JP2017520557A - ヒト化抗Ｔａｕ（ｐＳ４２２）抗体脳シャトル及びその使用 - Google Patents

ヒト化抗Ｔａｕ（ｐＳ４２２）抗体脳シャトル及びその使用 Download PDF

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Abstract

本明細書において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体が報告される。

Description

本発明は、配列番号：０３のリン酸化Ｔａｕフラグメントに特異的に結合するヒト化抗Ｔａｕ（ｐＳ４２２）抗体脳シャトル構築物及び脳疾患を処置するためのその使用に関する。
ヒトＴａｕ（微小管関連タンパク質Ｔａｕ（神経原線維タングルタンパク質、対らせん状細線維Ｔａｕ（ＰＨＦ−Ｔａｕ））は、軸索中に主に見出されるニューロン微小管関連タンパク質であり、チューブリン重合を促進し、微小管を安定化するのに機能する。８つのアイソフォーム（アイソフォームＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、胎児Ｔａｕ）が、ヒトの脳において見出されている。最も長いアイソフォームは、４４１個のアミノ酸を含む（アイソフォームＦ、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１０６３６−８）。また、Ｔａｕ及びその性質は、Reynolds, C.H., et al., J. Neurochem. 69 (1997) 191-198（非特許文献１）に記載されている。
その過剰リン酸化型にあるＴａｕは、対らせん状細線維（ＰＨＦ）の主な成分であり、アルツハイマー病（ＡＤ）の脳における神経原線維病変の構成要素である。Ｔａｕは、そのセリン又はスレオニン残基において、ＧＳＫ３ベータ、ｃｄｋ５、ＭＡＲＫ、及びＭＡＰキナーゼファミリーメンバーを含む、複数種類のキナーゼによりリン酸化される場合がある。
タウオパシーは、Ｔａｕの異常な過剰リン酸化により特徴付けられ、Iqbal, K., et al.（Biochim. Biophys. Acta 1739 (2005) 198-210）（非特許文献２）によれば、
・タングルのみの型の疾患を含む、アルツハイマー病
・ダウン症候群、成人の症例
・グアム−パーキンソン痴呆複合
・パンチドランカー
・ピック病
・嗜銀顆粒性痴呆
・前頭側頭痴呆
・大脳皮質基底核変性症
・Ｐａｌｌｉｄｏ−ｐｏｎｔｏ黒質変性症
・進行性核上性麻痺
・タングルを伴うゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病である。
これまで、４０近くのセリン（Ｓ）／スレオニン（Ｔ）リン酸化部位が、アルツハイマー病の脳からのＴａｕにおいて見出されてきた（Hanger, D.P., et al., J. Biol. Chem. 282 (2007) 23645-23654）（非特許文献３）。アルツハイマー病におけるＴａｕ病理の進行は、そのリン酸化状態に関連する。しかしながら、４０か所のリン酸化部位の大部分は、疾患の病理に関わっていない。それらは、健常な胎児の脳組織から抽出されたＴａｕにおいても見出されているためである。わずかなリン酸化のみが、疾患状態に固有であり、アルツハイマーの脳のＰＨＦにおけるＴａｕを規定する、異常な凝集及び特徴的な不溶性を担っているであろう（Morishima-Kawashima, M., et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 823-829）（非特許文献４）。Pei, J.J., et al.（J. Alzheimer’s Disease 14 (2008) 385-392）（非特許文献５）によれば、既存の文献には、これらの部位がＡＤ脳に特異的であることについての限られた、不明確な情報しか提供されていない。Peiは、Ｔａｕのリン酸化部位特異的抗体のリストを使用し、２２名のＡＤ患者及び１０名の対照からの内側側頭皮質のホモジネートにおけるそれらのレベルを測定した。
Bussiere, T., et al.（Acta Neuropathol. 97 (1999) 221-230）（非特許文献６）には、Ｔａｕタンパク質上のリン酸化セリン４２２が、神経原線維変性を伴う複数の疾患において見出された病的エピトープであることが記載されている。Augustinack, J.C., et al.,（Acta Neuropathol. 103 (2002) 26-35）（非特許文献７）には、ｐＳ４２２が、アルツハイマー病におけるニューロン病理の重症度に関連すると記載されている。Guillozet-Bongaarts, A.,（J. Neurochem. 97 (2006) 1005-1014）（非特許文献８）には、セリン４２２におけるＴａｕのリン酸化が、ＰＨＦの成熟プロセスの一部であると記載されている。また、Ｔａｕ ｐＳ４２２は、アルツハイマー病の種々のトランスジェニックマウスモデルにおける病理の進行に関連することも見出されている。このため、Deters, N., et al.,は、Biochem. Biophys. Res. Commun. 379 (2009) 400-405（非特許文献９）において、二重トランスジェニックＤｏｍ５／ｐＲ５マウスが、病的なＳ４２２エピトープが特異的にリン酸化されたＴａｕを含む、７倍増大した数の海馬ニューロンを示したことに言及している。Goetz, J., et al.,（Science 293 (2001) 1491-1495）（非特許文献１０）には、Ａベータ４２原線維を注入したＴａｕＰ３０１Ｌトランスジェニックマウスの脳に、Ｓ４２２でリン酸化されたＴａｕが出現したことが報告されている。
欧州特許第２００９１０４号（特許文献１）は、アルツハイマー病ＰＨＦからのＴａｕタンパク質におけるリン酸化状態で生じるＴａｕタンパク質のエピトープ及びアルツハイマーＴａｕタンパク質を特異的に検出する抗体を産生するための前記エピトープの使用に関する。国際公開公報第２００２／０６２８５１号及び米国特許第７，４４６，１８０号（特許文献２及び３）は、異常にトランケートした形態のＴａｕタンパク質に対する特異性を有する抗体、並びに、アルツハイマー病及び関連するタウオパシーに関する診断的及び治療的態様に関する。
国際公開公報第９８／２２１２０号（特許文献４）は、アルツハイマー病を有する患者を処置する方法であって、約２０７個〜約２２２個のアミノ酸、約２２４個〜約２４０個のアミノ酸、及び約３９０個〜約４０８個のアミノ酸の、リン酸化Ｔａｕフラグメントに対する抗体を、この患者に投与する工程を含む方法に関する。リン酸化Ｔａｕフラグメント３７９〜４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６，４０４］を使用してＴａｕトランスジェニックマウスをワクチン接種した動物実験が、Asuni, A.A., et al., J. Neuroscience 27 (2007) 9115-9129（非特許文献１１）に言及されている。米国特許出願公開公報第２００８／００５０３８３号（特許文献５）は、Ｔａｕタンパク質フラグメントを投与することにより、対象におけるアルツハイマー病又は他のタウオパシーを治療及び予防する方法に関する。
Hasegawa, M., et al.（FEBS Lett. 384 (1996) 25-30）（非特許文献１２）には、微小管関連タンパク質ｔａｕにおけるホスホセリン４２２に特異的なモノクローナル抗体（ＡＰ４２２）が報告されている。
国際公開公報第０１／５５７２５号（特許文献６）には、タウオパシーのｉｎ ｖｉｖｏ診断のため方法、及び／又は、タウオパシーと非タウオパシーとのｉｎ ｖｉｖｏ鑑別診断のための方法において使用するための、ｔａｕを特異的に認識する抗体及びホスホ−ｔａｕ（１８１）を特異的に認識する抗体が報告されている。
国際公開公報第０２／０２７０１７号（特許文献７）には、リン酸化セリンを有するポリペプチド免疫原から調製された抗体が報告されている。国際公開公報第０２／０６２８５１号は、異常にトランケートした形態のＴａｕタンパク質に対する特異性を有する抗体、並びに、アルツハイマー病及び関連するタウオパシーに関する診断的及び治療的態様に関する。
国際公開公報第２００４／０１６６５５号（特許文献８）には、中枢神経系（ＣＮＳ）ｔａｕタンパク質に特異的な抗体であって、この抗体が、ＣＮＳ ｔａｕタンパク質を特異的に認識するが、末梢ｔａｕタンパク質を認識せず、ここで、この抗体が、ｔａｕタンパク質をコードする遺伝子のエクソン４によりコードされたアミノ酸配列とそのエクソン５によりコードされたアミノ酸配列との間の連結部分のアミノ酸配列をエピトープとして特異的に認識することが報告されている。
Ｔａｕ ｐＳ４２２に対するモノクローナル抗体が、例えば、欧州特許第１８７６１８５号（特許文献９）に記載されている。Ｔａｕ ｐＳ４２２に対するポリクローナル抗体が市販されている（例えば、ProSci Inc.及びBiosource International）。
国際公開公報第２００６／０５５１７８号（特許文献１０）には、Ｓｅｒ２０２／Ｔｈｒ２０５におけるｔａｕタンパク質のリン酸化を阻害するための方法であって、ｔａｕタンパク質を含有するサンプルを、アミロイドベータ由来拡散性リガンドに結合する抗体又は抗原結合フラグメントと接触させることにより、Ｓｅｒ２０２／Ｔｈｒ２０５におけるｔａｕタンパク質のリン酸化を阻害することを含む、方法が報告されている。
ｔｙｒ３９４及び／又はｔｙｒ３１０でリン酸化されたｔａｕに特異的に結合する抗体調製物が、国際公開公報第２００７／０１９２７３号（特許文献１１）に報告されている。リン酸化Ｔａｕフラグメント３７９〜４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６，４０４］を使用してＴａｕトランスジェニックマウスをワクチン接種した動物実験が、Asuni, A.A., et al., J. Neuroscience 27 (2007) 9115-9129に言及されている。
欧州特許第２００９１０４号は、アルツハイマー病ＰＨＦからのＴａｕタンパク質におけるリン酸化状態で生じるＴａｕタンパク質のエピトープ及びアルツハイマーＴａｕタンパク質を特異的に検出する抗体を生成するための前記エピトープの使用に関する。
米国特許出願公開公報第２００８／００５０３８３号は、Ｔａｕタンパク質フラグメントを投与することにより、対象におけるアルツハイマー病又は他のタウオパシーを治療及び予防する方法に関する。
国際公開公報第２０１０／０３７１３５号（特許文献１２）には、血液脳関門（ＢＢＢ）レセプターもしくは同等物についてのリガンドを含む又は同リガンドからなる第１のドメインと、タンパク質凝集体の凝集速度を遅らせる酵素もしくは組成を含む又は同酵素もしくは組成からなる第２のドメインとを含む、単離された、合成又はリコンビナントのポリペプチド又はペプチドが、タンパク質凝集体の形成を阻害し、タンパク質凝集体を戻し、消化し、又は溶解させることが報告されている。ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏにおいてｔａｕタンパク質を認識及び結合可能な抗体、特に、モノクローナル抗体又はその機能部分が、国際公開公報第２０１０／１１５８４３号（特許文献１３）に報告されている。
国際公開公報第２０１１／０２６０３１号（特許文献１４）には、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、及び大脳皮質基底核変性などのタウオパシーを処置するのに有用な、ｔａｕオリゴマーに特異的に結合するが、可溶性ｔａｕ又はｔａｕ原線維には結合しないモノクローナル抗体又はそのフラグメントが報告されている。Ｓｅｒ（２３８）及びＴｈｒ（２４５）の内の１つ以上でリン酸化されたヒトｔａｕタンパク質に特異的に結合する単離された抗体が、国際公開公報第２０１１／０５３５６５号（特許文献１５）に報告されている。
国際公開公報第２０１２／０４５８８２号（特許文献１６）には、タウオパシーなどの神経変性障害を処置するのに有用であり、認知障害を治療又は緩和するための、哺乳類のＴａｕタンパク質上のホスホ−エピトープに特異的に結合する抗体が報告されている。ヒトモノクローナル抗ｔａｕ抗体又はそのｔａｕ結合フラグメントが、国際公開公報第２０１２／０４９５７０号（特許文献１７）に報告されている。対象におけるアルツハイマー病又は他のタウオパシーを治療及び予防する方法であって、アルツハイマー病又は他のタウオパシーを治療するのを必要とするヒトに、抗体を投与することを含み、この抗体が、異常な形態のｔａｕタンパク質に特異性を有し、前記抗体が、正常なｔａｕタンパク質に対する結合性及び／又は反応性を示さず、アルツハイマー病又は他のタウオパシーを予防又は治療するのに有効な条件下及び同有効な量において投与されることが、国際公開公報第２０１２／１０６３６３号（特許文献１８）に報告されている。
国際公開公報第２０１２／１４９３６５号（特許文献１９）には、凝集したｔａｕに対する反応性を示し、凝集していないＴａｕに対する反応性を実質的に示さない抗体であって、凝集したｔａｕが、直接又はリンカーを介してのいずれかで、１つ以上のシステイン残基において、互いに架橋された少なくとも２つのタンパク質を含む、抗体が報告されている。
アルツハイマー病などのタウオパシーを処置するのに有用な組成物は、Ｔａｕに結合する抗体と、特異的リン酸化Ｔａｕに特異的に結合する特異的位置においてリン酸化セリンを修飾する化合物及びそのフラグメントと、担体とを含むことが、国際公開公報第２０１０／１４２４２３号（特許文献２０）に報告されている。
欧州特許第１８７６１８５号には、リン酸化ポリペプチドを認識する抗体が報告されている。国際公開公報第２０１３／１５１７６２号（特許文献２１）には、ヒト化ｔａｕ抗体が報告されている。国際公開公報第２０１４／０１６７３７号（特許文献２２）には、ヒトリン酸化ｔａｕに対する新規なニワトリモノクローナル抗体及びその使用が報告されている。
国際公開公報第２００４／０５００１６号（特許文献２３）には、ヒトインスリンレセプターを介した医薬品の送達が報告されている。マウスの血液脳関門を通過させるＦａｂカーゴを含む抗トランスフェリンレセプター抗体の経細胞輸送の研究が、Manich G., et al.（Eur. J Pharm. Sci. 49 (2013) 556-564）（非特許文献１３）により報告された。Dufes, C., et al.は、脳及びガン細胞に対する治療剤のターゲット送達のためのトランスフェリン及びトランスフェリンレセプターを報告した（Ther. Deliv. 4 (2013) 629-640（非特許文献１４））。ＢＢＢを通過させる薬剤のレセプター媒介性輸送が、Feng, J-M., et al., Neurometh. 45 (2010) 15-34（非特許文献１５）に報告されている。Pardridge, W., et al.は、トロイの木馬分子による、脳への送達のためのバイオ医薬品の再設計を報告した（Bioconjug. Chem. 19 (2008) 1327-1338（非特許文献１６））。国際公開公報第２００４／０４５６４２号（特許文献２４）には、治療剤のターゲット送達のための多重特異性非共有複合体の使用が報告されている。Ferrari, A., et al.は、ベータアミロイドが組織培養において対らせん状細線維様ｔａｕ原線維を誘引することを報告した（J. Biol. Chem. 278 (2003) 40162-40168（非特許文献１７））。ＰＰ２Ａ活性の基質特異的低下がｔａｕ病理を悪化させることが、Deters, N., et al., Biochem. Biophys. Res. 379 (2009) 400-405（非特許文献１８）に報告されている。
欧州特許第２００９１０４号 国際公開公報第２００２／０６２８５１号 米国特許第７，４４６，１８０号 国際公開公報第９８／２２１２０号 米国特許出願公開公報第２００８／００５０３８３号 国際公開公報第０１／５５７２５号 国際公開公報第０２／０２７０１７号 国際公開公報第２００４／０１６６５５号 欧州特許第１８７６１８５号 国際公開公報第２００６／０５５１７８号 国際公開公報第２００７／０１９２７３号 国際公開公報第２０１０／０３７１３５号 国際公開公報第２０１０／１１５８４３号 国際公開公報第２０１１／０２６０３１号 国際公開公報第２０１１／０５３５６５号 国際公開公報第２０１２／０４５８８２号 国際公開公報第２０１２／０４９５７０号 国際公開公報第２０１２／１０６３６３号 国際公開公報第２０１２／１４９３６５号 国際公開公報第２０１０／１４２４２３号 国際公開公報第２０１３／１５１７６２号 国際公開公報第２０１４／０１６７３７号 国際公開公報第２００４／０５００１６号 国際公開公報第２００４／０４５６４２号
Reynolds, C.H., et al., J. Neurochem. 69 (1997) 191-198 Biochim. Biophys. Acta 1739 (2005) 198-210 Hanger, D.P., et al., J. Biol. Chem. 282 (2007) 23645-23654 Morishima-Kawashima, M., et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 823-829 J. Alzheimer’s Disease 14 (2008) 385-392 Acta Neuropathol. 97 (1999) 221-230 Acta Neuropathol. 103 (2002) 26-35 J. Neurochem. 97 (2006) 1005-1014 Biochem. Biophys. Res. Commun. 379 (2009) 400-405 Science 293 (2001) 1491-1495 Asuni, A.A., et al., J. Neuroscience 27 (2007) 9115-9129 FEBS Lett. 384 (1996) 25-30 Eur. J Pharm. Sci. 49 (2013) 556-564 Ther. Deliv. 4 (2013) 629-640 Feng, J-M., et al., Neurometh. 45 (2010) 15-34 Bioconjug. Chem. 19 (2008) 1327-1338 J. Biol. Chem. 278 (2003) 40162-40168 Deters, N., et al., Biochem. Biophys. Res. 379 (2009) 400-405
本発明は、抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体脳シャトル構築物及びそれを使用する方法を提供する。
抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体と、一価の抗ヒトトランスフェリンレセプター抗体又は抗体フラグメントなどの脳シャトルモジュールとの共有複合体が、脳シャトルモジュールにコンジュゲートしていない抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体と比較して、Ｔａｕ関連病理の減少にほとんど有効でないことが見出されている。さらに、脳シャトルコンジュゲートは、（神経）毒性であると考えられる。この理論に拘束されるものではないが、これは、抗体の作用方式及び抗体ターゲットの細胞局在による可能性がある。
このため、本明細書において、血液脳関門を通過して機能性抗Ｔａｕ（ｐＳ４２２）抗体を輸送するための、本明細書で報告された非共有複合体の使用を報告する。
本明細書で報告された構築物は、ハプテンに対する第１の結合特異性と血液脳関門レセプター（ＢＢＢＲ）に対する第２の結合特異性とを有する二重特異性抗体である血液脳関門シャトルモジュール（ＢＢＢシャトルモジュール）を含む。このようなＢＢＢシャトルモジュールは、血液脳関門における経細胞輸送性細胞表面ターゲット（例えば、ＴｆＲ、ＬＲＰ、又は他のターゲット＝ＢＢＢＲ）を認識し、同時に、ハプテン化ペイロードに結合する。
結合価、抗体フォーマット、ＢＢＢＲ結合親和性に関する更なる要求に合致する必要がないことが見出された。
本明細書で報告された二重特異性抗体系シャトルモジュールが、ハプテン化ペイロードの経細胞輸送を媒介するために、全体として、すなわち、複合体として、血液脳関門の内皮細胞から放出されることが要求されないことも更に見出された。その代りに、二重特異性抗体系シャトルモジュールにより複合体化され、同モジュールに非共有的に結合したハプテン化ペイロードは、ｉ）二重特異性抗体系シャトルモジュールからＢＢＢ細胞内に放出され、すなわち、細胞内小胞系における内部移行後に放出され、ｉｉ）該シャトルモジュールから分離され、ｉｉｉ）その後、ＢＢＢ細胞から脳内にエイソサイトーシスされる（二重特異性抗体をＢＢＢ細胞内に残していく）。
本明細書で報告された二重特異性抗体系シャトルモジュールは、ＢＢＢＲ結合特異性価及びＢＢＢＲ結合特異的親和性に関して非常に可変性である。同時に、本明細書で報告された二重特異性抗体系シャトルモジュールは、シャトルモジュールからペイロードを放出可能である。
本明細書で報告された一態様は、ｉ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、ｉｉ）抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体である。
抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体は、ハプテン、例えば、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合する第２の結合特異性とを含む二重特異性抗体である。
本明細書で報告された一態様は、ｉ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）及びハプテンに特異的に結合する二重特異性抗体と、ｉｉ）ハプテン化抗血液脳関門レセプター抗体との非共有複合体である。
ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）及びハプテンに特異的に結合する抗体は、例えば、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを含む二重特異性抗体である。
本明細書で報告された一態様は、ｉ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、ｉｉ）二重特異性抗体とを含み、二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、ｉ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体と、ｉｉ）二重特異性抗体とを含み、二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、二重特異性抗体の第２の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）及びハプテンに特異的に結合する二重特異性抗体と、ハプテン化抗血液脳関門レセプター抗体との非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含み、二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含み、二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体の使用である。
一実施態様において、ハプテン化抗体は、ビオチン化抗体、テオフィリン抗体、ジゴキシゲニン抗体、カルボラニル抗体、フルオレセイン抗体、へリックス化抗体、及びブロモデオキシウリジン抗体からなる群より選択される。好ましい一実施態様では、ハプテン化抗体は、ビオチン化抗体又はジゴキシゲニン抗体である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するカルボラニル抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するへリックス化抗体、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体からなる群より選択される。好ましい一実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体又はヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体である。
一実施態様において、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体は、血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するカルボラニル抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するへリックス化抗体、及び血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体からなる群より選択される。好ましい一実施態様では、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体は、血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体又は血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体である。
一実施態様において、血液脳関門レセプターは、トランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）、インスリンレセプター、インスリン様成長因子レセプター（ＩＧＦレセプター）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８（ＬＲＰ８）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＲＰ１）、及びヘパリン結合上皮成長因子様成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）からなる群より選択される。好ましい一実施態様では、血液脳関門レセプターは、トランスフェリンレセプターである。
一実施態様において、二重特異性抗体は、２つの結合部位を含む全長抗体である。
一実施態様において、二重特異性抗体は、１つ又は２つのｓｃＦｖ又はｓｃＦａｂ又はＣｒｏｓｓＦａｂ又はｓｃＣｒｏｓｓＦａｂが融合しており、かつ、３つ又は４つの結合部位を含む、全長抗体である。
一実施態様において、二重特異性抗体は、抗体フラグメントである。一実施態様において、抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２及びディアボディから選択される。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒト化又はヒト抗体である。
一実施態様において、二重特異性抗体は、エフェクター機能を有さない。一実施態様において、二重特異性抗体は、機能性Ｆｃ領域を有さない。一実施態様において、二重特異性抗体は、Ｆｃ領域を有さない。一実施態様において、二重特異性抗体は、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのＦｃ領域を有し、ここで、これらの位置は、ＫａｂａｔのＦｃ領域ナンバリングに従って決定される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス）。一実施態様において、二重特異性抗体は、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトＩｇＧ４サブクラスのＦｃ領域を有し、ここで、これらの位置は、ＫａｂａｔのＦｃ領域ナンバリングに従って決定される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス）。
一実施態様において、二重特異性抗体は、
ａ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
ｂ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
ｃ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
ｄ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位
を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、
ａ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
ｂ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
ｃ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
ｄ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位
を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、
ａ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
ｂ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
ｃ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位、又は
ｄ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位
を含む。
前述の実施態様のｂ）及びｃ）の場合には、二重特異性抗体の１つの重鎖は、ホールの変異を含み、各他の鎖は、ノブの変異を含む。
好ましい一実施態様では、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位を含む。
好ましい一実施態様では、二重特異性抗体は、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位とを含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ハプテン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する。
一実施態様において、二重特異性抗体は、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ハプテン結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ハプテン結合特異性）と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する２つの結合特異性とを有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：６９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性は、ヒト化結合特異性である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性は、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：７３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：７９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：６８又は７６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体は、ジゴキシゲニンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：６８又は７６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、ジゴキシゲニン結合特異性は、配列番号：６８又は７６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：７２又は８０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体は、ジゴキシゲニンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：７２又は８０中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、ジゴキシゲニン結合特異性は、配列番号：７２又は８０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する第１の結合特異性（抗ビオチン結合特異性；抗ＢＩ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する第２の結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ビオチン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：８５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：８６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性は、ヒト化結合特異性である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性は、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：８９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：９０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：９１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：９３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：９４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：８４又は９２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ビオチン抗体は、ビオチンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８４又は９２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、ビオチン結合特異性は、配列番号：８４又は９２のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：８８又は９６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ビオチン抗体は、ビオチンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８８又は９６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、ビオチン結合特異性は、配列番号：８８又は９６のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する第１の結合特異性（抗テオフィリン結合特異性；抗ＴＨＥＯ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する第２の結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗テオフィリン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：９７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：９８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：９９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性は、ヒト化結合特異性である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性は、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：１００又は１０８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗テオフィリン抗体は、テオフィリンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１００又は１０８中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、テオフィリン結合特異性は、配列番号：１００又は１０８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：１０４又は１１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗テオフィリン抗体は、テオフィリンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１０４又は１１２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、テオフィリン結合特異性は、配列番号：１０４又は１１２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する第１の結合特異性（抗フルオレセイン結合特異性；抗ＦＬＵＯ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する第２の結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗フルオレセイン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：１１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性は、ヒト化結合特異性である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性は、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：１１６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗フルオレセイン抗体は、フルオレセインに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１１６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、フルオレセイン結合特異性は、配列番号：１１６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：１２０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗フルオレセイン抗体は、フルオレセインに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１２０中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、フルオレセイン結合特異性は、配列番号：１２０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ブロモデオキシウリジンペイロードに特異的に結合する第１の結合特異性（抗ブロモデオキシウリジン結合特異性；抗ＢｒｄＵ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する第２の結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、ブロモデオキシウリジンペイロードに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ブロモデオキシウリジン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：１２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性は、ヒト化結合特異性である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性は、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性は、（ａ）配列番号：１２１又は１２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１２３又は１２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：１２９又は１３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ブロモデオキシウリジン抗体は、ブロモデオキシウリジンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１２９又は１３１中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、ブロモデオキシウリジン結合特異性は、配列番号：１２９又は１３１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性は、配列番号：１３０又は１３２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ブロモデオキシウリジン抗体は、ブロモデオキシウリジンに結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１３０又は１３２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる。場合により、ブロモデオキシウリジン結合特異性は、配列番号：１３０又は１３２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体は、ハプテンとヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体との間に、リンカーを含む。一実施態様において、リンカーは、ペプチドリンカーである。一実施態様において、リンカーは、化学リンカー（非ペプチドリンカー）である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、全長抗体である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕに特異的に結合する。
本明細書で報告されたヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、非リン酸化野生型ヒトＴａｕ及びＴａｕ変異Ｓ４２２Ａに対して、４２２位におけるセリンでリン酸化されているヒトＴａｕに対する選択性を示す。リン酸化されていない野生型ヒトＴａｕ及びＴａｕ変異Ｓ４２２Ａにはそれぞれ、全く結合しないか、又は、より低い親和性で結合する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ
を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、更に、
ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ
を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ
を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）配列番号：２０の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号：２１の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン
を含む。
一実施態様において、非共有複合体は、アルツハイマー病の処置に使用するためのものである。
一実施態様において、複合体中の両抗体は、エフェクター機能サイレントである。一実施態様において、複合体中の両抗体は、エフェクター機能を有さない。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下、及び／又は
ｂ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下、及び／又は
ｃ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下、及び／又は
ｄ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下
の、ＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）（配列番号：０２）に特異的に結合する抗体は、ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に結合しない。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合する抗体フラグメントであり、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、又は
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、
ｄ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、
ｅ）両重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｆ）両重鎖に変異Ｓ２２８Ｐ及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体
である。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：１８、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１３、配列番号：１４、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：０９、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１２、配列番号：０５、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：０９、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１３、配列番号：１４、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：２０のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：２１のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
全ての態様の好ましい一実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、重鎖可変ドメインの４、２４、及び７８位に、バリン残基を有する。
全ての態様の好ましい一実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、重鎖可変ドメインの７１位に、アルギニン残基を有する。
本明細書で報告された一態様では、本明細書で報告された非共有複合体と、薬学的に許容し得る担体とを含む、
医薬製剤である。
一実施態様において、医薬製剤は、さらに、更なる治療剤を含む。
一実施態様において、更なる治療剤は、抗アミロイド治療剤である。一実施態様において、抗アミロイド治療剤は、抗ヒトアルファシヌクレイン抗体又は抗Ａベータ抗体である。一実施態様において、抗ヒトアルファシヌクレイン抗体又は抗Ａベータ抗体は、ハプテン化されている。一実施態様において、抗ヒトアルファシヌクレイン抗体又は抗Ａベータ抗体は、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との複合体の状態にある。
本明細書で報告された一態様は、医薬として使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、アルツハイマー病の処置に使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、前駆性アルツハイマー病の処置に使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、軽度アルツハイマー病の処置に使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性を減少させるのに使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、認知及び機能を維持するのに使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、認知及び機能が衰える速度を遅らせるのに使用するための、本明細書で報告された非共有複合体である。
本明細書で報告された一態様は、医薬の製造における、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
一実施態様において、医薬は、アルツハイマー病を処置するためのものである。
一実施態様において、医薬は、前駆性アルツハイマー病を処置するためのものである。
一実施態様において、医薬は、軽度アルツハイマー病を処置するためのものである。
一実施態様において、医薬は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性を減少させるためのものである。
一実施態様において、医薬は、認知及び機能を維持するためのものである。
一実施態様において、医薬は、認知及び機能が衰える速度を遅らせるためのものである。
本明細書で報告された一態様は、アルツハイマー病を有する個体を処置する方法であって、
有効量の、本明細書で報告された非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法である。
本明細書で報告された一態様は、個体におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性を減少させる方法であって、
Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変成を減少させるのに有効量の、本明細書で報告された非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法である。
本明細書で報告された一態様は、個体における認知及び機能を維持する方法であって、
認知及び機能を維持するのに有効量の、本明細書で報告された非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法。
本明細書で報告された一態様は、個体における認知及び機能が衰える速度を遅らせる方法であって、
認知及び機能が衰える速度を遅らせるのに有効量の、本明細書で報告された非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法である。
本明細書で報告された一態様は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性の減少における、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、認知及び機能を維持するのにおける、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、認知及び機能が衰える速度を遅らせるのにおける、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された非共有複合体は、アルツハイマー病の処置に使用することができる。
本明細書で報告された非共有複合体で、アルツハイマー病及び神経病理の進行の阻害／減少を達成することができる。
本明細書で報告された非共有複合体は、アルツハイマー病の進行を防止するのに使用することができ、又は、アルツハイマー病の進展を停止させるのにも使用することができる。
一実施態様において、本明細書で報告された非共有複合体は、ｉ）Ｔａｕ（ｐＳ４２２）トランスジェニックマウス及びアルツハイマー病患者の脳切片におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合し、及び／又は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）トランスジェニック細胞中のＴａｕ（ｐＳ４２２）をラベルする。
本明細書で報告された一態様は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）中の配列番号：０３のアミノ酸配列に特異的に結合する非共有複合体である。
本明細書で報告された非共有複合体は、初期及び後期疾患関連型のヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合し／同ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）を特異的に認識する。
本明細書で報告された一態様は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）関連アルツハイマー病の拡散を予防するための、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、リソソーム膜崩壊の減少のための、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経不安定化及び／又は崩壊に対するリソソーム膜の安定化のための、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された一態様は、アルツハイマー病の進展の予防のための、本明細書で報告された非共有複合体の使用である。
本明細書で報告された非共有複合体は、細胞間でシードとなり、広がるヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の抗体媒介性阻害により機能する。
本明細書で報告された非共有複合体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合することにより、原線維損傷からリソソームを保護する。
ウサギ及びヒト化軽鎖可変ドメインの配列アライメント；ＣＤＲを四角で囲う。 ウサギ及びヒト化重鎖可変ドメインの配列アライメント；ＣＤＲを四角で囲う。 （Ａ）リン酸化ｔａｕペプチド、（Ｂ）リン酸化全長ヒトｔａｕ、（Ｃ）非リン酸化ｔａｕペプチド、（Ｄ）非リン酸化全長ヒトｔａｕに対する種々の組み合わせのヒト化ＶＨ及びＶＬ；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ２０／ＶＬ２２、（４）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２、（５）＝ＶＨ３３／ＶＬ２２の生化学的結合性；コーティング濃度：リン酸化ｔａｕペプチド：５０ng/mL、他の全てのターゲット：１μg/mL（リン酸化ｔａｕペプチドを１μg/mLでコートした場合、比較可能な結果が得られる（データを示さず））。 （Ａ）＝全長ヒトｔａｕ Ｓ４２２Ａ変異体、（Ｂ）凝集したヒトｔａｕ（ｐＳ４２２）に対する種々の組み合わせのヒト化ＶＨ及びＶＬ；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ２０／ＶＬ２２、（４）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２、（５）＝ＶＨ３３／ＶＬ２２の生化学的結合性；コーティング濃度：リン酸化ｔａｕペプチド：５０ng/mL、他の全てのターゲット：１μg/mL（リン酸化ｔａｕペプチドを１μg/mLでコートした場合、比較可能な結果が得られる（データを示さず））。 選択したＶＨ／ＶＬの組み合わせ；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ２０／ＶＬ２２、（４）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２、（５）＝ＶＨ３３／ＶＬ２２の選択性を示すウェスタンブロット。 アルツハイマー病患者の脳抽出物中の過剰リン酸化ｔａｕに対する結合性；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２。 血液脳関門−シャトルモジュール組成のスキーム。 実施例１４で産生された血液脳関門−シャトルモジュールのＳＥＣプロファイル及びＳＤＳ ＰＡＧＥ。 ＴｆＲ発現ＢＢＢ系細胞株としてｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞及び蛍光ペイロードとしてＤｉｇ−Ｃｙ５を使用する、ＦＡＣＳ分析の結果。 ハプテン結合二重特異性抗体血液脳関門−シャトルモジュールの経細胞輸送及び内皮細胞からの放出；Ａ：抗ＣＤ３３−ｄｉｇ抗体のトランスウェルアッセイ、ｈｕＦｃ ＥＬＩＳＡ；Ｂ：抗ＴｆＲ１抗体のトランスウェルアッセイ、ｈｕＦｃ ＥＬＩＳＡ；Ｃ：抗ＴｆＲ１抗体−Ｄｉｇのトランスウェルアッセイ、ｈｕＦｃ ＥＬＩＳＡ；Ｄ：抗ＴｆＲ２抗体のトランスウェルアッセイ、ｈｕＦｃ ＥＬＩＳＡ；Ｅ：抗ＴｆＲ２−抗体Ｄｉｇのトランスウェルアッセイ、ｈｕＦｃ ＥＬＩＳＡ。 二重特異性抗体−ハプテン化ペイロード非共有複合体の組成及び定量 ＴｆＲに対する低下した親和性を有する二重特異性抗体を使用するハプテン化ペイロードの経細胞輸送及び内皮細胞からの放出（Ａ：抗ＣＤ３３−Ｄｉｇ＋Ｄｉｇ−ＤＮＡのトランスウェルアッセイ、ｑＰＣＲ；Ｂ：抗ＣＤ３３−Ｂｉｏ＋Ｂｉｏ−ＤＮＡのトランスウェルアッセイ、ｑＰＣＲ；Ｃ：抗ＴｆＲ２−Ｄｉｇ＋Ｄｉｇ−ＤＮＡのトランスウェルアッセイ、ｑＰＣＲ；Ｄ：抗ＴｆＲ２−Ｂｉｏ＋Ｂｉｏ−ＤＮＡのトランスウェルアッセイ、ｑＰＣＲ）。 ＴｆＲに対する高い親和性を有する非放出性血液脳関門−シャトルモジュールを適用するハプテン化ペイロードの経細胞輸送及び内皮細胞からの放出（Ａ：抗ＴｒＦ１−Ｄｉｇ＋Ｄｉｇ−ＤＮＡのトランスウェルアッセイ、ｑＰＣＲ；Ｂ：抗ＴｆＲ１抗体−Ｂｉｏ＋Ｂｉｏ−ＤＮＡのトランスウェルアッセイ、ｑＰＣＲ）。 ＴｆＲに対する高い親和性を有する非放出性血液脳関門−シャトルモジュールからのハプテン化ペイロードの結合性、取込み、及び細胞内分離。二重特異性抗体複合体化ハプテン化蛍光ペイロードの、３７℃で３時間インキュベーションした後のｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞内での細胞内分離を示す。ＤＩＧ−ＤＮＡ−ＣＹ５又はＢｉｏ−ＤＮＡ−Ｃｙ５（ダークグレー）が、区別できる細胞内小胞中に現れ、内部移行した抗ジゴキシゲニン又は抗ビオチン結合二重特異性抗体（ミディアムグレー）とは重ならない。 ２．５モル濃度過剰の、共有複合体０１５６を形成する化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列を使用する、抗体０１５５のＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異２との結合のＳＤＳ ＰＡＧＥゲル。１＝ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異２；２＝抗体００１９；３＝抗体０１５５。 抗体０１５７のＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１との結合のＳＤＳ ＰＡＧＥゲル。１＝ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１（酸化型）；２＝対照結合（酸化型）；３＝共有コンジュゲート（酸化型）；４＝分子量マーカー；５＝共有コンジュゲート（還元型）；６＝対照結合（還元型）；７＝ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１（還元型）。 抗体０１５５、配列番号：２８の欠失したＣ末端リシン残基と共にPseudomonas外毒素分子ＬＲ８Ｍを含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１、及びその共有コンジュゲートのＳＥＣクロマトグラム。 非還元型サンプルについての、ＳＤＳ−ＣＥ、Ｃａｌｉｐｅｒによるコンジュゲーション効率の分析。 Ａ：ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、抗ＴｆＲ／ＢＲＤＵ二重特異性抗体とＢＲＤＵ−ラベルＤＮＡとの複合体、ならびに、遊離した二重特異性抗体及び遊離したＢＲＤＵ−ＤＮＡを特定し、特徴決定するために行った。複合体を、カラムから２４４．９kDaのＭＷで溶出する。遊離した二重特異性抗体を、２１５．４kDaのＭＷで検出する。遊離したＢＲＤＵ−ＤＮＡを、１６．４kDaのＭＷで検出する。Ｂ：ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、抗ＴｆＲ／ＢＲＤＵ二重特異性抗体とＢＲＤＵ−ラベルＤＮＡとの複合体、ならびに、遊離した二重特異性抗体及び遊離したＢＲＤＵ−ＤＮＡを特定し、特徴決定するために行った。複合体は、流体力学的半径６．８nmを示す。一方、遊離した二重特異性抗体は、流体力学的半径６．２nmを示す。 Ａ：ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体とビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体との複合体、ならびに、遊離した二重特異性抗体及び遊離したビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体を特定し、特徴決定するために行った。複合体は、流体力学的半径８．０nmを示す。一方、遊離した二重特異性抗体は、流体力学的半径６．２nmを示す。そして、遊離したビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体は、流体力学的半径５．５nmを示す。Ｂ：ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体とビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体との複合体、ならびに、遊離した二重特異性抗体及び遊離したビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体を特定し、特徴決定するために行った。複合体を、カラムから５０１kDaのＭＷで溶出する。遊離した二重特異性抗体を、２０５kDaのＭＷで検出する。遊離したビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体を、１５０kDaのＭＷで検出する。 Ｃ：悪い組み合わせのハプテン及び抗ハプテン抗体を使用した場合、複合体は形成されない。 ビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体と抗ＣＤ３３／ビオチン二重特異性抗体との複合体（左上パネル）及び遊離したビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体（右上パネル）は、効果的にエンドサイトーシスされず（細胞ライゼート、実線）、基底（左カラム、ライトグレー）又は頂端（右カラム、ブラック）の区画に輸送されない（ローディング３．８μg/mL）。ビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体を、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体１（左下パネル）又は、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体２（右下パネル）のいずれかと複合体化することは、効果的なエンドサイトーシス（細胞ライゼート、実線）、ならびに、ビオチン−ラベル抗ｐＴａｕ抗体の基底（左カラム、ライトグレー）区画へのその後の輸送、及び、頂端（右カラム、ブラック）区画に戻るその後の輸送を媒介する（ローディング３．８μg/mL）。 二重特異性抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）／ビオチン抗体とビオチン化抗ＴｆＲ抗体Ｆａｂフラグメントとの非共有複合体の経細胞輸送アッセイの結果。
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書で使用する場合、全ての定常領域ならびに重鎖及び軽鎖のドメインのアミノ酸位置は、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)に記載されたＫａｂａｔナンバリングシステムに従って、ナンバリングされ、本明細書において、「Ｋａｂａｔに従ったナンバリング」と呼ばれる。具体的には、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)のＫａｂａｔナンバリングシステム（６４７〜６６０頁を参照のこと）は、カッパ及びラムダアイソタイプの軽鎖定常ドメインＣＬに使用される。Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスナンバリングシステム（６６１〜７２３頁を参照のこと）は、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３）に使用される。
本明細書における目的で、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されているヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク由来の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでもよいし、又は、同フレームワークは、アミノ酸配列の変化を含有してもよい。一部の実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。一部の実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して同一の配列である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の１つの結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間における非共有的相互作用の総計強度を意味する。特に断りない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合対メンバー（例えば、抗体と抗原）間における１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を意味する。分子ＸとそのパートナーＹとの親和性は、一般的には、解離定数（ｋｄ）により表現することができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含めて、当技術分野において公知の一般的な方法により測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な実例となり、かつ、例示的な実施態様は、以下に記載されている。
「親和性成熟」抗体は、このような変異を有さない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において、１つ以上の変異を有する抗体を意味する。このような変異は、抗原に対する抗体の親和性における改善をもたらす。
「抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体」及び「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体」という用語は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に十分な特異性を有して結合可能な抗体を意味する。このため、該抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）をターゲットとする診断剤及び／又は治療剤として有用である。一実施態様において、関連しない非ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体の結合の度合いは、例えば、放射性免疫アッセイ法（ＲＩＡ）により測定された場合、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する抗体の結合性の約１０％未満である。
本明細書において、「抗体」という用語は、最も広い意味に使用され、種々の抗体構造を包含し、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限りにおいて抗体フラグメントを含むがこれらに限定されない。
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を意味する。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ディアボディ；直線抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；ＣｒｏｓｓＦａｂ；及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を含むがこれらに限定されない。
「ビオチン」、略した「ＢＩ」という用語は、５−［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル］ペンタン酸を指す。また、ビオチンは、ビタミンＨ又は補酵素Ｒとしても公知である。
「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体」という用語は、ビオチン部分、場合により、リンカー、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を含むコンジュゲート実体を指す。該リンカーは、任意のリンカー、例えば、ペプチドリンカー又は化学リンカーなどであることができる。
「二重特異性抗体」という用語は、２種類の（抗原／ハプテン）結合特異性を有する抗体を指す。一実施態様において、二重特異性抗体は、２種類の抗原、すなわち、ハプテン及び非ハプテン抗原に対して特異的である。
「ブロモデオキシウリジン」、略した「ＢｒｄＵ」という用語は、５−ブロモ−２’−デオキシウリジンを指す。また、ブロモデオキシウリジンは、ブロクスウリジン、ＢｕｄＲ、ＢｒｄＵｒｄとしても公知である。
「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体」という用語は、ブロモデオキシウリジン部分、場合により、リンカー、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を含むコンジュゲート実体を指す。該リンカーは、任意のリンカー、例えば、ペプチドリンカー又は化学リンカーなどであることができる。
「ジゴキシゲニン」、略した「ＤＩＧ」という用語は、３−［（３Ｓ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２，１４−トリヒドロキシ−１０，１３−ジメチル−１，２，３，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−シクロペンタ［ａ］−フェナントレン−１７−イル］−２Ｈ−フラン−５−オン（ＣＡＳ番号１６７２−４６−４）を指す。ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）は、Digitalis purpurea、Digitalis orientalis、及びDigitalis lanata（ジギタリス）植物の花及び葉に排他的に見出されたステロイドである（Polya, G., Biochemical targets of plant bioactive compounds, CRC Press, New York (2003) p. 847）。
「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体」という用語は、ジゴキシゲニン部分、場合により、リンカー、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を含むコンジュゲート実体を指す。該リンカーは、任意のリンカー、例えば、ペプチドリンカー又は化学リンカーなどであることができる。
「フルオレセイン」、略した「ＦＬＵＯ」という用語は、６−ヒドロキシ−９−（２−カルボキシフェニル）−（３Ｈ）−キサンテン−３−オン、あるいは、２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−（３Ｈ）−キサンテン−９−イル）安息香酸を指す。フルオレセインは、レゾルシノールフタレイン、Ｃ．Ｉ．４５３５０、ソルベントイエロー９４、Ｄ＆Ｃイエローｎｏ．７、アンジオフルオル（angiofluor）、ジャパンイエロー２０１、又はソープイエローとしても公知である。
「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体」という用語は、フルオレセイン部分、場合により、リンカー、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を含むコンジュゲート実体を指す。該リンカーは、任意のリンカー、例えば、ペプチドリンカー又は化学リンカーなどであることができる。
「テオフィリン」、略した「ＴＨＥＯ」という用語は、１，３−ジメチル−７Ｈ−プリン−２，６−ジオンを指す。テオフィリンは、ジメチルキサンチンとしても公知である。
「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体」という用語は、テオフィリン部分、場合により、リンカー、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を含むコンジュゲート実体を指す。該リンカーは、任意のリンカー、例えば、ペプチドリンカー又は化学リンカーなどであることができる。
「ハプテン」という用語は、タンパク質などの大きな担体に付着した場合にのみ、免疫応答を誘引することができる小分子を指す。例示的なハプテンは、アニリン、ｏ−、ｍ−、及びｐ−アミノ安息香酸、キノン、ヒスタミン−スクシニル−グリシン（ＨＳＧ）、ヒドララジン、ハロタン、インジウム−ＤＴＰＡ、フルオレセイン、ビオチン、ジゴキシゲニン、テオフィリン、ブロモデオキシウリジン、及びジニトロフェノールである。一実施態様において、ハプテンは、ビオチン又はジゴキシゲニン又はテオフィリン又はフルオレセイン又はブロモデオキシウリジンである。
「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体」という用語は、ハプテンがヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体に（共有的に）コンジュゲートしていることを指す。活性化ハプテン誘導体は、このようなコンジュゲートの形成のための開始材料として使用することができる。一実施態様において、ハプテンは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体に、リンカーを介して（一実施態様において、その３−ヒドロキシ基を介して）コンジュゲートしている。一実施態様において、該リンカーは、ａ）１つ以上（一実施態様において、３〜６つ）のメチレン−カルボキシ−メチル基（−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−）、及び／又は、ｂ）１〜１０個（一実施態様において、１〜５個）のアミノ酸残基（一実施態様において、グリシン、セリン、グルタミン酸、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、ε−アミノカプロン酸、又はリシンから選択される）、及び／又は、ｃ）１つ以上（一実施態様において、１つ又は２つ）の構造式ＮＨ２−［（ＣＨ２）ｎＯ］ｘＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ（式中、ｎは、２又は３であり、ｘは、１〜１０、一実施態様において、１〜７である）を有する化合物を含む。最後の要素は、式−ＮＨ−［（ＣＨ２）ｎＯ］ｘＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−の（部分的な）リンカーを（少なくとも部分的に）もたらす。このような化合物の一例は、例えば、１２−アミノ−４，７，１０−トリオキサドデカン酸（ＴＥＧ（トリエチレングリコール）リンカーをもたらす）である。一実施態様において、該リンカーは、マレイミド基を更に含む。加えて、該リンカーは、抗ハプテン抗体のヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンへの結合を、立体的に容易にすることができる。一実施態様において、該リンカーは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体のアミノ酸の側鎖にコンジュゲートする（例えば、アミノ又はチオール基を介して、リシン又はシステインの側鎖にコンジュゲートする）。一実施態様において、該リンカーは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体のアミノ末端又はカルボキシ末端にコンジュゲートする。該リンカーのヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体へのコンジュゲーション位置は、典型的には、該リンカーへのコンジュゲーションがヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の生体活性に影響を及ぼさない領域にあるように選択される。したがって、該リンカーの付着位置は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の生体活性を担う関連する構造要素により決まる。ハプテンが付着したヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の生体活性は、コンジュゲーションの前後にｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ法で試験することができる。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定のソース又は種に由来し、一方、重鎖及び／又は軽鎖の残り部分が、異なるソース又は種に由来する抗体を意味する。
抗体の「クラス」は、その重鎖により保有されている定常ドメイン又は定常領域の種類を意味する。５つの主なクラスの抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分割することができる。種々のクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域に起因する、それらの生物学的活性を意味する。同Ｆｃ領域は、抗体クラスにより変化する。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合性及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）；Ｆｃレセプター結合性；抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化を含む。
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、所望の治療的又は予防的結果を達成するのに必要な用量及び期間において、有用な量を意味する。
本明細書において、「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用される。この用語は、ネイティブな配列のＦｃ領域及び変異型のＦｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に広がっている。ただし、Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもよいし、又は、存在しなくてもよい。本明細書において特に断りない限り、Ｆｃ領域又は定常領域中のアミノ酸残基のナンバリングは、Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242に記載されており、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵナンバリングシステムに従う。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を意味する。可変ドメインのＦＲは、一般的には、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的には、ＶＨ（又はＶＬ）における下記配列：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で表される。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、ネイティブな抗体構造と実質的に同じ構造を有するか、又は、本明細書で定義されたＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を意味するのに、本明細書において互換的に使用される。「全長抗体」という用語は、ジスルフィド結合により連結された２つの抗体軽鎖ポリペプチドと２つの抗体重鎖ポリペプチドとからなる多量体ポリペプチドを指す。この場合、２つの抗体重鎖ポリペプチドにおいて、Ｃ末端リシン残基（Ｋ）は、存在してもよいし、又は、存在しなくてもよい。
「ホスト細胞」、「ホスト細胞株」、及び「ホスト細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性の核酸が導入されている細胞を意味し、このような細胞の子孫を含む。ホスト細胞は、「トランスフォーマント」及び「トランスフォーメーションされた細胞」を含む。トランスフォーメーションされた細胞は、初代のトランスフォーメーションされた細胞と、継代回数に関わらずそれ由来の子孫とを含む。子孫は、核酸含量において、親細胞と完全に同一でなくてもよく、突然変異を含有してもよい。元のトランスフォーメーションされた細胞についてスクリーニング又は選択されたのと同じ機能又は生体活性を有する突然変異子孫は、本明細書に含まれる。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に出現するアミノ酸残基を表現するフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、サブグループの可変ドメイン配列からである。一般的には、サブグループの配列は、Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Bethesda MD (1991), NIH Publication 91-3242, Vols. 1-3におけるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは、前記Kabat et al.,におけるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは、前記Kabat et al.,におけるサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基と、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基とを含むキメラ抗体を意味する。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含むであろう。その中で、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全部又は実質的に全部が、非ヒト抗体のそれらに対応し、ＦＲの全部又は実質的に全部が、ヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は、場合により、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含むことができる。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を意味する。
本明細書で使用する場合、「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、配列において超可変性であり（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）、構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／又は、抗原接触残基（「抗原コンタクト」）を含有する、抗体の可変ドメインの各領域を意味する。一般的には、抗体は、６つのＨＶＲ；ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。
本明細書において、ＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる超可変ループ（Chothia、C. and Lesk、A.M.、J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917）と、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）において生じるＣＤＲ（Kabat、E.A. et al.、Sequences of Proteins of Immunological Interest、5th ed. Public Health Service、National Institutes of Health、Bethesda、MD (1991)、NIH Publication 91-3242）と、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）において生じる抗原コンタクト（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）と、
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせとを
含む。
特に断りない限り、可変ドメイン中のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において、前記Kobat et al.,に従ってナンバリングされる。
「免疫コンジュゲート」は、１つ以上の異種分子にコンジュゲートした抗体である。
「個体」又は「対象」は、哺乳類である。哺乳類は、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ、ならびにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含むがこれらに限定されない。特定の実施態様では、個体又は対象は、ヒトである。
「単離された抗体」は、その本来の環境の成分から分離されているものである。一部の実施態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）により決定された場合、９５％又は９９％より高い純度に精製される。抗体純度を評価するため方法のレビューについては、例えば、Flatman, S. et al., J. Chromatogr. B 848 (2007) 79-87を参照のこと。
「単離された核酸」は、その本来の環境の成分から分離されている核酸分子を意味する。単離された核酸は、核酸分子を通常含有する細胞中に含有されるが、この核酸分子が、染色体外又はその本来の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する核酸分子を含む。
抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体をコードする単離された核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（又は、それらのフラグメント）をコードする１つ以上の核酸分子を意味し、１つのベクター又は別箇のベクター中にこのような核酸分子を含む。このような核酸分子は、ホスト細胞中の１つ以上の位置に存在する。
本明細書で使用する場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を意味する。すなわち、この集団に含まれる個々の抗体は、自然発生的に生じる変異を含有し、又は、モノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性ある変異型抗体を除いて、同一であり、及び／又は、同じエピトープに結合する。このような変異体は、一般的には、少量しか存在しない。種々の決定因子（エピトープ）に対する種々の抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の１つの決定因子を対象にする。このため、「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均質な集団から得られた抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるものではない。例えば、本発明に基づいて使用されるモノクローナル抗体は、各種の技術により調製することができる。同技術は、ハイブリドーマ法、リコンビナントＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリンローカスの全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない。モノクローナル抗体を調製するためのこのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
「ネイティブな抗体」は、変化する構造を有する、天然の免疫グロブリン分子を意味する。例えば、ネイティブなＩｇＧ抗体は、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、ジスルフィド結合している、２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖とから構成される。Ｎ末端からＣ末端にかけて、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続けて、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端にかけて、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続けて、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の内の１つに割り当てることができる。
「添付文書」という用語は、治療剤製品の商業的な梱包に習慣的に含まれる説明書を意味するのに使用され、適用症、用途、用量、投与、組み合わせ治療、禁忌、及び／又はこのような治療剤製品の使用に関する警告についての情報を含有する。
参照ポリペプチド配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列同一性の一部として保存的置換を何ら考慮せずに、配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入して、最大のパーセント同一性を達成した後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的でのアライメントは、当業者の範囲内にある種々の方法で、例えば、公衆に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGN、又はMegalign（DNASTAR）ソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、配列をアライメントするための適切なパラメータを決定することができる。同パラメータは、比較される配列の全長に対する最大アライメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含む。ただし、本明細書の目的で、％ アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムであるALING-2を使用して生成される。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムは、Genentech, Inc.,により作製され、ソースコードは、U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559にユーザ文書としてファイルされており、同ソースコードは、著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ALIGN-2プログラムは、Genentech, Inc., South San Francisco, Californiaから公衆に利用可能であり、又は、ソースコードからコンパイルすることができる。ALIGN-2プログラムは、デジタルUNIX（登録商標）V4.0Dを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレイティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムにより設定されており、変更しない。
ALIGN-2がアミノ酸配列比較に利用される状況において、所定のアミノ酸配列Ｂに対する、同配列Ｂと共に、又は、同配列Ｂに対する、所定のアミノ酸配列Ａの％ アミノ酸配列同一性（％ アミノ酸配列同一性は、所定のアミノ酸配列Ｂに対する、同配列Ｂと共に、又は、同配列Ｂに対する、特定の％ アミノ酸配列同一性を有する又は含む所定のアミノ酸配列Ａとして代替的に表現することができる）は、下記のように算出される。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムALIGN-2により、Ａ及びＢのそのプラグラムアライメントにおいて、同一マッチとしてスコアされたアミノ酸残基数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さは、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくなく、Ｂに対するＡの％ アミノ酸配列同一性は、Ａに対するＢの％ アミノ酸配列同一性と等しくないであろうことを理解されたい。特に断りない限り、本明細書において使用される全ての％ アミノ酸配列同一性値は、ALIGN-2コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載されているように得られる。
「医薬製剤」という用語は、有効であるようにそれに含有される活性成分の生物学的活性を可能にするような形態にあり、この製剤が投与されるであろう対象に許容できない毒性を有する更なる成分を含有しない調製物を意味する。
「薬学的に許容し得る担体」は、活性成分以外の医薬製剤中の成分を意味し、対象に対して毒性を有さない。薬学的に許容し得る担体は、バッファー、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用する場合、「ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）」という用語は、ネイティブなヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ３７８４０）を意味する。この用語は、「全長」の処理されていないヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）及び細胞中での処理により生じる任意の形態のヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）を包含する。また、この用語は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の天然の変異体、例えば、変異体、スプライス変異体、又はアレル変異体を包含する。ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）のアミノ酸配列は、配列番号：０２に示される。
本明細書で使用する場合、「処置」（及びその文法上のバリエーション、例えば、「処置する」又は「処置すること」）は、処置される個体の本来の経過を変化させる試みにおける臨床的介在を意味し、予防又は臨床病理の経過中のいずれかにおいて行うことができる。処置の望ましい効果は、疾患の発生又は再発を予防すること、兆候の緩和、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移の予防、疾患の進展速度の低下、疾患状態の改善又は寛解、及び緩和又は改善された予後を含むがこれらに限定されない。一部の実施態様では、本発明の抗体は、疾患の進行を遅延させ、又は、疾患の進展を遅れさせるのに使用される。
「ｘ価」、例えば、「一価」又は「二価」又は「三価」又は「四価」という用語は、抗体分子中の、特定数の結合部位、すなわち、「ｘ」の存在を指す。このため、「二価」、「四価」、及び「六価」という用語は、抗体分子中の、２つの結合部位、４つの結合部位、及び６つの結合部位の存在をそれぞれ指す。二重特異性抗体は、少なくとも「二価」であり、「三価」又は「多価」（例えば、「四価」又は「六価」）でもよい。一実施態様において、二重特異性抗体は、二価、三価、又は四価である。一実施態様において、二重特異性抗体は、二価である。一実施態様において、二重特異性抗体は、三価である。一実施態様において、二重特異性抗体は、四価である。
二重特異性抗体は、３つ以上の結合部位が存在する（すなわち、抗体が三価又は四価である）場合でも、二重特異性であることができる。二重特異性抗体という用語は、例えば、多価の一本鎖抗体、ディアボディ、及びトリアボディ、ならびに、更なる抗原結合部位（例えば、一本鎖Ｆｖ、ＶＨドメイン、及び／もしくはＶＬドメイン、Ｆａｂ、又は（Ｆａｂ）２）が１つ以上のペプチドリンカーを介して連結されている全長抗体の定常ドメイン構造を有する抗体を含む。該抗体は、１つの種からの全長であることができ、又は、キメラ化もしくはヒト化されていることができる。３つ以上の抗原結合部位を有する抗体について、一部の結合部位は、該抗体が２種類の抗原に対する結合部位を有する限り、同一でもよい。すなわち、第１の結合部位がハプテンに対して特異的である一方で、第２の結合部位は、非ハプテン抗原に対して特異的である、及びその反対である。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に抗体を結合させるのに関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを意味する。ネイティブな抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般的には、４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む各ドメインを有する類似構造を有する（例えば、Kindt, T.J. et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., N.Y. (2007), page 91を参照のこと）。１つのＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であることができる。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、相補なＶＬ又はＶＨドメインそれぞれのライブラリをスクリーニングするための抗原に結合する抗体からのＶＨ又はＶＬドメインを使用して単離することができる。例えば、Portolano, S. et al., J. Immunol. 150 (1993) 880-887；Clackson, T. et al., Nature 352 (1991) 624-628を参照のこと。
本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語は、それが連結している別の核酸を伝播可能な核酸分子を意味する。この用語は、自己複製核酸構築物としてのベクターと、それが導入されるホスト細胞のゲノム内に組み込まれるベクターとを含む。特定のベクターは、それらが操作可能に連結している核酸の発現に向けさせることができる。このようなベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と呼ばれる。
ＩＩ．組成物及び方法
Ａ．本明細書で報告された血液脳関門シャトル
本明細書で報告された非共有複合体の一部分は、ハプテンに対する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプター（ＢＢＢＲ）に対する第２の結合特異性とを有する二重特異性抗体である血液脳関門−シャトルモジュール（ＢＢＢＲ−シャトルモジュール）である。このようなＢＢＢＲ−シャトルモジュールは、血液脳関門上の経細胞輸送可能な細胞表面ターゲット（例えば、ＴｆＲ、ＬＲＰ、又は他のターゲット、ＢＢＢＲ）を認識し、同時に、ハプテン化ペイロードに結合する。
結合価、抗体フォーマット、ＢＢＢＲ結合親和性に関する更なる要求に合致する必要がないことが見出された。
本明細書で報告された二重特異性抗体系シャトルモジュールが、ハプテン化ペイロードの経細胞輸送を媒介するために、血液脳関門の内皮細胞から放出されることが要求されないことも更に見出された。その代りに、二重特異性抗体系シャトルモジュールにより複合体化され／同モジュールに結合したハプテン化ペイロードは、ＢＢＢＲに対する結合性に基づいて、二重特異性抗体系シャトルモジュールからＢＢＢ細胞内に放出され、すなわち、細胞内小胞系において、該シャトルモジュールから分離され、その後、二重特異性抗体をＢＢＢ細胞内に残して、ＢＢＢ細胞から脳内にエイソサイトーシスされる。
本明細書で報告された二重特異性抗体系シャトルモジュールは、結合特異性価及びＢＢＢＲ結合特異性の親和性に関して非常に可変性である。同時に、本明細書で報告された二重特異性抗体系シャトルモジュールは、該シャトルモジュールからペイロードを放出可能である。
多重特異性抗体
広い各種のリコンビナント抗体フォーマット、例えば、ＩｇＧ抗体フォーマットと１つの鎖ドメインとの融合による三価の二重特異性抗体が、開発されてきた（例えば、Coloma, M.J., et al., Nature Biotech 15 (1997) 159-163；国際公開公報第２００１／０７７３４２号；及びMorrison, S.L., Nature Biotech 25 (2007) 1233-1234を参照のこと）。
また、２つ以上の抗原に結合可能な、抗体のコア構造（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ）がもはや保持されていない幾つかの他のフォーマット、例えば、ディアボディ、トリアボディ、又はテトラボディ、ミニボディ、幾つかの一本鎖フォーマット（ｓｃＦｖ、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）も、開発されてきた（Holliger, P., et al., Nature Biotech 23 (2005) 1126-1136；Fischer, N., Leger, O., Pathobiology 74 (2007) 3-14；Shen, J., et al., Journal of Immunological Methods 318 (2007) 65-74；Wu, C., et al., Nature Biotech. 25 (2007) 1290-1297）。
このようなフォーマットは全て、抗体コア（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ）の更なる結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）への融合、又は、例えば、２つのＦａｂフラグメントもしくはｓｃＦｖ（Fischer, N. and Leger, O., Pathobiology 74 (2007) 3-14）又はＣｒｏｓｓＦａｂへの融合のいずれかをさせるリンカーを使用する。エフェクター機能、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）又は抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を保持したい場合があることを念頭に置く必要がある。これらのエフェクター機能は、天然の抗体に対する高度の類似性を維持することにより、Ｆｃレセプター結合を介して媒介される。
国際公開公報第２００７／０２４７１５号には、操作された多価及び多重特異性結合タンパク質として、二重可変ドメイン免疫グロブリンが報告されている。生体活性な抗体二量体を調製するための方法は、米国特許第６，８９７，０４４号に報告されている。ペプチドリンカーを介して互いに連結している、少なくとも４つの可変ドメインを有する多価ＦＶ抗体構築物が、米国特許第７，１２９，３３０号に報告されている。二量体及び多量体抗原結合構造体が、米国特許出願公開公報第２００５／００７９１７０号に報告されている。結合構造により互いに共有的に結合した３つ又は４つのＦａｂフラグメントを含む三価又は四価の単特異性抗原結合タンパク質（このタンパク質は、天然の免疫グロブリンではない）が、米国特許第６，５１１，６６３号に報告されている。国際公開公報第２００６／０２０２５８号において、四価の二重特異性抗体は、原核生物及び真核生物の細胞中で効率的に発現させることができ、治療法及び診断法に有用であることが報告されている。２種類のポリペプチド二量体を含む混合物から、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して連結された二量体を、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して連結されていない二量体と分離又は優先的に合成する方法が、米国特許出願公開公報第２００５／０１６３７８２号に報告されている。二重特異性四価レセプターが、米国特許第５，９５９，０８３号に報告されている。抗体を３つ以上の機能性抗原結合部位で操作することが、国際公開公報第２００１／０７７３４２号に報告されている。
多重特性及び多価の抗原結合ポリペプチドが、国際公開公報第１９９７／００１５８０号に報告されている。国際公開公報第１９９２／００４５０５３号には、同じ抗原決定因子に結合するＩｇＧクラスのモノクローナル抗体から、典型的に調製されたホモコンジュゲートが、合成的な架橋により共有結合することが報告されている。抗原に対する高いアビジティを有するオリゴマーモノクローナル抗体が、国際公開公報第１９９１／０６３０５号に報告されている。これにより、互いに会合した２つ以上の免疫グロブリンモノマーを有する、典型的にＩｇＧクラスのオリゴマーが分泌されて、四価又は六価のＩｇＧ分子を形成する。ヒツジ由来抗体及び操作された抗体構築物が、米国特許第６，３５０，８６０号に報告されている。これらは、インターフェロンガンマ活性が病因となる疾患を処置するのに使用することができる。米国特許出願公開公報第２００５／０１００５４３号には、二重特異性抗体の多価担体であるターゲット可能な構築物（すなわち、ターゲット可能な構築物の各分子は、２つ以上の二重特異性抗体の担体として機能することができる）が報告されている。遺伝子操作された二重特異性の四価抗体が、国際公開公報第１９９５／００９９１７号に報告されている。国際公開公報第２００７／１０９２５４号には、安定化されたｓｃＦｖからなる又は同ｓｃＦｖを含む安定化された結合分子が報告されている。
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体又は本明細書で報告されたコンジュゲート中の抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２種類の部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、一方の結合特異性は、ハプテンに対するものであり、他方は、任意の他の（非ハプテン）抗原に対するものである。また、二重特異性抗体は、細胞傷害剤を細胞に局在させるのにも使用することができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体フラグメントとして調製することができる。
多重特異性抗体を調製するための技術は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対のリコンビナント共発現（Milstein, C. and Cuello, A.C., Nature 305 (1983)537-540、国際公開公報第９３／０８８２９号、及びTraunecker, A. et al., EMBO J. 10 (1991) 3655-3659を参照のこと）及び「ノブ−ｉｎ−ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）を含むが、これらに限定されない。また、多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を調製するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開公報第２００９／０８９００４号）；２つ以上の抗体又はフラグメントを架橋させること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びBrennan, M. et al., Science229 (1985) 81-83）；二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny, S.A. et al., J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553を参照のこと）；二重特異性抗体フラグメントを調製するための「ディアボディ」技術を使用すること（例えば、Holliger, P. et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448を参照のこと）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Gruber, M et al., J. Immunol. 152 (1994) 5368-5374を参照のこと）；及び例えば、Tutt, A. et al., J. Immunol. 147 (1991)60-69に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによっても調製することができる。
一実施態様において、二重特異性抗体の重鎖におけるＣＨ３ドメインは、「ノブ−ｉｎｔｏ−ホール」技術により変異される。同技術は、例えば、国際公開公報第９６／０２７０１１号、同第９８／０５０４３１号、Ridgway, J.B., et al., Protein Eng. 9 (1996) 617-621、Merchant, A.M., et al., Nat. Biotechnol. 16 (1998) 677-681に、複数の例を伴って詳細に記載されている。この方法において、２つのＣＨ３ドメインの相互作用表面は、これらの２つのＣＨ３ドメインを含有する両重鎖のヘテロ二量体化を向上させるように変異される。（２つの重鎖の）２つのＣＨ３ドメインはそれぞれ、「ノブ」であることができ、一方、他のものは、「ホール」である。ジスルフィド架橋の導入は、ヘテロ二量体を安定化させ（Merchant, A.M., et al., Nature Biotech. 16 (1998) 677-681、Atwell, S., et al., J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35）、収率を向上させる。
全ての態様の一実施態様において、二重特異性抗体は、
−一方の重鎖のＣＨ３ドメイン及び他方の重鎖のＣＨ３ドメインがそれぞれ、抗体ＣＨ３ドメイン間の元の界面を含む界面において一致し、
ここで、前記界面は、二重特異性抗体の形成を促進するように改変され、ここで、この改変は、
ａ）該一方の重鎖のＣＨ３ドメインが改変され、
これにより、元の界面内で、該一方の重鎖のＣＨ３ドメインが、二重特異性抗体内の他方の重鎖のＣＨ３ドメインの元の界面に一致し、
アミノ酸残基が、より大きな側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えられることにより、該他方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内のキャビティに位置することができる該一方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内の隆起を生じさせ、
ｂ）該他方の重鎖のＣＨ３ドメインが改変され、
これにより、元の界面内で、第２のＣＨ３ドメインが、二重特異性抗体内の第１のＣＨ３ドメインの元の界面に一致し、
アミノ酸残基が、より小さい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えられることにより、第１のＣＨ３ドメインの界面内の隆起が位置することができる第２のＣＨ３ドメインの界面内にキャビティを生じさせる、
ことを特徴とする。
このため、一実施態様において、本明細書で報告された抗体は、
−全長抗体の第１の重鎖のＣＨ３ドメイン及び全長抗体の第２の重鎖のＣＨ３ドメインが互いに、抗体ＣＨ３ドメイン間の元の界面に改変を含む界面において一致し、
ここで、ｉ）第１の重鎖のＣＨ３ドメインにおいて、
アミノ酸残基が、より大きな側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えられることにより、他方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内のキャビティに位置することができる一方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内の隆起を生じさせ、
かつ、ここで、ｉｉ）第２の重鎖のＣＨ３ドメインにおいて、
アミノ酸残基が、より小さい側鎖の体積を有するアミノ酸残基で置き換えられることにより、第１のＣＨ３ドメインの界面内の隆起が位置することができる第２のＣＨ３ドメインの界面内にキャビティを生じさせる、
ことを特徴とする。
一実施態様において、より大きな側鎖の体積を有するアミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）からなる群より選択される。
一実施態様において、より小さな側鎖の体積を有するアミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）からなる群より選択される。
一実施態様において、両ＣＨ３ドメインは、各ＣＨ３ドメインの対応する位置に、アミノ酸として、システイン（Ｃ）の導入することにより更に改変される。これにより、両ＣＨ３ドメイン間のジスルフィド架橋を形成することができる。
好ましい一実施態様では、多重特異性抗体は、「ノブ鎖」の第１のＣＨ３ドメイン中にアミノ酸Ｔ３６６Ｗ変異を含み、「ホール鎖」の第２のＣＨ３ドメイン中にアミノ酸Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含む。また、例えば、「ホール鎖」のＣＨ３ドメイン中にアミノ酸Ｙ３４９Ｃ変異を導入し、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメイン中にアミノ酸Ｅ３５６Ｃ変異又はアミノ酸Ｓ３５４Ｃ変異を導入することにより、ＣＨ３ドメイン間の更なる鎖間ジスルフィド架橋を使用することもできる（Merchant, A.M., et al., Nature Biotech. 16 (1998) 677-681）。
一実施態様において、二重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含む。一実施態様において、二重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含む（一方のＣＨ３ドメイン中の更なるＹ３４９Ｃ変異及び他方のＣＨ３ドメイン中の更なるＥ３５６Ｃ又はＳ３５４Ｃ変異は、鎖間ジスルフィド架橋を形成する）（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ったナンバリング；（Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)））。欧州特許第１８７０４５９号に記載された更なるノブ−ｉｎｔｏ−ホール技術を、代替的又は付随的に使用することができる。このため、二重特異性抗体の別の例は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメイン中のＲ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異であり、「ホール鎖」のＣＨ３ドメイン中のＤ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異である（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ったナンバリング；（Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)））。
一実施態様において、二重特異性抗体は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｗ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含み、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインに更なるＲ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＤ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異を含む。
一実施態様において、二重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含み、又は、二重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含み、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインに更なるＲ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＤ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異を含む。ＣＨ３ドメイン中のこのようなノブ及びホールの変異は、典型的には、配列番号：５８（ヒトＩｇＧ１サブクラスアロタイプ（白色人種及びアフリカ系アメリカ人又は変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ）（Kabatet et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)のＥＵインデックスに従ったナンバリング）のヒト重鎖定常領域に使用される
一実施態様において、二重特異性抗体は、ＣＨ３ドメインにこのような「ノブ」及び「ホール」変異（例えば、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異及び２つのＣＨ３ドメインの他方にＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異）（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)のＥＵインデックスに従ったナンバリング）を更に含む、配列番号：５８のヒト重鎖定常領域を含む。
また、「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能性抗原結合部位を有する操作抗体も、本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開公報第２００６／００２５５７６号を参照のこと）。
また、本明細書における抗体又はフラグメントは、ハプテン及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用Ｆａｂ」又は「ＤＡＦ」も含む（例えば、米国特許出願公開公報第２００８／００６９８２０号を参照のこと）。
また、本明細書における抗体又はフラグメントは、

に記載された多重特異性抗体も含む。
好ましい一実施態様では、（各重鎖にＣＨ３ドメインを含む）多重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にアミノ酸Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にアミノ酸Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含む（一方のＣＨ３ドメイン中の更なるアミノ酸Ｓ３５４Ｃ変異及び他方のＣＨ３ドメイン中の更なるアミノ酸Ｙ３４９Ｃ変異は、鎖間ジスルフィド架橋を形成する）（Ｋａｂａｔに従ったナンバリング）。
ヘテロ二量体化させるためのＣＨ３改変の他の技術が、代替手段として考慮され、例えば、

に記載されている。
一実施態様において、欧州特許第１８７０４５９号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。このアプローチは、両重鎖間のＣＨ３／ＣＨ３ドメイン界面中の特定のアミノ酸位置における、反対電荷を有する荷電アミノ酸の置換／変異の導入に基づいている。好ましい一実施態様では、多重特異性抗体は、（多重特異性抗体の）第１の重鎖のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｒ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異を含み、（多重特異性抗体の）第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異を含む（Ｋａｂａｔに従ったナンバリング）。
別の実施態様では、多重特異性抗体は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｔ３６６Ｗ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含み、更に、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｒ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異を含む。
別の実施態様では、多重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にアミノ酸Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にアミノ酸Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含み、又は、多重特異性抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にアミノ酸Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異を含み、２つのＣＨ３ドメインの他方にアミノ酸Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を含み、更に、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｒ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異を含み、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにアミノ酸Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異を含む。
一実施態様において、国際公開公報第２０１３／１５７９５３号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。一実施態様において、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｋ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｌ３５１Ｄ変異を含む。更なる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、更に、アミノ酸Ｌ３５１Ｋ変異を含む。更なる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、更に、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ、及びＬ３６８Ｅ（好ましくはＬ３６８Ｅ）から選択されるアミノ酸変異を含む。
一実施態様において、国際公開公報第２０１２／０５８７６８号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。一実施態様において、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ａ、Ｋ４０９Ｆ変異を含む。更なる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、Ｔ４１１、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｆ４０５、Ｎ３９０、又はＫ３９２位に、例えば、ａ）Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、又はＴ４１１Ｗ、ｂ）Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｗ、Ｄ３９９Ｙ、又はＤ３９９Ｋ、ｃ）Ｓ４００Ｅ、Ｓ４００Ｄ、Ｓ４００Ｒ、又はＳ４００Ｋ、Ｆ４０５Ｉ、Ｆ４０５Ｍ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、Ｆ４０５Ｖ、又はＦ４０５Ｗ、Ｎ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｋ、又はＮ３９０Ｄ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｒ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｆ、又はＫ３９２Ｅから選択される更なるアミノ酸変異を含む。更なる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｖ、Ｋ４０９Ｆ変異を含む。更なる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｙ４０７Ａ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ａ、Ｋ４０９Ｆ変異を含む。更なる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、更に、アミノ酸Ｋ３９２Ｅ、Ｔ４１１Ｅ、Ｄ３９９Ｒ、及びＳ４００Ｒ変異を含む。
一実施態様において、国際公開公報第２０１１／１４３５４５号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが、例えば、３６８及び４０９からなる群より選択される位置におけるアミノ酸改変と共に使用される。
一実施態様において、国際公開公報第２０１１／０９０７６２号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。また、同アプローチは、上記されたノブ−ｉｎｔｏ−ホール技術も使用する。一実施態様において、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｗ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｙ４０７Ａ変異を含む。一実施態様において、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｙ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｙ４０７Ｔ変異を含む。
一実施態様において、多重特異性抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのものであり、国際公開公報第２０１０／１２９３０４号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。
一実施態様において、国際公開公報第２００９／０８９００４号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。一実施態様において、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸残基Ｋ３９２又はＮ３９２の、負に電荷したアミノ酸（例えば、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ３９２Ｄ又はＮ３９２Ｄ）による置換を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸残基Ｄ３９９、Ｅ３５６、Ｄ３５６、又はＥ３５７の、正に電荷したアミノ酸（例えば、リシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ、好ましくはＤ３９９Ｋ、Ｅ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｋ、又はＥ３５７Ｋ、及びより好ましくはＤ３９９Ｋ及びＥ３５６Ｋ）による置換を含む。更なる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、更に、アミノ酸残基Ｋ４０９又はＲ４０９の、負に電荷したアミノ酸（例えば、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ４０９Ｄ又はＲ４０９Ｄ）による置換を含む。更なる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、更に又は代替的に、アミノ酸残基Ｋ４３９及び／又はＫ３７０の、負に電荷したアミノ酸（例えば、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ））による置換を含む。
一実施態様において、国際公開公報第２００７／１４７９０１号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。一実施態様において、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｋ２５３Ｅ、Ｄ２８２Ｋ、及びＫ３２２Ｄ変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｄ２３９Ｋ、Ｅ２４０Ｋ、及びＫ２９２Ｄ変異を含む。
一実施態様において、国際公開公報第２００７／１１０２０５号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが使用される。
Ｂ．本明細書で報告された非共有複合体
本明細書で報告された血液脳関門シャトルは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体送達媒体として使用される。ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、ハプテンとコンジュゲートするため、血液脳関門シャトルのハプテン結合部位により複合体化される。この複合体は、定義され、かつ、安定であり、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体を、血液脳関門を通過して特異的に送達する。ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体は、血液脳関門シャトルにより非共有的方法で複合体化されているため、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体は、その循環中には、その送達媒体（＝血液脳関門シャトル＝二重特異性抗体）に結合している一方、他方では、経細胞輸送後に効率的に放出されることもできる。ハプテンとのコンジュゲーションは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の活性に対する干渉なしに達成することができる。血液脳関門シャトルは、異常な共有付加を含まないため、免疫原性の任意のリスクを除去する。ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、ハプテン特異的結合部位を含む本明細書で報告された二重特異性抗体との複合体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体に対する、良性の生物物理学的な挙動を付与する。さらに、このような複合体は、二重特異性抗体の第２の結合特異性により認識される抗原を提示する細胞又は組織に対するロードをターゲット可能である。
ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、ハプテン化されているにも関わらず、その機能性を保持している一方で、血液脳関門シャトル（＝二重特異性抗体）により複合体化される。加えて、二重特異性抗体の血液脳関門レセプター結合部位は、複合体化された、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体の存在下において、その結合特異性及び親和性を保持している。ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と本明細書で報告された二重特異性抗体との複合体は、血液脳関門レセプターを特異的に発現している細胞に対して、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体をターゲットするのに使用することができる。ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体は、二重特異性抗体に非共有的方法で結合しているため、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を、内部移行又は経細胞輸送後に放出することができる。
その化学的及び物理的特性、例えば、分子量、二次修飾を含むドメイン構造のために、抗体の下流処理が非常に考慮される。例えば、製剤化された薬剤だけでなく、下流処理（ＤＳＰ）濃縮液中の中間体についても、経済的な取扱い及び用途保存のために、少量を達成する必要がある。
抗体濃度の増大について、凝集体を形成する傾向が観察される場合がある。これらの凝集した抗体は、単離された抗体と比較して、低下した特徴を有する。本明細書で報告された複合体の凝集は、血液脳関門シャトルモジュールの一本鎖抗体における重鎖と軽鎖との可変ドメイン間のジスルフィド結合の導入により減少させることができる。この改善された安定性は、製造プロセス中に有用であるだけでなく、複合体の保存にも有用である。一実施態様において、二重特異性抗体に含まれる一本鎖抗体の可変ドメイン間のジスルフィド結合は、それぞれ独立して、
ｉ）重鎖可変ドメインの４４位〜軽鎖可変ドメインの１００位
ｉｉ）重鎖可変ドメインの１０５位〜軽鎖可変ドメインの４３位、又は
ｉｉｉ）重鎖可変ドメインの１０１位〜軽鎖可変ドメインの１００位
から選択される一本鎖抗体のためのものである。
一実施態様において、二重特異性抗体に含まれる一本鎖抗体の可変ドメイン間のジスルフィド結合は、重鎖可変ドメインの４４位と軽鎖可変ドメインの１００位との間にある。
一実施態様において、二重特異性抗体に含まれる一本鎖抗体の可変ドメイン間のジスルフィド結合は、重鎖可変ドメインの１０５位と軽鎖可変ドメインの４３位との間にある。
Ｃ．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する例示的な抗体
本明細書で報告された非共有複合体のヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体は、標準的なヒト化法により得ることができなかった。親ウサギ抗体として特徴的な比較可能な結合性を有するヒト化抗体を得るために、アミノ酸配列中に標準的でない変異を導入する必要があった。このことは、本明細書で報告された抗体がヒト血液脳関門を通過し、ヒト脳内で有効であることを目的とするのに、特に重要である。このため、ヒト化抗体の選択に一般的に適用される基準は、本件に直接適用するには、十分説得力があるものではない。
適切で、開発可能なヒト化抗体を得るために、ＣＤＲＬ３（軽鎖ＣＤＲ３）中のジスルフィド架橋を形成する２つのシステインが、セリン及びイソロイシンそれぞれにより置換される必要があることが見出された。同じＣＤＲＬ３の適切な配向を確保するのに加えて、ウサギＣＤＲＬ３の中央に存在するイソロイシン残基が、親ウサギＣＤＲＬ３より小さい１つのアミノ酸残基であるヒト化ＣＤＲＬ３をもたらすことが検出された。
重鎖の４、２４、及び７８位における、３つのバリンアミノ酸残基を維持するのが有益であることが更に見出された。この理論に拘束されるものではないが、重鎖可変領域の抗原結合ループの適切な提示を確保するのに、これらの残基が必要であると推測される。さらに、７１位におけるアルギニン残基の存在が有益である。
種々のヒト化軽鎖可変ドメインの配列アライメントを、図１に示す。種々のヒト化重鎖可変ドメインの配列アライメントを、図２に示す。本明細書で使用された全てのナンバリングは、Ｋａｂａｔ可変ドメインナンバリングスキームに基づいている。
下記表に、ヒト化重鎖可変ドメインＶＨ１４及びＶＨ２０それぞれとの組み合わせにおける、ウサギ軽鎖可変ドメインの種々のヒト化変異体の特徴を示す。結合パートナーは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）とした。
下記表に、ヒト化軽鎖可変ドメインＶＬ１７及びＶＬ１９それぞれとの組み合わせにおける、ウサギ重鎖可変ドメインの種々のヒト化変異体の特徴を示す。
下記表に、種々のＶＨ／ＶＬ組み合わせについての反応速度定数を示す。
ヒト化ＶＨ及びＶＬの種々の組み合わせの生化学的結合性を、図３及び４に示す。
下記表に、種々のＶＨ／ＶＬ組み合わせについての結合特異性を示す（ＥＣ５０値［ng/mL］）。
選択されたヒト化ＶＨ／ＶＬ組み合わせのヒトｔａｕ変異体Ｓ４２２Ａに対する感度を、図５で示されたウェスタンブロットから見ることができる。全てのヒト化変異体は、Ｓ４２２でリン酸化されたヒトｔａｕに選択的に結合する。親ウサギ抗体の非Ｓ４２２ホスホエピトープに対する低レベルのｘ−反応性が存在するが、示されたヒト化変異体は、この態様において、親ウサギ抗体より交叉反応性が低い。
図６に、親ウサギ抗体及び選択されたヒト化抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体についての、アルツハイマー病患者の脳抽出物中のＰＨＦ−ｔａｕに対する結合性を示す。
下記表に、選択されたヒト化ＶＨ／ＶＬ組み合わせの生物学的特性をまとめる。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ｉ） （ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；又は
ｉｉ）（ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３
から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ｉ） （ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；又は
ｉｉ）（ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３
を含む。
別の実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、更に、
ｉ） （ａ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉ）（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号：０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む。
更なる実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ｉ） （ａ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉ）（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号：０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｃ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む。
一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、
ｉ） （ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉ） （ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号：０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉｉ）（ａ）配列番号：０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号：０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む。
別の実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体のＶＨ又はＶＬは、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合する能力を保持している。
更なる実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、ｓｃＣｒｏｓｓＦａｂ、ディアボディ、又はＦ（ａｂ’）２フラグメントである。別の実施態様では、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、本明細書で定義された全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体又は他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
更なる実施態様では、上記実施態様のいずれか記載のヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体は、以下のセクション１〜５に記載された特徴のいずれかを、単独又は組み合わせで包含することができる。
１．抗体親和性
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体は、１００nM以下、５０nM以下、又は１nM〜１００nM（例えば、１０−７M以下、例えば、１０−７M〜１０−９M）の解離定数（ＫＤ）を有する。
一実施態様において、Ｋｄを、放射線ラベルされた抗原結合アッセイ法（ＲＩＡ）により測定する。一実施態様において、ＲＩＡを、対象となる抗体のＦａｂバージョンとその抗原とにより行う。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を、用量設定系列のラベルしていない抗原の存在下において、Ｆａｂを最少濃度の（１２５Ｉ）ラベル抗原により平衡化し、ついで、結合した抗原を、抗Ｆａｂ抗体をコートしたプレートで捕捉することにより測定する（例えば、Chen, Y. et al., J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881を参照のこと）。アッセイ法のための条件を確立するために、MICROTITER（登録商標）マルチウェルプレート（Thermo Scientific）を、５０mM 炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μg/mL 捕捉性抗Ｆａｂ抗体（Cappel Labs）により一晩コートし、その後、ＰＢＳ中の２％（w/v） ウシ血清アルブミンにより、室温（約２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性プレート（Nunc #269620）において、１００pM又は２６pM ［１２５Ｉ］抗原を、対象となるＦａｂの連続希釈と混合する（例えば、Presta, L.G. et al., Cancer Res. 57 (1997) 4593-4599における、抗ＶＥＧＦ抗体であるＦａｂ−１２の評価と一致）。ついで、対象となるＦａｂを、一晩インキュベーションする。ただし、このインキュベーションは、平衡が達成されるのを確保するために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温でのインキュべーション（例えば、１時間）のために捕捉プレートに移す。ついで、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中の０．１％ ポリソルベート２０（TWEEN-20（登録商標））で、８回洗浄する。このプレートを乾燥させた時点で、１５０μL／ウェル シンチラント（MICROSCINT-20（商標）；Packard)を加え、プレートを、TOPCOUNT（商標）ガンマカウンタ（Packard）において、１０分間カウントする。最大結合の２０％以下を提供する各Ｆａｂ濃度を、競合的結合アッセイ法に使用するために選択する。
別の実施態様に従って、Ｋｄを、BIACORE（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイ法を使用して測定する。例えば、BIACORE（登録商標）-2000又はBIACORE（登録商標）-3000（BIAcore, Inc., Piscataway、NJ）を使用するアッセイ法を、固定化抗原ＣＭ５チップにより、約１０応答単位（RU）において２５℃で行う。一実施態様において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（CM5, BIACORE, Inc.）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により、供給元の説明書に従って活性化する。抗原を、１０mM 酢酸ナトリウム ｐＨ４．８で５μg/mL（約０．２μM）に希釈し、その後、流速５μL/分で注入し、約１０応答単位（RU）の連結したタンパク質を達成する。抗原の注入後、１M エタノールアミンを注入して、反応しなかった基をブロックする。反応速度測定について、２倍の連続希釈のＦａｂ（０．７８nM〜５００nM）を、０．０５％ ポリソルベート２０（TWEEN-20（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中に、流速約２５μL/分で２５℃において注入する。シンプルな一対一のラングミュア結合モデル（BIACORE（登録商標） Evolution Software version 3.2）を使用し、会合及び解離のセンサーグラムを同時に当て嵌めることにより、会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平行解離定数（Ｋｄ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する（例えば、Chen, Y. et al., J. Mol. Biol.293 (1999) 865-881を参照のこと）。ｏｎ速度が、上記表面プラズモン共鳴アッセイ法により１０６M-1s-1を超える場合、同ｏｎ速度を、攪拌キュベットを備える分光計、例えば、ストップフローを備えた分光計（Aviv Instruments）又は8000-series SLM-AMINCO（商標）分光計（ThermoSpectronic）において測定する場合は、増大する濃度の抗原の存在下において、ＰＢＳ ｐＨ７．２中の２０nM 抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃における蛍光放出強度（励起＝２９５nm；放出＝３４０nm、バンドパス１６nm）における増大又は減少を測定する蛍光クエンチ技術を使用することにより決定することができる。
２．抗体フラグメント
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＣｒｏｓｓＦａｂ、ｓｃＣｒｏｓｓＦａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖフラグメントならびに以下に記載された他のフラグメントを含むがこれらに限定されない。特定の抗体フラグメントのレビューについて、Hudson, P.J. et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134を参照のこと。ｓｃＦｖフラグメントのレビューについて、例えば、Plueckthun, A., In; The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore (eds.), Springer-Verlag, New York (1994), pp. 269-315を参照のこと。また、国際公開公報第９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号、及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージレセプター結合エピトープ残基を含み、延長したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２の検討については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
ディアボディは、二価又は二重特異性であることができる、２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、欧州特許第０４０４０９７号；国際公開公報第１９９３／０１１６１号；Hudson, P.J. et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134；及びHolliger, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448を参照のこと。また、トリアボディ及びテトラボディも、Hudson, P.J. et al., Nat. Med. 9 (20039 129-134)に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部又は軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体フラグメントである。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Domantis, Inc., Waltham, MA；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照のこと）。
抗体フラグメントは、種々の技術により調製することができる。同技術は、本明細書で記載されたように、インタクトな抗体のタンパク質分解的消化及びリコンビナントホスト細胞（例えば、E. coli又はファージ）による産生を含むがこれらに限定されない。
３．ヒト化抗体
典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する抗原性を減少させるが、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持するようにヒト化される。一般的には、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、同ドメインにおいて、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその一部）は、非ヒト抗体由来であり、ＦＲ（又はその一部）は、ヒト抗体配列由来である。ヒト化抗体は、場合により、少なくとも一部又は全長のヒト定常領域も含むであろう。一部の実施態様では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が得られる抗体）由来の対応する残基により置換されている。
ヒト化抗体及びそれを調製する方法は、例えば、Almagro, J.C. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633においてレビューされており、例えば、（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフト化について記載されている）Riechmann, I. et al., Nature 332 (1988) 323-329；Queen, C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Kashmiri, S.V. et al., Methods 36 (2005) 25-34；（「表面再生」について記載されている）Padlan, E.A., Mol. Immunol.28 (1991) 489-498；（「ＦＲシャッフリング」について記載されている）Dall’Acqua, W.F. et al., Methods 36 (2005) 43-60；ならびに（ＦＲシャッフリングに対する「ガイドセレクション」アプローチについて記載されている）Osbourn, J. et al., Methods 36 (2005) 61-68及びKlimka, A. et al., Br. J. Cancer 83 (2000) 252-260に更に記載されている。
ヒト化に使用することができるヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims, M.J. et al., J. Immunol. 151 (1993) 2296-2308を参照のこと）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289；及びPresta, L.G. et al., J. Immunol. 151 (1993) 2623-2632を参照のこと）；ヒト成熟（体細胞的に成熟）フレームワーク領域又はヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Almagro, J.C. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633を参照のこと）；及び、ＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Baca, M. et al., J. Biol. Chem. 272 (1997) 10678-10684及びRosok, M.J. et al., J. Biol. Chem. 271 (19969 22611-22618)を参照のこと）を含むがこれらに限定されない。
４．多重特異性抗体
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２種類の部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、結合特異性の一方は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。特定の実施態様では、二重特異性抗体は、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の２種類のエピトープに結合することができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体フラグメントとして調製することができる。
多重特異性抗体を調製するための技術は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対のリコンビナント共発現（Milstein, C. and Cuello, A.C., Nature 305 (1983)537-540、国際公開公報第９３／０８８２９号、及びTraunecker, A. et al., EMBO J. 10 (1991) 3655-3659を参照のこと）及び「ノブ−ｉｎ−ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号）を含むがこれらに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を調製するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開公報第２００９／０８９００４号）；２つ以上の抗体又はフラグメントを架橋させること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びBrennan, M. et al., Science229 (1985) 81-83）；二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパー（例えば、Kostelny, S.A. et al., J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553を参照のこと）；二重特異性抗体フラグメントを調製するための「ディアボディ」技術を使用すること（例えば、Holliger, P. et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448を参照のこと）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Gruber, M et al., J. Immunol. 152 (1994) 5368-5374を参照のこと）；及び例えば、Tutt, A. et al., J. Immunol. 147 (1991)60-69に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによっても調製することができる。
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性の抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号を参照のこと）。
本明細書における抗体又はフラグメントは、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）と、別の種々の抗原とに結合する抗原結合部位を含む、「二重作用Ｆａｂ」又は「ＤＡＦ」も含む（例えば、米国特許出願公開公報第２００８／００６９８２０号を参照のこと）。
本明細書における抗体又はフラグメントは、国際公開公報第２００９／０８０２５１号、同第２００９／０８０２５２号、同第２００９／０８０２５３号、同第２００９／０８０２５４号、同第２０１０／１１２１９３号、同第２０１０／１１５５８９号、同第２０１０／１３６１７２号、同第２０１０／１４５７９２号、及び同第２０１０／１４５７９３号に記載されている多重特異性抗体も含む。
５．抗体変異体
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体のアミノ酸配列変異体が考慮される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善するのが望ましい場合ある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列内に適切な改変を導入することにより、又は、ペプチド合成により調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は、同配列内への挿入、及び／又は、同配列内の残基の置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終的な構築物に達するのに行うことができる。ただし、最終的な構築物は、所望の特徴、例えば、抗原結合性を有するという条件である。
ａ）置換、挿入、及び欠失の変異体
特定の実施態様では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換変異誘発の対象となる部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しで下記表に示されている。より実質的な変化は、「例示的な置換」の見出しで下記表に提供され、アミノ酸側鎖の分類を参照して、更に以下に記載されているように提供される。アミノ酸置換は、対象となる抗体内に導入することができ、生成物は、所望の活性、例えば、保持／活性化された抗原結合性、低下した免疫原性、又は改善したＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
アミノ酸は、共通する側鎖の特性に従ってグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを、別のクラスに交換することを必要とするであろう。
ある種の置換変異体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体）の１つ以上の超可変領域残基の置換を含む。一般的には、更なる研究に選択される得られた変異体は、親抗体に対する特定の生物学的特性（例えば、向上した親和性、低下した免疫原性）における改変（例えば、改善）を有し、及び／又は、親抗体の実質的に保持された特定の生物学的特性を有するであろう。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、同抗体は、例えば、ファージディスプレイ系親和性成熟技術、例えば、本明細書で記載されたものを使用して、都合良く生成することができる。簡潔に、１つ以上のＨＶＲ残基が成熟され、変異型抗体は、ファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
変異（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲ中にすることができる。このような変異は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟中に高頻度で突然変異を受けるコドンによりコードされる残基（例えば、Chowdhury, P.S., Methods Mol. Biol. 207 (2008) 179-196を参照のこと）、及び／又は、抗原と接触する残基にすることができる。得られた変異ＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築及び二次ライブラリから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Hoogenboom, H.R. et al. in Methods in Molecular Biology 178 (2002) 1-37に記載されている。親和性成熟の一部の実施態様では、多様性が、各種の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異）のいずれかにより、成熟について選択される可変遺伝子内に導入される。ついで、二次ライブラリが調製される。ついで、このライブラリが、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定するのにスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、ＨＶＲ指定アプローチを含む。そのアプローチにおいて、複数のＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）がランダム化される。抗原結合性に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発を使用して、又は、モデリングして、特異的に特定することができる。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、多くの場合、ターゲッティングされる。
特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、このような変異が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内に起こすことができる。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変異（例えば、本明細書で提供された保存的置換）を、ＨＶＲ中にすることができる。このような変異は、例えば、ＨＶＲ中の抗原接触残基の外側でもよい。上記で提供された変異型ＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施態様では、各ＨＶＲは、変異していないか、又は、２つ以上、２つもしくは３つのアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
変異誘発のためにターゲティングすることができる抗体の残基又は領域を特定するのに有用な方法は、Cunningham, B.C. and Wells, J.A., Science 244 (1989) 1081-1085に記載されている、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、ターゲット残基の残基又は基（例えば、電荷した残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ）が特定され、中性又は負に電荷したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）により置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けたかどうかを決定する。更なる置換は、最初の置換に対する機能的感受性を証明するアミノ酸位置に導入することができる。代替的に又は附随的に、抗原−抗体複合体の結晶構造は、抗体と抗原との間の接触点を特定する。このような接触残基及び隣接する残基は、置換のための候補としてターゲッティングすることができ、又は、除去することができる。変異体は、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するのにスクリーニングすることができる。
アミノ酸配列挿入は、長さが１つの残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲で、アミノ末端融合及び／又はカルボキシル末端融合、ならびに、１つ又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を長くする、（例えば、ＡＤＥＰＴのための）酵素又はポリペプチドへの抗体のＮ末端又はＣ末端に対する融合を含む。
ｂ）グリコシル化変異体
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体は、抗体がグリコシル化されている度合いを向上又は低下させるように変異させる。抗体に対するグリコシル化部位の付加又は欠失は、アミノ酸配列を変異させることにより、都合良く達成することができる。これにより、１つ以上のグリコシル化部位が形成又は除去される。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着した炭水化物を改変することができる。哺乳類細胞により産生されるネイティブな抗体は、典型的には、二分岐したオリゴ糖を含む。同オリゴ糖は、一般的には、Ｆｃ領域におけるＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により付着する（例えば、Wright, A. and Morrison, S.L., TIBTECH 15 (1997) 26-32を参照のこと）。オリゴ糖は、二分岐したオリゴ糖構造の「幹」において、ＧｌｃＮＡｃに付着した、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸ならびにフコースを含むことができる。一部の実施態様では、本発明の抗体中のオリゴ糖の改変を、特定の改善した特性を有する抗体変異体を形成するためにすることができる。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様では、１つ以上のアミノ酸改変を、本明細書で提供された抗体のＦｃ領域に導入することにより、Ｆｃ領域変異体を生成することができる。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置において、アミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
特定の実施態様では、本発明は、全てのエフェクター機能の一部を有するが全ては有さない抗体変異体を考慮する。同変異体は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗体の半減期が重要である用途の望ましい候補となる。更なる特定のエフェクター機能（例えば、相補性及びＡＤＣＣ）は必須でないか、又は、有害である。ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏにおける細胞毒アッセイ法は、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／欠損を確認するのに行うことができる。例えば、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合アッセイ法は、抗体がＦｃγＲ結合性を欠いている（このため、おそらくＡＤＣＣ活性を欠いている）が、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確保するのに行うことができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現しているが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現している。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ravetch, J.V. and Kinet, J.P., Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492における第４６４頁の表３中に概説されている。対象となる分子のＡＤＣＣ活性を評価するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ法の非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83 (1986) 7059-7063；及びHellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 (1985) 1499-1502を参照のこと)；米国特許第５，８２１，３３７号（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を利用することができる（例えば、フローサイトメトリー用のACTI（商標）非放射性細胞毒アッセイ法（CellTechnology, Inc. Mountain View, CA）及びCytoTox 96（登録商標）非放射性細胞毒アッセイ法（Promega, Madison, WI）を参照のこと)。このようなアッセイ法に有用なエフェクター細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的に又は附随的に、対象となる分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Clynes, R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 652-656に開示されているもの等の動物モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。Ｃｑ１結合アッセイ法も、抗体がＣ１ｑと結合できないため、ＣＤＣ活性を欠いているのを確認するのに行うことができる。例えば、国際公開公報第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補完的な活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ法を行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro, H. et al., J. Immunol. Methods 202 (1996) 163-171；Cragg, M.S. et al., Blood 101 (2003) 1045-1052；及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103 (2004) 2738-2743を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合性及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス／半減期決定も、当技術分野において公知の方法を使用して行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int. Immunol. 18 (2006) 1759-1769を参照のこと）。
低下したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９の１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７の２つ以上に置換を有するＦｃ領域変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
改善又は減少したＦｃＲに対する結合性を有する特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開公報第２００４／０５６３１２号、及びShields, R.L. et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604を参照のこと）。
一部の実施態様では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開公報第９９／５１６４２号、及びIdusogie, E.E. et al., J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184に記載されているように、変異は、変化した（すなわち、減少した）Ｃ１ｑ結合性及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすＦｃ領域中になされる。
延長した半減期及び、胎児への母方のＩｇＧ輸送を担う（Guyer, R.L. et al., J. Immunol. 117 (1976) 587-593及びKim, J.K. et al., J. Immunol. 24 (1994) 2429-2434）新生児型Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）に対する改善した結合性を有する抗体は、米国特許出願公開公報第２００５／００１４９３４号に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合性を改善する、１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４の１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６）。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Duncan, A.R. and Winter, G., Nature 322 (1988) 738-740；米国特許第５，６４８，２６０号；同第５，６２４，８２１号；及び国際公開公報第９４／２９３５１号も参照のこと。
ｄ）システイン操作抗体変異体
特定の実施態様では、システイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を形成するのが望ましい場合がある。同抗体において、抗体の１つ以上の残基は、システイン残基により置換されている。特定の実施態様では、置換された残基は、抗体のアクセッシブル部位において起こる。システインによりそれらの残基を置換することにより、反応性チオール基は、抗体のアクセッシブル部位に位置することで、抗体を他の部分、例えば、薬剤部分又はリンカー−薬剤部分にコンジュゲートして、本明細書で更に記載されているように、免疫コンジュゲートを形成するのに使用することができる。特定の実施態様では、任意の１つ以上の下記残基：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）；重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）は、システインにより置換することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成することができる。
ｅ）抗体誘導体
特定の実施態様では、本明細書で提供された抗体は、当技術分野において公知であり、容易に利用できる、更なる非タンパク質性部分を含有するように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分は、水溶性ポリマーを含むがこれに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物を含むがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために、製造中での利点を有する場合がある。このポリマーは、任意の分子量のものであることができ、分岐鎖又は非分岐鎖であることができる。抗体に付着するポリマー数は変化させることができ、２つ以上のポリマーが付着する場合、それらは、同じか又は異なる分子であることができる。一般的には、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善されるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が規定条件下での治療に使用されるであろうかどうか等を含むがこれらに限定されない考慮に基づいて決定することができる。
別の実施態様では、抗体と、放射への曝露により選択的に加熱することができる非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施態様において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Kam, N.W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102 (2005) 11600-11605）。放射は、任意の波長のものでよく、通常の細胞に有害でないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分近くの細胞が殺傷される温度に加熱する波長を含むが、これに限定されない。
Ｄ．リコンビナント法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているリコンビナント法及び組成物を使用して産生することができる。一実施態様において、本明細書で記載された抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードすることができる。更なる実施態様では、このような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様では、このような核酸を含むホスト細胞が提供される。１つのこのような実施態様では、ホスト細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は、（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１ベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２ベクターを含む（例えば、（１）又は（２）によりトランスフォーメーションされている）。一実施態様において、ホスト細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体を製造する方法が提供される。ここで、同方法は、抗体の発現に適した条件下において、本明細書で提供された抗体をコードする核酸を含むホスト細胞を培養することと、場合により、ホスト細胞（又はホスト細胞培養培地）から、抗体を回収することとを含む。
抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体のリコンビナント産生のために、例えば、上記された抗体をコードする核酸が単離され、ホスト細胞中で更なるクローニング及び／又は発現のために、１つ以上のベクター内に挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによる）従来の手法を使用してシークエンシングすることができる。
抗体コードベクターのクローニング又は発現に適したホスト細胞は、本明細書で記載された原核生物又は真核生物の細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能を必要としない場合、抗体は、細菌中で産生することができる。細菌中での抗体フラグメント及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照のこと（E. coli中での抗体フラグメントの発現が記載されている、Charlton, K.A., In: Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2003), pp. 245-254も参照のこと）。発現後、抗体は、細菌細胞のペーストから、可溶性画分中に単離することができ、更に精製することができる。
原核生物に加えて、真核生物の微生物、例えば、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的又は完全にヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす糸状菌及び酵母株を含む、真菌又は酵母が、抗体コードベクター用のクローニング又は発現ホストに適している。Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414; and Li, H. et al., Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215を参照のこと。
グリコシル化抗体の発現に適したホスト細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物の例は、植物及び昆虫細胞を含む。数多くのバキュロウイルス株が特定されており、特にSpodoptera frugiperda細胞のトランスフェクション用の昆虫細胞に関して使用することができる。
植物細胞培養物も、ホストとして利用することができる。例えば、（トランスジェニック植物中で抗体を産生するためのPLANTIBODIES（商標）技術が記載されている）米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号を参照のこと。
脊椎動物細胞も、ホストとして使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖させるのに適合した哺乳類の細胞株が有用であることができる。有用な哺乳類ホスト細胞株の他の例は、ＳＶ４０によりトランスフォーメーションされるサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Graham, F.L. et al., J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74に記載されている２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカグリーンモンキー腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸ガン細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Mather, J.P. et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68に記載されているＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類ホスト細胞株は、ＤＨＦＲ− ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Urlaub, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220）ならびにメラノーマ細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０を含む。抗体産生に適した特定の哺乳類ホスト細胞株のレビューについては、例えば、Yazaki, P. and Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2004), pp. 255-268を参照のこと。
Ｅ．アッセイ法
本明細書で報告された非共有複合体の抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体は、当技術分野において公知の種々のアッセイ法により、その物理的／化学的特性及び／又は生体活性を特定し、スクリーニングし、又は、特徴付けることができる。
１．結合アッセイ法及び他のアッセイ法
ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体を、その抗原結合活性について、例えば、公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、アルファＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、抗体アレイ又は逆相アレイ等により試験する。
例示的なＥＬＩＳＡ又はアルファＬＩＳＡアッセイ法において、溶液（細胞上清、細胞又は組織ライゼート、体液等）中におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）は、捕捉抗体により結合される。同捕捉抗体は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）上の第１エピトープ又は特定のコンフォーメーションにあるＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する。検出実体に連結した検出抗体は、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）の第２エピトープ又はコンフォーメーションに特異的に結合する。この読出しは、検出実体（化学発光、蛍光、エネルギー移動誘引発光等）に基づいている。一部の例では、同じ抗体を、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体を検出するための捕捉及び検出抗体として、同じアッセイ法に使用することができる（例えば、Tokuda, T. et al., Neurology 75 (2010) 1766-1772を参照のこと）。
抗体アレイの場合には、抗体を、ガラス又はニトロセルロースチップ上にスポットする。このスライドをブロッキングし、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）含有溶液と共にインキュベーションし、結合しなかった抗体を除去するために洗浄する。結合した抗体を、蛍光ラベルした対応する二次抗体により検出する。蛍光シグナルを、蛍光スライドスキャナにより測定する。同様に、逆相アレイのために、リコンビナントＴａｕ（ｐＳ４２２）、細胞上清、細胞又は組織ライゼート、体液等を、ガラス又はニトロセルロースチップ上にスポットする。このスライドをブロッキングし、個々のアレイを、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）上の特定のエピトープに対する抗体と共にインキュベーションする。結合しなかった抗体を洗浄し、結合した抗体を、蛍光ラベルした対応する二次抗体により検出する。蛍光シグナルを、蛍光スライドスキャナにより測定する（Dernick, G., et al., J. Lipid Res. 52 (2011) 2323-2331）。
ウェスタンブロットの例において、凝集したリコンビナントＴａｕ（ｐＳ４２２）又は細胞上清、細胞もしくは組織ライゼート、体液などから得られたＴａｕ（ｐＳ４２２）を、ＳＤＳ ＰＡＧＥ又はネイティブゲル条件において、分子量により分離し、ニトロセルロース又はＰＶＤＦメンブラン上にブロットする。ブロッキング後、メンブランを、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）のアミノ酸配列又はコンフォーメーションに特異的な抗体と共にインキュベーションする。その後、メンブランを洗浄して、結合しなかった抗体を除去する。結合した抗体を、化学発光もしくは蛍光又は検出の他の手段のための検出実体に結合させた対応する二次抗体により検出する。Ｔａｕ（ｐＳ４２２）のアミノ酸配列に特異的な抗体は、エピトープが凝集によりマスクされない限り、種々の凝集型及びその凝集による分子量にあるＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合するであろう。一方、コンフォーメーション特異的な抗体は、特定の分子量でのバンドのみを示す特定の凝集型のＴａｕ（ｐＳ４２２）のみを検出するであろう（例えば、Towbin, H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76 (1979) 4350-4353；Burnette, W.N., Anal. Biochem. 112 (1981) 195-203を参照のこと）。
２．活性アッセイ法
一態様において、生体活性を有するその抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体を特定するためのアッセイ法が提供される。生体活性は、例えば、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害からの保護／同細胞傷害の減少／同細胞傷害の阻害、及び／又は、オリゴマーヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の細胞間伝達からの保護／同伝達の減少／同伝達の阻害、及び／又は、ＬＵＨＭＥＳ細胞中でのＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性カスパーゼ活性の低下を含むことができる。また、ｉｎ ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるこのような生体活性を有する抗体も提供される。
特定の実施態様では、本発明の抗体を、このような生体活性について試験する。
保護的な生体活性を、分泌型Ｔａｕ（ｐＳ４２２）を含有する順化培地を加えることにより評価することができる。分泌型Ｔａｕ（ｐＳ４２２）は、レシピエントのニューロン細胞の細胞死を引き起こす。この毒性を、本明細書で記載された保護的な抗体を加えることにより反転させることができる。分泌型Ｔａｕ（ｐＳ４２２）の毒性は、以前に確立されている（Emmanouilidou, E., et al., J. Neurosci., 30 (2010) 6838-6851）。
Ｆ．医薬製剤
本明細書で記載された非共有複合体の医薬製剤は、所望の度合いの純度を有するこのような非共有複合体を、１つ以上の任意の薬学的に許容し得る担体と混合することにより、凍結乾燥製剤又は水溶液の状態で調製される（Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980）)。薬学的に許容し得る担体は、一般的には、利用される用量及び濃度において、レシピエントに対して非毒性であり、バッファー、例えば、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリ（ビニルピロリドン）；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール；塩形成カウンターイオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むがこれらに限定されない。本明細書において、例示的な薬学的に許容し得る担体は、間質薬分散剤、例えば、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒｈｕＰＨ２０（HYLENEX（登録商標）、Baxter International, Inc.）を更に含む。ｒｈｕＰＨ２０を含む特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開公報第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上の更なるグリコサミノグリカナーゼ、例えば、コンドロイチナーゼと組み合わせられる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開公報第２００６／０４４９０８号に記載されているものを含む。後者の製剤は、ヒスチジン−アセタートバッファーを含む。
また、本明細書における製剤は、処置される特定の適応症に必要な場合、２つ以上の活性成分、好ましくは、互いに有害に影響しない補完的な活性を有するものも含有することができる。このような活性成分は、意図した目的に効果的な量で、組み合わせ中に適切に存在する。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術により、又は、界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリラート）マイクロカプセルそれぞれに、コロイド状薬剤送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）の状態又はマイクロエマルジョンの状態で封入することができる。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)に開示されている。
持続放出型製剤が調製される場合がある。持続放出型製剤の適切な例は、抗体を含有する固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含む。同マトリックスは、造形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの状態である。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、一般的には、無菌である。無菌は、例えば、ろ過滅菌膜によるろ過により容易に達成することができる。
Ｇ．治療法及び組成物
本明細書で報告された非共有複合体のいずれかを、治療法に使用することができる。
一態様において、医薬として使用するための、本明細書で報告された非共有複合体が提供される。更なる態様では、アルツハイマー病を処置するのに使用するための、本明細書で報告された非共有複合体が提供される。特定の実施態様では、処置方法に使用するための、本明細書で報告された非共有複合体が提供される。特定の実施態様では、本発明は、有効量の非共有複合体を、個体に投与することを含む、アルツハイマー病を有する個体を処置する方法における使用のための、本明細書で報告された非共有複合体を提供する。このような一実施態様では、該方法は、更に、有効量の、例えば、以下に記載された少なくとも１つの更なる治療剤を、個体に投与することを含む。更なる実施態様では、本発明は、ヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害するのに使用するための、非共有複合体を提供する。特定の実施態様では、本発明は、個体中のヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害する方法であって、ヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害するのに有効量の非共有複合体を個体に投与することを含む方法に使用するための、非共有複合体を提供する。上記実施態様のいずれかの「個体」は、好ましくは、ヒトである。
更なる態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における、本明細書で報告された非共有複合体の使用を提供する。一実施態様において、医薬は、アルツハイマー病を処置するためのものである。更なる実施態様では、医薬は、アルツハイマー病を有する個体に有効量の該医薬を投与することを含むアルツハイマー病を処置する方法に使用するためのものである。このような一実施態様では、該方法は、更に、有効量の、例えば、以下に記載された少なくとも１つの更なる治療剤を、個体に投与することを含む。更なる実施態様では、医薬は、ヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害するためのものである。更なる実施態様では、医薬は、個体中のヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害する方法であって、ヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害するのに有効量の該医薬を個体に投与することを含む方法に使用するためのものである。上記実施態様のいずれかの「個体」は、ヒトであることができる。
更なる態様では、本発明は、アルツハイマー病を処置するための方法を提供する。一実施態様において、該方法は、このようなアルツハイマー病を有する個体に、有効量の、本明細書で報告された非共有複合体を投与することを含む。このような一実施態様では、該方法は、更に、有効量の、以下に記載された少なくとも１つの更なる治療剤を、個体に投与することを含む。上記実施態様のいずれかの「個体」は、好ましくは、ヒトであることができる。
更なる態様では、本発明は、個体中のヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害するための方法を提供する。一実施態様において、該方法は、ヒトのニューロン及びグリア細胞におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性細胞傷害を阻害するのに有効量の非共有複合体を個体に投与することを含む。一実施態様において、「個体」はヒトである。
更なる態様では、本発明は、例えば、上記治療法のいずれかに使用するための、本明細書で報告された非共有複合体のいずれかを含む医薬製剤を提供する。一実施態様において、医薬製剤は、本明細書で報告された非共有複合体のいずれかと、薬学的に許容し得る担体とを含む。別の実施態様では、医薬製剤は、本明細書で報告された非共有複合体のいずれかと、例えば、以下で記載された少なくとも１つの更なる治療剤とを含む。
本発明の抗体は、治療において、単独又は他の治療剤との組み合わせのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの更なる治療剤と共投与することができる。
上記されたこのような組み合わせの治療法は、組み合わせられた投与（この場合、２つ以上の治療剤が同じ又は別箇の製剤に含まれる）及び別箇の投与を包含する。この場合、本発明の抗体の投与を、１つ以上の更なる治療剤の投与前、同投与と同時に、及び／又は、同投与後に行うことができる。一実施態様において、非共有複合体の投与及び更なる治療剤の投与は互いに、約１か月以内又は約１、２、もしくは３週間以内、又は、約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に行う。
本明細書で報告された非共有複合体（及び任意の更なる治療剤）は、任意の適切な手段により投与することができる。同手段は、非経口、肺内、及び鼻内、及び局所処置の必要に応じて、病巣内投与を含む。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。投与は、一部、投与が短期間であるか、又は、慢性的であるかに応じて、任意の適切な経路により、例えば、静脈内又は皮下注入などの注入によることができる。種々の投与計画は、種々の時点にわたる単回又は複数回の投与、ボーラス投与を含むが、これらに限定されない。パルス注入が、本明細書において考慮される。
本明細書で報告された非共有複合体は、良質の医療のための原則（good medical practice）に合致する方法で、配合、製剤化、及び投与されるであろう。この文脈において考慮すべき要因は、処置される特定の障害、処置される特定のほ乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療実務家に公知の他の要因を含む。非共有複合体は、対象となる障害を予防又は治療するのに現在使用されている１つ以上の薬剤と共に、任意選択的に配合されるが、同配合は必ずしも必要ではない。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する非共有複合体の量、障害又は処置の種類、及び上記で検討された他の要因により決まる。これらは、一般的には、同じ用量で、本明細書で記載された投与経路により使用される。また、約１〜９９％ 本明細書で記載された用量で、又は、経験的に／臨床的に適切であると決定される任意の用量もしくは任意の経路で使用される。
疾患の予防又は治療のために、適切な用量の本明細書で報告された非共有複合体（単独又は１つ以上の他の更なる治療剤との組み合わせ時に）は、処置される疾患の種類、非共有複合体の種類、疾患の重症度及び経過、非共有複合体が予防又は治療目的で投与されるかどうか、以前の治療、患者の既往歴、及び抗体に対する応答、ならびに担当医の裁量により決まるであろう。非共有複合体は、１回又は一連の処置にわたって、患者に適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μg/kg〜１５mg/kg（例えば、０．５mg/kg〜１０mg/kg） 非共有複合体が、例えば、１つ以上の別箇の投与によるか又は連続的な注入によるかに関わらず、患者に投与するための最初の候補用量であることができる。１つの典型的な日量は、上記された要因に応じて、約１μg/kg〜１００mg/kg以上の範囲であることができる。数日以上にわたる繰返しでの投与のために、症状に応じて、処置は、一般的には、疾患兆候の所望のサプレッションが生じるまで、持続されるであろう。非共有複合体の１つの例示的な用量は、約０．０５mg/kg〜約５０mg/kgの範囲であろう。このため、約０．５mg/kg、２．０mg/kg、４．０mg/kg、１５mg/kg、２５mg/kg、又は５０mg/kgの内の１つ以上の用量（又は、それらの任意の組み合わせ）を、患者に投与することができる。このような用量は、例えば、毎週又は三週間毎に断続的に投与することができる（例えば、これにより、患者は、約２〜約２０回、又は、例えば、約６回の抗体の投与を受ける）。最初のより大きいローディング用量、続けて、１つ以上のより小さい用量が投与されてもよい。ただし、他の投与計画も有用であることができる。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイ法により、容易にモニターされる。
上記製剤又は治療法のいずれかが、非共有複合体に代えて、又は、同複合体に加えて、本発明の免疫コンジュゲートを使用して行うことができることが理解される。
ＩＩＩ．製品
本発明の別の態様では、上記された障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含有する製品が提供される。本製品は、容器と、該容器上又は該容器に関連するラベル又は添付文書を含む。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等を含む。容器は、各種の材料、例えば、ガラス又はプラスチックから形成することができる。容器は、組成物自体、又は、症状を治療、予防、及び／又は診断するのに有効な別の組成物との組み合わせで、組成物を保持し、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針により突き刺し可能なストッパーを有するバイアルでもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が選択された症状を処置するのに使用されることを示す。さらに、本製品は、（ａ）本製品に含有される組成物を含む第１容器であって、同組成物が本発明の抗体を含む第１容器と、（ｂ）本製品に含有される組成物を含む第２容器であって、同組成物が更なる細胞毒又はその他の方法での治療剤を含む第２容器とを含んでもよい。本発明のこの実施態様における製品は、組成物が特定の症状を処置するのに使用することができることを示す添付文書を更に含んでもよい。代替的に又は追加的に、本製品は、薬学的に許容し得るバッファー、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液を含む第２（又は第３）容器を更に含む。他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザ視点から望ましい他の材料を更に含んでもよい。
上記製品のいずれかが、抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体に代えて、又は、同抗体に加えて、本発明の免疫コンジュゲートを含むことができることが理解される。
ＩＶ．具体的な実施態様
１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体。
２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含み、二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体。
３．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するカルボラニル抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するへリックス化抗体、及びヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体からなる群より選択される、実施態様１又は２記載の非共有複合体。
４．血液脳関門レセプターが、トランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）、インスリンレセプター、インスリン様成長因子レセプター（ＩＧＦレセプター）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８（ＬＲＰ８）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＲＰ１）、及びヘパリン結合性上皮成長因子様成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）からなる群より選択される、実施態様１〜３のいずれか記載の非共有複合体。
５．二重特異性抗体が、２つの結合部位を含む全長抗体である、実施態様１〜４のいずれか記載の非共有複合体。
６．二重特異性抗体が、１つ又は２つのｓｃＦｖ又はｓｃＦａｂ又はＣｒｏｓｓＦａｂ又はｓｃＣｒｏｓｓＦａｂが融合しており、かつ、３つ又は４つの結合部位を含む、全長抗体である、実施態様１〜５のいずれか記載の非共有複合体。
７．二重特異性抗体が、抗体フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、及びディアボディから選択される、実施態様１〜６のいずれか記載の非共有複合体。
８．二重特異性抗体が、ヒト化又はヒト抗体である、実施態様１〜７のいずれか記載の非共有複合体。
９．二重特異性抗体が、エフェクター機能を有さない、実施態様１〜８のいずれか記載の非共有複合体。
１０．二重特異性抗体が、機能性Ｆｃ領域を有さない、実施態様１〜９のいずれか記載の非共有複合体。
１１．二重特異性抗体が、Ｆｃ領域を有さない、実施態様１〜１０のいずれか記載の非共有複合体。
１２．二重特異性抗体が、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのＦｃ領域を有し、ここで、これらの位置が、ＫａｂａｔのＦｃ領域ナンバリングに従って決定される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス）、実施態様１〜１２のいずれか記載の非共有複合体。
１３．二重特異性抗体が、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトＩｇＧ４サブクラスのＦｃ領域を有し、ここで、これらの位置が、ＫａｂａｔのＦｃ領域ナンバリングに従って決定される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス）、実施態様１〜１２のいずれか記載の非共有複合体。
１４．二重特異性抗体が、
ａ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
ｂ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
ｃ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
ｄ）ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位
を含み、
ここで、ｂ）及びｃ）の場合には、二重特異性抗体の１つの重鎖が、ホールの変異を含み、各他の鎖が、ノブの変異を含む、実施態様１〜１３のいずれか記載の非共有複合体。
１５．二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と、血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位とを含む、実施態様１〜１４のいずれか記載の非共有複合体。
１６．二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ハプテン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、実施態様１〜１５のいずれか記載の非共有複合体。
１７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：６９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６のいずれか記載の非共有複合体。
１８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１〜１７のいずれか記載の非共有複合体。
１９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、実施態様１７記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１〜１８のいずれか記載の非共有複合体。
２０．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：７３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：７９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１９のいずれか記載の非共有複合体。
２１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：６８又は７６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜２０のいずれか記載の非共有複合体。
２２．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体が、ジゴキシゲニンに結合する能力を保持している、実施態様１〜２１のいずれか記載の非共有複合体。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：６８又は７６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。
２３．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜２２のいずれか記載の非共有複合体。
２４．ジゴキシゲニン結合特異性が、配列番号：６８又は７６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜２３のいずれか記載の非共有複合体。
２５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：７２又は８０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜２４のいずれか記載の非共有複合体。
２６．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体が、ジゴキシゲニンに結合する能力を保持している、実施態様１〜２５のいずれか記載の非共有複合体。特定の実施態様では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：７２又は８０中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。
２７．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜２６のいずれか記載の非共有複合体。
２８．ジゴキシゲニン結合特異性が、配列番号：７２又は８０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜２７のいずれか記載の非共有複合体。
２９．二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する第１の結合特異性（抗ビオチン結合特異性；抗ＢＩ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む、実施態様１〜１６のいずれか記載の非共有複合体。
３０．二重特異性抗体が、ビオチン化ペイロードに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ビオチン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、実施態様１〜１６及び２９のいずれか記載の非共有複合体。
３１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：８５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：８６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び２９又は３０のいずれか記載の非共有複合体。
３２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１〜１６及び２９〜３１のいずれか記載の非共有複合体。
３３．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、実施態様３１記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１〜１６及び２９〜３２のいずれか記載の非共有複合体。
３４．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：８９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：９０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：９１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：９３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：９４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び２９〜３３のいずれか記載の非共有複合体。
３５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：８４又は９２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び２９〜３４のいずれか記載の非共有複合体。
３６．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ビオチン抗体が、ビオチンに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び２９〜３５のいずれか記載の非共有複合体。
３７．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８４又は９２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び２９〜３６のいずれか記載の非共有複合体。
３８．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び２９〜３７のいずれか記載の非共有複合体。
３９．ビオチン結合特異性が、配列番号：８４又は９２のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び２９〜３８のいずれか記載の非共有複合体。
４０．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：８８又は９６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び２９〜３８のいずれか記載の非共有複合体。
４１．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ビオチン抗体が、ビオチンに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び２９〜４０のいずれか記載の非共有複合体。
４２．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８８又は９６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び２９〜４１のいずれか記載の非共有複合体。
４３．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び２９〜４２のいずれか記載の非共有複合体。
４４．ビオチン結合特異性が、配列番号：８８又は９６のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び２９〜４３のいずれか記載の非共有複合体。
４５．二重特異性抗体が、テオフィリンペイロードに特異的に結合する第１の結合特異性（抗テオフィリン結合特異性；抗ＴＨＥＯ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む、実施態様１〜１６のいずれか記載の非共有複合体。
４６．二重特異性抗体が、テオフィリンペイロードに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗テオフィリン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、実施態様１〜１６及び４５のいずれか記載の非共有複合体。
４７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：９７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：９８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：９９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び４５又は４６のいずれか記載の非共有複合体。
４８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する第１の結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１〜１６及び４５〜４７のいずれか記載の非共有複合体。
４９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、実施態様４７記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１〜１６及び４５〜４８のいずれか記載の非共有複合体。
５０．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び４５〜４９のいずれか記載の非共有複合体。
５１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１００又は１０８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び４５〜５０のいずれか記載の非共有複合体。
５２．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗テオフィリン抗体が、テオフィリンに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び４５〜５１のいずれか記載の非共有複合体。
５３．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１００又は１０８中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び４５〜５２のいずれか記載の非共有複合体。
５４．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び４５〜５３のいずれか記載の非共有複合体。
５５．テオフィリン結合特異性が、配列番号：１００又は１０８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び４５〜５４のいずれか記載の非共有複合体。
５６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１０４又は１１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び４５〜５５のいずれか記載の非共有複合体。
５７．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗テオフィリン抗体が、テオフィリンに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び４５〜５６のいずれか記載の非共有複合体。
５８．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１０４又は１１２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び４５〜５７のいずれか記載の非共有複合体。
５９．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び４５〜５８のいずれか記載の非共有複合体。
６０．テオフィリン結合特異性が、配列番号：１０４又は１１２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び４５〜５９のいずれか記載の非共有複合体。
６１．二重特異性抗体が、フルオレセインペイロードに特異的に結合する第１の結合特異性（抗フルオレセイン結合特異性；抗ＦＬＵＯ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む、実施態様１〜１６のいずれか記載の非共有複合体。
６２．二重特異性抗体が、フルオレセインペイロードに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗フルオレセイン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、実施態様１〜１６及び６１のいずれか記載の非共有複合体。
６３．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び６１又は６２のいずれか記載の非共有複合体。
６４．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１〜１６及び６１〜６３のいずれか記載の非共有複合体。
６５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、実施態様６３記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１〜１６及び６１〜６４のいずれか記載の非共有複合体。
６６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１１６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び６１〜６５のいずれか記載の非共有複合体。
６７．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗フルオレセイン抗体が、フルオレセインに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び６１〜６６のいずれか記載の非共有複合体。
６８．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１１６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び６１〜６７のいずれか記載の非共有複合体。
６９．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び６１〜６８のいずれか記載の非共有複合体。
７０．フルオレセイン結合特異性が、配列番号：１１６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び６１〜６９のいずれか記載の非共有複合体。
７１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１２０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び６１〜７０のいずれか記載の非共有複合体。
７２．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗フルオレセイン抗体が、フルオレセインに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び６１〜７１のいずれか記載の非共有複合体。
７３．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１２０中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び６１〜７２のいずれか記載の非共有複合体。
７４．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び６１〜７３のいずれか記載の非共有複合体。
７５．フルオレセイン結合特異性が、配列番号：１２０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び６１〜７４のいずれか記載の非共有複合体。
７６．二重特異性抗体が、ブロモデオキシウリジンペイロードに特異的に結合する第１の結合特異性（抗ブロモデオキシウリジン結合特異性；抗ＢｒｄＵ結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する第２の結合特異性（抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性；抗（ｈ）ＴｆＲ結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性；抗ＬＲＰ８結合特異性）とを含む、実施態様１〜１６のいずれか記載の非共有複合体。
７７．二重特異性抗体が、ブロモデオキシウリジンペイロードに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ブロモデオキシウリジン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、実施態様１〜１６及び７６のいずれか記載の非共有複合体。
７８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び７６又は７７のいずれか記載の非共有複合体。
７９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１〜１６及び７６〜７８のいずれか記載の非共有複合体。
８０．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１〜１６及び７６〜７９のいずれか記載の非共有複合体。
８１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１２１又は１２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１２３又は１２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び７６〜８０のいずれか記載の非共有複合体。
８２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１２９又は１３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び７６〜８１のいずれか記載の非共有複合体。
８３．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ブロモデオキシウリジン抗体が、ブロモデオキシウリジンに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び７６〜８２のいずれか記載の非共有複合体。
８４．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１２９又は１３１中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び７６〜８３のいずれか記載の非共有複合体。
８５．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び７６〜８４のいずれか記載の非共有複合体。
８６．ブロモデオキシウリジン結合特異性が、配列番号：１２９又は１３１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び７６〜８５のいずれか記載の非共有複合体。
８７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１３０又は１３２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１〜１６及び７６〜８６のいずれか記載の非共有複合体。
８８．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ブロモデオキシウリジン抗体が、ブロモデオキシウリジンに結合する能力を保持している、実施態様１〜１６及び７６〜８７のいずれか記載の非共有複合体。
８９．合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１３０又は１３２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１〜１６及び７６〜８８のいずれか記載の非共有複合体。
９０．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１〜１６及び７６〜８９のいずれか記載の非共有複合体。
９１．ブロモデオキシウリジン結合特異性が、配列番号：１３０又は１３２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１〜１６及び７６〜９０のいずれか記載の非共有複合体。
９２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、ハプテンとヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体との間に、リンカーを含む、実施態様１〜９１のいずれか記載の非共有複合体。
９３．リンカーが、ペプチドリンカーである、実施態様９２記載の非共有複合体。
９４．リンカーが、化学リンカー（非ペプチドリンカー）である、実施態様９２記載の非共有複合体。
９５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、全長抗体である、実施態様１〜９４のいずれか記載の非共有複合体。
９６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕに特異的に結合する、実施態様１〜９５のいずれか記載の非共有複合体。
９７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ
を含む、実施態様１〜９６のいずれか記載の非共有複合体。
９８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、更に、
ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ
を含む、実施態様１〜９７のいずれか記載の非共有複合体。
９９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ
を含む、実施態様１〜９８のいずれか記載の非共有複合体。
１００．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号：２０の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号：２１の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン
を含む、実施態様１〜９９のいずれか記載の非共有複合体。
１０１．非共有複合体が、アルツハイマー病を処置するのに使用するためのものである、実施態様１〜１００のいずれか記載の非共有複合体。
１０２．複合体中の両抗体が、エフェクター機能サイレントである、実施態様１〜１０１のいずれか記載の非共有複合体。
１０３．複合体の両抗体が、エフェクター機能を有さない、実施態様１〜１０２のいずれか記載の非共有複合体。
１０４．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合する、実施態様１〜１０３のいずれか記載の非共有複合体。
１０５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下、及び／又は
ｂ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下、及び／又は
ｃ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下、及び／又は
ｄ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下
の、ＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１０４のいずれか記載の非共有複合体。
１０６．抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）（配列番号：０２）に特異的に結合し、ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に結合しない、実施態様１〜１０５のいずれか記載の非共有複合体。
１０７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、モノクローナル抗体である、実施態様１〜１０６のいずれか記載の非共有複合体。
１０８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合する抗体フラグメントであり、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１０７のいずれか記載の非共有複合体。
１０９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、又は
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、
ｄ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、
ｅ）両重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｆ）両重鎖に変異Ｓ２２８Ｐ及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体
である、実施態様１〜１０８のいずれか記載の非共有複合体。
１１０．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：１８、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１３、配列番号：１４、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１０９のいずれか記載の非共有複合体。
１１１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：０９、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１２、配列番号：０５、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１１０のいずれか記載の非共有複合体。
１１２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：０９、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１３、配列番号：１４、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１１１のいずれか記載の非共有複合体。
１１３．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：２０のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１１２のいずれか記載の非共有複合体。
１１４．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１１３のいずれか記載の非共有複合体。
１１５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１１４のいずれか記載の非共有複合体。
１１６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：２１のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１〜１１５のいずれか記載の非共有複合体。
１１７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、重鎖可変ドメインの４、２４、及び７８位に、バリン残基を有する、実施態様１〜１１６のいずれか記載の非共有複合体。
１１８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、重鎖可変ドメインの７１位に、アルギニン残基を有する、実施態様１〜１１７のいずれか記載の非共有複合体。
１１９．血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体と、抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体。
１２０．血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含み、二重特異性抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体。
１２１．血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するカルボラニル抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体、血液脳関門レセプターに特異的に結合するへリックス化抗体、及び血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体からなる群より選択される、実施態様１１９又は１２０記載の非共有複合体。
１２２．血液脳関門レセプターが、トランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）、インスリンレセプター、インスリン様成長因子レセプター（ＩＧＦレセプター）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８（ＬＲＰ８）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＲＰ１）、及びヘパリン結合性上皮成長因子様成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）からなる群より選択される、実施態様１１９〜１２１のいずれか記載の非共有複合体。
１２３．二重特異性抗体が、２つの結合部位を含む全長抗体である、実施態様１１９〜１２２のいずれか記載の非共有複合体。
１２４．二重特異性抗体が、１つ又は２つのｓｃＦｖ又はｓｃＦａｂ又はＣｒｏｓｓＦａｂ又はｓｃＣｒｏｓｓＦａｂが融合しており、かつ、３つ又は４つの結合部位を含む、全長抗体である、実施態様１１９〜１２３のいずれか記載の非共有複合体。
１２５．二重特異性抗体が、抗体フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、及びディアボディから選択される、実施態様１１９〜１２４のいずれか記載の非共有複合体。
１２６．二重特異性抗体が、ヒト化又はヒト抗体である、実施態様１１９〜１２５のいずれか記載の非共有複合体。
１２７．二重特異性抗体が、エフェクター機能を有さない、実施態様１１９〜１２６のいずれか記載の非共有複合体。
１２８．二重特異性抗体が、機能性Ｆｃ領域を有さない、実施態様１１９〜１２７のいずれか記載の非共有複合体。
１２９．二重特異性抗体が、Ｆｃ領域を有さない、実施態様１１９〜１２８のいずれか記載の非共有複合体。
１３０．二重特異性抗体が、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのＦｃ領域を有し、ここで、これらの位置が、ＫａｂａｔのＦｃ領域ナンバリングに従って決定される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス）、実施態様１１９〜１２９のいずれか記載の非共有複合体。
１３１．二重特異性抗体が、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトＩｇＧ４サブクラスのＦｃ領域を有し、ここで、これらの位置が、ＫａｂａｔのＦｃ領域ナンバリングに従って決定される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス）、実施態様１１９〜１２９のいずれか記載の非共有複合体。
１３２．二重特異性抗体が、
ａ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
ｂ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
ｃ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位、又は
ｄ）血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位
を含み、
ここで、ｂ）及びｃ）の場合には、二重特異性抗体の１つの重鎖が、ホールの変異を含み、各他の鎖が、ノブの変異を含む、実施態様１１９〜１３１のいずれか記載の非共有複合体。
１３３．二重特異性抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位とを含む、実施態様１１９〜１３２のいずれか記載の非共有複合体。
１３４．（ヒト）トランスフェリンレセプター又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（抗ハプテン結合特性）を有する、実施態様１１９〜１３３のいずれか記載の非共有複合体。
１３５．血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：６９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４のいずれか記載の非共有複合体。
１３６．血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１１９〜１３５のいずれか記載の非共有複合体。
１３７．血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、実施態様１７記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１１９〜１３６のいずれか記載の非共有複合体。
１３８．血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：７３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：７９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３７のいずれか記載の非共有複合体。
１３９．血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：６８又は７６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３８のいずれか記載の非共有複合体。
１４０．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体が、ジゴキシゲニンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３９のいずれか記載の非共有複合体。特定の実施態様では、合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：６８又は７６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。
１４１．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１４０のいずれか記載の非共有複合体。
１４２．ジゴキシゲニン結合特異性が、配列番号：６８又は７６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１４１のいずれか記載の非共有複合体。
１４３．血液脳関門レセプターに特異的に結合するジゴキシゲニン抗体のジゴキシゲニンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：７２又は８０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１４２のいずれか記載の非共有複合体。
１４４．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体が、ジゴキシゲニンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１４３のいずれか記載の非共有複合体。特定の実施態様では、合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：７２又は８０中において、置換、挿入、及び／又は欠失している。
１４５．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１４４のいずれか記載の非共有複合体。
１４６．ジゴキシゲニン結合特異性が、配列番号：７２又は８０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１４５のいずれか記載の非共有複合体。
１４７．二重特異性抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する第１の結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを含む、実施態様１１９〜１３４のいずれか記載の非共有複合体。
１４８．二重特異性抗体が、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合するビオチン化抗体又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合するビオチン化抗体に特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ビオチン結合特異性）と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する２つの結合特異性とを有する、実施態様１１９〜１３４及び１４７のいずれか記載の非共有複合体。
１４９．血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：８５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：８６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１４７又は１４８のいずれか記載の非共有複合体。
１５０．血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１４９のいずれか記載の非共有複合体。
１５１．血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、実施態様１４９記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５０のいずれか記載の非共有複合体。
１５２．血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：８９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：９０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：９１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：９３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：９４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５１のいずれか記載の非共有複合体。
１５３．血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：８４又は９２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５２のいずれか記載の非共有複合体。
１５４．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ビオチン抗体が、ビオチンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５３のいずれか記載の非共有複合体。
１５５．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８４又は９２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５４のいずれか記載の非共有複合体。
１５６．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５５のいずれか記載の非共有複合体。
１５７．ビオチン結合特異性が、配列番号：８４又は９２のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５６のいずれか記載の非共有複合体。
１５８．血液脳関門レセプターに特異的に結合するビオチン化抗体のビオチンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：８８又は９６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５７のいずれか記載の非共有複合体。
１５９．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ビオチン抗体が、ビオチンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５８のいずれか記載の非共有複合体。
１６０．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８８又は９６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１５９のいずれか記載の非共有複合体。
１６１．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１６０のいずれか記載の非共有複合体。
１６２．ビオチン結合特異性が、配列番号：８８又は９６のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１４７〜１６１のいずれか記載の非共有複合体。
１６３．二重特異性抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体に特異的に結合する第１の結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを含む、実施態様１１９〜１３３のいずれか記載の非共有複合体。
１６４．二重特異性抗体が、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合するテオフィリン抗体に特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗テオフィリン結合特異性）と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する２つの結合特異性とを有する、実施態様１１９〜１３４及び１６３のいずれか記載の非共有複合体。
１６５．血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：９７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：９８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：９９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１６３又は１６４のいずれか記載の非共有複合体。
１６６．血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１６５のいずれか記載の非共有複合体。
１６７．血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、実施態様１６５記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１６６のいずれか記載の非共有複合体。
１６８．血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１６７のいずれか記載の非共有複合体。
１６９．血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１００又は１０８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１６８のいずれか記載の非共有複合体。
１７０．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗テオフィリン抗体が、テオフィリンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１６９のいずれか記載の非共有複合体。
１７１．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１００又は１０８中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７０のいずれか記載の非共有複合体。
１７２．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７１のいずれか記載の非共有複合体。
１７３．テオフィリン結合特異性が、配列番号：１００又は１０８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７２のいずれか記載の非共有複合体。
１７４．血液脳関門レセプターに特異的に結合するテオフィリン抗体のテオフィリンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１０４又は１１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７３のいずれか記載の非共有複合体。
１７５．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗テオフィリン抗体が、テオフィリンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７４のいずれか記載の非共有複合体。
１７６．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１０４又は１１２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７５のいずれか記載の非共有複合体。
１７７．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７６のいずれか記載の非共有複合体。
１７８．テオフィリン結合特異性が、配列番号：１０４又は１１２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１６３〜１７７のいずれか記載の非共有複合体。
１７９．二重特異性抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体に特異的に結合する第１の結合特異性（抗フルオレセイン結合特異性；抗ＦＬＵＯ結合特異性）と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを含む、実施態様１１９〜１３３のいずれか記載の非共有複合体。
１８０．二重特異性抗体が、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する抗体に特異的に結合する２つの結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを有する、実施態様１１９〜１３４及び１７９のいずれか記載の非共有複合体。
１８１．血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１７９又は１８０のいずれか記載の非共有複合体。
１８２．血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８１のいずれか記載の非共有複合体。
１８３．血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、実施態様６３記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８２のいずれか記載の非共有複合体。
１８４．血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１１６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８３のいずれか記載の非共有複合体。
１８５．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗フルオレセイン抗体が、フルオレセインに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８４のいずれか記載の非共有複合体。
１８６．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１１６中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８５のいずれか記載の非共有複合体。
１８７．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８６のいずれか記載の非共有複合体。
１８８．フルオレセイン結合特異性が、配列番号：１１６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８７のいずれか記載の非共有複合体。
１８９．血液脳関門レセプターに特異的に結合するフルオレセイン抗体のフルオレセインに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１２０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８８のいずれか記載の非共有複合体。
１９０．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗フルオレセイン抗体が、フルオレセインに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１８９のいずれか記載の非共有複合体。
１９１．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１２０中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１９０のいずれか記載の非共有複合体。
１９２．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１９１のいずれか記載の非共有複合体。
１９３．フルオレセイン結合特異性が、配列番号：１２０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１７９〜１９２のいずれか記載の非共有複合体。
１９４．二重特異性抗体が、血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体に特異的に結合する第１の結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する２つの結合特異性とを含む、実施態様１１９〜１３３のいずれか記載の非共有複合体。
１９５．二重特異性抗体が、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する抗体に特異的に結合する２つの結合特異性と、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第２の結合特異性とを有する、実施態様１１９〜１３４及び１９４のいずれか記載の非共有複合体。
１９６．血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１９４又は１９５のいずれか記載の非共有複合体。
１９７．血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、ヒト化結合特異性である、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜１９６のいずれか記載の非共有複合体。
１９８．血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、上記実施態様記載のＣＤＲ及びアクセプターヒトフレームワーク（例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク）を含む、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜１９７のいずれか記載の非共有複合体。
１９９．血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、（ａ）配列番号：１２１又は１２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号：１２３又は１２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜１９８のいずれか記載の非共有複合体。
２００．血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１２９又は１３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜１９９のいずれか記載の非共有複合体。
２０１．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ブロモデオキシウリジン抗体が、ブロモデオキシウリジンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２００のいずれか記載の非共有複合体。
２０２．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１２９又は１３１中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０１のいずれか記載の非共有複合体。
２０３．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０２のいずれか記載の非共有複合体。
２０４．ブロモデオキシウリジン結合特異性が、配列番号：１２９又は１３１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０３のいずれか記載の非共有複合体。
２０５．血液脳関門レセプターに特異的に結合するブロモデオキシウリジン抗体のブロモデオキシウリジンに特異的に結合する結合特異性が、配列番号：１３０又は１３２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に含む、抗体重鎖可変ドメインと抗体軽鎖可変ドメインとのペアである、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０４のいずれか記載の非共有複合体。
２０６．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列が、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ブロモデオキシウリジン抗体が、ブロモデオキシウリジンに結合する能力を保持している、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０５のいずれか記載の非共有複合体。
２０７．合計１１９〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１３０又は１３２中において、置換、挿入、及び／又は欠失している、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０６のいずれか記載の非共有複合体。
２０８．置換、挿入、又は欠失が、ＣＤＲの外側の領域に（すなわち、ＦＲに）生じる、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０７のいずれか記載の非共有複合体。
２０９．ブロモデオキシウリジン結合特異性が、配列番号：１３０又は１３２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む、実施態様１１９〜１３４及び１９４〜２０８のいずれか記載の非共有複合体。
２１０．血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、ハプテンと血液脳関門レセプターに特異的に結合する抗体との間に、リンカーを含む、実施態様１１９〜２０８のいずれか記載の非共有複合体。
２１１．リンカーが、ペプチドリンカーである、実施態様２１０記載の非共有複合体。
２１２．リンカーが、化学リンカー（非ペプチドリンカー）である、実施態様２１０記載の非共有複合体。
２１３．血液脳関門レセプターに特異的に結合する抗体が、全長抗体である、実施態様１１９〜２１２のいずれか記載の非共有複合体。
２１４．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕに特異的に結合する、実施態様１１９〜２１３のいずれか記載の非共有複合体。
２１５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ
を含む、実施態様１１９〜２１４のいずれか記載の非共有複合体。
２１６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、更に、
ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ
を含む、実施態様１１９〜２１５のいずれか記載の非共有複合体。
２１７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ
を含む、実施態様１１９〜２１６のいずれか記載の非共有複合体。
２１８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号：２０の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号：２１の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン
を含む、実施態様１１９〜２１７のいずれか記載の非共有複合体。
２１９．非共有複合体が、アルツハイマー病の処置に使用するためのものである、実施態様１１９〜２１８のいずれか記載の非共有複合体。
２２０．複合体中の両抗体が、エフェクター機能サイレントである、実施態様１１９〜２１９のいずれか記載の非共有複合体。
２２１．複合体中の両抗体が、エフェクター機能を有さない、実施態様１１９〜２２０のいずれか記載の非共有複合体。
２２２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合する、実施態様１１９〜２２１のいずれか記載の非共有複合体。
２２３．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下、及び／又は
ｂ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下、及び／又は
ｃ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下、及び／又は
ｄ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下
の、ＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２２２のいずれか記載の非共有複合体。
２２４．抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）（配列番号：０２）に特異的に結合し、ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に結合しない、実施態様１１９〜２２３のいずれか記載の非共有複合体。
２２５．血液脳関門レセプターに特異的に結合する抗体が、モノクローナル抗体である、実施態様１１９〜２２４のいずれか記載の非共有複合体。
２２６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に結合する抗体フラグメントであり、
ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２２５のいずれか記載の非共有複合体。
２２７．血液脳関門レセプターに特異的に結合する抗体が、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、又は
ｃ）変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、
ｄ）変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、
ｅ）両重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｆ）両重鎖に変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体、又は
ｇ）両重鎖に変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ１の全長抗体、又は
ｈ）両重鎖に変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇ、１つの重鎖に変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃ、ならびに、各他の重鎖に変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＳ３５４Ｃを有するヒトサブクラスＩｇＧ４の全長抗体
である、実施態様１１９〜２２６のいずれか記載の非共有複合体。
２２８．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：１８、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１３、配列番号：１４、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２２７のいずれか記載の非共有複合体。
２２９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：０９、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１２、配列番号：０５、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２２８のいずれか記載の非共有複合体。
２３０．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：０８、配列番号：０９、及び配列番号：１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１３、配列番号：１４、及び配列番号：１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２２９のいずれか記載の非共有複合体。
２３１．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：２０のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２３０のいずれか記載の非共有複合体。
２３２．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２３１のいずれか記載の非共有複合体。
２３３．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２３２のいずれか記載の非共有複合体。
２３４．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
ａ）２つの抗体重鎖を含み、それぞれ、重鎖可変ドメインと重鎖定常領域とを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：２１のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここで、Ｃ末端リシン残基が存在し、又は、存在しなくてもよく、
ｉｉｉ）該定常領域が、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを含み、
ｂ）２つの抗体軽鎖を含み、それぞれ、軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインとを含み、ここで、
ｉ）該可変ドメインが、配列番号：１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）該定常領域が、ヒトカッパ軽鎖定常領域又はヒトラムダ軽鎖定常領域であり、
ｃ）ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有する全長ヒトＴａｕに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）フラグメントについて、６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有する全長ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）について、４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号：０２のアミノ酸配列を有するヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）の凝集体について、３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕについて、１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、実施態様１１９〜２３３のいずれか記載の非共有複合体。
２３５．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、重鎖可変ドメインの４、２４、及び７８位に、バリン残基を有する、実施態様１１９〜２３４のいずれか記載の非共有複合体。
２３６．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、重鎖可変ドメインの７１位に、アルギニン残基を有する、実施態様１１９〜２３５のいずれか記載の非共有複合体。
２３７．実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体と、薬学的に許容し得る担体とを含む、
医薬製剤。
２３８．さらに、更なる治療剤を含む、請求項２３７記載の医薬製剤。
２３９．更なる治療剤が、抗アミロイド治療剤である、請求項２３８記載の医薬製剤。
２４０．抗アミロイド治療剤が、抗ヒトアルファシヌクレイン抗体又は抗Ａベータ抗体である、請求項２３９記載の医薬製剤。
２４１．抗ヒトアルファシヌクレイン抗体又は抗Ａベータ抗体が、ハプテン化されている、請求項２３９〜１２２記載の医薬製剤。
２４２．抗ヒトアルファシヌクレイン抗体又は抗Ａベータ抗体が、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との複合体の状態にある、請求項２３９〜１２３記載の医薬製剤。
２４３．医薬として使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２４４．アルツハイマー病を処置するのに使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２４５．前駆性アルツハイマー病を処置するのに使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２４６．軽度アルツハイマー病を処置するのに使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２４７．Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性を減少させるのに使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２４８．認知及び機能を維持するのに使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２４９．認知及び機能が衰える速度を遅らせるのに使用するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体。
２５０．医薬の製造における、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２５１．医薬が、アルツハイマー病を処置するためのものである、実施態様２５０記載の使用。
２５２．医薬が、前駆性アルツハイマー病を処置するためのものである、実施態様２５０又は２５１記載の使用。
２５３．医薬が、軽度アルツハイマー病を処置するためのものである、実施態様２５０又は２５１記載の使用。
２５４．医薬が、Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性を減少させるためのものである、実施態様２５０又は２５１記載の使用。
２５５．医薬が、認知及び機能を維持するためのものである、実施態様２５０又は２５１記載の使用。
２５６．医薬が、認知及び機能が衰える速度を遅らせるためのものである、実施態様２５０又は２５１記載の使用。
２５７．アルツハイマー病を有する個体を処置する方法であって、
有効量の、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法。
２５８．個体におけるＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性を減少させる方法であって、
Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変成を減少させるのに有効量の、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法。
２５９．個体における認知及び機能を維持する方法であって、
認知及び機能を維持するのに有効量の、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法。
２６０．個体における認知及び機能が衰える速度を遅らせる方法であって、
認知及び機能が衰える速度を遅らせるのに有効量の、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体を、個体に投与することを含む、
方法。
２６１．Ｔａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経変性の減少における、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６２．認知及び機能を維持するのにおける、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６３．認知及び機能が衰える速度を遅らせるのにおける、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６４．アルツハイマー病の処置における、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６５．アルツハイマー病の進行を防止するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６６．アルツハイマー病の進展を停止させるための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６７．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）関連アルツハイマー病の拡散を予防するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６８．リソソーム膜崩壊を減少させるための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２６９．ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）誘引性神経不安定化及び／又は崩壊に対してリソソーム膜を安定化させるための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
２７０．アルツハイマー病の進展を予防するための、実施態様１〜２３６のいずれか記載の非共有複合体の使用。
Ｖ．実施例
下記は、本発明の方法及び組成物の例示である。種々の他の実施態様を実施でき、上記で提供された一般記載を提供すると理解される。
材料及び方法
リコンビナントＤＮＡ技術
標準的な方法を使用して、Sambrook, J. et al., Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989に記載されているように、ＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬を、製造メーカーの説明書に従って使用した。
遺伝子及びオリゴヌクレオチド合成
所望の遺伝子セグメントを、Geneart GmbH（Regensburg, Germany）での化学合成により調製した。合成した遺伝子フラグメントを、増殖／増幅用のE. coliプラスミド内にクローニングした。サブクローニングされた遺伝子フラグメントのＤＮＡ配列を、ＤＮＡシークエンシングにより確かめた。あるいは、短い合成ＤＮＡフラグメントを、化学的に合成したオリゴヌクレオチドをアニーリングさせることにより、又は、ＰＣＲによりアッセンブリした。各オリゴヌクレオチドを、metabion GmbH（Planegg-Martinsried, Germany）により調製した。
試薬
特に断りない限り、全ての市販の化学薬品、抗体、及びキットを、製造メーカーのプロトコールに従って提供されたまま使用した。
実施例１
ウサギ抗体の調製及び精製
免疫化
Charles River Laboratories International, IncからのＮＺＷウサギを、免疫化に使用した。ＫＬＨに連結したホスホペプチドＴａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を、Ｋ３ＰＯ４バッファー ｐＨ７．０に、濃度１mg/mLで溶解させ、安定したエマルジョンが生成されるまで、完全フロイントアジュバントと混合した（１：１）。３匹のウサギに、エマルジョン ２mLの皮内（ｉ．ｄ．）注入を受けさせ、続けて、２回目に筋肉内（ｉ．ｍ．）注入、及び３回目に皮下（ｓ．ｃ．）注入を、それぞれ１mLにおいて、１週間間隔で受けさせた。４回目のｉ．ｍ．注入 １mLを、２週間後に行い、続けて更に、２回ｓ．ｃ．注入 １mLを４週間間隔で行った。各動物の末梢全血サンプル １０mLを、３回目、４回目、５回目、及び６回目の注入後４〜６日で収集し、ＦＡＣＳでの単一細胞ソーティングに使用した。さらに、各動物の血清 ０．５mLを、同時に収集し、Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］特異的抗体応答の決定に使用した。
抗体応答
免疫化に対する抗体応答を、血清の系列希釈により、ＥＬＩＳＡを使用して決定した。同ＥＬＩＳＡにおいて、ウェル当たりに、３０ng ビオチン化Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を、１×ＰＢＳ中において、ストレプトアビジンプレコート９６ウェルマイクロタイタープレート（MC1347, Micro Coat Biotechnologie GmbH, Bernried, Germany）上で、４℃で一晩インキュベーションした。検出のために、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させたヤギ抗ウサギＩｇＧ（The Jackson laboratory）を、１：１６，０００希釈で使用した。ＢＭ Ｂｌｕｅ ＰＯＤ基質である沈殿性テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（Roche Diagnostics GmbHからのすぐ使用できる溶液）を、可視化に使用した。反応を、１N ＨＣｌにより停止させ、Tecan Inginiteで４５０／６９０nmにより測定した。
Ｂ細胞クローニング
プレートのコーティング
無菌のストレプトアビジンコート６ウェルプレート（細胞培養グレード）を、３つのビオチン化対照ペプチド（非リン酸化Ｔａｕ（４１６〜４３０）、ＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］、及びＭＡＰ２＿ヒト（１８０２〜１８１６）［ｐＳｅｒ−１８０２］）の混合物、又は、ビオチン化ホスホペプチドＴａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］のいずれかと、ＰＢＳ中でそれぞれ濃度０．５〜１μg/mLで、室温において１時間インキュベーションした。プレートを、使用前に３回、無菌のＰＢＳで洗浄した。細胞培養６ウェルプレートを、炭酸バッファー（０．１M 炭酸ナトリウム、３４mM 炭酸水素二ナトリウム、ｐＨ９．５５）中の２μg/mL ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）で、４℃で一晩コートした。プレートを、使用前に３回、無菌のＰＢＳで洗浄した。
ウサギ末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の単離
ＥＤＴＡ含有全血を、lympholyte mammal（Cedarlane Laboratories）での密度遠心前に、１×ＰＢＳで２倍希釈した。lympholyte mammalを、ウサギＰＢＭＣを単離するのに行った。ＰＢＭＣを、抗体による染色前に２回洗浄した。
ＥＬ−４ Ｂ５培地
ＲＰＭＩ１６４０（Pan Biotech, Aidenbach, Germany）に、１０％ ＦＣＳ（Hyclone, Logan, UT, USA）、２mM グルタミン、１％ ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（PAA, Pasching, Austria）、２mM ピルビン酸ナトリウム、１０mM ＨＥＰＥＳ（PAN Biotech, Aidenbach, Germany）、及び０．０５mM ベータ−メルカプトエタノール（Gibco, Paisley, Scotland）を添加した。
マクロファージ／単球の枯渇
無菌の６ウェルプレート（細胞培養グレード）を、非特異的付着により、マクロファージ及び単球を枯渇させるのに使用した。ウェルを、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）又はストレプトアビジンのいずれか及び対照ペプチドでコートした。各ウェルを、培地 最大４mL及び最大６×１０６個 免疫化ウサギからの末梢血単核細胞で満たし、インキュベーター中において、３７℃で１時間結合させた。上清中の５０％ 細胞を、パニング工程に使用し、残り５０％ 細胞を、免疫蛍光染色及び単一細胞ソーティングに直接供した。
ペプチドによるＢ細胞のパニング
６ウェル組織培養プレートを、ストレプトアビジンでコートし、ビオチン化ペプチドＴａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を、培地 ４mL当たりに、最大６×１０６個 細胞と共に播種し、インキュベーター中において、３７℃で１時間結合させた。付着しなかった細胞を、１×ＰＢＳで１〜２回、ウェルを注意深く洗浄することにより除去した。残りの付着した細胞を、トリプシンにより、インキュベーター中において３７℃で１０分間引き剥がし、ついで、培地中で２回洗浄した。細胞を、免疫蛍光染色まで、氷上で維持した。
免疫蛍光染色及び単一細胞ソーティング
単一細胞ソーティングに使用した抗ウサギＩｇＧ ＦＩＴＣを、AbD Serotec（STAR121F, Dusseldorf, Germany）から得た。表面染色のために、枯渇及びパニング工程からの細胞を、ＰＢＳ中の抗ウサギＩｇＧ ＦＩＴＣ抗体と共に、暗所での４℃の低温室において回転させながら、３０分間インキュベーションさせた。遠心分離後、上清を、吸引により除去した。ＰＢＭＣを、遠心分離及び氷冷ＰＢＳでの洗浄の２サイクルに供した。最終的に、ＰＢＭＣを、氷冷ＰＢＳ中に再懸濁させ、ＦＡＣＳ分析に直ちに供した。ヨウ化プロピジウム（BD Pharmingen, San Diego, CA, USA）を、ＦＡＣＳ分析前に濃度５μg/mLで加えて、死んだ細胞と生きた細胞とを識別した。ＦＡＣＳを、FACSDivaソフトウェア（BD Biosciences, USA）を備えたBecton Dickinson FACSAriaを使用して行った。単一のＦＩＴＣラベル生細胞を、９６ウェルプレート中に堆積させた。
Ｂ細胞培養
Ｂ細胞の培養を、Zubler, R.H. et al., J. Immunol. 134 (1985) 3662-3668に記載されている方法と同様の方法により準備した。簡潔に、単一ソーティングしたＢ細胞を、２１０μL/ウェル Pansorbin Cells（1:20000）（Calbiochem (Merck), Darmstadt, Deutschland）、５％ ウサギ胸腺細胞上清、及びガンマ線照射ＥＬ−４−Ｂ５マウス胸腺細胞（２×１０４個／ウェル）を含む、ＥＬ−４ Ｂ５培地を含む９６ウェルプレート中で、インキュベーター中において、５％ ＣＯ２の雰囲気下での３７℃で７日間培養した。Ｂ細胞培養上清を、スクリーニングのために除去し、細胞を、可変領域遺伝子クローニングのために直ちに収集し、又は、ＲＬＴバッファー（Qiagen, Hilden, Germany） １００μL中において、−８０℃で凍結させた。
Ｂ細胞クローンスクリーニング
Ｂ細胞培養上清を、ビオチン化Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］に対する結合性について、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。非リン酸化Ｔａｕ（４１６〜４３０）、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、及び非関連ホスホペプチドＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］を、対照抗原として使用した。ＥＬＩＳＡプレートの準備に関して、ストレプトアビジンプレコートマイクロタイタープレートを、ビオチン化Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］と、５０ng/mLで、室温において１時間インキュベーションした。ＫＬＨ又は対照ペプチドでのコーティングを、１μg/mLで行った。Ｂ細胞上清を、１：５〜１：１０で希釈し、抗原コートマイクロタイタープレートにおいて、６０分間インキュベーションした。徹底的な洗浄後に、ウサギ抗体の結合性を、ヒツジ抗ウサギＩｇＧジゴキシゲニンコンジュゲート検出抗体（Chemicon AQ301D）を使用して検出した。ＴＭＢとの室温でのインキュベーション後、３７０nm〜４９２nmでの吸光度を測定した。ビオチン化Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］により、バックグラウンドを上回るシグナルを生じるが、ＫＬＨ及びＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］によってはシグナルを生じないＢ細胞クローンを、更に検討し、可変領域遺伝子クローニングに供した。
ＶドメインのＰＣＲ増幅及びシークエンシング
トータルＲＮＡを、NucleoSpin（登録商標）8/96 ＲＮＡキット（Macherey&Nagel; 740709.4, 740698）を使用し、製造メーカーのプロトコールに従って調製した。全ての工程を、epMotion 5075 liquid handling system（Eppendorf）において行った。ＲＮＡを、ＲＮＡｓｅフリー水 ６０μLにより溶出した。ＲＮＡ ６μLを使用し、製造メーカーの説明書に従って、Superscript III First-Strand Synthesis SuperMix（Invitrogen 18080-400）及びオリゴ−ｄＴ−プライマーを使用するリバーストランスクリプターゼ反応によりｃＤＮＡを生成した。ｃＤＮＡ ４μLを使用して、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を、最終容量 ５０μLにおいて、重鎖についてのプライマーであるrbHCfinal.up及びrbHCfinal.do、ならびに、軽鎖についてのプライマーであるrbLCfinal.up及びrbLCfinal.do（以下の表を参照のこと）を使用する、AccuPrime SuperMix（Invitrogen 12344-040）により増幅させた。ＰＣＲ条件は、下記の通りとした。９４℃で５分の高温開始；９４℃で２０秒 ３５サイクル、７０℃で２０秒、６８℃で４５秒、及び６８℃で７分での最後の伸長。
ＰＣＲ溶液 ５０μLの内の８μLを、48 E-ゲル ２％（Invitrogen G8008-02）にロードした。陽性のＰＣＲ反応を、NucleoSpin（登録商標）Extract IIキット（Macherey&Nagel; 740609250）を使用し、製造メーカーのプロトコールに従って洗浄し、溶出バッファー ５０μL中に溶出した。精製したＰＣＲ産物 １２μLを、重鎖についてのrbHCfinal.up及びrbHCfinal.do、ならびに、軽鎖についてのrbLCfinal.up及びrbLCfinal.do（上記表を参照のこと）を使用して、両方向で直接シークエンシングした。
ウサギモノクローナル抗体及びウサギ／マウスキメラ抗体のリコンビナント発現
ウサギモノクローナル抗体のリコンビナント発現のために、ＶＨ又はＶＬをコードするＰＣＲ産物を、オーバーハングクローニング法（Haun, R.S. et al., BioTechniques 13 (1992) 515-518；Li, M.Z., et al., Nature Methods 4 (2007) 251-256）により、発現ベクター内にｃＤＮＡとしてクローニングした。ウサギカッパ又はガンマ定常領域及びＶＬ又はＨＬインサートをコードする線状発現プラスミドを、オーバーラッププライマーを使用するＰＣＲにより増幅した。精製したＰＣＲ産物を、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼと共にインキュベーションし、一本鎖オーバーハングを生成した。この反応を、ｄＣＴＰを加えることにより停止させた。次の工程において、プラスミド及びインサートを組み合わせ、ｒｅｃＡと共にインキュベーションして、部位特異的組換えを誘引した。組換えプラスミドを、E. coli内にトランスフォーメーションした。翌日、増殖したコロニーを選択し、プラスミド調製、切断解析、及びＤＮＡシークエンシングにより、正しく組み換えられたプラスミドについて試験した。抗体発現について、単離したＨＣ及びＬＣプラスミドを、ＨＥＫ２９３細胞内に一過性共トランスフェクションした。上清を、１週間後に収集した。ウサギマウスキメラ抗体のクローニング及び発現について、ＶＨ及びＶＬ領域を、ＰＣＲにより増幅し、マウス定常カッパ及びマウス定常ガンマ１領域を含有する発現ベクター内にサブクローニングした。ウサギ／マウスキメラＨＣ及びＬＣプラスミドを単離し、正しい挿入について、切断解析及びＤＮＡシークエンシングにより試験し、ＨＥＫ２９３細胞内に一過性に共トランスフェクションした。上清を、トランスフェクション後１週間で収集した。
抗体精製
リコンビナントに発現させたウサギ抗体を、MabSelectSuRe（商標）カラム（GE Healthcare）において、細胞培養上清から精製した。サンプルをロードする前に、該カラムを、２５mmol/L Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２５mmol/L ＮａＣｌ、ｐＨ７．４で平衡化した。抗体の溶出を、５０mmol/L 酢酸 ｐＨ３．１４で達成した。溶出したサンプルを、脱塩カラム（Sephadex G25, GE Healthcare）上に直ちにロードし、２０mmol/L Ｈｉｓ−ＨＣｌ、１４０mmol/L ＮａＣｌ ｐＨ６．０中に溶出した。また、このバッファーを、精製した抗体の保存にも使用した。全体的な保存温度を４℃とし、精製プロセス中は室温とし、分注後は−８０℃とした。細胞培養上清からリコンビナントに発現させたウサギ／マウスキメラ抗体を、MabSelectSuRe（商標）カラム（GE Healthcare）において精製した。サンプルをロードする前に、該カラムを、１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４で平衡化させた。抗体の溶出を、１００mmol/L クエン酸 ｐＨ３．０で達成した。溶出したサンプルを、２mol/L Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ９．０で直ちに中和した。その後、抗体を、サイズ排除カラム（Superdex 200, GE Healthcare）上にロードし、２０mmol/L Ｈｉｓ−ＨＣｌ、１４０mmol/L ＮａＣｌ ｐＨ６．０中に溶出した。また、このバッファーを、精製した抗体の保存にも使用した。全体的な保存温度を４℃とし、精製プロセス中は室温とし、分注後は−８０℃とした。
実施例２
抗Ｔａｕ ｐＳ４２２モノクローナルウサギ抗体は、ｐＳ４２２でリン酸化されたＴａｕに非常に選択的であり、Ｔａｕ ｐＳ４２２の原線維凝集体に結合する。
ＥＬＩＳＡ
ウサギモノクローナル抗体を、ＨＥＫ２９３細胞中で、リコンビナントに発現させた。細胞培養上清又は精製したウサギ抗体を、ビオチン化Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］、非リン酸化Ｔａｕ（４１６〜４３０）、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、及び非関連ホスホペプチドＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］に対する結合性を、ＥＬＩＳＡにより試験した。ＥＬＩＳＡプレートの準備に関して、ストレプトアビジンプレコートマイクロタイタープレートを、ビオチン化Ｔａｕ（４１５〜４３０）［ｐＳ４２２］と、５０ng/mLで、室温において１時間インキュベーションした。ＫＬＨ又は対照ペプチドでのコーティングを、１μg/mLで行った。ウサギ抗Ｔａｕ ｐＳ４２２抗体（Abcam AB51071）又はウサギ抗体含有上清を、種々の濃度で、抗原ラベルマイクロタイタープレートにおいて、６０分間インキュベーションした。徹底的な洗浄後に、ウサギ抗体の結合性を、ヒツジ抗ウサギＩｇＧジゴキシゲニンコンジュゲート検出抗体（Chemicon AQ301D）を使用して検出した。ＴＭＢとの室温でのインキュベーション後、３７０nm〜４９２nmでの吸光度を測定した。抗体結合性を、そのＥＣ５０値により特徴付けた。ビオチン化Ｔａｕ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］及び非リン酸化Ｔａｕ（４１６〜４３０）のペプチドに対する抗体結合性を、そのＥＣ５０値により特徴付けた。ＫＬＨ又はＭＣＡＫホスホペプチドによる交叉反応性を、高濃度、すなわち、細胞培養上清の１：５希釈での一点測定により推測した。結果を、以下の表に示す。Ｔａｕホスホペプチドに対する結合性のＥＣ５０値は、Ｔａｕペプチドに対する結合性のＥＣ５０値より、１００倍超低いことが見出された。このことは、非リン酸化Ｔａｕペプチドと比較して、リン酸化Ｔａｕフラグメントに対する少なくとも１００倍の選択性を示す。ＫＬＨ及びＭＣＡＫの対照ホスホペプチドに対する結合性は、全ての抗体に関して、バックグラウンドレベルであり、Ｔａｕホスホペプチドに関する最大側定値の約１＜３％であった。
また、可溶性及び凝集した全長Ｔａｕ ｐＳ４２２についての特異性も試験した。Ｔａｕ ｐＳ４２２の原線維凝集体（３００μg/mL）を、ポリスチレン系Maxisorbマイクロタイタープレート（Nunc）に、ＲＴで一晩コートした。同様の方法で、可溶性全長Ｔａｕ及びＴａｕ ｐＳ４２２を、このMaxisorbマイクロタイタープレートにコートした。ウサギ抗Ｔａｕ ｐＳ４２２抗体対照（Abcam AB51071）又は精製したウサギ抗体を加え、最大濃度１０００ng/mLで、６０分間インキュベーションした。徹底的な洗浄後、ウサギ抗体の結合性を、ヒツジ抗ウサギＩｇＧジゴキシゲニンコンジュゲート検出抗体（Chemicon AQ301D）を使用して検出した。ＴＭＢとの室温でのインキュベーション後、３７０nm〜４９２nmでの吸光度を測定した。抗体結合性を、そのＥＣ５０値により特徴付けた。結果を、下記表に示す。
ウサギモノクローナル抗体は、Ｔａｕ−ｐＳ４２２タンパク質に、１ng/mLを下回るＥＣ５０値で結合した。原線維Ｔａｕ ｐＳ４２２を、０．４ng/mL〜１４ng/mLの範囲のＥＣ５０値で検出した。非リン酸化全長Ｔａｕタンパク質に対する結合性についてのシグナルは、バックグランドレベルと区別することができなかった。したがって、それぞれの抗体が、Ｔａｕと比較して、少なくとも１００倍の選択性で、Ｔａｕ ｐＳ４２２及び原線維Ｔａｕ ｐＳ４２２に結合すると推測された。
BIAcore（商標）
原線維Ｔａｕ ｐＳ４２２の凝集体に対する結合性を、BIAcore（商標）分析により更に調査し、確認した。測定を、BIAcore 3000機器を使用して、３７℃で行った。このシステム及びサンプルのバッファーを、ＨＢＳ−ＥＰ（１０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、３．４mM ＥＤＴＡ、０．００５％ ポリソルベート２０（v/v））とした。BIAcore（商標）ＣＭ５センサチップを、前処理手順に供した。０．１％ ＳＤＳ、５０mM ＮａＯＨ、１０mM ＨＣｌ、及び１００mM Ｈ３ＰＯ４を続けて、フローセルＦＣ１、ＦＣ２、ＦＣ３、及びＦＣ４に、３０秒間注入した。アミンカップリング手順を、製造メーカーの説明書に従って、BIAcore（商標） 3000 wizard v. 4.1を使用して行った。センサ表面のＥＤＣ／ＮＨＳ活性化後に、非ホスホ選択性抗Ｔａｕ抗体ｍＡｂ＜ＴＡＵ＞Ｍ−４／５３−ＩｇＧを、センサのフローセルＦＣ２、ＦＣ３、及びＦＣ４に固定した。対照として、無関係な抗原を認識する、ＣＫ−ＭＭ（クレアチンキナーゼアイソタイプ）に対する抗体を、ＣＦ１において捕捉した。ｍＡｂ＜ＴＡＵ＞Ｍ−４／５３−ＩｇＧ及びＣＫ−ＭＭに対する抗体を、１０mM ＮａＡｃ ｐＨ５．０中において、３０μg/mLに希釈し、１０μL/分で、接触時間７分間注入して、１０，０００RU 抗体捕捉系を固定した。この表面を、１M エタノールアミンによる飽和により不活性化した。センサを、１０μL/分で２分間、溶液中の検体として、リン酸化線維状Ｔａｕタンパク質（０．３mg/mL ストックをＨＢＳ−ＥＰ中に１：１００希釈）による５サイクルで順化させた。再生を、１０mM グリシン ｐＨ２．５により、３０μL/分で３分間行った。ｍＡｂ４／５３に結合する検体は、線維状ｐＴａｕを解離しないと推測される。ｍＡｂ４／５３からの線維状ｐＴａｕの解離を観察することができなかったためである。全ての更なる測定サイクルについて、０．３mg/mL 線維状ｐＴａｕを、ＨＢＳ−ＥＰバッファー中で１：１００希釈し、ｐＴａｕを異種サンドイッチ方式で各抗体の検体に提示するために、１０μL/分で１分間注入した。抗体の検体を、ＨＢＳ−ＥＰバッファー中に、濃度１００nMに希釈し、この系内に、２０μL/分で３分間注入した。解離の３分後、センサ表面を、１０mM グリシン ｐＨ２．５、１００μL/分で１分間、続けて、ＨＢＳ洗浄、１００μL/分で１５秒間の、２回の注入により再生した。相互作用の会合及び解離期をモニターした。溶液中における抗体の検体は二価であるため、結合活性負荷抗体−ｐＴａｕ動力学を、二相性解離モデルにより特徴付けた。同モデルは、速い親和性系初期解離工程、続けて、後期の複合体解離における結合活性が安定化されているが、速度制限した動力学工程からなる。検体注入終了後１０秒（初期）及び５０秒（後期）に、ｋｄ及びｔ／２ ｄｉｓｓをできる限り定量した。動力学測定を、二重参照法を使用して評価した。まず、ＦＣ１参照からのシグナルを差し引いて、バッファーバルク効果及び非特異的結合を補正した。第二に、０nM 検体注入を差し引いて、各捕捉系からの一次抗体の解離を補正した。動力学的速度を、ラングミュア１．１解離当嵌めモデルを使用して、BIAcore（商標）evaluation software v.4.1により評価した。抗原／抗体複合体安定性半減期（分）を、式ｌｎ（２）／６０＊ｋｄにより算出した。
結果を、下記表にまとめる。
実施例３
抗Ｔａｕ ｐＳ４２２モノクローナルウサギ抗体の、アルツハイマー病患者の脳切片における細胞内ｐＴａｕに対する結合性
アルツハイマー病の脳組織におけるｐＴａｕ病理のモノクローナルウサギ抗Ｔａｕ ｐＳ４２２抗体により特異的で、高感度の免疫組織化学検出を、ＡＤ患者からのヒト脳組織の凍結切片を使用して、免疫蛍光染色実験により調査した。方法は、基本的に、例Ｘ（マウス抗体）に記載されているのと同じとした。ウサギＩｇＧを、ヤギ抗ウサギAlexa Fluor488（登録商標）コンジュゲート二次抗体（Invitrogen/Molecular Probes A11034）により検出した。ｐＴａｕ堆積及び線維の特異的で、高感度の染色が、クローンＭａｂ００５、Ｍａｂ０１９、Ｍａｂ０２０、Ｍａｂ０８５、Ｍａｂ０８６、及びＭａｂ０９７について明らかとなる。細胞内ｐＴａｕ堆積が、大きな神経線維もつれ及び伸長した好中球閾値と同様に、顕著である。０．０８〜０．０１６μg/mLの範囲の最少有効濃度を、調査した全てのクローンについて決定した。このことは、本物のヒトｐＴａｕ堆積に対する非常に高感度の結合性を示す。
実施例４
ウサギ抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体のヒト化
本明細書で使用する場合、「可変ドメイン」（軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖の可変ドメイン（ＶＨ））は、抗体のＴａｕ（ｐＳ４２２）抗原に対する結合性に直接関与する軽鎖ドメインと重鎖ドメインとの各ペアを指す。可変軽鎖及び重鎖ドメインは、同じ全体構造を有し、各ドメインは、４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。これらの配列は、広く保存されており、３つの「超可変領域」により連結されている。
ウサギ抗体ｍＡｂ０８６のＶＨ及びＶＬドメインの構造を、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏで分析し、ヒトＶＨ及びＶＬドメインの構造データベース（IMGT）と比較した。構造的に最も類似するＶドメインのパネルを、ウサギ抗体のＣＤＲを選択されたヒトＶＨ及びＶＬドメイン上にグラフト化するのに選択した。加えて、一次配列中の類似性を考慮して、ウサギ抗体のＶＨ及びＶＬドメインの一次配列をヒトＶドメインレパートリーに対して整列させることにより、ヒトＶドメインの選択を狭めた。ウサギ親残基へのヒトフレームワーク内での逆突然変異を、一部のヒト化変異体中に導入した。同様に、ＣＤＲ中の変異を、抗原に対する親和性を増大させる可能性があり、ＣＤＲの三次構造を維持し、抗体精製後に修飾を受ける可能性がある１つ以上のシステイン残基などの望ましくない構造を除去するのに適した一部の変異体に導入した。
各ヒト化変異体を含有する重鎖及び軽鎖ベクターを、マイクロタイター培養プレート中のＨＥＫ２９３懸濁細胞内に、マトリックス法において共トランスフェクションして、可能性のある全ての軽鎖／重鎖組合せの全長ＩｇＧを発現する細胞培養物を得た。３７℃での５日の培養後、上清を収集し、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーにより、マイクロタイタースケールで精製した。
実施例５
リコンビナント発現ベクターの生成
ａ）ヒトＩｇＧ１定常領域を使用する免疫グロブリン重鎖発現用ベクターの生成
ヒトＩｇＧ１定常領域（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３）及びウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来のヒト化抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＨドメインを含むヒト化重鎖コード融合遺伝子を、各抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）特異的抗体ＶＨドメインをコードするＤＮＡフラグメントを、ヒトＩｇＧ１定常領域をコードする配列エレメントに融合させることによりアッセンブリした。
ヒトＩｇＧ１定常領域は、下記アミノ酸配列：

を有する。
また、発現ベクターは、E. coli中でこのプラスミドを複製することができるベクターｐＵＣ１８由来の複製起点及びE. coliにアンピシリン抵抗性を付与するベータ−ラクタマーゼ遺伝子も含んだ。
抗体重鎖の転写ユニットは、下記の機能性エレメントを５’から３’方向に含む。
−イントロンＡを含むヒトサイトメガロウイルス由来の最初期エンハンサー及びプロモーター（Ｐ−ＣＭＶ）、
−ヒト重鎖免疫グロブリン ５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−重鎖可変（ＶＨ）ドメインコード核酸、
−ヒトＩｇＧ１定常領域コード核酸、及び
ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）
ｂ）ヒトＩｇ−カッパ定常領域を使用する免疫グロブリン軽鎖発現用ベクターの生成
ヒトＩｇ−カッパ定常領域（ＣＬ−カッパ）及びウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（カッパ）ドメインを含むヒト化カッパ軽鎖コード融合遺伝子を、各抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（カッパ）ドメインをコードするＤＮＡフラグメントを、ヒトＩｇ−カッパ定常領域をコードする配列エレメントに融合させることによりアッセンブリした。
ヒトＩｇ−カッパ定常領域は、下記アミノ酸配列：

を有する。
また、発現ベクターは、E. coli中でこのプラスミドを複製することができるベクターｐＵＣ１８由来の複製起点及びE. coliにアンピシリン抵抗性を付与するベータ−ラクタマーゼ遺伝子も含んだ。
抗体カッパ軽鎖の転写ユニットは、下記の機能性エレメントを５’から３’方向に含む。
−イントロンＡを含むヒトサイトメガロウイルス由来の最初期エンハンサー及びプロモーター（Ｐ−ＣＭＶ）、
−ヒト重鎖免疫グロブリン ５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインコード核酸、
−ヒトＩｇ−カッパ定常領域コード核酸、及び
ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）
ｃ）ヒトＩｇ−ラムダ定常領域を使用する免疫グロブリン軽鎖発現用ベクターの生成
ヒトＩｇ−ラムダ定常領域（ＣＬ−ラムダ）及びウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（ラムダ）ドメインを含むヒト化ラムダ軽鎖コード融合遺伝子を、各抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（ラムダ）ドメインをコードするＤＮＡフラグメントを、ヒトＩｇ−ラムダ定常領域をコードする配列エレメントに融合させることによりアッセンブリした。
ヒトＩｇ−ラムダ定常領域は、下記アミノ酸配列：

を有する。
また、発現ベクターは、E. coli中でこのプラスミドを複製することができるベクターｐＵＣ１８由来の複製起点及びE. coliにアンピシリン抵抗性を付与するベータ−ラクタマーゼ遺伝子も含んだ。
抗体ラムダ軽鎖の転写ユニットは、下記の機能性エレメントを５’から３’方向に含む。
−イントロンＡを含むヒトサイトメガロウイルス由来の最初期エンハンサー及びプロモーター（Ｐ−ＣＭＶ）、
−ヒト重鎖免疫グロブリン ５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインコード核酸、
−ヒトＩｇ−ラムダ定常領域コード核酸、及び
ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）
ｄ）ヒトＩｇ−カッパ定常領域を使用する免疫グロブリン軽鎖発現用ベクターの生成
ヒトＩｇ−カッパ定常領域（ＣＬ−カッパ）及びウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（カッパ）ドメインを含むヒトＩｇ−カッパ軽鎖コード融合遺伝子を、各抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（カッパ）ドメインをコードするＤＮＡフラグメントを、ヒトＩｇ−カッパ定常領域をコードする配列エレメントに融合させることによりアッセンブリした。構築物は、ゲノム構成にあった。すなわち、イントロンが、シグナルペプチド及びＶＬ（カッパ）とＣＬ−カッパドメインとの間に存在した。
また、発現ベクターは、E. coli中でこのプラスミドを複製することができるベクターｐＵＣ１８由来の複製起点及びE. coliにアンピシリン抵抗性を付与するベータ−ラクタマーゼ遺伝子も含んだ。
抗体カッパ軽鎖の転写ユニットは、下記の機能性エレメントを５’から３’方向に含む。
−ヒトサイトメガロウイルス由来の最初期エンハンサー及びプロモーター（Ｐ−ＣＭＶ）、
−ヒト重鎖免疫グロブリン ５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインコード核酸、
−ヒトＩｇＧカッパ定常領域、及び
ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）
ｅ）ヒトＩｇ−ラムダ定常領域を使用する免疫グロブリンラムダ軽鎖発現用ベクターの生成
ヒトＩｇ−ラムダ定常領域（ＣＬ−ラムダ）及びウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（ラムダ）ドメインを含むヒトＩｇ−ラムダ軽鎖コード融合遺伝子を、各抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（ラムダ）ドメインをコードするＤＮＡフラグメントを、ヒトＩｇ−ラムダ定常領域をコードする配列エレメントに融合させることによりアッセンブリした。構築物は、ゲノム構成にあった。すなわち、イントロンが、シグナルペプチド及びＶＬ（ラムダ）とＣＬ−ラムダドメインとの間に存在した。
また、発現ベクターは、E. coli中でこのプラスミドを複製することができるベクターｐＵＣ１８由来の複製起点及びE. coliにアンピシリン抵抗性を付与するベータ−ラクタマーゼ遺伝子を含んだ。
抗体ラムダ軽鎖の転写ユニットは、下記の機能性エレメントを５’から３’方向に含む。
−ヒトサイトメガロウイルス由来の最初期エンハンサー及びプロモーター（Ｐ−ＣＭＶ）、
−ヒト重鎖免疫グロブリン ５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインコード核酸、
−ヒトＩｇＧラムダ定常領域、及び
ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）
実施例６
抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体のリコンビナント生成
抗体を、Ｆ１７培地（Invitrogen Corp.）中で培養された、一過性にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞（ヒト胚性腎臓細胞株２９３由来）中で生成した。実施例５で記載された各ベクターのトランスフェクションのために、「293-Free」トランスフェクション試薬（Novagen）を使用した。抗体を、個々の発現プラスミドから発現させた。トランスフェクションを、製造メーカーの説明書において特定されたように行った。リコンビナント抗体含有細胞の培養上清を、トランスフェクション後３〜７日で収集した。上清を、精製まで低温（例えば、−８０℃）において保存した。
例えば、ＨＥＫ２９３細胞中でのヒト免疫グロブリンのリコンビナント発現に関する一般的な情報は、Meissner, P. et al., Biotechnol. Bioeng. 75 (2001) 197-203に提供されている。
実施例７
リコンビナント抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）抗体の精製
抗体を含有する培養上清をろ過し、２つのクロマトグラフ工程により精製した。
抗体を、ＰＢＳ（１mM ＫＨ２ＰＯ４、１０mM Ｎａ２ＨＰＯ４、１３７mM ＮａＣｌ、２．７mM ＫＣｌ）、ｐＨ７．４で平衡化させた、HiTrap MabSelectSuRe（GE Healthcare）を使用する、親和性クロマトグラフィーにより捕捉した。結合しなかったタンパク質を、平衡化バッファーで洗浄することにより除去した。抗体を、２５mM クエン酸バッファー、ｐＨ３．１で回収し、溶出後直ちに、１M Ｔｒｉｓ塩基、ｐＨ９．０でｐＨ６．０に調整した。
Superdex200（商標）（GE Healthcare）でのサイズ排除クロマトグラフィーを、２番目の精製工程として使用した。サイズ排除クロマトグラフィーを、２０mM ヒスチジンバッファー、０．１４M ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中で行った。抗体含有溶液を、Biomax-SKメンブラン（Millipore, Billerica, MA, USA）を備えるUltrafree-CL遠心分離フィルタユニットで濃縮し、−８０℃で保存した。
実施例８
動力学的スクリーニング
動力学的スクリーニングを、Schraeml et al.（Schraeml, M. and M. Biehl, Methods Mol. Biol. 901 (2012) 171-181）に従って、BIAcore ＣＭ５センサを搭載したBIAcore 4000機器において行った。BIAcore 4000機器を、software version V1.1の制御下とした。BIAcore ＣＭ５シリーズＳチップを、該機器内に搭載し、流体力学的に取り扱い、製造メーカーの説明書に従って前処理した。機器バッファーを、ＨＢＳ−ＥＰバッファー（１０mM ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０mM ＮａＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、０．０５％（w/v）Ｐ２０）とした。抗体捕捉系を、センサ表面上に準備した。ヒトＩｇＧ−Ｆｃ特異性を有するポリクローナルヤギ抗ヒト抗体（Jackson Lab.）を、３０μg/mLで、１０mM 酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５）中において、該機器のフローセル１、２、３、及び４におけるスポット１、２、４、及び５に、ＮＨＳ／ＥＤＣ化学を使用する１０，０００RUで固定した。各フローセルにおいて、抗体を、スポット１及びスポット５に捕捉させた。スポット２及びスポット４を、参照スポットとして使用した。センサを、１M エタノールアミン溶液で不活性化した。ヒト化抗体誘導体を、１mg/mL ＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン）を加えた機器バッファー中に濃度４４nM〜７０nMでアプライした。抗体を、流速３０μL/分で２分間注入した。表面提示抗体の捕捉レベル（ＣＬ）を、ｒｅｌ．応答単位（RU）で測定した。溶液中の検体、リン酸化ヒトｔａｕタンパク質、非リン酸化ヒトｔａｕタンパク質、及びリン酸化ヒトｔａｕ変異タンパク質Ｔ４２２Ｓを、流速３０μL/分において、３００nMで３分間注入した。解離を、５分間モニターした。捕捉系を、１０mM グリシンバッファー ｐＨ１．７を３０μL/分で全てのフローセルに１分注入することにより再生した。２つの報告点（検体注入終了直前に記録したシグナルを結合後期（ＢＬ）とし、解離時間の終了直前に記録したシグナルを、安定後期（ＳＬ）とする）を使用して、動力学的スクリーニング性能を特徴決定した。さらに、解離速度定数ｋｄ（１／秒）を、ラングミュアモデルに従って算出し、抗体／抗原複合体半減期を、式ｌｎ（２）／（６０＊ｋｄ）により、分で算出した。モル比（ＭＲ）を、式ＭＲ＝（結合後期（RU）／（捕捉レベル（RU）））＊（ＭＷ（抗体）／（ＭＷ（抗原））に従って算出した。センサが適切な量の抗体リガンド捕捉レベルで構成された場合、各抗体は、溶液中の少なくとも１つの検体に機能的に結合可能であるべきである。この結合は、ＭＲ＝１．０のモル比で表現される。また、モル比は、検体結合の結合価モードについての指標でもある。最大結合価は、２つの検体に結合する抗体（各Ｆａｂ価を有するもの）について、ＭＲ＝２であることができる。
別の実施態様では、動力学的速度を、２５℃及び３７℃において、同じ実験設定を使用するが、溶液中の各検体の複数の濃度系列の各検体を、０nM（バッファー）、１．２nM、３．７nM、１１．１nM、３３．３nM、１００nM、及び３００nMで使用して決定した。濃度依存的結合挙動から、動力学的データを、BIAcore evaluation softwareを使用して、製造メーカーの説明書に従って、かつ、RMAX globalによるラングミュア１．１モデルを使用して算出した。
実施例９
ＥＬＩＳＡ
ＰＢＳ中で、コートしていないMaxisorbプレートに、非ビオチン化ペプチド／タンパク質／凝集体を加え、ストレプトアビジンコートしたMaxisorbプレートに、ビオチン化ペプチド／タンパク質／凝集体を加え、一晩インキュベーションした。上清を捨て、ウェルを、洗浄バッファー（１×ＰＢＳ／０．１％ Tween20） ９０μLで３回洗浄した。残った反応性スポットを、ブロッキングバッファー（１×ＰＢＳ／２％ ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン画分Ｖ、脂肪酸フリー、Roche, Cat. No.: 10735078001）／０．０５％ Tween20）で、１時間インキュベーションすることによりブロッキングした。上清を捨て、ウェルを、洗浄バッファー ９０μLで３回洗浄した。サンプル及び対照抗体を、ＥＬＩＳＡバッファー（１×ＰＢＳ／０．５％ ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン画分Ｖ、脂肪酸フリー、Roche, Cat. No.: 10735078001）／０．０５％ Tween20）中に、開始濃度５００ng/mLで１２回希釈（１：２）で調製した。インキュベーション時間を、振とう器において、ＲＴで６０分とした。上清を捨て、ウェルを、洗浄バッファー ９０μLで３回洗浄した。二次抗体溶液を、ＥＬＩＳＡバッファーで調製した。抗体混合物 合計２５μLを、アッセイプレートの全てのウェルに移し、その後、このプレートを、振とう器において、ＲＴで６０分間インキュベーションした。上清を捨て、ウェルを、洗浄バッファー ９０μLで３回洗浄した。全てのウェルに、ＡＢＴＳ溶液 ２５μLを加えた。吸光度を、４０５nm〜４９２nmで読み取った。
実施例１０
リコンビナントヒト化抗ビオチン抗体のビオチンラベル化合物（ハプテン化化合物）に対する結合性
ヒト化法及びその後のシステイン変異の導入が完全な結合活性を保持している誘導体をもたらすかどうかを判定するために、下記実験を行った。
リコンビナント抗ビオチン抗体誘導体の結合特性を、Octet QK機器（Fortebio Inc.）を使用するバイオレイヤーインターフェロメトリー（ＢＬＩ）技術により分析した。この系は、分子相互作用の研究について十分確立されている。ＢＬｉ技術は、バイオセンサチップ表面及び内部参照から反射された白色光の干渉パターンの測定に基づいている。バイオセンサチップに対する分子の結合性は、測定することができる干渉パターンのシフトをもたらす。上記されたヒト化法が抗ビオチン抗体のビオチンに結合する能力を低下させたかどうかを分析するために、抗体のキメラ及びヒト化バージョンの特性を、ビオチン化タンパク質に結合するその能力において、直接比較した。結合性研究を、抗ｈｕＩｇＧ Ｆｃ抗体捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサ（Fortebio Inc.）において、抗ビオチン抗体を捕捉することにより行った。まず、バイオセンサを、２０mM ヒスチジン、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中の、濃度０．５mg/mLでの抗体溶液中において、１分間インキュベーションした。その後、バイオセンサを、１×ＰＢＳ ｐＨ７．４中において、１分間インキュベーションして、安定なベースラインに達した。結合性を、２０mM ヒスチジン、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中の、濃度０．０６mg/mLでのビオチン化タンパク質を含有する溶液中において、抗体コートバイオセンサを、５分間インキュベーションすることにより測定した。解離を、１×ＰＢＳ ｐＨ７．４中において、５分間モニターした。キメラ及びヒト化抗ビオチン抗体について得られた結合曲線を、直接比較した。
抗体のヒト化バージョンは、キメラ抗体と同等又はキメラ抗体より良好な、ビオチン化抗原の結合性を示した。ビオチン化タンパク質は、バイオセンサに対して残留非特異的結合性を示した。この結合性は、バイオセンサをハーセプチンでコートした場合に低下した。ハーセプチンは、ビオチンに結合しない。このため、抗ビオチン抗体の機能性は、（配列番号：９２及び９６で示された配列により規定される）そのヒト化変異体において保持された。
表面プラズモン共鳴
表面プラズモン共鳴測定を、BIAcore（登録商標） T200機器（GE Healthcare Biosciences AB, Sweden）において、２５℃で行った。約４３００応答単位（RU） 捕捉系（１０μg/mL ヒト抗体捕捉キットからの抗ヒト捕捉（ＩｇＧ Ｆｃ）、BR-1008-39, GE Healthcare Biosciences AB, Sweden）を、ＣＭ３チップ（GE Healthcare, BR-1005-36）において、ｐＨ５．０で、GE Healthcareにより供給された標準的なアミンカップリングキット（BR-1000-50）を使用することにより結合させた。アミンカップリング用のランニングバッファーを、ＨＢＳ−Ｎ（１０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０mM ＮａＣｌ、GE Healthcare, BR-1006-70）とした。下記結合性研究用のランニング及び希釈バッファーを、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％ Tween20を含む１０mM リン酸緩衝生理食塩水）ｐＨ７．４とした。ヒト化抗ビオチン抗体を、流速５μL/分で２nM 溶液を６０秒間注入することにより捕捉した。ビオチン化ｓｉＲＮＡを、ＰＢＳ−Ｔで、濃度０．１４〜１００nM（１：３希釈系列）で希釈した。結合性を、流速３０μL/分で各濃度を１８０秒間注入し、解離時間６００秒で測定した。表面を、３M ＭｇＣｌ２溶液で流速５μL/分において、３０秒洗浄することにより再生した。データを、BAIevaluation software（GE Healthcare Biosciences AB, Sweden）を使用して評価した。バルク屈折率差を、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ表面から得られた応答を差し引くことにより収集した。また、ブランクの注入も差し引いた（＝二重参照）。ＫＤ及び動力学的パラメータの算出のために、ラングミュア１：１モデルを使用した。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による動力学的結合分析を、配列番号：９２及び９６のヒト化抗ビオチン抗体について行った。濃度２nMでの抗ビオチン抗体を、ＣＭ３センサチップに結合した抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体により捕捉した。ビオチン化ｓｉＲＮＡ（Ｍｗ：１３８６８Ｄａ）の結合性を、濃度０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００、及び３００nMで記録した。測定をダプリケートで行った。ヒト化抗ビオチン抗体についての算出ＫＤは、０．６３３nMであった。
実施例１１
ハプテン化化合物と抗ハプテン抗体との非共有複合体の生成
全体的な方法
抗ハプテン抗体とハプテン化化合物（＝ペイロードにコンジュゲートしたハプテン）との複合体の生成により、規定された複合体がもたらされるであろう。これらの複合体中の化合物（＝ペイロード）は、その活性を保持していると推測されるであろう。ハプテン化化合物と各抗ハプテン抗体との複合体の生成について、ハプテン化化合物を、Ｈ２Ｏ中に、最終濃度１mg/mLに溶解させた。抗体濃度を、２０mM ヒスチジンバッファー、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ＝６．０中に、最終濃度１mg/mL（４．８５μM）とした。ハプテン化ペイロード及び抗体を、上下のピペッティングにより、モル比２：１（抗体に対する化合物）で混合し、ＲＴで１５分間インキュベーションした。
あるいは、ハプテン化化合物を、１００％ ＤＭＦ中において、最終濃度１０mg/mLで溶解させた。抗体濃度を、５０mM ＴｒｉｓＨＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、ｐＨ＝８．２中で、最終濃度１０mg/mLにした。ハプテン化化合物及び抗体を、上下のピペッティングにより、モル比２．５：１（抗体に対する化合物）で混合し、ＲＴ及び３５０rpmで６０分間インキュベーションした。
ハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体との複合体を形成するための例示的な方法−ジゴキシゲニン−ＰＹＹ（３〜３６）／抗ジゴキシゲニン抗体複合体
ジゴキシゲニンポリペプチドと抗ジゴキシゲニン抗体との非共有複合体の生成について、マウスハイブリドーマ由来抗体（１０mM ＫＰＯ４、７０mM ＮａＣｌ；ｐＨ７．５からの凍結乾燥物）を、水 １２mL中に溶解させ、２０mM ヒスチジン、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ６．０を含む溶液に対して透析して、バッファー １１mL中に３００mg（２×１０−６mol）を生成した（ｃ＝２７．３mg/mL）。ジゴキシゲニン−ＰＹＹ（３〜３６）コンジュゲート（１１．５７mg、４×１０−６mol、２当量）を、１時間以内に２．８５mgで４回加え、室温でもう１時間インキュベーションした。複合体化反応の完了後、複合体を、２０mM ヒスチジン、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中において、流速２．５ml/分で、Superdex 200 26/60 GLカラム（３２０mL）によるサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。溶出した複合体を、画分４mLで収集し、プールし、０．２μm フィルタを通過させて滅菌して、２３４mg 複合体を濃度１４．３mg/mLで与えた。同様の方法で、ヒト化抗ジゴキシゲニン抗体の複合体生成について、抗体を、２０mM ヒスチジン、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中において、濃度１０．６mg/mL（０．９３mL中に９．８１mg、６．５×１０−８mol）に調整した。０．５７mg＝１．９７×１０−７mol＝３．０３当量 ジゴキシゲニンポリペプチド（ＤＩＧ−ＰＹＹ）を、凍結乾燥物として抗体溶液に加えた。ポリペプチド及び抗体を、室温で１．５時間インキュベーションした。過剰のポリペプチドを、２０mM ヒスチジン、１４０mM ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中において、流速０．５mL/分で、Superose 6 10/300 GLカラムによるサイズ排除クロマトグラフィーにより除去した。溶出した複合体を、０．５mL画分で収集し、プールし、０．２μm フィルタを通過させて滅菌して、４．７mg 複合体を濃度１．８６mg/mLで与えた。
得られたハプテン化ポリペプチド−抗ハプテン抗体複合体を、サイズ排除クロマトグラフィーにおける単一ピークの出現により、単量体ＩｇＧ様分子と規定した。得られた複合体を、抗体分子当たりに２つのジゴキシゲニン−ＰＹＹ誘導体を有する単量体ＩｇＧ様分子と規定した。規定された組成のこれらのペプチド複合体を、サイズ排除クロマトグラフィーにより確認した。この確認により、タンパク質凝集体が存在しないことも示された。規定された組成（及び、ペプチドとタンパク質との比 ２：１）のこれらの二重特異性ペプチド複合体を、更に、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ（サイズ排除クロマトグラフィー−マルチアングル光散乱）により確認した。ＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析のために、１００〜５００μg 各サンプルを、移動相として１×ＰＢＳ ｐＨ７．４によるSuperdex 200 10/300 GLサイズ排除カラムに、流速０．２５〜０．５mL/分でアプライした。光散乱を、Wyatt MiniDawn TREOS/QELS検出器で検出し、屈折率を、Wyatt Optilab rEX−検出器により測定した。得られたデータを、ソフトウェアASTRA（version 5.3.4.14）を使用して分析した。ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析の結果から、複合体の質量、半径及びサイズについての情報が提供される。ついで、これらのデータを、対応する非複合体化抗体のデータと比較した。これらの実験結果から、ジゴキシゲニン−ＰＹＹの抗ジゴキシゲニン抗体に対する曝露は、１つの抗体分子当たりに、２つのジゴキシゲニン−ＰＹＹ誘導体を含有する複合体をもたらすことが証明される。このため、ジゴキシゲニンＰＹＹを、規定された部位（結合領域）において、規定された化学量論で、抗ジゴキシゲニン抗体と複合体化することができる。
表面プラズモン共鳴研究による複合体の特徴決定から、複合体化反応が、規定され、完全に複合体化された分子を生成したことの更なる証拠が提供された。抗ジゴキシゲニン抗体は、シグナル増大をもたらすＳＰＲチップに結合することができる。ジゴキシゲニン−ＰＹＹコンジュゲートのその後の添加により、全ての結合部位が完全に占有されるまで、更なるシグナル増大がもたらされる。これらの条件において、更なるジゴキシゲニン−ＰＹＹの添加によっては、更なシグナルの増大は起こらない。このことは、複合体化反応が特異的であり、ジゴキシゲニンポリペプチドの非特異的付着により生じないことを示す。
ハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体との複合体を形成するための例示的な方法−Ａｃ−ＰＹＹ−ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−Ｂｉｏｔ／キメラ抗ビオチン抗体複合体
システインリンカーを含有するビオチン化ＰＹＹ−ポリペプチドの非共有複合体生成について、０．１６mg Ａｃ−ＰＹＹ−ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−Ｂｉｏｔを、１００％ ＤＭＦ中において、濃度１０mg/mLに溶解させた。該抗体を、５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、ｐＨ８．２で構成されたバッファー中において、濃度１０．７mg/mL（約７３μM）で使用した。Ａｃ−ＰＹＹ−ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−Ｂｉｏｔと抗体とを、モル比２．５：１（抗体に対するＡｃ−ＰＹＹ−ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−Ｂｉｏｔ）で混合し、ＲＴ及び３５０rpmで、６０分間インキュベーションした。得られた複合体を、サイズ排除クロマトグラフィーにより、６３％ 単量体ＩｇＧ様分子及び３７％ 二量体可溶性凝集体として規定した。得られた複合体を、更に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びその後のウェスタンブロット分析により分析した。１０μg 複合体を、４×ＬＤＳサンプルバッファー（Invitrogen）と混合し、９５℃で５分間インキュベーションした。サンプルを、４〜１２％ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓポリアクリルアミド−ゲル（NuPAGE, Invitrogen）にアプライし、このゲルを、２００Ｖ及び１２０mAで３５分間ランした。ポリアクリルアミド−ゲル中で分離された分子を、ＰＶＤＦメンブラン（孔径０．２μm、Invitrogen）に、２５Ｖ及び１６０mAで４０分間トランスファーした。該メンブランを、１×ＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ＋０．１％ Tween20）中の１％（w/v） スキムミルク中において、ＲＴで１時間ブロッキングした。該メンブランを、１×ＰＢＳＴ中において、３×５分間洗浄し、その後、ストレプトアビジン−ＰＯＤ−コンジュゲート（２９００U/mL, Roche）と共にインキュベーションした。同コンジュゲートを、１：２０００希釈で使用した。該メンブラン上のビオチンに結合したストレプトアビジン−ＰＯＤの検出を、Lumi-Lightウェスタンブロット基質（Roche）を使用して行った。
ハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体との複合体を形成するための例示的な方法−Ａｃ−ＰＹＹ（ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−５−Ｆｌｕｏ）／キメラ抗フルオレセイン抗体複合体
システインリンカーを含有するフルオレセインコンジュゲートＰＹＹ−ポリペプチドの非共有複合体生成について、０．３３mg Ａｃ−ＰＹＹ（ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−５−Ｆｌｕｏ）を、１００％ ＤＭＦ中において、濃度１０mg/mLに溶解させた。該抗体を、５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、ｐＨ８．２で構成されたバッファー中において、濃度９．９９mg/mL（約６８μM）で使用した。Ａｃ−ＰＹＹ（ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−５−Ｆｌｕｏ）と抗体とを、モル比２．５：１（抗体に対するＡｃ−ＰＹＹ（ＰＥＧ３−Ｃｙｓ−ＰＥＧ２−５−Ｆｌｕｏ））で混合し、ＲＴ及び３５０rpmで、６０分間インキュベーションした。得られた混合物を、サイズ排除クロマトグラフィーにより、７６％ 単量体ＩｇＧ様分子及び２４％ 二量体可溶性凝集体として規定した。得られた複合体を、更に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びその後のポリアクリルアミド−ゲル中でのフルオレセイン関連蛍光の検出により分析した。８μg 複合体を、４×ＬＤＳサンプルバッファー（Invitrogen）と混合し、９５℃で５分間インキュベーションした。フルオレセイン関連蛍光を、LumiImager F1装置（Roche）を使用して、励起波長６４５nmで記録した。
実施例１２
コンジュゲート中のポリペプチド及び抗ハプテン抗体との複合体中のポリペプチドは機能性を保持する
非共有ハプテン−ポリペプチドコンジュゲートの一部であるポリペプチド及び抗ハプテン抗体との複合体中のポリペプチドが、機能性を保持することが、以前に示されている（国際公開公報第２０１１／００３５５７号、同第２０１１／００３７８０号、及び国際特許出願第ＥＰ２０１１／０７４２７３号）。
実施例１３
血液脳関門−シャトルモジュールの操作
ハプテン結合二重特異性血液脳関門−シャトルモジュールを、ジスルフィド安定化ハプテン結合性一本鎖Ｆｖを、抗ＴｆＲ抗体のＣＨ３ドメインのＣ末端に融合させることにより生成した。以前に記載されたのと同様の設計及び技術を適用した（例えば、国際公開公報第２０１４／００６１２４号を参照のこと）。これらの血液脳関門−シャトルモジュールの組成についての例を、図７に示す。
血液脳関門−シャトルモジュールは、血液脳関門の内皮細胞上の経細胞輸送可能な細胞表面ターゲット（血液脳関門レセプター）を認識する。例示的に、トランスフェリンレセプターに異なる親和性で結合する２種類の抗体を使用した。抗体ＴｆＲ１は、トランスフェリンレセプターに高い親和性で結合する。抗体ＴｆＲ２は、トランスフェリンレセプターに低下した親和性で結合する（例えば、国際公開公報第２０１２／０７５０３７号を参照のこと）。これらの抗ＴｆＲ抗体からのＴｆＲ結合部位を、二重特異性抗体内の非改変Ｆａｂアームとして設定して、二価の全長ＩｇＧモジュールを得た。ジスルフィド安定化ハプテン結合性一本鎖Ｆｖを、短いＧＳリンカーを介して、生成した二重特異性抗体のＣＨ３ドメインのＣ末端に融合させた。例示的に、抗ハプテン結合部位として、ジゴキシゲニン（Ｄｉｇ）又はビオチン（Ｂｉｏ）の誘導体に結合する以前に記載された実体を使用した（配列については、上記を参照のこと）。
これらのシャトル媒体の配列組成についての例を、配列番号：１３４（ＬＣ抗ＴｆＲ１抗体）、配列番号：１３５（ｓｃＦｖ抗ジゴキシゲニン抗体フラグメントにコンジュゲートしたＨＣ抗ＴｆＲ１抗体）、配列番号：１３６（ｓｃＦｖ抗ビオチン抗体フラグメントにコンジュゲートしたＨＣ抗ＴｆＲ１抗体）、配列番号：１３７（ＬＣ抗ＴｆＲ２抗体）、配列番号：１３８（ｓｃＦｖ抗ジゴキシゲニン抗体フラグメントにコンジュゲートしたＨＣ抗ＴｆＲ２抗体）、配列番号：１３９（ｓｃＦｖ抗ビオチン抗体フラグメントにコンジュゲートしたＨＣ抗ＴｆＲ２抗体）として列記する。
実施例１４
二重特異性抗体（血液脳関門−シャトルモジュール）の発現及び精製
血液脳関門−シャトルモジュール二重特異性抗体を、先に記載された（上記を参照のこと）規定の血清フリー培地中において、哺乳類細胞中で生成した。ＨＥＫ２９３懸濁細胞を、Ｌ−及びＨ−鎖コード発現プラスミドにより一過性にトランスフェクションし、血液脳関門−シャトルモジュール二重特異性抗体を発現する培養物を生成した。
ＴｆＲに高い親和性で結合するジゴキシゲニンペイロード結合性血液脳関門−シャトルモジュールを生成するために、配列番号：１３４コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドを、配列番号：１３５コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドと、共トランスフェクションした。
ＴｆＲに高い親和性で結合するジゴキシゲニンペイロード結合性血液脳関門−シャトルモジュールを生成するために、配列番号：１３４コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドを、配列番号：１３６コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドと、共トランスフェクションした。
ＴｆＲに低下した親和性で結合するジゴキシゲニンペイロード結合性血液脳関門−シャトルモジュールを生成するために、配列番号：１３７コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドを、配列番号：１３８コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドと、共トランスフェクションした。
ＴｆＲに低下した親和性で結合するジゴキシゲニンペイロード結合性血液脳関門−シャトルモジュールを生成するために、配列番号：１３７コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドを、配列番号：１３９コード核酸／発現カセットを含有する発現プラスミドと、共トランスフェクションした。
二重特異性抗体を、Ｌ−及びＨ−鎖コード発現プラスミドにより一過性にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３懸濁細胞の上清から、プロテインＡクロマトグラフィー（上記を参照のこと）により精製した。その後、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を適用して、凝集体又は汚染物質を含まない二重特異性抗体を得た。精製した血液脳関門−シャトルモジュールの純度及び組成についての例を、ＳＥＣプロファイル及びＳＤＳ ＰＡＧＥとして、図８に示す。
実施例１５
二重特異性ハプテン結合性血液脳関門−シャトルモジュールはハプテン化ペイロード及び血液脳関門レセプターに同時に結合する
二重特異性抗体の血液脳関門−シャトル機能を可能にするために、同抗体は、血液脳関門の内皮細胞上の血液脳関門レセプターと、シャトル化されるべきハプテン化ペイロードとに同時に結合すべきである。本明細書で報告されたハプテン結合二重特異性抗体のこの機能性を評価するために、細胞表面及びペイロードへの同時結合性を、ＦＡＣＳ分析により取り組んだ。これらの分析のために、血液脳関門−シャトルモジュール（＝二重特異性抗体）の細胞結合性を、フィトエリスリンラベルＩｇＧ認識二次抗体により検出した。同時ペイロード結合性を、ハプテン化蛍光ペイロード（ジゴキシゲニンＣｙ５；ＤＩＧ−Ｃｙ５）の適用により検出した。ＴｆＲ発現ＢＢＢ由来細胞株としてｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞を使用し、蛍光ペイロードとしてＤＩＧ−Ｃｙ５を使用する、ＦＡＣＳ分析の結果を、図９に示す。両トランスフェリンレセプター結合二重特異性抗体は、抗ＩｇＧ−ＰＥ関連シグナルにより示されたように、ｈＣＭＥＣ／Ｄ３に結合する。また同様に、両二重特異性抗体は、細胞関連Ｃｙ５起因性シグナルにより示されたように、Ｄｉｇ−Ｃｙ５とも同時に結合する。（高い親和性の）ＴｆＲ１二重特異性抗体と（低下した親和性の）ＴｆＲ２二重特異性抗体との間のシグナル強度の比較から、（予測された通りに）高い親和性を有する細胞において、中程度の親和性の二重特異性抗体と比較して、より高いシグナル強度が示される。
これらの結果から、二重特異性ハプテン結合性血液脳関門−シャトルモジュールが、内皮細胞表面上のそのターゲットに特異的に結合することが示される。さらに、これらの二重特異性抗体は、ハプテン化ペイロードと同時に結合し、これにより、血液脳関門の内皮細胞に、ハプテン化ペイロードを向かわせることができる。
実施例１６
血液脳関門−シャトルモジュールのレセプター結合モードは脳内皮細胞からの放出に影響を及ぼす
脳内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／Ｄ３）を使用して、本明細書で報告されたシャトルモジュールの細胞結合性及び経細胞輸送を調査した。以前の研究（Crepin et al., 2010; Lesley et al., 1989、国際公開公報第２０１２／０７５０３７号、同第２０１４／０３３０７４号）には、ＴｆＲ結合抗体の結合価及び親和性が、血液脳関門の内皮細胞に対する結合性、同細胞を通過する経細胞輸送、及び同細胞からの放出の有効性に影響を及ぼすことが報告されている。ｈＣＭＥＣ／Ｄ３における細胞結合性及び経細胞輸送を調査するために、フィルタインサート上で培養したｈＣＭＥＣ／Ｄ３を、二重特異性抗体又は（対照として、ハプテン結合性ｓｃＦｖを含まない）親抗体と、頂端方向において、３７℃で１時間インキュベーションした。単層の細胞を、血清フリー培地中において、それぞれ、頂端方向（４００μL）にＲＴで洗浄し、基底方向（１６００μL）に３〜５分間で３回洗浄した。全ての洗浄量を収集して、結合しなかったリガンド又は抗体の除去効率をモニターした。予め温めた培地を、頂端チャンバに加え、フィルタを、予め温めた培地 １６００μLを含有する、（１％ ＢＳＡを含有するＰＢＳで一晩ブロッキングした）新たな１２ウェルプレートに移した。この時点で、特異的取込みを決定するために、細胞を、ＲＩＰＡバッファー（Sigma, Munich, Germany, #R0278） ５００μL中で溶解させた。残ったフィルタを、３７℃でインキュベーションし、サンプルを、種々の時点で収集して、頂端及び／又は基底での放出を決定した。サンプル中の抗体含量を、非常に高感度のＩｇＧ ＥＬＩＳＡを使用して定量した。これらの分析結果を、図１０に示す。高親和性の二価抗ＴｆＲ抗体（ＴｆＲ１）は、該細胞に効率的に結合するが、頂端又は基底区画に放出されない。同様に、高親和性のＴｆＲ結合部位（ＴｆＲ１−Ｄｉｇ、ＴｆＲ１−Ｂｉｏ）を含有する二重特異性抗体は、該細胞に効率的に結合するが、頂端又は基底区画に放出されない。対照的に、低下した親和性を有する二価抗ＴｆＲ抗体（ＴｆＲ２）は、該細胞に効率的に結合し、その後、頂端又は基底区画に経時的に放出される。また、低下した親和性の二価ＴｆＲ結合部位（ＴｆＲ２−Ｄｉｇ、ＴｆＲ２−Ｂｉｏ）を含有する二重特異性抗体も、該細胞に効率的に結合し、親抗体と同程度に、頂端又は基底区画に放出される。ｈＣＭＥＣ／Ｄ３上に存在しない抗原と結合する対照の二重特異性抗体（ＣＤ３３−Ｄｉｇ、ＣＤ３３−Ｂｉｏ）は、これらの細胞に結合せず、このため、頂端又は基底区画に経時的に放出されることもない。
実施例１７
ＴｆＲシャトルに対して低下した親和性を有する血液脳関門−シャトルモジュールは内皮細胞を通過し、経細胞輸送を支持し、ハプテン化ペイロードを放出する
脳内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／Ｄ３）を使用して、ハプテン結合性血液脳関門−シャトルモジュールと非共有複合体を形成するハプテン化ペイロードの細胞結合性及び経細胞輸送を調査した。非共有的に複合体化されたペイロードについて、ペイロードの経細胞輸送を本明細書で報告されたハプテン結合性血液脳関門−シャトルモジュール（二重特異性抗体）により達成することができるかどうかを評価するために、トランスウェルシステム中のｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞を、本明細書で報告された二重特異性抗体（例示的な構築物については、先の実施例を参照のこと）により複合体化されたハプテン化ペイロードに、１時間曝して、ＴｆＲと結合させた。シャトル及びペイロードを洗浄（実施例１５を参照のこと）により除去した後に、結合した分子、内部移行、細胞内ソーティング、経細胞輸送、及びペイロードの放出を、シャトルモジュールについて実施例１５で記載されたのと同様に、経時的（実験開始後０〜５時間＝洗浄工程）にモニターした。本実施例で使用したペイロードは、モノハプテン化ＤＮＡとし、本明細書で報告された二重特異性抗体とのインキュベーションに基づいて、図１１Ａで示されたように、（モル）比２：１で非共有的に複合体化される。ペイロードの存在を、細胞抽出物、頂端及び基底区画中において、ｑＰＣＲにより、検出及び定量することができる。例示的に、ペイロードとしての末端モノビオチン化又はモノジゴキシゲニン二重鎖ＤＮＡ５０mer（配列番号：１４０）と、Roche LightCyclerにおけるペイロード定量のための２つのＰＣＲプライマーであるＰｒＦｏｒ（配列番号：１４１）及びＰｒＲｅｖ（配列番号：１４２）とを、図１１Ａに示す。これらの分析結果（図１１Ｂ）から、非共有的に付着したハプテン化ペイロードが、細胞に結合し、内部移行し、その後、頂端及び基底区画に放出されることが証明される。結合及びその後の放出は、ＴｆＲ結合性血液脳関門−シャトルモジュールにより媒介される。ＣＤ３３結合性対照二重特異性抗体を適用した場合には、細胞への結合も放出も検出されない。さらに、二重特異性抗体を含まないハプテン化ペイロードを適用した場合には、細胞への結合も放出も検出されない。非共有的に複合体化されたペイロードの経細胞輸送は、二重特異性抗体及び対応するハプテン化ペイロードを含むジゴキシゲニン結合部位及びビオチン結合部位について観察された。このことは、種々のハプテンを使用して、非共有二重特異性抗体血液脳関門−シャトルモジュールを設計することができることを示している。このため、血液脳関門を通過するペイロードの経細胞輸送を、非共有的に複合体化されたハプテン化ペイロードのために、ハプテン結合二重特異性抗体を使用して達成することができる。
実施例１８
ＴｆＲに対して高い親和性を有する、結合部位を有する血液脳関門−シャトルモジュールは内皮細胞に結合するが、同内皮細胞から放出されなくとも、ハプテン化ペイロードの経細胞輸送及び放出を支持する
脳内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／Ｄ３）を使用して、先の実施例１７に記載されたのと同様にして、ハプテン結合性血液脳関門−シャトルモジュールと非共有複合体を形成することができるハプテン化ペイロードの細胞結合性及び経細胞輸送を調査した。トランスウェルシステム中のＨＣＭＥＣ／Ｄ３細胞を、血液脳関門−シャトルモジュール（二重特異性抗体）により複合体化されたハプテン化ペイロードに、１時間曝して、ＴｆＲと結合させ、内部移行及び細胞内ソーティング、経細胞輸送をさせた。該ペイロードを、モノハプテン化ＤＮＡとし、二重特異性抗体とのインキュベーションに基づいて、図１１Ａで示されたように、（モル）比２：１で非共有的に複合体化される。モノビオチン化又はモノジゴキシゲニン二重鎖ＤＮＡ５０mer ペイロード（配列番号：１４０）の存在を、先の実施例１７で記載されたように、細胞抽出物、頂端及び基底区画中において、ｑＰＣＲにより定量した。
これらの分析結果（図１２）から、非共有的に複合体化されたハプテン化ペイロードが、細胞に結合し、内部移行し、その後、頂端及び基底区画に放出されることが証明される。これは、二価の高親和性シャトルモジュール自体が細胞から放出されないため、驚くべき知見であった。結合及びその後のペイロード放出は、ＴｆＲ結合二重特異性抗体血液脳関門−シャトルモジュールにより媒介される。ＣＤ３３結合対照二重特異性抗体を適用した場合には、細胞への結合も放出も検出されないためである。さらに、二重特異性抗体血液脳関門−シャトルモジュールを含まないハプテン化ペイロードを適用した場合には、細胞への結合も放出も検出されない。非共有的に複合体化されたペイロードの経細胞輸送及び放出は、二重特異性抗体及び対応するハプテン化ペイロードを含むジゴキシゲニン結合部位及びビオチン結合部位について観察された。このことは、種々のハプテンを使用して、ハプテン化ペイロードと二重特異性抗体血液脳関門−シャトルモジュールとの非共有複合体を設計することができることを示している。血液脳関門を含む細胞を通過するペイロードの経細胞輸送を、血液脳関門−シャトルモジュール（二重特異性抗体）により非共有的に複合体化されたハプテン化ペイロードにより達成することができる。驚くべきことに、系細胞輸送は、シャトル媒体自体の放出によらない。該ペイロードは、放出されないシャトルモジュールを提供した場合であっても放出されるためである。
実施例１９
ハプテン化ペイロードは、小胞区画内で血液脳関門−シャトルモジュールから分離する
内皮細胞に結合するが、それ自体はこれらの細胞から放出されない血液脳関門−シャトルモジュールを含む高親和性のＴｆＲ結合部位（ＴｆＲ１）についての経細胞輸送アッセイ法により、驚くべき結果が示された。シャトルモジュール自体が細胞に付着したままであり／同細胞に含まれたままであっても、ハプテン化ペイロードは、細胞を通過してシャトルされ、頂端及び基底区画に放出された。細胞結合、取込み、及びペイロードの分布を媒介した二重特異性抗体を、共焦点顕微鏡観察により分析した。このため、脳内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／Ｄ３）を、二重特異性複合体化されたハプテン化蛍光ペイロード（ハプテン−Ｃｙ５又はハプテン−ＤＮＡ−Ｃｙ５）に曝し、共焦点蛍光顕微鏡観察により分析した。したがって、ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞を、顕微鏡観察グレードのカバーガラスに撒き、５０nM 二重特異性抗体複合体化されたハプテン化蛍光ペイロードと共に、細胞培養培地中において、３７℃で３時間インキュベーションした。ついで、細胞を洗浄し、固定し（４％ パラホルムアルデヒド）、シャトルモジュールのＩｇＧ部分を、抗カッパ軽鎖特異性抗体、続けて、ALEXA Fluor 488にコンジュゲートさせた二次抗体により対比染色することにより検出した。画像を、LEICA SP5x共焦点顕微鏡において、ALEXAFluor488（ＩｇＧ）及びＣＹ５（ハプテン−ＤＮＡ−ＣＹ５ペイロード）に適したバンドパスフィルタ設定を使用する100x/1.46NA対物レンズを使用して取得した。これらの分析結果を、図１３に示す。高親和性の二重特異性抗体と蛍光ラベルハプテン化ペイロード（ＤＮＡ−Ｃｙ５）との複合体は、ＴｆＲに結合し、最初に細胞表面上に位置する。その後、同複合体は、その同起源レセプターと共に内部移行し、細胞内の小胞区画、すなわち、エンドソーム及びリソソームに現れる。内部移行直後（３時間）、ハプテン化ペイロードによる蛍光シグナルからの、シャトルモジュールによる蛍光シグナルの実質的な分離が観察された。このため、本明細書で報告された血液脳関門−シャトルモジュールとハプテン化ペイロードとの非共有複合体は、細胞内で、異なる小胞区画に解離することができる。これにより、該ペイロードは、シャトルモジュールが細胞に結合したままであり／同細胞に保持されたままであっても、シャトルモジュールから放出され、経細胞輸送により内皮細胞から出ることができる。非共有的に複合体化されたハプテン化ペイロードの細胞内分離が、ジゴキシゲニン結合性及びビオチン結合性の血液脳関門−シャトルモジュール（二重特異性抗体）及び対応するハプテン化ペイロードについて観察された。このため、種々のハプテンを使用して、ペイロードを経細胞輸送することができる、ハプテン化ペイロードと血液脳関門−シャトルモジュールとの非共有複合体を設計することができる。
実施例２０
ペプチドＹＹを含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列
ペプチドＹＹは、摂食に応じて、回腸及び結腸における細胞により放出される短い（３６個のアミノ酸）ペプチドである。ヒトにおいて、ペプチドＹＹは、食欲を低下させると考えられる。最も一般的な形態の循環型ＰＹＹは、ＰＹＹ３〜３６である。ＰＹＹ３〜３６は、ＹファミリーレセプターのＹ２レセプター（Ｙ２Ｒ）に結合する。ＰＹＹは、消化管、特に、回腸及び結腸の粘膜におけるＬ細胞に見出される。また、少量の、約１〜１０％ ＰＹＹが、食道、胃、十二指腸、及び空腸に見出される。循環において、ＰＹＹ濃度は、食物摂取後に増大し、絶食中に低下する。ＰＹＹは、ＮＰＹレセプターを介して、その作用を発揮し、胃運動を阻害し、結腸における水及び電解質の吸収を増大させる。ＰＹＹ及びＰＹＹ模倣物は、肥満に取り組むのに使用されてきた。
ＰＹＹは、抗体の薬物動態学的特性の利益を得るため、及び、ＰＹＹ固有の不安定性を避けるために、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列を含むように改変され、抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体により複合体化された。
非共有複合体形成
ＰＹＹ３〜３６の構造調査（Nygaard, R., et al., Biochem. 45 (2006) 8350-8357；配列番号：１４３)から、中心アミノ酸についてのらせん状モチーフ（ＨｅｌｉＣａｒ様モチーフアミノ酸配列）が明らかとなっている。Ｎ末端イソロイシン及び修飾Ｃ末端は、該ペプチドの機能性活性に必須であると記載されているため、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列におけるアミノ酸を反映させるために、中心へリックスを改変した。

全長ＩｇＧ１抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体を、ＨＥＫ２９３細胞において、定常ヒトＩｇＧ１及び定常ヒトラムダドメインそれぞれを含有するベクター中に挿入された重鎖及び軽鎖の可変領域を含有する２つのプラスミドをトランスフェクションすることにより生成した。抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体（００１９）を、標準的な手法により、プロテインＡクロマトグラフィーを使用して精製した。質量分光実験により、抗体００１９の同一性が確認された。
抗体００１９と改変ＰＹＹペプチドＰＹＹ＿ＨｅｌｉＣａｒとの間の複合体を、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、少し過剰のペプチドを抗体溶液にアプライすることにより得た。複合体００５２を形成した。複合体の化学量論を、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析実験により、１つの二価抗体に１．６個のペプチドが複合体化されていると決定した。
抗体００１９、ＰＹＹ（３〜３６）野生型、ＰＹＹ＿ＨｅｌｉＣａｒ、及び複合体００５２を、Ｙ２Ｒレセプターファミリーに対するその効果について試験した。
証明されたように（Hoffmann, E., et al., J. Cont. Rel. 171 (2013) 48-56.）、抗体により複合体化されたペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける伸長した半減期を有する。さらに驚くべきことに、該複合体は、非複合体化ペプチドと比較して、ＮＰＹ２Ｒレセプターに対するわずかに良好な親和性を証明する。該抗体は、該ポリペプチドを安定化させ、該ペプチドを固定された生体活性なコンホーメーションで存在させる。
共有複合体形成（共有ジスルフィド結合）
抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体と化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列との間の複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの安定性を増大させるために、結合性に基づくジスルフィド架橋の形成が使用されている。
第１の工程は、特異的認識工程（抗親和性相互作用）、すなわち、化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列−抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体複合体の形成である。これに続けて、第２の工程において、ジスルフィド架橋の自発的シャッフリングにより、安定性が改善された共有複合体が形成される。
１２mer ペプチド（ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列）が、（少なくとも、特異的な抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体により複合体化された場合）比較的堅牢な実体であるため、ジスルフィド架橋に対して構造的に特異的な設計を使用する必要があることが見出されている。複合体形成及びその後に達成された共有結合が２つのリコンビナントに生成された実体間であるために、共有的ジスルフィド結合を形成するために導入された人工のシステイン残基は、遊離したシステイン残基として生成される必要は必ずしもないが、還元型で発現される、すなわち、遊離したシステイン又はホモシステインアミノ酸にコンジュゲートされる。
人工の遊離したシステイン残基が導入される、抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体の可変ドメインのアミノ酸配列における位置が重要である。抗体可変ドメインアミノ酸配列中の露出していないシステインは、遊離したシステイン（コンジュゲートしていない）として現わされるより高い可能性を有する。一方、結合ポケットに近い露出したシステイン残基は、遊離したシステインなどの更なる部分へのシステインコンジュゲーションにより誘引された立体障害のために、１２mer ペプチド（ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列）の結合性を消失させる場合がある。
ａ）蛍光化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列との複合体
立体障害のリスクを最少化し、強力な親和性を低下させるのに適した位置を特定するために、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列中に人工のシステイン残基を導入するための種々の位置が試験されている。システイン残基は、変異していないパラトープの主要部分を有するために、１２mer（ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列）のＣ末端に導入されてきた。該ペプチドを合成し、蛍光モチーフに融合させた。
該抗体上において、異なる３Ｄ環境におけるシステインをそれぞれ含む設計された両ペプチドについて、構造設計を、ジスルフィド架橋を形成させるために行った。
１２mer らせん状ペプチドAHLENEVARLKK（配列番号：１４５、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列）を、ＶＨ及びＶＨドメイン中にモデル化した。該ペプチドのＣ末端において、残基Ｌ１０及びＫ１１を、可能性のある位置として特定する。軽鎖可変ドメインにおいて、Ｋａｂａｔの軽鎖ナンバリングに従った位置Ｎ５５及びＧ５１を特定する。
抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体（００１９）の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：

を有する。
抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体（００１９）の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：

を有する。
抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体（０１５５）の軽鎖可変ドメインＮ５５Ｃ変異体は、アミノ酸配列：

を有する。
抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体（０１５７）の軽鎖可変ドメインＮ５１Ｃ変異体は、アミノ酸配列：

を有する。
ｉ）化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列と抗体０１５５との共有コンジュゲート
二価抗体０１５５を、ＨＥＫ２９３細胞中において、遊離したシステインを含まないその親分子Ｙ２Ｒ（ｂｃｋ）−００１９と同様に発現させる。改変抗体を、抗体００１９で使用したのと同じプロトコールを使用して精製する。質量分光分析から、脱グルコシル化抗体の実験的に決定された質量が、１４２，００１Daであることが示される。この質量は、算出質量より２５９Da過剰である。還元型鎖は、４８，１６７Da（完全な重鎖、計算値４８，１６８Da、Ｃｙｓ＝ＳＨ、Ｃ末端＝−Ｋ）及び２２，７２０Da（完全な軽鎖、Ｎ５５Ｃ、計算値２２，７２０Da、Ｃｙｓ＝ＳＨ）の実験的に決定された質量を有する。該鎖の配列を、還元後に確認した。
抗体０１５５を、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列変異２に、２．５モル過剰の化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列を使用して、１００％ ＤＭＦ中において連結させて、共有複合体０１５６を形成した。
ＳＤＳ ｐａｇｅ（変性条件、図１４を参照のこと）において、蛍光は、抗体０１５５にのみ見られる。還元条件において、小さなペプチドのみが見られる。
結果
蛍光化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列の抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体への共有コンジュゲーションは成功した。合計約４３％ 抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体を、２つのＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列に共有的にコンジュゲートした。約４０％ 抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体が、１つのＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列に共有的にコンジュゲートし、約１７％ 抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体がコンジュゲートしなかった。
２つのＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列を含むコンジュゲートを、約５０％まで改変させる。この種は、定量に考慮されなかった。開始材料について既に決定されたように、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列を含まない抗体は、約１２８Daの２つの改変を含む。１つのＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列にコンジュゲートした抗体は、約１２８Daの１つの改変のみを有する。
ｉｉ）化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列と抗体０１５７との共有コンジュゲート
抗体０１５５と同様に、抗体０１５７を、大部分がシステイン化型として発現させる。質量分光分析から、脱グルコシル化抗体の実験的に決定された質量が、１４１，８６３Daであることが示される。この質量は、算出質量より３Da過剰である。該抗体は、主に、一本鎖又は二本鎖のホモシステイン化型として存在する。還元型鎖は、４８，１６８Da（完全な重鎖、計算値４８，１６８Da、Ｃｙｓ＝ＳＨ、Ｃ末端＝−Ｋ）及び２２，７７７Da（完全な軽鎖、Ｎ５５Ｃ、計算値２２，７７７Da、Ｃｙｓ＝ＳＨ）の実験的に決定された質量を有する。該鎖の配列を、還元後に確認した。
抗体０１５７とＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１との連結は、予測された共有複合体をもたらさなかった。蛍光は、予測されたレーンに見られないが、この実験においてネガティブであるべき参照に見られる（図１５を参照のこと）。
抗体０１５７を、ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列変異１と共にインキュベーションした。対照として、抗体００１９を、同じＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列変異１と共にインキュベーションした。
結果
蛍光化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列の抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体への共有コンジュゲーションは成功しなかった。理論に拘束されるものではないが、この場合には、抗体のシステイン化は、結合ポケットにおいて、蛍光化合物を含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列を、効率的に結合させ、Ｃ５１を攻撃するのに適した位置に求核チオール基を送達するには深すぎると推測される。
ｂ）リコンビナントポリペプチドを含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列との複合体
ＨｅｌｉＣａｒベースの方法は、リコンビナントに生成した、ポリペプチドを含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列との共有複合体の形成を考慮する時に、特に魅力的になる。
ＶＬ−Ｎ５５Ｃ変異を含有する抗体０１５５とＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１（AHLENEVARLCK；配列番号１４６）とのコンジュゲーションは、代替物（ＶＬ上のＧ５１ＣとＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異２（AHLENEVARCKK；配列番号：１４７））と比較して、非常に良好に行われた。０１５５とポリペプチドを含有するＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１とのコンジュゲーションを、更に調査した。該ポリペプチドは、Ｎ末端に融合したＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１（AHLENEVARLCK；配列番号１４６）を含んだ。
Pseudomonas外毒素分子ＬＲ８Ｍを含有し、Ｃ末端リシン残基を欠失したＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１（０２３６；配列番号：１５２）を、E. coli中において生成し、アニオン交換クロマトグラフィー及びＳＥＣの組み合わせを使用して精製した（例えば、国際公開公報第２０１１／０３２０２２号を参照のこと）。
抗体０１５５を、配列番号：１５２の、Pseudomonas外毒素分子ＬＲ８Ｍを含有し、Ｃ末端リシン残基を欠失したＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列システイン変異１と共有的にコンジュゲートさせる。ＳＥＣクロマトグラムを、図１６に示す。コンジュゲーション効率を、非還元型サンプルについて、ＳＤＳ−ＣＥ（Caliper）により分析する（図１７を参照のこと）。
合計約４％ 抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体が、２つの配列番号：１５２のポリペプチドに共有的にコンジュゲートした。約４１％ 抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体が、１つの配列番号：１５２のポリペプチドに共有的にコンジュゲートした。そして、約５５％ 抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体がコンジュゲートしなかった。
まとめると、抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列モノクローナル抗体を、ペプチド、ペプチドリンカーを有する小分子、及びリコンビナントタンパク質を、１２mer ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列の高親和性認識により複合体化するのに使用することができる。へリックスとして折り畳む傾向を有するペプチドを改変して、元の１２mer ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列AHLENEVARLKK（配列番号：１４５）を模倣することができ、その後、抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列モノクローナル抗体と複合体化させることができる。高親和性複合体化に加えて、共有コンジュゲーションが、システインを含有する配列番号：１４５のシステイン変異と、ＣＤＲ中にシステインを含有する改変した抗ＨｅｌｉＣａｒモチーフアミノ酸配列抗体とで、安定したジスルフィド結合の形成により可能である。種々の系により発現されたリコンビナントタンパク質を、特定の反応条件を必要とせず、自発的なジスルフィド架橋シャッフリングにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、その後にコンジュゲートさせることができる。
実施例２１
ＢｒｄＵ含有ペイロードとの複合体からのＢｒｄＵ結合二重特異性抗体
ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、トランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）−及びブロモデオキシウリジン（ＢＲＤＵ）−結合二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）がＢＲＤＵ含有ペイロードに結合可能であるか、そして、その程度を評価するのに適用した。したがって、ＢＲＤＵ−ＤＮＡを、ＴｆＲ−ＢＲＤＵ ｂｓＡｂに。化学量論比２：１（３５０μg：２．５mg/mL）で加え、ｂｓＡｂ／ペイロード−複合体を形成するために、室温で３０分間インキュベーションした。対照試薬として、遊離した二重特異性抗体（２．５mg/mL）及び遊離したＢＲＤＵ−ＤＮＡ（３．２mg/mL）を調製した。ＢＲＤＵ−ＤＮＡ（ＢＲＤＵ−ACC AAG CCT AGA GAG GAG CAA TAC AAC AGT ACA TAT CGC GTG GTA AGC GT；配列番号：１５３）は、ＤＮＡ分子当たりに、該ＤＮＡの５’端に１つのＢＲＤＵを含有した。複合体及び対照試薬を、分析まで−８０℃で保存した。
このようにして生成した複合体及び対照試薬を、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析に供して、遊離した二重特異性抗体、遊離したペイロード、及び両方の複合体を特定し、特徴決定した。ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、Wyatt miniDawnTREOS/QELS及びOptilab rEX検出器を備えたDionex Ultimate 3000 HPLCで行った。検体を、ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４中において、１mg/mLで溶解させ、Superdex200 10/300GLカラムに、流速０．５mL/分でアプライし、ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４で６０分間溶出した。
これらの分析結果（図１８に示す）から、ＢＲＤＵ含有ＤＮＡは、二重特異性抗体と規定された複合体を形成することが示される。これらの複合体は、カラムから、２４４．９kDa ＭＷで溶出し（図１８Ａ）、流体力学的半径６．８nmを示す（図１８Ｂ）。これにより、二重特異性抗体分子当たりに、約２（１．８）個のＤＮＡ分子の化学量論比を算出することができる。それとの比較において、遊離した二重特異性抗体を、２１５．４kDa ＭＷで検出し、その流体力学的半径を、６．２nmと決定した。遊離したＢＲＤＵ−ＤＮＡを、１６．４kDa ＭＷで検出した。
このため、ＢＲＤＵ含有ＤＮＡは、効率的で、かつ、化学量論的に、抗ＴｆＲ／ＢＲＤＵ二重特異性抗体により結合し、モル比２：１での複合体がもたらされたことが示された。
実施例２２
ビオチン結合二重特異性抗体はビオチン含有ＩｇＧに結合する
ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体がモノビオチン化全長抗体ＩｇＧに結合できるかどうか、そして、その程度を分析するために、ｐＴａｕに特異的に結合するＩｇＧアイソタイプのモノビオチン化抗体（ビオチンラベル抗ｐＴａｕ抗体、ＢＩＯ−ｐＴａｕ）を、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体に、化学量論比２：１（３００μg、１．３mg/mL）で加えた。この混合物を、室温で３０分間インキュベーションした（二重特異性抗体−ペイロード複合体の形成）。モノビオチン化ＩｇＧを、ＩｇＧアイソタイプのノブ−ｉｎｔｏ−ホールヘテロ二量体抗体における１つの鎖のＣ末端にＡｖｉタグを有するＩｇＧ誘導体を生成することにより生成した。Ａｖｉタグは、規定の方法において、１つのビオチンに対して、酵素的にコンジュゲートする。
複合体形成の特異性についての対照として、抗ＴｆＲ／ジゴキシゲニン二重特異性抗体を、ＢＩＯ−ｐＴａｕと混合した。遊離した二重特異性抗体と遊離したＢＩＯ−ｐＴａｕとの両方の更なる対照試薬アリコートを調製した。複合体及び対照試薬を、分析まで−８０℃で保存した。
生成した複合体を、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析に供して、遊離した二重特異性抗体、遊離したＢＩＯ−ｐＴａｕ、及びそれらの複合体を特定し、特徴決定した。ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析を、Wyatt miniDawnTREOS/QELS及びOptilab rEX検出器を備えたDionex Ultimate 3000 HPLCで行った。検体を、ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４中において、１〜２mg/mLで溶解させ、Superose 10/300GLカラムに、流速０．５mL/分でアプライし、ＰＢＳバッファー ｐＨ７．４で６０分間溶出した。
これらの分析結果（図１９に示す）から、ＢＩＯ−ｐＴａｕは、二重特異性抗体と規定された複合体を形成することが示される。これらの複合体は、カラムから、５０１kDa ＭＷで溶出し（図１９Ｂ）、流体力学的半径８．０nmを示す（図１９Ａ）。それとの比較において、遊離した二重特異性抗体を、２０５kDa ＭＷで検出し、その流体力学的半径を、６．２nmで決定した。遊離したＢＩＯ−ｐＴａｕを、１５０kDa ＭＷで検出し、その流体力学的半径を、５．５nmで決定した。
該複合体は、ビオチンと二重特異性抗体のビオチン結合部分との間の相互作用により、特異的に形成される。ジゴキシゲニン結合二重特異性抗体がＢＩＯ−ｐＴａｕと複合体を形成しないためである。
実施例２３
ビオチンラベル抗ｐＴａｕ抗体と抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体との複合体の経細胞輸送
抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体が全長抗体ペイロードの経細胞輸送を容易にするかどうか、そして、その程度を分析するために、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体（抗ＴｆＲ／ビオチンｂｓＡｂ−１及び抗ＴｆＲ／ビオチンｂｓＡｂ−２）とＢＩＯ−ｐＴａｕとの複合体を、実施例２２で記載されたように形成し、例えば、実施例１８で上記された経細胞輸送アッセイ法に供した。非特異的経細胞輸送についての対照として、抗ＣＤ３３／ビオチン二重特異性抗体とＢＩＯ−ｐＴａｕとの複合体及び遊離したＢＩＯ−ｐＴａｕを、平行して試験した。頂端及び基底区画のサンプル及び細胞ライゼートのサンプルを、細胞のローディング後０、１、２、３、４、及び５時間後に取得した。ローディングは、常に３．８μg/mLとした。
ビオチンラベル抗ｐＴａｕ抗体の量を、ＥＬＩＳＡにより測定した。したがって、ｐＴａｕタンパク質を、NUNC Maxisorb White 384ウェルプレート上に、５００ng/mLで、２〜８℃において一晩、又は、室温において１時間コートした。プレートを、２％ ＢＳＡ及び０．０５％ Tween20を含有するＰＢＳで、少なくとも１時間ブロッキングした。０．５％ ＢＳＡ及び０．０５％ Tween 20を含有するＰＢＳ中に、最大１／７２９のサンプル希釈を１．５〜２時間、続けて、ポリ−ＨＲＰ４０−ストレプトアビジン（Fitzgerald）を３０分間、及び、Super Signal ELISA Pico基質（Thermo Scientific）を１０分間、全て室温でアプライした。ＢＩＯ−ｐＴａｕ抗体の標準的な希釈（１００ng/mL〜０．５pg/mL）を、同じプレートでアッセイした。プレートを、連続的なインキュベーション工程の間に、０．１％ Tween20を含有するＰＢＳで洗浄した。
これらの経細胞輸送アッセイ法の結果（図２０）から、ＢＩＯ−ｐＴａｕを抗ＴｆＲ／ビオチンｂｓＡｂ−１又は抗ＴｆＲ／ビオチンｂｓＡｂ−２のいずれかに複合体化することにより、効果的なエンドサイトーシスと、その後のＢＩＯ−ｐＴａｕの基底区画への輸送及び頂端区画に戻る輸送とが媒介されることが示される。対照的に、ＢＩＯ−ｐＴａｕの抗ＣＤ３３／ビオチン二重特異性抗体の対する複合体又は遊離のＢＩＯ−ｐＴａｕのいずれも、効果的にエンドサイトーシス又は経細胞輸送しない。このことは、観察された経細胞輸送が、抗ＴｆＲ／ビオチン二重特異性抗体の細胞表面上のＴｆＲへの特異的結合により生じることを示している。
実施例２４
二重特異性抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）／ビオチン抗体とビオチン化抗ＴｆＲ抗体Ｆａｂフラグメントとの複合体の経細胞輸送
上記で示された実施例と同様に、二重特異性抗ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）／ビオチン抗体とビオチン化抗ＴｆＲ抗体Ｆａｂフラグメントとの非共有複合体の経細胞輸送を解明した。結果を、図２１に示す。分析のために、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）を、プレートに固定し、抗ヒトＣＨ２を、二次抗体として使用した。検出を、抗ジゴキシゲニン抗体ＰＯＤコンジュゲートにより行った。

Claims (28)

  1. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体の使用。
  2. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）及びハプテンに特異的に結合する二重特異性抗体と、ハプテン化抗血液脳関門レセプター抗体との非共有複合体の使用。
  3. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含む非共有複合体の使用であって、前記二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、前記二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体の使用。
  4. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体の血液脳関門を通過する輸送のための、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含む非共有複合体の使用であって、前記二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、前記血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、前記二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体の使用。
  5. 前記ハプテン化抗体が、ビオチン化抗体又はジゴキシゲニン抗体である、請求項１〜４のいずれか一項記載の使用。
  6. 前記血液脳関門レセプターが、トランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８（ＬＲＰ８）である、請求項１〜５のいずれか一項記載の使用。
  7. 前記二重特異性抗体が、
    ａ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
    ｂ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
    ｃ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
    ｄ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
    ｅ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
    ｆ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
    ｇ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位、又は
    ｈ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位
    を含み、
    ここで、ｂ）、ｃ）、ｆ）、及びｇ）の場合には、二重特異性抗体の１つの重鎖がホールの変異を含み、各他の鎖がノブの変異を含む、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用。
  8. 前記二重特異性抗体が、ハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ハプテン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、請求項１〜７のいずれか一項記載の使用。
  9. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
    ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
    ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
    ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
    ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕに特異的に結合する、請求項１〜８のいずれか一項記載の使用。
  10. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、又は
    ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ
    を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の使用。
  11. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、更に、
    ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
    ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ
    を含む、請求項１〜１０のいずれか一項記載の使用。
  12. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
    ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ、又は
    ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ
    を含む、請求項１〜１１のいずれか一項記載の使用。
  13. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ａ）配列番号：２０の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｂ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１６の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｃ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｄ）配列番号：２１の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項記載の使用。
  14. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、抗血液脳関門レセプター／ハプテン二重特異性抗体との非共有複合体。
  15. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）及びハプテンに特異的に結合する二重特異性抗体と、ハプテン化抗血液脳関門レセプター抗体との非共有複合体。
  16. ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含む非共有複合体であって、前記二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するハプテン化抗体が、前記二重特異性抗体の第１の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体。
  17. 血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体と、二重特異性抗体とを含む非共有複合体であって、二重特異性抗体が、ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する第１の結合特異性と、血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する第２の結合特異性とを有し、ここで、前記血液脳関門レセプターに特異的に結合するハプテン化抗体が、前記二重特異性抗体の第２の結合特異性により特異的に結合している、非共有複合体。
  18. 前記ハプテン化抗体が、ビオチン化抗体又はジゴキシゲニン抗体である、請求項１４〜１７のいずれか一項記載の非共有複合体。
  19. 前記血液脳関門レセプターが、トランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）である、請求項１４〜１８のいずれか一項記載の非共有複合体。
  20. 前記二重特異性抗体が、
    ａ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
    ｂ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する１つの結合部位、又は
    ｃ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
    ｄ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位と血液脳関門レセプターに対する２つの結合部位、又は
    ｅ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
    ｆ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する１つの結合部位、又は
    ｇ）ハプテン化抗体のハプテンに対する１つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位、又は
    ｈ）ハプテン化抗体のハプテンに対する２つの結合部位とヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に対する２つの結合部位
    を含み、
    ここで、ｂ）、ｃ）、ｆ）、及びｇ）の場合には、二重特異性抗体の１つの重鎖がホールの変異を含み、各他の鎖がノブの変異を含む、請求項１４〜１９のいずれか一項記載の非共有複合体。
  21. 前記二重特異性抗体が、ハプテン化抗体のハプテンに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗ハプテン結合特異性）と、（ヒト）トランスフェリンレセプターに特異的に結合する２つの結合特異性（２つの抗（ヒト）トランスフェリンレセプター結合特異性）又は低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８に特異的に結合する結合特異性（抗低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質８結合特異性）とを有する、請求項１４〜２０のいずれか一項記載の非共有複合体。
  22. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ｉ）配列番号：０３のアミノ酸配列を有するポリぺプチドに特異的に結合し、及び／又は
    ｉｉ）全長ヒトＴａｕ（配列番号：０１）に１μg/mLでは結合せず、及び／又は
    ｉｉｉ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されている全長ヒトＴａｕ（配列番号：０２）に特異的に結合し、及び／又は
    ｉｖ）４２２位のセリンにおいてリン酸化されているヒトＴａｕ（配列番号：０２）の凝集体に特異的に結合し、及び／又は
    ｖ）配列番号：０１のアミノ酸配列を有し、アミノ酸変異Ｓ４２２Ａを有するヒトＴａｕに特異的に結合する、
    請求項１４〜２１のいずれか一項記載の非共有複合体。
  23. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、又は
    ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ
    を含む、請求項１４〜２２のいずれか一項記載の非共有複合体。
  24. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、更に、
    ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
    ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ
    を含む、請求項１４〜２３のいずれか一項記載の非共有複合体。
  25. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、１８、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
    ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１２、０５、及び１５のＨＶＲ、又は
    ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号：０８、０９、及び１０のＨＶＲ、及び、軽鎖可変ドメインに、配列番号：１３、１４、及び１５のＨＶＲ
    を含む、請求項１４〜２４のいずれか一項記載の非共有複合体。
  26. 前記ヒトＴａｕ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体が、
    ａ）配列番号：２０の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｂ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１６の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｃ）配列番号：１９の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｄ）配列番号：２１の重鎖可変ドメイン及び配列番号：１７の軽鎖可変ドメイン
    を含む、請求項１４〜２５のいずれか一項記載の非共有複合体。
  27. 医薬として使用するための、請求項１４〜２６のいずれか一項記載の非共有複合体。
  28. アルツハイマー病を処置するのに使用するための、請求項１４〜２６のいずれか一項記載の非共有複合体。
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