JP2017502665A - オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉誘導拡散およびその用途 - Google Patents
オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉誘導拡散およびその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017502665A JP2017502665A JP2016541157A JP2016541157A JP2017502665A JP 2017502665 A JP2017502665 A JP 2017502665A JP 2016541157 A JP2016541157 A JP 2016541157A JP 2016541157 A JP2016541157 A JP 2016541157A JP 2017502665 A JP2017502665 A JP 2017502665A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- target
- nucleic acid
- rna interference
- induces
- sirna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/332—Abasic residue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/533—Physical structure partially self-complementary or closed having a mismatch or nick in at least one of the strands
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
- C12N2320/53—Methods for regulating/modulating their activity reducing unwanted side-effects
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本発明者は、図1の図式化された例のように、アルゴノートタンパク質に結合するすべてのRNA干渉誘導拡散の5’シード部分を塩基配列ができないスペーサに変形させた場合、ターゲット遺伝子抑制効率(オンターゲット効果)が高いながらも、オフターゲット効果は完全に遮断することができることを予測し、マイクロRNA認識メカニズムに対するモデルである転移核型性モデル(Nat Struct Mol Biol.2012 Feb 12;19(3):321−7)に基づき、5’シードのうち特に軸(pivot)と呼ばれる5’末端の6番目の塩基配列に注目して本RNA干渉誘導拡散を発明した。
前記実施形態1においてdSpacerを利用して確認された事実をリボヌクレオチドバックボーンの類似スペーサであるリボヌクレオチドスペーサ(rSpacer)で確認するために、オフターゲットがなくなると現れたsiRLの5’末端の2番から7番までの位置のうち1つをrSpacerに置換(pi−r)した後、前記実施形態1で施行したものと同じ方法によってIC50を測定してオンターゲット効果を調査した。
前記デオキシリボヌクレオチドスペーサ(dSpacer)がsiRNAのシード部分に備えられるようにする配列構造には、前記実施例1と実施例2のように置換されるようになれば、siRNAがターゲット遺伝子のRNAと結合するときに非塩基部分がミスマッチ塩基配列(mismatch base pairing)するケースが存在する。さらに、図4aに示すように、dSpacerをsiRNAシード部分に挿入するようになれば、非塩基部分にバルジ(bulge)が生成されるケースも存在する。これにより、dSpacerを挿入した場合に現われるオンターゲットおよびオフターゲット効果の変化を調査した。先ず、前記実施例によってオフターゲットがなくなることを確認したsiRLの5’末端の2番から7番の間にdSpacerを挿入(pi−I)した後、前記実施例1と同じ方法によってIC50を測定してオンターゲット効果を調査した。
リボヌクレオチドスペーサ(rSpacer)がsiRNAのシード部分に挿入された変形(pi−rI)のオンターゲット効果を調べるために、前記実施例3と同じ方法によってIC50を測定した。
本発明に係るスペーサに置換されたsiRNA分子は、従来構造のsiRNA分子が有するマイクロRNA類似オフターゲットを抑制することを前記実施例1によって確認したため、これをマイクロRNAに適用して確認しようと、miR−124の5’末端から6番目の位置にデオキシリボヌクレオチドスペーサ(dSpacer)置換を加えて次のような実験を行った。先ず、人間のmiR−124−3pと同じ配列と6番の位置にdSpacerによって置換した配列(6pi)とを合成した後、miR−124−5pと二重体として製造し、HeLa細胞にmiR−124のシードサイト(5’末端から1〜8番目との完全相補配列)を2つ含んだpsi−check2ベクトルを共にトランスフェクションさせた後、前記実施例1と同じ方法によって多様な濃度のマイクロRNAにおけるルシフェラーゼ活性を測定した。
本発明に係る変形を実験用の目的から治療用の目的に確張することのできるsiRNA配列に適用してその効果を評価しようと、Alnylam社によって血中コレステロール数値を低めるために肝細胞のPCSK9遺伝子をRNA干渉現象によって阻害しようと開発されたsiRNAであるPCS−A1(A1)、PCS−A2(A2)(Proc Natl Acad Sci U S A.2008 Aug 19;105(33):11915−20)を対象にして実験を行った。A1の場合も、実施例1と同じ方法であるルシフェラーゼ活性度測定によって多様な位置に非塩基変形のオンターゲット効果を比較したとき、図7aに示すように、A1−6piが最も優れたターゲット遺伝子抑制効率を現したし、図7bに示すように、シード序列によるオフターゲット効果も完全に抑制した。A2の場合には、A1と同じ配列を備えるが、免疫反応を引き起こすという問題とRNAの安定化を改善するために、多様な位置に2’OMe変形が加えられるが、このようなA2 siRNA分子でも、実施例1と同じ方法によって測定したルシフェラーゼリポータ活性測定において、図7cに示すように、6pi変形がオフターゲットを防ぐと現われた。さらに、図7dに示すように、A2の場合には、6pi変形が加えられても、非変形形態のA2とほぼ類似する水準のオンターゲット抑制効率を、ルシフェラーゼリポータを利用したIC50測定において現わした。
前記実施例6で分析したPCSK9に対するsiRNAのオフターゲット効果を生体内で評価するために、生後7週の実験用マウス(C57/BL6)を利用してsiRNAを肝組職に伝達した後に評価を行った。siRNAの肝組職伝達は、invivo−jetPEI(polyplus社)という伝達物質を使用し、提供されるプロトコルにしたがって5mg/kg siRNAをそれぞれ5匹のマウスの尻尾の血管に注入(tail−vein injection)して伝達し、48時間後にマウスを犠牲にして血液と肝組職を抽出した後に実験を行った。先ず、摘出した肝組職の一部にある小さなサイズのRNAを含む(small RNAs)すべてのRNAを、miRNeasyキット(Qiagen社)を使用して分離した後、ここでそれぞれ伝達されたsiRNA、そしてターゲットであるPCSK9 mRNAの量をqPCRによって測定した。siRNAに対する測定は、プロトコル(Biotechniques.2005 Oct;39(4):519−25)にしたがってPoly(A)Tailing Kit(Ambion社)を利用して行った。先ず、RNAの3’末端に多様のアデノシンを付着させ、特定の配列を含むoligo−dTによってSuperscript III RT(invitrogen社)に逆転写を施行した後、oligo−dTに付けておいた特定のsequenceを認識する序列と測定しようとするsiRNAと同じ序列を備えたDNAプリマとを一対にし、SYBR○R Green PCR Master Mix(Applied Biosystems社)によってqPCRを施行した。PCSK9 mRNA測定は、前記実施例6と同じ方法によって実行した。血液中の総コレステロールの量は、Wako社のキットを利用してELISA方法により、提供プロトコルにしたがって測定した。
前記実施例1において、ターゲット遺伝子発現抑制効果と共にオフターゲット効果を防ぐ効果を確認した、本発明に係る5’末端から6番目のヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドスペーサ(dSpacer)に置換した置換体と従来のオフターゲット効果抑制用変形置換体の性能を、前記実施例1と同じ方法によってIC50を測定して比較した。
前記実施例8で観察されたように、5’末端から6番目のヌクレオチドをdSpacerに置換した(6pi)siRNAは完全にオフターゲット効果を取り除くという点において、これは6番目に塩基がなくなり、これ以上この部分を通じてオフターゲットと塩基配列ができなくなるためであると予想することができる。したがって、理論的には、5’末端から6番目のヌクレオチドに塩基が存在しなければ、そのバックボーンがヌクレオチドではない他の変形であっても、その変形が単一ヌクレオチドと置換される同じ大きさのスペーサ変形であれば、同じオフターゲット除去効果を示すようになるであろう。これにより、本発明者は、図10に示した図式化した例のように、図1の5’末端から6番目の位置をdSpacer置換で確張し、5’末端から6番目の位置に塩基(base)がない形態で骨格を維持する最小のスペーサ(spacer)として5番目と7番目のヌクレオチドが共有結合するように設計した。すなわち、6番目の位置に、ヌクレオチドが占める空間を維持することのできるスペーサの最小の大きさでリン酸基と炭素原子3個(C3 spacer)からなる変形を設計した。ヌクレオチドなくC3変形を最小基準とし、塩基のないあらゆる形態の共有結合変形であっても5’末端から6番目の位置に適用されるようになれば、非塩基性ヌクレオチド置換と同じように、オンターゲット抑制効率を維持しながらも、オフターゲット効果は完全に取り除くことができるという効果を現すものと予想しながら、新たなRNA干渉誘導拡散を発明した。
siRNAを使用するときに現われるオフターゲット効果は、マイクロRNAのように主にシード位置の塩基配列によってターゲット遺伝子を認識し、その配列と塩基配列結合に依存的に引き起こる。マイクロRNAが生体で標的を認識する場合において、このようなシード結合による標的遺伝子抑制現象は、シード部分と標的との結合が弱く起こるときには、3’末端部分における追加的な塩基配列を形成した3’末端補償結合(3’−compensatory pairing)によって標的遺伝子が阻害されるという現象が報告された(Cell.2009;136:215−233)。したがって、マイクロRNA類似オフターゲット現象の一部も、このような3’末端補償結合のメカニズムによって現われるため、これを防ぐ方法が必要となる。
Claims (15)
- RNA干渉(RNA interference)を誘導する核酸の二本鎖のうち1つ以上の一本鎖において、5’末端から6番目のヌクレオチドまたは3’末端から1番目と2番目のヌクレオチドがスペーサ(Spacer)に置換される変形を少なくとも1つ以上含むことを特徴とする、RNA干渉を誘導する核酸。
- 前記二本鎖のうち変形の対象となる一本鎖は、RNA干渉現象を引き起こすアルゴノート(argonaute)タンパク質に結合することができる能力を備えることを特徴とする、請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸。
- 前記スペーサは、リン酸基または硫酸基を含む炭化水素鎖であることを特徴とする、請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸。
- 前記スペーサは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および炭素数が3であるアルキル基からなる群から選択されるバックボーンであり、塩基配列ができないことを特徴とする、請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸。
- 前記RNA干渉を誘導する核酸は、置換によるターゲット遺伝子のRNAとのミスマッチ塩基配列(mismatch base pairing)または挿入によるバルジ(bulge)生成をさらに含むことを特徴とする、請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸。
- 前記核酸は、siRNA、miRNA、shRNA、DsiRNA、lsiRNA、ss−siRNA、piRNA、endo−siRNA、およびasiRNAからなる群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸。
- 前記RNA干渉を誘導する核酸は、ターゲット遺伝子の発現を抑制することを特徴とする、請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を含む、遺伝子発現抑制用組成物。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を含む、遺伝子発現抑制用キット。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を細胞内に導入させる段階を含む、細胞内ターゲット遺伝子の発現抑制方法。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を細胞内で発現させる段階を含む、細胞内ターゲット遺伝子の発現抑制方法。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を細胞内に導入させる段階を含む、RNA干渉を誘導する核酸のガイド鎖(guide strand)によるオフターゲット効果を抑制する方法。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を細胞内に導入させる段階を含む、RNA干渉を誘導する核酸のパッセンジャ鎖(passenger strand)によるオフターゲット効果を抑制する方法。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を細胞内で発現させる段階を含む、RNA干渉を誘導する核酸のガイド鎖(guide strand)によるオフターゲット効果を抑制する方法。
- 請求項1に記載のRNA干渉を誘導する核酸を細胞内で発現させる段階を含む、RNA干渉を誘導する核酸のパッセンジャ鎖(passenger strand)によるオフターゲット効果を抑制する方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2013-0157498 | 2013-12-17 | ||
KR20130157498 | 2013-12-17 | ||
KR10-2014-0173038 | 2014-12-04 | ||
KR1020140173038A KR101696704B1 (ko) | 2013-12-17 | 2014-12-04 | 오프-타겟을 막기 위해 변형된 rna 간섭 유도 핵산 및 그 용도 |
PCT/KR2014/011994 WO2015093769A1 (ko) | 2013-12-17 | 2014-12-08 | 오프-타겟을 막기 위해 변형된 rna 간섭 유도 핵산 및 그 용도 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018189793A Division JP6748687B2 (ja) | 2013-12-17 | 2018-10-05 | オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉を誘導する核酸、遺伝子発現抑制用組成物、遺伝子発現抑制用キット、細胞内ターゲット遺伝子の発現抑制方法、オフターゲット効果を抑制する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017502665A true JP2017502665A (ja) | 2017-01-26 |
JP2017502665A5 JP2017502665A5 (ja) | 2018-02-22 |
Family
ID=53517374
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016541157A Pending JP2017502665A (ja) | 2013-12-17 | 2014-12-08 | オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉誘導拡散およびその用途 |
JP2018189793A Active JP6748687B2 (ja) | 2013-12-17 | 2018-10-05 | オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉を誘導する核酸、遺伝子発現抑制用組成物、遺伝子発現抑制用キット、細胞内ターゲット遺伝子の発現抑制方法、オフターゲット効果を抑制する方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018189793A Active JP6748687B2 (ja) | 2013-12-17 | 2018-10-05 | オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉を誘導する核酸、遺伝子発現抑制用組成物、遺伝子発現抑制用キット、細胞内ターゲット遺伝子の発現抑制方法、オフターゲット効果を抑制する方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10227592B2 (ja) |
EP (1) | EP3085784B1 (ja) |
JP (2) | JP2017502665A (ja) |
KR (1) | KR101696704B1 (ja) |
CN (1) | CN105829535B (ja) |
AU (1) | AU2014367550B2 (ja) |
BR (1) | BR112016014155A2 (ja) |
CA (1) | CA2933171C (ja) |
MX (1) | MX2016007980A (ja) |
RU (1) | RU2016129053A (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102012943B1 (ko) * | 2018-05-31 | 2019-08-21 | 고려대학교 산학협력단 | 마이크로rna의 비정규 표적을 억제하는 rna 간섭 유도 핵산 및 그 용도 |
WO2021010449A1 (ja) * | 2019-07-16 | 2021-01-21 | 国立大学法人 東京大学 | Rna分子、キメラ型na分子、二本鎖rna分子、および二本鎖キメラ型na分子 |
JP2021525762A (ja) * | 2018-05-31 | 2021-09-27 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションKorea University Research And Business Foundation | マイクロrnaを抑制する変形核酸及びその用途 |
JP2021525527A (ja) * | 2018-05-31 | 2021-09-27 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションKorea University Research And Business Foundation | マイクロrnaの非正規標的を抑制するrna干渉誘導核酸およびその用途 |
WO2022154123A1 (ja) * | 2021-01-15 | 2022-07-21 | 国立大学法人 東京大学 | Rna分子、キメラ型na分子、二本鎖rna分子、および二本鎖キメラ型na分子 |
JP7497061B2 (ja) | 2019-07-16 | 2024-06-10 | 国立大学法人 東京大学 | Rna分子、キメラ型na分子、二本鎖rna分子、および二本鎖キメラ型na分子 |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2018216509B2 (en) | 2017-01-31 | 2024-02-29 | Curigin Co.,Ltd. | Nucleic acid simultaneously inhibiting expression of mTOR gene and STAT3 gene |
KR102034764B1 (ko) * | 2018-01-17 | 2019-10-22 | (주)큐리진 | mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
WO2019231299A1 (ko) * | 2018-05-31 | 2019-12-05 | 고려대학교 산학협력단 | 마이크로rna를 억제하는 변형 핵산 및 이의 용도 |
KR102193864B1 (ko) * | 2019-05-31 | 2020-12-22 | 고려대학교 산학협력단 | 마이크로rna의 비정규 표적을 억제하는 rna 간섭 유도 핵산 및 그 용도 |
EP4019088A4 (en) | 2019-08-23 | 2024-01-17 | National Univ Corporation Tokai National Higher Education And Research System | RNA INHIBITOR AND USE THEREOF |
EP4176061A1 (en) * | 2021-01-30 | 2023-05-10 | E-Therapeutics plc | Nucleic acids containing abasic nucleotides |
WO2023020574A1 (en) * | 2021-08-18 | 2023-02-23 | Peking University | Engineered adar-recruiting rnas and methods of use thereof |
WO2023055774A1 (en) * | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Antisense oligonucleotides having one or more abasic units |
WO2023059948A1 (en) * | 2021-10-08 | 2023-04-13 | E-Therapeutics Plc | Nucleic acids containing abasic nucleosides |
EP4183825A1 (en) | 2021-11-23 | 2023-05-24 | SHPP Global Technologies B.V. | Thermoplastic film compositions having improved blue led light stability |
WO2023143479A1 (zh) * | 2022-01-28 | 2023-08-03 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 小rna及其在高血脂治疗中的用途 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007531520A (ja) * | 2004-04-01 | 2007-11-08 | ダーマコン, インコーポレイテッド | Rna干渉においてオフターゲット効果を減じるための修飾されたポリヌクレオチド類 |
WO2010145778A1 (en) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Qiagen Gmbh | MODIFIED siNA |
JP2011500003A (ja) * | 2007-10-03 | 2011-01-06 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド | 新規siRNA構造 |
JP2013511990A (ja) * | 2009-11-26 | 2013-04-11 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド | 末端置換を含むsiRNA化合物 |
JP2013535982A (ja) * | 2010-08-24 | 2013-09-19 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 内部非核酸スペーサーを含む一本鎖RNAi剤関連出願の相互参照本出願は、2010年8月24日に出願された米国特許仮出願第61/376,471号の恩典を主張し、該仮出願は引用により本明細書に組み込まれる。 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2004269150C1 (en) * | 2003-08-28 | 2010-11-18 | Novartis Ag | Interfering RNA duplex having blunt-ends and 3'-modifications |
WO2011056005A2 (ko) * | 2009-11-04 | 2011-05-12 | 성균관대학교산학협력단 | 안티센스 가닥에 의한 오프-타겟 효과를 최소화한 신규한 siRNA 구조 및 그 용도 |
WO2011084193A1 (en) | 2010-01-07 | 2011-07-14 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs |
-
2014
- 2014-12-04 KR KR1020140173038A patent/KR101696704B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-08 US US15/104,454 patent/US10227592B2/en active Active
- 2014-12-08 EP EP14872036.0A patent/EP3085784B1/en active Active
- 2014-12-08 CA CA2933171A patent/CA2933171C/en active Active
- 2014-12-08 AU AU2014367550A patent/AU2014367550B2/en active Active
- 2014-12-08 CN CN201480068785.4A patent/CN105829535B/zh active Active
- 2014-12-08 MX MX2016007980A patent/MX2016007980A/es unknown
- 2014-12-08 RU RU2016129053A patent/RU2016129053A/ru unknown
- 2014-12-08 BR BR112016014155A patent/BR112016014155A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2014-12-08 JP JP2016541157A patent/JP2017502665A/ja active Pending
-
2018
- 2018-10-05 JP JP2018189793A patent/JP6748687B2/ja active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007531520A (ja) * | 2004-04-01 | 2007-11-08 | ダーマコン, インコーポレイテッド | Rna干渉においてオフターゲット効果を減じるための修飾されたポリヌクレオチド類 |
JP2011500003A (ja) * | 2007-10-03 | 2011-01-06 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド | 新規siRNA構造 |
WO2010145778A1 (en) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Qiagen Gmbh | MODIFIED siNA |
JP2013511990A (ja) * | 2009-11-26 | 2013-04-11 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド | 末端置換を含むsiRNA化合物 |
JP2013535982A (ja) * | 2010-08-24 | 2013-09-19 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 内部非核酸スペーサーを含む一本鎖RNAi剤関連出願の相互参照本出願は、2010年8月24日に出願された米国特許仮出願第61/376,471号の恩典を主張し、該仮出願は引用により本明細書に組み込まれる。 |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102012943B1 (ko) * | 2018-05-31 | 2019-08-21 | 고려대학교 산학협력단 | 마이크로rna의 비정규 표적을 억제하는 rna 간섭 유도 핵산 및 그 용도 |
JP2021525762A (ja) * | 2018-05-31 | 2021-09-27 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションKorea University Research And Business Foundation | マイクロrnaを抑制する変形核酸及びその用途 |
JP2021525527A (ja) * | 2018-05-31 | 2021-09-27 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションKorea University Research And Business Foundation | マイクロrnaの非正規標的を抑制するrna干渉誘導核酸およびその用途 |
JP7162918B2 (ja) | 2018-05-31 | 2022-10-31 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーション | マイクロrnaを抑制する変形核酸及びその用途 |
JP7432929B2 (ja) | 2018-05-31 | 2024-02-19 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーション | マイクロrnaの非正規標的を抑制するrna干渉誘導核酸およびその用途 |
WO2021010449A1 (ja) * | 2019-07-16 | 2021-01-21 | 国立大学法人 東京大学 | Rna分子、キメラ型na分子、二本鎖rna分子、および二本鎖キメラ型na分子 |
JP7497061B2 (ja) | 2019-07-16 | 2024-06-10 | 国立大学法人 東京大学 | Rna分子、キメラ型na分子、二本鎖rna分子、および二本鎖キメラ型na分子 |
WO2022154123A1 (ja) * | 2021-01-15 | 2022-07-21 | 国立大学法人 東京大学 | Rna分子、キメラ型na分子、二本鎖rna分子、および二本鎖キメラ型na分子 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3085784A4 (en) | 2017-07-19 |
JP6748687B2 (ja) | 2020-09-02 |
CN105829535B (zh) | 2021-01-15 |
MX2016007980A (es) | 2016-12-16 |
RU2016129053A (ru) | 2018-01-23 |
AU2014367550B2 (en) | 2018-04-19 |
KR20150070944A (ko) | 2015-06-25 |
CN105829535A (zh) | 2016-08-03 |
EP3085784A1 (en) | 2016-10-26 |
CA2933171C (en) | 2022-12-06 |
US10227592B2 (en) | 2019-03-12 |
KR101696704B1 (ko) | 2017-01-16 |
BR112016014155A2 (pt) | 2018-01-09 |
JP2019030312A (ja) | 2019-02-28 |
EP3085784B1 (en) | 2020-10-28 |
AU2014367550A1 (en) | 2016-07-07 |
US20160304878A1 (en) | 2016-10-20 |
CA2933171A1 (en) | 2015-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6748687B2 (ja) | オフターゲットを防ぐために変形したrna干渉を誘導する核酸、遺伝子発現抑制用組成物、遺伝子発現抑制用キット、細胞内ターゲット遺伝子の発現抑制方法、オフターゲット効果を抑制する方法 | |
Portnoy et al. | Small RNA and transcriptional upregulation | |
Li et al. | Therapeutic targeting of microRNAs: current status and future challenges | |
Naguibneva et al. | An LNA-based loss-of-function assay for micro-RNAs | |
EP3358014B1 (en) | Method for stabilizing functional nucleic acids | |
KR101237036B1 (ko) | 안티센스 가닥에 의한 오프-타겟 효과를 최소화한 신규한 siRNA 구조 및 그 용도 | |
F Place et al. | Defining features and exploring chemical modifications to manipulate RNAa activity | |
Hogan et al. | Anti-miRs competitively inhibit microRNAs in Argonaute complexes | |
KR20110110776A (ko) | 유전자 발현의 특이적 억제를 위한 연장된 다이서 기질 제제 및 방법 | |
JP2015211680A (ja) | 遺伝子発現の阻害のためのショートヘアピンrna | |
Snead et al. | Biogenesis and function of endogenous and exogenous siRNAs | |
Gredell et al. | Impact of target mRNA structure on siRNA silencing efficiency: A large‐scale study | |
US10695362B2 (en) | Stabilization method of functional nucleic acid | |
WO2015093769A1 (ko) | 오프-타겟을 막기 위해 변형된 rna 간섭 유도 핵산 및 그 용도 | |
Zhou et al. | MicroRNA-related strategies to improve cardiac function in heart failure | |
Durso et al. | Chemical modifications in the seed region of miRNAs 221/222 increase the silencing performances in gastrointestinal stromal tumor cells | |
JP7050277B2 (ja) | Rna分子 | |
CN107630015B (zh) | 一种稳定的dna-rna双链结构 | |
Muñoz-Alarcón et al. | Modulating anti-microRNA-21 activity and specificity using oligonucleotide derivatives and length optimization | |
WO2023283553A1 (en) | Methods of generating core strands in conditionally activatable nucleic acid complexes | |
US11312958B2 (en) | Components and methods for producing toxic RNAs in eukaryotic cells | |
WO2023283548A1 (en) | Signal activatable nucleic acid constructs with wobble base pairings | |
EP4367238A1 (en) | Methods of placing locked nucleic acids in small interfering rna strands |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20161213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20161213 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170622 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170711 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170926 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20171201 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180111 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20180111 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20180605 |