JP2018166515A

JP2018166515A - インフルエンザウイルス疾患の予防及び治療で用いるためのワクチン

Info

Publication number: JP2018166515A
Application number: JP2018126633A
Authority: JP
Inventors: ガルシア‐サス‐トレアドルフォ; Garcia-Sastre Adolfo; パレセペテル; Palese Peter; ティー．ワングタイア; T Wang Taia; エス．タングエネ; S Tan Gene
Original assignee: Icahn School of Medicine at Mount Sinai
Current assignee: Icahn School of Medicine at Mount Sinai
Priority date: 2010-02-18
Filing date: 2018-07-03
Publication date: 2018-11-01
Also published as: MX2012009581A; EP2536425A4; US20170114103A9; US20130209499A1; CN102939096A; EP2536425B1; BR112012020839A2; AU2011217903B2; CA2790380A1; CN102939096B; WO2011103453A3; MX342716B; EP2536425A2; AU2011217903A1; US9701723B2; JP2016196472A; JP2013520172A; WO2011103453A2; KR20120132506A

Abstract

【課題】複数の異なるインフルエンザ株及び亜型に対する免疫応答を生じさせることができる免疫原性組成物(例えば、ワクチン)、つまり「普遍的な」fluワクチンインフルエンザウイルスの提供。【解決手段】特定の配列を持ち、全長インフルエンザウイルス血球凝集素ではない単離されたコアペプチド、及びポリペプチドを含む組成物、対象において複数のインフルエンザ亜型に対する免疫応答を生じさせるためのその使用方法を提供する。【選択図】図１

Description

本出願は、2010年2月18日に出願された米国仮特許出願第61/305,898号、2010年5月26日
に出願された米国非仮特許出願第12/788,103号、2010年6月11日に出願された米国仮特許
出願第61/354,160号、及び2010年9月21日に出願された米国仮特許出願第61/385,083号の
優先権の利益を主張し、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる。

本発明は、米国国立衛生研究所(NIH)によって授与された助成番号U01 AI070469-02及び
1RC1 AI086061-01の下で米国政府による支援を受けて行なわれた。米国政府は、本発明に
おける一定の権利を有する。

(1.序論)
インフルエンザウイルス血球凝集素の部分を含むポリペプチド、ワクチン中の免疫原と
して用いることができるそのようなポリペプチドを含む組成物、及び対象において複数の
インフルエンザ亜型に対する免疫応答を生じさせるためのその使用方法が本明細書で提供
される。

(2.背景)
インフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルス科(Orthomyxoviridae)のファミリー
に属するエンベロープ型のRNAウイルスである(Palese及びShawの文献(2007、オルトミク
ソウイルス科:ウイルス及びその複製(Orthomyxoviridae: The Viruses and Their Replic
ation), 第5版.フィールズのウイルス学(Fields' Virology), B.N. Fields, D. M. Knipe
、及びP.M. Howley編. Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams ＆ Wilkins, Phila
delphia, USA, p1647-1689))。インフルエンザウイルスの自然宿主は鳥類であるが、イン
フルエンザウイルス(鳥類起源のものを含む)は、ヒト及び他の動物宿主(イヌ、ブタ、ウ
マ、海洋哺乳動物、及びイタチ類)に感染し、疾病を引き起こすこともできる。例えば、
アジアで広がっているH5N1鳥インフルエンザウイルスは、中国及びインドネシアのブタで
発見されており、その宿主範囲を広げて、A型インフルエンザに感染しやすいと一般に考
えられていなかったネコ、ヒョウ、及びトラを含むようになってもいる(CIDRAP-鳥インフ
ルエンザ:農業及び野生生物での注意事項(Avian Influenza: Agricultural and Wildlife
Considerations))。動物におけるインフルエンザウイルス感染の出現は、ヒトパンデミ
ックインフルエンザ株を発生させる可能性がある。

A型及びB型インフルエンザウイルスは、主要なヒト病原体であり、不顕性感染から死を
もたらすこともある原発性ウイルス肺炎まで重症度が異なる呼吸器疾患を引き起こす。感
染の臨床的効果は、インフルエンザ株の病原性、並びに宿主の曝露、病歴、年齢、及び免
疫状態によって様々である。季節性インフルエンザに起因する累積罹患率及び死亡率は、
比較的高い感染率のためにかなり高い。通常の季節では、インフルエンザは、300万〜500
万症例の重症疾患を引き起こすことができ、全世界で200,000〜500,000人の死亡と関連す
る(世界保健機構(2009年4月)インフルエンザ(季節性)概況報告書211(Influenza(Seasonal
)Fact Sheet 211))。米国では、インフルエンザウイルスは、人口のおよそ10〜15％に感
染し(Glezen及びCouch RBの文献(1978)1974〜76年のヒューストン地区のパンデミック間
期インフルエンザ(Interpandemic influenza in the Houston area, 1974-76.)(N Engl J
Med 298:587-592);Foxらの文献(1982)1975〜1979年のシアトルの家族におけるインフル
エンザウイルス感染。II.病気に侵された家庭における感染パターン、並びに年齢及び事
前抗体と感染及び関連疾病の発生との関係(Influenza virus infections in Seattle fam
ilies, 1975-1979. II. Pattern of infection in invaded households and relation of
age and prior antibody to occurrence of infection and related illness.)(Am J Ep
idemiol 116:228-242)、毎年約30,000人の死亡と関連する(Thompson WWらの文献(2003)米
国におけるインフルエンザ及び呼吸器合胞体｛こきゅうきごうほうたい｝ウイルスと関
連する死亡(Mortality Associated with Influenza and Respiratory Syncytial Virus i
n the United States.)(JAMA 289:179-186);Belshe(2007)ワクチンに関するトランスレー
ショナルリサーチ:インフルエンザを一例として(Translational research on vaccines:
influenza as an example.)(Clin Pharmacol Ther 82:745-749)。

毎年の流行に加え、インフルエンザウイルスは、たまに起こるパンデミックの原因であ
る。例えば、A型インフルエンザウイルスは、1918年、1957年、及び1968年に発生したよ
うなパンデミックを引き起こすことができる。主要なウイルス抗原である血球凝集素(HA)
に対する予め形成された免疫がないために、パンデミックインフルエンザウイルスは、単
年で人口の50％よりも多くに罹患させることができ、しばしば季節性インフルエンザウイ
ルスよりも重い疾患を引き起こす。明確な例は、およそ5000万人〜1億人が死亡した、191
8年のパンデミックである(Johnson及びMuellerの文献(2002)説明の更新:1918〜1920年の
「スペイン風邪(Spanish)」による全世界の死亡者数(Updating the Accounts: Global Mo
rtality of the 1918-1920 "Spanish")(Influenza Pandemic Bulletin of the History o
f Medicine 76:105-115)。1990年代後半の高病原性鳥H5N1インフルエンザウイルス(Claas
らの文献(1998)高病原性鳥インフルエンザウイルスと関連するヒトA型インフルエンザH5N
1ウイルス(Human Influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian infl
uenza virus.)(Lancet 351:472-7)の出現以降、このウイルスがヒトからヒトへと感染す
るようになり、大きなパンデミックを引き起こすかも知れないという懸念がある。

インフルエンザウイルス感染を防御する有効な方法は、ワクチン接種によるものである
;しかしながら、現在のワクチン接種手法は、循環している株とワクチン製剤に含まれる
分離株との間で良好な一致が得られることを当てにしている。そのような一致は、因子の
組合せのために得るのが困難であることが多い。第一に、インフルエンザウイルスは絶え
ず変化を遂げている:3〜5年ごとに、A型インフルエンザウイルスの優勢株は、既存の抗体
応答を避けるのに十分な抗原連続変異(antigenic drift)を経た変異体に取って代わられ
る。そのため、ワクチン製剤に含まれるべき分離株は、世界保健機関(WHO)の共同研究セ
ンターの集中的な監視努力に基づいて、毎年選択されなければならない。第二に、ワクチ
ンの製造及び流通に十分な時間を与えるために、株は、インフルエンザシーズンの開始の
約6カ月前に選択されなければならない。ワクチン株選択委員会の予測が不正確で、ワク
チン接種の有効性が大幅に低下することもある。

A型インフルエンザウイルスの新規亜型がヒト集団に侵入する可能性も、現在のワクチ
ン接種戦略にとって大きな課題となっている。インフルエンザウイルスのどの亜型及び株
が次のパンデミックをもたらすかを予測することは不可能なので、現在の株特異的手法を
用いて、パンデミックインフルエンザワクチンを調製することはできない。

(3.概要)
特定の亜型の複数のインフルエンザウイルス株、又は異なる亜型由来の株と交差反応性
がある免疫応答を生じさせるために対象(ヒト対象を含む、動物対象)で用いることができ
るポリペプチド組成物(「fluポリペプチド」)が記載されている。特に、fluポリペプチド
は、アミノ酸の配列及び/又は構造において、本明細書に記載のインフルエンザ血球凝集
素のHA2サブユニットの長いαヘリックスの領域に対応する「コアポリペプチド」又は修
飾コアポリペプチドを含む。

本発明は、インフルエンザ血球凝集素のHA2サブユニットの長いαヘリックス領域の構
造及び機能/活性を模倣するfluポリペプチドの設計に一部基づいている。驚くことに、特
定のインフルエンザ亜型のHA2の長いαヘリックスに対応するfluポリペプチドによる免疫
は、複数のインフルエンザ亜型由来の血球凝集素と交差反応する血清抗体を誘導する。本
明細書に記載のデータは、ある特定の亜型のHA2の長いαヘリックスに対応するfluポリペ
プチドで免疫した動物が、異なるインフルエンザウイルス亜型による致死的インフルエン
ザウイルス曝露から防御されることも示している。したがって、本明細書で提供されるfl
uポリペプチドは、複数の異なるインフルエンザ株及び亜型に対する免疫応答を生じさせ
ることができる免疫原性組成物(例えば、ワクチン)、つまり、「普遍的な」fluワクチン
に使用できる。

任意の特定の作動理論に束縛されることを意図するものではないが、異なるインフルエ
ンザ亜型におけるHAの可変性にもかかわらず、インフルエンザ血球凝集素のHA2サブユニ
ットの長いαヘリックス領域は、希少な交差反応性抗体(例えば、H3インフルエンザウイ
ルスに対する広範な中和活性を有するモノクローナル抗体12D1など)によって認識される
保存されたエピトープ(複数可)/領域を含み得る。fluポリペプチドは、このエピトープ/
領域を適切な立体構造で露出させ、かつ交差反応性の又は「普遍的な」エピトープ/領域
に対する増強された免疫原性を付与するように設計されたコンストラクト中で免疫系に提
示され、これを用いて、複数のインフルエンザ亜型に対する対象の血清抗体応答、及び好
ましくは、中和応答を生じさせることができる。

他の態様では、fluポリペプチド(複数可)をコードする核酸、fluポリペプチド(複数可)
を含むウイルス及び免疫原性組成物、並びに免疫方法が本明細書で提供される。

(3.1 用語)
アミノ酸位置に関して用いられるときの、用語「約(about)」又は「約(approximately)
」は、配列中の特定のアミノ酸位置、又はそのアミノ酸位置からN末端方向もしくはC末端
方向に、5、4、3、2、もしくは1残基以内にある任意のアミノ酸を指す。

本明細書で用いられるように、数字と一緒に用いられる場合、用語「約(about)」又は
「約(approximately)」は、言及された数字の1、5、又は10％以内の任意の数字を指す。

用語「アミノ酸」又は特定のアミノ酸に対する任意の言及は、天然のタンパク質新生ア
ミノ酸、並びに非天然アミノ酸、例えば、アミノ酸類似体を含むことが意図される。当業
者であれば、この定義が、特に具体的に記述しない限り、天然のタンパク質新生(L)-アミ
ノ酸、その光学(D)-異性体、アミノ酸類似体、例えば、ペニシラミン(3-メルカプト-D-バ
リン)を含む化学修飾アミノ酸、天然の非タンパク質新生アミノ酸、例えば、ノルロイシ
ン、及び当技術分野でアミノ酸に特徴的であることが知られている特性を有する化学合成
アミノ酸を含むことを知っている。さらに、用語「アミノ酸等価物」は、天然アミノ酸の
構造から逸脱しているが、それらをペプチド内で置換することができるような、アミノ酸
の構造を実質的に有する化合物を指し、このアミノ酸は、その置換にもかかわらず、その
生物学的活性を保持する。したがって、例えば、アミノ酸等価物は、側鎖修飾又は置換を
有するアミノ酸を含み、かつ関連する有機酸、アミドなどを含むこともできる。用語「ア
ミノ酸」は、アミノ酸等価物を含むことが意図される。

用語「アミノ酸配列同一性」は、1対の整列されたアミノ酸配列間の、通常パーセンテ
ージとして表される同一性又は類似性の程度を指す。本明細書で用いられるように、アミ
ノ酸配列に関する用語「同一性パーセント」、「同一パーセント」、「同一性％」、及び
「同一％」は、配列を整列させ、かつ最大の配列相同性パーセントを達成するために、必
要に応じてギャップを導入した後の、ペプチド中の対応するアミノ酸残基と同一である(
すなわち、アラインメント中の所与の位置のアミノ酸残基が同じ残基である)候補配列中
のアミノ酸残基のパーセンテージを指す。本明細書で用いられるように、アミノ酸配列に
関する用語「類似性パーセント」、「類似パーセント」、「類似性％」、及び「類似％」
は、配列を整列させ、かつ最大の配列相同性パーセントを達成するために、必要に応じて
ギャップを導入した後の、ペプチド中の対応するアミノ酸残基と類似する(すなわち、ア
ラインメント中の所与の位置のアミノ酸置換が、以下で論じるような、保存的な置換であ
る)候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージを指す。配列の同一性及び類似性のパー
センテージを含む配列相同性は、周知の配列アラインメント技術、好ましくは、この目的
のために設計されたコンピュータアルゴリズムを用いて、該コンピュータアルゴリズムの
デフォルトパラメータ、又はそれを含むソフトウェアパッケージを用いて決定される。コ
ンピュータアルゴリズム及びそのようなアルゴリズムを組み込んでいるソフトウェアパッ
ケージの非限定的な例としては、以下のものが挙げられる。BLASTファミリーのプログラ
ムは、2つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの特定の非限定的な例を例示す
る(例えば、Karlin及びAltschulの文献(1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-226
8)(Karlin及びAltschulの文献(1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877)のよう
に修正された)、Altschulらの文献(1990, J. Mol. Biol. 215:403-410)(NBLAST及びXBLAS
Tを記載している)、Altschulらの文献(1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)(Gapped
BLAST及びPSI-Blastを記載している)。別の特定の例は、Myers及びMillerの文献(1988 C
ABIOS 4:11-17)のアルゴリズムであり、これは、ALIGNプログラム(バージョン2.0)に組み
込まれ、GCG配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部として入手可能である。
別の特定の例は、FASTAプログラム(Pearson W.R.及びLipman D.J.の文献(Proc. Nat. Aca
d. Sci. USA, 85:2444-2448, 1988))であり、Wisconsin Sequence Analysisパッケージの
一部として入手可能である。さらなる例としては、BESTFIT、これは、Smith及びWaterman
の文献(Advances in Applied Mathematics, 2:482-489, 1981)の「局所相同性」アルゴリ
ズムを用いて、2つの配列間で最良の単一の類似性領域を見出すものであり、比較されて
いる2つの配列の長さが異なる場合に好ましい;並びにGAP、これは、Neddleman及びWunsch
の文献(J. Mol. Biol. 48:443-354, 1970)のアルゴリズムに従って「最大類似性」を見出
すことによって2つの配列を整列させるものであり、2つの配列がおよそ同じ長さであり、
アラインメントが全長にわたって予想される場合に好ましい、が挙げられる。

「保存的置換」は、あるクラスのアミノ酸の同じクラスの別のアミノ酸との交換を指す
。特定の実施態様では、保存的置換は、ポリペプチドの構造もしくは機能、又は両方を変
化させない。保存的置換の目的のためのアミノ酸のクラスには、疎水性のもの(Met、Ala
、Val、Leu、Ile)、中性で親水性のもの(Cys、Ser、Thr)、酸性のもの(Asp、Glu)、塩基
性のもの(Asn、Gln、His、Lys、Arg)、立体構造を破壊するもの(conformation disrupter
)(Gly、Pro)、及び芳香族性のもの(Trp、Tyr、Phe)が含まれる。

本明細書で用いられるように、用語「コアポリペプチド」は、インフルエンザ血球凝集
素HA2ポリペプチドの領域に対応するポリペプチドセグメントを指す、すなわち、本明細
書で言及されるコアポリペプチドは、インフルエンザ血球凝集素HA2ポリペプチド全体を
含むわけではない。具体的な実施態様では、この用語は、インフルエンザ血球凝集素HA2
ポリペプチドの長いαヘリックス領域の領域に対応するポリペプチドセグメントを指す。
コアポリペプチドの例については、第5.1.1節を参照されたい。

本明細書で用いられるように、用語「断片」は、特定のポリペプチドの一部を指す。あ
る実施態様では、ポリペプチド(例えば、コアポリペプチド)の断片は、長さが少なくとも
8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、40、35、40、45、又は50アミ
ノ酸である。いくつかの実施態様では、ポリペプチド(例えば、コアポリペプチド)の断片
は、長さが8〜15、8〜20、8〜25、8〜30、8〜40、10〜15、10〜20、10〜25、10〜30、10
〜40、10〜45、10〜50、15〜20、15〜25、15〜30、15〜35、15〜40、15〜45、15〜50、25
〜30、25〜40、25〜45、又は25〜50アミノ酸である。

本明細書で用いられるように、用語「修飾コアポリペプチド」は、何らかの方法でコア
ポリペプチドのインビボでの半減期を延長又は増大させるように修飾されたコアポリペプ
チドを指す。コアポリペプチドの半減期を延長又は増大させるようにポリペプチドを修飾
する技術は当業者に公知である。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドを、末端L-
アミノ酸のD-アミノ酸との置換によるか、該ポリペプチドのペグ化によるか、該ポリペプ
チドのC末端のアミド化によるか、又は該ポリペプチドのN末端のアセチル化によって修飾
することができる。修飾コアポリペプチドの例については、第5.1.2節を参照されたい。

本明細書で用いられるように、用語「fluポリペプチド」は、コアポリペプチド又は修
飾コアポリペプチドを含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、fluポリペプ
チドは、コアポリペプチドからなる。ある実施態様では、fluポリペプチドは、修飾コア
ポリペプチドからなる。ある実施態様では、fluポリペプチドは、ペグ化コアポリペプチ
ドを含む。ある実施態様では、fluポリペプチドは、そのN末端及び/又はC末端でペグ化さ
れている。ある実施態様では、fluポリペプチドは、そのN末端及び/又はC末端でアセチル
化されたコアポリペプチドを含む。ある実施態様では、fluポリペプチドは、そのN末端及
び/又はC末端でアセチル化されている。ある実施態様では、fluポリペプチドは、コアポ
リペプチド又は修飾コアポリペプチドとリンカーとを含む。ある実施態様では、fluポリ
ペプチドは、キャリアに連結されたコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド及び/又は修飾コアポリペプチド、並びに以下のうちの1つ、2つ、3つ、もしくは
それより多く、又は全てを含む:1)1つ、2つ、又はそれより多くのT細胞エピトープ(例え
ば、CD8 T細胞エピトープ);2)1つ、2つ、又はそれより多くの免疫原性ポリペプチド;3)fl
uポリペプチドの多量体化を促進するポリペプチド;4)fluポリペプチドの精製を促進し、
かつ/又は溶解度を高める1つ、2つ、又はそれより多くのタンパク質タグ;5)1つ、2つ、又
はそれより多くのキャリア;並びに6)1つ、2つ、又はそれより多くのリンカー。

本明細書で用いられるように、対象への療法の投与との関連における用語「有効量」は
、予防及び/又は治療効果(複数可)を有する療法の量を指す。ある実施態様では、対象へ
の療法の投与との関連における「有効量」は、以下の効果のうちの1つ、2つ、3つ、4つ、
又はそれより多くを達成するのに十分である療法の量を指す:(i)インフルエンザウイルス
感染、それと関連する疾患もしくは症状の重症度を軽減もしくは改善する;(ii)インフル
エンザウイルス感染、それと関連する疾患もしくは症状の持続期間を短縮する;(iii)イン
フルエンザウイルス感染、それと関連する疾患もしくは症状の進行を予防する;(iv)イン
フルエンザウイルス感染、それと関連する疾患もしくは症状の退行をもたらす;(v)インフ
ルエンザウイルス感染、それと関連する疾患もしくは症状の発症もしくは開始を予防する
;(vi)インフルエンザウイルス感染、それと関連する疾患もしくは症状の再発を予防する;
(vii)1つの細胞から別の細胞、1つの組織から別の組織、もしくは1つの器官から別の器官
へのインフルエンザウイルスの伝播を低減もしくは予防する;(ix)1つの対象から別の対象
へのインフルエンザウイルスの伝播を予防もしくは低減する;(x)インフルエンザウイルス
感染と関連する器官不全を低減する;(xi)対象の入院を減少させる;(xii)入院期間を短縮
する;(xiii)インフルエンザウイルス感染もしくはそれと関連する疾患を有する対象の生
存を増加させる;(xiv)インフルエンザウイルス感染もしくはそれと関連する疾患を消失さ
せる;(xv)インフルエンザウイルスの複製を阻害もしくは低減する;(xvi)宿主細胞(複数可
)へのインフルエンザウイルスの侵入を阻害もしくは低減する;(xviii)インフルエンザウ
イルスゲノムの複製を阻害もしくは低減する;(xix)インフルエンザウイルスタンパク質の
合成を阻害もしくは低減する;(xx)インフルエンザウイルス粒子の会合を阻害もしくは低
減する;(xxi)宿主細胞(複数可)からのインフルエンザウイルス粒子の放出を阻害もしくは
低減する;(xxii)インフルエンザウイルス力価を低下させる;及び/又は(xxiii)別の療法の
予防もしくは治療効果(複数可)を増強又は改善する。

ある実施態様では、有効量はインフルエンザウイルス疾患からの完全な防御をもたらす
のではなく、未処置の対象と比較してより低い力価又は少ない数のインフルエンザウイル
スをもたらす。ある実施態様では、有効量は、未処置の対象と比べて、0.5倍、1倍、2倍
、4倍、6倍、8倍、10倍、15倍、20倍、25倍、50倍、75倍、100倍、125倍、150倍、175倍
、200倍、300倍、400倍、500倍、750倍、もしくは1,000倍、又はそれより大きいインフル
エンザウイルスの力価の低下をもたらす。いくつかの実施態様では、有効量は、未処置の
対象と比べて、約1log以上、約2log以上、約3log以上、約4log以上、約5log以上、約6log
以上、約7log以上、約8log以上、約9log以上、約10log以上、1〜3log、1〜5log、1〜8log
、1〜9log、2〜10log、2〜5log、2〜7log、2〜8log、2〜9log、2〜10log、3〜5log、3〜7
log、3〜8log、3〜9log、4〜6log、4〜8log、4〜9log、5〜6log、5〜7log、5〜8log、5〜
9log、6〜7log、6〜8log、6〜9log、7〜8log、7〜9log、又は8〜9logのインフルエンザウ
イルスの力価の低下をもたらす。インフルエンザウイルスの力価、数、又は総負荷量の低
下の利点としては、重症度がより低い感染症状、より少ない感染症状、及び感染と関連す
る疾患の長さの短縮が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いられるように、「血球凝集素」及び「HA」は、当業者に公知の任意の血
球凝集素を指す。ある実施態様では、血球凝集素は、インフルエンザ血球凝集素、例えば
、A型インフルエンザ血球凝集素、B型インフルエンザ血球凝集素、又はC型インフルエン
ザ血球凝集素である。現在、2つの異なるグループ:グループ1及びグループ2に分類される
、インフルエンザウイルスの16の血球凝集素亜型がある。典型的な血球凝集素は、シグナ
ルペプチド(本明細書では任意)、ステムドメイン、球状ヘッドドメイン、内腔ドメイン(
本明細書では任意)、膜貫通ドメイン(本明細書では任意)、及び細胞質ドメイン(本明細書
では任意)を含む、当業者に公知のドメインを含む。ある実施態様では、血球凝集素は、
単一のポリペプチド鎖、例えば、HA0からなる。ある実施態様では、血球凝集素は、4次結
合した2以上のポリペプチド鎖、例えば、HA1及びHA2からなる。当業者であれば、未成熟
なHA0が切断されてシグナルペプチド(約20アミノ酸)を放出し、成熟した血球凝集素HA0を
生じさせ得ることを認識するであろう。血球凝集素HA0は、別の部位で切断されて、HA1ポ
リペプチド(約320アミノ酸、球状ヘッドドメインとステムドメインの一部とを含む)及びH
A2ポリペプチド(約220アミノ酸、ステムドメインの残り、内腔ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞質ドメインを含む)を生じさせ得る。ある実施態様では、血球凝集素は、シグ
ナルペプチド、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインを含む。ある実施態様では、血球凝
集素は、シグナルペプチドを欠く、すなわち、血球凝集素は成熟した血球凝集素である。
ある実施態様では、血球凝集素は、膜貫通ドメインもしくは細胞質ドメイン、又は両方を
欠く。本明細書で用いられるように、用語「血球凝集素」及び「HA」は、翻訳後プロセシ
ング、例えば、シグナルペプチド切断、ジスルフィド結合形成、グリコシル化(例えば、N
結合型グリコシル化)、プロテアーゼ切断、及び脂質修飾(例えば、S-パルミトイル化)に
よって修飾される血球凝集素ポリペプチドを包含する。

本明細書で用いられるように、「HA2」は、当業者に公知のインフルエンザ血球凝集素
ポリペプチドのHA2ドメインに対応するポリペプチドドメインを指す。ある実施態様では
、HA2は、ステムドメイン、内腔ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインからな
る(例えば、Scheiffleらの文献(2007, EMBO J. 16(18):5501-5508)を参照されたく、その
内容は、その全体が引用により組み込まれている)。ある実施態様では、HA2は、ステムド
メイン、内腔ドメイン、及び膜貫通ドメインからなる。ある実施態様では、HA2は、ステ
ムドメイン及び内腔ドメインからなり;そのような実施態様では、HA2は可溶性であり得る
。ある実施態様では、HA2はステムドメインからなり;そのような実施態様では、HA2は可
溶性であり得る。

本明細書で用いられるように、ポリペプチド、核酸、又はウイルスとの関連における用
語「異種」は、通常天然で見られないか、又は通常天然で関心対象のポリペプチド、核酸
、もしくはウイルスと関連していないポリペプチド、核酸、又はウイルスをそれぞれ指す
。例えば、「異種ポリペプチド」は、異なるウイルス、例えば、異なるインフルエンザ株
もしくは亜型、又は無関係なウイルスもしくは異なる種に由来するポリペプチドを指すこ
とができる。

本明細書で用いられるように、対象への2以上の療法の投与との関連における用語「併
用」は、2以上の療法(例えば、2以上の予防剤及び/又は治療剤)の使用を指す。用語「併
用」の使用は、療法が対象に投与される順序を制限しない。例えば、第一の療法(例えば
、第一の予防剤又は治療剤)は、対象への第二の療法の投与の前に(例えば、5分、15分、3
0分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、16時間、24時間、48時間、72時間、9
6時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、もしくは12週間前に)、そ
れと同時に、又はその後に(例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時
間、12時間、16時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、
5週間、6週間、8週間、もしくは12週間後に)投与することができる。

本明細書で用いられるように、用語「感染」は、細胞又は対象におけるウイルスの侵入
、その増殖、及び/又は存在を意味する。一実施態様では、感染は、「活動性」感染、す
なわち、ウイルスが細胞又は対象で複製している感染である。そのような感染は、ウイル
スが最初に感染した細胞、組織、及び/又は器官から、他の細胞、組織、及び/又は器官へ
のウイルスの伝播を特徴とする。感染はまた、潜伏性の感染、すなわち、ウイルスが複製
していない感染であってもよい。ある実施態様では、感染は、細胞もしくは対象における
ウイルスの存在に起因するか、又は細胞もしくは対象へのウイルスの侵入による病理学的
状態を指す。

本明細書で用いられるように、用語「インフルエンザウイルス疾患」は、細胞又は対象
におけるインフルエンザ(例えば、A型もしくはB型インフルエンザウイルス)ウイルスの存
在、又は細胞もしくは対象へのインフルエンザウイルスの侵入に起因する病理学的状態を
指す。具体的な実施態様では、この用語は、インフルエンザウイルスによって引き起こさ
れる呼吸器疾患を指す。

本明細書で用いられるように、語句「IFN欠損システム」又は「IFN欠損基体」は、1種
類以上のインターフェロン(IFN)(例えば、IFN-γ)を産生しないか、又は低レベルのIFNを
産生するか(すなわち、同じ条件下のIFNコンピテント系と比較して、5〜10％、10〜20％
、20〜30％、30〜40％、40〜50％、50〜60％、60〜70％、70〜80％、80〜90％、もしくは
それより大きいIFN発現の低下)、1種類以上のIFNに応答しないか、もしくはそれにあまり
効率的には応答せず、かつ/又は1種類以上のIFNによって誘導される1以上の抗ウイルス遺
伝子の活性が欠損している、システム、例えば、細胞、細胞株、及び動物、例えば、ブタ
、マウス、ニワトリ、七面鳥、ウサギ、ラットを指す。

本明細書で用いられるように、数値用語「log」は、log₁₀を指す。

本明細書で用いられるように、語句「感染多重度」又は「MOI」は、感染細胞当たりの
感染性ウイルス粒子の平均数である。MOIは、添加した感染性ウイルス粒子の数(添加した
ml×PFU/ml)を、添加した細胞の数(添加したml×細胞/ml)で割ることによって決定される
。

本明細書で用いられるように、用語「核酸」は、DNA分子(例えば、cDNA又はゲノムDNA)
及びRNA分子(例えば、mRNA)及びヌクレオチド類似体を用いて作製されたDNA又はRNAの類
似体を含むことが意図される。核酸は、一本鎖又は二本鎖であることができる。本明細書
で用いられるように、核酸は、天然ヌクレオチド塩基(例えば、A、G、C、もしくはT)又は
修飾ヌクレオチド塩基(6-ジメチルアミノプリン、5-フルオロシステイン、2-ピリドン、7
-デアザグアノシン、イノシンなど)を含むことができる。

当業者に公知であるように、「ポリペプチド」は、アミド結合によって連結されたアミ
ノ酸のポリマーを指す。ポリペプチドは、共有アミド結合で連結された5、6、7、8、9、1
0、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150
、200、250、300、350、400、450、500、550、又はそれより多くのアミノ酸のポリマーで
あることができる。いくつかの実施態様では、ポリペプチドは、共有アミド結合で連結さ
れた10〜25、10〜30、10〜40、10〜50、又は25〜50アミノ酸である。ある実施態様では、
ポリペプチドは、共有アミド結合で連結された100〜150、100〜200、100〜250、100〜300
、100〜350、100〜400、100〜450、100〜500、100〜550、100〜600、100〜650、100〜700
、又は100〜750アミノ酸である。ある実施態様では、ポリペプチドは、共有アミド結合で
連結された50〜55、50〜60、50〜65、50〜75、50〜80、50〜85、50〜90、50〜95、50〜10
0、75〜80、75〜85、75〜90、75〜95、又は75〜100アミノ酸である。いくつかの実施態様
では、ポリペプチドは、共有アミド結合で連結された55〜60、55〜65、55〜70、55〜75、
55〜80、55〜85、55〜90、55〜95、55〜100、又は60〜75アミノ酸である。本明細書で用
いられるように、この用語は、共有アミド結合で連結された単一のポリペプチド鎖を指す
ことができる。この用語は、非共有結合的相互作用、例えば、イオン接触、水素結合、フ
ァンデルワールス接触、及び疎水性接触によって会合する複数のポリペプチド鎖を指すこ
ともできる。当業者であれば、この用語が、例えば、翻訳後プロセシング、例えば、シグ
ナルペプチド切断、ジスルフィド結合形成、グリコシル化(例えば、N結合型グリコシル化
)、プロテアーゼ切断、及び脂質修飾(例えば、S-パルミトイル化)によって修飾されてい
るポリペプチドを含むことを理解するであろう。

本明細書で用いられるように、天然源、例えば、細胞から得られるポリペプチド(抗体
を含む)との関連で用いられる場合の用語「精製された」及び「単離された」は、天然源
由来の夾雑物質、例えば、土壌粒子、鉱物、環境由来の化学物質、並びに/又は天然源由
来の細胞性物質、例えば、限定するものではないが、細胞破片、細胞壁物質、膜、オルガ
ネラ、細胞内に存在する核酸、炭水化物、タンパク質、及び/もしくは脂質の大部分を実
質的に含まないポリペプチドを指す。したがって、単離されたポリペプチドには、細胞性
物質及び/又は夾雑物質の(乾燥重量で)約30％、20％、10％、5％、2％又は1％未満を有す
るポリペプチド調製物が含まれる。本明細書で用いられるように、化学合成されるポリペ
プチド(抗体を含む)との関連で用いられる場合の用語「精製された」及び「単離された」
は、ポリペプチドの合成に関与する化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に含まないポ
リペプチドを指す。したがって、そのようなポリペプチドの調製物は、(乾燥重量で)約30
％、20％、10％、又は5％未満の関心対象のペプチド以外の化学的前駆体又は化合物を有
する。具体的な実施態様において、fluポリペプチドは化学合成される。別の具体的な実
施態様では、fluポリペプチドは組換えで発現される。別の具体的な実施態様では、fluポ
リペプチドは単離される。

本明細書で用いられるように、ウイルスとの関連における用語「複製」、「ウイルスの
複製」、及び「ウイルス複製」は、ウイルスの増殖をもたらすウイルスの生活環の段階の
うちの1つもしくは複数、又は全てを指す。ウイルスの生活環の段階には、宿主細胞表面
へのウイルス付着、宿主細胞への貫入又は侵入(例えば、受容体介在性エンドサイトーシ
ス又は膜融合によるもの)、脱外被(ウイルスカプシドがウイルス酵素又は宿主酵素によっ
て除去及び分解され、それにより、ウイルスゲノム核酸が放出される過程)、ゲノム複製
、ウイルスメッセンジャーRNA(mRNA)の合成、ウイルスタンパク質合成、並びにゲノム複
製のためのウイルスリボ核タンパク複合体の会合、ウイルス粒子の会合、ウイルスタンパ
ク質の翻訳後修飾、及び溶解又は出芽による宿主細胞からの遊離、及び埋め込まれたウイ
ルス糖タンパク質を含むリン脂質エンベロープの獲得が含まれるが、これらに限定されな
い。いくつかの実施態様では、用語「複製」、「ウイルスの複製」、及び「ウイルス複製
」は、ウイルスゲノムの複製を指す。他の実施態様では、用語「複製」、「ウイルスの複
製」、及び「ウイルス複製」は、ウイルスタンパク質の合成を指す。他の実施態様では、
用語「複製」、「ウイルスの複製」、及び「ウイルス複製」は、新しいウイルス粒子の合
成を指す。

本明細書で用いられるように、用語「対象」又は「患者」は互換的に用いられ、動物(
例えば、鳥、爬虫類、及び哺乳動物)を指す。具体的な実施態様において、対象は鳥であ
る。別の実施態様では、対象は、非霊長類(例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブ
タ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、及びマウス)並びに霊長類(例えば、サル
、チンパンジー、及びヒト)を含む哺乳動物である。ある実施態様では、対象は非ヒト動
物である。いくつかの実施態様では、対象は家畜又はペット(例えば、イヌ、ネコ、ウマ
、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ロバ、もしくはニワトリ)である。別の実施態様では、対象はヒ
トである。別の実施態様では、対象はヒト乳児である。別の実施態様では、対象はヒト小
児である。別の実施態様では、対象はヒト成人である。別の実施態様では、対象はヒト高
齢者である。別の実施態様では、対象はヒト早産児である。

本明細書で用いられるように、用語「ヒト早産児」は、妊娠37週未満で生まれるヒト乳
児を指す。

本明細書で用いられるように、用語「ヒト乳児」は、新生児から1歳までのヒトを指す
。

本明細書で用いられるように、用語「ヒト幼児」は、1歳から3歳までのヒトを指す。

本明細書で用いられるように、用語「ヒト小児」は、1歳から18歳までのヒトを指す。

本明細書で用いられるように、用語「ヒト成人」は、18歳以上のヒトを指す。

本明細書で用いられるように、用語「ヒト高齢者」は、65歳以上のヒトを指す。

用語「三次構造」及び「四次構造」は、当業者によって理解される意味を有する。三次
構造は、単一のポリペプチド鎖の三次元構造を指す。四次構造は、複数のポリペプチド鎖
を有するポリペプチドの三次元構造を指す。

本明細書で用いられるように、用語「療法(複数)」及び「療法」は、ウイルス感染又は
それと関連する疾患もしくは症状の予防または治療において用いることができる任意のプ
ロトコル(複数可)、方法(複数可)、化合物(複数可)、組成物(複数可)、製剤(複数可)、及
び/又は薬剤(複数可)を指すことができる。ある実施態様では、用語「療法(複数)」及び
「療法」は、当業者に公知のウイルス感染又はそれと関連する疾患もしくは症状の予防ま
たは治療において有用な生物学的療法、支持療法、及び/又は他の療法を指す。いくつか
の実施態様では、用語「療法」は、fluポリペプチドをコードする核酸、又は該fluポリペ
プチドをコードする核酸を含むベクターもしくは組成物を指す。いくつかの実施態様では
、用語「療法」は、fluポリペプチドに特異的に結合する抗体を指す。

本明細書で用いられるように、インフルエンザウイルス疾患を予防するための対象への
療法(複数可)の投与との関連における用語「予防する」、「予防すること」、及び「予防
」は、療法又は療法の組合せの投与から得られる以下の効果のうちの1つ又は複数を指す:
(i)インフルエンザウイルス疾患又はその症状の発症又は開始の阻害;(ii)インフルエンザ
ウイルス疾患又はそれと関連する症状の再発の阻害;並びに(iii)インフルエンザウイルス
の感染及び/又は複製の低減又は阻害。

本明細書で用いられるように、インフルエンザウイルス感染を予防するための対象への
療法の投与との関連における用語「予防する」、「予防すること」、及び「予防」は、イ
ンフルエンザウイルス感染と関連する1以上の症状の開始又は発症の阻害又は低減を指す
。

本明細書で用いられるように、用語「治療する」、「治療」、及び「治療すること」は
、対象への療法(複数可)の投与との関連において、療法又は療法の組合せの有益な又は治
療的な効果を得るためにインフルエンザウイルス疾患を治療することを指す。具体的な実
施態様では、そのような用語は、療法又は療法の組合せの投与から得られる以下の効果の
うちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、又はそれより多くを指す:(i)インフルエンザウイルス
感染、又はそれと関連する疾患もしくは症状の重症度の軽減又は改善;(ii)インフルエン
ザウイルス感染、又はそれと関連する疾患もしくは症状の持続時間の短縮;(iii)インフル
エンザウイルス感染又はそれと関連する疾患もしくは症状の退行;(iv)インフルエンザウ
イルスの力価の低減;(v)インフルエンザウイルス感染又はそれと関連する疾患と関連する
器官不全の低減;(vi)対象の入院の減少;(vii)入院期間の短縮;(viii)対象の生存の増加;(
ix)インフルエンザウイルス感染、又はそれと関連する疾患もしくは症状の消失;(x)イン
フルエンザウイルス感染又はそれと関連する疾患もしくは症状の進行の阻害;(xi)細胞、
組織、器官、又は対象から別の細胞、組織、器官、又は対象へのインフルエンザウイルス
の伝播の予防;(xii)宿主細胞(複数可)へのインフルエンザウイルスの侵入の阻害又は低減
;(xiii)インフルエンザウイルスゲノムの複製の阻害又は低減;(xiv)インフルエンザウイ
ルスタンパク質の合成の阻害又は低減;(xv)宿主細胞(複数可)からのインフルエンザウイ
ルス粒子の放出の阻害又は低減;並びに/或いは(xvi)別の療法の治療効果の増強又は改善
。

本明細書で用いられるように、インフルエンザウイルス感染を治療するための対象への
療法の投与との関連における用語「治療する」、「治療」、及び「治療すること」は、(i
)インフルエンザウイルス複製の低減;(ii)インフルエンザウイルス力価の低減;(iii)ある
細胞、器官、もしくは組織から別の細胞、器官、もしくは組織へのインフルエンザウイル
スの伝播の低減;(iv)インフルエンザウイルス感染と関連する症状の重症度及び/もしくは
数の低減;(v)インフルエンザウイルス感染と関連する症状(複数可)の持続時間の低減;並
びに/又は(vi)インフルエンザウイルス感染の進行の阻害もしくは低減を指す。

本明細書で用いられるように、いくつかの実施態様では、ウイルスとの関連における語
句「野生型」は、一般的であり、自然に循環しており、かつ疾患の典型的な発生をもたら
すウイルスの型を指す。他の実施態様では、ウイルスとの関連における用語「野生型」は
、親ウイルスを指す。

(4.図面の簡単な説明)
MAb 12D1は、ウェスタンブロットで、切断型の血球凝集素コンストラクトと反応する。12D1は、アミノ酸30〜106(H3付番(例えば、Wilsonらの文献(Nature 1981;289(5796):366))を参照されたい)の領域内のHA2サブユニットと優先的に接触する。HA2 76-184切断体及びHA2 91-184切断体におけるGFP発現の低下を伴わない12D1結合の低下は、HA2 106-184切断体との結合の喪失と併せて、結合エピトープがアミノ酸HA2 76-106由来の領域に存在することを示唆している。これらの30アミノ酸は、HA2の長いα-ヘリックスの膜遠位半分(membrane distal half)に含まれる。

モノクローナル抗体(mAb)12D1は、HA2の長いα-ヘリックスと反応する。GFP又はGFP HA76-130をトランスフェクトした293T細胞のライセートを、mAb 12D1とともにインキュベートし、プロテインGビーズでプルダウンした。プルダウン画分をmAb 12D1又はウサギ抗GFPでブロッティングした。12D1結合を検出するために用いた抗マウスHRPは、プルダウン画分中のマウスIg重鎖及び軽鎖と反応する(A)。HApep-KLHコンジュゲートにおける12D1エピトープの構造完全性を直接結合ELISAで確認した。MAb 36A7は、HA2の76-130領域の外側に結合する(B)。

fluポリペプチド(76-130)-KLH(「HApep-KLH」)は強力な免疫原として作用し、HApep-KLHによって誘起される血清抗体は、複数の血球凝集素亜型と反応する。個々のマウス由来の血清を、一次免疫又は二次免疫の10日後に採取し、H3又はH1 HAへの結合についてELISAで試験した(A)。HApep-KLHによる二次免疫後に採取されたプール血清を、精製されたH3又はH1亜型インフルエンザウイルスとの、又はニューカッスル病ウイルス(NDV)との反応性について、ウェスタンブロットで試験した(B)。プール血清を、H2、H5、又はH7 HAに対する結合活性について、ELISAで試験した(C)。インフルエンザ亜型間のコアポリペプチド(76-130)の同一性/類似性パーセント(D)。

fluポリペプチド(76-130)-KLH(「HApep-KLH」)による免疫は、マウスを致死的曝露から防御する。致死用量のH3N2ウイルスに感染させたマウスの平均体重変化(A)。HApep-KLHのワクチン接種は、H3N2感染マウスを死から防御した(B)。HApep-KLHワクチンは、マウスの80％を致死用量のH1N1ウイルスから防御した(C)。抗H1力価は、PR8曝露後の体重減少と相関する(D)。

亜型H1、H2、H3、H5、及びH7由来の選択株を用いる様々なA型インフルエンザウイルス亜型間の配列アラインメント(A)。配列アラインメントは、異なる亜型間の保存されたアミノ酸を示す(B)。

を含む、様々なA型インフルエンザウイルス亜型の株間の配列アラインメント。

モノクローナル抗体12D1は、HA2の長いα-ヘリックスと反応する。(A)血球凝集素モノマー。HA2のアミノ酸76〜130が示されている。(B)pCAGGs-GFP又はpCAGGs-GFP HA2 76-130をトランスフェクトし、mAb 12D1とともにインキュベートし、プロテインGビーズでプルダウンした293T細胞由来のライセート。プルダウン画分をmAb 12D1又はウサギ抗GFPでブロッティングした。矢印は、76-130 GFP融合タンパク質の位置を示す。抗マウスHRPを用いて、プルダウン画分中のマウスIg重鎖及び軽鎖との12D1結合を検出した。(C)LAH-KLHコンジュゲートにおける12D1エピトープの構造完全性を直接結合ELISAで確認した(B)。血球凝集素特異的mAb 36A7は、HA2の76-130領域内で結合しない。

LAH-KLHワクチンは強力な免疫原として作用し、誘起される血清抗体は、複数の血球凝集素亜型と反応する。(A、B)個々のマウス由来の血清を、一次免疫又は二次免疫の10日後に採取し、H3又はH1血球凝集素への結合についてELISAで試験した。(C)LAH-KLHによる二次免疫後に採取された20匹のマウス由来のプール血清を、精製されたA/香港/1/1968(H3)又はA/USSR/90/1977(H1)亜型インフルエンザウイルス、精製されたA/カリフォルニア/04/09血球凝集素(膜貫通ドメインが欠如している)との、又はニューカッスル病ウイルスとの反応性について、ウェスタンブロットで試験した。(D)プール血清を、H2、H5、又はH7 HAに対する結合活性について、ELISAで試験した。LAH-KLH抗血清は、3つ全てのHA亜型に対するかなりの結合活性を有する。使用した陽性の血清は、グループ1インフルエンザウイルス(H2及びH5 ELISAの場合)又はグループ2ウイルス(H7 ELISAの場合)のいずれかに感染させたマウス由来のものであった(Steelの文献(2010)mBio 1(1):1-9を参照されたい)。(E)異なる血球凝集素亜型のHA2由来のLAHアミノ酸76〜130。黒色の強調/白色の文字:5つ全てのHAで保存されている残基。保存されている残基は、4つのグループのうちの1つに分類される:1)D/N/E/Q、2)I/L/V/M、3)K/R、4)S/T。灰色の強調/白色の文字:4/5のHAで保存されている残基又はあまりストリンジェントでない保存(中央付近のRとHは、電荷を保存するが、大きさが変わる)。太字のテキスト、白色の背景:部分保存(3/5)又はあまりストリンジェントでない(中央のLとA、又は向かって左のFとM)。(F)正常マウス、A/香港/1/1968(H3)に感染させたマウス、又はLAH-KLHで免疫したマウス由来の血清プールにおける血球凝集素特異的抗体のアイソタイププロファイル。A/香港/1/1968由来の組換え血球凝集素を用いて、ELISA用のプレートをコーティングした。

LAH-KLHによる免疫はインビボでマウスを防御する。(A、B)二次免疫の2週間後、マウスを、4×10⁵pfuのマウス適合性H3インフルエンザウイルスX31、(C、D)500pfuのマウス適合性H1ウイルスPR8、又は(E、F)ウイルス血球凝集素中のポリ塩基性切断部位を除去するように修飾された500pfuの高病原性鳥インフルエンザウイルスH5(HAloウイルス)を曝露させた(Steel Jらの文献(2009)J Virol 83(4):1742-1753を参照されたい)。各実験群は、5匹のBALB/cマウスを含む。病原性に差があるため、生存を、X31(H3)及びPR8(H1)ウイルスについては20％体重減少、VN/2004ウイルス(H5)については30％体重減少と定義した。

抗体は、LAH-KLHによる免疫によって与えられる防御を仲介する。(A)PR8に感染させたマウス由来の曝露前血清の解析から、血球凝集素特異的抗体力価と感染後1〜3日目の体重増加の正の相関が明らかにされている。(B、C)季節性ヒトH3ウイルスA/ジョージア/81、又はH1ウイルスPR8に感染させる2時間前に、LAH-KLHで免疫したマウス、H1もしくはH3ウイルスを感染させたマウス、又はKLHのみで免疫したマウス由来のプール血清をマウスに移入した。感染後2日目に、肺力価を評価した。(D、E)TIVによる免疫の前又は後に採取されたヒト血清をLAHポリペプチドとの結合活性について評価した。示したデータは、1:3000希釈した血清試料のものである。(D)対象は季節性ウイルス接種に様々に応答し、(E)血清は、LAHペプチドに対する最小限の結合活性を示している。

LAH-KLH抗血清は、グループ1血球凝集素タンパク質とグループ2血球凝集素タンパク質の両方と反応するが、HA2抗血清は、グループ2血球凝集素タンパク質としか反応しない。(A、B、及びC)グループ2血球凝集素タンパク質に対する抗血清の活性。HA2血清プールとLAH-KLH血清プールは、HK/68 H3血球凝集素に対して同程度の結合活性を示すが、他のグループ2血球凝集素に対しては異なる結合活性を有する。(D、E、F、G、及びH)グループ1血球凝集素タンパク質に対する抗血清の活性。LAH-KLH血清プールは、試験した全てのグループ1血球凝集素タンパク質と反応するが、HA2抗血清は反応しない。陽性対照血清は、グループ2のH3亜型X31ウイルス又はグループ1のH1亜型PR8ウイルスのいずれかに感染させたマウス由来のものである。

(5.詳細な説明)
(5.1 fluポリペプチド)

fluポリペプチドが本明細書で提供される。任意の特定の作動理論に束縛されることを
意図するものではないが、fluポリペプチドは、単一の亜型、又は2つ、3つ、4つ、もしく
はそれより多くの異なる亜型由来の複数のインフルエンザウイルス株と交差反応し、かつ
好ましくは、それらを防御することができる免疫応答を生じさせるために、HA2血球凝集
素サブユニットの1以上の比較的保存された抗原性領域(例えば、HA2血球凝集素サブユニ
ットの長いα-ヘリックス)を対象の免疫系に提示するのに有用であると考えられている。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチド
を含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、そのN末端及び/又はC末端でアセチル化されて
いる。ある実施態様では、fluポリペプチドは、ペグ化されている。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド及び/又は修飾ポリペプチドを含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド又は修飾ポリペプチド、及び1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのT細胞エピトー
プを含む。

いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのコ
アポリペプチド又は修飾ポリペプチド、及び1つ、2つ、3つ、又はそれより多くの免疫原
性ポリペプチドを含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド又は修飾コアポリペプチド、及び多量体化(例えば、fluポリペプチドの三量体化
)を促進するポリペプチドを含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド又は修飾コアポリペプチド、及び以下のうちの1つ、2つ、3つ、もしくはそれよ
り多く、又は全てを含む:1)1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのキャリア;2)1つ、2つ、3
つ、又はそれより多くのT細胞エピトープ(例えば、CD8 T細胞エピトープ);3)1つ、2つ、3
つ、又はそれより多くの免疫原性ポリペプチド(例えば、サルモネラ菌のフラジェリン、
第5.1.6節を参照されたい);4)1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのタンパク質タグ(例え
ば、His-タグ又はFLAG-タグ、第5.1.3節を参照されたい);5)fluポリペプチドの多量体化
を促進する1以上のポリペプチド(例えば、T4フォルドンドメイン、第5.1.8節を参照され
たい)。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、リンカーポリペプチドに連結されたコアポリ
ペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。ある実施態様では、fluポリペプチドは、キ
ャリアタンパク質に連結されたコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。

(5.1.1 コアポリペプチド)
ある実施態様では、fluポリペプチドは、コアポリペプチドを含む。ある実施態様では
、コアポリペプチドは、HA2血球凝集素サブユニットの長いα-ヘリックスの1以上の比較
的保存された抗原性領域を含む。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、単一の亜
型由来の複数のインフルエンザウイルス株、又は2つ、3つ、4つ、もしくはそれより多く
の亜型由来の株と交差反応し、かつ好ましくは、それらを防御することができる対象の免
疫応答を生じさせることができる。単一の亜型由来の複数のインフルエンザウイルス株、
又は2つ、3つ、4つ、もしくはそれより多くの亜型由来の株と交差反応し、かつ好ましく
は、それを防御することができる対象の免疫応答を生じさせるコアポリペプチドの能力は
、当業者に公知かつ本明細書に記載の方法を用いて評価することができる(以下の第5.13
節及び第6節を参照されたい)。別の具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、単一の
亜型由来の複数のインフルエンザウイルス株、又は2つ、3つ、4つ、もしくはそれより多
くの亜型由来の株を中和することができる対象の免疫応答を生じさせることができる。単
一の亜型由来の複数のインフルエンザウイルス株、又は2つ、3つ、4つ、もしくはそれよ
り多くの亜型由来の株を中和することができる対象の免疫応答を生じさせるコアポリペプ
チドの能力は、当業者に公知かつ本明細書に記載の方法を用いて評価することができる(
以下の第5.13節及び第6節を参照されたい)。別の具体的な実施態様では、コアポリペプチ
ドは、単一の亜型由来の複数のインフルエンザウイルス株、又は2つ、3つ、4つ、もしく
はそれより多くの亜型由来の株の複製を阻害又は低減することができる対象の免疫応答を
生じさせることができる。単一の亜型由来の複数のインフルエンザウイルス株、又は2つ
、3つ、4つ、もしくはそれより多くの亜型由来の株の複製を阻害又は低減することができ
る対象の免疫応答を生じさせるコアポリペプチドの能力は、当業者に公知かつ本明細書に
記載の方法を用いて評価することができる(以下の第5.13節及び第6節を参照されたい)。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、インフルエンザウイルスのHA2血球凝集
素サブユニットの長いα-ヘリックスを含む。具体的な実施態様では、コアポリペプチド
は、インフルエンザウイルスのHA2血球凝集素サブユニットの長いα-ヘリックスの一部を
含む。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、HA2の長いα-ヘリックスの一部を含
み、ここで、該一部の天然の立体構造は維持されている。具体的な実施態様では、コアポ
リペプチドは、HA2の長いα-ヘリックスの一部を含み、ここで、該一部は、天然のαヘリ
ックス構造を維持する。当業者は、例えば、NMR、X線結晶学的方法、又は二次構造予測法
、例えば、円二色性などの当技術分野で公知の任意の方法を用いて、該αヘリックス構造
が維持されているかどうかを決定することができる。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルス血球凝集素
のアミノ酸配列を含まない。ある実施態様では、コアポリペプチドは、25〜50、50〜55、
50〜60、50〜65、50〜70、50〜75、50〜80、50〜85、50〜90、50〜95、50〜100、100〜15
0、100〜200、もしくは100〜250個のアミノ酸を含むか、又はそれらからなる。他の実施
態様では、コアポリペプチドは、50〜55、50〜60、50〜65、50〜75、50〜80、50〜85、50
〜90、50〜95、50〜100、75〜80、75〜85、75〜90、75〜95、もしくは75〜100個のアミノ
酸を含むか、又はそれらからなる。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸1(±5)〜184(±5)、16(±5)〜184(±5)、30(±5)
〜184(±5)、31(±5)〜184(±5)、46(±5)〜184(±5)、61(±5)〜184(±5)、70(±5)〜11
0(±5)、76(±5)〜106(±5)、76(±5)〜130(±5)、もしくは76(±5)〜184(±5)を含むか
、又はそれらからなる。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型
付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸1(±5)〜184(±5)、16(
±5)〜184(±5)、30(±5)〜184(±5)、31(±5)〜184(±5)、46(±5)〜184(±5)、61(±5)
〜184(±5)、70(±5)〜184(±5),(70(±5)〜110(±5)、76(±5)〜106(±5)、76(±5)〜13
0(±5)、もしくは76(±5)〜184(±5)を含むか、又はそれらからなり、ここで、該コアポ
リペプチドは、長さが300、275、250、200、190、185、又は180アミノ酸未満である。具
体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された
血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸76〜106を含むか、又はそれからなる。

別の具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付
番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸76〜130を含む。ある実施態様では、コアポ
リペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのア
ミノ酸76〜130を含むか、又はそれからなり、ここで、該コアポリペプチドは、長さが300
、275、250、200、190、185、180、175、150、145、130、130、125、100、又は75アミノ
酸未満である。別の具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体
系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸76〜130からなる。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜125(±5)、80(±5)〜115(±5)、90(±5
)〜105(±5)、もしくは76(±5)〜95(±5)を含むか、又はそれらからなる。ある実施態様
では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリ
ペプチドのアミノ酸70(±5)〜125(±5)、80(±5)〜115(±5)、90(±5)〜105(±5)、もし
くは76(±5)〜95(±5)を含むか、又はそれらからなり、ここで、該コアポリペプチドは、
長さが300、275、250、200、190、185、180、175、150、145、130、130、125、100、又は
75アミノ酸未満である。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜130(±5)、70(±5)〜120(±5)、70(±5
)〜110(±5)、70(±5)〜100(±5)、もしくは70(±5)〜95(±5)を含むか、又はそれらから
なる。ある実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜130(±5)、70(±5)〜120(±5)、70(±5
)〜110(±5)、70(±5)〜100(±5)、もしくは70(±5)〜95(±5)を含むか、又はそれらから
なり、ここで、該コアポリペプチドは、長さが300、275、250、200、190、185、180、175
、150、145、130、130、125、100、又は75アミノ酸未満である。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜130(±5)、80(±5)〜130(±5)、90(±5
)〜130(±5)、100(±5)〜130(±5)、もしくは110(±5)〜130(±5)を含むか、又はそれら
からなる。ある実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付
番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜130(±5)、80(±5)〜130(±5)、90
(±5)〜130(±5)、100(±5)〜130(±5)、もしくは110(±5)〜130(±5)を含むか、又はそ
れらからなり、ここで、該コアポリペプチドは、長さが300、275、250、200、190、185、
180、175、150、145、130、130、125、100、又は75アミノ酸未満である。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸1〜184、10(±5)〜184、20(±5)〜184、30(±5)
〜184、40(±5)〜184、50(±5)〜184、60(±5)〜184、70(±5)〜184、もしくは80(±5)〜
184を含むか、又はそれらからなる。ある実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH
3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸1〜184、10(±5)〜
184、20(±5)〜184、30(±5)〜184、40(±5)〜184、50(±5)〜184、60(±5)〜184、70(±
5)〜184、もしくは80(±5)〜184を含むか、又はそれらからなり、ここで、該コアポリペ
プチドは、長さが300、275、250、200、190、185、180、175、150、145、130、130、125
、100、又は75アミノ酸未満である。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、インフルエンザウイルス株A/香港/1/196
8(H3)のHA2血球凝集素サブユニットの長いα-ヘリックスもしくはその断片(すなわち、古
典的なH3亜型付番体系によって付番されたアミノ酸76〜130もしくはその断片)を含むか、
又はそれらからなる、すなわち、コアポリペプチドは、以下のアミノ酸配列:

もしくはその断片)を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施態様では、配列番号2
のアミノ酸配列を含むコアポリペプチドは、少なくとも56個以上のアミノ酸を含む。配列
番号2に対応するコアポリペプチドは、N末端、C末端、又は両方で修飾されることができ
る。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、N末端で修飾されている。いくつか
の実施態様では、コアポリペプチドは、C末端で修飾されている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。別の具体的な実施態様では、コ
アポリペプチドは、C末端でリンカー、例えば、FLAG-タグに連結されている。別の具体的
な実施態様では、コアポリペプチドのC末端は、リンカー、例えば、FLAG-タグ、及び例え
ば、該コアポリペプチドをキャリア(例えば、KLH)に結合/連結させるために用いることが
できるシステイン残基に連結されている。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れたアミノ酸79〜134に対応するインフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)もしくはそ
の断片の血球凝集素サブユニットの領域、又はその断片を含むか、或いはそれらからなる
(すなわち、コアポリペプチドは、以下のアミノ酸配列:

もしくはその断片を含むか、又はそれらからなる。)

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、FLAG-タグ及びC末端のシステイン残基に
連結されており、該FLAG-タグ及びシステイン残基を有するそのようなポリペプチドは、
以下のアミノ酸配列:

を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施態様では、そのようなポリペプチドは、N
末端でアセチル化されている。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との
少なくとも50％のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付
番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体
構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のア
ミノ酸配列との少なくとも60％のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番
体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜1
30の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又
は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも65％のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古
典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3
)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチド
は、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも70％のアミノ酸配列同一性を
共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/
香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コ
アポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも75％のアミノ
酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエン
ザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実
施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくと
も80％のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された
、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維
持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配
列との少なくとも85％のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によ
って付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然
の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番
号2のアミノ酸配列との少なくとも90％のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3
亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミ
ノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配
列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも95％のアミノ酸配列同一性を共有し
、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1
/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリ
ペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも98％のアミノ酸配列
同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイ
ルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様
では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも99％
のアミノ酸配列同一性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、イン
フルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する
。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との
少なくとも50％のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付
番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体
構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のア
ミノ酸配列との少なくとも60％のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番
体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜1
30の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又
は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも65％のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古
典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3
)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチド
は、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも70％のアミノ酸配列類似性を
共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/
香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コ
アポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも75％のアミノ
酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエン
ザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実
施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくと
も80％のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された
、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維
持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配
列との少なくとも85％のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によ
って付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然
の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番
号2のアミノ酸配列との少なくとも90％のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3
亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミ
ノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリペプチドは、配
列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも95％のアミノ酸配列類似性を共有し
、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイルス株A/香港/1
/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様では、コアポリ
ペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも98％のアミノ酸配列
類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、インフルエンザウイ
ルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する。ある実施態様
では、コアポリペプチドは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列との少なくとも99％
のアミノ酸配列類似性を共有し、かつ古典的なH3亜型付番体系によって付番された、イン
フルエンザウイルス株A/香港/1/1968(H3)のアミノ酸76〜130の天然の立体構造を維持する
。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、インフルエンザウイルス株A/香港/1/196
8(H3)のHA2血球凝集素サブユニットの長いα-ヘリックス(すなわち、古典的なH3亜型付番
体系によって付番されたアミノ酸76〜130)を含まない、すなわち、コアポリペプチドは、
以下のアミノ酸配列:

を含まない。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、FLAG-タグ、及び例えば、該コアポリペプチ
ドをキャリア(例えば、KLH)に結合/連結させるために用いることができるC末端のシステ
イン残基に連結されていない。いくつかの具体的な実施態様では、本明細書に記載のコア
ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列:

を含まず、ここで、FLAG-タグは、アミノ酸配列

で表されている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化さ
れていない。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜125(±5)を含まない。具体的な実施態
様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポ
リペプチドのアミノ酸80(±5)〜115(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリ
ペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミ
ノ酸90(±5)〜105(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典
的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸76(±5)〜95(
±5)を含まない。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜130(±5)を含まない。具体的な実施態
様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポ
リペプチドのアミノ酸70(±5)〜120(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリ
ペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミ
ノ酸70(±5)〜110(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典
的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜100
(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体
系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜95(±5)を含まない。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜130(±5)を含まない。具体的な実施態
様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポ
リペプチドのアミノ酸80(±5)〜130(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリ
ペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミ
ノ酸90(±5)〜130(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典
的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸100(±5)〜13
0(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体
系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸110(±5)〜130(±5)を含まない
。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸1〜184を含まない。具体的な実施態様では、コア
ポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドの
アミノ酸10(±5)〜184を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的
なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸20(±5)〜184を
含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によっ
て付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸30(±5)〜184を含まない。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素
ポリペプチドのアミノ酸40(±5)〜184を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプ
チドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸
50(±5)〜184を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型
付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸60(±5)〜184を含まない
。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸70(±5)〜184を含まない。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型付番体系によって付番された血球凝集素ポリペプ
チドのアミノ酸80(±5)〜184を含まない。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型番号体系によって付番さ
れた血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸1(±5)〜184(±5)を含まない。具体的な実施態様
では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型番号体系によって付番された血球凝集素ポリ
ペプチドのアミノ酸16(±5)〜184(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペ
プチドは、古典的なH3亜型番号体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ
酸30(±5)〜184(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的
なH3亜型番号体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸31(±5)〜184(
±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型番号体系
によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸46(±5)〜184(±5)を含まない。
具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型番号体系によって付番され
た血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸61(±5)〜184(±5)を含まない。具体的な実施態様
では、コアポリペプチドは、古典的なH3亜型番号体系によって付番された血球凝集素ポリ
ペプチドのアミノ酸70(±5)〜184(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペ
プチドは、古典的なH3亜型番号体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ
酸76(±5)〜106(±5)を含まない。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、古典的
なH3亜型番号体系によって付番された血球凝集素ポリペプチドのアミノ酸76(±5)〜184(
±5)を含まない。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、アミノ酸配列:

を含む包括的コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、親水性アミノ酸であり;X₂は、疎水性アミノ酸であり;X₃は、親水性アミノ
酸であり;X₄は、親水性アミノ酸であり;X₅は、疎水性アミノ酸であり;X₆は、N、E、又はI
であり;X₇は、親水性アミノ酸であり;X₈は、K、R、Y、又はWであり;X₉は、M、V、又はTで
あり;X₁₀は、親水性残基であり;X₁₁は、A、G、T、又はSであり;X₁₂は、F、I、K、L、又は
Mであり;X₁₃は、L、I、又はTであり;X₁₄は、親水性の酸性アミノ酸であり;X₁₅は、疎水性
アミノ酸であり;X₁₆は、親水性アミノ酸であり;アミノ酸X₁₇は、親水性アミノ酸であり;X
₁₈は、疎水性アミノ酸であり;X₁₉は、疎水性アミノ酸であり;X₂₀は、親水性アミノ酸であ
り;X₂₁は、親水性の塩基性アミノ酸であり;X₂₂は、疎水性アミノ酸であり;X₂₃は、疎水性
アミノ酸であり;X₂₄は、H、T、又はAであり;X₂₅は、親水性アミノ酸であり;X₂₆は、疎水
性アミノ酸であり;X₂₇は、親水性アミノ酸であり;X₂₈は、親水性アミノ酸であり;X₂₉は、
疎水性アミノ酸であり;X₃₀は、親水性の酸性アミノ酸であり;X₃₁は、親水性の塩基性アミ
ノ酸であり;X₃₂は、T又はVであり;X₃₃は、親水性の塩基性アミノ酸であり;X₃₄は、K、L、
M、S、又はRであり;X₃₅は、親水性の塩基性アミノ酸であり;X₃₆は、親水性アミノ酸であ
り、かつX₃₇は、疎水性アミノ酸である。

具体的な実施態様では、X₁は、R又はQであり;X₂は、L、M、又はIであり;X₃は、E、D、Q
、又はGであり;X₄は、D又はNであり;X₅は、L、M、又はVであり;X₆は、N、E、又はIであり
;X₇は、K又はNであり;X₈は、K、R、Y、又はWであり;X₉は、M、V、又はTであり;X₁₀は、E
、D、K、又はRであり;X₁₁は、A、G、T、又はSであり;X₁₂は、F、I、K、L、又はMであり;X
₁₃は、L、I、又はTであり;X₁₄は、D又はEであり;X₁₅は、V、I、又はLであり;X₁₆は、S又
はTであり;X₁₇は、N又はQであり;X₁₈は、A又はLであり;X₁₉は、L又はMであり;X₂₀は、E又
はQであり;X₂₁は、R又はHであり;X₂₂は、L又はIであり;X₂₃は、F、V、M、Y、又はLであり
;X₂₄は、H、T、又はAであり;X₂₅は、N又はEであり;X₂₆は、V又はMであり;X₂₇は、K、N、R
、又はSであり;X₂₈は、K又はNであり;X₂₉は、Y又はFであり;X₃₀は、D又はEであり;X₃₁は
、K又はRであり;X₃₂は、T又はVであり;X₃₃は、K又はRであり;X₃₄は、K、L、M、S、又はR
であり;X₃₅は、K又はRであり;X₃₆は、D、N、Q、又はEであり、かつX₃₇は、A又はVである
。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、包括的コアポリペプチドの断片である。具体
的な実施態様では、コアポリペプチドは、包括的コアポリペプチドの断片であり、ここで
、該断片は、包括的コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6
、7、8、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸
を欠いている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、包括的コアポリペプチド
の断片であり、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具
体的な実施態様では、コアポリペプチドは、包括的コアポリペプチドの断片であり、ここ
で、該断片は、包括的コアポリペプチドのN末端から1、2、3、4、5、6、7、8、9、10(±5
)、15(±5)、20(±5)、又は25(±5)個のアミノ酸、及び包括的コアポリペプチドのC末端
から1、2、3、4、5、6、7、8、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、又は25(±5)個のアミノ
酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を有
している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAではな
い包括的コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さ
が51〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜10
0、又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、2
0〜30、又は20〜25アミノ酸である包括的コアポリペプチドである。いくつかの実施態様
では、コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175
、150、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25
アミノ酸未満である包括的コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチ
ドは、長さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満
であるが、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸である包括的コアポリペプ
チドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、包括的コアポリペプチドの誘導体であり
、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸が包括的
コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続された包括的コアポリペプチドを含
み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、包括的コアポリペプチドの誘導体であり
、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸が包括的
コアポリペプチドのN末端に接続され、かつ1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個
のアミノ酸が包括的コアポリペプチドのC末端に接続された包括的コアポリペプチドを含
み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるコンセンサスコアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、M、V、Tであり;X₂は、疎水性アミノ酸であり;X₃は、L、M、S、K、Rであり
;かつX₄は、親水性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、M、V、Tであり;X₂は
、F、Y、又はLであり;X₃は、L、M、S、K、Rであり;かつX₄は、D、N、又はEである。ある
実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、コンセンサスコアポリペプチドの断片である
。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、コンセンサスコアポリペプチドの断片で
あり、ここで、該断片は、コンセンサスコアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかか
ら1、2、3、4、5、6、7、8、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35
(±5)個のアミノ酸を欠いている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、コン
センサスコアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個の
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、コンセンサスコア
ポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、コンセンサスコアポリペプチドのN末端
とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を欠いている。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を有している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
コンセンサスコアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、
長さが51〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51
〜100、又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜3
0、20〜30、又は20〜25アミノ酸であるコンセンサスコアポリペプチドである。いくつか
の実施態様では、コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225
、200、175、150、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、3
0、又は25アミノ酸未満であるコンセンサスコアポリペプチドである。ある実施態様では
、コアポリペプチドは、長さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又
は40アミノ酸未満であるが、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のコンセ
ンサスコアポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、コンセンサスコアポリペプチドの誘導体
であり、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸が
コンセンサスコアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたコンセンサスコ
アポリペプチドを含み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している
。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、コンセンサスコアポリペプチドの誘導体
であり、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸が
コンセンサスコアポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたコンセンサスコアポリ
ペプチドを含み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるグループ1コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸であり;X₂は、疎水性アミノ酸であり;X₃は、親水性アミノ
酸であり;X₄は、疎水性アミノ酸であり;X₅は、疎水性アミノ酸であり;X₆は、疎水性の酸
性アミノ酸であり;X₇は、親水性の酸性アミノ酸であり;X₈は、L、M、又はSであり;X₉は、
親水性の塩基性アミノ酸であり;X₁₀は、親水性アミノ酸であり、かつX₁₁は、疎水性アミ
ノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、L又はIであり;X₂は、M又はVであり;X₃は、E
又はDであり;X₄は、V又はIであり;X₅は、M又はLであり;X₆は、F又はYであり;X₇は、D又は
Eであり;X₈は、L、M、又はSであり;X₉は、R又はKであり;X₁₀は、D又はNであり、かつX₁₁
は、A又はVである。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、グループ1
血球凝集素亜型に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導され
る免疫応答は、2種以上のインフルエンザウイルスグループ1血球凝集素亜型を中和する。
ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、グループ1コアポリペプチドの断片である。
具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ1コアポリペプチドの断片であり
、ここで、該断片は、グループ1コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2
、3、4、5、6、7、8、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)
個のアミノ酸を欠いている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、グループ1
コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸
を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ1コアポリペプチ
ドの断片であり、ここで、該断片は、グループ1コアポリペプチドのN末端とC末端の両方
から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様で
は、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
グループ1コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが51〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜
100、又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30
、20〜30、又は20〜25アミノ酸であるグループ1コアポリペプチドである。いくつかの実
施態様では、コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、20
0、175、150、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、
又は25アミノ酸未満であるグループ1コアポリペプチドである。ある実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40ア
ミノ酸未満であるが、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のグループ1コ
アポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ1コアポリペプチドの誘導体で
あり、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がグ
ループ1コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたグループ1コアポリペ
プチドを含み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ1コアポリペプチドの誘導体で
あり、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がグ
ループ1コアポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたグループ1コアポリペプチド
を含み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるグループ2コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、親水性アミノ酸であり;X₂は、親水性アミノ酸であり;X₃は、親水性アミノ
酸であり;X₄は、疎水性アミノ酸であり;X₅は、E又はIであり;X₆は、親水性アミノ酸であ
り;X₇は、疎水性アミノ酸であり;X₈は、V又はTであり;X₉は、親水性アミノ酸であり;X₁₀
は、親水性アミノ酸であり;X₁₁は、K又はMであり;X₁₂は、I又はTであり;X₁₃は、親水性の
酸性アミノ酸であり;X₁₄は、疎水性アミノ酸であり;X₁₅は、疎水性アミノ酸であり;X₁₆は
、T又はAであり;X₁₇は、疎水性アミノ酸であり;X₁₈は、親水性の塩基性アミノ酸であり;X
₁₉は、T又はVであり、かつX₂₀は、親水性の塩基性アミノ酸である。具体的な実施態様で
は、X₁は、R又はQであり;X₂は、Q又はGであり;X₃は、D又はNであり;X₄は、L又はVであり;
X₅は、E又はIであり;X₆は、K又はNであり;X₇は、Y又はWであり;X₈は、V又はTであり;X₉は
、E又はRであり;X₁₀は、T又はSであり;X₁₁は、K又はMであり;X₁₂は、I又はTであり;X₁₃は
、D又はEであり;X₁₄は、L又はVであり;X₁₅は、L又はMであり;X₁₆は、T又はAであり;X₁₇は
、F又はYであり;X₁₈は、K又はRであり;X₁₉は、T又はVであり、かつX₂₀は、K又はRである
。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、グループ2血球凝集素亜型に
対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、2
種以上のインフルエンザウイルスグループ2血球凝集素亜型を中和する。ある実施態様で
は、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、グループ2コアポリペプチドの断片である。
具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ2コアポリペプチドの断片であり
、ここで、該断片は、グループ2コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2
、3、4、5、6、7、8、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)
個のアミノ酸を欠いている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、グループ2
コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸
を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ2コアポリペプチ
ドの断片であり、ここで、該断片は、グループ2コアポリペプチドのN末端とC末端の両方
から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様で
は、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
グループ2コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが51 〜 511、 51 〜 500、 51 〜 450、 51 〜 400、 51 〜 350、51〜300、51〜275
、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又は51〜75、15
〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30、又は20〜25
アミノ酸であるグループ2コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリ
ペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125、10
0、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未満で
あるグループ2コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さ
が150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、
長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のグループ2コアポリペプチドである
。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ2コアポリペプチドの誘導体で
あり、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がグ
ループ2コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたグループ2コアポリペ
プチドを含み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、グループ2コアポリペプチドの誘導体で
あり、ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がグ
ループ2コアポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたグループ2コアポリペプチド
を含み、かつ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH1コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸であり;X₂は、疎水性アミノ酸であり;X₃は、疎水性アミノ
酸であり;X₄は、親水性の塩基性アミノ酸であり、かつX₅は、親水性の塩基性アミノ酸で
ある。具体的な実施態様では、X₁は、M又はIであり;X₂は、L又はIであり;X₃は、F又はYで
あり;X₄は、K又はRであり;かつX₅は、K又はRである。この配列は、古典的なH3亜型付番体
系によって付番されたH1亜型血球凝集素のアミノ酸76〜130と対応する。ある実施態様で
は、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コア
ポリペプチドは、図6Aに示すアミノ酸配列(配列番号8〜11)又はその断片のいずれか1つを
含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的
な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H1のインフルエンザウイルス株に
対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、イ
ンフルエンザウイルス亜型H1の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H1コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H1コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H1コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H1コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H1コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H1コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H1コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH1コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH1コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH1ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H1コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH1コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH1コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H1コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH1コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH1コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH2コアポリペプチドであり、

ここで、Xは、親水性の酸性アミノ酸である。具体的な実施態様では、Xは、D又はEである
。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実
施態様では、コアポリペプチドは、図6Bに示すアミノ酸配列(配列番号13もしくは14)又は
その断片のいずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチ
ル化されている。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H2のイン
フルエンザウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘
導される免疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H2の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H2コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H2コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H2コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H2コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H2コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H2コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H2コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH2コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH2コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH2ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H2コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH2コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH2コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H2コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH2コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH2コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH3コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、親水性の塩基性アミノ酸であり;X₂は、親水性の塩基性アミノ酸であり、
かつX₃は、親水性の塩基性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、K又はRであり
;X₂は、K又はRであり、かつX₃は、K又はRである。ある実施態様では、コアポリペプチド
は、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、図6C
に示すアミノ酸配列(配列番号16〜18)又はその断片のいずれか1つを含む。ある実施態様
では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、こ
のコアポリペプチドを用いて、亜型H3のインフルエンザウイルス株に対する免疫応答を誘
導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、インフルエンザウイル
ス亜型H3の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H3コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H3コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H3コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H3コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H3コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H3コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H3コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH3コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH3コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH3ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H3コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH3コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH3コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H3コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH3コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH3コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH4コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、親水性の塩基性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、R又はHで
ある。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、図6Fに示すアミノ酸配列(配列番号20及び21)又は
その断片のいずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチ
ル化されている。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H4のイン
フルエンザウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘
導される免疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H4の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H4コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H4コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H4コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H4コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H4コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H4コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H4コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH4コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH4コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH4ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H4コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH4コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH4コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H4コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH4コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH4コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH5コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペ
プチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは
、図6Dに示すアミノ酸配列(配列番号22)又はその断片のいずれか1つを含む。ある実施態
様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、
このコアポリペプチドを用いて、亜型H5のインフルエンザウイルス株に対する免疫応答を
誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、インフルエンザウイ
ルス亜型H5の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H5コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H5コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H5コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H5コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H5コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H5コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H5コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
511、51〜500、51〜450、51〜400、51〜350、51〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51
〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、1
5〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30、又は20〜25アミノ酸であるH5コアポ
リペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが500、450、40
0、350、300、275、250、225、200、175、150、125、100、95、90、85、80、75、70、65
、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未満であるH5コアポリペプチドである。
ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが150、125、95、90、85、80、75、65、60
、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35
アミノ酸のH5ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H5コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH5コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH5コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H5コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH5コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH5コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH6コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、G又はDであり;X₂は、疎水性アミノ酸であり;X₃は、親水性アミノ酸であり
;X₄は、疎水性アミノ酸であり;X₅は、親水性アミノ酸であり;X₆は、H又はYであり;X₇は、
Q又はLであり、かつX₈は、親水性の塩基性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は
、G又はDであり;X₂は、L又はMであり;X₃は、E又はGであり;X₄は、L又はMであり;X₅は、N
又はSであり;X₆は、H又はYであり;X₇は、Q又はLであり、かつX₈は、R又はKである。ある
実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様
では、コアポリペプチドは、図6Gに示すアミノ酸配列(配列番号24〜29)又はその断片のい
ずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されてい
る。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H6のインフルエンザウ
イルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫
応答は、インフルエンザウイルス亜型H6の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H6コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H6コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H6コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H6コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H6コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H6コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H6コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH6コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH6コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH6ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H6コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH6コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH6コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H6コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH6コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH6コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH7コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸又は親水性アミノ酸であり;X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、親水性アミノ酸であり、かつX₄は、親水性の塩基性アミノ酸である。具体的な実施
態様では、X₁は、A又はSであり;X₂は、V又はIであり;X₃は、N又はSであり;かつX₄は、K又
はRである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具
体的な実施態様では、コアポリペプチドは、図6Eに示すアミノ酸配列(配列番号31〜35)又
はその断片のいずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセ
チル化されている。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H7のイ
ンフルエンザウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、
誘導される免疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H7の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H7コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H7コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H7コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H7コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H7コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H7コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H7コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH7コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH7コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH7ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H7コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH7コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH7コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H7コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH7コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH7コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH8コアポリペプチドであり、ここで、X₁は、親水性アミノ酸
である。ある実施態様では、X₁は、D又はNである。具体的な実施態様では、コアポリペプ
チドは、図6Hに示すアミノ酸配列(配列番号37及び38)又はその断片のいずれか1つを含む
。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H8のインフルエンザウイ
ルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応
答は、インフルエンザウイルス亜型H8の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H8コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H8コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H8コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H8コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H8コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H8コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H8コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH8コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH8コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH8ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H8コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH8コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH8コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H8コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH8コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH8コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH9コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、V又はIである。あ
る実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態
様では、コアポリペプチドは、図6Iに示すアミノ酸配列(配列番号40及び41)又はその断片
のいずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化され
ている。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H9のインフルエン
ザウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される
免疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H9の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H9コアポリペプチドの断片である。具体的な
実施態様では、コアポリペプチドは、H9コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片
は、H9コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠いている
。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H9コアポリペプチド断片であり、ここ
で、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では
、コアポリペプチドは、H9コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は、H9コアポ
リペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くのアミノ酸を
欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持し
ている。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H9コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜
300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又
は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30
、又は20〜25アミノ酸であるH9コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コア
ポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125
、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ酸未
満であるH9コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さが15
0、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、長さ
が少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH9ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H9コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH9コアポリ
ペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH9コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H9コアポリペプチドの誘導体であり、こ
こで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH9コアポリ
ペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH9コアポリペプチドを含み、かつ該コアポリ
ペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH10コアポリペプチドであり、ここで、X₁は、親水性アミノ
酸である。具体的な実施態様では、X₁は、Q又はNである。ある実施態様では、コアポリペ
プチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは
、図6Jに示すアミノ酸配列(配列番号43及び44)又はその断片のいずれか1つを含む。ある
実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様
では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H10のインフルエンザウイルス株に対する免
疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、インフルエ
ンザウイルス亜型H10の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H10コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H10コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H10コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H10コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H10コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H10コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H10コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH10コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH10コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH10ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H10コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH10コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH10コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H10コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH10コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH10コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH11コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、V又はIである。あ
る実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態
様では、コアポリペプチドは、図6Kに示すアミノ酸配列(配列番号46及び47)又はその断片
のいずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化され
ている。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H11のインフルエ
ンザウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導され
る免疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H11の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H11コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H11コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H11コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H11コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H11コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H11コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H11コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH11コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH11コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH11ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H11コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH11コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH11コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H11コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH11コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH11コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH12コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸であり、かつX₂は、親水性の塩基性アミノ酸である。具体
的な実施態様では、X₁は、V又はIであり、かつX₂は、R又はKである。ある実施態様では、
コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリ
ペプチドは、図6Lに示すアミノ酸配列(配列番号49及び50)又はその断片のいずれか1つを
含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的
な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H12のインフルエンザウイルス株
に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、
インフルエンザウイルス亜型H12の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H12コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H12コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H12コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H12コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H12コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H12コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H12コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH12コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH12コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH12ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H12コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH12コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH12コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H12コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH12コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH12コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH13コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸であり;X₂は、親水性の酸性アミノ酸であり;X₃は、A、S、
又はEであり、かつX₄は、親水性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁は、V又はI
であり;X₂は、D又はEであり;X₃は、A、S、又はEであり、かつX₄は、T又はDである。ある
実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様
では、コアポリペプチドは、図6Mに示すアミノ酸配列(配列番号52〜54)又はその断片のい
ずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されてい
る。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H13のインフルエンザ
ウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免
疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H13の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H13コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H13コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H13コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H13コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H13コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H13コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H13コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH13コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH13コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH13ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H13コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH13コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH13コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H13コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH13コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH13コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH14コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリ
ペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリペプチド
は、図6Nに示すアミノ酸配列(配列番号55)又はその断片のいずれか1つを含む。ある実施
態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では
、このコアポリペプチドを用いて、亜型H14のインフルエンザウイルス株に対する免疫応
答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導される免疫応答は、インフルエンザ
ウイルス亜型H14の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H14コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H14コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H14コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H14コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H14コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H14コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H14コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH14コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH14コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH14ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H14コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH14コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH14コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H14コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH14コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH14コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH15コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリ
ペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリペプチド
は、図6Oに示すアミノ酸配列もしくはその断片のいずれか1つを含む。ある実施態様では
、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、このコ
アポリペプチドを用いて、亜型H15のインフルエンザウイルス株に対する免疫応答を誘導
することができる。ある実施態様では、ある実施態様では、誘導される免疫応答は、イン
フルエンザウイルス亜型H15の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H15コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H15コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H15コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H15コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H15コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H15コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H15コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH15コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH15コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH15ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H15コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH15コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH15コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H15コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH15コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH15コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

を含むか、又はそれからなるH16コアポリペプチドであり、

ここで、X₁は、疎水性アミノ酸であり;X₂は、親水性の塩基性アミノ酸であり;X₃は、親水
性の酸性アミノ酸であり、かつX₄は、親水性アミノ酸である。具体的な実施態様では、X₁
は、L又はIであり;X₂は、K又はRであり;X₃は、D又はEであり、かつX₄は、S又はNである。
ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化されている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、図6Pに示すアミノ酸配列(配列番号58〜60)又はその断片
のいずれか1つを含む。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチル化され
ている。具体的な実施態様では、このコアポリペプチドを用いて、亜型H16のインフルエ
ンザウイルス株に対する免疫応答を誘導することができる。ある実施態様では、誘導され
る免疫応答は、インフルエンザウイルス亜型H16の株を中和する。

ある実施態様では、コアポリペプチドは、H16コアポリペプチドの断片である。具体的
な実施態様では、コアポリペプチドは、H16コアポリペプチドの断片であり、ここで、該
断片は、H16コアポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかから1、2、3、4、5、6、7、8
、9、10(±5)、15(±5)、20(±5)、25(±5)、30(±5)、又は35(±5)個のアミノ酸を欠い
ている。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、H16コアポリペプチド断片であ
り、ここで、該断片は、そのC末端から24(±5)個のアミノ酸を欠いている。具体的な実施
態様では、コアポリペプチドは、H16コアポリペプチドの断片であり、ここで、該断片は
、H16コアポリペプチドのN末端とC末端の両方から1、2、3、4、5個、又はそれより多くの
アミノ酸を欠いている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、α-ヘリックス構
造を維持している。

いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、全長インフルエンザウイルスHAでない
H16コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51
〜300、51〜275、51〜250、51〜225、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、
又は51〜75、15〜50、20〜50、25〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜
30、又は20〜25アミノ酸であるH16コアポリペプチドである。いくつかの実施態様では、
コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、250、225、200、175、150
、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、又は25アミノ
酸未満であるH16コアポリペプチドである。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長
さが150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが
、長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸のH16ポリペプチドである。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H16コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH16コア
ポリペプチドのN末端又はC末端のどちらかに接続されたH16コアポリペプチドを含み、か
つ該コアポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、H16コアポリペプチドの誘導体であり、
ここで、該誘導体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10(±5)個のアミノ酸がH16コア
ポリペプチドのN末端とC末端の両方に接続されたH16コアポリペプチドを含み、かつ該コ
アポリペプチドは、α-ヘリックス構造を維持している。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、配列:

を含むか、又はそれからなる。ある実施態様では、コアポリペプチドは、N末端でアセチ
ル化されている。

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、図5Aに示すアミノ酸配列もしくはその断
片のいずれか1つを含むか、又はそれらからなる。ある実施態様では、コアポリペプチド
は、N末端でアセチル化されている。具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、図5B
に示すアミノ酸配列もしくはその断片のいずれか1つを含むか、又はそれらからなる。い
くつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが51〜300、51〜275、51〜250、51〜2
25、51〜200、51〜175、51〜150、51〜125、51〜100、又は51〜75、15〜50、20〜50、25
〜50、15〜37、15〜35、20〜37、20〜35、15〜30、20〜30、又は20〜25アミノ酸である。
いくつかの実施態様では、コアポリペプチドは、長さが500、450、400、350、300、275、
250、225、200、175、150、125、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、4
0、35、30、又は25アミノ酸未満である。ある実施態様では、コアポリペプチドは、長さ
が150、125、95、90、85、80、75、65、60、55、50、45、又は40アミノ酸未満であるが、
長さが少なくとも15、20、25、30、又は35アミノ酸である。

(5.1.2 増大した半減期を有するfluポリペプチド及びコアポリペプチド)
いくつかの実施態様では、本明細書に記載のfluポリペプチド及びコアポリペプチドは
、インビボでの延長された(又は増大した)半減期を有するように修飾される(すなわち、
修飾コアポリペプチド)。特に、約3日から約180日の(又はそれより長い)、及びいくつか
の実施態様では、3日よりも長いか、7日よりも長いか、10日よりも長いか、15日よりも長
いか、20日よりも長いか、25日よりも長いか、30日よりも長いか、35日よりも長いか、40
日よりも長いか、45日よりも長いか、50日よりも長いか、少なくとも約60日であるか、75
日よりも長いか、90日よりも長いか、105日よりも長いか、120日よりも長いか、135日よ
りも長いか、150日よりも長いか、165日よりも長いか、又は180日よりも長い、対象内で
の半減期を有する修飾されたflu及びコアポリペプチドが本明細書で提供される。

いくつかの実施態様では、インビボでの増大した半減期を有するflu又はコアポリペプ
チドは、該flu又はコアポリペプチドのN末端のアセチル化により生成される。ポリペプチ
ドのアセチル化は当業者に周知の技術であり、かつポリペプチドのN末端へのアセチル基
の付加を含む。コアポリペプチドのアセチル化は、コアポリペプチドをエキソペプチダー
ゼによる分解を受けにくいものにすることができる。

いくつかの実施態様では、インビボでの増大した半減期を有するflu又はコアポリペプ
チドは、該flu又はコアポリペプチドのC末端のアミド化により生成される。

いくつかの実施態様では、インビボでの増大した半減期を有するflu又はコアポリペプ
チドは、ペグ化、すなわち、該fluもしくはコアポリペプチドのN末端もしくはC末端へのP
EGの部位特異的コンジュゲーションによるか、又はリジン残基上に存在するε-アミノ基
を介するかのいずれかで、高分子量ポリエチレングリコール(PEG)などの不活性ポリマー
分子を、多官能性リンカーを含むか又は含まないflu又はコアポリペプチドに接続するこ
とにより生成される。1000Da、4000Da、5000Da、8000Da、10000Da、120000Da、又はそれ
よりさらに大きい、様々な平均分子量のPEGを用いることができる。具体的な実施態様で
は、flu又はコアポリペプチドのN末端は、ペグ化されている。生物学的活性の最小限の損
失をもたらす線状又は分岐状ポリマーの誘導体化を用いることができる。コンジュゲーシ
ョンの程度を、SDS-PAGE及びマススペクトロメトリーで綿密にモニタリングして、flu又
はコアポリペプチドへのPEG分子の適切なコンジュゲーションを保証することができる。
未反応のPEGは、サイズ排除によるか、又はイオン交換クロマトグラフィーによって、flu
又はコアポリペプチド-PEGコンジュゲートから分離することができる。PEGで誘導体化さ
れたflu又はコアポリペプチドを、当業者に周知の方法を用いて、例えば、本明細書に記
載の動物モデル系を用いて、インビボ効力について試験することができる。

別の実施態様では、flu又はコアポリペプチドを、該コアポリペプチドをインビボでよ
り安定なものとするか、又は該コアポリペプチドにインビボでのより長い半減期を持たせ
るために、アルブミンに結合させることができる。そのような技術は当技術分野で周知で
あり、例えば、引用によりその全てが本明細書中に組み込まれている、国際公開WO 93/15
199号、WO 93/15200号、及びWO 01/77137号;並びに欧州特許EP 413,622号を参照されたい
。

いくつかの実施態様では、インビボでの増大した半減期を有するflu又はコアポリペプ
チドは、該コアポリペプチドの末端L-アミノ酸とD-アミノ酸との置換により生成される。

(5.1.3 コアポリペプチド及びリンカーを含むfluポリペプチド)
いくつかの実施態様では、本明細書に記載のfluポリペプチドは、リンカーに連結され
たコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。本明細書に包含されるリンカーは
、該リンカーが関連しているコアポリペプチドの天然の構造を妨げない、当業者に公知の
任意のリンカーであることができる。具体的な実施態様では、本明細書に包含されるリン
カーは、疎水性ではない。

リンカーの長さは、本明細書に記載のコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドと該
コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドが連結されるべき基材(例えば、キャリアタ
ンパク質、T細胞エピトープ、免疫原性ポリペプチド)との最適な結合を提供するように変
化させることができる。さらに、リンカーの長さは、リンカーによる免疫原性応答を防ぐ
ように最適化することができる。リンカー分子は当技術分野で一般に公知であり、かつDe
nardoらの文献(1998, Clin. Cancer Res. 4:2483-90);Petersonらの文献(1999, Bioconju
g. Chem. 10:553);及びZimmermanらの文献(1999, Nucl. Med. Biol. 26:943-50)に記載さ
れており、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる。

リンカーは、長さが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20アミノ
酸、又は20アミノ酸より長くてもよい。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが20
アミノ酸未満である。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが15アミノ酸未満であ
る。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが10アミノ酸未満である。いくつかの実
施態様では、リンカーは、長さが9アミノ酸未満である。いくつかの実施態様では、リン
カーは、長さが8アミノ酸未満である。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが7ア
ミノ酸未満である。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが6アミノ酸未満である
。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが5アミノ酸未満である。いくつかの実施
態様では、リンカーは、長さが4アミノ酸未満である。いくつかの実施態様では、リンカ
ーは、長さが3アミノ酸未満である。いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが2アミ
ノ酸未満である。

いくつかの実施態様では、リンカーは、長さが1〜50アミノ酸である。いくつかの実施
態様では、リンカーは、長さが1〜40アミノ酸、1〜30アミノ酸、1〜20アミノ酸、1〜10ア
ミノ酸、1〜5アミノ酸、1〜4アミノ酸、1〜3アミノ酸、1〜2アミノ酸、又は1アミノ酸で
ある。

いくつかの実施態様では、リンカーは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドに
共有結合的に接続されている。具体的な実施態様では、リンカーは、ペプチド結合を介し
てコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドに接続されている。いくつかの実施態様で
は、リンカーは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドのN末端に接続されている
。いくつかの実施態様では、リンカーは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドの
C末端に接続されている。

いくつかの実施態様では、リンカーは、1以上のグリシン残基を含む。いくつかの実施
態様では、リンカーは、2以上のグリシン残基を含む。いくつかの実施態様では、リンカ
ーは、3以上のグリシン残基を含む。いくつかの実施態様では、リンカーは、4以上のグリ
シン残基を含む。いくつかの実施態様では、リンカーは、5以上のグリシン残基を含む。
いくつかの実施態様では、リンカーは、10以上のグリシン残基を含む。いくつかの実施態
様では、リンカーは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10、又はそれより多くのグ
リシン残基を含む。いくつかの実施態様では、リンカーは、2〜4、2〜6、2〜10、3〜6、3
〜8、3〜10、5〜10、8〜10、10〜15、又は10〜20のグリシン残基を含む。具体的な実施態
様では、リンカーは、3つのグリシン残基を含む。

いくつかの実施態様では、リンカーは、1以上のシステインアミノ酸残基を含む。いく
つかの実施態様では、リンカーは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10、又はそれ
より多くのシステイン残基を含む。いくつかの実施態様では、リンカーは、2〜4、2〜6、
2〜10、3〜6、3〜8、3〜10、5〜10、8〜10、10〜15、又は10〜20のシステイン残基を含む
。

ある実施態様では、リンカーは、タンパク質タグを含む。タンパク質タグは、タンパク
質複合体の単離、fluポリペプチドの単離、親和性クロマトグラフィー、及び/又は局在研
究に有用であることができる。さらに、タンパク質タグは、fluポリペプチドの溶解性を
増大させることができる。タンパク質タグの例としては、Hisタグ、Strep IIタグ、T7-タ
グ、FLAG-タグ、S-タグ、HAタグ、c-Mycタグ、DHFRタグ、及び緑色蛍光タンパク質(GFP)
が挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質タグは、fluポリペプチドのN末端又
はC末端に共有結合的に接続されていてもよい。いくつかの実施態様では、リンカーは、F
LAG-タグタンパク質タグを含む、すなわち、リンカーは、アミノ酸

を含む。具体的な実施態様では、リンカーは、システイン残基に共有結合的に連結された
FLAG-タグ

を含む。いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、4つ、又はそれ
より多くのタンパク質タグを含む。ある実施態様では、タンパク質タグは、fluポリペプ
チド中でリンカーとして用いられない。

(5.1.4 複数のコアポリペプチドを含むfluポリペプチド)
ある実施態様では、2以上のコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含むfluポリ
ペプチドが本明細書で提供される。2以上のコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチド
は、互いに直接的又は間接的に連結/結合させることができる。任意の特定の作動理論に
束縛されるものではないが、2つ、3つ、又はそれより多くのコアポリペプチド又は修飾コ
アポリペプチドを含むfluポリペプチドの投与は、キャリアタンパク質の共投与なしで、
対象内で幅広い反応性を有する血清抗体を誘発すると考えられている。ある実施態様では
、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドは、上の第5.1.3節に記載されているよう
なリンカーを介して1つに連結されている。つまり、ある実施態様では、fluポリペプチド
は、例えば、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドがリンカーに連結され、次に、
このリンカーにコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドが連結されたものを含むこと
ができる。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-(L-X)_nを有し、ここで、Xは、本明
細書に記載の任意のコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドであり、Lは、本明細書
に記載の任意のリンカーであり、n＝1〜20であり、かつ、ここでXは、Lに共有結合的に連
結されている。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-Xを含む。具体的な
実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、flu
ポリペプチドは、配列X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは
、配列X-L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-
X-L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-X-L-X-
L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-X-L-X-L-
X-L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-X-L-X-
L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、配列X-L-
X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは
、配列X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-Xを含む。

いくつかの実施態様では、Lは存在しない。つまり、fluポリペプチドのコアポリペプチ
ド又は修飾コアポリペプチドの各々は、1以上の他のコアポリペプチド(例えば、X-X、X-X
-X、X-X-X-X、X-X-X-X-Xなど)に直接的に連結されている。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、2以上の同じコアポリペプチド又は修飾コアポ
リペプチドを含む。他の実施態様では、fluポリペプチドは、2以上の異なるコアポリペプ
チド又はコアポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、2以上の
同じコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、fluポ
リペプチドは、3以上の同じコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。具体的
な実施態様では、fluポリペプチドは、4以上の同じコアポリペプチド又は修飾コアポリペ
プチドを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、5以上の同じコアポリペプチ
ド又は修飾コアポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドのコアポ
リペプチド又は修飾コアポリペプチドの各々は同じである。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、2以上の異なるコアポリペプチド又は修飾
コアポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、3以上の異なるコ
アポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプ
チドは、4以上の異なるコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。具体的な実
施態様では、fluポリペプチドは、5以上の異なるコアポリペプチド又は修飾コアポリペプ
チドを含む。

いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、配列Xを含み、ここで、Xは、アミノ酸
配列

を含むコアポリペプチドであり、かつLは、3つのグリシン残基からなるリンカーである。
他の実施態様では、Xは、

ではなく、かつ同じであるか、又は様々に異なる。

いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、2以上の修飾コアポリペプチドを含むこ
とに加えて、以下のうちの1つ、2つ、3つ、もしくはそれより多く、又は全てを含む:本明
細書に記載のT細胞エピトープ、多量体化を促進するポリペプチド(例えば、T4フォルドン
ドメイン)、タンパク質タグ、又は免疫原性ポリペプチド。具体的な実施態様では、fluポ
リペプチドは、そのN末端にHis-タグを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは
、そのC末端にFLAG-タグを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、そのN末端
にHis-タグ、及びそのC末端にFLAG-タグを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチ
ドは、そのC末端にA型インフルエンザ核タンパク質(NP)を含む。ある実施態様では、flu
ポリペプチドは、そのC末端にFljBフラジェリンを含む。

いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、アミノ酸配列H-X-L-X-L-X-Fを含み、こ
こで、Hは、Hisタグ、又はfluポリペプチドの精製を促進する、及び/もしくはfluポリペ
プチドの溶解度を高める別のタンパク質タグであり、Xは、コアポリペプチド又は修飾コ
アポリペプチドであり、Lは、リンカーであり、かつFは、FLAG-タグ、又はfluポリペプチ
ドの精製を促進する、及び/もしくはfluポリペプチドの溶解度を高める、Hとは異なる別
のタンパク質タグである。いくつかの実施態様では、Lは、3つのグリシン残基である。い
くつかの実施態様では、Lは同じものであり、他の実施態様では、Lは異なるものである。

(5.1.5 T細胞エピトープを含むfluポリペプチド)
ある実施態様では、fluポリペプチドは、本明細書に記載のコアポリペプチド又は修飾
コアポリペプチドとT細胞エピトープ(例えば、CD4又はCD8 T細胞エピトープ)とを含む。
具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチ
ドとCD4 T細胞エピトープとを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、コアポ
リペプチド又は修飾コアポリペプチドとCD8 T細胞エピトープとを含む。別の具体的な実
施態様では、T細胞エピトープは、インフルエンザウイルスCD8 T細胞エピトープ(例えば
、高度に保存されたT細胞エピトープを含むインフルエンザウイルスタンパク質)である。
T細胞エピトープは、修飾コアポリペプチドによってコアポリペプチドに直接的又は間接
的に連結/結合させることができる。

任意の特定の作動理論に束縛されるものではないが、コアポリペプチド又は修飾コアポ
リペプチドとCD8 T細胞エピトープとを含むfluポリペプチドは、広範な中和抗体を誘発し
、かつ広域スペクトルのCD8 T細胞応答をプライミングすることができると考えられてい
る。CD8 T細胞エピトープを含む高度に保存されたインフルエンザウイルス領域は、例え
ば、インフルエンザの核タンパク質(NP)、マトリックス1(M1)、ノイラミニダーゼ(NA)、
及びポリメラーゼ塩基性-1(PB1)に見られる。引用によりその全体が本明細書中に組み込
まれている、Alexanderらの文献(2010, Hum Immunol 71:468-74)を参照されたい。いくつ
かの実施態様では、CD8 T細胞エピトープは、核タンパク質(NP)又はその断片である。他
の実施態様では、CD8 T細胞エピトープポリペプチドは、マトリックス1(M1)タンパク質又
はその断片、又はその断片である。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、T細胞エピトープに連結されたコアポリペ
プチド又は修飾コアポリペプチドを含む。T細胞エピトープ(例えば、CD8 T細胞エピトー
プ)は、限定するものではないが、アミン対アミン架橋剤BS(ビス[スルホスクシンイミジ
ル]スベラート)、アミン対スルフヒドリルNHS-PEG-マレイミド架橋剤、又はスルフヒドリ
ル対スルフヒドリルBM(PEG)_nPEG架橋剤を用いる一級アミノ基又はスルフヒドリル基への
単一点接続を含む、当業者に公知の任意の技術を用いて、本明細書に記載のコアポリペプ
チド又は修飾コアポリペプチドに接続することができる。他の実施態様では、T細胞エピ
トープ(例えば、CD8 T細胞エピトープ)は、fluポリペプチドのN末端又はC末端に共有結合
的に連結されている。他の実施態様では、T細胞エピトープ(例えば、CD8 T細胞エピトー
プ)は、上の第5.1.3節に記載のリンカーを介してコアポリペプチド又は修飾コアポリペプ
チドに連結されている。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1以上のコアポリペプチド又は修飾コアポリペ
プチドとT細胞エピトープとを含むことに加えて、以下のうちの1つ、2つ、3つ、もしくは
それより多く、又は全てを含む:タンパク質タグ、免疫原性ポリペプチド、キャリア、及
び/又はfluポリペプチドの多量体化を促進するポリペプチド(例えば、T4フォルドンドメ
イン)。

いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、4つ、もしくはそれよ
り多くのコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドとT細胞エピトープ(複数可)とを含
む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、式H-X-L-X-L-X-F-Tを含み、ここで、H(
これは任意である)は、Hisタグ、又は精製を促進する、及び/もしくは溶解度を高める別
のタンパク質タグであり、Xは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドであり、Lは
、リンカー(例えば、第5.1.3節に記載のもの)であり、F(これは任意である)は、FLAG-タ
グ、又は精製を促進する、及び/もしくは溶解度を高める、Hとは異なる別のタンパク質タ
グであり、かつTは、T細胞エピトープである。ある実施態様では、ポリペプチドは、式H-
X-L-X-L-X-Tを含み、ここで、H(これは任意である)は、Hisタグ、又は精製を促進する、
及び/もしくは溶解度を高める別のタンパク質タグであり、Xは、コアポリペプチド又は修
飾コアポリペプチドであり、Lは、リンカー(例えば、第5.1.3節に記載のもの)であり、か
つTは、T細胞エピトープである。

ある実施態様では、Lは、3つのグリシン残基である。いくつかの実施態様では、Lは、
それが式に現われるたびに同じものであり、他の実施態様では、Lは、それが式に現われ
るたびに異なるか、又は変化する。ある実施態様では、FとTの間にリンカーがある。他の
実施態様では、Fは、Tに直接的に連結されている。ある実施態様では、コアポリペプチド
又は修飾コアポリペプチドは、それが式に現われるたびに同じものである。他の実施態様
では、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドは、それが式に現われるたびに異なる
か、又は変化する。

いくつかの実施態様では、XとTの間にリンカーがある。他の実施態様では、Xは、Tに直
接的に連結されている。

(5.1.6 免疫原性ポリペプチドを含むfluポリペプチド)
本明細書で提供されるある実施態様では、fluポリペプチドは、1以上のコアポリペプチ
ド又は修飾コアポリペプチドと免疫原性ポリペプチドとを含む。具体的な実施態様では、
fluポリペプチドは、免疫原性ポリペプチドに直接的又は間接的に連結/結合されているコ
アポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。免疫原性ポリペプチドは、コアポリペ
プチド又は修飾コアポリペプチドのN末端及び/又はC末端に連結/結合させることができる
。ある実施態様では、免疫原性ポリペプチドは、上の第5.1.3節に記載されているような
リンカーを介してコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドに連結されている。

免疫原性ポリペプチドの例としては、サルモネラ菌のフラジェリン(Toll様受容体5リガ
ンド)などの、Toll様受容体(TLR)リガンドが挙げられるが、これに限定されない。例えば
、Huleattらの文献(2008, Vaccine 26:201-14);Songらの文献(2009, Vaccine 27:5875-84
);及びWangらの文献(2010, PLos One 5:e13972)を参照されたい。具体的な実施態様では
、fluポリペプチドは、チフス菌(Salmonella enterica)由来のFljBフラジェリンに連結さ
れたコアポリペプチドを含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、1以上のコアポリペプチド又は修飾コアポリペ
プチドと免疫原性ポリペプチドとを含む。ある実施態様では、fluポリペプチドは、1以上
のコアポリペプチド又は修飾ポリペプチドと免疫原性ポリペプチドとを含むことに加えて
、以下のうちの1つ、2つ、3つ、もしくはそれより多く、又は全てを含む:fluポリペプチ
ドの精製を促進する、及び/もしくはfluポリペプチドの溶解度を高めるタンパク質タグ、
T細胞エピトープ、並びに/又はfluポリペプチドの多量体化を促進するポリペプチド(例え
ば、T4フォルドンドメイン)。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、2つ、3つ、4つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド又は修飾コアポリペプチドと免疫原性ポリペプチド(複数可)とを含む。具体的な
実施態様では、fluポリペプチドは、H-X-L-X-L-X-F-Iを含み、ここで、Hは、任意のHisタ
グ、又は精製を促進する、及び/もしくは溶解度を高める別のタンパク質タグであり、Xは
、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドであり、Lは、第5.1.3節に記載されている
ような任意のリンカーであり、Fは、任意のFLAG-タグ、又はfluポリペプチドの精製を促
進する、及び/もしくはfluポリペプチドの溶解度を高める、Hとは異なる別のタンパク質
タグであり、かつIは、免疫原性ポリペプチドである。ある実施態様では、Lは、3つのグ
リシン残基である。いくつかの実施態様では、Lは、fluポリペプチド全体にわたって同じ
ものであり、他の実施態様では、Lは、該ポリペプチド全体にわたって異なるものである
。ある実施態様では、FとIの間にリンカーがある。他の実施態様では、Fは、Iに直接的に
連結されている。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、H-X-L-X-L-X-Iを含み、ここで、Hは、任
意のHisタグ、又は精製を促進する、及び/もしくは溶解度を高める別のタンパク質タグで
あり、Xは、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドであり、Lは、第5.1.3節に記載
されているような任意のリンカーであり、かつIは、免疫原性ポリペプチドである。ある
実施態様では、Lは、3つのグリシン残基である。いくつかの実施態様では、Lは、fluポリ
ペプチド全体にわたって同じものであり、他の実施態様では、Lは、該ポリペプチド全体
にわたって異なるものである。ある実施態様では、XとIの間にリンカーがある。他の実施
態様では、Xは、Iに直接的に連結されている。

(5.1.7 キャリアを含むfluポリペプチド)
いくつかの実施態様では、fluポリペプチドは、本明細書に記載のコアポリペプチド又
は修飾コアポリペプチドとキャリアとを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチド
は、キャリアに結合/連結されたコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。コ
アポリペプチド又は修飾コアポリペプチドは、直接的又は間接的にキャリアに結合/連結
させることができる。本明細書に記載のコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドは、
当業者に公知の方法を用いて、破傷風トキソイド(例えば、化学的に不活化した破傷風毒
素)、ジフテリア毒素(例えば、化学的に不活化したジフテリアトキソイドもしくはCRM197
-非毒性ジフテリア毒素突然変異体)、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)、ウシ血
清アルブミン、オボアルブミン、チログロブリン、又は髄膜炎菌外膜タンパク質を含むが
、これらに限定されない、キャリアに結合/連結させる(例えば、リンカーによって直接的
に連結させる)ことができる。具体的な実施態様では、本明細書に記載のコアポリペプチ
ド(複数可)又は修飾コアポリペプチド(複数可)は、KLHに連結されている。

ある実施態様では、本明細書に記載のコアポリペプチド(複数可)又は修飾コアポリペプ
チド(複数可)は、キャリアタンパク質に直接的に連結されている、すなわち、コアポリペ
プチド又は修飾コアポリペプチドとキャリアタンパク質は、介在するリンカー分子なしで
、互いに連結されている。ある実施態様では、本明細書に記載のコアポリペプチド(複数
可)又は修飾コアポリペプチド(複数可)は、リンカーによってキャリアタンパク質に連結
されている。具体的な実施態様では、本明細書に記載のコアポリペプチド(複数可)又は修
飾コアポリペプチド(複数可)は、上の第5.1.3節に記載のリンカーによってキャリアタン
パク質に連結されている。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、2以上のキャリアに結合/連結されたコアポリ
ペプチド又は修飾コアポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは
、2つ、3つ、4つ、5つ、又はそれより多くのキャリアに結合/連結されたコアポリペプチ
ド又は修飾コアポリペプチドを含む。

ある実施態様では、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、又はそれより多くの本明細書に記載の
同じコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドが、キャリアに連結されている。いくつ
かの実施態様では、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、又はそれより多くの本明細書に記載の異
なるコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドが、キャリアに連結されている。

ある実施態様では、本明細書に記載のコアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドは、
化学的架橋によってキャリアに結合/連結されている。例えば、架橋剤1-エチル-3-(3-ジ
メチルアミノプロピル)カルボジイミド(「EDC」)又は架橋剤(スルホスクシンイミジル4-[
N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート(「スルホ-SMCC」)を用いて、
コアポリペプチドをキャリアに架橋することができる。他の架橋剤としては、グルタルア
ルデヒド及びビス-ジアゾ化ベンジジンが挙げられる。架橋方法は当業者に周知であり、
一般的な架橋化学は、以下のウェブサイトで見ることができる:www.piercenet.com/brows
e.cfm?fldID＝CE4D6C5C-5946-4814-9904-C46E01232683。

特定の実施態様では、fluポリペプチドは、(i)インフルエンザウイルス株A/香港/1/196
8(H3)のHA2血球凝集素サブユニットの長いα-ヘリックス(すなわち、古典的なH3亜型付番
体系によって付番されたアミノ酸76〜130);(ii)FLAG-タグ;及び(iii)例えば、コアポリペ
プチドをキャリア(例えば、KLH)に結合/連結させるために用いることができるC末端のシ
ステイン残基を含む。具体的な実施態様では、そのようなfluポリペプチドは、以下のア
ミノ酸配列:

を含み、ここで、FLAG-タグは、アミノ酸配列

によって表されている。いくつかの実施態様では、修飾コアポリペプチドのN末端は、ア
セチル化されている。

(5.1.8 多量体化ポリペプチド)
ある実施態様では、fluポリペプチドは、本明細書に記載のコアポリペプチド又は修飾
コアポリペプチドと、多量体(例えば、三量体)の形成を促進するポリペプチドとを含む。
いくつかの実施態様では、コアポリペプチド又は修飾ポリペプチドは、三量体の形成を可
能にする/促進するポリペプチド、例えば、T4フォルドンドメインに結合/連結されている
。

具体的な実施態様では、コアポリペプチド又は修飾コアポリペプチドは、そのC末端で
の多量体化(三量体化、例えば、T4フォルドンドメインによるもの)を促進するポリペプチ
ドに間接的又は直接的に連結/結合されている。引用によりその全体が本明細書中に組み
込まれている、Meierらの文献(2004, J Mol Biol 344:1051-69)。任意の特定の作動理論
に束縛されるものではないが、T4フォルドンドメインは、天然の血球凝集素分子に見られ
るA型インフルエンザの長いα-ヘリックスの三量体構造の形成を可能にし得る。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、2以上のコアポリペプチド又は修飾ポリペプチ
ドと、三量体の形成を促進するポリペプチドとを含む。具体的な実施態様では、三量体の
形成を促進するポリペプチドは、T4フォルドンドメインである。

ある実施態様では、多量体の形成を促進するポリペプチドは、上の第5.1.3節に記載さ
れているようなリンカーによってコアポリペプチド又は修飾コア(pore)ポリペプチドに連
結/結合されている。つまり、ある実施態様では、fluポリペプチドは、コアポリペプチド
又は修飾コアポリペプチドと、リンカーと、多量体の形成を促進するポリペプチド、例え
ば、T4フォルドンドメインとを含む。

ある実施態様では、fluポリペプチドは、2つ、3つ、4つ、又はそれより多くのコアポリ
ペプチド又は修飾コアポリペプチド、及び多量体化を促進するポリペプチド、例えば、T4
フォルドンドメインを含むことに加えて、以下のうちの1つ、2つ、3つ、もしくはそれよ
り多く、又は全てを含む:fluポリペプチドの精製を促進する、及び/もしくはfluポリペプ
チドの溶解度を高めるタンパク質タグ、免疫原性ポリペプチド、並びに/又は本明細書に
記載されているようなキャリア。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、精製及び/
又は溶解を促進するタンパク質タグ(例えば、Hisタグ)、コアポリペプチド又は修飾コア
ポリペプチド、並びに三量体化を促進するポリペプチド、例えば、T4フォルドンドメイン
を含む。

(5.2 fluポリペプチドをコードする核酸)
本明細書に記載のfluポリペプチドをコードする核酸が本明細書で提供される。遺伝暗
号の縮重のために、本明細書に記載のfluポリペプチドをコードする任意の核酸が本明細
書に包含される。ある実施態様では、fluポリペプチドを産生するために、血球凝集素タ
ンパク質のHA2ドメインの領域(例えば、長いα-ヘリックス領域)をコードする天然のイン
フルエンザウイルス核酸に対応する核酸が用いられる。

fluポリペプチドをコードする核酸にハイブリダイズすることができる核酸も本明細書
で提供される。ある実施態様では、fluポリペプチドをコードする核酸の断片にハイブリ
ダイズすることができる核酸が本明細書で提供される。他の実施態様では、fluポリペプ
チドをコードする核酸の全長にハイブリダイズすることができる核酸が本明細書で提供さ
れる。核酸のハイブリダイゼーション条件の一般的なパラメータは、Sambrookらの文献、
分子クローニング-実験マニュアル(Molecular Cloning - A Laboratory Manual)(第2版,
1〜3巻, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York(1989))、及び
Ausubelらの文献、分子生物学の最新プロトコル(Current Protocols in Molecular Biolo
gy)(2巻, Current Protocols Publishing, New York(1994))に記載されている。ハイブリ
ダイゼーションは、高いストリンジェンシー条件、中間のストリンジェンシー条件、又は
低いストリンジェンシー条件の下で実施することができる。当業者であれば、低いストリ
ンジェンシー条件、中間のストリンジェンシー条件、及び高いストリンジェンシー条件は
、その全てが相互作用する複数の因子に左右され、また、当該核酸によっても決まること
を理解するであろう。例えば、高いストリンジェンシー条件は、核酸(複数可)の融点の5
℃以内の温度、低い塩濃度(例えば、250mM未満)、及び高い共溶媒濃度(例えば、1〜20％
の共溶媒、例えば、DMSO)を含むことができる。他方、低いストリンジェンシー条件は、
核酸(複数可)の融点より10℃を超えて低い温度、高い塩濃度(例えば、1000mM超)、及び共
溶媒の欠如を含むことができる。

いくつかの実施態様では、インフルエンザウイルスfluポリペプチドをコードする核酸
が単離される、すなわち、本明細書に記載のfluポリペプチドが単離される。いくつかの
実施態様では、本明細書に記載のインフルエンザウイルスコアポリペプチド又は修飾コア
ポリペプチドをコードする核酸が単離される。ある実施態様では、「単離された」核酸は
、核酸の天然供給源に存在する他の核酸分子から分離されている核酸分子を指す。つまり
、単離された核酸は、天然ではそれに関連していない異種核酸を含むことができる。他の
実施態様では、「単離された」核酸、例えば、cDNA分子は、組換え技術によって産生され
たとき、他の細胞物質もしくは培養培地を実質的に含まないものであるか、又は化学合成
されたとき、化学物質前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないものであることが
できる。用語「細胞物質を実質的に含まない」には、それが単離されるか又は組換えで産
生される細胞の細胞成分から核酸が分離されている核酸調製物が含まれる。したがって、
細胞物質を実質的に含まない核酸には、(乾燥重量で)約30％、20％、10％、又は5％未満
の他の核酸を有する核酸調製物が含まれる。用語「培養培地を実質的に含まない」には、
培養培地が調製物の容量の約50％、20％、10％、又は5％未満である核酸調製物が含まれ
る。用語「化学物質前駆体又は他の化学物質を実質的に含まない」には、核酸の合成に関
与する化学物質前駆体又は他の化学物質から核酸が分離されている調製物が含まれる。具
体的な実施態様では、そのような核酸調製物は、(乾燥重量で)約50％、30％、20％、10％
、5％未満の化学物質前駆体又は関心対象の核酸以外の化合物を有する。

ある実施態様では、コアポリペプチドと、コアポリペプチドと関連する1以上のさらな
る成分、例えば、リンカー、キャリア、タンパク質タグ、及び/又はタンパク質とを含むf
luポリペプチドをコードする核酸が本明細書で提供される。

(5.3 fluポリペプチドの産生及び精製)
本明細書に記載のfluポリペプチドは、ポリペプチドの合成に関して当技術分野で公知
の任意の方法によって、特に、化学合成によるか、又は組換え発現技術によって産生する
ことができる。本明細書で提供される方法は、特に指示しない限り、分子生物学、微生物
学、遺伝子解析、組換えDNA、有機化学、生化学、PCR、オリゴヌクレオチド合成及び修飾
、核酸ハイブリダイゼーション、並びに当業者の技能の範囲内の関連分野における従来技
術を包含する。これらの技術は、本明細書に引用されている参考文献に記載されており、
かつ文献中で十分に説明されている。例えば、Maniatisらの文献(1982)分子クローニング
:実験マニュアル(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)(Cold Spring Harbor Labora
tory Press);Sambrookらの文献(1989)分子クローニング:実験マニュアル(Molecular Clon
ing:A Laboratory Manual)(第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press);Sambrookら
の文献(2001)分子クローニング:実験マニュアル(Molecular Cloning:A Laboratory Manua
l)(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY);Ausubelらの文献,
分子生物学の最新プロトコル(Current Protocols in Molecular Biology)(John Wiley
＆ Sons(1987及び年次更新));免疫学の最新プロトコル(Current Protocols in Immunolog
y)(John Wiley ＆ Sons(1987及び年次更新))、Gait(編)(1984)オリゴヌクレオチド合成:
実践的アプローチ(Oligonucleotide Synthesis:A Practical Approach)(IRL Press);Ecks
tein(編)(1991)オリゴヌクレオチド及び類似体:実践的アプローチ(Oligonucleotides and
Analogues:A Practical Approach)(IRL Press);Birrenらの文献(編)(1999)ゲノム解析:
実験マニュアル(Genome Analysis:A Laboratory Manual)(Cold Spring Harbor Laborator
y Press).
を参照されたい。

(5.3.1 合成によるfluポリペプチドの産生)
本明細書に記載のfluポリペプチドは、従来の段階的液相合成又は固相合成を用いて調
製することができる(例えば、ペプチド及びタンパク質合成の化学的手法(Chemical Appro
aches to the Synthesis of Peptides and Proteins)(Williamsら編, 1997, CRC Press,
Boca Raton Fla.)、及びそれに引用されている参考文献;固相ペプチド合成:実践的手法(S
olid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach)(Atherton ＆ Sheppard編, 1989
, IRL Press, Oxford, England)、及びそれに引用されている参考文献を参照されたい)。

或いは、本明細書に記載のfluポリペプチドは、例えば、Liuらの文献(1996, Tetrahedr
on Lett. 37(7):933-936);Bacaらの文献(1995, J. Am. Chem. Soc. 117:1881-1887);Tam
らの文献(1995, Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216);Schnolzer及びKentの文献(
1992, Science 256:221-225);Liu及びTamの文献(1994, J. Am. Chem. Soc. 116(10):4149
-4153);Liu及びTamの文献(1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6584-6588);Yamashiro
及びLiの文献(1988, Int. J. Peptide Protein Res. 31:322-334)に記載されている、セ
グメント縮合によって調製することができる。本明細書に記載のfluポリペプチドを合成
するのに有用な他の方法は、Nakagawaらのの文献(1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-70
92)に記載されている。

コアポリペプチド及びリンカーを含むfluポリペプチドは、合成における適切な工程で
リンカー(複数可)をコアポリペプチド鎖に付加することによって合成することができる。
好適な保護スキーム及び化学は周知であり、かつ当業者には明白であろう。

ジスルフィド結合の形成は、望ましい場合は、穏やかな酸化剤の存在下で通常行なわれ
る。化学的酸化剤を用いることができるか、又は化合物を単に大気中の酸素に触れさせて
、これらの結合を達成することができる。様々な方法が当技術分野で公知であり、これに
は、例えば、Tamらの文献(1979, Synthesis 955-957);Stewartらの文献(1984, 固相ペプ
チド合成(Solid Phase Peptide Synthesis)(第2版, Pierce Chemical Company Rockford,
Ill.));Ahmedらの文献(1975, J. Biol. Chem. 250:8477-8482);及びPenningtonらの文献
(1991 ペプチド1990(Peptides 1990) 164-166, Giralt及びAndreu編, ESCOM Leiden, The
Netherlands)に記載されているものが含まれる。さらなる代替法は、Kamberらの文献(19
80, Helv. Chim. Acta 63:899-915)に記載されている。固体支持体上で行なわれる方法は
、Albericioの文献(1985, Int. J. Peptide Protein Res. 26:92-97)に記載されており、
その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる。

(5.3.2 fluポリペプチドの組換え発現)
fluポリペプチドの組換え発現は、fluポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含
む発現ベクターの構築を必要とする。fluポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが
得られたら、fluポリペプチドの産生用のベクターは、当技術分野で周知の技術を用いて
、組換えDNA技術によって産生することができる。したがって、fluポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現させることによってfluポリペプチ
ドを調製する方法が本明細書に記載されている。当業者に周知の方法を用いて、fluポリ
ペプチドをコードする配列と適切な転写及び翻訳制御シグナルとを含む発現ベクターを構
築することができる。これらの方法は、例えば、インビトロ組換えDNA技術、合成技術、
及びインビボ遺伝子組換えを含む。したがって、プロモーターに機能的に連結されたflu
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能な発現ベクターが本明細書で
提供される。

発現ベクターは、fluポリペプチドをコードする核酸を、宿主細胞での核酸の発現に好
適な形態で含む。具体的な実施態様では、宿主細胞は、単離された宿主細胞である。具体
的な実施態様では、発現ベクターは、発現に用いられる宿主細胞に基づいて選択される、
発現させる核酸に機能的に連結された1以上の調節配列を含む。発現ベクターにおいて、
「機能的に連結された」とは、関心対象の核酸が、(例えば、インビトロ転写/翻訳系での
、又はベクターが宿主細胞に導入される場合は宿主細胞での)核酸の発現を可能にする様
式で調節配列(複数可)に連結されていることを意味するものとする。調節配列には、プロ
モーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメント(例えば、ポリアデニル化シグナ
ル)が含まれる。調節配列には、多くのタイプの宿主細胞で核酸の構成的発現を導くもの
、特定の宿主細胞でのみ核酸の発現を導くもの(例えば、組織特異的調節配列)、及び特定
の薬剤による刺激によって核酸の発現を導くもの(例えば、誘導可能な調節配列)が含まれ
る。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、タンパク質の所望の発現レ
ベルのような因子によって決まり得ることが当業者には理解されるであろう。用語「宿主
細胞」は、核酸で形質転換又はトランスフェクトされる特定の対象細胞、及びそのような
細胞の子孫又は可能性のある子孫を含むものとする。そのような細胞の子孫は、後続の世
代で起こり得る突然変異もしくは環境の影響又は宿主細胞ゲノムへの核酸の組込みのため
に、核酸で形質転換又はトランスフェクトされる親細胞と同一でなくてもよい。具体的な
実施態様では、宿主細胞は単離されている。

発現ベクターは、従来の形質転換又はトランスフェクション技術によって宿主細胞に導
入することができる。そのような技術としては、リン酸カルシウム又は塩化カルシウム共
沈、DEAE-デキストランによるトランスフェクション、リポフェクション、及びエレクト
ロポレーションが挙げられるが、これらに限定されない。宿主細胞を形質転換又はトラン
スフェクトするための好適な方法は、Sambrookらの文献(1989, 分子クローニング-実験マ
ニュアル(Molecular Cloning - A Laboratory Manual), 第2版, Cold Spring Harbor Pre
ss, New York)、及び他の実験マニュアルに見出すことができる。ある実施態様では、宿
主細胞は、fluポリペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターで一過性にトランスフ
ェクトされる。他の実施態様では、宿主細胞は、fluポリペプチドをコードする核酸を含
む発現ベクターで安定にトランスフェクトされる。したがって、本明細書に記載されてい
るか、又は本明細書で提供される方法に従って作製されるfluポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドを含む宿主細胞が本明細書で提供される。

種々の宿主-発現ベクター系を利用して、fluポリペプチドを発現させることができる。
そのような宿主-発現系は、関心対象のコード配列を産生し、その後、精製することがで
きる媒体であるが、適当なヌクレオチドコード配列で形質転換又はトランスフェクトした
ときに、インサイチュでfluポリペプチドを発現することができる細胞でもある。これら
には、fluポリペプチドコード配列を含む組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNA
、又はコスミドDNA発現ベクターで形質転換した細菌(例えば、大腸菌(E. coli)及び枯草
菌(B. subtilis))などの微生物;fluポリペプチドコード配列を含む組換え酵母発現ベクタ
ーで形質転換した酵母(例えば、サッカロミセス・ピキア(Saccharomyces Pichia));fluポ
リペプチドコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター(例えば、バキュロウイルス)に
感染させた昆虫細胞系;組換えウイルス発現ベクター(例えば、カリフラワーモザイクウイ
ルス、CaMV;タバコモザイクウイルス、TMV)に感染させたか、もしくはfluポリペプチドコ
ード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター(例えば、Tiプラスミド)で形質転換した植
物細胞系;又は哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター(例えば、メタロチオネインプロ
モーター)もしくは哺乳動物ウイルス由来のプロモーター(例えば、アデノウイルス後期プ
ロモーター;ワクシニアウイルス7.5Kプロモーター)を含む組換え発現コンストラクトを有
する哺乳動物細胞系(例えば、COS、CHO、BHK、293、NS0、及び3T3細胞)が含まれるが、こ
れらに限定されない。好ましくは、大腸菌などの細菌細胞、及びより好ましくは、真核生
物細胞がfluポリペプチドの発現に用いられる。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細
胞(CHO)などの哺乳動物細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中早期遺伝子プロ
モーターエレメントなどのベクターと併せて、fluポリペプチドの効果的な発現系である(
Foeckingらの文献(1986, Gene 45:101);及びCockettらの文献(1990, Bio/Technology 8:2
))。具体的な実施態様では、本明細書に記載されているか、又は本明細書で提供される方
法に従って作製されるfluポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的
プロモーター、誘導性プロモーター、又は組織特異的プロモーターによって調節される。

細菌系では、発現されるfluポリペプチドに意図される用途に応じて、いくつかの発現
ベクターを有利に選択することができる。例えば、fluポリペプチドの医薬組成物の作製
のために、大量のfluポリペプチドを産生しようとする場合、容易に精製される融合タン
パク質産物の高レベルの発現を導くベクターが望ましい場合がある。そのようなベクター
としては、融合タンパク質が産生されるように、fluポリペプチドコード配列をlacZコー
ド領域とインフレームにしてベクターに個別に連結することができる、大腸菌発現ベクタ
ーpUR278(Rutherらの文献(1983, EMBO 12:1791));pINベクター(Inouye及びInouyeの文献(
1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109);Van Heeke及びSchusterの文献(1989, J. Biol
. Chem. 24:5503-5509));などが挙げられるが、これらに限定されない。また、pGEXベク
ターを用いて、外来ポリペプチドをグルタチオンS-トランスフェラーゼ(glutathione 5-t
ransferase)(GST)との融合タンパク質として発現することができる。一般に、そのような
融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスのグルタチオンアガロースビーズへの吸着
及び結合、その後の遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解細胞から容易に精
製することができる。pGEXベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物をGST部分か
ら放出することができるように、トロンビン又は第Xa因子プロテアーゼ切断部位を含むよ
うに設計されている。

昆虫系では、オートグラファ・カリフォルニカ(Autographa californica)核多角体病ウ
イルス(AcNPV)が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして用いられる。該ウイルス
は、ヨトウガ(Spodoptera frugiperda)細胞内で増殖する。fluポリペプチドコード配列を
該ウイルスの非必須領域(例えば、ポリヘドリン遺伝子)に個別にクローニングし、AcNPV
プロモーター(例えば、ポリヘドリンプロモーター)の制御下に置くことができる。

哺乳動物宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。
アデノウイルスが発現ベクターとして用いられる場合、関心対象のfluポリペプチドコー
ド配列を、アデノウイルス転写/翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三分節(
tripartite)リーダー配列に連結させることができる。その後、このキメラ遺伝子を、イ
ンビトロ又はインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウ
イルスゲノムの非必須領域(例えば、領域E1又はE3)への挿入は、感染した宿主内で生存能
力があり、fluポリペプチドを発現することができる組換えウイルスを生じさせる(例えば
、Logan及びShenkの文献(1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359)を参照された
い)。挿入されたfluポリペプチドコード配列の効率的な翻訳のためには、特異的開始シグ
ナルが必要とされる場合もある。これらのシグナルとしては、ATG開始コドン及び隣接配
列が挙げられる。さらに、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望の
コード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性翻訳制御
シグナル及び開始コドンは、天然と合成の両方の、種々の起源のものであることができる
。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含める
ことによって増強することができる(例えば、Bittnerらの文献(1987, Methods in Enzymo
l. 153:51-544)を参照されたい)。

さらに、挿入された配列の発現を調節するか、又は遺伝子産物を望ましい特定の様式で
修飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのよ
うな修飾(例えば、グリコシル化)及びプロセシング(例えば、切断)は、fluポリペプチド
の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後
プロセシング及び修飾に特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。発現される外来タンパ
ク質の正確な修飾及びプロセシングを確実にするために、適切な細胞株又は宿主系を選択
することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写物の適切なプロセシング、
遺伝子産物のグリコシル化、及びリン酸化のための細胞機構を有する真核生物宿主細胞を
用いることができる。そのような哺乳動物宿主細胞としては、CHO、VERY、BHK、Hela、CO
S、Vero、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O、及びT47D、NS0(いかなる
免疫グロブリン鎖も内在性に産生しないマウス骨髄腫細胞株)、CRL7O3O、並びにHsS78Bst
細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

組換えfluポリペプチドの長期にわたる、高収率の産生のためには、安定発現が好まし
い。例えば、fluポリペプチド分子を安定に発現する細胞株を人為作製することができる
。ウイルス複製起点を含む発現ベクターを用いるよりも、宿主細胞を、適切な発現制御エ
レメント(例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデ
ニル化部位など)によって制御されるDNA、及び選択マーカーで形質転換することができる
。外来DNAの導入後、人為作製した細胞を富化培地中で1〜2日間増殖させ、その後、選択
培地に移すことができる。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を付
与し、細胞がプラスミドをその染色体に安定に組み込み、増殖して増殖巣(foci)を形成す
ることを可能にする。次に、この増殖巣をクローニングし、細胞株へと拡大することがで
きる。この方法を有利に用いて、fluポリペプチドを発現する細胞株を人為作製すること
ができる。人為作製されたそのような細胞株は、fluポリペプチドと直接的又は間接的に
相互作用する組成物のスクリーニング及び評価において特に有用であり得る。組換えDNA
技術の分野で一般に知られている方法を通常通りに適用して、所望の組換えクローンを選
択することができ、そのような方法は、例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み
込まれている、Ausubelらの文献(編)、分子生物学の最新プロトコル(Current Protocols
in Molecular Biology)(John Wiley ＆ Sons, NY(1993));Krieglerの文献、遺伝子の移入
及び発現、実験マニュアル(Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual)(Stoc
kton Press, NY(1990));並びにDracopoliらの文献(編)、ヒト遺伝学の最新プロトコル(Cu
rrent Protocols in Human Genetics)(John Wiley ＆ Sons, NY(1994))の第12章及び第13
章;Colberre-Garapinらの文献(1981, J. Mol. Biol. 150:1)に記載されている。

fluポリペプチドの発現レベルをベクター増幅によって増大させることができる(総説に
ついては、Bebbington及びHentschelの文献、DNAクローニングにおけるクローニングされ
た遺伝子の哺乳動物細胞内での発現のための遺伝子増幅に基づくベクターの使用(The use
of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in ma
mmalian cells in DNA cloning)(第3巻, Academic Press, New York, 1987)を参照された
い)。fluポリペプチドを発現するベクター系のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞
の培養物中に存在する阻害因子のレベルの上昇により、マーカー遺伝子のコピーの数が増
加する。増幅された領域はfluポリペプチドと関連しているため、fluポリペプチドの産生
も増加する(Crouseらの文献(1983, Mol. Cell. Biol. 3:257))。

宿主細胞を用いるfluポリペプチドの組換え発現の代替法として、fluポリペプチドをコ
ードする核酸を含む発現ベクターを、例えば、T7プロモーター調節配列及びT7ポリメラー
ゼを用いて、インビトロで転写及び翻訳することができる。具体的な実施態様では、共役
転写/翻訳系、例えば、Promega TNT(登録商標)、又は転写及び翻訳に必要な成分を含む細
胞溶解物もしくは細胞抽出物を用いて、fluポリペプチドを産生することができる。

したがって、fluポリペプチドを産生する方法が本明細書で提供される。一実施態様で
は、本方法は、ポリペプチドが産生されるように、ポリペプチドをコードする核酸を含む
宿主細胞を好適な培地中で培養することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、ポ
リペプチドを培地又は宿主細胞から単離することをさらに含む。

ある実施態様では、植物(例えば、タバコ属の植物)を、本明細書に記載のfluポリペプ
チドを発現するように改変することができる。具体的な実施態様では、当技術分野で公知
の方法を用いるアグロインフィルトレーションによって、植物を本明細書に記載のfluポ
リペプチドを発現するように改変することができる。例えば、関心対象の遺伝子、例えば
、本明細書に記載のfluポリペプチドをコードする遺伝子をコードする核酸を、アグロバ
クテリウムの株に導入する。その後、この株を液体培地中で増殖させ、得られる細菌を洗
浄し、緩衝溶液に懸濁する。その後、アグロバクテリウムが関心対象の遺伝子を植物細胞
の一部に形質転換するように、植物を(例えば、注射又は浸漬によって)本明細書に記載の
fluポリペプチドをコードする核酸を含むアグロバクテリウムに曝露させる。その後、flu
ポリペプチドを該植物によって一過性に発現させ、当技術分野で公知かつ本明細書に記載
の方法を用いて単離することができる(具体的な例については、Shojiらの文献(2008, Vac
cine, 26(23):2930-2934);及びD'Aoustらの文献(2008, J. Plant Biotechnology, 6(9):9
30-940))を参照されたい。具体的な実施態様では、植物は、タバコ植物(すなわち、タバ
コ(Nicotiana tabacum))である。別の具体的な実施態様では、植物は、タバコ植物の近縁
種(例えば、ベンサミアナタバコ(Nicotiana benthamiana))である。

いくつかの実施態様では、植物細胞培養系をfluポリペプチドの発現に用いる。植物細
胞及び植物細胞培養系を利用するタンパク質の産生方法については、例えば、米国特許第
5,929,304号;第7,504,560号;第6,770,799号;第6,551,820号;第6,136,320号;第6,034,298
号;第5,914,935号;第5,612,487号;及び第5,484,719号、米国特許出願公開第2009/0208477
号、第2009/0082548号、第2009/0053762号、第2008/0038232号、第2007/0275014号、及び
第2006/0204487号、並びにShojiらの文献(2008, Vaccine, 26(23):2930-2934)、及びD'Ao
ustらの文献(2008, J. Plant Biotechnology, 6(9):930-940)(これらは、引用によりその
全体が本明細書中に組み込まれている)を参照されたい。具体的な実施態様では、ニンジ
ン細胞を改変して、fluポリペプチドを発現させる。ある実施態様では、藻類(例えば、コ
ナミドリムシ(Chlamydomonas reinhardtii))を改変して、fluポリペプチドを発現させる
ことができる(例えば、Rasalaらの文献(2010, Plant Biotechnology Journal)(2010年3月
7日にオンラインで発表され、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている)を参
照されたい)。

(5.3.3 fluポリペプチドの精製)
本明細書に記載されており、かつ上の第5.3.1節及び第5.3.1節に記載の手法を用いて作
製されるfluポリペプチドは、ポリペプチドの精製のための当技術分野で公知の任意の方
法によって、例えば、クロマトグラフィー(例えば、イオン交換、親和性、特に、プロテ
インAの後ろの特異的抗原に対する親和性によるもの、及びサイジングカラムクロマトグ
ラフィー)、遠心分離、示差溶解度によって、又はタンパク質の精製のための任意の他の
標準技術によって精製することができる。さらに、fluポリペプチドは、本明細書に記載
されているか、又はそうでなければ、精製を容易にすることが当技術分野で知られている
異種ポリペプチド配列に融合させることができる。特定のfluポリペプチドを精製するた
めに用いられる実際の条件は、一つには、合成戦略(例えば、合成による産生と組換えに
よる産生)、並びにfluポリペプチドの正味の電荷、疎水性、及び/又は親水性などの因子
によって決まり、かつ当業者には明白であろう。

(5.4 インフルエンザウイルスベクター)
一態様では、fluポリペプチドを含むインフルエンザウイルスが本明細書で提供される
。具体的な実施態様では、fluポリペプチドをインフルエンザウイルスのビリオンに組み
込む。インフルエンザウイルスを、免疫細胞などの特定の細胞型にウイルスをターゲッテ
ィングする部分に結合させもよい。いくつかの実施態様では、インフルエンザウイルスの
ビリオンは、fluポリペプチドに加えて、異種ポリペプチドをそれらに組み込んでいるか
、又はそれを発現する。異種ポリペプチドは、免疫増強活性を有するか、又は特定の細胞
型にインフルエンザウイルスをターゲッティングするポリペプチド、例えば、特定の細胞
型の表面の抗原に結合する抗体、又は特定の細胞型の表面の特異的受容体に結合するリガ
ンドであってもよい。

fluポリペプチドを含むインフルエンザウイルスは、当業者に公知の技術、例えば、リ
バースジェネティクス及びヘルパーフリープラスミドレスキューを用いて、ビリオンの産
生の間にトランスでfluポリペプチドを供給することによって産生することができる。或
いは、親インフルエンザウイルスは、インフルエンザfluポリペプチドを含む子孫インフ
ルエンザウイルスを産生するように血球凝集素機能がトランスで提供されているウイルス
に感染しやすい細胞でfluポリペプチドを発現するように改変されたゲノムを含む。

別の態様では、fluポリペプチドを発現するように改変されたゲノムを含むインフルエ
ンザウイルスが本明細書で提供される。具体的な実施態様では、親インフルエンザウイル
スのゲノムは、子孫インフルエンザウイルスによって発現されるfluポリペプチドをコー
ドするように改変される。別の具体的な実施態様では、親インフルエンザウイルスのゲノ
ムは、発現されて、子孫インフルエンザウイルスのビリオンに組み込まれるfluポリペプ
チドをコードするように改変される。したがって、親インフルエンザウイルスの複製によ
って生じる子孫インフルエンザウイルスは、fluポリペプチドを含む。

いくつかの実施態様では、親インフルエンザウイルスのビリオンは、異種ポリペプチド
をそれらに組み込んでいる。ある実施態様では、親インフルエンザウイルスのゲノムは、
子孫インフルエンザウイルスによって発現される異種ポリペプチド及びインフルエンザウ
イルスfluポリペプチドをコードするように改変される。具体的な実施態様では、インフ
ルエンザfluポリペプチド、異種ポリペプチド、又は両方は、子孫インフルエンザウイル
スのビリオンに組み込まれる。

異種ポリペプチドは、特定の細胞型にインフルエンザウイルスをターゲッティングする
ポリペプチド、例えば、特定の細胞型の表面の抗原を認識する抗体、又は特定の細胞型の
表面の特異的受容体に結合するリガンドであってもよい。いくつかの実施態様では、ター
ゲッティングポリペプチドは、ウイルスの標的細胞認識機能を置換する。具体的な実施態
様では、異種ポリペプチドは、インフルエンザウイルスが天然で感染するのと同じ細胞型
にインフルエンザウイルスをターゲッティングする。他の具体的な実施態様では、異種ポ
リペプチドは、免疫細胞、例えば、B細胞、T細胞、マクロファージ、又は樹状細胞に子孫
インフルエンザウイルスをターゲッティングする。いくつかの実施態様では、異種ポリペ
プチドは、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞の細胞特異的マーカー(例えば、CD44など)を
認識して、それに結合する。一実施態様では、異種ポリペプチドは、樹状細胞にウイルス
をターゲッティングするDC-SIGNである。別の実施態様では、異種ポリペプチドは、免疫
細胞にウイルスをターゲッティングする抗体(例えば、単鎖抗体)であり、この抗体は、そ
れがインフルエンザウイルスビリオンに組み込まれるように、別のポリペプチド由来の膜
貫通ドメインと融合されていてもよい。いくつかの実施態様では、抗体は、CD20抗体、CD
34抗体、又はDEC-205に対する抗体である。ターゲッティング機能のあるポリペプチドを
発現するようにウイルスを改変する技術は当技術分野で公知である。例えば、Yangらの文
献(2006, PNAS103:11479-11484)及び2008年1月24日に公開された米国特許出願公開第2008
0019998号及び2007年1月25日に公開された第20070020238号を参照されたく、その各々の
内容は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる。

別の実施態様では、異種ポリペプチドは、ウイルス付着タンパク質である。その付着タ
ンパク質(複数可)をこの態様で用いることができるウイルスの非限定的な例は、以下の群
から選択されるウイルスである:ラッサ熱ウイルス、B型肝炎ウイルス、狂犬病ウイルス、
ニューカッスル病ウイルス(NDV)、レトロウイルス、例えば、ヒト免疫不全ウイルス、ダ
ニ媒介性脳炎ウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、ポリオウイルス、アル
ファウイルス、例えば、セムリキ森林ウイルス、ロスリバーウイルス、及びアウラウイル
ス(E1、E2、及びE3などの表面糖タンパク質を含む)、ボルナ病ウイルス、ハンターンウイ
ルス、フォーミーウイルス、並びにSARS-CoVウイルス。

具体的な実施態様では、A型インフルエンザウイルスは、fluポリペプチド及びC型イン
フルエンザHEFタンパク質をコードするように改変され、ここで、該C型インフルエンザHE
Fタンパク質は、A型インフルエンザノイラミニダーゼ(NA)タンパク質の代わりに用いられ
る。

一実施態様では、フラビウイルス表面糖タンパク質、例えば、デングウイルス(DV)Eタ
ンパク質を用いることができる。いくつかの実施態様では、アルファウイルスファミリー
由来のシンドビスウイルス糖タンパク質が用いられる(K. S. Wang, R. J. Kuhn, E. G. S
trauss, S. Ou, J. H. Straussの文献(J. Virol. 66, 4992(1992))。ある実施態様では、
異種ポリペプチドは、NDV HNもしくはFタンパク質;ヒト免疫不全ウイルス(HIV)gp160(又
はその産物、例えば、gp41もしくはgp120);B型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg);ヘルペスウ
イルスの糖タンパク質(例えば、gD、gE);或いはポリオウイルスのVP1に由来する。

別の実施態様では、異種ポリペプチドは、当技術分野で公知の任意の非ウイルスターゲ
ッティング系に由来する。ある実施態様では、非ウイルス病原体、例えば、細胞内細菌又
は細胞内原虫のタンパク質が用いられる。いくつかの実施態様では、細菌ポリペプチドは
、例えば、クラミジア(Chlamydia)、リケッチア(Rikettsia)、コクセリア(Coxelia)、リ
ステリア(Listeria)、ブルセラ(Brucella)、又はレジオネラ(Legionella)によって提供さ
れる。いくつかの実施態様では、原虫のポリペプチドは、例えば、マラリア原虫(Plasmod
ia)種、リューシマニア属(Leishmania)の種、トキソプラズマ原虫(Toxoplasma gondii)、
又はクルーズトリパノソーマ(Trypanosoma cruzi)によって提供される。他の例示的なタ
ーゲッティング系は、その全体が本明細書中に組み込まれている、Waehlerらの文献(2007
、「遺伝子治療のための標的ウイルスベクターの改変(Engineering targeted viral vect
ors for gene therapy)」、Nature Reviews Genetics 8:573-587)に記載されている。

ある実施態様では、インフルエンザウイルスによって発現される異種ポリペプチドは、
免疫増強(免疫賦活)活性を有する。免疫増強ポリペプチドの非限定的な例としては、刺激
分子、サイトカイン、ケモカイン、抗体、及び他の作用物質、例えば、Flt-3リガンドが
挙げられるが、これらに限定されない。免疫増強活性のあるポリペプチドの具体的な例と
しては、以下が挙げられる:インターフェロン1型、アルファ、ベータ、もしくはガンマイ
ンターフェロン、コロニー刺激因子、例えば、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(
GM-CSF)、インターロイキン(IL)-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、IL-
18、IL-21、IL-23、腫瘍壊死因子(TNF)-β、TNFα、B7.1、B7.2、4-1BB、CD40リガンド(C
D40L)及び薬剤誘導性CD40(iCD40)(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込ま
れている、Hanks, B. A.らの文献(2005. Nat Med 11:130-137)を参照されたい。)

A型及びB型インフルエンザウイルスのゲノムは8本(8)の一本鎖のマイナスセンスセグメ
ントからなる(C型インフルエンザウイルスは7本(7)の一本鎖のマイナスセンスセグメント
からなる)ので、親インフルエンザウイルスのゲノムは、組換えセグメント、並びに当業
者に公知の技術、例えば、リバースジェネティクス及びヘルパーフリープラスミドレスキ
ューを用いて、fluポリペプチド(及び任意の他のポリペプチド、例えば、異種ポリペプチ
ド)を発現するように改変することができる。一実施態様では、組換えセグメントは、flu
ポリペプチド、並びにvRNAの適切な複製、転写、及びパッケージングに必要とされる3'及
び5'組込みシグナルをコードする核酸を含む(Gaoらの文献(2010, J. of Virology 84:806
2-8074)、Fujiiらの文献(2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:2002-2007);Zhengらの
文献(1996, Virology 217:242-251)、及びPCT/US2010/043697号、これらは全て、引用に
よりその全体が本明細書中に組み込まれる)。ある実施態様では、fluポリペプチドをコー
ドする組換えセグメントは、親インフルエンザウイルスのHAセグメントに代わることがで
きる。いくつかの実施態様では、fluポリペプチドをコードする組換えセグメントは、親
インフルエンザウイルスのNS1遺伝子に代わることができる。いくつかの実施態様では、f
luポリペプチドをコードする組換えセグメントは、親インフルエンザウイルスのNA遺伝子
を代えることができる。fluポリペプチドを発現させるために用いることができる例示的
なインフルエンザウイルス株としては、アンアーバー/1/50、A/プエルトリコ/8/34、A/サ
ウスダコタ/6/2007、A/ウルグアイ/716/2007、及びB/ブリスベン/60/2008が挙げられる。

いくつかの実施態様では、親インフルエンザウイルスのゲノムは、二シストロン性であ
る組換えセグメントを用いて、fluポリペプチドを発現するように改変することができる
。二シストロン性技術は、内部リボソーム侵入部位(IRES)配列の使用により、複数のタン
パク質のコード配列の単一mRNAへの改変を可能にする。IRES配列は、RNA分子へのリボソ
ームの内部動員を導き、キャップ非依存的に下流の翻訳を可能にする。簡潔に述べると、
1つのタンパク質のコード領域が、第二のタンパク質のオープンリーディングフレーム(OR
F)に挿入される。挿入は、IRES並びに適切な発現及び/又は機能に必要な任意の非翻訳シ
グナル配列に連なる。挿入は、第二のタンパク質のORF、ポリアデニル化、又は転写プロ
モーターを妨害してはならない(例えば、Garcia-Sastreらの文献(1994, J. Virol. 68:62
54-6261)及びGarcia-Sastreらの文献(1994 Dev. Biol. Stand. 82:237-246)を参照された
く、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている)。例えば、米国
特許第6,887,699号、米国特許第6,001,634号、米国特許第5,854,037号、及び米国特許第5
,820,871号も参照されたく、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれ
る。当技術分野で公知又は本明細書に記載の任意のIRESを本発明に従って用いることがで
きる(例えば、BiP遺伝子のIRES、GenBankデータベースエントリーHUMGRP78のヌクレオチ
ド372〜592;又は脳心筋炎ウイルス(EMCV)のIRES、GenBankデータベースエントリーCQ8672
38のヌクレオチド1430-2115)。したがって、ある実施態様では、親インフルエンザウイル
スは、fluポリペプチドと、別のポリペプチド、例えば、親インフルエンザウイルスによ
って発現される遺伝子とを発現する二シストロン性RNAセグメントを含むように改変され
る。

当業者に公知の技術を用いて、fluポリペプチドを含むインフルエンザウイルス、及びf
luポリペプチドを発現するように改変されたゲノムを含むインフルエンザウイルスを産生
することができる。例えば、リバースジェネティクス技術を用いて、そのようなインフル
エンザウイルスを産生することができる。簡潔に述べると、リバースジェネティクス技術
は、一般に、ウイルスポリメラーゼによる認識及び成熟ビリオンの生成に必要なパッケー
ジングシグナルに必須である、マイナス鎖ウイルスRNAの非コード領域を含む合成組換え
ウイルスRNAの調製を含む。組換えRNAは、組換えDNA鋳型から合成され、精製されたウイ
ルスポリメラーゼ複合体によってインビトロで再構成されて、細胞をトランスフェクトす
るために用いることができる組換えリボ核タンパク質(RNP)を形成する。インビトロ又は
インビボでの合成RNAの転写の間にウイルスポリメラーゼタンパク質が存在する場合、よ
り効率的なトランスフェクションが達成される。合成組換えRNPは、感染性ウイルス粒子
中にレスキューすることができる。前述の技術は、1992年11月24日に出願された米国特許
第5,166,057号;1998年12月29日に出願された米国特許第5,854,037号;1996年2月20日に公
開された欧州特許公開EP 0702085A1号;米国特許出願第09/152,845号;1997年4月3日に公開
された国際特許公開PCT WO 97/12032号;1996年11月7日に公開されたWO 96/34625号;欧州
特許公開EP A780475号;1999年1月21日に公開されたWO 99/02657号;1998年11月26日に公開
されたWO 98/53078号;1998年1月22日に公開されたWO 98/02530号;1999年4月1日に公開さ
れたWO 99/15672号;1998年4月2日に公開されたWO 98/13501号;1997年2月20日に公開され
たWO 97/06270号;及び1997年6月25日に公開されたEPO 780 475A1号に記載されており、そ
の各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる。

或いは、ヘルパーフリープラスミド技術を用いて、fluポリペプチドを含むインフルエ
ンザウイルス、及び/又はfluポリペプチドを発現するように改変されたゲノムを含むイン
フルエンザウイルスを産生することができる。簡潔に述べると、プラスミドベクターへの
PCR産物の挿入を可能にする独特の制限部位を含むプライマーによるPCRを用いて、ウイル
スセグメントの全長cDNAを増幅させる(Flandorferらの文献(2003, J. Virol. 77:9116-91
23;Nakayaらの文献(2001, J. Virol. 75:11868-11873;これらは両方とも、引用によりそ
の全体が本明細書中に組み込まれている)。プラスミドベクターは、正確なマイナスの(vR
NAセンス)転写物が発現されるように設計される。例えば、正確なマイナスの(vRNAセンス
)転写物がポリメラーゼIプロモーターから産生されるように、プラスミドベクターは、切
断されたヒトRNAポリメラーゼIプロモーターとデルタ型肝炎ウイルスリボザイム配列の間
にPCR産物を配置するように設計することができる。各ウイルスセグメントを含む別個の
プラスミドベクター並びに必要なウイルスタンパク質を含む発現ベクターを細胞にトラン
スフェクトして、組換えウイルス粒子の産生をもたらすことができる。別の実施例では、
必要なウイルスタンパク質をコードするウイルスのゲノムRNAとmRNAの両方が発現される
プラスミドベクターを用いることができる。ヘルパーフリープラスミド技術の詳細な説明
については、例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、国際公開WO
01/04333号;米国特許第6,951,754号、第7,384,774号、第6,649,372号、及び第7,312,064
号;Fodorらの文献(1999, J. Virol. 73:9679-9682);Quinlivanらの文献(2005, J. Virol.
79:8431-8439);Hoffmannらの文献(2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:6108-6113);
並びにNeumannらの文献(1999, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:9345-9350)を参照された
い。

本明細書に記載のインフルエンザウイルスは、本明細書に記載の方法に従うその使用を
可能にする力価までウイルスを増殖させる任意の基体中で増殖させることができる。一実
施態様では、基体は、対応する野生株ウイルスについて測定される力価と同等の力価まで
ウイルスを増殖させる。ある実施態様では、基体は、インフルエンザウイルスにとって生
物学的に適するものである。具体的な実施態様では、例えば、NS1遺伝子中の突然変異に
よる弱毒化インフルエンザウイルスは、IFN欠損基体中で増殖させることができる。例え
ば、好適なIFN欠損基体は、インターフェロンを産生するか、もしくはそれに応答するそ
の能力に欠陥がある基体であってもよく、又はIFN欠損基体をインターフェロン欠損増殖
環境を必要とし得る任意の数のウイルスの増殖のために用いることができる基体である。
例えば、2003年6月3日に出願された米国特許第6,573,079号、2005年2月8日に出願された
第6,852,522号、及び2009年2月24日に出願された第7,494,808号を参照されたく、これら
の文献の各々の内容全体は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる。

本明細書に記載のインフルエンザウイルスは、当業者に公知の任意の方法によって単離
及び精製することができる。一実施態様では、ウイルスは、一般に、周知の清澄化手順、
例えば、密度勾配遠心分離及びカラムクロマトグラフィーによって細胞培養物から取り出
され、細胞成分から分離され、望ましい場合、当業者に周知の手順、例えば、プラークア
ッセイを用いて、さらに精製することができる。

ある実施態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイル
ス、又はインフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、
A型インフルエンザウイルスから得られるか、又はそれに由来する。ある実施態様では、
本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又はインフルエン
ザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、単一のA型インフルエ
ンザウイルスの亜型もしくは株から得られるか、又はそれらに由来する。他の実施態様で
は、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又はインフル
エンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、2以上のA型インフ
ルエンザウイルスの亜型もしくは株から得られるか、又はそれらに由来する。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザ
ウイルス、又はインフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメン
トは、B型インフルエンザウイルスから得られるか、又はそれに由来する。ある実施態様
では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又はインフ
ルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、単一のB型イン
フルエンザウイルスの亜型もしくは株から得られるか、又はそれらに由来する。他の実施
態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又はイ
ンフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、2以上のB型
インフルエンザウイルスの亜型もしくは株から得られるか、又はそれらに由来する。他の
実施態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又
はインフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、A型イ
ンフルエンザウイルスの亜型又は株とB型インフルエンザウイルスの亜型又は株の組合せ
から得られるか、又はそれに由来する。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザ
ウイルス、又はインフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメン
トは、C型インフルエンザウイルスから得られるか、又はそれに由来する。ある実施態様
では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又はインフ
ルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、単一のC型イン
フルエンザウイルスの亜型もしくは株から得られるか、又はそれらに由来する。他の実施
態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又はイ
ンフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、2以上のC型
インフルエンザウイルスの亜型もしくは株から得られるか、又はそれらに由来する。他の
実施態様では、本明細書に記載されているように用いられるインフルエンザウイルス、又
はインフルエンザウイルスポリペプチド、遺伝子、もしくはゲノムセグメントは、C型イ
ンフルエンザウイルスの亜型又は株とA型インフルエンザウイルスの亜型もしくは株及び/
又はB型インフルエンザウイルスの亜型もしくは株の組合せから得られるか、或いはそれ
らに由来する。

A型インフルエンザウイルスの非限定的な例としては、亜型H10N4、亜型H10N5、亜型H10
N7、亜型H10N8、亜型H10N9、亜型H11N1、亜型H11N13、亜型H11N2、亜型H11N4、亜型H11N6
、亜型H11N8、亜型H11N9、亜型H12N1、亜型H12N4、亜型H12N5、亜型H12N8、亜型H13N2、
亜型H13N3、亜型H13N6、亜型H13N7、亜型H14N5、亜型H14N6、亜型H15N8、亜型H15N9、亜
型H16N3、亜型H1N1、亜型H1N2、亜型H1N3、亜型H1N6、亜型H1N9、亜型H2N1、亜型H2N2、
亜型H2N3、亜型H2N5、亜型H2N7、亜型H2N8、亜型H2N9、亜型H3N1、亜型H3N2、亜型H3N3、
亜型H3N4、亜型H3N5、亜型H3N6、亜型H3N8、亜型H3N9、亜型H4N1、亜型H4N2、亜型H4N3、
亜型H4N4、亜型H4N5、亜型H4N6、亜型H4N8、亜型H4N9、亜型H5N1、亜型H5N2、亜型H5N3、
亜型H5N4、亜型H5N6、亜型H5N7、亜型H5N8、亜型H5N9、亜型H6N1、亜型H6N2、亜型H6N3、
亜型H6N4、亜型H6N5、亜型H6N6、亜型H6N7、亜型H6N8、亜型H6N9、亜型H7N1、亜型H7N2、
亜型H7N3、亜型H7N4、亜型H7N5、亜型H7N7、亜型H7N8、亜型H7N9、亜型H8N4、亜型H8N5、
亜型H9N1、亜型H9N2、亜型H9N3、亜型H9N5、亜型H9N6、亜型H9N7、亜型H9N8、及び亜型H9
N9が挙げられる。

A型インフルエンザウイルスの株の具体的な例としては、A/sw/アイオワ/15/30(H1N1);A
/WSN/33(H1N1);A/eq/プラハ/1/56(H7N7);A/PR/8/34;A/マガモ/ポツダム/178-4/83(H2N2);
A/セグロカモメ/DE/712/88(H16N3);A/sw/香港/168/1993(H1N1);A/マガモ/アルバータ/211
/98(H1N1);A/水鳥/デラウェア/168/06(H16N3);A/sw/オランダ/25/80(H1N1);A/sw/ドイツ/
2/81(H1N1);A/sw/ハノーバー/1/81(H1N1);A/sw/ポツダム/1/81(H1N1);A/sw/ポツダム/15/
81(H1N1);A/sw/ポツダム/268/81(H1N1);A/sw/フィニステール/2899/82(H1N1);A/sw/ポツ
ダム/35/82(H3N2);A/sw/コートダルモール/3633/84(H3N2);A/sw/ヘント/1/84(H3N2);A/sw
/オランダ/12/85(H1N1);A/sw/カレンツァイ(Karrenzien)/2/87(H3N2);A/sw/シュウェリン
/103/89(H1N1);A/七面鳥/ドイツ/3/91(H1N1);A/sw/ドイツ/8533/91(H1N1);A/sw/ベルギー
/220/92(H3N2);A/sw/ヘント/V230/92(H1N1);A/sw/ライプチヒ/145/92(H3N2);A/sw/Re220/
92hp(H3N2);A/sw/バークム/909/93(H3N2);A/sw/シュレースヴィヒ−ホルシュタイン/1/93
(H1N1);A/sw/スコットランド/419440/94(H1N2);A/sw/バークム/5/95(H1N1);A/sw/ベスト(
Best)/5C/96(H1N1);A/sw/イングランド/17394/96(H1N2);A/sw/イエナ/5/96(H3N2);A/sw/
ウーデンローデ/7C/96(H3N2);A/sw/ローネ/1/97(H3N2);A/sw/コートダルモール/790/97(H
1N2);A/sw/バークム/1362/98(H3N2);A/sw/イタリア/1521/98(H1N2);A/sw/イタリア/1553-
2/98(H3N2);A/sw/イタリア/1566/98(H1N1);A/sw/イタリア/1589/98(H1N1);A/sw/バークム
/8602/99(H3N2);A/sw/コートダルモール/604/99(H1N2);A/sw/コートダルモール/1482/99(
H1N1);A/sw/ヘント/7625/99(H1N2);A/香港/1774/99(H3N2);A/sw/香港/5190/99(H3N2);A/s
w/香港/5200/99(H3N2);A/sw/香港/5212/99(H3N2);A/sw/イル・エ・ヴィレーヌ/1455/99(H
1N1);A/sw/イタリア/1654-1/99(H1N2);A/sw/イタリア/2034/99(H1N1);A/sw/イタリア/206
4/99(H1N2);A/sw/ベルリン/1578/00(H3N2);A/sw/バークム/1832/00(H1N2);A/sw/バークム
/1833/00(H1N2);A/sw/コートダルモール/800/00(H1N2);A/sw/香港/7982/00(H3N2);A/sw/
イタリア/1081/00(H1N2);A/sw/ベルチヒ/2/01(H1N1);A/sw/ベルチヒ/54/01(H3N2);A/sw/
香港/9296/01(H3N2);A/sw/香港/9745/01(H3N2);A/sw/スペイン/33601/01(H3N2);A/sw/香
港/1144/02(H3N2);A/sw/香港/1197/02(H3N2);A/sw/スペイン/39139/02(H3N2);A/sw/スペ
イン/42386/02(H3N2);A/スイス/8808/2002(H1N1);A/sw/バークム/1769/03(H3N2);A/sw/ビ
ッセンドルフ/IDT1864/03(H3N2);A/sw/エーレン(Ehren)/IDT2570/03(H1N2);A/sw/ゲッシ
ャー/IDT2702/03(H1N2);A/sw/ハーゼリュンネ/2617/03hp(H1N1);A/sw/レーニンゲン/IDT2
530/03(H1N2);A/sw/IVD/IDT2674/03(H1N2);A/sw/ノルドキルヒェン/IDT1993/03(H3N2);A/
sw/ノルドヴァルデ/IDT2197/03(H1N2);A/sw/ノルデン/IDT2308/03(H1N2);A/sw/スペイン/
50047/03(H1N1);A/sw/スペイン/51915/03(H1N1);A/sw/フェヒタ/2623/03(H1N1);A/sw/ヴ
ィズベク/IDT2869/03(H1N2);A/sw/ヴァルタースドルフ/IDT2527/03(H1N2);A/sw/ダム(Dam
me)/IDT2890/04(H3N2);A/sw/ゲルダーン/IDT2888/04(H1N1);A/sw/グランステット(Granst
edt)/IDT3475/04(H1N2);A/sw/グレーフェン/IDT2889/04(H1N1);A/sw/グーテンスベルク/I
DT2930/04(H1N2);A/sw/グーテンスベルク/IDT2931/04(H1N2);A/sw/ローネ/IDT3357/04(H3
N2);A/sw/ノルトルップ/IDT3685/04(H1N2);A/sw/ゼーセン/IDT3055/04(H3N2);A/sw/スペ
イン/53207/04(H1N1);A/sw/スペイン/54008/04(H3N2);A/sw/シュトルツェナウ/IDT3296/0
4(H1N2);A/sw/ヴェーデル/IDT2965/04(H1N1);A/sw/バートグリースバッハ/IDT4191/05(H3
N2);A/sw/クロッペンブルク/IDT4777/05(H1N2);A/sw/デートリンゲン/IDT3780/05(H1N2);
A/sw/デートリンゲン/IDT4735/05(H1N2);A/sw/エックルハム/IDT5250/05(H3N2);A/sw/ハ
ーケンブレック(Harkenblek)/IDT4097/05(H3N2);A/sw/ヘルツェン(Hertzen)/IDT4317/05(
H3N2);A/sw/クローゲル(Krogel)/IDT4192/05(H1N1);A/sw/ラエル/IDT3893/05(H1N1);A/sw
/ラエル/IDT4126/05(H3N2);A/sw/メルツェン/IDT4114/05(H3N2);A/sw/ミュスラリンゲン(
Muesleringen)-S./IDT4263/05(H3N2);A/sw/オスターホーフェン/IDT4004/05(H3N2);A/sw/
シュプレンゲ(Sprenge)/IDT3805/05(H1N2);A/sw/シュタットローン/IDT3853/05(H1N2);A/
sw/フォーグラルン(Voglarn)/IDT4096/05(H1N1);A/sw/ヴォーラーシュト(Wohlerst)/IDT4
093/05(H1N1);A/sw/バートグリースバッハ/IDT5604/06(H1N1);A/sw/ヘルツラケ/IDT5335/
06(H3N2);A/sw/ヘルツラケ/IDT5336/06(H3N2);A/sw/ヘルツラケ/IDT5337/06(H3N2);及びA
/イノシシ/ドイツ/R169/2006(H3N2)が挙げられるが、これらに限定されない。

A型インフルエンザウイルスの株の他の具体的な例としては、A/トロント/3141/2009(H1
N1);A/レーゲンスブルク/D6/2009(H1N1);A/バイエルン/62/2009(H1N1);A/バイエルン/62/
2009(H1N1);A/ブランデンブルク/19/2009(H1N1);A/ブランデンブルク/20/2009(H1N1);A/
連邦直轄区(Distrito Federal)/2611/2009(H1N1);A/マトグロッソ/2329/2009(H1N1);A/サ
ンパウロ/1454/2009(H1N1);A/サンパウロ/2233/2009(H1N1);A/ストックホルム/37/2009(H
1N1);A/ストックホルム/41/2009(H1N1);A/ストックホルム/45/2009(H1N1);A/ブタ/アルバ
ータ/OTH-33-1/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OTH-33-14/2009(H1N1);A/ブタ/アルバー
タ/OTH-33-2/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OTH-33-21/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/
OTH-33-22/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OTH-33-23/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OT
H-33-24/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OTH-33-25/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OTH-
33-3/2009(H1N1);A/ブタ/アルバータ/OTH-33-7/2009(H1N1);A/北京/502/2009(H1N1);A/フ
ィレンツェ/10/2009(H1N1);A/香港/2369/2009(H1N1);A/イタリア/85/2009(H1N1);A/サン
トドミンゴ/572N/2009(H1N1);A/カタロニア/385/2009(H1N1);A/カタロニア/386/2009(H1N
1);A/カタロニア/387/2009(H1N1);A/カタロニア/390/2009(H1N1);A/カタロニア/394/2009
(H1N1);A/カタロニア/397/2009(H1N1);A/カタロニア/398/2009(H1N1);A/カタロニア/399/
2009(H1N1);A/サンパウロ/2303/2009(H1N1);A/秋田/1/2009(H1N1);A/カストロ/JXP/2009(
H1N1);A/福島/1/2009(H1N1);A/イスラエル/276/2009(H1N1);A/イスラエル/277/2009(H1N1
);A/イスラエル/70/2009(H1N1);A/岩手/1/2009(H1N1);A/岩手/2/2009(H1N1);A/鹿児島/1/
2009(H1N1);A/大阪/180/2009(H1N1);A/プエルトモント/Bio87/2009(H1N1);A/サンパウロ/
2303/2009(H1N1);A/札幌/1/2009(H1N1);A/ストックホルム/30/2009(H1N1);A/ストックホ
ルム/31/2009(H1N1);A/ストックホルム/32/2009(H1N1);A/ストックホルム/33/2009(H1N1)
;A/ストックホルム/34/2009(H1N1);A/ストックホルム/35/2009(H1N1);A/ストックホルム/
36/2009(H1N1);A/ストックホルム/38/2009(H1N1);A/ストックホルム/39/2009(H1N1);A/ス
トックホルム/40/2009(H1N1;)A/ストックホルム/42/2009(H1N1);A/ストックホルム/43/20
09(H1N1);A/ストックホルム/44/2009(H1N1);A/宇都宮/2/2009(H1N1);A/WRAIR/0573N/2009
(H1N1);及びA/浙江/DTID-ZJU01/2009(H1N1)が挙げられるが、これらに限定されない。

B型インフルエンザウイルスの非限定的な例としては、愛知/5/88株、秋田/27/2001株、
秋田/5/2001株、アラスカ/16/2000株、アラスカ/1777/2005株、アルゼンチン/69/2001株
、アリゾナ/146/2005株、アリゾナ/148/2005株、バンコク/163/90株、バンコク/34/99株
、バンコク/460/03株、バンコク/54/99株、バルセロナ/215/03株、北京/15/84株、北京/1
84/93株、北京/243/97株、北京/43/75株、北京/5/76株、北京/76/98株、ベルギー/WV106/
2002株、ベルギー/WV107/2002株、ベルギー/WV109/2002株、ベルギー/WV114/2002株、ベ
ルギー/WV122/2002株、ボン/43株、ブラジル/952/2001株、ブカレスト/795/03株、ブエノ
スアイレス/161/00株)、ブエノスアイレス/9/95株、ブエノスアイレス/SW16/97株、ブエ
ノスアイレス/VL518/99株、カナダ/464/2001株、カナダ/464/2002株、チャコ/366/00株、
チャコ/R113/00株、済州/303/03株、千葉/447/98株、重慶/3/2000株、SA1タイ/2002臨床
分離株、SA10タイ/2002臨床分離株、SA100フィリピン/2002臨床分離株、SA101フィリピン
/2002臨床分離株、SA110フィリピン/2002臨床分離株)、SA112フィリピン/2002臨床分離株
、SA113フィリピン/2002臨床分離株、SA114フィリピン/2002臨床分離株、SA2タイ/2002臨
床分離株、SA20タイ/2002臨床分離株、SA38フィリピン/2002臨床分離株、SA39タイ/2002
臨床分離株、SA99フィリピン/2002臨床分離株、CNIC/27/2001株、コロラド/2597/2004株
、コルドバ/VA418/99株、チェコスロバキア/16/89株、チェコスロバキア/69/90株、ダエ
ク/10/97株、ダエク/45/97株、ダエク/47/97株、ダエク/9/97株、B/Du/4/78株、B/ダーバ
ン/39/98株、ダーバン/43/98株、ダーバン/44/98株、B/ダーバン/52/98株、ダーバン/55/
98株、ダーバン/56/98株、イングランド/1716/2005株、イングランド/2054/2005株)、イ
ングランド/23/04株、フィンランド/154/2002株、フィンランド/159/2002株、フィンラン
ド/160/2002株、フィンランド/161/2002株、フィンランド/162/03株、フィンランド/162/
2002株、フィンランド/162/91株、フィンランド/164/2003株、フィンランド/172/91株、
フィンランド/173/2003株、フィンランド/176/2003株、フィンランド/184/91株、フィン
ランド/188/2003株、フィンランド/190/2003株、フィンランド/220/2003株、フィンラン
ド/WV5/2002株、福建/36/82株、ジュネーブ/5079/03株、ジェノバ/11/02株、ジェノバ/2/
02株、ジェノバ/21/02株、ジェノバ/54/02株、ジェノバ/55/02株、広東/05/94株、広東/0
8/93株、広東/5/94株、広東/55/89株、広東/8/93株、広州/7/97株、広州/86/92株、広州/
87/92株、京幾/592/2005株、ハノーバー/2/90株、ハルビン/07/94株、ハワイ/10/2001株
、ハワイ/1990/2004株、ハワイ/38/2001株、ハワイ/9/2001株、河北/19/94株、河北/3/94
株)、河南/22/97株、広島/23/2001株、香港/110/99株、香港/1115/2002株、香港/112/200
1株、香港/123/2001株、香港/1351/2002株、香港/1434/2002株、香港/147/99株、香港/15
6/99株、香港/157/99株、香港/22/2001株、香港/22/89株、香港/336/2001株、香港/666/2
001株、香港/9/89株、ヒューストン/1/91株、ヒューストン/1/96株、ヒューストン/2/96
株、湖南/4/72株、茨城/2/85株、仁川(ncheon)/297/2005株、インド/3/89株、インド/772
76/2001株、イスラエル/95/03株、イスラエル/WV187/2002株、日本/1224/2005株、江蘇/1
0/03株、ヨハネスブルク/1/99株、ヨハネスブルク/96/01株、門真/1076/99株、門真/122/
99株、鹿児島/15/94株、カンザス/22992/99株、ハズコフ(Khazkov)/224/91株、神戸/1/20
02株、高知/193/99株、ラツィオ/1/02株、リー/40株、レニングラード/129/91株、リスボ
ン/2/90株)、ロサンゼルス/1/02株、ルサカ/270/99株、リヨン/1271/96株、マレーシア/8
3077/2001株、マプト/1/99株、マルデルプラタ/595/99株、メリーランド/1/01、メンフィ
ス/1/01株、メンフィス/12/97-MA株、ミシガン/22572/99株、三重/1/93株、ミラノ/1/01
株、ミンスク/318/90株、モスクワ/3/03株、名古屋/20/99株、南昌/1/00株、ナッシュビ
ル/107/93株、ナッシュビル/45/91株、ネブラスカ/2/01株、オランダ/801/90株、オラン
ダ/429/98株、ニューヨーク/1/2002株、NIB/48/90株、寧夏/45/83株、ノルウェー/1/84株
、オマーン/16299/2001株、大阪/1059/97株、大阪/983/97-V2株、オスロ/1329/2002株、
オスロ/1846/2002株、パナマ/45/90株、パリ/329/90株、パルマ/23/02株、パース/211/20
01株、ペルー/1364/2004株、フィリピン/5072/2001株、釜山/270/99株、ケベック/173/98
株、ケベック/465/98株、ケベック/7/01株、ローマ/1/03株、佐賀/S172/99株、ソウル/13
/95株、ソウル/37/91株、山東/7/97株、上海/361/2002株)、滋賀/T30/98株、四川/379/99
株、シンガポール/222/79株、スペイン/WV27/2002株、ストックホルム/10/90株、スイス/
5441/90株、台湾/0409/00株、台湾/0722/02株、台湾/97271/2001株、テヘラン/80/02株、
東京/6/98株、トリエステ/28/02株、ウランウデ/4/02株、イギリス/34304/99株、USSR/10
0/83株、ビクトリア/103/89株、ウィーン/1/99株、武漢/356/2000株、WV194/2002株、玄
武/23/82株、山形/1311/2003株、山形/K500/2001株、アラスカ/12/96株、GA/86株、長崎/
1/87株、東京/942/96株、及びロチェスター/02/2001株が挙げられる。

C型インフルエンザウイルスの非限定的な例としては、愛知/1/81株、アンアーバー/1/5
0株、青森/74株、カリフォルニア/78株、イングランド/83株、ギリシア/79株、広島/246/
2000株、広島/252/2000株、兵庫/1/83株、ヨハネスブルク/66株、神奈川/1/76株、京都/1
/79株、ミシシッピー/80株、宮城/1/97株、宮城/5/2000株、宮城/9/96株、奈良/2/85株、
ニュージャージー/76株、ブタ/北京/115/81株、埼玉/3/2000株)、静岡/79株、山形/2/98
株、山形/6/2000株、山形/9/96株、ベルリン/1/85株、イングランド/892/8株、五大湖/11
67/54株、JJ/50株、ブタ/北京/10/81株、ブタ/北京/439/82)株、テーラー(TAYLOR)/1233/
47株、及びC/山形/10/81株が挙げられる。

ある実施態様では、本明細書で提供されるインフルエンザウイルスは、弱毒化表現型を
有する。具体的な実施態様では、弱毒化インフルエンザウイルスは、A型インフルエンザ
ウイルスに基づく。他の実施態様では、弱毒化インフルエンザウイルスは、B型インフル
エンザウイルスに基づく。さらに他の実施態様では、弱毒化インフルエンザウイルスは、
C型インフルエンザウイルスに基づく。他の実施態様では、弱毒化インフルエンザウイル
スは、A型インフルエンザ、B型インフルエンザ及び/又はC型インフルエンザウイルスの1
以上の株又は亜型由来の遺伝子又はゲノムセグメントを含むことができる。いくつかの実
施態様では、弱毒化骨格ウイルスは、A型インフルエンザウイルス及びB型インフルエンザ
ウイルス由来の遺伝子を含む。

具体的な実施態様では、ウイルスが少なくとも部分的に感染性を保持し、インビボで複
製することができるが、非病原性である不顕性レベルの感染をもたらす低い力価を生じさ
せることしかできないような、インフルエンザウイルスの弱毒化が望ましい。そのような
弱毒化ウイルスは、ウイルス又はその免疫原性組成物が免疫応答を誘発するために対象に
投与される、本明細書に記載の実施態様に特に好適である。インフルエンザウイルスの弱
毒化は、例えば、化学的突然変異誘発によって作製されるウイルス突然変異体を選択する
こと、遺伝子操作によるゲノムの突然変異、弱毒化された機能を有するセグメントを含む
再集合体ウイルスを選択すること、又は条件的ウイルス突然変異体(例えば、低温適応ウ
イルス)の選択などの、当技術分野で公知の任意の方法によって達成することができる。
或いは、天然に存在する弱毒化インフルエンザウイルスを、インフルエンザウイルスベク
ターのためのインフルエンザウイルス骨格として用いることができる。

いくつかの実施態様では、インフルエンザウイルスは、細胞のインターフェロン(IFN)
応答に拮抗するウイルスの能力を損なわせる突然変異したNS1遺伝子を発現するようにイ
ンフルエンザウイルスを改変することによって、少なくとも部分的に弱毒化することがで
きる。インフルエンザウイルスNS1遺伝子に導入することができる突然変異の種類の例と
しては、欠失、置換、挿入、及びそれらの組合せが挙げられる。NS1遺伝子全体のどこに
でも(例えば、N末端、C末端、もしくはその間のどこか)、及び/又はNS1遺伝子の調節エレ
メントに、1以上の突然変異を導入することができる。一実施態様では、弱毒化インフル
エンザウイルスは、NS1のC末端から5個、好ましくは10、15、20、25、30、35、40、45、5
0、55、60、65、75、80、85、90、95、99、100、105、110、115、120、125、126、130、1
35、140、145、150、155、160、165、170、もしくは175個のアミノ酸残基からなる欠失、
又はC末端から5〜170、25〜170、50〜170、100〜170、100〜160、もしくは105〜160個の
アミノ酸残基の欠失をもたらすインフルエンザウイルスNS1遺伝子の突然変異を有するゲ
ノムを含む。別の実施態様では、弱毒化インフルエンザウイルスは、それがアミノ酸残基
1〜130、アミノ酸残基1〜126、アミノ酸残基1〜120、アミノ酸残基1〜115、アミノ酸残基
1〜110、アミノ酸残基1〜100、アミノ酸残基1〜99、アミノ酸残基1〜95、アミノ酸残基1
〜85、アミノ酸残基1〜83、アミノ酸残基1〜80、アミノ酸残基1〜75、アミノ酸残基1〜73
、アミノ酸残基1〜70、アミノ酸残基1〜65又はアミノ酸残基1〜60のNS1タンパク質をコー
ドするような、インフルエンザウイルスNS1遺伝子の突然変異を有するゲノムを含み、こ
こで、N末端アミノ酸は、1番である。別の実施態様では、NS1のアミノ酸残基は、PR8ウイ
ルスを基にしてカウントされる。NS1突然変異及び突然変異したNS1を含むインフルエンザ
ウイルスの例については、例えば、米国特許第6,468,544号及び第6,669,943号;並びにLi
らの文献(1999, J. Infect. Dis. 179:1132-1138)を参照されたく、その各々は、引用に
よりその全体が本明細書中に組み込まれる。

(5.5 非インフルエンザウイルスベクター)
一態様では、fluポリペプチドを含む非インフルエンザウイルスが本明細書で提供され
る。具体的な実施態様では、fluポリペプチドを非インフルエンザウイルスのビリオンに
組み込む。非インフルエンザウイルスを、特定の細胞型、例えば、免疫細胞にウイルスを
ターゲッティングする部分に結合させもよい。いくつかの実施態様では、インフルエンザ
ウイルスのビリオンは、fluポリペプチドに加えて、異種ポリペプチドをそれらに組み込
んでいるか、又はそれを発現する。異種ポリペプチドは、免疫増強活性を有するか、又は
特定の細胞型に非インフルエンザウイルスをターゲッティングするポリペプチド、例えば
、特定の細胞型の表面の抗原に結合する抗体、もしくは特定の細胞型の表面の特異的受容
体に結合するリガンドであってもよい。そのような異種ポリペプチドの例については、上
の第5.4節を参照されたい。

fluポリペプチドを含む非インフルエンザウイルスは、当業者に公知の技術を用いて、
ビリオンの産生の間にトランスでfluポリペプチドを供給することによって産生すること
ができる。或いは、親の非インフルエンザウイルスは、インフルエンザfluポリペプチド
を含む子孫ウイルスを産生するように、血球凝集素機能がトランスで提供されているウイ
ルスに感染しやすい細胞でfluポリペプチドを発現するように改変されたゲノムを含む。

限定するものではないが、天然に存在する株、変異体、もしくは突然変異体、突然変異
させたウイルス、再集合体、及び/又は遺伝子改変ウイルスを含む、任意のウイルス型、
亜型、又は株を、非インフルエンザウイルスベクターとして用いることができる。具体的
な実施態様では、親の非インフルエンザウイルスは、天然に存在するウイルスではない。
別の具体的な実施態様では、親の非インフルエンザウイルスは、遺伝子改変ウイルスであ
る。ある実施態様では、エンベロープ型ウイルスが、本明細書に記載の膜結合fluポリペ
プチドの発現に好ましい。

例示的な実施態様では、非インフルエンザウイルスベクターは、ニューカッスル病ウイ
ルス(NDV)である。別の実施態様では、非インフルエンザウイルスベクターは、ワクシニ
アウイルスである。他の例示的で、非限定的な実施態様では、非インフルエンザウイルス
ベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、B型肝炎ウイルス、レトロウイ
ルス(例えば、ガンマレトロウイルス、例えば、マウス幹細胞ウイルス(MSCV)ゲノムもし
くはマウス白血病ウイルス(MLV)、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス、腫瘍レトロ
ウイルス、もしくはレンチウイルス)、アルファウイルス(例えば、ベネズエラウマ脳炎ウ
イルス)、ラブドウイルス、例えば、水疱性口内炎ウイルスもしくはパピローマウイルス
、ポックスウイルス(例えば、ワクシニアウイルス、MVA-T7ベクター、もしくは鶏痘)、メ
タニューモウイルス、麻疹ウイルス、ヘルペスウイルス、例えば、単純ヘルペスウイルス
、又はフォーミーウイルスである。例えば、Lawrie及びTuminの文献(1993, Cur. Opin. G
enet. Develop. 3, 102-109)(レトロウイルスベクター);Bettらの文献(1993, J. Virol.
67, 5911)(アデノウイルスベクター);Zhouらの文献(1994, J. Exp. Med. 179, 1867)(ア
デノ随伴ウイルスベクター);Dubenskyらの文献(1996, J. Virol. 70, 508-519)(ワクシニ
アウイルス及び鶏痘ウイルスを含むポックスファミリー由来のウイルスベクター並びにア
ルファウイルス属由来のウイルスベクター、例えば、シンドビスウイルス及びセムリキ森
林ウイルスに由来するもの);米国特許第5,643,576号(ベネズエラウマ脳炎ウイルス);WO 9
6/34625号(VSV);Oheらの文献(1995, Human Gene Therapy 6, 325-333);Wooらの文献、WO
94/12629号;Xiao及びBrandsmaの文献(1996, Nucleic Acids. Res. 24、2630-2622)(パピ
ローマウイルス);並びにBukreyev及びCollinsの文献(2008, Curr Opin Mol Ther. 10:46-
55)(NDV)を参照されたく、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれる
。

具体的な実施態様では、非インフルエンザウイルスベクターは、NDVである。任意のNDV
型、亜型、又は株は、限定するものではないが、天然に存在する株、変異体、もしくは突
然変異体、突然変異させたウイルス、再集合体及び/又は遺伝子改変ウイルスを含む、flu
ポリペプチドを発現するように改変される骨格の役割を果たすことができる。具体的な実
施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、天然に存在する株である。
ある実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、溶解性株である。他
の実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、非溶解性株である。あ
る実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、長潜伏期性株である。
いくつかの実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、亜病原性株で
ある。他の実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、短潜伏期性株
である。NDV株の具体的な例としては、73-T株、アルスター株、MTH-68株、イタリアン(It
alien)株、ヒックマン(Hickman)株、PV701株、ヒッチナー(Hitchner)B1株、ラソタ(La So
ta)株、YG97株、MET95株、及びF48E9株が挙げられるが、これらに限定されない。具体的
な実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、ヒッチナーB1株である
。別の具体的な実施態様では、遺伝子操作のための骨格の役割を果たすNDVは、La Sota株
である。

一実施態様では、非インフルエンザウイルスベクターのための骨格として用いられるND
Vは、修飾Fタンパク質を発現するように改変されており、この修飾Fタンパク質中では、
該Fタンパク質の切断部位が1つ又は2つの追加のアルギニン残基を含む部位に置き換えら
れ、この突然変異切断部位がフリンファミリーのユビキタスに発現されるプロテアーゼに
よって活性化されるようになる。そのような修飾Fタンパク質を発現するNDVの具体的な例
としては、rNDV/F2aa及びrNDV/F3aaが挙げられるが、これらに限定されない。突然変異し
た切断部位を有する修飾Fタンパク質を産生するためにNDVのFタンパク質に導入される突
然変異の説明については、例えば、Parkらの文献(2006、「二重特異性を有する改変され
たウイルスワクチンコンストラクト:鳥インフルエンザ及びニューカッスル病(Engineered
viral vaccine constructs with dual specificity: Avian influenza and Newcastle d
isease)」PNAS USA 103:8203-2808))を参照されたい。

一実施態様では、非インフルエンザウイルスベクターは、ポックスウイルスである。ポ
ックスウイルスベクターは、ワクチンベクターに好適な配列を提供するポックスウイルス
科の任意のメンバー、特に、ワクシニアウイルス又はアビポックスウイルス(例えば、カ
ナリア痘ウイルス、鶏痘など)に基づくことができる。具体的な実施態様では、ポックス
ウイルスベクターは、ワクシニアウイルスベクターである。好適なワクシニアウイルスと
しては、コペンハーゲン(VC-2)株(Goebelらの文献(Virol 179:247-266, 1990);Johnsonら
の文献(Virol. 196:381-401、1993)、改変コペンハーゲン株(NYVAC)(米国特許第6,265,18
9号)、WYETH株、及び改変アンカラ(MVA)株(Antoineらの文献(Virol. 244:365-396、1998)
)が挙げられるが、これらに限定されない。他の好適なポックスウイルスとしては、望ま
しい特性を提供し、高度に弱毒化されているALVAC及びTROVACベクターなどの鶏痘株が挙
げられる(例えば、米国特許第6,265,189号;AIDS研究レビュー(AIDS Research Reviews)中
のTartagliaらの文献(Koffら編, 3巻, Marcel Dekker, N. Y., 1993);及びTartagliaらの
文献(1990, Reviews in Immunology 10:13-30、1990)を参照されたい)。

fluポリペプチドを発現させるために非インフルエンザウイルスを改変する方法は、そ
のようなウイルスを弱毒化させ、増殖させ、かつ単離及び精製する方法と同様に当技術分
野で周知である。NDVベクターに関するそのような技術については、国際公開WO 01/04333
号;米国特許第7,442,379号、第6,146,642号、第6,649,372号、第6,544,785号、及び第7,3
84,774号;Swayneらの文献(2003)(Avian Dis. 47:1047-1050);及びSwayne文献(2001)(J. V
irol. 11868-11873)を参照されたく、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組
み込まれる。ポックスウイルスに関するそのような技術については、Picciniらの文献(Me
thods of Enzymology 153:545-563, 1987);国際公開WO 96/11279;米国特許第4,769,330号
;米国特許第No. 4,722,848号;米国特許第4,769,330号;米国特許第4,603,112号;米国特許
第5,110,587号;米国特許第5,174,993号;欧州特許第83 286号;欧州特許第206 920号;Mayr
らの文献(Infection 3:6-14, 1975);並びにSutter及びMossの文献(Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA 89:10847-10851, 1992)を参照されたい。ある実施態様では、非インフルエンザウ
イルスは弱毒化されている。

特に、対象への投与のための組成物中で使用するための、非インフルエンザウイルスベ
クターの選択のための例示的な検討事項は、安全性、低毒性、安定性、細胞型特異性、及
び免疫原性、特に、非インフルエンザウイルスベクターによって発現されるfluポリペプ
チドの抗原性である。

(5.6 ウイルス様粒子及びウイロソーム)
fluポリペプチドは、ウイルス様粒子(VLP)ベクターに組み込むことができる。VLPは、
通常、ウイルスの構造タンパク質(複数可)に一般的に由来するウイルスポリペプチド(複
数可)を含む。いくつかの実施態様では、VLPは複製することができない。ある実施態様で
は、VLPはウイルスの完全なゲノムを欠いていてもよく、又はウイルスのゲノムの一部を
含んでいてもよい。いくつかの実施態様では、VLPは細胞に感染することができない。い
くつかの実施態様では、VLPは、当業者に公知又は本明細書に記載の1以上のウイルス性標
的部分(例えば、ウイルス表面糖タンパク質)又は非ウイルス性標的部分(例えば、抗体も
しくはタンパク質)をその表面に発現する。いくつかの実施態様では、VLPは、fluポリペ
プチド、及びウイルス構造タンパク質、例えば、HIV gagを含む。

組換えで産生されるVLPを産生して特徴付けるための方法は、インフルエンザウイルス(
Brightらの文献(2007, Vaccine. 25:3871))、ヒトパピローマウイルス1型(Hagneseeらの
文献(1991, J. Virol. 67:315))、ヒトパピローマウイルス16型(Kirnbauerらの文献(Proc
. Natl. Acad. Sci.(1992)89:12180))、HIV-1(Hafferらの文献(1990, J. Virol. 64:2653
))、及びA型肝炎(Winokurの文献(1991, 65:5029))を含む、いくつかのウイルスに基づい
て記載されており、その各々は、その全体が本明細書中に組み込まれている。NDVタンパ
ク質を含むVLPを発現させる方法は、Pantuaらの文献(2006, J. Virol. 80:11062-11073)
、及び2009年3月12日に公開された米国特許出願公開第20090068221号で提供されており、
その各々は、その全体が本明細書中に組み込まれている。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドは、ウイロソームに組み込むことができる。f
luポリペプチドを含むウイロソームは、当業者に公知の技術を用いて産生することができ
る。例えば、ウイロソームは、精製されたウイルスを破壊し、ゲノムを抽出し、ウイルス
タンパク質(例えば、fluポリペプチド)及び脂質で粒子を再び組み立てて、ウイルスタン
パク質を含む脂質粒子を形成させることによって産生することができる。

(5.7 細菌ベクター)
具体的な実施態様では、細菌は、本明細書に記載のfluポリペプチドを発現するように
改変することができる。fluポリペプチドの発現のために好適な細菌としては、リステリ
ア、サルモネラ(Salmonella)、赤痢菌(Shigella)の種、ヒト結核菌(Mycobacterium tuber
culosis)、大腸菌、髄膜炎菌(Neisseria meningitides)、ウシ流産菌(Brucella abortus)
、マルタ熱菌(Brucella melitensis)、ライム病ボレリア(Borrelia burgdorferi)、及び
野兎病菌(Francisella tularensis)が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な実
施態様では、fluポリペプチドを発現するように改変された細菌は、弱毒化されている。
異種ポリペプチドを発現するように改変された細菌の産生技術は当技術分野で公知であり
、fluポリペプチドの発現に適用することができる。例えば、2008年10月9日に公開された
米国特許出願公開第20080248066号及び2007年9月6日に公開された米国特許出願公開第200
70207171号を参照されたく、その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれ
る。

(5.8 fluポリペプチドに対する抗体の作製)
本明細書に記載のfluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又は
そのような核酸もしくはポリペプチドを含むベクターを用いて、インフルエンザに対する
、例えば、fluポリペプチドのHA2ドメインの長いα-ヘリックス領域に対する中和抗体を
誘発することができる。具体的な実施態様では、本明細書に記載のfluポリペプチド、そ
のようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸もしくはポリペプチドを含
むベクターを非ヒト対象(例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど)に投与して
、抗体の産生を含む免疫応答を誘発することができ、この抗体は、当業者に公知の技術(
例えば、免疫親和性クロマトグラフィー、遠心分離、沈殿など)を用いて単離することが
できる。

或いは、本明細書に記載のfluポリペプチドを用いて、抗体ライブラリーから抗体をス
クリーニングすることができる。例えば、fluポリペプチドを含む単離されたfluポリペプ
チドを固体支持体(例えば、シリカゲル、樹脂、誘導体化プラスチックフィルム、ガラス
ビーズ、綿、プラスチックビーズ、ポリスチレンビーズ、アルミナゲル、又は多糖、磁気
ビーズ)に固定し、抗体への結合についてスクリーニングすることができる。代替法とし
て、抗体を固体支持体に固定し、単離されたfluポリペプチドへの結合についてスクリー
ニングすることができる。任意のスクリーニングアッセイ、例えば、パニングアッセイ、
ELISA、表面プラズモン共鳴、又は当技術分野で公知の他の抗体スクリーニングアッセイ
を用いて、fluポリペプチドに結合する抗体についてスクリーニングすることができる。
スクリーニングされる抗体ライブラリーは、市販の抗体ライブラリー、インビトロで作製
されたライブラリー、又はインフルエンザに感染した個体から抗体を同定及びクローニン
グ又は単離することによって得られたライブラリーであることができる。特定の実施態様
では、抗体ライブラリーは、インフルエンザウイルス大発生の生存者から作製される。抗
体ライブラリーは、当技術分野で公知の方法に従って作製することができる。特定の実施
態様では、抗体ライブラリーは、抗体をクローニングし、それをファージディスプレイラ
イブラリー又はファージミドディスプレイライブラリーで用いることによって作製される
。

本明細書に記載の方法で同定される抗体は、当技術分野で公知又は本明細書に記載の生
物学的アッセイを用いて、中和活性及び自己反応性の欠如について試験することができる
。一実施態様では、非ヒト動物又は抗体ライブラリーから単離された抗体は、2以上のイ
ンフルエンザ亜型由来の血球凝集素ポリペプチドを中和する。いくつかの実施態様では、
fluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸もし
くはポリペプチドをコードするベクターを用いて誘発又は同定される抗体は、インフルエ
ンザH3ウイルスを中和する。いくつかの実施態様では、fluポリペプチド、そのようなポ
リペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸もしくはポリペプチドを含むベクター
を用いて誘発又は同定される抗体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14
、15、もしくは16種、又はそれより多くのインフルエンザウイルスの亜型又は株を中和す
る。一実施態様では、中和抗体は1以上のA型インフルエンザウイルス及び1以上のB型イン
フルエンザウイルスを中和する。特定の実施態様では、中和抗体は、Wangらの文献(2010)
「異なる血球凝集素による連続免疫後のH3インフルエンザウイルスに対する広範防御性モ
ノクローナル抗体(Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza V
iruses following Sequential Immunization with Different Hemagglutinins)」(PLOS P
athogens 6(2):1-9)に記載されている抗体ではない。

fluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸も
しくはポリペプチドを含むベクターを用いて同定又は誘発される抗体には、免疫グロブリ
ン分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性部分、すなわち、fluポリペプチドに特異的に
結合する抗原結合部位を含む分子が含まれる。免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分
子の任意のタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG₁
、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁、及びIgA₂)、又はサブクラスであることができる。抗体には
、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖Fv(s
cFv)、単鎖抗体、Fab断片、F(ab')断片、ジスルフィド結合Fv(sdFv)、及び抗イディオタ
イプ(抗Id)抗体(例えば、本明細書に記載の方法を用いて誘発又は同定される抗体に対す
る抗Id抗体を含む)、並びに上記のいずれかのエピトープ結合性断片が含まれるが、これ
らに限定されない。具体的な実施態様では、fluポリペプチド、そのようなポリペプチド
をコードする核酸、又はそのような核酸もしくはポリペプチドを含むベクターを用いて誘
発又は同定される抗体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。

fluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸も
しくはポリペプチドを含むベクターを用いて誘発又は同定される抗体を用いて、療法の効
果及び/又は疾患の進行をモニタリングすることができる。この目的のために、限定する
ものではないが、少し例を挙げれば、ラジオイムノアッセイ、ELISA(酵素結合免疫吸着ア
ッセイ)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散ア
ッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光イムノアッセイ、プ
ロテインAイムノアッセイ、及び免疫電気泳動アッセイなどの技術を用いる、競合的及び
非競合的アッセイ系を含む、当技術分野で公知の任意のイムノアッセイ系を用いることが
できる。

fluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸も
しくはポリペプチドを含むベクターを用いて誘発又は同定される抗体を用いて、例えば、
単一の亜型、又は2つ、3つ、4つ、もしくはそれより多くの異なる亜型由来の複数のイン
フルエンザウイルス株由来のインフルエンザウイルスを検出し、かつ/或いは例えば、単
一の亜型、又は2つ、3つ、4つ、もしくはそれより多くの異なる亜型由来の複数のインフ
ルエンザウイルス株によるインフルエンザウイルス感染を診断することができる。

fluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸も
しくはポリペプチドを含むベクターを用いて誘発又は同定される抗体は、抗イディオタイ
プ抗体の作製において用いることができる。その後、今度は、この抗イディオタイプ抗体
を、インフルエンザの特定の抗原、例えば、fluポリペプチドに結合する抗体の亜集団を
産生するために、免疫に用いることができる(引用によりその全体が本明細書中に組み込
まれている、Jerneの文献(1974, Ann. Immunol.(Paris)125c:373);Jerneらの文献(1982,
EMBO J. 1:234))。

ある実施態様では、本明細書に記載の方法に従って抗体を作製するためにfluポリペプ
チド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、又はそのような核酸もしくはポリペプ
チドを含むベクターを投与される非ヒト対象は、ヒト抗体を産生することができるトラン
スジェニック動物(例えば、トランスジェニックマウス)である。ヒト抗体は、機能的な内
在性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する
ことができるトランスジェニックマウスを用いて産生することができる。例えば、ヒト重
鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体を、ランダムに、又は相同組換えによってマウス
胚性幹細胞に導入することができる。或いは、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域
を、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚性幹細胞に導入することができる。マウ
スの重鎖遺伝子免疫グロブリン遺伝子と軽鎖遺伝子免疫グロブリン遺伝子を、相同組換え
によるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入によって、個別に又は同時に、非機能的にする
ことができる。特に、JH領域のホモ接合性欠失は、内在性の抗体産生を妨げる。改変され
た胚性幹細胞を拡大し、胚盤胞に微量注射して、キメラマウスを産生する。その後、この
キメラマウスを交配させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を産生する。このトラン
スジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、B細胞分化の間に再編成
し、その後、クラススイッチング及び体細胞突然変異を経る。したがって、そのような技
術を用いて、治療的に有用なIgG、IgA、IgM、及びIgE抗体を産生することが可能である。
ヒト抗体を産生するためのこの技術の概略については、Lonberg及びHuszarの文献(Int. R
ev. Immunol. 13:65-93(1995))を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を
産生するためのこの技術、並びにそのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考
察については、例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、PCT公開W
O 98/24893号;WO 92/01047号;WO 96/34096号;WO 96/33735号;欧州特許第0 598 877号;米
国特許第5,413,923号;第5,625,126号;第5,633,425号;第5,569,825号;第5,661,016号;第5,
545,806号;第5,814,318号;第5,885,793号;第5,916,771号;及び第5,939,598号を参照され
たい。Abgenix社(Freemont, Calif.)、Genpharm(San Jose, Calif.)、及びMedarex社(Pri
nceton, N.J.)などの会社に、選択された抗原に対するヒト抗体を提供することを請け負
わせることができる。

(5.9 fluポリペプチドによる細胞の刺激)
別の態様では、本明細書に記載のfluポリペプチドによってエクスビボで細胞を刺激す
る方法が本明細書で提供される。そのような細胞、例えば、樹状細胞を、fluポリペプチ
ドに対する抗体を作製するためにインビトロで用いることができるか、又はそれ自体を、
例えば、当技術分野で公知の養子移入技術によって対象に投与することができる。養子移
入技術の説明については、例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている
、2008年1月24日に公開された米国特許出願公開第20080019998号を参照されたい。ある実
施態様では、本明細書に記載のfluポリペプチドによってエクスビボで刺激された細胞を
対象に投与する場合、該細胞は、哺乳動物細胞(例えば、CB-1細胞)ではない。ある実施態
様では、本明細書に記載のfluポリペプチドによってエクスビボで刺激された細胞を対象
に投与する場合、該細胞は、哺乳動物細胞(例えば、CB-1細胞)である

1つの非限定的な例では、本明細書に記載のfluポリペプチドを発現するように改変され
たベクター、例えば、インフルエンザウイルスベクターを用いて、fluポリペプチドを発
現させ、fluポリペプチドに対して向けられた免疫刺激特性を提示する樹状細胞(DC)を生
成させることができる。そのようなDCは、メモリーT細胞を拡大するために用いられるこ
とができ、fluポリペプチド特異的な細胞傷害性Tリンパ球クローンを含む、T細胞の強力
なスティミュレーターである。引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、St
robelらの文献(2000, Human Gene Therapy 11:2207-2218)を参照されたい。

本明細書に記載のfluポリペプチドは、該ポリペプチドを標的細胞、例えば、DCと接触
させ、該ポリペプチドを標的細胞に送達する任意の方法で標的細胞に送達することができ
る。ある実施態様では、本明細書に記載されているように、fluポリペプチドを対象に送
達する。いくつかのそのような実施態様では、ポリペプチドと接触させた細胞を単離し、
増殖させることができる。

ある実施態様では、fluポリペプチドをインビトロで標的細胞に送達する。当業者に公
知の技術を用いて、標的細胞にポリペプチドを送達することができる。例えば、標的細胞
を、組織培養プレート、チューブ、又は他の容器中のポリペプチドと接触させることがで
きる。ポリペプチドを培地に懸濁し、培養プレートのウェル、チューブ、又は他の容器に
添加することができる。ポリペプチドを含む培地を、細胞のプレーティングの前に、又は
細胞をプレーティングした後に添加することができる。標的細胞は、ポリペプチドを細胞
と接触させるのに十分な量の時間、ポリペプチドとともにインキュベートすることが好ま
しい。ある実施態様では、細胞を、ポリペプチドとともに、約1時間以上、約5時間以上、
約10時間以上、約12時間以上、約16時間以上、約24時間以上、約48時間以上、約1時間〜
約12時間、約3時間〜約6時間、約6時間〜約12時間、約12時間〜約24時間、又は約24時間
〜約48時間インキュベートする。fluポリペプチドがウイルス中にある、ある実施態様で
は、標的細胞を接触させることは、細胞をウイルスに感染させることを含む。

標的細胞は、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びモルモットを含む、任意の
種由来のものであることができる。いくつかの実施態様では、標的細胞は、健康な対象又
は治療を必要とする対象から得られるDCである。ある実施態様では、標的細胞は、ポリペ
プチドに対する免疫応答を刺激することが望ましい対象から得られるDCである。対象から
細胞を得る方法は、当技術分野で周知である。

(5.10 組成物)
本明細書に記載のfluポリペプチド、核酸、ベクター、細菌、抗体、又は細胞(本明細書
では「活性化合物」と呼ばれることもある)を組成物に組み込むことができる。具体的な
実施態様では、組成物は、医薬組成物、例えば、免疫原性組成物(例えば、ワクチン製剤)
である。本明細書で提供される医薬組成物は、組成物を対象に投与することができる任意
の形態であることができる。具体的な実施態様では、医薬組成物は、獣医学的投与及び/
又はヒトへの投与に好適である。組成物は、インフルエンザウイルス疾患を予防又は治療
する方法で用いることができる。

一実施態様では、医薬組成物は、医薬として許容し得る担体との混合物中に、fluポリ
ペプチドを含む。別の実施態様では、医薬組成物は、医薬として許容し得る担体との混合
物中に、本明細書に記載のfluポリペプチドをコードする核酸を含む。別の実施態様では
、医薬組成物は、医薬として許容し得る担体との混合物中に、fluポリペプチドをコード
する核酸を含む発現ベクターを含む。別の実施態様では、医薬組成物は、医薬として許容
し得る担体との混合物中に、fluポリペプチドを含むインフルエンザウイルス又は非イン
フルエンザウイルスを含む。別の実施態様では、医薬組成物は、医薬として許容し得る担
体との混合物中に、fluポリペプチドを発現するように改変されたゲノムを有するインフ
ルエンザウイルス又は非インフルエンザウイルスを含む。別の実施態様では、医薬組成物
は、医薬として許容し得る担体との混合物中に、fluポリペプチドを含むウイルス様粒子
又はウイロソームを含む。別の実施態様では、医薬組成物は、医薬として許容し得る担体
との混合物中に、fluポリペプチドを発現するか、又はそれを発現するように改変された
細菌を含む。別の実施態様では、医薬組成物は、医薬として許容し得る担体との混合物中
に、fluポリペプチドで刺激された細胞を含む。

いくつかの実施態様では、医薬組成物は、活性化合物に加えて1以上の他の療法を含む
ことができる。

本明細書で用いられるように、用語「医薬として許容し得る」は、動物、より具体的に
はヒトでの使用について、連邦政府もしくは州政府の規制当局に承認されているか、又は
米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に記載されていることを意味する。用語
「担体」は、医薬組成物がそれとともに投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又
は媒体を指す。食塩水溶液及び水性デキストロース溶液及びグリセロール溶液を、特に注
射用溶液のための液体担体として利用することもできる。好適な賦形剤としては、デンプ
ン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シ
リカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナト
リウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールな
どが挙げられる。好適な医薬担体の例は、E. W. Martin著「レミントンの薬学(Remington
's Pharmaceutical Sciences)」に記載されている。製剤は、投与様式に適するべきであ
る。

具体的な実施態様では、医薬組成物は、対象への意図された投与経路に好適であるよう
に製剤化される。例えば、医薬組成物は、皮下、非経口、経口、皮内、経皮、結腸直腸、
腹腔内、及び直腸投与に適するように製剤化することができる。具体的な実施態様では、
医薬組成物は、静脈内、経口、腹腔内、鼻腔内、気管内、皮下、筋肉内、局所、皮内、経
皮、又は肺投与用に製剤化することができる。

ある実施態様では、生体分解性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、
ポリエチレングリコール(PEG化)、ポリメタクリル酸メチルポリマー、ポリラクチド、ポ
リ(ラクチド-コ-グリコリド)、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及
びポリ乳酸を担体として用いることができる。いくつかの実施態様では、活性化合物は、
インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤のように、身体からの速
やかな消失からの化合物の保護を増大させる担体を用いて調製される。そのような製剤の
調製方法は当業者には明らかであろう。リポソーム又はミセルを医薬として許容し得る担
体として用いることもできる。これらは、例えば、米国特許第4,522,811号に記載されて
いるような、当業者に公知の方法によって調製することができる。ある実施態様では、医
薬組成物は、1以上のアジュバントを含む。

具体的な実施態様では、本明細書に記載の免疫原性組成物は一価製剤である。他の実施
態様では、本明細書に記載の免疫原性組成物は多価製剤である。一例では、多価製剤は、
A型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを発現する1以上のベクター、及
びB型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを発現する1以上のベクターを
含む。別の例では、多価製剤は、H3 A型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプ
チドを発現するベクター、及びH1 A型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチ
ドを発現するベクターを含む。別の例では、多価製剤は、H3 A型インフルエンザウイルス
に由来するfluポリペプチドを発現するベクター、H1 A型インフルエンザウイルスに由来
するfluポリペプチドを発現するベクター、及びB型インフルエンザウイルスに由来するfl
uポリペプチドを発現するベクターを含む。ある実施態様では、多価製剤は、単一のベク
ターを用いて発現される1以上の異なるfluポリペプチドを含むことができる。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、防腐剤、例えば、水銀誘導体のチ
メロサールをさらに含む。具体的な実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、0.00
1％〜0.01％のチメロサールを含む。他の実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は
、防腐剤を含まない。具体的な実施態様では、チメロサールは、本明細書に記載の医薬組
成物の製造時に用いられ、チメロサールは、医薬組成物の生産後の精製工程を通して除去
される、すなわち、医薬組成物は、微量のチメロサールを含む(精製後に、1用量当たり＜
0.3μgの水銀;そのような医薬組成物は、チメロサール不含製品とみなされる)。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、卵タンパク質(例えば、オボアル
ブミン又は他の卵タンパク質)をさらに含む。本明細書に記載の医薬組成物中の卵タンパ
ク質の量は、1mlの医薬組成物に対して、約0.0005〜約1.2μgの卵タンパク質であること
ができる。他の実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、卵タンパク質を含まない
。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、限定するものではないが、ゲンタ
マイシン、ネオマイシン、ポリミキシン(例えば、ポリミキシンB)及びカナマイシン、ス
トレプトマイシンを含む、1以上の抗微生物剤(例えば、抗生物質)をさらに含む。他の実
施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、いかなる抗生物質も含まない。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、ウイルスを不活化するために用い
られる1以上の成分、例えば、ホルマリンもしくはホルムアルデヒド、又は界面活性剤、
例えば、デオキシコール酸ナトリウム、オクトキシノール9(TritonX-100)、及びオクトキ
シノール10をさらに含む。他の実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、ウイルス
を不活化するために用いられるいかなる成分も含まない。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、ゼラチンをさらに含む。他の実施
態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、ゼラチンを含まない。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、1以上の緩衝剤、例えば、リン酸
緩衝剤及びスクロースホスフェートグルタメート緩衝剤をさらに含む。他の実施態様では
、本明細書に記載の医薬組成物は、緩衝剤を含まない。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、1以上の塩、例えば、塩化ナトリ
ウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、グルタミン酸一ナトリウム、及びアルミニウ
ム塩(例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、ミョウバン(硫酸アルミニウム
カリウム)、又はそのようなアルミニウム塩の混合物)をさらに含む。他の実施態様では、
本明細書に記載の医薬組成物は、塩を含まない。

具体的な実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、低添加剤インフルエンザウイ
ルスワクチンである、すなわち、該医薬組成物は、インフルエンザウイルスワクチン中に
一般に見られる1以上の添加剤を含まない。低添加剤インフルエンザワクチンは記載され
ている(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、国際公開WO 09/0
01217号として公開された国際出願PCT/IB2008/002238号を参照されたい)。

本明細書に記載の医薬組成物は、投与のための説明書と一緒に、容器、パック、又はデ
ィスペンサーに含めることができる。

本明細書に記載の医薬組成物は、使用前に保存することができ、例えば、該医薬組成物
は、冷凍して(例えば、約-20℃もしくは約-70℃で)保存するか;冷蔵条件で(例えば、約4
℃で)保存するか;又は室温で保存することができる(インフルエンザワクチンを含む組成
物を冷蔵しないで保存する方法については、引用によりその全体が本明細書中に組み込ま
れている、国際公開WO 07/110776号として公開された国際出願PCT/IB2007/001149号を参
照されたい)。

ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物中の活性化合物が、fluポリペプチド
を発現するように改変された細胞である場合、該医薬組成物中の細胞は、哺乳動物細胞(
例えば、CB-1細胞)ではない。ある実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物中の活性
化合物が、fluポリペプチドを発現するように改変された細胞である場合、該医薬組成物
中の細胞は、哺乳動物細胞である。

(5.10.1 サブユニットワクチン)
具体的な実施態様では、本明細書に記載のコアポリペプチドを含むサブユニットワクチ
ンが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、サブユニットワクチンは、fluポ
リペプチド、及び1以上の表面糖タンパク質(例えば、インフルエンザウイルスノイラミニ
ダーゼ)、他のターゲッティング部分、又はアジュバントを含む。具体的な実施態様では
、サブユニットワクチンは、単一のインフルエンザfluポリペプチドを含む。他の実施態
様では、サブユニットワクチンは、2つ、3つ、4つ、又はそれより多くのインフルエンザf
luポリペプチドを含む。具体的な実施態様では、サブユニットワクチンで用いられるイン
フルエンザfluポリペプチド(複数可)は、膜結合型でない、すなわち、それは可溶性であ
る。

ある実施態様では、1用量当たり、約10μg〜約60μgの本明細書に記載の1以上のfluポ
リペプチド、約0.001％〜0.01％のチメロサール、約0.1μg〜約1.0μgの鶏卵タンパク質
、約1.0μg〜約5.0μgのポリミキシン、約1.0μg〜約5.0μgのネオマイシン、約0.1μg〜
約0.5μgのベータプロピオラクトン、及び約0.001〜約0.05w/v％のノニルフェノールエト
キシレートを含むサブユニットワクチンが本明細書で提供される。

具体的な実施態様では、本明細書で提供されるサブユニットワクチンは、45μgの本明
細書で提供されるfluポリペプチド(複数可)、1.0μg以下の水銀(チメロサール由来)、1.0
μg以下の鶏卵タンパク質(すなわち、オボアルブミン)、3.75μg以下のポリミキシン、及
び2.5μg以下のネオマイシンを含む0.5ml用量を含むか、又はそれからなる。いくつかの
実施態様では、本明細書で提供されるサブユニットワクチンは、1用量当たり、0.5μg以
下のベータプロピオラクトン及び0.015w/v％以下のノニルフェノールエトキシレートをさ
らに含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施態様では、0.5ml用量のサブユニット
ワクチンは、充填済み注射器にパックされる。

具体的な実施態様では、本明細書で提供されるサブユニットワクチンは、45μgの本明
細書で提供されるfluポリペプチド(複数可)、25.0μgの水銀(チメロサール由来)、1.0μg
以下の鶏卵タンパク質(すなわち、オボアルブミン)、3.75μg以下のポリミキシン、及び2
.5μg以下のネオマイシンを含む5.0mlの多用量バイアル(1用量当たり、0.5ml)からなる。
いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるサブユニットワクチンは、1用量当たり
、0.5μg以下のベータプロピオラクトン及び0.015w/v％以下のノニルフェノールエトキシ
レートをさらに含むか、又はそれらからなる。

具体的な実施態様では、サブユニットワクチンは、発育鶏卵で増殖させたインフルエン
ザウイルスを用いて調製される(すなわち、サブユニットワクチンの成分(例えば、fluポ
リペプチド)は、発育鶏卵で増殖させたウイルスから単離される)。別の具体的な実施態様
では、サブユニットワクチンは、発育鶏卵で増殖させなかったインフルエンザウイルスを
用いて調製される(すなわち、サブユニットワクチンの成分(例えば、fluポリペプチド)は
、発育鶏卵で増殖させなかったウイルスから単離される)。別の具体的な実施態様では、
サブユニットワクチンは、哺乳動物細胞、例えば、不死化ヒト細胞(例えば、引用により
その全体が本明細書中に組み込まれている、国際公開WO 07/045674号として公開された国
際出願PCT/EP2006/067566号を参照されたい)、又はイヌ腎臓細胞、例えば、MDCK細胞(例
えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、国際公開WO 08/032219号と
して公開された国際出願PCT/IB2007/003536号を参照されたい)で増殖させたインフルエン
ザウイルスを用いて調製される(すなわち、サブユニットワクチンの成分(例えば、fluポ
リペプチド)は、哺乳動物細胞で増殖させたウイルスから単離される)。別の具体的な実施
態様では、サブユニットワクチン中のfluポリペプチド(複数可)は、発現ベクター、例え
ば、ウイルスベクター、植物ベクター、又は細菌ベクターを用いて調製される(すなわち
、サブユニットワクチン中のfluポリペプチド(複数可)は、発現ベクターから得られる/単
離される)。

(5.10.2 生ウイルスワクチン)
一実施態様では、fluポリペプチドを含む生ウイルスを含む免疫原性組成物(例えば、ワ
クチン)が本明細書で提供される。別の実施態様では、組成物を投与される対象で産生さ
れる子孫ウイルスによって発現されるfluポリペプチドをコードするように改変されてい
る生ウイルスを含む免疫原性組成物(例えば、ワクチン)が本明細書で提供される。具体的
な実施態様では、fluポリペプチドは、膜結合型である。他の具体的な実施態様では、イ
ンフルエンザウイルスfluポリペプチドは膜結合型ではない、すなわち、可溶性である。
特定の実施態様では、生ウイルスは、上の第5.4節に記載されているような、インフルエ
ンザウイルスである。他の実施態様では、生ウイルスは、上の第5.5節に記載されている
ような、非インフルエンザウイルスである。いくつかの実施態様では、生ウイルスは弱毒
化されている。いくつかの実施態様では、免疫原性組成物は、2つ、3つ、4つ、もしくは
それより多くの異なるfluポリペプチドを含むか、又はそれらを発現するように改変され
ている、2つ、3つ、4つ、又はそれより多くの生ウイルスを含む。

ある実施態様では、1用量当たり、本明細書に記載の1以上のfluポリペプチドを含む約1
0⁵〜約10¹⁰蛍光焦点単位(FFU)の弱毒化生インフルエンザウイルス、約0.1〜約0.5mgのグ
ルタミン酸一ナトリウム、約1.0〜約5.0mgの加水分解ブタ(procine)ゼラチン、約1.0〜約
5.0mgのアルギニン、約10〜約15mgのスクロース、約1.0〜約5.0mgの二塩基性リン酸カリ
ウム、約0.5〜約2.0mgのリン酸二水素カリウム、及び約0.001〜約0.05μg/mlの硫酸ゲン
タマイシンを含む免疫原性組成物(例えば、ワクチン)が本明細書で提供される。いくつか
の実施態様では、免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、単一の0.2ml用量を含む充填済
み噴霧器としてパックされる。

具体的な実施態様では、1用量当たり、本明細書に記載の1以上のfluポリペプチドを含
む10^6.5〜10^7.5FFUの弱毒化生インフルエンザウイルス、0.188mgのグルタミン酸一ナトリ
ウム、2.0mgの加水分解ブタゼラチン、2.42mgのアルギニン、13.68mgのスクロース、2.26
mgの二塩基性リン酸カリウム、0.96mgのリン酸二水素カリウム、及び0.015μg/ml未満の
硫酸ゲンタマイシンを含む免疫原性組成物(例えば、ワクチン)が本明細書で提供される。
いくつかの実施態様では、免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、単一の0.2ml用量を含
む充填済み噴霧器としてパックされる。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドを含む生ウイルスを、本明細書に記載の免疫
原性組成物中でのその使用の前に、発育鶏卵で増殖させる。別の具体的な実施態様では、
fluポリペプチドを含む生ウイルスを、本明細書に記載の免疫原性組成物中でのその使用
の前に、発育鶏卵で増殖させない。別の具体的な実施態様では、fluポリペプチドを含む
生ウイルスを、本明細書に記載の免疫原性組成物中でのその使用の前に、哺乳動物細胞、
例えば、不死化ヒト細胞(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている
、国際公開WO 07/045674号として公開された国際出願PCT/EP2006/067566号を参照された
い)、又はイヌ腎臓細胞、例えば、MDCK細胞(例えば、引用によりその全体が本明細書中に
組み込まれている、国際公開WO 08/032219号として公開された国際出願PCT/IB2007/00353
6号を参照されたい)で増殖させる。

対象でのウイルスの増殖は、自然感染で起こるものと同様の種類及び程度の長期刺激を
もたらし、そのため、かなりの長期持続性免疫を付与することができるので、対象への投
与用の生ウイルスを含む免疫原性組成物が好ましい場合がある。

(5.10.3 不活化ウイルスワクチン)
一実施態様では、fluポリペプチドを含む不活化ウイルスを含む免疫原性組成物(例えば
、ワクチン)が本明細書で提供される。具体的な実施態様では、fluポリペプチドは膜結合
型である。特定の実施態様では、不活化ウイルスは、上の第5.4節に記載されているよう
な、インフルエンザウイルスである。他の実施態様では、不活化ウイルスは、上の第5.5
節に記載されているような、非インフルエンザウイルスである。いくつかの実施態様では
、免疫原性組成物は、2つ、3つ、4つ、又はそれより多くの異なるfluポリペプチドを含む
、2つ、3つ、4つ、又はそれより多くの不活化ウイルスを含む。ある実施態様では、不活
化ウイルス免疫原性組成物は、1以上のアジュバントを含む。

当業者に公知の技術を用いて、fluポリペプチドを含むウイルスを不活化することがで
きる。一般的な方法は、不活化のためにホルマリン、熱、又は界面活性剤を用いる。例え
ば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、米国特許第6,635,246号を参
照されたい。他の方法としては、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、
米国特許第5,891,705号;第5,106,619号及び第4,693,981号に記載されているものが挙げら
れる。

ある実施態様では、免疫原性組成物の各用量が、約15〜約60μgの本明細書に記載のflu
ポリペプチド、約1.0〜約5.0mgの塩化ナトリウム、約20〜約100μgの一塩基リン酸ナトリ
ウム、約100〜約500μgのリン酸水素ナトリウム、約5〜約30μgのリン酸二水素カリウム
、約5〜約30μgの塩化カリウム、及び約0.5〜約3.0μgの塩化カルシウムを含むような、
不活化インフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物(例えば、ワクチン)が本明細書で提
供される。いくつかの実施態様では、免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、単一の0.25
ml又は単一の0.5mlの用量としてパックされる。他の実施態様では、免疫原性組成物(例え
ば、ワクチン)は、多用量製剤としてパックされる。

ある実施態様では、免疫原性組成物の各用量が、1用量当たり、約15〜約60μgの本明細
書に記載のfluポリペプチド、約0.001％〜0.01％のチメロサール、約1.0〜約5.0mgの塩化
ナトリウム、約20〜約100μgの一塩基リン酸ナトリウム、約100〜約500μgのリン酸水素
ナトリウム、約5〜約30μgのリン酸二水素カリウム、約5〜約30μgの塩化カリウム、及び
約0.5〜約3.0μgの塩化カルシウムを含むような、不活化インフルエンザウイルスを含む
免疫原性組成物(例えば、ワクチン)が本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、
免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、単一の0.25ml又は単一の0.5mlの用量としてパッ
クされる。他の実施態様では、免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、多用量製剤として
パックされる。

具体的な実施態様では、本明細書で提供される免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、
単一の0.25ml用量としてパックされ、1用量当たり、22.5μgの本明細書に記載のfluポリ
ペプチド、2.05mgの塩化ナトリウム、40μgの一塩基リン酸ナトリウム、150μgのリン酸
水素ナトリウム、10μgのリン酸二水素カリウム、10μgの塩化カリウム、及び0.75μgの
塩化カルシウムを含む。

具体的な実施態様では、本明細書で提供される免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、
単一の0.5ml用量としてパックされ、1用量当たり、45μgの本明細書に記載のfluポリペプ
チド、4.1mgの塩化ナトリウム、80μgの一塩基リン酸ナトリウム、300μgのリン酸水素ナ
トリウム、20μgのリン酸二水素カリウム、20μgの塩化カリウム、及び1.5μgの塩化カル
シウムを含む。

具体的な実施態様では、免疫原性組成物(例えば、ワクチン)は、5.0mlのワクチン(1用
量当たり、0.5ml)を含むか、又はそれからなる多用量製剤としてパックされ、1用量当た
り、24.5μgの水銀(チメロサール由来)、45μgの本明細書に記載のfluポリペプチド、4.1
mgの塩化ナトリウム、80μgの一塩基リン酸ナトリウム、300μgのリン酸水素ナトリウム
、20μgのリン酸二水素カリウム、20μgの塩化カリウム、及び1.5μgの塩化カルシウムを
含む。

具体的な実施態様では、fluポリペプチドを含む不活化ウイルスを、その不活化及びそ
の後の本明細書に記載の免疫原性組成物中での使用の前に、発育鶏卵で増殖させた。別の
具体的な実施態様では、fluポリペプチドを含む不活化ウイルスを、その不活化及びその
後の本明細書に記載の免疫原性組成物中での使用の前に、発育鶏卵で増殖させなかった。
別の具体的な実施態様では、fluポリペプチドを含む不活化ウイルスを、その不活化及び
その後の本明細書に記載の免疫原性組成物中での使用の前に、哺乳動物細胞、例えば、不
死化ヒト細胞(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、国際公開W
O 07/045674号として公開された国際出願PCT/EP2006/067566号を参照されたい)、又はイ
ヌ腎臓細胞、例えば、MDCK細胞(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれ
ている、国際公開WO 08/032219号として公開された国際出願PCT/IB2007/003536号を参照
されたい)で増殖させた。

(5.10.4 スプリットウイルスワクチン)
一実施態様では、fluポリペプチドを含む免疫原性組成物は、スプリットウイルスワク
チンである。いくつかの実施態様では、スプリットウイルスワクチンは、2つ、3つ、4つ
、又はそれより多くの異なるfluポリペプチドを含む。ある実施態様では、fluポリペプチ
ドは、膜結合型である/あった。ある実施態様では、スプリットウイルスワクチンは、1以
上のアジュバントを含む。

スプリットウイルスワクチンの産生技術は当業者に公知である。非限定的な例として、
インフルエンザウイルススプリットワクチンは、界面活性剤で破壊された不活化粒子を用
いて調製することができる。本明細書に記載の方法による使用に適合させることができる
スプリットウイルスワクチンの一例は、筋肉内使用のためのFluzone(登録商標)インフル
エンザウイルスワクチン(ゾーン精製、サブビリオン)であり、それを、発育鶏卵で増殖さ
せたインフルエンザウイルスから調製される滅菌懸濁剤として製剤化する。ウイルス含有
液を回収し、ホルムアルデヒドで不活化する。インフルエンザウイルスを、連続フロー遠
心分離機を用いて、線形ショ糖密度勾配溶液中で濃縮し、精製する。次に、ウイルスを、
非イオン性界面活性剤、オクトキシノール-9(Triton(登録商標)X-100-Union Carbide社の
登録商標)を用いて化学的に破壊し、「スプリットウイルス」を生じさせる。次に、この
スプリットウイルスを、化学手段によってさらに精製し、リン酸ナトリウム緩衝生理食塩
液に懸濁する。

ある実施態様では、約10μg〜約60μgの本明細書に記載の1以上のfluポリペプチド、約
0.01〜約1.0mgのオクトキシノール-10(TRITON X-100(登録商標))、約0.5〜0.5mgのα-ト
コフェリルハイドロジェンスクシネート、約0.1〜1.0mgのポリソルベート80(Tween 80)、
約0.001〜約0.003μgのヒドロコルチゾン、約0.05〜約0.3μgの硫酸ゲンタマイシン(gent
amcin)、約0.5〜約2.0μgの鶏卵タンパク質(オボアルブミン)、約25〜75μgのホルムアル
デヒド、及び約25〜75μgのデオキシコール酸ナトリウムを含むスプリットウイルスワク
チンが本明細書で提供される。

具体的な実施態様では、本明細書で提供されるスプリットウイルスワクチンは、45μg
の本明細書で提供されるfluポリペプチド(複数可)、0.085mg以下のオクトキシノール-10(
TRITON X-100(登録商標))、0.1mg以下のα-トコフェリルハイドロジェンスクシネート、0
.415mg以下のポリソルベート80(Tween 80)、0.0016μg以下のヒドロコルチゾン、0.15μg
以下の硫酸ゲンタマイシン、1.0以下の鶏卵タンパク質(オボアルブミン)、50μg以下のホ
ルムアルデヒド、及び50μg以下のデオキシコール酸ナトリウムを含む0.5ml用量を含むか
、又はそれからなる。いくつかの実施態様では、0.5ml用量のサブユニットワクチンは、
充填済み注射器にパックされる。

具体的な実施態様では、スプリットウイルスワクチンは、発育鶏卵で増殖させたインフ
ルエンザウイルスを用いて調製される。別の具体的な実施態様では、スプリットウイルス
ワクチンは、発育鶏卵で増殖させなかったインフルエンザウイルスを用いて調製される。
別の具体的な実施態様では、スプリットウイルスワクチンは、哺乳動物細胞、例えば、不
死化ヒト細胞(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、WO 07/045
674号として公開された国際出願PCT/EP2006/067566号を参照されたい)、又はイヌ腎臓細
胞、例えば、MDCK細胞(例えば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、W
O 08/032219号として公開された国際出願PCT/IB2007/003536号を参照されたい)で増殖さ
せたインフルエンザウイルスを用いて調製される。

(5.10.5 アジュバント)
ある実施態様では、本明細書に記載の組成物は、アジュバントを含むか、又はそれと併
用投与される。本明細書に記載の組成物との併用投与のためのアジュバントは、該組成物
の投与前、それと同時、又はその後に投与されてもよい。いくつかの実施態様では、用語
「アジュバント」は、本明細書に記載の組成物とともに又はその一部として投与した場合
、fluポリペプチドに対する免疫応答を強化、増強、及び/又は亢進するが、その化合物を
単独で投与した場合、ポリペプチドに対する免疫応答を生じさせない化合物を指す。いく
つかの実施態様では、アジュバントは、ポリペプチドに対する免疫応答を生じさせ、アレ
ルギー又は他の有害反応を生じさせない。アジュバントは、例えば、リンパ球動員、B及
び/又はT細胞の刺激、並びにマクロファージの刺激を含むいくつかの機構によって、免疫
応答を増強することができる。

ある実施態様では、アジュバントは、応答の定性的形態に影響を及ぼすポリペプチドの
立体構造変化を引き起こすことなく、fluポリペプチドに対する固有の応答を強化する。
アジュバントの具体的な例としては、アルミニウム塩(ミョウバン)(例えば、水酸化アル
ミニウム、リン酸アルミニウム、及び硫酸アルミニウム)、3脱O-アシル化モノホスホリル
脂質A(MPL)(GB 2220211号を参照されたい)、MF59(Novartis)、AS03(GlaxoSmithKline)、A
S04(GlaxoSmithKline)、ポリソルベート80(Tween 80;ICL Americas社)、イミダゾピリジ
ン化合物(国際公開WO 2007/109812号として公開された国際出願PCT/US2007/064857号を参
照されたい)、イミダゾキノキサリン化合物(国際公開WO 2007/109813号として公開された
国際出願PCT/US2007/064858号を参照されたい)、及びサポニン、例えば、QS21(Kensilら
の文献、ワクチンの設計:サブユニット及びアジュバント手法(Vaccine Design: The Subu
nit and Adjuvant Approach)(Powell及びNewman編, Plenum Press, NY, 1995);米国特許
第5,057,540号を参照されたい)が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施
態様では、アジュバントは、フロイントアジュバント(完全又は不完全)である。他のアジ
ュバントは、任意に免疫賦活剤、例えば、モノホスホリル脂質Aと組み合わせた、水中油
エマルジョン(例えば、スクアレン又は落花生油)である(Stouteらの文献(N. Engl. J. Me
d. 336, 86-91(1997))を参照されたい)。別のアジュバントは、CpGである(Bioworld Toda
y, 1998年11月15日)。そのようなアジュバントは、他の特異的免疫刺激剤、例えば、MPL
もしくは3-DMP、QS21、重合体もしくは単量体のアミノ酸、例えば、ポリグルタミン酸も
しくはポリリジン、又は上の第5.4節に記載されている他の免疫増強剤とともに、又はそ
れらなしで用いることができる。fluポリペプチドの異なる製剤が、異なるアジュバント
を含み得るか、又は同じアジュバントを含み得ることを理解すべきである。

(5.11 予防的及び治療的使用)
一態様では、活性化合物、すなわち、本明細書に記載のfluポリペプチド、そのような
ポリペプチドをコードする核酸、そのようなポリペプチドを含むかもしくは発現するベク
ター(例えば、ウイルスベクターもしくは細菌)、又はそのようなポリペプチドで刺激され
た細胞を利用して、対象の免疫応答を誘導する方法が本明細書で提供される。具体的な実
施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法は、それを
必要とする対象に、fluポリペプチドをコードする核酸又はその免疫原性組成物の有効量
を投与することを含む。別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫
応答を誘導する方法は、それを必要とする対象に、fluポリペプチドをコードする核酸又
はその免疫原性組成物の有効量を投与することを含む。別の実施態様では、対象のインフ
ルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法は、それを必要とする対象に、fluポ
リペプチドを含むかもしくは発現するウイルスベクター、又はその免疫原性組成物の有効
量を投与することを含む。さらに別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対
する免疫応答を誘導する方法は、それを必要とする対象に、fluポリペプチドで刺激され
た細胞又はその医薬組成物の有効量を投与することを含む。ある実施態様では、本方法で
用いられるfluポリペプチドは、哺乳動物細胞、植物細胞、又は昆虫細胞に由来する精製
されたfluポリペプチドである。

具体的な実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方
法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のサブユニットワクチンを投与すること
を含む。別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する
方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載の生ウイルスワクチンを投与すること
を含む。特定の実施態様では、生ウイルスワクチンは、弱毒化ウイルスを含む。別の実施
態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法は、それを必
要とする対象に、本明細書に記載の不活化ウイルスワクチンを投与することを含む。別の
実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法は、それ
を必要とする対象に、本明細書に記載のスプリットウイルスワクチンを投与することを含
む。別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法
は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のウイルス様粒子ワクチンを投与すること
を含む。別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する
方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のウイロソームを投与することを含む
。別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘導する方法は
、それを必要とする対象に、fluポリペプチドを発現するかもしくは発現するように改変
された細菌又はその組成物を投与することを含む。ある実施態様では、本方法で用いられ
るfluポリペプチドは、哺乳動物細胞、植物細胞、又は昆虫細胞に由来する精製されたflu
ポリペプチドである。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される
免疫応答は、インフルエンザウイルスの任意の亜型又は株によって引き起こされるインフ
ルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効である。ある実施態様では、本
明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、一方のHAグループ
(例えば、H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、及びH16を含むグループ1)に属し、
もう一方のHAグループ(例えば、H3、H4、H7、H10、H14、及びH15を含むグループ2)に属さ
ないインフルエンザウイルスの亜型によって引き起こされるインフルエンザウイルス感染
を予防及び/又は治療するのに有効である。例えば、誘導される免疫応答は、H11、H13、H
16、H9、H8、H12、H6、H1、H5、及びH2からなるHAグループに属するインフルエンザウイ
ルスによって引き起こされるインフルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療するのに
有効であり得る。或いは、誘導される免疫応答は、H3、H4、H14、H10、H15、及びH7から
なるHAグループに属するインフルエンザウイルスによって引き起こされるインフルエンザ
ウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効であり得る。いくつかの実施態様では、
本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、インフルエンザ
ウイルスの1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つの亜型によって引き起こされるインフルエンザ
ウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効である。ある実施態様では、本明細書に
記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、インフルエンザウイルスの
6つ、7つ、8つ、9つ、10、11、12、13、14、又は15の亜型によって引き起こされるインフ
ルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効である。いくつかの実施態様で
は、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、インフルエ
ンザウイルスの同じ亜型内の1以上の変異体によって引き起こされるインフルエンザウイ
ルス感染を予防及び/又は治療するのに有効である。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される
免疫応答は、H1N1とH2N2の両方の亜型によって引き起こされるインフルエンザウイルス感
染を予防及び/又は治療するのに有効である。他の実施態様では、本明細書に記載の活性
化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、H1N1とH2N2の両方の亜型によって引き
起こされるインフルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効でない。いく
つかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応
答は、H1N1、H2N2、及びH3N2の亜型によって引き起こされるインフルエンザウイルス感染
を予防及び/又は治療するのに有効である。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の
活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、H3N2亜型によって引き起こされる
インフルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効である。他の実施態様で
は、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、H3N2亜型に
よって引き起こされるインフルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療するのに有効で
ない。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される
免疫応答は、インフルエンザウイルスの任意の亜型又は株によって引き起こされるインフ
ルエンザウイルス疾患を予防及び/又は治療するのに有効である。ある実施態様では、本
明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される免疫応答は、一方のHAグループ
に属し、もう一方のHAグループに属さないインフルエンザウイルスの亜型によって引き起
こされるインフルエンザウイルス疾患を予防及び/又は治療するのに有効である。例えば
、誘導される免疫応答は、H11、H13、H16、H9、H8、H12、H6、H1、H5、及びH2からなるHA
グループに属するインフルエンザウイルスによって引き起こされるインフルエンザウイル
ス疾患を予防及び/又は治療するのに有効であり得る。或いは、誘導される免疫応答は、H
3、H4、H14、H10、H15、及びH7からなるHAグループに属するインフルエンザウイルスによ
って引き起こされるインフルエンザウイルス疾患を予防及び/又は治療するのに有効であ
り得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導
される免疫応答は、インフルエンザウイルスの1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つの亜型のい
ずれかによって引き起こされるインフルエンザウイルス疾患を予防及び/又は治療するの
に有効である。ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導
される免疫応答は、インフルエンザウイルスの6つ、7つ、8つ、9つ、10、11、12、13、14
、又は15の亜型のいずれかによって引き起こされるインフルエンザウイルス疾患を予防及
び/又は治療するのに有効である。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合
物又は組成物によって誘導される免疫応答は、インフルエンザウイルスの同じ亜型内の1
以上の変異体によって引き起こされるインフルエンザウイルス疾患を予防及び/又は治療
するのに有効である。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される
免疫応答は、インフルエンザウイルス疾患/感染に起因する症状を軽減するのに有効であ
る。インフルエンザウイルス疾患/感染の症状としては、体の痛み(特に、関節及び咽喉)
、発熱、吐き気、頭痛、ひりひり痛む目、疲労、咽喉炎、赤くなった目又は皮膚、並びに
腹痛が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によって誘導される
免疫応答は、インフルエンザウイルス疾患/感染に罹患している対象の入院を減少させる
のに有効である。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物によ
って誘導される免疫応答は、インフルエンザウイルス疾患/感染に罹患している対象の入
院期間を短縮するのに有効である。

別の態様では、本明細書に記載の活性化合物(例えば、本明細書に記載のfluポリペプチ
ド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、そのようなポリペプチドを含むかもしく
は発現するベクター、又はそのようなポリペプチドで刺激された細胞)或いは組成物を利
用して、対象のインフルエンザウイルス感染を予防及び/又は治療する方法が本明細書で
提供される。一実施態様では、対象のインフルエンザウイルス感染を予防又は治療する方
法は、それを必要とする対象に、fluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードす
る核酸、そのようなポリペプチドを含むかもしくは発現するベクター、又は上記のいずれ
か1つの組成物を投与することを含む。具体的な実施態様では、対象のインフルエンザウ
イルス感染を予防又は治療する方法は、それを必要とする対象に、サブユニットワクチン
、生ウイルスワクチン、不活化ウイルスワクチン、スプリットウイルスワクチン、又はウ
イルス様粒子ワクチンを投与することを含む。具体的な実施態様では、インフルエンザウ
イルス感染は、A型インフルエンザウイルスによって引き起こされる。他の実施態様では
、インフルエンザウイルス感染は、B型又はC型インフルエンザウイルスによって引き起こ
される。

別の態様では、本明細書に記載のfluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコード
する核酸、そのようなポリペプチドを含むかもしくは発現するベクター、又はそのような
ポリペプチドで刺激された細胞を利用して、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防及
び/又は治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施態様では、対象のインフル
エンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする対象に、fluポリペプ
チド又はその免疫原性組成物の有効量を投与することを含む。別の実施態様では、対象の
インフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする対象に、flu
ポリペプチドをコードする核酸又はその免疫原性組成物の有効量を投与することを含む。
別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それ
を必要とする対象に、fluポリペプチドを含むかもしくは発現するウイルスベクター、又
はその免疫原性組成物の有効量を投与することを含む。さらに別の実施態様では、対象の
インフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする対象に、flu
ポリペプチドで刺激された細胞又はその医薬組成物の有効量を投与することを含む。

具体的な実施態様では、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は
、それを必要とする対象に、本明細書に記載されるサブユニットワクチンを投与すること
を含む。別の実施態様では、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法
は、それを必要とする対象に、本明細書に記載の生ウイルスワクチンを投与することを含
む。特定の実施態様では、生ウイルスワクチンは、弱毒化ウイルスを含む。別の実施態様
では、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする
対象に、本明細書に記載の不活化ウイルスワクチンを投与することを含む。別の実施態様
では、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする
対象に、本明細書に記載のスプリットウイルスワクチンを投与することを含む。別の実施
態様では、インフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする対
象に、本明細書に記載のウイルス様粒子ワクチンを投与することを含む。別の実施態様で
は、対象のインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする対
象に、本明細書に記載のウイロソームを投与することを含む。別の実施態様では、対象の
インフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要とする対象に、flu
ポリペプチドを発現するかもしくは発現するように改変された細菌又はその組成物を投与
することを含む。具体的な実施態様では、インフルエンザウイルス疾患は、A型インフル
エンザウイルスの存在に起因するか、又はそれと関連する。他の実施態様では、インフル
エンザウイルス疾患は、B型インフルエンザウイルスの存在に起因するか、又はそれと関
連する。

別の態様では、本明細書に記載の中和抗体を投与することによって、対象でインフルエ
ンザウイルス疾患を予防及び/又は治療する方法が本明細書で提供される。具体的な実施
態様では、対象でインフルエンザウイルス疾患を予防又は治療する方法は、それを必要と
する対象に、本明細書に記載の中和抗体、又はその医薬組成物の有効量を投与することを
含む。特定の実施態様では、中和抗体はモノクローナル抗体である。ある実施態様では、
中和抗体は、Wangらの文献(2010)「異なる血球凝集素による連続免疫後のH3インフルエン
ザウイルスに対する広範防御性モノクローナル抗体(Broadly Protective Monoclonal Ant
ibodies against H3 Influenza Viruses following Sequential Immunization with Diff
erent Hemagglutinins)」(PLOS Pathogens 6(2):1-9)に記載される抗体でない。ある実施
態様では、中和抗体は、PCT/US2010/036170号に記載されている抗体ではない。

ある実施態様では、本明細書で提供される、対象(例えば、ヒト又は非ヒト動物)のイン
フルエンザウイルス疾患又は感染を予防又は治療する方法は、当業者に公知かつ本明細書
に記載のインビボ及びインビトロアッセイで測定したときに、対象でのインフルエンザウ
イルスの複製の低減をもたらす。いくつかの実施態様では、インフルエンザウイルスの複
製は、約1log以上、約2log以上、約3log以上、約4log以上、約5log以上、約6log以上、約
7log以上、約8log以上、約9log以上、約10log以上、1〜3log、1〜5log、1〜8log、1〜9lo
g、2〜10log、2〜5log、2〜7log、2log〜8log、2〜9log、2〜10log、3〜5log、3〜7log、
3〜8log、3〜9log、4〜6log、4〜8log、4〜9log、5〜6log、5〜7log、5〜8log、5〜9log
、6〜7log、6〜8log、6〜9log、7〜8log、7〜9log、又は8〜9log低減される。

(5.11.1 併用療法)
様々な態様では、本明細書に記載のfluポリペプチド、そのようなポリペプチドをコー
ドする核酸、そのようなポリペプチドを含むかもしくは発現するベクター(例えば、ウイ
ルスベクターもしくは細菌)、そのようなポリペプチドで刺激された細胞、又は中和抗体
は、1以上の他の療法(例えば、抗ウイルス療法、抗細菌療法、もしくは免疫調節療法)と
の併用で対象に投与することができる。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の医薬
組成物(例えば、免疫原性組成物)は、1以上の療法との併用で対象に投与することができ
る。1以上の他の療法は、インフルエンザウイルス疾患の治療もしくは予防に有益である
ことができるか、又はインフルエンザウイルス疾患と関連する症状もしくは状態を改善す
ることができる。いくつかの実施態様では、1以上の他の療法は、鎮痛剤、解熱薬、又は
呼吸を楽にするかもしくは助ける療法である。ある実施態様では、療法は、5分未満の間
隔、30分未満の間隔、1時間の間隔、約1時間の間隔、約1〜約2時間の間隔、約2時間〜約3
時間の間隔、約3時間〜約4時間の間隔、約4時間〜約5時間の間隔、約5時間〜約6時間の間
隔、約6時間〜約7時間の間隔、約7時間〜約8時間の間隔、約8時間〜約9時間の間隔、約9
時間〜約10時間の間隔、約10時間〜約11時間の間隔、約11時間〜約12時間の間隔、約12時
間〜18時間の間隔、18時間〜24時間の間隔、24時間〜36時間の間隔、36時間〜48時間の間
隔、48時間〜52時間の間隔、52時間〜60時間の間隔、60時間〜72時間の間隔、72時間〜84
時間の間隔、84時間〜96時間の間隔、又は96時間〜120時間の間隔で投与される。具体的
な実施態様では、2種以上の療法が、同じ患者(patent)診察時に投与される。

当業者に周知の任意の抗ウイルス剤を、本明細書に記載の活性化合物又は医薬組成物と
併用することができる。抗ウイルス剤の非限定的な例としては、その受容体へのウイルス
の付着、細胞内へのウイルスの内在化、ウイルスの複製、又は細胞からのウイルスの放出
を阻害及び/又は低減する、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質抗体
、核酸分子、有機分子、無機分子、及び小分子が挙げられる。特に、抗ウイルス剤として
は、ヌクレオシド類似体(例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガンシクロビル、ビダラ
ビン、イドクスウリジン、トリフルリジン、及びリバビリン)、フォスカーネット、アマ
ンタジン、ペラミビル、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、α-イ
ンターフェロン及び他のインターフェロン、AZT、ザナミビル(Relenza(登録商標))、並び
にオセルタミビル(Tamiflu(登録商標))が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗
ウイルス剤としては、インフルエンザウイルスワクチン、例えば、Fluarix(登録商標)(Gl
axoSmithKline)、FluMist(登録商標)(MedImmune Vaccines)、Fluvirin(登録商標)(Chiron
社)、Flulaval(登録商標)(GlaxoSmithKline)、Afluria(登録商標)(CSL Biotherapies社)
、Agriflu(登録商標)(Novartis)、又はFluzone(登録商標)(Aventis Pasteur)が挙げられ
る。

具体的な実施態様では、抗ウイルス剤は、ウイルス抗原に特異的である免疫調節剤であ
る。特定の実施態様では、ウイルス抗原は、血球凝集素ポリペプチド以外のインフルエン
ザウイルスポリペプチドである。他の実施態様では、ウイルス抗原は、fluポリペプチド
である。

当業者に公知の任意の抗細菌剤を、本明細書に記載の活性化合物又は医薬組成物と併用
することができる。抗細菌剤の非限定的な例としては、アミカシン、アモキシシリン、ア
モキシシリン-クラブラン酸、アンホテリシンB、アンピシリン、アンピシリン(Ampicllin
)-スルバクタム、アプラマイシン、アジスロマイシン、アズトレオナム、バシトラシン、
ベンジルペニシリン、カスポファンギン、セファクロル、セファドロキシル、セファレキ
シン、セファロチン、セファゾリン、セフジニル、セフェピム、セフィキシム、セフメノ
キシム、セフォペラゾン、セフォペラゾン-スルバクタム、セフォタキシム、セフォキシ
チン、セフピロム、セフポドキシム、セフポドキシム-クラブラン酸、セフポドキシム-ス
ルバクタム、セフプロジル、セフキノム、セフタジジム、セフチブテン(Ceftibutin)、セ
フチオフル、セフトビプロール、セフトリアキソン、セフロキシム、クロラムフェニコー
ル、フロルフェニコール、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリナフロキサシ
ン、クリンダマイシン、クロキサシリン、コリスチン、コトリモキサゾール(トリムトプ
リム/スルファメトキサゾール)、ダルババンシン、ダルフォプリスチン/キノプリスチン
、ダプトマイシン、ジベカシン、ジクロキサシリン、ドリペネム、ドキシサイクリン、エ
ンロフロキサシン、エルタペネム、エリスロマイシン、フルクロキサシリン、フルコナゾ
ール、フルシトシン、ホスホマイシン、フシジン酸、ガレノキサシン、ガチフロキサシン
、ゲミフロキサシン、ゲンタマイシン、イミペネム、イトラコナゾール、カナマイシン、
ケトコナゾール、レボフロキサシン、リンコマイシン、リネゾリド、ロラカルベフ、メシ
ルナム(アムジノシリン)、メロペネム、メトロニダゾール、メジオシリン、メズロシリン
-スルバクタム、ミノサイクリン、モキシフロキサシン、ムピロシン、ナリジキシン酸、
ネオマイシン、ネチルマイシン、ニトロフラントイン、ノルフロキサシン、オフロキサシ
ン、オキサシリン、ペフロキサシン、ペニシリンV、ピペラシリン、ピペラシリン-スルバ
クタム、ピペラシリン-タゾバクタム、リファンピシン、ロキシスロマイシン、スパルフ
ロキサシン、スペクチノマイシン、スピラマイシン、ストレプトマイシン、スルバクタム
、スルファメトキサゾール、テイコプラニン、テラバンシン、テリスロマイシン、テモシ
リン、テトラサイクリン、チカルシリン、チカルシリン-クラブラン酸、チゲサイクリン
、トブラマイシン、トリメトプリム、トロバフロキサシン、タイロシン、バンコマイシン
、バージニアマイシン及びボリコナゾールが挙げられる。

いくつかの実施態様では、併用療法は、第5.4節〜第5.7節に記載の2以上の異なるベク
ターの投与を含む。一例では、A型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを
発現する1以上のベクター及びB型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを
発現する1以上のベクターを併用投与する。いくつかの実施態様では、併用療法は、H3 A
型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを発現するベクター及びH1 A型イ
ンフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを発現するベクターの投与を含む。い
くつかの実施態様では、併用療法は、H3 A型インフルエンザウイルスに由来するfluポリ
ペプチドを発現するベクター、H1 A型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチ
ドを発現するベクター、及びB型インフルエンザウイルスに由来するfluポリペプチドを発
現するベクターの投与を含む。

いくつかの実施態様では、併用療法は、もう一方のHAグループ(例えば、グループ2)の1
つ、2つ、3つ、又はそれより多くのHA亜型に対する免疫応答を誘導する活性化合物と併用
した、一方のHAグループ(例えば、グループ1)の1つ、2つ、3つ、又はそれより多くのHA亜
型に対する免疫応答を誘導する活性化合物による能動免疫を含む。

いくつかの実施態様では、併用療法は、第5.1節に記載の2以上のfluポリペプチドによ
る能動免疫を含む。

ある実施態様では、併用療法は、A型インフルエンザウイルスに由来する1つ、2つ、又
はそれより多くのfluポリペプチド、及びB型インフルエンザウイルスに由来する1以上のf
luポリペプチドによる能動免疫を含む。

(5.11.2 患者集団)
ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、未感作の対象、すなわ
ち、インフルエンザウイルス感染に起因する疾患を有していないか、又はインフルエンザ
ウイルス感染症に感染したことがなく、かつ現在それに感染していない対象に投与するこ
とができる。一実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、インフルエン
ザウイルス感染を獲得する危険のある未感作の対象に投与される。一実施態様では、本明
細書に記載の活性化合物又は組成物は、fluポリペプチドが免疫応答を誘導する、特定の
インフルエンザウイルスによって引き起こされる疾患を有していないか、又は特定のイン
フルエンザウイルスに感染したことがなく、かつそれに感染していない対象に投与される
。本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、fluポリペプチドが免疫応答を誘導する、
インフルエンザウイルス、又はインフルエンザウイルスの別の型、亜型、もしくは株に感
染している対象、及び/或いはそれらに感染したことがある対象に投与することができる
。

ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、インフルエンザウイル
ス感染と診断された患者に投与される。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性
化合物又は組成物は、症状が現われるか又は症状が重くなる前に(例えば、患者が入院を
必要とする前に)、インフルエンザウイルス感染患者に投与される。いくつかの実施態様
では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、その活性化合物又は組成物のfluポリ
ペプチドが由来したインフルエンザウイルスの型と異なる型のインフルエンザウイルスに
感染しているか、又はそう診断された患者に投与される。

ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、インフルエンザfluポ
リペプチドのHAグループと同じHAグループに属するインフルエンザウイルスに感染してい
る可能性があるか、又はそれに感染している患者に投与される。ある実施態様では、本明
細書に記載の活性化合物又は組成物は、インフルエンザfluポリペプチドの亜型と同じ亜
型のインフルエンザウイルスに感染している可能性があるか、又はそれに感染している患
者に投与される。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべき対
象は、動物である。ある実施態様では、動物は鳥である。ある実施態様では、動物はイヌ
である。ある実施態様では、動物はネコである。ある実施態様では、動物はウマである。
ある実施態様では、動物はウシである。ある実施態様では、動物は哺乳動物、例えば、ウ
マ、ブタ、マウス、又は霊長類、好ましくはヒトである。

ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべき対象は、
ヒト成人である。ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与され
るべき対象は、50歳を超えるヒト成人である。ある実施態様では、本明細書に記載の活性
化合物又は組成物が投与されるべき対象は、高齢のヒト対象である。

ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべき対象は、
ヒト小児である。ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与され
るべき対象は、ヒト乳児である。ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組
成物が投与される対象は、ヒト早産児である。いくつかの実施態様では、本明細書で提供
される方法に従って治療又は予防される患者は、ヒト幼児である。ある実施態様では、本
明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与される対象は、月齢6カ月未満の乳児ではな
い。具体的な実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべき対
象は、2歳以下である。

具体的な実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべき対象
は、月齢6カ月を超える任意の乳児又は小児、及び50歳を超える任意の成人である。他の
実施態様では、対象は妊娠個体である。別の実施態様では、対象は、インフルエンザシー
ズン(例えば、11月から4月)中に妊娠の可能性又はその予定がある個体である。具体的な
実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべき対象は、1、2、
3、4、5、6、7、又は8週間前に出産した女性である。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒ
ト対象は、インフルエンザウイルス感染又はインフルエンザウイルス感染に起因する疾患
の危険が高い任意の個体(例えば、免疫障害又は免疫不全個体)である。いくつかの実施態
様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒト対象は、インフル
エンザウイルス感染又はインフルエンザウイルス感染に起因する疾患の危険が高い個体(
例えば、免疫障害又は免疫抑制個体)と密接に接触する任意の個体である。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒ
ト対象は、インフルエンザウイルス感染又はインフルエンザウイルス感染に起因する合併
症もしくは疾患に対する感受性を高める任意の病気に罹患した個体である。他の実施態様
では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、インフルエンザウイルス感染によって
、個体が罹患するか、又は個体が危険に曝される別の病気の合併症が増加する可能性を有
する対象に投与される。特定の実施態様では、インフルエンザウイルス合併症に対する感
受性を高める病気、又はインフルエンザウイルスによってその病気と関連する合併症が増
加する病気は、例えば、肺を侵す病気、例えば、嚢胞性線維症、気腫、喘息、又は細菌感
染症(例えば、インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)、肺炎連鎖球菌(Streptococcu
s pneumoniae)、レジオネラ・ニューモフィラ(Legionella pneumophila)、及びトラコー
マ病原体(Chlamydia trachomatus)によって引き起こされる感染症);心血管疾患(例えば、
先天性心臓疾患、鬱血性心不全、及び冠動脈疾患);内分泌障害(例えば、糖尿病)、神経学
的障害及びニューロン発達障害(例えば、脳、脊髄、末梢神経、及び筋肉の障害(例えば、
脳性麻痺、癲癇(発作性疾患)、脳卒中、知的障害(例えば、精神遅滞)、筋ジストロフィー
、及び脊髄損傷))である。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒ
ト対象は、グループホーム、例えば、老人ホームに在住する個体である。いくつかの実施
態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒト対象は、グルー
プホーム、例えば、老人ホームで勤務するか、又はそこでかなりの時間を過ごす。いくつ
かの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒト対象は
、医療従事者(例えば、医師又は看護士)である。いくつかの実施態様では、本明細書に記
載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒト対象は、喫煙者である。具体的な実施態
様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物が投与されるべきヒト対象は、免疫障害
又は免疫抑制を起こしている。

さらに、本明細書に記載の活性化合物又は組成物を投与することができる、インフルエ
ンザの合併症を発症する危険が高い対象には、以下の者が含まれる:合併症の危険が高い
者にインフルエンザウイルスを伝染させることができる個体、例えば、6カ月未満の乳児
を含むことになる家族を含む、高リスク個体がいる家族の構成員、6カ月未満の乳児と接
触する個体、又は老人ホームもしくは他の長期介護施設に住む個体と接触する個体;長期
にわたる肺、心臓、又は循環障害を有する個体;代謝性疾患(例えば、糖尿病)を有する個
体;腎臓障害を有する個体;血液障害(貧血又は鎌状赤血球症を含む)を有する個体;弱くな
った免疫系(医薬品、悪性腫瘍、例えば、癌、臓器移植、又はHIV感染に起因する免疫抑制
を含む)を有する個体;長期アスピリン療法を受けている(そのため、インフルエンザに感
染した場合、ライ症候群を起こす可能性が高い)小児。

他の実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物の投与の対象には、以下の
、生後6カ月以上の健康な個体が含まれる:4月から9月にかけて、例えば、熱帯地方及び南
半球などの、インフルエンザの大発生が起こり得る外国及び地域に旅行する予定のある者
;インフルエンザウイルスが蔓延している世界の地域から来た者を含む可能性がある大き
な組織的観光団の一員として旅行する者;学校もしくは大学に通い、寄宿舎に住むか、も
しくは施設環境に住む者;又は自分がインフルエンザで病気になる危険を減らしたい者。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又は組成物の投与が禁忌である
対象には、インフルエンザワクチン接種が禁忌である以下の任意の個体が含まれる:生後6
カ月未満の乳児;及び免疫原性製剤の生産で用いられる卵、卵製品、又は他の成分に対し
てアナフィラキシー反応(ショックが続発することが多い呼吸困難を引き起こすアレルギ
ー反応)を経験したことがある個体。ある実施態様では、本明細書に記載の活性化合物又
は組成物の投与が、免疫原性製剤の生産で用いられる1以上の成分のために(例えば、卵又
は卵製品の存在のために)禁忌である場合、該活性化合物又は組成物を、活性化合物又は
組成物の投与を禁忌にする成分を含まない方法で生産することができる(例えば、該活性
化合物又は組成物を、卵又は卵製品を使用しないで生産することができる)。

いくつかの実施態様では、以下の患者集団の1つ又は複数に生ウイルスワクチンを投与
しないことが望ましい場合がある:高齢者;生後6カ月未満の乳児;妊娠個体;1歳未満の乳児
;2歳未満の小児;3歳未満の小児;4歳未満の小児;5歳未満の小児;20歳未満の成人;25歳未満
の成人;30歳未満の成人;35歳未満の成人;40歳未満の成人;45歳未満の成人;50歳未満の成
人;70歳を超える高齢者;75歳を超える高齢者;80歳を超える高齢者;85歳を超える高齢者;9
0歳を超える高齢者;95歳を超える高齢者;その年齢層でのアスピリン及び野生型インフル
エンザウイルス感染と関連する合併症が理由で、アスピリンもしくはアスピリン含有医薬
品を服用している小児及び若者(2〜17歳);喘息又は他の反応性気道疾患の病歴がある個体
;重度のインフルエンザ感染の素因となり得る慢性の医学的基礎疾患を有する個体;ギラン
バレー症候群の病歴がある個体;発熱を伴う急性の重篤な疾患を有する個体;又は中程度も
しくは重度の病気である個体。そのような個体については、本明細書に記載の不活化ウイ
ルスワクチン、スプリットウイルスワクチン、サブユニットワクチン、ウイロソーム、ウ
イルス様粒子、又は非ウイルスベクターの投与が好ましい場合がある。ある実施態様では
、生ウイルスワクチンを投与することが好ましい対象には、2〜17歳の健康な小児及び若
者、並びに18〜49歳の健康な成人が含まれ得る。

ある実施態様では、生ウイルスベクターを含む免疫原性製剤は、他の生ウイルスワクチ
ンと同時に投与されない。

(5.12 投与様式)
(5.12.1 送達経路)
本明細書に記載の活性化合物又は組成物は、種々の経路によって対象に送達することが
できる。これらには、鼻腔内、気管内、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、結
膜内、及び皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。具体的な実施態様では、本明
細書に記載の活性化合物又は組成物は、皮下経路で対象に送達される。いくつかの実施態
様では、組成物は、局所投与用に、例えば、皮膚への塗布用に製剤化される。具体的な実
施態様では、投与経路は、例えば、鼻スプレーの一部として、鼻腔内へのものである。あ
る実施態様では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。いくつかの実施態様では、組
成物は、皮下投与用に製剤化される。ある実施態様では、組成物は、注射による投与用に
は製剤化されない。生ウイルスワクチンのための具体的な実施態様では、ワクチンは、注
射以外の経路による投与用に製剤化される。

例えば、抗原がウイルスベクター、ウイルス様粒子ベクター、又は細菌ベクターである
場合、ベクターが由来する骨格ウイルス又は細菌の天然の感染経路から免疫原性組成物を
導入することが好ましいと考えられる。或いは、ポリペプチドが由来するインフルエンザ
ウイルスの天然の感染経路からfluポリペプチドを導入することが好ましい場合がある。
激しい分泌性及び細胞性免疫応答を誘導する抗原、特に、ウイルスベクターの能力を有利
に用いることができる。例えば、ウイルスベクターによる気道の感染は、インフルエンザ
ウイルスからの防御を同時に伴って、例えば、泌尿器系での強い分泌性免疫応答を誘導す
ることができる。さらに、好ましい実施態様では、任意の好適な経路によって医薬組成物
を肺に導入することが望ましい場合がある。肺投与は、例えば、吸入器又はネブライザー
、及び噴霧剤として用いるためのエアゾール化剤を含む製剤の使用によって利用すること
もできる。

具体的な実施態様では、サブユニットワクチンは、鼻腔内投与される。具体的な実施態
様では、サブユニットワクチンは、筋肉内投与される。別の具体的な実施態様では、サブ
ユニットワクチンは、皮下投与される。別の具体的な実施態様では、サブユニットワクチ
ンは、皮内投与される。

具体的な実施態様では、生ウイルスワクチンは、鼻腔内投与される。具体的な実施態様
では、生ウイルスワクチンは、筋肉内投与される。別の具体的な実施態様では、生ウイル
スワクチンは、皮下投与される。別の具体的な実施態様では、生ウイルスワクチンは、皮
内投与される。

具体的な実施態様では、不活化ウイルスワクチンは、鼻腔内投与される。具体的な実施
態様では、不活化ウイルスワクチンは、筋肉内投与される。別の具体的な実施態様では、
不活化ウイルスワクチンは、皮下投与される。別の具体的な実施態様では、不活化ウイル
スワクチンは、皮内投与される。

具体的な実施態様では、スプリットウイルスワクチンは、鼻腔内投与される。具体的な
実施態様では、スプリットウイルスワクチンは、筋肉内投与される。別の具体的な実施態
様では、スプリットウイルスワクチンは、皮下投与される。別の具体的な実施態様では、
スプリットウイルスワクチンは、皮内投与される。

具体的な実施態様では、ウイルス様粒子又はその組成物は、鼻腔内投与される。具体的
な実施態様では、ウイルス様粒子又はその組成物は、筋肉内投与される。別の具体的な実
施態様では、spウイルス様粒子又はその組成物は、皮下投与される。別の具体的な実施態
様では、ウイルス様粒子又はその組成物は、皮内投与される。

いくつかの実施態様では、インビトロでfluポリペプチドで刺激された細胞は、当業者
に公知の技術を用いて対象に導入(又は再導入)することができる。いくつかの実施態様で
は、該細胞は、真皮内に、真皮下に、又は末梢血流中に導入することができる。いくつか
の実施態様では、対象に導入される細胞は、有害な免疫応答を回避するために、その対象
に由来する細胞であることが好ましい。他の実施態様では、同様の免疫バックグラウンド
を有するドナー宿主に由来する細胞を用いることもできる。有害な免疫原性応答を回避す
るように設計されたものを含む、他の細胞を用いることもできる。

(5.12.2 投薬量及び投与頻度)
インフルエンザウイルス感染又はインフルエンザウイルス疾患の治療及び/又は予防で
有効である活性化合物又は組成物の量は疾患の性質によって決まり、標準的な臨床技術で
決定することができる。

製剤で使用すべき正確な用量は、投与経路、及び感染又はそれに起因する疾患の重篤度
によっても決まり、臨床医の判断及び各対象の状況に従って決定されるべきである。例え
ば、有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理的状態(年齢、体重、健康を含む)、患
者がヒトであるか動物であるかということ、投与される他の医薬品、及び治療が予防的で
あるか治療的であるかということによって異なってもよい。通常、患者はヒトであるが、
トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物を治療することもできる。治療投薬量
は、安全性及び有効性を最適化するために最適に調節される。

ある実施態様では、最適な投薬量範囲の特定を助けるために、インビトロアッセイが用
いられる。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られる、用量応答曲線か
ら推定することができる。

fluポリペプチドをコードする核酸の例示的な用量の範囲は、患者1人当たり、約10ng〜
1g、100ng〜100mg、1μg〜10mg、又は30〜300μgの核酸、例えば、DNAである。

ある実施態様では、(例えば、スプリットウイルスワクチン及びサブユニットワクチン
中に提供される)fluポリペプチド(複数可)の例示的な用量の範囲は、患者1キログラム当
たり、約5μg〜100mg、15μg〜50mg、15μg〜25mg、15μg〜10mg、15μg〜5mg、15μg〜1
mg、15μg〜100μg、15μg〜75μg、5μg〜50μg、10μg〜50μg、15μg〜45μg、20μg
〜40μg、又は25〜35μgである。他の実施態様では、fluポリペプチド(複数可)の例示的
な用量の範囲は、1用量当たり、約1μg〜50mg、5μg〜50mg、1μg〜100mg、5μg〜100mg
、15μg〜50mg、15μg〜25mg、15μg〜10mg、15μg〜5mg、15μg〜1mg、15μg〜100μg、
15μg〜75μg、5μg〜50μg、10μg〜50μg、15μg〜45μg、20μg〜40μg、又は25〜35
μgのfluポリペプチド(複数可)である。ある実施態様では、fluポリペプチド(複数可)の
例示的な用量は、1用量当たり、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、
36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50μgのfluポリペプチ
ド(複数可)を含む。ある実施態様では、fluポリペプチド(複数可)の例示的な用量は、1用
量当たり、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、又は100μgのfluポリペプチド(複
数可)を含む。

感染性ウイルスベクターの用量は、1用量当たり、ビリオン数が10〜100個、又はそれよ
り多くまで様々であることができる。いくつかの実施態様では、ウイルスベクターの好適
な投薬量は、10²、5×10²、10³、5×10³、10⁴、5×10⁴、10⁵、5×10⁵、10⁶、5×10⁶、10⁷
、5×10⁷、10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹、1×10¹⁰、5×10¹⁰、1×10¹¹、5×10¹¹、又は1
0¹²pfuであり、必要とされるだけの間隔で、1回、2回、3回、又はそれより多くの回数、
対象に投与することができる。

ある実施態様では、VLPの例示的な用量の範囲は、患者1kg当たり、約0.01μg〜約100mg
、約0.1μg〜約100mg、約5μg〜約100mg、約15μg〜約50mg、約15μg〜約25mg、約15μg
〜約10mg、約15μg〜約5mg、約15μg〜約1mg、約15μg〜約100μg、約15μg〜約75μg、
約5μg〜約50μg、約10μg〜約50μg、約15μg〜約45μg、約20μg〜約40μg、又は約25
〜約35μgである。他の実施態様では、fluポリペプチドの例示的な用量の範囲は、1用量
当たり、約1μg〜約50mg、約5μg〜約50mg、約1μg〜約100mg、約5μg〜約100mg、約15μ
g〜約50mg、約15μg〜約25mg、約15μg〜約10mg、約15μg〜約5mg、約15μg〜約1mg、約1
5μg〜約100μg、約15μg〜約75μg、約5μg〜約50μg、約10μg〜約50μg、約15μg〜約
45μg、約20μg〜約40μg、又は約25〜約35μgのfluポリペプチド(複数可)であり、必要
とされるだけの間隔で、1回、2回、3回、又はそれより多くの回数、対象に投与すること
ができる。

一実施態様では、不活化ワクチンは、それが約5μg〜約50μg、約10μg〜約50μg、約1
5μg〜約100μg、約15μg〜約75μg、約15μg〜約50μg、約15μg〜約30μg、約20μg〜
約50μg、約25μg〜約40μg、約25μg〜約35μgのfluポリペプチド(複数可)を含むように
製剤化される。そのようなワクチンは、1以上の異なるfluポリペプチド、例えば、A型イ
ンフルエンザウイルス由来の1以上のfluポリペプチドとB型インフルエンザウイルス由来
の1以上のfluポリペプチドの組合せを含むことができる。一実施態様では、弱毒化生イン
フルエンザワクチン(LAIV)は、0.2mL用量が少なくとも1つのfluポリペプチドを発現する3
種の株に由来する、10^6.5〜7.5蛍光焦点単位の弱毒化生インフルエンザウイルスを含むよ
うに製剤化される。

ある実施態様では、活性化合物又は組成物は、単一用量として1回、対象に投与される
。ある実施態様では、活性化合物又は組成物は、単一用量として、次いで3〜6週間後に2
回目の用量として、対象に投与される。これらの実施態様に従って、2回目の接種の後に6
〜12カ月間隔で、追加免疫接種を対象に投与することができる。ある実施態様では、追加
免疫接種は、異なる活性化合物又は組成物を利用することができる。いくつかの実施態様
では、同じ活性化合物又は組成物の投与を繰り返すことができ、投与は、少なくとも1日
、2日、3日、5日、10日、15日、30日、45日、2カ月、75日、3カ月、又は少なくとも6カ月
の間隔を空けることができる。ある実施態様では、活性化合物又は組成物は、単一用量と
して1年に1回、対象に投与される。

小児への投与のための具体的な実施態様では、少なくとも1カ月間隔で与えられる、活
性化合物又は組成物の2用量が小児に投与される。成人への投与のための具体的な実施態
様では、単一用量が与えられる。別の実施態様では、少なくとも1カ月間隔で与えられる
、活性化合物又は組成物の2用量が成人に投与される。別の実施態様では、若年小児(6カ
月〜9歳)には、1カ月間隔で与えられる2用量の活性化合物又は組成物を初めて投与するこ
とができる。特定の実施態様では、その最初のワクチン接種の年に1用量だけ投与された
小児には、その翌年に2用量が投与されるべきである。いくつかの実施態様では、インフ
ルエンザワクチン、例えば、本明細書に記載の免疫原性製剤を初めて投与される2〜8歳の
小児には、4週間の間隔で投与される2用量が好ましい。ある実施態様では、3歳を超える
対象に好ましい可能性がある0.5mlとは対照的に、生後6〜35カ月の小児には、半用量(0.2
5ml)が好ましい場合がある。

特定の実施態様では、活性化合物又は組成物は、秋又は冬に、すなわち、各半球のイン
フルエンザシーズンの前又はその期間中に、対象に投与される。一実施態様では、2回目
の用量をインフルエンザシーズンのピークの前に与えることができるように、小児には、
該シーズンの初め、例えば、9月下旬又は10月初旬に1回目の用量が投与される。

ある実施態様では、活性化合物又はその組成物は、2、3、4、5、又はそれより多い用量
で、2週間、3週間、4週間、5週間、又は6週間の間隔で対象に投与される。いくつかの実
施態様では、2、3、4、5、又はそれより多い用量の活性化合物又はその組成物は、1μg〜
20mg、10μg〜20mg、500μg〜20mg、1mg〜20mg、又は5mg〜20mgの投薬量で、2週間、3週
間、4週間、5週間、又は6週間の間隔で対象に投与される。ある実施態様では、投与され
る活性化合物又はその組成物は、毎回同じものである。ある実施態様では、投与されるfl
uポリペプチド又はその組成物は、毎回違うものである。

fluポリペプチドに結合する抗体による受動免疫について、投薬量の範囲は、患者の体
重1kg当たり、約0.0001〜100mg、より一般的には0.01〜5mgである。例えば、投薬量は、
体重1kg当たり、1mgもしくは10mg、又は1〜10mgの範囲、すなわち、70kgの患者の場合、
それぞれ、70mgもしくは700mg、又は70〜700mgの範囲であることができる。例示的な治療
レジメンは、1年もしくは数年の間、又は数年間隔で、2週間毎に1回、又は月に1回、又は
3〜6カ月毎に1回の投与を必要とする。いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する2
種以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、その場合、投与される各抗体の投薬量は
示された範囲に含まれる。抗体は、通常、複数の機会に投与される。単一の投薬の間隔は
、毎週、毎月、又は毎年であることができる。間隔は、患者でfluポリペプチドに対する
抗体の血液レベルを測定することにより示されるように、不規則であることができる。

(5.13 生物学的アッセイ)
(5.13.1 インフルエンザfluポリペプチドの活性を試験するためのアッセイ)
本明細書に開示されているベクターでfluポリペプチドの発現を試験するためのアッセ
イは、当技術分野で公知の任意のアッセイを用いて実施することができる。例えば、ウイ
ルスベクターへの組込みについてのアッセイは、この節又は第5.4節もしくは第5.5節に記
載されているように、ウイルスを増殖させること、ショ糖クッションに通す遠心分離によ
ってウイルス粒子を精製すること、及び当技術分野で周知の方法を用いるイムノアッセイ
、例えば、ウェスタンブロットによるfluポリペプチド発現についてのその後の解析を含
む。

一実施態様では、本明細書で開示されているfluポリペプチドは、当技術分野で公知の
抗体抗原相互作用のアッセイを用いてfluポリペプチドに対する抗体に特異的に結合する
その能力を試験することにより、適切なフォールディング及び機能性についてアッセイさ
れる。そのようなアッセイで用いられる抗体としては、例えば、Wangらの文献(2010)「異
なる血球凝集素による連続免疫後のH3インフルエンザウイルスに対する広範防御性モノク
ローナル抗体(Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza Virus
es following Sequential Immunization with Different Hemagglutinins)」(PLOS Patho
gens 6(2):1-9)、国際公開PCT/US2010/036170号、及びU.S.12/778,103号に記載されてい
る中和抗体が挙げられる。

別の実施態様では、本明細書に開示されているfluポリペプチドは、例えば、NMR、X線
結晶学的方法、又は二次構造予測法、例えば、円二色性などの、当技術分野で公知の任意
の方法を用いるfluポリペプチドの構造又は立体構造の決定により、適切なフォールディ
ングについてアッセイされる。

(5.13.2 インフルエンザfluポリペプチドを用いて作製された抗体の活性を試験するため
のアッセイ)
本明細書に記載の抗体は、当業者に公知の種々の方法(例えば、ELISA、表面プラズモン
共鳴ディスプレイ(BIAcore)、ウェスタンブロット、免疫蛍光、免疫染色、及び/又は微量
中和アッセイ)で特徴付けることができる。いくつかの実施態様では、抗体は、fluポリペ
プチド、又は該ポリペプチドを含むベクターに特異的に結合する能力についてアッセイさ
れる。そのようなアッセイは、溶液中で(例えば、Houghtenの文献(1992, Bio/Techniques
13:412 421))、ビーズ表面で(Lamの文献(1991, Nature 354:82 84))、チップ表面で(Fod
orの文献(1993, Nature 364:555 556))、細菌を用いて(米国特許第5,223,409号)、胞子を
用いて(米国特許第5,571,698号;第5,403,484号;及び第5,223,409号)、プラスミドを用い
て(Cullらの文献(1992, Proc Natl. Acad. Sci. USA 89:1865 1869))、又はファージを用
いて(Scott及びSmithの文献(1990, Science 249:386 390);Cwirlaらの文献(1990, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 87:6378 6382);及びFeliciの文献(1991, J. Mol. Biol. 222:301
310))実施することができる(その各々は、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれ
ている)。

fluポリペプチドに対する抗体の特異的結合及び他の抗原との交差反応性は、当技術分
野で公知の任意の方法で評価することができる。特異的結合及び交差反応性を解析するた
めに用いることができるイムノアッセイには、少し例を挙げれば、ウェスタンブロット、
ラジオイムノアッセイ、ELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)、「サンドイッチ」イムノア
ッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッ
セイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノ
アッセイなどの技術を用いる、競合的及び非競合的アッセイ系が含まれるが、これらに限
定されない。そのようなアッセイはルーチンであり、かつ当技術分野で周知である(例え
ば、引用によりその全体が本明細書中に組み込まれている、Ausubelら編の文献(1994,分
子生物学の最新プロトコル(Current Protocols in Molecular Biology), 1巻, John Wile
y ＆ Sons社, New York)を参照されたい)。

fluポリペプチドに対する抗体の結合親和性及び抗体抗原相互作用の解離速度は、競合
的結合アッセイによって測定することができる。競合的結合アッセイの一例は、漸増する
量の非標識抗原の存在下での標識抗原(例えば、³H又は¹²⁵I)と関心対象の抗体とのインキ
ュベーション、及び標識抗原に結合した抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。
fluポリペプチドに対する抗体の親和性及び結合解離速度は、スキャッチャードプロット
解析によるデータから測定することができる。二次抗体との競合もラジオイムノアッセイ
を用いて測定することができる。この場合、fluポリペプチドは、漸増する量の非標識二
次抗体の存在下で、標識化合物(例えば、³H又は¹²⁵I)と結合させた試験抗体とともにイン
キュベートされる。

ある実施態様では、抗体結合親和性及び速度定数は、KinExA 3000システム(Sapidyne I
nstruments、Boise、ID)を用いて測定される。いくつかの実施態様では、fluポリペプチ
ドに対する抗体の結合及び解離速度を測定するために、表面プラズモン共鳴(例えば、BIA
core動態)解析を用いる。BIAcore動態解析は、その表面にfluポリペプチドに対する抗体
が固定されたチップからのfluポリペプチドの結合及び解離を解析することを含む。典型
的なBIAcore動態試験は、fluポリペプチドが固定されているセンサーチップ表面への、0.
005％のTween20を含むHBS緩衝液中の様々な濃度の250μLの抗体試薬(mAb、Fab)の注入を
含む。流速は、75μL/分で一定に保たれる。解離データは、必要に応じて15分間又はそれ
より長く収集される。各注入/解離サイクルの後、結合抗体は、希酸、通常、10〜100mM H
Clの短い1分間の投入を用いて、fluポリペプチド表面から除去されるが、状況が許せば、
他の再生剤を用いる。より具体的には、結合速度k_on及び解離速度k_offの測定のために、
ポリペプチドを、標準的なアミンカップリング化学、すなわち、EDC/NHS法(EDC＝N-ジエ
チルアミノプロピル)-カルボジイミド)を用いて、センサーチップ表面に直接固定する。
簡潔に述べると、pH4又はpH5の10mM NaOAc中のポリペプチドの5〜100nM溶液を調製し、約
30〜50RU相当のポリペプチドが固定されるまで、EDC/NHS活性化表面に流す。この後、1M
のEt-NH₂を注入して、未反応の活性エステルの「キャップ」を外す。参照目的のために、
同一の固定条件下で、ポリペプチドを含まないブランク表面を調製する。適当な表面が調
製されたら、抗体試薬のそれぞれの好適な希釈系列をHBS/Tween-20中に調製し、直列につ
ながれたポリペプチドセル表面と参照セル表面の両方に流す。調製される抗体濃度の範囲
は、平衡結合定数K_Dの推定値によって異なる。上記のように、結合した抗体は、適当な再
生剤を用いて、各注入/解離サイクル後に除去される。

抗体の中和活性は、当業者に公知の任意のアッセイを用いて決定することができる。本
明細書に記載の抗体は、当業者に公知の技術を用いて、その宿主細胞受容体(すなわち、
シアル酸)へのインフルエンザウイルスの結合を阻害するその能力についてアッセイする
ことができる。例えば、インフルエンザウイルス受容体を発現する細胞は、抗体の存在下
又は非存在下でインフルエンザウイルスを含む組成物と接触させることができ、インフル
エンザウイルスの結合を阻害する抗体の能力を決定することができる。或いは、インフル
エンザウイルスのその受容体への結合を阻害する抗体の能力は、無細胞アッセイで決定す
ることができる。

他の実施態様では、本明細書に記載の方法で用いるのに好適な抗体は、インフルエンザ
ウイルスの受容体結合を阻害しないが、それでもなお本明細書に記載のアッセイで中和す
ることが分かっている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の方法に従って用いる
のに好適な抗体は、当技術分野で公知又は本明細書に記載のアッセイでウイルスと宿主膜
との融合を低減又は阻害する。

一実施態様では、ウイルスと宿主膜との融合は、レポーターを含むインフルエンザウイ
ルスと、ウイルスに感染することができる宿主細胞とを用いるインビトロアッセイでアッ
セイされる。レポーター活性が、陰性対照(例えば、対照抗体の存在下又は抗体の不在下
でのレポーター活性)と比較して阻害されるか又は低減する場合、抗体は融合を阻害する
。

(5.13.3 刺激された細胞の活性を試験するためのアッセイ)
本明細書に記載の方法に従って刺激された細胞は、例えば、関心対象のポリヌクレオチ
ド又は遺伝子(複数可)の組込み、転写、及び/又は発現、組み込まれた遺伝子のコピー数
、並びに組込みの位置について解析することができる。そのような解析は、いつでも実施
することができ、かつ当技術分野で公知の任意の方法によって実施することができる。他
の実施態様では、本明細書に記載のfluポリペプチドによる標的細胞の良好な刺激は、当
技術分野で公知又は本明細書に記載の方法を用いて、fluポリペプチドに対する中和抗体
の産生を検出することにより決定される。

ある実施態様では、刺激された細胞、例えば、DCが投与される対象を、細胞の位置、ベ
クターによって送達されるfluポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもしくは遺伝
子の発現、免疫応答の刺激(例えば、fluポリペプチドに対する中和抗体の産生)について
解析し、かつ/又は当技術分野で公知もしくは本明細書に記載の任意の方法によって、イ
ンフルエンザウイルス感染もしくはそれと関連する疾患と関連する症状についてモニタリ
ングすることができる。

レポーターアッセイを用いて、fluポリペプチドのターゲッティングの特異性を決定す
ることができる。例えば、骨髄細胞の混合集団を対象から得て、インビトロで培養するこ
とができる。fluポリペプチドを骨髄細胞の混合集団に投与することができ、fluポリペプ
チドと関連するレポーター遺伝子の発現を培養細胞でアッセイすることができる。いくつ
かの実施態様では、混合細胞集団中の刺激された細胞の少なくとも約50％、より好ましく
は、少なくとも約60％、70％、80％、又は90％、さらにより好ましくは、少なくとも約95
％は、樹状細胞である。

(5.13.4 ウイルス活性アッセイ)
本明細書に記載の抗体又はその組成物は、抗ウイルス活性についてインビトロで評価す
ることができる。一実施態様では、抗体又はその組成物は、インフルエンザウイルスの増
殖に対するその効果についてインビトロで試験される。インフルエンザウイルスの増殖は
、当技術分野で公知又は本明細書に記載の任意の方法で(例えば、細胞培養で)評価するこ
とができる。具体的な実施態様では、細胞は、0.0005及び0.001、0.001及び0.01、0.01及
び0.1、0.1及び1、もしくは1及び10のMOI、又は0.0005、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1
、0.5、1、5、もしくは10のMOIで感染させられ、補充された無血清培地とともにインキュ
ベートされる。ウイルス力価は、血球凝集素プラーク又は本明細書に記載の任意の他のウ
イルスアッセイによって上清中で測定される。ウイルス力価を評価することができる細胞
としては、EFK-2細胞、Vero細胞、MDCK細胞、初代ヒト臍静脈内皮細胞(HUVEC)、H292ヒト
上皮細胞株、及びHeLa細胞が挙げられるが、これらに限定されない。インビトロアッセイ
には、当技術分野で周知又は本明細書に記載の方法を用いて、インビトロで、培養細胞に
おけるウイルス複製の変化(例えば、プラーク形成で測定される)、或いはウイルスタンパ
ク質の産生(例えば、ウェスタンブロット解析で測定される)又はウイルスRNAの産生(例え
ば、RT-PCRもしくはノーザンブロット解析で測定される)を測定するものが含まれる。

非限定的な例では、標的哺乳動物細胞株の単層を様々な量(例えば、3プラーク形成単位
(pfu)又は5pfuの多重度)のウイルス(例えば、インフルエンザ)に感染させ、その後、様々
な希釈の抗体(例えば、0.1μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、又は10μg/ml)の存在下又は非存
在下で培養する。感染した培養物を感染から48時間後又は72時間後に回収し、適当な標的
細胞株(例えば、Vero細胞)に対する当技術分野で公知の標準的なプラークアッセイによっ
て力価を測定する。

血球凝集アッセイの非限定的な例では、細胞を抗体と接触させ、同時に又はその後(例
えば、1のMOIで)ウイルスに感染させ、ウイルス複製を可能にする条件下で(例えば、20〜
24時間)ウイルスをインキュベートする。抗体は、感染の全過程で存在することが好まし
い。次に、ウイルスの複製及びウイルス粒子の放出を、0.5％のニワトリ赤血球を用いる
血球凝集アッセイで決定する。例えば、Kashyapらの文献(PNAS USA 105:5986-5991)を参
照されたい。いくつかの実施態様では、化合物は、それが、ウイルス力価の約75％低下に
相当する少なくとも2ウェルのHAだけウイルスの複製を低減させる場合、ウイルス複製の
阻害剤とみなされる。具体的な実施態様では、阻害剤は、このアッセイで、ウイルス力価
を50％以上、55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上、85％以上
、90％以上、又は95％以上低下させる。他の具体的な実施態様では、阻害剤は、対象にお
いて、インフルエンザウイルス力価の約1log以上、約2log以上、約3log以上、約4log以上
、約5log以上、約6log以上、約7log以上、約8log以上、約9log以上、約10log以上、1〜3l
og、1〜5log、1〜8log、1〜9log、2〜10log、2〜5log、2〜7log、2log〜8log、2〜9log、
2〜10log、3〜5log、3〜7log、3〜8log、3〜9log、4〜6log、4〜8log、4〜9log、5〜6log
、5〜7log、5〜8log、5〜9log、6〜7log、6〜8log、6〜9log、7〜8log、7〜9log、又は8
〜9logの低下をもたらす。インフルエンザウイルス力価のlog低下は、陰性対照と比較し
たもの、別の治療と比較したもの、又は抗体投与前の患者における力価と比較したもので
あることができる。

(5.13.5 細胞傷害性アッセイ)
当技術分野で周知の多くのアッセイを用いて、活性化合物又はその組成物への曝露後の
細胞(感染もしくは未感染)又は細胞株の生存率を評価し、それにより、該化合物又は組成
物の細胞傷害性を決定することができる。例えば、細胞増殖は、ブロモデオキシウリジン
(BrdU)の取込み(例えば、Hoshinoらの文献(1986, Int. J. Cancer 38, 369);Campanaらの
文献(1988, J. Immunol. Meth. 107:79)を参照されたい)、(3H)チミジンの取込み(例えば
、Chen, J.の文献(1996, Oncogene 13:1395-403);Jeoung, J.の文献(1995, J. Biol. Che
m. 270:18367 73)を参照されたい)を測定することによるか、直接的な細胞カウントによ
るか、又は既知の遺伝子、例えば、癌原遺伝子(例えば、fos、myc)もしくは細胞周期マー
カー(Rb、cdc2、サイクリンA、D1、D2、D3、Eなど)の転写、翻訳、もしくは活性の変化を
検出することによってアッセイすることができる。そのようなタンパク質及びmRNA及び活
性のレベルは、当技術分野で公知の任意の方法で測定することができる。例えば、市販の
抗体を含む抗体を用いる公知の免疫診断方法、例えば、ELISA、ウェスタンブロッティン
グ、又は免疫沈降によって、タンパク質を定量することができる。当技術分野で周知かつ
ルーチンの方法を用いて、例えば、ノーザン解析、RNアーゼ保護、又は逆転写と関連した
ポリメラーゼ連鎖反応を用いて、mRNAを定量することができる。細胞生存率は、トリパン
ブルー染色又は当技術分野で公知の他の細胞生死マーカーを用いて評価することができる
。具体的な実施態様では、細胞のATPレベルを測定して、細胞生存率を決定する。

具体的な実施態様では、細胞生存率は、細胞内ATPレベルを測定する、当技術分野で標
準的なアッセイ、例えば、CellTiter-Gloアッセイキット(Promega)を用いて、3日及び7日
の期間で測定される。細胞ATPの低下は細胞傷害効果を示す。別の具体的な実施態様では
、細胞生存率は、ニュートラルレッド取込みアッセイで測定することができる。他の実施
態様では、形態変化の目視観察には、肥大、粒状度、ギザギザの縁を有する細胞、薄膜状
の外観、円形化、ウェル表面からの剥離、又は他の変化が含まれ得る。こうした変化には
、観察された細胞傷害性の程度に従って、T(100％毒性)、PVH(部分的毒性-非常に強い-80
％)、PH(部分的毒性-強い-60％)、P(部分的毒性-40％)、Ps(部分的毒性-わずか-20％)、
又は0(毒性なし-0％)という呼称が与えられる。50％細胞阻害(細胞傷害)濃度(IC₅₀)は、
これらのデータの回帰分析により決定される。

具体的な実施態様では、細胞傷害性アッセイで用いられる細胞は、初代細胞及び細胞株
を含む動物細胞である。いくつかの実施態様では、細胞はヒト細胞である。ある実施態様
では、細胞傷害性は、以下の細胞株のうちの1つ又は複数で評価される:U937、ヒト単球細
胞株;初代末梢血単核細胞(PBMC);Huh7、ヒト肝芽細胞腫細胞株;293T、ヒト胚性腎細胞株;
及びTHP-1、単球細胞。ある実施態様では、細胞傷害性は、以下の細胞株のうちの1つ又は
複数で評価される:MDCK、MEF、Huh 7.5、Detroit、又はヒト気管気管支上皮(HTBE)細胞。

活性化合物又はその組成物は、動物モデルでインビボ毒性について試験することができ
る。例えば、活性化合物の活性を試験するために用いられる、本明細書に記載の動物モデ
ル及び/又は当技術分野で公知の他のものを用いて、これらの化合物のインビボ毒性を測
定することもできる。例えば、動物に様々な濃度の活性化合物を投与する。その後、この
動物を、致死率、体重減少もしくは体重増加失敗、及び/又は組織損傷を示し得る血清マ
ーカーのレベル(例えば、全般的な組織障害の指標としてのクレアチンホスホキナーゼレ
ベル、肝障害の可能性の指標としてのグルタミン酸シュウ酸トランスアミナーゼ又はピル
ビン酸トランスアミナーゼのレベル)について経時的にモニタリングする。これらのイン
ビボアッセイは、投薬量の他に、様々な投与様式及び/又はレジメンの毒性を試験するよ
うに適合させることができる。

活性化合物の毒性及び/又は効力は、例えば、LD₅₀(集団の50％に致死的な用量)及びED₅
₀(集団の50％で治療的に有効な用量)を決定するための、細胞培養又は実験動物における
標準的な薬学的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果の間の用量比が
治療指数であり、それは、比LD₅₀/ED₅₀と表すことができる。大きい治療指数を示す活性
化合物が好ましい。毒性のある副作用を示す活性化合物を用いてもよいが、感染していな
い細胞に対する潜在的な障害を最小限に抑え、それにより、副作用を低下させるために、
そのような薬剤を罹患組織の部位にターゲッティングする送達系を設計するよう、注意を
払うべきである。

細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータは、ヒトで用いるための活性化合物
の投薬量の範囲を定める際に用いることができる。そのような薬剤の投薬量は、循環濃度
の範囲内にあることが好ましく、この範囲には、ほとんど又は全く毒性のないED₅₀が含ま
れる。投薬量は、利用される剤形及び利用される投与経路によって、この範囲内で異なり
得る。本明細書に記載の方法で用いられるどの活性化合物についても、有効用量は、最初
に細胞培養アッセイから推定することができる。用量を動物モデルで定めて、循環血漿濃
度範囲を得ることができ、この循環血漿濃度範囲には、細胞培養で測定されるIC₅₀(すな
わち、症状の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度)が含まれる。そのような情報を用
いて、ヒトでの有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例え
ば、高速液体クロマトグラフィーで測定することができる。投薬量の決定に関するさらな
る情報が本明細書で提供される。

さらに、当業者に公知の任意のアッセイを用いて、例えば、ウイルス感染又はそれと関
連する状態もしくは症状を測定することにより、本明細書に記載の活性化合物及び組成物
の予防的及び/又は治療的有用性を評価することができる。

(5.13.6 免疫応答を誘導するfluポリペプチドの能力を評価するためのアッセイ)
複数のインフルエンザウイルス株と交差反応し、かつ好ましくは、それを防御すること
ができる対象の免疫応答を生じさせるfluポリペプチドの能力は、当業者に公知又は本明
細書に記載の任意の手法を用いて評価することができる。いくつかの実施態様では、複数
のインフルエンザウイルス株と交差反応し、かつ好ましくは、それを防御することができ
る対象の免疫応答を生じさせるfluポリペプチドの能力は、対象(例えば、マウス)又は対
象の組を本明細書に記載のfluポリペプチドで免疫し、かつさらなる対象(例えば、マウス
)又は対象の組を対照(PBS)で免疫することによって評価することができる。その後、該対
象又は対象の組を複数の病原性インフルエンザウイルス株に曝露させることができ、かつ
該対象又は対象の組においてインフルエンザウイルス疾患を引き起こす病原性インフルエ
ンザウイルス株の能力を決定することができる。当業者であれば、対照で免疫された対象
又は対象の組は、病原性インフルエンザウイルス株への曝露後にインフルエンザウイルス
疾患に罹患するが、本明細書に記載のfluポリペプチドで免疫された対象又は対象の組が
、インフルエンザウイルス疾患に罹患しないならば、fluポリペプチドは、複数のインフ
ルエンザウイルス株と交差反応することができる対象の免疫応答を生じさせることができ
ることを認識するであろう。さらに、ある実施態様では、fluポリペプチドで免疫された
対象又は対象の組が、対照で免疫された対照と比べて、より短い期間、インフルエンザウ
イルス疾患に罹患するか、より短い入院時間を経験するか、インフルエンザウイルス疾患
と関連する1以上の症状の軽減/欠如を示すか、又はより短い期間現われる症状を有するな
らば、本明細書に記載のfluポリペプチドは、複数のインフルエンザウイルス株と交差反
応することができる免疫応答を生じさせることができる。対象がインフルエンザウイルス
疾患に罹患しているかどうかを決定する方法は当技術分野で公知であり、かつ本明細書に
記載されている。例えば、以下の第5.13.7節及び第6.3節を参照されたい。複数のインフ
ルエンザウイルス株と、又は複数の血球凝集素亜型と簡単に交差反応する抗血清を誘導す
るfluポリペプチドの能力は、イムノアッセイ、例えば、ELISAによって試験することがで
きる。

(5.13.7 動物におけるインフルエンザ活性をアッセイする方法)
活性化合物及びその組成物は、ヒトで用いる前に所望の治療的又は予防的活性について
インビボでアッセイすることが好ましい。例えば、インビボアッセイを用いて、活性化合
物又はその組成物及び/又は別の療法を投与することが好ましいかどうかを決定すること
ができる。例えば、インフルエンザウイルス疾患を予防するための活性化合物又はその組
成物の使用を評価するために、動物をインフルエンザウイルスに感染させる前に組成物を
投与することができる。或いは、又はさらに、動物をインフルエンザウイルスに感染させ
るのと同時に、活性化合物又はその組成物を動物に投与することができる。インフルエン
ザウイルス感染又はそれと関連する疾患を治療するための活性化合物又はその組成物の使
用を評価するために、動物をインフルエンザウイルスに感染させた後に化合物又は組成物
を投与することができる。具体的な実施態様では、活性化合物又はその組成物は、動物に
2回以上投与される。

活性化合物及びその組成物は、限定するものではないが、ラット、マウス、ニワトリ、
ウシ、サル、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ウサギ、モルモットなどを含む動物モデル系で
、抗ウイルス活性について試験することができる。具体的な実施態様では、活性化合物及
びその組成物は、マウスモデル系で試験される。そのようなモデル系は広く用いられてお
り、かつ当業者に周知である。具体的な実施態様では、活性化合物及びその組成物は、マ
ウスモデル系で試験される。インフルエンザウイルスのための動物モデルの非限定的な例
がこの節で提供される。

一般に、動物をインフルエンザウイルスに感染させ、同時に又はその後に、活性化合物
もしくはその組成物、又はプラセボで処置する。或いは、動物を、活性化合物もしくはそ
の組成物、又はプラセボで処置し、その後、インフルエンザウイルスに感染させる。これ
らの動物から得られる試料(例えば、血清、尿、痰、精液、唾液、血漿、又は組織試料)は
、当技術分野で周知の方法、例えば、ウイルス力価の変化(例えば、プラーク形成で測定
される)、ウイルスタンパク質の産生(例えば、ウェスタンブロット、ELISA、もしくはフ
ローサイトメトリー解析で測定される)、又はウイルス核酸の産生(例えば、RT-PCRもしく
はノーザンブロット解析で測定される)を測定する方法によって、ウイルス複製について
試験することができる。組織試料中のウイルスの定量のために、組織試料を、リン酸緩衝
食塩水(PBS)中でホモジナイズし、透明になったホモジネートの希釈物を、細胞(例えば、
Vero、CEF、又はMDCK細胞)の単層上へ37℃で1時間吸着させる。他のアッセイでは、組織
病理学的評価、好ましくは、ウイルスが感染の標的にすることが知られている器官(複数
可)の評価を感染後に実施する。ウイルス特異的モノクローナル抗体を用いて、ウイルス
免疫組織化学検査を実施することができる。

活性化合物もしくはその組成物が投与される感染対象におけるウイルスの力価、活性化
合物もしくはその組成物が投与される感染対象の生存期間、活性化合物もしくはその組成
物が投与される感染対象における免疫応答、活性化合物もしくはその組成物が投与される
感染対象における症状の数、持続時間、及び/もしくは重症度、並びに/又は活性化合物も
しくはその組成物が投与される感染対象における1以上の症状の開始までの時間が評価さ
れるインビボアッセイを用いて、ウイルスの病原性に対する活性化合物又はその組成物の
効果を決定することもできる。当業者に公知の技術を用いて、そのような効果を測定する
ことができる。ある実施態様では、活性化合物又はその組成物は、未処置の対象と比べて
、0.5倍、1倍、2倍、4倍、6倍、8倍、10倍、15倍、20倍、25倍、50倍、75倍、100倍、125
倍、150倍、175倍、200倍、300倍、400倍、500倍、750倍、もしくは1,000倍、又はそれよ
り大きいインフルエンザウイルスの力価の低下をもたらす。いくつかの実施態様では、活
性化合物又はその組成物は、未処置の対象と比べて、約1log以上、約2log以上、約3log以
上、約4log以上、約5log以上、約6log以上、約7log以上、約8log以上、約9log以上、約10
log以上、1〜3log、1〜5log、1〜8log、1〜9log、2〜10log、2〜5log、2〜7log、2log〜8
log、2〜9log、2〜10log、3〜5log、3〜7log、3〜8log、3〜9log、4〜6log、4〜8log、4
〜9log、5〜6log、5〜7log、5〜8log、5〜9log、6〜7log、6〜8log、6〜9log、7〜8log、
7〜9log、又は8〜9logのインフルエンザウイルスの力価の低下をもたらす。

インフルエンザウイルスに対する抗ウイルス剤の試験用に開発された、インフルエンザ
ウイルス動物モデル、例えば、フェレット、マウス、モルモット、リスザル、マカク、及
びニワトリが記載されている。例えば、Sidwellらの文献(Antiviral Res., 2000, 48:1-1
6);Lowen A.C.らの文献(PNAS., 2006, 103:9988-92);及びMcCauleyらの文献(Antiviral R
es., 1995, 27:179-186)及びRimmelzwannらの文献(Avian Diseases, 2003, 47:931-933)
を参照されたい。インフルエンザのマウスモデルについて、インフルエンザ感染マウスに
投与される活性化合物の抗ウイルス活性をアッセイするために用いることができるパラメ
ータの非限定的な例としては、肺炎関連死、血清α1酸糖タンパク増加、動物体重、血球
凝集素によってアッセイされる肺ウイルス、プラークアッセイによってアッセイされる肺
ウイルス、及び肺の組織病理学的変化が挙げられる。統計解析を実施して、有意性(例え
ば、0.05以下のP値)を計算する。

他のアッセイでは、動物モデル対象の感染後に、組織病理学的評価を行なう。鼻甲介及
び気管を、上皮変化及び上皮下炎症について調べることができる。肺を、細気管支上皮の
変化、及び大、中、小、又は末端細気管支における細気管支周囲炎症について調べること
ができる。肺胞を、炎症性変化についても評価する。中細気管支は、以下のように、0〜3
+のスコアで等級付けられる:0(正常:繊毛性頂端境界及び基底偽重層核を有する中位から
高い円柱状の上皮細胞により裏打ちされている;最小限の炎症);1+(輪郭が円柱状かつ均一
で増殖がわずかに増加した上皮層;繊毛がなおも多くの細胞に見られる);2+(減弱から顕著
な増殖までの範囲の上皮層における顕著な変化;破壊された細胞及び管腔境界での不規則
な層輪郭);3+(著しく破壊され、無秩序になった上皮層、内腔には壊死細胞が見られる;減
弱した細気管支もあれば、反応性増殖が顕著な細気管支もある)。

気管は、以下のように、0〜2.5+のスコアで等級付けられる:0(正常:繊毛性頂端境界、
基底偽重層核を有する中位から高い円柱状の上皮細胞により裏打ちされている。頂端境界
と核との間に明らかな細胞質。時折見られる扁平上皮細胞の小さな増殖巣);1+(上皮層の
限局的扁平上皮化生);2+(上皮層の大部分の広範囲の扁平上皮化生、繊毛は限局的に明白
な場合がある);2.5+(明白な繊毛が極めて少ない広範囲の扁平上皮化生)。

ウイルス免疫組織化学は、ウイルス特異的モノクローナル抗体(例えば、NP-、N-、又は
HN-特異的モノクローナル抗体)を用いて行なわれる。染色は、以下のように、0〜3+に等
級付けられる:0(感染細胞なし);0.5+(ほとんど感染細胞なし);1+(ほとんど感染細胞なし
、広く離れた個々の細胞として);1.5+(ほとんど感染細胞なし、広く離れた単体として、
及び小クラスターで);2+(通常、上皮層が裏打ちする細気管支の一部の、又は肺胞内の小
さな小葉下病巣(sublobular foci)の、隣接細胞のクラスターを侵す、適度な数の感染細
胞);3+(細気管支の上皮層の大部分を侵すか、又は肺胞内の大きな小葉下病巣に広がる、
多数の感染細胞)。

一例では、ウイルス感染の動物モデルで肺病変を誘導し、感染を引き起こす能力を、野
生株ウイルス及び模擬ウイルスを用いて比較する。肺病変は、目視検査で健康である肺葉
の割合として評価することができる。ペントバルビタールの静脈内投与によって感染5日
後に動物を安楽死させ、その肺全体を取り出す。肉眼的病変に侵された各肺葉の表面の割
合を目視で見積もる。割合を平均化して、各動物の7つの肺葉についての平均値を得る。
他のアッセイでは、鼻スワブを検査して、ウイルス負荷量又は力価を測定することができ
る。検死時に鼻スワブを採取して、感染後のウイルス負荷量を測定することができる。

一実施態様では、ウイルスを組織試料中で定量する。例えば、組織試料をリン酸緩衝食
塩水(PBS)中でホモジナイズし、透明になったホモジネートの希釈物を、細胞(例えば、MD
CK細胞)の単層上へ37℃で1時間吸着させる。次に、感染させた単層に、0.1％ウシ血清ア
ルブミン(BSA)、0.01％DEAE-デキストラン、0.1％NaHCO₃、及び1％寒天を含む最小必須培
地の溶液を重層する。プラークを可視化することができるまで、プレートを2〜3日インキ
ュベートする。PR8感染試料由来のウイルスの力価を測定する(titrate)ための組織培養感
染量(TCID)アッセイを以下のように実施する。96ウェルプレート中の細胞(例えば、MDCK
細胞)のコンフルエントな単層を、培地中の透明になった組織ホモジネートの対数希釈物
とともにインキュベートする。接種の2〜3日後に、血球凝集アッセイ(HAアッセイ)で、各
ウェルからの0.05mlのアリコートをウイルス増殖について評価する。

(5.13.8 ヒトにおけるインフルエンザ活性をアッセイする方法)
一実施態様では、活性化合物又はその組成物を感染ヒト対象で評価する。この実施態様
に従って、活性化合物又はその組成物をヒト対象に投与し、ウイルス複製及び/又は生存
に対する活性化合物又は組成物の効果を、例えば、生物学的試料(例えば、血清又は血漿)
中のウイルス又はウイルス核酸のレベルを解析することにより決定する。ウイルス複製及
び/又は生存を変化させる活性化合物又はその組成物は、対照で処置した対象又は対象群
におけるウイルス複製及び/又は生存のレベルを、活性化合物又はその組成物で処置した
対象又は対象群におけるウイルス複製及び/又は生存のレベルと比較することによって同
定することができる。或いは、ウイルス複製及び/又は生存の変化は、活性化合物又はそ
の組成物の投与の前後で対象又は対象群におけるウイルス複製及び/又は生存のレベルを
比較することによって同定することができる。当業者に公知の技術を用いて、生物学的試
料を得て、mRNA又はタンパク質の発現を解析することができる。

別の実施態様では、インフルエンザウイルス感染/疾患と関連する1以上の症状の重症度
に対する活性化合物又はその組成物の効果を感染対象で評価する。この実施態様に従って
、活性化合物もしくはその組成物又は対照をインフルエンザウイルス感染に罹患している
ヒト対象に投与し、ウイルス感染の1以上の症状に対する活性化合物又は組成物の効果を
決定する。1以上の症状を軽減する活性化合物又はその組成物は、対照で処置した対象を
活性化合物又は組成物で処置した対象と比較することによって同定することができる。別
の実施態様では、活性化合物又はその組成物を健康なヒト対象に投与し、ワクチンとして
の効力についてモニタリングする(例えば、対象を、インフルエンザウイルス感染の症状
の開始;入院の減少、対象に感染するインフルエンザウイルスの能力;並びに/又はインフ
ルエンザウイルス感染と関連する1以上の症状及び/もしくは症状の持続時間の低減/欠如
についてモニタリングする)。感染性疾患を熟知している医師に公知の技術を用いて、活
性化合物又はその組成物がインフルエンザウイルス疾患と関連する1以上の症状を軽減す
るかどうか決定することができる。

(5.14 キット)
本明細書に記載の医薬組成物の1以上の成分、例えば、本明細書で提供される1以上の活
性化合物を充填した1以上の容器を含む医薬パック又はキットが本明細書で提供される。
医薬又は生物学的製品の製造、使用、又は販売を規制する行政機関によって規定された形
式での通知を、そのような容器(複数可)に任意で関連付けることができ、その通知は、こ
の機関による、ヒト投与のための製造、使用、又は販売の承認を示している。

本明細書に包含されるキットは、上記の方法で用いることができる。一実施態様では、
キットは、1以上の容器中に、本明細書に記載の活性化合物、好ましくは1以上のインフル
エンザfluポリペプチドを含む。ある実施態様では、キットは、本明細書に記載のワクチ
ン、例えば、スプリットウイルスワクチン、サブユニットワクチン、不活化インフルエン
ザウイルスワクチン、又はインフルエンザ生ウイルスワクチンを含む。

(6.実施例)
(6.1 モノクローナル抗体12D1)
この実施例は、抗インフルエンザウイルス抗体のモノクローナル抗体12D1が、HA2の長
いα-ヘリックスと反応することを示す。

(6.1.1 材料及び方法)
(6.1.1.1 切断型血球凝集素サブユニット2(HA2))
A/HK/1/68 HAの全コード領域をウイルスRNAから逆転写して、増幅し、その後、pCAGGs
発現ベクターにサブクローニングした。切断型のHA2部分をpCAGGs-HK68 HAからのPCR増幅
で生成させ、pCAGGs-緑色蛍光タンパク質(GFP)発現プラスミドにサブクローニングした。
したがって、得られたプラスミドは、切断型HA2の一部に融合されたGFPをコードする発現
ベクターからなる。全てのコンストラクトをシークエンシングし、確認した。

(6.1.1.2 ウェスタンブロット)
ブロットを、以前に記載されている方法で作製した(Towbinらの文献(Proc Natl Acad S
ci U S A, 1979. 76(9):4350-4))。試料を、SDSと0.6M DTTを含むローディング緩衝液中
、100℃で5分間煮沸した。免疫沈降した複合体、細胞ライセート、又は精製ウイルスを、
4-20％Tris-HCl SDS-PAGEゲル(Bio-Rad社)で分離し、試料をProtranニトロセルロース膜(
Whatman)にブロッティングした。GFP及び融合GFP-HA切断型ペプチドを、ウサギ抗GFP(San
ta Cruz Biotechnology社)及び/又はmAb 12D1を用いて検出した。二次抗体は、抗ウサギI
gG HRP(Dako)及び抗マウスIg(GE Healtchare社)であった。

(6.1.1.3 免疫沈降)
293T細胞に、Lipofectamine 2000(Invitrogen社)を用いて、GFP-切断型HA2融合タンパ
ク質をコードする様々なpCAGGをトランスフェクトした。トランスフェクションの24時間
後、細胞を放射性免疫沈降アッセイ(RIPA)緩衝液を用いて溶解させ、切断型融合ペプチド
を、プロテインG-アガロース(Roche社)に結合した1〜5μgのmAb 12D1を用いて、4℃で一
晩、免疫沈降した。免疫沈降物を、還元及び変性条件下のウェスタンブロッティングによ
り解析した。

(6.1.1.4 ELISA)
96ウェルプレート(Nunc Immulon 2)に、PBS中、4℃で一晩、2ug/mlのHApep-KLHコンジ
ュゲート(図2B)又は精製HA(図2A、C)をコーティングした。プレートを、室温で30分間、1
％BSA/PBSでブロッキングし、PBS/.025％Tweenで2回洗浄した。抗体又は抗血清を1％BSA/
PBSに連続希釈し、プレートに添加し、その後、37℃で3時間インキュベートした。プレー
トを3回洗浄し、1:2000希釈した抗マウス-AP(Southern Biotech)をウェルに添加し、その
後、37℃で3時間インキュベートした。その後、P-ニトロフェニルホスフェート(PNPP)基
質をウェルに添加し、室温で20〜30分間、発色させておいた。光学密度測定値を405nmで
記録した。

(6.1.2 結果)
図1に示すように、mAb 12D1は、HA2分子のアミノ酸76-130の領域内で反応する;この領
域は、HA2の「長いα-ヘリックス」を含む。mAb 12D1は、(ウイルス曝露前のmAb 12D1の
受動移入によって示される)H3ウイルス感染に対するインビボでの防御活性を有すること
が知られている。

(6.2 fluポリペプチドの設計及び産生)
HA2の76-130領域による免疫は、H3亜型又は複数の亜型のインフルエンザウイルスに対
する同様に防御的な免疫応答を誘発し得るという仮説を立てた。

HA2の76-130ペプチドの免疫原性を増大させるために、8つのアミノ酸と、それに続くシ
ステイン残基からなる、C末端スペーサードメインを有するコンストラクトを設計した。
このシステイン残基は、一級アミンを介するキャリアタンパク質キーホールリンペットヘ
モシアニン(KLH)との結合を促進する。血清半減期を増大させるために、このペプチドをN
末端でアセチル化した。

KLHコンジュゲート内の長いα-ヘリックスの構造的完全性を確認するために、このコン
ジュゲートに対するmAb 12D1の結合を直接結合ELISAで試験し、12D1結合領域が無傷であ
ることを見出した(図1B)。

(6.2.1 mAb 12D1のHA2結合領域)
12D1モノクローナル抗体(mAb)と同様の抗体を誘発し得るH3血球凝集素の領域の内容(id
entity)を検討した。抗H3 mAbの存在下でのA/HK/1968ウイルスの16回の継代は、結合エピ
トープの同定を助けたかも知れないエスケープ変異体を生じさせなかった。プラークアッ
セイでA/HK/1968ウイルスを50ug/mlのmAb 12D1とインキュベートした後に存在した6つの
プラークの血球凝集素をシークエンシングし、野生型血球凝集素からの変化は全く見られ
なかった。mAb 12D1は、インビボでインフルエンザ疾患からの防御を仲介し、ウェスタン
ブロットによる変性した血球凝集素単量体との反応性からも明らかなように、ウイルス血
球凝集素の連続的エピトープと反応する(三量体構造は必要とされない)ので、12D1結合エ
ピトープに焦点を合わせた。GFPに融合した様々な長さの血球凝集素セグメントからなる
切断型血球凝集素コンストラクトを作製した。GFP発現を利用して、トランスフェクトさ
れた293T細胞でのコンストラクトの発現を評価した。切断型血球凝集素コンストラクトの
解析により、12D1パラトープは、アミノ酸30〜106の領域でHA2サブユニットと優先的に相
互作用することが明らかになった。76-184及び91-184切断体におけるGFP発現の減少を伴
わない12D1結合の減少は、106-184切断体との結合の喪失と併せて、12D1結合がHA2 76-10
6領域内のアミノ酸との接触に依存することを示唆した(図1)。12D1の最小結合部位をさら
に絞り込むために、さらなる切断型HAを設計及び構築した。その中で、HA2の長いα-ヘリ
ックスに相当する、aa 76からaa 130に及ぶ領域は、ウェスタンブロットで12D1によって
検出されただけでなく、免疫沈降でも陽性であった。

これらの30アミノ酸は、HA2の長いα-ヘリックスの膜遠位半分に含まれる。12D1パラト
ープは、ウェスタンブロットによる結合に必要でない(HA1又はHA2中の)この領域の外側の
アミノ酸とさらに接触する可能性がある。

(6.3. fluポリペプチドによって誘導された血清抗体は、複数のHA亜型と反応する)
(6.3.1 材料及び方法)
ウェスタンブロット及びELISAを上の第6.1.1節に記載の通りに実施した。

(6.3.2 結果)
図3に示すように、fluポリペプチド(76-130)-KLH(「HApep-KLH」)は、強力な免疫原と
して作用し、HApep-KLHによって誘発された血清抗体は、複数の血球凝集素亜型と反応す
る。

HApep-KLHコンストラクトの免疫原としての効力を評価するために、一次免疫及び二次
免疫の10日後にマウスから血清を採取した。これらの血清を、組換えで発現され、精製さ
れた異なる亜型の血球凝集素との反応性について試験した。まず、HApep-KLHワクチンコ
ンストラクトは、精製された血球凝集素タンパク質と反応する血清抗体を実際に誘発する
ことが分かった。次に、二次免疫後の抗HA力価の顕著な増加が明らかであり、このコンス
トラクトが、実際にマウスで強力な液性免疫応答を誘発するように作用することを示した
。最後に、HApep-KLH抗血清の異種亜型反応性が興味深かった。免疫マウス由来の血清は
、H3、H1、H2、H9、及びH7亜型の血球凝集素との結合活性を示した。

(6.4 fluポリペプチドによる免疫は、マウスを致死的ウイルス曝露から防御する)
(6.4.1.材料及び方法)
6〜8週齢のBALB/Cマウス(Jackson Laboratories)を、皮下投与により、完全フロイント
アジュバント(Sigma)中の25ugのHApep-KLH又はKLHのみで免疫した。一次免疫の3週間後、
マウスを、不完全フロイントアジュバント中の25ugのHApep-KLH又はKLHのみで追加免疫し
た。追加免疫の2〜3週間後、マウスをウイルスに曝露させた。ウイルス感染前に、ケタミ
ン(75mg/kg体重)/キシラジン(15mg/kg体重)混合物の腹腔内投与によりマウスに麻酔した
。ウイルスを合計50ugのPBSに入れて鼻腔内投与し;曝露用量は、40,000pfuのX31又は500p
fuのPR8からなっていた。体重を毎日モニタリングした。

(6.4.2.結果)
図4に示すように、fluポリペプチド(76-130)-KLH(「HApep-KLH」)による免疫は、マウ
スを致死的曝露から防御する。

マウスを、プライム-ブースト免疫スケジュールでの皮下投与により、25ugのHApep-KLH
で免疫した。免疫に3週間の間隔を空け、二次免疫の2〜3週間後に、マウスをウイルスに
曝露させた。ウイルス曝露後、疾患重症度の出力としてマウス重量を毎日記録した。HApe
p-KLHによる免疫は、香港/1/1968(H3)由来のHA及びNAを発現するマウス適合性ウイルスで
あるX31の致死的曝露から100％のマウスを防御することが分かった(図3B)。HApep-KLHコ
ンストラクトで免疫したマウス又はPBSを投与したマウスの平均重量は、全ての日で有意
に異なっていた(図3A)。

同様の曝露実験において、マウスに致死用量のマウス適合性PR/8ウイルス(H1)を投与し
た。曝露の7日後までに、PBSを投与されたマウスは全て疾患で死んでいたが、HApep-KLH
ワクチンを投与されたマウスの80％は防御された(図4A)。H1亜型血球凝集素に対する血清
抗体力価は、ウイルス曝露後の日々の体重変化と相関することが分かった(4B)。

(6.5 fluポリペプチドによるワクチン接種は、異なるウイルス亜型に対する防御を提供
する)
この実施例は、fluポリペプチドが、構造的に分岐した亜型H3N2、H1N1、及びH5N1のイ
ンフルエンザウイルスに対するマウスにおける防御を提供することができることを示す。

(6.5.1 材料及び方法)
(6.5.1.1 ウイルス及び精製血球凝集素)
使用したウイルスは:X31ウイルス(A/香港/1/1968の血球凝集素及びノイラミニダーゼ、
残りの6つのセグメントはPR8由来)、A/プエルトリコ/8/34(PR8)ウイルス、A/USSR/90/197
7ウイルス、A/ジョージア/81ウイルス、HAloウイルス(ポリ塩基性切断部位を除去するよ
う修飾された血球凝集素を有するA/ベトナム/4/2005ウイルス)であった。使用した精製血
球凝集素は:A/香港/1/1968;A/ブリスベン/10/2007;A/ベトナム/12032004(H5);A/シンガポ
ール/1/57(H2);A/コガモ(teal)/HK/312/97(H6);A/オランダ/219/2003(H7);A/HK/1073/99(
H9);及びA/カリフォルニア/04/2009(H1)由来のものであった。

(6.5.1.2 ウェスタンブロット)
ブロットを、以前に記載されている方法で作製した(Towbinらの文献((1979)Proc Natl
Acad Sci U S A 76(9):4350-4354)を参照されたい)。試料を、SDSと0.6M DTTを含むロー
ディング緩衝液中、100℃で5分間煮沸した。免疫沈降した複合体、細胞ライセート、又は
精製ウイルスを、4-20％Tris-HCl SDS-PAGEゲル(Bio-Rad社)で分離し、試料をProtranニ
トロセルロース膜(Whatman)にブロッティングした。GFP及び融合GFP-HA切断型ペプチドを
、ウサギ抗GFP(Santa Cruz Biotechnology社)及び/又はmAb 12D1を用いて検出した。二次
抗体は、抗ウサギIgG HRP(Dako)及び抗マウスIg(GE Healtchare社)であった。

(6.5.1.3 免疫沈降)
A/HK/1/68 HA2の76-130(LAH)領域をウイルスRNAのPCR増幅で作製し、pCAGG-緑色蛍光タ
ンパク質(GFP)プラスミドにサブクローニングした(Baslerらの文献(2001)Proc Natl Acad
Sci U S A 98(5):2746-2751を参照されたい)。GFPは、HA2切断体のN末端に存在していた
。293T細胞に、Lipofectamine 2000(Invitrogen社)を用いて、GFP-LAHコンストラクトを
トランスフェクトした。トランスフェクションの24時間後、細胞を、放射性免疫沈降アッ
セイ(RIPA)緩衝液を用いて溶解させ、GFP-LAH融合タンパク質を、プロテインG-アガロー
ス(Roche社)に結合した1〜5μgのmAb 12D1を用いて、4℃で一晩、免疫沈降した。

(6.5.1.4 長いαヘリックス-KLHワクチン)
使用したA/HK/1/68 HA2 LAHポリペプチド(アミノ酸76-130)配列は:

であった。このコンストラクトはN末端でアセチル化されており、かつH3 A/香港/1/1968
HA2分子のアミノ酸76-130と、それに続くFLAG-タグ

と、それに続くシステインからなっていた。このポリペプチドを、チオールと一級アミン
の共役によって、キャリアタンパク質キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)に結合さ
せた。このコンジュゲートは、CHI Scientific社(Maynard, MA USA)により製造された。

(6.5.1.6 ELISA)
96ウェルプレート(Nunc Immulon 2)に、PBS中、4℃で一晩、2μg/mlのLAH-KLHコンジュ
ゲート(図7B)、精製血球凝集素(図7A、C)、又はインフルエンザウイルスワクチン(BEI Re
sourcesから入手した、FLUVIRON(R))精製表面抗原(Novartis Vaccines)をコーティングし
た。プレートを、室温で30分間、1％BSA/PBSでブロッキングし、PBS/.025％Tweenで2回洗
浄した。抗体、抗血清、又は2008〜2009年の三価不活化インフルエンザウイルスワクチン
(TIV)をワクチン接種した個体由来の血清を1％BSA/PBSに連続希釈し、プレートに添加し
、その後、37℃で3時間インキュベートした。抗flag抗体(Sigma)を、LAH-KLHコンジュゲ
ートをコーティングしたウェル中で陽性対照として用いた。プレートを3回洗浄し、1:200
0希釈した抗マウスアルカリホスファターゼ(AP)(Southern Biotech)をウェルに添加し、
その後、37℃で3時間インキュベートした。ヒト血清については、抗ヒトIgG(Fc特異的)-A
P(Sigma)抗体を1:500希釈で用いた。1:500希釈の抗ウサギIg-AP(Southern Biotech)を抗f
lag抗体の二次抗体として用いた。その後、P-ニトロフェニルホスフェート(PNPP)基質を
ウェルに添加し、室温で20〜30分間、発色させておいた。光学密度測定値を405nmで記録
した。

(6.5.1.6 マウス免疫及び曝露実験)
6〜8週齢のBALB/Cマウス(Jackson Laboratories)を、皮下投与により、完全フロイント
アジュバント(Sigma)中の25μgのLAH-KLH、HA2、KLHのみ、又はPBSで免疫した。一次免疫
の3週間後、マウスを、不完全フロイントアジュバント中の25μgの同じ免疫原又はPBSで
追加免疫した。追加免疫の2〜3週間後、マウスをウイルスに曝露させた。ウイルス感染前
に、ケタミン(75mg/kg体重)/キシラジン(15mg/kg体重)混合物の腹腔内投与によりマウス
に麻酔した。ウイルスを合計50μlのPBSに入れて鼻腔内投与し;曝露用量は、4×10⁵pfuの
X31又は500pfuのPR8もしくはHAloウイルスからなっていた。体重を毎日モニタリングした
。受動移入実験のために、KLHもしくはLAH-KLHによる最後の免疫の2週間後、又はPR8ウイ
ルスもしくはA/香港/1/1968ウイルスの感染から3週間後に、マウスから採血した。マウス
由来の血清をワクチン接種抗原又はウイルス感染に従ってプールし、200μlの血清を、50
pfuのPR8ウイルス又は3700pfuのジョージア/81ウイルスのいずれかに感染させる2時間前
に腹腔内投与によって、各レシピエントマウスに移入した。感染の2日後に、肺力価をプ
ラークアッセイで評価した。

(6.5.2 結果)
マウスモノクローナル抗体12D1は、HA2分子の連続的部分に結合し、H3亜型のインフル
エンザウイルスに対する広範な中和活性を有する。HA2分子の短い領域を発現するように
設計されたコンストラクトを作製することにより、mAb 12D1が、このタンパク質の高度に
保存された「長いα-ヘリックス」(LAH)領域内のアミノ酸に結合することが明らかにされ
た。mAb 12D1と相互作用する血球凝集素の部分は、当初は、様々な長さの複数のHA2切断
を用いた結合データの解釈によって同定された。累積的な切断データに基づいて、mAb 12
D1は、HA2の76-106領域内で結合することが明らかにされた(Wangらの文献(2010)PLoS Pat
hog 6(2):e1000796を参照されたい)。しかしながら、その後の研究から、H3ウイルスA/香
港/1/1968のLAH全体(アミノ酸76-130)に相当するペプチドが、mAb 12D1による最大結合の
ための必要な構造エレメントを提供することが明らかになった(図7A)。HA2のこの領域、
アミノ酸76-130を293T細胞で発現させ、mAb 12D1でプルダウンした(図7B)。HA2の76-130
領域による免疫が、mAb 12D1の抗体レパートリーとの機能的類似性を有する抗体レパート
リーを誘発し、かつH3亜型又は複数の亜型のインフルエンザウイルスに対する防御を提供
することができるかどうかをこのようにして決定した。

LAHと、8アミノ酸のC末端スペーサードメイン(FLAG-タグ)と、それに続くシステイン残
基からなるコンジュゲートワクチンを設計することにより、76-130ポリペプチド(LAH)の
抗原性を増強させた。システイン残基は、チオールと一級アミンを介したキャリアタンパ
ク質キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)への結合を促進する。血清半減期を延長さ
せるために、LAHペプチドをN末端でアセチル化した(Werle及びBernkop-Schnurchの文献(2
006)Amino Acids 30(4):351-367を参照されたい)。このコンジュゲート中のmAb 12D1結合
領域の構造完全性を直接結合ELISAにより確認した(図7C)。

このコンストラクトをインビボで試験するために、免疫と免疫の間を3週間空けるプラ
イム-ブーストスケジュールで、マウスをLAH-KLHコンジュゲートで免疫した。一次免疫と
二次免疫の10日後に、マウスから血清を採取した。このコンジュゲートを関連する特異性
の抗体の産生を誘発するその能力について評価するために、抗血清を、異なる亜型の精製
血球凝集素タンパク質との反応性について試験した。まず、LAH抗血清は、ELISAとウェス
タンブロットの両方で血球凝集素タンパク質と反応することが分かった(図8A〜C)。次に
、二次免疫後の抗HA力価の顕著な増加は、このコンストラクトがマウスで生産的な免疫原
として作用することを示した(図8A及び8B)。最後に、免疫マウス由来の血清は、実質的な
異種亜型結合活性を有していた。抗LAH血清は、ELISAで、1968パンデミックH3ウイルスA/
香港/1/1968、2009パンデミックH1ウイルスA/カリフォルニア/04/09由来の血球凝集素、
並びにH2、H5、及びH7亜型の血球凝集素との活性を示した(図8D)。これらの亜型由来の血
球凝集素の76-130領域のアラインメントは、アミノ酸配列及びアミノ酸種類における高度
の保存を示している(図8E)。さらなる血清学的解析は、LAH-KLHワクチン接種で生成され
た抗体が、ウイルス血球凝集素に特異的な血清IgM及びIgG亜型を増加させることを示した
。IgG亜型の顕著な増加は、T細胞依存的抗体産生を示し、かつ親和性成熟した抗血球凝集
素応答を示唆している(図8F)(Jumperらの文献(1994)J Immunol 152(2):438-445を参照さ
れたい)。

二次免疫の2〜3週間後、4×10⁵pfuの、1968パンデミックH3インフルエンザウイルスの
血球凝集素及びノイラミニダーゼを発現するマウス適合性ウイルスX31を鼻腔内投与によ
り、マウスに投与した。LAH-KLHコンストラクトで免疫したマウスは、アジュバントとと
もにPBSを投与したマウスよりも、全ての時点において有意に体重の減少が少なかった。
さらに、免疫マウスは全て曝露を切り抜けて生き残ったが、対照マウスは、感染のために
4日目までに死亡した(図9A及び9B)。

次に、免疫マウスを、ヒトインフルエンザ疾患を引き起こすが、H3亜型ウイルスとは異
なる系統発生学的クラスに属する他のウイルス亜型に曝露させた(Fields BN, Knipe DM,
＆ Howley PMの文献(2007) フィールズのウイルス学(Fields' virology)(Lippincott Wil
liams ＆ Wilkins, Philadelphia)第5版pp 2 v.(xix, 3091, I-3086 p.)を参照されたい)
。マウスに、500pfu(10〜15mLD50)のマウス適合性H1ウイルスPR8、又はウイルス血球凝集
素のポリ塩基性切断部位を除去するように修飾された500pfuの高病原性鳥インフルエンザ
ウイルスH5を感染させた(Steelらの文献(2009)J Virol 83(4):1742-1753を参照されたい)
。LAH-KLHコンジュゲートのワクチン接種は、感染の間ほぼ毎日、極めて有意な程度まで
、H1及びH5インフルエンザ疾患によって引き起こされる体重減少から防御した。ワクチン
を接種し、PR8に感染させたマウスは、体重減少の動態の有意な遅延を示したが、ワクチ
ンを接種し、H5鳥ウイルスに感染させたマウスの60％は、致死的曝露を切り抜けて、感染
後10日まで生き残った(図9C〜F)。

後にPR8に感染させたマウス由来の曝露前血清の解析により、血球凝集素特異的抗体力
価と感染後の日々の体重増加との間の正の相関が明らかになった(図10A)。(抗H1血清抗体
で)生産的に免疫した動物は、感染後1〜3日の間、体重を増やしたが、H1特異的抗体を持
たない動物は、この臨界期(critical period)に体重を落とした。これらのデータにより
、LAH-KLHワクチン接種によって誘導される抗体は、疾患からのマウスの防御における必
要不可欠な成分であることが示唆された。

防御における抗LAH抗体の役割をさらに調べるために、インビボ受動移入実験を行なっ
た。感染の2時間前に、レシピエントマウスに、H1もしくはH3ウイルスに感染させたか、K
LHのみをワクチン接種したか、又はLAH-KLHワクチンをワクチン接種したドナーマウス由
来の200μlの血清を腹腔内投与により投与した。その後、レシピエントマウスに、ヒト季
節性H3ウイルスのA/ジョージア/81、又はH1ウイルスPR8を感染させた。感染2日後、肺力
価を評価した。LAH-KLH抗血清の移入は、ヒト季節性H3ウイルス(p＝.0009)又はH1(p＝.00
08)ウイルスのいずれかに感染させた動物で肺力価を有意に低下させることが分かった(図
10B及び10C)。この移入実験は、LAHコンストラクトが、ワクチン接種したマウスで中和抗
体を誘導することを示唆している。

次に、ヒトにおける季節性インフルエンザワクチン接種が血球凝集素のLAH領域に特異
的な抗体を誘導するかどうかを調べた。この可能性を探るために、2008〜2009年の三価不
活化インフルエンザウイルスワクチン(TIV)による免疫の前後に採取されたヒト血清中の
結合活性を評価した。この季節性ワクチン組成物は、A/ブリスベン/59/2007(H1N1)様ウイ
ルス、A/ブリスベン/10/2007(H3N2)様ウイルス、及びB/フロリダ/4/2006様ウイルスを含
んでいた(Administration UFaD(2010)2008〜2009年シーズンのためのインフルエンザウイ
ルスワクチン(Influenza Virus Vaccine for the 2008-2009 Season)を参照されたい)。
ヒト患者由来の血清試料を、ワクチン応答の尺度としての季節性TIV組成物に対するIgG抗
体力価のワクチン接種後の上昇について評価した。LAHペプチドに特異的な最小量の血清
抗体は、季節性ワクチン接種に対する最も高い応答を示す対象でも検出された(図10D及び
10E)。

図8Dに示すように、LAH-KLH抗血清に見られる反応性の幅は、以前に血球凝集素ストー
クワクチンコンストラクトの研究で記載されたものよりも大きい(Bommakantiらの文献(20
10)Proc Natl Acad Sci U S A;及びSteelの文献(2010)mBio 1(1):1-9を参照されたい)。
この幅広い応答の誘発におけるコンジュゲート複合体の設計の重要性を調べるために、LA
H-KLHコンストラクトのワクチン接種によって誘発される血清活性を、無傷のHA2分子のワ
クチン接種によって誘発される血清活性と比較した。A/香港/1/1968 HA2タンパク質の細
胞外ドメインを以前に記載されているように組換えで発現させた(Chenらの文献(1999)Pro
c Natl Acad Sci U S A 96(16):8967-8972を参照されたい)。マウスにLAH-KLHをワクチン
接種するために用いるのと同じ方法で、マウスに、何も結合していない、純粋なHA2タン
パク質をワクチン接種した。LAH-KLH又はHA2タンパク質の二次ワクチン接種の10日後に採
取された20匹のマウス由来のプール抗血清を、組換えで発現させた血球凝集素のパネルに
対する結合活性について評価した。LAH-KLH抗血清は、試験した全ての血球凝集素亜型と
反応したが、HA2抗血清は、グループ2血球凝集素タンパク質としか反応しない抗体を含ん
でいた(図11A〜H及び表1)。LAH構造はHA2タンパク質中に存在するので、LAH-KLH抗血清に
見られる幅広い反応性は、LAHがコンジュゲート複合体内で抗原として提示される様式の
結果であるに違いない。HA2の免疫優勢領域の排除が、LAH-KLHワクチンに、血球凝集素亜
型間の幅広い反応性を仲介するより的を絞った抗LAH免疫応答を誘導させるのかも知れな
い。或いは、幅広い反応性の抗体の誘導は、LAHをC末端でキャリアタンパク質に固定し、
それにより、そうでなければ、無傷のHA2タンパク質の状況において抗原としてサイレン
トであるLAHの領域を免疫原性にすることの結果であるのかも知れない。

(6.5.3 結論)
KLHに連結されたこのLAHコアポリペプチドは、現在ヒトにおいて季節性疾患とパンデミ
ック疾患を引き起こす抗原性が多様なインフルエンザウイルス亜型に対する防御活性を有
する。さらに、KLHに連結されたLAHコアポリペプチドは、ヒトにおいてパンデミックイン
フルエンザ疾患を引き起こす可能性がある亜型である、鳥H5N1ウイルスに対する防御活性
を有する。したがって、KLHに連結されたLAHコアポリペプチドは、製造するのが安価でか
つ簡単なペプチドベースのインフルエンザウイルスワクチンである。

本明細書で引用されている全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各々の個々の刊行物
又は特許出願が引用により組み込まれていることが具体的にかつ個別に示されているかの
ように、引用により本明細書に組み込まれている。上の発明は理解の明快さの目的のため
に図及び実施例によって少し詳細に記載されているが、本発明の教示に照らし、添付の請
求項の精神又は範囲を逸脱することなく、一定の変更及び修正をそれに加えることができ
ることが、当業者には容易に明らかであろう。

もしくはその断片を含むか、又はそれらからなる。)

を含まず、ここで、FLAG-タグは、アミノ酸配列

具体的な実施態様では、コアポリペプチドは、配列:

を含み、ここで、FLAG-タグは、アミノ酸配列

Claims

単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで:
X₁は、親水性アミノ酸であり;
X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、親水性アミノ酸であり;
X₄は、親水性アミノ酸であり;
X₅は、疎水性アミノ酸であり;
X₆は、N、E、又はIであり;
X₇は、親水性アミノ酸であり;
X₈は、K、Y、又はWであり;
X₉は、M、V、又はTであり;
X₁₀は、親水性残基であり;
X₁₁は、A、G、T、又はSであり;
X₁₂は、F、K、又はMであり;
X₁₃は、L、I、又はTであり;
X₁₄は、親水性の酸性アミノ酸であり;
X₁₅は、疎水性アミノ酸であり;
X₁₆は、親水性アミノ酸であり;
X₁₈は、疎水性アミノ酸であり;
X₁₉は、疎水性アミノ酸であり;
X₂₀は、親水性アミノ酸であり;
X₂₁は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₂₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₂₃は、疎水性アミノ酸であり;
X₂₄は、H、T、又はAであり;
X₂₅は、親水性アミノ酸であり;
X₂₆は、疎水性アミノ酸であり;
X₂₇は、親水性アミノ酸であり;
X₂₈は、親水性アミノ酸であり;
X₂₉は、疎水性アミノ酸であり;
X₃₀は、親水性の酸性アミノ酸であり;
X₃₁は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₃₂は、T又はVであり;
X₃₃は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₃₄は、K、L、M、S、又はRであり;
X₃₅は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₃₆は、親水性アミノ酸であり;かつ
X₃₇は、疎水性アミノ酸であり、
かつ全長インフルエンザウイルス血球凝集素ではない、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、R又はQであり;
X₂は、L、M、又はIであり;
X₃は、E、D、Q、又はGであり;
X₄は、D又はNであり;
X₅は、L、M、又はVであり;
X₆は、N、E、又はIであり;
X₇は、K又はNであり;
X₈は、K、R、Y、又はWであり;
X₉は、M、V、又はTであり;
X₁₀は、E、D、K、又はRであり;
X₁₁は、A、G、T、又はSであり;
X₁₂は、F、K、I、L、又はMであり;
X₁₃は、L、I、又はTであり;
X₁₄は、D又はEであり;
X₁₅は、V、I、又はLであり;
X₁₆は、S又はTであり;
X₁₇は、Q又はNであり;
X₁₈は、A又はLであり;
X₁₉は、L又はMであり;
X₂₀は、E又はQであり;
X₂₁は、R又はHであり;
X₂₂は、L又はIであり;
X₂₃は、F、V、M、Y、又はLであり;
X₂₄は、H、T、又はAであり;
X₂₅は、N又はEであり;
X₂₆は、V又はMであり;
X₂₇は、K、N、S、又はRであり
X₂₈は、K、S、又はNであり;
X₂₉は、Y又はFであり;
X₃₀は、D又はEであり;
X₃₁は、K又はRであり;
X₃₂は、T又はVであり;
X₃₃は、K又はRであり;
X₃₄は、K、L、M、S、又はRであり;
X₃₅は、K又はRであり;
X₃₆は、D、N、Q、又はEであり;かつ
X₃₇は、A又はVであり、
かつ全長インフルエンザウイルス血球凝集素ではない、請求項1記載の単離されたコアペ
プチド。
配列番号1もしくは配列番号2を含むか、又はそれらからなる、請求項1記載の単離され
たコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで:
X₁は、M、V、Tであり;
X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、L、M、S、K、Rであり; かつ
X₄は、親水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、M、V、Tであり;
X₂は、F、Y、又はLであり;
X₃は、L、M、S、K、Rであり; かつ
X₄は、D、N、又はEである、請求項4記載の単離されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで:
X₁は、疎水性アミノ酸であり;
X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、親水性アミノ酸であり;
X₄は、疎水性アミノ酸であり;
X₅は、疎水性アミノ酸であり;
X₆は、疎水性の酸性アミノ酸であり;
X₇は、親水性の酸性アミノ酸であり;
X₈は、L、M、又はSであり;
X₉は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₁₀は、親水性アミノ酸であり; かつ
X₁₁は、疎水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、L又はIであり;X₂は、M又はVであり;X₃は、E又はDであり;X₄は、V又はIであり;X₅
は、M又はLであり;X₆は、F又はYであり;X₇は、D又はEであり;X₈は、L、M、又はSであり;X
₉は、R又はKであり;X₁₀は、D又はNであり、かつX₁₁は、A又はVである、請求項記載の単離
されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで:
X₁は、親水性アミノ酸であり;
X₂は、親水性アミノ酸であり;
X₃は、親水性アミノ酸であり;
X₄は、疎水性アミノ酸であり;
X₅は、E又はIであり;
X₆は、親水性アミノ酸であり;
X₇は、疎水性アミノ酸であり;
X₈は、V又はTであり;
X₉は、親水性アミノ酸であり;
X₁₀は、親水性アミノ酸であり;
X₁₁は、K又はMであり;
X₁₂は、I又はTであり;
X₁₃は、親水性の酸性アミノ酸であり;
X₁₄は、疎水性アミノ酸であり;
X₁₅は、疎水性アミノ酸であり;
X₁₆は、T又はAであり;
X₁₇は、疎水性アミノ酸であり;
X₁₈は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₁₉は、T又はVであり; かつ
X₂₀は、親水性の塩基性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、R又はQであり;X₂は、Q又はGであり;X₃は、D又はNであり;X₄は、L又はVであり;X₅
は、E又はIであり;X₆は、K又はNであり;X₇は、Y又はWであり;X₈は、V又はTであり;X₉は、
E又はRであり;X₁₀は、T又はSであり;X₁₁は、K又はMであり;X₁₂は、I又はTであり;X₁₃は、
D又はEであり;X₁₄は、L又はVであり;X₁₅は、L又はMであり;X₁₆は、T又はAであり;X₁₇は、
F又はYであり;X₁₈は、K又はRであり;X₁₉は、T又はVであり、かつX₂₀は、K又はRである、
請求項8記載の単離されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで:
X₁は、疎水性アミノ酸であり;
X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、疎水性アミノ酸であり;
X₄は、親水性の塩基性アミノ酸であり;かつ
X₅は、親水性の塩基性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、M又はIであり;X₂は、L又はIであり;X₃は、F又はYであり;X₄は、K又はRであり;か
つX₅は、K又はRである、請求項10記載の単離されたコアペプチド。
配列番号8、配列番号9、配列番号10、又は配列番号11のアミノ酸配列を有する、請求項
10記載の単離されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、Xは、親水性の酸性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
Xは、D又はEである、請求項13記載の単離されたコアペプチド。
配列番号13又は配列番号14記載のアミノ酸配列を有する、請求項13記載の単離されたコ
アペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁、X₂、及びX₃は、親水性の塩基性アミノ酸である、前記単離されたコ
アペプチド。
X₁は、K又はRであり;X₂は、K又はRであり、かつX₃は、K又はRである、請求項16記載の
単離されたコアペプチド。
配列番号16、配列番号17、又は配列番号18のアミノ酸配列を有する、請求項16記載の単
離されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁は、親水性の塩基性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、R又はHである、請求項19記載の単離されたコアペプチド。
配列番号20又は配列番号21のアミノ酸配列を有する、請求項19記載の単離されたコアペ
プチド。
以下の式:

を含む、単離されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、
X₁は、G又はDであり;
X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、親水性アミノ酸であり;
X₄は、疎水性アミノ酸であり;
X₅は、親水性アミノ酸であり;
X₆は、H又はYであり;
X₇は、Q又はLであり;かつ
X₈は、親水性の塩基性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、G又はDであり;X₂は、L又はMであり;X₃は、E又はGであり;X₄は、L又はMであり;X₅
は、N又はSであり;X₆は、H又はYであり;X₇は、Q又はLであり、かつX₈は、R又はKである、
請求項23記載の単離されたコアペプチド。
配列番号24〜29のいずれか1つのアミノ酸配列を有する、請求項23記載の単離されたコ
アペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、
X₁は、疎水性アミノ酸又は親水性アミノ酸であり;
X₂は、疎水性アミノ酸であり;
X₃は、親水性アミノ酸であり;かつ
X₄は、親水性の塩基性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、A又はSであり;X₂は、V又はIであり;X₃は、N又はSであり;かつX₄は、K又はRであ
る、請求項26記載の単離されたコアペプチド。
配列番号31〜35のいずれか1つのアミノ酸配列を有する、請求項26記載の単離されたコ
アペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁は、親水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、D又はNである、請求項29記載の単離されたコアペプチド。
配列番号37又は配列番号38のアミノ酸配列を有する、請求項29記載の単離されたコアペ
プチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁は、疎水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、V又はIである、請求項32記載の単離されたコアペプチド。
配列番号40又は配列番号41のアミノ酸配列を有する、請求項29記載の単離されたコアペ
プチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁は、親水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、Q又はNである、請求項35記載の単離されたコアペプチド。
配列番号43又は配列番号44のアミノ酸配列を有する、請求項35記載の単離されたコアペ
プチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁は、疎水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
V又はIである、請求項38記載の単離されたコアペプチド。
配列番号46又は配列番号47のアミノ酸配列を有する、請求項38記載の単離されたコアペ
プチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、X₁は、疎水性アミノ酸であり、かつX₂は、親水性の塩基性アミノ酸であ
る、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、V又はIであり、かつX₂は、R又はKである、請求項41記載の単離されたコアペプチ
ド。
配列番号49又は配列番号50のアミノ酸配列を有する、請求項341記載の単離されたコア
ペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで、
X₁は、疎水性アミノ酸であり;
X₂は、親水性の酸性アミノ酸であり;
X₃は、A、S、又はEであり;かつ
X₄は、親水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、V又はIであり;X₂は、D又はEであり;X₃は、A、S、又はEであり、かつX₄は、T又は
Dである、請求項44記載の単離されたコアペプチド。
配列番号52〜54のいずれか1つのアミノ酸配列を有する、請求項41記載の単離されたコ
アペプチド。
以下の式:

を含む、単離されたコアペプチド。
以下の式:

を含む、単離されたコアペプチド。
単離されたコアペプチドであって、以下の式:

を含み、ここで:
X₁は、疎水性アミノ酸であり;
X₂は、親水性の塩基性アミノ酸であり;
X₃は、親水性の酸性アミノ酸であり;かつ
X₄は、親水性アミノ酸である、前記単離されたコアペプチド。
X₁は、L又はIであり;X₂は、K又はRであり;X₃は、D又はEであり、かつX₄は、S又はNであ
る、請求項49記載の単離されたコアペプチド。
配列番号58〜60のいずれか1つのアミノ酸配列を有する、請求項49記載の単離されたコ
アペプチド。
fluポリペプチドであって、以下の式:
X-L-X-L-X
を含み、ここで、
Xは、請求項1〜51のいずれか一項記載のコアポリペプチド又はその断片であり;かつ
Lはリンカーであるか、又は存在しない、前記fluポリペプチド。
前記コアポリペプチドが同じである、請求項52記載のfluポリペプチド。
fluポリペプチドであって、請求項1〜51のいずれか一項記載のコアポリペプチドを含み
、そのN末端でアセチル化されている、前記fluポリペプチド。
fluポリペプチドであって、請求項1〜51のいずれか一項記載のコアポリペプチドを含み
、そのN末端及び/又はC末端でポリエチレングリコールに連結されている、前記fluポリペ
プチド。
fluポリペプチドであって、請求項1〜51のいずれか一項記載のコアポリペプチドを含み
、該コアポリペプチドは、そのN末端及び/又はC末端で1以上のタンパク質タグに直接的又
は間接的に連結されている、前記fluポリペプチド。
前記タンパク質タグがHis-タグである、請求項55記載のfluポリペプチド。
前記タンパク質タグがFLAG-タグである、請求項55記載のfluポリペプチド。
fluポリペプチドであって、請求項1〜51のいずれか一項記載のコアポリペプチドを含み
、ここで、該コアペプチドは、そのN末端及び/又はC末端でT細胞エピトープに直接的又は
間接的に連結されている、前記fluポリペプチド。
前記T細胞エピトープがCD8 T細胞エピトープである、請求項59記載のfluポリペプチド
。
前記CD8 T細胞エピトープが、A型インフルエンザ核タンパク質(NP)もしくはマトリック
ス1(M1)タンパク質、又はそれらの断片である、請求項60記載のfluポリペプチド。
fluポリペプチドであって、請求項1〜51のいずれか一項記載のコアポリペプチドを含み
、ここで、該コアポリペプチドは、直接的又は間接的に、そのN末端及び/又はC末端でTol
l様受容体リガンドに連結されている、前記fluポリペプチド。
前記Toll様受容体リガンドがサルモネラ菌のフラジェリンである、請求項62記載のflu
ポリペプチド。
fluポリペプチドであって、請求項1〜51のいずれか一項記載の単離されたコアポリペプ
チドを含み、ここで、該単離されたコアペプチドは、直接的又は間接的に、そのN末端及
び/又はC末端でT4フォルドンドメイン又はその断片に連結されている、前記fluポリペプ
チド。
そのN末端でHis-タグに連結され、かつそのC末端でT4フォルドンドメイン又はその断片
に連結されているコアポリペプチドを含む、fluポリペプチド。
直接的又は間接的に、そのN-又はC末端で1以上のタンパク質タグに連結されている、請
求項52記載のfluポリペプチド。
前記タンパク質タグが、His-タグ又はFLAG-タグである、請求項66記載のfluポリペプチ
ド。
直接的又は間接的に、そのN-又はC末端でCD8 T細胞エピトープに連結されている、請求
項52記載のfluポリペプチド。
前記CD8 T細胞エピトープが、A型インフルエンザ核タンパク質(NP)又はマトリックス1(
M1)タンパク質である、請求項68記載のfluポリペプチド。
直接的又は間接的に、そのN-又はC末端でToll様受容体リガンドに連結されている、請
求項52記載のfluポリペプチド。
前記Toll様受容体リガンドがサルモネラ菌のフラジェリンである、請求項70記載のflu
ポリペプチド。
直接的又は間接的に、そのN末端でHis-タグに連結され、そのC末端でFLAG-タグに連結
されており、かつLがグリシン残基である、請求項52記載のfluポリペプチド。
直接的又は間接的に、そのN末端でHis-タグに、かつそのC末端でサルモネラ菌(Samonel
la)のフラジェリンに連結されている、請求項52記載のfluポリペプチド。
直接的又は間接的に、そのN末端でHis-タグ(Hist-tag)に、かつそのC末端でA型インフ
ルエンザ核タンパク質(NP)又はその断片に連結されている、請求項52記載のfluポリペプ
チド。
インフルエンザ血球凝集素に結合することができる中和抗血清に選択的に結合する、請
求項1〜51のいずれか一項記載の単離されたコアペプチド又は請求項52〜74のいずれか一
項記載のfluポリペプチド。
キャリアタンパク質に連結された請求項1〜51のいずれか一項記載の単離されたコアペ
プチド又は請求項52〜74のいずれか一項記載のfluポリペプチドを含む、組成物。
前記単離されたコアペプチド又はfluポリペプチドが、1〜50アミノ酸のリンカーによっ
てキャリアタンパク質に連結されている、請求項76記載の組成物。
前記リンカーが、長さ1〜40アミノ酸、1〜30アミノ酸、1〜20アミノ酸、1〜10アミノ酸
、1〜5アミノ酸、1〜4アミノ酸、1〜3アミノ酸、1〜2アミノ酸、又は1アミノ酸である、
請求項77記載の組成物。
前記キャリアタンパク質がキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)である、請求項76
記載の組成物。
fluポリペプチドであって、アミノ酸配列

を有するコアポリペプチドを含み、ここで、該コアポリペプチドは、そのC末端で、配列

を有するポリペプチドに連結されている、前記fluポリペプチド。
アセチル化されたN末端をさらに含む、請求項80記載のfluポリペプチド。
請求項1〜75、80、又は81のいずれか一項記載の単離されたコアペプチド又はfluポリペ
プチドをコードする、単離された核酸。
請求項82記載の核酸を発現する、単離された細胞。
請求項82記載の核酸を発現するように改変されたゲノムを含む、単離されたウイルス。
請求項1〜75、80、又は81のいずれか一項記載の単離されたコアペプチド又はfluポリペ
プチドを含む、単離されたウイルス。
前記ウイルスがインフルエンザウイルスである、請求項84又は85記載の単離されたウイ
ルス。
A型インフルエンザウイルスである、請求項86記載の単離されたウイルス。
B型インフルエンザウイルスである、請求項86記載の単離されたウイルス。
前記ウイルスが、ニューカッスル病ウイルス(NDV)、ワクシニアウイルス、アデノウイ
ルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、又はレトロウイルスである、請求項84又は85記載の単
離されたウイルス。
不活化されているか、又は分割されている、請求項85記載の単離されたウイルス。
請求項1〜75、80、又は81のいずれか一項記載の単離されたコアペプチド又はfluポリペ
プチドを含む、ウイルス様粒子。
請求項1〜75、80、又は81のいずれか一項記載の単離されたコアペプチド又はfluポリペ
プチドを含む、免疫原性組成物。
請求項84記載の単離されたウイルス及び医薬として許容し得る担体を含む、免疫原性組
成物。
請求項85記載の単離されたウイルス及び医薬として許容し得る担体を含む、免疫原性組
成物。
請求項86、87、又は88記載の単離されたウイルス及び医薬として許容し得る担体を含む
、免疫原性組成物。
請求項89記載の単離されたウイルス及び医薬として許容し得る担体を含む、免疫原性組
成物。
請求項90記載の単離されたウイルス及び医薬として許容し得る担体を含む、免疫原性組
成物。
アジュバントをさらに含む、請求項93記載の免疫原性組成物。
アジュバントをさらに含む、請求項94、95、又は97記載の免疫原性組成物。
請求項91記載のウイルス様粒子及び医薬として許容し得る担体を含む、免疫原性組成物
。
対象を免疫する方法であって、該対象に請求項92〜100のいずれか一項記載の免疫原性
組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
前記対象がヒトである、請求項101記載の方法。
前記免疫原性組成物が、前記対象に、皮下、筋肉内、又は鼻腔内投与される、請求項10
1記載の方法。
インフルエンザウイルス疾患を予防する方法であって、対象に請求項92〜100記載の免
疫原性組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
インフルエンザウイルス感染又はインフルエンザウイルス疾患を治療する方法であって
、対象に請求項92〜100記載の免疫原性組成物の有効量を投与することを含む、前記方法
。
前記対象がヒトである、請求項104記載の方法。
前記対象がヒトである、請求項105記載の方法。
対象を免疫する方法であって、対象に請求項76記載の組成物の有効量を投与することを
含む、前記方法。
インフルエンザ疾患を予防する方法であって、対象に請求項76記載の組成物の有効量を
投与することを含む、前記方法。
インフルエンザウイルス疾患又はインフルエンザウイルス感染を治療する方法であって
、対象に請求項76記載の組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
前記対象がヒトである、請求項108、109、又は110記載の方法。