JP2019530875A - 患者サンプルにおけるｕｃｈ−ｌ１状況を評価する改善された方法 - Google Patents

患者サンプルにおけるｕｃｈ−ｌ１状況を評価する改善された方法 Download PDF

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Abstract

本明細書では、対象者におけるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する改善された方法（例えば、外傷性脳損傷の尺度として、又は他の臨床的理由のため）が開示されている。本明細書では、対象者における対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＵＣＨ−Ｌ１状況を、例えば、外傷性脳損傷の尺度として、又は他の臨床的理由のために、評価する方法も開示されている。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１６年１０月３日出願の米国暫定特許出願第６２／４０３，２９３号、及び２０１７年２月６日出願の米国特許出願第６２／４５５，２６９号（いずれも、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）に対する優先権を主張するものである。
電子的提出物の援用
本願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるものとする。２０１７年１０月２日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０１７＿１０＿０２＿１２９９４ＷＯＯ１−ＳＥＱ−ＬＩＳＴ．ｔｘｔと称され、サイズは６，２７４バイトである。
本開示は、例えば、外傷性脳損傷の尺度としての、又は他の臨床的理由による、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する改善された方法に関するものである。本発明は、例えば、外傷性脳損傷の尺度としての、又は他の臨床的理由による、対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価する方法に関するものである。
外傷誘発性の脳、脊髄及び他の神経損傷が観察される、多くの状況がある。例えば、でこぼこで高振動の地上輸送及び航空輸送をされた場合に脊髄及び頭部の損傷のある犠牲者が経験する重度の疼痛を、戦場医療従事者が報告している。医療輸送時に患者が経験するショック及び振動の繰り返しが、医学的転帰に影響する可能性がある。脊髄損傷（ＳＣＩ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、及び／又は他の重度の神経損傷の犠牲者は、車両での繰り返しのショック及び振動に対して最も脆弱である。神経、軸索及び星状膠細胞損傷の液体マーカーがあれば、それが、患者における振盪の診断を助け、頭部外傷の撮像を行って短期及び長期の臨床的転帰を予測し、その脳がＴＢＩからいつ頃回復するかを知らせる必要性を評価する上で役立つものと考えられる。現時点で生物マーカーの候補となっているものには、血清検出の感度、脳に向かう特異性、及びアッセイ標準化の欠如において不十分なものであることにより、制限されている。超急性から急性のＴＢＩの損傷の範囲を評価するための、現場アッセイ用の急性マーカーが存在しない。さらに、現在、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）又は慢性神経変性（慢性進行性外傷性脳症、ＣＴＥ、「パンチドランク」）を引き起こし得る、振盪後の持続的脳損傷を伴う軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）を確認する方途がない。
軽度ＴＢＩ又は振盪は客観的に検出することは非常に困難であり、救急治療部署、戦場、緊急治療室、入院患者のある病院、外来患者診療所、スポーツ部門及び地域で広く日常的な問題となっている。振盪は通常、出血などの目で見える病態や、従来の脳のコンピュータ断層撮影での異常を生じさせることはないが、急速に発症する神経機能障害を生じさせ、それは数日から数週間かけて自然に回復する。軽度ＴＢＩ患者の約１５％が持続的認知機能障害に苦しむ。
緊急治療室、入院患者のある病院、及び診療所、スポーツ分野及び軍事活動（例えば、戦闘）において現場で軽度ＴＢＩ被害者を評価する手段が必要とされているが、それを満足させるものはない。
本開示は、対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法に関する。当該方法は、前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも一つの生物マーカーを検出する工程を含み、生物マーカーの少なくとも一つがＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、及び（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である。本方法において、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出することができる。一部の態様において、測定されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、２５，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
本開示は、対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法に関するものである。当該方法は、ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生する工程と；ｂ）前記サンプル中に存在する前記一又は複数の第１の複合体中のＵＣＨ−Ｌ１を検出する工程とを含み、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；（ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法は５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は（ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、約１０％未満ＣＶの精度及び約１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される。本方法では、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出することができる。一部の態様において、測定されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、２５，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
本開示は、対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法に関するものである。当該方法は、ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーの少なくとも一方が検出可能な標識を含む工程と；ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；（ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法は５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は（ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、約１０％未満ＣＶの精度及び約１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される。一部の態様において、測定されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、２５，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
本開示は、対象者からの生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法に関するものである。本開示は、対象者からの生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の測定方法に関するものでもある。当該方法は、（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、（１）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（２）（第１の）可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合することにより少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの（第１の）検出抗体と接触させることにより、少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成すること、及び（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めることを含み、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；（ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法は５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は（ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、約１０％未満ＣＶの精度及び約１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される。一部の態様において、測定されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、２５，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
上記の方法はさらに、一又は複数の他の生物マーカーとともにＵＣＨ−Ｌ１を評価することをさらに含むことができる。例えば、対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）状況を、対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況とともに評価することができる。１態様において、当該方法では、対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出し、その生物マーカーのうちの少なくとも二つがＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、及び（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である。この方法において、ＵＣＨ−Ｌ１は、イムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出することができる。一部の態様において、測定されるＧＦＡＰのレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、５０，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
別の態様において、前記の対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況の評価方法は、
ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程と；ｂ）前記サンプル中の前記一又は複数の第２の複合体中のＧＦＡＰを検出することを含む方法を用いて、対象者のＧＦＡＰ状況を評価する工程とを含み；当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、及び（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる。この方法において、ＧＦＡＰは、イムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出することができる。一部の態様において、測定されるＧＦＡＰのレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、５０，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
さらに別の態様において、前記の対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況の評価方法はさらに、ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーは第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量がサンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの前記検出可能な標識からの前記検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができる工程とを含む方法を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することを含み、当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、及び（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる。一部の態様において、測定されるＧＦＡＰのレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、５０，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
さらに別の態様において、前記の対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況の評価方法は、（ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、（１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＧＦＡＰ上のエピトープに結合することにより少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの検出抗体と接触させる工程と、（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰの量若しくは濃度を求める工程とを含む方法を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することをさらに含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である。一部の実施形態において、当該方法は、ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の両方について５ｌｏｇのダイナミックレンジを有する。一部の態様において、測定されるＧＦＡＰのレベルは、使用されるアッセイ方式及び装置に応じて、５０，０００ｐｇ／ｍＬより高い可能性がある。
上記各方法が、拡張された検出ウィンドウを提供することができる。その拡張された検出ウィンドウとは、広い検出ウィンドウ、例えば最新技術のアッセイより広い検出ウィンドウである。具体的には、上記方法は、前記対象者の臨床状態、臨床検査値、臨床状態及び臨床検査値、低若しくは高レベルのＵＣＨ−Ｌ１の表示とは無関係に行うことができる。上記方法はまた、前記対象者の臨床状態、臨床検査値、臨床状態及び臨床検査値、低若しくは高レベルのＧＦＡＰの表示とは無関係に行うことができる。さらに又は或いは、上記方法は、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有することができる。さらに又は或いは、上記方法は、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有することができる。
さらに、上記各方法は、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行うことができる。
さらに、上記各方法を用いて、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される範囲にわたってＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定することができる。
さらに、上記の方法において、第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー、第３の特異的結合メンバー又は第４の特異的結合メンバー等（複数の生物マーカーを検出している場合に応じて）のいずれか、検出可能な標識を含まないものを、固体支持体上に固定化することができる。
さらに、上記の方法において、前記特異的結合相手（ＵＣＨ−Ｌ１、ＧＦＡＰその他など）のいずれも、単一特異性抗体（例えば、モノクローナル抗体）であることができる。
さらに、上記の方法において、生体サンプルは希釈を必要としない。例えば、上記の方法において、生体サンプルは、全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択することができる。上記の方法において上記の方法において、生体サンプルは、約１〜約２５マイクロリットルである。
さらに、上記の方法において、当該方法は、約５〜約２０分以内で行うことができる。或いは、当該方法は約１５分以内で行われる。或いは、当該方法は、約３０分未満、例えば約２５分未満、約２０分未満、又は約１５分未満で行われる。
さらに、上記の方法において、生体サンプル取得時点と対象者が頭部に損傷を受けた可能性がある時点との間の時間は未知である可能性がある。或いは、生体サンプル取得時点と対象者が頭部に損傷を受けた可能性がある時点との間の時間は、０〜約１２時間、約１２〜約２４時間、約２４〜約３６時間、約３６〜約４８時間、約４８〜約７２時間、約７２〜約９６時間、約９６〜約１２０時間、約１２０時間〜約７日、約７日〜約１ヶ月、約１ヶ月〜約３ヶ月、約３ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約１年、約１年〜約３年、約３年〜約６年、約６年〜約１２年、約１２年〜約２０年、約２０年〜約３０年、及び約３０年〜約５０年からなる群から選択することができる。或いは、生体サンプル取得時点と対象者が頭部に損傷を受けた可能性がある時点との間の時間は、５０年未満、３０年未満、２０年未満、１２年未満、６年未満、３年未満、１年未満、約６ヶ月未満、約３ヶ月未満、約１ヶ月未満、約７日未満、約１２０時間未満、約９６時間未満、約７２時間未満、約４８時間未満、約３６時間未満、約２４時間未満、又は約１２時間未満からなる群から選択することができる。
上記の方法において、当該方法は、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷がないことを確認するために行う事ができる。例えば、当該方法を用いて、対象者における外傷性脳損傷又は外傷性脳損傷のないことの診断を支援し、リスクを明らかにし、確認し、評価し、及び／又は予後判定することができる。上記の方法において、外傷性脳損傷は、軽度外傷性脳損傷であることができる。
上記の方法において、前記接触は、同時に行うことができる。或いは、前記接触は、順次に行うことができる。
上記の方法において、前記状況は、単一時点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル及び量を測定することによって評価することができる。或いは、上記の方法において、対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況は、複数の時点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル及び量を測定することによって評価することができる。
上記方法のいずれにおいても、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーは、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する。
上記方法のいずれにおいても、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー、第３の特異的結合メンバー、第４の特異的結合メンバー等は、抗体又は抗体断片であることができる。例えば、上記方法のいずれにおいても、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー、第３の特異的結合メンバー、第４の特異的結合メンバー等はそれぞれ、単一特異性抗体、例えばヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体であることができる。
上記各方法は、ポイント・オブ・ケア機器で行うことができる。
ＵＣＨ−Ｌ１較正曲線を示す図である。 正常ドナーにおけるＵＣＨ−Ｌ１サンプル分布を示す図である。 ＵＣＨ−Ｌ１生物マーカープロファイルを示す図である。時間点は、実施例３に記載の通りである。 患者群横断的なＵＣＨ−Ｌ１結果の広い分布を示すボックスプロットを示す図である。時間点は、実施例３に記載の通りである。 希釈液１（実施例１に記載）中のＵＣＨ−Ｌ１の予測濃度対実測濃度を示す図である。 希釈液２（実施例１に記載）中のＵＣＨ−Ｌ１の予測濃度対実測濃度を示す図である。 延長較正曲線（実施例１に記載）での希釈液３中のＵＣＨ−Ｌ１の予測濃度対実測濃度を示す図である。 可能なＴＢＩドナーにおけるＵＣＨ−Ｌ１サンプル相関を示す図である。 正常ドナーにおけるＵＣＨ−Ｌ１サンプル相関を示す図である。 可能なＴＢＩドナーにおけるグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）を示す図である。 正常ドナーにおけるＧＦＡＰサンプル相関を示す図である。
本開示は、生体サンプル若しくは試験サンプル中のＧＦＡＰのレベル、生体サンプル若しくは試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルの検出、分析、又は検出と分析する上で役立つ改善されたアッセイに関するものである。本明細書に記載の改善されたアッセイは、当業界で公知のあらゆる種類のアッセイであることができる。一つの好ましい種類のアッセイはイムノアッセイである。当該改善されたアッセイを用いてあらゆる目的のためにＵＣＨ−Ｌ１を検出、分析、又は検出と分析若しくは評価することができる。１実施形態において、改善されたアッセイを用いて、生体サンプル若しくは試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを検出、分析、検出と分析、又は評価して、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の診断を即座に支援し、進行をモニタリングし、及び／又は頭部への損傷を有していると疑われるか、頭部に実際の損傷を有している対象者における転帰を予測することができる。
驚くべきことに、改善されたイムノアッセイを用いて、広い濃度範囲にわたって生体サンプル中低レベルでのＵＣＨ−Ｌ１を測定又は評価することができることから、例えば、患者におけるＴＢＩの診断及び識別において役立つ、より用途が広く感度の高いアッセイを提供することができる。詳細には、開示のイムノアッセイの濃度範囲が広がることにより、より正確且つ高感度のアッセイが提供され、適宜にそれを、患者における外傷性脳損傷の診断及び識別のために、頭部損傷及び／又は振盪の評価のために、画像診断の必要性の予測のために用いることができる。従って、開示のイムノアッセイを用いて、対照サンプル若しくはキャリブレータサンプルと比較した希釈若しくは未希釈サンプル中の低レベル若しくはより高レベルのＵＣＨ−Ｌ１での増加若しくは減少したＵＣＨ−Ｌ１濃度を測定することができることから、適宜に、患者におけるＴＢＩの確認に用いることができる。さらに、開示のイムノアッセイは、当該アッセイのダイナミックレンジにおいて直線性である。さらに、開示のイムノアッセイは、５ｌｏｇ以下のダイナミックレンジ（即ち、５〜２５，０００）を有する。ＵＣＨ−Ｌ１イムノアッセイを用いることにより、例えば、外傷性脳損傷患者の正確な診断及びその後の治療における正確な支援を得ることができる。改善されたＵＣＨ−Ｌ１イムノアッセイは、患者の状況の診断及び識別（例えば、外傷性脳損傷の尺度又は他の臨床的理由による）における支援のために、改善されたグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）イムノアッセイと併用することもできる。１態様において、当該ＵＣＨ−Ｌ１及びＧＦＡＰイムノアッセイは、多重方式で行う。多重方式を行う方法は、当業界では公知である。生体サンプル若しくは試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１レベルを求めるのに用いられる最新技術のアッセイ、例えばイムノアッセイは、本明細書に記載の改善されたアッセイのダイナミックレンジから外れたＵＣＨ−Ｌ１レベルを検出できない可能性がある。そうした場合、いずれのＵＣＨ−Ｌ１レベルも、希釈後に再測定するか（例えば、サンプル濃度が検出上限を超える場合）、又はより高いサンプル体積を用いて再測定する（例えば、測定されるＧＦＡＰ濃度が検出限界（ＬｏＤ）以下である場合）必要がある。そのような再測定は、発生する追加経費並びに時間の損失のため問題があり、そのいずれも、当該アッセイを、迅速かつ正確で費用効率が高い検出が必須である実際のＴＢＩ（又は他のＵＣＨ−Ｌ１関連の重大な疾患、障害若しくは状態）が疑われるかそれを得ている対象者における診断を助け、診断し、進行をモニタリングし、又は転帰を予測するのに用いられる場合に特に問題となる。従って、当業界で公知のアッセイのダイナミックレンジを増加又は拡大する改善されたアッセイは、再試験の回数を減らし、処置を必要とする対象者における、外傷性脳損傷患者などの患者における迅速かつ正確な費用効率の高い支援を可能とするものと考えられる。
本開示のアッセイは、当業界において公知のアッセイに勝る多くの改善を示すものである。具体的には、本開示のアッセイは、ダイナミックレンジ増加及び感度上昇を示す。１態様において、本開示のアッセイは、約１ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、約１０ｐｇ／ｍＬ、約１５ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ又は約３０ｐｇ／ｍＬというより低い検出限界（ＬｏＤ）を示す。さらに、本開示のアッセイは、５ｌｏｇ以下のダイナミックレンジ（即ち、５ｐｇ／ｍＬ〜５０，０００ｐｇ／ｍＬ）を示す。本開示の改善されたアッセイの一つの例は、約１０ｐｇ／ｍＬ又は約２０ｐｇ／ｍＬのＬＯＤを有するイムノアッセイである。改善されたアッセイの別の例は、５ｌｏｇ以下のダイナミックレンジを有するイムノアッセイである。本開示のアッセイの改善された感度下限は、本明細書において上記で論じられたサンプルの再測定の問題を回避するものである。さらに、本開示のアッセイで使用される生体サンプル若しくは試験サンプは、希釈することができるか、未希釈であることができ、希釈が必要とされているわけではない。
さらに、本開示の改善されたアッセイは、迅速に実施若しくは実行することができ、アッセイを開始若しくは着手した時点から約５分未満、約６分未満、約７分未満、約８分未満、約９分未満、約１０分未満、約１１分未満、約１２分未満、約１３分未満、約１４分未満、約１５分未満、約１６分未満、約１７分未満、約１８分未満、約１９分未満及び約２０分未満以内で結果を提供することができる。本開示の改善されたアッセイの一つの例は、アッセイ開始若しくは着手から約１０分未満以内に結果を提供するイムノアッセイである。本開示の改善されたアッセイの別の例は、約１０ｐｇ／ｍＬのＬｏＤを有し、１０分未満以内に結果を提供するイムノアッセイである。本開示の改善されたアッセイのさらに別の例は、約２０ｐｇ／ｍＬのＬｏＤを有し、１０分未満以内に結果を提供するイムノアッセイである。
本開示のアッセイは実行され、迅速に結果を提供することから、アッセイによって生じるシグナルの量が制御され、シグナルの過飽和が減る。当業界で公知のアッセイと比較した場合にシグナルのそのような過飽和が減ることから、本開示のアッセイは、当業界で公知の他のアッセイと比較して、少ない若しくは低減されたフック効果を示す。
広い濃度範囲にわたって生体サンプル中の低レベルでのＵＣＨ−Ｌ１を測定又は評価するのに用いられる場合の本開示の改善されたアッセイは、現在当業界で公知のアッセイより、外傷性脳損傷を評価するための用途が広く感度の高いアッセイを提供する。結果的に、開示のアッセイの濃度範囲増加によって、患者における外傷性脳損傷の診断及び識別を支援するためのより正確且つ高感度のアッセイが提供される。従って、本開示の改善されたアッセイを用いて、対照サンプル若しくはキャリブレータサンプルと比較した希釈若しくは未希釈サンプル中の低レベル若しくはより高レベルのＵＣＨ−Ｌ１での増加若しくは減少したＵＣＨ−Ｌ１濃度を測定することができるので、患者におけるＴＢＩの確認に用いることができる。
理論に拘束されるものではないが、本開示の驚くべき改善されたアッセイに寄与しかつこれをもたらす、多くの理由があると考えられている。主たる理由は、アッセイ時間短縮によるフック効果の可能性低下であるように思われる。フック効果（又はプロゾーン現象）は、当業界で公知の他の手段によっても回避可能であるが（例えば、複合体濃度の上昇）、場合によっては、アッセイの下限感度を破壊する可能性がある。しかしながら、その場合は、例えば、アッセイで使用される試薬の濃度を至適化することによって、アッセイの加減感度を維持するように注意が払われた。さらに、ＵＣＨ−Ｌ１に対して異なる結合特異性を有する抗体のスクリーニング及び選択において注意を払うことにより、その抗体が異なる部位に結合できるので、従って、捕捉若しくは検出のどちらかに用いることができるようになった。そのような至適化は、当業界における通常の技術を用いて行うことができる。
本セクション及び本明細書における開示全体で使用されるセクションの表題は、単に構成上の目的のためであり、本発明を限定するものではない。
１．定義
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者が通常理解するものと同じ意味を有する。不一致がある場合は、定義を含めて本明細書が優先される。好ましい方法及び材料は後述されるが、本明細書に記載されている方法及び材料と同様又は同等のものは本発明の実施又は試験において使用することができる。本明細書において言及される全ての出版物、特許出願、特許及び他の参考文献は参照によりそれらの全体を組み込む。本明細書において開示されている材料、方法及び実施例は例として挙げたにすぎず、限定を意図したものではない。
「含む」、「含む」、「有すること」、「有する」、「できる」、「含有する」という用語及びこれらの派生語は、本明細書において使用するとき、作業又は構造を追加する可能性を排除することのない、オープンエンドな移行句、用語又は単語であることが意図される。単数形である「１つの（ａ）」、「及び（ａｎｄ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に他に指示をしていなければ、複数参照を含む。本開示はまた、明示的に記載されているか否かにかかわらず、本明細書において提示されている実施形態又は要素「を含む」、「からなる」及び「から本質的になる」他の実施形態を考慮している。
本明細書における数的範囲の記載に関して、その範囲内の各中間数値が、同程度の正確さを持って明瞭に想定される。例えば、６〜９の範囲の場合、６及び９に加えて、７及び８という数字が想定され、範囲６．０〜７．０の場合、数字６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０が明瞭に想定される。
「親和性成熟抗体」は、改変（複数可）を有しない親抗体と比較して、標的抗原に対する抗体の親和性（すなわち、ＫＤ、ｋｄ又はｋａ）の改善をもたらす、１つ以上のＣＤＲにおける１つ以上の改変を有する抗体を指すために本明細書において使用される。例示的な親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル又はさらにはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体を生産するための様々な手段が当該技術分野において知られ、バイオディスプレイを用いて生産されているコンビナトリー抗体ライブラリーのスクリーニングを含む。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９−７８３頁（１９９２年）は、ＶＨ及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１巻：３８０９−３８１３頁（１９９４年）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９巻：１４７−１５５頁（１９９５年）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５巻：１９９４−２００４頁（１９９５年）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４巻（７号）：３３１０−３３１９頁（１９９５年）；及びＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６巻：８８９−８９６頁（１９９２年）に記載されている。選択的突然変異誘発部位及び活性増強アミノ酸残基との接触部位又は超突然変異部位での選択的突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
本明細書で使用される場合の「抗体」及び「抗体（複数）」とは、モノクローナル抗体、単一特異性抗体（例えば、モノクローナルであってもよく、又は共通の胚細胞からモノクローナル抗体を産生する他の手段によって産生されてもよい）、多重特異性抗体、ヒト抗体、（完全に又は部分的にヒト化された）ヒト化抗体、鳥類（例えば、アヒル又はガチョウ）、サメ、クジラ及び哺乳動物、例えば非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど）若しくは非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジーなど）を含むがこれらに限定されない動物抗体、組換え抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖｓ（「ｓｃＦｖ」）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（「ｓｄＦｖ」）及び抗イディオタイプ抗体（「抗Ｉｄ」）、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体又は三重可変ドメイン（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びこれらを製造する方法は、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５巻（１１号）：１２９０−１２９７頁（２００７年）及びＰＣＴ国際出願公開第ＷＯ２００１／０５８９５６号に記載されており、それぞれの文献の内容は、参照により本明細書に組み込む）、又はドメイン抗体（ｄＡｂｓ）（例えば、Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２１：４８４−４９０に記載のものなど）、及び例えば、軟骨魚類及びラクダ科でのように天然の、又は合成の単一ドメイン抗体ｓｄＡｂｓ、例えば、ナノボディ、ＶＨＨ、又は他のドメイン構造）など、並びに上述されたいずれかの機能的に活性なエピトープ結合断片を指す。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、分析物結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。簡単にするために、分析物に対する抗体は、本明細書においてしばしば「抗分析物抗体」又は単に「分析物抗体」（例えば、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体又はＵＣＨ−Ｌ１抗体）と称される。
本明細書で使用される場合の「抗体断片」とは、抗原−結合部位又は可変領域を含む完全な抗体の一部を指す。一部は、完全な抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわち、抗体アイソタイプに応じたＣＨ２、ＣＨ３又はＣＨ４）を含まない。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、ただ１つの軽鎖可変ドメインを含有する一本鎖ポリペプチド、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有する一本鎖ポリペプチド、ただ一つの重鎖可変領域を含有する一本鎖ポリペプチド及び重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有する一本鎖ポリペプチドが挙げられる。
「曲線下面積」又は「ＡＵＣ」は、ＲＯＣ曲線下の面積を指す。ＲＯＣ曲線下のＡＵＣは、精度の尺度である。ＡＵＣ １は完全な試験を表し、ＡＵＣ ０．５は意味のない試験を表す。好ましいＡＵＣは、少なくとも約０．７００、少なくとも約０．７５０、少なくとも約０．８００、少なくとも約０．８５０、少なくとも約０．９００、少なくとも約０．９１０、少なくとも約０．９２０、少なくとも約０．９３０、少なくとも約０．９４０、少なくとも約０．９５０、少なくとも約０．９６０、少なくとも約０．９７０、少なくとも約０．９８０、少なくとも約０．９９０、又は少なくとも約０．９９５であることができる。「ビーズ」及び「粒子」は本明細書において互換的に使用され、実質的に球形の固体支持体を指す。ビーズ又は粒子の一つの例は、微小粒子である。本明細書で使用可能な微小粒子は、当業界で公知のあらゆる種類であることができる。例えば、そのビーズ又は粒子は、磁性ビーズ又は磁性粒子であってよい。磁性ビーズ／粒子は強磁性、フェリ磁性、常磁性、超常磁性又は磁性流体であることができる。例示的な強磁性材料には、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｇｄ、Ｄｙ、ＣｒＯ２、ＭｎＡｓ、ＭｎＢｉ、ＥｕＯ、及びＮｉＯ／Ｆｅなどがある。フェリ磁性材料の例には、ＮｉＦｅ２Ｏ４、ＣｏＦｅ２Ｏ４、Ｆｅ３Ｏ４（又はＦｅＯ・Ｆｅ２Ｏ３）などがある。ビーズは、磁性であって、一又は複数の非磁性層によって囲まれた固体コア部分を有することができる。或いは、その磁性部分は、非磁性コア周囲の層であることができる。微小粒子は、本明細書に記載の方法で作用すると考えられる大きさのものであることができ、例えば、約０．７５〜約５ｎｍ、又は約１〜約５ｎｍ、又は約１〜約３ｎｍである。微小粒子は、本明細書に記載の方法で作用すると考えられる大きさのものであることができ、例えば、約０．７５〜約５ｎｍ、又は約１〜約５ｎｍ、又は約１〜約３ｎｍである。
「結合タンパク質」は、本明細書において、例えばポリペプチド、抗原、化合物若しくは他の分子、又はあらゆる種類の基質などの結合相手に結合し、複合体を形成するモノマー若しくは多量体タンパク質を指すのに用いられる。結合タンパク質は、結合相手に特異的に結合する。結合タンパク質には、抗体、並びにそれの抗原結合断片並びに当業界で公知であって本明細書において下記の他の各種形態及び誘導体、及び抗原分子又は抗原分子上の特定部位（エピトープ）に結合する一又は複数の抗原結合ドメインを含む他の分子などがある。従って、結合タンパク質には、抗体、四量体免疫グロブリン、ＩｇＧ分子、ＩｇＧ１分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、親和性成熟抗体、及び抗原に結合する能力を保持したそのような抗体の断片などがあるが、これらに限定されるものではない。
「二重特異性抗体」は、クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ）技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻（５９３４号）：５３７−５４０頁（１９８３年）を参照されたい）により、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的結合（Ｓｔａｅｒｚら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４巻（６０１２号）：６２８−６３１頁（１９８５年）を参照されたい）により又はノブイントゥーホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）若しくは１つだけが機能的な二重特異性抗体である多数の異なる免疫グロブリン種をもたらすＦｃ領域に突然変異を導入する類似したアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻（１４号）：６４４４−６４４８頁（１９９３年）を参照されたい）により作製される完全長抗体を指すために本明細書において使用される。二重特異性抗体は、２つの結合アーム（１対のＨＣ／ＬＣ）のうちの１つにおいて１つの抗原（又はエピトープ）を結合させ、第２のアーム（別の１対のＨＣ／ＬＣ）において異なる抗原（又はエピトープ）を結合させる。この定義によって、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原結合性アーム（特異性とＣＤＲ配列の両方において）を有し、それが結合する各抗原に対して一価である。
「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の「相補性決定領域」を指すために本明細書において使用される。重鎖及び軽鎖のそれぞれの可変領域において３つのＣＤＲがある。重鎖又は軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域は「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、及び「ＣＤＲ３」と称される。本明細書で使用される「ＣＤＲセット」という用語は、抗原を結合させる単一の可変領域に存在する３つのＣＤＲの群を指す。従って、抗原結合部位は、重鎖及び軽鎖可変領域のそれぞれからのＣＤＲセットを含む６種類のＣＤＲを含むことができる。単一ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、「分子認識ユニット」と称することができる。抗原−抗体複合体の結晶学的解析によって、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合した抗原と広範な接触を形成しており、最も広範な抗原接触は重鎖ＣＤＲ３とのものであることが明らかにされている。従って、分子認識ユニットは主として、抗原結合部位の特異性に関与している可能性がある。概して、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接及び最も実質的に関与している。
これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って、異なって画定されている。Ｋａｂａｔにより報告されているシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．（１９８７年）及び（１９９１年））は、抗体の任意の可変領域に適用可能な一義的に残基を番号付けするシステムをもたらすだけでなく、３つのＣＤＲを画定する正確な残基の境界ももたらす。これらのＣＤＲは「Ｋａｂａｔ ＣＤＲ」と呼ばれる場合がある。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９６：９０１−９１７（１９８７）；及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３４２：８７７−８８３（１９８９））は、アミノ酸配列のレベルで非常に多様であるにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定の小部分がほぼ同一のペプチド骨格構造をとることを見出した。これらの小部分は、「Ｌ１」、「Ｌ２」及び「Ｌ３」、又は「Ｈ１」、「Ｈ２」及び「Ｈ３」と称され、この場合、「Ｌ」及び「Ｈ」は軽鎖及び重鎖の領域をそれぞれ称する。これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」と呼ばれる場合があり、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを画定する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、９巻：１３３−１３９頁（１９９５年）；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ，Ｊ．、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２巻（５号）：７３２−７４５頁（１９９６年）によって報告されている。さらに他のＣＤＲ境界の画定は、本明細書の１つのシステムに厳密には従わないが、それでもなおＫａｂａｔ ＣＤＲと重複する。ただし、特定の残基若しくは残基のグループ又はさらにＣＤＲ全体が抗原結合に有意な影響を与えないという予想又は実験的見解を考慮すると、これらは短くされｒｗもよく又は長くされてもよい。ある特定の実施形態がＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａで画定されたＣＤＲを使用するが、本明細書において使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って画定されたＣＤＲを利用することができる。
「相対変動性」とも称される「変動係数」（ＣＶ）は、平均で割った分布の標準偏差に等しい。
「成分」、「成分（複数）」又は「少なくとも一つの成分」は、本明細書に記載の方法及び当業界で公知の他の方法に従って、患者尿、全血、血清又は血漿サンプルなどの試験散歩売るのアッセイのためのキットに含めることができる、捕捉抗体、検出若しくは複合体（ａ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｒ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、キャリブレータ、対照、感度パネル、容器、緩衝剤、希釈剤、塩、酵素、酵素の補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止溶液などを指す。一部の成分は溶液であることができるか、アッセイ用に再生される凍結品であることができる。
本明細書で使用される場合の「ＣＴスキャン」は、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを指す。ＣＴスキャンは、異なる角度から撮った一連のＸ線画像を組み合わせ、コンピュータ処理を用いて、体内の骨、血管及び軟組織の断面画像又はスライスを作成するものである。ＣＴスキャンは、Ｘ線ＣＴ、陽電子放出型断層撮影（ＰＥＴ）、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴスキャン）、又はコンピュータ断層佐津駅を用いることができる。ＣＴスキャンは、従来のＣＴスキャン又は渦巻状／ヘリカルＣＴスキャンであることができる。従来のＣＴスキャンでは、スキャンをスライスごとに行い、例えば腹部頂部から骨盤まで、各スライス後にスキャンを停止し、次のスライスに移動させる。従来のＣＴスキャンでは、患者は息を止めて、人為的な動きを回避する必要がある。渦巻状／ヘリカルＣＴスキャンは連続スキャンであり、渦巻状に撮像を行い、スキャンされる画像が近接しているかなり迅速なプロセスである。
本明細書で使用される場合の抗体の「誘導体」とは、真正又は親の抗体と比較した場合、アミノ酸配列に対する１つ以上の修飾を有する抗体を指し、改変されたドメイン構造を示し得る。この誘導体は、依然として、天然の抗体に見られる典型的なドメイン構成及び標的（抗原）に特異的に結合することができるアミノ酸配列を採用することができる。抗体誘導体の典型的な例は、他のポリペプチドに連結された抗体、再構成された抗体ドメイン又は抗体の断片である。誘導体はまた、少なくとも１つのさらなる化合物、例えば、タンパク質ドメインを含み得、上記タンパク質ドメインは、共有結合又は非共有結合によって連結されている。この連結は、当該技術分野において公知の方法に従って遺伝子融合に基づくことができる。抗体を含む融合タンパク質中に存在するさらなるドメインは、好ましくは可動性リンカー、有利にはペプチドリンカーによって連結されてもよく、ここで、上記ペプチドリンカーは、さらなるタンパク質ドメインのＣ末端と抗体のＮ末端の間の距離又はその反対にまたがるのに十分な長さの複数の親水性ペプチド結合したアミノ酸を含む。抗体は、生物学的活性又は、例えば、固体支持体、生物学的に活性な物質（例えば、サイトカイン若しくは成長ホルモン）、化学物質、ペプチド、タンパク質若しくは薬物への選択的結合に適した構造を有するエフェクター分子に連結され得る。
「乱用薬物」は、本明細書においては、非医学的理由（例えば、娯楽効果及び／又は精神作用効果のため）で摂取される一又は複数の常習性物質（例えば、薬剤）を指すのに用いられる。そのような乱用薬物の過度の耽溺、使用又は依存は多くの場合、「薬物乱用」と称される。乱用薬物の例には、アルコール、バルビツール酸類、ベンゾジアゼピン類、大麻、コカイン、幻覚薬（例えば、ケタミン、メスカリン（ペヨーテ）、ＰＣＰ、シロシビン、ＤＭＴ及び／又はＬＳＤ）、メタカロン、オピオイド類、アンフェタミン類（メタアンフェタミン類を含む）、タンパク同化ステロイド類、吸入薬（即ち、例えば、亜硝酸塩、スプレー式塗料、クリーニング液、マーカー類、接着剤などの精神活性作用を含む揮発性物質を含む物質）及びこれらの組み合わせなどがある。
「二重特異性抗体」は、それぞれの２つの結合アーム（１対のＨＣ／ＬＣ）において２つの異なる抗原（又はエピトープ）を結合することができる完全長抗体を指すために本明細書において使用される（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０２／０２７７３号を参照されたい）。したがって、二重特異性結合タンパク質は、同一の特異性及び同一のＣＤＲ配列を有する、２つの同一の抗原結合性アームを有し、結合する各抗原に対して二価である。
「二重可変ドメイン」は、結合タンパク質における２つ以上の抗原結合部位を指すために本明細書において使用され、結合タンパク質は、二価（２つの抗原結合部位）結合タンパク質、四価（４つの抗原結合部位）結合タンパク質又は多価結合タンパク質であり得る。ＤＶＤは、単一特異的、すなわち、１つの抗原（又は１つの特異的エピトープ）を結合させることが可能であり得、又は多重特異的、すなわち、２つ以上の抗原（すなわち、同じ標的抗原分子の２つ以上のエピトープ又は異なる標的抗原の２つ以上のエピトープ）を結合させることが可能であり得る。好ましいＤＶＤ結合タンパク質は、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含み、「ＤＶＤ免疫グロブリン」又は「ＤＶＤ−Ｉｇ」と称される。したがって、このようなＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、四量体であり、ＩｇＧ分子を連想させるが、ＩｇＧ分子よりも多くの抗原結合部位を提供する。したがって、四量体ＤＶＤ−Ｉｇ分子の各半分は、ＩｇＧ分子の半分を連想させ、重鎖ＤＶＤポリペプチド及び軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むが、単一の抗原結合ドメインを提供するＩｇＧ分子の１対の重鎖及び軽鎖と異なり、ＤＶＤ−Ｉｇの１対の重鎖及び軽鎖は、２つ以上の抗原結合部位を提供する。
ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の各抗原結合部位は、ドナーの（「親の」）モノクローナル抗体に由来し得、したがって、抗原結合部位ごとに抗原結合に関与する計６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。したがって、２つの異なるエピトープ（すなわち、２つの異なる抗原分子の２つの異なるエピトープ又は同じ抗原分子の２つの異なるエピトープ）を結合させるＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、第１の親モノクローナル抗体に由来する抗原結合部位及び第２の親モノクローナル抗体の抗原結合部位を含む。
ＤＶＤ−Ｉｇ結合分子の設計、発現及び特徴付けの記載は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００７／０２４７１５号、米国特許第７，６１２，１８１号、及びＷｕら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２５巻：１２９０−１２９７頁（２００７年）において提供されている。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の好ましい例は、構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件でリンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは０又は１であるが、好ましくは１である）を含む重鎖を含み；構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件でリンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である）を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖及び２つのこのような軽鎖を含み得、各鎖は、可変領域間に定常領域を挟むことなく、タンデムに連結された可変ドメインを含み、ここで、重鎖及び軽鎖は、結合して、タンデムな機能的抗原結合部位を形成し、１対の重鎖及び軽鎖は、別の１対の重鎖及び軽鎖と結合して、４つの機能的抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。別の例において、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、重鎖及び軽鎖を含み得、重鎖及び軽鎖のそれぞれは、可変ドメイン間に定常領域を挟むことなく、タンデムに連結された３の可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）を含み、ここで、１対の重鎖及び軽鎖は、結合して、３つの抗原結合部位を形成し得、１対の重鎖及び軽鎖は、別の１対の重鎖及び軽鎖と結合して、６つの抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。
好ましい実施形態において、ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、この親モノクローナル抗体が結合する同じ標的分子を結合させるだけでなく、一又は複数のこの親モノクローナル抗体の一又は複数の望ましい特性も有する。好ましくは、このような追加的特性は、一又は複数の親モノクローナル抗体の抗体パラメーターである。一又は複数のこの親モノクローナル抗体からのＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質に寄与し得る抗体パラメーターは、限定されないが、抗原特異性、抗原親和性、有効性、生物学的機能、エピトープ認識、タンパク質安定性、タンパク質可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用能、組織交差反応性及びオルソロガスな抗原の結合を含む。
ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、ＵＣＨ−Ｌ１の少なくとも一つのエピトープを結合させる。ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の非制限的な例としては、ＵＣＨ−Ｌ１の一又は複数のエピトープを結合させるＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質、ヒトＵＣＨ−Ｌ１のエピトープ及び別の種（例えば、マウス）のＵＣＨ−Ｌ１ペプチドのエピトープを結合させるＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質並びにヒトＵＣＨ−Ｌ１のエピトープ及び別の標的分子のエピトープを結合させるＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質が挙げられる。
本明細書で使用される「ダイナミックレンジ」は、アッセイ読取値が分析対象のサンプル中の標的分子又は分析物の量に比例している範囲を指す。ダイナミックレンジは、標準曲線の直線性の範囲であることができる。
「エピトープ」又は「エピトープ（複数）」又は「対象エピトープ」は、認識され、特異的結合相手における相補的部位（複数可）に結合し得る分子上の部位（複数可）を指す。分子及び特異的結合相手は、特異的結合ペアの一部である。例えば、エピトープは、ポリペプチド、タンパク質、ハプテン、糖鎖抗原（例えば、限定されないが、糖脂質、糖タンパク質若しくはリボ多糖）又は多糖であり得る。その特異的結合相手は抗体であり得るが、それに限定されるものではない。
本明細書で使用される「拡張された検出ウィンドウ」は、記載の及び／又は特許請求されている改善された方法を、他のＵＣＨ−Ｌ１アッセイと比較した場合に、多様な臨床的シナリオで又はそのようなシナリオ下で行うことができることを指す。例えば、本開示の方法は、対象者の臨床状態（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１に関するチェックの理由以外に合併状態があるか否か、又はＴＢＩ以外の何らかの臨床的状況の評価が行われているか否か）、対象者の臨床検査値（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１レベル以外の臨床検査値、例えば患者の全体的健康状態を評価するために行われる標準的な臨床検査に関する値、及び対象者が事故に遭ったと疑われるか、頭部損傷に至り得る外傷など（それに限定されるものではない）のある種の外傷に曝されている場合に行われるより個別的な検査での値があるが、これらに限定されるものではない）、軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという対象者の分類、低レベル若しくは高レベルのＵＣＨ−Ｌ１の対象者の表出（例えば、表示又は所有）、及び対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミング（例えば、検査に対して）からなる群から選択される因子とは無関係に、全ての対象者で行うことができる。特許請求の方法の拡張された検出ウィンドウは、希釈を必要とし得る、或いは、本明細書に記載の改善されたアッセイの利点（例えば、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の測定、５ｌｏｇのダイナミックレンジ、ダイナミックレンジにおけるアッセイ直線性、２０マイクロリットル未満のサンプル体積でのＵＣＨ−Ｌ１の測定、拡張された検出ウィンドウなど）の一又は複数を持たない可能性がある先行技術で公知の他の方法とは異なる。
本明細書で使用される「断片抗原結合断片」又は「Ｆａｂ断片」は、抗原に結合し、一つの抗原結合部位、一つの完全な軽鎖、及び一つの重鎖の部分を含む抗体の断片を指す。Ｆａｂは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片である。Ｆａｂは、重鎖及び軽鎖のそれぞれの一つの定常ドメイン及び一つの可変ドメインから構成される。その可変ドメインは、そのモノマーのアミノ末端に一組の相補性決定領域を含むパラトープ（抗原結合部位）を含む。従って、Ｙの各アームは、抗原上のエピトープに結合する。Ｆａｂ断片は、当業界で報告されているように、例えば、免疫グロブリンモノマーを開裂させて二つのＦａｂ断片及びＦｃ断片とするのに用いることができる、又は組み換え法によって産生させることが可能である酵素パパインを用いて発生させることができる。
本明細書で使用される「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、ヒンジ領域の一部を無傷（ｉｎｔａｃｔ）の状態に留めながら、Ｆｃ領域のほとんどを除去するための全ＩｇＧ抗体のペプシン消化によって生じる抗体を指す。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された二つの抗原結合Ｆ（ａｂ）部分を有することから二価であり、分子量は約１１０ｋＤａである。二価抗体断片（Ｆ（ａｂ’）２断片）は、全ＩｇＧ分子より小さく、組織中により良好に浸透することができることから、免疫組織化学におけるより良好な抗原認識を容易にするものである。さらに、Ｆ（ａｂ’）２断片を用いることにより、生存細胞上のＦｃ受容体への、又はタンパク質Ａ／Ｇへの非特異的結合が回避される。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原に結合もし、抗原を沈殿させることもできる。
「フレームワーク」（ＦＲ）又は「フレームワーク配列」とは、本明細書において使用するとき、ＣＤＲを除いた可変領域の残りの配列を意味し得る。ＣＤＲ配列の正確な画定は、異なるシステムによって決定することができるため（例えば、上記を参照されたい）、フレームワーク配列の意味は、それに応じて異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２及び−Ｌ３並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２及び−Ｈ３）はまた、軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を、各鎖において４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間に位置し及びＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４として具体的なサブ領域を特定するものではないが、他に言及されるように、フレームワーク領域は、単一の、天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わせられたＦＲを表す。本明細書において使用するとき、ＦＲは、４つのサブ領域のうちの１つを表し、ＦＲ（複数）は、フレームワーク領域を構成する４つのサブ領域のうちの２つ以上を表す。
ヒト重鎖及び軽鎖ＦＲ配列は、当該技術分野において公知の技術を用いて、非ヒト抗体をヒト化するための重鎖及び軽鎖「アクセプター」フレームワーク配列（又は単に「アクセプター」配列）として使用され得ると、当該技術分野において公知である。一実施形態において、ヒト重鎖及び軽鎖アクセプター配列は、Ｖ−ベースのような公衆に利用可能なデータベース（ハイパーテキスト転送プロトコル：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）において又は国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（Ｒ）（ＩＭＧＴ（Ｒ））情報システムにおいて列挙されたフレームワーク配列（ハイパーテキスト転送プロトコル：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）から選択される。
「機能的抗原結合部位」とは、本明細書において使用するとき、標的抗原に結合することができる結合タンパク質（例えば、抗体）上の部位を意味し得る。抗原結合部位の抗原結合親和性は、抗原結合部位が由来する親結合タンパク質、例えば親抗体ほど強力でなくてもよいが、抗原に結合する能力が、抗原に結合するタンパク質、例えば抗体について評価するために公知の様々な方法のうちのいずれか１つを用いて，測定可能でなければならない。さらに、多価タンパク質、例えば多価抗体の各抗原結合部位の抗原結合親和性は、本明細書において定量的に同じである必要はない。
「ＧＦＡＰ」は本明細書において、グリア細胞繊維性酸性タンパク質を記述するのに用いられる。ＧＦＡＰは、ヒトにおいてＧＦＡＰ遺伝子によってコードされ、他の生物種で産生可能な（例えば、組み換え法によって）タンパク質である。
「ＧＦＡＰ状況」は、ある時間点でのＧＦＡＰのレベル若しくは量（例えば、ＧＦＡＰの１回測定による）、モニタリングに関連するＧＦＡＰのレベル若しくは量（例えば、ＧＦＡＰ量の増減を確認するために対象者に対して行う繰り返し試験による）、外傷性脳損傷の治療に関連するＧＦＡＰのレベル若しくは量（一次的脳損傷及び／又は二次的脳損傷）又はこれらの組み合わせを意味することができる。
本明細書で使用される「グラスゴー昏睡スケール」又は「ＧＣＳ」は、全体的な社会的能力又は他者への依存性に基づいて、脳損傷の転帰を推算及び分類するための１５点スケールを指す。その試験は、運動応答、音声応答及び開眼応答をそれらの値で測定するものであり、Ｉ．運動応答（６−完全に命令に従う；５−有害刺激の場所を突き止める；４−有害刺激から逃れる；３−異常屈曲、即ち除皮質姿勢；２−伸展応答、即ち除脳姿勢；及び１−応答なし）；ＩＩ．音声応答（５−警告及び見当識あり；４−錯乱しているが、理路整然としており、話せる；３−不適当な言葉及び言葉からなる混乱したフレーズ；２−理解できない音；及び１−音なし）；及びＩＩＩ．開眼（４−自然開眼；３−話をするための開眼；２−疼痛に対する開眼；及び１−開眼しない）である。Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩの値を加えることによって、最終スコアを求める。最終スコアを、生存に関して四つの可能なレベルに分類することができ数字が低いほど損傷の重度が高く、予後が悪い：軽度（１３〜１５）；中等度障害（９〜１２）（３０分より長い意識消失；回復可能又は可能な身体機能障害又は認識機能障害：及びリハビリテーションが有効）；重度能力障害（３〜８）（昏睡：無意識状態。意味のある応答なし、自発的活動なし）；及び植物状態（３未満）（睡眠覚醒サイクル；覚醒しているが、環境との相互作用なし；疼痛に対する限局性応答なし）。中等度脳損傷は、２０分〜６時間の意識消失を生じ、グラスゴー昏睡スケール９〜１２である脳損傷と定義される。重度脳損傷は、６時間を超える意識消失を生じ、グラスゴー昏睡スケール３〜８である脳損傷と定義される。
本明細書で使用される「グラスゴー転帰スケール」は、患者状況を５つのカテゴリー：死亡、植物状態、重度能力障害、中等度能力障害又は良好な回復のうちの一つに等級分けする機能転帰についての世界基準を指す。
本明細書では互換的に使用される「拡大グラスゴー転帰スケール」又は「ＧＯＳＥ」は、表１に示したように、重度能力障害、中等度能力障害および良好な回復のカテゴリーを下位カテゴリー及び上位カテゴリーに細分類することによって、８つのカテゴリーへのより詳細なカテゴリー化を提供するものである。
Figure 2019530875
「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）からの重鎖及び軽鎖の可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列のうちの少なくとも一部が、より「ヒトのような」、すなわち、ヒト生殖細胞系列可変配列により類似するように改変されている抗体を記載するために本明細書において使用される。「ヒト化抗体」は、抗体又はこの変異体、誘導体、類似体若しくは断片であり、免疫特異的に目的の抗原に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域並びに非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。本明細書において使用するとき、ＣＤＲとの関連において「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含み、ここで、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。一実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖に加えて、重鎖の少なくとも可変ドメインも含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含み得る。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖だけを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖だけを含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖だけを含有する。
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン並びに限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、１つを超えるクラス又はアイソタイプからの配列を含み得、特定の定常ドメインは、当該技術分野において周知の技術を用いて、望ましいエフェクター機能を最適化するために選択され得る。
ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤＲは、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、その部位におけるＣＤＲ又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又はコンセンサスフレームワークのいずれかに対応しないように、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークが、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によって突然変異させられ得る。しかしながら、好ましい実施形態において、このような突然変異は広範囲なものではない。通常、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％のヒト化抗体残基は、親ＦＲ及びＣＤＲ配列のヒト化抗体残基に対応する。本明細書において使用するとき、「コンセンサスフレームワーク」という用語は、免疫グロブリンコンセンサス配列におけるフレームワーク領域を指す。本明細書において使用するとき、用語「免疫グロブリンコンセンサス配列」とは、関連する免疫グロブリン配列のファミリー（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ， Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ， Ｗｅｉｎｈｅｉｍ， １９８７）を参照されたい）において最も頻繁に現れるアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列を指す。したがって、「免疫グロブリンコンセンサス配列」は、「コンセンサスフレームワーク領域（複数可）」及び／又は「コンセンサスＣＤＲ（複数可）」を含み得る。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列における各位置は、ファミリーにおいてこの位置に最も頻繁に現れるアミノ酸によって占有される。２つのアミノ酸が同等の頻度で現れる場合、いずれかがコンセンサス配列に含まれ得る。２以上のポリペプチド又はポリヌクレオチド配列の文脈において本明細書で使用される「同一の」又は「同一性」は、それらの配列が、特定の領域にわたり同一である特定パーセントの残基を有することを意味することができる。そのパーセントは、その二つの配列を至適に整列させ、特定領域においてその二つの配列を比較し、両方の配列において同一の残基があることにより、一致位置数が得られる位置の数を求め、その一致位置数を前記特定領域中の位置の総数で割り、その結果に１００を掛けることにより配列同一性のパーセントを得ることによって計算することができる。その二つの配列が異なる長さのものであり、整列させることにより一又は複数の不揃いな末端が生じ、比較される特定領域が単一配列のみを含む場合、その単一配列の残基は、計算の分母に含まれるだけでなく、分子にも含まれる。
本明細書では互換的に使用される「頭部に対する損傷」又は「頭部損傷」は、頭皮、頭蓋骨、又は脳に対する外傷を指す。そのような損傷は、頭蓋骨上の小さい瘤のみを含む可能性があるか、重大な脳損傷である可能性もある。そのような損傷には、脳に対する一次損傷及び／又は脳に対する二次損傷などがある。一次脳損傷は、最初の傷害時に起こり、脳の物理構造のずれから生じる。より具体的には、一次脳損傷は、外傷事象時に起こる実質（組織、血管）に対する物理的損傷であり、周囲の脳組織の剪断及び圧迫に至る。二次脳損傷は、一次損傷に続発して起こり、一連の細胞プロセスが関与し得る。より具体的には、二次脳損傷は、一次脳損傷後に期間をかけて（数時間から数日）進行する変化を指す。それは、脳組織のさらなる破壊に寄与する脳における細胞、化学的、組織又は血管の変化の全体カスケードを含む。
頭部への損傷は、非開放性であるか開放性である（貫通）ことができる。非開放性頭部損傷は、打撃物による頭蓋骨の貫通がない頭皮、頭蓋骨又は脳への外傷を指し。開放性頭部損傷は、打撃物による頭蓋骨の貫通がある頭皮、頭蓋骨又は脳への外傷を指す。頭部への損傷は、人の物理的振盪により、非開放性若しくは開放性の頭部外傷を生じる外部的な機械的その他の力による鈍的衝撃（例えば、自動車、飛行機、列車などでの車両事故；野球のバットなどによる、又は拳銃からの頭部への衝撃）、脳血管発作（例えば、卒中）、一又は複数の落下（例えば、スポーツその他の活動でのもの）、爆発若しくは爆風（総称して、「爆風損傷」）により、そして他の種類の鈍的力による外傷により生じる可能性がある。或いは、頭部への損傷は、化学薬品、毒物又は化学薬品と毒物の組み合わせの摂取及び／又はそれらへの曝露によって引き起こされ得る。そのような化学薬品及び／又は毒物の例には、火、カビ、アスベスト、農薬及び殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス（例えば、一酸化炭素、硫化水素、及びシアン化物）、有機金属（例えば、メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズ）及び／又は一又は複数の乱用薬物などがある。或いは、頭部への損傷は、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、一又は複数のウィルス、髄膜炎、水頭症、低酸素症又はこれらのいずれかの組み合わせを患う対象者の結果として引き起こされ得る。場合により、そのような事象若しくは損傷が起こったか否かが確かでない可能性がある。例えば、患者又は対象者に関して病歴がない可能性があり、対象者が話せない可能性があり、対象者が、自分がどのような事象に曝されたかについて気付いていないかそれについての完全な情報を持っていない可能性がある等がある。そのような状況を、本明細書においては、対象者が「頭部への損傷を受けた可能性がある）と記載している。本発明におけるある種の実施形態では、非開放性頭部損傷は、卒中などの脳血管発作を含まず、特に除外するものである。
本明細書で使用される「単離ポリヌクレオチド」は、起源の故に、単離ポリヌクレオチドが、「単離ポリヌクレオチド」が自然界で認められ；それが自然界では連結していないポリヌクレオチドに動作的に連結されており；又はより大きい配列の一部としては自然界では生じないポリヌクレオチドの全て又は一部と関連していないポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成起源、又はそれらの組み合わせのもの）を意味することができる。
本明細書で使用される「標識」及び「検出可能な標識」は、抗体又は分析物に結合していることにより、その抗体及び分析物との間の反応を、検出可能とする部分を指し、そのように標識された抗体又は分析物は、「検出可能に標識された」と称される。標識は、視覚的手段又は機器的手段によって検出可能なシグナルを生じさせることができる。各種標識には、シグナル発生物質、例えば色素原類、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性化合物などがある。標識の代表例には、光を発生させる部分、例えば、アクリジニウム化合物、及び蛍光を発生させる部分、例えばフルオレセインなどがある。他の標識が本明細書に記載されている。それについては、その部分自体が検出可能でなく、さらに別の部分との反応で検出可能となる場合がある。「検出可能に標識された」という用語の使用が、そのような標識化を包含するものである。
当業界で公知のいずれか好適な検出可能な標識を用いることができる。例えば、その検出可能な標識は、放射性標識（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、及び１５３Ｓｍ）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリペルオキシダーゼ、グルコース６−ホスフェートデヒドロゲナーゼなど）、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル類、チオエステル類又はスルホンアミド類；ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウムエステル類など）、蛍光標識（例えば、フルオレセイン（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロ−フルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネートなど））、ローダミン、フィコビリタンパク質、Ｒ−フィコエリトリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛キャップカドミウムセレニド）、温度標識、又はイムノ−ポリメラーゼ連鎖反応標識であることができる。標識、標識化手順及び標識の検出についての導入が、Ｐｏｌａｋ ａｎｄ Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２ｎｄ ｅｄ．， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ， Ｎ．Ｙ． （１９９７）、及びＨａｕｇｌａｎｄ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ （１９９６）［これは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｃ．， Ｅｕｇｅｎｅ， Ｏｒｅｇｏｎによって刊行された総合ハンドブック及びカタログである］にある。蛍光標識は、ＦＰＩＡで用いることができる（例えば、米国特許第５，５９３，８９６号、同５，５７３，９０４号、同５，４９６，９２５号、同５，３５９，０９３号、及び同５，３５２，８０３号［これらは参照によって全体が本明細書に組み込まれる］参照）。アクリジニウム化合物を、均一化学発光アッセイでの検出可能な標識として用いることができる（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． １６：１３２４−１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ４：２３１３−２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． １４：３９１７−３９２１（２００４）；及びＡｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ． ５：３７７９−３７８２（２００３）参照）。
１態様において、アクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム９−カルボキサミドの製造方法は、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ， Ｊ． Ｂｉｏｌｕｍｉｎ． Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ． ６：１０７−１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ６３：５６３６−５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５５：１０８９９−１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ． １：７７９−７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １１：７１４−７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ｄｙｋｅ， Ｋ． Ｖ． Ｅｄ．； ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ： Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、ｐｐ． ７７−１０５（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ． ５：３７７９−３７８２（２００３）；及び米国特許第５，４６８，６４６号、同５，５４３，５２４号及び同５，７８３，６９９号（これらはそれぞれ、参照によって、それに関する記述に関して全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
アクリジニウム化合物の別の例は、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。式ＩＩのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの１例は、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ， Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ， ＭＩから入手可能）である。アクリジニウム９−カルボキシレートアリールエステルの製造方法は、ＭｃＣａｐｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ． Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． ４：１１１１−２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉ ｅｔ ａｌ．， Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ １５：２４５−２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉ ｅｔ ａｌ．， Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ １５：２３９−２４４（２０００）；及び米国特許第５，２４１，０７０号（それらはそれぞれ、参照によって、それに関する記述に関して全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。そのようなアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、シグナルの強度及び／又はそのシグナルの速度に関して少なくとも一つのオキシダーゼによる分析物の酸化で生じる過酸化水素についての効率的な化学発光指示薬である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルについての化学発光の経過は、急速に、即ち、１秒以内に完了するが、アクリジニウム−９−カルボキサミド化学発光は２秒に及ぶ。しかしながら、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、タンパク質の存在下にそれの化学発光特性を失う。従って、それの使用では、シグナルの発生及び検出時にタンパク質が存在しない必要がある。サンプル中のタンパク質の分離又は除去方法は当業者には公知であり、それには限外濾過、抽出、沈殿、透析、クロマトグラフィー及び／又は温浸などがあるが、これらに限定されるものではない（例えば、Ｗｅｌｌｓ， Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ （２００３）を参照する）。試験サンプルから除去又は分離されるタンパク質の量は、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、又は約９５％であることができる。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル及びそれの使用に関するさらなる詳細が、２００７年４月９日出願の米国特許出願第１１／６９７，８３５号に記載されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、いずれか好適な溶媒、例えば脱気された脱水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はコール酸ナトリウム水溶液に溶かすことができる。
本明細書で使用される「ブランク限界（ＬｏＢ）」は、分析物を全く含まないブランクサンプルの複製物を検査した場合に認められると予想される、最も高い見かけの分析物濃度を指す。
本明細書で使用される「検出限界（ＬｏＤ）」は、指定の信頼度で検出可能な測定量（即ち、測定される量）の最低濃度を指す。信頼度は代表的には、偽陰性測定の５％尤度で９５％である。ＬｏＤは、ＬｏＢと信頼性高く識別されやすい、検出が可能な最低分析物濃度である。ＬｏＤは、測定ＬｏＢと低濃度の分析物を含むことが知られているサンプルの試験複製物の両方を用いることにより求めることができる。本明細書で使用されるＬｏＤという用語は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）プロトコールＥＰ１７−Ａ２（″Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ − Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，″ ＥＰ１７Ａ２Ｅ， Ｊａｍｅｓ Ｆ． Ｐｉｅｒｓｏｎ−Ｐｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｊｕｎｅ １， ２０１２）からの定義に基づいている。
本明細書で使用される「定量限界（ＬｏＱ）」は、分析物が信頼性高く検出できるだけでなく、バイアス及び不正確さについてのいくつかの所定の目標が満足される最低濃度を指す。ＬｏＱは、ＬｏＤと等価であり得るか、それよりかなり高い濃度である可能性がある。
「直線性」は、特定の操作範囲での方法又はアッセイの実際の成績がどれだけ良好に直線に近いかを指す。直線性は、理想的直線からの偏差、又は非直線性に関して測定することができる。「直線性からの偏差」は、フルスケールのパーセントで表すことができる。本明細書で開示の方法の一部において、１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が、アッセイのダイナミックレンジで達成される。「直線的」は、例示の範囲若しくは列挙された値について又はそれ全体において約２０％、約１９％、約１８％、約１７％、約１６％、約１５％、約１４％、約１３％、約１２％、約１１％、約１０％、約９％、又は約８％以下の変動があることを意味する。
「連結配列」又は「連結ペプチド配列」とは、目的の１つ以上のポリペプチド配列（例えば、全長、断片など）に接続された天然又は人工のポリペプチド配列を指す。用語「接続された」とは、目的のポリペプチド配列への連結配列の接続を指す。このようなポリペプチド配列は、好ましくは、１つ以上のペプチド結合によって接続される。連結配列は、約４から約５０アミノ酸の長さを有し得る。好ましくは、連結配列の長さは、約６から約３０アミノ酸である。天然の連結配列は、アミノ酸の置換、付加又は欠失によって改変され、人工の連結配列を作ることができる。連結配列は、組み換えＦａｂｓなどの多くの目的に用いることができる。例示的な連結配列としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：（ｉ）アミノ酸配列ＨＨＨＨＨＨ（配列番号３）を有する６×Ｈｉｓタグのようなヒスチジン（Ｈｉｓ）タグは、目的のポリペプチド及び抗体の単離及び精製を容易にするために連結配列として有用である；（ｉｉ）Ｈｉｓタグのようなエンテロキナーゼ切断部位は、目的のタンパク質及び抗体の単離及び精製に使用される。多くの場合、エンテロキナーゼ切断部位は、目的のタンパク質及び抗体の単離及び精製において、Ｈｉｓタグとともに使用される。種々のエンテロキナーゼ切断部位が、当該技術分野において公知である。エンテロキナーゼ切断部位の例としては、限定されないが、アミノ酸配列ＤＤＤＤＫ（配列番号４）及びこの誘導体（例えば、ＡＤＤＤＤＫ（配列番号５）など）が挙げられる；（ｉｉｉ）一本鎖可変領域断片の軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を連結又は接続するために、種々の配列を使用することができる。他の連結配列の例は、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ， ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３（１９８８）；及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４（１９９０）にある。また、薬物の結合又は固体支持体への結合のようなさらなる機能のために、連結配列が改変され得る。本開示との関連では、モノクローナル抗体は、例えば、Ｈｉｓタグ、エンテロキナーゼ切断部位又はこの両方のような連結配列を含有し得る。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の群から得られる抗体を指す。即ち、その群を含む個々の抗体は、少量存在し得る可能な自然発生突然変異以外は同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原を指向する。さらに、異なる決定基（エピトープ）を指向する異なる抗体を含むのが普通であるポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を指向する。本明細書におけるモノクローナル抗体は具体的には、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の生物種由来の抗体又は特定の抗体群若しくは下位群に属する抗体中の相当する配列と同一若しくは相同であるが、鎖の残りの部分は、別の生物種由来の抗体又は別の抗体群若しくは下位群に属する抗体、並びに所望の生物特性を示す限りにおいてそのような抗体の断片中の相当する配列と同一若しくは相同である「キメラ」抗体を含む。
本明細書において互換的に使用される「磁気共鳴映像法」又は「ＭＲＩ」は、健常身体及び疾患を有する身体の両方の解剖学及び生理プロセスの像を形成するために放射線学で用いられる医用撮像技術を指す。ＭＲＩは、強磁場に置かれた場合の身体組織の原子核の高周波数電波に対する応答を測定し、内臓の画像を与える医用撮像の１形態である。核磁気共鳴（ＮＭＲ）の科学に基づくＭＲＩスキャン装置は、強磁場、電波、及び磁場勾配を用いて、身体内部の画像を得る。
「多価結合タンパク質」は、２以上の抗原結合部位（本明細書において「抗原結合ドメイン」とも称される）を含む結合タンパク質を指すために本明細書において使用される。多価結合タンパク質は、好ましくは、３以上の抗原結合部位を有するように遺伝子操作され、一般的に天然に存在する抗体ではない。用語「多特異的結合タンパク質」とは、同じ標的分子の２以上の異なるエピトープに結合することができる結合タンパク質を含む、２以上の関連する又は無関係の標的に結合することができる結合タンパク質を指す。
本明細書で使用される「所定カットオフ」及び「所定レベル」は、アッセイ結果を所定カットオフ／レベルに対して比較することにより、診断、予後若しくは治療効力結果を評価するのに用いられるアッセイカットオフ値を指し、所定カットオフ／レベルは既に、各種臨床パラメータ（例えば、疾患の存在、疾患の段階、疾患の重度、疾患の進行、非進行若しくは改善など）とリンクされているか関連付けられている。本開示は、所定レベルの例を提供する。しかしながら、カットオフ値はイムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体、反応条件、サンプル純度など）に応じて変動し得ることが知られている。さらに、本明細書の開示を他のイムノアッセイに適応させて、本開示によって提供される記載に基づいて他のイムノアッセイについてのイミノアッセイ特異的カットオフ値を得ることは、当業者の通常の技術の範囲内である。所定カットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で変動し得るが、本明細書に記載の相関が適用可能であるはずである。
「ポイント・オブ・ケア機器」は、患者ケアの時間及び場所で（例えば、病院、医院、救急その他の医療施設、患者の家、養護施設及び／又は長期ケア及び／又はホスピス施設で）、ポイント・オブ・ケアでの又はその近くでの（即ち、臨床検査室外）医療診断検査を提供するのに用いられる機器を指す。ポイント・オブ・ケア機器の例には、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）（例えば、ｉ−ＳＴＡＴ及びｉ−ＳＴＡＴ Ａｌｉｎｉｔｙ）、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｒｏｗｖｉｌｌｅ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＵＳ２００６／０１３４７１３参照）、Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ ＰｏＣ ＡＳ（Ｏｓｌｏ， Ｎｏｒｗａｙ）及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ， ＵＳＡ）が製造しているものなどがある。
本明細書に記載のイムノアッセイ及びキットの文脈での「品質管理試薬」には、キャリブレータ、対照及び感度パネルなどがあるが、これらに限定されるものではない。代表的には、分析物、例えば抗体又は分析物の濃度の内挿のための較正（標準）曲線を作成するのに、「キャリブレータ」又は「標準」を用いる（例えば、一又は複数、例えば複数）。或いは、所定の陽性／陰性カットオフ、基準レベル若しくは対照レベル（例えば、「低」、「中」又は「高」レベル）に近い単一のキャリブレータを用いることができる。複数のキャリブレータ（即ち、一つより多いキャリブレータ又は多様な量のキャリブレータ）を一緒に用いて、「感度パネル」を構成することができる。
「受信者動作特性」曲線又は「ＲＯＣ」曲線は、弁別閾値を変動させながらのバイナリ分類システム（ｂｉｎａｒｙ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ ｓｙｓｔｅｍ）の成績を示すグラフィカルプロットを指す。例えば、ＲＯＣ曲線は、診断検査の異なる可能なカットオフポイントについての偽陽性率に対する真陽性率のプロットであることができる。それは、各種閾値設定で陽性からの真陽性の割合（ＴＰＲ＝真陽性率）対陰性からの偽陽性の割合（ＦＰＲ＝偽陽性率）をプロットすることにより作成される。ＴＰＲは感度としても知られ、ＦＰＲは、１−特異度若しくは真陰性率である。ＲＯＣ曲線は、感度と特異度の間のトレードオフを示し（感度上昇は、特異度低下を伴うであろう）；曲線がＲＯＣスペースの左縁及び次に上縁に近く進むほど、検査は正確になり、曲線がＲＯＣスペースの４５度対角線に近くなるほど、検査は正確さを失い、カットオフポイントでの接線の傾きが検査のその値についての尤度比（ＬＲ）を提供し；曲線下の面積が検査正確さの尺度である。
「組換え抗体」及び「組換え抗体（複数）」とは、組換え技術により適切な発現ベクターに１つ以上のモノクローナル抗体の全部又は一部をコードする核酸配列をクローニングし、この後、適切な宿主細胞において抗体を発現させることを含む、１つ以上の工程により調製された抗体を指す。これらの用語は、限定されないが、組換え的に生成されたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（完全に又は部分的にヒト化されている）、抗体断片から形成された多重特異性又は多価構造、二官能性抗体、ヘテロコンジュゲートＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ（Ｒ）及び本明細書において（ｉ）に記載されている他の抗体を含む（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作製する方法は、Ｗｕ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２５：１２９０−１２９７（２００７）に記載されている）。「二官能性抗体」という用語は、本明細書において使用するとき、１つの抗原部位に特異性を有する第１のアーム及び異なる抗原部位に特異性を有する第２のアームを含む抗体を指し、即ち、二官能性抗体は二重特異性を有する。
本明細書で使用される「基準レベル」は、診断、予後若しくは治療効力を評価するのに用いられ、各種臨床パラメータ（例えば、疾患の存在、疾患の段階、疾患の重度、疾患の進行、非進行若しくは改善など）とリンクされているか関連付けられているアッセイカットオフ値を指す。本開示は、基準レベルの例を提供する。しかしながら、基準レベルはイムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体、反応条件、サンプル純度など）に応じて変動し得ること、そしてアッセイを比較及び標準化することができることが知られている。さらに、本明細書の開示を他のイムノアッセイに適応させて、本開示によって提供される記載に基づいて他のイムノアッセイについてのイミノアッセイ特異的基準レベルを得ることは、当業者の通常の技術の範囲内である。基準レベルの正確な値はアッセイ間で変動し得るが、本明細書に記載の所見が他のアッセイに適用可能であり、それに外挿できるはずである。
本明細書で使用される対象者（例えば、患者）の「リスク評価」、「リスク分類」、「リスク確認」又は「リスク層化」は、疾患発症又は疾患進行などの将来の事象の発生リスクを予測して、より多くの情報に基づいて対象者に関する治療決定を行うことができるようにするための、生物マーカーなどの因子の評価を指す。
本明細書で使用される「サンプル」、「試験サンプル」、「試料」、「対象者からのサンプル」及び「患者サンプル」は互換的に使用することができ、血液、例えば全血、組織、尿、血清、血漿、羊水、脳脊髄液、胎盤細胞又は組織、内皮細胞、白血球、又は単球のサンプルであることができる。サンプルは、患者から入手したまま直接用いることができるか、濾過、蒸溜、抽出、濃縮、遠心、妨害成分の失活、試薬添加などによる前処理を行って、本明細書に記載の何らかの形で、又は当業界で公知である他の形でサンプルの特性を変えることができる。
多様な細胞種、組織、又は体液を用いて、サンプルを得ることができる。そのような細胞種、組織、及び液には、生検及び剖検サンプルなどの組織の切片、組織学的目的のために採取した冷凍切片、血液（例えば、全血）、血漿、血清、赤血球、血小板、間質液、脳脊髄液などであってもよい。細胞種及び組織には、リンパ液、脳脊髄液などによって採取された液などであってもよい。組織又は細胞種は、ヒト及び非ヒト動物から細胞サンプルを取ることにより提供され得るが、既に単離された細胞（例えば、別の時点で、及び／又は別の目的で、別の人物によって単離されたもの）を用いることによっても得ることができる。治療歴又は転帰歴のあるものなどの保存組織も用いることができる。タンパク質又はヌクレオチドの単離及び／又は精製が必要ない場合もある。
本明細書で使用されるアッセイの「感度」は、転帰が陽性であり、それが正確に陽性と確認される対象者の割合を指す。
本明細書で使用されるアッセイの「特異性」は、転帰が陰性であり、それが正確に陰性と確認される対象者の割合を指す。
「一連の較正組成物」は、各組成物がＵＣＨ−Ｌ１濃度ごとに連続して他の組成物と異なる、既知濃度のＵＣＨ−Ｌ１を含む複数の組成物を指す。
本明細書で使用される「単一分子検出」という用語は、非常に低レベルの濃度（例えば、ｐｇ／ｍＬ又はフェトグラム／ｍＬレベル）での試験サンプル中の分析物の単一分子の検出及び／又は測定を指す。多くの異なる単一分子分析装置又は機器が当業界で公知であり、ナノ細孔及びナノウェル機器などがある。ナノ細孔機器の例は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６／１６１４０２（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。ナノウェル機器の例は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６／１６１４００（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本明細書で互換的に使用される「固相」又は「固体支持体」は、（１）一又は複数の捕捉剤又は捕捉特異的結合相手、又は（２）一又は複数の検出剤又は検出特異的結合相手を付着及び／又は誘引及び固定化するのに用いることができる材料を指す。固相は、捕捉剤を誘引及び固定化するそれの固有の能力について選択することができる。或いは、固相は、（１）捕捉剤又は捕捉特異的結合相手、又は（２）検出剤又は検出特異的結合相手を誘引及び固定化する能力を有する連結剤をそれに添加していることができる。例えば、連結剤は、捕捉剤（例えば、捕捉特異的結合相手）又は検出剤（例えば、検出特異的結合相手）自体又は（１）捕捉剤又は捕捉特異的結合相手又は（２）検出剤又は検出特異的結合相手に結合した帯電物質に関して逆に帯電している帯電物質を含むことができる。概して、連結剤は、固相上に固定化されて（結合して）おり、及び結合反応によって（１）捕捉剤又は捕捉特異的結合相手、又は（２）検出剤又は検出特異的結合相手を固定化する能力を有する、（好ましくは特異的な）結合相手であることができる。連結剤は、アッセイ実行前又はアッセイ実行時の捕捉剤の固相材料への間接結合を可能とするものである。例えば、固相は、プラスチック、誘導体化プラスチック、磁性若しくは非磁性金属、ガラス又はケイ素、例えば試験管、マイクロタイターウェル、シート、ビーズ、微小粒子、チップ及び当業者に公知である他の構造であることができる。
「特異的結合」又は「特異的に結合する」とは、本明細書において使用するとき、抗体、タンパク質又はペプチドと第２の化学種との相互作用を指し得、ここで、相互作用は、化学種の特定の構造（例えば、抗原性決定基又はエピトープ）の存在に依存する；例えば、抗体は、一般的には、タンパク質というよりはむしろ特定のタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、エピトープＡ（又は遊離の標識されていないＡ）を含有する分子の存在は、標識された「Ａ」及び抗体を含む反応において、抗体に結合した標識されたＡの量を減少させる。
「特異的結合相手」は、特異的結合ペアのメンバーである。特異的結合ペアは、二つの異なる分子を含み、それらは特異的に、化学的若しくは物理的手段によって互いに結合している。従って、一般的なイムノアッセイの抗原及び抗体特異的結合ペアに加えて、他の特異的結合ペアには、ビオチン及びアビジン（又はストレプトアビジン）、炭水化物及びレクチン、相補ヌクレオチド配列、エフェクター及び受容体分子、補因子及び酵素、酵素及び酵素阻害剤などがあり得る。さらに、特異的結合ペアには、元の特異的結合メンバーの類縁体であるメンバー、例えば、分析物−類縁体などがあり得る。免疫反応性特異的結合メンバーには、抗原、抗原断片、及び抗体、例えばモノクローナル及びポリクローナル抗体、並びにそれらの複合体及び断片（単離されているか組換え的に産生されたかを問わず）などがある。
本明細書で互換的に使用される「対象者」及び「患者」は、哺乳動物（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット及びマウス、非ヒト霊長類（例えば、サル、例えばカニクイザル又はアカゲザル、チンパンジーなど）及びヒト）など（これらに限定されるものではない）の脊椎動物を指す。一部の実施形態において、対象者は、ヒト又は非ヒトであることができる。対象者又は患者は、他の形態の処置を受けていても良い。一部の実施形態において、対象者がヒトである場合、その対象者は、脳血管発作（例えば、卒中）を患ったヒトを含まない。一部の実施形態において、その対象者は、頭部への損傷を受けたことが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、頭部への損傷を受けたことが分かっている。一部の実施形態において、対象者は、軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っていることが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、軽度ＴＢＩを患っていることが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、中等度ＴＢＩを患っていることが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、重度ＴＢＩを患っていることが疑われる。
「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、それぞれ、このような用語が適用される疾患及び／又は損傷、又はこのような疾患の一又は複数の症状を改善し、緩和し、又はこの進行を阻害することを記載するために、本明細書において交換可能に使用される。対象者の状態に応じて、その用語は、疾患を予防することも指し、疾患発症の予防、又は疾患関連の症状の予防を含む。治療は、急性又は慢性のいずれかの方法で行うことができる。この用語はまた、疾患により苦痛になる前にこのような疾患に関連する疾患又は症状の重症度を低下させることを指す。苦痛になる前の疾患のそのような予防若しくは重度低下は、疾患により苦痛になった投与の時点ではない対象者に、医薬組成物を投与することを指す。「予防すること」は、疾患又はそのような疾患関連の一又は複数の症状の再発を予防することも指す。「治療」及び「治療的に」とは、上記で定義された「治療すること」と同様に、治療する行為を指す。本明細書において互換的に使用される「外傷性脳損傷」又は「ＴＢＩ」は、広いスペクトルの症状及び能力障害を有する複合損傷を指す。ＴＢＩは最も多くの場合、他の損傷と同様の急性事象である。ＴＢＩは、「軽度」、「中等度」、又は「重度」と分類することができる。ＴＢＩの原因は多様であり、例えば、人、自動車事故による物理的振盪、拳銃、脳血管発作（例えば、卒中）、落下、爆発若しくは爆風及び他の種類の鈍的力による外傷からの損傷などがある。ＴＢＩの他の原因には、一又は複数の化学物質又は毒物（例えば、火、カビ、アスベスト、農薬及び殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス（例えば、一酸化炭素、硫化水素、及びシアン化物）、有機金属（例えば、メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズ）、一又は複数の乱用薬物又はそれらの組み合わせ）の摂取及び／又はそれへの曝露などがある。或いは、ＴＢＩは、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、一又は複数のウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患う対象者で起こり得る。若年成人及び高齢者が、ＴＢＩリスクが最も高い群である。本明細書におけるある種の実施形態において、外傷性脳損傷又はＴＢＩは、卒中などの脳血管発作を含まず、特に除外するものである。
本明細書で使用される「軽度ＴＢＩ」は、意識消失が短時間であり、通常は数秒若しくは数分であり、及び／又は混乱及び失見当識が１時間未満である脳損傷を指す。軽度ＴＢＩは、振盪、微小頭部外傷、微小ＴＢＩ、微小脳損傷、及び微小頭部損傷とも称される。ＭＲＩ及びＣＴスキャンは通常は正常であるが、軽度ＴＢＩを有する個体は、頭痛、思考困難、記憶障害、注意欠陥、気分変動及びフラストレーションなどの認知的問題を有する可能性がある。
軽度ＴＢＩは、最も広くあるＴＢＩであり、多くの場合、最初の損傷時に消失する。代表的には、対象者は、１３〜１５（例えば、１３〜１５又は１４〜１５）のグラスゴー昏睡スケール数を有する。軽度ＴＢＩの人の１５％が、３ヶ月以上続く症状を有する。軽度ＴＢＩは、３０分未満の精神状態における短時間の変化（混乱、失見当識又は記憶喪失）又は意識消失を引き起こす頭部の強い動き又は衝撃の結果と定義される。軽度ＴＢＩの一般的な症状には、疲労、頭痛、視覚障害、記憶喪失、注意／集中力低下、睡眠障害、眩暈／バランス喪失、易刺激性−情緒不安定、抑鬱の気分、及び発作などがある。軽度ＴＢＩ関連の他の症状には、吐き気、嗅覚喪失、光及び音に対する感度喪失、情緒変化、迷子感又は混乱、及び／又は思考遅延などがある。
本明細書で使用される「中等度ＴＢＩ」は、意識消失及び／又は混乱及び失見当識が１〜２４時間であり、対象者が９〜１２のグラスゴー昏睡スケール数を有する脳損傷を指す。中等度ＴＢＩを有する個体は、異常な脳画像結果を有する。本明細書で使用される「重度ＴＢＩ」は、意識消失が２４時間を超えており、損傷若しくは貫通性の頭蓋骨損傷後の記憶喪失が２４時間より長く、対象者が３〜８のグラスゴー昏睡スケール数を有する脳損傷を指す。その欠陥は、高レベル認知機能の障害から昏睡状態の範囲に及ぶ。生存者は、腕若しくは足の機能の制限、発話若しくは言語の異常、思考能力喪失又は情緒上の問題を有する可能性がある。重度損傷を有する個体は、長期の無反応状態に放置される可能性がある。重度ＴＢＩのある人の多くにおいて、機能及び自立性を最大とするのに、長期間のリハビリテーションが必要となることが多い。
中等度ないし重度ＴＢＩの一般的症状には、注意、集中力、散漫性、記憶、処理速度、混乱、固執、衝動性、言語処理及び／又は「実行機能」における困難などの認知障害、話し言葉の理解不能（受容失語症）、話すこと及び理解されることの困難（表出性失語）、不明瞭な発語、非常に早い若しくは非常に遅い話、読みの問題、書くことの問題、触覚、温度、運動、四肢位置及び微細（ｆｉｎｅ）の解釈、区別、感覚印象の心理学的に意味のあるデータへの統合若しくはパターン化の困難、視力の部分若しくは完全喪失、眼筋の虚弱及び複視（二重視）、視覚低下、距離判断の問題、眼球の固視微動（眼振）、光の不耐（羞明）、聴覚、例えば聴覚の低下若しくは喪失、耳の鳴り響き（耳鳴）、音に対する感受性増加、嗅覚の喪失若しくは感覚低下（嗅覚消失）、味覚の喪失若しくは感覚低下、重度型であり得て意識、知覚又は運動における混乱が関与し得る癲癇関連の痙攣、腸及び膀胱の制御、睡眠障害、スタミナ減退、食欲変化、体温制御、月経困難、依存行動、情緒的能力、モチベーションの欠如、易刺激性、攻撃性、抑鬱、脱抑制、又は覚醒の否定／欠如などがある。
「ＵＣＨ−Ｌ１」は、本明細書において、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１を記述するのに用いられる。ＵＣＨ−Ｌ１は、ヒトにおけるＵＣＨ−Ｌ１遺伝子によってコードされ、製造可能な（例えば、他の生物種での組換え手段によって）タンパク質である。
「ＵＣＨ−Ｌ１状況」は、ある時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１の１回測定による）、モニタリングに関連するＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１量の増減を確認するために対象者に対して行う繰り返し試験による）、外傷性脳損傷の治療に関連するＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量（一次的脳損傷及び／又は二次的脳損傷）又はこれらの組み合わせを意味することができる。
「変異体」は、アミノ酸の挿入、欠失又は保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも一つの生物学的活性を保持するペプチド又はポリペプチドを記載するために本明細書において使用される。「生物学的活性」の代表例には、特異的抗体に結合する能力又は免疫応答を促進する能力が含まれる。変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質を記載するために本明細書において使用される。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を類似の特性（例えば、親水性、程度及び荷電領域の分布）の異なるアミノ酸で置換することは、典型的には軽微な変化を伴うものとして当該技術分野において認識されている。これらの軽微な変化は、当該技術分野で理解されているように、部分的には、アミノ酸の疎水性指数を考慮することによって同定することができる。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， １５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸の疎水性指数は、疎水性及び電荷の考慮に基づく。類似の疎水性指数のアミノ酸が置換され、なおもタンパク質機能を保持することができることは当該技術分野において公知である。一態様において、±２の疎水性指数を有するアミノ酸が置換される。また、アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらす置換を明らかにするために使用され得る。ペプチドとの関連においてアミノ酸の親水性の考慮は、ペプチドの最大の局所平均親水性の計算を可能にし、これは抗原性及び免疫原性と十分に相関すると報告されている有用な手段である。参照により本明細書に完全に組み込む米国特許第４，５５４，１０１号。類似した親水性値を有するアミノ酸の置換は、当該技術分野において理解されるように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらすことができる。置換は、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸で行うことができる。アミノ酸の疎水性指数と親水性値はともに、このアミノ酸の特定の側鎖により影響を受ける。この観察と一致して、生物学的機能に適合するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ及び他の特性によって明らかにされるように、アミノ酸の相対的類似性、特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると理解される。「変異体」はまた、アミノ酸配列中の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の対応する断片とは異なるが、なおも抗原的に反応性である抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の抗原的反応性断片を指すために使用することができ、ＵＣＨ−Ｌ１と結合するための抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の対応する断片と競合し得る。「変異体」はまた、例えばタンパク質分解、リン酸化又は他の翻訳後修飾などによって差異的にプロセシングされたが、抗原反応性を保持しているポリペプチド又はこの断片を記載するために使用することができる。
「ベクター」は、本明細書では、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を説明するのに使用される。ある種のベクターは「プラスミド」であり、それは別のＤＮＡ断片が連結されていても良い環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターはウィルスベクターであり、そこでは別のＤＮＡ断片がウィルスゲノムに連結されていても良い。ある種のベクターは、それらが導入される宿主細胞で自律的に複製できる（例：細菌起源の複製を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクターは、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み入れることができ、それによって宿主ゲノムに従って複製される（例：非エピソーム哺乳動物ベクター）。さらに、ある種のベクターは、それらが機能可能に連結されている遺伝子の発現を有向化することができる。そのようなベクターは本明細書において、「組換え発現ベクター」（又は簡単に「発現ベクター」）と称する。通常、組換えＤＮＡ技術で利用される発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であることから、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に使用しても良い。しかしながら、同等の機能を果たすウィルスベクター（例：複製欠損アデノウイルス、アデノウィルス及びアデノ随伴ウイルス）などの他の形態の発現ベクターを用いることができる。この点に関して、ＲＮＡ型のベクター（ＲＮＡウィルスベクターなど）も、本開示の文脈で使用可能である。
本明細書において別段の定義がない限り、本開示との関連で使用される科学用語及び技術用語は、当業者が通常理解する意味を有するものである。例えば、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学及びタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用される命名及びそれらの技術は、当業界で公知であり、一般に使用されるものである。それらの用語の意味及び範囲は明瞭であるべきであるが、潜在的な曖昧性がある場合は、本明細書で提供の定義が、辞書や外部の定義に優先するものである。さらに、文脈によって別のものである必要がない限り、単数形の用語は複数形を包含し、複数形の用語は単数形を含むものである。
２．ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況に基づく方法
本開示は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の診断を即座に支援し、進行をモニタリングし、及び処置を必要とする対象者（ＴＢＩの治療を受けている対象者並びにＴＢＩの治療を受けていない対象者を含む）における転帰を予測するために、改善されたイムノアッセイを用いてユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法に関するものである。その方法は、それぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む第１の複合体を形成する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーを用いて行われる。一部の実施形態において、第２の特異的結合メンバーは、検出可能な標識で標識されている。一部の実施形態において、イムノアッセイは、ポイント・オブ・ケア機器で行われる。
前記改善されたイムノアッセイを用いて、低レベル並びに高レベルの両方のＵＣＨ−Ｌ１でＵＣＨ−Ｌ１を求めることができ、それによって、生体サンプルの希釈や濃縮を行う必要なく、拡大された若しくはより広い濃度範囲にわたってサンプル中のＵＣＨ−Ｌ１量を測定する手段が得られる。そのイムノアッセイは、より多用途で高感度の外傷性脳損傷評価アッセイを提供する。開示のイムノアッセイは、ＵＣＨ−Ｌ１の高感度血清検出及び軽度ＴＢＩなどのＴＢＩを評価するのに用いることができる標準化アッセイを提供するものである。そのイムノアッセイによって、生体サンプル中の２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の測定が可能となり、生体サンプルを希釈する必要がない。そのイムノアッセイはまた、アッセイダイナミックレンジにわたってアッセイ直線性を維持する。一部の実施形態において、そのイムノアッセイは、５ｌｏｇのダイナミックレンジを有する。他の実施形態において、そのイムノアッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、そのダイナミックレンジにわたってアッセイ直線性を維持する。さらに他の実施形態において、生体サンプル中で評価可能な低レベル及び高レベルのＵＣＨ−Ｌ１は、アッセイのダイナミックレンジの範囲内であり、生体サンプルの希釈や濃縮は必要ない。さらに他の実施形態において、当該イムノアッセイは、２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中の５ｐｇ／ｍＬ以下であるＵＣＨ−Ｌ１の量を測定することができる。さらに他の実施形態において、当該イムノアッセイは、（１）２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中の２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下であるＵＣＨ−Ｌ１の量を測定することができ；（２）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し；及び（３）そのダイナミックレンジにおいて直線性である。
開示のイムノアッセイで測定可能なＵＣＨ−Ｌ１濃度の範囲が大きくなったことにより、患者における外傷性脳損傷の診断及び識別を支援するためのより正確で高感度のアッセイが提供される。従って、開示のイムノアッセイを用いて、対照又はキャリブレータサンプルと比較して、希釈若しくは未希釈サンプル中の低レベルのＵＣＨ−Ｌ１でのＵＣＨ−Ｌ１濃度の増減を測定若しくは評価することができることから、それを用いて、患者におけるＴＢＩを確認することができる。ＵＣＨ−Ｌ１イムノアッセイを用いることにより、外傷性脳損傷患者の診断及びその後の治療における正確な支援を提供できる。さらに、開示のイムノアッセイは、拡張された検出ウィンドウを提供する。
一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１を求めることができる範囲は、他の市販のＵＣＨ−Ｌ１イムノアッセイと比較して、少なくとも約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、約１００％、約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約１６０％、約１７０％、約１８０％、約１９０％、約２００％、約２１０％、約２２０％、約２３０％、約２４０％、約２５０％、約２６０％、約２７０％、約２８０％、約２９０％、約３００％、約４００％、又は約５００％改善された範囲サイズを有する。
一部の実施形態において、約０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、又は約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ範囲のＵＣＨ−Ｌ１を一部の実施形態において、約０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約
１００ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０００１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．００１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．０１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約０．５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬ、又は約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲のＵＣＨ−Ｌ１を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約３ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約８ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６，４００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１６５ｐｇ／ｍＬ〜約１８，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
ポイント・オブ・ケア機器以外のいくつかの装置（例えば、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ装置ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）、及び他の中心的臨床検査装置）は、２５，０００ｐｇ／ｍＬより高い若しくは大きい、生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１レベルを測定することができる。従って、一部の実施形態において、本開示の方法に従って測定可能なＵＣＨ−Ｌ１の濃度は、２５，０００ｐｇ／ｍＬより大きいものであることができる。本明細書に記載の方法を用いることにより、それらの機器で本明細書に記載の利点の一又は複数を得ることができる（例えば、２５，０００ｐｇ／ｍＬまでの測定、５ｌｏｇのダイナミックレンジ、ダイナミックレンジにわたるアッセイ直線性、２０マイクロリットル未満のサンプル体積でのＵＣＨ−Ｌ１の測定、拡大検出ウィンドウなど）。
他の検出方法には、例えば単一分子検出のためのナノ細孔機器若しくはナノウェル機器の使用などがあるか、それらでの使用に適応させることができる。ナノ細孔機器の例は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６／１６１４０２（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。ナノウェル機器の例は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６／１６１４００（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。単一分子検出に適した他の機器及び方法を用いることもできる。
ａ．外傷性脳損傷の尺度としてのＵＣＨ−Ｌ１状況の評価方法
１実施形態において、本明細書に記載の方法を用いて、対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる。その方法は、ａ）生体サンプルを、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合することによって、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１がサンプル中に存在することを示し、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量がサンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、当該対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含む。当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１レベルを測定するのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる。
１実施形態において、本明細書に記載の方法を用いて、ヒト対象者から得られた生体サンプル中の対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる。当該対象者は、頭部への損傷を受けた可能性があるか、頭部への損傷を受けたことが分かっている．当該方法は、（ａ）ヒト対象者から得られた生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、（１）固体支持体上に固定化されており、ヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合することにより捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び（２）検出可能な標識を含み、捕捉抗体によって結合されていないヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合することによりＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する、検出抗体と接触させることによって、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する工程であって、ここで、当該捕捉抗体及び検出抗体はモノクローナル抗体である工程と、（ｂ）捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体で前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて生体サンプルでのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定する工程とを含む。当該方法は、５ｐｇ／ｍＬ〜２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジにわたり、そのダイナミックレンジにおいて≦１０％ＣＶの正確さ及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）で、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができる。
１実施形態において、本明細書に記載の方法を用いて、頭部への損傷を受けた可能性がある又は頭部への損傷を受けたことが分かっている対象者においてグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として測定することができる。当該方法は、ａ）当該対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合することによって、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含み、前記第１の特異的結合メンバーは固体支持体上に固定化されている工程と；ｂ）前記一又は複数の第１の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１がサンプル中に存在することを示す工程と；ｃ）前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、当該量が、サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、当該対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含む。当該アッセイは、２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中、２０ｐｇ／ｍＬ〜２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジにわたり、そのダイナミックレンジで達成される１０％未満ＣＶの正確さ及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）で、ＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定することができる。
一部の実施形態において、当該方法を用いて、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、又は約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる。一部の実施形態において、当該方法を用いて、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる。
一部の実施形態において、生体サンプル中の少なくとも０．５ｐｇ／ｍＬ、０．１０ｐｇ／ｍＬ、０．５０ｐｇ／ｍＬ、１ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、１５ｐｇ／ｍＬ、２０ｐｇ／ｍＬ、３１ｐｇ／ｍＬ、３２ｐｇ／ｍＬ、３３ｐｇ／ｍＬ、３４ｐｇ／ｍＬ、３５ｐｇ／ｍＬ、４０ｐｇ／ｍＬ、５０ｐｇ／ｍＬ、６０ｐｇ／ｍＬ、７０ｐｇ／ｍＬ、８０ｐｇ／ｍＬ、９０ｐｇ／ｍＬ、又は１００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１（若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片）のレベルを検出することができる。一部の実施形態において、生体サンプル中の約５０，０００ｐｇ／ｍＬ未満、約４０，０００ｐｇ／ｍＬ未満、約３０，０００ｐｇ／ｍＬ未満、又は約２５，０００ｐｇ／ｍＬ未満のＵＣＨ−Ｌ１（若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片）のレベルを検出することができる。
一部の実施形態において、生体サンプル中の少なくとも約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約１５，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３０，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約３５，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４０，０００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも約４５，０００ｐｇ／ｍＬ、又は少なくとも約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１（若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片）のレベルを検出することができる。
一部の実施形態において、当該アッセイは、約１０ｐｇ／ｍＬ、約１５ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ、又は約５０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬＯＤ）を有することができる。
一部の実施形態において、当該アッセイは、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲で１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）を有することができる。例えば、当該アッセイは、約３ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲、約８ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの範囲、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬの範囲、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約１３，６６０ｐｇ／ｍＬの範囲、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約９００ｐｇ／ｍＬの範囲、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約６，４００ｐｇ／ｍＬの範囲、又は約１６５ｐｇ／ｍＬ〜約１８，０００ｐｇ／ｍＬの範囲で１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満の直線性からの偏差を有することができる。
一部の実施形態において、当該方法は、２０％変動係数（ＣＶ）で２０ｐｇ／ｍＬ〜２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１定量範囲を有する。一部の実施形態において、当該方法は、２０％変動係数（ＣＶ）で２０ｐｇ／ｍＬ〜２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１検出範囲を有する。
一部の実施形態において、当該方法は、２０％変動係数（ＣＶ）で２０ｐｇ／ｍＬ〜２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１定量範囲を有する。一部の実施形態において、当該方法は、２０％変動係数（ＣＶ）で２０ｐｇ／ｍＬ〜２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１検出範囲を有する。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている。一部の実施形態において、第２の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、下記に記載のＵＣＨ−Ｌ１抗体である。一部の実施形態において、第２の特異的結合メンバーは、下記に記載のＵＣＨ−Ｌ１抗体である。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーのそれぞれがＵＣＨ−Ｌ１抗体である。
一部の実施形態において、生体サンプルは希釈されているか未希釈である。生体サンプルは、約１〜約２５マイクロリットル、約１〜約２４マイクロリットル、約１〜約２３マイクロリットル、約１〜約２２マイクロリットル、約１〜約２１マイクロリットル、約１〜約２０マイクロリットル、約１〜約１８マイクロリットル、約１〜約１７マイクロリットル、約１〜約１６マイクロリットル、約１５マイクロリットル又は約１マイクロリットル、約２マイクロリットル、約３マイクロリットル、約４マイクロリットル、約５マイクロリットル、約６マイクロリットル、約７マイクロリットル、約８マイクロリットル、約９マイクロリットル、約１０マイクロリットル、約１１マイクロリットル、約１２マイクロリットル、約１３マイクロリットル、約１４マイクロリットル、約１５マイクロリットル、約１６マイクロリットル、約１７マイクロリットル、約１８マイクロリットル、約１９マイクロリットル、約２０マイクロリットル、約２１マイクロリットル、約２２マイクロリットル、約２３マイクロリットル、約２４マイクロリットル又は約２５マイクロリットルであることができる。一部の実施形態において、生体サンプルは、約１〜約１５０マイクロリットル以下、又は約１〜約２５マイクロリットル以下である。
一部の実施形態において、対象者は、頭部への損傷を受けたことが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、頭部への損傷を受けたことが分かっている．一部の実施形態において、対象者は、軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っていることが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、軽度ＴＢＩを患っていることが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、中等度ＴＢＩを患っていることが疑われる。一部の実施形態において、対象者は、重度ＴＢＩを患っていることが疑われる。
一部の実施形態において、生体サンプル取得時点と対象者が損傷を患っている時点の間の時間は未知である。一部の実施形態において、生体サンプルは、対象者が損傷を患ってから（例えば、その損傷は頭部への損傷であることができる）約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約９０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２５時間、約２６時間、約２７時間、約２８時間、約２９時間、約３０時間、約３１時間、約３２時間、約３３時間、約３４時間、約３５時間、約３６時間、約３７時間、約３８時間、約３９時間、約４０時間、約４１時間、約４２時間、約４３時間、約４４時間、約４５時間、約４６時間、約４７時間、約４８時間、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１６ヶ月、約１７ヶ月、約１８ヶ月、約１９ヶ月、約２０ヶ月、約２１ヶ月、約２２ヶ月、約２３ヶ月、約２４ヶ月、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年又は約１０年以内に得られる。一部の実施形態において、生体サンプルは、対象者が化学薬品、毒物又は化学薬品若しくは毒物の組み合わせを摂取若しくはそれに曝露されてから約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約９０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２５時間、約２６時間、約２７時間、約２８時間、約２９時間、約３０時間、約３１時間、約３２時間、約３３時間、約３４時間、約３５時間、約３６時間、約３７時間、約３８時間、約３９時間、約４０時間、約４１時間、約４２時間、約４３時間、約４４時間、約４５時間、約４６時間、約４７時間、約４８時間、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１６ヶ月、約１７ヶ月、約１８ヶ月、約１９ヶ月、約２０ヶ月、約２１ヶ月、約２２ヶ月、約２３ヶ月、約２４ヶ月、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年又は約１０年以内に得られる。そのような化学薬品及び／又は毒物の例には、火、カビ、アスベスト、農薬及び殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス（例えば、一酸化炭素、硫化水素、及びシアン化物）、有機金属（例えば、メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズ）及び／又は一又は複数の乱用薬物などがある。一部の実施形態において、生体サンプルは、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、一又は複数のウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせなどの疾患を患う対象者から得られる。一部の実施形態において、当該方法を行って、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷がないことを確認する。当該方法は、約１分、約２分、約３分、約４分、約５分、約６分約７分、約８分、約９分、約１０分、約１１分、約１２分、約１３分、約１４分、約１５分、約１６分、約１７分、約１８分、約１９分、約２０分、約３０分、約４５分、約６０分、約９０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、時間７２時間等以内に行うことができる。
ｂ．外傷性脳損傷を有する対象者の診断における支援を提供する方法
別の実施形態では、本明細書に記載の方法を用いて、対象者におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることによって、外傷性脳損傷を有する対象者の診断における支援を提供することができる。当該方法を用いて、下記の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体又はそれの抗体断片を用いて対象者における外傷性脳損傷を検出若しくは評価することができる。その方法は、（ａ）対象者から生体サンプルを得る工程と、（ｂ）抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体若しくはそれの抗体断片を用いて生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求める工程と、（ｃ）生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルをＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルと比較する工程と、（ｄ）生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１のレベルがＵＣＨ−Ｌ１の基準レベルより大きい場合に、対象者が外傷性脳損傷を有するものと確認する工程と、（ｅ）外傷性脳損傷を有すると確認された対象者に対して治療計画を行う工程とを含む。
ＵＣＨ−Ｌ１を測定及び評価することにより、当該方法によって、他の市販のＵＣＨ−Ｌ１イムノアッセイと比較して、より多くの疾患をより正確に診断し、それに続いて、より良好に治療できるようになる。当該方法は、自動化システム又は半自動化システムで使用するように適応させることができる。
通常、ＵＣＨ−Ｌ１について試験サンプルのアッセイを行って得られる結果を評価するのに、所定レベルをベンチマークとして用いることができる。通常、そのような比較を行うにおいて、その所定レベルは、ある特定のアッセイを、分析物の存在、量若しくは濃度のＴＢＩの特定の工程若しくはエンドポイント又は特定の兆候とのリンク若しくは関連を設けることができる十分な回数及び適切な条件下で行うことによって得られる。代表的には、所定レベルは、基準対象者（又は対象者の群）のアッセイで得られる。測定されるＵＣＨ−Ｌ１は、それのＵＣＨ−Ｌ１断片、それの分解産物及び／又はそれの酵素開裂産物を含むことができる。
この方法における基準レベルは、外傷性脳損傷を有する患者でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルであることができる。一部の実施形態において、その基準レベルは、本明細書に記載の方法のダイナミックレンジ内である。一部の実施形態において、そのダイナミックレンジは、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０．０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、又は約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の血清中５ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、２０ｐｇ／ｍＬ、３０ｐｇ／ｍＬ、４０ｐｇ／ｍＬ、５０ｐｇ／ｍＬ、６０ｐｇ／ｍＬ、７０ｐｇ／ｍＬ、８０ｐｇ／ｍＬ、９０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、５００ｐｇ／ｍＬ、１０００ｐｇ／ｍＬ、５０００ｐｇ／ｍＬ、１００００ｐｇ／ｍＬ、又は５００００ｐｇ／ｍＬ以上のレベルが、外傷性脳損傷を有する対象者を確認するものである。適宜に、場合によっては、ＵＣＨ−Ｌ１の血清中１０００００ｐｇ／ｍＬ、５０００００ｐｇ／ｍＬ、１００００００ｐｇ／ｍＬ、１５００００ｐｇ／ｍＬ、２０００００ｐｇ／ｍＬ、又は５０００００ｐｇ／ｍＬ以上のレベルが、外傷性脳損傷を有する対象者を確認するものである。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１の血漿中５ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、２０ｐｇ／ｍＬ、３０ｐｇ／ｍＬ、４０ｐｇ／ｍＬ、５０ｐｇ／ｍＬ、６０ｐｇ／ｍＬ、７０ｐｇ／ｍＬ、８０ｐｇ／ｍＬ、９０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、５００ｐｇ／ｍＬ、１０００ｐｇ／ｍＬ、５０００ｐｇ／ｍＬ、１００００ｐｇ／ｍＬ、又は５００００ｐｇ／ｍＬ以上のレベルが、外傷性脳損傷を有する対象者を確認するものである。適宜に、場合によっては、ＵＣＨ−Ｌ１の血漿中１０００００ｐｇ／ｍＬ、５０００００ｐｇ／ｍＬ、１００００００ｐｇ／ｍＬ、１５００００ｐｇ／ｍＬ、２０００００ｐｇ／ｍＬ、又は５０００００ｐｇ／ｍＬ以上のレベルが、外傷性脳損傷を有する対象者を確認するものである。
ｃ．外傷性脳損傷を患ったことがある対象者が療法若しくは治療の候補者であるか否かの予測方法
さらに別の実施形態において、本明細書に記載の方法を用い、下記の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体又はそれの抗体断片を用いて対象者でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを測定することによって、過去にＴＢＩを患ったことがある対象者が療法の候補者であるか否かを予測するのに用いることもできる。従って、特定の実施形態において、本開示は、本明細書に記載され当業界で公知である外傷性脳損傷を有するかそのリスクのある対象者が療法若しくは治療の候補者であるか否かを決定する方法も提供する。概して、その対象者は、（ｉ）頭部への損傷を経験したことがあり；（ｉｉ）一又は複数の化学薬品及び／又は毒物を摂取及び／又はそれらに曝露されたことがあり；（ｉｉｉ）自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、一又は複数のウィルス、髄膜炎、水頭症を患い、又はそれらのいずれかの組み合わせを患っており；又は（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれかの組み合わせに該当する；或いは、実際にＴＢＩ（例えば、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、一又は複数のウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患っている対象者）を有すると診断されたことがあるかそれらのリスクがある、及び／又は本明細書に記載の、好ましくない（即ち、臨床的に望ましくない）濃度若しくは量のＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片を示す少なくとも一人以上である。
具体的には、そのような方法は、（ａ）本明細書に記載の方法又は当業界で公知の方法を用いてＵＣＨ−Ｌ１の対象者からの試験サンプル中の濃度若しくは量を求める工程と；（ｂ）工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を所定レベルと比較する工程とを含むことができ、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が所定レベルに関して好ましい場合、その対象者は療法若しくは治療の候補者ではないと決定される。しかしながら、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が所定レベルに関して好ましくない場合、その対象者はセクションｆにおいて本明細書に記載され当業界で公知である療法若しくは治療の候補者であると決定される。
ｄ．対象者における外傷性脳損傷の進行のモニタリング方法
さらに別の実施形態において、本明細書に記載の方法を用いて、下記の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体若しくはそれの抗体断片を用いて対象者におけるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることによって、対象者における疾患及び／又は損傷、例えば外傷性脳損傷の進行をモニタリングすることもできる。至適には、当該方法は、（ａ）下記の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体若しくはそれの抗体断片を用いて対象者からの試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を求める工程と、（ｂ）下記の抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体若しくはそれの抗体断片を用いて対象者からの後の試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を求める工程と、（ｃ）工程（ｂ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量と比較する工程とを含み、工程（ｂ）で求めた濃度若しくは量が、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量と比較した場合に変化していないか好ましくない場合、その対象者におけるその疾患は、継続している、進行している、又は悪化していると決定される。比較により、工程（ｂ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量と比較した場合に好ましい場合、その対象者におけるその疾患は、停止、退行若しくは改善されたと決定される。
適宜に、当該方法は、工程（ｂ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を、例えば所定レベルと比較することをさらに含む。さらに、適宜に、当該方法は、その比較によって、工程（ｂ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が、例えば、所定レベルに関して好ましくない形で変化していることを示す場合、対象者を、ある期間にわたって一又は複数の医薬組成物で治療することを含む。
さらに、当該方法を用いて、一又は複数の医薬組成物による治療を受けている対象者における治療をモニタリングすることができる。具体的には、そのような方法では、対象者が一又は複数の医薬組成物を投与される前に、対象者からの第１の試験サンプルを提供する。次に、対象者からの第１の試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を求める（例えば、本明細書に記載の方法又は当業界で公知の方法を用いて）。ＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を求めた後、適宜に、ＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を所定レベルと比較する。第１の試験サンプルで求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が所定レベルより低い場合、その対象者は一又は複数の医薬組成物による治療を受けないか、或いは、対象者は、一又は複数の医薬組成物による治療を受けることができる。第１の試験サンプルで求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が所定レベルより高い場合、その対象者は、ある期間にわたって一又は複数の医薬組成物による治療を受けるか、或いは、その対象者は一又は複数の医薬組成物による治療を受けない。対象者が一又は複数の医薬組成物による治療を受ける期間は、当業者が決定することができる（例えば、その期間は、約７日〜約２年、好ましくは約１４日〜約１年であることができる）。
一又は複数の医薬組成物による治療の途中で、第２及びそれ以後の試験サンプルを対象者から得る。試験サンプル数及びその試験サンプルを対象者から得る時期はあまり重要ではない。例えば、第２の試験サンプルは対象者に一又は複数の医薬組成物を投与してから７日後に得ることができ、第３の試験サンプルは対象者に一又は複数の医薬組成物を投与してから２週間後に得ることができ、第４の試験サンプルは対象者に一又は複数の医薬組成物を投与してから３週間後に得ることができ、第５の試験サンプルは対象者に一又は複数の医薬組成物を投与してから４週間後に得ることができる等である。
第２又はそれ以降の試験サンプルそれぞれを対象者から得た後、ＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を、第２若しくはそれ以降の試験サンプルで求める（例えば、本明細書に記載の方法又は当業界で公知の方法を用いて）。次に、第２及びそれ以降の試験サンプルのそれぞれで求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量を、第１の試験サンプル（例えば、最初に適宜に所定レベルと比較した試験サンプル）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量と比較する。工程（ｃ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量が、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量と比較した場合に好ましい場合、対象者における疾患は、停止、退行若しくは改善されたと決定され、その対象者は、工程（ｂ）の一又は複数の医薬組成物の投与を続けることができる。しかしながら、工程（ｃ）で求めた濃度若しくは量が、工程（ａ）で求めたＵＣＨ−Ｌ１の濃度若しくは量と比較した場合に変化していないか好ましくない場合、その対象者における疾患は、継続している、進行している、又は悪化していると決定され、対象者は、工程（ｂ）で対象者に投与された一又は複数の医薬組成物の濃度をより高くして治療を受けることができるか、対象者は、工程（ｂ）で対象者に投与された一又は複数の医薬組成物とは異なる一又は複数の医薬組成物による治療を受けることができる。具体的には、対象者は、対象者が当該対象者のＵＣＨ−Ｌ１レベルを低減若しくは低下させるために以前に投与を受けていた一又は複数の医薬組成物とは異なる一又は複数の医薬組成物による治療を受けることができる。
概して、繰り返し試験を行うことができるアッセイについては（例えば、疾患進行及び／又は治療への応答のモニタリング）、第２又はそれ以降の試験サンプルは、対象者から第１の試験サンプルを得てからある期間経ってから得る。具体的には、対象者からの第２の試験サンプルは、対象者から第１の試験サンプルを得てから数分、数時間、数日、数週間又は数年後に得ることができる。例えば、第２の試験サンプルは、対象者からの第１の試験サンプルを得てから約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、約３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、約４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年、約２年、約２．５年、約３．０年、約３．５年、約４．０年、約４．５年、約５．０年、約５．５．年、約６．０年、約６．５年、約７．０年、約７．５年、約８．０年、約８．５年、約９．０年、約９．５年、又は約１０．０年後に対象者から得ることができる。
疾患進行をモニタリングするのに用いる場合、上記アッセイは、急性状態を患っている対象者における疾患の進行をモニタリングすることができる。救命救急状態とも称される急性状態は、例えば心血管系若しくは排泄系が関与する急性で生命を脅かす疾患その他の救急医学状態を指す。代表的には、救命救急状態は、病院環境（例えば、緊急治療室、集中治療室、外傷センター、又は他の緊急医療環境などがあるが、これらに限定されるものではない）での急性医学的介入又は救急医療隊員その他の現場医療担当者による投与を必要とする状態を指す。救命救急状態の場合、繰り返しモニタリングは通常、比較的短い時間フレーム内で行われ、即ち数分、数時間又は数日（例えば、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日又は約７日）以内であり、最初のアッセイも同様に、比較的短い時間フレーム内で行われ、例えば、疾患若しくは状態の発症の約数分、数時間又は数日以内である。
当該アッセイを用いて、慢性又は非急性状態を患う対象者における疾患の進行をモニタリングすることもできる。非救命救急状態又は非急性状態は、例えば心血管系及び／又は排泄系が関与する急性の生命を脅かす疾患その他の救急医学状態以外の状態を指す。代表的には、非急性状態には、長期若しくは慢性期間のものなどがある。非急性状態の場合、繰り返しモニタリングは通常、比較的長い時間フレームで行われ、例えば、数時間、数日、数週間、数ヶ月又は数年（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、約３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、約４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年、約２年、約２．５年、約３．０年、約３．５年、約４．０年、約４．５年、約５．０年、約５．５．年、約６．０年、約６．５年、約７．０年、約７．５年、約８．０年、約８．５年、約９．０年、約９．５年又は約１０．０年）であり、最初のアッセイも同様に、比較的長い時間フレーム内で行われ、例えば、疾患若しくは状態の発症の約数時間、数日、数ヶ月又は数年以内である。
さらに、上記アッセイは、対象者から得られた第１の試験サンプルを用いて行うことができ、前記第１の試験サンプルは、一つの入手源、例えば尿、全血、血清、又は血漿から得られる。適宜に、次に、対象者から得られた第２の試験サンプルを用いて上記アッセイを繰り返すことができ、前記第２の試験サンプルは別の入手源から得られる。例えば、第１の試験サンプルを尿から得ていた場合、第２の試験サンプルは、全血、血清又は血漿から得ることができる。第１の試験サンプル及び第２の試験サンプルを用いるアッセイから得られた結果を比較することができる。その比較を用いて、対象者における疾患若しくは状態の状況を評価することができる。
特に、疾患進行及び／又は治療をモニタリングするために、又は対象者が外傷性脳損傷を発症するリスクを求めるために用いられる所定レベルに関して、ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片の量若しくは濃度は、「未変化」、「好ましい」（又は「好ましく変化」）、又は「好ましくない」（又は「好ましくない形で変化」）であることができる。「上昇」又は「増加」は、代表的若しくは正常なレベル若しくは範囲（例えば、所定レベル）より高い若しくは大きい、又は別の基準レベル若しくは範囲（例えば、より初期のサンプル又は基底線サンプル）より高いか若しくは大きい試験サンプル中の量若しくは濃度を指す。「低下」又は「低減」という用語は、代表的若しくは正常レベル若しくは範囲（例えば、所定レベル）より低いか又は少ない、又は別の基準レベル若しくは範囲（例えば、より初期のサンプル又は基底線サンプル）より低いか若しくは少ない、試験サンプル中の量若しくは濃度を指す。「変化」という用語は、代表的若しくは正常レベル若しくは範囲（例えば、所定レベル）で、又は別の基準レベル若しくは範囲（例えば、より初期のダンプル又は基底線サンプル）で変化（増加又は減少）するサンプル中の量若しくは濃度を指す。
ＵＣＨ−Ｌ１についての代表的若しくは正常レベル若しくは範囲は、標準的な実務に従って定義される。実験誤差又はサンプル変動によって説明できない、代表的若しくは正常レベル若しくは範囲、又は基準レベル若しくは範囲と比較した正味の変化がある場合に、いわゆる変化レベル又は変化が起こったと考えることができる。従って、特定のサンプルで測定されるレベルは、いわゆる正常対象者からの同様のサンプルで測定されるレベル若しくはレベルの範囲と比較されることになる。この文脈で、「正常対象者」は、検出可能な疾患や障害を持たない個体であり、「正常」（「対照」と称される場合もある）患者又は群は、例えば、それぞれ検出可能な疾患や障害を示さない者である。「見かけ上正常対象者」は、ＵＣＨ−Ｌ１が評価されたことがないか評価中である者である。分析物が通常は検出できないが（例えば、正常レベルがゼロであるか、正常群の約２５〜約７５パーセンタイルの範囲内である）、試験サンプルにおいて検出される場合、並びに分析物が、正常レベルより高いレベルで試験サンプル中に存在する場合に、分析物のレベルは「上昇」と言われる。従って、特に、本開示は、外傷性脳損傷を有するかそれを有するリスクのある対象者のスクリーニング方法を提供するものである。
ｅ．他の因子
上記のような、診断、予後判定、及び／又は評価における支援方法はさらに、診断並びに予後判定及び評価における支援のための他の因子を用いることを含むことができる。一部の実施形態において、外傷性脳損傷は、グラスゴー昏睡スケール又は拡大グラスゴー転帰スケール（ＧＯＳＥ）を用いて診断することができる。他の検査、スケール又は指標を、単独で又はグラスゴー昏睡スケールと組み合わせて使用することもできる。１例は、Ｒａｎｃｈｏｓ Ｌｏｓ Ａｍｉｇｏｓ Ｓｃａｌｅである。Ｒａｎｃｈｏｓ Ｌｏｓ Ａｍｉｇｏｓ Ｓｃａｌｅは、覚醒、認知、行動及び環境との相互作用のレベルを測定するものである。Ｒａｎｃｈｏｓ Ｌｏｓ Ａｍｉｇｏｓ Ｓｃａｌｅには、レベルＩ：応答なし；レベルＩＩ：全身性応答；レベルＩＩＩ：局部的応答；レベルＩＶ：混乱−興奮；レベルＶ：混乱−不適切；レベルＶＩ：混乱−適切；レベルＶＩＩ：自動的−適切；及びレベルＶＩＩＩ：目的性−適切などがある。
ｆ．外傷性脳損傷を患う対象者の医学的治療
上記の方法で外傷性脳損傷、例えば軽度外傷性脳損傷又は中等度ないし重度の外傷性脳損傷を有すると確認若しくは評価された対象者は、当業界で公知の医療技術を用いて治療することができる。一部の実施形態において、当該方法はさらに、外傷性脳損傷を有すると評価されたヒト対象者を、外傷性脳損傷治療、例えば当業界で公知のいずれかの治療で治療することを含む。例えば、外傷性脳損傷の治療は、頭部への損傷の重度に応じて、多様な形態を取り得る。例えば、軽度ＴＢＩを患っている対象者の場合、治療は、休息、身体活動、例えばスポーツの差し控え、光の回避、又は外で日光に当たる場合はサングラスの着用、頭痛若しくは編頭痛の緩解のための投薬、吐気止め投薬などの一又は複数を含み得る。重度ＴＢＩを患っている患者の治療は、一又は複数の適切な医薬の投与（例えば、利尿剤、抗痙攣薬、鎮静させて個人を薬剤誘発昏睡状態とする医薬、又は他の医薬若しくは生物医薬（公知のもの又はＴＢＩ治療のために将来開発されるもの）、一又は複数の外科的処置（例えば、血腫の除去、頭蓋骨骨折の修復、減圧頭蓋骨切除術など）及び一又は複数の療法（例えば一又は複数のリハビリテーション、認知行動療法、アンガーマネジメント、カウンセリング心理学など）を含むものと考えられる。
ｇ．外傷性脳損傷を患う対象者のモニタリング
上記の方法で外傷性脳損傷、例えば軽度外傷性脳損傷又は中等度ないし重度の外傷性脳損傷を有すると確認若しくは評価された対象者は、当業界で公知の技術を用いてモニタリングすることができる。例えば、外傷性脳損傷、例えば軽度外傷性脳損傷又は重度外傷性脳損傷を患っている患者を、ＣＴスキャン又はＭＲＩでモニタリングすることができる。
３．ＵＣＨ−Ｌ１抗体
本明細書に記載の方法は、「ＵＣＨ−Ｌ１抗体」と称される、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（「ＵＣＨ−Ｌ１」）（又はそれの断片）に特異的に結合する単離抗体を用いることができる。ＵＣＨ−Ｌ１抗体を用いて、ＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価し、生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の存在を検出し、生体サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を定量し、又は生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の存在及びそれの量を検出することができる。
ａ．ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）
「ユビキチンＣ末端ヒドロラーゼ」とも称されるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（「ＵＣＨ−Ｌ１」）は、脱ユビキチン化酵素である。ＵＣＨ−Ｌ１は、産生物がユビキチンの小型Ｃ末端付加物を加水分解してユビキチンモノマーを発生させる遺伝子ファミリーの構成員である。ＵＣＨ−Ｌ１の発現は、ニューロン並びに散在性神経内分泌系及びそれらの腫瘍の細胞に対して高度に特異的である。それは、全てのニューロンに豊富に存在し（総脳タンパク質の１〜２％を占める）、ニューロン及び睾丸／卵巣で特異的に発現される。ＵＣＨ−Ｌ１の触媒三要素は、９０位のシステイン、１７６位のアスパラギン酸、及び１６１位のヒスチジンを含み、これらはそれのヒドロラーゼ活性を担うものである。
ヒトＵＣＨ−Ｌ１は、下記のアミノ酸配列を有することができる。
ＭＱＬＫＰＭＥＩＮＰＥＭＬＮＫＶＬＳＲＬＧＶＡＧＱＷＲＦＶＤＶＬＧＬＥＥＥＳＬＧＳＶＰＡＰＡＣＡＬＬＬＬＦＰＬＴＡＱＨＥＮＦＲＫＫＱＩＥＥＬＫＧＱＥＶＳＰＫＶＹＦＭＫＱＴＩＧＮＳＣＧＴＩＧＬＩＨＡＶＡＮＮＱＤＫＬＧＦＥＤＧＳＶＬＫＱＦＬＳＥＴＥＫＭＳＰＥＤＲＡＫＣＦＥＫＮＥＡＩＱＡＡＨＤＡＶＡＱＥＧＱＣＲＶＤＤＫＶＮＦＨＦＩＬＦＮＮＶＤＧＨＬＹＥＬＤＧＲＭＰＦＰＶＮＨＧＡＳＳＥＤＴＬＬＫＤＡＡＫＶＣＲＥＦＴＥＲＥＱＧＥＶＲＦＳＡＶＡＬＣＫＡＡ（配列番号１）。
ヒトＵＣＨ−Ｌ１は、配列番号１の断片又は変異体であることができる。ＵＣＨ−Ｌ１の断片は、長さ５〜２２５アミノ酸、１０〜２２５アミノ酸、５０〜２２５アミノ酸、６０〜２２５アミノ酸、６５〜２２５アミノ酸、１００〜２２５アミノ酸、１５０〜２２５アミノ酸、１００〜１７５アミノ酸、又は１７５〜２２５アミノ酸であることができる。その断片は、配列番号１からの連続数のアミノ酸を含むことができる。
ｂ．ＵＣＨ−Ｌ１認識抗体
当該抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１、その断片、ＵＣＨ−Ｌ１のエピトープ、又はそれの変異体に結合する抗体である。その抗体は、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体の断片又はそれの変異体若しくは誘導体であることができる。当該抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体であることができる。当該抗体は、キメラ抗体、一本鎖抗体、親和性成熟抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体又は抗体断片、例えばＦａｂ断片、又はこれらの混合物であることができる。抗体断片又は誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片を含むことができる。当該抗体誘導体は、ペプチド模倣薬によって産生することができる。さらに、一本鎖抗体の産生に関して記載の技術を、一本鎖抗体を産生するように適合させることができる。
抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、キメラ抗ＵＣＨ−Ｌ１又はヒト化抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体であることができる。１実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体の両方が一価である。１実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体の両方が、Ｆｃ領域に連結された単一のＦａｂ領域を含む。
ヒト抗体は、ファージディスプレイ技術から、又はヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスから誘導することができる。ヒト抗体は、ヒトイン・ビボ免疫応答の結果として発生させ、単離することができる。例えば、Ｆｕｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．， ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００８（８）：８５を参照する。従って、当該抗体は、ヒトの産物であることができ、動物レパートリーのものではない。それがヒト起源のものであることから、自己抗原に対する反応性のリスクを最小とすることができる。或いは、標準酵母ディスプレイライブラリ及びディスプレイ技術を用いて、ヒト抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を選択及び単離することができる。例えば、ナイーブヒト一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のライブラリを用いて、ヒト抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を選択することができる。トランスジェニック動物を用いて、ヒト抗体を発現させることができる。
ヒト化抗体は、非ヒト生物種からの一又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合した非ヒト生物種抗体由来の、抗体分子であることができる。
当該抗体は、当業界で公知のものと比較して、それが異なる生理機能を有するという点で、公知の抗体と区別することができる。
（１）エピトープ
当該抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１（配列番号１）、その断片又はそれの変異体に免疫特異的に結合することができる。当該抗体は、エピトープ領域内の少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸、又は少なくとも１０アミノ酸を免疫特異的に認識し、それに結合することができる。当該抗体は、エピトープ領域の少なくとも３連続アミノ酸、少なくとも４連続アミノ酸、少なくとも５連続アミノ酸、少なくとも６連続アミノ酸、少なくとも７連続アミノ酸、少なくとも８連続アミノ酸、少なくとも９連続アミノ酸、又は少なくとも１０連続アミノ酸を有するエピトープ免疫特異的に認識し、それに結合することができる。
ｃ．抗体の作製／製造
抗体は、当業者に公知の技術などの多様な技術のいずれかによって作製することができる。概して、抗体は、例えば従来の技術を介した、又は抗体の産生を可能とするための抗体遺伝子、重鎖、及び／又は軽鎖の好適な細菌若しくは哺乳動物細胞宿主へのトランスフェクションを介したモノクローナル抗体の発生などの細胞培養技術によって製造することができ、その抗体は組換え体であることができる。「トランスフェクション」という用語の各種形態は、外因性ＤＮＡの原核生物又は真核生物宿主細胞への導入に一般的に使用される非常に多様な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものである。原核生物宿主細胞又は真核生物宿主細胞で抗体を発現させることが可能であるが、そのような真核生物細胞（特に、哺乳動物細胞）が、原核生物細胞より、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を集合及び分泌しやすいことから、真核生物細胞での抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞での発現が最も好ましい。
組換え抗体を発現する哺乳動物宿主細胞の例には、例えばＫａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １５９： ６０１−６２１ （１９８２）に記載のＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ７７：４２１６−４２２０（１９８０）に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞など）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、及びＳＰ２細胞などがある。抗体遺伝子をコードする組換え体発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入されると、宿主細胞中の抗体発現又はより好ましくは宿主細胞が成長する培地中への抗体の分泌を可能とするだけの期間にわたり宿主細胞を培養することによって、その抗体が産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収することができる。
宿主細胞を用いて、機能性抗体断片、例えばＦａｂ断片又はｓｃＦｖ分子を製造することもできる。上記手順についての変形形態を行うことが可能であることは明らかであろう。例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖のＤＮＡをコードする機能性断片で宿主細胞をトランスフェクションすることが望ましい可能性がある。組換えＤＮＡ技術を用いて、対象の抗原への結合に必要ではない軽鎖及び重鎖のいずれか又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全てを除去することもできる。そのような切断ＤＮＡ分子から発現される分子も、その抗体によって包含される。さらに、１個の重鎖及び１個の軽鎖が（即ち、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する）抗体であり、そして他の重鎖及び軽鎖がヒトＵＣＨ−Ｌ１以外の抗原に対して特異的である、二官能性抗体を、標準的な化学架橋法によって抗体を第２の抗体に架橋することにより、産生することができる。
抗体又はそれの抗原結合部分の組換え体発現に好ましいシステムにおいて、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え体発現ベクターを、リン酸カルシウム介在トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。その組換え体発現ベクター内において、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子をそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に操作的に連結させて、それら遺伝子の高レベルの転写を行う。その組換え体発現ベクターは、ＤＨＦＲ遺伝子も有し、それはメトトレキセート選択／増幅を用いてベクターでトランスフェクションされたＣＨＯ細胞の選択を可能とするものである。選択された形質転換宿主細胞を培養して抗体重鎖及び軽鎖を発現できるようにし、無傷抗体を培地から回収する。標準的な分子生物学技術を用いて、組換え体発現ベクターを作製し、宿主細胞をトランスフェクションし、形質転換細胞について選択を行い、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。さらに、組換え抗体の合成方法は、組換え抗体が合成されるまで好適な培地中で宿主細胞を培養することによるものであることができる。その方法はさらに、培地から組換え抗体を単離することを含むことができる。
モノクローナル抗体の作製方法には、所望の特異性を有する抗体を産生する能力を有する不死細胞系の作製が関与する。そのような細胞系は、免疫動物から得た脾臓細胞から製造することができる。その動物は、ＵＣＨ−Ｌ１又はそれの断片及び／又は変異体で免疫化することができる。動物を免疫化するのに用いられるペプチドは、アミノ酸をコードするヒトＦｃ、例えばヒト抗体の断片結晶性領域又は尾部領域を含むことができる。次に、その脾臓細胞を、例えば、骨髄腫細胞融合相手との融合によって不死化することができる。各種融合技術を用いることができる。例えば、脾臓細胞及び骨髄腫細胞を数分間にわたりノニオン系洗剤と組み合わせ、次に骨髄腫細胞ではなくハイブリッド細胞の増殖を支援する選択培地に低密度で蒔くことができる。一つのそのような技術は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（ＨＡＴ）選択を用いる。別の技術は、電気融合を含む。通常約１〜２週間の十分な時間後、ハイブリッドのコロニーが観察される。単一のコロニーを選択し、それらの培養上清を、ポリペプチドに対する結合活性について調べる。高反応性及び特異性を有するハイブリドーマを用いることができる。
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマコロニー成長の上清から単離することができる。さらに、マウスなどの好適な脊椎動物宿主の腹腔へのハイブリドーマ細胞系の注射などの各種技術を用いて、収量を高めることができる。次に、モノクローナル抗体を腹水又は血液から回収することができる。クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈殿及び抽出などの従来の技術によって、汚染物を抗体から除去することができる。アフィニティクロマトグラフィーが、抗体を精製するためのプロセスで用いることができる方法の１例である。
タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を優先的に開裂させて、いくつかの断片を与え、そのうちの二つ（Ｆ（ａｂ）断片）はそれぞれ、無傷抗原結合部位を含む共有結合ヘテロダイマーを含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を開裂させて、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片などのいくつかの断片を得ることができる。
Ｆｖ断片は、ＩｇＭ、及び希にＩｇＧ又はＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的タンパク分解開裂によって産生させることができる。Ｆｖ断片は、組換え技術を用いて誘導することができる。Ｆｖ断片は、自然抗体分子の抗原認識及び結合能力のほとんどを保持する抗原結合部位を含む非共有結合ＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーを含む。
抗体、抗体断片、又は誘導体は、ＣＤＲに対する支援を提供し、互いに関してのＣＤＲの空間的関係を規定する重鎖及び軽鎖フレームワーク（「ＦＲ」）セットの間にそれぞれ割り込む重鎖及び軽鎖相補性決定領域（「ＣＤＲ」）セットを含むことができる。ＣＤＲセットは、重鎖又は軽鎖Ｖ領域の三つの超可変領域を含むことができる。
必要な特異性の抗体の他の好適な製造又は単離方法を用いることができ、例えば、当業界で公知の方法を用いる各種商業的供給元、例えばＣａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ， ＵＫ）、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ （Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ、Ｄｅｌ．）、Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ（Ａｂｅｒｄｅｅｎ， Ｓｃｏｔｌａｎｄ， ＵＫ）、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ（Ｌｕｎｄ， Ｓｗｅｄｅｎ）から入手可能なペプチド又はタンパク質ライブラリ（例えば、バクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、酵母など（これらに限定されるものではない）がライブラリを示す）から組換え抗体を選択する方法などがあるが、それらに限定されるものではない。米国特許第４，７０４，６９２号；５，７２３，３２３号；５，７６３，１９２号；５，８１４，４７６号；５，８１７，４８３号；５，８２４，５１４号；５，９７６，８６２号を参照する。別途方法は、当業界で公知で及び／又は本明細書に記載されているヒト抗体のレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物の免疫感作に依るものである（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４１：９０１−９０７；Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ． （１９９６）Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １６：９５−１１８；Ｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９３：１５４−１６１）。そのような技術には、リボソームディスプレイ（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９４：４９３７−４９４２；Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９５：１４１３０−１４１３５）；単一細胞抗体産生技術（例えば、選択リンパ球抗体法（「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７：８８７−８９２；Ｂａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ９３：７８４３−７８４８）；ゲル微液滴及びフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ８：３３３−３３７；Ｏｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ）．；Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ． Ｉｍｍ． Ｍｅｔｈ． １８２：１５５−１６３；Ｋｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ． １３：７８７−７９０）；Ｂ細胞選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｏｒｔｓ １９：１２５−１３４（１９９４））などがあるが、これらに限定されるものではない。
親和性成熟抗体は、当業界で公知の多くの手順のいずれか一つによって製造することができる。例えば、ＶＨ及びＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟が記載されているＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １０：７７９−７８３（１９９２）を参照する。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異導入法が、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９１： ３８０９−３８１３ （１９９４）； Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， １６９： １４７−１５５ （１９９５）； Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５５： １９９４−２００４ （１９９５）； Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５４（７）： ３３１０−３３１９ （１９９５）； Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２２６： ８８９−８９６ （１９９２）によって記載されている。選択的突然変異誘発位置及び又は活性促進性アミノ酸残基による接触若しくは過剰変異位置での選択的突然変異が、米国特許第６，９１４，１２８Ｂ１号に記載されている。
抗体変異体は、トランスジェニック動物又は哺乳動物を提供するのに好適な宿主、例えばそのような抗体を乳に産生するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどへの抗体をコードするポリヌクレオチドの送達を用いて作製することもできる。これらの方法は当業界で公知であり、例えば米国特許第５，８２７，６９０号；５，８４９，９９２号；４，８７３，３１６号；５，８４９，９９２号；５，９９４，６１６号；５，５６５，３６２号；及び５，３０４，４８９号に記載されている。
抗体変異体は、植物部分またはそれから培養された細胞で、そのような抗体、指定の部分若しくは変異体を産生するトランスジェニック植物及び培養植物細胞（例えば、タバコ、トウモロコシ及びウキクサであるが、これらに限定されるものではない）をポリヌクレオチドに送達することにより製造することもできる。例えば、Ｃｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｃｕｒｒ． Ｔｏｐ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４０：９５−１１８及びそこで引用の文献に、例えば誘導プロモーターを用いる、大量の組換え体タンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉の製造が記載されている。トランスジェニックトウモロコシを用いて、他の組換えシステムで産生されたもの又は天然入手源から精製したものと同等の生理活性を有する、商業生産レベルで哺乳動物タンパク質を発現させている。例えば、Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ． （１９９９）４６４：１２７−１４７及びそこで引用の参考文献を参照する。抗体変異体はまた、タバコ種子及びジャガイモ塊茎などの抗体断片、例えば一本鎖抗体（ｓｃＦｖ’ｓ）を含むトランスジェニック植物種子から大量に製造されている。例えば、Ｃｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３８：１０１−１０９及びそこで引用の参考文献を参照する。従って、抗体は、公知の方法に従って、トランスジェニック植物を用いて製造することもできる。
抗体誘導体は、例えば、外因性配列を加えることにより、免疫原性を変え、又は結合、アフィニティ、オンレート、オフレート、親和性、特異性、半減期、又はいずれか他の好適な特性を低減、促進若しくは変更することによって製造することができる。概して、非ヒト又はヒトＣＤＲ配列の一部又は全てが維持されるが、可変領域及び定常領域の非ヒト配列はヒトその他のアミノ酸で置き換わる。
小抗体断片は、二つの抗原結合部位を有する二重特異性抗体であることができ、その断片は、同一ポリペプチド鎖（ＶＨ ＶＬ）で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、（１９９３） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８を参照する。同一鎖上のその二つのドメインを対合できるようにするには短すぎるリンカーを用いることにより、それらのドメインを、別の鎖の相補ドメインと強制的に対合させ、二つの抗原結合部位を作る。親抗体の超可変領域に挿入された一又は複数のアミノ酸及び親抗体の抗原に対する結合アフィニティの少なくとも約２倍強い、標的抗原に対する結合アフィニティを有する抗体変異体を開示しているＣｈｅｎらに対する米国特許第６，６３２，９２６号（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）も参照する。
その抗体は直鎖抗体であることができる。直鎖抗体の製造手順は、当業界で公知であり、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８（１０）：１０５７−１０６２に記載されている。即ち、これらの抗体は、一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖抗体は、二重特異性又は単一特異性であることができる。
その抗体は、タンパク質Ａ精製、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン若しくはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーなど（これらに限定されるものではない）の公知の方法によって、組換え細胞培養物から回収及び精製することができる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）も精製に用いることができる。
抗体を検出可能な形で標識することが有用な場合がある。抗体をこれらの作用剤に結合させる方法は当業界で公知である。説明のみを目的とすると、抗体は、放射性原子、発色団、フルオロフォアなどの検出可能な部分で標識することができる。そのような標識抗体は、イン・ビボ、又は単離試験サンプルでの診断技術に用いることができる。それらは、サイトカイン、リガンド、別の抗体に連結させることができる。抗体にカップリングさせて抗腫瘍効果を達成するのに好適な作用剤には、サイトカイン類、例えばインターロイキン２（ＩＬ−２）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）；光線力学的治療で用いられる光増感剤、例えばアルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンテトラするホネート、ヘマトポルフィリン及びフタロシアニン；放射性核種、例えばヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、イットリウム−９０（９０Ｙ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２１３Ｂｉ）、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）、及びレニウム−１８８（１８８Ｒｅ）；抗生物質、例えばドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、ダウノマイシン、ネオカルチノスタチン、及びカルボプラチン；細菌、植物及び他の毒物、例えばジフテリア毒、緑膿菌外毒素Ａ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、アブリン−Ａ毒、リシンＡ（脱グリコシル化リシンＡ及び天然リシンＡ）、ＴＧＦ−α毒、タイワンコブラ（ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）からの細胞毒、及びゲロニン（植物毒素）；植物、細菌及び真菌からのリボソーム不活性化タンパク質、例えばレストリクトシン（アスペルギルス・レストリクタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｕｓ）によって産生されるリボソーム不活性化タンパク質）、サポリン（サポナリア・オフィシナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）からのリボソーム不活性化タンパク質）、及びＲＮａｓｅ；チロシンキナーゼ阻害剤；ｌｙ２０７７０２（二フッ化プリンヌクレオシド）；抗嚢胞化物質（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、毒素をコードするプラスミド、メトトレキセートなど）を含むリポソーム；及び他の抗体または抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ）などがある。
ハイブリドーマ技術、選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、トランスジェニック動物、及び組換え抗体ライブラリを用いることによる抗体産生について、下記でより詳細に説明する。
（１）ハイブリドーマ技術を用いる抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え体、及びファージディスプレイ技術、又はこれらの組み合わせの使用などの当業界で公知の非常に多様な技術を用いて製造することができる。例えば、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術、例えば当業界で公知若しくは例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， １９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ， （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎ．Ｙ．， １９８１）で報告されている技術を用いて製造することができる。さらに留意すべき点として、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって製造された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、単一クローン、例えば何らかの真核生物、原核生物、又はファージクローン由来の抗体を指し、それが製造される方法ではない。
モノクローナル抗体の生成方法並びにその方法によって産生された抗体は、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含むことができ、好ましくは、そのハイブリドーマは、ＵＣＨ−Ｌ１で免疫化された動物、例えばラット若しくはマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、次にその融合から得られたハイブリドーマを、本発明のポリペプチドと結合することができる抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることにより発生される。即ち、ラットをＵＣＨ−Ｌ１抗原で免疫化することができる。好ましい実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１抗原は、免疫応答を刺激するためのアジュバントとともに投与される。そのようなアジュバントには、完全若しくは不完全フロインドアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）又はＩＳＣＯＭ（免疫賦活性複合体）などがある。そのようなアジュバントは、限局性沈着におけるポリペプチドの隔絶による急速な分散からポリペプチドを保護することができ、又は、マクロファージに対して走化性である因子及び免疫系の他の成分を宿主が分泌するのを刺激する物質を含むことができる。好ましくは、ポリペプチドを投与しようとする場合、その免疫化スケジュールでは、数週間の期間を空けてのポリペプチドの２回以上の投与を行うことになるが、ポリペプチドの単回投与も用い得る。
ＵＣＨ−Ｌ１抗原で動物を免疫化した後、抗体及び／又は抗体産生細胞をその動物から得ることができる。動物の放血又は屠殺によってその動物から抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体含有血清が得られる。その血清を、動物から得たままで用いることができ、免疫グロブリン画分をその血清から得ることができ、又は抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体をその血清から精製することができる。このようにして得られた血清又は免疫グロブリンはポリクローナルであることから、異種の数々の特性を有する。
免疫応答が検出されたら、例えば、抗原ＵＣＨ−Ｌ１に特異的な抗体がラット血清で検出されたら、ラット脾臓を摘出し、脾細胞を単離した。次に、脾細胞を、公知の技術によって、いずれか好適な骨髄腫細胞、例えばＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖａ．， ＵＳ）から入手可能な細胞系ＳＰ２０由来の細胞に融合させる。限界希釈によって、ハイブリドーマを選択及びクローニングする。次に、そのハイブリドーマクローンを、ＵＣＨ−Ｌ１に結合する能力を有する抗体を分泌する細胞について当業界で公知の方法によってアッセイする。陽性ハイブリドーマクローンによってラットを免疫化することにより、通常は高レベルの抗体を含む腹水を得ることができる。
別の実施形態において、抗体産生性不死化ハイブリドーマを、免疫動物から作製することができる。免疫化後、動物を屠殺し、脾Ｂ細胞を、当業界で公知の方法で、不死化骨髄腫細胞に融合させる。例えば、上記のＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅを参照する。好ましい実施形態において、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌性細胞系）。融合及び抗生物質選択後、ＵＣＨ−Ｌ１、又はそれの部分、又はＵＣＨ−Ｌ１を発現する細胞を用いて、ハイブリドーマをスクリーニングする。好ましい実施形態において、初回スクリーニングを、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、好ましくはＥＬＩＳＡを用いて行う。ＥＬＩＳＡスクリーニングの１例が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／３７５０４にある。
抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体産生性ハイブリドーマを、選択、クローニング、及び、望ましい特性、例えば堅牢なハイブリドーマ増殖、高抗体産生、及び望ましい抗体特性についてのスクリーニングを行う。ハイブリドーマを培養し、同種動物、免疫系が欠如した動物、例えばヌードマウスにおいて、イン・ビボで又はイン・ビトロの細胞培養物で増殖させることができる。ハイブリドーマの選択、クローニング及び増殖方法は、当業者には公知である。
好ましい実施形態において、ハイブリドーマはラットハイブリドーマである。別の実施形態において、ハイブリドーマは、非ヒト非ラット生物種、例えばマウス、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、又はウマで産生される。さらに別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫を抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体を発現するヒト細胞と融合させたヒトハイブリドーマである。
特異的エピトープを認識する抗体断片は、公知の技術によって形成することができる。例えば、本発明のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（二つの同一のＦａｂ断片を産生するため）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するため）などの酵素を用いる、免疫グロブリン分子のタンパク分解開裂によって製造することができる。ＩｇＧ分子のＦ（ａｂ’）２断片は、より大きい（「親」）ＩｇＧ分子の二つの抗原結合部位、例えば両方の軽鎖（可変軽鎖及び定常軽鎖領域を含む）、重鎖のＣＨ１ドメイン、及び親ＩｇＧ分子のジスルフィド形成性ヒンジ領域を保持する。従って、Ｆ（ａｂ’）２断片はなお、親ＩｇＧ分子のような抗原分子を架橋させる能力を有する。
（２）ＳＬＡＭを用いる抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
本発明の別の態様において、組換え抗体は、米国特許第５，６２７，０５２号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０２５５１；及びＢａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９３：７８４３−７８４８（１９９６）に記載のような選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）と当業界で称される手順を用いて、単一の単離リンパ球から得られる。この方法では、対象の抗体を分泌する単一細胞、例えば、免疫動物のいずれか由来のリンパ球を、抗原ＵＣＨ−Ｌ１、ＵＣＨ−Ｌ１のサブユニット、又はそれの断片を、リンカー、例えばビオチンを用いてヒツジ赤血球細胞に結合させる抗原特異的溶血プラークアッセイを用いてスクリーニングし、それを用いて、ＵＣＨ−Ｌ１についての特異性を有する抗体を分泌する単一細胞を同定する。対象の抗体分泌性細胞を同定した後、重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡを、逆転写酵素−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって細胞から取り出し、次に、これらの可変領域を、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）の文脈で、哺乳動物宿主細胞、例えばＣＯＳ又はＣＨＯ細胞で発現させることができる。次に、例えば、トランスフェクション細胞を選別してＵＣＨ−Ｌ１に対する抗体を発現する細胞を単離することにより、イン・ビボ選択されたリンパ球由来の増幅免疫グロブリン配列でトランスフェクションされた宿主細胞について、イン・ビトロでのさらなる分析及び選択を行うことができる。増幅免疫グロブリン配列を、例えばイン・ビトロアフィニティ成熟法によってイン・ビトロでさらに操作することができる。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１及びＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５６７７２を参照する。
（３）トランスジェニック動物を用いる抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
本発明の別の実施形態において、ヒト免疫グロブリン座の一部若しくは全てを含む非ヒト動物をＵＣＨ−Ｌ１抗原で免疫化することにより、抗体が製造される。１実施形態において、その非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン座の大きい断片を含み、マウス抗体産生において欠乏している改変マウス系統であるＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（Ｒ）トランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ７：１３−２１（１９９４）及び米国特許第５，９１６，７７１号；５，９３９，５９８号；５，９８５，６１５号；５，９９８，２０９号；６，０７５，１８１号；６，０９１，００１号；６，１１４，５９８号；及び６，１３０，３６４号を参照する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１０７４１；ＷＯ９４／０２６０２；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；ＷＯ９８／１６６５４；ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９８／５０４３３；ＷＯ９９／４５０３１；ＷＯ９９／５３０４９；ＷＯ００／０９５６０；及びＷＯ００／３７５０４も参照する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（Ｒ）トランスジェニックマウスは、完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異性ヒトモノクローナル抗体を与える。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（Ｒ）トランスジェニックマウスは、ヒト重鎖座及びｘ軽鎖座のメガ塩基規模の生殖系列構造ＹＡＣ断片の導入によってヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， １５： １４６−１５６ （１９９７）、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １８８：４８３−４９５（１９９８）（これらの開示内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照する。
（４）組換え抗体ライブラリを用いる抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体
イン・ビトロ法を用いて本発明の抗体を作ることもでき、抗体ライブラリをスクリーニングして所望のＵＣＨ−Ｌ１結合特異性を有する抗体を同定する。組換え抗体ライブラリのそのようなスクリーニング方法は当業界で公知であり、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号（Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９（Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１（Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９（Ｍａｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８（Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０（Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ．）；Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ９：１３６９−１３７２（１９９１）；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ａｎｔｉｂｏｄ． Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ， ３：８１−８５（１９９２）；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４６： １２７５−１２８１ （１９８９）； ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ．， １２： ７２５−７３４ （１９９３）； Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２２６：８８９−８９６（１９９２）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３５２： ６２４−６２８ （１９９１）； Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８９：３５７６−３５８０（１９９２）；Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ９： １３７３−１３７７ （１９９１）； Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １９：４１３３−４１３７（１９９１）；Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８８：７９７８−７９８２（１９９１）；米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１（これらのそれぞれの内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の方法などがある。
組換え抗体ライブラリは、ＵＣＨ−Ｌ１又はＵＣＨ−Ｌ１の一部で免役化された対象者からのものであることができる。或いは、組換え抗体ライブラリは、未感作対象者、即ち、ＵＣＨ−Ｌ１Ｐで免疫化されたことがない対象者、例えばヒトＵＣＨ−Ｌ１で免疫化されたことがないヒト対象者からのヒト抗体ライブラリからのものであることができる。本発明の抗体は、ヒトＵＣＨ−Ｌ１を含むペプチドを有する組換え抗体ライブラリをスクリーニングすることにより、ＵＣＨ−Ｌ１を認識する抗体を選択することによって選択される。そのようなスクリーニング及び選択の実施方法は、前段落における参考文献に記載のように当業界で公知である。ＵＣＨ−Ｌ１に対する特定の結合親和性を有する本発明の抗体、例えば特定のＫｏｆｆ速度定数でヒトＵＣＨ−Ｌ１から解離するものを選択するには、当業界で公知の表面プラズモン共鳴方法を用いて、所望のＫｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することができる。ｈＵＣＨ−Ｌ１についての特定の中和活性を有する本発明の抗体、例えば特定のＩＣ５０を有するものを選択するには、当業界で公知のＵＣＨ−Ｌ１活性阻害の標準的な評価方法を用いることができる。
１態様において、本発明は、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する単離抗体又はそれの抗原結合部分に関するものである。好ましくは、その抗体は、中和抗体である。各種実施形態において、その抗体は、組換え抗体又はモノクローナル抗体である。
例えば、抗体は、当業界で公知の各種ファージディスプレイ法を用いて得ることもできる。ファージディスプレイ法では、機能性抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面に示される。そのようなファージを用いて、レパートリー又は組み合わせ抗体ライブラリ（例えば、ヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインを示すことができる。対象の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージを選択し、例えば、標識抗原又は固体表明若しくはビーズに結合若しくは捕捉された抗原を用いて、抗原で同定することができる。これらの方法で使用されるファージは、代表的には、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩタンパク質に組換え的に融合したＦａｂ、Ｆｖ、又はジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄ及びＭ１３結合ドメインを含む糸状ファージである。その抗体を作るのに用いることができるファージディスプレイ法の例には、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １８２： ４１−５０ （１９９５）； Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １８４：１７７−１８６ （１９９５）； Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２４： ９５２−９５８ （１９９４）； Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， １８７： ９−１８ （１９９７）； Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；及び米国特許第５，６９８，４２６号；５，２２３，４０９号；５，４０３，４８４号；５，５８０，７１７号；５，４２７，９０８号；５，７５０，７５３号；５，８２１，０４７号；５，５７１，６９８号；５，４２７，９０８号；５，５１６，６３７号；５，７８０，２２５号；５，６５８，７２７号；５，７３３，７４３号；及び５，９６９，１０８号に開示のものなどがある。
上記参考文献に記載のように、ファージ選択後、そのファージからの抗体コード領域を単離し、ヒト抗体又はいずれか他の所望の抗原結合性断片を含み、例えば下記で詳細に説明するように、いずれかの所望の宿主、例えば哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌で発現される、全抗体を得ることができる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２断片を製造する技術は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９２／２２３２４； Ｍｕｌｌｉｎａｘ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， １２（６）： ８６４−８６９ （１９９２）； Ｓａｗａｉ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｐｒｏｄ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ３４： ２６−３４ （１９９５）；及びＢｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４０： １０４１−１０４３ （１９８８）に開示のものなどの当業界で公知の方法を用いて使用することもできる。一本鎖Ｆｖｓ及び抗体を製造するのに用いることができる技術の例には、米国特許第４，９４６，７７８号及び５，２５８，４９８号； Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ２０３： ４６−８８ （１９９１）； Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０： ７９９５−７９９９ （１９９３）；及びＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４０： １０３８−１０４１ （１９８８）に記載のものなどがある。
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングに代えて、当業界で公知の大きい組み合わせライブラリーの他のスクリーニング方法を、本発明の抗体の同定に適用することができる。ある種類の代替の発現系は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／３１７００（Ｓｚｏｓｔａｋ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓ）及びＲｏｂｅｒｔｓ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９４：１２２９７−１２３０２（１９９７）に記載のように、組換え抗体ライブラリをＲＮＡ−タンパク質融合として発現するものである。この系では、ｍＲＮＡ及び３’末端にペプチジル受容体抗生物質であるピューロマイシンを有する合成ｍＲＮＡのイン・ビトロ翻訳によってそれがコードするペプチド若しくはタンパク質との間に共有結合融合が形成される。従って、特異的ｍＲＮＡは、コードされたペプチド又はタンパク質、例えば、抗体若しくはそれの部分の特性、例えば二重特異性抗原への抗体若しくはそれの部分の結合に基づいてｍＲＮＡの複合混合物（例えば、組み合わせライブラリ）から豊富化することができる。そのようなライブラリーのスクリーニングから回収された抗体若しくはそれの部分をコードする核酸配列は、上記に記載の組換え手段によって発現することができ（例えば、哺乳動物宿主細胞で）、さらに、突然変異が元々選択された配列に導入されたｍＲＮＡ−ペプチド融合のさらなるスクリーニングラウンドによって、又は上記のような組換え抗体の他のイン・ビトロのアフィニティ成熟方法によって、さらなるアフィニティ成熟を受けることができる。この方法の好ましい例は、ＰＲＯ融合ディスプレイ技術である。
別のアプローチでは、当該抗体は、当業界で公知の酵母ディスプレイ法を用いて得ることもできる。酵母ディスプレイ法では、遺伝学的方法を用いて、酵母細胞壁に抗体ドメインを連結し、それらを酵母表面上で示す。特に、そのような酵母を用いて、レパートリー又は組み合わせ抗体ライブラリ（例えば、ヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインを示すことができる。その抗体を作るのに用いることができる酵母ディスプレイ法の例には、米国特許第６，６９９，６５８号（Ｗｉｔｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．）（参照によって本明細書に組み込まれる）に開示のものなどがある。
ｄ．組換えＵＣＨ−Ｌ１抗体の製造
抗体は、当業界で公知の多くの技術のいずれかによって製造することができる。例えば、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターが標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクションされている宿主細胞からの発現である。各種形態の「トランスフェクション」という用語は、外因性ＤＮＡを原核生物又は真核生物宿主細胞に導入するのに一般的に使用される非常に多様な技術を包含するものであり、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどである。原核生物又は真核生物宿主細胞で本発明の抗体を発現させることが可能であるが、そのような真核生物細胞（特に、哺乳動物細胞）が、原核生物細胞より、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を集合及び分泌しやすいことから、真核生物細胞での抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞での発現が最も好ましい。
本発明の組換え抗体を発現する哺乳動物宿主細胞の例には、例えばＫａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １５９： ６０１−６２１ （１９８２）に記載のＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ７７：４２１６−４２２０（１９８０）に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞など）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、及びＳＰ２細胞などがある。抗体遺伝子をコードする組換え体発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入されると、宿主細胞中の抗体発現又はより好ましくは宿主細胞が成長する培地中への抗体の分泌を可能とするだけの期間にわたり宿主細胞を培養することによって、その抗体が産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収することができる。
宿主細胞を用いて、機能性抗体断片、例えばＦａｂ断片又はｓｃＦｖ分子を製造することもできる。上記手順についての変形形態を行うことが可能であることは明らかであろう。例えば、本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖のＤＮＡをコードする機能性断片で宿主細胞をトランスフェクションすることが望ましい可能性がある。組換えＤＮＡ技術を用いて、対象の抗原への結合に必要ではない軽鎖及び重鎖のいずれか又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全てを除去することもできる。そのような切断ＤＮＡ分子から発現される分子も、本発明の抗体によって包含される。さらに、１個の重鎖及び１個の軽鎖が本発明の抗体（即ち、ヒトＵＣＨ−Ｌ１に結合する）であり、他の重鎖及び軽鎖が、標準的な化学架橋法によって本発明の抗体を第２の抗体に架橋することによりヒトＵＣＨ−Ｌ１以外の抗原に対して特異的である二官能性抗体を産生することができる。
本発明の抗体又はそれの抗原結合部分の組換え体発現に好ましいシステムにおいて、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え体発現ベクターを、リン酸カルシウム介在トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。その組換え体発現ベクター内において、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子をそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に操作的に連結させて、それら遺伝子の高レベルの転写を行う。その組換え体発現ベクターは、ＤＨＦＲ遺伝子も有し、それはメトトレキセート選択／増幅を用いてベクターでトランスフェクションされたＣＨＯ細胞の選択を可能とするものである。選択された形質転換宿主細胞を培養して抗体重鎖及び軽鎖を発現できるようにし、無傷抗体を培地から回収する。標準的な分子生物学技術を用いて、組換え体発現ベクターを作製し、宿主細胞をトランスフェクションし、形質転換細胞について選択を行い、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。さらに、本発明は、本発明の組換え抗体が合成されるまで好適な培地中で本発明の宿主細胞を培養することによって本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。その方法はさらに、培地から組換え抗体を単離することを含むことができる。
（１）ヒト化抗体
ヒト化抗体は、抗体又はそれの変異体、誘導体、類似体若しくは部分であることができ、免疫特異的に目的の抗原に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域並びに非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ヒト化抗体は、非ヒト生物種からの一又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する非ヒト生物種抗体からのものであることができる。
本明細書において使用するとき、ＣＤＲとの関連において「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含み、ここで、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。１態様によれば、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖並びに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含み得る。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖だけを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖だけを含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖及び／又は重鎖のヒト化可変ドメインだけを含有する。
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン並びに限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、１つを超えるクラス又はアイソタイプからの配列を含み得、特定の定常ドメインは、当該技術分野において周知の技術を用いて、望ましいエフェクター機能を最適化するために選択され得る。
ヒト化抗体のフレームワーク及びＣＤＲ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、その部位におけるＣＤＲ又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又はコンセンサスフレームワークのいずれかに対応しないように、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークが、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によって突然変異させられ得る。しかしながら、１実施形態において、このような突然変異は広範囲なものではない。通常、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％のヒト化抗体残基は、親ＦＲ及びＣＤＲ配列のヒト化抗体残基に対応する。本明細書において使用するとき、「コンセンサスフレームワーク」という用語は、免疫グロブリンコンセンサス配列におけるフレームワーク領域を指す。本明細書において使用するとき、用語「免疫グロブリンコンセンサス配列」とは、関連する免疫グロブリン配列のファミリー（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ， Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ， Ｗｅｉｎｈｅｉｍ， Ｇｅｒｍａｎｙ， １９８７）を参照されたい）において最も頻繁に現れるアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列を指す。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列における各位置は、ファミリーにおいてこの位置に最も頻繁に現れるアミノ酸によって占有される。２つのアミノ酸が同等の頻度で現れる場合、いずれかがコンセンサス配列に含まれ得る。
ヒト被投与者におけるそれら部分の治療用途の期間および有効性を制限する、齧歯類抗ヒト抗体に対する望ましくない免疫応答を低減するように、ヒト化抗体を設計することができる。当該ヒト化抗体は、非ヒトであるソースからそれに導入された一又は複数のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒト残基は多くの場合、「インポート」残基と称され、それは代表的には可変ドメインから取られる。ヒト化は、ヒト抗体の相当する配列に代えて超可変領域配列を用いることにより行うことができる。従って、そのような「ヒト化」抗体は、実質的に無傷（ｉｎｔａｃｔ）に満たないヒト可変ドメインが、非ヒト生物種からの相当する配列によって置換されている、キメラ抗体である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号（その内容が、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照する。そのヒト化抗体は、一部の超可変領域残基、及び恐らくは一部のＦＲ残基が、齧歯類抗体中の類似の部位からの残基によって置換されているヒト抗体であることができる。本開示の抗体のヒト化又は操作は、いずれか公知の方法、例えば米国特許第５，７２３，３２３号；５，９７６，８６２号；５，８２４，５１４号；５，８１７，４８３号；５，８１４，４７６号；５，７６３，１９２号；５，７２３，３２３号；５，７６６，８８６号；５，７１４，３５２号；６，２０４，０２３号；６，１８０，３７０号；５，６９３，７６２号；５，５３０，１０１号；５，５８５，０８９号；５，２２５，５３９号；及び４，８１６，５６７号に記載の方法（それらに限定されるものではない）を用いて行うことができる。
ヒト化抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１に対する高アフィニティ及び他の好ましい生理特性を保持することができる。そのヒト化抗体は、親及びヒト化配列の三次元モデルを用いる親配列及び各種概念的（ｃｏｎｃｅｐｔｕａｌ）ヒト化生成物の分析方法によって製造することができる。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能である。選択される候補免疫グロブリン配列の可能な三次元立体配座構造を説明及び示すコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイを調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析、即ち、候補免疫グロブリンがそれの抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析が可能となる。このようにして、ＦＲ残基を被投与者及びインポート配列から選択及び組み合わせて、所望の抗体特性、例えばＵＣＨ−Ｌ１に対するアフィニティ上昇が達成されるようにすることができる。概して、超可変領域残基が、抗原結合への影響に直接及び最も実質的に関与する可能性がある。
ヒト化に代わるものとして、ヒト抗体（本明細書において、「完全ヒト抗体」とも称される）を形成することができる。例えば、ＰＲＯ融合及び／又は酵母関連技術によって、ライブラリーからヒト抗体を単離することが可能である。トランスジェニック動物（例えば、内因性免疫グロブリン産生なしに、ヒト抗体の完全レパートリーを産生する能力を有するマウス）を作ることも可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合体欠失によって、内因性抗体産生の完全阻害を生じる。そのような生殖細胞変異体マウスのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移動により、抗原チャレンジでヒト抗体が産生される。ヒト化又は完全ヒト抗体は、米国特許第５，７７０，４２９号；５，８３３，９８５号；５，８３７，２４３号；５，９２２，８４５号；６，０１７，５１７号；６，０９６，３１１号；６，１１１，１６６号；６，２７０，７６５号；６，３０３，７５５号；６，３６５，１１６号；６，４１０，６９０号；６，６８２，９２８号；及び６，９８４，７２０号（これらそれぞれの内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の方法に従って製造することができる。
ｅ．抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体
抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、上記の技術を用いて、並びに当業界で公知の通常の技術を用いて発生させることができる。一部の実施形態において、抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、非結合ＵＣＨ−Ｌ１抗体、例えばＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（カタログ番号０３１３２０）、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（カタログ番号３５２４）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号ＨＰＡ００５９９３）、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．（カタログ番号ｓｃ−５８５９３又はｓｃ−５８５９４）、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（カタログ番号ＭＡＢ６００７）、Ｎｏｖｕｓ ＢＩｏｌｏｇｉｃａｌｓ（カタログ番号ＮＢ６００−１１６０）、Ｂｉｏｒｂｙｔ（カタログ番号ｏｒｂ３３７１５）、Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．（カタログ番号ＡＤＩ−９０５−５２０−１）、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（カタログ番号ＶＭＡ００００４）、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ（カタログ番号６１３０−５０）、Ａｂｃａｍ（カタログ番号ａｂ７５２７５又はａｂ１０４９３８）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（カタログ番号４８００１２）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カタログ番号ＭＡ１−４６０７９、ＭＡ５−１７２３５、ＭＡ１−９０００８、又はＭＡ１−８３４２８）、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（カタログ番号ＭＡＢＮ４８）、又はＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．（カタログ番号５０６９０−Ｒ０１１）から入手可能なＵＣＨ−Ｌ１抗体であることができる。その抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体は、フルオロフォアに結合していることができ、例えばＢｉｏＶｉｓｉｏｎ（カタログ番号６９６０−２５）又はＡｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ（カタログ番号ＯＡＡＦ０１９０４−ＦＩＴＣ）から入手かに応な結合ＵＣＨ−Ｌ１抗体である。
４．ＵＣＨ−Ｌ１の他の生物マーカーとの組み合わせ
下記に詳細に記載するように、本明細書に記載の抗体を各種方法で用いて、一又は複数の疾患に特異的な生物マーカー又はイムノアッセイと組み合わせて、ＵＣＨ−Ｌ１のレベル及び濃度を検出及び測定することができる。本開示は、ＵＣＨ−Ｌ１の一又は複数の疾患に特異的な生物マーカー又はイムノアッセイとの組み合わせが、ＵＣＨ−Ｌ１単独での測定と比較して、健常対照と疾患を有する個人との間のより大きい識別を提供することができることを想定するものである。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１及び別の外傷性脳損傷生物マーカーのパネルを測定することにより、ＵＣＨ−Ｌ１単独での測定と比較して、健常対照と疾患を有する個人との間のより大きい識別を提供することができる。ＵＣＨ−Ｌ１と少なくとも一又は複数の生物マーカーとの組み合わせは、健常対照と外傷性脳損傷を有する個人との間のより大きい識別を提供することができる。前記一又は複数の生物マーカーの例には、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、Ｓ１００カルシウム−結合タンパク質Ｂ（Ｓ１００ｂ）、脳脂質結合タンパク質（ＢＬＢＰ）、アルドラーゼＣ（ＡＬＤＯＣ）、星状細胞リンタンパク質１５（ＰＥＡ１５）、グルタミン合成酵素（ＧＳ）、クリスタリンＢ鎖（ＣＲＹＡＢ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、タウ、Ｐ−タウ、ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡｐｏＡ１）及びＮＦＬなどがある。そのようなパネルアッセイは適宜に、独立のアッセイ、（例えば、一重アッセイ）を比較することにより行うことができる。或いは、本明細書に記載の方法は、多重アッセイを用いて行うことができる。そのような多重法は適宜に、多重化アッセイでサンプル中の一又は複数の（或いは２以上）標的分析物を検出するために一又は複数の（或いは２以上）特異的結合メンバーを含むことができる。前記一又は複数の（或いは２以上）特異的結合メンバーのそれぞれは適宜に、異なる標的分析物に結合し、各特異的結合メンバーは異なるシグナル発生化合物又はシグナル発生物質に接合される。例えば、第１の特異的結合メンバーは第１の標的分析物に結合し、第２の特異的結合メンバーは第２の標的分析物に結合し、第３の特異的結合メンバーは第３の標的分析物に結合する等である。前記第１の特異的結合メンバーは第１のシグナル発生化合物で標識され、又は第１のシグナル発生物質、第２の特異的結合メンバーは第２のシグナル発生化合物又は第２のシグナル発生物質で標識され、第３の特異的結合メンバーは第３のシグナル発生化合物又は第３のシグナル発生物質で標識される等である。一部の実施形態において、第１の条件が、前記第１の特異的結合メンバーがシグナル発生化合物又は第１のシグナル発生物質で標識されている場合に、前記第１のシグナル発生化合物又は第１のシグナル発生物質の活性化、開裂又は放出を引き起こし、第２の条件が、前記第２の特異的結合メンバーがシグナル発生化合物又はシグナル発生物質で標識されている場合に、前記第２のシグナル発生化合物又は第２のシグナル発生物質の活性化、開裂又は放出を引き起こし、第３の条件が、前記第３の特異的結合メンバーがシグナル発生化合物又はシグナル発生物質で標識されている場合に、前記第３のシグナル発生化合物又は第３のシグナル発生物質の活性化、開裂又は放出を引き起こす等である。一部の実施形態において、前記サンプルの条件をアッセイ時の各種時点で変えることにより、前記第１のシグナル発生化合物又は第１のシグナル発生物質、前記第２のシグナル発生化合物又は第２のシグナル発生物質、前記第３のシグナル発生化合物又は第３のシグナル発生物質等の検出を可能とすることによって、一又は複数の（或いは２以上）標的分析物を検出できるようにすることができる。一部の実施形態において、前記一又は複数の（或いは２以上）活性化若しくは開裂したシグナル発生化合物又はシグナル発生物質が同時に検出される。一部の実施形態において、前記一又は複数の（或いは２以上）活性化若しくは開裂したシグナル発生化合物又はシグナル発生物質が連続で検出される。一部の実施形態において、前記一又は複数の（或いは２以上）活性化若しくは開裂したシグナル発生化合物又はシグナル発生物質が、異なる検出可能なシグナル、例えば異なる波長の蛍光シグナルを発生させる。
或いは、前記一又は複数の（或いは２以上）特異的結合メンバーのそれぞれが異なる標的分析物に結合し、各特異的結合メンバーが異なる固体支持体、例えば、異なるフルオロフォアビーズに接合されている。例えば、第１の特異的結合メンバーが第１の標的分析物に結合しており、第２の特異的結合メンバーが第２の標的分析物に結合しており、第３の特異的結合メンバーが第３の標的分析物に結合している等であり、前記第１の特異的結合メンバーは第１のシグナル発生化合物又は第１のシグナル発生物質で標識され、前記第２の特異的結合メンバーは第２のシグナル発生化合物又は第２のシグナル発生物質で標識され、前記第３の特異的結合メンバーは第３のシグナル発生化合物又は第３のシグナル発生物質で標識される等であり、前記第１の特異的結合メンバーは第１の固体支持体上に固定化され、前記第２の特異的結合メンバーは第２の固体支持体上に固定化され、前記第３の特異的結合メンバーは第３の固体支持体上に固定化される等である。一部の実施形態において、前記一又は複数の（或いは２以上）活性化若しくは開裂したシグナル発生化合物又はシグナル発生物質が、異なる検出可能なシグナル、例えば異なる波長又は蛍光シグナルを発生させ、前記異なる固体支持体が同時又は連続で検出される。
一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは第１の標的分析物に結合し、第２の特異的結合メンバーは第２の標的分析物に結合し、第３の特異的結合メンバーは第３の標的分析物に結合する等であり、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー、前記第３の特異的結合メンバー等はシグナル発生化合物又はシグナル発生物質によって標識され、前記第１の特異的結合メンバーは第１の固体支持体上に固定化され、前記第２の特異的結合メンバーは第２の固体支持体上に固定化され、前記第３の特異的結合メンバーは第３の固体支持体上に固定化される等である。一部の実施形態において、前記活性化若しくは開裂したシグナル発生化合物又はシグナル発生物質が、検出可能なシグナル、例えば異なる波長又は蛍光シグナルを発生させ、前記異なる固体支持体が同時又は連続で検出される。
５．ＵＣＨ−Ｌ１状況及びグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）状況に基づく方法
本開示は、外傷性脳損傷の尺度としての対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＵＣＨ−Ｌ１状況の評価方法に関するものである。当該方法は、ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー［前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）第３の特異的結合メンバー及び第４の特異的結合メンバー［前記第３の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を前記捕捉抗体によって結合されていないＧＦＡＰ上のエピトープ工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程とを含み、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができ、及び（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる。当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、及び（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる。
本開示は、頭部への損傷を受けた可能性がある対象者からの生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の測定方法に関するものでもある。当該方法は、（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、（１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、捕捉抗体によって結合していないＧＦＡＰ上のエピトープに結合してＧＦＡＰ抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体、並びに（２）（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体と接触させること、及び（ｃ）前記捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−検出抗体複合体及び前記捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めることを含む。当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる。当該方法は、５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である。
本開示は、対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法に関するものである。当該方法は、前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出する工程を含み、その生物マーカーのうちの少なくとも二つがＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１である。当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である。
本開示は、頭部への損傷を受けた可能性がある対象者においてＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法に関するものである。当該方法は、ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー［前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）第３の特異的結合メンバー及び第４の特異的結合メンバー［前記第３の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程とを含み、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができ、（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる。当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法は５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である。
本開示は、頭部への損傷を受けた可能性がある対象者においてＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として測定する方法に関するものである。当該方法は、ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー［前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）第３の特異的結合メンバー及び第４の特異的結合メンバー［前記第３の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と；ｃ）（ｉ）サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示す前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナル及び（ｉｉ）前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの量を測定する工程とを含み、それによって、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量及び前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる。当該アッセイは、約２０マイクロリットル体積の試験サンプル中の５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰの量及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を求めることができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である。
ＵＣＨ−Ｌ１及びＧＦＡＰ状況に基づく上記方法は、多重方式で行うことができる。多重方式を行う方法は当業界で公知である。或いは、上記方法は、別個の単一生物マーカーアッセイとして行うことができ（即ち、多重方式ではない）．
ＵＣＨ−Ｌ１状況及びＧＦＡＰ状況に基づく上記方法は、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＧＦＡＰのレベルを検出することができる。
一部の実施形態において、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰから選択される範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
ＵＣＨ−Ｌ１状況及びＧＦＡＰ状況に基づく上記の方法は、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１６ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５，０００ｐｇ／ｍＬ及び約１７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを検出することができる。
一部の実施形態において、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬから選択されるＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができ、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができ、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができ、約１２ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
一部の実施形態において、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬのＧＦＡＰの範囲を決定、測定若しくは評価することができ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのＵＣＨ−Ｌ１の範囲を決定、測定若しくは評価することができる。
６．ＧＦＡＰ抗体
本明細書に記載の方法は、「ＧＦＡＰ抗体」と称されるＧＦＡＰに特異的に結合する単離抗体を用いることができる。ＧＦＡＰ抗体を用いて、ＧＦＡＰ状況を外傷性脳損傷の尺度として評価し、生体サンプル中のＧＦＡＰの存在を検出し、生体サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を定量し、又は生体サンプル中のＧＦＡＰの存在及びそれの量を検出することができる。
ａ．グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）
グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）は、星状細胞における細胞骨格の一部を構成する５０ｋＤａ細胞質内糸状タンパク質であり、それが、星状細胞起源の細胞の最も特異的なマーカーであることが証明されている。ＧＦＡＰタンパク質は、人においてＧＦＡＰ遺伝子によってコードされている。ＧＦＡＰは、成熟星状細胞の主要な中間フィラメントである。その分子の中央ロッドドメインにおいて、ＧＦＡＰは、他の中間フィラメントとかなりの構造的相同性を共有している。ＧＦＡＰは、星状細胞プロセスに構造的安定性を提供することによって、星状細胞の運動性及び形状に関与している。グリア細胞繊維性酸性タンパク質及びそれの分解産物（ＧＦＡＰ−ＢＤＰ）は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）後の病態生理的応答の一部として血中に放出される脳特異的タンパク質である。外傷、遺伝的障害又は化学薬品によって引き起こされるヒトＣＮＳに対する損傷後に、星状細胞が増殖し、細胞体及びプロセスの広範囲の肥大を示し、ＧＦＡＰが顕著に上昇する。対照的に、星状細胞の悪性度が高くなるに連れて、進行性のＧＦＡＰ産生喪失がある。ＧＦＡＰは、シュワン細胞、腸グリア細胞、唾液腺腫瘍、転移性腎臓癌、喉頭蓋軟骨、下垂体細胞、未熟乏突起膠細胞、乳頭状髄膜腫、及び乳房の筋上皮細胞で検出することもできる。
ヒトＧＦＡＰは、下記のアミノ酸配列を有することができる。
ＭＥＲＲＲＩＴＳＡＡＲＲＳＹＶＳＳＧＥＭＭＶＧＧＬＡＰＧＲＲＬＧＰＧＴＲＬＳＬＡＲＭＰＰＰＬＰＴＲＶＤＦＳＬＡＧＡＬＮＡＧＦＫＥＴＲＡＳＥＲＡＥＭＭＥＬＮＤＲＦＡＳＹＩＥＫＶＲＦＬＥＱＱＮＫＡＬＡＡＥＬＮＱＬＲＡＫＥＰＴＫＬＡＤＶＹＱＡＥＬＲＥＬＲＬＲＬＤＱＬＴＡＮＳＡＲＬＥＶＥＲＤＮＬＡＱＤＬＡＴＶＲＱＫＬＱＤＥＴＮＬＲＬＥＡＥＮＮＬＡＡＹＲＱＥＡＤＥＡＴＬＡＲＬＤＬＥＲＫＩＥＳＬＥＥＥＩＲＦＬＲＫＩＨＥＥＥＶＲＥＬＱＥＱＬＡＲＱＱＶＨＶＥＬＤＶＡＫＰＤＬＴＡＡＬＫＥＩＲＴＱＹＥＡＭＡＳＳＮＭＨＥＡＥＥＷＹＲＳＫＦＡＤＬＴＤＡＡＡＲＮＡＥＬＬＲＱＡＫＨＥＡＮＤＹＲＲＱＬＱＳＬＴＣＤＬＥＳＬＲＧＴＮＥＳＬＥＲＱＭＲＥＱＥＥＲＨＶＲＥＡＡＳＹＱＥＡＬＡＲＬＥＥＥＧＱＳＬＫＤＥＭＡＲＨＬＱＥＹＱＤＬＬＮＶＫＬＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥＮＲＩＴＩＰＶＱＴＦＳＮＬＱＩＲＥＴＳＬＤＴＫＳＶＳＥＧＨＬＫＲＮＩＶＶＫＴＶＥＭＲＤＧＥＶＩＫＥＳＫＱＥＨＫＤＶＭ（配列番号２）。
ヒトＧＦＡＰは、配列番号２の断片又は変異体であることができる。ＧＦＡＰの断片は、長さ５〜４００アミノ酸、１０〜４００アミノ酸、５０〜４００アミノ酸、６０〜４００アミノ酸、６５〜４００アミノ酸、１００〜４００アミノ酸、１５０〜４００アミノ酸、１００〜３００アミノ酸、又は２００〜３００アミノ酸であることができる。その断片は、配列番号２からの連続数のアミノ酸を含むことができる。配列番号２のヒトＧＦＡＰ断片又は変異体は、ＧＦＡＰ分解産物（ＢＤＰ）であることができる。ＧＦＡＰ ＢＤＰは、３８ｋＤａ、４２ｋＤａ（より淡い（ｆａｉｎｔｅｒ）４１ｋＤａ）、４７ｋＤａ（より淡い（ｆａｉｎｔｅｒ）４５ｋＤａ）；２５ｋＤａ（より淡い（ｆａｉｎｔｅｒ）２３ｋＤａ）；１９ｋＤａ、又は２０ｋＤａであることができる。
ｂ．ＧＦＡＰ認識抗体
当該抗体は、ＧＦＡＰ、その断片、ＧＦＡＰのエピトープ、又はそれの変異体に結合する抗体である。その抗体は、抗ＧＦＡＰ抗体の断片又はそれの変異体若しくは誘導体であることができる。当該抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体であることができる。当該抗体は、キメラ抗体、一本鎖抗体、親和性成熟抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体又は抗体断片、例えばＦａｂ断片、又はこれらの混合物であることができる。抗体断片又は誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片を含むことができる。当該抗体誘導体は、ペプチド模倣薬によって産生することができる。さらに、一本鎖抗体の産生に関して記載の技術を、一本鎖抗体を産生するように適合させることができる。
抗ＧＦＡＰ抗体は、キメラ抗ＧＦＡＰ又はヒト化抗ＧＦＡＰ抗体であることができる。１実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体の両方が一価である。１実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体の両方が、Ｆｃ領域に連結された単一のＦａｂ領域を含む。
ヒト抗体は、ファージディスプレイ技術から、又はヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスから誘導することができる。ヒト抗体は、ヒトイン・ビボ免疫応答の結果として発生させ、単離することができる。例えば、Ｆｕｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．， ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００８（８）：８５を参照する。従って、当該抗体は、ヒトの産物であることができ、動物レパートリーのものではない。それがヒト起源のものであることから、自己抗原に対する反応性のリスクを最小とすることができる。或いは、標準酵母ディスプレイライブラリ及びディスプレイ技術を用いて、ヒト抗ＧＦＡＰ抗体を選択及び単離することができる。例えば、ナイーブヒト一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のライブラリを用いて、ヒト抗ＧＦＡＰ抗体を選択することができる。トランスジェニック動物を用いて、ヒト抗体を発現させることができる。
ヒト化抗体は、非ヒト生物種からの一又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合した非ヒト生物種抗体由来の、抗体分子であることができる。
当該抗体は、当業界で公知のものと比較して、それが異なる生理機能を有するという点で、公知の抗体と区別することができる。
（１）エピトープ
当該抗体は、ＧＦＡＰ（配列番号２）、その断片又はそれの変異体に免疫特異的に結合することができる。当該抗体は、エピトープ領域内の少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸、又は少なくとも１０アミノ酸を免疫特異的に認識し、それに結合することができる。当該抗体は、エピトープ領域の少なくとも３連続アミノ酸、少なくとも４連続アミノ酸、少なくとも５連続アミノ酸、少なくとも６連続アミノ酸、少なくとも７連続アミノ酸、少なくとも８連続アミノ酸、少なくとも９連続アミノ酸、又は少なくとも１０連続アミノ酸を有するエピトープ免疫特異的に認識し、それに結合することができる。
ｃ．抗ＧＦＡＰ抗体
抗ＧＦＡＰ抗体は、上記の技術を用いて、そして当業界で公知の通常の技術を用いて得ることができる。一部の実施形態において、抗ＧＦＡＰ抗体は、非結合ＧＦＡＰ抗体、例えばＤａｋｏ（カタログ番号Ｍ０７６１）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カタログ番号ＭＡ５−１２０２３、Ａ−２１２８２、１３−０３００、ＭＡ１−１９１７０、ＭＡ１−１９３９５、ＭＡ５−１５０８６、ＭＡ５−１６３６７、ＭＡ１−３５３７７、ＭＡ１−０６７０１、又はＭＡ１−２００３５）、ＡｂＣａｍ（カタログ番号ａｂ１００６２、ａｂ４６４８、ａｂ６８４２８、ａｂ３３９２２、ａｂ２０７１６５、ａｂ１９０２８８、ａｂ１１５８９８、又はａｂ２１８３７）、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（カタログ番号ＦＣＭＡＢ２５７Ｐ、ＭＡＢ３６０、ＭＡＢ３４０２、０４−１０３１、０４−１０６２、ＭＡＢ５６２８）、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ（カタログ番号ｓｃ−１６６４８１、ｓｃ−１６６４５８、ｓｃ−５８７６６、ｓｃ−５６３９５、ｓｃ−５１９０８、ｓｃ−１３５９２１、ｓｃ−７１１４３、ｓｃ−６５３４３、又はｓｃ−３３６７３）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｇ３８９３又はＧ６１７１）又はＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．（カタログ番号１００１４０−Ｒ０１２−５０）から入手可能なＧＦＡＰ抗体であることができる。抗ＧＦＡＰ抗体は、フルオロフォア、例えばＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カタログ番号Ａ−２１２９５又はＡ−２１２９４）、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（カタログ番号ＭＡＢ３４０２Ｘ、ＭＡＢ３４０２Ｂ、ＭＡＢ３４０２Ｂ、又はＭＡＢ３４０２Ｃ３）又はＡｂＣａｍ（カタログ番号ａｂ４９８７４又はａｂ１９４３２５）から入手可能な結合ＧＦＡＰ抗体に結合させることができる。
７．対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法の改善
さらに別の実施形態において、本開示は、生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の存在又は量を評価することによる、対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法の改善に関するものである。その改善は、その方法によって、当該アッセイが２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１を測定できるようになり、生体サンプルの希釈を必要としないというものである。一部の実施形態において、ＵＣＨ−Ｌ１が評価される唯一の生物マーカーである場合、その改善は、ポイント・オブ・ケア機器を用いる方法を用いることを含む。その方法は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーを用いて行い、それぞれがＵＣＨ−Ｌ１に特異的に結合し、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む第１の複合体を形成する。一部の実施形態において、当該第２の特異的結合メンバーはそれぞれ、検出可能な標識で標識されている。
他の検出方法は、例えば単一分子検出のためのナノ細孔機器又はナノウェル機器の使用を含みか、その機器での使用に適応させることができる。ナノ細孔機器の例は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６／１６１４０２（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。ナノウェル機器の例は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６／１６１４００（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。単一分子検出に適した他の機器及び方法も使用可能である。
８．方法についての変形型
サンプル中に存在する対象分析物（ＵＣＨ−Ｌ１）の存在又は量を求める開示の方法は、本明細書に記載の通りであることができる。その方法は、他の分析物分析方法を考慮して適用させることもできる。公知の変形型の例には、イムノアッセイ、例えばサンドイッチイムノアッセイ（例えば、モノクローナル−モノクローナルサンドイッチイムノアッセイ、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ、例えば酵素検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）又は酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、競争阻害イムノアッセイ（例えば、順方向及び逆方向）、酵素多重化（ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｄ）イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、競争結合アッセイ、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、１工程抗体検出アッセイ、均一アッセイ、不均一アッセイ、キャプチャー・オン・ザ・フライ（ｃａｐｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｆｌｙ）アッセイなどがあるが、これらに限定されるものではない。
ａ．イムノアッセイ
対象の分析物及び／又はそれの断片のペプチド（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１、及び／又はペプチド又はそれの断片、即ち、ＵＣＨ−Ｌ１断片）を、イムノアッセイでＵＣＨ−Ｌ１抗体を用いて分析することができる。抗体を用い、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）への特異的結合を検出して、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の存在若しくは量を求めることができる。例えば、抗体、又はそれの抗体断片は、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に特異的に結合することができる。所望の場合、その抗体の一又は複数を、一又は複数の市販のモノクローナル／ポリクローナル抗体と組み合わせて用いることができる。そのような抗体は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ． （Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＭＮ）及びＥｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｉｎｃ．（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ， ＰＡ）などの企業から入手可能である。
身体サンプル中に存在する分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の存在若しくは量は、イムノアッセイ、例えばサンドイッチイムノアッセイ（例えば、モノクローナル−モノクローナルサンドイッチイムノアッセイ、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ、例えば放射性同位体検出（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））及び酵素検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）又は酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）（例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡアッセイ、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ， Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＭＮ））を用いて容易に求めることができる。使用可能なポイント・オブ・ケア機器の１例は、ｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）（Ａｂｂｏｔｔ， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）である。使用可能な他の方法には、化学発光微小粒子イムノアッセイ、特に、１例としてＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）自動分析装置（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）を用いるものなどがある。他の方法には、例えば、質量分析、及び分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に対する抗分析物（例えば、抗ＵＣＨ−Ｌ１）抗体（モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、ヒトなど）又はそれの抗体断片を用いる免疫組織化学（例えば、組織生検からの切片を用いる）などがある。他の検出方法には、例えば、米国特許第６，１４３，５７６号；６，１１３，８５５号；６，０１９，９４４号；５，９８５，５７９号；５，９４７，１２４号；５，９３９，２７２号；５，９２２，６１５号；５，８８５，５２７号；５，８５１，７７６号；５，８２４，７９９号；５，６７９，５２６号；５，５２５，５２４号；及び５，４８０，７９２号に記載のものなど（これらはそれぞれ、参照によって全体が本明細書に組み込まれる）がある。分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に対する抗体の特異的免疫結合は、直接標識、例えば蛍光若しくは発光タグ、抗体に結合した金属及び放射性核種によって、又は間接標識、例えばアルカリホスファターゼ若しくは西洋わさびペルオキシダーゼによって検出することができる。
固定化抗体又はそれの抗体断片の使用を、イムノアッセイに組み込むことができる。その抗体は、多様な支持体、例えば磁性若しくはクロマトグラフィー基材粒子、アッセイプレート（例えば、マイクロタイターウェル）の表面、固体基質材料の小片などに固定化することができる。アッセイ片は、固体支持体上に抗体又はアレイ状の複数抗体をコーティングすることにより製造することができる。次に、このアッセイ片を試験生体サンプル中に浸し、洗浄及び検出工程によって迅速に処理して、着色スポットなどの計測可能なシグナルを発生させることができる。
均一方式を用いることができる。例えば、試験サンプルを対象者から得た後に、混合物を調製する。その混合物は、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）について評価される試験サンプル、第１の特異的結合相手、及び第２の特異的結合相手を含む。試験サンプル、第１の特異的結合相手、及び第２の特異的結合相手を加えて混合物を形成する順序は、あまり重要ではない。試験サンプルは、第１の特異的結合相手及び第２の特異的結合相手と同時に接触する。一部の実施形態において、第１の特異的結合相手及び試験サンプルに含まれるＵＣＨ−Ｌ１は、第１の特異的結合相手−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−抗原複合体を形成することができ、第２の特異的結合相手は、第１の特異的結合相手−対象分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合相手複合体を形成することができる。一部の実施形態において、第２の特異的結合相手及び試験サンプルに含まれるＵＣＨ−Ｌ１は、第２の特異的結合相手−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−抗原複合体を形成することができ、第１の特異的結合相手は、第１の特異的結合相手−対象分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合相手複合体を形成することができる。第１の特異的結合相手は、抗分析物抗体（例えば、配列番号１の少なくとも３連続（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）であることができる。第２の特異的結合相手は、抗分析物抗体（例えば、配列番号１の少なくとも３連続（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）であることができる。さらに、第２の特異的結合相手は、上記の検出可能な標識で標識されているか、それを含む。
不均一方式を用いることができる。例えば、試験サンプルを対象者から得た後に、第１の混合物を調製する。その混合物は、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）について評価される試験サンプル及び第１の特異的結合相手を含み、第１の特異的結合相手及び試験サンプルに含まれるＵＣＨ−Ｌ１が第１の特異的結合相手−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−抗原複合体を形成する。第１の特異的結合相手は、抗分析物抗体（例えば、配列番号１の少なくとも３連続（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）であることができる。試験サンプル及び第１の特異的結合相手を加えて混合物を形成する順序は、あまり重要ではない。
第１の特異的結合相手は、固相に固定化することができる。イムノアッセイ（第１の特異的結合相手及び適宜に第２の特異的結合相手について）で用いられる固相は、当業界で公知のあらゆる固相であることができ、例えば、磁性粒子、ビーズ、マイクロタイターウェル、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスク、及びチップなどがあるが、これらに限定されるものではない。固相がビーズである実施形態では、そのビーズは、磁性ビーズ又は磁性粒子であることができる。磁性ビーズ／粒子は、強磁性、フェリ磁性、常磁性、超常磁性又は磁性流体であることができる。強磁性材料の例には、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｇｄ、Ｄｙ、ＣｒＯ２、ＭｎＡｓ、ＭｎＢｉ、ＥｕＯ、及びＮｉＯ／Ｆｅなどがある。フェリ磁性材料の例には、ＮｉＦｅ２Ｏ４、ＣｏＦｅ２Ｏ４、Ｆｅ３Ｏ４（又はＦｅＯ・Ｆｅ２Ｏ３）などがある。ビーズは、磁性であって、一又は複数の非磁性層によって囲まれた固体コア部分を有することができる。或いは、その磁性部分は、非磁性コア周囲の層であることができる。第１の特異的結合メンバーが固定化されている固体支持体は、乾燥型又は液体で貯蔵することができる。第１の特異的結合メンバーが固定化されている磁性ビーズとサンプルを接触させる前又は接触させた後に、磁性ビーズに磁場をかけることができる。
第１の特異的結合相手−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体を含む混合物を形成した後、当業界で公知の技術を用いて、未結合分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を複合体から除去する。例えば、未結合分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）は、洗浄によって除去することができる。しかしながら望ましくは、第１の特異的結合相手は、試験サンプル中に存在する分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の過剰量存在することにより、試験サンプル中に存在する全ての分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）が第１の特異的結合相手によって結合されるようにする。
未結合分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を除去した後、第２の特異的結合相手を混合物に加えて、第１の特異的結合相手−対象分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合相手複合体を形成する。第２の特異的結合相手は、抗分析物抗体（例えば、配列番号１の少なくとも３連続（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体）であることができる。さらに、第２の特異的結合相手は、上記で記載の検出可能な標識で標識されているか、それを含む。
固定化された抗体又はそれの抗体断片の使用を、イムノアッセイに組み込むことができる。抗体を、各種支持体、例えば磁性若しくはクロマトグラフィー基材粒子（例えば、磁性ビーズ）、ラテックス粒子又は変性表面ラテックス粒子、ポリマー若しくはポリマーフィルム、プラスチック若しくはプラスチックフィルム、平面基質、アッセイプレートの表面（マイクロタイターウェル）の表面、固体基質材料の小片などに固定化することができる。アッセイ片は、固体支持体上に抗体又はアレイ状の複数抗体をコーティングすることにより製造することができる。次に、このアッセイ片を試験生体サンプル中に浸し、洗浄及び検出工程によって迅速に処理して、着色スポットなどの計測可能なシグナルを発生させることができる。
（１）サンドイッチイムノアッセイ
サンドイッチイムノアッセイは、抗体（即ち、少なくとも一つの捕捉抗体）と検出抗体（即ち少なくとも一つの検出抗体）の二つの層の間の抗原の量を測定するものである。捕捉抗体及び検出抗体は、抗原（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１などの対象分析物）上の異なるエピトープに結合する。望ましくは、捕捉抗体のエピトープへの結合は、エピトープへの検出抗体の結合を妨害しない。モノクローナル又はポリクローナル抗体をサンドイッチイムノアッセイでの捕捉及び検出抗体として用いることができる。
概して、少なくとも二つの抗体を用いて、試験サンプル中の分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の分離及び定量を行う。より具体的には、その少なくとも二つの抗体が分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）のある種のエピトープに結合して、「サンドイッチ」と称される免疫複合体を形成する。一又は複数の抗体を用いて試験サンプル中の分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を捕捉することができ（これらの抗体は非常に多くの場合、「捕捉」抗体又は「捕捉」抗体（複数）と称される）、一又は複数の抗体を用いて、サンドイッチに検出可能な（即ち、定量可能な）標識を結合させる（これらの抗体は非常に多くの場合、「検出」抗体又は「検出」抗体（複数）と称される）。サンドイッチアッセイでは、抗体のそれのエピトープへの結合は望ましくは、アッセイにおけるいずれか他の抗体のそれの個々のエピトープへの結合によって減少しない。分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含むと予想される試験サンプルと接触させるようにした一又は複数の第１の抗体が、第２又はその後の抗体によって認識されるエピトープの全て又は部分に結合し、それにより、一又は複数の第２の検出抗体が分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に結合する能力を妨害するように、抗体を選択する。
その抗体は、前記イムノアッセイで第１の抗体として用いることができる。抗体は、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）上のエピトープに免疫特異的に結合する。本開示の抗体に加えて、前記イムノアッセイは、第１の抗体によって認識も結合もされないエピトープに免疫特異的に結合する第２の抗体を含むことができる。
分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含むことが予想される試験サンプルを、同時に又は順次に少なくとも一つの第１の捕捉抗体（又は抗体）及び少なくとも一つの第２の検出抗体と接触させることができる。サンドイッチアッセイ方式では、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含むと考えられる試験サンプルを最初に、第１の抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原複合体の形成を可能とする条件下で特定のエピトープに特異的に結合する少なくとも一つの第１の捕捉抗体と接触させる。複数の捕捉抗体を用いる場合、第１の複数捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する。サンドイッチアッセイでは、抗体、好ましくは少なくとも一つの捕捉抗体を、試験サンプル中で予想される分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の最大量のモル過剰量で用いる。例えば、微小粒子コーティング緩衝液１ｍＬ当たり約５μｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの抗体を用いることができる。
（ａ）抗ＵＣＨ−Ｌ１捕捉抗体
適宜に、試験サンプルを少なくとも一つの第１の捕捉抗体と接触させる前に、前記少なくとも一つの第１の捕捉抗体を、第１の抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体の試験サンプルからの分離を容易にする固体支持体に結合させることができる。当業界で公知のあらゆる固体支持体を用いることができ、それには、ウェル、管又はビーズ（例えば、微小粒子）の形態のポリマー材料製の固体支持体などがあるが、これらに限定されるものではない。抗体（又は抗体（複数））は、吸着、化学カップリング剤を用いる共有結合又は当業界で公知の他の手段によって固体支持体に結合させることができるが、但し、そのような結合は、抗体が分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）に結合する能力を妨害するものではない。さらに、必要であれば、固体支持体を誘導体化して、抗体上の各種官能基との反応性を可能とするようにすることができる。そのような誘導体化では、ある種のカップリング剤、例えば、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドなど（これらに限定されるものではない）を用いる必要がある。
その後、分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）を含むと思われる試験サンプルをインキュベートして、第１の捕捉抗体（又は多重抗体）−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体を形成できるようにする。そのインキュベーションは、ｐＨ約４．５〜約１０．０で、約２℃〜約４５℃の温度で、及び少なくとも約１分〜約１８時間、約２〜６分、約７〜１２分、約５〜１５分、又は約３〜４分の期間にわたって行うことができる。
（ｂ）検出抗体
第１の／多重捕捉抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体の形成後、複合体を、少なくとも一つの第２の検出抗体と接触させる（第１の／多重抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）抗原−第２の抗体複合体の形成を可能とする条件下）。一部の実施形態において、試験サンプルを、捕捉抗体と同時に検出抗体と接触させる。第１の抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体を複数の検出抗体と接触させる場合、第１の／多重捕捉抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−多重抗体検出複合体が形成される。第１の抗体と同様に、少なくとも第２の（及びそれ以降の）抗体を第１の抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）複合体と接触させる場合、上記の条件と同様の条件下でのインキュベーション期間が、第１の／多重抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の／多重抗体複合体の形成に必要である。好ましくは、少なくとも一つの第２の抗体は検出可能な標識を含む。検出可能な標識は、第１の／多重抗体−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の／多重抗体複合体の形成前、それと同時又はその後に、少なくとも一つの第２の抗体に結合させることができる。当業界で公知のあらゆる検出可能な標識を用いることができる。
Ａｄａｍｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ ５７９（１）： ６１−６７（２００６）に記載の方法に従って、化学発光アッセイを行うことができる。いずれか好適なアッセイ方式を用いることが可能であるが、マイクロプレート化学発光計（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ）（Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ−９４０， Ｂｅｒｔｈｏｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｕ．Ｓ．Ａ．， ＬＬＣ， Ｏａｋ Ｒｉｄｇｅ， ＴＮ）によって、小容量の複数サンプルの迅速なアッセイが可能となる。その化学発光計には、９６ウェル黒色ポリスチレンマイクロプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９２）を用いる複数の試薬インジェクターを搭載することができる。各サンプルを別個のウェルに加え、次に、使用されるアッセイの種類によって決まる他の試薬の同時／順次添加を行うことができる。望ましくは、アクリジニウムアリールエステルを用いる中性若しくは塩基性溶液中の擬塩基の形成を、例えば酸性化によって回避する。次に、化学発光応答を、ウェルごとに記録する。この点に関して、化学発光応答を記録する時間は、部分的に、試薬添加間の遅れ及び使用される特定のアクリジニウムによって決まるものである。
試験サンプル及び特異的結合相手を加えて、化学発光アッセイ用の混合物を形成する順序は、あまり重要ではない。第１の特異的結合相手をアクリジニウム化合物で検出可能に標識する場合、検出可能に標識された第１の特異的結合相手−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成される。或いは、第２の特異的結合相手を用い、第２の特異的結合相手がアクリジニウム化合物で検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合相手−分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）−第２の特異的結合相手複合体が形成される。標識されているか標識されていないかを問わず、あらゆる未結合の特異的結合相手を、洗浄などの当業界で公知の技術を用いて、混合物から除去することができる。
過酸化水素を混合物中にてイン・サイチュで発生させ、上記アクリジニウム化合物の添加の前、それと同時、又はそれの後に混合物に提供若しくは供給することができる。過酸化水素は、当業者には明らかであると考えられる多くの方法によってイン・サイチュで発生させることができる。
或いは、過酸化水素源を単純に混合物に加えることができる。例えば、過酸化水素源は、過酸化水素を含むことが知られている一又は複数の緩衝液その他の溶液であることができる。この点に関しては、過酸化水素の溶液を単純に加えることができる。
少なくとも一つの塩基性溶液をサンプルに同時又は後に加えると、ＵＣＨ−Ｌ１の存在を示す検出可能なシグナル、即ち化学発光シグナルが発生する。その塩基性溶液は、少なくとも一つの塩基を含み、１０以上、好ましくは１２以上のｐＨを有する。塩基性溶液の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、及び重炭酸カルシウムなどがあるが、これらに限定されるものではない。サンプルに加えられる塩基性溶液の量は、その塩基性溶液の濃度によって決まる。使用される塩基性溶液の濃度に基づいて、当業者は、サンプルに加える塩基性溶液の量を容易に決定することができる。化学発光標識以外の他の標識を用いることができる。例えば、酵素標識（アルカリホスファターゼなど（これに限定されるものではない））を用いることができる。
発生する化学発光シグナルその他のシグナルを、当業者に公知の通常の技術を用いて検出することができる。発生するシグナルの強度に基づき、サンプル中の対象分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の量を定量することができる。具体的には、サンプル中の分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の量は、発生するシグナルの強度に比例する。存在する分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の量は、発生する光の量を分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）についての標準曲線と比較することにより、又は参照基準と比較することにより定量することができる。標準曲線は、質量分析、重量法及び当業界で公知の他の技術により、既知濃度の分析物（例えば、ＵＣＨ−Ｌ１）の連続希釈液若しくは溶液を用いて得ることができる。
（２）順方向競争阻害アッセイ
順方向競争方式では、既知濃度の標識された対象分析物（例えば、蛍光標識、開裂可能リンカーと結合したタグなどを有する分析物）の少量サンプルを用いて、対象分析物抗体への結合について試験サンプル中の対象分析物と競争させる。
順方向競争アッセイでは、固定化された特異的結合相手（例えば、抗体）を、順次に又は同時に、試験サンプル及び標識された対象分析物、対象分析物断片又はそれの対象分析物変異体と接触させることができる。対象分析物ペプチド、対象分析物断片又は対象分析物変異体を、いずれか検出可能な標識、例えば開裂可能なリンカーと結合したタグからなる検出可能な標識で標識することができる。このアッセイでは、抗体を固体支持体上に固定化することができる。或いは、抗体を、微小粒子又は平面基質などの固体支持体上に固定化されている抗体、例えば抗種（ａｎｔｉｓｐｅｃｉｅｓ）抗体にカップリングさせることができる。
標識された対象分析物、試験サンプル及び抗体を、サンドイッチアッセイ方式の関連で上述した条件と同様の条件下にインキュベートする。二つの異なる種類の抗体−対象分析物複合体を発生させることができる。具体的には、発生させた抗体−対象分析物複合体のうちの一方は検出可能な標識（例えば、蛍光標識など）を含み、他方の抗体−対象分析物複合体は検出可能な標識を含まない。抗体−対象分析物複合体は、検出可能な標識の定量に先だって、試験サンプルの残りのものから分離することができるが、それが必要なわけではない。抗体−対象分析物複合体が試験サンプルの残りの部分から分離されているか否かに拘わらず、抗体−対象分析物複合体中の検出可能な標識の量を定量する。試験サンプル中の対象分析物（例えば、膜結合対象分析物、可溶性対象分析物、可溶性対象分析物の断片、対象分析物（膜結合若しくは可溶性対象分析物）の変異体又はそれらのいずれかの組み合わせ）の濃度を、例えば上記の方法に従って求めることができる。
（３）逆方向競争阻害アッセイ
逆方向競争アッセイでは、固定化された対象分析物を、試験サンプル及び少なくとも一つの標識抗体と順次に又は同時に接触させることができる。
対象分析物を、固体支持体、例えばサンドイッチアッセイ方式との関連で上記で述べた固体支持体に結合させることができる。
固定化した対象分析物、試験サンプル及び少なくとも一つの標識抗体を、サンドイッチアッセイ方式の関連で上述した条件と同様の条件下にインキュベートする。二つの異なる種類の対象分析物−抗体複合体を発生させる。具体的には、発生させた対象分析物−抗体複合体のうちの一方は固定化され、検出可能な標識（例えば、蛍光標識など）を含み、他方の対象分析物−抗体複合体は固定化されておらず、検出可能な標識を含む。非固定化対象分析物−抗体複合体及び試験サンプルの残りを、洗浄などの当業界で公知の技術によって、固定化対象分析物−抗体複合体の存在から除去する。非固定化対象分析物抗体複合体を除去したら、固定化対象分析物−抗体複合体中の検出可能な標識の量を、タグの開裂後に定量する。試験サンプル中の対象分析物の濃度を、上記のように検出可能な標識の量を比較することにより求めることができる。
（４）一工程イムノアッセイ又は「キャプチャー・オン・ザ・フライ」アッセイ
キャプチャー・オン・ザ・フライイムノアッセイでは、固体基質を、固定化剤でプレコートする。捕捉剤、分析物及び検出剤をその固体基質に一緒に加え、次に洗浄工程を行ってから、検出を行う。捕捉剤は、分析物に結合することができ、固定化剤に対するリガンドを含む。捕捉剤及び検出剤は、抗体、又は本明細書に記載の若しくは当業界で公知の捕捉若しくは検出を行う能力を有するいずれか他の部分であることができる。リガンドはペプチドタグを含むことができ、固定化剤は抗ペプチドタグ抗体を含むことができる。或いは、リガンド及び固定化剤は、キャプチャー・オン・ザ・フライアッセイ（例えば、特異的結合ペア、及び当業界で公知の他のもの）に用いるために、一緒に結合する能力を有する薬剤ペアであることができる。複数の分析物を測定することができる。一部の実施形態において、固体基質は、抗原でコーティングすることができ、分析される分析物は抗体である。
ある種の他の実施形態において、一工程イムノアッセイ又は「キャプチャー・オン・ザ・フライ」で、固定化剤（例えば、ビオチン、ストレプトアビジンなど）及び少なくとも第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー（それぞれ捕捉及び検出試薬として機能する）でプレコートされた固体支持体（例えば、微小粒子）を用いる。第１の特異的結合メンバーは、固定化剤に対するリガンドを含み（例えば、固体支持体上の固定化剤がストレプトアビジンである場合、第１の特異的結合メンバー上のリガンドはビオチンであることができる）、対象分析物にも結合する。第２の特異的結合メンバーは、検出可能な標識を含み、対象分析物に結合する。固体支持体並びに第１及び第２の特異的結合メンバーを、試験サンプルに加えることができる（順次に又は同時に）。第１の特異的結合メンバー上のリガンドは、固体支持体上の固定化剤に結合して、固体支持体／第１の特異的結合メンバー複合体を形成する。サンプル中に存在する対象分析物は固体支持体／第１の特異的結合メンバー複合体に結合して、固体支持体／第１の特異的結合メンバー／分析物複合体を形成する。第２の特異的結合メンバーは固体支持体／第１の特異的結合メンバー／分析物複合体に結合し、検出可能な標識が検出される。検出を行う前に、適宜の洗浄工程を用いることができる。ある種の実施形態において、１工程アッセイで、複数の分析物を測定することができる。ある種の他の実施形態において、２より多い特異的結合メンバーを用いることができる。ある種の他の実施形態において、複数の検出可能な標識を加えることができる。ある種の他の実施形態において、複数の対象分析物を、検出することができるか、それらの量、レベル若しくは濃度を測定、決定若しくは評価することができる。
キャプチャー・オン・ザ・フライアッセイの使用は、本明細書に記載され、当業界で公知である多様な方式で行うことができる。例えばその方式は、上記で述べたものなどのサンドイッチアッセイであることができるが、或いは競争アッセイであることができ、単一の特異的結合メンバーを用いることができ、又は公知のものなどの他の変形形態を用いることができる。
９．サンプル
ａ．試験サンプル若しくは生体サンプル
本明細書で使用される「サンプル」、「試験サンプル」、「生体サンプル」は、ＵＣＨ−Ｌ１を含むかそれを含むと思われる流体サンプルを指す。サンプルは、好適な入手源由来であることができる。場合により、サンプルは、液体、流動性粒子状固体、又は固体粒子の流動性懸濁液を含むことができる。場合により、サンプルは、本明細書に記載の分析の前に処理を受けることができる。例えば、サンプルは、分析の前にそれの入手源から分離又は精製することができる。しかしながら、ある種の実施形態では、分析物を含む未処理サンプルを直接アッセイすることができる。分析物分子の入手源は、合成品（例えば、研究室で製造）、環境（例えば、空気、土壌、液体サンプル、例えば、水道など）、動物、例えば、哺乳動物、植物、又はこれらのいずれかの組み合わせであることができる。特定の例では、分析物の入手源は、ヒト身体物質（例えば、体液、血液、例えば全血、血清、血漿、尿、唾液、汗、痰、精液、粘液、涙液、リンパ液、羊水、間質液、肺洗浄液、脳脊髄液、糞便、組織、臓器など）である。組織には、骨格筋組織、肝臓組織、肺組織、腎臓組織、心筋組織、脳組織、骨髄、頸部組織、皮膚などがあり得るが、これらに限定されるものではない。サンプルは、液体サンプル又は固体サンプルの液体抽出物であることができる。ある種の場合、サンプルの入手源は、臓器又は組織、例えば生検サンプルであることができ、それを組織分解／細胞溶解によって可溶化することができる。
広範囲の体積の流体サンプルを分析することができる。いくつかの例示的実施形態において、サンプル体積は、約０．５ｎＬ、約１ｎＬ、約３ｎＬ、約０．０１μＬ、約０．１μＬ、約１μＬ、約５μＬ、約１０μＬ、約１００μＬ、約１ｍＬ、約５ｍＬ、約１０ｍＬなどであることができる。場合により、流体サンプルの体積は、約０．０１μＬ〜約１０ｍＬ、約０．０１μＬ〜約１ｍＬ、約０．０１μＬ〜約１００μＬ、又は約０．１μＬ〜約１０μＬである。
場合により、流体サンプルは、アッセイで使用する前に希釈することができる。例えば、分析物分子の入手源がヒト体液（例えば、血液、血清）である実施形態では、その流体を適切な溶媒（例えば、ＰＢＳ緩衝液などの緩衝液）で希釈することができる。流体サンプルは、使用前に、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約１０倍、約１００倍、又はそれ以上希釈することができる。他の場合、流体サンプルは、アッセイでの使用前に希釈しない。
場合により、サンプルについて、分析前処理を行うことができる。分析前処理は、さらなる機能性、例えば非特異的タンパク質の除去及び／又は有効であるが安価に実行可能な混合機能性を提供することができる。分析前処理の一般的方法には、動電的トラップ、ＡＣ動電学、表面弾性波、等速電気泳動、誘電泳動、電気泳動、又は当業界で公知の他の濃縮前技術の使用などがあり得る。場合により、流体サンプルは、アッセイでの使用前に濃縮することができる。例えば、分析物分子の入手源がヒト体液（例えば、血液、血清）である実施形態では、その流体を、沈殿、蒸発、濾過、遠心又はそれらの組み合わせによって濃縮することができる。流体サンプルは、使用前に、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約１０倍、約１００倍、又はそれ以上濃縮することができる。
ｂ．対照
対照サンプルを含めることが望ましい場合がある。対照サンプルは、上記の対象者からのサンプルと同時に分析することができる。対象者サンプルから得られた結果を、対照サンプルから得られた結果と比較することができる。生体サンプルについてのアッセイ結果を比較できる標準曲線を得ることができる。そのような標準曲線は、アッセイユニットの関数としてのマーカーのレベル、即ち、蛍光標識を用いる場合は蛍光シグナル強度を提供する。複数ドナーから得たサンプルを用いて、正常な健常組織中のＵＣＨ−Ｌ１の対照レベル又は基準レベルについて、並びに上記の特徴の一又は複数を有し得るドナーから採った組織中のＵＣＨ−Ｌ１の「有リスク」レベルについて、標準曲線を提供することができる。
従って、上記を考慮すると、試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の存在、量又は濃度を求め方法が提供される。その方法は、例えば、ＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合する少なくとも一つの捕捉抗体及び捕捉抗体のエピトープとは異なり、検出可能な標識を含んでいても良いＵＣＨ−Ｌ１についてのエピトープに結合する少なくとも一つの検出抗体を用いるイムノアッセイによって、ＵＣＨ−Ｌ１について試験サンプルをアッセイすること、並びに試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の存在、量若しくは濃度の直接若しくは間接の指標としての検出可能な標識によって発生するシグナルを、キャリブレータ中のＵＣＨ−Ｌ１の存在、量若しくは濃度の直接若しくは間接の指標として発生するシグナルと比較することを含む。キャリブレータは、適宜に、そして好ましくは、各キャリブレータがＵＣＨ−Ｌ１の濃度によって連続で他のキャリブレータと異なる一連のキャリブレータの一部である。一部の実施形態において、キャリブレータは、セクション３ａにおいて上記のＵＣＨ−Ｌ１又はそれの断片を含むことができる。一部の実施形態において、キャリブレータは、セクション６ａで上述したようにＧＦＡＰ又はそれの断片を含むことができる。
１０．キット
本明細書では、ＵＣＨ−Ｌ１又はＵＣＨ−Ｌ１断片について試験サンプルのアッセイ又は評価を行うのに用いることができるキットが提供される。そのキットは、ＵＣＨ−Ｌ１について試験サンプルをアッセイするためのＵＣＨ−Ｌ１説明書のための、試験サンプルをアッセイするための少なくとも一つの成分を含む。例えば、そのキットは、イムノアッセイ、例えば、化学発光微小粒子イムノアッセイによってＵＣＨ−Ｌ１について試験サンプルをアッセイするための説明書を含むことができる。キットに入っている説明書は、包装材に添付することができるか、添付書類として入れることができる。説明書は通常は文書又は印刷物であるが、それに限定されるものではない。そのような説明書を保存でき、それらを末端ユーザーに伝えることができる媒体が、本開示によって想定される。そのような媒体には、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤＲＯＭ）などがあるが、これらに限定されるものではない。本明細書で使用される場合、「説明書」という用語は、その説明書を提供するインターネットサイトのアドレスを含むことができる。
前記少なくとも一つの成分は、ＵＣＨ−Ｌ１に特異的に結合する一又は複数の単離抗体又はそれの抗体断片を含む少なくとも一つの組成物を含むことができる。その抗体は、ＵＣＨ−Ｌ１捕捉抗体及び／又はＵＣＨ−Ｌ１検出抗体であることができる。
或いは又はさらに、そのキットは、キャリブレータ又は対照、例えば、精製され、適宜に凍結乾燥されたＵＣＨ−Ｌ１、及び／又はアッセイを行うための少なくとも一つの容器（例えば、管、マイクロタイタープレート又は帯片であり、それらは抗ＵＣＨ−Ｌ１モノクローナル抗体で既にコーティングされていることができる）、及び／又は緩衝液、例えばアッセイ緩衝液若しくは洗浄緩衝液（それらのうちのいずれか一方は、検出可能な標識（例えば、酵素標識）用の基質溶液、又は停止溶液として提供することができる）を含むことができる。一部の実施形態において、キャリブレータ又は対照は、セクション３ａで上述したＵＣＨ−Ｌ１又はそれの断片を含むことができる。一部の実施形態において、キャリブレータ又は対照は、セクション６ａで上述したＧＦＡＰ又はそれの断片を含むことができる。好ましくは、そのキットは、アッセイを行うのに必要な全ての成分、即ち、試薬、標準、緩衝液、希釈剤などを含む。説明書は、標準曲線を得るための説明書が含むことができる。
そのキットはさらに、ＵＣＨ−Ｌ１を定量するための基準標準を含むことができる。その基準標準を用いて、ＵＣＨ−Ｌ１濃度の内挿及び／又は外挿のための標準曲線を確立することができる。その基準標準は、高ＵＣＨ−Ｌ１濃度レベル、例えば、約１０００００ｐｇ／ｍＬ、約１２５０００ｐｇ／ｍＬ、約１５００００ｐｇ／ｍＬ、約１７５０００ｐｇ／ｍＬ、約２０００００ｐｇ／ｍＬ、約２２５０００ｐｇ／ｍＬ、約２５００００ｐｇ／ｍＬ、約２７５０００ｐｇ／ｍＬ、又は約３０００００ｐｇ／ｍＬ；中等度ＵＣＨ−Ｌ１濃度レベル、例えば、約２５０００ｐｇ／ｍＬ、約４００００ｐｇ／ｍＬ、約４５０００ｐｇ／ｍＬ、約５００００ｐｇ／ｍＬ、約５５０００ｐｇ／ｍＬ、約６００００ｐｇ／ｍＬ、約７５０００ｐｇ／ｍＬ又は約１０００００ｐｇ／ｍＬ；及び／又は低ＵＣＨ−Ｌ１濃度レベル、例えば、約１ｐｇ／ｍＬ、約５ｐｇ／ｍＬ、約１０ｐｇ／ｍＬ、約１２．５ｐｇ／ｍＬ、約１５ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ、約４５ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ、約５５ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ、約６５ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ、約８５ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ、約９５ｐｇ／ｍＬ、又は約１００ｐｇ／ｍＬを含むことができる。
ＵＣＨ−Ｌ１に特異的な組換え抗体などのキット中で提供される抗体は、検出可能な標識、例えばフルオロフォア、放射性部分、酵素、ビオチン／アビジン標識、発色団、化学発光標識などを組み込むことができ、又はそのキットは、抗体を標識するための試薬若しくは抗体（例えば、検出抗体）を検出するための試薬、及び／又は分析物若しくは分析物検出用の試薬を標識するための試薬を含むことができる。抗体、キャリブレータ、及び／又は対照は、別個の容器に入れて提供することができるか、適切なアッセイ方式に、例えばマイクロタイタープレートに前分配することができる。
適宜に、そのキットは、品質管理成分（例えば、感度パネル、キャリブレータ、及び陽性対照）を含む。品質管理試薬の製造は当業界で公知であり、各種免疫診断製品用の添付シートに記載されている。感度パネル部材を用いてアッセイ実行特性を確立しても良く、それはさらにイムノアッセイキット試薬の完全性、及びアッセイの標準化の有用な指標であっても良い。
そのキットは、診断アッセイを実施するのに、又は品質管理評価を容易にするのに必要な他の試薬、例えば緩衝液、塩、酵素、酵素補因子、基質、検出試薬などを含んでいることもできる。他の成分、例えば試験サンプルの単離及び／又は処理のための緩衝液及び溶液（例えば、前処理試薬）を、キットに含めることもできる。そのキットはさらに、一又は複数の他の対照を含むことができる。キットの成分の一又は複数を凍結乾燥させることができ、その場合、キットはさらに、凍結乾燥成分の再生に好適な試薬を含むことができる。
キットの各種成分を、必要に応じて好適な容器、例えばマイクロタイタープレートに入れて提供しても良い。そのキットはさらに、サンプルを保持若しくは貯蔵するための容器（例えば、尿、全血、血漿又は血清サンプル用の容器又はカートリッジ）を含むことができる。適切な場合、当該キットは、試薬若しくは試験サンプルの調製を容易にする反応容器、混合容器、及び他の成分を含んでいても良い。当該キットは、試験サンプルの取得を支援するための一又は複数の装置、例えば注射器、ピペット、ピンセット、計量スプーンなどを含むこともできる。
検出可能な標識が少なくとも一つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、少なくとも一つのアクリジニウム−９−カルボキサミド、少なくとも一つのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル、又はこれらのいずれかの組み合わせを含むことができる。検出可能な標識が少なくとも一つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、過酸化水素源、例えば緩衝液、溶液及び／又は少なくとも一つの塩基性溶液を含むこともできる。所望に応じて、キットは、固相、例えば磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスク又はチップなどを含むことができる。
所望に応じて、キットはさらに、別の分析物［生物マーカー、例えば外傷性脳損傷若しくは障害の生物マーカーであることができる。］についての試験サンプルのアッセイのために、一又は複数の成分を、単独で、又は説明書とさらに組み合わせて含むことができる。
ａ．キット及び方法の適応化
キット（又はそれの成分）、並びに本明細書に記載のイムノアッセイによって試験サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の濃度を評価若しくは測定する方法を、例えば、米国特許第号５，０６３，０８１、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、２００４／００１８５７７号、２００５／００５４０７８号、及び２００６／０１６０１６４号に記載の、及び例えば、Ａｂｂｏｔｔ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）又はｉ−ＳＴＡＴ Ａｌｉｎｉｔｙ， Ａｂｂｏｔｔ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓとしてＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）によって市販されている各種の自動化及び半自動化システム（固相が微小粒子を含むものなど）、並びに米国特許第５，０８９，４２４号及び５，００６，３０９号に記載され、例えばＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）又は一連のＡｂｂｏｔｔ Ａｌｉｎｉｔｙ機器としてＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ （Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）によって市販されているものでの使用に向けて適応化させることができる。
非自動化システム（例えば、ＥＬＩＳＡ）と比較した自動化若しくは半自動化システムの間の相違の一部には、第１の特異的結合相手（例えば、分析物抗体又は捕捉抗体）が結合している基質（サンドイッチ形式及び分析物反応性に影響し得るもの）、並びに捕捉、検出及び／又はいずれか適宜の洗浄工程の長さ及び時期などがある。ＥＬＩＳＡなどの非自動化方式にはサンプル及び捕捉試薬との比較的長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）が必要であり得るが、自動化若しくは半自動化方式（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）及び後継プラットフォーム、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）で約１８分）を有し得る。同様に、ＥＬＩＳＡなどの非自動化方式は、比較的長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）にわたって結合試薬などの検出抗体をインキュベートし得るが、自動化又は半自動化方式（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）及びいずれか後継プラットフォーム）は比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）及び後継プラットフォームについては約４分）を有し得る。
Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能な他のプラットフォームには、ＡｘＳＹＭ（Ｒ）、ＩＭｘ（Ｒ）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号（参照によって全体が本明細書に組み込まれる）参照）、ＰＲＩＳＭ（Ｒ）、ＥＩＡ（ビーズ）、及びＱｕａｎｔｕｍ（商標名）ＩＩ、並びに他のプラットフォームなどがあるが、これらに限定されるものではない。さらに、アッセイ、キット及びキット成分を、他の方式で、例えば、電気化学その他の携帯システム又はポイント・オブ・ケアアッセイシステムで用いることができる。既に述べたのように、本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う商業的Ａｂｂｏｔｔ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサー及び使い捨て試験機器でのそれらの製造及び操作方法について、例えば、米国特許第号５，０６３，０８１、米国特許出願公開２００３／０１７０８８１号、２００４／００１８５７７号、２００５／００５４０７８号、及び２００６／０１６０１６４号（それらは、それに関する記述について参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
特に、アッセイのｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）システムへの適応化に関して、次の構成が好ましい。微細加工シリコンチップが、金製の電流測定作業電極及び銀−塩化銀参照電極のペアを用いて製造される。作業電極の片方で、固定化捕捉抗体を有するポリスチレンビーズ（直径０．２ｍｍ）を、その電極全体のパターン化ポリビニルアルコールのポリマーコーティングに接着させる。このチップを集めて、イムノアッセイに好適な流体工学方式でｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）カートリッジとする。そのシリコンチップの一部の表面には、ＵＣＨ−Ｌ１の特異的結合相手、例えば一又は複数のＵＣＨ−Ｌ１抗体（ＵＣＨ−Ｌ１に結合し得る一又は複数のモノクローナル／ポリクローナル抗体又はそれの断片、それの変異体、又はそれの変異体の断片）又は一又は複数の抗ＵＣＨ−Ｌ１ＤＶＤ−Ｉｇ（又はＵＣＨ−Ｌ１に結合し得るそれの断片、それの変異体、又はそれの変異体の断片）があり、それらのいずれも検出可能に標識されていることができる。カートリッジの流体袋部内には、ｐ−アミノフェノールホスフェートを含む水系試薬がある。
操作においては、ＴＢＩを患っている疑いのある対象者からのサンプルを、試験カートリッジの保持チャンバに加え、そのカートリッジをｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）読取装置に挿入する。カートリッジ内のポンプ部品がサンプルを、チップを含む管路に押し込む。サンプルをセンサーと接触させて、酵素結合体をサンプルに溶解させる。サンプルをセンサーを横切って振動させて、約２〜１２分間のサンドイッチ形成を促進させる。アッセイの最後から２番目の工程で、サンプルを廃液チャンバに入れ、アルカリホスファターゼ酵素用の基質を含む洗浄液を用いて、センサーチップから酵素結合体及びサンプルを洗い落とす。アッセイの最終工程で、アルカリホスファターゼ標識をｐ−アミノフェノールホスフェートと反応させてリン酸基を開裂させ、放出されたｐ−アミノフェノールを作業電極で電気化学的に酸化できるようにする。測定された電流に基づいて、読取装置は、内蔵アルゴリズム及び工場作製の較正曲線によってサンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量を計算することができる。
本明細書に記載の方法及びキットは、必然的に、そのイムノアッセイを行うための他の試薬および方法を包含するものである。例えば、当業界で公知であり、及び／又は容易に調製可能であるか、例えば、結合体希釈剤として及び／又はキャリブレータ希釈剤として洗浄に用いるのに至適化されていることができる各種緩衝液が包含される。結合体希釈剤の１例は、ある種のキットで使用されるＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）結合体希釈剤（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）であり、それは２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、塩、タンパク質ブロッカー、抗微生物剤及び洗剤を含む。キャリブレータ希釈剤の１例は、ある種のキットで用いられるＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（Ｒ）ヒトキャリブレータ希釈剤（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）であり、それはＭＥＳ、他の塩、タンパク質ブロッカー及び抗微生物剤を含む緩衝液を含む。２００８年１２月３１日出願の米国特許出願第６１／１４２，０４８号に記載のように、例えば、シグナル増幅剤としてのシグナル抗体に連結された核酸配列を用い、ｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）カートリッジ方式で、改善されたシグナル発生を得ることができる。
外傷性脳損傷などの疾患を評価するのに用いられる場合、本明細書におけるある種の実施形態が有利であるが、それらのアッセイ及びキットは、適宜に他の疾患、障害及び状態においてＵＣＨ−Ｌ１を評価するのに用いても良い。
当該アッセイ方法は、疾患、例えば外傷性脳損傷を改善する化合物を確認するのに用いることもできる。例えば、ＵＣＨ−Ｌ１を発現する細胞を、候補化合物と接触させることができる。その化合物と接触した細胞中のＵＣＨ−Ｌ１の発現レベルを、本明細書に記載のアッセイ方法を用いた対照細胞でのレベルと比較することができる。
本開示は、下記の非限定的実施例によって示される複数の態様を有する。
１１．実施例
本開示又はそこに開示の態様及び実施形態の範囲を逸脱しない限り、本明細書に記載の本開示の他の好適な改変及び適応化が容易に適用可能であって理解できるものであり、好適な均等物を用いて行うことが可能であることは、当業者には容易に明らかになろう。本開示を詳細に説明したことにより、それは、本開示の一部の態様及び実施形態を説明することのみを目的とした下記の実施例を参照することにより、より明瞭に理解されるであろうし、本開示の範囲を限定するものと見るべきではない。本明細書で言及されている全ての雑誌参考文献、米国特許及び刊行物の開示内容は、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
さらに、本願は、２０１６年１０月３日出願の米国暫定特許出願第６２／４０３，２９３号及び２０１７年２月６日出願の米国暫定特許出願第６２／４５５，２６９号における開示内容全体を組み込むものである。
本願は、米国特許出願第ＸＸ／ＸＸＸ，ＸＸＸ号及びＰＣＴ／ＵＳ２０１７／ＸＸＸＸＸＸ（それぞれ、発明の名称は、「ＩＭＰＲＯＶＥＤ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ＧＦＡＰ Ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ」である）及び米国特許出願第ＸＸ／ＸＸＸ，ＸＸＸ号及びＰＣＴ／ＵＳ２０１７／ＸＸＸＸＸＸ（それぞれ、発明の名称は、「ＩＭＰＲＯＶＥＤ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ＵＣＨ−Ｌ１ Ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ」である）（これらはいずれも、２０１７年１０月２日に出願されている）中の開示内容全体を参照によって組み込むものでもある。
本開示は、下記の非限定的実施例によって示される複数の態様を有する。
［実施例１］
ｉ−ＳＴＡＴ（Ｒ）ＵＣＨ−Ｌ１アッセイ
対象のアッセイ方式（ｉ−ＳＴＡＴ）を用いて、抗体のスクリーニングを行った。当該アッセイでシグナルを発生させた抗体のペアを選択した。初期選択基準は、低キャリブレータ濃度を用いてスクリーニングした場合の抗体ペアによるシグナルの検出を含む多くの因子に基づくものであった。モノクローナル抗体ペア、例えば捕捉モノクローナル抗体としての抗体Ａ及び検出モノクローナル抗体としての抗体Ｂ及びＣを調べた。抗体Ａは、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）で社内開発された抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体例である。抗体Ｂ及び抗体Ｃは、Ｂａｎｙａｎ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ、 Ｉｎｃ．で開発された抗ＵＣＨ−Ｌ１抗体例である。抗体Ｂ及びＣは、ＵＣＨ−Ｌ１の異なるエピトープを認識し、サンプル中の抗原の検出を促進する。その抗体の組み合わせは、その抗体の組み合わせは、一緒に用いると相乗効果を提供し、シグナル増加をもたらした。Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）で社内開発された他の抗体も、各種組み合わせで捕捉抗体又は検出抗体として一緒に用いた場合に、シグナルの同様の促進を示すか、示すと予想される。ＵＣＨ−Ｌ１アッセイ設計を、主要な性能属性に対して評価した。カートリッジ構成は、抗体構成：抗体Ａ（捕捉抗体）／抗体Ｂ＋Ｃ（検出抗体）；試薬条件：０．８％固体、１２５μｇ／ｍＬＦａｂアルカリホスファターゼクラスター複合体；及びサンプルＩｎｌｅｔ Ｐｒｉｎｔ：標準であった。アッセイ時間は、１０〜１５分（７〜１２分のサンプル捕捉時間）であった。
アッセイ較正。ＥＤＴＡ血漿プール中、ＯｒｉＧｅｎｅ組換えＵＣＨ−Ｌ１（０〜２５，０００ｐｇ／ｍＬ）（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）を用いて、キャリブレータを調製した。ＵＣＨ−Ｌ１濃度は、販売者のラベル表示に基づいた。キャリブレータを小分けし、冷凍保存した（−７０℃）。曲線回帰は４ＰＬＣ（４パラメータロジスティック曲線）であった。図１参照；表２（ｎ＝７０回／キャリブレータレベルに基づくものである）も参照。
Figure 2019530875
アッセイ精度。５日精度設計は、ＣＬＳＩプロトコールからの指針に基づいたものであった（ＥＰ５−Ａ２（ＮＣＣＬＳ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ；承認ガイドライン−第２版。ＮＣＣＬＳ文書ＥＰ５−Ａ２［ＩＳＢＮ１−５６２３８−５４２−９］。ＮＣＣＬＳ、９４０ Ｗｅｓｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ， Ｓｕｉｔｅ １４００， Ｗａｙｎｅ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９０８７−１８９８ ＵＳＡ， ２００４）及びＥＰ１５−Ａ２（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。Ｕｓｅｒ Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｆｏｒ Ｐｒｅｃｉｓｏｎ ａｎｄ Ｔｒｕｅｎｅｓｓ；承認ガイドライン−第２版。ＣＬＳＩ文書ＥＰ１５−Ａ２［ＩＳＢＮ１−５６２３８−５７４−７］。Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， ９４０ Ｗｅｓｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ， Ｓｕｉｔｅ １４００， Ｗａｙｎｅ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９０８７−１８９８ ＵＳＡ， ２００５））。試験プロトコールには、５日間、２試験／日、４回／試験（ｎ＝４０回／サンプル）を含めた。この分析では、ＪＭＰソフトウェアプログラム（ＳＡＳ， Ｃａｒｙ， ＮＣからの統計的発見プログラム）を用いて、枝分かれモデルを用いて日数、試験及び反復分散成分を決定した。パネル（ｎ＝６）は、表３に示した標的ＵＣＨ−Ｌ１濃度で準備した。
Figure 2019530875
 ＊Ｃｌｉｎｉｑａ（Ｆａｌｌｂｒｏｏｋ， ＣＡ）血清マトリクスを、ｉ−ＳＴＡＴ ＴＢＩ品質管理材料用のマトリクスとして用いた。ＳＣＬは、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｉｎｃ．（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ， ＤＥ）からのものであった。
表４に示したように、１０％未満合計ＣＶが、ＵＣＨ−Ｌ１についての個々のカートリッジで１００〜４，５００ｐｇ／ｍＬの全てのパネルで認められた。
Figure 2019530875
検出限界（ＬｏＤ）。ＬｏＤ試験設計は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）プロトコールＥＰ１７−Ａ２（″Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ；承認ガイドライン−第２版″， ＥＰ１７Ａ２Ｅ， Ｊａｍｅｓ Ｆ． Ｐｉｅｒｓｏｎ−Ｐｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｊｕｎｅ １， ２０１２， ８０ページ［ＩＳＢＮ：１５６２３８７９５２］）からの指針に基づいたものである。当試験プログラムは、ゼロレベル血漿プールを用いて、ブランク限界（ＬｏＢ）を求めた。合計６０回を調べた。正常ドナースクリーニングから５０ｐｇ／ｍＬでＥＤＴＡ血漿サンプルユニットを選択することにより、５０ｐｇ／ｍＬＵＣＨ−Ｌ１パネルを得た。１０ｐｇ／ｍＬ ＵＣＨ−Ｌ１濃度で熱処理ＥＤＴＡ血漿プールによって希釈することにより、希釈液を標的濃度１０〜４０ｐｇ／ｍＬまで調製した。３日間にわたりＵＣＨ−Ｌ１パネルについて、４０回を調べた。データ解析は次の通り：ＬｏＢ＝ゼロ−分析物サンプル濃度の９５パーセンタイル；ＬｏＤ＝ＬｏＢ＋Ｃｐ×ＳＤ（研究室内）であり、ＣｐはＳＤの９５パーセンタイル（研究室内）を得るための乗数である。ＳＤ（研究室内）は、５パネル全てについてのプールされた標準偏差であった。
ＵＣＨ−Ｌ１：各パネルについての精度プロファイルは、ＣＶがパネル＞２５ｐｇ／ｍＬについて６〜１０の範囲であることを示している。表５を参照する。結果を用いて、下記方程式に当てはめることにより実効感度を求める。
Figure 2019530875
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ＬｏＤは、＜１０ｐｇ／ｍＬであると決定された。その結果は、単一試薬ロット及びカートリッジロットに基づいたものである。実効感度（２０％ＣＶで）は＜２０ｐｇ／ｍＬであった。表６を参照する。実効感度は、定量限界（ＬｏＱ）の推定値である。
Figure 2019530875
直線性／アッセイ範囲。下記のような一連の希釈液を用いて、アッセイ直線性を評価した。各希釈試験において、高濃度及び低濃度サンプルを混合することにより、一連の希釈液を調製した。高濃度サンプルを用いた第１の希釈液は、組織溶解物をＥＤＴＡ血漿プールに標的ＵＣＨ−Ｌ１濃度約８，０００ｐｇ／ｍＬまで加えることにより調製した。第２の希釈液は、疑わしいＴＢＩ患者からのプールＥＤＴＡ血漿試料を用いた。標的開始ＵＣＨ−Ｌ１濃度は約１，０００ｐｇ／ｍＬであった。第３の希釈試験は、ＥＤＴＡ血漿プールへの標的ＵＣＨ−Ｌ１濃度約２０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の添加組織溶解物を用いて評価した。データは次のように解析した。即ち、予想濃度対実測濃度プロットし、相関係数を求めた。１次、２次、３次多項式回帰にデータを当てはめることにより、ＣＬＳＩ ＥＰ６−Ａによって直線性を評価した。最適モデルを用いて、直線性からの偏差を求めた。
ＵＣＨ−Ｌ１：希釈液１：相関係数（実測値対予測値）は、個別アッセイについてｒ＝０．９９９８であった。表７；図５を参照する。直線性からの１０％未満偏差（ＤＬ）が、２０〜６，４００ｐｇ／ｍＬで達成された。希釈液２：相関係数（実測値対予測値）はｒ＝０．９９８９であった。表８；図６を参照する。直線性からの１０％未満偏差（ＤＬ）が、１２〜９００ｐｇ／ｍＬで達成された。希釈液３：相関係数（実測値対予測値）はｒ＝０．９９９２であった。表９；図７を参照する。直線性からの１５％未満偏差が、１６５〜＞１８，０００ｐｇ／ｍＬで達成された。
Figure 2019530875
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正常ドナーサンプル。商業的入手先から得た外見上健常ドナーからの５０血漿サンプルを、ｉ−ＳＴＡＴＵＣＨ−Ｌ１アッセイで調べた。ＵＣＨ−Ｌ１レベルは低く、このサンプルセットでは、中央値約４０ｐｇ／ｍＬであり、最大値１８０ｐｇ／ｍＬ未満であった。図２及び表１０を参照する。
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ＵＣＨ−Ｌ１アッセイは、検出限界（ＬｏＤ）＜２０ｐｇ／ｍＬ；２０，０００ｐｇ／ｍＬまでのアッセイ較正、及び１８，０００ｐｇ／ｍＬまでのアッセイ直線性；１００〜４，５００ｐｇ／ｍＬで精度＜１０％ＣＶ；≦１５分以内に結果；を示している。
［実施例２］
可能なアッセイ妨害物質
ＵＣＨ−Ｌ１アッセイを、表１１に示した可能な妨害物質及び交差反応物について評価した。要約すると、妨害物質を、標的濃度２００〜２５０ｐｇ／ｍＬでＵＣＨ−Ｌ１パネルに加えた。妨害物質試験濃度は、ＣＬＳＩＥＰ７−Ａ２指針（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；承認ガイドライン−第２版。ＣＬＳＩ文書ＥＰ７−Ａ２［ＩＳＢＮ１−５６２３８−５８４−４］。Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， ９４０ Ｗｅｓｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ， Ｓｕｉｔｅ １４００， Ｗａｙｎｅ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９０８７−１８９８ ＵＳＡ， ２００５）に基づいた。可能な交差反応物を、５００ｎｇ／ｍＬで調べた。合格基準は、＜１０％妨害であった。
具体的には、ＵＣＨ−Ｌ１アッセイを、可能な内因性妨害物質について評価した。可能な妨害物質は、選択した緩衝液／溶媒中で調製し、対象分析物を含む試験サンプルに加えた。対照サンプルは、選択した緩衝液／溶媒のみを加えて調製した。妨害は、対照サンプルと妨害物質を含む試験サンプルとの間の測定結果の％差に基づいて計算した。
次の可能な妨害性内因性物質：ビリルビン（非結合及び結合）；トリグリセリド；総タンパク質；ヘパリン；及び内因性抗体（ＨＡＭＡ、ＲＦ）を含むサンプルを、妨害について評価した。ＵＣＨ−Ｌ１パネルは、標的２００〜２５０ｐｇ／ｍＬで組織溶解物を用いてＬｉヘパリン血漿プール中で調製した。全てのサンプルを、ＵＣＨ−Ｌ１カートリッジで調べた。％妨害を、方程式：％妨害＝１００×（試験−対照）／対照で示したように、試験溶液と対照溶液の差を取り、それを対照溶液で割り、１００を掛けることにより計算した。
ビリルビン：結合及び非結合ビリルビンを、上記のＣＬＳＩ ＥＰ７−Ａ２指針で推奨の方法に従って、別個に妨害について調べた。ビリルビン濃度は、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ臨床化学分析装置でサンプルを調べることにより確認した。表１１は、ＵＣＨ−Ｌ１について、＞２０ｍｇ／ｄＬビリルビンで＜１０％妨害を示している。
トリグリセリド：トリグリセリド原液（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ）を、ＵＣＨ−Ｌ１を含むサンプルに加え、そして、緩衝液／マトリクスを、ＵＣＨ−Ｌ１を含むサンプルに加えて、対照を調製した。ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ臨床化学分析装置でサンプルを調べることにより、トリグリセリド濃度を確認した。表１１は、ＵＣＨ−Ｌ１について、＞３，０００ｍｇ／ｄＬトリグリセリドで＜１０％妨害を示している。
総タンパク質：ヒト試料中の総タンパク質含有量は６．４〜８．３ｇ／ｄＬの正常範囲（Ｔｉｅｔｚ）で若干の変動性を示し、９９％の試料が＜９ｇ／ｄＬであった（社内分析）。総タンパク質の効果を評価するため、サンプルにＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）を補充し、正常サンプルと比較した。サンプルのタンパク質含有量を、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ臨床化学総タンパク質試験を用いて独立に求めた。表１１は、ＵＣＨ−Ｌ１について、８．８ｇ／ｄＬ総タンパク質で＜１０％妨害を示している。
ヘパリン：ヘパリンは、採血管中で抗凝血剤として使用され、ヘパリン処理された全血及び血漿がｉ−ＳＴＡＴアッセイで可能なサンプルタイプであることから、可能な妨害物質として評価される。ヘパリン管は約１５Ｕ／ｍＬヘパリンを含むことから、試験濃度は、採血管が完全に満たされていない場合（少量採血）に存在すると考えられる比較的高い濃度を代表している。表１１は、ＵＣＨ−Ｌ１について、サンプル中９０Ｕ／ｍＬヘパリンによる＜１０％妨害を示している。
内因性抗体（ＨＡＭＡ、ＲＦ）：イムノアッセイは、至適な成績を得るのに、抗体と対象分析物の間の特異的相互作用に依るものである。しかしながら、一部の試料は、アッセイで用いられる抗体と交差反応する内因性抗体を含む可能性がある。非特異的抗体を、非特異的相互作用のブロッキングタンパク質としてアッセイに加え、妨害の可能性を低下させた。一般に確認されているイムノアッセイでの可能な妨害源２種類：ＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）及びＲＦ（リウマチ因子）を用いた。ＨＡＭＡ及びＲＦ濃縮物を、商業的入手先：Ｒｏｃｈｅ、Ｓｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ及びＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎから得た。これらの濃縮液を、やはり可能な妨害を評価するために低量のＵＣＨ−Ｌ１を添加された血漿プールに加えた。相当するサンプルに緩衝液を加えることにより、対照サンプルを調製した。ＨＡＭＡ又はＲＦ添加血漿プールと比較して、回復率を求めた。結果を表１１に示している。ＵＣＨ−Ｌ１回復率は、ＨＡＭＡ及びＲＦ存在下で１００±１０％以内であった。
相同タンパク質の交差反応性及び妨害：可能なＵＣＨ−Ｌ１；一次配列アラインメントに基づいてＵＣＨ−Ｌ１に対してかなりの配列相同性を示す一連の脱ユビキチン化酵素の一部であるいくつかのユビキチンカルボキシヒドロラーゼ酵素がある。ＵＣＨ−Ｌ２、ＵＣＨ−Ｌ３及びＵＣＨ−Ｌ５の交差反応性（ＵＣＨ−Ｌ１の非存在）及び妨害（ＵＣＨ−Ｌ１の存在）の両方を、５００ｎｇ／ｍＬの濃度で評価した。組換えＵＣＨ−Ｌ２及びＵＣＨ−Ｌ３を、Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｉｎｃ． （Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ）から購入し、組換えＵＣＨ−Ｌ５を、Ｇｅｎｗａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）から購入した。％交差反応性を、方程式：１００×（試験−対照）／交差反応物濃度を用いて求めた。表１１に示した結果は、有意な交差反応性がないこと、そしてＵＣＨ−Ｌ１アッセイでのビメンチン及びデスミンによる＜１０％妨害を示している。
Figure 2019530875
［実施例３］
ＴＢＩ集団試験
ＴＢＩ患者集団試験で、ｉ−ＳＴＡＴＵＣＨ−Ｌ１アッセイを用いた。
試験試料：中等度ないし重度ＴＢＩの対象者計２６０名を、８以下の時点／対象者で登録し、サンプルは全て血清であった。表１２；図３。
Figure 2019530875
試験試料の分布。図３は、各時間点での全てのＵＣＨ−Ｌ１アッセイ結果の中央値結果を示すものであり、これは、ＵＣＨ−Ｌ１がＢ１サンプルで高く、後の時間点になるに連れて低下する傾向があることを示している。図４は、各サンプル時点でのボックスプロット（対数スケール）を示しており、それは患者集団全体でのＵＣＨ−Ｌ１結果の広い分布を示している。ボックスは、四分位範囲を表す（２５、５０、及び７５パーセンタイル）。
要約すると、対象者合計２５０名が試験に参加できた。全ての時間点が、必ずしも、対象者全員で使えたわけではなかった。一部のサンプルは、体積が限られていたり不十分であったりした。ＵＣＨ−Ｌ１結果は、＜０．０５〜１２，１００に及ぶものであり、アッセイ較正範囲内で読み取られた。
［実施例４］
ＵＣＨ−Ｌ１及びＧＦＡＰの多重化
ＵＣＨ−Ｌ１アッセイを、多重方式でＧＦＡＰアッセイとともに用いた。その多重方式はｉ−ＳＴＡＴ方式で用いることにより、多重ｉ−ＳＴＡＴカートリッジが、同一サンプルを用いる１回の試験でＵＣＨ−Ｌ１結果及びＧＦＡＰ結果の両方を提供する。ＧＦＡＰアッセイでは、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ， ＩＬ）で社内開発された抗ＧＦＡＰ抗体例である抗体Ｄ（捕捉モノクローナル抗体として）及び抗体Ｅ（検出モノクローナル抗体として）を用いた。カートリッジ構成は、抗体構成：抗体Ｄ（捕捉抗体）／抗体Ｅ（検出抗体）；試薬条件：０．８％固体、２５０μｇ／ｍＬ Ｆａｂアルカリホスファターゼクラスター結合体；及びＳａｍｐｌｅ Ｉｎｌｅｔ Ｐｒｉｎｔ：ＧＦＡＰ特異的であった。アッセイ時間は１０〜１５分であった（７〜１２分のサンプル捕捉時間）。
アッセイ較正−ＧＦＡＰ。熱処理ＥＤＴＡ血漿プール中のＯｒｉＧｅｎｅ組換えＧＦＡＰ（０〜１５，０００ｐｇ／ｍＬ）を用いて、キャリブレータを調製した。ＧＦＡＰ濃度は、販売者のラベル表示に基づいた。キャリブレータを小分けし、冷凍保存した（−７０℃）。多重方式でのＧＦＡＰアッセイの較正を表１３に示しており、多重方式でのＵＣＨ−Ｌ１アッセイの較正を表１４に示している。
Figure 2019530875
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表１５に示したように、ＵＣＨ−Ｌ１について多重カートリッジで、１２０〜４，５５０ｐｇ／ｍＬで全てのパネルで、＜１０％合計ＣＶであった。表１６に示したように、ＧＦＡＰについて多重カートリッジで、８０〜５，６００ｐｇ／ｍＬで全てのパネルで、＜１５％合計ＣＶが達成された。
Figure 2019530875
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検出限界（ＬｏＤ）。約５０ｐｇ／ｍＬ ＵＣＨ−Ｌ１を含むサンプルに高ＧＦＡＰサンプルを加えることにより、５０ｐｇ／ｍＬＧＦＡＰパネルを得た。希釈液を標的濃度１０〜４０ｐｇ／ｍＬまで調製した。多重カートリッジ構成で３日間にわたり各パネルについて、４０回を調べた。データ解析は次の通り：ＬｏＢ＝ゼロ−分析物サンプル濃度の９５パーセンタイル；ＬｏＤ＝ＬｏＢ＋Ｃｐ×ＳＤ（研究室内）であり、ＣｐはＳＤの９５パーセンタイル（研究室内）を得るための乗数である。ＳＤ（研究室内）は、５パネル全てについてのプールされた標準偏差であった。
（ａ）ＵＣＨ−Ｌ１：多重カートリッジ構成での各パネルについての精度プロファイルは、パネル＞１０ｐｇ／ｍＬについて８〜２２％のＣＶ範囲を有していた（プールＳＤ＝３．１）。表１７を参照する。結果を用いて、下記方程式に当てはめることにより実効感度を求める。
Figure 2019530875
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（ｂ）ＧＦＡＰ：多重カートリッジ構成での各パネルについての精度プロファイルは、パネル＞１９ｐｇ／ｍＬについて１４〜２５％のＣＶ範囲を有していた（プールＳＤ＝５．６２）。表１８を参照する。結果を用いて、下記方程式に当てはめることにより実効感度を求める。
Figure 2019530875
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ＬｏＤは、多重カートリッジ構成での各アッセイについて＜３５ｐｇ／ｍＬであった。結果は、単一の試薬ロット及びカートリッジロットに基づくものであった。試薬ロット及び製造変動性は、ＬｏＤ計算には考慮しなかった。多重構成では、パネルで認められるＳＤが相対的に高いため、ＬｏＤが相対的に高かった。実効感度（２０％ＣＶで）は、各抗体構成について＜５０ｐｇ／ｍＬであった。表１９を参照する。実効感度は、定量限界（ＬｏＱ）の推定値である。
Figure 2019530875
直線性／アッセイ範囲。直線性試験設計は次の通りであった。ＥＤＴＡ血漿プールに組織溶解物を加えることにより、高濃度サンプルを調製した。標的ＵＣＨ−Ｌ１濃度は約６，４００ｐｇ／ｍＬであり、添加サンプルの標的ＧＦＡＰ濃度は約１５，０００ｐｇ／ｍＬであった。第２の希釈液は、疑わしいＴＢＩ患者からのプールＥＤＴＡ血漿試料を含んでいた。ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の両方について、標的濃度は約１，０００ｐｇ／ｍＬであった。高及び低濃度サンプルを混合することにより、アッセイ範囲にわたる希釈液を調製した。各希釈液について、多重カートリッジ構成で１０回の試験を行った。データは次のように解析した。即ち、予想濃度対実測濃度をプロットし、相関係数を求めた。ＥＰ６−Ａプロトコール（ＮＣＣＬＳ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ： Ａ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ アプローチ； Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ． ＮＣＣＬＳ ｄｏｃｕｍｅｎｔ ＥＰ６−Ａ ［ＩＳＢＮ １−５６２３８−４９８−８］． ＮＣＣＬＳ、９４０ Ｗｅｓｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ， Ｓｕｉｔｅ １４００， Ｗａｙｎｅ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９０８７−１８９８ ＵＳＡ， ２００３．）に従って、直線性を評価した。１次、２次、３次多項式回帰にデータを当てはめた。最適モデル及び実測の直線性からの偏差を求めた。
（ｃ）ＵＣＨ−Ｌ１：相関係数（実測値対予測値）は、多重アッセイについてｒ＞０．９９９７であった。表２０。１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が２５〜６，４００ｐｇ／ｍＬで達成された。
Figure 2019530875
（ｂ）ＧＦＡＰ：相関係数（実測値対予測値）は、多重アッセイについてｒ＞０．９９であった。表２１。１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が２５〜６，４００ｐｇ／ｍＬで達成された。
Figure 2019530875
サンプル相関：ＵＣＨ−Ｌ１（多重対個別）。１３３の可能なＴＢＩ試料について試験を行った。良好な全体的相関（ｒ＞０．９８）及び勾配（１．１）が観察された。図８参照。５０名の正常ドナーを用いた。サンプルの大半が良好な一致及び良好な全体的相関を示した（ｒ＞０．９８）。図９及び表２２を参照する。
Figure 2019530875
サンプル相関：ＧＦＡＰ（多重対個別）。１３３の可能なＴＢＩ試料について試験を行った。良好な全体的相関（ｒ＞０．９８）及び勾配（１．１）が観察された。図１０及び表２３参照。５０名の正常ドナーを用いた。ＧＦＡＰレベルは非常に低く、値は多重カートリッジでの方がわずかに高かった。図１１及び表２４を参照する。
Figure 2019530875
Figure 2019530875
多重カートリッジ構成は次のものを示した；（ａ）ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の両方についての検出限界（ＬｏＤ）＜２５ｐｇ／ｍＬ；（ｂ）ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の両方についての６，４００ｐｇ／ｍＬまでの範囲；６，４００ｐｇ／ｍＬまでのアッセイ較正、及び＞６，４００ｐｇ／ｍＬまでのアッセイ直線性；（ｃ）ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の両方についての精度＜１５％；＜１０％ＣＶ（１００〜４，０００ｐｇ／ｍＬ）；（ｄ）≦２０分以内での時間結果；性能試験のため１５分アッセイサイクルを使用；（ｅ）試料タイプ血漿；キャリブレータ及び性能試験にＥＤＴＡ血漿を使用；（ｆ）直線性ｒ≧０．９５；相関係数：ｒ＞０．９９；及びＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の両方について、２５〜＞６，４００ｐｇ／ｍＬで＜１０％直線性からの偏差；（ｇ）相関：ｒ≧０．８５、相関係数、多重対個別、ｒ＞０．９９。
以上の詳細な説明及び付随する実施例は、例示的なものにすぎず、専ら添付の特許請求の範囲及びそれの均等物によって定義される本発明の範囲を制限するものと捉えるべきではないことは明らかである。
開示の実施形態に対する各種の変更及び改変は、当業者には明らかであろう。本発明の精神および範囲を逸脱しない限りにおいて、そのような変更及び改変、例えば化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤又は本発明の使用方法に関係するもの（これらに限定されるものではない）がなされ得る。
完全を期して、本発明の各種態様を、下記の番号付けされた項目に記載する。
項目１：対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第１の若しくは少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含む工程と；ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要としない方法。
項目２：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目１の方法。
項目３：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者からの生体サンプルでのＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、（１）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（２）（第１の）可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合することにより少なくとも一つの第１の捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの（第１の）検出抗体と接触させることにより、
捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−検出抗体複合体を形成すること、及び（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めることを含み、当該方法を用いて、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目４：対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも一つの生物マーカーを検出する工程を含み、生物マーカーの少なくとも一つがＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目５：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者においてユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含む工程と；ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在は、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み、当該方法を用いて、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目６：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者においてユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含む工程と；ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と、及びｃ）検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み、前記アッセイが約２０マイクロリットルの体積の試験サンプル中、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を求めることができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目７：前記方法を約２０マイクロリットルの体積の前記生体サンプルを用いて行う、項目１〜５のいずれか１項の方法。
項目８：当該方法を用いて、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる、項目１〜７のいずれか１項の方法。
項目９：前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー又は前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーで、いずれか検出可能な標識を含まない方が固体支持体上に固定化されている、項目１、５又は６のいずれか１項の方法。
項目１０：ＵＣＨ−Ｌ１を一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、項目１〜９のいずれか１項の方法。
項目１１：前記生体サンプルが希釈を必要としない、項目３〜１０のいずれか１項の方法。
項目１２：前記生体サンプルが、全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択される、項目１〜１１のいずれか１項の方法。
項目１３：前記方法を約５〜約２０分以内に行う、項目１〜１２のいずれか１項の方法。
項目１４：前記方法を約１５分以内に行う、項目１〜１３のいずれか１項の方法。
項目１５：前記生体サンプルが約１〜約２５マイクロリットルである、項目１〜１４のいずれか１項の方法。
項目１６：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が未知である、項目１〜１５のいずれか１項の方法。
項目１７：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が、０〜約１２時間、約１２〜約２４時間、約２４〜約３６時間、約３６〜約４８時間、約４８〜約７２時間、約７２〜約９６時間、約９６〜約１２０時間、約１２０時間〜約７日、約７日〜約１ヶ月、約１ヶ月〜約３ヶ月、約３ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約１年、約１年〜約３年、約３年〜約６年、約６年〜約１２年、約１２年〜約２０年、約２０年〜約３０年、及び約３０年〜約５０年からなる群から選択される、項目１〜１６のいずれか１項の方法。
項目１８：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が物理的振盪、非開放性若しくは開放性の頭部外傷を生じる外部的な機械的その他の力による鈍的衝撃、一又は複数の落下、爆発若しくは爆風又は他の種類の鈍的力による外傷によって引き起こされる頭部への損傷を受けた可能性があった後である、項目１〜１７のいずれか１項の方法。
項目１９：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、化学薬品、毒物又は化学薬品と毒物の組み合わせを摂取したか、それらに曝露された後である、項目１〜１７のいずれか１項の方法。
項目２０：前記化学薬品若しくは毒物が、火、カビ、アスベスト、農薬、殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの一又は複数の組み合わせである、項目１９の方法。
項目２１：前記生体サンプルが、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、ウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患う対象者から得られる、項目１〜１７のいずれか１項の方法。
項目２２：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目１〜２１のいずれか１項の方法。
項目２３：前記外傷性脳損傷が軽度外傷性脳損傷である、項目１〜２１のいずれか１項の方法。
項目２４：前記接触を同時に行う、項目１、４、５及び６のいずれか１項の方法。
項目２５：前記接触を順次に行う、項目１、４、５及び６のいずれか１項の方法。
項目２６：状況が、単一時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量を測定することによって評価される、項目１、４、５及び６のいずれか１項の方法。
項目２７：状況が、モニタリングを行ってＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量を測定することによって評価される、項目１、４、５及び６のいずれか１項の方法。
項目２８：前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１〜２１のいずれか１項の方法。
請求項２９：前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、請求項１〜２１のいずれか１項の方法。
項目３０：前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、項目１〜２１のいずれか１項の方法。
項目３１：前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、項目１〜２１のいずれか１項の方法。
項目３２：対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー（前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する）；及び（ｉｉ）少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー（前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する）と接触させることにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができ、（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み、当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる方法。
項目３３：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者からの生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、（１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＧＦＡＰ上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−第１の検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの（第１の）検出抗体と、及び（２）（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの（第１の）検出抗体と接触させること；及び（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体及び前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰの量若しくは濃度及びＵＣＨ−Ｌ１を求めることを含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１を求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目３４：前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出する工程を有し、前記生物マーカーの少なくとも二つがＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、及び（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目３５：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者においてＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができ、（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰを求めることができ、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目３６：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者においてＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として測定する方法であって、ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と；ｃ）（ｉ）サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示す前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナル、及び（ｉｉ）前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルを測定する工程であって、ここで、それにより、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量及び前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み；当該アッセイが、約２０マイクロリットルの体積の試験サンプル中、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰの量を求めることができ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を求めることができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である。
項目３７：前記方法が、約１６ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＧＦＡＰのレベルを検出する、項目３２〜３６のいずれか１項の方法。
項目３８：項目３２〜３７のいずれか１項の方法。前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５，０００ｐｇ／ｍＬ及び約１７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを検出する、項目３２〜３７のいずれか１項の方法。
項目３９：前記生体サンプルが約１〜約１５０マイクロリットル以下である、項目３２〜３８の方法。
項目４０：前記生体サンプルが約１〜約２５マイクロリットル以下である、項目３２〜３９の方法。
項目４１：前記方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目３２〜４０の方法。
項目４２：前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている。項目３２〜４１の方法。
項目４３：前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目３２〜４２の方法。
項目４４：前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目３２〜４３の方法。
項目４５：前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー固体支持体上に固定化されている、項目３２〜４４の方法。
項目４６：前記生体サンプルが希釈されているか希釈されていない、項目３２〜４５の方法。
項目４７：前記生体サンプルが全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル又は血漿サンプルである、項目３２〜４６の方法。
項目４８：前記方法を約５〜約２０分行う、項目３２〜４７の方法。
項目４９：前記方法を約１５分以内に行う、項目３２〜４８の方法。
項目５０：前記生体サンプルを取得する時と前記対象者が損傷を患う時との間の時間が未知である、項目３２〜４９の方法。
項目５１：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が、０〜約１２時間、約１２〜約２４時間、約２４〜約３６時間、約３６〜約４８時間、約４８〜約７２時間、約７２〜約９６時間、約９６〜約１２０時間、約１２０時間〜約７日、約７日〜約１ヶ月、約１ヶ月〜約３ヶ月、約３ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約１年、約１年〜約３年、約３年〜約６年、約６年〜約１２年、約１２年〜約２０年、約２０年〜約３０年、及び約３０年〜約５０年からなる群から選択される、項目３２〜５０の方法。
項目５２：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、物理的振盪、非開放性若しくは開放性の頭部外傷を生じる外部的な機械的その他の力による鈍的衝撃、一又は複数の落下、爆発若しくは爆風又は他の種類の鈍的力による外傷によって引き起こされる頭部への損傷を受けた可能性があった後である、項目３２〜５１の方法。
項目５３：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、化学薬品、毒物又は化学薬品と毒物の組み合わせを摂取したか、それらに曝露された後である、項目３２〜５１の方法。
項目５４：前記化学薬品若しくは毒物が火、カビ、アスベスト、農薬、殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの一又は複数の組み合わせである、項目５３の方法。
項目５５：前記生体サンプルが、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、ウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患う対象者から得られる、項目３２〜５１の方法。
項目５６：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目３２〜５５のいずれか１項の方法。
項目５７：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目３〜３１及び４２〜５６のいずれか１項の方法。
項目５８：対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の評価方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー及び前記第３の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、前記第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバー−第３の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー又は第３の特異的結合メンバーのうちの二つが検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す工程とを含み、
当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要としない方法。
項目５９：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目５８の方法。
項目６０：対象者からの生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
（１）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープと結合して捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合する第１の検出抗体、及び（３）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体若しくは前記第１の検出抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合してＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体−第２の抗体複合体を形成する第２の検出抗体と接触させることにより、
捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体−第２の検出抗体複合体を形成すること、及び
（ｃ）前記捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体−第２の検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求める工程とを含み、当該方法を用いて、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目６１：対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の評価方法であって、
前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも一つの生物マーカーを検出する工程を含み、生物マーカーの少なくとも一つはＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目６２：対象者におけるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバー−第３の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーがそれぞれ検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、前記検出可能な標識のそれぞれからの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程とを含み、
当該方法を用いて、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目６３：ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の測定方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバー，−第３の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーがそれぞれ検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記検出可能な標識のそれぞれからの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と、
ｃ）前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、
前記アッセイが２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中の２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を測定することができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目６４：前記方法を、前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に外傷性脳損傷の尺度として行って、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができるようにする、項目５８、６１及び６２のいずれか１項の方法。
項目６５：前記方法を行って、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができるようにする、項目６０及び６３の方法。
項目６６：前記方法を、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行う、項目５８〜６２のいずれか１項の方法。
項目６７：当該方法を用いて、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる、項目５８〜６６のいずれか１項の方法。
項目６８：前記第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー又は第３の特異的結合メンバーのいずれか、前記検出可能な標識を含まないものが固体支持体上に固定化されている、項目５８、６１又は６２のいずれか１項の方法。
項目６９：ＵＣＨ−Ｌ１を、一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、項目５８〜６８のいずれか１項の方法。
項目７０：前記生体サンプルが希釈を必要としない、項目６０〜６９のいずれか１項の方法。
項目７１：前記生体サンプルが、全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択される、項目５８〜７０のいずれか１項の方法。
項目７２：前記方法を約５〜約２０分以内に行う、項目５８〜７１のいずれか１項の方法。
項目７３：前記方法を約１５分以内に行う、項目５８〜７２のいずれか１項の方法。
項目７４：前記生体サンプルが約１〜約２５マイクロリットルである、項目５８〜７３のいずれか１項の方法。
項目７５：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が未知である、項目３８〜７４のいずれか１項の方法。
項目７６：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が、０〜約１２時間、約１２〜約２４時間、約２４〜約３６時間、約３６〜約４８時間、約４８〜約７２時間、約７２〜約９６時間、約９６〜約１２０時間、約１２０時間〜約７日、約７日〜約１ヶ月、約１ヶ月〜約３ヶ月、約３ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約１年、約１年〜約３年、約３年〜約６年、約６年〜約１２年、約１２年〜約２０年、約２０年〜約３０年、及び約３０年〜約５０年からなる群から選択される、項目５８〜７５のいずれか１項の方法。
項目７７：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、物理的振盪、非開放性若しくは開放性の頭部外傷を生じる外部的な機械的その他の力による鈍的衝撃、一又は複数の落下、爆発若しくは爆風又は他の種類の鈍的力による外傷によって引き起こされる頭部への損傷を受けた可能性があった後である、項目５８〜７６のいずれか１項の方法。
項目７８：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、化学薬品、毒物又は化学薬品と毒物の組み合わせを摂取したか、それらに曝露された後である、項目５８〜７６のいずれか１項の方法。
項目７９：前記化学薬品若しくは毒物が火、カビ、アスベスト、農薬、殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの一又は複数の組み合わせである、項目７８の方法。
項目８０：前記生体サンプルが、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、ウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患う対象者から得られる、項目５８〜７６のいずれか１項の方法。
項目８１：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目５８〜８０のいずれか１項の方法。
項目８２：前記外傷性脳損傷が軽度外傷性脳損傷である、項目５８〜８１のいずれか１項の方法。
項目８３：前記接触を同時に行う、項目５８、６２、６３及び６４のいずれか１項の方法。
項目８４：前記接触を順次に行う、項目５８、６２、６３及び６４のいずれか１項の方法。
項目８５：状況が、単一時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量を測定することによって評価される、項目５８、６２、６３及び６４のいずれか１項の方法。
項目８６：状況が、モニタリングを行ってＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量を測定することによって評価される、項目５８、６２、６３及び６４のいずれか１項の方法。
項目８７：前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目５８〜８６のいずれか１項の方法。
項目８８：前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目５８〜８６のいずれか１項の方法。
項目８９：前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、項目５８〜８８のいずれか１項の方法。
項目９０：前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、項目５８〜８９のいずれか１項の方法。
項目９１：対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価する方法であって、
ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー［前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的に（好ましくは、異なるエピトープに）ＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）第３の特異的結合メンバー、第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合メンバー［前記第３の特異的結合メンバー、前記第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープに）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバー−第５の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー、前記第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合メンバーは、それぞれ第１の検出可能な標識、第２の検出可能な標識及び第３の検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができ、（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び前記第３の検出可能な標識からの前記第３の検出可能なシグナルが、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の及び第３の検出可能なシグナルの量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことから、前記第２の及び第３の検出可能な標識からの第２の及び第３の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる工程とを含み、
当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のレベルのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１を求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる方法。
項目９２：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者からの生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
（１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、捕捉抗体によって結合していないＧＦＡＰ上のエピトープに結合してＧＦＡＰ抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体、及び
（２）（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合することにより捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、（ｉｉ）出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合する第１の検出抗体；及び（ｉｉｉ）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープ及び第１の検出可能な標識に結合して、ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体−第２の検出抗体複合体を形成する第２の検出抗体と接触させること；
（ｃ）前記捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−検出抗体複合体及び前記捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出−第２の検出複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めることを含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１を求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目９３：前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価する方法であって、
前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出する工程を含み、前記生物マーカーのうちの少なくとも二つがＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のの量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目９４：ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価する方法であって、
ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー［前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）第３の特異的結合メンバー、第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合メンバー［前記第３の特異的結合メンバー、前記第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバー−第５の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー、前記第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができる。］、及び（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び前記第３の検出可能な標識からの第３の検出可能なシグナルが、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの量及び前記第３の検出可能な標識からの第３の検出可能なシグナルの量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことから、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナル及び前記第３の検出可能な標識からの第３の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、
当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目９５：ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を測定する方法であって、
ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー［前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）第３の特異的結合メンバー、第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合相手［前記第３の特異的結合メンバー、前記第４の特異的結合メンバー及び第５の特異的結合相手がそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第４の特異的結合メンバー−第５の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー、前記第４の特異的結合メンバー及び前記第５の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識、第２の検出可能な標識及び第３の検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナル及び前記第３の検出可能な標識からの第３の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と；
ｃ）（ｉ）サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示す前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナル、及び（ｉｉ）前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す前記第２の検出可能な標識及び前記第３の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、それにより、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量及びそれぞれ前記第２の検出可能な標識及び第３の検出可能なシグナルからの前記第２の検出可能なシグナル及び第３の検出可能な標識の量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、
当該アッセイが、約２０マイクロリットルの体積の試験サンプル中の５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰの量及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を求めることができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目９６：前記方法が、約１６ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＧＦＡＰのレベルを検出する、項目９１〜９５のいずれか１項の方法。
項目９７：前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５，０００ｐｇ／ｍＬ及び約１７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを検出する、項目９１〜９５のいずれか１項の方法。
項目９７：前記生体サンプルが約１〜約１５０マイクロリットル以下である、項目９１〜９７の方法。
項目９８：前記生体サンプルが約１〜約２５マイクロリットル以下である、項目９１〜９７の方法。
項目９９：前記方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目９１〜９８の方法。
項目１００：前記第１の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目９１〜９９の方法。
項目１０１：前記第２の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目９１〜９９の方法。
項目１０２：前記第３の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目９１〜９９の方法。
項目１０３：前記第４の特異的結合メンバーが固体支持体に固定化されている、項目９１〜９９の方法。
項目１０４：前記生体サンプルが希釈されているか希釈されていない、項目９１〜１０３の方法。
項目１０５：前記生体サンプルが全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル又は血漿サンプルである、項目９１〜１０４の方法。
項目１０６：前記方法を約５〜約２０分行う、項目９１〜１０５の方法。
項目１０７：前記方法を約１５分以内に行う、項目９１〜１０６の方法。
項目１０８：前記生体サンプルを取得する時と前記対象者が損傷を患う時との間の時間が未知である、項目９１〜１０７の方法。
項目１０９：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が、０〜約１２時間、約１２〜約２４時間、約２４〜約３６時間、約３６〜約４８時間、約４８〜約７２時間、約７２〜約９６時間、約９６〜約１２０時間、約１２０時間〜約７日、約７日〜約１ヶ月、約１ヶ月〜約３ヶ月、約３ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約１年、約１年〜約３年、約３年〜約６年、約６年〜約１２年、約１２年〜約２０年、約２０年〜約３０年、及び約３０年〜約５０年からなる群から選択される、項目９１〜１０８の方法。
項目１１０：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、物理的振盪、非開放性若しくは開放性の頭部外傷を生じる外部的な機械的その他の力による鈍的衝撃、一又は複数の落下、爆発若しくは爆風又は他の種類の鈍的力による外傷によって引き起こされる頭部への損傷を受けた可能性があった後である、項目９１〜１０９の方法。
項目１１１：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、化学薬品、毒物又は化学薬品と毒物の組み合わせを摂取したか、それらに曝露された後である、項目９１〜１０９の方法。
項目１１２：前記化学薬品若しくは毒物が火、カビ、アスベスト、農薬、殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの一又は複数の組み合わせである、項目１１１の方法。
項目１１３：前記生体サンプルが、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、ウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患う対象者から得られる、項目９１〜１０９の方法。
項目１１４：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目９１〜１１４のいずれか１項の方法。
項目１１５：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目６０〜９０及び１００〜１１４のいずれか１項の方法。
項目１１６：対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況の評価方法であって、
（ａ）ヒト対象者から得られた生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、
（１）固体支持体上に固定化されており、ヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合し、それにより、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する捕捉抗体、及び
（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体複合体を形成する第１の検出抗体、
（３）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体及び前記第１の抗体によって結合されていないヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体−第２の検出抗体複合体を形成する第２の検出抗体と接触させて、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−第１の検出抗体−第２の検出抗体複合体を形成する工程と
［前記捕捉抗体及び第１の検出抗体及び第２の検出抗体は単一特異性抗体であり、適宜にモノクローナル抗体である］、
（ｂ）前記捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原抗原−第１の検出抗体−第２の検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルを検出する工程であって、ここで、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と、
（ｃ）前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量は、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す工程とを含み、，
当該方法は、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される方法。
項目１１７：前記方法を、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行う、項目１１６の方法。
項目１１８：ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を測定する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー及び前記第３の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバー−第３の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーがそれぞれ検出可能な標識を含み、前記第１の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と、及び
ｃ）前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量は、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す工程とを含み、
前記アッセイが、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中で前記ダイナミックレンジで達成される方法。
項目１１９：前記方法を、前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合の対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価するために行い、工程（ｃ）で測定した前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる、項目１１６又は１１８の方法。
項目１２０：当該方法を用いて、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる、項目１１６〜１１９のいずれか１項の方法。
項目１２１：ＵＣＨ−Ｌ１を、一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、項目１１６〜１２０のいずれか１項の方法。
項目１２２：前記生体サンプルが希釈を必要としない、項目１１６〜１２１のいずれか１項の方法。
項目１２３：前記生体サンプルが全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択される、項目１１６〜１２２のいずれか１項の方法。
項目１２４：前記方法を約５〜約２０分以内に行う、項目１１６〜１２３のいずれか１項の方法。
項目１２５：前記方法を約１０分以内に行う、項目１１６〜１２４のいずれか１項の方法。
項目１２６：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が未知である、項目１１６〜１２５のいずれか１項の方法。
項目１２７：生体サンプルを取得する時と対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある時との間の時間が、０〜約１２時間、約１２〜約２４時間、約２４〜約３６時間、約３６〜約４８時間、約４８〜約７２時間、約７２〜約９６時間、約９６〜約１２０時間、約１２０時間〜約７日、約７日〜約１ヶ月、約１ヶ月〜約３ヶ月、約３ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約１年、約１年〜約３年、約３年〜約６年、約６年〜約１２年、約１２年〜約２０年、約２０年〜約３０年、及び約３０年〜約５０年からなる群から選択される、項目１１６〜１２５のいずれか１項の方法。
項目１２８：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、物理的振盪、非開放性若しくは開放性の頭部外傷を生じる外部的な機械的その他の力による鈍的衝撃、一又は複数の落下、爆発若しくは爆風又は他の種類の鈍的力による外傷によって引き起こされる頭部への損傷を受けた可能性があった後である、項目１１６〜１２７のいずれか１項の方法。
項目１２９：前記生体サンプルが得られたのが、前記対象者が、化学薬品、毒物又は化学薬品と毒物の組み合わせを摂取したか、それらに曝露された後である、項目１１６〜１２７のいずれか１項の方法。
項目１３０：前記化学薬品若しくは毒物が火、カビ、アスベスト、農薬、殺虫剤、有機溶媒、塗料、接着剤、ガス、有機金属、乱用薬物又はこれらの一又は複数の組み合わせである、項目１２９の方法。
項目１３１：前記生体サンプルが、自己免疫疾患、代謝障害、脳腫瘍、低酸素症、ウィルス、髄膜炎、水頭症又はそれらの組み合わせを患う対象者から得られる、項目１１６〜１２７のいずれか１項の方法。
項目１３２：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目１１６〜１３１のいずれか１項の方法。
項目１３３：前記外傷性脳損傷が軽度外傷性脳損傷である、項目１１６〜１３２のいずれか１項の方法。
項目１３４：前記接触を同時に行う、項目１１６〜１３３のいずれか１項の方法。
項目１３５：前記接触を順次に行う、項目１１６〜１３４のいずれか１項の方法。
項目１３６：状況が、単一時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量を測定することによって評価される、項目１１６〜１３５のいずれか１項の方法。
項目１３７：状況が、モニタリングを行ってＵＣＨ−Ｌ１のレベル若しくは量を測定することによって評価される、項目１１６〜１３６のいずれか１項の方法。
項目１３８：前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１１６〜１３７のいずれか１項の方法。
項目１３９：前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１１６〜１３７のいずれか１項の方法。
項目１４０：前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、項目１１６〜１４０のいずれか１項の方法。
項目１４１：前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、項目１１６〜１４０のいずれか１項の方法。
項目１４２：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目１１６〜１４１のいずれか１項の方法。
項目１４３：対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第１の特異的結合メンバー又は前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーの少なくとも一つが検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す工程とを含み、
当該方法が、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要としない方法。
項目１４４：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目１４３の方法。
項目１４５：対象者からの生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の測定方法であって、
（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、
（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
（１）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの検出抗体と接触させること、及び
（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めることを含み、当該方法を用いて、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１４６：対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも一つの生物マーカーを検出する工程を含み、生物マーカーの少なくとも一つがＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１４７：対象者におけるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程とを含み、
当該方法を用いて、２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１４８：ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を測定する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と、
ｃ）検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、
前記アッセイが、２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中の２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を求めることができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１４９：前記方法を、前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に外傷性脳損傷の尺度として行って、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができるようにする、項目１４３、１４６及び１４７のいずれか１項の方法。
項目１５０：前記方法を行って、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができるようにする、項目１４５及び１４８の方法。
項目１５１：前記方法を、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行う、項目１４３〜１４７のいずれか１項の方法。
項目１５２：当該方法を用いて、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約７５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約９０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができる、項目１４３〜１５１のいずれか１項の方法。
項目１５３：前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー又は少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーのいずれか、前記検出可能な標識を含まない方が固体支持体上に固定化されている、項目１４３、１４７又は１４８のいずれか１項の方法。
項目１５４：ＵＣＨ−Ｌ１を一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、項目１４３〜１５３のいずれか１項の方法。
項目１５５：前記生体サンプルが希釈を必要としない、項目１４５〜１５４のいずれか１項の方法。
項目１５６：前記生体サンプルが全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択される、項目１４３〜１５５のいずれか１項の方法。
項目１５７：前記方法を約５〜約２０分以内に行う、項目１４３〜１５６のいずれか１項の方法。
項目１５８：前記方法を約１５分以内に行う、項目１４３〜１５７のいずれか１項の方法。
項目１５９：前記生体サンプルが約１〜約２５マイクロリットルである、項目１４３〜１５８のいずれか１項の方法。
項目１６０：前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１４３〜１５９のいずれか１項の方法。
項目１６１：前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１４３〜１５９のいずれか１項の方法。
項目１６２：前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、項目１４３〜１５９のいずれか１項の方法。
項目１６３：前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、項目１４３〜１５９のいずれか１項の方法。
項目１６４：対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価する方法であって、
ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する。］；及び（ｉｉ）少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する。］と接触させることにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことにより、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができ、及び（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２のシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことにより、前記第２の検出可能な標識からの第２のシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、
当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる方法。
項目１６５：頭部への損傷を受けた可能性がある対象者からの生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、
（ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること、
（ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
（１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＧＦＡＰ上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの検出抗体、及び
（２）（ｉ）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）検出可能な標識を含み、前記少なくとも一つの捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの検出抗体と接触させること、及び
（ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体及び前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めることを含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１を求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１６６：対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価する方法であって、
前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出する工程を含み、前記生物マーカーの少なくとも二つがＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１６７：ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価する方法であって、
ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する］；及び（ｉｉ）少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの前記第４の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する］と接触させることにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの前記第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを評価する工程であって、ここで、（ｉ）前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことから、前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができ、及び（ｉｉ）前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示すことから、前記第２の検出可能な標識からの第２の検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み、
当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１６８：ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を測定する方法であって、
ａ）生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＧＦＡＰに結合する］；及び（ｉｉ）少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第４の特異的結合メンバー［前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合する］と接触させることにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体及び前記少なくとも一つの第３の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第４の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する工程であって、ここで、前記第２の特異的結合メンバー及び前記第４の特異的結合メンバーが、それぞれ第１の検出可能な標識及び第２の検出可能な標識を含む工程と；
ｂ）前記一又は複数の第１及び第２の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と；
ｃ）（ｉ）サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示す前記第１の検出可能な標識からの前記第１の検出可能なシグナルの量、及び（ｉｉ）前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、それによって、前記第１の検出可能な標識からの第１の検出可能なシグナルの量及び前記第２の検出可能な標識からの前記第２の検出可能なシグナルの量をそれぞれ用いて、前記対象者のＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１状況を評価することができる工程とを含み；
当該アッセイが、約２０マイクロリットルの体積の試験サンプル中の５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰの量及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１の量を求めることができ、当該アッセイは５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である方法。
項目１６９：前記生体サンプルが約１〜約２５マイクロリットル以下である、項目１６４〜１６８の方法。
項目１７０：前記第１の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目１６４〜１６９の方法。
項目１７１：前記第２の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目１６４〜１７０の方法。
項目１７２：前記第３の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている、項目１６４〜１７１の方法。
項目１７３：前記第４の特異的結合メンバーが固体支持体に固定化されている、項目１６４〜１７２の方法。
項目１７４：前記生体サンプルが希釈されているか希釈されていない、項目１６４〜１７３の方法。
項目１７５：前記生体サンプルが全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル又は血漿サンプルである、項目１６４〜１７４の方法。
項目１７６：前記方法を約５〜約２０分で行う、項目１６４〜１７５の方法。
項目１７７：前記方法を約１５分以内に行う、項目１６４〜１７６の方法。
項目１７８：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目１６４〜１７７のいずれか１項の方法。
項目１７９：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目１４５〜１６３及び１７０〜１７８のいずれか１項の方法。
項目１８０：対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
（ａ）ヒト対象者から得られた生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、
（１）固体支持体上に固定化されており、ヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び
（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないヒトＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して、少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体を形成する少なくとも一つの第１の検出抗体と接触させる工程と
［前記少なくとも一つの捕捉抗体及び少なくとも一つの検出抗体は単一特異性抗体であり、適宜にモノクローナル抗体である］、
（ｂ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原抗原−少なくとも一つの検出抗体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルを検出する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在は、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と、
（ｃ）検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す工程とを含み、
当該方法が、約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される方法。
項目１８１：前記方法を、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行う、項目１８０の方法。
項目１８２：グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を測定する方法であって、
ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー、及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程であって、ここで、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーがそれぞれ特異的に（好ましくは異なるエピトープ）ＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーが検出可能な標識を含み、前記少なくとも一つの第１の特異的結合メンバーが固体支持体上に固定化されている工程と；
ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを検出する工程であって、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＵＣＨ−Ｌ１が前記サンプル中に存在することを示す工程と；
ｃ）検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を測定する工程であって、ここで、その量が前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す工程とを含み、
前記アッセイが、約２０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めることができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が、２０マイクロリットル未満の体積の試験サンプル中で、前記ダイナミックレンジで達成される方法。
項目１８３：前記方法を、対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある場合に対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価するために行い、工程（ｃ）で測定された前記検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量を用いて、前記対象者のＵＣＨ−Ｌ１状況を外傷性脳損傷の尺度として評価することができる、項目１８０又は１８２の方法。
項目１８４：ＵＣＨ−Ｌ１を一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、項目１８０〜１８３のいずれか１項の方法。
項目１８５：前記生体サンプルが希釈を必要としない、項目１８０〜１８４のいずれか１項の方法。
項目１８６：前記生体サンプルが全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択される、項目１８０〜１８５のいずれか１項の方法。
項目１８７：前記方法を約５〜約２０分以内に行う、項目１８０〜１８６のいずれか１項の方法。
項目１８８：前記方法を約１０分以内で行う、項目１８０〜１８７のいずれか１項の方法。
項目１８９：前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、項目１８０〜１８８のいずれか１項の方法。
項目１９０：前記接触を同時に行う、項目１８０〜１８９のいずれか１項の方法。
項目１９１：前記接触を順次に行う、項目１８０〜１９０のいずれか１項の方法。
項目１９２：前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１８０〜１９１のいずれか１項の方法。
項目１９３：前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、項目１８０〜１９１のいずれか１項の方法。
項目１９４：前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、項目１８０〜１９３のいずれか１項の方法。
項目１９５：前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、項目１８０〜１９４のいずれか１項の方法。
項目１９６：当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、項目１８０〜１９５のいずれか１項の方法。

Claims (40)

  1. 対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
    前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも一つの生物マーカーを検出する工程を含み、生物マーカーの少なくとも一つがＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法は、（ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である、方法。
  2. 対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
    ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーはそれぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それにより、前記第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生する、
    ｂ）前記サンプル中に存在する前記一又は複数の第１の複合体中のＵＣＨ−Ｌ１を検出する工程と
    を含み、
    当該方法が、
    （ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；又は
    （ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は
    （ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される、方法。
  3. 対象者のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨ−Ｌ１）状況を評価する方法であって、
    ａ）前記対象者からの生体サンプルを、同時若しくは順次に、任意の順序で、少なくとも一つの第１の特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２の特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーは、それぞれ特異的にＵＣＨ−Ｌ１に結合し、それによって、前記第１の特異的結合メンバー−ＵＣＨ−Ｌ１−第２の特異的結合メンバーを含む一又は複数の第１の複合体を産生し、前記第１の特異的結合メンバー又は第２の特異的結合メンバーのいずれかは、検出可能な標識を含む、
    ｂ）一又は複数の第１の複合体からのシグナルを評価する工程と、ここで、検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が、前記サンプル中に存在するＵＣＨ−Ｌ１の量を示す、
    を含み、
    当該方法が、
    （ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、前記生体サンプルの希釈を必要とせず；又は
    （ｉｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は
    （ｉｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される、方法。
  4. 対象者からの生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１を測定する方法であって、
    （ａ）前記対象者からの生体サンプルを得ること；
    （ｂ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
    （１）ＵＣＨ−Ｌ１若しくはＵＣＨ−Ｌ１断片上のエピトープに結合して、捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（２）検出可能な標識を含み、前記捕捉抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの第１の検出抗体−複合体を形成する、少なくとも一つの第１の検出抗体
    と接触させること、及び
    （ｃ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＵＣＨ−Ｌ１抗原−少なくとも一つの第１の検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、前記生体サンプル中のＵＣＨ−Ｌ１の量若しくは濃度を求めること
    を含み、
    当該方法が、
    （ｉ）２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるに用いることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、前記ダイナミックレンジで直線性であり；又は
    （ｉｉ）約５ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬのダイナミックレンジでＵＣＨ−Ｌ１のレベルを定量することができ、１０％未満ＣＶの精度及び１０％未満の直線性からの偏差（ＤＬ）が前記ダイナミックレンジで達成される、方法。
  5. 前記方法が、前記少なくとも第１の特異的結合メンバー及び前記少なくとも第２の特異的結合メンバーによって結合されていないエピトープに結合する少なくとも一つの第３の特異的結合メンバーをさらに含み、前記第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー及び第３の特異的結合メンバーの少なくとも二つが、検出可能な標識を含む、請求項３に記載の方法。
  6. 前記少なくとも一つの特異的結合メンバー、少なくとも第２の特異的結合メンバー及び少なくとも第３の特異的結合メンバーが、単一特異性抗体である、請求項５に記載の方法。
  7. 前記方法が、前記捕捉抗体及び前記第１の検出抗体によって結合されていないＵＣＨ−Ｌ１上のエピトープに結合し、検出可能な標識を含む、少なくとも一つの第２の検出抗体をさらに含む、請求項４に記載の方法。
  8. 前記少なくとも一つの捕捉抗体、少なくとも一つの検出抗体及び少なくとも第２の検出抗体が、単一特異性抗体である、請求項７に記載の方法。
  9. 前記第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーのいずれかであって、前記検出可能な標識を含まないメンバーが、固体支持体上に固定化されている、請求項３、５又は６のいずれか１項に記載の方法。
  10. ＵＣＨ−Ｌ１を一又は複数の他の生物マーカーとともに評価する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
  11. ＵＣＨ−Ｌ１を前記対象者のグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）状況とともに評価し、前記方法が、
    前記対象者からの生体サンプル中の少なくとも二つの生物マーカーを検出する工程を含み、前記生物マーカーの少なくとも二つが、ＧＦＡＰ及びＵＣＨ−Ｌ１であり、当該方法が、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、（ｉｉｉ）そのダイナミックレンジにおいて直線性である、請求項１に記載の方法。
  12. 前記ＵＣＨ−Ｌ１をイムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出する、請求項１、２又は１１に記載の方法。
  13. 前記ＧＦＡＰをイムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出する、請求項１１又は１２に記載の方法。
  14. 前記方法が、対象者のＧＦＡＰ状況を評価することを含み、当該方法が、
    ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが、それぞれ特異的にＧＦＡＰに結合し、それにより、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生する、
    ｂ）前記サンプル中の前記一又は複数の第２の複合体中のＧＦＡＰを検出する工程と
    をさらに含み、
    当該方法が、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる、請求項２に記載の方法。
  15. 前記方法は、対象者のＧＦＡＰ状況を評価することをさらに含み、当該方法が、
    ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、（ｉ）少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーと接触させる工程と、ここで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーがそれぞれ特異的にＧＦＡＰに結合することで、前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー−ＧＦＡＰ−少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーを含む一又は複数の第２の複合体を産生し、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが第２の検出可能な標識を含む、
    ｂ）前記一又は複数の第２の複合体からのシグナルを評価する工程と、ここで、（ｉ）前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの検出可能な標識からの検出可能なシグナルの存在が、ＧＦＡＰがサンプル中に存在することを示し、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの検出可能な標識からの検出可能なシグナルの量が、サンプル中に存在するＧＦＡＰの量を示すことから、前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーからの前記検出可能な標識からの前記検出可能なシグナルの存在及び／又は量を用いて、前記対象者のＧＦＡＰ状況を評価することができる、
    をさらに含み、
    当該方法が、（ｉ）５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＧＦＡＰのレベル及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下のＵＣＨ−Ｌ１のレベルを求めるのに用いることができ、（ｉｉ）生体サンプルの希釈を必要とせず、（ｉｉｉ）ポイント・オブ・ケア機器を用いて行われる、請求項３、５、６、９又は１４に記載の方法。
  16. 前記方法は、対象者からの生体サンプル中のＧＦＡＰを測定することをさらに含み、
    （ａ）前記生体サンプルを、同時に又は順次に、任意の順序で、
    （１）（ｉ）ＧＦＡＰ若しくはＧＦＡＰ断片上のエピトープに結合して少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原複合体を形成する少なくとも一つの捕捉抗体、及び（ｉｉ）少なくとも一つの検出可能な標識を含み、捕捉抗体によって結合していないＧＦＡＰ上のエピトープに結合してＧＦＡＰ抗原−検出抗体複合体を形成する検出抗体と接触させる工程、及び
    （ｂ）前記少なくとも一つの捕捉抗体−ＧＦＡＰ抗原−少なくとも一つの検出抗体複合体中の前記検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて前記生体サンプル中のＧＦＡＰの量若しくは濃度を求める工程と
    をさらに含み、当該方法を用いて、５０，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＧＦＡＰ及び２５，０００ｐｇ／ｍＬ以下の量でのＵＣＨ−Ｌ１を求めることができ、当該方法が５ｌｏｇのダイナミックレンジを有し、当該ダイナミックレンジにおいて直線性である、請求項４、７、８又は１５に記載の方法。
  17. 前記方法が、約１６ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、及び約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約５０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＧＦＡＰのレベルを検出する、請求項１４、１５又は１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約３５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２５ｐｇ／ｍＬ〜約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ〜約１５，０００ｐｇ／ｍＬ及び約１７５ｐｇ／ｍＬ〜約１０，０００ｐｇ／ｍＬからなる群から選択されるＵＣＨ−Ｌ１のレベルを検出する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記接触を同時に行う、請求項３、４、１４、１５又は１６のいずれか１項に記載の方法。
  20. 前記接触を順次に行う、請求項３、４、１４、１５又は１６のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記少なくとも一つの捕捉抗体が、固体支持体上に固定化されている、請求項４、８又は１６のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記方法を約５〜約２０分以内に行う、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記方法を約１５分以内に行う、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記生体サンプルが、全血サンプル、血清サンプル、脳脊髄液サンプル及び血漿サンプルからなる群から選択される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記方法を、外傷性脳損傷の発生又は外傷性脳損傷のないことを確認するために行う、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記外傷性脳損傷が、軽度外傷性脳損傷である、請求項２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 状況が、単一時間点でのＵＣＨ−Ｌ１のレベル又は量を測定することによって評価される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  28. 状況が、モニタリングを行ってＵＣＨ−Ｌ１のレベル又は量を測定することによって評価される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  29. 前記方法を、前記対象者の臨床状態、前記対象者の臨床検査値、前記対象者の軽度、中等度若しくは重度ＴＢＩを患っているという分類、前記対象者の低若しくは高ＵＣＨ−Ｌ１のレベルの表示、及び前記対象者が頭部への損傷を受けた可能性がある事象のタイミングからなる群から選択される因子とは無関係に、対象者について行うことができる、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記方法を、２０マイクロリットル未満の体積の前記生体サンプルを用いて行う、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記生体サンプルが希釈を必要としない、請求項１、４、７、又は８のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記方法が、約１０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記方法が、約２０ｐｇ／ｍＬの検出下限（ＬｏＤ）を有する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記方法が、拡大された検出ウィンドウを提供する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが、固体支持体上に固定化されている、請求項１４に記載の方法。
  36. 少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが固体支持体に固定化されている、請求項１４に記載の方法。
  37. 前記生体サンプルが、希釈されている又は未希釈である、請求項２４に記載の方法。
  38. 前記少なくとも一つの第１のＧＦＡＰ特異的結合メンバー及び前記少なくとも一つの第２のＧＦＡＰ特異的結合メンバーが単一特異性抗体である、請求項１４〜１５に記載の方法。
  39. 当該方法を、ポイント・オブ・ケア機器を用いて行う、請求項１〜１３及び１６〜３８に記載の方法。
  40. 前記ＧＦＡＰをイムノアッセイ又は単分子検出アッセイによって検出する、請求項１４に記載の方法。
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