KR102284112B1 - 서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물 및 상기 조성물의 제조 방법 - Google Patents

서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물 및 상기 조성물의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물 및 상기 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물 및 상기 조성물의 제조 방법{A composition for lowering blood glucose level or blood pressure or for use of antioxidant comprising Rhynchosia nulubilis fermented by a yeast and a method for preparing the composition}
본 발명은 서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물 및 상기 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
최근 당뇨, 고혈압, 심장질환, 심혈관계 질환 등과 같은 만성질환의 유병률이 증가되면서 이에 대한 예방과 치료의 목적으로 유익 균주 및 그 생리활성 물질을 이용한 연구들이 진행되고 있다. 현대인의 산화적 스트레스의 원인인 활성산소종(Reactive Oxygen Species)이나 free radical은 체내에서 인간의 대사과정 중에 지속적으로 발생되며, 또한 불안정하고 반응성이 높아서 다른 생체 내 물질들과 쉽게 반응하게 된다. 이들은 체내 고분자들을 공격하여 세포막을 분해하고, 단백질 합성을 억제하여 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래한다.
천연 생리활성 물질들(bioactive components)은 체내에 들어오면 산화를 억제하는 작용을 통해 당뇨나 암 등의 예방 기능을 가지고 있는 것으로 알려져 왔다. 따라서 현대인들에게는 산화적 스트레스를 경감시킬 수 있는 부작용이 없고 항산화 활성이 뛰어난 천연 항산화제의 개발이 필요하다.
또한 만성질환인 당뇨병은 1970년대 발병율이 인구의 1% 미만이었던 것이 2001년 이후에는 30세 이상의 발병률이 10명 중 1명으로 10% 수준으로 증가하고 있으며, 우리나라 사망원인의 5위에 해당한다. 특히 망막증, 백내장 등 같은 합병증을 야기하므로 당뇨병 치료는 탄수화물의 소화와 흡수를 느리게 하여 식후 혈당을 저하시키면서 합병증을 예방할 수 있어야 한다. 현재 acarbose와 voglibose 등과 같은 α-glucosidase 억제제와 같은 혈당강하제는 내성과 체중증가, 부종, 오심, 소화기 장애와 같은 부작용이 우려되면서 천연 물질을 대상으로 한 혈당 개선제 개발이 요구되고 있다.
서목태(학명: Rhynchosia Nulubilis)는 7월에 꽃이 피어 타원형의 깍지 속에 지름 5∼7mm정도의 쥐눈처럼 검고 둥근 종실이 여물면 수확하는 것으로 무농약 유기농법으로 황토에서 재배한 것이 최상의 작물이며, 유황을 뿌리고 재배하면 약성이 더욱 우수해진다. 섬유질이 많아 장의 활성에 기여하고, 서목태를 발효시키면 인체에 유용한 효소가 어느 식품보다 많은데, 그 약성에 대해서는 예로부터 속을 다스리고 관맥을 통하여 모든 약독을 제거하고(名醫別錄), 복창(水腫)을 내리고 위열을 없애며 마비증을 다스리고 어혈을 풀어내며(本草綱目), 콩죽을 먹으면 소갈증(당뇨로 인한 목마름)을 없애주며(經驗方), 신장병을 다스리며 기(氣)를 내리어 모든 풍열을 억제하고 특히, 혈액을 활발히 하며 모든 독을 풀어주는(本草綱目)것이라 하여 약콩으로도 불리고 있다.
대한민국 특허 출원 공개 공보 제10-2017-0114049호 대한민국 특허 등록 공보 제10-1908862B1호
없음
본 발명의 하나의 목적은 효모 및 서목태를 이용하여 부작용 없이 혈당을 저하 혹은 조절하거나 혈압을 저하시키거나 항산화 기능을 갖는 신규 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 항산화, 항고혈압 또는 항당뇨 활성을 갖는 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 양태는,
효모를, 추가의 질소원을 실질적으로 포함하지 않는 서목태 함유 배지에서 배양하고,
상기 배양 후 얻어진 배양물로부터 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물을 제조하는 것을 포함하는, 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
효모는 맥주, 포도주, 막걸리 등을 만드는 데 사용되는 미생물로서 곰팡이나 버섯 무리지만 균사가 없고 광합성능이나 운동성도 없는 단세포 생물의 총칭이다. 본원에서는 효모로 사카로마이세스 속 미생물을 이용할 수 있고, 구체적으로 사카로마이세스 서바지 또는 사카로마이세스 세레비지아에를 이용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 일 예에서 사카로마이세스 서바지 Saccharomyces servazzii KCCM12157P 균주가 이용될 수 있다. 상기 균주는 한국의 전통식품인 김치로부터 분리된 것이다.
배양에 의해 효모는 배양물 중, 5 x 104 내지 5 x 1010 CFU/ml의 농도로, 구체적으로는 효모를 5 x 104 내지 5 x 109 CFU/ml의 농도로 포함되도록 하며, 보다 구체적으로는 1 x 106 내지 1 x 109 CFU/ml의 농도로 포함되도록 한다.
효모를 배양하기 위한 배지는, 서목태를 포함하는 배지로, 서목태 외에 추가의 질소원은 실질적으로 포함하지 않는다. 추가의 질소원을 포함하는 경우, 질소원으로 고분자인 서목태 보다, 주로 저분자인 추가의 질소원을 이용하기 때문에 서목태의 효모에 의한 분해가 적게 일어나 혈당 저하, 항산화, 또는 혈압 저하를 발현하는 유효 성분이 감소하는 것으로 생각된다. 이러한 추가의 질소원으로는 N을 구조 내 포함하고 있는 것이라면 제한되지 않으며, 예를 들어 유기 질소원 또는 무기 질소원, 보다 구체적으로, YPD ((yeast ext., peptone, dextrose), 이중 효소 추출물과 펩톤이 질소원으로 사용된다), 우레아, 카제인, 대두, 밀기울, 현미유, 육류 추출물, 전지분유, 건조된 효모, 암모늄염, 트립토판, 프롤린, 아스파라긴, 글루타메이트와 같은 N 함유 아미노산 등을 들 수 있다.
본원에서 '실질적으로 포함하지 않는'의 의미는 전체 조성물 또는 배지 전체 중량 기준, 해당 성분이 0.05 중량% 이하, 구체적으로 0.0005 중량% 이하로 포함되어 있는 것을 말한다.
서목태(일명 쥐눈이콩)는 검은콩의 일종으로 껍질이 까맣고 크기는 보통 검은콩보다 훨씬 작다. 본원에서 서목태는 효모의 질소 제공원으로 사용되며, 효모에 의한 서목태의 분해로 혈당저하, 혈압저하 또는 항산화에 효과적인 유효 펩타이드들이 제공되는 것으로 생각된다.
배양 시, 서목태의 함량이 증가할수록 효모의 수 또한 증가하므로 서목태의 함량은 많을수록 좋지만, 배양 배지 전체 부피를 기준으로(서목태 g수 / 배지 mL수 × 100, w/v) 서목태의 함량은 0.2 중량% 내지 4 중량%가 되도록 한다. 4 중량%를 초과하면 배양시 단백질 응고에 의해 엉김 현상이 생길 수 있으므로 4 중량% 이하로 하는 것이 좋다. 보다 구체적으로 서목태 함량은 0.6 중량% 내지 1.0 중량%의 범위인 것이 가장 좋고, 0.6 중량%인 것이 또한 가장 좋다. 상기 범위에서 혈당 저하 효과가 가장 좋을 수 있다.
배양의 배지로는 천연배지 또는 합성배지를 사용할 수 있다. 배지의 탄소원으로는 예를 들어, 단당류, 또는 이당류를 사용할 수 있으며, 예로는, 글루코오스, 포도당, 갈락토스, 설탕, 덱스트린, 덱스트로스, 글리세롤 등이 사용될 수 있다. 바람직하게는 탄소원으로 포도당, 글루코스와 같은 단당류를 사용하는 것이 좋으며, 단당류는 다당류 또는 이당류에 비해 탄소원으로서 이용 효율이 높아, 효모에 의한 분해가 활발하여 혈당저하, 혈압저하 또는 항산화에 효과적인 성분이 많아지기 때문이다. 상기 탄소원의 배지 중 함량은 배지 전체 부피를 기준으로 1 중량% 내지 5 중량%이고, 특히 혈당저하, 혈압저하, 또는 항산화 효과 측면에서는 1 중량% 내지 3 중량%, 또는 2 중량% 내지 3 중량%인 것이 좋다.
질소원으로는 서목태를 사용하며, 서목태 외에 다른 질소원은 실질적으로 포함하지 않는다. 다른 질소원을 포함하는 경우, 혈당저하, 혈압저하, 또는 항산화 효과는 서목태만을 질소원으로 포함하여 배양된 배양물에 비해 현저히 저하될 수 있다. 배지에 포함되는 무기염으로는 마그네슘. 망간, 칼슘. 철, 칼륨 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 탄소원, 질소원 및 무기염의 성분 이외에 아미노산, 비타민, 핵산 및 그와 관련된 화합물들이 배지에 첨가될 수 있다.
효모 균주의 배양온도 조건은 20℃내지 40℃의 온도 범위, 구체적으로는 21℃내지 30℃에서 12시간 내지 7일간, 예컨대 12시간 내지 3일간 배양할 수 있다. 일 예에서, 배양 배지에 가시오가피, 구아바, 황금, 황백, 치자, 오미자, 황련, 옥죽 등의 생약 제제, 이의 추출물, 또는 이의 혼합물을 첨가하여 배양하고, 상기 배양물을 사용함으로써 본원 발명의 조성물의 혈당 저하, 혈압 저하 또는 항산화의 효과를 보다 개선할 수 있다. 특히, 배양 배지에 가시오가피 또는 황금을 첨가하는 것이 좋으며, 첨가되는 이의 양은, 각각 배지 중량을 기준으로 0.01 중량% 내지 10 중량%, 구체적으로는 0.01 중량% 내지 5 중량% 정도가 좋다.
이후, 상기 배양 후 얻어진 배양물로부터 혈당강하, 혈압강하 또는 항산화용 조성물을 제조할 수 있다. 상기 조성물 제조는 일예에서 상기 배양물에 약학적으로 혹은 식품학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 것일 수 있다. 이후 상기 조성물은 제제화되어 식품 혹은 의약품으로 제공될 수 있다. 또는 상기 조성물 제조는 상기 배양 후 얻어진 배양물 자체 또는 이의 배양 상등액을 조성물로 이용하는 것일 수 있다.
본 발명에서 용어, "약학적으로 혹은 식품학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 배양물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다.
상기 배양물은 효모 균체 함유 물질과 배양액을 포함한다. 상기 배양 배지에서 배양된 효모 균체를 포함하는 배양물을 원심분리하면 균체 함유 물질과 배양액으로 각각 분리할 수 있다. 따라서 배양액은 원심분리 후 균체 함유 물질을 제외한 배양 상등액이다. 균체 함유 물질은 균체를 포함하며 배양 상등액을 제거하거나 이후 잔류물을 농축한 균체 함유 성분일 수 있다. 상기 배양액 또는 균체 함유 물질의 조성은 통상의 효모 배양에 필요한 성분뿐 아니라, 효모의 생장에 상승적으로 작용하는 성분을 추가적으로 포함할 수 있으며, 이에 따른 조성은 당업계의 통상의 기술을 가진 자에 의하여 용이하게 선택될 수 있다.
상기 양태는 배양물로부터 배양액을 분리하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 이 경우 상기 분리는 배양물을 원심분리하여 균체 함유 물질을 제거하는 것을 포함할 수 있다.
다음으로, 상기 배양물 또는 배양액을 농축 및/또는 건조하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 농축 방법에는 증발농축법, 냉동농축법, 막농축법, 또는 건조농축법 등이 있으며, 구체적으로는 회전식 증발기를 사용하여 감압농축할 수 있다. 건조는 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니며, 구체적으로는 동결건조할 수 있다.
본 발명의 다른 양태는, 본원에 기술된 방법으로 제조된 서목태의 효모 발효물을 유효성분으로 포함하는 혈당 저하, 혈압 저하 또는 항산화용 조성물에 관한 것이다. 상기 발효물은 일 예에서 발효물 중 효모 균체 함유 물질이 제거된 발효액 또는 발효 상등액일 수 있다.
본원 발명의 조성물은 효모 발효에 의해 서목태의 약성이 변화되어 발효 전보다 현저히 개선된 혈당 저하, 혈압 저하 또는 항산화 특성을 나타내게 되며, 이는 특정 이론에 구속되는 것은 아니지만, 효모가 제공하는 여러 효소에 의해 서목태의 여러 고분자가 분해되어 유효 펩타이드가 생성되고, 이로써 혈당 저하, 혈압 저하 또는 항산화 효과가 증진되는 것으로 생각된다.
상기 조성물은 혈당 저하, 혈압 저하, 또는 항산화를 위한 식품 조성물 또는 의약 조성물일 수 있다. 본원의 조성물은 항산화 활성으로 인해 암, 염증, 빈혈, 심근경색, 동맥경화증, 당뇨, 뇌성마비, 관절염(예:류마티즘 관절염), 파킨슨씨 병, 또는 자기면역질환 치료에 유용할 수 있다. 식품 조성물의 일 양태로는 식품, 건강식품, 건강보조식품, 또는 건강기능성 식품 조성물일 수 있다. 의약 조성물의 일 양태로는 의약외품 또는 의약적 제제일 수 있다.
일 예에서, 상기 조성물은 가시오가피, 구아바, 황금, 황백, 치자, 오미자, 황련, 옥죽 등의 생약 제제, 이의 추출물, 또는 이의 혼합물 등과 같이 항당뇨 항고혈압 또는 항산화 효과가 있는 성분을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 조성물의 고형 중량을 기준으로 1 중량% 내지 70 중량%, 구체적으로 5 중량% 내지 60 중량%의 서목태의 효모 발효물을 포함할 수 있다.
서목태의 효모 발효물은 액상상태 또는 건조상태일 수 있으며, 구체적으로는 건조된 분말 상태일 수 있다.
상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러가지 제형으로 제제화될 수 있으나, 바람직하게는 액상 경구 용액으로 제형화될 수 있다.
액상 용액으로 제제화되는 경우, 허용되는 약제학적 혹은 식품학적 허용 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 완충식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 액상 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화 할 수 있다. 또한 조성물의 품질 저하를 방지하기 위하여 결착제, 유화제, 보존제 등을 추가로 첨가할 수 있고, 또는, 아미노산제, 비타민제, 효소제, 향미제, 비단백질태질소화합물, 규산염제, 완충제, 추출제, 올리고당 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 포함하는 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제를 들 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화 하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 마니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활제를 포함할 수 있으며, 캡슐 제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.
상기 조성물 또는 상기 서목태의 효모 발효물의 1일 투여량은 대상체의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 치료, 예방, 또는 개선하고자 하는 주요 증상, 투여시간, 투여 방법, 중증도에 따라 달라질 수 있으나, 약 0.0001mg/kg 내지 약 10g/kg, 구체적으로는 약 0.01 mg/kg 내지 약 500mg/kg일 수 있으며, 하루 1회 내지 6회, 예컨데, 하루 1회 내지 4회 투여 혹은 적용할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는, 본원에 기술된 방법에 따라 제조된 서목태의 효모 발효물의 치료적 또는 예방적 유효량을 당뇨 예방 또는 치료, 혈압 저하 또는 항산화를 위해 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 당뇨 개선, 예방 또는 치료 방법, 혈압 저하 혹은 항산화 방법에 관한 것이다. 상기 치료적 또는 예방적 유효량은 전술한 바와 같이, 대상체의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 치료, 예방, 또는 개선하고자 하는 주요 증상, 투여시간, 투여 방법, 중증도에 따라 달라질 수 있으나, 1일 약 0.0001mg/kg 내지 약 10g/kg, 구체적으로는 약 0.01 mg/kg 내지 약 500mg/kg일 수 있으며, 하루 1회 내지 6회, 예컨대, 하루 1회 내지 4회 투여 혹은 적용하는 것일 수 있다.
본 발명의 방법에 따라 제조된 서목태의 효모 발효물은 α-glucosidase의 억제 능력이 우수하고 부작용이 적고 안전하여, 당뇨병의 예방 및/또는 치료에 활용 가치가 높다.
또한, 항산화 효능이 뛰어나므로 항산화제 및 활성산소가 과량 축적되어 유발되는 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
나아가 혈압 저하 효능이 뛰어나므로 고혈압 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 제조 방법에서, 배지 중 서목태의 함량에 따른 효모의 균수 변화를 나타낸 막대 그래프이다.
도 2은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 제조 방법에서, 각 배지 성분에 따른 α-glucosidase 저해능(%)의 차이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 제조 방법에서, 각 배양 배지의 탄소원(전분, 수크로스, 포도당, 갈락토스)의 변화에 따른 α-glucosidase 저해능(%)의 차이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 제조 방법에서, 서목태의 함량 변화에 따른 α-glucosidase 저해능(%)의 차이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 제조 방법에서, 탄소원인 포도당의 농도 변화에 따른 α-glucosidase 저해능(%)의 차이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 제조 방법에서, 배지에 저분자 질소원 추가에 따른 α-glucosidase 저해능(%)의 차이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 방법으로 제조된 조성물(서목태 0.6 중량%, 및 포도당 2 중량% 및 효모)의 농도 변화에 따른 α-glucosidase 저해율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 8은 양성 대조군으로 사용된 종래 알려진 혈당 강하제, Acarbose의 농도 변화에 따른 α-glucosidase 저해율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 방법으로 제조된 조성물(서목태 0.6 중량%, 및 포도당 2 중량% 및 효모)의 농도 변화에 따른 ACE 억제율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 10은 양성 대조군으로 사용된 종래 알려진 혈압 강하제, Lisinopril의 각 농도에 따른 ACE 억제율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 방법으로 제조된 조성물(서목태 0.6 중량%, 및 포도당 2 중량% 및 효모)의 농도 변화에 따른 DPPH 라디칼 제거율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 12는 양성 대조군으로 사용된 종래 알려진 항산화제, Ascorbic acid의 농도에 따른 DPPH 라디칼 제거율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 방법으로 제조된 조성물(서목태 0.6 중량%, 및 포도당 2 중량% 및 효모)의 농도 변화에 따른 ABTS 라디칼 제거율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 14는 양성 대조군으로 사용된 종래 알려진 항산화제, Ascorbic acid의 각 농도에 따른 ABTS 라디칼 제거율(%)을 보여주는 그래프이다.
도 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 방법으로 제조된 조성물(서목태 0.6 중량%, 및 포도당 2 중량% 및 효모)과 양성 대조군으로 사용된 종래 알려진 항산화제, Ascorbic acid의 농도 변화에 따른 환원력(reducing power)의 차이를 보여주는 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 이들 실시 예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 국한되는 것은 아니다.
1. 발효에 필요한 서목태 적정량
실시예 1: 서목태의 효모 발효물 1의 제조
(1) 시료 확보 및 균주 분리
한국의 전통식품인 김치를 채취하고, 확보된 시료를 단계 희석하여 1% 염화나트륨이 첨가된 YPD(Yeast extract Peptone Dextrose)에 도말 후 37℃ 조건으로 24 시간 동안 배양하였다. 상기 시료에서 우점한 균주를 분리하였다. 선별된 콜로니는 3차에 걸쳐 새로운 배지에 옮겨 배양하는 방법으로 순수 분리하였으며, 순수 배양된 균을 20% 글리세롤이 첨가된 배지에 담아 영하 70℃이하에서 보존하였다.
(2) 분류학적 특성 조사
상기 분리된 균주의 동정을 위하여, 분류학적 특성을 분석하기 위하여 18s rRNA partial sequencing에 의해 분석을 실시하였으며, 그 결과 서열번호 1의 염기서열을 가지며, 당해 분리 균주는 사카로마이세스서바지(Saccharomyces servazzii)와 99%의 상동성을 갖는 것으로 확인되었다.
이에 본 발명자들은 신규 분리한 사카로마이세스서바지 Ceb-kc-011을 2017년 11월 10일 한국 미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, 서울시 서대문구 홍제-2가-길 120-861)에 기탁번호 KCCM12157P로 기탁하였다.
(3) 서목태의 효모 발효물의 제조
사카로마이세스서바지 Ceb-kc-011의 배양물을 다음과 같은 방법으로 제조하였다:
정제수 100리터에, 서목태 4 중량%, yeast extract 및 펩톤 제거된 YPD 배지 (덱스트로스 2 중량% 함유, 덱스트로스는 포도당의 일종으로 본원에서는 호환되어 사용됨)를 각각 첨가 후, 사카로마이세스 서바지 Ceb-kc-011을 무균 상태에서 0.2~0.4 리터 접종한 다음 25℃ 배양기에서 24시간 내지 48시간 배양하여 사카로마이세스 서바지 Ceb-kc-011의 배양물을 수득하였다.
이후, 상기 배양물을 원심분리하여 균체 함유 물질과 배양액으로 각각 분리하고, 상기 배양액을 60℃에서 12시간 건조하여 서목태의 효모 발효액 건조물을 수득하였다.
실시예 2: 서목태의 효모 발효물 2의 제조
상기 실시예 1에서 사카로마이세스서바지 Ceb-kc-011 대신, 사카로마이세스서바지를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 서목태의 효모 발효물 2를 수득하였다.
실시예 3: 서목태의 효모 발효물 3의 제조
상기 실시예 2에서 서목태를 4 중량%가 아닌 2 중량%가 되는 양으로 첨가한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 실시하여 실시예 3의 서목태의 효모 발효물 3을 수득하였다.
실시예 4: 서목태의 효모 발효물 4의 제조
상기 실시예 2에서 서목태를 4 중량%가 아닌 2.5 중량%가 되는 양으로 첨가한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 실시하여 실시예 4의 서목태의 효모 발효물 4을 수득하였다.
실시예 5: 서목태의 효모 발효물 5의 제조
상기 실시예 2에서 서목태를 4 중량%가 아닌 3 중량%가 되는 양으로 첨가한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 실시하여 실시예 5의 서목태의 효모 발효물 5을 수득하였다.
실시예 6: 서목태의 효모 발효물 6의 제조
상기 실시예 2에서 서목태를 4 중량%가 아닌 3.5 중량%가 되는 양으로 첨가한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 실시하여 실시예 6의 서목태의 효모 발효물 6을 수득하였다.
비교예 1: 효모 발효물 1의 제조
상기 실시예 2에서 서목태를 첨가하지 않고, yeast extract 및 펩톤 제거된 YPD 배지 대신, yeast extract 1.0 중량%, 펩톤 2.0 중량%, 및 덱스트로스 2.0 중량% 로 함유하는 YPD 배지를 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 실시하여 비교예 1의 효모 발효물 1을 수득하였다.
실험예 1: 효모 생균수 검사
효모 생균수 측정 방법은 YPD 배지에 2% agar를 첨가하여 평판을 준비하고, 0.85% 멸균생리식염수로 단계 희석한 상기 실시예 1 내지 6 및 비교예 1의 제조 과정 중에서 배양하여 얻은 배양물 시료를 100㎕씩 접종 및 도말하여 25℃ 배양기에서 24~48시간 배양하였다. 배양 후 집락을 계수하여 표 1과 도 1에 나타내었다.
Yeast ex.(Y) Peptone(P) 포도당의 일종인 덱스트로스(D) 서목태 (R) CFU /mL
비교예 1
(YPD)		 1.0중량% 2.0 중량% 2.0 중량% 1.7Х108
실시예 3(DR2) - - 2.0 중량% 2.0 중량% 2.8Х107
실시예 4(DR2.5) - - 2.0 중량% 2.5 중량% 4.0Х107
실시예 5(DR3.0) - - 2.0 중량% 3.0 중량% 4.3Х107
실시예 6(DR3.5) - - 2.0 중량% 3.5 중량% 5.0Х107
실시예 2(DR4.0) - - 2.0 중량% 4.0 중량% 5.8Х107
(상기 표에서 중량%는 배지 전체 부피 기준 특정 성분의 중량 백분율을 의미한다)
효모 배양 배지인 YPD 조성을 토대로 YPD 내 질소원인 yeast extracts 및 peptone을 배제 후 대체 질소원으로서 서목태 함량을 달리하여 효모를 배양시 서목태와 포도당으로 제조된 배지에서 서목태 함량이 증가할수록 효모 수 또한 증가하였다. 상기 실시예와는 별도로 서목태 첨가량을 4 중량% 초과로 하여 배양해 보았으며, 이 경우 단백질 응고에 의한 엉김 현상이 나타났다. 따라서 서목태 적정량은 4 중량% 이하라 할 수 있다.
2. 배지 조성에 따른 배양액 건조물의 α- 글루코시다제 저해능
실시예 7
사카로마이세스서바지 Ceb-kc-011의 배양물을 다음과 같은 방법으로 제조하였다:
정제수 100리터에 서목태 4 중량%, 덱스트로스 2 중량%가 되도록 각각 첨가 후, 사카로마이세스 서바지 Ceb-kc-011을 무균 상태에서 5~10 리터 접종한 다음 25℃ 배양기에서 24시간 내지 48시간 배양하여 사카로마이세스 서바지 Ceb-kc-011의 배양물을 수득하였다.
이후, 상기 배양물을 원심분리하여 균체 함유 물질과 배양 상등액으로 각각 분리하고, 상기 배양 상등액을 60℃에서 12시간 건조하여 실시예 7의 서목태의 효모 배양액 건조물을 수득하였다.
비교예 2: 서목태 미배양 수용성 단백질 건조물
50~200mesh로 분말화시킨 서목태(제조원: 경북 예천군 소화농장)를 정제수 전체 부피에 대하여 4중량%가 되도록 첨가한 후 121℃에서 15분간 습열멸균(autoclave)하였다. 그 다음 3000rpm/5min 원심분리 후 상등액을 여과하였고, 60℃에서 12시간 건조하여 수용성 단백질 건조물을 수득하고 이를 비교예 2로 사용하였다.
비교예 3: 효모의 배양물
정제수 100리터에 YPD(효모 추출물 1 중량%, 펩톤 2 중량%, 덱스트로스 2 중량%)를 첨가 후, 사카로마이세스 서바지를 무균 상태에서 5~10 리터 접종한 다음 25℃ 배양기에서 24시간 내지 48시간 배양하여 사카로마이세스 서바지의 배양물을 수득하였다.
이후, 상기 배양물을 원심분리하여 균체 함유 물질과 배양 상등액으로 각각 분리하고, 상기 배양 상등액을 60℃에서 12시간 건조하여 효모 배양액 건조물을 수득하였다.
비교예 4: 서목태의 효모 배양물
상기 실시예 7에서, 덱스트로스 대신 YPD (효모 추출물 1 중량%, 펩톤 2 중량%, 덱스트로스 2 중량%)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 7과 동일하게 실시하여 비교예 4의 서목태의 효모 배양물을 수득하였다.
비교예 5: 서목태의 유산균 배양물
상기 실시예 7에서, 사카로마이세스서바지 Ceb-kc-011 대신 유산균인 Leuconostoc holzapfelii를 사용한 것을 제외하고는 실시예 7과 동일하게 실시하여 비교예 5의 서목태의 유산균 배양물을 수득하였다.
상기 실시예 7 및 비교예 2 내지 5의 조성을 아래 표 2에 정리하여 나타내었다:
실시예 7(S/R4/D) 효모(S) + 서목태(R, 4 중량%) + Dextrose(D, 2 중량%)
비교예 2(R) 서목태(R, 미배양 수용성 단백질 건조물)
비교예 3(S/YPD) 효모(S) + YPD(yeast ex.(1 중량%), peptone(2 중량%), dextrose(2 중량%))
비교예 4(S/R4/YPD) 효모(S) + 서목태(R, 4중량%) + YPD
비교예 5(L/R4/D) 유산균(L. holzapfelii) + 서목태(R, 4 중량%) + Dextrose (D, 2 중량%)
(상기 표에서 중량%는 배지 전체 부피 기준 특정 성분의 중량 백분율을 의미한다)
실험예 2: α- 글리코시다제 저해능 검사
상기 제조된 실시예 7 및 비교예 2 내지 비교예 5의 발효물의 α-glucosidase 저해능을 다음과 같은 방법으로 측정하였다:
[α-glucosidase 저해능]
각 시료를 0.1M sodium phosphate buffer(pH 6.8)에 용해시켜 시료 용액 20㎕를 제조하고, 이를 α-glucosidase(1U/mL) 20㎕와 함께 37℃에서 10분간 반응시킨 후, 여기에 20㎕ 기질 (5mM P-NPG)을 넣어 각각 20분 동안 반응시킨다. 그리고 0.1M Na2CO3 50㎕를 넣어 반응을 종료시킨 후 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 저해도는 [(Acontrol-Asample)/Acontrol]
Figure 112019102253849-pat00001
100(%)에 의해 산출하였으며, 여기서 Acontrol은 저해물질이 없을 경우의 흡광도이고, Asample은 저해물질이 있을 경우의 흡광도이다.
[결과]
동일 농도 (50mg/mL)로 처리한 시료의 α-glucosidase 저해능 분석 결과 서목태와 포도당(덱스트로스)으로 제조된 배지를 효모로 발효한 실시예 7의 S/R4/D에서 가장 높은 α-glucosidase 저해능을 나타냈다. S/R4/D 시료의 경우 서목태가 유일한 질소원으로 사용되었기 때문에 효모에 의한 가수분해 효율이 증가된 것으로 판단되었다. YPD 배지에 서목태 첨가 후 효모로 배양한 비교예 4의 시료(S/R4/YPD)는 전체 비교예 중 세 번째로 높은 저해능을 나타냈으며, 이는 고분자 단백질인 서목태가 YPD 배지 내에 포함된 저분자 질소원인 yeast extracts 및 peptone보다 상대적으로 효모의 영양 질소원으로 이용되기 어려워 서목태의 가수분해 정도가 낮아 파생된 결과라고 판단된다. 발효 전 서목태의 α-glucosidase 저해능 효과를 확인하기 위하여 비교예 2의 수용성 서목태(R)를 분석하였으나 저해능은 미미하였다. 또한, 비교예 3에서는 서목태가 없는 상태에서 yeast extracts 및 peptone을 질소원으로 하는 YPD 배지에서 효모 배양 시 α-glucosidase 저해능을 확인한 결과 전체 시료 중 가장 낮은 저해능을 나타냈다. 유일한 질소원으로서 서목태를 첨가하여 유산균 (L. holzapfelii)으로 발효한 비교예 5의 L/R4/D 시료는 효모로 발효한 실시예 7의 S/R4/D 시료보다 낮은 저해능을 나타냈다.
상기 결과는 도 2에 나타내었다.
3. 당 종류에 따른 α- 글루코시다제 저해능
실시예 8
상기 실시예 7에 있어서, 탄소원으로 덱스트로스 대신 전분을 사용한 것을 제외하고는 실시예 7과 동일하게 실시하여 실시예 8의 서목태의 효모 발효물을 수득하였다.
실시예 9
상기 실시예 7에 있어서, 탄소원으로 덱스트로스 대신 설탕을 사용한 것을 제외하고는 실시예 7과 동일하게 실시하여 실시예 9의 서목태의 효모 발효물을 수득하였다.
실시예 10
상기 실시예 7에 있어서, 탄소원으로 덱스트로스 대신 갈락토스를 사용한 것을 제외하고는 실시예 7과 동일하게 실시하여 실시예 10의 서목태의 효모 발효물을 수득하였다.
상기 실시예 8 내지 10의 발효물 및 실시예 7의 발효물에 대해 상기 실험예 2에 기재된 방법으로 α-글리코시다제 저해능을 측정하고 그 결과를 도 3에 나타내었다.
[결과]
종류가 다른 4종의 당을 각각 서목태에 첨가 후 효모로 배양하여 얻은 상등액 건조물의 α-glucosidase 저해능은 포도당을 사용한 시료에서 가장 높게 나타났다. 고분자로 이루어진 전분은 효모가 탄소원으로 분해하여 사용하기 쉽지않아 가장 낮은 저해능이 나타났다. 이당류인 설탕도 단당류인 포도당 및 갈락토스에 비하여 탄소원으로서의 이용 효율이 낮았고, 단당류 중에서는 포도당이 가장 높은 효과를 나타냈다.
4. 포도당에 서목태의 함량을 달리하여 배양한 시료의 α- 글루코시다제 저해능
최적 탄소원인 포도당에 서목태 사용량을 달리하여 배양 후 α-glucosidase 저해능이 가장 높은 서목태 최소량을 결정하기 위하여 0.2중량%, 0.4 중량%, 0.6 중량%, 0.8 중량%, 1.0 중량%, 2.0 중량%, 3.0 중량%, 4.0 중량%의 다양한 조건으로 배양하여 시료를 제조하였다.
실시예 7, 실시예 11 내지 실시예 17
상기 실시예 7에 있어서, 서목태 4 중량% 대신 서목태 0.2 중량%(실시예 11), 0.4 중량%(실시예 12), 0.6 중량%(실시예 13), 0.8 중량%(실시예 14), 1.0 중량%(실시예 15), 2.0 중량%(실시예 16), 3.0 중량%(실시예 17)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 7과 동일하게 실시하여 실시예 11 내지 실시예 17의 서목태의 효모 발효물을 제조하였다.
상기 실시예 7 및 실시예 11 내지 17의 발효물에 대해 상기 실험예 2에 기재된 방법으로 α-글리코시다제 저해능을 측정하고 그 결과를 도 4에 나타내었다.
[결과]
탄소원인 포도당 함량을 2중량%로 고정하고 질소원인 서목태 첨가량을 달리하여 제조한 시료의 α-glucosidase 저해능을 분석한 결과 서목태를 0.6중량% 처리시 가장 높은 저해활성을 나타냈다. 서목태 사용량이 0.6~1.0 중량%까지는 유의적으로 동일한 높은 저해능을 나타내었으나 2중량% 이상에서는 오히려 저해능이 낮아졌다. 그 이유는 효모의 생장에 충분하고도 남는 과잉의 질소원이 공급되어 가수분해되지 않고 남아있는 고분자 단백질 함량 비율이 상대적으로 높아 1 중량% 이하에서 제조한 시료보다 낮은 저해능을 나타낸 것으로 판단된다. 따라서, 저해능이 가장 높으면서 경제적으로도 합리적 서목태 사용 최소량은 0.6중량%가 적절하였다.
5. 서목태에 포도당의 함량을 달리하여 배양한 시료의 α- 글루코시다제 저해능
서목태 최적 사용량인 0.6중량%에 탄소원인 포도당 농도를 1.0중량%(실시예 18, S/R0.6/D1), 2.0중량%(실시예 13, S/R0.6/D2), 3.0중량%(실시예 19, S/R0.6/D3)로 달리하여 제조한 시료의 α-glucosidase 저해능을 분석하였다.
실시예 18 및 실시예 19
상기 실시예 13에 있어서, 포도당 2.0 중량% 대신 포도당 1.0 중량%(실시예 19), 또는 포도당 3.0 중량%(실시예 19)을 사용한 것을 제외하고는 실시예 13과 동일하게 실시하여 실시예 18 내지 실시예 19의 서목태의 효모 발효물을 제조하였다.
상기 실시예 13, 실시예 18 내지 19의 발효물에 대해 상기 실험예 2에 기재된 방법으로 α-글리코시다제 저해능을 측정하고 그 결과를 도 5에 나타내었다.
[결과]
유일한 질소원으로서 서목태의 최적 사용량을 0.6 중량%로 고정 후 탄소원인 포도당의 사용량을 달리하여 효모로 배양한 시료의 α-glucosidase 저해능은 포도당이 2중량%일 때 가장 높게 나타났다. 3중량%인 경우도 2 중량%와 비슷한 결과가 얻어진 것으로부터 볼 때, 배지 내 포도당 함량은 1.5 중량% 이상, 또는 2 중량% 이상인 것이 바람직함을 알 수 있다.
6. 서목태 0.6중량% , 포도당 2중량%인 배지에 저분자 질소원을 추가로 투입 시 α- glucosidase 저해능 개선 여부
서목태 이외에 추가 저분자 질소원을 투입 시 α-glucosidase 저해능이 개선되는지 여부를 확인하기 위하여 yeast extracts 및 peptone 조성을 아래와 같이 조합하여 실험하였다.
비교예 6 내지 비교예 11
상기 실시예 13에 있어서 추가의 저분자 질소원으로 효모 추출물 0.25 중량% + 펩톤 0.25 중량%(비교예 6, S/R0.6/Yex.0.25/Pep.0.25/D), 효모 추출물 0.5 중량%(비교예 7, S/R0.6/Yex.0.5/D), 펩톤 0.5 중량% (비교예 8, S/R0.6/Pep.0.5/D), 효모 추출물 0.5 중량% + 펩톤 0.5 중량%(비교예 9, S/R0.6/Yex.0.5/Pep.0.5/D), 효모 추출물 1.0 중량%(비교예 10, S/R0.6/Yex.1.0/D), 펩톤 1.0 중량% (비교예 11, S/R0.6/Pep.1.0/D)를 추가한 것을 제외하고는 실시예 13(S/R0.6/D)와 동일하게 실시하여 비교예 6 내지 비교예 11의 서목태 효모 발효물을 제조하였다.
상기 비교예 6 내지 비교예 11의 발효물에 대해 상기 실험예 2에 기재된 방법으로 α-글리코시다제 저해능을 측정하고 그 결과를 도 6에 나타내었다.
[결과]
서목태 이외의 저분자 질소원을 추가로 사용하여 효모 발효 시 α-glucosidase 저해능이 개선되는지 여부를 확인한 결과 서목태를 단독으로 사용한 시료에서 가장 높은 저해능을 나타냈다. Yeast extracts 및 peptone 모두 사용 농도가 증가할수록 저해능이 낮아졌다. 따라서 추가 질소원은 필요하지 않으며 서목태를 유일한 질소원으로 사용 시 가장 높은 저해능을 가지는 펩타이드를 생산할 수 있음을 확인하였다.
7. 최적 조건 ( 서목태 0.6 중량% , 포도당 2중량% )에서 배양하여 얻은 상등액 건조물의 α- 글리코시다제 저해능 , ACE ( angiotensin I converting enzyme) 저해능 및 항산화능 결과( IC 50 값)
실시예 13의 발효물, 즉, 최적 조건 (서목태 0.6 중량%, 포도당 2중량%)에서 배양하여 얻은 상등액 건조물의 α-글리코시다제 저해능을 상기 실험예 2의 방법으로 측정하고, ACE (angiotensin I converting enzyme) 저해능 및 항산화능(IC50 값)은 아래 방법으로 측정하고 그 결과를 각각 도 7(α-글리코시다제 저해능), 도 9(ACE 저해능), 도 11, 도 13 및 도 15(항산화능)에 나타내었다.
실험예 3 : ACE 저해능 측정
배양 상등액 건조물을 0.3M NaCl이 포함된 50mM sodium borate buffer(pH8.3)에 용해시킨 후 시료 용액 10㎕에 ACE (0.2U/mL, rabbit lung) 5㎕, 50mM sodium borate buffer 31㎕ 및 기질(4mM HHL) 13㎕를 넣어 37℃에서 60분 동안 반응시킨다. 그리고 200mM sodium tetraborate 100㎕, 10mM sodium sulfite 50㎕ 및 3.4mM TNBS 50㎕를 넣어 37℃에서 20분 동안 추가로 반응시켰으며, 반응 종료 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조구로는 Lisinopril을 사용하였다. 저해도는 [1-(S-Bs)/(C-Bi)]
Figure 112019102253849-pat00002
100에 의해 산출하였으며, 여기서 S는 시료의 흡광도이고, Bs는 기질과 효소가 없을 경우의 흡광도이고, Bi는 시료와 효소가 없을 경우의 흡광도이며, C는 효소와 기질을 포함하고 저해물질이 없을 경우의 흡광도이다.
실험예 4: 항산화능 측정
(1) DPPH (free radical scavenging assay)
유기 용매에 녹인 DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼은 515 nm에서 최대 흡광도를 가지게 되는데, 항산화 물질은 DPPH라디칼을 소거하여 고유의 색을 잃고 투명하게 변화시킨다. DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 100 μM과 처리할 물질의 시료 준비하고, 준비된 시료를 DPPH 용액과 1:20의 비율로 섞어 30분간, 37 ℃에서 보관하였다. 이후, 반응이 끝난 시료를 Spectrophotometer를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 양성 대조구로는 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다. DPPH 소거능은 [(Acontrol-Asample)/Acontrol]
Figure 112019102253849-pat00003
100에 의해 산출하였으며, 여기서 Acontrol은 소거물질이 없을 경우의 흡광도이고, Asample은 소거물질이 있을 경우의 흡광도이다.
(2) ABTS (radical cation de-colorization assay)
7mM ABTS와 2.45mM potassium persulfate를 섞고, 상온에서 16시간 incubation 후 ABTs 양이온(ABTs+)을 생성하였다. 734nm에서 흡광도의 값이 0.7 이하가 되도록 희석하여 시험용액으로 제조하였다. ABTs+ 용액은 7mM ABTS와 2.45mM potassium persulfate를 1:1(v/v)로 섞고 상온에서 16시간 incubation 후 ABTs 양이온(ABTs+)을 생성하였다. 그리고, 734nm에서 흡광도의 값이 0.7 이하가 되도록 에탄올로 희석하여 시험용액으로 제조하였다. ABTs+ 용액 143㎕에 시료 7㎕를 가하여 흡광도 값을 5분 후에 측정하였으며, 양성 대조구로는 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다. ABTs+ 소거능은 [(Acontrol-Asample)/Acontrol]
Figure 112019102253849-pat00004
100에 의해 산출하였으며, 여기서 Acontrol은 소거물질이 없을 경우의 흡광도이고, Asample은 소거물질이 있을 경우의 흡광도이다.
(3) Reducing power
0.2 M의 인산완충용액(pH 6.6) 50㎕에 페리시안화칼륨 50㎕와 시료 20 ㎕를 넣은 후, 50℃에서 20분간 반응시켰다. 반응이 완료된 후에 10% TCA 용액 50㎕를 넣고, 3000
Figure 112019102253849-pat00005
g로 20분간 원심분리 하였다. 상층액 100㎕와 3차 증류수 100㎕, 0.1% 염화제이철(ferric chloride) 20㎕를 넣은 뒤에 700nm에서 흡광도를 측정하였으며, 양성 대조구로는 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.
[결과]
서목태를 최적조건에서 발효한 상등액 건조물을 각각 다른 농도로 제조 후 α-glucosidase 저해능, ACE 저해능 및 항산화능을 측정하였으며, 그 결과를 SPSS 통계 프로그램을 사용하여 50% 저해하는 농도(IC50) 값으로 계산하였다. 서목태 0.6 중량% 및 포도당 2 중량%로 제조된 배지를 효모로 발효하여 얻은 배양 상등액 건조물의 IC50 값은 α-glucosidase 저해능의 경우 29.5mg/mL, ACE 저해능은 6.3mg/mL 및 항산화능 또한 3~6mg/mL으로 확인되었다.
α- glucosidase 저해능 (IC 50 )
실시예 13 (S/R0.6/D) 29.5 mg/mL
Acarbose 5.9 mg/mL
ACE 저해능
실시예 13 (S/R0.6/D) 6.3 mg/mL
Lisinopril 1.8 ng/mL
항산화능
실시예 13 (S/R0.6/D) DPPH: 3.0 mg/mL
ABTS: 27.4 mg/mL
Ascorbic acid DPPH: 6.8 μg/mL
ABTS: 238.6 μg/mL
기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국외)
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Claims (18)

  1. 사카로마이세스 서바지 또는 사카로마이세스 세레비지아에를, 추가의 질소원을 실질적으로 포함하지 않는 서목태 함유 배지에서 배양하고,
    상기 배양 후 얻어진 배양물로부터 혈당강하용 조성물을 제조하는 것을 포함하는, 혈당강하용 조성물의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추가의 질소원은 YPD, 우레아, 카제인, 대두, 밀기울, 현미유, 육류 추출물, 전지분유, 건조된 효모, 암모늄염, 트립토판, 프롤린, 아스파라긴, 및 글루타메이트로 이루어진 군 중 하나 이상 선택된 것인, 제조 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 배양은 20℃ 내지 40℃의 온도에서 12시간 내지 7일간 실시하는 제조 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은, 추가로 항산화 효과를 갖는, 제조 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 사카로마이세스 서바지는 KCCM12157P로 기탁된 사카로마이세스 서바지 Ceb-kc-011인, 제조 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 배양 후 얻어진 배양물을 원심분리하고 균체 함유 물질을 제거하여 배양 상등액을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 제조 방법.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 배지가 탄소원을 추가로 포함하는, 제조 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 탄소원이 단당류 또는 이당류인, 제조 방법.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 서목태가 전체 배지 부피를 기준으로 0.2 중량% 내지 4 중량%인, 제조 방법.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 따른 방법에 의해 제조된 서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈당강하용 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 조성물 고형 중량을 기준으로 상기 서목태의 효모 발효물이 1 중량% 내지 70 중량% 로 포함되는, 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 상기 조성물이 의약 또는 식품 조성물인, 조성물.
  13. 제10항에 있어서, 상기 서목태의 효모 발효물이 액상 상태 또는 건조된 분말 상태인, 조성물.
  14. 사카로마이세스 서바지 또는 사카로마이세스 세레비지아에를, 추가의 질소원을 실질적으로 포함하지 않는 서목태 함유 배지에서 배양하고,
    상기 배양 후 얻어진 배양물로부터 혈압강하용 조성물을 제조하는 것을 포함하는, 혈압강하용 조성물의 제조 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 추가의 질소원은 YPD, 우레아, 카제인, 대두, 밀기울, 현미유, 육류 추출물, 전지분유, 건조된 효모, 암모늄염, 트립토판, 프롤린, 아스파라긴, 및 글루타메이트로 이루어진 군 중 하나 이상 선택된 것인, 제조 방법.
  16. 제14항에 있어서, 상기 배양은 20℃ 내지 40℃의 온도에서 12시간 내지 7일간 실시하는 제조 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 배양 후 얻어진 배양물을 원심분리하고 균체 함유 물질을 제거하여 배양 상등액을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 제조 방법.
  18. 제14항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 따른 방법에 의해 제조된 서목태의 효모 발효물을 포함하는 혈압강하용 조성물.
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