JP2018503355A - C1エステラーゼ阻害因子融合タンパク質及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2014年10月31日出願の、米国仮出願番号第62/073657号の優先権を主張し、その開示は、そのまま全体が本明細書により参照により援用される。
本発明をより理解しやすくする目的で、ある特定の用語を最初に以下で定義する。以下の用語及び他の用語についてのさらなる定義は、明細書全体を通じて記載される。
本発明は、特に、タンパク質療法としてのC1−INHに基づいた、遺伝性血管性浮腫(HAE)をはじめとする補体関連型障害を治療する方法及び組成物を提供する。
ヒトC1−INHは、広範囲に渡る阻害的及び非阻害的な生物学的活性を持つ重要な抗炎症性血漿タンパク質である。配列相同性、そのC末端ドメインの構造、及びプロテアーゼ阻害の機構により、ヒトC1−INHは、血漿プロテアーゼ阻害因子の最大クラスであるセルピンスーパーファミリーに属する。このスーパーファミリーは、抗トロンビン、α1−プロテイナーゼ阻害因子、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子、及び多種多様な生理学的系を調節する多くの他の構造上類似したタンパク質も含む。C1−INHは、補体系、キニン生成の接触系、及び固有凝固経路におけるプロテアーゼの阻害因子である。Cai, S. & Davis, A. E., Complement Regulatory Protein C1 Inhibitor Binds to Selectins and Interferes with Endothelial−Leukocyte Adhesion, J Immunol, 171:4786−4791 (2003)。具体的には、C1−INHは、補体系のC1r及びC1sを阻害することが示されている。C1−INHは、凝固第XI因子及び凝固第XII因子、ならびにカリクレイン及び組織型プラスミノーゲン活性化因子及びプラスミンをはじめとする凝固及び線維素溶解系の他のセリンプロテアーゼの主要レギュレーターでもある。
[NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTT]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号1)。
GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号2)。
GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号2)。
いくつかの実施形態において、適切なC1−INH融合タンパク質は、FcRn受容体と結合するFcドメインまたはその一部分を含む。限定ではなく例として、適切なFcドメインは、IgGなどの免疫グロブリンサブクラスに由来する場合がある。いくつかの実施形態において、適切なFcドメインは、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4に由来する。いくつかの実施形態において、適切なFcドメインは、IgM、IgA、IgD、またはIgEに由来する。特に適切なFcドメインとして、ヒト抗体またはヒト化抗体に由来するものが挙げられる。いくつかの実施形態において、適切なFcドメインは、修飾されたFc部分、例えば修飾されたヒトFc部分などである。
C1阻害因子Fc融合タンパク質は、図1Aに示すとおり、二量体として存在する場合がある。
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号3)。
野生型IgG1は、補体カスケード活性化のレベルが低く、補体関連型障害を患っている患者にとってはいずれにしろ望ましくない場合がある。補体活性化及び抗体依存性細胞性細胞障害(ADCC)活性を低下させまたは排除するエフェクターデッド構築物のためのIgG選択が重要になる場合がある。適切なFcドメインとして、L234A及びL235Aの変異を持つIgG1(LALA)が挙げられる。
DKTHTCPPCPAPE[AA]GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号4)。
FcドメインとFcRn受容体の結合を改善することで血清中半減期の延長をもたらすことも企図されている。したがって、いくつかの実施形態において、適切なFcドメインは、FcRnとの結合の改善を招く1つまたは複数のアミノ酸変異を有する。FcRnとの結合の改善をもたらすFcドメイン内の様々な変異が、当該分野で既知であり、本発明の実施に適応的ル。いくつかの実施形態において、適切なFcドメインは、ヒトIgG1のThr250、Met252、Ser254、Thr256、Thr307、Glu380、Met428、His433、及び/またはAsn434に対応する1つまたは複数の位置で1つまたは複数の変異を有する。
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL[KF]HYTQKSLSLSPGK(配列番号5)。
DKTHTCPPCPAPE[AA]GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL[KF]HYTQKSLSLSPGK(配列番号6)。
[METPAQLLFLLLLWLPDTTG]DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL[KF]HYTQKSLSLSPGK(配列番号7)。
[METPAQLLFLLLLWLPDTTG]DKTHTCPPCPAPE[AA]GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL[KF]HYTQKSLSLSPGK(配列番号8)。
ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(配列番号9)。
ESKYGPPCP[P]CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(配列番号10)。
いくつかの実施形態において、エフェクターデッドFc融合タンパク質のためのIgG4 IgG選択が、HAEにおいて重要である(補体活性化及びADCCを排除する)。具体的には、IgG4は、補体活性化が野生型IgG1よりも低いことが報告されている。天然のIgG4の発現は、様々な大きさの構築物の混合物をもたらす。それに従い、先行技術に基づいて、IgG4のS241P変異体が示す二量体構造の向上した安定性及び維持を理由に、本計画では、IgG4のS241Pを選択した。
特定の実施形態において、適切な組換えC1−INH融合タンパク質は、C1−INHポリペプチド、Fcドメインを含み、C1−INHポリペプチドは、野生型ヒトC1−INHポリペプチド(配列番号1)または切断型C1−INHポリペプチド(配列番号2)と少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、C1−INHポリペプチドとFcドメインを結びつけるリンカーが存在する。いくつかの実施形態において、適切な組換えC1−INH融合タンパク質は、約0.5〜10日間(例えば、約0.5〜5.5日間、約0.5〜5日間、約1〜5日間、約1.5〜5日間、約1.5〜4.5日間、約1.5〜4.0日間、約1.5〜3.5日間、約1.5〜3日間、約1.5〜2.5日間、約2〜6日間、約2〜5.5日間、約2〜5日間、約2〜4.5日間、約2〜4日間、約2〜3.5日間、約2〜3日間)の範囲のin vivo半減期を有する。いくつかの実施形態において、適切な組換えC1−INH融合タンパク質は、約2〜10日間の範囲(例えば、約2.5〜10日間、約3〜10日間、約3.5〜10日間、約4〜10日間、約4.5〜10日間、約5〜10日間、約3〜8日間、約3.5〜8日間、約4〜8日間、約4.5〜8日間、約5〜8日間、約3〜6日間、約3.5〜6日間、約4〜6日間、約4.5〜6日間、約5〜6日間の範囲)のin vivo半減期を有する。
[DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号11)
または
[DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号12)
または
[DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号13)
または
[DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号14)
または
[ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号32)
または
[ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号33)
または
[ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号15)
または
[ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号16)。
アルブミンは、血液の血清タンパク質の約半分を占める、可溶性の単量体タンパク質である。アルブミンは、ステロイド、脂肪酸、及び甲状腺ホルモンの担体タンパク質として主に機能し、細胞外液体積の安定化で役割を果たす。アルブミンは、分子量66,500の球状未グリコシル化血清タンパク質を有する。アルブミンは、肝臓で、N末端ペプチドを有するプレプロアルブミンとして合成され、N末端ペプチドは新生タンパク質が粗面小胞体から放出される前に除去される。生成物であるプロアルブミンは、次いでゴルジ小胞中で切断されて、分泌型アルブミンを生成する。
MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(配列番号17)。
METPAQLLFLLLLWLPDTTGVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL(配列番号20)。
C1−INHドメインは、Fcドメインまたはアルブミンドメインと、直接連結していても間接的に連結していてもよい。いくつかの実施形態において、適切な組換えC1−INH融合タンパク質は、C1−INHポリペプチドとFcドメインをつなぐリンカーまたはスペーサーを含有する。いくつかの実施形態において、適切な組換えC1−INH融合タンパク質は、C1−INHポリペプチドとアルブミンポリペプチドをつなぐリンカーまたはスペーサーを含有する。アミノ酸リンカーまたはスペーサーは、概して、2つのタンパク質部分間で、柔軟であるように、またはアルファ螺旋などの構造を与えるように設計される。リンカーまたはスペーサーは、相対的に短くても、長くなってもよい。典型的には、リンカーまたはスペーサーは、例えば、3〜100(例えば、5〜100、10〜100、20〜100、30〜100、40〜100、50〜100、60〜100、70〜100、80〜100、90〜100、5〜55、10〜50、10〜45、10〜40、10〜35、10〜30、10〜25、10〜20)アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または100アミノ酸長に等しいか、それより長い。典型的には、リンカーは長い方が、立体障害が小さくなる場合がある。いくつかの実施形態において、リンカーは、グリシン残基とセリン残基の混合物を含むことになる。いくつかの実施形態において、リンカーは、さらに、トレオニン、プロリン、及び/またはアラニン残基を含む場合がある。すなわち、いくつかの実施形態において、リンカーは、10〜100、10〜90、10〜80、10〜70、10〜60、10〜50、10〜40、10〜30、10〜20、10〜15のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、少なくとも10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、または95のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、ALEVLFQGPからなるリンカーではない。
本発明に適した組換えC1−INH融合タンパク質は、任意の利用可能な手段で製造することができる。例えば、組換えC1−INH融合タンパク質は、組換えC1−INH融合タンパク質をコードする核酸を発現するように改変された宿主細胞系を用いて、遺伝子組換え技術により製造することができる。あるいはまたはこれに加えて、組換えC1−INH融合タンパク質は、内在性遺伝子の活性化により製造することができる。あるいはまたはこれに加えて、組換えC1−INH融合タンパク質は、化学合成により、部分的にまたは完全に調製することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書中の様々な実施形態で記載されるC1阻害因子Fc融合タンパク質及び/またはC1阻害因子アルブミン融合タンパク質などの注目対象の組換え遺伝子(本明細書中、導入遺伝子と称する)をコードする核酸配列を含む核酸分子が提供される。いくつかの実施形態において、導入遺伝子をコードする核酸は、コードされたC1阻害因子Fc融合タンパク質及び/またはC1阻害因子アルブミン融合タンパク質の発現が増加するように修飾されている場合があり、そのような修飾は、コドン最適化とも称する。例えば、導入遺伝子をコードする核酸は、コード配列の翻訳領域を改変することにより修飾することができる。本明細書中使用される場合、「翻訳領域」という用語は、「ORF」と同義であり、タンパク質、またはタンパク質の一部分をコードすることが潜在的に可能である任意のヌクレオチド配列を意味する。翻訳領域は、通常、開始コドン(例えば、標準コードで、RNA分子についてAUG及びDNA分子のATGで表される)で始まり、終止コドン(例えば、標準コードで、RNA分子についてUAA、UGA、またはUAG、及びDNA分子のTAA、TGA、またはTAGで表される)で翻訳領域が終わるまで、コドントリプレットで読まれる。本明細書中使用される場合、「コドン」という用語は、タンパク質合成中に特定のアミノ酸を指定する、核酸分子中の3つのヌクレオチドの配列を意味し;トリプレットまたはコドントリプレットとも呼ばれる。例えば、標準遺伝コードの64の可能なコドンのうち、2つのコドン、GAA及びGAGは、アミノ酸グルタミンをコードするが、一方、AAA及びAAGというコドンは、アミノ酸リシンを指定する。標準遺伝コードにおいて、3つのコドンが終止コドンであり、これらはアミノ酸を指定しない。本明細書中使用される場合、「同義コドン」という用語は、1種類のアミノ酸をコードするありとあらゆるコドンを意味する。メチオニン及びトリプトファンを除けば、アミノ酸は、2〜6の同義コドンでコードされる。例えば、標準遺伝コードにおいて、アミノ酸アラニンをコードする4つの同義コドンは、GCA、GCC、GCG、及びGCUであり、グルタミンを指定する2つの同義コドンは、GAA及びGAGであり、リシンをコードする2つの同義コドンは、AAA及びAAGである。
例示核酸配列は、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号18、配列番号19、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、または配列番号33と少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、またはそれ以上の同一性または相同性があるアミノ酸配列を有するC1阻害因子Fc融合タンパク質及びC1阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする。
本出願中記載されるとおりのC1阻害因子Fc融合タンパク質及び/またはC1阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列は、宿主細胞での増殖または発現に適切なベクターに分子としてクローン導入する(挿入する)ことができる。本発明を実施するために多様な発現ベクターを使用することができ、そのようなベクターとして、制限なく、原核生物発現ベクター;酵母菌発現ベクター;昆虫発現ベクター、及び哺乳類発現ベクターを挙げることができる。本発明に適したベクターの例として、ウイルス系ベクター(例えば、AAV系ベクター、レトロウイルス系ベクター、プラスミド系ベクター)が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、C1阻害因子Fc融合タンパク質をコードする核酸配列を、適切なベクターに挿入することができる。いくつかの実施形態において、C1阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列を、適切なベクターに挿入することができる。典型的には、C1阻害因子Fc融合タンパク質またはC1阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列は、様々な制御配列または配列と作動可能に連結している。
様々な制御配列またはエレメントを、本発明に適した発現ベクターに組み込むことができる。制御配列またはエレメントの例として、プロモーター、エンハンサー、リプレッサーまたは阻害因子、5’非翻訳(または非コード)配列、イントロン、3’非翻訳(または非コード)配列が挙げられるが、これらに限定されない。
発現ベクターは、好ましくは、しかし任意選択で、少なくとも1つの選択マーカーを含むことになる。いくつかの実施形態において、選択マーカーは、宿主細胞に細胞毒性化学物質及び/または薬物の存在下で増殖する場合に生存能力を維持する能力を付与する、1つまたは複数の遺伝子制御エレメントと作動可能に連結した耐性遺伝子をコードする核酸配列である。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、宿主細胞内の発現ベクターの保持を維持するために使用する場合がある。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、発現ベクター内の導入遺伝子配列の修飾(すなわちメチル化)及び/またはサイレンシングを防ぐために使用する場合がある。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、宿主細胞内のベクターのエピソーム発現を維持するために使用される。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、導入遺伝子配列が宿主細胞ゲノム中へ安定して組み込まれるのを促進するために使用される。いくつかの実施形態において、作用剤及び/または耐性遺伝子として、真核生物宿主細胞についてはメトトレキセート(MTX)、ジヒドロ葉酸レダクターゼ(DHFR、米国特許第4,399,216号;同第4,634,665号;同第4,656,134号;同第4,956,288号;同第5,149,636号;同第5,179,017号、アンピシリン、ネオマイシン(G418)、ゼオマイシン、ミコフェノール酸、またはグルタミンシンセターゼ(GS、米国特許第5,122,464号;同第5,770,359号;同第5,827,739号);原核生物宿主細胞についてはテトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシン、またはクロラムフェニコール;及び酵母菌宿主細胞についてはURA3、LEU2、HIS3、LYS2、HIS4、ADE8、CUP1、またはTRP1を挙げることができるが、これらに限定されない。
本明細書中使用される場合、「宿主細胞」という用語は、組換えC1阻害因子融合タンパク質を製造するのに使用することができる細胞を示す。詳細には、宿主細胞は、組換えC1阻害因子融合タンパク質を大規模で製造するのに適している。適切な宿主細胞は、様々な生命体に由来するものが可能であり、そのような生命体として、哺乳類、植物、鳥類(例えば、鳥系統)、昆虫、酵母菌、及び細菌が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、哺乳類細胞である。いくつかの実施形態において、適切な宿主細胞は、発現した組換えC1阻害因子融合タンパク質のグリコシル化特性を改善するように操作されている。本発明のいくつかの実施形態において、C1−INHポリペプチドは、天然の血漿由来C1−INHの類似部分と同じまたは同様なグリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、C1−INHポリペプチドは、天然の血漿由来C1−INHと少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%等価なグリカンを有する。いくつかの実施形態において、C1−INH融合タンパク質のグリコシル化特性は、ヒト化グリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、C1−INH融合タンパク質は、天然の血漿由来C1−INHと比較して増加したシアリル化を有する。
細胞培養の影響を受けやすく、ポリペプチド発現の影響を受けやすい任意の哺乳類細胞または細胞型が、本発明に従って宿主細胞として使用され得る。本発明に従って使用され得る哺乳類細胞の限定ではなく例として、ヒト胚性腎臓293細胞(HEK293)、HeLa細胞;BALB/cマウス骨髄腫細胞株(NSO/l、ECACC No:85110503);ヒト網膜芽細胞(PER.C6(CruCell、Leiden、The Netherlands));SV40で形質転換されたサル腎臓CV1細胞株(COS−7、ATCC CRL 1651);ヒト胚性腎臓細胞株(293細胞または浮遊培養での増殖用にサブクローン化された293細胞、Graham et al., J. Gen Virol., 36:59 (1977));ベビーハムスター腎臓細胞(BHK、ATCC CCL 10);チャイニーズハムスター卵巣細胞+/−DHFR(CHO、Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980));マウスセルトリ細胞(TM4、Mather, Biol. Reprod., 23:243−251 (1980));サル腎臓細胞(CV1 ATCC CCL 70);アフリカミドリザル腎臓細胞(VERO−76、ATCC CRL−1 587);ヒト子宮頸癌細胞(HeLa、ATCC CCL 2);イヌ腎臓細胞(MDCK、ATCC CCL 34);バッファローラット肝細胞(BRL 3A、ATCC CRL 1442);ヒト肺細胞(W138、ATCC CCL 75);ヒト肝細胞(Hep G2、HB 8065);マウス乳癌(MMT 060562、ATCC CCL51);TRI細胞(Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44−68 (1982));MRC5細胞;FS4細胞;及びヒト肝細胞腫系統(Hep G2)が挙げられる。いくつかの実施形態において、適切な哺乳類細胞は、エンドソーム酸性化欠損細胞ではない。
細胞培養の影響を受けやすく、ポリペプチド発現の影響を受けやすい任意の非哺乳類由来細胞または細胞型が、本発明に従って宿主細胞として使用され得る。本発明に従って使用され得る非哺乳類宿主細胞及び細胞株の限定ではなく例として、酵母菌については、Pichia pastoris、Pichia methanolica、Pichia angusta、Schizosacccharomyces pombe、Saccharomyces cerevisiae、及びYarrowia lipolytica;昆虫については、Sodoptera frugiperda、Trichoplusis ni、Drosophila melangoster、及びManduca sexta;ならびに細菌については、Escherichia coli、Salmonella typhimurium、Bacillus subtilis、Bacillus lichenifonnis、Bacteroides fragilis、Clostridia perfringens、Clostridia difficile;ならびに両生類由来のXenopus Laevisに由来する細胞及び細胞株が挙げられる。
ある特定の実施形態において、宿主細胞は、ある特定の優先特質または細胞培養に選択された特定条件下での増殖に基づいて、細胞株を生成するように選択される。当業者には理解されるように、そのような特質は、確立された細胞株(すなわち、特性決定済みの市販されている細胞株)の既知の特徴及び/または形質に基づいて、または実験による評価を通じて、確定される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞株は、その株が持つ支持細胞層で増殖する能力によって選択される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞株は、その株が持つ浮遊液で増殖する能力によって選択される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞株は、その株が持つ接着細胞単層として増殖する能力によって選択される場合がある。いくつかの実施形態において、そのような細胞は、任意の組織培養容器または適切な接着基質で処理された任意の容器とともに使用することができる。いくつかの実施形態において、適切な接着基質は、コラーゲン(例えばコラーゲンI、II、II、またはIV)、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、BDマトリゲル(商標)、基底膜マトリクス、デルマタン硫酸プロテオグリカン、ポリ−D−リシン及び/またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、接着宿主細胞は、浮遊液で増殖させるための特定増殖条件下で選択及び修飾される場合がある。接着細胞を浮遊液で増殖させるために修飾するそのような方法は、当該分野で既知である。例えば、時間をかけて、増殖培地から動物血清を徐々に除去することにより、細胞を浮遊培養で増殖するように調整することができる。
本発明に従って、組換えC1−INH融合タンパク質を発現するように改変された細胞は、商業的に実行可能な規模で組換えC1−INH融合タンパク質を産生する能力について選択される。詳細には、本発明による遺伝子改変細胞は、高レベルで及び/または高い酵素活性を持って、組換えC1−INH融合タンパク質を産生することができる。いくつかの実施形態において、所望の細胞は、細胞培養条件下(例えば、標準的な大規模浮遊液または接着培養条件)で培養されるようになると、約5ピコグラム/細胞/日またはそれを超える(例えば、約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または100ピコグラム/細胞/日を超超える)量でC1−INH融合タンパク質を産生することができる。いくつかの実施形態において、所望の細胞は、細胞培養条件下(例えば、標準的な大規模浮遊液または接着培養条件)で培養されるようになると、約5〜100ピコグラム/細胞/日(例えば、約5〜90ピコグラム/細胞/日、約5〜80ピコグラム/細胞/日、約5〜70ピコグラム/細胞/日、約5〜60ピコグラム/細胞/日、約5〜50ピコグラム/細胞/日、約5〜40ピコグラム/細胞/日、約5〜30ピコグラム/細胞/日、約10〜90ピコグラム/細胞/日、約10〜80ピコグラム/細胞/日、約10〜70ピコグラム/細胞/日、約10〜60ピコグラム/細胞/日、約10〜50ピコグラム/細胞/日、約10〜40ピコグラム/細胞/日、約10〜30ピコグラム/細胞/日、約20〜90ピコグラム/細胞/日、約20〜80ピコグラム/細胞/日、約20〜70ピコグラム/細胞/日、約20〜60ピコグラム/細胞/日、約20〜50ピコグラム/細胞/日、約20〜40ピコグラム/細胞/日、約20〜30ピコグラム/細胞/日)の範囲の量でC1−INH融合タンパク質を産生することができる。
本発明による遺伝子改変細胞を用いて組換えC1−INH融合タンパク質を産生させるのに、様々な細胞培養培地及び条件を使用することができる。例えば、組換えC1−INH融合タンパク質は、血清含有培地でも無血清培地でも産生させることができる。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質は、無血清培地で産生される。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質は、動物質を含まない培地、すなわち動物由来成分が入っていない培地で産生される。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質は、化学的限定培地で産生される。本明細書中使用される場合、「化学的限定栄養培地」という用語は、実質的に全ての化学成分が既知である培地を示す。いくつかの実施形態において、化学的限定栄養培地は、動物由来成分、例えば血清、血清由来タンパク質(例えば、アルブミンまたはフェチュイン)、及び他の成分などを含まない。場合によっては、化学的限定培地は、1種または複数のタンパク質(例えば、タンパク質成長因子またはサイトカイン)を含む。場合によっては、化学的限定栄養培地は、1種または複数のタンパク質加水分解産物を含む。他の場合では、化学的限定栄養培地は、無タンパク質培地、すなわち、タンパク質も、加水分解産物も、未知の組成の成分も含まない、無血清培地である。
本明細書中記載される様々な方法に従って産生されたC1−INH融合タンパク質を精製または単離するのに、様々な方法を使用することができる。いくつかの実施形態において、発現したC1−INH融合タンパク質は、培地に分泌され、したがって、精製プロセスの第一ステップとして、細胞及び他の固形分を、例えば、遠心または濾過により、除去する場合がある。あるいはまたはこれに加えて、発現したC1−INH融合タンパク質は、宿主細胞の表面に結合している。この実施形態では、ポリペプチドまたはタンパク質を発現する宿主細胞を、精製のため溶解させる。哺乳類宿主細胞の溶解は、当業者に周知の任意の数の手段により達成することができ、そのような手段として、ガラスビーズによる物理的破壊、及び高pH条件への曝露が挙げられる。
本発明はさらに、本明細書中記載される組換えC1−INH融合タンパク質及び生理学的に許容される担体または賦形剤を含有する医薬組成物を提供する。担体及び組換えC1−INH融合タンパク質は、滅菌されていることが可能である。配合は、投与様式に適合していなければならない。
本明細書中記載される組換えC1−INH融合タンパク質(または本明細書中記載される組換えC1−INH融合タンパク質を含有する組成物もしくは薬剤)は、任意の適切な経路で投与される。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、全身投与される。全身投与は、静脈内、皮内、頭蓋内、くも膜下腔内、吸入、経皮(外用)、眼内、筋肉内、皮下、筋肉内、経口、及び/または経粘膜投与が可能である。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、皮下投与される。本明細書中使用される場合、「皮下組織」という用語は、皮膚のすぐ真下にある緩い不規則な結合組織の層と定義される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部をはじめとする領域(これらに限定されない)に組成物を注射することにより、行うことができる。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、経口投与される。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、頭蓋内投与される。いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、くも膜下腔内投与される。所望であれば、複数の経路を同時に利用することができる。
いくつかの実施形態において、組成物は、治療上有効量で及び/または特定の所望の結果と(例えば、補体関連型慢性疾患、例えばHAEの予防と)関連する投薬レジメンに従って、投与される。
いくつかの実施形態において、組換えC1−INH融合タンパク質は、補体関連型疾患の治療に現在使用されている1種または複数の既知の治療薬(例えば、コルチコステロイド)と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、既知の治療薬(複数可)は、その薬の標準または承認された投薬レジメン及び/または投薬計画に従って投与される。いくつかの実施形態において、既知の治療薬(複数可)は、その薬の標準または承認された投薬レジメン及び/または投薬計画と比較した場合に改変されているレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態において、そのような改変レジメンは、1つまたは複数の単位用量の量が改変されている(例えば、減量または増量された)という点で、及び/または投薬の頻度が改変されている(例えば、単位用量間の1つまたは複数の間隔が延長されており、その結果、頻度が低下している、あるいは間隔が短縮されており、その結果、頻度が高くなる)という点で、標準または承認された投薬レジメンと異なっている。
好適な実施形態は、慢性障害の治療である。
この実施例は、様々な例示融合タンパク質構築物及びそのような融合タンパク質構築物の哺乳類細胞での一過性またはスケールアップ発現を例示する。以下に示すとおり、野生型または変異Fc部分を、全長(1〜478アミノ酸)または切断型(98〜478アミノ酸)ヒトC1阻害因子と融合させる。
N末端IgG1 Fcを持つ全長C1阻害因子の融合タンパク質を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する(Fc部分を角括弧で括ってある):
[DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号11)。
[DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号12)。
[DKTHTCPPCPAPE《AA》GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号13)。
[DKTHTCPPCPAPE《AA》GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号14)。
[ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号32)。
[ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号33)。
[ESKYGPPCP《P》CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号15)。
[ESKYGPPCP《P》CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号16)。
FreeStyle(商標)293−F細胞(ヒト胚性腎臓細胞浮遊液、Invitrogen、カタログ番号R790−07)、FreeStyle(商標)CHO−S細胞(チャイニーズハムスター卵巣細胞浮遊液、Invitrogen、カタログ番号R800−07)、及びHT1080細胞を、様々なC1阻害因子融合プラスミド(N−hFc、N−hFcLALA、及びN−hFcIgG4m)で形質移入し、及び対照としてDNAの形質移入を行わなかった。
FreeStyle(商標)293−F細胞を、LALA−C1阻害因子融合プラスミド(全長及び切断型C1の両方)ならびにIgG4m−C1阻害因子融合プラスミド(全長及び切断型C1)で形質移入した。形質移入は、上記のとおり293−FreeStyle(商標)MAX試薬を用いて行った。
全長C1阻害因子を持つFc融合物は、天然の組換えC1よりも高いレベルで一貫して発現する。切断型C1阻害因子を持つFc融合物は、天然の組換えC1阻害因子と同様に発現する。タンパク質の重大なクリッピングは、試験した構築物のどれに対しても、どの宿主細胞培養試料でも観察されなかった。
Fc−C1阻害因子融合タンパク質を特性決定するため、融合タンパク質を、最初に、タンパク質Aカラムを含むプロセスを用いて精製した。例示の精製の結果を図3に示す。
C1阻害因子融合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィーを、以下の例示条件下で行った:カラム:Tosoh G3000swxl;移動相緩衝液:0.2Mのリン酸ナトリウム、pH6.8;流速:0.5mL/分
結果
Fc新生児受容体(FcRN)との結合は、分子の再循環を可能にし、Fc融合タンパク質のin vivo血清中半減期の延長を招く。再循環は、分子が受動的に細胞に取り込まれてエンドソームのpHが下がることとして起こる。これにより、分子のFc部分とFcRNの結合がもたらされる。FcRNが再循環して細胞表面にもどると、pHは中性になり、タンパク質は、再び血漿に放出される。
FcRn(Sino Biological Incまたは自家製BD1)を、酢酸緩衝液pH5.0(Cat#BR−1003−51)に10μg/mLで希釈する。
流速:10μl/分
最終カップリングシグナル354Ru
泳動緩衝液:PBS−P+、pHを6.0にする
流速30μL/分での会合300秒及び解離600秒
25mMのトリス、150mMのNaCl、pH8.0で再生
野生型Fc分子は、本発明の目的にとっては望ましくない様々な量のエフェクター機能、例えば、補体カスケードを活性化する能力、ADCC活性、及び/または特定のFc受容体と結合する能力を有する。本発明のC1−INH融合タンパク質を必要としている患者は補体関連型疾患を患っており、したがって、Fcドメインに関連するエフェクター機能を低下させまたは排除することは、本発明の目的である。本明細書中開示されるC1−INH Fc融合構築物は、好ましくは、エフェクター機能を低下させまたは排除する。C1−INH Fc融合構築物は、好ましくは、補体活性化、ADCC、及び/またはFcγ受容体を減少または排除する。エフェクター機能は、C1qとの結合により、同じく、Fcγ受容体との結合により測定することができる。
使用したC1q結合ELISAプロトコルは、以下のとおりであった:
・タンパク質をマキシソーププレートに塗布し、50mMの炭酸緩衝液、pH9.6、O/N中、4℃で、100μg/mLから0μg/mLまで力価測定した
・ELISA洗浄緩衝液(PBS/0.05%TWEEN−20)で3回洗浄
・2μg/mLのC1q含有アッセイ緩衝液(PBS/0.05%TWEEN−20/0.1%魚類ゼラチン)を加え、室温で2時間インキュベートする
・ELISA洗浄緩衝液(PBS/0.05%TWEEN−20)で3回洗浄
・抗C1q−HRP抗体(Thermo PA1−84324)を4μg/mLで加え、室温で1時間インキュベートする
・ELISA洗浄緩衝液(PBS/0.05%TWEEN−20)で3回洗浄
・室温で15分間のTMB
・OD450を読む
FcγR1の細胞外ドメインとの結合を、表面プラズモン共鳴(SPR)により、ビアコアシステムを用いて測定した。ビアコア捕捉アプローチを、図7に示す。アッセイの設定は以下のとおりであった:
HBS−P+を測定緩衝液として使用
CM5上の抗His(GE、抗Hisキット)を16000Ruまでカップリングさせる
FcγRI(5μg/mL、R&D system)について、捕捉レベルは約350Ru
陽性対照:N−hFc−C1−INHを、HBS−P+緩衝液に希釈して、12.5、6.25、3.175、1.59、及び0.79nMにする
他の試料(N−hFcIgG4m−C1 Inh、N−hFcIgG4m−C1−INH Tr、N−hFcLala−C1−INH、及びN−hFclala−C1−INH Tr)は、HBS−P+緩衝液に希釈して、100、50、25、12.5、6.25nMにする。
捕捉:10μl/mLで12秒の注入
捕捉安定化:30秒
会合:流速30μl/mLで300秒
解離:流速30μl/mLで600秒
再生:10mMのリン酸、500mMのNaCl、pH2.5を用いて30μl/mLで40秒
C1阻害因子は、多くの酵素の、凝固、接触、及び補体経路を阻害することができ、したがって、HAE、AMR、NMOSD、及びPNHなどの疾患の治療で有用である。
この方法は、図8のPK試験用に作られたエフェクターデッドFc構築物を試験するのに用いた。ELISAプロトコルは以下のとおりであった:
・60μLの希釈C1−INH+12μLのビオチン−C1s
○室温で30分間インキュベーション
・50μLの複合体をストレプトアビジンコーティングしたプレートに移す
○室温で10分間インキュベーション、5回洗浄
・50μLの抗C1−INH−HRPを加える
○室温で60分間インキュベーション、5回洗浄
・100μLのTMB基質を加える
○室温で15分間インキュベーション、
・100μLの停止溶液(4%HCl)を加える
・OD450で読む
C1s+/−C1−INHによる比色測定用ペプチドのC1s切断を阻害する能力についてエフェクターデッド構築物が持つ能力を、R&D systemsのC1阻害因子用活性アッセイを用いて試験した。アッセイプロトコルは、https://www.rndsystems.com/products/human−serpin−g1−c1−inhibitor−plasma−protein−cf_2488−piで見ることができる。
・rhC1s:0.010μg(1.33nM)
・hセルピンG1曲線:100、50、25、5、2.5、1.25、0.625、0.2、0.04、及び0.01nM
・基質:100μM
・DTNB:100μM
25μLのC1阻害因子+25μLのC1s(2μg/mL)
室温で30分間インキュベーション
複合体をアッセイ緩衝液で5倍に希釈
50μLの希釈C1−INH−C1s複合体+50μLの基質(500uM)/反応体(200uM)
室温で15分間インキュベーション
OD405で読む
図10A及び図10Bは、補体第二経路及び補体古典経路の溶血アッセイの図式的外観を示す。Seelen et al., J. of Immun. Methods, 296:187−198 (2005)。図11A、図11B、及び図11Cは、血漿由来C1−INH、IgG1 LALA Fc切断型C1阻害因子、IgG1 LALA全長C1阻害因子、及び血漿由来C1−INHの2種の製剤が発揮する溶血活性、例えば、補体の第二経路の活性化度合いの比較を示す。融合タンパク質は、血漿由来C1阻害因子と同様に挙動した。
Fc−C1阻害因子融合タンパク質は全て、C1s活性を阻害することができる。Fc融合タンパク質、特に、全長C1阻害因子融合タンパク質は、一貫して、血漿由来C1阻害因子よりも高い親和性でC1sを阻害する。全長及び切断型C1阻害因子融合タンパク質(例えばFc IgG1 LALAを用いて作られたもの)の両方とも、in vitroで赤血球の溶解を阻害することができる。
図12は、血漿由来C1阻害因子及び組換えC1−INHと比較した、エフェクターデッド融合構築物のウサギPK試験の例示結果を示す。IV投与された血漿由来C1−INHは、単相性血清中濃度時間特性を示す。IV投与されたrhC1−INH−IgG構築物は、二相性血清中濃度時間特性を示す。初期急速クリアランス相(約2時間)は、受容体介在性細胞取り込みを示していた。構築物は、第二のより遅いクリアランス相を示した。
A.アルブミン−C1阻害因子融合発現構築物
複数のアルブミンタンパク質構築物を生成させた。これらの構築物の模式図を図13A〜Fに示す。全長C1−INHのN末端と直接連結した全長及び切断型C1−INHのN末端と直接連結したアルブミンまたはアルブミンのD3ドメインを含む融合構築物発現ベクターを作った。全長C1−INHのN末端と直接連結した全長及び切断型C1−INHのN末端とリンカーを用いて連結したアルブミンまたはアルブミンのD3ドメインを含む融合構築物発現ベクターも作った。これらの構築物により発現する融合タンパク質のアミノ酸配列は、以下の配列を含むものであった:
[MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号18)。
[MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号19)。
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[METPAQLLFLLLLWLPDTTGVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号22)。
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[MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]《GGG》GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号24)。
[METPAQLLFLLLLWLPDTTGVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]《GGG》NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号25)。
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[MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYKTTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]《GGGGSGGGGS》GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号29)。
[METPAQLLFLLLLWLPDTTGVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]《GGGGSGGGGS》NPNATSSSSQDPESLQDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATKITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号30)。
[METPAQLLFLLLLWLPDTTGVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASRAALGL]《GGGGSGGGGS》GSFCPGPVTLCSDLESHSTEAVLGDALVDFSLKLYHAFSAMKKVETNMAFSPFSIASLLTQVLLGAGENTKTNLESILSYPKDFTCVHQALKGFTTKGVTSVSQIFHSPDLAIRDTFVNASRTLYSSSPRVLSNNSDANLELINTWVAKNTNNKISRLLDSLPSDTRLVLLNAIYLSAKWKTTFDPKKTRMEPFHFKNSVIKVPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVGQLQLSHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEKLEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLTEDPDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAISVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(配列番号31)。
FreeStyle(商標)CHO−S細胞を、上記のとおり、これらの融合構築物発現ベクターで形質移入した。CHO−GS安定プールを調製し、収集及び分析用CMの生成に使用した。細胞を、2×106細胞/mLで播種し、33℃で4日間インキュベートした。グルタミンを3日目に補充した。
カラム:Tosoh G3000swxl
泳動相緩衝液:0.2Mのリン酸ナトリウム、pH6.8
流速:0.5mL/分
試料:
HSA D3 C1−INHは30μg注入
HSA C1−INHは35μg注入
BSA対照は40μg注入
C1−INH IgG1 LALA Fcは35μg注入
当業者なら、定法にすぎない実験を使用して、本明細書中記載される本発明の特定の実施形態との多くの等価物が分かるだろうし、確認することができる。本発明の範囲は、上記の説明に限定されることを意図せず、そうではなくて、以下の請求項に記載されるとおりである:
Claims (87)
- 以下:
ヒトC1阻害因子ポリペプチド;及び
Fcドメイン
を含む、融合タンパク質。 - 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号1を有する全長ヒトC1阻害因子と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号1を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号1と比較して切り詰められている、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号2と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項4に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列を含む、請求項4に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドのN末端と結合している、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、ヒトIgG1のFcドメインである、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、配列番号3と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項8に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、L234A及び/またはL235A変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項10に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、前記融合タンパク質の半減期を延長する1つまたは複数の変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記1つまたは複数の変異は、ヒトIgG1のThr250、Met252、Ser254、Thr256、Thr307、Glu380、Met428、His433、及び/またはAsn434に対応する1つまたは複数の位置から選択される、請求項12に記載の融合タンパク質。
- 前記1つまたは複数の変異は、H433K及び/またはN434Fから選択される、請求項12に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、配列番号5〜8のいずれか1つと少なくとも80%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項12から14のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、配列番号5〜8のいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項14に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、ヒトIgG4のFcに由来する、請求項1から7のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、配列番号9と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項17に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、S241P変異を含む、請求項18に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、配列番号10のアミノ酸配列を含む、請求項19に記載の融合タンパク質。
- 配列番号11と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 配列番号12と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 配列番号13と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 配列番号14と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 配列番号15と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 配列番号16と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、または配列番号16から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、ADCC活性を低下させる、または排除する変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、CDC活性を低下させる、または排除する変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、FcγR結合を低下させる、または排除する変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記Fcドメインは、FcγRエフェクター機能を低下させる、または排除する変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記組換えヒトC1阻害因子Fc融合タンパク質は、C1q結合を低下させる、または排除する変異を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- C1q結合を低下させる、または排除する前記変異は、前記Fcドメイン中にある、請求項32に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドと前記Fcドメインの間にリンカーをさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記リンカーは、3〜100のアミノ酸を含むペプチドである、請求項34に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、C1r及び/またはC1sプロテアーゼ活性を阻害及び/または不活性化する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、in vitroで赤血球の溶解を阻害する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、血漿由来ヒトC1阻害因子よりも長い半減期を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも4日間の半減期を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも5日間の半減期を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも6日間の半減期を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも7日間の半減期を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、一価である、先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、二量体である、請求項1から42のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 以下:
ヒトC1阻害因子ポリペプチド;及び
アルブミンポリペプチド
を含む、融合タンパク質。 - 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号1を有する全長ヒトC1阻害因子と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項45に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号1を含む、請求項46に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号1と比較して切り詰められている、請求項45から47のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号2と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項48に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列を含む、請求項49に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンは、前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドのN末端と結合している、請求項45から50のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの1つまたは複数のドメインを含む、請求項45から51のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンのD3ドメインを含む、請求項52に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、配列番号20と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項53に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、配列番号20のアミノ酸配列を含む、請求項54に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、配列番号17と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項45から52のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、配列番号17のアミノ酸配列を含む、請求項56に記載の融合タンパク質。
- 配列番号18と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項45から57のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 配列番号19と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項45から57のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 配列番号21と少なくとも少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項45から57のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 配列番号22と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、または95%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項45から57のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号21、または配列番号22から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項44から56のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、FcRNと結合する、請求項45から62のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、C1エステラーゼ活性を阻害する、請求項45から63のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、in vitroで赤血球の溶解を阻害する、請求項45から64のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒトC1阻害因子ポリペプチドと前記アルブミンポリペプチドの間にリンカーをさらに含む、請求項45から65のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記リンカーは、3〜100のアミノ酸を含むペプチドである、請求項66に記載の融合タンパク質。
- 前記リンカーは、配列GGGを含む、請求項67に記載の融合タンパク質。
- 前記リンカーは、配列番号27の配列を含む、請求項67に記載の融合タンパク質。
- 前記アルブミンポリペプチドは、464His、510His、535His、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される1つまたは複数の変異を含まない、請求項45から69のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、血漿由来ヒトC1阻害因子よりも長い半減期を有する、請求項45から70のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも4日間の半減期を有する、請求項45から71のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも5日間の半減期を有する、請求項45から71のいずれか1項に記載の組換えヒトC1阻害因子アルブミン融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも6日間の半減期を有する、請求項45から71のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、少なくとも7日間の半減期を有する、請求項45から71のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 先行請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸。
- 請求項76に記載の核酸を含む、細胞。
- 哺乳類細胞である、請求項77に記載の細胞。
- 前記哺乳類細胞は、ヒト細胞である、請求項78に記載の細胞。
- 前記哺乳類細胞は、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)である、請求項78に記載の細胞。
- 前記細胞は、グリコシル化を修飾するように改変されている、請求項77から80のいずれか1項に記載の細胞。
- 前記細胞は、シアリル化を改善するように改変されている、請求項81に記載の細胞。
- 融合タンパク質の製造方法であって、請求項77から82のいずれか1項に記載の細胞を培養するステップを含む、前記方法。
- シアリル化を改善するように改変された細胞により産生される、請求項1から75のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 請求項1から75及び84のいずれか1項に記載の融合タンパク質ならびに薬学上許容される担体を含む、医薬組成物。
- 補体関連型障害の治療方法であって、治療を必要としている対象に、請求項85に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
- 前記補体関連型障害は、遺伝性血管性浮腫、抗体関連型拒絶、視神経脊髄炎スペクトラム疾患、外傷性脳損傷、脊椎損傷、虚血性脳傷害、火傷、中毒性表皮壊死症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、脳卒中、慢性炎症性脱髄性多発神経炎(CIDP)、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチーから選択される、請求項86に記載の方法。
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BR112018010160A8 (pt) * | 2015-11-19 | 2019-02-26 | Shire Human Genetic Therapies | inibidor da c1 esterase humana recombinante e usos do mesmo |
US20190183991A1 (en) | 2016-08-23 | 2019-06-20 | Csl Behring Gmbh | Method of preventing acute attacks of hereditary angioedema associated with c1 esterase inhibitor deficiency |
EP3634466A4 (en) * | 2017-06-06 | 2021-03-24 | Relinia, Inc. | MONOCATENARY TNF RECEPTOR 2 AGONIST FUSION PROTEINS |
CN108743968B (zh) * | 2017-06-20 | 2022-04-19 | 成都百利多特生物药业有限责任公司 | 半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物(tdc)定点偶联位点筛选 |
EP3866860A4 (en) * | 2018-10-15 | 2022-07-13 | The Regents Of The University Of California | CELLS DEFICIENT IN COMPONENT 1S (C1S) OF COMPLEMENT FOR THE PRODUCTION OF VACCINES AND BIOPHARMACEUTICAL PROTEINS |
EP3983449A1 (en) * | 2019-06-11 | 2022-04-20 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Adeno associated viral vector delivery of antibodies for the treatment of disease mediated dysregulated plasma kallikrein |
CN111087475B (zh) * | 2019-12-25 | 2022-07-08 | 东莞市东阳光生物药研发有限公司 | Fgf21融合蛋白及抑制其降解的方法 |
CN113493519B (zh) * | 2020-03-19 | 2022-12-27 | 浙江道尔生物科技有限公司 | 一种半衰期显著延长的治疗眼部血管新生疾病的融合蛋白 |
JP2023551193A (ja) | 2020-11-20 | 2023-12-07 | ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー | 抗体関連型拒絶反応を処置するための方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992022320A1 (en) * | 1991-06-14 | 1992-12-23 | Genentech, Inc. | C1 inhibitor variants and treating inflammatory response with c1 inhibitor |
JP2003522200A (ja) * | 2000-02-11 | 2003-07-22 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 抗体ベース融合タンパク質の循環系内半減期の増強 |
JP2005501514A (ja) * | 2000-12-12 | 2005-01-20 | メディミューン,インコーポレイテッド | 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途 |
WO2011108714A1 (ja) * | 2010-03-04 | 2011-09-09 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
JP2014503209A (ja) * | 2010-12-22 | 2014-02-13 | テバ ファーマシューティカルズ オーストラリア プロプライアタリー リミティド | 改善された半減期を有する修飾された抗体 |
Family Cites Families (46)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4634665A (en) | 1980-02-25 | 1987-01-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US5179017A (en) | 1980-02-25 | 1993-01-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4656134A (en) | 1982-01-11 | 1987-04-07 | Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University | Gene amplification in eukaryotic cells |
US5149636A (en) | 1982-03-15 | 1992-09-22 | Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US4956288A (en) | 1988-04-22 | 1990-09-11 | Biogen, Inc. | Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA |
US5047335A (en) | 1988-12-21 | 1991-09-10 | The Regents Of The University Of Calif. | Process for controlling intracellular glycosylation of proteins |
US5096816A (en) | 1990-06-05 | 1992-03-17 | Cetus Corporation | In vitro management of ammonia's effect on glycosylation of cell products through pH control |
FR2672895B1 (fr) | 1991-02-15 | 1995-05-12 | Transgene Sa | Procede de purification d'une proteine fortement glycosylee. |
US5705364A (en) | 1995-06-06 | 1998-01-06 | Genentech, Inc. | Mammalian cell culture process |
US6277375B1 (en) | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
US6528286B1 (en) | 1998-05-29 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Mammalian cell culture process for producing glycoproteins |
EP1276849A4 (en) * | 2000-04-12 | 2004-06-09 | Human Genome Sciences Inc | ALBUMIN FUSION PROTEINS |
MXPA05000552A (es) | 2002-07-15 | 2005-04-28 | Immunex Corp | Metodos y medios para controlar la sialilacion de proteinas producidas por celulas de mamifero. |
US8524477B2 (en) | 2002-10-29 | 2013-09-03 | Crucell Holland B.V. | Methods to obtain recombinant proteins with increased sialylation from cells that express adenovirus E1A protein, and proteins obtained thereby |
US7384754B2 (en) | 2003-10-31 | 2008-06-10 | Agilent Technologies, Inc. | Enrichment and tagging of glycosylated proteins |
CA2575756A1 (en) * | 2004-08-03 | 2006-02-16 | Biorexis Technology, Inc. | Combination therapy using transferrin fusion proteins comprising glp-1 |
GB0507123D0 (en) | 2005-04-08 | 2005-05-11 | Isis Innovation | Method |
US8163881B2 (en) | 2005-05-31 | 2012-04-24 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Immunoglobulin molecules with improved characteristics |
ES2564790T5 (es) | 2005-12-08 | 2023-08-25 | Amgen Inc | Producción mejorada de glicoproteínas usando manganeso |
US20070249014A1 (en) | 2006-02-10 | 2007-10-25 | Invitrogen Corporation | Labeling and detection of post translationally modified proteins |
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IL182956A0 (en) | 2007-05-03 | 2008-01-20 | Yeda Res & Dev | Glycan modified soluble receptors and binding proteins and their use |
AU2008310583A1 (en) | 2007-10-12 | 2009-04-16 | Sigma-Aldrich Co. Llc | Compositions and methods for improved glycoprotein sialylation |
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WO2011116291A1 (en) * | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Thrombolytic Science International | Production of human c1 inhibitor in human cells |
US20120010013A1 (en) * | 2010-06-19 | 2012-01-12 | Fellows Edwin E | Swing assistant device |
EP2603526A1 (en) | 2010-08-13 | 2013-06-19 | Medimmune Limited | Monomeric polypeptides comprising variant fc regions and methods of use |
WO2012107572A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | Leiden University Medical Center | Method for the purification of a glycan and/or a glycoconjugate by chromatography using a stationary phase comprising cotton |
US8580922B2 (en) | 2011-03-04 | 2013-11-12 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Peptide linkers for polypeptide compositions and methods for using same |
PT2691417T (pt) * | 2011-03-29 | 2018-10-31 | Roche Glycart Ag | Variantes de fc de anticorpos |
PL2726092T3 (pl) * | 2011-06-28 | 2019-11-29 | Inhibrx Lp | Polipeptydy fuzyjne serpiny i sposoby ich stosowania |
DK2729482T3 (en) | 2011-07-08 | 2018-05-07 | Merck Sharp & Dohme | PROCEDURE FOR CLEANING FC-FUSION PROTEIN |
CN102890790B (zh) * | 2011-07-22 | 2014-04-30 | 鸿富锦精密工业(深圳)有限公司 | 扩展卡 |
WO2013093760A2 (en) | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Grifols, S.A. | Compositions, methods, and kits for preparing sialylated recombinant proteins |
US9452203B2 (en) * | 2011-12-22 | 2016-09-27 | Csl Behring Gmbh | Use of C1-inhibitor for the treatment of secondary edema of the central nervous system |
EP2623110A1 (en) * | 2012-01-31 | 2013-08-07 | CSL Behring GmbH | Factor XII inhibitors for the treatment of neurological inflammatory disorders |
EP2825557B1 (en) | 2012-03-16 | 2017-06-28 | The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Soluble engineered monomeric fc |
ES2664095T3 (es) | 2012-12-07 | 2018-04-18 | Pfizer Inc. | Fragmentos de anticuerpos monoméricos diseñados mediante ingeniería genética |
CA2901225C (en) * | 2013-03-08 | 2023-09-19 | Csl Behring Gmbh | Treatment and prevention of remote ischemia-reperfusion injury |
WO2014152940A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders |
EP2796145B1 (en) * | 2013-04-22 | 2017-11-01 | CSL Ltd. | A covalent complex of von willebrand factor and faktor viii linked by a disulphide bridge |
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992022320A1 (en) * | 1991-06-14 | 1992-12-23 | Genentech, Inc. | C1 inhibitor variants and treating inflammatory response with c1 inhibitor |
JP2003522200A (ja) * | 2000-02-11 | 2003-07-22 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 抗体ベース融合タンパク質の循環系内半減期の増強 |
JP2005501514A (ja) * | 2000-12-12 | 2005-01-20 | メディミューン,インコーポレイテッド | 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途 |
WO2011108714A1 (ja) * | 2010-03-04 | 2011-09-09 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
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