JP2019041702A - 水溶性食物繊維組成物の製造方法、飲食品の製造方法、及び新規微生物 - Google Patents
水溶性食物繊維組成物の製造方法、飲食品の製造方法、及び新規微生物 Download PDFInfo
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Abstract
Description
バチルス スミシー2701株(受領番号AP−02541)。
ゲオバチルス サーモグルコシダシウス65801株(受領番号AP−02533)。
まず、サンプル1 gを精密に測り、0.08 mol/lリン酸緩衝液50 mlを加え、pH6.0±0.5であることを確認する。これに熱安定性α-アミラーゼ(Sigma社:EC3.2.1.1 Bacillus licheniformis由来)溶液0.1 mlを加え、沸騰水中に入れ、5分ごとに撹拌しながら30分間放置する。冷却後、水酸化ナトリウム溶液(1.1gの水酸化ナトリウムを水に溶解し、100 mlにメスアップ)を加えてpHを7.5±0.1に調整する。プロテアーゼ(Sigma社:EC.3.4.21.62 Bacillus licheniformis由来)溶液0.1 mlを加えて、60±2℃の水浴中で振とうしながら30分間反応させる。冷却後、0.325 mol/l塩酸を加え、pHを4.3±0.3に調整する。アミログルコシダーゼ(Sigma社:EC3.2.13 Aspergillus niger由来)溶液0.1 mlを加え、60±2℃の水浴中で振とうしながら30分間反応させる。以上の酵素処理終了後、直ちに沸騰水浴中で10分間加熱した後、冷却し、グリセリン溶液(10gのグリセリンを水と混合し、100 mlにメスアップ)を内部標準物質として5 ml加え、水で100 mlとし酵素処理液とする。
検出器:示差屈折計
カラム:ULTRON PS-80N(φ8.0×300 mm、島津ジーエルシー)を二本連結
カラム温度:80℃
移動相:純水
流速:0.5 ml/分
(上記式中、f1はグリセリンとブドウ糖のピーク面積の感度比(0.82)である。)
様々な土壌よりサンプルを取得し、液体培養及び固体培養を行うことにより、レボグルコサン分解活性を有する菌株の分離を試みた。そのための液体培養培地としては、Yeast Nitrogen Base培地(BD社製)にレボグルコサンを固形分当たり1質量%となるように添加し、pH7.0に調整したものを用いた。また、固体培養培地としては、上記液体培養用の培地に1.5質量%Agarを添加して調製した固体培養プレートを用いた。培養温度60℃で生育する菌株の分離を試みた結果、特に良い生育を示す菌株が3株分離された。この3菌株をそれぞれ1501株、2701株、及び65801株と命名した。
試験例1と同様の液体培地を用いて、1501株及び65801株については培養温度60℃にて、2701株については培養温度50℃にて、それぞれ振とう培養(100rpm)を行った。菌株の生育は培養液の濁度(OD660)で確認した(図2)。また、レボグルコサンの減少は薄層クロマトグラフィー(TLC)にて確認した。なお、TLC条件としては、1−ブタノール:エタノール:水(5:3:2/v:v:v(容量比))を用いて展開し、プレートをよく乾燥させた後、ナフトレゾシノール試薬を噴霧して、120℃で5分間加熱することにより、レボグルコサンを検出した(図3)。
試験例1及び試験例2においてレボグルコサンを資化(分解)することが確認された3菌株について、16S rDNA塩基配列に基づく分子系統解析を行った。
触媒として活性炭の存在下にグルコースシラップを加熱処理することで得られた、難消化性グルカン(商品名「フィットファイバー#80」、日本食品化工株式会社製)を使用し、これを更に糖質分解酵素(α−アミラーゼ及びアミログルコシダーゼ)で処理したうえ、固形分濃度10質量%に希釈し、pHを約7.0に調整して、資化処理に供する対象物とした。
カラム: Ultron PS-80N・L (φ8.0 mm×500 mm)
カラム温度:80℃
流速:0.3mL/min
移動相:水
検出器: Refractive index
注入量:10μL
糖類ゼロ設計の飲料試験を行うため、アセスルファムKは砂糖の200倍、スクラロースは砂糖の600倍の甘味として計算し、飲料(水溶液)全体の甘味度が9.6となるよう両者を質量比1:1で水に溶解し、水溶性食物繊維組成物および香料を添加し、飲料(水溶液)を調製した。水溶性食物繊維組成物は、試験例4で得られた資化処理物をフィルターろ過、脱色および脱塩処理したものを用い、食物繊維組含量が固形分あたり1.5 g/100 mlとなるよう添加した。香料はグレープフルーツフレーバーを用いた。その結果、資化処理物(水溶性食物繊維組成物)を添加することで、水溶性食物繊維組成物未添加区よりもコクやボディ感といった味質が改善され、高甘味度甘味料特有の嫌味も低減することができた。
バチルス スミシー2701株(受託番号 NITE P−02541)。
ゲオバチルス サーモグルコシダシウス65801株(受託番号 NITE P−02533)。
Claims (8)
- 糖加熱縮合物をバチルス(Bacillus)属細菌又はゲオバチルス(Geobacillus)属細菌に資化させる工程を含む、水溶性食物繊維組成物の製造方法。
- 前記バチルス属細菌がバチルス スミシー(Bacillus smithii)であり、又は、前記ゲオバチルス属細菌がゲオバチルス サーモグルコシダシウス(Geobacillus thermoglucosidasius)である請求項1記載の水溶性食物繊維組成物の製造方法。
- 前記バチルス属細菌がバチルス スミシー1501株(受領番号AP−02542)又はバチルス スミシー2701株(受領番号AP−02541)であり、又は、前記ゲオバチルス属細菌がゲオバチルス サーモグルコシダシウス65801株(受領番号AP−02533)である請求項1記載の水溶性食物繊維組成物の製造方法。
- 前記バチルス(Bacillus)属細菌又は前記ゲオバチルス(Geobacillus)属細菌による前記糖加熱縮合物の資化を40℃〜95℃の範囲に属する温度環境で行う請求項1〜3のいずれか1項に記載の水溶性食物繊維組成物の製造方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法で得られた水溶性食物繊維組成物を飲食品原料に添加する工程を含む、飲食品の製造方法。
- バチルス スミシー1501株(受領番号AP−02542)。
- バチルス スミシー2701株(受領番号AP−02541)。
- ゲオバチルス サーモグルコシダシウス65801株(受領番号AP−02533)。
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CN111154705B (zh) * | 2020-01-07 | 2021-06-29 | 中国科学院微生物研究所 | 热葡萄糖苷酶地芽孢杆菌工程菌及其构建方法及应用 |
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