JP2018177741A - 疲労回復用組成物及び疲労回復用加圧酵素分解物を製造する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[1].牡蠣を60℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物。
[2].酵素反応が、圧力40〜200MPa、温度30〜80℃で、1〜48時間の加圧酵素反応である[1]記載の疲労回復用組成物。
[3].酵素反応が、圧力50〜150MPa、温度40〜70℃で、3〜24時間の加圧酵素反応である[2]記載の疲労回復用組成物。
[4].酵素がプロテアーゼである[1]〜[3]のいずれかに記載の疲労回復用組成物。
[5].疲労回復用医薬組成物又は疲労回復用食品組成物である[1]〜[4]のいずれかに記載の疲労回復用組成物。
[6].牡蠣を60℃以上で加熱処理する工程と、得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる工程を含む、疲労回復用加圧酵素分解物を製造する方法。
本発明は、牡蠣を60℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物である。
加圧酵素分解物を製造する方法としては、牡蠣を60℃以上で加熱処理する工程と、得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる工程を含むものであり、上記で説明した通りである。
本発明の疲労回復用組成物は、上記牡蠣の加圧酵素分解物を有効成分として含むものであり、経口等の内服、外用等が挙げられるが、経口摂取が好ましい。その摂取量は成人一人当たり一日10〜10,000mg(固形分、以下同様)が好ましく、100〜500mgがより好ましい。組成物中の牡蠣の加圧酵素分解物の配合量は、上記摂取量となるように0.01〜99質量%の範囲から適宜選定される。摂取方法も特に限定されず、1日複数回に分けて摂取してもよい。
本発明の牡蠣の加圧酵素分解物は、後述する実施例で示された通り、ATP産生促進作用及びcGMP−PDE活性阻害作用を有するため、牡蠣の加圧酵素分解物を有効成分として含有するATP産生促進剤、cGMP−PDE活性阻害剤としても好適である。これらの剤として用いる場合も、摂取量等は上記と同じである。なお、「ATP産生促進」とは「生体のエネルギー物質であるATPの生産量を上げること」であり、「cGMP−PDE活性阻害」とは、細胞内のcGMP濃度を阻害することで、血管を弛緩させること」であり、いずれも疲労回復の指標となる。
実施品:牡蠣の加圧・酵素分解物
冷凍品の生牡蠣100kgをミンチ化し、加圧加温装置に投入し、90℃以上で20分処理し、自己消化酵素を失活させた。これにサモアーゼPC10S(天野エンザイム(株)製)0.3kgを添加し、60MPa・50℃で24時間加圧加温酵素分解処理を行った。その後、90℃以上・30分で酵素を失活させ、セライトろ過を行って、加熱処理した後噴霧乾燥して牡蠣の加圧酵素分解物を得た。
比較品:
(1)牡蠣粉末(凍結乾燥品)
冷凍品の生牡蠣100kgをミンチ化、凍結乾燥して牡蠣粉末を得た。
(2)牡蠣の加圧処理物(自己消化酵素処理)
冷凍品の生牡蠣100kgをミンチ化し、加圧加温装置に投入し、60MPa・50℃で24時間加圧加温酵素分解処理を行った。その後、90℃以上・30分で自己消化酵素を失活させ、セライトろ過を行って、加熱処理した後噴霧乾燥して牡蠣の加圧処理物を得た。
(3)カキエキスパウダー(熱水抽出)
冷凍品の生牡蠣100kgを熱水抽出し、固液分離を行って、加熱処理した後噴霧乾燥してかきエキスパウダー(熱水抽出)を得た。
<試験方法>
正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地(KGM)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.0×105cells/mLの濃度にKGMで希釈した後、コラーゲンコートした96wellプレートに1well当たり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、KGMで溶解した被験試料を各wellに100μL添加し、2時間培養した。ATP産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のATP量を測定した。すなわち、培養終了後、『「細胞の」ATP測定試薬』(東洋ビーネット社)を各wellに100μLずつ添加した。反応後、化学発光量を測定した。
ATP産生促進率(%)の計算方法は以下の通りである。
ATP産生促進率(%)=A/B×100
A:被験試料を添加した細胞での化学発光量
B:被験試料を添加しない細胞での化学発光量
PDE−GloPhosphodiesterase Assay(Promega)を用い、試験を実施した。
すなわち10容量%DMSOに溶解した被験試料5μL、酵素源として10U/wellとなるように調整したPhosphodiesterase(Type V,cGMP−Specific,Bovine,Recombinant,Spodoptera frugiperda、CALBIOCHEM、Lot.D00111100)7.5μL及び基質として20μmol/L、cGMP12.5μLを96wellプレートに加え、37℃で2時間間反応した。反応後、PDE−Glo Termination buffer 12.5μLを加え、反応を停止させた後、PDE−Glo Detection buffer 12.5μLを加え、室温で20分間静置した。Kinase−Glo reagent 50μLを加え、室温で10分間反応した後、発光を測定した。
cGMP−PDE活性阻害率(%)の計算方法は以下の通りである。
cGMP−PDE活性阻害率(%)=(C−S)/C×100
S:被験試料溶液の発光度
C:コントロール溶液(イオン交換水)の発光度
Claims (6)
- 牡蠣を60℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物。
- 酵素反応が、圧力40〜200MPa、温度30〜80℃で、1〜48時間の加圧酵素反応である請求項1記載の疲労回復用組成物。
- 酵素反応が、圧力50〜150MPa、温度40〜70℃で、3〜24時間の加圧酵素反応である請求項2記載の疲労回復用組成物。
- 酵素がプロテアーゼである請求項1〜3のいずれか1項記載の疲労回復用組成物。
- 疲労回復用医薬組成物又は疲労回復用食品組成物である請求項1〜4のいずれか1項記載の疲労回復用組成物。
- 牡蠣を60℃以上で加熱処理する工程と、得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる工程を含む、疲労回復用加圧酵素分解物を製造する方法。
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