KR102034764B1 - mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 - Google Patents

mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 Download PDF

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Abstract

본 발명은 mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 분자와, 이를 포함하는 항암용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, siRNA의 표적 특이성으로 인한 치료 효과가 높지 않은 단점을 극복하기 위하여, 암과 관련된 mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하도록 설계된 본원발명의 이중 가닥 siRNA는 암세포의 사멸을 촉진하는 효과가 있다. 또한, 항암제와의 병용 처리에서 암세포 사멸을 시너지적으로 향상시키는 효과가 있으므로, 다양한 암종에 항암용 조성물 또는 항암보조제로서 유용하게 이용될 수 있다.

Description

mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산{Nucleic acids for simultaneous inhibition of mTOR gene and STAT3 gene}
본 발명은 mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 분자와, 이를 포함하는 항암용 약학적 조성물에 관한 것이다.
암은 전세계적으로 가장 많은 사망자를 내는 질병 중 하나로, 혁신적인 암 치료제의 개발은 이에 대한 치료시 발생되는 의료비를 절감할 수 있음과 동시에 고부가가치를 창출할 수 있다. 또한, 2008년의 통계에 따르면, 기존항암제 내성을 극복 할 수 있는 분자 치료제는 주요 7개국(US, Japan, France, Germany, Italy, Spain, UK)에서 $17.5 billion을 차지했고, 2018년의 경우 약 $45 billion 정도의 market size를 차지하여, 2008년 대비 9.5%의 성장률을 보일 것이라 예측되고 있다. 암의 치료는 수술, 방사선치료, 화학요법, 생물학적 치료로 구분되는데, 이 중에 화학요법은 화학물질로서 암 세포의 증식을 억제하거나 죽이는 치료법으로 항암제에 의하여 나타나는 독성은 상당부분 정상세포에서도 나타나기 때문에 일정 정도의 독성을 나타내며, 항암제가 효과를 나타내다가도 일정 기간의 사용 후에는 효과가 상실되는 내성이 발생하기 때문에 암세포에 선택적으로 작용하고 내성이 생기지 않는 항암제의 개발이 절실하다 (암 정복의 현주소 Biowave 2004. 6(19)). 최근 암에 대한 분자유전정보의 확보를 통해 암의 분자적 특성을 표적으로 한 새로운 항암제의 개발이 진행되고 있으며, 암세포만이 가지고 있는 특징적인 분자적 표적(molecular target)을 겨냥하는 항암제들은 약제 내성이 생기지 않는다는 보고도 있다.
유전자의 발현을 억제하는 기술은 질병치료를 위한 치료제 개발 및 표적 검증에서 중요한 도구이다. 간섭 RNA(RNA interference, 이하 ‘RNAi’라고 한다)는 그 역할이 발견된 이후로, 다양한 종류의 포유동물세포(mammalian cell)에서 서열 특이적 mRNA에 작용한다는 사실이 밝혀졌다 (Silence of the transcripts: RNA interference in medicine. J Mol Med (2005) 83: 764773). RNAi는 21-25개의 뉴클레오타이드 크기의 이중나선 구조를 가진 작은 간섭 리보핵산 짧은 간섭 RNA (small interfering RNA, 이하 ‘siRNA’라고 한다)이 상보적인 서열을 가지는 전사체(mRNA transcript)에 특이적으로 결합하여 해당 전사체를 분해함으로써 특정 단백질의 발현을 억제하는 현상이다. 세포 내에서는 RNA 이중가닥이 Dicer라는 엔도뉴클라아제(endonuclease)에 의해 프로세싱되어 21 내지 23개의 이중가닥(base pair,bp)의 siRNA로 변환되며, siRNA 는 RISC(RNA-induced silencing complex)에 결합하여 가이드(안티센스) 가닥이 타겟 mRNA를 인식하여 분해하는 과정을 통해 타겟 유전자의 발현을 서열 특이적으로 저해한다 (NUCLEIC-ACID THERAPEUTICS: BASIC PRINCIPLES AND RECENT APPLICATIONS. Nature Reviews Drug Discovery. 2002. 1, 503-514). 베르트랑(Bertrand) 연구진에 따르면 동일한 타겟 유전자에 대한 siRNA가 안티센스 올리고뉴클레오티드(Antisense oligonucleotide, ASO)에 비하여 생체 내/외(in vitro 및 in vivo)에서 mRNA 발현의 저해효과가 뛰어나고, 해당 효과가 오랫동안 지속되는 효과를 포함하는 것으로 밝혀졌다 (Comparison of antisense oligonucleotides and siRNAs in cell culture and in vivo. Biochem. Biophys. Res.Commun. 2002. 296: 1000-1004). siRNA를 포함하는 RNAi 기술 기반 치료제 시장은 향후 세계 시장규모가 2020년경에 총 12조원 이상을 형성하는 것으로 분석되었으며, 해당 기술을 적용할 수 있는 대상이 획기적으로 확대되어 기존의 항체, 화합물 기반 의약품으로 치료하기 어려운 질병을 치료할 수 있는 차세대 유전자 치료기술로 평가되고 있다. 또한 siRNA의 작용 기작은 타겟 mRNA와 상보적으로 결합하여 서열 특이적으로 타겟 유전자의 발현을 조절하기 때문에, 기존의 항체 기반 의약품이나 화학물질(small molecule drug)이 특정한 단백질 표적에 최적화되기까지 오랜 동안의 개발 기간 및 개발 비용이 소요되는 것에 비하여, 적용할 수 있는 대상이 획기적으로 확대될 수 있고, 개발 기간이 단축되면서, 의약화가 불가능한 표적 물질을 포함한 모든 단백질 표적에 대하여 최적화된 리드 화합물을 개발할 수 있다는 장점을 가진다 (Progress Towards in Vivo Use of siRNAs. MOLECULAR THERAPY. 2006 13(4):664-670). 이에, 최근 이 리보핵산 매개 간섭현상이 기존의 화학 합성 의약 개발에서 발생되는 문제의 해결책을 제시하면서 전사체 수준에서 특정 단백질의 발현을 선택적으로 억제하여 각종 질병 치료제, 특히 종양 치료제 개발에 이용하려는 연구가 진행되고 있다. 또한, siRNA 치료제는 기존 항암제와 달리 표적이 명확하여 부작용이 예측 가능하다는 장점이 있으나, 이러한 표적 특이성은 다양한 유전자의 문제에 의해 발생하는 질병인 종양의 경우, 오히려 이러한 표적 특이성은 치료 효과가 높지 않은 원인이 되기도 한다.
mTOR(포유동물의 라파마이신 표적; mammalian Target of rapamycin)은 사이토카인-자극 세포 증식, 세포주기의 G1 위상을 조절하는 몇몇 중요 단백질을 위한 mRNA의 번역(translation), 및 인터루킨-2(IL-2) 유도 전사(transcription)를 포함하는, 다양한 신호 전환 경로에 있어서 중요한 효소이다. mTOR의 억제는 세포주기의 G1으로부터 S까지의 진행의 억제를 야기한다. mTOR 억제제는 면역억제, 항증식 및 항암 활성을 나타내므로, 이러한 질환의 치료를 위하여 mTOR이 표적으로 되고 있다 (Current Opinion in Lipidology, 16: 317-323, 2005). 또한, mTOR은 자가소화(autophage) 조절에 중요한 인자로서, 자가소화 경로를 조절하는 mTOR을 표적으로 하여 다양한 질환 예를들어, 암, 신경변성 질환, 심장질환, 노화, 면역질환, 감염 질환 및 크론병 등을 치료할 수 있다(Immunology, 7:767-777; Nature 451: 1069-1075, 2008).
STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3)는 세포 외부의 다양한 성장인자(growth factor)와 사이토카인(cytokine)의 신호를 핵에 전달하여 전사를 촉진하는 전사조절인자(transcription factor)로, 세포질 내 비활성 상태에서 전사활성 도메인(transactivation domain)의 타이로신 잔기가 인산화되어 활성화되면 핵 안으로 유입된다 (STAT3 inhibitors for cancer therapy: Have all roads been explored Jak-Stat. 2013;1;2(1):e22882). 인산화된 STAT3(p-STAT3)는 핵의 DNA와 결합하여 세포의 성장(proliferation)과 분화(differentiation) 등의 종양형성(tumorigenesis)에 관련된 광범위한 표적유전자의 발현을 유도하며, 고형암 및 혈액암 환자의 약 70%에서 상시 활성화 되어있다 (Role of STAT3 in cancer metastasis and translational advances. BioMed research international. 2013; 2013:421821). 하지만 STAT3와 같은 전사인자들은 단백의 3차 구조상, 활성을 저해할 수 있는 표적을 찾기 힘들기 때문에 전통적인 합성 신약 개발 분야에서 난개발(undruggable)로 여겨져 왔다 (Transcription Factor STAT3 as a Novel Molecular Target for Cancer Prevention. Cancers. 2014; 16;6(2):926-57). 따라서 STAT3의 발현을 저해할 수 있는 siRNA 치료제 및 이의 전달기술에 대한 시장의 수요는 매우 높은 상황이다.
즉, Stat3 및 mTOR 는 발현 정도에 따라 폐암, 전립선암, 두경부 암 등에서 예후가 결정되는 주요한 암 관련 유전자로, 항암제 개발에 타겟이 되고 있지만, 세포질에 존재하므로 기존에 많이 사용되는 항체치료제로는 접근이 불가하고, 또한 약물로 전달하기에는 시스테믹한 부작용이 예상되어 이들을 억제하기 위한 신약 개발이 어려운 실정이다.
본 발명에서는 siRNA의 표적 특이성으로 인한 치료 효과가 높지 않은 단점을 극복하기 위하여, 암과 관련된 mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 siRNA를 제작하였으며, 이의 항암 활성 및 항암제와의 시너지적 항암 활성을 확인함으로써 이를 암 예방 또는 치료용 약학 조성물로 사용하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적의 달성을 위해, 본 발명은 mTOR 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 분자를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 발현 벡터를 도입한 재조합 미생물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 핵산 분자를 유효성분으로 포함하는, 항암용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 본원발명의 이중 가닥 siRNA는 센스 가닥은 mTOR 유전자의 발현을 억제하고 안티센스 가닥은 STAT3 유전자의 발현 억제하여, 각각의 siRNA를 따로 처리하지 않아도 두 유전자를 동시에 억제할 수 있다. 이를 통해 암세포의 사멸을 촉진하고, 항암제와의 병용 처리에서 암세포 사멸을 시너지적으로 향상시키는 효과가 있으며, siRNA는 국소 전달이 가능하고, 선택성이 뛰어나므로, 다양한 암종에 항암용 조성물 또는 항암보조제로서 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 이중 표적의 이중 가닥 siRNA에 의한 mTOR 또는 STAT3 유전자 발현 억제 효과를 확인한 도이다.
도 2는 본 발명의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때의 인간 폐암세포주 A549 세포의 세포 생존율을 확인한 도이다.
도 3은 시스플라틴 처리 후, 본 발명의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때의 인간 폐암세포주 A549 세포의 세포 생존율을 확인한 도이다.
도 4는 파클리탁셀 처리 후, 본 발명의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때의 인간 폐암세포주 A549 세포의 세포 생존율을 확인한 도이다.
도 5는 5-FU(5-fluorouracil) 처리 후, 본 발명의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때의 인간 폐암세포주 A549 세포의 세포 생존율을 확인한 도이다.
본 발명은 mTOR 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 분자를 제공한다.
상기 핵산 분자는 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 16; 또는 서열번호 17 및 18;의 염기서열을 포함할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 및 17로 표시되는 염기서열은 RNA 간섭에 의해 mTOR유전자 발현을 억제하고, 상기 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 및 18로 표시되는 염기서열은 RNA 간섭에 의해 STAT3 유전자의 발현을 억제할 수 있어, 본 발명의 핵산 분자는 mTOR 유전자와 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 서열번호 1은 서열번호 2와, 서열번호 3은 서열번호 4와, 서열번호 5는 서열번호 6과, 서열번호 7은 서열번호 8과, 서열번호 9는 서열번호 10과, 서열번호 11은 서열번호 12와, 서열번호 13은 서열번호 14와, 서열번호 15는 서열번호 16과, 서열번호 17은 서열번호 18과 부분적으로 상보적 결합을 이루고 있는 이중 가닥(double strand) siRNA를 이루도록 제작하였고, 이중 가닥의 siRNA가 각각 mTOR 및 STAT3 유전자를 표적화하여 발현을 억제함을 확인함으로써 이중 표적 siRNA 세트임을 확인하였다.
본 발명에서 mTOR 또는 STAT3를 표적으로 하는 siRNA는 인간(Homo sapiens)의 mTOR 유전자 또는 STAT3 유전자의 일부와 100% 상보적인 서열을 가지고, mTOR 유전자 또는 STAT3 유전자의 mRNA를 분해하거나, 번역을 억제할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "발현 억제"란 표적 유전자의 발현 또는 번역 저하를 야기하는 것을 의미하며, 바람직하게는 이에 의해 표적 유전자 발현이 탐지 불가능해지거나 무의미한 수준으로 존재하게 되는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "siRNA(small interfering RNA)"란 특정 mRNA의 절단(cleavage)을 통하여 RNAi(RNA interference) 현상을 유도할 수 있는 짧은 이중사슬 RNA를 의미한다. 일반적으로 siRNA는 타겟 유전자의 mRNA와 상동인 서열을 가지는 센스 RNA 가닥과 이와 상보적인 서열을 가지는 안티센스 RNA 가닥으로 구성되나, 본 발명의 이중 가닥 siRNA는 센스 RNA 가닥이 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 및 17의 염기서열로 표시되는 siRNA (mTOR 유전자에 대한 안티센스 가닥)이고, 안티센스 RNA 가닥이 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 및 18의 염기서열로 이루어진 siRNA(STAT3 유전자에 대한 안티센스 가닥)이므로, 이중 가닥의 siRNA가 각각 동시에 mTOR 및 STAT3 유전자의 발현을 억제할 수 있기 때문에 효율적인 유전자 넉다운(knock-down) 방법으로서 또는, 유전자치료(gene therapy)의 방법으로 제공된다.
일실시예에 있어서, 세트 1의 서열번호 1 및 2의 siRNA는 21mer 중 17mer가, 세트 2의 서열번호 3 및 4의 siRNA는 20mer 중 16mer가, 세트 3의 서열번호 5 및 6의 siRNA는 19mer 중 15mer가, 세트 4의 서열번호 7 및 8의 siRNA는 18mer 중 14mer가, 세트 5의 서열번호 9 및 10의 siRNA는 17mer 중 16mer가 상보적으로 결합한다. 또한, 세트 6의 서열번호 11 및 12의 siRNA는 20mer 중 17mer가, 세트 7의 서열번호 13 및 14의 siRNA는 19mer 중 16mer가, 세트 8의 서열번호 15 및 16의 siRNA는 18mer 중 15mer가, 세트 9의 서열번호 17 및 18의 siRNA는 17mer 중 15mer가 상보적 결합한다.
상기 염기 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 mTOR 및 STAT3 유전자 발현을 동시에 억제하는 핵산분자는 이를 구성하는 핵산 분자의 작용성 등가물, 예를 들어, 핵산 분자의 일부 염기서열이 결실(deletion), 치환(substitution) 또는 삽입(insertion)에 의해 변형되었지만, 핵산 분자와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체(variants)를 포함하는 개념이다. 구체적으로, 상기 유전자는 서열번호 1 내지 18의 염기 서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 핵산 분자에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 핵산 분자 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다.
본 발명에서 mTOR 및 STAT3를 표적으로 하는 이중 가닥 siRNA가 전달된 세포에서 적절히 전사되게 하기 위해서는 이를 포함하는 shRNA, 특히, 서열번호 1 내지 18의 염기서열이 일부 변형된 shRNA를 적어도 프로모터에 작동가능하게 연결되는 것이 바람직하다. 상기 프로모터는 진핵세포에서 기능할 수 있는 프로모터라면 어떤 것이든지 무방하다. mTOR 및 STAT3를 표적으로 하는 이중 가닥 siRNA 또는 shRNA의 효율적인 전사를 위하여 필요에 따라 리더 서열, 폴리아데닐화 서열, 프로모터, 인핸서, 업스트림 활성화 서열, 신호펩타이드 서열 및 전사 종결인자를 비롯한 조절서열을 추가로 포함할 수도 있다.
본 발명의 용어 "shRNA(short hairpin RNA)"란, 단일가닥 RNA에서 부분적으로 회문상의 염기서열을 포함함으로써, 3´영역에 이중가닥 구조를 가지고 헤어핀과 같은 구조를 형성하고, 세포내에서 발현된 후에 세포내에 존재하는 RNase의 일종인 dicer에 의하여 절단되어 siRNA로 변환될 수 있는 RNA를 의미하는데, 상기 이중가닥 구조의 길이는 특별히 한정되지는 않으나, 바람직하게는 10 뉴클레오티드 이상이고, 보다 바람직하게는 20 뉴클레오티드 이상이다. 본 발명에 있어서, 상기 shRNA는 벡터에 포함될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "벡터"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단으로 플라스미드 벡터; 파지미드 벡터; 코즈미드 벡터; 그리고 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터 같은 바이러스 벡터 등을 포함될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 벡터에서 유전자는 프로모터와 작동적으로 결합(operatively linked)되어 있다.
본 발명에 있어서, 용어 "작동적으로 결합된"은 유전자 발현 조절 서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절 인자 결합 위치의 어레이)과 다른 유전자 서열 사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 유전자 서열의 전사 및/또는 해독을 조절하게 된다.
본 발명의 벡터 시스템은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있으며, 이에 대한 구체적인 방법은 Sambrook et al.(2001), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press에 개시되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터(예컨대, tac 프로모터, lac 프로모터, lacUV5 프로모터, lpp 프로모터, pLλ 프로모터, pRλ 프로모터, rac5 프로모터, amp 프로모터, recA 프로모터, SP6 프로모터, trp 프로모터 및 T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 숙주 세포로서 E. coli(예컨대, HB101, BL21, DH5α 등)가 이용되는 경우, E. coli 트립토판 생합성 경로의 프로모터 및 오퍼레이터 부위(Yanofsky, C.(1984), J. Bacteriol., 158:1018-1024) 그리고 파아지 λ의 좌향 프로모터(pLλ 프로모터, Herskowitz, I. and Hagen, D.(1980), Ann. Rev. Genet., 14:399-445)가 조절 부위로서 이용될 수 있다.
한편, 본 발명에 이용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드 (예: pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파아지미드(예: pComb3X), 파아지 또는 바이러스 (예: SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.
한편, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 유전체로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 사 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
본 발명의 벡터는 단백질의 정제를 용이하게 하기 위하여, 필요에 따라 다른 서열과 융합될 수도 있으며, 융합되는 서열은 예컨대, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질(NEB, USA), FLAG (IBI, USA) 및 6x His(hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 발현 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 발현 벡터를 도입한 재조합 미생물을 제공한다.
본 발명의 벡터를 안정되면서 연속적으로 클로닝 및 발현시킬 수 있는 숙주 세포는 당업계에 공지된 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있으며, 예컨대, 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 바실러스 서브틸리스 및 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 스트렙토마이세스(Streptomyces), 슈도모나스(Pseudomonas)(예를 들면, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida)), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis) 또는 스타필로코쿠스(Staphylococcus)(예를 들면, 스타필로코쿠스 카르노수스(Staphylocus carnosus))와 같은 원핵 숙주 세포를 포함하나 이로 제한되는 것은 아니다. 상기 숙주세포는 바람직하게는 E. coli이고 보다 바람직하게는 E.coli ER2537, E. coli ER2738, E. coli XL-1 Blue, E. coli BL21(DE3), E. coli JM109, E. coli DH 시리즈, E. coli TOP10, E. coli TG1 및 E. coli HB101이다.
본 발명의 벡터를 숙주 세포 내로 운반하는 방법은, CaCl2 방법(Cohen, S.N. et al.(1973), Proc. Natl. Acac. Sci. USA, 9:2110-2114), 하나한 방법(Cohen, S.N. et al.(1973), Proc. Natl. Acac. Sci. USA, 9:2110-2114; 및 Hanahan, D.(1983), J. Mol. Biol., 166:557-580) 및 전기 천공 방법(Dower, W.J. et al.(1988), Nucleic. Acids Res., 16:6127-6145) 등에 의해 실시될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 핵산 분자를 유효성분으로 포함하는, 항암용 약학 조성물을 제공한다.
상기 핵산 분자는 항암제를 추가로 포함할 수 있고, 예를 들어, 아시바이신, 아클라루비신, 아코다졸, 아크로나이신, 아도젤레신, 알라노신, 알데스루킨, 알로푸리놀 소듐, 알트레타민, 아미노글루테티미드, 아모나파이드, 암플리겐, 암사크린, 안드로겐스, 안구이딘, 아피디콜린 글리시네이트, 아사레이, 아스파라기나아제, 5-아자시티딘, 아자티오프린, 바실러스 칼메테-구에린(BCG), 베이커스 안티폴, 베타-2-디옥시티오구아노신, 비스안트렌 HCl, 블레오마이신 설페이트, 불서판, 부티오닌 설폭시민, BWA 773U82, BW 502U83/HCl, BW 7U85 메실레이트, 세라세미드, 카르베티머, 카르보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 클로로퀴녹살린-설포나미드, 클로로조토신, 크로모마이신 A3, 시스플라틴, 클라드리빈, 코르티코스테로이드, 코리너박테리움 파르붐, CPT-11, 크리스나톨, 사이클로사이티딘, 사이클로포스파미드, 사이타라빈, 사이템베나, 다비스 말리에이트, 데카르바진, 닥티노마이신, 다우노루바이신 HCl, 디아자유리딘, 덱스라족산, 디언하이드로 갈락티톨, 디아지쿠온, 디브로모둘시톨, 디데민 B, 디에틸디티오카르바메이트, 디클라이코알데하이드, 다이하이드로-5-아자사이틴, 독소루비신, 에치노마이신, 데다트렉세이트, 에델포신, 에플롤니틴, 엘리옷스 용액, 엘사미트루신, 에피루비신, 에소루비신, 에스트라머스틴 포스페이트, 에스트로겐, 에타니다졸, 에티오포스, 에토포사이드, 파드라졸, 파자라빈, 펜레티나이드, 필그라스팀, 피나스테라이드, 플라본 아세트산, 플록스유리딘, 플루다라빈 포스페이트, 5'-플루오로우라실, Fluosol™, 플루타미드, 갈륨 나이트레이트, 겜사이타빈, 고세레린 아세테이트, 헤프설팜, 헥사메틸렌 비스아세트아미드, 호모하링토닌, 하이드라진 설페이트, 4-하이드록시안드로스테네디온, 하이드로지우레아, 이다루비신 HCl, 이포스파미드, 4-이포메아놀, 이프로플라틴, 이소트레티노인, 류코보린 칼슘, 류프로라이드 아세테이트, 레바미솔, 리포좀 다우노루비신, 리포좀 포집 독소루비신, 로머스틴, 로니다민, 마이탄신, 메클로레타민 하이드로클로라이드, 멜팔란, 메노가릴, 메르바론, 6-머캅토푸린, 메스나, 바실러스 칼레테-구에린의 메탄올 추출물, 메토트렉세이트, N-메틸포름아미드, 미페프리스톤, 미토구아존, 마이토마이신-C, 미토탄, 미톡산트론 하이드로클로라이드, 모노사이트/마크로파아지 콜로니-자극 인자, 나빌론, 나폭시딘, 네오카르지노스타틴, 옥트레오타이드 아세테이트, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 파크리탁셀, 팔라, 펜토스타틴, 피페라진디온, 피포브로만, 피라루비신, 피리트렉심, 피록산트론 하이드로클로라이드, PIXY-321, 플리카마이신, 포르피머 소듐, 프레드니무스틴, 프로카르바진, 프로게스틴스, 파이라조푸린, 라족산, 사르그라모스팀, 세무스틴, 스피로게르마늄, 스피로무스틴, 스트렙토나이그린, 스트렙토조신, 술로페너르, 수라민 소듐, 타목시펜, 탁소레레, 테가푸르, 테니포사이드, 테레프탈아미딘, 테록시론, 티오구아닌, 티오테파, 티미딘 인젝션, 티아조푸린, 토포테칸, 토레미펜, 트레티노인, 트리플루오페라진 하이드로클로라이드, 트리플루리딘, 트리메트렉세이트, TNF(tumor necrosis factor), 우라실 머스타드, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 빈데신, 비노렐빈, 빈졸리딘, Yoshi 864, 조루비신, 사이토신아라비노시드, 에토포시드, 멜파란, 탁솔 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 바람직하게는 시스플라틴, 파클리탁셀, 5-FU(5-fluorouracil), 메토트렉세이트, 독소루비신, 다우노루비신, 사이토신아라비노시드, 에토포시드, 멜파란, 클로람부실, 사이클로포스파마이드, 빈데신, 마이토마이신, 블레오마이신, 타목시펜 및 탁솔이고, 더욱 바람직하게는, 시스플라틴, 파클리탁셀 또는 5-FU(5-fluorouracil)이나, 본 발명의 핵산분자와 병용 처리하여 항암 효과에 시너지 효과를 나타낼 수 있는 목적을 달성하기 위해서라면, 이에 제한되지 않는다.
상기 암은 대장암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 백혈병, 림프종, 위암, 폐암, 췌장암, 비소세포성폐암, 간암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종, 골암, 피부암, 두부암, 경부암, 피부흑색종, 안구내흑색종, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직육종, 요도암, 음경암, 중추신경계(central nervous system; CNS) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수종양, 다형성교모세포종 및 뇌하수체선종으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에는 단일 도메인 항체 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있으나, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 더 포함하여 그 효과를 증가시킬 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 단일 도메인 항체 의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 5,000 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 5,000 ㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 암 및 이의 합병증의 예방 또는 치료에 이용될 수 있으며, 항암보조제로도 사용될 수 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 이중 표적 siRNA 제작
STAT3(signal transducer and activator of transcription 3) 및 mTOR(mammalian target of rapamycin)를 동시에 억제할 수 있는 이중 표적 siRNA (double strand)를 하기 표 1의 서열로 제작하였다 (Bioneer, Daejeon, Korea).
set siRNA 서열 Length 상보적 결합 서열번호
1 antisense_mTOR(5'→3') gactgtggcatccacctgcat 21
 17
 1
antisense_STAT3(3'→5') ctgactccgcggatggacgta 2
2 antisense_mTOR(5'→3') gactgtggcatccacctgca 20
 16
 3
antisense_STAT3(3'→5') ctgactccgcggatggacgt　 4
3 antisense_mTOR(5'→3') gactgtggcatccacctgc　 19
 15
 5
antisense_STAT3(3'→5') ctgactccgcggatggacg　 6
4 antisense_mTOR(5'→3') gactgtggcatccacctg 18
 14
 7
antisense_STAT3(3'→5') ctgactccgcggatggac 8
5 antisense_mTOR(5'→3') caagctgctgtggctga　 17
 16
 9
antisense_STAT3(3'→5') gttcgacgacatcgact　 10
6 antisense_mTOR(5'→3') tgctgggccgcatgcgctgc 　 20
 17
 11
antisense_STAT3(3'→5') acgacccggcgtcaccgacg 　 12
7 antisense_mTOR(5'→3') gctgggccgcatgcgctgc 19
 16
 13
antisense_STAT3(3'→5') cgacccggcgtcaccgacg 14
8 antisense_mTOR(5'→3') ctgggccgcatgcgctgc 　 18
 15
 15
antisense_STAT3(3'→5') gacccggcgtcaccgacg 　 16
9 antisense_mTOR(5'→3') tgggccgcatgcgctgc 　 17
 14
 17
antisense_STAT3(3'→5') acccggcgtcaccgacg 18
상기 세트 1의 서열번호 1 및 2의 siRNA는 21mer 중 17mer가, 세트 2의 서열번호 3 및 4의 siRNA는 20mer 중 16mer가, 세트 3의 서열번호 5 및 6의 siRNA는 19mer 중 15mer가, 세트 4의 서열번호 7 및 8의 siRNA는 18mer 중 14mer가, 세트 5의 서열번호 9 및 10의 siRNA는 17mer 중 16mer가 상보적으로 결합한다. 또한, 세트 6의 서열번호 11 및 12의 siRNA는 20mer 중 17mer가, 세트 7의 서열번호 13 및 14의 siRNA는 19mer 중 16mer가, 세트 8의 서열번호 15 및 16의 siRNA는 18mer 중 15mer가, 세트 9의 서열번호 17 및 18의 siRNA는 17mer 중 15mer가 상보적 결합한다.
구체적으로, 각 세트의 두 서열이 double strand 형태로 세포 내로 들어간 뒤, 각 세트의 antisense_mTOR의 siRNA가 mTOR mRNA(gi|206725550|ref|NM_004958.3| Homo sapiens mechanistic target of rapamycin (serine/threonine kinase) (MTOR), mRNA)의 표적 부위에 상보적으로 결합한다.
또한, 각 세트의 antisense_STAT3의 siRNA가 STAT mRNA(gi|47080104|ref|NM_139276.2| Homo sapiens signal transducer and activator of transcription 3 (acute-phase response factor)(STAT3), transcript variant 1, mRNA)의 표적 부위에 상보적으로 결합하여 mTOR 및 STAT3 유전자 발현을 감소시킨다.
실험예 1. 이중 표적 siRNA의 mTOR 및 STAT3 유전자 발현 억제 효과 확인
12-웰 플레이트에 Hela 세포를 분주한 뒤, 세포 confluent가 50%가 될 때까지 10% FBS (Hyclone 사)가 첨가된 RPMI 배지 (Hyclone 사)에서 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하였다. 그 후, 상기 세포에 상기 실시예 1에서 제작한 이중 표적 siRNA를 lipofectamine3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)으로 트랜스펙션하여 Bcl1, BI1, AR, mTOR 및 STAT3를 동시에 낙다운하였다. 트랜스펙션 48시간 후, 세포를 파쇄하여 GeneJET RNA Purification Kit (Invitrogen)로 총 RNA를 추출하였다. 추출한 총 RNA를 주형으로 사용하여 RevoScriptTM RT PreMix(iNtRON BIOTECHNOLOGY)로 역전사 반응을 수행하였다. 역전사된 cDNA를 25 내지 200ng 함유한 시료 20㎕와 AmpONE taq DNA polymerase (GeneAll) 및 TaqMan Gene Expression assays (Applied Biosystems)를 이용하여 mTOR (Hs00234522_m1), STAT3 (Hs01047580_m1) 및 GAPDH (Hs02758991_g1)에 대하여, ABI PRISM 7700 Sequence Detection System 및 QS3 Real-time PCR(Biosystems)을 이용하여 반응을 수행하였다. Real-time PCR 반응 조건은 [50℃에서 2분, 95℃에서 10분, 및 95℃에서 15초 및 60℃에서 60초의 두 단계 사이클]을 총 40 사이클로 수행하였다. 모든 반응은 3회씩 반복수행되고 이들의 평균값을 구하였다. 이렇게 얻은 결과들은 하우스키핑 유전자인 GAPDH의 mRNA 값에 대해 정규화하였다.
그 결과, 세트 1-9의 이중 표적 siRNA에 의해 mTOR 및 STAT3는 대조군과 비교하여, 잔여 발현이 약 20 내지 40%인 것으로 확인되어, 이중 표적 siRNA가 두 유전자 모두 동시에 발현 억제하는 것을 알 수 있었다 (도 1).
실험예 2. 이중 표적 siRNA에 의한 암세포 사멸 효과 확인
본 발명의 표 1의 세트1-9의 이중 표적 siRNA에 의한 암세포에 대한 사멸 효과를 확인하기 위하여, 인간 폐암세포주 A549 세포를 96-웰 플레이트에 5×103cell/웰로 분주한 뒤, lipofectamine 3000으로 이중 표적 siRNA (mTOR 및 STAT3 동시 낙다운)을 각각 세포에 트랜스펙션하였다. 트랜스펙션 48시간 후, 추가로 24시간 뒤에 5mg/mL MTT (Promega, Ltd.)를 세포에 처리하고 4시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 배지를 제거하고 가용화 용액(solubilization solution) 및 정지 용액(stop solution) 150㎕을 처리하고 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션 하였다. 반응 용액의 흡광도를 570nm에서 측정하고 하기 수학식을 이용하여 세포 생존율을 계산하였다.
Figure 112018005491057-pat00001
그 결과, 본 발명의 세트 1-9의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때, 세포 생존율이 대조군과 비교하여 유의적으로 감소됨을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 세트 1-9의 이중 표적 siRNA는 효과적으로 암세포를 사멸함을 확인하였다(도 2).
실험예 3. 이중 표적 siRNA와 항암제 병용 처리에 의한 암세포 사멸 효과 확인
3-1. 시스플라틴(cisplatin)과의 병용 처리
인간 폐암세포주 A549 세포를 96-웰 플레이트에 5×103cell/웰로 분주한 뒤, lipofectamine3000으로 이중 표적 siRNA(mTOR 및 STAT3 동시 낙다운)을 각각 세포에 트랜스펙션하였다. 트랜스펙션 48시간 후, 시스플라틴 5μM을 처리하고 10시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 상기 실험예 2에서와 같이 MTT 반응을 수행하고, 이의 흡광도를 570nm에서 측정하여 세포 생존율을 계산하였다.
그 결과, 시스플라틴과의 병용 처리하고, 본 발명의 세트 1-9의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때, 세포 생존율이 약 50-70%까지 감소하고, 대조군과 비교하여 유의적인 차이를 보임을 확인하였다. 따라서, 항암제와의 병용 처리에서도 두 유전자를 동시에 억제할 때 세포사멸효과가 현저히 향상됨을 확인하였다(도 3).
3-2. 파클리탁셀(paclitaxel)과의 병용 처리
인간 폐암세포주 A549 세포를 96-웰 플레이트에 5×103cell/웰로 분주한 뒤, lipofectamine3000으로 이중 표적 siRNA (mTOR 및 STAT3 동시 낙다운)을 각각 세포에 트랜스펙션하였다. 트랜스펙션 48시간 후, 파클리탁셀 5μM을 처리하고 10시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 상기 실험예 2에서와 같이 MTT 반응을 수행하고, 이의 흡광도를 570nm에서 측정하여 세포 생존율을 계산하였다.
그 결과, 파클리탁셀과의 병용 처리하고, 본 발명의 세트 1-9의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때, 세포 생존율이 약 30-50%까지 감소하고, 대조군과 비교하여 유의적인 차이를 보임을 확인하였다. 따라서, 항암제와의 병용 처리에서도 두 유전자를 동시에 억제할 때 세포사멸효과가 현저히 향상됨을 확인하였다(도 4).
3-3. 5-플루오로우라실(5-FU, 5-fluorouracil)과의 병용 처리
인간 폐암세포주 A549 세포를 96-웰 플레이트에 5×103cell/웰로 분주한 뒤, lipofectamine3000으로 이중 표적 siRNA (mTOR 및 STAT3 동시 낙다운)을 각각 세포에 트랜스펙션하였다. 트랜스펙션 48시간 후, 5-플루오로우라실 1μM을 처리하고 10시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 상기 실험예 2에서와 같이 MTT 반응을 수행하고, 이의 흡광도를 570nm에서 측정하여 세포 생존율을 계산하였다.
그 결과, 5-플루오로우라실과 병용 처리하고, 본 발명의 세트 1-9의 이중 표적 siRNA로 mTOR 및 STAT3를 동시에 억제하였을 때, 세포 생존율이 약 30%까지 감소하고, 대조군과 비교하여 유의적인 차이를 보임을 확인하였다. 따라서, 항암제와의 병용 처리에서도 두 유전자를 동시에 억제할 때 세포사멸효과가 현저히 향상됨을 확인하였다(도 5).
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Claims (11)

  1. mTOR(mammalian target of rapamycin) 유전자 및 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3) 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 분자이고,
    상기 핵산 분자는 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 16; 및 서열번호 17 및 18;로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 염기서열을 포함하는 핵산 분자.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 및 17로 표시되는 염기서열은 RNA 간섭에 의해 mTOR유전자 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 핵산 분자.
  4. 제1항에 있어서, 상기 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 및 18로 표시되는 염기서열은 RNA 간섭에 의해 STAT3 유전자의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 핵산 분자.
  5. 제1항에 있어서, 상기 서열번호 1은 서열번호 2와, 서열번호 3은 서열번호 4와, 서열번호 5는 서열번호 6과, 서열번호 7은 서열번호 8과, 서열번호 9는 서열번호 10과, 서열번호 11은 서열번호 12와, 서열번호 13은 서열번호 14와, 서열번호 15는 서열번호 16과, 서열번호 17은 서열번호 18과 부분적으로 상보적 결합을 이루고 있는 이중 가닥(double strand) siRNA인 것을 특징으로 하는, 핵산 분자.
  6. 삭제
  7. 제1항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현 벡터.
  8. 제7항의 재조합 발현 벡터를 도입한 재조합 미생물.
  9. 제1항의 핵산 분자를 유효성분으로 포함하는, 폐암의 항암용 약학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 조성물은 항암제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 폐암의 항암용 약학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 항암제는 시스플라틴, 파클리탁셀, 5-FU(5-fluorouracil), 메토트렉세이트, 독소루비신, 다우노루비신, 사이토신아라비노시드, 에토포시드, 멜파란, 클로람부실, 사이클로포스파마이드, 빈데신, 마이토마이신, 블레오마이신, 타목시펜 및 탁솔로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 항암제인 것을 특징으로 하는, 폐암의 항암용 약학적 조성물.

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