JP2018115202A - 狼毒抽出物またはその分画物を含む、傷を治療するための組成物、及び個体の傷を治療する方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】狼毒抽出物またはその分画物を含む、傷を治療するための組成物、傷を治療するのに有効な量の組成物を個体に投与する段階を含む、個体の傷を治療する方法、傷の改善用、皮膚しわ改善用または皮膚老化防止用の化粧料組成物、及び傷の改善、皮膚しわ改善または皮膚老化防止のための化粧方法の提供。
【選択図】図1
Description
前記組成物は、組成物総重量に対して、0.001重量%ないし80重量%、例えば、0.01重量%ないし60重量%、0.01重量%ないし40重量%、0.01重量%ないし30重量%、0.01重量%ないし20重量%、0.01重量%ないし10重量%、0.01重量%ないし5重量%、0.05重量%ないし60重量%、0.05重量%ないし40重量%、0.05重量%ないし30重量%、0.05重量%ないし20重量%、0.05重量%ないし10重量%、0.05重量%ないし5重量%、0.1重量%ないし60重量%、0.1重量%ないし40重量%、0.1重量%ないし30重量%、0.1重量%ないし20重量%、0.1重量%ないし10重量%、または0.1重量%ないし5重量%の狼毒抽出物またはその分画物を含んでもよい。
前記皮膚外用剤は、一般的に、化粧品や医薬品などの皮膚外用剤に使用される成分、例えば、水性成分、油性成分、粉末成分、アルコール類、保湿剤、増粘剤、紫外線吸収剤、美白剤、防腐剤、酸化防止剤、界面活性剤、香料、色剤、各種皮膚栄養剤、またはそれらの組み合わせと、必要によって適切に配合されてもよい。
前記方法は、傷を改善させたり、皮膚しわを改善させたり、皮膚老化を防止したりするものでもある。
本実施例においては、狼毒から狼毒抽出物を製造し、狼毒抽出物及び前記分画物が傷治療に及ぼす効果を確認した。
(1)狼毒エタノール抽出物の製造
狼毒抽出物は、モンゴル・ウランバートル近郊で生育したものであり、地上部のみを採集した。採集された地上部を水で洗浄して乾燥させた。乾燥された狼毒地上部は、押し切り(straw cutter)を利用して、2〜3cmに細切りして使用した。ガラス三角フラスコに、前記細切りされた狼毒地上部100gと、水内95(v/v)%のエタノール1Lとを入れて混合した。該混合物を約20℃の常温で、48時間150rpmで撹拌して抽出した。
(2.1)エタノール抽出物の分画物
乾燥された狼毒エタノール抽出物3g、及び水100mLを三角フラスコに入れて懸濁した後、250mL分別漏斗に入れ、そこにn−ヘキサン(extra pure grade、100(v/v)%)100mLを添加し、十分に振った後、常温で3時間放置した。前記混合物を、分別漏斗を利用して、ヘキサン層のみを取り、前述のような過程を3反復して実施し得られたヘキサン層は、減圧濃縮(EYELA、N−1100)を行い、ヘキサン分画物を得た。
(2.1)における溶媒としてのエタノールの代わりに、100(v/v)%アセトン、指定された濃度のメタノール、またはブタノールを使用したことを除いては、同一過程によって、他の溶媒を使用した抽出物及びその分画物を得た。
前記狼毒抽出物またはその分画物が、ヒト角質形成細胞が移動(migration)することを増大させるか否かということを、下記のように確認した。
前記狼毒抽出物がヒト線維芽細胞において、コラーゲン遺伝子の発現を促進させるか否かということを下記のように確認した。
4.UV照射によって老化が誘導された線維芽細胞におけるコラーゲン分解酵素−1分泌抑制測定実験
前記狼毒エタノール抽出物のコラーゲン分解酵素−1(MMP−1:matrix metalloproteinase−1)の生成を抑制する効能を測定した。
前記狼毒エタノール抽出物のタイプ−1プロコラーゲン(type−1 procollagen)の発現を促進させるか否かということを確認した。
前記狼毒抽出物が、動物実験において、傷部位の回復を促進するか否かということを下記のように確認した。
SD(Sprague-Dawley)ラット(雄、7週齢)を(株)コアテックから入手し、25±1℃、湿度50±10%を維持し、明暗は、昼夜12時間で自動調節しながら維持した。また、一般食餌の飼料及び水は、自由に摂取するようにし、全ての実験動物は、1週間動物室環境に適応させた後、実験に使用した。実験群に投与した食餌、投与用量及び投与方法は、下記表2に示した。
(2)傷誘発及び処置
SDラットを、麻酔前24時間節食させ、100mlの水を供給した。全ての実験群に傷を誘発させる1時間前、100%のゾレチルと100%のロムプンとを1:2比率で混合し、全ての実験群に対して、得られた混合物を0.1cc/kg使用して、筋肉注射で麻酔させた。その後、全ての実験群に対して、電気除毛機でラット背部位の毛を除去した。背部位に、それぞれ10%のポビドン・ヨードと、70(v/v)%のエタノールとを塗布して消毒した後、背部位に、消毒された手術用はさみを利用して、直径2cmx2cmの正方形サイズに、真皮層を含んだ全層欠損傷(full-thickness excisional wound)を誘発させた。
それぞれの前記狼毒抽出物(1%あるいは3%(v/v))、及び傷治癒に効能があると知られている壺草抽出物(1%あるいは3%(v/v))を、2週間1日1回傷ついた皮膚に塗布した。該壺草抽出物は、実施例1の2に記載されたところと同一である。それぞれの試験物質を傷に塗布して、それぞれ1日目、4日目、8日目、11日目及び15日目に傷部位を撮影し、ImageJ(NIH、米国)を利用して、傷口面積を測定して分析した。
それぞれの試験物質投与後14日目、全ての実験群をエーテルで吸入麻酔させ、試験物質の投与部位を、10%中性緩衝ホルマリン溶液で固定した。病理組織学的検査のために、傷口面を等しく検査することができるように、固定が完了した皮膚組織を、傷口面の長軸を基準に、縦横2cmx2cmの正方形サイズにそれぞれ1部位ずつ切断した。切断された組織を、一般的な組織処理方法によって、パラフィンで包埋した後、約3〜4μm厚に組織切片を製作し、スライドガラスに付着させた。付着が完了した切片に、ヘマトキシリン・エオシン(H&E)染色を行い、染色された切片を、光学顕微鏡(Olympus BX53、日本)で検査した。傷組織(例:創傷)に対する判読は、Nisbetら(Tissue Eng Part A. 2010, Sep; 16 (9): 2833-42)とBaratiら(Diagn Pathol. 2013; 8: 120)とが評価した方法を基に点数を決め、それぞれ所見に係る基準は、下表3の通りである。
図8は、狼毒エタノール抽出物が、動物実験において、開いた傷の上皮化(epithelialization)に及ぼす影響を示した図面である。図8において、横軸のG1、G2、G3、G4及びG5は、表2に示されているような実験群を示し、縦軸の点数(score)は、表3に定義される上皮化基準によって測定された値である。
本実施例においては、狼毒から、狼毒幹抽出物及びその分画物を製造し、狼毒幹抽出物及び前記分画物が傷治療に及ぼす効果を確認した。
(1)狼毒幹抽出物の製造
狼毒抽出物は、モンゴルウランバートル近郊で生育したものであり、地上部のうち幹のみを採集した。採集された幹を水で洗浄して乾燥させた。乾燥された狼毒幹は、押し切りを利用して、2〜3cmに細切りして使用した。ガラス三角フラスコに、前記細切りされた狼毒幹100gと、95%のエタノール1Lとを入れて混合した。該混合物を常温(約20℃)で48時間150rpmで撹拌して抽出した。
乾燥された狼毒抽出物3gと水100mLとを三角フラスコに入れて懸濁した後、分別漏斗(250mL)に入れ、ここに、n−ヘキサン(extra pure grade、95%以上)100mLを添加して十分に振った後、常温で3時間放置した。前記混合物から、分別漏斗を利用してヘキサン層のみを取り、前述のような過程を3反復して実施し得られたヘキサン分画は、減圧濃縮(EYELA、N−1100)を行い、ヘキサン分画を得た。
前記狼毒幹抽出物またはその分画物が、ヒト角質形成細胞が移動することを増大させるか否かということを下記のように確認した。
前記狼毒幹抽出物またはその分画物が、ヒト線維芽細胞において、コラーゲン遺伝子の発現を促進させるか否かということを下記のように確認した。
前記狼毒幹抽出物が、動物実験において、傷部位の回復を促進するか否かということを下記のように確認した。
SD(Sprague-Dawley)ラット(雄、7週齢)を(株)コアテックから入手し、25±1℃、湿度50±10%を維持し、明暗は、昼夜12時間で自動調節しながら保管した。また、一般食餌の飼料及び水は自由に摂取するようにし、全ての実験動物は、1週間動物室環境に適応させた後、実験に使用した。実験群に投与した食餌、投与用量及び投与方法は、下記表4に示した。
(2)傷誘発及び処置
SDラットを、麻酔前24時間節食させ、100mlの水を供給した。全ての実験群に、傷を誘発する1時間前、100%のゾレチルと100%のロムプンとを1:2比率で混合し、全ての実験群に対して、得られた混合物を0.1cc/kg使用して、筋肉注射で麻酔させた。その後、全ての実験群に対して、電気除毛機でラットの背部位毛を除去した。背部位に、それぞれ10%のポビドン・ヨードと70%エタノールとを塗布して消毒した後、背部位に、消毒された手術用はさみを利用して、直径2cmx2cmの正方形サイズに真皮層を含んだ全層欠損傷(full-thickness excisional wound)を誘発させた。
それぞれの前記狼毒幹抽出物及び傷治癒に効能があると知られている壺草抽出物を、2週間3%(v/v)で、1日1回傷ついた皮膚に塗布した。壺草抽出物は、実施例1の2に記載されたところと同一である。それぞれの試験物質を傷に塗布して、それぞれ1日目、4日目、8日目、11日目及び14日目に傷部位を撮影し、ImageJ(NIH、米国)を利用して、傷口面積を測定して分析した。
それぞれの試験物質投与後14日目、全ての実験群に対して、エーテルで吸入麻酔し、試験物質の投与部位を10%の中性緩衝ホルマリン溶液で固定した。病理組織学的検査のために、傷口面を等しく検査することができるように、固定が完了した皮膚組織を、傷口面の縦方向(longitudinal)に、縦横で2cmx2cmの正方形サイズに、それぞれ1部位ずつ切断した。切断された組織を、一般的な組織処理方法によって、パラフィンで包埋した後、約3〜4μm厚に組織の切片を製作し、スライドガラスに付着させた。付着が完了した切片に、ヘマトキシリン・エオシン染色を行い、染色された切片を光学顕微鏡(Olympus BX53、日本)で検査した。傷組織に対する判読は、当該技術分野に公知の評価方法で点数を決めて行った(Nisbetら(Tissue Eng Part A. 2010, Sep; 16 (9): 2833-42))及びBaratiら(Diagn Pathol. 2013; 8: 120))。判読時、それぞれの所見に係る基準は、下記表5に示されている通りであり、その判読結果を表6に示した。
製剤1:薬学的製剤の製造
1.軟質カプセル制の製造
狼毒幹エタノール抽出物または分画物150mg、パーム油2mg、パーム硬化油8mg、黄蝋4mg及びレシチン6mgを混合し、一般的な方法によって、1カプセル当たり400mgずつ充填し、軟質カプセル剤を製造した。
狼毒幹エタノール抽出物または分画物150mg、ブドウ糖100mg、紅参抽出物50mg、澱粉96mg及びステアリン酸マグネシウム4mgを混合し、30%エタノールを40mg添加して顆粒を形成した後、60℃で乾燥させ、打錠機を利用して、錠剤に打錠して錠剤を製造した。
狼毒幹エタノール抽出物または分画物150mg、ブドウ糖100mg、紅参抽出物50mg及び澱粉600mgを混合し、30%エタノールを100mg添加し、顆粒を形成した後、60℃で乾燥させて顆粒を形成した後、包みに充填した。内容物の最終重量は、1gにした。
本製剤例に使用された狼毒抽出物は、幹のエタノール抽出物である。
2.栄養化粧水(ミルクローション)の製造
3.栄養クリームの製造
4.マッサージクリームの製造
5.パックの製造
6.軟膏の製造
Claims (9)
- 狼毒抽出物またはその分画物を有効成分として含む、傷を治療するための薬学的組成物であって、前記狼毒抽出物は、前記狼毒の地上部から抽出されたものである組成物。
- 前記狼毒抽出物は、水、アセトン、C1−C6アルコール、またはそれらの組み合わせのうちから抽出されたものである,請求項1に記載の組成物。
- 前記狼毒抽出物は、75(v/v)%ないし100(v/v)%エタノール、75(v/v)%ないし100(v/v)%メタノール、75(v/v)%ないし100(v/v)%ブタノール、またはそれらの組み合わせのうちから抽出されたものである,請求項1に記載の組成物。
- 前記分画物は、前記狼毒抽出物を水に懸濁させた後、ヘキサン、酢酸エチル及びブタノールで順次に分画化して得られた、ヘキサン分画物、酢酸エチル分画物、ブタノール分画物、またはそれらの組み合わせである,請求項1に記載の組成物。
- 前記傷は、皮膚にあるものである,請求項1に記載の組成物。
- 前記狼毒抽出物またはその分画物は、組成物重量に対して、0.001重量ないし80重量%である,請求項1に記載の組成物。
- 薬学的に許容可能な賦形剤または担体をさらに含む,請求項1に記載の組成物。
- 細胞中のコラーゲン遺伝子の発現を促進させる,請求項1に記載の組成物。
- 傷を治療するのに有効な量の、請求項1ないし8のうちいずれか1項に記載の組成物を個体に投与する段階を含む、個体の傷を治療する方法。
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