JP2020063307A - 抗体製剤および方法 - Google Patents

Abstract

【課題】抗体製剤および方法を提供すること。【解決手段】例えば、医薬製剤であって：（ａ）抗原に対する結合について抗体２Ａ４もしくは抗体７Ｄ８と特異的に競合する、抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のキメラもしくはヒト化バージョン、またはそれらの断片であって、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する抗体；（ｂ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；および（ｄ）約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含み、約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とする、医薬製剤が提供される。【選択図】なし

Description

関連出願
２０１１年１０月２５日に出願した米国仮出願第６１／５５１，４０６号に対する優先権を主張する。米国仮出願第６１／５５１，４０６号は、その全体が本明細書中に参考として援用される。

本発明は、免疫学および医学の技術分野に存する。

アミロイドーシスは、局所部位でまたは全身に発生し得る多くの「アミロイド沈着物」または「アミロイド斑」を形成するタンパク質線維の細胞外沈着を伴うことが多い、病原性型のアミロイドタンパク質の存在を特徴とする多数の疾患を説明する一般用語である。これらの沈着物または斑は、天然に存在する可溶性タンパク質またはペプチドから主に構成され、様々な組織部位で直径１０〜１００μｍの広範囲に及ぶ不溶性沈着物に会合する。沈着物は、直径約１０〜１５ｎｍである原線維の側方凝集体から一般に構成される。アミロイド原線維は、コンゴーレッド色素で染色した場合に、偏光中で特徴的な青リンゴ色の複屈折を生じる。一般に、これらの沈着物の原線維組成は、種々の形態のアミロイド疾患を識別する特徴である。

斑沈着物を形成するペプチドまたはタンパク質は、より大型の前駆体タンパク質から産生されることが多い。より具体的には、原線維沈着物などのアミロイド凝集体の病因は、一般に、「異常な」前駆体タンパク質が、逆平行βプリーツシートに凝集する断片にタンパク質分解切断されることが関与している。

全身性アミロイドーシスは、進行性臓器障害をもたらすミスフォールドタンパク質の組織沈着によって引き起こされる複合疾患群である。最も一般的な種類のＡＬアミロイドーシスまたは原発性アミロイドーシスは、ミスフォールド免疫グロブリン軽鎖を産生するクローン性形質細胞によって引き起こされる血液学的障害が関与する。形質細胞によるミスフォールド軽鎖の過剰産生は、ＡＬアミロイドーシスを有する個体の組織および臓器において、異常ＡＬタンパク質（アミロイド）の沈着物をもたらす。ＡＬアミロイドーシスの臨床的特徴としては、心臓、腎臓および肝臓の機能障害、胃腸障害、神経障害ならびに巨大舌を含むことができる一連の症候および臓器機能障害が挙げられる。アミロイド生成性免疫グロブリン軽鎖が臓器機能障害をもたらす機序は十分に特徴付けられていないが、アミロイド沈着物および前原線維凝集体の両方が、ＡＬアミロイドーシスを有する患者で観察される臓器に対する細胞毒性効果に寄与し得るという仮説が立てられている。ＡＬアミロイドーシスはそれ自体の疾患実体であるが、ＡＬアミロイドーシスは、多発性骨髄腫を有する患者の小サブセット（最大１５％）で同時に起こり得る。

ＡＬアミロイドーシスは、推定発生率が１，０００，０００人に８人の珍しい障害である。合衆国では毎年、ＡＬアミロイドーシスの新たな症例は、１２００〜３２００件しか報告されていない。ＡＬアミロイドーシスを有する患者の３分の２は男性であり、患者の５％未満は４０歳未満である。ＡＬアミロイドーシスの原因および起源は、依然としてほとんど解明されていない。

ＡＬアミロイドーシスを有する患者の現在の処置は、骨髄障害、すなわち、軽鎖の産生に関わる形質細胞を低減および排除し、それによりアミロイドの産生を制限および停止させることを目的とするものである。最も積極的な処置選択肢としては、許容することができる患者に対しての幹細胞移植および高用量化学療法が挙げられる。他の処置計画としては、軽鎖の産生を低減させようとして、血液学的悪性腫瘍を処置するのに使用されることが多い薬物、例えば、メルファラン、プレドニゾン、デキサメタゾンと、プロテオソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブとを組み合わせることが挙げられる。ＡＬアミロイドーシスの現在承認されている処置には、潜在的に毒性形態のアミロイド生成性タンパク質を直接標的とするものはない。

様々な形態の全身性アミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシスまたは二次性アミロイドーシスが、慢性炎症性疾患（例えば、関節リウマチおよび強直性脊椎炎）または慢性感染症（例えば、結核または骨髄炎）などの他の病気の結果として「二次的」に起こり得る。二次性アミロイドーシスでは、沈着しているアミロイドタンパク質は、急性期タンパク質血清アミロイドＡ由来のアミロイドＡタンパク質である。二次性アミロイドーシスの処置は、基礎の病気を処置することに向けられている。

したがって、ＡＡアミロイドーシスおよびＡＬアミロイドーシスを処置するための治療であって、病原性アミロイド原線維を直接標的とする治療が必要とされている。本発明は、２Ａ４および７Ｄ８抗体ならびにそれらのキメラおよびヒト化バージョンの医薬製剤を提供するものであり、これらは、ＡＬおよびＡＡアミロイドの両方に対して高親和性結合を示し、これは、病原性型のこれらのタンパク質の免疫原性エピトープが共通しているためである。

本発明は、アミロイド疾患の予防および処置に有用な抗体製剤を提供する。本発明の一態様では、医薬製剤は、（ａ）抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のキメラもしくはヒト化バージョン、または抗原に対する結合について２Ａ４もしくは７Ｄ８と特異的に競合し、および／またはＡＥＤＳ（配列番号１８）を含むエピトープに指向性を有するそれらの断片であって、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する抗体；（ｂ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；および（ｄ）約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含み、上記製剤は、約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とする。例えば、本発明の代表的な製剤は、配列番号４として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する抗体を含む。より特定的には、このような製剤は、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを有する抗体、例えば、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを有する抗体を含むことができる。

本発明のさらなる代表的な製剤は、（ａ）配列番号６、７、および８として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、配列番号９、１０、および１１として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域とを有する抗体；ならびに（ｂ）配列番号１２、７、および８として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、配列番号９、１０、および１１として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域とを有する抗体を含む。

本発明の代表的な製剤では、抗体は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１０ｍｇ／ｍＬ）の範囲内の濃度で存在するか、または約２５〜７５ｍｇ／ｍＬ（例えば、５０ｍｇ／ｍＬ）の範囲内の濃度で存在する。

本発明の他の代表的な製剤では、ヒスチジンバッファーは、約２５ｍＭの濃度で存在する。ヒスチジンバッファーは、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物を含むことができる。例えば、Ｌ−ヒスチジンは、約１６ｍＭ〜約２２ｍＭの範囲内の濃度で使用することができ、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物は、約４ｍＭ〜約８ｍＭの範囲内の濃度で使用することができる。

本発明の他の代表的な製剤では、トレハロースは、約２３０ｍＭの濃度で存在する。

本明細書に記載されるように調製された本発明の代表的な製剤は、（ａ）約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を特徴とし；（ｂ）上記製剤中で凝集体として存在する約１０％未満の上記抗体を含み；（ｃ）増量剤をさらに含み；（ｄ）滅菌されており；および／または（ｅ）凍結解凍の際に安定である。

本発明の一態様では、製剤は、（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および（ｅ）約６．５のｐＨを含む。

本発明の別の態様では、医薬製剤は、（ａ）抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）、抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）、または抗体２Ａ４もしくは抗体７Ｄ８のキメラもしくはヒト化バージョン、または抗原に対する結合について２Ａ４もしくは７Ｄ８と特異的に競合し、および／またはＡＥＤＳ（配列番号１８）を含むエピトープに指向性を有するそれらの断片である抗体であって、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する抗体；（ｂ）バッファー；（ｃ）非還元糖；および（ｄ）非イオン性界面活性剤を含む。特定の例では、開示されている製剤の抗体は、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。

本発明の別の態様では、抗体製剤は、凍結乾燥されている。例えば、代表的な凍結乾燥製剤は、（ａ）抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のヒト化バージョン、またはそれらの抗原結合断片；（ｂ）ヒスチジン；（ｃ）トレハロース；および（ｄ）ポリソルベート２０を含むことができる。凍結乾燥製剤は、再構成された場合に約６〜約７のｐＨ、例えば、再構成された場合に６．５のｐＨを有することができる。凍結乾燥製剤は、典型的には、約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇの上記抗体を含む。凍結乾燥製剤は、典型的には、約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度のポリソルベート２０を含む。再構成後、凍結乾燥製剤は、水溶液、例えば、（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および（ｅ）約６．５のｐＨを含む水溶液を生成する。代表的な凍結乾燥製剤は、滅菌水による再構成後に、約１００ｍｇの上記抗体を含む。

開示されている製剤を調製するのに使用される抗体をコードする核酸も提供される。例えば、このような核酸としては、配列番号１３の抗体軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸、および配列番号１４〜１６のいずれか１つの抗体重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸が挙げられる。例えば、配列番号１９および配列番号２０（これは、配列番号１９と同一であり、シグナルペプチドをコードする配列をさらに含む）として示されるヌクレオチド配列は、それぞれ、配列番号１３のヒト化２Ａ４軽鎖をコードする。別の例として、配列番号２２および配列番号２３（これは、配列番号２２と同一であり、シグナルペプチドをコードする配列をさらに含む）として示されるヌクレオチド配列は、それぞれ、配列番号１５のヒト化２Ａ４重鎖をコードする。

抗体の産生のために、開示されている核酸を単独でまたは組み合わせて（例えば、ヒト化２Ａ４軽鎖をコードする核酸と、ヒト化２Ａ４重鎖をコードする核酸との組み合わせ）ベクターに含ませてもよい。例えば、ベクターは、配列番号１３〜１６、２１、および２４のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む核酸；配列番号１９〜２０および２２〜２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む核酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。本発明の代表的なベクターとしては、（ａ）配列番号１３または２１として示されるヒト化２Ａ４軽鎖と、配列番号１５または２４として示されるヒト化２Ａ重鎖とをコードする核酸配列を含むベクター；（ｂ）配列番号１９のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２２のヌクレオチド配列を有する核酸とを含むベクター；および（ｃ）配列番号２０のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２３のヌクレオチド配列を有する核酸とを含むベクターが挙げられる。

宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）であって、そのゲノムに、本明細書に開示されている核酸の１つ以上が安定的に組み込まれている宿主細胞も提供される。例えば、宿主細胞は、そのゲノムに、配列番号１３〜１６、２１、および２４のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む安定的に取り込まれている核酸；配列番号１９〜２０および２２〜２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む安定的に取り込まれている核酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。本発明の代表的な宿主細胞としては、（ａ）配列番号１３または２１として示されるヒト化２Ａ４軽鎖と、配列番号１５または２４として示されるヒト化２Ａ重鎖とをコードする核酸配列を含む宿主細胞；（ｂ）配列番号１９のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２２のヌクレオチド配列を有する核酸とを含む宿主細胞；および（ｃ）配列番号２０のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２３のヌクレオチド配列を有する核酸とを含む宿主細胞が挙げられる。

本発明はまた、医薬製剤を調製する方法を提供する。本発明の一態様では、このような方法は、（ａ）哺乳動物細胞であって、そのゲノムに、ネズミ、キメラもしくはヒト化２Ａ４抗体またはネズミ、キメラもしくはヒト化７Ｄ８抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸が安定的に組み込まれている上記細胞を、上記細胞が上記抗体を細胞培養培地に分泌するように培養し、細胞培養培地から上記抗体を精製すること；（ｂ）ならびに、（ｉ）抗原に対する結合について抗体２Ａ４もしくは抗体７Ｄ８と特異的に競合する、抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のキメラもしくはヒト化バージョン、またはそれらの断片であって、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する抗体；（ｉｉ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｉｉｉ）約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；および（ｉｖ）約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含み、約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とする製剤を調製することを含む。例えば、本発明の一態様では、哺乳動物細胞であって、そのゲノムに、ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸が安定的に組み込まれている哺乳動物細胞を培養する。この目的に有用な哺乳動物細胞としては、（ａ）宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号１３または２１として示されるヒト化２Ａ４軽鎖と、配列番号１５または２４として示されるヒト化２Ａ重鎖とをコードする核酸配列が安定的に組み込まれている宿主細胞；（ｂ）宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号１９のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２２のヌクレオチド配列を有する核酸とが安定的に組み込まれている宿主細胞；および（ｃ）宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号２０のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２３のヌクレオチド配列を有する核酸とが安定的に組み込まれている宿主細胞が挙げられる。本発明のいくつかの態様では、医薬製剤を調製する開示されている方法は、上記製剤中の抗体の少なくとも１つの特性、例えば、物理的安定性、化学的安定性および／または生物学的活性を評価するさらなる工程を含む。

また、アミロイドタンパク質原線維の存在を特徴とするアミロイドーシスを有するまたはこれを有するリスクがあるヒト患者を治療的または予防的に処置する方法であって、有効投与量の本発明の製剤を上記患者に投与することを含む方法がさらに提供される。処置に適した患者は、アミロイドＡタンパク質原線維の存在を特徴とするアミロイドＡアミロイドーシス、またはアミロイド軽鎖型タンパク質原線維の存在を特徴とするＡＬアミロイドーシスなどのアミロイド疾患を有する。ＡＬアミロイドーシスを有する患者は、Ｂリンパ球系列の関連悪液質、例えば悪性腫瘍、例えば多発性骨髄腫に罹患していてもよい。

開示されている治療的および予防的処置方法は、併用療法（すなわち、開示されている抗体製剤を１つ以上のさらなる原薬と共に投与すること）を含み、それにより相乗的な結果を生じさせる。２つ以上の原薬を任意の順序で一斉または逐次投与する、すなわち、本発明の製剤を、第２の原薬の投与前に、第２の原薬と同時に、または第２の原薬の投与後に投与する。例えば、本発明の製剤をメルファランと組み合わせて同時または連続投与することができる。別の例として、本発明の製剤をボルテゾミブ、メルファラン、レナリドミドおよびカーフィルゾミブの１つ以上と組み合わせて同時または連続投与することができる。

開示されている治療的および予防的処置方法にしたがって、本発明の製剤を、複数回投与量で、例えば、約毎日〜約毎年の範囲内の頻度で、例えば、約隔週〜約３カ月毎の範囲内の頻度で、または例えば１カ月に１回投与することができる。一態様では、本発明の抗体製剤を約１０ｍｇ〜約５０００ｍｇの原薬の範囲内の用量で静脈内投与する。例えば、製剤を約３０ｍｇ〜約２５００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬の範囲内の用量で、約隔週〜約隔月の範囲内の頻度で投与することができる。開示されている方法に使用される代表的な投与量としては、３０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇ、１０００ｍｇ、２０００ｍｇ、および２５００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬が挙げられる。

本発明の一態様では、アミロイド原線維、沈着物または前原線維凝集体の存在を特徴とする軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシスを有するまたはこれを有するリスクがあるヒト患者を治療的または予防的に処置する方法は、（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および（ｅ）約６．５のｐＨを含む有効投与量の医薬製剤を上記患者に投与することを含む。このような方法では、投与量は、典型的には、約毎週〜約四半期毎（quarterly）の頻度で（例えば、２８
日毎に１回）静脈内または皮下投与される約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの上記抗体（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇ、または約８ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ）である。

本発明はさらに、医薬製品であって、（ａ）粉末形態の約１００ｍｇの抗体を含むバイアル；（ｂ）上記抗体の再構成説明書；および（ｃ）注入用の再構成抗体を調製するための説明書を含み、（ｉ）上記抗体が、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含み、（ｉｉ）再構成説明書が、注射用水によって抽出可能体積１０ｍＬに再構成することを要求する医薬製品を提供する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
医薬製剤であって：
（ａ）抗原に対する結合について抗体２Ａ４もしくは抗体７Ｄ８と特異的に競合する、抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のキメラもしくはヒト化バージョン、またはそれらの断片であって、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する抗体；
（ｂ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；および
（ｄ）約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０
を含み、
約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とする、医薬製剤。
（項目２）
前記抗体が抗体２Ａ４のヒト化バージョンである、項目１に記載の製剤。
（項目３）
前記抗体が、配列番号４として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１に記載の製剤。
（項目４）
前記抗体が、配列番号５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目１に記載の製剤。
（項目５）
前記抗体が、配列番号５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目３に記載の製剤。
（項目６）
前記抗体が、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、項目５に記載の製剤。
（項目７）
前記抗体が、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、項目６に記載の製剤。
（項目８）
前記抗体が、配列番号６、７、および８として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、配列番号９、１０、および１１として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域とを含む、項目１に記載の製剤。
（項目９）
前記抗体が、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８によって産生される抗体７Ｄ８のヒト化またはキメラバージョンである、項目１に記載の製剤。
（項目１０）
前記抗体が、配列番号１２、７、および８として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、配列番号９、１０、および１１として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域とを含む、項目１に記載の製剤。
（項目１１）
前記抗体が、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する、項目１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
（項目１２）
前記抗体が、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目１１に記載の製剤。
（項目１３）
前記抗体が、約２５〜７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する、項目１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
（項目１４）
前記抗体が、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目１３に記載の製剤。
（項目１５）
前記ヒスチジンバッファーが、約２５ｍＭの濃度で存在する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の製剤。
（項目１６）
前記ヒスチジンバッファーが、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物を含む、項目１５に記載の製剤。
（項目１７）
前記Ｌ−ヒスチジンが、約１６ｍＭ〜約２２ｍＭの範囲内の濃度で存在し、前記Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物が、約４ｍＭ〜約８ｍＭの範囲内の濃度で存在する、項目１６に記載の製剤。
（項目１８）
前記トレハロースが、約２３０ｍＭの濃度で存在する、項目１〜１７のいずれか一項に記載の製剤。
（項目１９）
約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を特徴とする、項目１〜１８のいずれか一項に記載の製剤。
（項目２０）
前記抗体の約１０％未満が、前記製剤中で凝集体として存在する、項目１〜１９のいずれか一項に記載の製剤。
（項目２１）
増量剤をさらに含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の製剤。
（項目２２）
無菌である、項目１〜２１のいずれか一項に記載の製剤。
（項目２３）
凍結解凍の際に安定である、項目１〜２２のいずれか一項に記載の製剤。
（項目２４）
医薬製剤であって：
（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；
（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；
（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および
（ｅ）約６．５のｐＨ
を含む、医薬製剤。
（項目２５）
前記抗体が、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、項目２４に記載の製剤。
（項目２６）
医薬製剤であって：
（ａ）抗原に対する結合について抗体２Ａ４もしくは抗体７Ｄ８と特異的に競合する抗体であって、該抗体は、抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）、抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）、または抗体２Ａ４もしくは抗体７Ｄ８のキメラもしくはヒト化バージョン、またはそれらの断片であり、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する、抗体；
（ｂ）バッファー；
（ｃ）非還元糖；および
（ｄ）非イオン性界面活性剤
を含む、医薬製剤。
（項目２７）
抗体の凍結乾燥製剤であって：
（ａ）抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のヒト化バージョン、またはそれらの抗原結合断片；
（ｂ）ヒスチジン；
（ｃ）トレハロース；および
（ｄ）ポリソルベート２０
を含む、抗体の凍結乾燥製剤。
（項目２８）
再構成された場合に約６〜約７のｐＨを有する、項目２７に記載の凍結乾燥製剤。
（項目２９）
再構成された場合に約６．５のｐＨを有する、項目２８に記載の凍結乾燥製剤。
（項目３０）
約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇの前記抗体を含む、項目２７に記載の凍結乾燥製剤。
（項目３１）
前記ポリソルベート２０が、約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在する、項目２７に記載の凍結乾燥製剤。
（項目３２）
（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；
（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；
（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および
（ｅ）約６．５のｐＨ
を含む水溶液を生成する再構成を可能にする、項目２７に記載の凍結乾燥製剤。
（項目３３）
約１００ｍｇの前記抗体を含み、滅菌水による再構成を可能にする、項目３２に記載の凍結乾燥製剤。
（項目３４）
配列番号１３をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
（項目３５）
配列番号１９のヌクレオチド配列を含む、項目３４に記載の核酸。
（項目３６）
配列番号２０のヌクレオチド配列を含む、項目３５に記載の核酸。
（項目３７）
配列番号１４〜１６のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
（項目３８）
配列番号１５をコードするヌクレオチド配列を含む、項目３７に記載の核酸。
（項目３９）
配列番号２２のヌクレオチド配列を含む、項目３８に記載の核酸。
（項目４０）
配列番号２３のヌクレオチド配列を含む、項目３９に記載の核酸。
（項目４１）
項目３４〜４０のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
（項目４２）
項目３４および３８に記載の核酸を含むベクター。
（項目４３）
項目３５および３９に記載の核酸を含むベクター。
（項目４４）
項目３６および４０に記載の核酸を含むベクター。
（項目４５）
宿主細胞であって、そのゲノムに、項目３４〜４０のいずれかに記載の核酸が安定的に組み込まれている、宿主細胞。
（項目４６）
ＣＨＯ細胞である、項目４５に記載の宿主細胞。
（項目４７）
項目４５に記載の宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号１３をコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、配列番号１４〜１６のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む核酸とが安定的に組み込まれている、宿主細胞。
（項目４８）
項目３８に記載の宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号１９をコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、配列番号２２をコードするヌクレオチド配列を含む核酸とが安定的に組み込まれている、宿主細胞。
（項目４９）
項目３８に記載の宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号２０をコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、配列番号２３をコードするヌクレオチド配列を含む核酸とが安定的に組み込まれている、宿主細胞。
（項目５０）
ＣＨＯ細胞である、項目４７〜４９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目５１）
医薬製剤を作製する方法であって：
（ａ）哺乳動物細胞であって、そのゲノムに、ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖をコードする１つ以上の核酸が安定的に組み込まれている哺乳動物細胞を、該細胞が該抗体を細胞培養培地に分泌するように培養し、該細胞培養培地から該抗体を精製すること；
（ｂ）および、項目１に記載の製剤を調製すること
を含む方法。
（項目５２）
ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖をコードする核酸が、配列番号１３をコードするヌクレオチド配列を含み、ヒト化２Ａ４抗体の重鎖をコードする核酸が、配列番号１４〜１６のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖をコードする核酸が、配列番号１３をコードするヌクレオチド配列を含み、ヒト化２Ａ４抗体の重鎖をコードする核酸が、配列番号１５をコードするヌクレオチド配列を含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖をコードする核酸が、配列番号１９のヌクレオチド配列を含み、ヒト化２Ａ４抗体の重鎖をコードする核酸が、配列番号２２のヌクレオチド配列を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖をコードする核酸が、配列番号２０のヌクレオチド配列を含み、ヒト化２Ａ４抗体の重鎖をコードする核酸が、配列番号２３のヌクレオチド配列を含む、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
物理的安定性、化学的安定性および生物学的活性からなる群より選択される、前記製剤中の抗体の少なくとも１つの特性を評価することをさらに含む、項目５１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、項目５１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
アミロイドタンパク質原線維の存在を特徴とするアミロイドーシスを有するかまたはこれを有するリスクがあるヒト患者を治療的または予防的に処置する方法であって、有効投与量の項目１〜３３のいずれか一項に記載の製剤を該患者に投与することを含む方法。
（項目５９）
前記ヒト患者が、アミロイドＡタンパク質原線維の存在を特徴とするアミロイドＡアミロイドーシスを有する、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記製剤が項目２５に記載の製剤である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記ヒト患者が、アミロイド軽鎖型タンパク質原線維の存在を特徴とするＡＬアミロイドーシスを有する、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記製剤が項目２５に記載の製剤である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
メルファラン、ボルテゾミブ、レナリドミドまたはカーフィルゾミブの１つまたは両方によっても前記患者を処置する、項目６１または６２に記載の方法。
（項目６４）
項目１〜３３のいずれか一項に記載の製剤による処置の前に、メルファランおよび／またはボルテゾミブによって前記患者を処置する、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
項目１〜３３のいずれか一項に記載の製剤による処置と同時に、メルファランおよび／またはボルテゾミブによって前記患者を処置する、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
項目１〜３３のいずれか一項に記載の製剤による処置の後に、メルファランおよび／またはボルテゾミブによって前記患者を処置する、項目６４に記載の方法。
（項目６７）
前記ＡＬアミロイドーシスが、Ｂリンパ球系列の悪液質に関連する、項目５８〜６６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６８）
前記悪液質が悪性腫瘍である、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記悪性腫瘍が多発性骨髄腫である、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
複数回投与量で前記製剤が投与される、項目５８〜６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
約毎日〜約毎年の範囲内の頻度で前記製剤が投与される、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記頻度が、約隔週〜約３カ月毎の範囲内である、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
約１０ｍｇ〜約５０００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬の範囲内の用量で前記製剤が静脈内投与される、項目５８〜７２のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
約３０ｍｇ〜約２５００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬の範囲内の用量にて、約隔週〜約隔月の範囲内の頻度で前記製剤が投与される、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記製剤が１カ月に１回投与される、項目７３または７４に記載の方法。
（項目７６）
前記用量が、約３０ｍｇのヒト化２Ａ４原薬である、項目７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記用量が、約１００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬である、項目７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７８）
前記用量が、約３００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬である、項目７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記用量が、約１０００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬である、項目７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
前記用量が、約２５００ｍｇのヒト化２Ａ４原薬である、項目７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
アミロイド原線維、沈着物または前原線維凝集体の存在を特徴とする軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシスを有するかまたはこれを有するリスクがあるヒト患者を治療的または予防的に処置する方法であって：
（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；
（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；
（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および
（ｅ）約６．５のｐＨ
を含む有効投与量の医薬製剤を該患者に投与することを含む方法。
（項目８２）
前記投与量が、約毎週〜約四半期毎の頻度で静脈内または皮下投与される約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの前記抗体である、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
投与の前記頻度が２８日毎に１回である、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
前記投与量が約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇである、項目８２に記載の方法。
（項目８５）
前記投与量が約８ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである、項目８２に記載の方法。
（項目８６）
医薬製品であって：
（ａ）粉末形態の約１００ｍｇの抗体を含むバイアル；
（ｂ）該抗体の再構成説明書；および
（ｃ）注入用の再構成抗体を調製するための説明書
を含み、
（ｉ）該抗体が、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含み、
（ｉｉ）該再構成説明書が、注射用水によって抽出可能体積１０ｍＬに再構成することを要求する、医薬製品。

図１Ａ〜１Ｂは、種々のヒト化２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖の配列を示す。太字下線、Ｎ連結グリコシル化用のコンセンサス配列。 図１Ａ〜１Ｂは、種々のヒト化２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖の配列を示す。太字下線、Ｎ連結グリコシル化用のコンセンサス配列。 図２は、ネズミ２Ａ４および７Ｄ８の軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）の配列を示す。二重下線、リーダー配列；下線、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列。 図３は、ヒト化２Ａ４バージョン３の軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）の配列を示す。小文字、逆突然変異。 図４Ａ〜４Ｂは、ヒト化２Ａ４バージョン３の重鎖（図４Ａ）および重鎖（図４Ｂ）の配列をコードする核酸配列を示す。一重下線、リーダー配列；下線なし、可変領域；二重下線、定常領域。 図４Ａ〜４Ｂは、ヒト化２Ａ４バージョン３の重鎖（図４Ａ）および重鎖（図４Ｂ）の配列をコードする核酸配列を示す。一重下線、リーダー配列；下線なし、可変領域；二重下線、定常領域。

発明の詳細な説明
本発明は、アミロイド疾患の予防および処置に有用な抗体製剤を提供する。本発明の一態様では、医薬製剤は、（ａ）抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のキメラもしくはヒト化バージョン、または抗原に対する結合について２Ａ４もしくは７Ｄ８と特異的に競合し、および／またはＡＥＤＳ（配列番号１８）を含むエピトープに指向性を有するそれらの断片であって、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する抗体；（ｂ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；および（ｄ）約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含み、上記製剤は、約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とする。

本明細書に記載されている本発明の一態様では、ヒト化２Ａ４は、ネズミ２Ａ４のＩｇＧ１κアイソタイプバージョンである。ヒト化２Ａ４の特異性特性決定の過程において、この抗体は、高親和性で立体構造依存的に軽鎖アミロイド原線維の軽鎖とも反応するが、循環中の遊離軽鎖とは反応しないことが見出された。

本発明は、ヒト化２Ａ４および／またはヒト化７Ｄ８抗体を静脈内注入して、ＡＡアミロイドーシスおよびＡＬアミロイドーシスを有する患者におけるミスフォールドアミロイドタンパク質を標的化するための方法を提供する。いくつかのヒト化２Ａ４抗体は、病原性アミロイド型のＡＬおよびＳＡＡに特異的に結合するが、これらの病原性型が由来する親分子（ＳＡＡ、ネイティブな免疫グロブリン軽鎖［ＬＣ］、インタクトな免疫グロブリン［Ｉｇ］）には結合しない。

Ｉ．医薬製剤および製品
Ｉ．Ａ．特徴
医薬製剤であって、抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）のキメラもしくはヒト化バージョン、または抗原（すなわち、ヒトＡＡまたはＡＬタンパク質）に対する結合について２Ａ４もしくは７Ｄ８とそれぞれ特異的に競合し、および／またはエピトープＡＥＤＳ（配列番号１８）に指向性を有するそれらの断片を含む医薬製剤が本明細書で提供される。ネズミ抗体２Ａ４もしくはネズミ抗体７Ｄ８またはそれらの断片を含む医薬製剤も提供される。上記抗体は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。上記製剤は、約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とし、約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度のヒスチジンバッファー、約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度のトレハロース；および約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度のポリソルベート２０を含む。

「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち、少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（すなわち、「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）という用語は、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、より好ましくは３つのＣＤＲ）とを含み、定常領域（例えば、軽鎖の場合には少なくとも１つの定常領域またはその部分、好ましくは重鎖の場合には３つの定常領域）をさらに含む可変領域を有する免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち、それぞれ軽鎖または重鎖）を指す。「ヒト化可変領域」（例えば、「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）という用語は、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む可変領域を指す。

「ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的にヒト」という句は、比較目的でヒト免疫グロブリンまたは抗体アミノ配列とアライメントした場合に、その領域が、例えば、保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、逆突然変異などを可能にするヒトフレームワークまたは定常領域配列と少なくとも８０〜９０％、好ましくは９０〜９５％、より好ましくは９５〜９９％の同一性（すなわち、局所配列同一性）を共有することを意味する。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、逆突然変異などの導入は、ヒト化抗体または鎖の「最適化」と称されることが多い。「非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的に非ヒト」という句は、非ヒト生物、例えば非ヒト哺乳動物の免疫グロブリンまたは抗体配列と少なくとも８０〜９５％、好ましくは９０〜９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％、または９９％同一である免疫グロブリンまたは抗体配列を有することを意味する。

したがって、おそらくＣＤＲを除く、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体またはヒト化免疫グロブリンもしくは抗体鎖のすべての領域または残基は、１つ以上のネイティブなヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。「対応する領域」または「対応する残基」という用語は、比較目的で第１および第２の配列を最適にアライメントした場合に、第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基と同じ（すなわち、同等の）位置を占有する第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基を指す。

いくつかの製剤では、抗体は、配列番号１、２、または４のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの製剤では、抗体は、配列番号３または５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの製剤では、抗体は、配列番号１、２、または４のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号３または５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの製剤では、抗体は、配列番号１として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの製剤では、抗体は、配列番号４として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの製剤では、抗体は、配列番号２として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。

いくつかの製剤では、抗体は、配列番号６、７、および８として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、配列番号９、１０、および１１として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域とを含む。他の製剤では、抗体は、配列番号１２、７、および８として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、配列番号９、１０、および１１として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域とを含む。

本発明の他の製剤では、抗体は、米国特許第７，９２８，２０３号およびＰＣＴ国際公開第２００９／０８６５３９号（これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、上記参照特許および公報に記載されている軽鎖および重鎖可変領域の配列は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる）に記載されているネズミ、キメラもしくはヒト化２Ａ４抗体またはネズミ、キメラもしくはヒト化７Ｄ８抗体の軽鎖および重鎖可変領域を含む。

いくつかの製剤では、抗体は、配列番号１３または２１として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６および２４のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。抗体は、上記軽鎖および重鎖アミノ酸配列のリーダー配列を含んでも、含まなくてもよい。

他の製剤では、抗体は、キメラおよびヒト化バージョンを含めた２Ａ４または７Ｄ８抗体の断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片またはＳｃＦｖ断片である。

本発明のいくつかの態様では、抗体は、単量体アミロイドタンパク質には特異的に結合せずに、凝集アミロイドタンパク質に特異的に結合する（例えば、単量体型アミロイドタンパク質に対する特異的結合親和性は、少なくとも１０倍、通常は少なくとも１００倍低い）。

いくつかの製剤では、抗体は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。いくつかの製剤では、抗体は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。いくつかの製剤では、抗体は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。例えば、抗体は、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよく、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。抗体は、約５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアルまたはそれより多くの滅菌液体剤形で存在してもよい。例えば、抗体は、約１００ｍｇ／バイアルの滅菌液体剤形で存在してもよい。

開示されている製剤に使用される抗体を、治療部分、例えば、細胞毒性剤、放射線治療剤、免疫調節剤、第２の抗体（例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを形成するためのもの）、あるいはキメラもしくはヒト化２Ａ４またはキメラもしくはヒト化７Ｄ８抗体の活性を促進もしくは増強する任意の他の生物学的に活性な薬剤とカップリングすることができる。代表的な治療部分としては、アミロイド疾患またはアミロイド疾患の症候を処置、管理または改善するのに有用であることが公知の薬剤が挙げられる。

開示されている製剤に使用される抗体は、例えば、アミロイド障害を診断するため、アミロイド疾患の進行をモニタリングするため、および／または処置の有効性を評価するために有用な検出可能な標識とカップリングすることもできる。記載されているように製剤化された抗体は、ＡＡアミロイドーシスもしくはＡＬアミロイドーシスを有するもしくはこれらに易罹患性の被験体において、またはこのような被験体から得られた適切な生物学的試料において、このような決定を実施するのに特に有用である。ヒト化２Ａ４抗体またはヒト化７Ｄ８抗体にカップリングまたは連結することができる代表的な検出可能な標識としては、種々の酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼ；補欠分子族、例えば、ストレプトアビジンおよびアビジン／ビオチン；蛍光物質、例えばしかし、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅ）、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリン；発光物質、例えば、ルミノール；生体発光性物質、例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリン；放射性物質、例えば限定されないが、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１１５Ｉｎ、^１１３Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ，）、およびテクネチウム（^９９Ｔｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、フッ素（^１８Ｆ）、^１５３Ｓｍ、^１７７Ｌｕ、^１５９Ｇｄ、^１４９Ｐｍ、^１４０Ｌａ、^１７５Ｙｂ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^４７Ｓｃ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１４２Ｐｒ、^１０５Ｒｈ、^９７Ｒｕ、^６８Ｇｅ、^５７Ｃｏ、^６５Ｚｎ、^８５Ｓｒ、^３２Ｐ、^１５３Ｇｄ、^１６９Ｙｂ、^５１Ｃｒ、^５４Ｍｎ、^７５Ｓｅ、^１１３Ｓｎ、および^１１７Ｔｉｎ；種々の陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属、非放射性常磁性金属イオン、および放射標識された、または特定の放射性同位体にコンジュゲートされた分子が挙げられる。

治療部分および／または検出可能な物質は、ネズミ、キメラもしくはヒト化２Ａ４抗体またはネズミ、キメラもしくはヒト化７Ｄ８抗体に直接的にカップリングもしくはコンジュゲートしてもよく、または当該分野において公知の技術を使用して媒介物（例えば、リンカー）を介して間接的にカップリングもしくはコンジュゲートしてもよい。例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ
Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１９８２，６２：１１９−５８を参照のこと。

開示されている製剤に使用される抗体としては、ネズミ、キメラもしくはヒト化２Ａ４抗体またはネズミ、キメラもしくはヒト化７Ｄ８抗体の改変型であって、対応する未改変抗体と比べて増加したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する改変型も挙げられる。このような改変型は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への連結などによって調製してもよい。一例として、抗体の半減期を延長するための代表的な方法は、ＰＣＴ国際公開第０２／０６０９１９号に記載されている。

本発明は、高速サイズ排除クロマトグラフィ（ＨＰＳＥＣ）によって評価した場合に、少なくとも約３０日間にわたって３８℃〜４２℃で安定性を有する抗体製剤、少なくとも約１年間にわたって２０℃〜２４℃で安定性を有する製剤、および少なくとも約３年間にわたって２℃〜４℃で安定性を有する製剤を包含する。より特定的には、開示されている製剤は、低レベルから検出不可能なレベルの抗体凝集および／もしくは断片化、または抗体断片化および／もしくは凝集の初期レベルを上回るわずかな増加もしくは検出不可能な増加（例えば、約１０％未満の凝集）を示す。低レベルから検出不可能なレベルの断片化を有する製剤は、全タンパク質の少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％を、高速サイズ排除クロマトグラフィ（ＨＰＳＥＣ）によって決定した場合には単一ピークに含有し、または還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）によって決定した場合には２つ（２）のピーク（１つが、抗体重鎖および抗体軽鎖のそれぞれに対応する）に含有し、これは、分解されていない抗体を表しており、それぞれ全タンパク質の５％超、４％超、３％超、２％超、１％超、または０．５％超を有する単一ピーク以外は含有しない。低レベルから検出不可能なレベルの凝集を有する製剤は、高速サイズ排除クロマトグラフィ（ＨＰＳＥＣ）によって測定した場合には、タンパク質重量基準で約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、または約０．５％以下の凝集を含有する。例えば、いくつかの製剤では、抗アミロイド抗体の約１０％未満は、凝集体として存在する。本発明の適切な製剤は、キメラもしくはヒト化２Ａ４またはキメラもしくはヒト化７Ｄ８の生物学的活性、例えば、ＥＬＩＳＡおよび／またはさらなる機能的アッセイによって測定可能な結合親和性の喪失をほとんどまたは全く示さず、例えば、所定の活性の測定可能な初期値の少なくとも約少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％を示す。

ヒスチジンバッファーは、いくつかの製剤では約２５ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの製剤では、ヒスチジンバッファーは、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物を含む。例えば、いくつかの製剤では、Ｌ−ヒスチジンは、約１６ｍＭ〜約２２ｍＭの範囲内の濃度で存在し、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物は、約４ｍＭ〜約８ｍＭの範囲内の濃度で存在する。

いくつかの製剤では、トレハロースは、約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、例えば、約２３０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの製剤では、異なる非還元糖、例えば、スクロース、マンニトールまたはソルビトールが使用される。

いくつかの製剤では、ポリソルベート２０は、約約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内、例えば、０．００５％、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３５％、０．０４％、０．０４５％、または０．０５％の濃度で存在する。あるいは、いくつかの製剤では、ポリソルベート２０は、約約０．０５ｇ／Ｌ、０．１ｇ／Ｌ、０．１５ｇ／Ｌ、０．２ｇ／Ｌ、０．２５ｇ／Ｌ、０．３ｇ／Ｌ、０．３５ｇ／Ｌ、０．４ｇ／Ｌ、０．４５ｇ／Ｌ、または０．５ｇ／Ｌの範囲内の濃度で存在する。いくつかの製剤は、０．２ｇ／Ｌの濃度のポリソルベート２０を含む。

いくつかの製剤は、約６〜７の範囲内のｐＨ、例えば、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、または７．０のｐＨを特徴とする。いくつかの製剤は、約６．５のｐＨを有する。

いくつかの製剤は、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を特徴とする。

また、いくつかの製剤では、増量剤を含めてもよい。

典型的には、製剤は、０．２μｍまたは０．２２μｍのフィルタを使用する滅菌ろ過によって達成されるにように無菌である。本発明の製剤はまた、一般に、凍結解凍の際に安定である。

場合により、本発明の製剤は、他の賦形剤、例えば、糖類、ポリオールおよびアミノ酸（例えば、アルギニン、リシンおよびメチオニン）をさらに含んでもよい。他の態様では、本発明はまた、界面活性剤、無機塩、さらなる糖および／または他の賦形剤を実質的に含まない、すなわち、このような化合物が未満約０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満である製剤を提供する。

例示的な製剤は、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４、１５、または１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体、約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー、約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０、および約６．５のｐＨを含む。

Ｉ．Ｂ．医薬製剤の調製
本発明はまた、医薬製剤を調製する方法を提供する。本発明の一態様では、このような方法は、（ａ）哺乳動物細胞であって、そのゲノムに、ネズミ抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６６２）もしくは抗体７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９４６８）またはそれらのキメラもしくはヒト化バージョンの軽鎖および重鎖をコードする核酸が安定的に組み込まれている上記細胞を、上記細胞が上記抗体を細胞培養培地に分泌するように培養し、細胞培養培地から上記抗体を精製すること；（ｂ）ならびに、（ｉ）約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する精製抗体；（ｉｉ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｉｉｉ）約２１０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；および（ｉｖ）約０．００５重量％〜約０．０５重量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含み、約６〜約７の範囲内のｐＨを特徴とする製剤を調製することを含む。

本発明のいくつかの態様では、医薬製剤を調製する開示されている方法は、物理的安定性、化学的安定性および生物学的活性からなる群より選択される、上記製剤中の抗体の少なくとも１つの特性を評価するさらなる工程を含む。

例えば、本発明の一態様では、抗体の産生のために哺乳動物細胞を培養し、ここで、哺乳動物細胞は、そのゲノムに、ヒト化２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸が安定的に組み込まれている。この目的に有用な哺乳動物細胞としては、（ａ）宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号１３または２１として示されるヒト化２Ａ４軽鎖と、配列番号１５または２４として示されるヒト化２Ａ重鎖とをコードする核酸配列が安定的に組み込まれている宿主細胞；（ｂ）宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号１９のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２２のヌクレオチド配列を有する核酸とが安定的に組み込まれている宿主細胞；および（ｃ）宿主細胞であって、そのゲノムに、配列番号２０のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２３のヌクレオチド配列を有する核酸とが安定的に組み込まれている宿主細胞が挙げられる。

抗体の産生のために、開示されている核酸をベクターに含ませる。いくつかの例では、ベクターは、７Ｄ８抗体のネズミ２Ａ４またはそれらのキメラもしくはヒト化バージョンをコードする核酸であって、宿主細胞でＤＮＡの発現をもたらすことが可能である適切な制御配列に機能的に連結された核酸を含有する。このような制御配列としては、転写をもたらすためのプロモータ（例えば、当該分野において公知の構成的プロモータまたは誘発性プロモータ）、このような転写を制御するための任意のオペレータ配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、エンハンサ、ポリアデニル化シグナル、ならびに転写および翻訳の終結を制御するための配列が挙げられる。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子（例えば、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルスおよびサイトメガロウイルスベクターなどのウイルスベクター）、または単にゲノムインサートであってもよい。適切な宿主に転換されると、抗体核酸が宿主のゲノムに取り込まれてもよく、または宿主のゲノムとは独立にベクターが複製および機能してもよい。

開示されている核酸は、単独で、または組み合わせて（例えば、抗体軽鎖をコードする核酸と、抗体重鎖をコードする核酸との組み合わせ）ベクターに含まれる。例えば、ベクターは、配列番号１３〜１６、２１、または２４のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む核酸；配列番号１９〜２０および２２〜２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む核酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。本発明の代表的なベクターとしては、（ａ）配列番号１３として示されるヒト化２Ａ４軽鎖と、配列番号１５として示されるヒト化２Ａ重鎖とをコードする核酸配列を含むベクター；（ｂ）配列番号１９のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２２のヌクレオチド配列を有する核酸とを含むベクター；および（ｃ）配列番号２０のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２３のヌクレオチド配列を有する核酸とを含むベクターが挙げられる。

本発明の抗体製剤を調製するのに有用な宿主細胞としては、ヒト起源の細胞を含む哺乳動物細胞、例えば、サル腎臓細胞、ヒト胎児腎臓細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞、マウスセルトリ細胞、ヒト子宮頸癌腫（ＨｅＬａ）細胞、イヌ腎臓細胞、ヒト肺細胞、ヒト肝臓細胞、マウス乳房腫瘍細胞、およびＮＳ０細胞が挙げられる。例えば、宿主細胞は、そのゲノムに、配列番号１３〜１６、２１、および２４のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む安定的に取り込まれている核酸；配列番号１９〜２０および２２〜２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む安定的に取り込まれている核酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。本発明の代表的な宿主細胞としては、（ａ）配列番号１３または２１として示されるヒト化２Ａ４軽鎖と、配列番号１５または２４として示されるヒト化２Ａ重鎖とをコードする核酸配列を含む宿主細胞；（ｂ）配列番号１９のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２２のヌクレオチド配列を有する核酸とを含む宿主細胞；および（ｃ）配列番号２０のヌクレオチド配列を有する核酸と、配列番号２３のヌクレオチド配列を有する核酸とを含む宿主細胞が挙げられる。

本発明の別の態様では、キメラもしくはヒト化２Ａ４抗体またはキメラもしくはヒト化７Ｄ８抗体を化学合成によって調製し、次いで、開示されている製剤に使用する。

開示されている製剤を調製するのに使用される抗体は、典型的には、単離または精製されたもの、すなわち、細胞物質もしくはそれらが産生される細胞由来の他の混入タンパク質を実質的に含まないもの、または化学的に合成される場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないものである。例えば、細胞物質を実質的に含まない抗体としては、約３０％未満、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、５％、２％、１％、０．５％、０．１％以下（乾燥重量基準）の混入タンパク質を有する抗体の調製物が挙げられる。抗体を組換え産生する場合、それはまた、培養培地が約３０％未満、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、５％、２％、１％、０．５％、０．１％以下の体積のタンパク質調製物に相当するような、培養培地を実質的に含まないものである。抗体を化学合成によって産生する場合、それは、好ましくは、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まないか、またはこれらから分離されたものである。したがって、このような抗体調製物は、約３０％未満、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、５％、２％、１％、０．５％、０．１％以下（乾燥重量基準）の化学的前駆体または化合物（抗体原薬以外）を有する。組換え発現された抗体の精製は、当該分野において公知の多数の方法、例えば、アフィニティクロマトグラフィ、酸処理、深層ろ過、陰イオン交換クロマトグラフィ、陽イオン交換クロマトグラフィ、ナノろ過、限外ろ過、透析および透析ろ過などのいずれかを利用することができる。

精製抗体原薬を、本明細書に記載されている製剤のいずれかを含む溶液に調整し、所望の濃度に希釈し、使用できる状態まで保存することができる。場合により、製剤を使用できる状態まで濃縮形態で保存することができる。液体製剤は、実験的に決定することができるそれらの安定性プロファイルに応じて、冷凍または室温で凍結形態にて保存することができる。いくつかの場合、さらなるろ過工程を適用する。本明細書に記載されている製剤のいくつかは、凍結乾燥して粉末形態で保存されてもよい。凍結乾燥製剤は、実験的に決定することができるそれらの安定性プロファイルに応じて、冷凍または室温で凍結形態にて保存することができる。例えば、凍結乾燥製剤は、約２℃〜８℃の温度で保存することができる。このような場合、製剤を患者への投与前に再構成して、本明細書に記載されている濃度で存在する抗体および賦形剤を有する液体製剤を生成し得る。いくつかの場合、製剤を滅菌水で再構成する。いくつかの場合、製剤を再構成し、患者への投与用の輸液バッグに添加する。再構成された製剤は、安定性プロファイルに一致した時間にわたって、患者への投与前に冷凍または室温で保存することができる。凍結乾燥および再構成の技術は当該分野において公知であり、実施例で説明する。

したがって、本発明は、凍結乾燥抗体原薬、ならびに再構成説明書および使用説明書を含む医薬製品を包含する。例えば、代表的な医薬製品は、（ａ）粉末形態の約１００ｍｇの抗体を含むバイアル；（ｂ）上記抗体の再構成説明書；および（ｃ）注入用の再構成抗体を調製するための説明書を含むことができ、（ｉ）上記抗体は、配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含み、（ｉｉ）再構成説明書は、注射用水によって抽出可能体積１０ｍＬに再構成することを要求する。

ＩＩ．診断方法および処置方法
また、アミロイドタンパク質原線維の存在を特徴とするアミロイドーシスを有するまたはこれを有するリスクがあるヒト患者を治療的または予防的に処置する方法であって、有効投与量の本明細書に記載されている製剤のいずれかを上記患者に投与することを含む方法が提供される。

ＩＩ．Ａ．診断および処置に適した被験体
ヒト化２Ａ４原薬は、全身性アミロイドーシス、例えば、アミロイド軽鎖ＡＬまたはアミロイドＡ（ＡＡ）タンパク質のいずれかが関与するアミロイドーシスを処置するのに使用されるべきものである。全身性アミロイドーシスは、進行性臓器障害をもたらすミスフォールドタンパク質の組織沈着によって引き起こされる複合疾患群である。最も一般的な種類のＡＬアミロイドーシスまたは原発性アミロイドーシスは、ミスフォールド免疫グロブリン軽鎖を産生するクローン性形質細胞によって引き起こされる血液学的障害が関与する。形質細胞によるミスフォールド軽鎖の過剰産生は、ＡＬアミロイドーシスを有する個体の組織および臓器において、異常ＡＬタンパク質（アミロイド）の沈着物をもたらす。ＡＬアミロイドーシスの臨床的特徴としては、心臓、腎臓および肝臓の機能障害、胃腸障害、神経障害ならびに巨大舌を含むことができる一連の症候および臓器機能障害が挙げられる。様々な形態の全身性アミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシスまたは二次性アミロイドーシスが、慢性炎症性疾患（例えば、関節リウマチおよび強直性脊椎炎）または慢性感染症（例えば、結核または骨髄炎）などの他の病気の結果として「二次的」に起こり得る。二次性アミロイドーシスでは、沈着しているアミロイドタンパク質は、急性期タンパク質血清アミロイドＡ由来のアミロイドＡタンパク質である。

末梢アミロイドーシスは、ＡＡアミロイドおよびＡＬアミロイドで同定された新たなエピトープを標的とする抗体によるこの種のアミロイド特異的免疫療法に適している。ＡＡおよびＡＬ両方の動物モデルにおける研究により、合理的な用量の抗体で、有意なプラスの治療効果が可能であり得ることが実証されている。

開示されている抗体製剤を使用して処置するのに適した被験体または患者としては、疾患のリスクを有するが症候を示していない個体、およびアミロイド疾患の症候を現在示している患者が挙げられる。したがって、本方法は、被験体患者のいかなるリスク評価も必要とせずに、一般集団に対して予防的に行うことができる。例えば、本方法は、公知の遺伝的リスクである自己免疫障害を有する個体に特に有用である。このような個体としては、この疾患を経験したことがある親戚を有する個体、および遺伝または生化学マーカーの分析によってそのリスクが決定される個体が挙げられる。別の例として、ＡＡアミロイドーシスに罹患している患者は、長期間にわたって無症候性であり得、したがってＡＡアミロイドーシスの臨床診断は、アミロイド沈着物が広範囲に及ぶまで遅れるか、または見落とされることが多い。症候性である患者の場合、症例の５３％しか診断されていないと推定される。例えば、Ｌ．Ｅ．Ｋ．Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ，Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｍａｒｋｅｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）を参照のこと。開示されている抗体製剤の予防的投与は、ＡＡアミロイドーシスの発生率を低減し得る。

本方法は、ＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスの公知のリスクを有するか、これらを有すると疑われるか、またはこれらであると診断された個体に特に有用である。このような個体としては、限定されないが、慢性炎症性疾患、遺伝性炎症性疾患、および慢性微生物感染症、例えば関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、家族性地中海熱、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、骨髄腫、マクログロブリン血症、免疫細胞悪液質、単クローン性高ガンマグロブリン血症、潜在性悪液質を有する個体が挙げられる。慢性炎症性および感染性症状は、ＡＡアミロイドーシスの発生に不可欠であり、局所的な結節性アミロイドーシスによって媒介されるＡＬアミロイドーシスは、慢性炎症性疾患に関連し得る。ＡＡアミロイドーシスの公知のリスクを有する個体としては、限定されないが、ホジキンリンパ腫、腎臓癌腫、消化管、肺および尿生殖路の癌腫、基底細胞癌腫、ならびにヘアリー細胞白血病などの悪性新生物を有する個体も挙げられる。加えて、ＡＡアミロイドーシスの公知のリスクを有する個体としては、限定されないが、キャッスルマン病などのリンパ球増殖性障害を有する個体も挙げられる。このような患者の一部は、アミロイドＡタンパク質原線維の存在を特徴とするＡＡアミロイドーシスを有する。このような患者の一部は、アミロイド軽鎖型タンパク質原線維の存在を特徴とするＡＬアミロイドーシスを有する。一部の患者は、心臓、腎臓、肝臓、末梢神経系、胃腸系、自律神経系、肺、および／または軟組織もしくはリンパ系の機能障害を含む、ＡＬアミロイドーシスに起因する全身性臓器機能障害を有する。

処置に適した被験体としては、アミロイド疾患または関連症状、例えば、炎症性疾患、慢性微生物感染症、悪性新生物、遺伝性炎症性疾患、およびリンパ球増殖性障害の処置の代替治療を受けたか、現在受けているか、または後で受ける予定の患者も挙げられる。例えば、患者は、併用療法に関して本明細書で特定されている治療剤の１つ以上の投与を受けてもよく、または受けたことがあってもよい。特定の例として、ＡＬに罹患している患者は、ボルテゾミブ、メルファラン、レナリドミドおよび／またはカーフィルゾミブの投与を受けてもよく、または受けたことがあってもよい。アミロイド疾患の処置の代替治療を以前に受けた患者の場合、このような治療は、関連する臨床的尺度に基づいて成功していてもよく、または成功していなくてもよい。

ＩＩ．Ｂ．処置レジーム
本明細書で使用される場合、「処置する」および「処置」という用語は、疾患に関連する１つ以上の症候もしくは影響の緩和もしくは改善、疾患の１つ以上の症候もしくは影響の発症の防止、阻害もしくは遅延、疾患の１つ以上の症候もしくは影響の重症度もしくは頻度の軽減、および／または本明細書に記載されている所望の成果の増加もしくは傾向を指す。

本明細書に開示されている処置の所望の成果は、アミロイド疾患および患者プロファイルにしたがって変動し、当業者であれば容易に決定可能である。一般に、所望の成果としては、測定可能な指標、例えば、病原性アミロイド原線維の低減もしくはクリアランス、アミロイド凝集および／もしくはアミロイド原線維の沈着の減少もしくは阻害、ならびに病原性および／もしくは凝集アミロイド原線維に対する免疫応答の増加が挙げられる。所望の成果としては、アミロイド疾患特異的症候の改善も挙げられる。例えば、ＡＬアミロイドーシスの処置の所望の成果としては、臓器機能障害、末梢神経障害および自律神経障害、手根管症候群、巨大舌、拘束型心筋症、大関節の関節症、免疫悪液質、骨髄腫、ならびに潜在性悪液質を含む公知の症候の発生率または重症度の減少が挙げられる。別の例として、ＡＡの処置の所望の成果としては、関連する炎症、関節炎、乾癬、微生物感染症、悪性腫瘍、またはＡＡアミロイドーシスが続発する他の既存疾患もしくは合併疾患の症候の減少が挙げられる。

開示されている治療の所望の成果は、一般に、対照またはベースラインの測定結果と比較して定量可能な尺度である。本明細書で使用される場合、「改良する」、「増加させる」または「低減させる」などの相対的な用語は、本明細書に記載されている処置を開始する前の同じ個体における測定結果、または対照個体もしくは群における測定結果などの対照と比べた値を示す。対照個体は、処置されている個体と同じアミロイド疾患を患っている個体であって、処置されている個体とほぼ同じ年齢であるが（これは、処置個体および対照個体における病期が同程度であることを保証するためである）、開示されている抗体製剤を使用する処置を受けていない個体である。この場合、開示されている抗体製剤の有効性は、未処置対照における測定可能な指標からのシフトまたは傾向によって評価される。あるいは、対照個体は、処置されている個体とほぼ同じ年齢の健常個体である。この場合、開示されている抗体製剤の有効性は、健常対照における測定可能な指標からのシフトまたは傾向によって評価される。治療に対する応答の変化または改良は、一般に、統計的に有意なものであり、０．１以下、０．０５未満、０．０１未満、０．００５未満、または０．００１未満のｐ値によって記載されるものは、有意であるとみなしてもよい。

無症候性患者および症候性患者の両方において、開示されている方法による処置は、基礎ＡＡまたはＡＬアミロイド疾患の診断前または後の任意の時期に開始することができる。処置は、典型的には、期間全体にわたる複数回投与を必要とする。処置は、抗体を評価することによって、または経時的に放射標識ＳＡＰシンチグラフィを用いることによってモニタリングすることができる。応答が低下する場合、ブースター投与量を指示してもよい。ＡＬアミロイドーシスを有する患者の処置に対する応答は、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰおよび／またはトロポニン、血清クレアチン、および／またはアルカリホスファターゼなどの心臓マーカーを評価することによって；無血清軽鎖（ＳＦＬＣ）アッセイ、定量免疫グロブリンアッセイ、生検、血清タンパク質電気泳動（ＳＰＥＰ）、尿タンパク質電気泳動（ＵＰＥＰ）、血清、尿免疫固定電気泳動（ＩＦＥ）、および／または臓器造影技術を実施することによってモニタリングすることができる。例示的な完全寛解（ＣＲ）は、血清および尿のネガティブＩＦＥ、正常κ／λ比、および／または＜５％の骨髄形質細胞を含む応答基準から決定することができる。例示的な非常に良好な部分寛解（ＶＧＰＲ）は、＜４０ｍｇ／ＬのｄＦＬＣから決定することができる。例示的な部分寛解（ＰＲ）は、ｄＦＬＣが≧５０％減少することから決定することができる。腎臓では、処置に対する応答は、例えば、ｅＧＦＲの≧２５％の低減または血清クレアチンの≧０．５ｍｇ／ｄＬの増加を伴わずに２４時間尿中タンパク排泄量が≧５０％低減すること（例えば、＞０．５ｇ／２４時間）から決定することができる。肝臓では、処置に対する応答は、例えば、初期に上昇したアルカリホスファターゼが≧５０％低減すること、またはＣＴスキャンもしくはＭＲＩによる肝臓サイズが≧２ｃｍ低減することから決定することができる。心臓では、処置に対する応答は、例えば、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのベースラインが＞６５０ｎｇ／Ｌである患者においてＮＴ−ｐｒｏＢＮＰが≧３０％および３００ｎｇ／Ｌ低減することから決定することができる。

抗体製剤は、問題となっている患者では約１０ｍｇ〜約５０００ｍｇの投与量範囲、例えば、約１０ｍｇ、約３０ｍｇ、約１００ｍｇ、約３００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約２０００ｍｇ、または約２５００ｍｇなどで静脈内投与することができる。抗体製剤はまた、約０．１ｍｇ／ｋｇ宿主体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ宿主体重、または約０．５ｍｇ／ｋｇ宿主体重〜約３０ｍｇ／ｋｇ宿主体重の投与量範囲で静脈内投与することができる。例えば、投与量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約８．０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、または約３０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。処方者が患者にとって過度の安全性リスク（例えば、≧第３度の非血液学的毒性、≧第３度の吐き気、最大限の制吐／抗下痢療法によって制御されない嘔吐もしくは下痢、成長因子のサポートなしで＞７日間続く第４度の好中球減少、≧３８．５℃の発熱および／もしくは全身感染症を伴う第３度もしくは第４度の好中球減少（持続期間は任意）、または他の≧第４度の非血液学的毒性など）があると合理的に考え得る臨床的に有意ないかなる出来事も存在しない場合、処方者の裁量で、個々の患者のための用量増加が行われ得る。

抗体は、通常、複数回で投与される。例示的な処置レジームは、２週間毎に１回、１カ月間に１回または３〜６カ月間毎に１回の投与を必要とする。例えば、患者は、抗体製剤を、４週間毎に１回を１サイクルとして、例えば、２８日間毎に受けることができる。投与頻度は、患者における抗体製剤の薬物動態プロファイルに応じて調整することができる。例えば、抗体の半減期により、２週間頻度の投与が必要とされ得る。いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体が一斉投与され、この場合、投与された各抗体の投与量は、示された範囲内にある。単回投与間の間隔は、毎週、毎月または毎年であり得る。間隔はまた、患者のアミロイドタンパク質（例えば、ＡＡ）に対する抗体の血中レベルを測定することによって示されるように、不規則であり得る。いくつかの方法では、投与量は、約１〜１０００μｇ／ｍｌまたは約２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整される。あるいは、抗体は、持続放出製剤として投与することができ、この場合、頻繁な投与はほとんど要求されない。

投与量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変動する。一般に、ヒト抗体は最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体が続く。投与の投与量および頻度は、処置が予防的または治療的であるかに応じて変動し得る。予防用途では、比較的低い投与量が、長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。一部の患者は、生涯にわたって処置を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が低減または終了するまで、部分寛解または完全寛解が達成されるまで、および／または患者が疾患の症候の軽減または改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投与量が時には要求される。その後、予防的レジームを患者に投与することができる。

本明細書で開示されている製剤は、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、皮下）投与に適切な剤形で提供してもよい。あるいは、特定の用途に応じて、製剤は、直腸投与、経皮投与、鼻腔投与、膣投与、吸入投与、眼投与または他の投与に適切な投与量で提供してもよい。医薬製剤は、典型的には、従来の製薬プラクティスにしたがって調製する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，（１９ｔｈ ｅｄ．）ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，１９９５，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．ａｎｄ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ ａｎｄ Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８−１９９９，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ．Ｙを参照のこと。

本発明の一態様では、アミロイド原線維、沈着物または前原線維凝集体の存在を特徴とする軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシスを有するまたはこれを有するリスクがあるヒト患者を治療的または予防的に処置する方法は、（ａ）配列番号１３として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１４〜１６のいずれか１つとして示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗体であって、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する抗体；（ｂ）約２５ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２３０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；および（ｅ）約６．５のｐＨを含む有効投与量の医薬製剤を上記患者に投与することを含む。このような方法では、投与量は、典型的には、約毎週〜約四半期毎の頻度で（例えば、２８日毎に１回）静脈内または皮下投与される約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの上記抗体（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇ、または約８ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ）である。

ＩＩ．Ｃ．併用薬物療法処置レジーム
本発明はまた、アミロイド疾患、特にＡＡアミロイドーシスおよびＡＬアミロイドーシスの処置または予防のための併用療法を包含する。このような併用療法は、場合により、１つ以上の第２の治療剤、例えば、ＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスを処置または予防するための別の治療と併せて本発明の抗体製剤を投与することによって実施される。本発明による併用療法はまた、アミロイド疾患に関連する疾患または症状、例えば炎症性疾患、慢性微生物感染症、新生物（悪性新生物を含む）、遺伝性炎症性疾患、および／またはリンパ球増殖性障害を処置または予防するのに使用される第２の治療と併せて実施してもよい。商業用途、臨床評価および前臨床開発で多くの処置が利用可能であり、これらのいずれかを選択して開示されている抗体製剤と併用することができる。このような処置は、限定されないが、いくつかの主要な分類、すなわち（ｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ；例えば、デトプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸塩、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｏｎｅ）、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、アスピリン、サリチル酸コリン、サルサラート（ｓａｌｓａｌｔｅ）、ならびにサリチル酸ナトリウムおよびサリチル酸マグネシウム）；（ｉｉ）ステロイド（例えば、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン）；（ｉｉｉ）ＤＭＡＲＤ、すなわち疾患修飾抗リウマチ薬（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、レフルノミド、シクロホスファミド、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、Ｄ−ペニシラミン、ミノサイクリン、および金）；（ｉｖ）組換えタンパク質（例えば、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト、可溶性ＴＮＦ受容体）およびＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）キメラモノクローナル抗ＴＮＦ抗体）；（ｖ）幹細胞移植；および／または（ｖｉ）化学療法から選択される１つ以上の化合物または処置であり得る。ＡＬアミロイドーシスを有する患者はまた、血液悪性腫瘍を処置するのに使用されることが多い薬物または薬物の組み合わせ、例えば、メルファラン、プレドニゾン、デキサメタゾン、レナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））およびプロテオソーム阻害剤、例えばボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、およびカーフィルゾミブ（ＫＹＰＲＯＬＩＳ（商標））を標準ケアの範囲内の投与量で含む処置レジームを受けてもよい。

併用療法の期間は、処置されるアミロイド疾患、アミロイド疾患に関連する任意の基礎疾患の種類、患者の年齢および状態、患者の疾患の段階および種類、ならびに患者が処置にどのように応答するかなどに依存する。医師は、治療効果を厳密に観察して、必要に応じて任意の調整を行うことができる。加えて、ＡＡアミロイドーシス（例えば、遺伝的に素因があるか、または炎症性障害もしくは他の基礎疾患を以前に有していた者）またはＡＬアミロイドーシスを発生するより大きなリスクを有する者は、ＡＡ、ＡＬ凝集体、例えば原線維の発生を阻害または遅延するための予防的併用処置または処置後維持療法を受けてもよい。

併用療法を実施する場合、任意の順序で、２つ以上の原薬を一斉または逐次投与する、すなわち、第２の原薬の投与前に、第２の原薬と同時に、または第２の原薬の投与後に、本発明の製剤を投与する。例えば、併用療法は、第２の薬剤／治療を投与する前（例えば、１分前、５分前、１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前、１２時間前、２４時間前、４８時間前、７２時間前、９６時間前、１週間前、２週間前、３週間前、４週間前、５週間前、６週間前、８週間前、または１２週間前）に、これと同時に、またはこれの後（例えば、１分後、５分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、８週間後、または１２週間後）に、第１の治療を投与することによって実施してもよい。

組み合わせの各成分の投与量、頻度および投与様式は、独立に制御することができる。例えば、第１の治療剤／治療を１日に３回経口投与してもよく、第２の治療剤／治療を１日に１回筋肉内投与してもよい。併用療法は、休止期間を含むオン・オフサイクルで行ってもよい。また、１回の投与により両方の化合物が送達されるように、化合物を互いに混合するかまたは別の方法で製剤化してもよい。この場合、各治療剤は、一般に、組成物の総重量の１〜９５重量％の量で存在する。あるいは、本発明の抗体製剤および第２の治療剤は、個々の投与量で別々に製剤化することができる。処置のための薬物の組み合わせは、医薬パックの要素として提供することができる。

好ましくは、開示されている併用療法は、相乗的治療効果、すなわち、それらの個々の効果または治療成果の総和よりも大きい効果を引き起こす。測定可能な治療成果は、本明細書に記載されている。例えば、相乗的治療効果は、所定の組み合わせの単一薬剤によって引き起こされる治療効果の総和よりも少なくとも約２倍超、または少なくとも約５倍超、または少なくとも約１０倍超、または少なくとも約２０倍超、または少なくとも約５０倍超、または少なくとも約１００倍超の効果であり得る。相乗的治療効果はまた、所定の組み合わせの単一薬剤によって引き起こされる治療効果の総和と比較して少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％またはそれより多くの治療効果の増加として観察され得る。相乗的効果はまた、治療剤を併用する場合に、治療剤の投与の低減を可能にする効果である。

以下の実施例は、本発明の様式を示すために含めたものである。以下の実施例のある特定の態様は、本発明の実行の際にうまく作用することが本共同発明者によって見出されたまたは意図された技術および手順の観点から記載されている。本開示および当業者の一般的レベルを考慮して、当業者であれば、以下の実施例が例示的なものに過ぎないこと、および本発明の範囲を逸脱せずに多数の変更、改変および修正が用いられ得ることを理解する。

実施例１．ＡＬアミロイドーシスの処置のためのヒト化２Ａ４の選択
ネズミ抗体２Ａ４のヒト化バージョンであるＩｇＧ１κアイソタイプ抗体を調製した。代表的なヒト化２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖の配列を図１Ａ〜１Ｂおよび図３に示す。特定のヒト化２Ａ４抗体バージョン３（アミノ酸配列は図３に示されている）をコードする核酸を図４Ａ〜４Ｂに示す。

親モノクローナル２Ａ４抗体は、ヒト血清アミロイドＡ（ｓＡＡ）の新しいカルボキシ末端エピトープに指向性を有し、該エピトープは、ネイティブなｓＡＡ分子のアミノ酸残基７６における切断から生じる。このネズミ抗体はＩｇＧまたは遊離軽鎖（ＬＣ）と交差反応せず、これまでに調べた患者由来ＡＬアミロイド試料のアイソタイプを広範囲に認識することを示した。２Ａ４は、可溶性マルチマーおよび不溶性沈着物を含む複数の形態のＡＬ軽鎖アミロイドを認識する。加えて、この抗体は、マウス異種移植モデルにおいて、アミロイドーマの退縮を促進することが示された。ネズミ２Ａ４抗体の軽鎖および重鎖の配列を図２に示す。

実施例２．ヒト化２Ａ４抗体の用量決定
ＴＲＩＡＤマウスモデルおよびカニクイザルにおける非臨床的研究では、マウスでは４および４０ｍｇ／ｋｇ、ならびにサルでは１０、５０、および１００ｍｇ／ｋｇの用量を用いた。ｍｇ／ｋｇ基準でヒト等価用量（ＨＥＤ）に変換すると（モノクローナル抗体の血管腔への限定のために、モノクローナル抗体には最適な変換である）、ＨＥＤは、マウスでは０．３２および３．２、ならびにサルでは３．２、１６、および３２になる。現在利用可能なデータに基づいて、両種のＮＯＡＥＬが、最大投与量であると予想される。３．２のマウスＨＥＤ（用量制限のために、最も感度の高い種である）および安全係数１０倍を使用すると、ヒト初回用量のＭＲＳＤは、約０．３２ｍｇ／ｋｇであろう。動物研究に基づいて、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ヒトへの投与を開始する。

実施例３．発現ベクターの調製
最終ｈ２Ａ４ ＩｇＧ１ ＨＣベクターの作製のために、プラスミドＣＥＴ１０１９ＡＳ−ｈｙｇｒｏ−ｈ２Ａ４ＶＨ３−Ｓｃｅ４．２３．０７を鋳型として使用してＰＣＲによって重鎖可変領域を単離した。サブクローニングのために、増幅に使用するプライマーを、断片の５’末端のＭｆｅＩ制限部位および３’末端のＢｌｐＩ制限部位に導入した。ＭｆｅＩおよびＢａｍＨＩで消化した真核細胞発現ベクターｐＢＩ−６１（これは、Ｇ１ｍ（３）アロタイプのヒトＩｇＧ１のゲノム定常領域を含有する）に、可変領域をクローニングした。得られた組換え発現ベクターｐＢＩ−６１／２Ａ４ ＩｇＧ１−ＲＥＭは、サイズが９，０１５塩基対であり、ＤＨＦＲプロモータの制御下にあるハムスター由来の選択可能マーカージヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）およびポリアデニル化シグナルを有する。このベクターはまた、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における選択用のβ−ラクタマーゼ遺伝子、ならびに大腸菌（ＣｏｌＥ１ ｏｒｉ）、ＳＶ４０（ＳＶ４０ ｏｒｉ）および繊維状ファージｆ１（ｆ１ ｏｒｉ）の複製起点を含有する。ＨＣの発現は、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からの前初期プロモータ／エンハンサ領域を、ハムスターゲノム由来の転写増強要素（ＴＥ）と組み合わせたものによって駆動される。転写終結および安定化のために、ハムスター成長ホルモン由来のポリアデニル化シグナルを使用し、転写の増強のために、ハムスターゲノム由来の非コード配列（ＴＥ）を使用する。

プラスミドＣＥＴ１０１９ＡＳ−ｈｕ２Ａ４ＶＬ３−ｈｃｋ−ｐｕｒｏ−Ｓｃｅ４．１９．０７を鋳型として使用してＰＣＲによってｈ２Ａ４ ＬＣの可変領域を単離し、断片の５’末端のＳｇｒＡＩ制限部位および３’末端のＫｐｎＩ制限部位に導入して、同じ制限酵素で消化した最終真核細胞発現ベクターｐＢＩ−６０にサブクローニングした。このベクターは、ヒトκ鎖のゲノム定常領域を含有する。得られた組換え発現ベクターｐＢＩ−６０／２Ａ４ ＬＣは、サイズが７，１４４塩基対であり、ＳＶ４０プロモータの制御下にある選択可能マーカーネオマイシンホスホトランスフェラーゼ変異体（ジェネティシン耐性を付与する）を含有する。転写終結のために、単純ヘルペス（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ）チミジンキナーゼ由来のポリアデニル化シグナルを使用する。このベクターはまた、大腸菌における選択用のβ−ラクタマーゼ遺伝子、ならびに大腸菌（ＣｏｌＥ１
ｏｒｉ）および繊維状ファージｆ１（ｆ１ ｏｒｉ）の複製起点を含有する。ＬＣの発現は、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からの前初期プロモータ／エンハンサ領域を、ハムスターゲノム由来の転写増強因子（ＴＥ）と組み合わせたものによって駆動される。転写終結および安定化のために、ハムスター成長ホルモン由来のポリアデニル化シグナルを使用し、転写増強のために、ハムスターゲノム由来の非コード配列（ＴＥ）を使用する。

実施例４．ヒト化２Ａ４抗体（プール由来の物質）の産生
いかなるウシ由来成分も含まない既知組成培地で成長させたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で、ヒト化２Ａ４を産生した。産生細胞株が最終的に誘導される安定トランスフェクト細胞から、抗体をプールした。プロテインＡアフィニティクロマトグラフィによって、プール由来の物質を精製した。この物質を、カニクイザルにおけるヒト組織交差反応性研究および単回投与薬物動態（ＰＫ）研究に使用した。ヒト化２Ａ４抗体の製剤は、１０ｍｇ／ｍＬ抗体、２５ｍＭ Ｌ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ一水和物、２３０ｍＭ無水トレハロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート（ＴＷＥＥＮ（登録商標））２０、ｐＨ＝６．５である。

実施例５．ヒト化２Ａ４抗体（クローン由来の物質）の産生
実施例３に記載した細胞プールから単一のＣＨＯ細胞クローンを単離し、これを使用して、いかなるウシ由来物質も含まないマスターセルバンク（ＭＣＢ）を樹立した。ヒト化２Ａ４（２，０００Ｌスケール）のＧＭＰ臨床バージョンと同じ細胞培養および精製過程（スケールアップの改変を除く）を使用して８０Ｌスケールで非臨床的研究用のヒト化２Ａ４を製造した。２，０００Ｌスケールの産生からの物質を非臨床的研究に使用してもよい。

実施例６．ヒト化２Ａ４抗体を製造するためのプロセス
バイアルの解凍および接種材料の増殖。ＭＣＢからの細胞を解凍し、適切な細胞培養フラスコに移す。細胞を約３７℃でインキュベートする。解凍した培養物を１〜４日間繁殖させる（細胞解凍後第１継代）。継代培養のために、一定分量の成長させた細胞培養物（および、予め温めて０．２２μｍ以下のフィルタでろ過した規定体積の接種培地）を使用して、実用体積約０．０２Ｌ〜１Ｌの標準細胞培養容器中で、細胞が約０．１〜０．５×１０^６個／ｍＬの播種密度にする。例として、０．１２５Ｌまたは０．２５Ｌまたは０．５Ｌの容器で第１継代を行って、続いて１Ｌの容器で継代することができる。この培養段階で、保存培養を開始することができる。個々の産生発酵槽用の接種培養物を調製するために、一定分量の保存培養物を増殖させて、最大２５Ｌ体積の培養物を作製する。典型的には、細胞培養を１Ｌ培養から２つ以上の１Ｌまたは２Ｌ培養にスケールアップし、次いで２つ以上の２Ｌまたは３Ｌ培養にスケールアップし、最終的には２つ以上の培養体積最大２５Ｌ／容器の培養にスケールアップする。いくつかの容器の成長させた細胞懸濁液をプールし、これを使用して８０Ｌのバイオリアクタに接種することができる。振盪フラスコ、Ｔフラスコ、スピナーフラスコおよびバッグを、上記培養工程用の標準細胞培養容器として使用することができる。

バイオリアクタにおける播種培養。細胞を接種する前に、０．２２μｍ以下のフィルタでろ過した成長培地をバイオリアクタに添加する。充填したバイオリアクタの内容物を約３７℃に加温し、細胞を接種する間にわたってこの温度に維持する。接種培養物からの細胞を予め温めた培地に移す。初期細胞密度は、細胞０．１〜０．５×１０^６個／ｍＬの範囲内を目標とする。８０Ｌバイオリアクタ、続いて４００Ｌバイオリアクタ中で細胞を成長させる。細胞を約２〜４日間毎に継代培養する。この段階で、同じまたはより大きい容量の別の容器に、細胞を移してもよい。典型的には、細胞培養を１×８０Ｌバイオリアクタ培養から１×４００Ｌ培養にスケールアップする。産生段階を開始するために、細胞を、成長させた４００Ｌの細胞懸濁液から実用容量約２，０００Ｌの産生バイオリアクタに移す。

２，０００Ｌバイオリアクタにおける産生培養。細胞を接種する前に、０．２２μｍ以下のフィルタでろ過した産生培地を産生バイオリアクタに添加する。充填した産生バイオリアクタの内容物を約３７℃に加温し、細胞を接種する間にわたってこの温度に維持する。産生段階の初期細胞密度は、細胞０．１〜０．５×１０^６個／ｍＬの範囲内を目標とする。フェドバッチモードで、産生バイオリアクタを稼働させる。抗体の産生を支援して培養継続期間を延長するために、産生段階で栄養供給培地を添加する。供給を開始する時点は、培養時間または細胞密度のいずれかによって決定する。必要に応じて、産生段階でグルコース溶液および／またはグルタミン溶液を添加して、産生期間中にこれらの物質が枯渇するのを回避することができる。２，０００Ｌ産生バイオリアクタの稼働時間は、典型的には、８〜１４日間である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで、無菌性、マイコプラズマおよびアデノウイルスについて、採取前の試料を試験する。

採取および浄化。産生相における培養の８〜１４日後に、細胞培養液を細胞から分離する。採取前サンプリングの後および採取前に、培養物のｐＨおよび温度を調整して、採取時における細胞、デブリおよび粒子の除去を容易にすることができる。細胞を除去するために、培養物を遠心分離およびデッドエンドろ過ユニットに通す。細胞を遠心分離し、および／または膜によって保持する。採取した培養液を孔径０．２２μｍ以下のフィルタに通して、適切な容器内に収集する。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗い流すことによって、残った培養液を採取システムから除去して、残った産生物を採取システムから回収することができる。得られた回収産生物量を採取した培養液と共に収集して、無細胞採取培養液（ＨＣＣＦ）とも呼ばれる採取プールを形成する。ＨＣＣＦのｐＨおよび温度を調整して、この後の下流の処理工程を容易にすることができる。

精製。アフィニティクロマトグラフィ、酸処理、深層ろ過、陰イオン交換クロマトグラフィ、陽イオン交換クロマトグラフィ、ナノろ過および限外ろ過／透析ろ過（これらのいくつかは、数サイクルで実施してもよい）を含む一連の工程によって、ＨＣＣＦから抗体を精製する。混入物を除去するために、アフィニティクロマトグラフィのプロセス工程は、抗体産生物に特異的に結合する。ＭａｂＳｅｌｅｃｔマトリックスを詰めたクロマトグラフィカラムにＨＣＣＦを適用する。このマトリックスは中性ｐＨで抗体に結合するが、混入物はフロースルーに現れて除去される。ｐＨ３．５における１００ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム溶液による溶出工程においてこのカラムを溶出する。潜在的なウイルス混入物を不活性化するために、抗体溶液を室温、ｐＨ３．５±０．１で最低６０分間インキュベートする。インキュベートした後、２Ｍトロメタモール溶液を使用して、酸処理したプールをｐＨ７．２に調整し、深層ろ過に供して浄化する。陰イオン交換クロマトグラフィの場合、深層ろ過産生物のプールを注射用水（ＷＦＩ）で伝導率≦７ｍＳ／ｃｍに調整する。Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ樹脂を詰めたクロマトグラフィカラムに、調整したプールを適用する。抗体は、陰イオン交換マトリックス非結合部を通過する。フロースルーをモニタリングし、吸光度測定に基づいて抗体含有画分を収集する。陽イオン交換クロマトグラフィの場合、酢酸を添加することによって産生物のプールをｐＨ５．５±０．１に調整し、ＷＦＩで最大≦７．５ｍＳ／ｃｍの伝導率に調整する。ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ陽イオン交換樹脂を詰めたクロマトグラフィカラムに、調整した産生物のプールを適用する。このクロマトグラフィ工程は、結合−溶出モードで実施する。抗体は、陽イオン交換マトリックスに結合する。ｐＨ５．５における１００ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウムおよび１３８．５ｍＭ塩化ナトリウム溶液による溶出工程にてこのカラムを溶出する。抗体溶液を０．１μｍプレフィルタおよびＰｌａｎｏｖａ ２０ＮナノフィルタにＰｌａｎｏｖａ ２０Ｎナノフィルタの差圧が最大圧１ｂａｒで通すことによって、潜在的なウイルス混入物を除去する。限外ろ過／透析ろ過（ＵＦ／ＤＦ）の際に、産生物を目標濃度に濃縮し、バッファーを製剤バッファーに交換する。約３０ｋＤのカットオフを有する限外ろ過膜を使用して、濃縮および透析ろ過を実施する。この産生物を３０〜１００ｍｇ／ｍＬに濃縮することによって、この物質を処理する。次いで、３０ｋＤプールを２５ｍＭ Ｌ−ヒスチジン溶液（ｐＨ６．５）で透析ろ過し、約６０〜７０ｍｇ／ｍＬの濃度にする。３０ｋＤプールの中間体は、製剤化を実施するまで−４０℃で保存してもよい。製剤化では、３０ｋＤ産生物プールを、１７．５ｍＭＬ−ヒスチジン／７．５ｍＭＬ−ヒスチジン塩酸塩、２３０ｍＭトレハロース、および０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０を含有する溶液（ｐＨ＝６．５）に調整する。最後に、製剤バッファーで、抗体を所望の目標濃度１０ｍｇ／ｍＬに希釈する。得られた原薬を０．２２μｍのフィルタに通してろ過し、あらゆる潜在的な外来性微生物混入物および粒子状物質を除去する。原薬は、充填するまで−４０℃で凍結保存することができる。

実施例７．ヒト化２Ａ４抗体を含有する原薬の特性決定
製剤化に使用するヒト化２Ａ４は、２つのヘテロダイマーから構成される。ヘテロダイマーは、それぞれ、約５０ｋＤａ（４４９アミノ酸）の重鎖ポリペプチドおよび約２４ｋＤａ（２１９アミノ酸）のκ軽鎖ポリペプチドから構成される。抗体タンパク質は、総分子量約１４７ｋＤａのヒト化アミノ酸配列を有する。抗体分子の４本のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに連結されている。重鎖ポリペプチドは、それぞれ、占有されたＮ連結グリコシル化のための１つのコンセンサス配列（図１Ａの太字下線で強調されている２９９位〜３０１位）を含有する。血清アミロイドＡエピトープに対する結合部位は、１抗体分子あたり２つある。

競合結合ＥＬＩＳＡを行って、ヒト化２Ａ４のその抗原（オボアルブミンにコンジュゲートされる場合にはＣＧＧＨＥＤＴ（配列番号１７））に対する結合を参照基準と比較して測定した。

実施例８．ヒト化２Ａ４原薬の成分および組成
臨床用途のヒト化２Ａ４原薬（１００ｍｇ／バイアル）は、２５ｍＬバイアル（２０Ｒ）中の１０ｍＬ分からなる滅菌液体剤形である。非臨床ヒト化２Ａ４原薬（２００ｍｇ／バイアル）は、２５ｍＬバイアル（２０Ｒ）中の２０ｍＬ分である。ヒト化２Ａ４の非臨床製剤および臨床製剤を表１に与える。ヒト化２Ａ４原薬の最終製剤は、２０℃およびｐＨ６．５で１．０３４ｇ／ｍＬの密度を有する。

実施例９．薬物製品用のバッチ処方（１００ｍｇ／ｍｌバイアル）

表２に示されているように、２，６００バイアルバッチの薬物製品について、処方を設計した。

実施例１０．凍結乾燥

Ｈｏｆ Ｃｏｍ ２６０４１凍結乾燥機を使用して、製剤化したヒト化２Ａ４原薬を約８６時間にわたって凍結乾燥し、圧力は、表３に示されているプログラムにしたがってＮ_２注入によりＭＫＳ制御システム（ＭＫＳ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）によって調節した。終点は、ピラニシグナルによって検出した。乾燥モードでは、凍結乾燥プレート（ｌｙｏ ｐｌａｔｅ）を用いずに、バイアルを棚に直接立てた。窒素バックフィルは、医薬品グレードの滅菌Ｎ_２による約６００ｍｂａｒである。次いで、バイアルを閉じ、凍結乾燥機内に５℃で保存した。最終薬物製品を２〜８℃で保存し、光から保護する。このプロセスにより、白色〜黄色っぽい凍結乾燥ケーキが得られるはずである。

表３は、ヒト化２Ａ４原薬の凍結乾燥プログラムを要約したものである。

実施例１１．凍結乾燥薬物製品の再構成
適用前に、凍結乾燥物を注射用滅菌水で再構成しなければならない。層流下で以下の手順にしたがって、ｈ２Ａ４バイアルの再構成を実施した。それぞれの製品バイアルのコンプリートフリップオフキャップを除去した。ゴム栓も除去した。必要体積をピペッティング（ピストンピペットを使用して２×５ｍＬ ＷＦＩ）することによって溶媒を添加した。この操作を実施する際、確実に、溶媒を凍結乾燥製品にゆっくりと添加するようにした。凍結乾燥製品が完全に溶解するまで、バイアルを注意深く回した（振盪ではない）。バイアルを転がして注意深く回転させることによって、この溶液を均一にした。溶解した物質を表１にしたがって等分し、分析まで−７０℃で保存した。

実施例１２．ヒト化２Ａ４原薬の臨床評価
臨床試験を設計して、ＡＬアミロイドーシスを有する被験体におけるヒト化２Ａ４原薬の最大耐用量（ＭＴＤ）および／または第２相推奨用量（Ｐ２ＲＤ）を決定する。投与を０．５ｍｇ／ｋｇで開始し、３０ｍｇ／ｋｇの高さまたは合計２５００ｍｇ（いずれか少ない方）まで増加させる。最初は、臓器機能の進行、または処置に関係する許容できない毒性、または同意の取り下げまで、ヒト化２Ａ４原薬を２８日間毎に単一薬剤として静脈内付与する。初期用量のヒト化２Ａ４原薬の半減期（ｔ_１／２）により、異なる投与スケジュール（例えば、２週間毎、あるいは２８日間に１回よりも少ない頻度のスケジュール）がより適切であることが示唆される場合、別の投与スケジュールを使用して、次のコホートの投与を改変してもよい。

Claims (1)

1. 本明細書に記載の製剤。