JP2017048208A - 多発性骨髄腫およびｎｈｌ治療用の抗ｃｄ３８抗体およびレナリドミドまたはボルテゾミブ - Google Patents

Abstract

【課題】多発性骨髄腫及び／又は非ホジキンスリンパ腫の治療に使用するための医薬組成物の提供。【解決手段】配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮまたは配列ＳＹＹＭＮのＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧのＨＣＤＲの２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹのＨＣＤＲ３、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹのＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳのＬＣＤＲ２領域、及び配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬのＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体と、（ａ）サリドマイド若しくはその類似体、又は（ｂ）プロテアソーム阻害剤との相乗的組み合わせた、医薬組成物。【選択図】図３

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１１年５月１７日に出願の米国仮特許出願第６１／４８６，８１４号、２０１１年３月２９日に出願の米国仮特許出願第６１／４６８，６０７号、２０１１年１月３１日に出願の米国仮特許出願第６１／４３７，６９６号、および２０１０年９月２７日に出願の米国仮特許出願第６１／３８６，６１９号の利益を主張するものであり、これらの全ては、その全体が参照により組み込まれる。

多発性骨髄腫は、増殖指数が低く長寿命の分泌性形質細胞が骨髄に潜伏的に蓄積することを特徴とするＢ細胞性悪性腫瘍である。この病気は、最終的に骨および骨髄を攻撃し、骨格系全体にわたる多発性腫瘍および病変をもたらす。

癌全体の約１％、そして血液系腫瘍の１０％強は、多発性骨髄腫（ＭＭ）に起因すると考えられ得る。ＭＭの発生率は老齢人口において増加しており、診断時点での年齢中央値は約６１歳である。現在適用し得る多発性骨髄腫の治療法としては、化学療法、幹細胞移植、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）（パミドロネート）、およびＺｏｍｅｔａ（登録商標）（ゾレドロン酸）が挙げられる。ビンクリスチン、ＢＣＮＵ、メルファラン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、およびプレドニゾンまたはデキサメタゾンなどの化学療法薬剤の組み合わせを含む現在の治療プロトコルは、わずかに約５％の完全寛解率をもたらすのみであり、かつ生存時間の中央値は診断の時点からおよそ３６〜４８か月である。高用量の化学療法後に自己の骨髄または末梢血単核細胞の移植を行う最近の進歩によって、完全寛解率および寛解持続時間が増加している。それでも、全生存時間はわずかに延びているに過ぎず、かつ治癒の証拠は得られていない。最終的には、ＭＭ患者は、インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）を単独またはステロイドと併用して使用する維持療法ですら、しばしば再発する。

非ホジキンスリンパ腫は、リンパ腫の広範囲の分類であり、リンパ球（Ｂ細胞またはＴ細胞）が悪性化し、制御不能に増殖して腫瘤を形成するときの、リンパ系を起源とする癌である。全体として、ＮＨＬには、リンパ腫の約３０の異なるサブタイプがあり、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）および濾胞性リンパ腫（ＦＬ）を含む。２０１９年には、ＮＨＬの発生率は、主要マーケットで１４０，０００人を超えるであろう。利用可能な治療法の選択肢には、Ｒｉｔｕｘａｎ／ＭａｂＴｈｅｒａ、その組み合わせ、例えば、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、Ｒ−ＣＶＰ（リツキサン、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）など、並びに化学療法が含まれる。さらに、寛解後、または再発後に、造血幹細胞移植を行うことも考えられる。しかしながら、現在の治療法の選択肢にかかわらず、アグレッシブＮＨＬの高リスク群では、５年超の生存率は３０％の低さとなり得る。したがって、有効な治療および組み合わせ治療に対する、未だ対処されていない強いニーズが存在する。

ＣＤ３８はそのような悪性形質細胞および他のリンパ球上に発現する抗原の例である。ＣＤ３８に帰する作用には、接着およびシグナル伝達事象における受容体仲介および（外）酵素活性の両方が含まれる。外酵素として、ＣＤ３８は、環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）およびＡＤＰＲの形成だけでなく、ニコチンアミドおよびニコチン酸−アデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＡＤＰ）形成のための基質としてＮＡＤ＋を使用する。ｃＡＤＰＲおよびＮＡＡＤＰは、Ｃａ２＋動員のためのセカンドメッセンジャーとして作用することが明らかになっている。ＮＡＤ＋をｃＡＤＰＲへ変換することによって、ＣＤ３８は細胞外のＮＡＤ＋の濃度を調節し、したがって、ＮＡＤ誘導細胞死（ＮＣＩＤ）の調節により細胞の生存を調節する。Ｃａ２＋を介したシグナル伝達に加え、ＣＤ３８シグナル伝達は、ＴおよびＢ細胞上の抗原−受容体複合体、または他の種類の受容体複合体、例えばＭＨＣ分子とのクロストークを介して行われ、かつ、このようにしていくつかの細胞応答に関与するだけでなく、ＩｇＧのスイッチングおよび分泌にも関与する。

ＣＤ３８に特異的な抗体については、国際公開第１９９９／６２５２６号パンフレット（Ｍａｙｏ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）；国際公開第２００２／０６３４７号パンフレット（Ｃｒｕｃｅｌｌ Ｈｏｌｌａｎｄ）；米国特許出願公開第２００２／１６４７８８号明細書（Ｊｏｎａｔｈａｎ Ｅｌｌｉｓ）（その全体が参照により組み込まれる）；国際公開第２００５／１０３０８３号パンフレット（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ）、米国特許出願第１０／５８８，５６８号明細書（その全体が参照により組み込まれる）、国際公開第２００６／１２５６４０号パンフレット（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ）、米国特許出願第１１／９２０，８３０号明細書（その全体が参照により組み込まれる）、および国際公開第２００７／０４２３０９号パンフレット（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ）、米国特許出願第１２／０８９，８０６号明細書（その全体が参照により組み込まれる）；国際公開第２００６／０９９８７５号パンフレット（Ｇｅｎｍａｂ）、米国特許出願第１１／８８６，９３２号明細書（その全体が参照により組み込まれる）；および国際公開第０８／０４７２４２号パンフレット（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、米国特許出願第１２／４４１，４６６号明細書（その全体が参照により組み込まれる）に記載されている。

ＣＤ３８に特異的な抗体と他の薬剤との組み合わせは、国際公開第２０００／４０２６５号パンフレット（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）；国際公開第２００６／０９９８７５号パンフレットおよび国際公開第２００８／０３７２５７号パンフレット（Ｇｅｎｍａｂ）；並びに国際公開第２０１０／０６１３６０号パンフレット、国際公開第２０１０／０６１３５９号パンフレット、国際公開第２０１０／０６１３５８号パンフレットおよび国際公開第１０／０６１３５７号パンフレット（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）に記載されており、これらは全て、その全体が参照により組み込まれる。

抗癌剤の発見および開発における最近の進歩にもかかわらず、ＣＤ３８発現腫瘍に関係する多くの癌で、予後は依然芳しくないことは明らかである。このように、そのような種類の癌の治療法の改善に対するニーズが存在する。

一態様において、本開示は、ＣＤ３８特異抗体とサリドマイドまたはその類似体、例えばレナリドミドとの相乗的組み合わせに関する。他の態様において、本開示は、ＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブまたは他のプロテアソーム阻害剤を含む相乗的組み合わせに関する。そのような組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫などの癌の治療に有用である。

インビトロおよびインビボモデルにより、ある種の化合物または化合物の組み合わせがヒトの体内でどのような挙動を示すかを予測できると考えられる。本明細書では、ＣＤ３８特異抗体とレナリドミドの組み合わせをヒト多発性骨髄腫細胞株で試験し、相乗作用を確認した。さらに、多発性骨髄腫細胞およびバーキットリンパ腫（ＮＨＬの一形態）細胞の両者について、ＣＤ３８特異抗体とレナリドミドの組み合わせ、およびＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブの組み合わせをマウスモデルで試験し、相乗作用を確認した。したがって、これらの組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫に罹患したヒトの治療に有効であろう。さらに、本明細書で例示したＣＤ３８特異抗体は、ヒトにおけるそのような組み合わせを確認することができる臨床試験に入りつつある。

インビトロまたはインビボのいずれかで化合物を組み合わせた場合、人はその組み合わせが単に相加効果を有すると予測する。全く意外なことに、発明者らは、特定の抗ＣＤ３８抗体とレナリドミドの組み合わせが、ＡＭＯ−１およびＮＣＩ−Ｈ９２９の両多発性骨髄細胞株で、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）の相乗作用レベルを媒介することを見出した。また意外なことに、さらに、特定の抗ＣＤ３８抗体は、レナリドミドと組み合わせるか、またはボルテゾミブと組み合わせると、ＮＣＩ−Ｈ９２９のＳＣＩＤマウスモデルで骨溶解減少の相乗作用レベルを媒介し、ＲＡＭＯＳのＳＣＩＤマウスモデルの生存日数中央値を相乗的に増加させた。したがって、例示したＣＤ３８特異抗体とレナリドミド、および例示したＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブの組み合わせはいずれも、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫に関係しているインビトロおよび／またはインビボモデルで相乗的な挙動を示した。

本開示の一態様は、ＣＤ３８特異抗体が配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含み、かつサリドマイドまたはその類似体がレナリドミドである組み合わせを含む。好ましい態様では、この組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用される。

本開示の一態様は、ＣＤ３８特異抗体が配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含み、かつプロテアソーム阻害剤がボルテゾミブである組み合わせを含む。好ましい態様では、この組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用される。

図１は、ＡＭＯ−１細胞におけるＣＤ３８の発現に対するレナリドミド単独の効果を示す。 図２は、各種多発性骨髄腫細胞株の細胞増殖に対するレナリドミド単独の効果を示す。この測定は各細胞株に対するレナリドミドの相対的細胞毒性を示している。 図３は、ＭＯＲ０３０８７とレナリドミドの組み合わせによる、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介を示す。ＰＢＭＣとＡＭＯ−１細胞は、ＭＯＲ０３０８７による処理の前にレナリドミドで処理した。ＭＯＲ０３２０７はリソザイム（ｌｙｓｏｓｙｍｅ）に結合し、ＩｇＧ１のようにアイソタイプコントロールとして使用される。ＬＥＮはレナリドミドを表す。「理論値」は、ＭＯＲ０３０８７単独の値とＬＥＮ単独の値の和を表す。示したデータは、表３ｂからの平均である。 図４は、ＭＯＲ０３０８７とレナリドミドの組み合わせによる、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介を示す。ＭＯＲ０３０８７による処理の前に、レナリドミドでＰＢＭＣのみを処理した。ＭＯＲ０３２０７はリソザイム（ｌｙｓｏｓｙｍｅ）に結合するので、ＩｇＧ１のようにアイソタイプコントロールとして使用される。ＬＥＮはレナリドミドを表す。「理論値」は、ＭＯＲ０３０８７単独の値とＬＥＮ単独の値の和を表す。示したデータは、表４ｂからの平均である。 図５は、ＮＣＩ−Ｈ９２９の細胞におけるＣＤ３８発現に対するレナリドミド単独の効果を示す。 図６は、ＭＯＲ０３０８７とレナリドミドの組み合わせによる、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＡＤＣＣの媒介を示す。ＰＢＭＣおよびＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を、ＭＯＲ０３０８７による処理の前にレナリドミドで処理した。理論値は、Ｃｈｏｕらのフラクショナル・プロダクトの概念を使用して計算した組み合わせを表す。示したデータは、表７ｂからの平均である。 図７は、ＭＯＲ０３０８７とレナリドミドの組み合わせによる、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＡＤＣＣの媒介を示す。ＭＯＲ０３０８７による処理の前に、レナリドミドでＰＢＭＣのみを処理した。理論値は、Ｃｈｏｕらのフラクショナル・プロダクトの概念を使用して計算した組み合わせを表す。示したデータは、表８ｂからの平均である。 図８は、ボルテゾミブ単独で引き起こされる各種多発性骨髄腫細胞株の成長阻害を示す。ＡＭＯ−１細胞に対するＩＣ５０は３．９ｎＭであった。ＬＰ−１細胞に対するＩＣ５０は６．１ｎＭであった。ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＩＣ５０は３．３ｎＭであった。ＲＰＭＩ−８２２６細胞に対するＩＣ５０は９．０ｎＭであった。 図９は、１５μｇ／ｍｌのＭＯＲ０３０８７とＶａｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）の組み合わせによる、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＡＤＣＣの媒介を示す。２つのチャートは２人の異なるドナーを表す。 図１０は、１５μｇ／ｍｌのＭＯＲ２０２とＶａｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）の組み合わせによる、ＬＰ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介を示す。２つのチャートは２人の異なるドナーを表している。 図１１は、ＭＯＲ２０２のアミノ酸配列を示す。 図１２は、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介における、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせの最良適合曲線（Ｃｈｏｕらで説明されている）を示し、それはまた、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＡＤＣＣの媒介を解析するために作成された最良適合曲線を表すものでもある。 図１３は、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせを使用した、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介に関する６つの個別の実験に対するＣｈｏｕの因子の相乗性解析を示す。図１３は実験１を示す。図１３は表３ａ〜ｃおよび図３に示した３つの実験から導かれたものである。 図１４は、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせを使用した、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介に関する６つの個別の実験に対するＣｈｏｕの因子の相乗性解析を示す。図１４は実験２を示す。図１４は表３ａ〜ｃおよび図３に示した３つの実験から導かれたものである。 図１５は、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせを使用した、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介に関する６つの個別の実験に対するＣｈｏｕの因子の相乗性解析を示す。図１５は実験３を示す。図１５は表３ａ〜ｃおよび図３に示した３つの実験から導かれたものである。 図１６は、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせを使用した、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介に関する６つの個別の実験に対するＣｈｏｕの因子の相乗性解析を示す。図１６は実験４を示す。図１６は表４ａ〜ｃおよび図４に示した３つの実験から導かれたものである。 図１７は、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせを使用した、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介に関する６つの個別の実験に対するＣｈｏｕの因子の相乗性解析を示す。図１７は実験５を示す。図１７は表４ａ〜ｃおよび図４に示した３つの実験から導かれたものである。 図１８は、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせを使用した、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣの媒介に関する６つの個別の実験に対するＣｈｏｕの因子の相乗性解析を示す。図１８は実験６を示す。図１８は表４ａ〜ｃおよび図４に示した３つの実験から導かれたものである。 図１９は、実施例７で説明し、結果を表１１に示した各実験グループの、マイクロＣＴスキャンの平均総骨容積を示す。 図２０は、実施例１１で説明し、結果を表１７に示した各実験グループの、マイクロＣＴスキャンの平均総骨容積を示す。

「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｙ）」、「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）」または「相乗的な（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）」とは、ある組み合わせの予期される相加効果より大きいことを意味する。ある組み合わせの「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｙ）」、「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）」または「相乗的な（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）」効果は、本明細書では、Ｃｈｏｕらおよび／またはＣｌａｒｋｅらの方法により決定する。Ｔｉｎｇ−Ｃｈａｏ Ｃｈｏｕ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５８：６２１−６８１（２００６）（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。Ｃｈｏｕらには、相乗作用を決定する複数の方法が開示されており、本明細書ではこれらの方法の少なくとも１つを使用する。また、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｅｎｄｐｏｉｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｏｄｅｌｓ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ４６：２５５−２７８（１９９７）（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。

用語「抗体」は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥなどの任意のアイソタイプを含む、モノクローナル抗体を意味する。ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合で結合している２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖を含む。重鎖および軽鎖のそれぞれは、定常領域および可変領域を含む。各可変領域は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「高度可変領域」と呼ばれ、主として抗原のエピトープに結合する役割を担う、３つのセグメントを含む。これらは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称され、Ｎ末端から順次番号が付けられている。ＣＤＲ外の可変領域の比較的高度に保存された部分は「フレームワーク領域」と呼ばれる。「抗体フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、または、それぞれがＣＤＲおよびフレームワーク領域を含む、少なくとも１つの可変重鎖または可変軽鎖を含む他のフラグメントを意味する。

デキサメタゾンと組み合わせたＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）（サリドマイド）は、新たに多発性骨髄腫と診断された患者の治療用と指示されており、Ｃｅｌｇｅｎｅから市販されている。

「サリドマイド類似体」には、サリドマイド自身、レナリドミド（ＣＣ−５０１３、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（商標））、ポマリドマイド（ＣＣ４０４７、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標））、並びに国際公開第２００２／０６８４１４号パンフレットおよび国際公開第２００５／０１６３２６号パンフレット（これらは、その全体が参照により組み込まれる）に開示されている化合物が含まれるが、これらに限定されない。この用語は、サリドマイド構造を骨格として使用している合成化合物（例えば、側鎖が付加されるか、またはそのような基が親構造から除去されている）をいう。類似体は、サリドマイドおよびその代謝化合物とは、アルキル鎖の長さの違い、分子フラグメント、１つ以上の官能基、またはイオン化における変化などによって構造的に異なる。用語「サリドマイド類似体」にはまた、サリドマイドの代謝物も含まれる。サリドマイド類似体には、各化合物のＳ−およびＲ−エナンチオマーのラセミ混合物や、Ｓ−エナンチオマーまたはＲ−エナンチオマーが個々に含まれる。ラセミ混合物が望ましい。サリドマイド類似体には次の構造の化合物が含まれる。

（ここで、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３およびＲ２４はそれぞれ独立にＨ、アルコキシ基、アミノ基またはアルキルアミン基である）
および

（ここで、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３およびＲ２４はそれぞれ独立にＨ、アルコキシ基、アミノ基またはアルキルアミン基である）。レナリドミドは、現在、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）としてＣｅｌｅｇｅｎｅから多発性骨髄腫の治療用に市販されている。レナリドミドは、腫瘍の治療に関連して、少なくとも次の特性を有するといわれている。ａ）腫瘍細胞に対する細胞毒性、Ｇａｎｄｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａｍａｌｗａ ＣＳＮ．７０ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓ ｗｉｔｈ Ｇａｂ１ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｄａｐｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｓｓｅｍｂｌｙ，Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ．，３０（７）：８４９−５８（２００６）（その全体が参照により組み込まれる）；ｂ）ナチュラルキラー（Ｎｋ）細胞の活性化、Ｇａｎｄｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｓ ｗｉｔｈ ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ，ｂｕｔ ｒｅｄｕｃｅｓ ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ａｎｄ ＮＫ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｃｕｒｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，１；１０（２）：１５５−６７（Ｍａｒｃｈ ２０１０）（その全体が参照により組み込まれる）；およびｃ）ＣＤ３８の腫瘍細胞上での発現の上方制御、Ｌａｐａｌｏｍｂｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ＣＤ２０ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ ｄｉｒｅｃｔ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｏｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ，Ｂｌｏｏｄ，１１２：１３，５１８０−５１８９（１５ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００８）（その全体が参照により組み込まれる）を参照。「ＬＥＮ」はレナリドミドの記載のために使用する。

説明したように、サリドマイド類似体は腫瘍細胞上でのＣＤ３８の発現を上方制御する。腫瘍細胞の表面でＣＤ３８の発現を上方制御する他の薬剤は、国際公開第００／４０２６５号パンフレット、米国特許出願第０９／２２６，８９５号明細書（その全体が参照により組み込まれる）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）に記載されている。

「プロテアソーム阻害剤」は、プロテアソーム、すなわち、例えばｐ５３タンパク質などのタンパク質を分解する細胞複合体の作用をブロックする化合物をいう。プロテアソーム阻害剤には数種類のクラスが知られている。ペプチドボロン酸エステルのクラスには、ボルテゾミブ（ＩＮＮ、ＰＳ−３４１；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、再発した多発性骨髄腫の治療用として米国で承認されている化合物が含まれる。他のペプチドボロン酸エステルはＣＥＰ−１８７７０である。プロテアソーム阻害剤の他のクラスには、ペプチドアルデヒド（例えば、ＭＧ１３２）、ペプチドビニルスルホン、ペプチドエポキシケトン（例えば、エポキソミシン、カーフィルゾミブ）、βラクトン阻害剤（例えば、ラクタシスチン、ＭＬＮ５１９、ＮＰＩ−００５２、サリノスポラミドＡ）、金属とジチオカルバミン酸錯体を生成する化合物（例えば、ジスルフィラム、慢性アルコール中毒の治療にも使用される薬剤）、およびある種の抗酸化剤（例えば、エピガロカテキン−３−ガレート）カテキン−３−ガレート、およびサリノスポラミドＡが含まれる。

「ＶＨ」は、抗体または抗体フラグメントの免疫グロブリン重鎖の可変領域をいう。「ＶＬ」は、抗体または抗体フラグメントの免疫グロブリン軽鎖の可変領域をいう。

用語「ＣＤ３８」は、ＣＤ３８として知られるタンパク質をいい、次の同義語がある。ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ１、Ｔ１０。

ヒトＣＤ３８は、

のアミノ酸配列を有する。

「ＭＯＲ２０２」、アミノ酸配列が図１１で与えられる抗ＣＤ３８抗体。「ＭＯＲ２０２」および「ＭＯＲ０３０８７」は、図１１に示した抗体を記載する同義語として使用される。

ＭＯＲ２０２の可変重鎖ドメインをコードするＤＮＡ配列は、

である。

ＭＯＲ２０２の可変軽鎖ドメインをコードするＤＮＡ配列は、

である。

抗体「Ｒｅｆ ｍＡＢ５」は、アミノ酸配列が以下に与えられる抗ＣＤ３８抗体である（ＣＤＲは下線を付した太字で記す）：

Ｒｅｆ ｍＡＢ５のＣＤＲはＫａｂａｔらにより定義され、Ｒｅｆ ｍＡＢ５と同じＣＤＲを有する抗体が、国際公開第２００８／０４７２４２号パンフレット、米国特許出願第１２／４４１，４６６号明細書（その全体が参照により組み込まれる）に記載されている。

「Ｆｃ領域」は、抗体の定常領域を意味し、ヒトではこれはＩｇＧ１、２、３、４サブクラスまたはその他のものであり得る。ヒトＦｃ領域の配列はＩＭＧＴ、Ｈｕｍａｎ ＩＧＨ Ｃ−ＲＥＧＩＯＮｓ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｇｅｎｅｓ．ｈｔｍｌから取得することができる（２０１１年５月１６日に取得）。

「ＡＤＣＣ活性を亢進させる」とは、抗体依存性細胞毒性の媒介の増加を意味する。ＡＤＣＣ活性の亢進をもたらすＦｃ領域内のアミノ酸の改変については、国際公開第２０００／４２０７２号パンフレット（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、国際公開第２００４／０２９２０７Ａ２号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）および国際公開第２００４／０６３３５１Ａ２号パンフレット（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）に開示されており、これらは全て、その全体が参照により組み込まれる。

「ＭＯＲ０３２０７」はアミノ酸配列が、

の抗体である。

ＭＯＲ０３２０７はリソザイム（ｌｙｓｏｓｙｍｅ）に結合し、ＩｇＧ１のようにアイソタイプコントロールとして使われる。

「組み合わせ」とは、２つ以上の項目、例えば、抗体やレナリドミドなどの化合物をいう。

本開示はまた、組み合わせ、医薬品、および上記組み合わせを含む医薬組成物に関する。本発明の相乗作用を有する組み合わせの２つの成分、例えばＣＤ３８特異抗体とレナリドミドは、一緒に、または別々に投与することができる。一緒に投与するときは、２つの成分を１つの医薬組成物中に一緒に配合することができ、それには、薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含有させることができる。あるいは、２つの成分はまた、異なる医薬組成物に配合してもよいであろう。この場合、２つの成分は同時に、または続けて投与することができる。一実施形態では、サリドマイドまたはその類似体、例えば、レナリドミドは、ＣＤ３８特異抗体、例えばＭＯＲ２０２の投与に先立って、および／または別々に投与される。他の実施形態では、レナリドミドはＣＤ３８特異抗体、例えばＭＯＲ２０２の投与の少なくとも７２時間前に投与される。この時間によって、レナリドミドは、標的細胞中でＣＤ３８の上方制御を媒介することができる。

医薬組成物には、ヒトの治療用として活性薬剤、例えば抗体が含まれる。医薬組成物は許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい。

「投与された」または「投与」には、例えば、静脈内、筋肉内、皮内もしくは皮下経路などの注入可能な形態、または、例えば吸入のための鼻内噴霧もしくはエアロゾルとしての粘膜経路などによる送達、あるいは摂取可能な溶液、カプセルもしくは錠剤としての送達が含まれるが、これらに限定されない。

化合物または組み合わせの「治療に有効な量」とは、所与の病気または障害、およびその合併症の臨床症状を治療、緩和または部分的に阻止するのに十分な量をいう。特定の治療目的に有効な量は、病気または傷害の重篤度ばかりでなく患者の体重や全身状態にも依るであろう。適切な用量の決定については、ルーチンの実験を行い、値のマトリックスを作成し、マトリックス中の異なる点を試験することにより達成できることは理解されるであろう。それらは全て、当業者の医師または臨床科学者が有する通常の技能の範囲内にある。

驚いたことに、特定の抗ＣＤ３８抗体とレナリドミドの組み合わせは、ＡＭＯ−１およびＮＣＩ−Ｈ９２９の両多発性骨髄腫細胞において、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を相乗的レベルで媒介することがわかった。さらに、また予期しなかったことに、特定の抗ＣＤ３８抗体は、レナリドミドと組み合わされると、ＮＣＩ−Ｈ９２９のＳＣＩＤマウスモデルにおいて、骨溶解の減少を相乗的レベルで媒介し、ＲＡＭＯＳのＳＣＩＤマウスモデルでは生存日数の中央値を相乗的に増大させた。したがって、例示したＣＤ３８特異抗体とレナリドミドの組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫に関係しているインビトロおよびインビボの両モデルにおいて、相乗的な挙動を示した。したがって、この組み合わせは、ヒトの多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療において相乗的な結果を与える。

レナリドミドはサリドマイド類似体であり、したがって、抗ＣＤ３８特異抗体と組み合わせて使用すれば、ポマリドマイドまたはサリドマイド自身などの他のサリドマイド類似体もまた、相乗的効果をもたらすと期待される。さらに、サリドマイドまたはその類似体が多発性骨髄腫細胞株においてＣＤ３８の発現を上方制御することから、したがって、腫瘍細胞の表面でＣＤ３８の発現を上方制御する他の薬剤、例えばトランス−レチノイン酸と抗ＣＤ３８抗体を組み合わせて使用すれば相乗効果が得られるものと期待される。

驚いたことに、特定の抗ＣＤ３８抗体とボルテゾミブの組み合わせが、ＮＣＩ−Ｈ９２９およびＬＰ−１多発性骨髄腫細胞株において、高レベルで抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介することがわかった。さらに、また驚いたことに、特定の抗ＣＤ３８抗体とボルテゾミブの組み合わせが、ＮＣＩ−Ｈ９２９のＳＣＩＤマウスモデルにおいて、骨溶解の減少を相乗的レベルで媒介し、ＲＡＭＯＳのＳＣＩＤマウスモデルでは生存日数の中央値を相乗的に増大させることがわかった。したがって、例示したＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブの組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫に関係するインビボモデルにおいて、相乗的な挙動を示した。したがって、この組み合わせは、ヒトの多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療において相乗的な結果を与える。

ジスルフィラム、エピガロカテキン−３−ガレートおよびサリノスポラミドＡなどの他のプロテアソーム阻害剤は、抗ＣＤ３８抗体と組み合わせて使用すると、類似の効果が得られるであろうことが期待される。

本明細書では、「ＣＤＲ」は、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｋａｂａｔら、または内部番号付与方法（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）のいずれかにより定義される。Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ，Ｌｅｓｋ ＡＭ．（１９８７） Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，１９６（４）：９０１−１７（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ，Ｗｕ Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ Ｋ．Ｓ．ａｎｄ Ｆｏｅｌｌｅｒ Ｃ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１−３２４２，ＵＳ Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。

実施形態
本開示の一態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療で使用するための、ＣＤ３８特異抗体と（ａ）サリドマイドもしくはその類似体、または（ｂ）プロテアソーム阻害剤との相乗的組み合わせを含む。

本開示の一態様は、ＣＤ３８特異抗体とサリドマイドまたはその類似体との組み合わせを含む。実施形態では、組み合わせは相乗的である。

実施形態では、ＣＤ３８特異抗体は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む。

実施形態では、ＣＤ３８特異抗体は、配列ＤＹＷＭＱ（配列番号：１５）のＨＣＤＲ１領域、配列ＴＩＹＰＧＤＧＤＴＧＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号：１６）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＤＹＹＧＳＮＳＬＤＹ（配列番号１７）、配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＶＶＡ（配列番号：１８）のＬＣＤＲ１領域、配列ＳＡＳＹＲＹＩ（配列番号：１９）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＱＨＹＳＰＰＹＴ（配列番号：２０）のＬＣＤＲ３領域を含む。

一態様では、組み合わせは、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用される。実施形態は、サリドマイド類似体がレナリドミドである組み合わせを含む。

一態様は、組み合わせを含む医薬組成物に関する。実施形態では、組成物は許容可能な担体を含む。実施形態では、組成物は有効量投与される。

本開示の一態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療のために、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドとの相乗的組み合わせを含む。

他の実施形態は、抗体が配列

の可変重鎖と、配列

の可変軽鎖とを含む組合せを含む。

本開示の一態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療のために、配列ＤＹＷＭＱ（配列番号：１５）のＨＣＤＲ１領域、配列ＴＩＹＰＧＤＧＤＴＧＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号：１６）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＤＹＹＧＳＮＳＬＤＹ（配列番号：１７）のＨＣＤＲ３領域、配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＶＶＡ（配列番号：１８）のＬＣＤＲ１領域、配列ＳＡＳＹＲＹＩ（配列番号：１９）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＱＨＹＳＰＰＹＴ（配列番号：２０）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドとの相乗的組み合わせを含む。

他の実施形態は、抗体が配列

の可変重鎖と、配列

の可変軽鎖とを含む組合せを含む。

実施形態では、抗体はＩｇＧ１のＦｃ領域を有する。実施形態では、抗体は改変されたＦｃ領域を有し、前記改変はＡＤＣＣ活性を亢進させる。

他の態様では、組み合わせの成分、すなわち、ＣＤ３８特異抗体とレナリドミドは別々に投与される。ある実施形態では、レナリドミドは、ＣＤ３８特異抗体の投与の前に投与される。さらに他の実施形態では、レナリドミドはＣＤ３８特異抗体の投与の少なくとも７２時間前に投与される。

他の態様では、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドの相乗的組み合わせは、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下に、レナリドミド単独の場合と比べて少なくとも２倍、３倍、４倍または５倍の有効性で、ＣＤ３８発現ＡＭＯ−１細胞および／またはＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＡＤＣＣによる殺滅を媒介することができる。

他の態様では、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドの相乗的組み合わせは、レナリドミド単独の場合と比べて少なくとも２倍、３倍、４倍または５倍の有効性で、骨溶解を減少させることができる。

他の態様は、治療を必要としている個体の多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療法を含み、この方法は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドを、多発性骨髄腫または非ホジキンスリンパ腫に罹患した個体に投与することを含む。実施形態では、組み合わせは有効量投与される。

他の態様は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドを含む組み合わせを含む。一実施形態では、この組み合わせは癌の治療に使用される。さらに他の実施形態では、癌は多発性骨髄腫および非ホジキンスリンパ腫から選択される。

他の態様は、ＣＤ３８特異抗体とプロテアソーム阻害剤の組み合わせを含む。実施形態では、この組み合わせは相乗的である。実施形態では、ＣＤ３８特異抗体は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む。

一態様では、この組み合わせは多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用される。実施形態では、この組み合わせは、ボルテゾミブのプロテアソーム阻害剤を含む。一態様は、この組み合わせを含む医薬組成物に関する。実施形態では、この組成物は許容可能な担体を含む。実施形態では、この組成物は有効量投与される。

本開示の一態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療のために、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブとの相乗的組み合わせを含む。

さらなる実施形態は、抗体が配列

の可変重鎖と、配列

の可変軽鎖とを含む組み合わせを含む。

実施形態では、抗体はＩｇＧ１のＦｃ領域を有する。実施形態では、抗体は改変されたＦｃ領域を含み、前記改変はＡＤＣＣ活性を亢進させる。

１つの実施形態では、この組み合わせは癌の治療に使用される。さらなる一実施形態では、癌は多発性骨髄腫および非ホジキンスリンパ腫から選択される。

他の一態様では、この組み合わせの成分、すなわち抗体とプロテアソーム阻害剤は、個別に投与される。

他の一態様では、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブの相乗的組み合わせは、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下に、ボルテゾミブ単独の場合と比べて少なくとも２倍、３倍、４倍または５倍の有効性で、ＣＤ３８発現ＬＰ−１細胞および／またはＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＡＤＣＣによる殺滅を媒介することができる。

他の一態様では、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブの相乗的組み合わせは、ボルテゾミブ単独の場合と比べて少なくとも２倍、３倍、４倍または５倍の有効性で、骨溶解を減少させることができる。

他の一態様では、本開示は、治療を必要としている個体の多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療法であって、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブを、多発性骨髄腫または非ホジキンスリンパ腫に罹患した個体に投与することを含む方法を含む。

実施形態では、この組み合わせが有効量投与される。

他の一態様は、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブを含む組み合わせを含む。

ある態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療で使用するための、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体と、
（ａ）サリドマイドもしくはその類似体、または
（ｂ）プロテアソーム阻害剤
との相乗的組み合わせを含む。

実施形態は、抗体が配列

の可変重鎖と配列

の可変軽鎖とを含む組合せを含む。

実施形態は、抗体がＩｇＧ１のＦｃ領域を含む組み合わせを含む。実施形態は、抗体が改変されたＦｃ領域を含み、前記改変はＡＤＣＣ活性を亢進させる組み合わせを含む。

実施形態は、前記ＣＤ３８特異抗体と前記サリドマイドもしくはその類似体またはプロテアソーム阻害剤が個別に投与される組み合わせを含む。

実施形態は、レナリドミドおよび／またはボルテゾミブのみの場合と比べて、少なくとも２倍の有効性で骨溶解を減少させることができる組み合わせを含む。

実施形態は、前記ＣＤ３８特異抗体をサリドマイドまたはその類似体と組み合わせた組み合わせを含む。実施形態は、サリドマイドの類似体がレナリドミドを含む組み合わせを含む。実施形態は、レナリドミドがＣＤ３８特異抗体の投与の前に投与される組み合わせを含む。実施形態は、レナリドミドがＣＤ３８特異抗体投与の少なくとも７２時間前に投与される組み合わせを含む。

実施形態は、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下に、レナリドミド単独の場合と比べて少なくとも２倍の有効性で、ＣＤ３８発現ＡＭＯ−１細胞および／またはＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＡＤＣＣによる殺滅を媒介することができる、ＣＤ３８特異抗体とレナリドミドの組み合わせを含む。

実施形態は、前記ＣＤ３８特異抗体とプロテアソーム阻害剤を含む組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、プロテアソーム阻害剤はボルテゾミブである。実施形態は、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下に、ボルテゾミブ単独の場合と比べて少なくとも２倍の有効性で、ＣＤ３８発現ＬＰ−１細胞および／またはＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＡＤＣＣによる殺滅を媒介することができる、ＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブの組み合わせを含む。

ある態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用するための、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とレナリドミドまたは他のサリドマイド類似体の相乗的組み合わせを含む。

ある態様は、多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療で使用するための、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体とボルテゾミブまたは他のプロテアソーム阻害剤の相乗的組み合わせを含む。

実施例１：各種細胞株表面でのＣＤ３８の発現
表１の細胞株について、ＣＤ３８の発現レベルを試験した。

Ｋｌｉｎｉｋｕｍ ｒｅｃｈｔｓ ｄｅｒ Ｉｓａｒ（「ＫｒｄＩ」）（Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によるインフォームドコンセント後、多発性骨髄腫患者からの骨髄試料（４〜１０ｍｌの吸引液）および骨髄外腫瘍の形質細胞腫試料を採取した。試料を遠心分離にかけ、さらに磁気活性化細胞分離法により形質細胞の濃縮を行った。

ＣＤ３８に特異性を有する、直接標識したＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ（商標）ＣＤ３８−ＰＥ抗体（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｃｌｏｎｅ ＨＢ７，ＣＡＴ ＃３４２３７１）で、細胞を染色した。「細胞１個当たりの結合抗体数」（ＡＢＣ）を、細胞１個当たりの幾何平均（ＧｅｏＭｅａｎ）を測定する、フローサイトメトリーをベースとしたＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ（商標）システムを使用して測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ（商標）ソフトウェアにより、測定したＧｅｏＭｅａｎを、相関する細胞１個当たりのＡＢＣ量へ変換した。ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ（商標）のＣＤ３８−ＰＥは抗体１個当たり１つのＰＥ分子を保有しているため、ＡＢＣ値は細胞１個当たりのＣＤ３８分子の数と相関すると仮定する。結果を表２に示す。

実施例２：各種細胞株におけるＣＤ３８の上方制御に対するレナリドミドの効果の評価
レナリドミドが、表１に示す多発性骨髄腫および形質細胞腫の細胞においてＣＤ３８の上方制御を誘発するかどうかを調べるために、細胞株を１００μＭのレナリドミドとともにインキュベートし、その後、ＣＤ３８の表面発現をＦＡＣＳにより解析した。

材料および方法
表１に示した各細胞株の細胞をそれぞれ約２×１０^５個、４８ウェルディッシュの標準ＲＰＭＩ培地に蒔いた。Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入したレナリドミド（ＬＬＣ Ｓ１０２９，ＣＡＳ Ｎｏ．１９１７３２−６；バッチ：Ｓ１０２９０）を、２０％のＦＣＳおよび０．１％のＤＭＳＯを含有する７５０μｌの体積中に、最終濃度が１００μＭとなるよう、それぞれのウェルに加えた。陰性のコントロールとして、ＤＭＳＯを０．１％含有するＦＣＳ補充培地を使用し、３７℃、５％ＣＯ_２の加湿インキュベータ中で２４時間、４８時間および７２時間、プレートをインキュベートした。

やさしくピペッティングして細胞を再懸濁させ、１回のインキュベーションにつき２５０μｌの細胞懸濁物を９６ウェル丸底プレートのウェルに移した。７００×ｇで１分間遠心分離して細胞を洗浄し、１５０μｌの冷ＦＡＣＳ緩衝液（３％ＦＣＳを補った１×ＰＢＳ）中に再懸濁させた。再び、遠心分離により細胞をペレットへと沈降させ、１５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３８抗体（ＭＯＲ２０２、ＩｇＧ１）またはコントロール抗体ＭＯＲ０３２０７を含有する１５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、氷上で１時間インキュベートした。その後、遠心分離により細胞を３回洗浄し、ＰＥ標識二次抗体（ＰＥ−Ｆａｂ２フラグメント、ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃフラグメント特異性；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；ＣＡＴ：１０９−１１６−０９８；Ｌｏｔ：８０９３８）を補ったＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。氷上で４５分間、細胞をインキュベートし、その後、遠心分離により３回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。その後、細胞懸濁物を、ＦＡＣＳアレイデバイスを使用したＦＡＣＳ解析に供した。

各細胞株のＣＤ３８基底発現と、ＣＤ３８の発現に対するレナリドミドの影響を表２に示す。さらに、ＡＭＯ−１細胞のＣＤ３８発現に対するレナリドミドの影響を図１に、そして、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＣＤ３８発現に対するレナリドミドの影響を図５に示す。

実施例３：レナリドミドの単独使用によるＡＭＯ−１細胞の増殖の阻害
レナリドミドの細胞毒性をＡＭＯ−１細胞で試験した。細胞を採取し、９６ウェルプレートに、１ウェル当たり５０００個分配した。レナリドミドの量を増加させながらウェルに加え、プレートを、３７℃の加湿インキュベータ（５％ＣＯ_２）で、２４時間、４８時間および７２時間インキュベートした。

インキュベート後、細胞の増殖について、細胞増殖キットＩＩ（ＲＯＣＨＥ、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：１１４６５０１５００１）を使用し、ＸＴＴベースの定量的比色分析法により、プレートを分析した。その後の測定のために、Ｔｅｃａｎ Ｇｅｎｉｏｓ Ｒｅａｄｅｒに供し、４９２ｎｍの吸収を検出した。

結果を図２に示す。

実施例４：ＡＭＯ−１細胞におけるＭＯＲ０２０２とレナリドミドの相乗的組み合わせ
ＭＯＲ０２０２とレナリドミドの組み合わせを試験するために、ＡＭＯ−１細胞を選択した。ＡＭＯ−１細胞とヒトの形質細胞腫細胞とは、表２に示すように、両者ともＣＤ３８基底発現が低く、かつレナリドミドによる処理で両者ともＣＤ３８が大きく上方制御するという点で類似している。

新たに採取した人の血液を密度勾配遠心分離してＰＢＭＣを単離した。異なるドナーから単離した血液を、ファルコンチューブ内の規定体積のＢｉｏｃｏｌｌ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍｅ ＡＧ；ＣＡＴ Ｎｏ．：Ｌ６１１５；ＬＯＴ Ｎｏ．：１０５０Ｔ）上に重ね、３８０ｇで遠心分離を行った。ＰＢＭＣを単離し、ＲＰＭＩ培地を補充した。

７２時間後、細胞を計数し、ＰＢＭＣの濃度が６．６×１０６／ｍｌとなるよう調節し、一方、ＡＭＯ−１細胞は最終濃度が２．５×１０^５／ｍｌとなるよう調節した。フローサイトメトリーにおける後の同定のために、ＡＭＯ−１細胞を０．１μｇ／ｍｌのＣａｌｃｅｉｎＡＭ（Ｃａｌｃｅｉｎ：１ｍｇ／ｍｌストック溶液、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ Ｎｏ．：Ｃ３０９９）で３分間染色し、弱い遠心分離により３回洗浄した。１００μｌの標的細胞懸濁液を１００μｌのＰＢＭＣと混合し、１：３０の比とした。抗体ＭＯＲ２０２または抗体ＭＯＲ０３２０７（陰性コントロール）を、最終濃度が１５μｇ／ｍｌとなるように加えた。細胞懸濁液を３７℃でさらに４時間インキュベートした。ＡＭＯ−１細胞死を検出するために、細胞懸濁液をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）に曝露し、次いでフローサイトメトリーで分析した。標的細胞をＣａｌｃｅｉｎＡＭ陽性細胞集団のゲーティングにより分離し、ＡＤＣＣにより殺滅した細胞を定量した。

ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせによる、ＡＭＯ−１細胞に対するＡＤＣＣ媒介を測定するために、全部で６回の実験を行った。３回の実験では、ＭＯＲ２０２による処理の前に、レナリドミドによりＰＢＭＣとＡＭＯ−１細胞を処理した。結果を表３ａ〜ｃおよび図３に示す。さらなる３回の実験では、ＭＯＲ２０２による処理の前に、レナリドミドによりＰＢＭＣのみを処理した。結果を表４ａ〜ｃおよび図４に示す。

表３ エフェクターおよびＡＭＯ−１細胞を共に、ＭＯＲ２０２による処理の前にレナリドミドにより処理した。単一の場合と組み合わせた場合の用量として、１０μＭのＬＥＮと、１５μｇ／ｍｌのＭＯＲ０３２０７およびＭＯＲ２０２を使用した。

データを次の３つの方法、すなわちａ）生データ（死細胞％）、ｂ）ＭＯＲ２０２処理グループを１（１００％）として、正規化した比殺滅データ、および理論的組み合わせを１（１００％）として、正規化した比殺滅データで示す。表３ａは生データを示す。

掲げた値の単位は、死細胞％である。ＤＭＳＯ、ＭＯＲ０３２０７、ＭＯＲ０３２０７＋ＤＭＳＯ、ＬＥＮ０、ＰＢＭＣ非含有ＬＥＮ１０、およびＰＢＭＣ非含有ＤＭＳＯのグループはコントロールである。

表３ｂは表３ａのデータを示すが、正規化されており、ＭＯＲ２０２処理グループが１（１００％）とされている。

表３ｂ〜ｃにおいて、「理論的組み合わせ」は、ＭＯＲ２０２単独の値とＬＥＮ単独の値の和を示す。表３ｂの正規化データは次のように計算される。表３ａは死細胞の数を示す。したがって、表３ｂの比殺滅値は、コントロールの値を減じることにより計算される。その後、比殺滅値は、１に設定したＭＯＲ２０２グループと比較される。表３ｂの結果の平均値を図３に示す。

１．相乗性の決定
１．１Ｃｈｏｕら
Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法を使用して相乗性を決定した。Ｃｈｏｕ ＴＣ，Ｔａｌａｌａｙ Ｐ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ ２２：２７−５５（１９８４）（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。相乗性の解析はＣＩ−イソボール法を使用して行う。

５０％有効式
５０％有効式は、阻害剤（薬剤など）の効果を
Ｆ_ａ／Ｆ_ｕ＝（Ｄ／Ｄ５０）＾ｍ
でモデル化するものであり、ここで、Ｄは用量、Ｆ_ａおよびＦ_ｕは用量Ｄによって影響を受けたシステム分率および影響を受けなかったシステム分率（Ｆ_ａ＋Ｆ_ｕ＝１）；Ｄ５０は５０％効果が得られた用量（例えば、ＩＣ５０、ＥＤ５０、ＬＤ５０）である。定数ｍは用量−効果曲線の形を決定する。
我々は、Ｅｘｃｅｌ Ｆｉｔソフトウェアを使用して線形回帰計算を行い、パラメータｍおよびＤ５０を推定した。

ＡＭＯ−１細胞に対する組み合わせの効果は、上述したように細胞死％を測定する。我々は、分率Ｆｕを、処理した細胞株の細胞死％とコントロールに曝露した細胞株の細胞死％の比と定義している。すなわち：
Ｆ_ｕ＝細胞死％（処理細胞株）／細胞死％（非処理細胞株）

その結果、細胞株の細胞死％は、５０％有効式の定数Ｄ５０となり、これは上述の線形回帰によって推定することができる。

ＣＩ−イソボール法
ＣＩ−イソボール法は、薬剤間の相乗性の定量的評価を提供する。単独および組み合わせの薬剤処理の用量−効果データから組み合わせ指数（ＣＩ）が推定される。１未満のＣＩ値は相乗性を示し；ＣＩ＝１は相加効果を示し；そしてＣＩ＞１は拮抗性を示す。ＣｈｏｕおよびＴａｌａｈａｙは、さらに相乗性の範囲を定義しており、ＣＩ値＜０．１を非常に強い相乗性、ＣＩ値０．１〜０．３を強い相乗性、ＣＩ値０．３〜０．７を相乗性、ＣＩ値０．７〜０．９を弱いないしやや弱い相乗性としている。薬剤の相互作用（相乗性または拮抗性）は、ＣＩ値が１から離れるほど顕著になる。

正式には、組み合わせ薬剤処理の組み合わせ指数（ＣＩ）は、
ＣＩ＝Ｄ_１／Ｄ_ｘ１＋Ｄ_２／Ｄ_ｘ２
で定義される。

ここで、Ｄ１およびＤ２は、組み合わせにおける薬剤１および薬剤２それぞれの用量であり；各Ｄｘ１およびＤｘ２は、それぞれ、組み合わせたときと同じ効果を与えるであろう薬剤１および薬剤２単独による治療用量である。用量Ｄｘ１およびＤｘ２は、単一薬剤治療の用量−効果データから推定する必要がある。５０％有効式を各薬剤のデータに適合させることは必須である。薬剤の５０％有効式から、我々は一定の効果（すなわち、Ｆａ、Ｆｕ）を得るために必要な容量（すなわち、Ｄ）を推定することができる。ある点が相加曲線から離れるほど、１とそのＣＩの差は大きくなり、したがって、（相乗的または拮抗的な）効果は大きくなる。

上記の方法は、Ｃｈｏｕ ＴＣ、Ｔａｌａｌａｙ Ｐ、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ ２２：２７−５５（１９８４）に記載されており、その全体が参照により組み込まれる。上記Ｃｈｏｕの方法のさらなるレビューもまた、Ｔｉｎｇ−Ｃｈａｏ Ｃｈｏｕ、Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５８：６２１−６８１（２００６）に記載されており、参照によりその全体が組み込まれる。

Ｃｈｏｕに基づく相乗計算用に作成した曲線を図１２〜１８に示す。図１２では、ａ）ＭＯＲ２０２の濃度が低すぎて効果が得られなかったデータ点と、ｂ）濃度が飽和に近かったデータ点を除くことにより、最良の適合曲線を決定した。適当なデータ点、約８０％の細胞殺滅点で、ＣＩ値は１未満となり、明確な相乗性を示している。図１３〜１８は表３および４からの６つの実験を示しており、それぞれにおいて、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせ効果に１００％到達するために必要なＤｘ１（ＭＯＲ２０２の用量）は無限大になる。したがって、Ｄ_１／Ｄ_ｘ１は１未満であり、レナリドミドは細胞の殺滅に関し、ＡＭＯ−１に対して何らの効果を有さず、Ｄｘ２値もまた無限大に近づくため、Ｄ_２／Ｄ_ｘ２は０に近づく。したがって、６つの実験のそれぞれのＣＩ値は１未満となり、明確な相乗性を示している。

表３ｃは、理論的組み合わせを１（１００％）とした正規化データを示し、またＣＩについてのＣｈｏｕの計算を含む。

表３ｃに示したデータは表３ａおよび３ｂとは異なっている。表３ｃで選択した濃度は抗体のＥＣ_５０（生データは示さず）に近く、表３ｃは表３ａで示したものとは異なる生データ点に基づいている。「理論的組み合わせ」はＭＯＲ２０２単独の値とＬＥＮ単独の値の和を示している。

表４ エフェクター細胞をＭＯＲ２０２で処理する前にレナリドミドでのみ処理。単一の場合と組み合わせた場合の用量として、１０μＭのＬＥＮと、１５μｇ／ｍｌのＭＯＲ０３２０７およびＭＯＲ２０２を使用した。

データを次の３つの方法、すなわちａ）生データ（死細胞％）、ｂ）ＭＯＲ２０２処理グループを１（１００％）として、正規化した比殺滅データ、およびｃ）理論的組み合わせを１（１００％）として、正規化した比殺滅データで示す。表４ａは生データを示す。

掲げた値の単位は、死細胞％である。ＤＭＳＯ、ＭＯＲ０３２０７、ＭＯＲ０３２０７＋ＤＭＳＯ、ＬＥＮ０、ＰＢＭＣ非含有ＬＥＮ１０、およびＰＢＭＣ非含有ＤＭＳＯはコントロールである。

表４ｂは表４ａのデータを表すが、ＭＯＲ２０２処理グループを１（１００％）として正規化されている。表４ｂ〜ｃで、「理論的組み合わせ」はＭＯＲ２０２単独の値とＬＥＮ単独の値の和を示している。

表４ｂに示したデータの正規化は、表３ｂで述べたようにコントロールを減じることにより計算する。表４ｂの結果の平均を図４に示す。

表４ｃは、理論的組み合わせを１（１００％）とした、データの正規化を示し、上記実施例４で説明した方法論を使用したＣＩについてのＣｈｏｕらの計算を含む。

表４ｃは表４ａおよび４ｂとは異なっている。表４ｃで選択した濃度は抗体のＥＣ_５０（生データは示さず）に近く、表４ｃは表４ａに示したものとは異なる生データ点に基づいている。

１．相乗性の決定
１．２ Ｃｌａｒｋｅらの相乗性
レナリドミド単独ではＡＭＯ−１細胞に対する細胞毒性が低い本明細書の場合のように、１つの薬剤の活性が低い場合、相乗性は、組み合わせでは阻害剤単独の場合と大きく異なるという統計的証拠によって決定することもできる。Ｃｌａｒｋｅら、Ｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｅｎｄｐｏｉｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｏｄｅｌｓ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ４６：２５５−２７８（１９９７）（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。本明細書では、相乗性の決定に、上述したＣｈｏｕらと、Ｃｌａｒｋｅらの方法を共に使用した。

データは次のようにして解析する。
阻害性 （ＡＢ）／Ｃ＜（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
相加性 （ＡＢ）／Ｃ＝（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
相乗性 （ＡＢ）／Ｃ＞（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
ただし、ＡはＬＥＮ単独による処理であり、ＢはＭＯＲ２０２単独による処理であり、Ｃは処理用ビヒクルに対する応答であり、ＡＢは処理Ａと処理Ｂの組み合わせである。

各実験で（ＡＢ）／Ｃは（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）より大きく、明確な相乗性を示している。

各実験で（ＡＢ）／Ｃは（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）より大きく、明確な相乗性を示している。

結果
Ｃｌａｒｋｅらの解析を適用したところ、ＬＥＮは、６つの実験全てでＡＭＯ−１細胞におけるＭＯＲ２０２のＡＤＣＣ活性を亢進した。Ｃｈｏｕらの解析を適用したところ、ＬＥＮは、６つの実験のうち６つでＡＭＯ−１細胞におけるＭＯＲ２０２のＡＤＣＣ活性を亢進した。この活性の亢進は、直接の細胞毒性、エフェクター細胞の活性化、およびＭＭ細胞上のＣＤ３８発現レベルの上方制御など、数種のメカニズムによるものであることが確認された。

実施例４の実験はまた、他のＣＤ３８特異抗体、例えば、「Ｒｅｆ ｍＡＢ５」抗体を使用しても実施される。

実施例５：レナリドミド単独使用によるＮＣＩ−Ｈ９２９の増殖阻害
実施例３で説明した方法により、ＮＣＩ−Ｈ９２９におけるレナリドミドの細胞毒性を試験した。結果を図２に示す。要約すると、レナリドミド単独の処理で、ＮＣＩ−９２９細胞の増殖が大きく阻害された。

実施例６：ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞におけるＭＯＲ２０２とレナリドミドの相乗的組み合わせ。
ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせによる試験を実施するために、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を選択した。ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞はＡＭＯ−１細胞よりＣＤ３８を高レベルで発現し、したがって、多発性骨髄腫または非ホジキンスリンパ腫に罹患したヒト患者に見出されるある種の細胞種の代表的なものである。

ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞に対するＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせによるＡＤＣＣの媒介を調べるために、実施例４で説明した方法を使用して、全部で６つの実験を行った。３つの実験では、ＰＢＭＣとＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を、ＭＯＲ２０２による処理の前にレナリドミドで処理した。結果を表７ａ〜ｂおよび図６に示す。３つの追加実験では、ＭＯＲ２０２による処理の前にＰＢＭＣのみをレナリドミドで処理した。結果を表８ａ〜ｂおよび図７に示す。

表７ エフェクターおよびＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を共にＭＯＲ２０２による処理の前にレナリドミドで処理した。単一の場合と組み合わせた場合の用量として、５μＭのＬＥＮと、１５μｇ／ｍｌのＭＯＲ０３２０７と、０．２または０．０７μｇ／ｍｌのＭＯＲ２０２を使用した。

データを次の方法、すなわちａ）生データ（死細胞％）、およびｂ）フラクショナル・プロダクト・コンビネーション（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）を１（１００％）として正規化した比殺滅データで示す。表７ａは生データを示す。

掲げた値の単位は死細胞％である。ＤＭＳＯ、ＭＯＲ０３２０７、ＭＯＲ０３２０７＋ＤＭＳＯ、ＬＥＮ０、ＰＢＭＣ非含有ＬＥＮ１０およびＰＢＭＣ非含有ＤＭＳＯはコントロールである。

表７ｂは、フラクショナル・プロダクト・コンビネーションを１（１００％）とした正規化データを示す。

Ｔｉｎｇ−Ｃｈａｏ Ｃｈｏｕ、Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｓｉｇｎ， ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｓｔｕｄｉｅｓ， Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５８：６２１−６８１（２００６）（その全体が参照により組み込まれる）に記載されるように、フラクショナル・プロダクト・コンビネーションを、次式、１−［（１−Ａ）^＊（１−Ｂ）］＝ｆｐｃ（％）を使用して計算する。表７ｂは表７ａに示した生データに基づいている。表７ｂに示したデータの正規化は、表３ｂで説明したように、コントロールを減じることにより計算する。表７ｂにおいて、ＬＥＮとＭＯＲ２０２の組み合わせは、フラクショナル・プロダクトの概念に基づく組み合わせより大きく、したがって、明確な相乗性が存在する。さらに、実施例４で記載したように、Ｃｈｏｕらの方法を使用して、組み合わせ指数値を計算した。表７ｂの結果の平均を図６に示す。

表８ エフェクター細胞をＭＯＲ２０２で処理する前にレナリドミドでのみ処理。単一の場合と組み合わせた場合の用量として、５μＭのＬＥＮと、１５μｇ／ｍｌのＭＯＲ０３２０７と、０．２^＊または０．０７μｇ／ｍのＭＯＲ２０２を使用した。

データを次の方法、すなわちａ）生データ（死細胞％）と、ｂ）フラクショナル・プロダクト・コンビネーションを１（１００％）として、正規化した比殺滅データで示す。表８ａは生データを示す。

掲げた値の単位は死細胞％である。ＤＭＳＯ、ＭＯＲ０３２０７、ＭＯＲ０３２０７＋ＤＭＳＯ、ＬＥＮ０、ＰＢＭＣ非含有ＬＥＮ１０およびＰＢＭＣ非含有ＤＭＳＯはコントロールである。

表８ｂは、フラクショナル・プロダクト・コンビネーションを１（１００％）とした正規化データを表す。

表８ｂは表８ａに示した生データに基づいている。表８ａに示したデータの正規化は、表３ｂで説明したように、コントロールを減じることにより計算する。表８ｂでは、ＬＥＮとＭＯＲ２０２の組み合わせは、フラクショナル・プロダクトの概念に基づく組み合わせより大きく、したがって、明確な相乗性が存在する。さらに、実施例４で説明したように、Ｃｈｏｕらの方法を使用して、組み合わせ指数値を計算した。表８ｂの結果の平均を図７に示す。

相乗性の決定
１．３ フラクショナル・プロダクトの概念
この実施例におけるデータの評価は、実施例４のＡＭＯ−１細胞に対するＭＯＲ２０２およびＬＥＮの組み合わせ効果を解析する際に使用したものとは異なっている。ここでは、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を試験しており、実施例５で示したように、ＬＥＮ単独でＮＣＩ−Ｈ９２９細胞の増殖に大きな効果を示すため、フラクショナル・プロダクトの概念を使用する。フラクショナル・プロダクトの概念は、Ｔｉｎｇ−Ｃｈａｏ Ｃｈｏｕ、Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５８：６２１−６８１（２００６）（その全体が参照により組み込まれる）に記載されている。そこで、Ｃｈｏｕらは、ＡとＢがそれぞれ６０％の阻害を示すとき、相加効果は８４％の阻害になるというのは過度の単純化であると述べている。Ｗｅｂｂ（１９６３）の論法に基づけば、この種の問題は（１−０．６）（１−０．６）＝０．１６、１−０．１６＝０．８４と解くことができる。ＣｈｏｕとＴａｌａｌａｙ（１９８４）は、これをフラクショナル・プロダクト法と称した。この方法によれば、組み合わせによる阻害効果が１００％を超えることは決してないであろう。しかしながら、ＣｈｏｕとＴａｌａｌａｙ（１９８４）はまた、この方法は有効性（例えば、阻害分率）を考慮しているが、用量−効果曲線の形状（例えば、双曲線状、またはＳ字状）を無視しているため、有効性が限られることを示した。用量−効果曲線における「形状」の重要性は、図１に示されている。ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）は、Ｗｅｂｂの方法は両薬剤が双曲線を描くとき（すなわち、用量−効果曲線が双曲線状、すなわち、中央値−効果プロットでｍ＝１のときの、単純なミカエリス・メンテンの反応速度論において）のみ有効であり、Ｓ字状（ｍ＞１）またはフラットなＳ字状（ｍ＜１）曲線など、ｍが１に等しくないときは有効でないことを示した。さらに、Ｗｅｂｂの方法は、２つの薬剤の効果が互いに非排他的である（例えば、完全に独立している）ときは有効であり、互いに排他的なとき（例えば、古典的なアイソボログラムで仮定されているような、類似の機構または作用様式、下記を参照）は無効である。

Ｃｌａｒｋｅの方法は１つの単剤療法の効果が低いときに最も適切であることから、Ｃｌａｒｋｅらの方法は使用しなかった。

図１２を参照されたい。ａ）ＭＯＲ２０２の濃度が低すぎていかなる効果も得られなかったデータ点、およびｂ）濃度が飽和に近いデータ点を除くことにより、最良適合曲線を決定した。適当なデータ点、約８０％の細胞殺滅点で、ＣＩ値は１より小さく、明確な相乗性を支持している。

結果
フラクショナル・プロダクトの概念の解析を適用すると、ＬＥＮは、６つの実験中６つで、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞におけるＭＯＲ２０２活性を相乗的に亢進した。Ｃｈｏｕらの解析を適用すると、ＬＥＮは、６つの実験中６つで、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞におけるＭＯＲ２０２活性を相乗的に亢進した。表７ａ〜ｂおよび８ａ〜ｂを参照されたい。

実施例７：ＮＣＩ−Ｈ９２９骨溶解ＳＣＩＤマウスＭＭモデルにおけるＭＯＲ２０２およびＬＥＮの単独および組み合わせ

材料
レナリドミド（ＳＹＮｔｈｅｓｉｓ ｍｅｄ ｃｈｅｍ；Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ；Ｌｏｔ ｎｏ：ＺＨＭ−０６６−０５１）。ＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ，Ｌｏｔ １００７０６−５ＫＬＥ１８）。ビヒクル・コントロール：Ｏｒａ−Ｐｌｕｓ：Ｏｒａ−Ｓｗｅｅｔ ＳＦ（Ｐａｄｄｏｃｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ，Ｌｏｔ ｎｏ．９４９９５２８）。ＳＣＩＤマウス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ｗａｉｔｅ Ｃａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ｓｔｒａｉｎ Ｃ．Ｂ．−１７−Ｉｇｈ−１^ｂ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ）。ＮＣＩ−Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫細胞（表１参照）。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ（Ｍｔ Ｗａｖｅｒｌｅｙ，ＶＩＣ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）のＲＰＭＩ １６４０細胞培地、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、メルカプトエタノール、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）およびペニシリン−ストレプトマイシン；ならびにＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｃａｓｔｌｅ Ｈｉｌｌ，ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）のトリパン青およびグルコース。

方法
骨溶解を引き起こすために、−７日目の日に６３匹のマウスの右脛骨に２．５×１０^６個のＮＣＩ−Ｈ９２９ＭＭ細胞（５μｌ中）を接種した。接種後３日目（−４日目）に、６０匹のＳＣＩＤマウスを体重に関してランダムに、１グループ当たり１０匹として、表１３に示すようにグループ分けした。投与計画を表９に示す。レナリドミド（グループＡおよびＤ）およびビヒクル・コントロール（グループＣ）による治療を、−１日目に開始した。ＭＯＲ２０２による治療（グループＢおよびＤ）は０日目に開始した。処理は６週間続けた。

骨溶解を評価するために、マイクロＣＴスキャンを使用したが、これには総骨容積（ＴＢＶ）、海綿骨容積（Ｔｂ．ＢＶ）、骨梁配列因子（Ｔｂ．Ｐｆ）および構造モデル指数（ＳＭＩ）を含む３次元解析が含まれた。表１０はこれらのパラメータのそれぞれを定義する。各マイクロＣＴスキャンパラメータの結果を表１１に示す。総骨容積（ＴＢＶ）の結果は図１９に示す。

Ｃｌａｒｋｅらの理論に従って、相乗的活性の各パラメータの解析を行った。表１２に、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせの相乗性を決定するために行った計算を示す。

表１２に示した数値は、各グループの各パラメータについて表１１に示した平均値から直接取ったものである。Ａ、Ｂ、ＣおよびＡＢと記したグループは、表９、１１および１２の全てで、同じ治療グループである。

総骨容積では、（ＡＢ）／Ｃは（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）より大きく、明確な相乗性を示している。骨梁配列因子および構造モデル指数では、表１０に記載したように、値が小さいほど、骨溶解が少ないことを示しており（治療の効果）、したがって、（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）より小さい（ＡＢ）／Ｃは、両パラメータにおける明確な相乗性を示している。

結果
マイクロＣＴスキャンによる骨溶解の測定で示されているように、本研究では、多発性骨髄腫細胞ＮＣＩ−Ｈ９２９の接種は、メスのＳＣＩＤマウスの脛骨にかなりの骨溶解を誘起した。骨溶解の程度は、マイクロＣＴスキャンが示しているように、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせで治療したマウスの脛骨で大きく低減した。マイクロＣＴスキャンの各パラメータ：総骨容積（ＴＢＶ）、海綿骨容積（Ｔｂ．ＢＶ）、骨梁配列因子（Ｔｂ．Ｐｆ）および構造モデル指数（ＳＭＩ）において、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせ（グループＡＢ）は、多発性骨髄腫細胞ＮＣＩ−Ｈ９２９によって引き起こされる骨溶解の低減に明確な相乗性を示した。

コントロールグループ（非接種の腫瘍がない対側性脛骨）では骨溶解が０％と見做し、グループＣ（ビヒクル・コントロール（０．９％塩化ナトリウム注射剤）で骨溶解が１００％であると見做して、表１１の値を調節すると、１２ｍｇ／ｋｇのＭＯＲ２０２単独で、ビヒクル・コントロールと比べて骨溶解を５５％まで用量に依存して減少させた。５０ｍｇ／ｋｇのＬＥＮ単独では、骨溶解を２０％阻害した。３ｍｇ／ｋｇのＭＯＲ２０２と５０ｍｇ／ｋｇのＬＥＮの組み合わせでは、骨溶解を完全に消滅させた。これらの知見は、併用療法の相乗的効果を支持する。さらに、組み合わせグループでは、Ｍタンパクの血清中の濃度が低下（＞９０％）したが、これは腫瘍細胞量が大きく減少したことを示している。

実施例８ メスＳＣＩＤマウスにおける、ヒト非ホジキンＲＡＭＯＳ腫瘍に対するＭＯＲ２０２およびレナリドミドの単独および組み合わせ、生存モデル

材料
シクロホスファミド（Ｆｌｕｋａ，Ｂｕｃｈｓ Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，Ｌｏｔ．Ｎｏ．０７５５１６６１）。レナリドミド（ＳＹＮｔｈｅｓｉｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ；Ｓｈａｎｇｈａｉ， Ｃｈｉｎａ；Ｌｏｔ．＃ＺＨＭ−０６６−０５１）。ＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ，Ｌｏｔ １００７０６−５ＫＬＥ１８）。ビヒクル・コントロール：Ｏｒａ−Ｐｌｕｓ：Ｏｒａ−Ｓｗｅｅｔ ＳＦ，１：１，ｖ／ｖ（ＳＹＮｔｈｅｓｉｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ； Ｓｈａｎｇｈａｉ， Ｃｈｉｎａ）。ＳＣＩＤマウス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ｗａｉｔｅ Ｃａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ｓｔｒａｉｎ Ｃ．Ｂ．−１７−Ｉｇｈ−１^ｂ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ）。

ＲＡＭＯＳ細胞（Ｏｎｃｏｄｅｓｉｇｎ，Ｄｉｊｏｎ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）を、ＲＰＭＩ１６４０＋２０％熱不活性化代替ソースＦＢＳ＋１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｍｅｄｉｕｍ＃２）中で培養した。ＲＡＭＯＳ非ホジキンリンパ腫細胞の培養試薬を、次の供給元から入手した：ＲＰＭＩ１６４０細胞培地、ＦＢＳ、Ｇｌｕｔａｍａｘ、ＨＥＰＥＳ、ピルビン酸ナトリウム、ＨＢＳＳおよびペニシリン−ストレプトマイシンは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ（Ｍｔ Ｗａｖｅｒｌｅｙ，ＶＩＣ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から；そして、トリパン青およびグルコースはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｃａｓｔｌｅ Ｈｉｌｌ，ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から。

方法
ＲＡＭＯＳ細胞接種前の２日間（−５および−４日目）、シクロホスファミド（７５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、１日２回）で６８匹のメスＳＣＩＤマウスに前処置を施した。接種の日（−３日目）に、１×１０^６個のＲＡＭＯＳ細胞を、全マウスそれぞれの尾静脈内に接種した。６４匹のマウスを体重でランダム化して８匹づつの８グループに分けた。各グループの投与計画を表１３に示す。

研究は９８日間継続し、測定終了は生存の終了とした。各グループの結果を表１４に示す。

実施例４に示すように、Ｃｌａｒｋｅらの理論にしたがって、相乗的活性の解析を行った。ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせの相乗性の決定で行った計算を表１５に示す。

表１５に示した数値は、各グループについて表１４に示した生存期間中央値から直接取ったものである。Ａ、Ｂ、ＣおよびＡＢと記したグループは、表１３〜１５と同じ治療グループである。

コントロールグループでは、ＲＡＭＯＳ細胞の接種により、２０日の生存期間中央値内で死に至った。しかしながら、ＭＯＲ２０２とレナリドミドの組み合わせでは、生存期間中央値が増大し、明確な相乗性を示した。

実施例９：ボルテゾミブ単独は各種多発性骨髄腫細胞株の増殖を阻害する。
複数の細胞株について、多発性骨髄腫細胞の増殖に対するボルテゾミブの阻害効果を解析した。量を増加させながら、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標），Ｌｏｔ：Ｎｏ．：＃９ＡＺＳＹ００）を、ＡＭＯ−１、ＬＰ−１、ＮＣＩ−Ｈ９２９およびＲＰＭＩ−８２２６細胞に適用し、２４時間、４８時間および７２時間インキュベートした。インキュベート後、細胞増殖キットＩＩ（ＲＯＣＨＥ、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：１１４６５０１５００１）を使用し、ＸＴＴベースの定量的比色分析法により、細胞増殖について、時間ごとのプレートを分析した。その後の測定のために、プレートをＴｅｃａｎ Ｇｅｎｉｏｓ Ｒｅａｄｅｒに供し、４９２ｎｍの吸収を検出した。

試験した細胞株全ての細胞増殖が、図８に示したようにボルテゾミブにより阻害され、ＩＣ_５０濃度は、それぞれＡＭＯ−１細胞で３．９ｎＭ、ＬＰ−１細胞で６．１ｎＭ、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞で３．３ｎＭ、そしてＲＰＭＩ−８２２６細胞で９．０ｎＭであった。

実施例１０：ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせによるＡＤＣＣ
実施例４で説明した方法を使用して、ボルテゾミブとＭＯＲ２０２の組み合わせのＡＤＣＣ効果を解析した。ここでは、標的細胞をＭＯＲ２０２による処理の前にボルテゾミブで処理した。２種の標的細胞、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞およびＬＰ−１細胞を試験した。結果を図９および図１０に示す。ボルテゾミブによるＭＯＲ２０２活性の亢進は、ＭＭ細胞に対する直接の細胞毒性によって媒介された。

実施例１１：ヒト多発性骨髄腫ＮＣＩ−Ｈ９２９骨溶解ＳＣＩＤマウスモデルにおける、ＭＯＲ２０２およびＢＯＲの単独および組み合わせ

材料
ボルテゾミブ（ＳＹＮｔｈｅｓｉｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ；Ｌｏｔ．＃ＺＨＭ−０６６−０５４）。ボルテゾミブを投与用の滅菌済み０．９％塩化ナトリウム溶液に配合した。ＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ，Ｌｏｔ １００７０６−５ＫＬＥ１８）。ビヒクル・コントロール：０．９％塩化ナトリウム注射剤。ＳＣＩＤマウス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ｗａｉｔｅ Ｃａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ｓｔｒａｉｎ Ｃ．Ｂ．−１７−Ｉｇｈ−１^ｂ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ）。

方法
骨溶解を引き起こすために、−７日目に、６３匹のＳＣＩＤマウスの脛骨内に２．５×１０^６個のＮＣＩ−Ｈ９２９ＭＭ細胞を接種した。接種後３日目（−４日目）に、６０匹のＳＣＩＤマウスを体重に関してランダム化し、１グループ当たり１０匹として表１６に示したグループに分けた。投与計画を表１６に示す。ボルテゾミブ（グループＡおよびＡＢ）およびビヒクル・コントロール（グループＣ）の治療を、−１日目に開始した。ＭＯＲ２０２治療（グループＢおよびＡＢ）を０日目に開始した。治療を６週間続けた。

骨溶解を評価するために、マイクロＣＴスキャンを使用したが、これには総骨容積（ＴＢＶ）、海綿骨容積（Ｔｂ．ＢＶ）、骨梁配列因子（Ｔｂ．Ｐｆ）および構造モデル指数（ＳＭＩ）を含む３次元解析が含まれた。上記の表１０はこれらのパラメータのそれぞれを定義する。各マイクロＣＴスキャンパラメータの結果を表１７に示す。総骨容積（ＴＢＶ）の結果は図２０に示す。

実施例４で記載したように、Ｃｌａｒｋｅらの理論に従い、相乗的活性の各パラメータの解析を行った。表１８に、ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせの相乗性を決定するために行った計算を示す。

表１８に示した数値は、各グループの各パラメータについて表１７に示した平均値から直接取ったものである。Ａ、Ｂ、ＣおよびＡＢと記したグループは、表１６〜１８と同じ治療グループである。

総骨容積および海綿骨容積では、（ＡＢ）／Ｃは（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）より大きく、明確な相乗性を示している。骨梁配列因子および構造モデル指数では、表１０に記載したように、値が小さいほど、骨溶解が少ないことを示しており（治療の効果）、したがって、（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）より小さい（ＡＢ）／Ｃは、両パラメータ共に、明確な相乗性を支持している。

結果
マイクロＣＴスキャンによる骨溶解の測定で示されているように、本研究では、多発性骨髄腫細胞ＮＣＩ−Ｈ９２９の接種は、メスのＳＣＩＤマウスの脛骨にかなりの骨溶解を誘起した。骨溶解の程度は、マイクロＣＴスキャンが示しているように、ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせで治療したマウスの脛骨で大きく低減した。マイクロＣＴスキャンの各パラメータ：総骨容積（ＴＢＶ）、海綿骨容積（Ｔｂ．ＢＶ）、骨梁配列因子（Ｔｂ．Ｐｆ）および構造モデル指数（ＳＭＩ）において、ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせ（グループＡＢ）は、ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞によって引き起こされる骨溶解の減少に明確な相乗性を示した。

コントロールグループ（非接種の腫瘍がない対側性脛骨）では骨溶解が０％と見做し、グループＣ（ビヒクル・コントロール（０．９％塩化ナトリウム注射剤）で骨溶解が１００％であると見做して、表１７の値を調節すると、１２ｍｇ／ｋｇのＭＯＲ２０２単独で、ビヒクル・コントロールと比べて骨溶解を５５％まで用量に依存して減少させ、０．６ｍｇ／ｋｇのＢＯＲ単独では、骨溶解を４０％阻害し、より少ない用量の３ｍｇ／ｋｇのＭＯＲ２０２と０．６ｍｇ／ｋｇのＢＯＲの組み合わせでは、骨溶解を完全に消滅させた。これらの知見は、併用療法の相乗的効果を支持する。さらに、組み合わせグループでは、Ｍタンパクの血清中の濃度が低下（＞９０％）したが、これは腫瘍細胞量が大きく減少したことを示している。

実施例１２ メスＳＣＩＤマウスにおける、ヒト非ホジキンＲＡＭＯＳ腫瘍に対するＭＯＲ２０２およびボルテゾミブの単独および組み合わせ、生存モデル

材料
シクロホスファミド（Ｆｌｕｋａ，Ｂｕｃｈｓ Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ＷＢ１０４６８）。ボルテゾミブ（ＳＹＮｔｈｅｓｉｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ；Ｌｏｔ．ｎｏ．＃ＺＨＭ−０６６−０５４）。ボルテゾミブを投与用の滅菌済み０．９％塩化ナトリウム溶液に配合した。ＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ，Ｌｏｔ １００７０６−５ＫＬＥ１８）。ビヒクル・コントロール：０．９％塩化ナトリウム注射剤。ＳＣＩＤマウス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ｗａｉｔｅ Ｃａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ｓｔｒａｉｎ Ｃ．Ｂ．−１７−Ｉｇｈ−１^ｂ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ）。

ＲＡＭＯＳ細胞（Ｏｎｃｏｄｅｓｉｇｎ，Ｄｉｊｏｎ Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）を、ＲＰＭＩ１６４０＋２０％熱不活性化代替ソースＦＢＳ＋１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｍｅｄｉｕｍ＃２）中で培養した。ＲＡＭＯＳ非ホジキンリンパ腫細胞の培養試薬を、次の供給元から入手した：ＲＰＭＩ１６４０細胞培地、ＦＢＳ、Ｇｌｕｔａｍａｘ、ＨＥＰＥＳ、ピルビン酸ナトリウム、ＨＢＳＳおよびペニシリン−ストレプトマイシンは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ（Ｍｔ Ｗａｖｅｒｌｅｙ，ＶＩＣ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から；そしてトリパン青およびグルコースはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｃａｓｔｌｅ Ｈｉｌｌ，ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から。

方法
ＲＡＭＯＳ細胞接種前の２日間（−５および−４日目）、シクロホスファミド（７５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、１日２回）で５５匹のメスＳＣＩＤマウスに前処置を施した。接種の日（−３日目）に、１×１０^６個のＲＡＭＯＳ細胞（１００μＬで）を、全マウスそれぞれの尾静脈内に接種した。４８匹のマウスを体重でランダム化して８匹づつの６グループに分けた。各グループの投与計画を表１９に示す。

研究は９８日間継続し、測定終了は生存の終了とした。各グループの結果を表２０に示す。

Ｃｌａｒｋｅらの理論にしたがって、相乗的活性の解析を行った。ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせの相乗性の決定で行った計算を表２１に示す。

表２１に示した数値は、各グループについて表２０に示した生存期間中央値から直接取ったものである。Ａ、Ｂ、ＣおよびＡＢと記したグループは、表１９〜２１と同じ治療グループである。

コントロールグループでは、ＲＡＭＯＳ細胞の接種により、２０．５日の生存期間中央値内で死に至った。しかしながら、ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせでは、生存期間中央値が増大し、明確な相乗性を示した。重要なことに、ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせ（グループＡＢ）を使用すると、５匹のマウスのうち２匹が研究期間中生存した。これは、ＭＯＲ２０２とボルテゾミブの組み合わせにおける相乗性の発見を強力に支持する。

本説明、具体的な例およびデータは、代表的実施形態を示しつつ、説明のために示されたものであって、本発明を限定することを意図するものではないことは、理解されるべきである。当業者であれば、本明細書に含まれる議論、開示およびデータから、本発明における様々な変更形態や修正形態は明らかであり、それらは本発明の一部であると見做される。

Claims (16)

1. 多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用するための、
   配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）または配列ＳＹＹＭＮ（配列番号：１４）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体と、
   （ａ）サリドマイドもしくはその類似体、または
   （ｂ）プロテアソーム阻害剤
   との相乗的組み合わせ。
2. 請求項１に記載の組み合わせにおいて、前記抗体が、配列
   

   

   の可変重鎖、および配列
   

   

   の可変軽鎖を含むことを特徴とする組み合わせ。
3. 請求項１または２に記載の組み合わせにおいて、前記抗体がＩｇＧ１のＦｃ領域を含むことを特徴とする組み合わせ。
4. 請求項１乃至３の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記抗体が改変されたＦｃ領域を含み、前記改変はＡＤＣＣ活性を亢進させることを特徴とする組み合わせ。
5. 請求項１乃至４の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ＣＤ３８特異抗体と前記サリドマイドもしくはその類似体またはプロテアソーム阻害剤が個別に投与されることを特徴とする組み合わせ。
6. 請求項１乃至５の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、レナリドミドおよび／またはボルテゾミブのみの場合と比べて、少なくとも２倍の有効性で骨溶解を減少させることができることを特徴とする組み合わせ。
7. 請求項１乃至６の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ＣＤ３８特異抗体がサリドマイドまたはその類似体と併用されることを特徴とする組み合わせ。
8. 請求項７に記載の組み合わせにおいて、前記サリドマイド類似体がレナリドミドを含むことを特徴とする組み合わせ。
9. 請求項１乃至８の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ＣＤ３８特異抗体の投与前にレナリドミドが投与されることを特徴とする組み合わせ。
10. 請求項１乃至９の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ＣＤ３８特異抗体の投与の少なくとも７２時間前に、レナリドミドが投与されることを特徴とする組み合わせ。
11. 請求項７乃至１０の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下に、レナリドミド単独の場合と比べて少なくとも２倍の有効性で、ＣＤ３８発現ＡＭＯ−１細胞および／またはＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＡＤＣＣによる殺滅を媒介することができることを特徴とする組み合わせ。
12. 請求項１乃至６の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ＣＤ３８特異抗体とプロテアソーム阻害剤を含むことを特徴とする組み合わせ。
13. 請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブであることを特徴とする組み合わせ。
14. 請求項１２または１３に記載の組み合わせにおいて、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下に、ボルテゾミブ単独の場合と比べて少なくとも２倍の有効性で、ＣＤ３８発現ＬＰ−１細胞および／またはＮＣＩ−Ｈ９２９細胞のＡＤＣＣによる殺滅を媒介することができることを特徴とする組み合わせ。
15. 多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用するための、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体と、レナリドミドまたは他のサリドマイド類似体との相乗的組み合わせ。
16. 多発性骨髄腫および／または非ホジキンスリンパ腫の治療に使用するための、配列ＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＧＤＳＫＲＰＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＱＴＹＴＧＧＡＳＬ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ３８特異抗体と、ボルテゾミブまたは他のプロテアソーム阻害剤との相乗的組み合わせ。

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