JP2017507953A

JP2017507953A - 抗ｃｄ３８抗体との併用療法

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Publication number: JP2017507953A
Application number: JP2016554350A
Authority: JP
Inventors: ドシ，パルル
Original assignee: ヤンセンバイオテツク，インコーポレーテツド
Priority date: 2014-02-28
Filing date: 2015-02-25
Publication date: 2017-03-23
Anticipated expiration: 2035-02-25
Also published as: NZ723535A; ZA201606682B; CA2940864C; ME03583B; ES2756349T3; EP3110843A4; UA120926C2; CN106459184B; MX2016011186A; SV2016005267A; RS59516B1; IL247392B; US9603927B2; MX378546B; BR112016019866A2; EP3110843A1; US20250011457A1; CN106459184A; US20170174780A1; HRP20192058T1

Abstract

本発明は、抗ＣＤ３８抗体との併用療法に関する。

Description

本発明は、抗ＣＤ３８抗体との併用療法に関する。

ＣＤ３８は、受容体媒介性の接着及びシグナル伝達の機能を有するばかりでなく、そのエクトエンザイム活性を介して、カルシウム動員を媒介し、環状ＡＤＰリボース（ｃＡＤＰＲ）及びＡＤＰＲの形成を触媒する、多機能性タンパク質である。ＣＤ３８は、サイトカインの分泌並びにリンパ球の活性化及び増殖を媒介する（Ｆｕｎａｒｏｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌｏｇ１４５：２３９０〜６，１９９０；Ｔｅｒｈｏｒｓｔｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ７７１〜８０，１９８１；Ｇｕｓｅｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３９８：７０〜３，１９９９）。ＣＤ３８はまた、そのＮＡＤグリコヒドロラーゼ活性を介して、細胞外ＮＡＤ⁺濃度を制御することから、制御性Ｔ細胞コンパートメントの調節に関連するとされている（Ａｄｒｉｏｕｃｈｅｔａｌ．，１４：１２８４〜９２，２０１２；Ｃｈｉａｒｕｇｉｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ１２：７４１〜５２，２０１２）。Ｃａ²⁺を介するシグナル伝達に加えて、Ｔ細胞及びＢ細胞上の抗原−受容体複合体又は他の種類の受容体複合体（例えば、ＭＨＣ分子）とのクロストークを介して、ＣＤ３８シグナル伝達が生じることから、ＣＤ３８は、いくつかの細胞応答に関与するだけでなく、ＩｇＧ１のスイッチング及び分泌にも関与している。

ＣＤ３８は、髄質胸腺細胞、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞、休止ＮＫ細胞及び単球、リンパ節胚中心リンパ芽球、形質Ｂ細胞、濾胞内細胞並びに樹状細胞などの造血系細胞上に発現する、ＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。正常骨髄細胞、特定の前駆体細胞及び臍帯細胞の一部は、ＣＤ３８陽性である。リンパ系前駆体細胞に加えて、ＣＤ３８は、赤血球及び血小板上にも発現しており、腸、脳、前立腺、骨及び膵臓などのいくつかの固形組織上にも発現が確認されている。休止期の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞は、表面にＣＤ３８をほとんど発現しない。

ＣＤ３８はまた、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、Ｔ細胞及びＢ細胞急性リンパ性白血病、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、原発性全身アミロイドーシス、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性／骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、大顆粒リンパ球性（ＬＧＬ）白血病、ＮＫ細胞白血病並びに形質細胞白血病などの多発性骨髄腫、白血病及びリンパ腫を含む、種々の悪性血液疾患にて発現している。ＣＤ３８の発現については、前立腺の腺上皮、膵臓の膵島細胞、耳下腺を含む腺の導管上皮、気管支上皮細胞、精巣及び卵巣の細胞並びに結腸直腸腺癌の腫瘍上皮を含む、異なる起源の上皮／内皮細胞に関して記載されている。ＣＤ３８の発現が関与し得る他の疾患には、例えば、肺の気管支上皮癌、乳癌（乳管上皮内層及び胸小葉の悪性増殖から生じるもの）、β細胞から生じる膵臓腫瘍（インスリノーマ）、消化管上皮から生じる腫瘍（例えば、腺癌及び扁平上皮細胞癌）、前立腺癌、精巣の精上皮腫及び卵巣癌が挙げられる。中枢神経系では、神経芽細胞腫がＣＤ３８を発現する。

Ｂ細胞性腫瘍は、Ｂ細胞が通常産生される、全てのリンパ系組織で生じ得る。Ｂ細胞性腫瘍を有するほとんどの患者は、最初は、骨髄又はリンパ節に関与する疾患であると診断される。骨髄が関与する場合、形質転換したＢ細胞は、往々にして血液中を循環し、周辺リンパ系組織全体に広く分布することになる。しかしながら、Ｂ細胞性腫瘍はまた、甲状腺、消化管、唾液腺及び結膜などの一部の非リンパ系組織にも生じ得る。

周知のＢ細胞性腫瘍には、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、毛様細胞性白血病、原発性滲出性リンパ腫及びＡＩＤＳ関連非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）が挙げられる。Ｂ細胞性腫瘍は、リンパ腫の診断のうちの８５％超を占める。

ＮＨＬは、リンパ球（Ｂ細胞又はＴ細胞）が悪性になり、制御不能に増殖し、腫瘤を形成した場合の、リンパ系を起源とするリンパ腫の広範な分類である。全体で、ＮＨＬは、表現型及び予後に幅がある、およそ３０の異なるリンパ腫のサブタイプを含む。ＮＨＬの発病は、主要市場国で、２０１９年までに１４０，０００件を超えると推定されている。

びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）は、リンパ性悪性疾患の３０〜４０％を占める、最も一般的な侵攻性ＮＨＬのサブタイプであり、生物学的及び臨床的に異なる群の疾患を含む。遺伝子発現プロファイル研究では、遺伝子発現プロファイルに基づいて、ＤＬＢＣＬを２つの群に分けられることが示唆されており、これらの群は、胚中心Ｂ細胞型（ＧＣＢ）及び活性化Ｂ細胞型（ＡＢＣ）リンパ腫として知られている。

ＤＬＢＣＬの標準治療処置は、一般にＣＨＯＰと呼ばれる、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン（ドキソルビシン）、ビンクリスチン及びプレドニゾンの組み合わせ、又はＲ−ＣＨＯＰと呼ばれる、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ及びＣＨＯＰの組み合わせである。更に、緩和後、造血幹細胞移植が検討され得る。

現在の処置の選択肢にかかわらず、侵攻性ＮＨＬの高リスク群における生存率は、５年で３０％という低さであり得る。したがって、ＮＨＬ及びＢ細胞性腫瘍に対する有効な処置及び併用処置法が必要とされている。

本発明の一実施形態は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性の調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する、方法である。

びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の患者由来モデルにおけるダラツムマブ単独又はＣＨＯＰ若しくはＲ−ＣＨＯＰとの組み合わせの有効性を示す。切除したＤＬＢＣＬ腫瘍をＳＣＩＤ／Ｂｅｉｇｅマウスに移植した。腫瘍がおよそ１２５〜２５０ｍｍ³に達したら、処置を開始した。ダラツムマブは、２０ｍｇ／ｋｇで、週１回３週間投与した。ＣＨＯＰ及びＲ−ＣＨＯＰは、次のレジメンを用いて、０日に１回投与した（ただし、プレドニゾンは０〜４日目に投与）。ＣＨＯＰ：（シクロホスファミド（ＣＴＸ）：３０ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．；ドキソルビシン：２．５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ；ビンクリスチン：０．４ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ）；プレドニゾン：０．１５ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ；Ｒ−ＣＨＯＰ：リツキシマブ２０ｍｇ／ｋｇｉ．ｐ．０日目。腫瘍体積を３日ごとに測定した。Ｙ軸は、腫瘍体積±ＳＥＭを表す。図１Ａの研究について、腫瘍接種後日数に対してプロットした生存期間中央値を示す。非ホジキンリンパ腫の前臨床モデルにおけるダラツムマブ単独又はＣＨＯＰとの組み合わせの有効性を示す。マトリゲル中の２×１０⁵個のＮＡＭＡＬＷＡ細胞をＮＯＤＳＣＩＤマウスに移植し、主な腫瘍サイズがおよそ１８９ｍｍ³に達したら、処置を開始した。ダラツムマブは、１０ｍｇ／ｋｇで、週１回３週間投与した。ＣＨＯＰは、次の用量を用いて０〜５日目に毎日投与した。シクロホスファミド（ＣＴＸ）：５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．；ドキソルビシン：０．５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ；ビンクリスチン：０．０８ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．、プレドニゾン：０．０３ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ．。腫瘍体積を３日ごとに測定した。Ｙ軸は、腫瘍体積±ＳＥＭを表す。ＤＬＢＣＬの前臨床モデルにおけるダラツムマブ単独又はＣＨＯＰとの組み合わせの有効性を示す。５×１０⁶個のＳＵ−ＤＨＬ−６細胞をＮＯＤＳＣＩＤマウスに移植し、主な腫瘍サイズがおよそ１５４ｍｍ³に達したら、処置を開始した。ダラツムマブは、１０ｍｇ／ｋｇで、週１回４週間投与した。ＣＨＯＰは、次の用量を用いて０〜５日目に毎日投与した。シクロホスファミド（ＣＴＸ）：５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．；ドキソルビシン：０．５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ；ビンクリスチン：０．０８ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．、プレドニゾン：０．０３ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ．。腫瘍サイズを平均±ＳＥＭとしてプロットした。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の患者由来モデルにおける、研究の４５日目まで同時に又は連続的に投与したＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブの有効性を示す。ダラツムマブは、２０ｍｇ／ｋｇで、週１回３週間、０日目又は７日目に投与した。ＣＨＯＰは、次のレジメンを用いて、０日目に１回、投与した（ただし、プレドニゾンは０〜４日目）。ＣＨＯＰ：（シクロホスファミド（ＣＴＸ）：３０ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．；ドキソルビシン：２．５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ；ビンクリスチン：０．４ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ）；プレドニゾン：０．１５ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ．。リツキシマブは、２０ｍｇ／ｋｇで、０日目又は７日目のいずれかに、ｉ．ｐ．投与した。腫瘍サイズを平均±ＳＥＭとしてプロットした。ＣＮＴＯ３９３０：アイソタイプコントロール。括弧内の値は、投薬日を示す。データは、継続研究の４４日目での結果を表す。ＤＬＢＣＬの患者由来モデルにおける、研究の１０１日目まで同時に又は連続的に投与したＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブの有効性を示す。投薬は図４に示す通りであった。腫瘍サイズを平均±ＳＥＭとしてプロットした。ＣＮＴＯ３９３０：アイソタイプコントロール。括弧内の値は、投薬日を示す。腫瘍体積における統計的差異は、両側一元配置ＡＮＯＶＡに続いてダネットの多重比較検定を用いて、単剤処置群をコントロール及び標準薬剤の組み合わせと比較して特定した。＊Ｐ＜０．０５（コントロールに対して）、†Ｐ＜０．０５（ＣＨＯＰ：シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンに対して）、ＤＬＢＣＬ：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＩＨＣ：免疫組織化学、ｉ．ｖ．：静脈内、ｉ．ｐ．：腹腔内。

「ＣＤ３８」とは、ヒトＣＤ３８タンパク質（同義語：ＡＤＰリボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ１）を指す。ヒトＣＤ３８は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する。

本明細書で使用する「抗体」という用語は、広義に用いられ、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ネズミ、ヒト、ヒト適合化、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含む）、抗体断片、二重特異性又は多重特異性抗体、二量体、四量体又は多量体抗体、並びに一本鎖抗体を含めた、免疫グロブリン分子を含む。

免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、即ち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭに分類することができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、更に、アイソタイプＩｇＡ₁、ＩｇＡ₂、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ₂、ＩｇＧ₃及びＩｇＧ₄に下位分類される。あらゆる脊椎種の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、即ちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの１つに分類することができる。

「抗体断片」という用語は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）又は軽鎖可変領域（ＶＬ）などの重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位を保持する免疫グロブリン分子の一部を指す。抗体断片には、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨＩドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ）₂断片、ＶＨ及びＣＨＩドメインからなるＦｄ断片、抗体の一本のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、ＶＨドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４〜５４６，１９８９）が挙げられる。ＶＨドメイン及びＶＬドメインを操作して、合成リンカーを介して一つに連結させ、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができ、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが別々の一本鎖抗体構築物で発現される場合は、ＶＨ／ＶＬドメインが分子内又は分子間で対合して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディなどの一価の抗原結合部位を形成する。これらは、例えば、国際公開第１９９８／４４００１号、第１９８８／０１６４９号、第１９９４／１３８０４号及び第１９９２／０１０４７号に記載されている。これらの抗体断片は、当業者に周知の技術を用いて得られ、これらの断片は、完全長抗体と同様に有用性に応じて選別される。

「単離された抗体」という語句は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す（例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する抗体）。しかしながら、ＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原、例えば、カニクイザル（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＣＤ３８などのヒトＣＤ３８のオルソログに対する交差反応を有し得る。更に、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。

抗体可変領域は、３つの「抗原結合部位」で遮られた「フレームワーク」領域からなる。抗原結合部位は、様々な用語を用いて定義され、例えば、ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）ある、相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語は、配列の多様性に基づくものであり（ＷｕａｎｄＫａｂａｔＪＥｘｐＭｅｄ１３２：２１１〜５０，１９７０；ＫａｂａｔｅｔａｌＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）、ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）ある「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋによって定義された、構造の変化が大きい抗体可変ドメインの領域を指す（ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋＭｏｌＢｉｏｌ１９６：９０１〜１７，１９８７）。他の用語には、「ＩＭＧＴ−ＣＤＲ」（Ｌｅｆｒａｎｃｅｔａｌ．，ＤｅｖＣｏｍｐａｒａｔＩｍｍｕｎｏｌ２７：５５〜７７，２００３）及び「特性決定残基使用」（ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ，ＭｏｌＲｅｃｏｇｎｉｔ１７：１３２〜４３，２００４）が挙げられる。ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準的な番号付け及び定義を提供している。各ＣＤＲ、ＨＶ及びＩＭＧＴの記述間の対応については、Ｌｅｆｒａｎｃｅｔａｌ．，ＤｅｖＣｏｍｐａｒａｔＩｍｍｕｎｏｌ２７：５５〜７７，２００３に記載されている。

本明細書で使用する「Ｃｈｏｔｈｉａ残基」は、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉに従って番号付けされたＶＬ及びＶＨの抗体残基である（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、ＪＭｏｌＢｉｏｌ２７３：９２７〜４８，１９９７）。

「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位として定義された配列を除く、可変領域の残りの配列である。抗原結合部位は、上記に記載した様々な用語によって定義することができるため、フレームワークの正確なアミノ酸配列は、抗原結合部位がどのように定義されるかによって決まる。

「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位が非ヒト種に由来し、可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を指す。ヒト化抗体はフレームワーク領域内に置換を含んでいてもよく、そのため、当該フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又は生殖細胞系列遺伝子配列の完全な複製物でなくてもよい。

「ヒト適合化」抗体又は「ヒトフレームワーク適合化（ＨＦＡ）」抗体とは、米国特許出願公開第２００９／０１１８１２７号に記載された方法に従って適合化されたヒト化抗体を指す。ヒト適合化抗体は、ＣＤＲとＦＲの最大類似性、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２ループ並びに軽鎖ＣＤＲ３ループの一部に関する長さ適合性及び配列類似性に基づいて、アクセプターとなるヒトフレームワークを選択することによってヒト化される。

「ヒト抗体」とは、フレームワークと抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する、重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域を含む場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。

ヒト抗体は、ヒト起源の配列に「由来」する重鎖又は軽鎖可変領域を含み、この場合、抗体の可変領域は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン又は再構成された免疫グロブリン遺伝子を用いる系から得られる。このような系には、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリー、及び本明細書に記載するヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するマウスなどのトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系又は再構成された免疫グロブリン配列と比較した場合、例えば、天然に発生する体細胞変異又はフレームワーク若しくは抗原結合部位における意図的な置換の導入により、アミノ酸差異を含み得る。典型的には、ヒト抗体は、アミノ酸配列が、ヒト生殖細胞系又は再構成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である。ある場合には、ヒト抗体は、ヒトフレームワーク配列分析から得られるコンセンサスフレームワーク配列（例えば、Ｋｎａｐｐｉｋｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２９６：５７〜８６，２０００に記載のもの）又はファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３（例えば、Ｓｈｉｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ３９７：３８５〜９６，２０１０及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載のもの）を含み得る。抗原結合部位が非ヒト種に由来する抗体は、ヒト抗体の定義に含まれない。

単離されたヒト化抗体は合成であり得る。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来するものであるが、合成ＣＤＲ及び／又は合成フレームワークを組み込んだファージディスプレイなどの系を用いて作製してもよく、抗体特性を改善するためにインビトロ変異導入を行うこともできる。これにより、インビボのヒト抗体生殖細胞系レパートリー内で天然には存在しない抗体が得られる。

本明細書で使用する「組み換え抗体」という用語には、組み換え手段によって調製、発現、作製若しくは単離される全ての抗体が含まれ、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子が遺伝子導入若しくは染色体導入された動物（例えば、マウス）若しくはこれらから作製されたハイブリドーマから単離される抗体（以下で詳述）、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離される抗体、組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される抗体、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライスすることなどの任意の他の手段によって調製、発現、作製若しくは単離される抗体、又は二重特異性抗体などのＦａｂアーム交換を用いてインビトロで生成される抗体が含まれる。

本明細書で使用する「モノクローナル抗体」という用語は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示すか、又は二重特異性モノクローナル抗体の場合、２つの異なるエピトープに対して二重結合特異性を示す。

本明細書で使用する「エピトープ」という用語は、抗体が特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは通常、アミノ酸又は多糖類側鎖のような部位の化学的に活性な（極性、非極性又、は疎水性など）表面基からなり、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、立体配座空間単位を形成する連続した、かつ／又は連続していないアミノ酸からなり得る。連続していないエピトープの場合、タンパク質分子が折り畳まれることにより、抗原の直鎖配列の異なる部分のアミノ酸が、３次元空間において近接するようになる。

本明細書で使用する「変異体」とは、１つ又は２つ以上の変更、例えば、置換、挿入又は欠失によって、基準ポリペプチド又は基準ポリヌクレオチドとは異なっているポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。

「相乗効果」、「共力作用」又は「相乗作用的」とは、ある組み合わせについて予想される相加作用を超えることを意味する。

本明細書で使用する「組み合わせて」という用語は、２種類以上の治療物質を、混合物の状態で一緒に、単剤として同時に、又は単剤として任意の順番で連続的に、対象に対して投与できることを意味する。

「処置する」又は「処置」という用語は、治療的処置及び予防的又は防止的措置の両方を指し、腫瘍又は腫瘍細胞の成長又は拡大などの好ましくない生理学的変化又は疾患を予防又は遅延（緩和）することを目的とする。有益な又は好ましい臨床結果には、検出が可能か不可能かにかかわらず、症状の緩和、疾患程度の低減、疾患状態の安定化（即ち、悪化していない）、疾患進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は一時的緩和、及び寛解（部分的でも完全でも）が含まれる。「処置」はまた、対象が処置を受けなかった場合に予想される生存性と比較して、長く生存することを意味し得る。処置の必要な対象には、その状態若しくは障害をすでに有している対象に加えて、その状態若しくは障害を有する可能性のある対象、又はその状態若しくは障害を予防すべき対象が含まれる。

「成長の阻害」（例えば、腫瘍細胞などの細胞に関して）とは、治療物質又は治療物質若しくは薬物の組み合わせに接触させた場合、当業者に周知の適切な制御条件下において成長させた同じ細胞の成長と比較して、インビトロ又はインビボにおける細胞成長が測定可能な程減少することを指す。インビトロ又はインビボにおける細胞成長の阻害は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％又は１００％であり得る。細胞成長の阻害は、種々の機構、例えば、抗体依存性細胞介在性毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス、壊死又は細胞増殖の阻害によって生じ得る。

「治療的有効量」とは、必要な用量及び期間で、所望の治療効果を得るのに有効な量を指す。治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、並びに個体において所望の反応を引き起こす治療物質又は治療物質の組み合わせの能力などの因子に従って変化し得る。有効的な治療物質又は治療物質の組み合わせの例示的な指標には、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の減少、腫瘍成長の停止若しくは遅延、及び／又は癌細胞の他の体内位置への転移のないことが挙げられる。

本発明は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する患者を処置するための方法を提供する。本発明は、抗ＣＤ３８抗体をＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰと組み合わせて投与すると、血液悪性疾患に関連する腫瘍モデルにて、インビボで相乗効果のある治療有効性がもたらされるという発見に基づく。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性の調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する、方法である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣ又はＣＤＣによるＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。

「ＣＤ３８陽性血液悪性疾患」とは、白血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む、ＣＤ３８を発現している腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる血液悪性疾患を指す。このようなＣＤ３８陽性血液悪性疾患の例には、前駆体Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫及びＢ細胞非ホジキンリンパ腫、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ性白血病及び成熟Ｂ細胞腫瘍、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）（低グレード、中グレード及び高グレードＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、節性及び脾性）、毛様細胞性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、形質細胞腫、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、移植後リンパ球増殖性疾患、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、形質細胞性白血病並びに未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）が挙げられる。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、多発性骨髄腫である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、非ホジキンリンパ腫である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、バーキットリンパ腫（ＢＬ）である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。

Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の例は、リンパ腫様肉芽腫症、原発性滲出性リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、重鎖病（γ、μ及びα病を含む）、免疫抑制剤を用いる治療によって誘発されるリンパ腫、例えばシクロスポリン誘発リンパ腫及びメトトレキサート誘発リンパ腫である。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本発明の一実施形態において、ＣＤ３８を発現している細胞に関する疾患は、ホジキンリンパ腫である。

ＣＤ３８を発現する細胞に関する疾患の他の例には、Ｔ細胞及びＮＫ細胞に由来する悪性疾患が挙げられ、例えば、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性鼻型ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、７８腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症／セザリー症候群、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖異常症（原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫Ｃ−ＡＬＣＬ、リンパ腫様丘疹症、境界病変）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫及び未分化大細胞リンパ腫などの成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞腫瘍が挙げられる。

骨髄細胞に由来する悪性疾患の例には、急性前骨髄球性白血病を含む急性骨髄性白血病、及び慢性骨髄性白血病を含む慢性骨髄増殖性疾患が挙げられる。

いずれの抗ＣＤ３８抗体も、以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の方法にて使用することができるが、その抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性の調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する場合に限る。抗ＣＤ３８抗体の可変領域は、標準的方法を用いて、既存の抗ＣＤ３８抗体から得ることができ、完全長抗体としてクローン化することができる。ＣＤ３８に結合する可変領域として使用することができるものの例は、例えば、国際公開第０５／１０３０８３号、第０６／１２５６４０号、第０７／０４２３０９号、第０８／０４７２４２号、第１２／０９２６１２号、第０６／０９９８７５号及び第１１／１５４４５３Ａ１号に記載されている。

使用することができる例示的な抗ＣＤ３８抗体は、ダラツムマブである。ダラツムマブは、それぞれ配列番号４及び５に示す重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲとして、それぞれ配列番号６、７及び８であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲとして、それぞれ配列番号９、１０及び１１であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、また、ＩｇＧ１／κサブタイプである。ダラツムマブの重鎖アミノ酸配列を配列番号１２に示し、軽鎖アミノ酸配列を配列番号１３に示す。

配列番号１
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ

配列番号２
ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ

配列番号３
ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ

配列番号４
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号６
ＳＦＡＭＳ

配列番号７
ＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ

配列番号８
ＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹ

配列番号９
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ

配列番号１０
ＤＡＳＮＲＡＴ

配列番号１１
ＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦ

配列番号１２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号１３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号１４及び１５であるＶＨ及びＶＬ配列を含む、米国特許第７，８２９，６９３号に記載されている、ｍＡｂ００３である。

配列番号１４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＶＩＰＦＬＧＩＡＮＳＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹ
ＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＩＡＡＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳ

配列番号１５
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号１６及び１７であるＶＨ及びＶＬ配列を含む、米国特許第７，８２９，６９３号に記載されている、ｍＡｂ０２４である。

配列番号１６
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＮＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＨＤＳＤＡＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＦＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹ
ＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＶＧＷＧＳＲＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号１７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ
ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号１８及び１９であるＶＨ及びＶＬ配列を含む、米国特許第８，０８８，８９６号に記載されている、ＭＯＲ−２０２（ＭＯＲ−０３０８７）である。

配列番号１８
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ
ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号１９
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥ
ＤＥＡＤＹＹＣＱＴＹＴＧＧＡＳＬＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱ

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の方法にて用いられる抗ＣＤ３８抗体はまた、例えば、ヒト免疫グロブリン又はその部分（Ｆａｂ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は対合していない若しくは対合した抗体可変領域など）をファージに発現させるように操作したファージディスプレイライブラリーから新たに選択してもよい（Ｋｎａｐｐｉｋｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２９６：５７〜８６，２０００；Ｋｒｅｂｓｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈ２５４：６７〜８４，２００１；Ｖａｕｇｈａｎｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：３０９〜３１４，１９９６；Ｓｈｅｅｔｓｅｔａｌ．，ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２，１９９８；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍａｎｄＷｉｎｔｅｒ，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２２７：３８１，１９９１；Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２２２：５８１，１９９１）。ＣＤ３８結合可変ドメインは、例えば、抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を、バクテリオファージｐＩＸコートタンパク質との融合タンパク質として発現するファージディスプレイライブラリーから単離することができる（Ｓｈｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９７：３８５〜９６，２０１０及び国際公開第０９／０８５４６２号に記載の通り）。この抗体ライブラリーを、ヒトＣＤ３８細胞外ドメインとの結合について選別し、得られた陽性クローンを更に特性評価し、クローン溶解物からＦａｂを単離し、続いて完全長抗体としてクローニングすることができる。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ法は、当技術分野にて確立されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；米国特許第５，４０３，４８４号；及び米国特許第５，５７１，６９８号、米国特許第５，４２７，９０８号、米国特許第５，５８０，７１７号、米国特許第５，９６９，１０８号、米国特許第６，１７２，１９７号、米国特許第５，８８５，７９３号；米国特許第６，５２１，４０４号；米国特許第６，５４４，７３１号；米国特許第６，５５５，３１３号；米国特許第６，５８２，９１５号；及び米国特許第６，５９３，０８１号を参照されたい。

抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの抗体エフェクター機能を媒介し得る。このような機能は、食作用若しくは溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体への１つ又は複数のＦｃエフェクタードメインの結合、又は補体系成分への１つ又は複数のＦｃエフェクタードメインの結合によって媒介され得る。通常、Ｆｃ結合細胞又は補体成分によって媒介される１つ又は複数の作用は、標的細胞、例えば、ＣＤ３８発現細胞の阻害及び／又は枯渇をもたらす。ヒトＩｇＧアイソタイプのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４は、エフェクター機能について、異なる能力を示す。ＡＤＣＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され得、ＡＤＣＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４によって媒介され得、ＣＤＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され得る。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のアイソタイプである。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣによるＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣによるＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、インビトロで、ＡＤＣＰによるＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、インビトロで、アポトーシスによるＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、インビトロで、ＡＤＣＣ及びＣＤＣによるＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。

作用機構に関していかなる特定の理論に束縛されるものではないが、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビボ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビボ殺傷を誘発することが予想される。

「抗体依存性細胞傷害」又は「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞上に発現したＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を介した、抗体で被覆された標的細胞と、溶解活性を有するエフェクター細胞（ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ及び好中球など）との相互作用に依存する、細胞死を誘発する機構である。例えば、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩａを発現するのに対し、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃｖＲＩＩＩａを発現する。抗体で被覆された標的細胞、例えばＣＤ３８発現細胞の死は、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌によるエフェクター細胞活性の結果として生じる。抗ＣＤ３８抗体のＡＤＣＣ活性をインビトロで評価するには、その抗体を、抗原抗体複合体によって活性化され得る免疫エフェクター細胞とともにＣＤ３８発現細胞に添加し、標的細胞の細胞溶解を生じさせればよい。細胞溶解は、通常、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然細胞内タンパク質）の放出によって検出される。このようなアッセイのための例示的なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。例示的な標的細胞には、ＣＤ３８を発現しているＤａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２１３（商標））又はＢ細胞白血病若しくはリンパ腫の腫瘍細胞が挙げられる。例示的なアッセイにおいて、標的細胞を２０μＣｉの⁵¹Ｃｒで２時間標識し、広範に洗浄する。標的細胞の細胞濃度は、１×１０⁶細胞／ｍＬに調整され得、様々な濃度で抗ＣＤ３８抗体を添加する。Ｄａｕｄｉ細胞を、４０：１のエフェクター：標的細胞の比で添加することによって、アッセイを開始する。３７℃で３時間インキュベーションした後、アッセイを遠心分離によって停止し、溶解した細胞からの⁵¹Ｃｒ放出をシンチレーションカウンターで計測する。細胞傷害のパーセンテージは、３％過塩素酸を標的細胞に添加することによって誘発され得る最大溶解率（％）として算出することができる。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体は、コントロール（３％過塩素酸によって誘発させた細胞溶解）の約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％でＡＤＣＣを誘発し得る。

「抗体依存性細胞貪食」（「ＡＤＣＰ」）は、マクロファージ又は樹状細胞などの食細胞による内在化によって、抗体で被覆された標的細胞が除去される機構を指す。インビトロＡＤＣＰは、エフェクター細胞として単球由来マクロファージを用い、またＧＦＰ又は他の標識分子を発現するように操作された標的細胞として、ＣＤ３８を発現しているＤａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２１３（商標））又はＢ細胞白血病若しくはリンパ腫の腫瘍細胞を用いることによって、評価することができる。エフェクター：標的細胞の比は、例えば、４：１であってよい。エフェクター細胞を、抗ＣＤ３８抗体とともに又は抗ＣＤ３８抗体を含めずに、標的細胞と４時間インキュベートすることができる。インキュベーション後、アクターゼを用いて細胞を剥離することができる。マクロファージは、蛍光標識と結合した抗ＣＤ１１ｂ及び抗ＣＤ１４抗体によって特定することができ、標準的方法を用いて、ＣＤ１１⁺ＣＤ１４⁺マクロファージの％ＧＦＰ蛍光に基づいて、食作用率を決定することができる。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＰを約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％誘発し得る。

「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」とは、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメインが補体成分Ｃ１ｑと結合して活性化し、これにより、補体カスケードが活性化して標的細胞の死がもたらされる、細胞死を誘発する機構を指す。補体の活性化はまた、白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）に結合することによってＡＤＣＣを促進する、標的細胞表面上への補体成分の蓄積をもたらすことができる。ＣＤ３８発現細胞のＣＤＣは、インビトロで測定することができ、例えば、Ｄａｕｄｉ細胞を１×１０⁵細胞／ウェル（５０μＬ／ウェル）でＲＰＭＩ−Ｂ（１％ＢＳＡ添加ＲＰＭＩ）中に播種し、５０μＬの抗ＣＤ３８抗体を最終濃度０〜１００μｇ／ｍＬでウェルに添加し、反応物を室温で１５分間インキュベートし、１１μＬのヒトプール血清をウェルに添加し、反応物を３７℃で４５分間インキュベートすることによって、測定することができる。溶解細胞のパーセンテージ（％）は、標準的方法を用いて、ＦＡＣＳアッセイにおけるヨウ化プロピジウム染色細胞率（％）として検出することができる。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣを約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％誘発し得る。

モノクローナル抗体のＡＤＣＣを誘発する能力は、そのオリゴ糖成分を操作することによって高めることができる。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ−グリコシル化されており、グリカンの大部分はよく知られた二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２又はＧ２Ｆ型である。操作されていないＣＨＯ細胞によって産生される抗体は、通常、およそ少なくとも８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に結合した二分岐複合型オリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合又はＣＤＣ活性を変えることなく、ＦｃγＲＩＩＩａの結合が改善され、抗体のＡＤＣＣが向上する。このような抗体は、二分岐複合型のＦｃオリゴ糖を有する比較的高度に脱フコシル化された抗体の発現につながることが報告されている種々の方法を用いて達成することができ、例えば、培養浸透圧の調節（Ｋｏｎｎｏｅｔａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６４：２４９〜６５，２０１２）、変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の宿主細胞株としての応用（Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜４０，２００２）、変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の宿主細胞株としての応用（Ｏｌｉｖｉｅｒｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０；印刷版に先駆けた電子版；ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、ラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の宿主細胞株としての応用（Ｓｈｉｎｋａｗａｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６〜３４７３，２００３）、α １，６−フコシルトラスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な小分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ８８：９０１〜９０８，２００４）、又はβ−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩとゴルジα−マンノシダーゼＩＩ若しくは強力なα−マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシンとの共発現（Ｆｅｒｒａｒａｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２８１：５０３２〜５０３６，２００６，Ｆｅｒｒａｒａｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ９３：８５１〜８６１，２００６；Ｘｈｏｕｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ９９：６５２〜６５，２００８）などである。本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態にて使用される抗ＣＤ３８抗体によって誘発されるＡＤＣＣは、抗体Ｆｃ内の特定の置換によっても向上し得る。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されている、アミノ酸位２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８又は４３０での置換である（残基の番号付けはＥＵインデックスに従う）。

本明細書にて記載するいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、抗体Ｆｃ内に置換を含む。

本明細書にて記載するいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、抗体Ｆｃにおいて、アミノ酸位２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８又は４３０における置換を含む（残基の番号付けはＥＵインデックスに従う）。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発し、抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体（ダラツムマブ）と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、方法である。

抗体は、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを有するダラツムマブとのＣＤ３８への結合に関する競合について、周知のインビトロ法を用いて、評価することができる。例示的な方法において、ＣＤ３８を組み換え的に発現するＣＨＯ細胞を、４℃で１５分間、非標識のダラツムマブとインキュベートし、続いて、４℃で４５分間、過剰の蛍光標識した試験抗体とインキュベートすることができる。ＰＢＳ／ＢＳＡ中で洗浄後、標準的方法を用いて、フローサイトメトリーによって蛍光を測定することができる。別の例示的な方法において、ヒトＣＤ３８の細胞外部分を、ＥＬＩＳＡプレートの表面上にコーティングすることもできる。過剰の非標識ダラツムマブを約１５分間添加し、その後、ビオチン化した試験抗体を添加することができる。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中で洗浄後、ビオチン化した試験抗体の結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ストレプトアビジンを用いて検出し、標準的方法を用いて、そのシグナルを検出することができる。競合アッセイにおいて、ダラツムマブが標識され、試験抗体が非標識であってもよいことは容易に明らかである。試験抗体は、ダラツムマブが試験抗体の結合を阻害するとき、又は試験抗体が、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％ダラツムマブの結合を阻害するとき、ダラツムマブと競合する。試験抗体のエピトープは、既知の方法を用いて、例えば、ペプチドマッピング又は水素／重水素保護アッセイによって、更に定義することができる。

以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示する本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）に結合する抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する方法である。この抗体のエピトープは、配列番号２又は配列番号３に示す配列を有するこれらの領域の残基の一部又は全てを含む。以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示するいくつかの実施形態において、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくとも１つのアミノ酸、及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくとも１つのアミノ酸を含む。以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示するいくつかの実施形態において、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくとも２つのアミノ酸、及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくとも２つのアミノ酸を含む。以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示するいくつかの実施形態において、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくとも３つのアミノ酸、及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくとも３つのアミノ酸を含む。以下に記載する付番した実施形態におけるものを含む、本明細書にて開示するいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくともＫＲＮを含み、ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくともＶＱＬＴ（配列番号２０）を含むエピトープに結合する。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくともＫＲＮを含み、ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくともＶＱＬＴ（配列番号２０）を含むエピトープに結合する。

上述したヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）又は最小限で残基ＫＲＮ及びＶＱＬＴ（配列番号２０）に結合する、例示的な抗体は、上記に記載した特定のＶＨ、ＶＬ及びＣＤＲ配列を有するダラツムマブである。ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）に結合する抗体は、例えば、標準的な方法を用いて、かつ本明細書に記載するように、配列番号２及び３に示すアミノ酸配列を有するペプチドでマウスを免疫化することによって、作製することができる。抗体は、例えば、上述した通り、ダラツムマブと試験抗体との間のＣＤ３８への結合に関する競合をアッセイすることによって、更に評価することができる。

本明細書にて記載する方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ある範囲の親和性（Ｋ_D）でヒトＣＤ３８に結合することができる。本発明に係る一実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、高親和性、例えば、当業者によって実施される表面プラズモン共鳴又はＫｉｎｅｘａ法で測定されるとき、Ｋ_Dが約１０^-7Ｍ以下、例えば、限定するものではないが、１〜９．９（又はこのうちの任意の範囲若しくは値、例えば１、２、３、４、５、６、７、８若しくは９）×１０^-8、１０^-9、１０^-10、１０^-11、１０^-12、１０^-13、１０^-14、１０^-15又はこのうちの任意の範囲若しくは値でＣＤ３８に結合する。１つの例示的な親和性は、１×１０^-8Ｍ以下である。別の例示的な親和性は、１×１０^-9Ｍ以下である。

本明細書にて記載するいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、二分岐グリカン構造を有し、該二分岐グリカン構造のフコース含量が、約０％〜約１５％、例えば、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又は０％である。

本明細書にて記載するいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、二分岐グリカン構造を有し、該二分岐グリカン構造のフコース含量が、約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又は０％である。

Ｆｃにおける置換及びフコース含量の低減により、抗ＣＤ３８抗体のＡＤＣＣ活性が向上し得る。

「フコース含量」は、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコース単糖の量を意味する。フコースの相対量は、全ての糖鎖構造に対するフコース含有構造のパーセンテージである。これらは、多くの方法によって特性評価及び定量化を行うことができ、例えば、１）国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、Ｎ−グリコシダーゼＦで処理したサンプル（例えば、複合体、ハイブリッド、並びにオリゴ及び高マンノース構造）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦの使用、２）Ａｓｎ２９７グリカンの酵素による放出の後、誘導体化し、蛍光検出及び／若しくはＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）を用いてＨＰＬＣ（ＵＰＬＣ）による検出／定量化を行うこと、３）第１と第２のＧｌｃＮＡｃ単糖間で切断し、フコースを第１のＧｌｃＮＡｃに結合したままにするＥｎｄｏＳ若しくは他の酵素でのＡｓｎ２９７グリカンの処理を行うか若しくは行わない天然型若しくは還元型ｍＡｂのインタクトタンパク質分析、４）ｍＡｂを酵素的消化（例えば、トリプシン又はエンドペプチダーゼＬｙｓ−Ｃ）により構成ペプチドに消化した後、ＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）によって分離、検出及び定量化を行うこと、又は５）ＰＮＧａｓｅＦによるＡｓｎ２９７での特異的酵素脱グリコシル化によって、ｍＡｂタンパク質からｍＡｂオリゴ糖を分離することによってなされ得る。放出されたオリゴ糖をフルオロフォアで標識し、これを様々な補完的な技術によって分離及び特定することができる。これらの技術は、マトリックス支援レーザ脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析による実験質量と理論質量との比較によるグリカン構造の詳細な特性評価、イオン交換ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐＣ）によるシアリル化度の測定、順相ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐＮ）による親水性基準に従ったオリゴ糖形態の分離及び定量化、並びに高性能キャピラリー電気泳動レーザ誘起蛍光法（ＨＰＣＥ−ＬＩＦ）によるオリゴ糖の分離及び定量化を可能とする。

本出願で使用する「低フコース」又は「低フコース含量」とは、約０％〜１５％のフコース含量である抗体を指す。

本明細書で使用する「通常フコース」又は「通常フコース含量」とは、約５０％超、一般に約６０％、７０％、８０％又は８５％超のフコース含量である抗体を指す。

本方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において使用される抗ＣＤ３８抗体は、インビトロで、アポトーシスによるＣＤ３８陽性細胞殺傷を誘発することができる。アポトーシスを評価するための方法は、周知であり、例えば、標準的な方法を用いるアネキシンＩＶ染色が挙げられる。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体は、細胞の約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％でアポトーシスを誘発し得る。

本方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において使用される抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８酵素活性の調節によりＣＤ３８陽性細胞殺傷を誘発することができる。ＣＤ３８は、環状ＡＤＰリボース（ｃＡＤＰＲ）及びＡＤＰＲのＮＡＤ⁺からの形成を触媒するＡＤＰリボシルシクラーゼ１活性を有するエクトエンザイムであり、ＮＡＤ⁺及びｃＡＤＰＲをＡＤＰＲに加水分解するようにも機能する。ＣＤ３８はまた、酸性条件下で、ＮＡＤＰ⁺のニコチンアミド基のニコチン酸による交換を触媒し、ＮＡＡＤＰ⁺（ニコチン酸アデニンジヌクレオチドリン酸塩）を生成する。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体によるヒトＣＤ３８の酵素活性の調節は、Ｇｒａｅｆｆｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，３０２６０〜３０２６７（１９９４）に記載のアッセイで測定することができる。例えば、基質ＮＧＤ⁺をＣＤ３８とともにインキュベートしてもよく、抗体を様々な濃度で添加した後の種々の時間点で、環状ＧＤＰリボース（ｃＧＤＰＲ）生成の調節を、励起３４０ｎＭ及び発光４１０ｎＭで分光光度的に観察することができる。ｃＡＤＰＲの合成の阻害は、Ｍｕｎｓｈｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５，２１５６６〜２１５７１（２０００）に記載のＨＰＬＣ法に従って決定することができる。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８酵素活性を少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％阻害し得る。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７及び８である重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含む。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号９、１０及び１１である軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）及び３（ＬＣＤＲ３）の配列を含む。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。

配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む抗体と実質的に同一である抗体を、本発明の方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、使用することができる。本明細書で使用する「実質的に同一」という用語は、比較する２つの抗体重鎖又は軽鎖アミノ酸配列が同一であるか、又は「わずかな差異」しか有していないことを意味する。わずかな差異とは、抗体の特性に悪影響を及ぼさない、抗体重鎖又は軽鎖における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸の置換である。同一性パーセントは、例えば、ＶｅｃｔｏｒＮＴＩｖ．９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）のＡｌｉｇｎＸモジュールの初期設定を使用するペアワイズアライメントによって決定することができる。本発明のタンパク質配列を問い合わせ配列として使用して、例えば、近縁配列を特定するために公開データベース又は特許データベースでの検索を実行することができる。かかる検索を実行するために使用されるプログラム例は、初期設定を使用する、ＸＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴＰプログラム（ｈｔｔｐ＿／／ｗｗｗ＿ｎｃｂｉ＿ｎｌｍ／ｎｉｈ＿ｇｏｖ）、又はＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ（商標）（ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）スイートである。本発明の方法にて使用される抗ＣＤ３８抗体に対して行うことができる例示的な置換は、例えば、類似の電荷、疎水性又は立体化学的特性を有するアミノ酸による保存的置換である。また、保存的置換は、抗体特性、例えば安定性若しくは親和性を向上させるために、又は抗体エフェクター機能を向上させるために行うこともできる。１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を、例えば、抗ＣＤ３８抗体の重鎖又は軽鎖に対して行ってよい。更に、アラニンスキャニング変異導入法として先に記載されている通り、重鎖又は軽鎖内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる（ＭａｃＬｅｎｎａｎｅｔａｌ．，ＡｃｔａＰｈｙｓｉｏｌＳｃａｎｄＳｕｐｐｌ６４３：５５〜６７，１９９８；Ｓａｓａｋｉｅｔａｌ．，ＡｄｖＢｉｏｐｈｙｓ３５：１〜２４，１９９８）。当業者であれば、こうした置換が望ましい時点で、所望のアミノ酸置換を決定することができる。アミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲ変異導入（米国特許第４，６８３，１９５号）によって行うことができる。変異体のライブラリーは、周知の方法を用いて、例えば、ランダム（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えば、１１のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを用い、所望の特性を有する変異体についてライブラリーを選別することで作製することができる。作製された変異体を、本明細書に記載の方法を用いて、ＣＤ３８への結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ又はアポトーシスをインビトロで誘発する能力について、試験することができる。

いくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、二重特異性抗体である。既存の抗ＣＤ３８抗体のＶＬ及び／若しくはＶＨ領域、又は上記で新たに特定されたＶＬ及びＶＨ領域を操作して、二重特異性完全長抗体にしてもよい。このような二重特異性抗体は、２つの単一特異性抗体の重鎖間のＣＨ３相互作用を、二重特異性抗体を形成するように調節することによって行うことができ、米国特許第７，６９５，９３６号；国際公開第０４／１１１２３３号；米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号；米国特許出願公開第２００７／０２８７１７０号；国際公開第２００８／１１９３５３号；米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号；米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７４号；米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号；国際公開第２０１１／１３１７４６号；国際公開第２０１１／１４３５４５号；又は米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号に記載の技術などを用いて行うことができる。本発明の抗体のＶＬ及び／又はＶＨ領域に組み込むことができる更なる二重特異性構造は、例えば、二重可変ドメイン免疫グロブリン（国際公開第２００９／１３４７７６号）、又は異なる特異性を有する２つの抗体アームを接続する種々の二量化ドメイン、例えば、ロイシンジッパー又はコラーゲン二量化ドメインを含む構造（国際公開第２０１２／０２２８１１号、米国特許第５，９３２，４４８号；米国特許第６，８３３，４４１号）である。

本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、インビトロ抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節を誘発し、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、方法である。

シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせた抗ＣＤ３８抗体の治療レジメンは、ＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰの標準治療と比較して、インビボ腫瘍殺傷に相乗作用的効果をもたらすことができ、したがって、ＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰを単独で用いる場合と比較して、患者集団に利益をもたらすことができる。

本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発し、対象が、少なくとも１種類の化学療法薬、又は少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得している、方法を提供する。

本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発し、対象が、少なくとも１種類の化学療法薬、又は少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置を、副作用に起因して中断したことのある（原文「has discontinued」）、方法を提供する。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬による処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、イホスファミド、カルボプラチン又はエトポシドである。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬による処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）の組み合わせである。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬による処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、イホスファミド、カルボプラチン及びエトポシド（ＩＣＥ）の組み合わせである。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、ベルツズマブ、オクレリズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡ−１０１）、ＰＲＯ１３１９２又はオカラツズマブ（ＡＭＥ−１３３ｖ）である。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）の組み合わせであり、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、ベルツズマブ、オクレリズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡ−１０１）、ＰＲＯ１３１９２又はオカラツズマブ（ＡＭＥ−１３３ｖ）である。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、イホスファミド、カルボプラチン及びエトポシド（ＩＣＥ）の組み合わせであり、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、ベルツズマブ、オクレリズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡ−１０１）、ＰＲＯ１３１９２又はオカラツズマブ（ＡＭＥ−１３３ｖ）である。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）の組み合わせであり、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得しており、この少なくとも１種類の化学療法薬は、イホスファミド、カルボプラチン及びエトポシド（ＩＣＥ）の組み合わせであり、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。

対象が少なくとも１種類の化学療法薬又は少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか、耐性を持つようになったか又は耐性を持つ可能性があるかを判断するには、様々な定性的及び／又は定量的方法を用いることができる。耐性に関連し得る症状には、例えば、患者の健康状態の低下若しくは停滞、腫瘍サイズの増大、癌細胞数の増加、腫瘍若しくは腫瘍細胞の成長低下の停止若しくは鈍化、ある位置から他の器官、組織若しくは細胞への癌性細胞の体内における拡大が挙げられる。また、腫瘍に関連する種々の症状の再発又は悪化も、対象が少なくとも１種類の化学療法薬及び抗ＣＤ２０抗体に対する耐性を持つようになったか、又は耐性を持つ可能性があることの指標となり得る。癌に関連する症状は、癌の種類によって変化し得る。例えば、Ｂ細胞悪性疾患に関係する症状には、頸部、鼠径部若しくは腋窩のリンパ節腫脹、発熱、寝汗、咳嗽、胸痛、原因不明の体重減少、腹部の膨隆若しくは痛み、又は膨満感が含まれ得る。悪性リンパ腫における寛解は、Ｃｈｅｓｏｎ基準（Ｃｈｅｓｏｎｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２５：５７９〜５８６，２００７）を用いて標準化されており、このガイドラインを、対象が少なくとも１種類の化学療法薬又は少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせに対する耐性を持つようになったかどうかを判断するのに用いることができる。

米国一般名（ＵＳＡＮ）によって特定される抗体の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列は、通常は、米国医学会（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ａｍａ−ａｓｓｎ＿ｏｒｇ）により、又はＣＡＳ登録番号、又は国際一般名称（ＩＮＮ）（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｄｒｕｇｓ＿ｃｏｍ／ｉｎｎ＿ｈｔｍｌ）により利用可能である。

本明細書にて記載する本発明のいくつかの実施形態において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象は、ＣＤ１６の１５８位がフェニルアラニンのホモ接合型（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ遺伝子型）であるか、又はＣＤ１６の１５８位がバリンとフェニルアラニンのヘテロ接合型（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ遺伝子型）である。ＣＤ１６はまた、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）又は低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩＩ−Ａアイソフォームとしても知られている。ＦｃγＲＩＩＩａタンパク質の残基１５８位におけるバリン／フェニルアラニン（Ｖ／Ｆ）多型は、ヒトＩｇＧに対するＦｃγＲＩＩＩａの親和力に影響することが示されている。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ又はＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ多型を有する受容体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖと比較して、低いＦｃ結合を示し、したがって、低いＡＤＣＣを示す。ヒトＮ型オリゴ糖にフコースが存在しないか又は少量であると、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）に対する抗体の結合が向上することから、ＡＤＣＣを誘発する抗体の能力が向上する（Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜４０，２００２）。慣用的方法を用いて、患者をＦｃγＲＩＩＩａ多型について分析することができる。

本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発し、対象は、ＣＤ１６の１５８位がフェニルアラニンのホモ接合型であるか、又はＣＤ１６の１５８位がバリンとフェニルアラニンのヘテロ接合型である、方法を提供する。

投与／医薬組成物
本発明の方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、抗ＣＤ３８抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む、好適な医薬組成物で提供され得る。担体は、希釈剤、補助剤、賦形剤又はビヒクルであってよく、この担体とともに抗ＣＤ３８抗体を投与する。そのようなビヒクルは、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成物起源のものを含む、水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いることができる。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、通常の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近づけるために必要なｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤並びに着色剤などの薬学的に許容可能な補助物質を含んでよい。このような医薬製剤中の本発明の分子又は抗体の濃度は、大幅に異なってもよく、即ち、重量にして約０．５％未満から、通常は少なくとも約１％まで又は最大で１５％若しくは２０％まで異なってよく、選択される特定の投与方法に従って、必要とされる用量、流体の体積、粘度などに主に基づいて選択される。好適なビヒクル及び配合物（他のヒトタンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンを含む）については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２１^st Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，ＬｉｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ２００６，Ｐａｒｔ５，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｐｐ６９１〜１０９２に記載されており、特に、９５８〜９８９頁を参照されたい。

本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体の投与方法は、非経口的投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内若しくは皮下、経肺、経粘膜（口腔内、鼻腔内、膣内、直腸）又は当該技術分野において周知である、当事者によって認識されている他の手段などの好適な任意の経路であってよい。

本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、患者に、任意の好適な経路、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）注入若しくはボーラス注入による非経口投与、筋肉内又は皮下又は腹腔内により投与することができる。ｉ．ｖ．注入は、例えば１５、３０、６０、９０、１２０、１８０若しくは２４０分にわたって、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２時間投与することができる。

ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する患者に投与される用量は、処置対象の疾患を軽減するか又は少なくとも部分的に抑えるのに十分な量（「治療的有効量」）であり、場合により、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ若しくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ若しくは約２４ｍｇ／ｋｇ、又は例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０ｍｇ／ｋｇであってよいが、更に高い、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。

例えば、５０、１００、２００、５００又は１０００ｍｇの固定用量を投与してもよいし、患者の体表面積に基づいた用量、例えば、５００、４００、３００、２５０、２００又は１００ｍｇ／ｍ²であってもよい。ＣＤ３８陽性Ｂ細胞悪性疾患を処置するには、通常、１〜８回の用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７又は８回）が投与され得るが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０回又はそれ以上の用量が投与されてもよい。

本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月又はそれ以上の期間の後に繰り返すことができる。長期投与と同様に、治療コースを繰返し行うことも可能である。繰り返し投与は、同一用量で行ってもよいし、又は異なる用量で行ってもよい。例えば、本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体は、１週間間隔で８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇでの８週間の投与、続いて、２週間ごとに８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇでの更に１６週間の投与、続いて、４週間ごとに８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇでの投与を、静脈内注入により行うことができる。

抗ＣＤ３８抗体は、例えば、６ヶ月又はそれ以上の間、１週間に１回などの維持療法によって、本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、投与することができる。

例えば、本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０日のうちの少なくとも１日、あるいは処置開始後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０週又はこれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１週に、２４、１２、８、６、４若しくは２時間又はこれらの任意の組み合わせごとの単回用量又は分割用量を用いて、１日当たり約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｋｇの１日用量で提供され得る。

本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、癌の発症リスクの低減、癌の進行における事象の発現遅延、及び／又は癌が寛解したときの再発リスクの低減のために、予防的に投与することもできる。これは、他の生物学的要因から、存在することがわかっている腫瘍の位置を特定するのが困難である患者において、特に有用であり得る。

本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、保存のために凍結乾燥し、使用前に好適な担体で再構成されてもよい。この技術は、従来のタンパク質調製にて有効であることが示されており、周知の凍結乾燥及び再構成の技術を採用することができる。

本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することができる。

例えば、ＣＨＯＰ及びこれらの個々の成分を、Ｍｏｈａｒｈｍａｄｅｔａｌ．，Ｇｕｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２５：４９５０，２０００；ＭｃＫｅｌｖｅｙｅｔａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ１４８４〜１４９３；１９７６；Ａｒｍｉｔａｇｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２：８９８〜９０２，１９８４；Ｓｋｅｅｌ，Ｒ．Ｔ．，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＣａｎｃｅｒＧｌｉｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ＆Ｃｏ．，１９９１：３４３に記載の通りに投与することができる。典型的な投与経路は、腹腔内（ｉ．ｐ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）又は経口（ｐ．ｏ．）である。レジメンは、毎日、隔日、又は４日に１回のいずれかであり得る。ＣＨＯＰ構成成分の典型的な用量は、次の通りである。シクロホスファミド、最大３０ｍｇ／ｋｇの単回用量をｉ．ｖ．若しくはｉ．ｐ．又は２０ｍｇ／ｋｇを８日間毎日ｉ．ｖ．若しくはｉ．ｐ．；ドキソルビシン、最大６ｍｇ／ｋｇの単回用量をｉ．ｖ．若しくはｉ．ｐ．；ビンクリスチン、０．２〜０．５ｍｇ／ｋｇの単回用量をｉ．ｐ．若しくはｉ．ｖ．；プレドニゾン、最大１０ｍｇ／ｋｇ／日を単剤としてｐ．ｏ．。

例えば、ＣＨＯＰは、用量：シクロホスファミド３０ｍｇ／ｋｇ、ドキソルビシン２．５ｍｇ／ｋｇ、ビンクリスチン０．４ｍｇ／ｋｇ、プレドニゾン０．１５ｍｇ／ｋｇで投与することができる。ＣＨＯＰは、異なるサイクル数で２１日ごとに投与してもよい。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンは、ｉ．ｖ．注入で投与することができる。プレドニゾンは、各サイクルの開始時に５日間、経口により毎日摂取される錠剤として投与することができる。

本発明の方法において、また以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体及びＣＨＯＰの組み合わせは、任意の都合の良い時間枠にわたって投与することができる。例えば、抗ＣＤ３８抗体及びＣＨＯＰは、同じ日に、更に同じ静脈内注入で（プレドニゾンを除く）患者に投与することができる。しかしながら、抗ＣＤ３８抗体及びＣＨＯＰはまた、１日おき又は１週若しくは１ヶ月おきなどで投与してもよい。いくつかの方法において、抗ＣＤ３８抗体及びＣＨＯＰは、処置対象の患者中（例えば、血清中）に検出可能な濃度で同時に存在するように、時間的に十分近接するように投与され得る。いくつかの方法において、ある期間にわたる複数の投与回数からなる抗ＣＤ３８抗体での全処置コースの後に又は前に、複数の投与回数からなるＣＨＯＰでの処置コースが行われる。抗ＣＤ３８抗体の投与とＣＨＯＰの投与との間に、１日、２日若しくは数日間、又は１週間、２週間若しくは数週間の回復期間を用いてもよい。

本発明の方法及び以下に記載する付番した実施形態の各々のいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン及び抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ（Ｒ−ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することができる。

リツキシマブは、３７５ｍｇ／ｍ²の用量で静脈内注入として投与され得、４回又は８回の用量を週１回投与することができる。

抗ＣＤ３８抗体とＣＨＯＰの組み合わせは、体外照射療法、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）を含む任意の形態の放射線治療、ガンマナイフ、サイバーナイフ、Ｌｉｎａｃ及び組織内放射線療法（例えば、埋め込み放射性シード、ＧｌｉａＳｉｔｅバルーン）を含む任意の形態の放射線手術、並びに／又は手術と合わせて投与することができる。放射線治療は、巨大病変（約１０ｃｍを超える腫瘍サイズ）を有する患者、又は化学療法の候補にならない患者の緩和治療において、使用することができる。

本発明は一般論として記述されてきているが、本発明の実施形態は、特許請求の範囲を限定するように解釈されるべきではない以下の実施例で更に開示される。

本発明の更なる実施形態
本明細書に別途記載される開示に従った本発明の更なる特定の実施形態について、以下に記載する。本明細書にて開示する本発明に関して上記で述べた本発明の実施形態の特徴はまた、これらの更なる付番した実施形態の各々にも関連する。
１．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象の処置にて、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて使用するための抗ＣＤ３８抗体。
２．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象の処置にて、抗ＣＤ３８抗体と組み合わせて使用するためのシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）。
３．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象の処置にて使用するための抗ＣＤ３８抗体、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）の組み合わせ。
４．前記抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によるＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発し、好ましくは、前記抗ＣＤ３８抗体が、インビトロで、ＡＤＣＣ又はＣＤＣによるＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、実施形態１に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２に記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３に記載の組み合わせ。
５．前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、実施形態１若しくは４に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４に記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３若しくは４に記載の使用のための組み合わせ。
６．前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、実施形態１、４若しくは５に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４若しくは５に記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３、４若しくは５に記載の使用のための組み合わせ。
７．前記抗ＣＤ３８抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくとも１つのアミノ酸を含み、ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくとも１つのアミノ酸を含むエピトープに結合する、実施形態１若しくは４〜６のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜６のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜６のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
８．前記抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）内の少なくともＫＲＮを含み、ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）内の少なくともＶＱＬＴ（配列番号２０）を含むエピトープに結合する、実施形態７に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、ＣＨＯＰ又は組み合わせ。
９．前記抗ＣＤ３８抗体が、
（ｉ）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４のアイソタイプであり、
（ｉｉ）二分岐グリカン構造を有し、該二分岐グリカン構造のフコース含量が、約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％若しくは０％であり、
（ｉｉｉ）抗体Ｆｃにおいて、アミノ酸位２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８若しくは４３０（ここで、残基の番号付けは、ＥＵインデックスに従う）における置換を含み、かつ／又は
（ｉｖ）１×１０^-9以下、１×１０^-10以下、１×１０^-11以下、若しくは１×１０^-12以下の親和性でＣＤ３８に結合する、実施形態１若しくは４〜８のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜８のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜８のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１０．前記抗ＣＤ３８抗体が、
（ｉ）それぞれ配列番号６、７及び８である重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）及び３（ＨＣＤＲ３）配列、
（ｉｉ）それぞれ配列番号９、１０及び１１である軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含むか、
（ｉｉｉ）配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むか、
（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含むか、又は
（ｖ）配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む、実施形態１若しくは４〜９のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜９のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜９のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１１．前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）であり、特に、前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患がＤＬＢＣＬである、実施形態１若しくは４〜１０のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１０のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜１０のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１２．
（ｉ）前記対象が、少なくとも１種類の化学療法薬、若しくは少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか若しくは耐性を獲得しているか、かつ／又は
（ｉｉ）前記対象が、少なくとも１種類の化学療法薬若しくは少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置を、副作用に起因して中断したことのある、実施形態１若しくは４〜１１のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１１のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜１１のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１３．前記抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、ベルツズマブ、オクレリズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡ−１０１）、ＰＲＯ１３１９２又はオカラツズマブ（ＡＭＥ−１３３ｖ）であり、特に、前記抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブである、実施形態１２に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、ＣＨＯＰ又は組み合わせ。
１４．前記少なくとも１種類の化学療法薬が、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、イホスファミド、カルボプラチン又はエトポシドであり、任意選択的に、
（ｉ）前記少なくとも１種類の化学療法薬が、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）の組み合わせであるか、又は
（ｉｉ）前記少なくとも１種類の化学療法薬が、イホスファミド、カルボプラチン及びエトポシド（ＩＣＥ）の組み合わせである、実施形態１２又は１３に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、ＣＨＯＰ又は組み合わせ。
１５．前記抗ＣＤ３８抗体、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンが、同時に、連続的に又は個別に投与される、実施形態１若しくは４〜１４のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１４のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜１４のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１６．前記対象が、放射線治療により更に処置される、実施形態１若しくは４〜１５のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１５のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜１５のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１７．
（ｉ）前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ｉｉ）前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１であり、かつ
（ｉｉｉ）前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、ＤＬＢＣＬである、実施形態１若しくは４〜１６のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１６のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜１６のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。
１８．
（ｉ）前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ｉｉ）前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１であり、
（ｉｉｉ）前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、バーキットリンパ腫である、実施形態１若しくは４〜１６のいずれか１つに記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１６のいずれか１つに記載の使用のためのＣＨＯＰ、又は実施形態３〜１６のいずれか１つに記載の使用のための組み合わせ。

実施例１．患者由来非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）モデルにおけるダラツムマブ及びＣＨＯＰの併用療法
方法
ＳＴ１３６１は、転移性サンプルの採取前に化学療法を受けていない５８歳のラテンアメリカ系男性に由来するＮＨＬ−ＤＬＢＣＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）ＰＤＸ（患者由来異種移植）モデルである。患者は、切除の前に８サイクルのＲ−ＣＨＯＰ処置を受け、Ｒ−ＩＣＥ及びＲ−ＧＥＭＯＸの後続処置を受けていた。

腫瘍を、５〜８週齢の免疫不全マウスに移植した。腫瘍がおよそ１２５〜２５０ｍｍ³に達したとき（０日目）、動物を処置群及びコントロール群に無作為化し、投薬を０日目に開始した。ダラツムマブは、２０ｍｇ／ｋｇで、週１回、３週間投薬した。ＣＨＯＰ及びＲ−ＣＨＯＰは、以下に記載する濃度で、０日目に１回、投薬した。ＣＨＯＰ（シクロホスファミド：３０ｍｇ／ｋｇ；ドキソルビシン：２．５ｍｇ／ｋｇ；ビンクリスチン：０．４ｍｇ／ｋｇ）−ＩＶ、０日目；プレドニゾン：０．１５ｍｇ／ｋｇ、０〜４日目；Ｒ−ＣＨＯＰ：リツキシマブ２０ｍｇ／ｋｇ−ＩＰ、０日目。０日目から開始し、腫瘍体積をデジタルノギスにより週２回測定し、個々の腫瘍体積と平均推定腫瘍体積（平均ＴＶ±ＳＥＭ）を含むデータを各群について記録した。この研究は、コントロール群が終了するまでは腫瘍成長阻害を測定するために用い、その後は、ダラツムマブの効能継続期間を評価するための生存研究として継続した。

研究に関して、０日目から開始し、腫瘍寸法をデジタルノギスにより週２回測定し、個々の腫瘍体積と平均推定腫瘍体積（平均ＴＶ±ＳＥＭ）を含むデータを各群について記録した。腫瘍体積（ＴＶ）は、次式：ＴＶ＝短径²×長径×０．５２を用いて算出した。初期（ｉ）及び最終（ｆ）の腫瘍測定値を用い、次式：％ＴＧＩ＝１−Ｔ_f−Ｔ_i／Ｃ_f−Ｃによって、腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）の値を、各処置群（Ｔ）について、コントロール（Ｃ）に対して算出した。

結果
ＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブが、本患者由来腫瘍モデルＤＬＢＣＬにて極めて有効であった。３１日目に、ＣＨＯＰレジメン単独は腫瘍成長を約２７％遅延したが、ダラツムマブは腫瘍成長を約７１％阻害した。Ｒ−ＣＨＯＰは、より有効な治療であり、８２％の腫瘍成長阻害であった。ダラツムマブとＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰの組み合わせは、腫瘍退縮を示し、研究終了時までに、測定可能な腫瘍は、いずれの動物にもなかった。

％ＴＧＩ：腫瘍成長阻害率
３１日目以降では、ダラツムマブ＋ＣＨＯＰ及びダラツムマブ＋Ｒ−ＣＨＯＰでは動物の１００％が生存し、他の群は腫瘍進行により動物の死亡が見られた。図１Ａは、各処置群の経時的な腫瘍体積を示し、図１Ｂは、経時的な生存期間中央パーセントを示す。表１は、研究の３１日目までの％ＴＧＩを示す。０日目時点で、各群の腫瘍体積は、１４５〜１４６ｍｍ³であった。ダラツムマブ及びＣＨＯＰの組み合わせは、研究の開始から６０日目後でも、１００％ＴＧＩであった。

本研究では、ダラツムマブの有効性について、患者由来ＤＬＢＣＬモデルで評価した。この患者は、Ｒ−ＣＨＯＰによる処置を受け、最初はＲ−ＣＨＯＰに反応したが、疾患進行により後に死去した。本研究の目標は、ダラツムマブの追加により、ＤＬＢＣＬ患者に大きな利益が提供されるかどうかを判断することであった。ＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰにダラツムマブを加えると、単独療法（ダラツムマブ、ＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰ）と比較して、全ての動物で腫瘍退縮が生じたが、他の全ての群の動物は、疾患の負荷により死亡した。ダラツムマブとＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰの組み合わせは、相加効果を大きく超える腫瘍成長阻害を示した。

実施例２．バーキットリンパ腫におけるＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブの有効性
バーキットリンパ腫のモデルとして、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞を用いて、ダラツムマブ単独又はＣＨＯＰとの組み合わせの有効性を調べた。

方法
Ｎａｍａｌｗａ細胞を、ウシ胎児血清（１０％ｖ／ｖ）及びＬ−グルタミン（２ｍＭ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ₂の雰囲気下にて、インビトロで維持した。細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処置によって週に２回、常法により継代培養した。指数増殖相で増殖する細胞を回収して、腫瘍接種のために計数した。マウスに、マトリゲル（１：１）を含むＰＢＳ０．１ｍＬ中の２×１０⁵個のＮａｍａｌｗａ細胞を皮下注入し、平均腫瘍サイズが１８９ｍｍ³に達したら、処置を開始した。腫瘍細胞接種の日を０日目と表す。主なエンドポイントは、腫瘍成長を遅延することができたか、又は腫瘍担持マウスが治ったかどうかが認められることとした。腫瘍サイズを週２回測定し、％ＴＧＩ値を実施例１に記載の通り算出した。

結果
動物を４つの処置群に分け、ビヒクル（アイソタイプコントロール）、ダラツムマブ、ＣＨＯＰ又はＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブを、表２に記載する用量で投与した。

ｎ：動物数
ｉ．ｐ：腹腔内注入
ｉ．ｖ．静脈内注入
ｐ．ｏ．経口投与
ＱＤ：毎日投与
ＱＷ：週１回
ＣＴＸ：シクロホスファミド

図２は、バーキットリンパ腫のＮＡＭＡＬＷＡモデルにおけるダラツムマブ単独又はＣＨＯＰとの組み合わせの有効性の結果を示す。腫瘍接種後の異なる時間点での種々の処置群における腫瘍サイズの低減（腫瘍体積として測定）を図２に示す。ビヒクル群（群１）の平均腫瘍サイズは、腫瘍接種後２６日目で、４，２８１ｍｍ³に達した。ダラツムマブ１０ｍｇ／ｋｇ、ＣＨＯＰ及びＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブ１０ｍｇ／ｋｇでの処置は、腫瘍接種後２６日目で、それぞれ腫瘍サイズにおける有意な抗腫瘍活性をもたらした。平均腫瘍サイズは、３，０１７ｍｍ³（Ｔ／Ｃ値＝７０．４６％、ｐ値＜０．００１）、３，３０４ｍｍ³（Ｔ／Ｃ値＝７７．１７％、ｐ値＝０．００３）及び２，３０３ｍｍ³（Ｔ／Ｃ値＝５３．７９％、ｐ値＜０．００１）であり、同時に、２，３０３ｍｍ³の腫瘍サイズでの腫瘍成長遅延は、それぞれ２日、１日及び４日であった。

実施例３．非ホジキンリンパ腫におけるＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブの有効性
ＳＵ−ＤＨＬ−６細胞株をベースにしたＮＨＬ−ＤＬＢＣＬモデルを用いて、ダラツムマブ単独又はＣＨＯＰとの組み合わせの有効性を調べた。

方法
ＳＵ−ＤＨＬ−６細胞を、２０％ウシ胎児血清（ｖ／ｖ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ₂の雰囲気下にて、インビトロで個別に維持した。細胞を、週に２回、常法により継代培養した。指数増殖相で増殖する細胞を回収して、腫瘍接種のために計数した。注入の２４時間前に、ＮＯＤＳＣＩＤマウスをγ線照射した（２００ラド）。各マウスに、マトリゲル（１：１）を含むＰＢＳ０．１ｍＬ中のＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍細胞（５×１０⁶個）を右側腹部に、腫瘍発生のために皮下接種した。腫瘍サイズがおよそ１５４ｍｍ³に達したら、処置を開始した。腫瘍細胞接種の日を０日目と表す。腫瘍サイズを週２回測定し、％ＴＧＩ値を実施例１に記載の通り算出した。

動物を４つの処置群に分け、ビヒクル、ダラツムマブ、ＣＨＯＰ又はＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブを、表３に記載する用量で投与した。

腫瘍接種後の異なる時間点での種々の群における腫瘍サイズの結果を図３に示す。ビヒクル群（群１）の平均腫瘍サイズは、腫瘍接種後３２日目で、４，２８１ｍｍ³に達した。ダラツムマブ１０ｍｇ／ｋｇ及びＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブ１０ｍｇ／ｋｇでの処置は、腫瘍接種後３２日目で、それぞれ腫瘍サイズにおける有意な抗腫瘍活性をもたらした。平均腫瘍サイズは、１，９４６ｍｍ³（Ｔ／Ｃ値＝４５．４５％、ｐ値＝０．００６）及び１，６１１ｍｍ³（Ｔ／Ｃ値＝３７．６２％、ｐ値＝０．００２）であり、同時に、１，５００ｍｍ³の腫瘍サイズでの腫瘍成長遅延は、それぞれ３日及び３．５日であった。ＣＨＯＰでの処置は、ビヒクル群と比較して腫瘍サイズを低減することができたが、その低減は、有意差に至らなかった。

実施例４．ＣＨＯＰ又はＲ−ＣＨＯＰと組み合わせたダラツムマブでの連続又は同時療法は、患者由来非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）モデルにおいて有効性をもたらす。
ダラツムマブ単独又はＣＨＯＰ若しくはＲ−ＣＨＯＰとの組み合わせの有効性について、患者由来ＤＬＢＣＬ腫瘍モデルＳＴ１３６１への同時又は連続投与を用い、実施例１に記載の方法に従って、評価した。

動物を各処置群に分け、表４に示す通りに投薬を行った。ダラツムマブ及びＲ−ＣＨＯＰは、０日又は７日間隔で、同時に投与した。

ｎ：動物数
ｉ．ｐ：腹腔内注入
ｉ．ｖ．静脈内注入
ｐ．ｏ．経口投与
ＱＤ：毎日投与
ＱＷ：週１回投与
Ｄ０＝０日目における投与
Ｄ０−４＝ｄ０〜ｄ４日目における１日１回の投与

結果
図４は、研究の４５日目までの処置応答における腫瘍成長曲線の結果を示す。ビヒクルコントロール群における腫瘍は、平均腫瘍体積が１７日目までに２１３４ｍｍ³に達した。ダラツムマブ＋ＣＨＯＰ群における腫瘍は、平均腫瘍体積が４５日目までに９６ｍｍ³に退縮した。０日目にダラツムマブ及びＲ−ＣＨＯＰで同時に処置した動物（群４）における腫瘍は、４５日目までに完全に退縮した。０日目にＲ−ＣＨＯＰ、続いて７日目にダラツムマブで処置した動物（群５）における腫瘍は、９９８ｍｍ³の平均腫瘍体積を示した。０日目にダラツムマブ、続いて７日目にＲ−ＣＨＯＰで処置した腫瘍（群６）は、６３３ｍｍ³の平均腫瘍体積を示した。研究を最大１０１日目まで続けた。０日目にダラツムマブ及びＲ−ＣＨＯＰで同時に処置した動物（群４）は、更に１０１日目までに完全に退縮した。

Claims

ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を処置する方法であって、必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与することを含み、該抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス又はＣＤ３８酵素活性のインビトロ調節によりＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する、方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、インビトロでＡＤＣＣ又はＣＤＣによる前記ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、請求項１に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のアイソタイプである、請求項２に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、二分岐グリカン構造を有し、該二分岐グリカン構造のフコース含量が、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又は０％である、請求項３に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、抗体Ｆｃにおいて、アミノ酸位２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８又は４３０（ここで、残基の番号付けは、ＥＵインデックスに従う）における置換を含む、請求項３に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と、ＣＤ３８への結合に関して競合する、請求項１に記載の方法。
前記抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）のＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ領域（配列番号２）及びＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ領域（配列番号３）に結合する、請求項６に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号６、７及び８である重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含む、請求項７に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号９、１０及び１１である軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含む、請求項８に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項９に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む、請求項１に記載の方法。
前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、請求項１に記載の方法。
前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、ＤＬＢＣＬである、請求項１３に記載の方法。
前記対象が、少なくとも１種類の化学療法薬、又は少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置に対して、耐性があるか又は耐性を獲得している、請求項１３に記載の方法。
前記対象が、少なくとも１種類の化学療法薬、又は少なくとも１種類の化学療法薬と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせによる処置を、副作用に起因して中断したことのある、請求項１３に記載の方法。
前記抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、ベルツズマブ、オクレリズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡ−１０１）、ＰＲＯ１３１９２又はオカラツズマブ（ＡＭＥ−１３３ｖ）である、請求項１５又は１６に記載の方法。
前記抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブである、請求項１７に記載の方法。
前記少なくとも１種類の化学療法薬が、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、イホスファミド、カルボプラチン又はエトポシドである、請求項１５又は１６に記載の方法。
前記少なくとも１種類の化学療法薬が、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）の組み合わせである、請求項１９に記載の方法。
前記少なくとも１種類の化学療法薬が、イホスファミド、カルボプラチン及びエトポシド（ＩＣＥ）の組み合わせである、請求項１９に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンが、同時に、連続的に又は個別に投与される、請求項１に記載の方法。
前記患者が、放射線治療により更に処置される、請求項１に記載の方法。