JP2016522254A - Ｂａｃｅ阻害剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、式ＩＩＩの化合物：【化７９】（式中、Ａは【化８０】であり、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は本明細書に定義される通りである）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、新規ＢＡＣＥ阻害剤、該化合物を含む医薬組成物、生理的障害を治療するために該化合物を使用する方法、ならびに該化合物の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。

本発明は、アルツハイマー病ならびにアミロイドβ（Ａβ）ペプチド、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の神経毒および高い凝集性のペプチド断片に関する他の疾患および障害の治療の分野である。アルツハイマー病は、世界中で数百万人の患者に影響を与える破壊的な神経性変性障害である。現在、患者に対する症状の有益性を一時的にのみ与える市販されている承認されている薬剤を考慮しても、アルツハイマー病の治療において重要で満たされていない必要性が存在する。

アルツハイマー病は、脳におけるＡβの生成、凝集、および沈着によって特徴付けられる。β−セクレターゼ（β部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素；ＢＡＣＥ）の完全または部分的な阻害は、マウスモデルにおいてプラークに関連したおよびプラークに依存した病理に対する顕著な効果を有することが示されており、Ａベータペプチドレベルの少しの減少さえも、プラーク負荷およびシナプス欠損の長期間の顕著な減少を生じ得るので、特にアルツハイマー病の治療において顕著な治療効果を与えることが示唆される。

米国特許出願公開第２０１２／０２０２８０４号明細書は、ＢＡＣＥ阻害活性を有する縮合アミノジヒドロオキサジン誘導体を開示しており、これはさらに、アルツハイマー型認知症などのＡベータペプチドによって引き起こされる神経変性疾患のための有用な治療剤として開示されている。米国特許第８，１５８，６２０号明細書は、ＢＡＣＥ阻害活性を有する縮合アミノジヒドロチアジン誘導体を開示しており、これはさらに、アルツハイマー型認知症などのＡベータペプチドによって引き起こされる神経変性疾患のための有用な治療剤として開示されている。米国特許出願公開第２０１２／０２４５１５５号明細書は、同様にＢＡＣＥ阻害活性を有する縮合複素環化合物を開示しており、これはさらに、アルツハイマー病を治療するのに有用であるとして開示されている。

中枢神経系（ＣＮＳ）浸透を有するＢＡＣＥ阻害剤が、アルツハイマー病などのＡβペプチド媒介性障害についての治療を提供するために望まれる。本発明は、ＢＡＣＥの阻害剤である特定の新規化合物を提供する。さらに、本発明は、ＣＮＳを浸透する特定の新規化合物を提供する。本発明はまた、改善された副作用プロファイルについての可能性を有する特定の新規化合物を提供する。

したがって、本発明は、式Ｉの化合物：

（式中、Ａは、

であり、
Ｒ^１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＯＣＨ_２ＣＦ_３、またはＯＣＨ_２ＣＦ_２ＣＨＦ_２であり、
Ｒ^２は、Ｈ、ＣＨ_３、Ｆ、またはＣｌであり、
Ｒ^３は、Ｈ、Ｆ、またはＣｌであり、
Ｒ^４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ_３、ＯＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＨ_２ＣＦ_３、

である）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

本発明はさらに、式ＩＩの化合物：

（式中、Ａは、

であり、
Ｒ^１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、またはＯＣＨ_２ＣＦ_３であり、
Ｒ^２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、Ｈ、ＯＣＨ_３、またはＯＣＨ_２ＣＦ_３である）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

本発明はさらに、式ＩＩＩの化合物：

（式中、Ａは、

であり、
Ｚは、ＯまたはＳであり、
Ｒ^１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、

であり、
Ｒ^２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはＣＨ_３であり、
Ｒ^３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、

であり、
Ｒ^４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはＯＣＨ_３である）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

本発明はまた、患者におけるアルツハイマー病を治療する方法であって、式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。

本発明は、患者における軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行を予防する方法であって、式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法をさらに提供する。本発明はまた、患者におけるＢＡＣＥを阻害する方法であって、式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。

本発明はまた、アミロイド前駆体タンパク質のＢＡＣＥ媒介性切断を阻害する方法であって、式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。本発明は、Ａベータペプチドの産生を阻害する方法であって、式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法をさらに提供する。

さらに、本発明は、療法に使用するため、特にアルツハイマー病の治療のためまたは軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行の予防のための式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。なおさらに、本発明は、アルツハイマー病の治療のための医薬の製造のための式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。

本発明は、式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態において、組成物は１種以上の他の治療剤をさらに含む。本発明はまた、式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物を合成するための新規中間体およびプロセスを含む。

軽度の認識機能障害は、臨床所見および時間と共に軽度の認識機能障害からアルツハイマー認知症を示す患者の進行に基づいたアルツハイマー病に関連する認知症の潜在的な前駆期と定義される（Ｍｏｒｒｉｓら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．５８、３９７−４０５（２００１）；Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．５６、３０３−３０８（１９９９））。「軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行の予防」という用語は、患者における軽度の認識機能障害からアルツハイマー病への進行を遅延、停止または反転することを含む。

本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑性、遅延、停止、または反転することを含む。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、ヒトを指す。

本明細書で使用される場合、「Ｃ１−Ｃ３アルコキシ」という用語は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、およびイソプロポキシ基を指す。

「Ａベータペプチドの産性の阻害」という用語は、患者におけるＡベータペプチドのインビボレベルの減少を意味する。

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者への単回または複数回用量投与で、診断または治療下の患者に所望の効果を与える、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の量または用量を指す。

有効量は、公知の技術の使用によって、および類似の状況下で得られる結果を観察することによって当業者としての担当診断医により容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際に、担当診断医によって、限定されないが、患者の種；その大きさ、年齢、および全体的な健康；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度または関与または重症度；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与様式；投与される製剤の生物学的利用能特性；選択される投与レジメン；併用薬の使用；および他の関連状況を含む、多くの要因が考慮される。

本発明の化合物は全体的に広範囲の投薬量にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬量は、通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の場合、上述の範囲の下限値以下の用量レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに高い用量が許容可能な副作用で利用されてもよく、したがって、上記の投薬量範囲は本発明の範囲を決して限定することを意図していない。

本発明の化合物は、好ましくは、化合物を生物学的に利用可能にする、経口および非経口経路を含む、任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、このような組成物は経口投与用である。このような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは当該分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ編、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６を参照のこと）。

式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩は本発明の治療方法に特に有用であるが、特定の基、置換基および構造が式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの化合物に好ましい。以下の段落は、このような好ましい基、置換基および構造を記載する。これらの選択は本発明の治療方法および新規化合物の両方に適用可能であることは理解されるであろう。

したがって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩について：
Ａが

であることが好ましい。

さらに、Ａが

であることが好ましい。

特に、Ａが

であることが好ましい。

Ｒ^１がＣＮまたはＦであることが好ましく、ＣＮが特に好ましい。

Ｒ^２がＨであることが好ましい。

Ｒ^１がＣＮまたはＦであり、Ｒ^２がＨである場合、特に好ましい。

Ｒ^１がＣＮであり、Ｒ^２がＨである場合、さらに特に好ましい。

さらに、Ｒ^３がＣｌであることが好ましい。

また、Ｒ^４がＯＣＨ_３であることが好ましい。

当業者は、式Ｉの化合物が、以下のスキームＡに示されるように２つのキラル中心を含有するコアから構成されることを理解するであろう：

本発明は、全ての個々の鏡像異性体およびジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む前記化合物の鏡像異性体の混合物を意図するが、スキームＡに例示したように１および２で標識した炭素原子において絶対配置を有する化合物が好ましい本発明の化合物である。

式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩について：
Ｒ^１がＣＮであることが好ましい。

Ｒ^２がＨであることが好ましい。

Ｒ^３がＯＣＨ^３であることが好ましい。

Ａが

であることがさらに好ましい。

Ｒ^１がＣＮであり、Ｒ^２がＨである場合、特に好ましい。

Ａが

であることがさらに特に好ましい。

Ａが

であることがさらに特に好ましい。

当業者は、式ＩＩの化合物が、以下のスキームＢに示すように２つのキラル中心を含有するコアから構成することを理解するであろう：

本発明は、全ての個々の鏡像異性体およびジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む前記化合物の鏡像異性体の混合物を意図するが、スキームＢに例示したように１および２で標識した炭素原子において絶対配置を有する化合物が好ましい本発明の化合物およびその薬学的に許容可能な塩である。

式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩について：
Ａが

であることが好ましい。

Ａが

であることがさらに好ましい。

Ａが、

であることが特に好ましい。

Ａが

であることが最も特に好ましい。

Ｒ^１がＣＮであることが好ましい。

Ｒ^２がＨであることが好ましい。

Ｒ^１がＣＮであり、Ｒ^２がＨである場合、さらに好ましい。

Ｒ^３がＯＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、

であることが好ましい。

Ｒ^３がＯＣＨ_３であることが特に好ましい。

式ＩＩＩの化合物は、以下に示すように縮合環について（ｃｉｓ）構造であることが好ましい：

さらに、当業者は、式ＩＩＩの化合物が、以下のスキームＣに示すように２つのキラル中心を含有するコアから構成することを理解するであろう：

本発明は、全ての個々の鏡像異性体およびジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む前記化合物の鏡像異性体の混合物を意図するが、スキームＣに例示したように１および２で標識した炭素原子において絶対配置を有する化合物が好ましい本発明の化合物である。

好ましい化合物は以下である：

およびそれらの薬学的に許容可能な塩。

最も好ましい化合物は以下である：

およびそれらの薬学的に許容可能な塩。

特に好ましい化合物は

およびその薬学的に許容可能な塩である。

より特には、以下の化合物が好ましい：
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−［（１−フルオロシクロプロピル）メトキシ］ピラジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピラジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−［（２，２−ジフルオロシクロプロピル）メトキシ］ピラジン−２−カルボキサミド；および
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（シクロプロピルメトキシ）ピラジン−２−カルボキサミド；
ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩。

より好ましい化合物は、
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；および
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド；
ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩である。

特に好ましい化合物は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミドおよびその薬学的に許容可能な塩である。

当業者は、本発明の化合物が、スキームＤに示されるように互変異性型で存在し得ることを理解するであろう。本発明の化合物の特定の互変異性体のものに対する本出願における任意の参照が与えられる場合、互変異性型およびその全ての混合物の両方を包含することが理解される。

特定の立体化学中心は特定されていないままであり、特定の置換基は簡潔さのために以下のスキームにおいて除外されており、スキームの教示を決して限定するものではない。さらに、個々の異性体、鏡像異性体、およびジアステレオマーは、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法によって式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物の合成において任意の都合の良い点で当業者により分離または分割され得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓら、「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９８１、ならびにＥ．Ｌ．ＥｌｉｅｌおよびＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４を参照のこと）。「異性体１」および「異性体２」という指定は、それぞれ第１および第２のキラルクロマトグラフィーから溶出する化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成において早期に開始される場合、同じ指定が後の中間体および実施例に適用される。

さらに、以下のスキームに記載される特定の中間体は１つ以上の窒素保護基を含有してもよい。様々な保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に応じて各々の出現において同じであっても、異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている（例えば、「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第４版、Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．ＷｕｔｓおよびＴｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７を参照のこと）。

特定の略語は以下のように定義される：「ＡＰＰ」はアミロイド前駆体タンパク質を指し；「ＣＳＦ」は脳脊髄液を指し；「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し；「ＤＩＣ」はジイソプロピルカルボジイミドを指し；「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−エチル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミンを指し；「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し；「ＤＭＡＰ」はジメチルアミノピリジンを指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指し；「ｅｅ」は鏡像異性体過剰率を指し；「Ｅｘ」は実施例を指し；「Ｆ１２」はＨｍａ’ｓ Ｆ１２培地を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し；「ＦＲＥＴ」は蛍光共鳴エネルギー移動を指し；「ＨＡＴＵ」は（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）メタンイミニウムヘキサフルオロホスフェートを指し；「ＨＥＫ」はヒト胚腎臓を指し；「ＨＯＡｃ」は酢酸を指し；「ＨＯＡｔ」は１−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾールを指し；「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指し；「ＨＢＴＵ」は２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを指し；「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し；「ＩＣ_５０」は薬剤について可能な５０％の最大阻害反応を生じるその薬剤の濃度を指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールまたはメチルアルコールを指し；「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し；「ＰＤＡＰＰ」は血小板由来アミロイド前駆体タンパク質を指し；「ＰＧ」は保護基を指し；「Ｐｒｅｐ」は調製例を指し；「ＰｙＢＯＰ」はベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し；「ＰｙＢｒｏｐ」はブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し；「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し；「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し；「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。

本発明の化合物またはその塩は当該分野において公知の様々な手順によって調製でき、それらのいくつかは以下のスキーム、調製例および実施例に例示される。記載される経路の各々についての特定の合成工程は、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物またはそれらの塩を調製するために、異なる方法で組み合わされてよいか、または異なるスキームからの工程と併せて組み合わされてもよい。以下のスキームにおける各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕および結晶化を含む、当該分野において周知の従来の方法によって回収できる。以下のスキームにおいて、他に示されない限り、全ての置換基は以前に定義される通りである。試薬および出発物質は当業者に容易に利用可能である。

スキーム１、工程Ａにおいて、臭化ブロムアセチルを、炭酸カリウムなどの無機塩基またはジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基を使用して当該分野において周知の条件下でＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩で処理して、ワインレブアミドを得る。

スキーム１、工程Ｂにおいて、ワインレブアミドを、当該分野において周知の条件下でアリルアルコールおよび炭酸カリウムなどの無機塩基で処理して、アリルエーテルを得る。例えば、ワインレブアミドは、約３０℃にて約３時間にわたって、約６〜７当量のアリルアルコールおよび約２当量の適切な塩基、例えば炭酸カリウムに加えられる。反応混合物を約３０℃にて約２時間撹拌し、トルエンなどの適切な有機溶媒を加える。次いで混合物を約０℃に冷やし、濾過する。濾過ケーキを冷（約０℃）トルエンで洗浄し、有機濾液を合わせ、硫酸水素カリウム水溶液でリンスする。次いで有機相を、さらなるトルエンを加えることで濃縮して、水および過剰のアリルアルコールを除去する。有機物を再び水で洗浄し、次いで濃縮して大部分のトルエンを除去する。有機残渣を最終的に希釈してアリルエーテルを得る。

スキーム１、工程Ｃにおいて、４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼンを、イソプロピルマグネシウムクロリドなどのグリニヤール試薬を使用してアルキルエーテルと反応させて、置換されたアリルオキシエタノンを得る。例えば、ＴＨＦ中のイソプロピルマグネシウムクロリドなどの約１当量の適切なグリニヤール試薬を、撹拌しながら約０℃にて、ＴＨＦなどの適切な有機溶媒中の約０．９５当量の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼンに加える。約０℃にて約６０分後、ＴＨＦなどの適切な有機溶媒中の約１当量のアリルエーテルを約６０分にわたって加える。次いで反応を約０℃にて過剰な塩化アンモニウム水溶液でクエンチする。ヘプタンなどの適切な有機溶媒を、混合物を室温に加温するように撹拌しながらクエンチした反応混合物に加える。次いで層を分離し、有機層を水で洗浄し、さらなるヘプタンで濃縮して水およびＴＨＦを除去して、アリルオキシエタノンを得る。

スキーム１、工程Ｄにおいて、二環式イソオキサゾールが、２工程手順（ヒドロキシルアミンを使用してオキシムをインサイチュで形成し、次いで二環式イソオキサゾリジンに環化する（ＰＧ＝Ｈ））を使用することなどのいくつかの方法によってアリルオキシエタノンから形成し得る。あるいは、１−フェニルプロピルヒドロキシルアミンｐ−トルエンスルホン酸塩などの置換されたヒドロキシルアミンを炭酸水素カリウムで処理し、続いてチタンテトライソプロポキシドで加熱して、インサイチュでニトロン中間体を得、それを窒素保護二環式イソオキサゾールに環化する。例えば、（Ｒ）−Ｎ−（１−フェニルプロピル）ヒドロキシルアミンｐ−トルエンスルホン酸塩などの適切な１−フェニルプロピルヒドロキシルアミンｐ−トルエンスルホン酸塩（Ｐａｔｅｌ，Ｉ．；Ｓｍｉｔｈ，Ｎ．Ａ．；Ｔｙｌｅｒ，Ｓ．Ｎ．Ｇ．Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２００９、１３、４９−５３を参照のこと）を、約２．７５当量の炭酸水素カリウム、水およびＭＴＢＥなどの適切な有機溶媒で処理する。層を分離し、有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。適切な有機溶媒を有機層に加え、ＭＴＢＥおよび水の大部分を約５０℃にて蒸留することによって除去する。ヘプタン中の約１当量の約２０〜２５％重量％溶液のアリルオキシエタノンを、約５０℃にてヘプタン中の１−フェニルプロピルヒドロキシルアミンに加える。次いで約１．５当量のチタンテトライソプロポキシドを加え、混合物を約１０時間約５５〜６０℃にて加熱する（チタン（ＩＶ）エトキシドも使用されてもよい）。次いで窒素保護二環式イソオキサゾールを、濃縮、冷却、および濾過による回収などの当該分野において周知の条件下で単離する。

スキーム１、工程Ｅにおいて、二環式イソオキサゾールを窒素保護アニリン二環式イソオキサゾリジンに変換する。例えば、約１当量の二環式イソオキサゾールを、ＤＭＦなどの適切な有機溶媒中の約４当量のアセトアミド、約０．２当量の適切な触媒、例えばヨウ化銅（Ｉ）、約０．７当量のヨウ化カリウム、約２当量のリン酸三カリウム、および約０．８当量のＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンと合わせる。次いで反応混合物を約４時間約１１０℃にて加熱する。当該分野において周知の技術および条件を使用して窒素保護アニリン二環式イソオキサゾリジンを単離する。例えば、反応混合物を約３０℃に冷やし、酢酸イソプロピルなどの適切な有機溶媒と塩化アンモニウム水溶液との間に分ける。層を分離し、水層を酢酸イソプロピルでさらに抽出する。有機抽出物を合わせ、塩化アンモニウム水溶液で洗浄し、有機層をキシレンなどの適切な有機溶媒と混合する。次いで有機混合物を希釈して、酢酸イソプロピルおよび残留ＤＭＦの大部分を除去する。次いで有機混合物を約０℃に冷やし、得られた固体窒素保護アニリン二環式イソオキサゾリジンを濾過により回収する。

スキーム１、工程Ｆにおいて、窒素保護アニリン二環式イソオキサゾリジン環を開環でき、イソオキサゾリジン窒素もまた、当該分野において周知の標準的な条件下で脱保護でき、アミノ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフランを得る。例えば、約１当量の窒素保護アニリン二環式イソオキサゾリジン環を、プロパノール／水および約０．９当量のＨＣｌの混合物中でスラリーにした約０．２当量の塩化亜鉛および約２０重量％負荷の水で湿潤した硫化５％炭素パラジウム触媒と合わせる。混合物を、約１６時間、約３００〜４００ｋＰａの水素下で約５０℃にて加熱する。次いで触媒を濾過により除去し、濾過ケーキをプロパノールでリンスする。次いで大部分の水を、さらなるプロパノールを加えて共沸蒸留によって濾液から除去する。さらなるＨＣｌを水に加え（約０．１当量）、固体を回収してアミノ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフランを得る。あるいは、水素条件下でＨＯＡｃ中の粉末亜鉛またはラネーＮｉを使用してイソオキサゾリジン環を開環できる。

スキーム１、工程Ｇにおいて、アミノ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフランを適切な窒素保護基で最初に保護する。続いてヒドロキシル基を当該分野において周知の条件下で酸化してアルデヒドを得る。例えば、アミノ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフランを、ＴＨＦなどの適切な有機溶媒中で、約２〜３当量の適切な有機塩基、例えばトリエチルアミンおよび約１．２〜１．４当量の適切な窒素保護基試薬、例えばジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートと合わせる。反応物を約５０℃にて約１５〜１８時間撹拌し、得られた窒素保護中間体を単離し、当該分野において周知の技術を使用して精製する。例えば、反応物を室温に冷やし、濃縮する。残渣を１０％クエン酸と酢酸エチルとの間に分け、酢酸エチルで抽出し、乾燥させ、濃縮して窒素保護中間体を得る。あるいは、反応物を室温に冷やし、濾過し、固体を酢酸エチルで洗浄し、濾液を減圧下で濃縮する。次いで残渣を、メタノール：ジクロロメタン勾配０：１０〜１：１０などの適切な溶出液で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィーによって精製して、工程Ｇ、副工程１の窒素保護中間体を得る。次いで窒素保護中間体を、工程Ｇ、副工程２において当業者に周知の条件下でアルデヒドに酸化する。例えば、ジクロロメタンなどの適切な有機溶媒に溶解した、すぐ上で調製した窒素保護中間体を、ジクロロメタン中の約１．７当量のクロロクロム酸ピリジニウムなどの適切な酸化剤、４Å分子篩、および約２．３当量の酢酸アンモニウムの撹拌混合物に加える。懸濁液を室温にて約３５分〜約２時間撹拌する。次いで工程Ｇ、副工程２の得られたアルデヒド化合物を単離し、当該分野において周知の技術を使用して精製する。例えば、反応混合物を減圧下で部分的に濃縮し、酢酸エチルなどの適切な有機溶媒を加え、混合物をシリカゲルで濾過する。シリカゲルを酢酸エチルでさらにリンスし、濾液を合わせ、次いで減圧下で濃縮してアルデヒドを得る。あるいは、ＤＭＳＯなどの適切な有機溶媒に溶解した、すぐ上で調製した窒素保護中間体に、２−ヨードキシ安息香酸（ＩＢＸ）を加え、混合物を約１８時間撹拌する。混合物を炭酸ナトリウム水溶液に加え、ＭＴＢＥを加え、混合物を室温にて約１５分間撹拌し、珪藻土で濾過し、有機層を回収し、濃縮して、工程Ｇ、副工程２のアルデヒド化合物を得る。

スキーム１、工程Ｈ、副工程１において、工程Ｇのアルデヒドは、１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボレート）（Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）とも称される）を使用してフッ素化してフッ素化化合物を得、次いでアルデヒドを副工程２において還元してフッ素化第一級アルコールを得る。例えば、アルデヒドをＴＨＦなどの適切な有機溶媒に溶解し、約１．０８当量の適切な第２級環状アミン、例えばピロリジンまたはＤ−（＋）−プロリンで処理する。溶液を約５〜１０分間室温にて撹拌し、約１．１５当量のＳｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）で処理し、反応物を約２〜３時間撹拌する。次いで反応物を飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチし、酢酸エチルおよびジクロロメタンなどの適切な有機溶媒で抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸マグネシウムまたは硫酸ナトリウムなどの適切な乾燥剤で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。あるいは、約１．１当量のＤ−（＋）−プロリンを２，２，２−トリフルオロ−エタノール中のアルデヒドの溶液に加え、それを炭酸カリウムおよび３Å分子篩で処理し、使用前に濾過する。メタノール、エタノール、ＴＨＦ、およびジクロロメタンなどの他の溶媒も使用されてもよく、それらは異なるジアステレオ選択性を生じ得る。３Å分子篩（５００ｍｇ）を加え、反応混合物を室温にて約４時間撹拌する。約１．３当量のＳｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）を混合物に加え、それを約３６時間撹拌する。混合物を濃縮し、当該分野において周知の技術を使用して精製して、工程Ｈ、副工程１の還元されていないフッ素化生成物を得る。

工程Ｈ、副工程２において、残渣をメタノールまたはエタノールなどの適切な有機溶媒に溶解し、１．０７〜１．４当量の適切な試薬剤、例えば水素化ホウ素ナトリウムまたはテトラヒドロホウ酸ナトリウムで処理し、次いで反応物を室温にて３０分〜２時間撹拌する。次いで反応物を飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチするか、または残渣まで蒸発させて、酢酸エチルおよびジクロロメタンなどの適切な有機溶媒で抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸マグネシウムまたは硫酸ナトリウムなどの適切な乾燥剤で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗製フッ素化第一級アルコールを得る。次いで０：１０〜１：１０のメタノール：ジクロロメタン勾配または酢酸エチル／ヘキサン（１：１）などの適切な溶出液を用いたシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーなどの当該分野において周知の技術を使用してこの粗物質を精製して、工程Ｈの精製されたフッ素化第一級アルコールを得る。直接フッ素化を達成するための当業者に公知の他の方法は、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）、銅（Ｉ）ビスイミン錯体、ならびにアニオン性相間移動触媒およびＮ−ヒドロキシフタルイミドまたはＮ，Ｎ−ジヒドロキシピロメリトイミドおよびＳｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）を利用する。Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）に加えて、使用され得るフッ素化試薬としは、以下：Ｎ−フルオロピリジニウムトリフルオロメタンスルホネートおよびＮ−フルオロベンゼンスルホンイミドが挙げられ、それらは異なるジアステレオ選択性を生じ得る。

スキーム２、工程Ｉにおいて、工程Ｈのフッ素化第一級アルコールは、当該分野において周知の条件を使用して脱保護アミンを後でチオ尿素に変換できる標準的な条件下で脱保護される。例えば、副工程１、脱保護において、フッ素化第一級アルコールを、ジクロロメタンなどの適切な有機溶媒に溶解し、約１５当量のトリフルオロ酢酸などの過剰な適切な酸で処理する。反応物を室温にて約２〜３時間撹拌する。次いで反応物を減圧下で濃縮し、トルエンと共沸する。副工程２、チオ尿素形成において、次いで残渣をＴＨＦなどの適切な有機溶媒に溶解し、約１．１当量の適切な有機アミン、例えばトリエチルアミンおよび約１．０６当量のベンゾイルイソチオシアネートで処理する。次いで反応物を室温にて約１６〜１８時間撹拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチする。次いでクエンチした反応物を適切な有機溶媒、例えば酢酸エチルおよびジクロロメタンで抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸マグネシウムなどの適切な乾燥剤で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して工程Ｉの粗チオ尿素生成物を得る。次いでこの粗物質を、０：１０〜１：１０のメタノール：ジクロロメタン勾配などの適切な溶出液を用いたシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーなどの当該分野において周知の技術を使用して精製して、精製したチオ尿素を得る。

スキーム２、工程Ｊ、結晶化において、工程Ｉのチオ尿素は、標準的な条件下で保護された二環式アミノチアジンに環化される。例えば、チオ尿素をジクロロメタンなどの適切な有機溶媒に溶解し、約１．４４当量の１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミンで処理する。次いで反応物を室温にて約３〜４時間撹拌し、反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチする。次いでクエンチした反応物をジクロロメタンなどの適切な有機溶媒で抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸マグネシウムなどの適切な乾燥剤で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、工程Ｊの粗製二環式アミノチアジン生成物を得る。次いで粗物質を、０：１〜１：０の酢酸エチル：ヘキサン勾配などの適切な溶出液を用いたシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーなどの当該分野において周知の技術を使用して精製して、精製した二環式アミノチアジンを得る。

スキーム２、工程Ｋにおいて、工程Ｊの二環式アミノチアジン生成物を当該分野において周知の条件下で副工程１において脱保護し、次いで副工程２において、アミド化を、適切なアリールアシルクロリド（Ａ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃｌ）（式中、「Ａ」は本発明明細書に定義される通りである）を用いて当該分野において周知の条件下で実施して、式Ｉまたは式ＩＩＩａ（ＺはＳである）の化合物を得る。例えば、二環式アミノチアジンを、エタノールなどの適切な有機溶媒中で約５．６当量のＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩および約５．９当量のピリジンと合わせ、約５０℃にて約１６時間加熱される。次いで約２５当量の適切な酸、例えば濃塩酸を加え、反応物を約５０℃にてさらに２４時間加熱する。次いで反応物を冷やし、減圧下で濃縮して、粗製脱保護ジアミノ化合物を得、次いでそれを、メタノール／ジクロロメタン勾配０：１０〜１：１０中の７Ｍアンモニアなどの適切な溶出液で溶出するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーなどの当該分野において周知の技術によって精製して、精製された脱保護ジアミノ化合物を得る。

あるいは、工程Ｊの二環式アミノチアジン生成物を、エタノールなどの適切な有機溶媒中で約９．４当量のＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩および約９．９当量のピリジンと合わせ、約５０℃にて約１８時間加熱する。次いで反応物を、例えば、メタノール、続いてメタノール中の７Ｍアンモニアなどの適切な溶出液を利用するＳＣＸカラムの使用により直接精製する。次いで精製した物質をエタノールなどの適切な有機溶媒に溶解し、約１６当量の適切な酸、例えば濃塩酸で処理し、５０℃にて約２３時間加熱する。次いで反応物を冷やし、減圧下で濃縮して、粗製脱保護ジアミノ化合物を得、それを、メタノール、続いてメタノール中の７Ｍアンモニアなどの適切な溶出液を利用するフラッシュクロマトグラフィーまたはＳＣＸカラムなどの当該分野において周知の技術によって精製できる。

次いで脱保護ジアミノを、例えば、アリールアシルクロリドを使用して当該分野において周知の条件下で工程Ｋ、副工程２においてアミド化して、式Ｉまたは式ＩＩＩａの化合物を得ることができる。例えば、２当量の塩化オキサリルをアセトニトリルなどの適切な有機溶媒中の２．２当量のＤＭＦに加え、反応物を約１０分間撹拌する。約２．０５当量の適切に置換されたアリールカルボン酸（Ａ−ＣＯ_２Ｈ）を反応物に加え、それを約３０〜６０分間撹拌し、約２当量の対応するアリールアシルクロリドを得る。約１〜２当量の新たに調製されたアリールアシルクロリドを、約５０℃にてエタノール：水（約１：１ｖｏｌ）中の上記で調製した脱保護ジアミノ化合物の溶液に滴下して加える。反応物を５０℃にて約４５〜９０分間加熱する。得られた式Ｉまたは式ＩＩＩａの化合物を次いで単離し、当該分野において周知の技術および条件を使用して精製する。例えば、反応混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と合わせ、ジクロロメタンなどの適切な有機溶媒で抽出する。（反応混合物はまた、ＳＣＸカラムに直接負荷でき、精製し、次いでシリカゲルによりさらに精製する。）有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、減圧下で濃縮して、式Ｉまたは式ＩＩＩａについて粗物質を得る。次いで粗物質は、例えば、０：１０〜１：１０のメタノール／ジクロロメタン勾配中の７Ｍアンモニアなどの適切な溶出液を使用したシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製できる。精製した物質は、５％メタノールを含む１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液中のアセトニトリルの５〜６０％勾配などの適切な溶出液で溶出する高性能Ｃ１８カラムを使用した逆相フラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製できる。次いで生成物を含有する溶出液を４：１のクロロホルム：イソプロパノールで抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、遊離塩基として式Ｉまたは式ＩＩＩａのさらに精製した化合物を得る。

あるいは、当業者は、カルボン酸およびアミンの反応から生じるアミド形成のための多くの方法および試薬が存在することを認識するであろう。例えば、カップリング試薬およびアミン塩基、例えばＤＩＰＥＡまたはトリエチルアミンの存在下で脱保護されたジアミノ化合物と適切なアリールカルボン酸（Ａ−ＣＯ_２Ｈ）との反応により、式Ｉまたは式ＩＩＩａの化合物が得られる。カップリング試薬としては、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩおよび芳香族カップリング試薬、例えばＨＯＢｔおよびＨＯＡｔなどのカルボジイミドが挙げられる。さらに、ウロニウムまたは非求核アニオンのホスホニウム塩、例えばＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰおよびＰｙＢｒＯＰが、多くの従来のカップリング試薬の代わりに使用されてもよい。ＤＭＡＰなどの添加剤が、反応を向上させ、式Ｉまたは式ＩＩＩａの化合物を提供するために使用されてもよい。

スキーム３、工程Ｌ、副工程１において、フッ素化第一級アルコール（スキーム１、工程Ｈにおいて調製した）は、標準的な条件下で脱保護され、続いて副工程２ａおよび２ｂにおいて中和され、チオ尿素が形成し、環化されて、保護された二環式アミノオキサジンが得られる。例えば、副工程１において、フッ素化第一級アルコールを酢酸エチルまたはジクロロメタンなどの適切な有機溶媒に溶解し、過剰な適切な酸、例えば塩酸（１，４−ジオキサン中４Ｍ）またはトリフルオロ酢酸で処理する。反応物を室温にて約２時間から一晩撹拌する。次いで脱保護したアミンを、濾過などの当該分野において周知の技術で塩として単離する。あるいは副工程１について、エタノールを、約０℃にて酢酸エチル中の過剰な塩化アセチルの溶液に滴下して加え、約３０分間撹拌する。フッ素化第一級アルコール（スキーム１、工程Ｈ）を加え、反応物を室温にて一晩撹拌する。次いで脱保護したアミン塩を濾過などの当該分野において周知の技術で単離する。次いで、副工程２ａについての中和およびチオ尿素について、脱保護したアミン塩を、アセトニトリルまたはテトラヒドロフランなどの適切な有機溶媒に溶解し、約１．１当量の適切な有機アミン、例えばトリエチルアミンで処理してアミンを中和し、約１．０５当量のベンゾイルイソチオシアネートを加えて中間体チオ尿素を形成する。次いで反応物を５℃にて約１時間撹拌するか、または約７０℃で２時間加熱する。副工程２ｂにおいて、保護された二環式アミノオキサジンを環化し、形成するために、約１．１当量のトリメチルシリルクロリドおよびＤＭＳＯを加え、撹拌を約２時間継続する。反応物をリン酸水素二カリウム（２０％）でクエンチしてｐＨを７〜８に調整し、当該分野において周知の技術を使用して生成物を単離して、工程Ｌの保護された二環式アミノオキサジン生成物を得る。あるいは、アミン塩を、工程Ｌ、工程２ａについて上記のようにトリエチルアミンで中和でき、ベンゾイルカルバメートで処理して、中間体のＮ−カルバモイルベンズアミドを形成し、次いでそれを、約−７８℃にてジクロロメタンなどの有機溶媒中で三フッ化ジエチルアミノ硫黄により環化し、１時間にわたってほぼ室温に加温する。当該分野において周知の技術を使用して生成物を単離して、工程Ｌの保護された二環式アミノオキサジン生成物を得る。

スキーム３、工程Ｍにおいて、保護された二環式アミノオキサジンの脱保護が最初に完了し、次いでアニリンが当該分野において周知の条件下で脱保護され、続いて副工程２において適切なアリールアシルクロリド−Ａ（式中、「Ａ」は本明細書に定義される通りである）を用いてアニリンのアミド化が行われて、式ＩＩまたは式ＩＩＩｂ（ＺはＯである）の化合物を得る。例えば、工程Ｍ、副工程１において、保護された二環式アミノオキサジンをメタノール中の約１．１当量の水酸化リチウムの溶液に加え、４０℃で約１８時間加熱して、二環式アミノオキサジン上のアミノ基を脱保護する。次いでアニリンを、１Ｍ塩化水素水溶液を使用し、９０℃にて約３時間加熱する酸性条件などの当該分野において周知の条件下で脱保護する。次いで反応物を冷やし、酢酸エチルで希釈し、水層を分離し、水酸化ナトリウム水溶液で処理して、ｐＨを約１０に調整する。次いでこの混合物を酢酸エチルで抽出し、減圧下で濃縮して、脱保護した粗ジアミノ化合物を得る。次いで脱保護した粗ジアミノ化合物を、メタノール／ジクロロメタン勾配中の７Ｍアンモニアなどの適切な溶出液で溶出するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーなどの当該分野において周知の技術によって精製して、精製された脱保護されたジアミノ化合物を得る。

次いで、スキーム３、工程Ｍ、副工程２において、脱保護されたジアミノ化合物を、例えば、アリールアシルクロリドを使用する、当該分野において周知の条件下でアニリン窒素にてアミド化して、式ＩＩまたは式ＩＩＩｂの化合物を得る。例えば、約１当量の塩化オキサリルおよび触媒量のＤＭＦをアセトニトリルなどの適切な有機溶媒中の約１．０７当量のアリールカルボン酸（Ａ−ＣＯ_２Ｈ）に加え、混合物を約１０分間撹拌する。次いでこの混合物をエタノールおよび水中の脱保護したジアミノ化合物の５０℃の溶液に加え、約５０℃にて約１０分間撹拌する。次いで式ＩＩまたは式ＩＩＩｂの得られた化合物を単離し、当該分野において周知の技術および条件を使用して精製する。例えば、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と合わせ、酢酸エチルなどの適切な有機溶媒で抽出する。次いで粗物質を、例えば、メタノール／ジクロロメタン中の７Ｍアンモニアの勾配などの適切な溶出液を使用してシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、遊離塩基として式ＩＩまたは式ＩＩＩｂの化合物を得ることができる。

あるいは、スキーム３、工程Ｎ、副工程１において、スキーム１、工程Ｈのフッ素化第一級アルコールは、工程Ｌ、副工程１について上記のように脱保護でき、アミンを最初に保護せずに副工程２ａおよび２ｂにおいて中和し、環化し、当該分野において周知の条件下で副工程３においてアミド化する。例えば、アミンは、塩酸（１，４−ジオキサン中４Ｍ）またはトリフルオロ酢酸などの過剰の適切な酸を使用して当該分野において周知の酸性条件下で副工程１において脱保護できる。次いでＨＣｌ塩などの脱保護したアミンを、濾過などの当該分野において周知の技術を用いて単離する。脱保護したアミン、ヒドロキシルＨＣｌアミンを、ジクロロメタンなどの適切な有機溶媒に溶解することによって副工程２ｂにおいて中和し、トリエチルアミンなどの約１．２当量の有機塩基で処理し、約１０分間撹拌し、濃縮する。酢酸エチルを加え、混合物を４０℃で約１０分間加熱し、続いて濃縮して、完全な中和を確実にする。結晶化を副工程２においてエタノールおよび臭化シアンを残渣に加えることによって完了し、混合物を約１２０℃で約４時間加熱する。溶媒の蒸発後、残渣を水および１．０Ｍの塩酸に溶解し、酢酸エチルで洗浄する。水性抽出物を濃塩酸水溶液で処理し、５０℃にて約４８時間撹拌する。混合物を冷やし、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを塩基性に調整し、酢酸エチルで抽出する。粗アニリンアミノ二環式オキサジンの精製は、メタノールおよびジクロロメタン中の７Ｍアンモニアなどの勾配で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを用いて達成できる。工程Ｎ、副工程３において、この物質は、工程Ｍ、副工程２において上記のようにアニリンアミンにてアミド化して、式ＩＩまたは式ＩＩＩｂの化合物を得ることができる。

あるいは、当業者は、スキーム２の下で以前に記載され、スキーム３にも適用され得るカルボン酸およびアミンの反応から生じるアミド形成の多くの方法および試薬が存在することを認識するであろう。

塩酸塩などの式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物の薬学的に許容可能な塩は、当該分野において周知の標準的な条件下で、適切な溶媒中で、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ（ＩＩＩａおよびＩＩＩｂを含む）の適切な遊離塩基と適切な薬学的に許容可能な酸との反応によって形成できる。さらに、このような塩の形成は窒素保護基の脱保護と同時に行われてもよい。このような塩の形成は周知であり、当該分野において理解される。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．、「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３３：２０１−２１７（１９８６）；Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．ら、「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、４：４２７−４３５（２０００）；およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、６６：１−１９（１９７７）を参照のこと。

以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示する。

調製例１
２−（アリルオキシ）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド

スキーム１、工程ＡおよびＢ：ブロモアセチルブロミド（１．０６当量）を、０℃にて水（４ｍＬ／ｇ）、トルエン（４ｍＬ／ｇ）およびＫ_２ＣＯ_３（１．１５当量）の撹拌混合物中のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．０当量）の溶液（体積はこの化合物のｍＬ／ｇである）に加える。１時間にわたって室温に加温した後、層を分離し、水層をトルエン（２ｍＬ／ｇ）で抽出する。合わせた有機層を濃縮して、約２０％のトルエンを含有する中間体２−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−アセトアミドを得る。２−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−アセトアミドを、３０℃にて３時間にわたってアリルアルコール（６．３当量）およびＫ_２ＣＯ_３（２当量）の混合物に加える。３０℃にて２時間後、トルエン（４ｍＬ／ｇ）を加え、混合物を０℃に冷やし、濾過する。濾過ケーキを冷（０℃）トルエン（２．７ｍＬ／ｇ）でリンスし、合わせた濾液をＫＨＳＯ_４の３重量％水溶液（０．６ｍＬ／ｇ）で洗浄する。水およびアリルアルコールを除去するために追加のトルエン（１１ｍＬ／ｇ）を加えながら、トルエン溶液を濃縮する。濃縮したトルエン溶液を水（０．５ｇ／ｇ）で洗浄し、さらに濃縮して大部分のトルエンを除去し、次いで蒸留して標題化合物を得る。ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６０（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２
（３ａＳ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−（（Ｒ）−１−フェニルプロピル）ヘキサヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール

スキーム１、工程ＣおよびＤ：０℃にてＴＨＦ（４．６ｍＬ／ｇ）中の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼン（０．９５当量）に、イソプロピルマグネシウムクロリド（１．０当量、ＴＨＦ中２０重量パーセント）を加える。０℃にて約６０分後、ＴＨＦ（２．２ｍＬ／ｇ）中の２−（アリルオキシ）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド（１．０当量）の溶液（この段階についての体積はこの化合物のｍＬ／ｇである）を約６０分にわたって加える。反応混合物を０℃にてＮＨ_４Ｃｌ（４．３当量）水溶液（５．８ｍＬ／ｇ）中でクエンチする。混合物を室温に加温しながらヘプタン（７．２ｍＬ／ｇ）を加え、層を分離する。有機層を水（７．２ｍＬ／ｇ）で洗浄する。水およびＴＨＦを除去するためにさらなるヘプタン（４ｍＬ／ｇ）を加えながら有機層を濃縮する。中間体、２−アリルオキシ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノンをヘプタン（約２０〜２５重量％）中の溶液として得る。

（Ｒ）−Ｎ−（１−フェニルプロピル）ヒドロキシルアミンｐ−トルエンスルホン酸塩をＫＨＣＯ_３（２．７５当量）、水（６．６ｍＬ／ｇ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（６．８ｍＬ／ｇ）で処理する。層を分離し、有機層を２５重量％のＮａＣｌ水溶液（２．８ｍＬ／ｇ）で洗浄する。ヘプタン（１２ｍＬ／ｇ）を加え、ＭＴＢＥおよび水の大部分を約５０℃にて蒸留により除去する。ヘプタン中の２−アリルオキシ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（１当量、この段階についての体積はこの化合物のｍＬ／ｇである）の２０〜２５重量％溶液を、５０℃にて（Ｒ）−Ｎ−（１−フェニルプロピル）ヒドロキシルアミンヘプタン混合物に加える。チタンテトライソプロポキシド（１．５当量）を加え、混合物を約１０時間、約５５〜６０℃にて加熱する。さらなるヘプタン（６ｍＬ／ｇ）を加えながら、混合物を約３５〜５０℃にて濃縮する。全体積が６０％の予想される産生収率に匹敵する約５ｍＬ／ｇになった場合に蒸留を停止する。混合物を−１０℃に冷却し、固体を濾過により回収し、冷（−１０℃）ヘプタン（１ｍＬ／ｇ）で２回リンスし、乾燥させて標題化合物を得る。ＬＣ−ＭＳ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒについてｍ／ｚ）：４０６／４０８（Ｍ＋Ｈ）。

調製例３
Ｎ−（４−フルオロ−３−（（３ａＳ，６ａＳ）−１−（（Ｒ）−１−フェニルプロピル）ヘキサヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−６ａ−イル）フェニル）アセトアミド

スキーム１、工程Ｅ：（３ａＳ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−（（Ｒ）−１−フェニルプロピル）ヘキサヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（１．０当量、体積はこの化合物のｍＬ／ｇである）、アセトアミド（４当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．２当量）、ヨウ化カリウム（０．７当量）、Ｋ_３ＰＯ_４（２．０当量）、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．８当量）およびＤＭＦ（４ｍＬ／ｇ）の混合物を１１０℃にて約４時間加熱する。３０℃に冷やした後、混合物を水中の酢酸イソプロピル（３．７ｍＬ／ｇ）と１０重量％ＮＨ_４Ｃｌ（５．７ｍＬ／ｇ）との間に分ける。層を分離し、水層を酢酸イソプロピル（２ｍＬ／ｇ）で抽出する。合わせた有機層を水中の１０重量％のＮＨ_４Ｃｌ（１ｍＬ／ｇ）で２回洗浄する。有機層をキシレン（４．３ｍＬ／ｇ）と混合し、混合物を真空下で蒸留して酢酸イソプロピルおよび残留ＤＭＦの大部分を除去する。混合物を０℃に冷やし、固体を濾過により回収し、キシレン（０．７ｍＬ／ｇ）で２回リンスし、乾燥させて標題化合物を得る。ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８５（Ｍ＋Ｈ）。

調製例４
Ｎ−（３−（（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル）−４−フルオロフェニル）アセトアミド塩酸塩

スキーム１、工程Ｆ：Ｎ−（４−フルオロ−３−（（３ａＳ，６ａＳ）−１−（（Ｒ）−１−フェニルプロピル）ヘキサヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−６ａ−イル）フェニル）アセトアミド（１．０当量、体積はこの化合物のｍＬ／ｇである）、塩化亜鉛（０．２当量）および２０重量％負荷の水で湿潤した、硫化５％Ｐｄ／Ｃ触媒の混合物を、１−プロパノール（４ｍＬ／ｇ）、水（３．８ｍＬ／ｇ）およびＨＣｌ（０．９当量、水中３３重量％）の混合物中でスラリーにする。混合物を水素圧（約３００〜４００ｋＰａ）下で５０℃にて約１６時間加熱する。触媒を約５０℃にて濾過により除去し、濾過ケーキを１−プロパノール（２．９ｍＬ／ｇ）でリンスする。水の大部分を、さらなる１−プロパノール（１０．５ｍＬ／ｇ）を使用して共沸蒸留によって合わせた濾液から除去する。さらなるＨＣｌ（０．１当量、水中３３重量％）を混合物に加え、固体を濾過により回収し、１−プロパノール（１ｍＬ／ｇ）で２回リンスし、乾燥させて標題化合物を得る。ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６９（Ｍ＋Ｈ）。

調製例５
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート
方法Ａ

スキーム１、工程Ｇ、副工程１（保護）：５０℃にてテトラヒドロフラン中のＮ−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩（６０．０ｇ、１９７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８５．０ｍＬ、６１０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（６０．０ｇ、２７２ｍｍｏｌ）の溶液を１５．５時間撹拌する。反応物を周囲温度に冷やし、濾過し、酢酸エチルで洗浄し、減圧下で濃縮する。残渣を、メタノール／ジクロロメタン（０：１０）からメタノール／ジクロロメタン（１：１０）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（７１．０ｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２６９（Ｍ−９９）。

方法Ｂ 調製例５
ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１３０ｇ、５９１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１．２Ｌ）中のＮ−（３−（（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル）−４−フルオロフェニル）アセトアミド塩酸塩（１５０ｇ、４９２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１３７ｍＬ、９８４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。窒素下で５０℃にて１８時間撹拌した後、反応混合物を室温に徐々に冷やし、溶媒を蒸発させる。残渣を１０％クエン酸水溶液（５００ｍＬ）と酢酸エチル（１Ｌ）との間に分ける。層を分離し、水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得、それを真空下で一定重量まで乾燥させて標題化合物（１９２ｇ、９５．３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６７（Ｍ＋１），２６７（Ｍ−９９）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．８５−７．７９（ｍ，１Ｈ），７．６０−７．５６（ｍ，１Ｈ），７．４１−７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，７Ｈ），７．０４−６．９５（ｍ，２Ｈ），４．２６−４．１１（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．７２（ｍ，３Ｈ），２．１５（ｓ，５Ｈ），２．０５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），１．７２−１．６７（ｍ，１Ｈ），１．３６（ｓ，１３Ｈ），１．３１−１．２６（ｍ，３Ｈ）。

調製例６
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−ホルミル−テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート
方法Ａ

スキーム１、工程Ｇ、副工程２（酸化）：クロロクロム酸ピリジニウム（１０．０ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）、４Å分子篩（２０．０ｇ）および酢酸アンモニウム（５．００ｇ、６２．３ｍｍｏｌ）の混合物を微細粉末に粉砕し、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）に加える。次いでジクロロメタン（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（１０．０ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）の溶液を加える。得られた懸濁液を周囲温度にて３５分間撹拌し、約１００ｍＬ体積のジクロロメタンまで減圧下で濃縮する。次いで酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、得られた混合物をシリカゲルケーキで濾過する。そのケーキを酢酸エチルで洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮して標題化合物（７１．０ｇ、９８％）を得、それをさらに精製せずに使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２６７（Ｍ−９９）。

方法Ｂ 調製例６
２−ヨードソ安息香酸（４５％ｗ／ｗ、８８．３ｇ、１４２ｍｍｏｌ）を、室温にてＤＭＳＯ（２００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（５０．０ｇ、１２９ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加える。２２℃にて１８時間撹拌した後、温度を２５℃以下に維持しながら反応混合物を炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）に加える。メチル−ｔ−ブチルエーテルを加え（５００ｍＬ）、混合物を室温にて１５分間撹拌する。混合物を珪藻土により濾過し、有機層を分離する。水層をメチル−ｔ−ブチルエーテル（２×１００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣を一定重量（４６．０ｇ、９３．５％）まで真空下で乾燥させる。この物質をさらに精製せずに使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６７（Ｍ−９９）．^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ９．８７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），９．４４（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．４３−７．３１（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｓ，３Ｈ），７．０４−６．９８（ｍ，２Ｈ），５．３０（ｓ，１Ｈ），４．４９−４．２８（ｍ，５Ｈ），４．１２−４．０６（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｔｄ，Ｊ＝７．６，２．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２１（ｓ，４Ｈ），２．６２（ｓ，１Ｈ），２．１５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，６Ｈ），１．６３（ｓ，４Ｈ），１．３６−１．３１（ｍ，１８Ｈ），１．１９（ｓ，１１Ｈ）。

調製例７
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート
方法Ａ

スキーム１、工程Ｈ、副工程１および２（フッ素化および還元）：テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−ホルミル−テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（９．０ｇ、２４．５６）の溶液をピロリジン（２．２０ｍＬ、２６．４ｍｍｏｌ）で処理する。得られた溶液を周囲温度にて７分間撹拌し、１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボレート）（１０．０ｇ、２８．２ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を周囲温度にて１６０分間撹拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチし、酢酸エチルおよびジクロロメタンで連続して抽出する。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１．００ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）を溶液に１回で加える。得られた反応物を周囲温度にて３７分間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチし、ジクロロメタンおよび酢酸エチルで連続して抽出する。有機層を合わせ、乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣を、メタノール／ジクロロメタン（０：１０）からメタノール／ジクロロメタン（１：１０）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（２．７０ｇ、２８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８７（Ｍ−９９）。

方法Ｂ 調製７
Ｄ−（＋）−プロリン（６９１ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）を、２，２，２−トリフルオロ−エタノール（１６ｍＬ、炭酸カリウムおよび３Å分子篩で処理し、使用前に濾過した）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−ホルミル−テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（２．００ｇ、５．４６ｍｍｏｌ）の溶液に１回で加える。３Å分子篩（５００ｍｇ）を加え、反応混合物を室温にて４時間撹拌する。反応混合物に、１−（クロロメチル）−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボレート）（２．５１ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）を一度に加え、混合物を室温にて３６時間撹拌する。溶媒を真空下で濃縮し、残渣を水（２５ｍＬ）と酢酸エチル（２５ｍＬ）との間に分ける。炭酸水素ナトリウム（７％水溶液）を加えてｐＨ＝８に調整し、有機層を分離する。水層を酢酸エチル（２×１５ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をエタノール（２５ｍＬ）に溶解し、テトラヒドロホウ酸ナトリウム（２８９ｍｇ、７．６４ｍｍｏｌ）を加える。室温にて２時間撹拌した後、溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を水（３０ｍＬ）と酢酸エチル（３０ｍＬ）との間に分ける。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を減圧下で蒸発させる。残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）から酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の泡状物として標題化合物（１．５０ｇ、７０．０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７（Ｍ−９９）．^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．９９−７．８９（ｍ，１Ｈ），７．８１−７．７４（ｍ，１Ｈ），７．４９−７．４６（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｓ，２Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝９．０，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７９−５．７４（ｍ，１Ｈ），４．３９−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．２７（ｍ，２Ｈ），２．１４（ｓ，４Ｈ），１．７１（ｓ，３Ｈ）。

方法Ｃ 調製例７
Ｄ−（＋）−プロリン（３６ｇ、３１３．１ｍｍｏｌ）を、メタノール（９５６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−ホルミル−テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（９５．６ｇ、２６０．９ｍｍｏｌ）の溶液に１回で加え、反応混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物に、１−（クロロメチル）−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボレート）（１２０．１ｇ、３３９．２ｍｍｏｌ）を１回で加え、混合物を室温にて２４時間撹拌する。溶媒を真空下で濃縮し、残渣を炭酸水素ナトリウム（７％水溶液）（８００ｍＬ）と酢酸エチル（６００ｍＬ）との間に分ける。水層を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をエタノール（９５６ｍＬ）に溶解し、テトラヒドロホウ酸ナトリウム（１３．８０ｇ、３６５．２ｍｍｏｌ）を加える。室温にて２時間撹拌した後、溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を水（５００ｍＬ）と酢酸エチル（５００ｍＬ）との間に分ける。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固する。残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）から酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（５５ｇ、５４％）を白色の泡状物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７（Ｍ−９９）．^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．９９−７．８９（ｍ，１Ｈ），７．８１−７．７４（ｍ，１Ｈ），７．４９−７．４６（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｓ，２Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝９．０，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７９−５．７４（ｍ，１Ｈ），４．３９−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．２７（ｍ，２Ｈ），２．１４（ｓ，４Ｈ），１．７１（ｓ，３Ｈ）。

調製例８
Ｎ−［［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバモチオイル］ベンズアミド

スキーム２、工程Ｉ、（脱保護およびチオ尿素形成）：ジクロロメタン（４０ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（８．００ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（２．７０ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）の溶液を周囲温度にて１５０分間撹拌する。反応物を減圧下で濃縮し、トルエンと共沸する。残渣をテトラヒドロフランに溶解し、トリエチルアミン（１．１０ｍＬ、７．８９ｍｍｏｌ）およびベンゾイルイソチオシアネート（１．００ｍＬ、７．４１ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を周囲温度にて１６．５時間撹拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチし、酢酸エチルおよびジクロロメタンで連続して抽出する。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣を、メタノール／ジクロロメタン（０：１０）からメタノール／ジクロロメタン（１：１０）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（２．６０ｇ、８３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４５０（Ｍ＋１）。

調製例９
Ｎ−［３−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩
方法Ａ

スキーム３、工程Ｌおよび工程Ｎ、副工程１（脱保護）：エタノール（８．６１ｍＬ、１４８ｍｍｏｌ）を、０℃にて酢酸エチル（１２７ｍＬ）中の塩化アセチル（９．３６ｍＬ、１３１ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。０℃にて３０分間撹拌した後、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（１２．７ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）を加え、次いで反応混合物を室温に徐々に加温し、さらに１８時間撹拌する。白色固体を濾過により回収し、一定重量まで減圧下で乾燥させて標題化合物（１１．０ｇ、９９．０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７（Ｍ−３５）．^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ，ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ１０．３１（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｓ，２Ｈ），７．８５−７．８３（ｍ，１Ｈ），７．７５−７．７１（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．２２（ｍ，１Ｈ），５．１５−５．０７（ｍ，３Ｈ），４．４８−４．３３（ｍ，３Ｈ），４．１２−３．９７（ｍ，３Ｈ），２．５０（ｓ，４Ｈ），２．０５（ｓ，４Ｈ），１．９８（ｓ，１Ｈ），１．５９（ｓ，１Ｈ）。

方法Ｂ 調製例９
塩酸（１，４−ジオキサン中４Ｍ、１．９５ｍＬ、７．８０ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（１．００ｇ、２．５９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を室温にて一晩撹拌する。混合物を濾過し、白色沈殿物を酢酸エチル（１０ｍｌ）で洗浄して標題化合物（８００ｍｇ、９６．０％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７（Ｍ＋１）。

方法Ｃ 調製例９
イソプロピルアルコール６Ｍ（１００ｍｌ、６００ｍｍｏｌ）中の塩化水素を、イソプロピルアルコール（２２５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバメート（５６ｇ、１４４．９ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。２２℃にて１６時間撹拌した後、反応物をヘキサン（３５０ｍＬ）で希釈し、さらに３０分撹拌する。白色固体を濾過により回収し、一定重量まで減圧下で乾燥させて標題化合物（３６．５ｇ、７８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７（Ｍ−３５）．^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ，ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ１０．３１（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｓ，２Ｈ），７．８５−７．８３（ｍ，１Ｈ），７．７５−７．７１（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．２２（ｍ，１Ｈ），５．１５−５．０７（ｍ，３Ｈ），４．４８−４．３３（ｍ，３Ｈ），４．１２−３．９７（ｍ，３Ｈ），２．５０（ｓ，４Ｈ），２．０５（ｓ，４Ｈ），１．９８（ｓ，１Ｈ），１．５９（ｓ，１Ｈ）。

調製例１０
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
方法Ａ

スキーム２、工程Ｊ（環化）：ジクロロメタン（５０ｍＬ）中のＮ−［［（３Ｓ，４Ｓ）−３−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］カルバモチオイル］ベンズアミド（２．６０ｇ、５．７８ｍｍｏｌ）および１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（１．１０ｍＬ、８．３１ｍｍｏｌ）の溶液を周囲温度にて１９０分間撹拌する。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出する。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（０：１）から酢酸エチル／ヘキサン（１：０）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（１．３６ｇ、５４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４３２．０（Ｍ＋１）。

方法Ｂ 調製例１０
ＴＨＦ（２９０ｍＬ）中のＮ−［３−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩（１４．５ｇ、４０．４４ｍｍｏｌ）の溶液をトリエチルアミン（５．６４ｍＬ、４０．４４ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を１５分間撹拌し、次いで５℃に冷やす。ベンゾイルイソチオシアネート（６ｍＬ、４４．４８ｍｍｏｌ）を加え、３時間にわたって反応物を室温に加温する。１，１’−カルボニルジイミダゾール（７．２１ｇ、４４．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１６時間撹拌し、次いで７２時間還流する。反応混合物を２２℃に冷やし、次いで水（１５０ｍＬ）およびＭＴＢＥ（２００ｍＬ）に注ぐ。有機層を分離し、水層をＭＴＢＥ（２×１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、残渣まで蒸発する。残渣を、塩化メチレン／酢酸エチル（１／１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、白色の泡状固体（１０．５ｇ、６０％）として標題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：３２８．０（Ｍ＋１）。

調製例１１
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−イル］ベンズアミド
方法Ａ

スキーム３、工程Ｌ、副工程２ａおよびｂ（中和、チオ尿素形成および環化）：トリエチルアミン（１．９０ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）を、窒素下で５℃にてアセトニトリル（４０ｍＬ）中のＮ−［３−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩（４．００ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。３０分間撹拌した後、ベンゾイルイソチオシアネート（１．７６ｍＬ、１３．０ｍｍｏｌ）を滴下して加える。得られた混合物を５℃にて１時間撹拌する。トリメチルシリルクロリド（１．７３ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＳＯ（９６８μＬ、１３．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５℃にて２時間撹拌する。反応混合物をリン酸水素二カリウム（２０％、１５０ｍＬ）水溶液に注いでｐＨ７〜８に到達させ、３０分間撹拌する。酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、混合物を珪藻土で濾過する。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を減圧下で蒸発させ、残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（６０％）から酢酸エチル／ヘキサン（９０％）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３．５０ｇ、６８．０％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１６（Ｍ＋１）。

方法Ｂ 調製例１１
スキーム３、工程Ｌ、副工程２ａおよびｂ（中和、Ｎ−カルバモイルベンズアミド形成および環化）：Ｎ−［３−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩（１２ｇ、３７．１９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．７ｍＬ、４１ｍｍｏｌ）およびフェニルＮ−ベンゾイルカルバメート（９．９ｇ、４１ｍｍｏｌ）の混合物をＴＨＦ（２４０ｍＬ）に溶解し、混合物を７０℃にて２時間加熱する。混合物を室温に冷やし、酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、水（２５０ｍＬ）、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して中間体のチオ尿素を得る。（ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：４３４（Ｍ＋Ｈ）。粗物質をジクロロメタン（２４０ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却する。三フッ化ジエチルアミノ硫黄（５．９ｍＬ、４５ｍｍｏｌ）を加え、ドライアイス冷却浴を取り除き、混合物を室温に加温し、１時間撹拌する。混合物をジクロロメタン（５００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄する。混合物を珪藻土で濾過し、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固する。残渣を、ジクロロメタンおよびメタノール（９９：１）から（９５：５）の勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。精製を混合画分で繰り返して標題化合物（１３．５ｇ、８７％）を得る。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５．８（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１２
（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン

方法Ａ
スキーム２、工程Ｋ、副工程１（脱保護）：エタノール（３０ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２．３６ｇ、３．１５ｍｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．５０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．５０ｍＬ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃で１６時間加熱する。次いで濃塩酸（６．００ｍＬ、７９．２ｍｍｏｌ）を加え、加熱をさらに２４時間継続する。反応物を周囲温度に冷やし、減圧下で濃縮する。残渣を、メタノール／ジクロロメタン（０／１０）中の７Ｍアンモニアからメタノール／ジクロロメタン（１／１０）中の７Ｍアンモニアで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（８００ｍｇ、８９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８６．０（Ｍ＋１）。

方法Ｂ
スキーム２、工程Ｋ、副工程１（脱保護）：エタノール（２５ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１．２０ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．５０ｇ、２３．５ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．００ｍＬ、２４．７ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃で１８時間加熱する。次いで反応物を、溶出液としてメタノール、続いてメタノール中の７Ｍアンモニアを使用したＳＣＸカラムによって直接精製して残渣を得る。残渣をエタノール（１５ｍＬ）および塩酸（３．００ｍＬ、３９．６ｍｍｏｌ）に溶解し、５０℃にて２３時間加熱する。反応物を周囲温度に冷やし、減圧下で濃縮する。残渣を、メタノール、続いてメタノール中の７ＭアンモニアにおいてＳＣＸカラムにより精製して標題化合物（６４０ｍｇ、９０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８６．０（Ｍ＋１）。

方法Ｃ 調製例１２
メタノール（２５ｍＬ）中のＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２．１５ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）、水酸化リチウム（１７９ｍｇ、７．４７ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃で１６時間加熱する。次いで反応混合物を室温に冷やし、溶媒を蒸発させる。残渣を酢酸エチル（１５ｍＬ）および水（２０ｍＬ）で希釈し、２Ｍクエン酸水溶液を加えてｐＨを１に調整する。水層を分離し、ｐＨ＝１０になるまでＮａＯＨ５０％ｗ／ｗ水溶液で中和する。反応混合物を酢酸エチル（２×１５ｍＬ）で洗浄し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を蒸発させて標題化合物（８５０ｍｇ、８９％）を得る。粗物質をさらに精製せずに使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８６．０（Ｍ＋１）。

調製例１３
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド
方法Ａ

スキーム３、工程Ｍ、副工程１（脱保護）：Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−イル］ベンズアミド（３．５０ｇ、８．４３ｍｍｏｌ）を、メタノール（３５ｍＬ）中の水酸化リチウム（２２５ｍｇ、９．２７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を４０℃にて１８時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間に分ける。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせる。有機溶液を塩酸水溶液（０．１Ｍ、５０ｍＬ）で洗浄する。次いで水層をｐＨ＝１０になるまで水酸化ナトリウム水溶液（２．０Ｍ）で処理し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で２回抽出する。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を減圧下で蒸発させて標題化合物（１．９ｇ、７２％）を白色の泡状物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１２（Ｍ＋１）。

方法Ｂ 調製例１３
スキーム３、工程Ｎ、副工程２ａおよび２ｂ（中和および環化）：ＴＨＦ（８０ｍＬ）中のＮ−［３−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩（８ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、［ベンゾイル（フェノキシカルボニル）アミノ］カリウム（７．６２、２７．３ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を還流で３時間加熱する。反応物を冷やし、溶媒を蒸発させる。残渣を水（５０ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）との間に分け、水層を捨てる。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を蒸発させ、残渣を一定重量まで真空下で乾燥させる。粗物質を塩化メチレン（１２０ｍＬ）に溶解し、次いで窒素雰囲気下で−３５℃に冷却する。内部温度を−３５℃に維持しながら三フッ化ジエチルアミノ硫黄（３．９４ｍＬ、２９．７５ｍｍｏｌ）を加える。混合物をこの温度で１時間撹拌し、次いで２時間、２２℃に加温する。反応物をリン酸水素二カリウム水溶液（２００ｍＬ）および塩化メチレン（５０ｍＬ）に注ぐ。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を蒸発させ、真空下で一定重量まで乾燥させる。この粗物質をメタノール（８０ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム（７８３ｍｇ、３２．２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１６時間の間、５０℃で加熱する。メタノールを蒸発させ、残渣を水（５０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）に注ぐ。有機層を分離し、水層をさらなる酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を合わせ、塩酸０．５Ｍ（２×３０ｍＬ）で洗浄する。水層を合わせ、水酸化ナトリウムを加えてｐＨ＝１０に調整し、水性混合物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を蒸発乾固し、残渣を一定重量まで真空下で乾燥させて標題化合物（５．５ｇ、７１％の全収率、３工程）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１２（Ｍ＋１）。

調製例１４
（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン
方法Ａ

スキーム３、工程Ｍ、副工程１（脱保護）：Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド（８００ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）を塩化水素水溶液（１．０Ｍ、１０ｍｌ）に加え、得られた溶液を９０℃で３時間加熱する。反応物を２２℃に冷やし、酢酸エチル（５ｍＬ）で洗浄する。水層を分離し、ｐＨ＝１０になるまで水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｍ）で処理し、酢酸エチル（２×５ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を減圧下で蒸発させて標題化合物（６５０ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７０（Ｍ＋１）。

方法Ｂ 調製例１４
スキーム３、工程Ｎ、副工程２ａおよびｂ（中和および環化）：トリエチルアミン（０．３２ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＮ−［３−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−フルオロ−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド塩酸塩（６００ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて１０分間撹拌し、濃縮する。酢酸エチル（１０ｍＬ）を残渣に加え、混合物を４０℃で１０分間加熱する。混合物を濾過し、濾液を濃縮し、４０ｍＬのねじ式の容器に加える。無水エタノール（１２ｍＬ）および臭化シアン（３０５ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１２０℃で４時間加熱する。溶媒を蒸発乾固する。水（２０ｍＬ）および塩酸水溶液（１．０Ｍ、２０ｍＬ）を加える。得られた混合物を酢酸エチル（４０ｍＬ）で洗浄する。水層を濃塩酸水溶液（３．２ｍＬ）で処理し、５０℃にて４８時間撹拌する。混合物を室温に冷やし、水酸化ナトリウム水溶液（２．０Ｍ）を使用してｐＨを塩基性に調整する。次いで混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出する。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣を、メタノール／ジクロロメタン（９８：２）中の７Ｍアンモニウムからメタノール／ジクロロメタン（９０：１０）中の７Ｍアンモニアの勾配で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１７５ｍｇ、３５％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７０（Ｍ＋１）。

方法Ｃ 調製例１４
Ｎ−［３−（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド（１７ｇ、５４．６ｍｍｏｌ）を塩化水素水溶液（１．０Ｍ、２１８ｍｌ）に加え、得られた溶液を９０℃で３時間加熱する。反応物を５℃に冷やし、水酸化ナトリウム水溶液５０％ｗ／ｗを加えてｐＨ＝１０に調整する。混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。濾液を減圧下で蒸発させて標題化合物を白色固体（１３．４ｇ、９１％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７０（Ｍ＋１）。

調製例１５
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド
方法Ａ

スキーム３、工程Ｍ、副工程２または工程Ｎ、副工程３（アミド化）：ジメチルホルムアミド（２０μＬ、０．２６ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（１６２μＬ、１．８７ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１０ｍＬ）中の５−シアノピリジン−２−カルボン酸（３１０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）のスラリーに加え、室温にて約１０分間撹拌する。次いでこの混合物を、エタノール（５ｍＬ）および水（５ｍＬ）中の（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン（５００ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）の溶液に５０℃で一度に加え、温度を５０℃に維持する。反応混合物を約１０分間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチする。次いで混合物を酢酸エチルで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得、それを、ジクロロメタン中の０〜１０％ＭｅＯＨの勾配で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、さらにメタノール／ジクロロメタン（５／９５）中の７Ｍアンモニアの勾配を使用して２回精製して標題化合物（４７０ｍｇ、６３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４００（Ｍ＋１）。

方法Ｂ 調製例１５
水（８１ｍＬ）およびエタノール（１１６ｍＬ）の混合物中の（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン（１１．６ｇ、４１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ塩化水素水溶液（４１．７ｍＬ、４１．７ｍｍｏｌ）を加える。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（８．４１ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）および５−シアノピリジン−２−カルボン酸（６．５ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）を一度に加え、反応物を室温にて３時間撹拌する。さらに１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０ｍｇ、５２．１６μｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌する。反応混合物を５０℃で加熱し、全ての固体を溶解する。１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（４５．９７ｍＬ、４５．９７ｍｍｏｌ）を、５０℃に温度を維持し、ｐＨを１１に調整しながら、滴下して加える。反応物を室温に冷やし、白色固体を濾過により回収し、水で洗浄する。固体を一定重量まで真空下で乾燥させ、次いで塩化メチレン／メタノール（９５：５）の混合物で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（７．５ｇ、４５％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４００（Ｍ＋１）。

調製例１６
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−クロロ−ピラジン−２−カルボキサミド

スキーム３、工程Ｍ、副工程２または工程Ｎ、副工程３（アミド化）：アセトニトリル（１５ｍＬ、２８３ｍｍｏｌ）中の５−クロロピラジン−２−カルボン酸（１．５３ｇ、９．６６ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（１１５μＬ、１．４９ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（９７０μＬ、１１．１ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を周囲温度にて窒素下で２０分間撹拌する。別のフラスコに、（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン（２．００ｇ、７．４３ｍｍｏｌ）、エタノール（７．４ｍＬ）、水（７．４ｍＬ）を加え、混合物を５０℃で加熱する。酸塩化物を上記で調製した溶液に加え、反応混合物を５０℃で２０分間撹拌する。反応物を室温に冷やし、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水（４０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ_３（４０ｍＬ）水溶液で洗浄する。水性洗浄物を合わせ、酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、溶媒を真空中で除去して粗生成物を得る。粗生成物を、酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題生成物（２．８５ｇ、９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４１０（Ｍ＋１）。

調製例１７
５−（シクロプロピルメトキシ）ピラジン−２−カルボン酸

ジメチルホルムアミド（２０．０ｍＬ）中の５−クロロピラジン−２−カルボン酸（１．００ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）、シクロプロピルカルビノール（１．００ｍＬ、１２．４ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．００ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃で３時間加熱する。反応物を室温に冷やし、１Ｍ塩酸でクエンチする。混合物を酢酸エチルおよびイソプロピルアルコール／クロロホルム（１／１０）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（１．１０ｇ、９０％）を灰色がかった固体として得る。この酸をさらに精製せずに直接使用する。

調製例１８
メチル５−（シクロプロポキシ）ピラジン−２−カルボキシレート

シクロプロパノール（５４２μＬ、８．６９ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（１１．６ｍＬ）中のメチル５−クロロピラジン−２−カルボキシレート（１．０ｇ、５．７９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．６０ｇ、１１．５９ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。反応混合物を室温にて１５時間、次いで５０℃にて２４時間撹拌する。反応物を周囲温度に冷やし、水で希釈し、酢酸エチルで抽出する（３回）。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して茶色の油を得る。粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン（０：１００）から酢酸エチル／ヘキサン（３５：６５）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（６１０ｍｇ、５４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９５．０（Ｍ＋１）。

調製例１９
５−（シクロプロポキシ）ピラジン−２−カルボン酸

水酸化リチウム（２６４ｍｇ、６．２８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中のメチル５−（シクロプロポキシ）ピラジン−２−カルボキシレート（６１０ｍｇ、３．１４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応混合物を５０℃で１時間撹拌し、周囲温度に冷やし、水で希釈し、１Ｍ ＨＣｌをゆっくり加えることによってｐＨ＝２にし、ジクロロメタンで抽出する（４回）。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（５５０ｍｇ、９７％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：１８１．０（Ｍ＋１）。

調製例２０
５−（オキセタン−２−イルメトキシ）ピラジン−２−カルボン酸

電子レンジバイアルに、５−クロロピラジン−２−カルボン酸（１００．０ｍｇ、０．６３１ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）、オキセタン−２−イルメタノール（８３．４ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１７６．９ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を加える。少しの発熱が観察される。室温にて１分後、バイアルを密封し、混合物を電子レンジにおいて１２０℃で３０分間加熱する。次いで反応混合物をＮＨ_４Ｃｌ水溶液でクエンチし、減圧下で溶媒を蒸発させる。得られた残渣を２−プロパノール中で粉砕する。濾液を減圧下で濃縮して標題化合物をクリーム色の固体（０．２９４ｇ、９９％）として得、さらに精製せずに使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２１１．０（Ｍ＋１）、２０８．８（Ｍ−Ｈ）。

調製例２１
５−（２，２−ジフルオロエトキシ）ピラジン−２−カルボン酸

カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４．２５ｇ、３７．８４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の５−クロロピラジン−２−カルボン酸（１．００ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）およびジフルオロエタノール（２．５９ｇ、３１．５４ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を１００℃にて２時間加熱する。反応物を室温に冷やし、窒素下で一晩撹拌する。反応物を１Ｍ ＨＣｌ（３０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチルで抽出する（３回）。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得る。粗生成物を、ジクロロメタン中の０．５％から１０％メタノールの勾配で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、キシレンと共沸して残留ＤＭＦを除去して標題生成物（１．１８ｇ、９１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２０５．０（Ｍ＋１）。

表１における以下の化合物は、適切なアルコールを使用して調製例２１に記載される方法と本質的に同様の方法で調製する。

調製例２８
メチル５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン−２−カルボキシレート

メチル５−ヒドロキシピリジン−２−カルボキシレート（０．９０３ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）をアセトン（７ｍＬ）およびＤＭＦ（７ｍＬ）中に懸濁する。３２５メッシュの炭酸カリウム（２．４４ｇ、１７．６９ｍｍｏｌ）を一度に加え、窒素下で室温にて１．５時間撹拌する。２，２，３，３−テトラフルオロプロピルトリフルオロメタンスルホネート（２．０２ｇ、７．６７ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物を２時間撹拌する。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮＨ_４Ｃｌで希釈し、酢酸エチルで抽出する（３回）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去する。粗生成物を、ジクロロメタン中の０〜２０％酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（１．０４７ｇ、６６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２６８．０（Ｍ＋１）。

調製例２９
５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン−２−カルボン酸

水酸化リチウム（４６９ｍｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（７ｍＬ）および水（７ｍＬ）中のメチル５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン−２−カルボキシレート（１．０４７ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応混合物を６０℃にて１時間撹拌し、周囲温度に冷やし、１Ｍ ＨＣｌ（２０ｍＬ）でクエンチし、ブラインで希釈し、ジクロロメタンで抽出する（３回）。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（９２１ｍｇ、９３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２５４．０（Ｍ＋１）。

調製例３０
エチル５−（２，２−ジフルオロエトキシ）−３−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシレート

エチル３，５−ジフルオロピリジン−２−カルボキシレート（０．９８ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解する。ジフルオロエタノール（４３０μＬ、６．８１ｍｍｏｌ）を加え、続いて炭酸カリウム（１．８３ｇ、１３．０９ｍｍｏｌ）を加える。溶液を室温にて２日間撹拌し、次いで濾過し、濾液を濃縮する。粗物質を、０〜２５〜５０％酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（２４２ｍｇ、１８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２５０．０（Ｍ＋１）。

調製例３１
５−（２，２−ジフルオロエトキシ）−３−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸

水酸化ナトリウム（水中２Ｍ、２．４３ｍＬ、４．８６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のエチル５−（２，２−ジフルオロエトキシ）−３−フルオロ−ピリジン−２−カルボキシレート（２４２ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応物を室温にて５日間撹拌する。ジオキサン（１．２５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌを加えることによって反応物をクエンチし、溶液を濃縮して粗標題化合物（４９３ｍｇ、２２９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２２２．０（Ｍ＋１）。

調製例３２
２−クロロ−３−フルオロ−５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン

６−クロロ−５−フルオロ−ピリジン−３−オール（３００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解する。炭酸カリウム（５６２ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ）、続いて２，２，３，３−テトラフルオロプロピルトリフルオロメタンスルホネート（５９１ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を加える（この試薬の調製については、ＵＳ２０１３／１４３９００、実施例１を参照のこと）。反応物を室温にて１８時間撹拌し、次いで室温にて４日間静置させる。反応物をＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルで希釈する。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出する（２×）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、濃縮する。粗物質を、０〜１０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（４４０ｍｇ、８３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２６２．０（Ｍ＋１）。

調製例３３
メチル３−フルオロ−５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン−２−カルボキシレート

２−クロロ−３−フルオロ−５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン（４４０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．０４ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（０．１２ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を含有するＰａｒｒオートクレーブに加える。アセトニトリル（９ｍＬ）、続いてメタノール（６ｍＬ）を加える。トリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ）を加え、オートクレーブを密閉し、Ｎ_２でパージし、ＣＯでパージし、次いで１００ｐｓｉＣＯで加圧し、１００℃にて１８時間加熱する。溶液を濃縮して粗生成物を得、それを、０〜２５％酢酸エチル／ヘキサン勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（４３０ｍｇ、９０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２８６．０（Ｍ＋１）。

調製例３４
３−フルオロ−５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン−２−カルボン酸

水酸化ナトリウム（水中２Ｍ、２ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のメチル３−フルオロ−５−（２，２，３，３−テトラフルオロプロポキシ）ピリジン−２−カルボキシレート（４３０ｍｇ、０．１．５１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応物を室温にて１８時間撹拌する。ジオキサン（１．２５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌを加えることによって反応物をクエンチし、溶液を濃縮して粗標題化合物（４７６ｍｇ、９９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２２２．０（Ｍ＋１）。

調製例３５
（１−フルオロシクロプロピル）メタノール

ＴＨＦ（８ｍＬ）中の１−フルオロ−シクロプロパンカルボン酸（０．７８ｇ、７．４９ｍｍｏｌ）の０℃の溶液を、１０分にわたって１Ｍボラン−テトラヒドロフラン錯体（８．９９ｍＬ、８．９９ｍｍｏｌ）を滴下することにより処理する。反応物を室温に加温し、窒素下で１８時間撹拌する。さらに１Ｍボラン−テトラヒドロフラン錯体（３．７５ｍＬ、３．７５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を２時間撹拌する。反応物を水（発熱が観察される）、続いて１Ｎ ＨＣｌ（２５ｍＬ）でクエンチする。混合物を酢酸エチルで抽出し、分離する。水層を酢酸エチルで抽出し（２回）、有機層を合わせる。合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、溶媒を真空中で除去して標題生成物（０．８４８ｇ、１００％）を得る。

調製例３６
５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピラジン−２−カルボン酸

窒素雰囲気下でＤＭＦ（２５０ｍＬ）中のメチル５−クロロピラジン−２−カルボキシレート（２５ｇ、１４４．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸セシウム（４７．２ｇ、１４４．８ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−エタノール（１５．７ｍＬ、２１７．３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて７２時間撹拌する。混合物を水（１Ｌ）に注ぎ、薄茶色の固体を濾過により回収する。固体を水で洗浄し、一定重量まで真空下で乾燥させる。乾燥粗物質を、水（２００ｍＬ）およびイソプロピルアルコール（４０ｍｌ）の混合物から２回再結晶化して、中間体メチル５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピリジン−２−カルボキシレート（１５ｇ、９３％）を薄いクリーム色の固体として得、それをさらに精製せずに使用する。メタノール（５０ｍＬ）および１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（４２．３ｍＬ、４２．３ｍｍｏｌ）中の中間体メチル５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピリジン−２−カルボキシレート（５ｇ、２１．１７ｍｍｏｌ）の溶液を室温にて２時間撹拌する。塩酸３５％ｗ／ｗを加えてｐＨを２に調整する。メタノールが蒸発し、薄いクリーム色の固体が濾過により単離される。固体を水で洗浄し、真空下で乾燥させて標題化合物（３ｇ、５１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２３．１（Ｍ＋１）。

調製例３７
５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピリジン−２−カルボン酸

ＤＭＦ（１Ｌ）中のメチル５−ヒドロキシピリジン−２−カルボキシレート（１０．１ｇ、６５．９５ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（４２．９ｇ、１３１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、２時間にわたって、２０ｍｌのＤＭＦ中の２，２，２−トリフルオロエチルトリフルオロメタンスルホネート（２２．９６ｇ、９８．９３ｍｍｏｌ）の溶液を加える。反応物を室温にて４時間撹拌し、次いで水（１Ｌ）に注ぎ、さらに１時間撹拌する。茶色の固体を濾過により回収し、さらなる水で洗浄する。固体を一定重量まで乾燥させて、メチル５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピリジン−２−カルボキシレートの中間体化合物（１０．３ｇ、６６％）を得、それをさらに精製せずに使用する。メタノール（４５ｍＬ）中のメチル５−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ピリジン−２−カルボキシレート（４．５ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３８．２ｍｌ、３８．２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて２時間撹拌する。反応混合物のｐＨをＨＣｌ３５％ｗ／ｗを用いてｐＨ＝１に調整し、次いで得られた固体を濾過により単離する。固体を水で洗浄し、次いで真空下で乾燥させて標題化合物（３ｇ、７０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２２．１（Ｍ＋１）。

調製例３８
［ベンゾイル（フェノキシカルボニル）アミノ］カリウム

カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１．５Ｍ溶液（１１３．８ｍＬ、１８２ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下でテトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）中のベンズアミド（２０．３６ｇ、１６８ｍｍｏｌ）ジ−フェニルカルボネート（３０ｇ、１４０ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応物を２０℃にて１６時間撹拌する。淡いピンク色の固体を濾過により回収し、一定重量まで減圧下で乾燥させて標題化合物（２９ｇ、７４％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ，ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ７．８８−７．８５（ｍ，２Ｈ），７．５５−７．４０（ｍ，３Ｈ），７．１５−７．１０（ｍ，２Ｈ），６．７７−６．６７（ｍ，３Ｈ）。

実施例１
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボキサミド塩酸塩

スキーム２、工程Ｋ、副工程２（アミド化）：塩化オキサリル（１８０μＬ、２．０７ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１０ｍＬ）中のジメチルホルムアミド（１８０μＬ、２．３３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた反応物を１０分間撹拌する。５−フルオロピリジン−２−カルボン酸（３００ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を得られた溶液に加える。得られた反応物をさらに４０分間撹拌し、次いでこの溶液の５．０ｍＬをシリンジにより除去し、５０℃にてエタノール（６．０ｍＬ）および水（６．０ｍＬ）中の（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（３３０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。得られた溶液を、ＳＣＸカラム（メタノール、次いでメタノール中の７Ｍアンモニア）により精製する前に５０℃で５０分間加熱して残渣を得、それを、メタノール／ジクロロメタン（０／１０）中の７Ｍアンモニアからメタノール／ジクロロメタン（１／１０）中の７Ｍアンモニアで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより再び精製して残渣を得、それを、（５％メタノールを含む１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）中のアセトニトリルの１５〜４０％勾配で溶出する高性能Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ ＯＢＤ ３０×７５ｍｍ、５μｍ粒径）を使用してＨＰＬＣによりさらに精製する。生成物を含有する溶出液を減圧下で約１００ｍＬに濃縮し、次いで凍結乾燥して白色の残留物を所望の生成物の遊離塩基として得る。この物質を２ｍＬのジクロロメタン／メタノール（１／１）に溶解し、エーテル（３６０μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）中の１Ｍ ＨＣｌで処理する。試料を濃縮して標題化合物（１７７ｍｇ、３８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４０９．０（Ｍ＋１）。

実施例２
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド塩酸塩

スキーム２、工程Ｋ（アミド形成）：塩化オキサリル（１２７μＬ、１．４６ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（６ｍＬ）中の５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（２２５ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド（１１３μＬ、１．４６ｍｍｏｌ）のスラリーに加える。得られた反応物を９０分間撹拌する。この溶液を、５０℃にてエタノール（５．５ｍＬ）および水（５．５ｍＬ）中の（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（３２０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。得られた溶液を５０℃にて５時間加熱する。反応物を、２００ｍＬのＮａＨＣＯ_３（水溶液）を含有する分液漏斗に注ぐ。試料をジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、濃縮する。粗生成物を、メタノール／ジクロロメタン（０／１０）中の７Ｍアンモニアからメタノール／ジクロロメタン（１／１０）中の７Ｍアンモニアで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。この物質を、１５０ｇの高性能Ｃ１８カラムを使用し、（５％ＭｅＯＨを含む１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）中のＡＣＮの５〜６０％勾配で溶出する逆相フラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製する。生成物を含有する溶出液を単離し、４：１のクロロホルム：イソプロパノール溶液（３×５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して所望の化合物の遊離塩基を得る。この物質をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、ジオキサン（９００μＬ、３．６ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌで処理する。試料を濃縮して標題化合物（１６０ｍｇ、３１．２％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４２２．０（Ｍ＋１）。

実施例３
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド塩酸塩

スキーム２、工程Ｋ（アミド形成）：塩化オキサリル（６０．０μＬ、６９２μｍｏｌ）をアセトニトリル（４．０ｍＬ）中のジメチルホルムアミド（６０．０μＬ、７７６μｍｏｌ）の溶液に加え、得られた反応物を１６分間撹拌する。５−シアノピリジン−２−カルボン酸（１０６ｍｇ、７１５μｍｏｌ）を得られた溶液に加える。反応物を３３分間撹拌し、この溶液の２．０ｍＬをシリンジにより除去し、５０℃にてエタノール（２．０ｍＬ）および水（２．０ｍＬ）中の（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（１１０ｍｇ、３４７μｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。得られた溶液を５０℃にて４４分間加熱し、続いてＳＣＸカラム（メタノールからメタノール中の７Ｍアンモニア）により精製して残渣を得、それを、メタノール／ジクロロメタン（０／１０）中の７Ｍアンモニアからメタノール／ジクロロメタン（１／１０）中の７Ｍアンモニアで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより再び精製して、所望の生成物（１２０ｍｇ、８３％）の遊離塩基として残渣を得る。この物質を５ｍＬのジクロロメタン／メタノール（１／１）に溶解し、エーテル（３００μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）中の１Ｍ ＨＣｌで処理する。試料を濃縮して標題化合物（１２８ｍｇ、８１．６％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４１６．１（Ｍ＋１）。

実施例４
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（オキセタン−２−イルメトキシ）ピラジン−２−カルボキサミド

酢酸エチル（８．９０μＬ、１．５０ｍｍｏｌ）中の１−プロパンホスホン酸環状無水物５０ｗｔ％溶液を、（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン（８１．２ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）、５−（オキセタン−２−イルメトキシ）ピラジン−２−カルボン酸（１４０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）および無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）の混合物を含有する電子レンジバイアルに加える。バイアルを密閉し、混合物を室温にて一晩撹拌する。次いで混合物を水とジクロロメタンとの間に分け、層分離カートリッジにより層を分離する。有機物を合わせ、溶媒を減圧下で蒸発させる。得られた油をメタノールに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ １０μｍ ５０^＊１５０ｍｍ Ｃ−１８）（１２０ｍｌ／分にて１０分にわたりＣＨ_３ＣＮおよび１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムを含む水、１０％〜１００％ＣＨ_３ＣＮ）（１回の注入）により精製する。生成物を有する画分を遠心蒸発器において一晩濃縮乾固して、標題化合物を白色固体（４０ｍｇ、２８％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４７８．２（Ｍ＋１）。

表２における以下の化合物は、アミド形成反応のために適切に置換されたカルボン酸を利用して実施例１〜３に記載される方法と本質的に同様の方法で調製する。実施例１〜３および表２に示される例の各々は、遊離塩基として、または実施例３に記載されるように薬学的に許容可能な塩、例えばＨＣｌ塩として調製され得る。

実施例３４
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド塩酸塩
方法Ａ

遊離塩基Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド（４５８ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、調製例１５において調製した）をジクロロメタン（３ｍＬ）およびメタノール（３ｍＬ）に溶解する。塩酸（１，４−ジオキサン中４Ｍ、３８０μＬ、１．５２ｍｍｏｌ）を加える。溶液を蒸発乾固させて標題化合物（３８０ｍｇ、７６％）を淡黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４００（Ｍ＋１）。

方法Ｂ 実施例３４
メタノール（１８２ｍＬ）中のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミド（９．１ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、イソプロピルアルコール（１８．９ｍＬ、２２．７ｍｍｏｌ）中の塩酸１．２Ｍの溶液を加える。混合物を１５分間撹拌する。溶媒を蒸発させて標題化合物を白色結晶固体（９．８ｇ、９９％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４００（Ｍ＋１）。

実施例３５
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−３−フルオロ−ピリジン−２−カルボキサミド塩酸塩

スキーム３、工程Ｍ、副工程２（アミド化）：ジメチルホルムアミド（１０μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（１１９μＬ、１．３８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３．７ｍＬ）に加え、室温にて１０分間撹拌する。５−シアノ−３−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸（２１３ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を加え、混合物をさらに１０分間撹拌する。次いでこの混合物を、エタノール（３．７ｍＬ）および水（３．７ｍＬ）中の（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン（２４７ｍｇ、０．９１７ｍｍｏｌ）の溶液に一度に加え、５５℃で加熱する。反応混合物を１．５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。残渣を酢酸エチルで希釈し、１／２飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄する。水層を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得、それを、メタノール／ジクロロメタン（１／９９）中の７Ｍアンモニアからメタノール／ジクロロメタン（１０／９０）中の７Ｍアンモニアの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３２８ｍｇ、０．７８６ｍｍｏｌ）の遊離塩基を得る。遊離塩基をジクロロメタン（５ｍＬ）およびメタノール（０．２ｍＬ）に溶解し、塩酸（ジエチルエーテル中１Ｍ、８６５μＬ、０．８６５ｍｍｏｌ）で処理し、減圧下で濃縮する。ジエチルエーテル（３ｍＬ）を残渣に加え、濃縮し、これを２回繰り返して標題化合物（３４９ｍｇ、０．７６９ｍｍｏｌ、８３．８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１８．０（Ｍ＋１）。

表３における以下の化合物は、アミド形成反応において適切に置換されたカルボン酸を利用して実施例３５に記載される方法と本質的に同様の方法で調製する。加えて、ＨＣｌ塩は実施例３５に記載される方法と同様の方法で対応する遊離塩基から調製する。

実施例５７
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−［（１−フルオロシクロプロピル）メトキシ］ピラジン−２−カルボキサミド塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−クロロ−ピラジン−２−カルボキサミド（１１０ｍｇ、２６８μｍｏｌ）、（１−フルオロシクロプロピル）メタノール（７３ｍｇ、８０５μｍｏｌ）および炭酸カリウム（１１１ｍｇ、８０５．３１μｍｏｌ）を電子レンジバイアル中で合わせる。アセトニトリル（３ｍＬ）を加え、反応混合物を電子レンジ反応器内で１５０℃にて１．５時間加熱する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および水で洗浄する。合わせた水層を酢酸エチルで２回抽出し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を真空中で除去して粗生成物を得る。粗生成物を、ジクロロメタン中の０〜３％（７Ｎ ＮＨ_３−メタノール）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題生成物（３７ｍｇ、３０％）の遊離塩基を得る。遊離塩基をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、塩酸（ジエチルエーテル中１Ｍ、８０μＬ、８０μｍｏｌ）で処理し、減圧下で濃縮して標題生成物（３９ｍｇ、２９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６４（Ｍ＋１）。

表４における以下の化合物は、２−フルオロプロパ−２−エン−１−オールを利用して実施例５７に記載される方法と本質的に同様の方法で調製する。加えて、ＨＣｌ塩は実施例３５に記載される方法と同様の方法で対応する遊離塩基から調製する。

インビトロアッセイ手順：
インビトロ酵素および細胞アッセイに関して、試験化合物をＤＭＳＯ中に調製して１０ｍＭのストック溶液を作製する。ストック溶液をＤＭＳＯ中で連続希釈して、インビトロ酵素および全細胞アッセイを実施する前に９６ウェル丸底プレート中で１０μＭ〜０．０５ｎＭの範囲の最終化合物濃度で１０点希釈曲線を得る。

インビトロプロテアーゼ阻害アッセイ：
ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃの発現および精製
ヒトＢＡＣＥ１（アクセッション番号：ＡＦ１９０７２５）を、ＲＴ−ＰＣＲによって全脳ｃＤＮＡからクローニングする。アミノ酸配列＃１〜４６０に対応するヌクレオチド配列を、ヒトＩｇＧ_１（Ｆｃ）ポリペプチドをコードするｃＤＮＡに挿入する（Ｖａｓｓａｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８６、７３５−７４２（１９９９））。ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃと命名される、ＢＡＣＥ（１〜４６０）およびヒトＦｃのこの融合タンパク質をｐＪＢ０２ベクター内に構築する。ヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ）をＨＥＫ２９３細胞において一過的に発現する。各構築物の２５０μｇのｃＤＮＡをＦｕｇｅｎｅ６と混合し、１リットルのＨＥＫ２９３細胞に加える。トランスフェクションの４日後、馴化培地を精製のために収集する。ｈｕＢＡＣＥ１：ＦｃをプロテインＡクロマトグラフィーによって精製する。酵素を少しのアリコートにおいて−８０℃に保存する（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照のこと）。

ＢＡＣＥ１ ＦＲＥＴアッセイ
試験化合物の連続希釈を上記のように調製する。化合物をＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中でさらに２０倍に希釈する。１０μＬの各希釈物を、反応混合物（２５μＬの５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４、ｐＨ４．６、１ｍＭのＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン、および１５μＭのＦＲＥＴ基質）を含有する、列Ａ〜Ｈの対応する低いタンパク質結合ブラックプレートで各ウェルに加える（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照のこと）。内容物を、プレートシェーカーで１０分間、十分に混合する。ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中の１５μＬの２００ｐＭのヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（Ｖａｓｓｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８６、７３５−７４１（１９９９）を参照のこと）を基質および試験化合物を含有するプレートに加えて反応を開始する。０時における混合物のＲＦＵを、プレートシェーカーで簡単に混合した後、励起波長３５５ｎｍおよび放射波長４６０ｎｍにて記録する。反応プレートをアルミニウム箔で覆い、１６〜２４時間、室温にて暗い加湿オーブン内に維持する。インキュベーションの終わりにＲＦＵを、０時において使用した同じ励起および放射設定で記録する。０時およびインキュベーションの終了時におけるＲＦＵの相違は、化合物処理下でのＢＡＣＥ１の活性を表す。ＲＦＵの相違を阻害剤濃度に対してプロットし、曲線を４パラメータロジスティック式に適合してＩＣ_５０値を得る（Ｍａｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、３１、１６５０７−１６５１６（２０１１）を参照のこと）。

本明細書における実施例１〜５８の化合物を本質的に上記のように試験すると、ＢＡＣＥ１について約１μＭ未満のＩＣ_５０値を示し、実施例１、２、３、３４および５７の化合物は表５に示すように以下の活性を示す。

このデータにより、実施形態１〜５８の化合物が、精製された組換えＢＡＣＥ１酵素活性をインビトロで阻害することが実証される。

ＰＤＡＰＰ初代神経細胞アッセイ
確認の全細胞アッセイもまた、ＰＤＡＰＰトランスジェニック胚マウスから生成された初代神経培養物中で実施する（Ｍａｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、３１、１６５０７−１６５１６（２０１１））。初代皮質ニューロンを胎生１６日目のＰＤＡＰＰ胚から調製し、９６ウェルプレート（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）プラス１０％ＦＢＳ中の１５×１０^４個の細胞／ウェル）中で培養する。インビトロで２日後、培養培地を、Ｂ２７補足物および２μＭ（最終）のＡｒａ−Ｃ（Ｓｉｇｍａ、Ｃ１７６８）を含有する無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）と置き換える。インビトロで５日目に、神経を、所望の濃度にて阻害剤（ＤＭＳＯ中に希釈した）の存在／非存在下で、３７℃にて２４時間、インキュベートする。インキュベーションの終わりに、例えば、特定のサンドイッチＥＬＩＳＡによるＡベータペプチド１〜４０および１〜４２を分析することによってベータ−セクレターゼ活性の証拠について馴化培地を分析する。Ａベータのこれらの特定のアイソフォームを測定するために、モノクローナル２１Ｆ１２をＡベータ１〜４２についての捕捉抗体として使用する。Ａベータ１〜４０およびＡベータ１〜４２ＥＬＩＳＡの両方は報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する（抗体の詳細については、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４、１５５０−１５５５（１９９７）を参照のこと）。化合物処理後に馴化培地に放出されるＡベータの濃度は、このような条件下でＢＡＣＥ１の活性に対応する。１０点阻害曲線をプロットし、Ａベータ低下効果についてＩＣ_５０値を得るために４パラメータロジスティック式に適合する。以下の例示した化合物を本質的に上記のように試験すると、Ａベータ低下効果について以下の活性を示した：

このデータにより、表６の化合物が、全細胞においてＡベータ産生を阻害することが実証される。

ベータ−セクレターゼのインビボでの阻害
マウス、モルモット、イヌ、およびサルを含む、いくつかの動物モデルを、化合物処理後のインビボでのベータ−セクレターゼ活性の阻害についてスクリーニングするために使用できる。本発明に使用した動物は、野生型、トランスジェニック、または遺伝子ノックアウト動物であってもよい。例えば、Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３、５２３−５２７（１９９５）に記載されるように準備したＰＤＡＰＰマウスモデル、および他の非トランスジェニックまたは遺伝子ノックアウト動物は、阻害化合物の存在下で、ＡベータおよびｓＡＰＰベータ産生のインビボでの阻害を分析するのに有用である。一般に、２ヶ月齢のＰＤＡＰＰマウス、遺伝子ノックアウトマウスまたは非トランスジェニックマウスに、コーンオイル、ベータ−シクロデキストラン、リン酸緩衝剤、ＰＨＡＲＭＡＳＯＬＶＥ（登録商標）などのビヒクル、または他の適切なビヒクル中で製剤化した化合物を、経口、皮下、静脈内、供給または他の投与経路により投与する。化合物の投与の１〜２４時間後、動物を屠殺し、脳をＡベータ１〜ｘの分析のために除去する。本明細書で使用される場合、「Ａベータ１〜ｘ」とは、残基１で開始し、残基２８より多いＣ末端で終了するＡベータ種の合計を指す。これはＡベータ種の大部分を検出し、しばしば「全Ａベータ」と呼ばれる。全Ａベータペプチド（Ａベータ１〜ｘ）レベルは、捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用してサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する（Ｍａｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、３１、１６５０７−１６５１６（２０１１）を参照のこと）。

急性試験に関して、適切なビヒクルの化合物を投与し、投与の約３時間後に動物を屠殺する。脳組織を選択した動物から得、Ａベータ１〜ｘの存在について分析する。長期間投与の後、高齢のＡＰＰトランスジェニック動物の脳組織もまた、化合物処理後のベータ−アミロイド斑の量について分析できる。

阻害化合物を投与した動物（ＰＤＡＰＰまたは他のＡＰＰトランスジェニックもしくは非トランスジェニックマウス）は、ビヒクル処置した対照またはゼロ時の対照と比較して、脳組織内のＡベータの減少を示し得る。例えば、若いメスのＰＤＡＰＰマウスへの実施例１の化合物の３０ｍｇ／ｋｇ経口投与の３時間後、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、ビヒクル処置したマウスと比較して、脳海馬内で約３７％、大脳皮質内で約４８％減少する、ｐ＜０．０１。実施例２、若いメスのＰＤＡＰＰマウスへの１０ｍｇ／ｋｇ経口投与に関して、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、投与の３時間後、ビヒクル処置したマウスと比較して脳海馬内で約４０％、大脳皮質内で約４５％減少する、ｐ＜０．０１。若いメスのＰＤＡＰＰマウスへの実施例２の３０ｍｇ／ｋｇの経口投与に関して、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、投与の３時間後、ビヒクル処置したマウスと比較して、脳海馬内で約５２％、大脳皮質内で約５４％減少する、ｐ＜０．０１。実施例３、若いメスのＰＤＡＰＰマウスへの１０ｍｇ／ｋｇ経口投与に関して、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、投与の３時間後、ビヒクル処置したマウスと比較して、脳海馬内で約３４％、大脳皮質内で約４６％減少する、ｐ＜０．０１。実施例３４に関して、若いメスのＰＤＡＰＰマウスへの実施例３４の化合物の１０ｍｇ／ｋｇの経口投与の３時間後、Ａベータ１〜ｘペプチドレベルは、ビヒクル処置したマウスと比較して、脳海馬内で約２６％（ｐ＜０．０５）、ｎ＝２およびｐ＜０．０１について大脳皮質内で３６％および２４％減少する。

インビトロでＢＡＣＥ酵素に対する実施例１、２、３および３４の活性を考慮して、これらのＡベータ低下効果はインビボでのＢＡＣＥ阻害と一致し、実施例１、２、３および３４のＣＮＳ浸透をさらに実証する。

これらの研究は、本発明の化合物がＢＡＣＥを阻害するので、Ａベータレベルを低下させるのに有用であることを示す。

Claims (16)

1. 以下の式の化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
   
   （式中、Ａは、
   
   であり、
   Ｚは、ＯまたはＳであり、
   Ｒ^１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、
   
   であり、
   Ｒ^２は、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＣＨ_３であり、
   Ｒ^３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、
   
   であり、
   Ｒ^４は、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＯＣＨ_３である）。
2. （ｃｉｓ）構造：
   
   の請求項１に記載の化合物または塩。
3. Ａが
   
   である、請求項１または２に記載の化合物または塩。
4. Ａが
   
   である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩。
5. Ａが
   
   である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
6. Ａが
   
   である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または塩。
7. Ｒ^３が、ＯＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、
   
   である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
8. Ｒ^３が、ＯＣＨ_３である、請求項１〜４および７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
9. ＺがＯである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または塩。
10. ＺがＳである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または塩。
11. Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミドである、請求項１に記載の化合物または塩。
12. Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−４ａ−フルオロ−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−シアノ−ピリジン−２−カルボキサミドである、請求項１１に記載の化合物。
13. 有効量の請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、治療を必要とする患者に投与することを含む、患者におけるアルツハイマー病を治療する方法。
14. 療法に使用するための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
15. アルツハイマー病の治療に使用するための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
16. 請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。