的なまたは承認された投薬レジメンおよび／または投薬スケジュールに従って投与される。一部の実施形態において、既知の治療薬（複数可）は、その標準的なまたは承認された投薬レジメンおよび／または投薬スケジュールと比較して変更されたレジメンに従って投与される。一部の実施形態において、このような変更されたレジメンは、１つまたは複数の単位投与量が変更される（例えば、減少されまたは増加される）、および／または投薬の頻度が変更される（例えば、単位投与間の１つまたは複数の間隔が拡大されて結果として頻度が低くなる、または間隔が減少して、結果として頻度が高くなる）という点において、標準的なまたは承認された投薬レジメンと異なる。
ＥＣＦの場合、ＧＬＰ－２ペプチボディと組み合わせて投与され得る例示的な治療薬には、コルチコステロイド、抗生物質、および胃酸抑制剤（acid reducer）が含まれる。閉塞性黄疸の場合、ＧＬＰ－２ペプチボディと組み合わせて投与され得る例示的な治療薬には、コルチコステロイドおよび抗生物質が含まれる。
上記の処置方法の様々な実施形態において、複数の異なるＧＬＰ－２ペプチボディを一緒に投与してもよい。さらに、ＧＬＰ－２ペプチボディは、ＧＡＴＴＥＸ、テデュグルチドまたはＧＬＰ－２ペプチドと同時に投与してもよい。
本発明はまた、以下の実施例によって説明および実証される。しかしながら、本明細書のいずれにおいてもこれらおよび他の例を使用することは例示にすぎず、本発明または例示された用語の範囲および意味を決して制限するものではない。同様に、本発明は、本明細書に記載の特定の好ましい実施形態に限定されない。実際、本発明の多くの修正および変形は、本明細書を読むと当業者に明らかであり、そのような変形は、精神または範囲において本発明から逸脱することなく行うことができる。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲が権利を付与される等価物の全範囲と共に、該特許請求の範囲の用語によってのみ限定される
実施例１：タンパク質安定性分析
各ＧＬＰ－２ペプチボディを、ナノ示差走査蛍光定量法（ＮａｎｏＤＳＦ）を用いて融解温度を決定することによって試験した。ＮａｎｏＤＳＦは、温度傾斜を用いた、ある範囲の温度にわたるタンパク質安定性の測定である。トリプトファンの安定性は、３５０ｎｍでの蛍光の３３０ｎｍでの蛍光に対する比に反映されるように、蛍光によって測定される。このアッセイから、１つまたは複数の融解温度が決定される。特定の状態のタンパク質は融解温度を有すると理解されているため、観察される溶融温度の数は、異なる状態の数を反映する。
ＳＥＣ－ＭＡＬＳアッセイを実施して、主状態（メインピーク）およびその分子量を決定した。結果を以下の表１に示す。ＧＬＰ－２ペプチボディＡは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する。ＧＬＰ－２ペプチボディＢは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する。ＧＬＰ－２ペプチボディＣは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有する。ＧＬＰ－２ペプチボディＤは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する。
Figure 2022512688000002
実施例２：ＧＬＰ－２ペプチボディのｉｎ ｖｉｔｒｏ効力
ＧＬＰ－２ペプチボディのＥＣ５０を、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸのｃＡＭＰ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ｅＸｐｒｅｓｓ ＧＬＰ２Ｒ ＣＨＯ－Ｋ１ ＧＰＣＲアッセイを使用してｉｎｖｉｔｒｏで評価した。ｃＡＭＰ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）アッセイは、酵素フラグメント相補性（ＥＦＣ）に基づく。ＥＦＣアッセイでは、酵素ドナーをｃＡＭＰに融合させる。ＧＬＰ－２Ｒの活性化による細胞内ｃＡＭＰの増加は、抗体のＥＤ－ｃＡＭＰと競合する。非結合ＥＤ－ｃＡＭＰは、酵素アクセプターを補完して活性なβガラクトシダーゼを形成し、それがその後に発光シグナルを生成する。
使用されるＣＨＯ－Ｋ１細胞株はヒトＧＬＰ－２Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ００４２４６．１）を過剰発現している。表２に記載されているＧＬＰ－２ペプチボディのさまざまな希釈物で細胞を処理した。細胞溶解に続いて、ＧＬＰ－２ペプチボディのアゴニスト活性を、ｃＡＭＰの濃度の測定を介してアッセイした。シグモイドカーブフィッティング（Ｓ字状曲線の当てはめ）を行って、以下の表２に示すように、ＥＣ５０値を得た。
Figure 2022512688000003
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。このような変更は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。さらに、すべての値は概算であり、説明のために提供されていることを理解されたい。
特許、特許出願、刊行物、製品の説明、およびプロトコルが本出願全体を通して引用されており、それらの開示は、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (87)

  1. ａ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
    ｂ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
    ｃ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ、
    ｄ）ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２ペプチボディ
    またはそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ－２）ペプチボディ。
  2. ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディ。
  3. ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディ。
  4. ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号７）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディ。
  5. ＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１０）のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディ。
  6. 請求項１～５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－２ペプチボディと、担体または薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  7. 注射または注入による投与に適した液体として処方される、請求項６に記載の医薬組成物。
  8. ＧＬＰ－２ペプチボディの持続放出、延長放出、遅延放出または徐放のために処方される、請求項６に記載の医薬組成物。
  9. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが、１０～１０００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  10. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが、１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  11. ポリヌクレオチドであって、
    ａ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、
    ｂ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、
    ｃ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド、および
    ｄ）ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチド
    からなる群より選択されるＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。
  12. ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチド。
  13. ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする配列が、配列番号３のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載のポリヌクレオチド。
  14. ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチド
  15. ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする配列が、配列番号６のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
  16. ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＬＥＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチド。
  17. ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする配列が、配列番号９のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１６に記載のポリヌクレオチド。
  18. ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＨＧＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－２前駆体ポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチド。
  19. ＧＬＰ－２ペプチボディをコードする配列が、配列番号１２のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  20. 請求項１１～１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  21. 請求項１１～１９のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
  22. 前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項２１に記載の宿主細胞。
  23. 前記宿主細胞が、流加細胞培養規模に十分なレベルで請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディを発現する、請求項２２に記載の宿主細胞。
  24. 残存小腸に連続する結腸を呈する短腸症候群の患者を処置する方法であって、短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、前記患者を請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで処置することを含む、方法。
  25. 残存小腸に連続する結腸を呈する短腸症候群の患者を処置する方法であって、短腸症候群を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、前記患者を請求項２～５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで処置することを含む、方法。
  26. 前記残存小腸が、少なくとも２５ｃｍ、少なくとも５０ｃｍ、または少なくとも７５ｃｍの長さを有する、請求項２４または２５に記載の方法。
  27. 前記患者の腸管吸収を高めるのに有効である、請求項２４または２５に記載の方法。
  28. 前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である、請求項２４または２５に記載の方法。
  29. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である、請求項２４または２５に記載の方法。
  30. 糞便の湿重量を減少させる、尿の湿重量を増加させる、小腸からのエネルギー吸収を増加させる、または小腸からの水分吸収を増加させるのに有効である、請求項２４または２５に記載の方法。
  31. 前記患者が非経口栄養に依存している、請求項２４または２５に記載の方法。
  32. ＧＬＰ－２ペプチボディが皮下投与される、請求項２４～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される、請求項３２に記載の方法。
  34. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項３２または３３に記載の方法。
  35. ＧＬＰ－２ペプチボディが静脈内投与される、請求項２４～３１のいずれか一項に記載の方法。
  36. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される、請求項３５に記載の方法。
  37. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項３５または３６に記載の方法。
  38. 消化管皮膚瘻（ＥＣＦ）を有する患者を処置する方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを使用して、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  39. 消化管皮膚瘻（ＥＣＦ）を有する患者を処置する方法であって、ＥＣＦの閉鎖、治癒、および／または修復を促進するのに有効な投薬レジメンを使用して、請求項２～５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  40. 前記患者による腸管吸収を高めるのに有効である、請求項３８または３９に記載の方法。
  41. 前記患者の胃液分泌の量を減少させるのに有効である、請求項３８または３９に記載の方法。
  42. 前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である、請求項３８または３９に記載の方法。
  43. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である、請求項３８または３９に記載の方法。
  44. ＧＬＰ－２ペプチボディが皮下投与される、請求項３８～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される、請求項３８～４３のいずれか一項に記載の方法。
  46. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項４５に記載の方法。
  47. 閉塞性黄疸を有する患者を処置する方法であって、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、前記患者を請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで処置することを含む、方法。
  48. 閉塞性黄疸を有する患者を処置する方法であって、閉塞性黄疸を処置するのに有効な投薬レジメンを使用して、前記患者を請求項２～５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで処置することを含む、方法。
  49. 前記処置前の血清ビリルビンのレベルと比較して、血清ビリルビンのレベルが低下する、請求項４７または４８に記載の方法。
  50. 前記患者の腸管吸収を高めるのに有効である、請求項４７または４８に記載の方法。
  51. 前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である、請求項４７または４８に記載の方法。
  52. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である、請求項４７または４８に記載の方法。
  53. 前記患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である、請求項４７または４８に記載の方法。
  54. 前記患者の腸管バリア機能を改善し、前記患者の小腸からのバクテリアルトランスロケーションの発生率を低下させるのに有効である、請求項４７または４８に記載の方法。
  55. ＧＬＰ－２ペプチボディが皮下投与される、請求項４７～５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される、請求項５５に記載の方法。
  57. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項５５または５６に記載の方法。
  58. ＧＬＰ－２ペプチボディが静脈内投与される、請求項４７～５４のいずれか一項に記載の方法。
  59. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される、請求項５８に記載の方法。
  60. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項５８または５９に記載の方法。
  61. 患者の消化管への放射線損傷を処置または予防する方法であって、患者の消化管への放射線損傷を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを使用して、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  62. 患者の消化管への放射線損傷を処置または予防する方法であって、患者の消化管への放射線損傷を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを使用して、請求項２～５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  63. 放射線損傷が小腸にある、請求項６１または６２に記載の方法。
  64. 消化管の細胞のアポトーシスを減少させるのに有効である、請求項６１または６２に記載の方法。
  65. 前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である、請求項６１または６２に記載の方法。
  66. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である、請求項６１または６２に記載の方法。
  67. 前記患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である、請求項６１または６２に記載の方法。
  68. 前記患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である、請求項６１または６２に記載の方法。
  69. ＧＬＰ－２ペプチボディが皮下投与される、請求項６１～６８のいずれか一項に記載の方法。
  70. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される、請求項６９に記載の方法。
  71. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項６９または７０に記載の方法。
  72. ＧＬＰ－２ペプチボディが静脈内投与される、請求項６１～６８のいずれか一項に記載の方法。
  73. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される、請求項７２に記載の方法。
  74. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項７２または７３に記載の方法。
  75. 患者の放射線誘発性腸炎を処置または予防する方法であって、患者の放射線誘発性腸炎を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを使用して、請求項１に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  76. 患者の放射線誘発性腸炎を処置または予防する方法であって、患者の放射線誘発性腸炎を処置または予防するのに有効な投薬レジメンを使用して、請求項２～５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－２ペプチボディで前記患者を処置することを含む、方法。
  77. 消化管の細胞のアポトーシスを減少させるのに有効である、請求項７５または７６に記載の方法。
  78. 前記患者の小腸における絨毛の高さを増加させるのに有効である、請求項７５または７６に記載の方法。
  79. 前記患者の小腸における陰窩の深さを増加させるのに有効である、請求項７５または７６に記載の方法。
  80. 前記患者の小腸における陰窩の組織化を増加させるのに有効である、請求項７５または７６に記載の方法。
  81. 前記患者の腸管バリア機能を改善するのに有効である、請求項７５または７６に記載の方法。
  82. ＧＬＰ－２ペプチボディが皮下投与される、請求項７５～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って皮下投与される、請求項８２に記載の方法。
  84. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８２または８３に記載の方法。
  85. 請求項２または３に記載のＧＬＰ－２ペプチボディが静脈内投与される、請求項７５～８１のいずれか一項に記載の方法。
  86. ＧＬＰ－２ペプチボディが、２～１４日に１回、０．０２～５．０ｍｇ／ｋｇの間の投薬レジメンに従って静脈内投与される、請求項８５に記載の方法。
  87. 投与されるＧＬＰ－２ペプチボディが１０～２００ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８５または８６に記載の方法。
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