CN111346111B - 一种复方海洋中药提取物及其在降糖方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种复方海洋中药提取物及其在降糖方面的应用，所述牡蛎肉与海马复方提取物的制备方法包括如下步骤：按重量份计，将牡蛎肉1‑10份、海马1‑10份与溶剂混合、匀浆，调pH6.0‑7.0后，于45‑50℃下，加入蛋白酶，保持45‑50℃酶解2‑5小时后，灭酶，分离酶解液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物。

Description

一种复方海洋中药提取物及其在降糖方面的应用
技术领域
本发明属于海洋中药领域，具体涉及一种复方海洋中药提取物及其在降糖方面的应用。
背景技术
牡蛎是世界上第一养殖贝类，牡蛎肉中含有45％-47％的蛋白质，7％-11％的脂肪，19％-38％的多糖，还有维生素、牛磺酸及微量元素等成分,具有缓解疲劳、抑制脂肪生成、抗炎等功效。海马是我国传统补益中药，具有温肾壮阳、散结消肿的作用。现代药理学表明，海马提取物还显示出抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳等功效。本发明提供一种牡蛎肉与海马复方提取物，该提取物在体外显示出较强的SLGT2抑制活性，有望被开发用于治疗II型糖尿病。
发明内容
本发明提供一种牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于所述牡蛎肉与海马复方提取物的制备方法包括如下步骤：
按重量份计，将牡蛎肉1-10份、海马1-10份与溶剂混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入蛋白酶，保持45-50℃酶解2-5小时后，灭酶，分离酶解液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物。
所述牡蛎肉可以是干牡蛎肉或新鲜牡蛎肉；海马可以是新鲜海马或干海马。所述溶剂选自水或乙醇溶液，溶剂的用量为牡蛎肉与海马质量之和的3-6倍。
所述蛋白酶选自中性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或几种；蛋白酶的酶活为20-1000u/mg，蛋白酶的用量为牡蛎肉和海马质量之和的0.1-1.8％。
所述灭酶为常规灭酶操作，优选置于沸水中保温5-15分钟。
所述分离酶解液优选采用过滤收集滤液或离心取上清液的操作。
本发明提供上述牡蛎肉与海马复方提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
按重量份计，将牡蛎肉1-10份、海马1-10份与溶剂混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入蛋白酶，保持45-50℃酶解2-5小时后，灭酶，分离酶解液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物。
所述牡蛎肉可以是干牡蛎肉或新鲜牡蛎肉；海马可以是新鲜海马或干海马。所述溶剂选自水或体积分数10-90％的乙醇溶液，溶剂的用量为牡蛎肉与海马质量之和的3-6倍。
所述蛋白酶选自中性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或几种；蛋白酶的酶活为20-1000u/mg，蛋白酶的用量为牡蛎肉和海马质量之和的0.1-1.8％。
所述灭酶为常规灭酶操作，优选置于沸水中保温5-15分钟。
所述分离酶解液优选采用过滤收集滤液或离心取上清液的操作。
本发明的另一实施方案提供上述牡蛎肉与海马复方提取物在制备SGLT2抑制剂中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述牡蛎肉与海马复方提取物在制备预防和/或治疗糖尿病药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种组合物，其特征在于以上述牡蛎肉与海马复方提取物作为有效成分。该组合物还可包括药学上可接受的辅料或食品上可接受的辅料。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明通过使用蛋白酶对牡蛎肉与海马的进行酶解，获得一种对SLGT2具有显著抑制作用的提取物，该提取物的活性原优于单一牡蛎肉或海马的酶解提取物，原因可能是海马或牡蛎肉中(或其酶解液)存在某种可以促进牡蛎肉或海马中某种或某几种有效成分的溶出；或者是海马酶解液中存在某种协同物质促进牡蛎肉酶解液提取物发挥SLGT2抑制活性。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
取新鲜牡蛎肉200g、干海马20g与水(660g)混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入中性蛋白酶(50u/mg，1.1g)，保持45-50℃酶解4小时后，置于沸水中保温15分钟灭酶，离心取上清液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物(1.52g，以下简称产品A)。
实施例2
取干牡蛎肉10g、干海马10g与体积分数10％乙醇溶液(120g)混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入中性蛋白酶(50u/mg，180mg)、风味蛋白酶(20u/mg，180mg)，保持45-50℃酶解5小时后，置于沸水中保温10分钟灭酶，过滤取滤液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物(0.65g，以下简称产品B)。
实施例3
取新鲜牡蛎肉200g、干海马20g与体积分数90％乙醇溶液(1100g)混合混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入木瓜蛋白酶(800u/mg，220mg)，保持45-50℃酶解2小时后，置于沸水中保温5分钟灭酶，离心取上清液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物(1.36g，以下简称产品C)。
实施例4
取新鲜牡蛎肉200g、干海马20g与水(660g)混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下浸泡4小时后，离心取上清液、冷冻干燥得复方提取物(1.12g，以下简称产品D)。
实施例5
取新鲜牡蛎肉200g与水(660g)混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入中性蛋白酶(50u/mg，1.1g)，保持45-50℃酶解4小时后，置于沸水中保温15分钟灭酶，离心取上清液、冷冻干燥即得牡蛎肉提取物(0.95g，以下简称产品E)。
实施例6
取干海马20g与水(660g)混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入中性蛋白酶(50u/mg，1.1g)，保持45-50℃酶解4小时后，置于沸水中保温15分钟灭酶，离心取上清液、冷冻干燥即得海马提取物(0.48g，以下简称产品F)。
实施例7
将能够稳定表达人SGLT2基因的CHO细胞接种到含F12(1x)培养基的96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2的孵化器中孵育过夜。使用pH＝7.4的实验缓冲液冲洗细胞后，用49μL的缓冲液(含10mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸，1.2mM氯化镁、120mM氯化钠，4.7mM氯化钾和2.2mM氯化钙，pH＝7.4M)、1μL产品A-F的DMSO稀释液(各5个浓度梯度分别为100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL)和50μL 6μM的[14C]-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷缓冲液，在37℃条件下孵育细胞1h。去除培养液，停止摄取反应，用冰冷终止缓冲液冲洗细胞停止孵化。然后加入50μL10％强氧化钠冰冷裂解缓冲液裂解细胞，将细胞裂解物转入picoprias-vial，加入2mL的Ultima Gold Cocktail。用Tri-carb对细胞内的放射性含量进行量化，并使用GraphPad Prism 5.0对所得到的数据进行分析，调整相应曲线拟合经验四参数模型，确定产品A-F的半数响应浓度，即IC50。本实验以达格列净作为阳性对照。结果见下表。
测试样品 IC50(μg/mL) 抑制率(100μg/mL)
产品A 10.62 107.20％
产品B 9.58 105.10％
产品C 12.50 104.20％
产品D - 48.50％
产品E 85.42 72.50％
产品F - 16.80％
达格列净 0.50 101.00％
“-”表示未测定。

Claims (10)

1.一种牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于所述牡蛎肉与海马复方提取物的制备方法包括如下步骤：
按重量份计，将牡蛎肉1-10份、海马1-10份与溶剂混合、匀浆，调pH6.0-7.0后，于45-50℃下，加入蛋白酶，保持45-50℃酶解2-5小时后，灭酶，分离酶解液、冷冻干燥即得所述牡蛎肉与海马复方提取物；
所述溶剂选自水或乙醇溶液。
2.权利要求1所述的牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于所述溶剂的用量为牡蛎肉与海马质量之和的3-6倍。
3.权利要求1所述的牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于所述蛋白酶选自中性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或几种。
4.权利要求1所述的牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于蛋白酶的用量为牡蛎肉和海马质量之和的0.1-1.8％，蛋白酶的酶活为20-1000u/mg。
5.权利要求1所述的牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于所述灭酶为置于沸水中保温5-15分钟。
6.权利要求1所述的牡蛎肉与海马复方提取物，其特征在于所述分离酶解液选自采用过滤收集滤液或离心取上清液的操作。
7.权利要求1-6任一项所述的牡蛎肉与海马复方提取物的制备方法，其特征在于包括权利要求1-6任一项所述的步骤。
8.权利要求1-6任一项所述的牡蛎肉与海马复方提取物在制备预防和/或治疗糖尿病药物中的应用。
9.一种用于预防和/或治疗糖尿病的组合物，其特征在于该组合物的有效成分为权利要求1-6任一项所述的牡蛎肉与海马复方提取物。
10.权利要求9所述的组合物，其特征在于该组合物还包括药学上可接受的辅料或食品上可接受的辅料。
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