JP2017505773A - 血液悪性腫瘍を処置するための抗ｌａｇ−３抗体 - Google Patents

Abstract

抗ＬＡＧ−３抗体を使用する、血液悪性腫瘍、例えば再発性または難治性慢性リンパ性白血病またはリンパ腫の臨床処置のための方法が提供される。特定の悪性腫瘍は、例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む。

Description

関連出願に対する相互参照
本願は、２０１４年１月２８日に出願された米国仮特許出願第６１／９３２，５８９号の優先権を主張する。この内容は、その全体が本願明細書に組み込まれる。

リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３；ＣＤ２２３）は、活性化ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞ならびにＮＫ細胞および樹状細胞のサブセットの細胞表面上に発現するＩ型膜貫通タンパク質である（Triebel F, et al., J. Exp. Med. 1990; 171:1393-1405；Workman CJ, et al., J. Immunol. 2009; 182(4):1885-91）。ＬＡＧ−３は、ヘルパーＴ細胞の活性化のための共受容体であるＣＤ４と密接に関連する。両分子は４個の細胞外Ｉｇ様ドメインを有し、その機能的活性のために、そのリガンドである主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩへの結合を必要とする。ＣＤ４とは対照的に、ＬＡＧ−３は活性化Ｔ細胞の細胞表面上にのみ発現し、細胞表面からのその切断はＬＡＧ−３シグナル伝達を終結させる。ＬＡＧ−３はまた、可溶性タンパク質としても見出されるが、ＭＨＣクラスＩＩに結合せず、その機能は不明である。

ＬＡＧ−３は調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）活性の促進ならびにＴ細胞の活性化および増殖の負の調節において重要な役割を果たすと報告されている（Workman CJ, et al., J. Immunol. 2005; 174:688-695）。天然のＴｒｅｇと誘導されたＴｒｅｇとは両方とも、ＬＡＧ−３の発現が上昇しており、これは、Ｔｒｅｇが抑制機能を最大限発揮するために必要である（Camisaschi C, et al., J. Immunol. 2010; 184:6545-6551およびHuang CT, et al., Immunity. 2004; 21:503-513）。さらに、ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞上でのＬＡＧ−３の異所性発現はその増殖能力を低下させ、それらに第三者のＴ細胞(third party T cells)に対する調節能を付与した（Huang CT, et al., Immunity. 2004; 21:503-513）。また、最近の研究により、消耗したリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞上での高いＬＡＧ−３発現がその不応答状態に寄与し、ＣＤ８^＋Ｔ細胞抗腫瘍応答を制限することも示された（Blackburn SD, et al., Nat. Immunol. 2009; 10:29-37およびGrosso JF, et al., J. Clin. Invest. 2007; 117:3383-3392）。事実、ＬＡＧ−３は、２つのマウスモデルにおいて、ＣＤ８^＋Ｔ細胞に対する直接効果により、自己および腫瘍抗原に対する寛容を維持した（Grosso JF, et al., J. Clin. Invest. 2007; 117:3383-3392）。

エプスタイン−バー・ウイルス感染は、血液悪性腫瘍においてＴ細胞枯渇の可能性のある誘導に考慮されるさらに別の因子である。ＥＢＶ関連ＣＬＬ、Ｒｉｃｈｔｅｒ症候群、およびリンパ腫症例はＥＢＶ（−）対応物よりも通常さらに侵襲性であることが知られている（Tsimberidou AM, et al., Leuk Lymphoma 2006;47:827; Ansell SM, et al., Am J Hematol 1999;60:99.; Dolcetti R, et al., Infectious Agents and Cancer 2010;5:22; Kanakry JA, et al., Blood 2013;121:3547）。興味深いことに、ＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３のようなチェックポイント阻害剤の発現もまた、ＥＢＶ関連悪性腫瘍において示されている（Green MR, et al., Clin Cancer Res 2012;18:1611; Monti S, et al., Blood 2005;105:1851）。ＬＡＧ−３の高発現は、実際に、慢性ウイルス感染において示されており、抗ＬＡＧ−３抗体でのその遮断は、マウスモデルにおいてウイルス力価およびチェックポイント阻害剤の発現を減少させることができる（Blackburn SD, et al., Nat. Immunol. 2009;10:29-37）。さらに、ＬＡＧ−３発現は、単独または他のマーカーと組み合わせて、ＣＬＬおよびホジキンリンパ腫において予後または予測マーカーとして評価されている（Zhang J, et al., BMC Bioinformatics 2010;11(Suppl 9):S5; Kotaskova J, et al., J Mol Diagn 2010;12(3):328-334）。新たなデータは、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）および末梢血におけるＬＡＧ−３発現が血液悪性腫瘍においてＴ細胞枯渇を媒介するということを示す（Dickinson JD, et al., Leuk Lymphoma 2006;47(2):231-44）。さらに、特異的抗体でのＬＡＧ−３遮断は、白血病（Berrien-Elliott, M, et al., Cancer Research 2013; 73(2):605-616）および固形腫瘍モデル（Woo, S-R, et al., Cancer Research 2011; 72(4):917-927; Goding, S. R., et al., Journal of Immunology, Baltimore, Md. 1950; 190(9):4899-909）において抗腫瘍活性を示す。したがって、ＬＡＧ−３は、血液悪性腫瘍における治療標的である。抗ＬＡＧ−３抗体単独または標準治療（例えば、イブルチニブ、レナリドミド）もしくは他のチェックポイント阻害剤（例えば、ニボルマブ）と組み合わせてのその遮断は、臨床試験においてさらなる検査をする価値がある。

したがって、本願発明の課題は、抗ＬＡＧ−３免疫療法を使用して血液悪性腫瘍を有する対象を処置するための改善された方法を提供することである。

ヒト患者における悪性腫瘍、特に血液悪性腫瘍（例えば、骨髄性またはリンパ球細胞系に由来する悪性腫瘍、例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）を処置するための方法であって、患者に、抗ＬＡＧ−３抗体を投与することを含み、抗体が特定の臨床投与レジメンに従って（すなわち、特定の用量で、特定の投薬スケジュールに従って）投与される（または投与のためのものである）、方法が本願明細書で提供される。一実施形態においては、ヒト患者は、再発性または難治性慢性リンパ性白血病またはリンパ腫、例えば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に罹患している。

例示的な抗ＬＡＧ−３抗体は、それぞれ配列番号１および配列番号２に記載の配列を有する重鎖および軽鎖を含むＢＭＳ−９８６０１６、またはその抗原結合断片および変異体である（例えば、ＷＯ２０１４／００８２１８参照）。他の実施形態においては、抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６の重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変領域（ＶＲ）を含む。したがって、一実施形態においては、抗体は、配列番号３に記載の配列を有するＢＭＳ−９８６０１６の重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有するＢＭＳ−９８６０１６の軽鎖可変（ＶＬ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態においては、抗体は、それぞれ配列番号７、８および９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む。別の実施形態においては、抗体は、それぞれ配列番号３および／または配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ領域を有する。別の実施形態においては、抗体は、それぞれ配列番号４および／または配列番号６に記載の核酸配列によりコードされるＶＨおよび／またはＶＬ領域を含む。別の実施形態においては、抗体は、上記の抗体と同じＬＡＧ−３上のエピトープとの結合について競合する、および／またはそれに結合する。別の実施形態においては、抗体は、上記の抗体との少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、配列番号３または配列番号５との少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性）を有する。

したがって、一態様において、ヒト患者における再発性または難治性慢性リンパ性白血病およびリンパ腫（例えば、ＣＬＬ、ＨＬ、またはＮＨＬ）を処置する方法であって、患者に、配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＬＡＧ−３抗体の有効量を投与することを含み、少なくとも１投与サイクルを含み、サイクルが８週間であり、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が２０、８０、２４０または８００ｍｇの用量で投与される、方法が提供される。別の実施形態においては、４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が、約０．０３、０．２５、１または３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、
（ａ）２０ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｂ）８０ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｃ）２４０ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体；または
（ｄ）８００ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体
の用量で投与される。

別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、
（ａ）０．０３ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｂ）０．０３ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｃ）０．２５ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体体；
（ｄ）１ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体；または
（ｅ）３ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体
の用量で投与される。

一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体の用量は、ｍｇ／ｋｇ体重あたりで算出される。別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体の用量は、一律固定用量である。別の実施形態においては、中間用量のＬＡＧ−３抗体が用いられる。例えば、抗ＬＡＧ−３抗体を、０．４ｍｇ／ｋｇで投与することができる。別の実施形態においては、投与レジメンは、最適な望ましい応答（例えば、有効応答）を提供するように調整される。

別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、各サイクルの１、１５、２９および４３日目に投与される。別の実施形態においては、処置は、最大で１２サイクルからなる。

一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、第一選択（「最前線」）処置（例えば、初回または第１の処置）として投与される。別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、第二選択処置（例えば、再発後および／または第１の処置が失敗した場合を含め、同じまたは異なる治療剤を用いる初回処置の後）として投与される。抗ＬＡＧ−３抗体を、任意の好適な手段によって対象に投与することができる。一実施形態においては、抗体は、静脈内投与のために製剤化されている。

本願明細書に提供される処置方法の効能を、任意の好適な手段を用いて評価することができる。一実施形態においては、処置は、少なくとも１つの治療効果、例えば、経時的な悪性細胞数の減少、完全な応答、部分的な応答、および安定疾患をもたらす。

また、本願明細書に記載の方法における使用のために適合させた治療有効量の、ＢＭＳ−９８６０１６などの抗ＬＡＧ−３抗体、および薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を含むキットも提供される。一実施形態においては、キットは、
（ａ）配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む１用量の抗ＬＡＧ−３抗体；ならびに
（ｂ）本願発明の方法において抗ＬＡＧ−３抗体を使用するための説明書
を含む。

別の態様において、少なくとも１サイクルにおいて投与するための、配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＬＡＧ−３抗体であって、各サイクルについて、４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が２０、８０、２４０または８００ｍｇの用量で投与される、抗ＬＡＧ−３抗体が提供される。別の実施形態においては、４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が０．０３、０．２５、１または３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

図１は、第Ｉ相臨床試験の部分を例示する略図である。 図２は、臨床試験のスクリーニング、処置、臨床追跡、および生存追跡フェーズを例示する略図である。 図３は、バイオマーカーサンプリングスケジュールを例示する表である。 図４は、ＮＳＣＬＣ細胞においてＬＡＧ−３のＩＨＣ分析の結果を示す。 図５は、胃癌細胞においてＬＡＧ−３のＩＨＣ分析の結果を示す。 図６は、黒色腫細胞において、腫瘍切片において他の全ての細胞型に対する、ＬＡＧ−３陽性細胞のパーセントを比較するグラフである。 図７は、ＮＳＣＬＣ細胞において、腫瘍切片において他の全ての細胞型に対する、ＬＡＧ−３陽性細胞のパーセントを比較するグラフである。 図８は、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）細胞において、腫瘍切片において他の全ての細胞型に対する、ＬＡＧ−３陽性細胞のパーセントを比較するグラフである。 図９は、胃癌細胞において、腫瘍切片において他の全ての細胞型に対する、ＬＡＧ−３陽性細胞のパーセントを比較するグラフである。 図１０は、頭頸部扁平上皮癌細胞において、腫瘍切片において他の全ての細胞型に対する、ＬＡＧ−３陽性細胞のパーセントを比較するグラフである。 図１１は、非ホジキンリンパ腫細胞のＬＡＧ−３光学顕微鏡分析に基づく、腫瘍切片において他の全ての細胞型に対する、リンパ球細胞（腫瘍細胞およびＴＩＬＳ）においてＬＡＧ−３陽性細胞のパーセントを要約する表である。 図１２は、ＮＨＬおよびＤＢＬＣＬ細胞においてＬＡＧ−３のＩＨＣ分析の結果を示す；（Ａ）低倍率表示および（Ｂ）高倍率表示。 図１３は、ＮＨＬおよびＦＬ細胞においてＬＡＧ−３のＩＨＣ分析の結果を示す；（Ａ）低倍率表示および（Ｂ）高倍率表示。 図１４は、ＮＨＬ、ＴＭＡ、およびＣＬＬ細胞においてＬＡＧ−３のＩＨＣ分析の結果を示す；（Ａ）低倍率表示および（Ｂ）高倍率表示。

詳細な説明
Ｉ．定義
本願明細書で用いられる用語「対象」または「患者」は、ヒト癌患者（例えば、進行難治性固形腫瘍などの進行固形腫瘍を有する患者）である。

本願明細書で用いられる「血液悪性腫瘍」は、血液、骨髄、および／またはリンパ節に及ぼす癌のタイプを指す。かかる悪性腫瘍は、悪性細胞または癌性細胞によって特徴付けられ、２つの主な血球系、すなわち、骨髄細胞系（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する）またはリンパ球細胞系（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび形質細胞を産生する）のいずれかに由来する。これらの癌は、全てのタイプの白血病、リンパ腫、および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ球および／または骨髄性白血病、例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（Ｍ０）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟にて）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（好酸球増多にてＭ４またはＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫、および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後のリンパ増殖性疾患、組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、バーキットリンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉腫またはセザリー症候群とも呼ばれる）、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症を有するリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫(light chain myeloma)、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、および多発性骨髄腫を含む。本願発明の方法を使用して処置され得る特定の癌は、例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む。

本願明細書で用いられる場合、「有効処置」とは、有益な効果、例えば、疾患または障害の少なくとも１つの症状の改善をもたらす処置を指す。有益な効果は、ベースラインと比較した改善、すなわち、前記方法による療法の開始前に行われた測定または観察と比較した改善の形態を取ってもよい。有益な効果はまた、血液悪性腫瘍のマーカーの有害な進行の停止、減速、遅延、または安定化の形態を取ってもよい。有効処置は、血液悪性腫瘍の少なくとも１つの症状の軽減を指してもよい。そのような有効処置は、例えば、患者の疼痛を軽減する、悪性細胞のサイズおよび／もしくは数を減少させる、悪性細胞の転移を減少させるか、もしくは防止する、ならびに／または悪性細胞増殖を減速させてもよい。

用語「有効量」とは、所望の生物学的、治療的、および／または予防的結果を提供する薬剤の量を指す。その結果は、疾患の兆候、症状、もしくは原因のうちの１つもしくは複数の減少、改善、緩和、低下、遅延化、および／もしくは軽減、または生物学的システムの任意の他の所望の変化であってもよい。血液悪性腫瘍を参照すると、有効量は、悪性細胞の増殖速度を低下させる（悪性腫瘍の進行を抑制するなど）、または他の望ましくない悪性細胞増殖を防止するか、もしくは遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの実施形態においては、有効量は、悪性細胞の発達を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態においては、有効量は、悪性細胞の再発を防止するか、または遅延させるのに十分な量である。有効量を、１回または複数回の投与において投与することができる。薬物または組成物の有効量は、（ｉ）悪性細胞の数を減少させる；（ｉｉ）悪性細胞浸潤をある程度阻害する、遅延させる、減速させる、および停止させ得る；（ｉｉｉ）悪性細胞転移を阻害する（すなわち、ある程度減速させる、および停止させ得る）；（ｉｖ）悪性細胞の出現および／もしくは再発を防止する、もしくは遅延させる；ならびに／または（ｖｉｉ）悪性腫瘍と関連する１つもしくは複数の症状をある程度緩和することができる。一例においては、「有効量」は、悪性腫瘍の有意な減少または悪性腫瘍の進行、例えば悪性細胞の数の増加の減速に影響することが臨床的に証明された、抗ＬＡＧ−３抗体の量である。本願明細書で用いられる用語「固定用量」、「一律用量」および「一律固定用量」は互換的に用いられ、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）とは無関係に患者に投与される用量を指す。固定または一律用量は、したがって、ｍｇ／ｋｇ用量としてではなく、むしろ絶対量の薬剤（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体）として提供される。

本願明細書で用いられる場合、「体表面積（ＢＳＡ）に基づく用量」とは、個々の患者の体表面積（ＢＳＡ）に対して調整される用量（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体の）を指す。ＢＳＡに基づく用量を、ｍｇ／ｋｇ体重として提供することができる。直接測定することなくＢＳＡに達するための様々な計算が公開されており、最も広く用いられるものはＤｕ Ｂｏｉｓの式である(Du Bois, EF, Arch. Intern. Medicine 1916; 17:863-871; and Verbraecken J, et al., Metabolism − Clinical and Experimental 2006;55(4): 515-24)。他の例示的なＢＳＡ式としては、Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒの式（Mosteller, et al., N. Engl. J. Med. 1987; 317:1098)、Ｈａｙｃｏｃｋの式（Haycock, et al., J. Pediatr. 1978; 93:62-66）、ＧｅｈａｎおよびＧｅｏｒｇｅの式（Gehan, et al., Cancer Chemother. Rep. 1970, 54:225-235）、Ｂｏｙｄの式（Current JD, The Internet Journal of Anesthesiology 1998, 2(2); and Boyd, Edith (1935), University of Minnesota. The Institute of Child Welfare, Monograph Series, No. x. London: Oxford University Press）、Ｆｕｊｉｍｏｔｏの式（Fujimoto S, et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50）、Ｔａｋａｈｉｒａの式（Fujimoto S, et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50）、およびＳｃｈｌｉｃｈの式（Schlich E, et al., Ernaehrungs Umschau 2010;57:178-183）が挙げられる。

用語「抗体」は、少なくとも１つの抗体由来抗原結合部位（例えば、ＶＨ／ＶＬ領域またはＦｖ、またはＣＤＲ）を含むポリペプチドを記述する。抗体としては、公知の形態の抗体が挙げられる。例えば、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二特異的抗体、またはキメラ抗体であってもよい。抗体はまた、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、ナノボディ、またはドメイン抗体であってもよい。抗体はまた、以下のアイソタイプのいずれかのものであってもよい：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ。抗体は、天然の抗体であってもよく、または変化した（例えば、突然変異、欠失、置換、非抗体部分へのコンジュゲーションにより）抗体であってもよい。例えば、抗体は、抗体の特性（例えば、機能特性）を変化させる１種または複数種のアミノ酸変異体（天然抗体と比較した）を含んでもよい。例えば、いくつかのそのような変化が当技術分野で公知であり、例えば、患者中での抗体の半減期、エフェクター機能、および／または免疫応答に影響する。抗体という用語はまた、少なくとも１つの抗体由来抗原結合部位を含む人工ポリペプチドコンストラクトも含む。

用語「ＬＡＧ−３」とは、リンパ球活性化遺伝子−３を指す。用語「ＬＡＧ−３」は、変異体、アイソフォーム、ホモログ、オルトログおよびパラログを含む。例えば、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的な抗体は、ある特定の場合、ヒト以外の種に由来するＬＡＧ−３タンパク質と交差反応することができる。他の実施形態においては、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的な抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に対して完全に特異的であってよく、種もしくは他の型の交差反応性を示さないか、ある特定の他の種に由来するＬＡＧ−３と交差反応するが、他の全ての種に由来するＬＡＧ−３とは交差反応しなくてもよい（例えば、サルＬＡＧ−３とは交差反応するが、マウスＬＡＧ−３とは交差反応しない）。用語「ヒトＬＡＧ−３」とは、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７（配列番号１３）を有するヒトＬＡＧ−３の完全アミノ酸配列などの、ヒトＬＡＧ−３配列を指す。用語「マウスＬＡＧ−３」とは、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３２５０５を有するマウスＬＡＧ−３の完全アミノ酸配列などの、マウスＬＡＧ−３配列を指す。ＬＡＧ−３は、例えば、ＣＤ２２３としても当技術分野で公知である。ヒトＬＡＧ−３配列は、例えば、保存された突然変異または非保存領域中の突然変異を有することによってＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ−３とは異なってもよく、ＬＡＧ−３はＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ−３と実質的に同じ生物学的機能を有する。例えば、ヒトＬＡＧ−３の生物学的機能は、本開示の抗体により特異的に結合されるＬＡＧ−３の細胞外ドメイン中のエピトープを有することであるか、またはヒトＬＡＧ−３の生物学的機能は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することである。

用語「サルＬＡＧ−３」は、限定されるものではないが、カニクイザルＬＡＧ−３およびアカゲザルＬＡＧ−３などの、旧世界および新世界サルにより発現されるＬＡＧ−３タンパク質を包含することが意図される。サルＬＡＧ−３の代表的なアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＸＭ＿００１１０８９２３としても寄託されるアカゲザルＬＡＧ−３アミノ酸配列である。サルＬＡＧ−３の別の代表的なアミノ酸配列は、ＵＳ２０１１／０１５０８９２Ａ１に記載のクローンｐａ２３−５の代替的なアカゲザル配列である。この代替的アカゲザル配列は、Ｇｅｎｂａｎｋに寄託された配列と比較して、４１９位に単一のアミノ酸の相違を示す。

特定のヒトＬＡＧ−３配列は一般に、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ−３とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種（例えば、マウス）のＬＡＧ−３アミノ酸配列と比較した場合、ヒトであるとアミノ酸配列を同定するアミノ酸残基を含有する。ある特定の場合、ヒトＬＡＧ−３は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７のＬＡＧ−３とアミノ酸配列において少なくとも９５％、またはさらには少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であってもよい。ある特定の実施形態においては、ヒトＬＡＧ−３配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７のＬＡＧ−３配列とは１０個以下のアミノ酸の相違を示す。ある特定の実施形態においては、ヒトＬＡＧ−３は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７のＬＡＧ−３配列とは５個以下、またはさらには４、３、２個以下、もしくは１個のアミノ酸の相違を示してもよい。同一性パーセントは、本願明細書に記載のように決定することができる。

ＩＩ．抗ＬＡＧ−３抗体
本願発明における使用にとって好適な抗ヒトＬＡＧ−３抗体（またはそれから誘導されるＶＨ／ＶＬドメイン）を、当技術分野で周知の方法を用いて産生することができる。あるいは、当技術分野で認識される抗ＬＡＧ−３抗体を使用することができる。例えば、モノクローナル抗体２５Ｆ７と呼ばれる（「２５Ｆ７」および「ＬＡＧ３．１」としても知られる）、ＵＳ２０１１／０１５０８９２Ａ１（その教示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗ヒトＬＡＧ−３抗体を使用することができる。使用することができる他の当技術分野で認識される抗ＬＡＧ−３抗体としては、ＵＳ２０１１／００７０２３（その教示も参照により本願明細書に組み込まれる）に記載のＩＭＰ７３１が挙げられる。

ＬＡＧ−３への結合について上記で参照された当技術分野で認識される抗体のいずれかと競合する抗体を使用することもできる。

例示的な抗ＬＡＧ−３抗体は、ＷＯ２０１４／００８２１８（その教示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載された、それぞれ配列番号１および配列番号２に示される配列を含む重鎖および軽鎖を含むＢＭＳ−９８６０１６、またはその抗原結合断片および変異体である。

他の実施形態においては、抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を有する。したがって、一実施形態においては、抗体は、配列番号３に記載の配列を有するＢＭＳ−９８６０１６のＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有するＢＭＳ−９８６０１６のＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態においては、抗体は、それぞれ配列番号７、８および９に記載の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態においては、抗体は、それぞれ配列番号３および／または配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ領域を含む。別の実施形態においては、抗体は、それぞれ配列番号４および／または配列番号６に記載の核酸配列によりコードされる重鎖可変（ＶＨ）および／または軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。別の実施形態においては、抗体は、上記の抗体と同じＬＡＧ−３上のエピトープと結合について競合する、および／またはそれに結合する。別の実施形態においては、抗体は、アミノ酸配列ＰＧＨＰＬＡＰＧ（配列番号１４）を含むヒトＬＡＧ−３のエピトープに結合する。別の実施形態においては、抗体は、アミノ酸配列ＨＰＡＡＰＳＳＷ（配列番号１５）またはＰＡＡＰＳＳＷＧ（配列番号１６）を含むヒトＬＡＧ−３のエピトープに結合する。

別の実施形態においては、抗体は、上記の抗体との少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、配列番号３または配列番号５との少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性）を有する。

ＩＩＩ．医薬組成物
ヒト患者への投与にとって好適な医薬組成物は、典型的には、非経口投与のために、例えば、液体担体中で製剤化されるか、または静脈内投与のための液体溶液もしくは懸濁液中での復元にとって好適である。

一般に、そのような組成物は、典型的には、薬学的に許容される担体を含む。本願明細書で用いられる用語「薬学的に許容される」は、政府の規制当局により認可されるか、または米国薬局方もしくは動物、特に、ヒトにおける使用のための別の一般的に認識される薬局方に列挙されることを意味する。用語「担体」とは、化合物が一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、または媒体を指す。そのような医薬担体は、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油、グリセロールポリエチレングリコールシリノール酸などの、石油、動物、植物または合成起源のものを含む、水および油などの滅菌液体であってもよい。水または水性溶液塩水および水性デキストロースおよびグリセロール溶液を、特に、注射溶液（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体を含む）のための担体として用いることができる。非経口投与のための液体組成物を、注射または連続輸注による投与のために製剤化することができる。注射または輸注による投与経路としては、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内および皮下が挙げられる。一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は静脈内投与される。

ＩＶ．患者集団
本願明細書で提供されるのは、抗ＬＡＧ−３抗体を用いてヒト患者における血液悪性腫瘍（例えば、再発性または難治性慢性リンパ性白血病またはリンパ腫）を処置するための臨床方法である。

本願発明の方法を用いて処置することができる癌の例としては、２つの主な血球系、すなわち、骨髄細胞系（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する）またはリンパ球細胞系（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび形質細胞を産生する）のいずれかに由来する血液悪性腫瘍を含む。これらの癌は、全てのタイプの白血病、リンパ腫、および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ球および／または骨髄性白血病、例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（Ｍ０）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟にて）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（好酸球増多にてＭ４またはＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫、および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後のリンパ増殖性疾患、組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、バーキットリンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉腫またはセザリー症候群とも呼ばれる）、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症を有するリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫(light chain myeloma)、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、および多発性骨髄腫を含む。本願発明の方法を使用して処置され得る特定の癌は、例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む。

一実施形態においては、ヒト患者は、再発性または難治性慢性リンパ性白血病またはリンパ腫に罹患している。特定の態様において、ヒト患者は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に罹患している。

処置の前、間、または後に、１つまたは複数の上記の臨床属性について、患者を試験または選択することができる。

Ｖ．処置プロトコール
ヒト患者における血液悪性腫瘍を処置するための好適な処置プロトコールは、例えば、
配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＬＡＧ−３抗体、
の有効量を患者に投与することを含み、
前記方法は少なくとも１投与サイクルを含み、サイクルは８週間であり、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、少なくとも４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が約１、３、１０、２０、５０、８０、１００、１３０、１５０、１８０、２００、２４０、２８０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０または８００ｍｇの一律用量で投与される。別の実施形態においては、４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が、０．０１、０．０３、０．２５、０．１、０．３、１または３、５、８または１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、
（ａ）２０ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｂ）８０ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｃ）２４０ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体；または
（ｄ）８００ｍｇの抗ＬＡＧ−３抗体
の用量で投与される。

別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、
（ａ）０．３ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｂ）０．２５ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体；
（ｃ）１ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体；または
（ｄ）３ｍｇ／ｋｇの抗ＬＡＧ−３抗体
の用量で投与される。

一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体の用量は、体重あたり、例えば、ｍｇ／ｋｇ体重で算出される。別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体の用量は、一律固定用量である。別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体の用量は、経時的に変化する。例えば、抗ＬＡＧ−３抗体を高用量で初期投与し、経時的に低下させることができる。別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は低用量で初期投与され、経時的に増加される。

別の実施形態においては、投与される抗ＬＡＧ−３抗体の量は、各用量について一定である。別の実施形態においては、投与される抗体の量は、各用量と共に変化する。例えば、抗体の維持（または継続）用量は、最初に投与される負荷用量より高いか、またはそれと同じであってもよい。別の実施形態においては、抗体の維持用量は、負荷用量より低いか、またはそれと同じであってもよい。

別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、静脈内投与のために製剤化されている。一実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、各サイクルの１、１５、２９および４３日目に投与される。

他の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、週に１回、２週間に１回または３週間に１回、月に１回または臨床利益が観察される限り、または完全な応答、確認される進行性疾患もしくは管理不能な毒性が存在するまで投与される。

別の実施形態においては、投与のサイクルは８週間であり、必要に応じて、繰り返すことができる。別の実施形態においては、処置は、最大で１２サイクルからなる。

別の実施形態においては、８週のサイクルあたり４用量の抗ＬＡＧ−３抗体が投与される。

別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、第一選択の処置（例えば、初期または最初の処置）として投与される。別の実施形態においては、抗ＬＡＧ−３抗体は、第二選択の処置（例えば、再発後および／または第１の処置が失敗した場合などの、初期または最初の処置の後）として投与される。

ＶＩ．転帰
療法に対する応答は、以下の基準を含んでもよい：
2007 INTERNATIONAL WORKING GROUP (IWG) RESPONSE CRITERIA FOR MALIGNANT LYMPHOMA (Cheson, BD, et al. J Clin Oncol. 2007; 25:579)

キー：ＣＲ＝完全寛解、ＣＴ＝コンピュータ断層撮影；ＦＤＧ＝［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース；ＩＷＧ＝国際ワーキンググループ；ＮＡ＝適用せず；ＰＤ＝進行性疾患；ＰＥＴ＝ポジトロン放出断層撮影；ＰＲ＝部分的寛解；ＳＤ＝安定疾患；ＳＰＤ＝直径積和

2008 INTERNATIONAL WORKING GROUP (IWG) RESPONSE CRITERIA FOR CLL WITH MODIFICATIONS (Hallek M, et al., Blood. 2008;111(12):5446-5456)

本願明細書に開示される方法に従って処置される患者は、悪性腫瘍の少なくとも１つの兆候の改善を経験するのが好ましい。一実施形態においては、改善は悪性細胞の数の減少により測定される。別の実施形態においては、完全血球算定および／または血液塗抹標本を用いて、療法に対する応答性を評価することができる。別の実施形態においては、リンパ節由来の生検および／または骨髄生検を用いて、療法に対する応答性を評価することができる。

一実施形態においては、処置される患者は、完全応答（ＣＲ）、部分的応答（ＰＲ）、安定疾患（ＳＤ）、免疫関連完全疾患（ｉｒＣＲ）、免疫関連部分的応答（ｉｒＰＲ）、または免疫関連安定疾患（ｉｒＳＤ）を示す。別の実施形態においては、処置される患者は、悪性細胞の増殖速度の低下、すなわち、悪性細胞増殖の抑制を経験する。別の実施形態においては、悪性細胞の再発を防止するか、または遅延させることができる；癌と関連する１つまたは複数の症状をある程度緩和することができる。

他の実施形態においては、本願明細書に提供されるいずれかの方法による抗ＬＡＧ−３抗体の有効量の投与は、腫瘍サイズの減少、経時的に出現する悪性細胞の数の減少、完全寛解、部分的寛解、または安定疾患からなる群から選択される少なくとも１つの治療効果をもたらす。さらに他の実施形態においては、処置方法は、別の治療レジメンと比較して抗ＬＡＧ−３抗体によって達成されるものよりも良好な相当な臨床利益率（ＣＢＲ＝ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ≧６カ月）をもたらす。他の実施形態においては、臨床利益率の改善は、別の治療レジメンと比較して約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％以上である。

ＶＩＩ．キットおよび単位剤形
また、前記方法における使用のために適合化された治療有効量で、ＢＭＳ−９８６０１６などの抗ＬＡＧ−３抗体および薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を含むキットも提供される。キットはまた、施術者（例えば、医師、看護師、または患者）が、癌（例えば、固形腫瘍）を有する患者に対し、キットの中に含有される組成物を投与することができるように、適宜、例えば、投与スケジュールを含む説明書を含んでもよい。キットはまた、注射筒を含んでもよい。

キットは、上記で提供された方法に従う単回投与のための有効量の抗ＬＡＧ−３抗体をそれぞれ含有する単回用量の医薬組成物の複数のパッケージを含んでもよい。医薬組成物を投与するのに必要な機器またはデバイスを、キット中に含めることもできる。例えば、キットは、ある量の抗ＬＡＧ−３抗体を含有する１つまたは複数の予め充填された注射筒を提供することができる。

一実施形態においては、本願発明は、ヒト患者における血液悪性腫瘍を処置するためのキットであって、
（ａ）配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む１用量の抗ＬＡＧ−３抗体；ならびに
（ｂ）本願明細書に記載の方法および臨床投与レジメンのいずれかにおいて抗ＬＡＧ−３抗体を使用するための説明書
を含む前記キットを提供する。

多くの変更および等価物が本開示を読む際に当業者には明らかとなるため、以下の実施例は単に例示的なものであり、いかなる意味でも本開示の範囲を限定すると解釈されるべきではない。

本出願を通して引用される全ての参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ登録、特許および公開特許出願の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

実施例１：抗ＬＡＧ−３抗体（ＢＭＳ−９８６０１６）の前臨床薬理
抗ＬＡＧ−３抗体、ＢＭＳ−９８６０１６
ＢＭＳ−９８６０１６は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する免疫化トランスジェニックマウスから単離されたヒトＬＡＧ−３に特異的な完全ヒト抗体である。ＢＭＳ−９８６０１６はＩｇＧ４アイソタイプ抗体として発現し、このアイソタイプ抗体は、抗体または補体の媒介により標的細胞を死滅させてしまう可能性を低減または排除するために、Ｆｃ受容体結合を減弱させる安定化ヒンジ突然変異（Ｓ２２８Ｐ）を含む。ＢＭＳ−９８６０１６の重鎖および軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１および配列番号２に示される。

組換えヒトＬＡＧ−３抗原に結合するＢＭＳ−９８６０１６の能力を、Ｂｉａｃｏｒｅおよび酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて決定した。ヒトおよび霊長類ＬＡＧ−３＋トランスフェクタントならびに活性化されたヒトまたは霊長類Ｔ細胞への結合を、フローサイトメトリーおよびＳｃａｔｃｈａｒｄ分析を用いて測定した。ＢＭＳ−９８６０１６は、高い親和性（Ｋ_Ｄ＝０．１２〜０．５ｎＭ）でヒトＬＡＧ−３に結合し、そのリガンドであるＭＨＣクラスＩＩを発現する細胞へのＬＡＧ−３の結合を阻害する（ＩＣ５０、０．６７ｎＭ）。ＢＭＳ−９８６０１６は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞および活性化されたカニクイザルＴ細胞上のカニクイザルＬＡＧ−３に、活性化されたヒトＴ細胞に対するよりも低い親和性（ＥＣ５０、２１．５〜３４．３ｎＭ）で結合する。第２の共刺激の非存在下で、高濃度のＢＭＳ−９８６０１６は、培養されたヒト末梢血液細胞から測定可能なサイトカイン応答を惹起せず、この薬物は標的細胞の測定可能な抗体依存的または補体依存的な死滅も媒介しない。ＢＭＳ−９８６０１６は、ＭＨＣクラスＩＩ陽性抗原提示細胞との共培養物中でヒトＬＡＧ−３を発現する抗原特異的マウスＴ細胞ハイブリドーマの活性化を促進する。さらに、ＢＭＳ−９８６０１６は、単独で、またはニボルマブ（抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせて添加した場合、スーパー抗原刺激アッセイにおいてヒトＴ細胞の活性化を増強する。

実施例２：抗ＬＡＧ−３抗体（ＢＭＳ−９８６０１６）の毒性
以下の前臨床毒性試験を実施した：

Ａ．ＢＭＳ−９８６０１６およびニボルマブを用い、６週間の回復を伴う、カニクイザルにおける４週の静脈内投与によるＧＬＰ準拠組合せ毒性試験
ＢＭＳ−９８６０１６での単剤処置に関する結果は以下の通りであった：

１．最大で１００ｍｇ／ｋｇ／週で投与された単剤ＢＭＳ−９８６０１６は、有害な変化をもたらさなかった。

２．単剤ＢＭＳ−９８６０１６に関するＮＯＡＥＬは、１００ｍｇ／ｋｇ／週（平均ＡＵＣ［０−１６８ｈ］＝４７４，０００μｇ・ｈ／ｍＬ）であると考えられた。投与される用量（１００ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９８６０１６）は、本試験について提唱される最大用量よりも１０倍以上高い。

Ｂ．ＢＭＳ−９８６０１６を用いるヒトおよび選択されたカニクイザルの組織におけるＧＬＰ準拠組織交差反応性試験
交差反応性に関する結果は以下の通りであった：

１．ＢＭＳ−９８６０１６−ＦＩＴＣによる陽性染色が、以下のヒト組織において観察された：膀胱、血液細胞、結腸−大腸、眼、食道、小腸、胃、腎臓、肺、リンパ節、胎盤、唾液腺、皮膚、脾臓、胸腺、扁桃腺、子宮頸部、および子宮内膜の単核白血球；ならびに骨髄の造血細胞の細胞膜または細胞膜顆粒。さらに、ＢＭＳ−９８６０１６−ＦＩＴＣによる染色が、ヒト下垂体内分泌細胞上皮の細胞質において観察された。評価したカニクイザル組織の限られたパネル内で、ＢＭＳ−９８６０１６−ＦＩＴＣによる染色が、脾臓の単核白血球の原形質膜または原形質膜顆粒において観察された。

２．正常なヒトリンパ系組織（リンパ節、扁桃腺、脾臓、胸腺、骨髄および粘膜関連リンパ系組織）の胚中心および毛包間Ｔ細胞領域中の、リンパ球の形態および分布を有するＬＡＧ−３発現細胞の科学的報告（Huard, et al., Immunogenetics 1994; 39(3):213-217）に関して、この試験における（ヒトおよびカニクイザル組織における）ＢＭＳ−９８６０１６−ＦＩＴＣによる単核白血球および造血細胞の染色が予測された。

３．ＬＡＧ−３ ｍＲＮＡがヒト下垂体中で発現し、ＬＡＧ３．１−Ｇ４Ｐ−ＦＩＴＣ染色がパイロット組織交差反応性試験におけるヒト下垂体の下垂体前葉において観察されたことを考慮すれば、ヒト下垂体内分泌細胞上皮細胞質および細胞質顆粒のＢＭＳ−９８６０１６−ＦＩＴＣ染色も予測された。ＢＭＳ−９８６０１６はインビボで細胞質コンパートメントへのアクセスを有するとは予想されず、サルにおける反復用量毒性試験は下垂体に対する効果を示さなかったが、これらの所見は臨床的に意義があるものであり得、モニタリングされ得る。

Ｃ．ヒト末梢血単核細胞を用いるＢＭＳ−９８６０１６に関するインビトロでのサイトカイン放出およびリンパ球活性化の評価
インビトロでのサイトカイン放出およびリンパ球活性化の評価に関する結果は以下の通りであった：

１．ＢＭＳ−９８６０１６は、濃度、ドナー、またはインキュベーション時間とは無関係にヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に提示された場合、サイトカイン放出を誘導しなかった。観察されたサイトカインのレベルは、定量化のアッセイ下限にあったか、またはその近辺にあり、ドナー間で用量依存性またはパターンの証拠はなく（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、およびＩＦＮ−γ）、または一般には、陰性対照と共にインキュベートされたＰＢＭＣからのサイトカインレベルと重複していた（ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α）。

２．サイトカイン放出の欠如と一致して、ＢＭＳ−９８６０１６が、ＣＤ２５およびＣＤ６９の表面発現により測定された場合、ＴまたはＮＫ細胞活性化を誘導する証拠はなかった。ＢＭＳ−９８６０１６による刺激後のＴおよびＮＫ細胞上でのこれらのマーカーの発現レベルは、陰性対照による刺激時に観察されるものと類似していた。

全体として、これらのデータは、ＢＭＳ−９８６０１６がＴもしくはＮＫ細胞活性化またはサイトカイン放出を誘導するアゴニスト能力を有さないことを示している。

実施例３：抗ＬＡＧ−３抗体（ＢＭＳ−９８６０１６）の前臨床代謝および薬物動態
バイオテクノロジー由来医薬品に関する規制ガイドライン（ICH Harmonised Tripartite Guideline, S6(R1) Preclinical Safety Evaluation of Biotechnology-Derived Pharmaceuticals. International Conference on Harmonisation, 2011）に従って、ＢＭＳ−９８６０１６に関する代謝試験は動物において行わなかった。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の予想されるインビボでの分解は、シトクロムＰ４５０酵素とは無関係である生化学経路による小ペプチドおよびアミノ酸までである。

ＢＭＳ−９８６０１６は、カニクイザルにおいて好ましい薬物動態（ＰＫ）特性を示した。単回用量と反復用量のＩＶ ＰＫ試験の両方から、ＢＭＳ−９８６０１６は双指数関数的に崩壊し、曝露はほぼ用量比例的であった。全身クリアランス（ＣＬＴｐ）は０．１２〜０．２２ｍＬ／ｈ／ｋｇであり、終末相半減期（Ｔ−ＨＡＬＦ）は１３３〜４１４時間であった。定常状態での分布容量（Ｖｓｓ）は６２〜７２ｍＬ／ｋｇであったが、これは、血漿外での分布が限定的であることを示唆している。抗ＢＭＳ−９８６０１６抗体は数匹のサルにおいて検出されたが、抗ＢＭＳ−９８６０１６抗体の存在はＢＭＳ−９８６０１６曝露に対する影響を有さないと考えられた。

実施例４：再発性または難治性ＣＬＬおよびリンパ腫を有する患者における第１相試験
抗ＬＡＧ−３抗体（ＢＭＳ−９８６０１６）の第１相試験は、処置としてＢＭＳ−９８６０１６を投与する効能を証明するために再発性または難治性ＣＬＬおよびリンパ腫を有する患者において行われる。

これは、再発性または難治性ＣＬＬおよびリンパ腫を有する対象に、単剤として投与されるＢＭＳ−９８６０１６の第１相、オープンラベル試験である。試験は２つのパートで行われる。パートＡは、再発性または難治性ＣＬＬ、ＨＬおよびＮＨＬを有する対象において３＋３＋３の用量漸増設計からなる。パートＢは、それぞれ約１２人の対象の４つの疾患に限定された集団におけるコホート拡大からなる（図１）。パートＢにおける処置は、パートＡに関するＭＴＤ（またはＭＴＤが確立されない場合、ＭＡＤ）が決定された場合に開始される。

対象は３つまでの期間の試験を完了する：スクリーニング（２８日まで）、処置（最大１２回の８週サイクルの試験療法まで）、および臨床追跡（試験薬物の最後の投与後１３５日；効能シグナルが明らかである場合、選択された事例においてはより長い追跡期間を考えることもできる）。ＷＯＣＢＰは、家庭用検査薬による妊娠判定のための１６５日にわたるさらなる追跡評価を有する。

処置期間は、最大１２回の８週処置サイクルからなる。それぞれの処置サイクルは、１、１５、２９および４３日目に投与される、４用量のＢＭＳ−９８６０１６を含む。対象に、（１）中止に関する基準を満たす、（２）１２回の８週サイクルの最大数の完了、（３）進行性疾患（ＰＤ）の確認、または（４）臨床的悪化のいずれかの最初の発生まで試験療法を継続させる。処置を中止する対象は１３５日の臨床追跡期間に入る（図２）。

身体検査、バイタルサイン測定、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、パルスオキシメトリ、および臨床検査値評価を、投薬間隔を通して選択された時点で実施する。対象を、試験を通してＡＥについて密接にモニタリングする。血液を、薬物動態（ＰＫ）分析のために試験薬物投与の開始後に採取する。

対象に、最大で１２回の８週サイクルにわたって、ＰＤの確認、または本願明細書に記載されている中止基準を満たすまで、療法を継続させる。対象は、２８日のスクリーニング期間、最大で１２回の８週サイクルの処置、および１３５日の臨床追跡期間を含む、合計で最大約２．３年にわたって試験中であってもよい。試験の合計持続期間は、最初の対象の最初の訪問時から、登録した最後の対象の必要な生存追跡まで約４．３年であると予想される。

パートＡ：用量漸増
パートＡにおいては、３＋３＋３の設計を用いて、ＢＭＳ−９８６０１６の安全性を評価する。用量漸増中の投与量を、図１および表１（以下に記載される）に示す。３人の対象を、各用量コホートにおいて最初に処置する；用量コホート１において、最初の３人の対象を、監視対象と指定し、少なくとも５日間隔で処置を開始する。その後のコホートにおける対象は、処置開始日と５日間隔で観察する必要はない。

用量漸増は、医学的にモニタリングする人および治験担当医によって決定されるとき、ＤＬＴ評価間隔中経験されるＤＬＴの数に基づく。ＤＬＴ評価間隔は、処置の最初の日に開始し、最初のサイクルの８週、すなわち５６日にわたって続ける。

パートＡにおける用量漸増は以下のように進行する：
−最初の３人の評価可能対象のうちの０人が用量コホートにおいてＤＬＴ評価間隔内でＤＬＴを経験する場合、次の３人の対象を次により高い用量コホートで処置する。
−最初の３人の評価可能対象のうちの１人がコホートにおいてＤＬＴ評価間隔内でＤＬＴを経験する場合、３人のさらなる対象をその用量コホートにおいて処置される。
−最初の６人の評価可能対象のうちの１人以下がＤＬＴ評価間隔中でＤＬＴを経験する場合、次の３人の対象を次により高い用量コホートで登録する。
−最初の６人の評価可能対象のうちの２人がコホート内でＤＬＴを経験する場合、そのコホートを９人の評価可能対象に拡大する。
−最初の３人の評価可能対象のうちの２人以上、最初の６人の評価可能対象のうちの３人以上、または最初の９人の評価可能対象のうちの３人以上がコホート内でＤＬＴ評価間隔中にＤＬＴを経験する場合、その用量レベルはＭＴＤを超え、用量漸増が決定される。

パートＢ：コホート拡大
コホート拡大の目的は、ＢＭＳ−９８６０１６に関するさらなる安全性、忍容性、予備効能、ＰＫ、および薬力学情報を集積することである。パートＢのために選択される用量はパートＡにおけるＭＴＤ（またはＭＴＤが決定されない場合、ＭＡＤ）を超えなくてよく、パートＡにおいて評価された用量における中間の用量であってよく、パートＡおよびＢからの遅延毒性およびＰＫおよび薬力学データを含む他のデータの評価を含んでもよい。パートＢにおいて評価された用量の選択について情報を与えるための補助として、モデリングを用いてもよい。

４つの拡大コホートは（以下に示される）図１および表２に列挙される腫瘍型に限定される。毒性事象の連続評価を、拡大コホートにおける登録を通して評価する。任意の時点で、ＤＬＴ基準を満たす処置関連毒性の統合率がパートＢのコホート拡大において処置される全対象にわたって３３％を超える場合、調査結果を医学的にモニタリングする人および治験担当医で議論する；さらなる登録は中断され得る。毒性の性質および等級に応じて、ならびにリスク：利益比を評価した後、全コホートに関する用量または選択されたコホートに関する用量を低下させてもよい。

^ａパートＢにおける全ての対象は、抗ＣＤ２０、アレムツズマブ、またはブレンツキシマブ抗体治療を除けば、例えば抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＫＩＲ、抗ＣＤ１３７、および／または抗ＯＸ４０抗体に限定はしないが、免疫細胞調節抗体レジメン（ＩＣＭＡＲ）にナイーブ(naive)である

用量制限毒性
パートＡにおける用量漸増に関する決定を指導する目的のために、試験処置と関連すると考えられる有害事象（ＡＥ）の発生率、強度、および持続期間に基づいて用量制限毒性（ＤＬＴ）を決定する。ＤＬＴ評価間隔は、処置の最初の日に開始し、最初のサイクルの５６日（すなわち、８週）にわたって続ける。有害事象の重篤度は、National Cancer Institute (NCI) Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE) v4.0に従って等級付けられる。対象の管理のために、起こるサイクルにかかわらず、ＤＬＴ基準を満たすＡＥが、用量妨害につながる。

用量漸増は、医学的にモニタリングする人および治験担当医によって決定されるとき、ＤＬＴ評価間隔中経験されるＤＬＴの数に基づく。対象内用量漸増は許されていない。８週評価間隔中少なくとも１用量の試験薬物を受ける対象は、ＤＬＴ決定に関して評価可能と考えられる。ＤＬＴ以外の理由のためにＤＬＴ評価間隔中に試験から離脱するおよび／または安全性データが全体のＤＬＴ評価間隔のために利用できない対象を、同じ用量レベルで置き換えることができる。ＤＬＴ評価間隔中に予定された訪問時に輸注を投与することができない場合、それをできるだけ早く投与しなければならない。遅延が１〜７日である場合、元の予定された訪問時の手順を実施するべきであり、対象はＤＬＴ決定のために評価可能であると考えられる。遅延が７日を超える場合、投与されなかったと考えられ、置き換えられない。７日を超える遅延を有する対象はＤＬＴ決定のために評価可能と考えられない。評価不可能な対象を、同じ用量レベルで置き換えることができる。

試験期間
対象に、最大で１２回の８週サイクルにわたって、ＰＤの確認、もしくは中止基準を満たすまで、療法を継続させる。対象は、２８日のスクリーニング期間、最大で１２回の８週サイクルの処置、１３５日の臨床追跡期間、およびＷＯＣＢＰについて、１６５日にわたるさらなる家庭用検査薬による妊娠判定を含む、合計で最大約２．３年にわたって試験中であってもよい。試験の合計持続期間は、最初の対象の最初の訪問時から、登録した最後の対象の必要な生存追跡まで約４．３年であると予想される。

対象の数
約８４人の対象に投与し得る（用量漸増中約３６人の対象およびコホート拡大において最大４８人の対象）。

試験集団
以前の処置後に再発されるまたは以前の処置に対して難治性であり、全ての組み入れ基準を満たす、ＣＬＬ、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫（Ｔ細胞およびＢ細胞リンパ腫を含む）の組織学的または細胞学的確認を有する男性および女性対象は、参加するために適格である。

用量漸増（パートＡ）
再発性または難治性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する成人対象は適格である．

コホート拡大（パートＢ）
４つの疾患限定群は、表２（上記）によってコホート拡大中に許容される

パートＡおよびＢ
好中球数は７５０／μＬより多く、血小板数は５０，０００／μＬより多くなければならない。原発性皮膚リンパ腫、原発性免疫不全と関連するリンパ増殖性疾患、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染と関連するリンパ腫を有する対象は除外される。自己免疫疾患を有する対象も除外される。

女性は授乳または妊娠であってはならない。ＷＯＣＢＰは試験投薬の最初の投与を受ける前の２４時間以内に陰性の妊娠試験を有さなければならない。ＷＯＣＢＰは被験薬の最終投与の後、合計２４週間（３０日間＋被験薬を５半減期受けるのに必要とされる時間（すなわち、合計１６５日または２４週）にわたって避妊の方法に関する指示書に従うことに同意しなければならない。

ＷＯＣＢＰと性的に活発である男性は、被験薬の最終投与の後、合計３３週間（９０日間＋被験薬を５半減期受けるのに必要とされる時間（すなわち、合計２２５日または３３週）にわたってＡｐｐｅｎｄｉｘ３における情報に基づいて避妊方法に関する説明書に従うことに同意しなければならない。

肝臓、非血液学的、および血液学的ＤＬＴは、以下に概略されるように別々に定義される。

１．肝臓ＤＬＴ
以下の薬物関連事象はいずれも肝臓ＤＬＴと考えられる：
・持続期間にかかわらず、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）＞８ｘＵＬＮ
・医学的介入にもかかわらず２週間以内に等級１以下に戻ることができない、ＡＬＴもしくはＡＳＴ＞５ｘおよび≦８ｘＵＬＮ
・総ビリルビン＞５×ＵＬＮ
・ＡＬＴもしくはＡＳＴ＞３ｘＵＬＮおよび同時的総ビリルビン＞２ｘＵＬＮ。

２．非血液学的ＤＬＴ
以下の薬物関連事象はいずれも非血液学的ＤＬＴと考えられる：
・全身的処置を要する等級２の眼疼痛または視力低下
・局所療法に応答せず、局所療法の開始の２週間以内に等級１まで改善しない、等級２の眼疼痛もしくは視力低下
・以下に記載のものを除く等級３以上の非肝臓もしくは非血液学的毒性。

以下の等級３の非血液学的事象はＤＬＴと考えない：
・７２時間未満続く、臨床的に悪化していない、および自発的に解消する、または従来の医学的介入に応答する等級３の電解質異常
・膵炎の症状、臨床症状もしくはＸ線像の証拠と関連しないアミラーゼまたはリパーゼの等級３の増加
・４８時間未満続く、および自発的に、または従来の医学的介入により等級１以下に解消する、等級３の悪心または嘔吐
・７２時間未満続く、および血行動態の悪化（低血圧、または末端臓器かん流障害の臨床的もしくは実験室的証拠を含む）と関連しない、等級３の発熱
・等級３の腫瘍フレア（既知の腫瘍または疑われる腫瘍の部位に局在する疼痛、刺激、または発疹と定義される）
・７日未満の等級３の疲労。

３．血液学的ＤＬＴの定義
以下の薬物関連事象はいずれも血液学的ＤＬＴと考えられる：
・等級４の貧血
・任意の持続期間の等級４の発熱性好中球減少症
・顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の開始の５日以内に等級３以下に解消しない等級４好中球減少症
・血小板輸血または＜１０，０００／μＬの血小板数
・臨床的に意義のある出血と関連する等級３の血小板減少症
・等級３の溶血
・ベースラインで≦等級１の貧血を有する対象における等級３の貧血。

８週評価間隔中少なくとも１用量の試験薬物を受ける対象は、ＤＬＴ決定に関して評価可能と考えられる。ＤＬＴ評価間隔中に予定された訪問時に試験薬物を投与することができない場合、それをできるだけ早く投与しなければならない。遅延が１〜７日である場合、元の予定された訪問時の手順を実施するべきであり、対象はＤＬＴ決定のために評価可能であると考えられる。遅延が７日を超える場合、投与されなかったと考えられ、置き換えられない。７日を超える遅延を有する対象はＤＬＴ決定のために評価可能と考えられない。評価不可能な対象を、同じ用量レベルで置き換えることができる。ＤＬＴ評価期間中に投与し損ねた対象は、他の点で対象恒久的中止の基準を満たさないとき、処置を続けてもよい。

試験対象患者基準
１．署名されたインフォームドコンセント
対象は、標準治療の一部とは考えられないいずれの試験関連手順の実施の前にも、ＩＲＢ／ＩＥＣに認可されたインフォームドコンセント文書に署名し、日付を記入しなければならない。

生検試料のための同意：
（ｉ）対象は、実施される処置前の腫瘍生検（例えば、リンパ節）を可能にすることに同意しなければならない（全ての対象）。処置前の腫瘍生検が臨床的に実行可能でないとき、対象は、保存される腫瘍試料（例えば、原発性腫瘍、リンパ節など）の獲得を可能にすることに同意しなければならない。新鮮な処置前の腫瘍生検または保存される腫瘍試料を提供することができない対象は適格ではない。処置前の生検により得られる組織の量または質が不十分な対象はこれだけに基づいて不適格とはならない。

（ｉｉ）対象は、実施される（全ての対象）、および、臨床的に示されるとき、完全応答（ＣＲ）、部分的応答（ＰＲ）または進行性疾患（ＰＤ）での処置での処置前の片側骨髄生検および／または穿刺液を可能にすることに同意しなければならない。これらの最後の治療の完了のため骨髄生検および／または穿刺液を有した対象は、必要なベースライン骨髄生検の代わりにそれらの結果を使用しないかもしれない。

２．標的集団
（ａ）対象は、慢性リンパ性白血病、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫の組織学的または細胞学的確認を行わなければならず、以前の処置後に再発または以前の処置に対して難治性を有さなければならない。
（ｂ）パートＡ 用量漸増：
（ｉ）慢性リンパ球性リンパ腫
（ｉｉ）ホジキンリンパ腫
（ｉｉｉ）非ホジキンリンパ腫
（ｃ）パートＢ コホート拡大
（ｉ）慢性リンパ性白血病
（ｉｉ）びまん性大Ｂ細胞リンパ腫
（ｉｉｉ）マントル細胞リンパ腫
（ｉｖ）ホジキンリンパ腫
（ｖ）多発性骨髄腫

（ｄ）対象は、リンパ腫（Cheson et al., J. Clin. Oncol. 2007;25(5):579-586）およびＣＬＬ（Hallek et al., Blood 2008;111(12)5446-5456）応答基準により定義されるとき、１．５ｃｍより大きい少なくとも１つの測定可能な病変を有さなければならない。測定可能と考えられる腫瘍部位は、以前に放射線療法受けていてはいけない。

（ｅ）抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、抗ＫＩＲ、抗ＣＤ１３７または抗ＯＸ４０抗体などの免疫細胞調節性抗体レジメン（ＩＣＭＡＲ）に以前に曝露されていない対象のみが許容される。以前の抗ＣＤ２０、アレムツズマブ、またはブレンツキシマブ抗体治療が許容される。

（ｆ）対象は、進行しているか、または照射、免疫療法、細胞毒性化学療法、および選択的抗体（抗ＣＤ２０、アレムツズマブまたはブレンツキシマブ）治療を含む少なくとも１つの以前の標準治療に対して難治性でなければならない。以下は、別系統の処置と考えない：進行中のレジメンへの化合物の追加、休薬期間後の同じレジメンの再開始、またはＩＶから経口療法への切替え。

（ｇ）対象は、延命または救命であることが知られている移植または任意の標準治療に適していない。（延命または救命であることが知られている移植または任意の標準治療に適しており、延命または救命であることが知られている移植または任意の標準治療を辞退している対象は、試験に適している。

（ｈ）対象は自己移植後１００日以上でなければならない
（ｉ）０または１の米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）状態
（ｊ）治験担当医評価によってインフォームドコンセントの時点で１０週以上の平均余命

（ｋ）以下により定義される十分な臓器機能：
（ｉ）５００／μＬ以上の好中球（最初の試験薬物投与の１週以内であれば、増殖因子なしでも安定）
（ｉｉ）５０ｘ１０^３／μＬ以上の血小板（このレベルを達成するための輸注は最初の試験薬物投与の２週間以内は容認されない）
（ｉｉｉ）８．５ｇ／ｄＬ以上のヘモグロビン（このレベルを達成するための輸注は最初の試験薬物投与の２週間以内は容認されない）
（ｉｖ）１．５ｘＵＬＮ未満のクレアチニンまたは４０ｍＬ／ｍｉｎ以上のクレアチニンクリアランス（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ−Ｇａｕｌｔ式）
（ｖ）３ｘＵＬＮ以下のＡＬＴおよびＡＳＴ
（ｖｉ）１．５ｘＵＬＮ以下の総ビリルビン（正常な直接ビリルビンを有さなければならないギルバート症候群を有する対象を除く）
（ｖｉｉ）治験担当医評価によって正常な甲状腺機能、またはホルモン補充に対して安定

（ｌ）処置、ＰＫ、および薬力学試料採取ならびに必要とされる試験追跡に従う能力
（ｍ）対象の再登録：この試験は、処置前の失敗として試験を中止した対象（すなわち、無作為化されていない／処置されていない対象）の再登録を容認する。再登録される場合、対象は再度同意しなければならない。

３．年齢および生殖状態
（ａ）インフォームドコンセントの時点で１８歳以上の年齢の男性および女性
（ｂ）出産能力のある女性（ＷＯＣＢＰ）は、試験薬物の開始前２４時間以内で血清または尿妊娠検査で陰性でなければならない（尿妊娠検査：最小感度２５ＩＵ／Ｌまたは等価単位のヒト絨毛性ゴナドトロピン［ｈＣＧ］）。
（ｃ）女性は授乳中であってはならない。
（ｄ）ＷＯＣＢＰは、ＢＭＳ−９８６０１６での処置の持続期間＋ＢＭＳ−９８６０１６の５半減期（１３５日）＋３０日（排卵サイクルの持続期間）、処置完了後の合計１６５日（２４週）、避妊方法のための以下の指示に同意しなければならない。
（ｅ）ＷＯＣＢＰと性的に活発である男性は、ＢＭＳ−９８６０１６での処置の持続期間＋ＢＭＳ−９８６０１６の５半減期（１３５日）＋９０日（精子代謝回転の持続期間）間、処置完了後の合計２２５日（３３週）間、避妊方法のための以下の指示に同意しなければならない。

治験担当医は、妊娠防止の重要性および予期しない妊娠の意味あいについて、ＷＯＣＢＰおよびＷＯＣＢＰと性的に活発である男性対象に忠告すべきである。治験担当医は、避妊の高度に有効な方法の使用について、ＷＯＣＢＰおよびＷＯＣＢＰと性的に活発である男性対象にアドバイスすべきである。避妊の高度に有効な方法は、一貫して正確に使用したとき年１％未満の失敗率を有する。

最小限で、対象は避妊の２つの方法の使用に同意しなければならない、１つの方法は高度に有効であり、他の方法は高度に有効であるか、あまり有効でないのいずれかである。

（ｆ）無精子症の男性および連続的に異性と性的関係をもたないＷＯＣＢＰは、避妊の必要性から排除される。しかしながら、継続的に異性間行為を控えるＷＯＣＢＰは、このプロトコールに記載されている妊娠検査を受けなければならない。

除外基準
１．標的疾患の例外
（ａ）原発性皮膚リンパ腫、原発性免疫不全と関連するリンパ増殖性疾患、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染と関連するリンパ腫を有する対象は除外される。
（ｂ）既知の、もしくは疑われる中枢神経系（ＣＮＳ）転移または活動性疾患の唯一の部位としてのＣＮＳを有する対象は除外される：
（ｉ）制御された脳転移を有する対象は登録を許可される。制御された脳転移は、同意の時点での照射または外科的処置の後、少なくとも４週間にわたってＸ線像による進行が見られないものと定義される。対象は、インフォームドコンセントの前の少なくとも２週間にわたってステロイドを除去されていなければならず、新しいか、または進行性の神経兆候および症状を有してはならない。
（ｉｉ）脳転移の兆候または症状を有する対象は、脳転移がコンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）によって除外されない限り、適格ではない。

２．病歴および併発疾患
（ａ）適切に処置された基底細胞もしくは扁平上皮皮膚癌、子宮頸部上皮内癌もしくは膀胱癌、または非浸潤性乳管癌もしくは上皮内小葉癌を除く、以前の悪性腫瘍を有する対象は除外される。２年より前に（インフォームドコンセントの時点で）診断された他の以前の悪性腫瘍を有する対象であって、治療目的で療法を受けており、間隔中に疾患の証拠がなく、治験担当医によって再発の危険性が低いと考えられる対象は適格である。

（ｂ）単離された白斑、解消された小児喘息／アトピー、制御された副腎機能低下症または下垂体機能低下症を有する対象、およびグレーブス病の病歴を有する甲状腺機能正常患者（制御された甲状腺機能亢進症を有する対象は試験薬物投与の前にサイログロブリンおよび甲状腺ペルオキシダーゼ抗体および甲状腺刺激免疫グロブリンについて陰性でなければならない）を除く、いずれかの活動性自己免疫疾患または既知もしくは疑われる自己免疫疾患の病歴を有する対象。

（ｃ）対象が治療用量の全身ステロイドを必要とする自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）または自己免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）を有する

（ｄ）対象が任意の同種移植を受けた

（ｅ）治験担当医または保証人の意見において、対象にとって危険な試験薬物の投与を行うか、または試験の手順および／または試験療法に従うか、もしくは試験を許容する対象の能力に有害な影響を与え得るか、または処置される対象においてＢＭＳ−９８６０１６の忍容性を解釈する能力を混乱させる、既知の、または基礎となる医学的状態。

（ｆ）毎日の酸素補給のための要件。

（ｇ）限定されるものではないが、以下のいずれかを含む制御されていないか、または有意な心血管疾患：
（ｉ）同意前の６カ月以内の心筋梗塞または脳卒中／一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）
（ｉｉ）同意前の３カ月以内の制御されていない狭心症
（ｉｉｉ）臨床的に意義のある不整脈（心室性頻脈、心室細動、または心室性不整脈）の病歴
（ｉｖ）４８０ｍｓｅｃを超えるＱＴｃ延長
（ｖ）他の臨床的に意義のある心疾患（すなわち、心筋症、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）機能分類ＩＩＩ〜ＩＶを有する鬱血性心疾患、心膜炎、有意な心外膜液）の病歴

（ｈ）ＨＩＶまたは既知の後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関する陽性の血液スクリーニング

（ｉ）以下により証明される任意の慢性肝炎の病歴：
（ｉ）Ａ型肝炎抗体（ＨｅｐＡ ＩｇＭ）（注記：解消されたＡ型肝炎ウイルス感染の病歴は除外基準ではない）について陽性の試験
（ｉｉ）Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）および／またはＢ型肝炎コア抗原について陽性の試験
（ｉｉｉ）定性的Ｃ型肝炎ウイルス量（ＰＣＲによる）について陽性の試験

（ｊ）試験薬物療法の開始前の７日以内に全身性抗細菌、抗ウイルス、または抗真菌療法を必要とする活動性感染の証拠

（ｋ）他のいずれかの有意な急性または慢性の医学的疾病

（ｌ）静脈穿刺を受けることができない、および／または静脈アクセスを許容できない対象

（ｍ）治験担当医によって決定される他のいずれかの正当な医学的、精神医学的、および／または社会的理由。

（ｎ）以下の手順または薬のいずれか：
（ｉ）インフォームドコンセントの時点より前の２週間以内：
（１）免疫抑制用量（７．５ｍｇ／日以上のプレドニゾンもしくは等価物）の全身もしくは局所コルチコステロイド
（２）医学的薬草調製物
（ｉｉ）試験薬物投与前の４週間以内：
（１）任意の被験薬またはプラセボ
（２）任意の抗癌療法（化学療法、抗腫瘍用のモノクローナル抗体［例えば、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ３０、またはアレムツズマブ抗体治療］、治療用ワクチン、放射線治療、もしくはホルモン処置）
（３）生ウイルスを含有する非腫瘍ワクチン
（４）アレルゲン減感作療法
（５）大手術
（ｉｉｉ）試験薬物投与前の６週間以内：
（１）ニトロソウレア、フルダラビン
（ｉｖ）試験薬物投与前の１０週間以内：（１）放射性または毒性免疫コンジュゲート（例えば、ブレンツキシマブ）

３．アレルギーおよび有害薬物反応
（ａ）ＢＭＳ−９８６０１６の成分に対するアレルギーの病歴（例えば、ポリソルベート８０と共に製剤化された薬物に対する重篤な過敏反応の病歴）

４．他の除外基準
（ａ）囚人または不本意に投獄される対象
（ｂ）精神医学的または身体的（例えば、感染症）疾病の処置のために強制的に拘留される対象
（ｃ）制限ならびに禁止された活動／処置を順守できないこと

安全性評価
試験中および最後の処置後１３５日にわたって連続的に有害事象を評価する。有害事象を、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン４．０に従って評価する。有害事象を、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（ＭｅｄＤＲＡ）の最新バージョンを用いてコード化し、潜在的な有意性および重要性について再調査する。

効能評価
効能評価は、腫瘍型に基づく好適な効能評価を使用してｅＣＲＦにて行われ、報告される。ＮＨＬまたはＨＬを有する対象は、悪性リンパ腫について改訂応答基準を使用して評価される（Cheson et al., J. Clin. Oncol. 2007;25(5):579-586）。ＣＬＬを有する対象は、慢性リンパ性白血病の診断および処置のためのガイドラインを使用して評価される（Hallek et al., Blood 2008;111(12):5446-56）。

二次効能評価
疾患評価は、それぞれの処置サイクル（最大１２回の８週処置サイクル）の５０から５６日に、および追跡調査来院３０日に生じる。腫瘍応答は、以下の効能基準により定義されるように十分なデータで対象について治験担当医によって評価される：
・ＮＨＬおよびＨＬ対象：悪性リンパ腫について改訂応答基準
・ＣＬＬ対象：慢性リンパ性白血病の診断および処置のためのガイドライン

薬物動態学試料分析
血清試料を、検証された免疫測定法によりＢＭＳ−９８６０１６について分析する。加えて、技術検査目的のために、選択される血清試料を、ＢＭＳ−９８６０１６を測定する探索的分析方法により分析し得る；探索的データは報告されない。

探索的バイオマーカー評価
腫瘍組織、骨髄、および／または穿刺液を、パートＡおよびＢ中の全対象において療法の前におよび処置中の選択される時点で回収する。末梢血を、パートＡ中の各用量レベルに登録された最初の３人の対象ならびにパートＢ中の全対象において療法の前におよび処置中の選択される時点で回収する。バイオマーカー試料を取り出すが試験薬物を投与しないとき、試料は保持される。薬物動力学評価のスケジュールを図３に提供する。

可溶性バイオマーカー
可溶性因子、例えばサイトカイン、ケモカイン、可溶性受容体、および腫瘍抗原に対する抗体を、血清の免疫測定法によって、特徴付け、定量する。分析物としては、必ずしも限定されるものではないが、可溶性ＣＤ２５、可溶性ＰＤ−１、可溶性ＬＡＧ−３、およびＣＸＣＬ−９が挙げられる。回収された血清試料もまた、抗腫瘍抗体が臨床応答と大きく関連するかどうかを探索する単剤療法での処置後に引き起こされる腫瘍抗原特異的応答の評価のために使用される。癌試験抗原に対する抗体レベルを、多重アッセイおよびＥＬＩＳＡによって評価される。

ＰＢＭＣおよび骨髄穿刺液の免疫表現型検査
ＰＢＭＣ調製物におけるＴ細胞共刺激マーカーの特異的リンパ球サブセットおよび発現レベルの割合を、フローサイトメトリーによって定量する。分析としては、必ずしも限定されるものではないが、Ｔ、ＢおよびＮＫ細胞の割合、記憶およびエフェクターＴ細胞サブセットの割合、およびＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＩＣＯＳおよびＫｉ６７の発現レベルが挙げられ得る。

エキソビボ機能アッセイ
ニボルマブがＴ細胞の活性化および機能を回復させるかどうかを探求するために、ＰＢＭＣを単離し、凍結保存する。限定されるものではないが、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）およびＣＤ１０７に対するアッセイを含む、エフェクターＴ細胞の機能状態のアッセイを行う。

末梢血遺伝子発現
ＢＭＳ−９８６０１６に対する応答と関連する遺伝子の発現レベルを、全血試料中でのＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘマイクロアレイおよび／または定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析などの分子方法を使用して定量化する。分析としては、必ずしも限定されるものではないが、Ｔ細胞活性化および抗原処理および提示などの免疫関連経路と関連する遺伝子が挙げられ得る。

ＢＭＳ−９８６０１６受容体占有
免疫細胞に結合したＢＭＳ−９８６０１６のパーセントならびに結合した薬物の平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、フローサイトメトリーをベースとする受容体占有アッセイによって定量される。このアッセイは、末梢血、および利用できるとき骨髄穿刺液にて実施される。受容体占有アッセイは、薬物が異なる生物学的コンパートメントにおいて相互作用しているＴ細胞の量および型を決定するデータを提供する。ベースラインを定義する処置前に、および骨髄穿刺液回収時に、試料を取る。末梢血および骨髄穿刺液の分析は、新鮮な試料において行われる。したがって、試料は回収後即座に輸送することが重要である。

Ｔ細胞レパートリー分析
末梢Ｔ細胞コンパートメントの低い多様性は、転移性乳癌における低い全生存と相関することが示されている（Manuel et al., Oncoimmunology 2012;1(4):432-440）。免疫腫瘍学における固定された理論は、種々の、および活性化された免疫環境は、ナイーブな、および寛容化されたＴ細胞のゆがんだ(skewed)レパートリーと比較して、根絶する腫瘍でより熟練(adept)していることを示唆している。種々のＴ細胞レパートリーが治療に対する応答を予測するか否かを探査するために、次世代ハイスループットＤＮＡシーケンシングは、末梢血および腫瘍組織から単離されたＤＮＡにて実施され、単剤療法の前に、および中にＴ細胞レパートリーの組成を定量する。

ＳＮＰ分析
ＢＭＳ−９８６０１６の安全性および効能と関連する潜在的な多型を同定するために、単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）について選択された遺伝子を評価する。分析としては、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＭＨＣ ＩＩ、およびＣＴＬＡ−４を含む、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、および活性化Ｔ細胞表現型と関連する遺伝子および経路に連結した配列多型に限定される。

腫瘍に基づくバイオマーカー測定
腫瘍生検標本（例えば原発性腫瘍、リンパ節）は、免疫細胞集団および選択される腫瘍マーカーの発現を特徴付けるために、ＢＭＳ−９８６０１６での処置前および後に得られる。

処置前の腫瘍生検（例えば、原発性腫瘍、リンパ節）は、全ての同意した成人において回収される。処置前の腫瘍生検が臨床的に実行不可能であるとき、保存される腫瘍組織試料（例えば、原発性腫瘍、リンパ節など）、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ブロックまたは非染色スライドのいずれかは、相関試験の実行のために提供されなければならない。病理学的レポートは、保存される、または新鮮な生検試料で付されるはずである。新鮮な生検および保存される試料の両方が利用できるとき、両方の試料を送るべきである。

処置中の腫瘍生検は任意であり、ベースラインで生検を有した対象において回収される。生検は、サイクル１、５０から５６日中に（または、臨床的に示されるとき、より早期に）およびＰＤで再び、得ることができる。生検は、プロトコール特定診断イメージングと調和され得る。

片側骨髄生検および／または穿刺液は、全対象において、ベースライン、または試験薬物の最初の投与前最大２８日間に行われる。これらの最後の治療の完了のため骨髄穿刺液および生検結果を有した対象は、この試験に必要なベースライン骨髄の代わりにそれらの骨髄結果を使用しないかもしれない。処置中の骨髄生検および／または穿刺液試料は、臨床的に示されるとき、ＣＲ、ＰＲまたはＰＤで得られ、プロトコール特定診断イメージングと調和され得る。

生検および骨髄試料は、以下の評価のために使用され得る：

腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、腫瘍抗原、およびウイルス陽性の特性化
免疫組織化学分析（ＩＨＣ）を用いて免疫浸潤の数および組成を評価して、療法に対する暴露の前および後のＦＦＰＥ腫瘍組織内に存在する免疫細胞サブセットを定義する。これらのＩＨＣ分析は、必ずしも限定されるものではないが、以下のマーカー：ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸｐ３、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、およびＭＨＣ ＩＩを含む。腫瘍のエプスタイン−バー・ウイルス（ＥＢＶ）状態はまた、ＥＢＶをコードするＲＮＡ、ＬＭＰ−１発現、または同様のアッセイの評価によって行われ得る。例えば、ヒトＬＡＧ−３に対するＩＨＣ分析は、以下のプロトコールにしたがってヒト扁桃腺およびＮＨＬ細胞にて行われ、これらの結果は図４−１４Ｂに示される：

機器および材料：
Ｌｅｉｃａ ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ
ＢｉｏＧｅｎｅｘ ｉ６０００ Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ
ＢｉｏＣａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｃｌｏａｋｉｎｇ Ｃｈａｍｂｅｒ^ＴＭ Ｐｌｕｓ

試薬：
Ｘｙｌｅｎｅ（登録商標）（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃａｔ ＃ ＵＮ１３０７）
エタノール（ＡＡＰＥＲ ａｌｃｏｈｏｌ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ）
ＡＲ１０（ＢｉｏＧｅｎｅｘ（登録商標）、Ｃａｔ＃ ＨＫ０５７−５Ｋ）
洗浄バッファー（ＤＡＫＯ（登録商標）、Ｃａｔ＃ Ｓ３００６）
ペルオキシダーゼブロック（Ｌｅｉｃａ（登録商標） Ｃａｔ＃ＲＥ７１０１−ＣＥ）
プロテインブロック（Ｌｅｉｃａ（登録商標） Ｃａｔ＃ＲＥ７１０２−ＣＥ）
コメント(Comment)抗体希釈剤（ＢｉｏＧｅｎｅｘ（登録商標）、Ｃａｔ＃ ＨＫ１５６−５Ｋ）
ＤＡＢ（Ｌｅｉｃａ（登録商標） Ｃａｔ＃ＲＥ７１９０−ＣＥ）
ヘマトキシリン（Ｄａｋｏ（登録商標）、Ｃａｔ＃Ｓ３３０９）
抗体：

Ｎｏｖｏｌｉｎｋ Ｍａｘ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌｅｉｃａ（登録商標）、Ｃａｔ＃ ＲＥ７２６０−ＣＥ）

手順：
１． 脱パラフィンおよび補水(rehydration)を、キシレン（２回、それぞれ５分間）、１００％エタノール（２回、それぞれ２分間）、９５％エタノール（２回、それぞれ２分間）、７０％エタノール（２回、それぞれ２分間）、蒸留Ｈ_２Ｏ（ｄＨ_２Ｏ）（２分間）を使用するＬｅｉｃａ自動染色装置で行った；
２． 抗原回復を、Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｃｌｏａｋｉｎｇ Ｃｈａｍｂｅｒ Ｐｌｕｓ（登録商標）を使用して成し遂げた。ＡＲ１０溶液を１０５℃（Ｐ１）に２０分間加熱し、次に次の工程に移した（Ｐ２ ＦＡＮ ＯＮ、９５℃；ＦＡＮ ＯＦＦ、９０℃）；
３． スライドを室温で１５分間冷却し、水（約１分間）で濯いだ；
４． ＩＨＣ試薬をｉ６０００自動染色装置に配置した；
５． 組織領域を定義するためにｐａｐ ｐｅｎを使用して、スライドをｉ６０００自動染色装置に配置した；および
６． ＩＨＣを、以下のとおりリサーチモードを使用するＢｉｏＧｅｎｅｘ ｉ６０００自動染色装置で行った。

ｉ６０００（ＮｏｖｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ）におけるＩＨＣ工程：
１． 「ペルオキシダーゼブロック」（ＮｏｖｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ）を１０分間適用し、次に、ＩＨＣ洗浄バッファーで濯いだ（３回）；
２． プロテインブロック（ＮｏｖｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ）をスライドに適用し、１０分室温でインキュベートし、次にバッファーで洗浄した（３回）；
３． 抗体をスライドに適用し、１時間室温でインキュベートし、バッファーで洗浄した（３回）；
４． 「ポストプライマリーブロック」（ＮｏｖｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ）をスライドに加え、３０分間インキュベートし、バッファーで洗浄した（３回）；
５． 「ＮｏｖｏＬｉｎｋ ポリマー」（ＮｏｖｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ）をスライドに加え、４５分間インキュベートした；
６． スライドをＩＨＣ洗浄バッファーで濯いだ（３回）；
７． ＤＡＢクロモゲン基質（ＮｏｖｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ）を加え、５分間発展させた；
８． スライドを、室温で５回ｄＨ_２Ｏで濯ぐことによって洗浄した；
９． スライドを、室温で１分間ヘマトキシリン（Ｄａｋｏ）１：１で対比染色した；
１０． 次に、スライドを、ｄＨ_２Ｏで（室温で５回）濯ぐことによって洗浄した。

脱水およびカバーグラス封入(coverslipping)：
１． スライドをｉ６０００自動染色装置から取り出し、Ｌｅｉｃａ自動染色装置に配置した；
２． スライドを、７０％エタノール、９５％エタノール、２Ｘ１００％エタノールで脱水した（それぞれ２分）；
３． スライドをキシレンで洗浄した（それぞれ２分で２回）；および
４． Ｌｅｉｃａ ＣＭ５０３０カバーグラス封入装置(coverslipper)においてＣｙｔｏｓｅａｌ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍでカバーグラス封入した。

血清中のウイルス量
エプスタイン−バー・ウイルス（ＥＢＶ）−およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）−ウイルス量状態を、異なる時点で（ＰＣＲ）によって血清中で評価される。次に、ウイルス量は、臨床転帰および腫瘍組織におけるＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸｐ３、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、およびＭＨＣ ＩＩのようなマーカーの発現と関連づけられる。

Ｔ細胞レパートリーの特性評価
上記のとおり、ＤＮＡ配列決定を処置前および処置後の腫瘍組織上で実施して、Ｔ細胞レパートリーの組成を評価する。ＦＦＰＥ腫瘍ブロックまたはＲＮＡｌａｔｅｒまたは等価調製物のいずれかからＤＮＡを単離する。

遺伝子発現プロファイリング
ＲＮＡｌａｔｅｒまたは等価固定剤中で採取される腫瘍生検および骨髄試料を、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子アレイ技術および／またはＲＴ−ＰＣＲによりｍＲＮＡ遺伝子発現について検査して、選択された免疫関連遺伝子の発現を検出する。

細胞遺伝学的、突然変異および腫瘍マーカー
以下の分析は以前に行われていないとき、ベースラインで行われる必要がある：
ホジキンリンパ腫を有する対象：増幅 ９ｐ２４．１、ＣＤ３０
ＣＬＬを有する対象：ｄｅｌ １１ｑ、ｄｅｌ １３ｑ、ｄｅｌ １７ｐ、ＩＧＨＶ状態、ＣＤ３８およびβ２ミクログロブリン
ＤＬＢＣＬを有する対象：表現型ＡＢＣ、ＧＣＢ、または分類できない、およびβ２ミクログロブリン。
これらの臨床マーカーの結果は、臨床転帰およびＴ細胞において消耗した(exhausted)表現型の両方と関連づけられる。

腫瘍試料回収
１．生検（原発性腫瘍および／またはリンパ節）
最低１ＦＦＰＥ腫瘍組織ブロック（好ましい）または最低１０ＦＦＰＥ非染色切片を、ＬＡＧ−３状態の評価、ＥＢＥＲ−ＩＳＨおよび他のバイオマーカー評価のために必要とする。ＦＦＰＥが利用できないとき、ホルマリン中の腫瘍生検もまた受け入れることができる。

生検試料は切除、切開またはコア針であるべきである。細針穿刺液または他の細胞学試料は、保証人のメディカルモニターとの議論後に許可されるのみである。

試料は、２４から４８時間１０％中性緩衝ホルマリンで固定されることが推奨される。

スライドが提示されるとき、推奨される組織切片厚さは４ミクロンであり、スライドは正電荷でなければならない。スライドは２−８℃で冷やされ輸送されるべきである。

新鮮な生検を取るとき、最大４コア生検が推奨される。病理学者によって生検の質の評価が、処理時に強く促される。これらの生検から得られる腫瘍組織を、ＦＦＰＥ試料およびＲＮＡｌａｔｅｒに等量に分割する。

治験担当医、放射線技師と相談して、手順と関連する危険性の程度を決定し、それが許容されなければならない。生検を、局所麻酔または意識下鎮静を用いて行い得る。生検の安全な実施に関する制度指針に従うべきである。切除生検を実施して、腫瘍生検試料を得ることができる。全身麻酔を要する侵襲的手順は、生検標本を得るためには実施されるべきでない。しかしながら、臨床適応のために外科的手順を実施する場合、対象の同意の下で、研究目的で過剰の腫瘍組織を使用され得る。

２．骨髄および／または穿刺液
ベースラインで、ＣＲまたはＰＲで、および進行で取られる骨髄生検および／または穿刺液は、免疫細胞および腫瘍細胞の表現型および機能状態を評価するために利用される。

骨髄生検および／または穿刺液は、これらの手順のために制度的標準を使用して得られる。骨髄生検および穿刺液回収のための詳細な説明書は検査的手順マニュアルにおいて提供される。簡潔には、骨髄の最低１ＦＦＰＥ腫瘍組織ブロック（好ましい）または最低１０ＦＦＰＥ非染色切片を必要とし、約１０ｍｌの穿刺液をナトリウムヘパリンチューブに回収し、周囲環境的に(ambiently)輸送される。病理学的レポートは、生検試料で付されるべきである。

有害事象
有害事象（ＡＥ）は、治験（医）薬を投与され、この処置との因果関係を必ずしも有さない臨床被験者における任意の新しい有害な医学的出来事または元々存在する医学的状態の悪化と定義される。したがって、ＡＥは、治験薬と関連すると考えられるかどうかに関係なく、治験薬の使用と時間的に関連する好ましくない、および意図されないあらゆる兆候（異常な検査所見など）、症状、または疾患である。

試験薬物との因果関係は医師により決定され、全ての有害事象（ＡＥ）を評価するために用いられる。因果（ｃａｓｕａｌ）関係は、以下の１つであってもよい：

関連：試験薬物投与とＡＥとの合理的因果関係が存在する。
非関連：試験薬物投与とＡＥとの合理的因果関係が存在しない。

１．重篤な有害事象
重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、いずれかの用量で、
・死亡をもたらす
・生命を脅かすものである（対象が事象の時点で死亡のリスクがあった事象と定義される；それは、それがより重篤であった場合に死亡を引き起こしたと仮定される事象を指すものではない）
・入院を必要とするか、または既に始まっていた入院の延長を引き起こす
・持続的または有意な身体障害／無能性をもたらす
・先天異常／出生異常である
・重要な医学的事象（すぐに生命を脅かすものではないか、または死亡もしくは入院をもたらすものではないが、適切な医学的および科学的判断に基づいて、対象を危険にさらすか、または上記の定義に列挙された他の重篤な転帰の１つを防止するために介入（例えば、医学的、外科的）を必要とし得る医学的事象と定義される）であるあらゆる有害な医学的出来事である。そのような事象の例としては、限定されるものではないが、アレルギー性気管支けいれんのための救急処置室または家庭での集中的処置；入院をもたらさない血液疾患またはけいれんが挙げられる。潜在的な薬物誘導性肝障害（ＤＩＬＩ）も重要な医学的事象と考えられる。

試験薬物による感染性因子（例えば、病原性または非病原性）の疑われる伝染はＳＡＥである。規制的定義によれば妊娠、過剰投与、癌、および潜在的な薬物誘導性肝障害（ＤＩＬＩ）は常に重篤であるわけではないが、これらの事象はＳＡＥとして取り扱わなければならない。試験療法と関連すると考えられる試験評価項目の任意の成分（例えば、死亡が評価項目であり、アナフィラキシーに起因して死亡が起こった場合、アナフィラキシーを報告しなければならない）をＳＡＥとして報告する。

以下の入院はＳＡＥと考えない：
−入院には至らない（重要な医学的事象または生命を脅かす事象と考えられない限り）、２４時間未満の救急処置室または他の医療部門への訪問。
−同意に署名する前に計画された待機手術。
−計画された内科的／外科的手順のためのプロトコールによる入院。
−健康状態のベースライン／傾向のための入院を要する日常的な健康評価（例えば、日常的な結腸内視鏡検査）。
−不健康を改善するため以外の、および試験への登録の前に計画された内科的／外科的手順。これらの事例では適切な文書化が必要である。
−健康状態に影響せず、内科的／外科的介入を必要としない別の生活環境（例えば、住居がない、経済的不十分性、介護者の休止、家族環境、管理上の理由）のために生じた入院。

試験に参加する対象の同意文書の後、試験薬物と関連するにしろ、関連しないにしろ、プロトコール特異的手順と関連すると考えられるものを含む、全てのＳＡＥを収集する。スクリーニング期間および投薬の中止の１３５日以内に起こる全てのＳＡＥを収集する。妥当な場合、その後のいずれのプロトコール特異的手順（例えば、追跡皮膚生検）についてもそれと関連するＳＡＥを収集する。全てのＳＡＥを、解消または安定化まで追跡する。

２．非重篤有害事象
非重篤有害事象は、重篤と分類されないＡＥである。非重篤ＡＥ情報の収集は、試験薬物の開始時に始まり、投薬の中止後１３５日間続く。非重篤ＡＥを、解消もしくは安定化まで追跡するか、またはそれらが重篤になる場合、ＳＡＥとして報告する。試験薬物の中断もしくは中止を引き起こす非重篤ＡＥについて、および必要に応じて試験処置の終わりに存在するものについても追跡が必要である。全ての同定された非重篤ＡＥを記録し、ＣＲＦ（紙または電子）の非重篤ＡＥの頁に記述する。

試験経過中に報告／同定されるＡＥおよび／または検査所見異常について、追加のＣＲＦの完了を要求する。

標本サイズ決定
１．パートＡ：用量漸増
各用量での標本サイズは観察される毒性に依存し、正確に決定することはできない。パートＡは、各コホート中に３〜９人の対象を有する。

２．パートＢ：コホート拡大
コホートあたり約１２人の対象の標本サイズは、毒性率のより良好な推定を可能にし、予備効能の推定値に近いより良好な精度を提供する。コホートにおいて１２人の対象のうちの３人（すなわち、３０％未満）が毒性を経験する場合、真の毒性率が４８％以下であることに関し、少なくとも９０％の信頼がある（Ｃｌｏｐｐｅｒ−Ｐｅａｒｓｏｎの直接二項片側９０％信頼区間に基づく）。加えて、コホートにわたって探査される安全性シグナルについて、試験の拡張部分において４８人の対象のうち１４人（すなわち、３０％未満）が毒性を経験するとき、毒性の真の割合が４０％を超えないという少なくとも９０％信頼性がある。

コホートあたり約１２人の対象の標本サイズはまた、客観的反応率について両側９０％信頼区間が、３人の対象（２５％）が応答を有するとき７％から５３％であり、４人の対象（３３％）が応答を有するとき１２％から６１％であるような、客観的反応を示す対象のコホート内における割合（すなわち、完全応答［ＣＲ］＋部分的応答［ＰＲ］）の推定を可能にする。加えて、１５％以上の真の応答率を考慮すると、１２人の対象のコホートにおいて少なくとも１つの応答を見る８６％を超えて機会がある。

分析のための集団
・全登録対象：試験のためのインフォームドコンセントに署名した全対象（スクリーニングの失敗を含む）。
・全処置対象：少なくとも１つの完全又は部分的用量のＢＭＳ−９８６０１６を受ける全対象。
・応答評価可能対象：評価可能な疾患に関するベースライン評価、および以下：（１）少なくとも１つの評価可能な処置中の疾患評価、（２）臨床的進行、または（３）最初の処置中の疾患評価の前の死亡の１つを有する全対象。
・薬物動態分析セット：少なくとも１つの正当なＰＫパラメーターを定義するために十分なＰＫデータを有する処置される全対象を要約表に含む。処置される対象からの全ての利用可能な血清濃度データを列挙する。
・免疫原性分析セット：１つの完全又は部分的用量のＢＭＳ−９８６０１６を受け、ベースラインおよび少なくとも１つの利用可能なベースライン後の免疫原性試料を有する全対象を要約表に含む。処置される対象からの全ての利用可能なデータを列挙する。
・薬力学分析セット：特定のバイオマーカーに対する少なくとも１つの正当な測定を有する処置される全対象を、該バイオマーカーに関して要約および表に含む。

評価項目
１．主要評価項目
この第１相試験の主要評価項目は、処置中に、および最後の処置後最大１３５日にわたって評価される、ＡＥ、ＳＡＥ、死亡、および検査所見異常の割合により試験レベルで測定される安全性である。少なくとも１用量のＢＭＳ−９８６０１６またはニボルマブを受ける全対象を、安全性について分析する。

２．二次評価項目
ａ．薬物動態学
ＢＭＳ−９８６０１６のＰＫを、種々の時点で血清濃度対時間のデータから誘導される以下の評価項目を用いて副次的目的として評価する。

評価されるＰＫパラメーターは以下を含む：
Ｃｍａｘ 最大血中濃度
Ｔｍａｘ 最大血中濃度到達時間
Ｃｔｒｏｕｇｈ トラフ血中濃度
Ｃｅｏｉｎｆ 輸注の終わりでの濃度
Ｃｔａｕ 投薬間隔の終わりでの濃度（例えば、３３６時間での濃度）
Ｃｓｓ，ａｖｇ 投薬間隔にわたる平均濃度（［ＡＵＣ（ＴＡＵ）／タウ］）
ＡＵＣ（ＴＡＵ） １つの投薬間隔における濃度時間曲線下面積
ＣＬＴ 全身クリアランス
Ｖｓｓ 定常状態での分布容量
Ｔ−ＨＡＬＦｅｆｆ ＡＵＣ 観察されるＡＵＣ蓄積度を説明する有効排出半減期
Ｔ−ＨＡＬＦｅｆｆ Ｃｍａｘ 観察されるＣｍａｘ蓄積度を説明する有効排出半減期
ＡＩ＿ＡＵＣ 蓄積指数；定常状態でのＡＵＣ（ＴＡＵ）と初回投与後のＡＵＣ（ＴＡＵ）との比
ＡＩ＿Ｃｍａｘ Ｃｍａｘ蓄積指数；定常状態でのＣｍａｘと初回投与後のＣｍａｘとの比
ＡＩ＿Ｃｔａｕ Ｃｔａｕ蓄積指数；定常状態でのＣｔａｕと初回投与後のＣｔａｕとの比
ＡＩ＿Ｃｅｏｉｎｆ Ｃｅｏｉｎｆ蓄積指数；定常状態でのＣｅｏｉｎｆと初回投与後のＣｅｏｉｎｆとの比
ＤＦ 変動度または変動指数（［Ｃｍａｘ−Ｃｔａｕ］／Ｃｓｓ，ａｖｇ）

個々の対象のＰＫパラメーター値を、検証されたＰＫ分析プログラムによる非コンパートメント法により誘導する。実際の時間を分析のために用いる。

ｂ．効能
以下の二次評価項目が、ＢＭＳ−９８６０１６の予備抗腫瘍活性を調査するために評価される：
・客観的反応率（ＯＲＲ）、すなわちＣＲまたはＰＲの最良総合応答を有する対象の割合
・それぞれの疾患タイプに関連している現在の基準に基づく応答の持続期間（ＤＯＲ）
・処置中の４、６、８および１０月および最後の投与後３０日間の画期的な(Landmark)無進行生存率（ＰＦＳＲ）を探索的評価項目として評価する。

３．探索的評価項目／バイオマーカー
末梢血からのバイオマーカー評価項目は、各予定された時点で、可溶性因子のレベルのような測定、ならびに免疫表現型検査により特徴付けられるＴ細胞のサブセットを含み得る。腫瘍生検からのバイオマーカー評価項目は、限定されるものではないが、測定、例えばリンパ球の機能状態および配置およびリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、およびプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）発現を含み得る。（利用できるとき）末梢血、骨髄およびリンパ節において特徴付けられる受容体占有の測定もまた提供され得る。

分析
特記されない限り、パートＡおよびＢからの安全性データは、それぞれの腫瘍型内で、１）全ての用量レベルにわたっておよび用量レベルによって全体、およびまた、２）全ての用量レベルにわたっておよび用量レベルによって両方で要約される。効能データは、それぞれの腫瘍型内で用量レベルによって要約される。

１．人口統計学データおよびベースライン特性
性別および人種の度数分布を表にする。年齢、体重、身長および肥満度指数（ＢＭＩ）についての要約統計量を表にする。

２．効能分析
ＨＬおよびＮＨＬを有する対象において、悪性リンパ腫に関する改訂応答基準（Ａｐｐｅｎｄｉｘ １）を、効能を評価するために使用する。ＣＬＬを有する対象について、慢性リンパ性白血病の診断および処置のためのガイドラインを使用する。

選択される時点での個々のＢＯＲ、ＯＲＲ、ＤＯＲおよびＰＦＳＲを決定する。分布表を使用して、ＢＯＲ結果を要約する。ＯＲＲ、画期的なＰＦＳＲ（処置中の４、６、８および１０月および最後の投与後３０日間）および対応する信頼区間は、パートＢに関して計算され、データによってサポートされるときパートＡに関して計算され得る。ＤＯＲおよびＰＦＳＲは、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ方法論を使用して腫瘍型によって概算される。効能のさらなる探索的提示は、腫瘍型、処置、免疫療法への暴露前、またはベースライン腫瘍マーカーによって分類される、用量漸増およびコホート拡大の両方において対象を含み得る。時間とともに疾患の負担において個々の変化のプロットもまた作成される。時間とともに腫瘍マーカーにおいて個々の変化が、選択される疾患タイプ内で用量レベルによってグラフで示され得る。分析の目的に依存して、効能は、全ての処置される対象または応答評価可能対象のいずれかについて報告され得る。

３．安全性分析
試験薬物療法を受ける全ての対象は、安全性評価項目の分析に含まれる。全ての記録されるＡＥは、器官別大分類、好ましい期間、試験薬物との関係、および処置によって、列挙され、表にされる。コーディング(Coding)はＭｅｄＤＲＡの最新バージョンによって行われる。バイタルサインおよび選択される臨床的な実験室試験結果は、処置によって、列挙され、要約される。臨床的な実験室試験のあらゆる有意な身体検査所見および結果を列挙する。治験担当医によって同定されるＥＣＧ異常を表にする。

４．薬物動態分析
ＢＭＳ−９８６０１６のＰＫパラメーターを、非コンパートメント分析を用いて算出する。処置および試験日／週によりＢＭＳ−９８６０１６のＰＫパラメーターについて要約統計量を表にする。ＢＭＳ−９８６０１６の用量への依存を記述するために、ＣｍａｘおよびＡＵＣ（ＴＡＵ）対用量の散乱プロットを、測定されたそれぞれの日について提供し得る。ＢＭＳ−９８６０１６の用量比例性も、パワーモデルに基づいて評価され得る。

５．探索的バイオマーカー分析
生検を受けた対象においてＴＩＬ、ＭＩＬおよび他の重要な腫瘍マーカーに対する薬物動力学効果は、要約統計量およびプロットを使用して要約される。加えて、ＴＩＬまたはＭＩＬ変化と末梢血マーカーの測定での腫瘍マーカー発現との相関関係は、データ利用可能性に基づいて好適なモデル化法を使用してグラフで探査され得る。臨床転帰での末梢血または腫瘍生検からのバイオマーカー測定の関連性もまた、グラフで探査され、必要に応じて、方法、例えば限定はしないがロジスティック回帰によってさらに評価され、好適な統計値により特徴付けられ得る。

６．免疫原性分析
リストは、全ての利用できる免疫原性データについて提供される。特定の評価項目定義に合う対象の数およびパーセントを要約する。免疫原性および安全性間の起こり得る関係性を試験するために、特別な関心のあるＡＥの頻度およびタイプを要約する表が免疫原性状態によって探査され得る。加えて、免疫原性および効能、薬物動力学マーカーおよび／またはＰＫ間の起こり得る関係性もまた探査され得る。

配列の概要

Claims (13)

1. ヒト患者における血液悪性腫瘍を処置する方法であって、患者に、
   配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＬＡＧ−３抗体
   の有効量を投与することを含み、
   少なくとも１投与サイクルを含み、サイクルが８週間であり、少なくとも１サイクルのそれぞれについて、抗ＬＡＧ−３抗体が以下のとおり投与される、方法：
   （ａ）４用量の２０ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体；
   （ｂ）４用量の８０ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体；
   （ｃ）４用量の２４０ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体；または
   （ｄ）４用量の８００ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体。
2. 抗ＬＡＧ−３抗体が静脈内投与のために製剤化されている、請求項１に記載の方法。
3. 処置が最大１２サイクルからなる、請求項１または２に記載の方法。
4. 抗ＬＡＧ−３抗体が、各サイクルの１、１５、２９および４３日目に投与される、請求項１−３のいずれかに記載の方法。
5. 処置が、悪性細胞数の減少、悪性細胞浸潤の阻害、悪性細胞転移の阻害、悪性細胞の発生防止、および悪性腫瘍と関連する１つ以上の症状の減少から選択される少なくとも１つの治療効果をもたらす、請求項１−４のいずれかに記載の方法。
6. 悪性腫瘍が、白血病、リンパ腫、および骨髄腫から選択される、請求項１−５のいずれかに記載の方法。
7. 悪性腫瘍が、再発性または難治性慢性リンパ性白血病およびリンパ腫から選択される、請求項１−６のいずれかに記載の方法。
8. 悪性腫瘍が、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）から選択される、請求項７に記載の方法。
9. 抗ＬＡＧ−３抗体が、
   （ａ）配列番号７に記載の配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；
   （ｂ）配列番号８に記載の配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；
   （ｃ）配列番号９に記載の配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；
   （ｄ）配列番号１０に記載の配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
   （ｅ）配列番号１１に記載の配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および
   （ｆ）配列番号１２に記載の配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３
   を含む、請求項１−８のいずれかに記載の方法。
10. 抗ＬＡＧ−３抗体が、それぞれ配列番号３および配列番号５に記載の配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む、請求項１−９のいずれかに記載の方法。
11. 抗ＬＡＧ−３抗体が、それぞれ配列番号１および配列番号２に記載の配列を有する重鎖および軽鎖を含む、請求項１−１０のいずれかに記載の方法。
12. ヒト患者における再発性または難治性慢性リンパ性白血病またはリンパ腫を処置するためのキットであって、
    （ａ）配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む１用量の抗ＬＡＧ−３抗体、ならびに
    （ｂ）請求項１−１１のいずれかに記載の方法において抗ＬＡＧ−３抗体を使用するための説明書
    を含む、キット。
13. 少なくとも１サイクルにおいて投与するための、配列番号３に記載の配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号５に記載の配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＬＡＧ−３抗体であって、各サイクルについて、抗ＬＡＧ−３抗体が以下のとおり投与される、抗ＬＡＧ−３抗体：
    （ａ）４用量の２０ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体；
    （ｂ）４用量の８０ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体；
    （ｃ）４用量の２４０ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体；または
    （ｄ）４用量の８００ｍｇ抗ＬＡＧ−３抗体。

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