JP2018514624A5

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Publication number: JP2018514624A5
Application number: JP2017556734A
Authority: JP
Filing date: 2016-04-25
Publication date: 2020-08-20
Anticipated expiration: 2036-04-25

Description

好ましい態様において、本発明は、１以上の血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ多糖類を含む複雑な肺炎球菌細胞溶解物または遠心分離液からタンパク質不純物を低減または除去するための方法に関する。

本発明において述べる方法を用いて精製した多糖類は、化粧品、食品、医薬および生物医薬産業など、種々の用途に使用できる。
本明細書中で用いる用語“実質的に純粋な形態”は、ＳｉＯ_２曝露前の溶解物または遠心分離液中のタンパク質の濃度と比較して少なくとも３０％のタンパク質が除去された溶解物または遠心分離液の多糖類を表わす。細胞溶解物または遠心分離液中のタンパク質濃度を定量するための方法は当技術分野で周知であり、たとえばブラッドフォードアッセイ(Bradford assay)、ＢＣＡアッセイ、ローリーアッセイ(Lowry assay)などの生化学的方法、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分析、クロマトグラフィー、および電気泳動などの分析法が含まれる(参照：たとえば、Deutscher, M. P. (ed.), Guide to Protein Purification, San Diego: Academic Press, Inc. (1990))。

本発明には、以下の態様も含まれる。
態様１
多糖類、タンパク質、核酸、細胞壁成分および他の不純物を含む溶液をＳｉＯ _２に曝露または接触させ、そして純粋な形態の多糖類を単離することを含む、実質的に純粋な形態の多糖類を単離するための改良法。
態様２
多糖類の供給源が細菌、酵母、糸状菌、藻類または植物細胞からのものである、態様１に記載の多糖類を単離するための方法。
態様３
多糖類の供給源が、髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)、肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)、ｂ型インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)、およびチフス菌(Salmonella typhi)から選択される細菌からのものである、態様２に記載の多糖類を単離するための方法。
態様４
ＳｉＯ _２の粒子サイズが０．０１μｍから２００μｍまでの範囲、好ましくは３μｍ〜４０μｍの範囲である、態様１に記載の多糖類を単離するための方法。
態様５
ＳｉＯ _２の量が０．５から２０％（ｗ／ｖ）までの範囲である、態様１に記載の多糖類を単離するための方法。
態様６
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の溶解物または遠心分離液が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択される１以上の血清型を含む、態様３に記載の肺炎球菌から多糖類を単離するための方法。
態様７
多糖類および他の不純物を含む溶液の、ＳｉＯ _２への曝露または接触が、１５℃から６０℃までの範囲の温度で１０分〜１６時間の期間行なわれる、態様１に記載の多糖類を単離するための方法。
態様８
ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７から選択されるキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、態様１の記載に従って調製した莢膜多糖類をを含む、免疫原組成物。
態様９
純粋な形態の多糖類を単離するための、下記の工程を含む改良法：
ｉ）多糖類、タンパク質、核酸、細胞壁成分および他の不純物を含む多糖類溶液を調製する、
ｉｉ）水または緩衝液中におけるＳｉＯ _２の懸濁液を調製する、
ｉｉｉ）ＳｉＯ _２の懸濁液を工程（ｉ）の多糖類溶液に添加する、そして
ｉｖ）純粋な形態の多糖類溶液を単離する。
態様１０
ＳｉＯ _２のサイズが０．０１μｍから２００μｍまでの範囲、好ましくは３μｍ〜４０μｍの範囲である、態様９に記載の多糖類を単離するための方法。
態様１１
ＳｉＯ _２の量が０．５から２０％（ｗ／ｖ）までの範囲である、態様９に記載の多糖類を単離するための方法。
態様１２
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の溶解物または遠心分離液が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択される１以上の血清型を含む、態様９に記載の肺炎球菌から多糖類を単離するための方法。
態様１３
多糖類および他の不純物を含む溶液の、ＳｉＯ _２への接触または曝露が、１５℃から６０℃までの範囲の温度で１０分〜１６時間の期間行なわれる、態様９に記載の多糖類を単離するための方法。
態様１４
純粋な形態の肺炎球菌莢膜多糖類を単離するための、下記の工程を含む方法：
ｉ）肺炎球菌莢膜の多糖類、タンパク質、核酸、細胞壁成分および他の不純物を含む多糖類溶液を調製し、その際、溶液のｐＨを３．０から９．０までの範囲に維持する、
ｉｉ）場合により他の試薬を添加する、
ｉｉｉ）場合により溶液を活性炭で処理する、
ｉｖ）水または緩衝液中における、０．０１μｍから２００μｍまでの範囲の粒子を有するＳｉＯ _２の懸濁液を調製する、
ｖ）ＳｉＯ _２の懸濁液を工程（ｉ）の多糖類溶液に、１５℃〜６０℃の範囲の温度で１０分〜２０時間の期間、添加する、
ｖｉ）場合により溶液を活性炭で処理する、
ｖｉｉ）場合により他の試薬を添加する、そして
ｖｉｉ）純粋な形態の多糖類溶液を単離する。
態様１５
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の溶解物または遠心分離液が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択される１以上の血清型を含む、態様１４に記載の肺炎球菌から多糖類を単離するための方法。
態様１６
多糖類および他の不純物を含む溶液の、ＳｉＯ _２への接触または曝露が、１５℃から６０℃までの範囲の温度で１０分〜１６時間の期間行なわれる、態様１４に記載の多糖類を単離するための方法。
態様１７
ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７から選択されるキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、態様１４の記載に従って調製した莢膜多糖類を含む、免疫原組成物。

Claims

髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)、肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)、ｂ型インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)、およびチフス菌(Salmonella typhi)から選択される細菌からの多糖類を実質的に純粋な形態で単離するための方法であって、該方法は、多糖類、タンパク質、核酸、細胞壁成分および他の不純物を含む溶解細胞の溶液をＳｉＯ _２に曝露または接触させ、そして実質的に純粋な形態の多糖類をＳｉＯ _２から分離することを含む、方法。
ＳｉＯ_２の粒子サイズが０．０１μｍから２００μｍまでの範囲、好ましくは３μｍ〜４０μｍの範囲である、請求項１に記載の多糖類を単離するための方法。
ＳｉＯ_２の量が０．５から２０％（ｗ／ｖ）までの範囲である、請求項１に記載の多糖類を単離するための方法。
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の溶解物または遠心分離液が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択される１以上の血清型を含む、請求項１に記載の肺炎球菌から多糖類を単離するための方法。
多糖類および他の不純物を含む溶液の、ＳｉＯ_２への曝露または接触が、１５℃から６０℃までの範囲の温度で１０分〜１６時間の期間行なわれる、請求項１に記載の多糖類を単離するための方法。
ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７から選択されるキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、請求項１の記載に従って調製した莢膜多糖類を含む、免疫原組成物。
髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)、肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)、ｂ型インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)、およびチフス菌(Salmonella typhi)から選択される細菌からの多糖類を純粋な形態で単離するための、下記の工程を含む方法：
ｉ）多糖類、タンパク質、核酸、細胞壁成分および他の不純物を含む溶解細胞の溶液を調製する、
ｉｉ）水または緩衝液中におけるＳｉＯ_２の懸濁液を調製する、
ｉｉｉ）ＳｉＯ_２の懸濁液を工程（ｉ）の溶解細胞の溶液に添加する、そして
ｉｖ）純粋な形態の多糖類を単離する。
ＳｉＯ_２のサイズが０．０１μｍから２００μｍまでの範囲、好ましくは３μｍ〜４０μｍの範囲である、請求項７に記載の多糖類を単離するための方法。
ＳｉＯ_２の量が０．５から２０％（ｗ／ｖ）までの範囲である、請求項７に記載の多糖類を単離するための方法。
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の溶解物または遠心分離液が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択される１以上の血清型を含む、請求項７に記載の肺炎球菌から多糖類を単離するための方法。
多糖類および他の不純物を含む溶解細胞の溶液の、ＳｉＯ_２への接触または曝露が、１５℃から６０℃までの範囲の温度で１０分〜１６時間の期間行なわれる、請求項７に記載の多糖類を単離するための方法。
純粋な形態の肺炎球菌莢膜多糖類を単離するための、下記の工程を含む方法：
ｉ）肺炎球菌莢膜の多糖類、タンパク質、核酸、細胞壁成分および他の不純物を含む溶解細胞の溶液を調製し、その際、溶液のｐＨを３．０から９．０までの範囲に維持する、
ｉｉ）場合により他の試薬を添加する、
ｉｉｉ）場合により溶液を活性炭で処理する、
ｉｖ）水または緩衝液中における、０．０１μｍから２００μｍまでの範囲の粒子を有するＳｉＯ_２の懸濁液を調製する、
ｖ）ＳｉＯ_２の懸濁液を工程（ｉ）の多糖類溶液に、１５℃〜６０℃の範囲の温度で１０分〜２０時間の期間、添加する、
ｖｉ）場合により溶液を活性炭で処理する、
ｖｉｉ）場合により他の試薬を添加する、そして
ｖｉｉｉ）純粋な形態の多糖類を単離する。
肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)の溶解物または遠心分離液が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択される１以上の血清型を含む、請求項１２に記載の肺炎球菌から多糖類を単離するための方法。
多糖類および他の不純物を含む溶解細胞の溶液の、ＳｉＯ_２への接触または曝露が、１５℃から６０℃までの範囲の温度で１０分〜１６時間の期間行なわれる、請求項１２に記載の多糖類を単離するための方法。
ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７から選択されるキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、請求項１２の記載に従って調製した莢膜多糖類を含む、免疫原組成物。