JP2018516858A5 - - Google Patents

Description

本発明はまた、生体液中のＳ-アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）またはＳ-アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）を検出するための方法を提供する。この方法は以下のステップを含む：（ａ）以下の成分の準備：（ｉ）ＳＡＭ、ＳＡＭ類似体またはＳＡＨのバイオコンジュゲート；（ｉｉ）（ｉ）のバイオコンジュゲートの中のトレーサーと特異的に結合するリガンドを有する、ドナーとしてのユーロピウム、テルビウムクリプテートまたは他のフルオロフォア；（ｉｉｉ）励起スペクトルがドナーの放射スペクトルと重複し、ＳＡＭまたはＳＡＨへの特異的な抗体を標識されたアクセプター蛍光色素；（ｂ）成分（ｉ）〜（ｉｉｉ）、および前記ＳＡＭまたはＳＡＨを含有する生体液の混合；及び（ｃ）混合物中のドナーおよびアクセプターの蛍光の分光測定。

Claims (23)

1. 下記式を有する化合物で、
   式中、ＸおよびＹが、窒素原子と共有結合し得る多官能基リンカーであり、Ｚがトレーサー分子であり、Ａが、下記構造の縮合環系で、
   式中、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨがＮ原子であり、
   ｎ＝３-１００であり、
   ＨＮ−Ａ結合は、Ａの前記縮合環系における６員ヘテロ環中の炭素原子と、窒素原子との結合を表し、
   Ｂが、１個の酸素原子を有しかつ１個以上のヒドロキシル基を有する５員ヘテロ環であり、前記Ｂは、Ａの前記縮合環系における５員ヘテロ環中の窒素原子に結合し、
   Ｃが、下記構造式を有する部分であり、
   式中、Ｊが、ＳおよびＮの原子からなる群から選択され、ＬがＣ₁-Ｃ₅アルキル基であり、ただしＪが硫黄原子であり、ＬがＣ₁-Ｃ₅アルキル基である場合、硫黄原子が正に荷電しており、ｍ＝０または１であり、ＫがＨ、ＮＨ₂、または、所望により下記構造の官能基であり、
   式中、ＸおよびＹが、窒素原子と共有結合し得る多官能基リンカーであり、Ｚがトレーサー分子であり、さらに、Ｋが、
   である場合には、Ａに結合している基がＮＨ ₂ のみである、化合物。
2. 式Ｉで表される構造を有する化合物であって、
   式中、縮合環系中のＡ、Ｂ、ＣおよびＤがＮ原子であり、ｎ＝３-１００である、化合物。
3. 式ＩＩで表される構造を有する化合物であって、
   式中、縮合環系中のＡ、Ｂ、ＣおよびＤがＮ原子であり、ｎ＝３-１００である、化合物。
4. 式ＩＩＩで表される構造を有する化合物であって、
   式中、縮合環系中のＡ、Ｂ、ＣおよびＤがＮ原子であり、ｎ＝３-１００である、化合物。
5. 式ＩＶで表される構造を有する化合物であって、
   式中、縮合環系中のＡ、Ｂ、ＣおよびＤがＮ原子であり、ｎ＝３-１００である、化合物。
6. 式Ｖで表される構造を有する化合物であって、
   式中、縮合環系中のＡ、Ｂ、ＣおよびＤがＮ原子であり、ｎ＝３-１００である、化合物。
7. 式ＶＩで表される構造を有する化合物であって、
   式中、縮合環系中のＡ、Ｂ、ＣおよびＤがＮ原子であり、ｎ＝３-１００である、化合物。
8. 式ＶＩＩで表される構造を有する化合物であって、
   式中、ｎ＝３-１００である、化合物。
9. 式ＶＩＩＩで表される構造を有する化合物であって、
   式中、ｎ＝３-１００である、化合物。
10. 式ＩＸで表される構造を有する化合物であって、
    式中、ｎ＝３-１００である、化合物。
11. 式Ｘで表される構造を有する化合物であって、
    式中、ｎ＝３-１００である、化合物。
12. 以下からなる群から選択された化合物：
    （Ｃ１）
    （２Ｒ）-４-（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）-５-（６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル）-３，４-ジヒドロキシテトラヒドロ-フラン-２-イル）メチル）チオ）-２-（６-（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）-６-（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）-６-（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）-６-（（３Ｒ，５Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）-１２，１４-ジヒドロキシ-１０，１３-ジメチル-１７-（５-オキソ-２，５-ジヒドロフラン-３-イル）ヘキサデカヒドロ-１Ｈ-シクロペンタ［ａ］フェナントレン-３-イル）-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-３-イル）オキシ）-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-３-イル）オキシ）-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-３-イル）オキシ）ヘキサンアミド）ブタン酸，
    
    （Ｃ２）
    （Ｓ）-４-（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）-５-（６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル）-３，４-ジヒドロキシテトラヒドロフラン-２-イル）メチル）チオ）-２-（６-（５-（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＲ）-２-オキソヘキサヒドロ-１Ｈ-チエノ［３，４-ｄ］イミダゾール-６-イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）ブタン酸、
    
    （Ｃ３）
    ４-（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）-３，４-ジヒドロキシ-５-（６-（（Ｅ）-（（Ｚ）-７-（（５-（５-（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＲ）-２-オキソヘキサヒドロ-１Ｈ-チエノ［３，４-ｄ］イミダゾール-６-イル）ペンタンアミド）ペンチル）イミノ）ヘプチリデン）アミノ）-９Ｈ-プリン-９-イル）テトラヒドロフラン-２-イル）メチル）（メチル）アミノ）ブタン酸、
    
    （Ｃ４）
    （Ｓ）-４-（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）-５-（６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル）-３，４-ジヒドロキシテトラヒドロフラン-２-イル）メチル）チオ）-２-（（Ｅ）-（（Ｚ）-７-（（５-（５-（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）-２-オキソヘキサヒドロ-１Ｈ-チエノ［３，４-ｄ］イミダゾール-６-イル）ペンタンアミド）ペンチル）イミノ）ヘプチリデン）アミノ）ブタン酸、
    
    （Ｃ５）
    ４-（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）-３，４-ジヒドロキシ-５-（６-（６-（５-（（３ａＲ，６Ｓ，６ａＳ）-２-オキソヘキサヒドロ-１Ｈ-チエノ［３，４-ｄ］イミダゾール-６-イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）-９Ｈ-プリン-９-イル）テトラヒドロフラン-２-イル）メチル）（メチル）アミノ）ブタン酸、
    
    ここで、ＨＲＰは、ホースラディッシュペルオキシダーゼを表す、
    
13. 請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を用いたイムノアッセイ。
14. ＳＡＭまたはＳＡＨを検出するための方法であって、以下のステップ：反応混合物中で、ＳＡＨまたはＳＡＭを含む疑いのある試料を、ＳＡＭまたはＳＡＨに結合する抗体、および請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を含む標識コンジュゲートと混合するステップ；前記ＳＡＭまたはＳＡＨおよび前記抗体を含む複合体の存在または非存在を検出するステップ；を含む、前記複合体の量または存在が前記試料中のＳＡＭまたはＳＡＨの存在を示す方法。
15. 請求項１３に記載の方法であって、
    （ａ）以下の成分：
    （ｉ）ＳＡＭ、ＳＡＭ類似体またはＳＡＨのバイオコンジュゲート；
    （ｉｉ）（ｉ）のバイオコンジュゲートの中のトレーサーと特異的に結合するリガンドを有する、ドナーとするユーロピウム、テルビウムクリプテートまたは他のフルオロフォア；
    （ｉｉｉ）励起スペクトルがドナーの放出スペクトルと重複し、ＳＡＭまたはＳＡＨの特異的な抗体で標識された、アクセプター蛍光色素；
    を準備するステップ；
    （ｂ）前記成分（ｉ）〜（ｉｉｉ）、および前記ＳＡＭまたはＳＡＨを含む生物学的液体を混合するステップ；そして
    （ｃ）混合物中のドナーの蛍光およびアクセプターからの蛍光を分光測定するステップ；
    を含む方法。
16. 請求項１３に記載の方法であって、さらに以下のステップ：
    （ａ）以下の成分：
    （ｉ）ＳＡＭまたはＳＡＨの特異的な抗体で標識された、ドナーとする、ユーロピウム、テルビウムクリプテートまたは他のフルオロフォア；
    （ｉｉ）励起スペクトルがドナーの放出スペクトルと重複するアクセプター蛍光色素を含む、ＳＡＭ、ＳＡＭ類似体またはＳＡＨのバイオコンジュゲート；
    を準備するステップ；
    （ｂ）前記成分（ｉ）〜（ｉｉ）、および前記ＳＡＭまたはＳＡＨを含む生物学的液体を混合するステップ；そして
    （ｃ）混合物中のドナーの蛍光およびアクセプターからの蛍光を分光測定するステップ；
    を含む方法。
17. 請求項１３に記載の方法であって、さらに以下のステップ：
    （ａ）以下の成分：
    （ｉ）ルシフェラーゼに標識された、ＳＡＭ、ＳＡＭ類似体またはＳＡＨのバイオコンジュゲート；
    （ｉｉ）対応する基質またはルシフェリン；
    （ｉｉｉ）ＳＡＭまたはＳＡＨの特異的な抗体で標識されたアクセプター蛍光色素で、その励起スペクトルが、（ｉ）と（ｉｉ）の反応による発光と重なり合う、アクセプター蛍光色素；
    を準備するステップ；
    （ｂ）前記成分（ｉ）〜（ｉｉｉ）、および前記ＳＡＭまたはＳＡＨを含む生物学的液体を混合するステップ；そして
    （ｃ）混合物中の前記基質またはルシフェリンの生物発光およびアクセプターからの蛍光を分光測定するステップ；
    を含む方法。
18. 蛍光共鳴エネルギー移動技術に使用される蛍光色素に結合した、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
19. 前記蛍光色素が、ドナー標識としての発光性ランタン族キレート、または、前記ランタン族キレートに対するアクセプター標識である、請求項１８に記載の化合物。
20. ルシフェラーゼに結合した、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
21. Ｘ（ＣＨ ₂ ） _n Ｙの部分が、下記構造からなる群から選択されたいずれか１つの構造である、請求項１に記載の化合物。
    式中、ｎ＝３-１００である。
22. Ｘ（ＣＨ ₂ ） _n Ｙの部分が、オキシエチレン基およびアジド基を含まない、請求項１に記載の化合物。
23. Ｚが、ビオチン、ジゴキシンまたはジゴキシゲニンである、請求項１、２１および２２のいずれか１項に記載の化合物。