JP2017053860A - 希少ではない細胞を用いて希少細胞を検出する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、概して医療診断に関し、より具体的には循環性腫瘍細胞(CTC)などの希少細胞の検出および分類に関する。
上皮がんを有する患者における細胞レベルでの長期的な疾患モニタリングに関して、重大なまだ満たされていない医学的必要性が存在する。治療反応および疾患進行を予測および監視することは、疾患の自然歴と治療圧力に対する選択的な選択工程とを経た上皮がん患者において特に重要である。それぞれの微少環境における原発性腫瘍および転移性腫瘍の理解において進展がみられるが、液相中のがんは血流内に広がり血流を占有するため、液相中のがんの動態の理解にはかなりの障壁が存在する。がんの循環性の構成要素は、その中に将来の転移を生じさせる細胞を含み、したがって研究にあたり説得力のある標的である。
以下に、本発明の基本的な諸特徴および種々の態様を列挙する。
[1]
対象からの試料中の細胞を検出するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)少なくとも1つの希少細胞と、希少細胞の濃度の少なくとも10倍の濃度で存在する少なくとも1つの細胞とを有することが疑われる試料を提供する工程;
(b)試料を少なくとも1つの検出可能な因子と接触させる工程;
(c)(b)の工程の試料に対して細胞の画像処理を行い、細胞画像を作製する工程;および
(d)(c)の工程の画像から細胞を解析することにより試料中の他の細胞と比較して少なくとも1つの希少細胞を検出し、それによって試料中の希少細胞を検出する工程。
[2]
少なくとも1つの希少細胞と、少なくとも1つの希少ではない細胞とがスライドに付着されている(a')の工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[3]
(d)の工程が、解析を行うための実行コードを含むコンピュータで行われる、[1]記載の方法。
[4]
(d)の工程の結果がグラフィカルユーザインターフェイス上に示される(e)の工程をさらに含む、[3]記載の方法。
[5]
(c)の工程の細胞の画像処理が、少なくとも1種の検出可能な因子に対する露光限界を最適化する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[6]
少なくとも1種の検出可能な因子に対する露光限界が、少なくとも1つの希少ではない細胞からのシグナルを用いて決定される、[5]記載の方法。
[7]
少なくとも1種の検出可能な因子が、細胞マーカーと結合し、かつ陽性マーカー、陰性マーカー、核マーカー、内容マーカー、およびそれらの任意の組み合わせから選択される、[5]記載の方法。
[8]
露光限界が、画像を作製する前に最適化される、[5]記載の方法。
[9]
露光限界が、画像を作製した後に最適化される、[5]記載の方法。
[10]
(d)の工程を行う前に試料が再画像化される(c')の工程をさらに含む、[5]記載の方法。
[11]
(c)の工程の細胞の画像処理が、露光時間を最適化しデータ収集時間を短縮する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[12]
少なくとも1つの細胞からのシグナルが、精度管理パラメータを決定するために用いられる、[1]記載の方法。
[13]
精度管理パラメータが、スライド上の少なくとも1つの細胞の分布である、[12]記載の方法。
[14]
精度管理パラメータが、複数の細胞画像のアライメントである、[12]記載の方法。
[15]
少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーおよび核マーカーであり、かつアライメントが、異なる画像上にそれぞれ存在する核マーカーからのシグナルを陰性マーカーからのシグナルと合わせることによって決定される、[14]記載の方法。
[16]
精度管理パラメータが細胞染色の品質である、[12]記載の方法。
[17]
少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーおよび核マーカーであり、かつ細胞染色の品質が、核マーカーからのシグナルに対する陰性マーカーからのシグナルの比を計算することによって決定される、[16]記載の方法。
[18]
比が1.2未満である、[17]記載の方法。
[19]
少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーであり、かつ精度管理パラメータが希少ではない細胞全体にわたる陰性マーカーの分布である、[12]記載の方法。
[20]
分布が、平均値、標準偏差、変動係数、またはそれらの任意の組み合わせを用いて計算される、[19]記載の方法。
[21]
少なくとも1種の検出可能な因子が陽性マーカーであり、かつ精度管理パラメータが希少ではない細胞全体にわたる陽性マーカーの分布である、[12]記載の方法。
[22]
分布が、平均値、標準偏差、変動係数、またはそれらの任意の組み合わせを用いて計算される、[21]記載の方法。
[23]
精度管理パラメータが細胞損失である、[12]記載の方法。
[24]
少なくとも1種の検出可能な因子が核マーカーまたは陰性マーカーであり、かつ細胞損失が、スライド上の希少ではない細胞の数に対する核マーカーからのシグナルまたは陰性マーカーからのシグナルの比を計算することによって決定される、[23]記載の方法。
[25]
(c)の工程の細胞の画像処理が、強度限界を最適化し希少細胞を他の細胞から区別する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[26]
少なくとも1種の検出可能な因子が陽性マーカーであり、かつ強度限界が、陽性マーカーの背景シグナルに関する平均値、標準偏差、変動係数、またはそれらの任意の組み合わせを用いて決定される、[25]記載の方法。
[27]
平均値、標準偏差または変動係数が、スライド全体に基づくか、単一のスライドに基づくか、単一スライドの領域に関するか、またはそれらの任意の組み合わせに関して決定される、[26]記載の方法。
[28]
少なくとも1種の検出可能な因子が陽性マーカーであり、かつ陽性マーカーの最も高いシグナルを同定し、最も高いシグナルをさらに陽性マーカーのシグナルから計算される標準偏差と比較することによって、強度限界が単一画像内で決定される、[25]記載の方法。
[29]
強度限界が、5から20の間の係数に標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものと等しい、[26]記載の方法。
[30]
強度限界が、係数12.5に標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものと等しい、[29]記載の方法。
[31]
強度限界が、係数15に標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものと等しい、[30]記載の方法。
[32]
強度限界が、試料画像ごとに計算される、[29]記載の方法。
[33]
少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーであり、かつ陰性マーカーに関する強度限界が、希少ではない細胞の陰性マーカーからのシグナルの平均値および標準偏差を用いて決定される、[25]記載の方法。
[34]
平均値および標準偏差が、スライド全体に基づくか、単一のスライドに基づくか、単一スライドの領域に関するか、またはそれらの任意の組み合わせに関して決定される、[33]記載の方法。
[35]
(d)の工程が、少なくとも1つの細胞の細胞サイズ、少なくとも1つの細胞の細胞サイズの分布またはそれらの組み合わせを測定する工程、および少なくとも1つの細胞の細胞サイズまたは細胞サイズの分布を既知の細胞サイズおよび分布と比較する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[36]
(d)の工程の解析が、少なくとも1つの細胞の核の大きさ、少なくとも1つの細胞の核の大きさの分布、少なくとも1つの細胞の輪郭パターンまたはそれらの組み合わせを測定する工程、および核の大きさ、核の大きさの分布または輪郭パターンを推定上の希少細胞と比較し、疑わしい希少細胞を希少細胞として同定する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[37]
(d)の工程の解析が、試料を採取した対象の体液中の希少細胞の濃度を決定する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[38]
検出可能な因子が内容マーカーであり、かつ(d)の工程の解析が内容マーカーの発現レベルを決定する工程をさらに含む、[1]記載の方法。
[39]
内容マーカーの発現レベルが、少なくとも1つの希少細胞および少なくとも1つの細胞で決定され、患者集団の内容マーカーの発現レベルと比較される、[36]記載の方法。
[40]
希少細胞が循環性腫瘍細胞(CTC)である、[1]記載の方法。
[41]
CTCが、陽性マーカーを発現し、インタクトな核を有し、かつ正常なWBCと形態的に異なっており、CTCが、陰性マーカーに関して陽性ではない、[40]記載の方法。
[42]
陽性マーカーがサイトケラチンまたはEpCAMである、[41]記載の方法。
[43]
陰性マーカーがCD45である、[41]記載の方法。
[44]
対象に診断または予後予測を提供する工程をさらに含む、[40]記載の方法。
[45]
対象ががんを有することが既知であり、かつがん治療を受けている、[40]記載の方法。
[46]
治療が化学療法である、[45]記載の方法。
[47]
内容マーカーが化学療法剤を決定するために用いられる、[46]記載の方法。
[48]
対象が候補薬剤を投与されている、[44]記載の方法。
[49]
がん治療に対する対象の反応性を決定する工程をさらに含む、[44]記載の方法。
[50]
対象においてがんを診断するまたは予後を予測するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)[40]記載の方法を行う工程;および
(b)検出されたCTCを解析して診断または予後予測を提供し、それによって対象におけるがんを診断するかまたは予後を予測する工程。
[51]
治療計画に対する対象の反応性を決定するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)[40]記載の方法を行う工程;および
(b)検出されたCTCを解析し、それによって治療計画に対する対象の反応性を決定する工程。
[52]
治療計画が、(b)の工程の結果に基づいて変更される、[51]記載の方法。
[53]
臨床試験のための候補対象を決定するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)[40]記載の方法を行う工程;および
(b)検出されたCTCを解析し、それによって臨床試験のための候補対象を決定する工程。
本発明は、混合集団からCTCなどの希少細胞を陽性濃縮するための物理的方法を省略する方法を提供し、それによって希少細胞の損失を最小化する。この方法論はさらに、カットオフ値などの異なるパラメータを用いる同一のまたは異なるマーカーの検出により、CTCの亜集団または他の希少な集団などの細胞集団のサブセットの捕捉/同定を可能にし、事象と非事象を区別することが可能である。例えば、本明細書に詳細に記載されているように、異なるカットオフは、異なる細胞亜集団を特性評価するのに利用されてもよい。
ばらつきはアッセイ最適化および機器標準化により最小化されるべきだが、マーカーの染色のばらつきは一般的であり、スライドごと、バッチごと、操作者ごと、およびその日ごとである。低すぎるまたは高すぎる設定は誤った情報をもたらすことから、特定のスライドに対して正しい露光を選択することは重要である。標準的な手法はスライド上の大部分の事象に対して一般的であるマーカーでは機能するが、希少細胞またはCTCに特異的であるマーカーについては難しい。画像処理システムのダイナミックレンジの範囲内では、希少細胞またはCTCのシグナル、および希少ではない細胞またはCTCではない細胞における背景は、露光時間に比例する。しかし、画像処理システム中の電子機器により生じるシグナルと背景の両方におけるランダム変動であるノイズは、露光が増大する場合に減少する。理想的には、露光は、画像処理システムを飽和させることなしにシグナルを最大化するように設定されるべきである。しかし、これは、データ収集時間におよぼす影響のために実際的ではない。希少細胞またはCTCは、非常に低い頻度で存在していることから、希少細胞またはCTCは少数の試料画像では見つけることができず、試料画像を用いて陽性マーカーに対する露光を設定することができない。これをさらに複雑にすることに、それらの標的細胞に対する陽性マーカーと陰性マーカーの両方の発現および染色には本来ばらつきが存在している。少数の試料画像による露光の設定は、標的とする希少細胞またはCTCのこの本来のばらつきを捕捉しない可能性がある。
上記のように、露光設定は、シグナル、またはシグナル:背景パラメータを最適化するように調整されうる。しかしながら、別の態様において、露光設定は、データ収集時間を最小化しかつ処理を最大化することを目標に調整される。例えば、CCDカメラのダイナミックレンジを十分に利用するには5秒の露光時間を要するが、非細胞の背景上に細胞の背景を得るには500ミリ秒しか要さないと認めた場合には、データ収集時間を10倍節約しうる。よって、露光時間は、最大のシグナル(もしくはシグナル:背景)または最小の時間のいずれかについて最適化されうる。
別の態様において、希少細胞またはCTCを同定するのを支援するための、希少ではない細胞またはCTCではない細胞の使用はまた、精度管理パラメータとしてのそれらの使用を含む。希少ではない細胞またはCTCではない細胞は、より高い頻度で表示されかつスライド全体にわたって分布するため、それらは、特定のスライドならびにスライド全体およびデータ一式全体の両方に対し、スライドの処理および画像処理の品質を評価するための利用可能な資源を提供する。
上述のとおり、希少細胞およびCTC検出のための本手法の課題は、(1)希少ではない細胞またはCTCではない細胞に対し、CTCなどの希少細胞の相対的頻度が低いこと;および(2)CTCおよびCTCではない細胞それぞれに対する陽性マーカーおよび陰性マーカーの染色が不完全であることである。しかしながら、本方法はこれらの課題に立ち向かい、これらを強みに変える。1つの態様において、大量の希少ではない細胞またはCTCではない細胞上の陽性マーカー由来の背景シグナルを用いて平均値、標準偏差およびCVを計算する。続いてこれらの基準を用いて、希少ではない細胞またはCTCではない細胞からCTCなどの希少細胞を分離するための検出カットオフを決定する。1つの局面において、係数10に、希少ではない細胞またはCTCではない細胞の陽性マーカーシグナルに関する標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものが、希少細胞またはCTCを区別するためのカットオフとして用いられ、ここで推定上の希少細胞またはCTCは、カットオフを上回る陽性マーカーシグナルを有するように決定される。他の局面において、基準は、5、7.5、12.5、15、17.5、もしくは20以上またはこれらの数の間の任意の数の係数を用いる。基準の計算はスライド全体に基づいて設定されてもよい。あるいは、画像に基づいて、または領域に基づいて設定されてもよい。
本発明の別の態様において、スライド上で測定した希少ではない細胞またはCTCではない細胞に関して、細胞サイズおよび細胞サイズの分布が、文献中でWBCとして発表された大きさおよび分布と比較される。加えて、分布は、自動細胞計数器から得られたWBCのサブグループの百分率を用いることによって個別の患者の違いについて補正してもよい。次いで、希少ではない細胞またはCTCではない細胞の、発表された大きさと計算された大きさとの比を補正係数として用いて、その比をスライド上で測定した希少細胞またはCTCの大きさに乗じることによって、希少細胞またはCTCの正確な大きさを決定してもよい。較正は、スライド間、血液チューブ間、患者間、および適用間の、標準化ならびに比較を可能にする。
本発明の態様において、希少ではない細胞またはCTCではない細胞の情報は、体液中の希少細胞またはCTCの濃度を正確に計算するために用いられる。本態様の1つの例において、CTCと、CTCではない細胞との合計(全ての核マーカー事象)に対するCTCの比を決定し、次いでそれをその実験に使用した元の体液の体積で割り、最後にそれに体液中の細胞の元の濃度を乗ずる。後の測定は、標準的な自動細胞計数器(または血球計算器)の使用により得られてもよい。
上述のように、内容マーカーの希少細胞またはCTCでの発現レベルを評価してもよい。しかしながら、処理および画像処理の変動により生じるスライド可変性のために、発現レベルを決定するための普遍的なパラメータを提供することは難しい。この課題を軽減するために、最初に、患者集団の希少ではない細胞またはCTCではない細胞の内容マーカーの発現レベルおよびその分布が決定される。次いで、個別のがん患者について、希少細胞またはCTC細胞、および希少ではない細胞またはCTCではない細胞における内容マーカーの発現レベルが決定される。希少細胞またはCTCと、希少ではない細胞またはCTCではない細胞との間の発現レベルの比は、スライドごとの変動を正規化する相対的測定となる。加えて、その比に、対照集団からの希少ではない細胞またはCTCではない細胞の発現レベルの平均値を乗ずることにより、スライドごとの変動を補正した希少細胞またはCTC発現の絶対値を提供する。
CTCアッセイおよびCTC亜集団の同定
本明細書で示すデータは、本明細書に定義されるHD-CTCなどの、CTCおよびCTCの亜集団に適用される本発明の方法論を実証する。アッセイは、アッセイの信頼性および頑強性に対応するよう管理された前向きプロトコル、ならびにCellSearch(登録商標)との分割した試料の比較によって行われる。この技術的確認の後に、アッセイを用いて、転移性の乳がん、前立腺がんおよび膵臓がんならびに正常な対照を有する患者における、CTCおよび特定のCTC亜集団の発生率および有病率を調査した。アッセイにより標的とされるCTCの特定の亜集団は、細胞がインタクトな核を有し、サイトケラチンを発現するがCD45は発現せず、周囲の白血球細胞(WBC)と形態的に異なり、かつ下流の解析に適したインタクトな悪性上皮細胞と一致する細胞学的特徴を有することが必要とされる。
HD-CTCは、(a)サイトケラチン陽性(有核白血球細胞のサイトケラチン強度の6倍を超える強度)であり;(b)CD45陰性(全ての細胞事象の最低で2%の強度)であり;(c)DAPIの画像処理によりインタクトな非アポトーシス状態に見える核を含み;かつ(d)正常なWBCと形態的に異なる細胞、として定義された。
スパイクイン試験を用いるアッセイの直線性および感度:
アッセイの直線性および感度を試験するために、10個から300個の範囲に特定した乳がん細胞株SKBR3の希釈物を、正常な対照血液に添加した。試験を4重で行い、方法の段落で説明したHD-CTCアッセイにしたがって、処理し、解析した。観察されたSKBR3の平均が、予測されたSKBR3に対してプロットされ、0.9997の相関係数(R2)を示す(図1)。
HD-CTCアッセイのアッセイ頑強性を複数の処理者および分割試料に対して試験した。9つの異なる患者試料に対して2名の別々の処理者により、2重の試験が行われた。分割サンプルを用いる2名の処理者間の1mlあたりのHD-CTCの数の比較は、0.979の相関係数(R2)を有する(図3)。全てのデータは、試験に関して盲検化された単一の操作者により解析された。
施設の健常人ドナープールからの15人の健常人ドナーを、24歳から62歳の年齢幅を有する8人の女性および7人の男性からなる対照集団として評価した。1人を除く全ての健常人対照において、体積によって補正されたそのような事象の数は、1mlあたりHD-CTC1個以下であった。外れ値は、1mlあたり4個のHD-CTC数を有する健常な女性ドナーであった。彼女の細胞の明示的評価によると、それらのうち約1/3は全ての組み入れ基準を強く満たしたが、残りの2/3は全ての基準を満たすものの1つまたは複数の基準による組み入れについては下限近くであった。4人の他の健常人ドナーは1mlあたり1個のHD-CTCを有した。これらの細胞の明示的評価は類似パターンを示し、その中で約1/3は全ての基準を強く満たしたが、細胞の残りの2/3は基準を満たすものの1つまたは複数の基準による組み入れについては下限近くであった。組み入れの下限近くで包含される事象の例としては、周囲のWBCより30%大きく測定されるが、形態的評価では著しく大きく見えない細胞、およびわずかに焦点から外れていて目測で検出できないアポトーシス性の核変化を有している可能性がある細胞、さらにカットオフを超える客観的サイトケラチン強度測定値を有するが、単一のチャネル蛍光評価では周囲のWBCより主観的には著しく明るくは見えないまれに表れる細胞がある。
合計で15名の患者、転移性乳がん5名および転移性前立腺がん10名について、CellSearch(登録商標)とHD-CTCアッセイの両方によりCTCを評価した。チューブ2本分の血液を各患者から収集した。チューブ1本分の7.5 mLの血液をCellSave(商標)チューブ(Veridex, Raritan NJ)中に収集し、CellSearch(登録商標)アッセイを用いるCTCの計数のためにQuest Diagnostics (San Juan Capistrano, CA)に送付した。試料がQuest Diagnosticsで処理される時期を模倣するために、第2のチューブ用の血液を各患者から収集し、標準的なHD-CTCプロセスと一致するように、採血の24時間後にHD-CTCプロトコルにしたがって処理した。CellSearch(登録商標)アッセイは、試験した患者の5/15で7.5 mLの血液あたり2個またはそれより多いCTCを検出した。これに対し、HD-CTCアッセイは、有意に多い患者において有意に多い数のCTCを検出した(HD-CTCは試験した患者の14/15で同定された。表1)。
30名の転移性乳がん患者、20名の転移性前立腺がん患者、18名の転移性膵臓がん患者および15名の正常な対照者のさらにコホートについても、HD-CTCを計数した。この手法を用いて、前立腺がん患者の80%(平均=92.2)、乳がん患者の70%(平均=56.8)、膵臓がん患者の50%(平均=15.8)、および正常対照者の0%(平均=0.6)で、1mLあたり5個以上のHD-CTCが見いだされた(表2)。
患者内でおよび患者間でCTCの不均一な集団が観察された。CTCは様々な形状、大きさおよびサイトケラチン強度を有した。いくつかのケースでは、大きいサイズ、多角形の細胞質形状などの特有の細胞学的特徴は、患者の試料内で極めて特徴的でありかつ変化がなかった。他のケースでは、単一の試料内のHD-CTC間で細胞形態学的多様性が存在した。細胞サイズも異なり;多くの患者試料は、一様に近傍のWBC核の大きさの3〜4倍の核を有するHD-CTCを有する一方で、他の患者は近傍のWBC核の大きさのわずかに1.3倍の核を有する細胞を有した。一部の患者は、大きさに幅があった。平均的なWBC核の1.3倍というHD-CTC核の大きさの下限は、サイトケラチンによる偽の非特異的染色、例えばCD45陽性およびサイトケラチン陽性を示すWBCとして発明者らが同定した細胞の最大の核サイズの評価に基づいて選択された。
HD-CTCプラットフォームの頑強性を、細胞株と患者試料の両方で評価した。このコホートに対して用いられた現行のHD-CTCアッセイはほとんど自動化されておらず、完全に手動のウェットラボ処理であるにも関わらず、アッセイの再現性は、2人の個別の技術者により処理された9つの異なる試料に対して9%未満の平均CVであり、印象的であった。
CTCアッセイおよび希少細胞集団の同定
本明細書で示すデータは、推定上の希少細胞集団の同定を実証する。本明細書に記載の方法論を用いて、推定上の希少細胞集団を同定した。試料の処理および画像処理を実施例1に記載のとおりに行った。さらに、HD-CTCを実施例1に記載のとおりに同定し、定義した。
Claims (53)
- 対象からの試料中の細胞を検出するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)少なくとも1つの希少細胞と、希少細胞の濃度の少なくとも10倍の濃度で存在する少なくとも1つの細胞とを有することが疑われる試料を提供する工程;
(b)試料を少なくとも1つの検出可能な因子と接触させる工程;
(c)(b)の工程の試料に対して細胞の画像処理を行い、細胞画像を作製する工程;および
(d)(c)の工程の画像から細胞を解析することにより試料中の他の細胞と比較して少なくとも1つの希少細胞を検出し、それによって試料中の希少細胞を検出する工程。 - 少なくとも1つの希少細胞と、少なくとも1つの希少ではない細胞とがスライドに付着されている(a')の工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- (d)の工程が、解析を行うための実行コードを含むコンピュータで行われる、請求項1記載の方法。
- (d)の工程の結果がグラフィカルユーザインターフェイス上に示される(e)の工程をさらに含む、請求項3記載の方法。
- (c)の工程の細胞の画像処理が、少なくとも1種の検出可能な因子に対する露光限界を最適化する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子に対する露光限界が、少なくとも1つの希少ではない細胞からのシグナルを用いて決定される、請求項5記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が、細胞マーカーと結合し、かつ陽性マーカー、陰性マーカー、核マーカー、内容マーカー、およびそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項5記載の方法。
- 露光限界が、画像を作製する前に最適化される、請求項5記載の方法。
- 露光限界が、画像を作製した後に最適化される、請求項5記載の方法。
- (d)の工程を行う前に試料が再画像化される(c')の工程をさらに含む、請求項5記載の方法。
- (c)の工程の細胞の画像処理が、露光時間を最適化しデータ収集時間を短縮する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 少なくとも1つの細胞からのシグナルが、精度管理パラメータを決定するために用いられる、請求項1記載の方法。
- 精度管理パラメータが、スライド上の少なくとも1つの細胞の分布である、請求項12記載の方法。
- 精度管理パラメータが、複数の細胞画像のアライメントである、請求項12記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーおよび核マーカーであり、かつアライメントが、異なる画像上にそれぞれ存在する核マーカーからのシグナルを陰性マーカーからのシグナルと合わせることによって決定される、請求項14記載の方法。
- 精度管理パラメータが細胞染色の品質である、請求項12記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーおよび核マーカーであり、かつ細胞染色の品質が、核マーカーからのシグナルに対する陰性マーカーからのシグナルの比を計算することによって決定される、請求項16記載の方法。
- 比が1.2未満である、請求項17記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーであり、かつ精度管理パラメータが希少ではない細胞全体にわたる陰性マーカーの分布である、請求項12記載の方法。
- 分布が、平均値、標準偏差、変動係数、またはそれらの任意の組み合わせを用いて計算される、請求項19記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陽性マーカーであり、かつ精度管理パラメータが希少ではない細胞全体にわたる陽性マーカーの分布である、請求項12記載の方法。
- 分布が、平均値、標準偏差、変動係数、またはそれらの任意の組み合わせを用いて計算される、請求項21記載の方法。
- 精度管理パラメータが細胞損失である、請求項12記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が核マーカーまたは陰性マーカーであり、かつ細胞損失が、スライド上の希少ではない細胞の数に対する核マーカーからのシグナルまたは陰性マーカーからのシグナルの比を計算することによって決定される、請求項23記載の方法。
- (c)の工程の細胞の画像処理が、強度限界を最適化し希少細胞を他の細胞から区別する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陽性マーカーであり、かつ強度限界が、陽性マーカーの背景シグナルに関する平均値、標準偏差、変動係数、またはそれらの任意の組み合わせを用いて決定される、請求項25記載の方法。
- 平均値、標準偏差または変動係数が、スライド全体に基づくか、単一のスライドに基づくか、単一スライドの領域に関するか、またはそれらの任意の組み合わせに関して決定される、請求項26記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陽性マーカーであり、かつ陽性マーカーの最も高いシグナルを同定し、最も高いシグナルをさらに陽性マーカーのシグナルから計算される標準偏差と比較することによって、強度限界が単一画像内で決定される、請求項25記載の方法。
- 強度限界が、5から20の間の係数に標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものと等しい、請求項26記載の方法。
- 強度限界が、係数12.5に標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものと等しい、請求項29記載の方法。
- 強度限界が、係数15に標準偏差を乗じかつ平均値を加えたものと等しい、請求項30記載の方法。
- 強度限界が、試料画像ごとに計算される、請求項29記載の方法。
- 少なくとも1種の検出可能な因子が陰性マーカーであり、かつ陰性マーカーに関する強度限界が、希少ではない細胞の陰性マーカーからのシグナルの平均値および標準偏差を用いて決定される、請求項25記載の方法。
- 平均値および標準偏差が、スライド全体に基づくか、単一のスライドに基づくか、単一スライドの領域に関するか、またはそれらの任意の組み合わせに関して決定される、請求項33記載の方法。
- (d)の工程が、少なくとも1つの細胞の細胞サイズ、少なくとも1つの細胞の細胞サイズの分布またはそれらの組み合わせを測定する工程、および少なくとも1つの細胞の細胞サイズまたは細胞サイズの分布を既知の細胞サイズおよび分布と比較する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- (d)の工程の解析が、少なくとも1つの細胞の核の大きさ、少なくとも1つの細胞の核の大きさの分布、少なくとも1つの細胞の輪郭パターンまたはそれらの組み合わせを測定する工程、および核の大きさ、核の大きさの分布または輪郭パターンを推定上の希少細胞と比較し、疑わしい希少細胞を希少細胞として同定する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- (d)の工程の解析が、試料を採取した対象の体液中の希少細胞の濃度を決定する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 検出可能な因子が内容マーカーであり、かつ(d)の工程の解析が内容マーカーの発現レベルを決定する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 内容マーカーの発現レベルが、少なくとも1つの希少細胞および少なくとも1つの細胞で決定され、患者集団の内容マーカーの発現レベルと比較される、請求項36記載の方法。
- 希少細胞が循環性腫瘍細胞(CTC)である、請求項1記載の方法。
- CTCが、陽性マーカーを発現し、インタクトな核を有し、かつ正常なWBCと形態的に異なっており、CTCが、陰性マーカーに関して陽性ではない、請求項40記載の方法。
- 陽性マーカーがサイトケラチンまたはEpCAMである、請求項41記載の方法。
- 陰性マーカーがCD45である、請求項41記載の方法。
- 対象に診断または予後予測を提供する工程をさらに含む、請求項40記載の方法。
- 対象ががんを有することが既知であり、かつがん治療を受けている、請求項40記載の方法。
- 治療が化学療法である、請求項45記載の方法。
- 内容マーカーが化学療法剤を決定するために用いられる、請求項46記載の方法。
- 対象が候補薬剤を投与されている、請求項44記載の方法。
- がん治療に対する対象の反応性を決定する工程をさらに含む、請求項44記載の方法。
- 対象においてがんを診断するまたは予後を予測するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)請求項40記載の方法を行う工程;および
(b)検出されたCTCを解析して診断または予後予測を提供し、それによって対象におけるがんを診断するかまたは予後を予測する工程。 - 治療計画に対する対象の反応性を決定するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)請求項40記載の方法を行う工程;および
(b)検出されたCTCを解析し、それによって治療計画に対する対象の反応性を決定する工程。 - 治療計画が、(b)の工程の結果に基づいて変更される、請求項51記載の方法。
- 臨床試験のための候補対象を決定するための方法であって、以下の工程を含む方法:
(a)請求項40記載の方法を行う工程;および
(b)検出されたCTCを解析し、それによって臨床試験のための候補対象を決定する工程。
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---|---|---|---|---|
WO2011050103A1 (en) | 2009-10-21 | 2011-04-28 | The Scripps Research Institute | Method of using non-rare cells to detect rare cells |
WO2011108454A1 (ja) * | 2010-03-05 | 2011-09-09 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 細胞の検出方法及び細胞検出システム |
JP5916991B2 (ja) * | 2010-11-09 | 2016-05-11 | オリンパス株式会社 | 遺伝子異常細胞の解析方法 |
EP2729802B1 (en) * | 2011-07-07 | 2015-05-06 | Scripps Health | Method of analyzing cardiovascular disorders and uses thereof |
US10314594B2 (en) | 2012-12-14 | 2019-06-11 | Corquest Medical, Inc. | Assembly and method for left atrial appendage occlusion |
US10813630B2 (en) | 2011-08-09 | 2020-10-27 | Corquest Medical, Inc. | Closure system for atrial wall |
US10307167B2 (en) | 2012-12-14 | 2019-06-04 | Corquest Medical, Inc. | Assembly and method for left atrial appendage occlusion |
WO2013109944A1 (en) * | 2012-01-18 | 2013-07-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods for assessing risk for cancer using biomarkers |
BR112014018192A8 (pt) | 2012-01-24 | 2021-03-02 | Epic Sciences Inc | método e kit para detecção de células tumorais circulantes 5t4-positivas, bem como métodos de diagnóstico de câncer 5t4-positivo e de seleção para atividade e eficácia de conjugado fármaco-anticorpo para tratamento de câncer |
US20140142689A1 (en) | 2012-11-21 | 2014-05-22 | Didier De Canniere | Device and method of treating heart valve malfunction |
WO2014164757A1 (en) * | 2013-03-11 | 2014-10-09 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Imaging blood cells |
US10222304B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-03-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Deposition and imaging of particles on planar substrates |
US10115034B2 (en) | 2013-05-01 | 2018-10-30 | Life Technologies Holdings Pte Limited | Method and system for projecting image with differing exposure times |
US10225483B1 (en) * | 2013-05-01 | 2019-03-05 | Pierce Biotechnology, Inc. | Method and system for projecting image with differing exposure times |
JP6453592B2 (ja) * | 2013-09-25 | 2019-01-16 | アークレイ株式会社 | 血液検体の処理方法 |
CN106062561B (zh) | 2013-09-30 | 2021-11-09 | 斯克利普斯研究院 | 为了监测前列腺癌患者中的肿瘤进化进行循环肿瘤细胞的基因型和表型分析 |
US10053692B2 (en) * | 2013-10-21 | 2018-08-21 | The General Hospital Corporation | Methods relating to circulating tumor cell clusters and the treatment of cancer |
US9566443B2 (en) | 2013-11-26 | 2017-02-14 | Corquest Medical, Inc. | System for treating heart valve malfunction including mitral regurgitation |
WO2015088979A1 (en) * | 2013-12-09 | 2015-06-18 | The Scripps Research Institute | Methods for the detection and quantification of circulating endothelial cells |
WO2015095603A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Axon Dx, Llc | Cell detection, capture and isolation methods and apparatus |
EA201691496A1 (ru) | 2014-01-27 | 2016-12-30 | Эпик Сайенсиз, Инк. | Диагностика биомаркеров рака предстательной железы с помощью циркулирующих опухолевых клеток |
EP3099821B1 (en) * | 2014-01-27 | 2021-08-11 | Epic Sciences, Inc. | Circulating tumor cell diagnostics for detection of neuroendocrine prostate cancer (nepc) |
EA201691505A1 (ru) * | 2014-01-27 | 2016-12-30 | Эпик Сайенсиз, Инк. | Детектирование экспрессии простатического специфического мембранного антигена (psma) на циркулирующих опухолевых клетках (ctc) |
ES2868077T3 (es) * | 2014-01-30 | 2021-10-21 | Epic Sciences Inc | Diagnóstico mediante células tumorales circulantes para biomarcadores predictivos de la resistencia a las terapias selectivas del receptor de andrógenos (RA) |
WO2015116780A1 (en) * | 2014-01-31 | 2015-08-06 | Epic Sciences, Inc. | Methods for the detection and quantification of circulating tumor cell mimics |
US10545151B2 (en) | 2014-02-21 | 2020-01-28 | Epic Sciences, Inc. | Methods for analyzing rare circulating cells |
EA201692223A1 (ru) | 2014-05-09 | 2017-04-28 | Дзе Скриппс Рисерч Инститьют | Композиции и способы жидкостной биопсии меланомы |
ES2869866T3 (es) * | 2014-09-25 | 2021-10-26 | Epic Sciences Inc | Diagnóstico mediante células tumorales circulantes para la identificación de la resistencia a las terapias selectivas del receptor de andrógenos |
US10823736B2 (en) * | 2014-09-26 | 2020-11-03 | The Regents Of The University Of California | Method of assessing disease condition of cancer |
US10842626B2 (en) | 2014-12-09 | 2020-11-24 | Didier De Canniere | Intracardiac device to correct mitral regurgitation |
WO2016121574A1 (ja) * | 2015-01-29 | 2016-08-04 | コニカミノルタ株式会社 | 相互作用する分子を有する血中細胞の同時検出方法 |
WO2016172160A1 (en) * | 2015-04-21 | 2016-10-27 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for prostate cancer analysis |
WO2016196284A1 (en) * | 2015-05-29 | 2016-12-08 | Epic Sciences, Inc. | Intra-patient genomic heterogeneity of single circulating tumor cells (ctcs) associated to phenotypic ctc heterogeneity in metastatic castrate resistant prostate cancer (mcrpc) |
WO2017079212A1 (en) * | 2015-11-04 | 2017-05-11 | Axon Dx, Llc | Cell detection, capture, analysis, aggregation, and output methods and apparatus |
US11371982B2 (en) | 2016-01-19 | 2022-06-28 | Tosoh Corporation | Method of predicting patient prognosis using rare cells |
US9739783B1 (en) * | 2016-03-15 | 2017-08-22 | Anixa Diagnostics Corporation | Convolutional neural networks for cancer diagnosis |
US10360499B2 (en) | 2017-02-28 | 2019-07-23 | Anixa Diagnostics Corporation | Methods for using artificial neural network analysis on flow cytometry data for cancer diagnosis |
US11164082B2 (en) | 2017-02-28 | 2021-11-02 | Anixa Diagnostics Corporation | Methods for using artificial neural network analysis on flow cytometry data for cancer diagnosis |
US9934364B1 (en) | 2017-02-28 | 2018-04-03 | Anixa Diagnostics Corporation | Methods for using artificial neural network analysis on flow cytometry data for cancer diagnosis |
CN108646034B (zh) * | 2018-07-03 | 2020-10-23 | 珠海圣美生物诊断技术有限公司 | 细胞群中的稀有细胞判读方法 |
CN111079579B (zh) * | 2019-12-02 | 2023-07-25 | 英华达(上海)科技有限公司 | 细胞图像的识别方法、装置以及系统 |
KR20220010132A (ko) | 2020-07-17 | 2022-01-25 | 주식회사 엘지에너지솔루션 | 고로딩 전극을 위한 집전체용 시트의 압연 방법 및 고로딩 전극 |
WO2022024564A1 (ja) * | 2020-07-30 | 2022-02-03 | 浜松ホトニクス株式会社 | 判別装置、判別方法、判別プログラム及び記録媒体 |
CN113567672A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-10-29 | 江南大学附属医院 | 一种检测腹水或腹腔灌洗液中癌细胞的试剂盒 |
US20230175073A1 (en) * | 2021-12-07 | 2023-06-08 | Epic Sciences, Inc. | Enhanced characterization of breast cancer |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009525468A (ja) * | 2006-01-30 | 2009-07-09 | ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 |
Family Cites Families (83)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2253965C (en) | 1997-11-22 | 2003-01-21 | Robert A. Levine | Method for the detection, identification, enumeration and confirmation of circulating cancer cells and/or hematologic progenitor cells in whole blood |
US6197523B1 (en) | 1997-11-24 | 2001-03-06 | Robert A. Levine | Method for the detection, identification, enumeration and confirmation of circulating cancer and/or hematologic progenitor cells in whole blood |
US20010018058A1 (en) | 1997-12-24 | 2001-08-30 | Reed Steven G. | Compounds for immunotherapy and diagnosis of breast cancer and methods for their use |
US8192994B2 (en) | 1998-02-10 | 2012-06-05 | Angros Lee H | Method of applying a biological specimen to an analytic plate |
IL137802A0 (en) | 1998-02-12 | 2001-10-31 | Immunivest Corp | A method and kit for detecting rare cells in a mixed cell population |
KR100691043B1 (ko) | 1998-05-09 | 2007-03-09 | 아이코니시스 인코포레이티드 | 컴퓨터 제어된 태아 세포 포함 희귀 세포 진단 방법 및 장치 |
AU2876900A (en) | 1999-02-10 | 2000-08-29 | Cell Works Inc. | Class characterization of circulating cancer cells isolated from body fluids andmethods of use |
US7546210B2 (en) * | 2000-06-08 | 2009-06-09 | The Regents Of The University Of California | Visual-servoing optical microscopy |
CA2411465C (en) * | 2000-06-08 | 2013-08-27 | The Regents Of The University Of California | Visual-servoing optical microscopy |
US7033832B2 (en) | 2000-10-13 | 2006-04-25 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Endothelial cell—cell cohesion |
EP1337826A2 (en) | 2000-10-25 | 2003-08-27 | Exiqon A/S | Open substrate platforms suitable for analysis of biomolecules |
US6701197B2 (en) | 2000-11-08 | 2004-03-02 | Orbotech Ltd. | System and method for side to side registration in a printed circuit imager |
US7361473B2 (en) | 2001-05-04 | 2008-04-22 | Biosite, Incorporated | Diagnostic markers of acute coronary syndrome and methods of use thereof |
US20080009019A1 (en) * | 2001-06-13 | 2008-01-10 | Smithkline Beecham Corporation | High throughput method for screening candidate compounds for biological activity |
US7863012B2 (en) | 2004-02-17 | 2011-01-04 | Veridex, Llc | Analysis of circulating tumor cells, fragments, and debris |
WO2003019141A2 (en) * | 2001-08-23 | 2003-03-06 | Immunivest Corporation | Analysis of circulating tumor cells, fragments, and debris |
US7943093B2 (en) | 2001-12-12 | 2011-05-17 | Erie Scientific Company | Cover slip |
KR20040105717A (ko) * | 2002-02-14 | 2004-12-16 | 이뮤니베스트 코포레이션 | 저비용 세포 분석기에서의 세포 계산 방법 및 알고리즘 |
US7397601B2 (en) * | 2004-11-24 | 2008-07-08 | Laudo John S | Optical system for cell imaging |
US7305112B2 (en) | 2002-10-15 | 2007-12-04 | The Scripps Research Institute | Method of converting rare cell scanner image coordinates to microscope coordinates using reticle marks on a sample media |
US7113624B2 (en) | 2002-10-15 | 2006-09-26 | Palo Alto Research Center Incorporated | Imaging apparatus and method employing a large linear aperture |
US7282180B2 (en) * | 2003-07-02 | 2007-10-16 | Immunivest Corporation | Devices and methods to image objects |
US7372985B2 (en) * | 2003-08-15 | 2008-05-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Systems and methods for volumetric tissue scanning microscopy |
USRE46379E1 (en) * | 2004-04-08 | 2017-04-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Functional immunohistochemical cell cycle analysis as a prognostic indicator for cancer |
WO2006041453A1 (en) | 2004-09-30 | 2006-04-20 | Immunivest Corporation | Circulating tumor cells (ctc’s): apoptotic assessment in prostate cancer patients |
US7280261B2 (en) | 2004-12-20 | 2007-10-09 | Palo Alto Research Center Incorporated | Method of scanning and light collection for a rare cell detector |
US20090081688A1 (en) * | 2005-06-20 | 2009-03-26 | Advanced Cell Diagnostics | Methods of detecting nucleic acids in individual cells and of identifying rare cells from large heterogeneous cell populations |
US20070009389A1 (en) | 2005-07-08 | 2007-01-11 | Antti Seppo | Slide deposition chamber |
US9134237B2 (en) | 2005-09-20 | 2015-09-15 | Janssen Diagnotics, LLC | High sensitivity multiparameter method for rare event analysis in a biological sample |
WO2011050103A1 (en) | 2009-10-21 | 2011-04-28 | The Scripps Research Institute | Method of using non-rare cells to detect rare cells |
US8337755B2 (en) * | 2006-03-13 | 2012-12-25 | Veridex, Llc | Operator independent programmable sample preparation and analysis system |
US20080076727A1 (en) | 2006-03-29 | 2008-03-27 | John Wayne Cancer Institute | Utility of high molecular weight melanoma associated antigen in diagnosis and treatment of cancer |
WO2007131507A2 (en) * | 2006-05-13 | 2007-11-22 | Dako Denmark A/S | Methods for flow cytometry analyses of cells without lysing subpopulations |
BRPI0712225A8 (pt) * | 2006-06-02 | 2019-01-22 | Pfizer Producs Inc | métodos para prever e monitorar a eficácia da terapia antagonista de igf-1r |
WO2008111990A1 (en) * | 2006-06-14 | 2008-09-18 | Cellpoint Diagnostics, Inc. | Rare cell analysis using sample splitting and dna tags |
EP2041299A4 (en) * | 2006-07-14 | 2010-01-13 | Aviva Biosciences Corp | METHOD AND COMPOSITIONS FOR DETECTION OF RARE CELLS FROM A BIOLOGICAL SAMPLE |
WO2008014516A2 (en) * | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Living Microsystems, Inc. | Selection of cells using biomarkers |
MX2009002397A (es) * | 2006-09-05 | 2009-03-16 | Veridex Llc | Metodos para clasificar imagenes celulares. |
US8244021B2 (en) | 2006-12-20 | 2012-08-14 | Ventana Medical Systems, Inc. | Quantitative, multispectral image analysis of tissue specimens stained with quantum dots |
CN101226118B (zh) | 2007-01-19 | 2010-06-16 | 中国医学科学院肿瘤研究所 | 一种兼容免疫荧光分析的细胞化学染色方法及其用途 |
WO2008151278A1 (en) | 2007-06-05 | 2008-12-11 | Nanopoint, Inc. | Cell tray systems and methods |
WO2009038754A2 (en) | 2007-09-19 | 2009-03-26 | The Research Foundation Of State University Of New York | Gene expression signatures in enriched tumor cell samples |
WO2009051734A1 (en) * | 2007-10-17 | 2009-04-23 | The General Hospital Corporation | Microchip-based devices for capturing circulating tumor cells and methods of their use |
US8088715B2 (en) | 2007-11-13 | 2012-01-03 | Ikonisys, Inc. | Detection of circulating tumor cells in peripheral blood with an automated scanning fluorescence microscope |
US20090258365A1 (en) | 2008-03-25 | 2009-10-15 | Terstappen Leon W M M | METHOD FOR DETECTING IGF1R/Chr 15 in CIRCULATING TUMOR CELLS USING FISH |
US20110189670A1 (en) | 2008-07-07 | 2011-08-04 | Ruth L Katz | Circulating Tumor and Tumor Stem Cell Detection Using Genomic Specific Probes |
US9779213B2 (en) | 2008-07-25 | 2017-10-03 | Fundacao D. Anna Sommer Champalimaud E Dr. Carlos Montez Champalimaud | System for evaluating a pathological stage of prostate cancer |
US8324280B2 (en) | 2008-08-07 | 2012-12-04 | The University Of British Columbia | Treatment of prostate cancer with DDC inhibitor |
CA2736178A1 (en) | 2008-09-05 | 2010-03-11 | Peter Kuhn | Methods for the detection of circulating tumor cells |
CA2788245A1 (en) | 2010-01-27 | 2011-08-04 | Duke University | Biomarkers for circulating tumor cells |
CA2791244A1 (en) | 2010-03-08 | 2011-09-15 | Regents Of The University Of Minnesota | Androgen receptor isoforms and methods |
TWI539158B (zh) | 2010-06-08 | 2016-06-21 | 維里德克斯有限責任公司 | 使用血液中之循環黑色素瘤細胞預測黑色素瘤病患之臨床結果的方法。 |
WO2012048113A2 (en) | 2010-10-07 | 2012-04-12 | The General Hospital Corporation | Biomarkers of cancer |
BR112013016708B1 (pt) | 2010-12-30 | 2021-08-17 | Foundation Medicine, Inc | Otimização de análise multigene de amostras de tumor |
AU2012209329A1 (en) | 2011-01-24 | 2013-09-12 | Epic Sciences, Inc. | Methods for obtaining single cells and applications of single cell omics |
EP2729802B1 (en) | 2011-07-07 | 2015-05-06 | Scripps Health | Method of analyzing cardiovascular disorders and uses thereof |
US20130078667A1 (en) | 2011-09-22 | 2013-03-28 | Oscar B. Goodman | Methods for detecting and collecting circulating tumor cells |
WO2013049926A1 (en) | 2011-10-06 | 2013-04-11 | UNIVERSITé LAVAL | PROGNOSTIC MARKERS OF INHERITED VARIATIONS IN THE 17β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE (HSD17B) GENES FOR PROSTATE CANCER |
KR20150008842A (ko) | 2011-12-09 | 2015-01-23 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 순환 종양 세포를 확인하기 위한 장치, 시스템 및 방법 |
US20130171642A1 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-04 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated analysis of circulating tumor cells |
BR112014018192A8 (pt) | 2012-01-24 | 2021-03-02 | Epic Sciences Inc | método e kit para detecção de células tumorais circulantes 5t4-positivas, bem como métodos de diagnóstico de câncer 5t4-positivo e de seleção para atividade e eficácia de conjugado fármaco-anticorpo para tratamento de câncer |
CA2874691C (en) | 2012-06-01 | 2021-08-24 | Creatv Microtech, Inc. | Capture, identification and use of a new biomarker of solid tumors in body fluids |
US9766244B2 (en) | 2012-07-02 | 2017-09-19 | The General Hospital Corporation | Diagnosis and monitoring treatment of prostate cancer |
US20140024024A1 (en) | 2012-07-17 | 2014-01-23 | General Electric Company | Methods of detecting dna, rna and protein in biological samples |
US9671405B2 (en) | 2012-09-19 | 2017-06-06 | Cornell University | Identifying taxane sensitivity in prostate cancer patients |
CA2889765C (en) | 2012-10-26 | 2021-06-22 | Minna D. BALBAS | Androgen receptor variants and methods for making and using |
GB2531881B (en) | 2013-02-02 | 2017-12-13 | Univ Duke | Method of isolating circulating tumor cells |
KR102158924B1 (ko) | 2013-03-15 | 2020-09-22 | 제넨테크, 인크. | Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법 |
CN106062561B (zh) | 2013-09-30 | 2021-11-09 | 斯克利普斯研究院 | 为了监测前列腺癌患者中的肿瘤进化进行循环肿瘤细胞的基因型和表型分析 |
WO2015073896A2 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Psma Development Company, Llc | Biomarkers for psma targeted therapy for prostate cancer |
US20170192003A1 (en) | 2013-12-03 | 2017-07-06 | The Scripps Research Institute | Compositions and methods for fluid biopsy of melanoma |
EP3090264B1 (en) | 2013-12-30 | 2020-02-12 | The Scripps Research Institute | Circulating tumor cell diagnostics for lung cancer |
EA201691496A1 (ru) | 2014-01-27 | 2016-12-30 | Эпик Сайенсиз, Инк. | Диагностика биомаркеров рака предстательной железы с помощью циркулирующих опухолевых клеток |
EP3099821B1 (en) | 2014-01-27 | 2021-08-11 | Epic Sciences, Inc. | Circulating tumor cell diagnostics for detection of neuroendocrine prostate cancer (nepc) |
EA201691505A1 (ru) | 2014-01-27 | 2016-12-30 | Эпик Сайенсиз, Инк. | Детектирование экспрессии простатического специфического мембранного антигена (psma) на циркулирующих опухолевых клетках (ctc) |
ES2868077T3 (es) | 2014-01-30 | 2021-10-21 | Epic Sciences Inc | Diagnóstico mediante células tumorales circulantes para biomarcadores predictivos de la resistencia a las terapias selectivas del receptor de andrógenos (RA) |
WO2015116780A1 (en) | 2014-01-31 | 2015-08-06 | Epic Sciences, Inc. | Methods for the detection and quantification of circulating tumor cell mimics |
US10545151B2 (en) | 2014-02-21 | 2020-01-28 | Epic Sciences, Inc. | Methods for analyzing rare circulating cells |
ES2869866T3 (es) | 2014-09-25 | 2021-10-26 | Epic Sciences Inc | Diagnóstico mediante células tumorales circulantes para la identificación de la resistencia a las terapias selectivas del receptor de andrógenos |
US20170242016A1 (en) | 2014-10-15 | 2017-08-24 | Epic Sciences, Inc. | Circulating tumor cell diagnostics for therapy targeting pd-l1 |
WO2016196284A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-12-08 | Epic Sciences, Inc. | Intra-patient genomic heterogeneity of single circulating tumor cells (ctcs) associated to phenotypic ctc heterogeneity in metastatic castrate resistant prostate cancer (mcrpc) |
CN115341033A (zh) | 2015-11-03 | 2022-11-15 | 艾匹克科学公司 | 一种表征疾病异质性的方法 |
AU2017205443A1 (en) | 2016-01-06 | 2018-07-19 | Epic Sciences, Inc. | Single cell genomic profiling of circulating tumor cells (CTCs) in metastatic disease to characterize disease heterogeneity |
-
2010
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009525468A (ja) * | 2006-01-30 | 2009-07-09 | ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
STINE-KATHREIN KRAEFT ET AL.: "Detection and Analysis of Cancer Cells in Blood and Bone Marrow Using a Rare Event Imaging System", CLIN. CANCER RES., vol. 6, JPN7014002253, February 2000 (2000-02-01), pages 434 - 442, XP055141215, ISSN: 0003769836 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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