BR112013006769B1 - combinação sinérgica - Google Patents

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Abstract

COMBINAÇÃO SINÉRGICA. A presente revelação descreve uma combinação farmacêutica de um anticorpo anti- CD38 e lenalidomi da e uma combinação farmacêutica de um anticorpo anti-CD38 e bortezomibe.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
Este pedido reivindica o benefício do pedido provisório número de série U.S. 61/486.814 depositado em 17 de maio de 2011, pedido provisório número de série U.S. 61/468.607 depositado em 29 de março de 2011, pedido provisório número de série U.S. 61/437.696 depositado em 31 de janeiro de 2011 e pedido provisório número de série U.S. 61/386.619 depositado em 27 de setembro de 2010, sendo que todos esses são incorporados a título de referência em sua totalidade.
ANTECEDENTES
O mieloma múltiplo é uma malignidade de célula B caracterizada pela acumulação latente na medula óssea de células de plasma secretoras com um baixo índice proliferativo e um período de vida estendido. A doença, em última análise, ataca ossos e a medula óssea, resultando em múltiplos tumores e lesões por todo o sistema esquelético.
Aproximadamente, 1% de todos os cânceres e um pouco mais que 10% de todas as malignidades podem ser atribuídos ao mieloma múltiplo (MM). A incidência de MM aumenta na população em envelhecimento com a idade média no momento do diagnóstico em torno de 61 anos. As terapias atualmente disponíveis para mieloma múltiplo incluem quimioterapia, transplante de célula-tronco, Thalomid(R) (talidomida), Velcade(R) (bortezomibe), Aredia(R) (pamidronato) e Zometa(R) (ácido zoledrônico). Os protocolos de tratamento atuais que incluem uma combinação de agentes quimioterapêuticos, como vincristina, BCNU, melfalano, ciclofosfamida, adriamicina e prednisona ou dexametasona, rendem uma taxa de remissão completa de somente cerca de 5% e sobrevivência média é de aproximadamente 36 a 48 meses a partir do momento do diagnóstico. Avanços recentes com uso de quimioterapia de alta dose seguida por transplante de célula sanguínea mononuclear periférica ou autóloga de medula óssea aumentaram a taxa de remissão completa e a duração de remissão. Mesmo assim, a sobrevivência geral foi prolongada somente ligeiramente e nenhuma evidência para uma cura foi obtida. Em última análise, os pacientes de MM frequentemente sofrem recidivas, mesmo sob terapia de manutenção com interferon- alfa (IFN-a) apenas ou em combinação com esteroides.
Linfoma não-Hodgkin é uma classificação ampla de linfomas que são cânceres originados a partir do sistema linfático quando linfócitos (células B ou células T) se tornam malignas e proliferam de modo incontrolável para formar uma massa tumoral. No total, NHL engloba cerca de 30 diferentes subtipos de linfoma, incluindo Linfoma difuso de grande célula-B (DLBCL) e linfoma folicular (FL) . A incidência de NHL alcançará mais de 140.000 nos principais mercados em 2019. As opções de tratamento disponíveis incluem Rituxan/MabThera, combinações dos mesmos como R-CHOP (rituximabe, ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina e prednisona), R-CVP (Rituxan, ciclofosfamida, vincristina e prednisona), e quimioterapia. Além disso, após a remissão ou após recidiva, o transplante de célula-tronco hematopoiética pode ser reconsiderado. Apesar das opções de tratamento atuais, no entanto, as taxas de sobrevivência em grupos de alto risco de NHL agressivo podem ser tão baixo quanto 30% no período de 5 anos. Portanto, resta uma grande necessidade não preenchida de tratamentos e combinações de tratamentos efetivos.
O CD38 é um exemplo de um antígeno expresso em tais células malignas de plasma e outros linfócitos. Funções atribuídas ao CD38 incluem tanto mediação de receptor em adesão quanto eventos de sinalização e atividade (ecto-) enzimática. Como uma ectoenzima, o CD3 8 usa NAD+ como substrato para a formação de ribose ADP cíclica (cADPR) e ADPR, mas também de ácido nicotínico-adenina dinucleotídeo fosfato (NAADP). cADPR e NAADP demonstraram atuar como segundos mensageiros para mobilização de Ca2+. Ao converter NAD+ para cADPR, o CD3 8 regula a concentração de NAD+ extracelular e, portanto, a sobrevivência de célula por modulação de morte de célula induzida por NAD (NCID) . Em adição à sinalização por meio de Ca2+, a sinalização de CD38 ocorre por meio de linha cruzada com complexos de receptor de antígeno em Células B e T ou outros tipos de complexos de receptor, por exemplo, moléculas de MHC e está, desse modo, envolvida em várias respostas celulares, mas também em comutação e secreção de IgG.
Os anticorpos específicos para CD38 são descritos nos documentos n° WO 1999/62526 (Mayo Foundation); WO 200206347 (Crucell Holland); U.S. 2002164788 (Jonathan Ellis) que são incorporados a título de referência em sua totalidade; WO 2005/103083 (MorphoSys AG) , número de série U.S. 10/588.568 que são incorporados a título de referência em sua totalidade, WO 2006/125640 (MorphoSys AG) , Número de série U.S. 1 1/920.830 que são incorporados a título de referência em sua totalidade e W02007/042309 (MorphoSys AG), número de série U.S. 12/089.806 que são incorporados a título de referência em sua totalidade; WO 2006099875 (Genmab), número de série U.S. 1 1/886.932 que são incorporados a título de referência em sua totalidade; e WO 08/047242 (Sanofi-Aventis), número de série U.S. 12/441.466 que são incorporados a título de referência em sua totalidade.
As combinações de anticorpos específicos para CD38 e outros agentes são descritas nos documentos n° WO 200040265 (Research Development Foundation); WO 2006099875 e WO 2008037257 (Genmab); e WO 2010061360, WO 2010061359, WO 2010061358 e WO 2010061357 (Sanofi Aventis), que são todos incorporados a título de referência em sua totalidade.
É evidente que, apesar do progresso recente no reconhecimento e desenvolvimento de agentes anticâncer, muitas formas de câncer que envolve tumores de expressão de CD38 ainda têm um prognóstico pobre. Assim, há uma demanda por métodos para tratamento de tais formas de câncer.
SUMÁRIO
Em um aspecto, a presente revelação refere-se a uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 e talidomida ou um análogo da mesma, por exemplo, lenalidomida. Em outro aspecto, a presente revelação refere-se a uma combinação sinérgica que compreende um anticorpo específico para CD38 e bortezomibe ou outro inibidor de proteassoma. Tais combinações são úteis no tratamento de cânceres, como mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Os modelos in vitro e in vivo são considerados indicadores de como certo composto ou combinação de compostos se comportariam em seres humanos. Aqui, as combinações de um anticorpo específico para CD38 e lenalidomida foram testadas em linhagens celulares humanas de mieloma múltiplo e sinergia foi identificada. Além disso, a combinação de um anticorpo específico para CD3 8 e lenalidomida e uma combinação de um anticorpo específico para CD38 e bortezomibe foi testada em modelos de camundongo contra tanto as células de mieloma múltiplo e células de linfoma de Burkitt (uma forma de NHL) e sinergia foi identificada. Portanto, as combinações serão efetivas no tratamento de seres humanos com mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin. Além disso, o anticorpo específico para CD38 exemplificado no presente relatório descritivo se encontra em fase de experimentos clínicos, em que tais combinações podem ser confirmadas em seres humanos.
Quando compostos são combinados seja in vitro ou in vivo, espera-se que a combinação tem somente efeitos aditivos. De modo completamente inesperado, os inventores constataram que a combinação de um anticorpo anti-CD38 particular e lenalidomida mediaram um nível sinérgico de Citotoxicidade Mediada por Célula Dependente de Anticorpo (ADCC) tanto nas linhagens celulares de mieloma múltiplo de AMO-1 quanto de NCI-H929. Além disso, e também de modo inesperado, um anticorpo anti-CD38 particular, quando combinado com lenalidomida ou quando combinado com bortezomibe, mediou um nível sinérgico de redução em lise de osso no modelo de camundongo SCID NCI-H929 e, de modo sinérgico, aumentou a dias de sobrevivência medianos no modelo de camundongo SCID RAMOS. Portanto, tanto a combinação do anticorpo específico exemplificado para CD38 e lenalidomida quanto o anticorpo específico exemplificado para CD38 e bortezomibe se comportaram de modo sinérgico nos modelos in vitro e/ou in vivo relevante a mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação em que o anticorpo específico para CD38 compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14) , uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e a talidomida ou um análogo da mesma é lenalidomida. Em aspectos preferenciais, a combinação é usada para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação em que o anticorpo específico para CD38 compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2) , uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e o inibidor de proteassoma é bortezomibe. Em aspectos preferenciais, a combinação é usada para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A Figura 1 mostra os efeitos de lenalidomida apenas na expressão de CD38 em células de AMO-1.
A Figura 2 mostra os efeitos de lenalidomida apenas na proliferação de células em várias linhagens celulares de mieloma múltiplo. Essa medida representa a citotoxicidade relativa de lenalidomida em cada linhagem celular.
A Figura 3 mostra a mediação de ADCC em células de AMO-1 pela combinação de MOR03087 e lenalidomida. As PBMCs e células de AMO-1 foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR03087. MOR03207 liga lisozima e é usada como controle de isótipo, assim como IgGl. LEN representa lenalidomida. "Teórico" representa a adição do valor de MOR03087 apenas e o valor de LEN apenas. Os dados mostrados são a média da Tabela 3b.
A Figura 4 mostra a mediação de ADCC em células de AMO-1 pela combinação de MOR03087 e lenalidomida. Somente as PBMCs foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR03087. MOR03207 liga lisozima e é usada como controle de isótipo, assim como IgGl. LEN representa lenalidomida. "Teórico" representa a adição do valor de MOR03087 apenas e o valor de LEN apenas. Os dados mostrados são a média da Tabela 4b.
A Figura 5 mostra os efeitos de lenalidomida apenas na expressão de CD38 em células de NCI-H929.
A Figura 6 mostra a mediação de ADCC em células de NCI-H929 pela combinação de MOR03087 e lenalidomida. As PBMCs e células de NCI-H929 foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR03087. Teórico representa a combinação calculada com uso do conceito de produto fracionário de Chou et al. Os dados mostrados são a média da Tabela 7b.
A Figura 7 mostra a mediação de ADCC em células de NCI-H929 pela combinação de MOR03087 e lenalidomida. Somente as PBMCs foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR03087. Teórico representa a combinação calculada com uso do conceito de produto fracionário de Chou et al. Os dados mostrados são a média da Tabela 8b.
A Figura 8 mostra a inibição de crescimento de várias linhagens celulares de mieloma múltiplo causada por bortezomibe apenas. A IC50 em células de AMO-1 foi de 3,9 nM. A IC50 em Células LP-1 foi de 6,1 nM. A IC50 em células de NCI-H929 foi de 3,3 nM. A IC50 em células RPMI-8226 foi de 9,0 nM.
A Figura 9 mostra a mediação de ADCC em células de NCI-H929 pela combinação de MOR03087 a 15 μg/ml e Velcade(R) (bortezomibe). Os dois gráficos representam dois doadores diferentes.
A Figura 10 mostra a mediação de ADCC em células LP-1 pela combinação de MOR202 a 15 μg/ml e Velcade(R) (bortezomibe). Os dois gráficos representam dois doadores diferentes.
A Figura 11 mostra a sequência de aminoácido de MOR202.
A Figura 12 mostra a curva de Melhor Ajuste, conforme descrito em Chou et al. , da combinação de lenalidomida e MOR202 na mediação de ADCC em células de AMO-1 e é também representativa para a curva de Melhor Ajuste gerada para a análise da mediação de ADCC em células de NCI- H929 .
As Figuras 13 a 18 mostram a análise de sinergia de fator Chou para seis experimentos separados com uso da combinação de MOR202 e lenalidomida na mediação de ADCC em células de AMO-1. A Figura 13 mostra experimento 1. A Figura 14 mostra experimento 2. A Figura 15 mostra experimento 3. A Figura 16 mostra experimento 4. A Figura 17 mostra experimento 5. A Figura 18 mostra experimento 6. As Figuras 13 a 15 foram derivadas a partir dos três experimentos mostrados nas Tabelas 3a a c e Figura 3. As Figuras 16 a 18 foram derivadas a partir dos três experimentos mostrados nas Tabelas 4a a c e Figura 4.
A Figura 19 mostra o volume ósseo total médio de MicroCT Scan de cada um dos grupos de estudo descritos no Exemplo 7, em que os resultados são mostrados na Tabela 11.
A Figura 20 mostra o volume ósseo total médio de MicroCT Scan de cada um dos grupos de estudo descritos no Exemplo 11, em que os resultados são mostrados na Tabela 17.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
"Sinergia", "sinergismo" ou "sinérgico" significam mais que o efeito aditivo esperado de uma combinação. O efeito de "sinergia", de "sinergismo" ou "sinérgico" de uma combinação é determinado no presente documento pelos métodos de Chou et al. e/ou Clarke et al. Consulte Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621 a 681 (2006), que é incorporado a título de referência em sua totalidade. Em Chou et al. , múltiplos métodos de determinação de sinergismo são revelados e pelo menos um desses métodos é usado no presente documento. Consulte também Clarke et al. , Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental citotoxic agents in vivo in breast cancer and other models, Breast Cancer Research and Treatment 46:255-278 (1997), que é incorporado a título de referência em sua totalidade.
O termo "anticorpo" significa anticorpos monoclonais que inclui qualquer isótipo como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE. Um anticorpo IgG é compreendido por duas cadeias pesadas idênticas e duas cadeias leves idênticas que são unidas por ligações de dissulfeto. Cada cadeia pesada e leve contém uma região constante e uma região variável. Cada região variável contém três segmentos chamados "regiões de determinação de complementaridade" ("CDRs") ou "regiões hipervariáveis" que são primariamente responsáveis pela ligação de um epítopo de um antígeno são referidos como CDR1, CDR2, e CDR3, numeradas sequencialmente a partir do N- terminal. As porções mais altamente conservadas das regiões variáveis fora das CDRs são chamadas de "regiões de estrutura". Um "fragmento de anticorpo" significa um fragmento Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' F(ab')2 ou outro fragmento que contenha pelo menos uma cadeia pesada variável ou leve variável, sendo que cada uma contém CDRs e regiões de estrutura.
THALOMID(R) (talidomida) em combinação com dexametasona é indicada para o tratamento de pacientes com mieoloma múltiplo recém-diagnosticado e é comercializado por Celgene.
Um "análogo de talidomida" inclui, mas sem limitação, a própria talidomida, lenalidomida (CC-5013, Revlimid(TM)) , Pomalidomida (CC4047, Actimid(TM)) e os compostos revelados no documento n° WO 2002068414 e WO 2005016326, que são incorporados a título de referência em sua totalidade. 0 termo se refere a um composto químico sintético que usa a estrutura de talidomida como uma cadeia principal (por exemplo, grupos laterais foram adicionados ou tais grupos foram excluídos da estrutura parental). O análogo difere em estrutura da talidomida e seus compostos de metabolite como por uma diferença no comprimento de uma cadeia alquila, um fragmento molecular, por um ou mais grupos 5 funcionais ou uma mudança em ionização. O termo "análogo de talidomida" também inclui os metabolitos de talidomida. Os análogos de talidomida incluem a mistura racêmica do enantiômero S e do R de um composto respectivo e o enantiômero S ou para o enantiômero R individualmente. A 10 mistura racêmica é preferencial. Os análogos de talidomida incluem os compostos das seguintes estruturas: (A) Lenalidomida (B) Talidomida
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em que R21, R22, R23 e R24 são (cada um) independentemente H, alcóxi, amina ou alquilamina e
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em que R21, R22, R23 e R24 são (cada um) independentemente H, alcóxi, amina ou alquila Lenalidomida é atualmente comercializada como Revlimid(R) por Celgene para o tratamento de mieloma múltiplo. Lenalidomida é descrita como tendo pelo menos as seguintes propriedades em relação ao tratamento de tumores, a) citotóxica para células tumorais, Gandhi et al. , Lenalidomida inibe a proliferação de células Namalwa CSN.70 e interfere na fosforilação de Gabl e montagem de complexo de proteína adaptadora, Leuk Res., 30 (7) :849 a 858 (2006) , que é incorporado a título de referência em sua totalidade; b) ativa células exterminadoras naturais (Nk) , Gandhi et al. , Dexametasona sinergiza com lenalidomida para inibir crescimento de tumor de mieloma múltiplo, mas reduz imunomodulação induzida por lenalidomida de função de célula T e NK, Curr Cancer Drug Targets, 1 ;10(2) :155 a 167 (março de 2010), que é incorporado a título de referência em sua totalidade; e c) regula de modo ascendente expressão de CD38 em células tumorais, consulte Lapalombella et al. , Lenalidomida regula de modo descendente o antígeno de CD20 e antagoniza citotoxicidade celular dependente de anticorpo de rituxima.be e direta em células de leucemia linfocitica crônica primária, Blood, 112:13, 5180 a 5189 (15 de dezembro de 2008) , que é incorporado a título de referência em sua totalidade. "LEN" é usado para descrever lenalidomida.
Conforme descrito, análogos de talidomida regulam de modo ascendente a expressão de CD38 em células tumorais. Outros agentes que regulam de modo ascendente a expressão de CD38 sobre a superfície de células tumorais são descritos nos documentos n° WO 00/40265, número de série U.S. 09/226.895, que são incorporados a título de referência em sua totalidade (Research Development Foundation).
Um "inibidor de proteassoma" se refere a um composto que bloqueia a ação de proteassomas, isto é, complexos celulares que quebram proteínas como, por exemplo, a proteína p53. Várias classes de inibidores de proteassoma são conhecidas. A classe dos boronatos de peptídeo inclui bortezomibe (INN, PS-341; Velcade(R)), um composto que é aprovado nos EUA para o tratamento de mieloma múltiplo recidivado. Outro boronato de peptídeo é CEP-18770. Outras classes de inibidores de proteassoma incluem aldeídos de peptídeo (por exemplo, MG132), peptídeo vinil sulfona, epoxicetonas de peptídeo (por exemplo, epoxomicina, carfilzomibe), inibidores de β lactona (por exemplo, lactacistina, MLN 519, NPI-0052, Salinosporamida A), compostos que criam complexos de ditiocarbamato com metais (por exemplo, Disulfiram, um fármaco que é também usado para o tratamento de alcoolismo crônico) e certos antioxidantes (por exemplo, Epigalocatequina-3-galato) catequina-3-gaiato, e Salinosporamida A. "VH" refere-se à região variável de uma cadeia pesada de imunoglobulina de um anticorpo ou fragmento de anticorpo. "VL" se refere à região variável da cadeia leve de imunoglobulina de um anticorpo ou fragmento de anticorpo. O termo "CD38" se refere à proteína conhecida como CD3 8 que tem os seguintes sinônimos: ADP-ribosila ciclase 1, cADPr hidrolase 1, Ribose ADP cíclica hidrolase 1, TIO. CD38 humano tem a sequência de aminoácido de: MANCEFS PVSGDKPCCRLSRRAQLCLGVSILVLILVWLAVWPRWRQQWS GPGTTKRFPETVLARCVKYTEIHPEMRHVDCQSVWDAFKGAFISKHPCNITEEDYQPLMKL GTQTVPCNKILLWSRIKDLAHQFTQVQRDMFTLEDTLLGYLADDLTWCGEFNTSKINYQSC PDWRKDCSNNPVSVFWKTVSRRFAEAACDWHVMLNGSRSKIFDKNSTFGSVEVHNLQPEK VQTLEAWVIHGGREDSRDLCQDPTIKELESIISKRNIQFSCKNIYRPDKFLQCVKNPEDSS CTSEI (SEQ ID NO: 7). "MOR202" um anticorpo anti-CD38 cuja sequência de aminoácido é fornecida na Figura 11. "MOR202" e "MOR03087" são usados como sinônimos para descrever o anticorpo mostrado na Figura 11.
A sequência de DNA que encodifica o Domínio Pesado Variável de MOR202 é: CAGGTGCAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGC CTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTTCTTCTTATTATATGAATTGGGTGC GCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGGTATCTCTGGTGATCCTAGCAATAC CTATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACC CTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTG ATCTTCCTCTTGTTTATACTGGTTTTGCTTATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAG CTCA (SEQ ID NO: 12) A sequência de DNA que encodifica o Domínio Leve Variável de MOR202 é: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACC GCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATCTTCGTCATTATTATGTTTATTGGTACCAGCAGA AACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGGTGATTCTAAGCGTCCCTCAGGCATCCC GGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAG GCGGAAGACGAAGCGGATTATTATTGCCAGACTTATACTGGTGGTGCTTCTCTTGTGTTTG GCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG (SEQ ID NO: 13) Anticorpo "Ref mAB5” é um anticorpo anti-CD38 cuja sequência de aminoácido é fornecida abaixo (as CDRs estão em negrito e sublinhadas): VH: QVQLVQSGAEVAKPGTSVKLSCKASGYTFTDYWMQWVKQRPGQGLEWIGTI YPGDGDTGYAQKFQGKATLTADKSS KTVYMHLS SLAS EDSAVYYCARGDYYGSNSLDYWGQ GTSVTVSS (SEQ ID NO: 21) VL: DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSTWAWYQQKPGQSPRRLIYSASYRYIGVPDR FTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPYTFGGGTKLEIKRT (SEQ ID NO: 22)
As CDRs de Ref mAB5 são definidas por Kabat et al. e um anticorpo que tem as mesmas CDRs como Ref mAB5 é descrito nos documento n° WO 2008/047242, U.S. 12/441.466, que são incorporados a título de referência em sua totalidade. "Região Fc" significa a região constante de um anticorpo que em seres humanos pode ser das subclasses de IgGl, 2, 3, 4 ou outras. As sequências de regiões Fc humanas estão disponíveis em IMGT, REGIÕES c de IGH Humano, http://www.imgt.org/lMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH /IGHC/Hu_IGHCallgenes.html (retirado em 16 de maio de 2011). "Intensifica atividade ADCC" significa um aumento na mediação de citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo. Modificações de aminoácido na região Fc que resultam em uma intensificação de atividade ADCC são revelados nos documentos n° WO 200042072 Genentech, WO 2004029207A2 Xencor e WO 2004063351 A2 Macrogenics, que são todos incorporados a título de referência em sua totalidade. "MOR03207" é um anticorpo cuja sequência de aminoácido é: VH: QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWSWIRQSPGRGLEWLG RIYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARLDHRYHEDTVY PGMDVWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 8) VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLPAYTVTWYQQKPGQAPVLVIYDDS DRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCASWDPSSGWFGGGTKLTVLGQ (SEQ ID NO: 9) . MOR03207 liga lisozima e é usado como controle de isótipo, assim como IgGl.
Uma "combinação" significa mais que um item, por exemplo, um composto como um anticorpo e lenalidomida.
A presente revelação também se refere a combinações, produtos farmacêuticos e composições farmacêuticas que contêm as combinações descritas. Os dois componentes da combinação sinérgica da presente invenção, por exemplo, o anticorpo específico para CD38 e lenalidomida, podem ser administrados juntos ou separadamente. Quando administrados juntos, os dois componentes podem ser formulados juntos em uma composição farmacêutica que pode incluir um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Alternativamente, os dois componentes podem também ser formulados em diferentes composições farmacêuticas. Nesse caso, os dois componentes podem ser administrados simultaneamente ou subsequentemente. Em uma modalidade, a talidomida ou um análogo da mesma, por exemplo, lenalidomida, é administrada antes e/ou separadamente da administração do anticorpo específico para CD38, por exemplo, MOR202. Em uma modalidade adicional, lenalidomida, é administrada pelo menos 72 horas antes da administração do anticorpo específico para CD38, por exemplo, MOR202. Esse período de tempo permite regulação ascendente mediada de lenalidomida de CD38 nas células-alvo. Uma composição farmacêutica inclui um agente ativo, por exemplo, um anticorpo para uso terapêutico em seres humanos. Uma composição farmacêutica pode incluir carreadores ou excipientes aceitáveis. "Administrado" ou "administração" inclui, mas sem limitação, entrega através de uma forma injetável como, por exemplo, uma rota intravenosa, intramuscular, intradérmica ou subcutânea ou rota mucosa, por exemplo, como um aspersor ou aerossol nasal para inalação ou como uma solução, cápsula ou tablete ingerível.
Uma "quantidade terapeuticamente efetiva" de um composto ou combinação se refere a uma quantidade suficiente para curar, aliviar ou parcialmente reter as manifestações clínicas de uma dada doença ou afecção e suas complicações. A quantidade que é efetiva para um propósito terapêutico particular dependerá da seriedade da doença ou lesão, bem como do peso e estado geral do indivíduo. Será entendido que a determinação de uma dosagem apropriada pode ser alcançada, com uso de experimentação de rotina, pela construção de uma matriz de valores e pelo teste de pontos diferentes na matriz, sendo que tudo isso se encontra dentro das habilidades comuns de um médico treinado ou cientista clínico.
Surpreendentemente, foi constatado que a combinação de um anticorpo anti-CD38 particular e lenalidomida mediou um nível sinérgico de Citotoxicidade Mediada por Célula Dependente de Anticorpo (ADCC) tanto nas células de mieloma múltiplo de AMO-1 quanto de NCI-H929. Além disso, e também de modo inesperado, um anticorpo anti-CD38 particular quando combinado com lenalidomida mediou um nível sinérgico de redução em lise de osso no modelo de camundongo SCID NCI-H929 e de modo sinérgico aumentou a dias de sobrevivência medianos no modelo de camundongo SCID RAMOS. Portanto, a combinação do anticorpo específico exemplificado para CD38 e lenalidomida se comportou de modo sinérgico tanto nos modelos in vitro quanto nos in vivo relevantes para o mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin. Portanto, essa combinação rende resultados sinérgicos no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin em seres humanos.
Lenalidomida é um análogo de talidomida, portanto, é esperado que outros análogos de talidomida como pomalidomida ou a própria talidomida também levem a efeitos sinérgicos quando usados em combinação com um anticorpo anti- CD38. Além disso, conforme a talidomida ou um análogo da mesma regula de modo ascendente a expressão de CD3 8 em linhagens celulares de mieloma múltiplo, portanto, é esperado que o sinergismo devesse resultar quando outros agentes que regulam de modo ascendente a expressão de CD38 sobre a superfície de células tumorais, por exemplo, ácido transretinoico e anticorpos anti-CD38 são usados em combinação.
Surpreendentemente, foi constatado que a combinação de um anticorpo anti-CD38 particular e bortezomibe mediaram um alto nível de Citotoxicidade Mediada por Célula Dependente de Anticorpo (ADCC) nas linhagens celulares de NCI-H929 e LP- 1 de mieloma múltiplo. Além disso, e também surpreendentemente, foi constatado que a combinação de um anticorpo anti-CD38 particular e bortezomibe mediaram um nível sinérgico de redução em lise de osso no modelo de camundongo SCID NCI-H929 e de modo sinérgico aumentaram a dias de sobrevivência medianos no modelo de camundongo SCID RAMOS. Portanto, a combinação do anticorpo específico exemplificado para CD38 e bortezomibe se comportou de modo sinérgico nos modelos ín vivo relevantes para mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin. Portanto, essa combinação rende resultados sinérgicos no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin em seres humanos.
É esperado que outros inibidores de proteassoma, como, Disulfiram, Epigalocatequina-3-gaiato e Salinosporamida levarão a efeitos similares quando usados em combinação com um anticorpo anti-CD38.
Os "CDRs" no presente documento são definidos ou por Chothia et al. , Rabat et al. ou por uma convenção de numeração interna. Consulte Chothia C, Lesk AM. (1987) Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J Mol Biol., 196(4):901 a 917, que é incorporado a título de referência em sua totalidade. Consulte Rabat E.A, Wu T.T., Perry H.M., Gottesman K.S. e Foeller C. (1991). Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5a edição, NIH Publicação n° 91-3242, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos Estados Unidos, Washington, DC, que é incorporado a título de referência em sua totalidade.
MODALIDADES
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 e (a) talidomida ou um análogo da mesma ou (b) um inibidor de proteassoma para uso no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação de um anticorpo específico para CD38 e talidomida ou um análogo da mesma. Em modalidades, a combinação é sinérgica.
Em modalidades, o anticorpo específico para CD38 compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14) , uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2) , uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6).
Em modalidades, o anticorpo específico para CD38 compreende uma região HCDR1 de sequência DYWMQ (SEQ ID NO: 15) , uma região HCDR2 de sequência TIYPGDGDTGYAQKFQG (SEQ ID NO: 16) , uma região HCDR3 de sequência GDYYGSNSLDY (SEQ ID NO: 17), uma região LCDR1 de sequência KASQDVSTWA (SEQ ID NO: 18), uma região LCDR2 de sequência SASYRYI (SEQ ID NO: 19) e uma região LCDR3 de sequência QQHYSPPYT (SEQ ID NO: 20) .
Em um aspecto, a combinação é usada para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin. As modalidades compreendem uma combinação em que o análogo de talidomida é lenalidomida.
Um aspecto refere-se a composições farmacêuticas que compreendem as combinações. Em modalidades, a composição compreende um carreador aceitável. Em modalidades, a composição é administrada em uma quantidade efetiva.
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14) , uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e lenalidomida para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não- Hodgkin .
Uma modalidade adicional compreende uma combinação em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada variável da sequência QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMNWVRQAPGKGLEWVSGISGDPSNTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLPLVYTGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) e uma cadeia leve variável da sequência DIELTQP PSVSVAPGQTARIS CSGDNLRHYYVYWYQQKPGQAPVLVIYGDS KRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTGGASLVFGGGTKLTVLGQ (SEQ ID NO: 11) •
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência DYWMQ (SEQ ID NO: 15) , uma região HCDR2 de sequência TIYPGDGDTGYAQKFQG (SEQ ID NO: 16) , uma região HCDR3 de sequência GDYYGSNSLDY (SEQ ID NO: 17) , uma região LCDR1 de sequência KASQDVSTWA (SEQ ID NO: 18) , uma região LCDR2 de sequência SASYRYI (SEQ ID NO: 19) e uma região LCDR3 de sequência QQHYSPPYT (SEQ ID NO: 20) e lenalidomida para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Uma modalidade adicional compreende uma combinação em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada variável da sequência QVQLVQSGAEVAKPGTSVKLSCKASGYTFTDYWMQWVKQRPGQGLEWIGTIYPGDGDTGYA QKFQGKATLTADKSSKTVYMHLSSLASEDSAVYYCARGDYYGSNSLDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 21) e uma cadeia leve variável da sequência DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSTWAWYQQKPGQSPRRLIYSASYRYIGVPDR FTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPYTFGGGTKLEIKRT (SEQ ID NO: 22) .
Em modalidades, o anticorpo tem uma região de IgGl Fc. Em modalidades, o anticorpo compreende uma região Fc modificada em que a dita modificação intensifica a atividade ADCC.
Em outro aspecto, os componentes da combinação, o anticorpo específico para CD38 e lenalidomida são administrados separadamente. Em uma modalidade, lenalidomida é administrada antes da administração do anticorpo específico para CD38. Em uma modalidade adicional, lenalidomida é administrada pelo menos 72 horas antes da administração do anticorpo específico para CD38.
Em outro aspecto, a combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e lenalidomida tem a capacidade de mediar extermínio de células de AMO-1 e/ou células de NCI-H929 de expressão de CD38 por ADCC na presença de PBMCs humanas isoladas com uma eficácia pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes ou cinco vezes maior que lenalidomida apenas.
Em outro aspecto, a combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e lenalidomida tem a capacidade de reduzir lise de osso com uma eficácia pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes ou cinco vezes maior que lenalidomida apenas.
Outro aspecto compreende um método de tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin em um indivíduo necessitado do mesmo, método esse que compreenda administração de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14) , uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2) , uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e lenalidomida a um indivíduo que tem mieloma múltiplo ou linfoma não-Hodgkin. Em modalidades, a combinação é administrada em uma quantidade efetiva.
Outro aspecto compreende uma combinação que compreende um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2) , uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e lenalidomida. Em uma modalidade, a combinação é usada para o tratamento de câncer. Em uma modalidade adicional, o câncer é selecionado a partir de mieloma múltiplo e linfoma não-Hodgkin.
Outro aspecto compreende uma combinação de um anticorpo específico para CD38 e um inibidor de proteassoma. Em modalidades, a combinação é sinérgica. Em modalidades, o anticorpo específico para CD38 compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14) , uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6).
Em um aspecto, a combinação é usada para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin. Em modalidades, a combinação compreende um inibidor de proteassoma que é bortezomibe. Um aspecto refere-se a composições farmacêuticas que compreendem as combinações. Em modalidades, a composição compreende um carreador aceitável. Em modalidades, a composição é administrada em uma quantidade efetiva.
Um aspecto da presente revelação compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e bortezomibe para o tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não- Hodgkin.
Uma modalidade adicional compreende uma combinação em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada variável da sequência QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMNWVRQAPGKGLEWVSGISGDPSNTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLPLVYTGFAYWGQGTLVTVS S (SEQ ID NO: 10) e uma cadeia leve variável da sequência DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLRHYYVYWYQQKPGQAPVLVIYGDSKRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTGGASLVFGGGTKLTVLGQ (SEQ ID NO: 11) .
Em modalidades, o anticorpo tem uma região de IgGl Fc. Em modalidades, o anticorpo compreende uma região Fc modificada em que a dita modificação intensifica a atividade ADCC.
Em uma modalidade, a combinação é usada para o tratamento de câncer. Em uma modalidade adicional, o câncer é selecionado a partir de mieloma múltiplo e linfoma não- Hodgkin .
Em outro aspecto, os componentes da combinação, o anticorpo e inibidor de proteassoma são administrados separadamente.
Em outro aspecto, a combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e bortezomibe tem a capacidade de mediar o extermínio células LP-1 e/ou células de NCI-H929 de expressão de CD38 por ADCC na presença de PBMCs humanas isoladas com uma eficácia pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes ou cinco vezes maior que bortezomibe apenas.
Em outro aspecto, a combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2) , uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e bortezomibe tem a capacidade de reduzir lise de osso com uma eficácia pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes ou cinco vezes maior que bortezomibe apenas.
Em outro aspecto, a presente revelação compreende um método de tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não- Hodgkin em um indivíduo necessitado do mesmo, método esse que compreende administração de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e bortezomibe a um indivíduo que tern mieloma múltiplo ou linfoma não-Hodgkin.
Em modalidades, a combinação é administrada em uma quantidade efetiva. Outro aspecto compreende uma combinação que compreende um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3), uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e bortezomibe.
Um aspecto compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), um HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e (a) talidomida ou um análogo da mesma ou (b) um inibidor de proteassoma, para uso no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
As modalidades compreendem uma combinação, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada variável da sequência QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMNWVRQAPGKGLEWVSGISGDPSNTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLPLVYTGFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) e uma cadeia leve variável da sequência DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLRHYYVYWYQQKPGQAPVLVIYGDSKRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTGGASLVFGGGTKLTVLGQ (SEQ ID NO: 11) •
As modalidades compreendem uma combinação em que o anticorpo compreende uma região de IgGl Fc. As modalidades compreendem uma combinação em que o anticorpo compreende uma região Fc modificada em que a dita modificação intensifica atividade ADCC.
As modalidades compreendem uma combinação, em que o dito anticorpo específico para CD38 e a dita talidomida ou um análogo da mesma ou inibidor de proteassoma são administrados separadamente.
As modalidades compreendem uma combinação que tem a capacidade de reduzir lise de osso com uma eficácia pelo menos duas vezes maior que lenalidomida e/ou bortezomibe apenas.
As modalidades compreendem uma combinação em que o dito anticorpo específico para CD38 é combinado com talidomida ou um análogo da mesma. As modalidades compreendem uma combinação em que o análogo de talidomida compreende lenalidomida. As modalidades compreendem uma combinação em que a lenalidomida é administrada antes da administração do anticorpo específico para CD38. As modalidades compreendem uma combinação em que lenalidomida é administrada pelo menos 72 horas antes da administração do anticorpo específico para CD3 8 .
As modalidades compreendem uma combinação de um anticorpo específico para CD38 e lenalidomida que tem a capacidade de mediar o extermínio de células de NCI-H929 e/ou de AMO1 de expressão de CD3 8 por ADCC na presença de PBMCs humanas isoladas com uma eficácia pelo menos duas vezes maior que lenalidomida apenas.
As modalidades compreendem uma combinação que compreende o dito anticorpo específico para CD38 e um inibidor de proteassoma. Em algumas modalidades, o inibidor de proteassoma é bortezomibe. As modalidades compreendem uma combinação de um anticorpo específico para CD38 e bortezomibe que tem a capacidade de mediar o extermínio de células de NCI-H929 e/ou de LP-1 de expressão de CD38 por ADCC na presença de PBMCs humanas isoladas com uma eficácia pelo menos duas vezes maior que bortezomibe apenas.
Um aspecto compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14), uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4), uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência QTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e lenalidomida ou outro análogo de talidomida para uso no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Um aspecto compreende uma combinação sinérgica de um anticorpo específico para CD38 que compreende uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1) ou de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14) , uma região HCDR2 de sequência GISGDPSNTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), uma região HCDR3 de sequência DLPLVYTGFAY (SEQ ID NO: 3) , uma região LCDR1 de sequência SGDNLRHYYVY (SEQ ID NO: 4) , uma região LCDR2 de sequência GDSKRPS (SEQ ID NO: 5) e uma região LCDR3 de sequência OTYTGGASL (SEQ ID NO: 6) e bortezomibe ou outro inibidor de proteassoma para uso no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin.
Exemplos
Exemplo 1: Expressão de CD38 sobre a superfície de várias linhagens celulares
As linhagens celulares da Tabela 1 foram testadas 5 em relação ao nível de expressão de CD38. Tabela 1
Figure img0004
As amostras de medula óssea (4 a 10 ml aspirados) a partir de pacientes com mieloma múltiplo e amostras de plasmacitoma tumoral extramedular foram obtidas após 10 consentimento informado a partir de Klinikum rechts der Isar ("KrdI") (Munique, Alemanha). As amostras foram submetidas à centrifugação de transistor orgânico e adícionalmente o enriquecimento de célula de plasma foi alcançado por meio de classificação de célula ativada magneticamente. 15 As células foram manchadas com um anticorpo CD38-PE
QuantiBRITETM diretamente identificado (Becton Dickinson GmbH, Clone HB7, CAT n°342371) que é específico para CD38. Os "Anticorpos Ligados por Célula" (ABCs) foram determinados com uso da citometria de fluxo baseada no sistema de 20 QuantiBRITETM que meda média geométrica (GeoMean) por célula.
A conversão da GeoMean medida em quantidade correspondente de ABC por célula foi feita com software GraphPad PRISMTM. Os valores de ABC são assumidos para se colacionar aos números de moléculas de CD3 8 por célula, já que CD3 8-PE Quant iBRITE<TM> carrega uma molécula de PE por anticorpo. Os resultados são mostrados na Tabela 2.
Exemplo 2: Avaliação de efeito de Lenalidomida na regulação ascendente de CD38 em várias linhagens celulares
A fim de determinar se a lenalidomida induziu a regulação ascendente de CD38 no mieloma múltiplo e células de plasmacitoma da Tabela 1, as linhagens celulares foram incubadas com 100 μm de lenalidomida e, subsequentemente, expressão de superfície de CD38 foi analisada por FACS.
Materiais e Métodos
Cerca de 2xl05 células de cada uma das linhagens celulares da Tabela 1 foram plaqueadas em placas de 48 cavidades em meio de RPMI padrão. A Lenalidomida, comprada de Selleck Chemicals (LLC S1029, CAS n° 191732-6; Lote: S10290), foi aplicada ãs respectivas cavidades a uma concentração final de lOOμrn em um volume de 750 μl que contém 20% de FCS e 0,1% de DMSO. Como controle negativo, 0,1% de DMSO em meio suplementado com FCS foi usado e placas foram incubadas por 24 horas, 48 horas e 72 horas a 37 °C e 5% de CO2 em incubadora umidifiçada.
As células foram ressuspensas por pipetagem suave e 250 μl de suspensão de células por período de incubação foram transferidas para uma cavidade de uma placa de fundo arredondado de 96 cavidades. As células foram lavadas por centrifugação por 1 min a 700 X g e foram ressuspensas em 150 μl de tampão de FACS frio (lx PBS suplementado com 3% de FCS). As células foram novamente peletizadas por centrifugação e foram ressuspensas em 150 μl de tampão de FACS que contém 15 μg/ml de anticorpo anti-CD38 (MOR202, IgGl) ou controla o anticorpo MORO3207 e incubadas por 1 hora em gelo. As células foram lavadas 3 vezes por centrifugação e foram ressuspensas em tampão de FACS suplementado com anticorpo secundário identificado como PE (fragmento de PE- Fab2, IgG de cabra anti-humano, específico de fragmento Fc ; Jackson Immuno Research; CAT: 109-1 16-098; Lote: 80938). As células foram incubadas por 45 minutes em gelo, então lavadas 3 vezes por centrifugação e ressuspensas em tampão de FACS. As suspensões de células foram então submetidas à análise de FACS com uso um dispositivo de arranjo de FACS.
A expressão de CD38 basal de cada linhagem celular e o afeto de lenalidomida na expressão de CD38 são mostrados na Tabela 2. Adicionalmente, o afeto de lenalidomida na expressão de CD38 de células de AMO-1 é mostrado na Figura 1 e o afeto de lenalidomida na expressão de CD3 8 de células de NCI-H929 é mostrado na Figura 5. Tabela 2
Figure img0005
Exemplo 3: Inibição de proliferação de células de
AMO-1 com uso de Lenalidomida apenas A citotoxicidade de Lenalidomida foi testada em células de AMO-1. As células foram coletadas e distribuídas em placas de 96 cavidades com 5000 células por cavidade. Quantidades crescentes de Lenalidomida foram adicionadas às cavidades e as placas foram incubadas por 24 horas, 48 horas e 7 2 horas a 37 °C em uma incubadora umidificada (5% de C02) . Após a incubação, as placas foram analisadas em relação à proliferação de células em um ensaio à base de XTT colorimiétrico quantitativo com uso do kit II de proliferação de células (ROCHE, Kit II de Proliferação de Células, Cat. n°: 11465015001). Para medições subsequentes, as placas foram submetidas a Tecan Gênios Reader e absorvância a 492 nM foi detectada.
Os resultados foram mostrados na Figura 2.
Exemplo 4: Combinação sinérgica de MOR0202 e Lenalidomida em células de AMO-1
As células de AMO-1 foram selecionadas para teste com a combinação de MOR202 e lenalidomida. As células de AMO- 1 são similares às células de plasmacitoma em seres humanos em que ambos têm uma baixa expressão de CD3 8 basal e CD3 8 é significantemente regulados de modo ascendente em ambos após tratamento com lenalidomida conforme mostrado na Tabela 2. PBMCs foram isoladas por centrifugação de gradiente de densidade de sangue humano isolado recentemente. 0 sangue isolado a partir de diferentes doadores foi colocado em camadas em um volume definido de Biocoll (Biochrome AG; CAT n° : L61 15; LOTE n°: 1050T) em um tubo de Falcon e centrifugado a 380g. As PBMCs foram isoladas e suplementadas com meio de RPMI. Após 72 horas, as células foram contadas e as PBMCs foram ajustadas a uma concentração de 6,6 x 106/ml, enquanto as células de AMO-1 foram ajustadas a uma concentração final de 2,5 x 105/ml. Para identificação posterior em citometria de fluxo, as células de AMO-1 foram manchadas por 3 min com 0,1 μg/ml de CalceinAM (Calceína: 1 mg/ml de solução estoque, Invitrogen, Cat n° : C3099) e lavadas três vezes por centrifugação suave. 100 μl de suspensão de células-alvo foram misturados com 100 μl de PBMCs para alcançar uma razão de 1:30. O anticorpo MOR202 ou anticorpo MOR03207 (controle negativo) foram adicionados a uma concentração final de 15 μg/ml. As suspensões de células foram incubadas adicionalmente por 4h a 37 °C. A fim de detectar células de AMO-1 mortas, as suspensões de células foram estimuladas com iodeto de propideo (PI) e, subsequentemente, analisadas em citometria de fluxo. As células-alvo foram separadas por meio de fechamento de populações de célula positiva de CalceinAM e células exterminadas por meio de ADCC foram quantifiçadas. No total, seis experimentos foram realizados a fim de determinar a mediação de ADCC em células de AMO-1 pela combinação de MOR202 e lenalidomida. Em três experimentos, as PBMCs e células de AMO-1 foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR202, os resultados são mostrados nas Tabelas 3a a 3c e Figura 3. Em três experimentos adicionais, somente as PBMCs foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR202, os resultados são mostrados nas Tabelas 4a a c e Figura 4. Tabela 3
Tanto as células de Efetor quanto as células de AMO-1 foram tratadas com Lenalidomida antes do tratamento com MOR202. Doses únicas e de combinação de 10 μm LEN e 15 μg/ml de MOR03207 e MOR202 foram usadas. Os dados são apresentados nos seguintes três modos como a) dados não processados (% células mortas) , b) dados normalizados de extermínio específico em que o grupo de tratamento de MOR202 é estabelecido como 1 (100%) e c) dados normalizados de extermínio específico em que a combinação teórica é estabelecida como 1 (100%). A Tabela 3a representa dados não processados. Tabela 3a
Figure img0006
mortas. Os grupos de DMSO, MOR03207, MOR03207+DMSO, LENO, LEN10 sem PBMCs e DMSO sem PBMCs são controles.
Tabela 3b representa os dados da Tabela 3a, mas normalizados em que o grupo de tratamento de MOR202 é estabelecido como 1 (100%). Tabela 3b
Figure img0007
representa a adição dos valores de MOR202 apenas e os valores de LEN apenas. Os dados normalizados da Tabela 3b são calculados como se seguem. A Tabela 3a representa o número de células mortas. Portanto, os valores de extermínio específico da Tabela 3b são calculados pela subtração dos valores dos controles. Então, os valores de extermínio específico são comparados ao grupo de MOR202 que é estabelecido como 1. As médias dos resultados na Tabela 3b são mostradas na Figura 3.
1. Determinação de sinergismo 1.1 Chou et al.
Os métodos de Chou-Talalay foram usados para determinar sinergismo. Consulte Chou TC, Talalay P, Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 22: 27 a 55 (1984) que é incorporado a título de referência em sua totalidade. A análise de sinergismo é executada com uso do método de Cl-isobol. Equação de efeito médio
Os modelos de equação de efeito médio do efeito de um inibidor (como um fármaco) como Fa/Fu = (D/D50) "m em que D é a dose, Fa e Fu são as frações do sistema afetada e não afetada pela dose D (Fa + Fu = 1) ; D50 é a dose que produz o efeito médio (por exemplo, IC50, ED50, LD5 0).
A constante m determina o formato da curva de efeito de dose. Foi usado o software Excel Fit para executar um cálculo de regressão linear para estimar os parâmetros m e D50 . Os efeitos da combinação em células de AMO-1 são medidos em % de morte de célula conforme descrito acima. Ê definida a fração Fu para ser a razão de % de morte de célula da linhagem celular tratada para % de morte de célula da linhagem celular exposta a um controle. Isto é: Fu = % de morte de célula (linhagem celular tratada)/% de morte de célula (linhagem celular não tratada) Então, o % de morte de célula de uma linhagem celular é a constante D50 na equação de efeito médio que pode ser estimado pela regressão linear descrita acima. Método de Cl-isobol O método de Cl-isobol fornece uma avaliação quantitativa de sinergismo entre fármacos. Um índice de Combinação (Cl) é estimado a partir dos dados de efeito de dose de tratamentos por fármacos únicos e combinados. Um valor de Cl menor que 1 indica sinergismo; Cl = 1 indica efeito aditivo; e Cl > 1 indica antagonismo. As faixas sinérgicas são definidas adicionalmente por Chou e Talahay para valores de Cl <0,1 como sinergismo muito forte, valores de Cl entre 0,1 e 0,3 como sinergismo forte, valores de Cl de 0,3 a 0,7 como sinergismo, valores de Cl de 0,7 a 0,9 como sinergismo moderado a leve. A interação de fármaco (sinergismo ou antagonismo) é mais pronunciada quanto mais afastado um valor de Cl estiver de 1. Formalmente, o índice de Combinação (Cl) de um tratamento por fármaco combinado é definido como CI = Di/Dxl + D2/DX2 Aqui Di e D2 são as doses de fármaco 1 e fármaco 2, respectivamente, na combinação; DX1 e Dx2 (cada um) representam a dose de um tratamento com somente fármaco 1 e fármaco 2 que confeririam o mesmo efeito que o da combinação, respectivamente. As doses DX1 e Dx2 necessitam ser estimadas a partir dos dados de efeito de dose de tratamentos por fármaco único. Essencialmente, uma equação de efeito médio é ajustada aos dados de cada fármaco. A partir da equação de efeito médio de um fármaco, pode-se estimar a dose (isto é, D) necessária para produzir um efeito (isto é, Fa, Fu) . Quanto mais distante um ponto se encontrar da linha aditiva, maior a diferença entre 1 e seu Cl, assim, mais forte é o efeito (sinérgico ou antagonista).
O método acima é descrito em Chou TC, Talalay P, Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 22: 27 a 55 (1984), que é incorporado a título de referência em sua totalidade. Uma revisão adicional do método de Chou acima é também fornecida em Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621 a 681 (2006) que é incorporado a título de referência em sua totalidade.
As curvas geradas para os cálculos de sinergia com base em Chou são mostradas nas Figuras 12 a 18. Na Figura 12, a curva de melhor ajuste foi determinada pela remoção dos pontos de dados a) em que a concentração de MOR202 foi baixa demais para ter qualquer efeito e b) em que a concentração foi próxima da saturação. No ponto de dados apropriado, aproximadamente 80% de extermínio de célula, o valor de Cl é menor que 1, suportando sinergia clara. As Figuras 13 a 18 representam os seis experimentos a partir das Tabelas 3 e 4, e, em cada, a DX1 (dose de MOR202) necessária para alcançar 100% de efeito da combinação de MOR 202 e lenalidomida chega a infinito; portanto, a DÍ/DXÍ é menor que 1 e como a lenalidomida tem nenhum efeito em células de AMO-1 em relação ao extermínio de célula, o valor de Dx2 também aproxima infinito, assim, as D2/DX2 aproximam 0, portanto, os valores de Cl de cada um dos seis experimentos são menores que 1, suportando sinergia clara.
A Tabela 3c representa a normalização de dados em que a combinação teórica é estabelecida como 1 (100%) e inclui os cálculos de Chou de Cl. Tabela 3c
Figure img0008
Os dados mostrados na Tabela 3c diferem das Tabelas 3a e 3b. A Tabela 3c é baseada nos pontos de dados não processados diferentes dos mostrados na Tabela 3a, como as concentrações escolhidas na Tabela 3c estão mais próximas da EC50 do anticorpo (dados não processados não mostrados). "Combinação teórica" representa a adição dos valores de MOR202 apenas e os valores de LEN apenas. Tabela 4
Células de Efetor somente tratadas com Lenalidomida antes do tratamento com MOR202. Doses únicas e de combinação de 10 μm LEN e 15 μg/ml de MOR03207 e MOR202 foram usadas.
Os dados são apresentados nos seguintes três modos, como a) dados não processados (% de células mortas), b) dados normalizados de extermínio específico em que o grupo de tratamento de MOR202 é estabelecido como 1 (100%), e c) dados normalizados de extermínio específico em que a combinação teórica é estabelecida como 1 (100%). Tabela 4a representa dados não processados. Tabela 4a
Figure img0009
As unidades de valores listados são % de células mortas. Os DMSO, MOR03207, MOR03207+DMSO, LENO, LEN10 sem PBMCs e DMSO sem PBMCs são controles. Tabela 4b
Figure img0010
A Tabela 4b representa os dados da Tabela 4a, mas normalizados em que o grupo de tratamento de MOR202 é estabelecido como 1 (100%). Para as Tabelas 4b a 4c, "Combinação teórica" representa os valores de MOR202 apenas mais os valores de LEN apenas.
A normalização dos dados conforme mostrado na Tabela 4b é calculado conforme descrito na Tabela 3b pela subtração dos controles. As médias dos resultados da Tabela 4b são mostrados na Figura 4. Tabela 4c
Figure img0011
A Tabela 4c representa a normalização dos dados em que a combinação teórica é estabelecido como 1 (100%) e inclui os cálculos de Chou et al. de Cl com uso da metodologia descrita acima no Exemplo 4.
A Tabela 4c difere das Tabelas 4a e 4b. A Tabela 4c é baseada nos pontos de dados não processados diferentes dos mostrados na Tabela 4a, como as concentrações escolhidas na Tabela 4c estão mais próximas de EC50 do anticorpo (dados não processados não mostrados).
1. Determinação de sinergismo 1.2 Sinergismo de Clarke et al.
Em que um fármaco tem baixa atividade, como aqui em que a Lenalidomida apenas tem baixa citotoxicidade contra células de AMO-1, a sinergia pode também ser determinada por evidência estatística que a combinação é significantemente diferente do fármaco inibidor apenas. Consulte Clarke et al., Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models, Breast Cancer Research e Treatment 46:255-278 (1997), que é incorporado a título de referência em sua totalidade. Aqui tanto Chou et al. conforme mostrado acima quanto os métodos de Clarke et al. foram usados na determinação de sinergismo.
Os dados foram analisados dos seguintes modos: Antagonista (AB)/C < (A/C) x (B/C) Aditivo (AB)/C - (A/C) x (B/C) Sinérgico (AB)/C > (A/C) x (B/C) em que A é o tratamento com LEN apenas; B é o tratamento com MOR202 apenas; C é a resposta ao veículo de tratamento; AB é a combinação de tratamentos A e B. Tabela 5: Os valores de dados não processados mostrados nessa tabela são os mesmos que aqueles mostrados na Tabela 3a, como os mesmos procedem dos mesmos três experimentos em que tanto as células de efetor quanto as células de AMO-1 foram tratadas com Lenalidomida antes do tratamento com MOR202 e as doses únicas e de combinação de 10 μm LEN e 15 μg/ml de MOR03207 e MOR202 foram usadas. A única diferença é que os dados são analisados com uso de Clarke et al. em vez de Chou et al. Experimento 1 Experimento 2 Experimento 3
Figure img0012
A = resposta a tratamento com LEN apenas B = resposta a tratamento com MOR202 apenas C = resposta a tratamento com controle AB = combinação de tratamentos UM e B
Os valores de A, B, C e AB representam % de extermínio de célula.
Em cada experimento (AB)/C é maior que (A/C) x (B/C), mostrando sinergia clara. Tabela 6: Os valores de dados não processados mostrados nessa tabela são os mesmos que aqueles mostrados na Tabela 4a, como os mesmos procedem dos mesmos três experimentos em que somente as células de Efetor foram tratadas com Lenalidomida antes do tratamento com MOR202 e as doses únicas e de combinação de 10 μm LEN e 15 μg/ml de MOR03207 e MOR202 foram usadas. A única diferença é que os dados são analisados com uso de Clarke et al. em vez de Chou et al.
Figure img0013
A = resposta a tratamento com LEN apenas B = resposta a tratamento com MOR202 apenas C = resposta a tratamento com controle AB = combinação de tratamentos A e B
Em cada experimento (AB)/C é maior que (A/C) x (B/C), mostrando sinergia clara.
Resultados
Aplicação da análise de Clarke et al. , LEN de modo sinérgico intensificou a atividade ADCC de MOR202 em células de AMO-1 em todos os 6 experimentos. A aplicação da análise de Chou et al., LEN de modo sinérgico intensificou a atividade ADCC de MOR202 em células de AMO-1 em 6 de 6 experimentos. Essa intensificação de atividade foi identificada, por vários mecanismos que incluem citotoxicidade direta, para ser a ativação de células de Efetor e regulação ascendente de níveis de expressão de CD38 em células MM. Os experimentos de acordo com o exemplo 4 são também realizados com outros anticorpos específicos para CD38, por exemplo, o anticorpo "Ref mAB5".
Exemplo 5: Inibição de proliferação de células de NCI-H929 com uso de Lenalidomida apenas
A citotoxicidade de Lenalidomida foi testada em NCI-H929 com uso dos métodos descritos no Exemplo 3. Os resultados foram mostrados na Figura 2. Em resumo, o estímulo com Lenalidomida apenas inibiu significantemente a proliferação de células em células de NCI-H929.
Exemplo 6: Combinação sinérgica de MOR202 e Lenalidomida em células de NCI-H929
As células de NCI-H929 foram selecionadas para teste com a combinação de MOR202 e lenalidomida. As células de NCI-H929 expressam níveis mais altos de CD38 que células de AMO-1, portanto, são representativas de certos tipos de células encontradas em pacientes humanos com mieloma múltiplo ou linfoma não-Hodgkin.
No total, seis experimentos foram realizados com uso dos métodos descritos no Exemplo 4 a fim de determinar a mediação de ADCC em células de NCI-H929 pela combinação de MOR202 e lenalidomida. Em três experimentos, as PBMCs e células de NCI-H929 foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR202, os resultados são mostrados nas Tabelas 7a a 7b e Figura 6. Em três experimentos adicionais, somente as PBMCs foram tratadas com lenalidomida antes do tratamento com MOR202, os resultados são mostrados nas Tabelas 8a a 8b e Figura 7. Tabela 7 Tanto as células de Efetor quanto as células de NCI-H929 foram tratadas com Lenalidomida antes do tratamento com MOR202. As doses únicas e de combinação de 5 μm LEN e 15 μ g/ml de MOR03207 e 0,2 ou 0,07 μg/ml de MOR202 foram usadas. Os dados são apresentados dos seguintes modos, como a) dados não processados (% de células mortas) e b) dados normalizados de extermínio específico em que combinação de produto fracionário é estabelecida como 1 (100%). Tabela 7a representa dados não processados. Tabela 7a
Figure img0014
As unidades de valores listados são % de células mortas. Os DMSO, MOR03207, MOR03207+DMSO, LENO, LEN10 sem PBMCs e DMSO sem PBMCs são controles.
A Tabela 7b representa dados normalizados em que a combinação de produto fracionário é estabelecida como 1 (100%) .
Figure img0015
A combinação de produto fracionário é calculada com uso da seguinte fórmula 1 -[(1 - A)*(1 - B)] = fpc(%) conforme descrito em Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621 a 681 (2006) que é incorporado a título de referência em sua totalidade. A Tabela 7b é baseada nos dados não processados mostrados na Tabela 7a. A normalização dos dados conforme mostrado na Tabela 7b é calculada conforme descrito na Tabela 3b pela subtração dos controles. Na Tabela 7b em que a combinação de LEN e MOR202 é maior que a combinação baseada no conceito de produto fracionário, então a sinergia clara existe. Além disso, os valores de índice de Combinação foram calculados com uso dos métodos de Chou et al. conforme descrito no Exemplo 4. As médias dos resultados da Tabela 7b são mostradas na Figura 6. Tabela 8 Células de Efetor tratadas somente com Lenalidomida antes do tratamento com MOR202. Doses únicas e de combinação de 5 μm LEN e 15 μg/ml de MOR03207 e 0,2* ou 0,07 μg/m de MOR202 foram usadas.
Os dados são apresentados dos seguintes modos, como a) dados não processados (% de células mortas) e b) dados normalizados de extermínio específico em que a combinação de produto fracionário é estabelecida como 1 (100%). A Tabela 8a representa dados não processados. Tabela 8a
Figure img0016
As unidades de valores listados são % de células 5 mortas. Os DMSO, MOR03207, MOR03207+DMSO, LENO, LEN10 sem PBMCs e DMSO sem PBMCs são controles. A Tabela 8b representa os dados normalizados em que combinação de produto fracionário é estabelecida como 1 (100%). Tabela 8b
Figure img0017
A Tabela 8b é baseada nos dados não processados mostrados na Tabela 8a. A normalização dos dados conforme mostrado na Tabela 8a é calculada conforme descrito na Tabela 3b pela subtração dos controles. Na Tabela 8b em que a 15 combinação de LEN e MOR202 é maior que a combinação baseada no conceito de produto fracionário, então a sinergia clara existe. Além disso, os valores de índice de Combinação foram calculados com uso dos métodos de Chou et al. conforme descrito no Exemplo 4. As médias dos resultados da Tabela 8b 20 são mostradas na Figura 7.
Determinação de sinergismo 1.3 Conceito de Produto Fracionário
A avaliação dos dados nesse exemplo difere daquela usada na análise do efeito da combinação de MOR2 02 e LEN em células de AMO-1 no exemplo 4. Aqui as células de NCI-H929 são testadas e LEN apenas tem um efeito significante na proliferação de células de NCI-H929 conforme mostrado no exemplo 5, portanto, o conceito de produto fracionário é utilizado. O conceito de produto fracionário foi descrito em Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism e Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621 a 681 (2006) que é incorporado a título de referência em sua totalidade. Nesse documento Chou et al. declaram: Se A e B (cada um) inibe 60%, então é uma simplificação exagerada dizer que o efeito aditivo é de 84% de inibição. Com base na racionalização por Webb (1963) , esse tipo de problema pode ser solucionado por (1 - 0,6) (1 - 0,6) = 0,16, 1 - 0,16 = 0,84. Chou e Talalay (1984) chamaram isso de método de produto fracionário. Esse método nunca levará a um efeito de combinação que excede 100% de inibição. Chou e Talalay (1984), no entanto, também provaram que esse método tem validade limitada porque leva em consideração a potência (por exemplo, inibição fracionária), mas ignora o formato da curva de efeito de dose (por exemplo, hiperbólica ou sigmoide). A importância do "formato" em uma análise de efeito de dose é mostrada na Figura 1. Chou e Talalay (1984) indicaram que método de Webb é válido somente quando ambos os fármacos têm curvas hiperbólicas (isto é, em cinética de Michaelis-Menten simples, quando as curvas de efeito de dose são hiperbólicas, isto é, m = 1 no traçado de efeito médio) e não é válido quando m não se iguala a 1, como curvas sigmoide (m > 1) ou sigmoide plana (m < 1) . Além disso, o método de Webb é válido quando os efeitos de dois fármacos são mutuamente não exclusivos (por exemplo, totalmente independente) e não é válido para mutualmente exclusivo (por exemplo, mecanismos similares ou modos de ação, conforme assumido para o isobolograma clássico, consulte abaixo). Clarke et al. não foi utilizado já que Clarke é mais adequado quando uma monoterapia tem um baixo efeito. Consulte Figura 12, a curva de melhor ajuste foi determinada pela remoção dos pontos de dados a) em que a concentração de MOR202 foi baixa demais para ter qualquer efeito e b) em que a concentração foi próxima da saturação. No ponto de dados apropriado, aproximadamente 80% de extermínio de célula, o valor de Cl é menor que 1, suportando sinergia clara. Resultados
Aplicação da análise do Conceito de Produto Fracionário, LEN intensificou de modo sinérgico Atividade de MOR202 em células de NCI-H929 em 6 de 6 experimentos. A aplicação da análise de Chou et al., LEN intensificou de modo sinérgico a atividade de MOR202 em células de NCI-H929 em 6 de 6 experimentos. Consulte Tabelas 7a a 7b e 8a a 8b.
Exemplo 7: MOR2 02 e LEN apenas e em combinação em modelo MM de camundongo de SCID de lise de osso de NCI-H929 Materiais
Lenalidomida (SYNthesis med chetn; Xangai, China; Lote n° : ZHM-066-051) . MOR202 (MorphoSys AG, Lote 100706- 5KLE18). Controle de veículo: Ora-Plus: Ora-Sweet SF (Paddock Laboratories, Minneapolis, MN, USA, Lote n° 9499528) . Camundongos de SCID (University of Adelaide, Waite Campus, Urrbaraie, SA, Austrália, Cepa C. B . -17-Igh-lb -Prkdcscld) . células de mieloma múltiplo humano de NCI-H929 (consulte Tabela 1). Meio de cultura de células RPMI 1640, Soro Bovino Fetal (FBS), Mercaptoetanol, Solução de Sal Equilibrada de Hank (HBSS) e penicilina-estreptomicina da Invitrogen Austrália (Mt Waverley, VIC, Austrália) ; e Trypan Blue e glicose da Sigma-Aldrich (Castle Hill, NSW, Austrália). Métodos 63 camundongos de SCID foram inoculados no Dia (-7) de modo ortotópico na tíbia direita com 2,5 x 10s células MM de NCI-H929 (em 5 μl) a fim de induzir lise de osso. Três dias após inoculação (Dia -4), 60 dos camundongos de SCID foram randomizados por peso corporal nos grupos mostrados na 10 Tabela 13, 10 camundongos por grupo. O regime de dosagem é fornecido na Tabela 9. Os tratamentos de Lenalidomida (Grupos A e D) e controle de veículo (Grupo C) foram iniciados no Dia (-1). Os tratamentos de MOR202 (Grupos B e D) foram iniciados no Dia 0. O tratamento continuou por 6 semanas.
Tabela 9: Regime de dosagem e Grupos Grupo Composto Tratamento Programa
Figure img0018
MicroCT Scan foi usado para avaliar a lise de osso e incluiu uma análise tridimensional que compreende Volume Ósseo Total (TBV), Volume Ósseo Trabecular (Tb.BV), Fator de Padrão Trabecular (Tb.Pf) e índice de Modelo de Estrutura 20 (SMI) . A Tabela 10 define cada um desses parâmetros. Os resultados de cada uma dos parâmetros de MicroCT Scan são mostrados na Tabela 11. Os resultados de Volume Ósseo Total (TBV) são mostrados na Figura 19. Tabela 10: parâmetros de MicroCT Scan
Figure img0019
Figure img0020
Figure img0021
A análise de cada parâmetro em relação à atividade sinérgica foi executada de acordo com al. A Tabela 12 mostra os cálculos feitos para determinar sinergia da combinação de MOR202 e lenalidomida. Tabela 12
Figure img0022
Figure img0023
Os valores numéricos mostrados na Tabela 12 são retirados diretamente a partir das médias mostradas na Tabela 11 para cada um dos parâmetros em cada um dos Grupos. Os Grupos descritos como A, B, C e AB são os mesmos grupos de tratamento nas Tabelas 9, 11 e 12.
No Volume Ósseo Total (AB)/C é maior que (A/C) X (B/C) mostrando sinergismo claro. No Fator de Padrão Trabecular e índice de Modelo Estrutural, conforme descrito na Tabela 10, um valor mais baixo representa menos lise de osso (eficácia no tratamento), portanto, (AB)/C menor que (A/C) X (B/C), mostra sinergismo claro nos parâmetros. Resultados
A inoculação de células de mieloma múltiplo de NCI- H929 induziu significante lise de osso nas tíbias de camundongos fêmeas de SCID nesse estudo, conforme indicado pela medição de lise de osso através de varredura por MicroCT. O grau de lise de osso foi significantemente diminuído na tíbia de camundongos tratados com a combinação de MOR202 e lenalidomida conforme mostrado pela varredura por MicroCT. Em cada um dos parâmetros de MicroCT Scan: Volume Ósseo Total (TBV), Volume Ósseo Trabecular (Tb.BV), Fator de Padrão Trabecular (Tb.Pf) e índice de Modelo de Estrutura (SMI) a combinação de MOR202 e lenalidomida (Grupo AB) mostrou sinergia clara na redução de lise de osso causada pelas células de mieloma múltiplo de NCI-H929.
Quando os valores na Tabela 11 são ajustados de modo que o Grupo de Controle (Tíbia Contralateral sem Tumor Não Inoculada) seja considerado de 0% de lise de osso e Grupo C (Controle de Veículo (0,9% de Injeção de Cloreto de Sódio) seja considerado de 100% de lise de osso, então MOR202 apenas reduziu de modo dependente de dose a lise de osso em até 55% a 12 mg/kg comparado ao controle de veículo. LEN apenas a 50mg/kg inibiu lise de osso em 20%. A combinação de 3mg/kg de MOR202 e 50mg/kg de LEN aboliu completamente lise de osso. Essas constatações suportam um efeito sinérgico de terapia de combinação. Além disso, houve uma redução (>90%) de níveis de soro de proteína M no grupo de combinação, indicando uma diminuição significativa de carga de tumor.
Exemplo 8 MOR202 e lenalidomida apenas e em combinação contra tumor de RAMOS não-Hodgkin humano em Camundongos fêmeas de SCID, modelo de sobrevivência
Materiais
Ciclofosfamida (Fluka, Buchs, Suíça, Lote n° 07551661). Lenalidomida (SYNthesis Med Chem; Xangai, China; Lote n°ZHM-066-051). MOR202 (MorphoSys AG, Lote 100706- 5KLE18). Controle de veículo: Ora-Plus:Ora-Sweet SF, 1:1, v/v (SYNthesis Med Chem, Xangai, China). Camundongos de SCID (University of Adelaide, Waite Campus, Urrbaraie, SA, Austrália, Cepa C . B . -17 - Igh-lb -Prkdcscld) . Células de RAMOS (Oncodesign, Dijon Cedex, França) foram cultivadas em RPMI1640 + 20% de fonte alternada inativada de calor FBS + 1% de Glutamax (Meio n°2). Reagentes para cultura de células de RAMOS de linfoma não-Hodgkin foram obtidas a partir dos seguintes fornecedores: meio de cultura de células RPMI 1640, FBS, Glutamax, HEPES, piruvato de sódio, HBSS e penicilina-estreptomicina de Invitrogen Austrália (Mt Waverley, VIC, Austrália); e Trypan Blue e glicose de Sigma-Aldrich (Castle Hill, NSW, Austrália). Métodos Sessenta e oito camundongos fêmeas de SCID foram pré-tratados com Ciclofosfamida (75 mg/kg, i.p., duas vezes 5 por dia) durante dois dias antes da inoculação de células de RAMOS (Dia -5 e -4) . No dia de inoculação (Dia -3) , todos os camundongos foram inoculados com 1 x 10s células de RAMOS (cada um) intravenosamente na veia da cauda. Sessenta e quatro dos camundongos foram randomizados por peso corporal 10 em oito grupos de oito. 0 regime de dosagem para cada grupo é mostrado na Tabela 13. Tabela 13: Regime de dosagem
Figure img0024
O estudo continuou por 98 dias e o ponto final medido foi sobrevivência. Os resultados de cada Grupo são 15 mostrados na Tabela 14 . Tabela 14: Número de Sobrevivência e período de tempo para cada grupo
Figure img0025
Figure img0026
Análise para atividade sinérgica foi executada de acordo com o teorema de Clarke et al. , conforme descrito no exemplo 4. Tabela 15 mostra os cálculos feitos na determinação de sinergia da combinação de MOR202 e lenalidomida. Tabela 15
Figure img0027
Os valores numéricos mostrados na Tabela 15 são retirados diretamente dos dias de sobrevivência medianos mostrada na Tabela 14 para cada um dos Grupos. Os Grupos descritos como A, B, C e AB são os mesmos grupos de tratamento das Tabelas 13 a 15.
A inoculação com células de RAMOS foi letal em um tempo mediano de 20 dias no Grupo de Controle. A combinação de MOR202 e lenalidomida, no entanto, mostrou sinergia clara 15 no aumento em dias de sobrevivência medianos.
Exemplo 9: Bortezomibe apenas inibe a proliferação de várias linhagens celulares de mieloma múltiplo.
O efeito inibidor de Bortezomibe na proliferação de células de mieloma múltiplo foi analisado em relação a 20 múltiplas linhagens celulares. Quantidades crescentes de
Bortezomibe (Velcade(R), Lote: n° : n°9AZSY00) foram aplicadas a células de AMO-1, LP-1, NCI-H929 e RPMI-8226 e incubadas por 24 horas, 48 horas e 72 horas. Após o periodo de incubação, as placas foram analisadas em relação à proliferação de células em um ensaio à base de XTT colorimiétrico quantitativo com uso do kit II de proliferação de células (ROCHE, Kit II de proliferação de células, Cat. n°: 1 1465015001). Para medição subsequente, as placas foram submetidas a Tecan Génios Reader e absorvância a 492nm foi detectada.
A proliferação de células de todas as linhagens celulares testadas foi inibida por Bortezomibe com uma concentração IC5 0 de 3,9 nM para células de AMO-1, 6,1 nM para células LP-1, 3,3 nM para células de NCI-H929 e 9,0 nM para células RPMI-8226 respectivamente, conforme mostrado na Figura 8.
Exemplo 10: ADCC com uso de combinação de MOR2 02 e Bortezomibe
Com uso dos métodos descritos no exemplo 4, o efeito de ADCC de bortezomibe e MOR202 combinados foi analisado. Aqui, as células-alvo foram tratadas com bortezomibe antes do tratamento com MOR202. As células-alvo, Células LP-1 e de NCI-H929, foram testadas. Os resultados foram mostrados nas Figuras 9 e 10. A intensificação em atividade de MOR202 por bortezomibe foi mediada através de um efeito citotóxico direto em células MM.
Exemplo 11: MOR202 e BOR apenas e em combinação em modelo de camundongo de SCID de lise de osso de NCI-H929 de mieloma múltiplo humano
Materiais Bortezomibe (SYNthesis med chem., Xangai, China, Lote n° n°ZHM-066 - 054) . Bortezomibe foi formulada em solução estéril a 0,9% de cloreto de sódio para dosagem. MOR202 (MorphoSys AG, Lote 100706-5KLE18). Controle de veículo: Injeção de Cloreto de Sódio a 0,9%. Camundongos de SCID (University of Adelaide, Waite Campus, Urrbaraie, SA, Austrália, Cepa C.B.-17-Igh-lb -Prkdcsoid) . Métodos 63 camundongos de SCID foram inoculados no Dia (-7) de modo intratibial com 2,5 x 106 células MM de NCI-H929 a fim de induzir lise de osso. Três dias após inoculação (Dia - 4) 6 0 dos camundongos de SCID foram randomizados por peso corporal nos grupos mostrados na Tabela 16, 10 camundongos por grupo. O regime de dosagem é fornecido na Tabela 16. Bortezomibe (Grupos A e AB) e Controle de Veículo (Grupo C) foram iniciados no Dia (-1). Os tratamentos de MOR202 (Grupos B e AB) foram iniciados no Dia 0. O tratamento continuou por 6 semanas. Tabela 16: Regime de dosagem e Grupos
Figure img0028
MicroCT Scan foi usado para avaliar lise de osso e incluiu uma análise tridimensional que compreendem Volume Ósseo Total (TBV), Volume Ósseo Trabecular (Tb.BV), Fator de Padrão Trabecular (Tb.Pf) e índice de Modelo de Estrutura (SMI). A Tabela 10 acima define cada um desses parâmetros. Os resultados de cada um dos parâmetros de MicroCT Scan são mostrados na Tabela 17. Os resultados do Volume Ósseo Total (TBV) são mostrados na Figura 20. Tabela 17: Resultados do MicroCT Scan: Volume Ósseo Total (TBV), Volume Ósseo Trabecular (Tb.BV), Fator de Padrão Trabecular (Tb.Pf) e índice de Modelo de Estrutura (SMI).
Figure img0029
Figure img0030
A análise de cada parâmetro em relação à atividade sinérgica foi executada de acordo com o teorema de Clarke et al. , conforme descrito no exemplo 4. A Tabela 18 mostra os
Figure img0031
Os valores numéricos mostrados na Tabela 18 são retirados diretamente a partir das médias mostradas na Tabela 17 para cada um dos parâmetros em cada um dos Grupos. Os 5 Grupos descritos como A, B, C e AB são os mesmos grupos de tratamento nas Tabelas 16 a 18.
No Volume Ósseo Total e Volume Ósseo Trabecular, (AB)/C é maior que (A/C) X (B/C) mostrando sinergismo claro. Em Fator de Padrão Trabecular e índice de Modelo Estrutural, 10 conforme descrito na Tabela 10, um valor mais baixo representa menos lise de osso (eficácia no tratamento), portanto, (AB)/C menor que (A/C) X (B/C), suporta sinergismo claro nos parâmetros. Resultados
A inoculação de células de mieloma múltiplo de NCI- H929 induziu significante lise de osso nas tíbias de camundongos fêmeas de SCID nesse estudo, conforme indicado pela medição de lise de osso através da varredura por MicroCT. O grau de lise de osso foi significantemente diminuído na tíbia de camundongos tratados com a combinação de MOR202 e bortezomibe conforme mostrado pela varredura por MicroCT. Em cada um dos parâmetros de MicroCT Scan: Volume Ósseo Total (TBV), Volume Ósseo Trabecular (Tb.BV), Fator de Padrão Trabecular (Tb.Pf) e índice de Modelo de Estrutura (SMI) a combinação de MOR202 e bortezomibe (Grupo AB) mostrou sinergia clara na redução de lise de osso causada pelas células de mieloma múltiplo de NCI-H929.
Quando os valores na Tabela 17 são ajustados de modo que o Grupo de Controle (Tíbia Contralateral sem Tumor Não Inoculada) seja considerado de 0% lise de osso e Grupo C (Controle de veículo (Injeção de Cloreto de Sódio a 0,9%) seja considerado de 100% lise de osso, então MOR202 apenas reduziu de modo dependente de dose a lise de osso em até 55% a 12 mg/kg comparado ao controle de veículo, BOR apenas a 0,6mg/kg inibiu lise de osso em 40% e a combinação de um dose mais baixa de 3mg/kg MOR202 e 0,6mg/kg BOR aboliu completamente lise de osso. Essas constatações suportam um efeito sinérgico de terapia de combinação. Além disso, houve uma redução (>90%) de níveis de soro de proteína M no grupo de combinação, indicando uma diminuição significativa de carga de tumor. Exemplo 12 MOR202 e bortezomibe apenas e em combinação contra tumor de RAMOS não-Hodgkin humano em Camundongos fêmeas de SCID, modelo de sobrevivência Materiais
Ciclofosfamida (Fluka, Buchs, Suíça, WB10468). Bortezomibe (SYNthesis med chem., Xangai, China, Lote n° n°ZHM-066 - 054) . Bortezomibe foi formulada em solução estéril a 0,9% de cloreto de sódio para dosagem. MOR202 (MorphoSys AG, Lote 100706-5KLE18). Controle de veículo: Injeção de Cloreto de Sódio a 0,9%. Camundongos de SCID (University of Adelaide, Waite Campus, Urrbaraie, SA, Austrália, Cepa C.B.- 17-lgh-lb -Prkdcscid) . Células de RAMOS (Oncodesign, Dijon Cedex, França) foram cultivadas em RPMI1640 + 20% de fonte alternada inativada de calor FBS + 1% Glutamax (Meio n°2) . Reagentes 5 para cultura de células de RAMOS de linfoma não-Hodgkin foram obtidos a partir dos seguintes fornecedores: meio de cultura de células RPMI 1640, FBS, Glutamax, HEPES, piruvato de sódio, HBSS, e penicilina-estreptomicina de Invitrogen Austrália (Mt Waverley, VIC, Austrália); e Trypan Blue e 10 glicose de Sigma-Aldrich (Castle Hill, NSW, Austrália). Métodos Cinquenta e cinco camundongos fêmeas de SCID foram pré-tratados com Ciclofosfamida (75 mg/kg, i.p., duas vezes por dia) durante dois dias antes da inoculação de células de 15 RAMOS (Dia -5 e -4) . No dia de inoculação (Dia -3) , todos os cinquenta e cinco camundongos foram inoculados com 1 x 106 células de RAMOS (cada um) (em 100 μl) intravenosamente na veia da cauda. Quarenta e oito dos camundongos foram randomizados por peso corporal em seis grupos de oito. O 20 regime de dosagem para cada grupo é mostrado na Tabela 19. Tabela 19: Regime de dosagem
Figure img0032
O estudo continuou por 98 dias e o ponto final medido foi sobrevivência. Os resultados de cada Grupo são mostrados na Tabela 20. Tabela 20: Número de Sobrevivência e período de tempo para cada grupo
Figure img0033
Análise para atividade sinérgica foi executada de acordo com o teorema de Clarke et al. A Tabela 21 mostra os cálculos feitos na determinação de sinergia da combinação de MOR202 e bortezomibe. Tabela 21
Figure img0034
Os valores numéricos mostrados na Tabela 21 são retirados diretamente dos dias de sobrevivência medianos mostrada na Tabela 20 para cada um dos Grupos. Os Grupos 10 descritos como A, B, C e AB são os mesmos grupos de tratamento nas Tabelas 19-21.
A inoculação com Células de RAMOS foi letal em um tempo mediano de 20,5 dias no Grupo de Controle. A combinação de MOR202 e bortezomibe, no entanto, mostrou sinergia clara no aumento em dias de sobrevivência medianos. De modo importante, com a combinação de MOR202 e bortezomibe (Grupo AB) , 2 de 5 camundongos sobreviveram durante a duração do estudo. Isso suporta fortemente uma constatação sinérgica da 5 combinação de MOR202 e bortezomibe.
Compreende-se que a descrição, os exemplos específicos e os dados, embora indiquem modalidades exemplificativas, são apresentados a título de ilustração e não são destinados a limitar a presente invenção. Várias 10 mudanças e modificações na presente invenção se tornarão aparentes para as pessoas versadas na técnica a partir da discussão, revelação e dados contidos no presente documento, e, assim, são considerados parte da invenção.

Claims (21)

1. COMBINAÇÃO SINÉRGICA, caracterizada por ser, de: (i) anticorpo MOR202 + talidomida, anticorpo MOR202 + lenalidomida, anticorpo MOR202 + pomalidomida, (ii) anticorpo MOR202 + bortezomibe, para uso no tratamento de mieloma múltiplo e/ou linfoma não-Hodgkin, em que o anticorpo MOR202 é definido por suas regiões variáveis da cadeia pesada (SEQ ID NO: 10) e regiões variáveis da cadeia leve (SEQ ID NO: 11).
2. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo anticorpo compreender uma região HCDR1 de sequência SYYMN (SEQ ID NO: 14).
3. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo anticorpo compreender uma região HCDR1 de sequência GFTFSSYYMN (SEQ ID NO: 1).
4. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo anticorpo compreender uma cadeia pesada variável da sequência QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMNWVRQAPGKGLEWVSGI SGDPSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLPLVYTGFAYWGQ GTLVTVSS (SEQ ID NO: 10); e uma cadeia leve variável da sequência: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLRHYYVYWYQQKPGQAPVLVIYGDSKRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTYTGGASLVFGGGTKLTVLGQ (SEQ ID NO: 11).
5. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo dito anticorpo ser um anticorpo IgG
6. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo dito anticorpo compreender uma região de IgG1 Fc.
7. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo anticorpo compreender uma região Fc modificada, em que a dita modificação intensifica a atividade ADCC.
8. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo dito anticorpo específico para CD38 e a dita talidomida, análogo de talidomida, lenalidomida, pomalidomida ou um inibidor de proteassoma, serem administrados separadamente.
9. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pela dita talidomida, análogo de talidomida, lenalidomida, pomalidomida ou um inibidor de proteassoma, serem administrados antes da administração do anticorpo específico para CD38.
10. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pela dita talidomida, análogo de talidomida, lenalidomida, pomalidomida ou um inibidor de proteassoma serem administrados por pelo menos 72 horas antes da administração do anticorpo específico para CD38.
11. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo dito anticorpo específico para CD38 e a dita talidomida, análogo de talidomida, lenalidomida, pomalidomida ou um inibidor de proteassoma serem administrado subsequentemente.
12. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pela dita combinação ter capacidade de reduzir lise de osso com uma eficácia pelo menos duas vezes maior que lenalidomida e/ou bortezomibe apenas.
13. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pela combinação compreender talidomida.
14. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pela combinação compreender um análogo de talidomida.
15. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pela combinação compreender lenalidomida.
16. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pela dita combinação ter a capacidade de mediar o extermínio de AMO-1 de expressão de CD38 e/ou células de NCI-H929 por ADCC na presença de PBMCs humanas isoladas com uma eficácia de pelo menos duas vezes maior do que com lenalidomida apenas.
17. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pela combinação compreender uma pomalidomida.
18. COMBINAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pela combinação compreender um inibidor de proteossoma.
19. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo dito inibidor de proteossoma ser bortezomibe.
20. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pela dita combinação ter a capacidade de mediar o extermínio de LP-1 de expressão de CD38 e/ou células de NCI-H929 por ADCC na presença de PBMCs humanas isoladas com uma eficácia de pelo menos duas vezes maior do que com bortezomibe apenas.
21. COMBINAÇÃO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo dito inibidor de proteossoma ser carfilzomibe.
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