EA027880B1 - Ингибиторы bace - Google Patents

Abstract

В настоящем изобретении предложено соединение формулы IIIгде А представляет собойи Z, R, R, Rи Rявляются такими, как определено в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемая соль.

Description

Настоящее изобретение относится к новым ингибиторам фермента, расщепляющего β-сайт белкапредшественника амилоида (ВАСЕ), к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам применения этих соединений для лечения физиологических расстройств и к промежуточным соединениям и способам, подходящим для синтеза указанных соединений.

Настоящее изобретение относится к области лечения болезни Альцгеймера и других заболеваний и расстройств, связанных с β-амилоидным (ЛЪе1а) пептидом, нейротоксическим и обладающим высокой способностью к агрегации пептидным сегментом белка-предшественника амилоида (АРР). Болезнь Альцгеймера является разрушительным нейродегенеративным расстройством, которое поражает миллионы пациентов во всем мире. В свете имеющихся на рынке одобренных в настоящее время агентов, которые обеспечивают лишь временную, симптоматическую пользу пациенту, существует значительная неудовлетворенная потребность в лечении болезни Альцгеймера.

Болезнь Альцгеймера характеризуется образованием, агрегацией и осаждением ЛЪе1а в головном мозге. Было показано, что полное или частичное ингибирование β-секретазы (фермента, расщепляющего β-сайт белка-предшественника амилоида; ВАСЕ) оказывает значительный эффект на связанные с бляшками или зависящие от бляшек патологии в моделях на мышах, указывая на то, что даже небольшие снижения уровней пептида ЛЪе1а могут привести к долговременному значительному снижению объема бляшек и синаптических недостаточностей, обеспечивая таким образом значительный положительный терапевтический эффект, в частности при лечении болезни Альцгеймера.

В ϋδ 2012/0202804 раскрыты конденсированные производные аминодигидрооксазина, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ВАСЕ, и также раскрыто, что они являются терапевтическими агентами, подходящими для лечения нейродегенеративного заболевания, вызываемого ЛЪе1апептидом, такого как деменция альцгеймеровского типа. В ϋδ 8158620 раскрыты конденсированные производные аминодигидротиазина, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ВАСЕ и также раскрыто, что они являются терапевтическими агентами, подходящими для лечения нейродегенеративного заболевания, вызываемого ЛЪе1а-пептидом, такого как деменция альцгеймеровского типа. В ϋδ 2012/0245155 раскрыты конденсированные гетероциклические соединения, которые также обладают ингибирующей активностью в отношении ВАСЕ и также раскрыто, что они являются подходящими для лечения болезни Альцгеймера.

Существует потребность в ингибиторах ВАСЕ, способных проникать в центральную нервную систему (ЦНС), чтобы обеспечить лечение опосредованных ЛЪе1а-пептидом расстройств, таких как болезнь Альцгеймера. Согласно настоящему изобретению предложены некоторые новые соединения, которые являются ингибиторами ВАСЕ. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложены некоторые новые соединения, которые проникают в ЦНС. Согласно настоящему изобретению также предложены некоторые новые соединения, которые обладают потенциалом в отношении улучшенного профиля побочных эффектов.

Таким образом, согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы I

К¹ представляет собой Н, Р, С1, СЫ, ОСН₂СР₃ или ОСН₂СР₂СНР₂;

К² представляет собой Н, СН₃, Р или С1;

К³ представляет собой Н, Р или С1; и

К⁴ представляет собой Н, Р, С1, СН₃, ОСН₃, СР₃, ОСН₂СР₃, [>Г ^сн₂-0 '· или или его фармацевтически приемлемая соль.

Согласно настоящему изобретению также предложено соединение формулы II

- 1 027880 где А представляет собой

К¹ представляет собой Н, Р, С1, СЫ или ОСН₂СР₃;

К² представляет собой Н, Р, С1 или СН₃; и

К³ представляет собой Н, ОСН₃ или ОСН₂СР₃;

или его фармацевтически приемлемая соль.

Согласно настоящему изобретению также предложено соединение формулы III где А представляет собой

Ζ представляет собой О или 8;

К¹ представляет собой Н, Р, С1, СЫ, ОСН₃, ОСН₂СН₂ОСН₃,

Р ₍ . , рф><-о4- . ЧЧУ ^или ;

К² представляет собой Н, Р, С1 или СН₃;

К³ представляет собой Н, Р, С1, СН₃, СР₃, С1-С3 алкокси, ОСН₂СН₂ОСН₃,

СЧ- , ^о4- · ^о4Хо6 Р

Хор р

К⁴ представляет собой Н, Р, С1 или ОСН₃;

или его фармацевтически приемлемая соль.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ предотвращения прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно настоящему изобретению также предложен способ ингибирования ВАСЕ у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно настоящему изобретению также предложен способ ингибирования ВАСЕ-опосредованного расщепления белка-предшественника амилоида, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I, II или III или его фармацевтически приемлемой

- 2 027880 соли. Кроме того, согласно данному изобретению предложен способ ингибирования выработки пептида ЛЬс1а. включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, согласно данному изобретению предложено соединение формул I, II или III или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии, в частности для лечения болезни Альцгеймера или для предотвращения прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера. Также согласно данному изобретению предложено применение соединения формул I, II или III или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.

Кроме того, согласно данному изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формул I, II или III или его фармацевтически приемлемую соль с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами. В конкретном варианте реализации указанная композиция дополнительно содержит один или более других терапевтических агентов. Настоящее изобретение также охватывает новые промежуточные соединения и способы синтеза соединений формул I, II или III.

Умеренное когнитивное нарушение было определено как потенциальная продромальная фаза деменции, связанной с болезнью Альцгеймера, на основе клинической картины и прогрессирования заболевания пациентов, у которых проявляется умеренное когнитивное нарушение, до деменции Альцгеймера в течение долгого времени. (Моте, с1 а1., Агсб. №иго1, 58, 397-405 (2001); Ре1егееп, с1 а1., Агсб. №иго1, 56, 303-308 (1999)). Термин предотвращение прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера включает замедление, задержку или обращение вспять прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера у пациента.

Используемые в настоящем описании термины лечение или лечить включают торможение, замедление, прекращение или обращение вспять прогрессирования или тяжести существующего симптома или расстройства.

Используемый в настоящем описании термин пациент относится к человеку.

Используемый в настоящем описании термин С1-С3 алкокси относится к группам метокси, этокси, н-пропокси и изопропокси.

Термин ингибирование выработки Айе1а-пептида используется для обозначения уменьшения ίη νίνο уровней Айе1а-пептида у пациента.

Используемый в настоящем описании термин эффективное количество относится к количеству или дозе соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, которые при однократном или многократном введении дозы пациенту обеспечивают желаемый эффект у пациента, находящегося на диагностике или лечении.

Эффективное количество может быть легко определено практикующим диагностом, являющимся специалистом в данной области техники, с использованием известных методов и путем просмотра результатов, полученных при аналогичных условиях. При определении эффективного количества для пациента практикующим диагностом рассматривается ряд факторов, включая, но не ограничиваясь ими: вид пациента; его размер, возраст и общее состояние здоровья; конкретное вовлеченное заболевание или расстройство; степень вовлечения или тяжести заболевания или расстройства; ответ отдельного пациента; конкретное вводимое соединение; способ введения; характеристики биодоступности вводимого препарата; выбранная схема введения доз; использование сопутствующих лекарственных средств и другие соответствующие обстоятельства.

Как правило, соединения согласно настоящему изобретению эффективны в широком диапазоне доз. Например, ежедневные дозы обычно находятся в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 20 мг/кг массы тела. В некоторых случаях уровни дозировки, находящиеся ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона, могут быть более чем адекватными, тогда как в других случаях могут быть использованы еще более высокие дозы с приемлемыми побочными эффектами, и, следовательно, указанный выше диапазон доз в любом случае не предназначен для ограничения объема изобретения.

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно изготавливают в виде фармацевтических композиций, вводимых любым путем, который делает соединение биодоступным, включая пероральный и парентеральный пути. Наиболее предпочтительно, такие композиции предназначены для перорального введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники (см., например, Реттфоп: Тйе 8с1епсе апб Ргасбсе оГ Рйагтасу (Ό.Β. Тгоу, Еббог, 2ΕΙ ЕбНюп Прртсой, Аббате апб ΑΠΚίηδ, 2006).

Соединения формул I, II и III или их фармацевтически приемлемые соли особенно подходят для применения в способах лечения согласно настоящему изобретению, но некоторые группы, заместители и конфигурации являются предпочтительными для соединений формул I, II и III. В следующих абзацах описаны такие предпочтительные группы, заместители и конфигурации. Следует понимать, что эти предпочтения применимы как к способам лечения, так и к новым соединениям согласно настоящему изобретению.

Таким образом, для соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей

- 3 027880 предпочтительно, что А представляет собой

Также предпочтительно, что А представляет собой

Особенно предпочтительно, что А представляет собой

Предпочтительно, что К¹ представляет собой ΟΝ или Т, причем ΟΝ является особенно предпочтительным.

Предпочтительно, что К² представляет собой Н.

Особенно предпочтительно, что когда К¹ представляет собой ΟΝ или Т, К² представляет собой Н. Также особенно предпочтительно, что когда К¹ представляет собой ΟΝ, К² представляет собой Н. Кроме того, предпочтительно, что К³ представляет собой С1.

Также предпочтительно, что К⁴ представляет собой ОСН₃.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения формулы I состоят из ядра, которое содержит два хиральных центра, как показано ниже на схеме А.

Хотя предусмотрено, что настоящее изобретение включает все индивидуальные энантиомеры и диастереомеры, а также смеси энантиомеров указанных соединений, включая рацематы, соединения с абсолютной конфигурацией при атомах углерода, обозначенных 1 и 2, как показано на схеме А, являются предпочтительными соединениями согласно настоящему изобретению.

Для соединений формулы II или их фармацевтически приемлемых солей: предпочтительно, что К¹ представляет собой ίΝ. Предпочтительно, что К² представляет собой Н. Предпочтительно, что К³ представляет собой ОСН₃. Также предпочтительно, что А представляет собой

Особенно предпочтительно, что когда К¹ представляет собой ίΝ, К² представляет собой Н. Также особенно предпочтительно, А представляет собой

Также особенно предпочтительно, что А представляет собой

Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения формулы II состоят из ядра, которое содержит два хиральных центра, как показано ниже на схеме В.

Хотя предусмотрено, что настоящее изобретение включает все индивидуальные энантиомеры и

- 4 027880 диастереомеры, а также смеси энантиомеров указанных соединений, включая рацематы, соединения с абсолютной конфигурацией при атомах углерода, обозначенных 1 и 2, как показано на схеме В, являются предпочтительными соединениями согласно настоящему изобретению.

Для соединений формулы III или их фармацевтически приемлемых солей предпочтительно, что А представляет собой

Также предпочтительно, что А представляет собой

Особенно предпочтительно, что А представляет собой

Наиболее предпочтительно, что А представляет собой

Предпочтительно, что К¹ представляет собой ΟΝ. Предпочтительно, что К² представляет собой Н. Также предпочтительно, что когда К¹ представляет собой ΟΝ, К² представляет собой Н. Предпочтительно, что К³ представляет собой ОСН₃, СН₂СР₃,

1>—'

О·

Особенно предпочтительно, что К³ представляет собой ОСН₃.

Предпочтительно, что соединения формулы III находятся в цис-конфигурации относительно кон-

Кроме того, специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения формулы III состоят из ядра, которое содержит два хиральных центра, как показано ниже на схеме С.

Хотя предусмотрено, что настоящее изобретение включает все индивидуальные энантиомеры и диастереомеры, а также смеси энантиомеров указанных соединений, включая рацематы, соединения с абсолютной конфигурацией при атомах углерода, обозначенных 1 и 2, как показано на схеме С, являются предпочтительными соединениями согласно настоящему изобретению.

- 5 027880

Предпочтительными соединениями являются

и их фармацевтически приемлемые соли.

Наиболее предпочтительными соединениями являются:

Е	Ε
О I	0 I
	%Ν ΝΗ2
0 ΓΥ
	1 .
Ρ	Ρ
	Ρν νη2
	0
1 ; и	ϊ/Ν

и их фармацевтически приемлемые соли. Особенно предпочтительным является

и его фармацевтически приемлемые соли.

Более конкретно, предпочтительными являются следующие соединения:

- 6 027880

М-|3-|(4аК.7а8)-2-а\1ино-4а-фтор-5.7-дигидро-4Н-фуро|3.4-с1|| 1.3|оксазин-7а-ил|-4фторфенил] -5 -цианопиридин-2-карбоксамид;

М-|3-|(4аК.7аЗ)-2-а\1ино-4а-фтор-5.7-дигидро-4Н-фуро|3.4-с1|| 1.3|оксазин-7а-ил|-4фторфенил] -5 -метоксипиразин-2-карбоксамид;

14-[3-[(4аК_,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]оксазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 - [(1 -фторцикл опропил)метокси]пиразин-2-карбоксамид;

14-[3-[(4аК_,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]оксазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 -(2,2,2-трифторэтокси)пиразин-2-карбоксамид;

]Х-[3-[(4аК-,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 -метоксипиразин-2-карбоксамид;

14-[3-[(4аК_,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 -цианопиридин-2-карбоксамид;

14-[3-[(4аК_,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-[(2,2-дифторциклопропил)метокси]пиразин-2-карбоксамид; и

14-[3-[(4аК_,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 -(циклопропилметокси)пиразин-2-карбоксамид;

и их фармацевтически приемлемые соли.

Более предпочтительными соединениями являются:

14-[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-(1][1,3]оксазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид;

14-[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]оксазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-метоксипиразин-2-карбоксамид;

Т4-[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-метоксипиразин-2-карбоксамид; и

14-[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-с1][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид; и их фармацевтически приемлемые соли.

Особенно предпочтительным соединением является П-[3-[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4-б[1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид и его фармацевтически приемлемые соли.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в таутомерных формах, как показано на схеме Ό. Когда в данной заявке дается какая-либо ссылка на один из конкретных таутомеров соединений согласно настоящему изобретению, следует понимать, что охватываются обе таутомерные формы и все их смеси.

Некоторые стереохимические центры оставлены неуказанными, и некоторые заместители были для ясности исключены на следующих схемах, и это не предназначено для ограничения каким-либо образом информации по данным схемам. Кроме того, отдельные изомеры, энантиомеры и диастереомеры могут быть разделены или отделены специалистом в данной области техники в любой удобный момент в процессе синтеза соединений формул I, II и III с помощью таких способов, как методы селективной кристаллизации или хиральной хроматографии (см., например, I. 1асдие§, е! а1., Епапйотегз, Касета!е§, апб Ке§о1и1юп§, 1ойп АПеу апб Зопз, Ппс.. 1981, и Е.Б. ЕЕе1 апб З.Н. АПеп, 31егеосйеш1§1гу о£ Огдашс Сотроипбз, АПеу-ПДегзаепсе, 1994). Обозначения изомер 1 и изомер 2 относятся к соединениям, которые элюируют при хиральной хроматографии первым и вторым соответственно, и, если хиральную хроматографию инициируют в начале синтеза, такое же обозначение применяют к последующим промежуточным соединениям и примерам.

Кроме того, некоторые промежуточные соединения, описанные на следующих схемах, могут содержать одну или более азотзащищающих групп. Переменная защитная группа может быть одной и той же или различной в каждом случае в зависимости от конкретных условий реакции и конкретных преобразований, которые должны быть осуществлены. Условия защиты и ее снятия хорошо известны специалисту в данной области техники и описаны в литературе (см., например, Сгеепе'з Рго!есЕуе Сгоирз ΐη

- 7 027880 (Руашс 8упШе§1§, РоиГЬ Εάΐίΐοη, Ьу Ре1ег О.М. \\'и1з апб ТЬеобога Огеепе, 1оЬп \\'Пеу апб δοη§, 1пс. 2007).

Некоторые аббревиатуры определены следующим образом: АРР относится к белкупредшественнику амилоида; СБР относится к цереброспинальной жидкости; ОСС относится к 1,3дициклогексилкарбодиимиду; О!С относится к диизопропилкарбодиимиду; ΏΙΡΕΑ относится к диизопропилэтиламину или Н-этил-Ы-изопропилпропан-2-амину; АСК относится к ацетонитрилу; ΏΜΑΡ относится к диметиламинопиридину; ΏΜΕΜ относится к модифицированной по способу Дульбекко среде Игла; ДМФА относится к диметилформамиду; ДМСО относится к диметилсульфоксиду; НОС! относится к гидрохлориду 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида; ее относится к энантиомерному избытку; Ех относится к примеру; Ρ12 относится к среде Хэма Р12; ΡΒδ относится к фетальной бычьей сыворотке; ΡΚΕΤ относится к флуоресцентному резонансному переносу энергии; НАТИ относится к гексафторфосфату (диметиламино)-К,К-диметил(3Н-[1,2,3]триазоло[4,5Ь]пиридин-3-илокси)метаниминия; ΗΕΚ относится к эмбриональной почке человека; НОАс относится к уксусной кислоте; НОАС относится к 1-гидрокси-7-азобензотриазолу; НОВ! относится к гидрату 1-гидроксибензотриазола; ΗΒΤϋ относится к гексафторфосфату 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилурония; ВЭЖХ относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии; 1С₅₀ относится к концентрации агента, которая производит 50% от максимального ингибирующего ответа, возможного для этого агента; мин относится к минуте или минутам; МеОН относится к метанолу или метиловому спирту; МТБЭ относится к метил-трет-бутиловому эфиру; ΡΏΑΡΡ относится к тромбоцитарному белку-предшественнику амилоида; ΡΟ относится к защитной группе; 'Тьер относится к примеру получения; РуВОР относится к гексафторфосфату бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония; ΡνΒΐΌρ относится к гексафторфосфату бром-трис-пирролидинофосфония; ΚΡϋ относится к относительной единице флуоресценции; БСХ относится к сильному катиониту; СФХ относится к сверхкритической флюидной хроматографии; и ТГФ относится к тетрагидрофурану.

Соединения согласно настоящему изобретению или их соли могут быть получены различными способами, известными в данной области техники, некоторые из которых показаны на схемах, в примерах получения и примерах, приведенных ниже. Конкретные стадии синтеза для каждого из описанных путей могут быть объединены различными способами либо использоваться в сочетании со стадиями из других схем для получения соединений формул I, II и III или их солей. Продукты каждой стадии в приведенных ниже схемах могут быть получены с помощью обычных способов, хорошо известных в данной области техники, в том числе с помощью экстракции, выпаривания, осаждения, хроматографии, фильтрования, измельчения в порошок и кристаллизации. В приведенных ниже схемах все заместители, если не указано иное, являются такими, как определено ранее. Реагенты и исходные материалы легко доступны для специалиста в данной области техники.

На схеме 1, стадия А, бромацетилбромид обрабатывают гидрохлоридом Ν,Ο-диметилгидроксиламида при условиях, хорошо известных в данной области техники, используя неорганическое основание, такое как карбонат калия, или органическое основание, такое как диизопропилэтиламин, с получением амида Вайнреба.

На схеме 1, стадия В, амид Вайнреба обрабатывают аллиловым спиртом и неорганическим основа- 8 027880 нием, таким как карбонат калия, при условиях, хорошо известных в данной области техники, с получением аллилового эфира. Например, амид Вайнреба добавляют к примерно 6-7 эквивалентам аллилового спирта и примерно 2 эквивалентам подходящего основания, такого как карбонат калия, в течение примерно 3 ч при температуре примерно 30°С. Реакционную смесь оставляют перемешиваться в течение 2 ч при примерно 30°С, и добавляют подходящий органический растворитель, такой как толуол. Затем смесь охлаждают до примерно 0°С и фильтруют. Осадок на фильтре промывают холодным (примерно 0°С) толуолом, и органические фильтраты объединяют и промывают водным раствором бисульфата калия. Далее органическую фазу концентрируют с дополнительным количеством толуола, добавляемым для удаления воды и избытка аллилового спирта. Органическую фазу снова промывают водой, а затем концентрируют для удаления большей части толуола. В конечном итоге органический остаток дистиллируют с получением аллилового эфира.

На схеме 1, стадия С, 4-бром-1-фтор-2-йодбензол подвергают взаимодействию с аллиловым эфиром с использованием реактива Гриньяра, такого как изопропилмагнийхлорид, для получения замещенного аллилоксиэтанона. Например, примерно 1 эквивалент подходящего реактива Гриньяра, такого как изопропилмагнийхлорид в ТГФ, добавляют к примерно 0,95 эквивалентам 4-бром-1-фтор-2-йодбензола в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ, при температуре примерно 0°С при перемешивании. После примерно 60 мин при примерно 0°С добавляют примерно 1 эквивалент аллилового эфира в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ, в течение примерно 60 мин. Затем реакцию гасят с применением избытка водного раствора хлорида аммония при примерно 0°С. Подходящий органический растворитель, такой как гептан, добавляют к погашенной реакционной смеси при перемешивании, как только смесь нагреется до комнатной температуры. Затем слои разделяют, и органический слой промывают водой и концентрируют при добавлении гептана для удаления воды и ТГФ с получением аллилоксиэтанона.

На схеме 1, стадия Ό, бициклический изоксазол может быть получен из аллилоксиэтанона несколькими способами, например, с использованием 2-стадийной методики, где оксим получают ίη δίΐιι с применением гидроксиламина, а затем циклизуют в бициклический изоксазолидин (РО=Н). В качестве альтернативы, замещенный гидроксиламин, такой как соль 1-фенилпропилгидроксиламиновая соль птолуолсульфоновой кислоты, обрабатывают бикарбонатом калия с последующим нагреванием с тетраизопропоксидом титана с получением нитронного промежуточного соединения ίη δίΐυ. которое циклизуется с получением бициклического изоксазола с защищенным атомом азота. Например, подходящую 1фенилпропилгидроксиламиновую соль η-толуолсульфоновой кислоты, такую как (К)-Ы-(1-фенилпропил)гидроксиламиновую соль η-толуолсульфоновой кислоты (см. Ра1е1, I.; 8тйЬ, Ν.Α.; Ту1ег, 8. N. О. Огдашс Ргосе88 Кезеагсй ан4 Оеуе1ортеШ 2009, 13, 49-53), обрабатывают примерно 2,75 эквивалентами бикарбоната калия, водой и подходящим органическим растворителем, таким как МТБЭ. Слои разделяют, и органический слой промывают водным раствором хлорида натрия. Подходящий органический растворитель добавляют к органическому слою, и удаляют большую часть МТБЭ и воды путем дистилляции при примерно 50°С. Примерно 1 эквивалент примерно 20-25 мас.% раствора аллилоксиэтанона в гептане добавляют к 1-фенилпропилгидроксиламину в гептане при примерно 50°С. Затем добавляют примерно 1,5 эквивалентов тетраизопропоксида титана, и смесь нагревают при примерно 55-60°С в течение примерно 10 ч (можно также использовать этоксид титана (IV)). Затем бициклический изоксазол с защищенным атомом азота выделяют при условиях, хорошо известных в данной области техники, таких как концентрирование, охлаждение и сбор фильтрованием. На схеме 1, стадия Е, бициклический изоксазол преобразуют в анилин-бициклический изоксазолидин с защищенными атомами азота. Например, примерно 1 эквивалент бициклического изоксазолидина объединяют с примерно 4 эквивалентами ацетамида, примерно 0,2 эквивалентами подходящего катализатора, такого как йодид меди (I), примерно 0,7 эквивалентами йодида калия, примерно 2 эквивалентами трикалийфосфата и примерно 0,8 эквивалентами Ν,Νдиметилэтилендиамина в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФА. Затем реакционную смесь нагревают при примерно 110°С в течение примерно 4 ч. Анилин-бициклический изоксазолидин с защищенными атомами азота выделяют с использованием методов и условий, хорошо известных в данной области техники. Например, реакционную смесь охлаждают до примерно 30°С и распределяют между подходящим органическим растворителем, таким как изопропилацетат, и водным раствором хлорида аммония. Слои разделяют, и водный слой дополнительно экстрагируют изопропилацетатом. Органические экстракты объединяют, промывают водным раствором хлорида аммония, и органический слой смешивают с подходящим органическим растворителем, таким как ксилолы. Затем органическую смесь дистиллируют для удаления большей части изопропилацетата и остаточного ДМФА. Затем органическую смесь охлаждают до примерно 0°С, и полученный твердый анилин-бициклический изоксазолидин с защищенными атомами азота собирают фильтрованием.

На схеме 1, стадия Р, кольцо анилин-бициклического изоксазолидина с защищенными атомами азота можно раскрыть, а также снять защиту с атома азота изоксазолидина при стандартных условиях, хорошо известных в данной области техники, с получением аминогидроксиметилтетрагидрофурана. Например, примерно 1 эквивалент анилин-бициклического изоксазолидинового кольца с защищенными атомами азота объединяют с примерно 0,2 эквивалентами хлорида цинка и примерно 20 мас.% загрузки

- 9 027880 смоченным водой сульфидированным катализатором 5% палладия на угле, суспендированным в смеси пропанол/вода и примерно 0,9 эквивалентов НС1. Смесь нагревают при примерно 50°С в атмосфере водорода при давлении 300-400 кПа в течение примерно 16 ч. Затем катализатор удаляют фильтрованием, и осадок на фильтре промывают пропанолом. Большую часть воды удаляют из фильтрата путем азеотропной дистилляции с дополнительным добавлением пропанола. В воду добавляют дополнительное количество НС1 (примерно 0,1 эквивалента), и твердое вещество собирают, получая аминогидроксиметилтетрагидрофуран. В качестве альтернативы, для раскрытия изоксазолидинового кольца можно использовать порошок цинка в НОАс или никель Ренея в условиях гидрирования.

На схеме 1, стадия О, аминогидроксиметилтетрагидрофуран сначала защищают подходящей азотзащищающей группой. Г идроксильную группу впоследствии окисляют в условиях, хорошо известных в данной области техники, с получением альдегида. Например, аминогидроксиметилтетрагидрофуран объединяют с примерно 2-3 эквивалентами подходящего органического основания, такого как триэтиламин, и примерно 1,2-1,4 эквивалентами подходящего реагента, с азотзащищающей группой, такого как дитрет-бутилдикарбонат в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ. Реакционную смесь перемешивают при примерно 50°С в течение примерно 15-18 ч, и полученный промежуточный продукт с защищенными атомами азота выделяют и очищают с использованием методов, хорошо известных в данной области техники. Например, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют. Остаток распределяют между 10% лимонной кислотой и этилацетатом, экстрагируют этилацетатом, сушат и концентрируют с получением промежуточного соединения с защищенными атомами азота. В качестве альтернативы, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, твердые вещества промывают этилацетатом, и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Затем остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле с элюированием подходящим элюентом, таким как градиент метанол:дихлорметан от 0:10 до 1:10, с получением промежуточного соединения с защищенными атомами азота стадии О, подстадии 1. Затем во время стадии О, подстадии 2, промежуточное соединение с защищенными атомами азота окисляют до альдегида при условиях, хорошо известных специалисту в данной области техники. Например, промежуточное соединение с защищенными атомами азота, полученное, как непосредственно указано выше, растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, добавляют к перемешиваемой смеси подходящий окислитель, такой как примерно 1,7 эквивалента хлорхромата пиридиния, молекулярные сита 4 А и примерно 2,3 эквивалента ацетата аммония в дихлорметане. Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение от примерно 35 мин до примерно 2 ч. Затем полученное альдегидное соединение стадии О, подстадии 2, выделяют и очищают с использованием методов, хорошо известных в данной области техники. Например, реакционную смесь частично концентрируют при пониженном давлении, добавляют подходящий органический растворитель, такой как этилацетат, и смесь фильтруют через силикагель. Силикагель дополнительно промывают этилацетатом, фильтраты объединяют и затем концентрируют при пониженном давлении с получением альдегида. В качестве альтернативы, к промежуточному соединению с защищенными атомами азота, полученному, как непосредственно указано выше, растворенному в подходящем органическом растворителе, таком как ДМСО, добавляют 2-йодоксибензойную кислоту (ГВХ), и смесь перемешивают примерно 18 ч. Смесь добавляют к водному раствору карбоната натрия, добавляют МТБЭ, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 15 мин, фильтруют через диатомовую землю, и органический слой собирают и концентрируют с получением альдегидного соединения стадии О, подстадии 2.

На схеме 1, стадия Н, подстадия 1, альдегид со стадии О фторируют с использованием 1-хлорметил4-фтор-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-бис(тетрафторбората) (также называемого 8е1ес1йиог™) с получением фторированного соединения, и затем альдегид восстанавливают на подстадии 2 с получением фторированного первичного спирта. Например, альдегид растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ, и обрабатывают примерно 1,08 эквивалентами подходящего вторичного циклического амина, такого как пирролидин или Э(+)-пролин. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 5-10 мин и обрабатывают примерно 1,15 эквивалентами §е1есЙ1иог™, и реакционную смесь перемешивают в течение примерно 2-3 ч. Затем реакционную смесь гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют подходящими органическими растворителями, такими как этилацетат и дихлорметан. Органические экстракты объединяют, сушат над подходящим осушающим агентом, таким как безводный сульфат магния или сульфат натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. В качестве альтернативы, примерно 1,1 эквивалентов Э(+)-пролина добавляют к раствору альдегида в 2,2,2-трифторэтаноле, который обрабатывают карбонатом калия и молекулярными ситами 3А и фильтруют перед использованием. Также могут быть использованы другие растворители, такие как метанол, этанол, ТГФ и дихлорметан, которые могут давать различные диастереоселективности. Добавляют молекулярные сита 3 А (500 мг), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 4 ч. Примерно 1,3 эквивалента 5>е1ес1Г1иог™ добавляют к смеси и перемешивают в течение примерно 36 ч. Смесь концентрируют и очищают с использованием методов, хорошо известных в данной области техники, с получением невосстановленного фторированно- 10 027880 го продукта стадии Н, подстадии 1.

На стадии Н, подстадия 2, остаток растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как метанол или этанол, обрабатывают 1,07-1,4 эквивалентами подходящего восстановителя, такого как боргидрид натрия или тетрагидроборат натрия, и затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение от примерно 30 мин до 2 ч. Затем реакционную смесь гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия или упаривают до остатка, и экстрагируют подходящими органическими растворителями, такими как этилацетат и дихлорметан. Органические экстракты объединяют, сушат над подходящим осушающим агентом, таким как безводный сульфат магния или сульфат натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного фторированного первичного спирта. Затем это неочищенное вещество очищают с использованием методов, хорошо известных в данной области техники, таких как флэш-хроматография на силикагеле, с использованием подходящего элюента, такого как градиент от 0:10 до 1:10 метанол:дихлорметан или этилацетат/гексан (1:1), с получением очищенного фторированного первичного спирта стадии Н. В других способах, известных обычному специалисту в данной области техники, для осуществления прямого фторирования используют Зе1ес1йиог™, комплекс бисимина меди(Э и анионный катализатор межфазного переноса, и Ν-гидроксифталимид или Ν,Ν-дигидроксипиромеллитимид и Зе1ес1йиог™. В дополнение к Зе1ес1йиог™, фторирующие реагенты, которые могут быть использованы, включают следующие соединения: трифторметансульфонат Ν-фторпиридиния и Ν-фторбензолсульфонимид, которые могут давать различные диастереоселективности.

На схеме 2, стадия I, фторированный первичный спирт со стадии Н подвергают снятию защиты при стандартных условиях, позволяющих амин со снятой защитной группой затем преобразовать в тиомочевину, используя условия, хорошо известные в данной области техники. Например, на подстадии 1, снятие защитной группы, фторированный первичный спирт растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, и обрабатывают избытком соответствующей кислоты, такой как примерно 15 эквивалентов трифторуксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 2-3 ч. Затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, осуществляя азеотропную дистилляцию толуолом. Затем на подстадии 2, образование тиомочевины, остаток растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ, и обрабатывают примерно 1,1 эквивалентами подходящего органического амина, например, триэтиламина, и примерно 1,06 эквивалентами бензоилизотиоцианата. Затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 16-18 ч, а затем гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Затем погашенную реакционную смесь экстрагируют подходящими органическими растворителями, такими как этилацетат и дихлорметан. Органические экстракты объединяют, сушат над подходящим осушающим агентом, таким как безводный сульфат магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного продукта тиомочевина стадии I. Затем это неочищенное вещество очищают с использованием способов, хорошо известных в данной области техники, таких как флэшхроматография на силикагеле, с использованием подходящего элюента, такого как градиент от 0:10 до 1:10 метанол:дихлорметан, с получением очищенной тиомочевины.

На схеме 2, стадия I, циклизация, тиомочевину со стадии I циклизуют в защищенный бициклический аминотиазин при стандартных условиях. Например, тиомочевину растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, и обрабатывают примерно 1,44 эквивалентами 1-хлорНН2-триметилпропениламин. Затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 3-4 ч, и реакционную смесь гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Затем погашенную реакционную смесь экстрагируют подходящим органическим растворителем,

- 11 027880 таким как дихлорметан. Органические экстракты объединяют, сушат над подходящим осушающим агентом, таким как безводный сульфат магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного продукта бициклического аминотиазина стадии 1. Затем неочищенное вещество очищают с помощью методов, хорошо известных в данной области техники, таких как флэшхроматография на силикагеле, с использованием подходящего элюента, такого как градиент этилацетат:гексан от 0:1 до 1:0, с получением очищенного бициклического аминотиазина.

На схеме 2, стадия К, на подстадии 1 с продукта бициклического аминотиазина стадии 1 снимают защиту при условиях, хорошо известных в данной области техники, а затем на подстадии 2 проводят амидирование при условиях, хорошо известных в данной области техники, с соответствующим арилхлорангидридом (А-(С=О)-С1), в котором А является таким, как определено в настоящем описании, с получением соединений формулы I или формулы 111а, (Ζ представляет собой §). Например, бициклический аминотиазин объединяют с примерно 5,6 эквивалентами гидрохлорид о-метилгидроксиламина и примерно 5,9 эквивалентами пиридина в подходящем органическом растворителе, таком как этанол, и нагревают при примерно 50°С в течение примерно 16 ч. Затем добавляют примерно 25 эквивалентов подходящей кислоты, такой как концентрированная хлористо-водородная кислота, и реакционную смесь нагревают при примерно 50°С в течение дополнительных 24 ч. Затем реакционную смесь охлаждают и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного диаминового соединения со снятой защитной группой, которое затем очищают с помощью методов, хорошо известных в данной области техники, таких как флэш-хроматография на силикагеле с использованием подходящего элюента, такого как градиент 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан от 0:10 до 1:10, с получением очищенного диаминового соединения со снятой защитной группой.

В качестве альтернативы, продукт бициклического аминотиазина стадии 1 объединяют с примерно 9,4 эквивалентами гидрохлорида о-метилгидроксиламина и примерно 9,9 эквивалентами пиридина в подходящем органическом растворителе, таком как этанол, и нагревают при примерно 50°С в течение примерно 18 ч. Затем реакционную смесь непосредственно очищают, например, с применением §СХ колонки с использованием подходящего элюента, такого как метанол, с последующим использованием 7 М раствора аммиака в метаноле. Затем очищенное вещество растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как этанол, обрабатывают примерно 16 эквивалентами подходящей кислоты, такой как концентрированная хлористо-водородная кислота, и нагревают при 50°С в течение примерно 23 ч. Затем реакционную смесь охлаждают и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного диаминового соединения со снятой защитной группой, которое может быть очищено методами, хорошо известными в данной области техники, такими как флэш-хроматография или §СХ колонка с использованием подходящего элюента, такого как метанол, с последующим использованием 7 М раствора аммиака в метаноле.

Диаминовое соединение со снятой защитной группой можно амидировать на стадии К, подстадии 2 при условиях, хорошо известных в данной области техники, с использованием, например, арилхлорангидрида с получением соединений формулы I или формулы 111а. Например, 2 эквивалента оксалилхлорида добавляют к 2,2 эквивалентам ДМФА в подходящем органическом растворителе, таком как ацетонитрил, и реакционную смесь перемешивают в течение примерно 10 мин. Примерно 2,05 эквивалентов соответствующего замещенного арила карбоновой кислоты (А-СО₂Н) добавляют к реакционной смеси, которую оставляют перемешиваться в течение примерно 30-60 мин, с получением примерно 2 эквивалентов соответствующего арилхлорангидрида. Примерно 1-2 эквивалента только что полученного арилхлорангидрида добавляют по каплям к раствору диаминового соединения со снятой защитной группой, полученного выше, в смеси этанол:вода (примерно 1:1 по объему) при примерно 50°С. Реакционную смесь нагревают при 50 °С в течение примерно 45-90 мин. Затем полученное соединение формулы I или формулы 111а выделяют и очищают с использованием методов и условий, хорошо известных в данной области техники. Например, реакционную смесь объединяют с насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют подходящим органическим растворителем, таким как дихлорметан. (Реакционную смесь также можно загрузить непосредственно на 8СХ колонку, очистить и затем дополнительно очистить с использованием силикагеля.) Органические слои объединяют, промывают рассолом и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного вещества формулы I или формулы 111а. Затем неочищенное вещество может быть очищено, например, путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием подходящего элюента, такого как градиент 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан от 0:10 до 1:10. Очищенное вещество может быть дополнительно очищено с помощью обращенно-фазовой флэш-хроматографии с использованием колонки С18 с высоким разрешением с использованием подходящего элюента, такого как градиент от 5 до 60% ацетонитрила в 10 мМ водном растворе бикарбоната аммония с 5% метанолом. Далее элюент, содержащий продукт, экстрагируют смесью хлороформ:изопропанол в соотношении 4:1. Органические экстракты объединяют, промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением дополнительно очищенных соединений формулы I или формулы Ша в виде свободного основания.

В качестве альтернативы, специалисту в данной области техники будет понятно, что существует

- 12 027880 целый ряд методов и реагентов для образования амида в результате реакции карбоновых кислот и аминов. Например, реакция диаминового соединения со снятой защитной группой с соответствующей арилкарбоновой кислотой (А-СО₂Н) в присутствии связывающего реагента и аминового основания, такого как ΌΙΡΕΆ или триэтиламин, приведет к образованию соединения формулы I или формулы 111а. Связывающие реагенты включают карбодиимиды, такие как ОСС, ОЮ, ЕОСЦ и ароматические связывающие реагенты, такие как НОВ! и НОЛ!. Кроме того, можно использовать урониевые или фосфониевые соли ненуклеофильных анионов, такие как НВТИ, НАТИ, РуВОР и РуВгОР, вместо более традиционных связывающих реагентов. Можно использовать добавки, такие как ΌΜΑΡ, для ускорения реакции и получения соединений формулы I или формулы Ша.

На схеме 3, стадия Б, подстадия 1, со фторированного первичного спирта (полученного согласно схеме 1, стадия Н) снимают защиту при стандартных условиях с последующей нейтрализацией, образованием тиомочевины и циклизацией на подстадиях 2а и 2Ъ с получением защищенного бициклического аминооксазина. Например, на подстадии 1, фторированный первичный спирт растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как этилацетат или дихлорметан, и обрабатывают избытком соответствующей кислоты, такой как хлористо-водородная кислота (4 Μ в 1,4-диоксане) или трифторуксусная кислота. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение примерно от 2 ч до периода времени, равному всей ночи. Затем амин со снятой защитой группой выделяют в виде соли методами, хорошо известными в данной области техники, такими как фильтрация. В качестве альтернативы подстадии 1, этанол добавляют по каплям к раствору избытка ацетилхлорида в этилацетате при примерно 0°С и перемешивают в течение примерно 30 мин. Добавляют фторированный первичный спирт (схема 1, стадия Н), и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Далее соль амина со снятой защитной группой выделяют методами, хорошо известными в данной области техники, такими как фильтрация. Затем для нейтрализации и образования тиомочевины согласно подстадии 2а соль амина со снятой защитной группой растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как ацетонитрил или тетрагидрофуран, и обрабатывают примерно 1,1 эквивалентами подходящего органического амина, такого как триэтиламин, для нейтрализации амина и добавляют примерно 1,05 эквивалентов бензоилизотиоцианата с получением промежуточного соединения тиомочевина. Затем реакционную смесь перемешивают при 5°С в течение примерно 1 ч или нагревают до примерно 70°С в течение 2 ч. Для циклизации и образования защищенного бициклического аминооксазина на подстадии 2Ъ добавляют примерно 1,1 эквивалента триметилсилилхлорида и ДМСО и продолжают перемешивание в течение примерно 2 ч. Реакцию гасят двухосновным фосфатом калия (20%) для доведения рН до 7-8, и продукт выделяют с помощью методов, хорошо известных в данной области техники, с получением продукта защищенный бициклический аминооксазин стадии Б. В качестве альтернативы, соль амина можно нейтрализовать триэтиламином, как описано выше для стадии Б, стадии 2а, и обработать бензоилкарбаматом с образованием промежуточного соединения Ν-карбамоилбензамид, которое затем циклизуют трифторидом диэтиламиносеры в органическом растворителе, таком как дихлорметан, при примерно 78°С и нагревают до примерно комнатной температуры в течение 1 ч. Продукт выделяют с помощью методов, хорошо известных в данной области техники, с получением продукта защищенный бициклический аминооксазин стадии Б.

На схеме 3, стадия М, сначала завершают снятие защиты с защищенного бициклического аминооксазина, а затем снимают защиту с анилина при условиях, хорошо известных в данной области техники, с последующим амидированием анилина на подстадии 2 с подходящим хлорангидридом-А, где А является таким, как определено в настоящем описании, для получения соединений формулы II или формулы ШЪ (Ζ представляет собой О). Например, на стадии М, подстадия 1, защищенный бициклический аминооксазин добавляют к раствору примерно 1,1 эквивалентов гидроксида лития в метаноле и нагревают до

- 13 027880

40°С в течение примерно 18 ч для снятия защиты с аминогруппы в бициклическом аминооксазине.

Далее снимают защиту с анилина при условиях, хорошо известных в данной области техники, таких как кислые условия, с использованием водной 1 М хлористо-водородной кислоты и нагревание до 90°С в течение примерно 3 ч. Затем реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и водный слой отделяют и обрабатывают водным раствором гидроксида натрия для доведения рН до примерно 10. Затем эту смесь экстрагируют этилацетатом и концентрируют при пониженном давлении с получением неочищенного диаминосоединения со снятой защитной группой. Затем неочищенное диаминосоединение со снятой защитной группой очищают методами, хорошо известными в данной области техники, такими как флэш-хроматография на силикагеле с элюированием подходящим элюентом, таким как градиент 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан, с получением очищенного диаминосоединения со снятой защитой.

Затем согласно схеме 3, стадия М, подстадия 2, диаминосоединение со снятой защитной группой амидируют по азоту анилина при условиях, хорошо известных в данной области техники, с использованием, например, хлорангидрида с получением соединений формулы II или формулы ШЬ. Например, примерно 1 эквивалент оксалилхлорида и каталитическое количество ДМФА добавляют к примерно 1,07 эквивалентам арилкарбоновой кислоты (А-СО₂Н) в подходящем органическом растворителе, таком как ацетонитрил, и смесь перемешивают в течение примерно 10 мин. Затем эту смесь добавляют к раствору диаминосоединения со снятой защитной группой в этаноле и воде, имеющему температуру 50°С, и перемешивают при примерно 50°С в течение примерно 10 мин. Затем полученное соединение формулы II или формулы ШЬ выделяют и очищают с использованием методов и условий, хорошо известных в данной области техники. Например, реакционную смесь объединяют с насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют подходящим органическим растворителем, таким как этилацетат. Затем неочищенное вещество можно очистить, например, путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием подходящего элюента, такого как градиент 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан, с получением соединения формулы II или формулы ШЬ в виде свободного основания.

В качестве альтернативы, согласно схеме 3, стадия Ν, подстадия 1, можно снять защиту со фторированного первичного спирта схемы 1, стадия Н, как описано выше для стадии Ь, подстадия 1, нейтрализовать и циклизовать на подстадии 2а и 2Ь без предварительной защиты амина, и амидировать согласно подстадии 3 при условиях, хорошо известных в данной области техники. Например, можно снять защиту с амина на подстадии 1 в кислых условиях, хорошо известных в данной области техники, с использованием избытка подходящей кислоты, такой как хлористо-водородная кислота (4 М в 1,4-диоксане) или трифторуксусная кислота. Амин со снятой защитой, в виде гидрохлоридной соли, затем выделяют методами, хорошо известными в данной области техники, такими как фильтрация. Защищенный анилин, гидрохлорид гидроксиламина нейтрализуют на подстадии 2Ь путем растворения его в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, и обрабатывают примерно 1,2 эквивалентами органического основания, такого как триэтиламин, перемешивают в течение примерно 10 мин и концентрируют. Добавляют этилацетат, и смесь нагревают до 40°С в течение примерно 10 мин с последующим концентрированием, чтобы обеспечить полную нейтрализацию. Циклизацию завершают на подстадии 2Ь путем добавления этанола и цианогенбромида к остатку, и смесь нагревают до примерно 120°С в течение примерно 4 ч. После выпаривания растворителя остаток растворяют в воде и 1,0 М хлористо-водородной кислоте и промывают этилацетатом. Водный экстракт обрабатывают концентрированной водной хлористо-водородной кислотой и перемешивают при 50 °С в течение примерно 48 ч. Смесь охлаждают, доводят рН до щелочного значения водным раствором гидроксида натрия и экстрагируют этилацетатом. Очистку неочищенного анилинаминобициклического оксазина можно выполнить с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом, таким как 7 М раствор аммиака в метаноле и дихлорметане. На стадии Ν, подстадия 3, это вещество может быть амидировано по амину анилина, как описано выше на стадии М, подстадия 2, с получением соединения формулы II или формулы ШЬ.

В качестве альтернативы, специалисту в данной области техники будет понятно, что существует целый ряд методов и реагентов для образования амида в результате реакции карбоновых кислот и аминов, как описано ранее в соответствии со схемой 2, и могут быть применены также к схеме 3.

Фармацевтически приемлемая соль соединения формул I, II и III, такая как гидрохлоридная соль, может быть образована привидением соответствующего свободного основания формул I, II, или III (включая Ша и ШЬ) во взаимодействие с соответствующей фармацевтически приемлемой кислотой в подходящем растворителе при стандартных условиях, хорошо известных в данной области техники. Кроме того, образование таких солей может происходить одновременно при снятии защиты азотзащищающей группы. Образование таких солей хорошо изучено и понятно в данной области техники. См., например, Сои1й, Р.Ь., 8а1! ке1ес1юп ίοτ Ьаме йгидк, !п1сгпаПопа1 1оитиа1 οί РЬагтасеийск, 33: 201-217 (1986); Вакби Κ.Ι., е! а1. 8а1! 8е1есйои апй ΘρΙίιηίζ;·ιΙίοη Ргосейитек ίοτ РЬагтасеийса1 Νον СЬетюа1 ΕηΐίПек, Отдашс Ргосекк Кекеатсй апй Неуе1ортеп1, 4: 427-435 (2000); и Вегде, 8.М., е! а1., РЬаттасеийса1 8а115, 1оитпа1 οί РЬагтасеийса1 8с1епсек, 66: 1-19 (1977).

Следующие способы получения и примеры дополнительно иллюстрируют данное изобретение.

- 14 027880

Пример получения 1. 2-(Аллилокси)-Ы-метокси-Ы-метилацетамид О /0

Схема 1, стадии А и В: бромацетилбромид (1,06 экв.) добавляют к раствору гидрохлорида Ы,Одиметилгидроксиламина (объемы в мл/г этого соединения) в перемешиваемой смеси воды ((1,0 экв.) 4 мл/г), толуола (4 мл/г) и К₂СО₃ (1,15 экв.) при 0 °С. После нагревания до комнатной температуры в течение 1 ч слои разделяют, и водный слой экстрагируют толуолом (2 мл/г). Объединенные органические слои концентрируют с получением промежуточного соединения 2-бром-Ы-метокси-Ы-метилацетамид, содержащего примерно 20% толуола. 2-Бром-Ы-метокси-Ы-метилацетамид добавляют к смеси аллилового спирта (6,3 экв.) и К₂СО₃ (2 экв.) в течение 3 ч при 30°С. Через 2 ч при 30°С добавляют толуол (4 мл/г), смесь охлаждают до 0°С и фильтруют. Осадок на фильтре промывают холодным (0°С) толуолом (2,7 мл/г), и объединенный фильтрат промывают 3 мас.% раствором КН8О₄ в воде (0,6 мл/г). Толуольный раствор концентрируют с добавлением дополнительного количества толуола (11 мл/г) для удаления воды и аллилового спирта. Концентрированный толуольный раствор промывают водой (0,5 г/г), дополнительно концентрируют для удаления большей части толуола, а затем дистиллируют с получением указанного в заголовке соединения. ЖХ-МС (т/ζ): 160 (М+Н).

Пример получения 2. (3а8,6а8)-6а-(5-Бром-2-фторфенил)-1-((К)-1-фенилпропил)гексагидрофуро[3,4-с]изоксазол

Схема 1, стадии С и Ό: к 4-бром-1-фтор-2-йодбензолу (0,95 экв.) в ТГФ (4,6 мл/г) при 0°С добавляют хлорид изопропилмагния (1,0 экв, 20 мас.% в ТГФ). После примерно 60 мин при 0°С добавляют раствор 2-(аллилокси)-Ы-метокси-Ы-метилацетамида (1,0 экв.) (объемы для этой стадии в мл/г этого соединения) в ТГФ (2,2 мл/г) в течение примерно 60 мин. Реакционную смесь гасят в растворе ЫН₄С1 (4,3 экв.) в воде (5,8 мл/г) при 0°С. Гептаны (7,2 мл/г) добавляют, когда смесь нагревают до комнатной температуры, и слои разделяют. Органический слой промывают водой (7,2 мл/г). Органический слой концентрируют с добавлением дополнительного количества гептанов (4 мл/г) для удаления воды и ТГФ. Промежуточное соединение 2-аллилокси-1-(5-бром-2-фторфенил)этанон получают в виде раствора в гептанах (приблизительно 20-25 мас.%).

(К)-Ы-(1-фенилпропил)гидроксиламин η-толуолсульфоновокислую соль обрабатывают КНСО₃ (2,75 экв.), водой (6,6 мл/г) и метил-трет-бутиловым эфиром (6,8 мл/г). Слои разделяют, и органический слой промывают 25мас.% раствором ЫаС1 (2,8 мл/г) в воде. Гептаны (12 мл/г) добавляют, и большую часть МТБЭ и воды удаляют дистилляцией при примерно 50°С. 20-25 мас.% раствор 2-аллилокси-1-(5бром-2-фторфенил)этанона (1 экв., объемы для этой стадии в мл/г этого соединения) в гептане добавляют к гептановой смеси (К)-Ы-(1-фенилпропил)гидроксиламина при 50°С. Добавляют тетраизопропоксид титана (1,5 экв.), и смесь нагревают при примерно 55-60°С в течение примерно 10 ч. Смесь концентрируют при примерно 35-50°С с добавлением дополнительного количества гептанов (6 мл/г). Дистилляцию прекращают, когда общий объем составляет примерно 5 мл/г по сравнению с ожидаемым выходом продукта 60%. Смесь охлаждают до -10°С, твердые вещества собирают фильтрованием, дважды промывают холодным (-10°С) гептаном (1 мл/г) и сушат с получением указанного в заголовке соединения. ЖХ-МС (т/ζ для ⁷⁹Вг/⁸¹Вг): 406/408 (М+Н).

Пример получения 3. Ы-(4-фтор-3-((3а8,6а8)-1-((К)-1-фенилпропил)гексагидрофуро[3,4-с]изоксазол-6а-ил)фенил)ацетамид

Схема 1, стадия Е: смесь (3а8,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-1-((К)-1-фенилпропил)гексагидрофуро[3,4-с]изоксазола (1,0 экв., объемы в мл/г этого соединения), ацетамида (4 экв.), йодида медиД) (0,2 экв.), йодида калия (0,7 экв.), К₃РО₄ (2,0 экв.), Ν,Ν-диметилэтилендиамина (0,8 экв.) и ДМФА (4 мл/г) нагревают при 110°С в течение примерно 4 ч. После охлаждения до 30°С смесь распределяют между изопропилацетатом (3,7 мл/г) и 10 мас.% ЫН₄С1 (5,7 мл/г) в воде. Слои разделяют, и водный слой экстрагируют изопропилацетатом (2 мл/г). Объединенные органические слои дважды промывают 10 мас.%

- 15 027880

ИН₄С1 (1 мл/г) в воде. Органический слой смешивают с ксилолами (4,3 мл/г), и смесь дистиллируют под вакуумом для удаления большей части изопропилацетата и остаточного ДМФА. Смесь охлаждают до 0°С, твердые вещества собирают фильтрованием, дважды промывают ксилолами (0,7 мл/г) и сушат с получением указанного в заголовке соединения. ЖХ-МС (т/ζ): 385 (М + Н).

Пример получения 4. Гидрохлорид Х-(3-((38,4К)-3-амино-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3ил)-4-фторфенил)ацетамида

Схема 1, стадия Г: смесь Х-(4-фтор-3-((3а8,6а8)-1-((К)-1-фенилпропил)гексагидрофуро[3,4-с]изоксазол-6а-ил)фенил)ацетамида (1,0 экв., объемы в мл/г этого соединения), хлорида цинка (0,2 экв) и 20 мас.% загрузки смоченного водой сульфидированного катализатора 5% Ρά/С суспендируют в смеси 1пропанола (4 мл/г), воды (3,8 мл/г) и НС1 (0,9 экв, 33 мас.% в воде). Смесь нагревают при 50°С под давлением водорода (примерно 300-400 кПа) в течение примерно 16 ч. Катализатор удаляют фильтрованием при примерно 50 °С, и осадок на фильтре промывают 1-пропанолом (2,9 мл/г). Большую часть воды удаляют из объединенных фильтратов путем азеотропной дистилляции с использованием дополнительного количества 1-пропанола (10,5 мл/г). Дополнительное количество НС1 (0,1 экв., 33 мас.% в воде) добавляют к смеси, и твердые вещества собирают фильтрованием, дважды промывают 1-пропанолом (1 мл/г) и сушат с получением указанного в заголовке соединения. ЖХ-МС (т/ζ): 269 (М+Н).

Пример получения 5. трет-Бутил-Х-[(38,4К)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамат

Схема 1, стадия С, подстадия 1 (защита): раствор гидрохлорида А[3-[(38,4К)-3-амино-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]-4-фторфенил]ацетамида (60,0 г, 197 ммоль), триэтиламина (85,0 мл, 610 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбоната (60,0 г, 272 ммоль) в тетрагидрофуране при 50 °С перемешивают в течение 15,5 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, промывают этилацетатом и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом смеси метанол/дихлорметан от 0:10 до 1:10 с получением указанного в заголовке соединения (71,0 г, 98%). ЭР/МС (т/е): 269 (М-99).

Пример получения 5, способ В ди-трет-Бутилдикарбонат (130 г, 591 ммоль) добавляют к раствору гидрохлорида Ν-(3-((38,4Κ)-3амино-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил)-4-фторфенил)ацетамида (150 г, 492 ммоль) и триэтиламина (137 мл, 984 ммоль) в ТГФ (1,2 л). После перемешивания при 50°С в атмосфере азота в течение 18 ч реакционную смесь постепенно охлаждают до комнатной температуры, и растворитель выпаривают. Остаток распределяют между 10% водным раствором лимонной кислоты (500 мл) и этилацетатом (1 л). Слои разделяют, и водный слой экстрагируют этилацетатом (2 х 150 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением остатка, который сушат под вакуумом до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (192 г, 95,3%). ЭР/МС (т/ζ): 367 (М+1), 267 (М-99); ¹Н-ЯМР (300,16 МГц, СОС1₃) δ 7,85-7,79 (т, 1Н), 7,60-7,56 (т, 1Н), 7,41-7,36 (т, 1Н), 7,26 (ά, Д = 1,0 Гц, 7Н), 7,04- 6,95 (т, 2Н), 4,26-4,11 (т, 2Н), 3,803,72 (т, 3Н), 2,15 (§, 5Н), 2,05 (ά, Д = 0,8 Гц, 1Н), 1,72-1,67 (т, 1Н), 1,36 (§, 13Н), 1,31-1,26 (т, 3Н).

Пример получения 6. трет-Бутил-А[(38,48)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-формилтетрагидрофуран-3-ил]карбамат

- 16 027880

Схема 1, стадия С, подстадия 2 (окисление): смесь пиридиния хлорхромата (10,0 г, 45,5 ммоль), молекулярных сит 4 А (20,0 г) и ацетата аммония (5,00 г, 62,3 ммоль) измельчают в мелкий порошок и добавляют к дихлорметану (150 мл). Затем добавляют раствор трет-бутил-Ы-[(33,4К)-3-(5-ацетамидо-2фторфенил)-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамата (10,0 г, 27,1 ммоль) в дихлорметане (100 мл). Полученную суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 35 мин и концентрируют при пониженном давлении до объема дихлорметана приблизительно 100 мл. Затем добавляют этилацетат (200 мл), и полученную смесь фильтруют через осадок силикагеля. Осадок промывают этилацетатом, и объединенный фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (71,0 г, 98%), который используют без дальнейшей очистки. ЭР/МС (т/е): 267 (М99).

Пример получения 6, способ В

2-Йодозобензойную кислоту (45% мас./мас. 88,3 г, 142 ммоль) добавляют порциями к раствору трет-бутил-Ы-[(33,4К)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамата (50,0 г, 129 ммоль) в ДМСО (200 мл) при комнатной температуре. После перемешивания при 22 °С в течение 18 ч реакционную смесь добавляют к водному раствору карбоната натрия (500 мл), поддерживая температуру ниже 25 °С. Добавляют метил-трет-бутиловый эфир (500 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Смесь фильтруют через диатомовую землю, и отделяют органический слой. Водный слой экстрагируют метил-трет-бутиловым эфиром (2 х 100 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением остатка. Остаток сушат под вакуумом до постоянной массы (46,0 г, 93,5%). Это вещество используют без дальнейшей очистки. ЭР/МС (т/ζ): 267 (М-99). ¹Н ЯМР (300,16 МГц, СОС1₃) δ 9,87 (ά, 1= 2,8 Гц, 1Н), 9,44 (1, 1= 2,2 Гц, 1Н), 7,63-7,55 (т, 3Н), 7,43-7,31 (т, 2Н), 7,26 (δ, 3Н), 7,04-6,98 (т, 2Н), 5,30 (δ, 1Н), 4,49-4,28 (т, 5Н), 4,12-4,06 (т, 2Н), 3,75 (ίά, 1= 7,6, 2,6 Гц, 1Н), 3,21 (δ, 4н), 2,62 (δ, 1Н), 2,15 (ά, 1= 4,4 Гц, 6Н), 1,63 (δ, 4Н), 1,36-1,31 (т, 18Н), 1,19 (δ, 11Н).

Пример получения 7. трет-Бутил-Ы-[(33,43)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-фтор-4-(гидрокисмметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамат

Способ А

Схема 1, стадия Н, подстадия 1 и 2 (фторирование и восстановление): раствор трет-бутил-Ν[(3З,4З)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-формил-тетрагидрофуран-3-ил]карбамата (9,0 г, 24,56) в тетрагидрофуране (100 мл) обрабатывают пирролидином (2,20 мл, 26,4 ммоль). Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 7 мин и обрабатывают 1-хлорметил-4-фтор-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-бис(тетрафторборатом) (10,0 г, 28,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 160 мин, затем гасят раствором насыщенного бикарбоната натрия в воде и экстрагируют последовательно этилацетатом и дихлорметаном. Органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворяют в метаноле (100 мл), и к раствору добавляют борогидрид натрия в виде одной порции (1,00 г, 26,2 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 37 мин, гасят раствором насыщенного бикарбоната натрия в воде и экстрагируют последовательно дихлорметаном и этилацетатом. Органические слои объединяют, сушат, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищают с помощью флэшхроматографии на силикагеле с элюированием градиентом смеси метанол/дихлорметан от 0:10 до 1:10 с получением указанного в заголовке соединения (2,70 г, 28%). ЕЗ/МС (т/е): 287 (М-99).

Пример получения 7, способ В

О(+)-пролин (691 мг, 6,00 ммоль) добавляют в виде одной порции к раствору трет-бутил-Щ(3З,4З)3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-формилтетрагидрофуран-3-ил]карбамата (2,00 г, 5,46 ммоль) в 2,2,2трифторэтаноле (16 мл, обрабатывают карбонатом калия и молекулярными ситами 3 А, и фильтруют пе- 17 027880 ред использованием). Добавляют молекулярные сита 3 А (500 мг), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. К реакционной смеси добавляют 1-(хлорметил)-4-фтор-1,4диазониабицикло[2.2.2]октан-бис(тетрафторборат) (2,51 г, 7,10 ммоль) в виде одной порции, и смесь перемешивалиют при комнатной температуре в течение 36 ч. Растворитель концентрируют под вакуумом, и остаток распределяют между водой (25 мл) и этилацетатом (25 мл). Добавляют бикарбонат натрия (7% водный раствор) для доведения рН до 8, и органический слой отделяют. Водный слой экстрагируют этилацетатом (2 х 15 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этаноле (25 мл) и тетрагидроборате натрия (289 мг, 7,64 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч растворитель выпаривают под вакуумом, и остаток распределяют между водой (30 мл) и этилацетатом (30 мл). Органический слой отделяют, сушат над сульфатом натрия и фильтруют. Фильтраты упаривают при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием от смеси этилацетат/гексан (1:1) до этилацетата с получением указанного в заголовке соединения (1,50 г, 70,0%) в виде белой пены. ЭР/МС (т/ζ): 287(М-99). ¹Н ЯМР (300,13 МГц, ίϋί1₃) δ 7,99-7,89 (т, 1Н), 7,81-7,74 (т, 1Н), 7,49-7,46 (т, 1Н), 7,26 (δ, 2Н), 6,98 (йй, 1= 9,0, 12,0 Гц, 1Н), 5,79-5,74 (т, 1Н), 4,39-4,34 (т, 1Н), 4,32-4,27 (т, 2Н), 2,14 (δ, 4Н), 1,71 (δ, 3Н).

Пример получения 7, способ С

П(+)-пролин (36 г, 313,1 ммоль) добавляют в виде одной порции к раствору трет-бутил-Х-[(33,43)3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-формил-тетрагидрофуран-3-ил]карбамата (95,6 г, 260,9 ммоль) в метаноле (956 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. К реакционной смеси добавляют 1-(хлорметил)-4-фтор-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-бис(тетрафторборат) (120,1 г, 339,2 ммоль) в виде одной порции, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель концентрируют под вакуумом, и остаток распределяют между раствором бикарбоната натрия (7% водный раствор) (800 мл) и этилацетатом (600 мл). Водный слой экстрагируют этилацетатом (2 х 300 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этаноле (956 мл) и тетрагидроборате натрия (13,80 г, 365,2 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч растворитель выпаривают под вакуумом, и остаток распределяют между водой (500 мл) и этилацетатом (500 мл). Органический слой отделяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием от смеси этилацетат/гексан (1:1) до этилацетата с получением указанного в заголовке соединения (55 г, 54%) в виде белой пены. ЭР/МС (т/ζ): 287(М-99). ¹Н ЯМР (300,13 МГц, СОС1₃) δ 7,99-7,89 (т, 1Н), 7,81-7,74 (т, 1Н), 7,497,46 (т, 1Н), 7,26 (δ, 2Н), 6,98 (йй, 1= 9,0, 12,0 Гц, 1Н), 5,79-5,74 (т, 1Н), 4,39-4,34 (т, 1Н), 4,32-4,27 (т, 2Н), 2,14 (§, 4Н), 1,71 (δ, 3Н).

Пример получения 8. Х-[[(33,43)-3-(5-Ацетамидо-2-фторфенил)-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил] карбамотиоил] бензамид

Схема 2, стадия I, (снятие защиты и образование тиомочевины): раствор трет-бутил-Ы-[(33,43)-3-(5ацетамидо-2-фторфенил)-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамата (2,70 г, 6,99 ммоль) в дихлорметане (40 мл) и трифторуксусную кислоту (8,00 мл, 106 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в течение 150 мин. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, и подвергают азеотропной дистилляции с толуолом. Остаток растворяют в тетрагидрофуране и обрабатывают триэтиламином (1,10 мл, 7,89 ммоль) и бензоилизотиоцианатом (1,00 мл, 7,41 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16,5 ч, а затем гасят раствором насыщенного бикарбоната натрия в воде, экстрагируют последовательно этилацетатом и дихлорметаном. Органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом смеси метанол/дихлорметан от 0:10 до 1:10 с получением указанного в заголовке соединения (2,60 г, 83%). ЭР/МС (т/е): 450 (М+1).

Пример получения 9. Гидрохлорид Х-[3-[(33,43)-3-амино-4-фтор-4-(гидроксиметил )тетрагидрофуран-3-ил]-4-фторфенил]ацетамида

- 18 027880

Схема 3, стадия Ь и стадия Ν, подстадия 1 (снятие защиты): этанол (8,61 мл, 148 ммоль) добавляют по каплям к раствору ацетилхлорида (9,36 мл, 131 ммоль) в этилацетате (127 мл) при 0 °С. После перемешивания при 0°С в течение 30 мин добавляют трет-бутил-^[(38,48)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамат (12,7 г, 32,8 ммоль), и затем реакционную смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают еще в течение 18 ч. Белое твердое вещество собирают фильтрацией и сушат при пониженном давлении до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (11,0 г; 99,0%). ЭР/МС (т/ζ): 287(М-35). ¹Н ЯМР (300,16 МГц, б₆ДМСО) δ 10,31 (δ, 1Н), 9,05 (δ, 2Н), 7,85-7,83 (т, 1Н), 7,75-7,71 (т, 1Н), 7,31-7,22 (т, 1Н), 5,15-5,07 (т, 3Н), 4,48-4,33 (т, 3Н), 4,12-3,97 (т, 3Н), 2,50 (е, 4Н), 2,05 (е, 4Н), 1,98 (е, 1Н), 1,59 (е, 1Н).

Пример получения 9, способ В

Хлористо-водородную кислоту (4 М В 1,4-диоксане, 1,95 мл, 7,80 ммоль) добавляют к раствору трет-о-бутил-^[(38,48)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3ил]карбамата (1,00 г, 2,59 ммоль) в этилацетате (10 мл), и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Смесь фильтруют, и белый осадок промывают этилацетатом (10 мл) с получением указанного в заголовке соединения (800 мг, 96,0%) в виде белого твердого вещества. ЭР/МС (т/ζ): 287 (М+1).

Пример получения 9, способ С

Хлористо-водородную кислоту в изопропиловом спирте 6 М (100 мл, 600 ммоль) добавляют по каплям к раствору трет-бутил-№[(38,48)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамата (56 г, 144,9 ммоль) в изопропиловом спирте (225 мл). После перемешивания при 22 °С в течение 16 ч реакционную смесь разбавляют гексанами (350 мл), и перемешивают еще в течение 30 мин. Белое твердое вещество собирают фильтрацией и сушат при пониженном давлении до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (36,5 г, 78%). ЭР/МС (т/ζ): 287 (М-35). ¹Н ЯМР (300,16 МГц, б6-ДМСО) δ 10,31 (е, 1Н), 9,05 (е, 2Н), 7,85-7,83 (т, 1Н), 7,75-7,71 (т, 1Н), 7,31-7,22 (т, 1Н), 5,15-5,07 (т, 3Н), 4,48-4,33 (т, 3Н), 4,12-3,97 (т, 3н), 2,50 (е, 4Н), 2,05 (е, 4Н), 1,98 (е, 1Н), 1,59 (е, 1Н).

Пример получения 10. ^[(4аК,7а8)-7а-(5-Ацетамидо-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро [3,4-б][ 1,3]тиазин-2-ил] бензамидин

Схема 2, стадия I (циклизация): раствор ^[[(38,48)-3-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамотиоил]бензамидина (2,60 г, 5,78 ммоль) и 1-хлор-Н^2-триметилпропениламина (1,10 мл, 8,31 ммоль) в дихлорметане (50 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 190 мин. Реакцию гасят раствором насыщенного бикарбоната натрия в воде и экстрагируют дихлорметаном. Органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищают с помощью флэшхроматографии на силикагеле с элюированием градиентом смеси этилацетат/гексан от 0:1 до 1:0 с получением указанного в заголовке соединения (1,36 г, 54%). ЭР/МС (т/е): 432,0 (М+1).

Пример получения 10, способ В

Раствор гидрохлорида №[3-[(38,48)-3-амино-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]-4фторфенил]ацетамида (14,5 г, 40,44 ммоль) в ТГФ (290 мл) обрабатывают триэтиламином (5,64 мл, 40,44 ммоль), и смесь перемешивают в течение 15 мин и затем охлаждают до 5°С. Добавляют бензоилизотиоцианат (6 мл, 44,48 ммоль), и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры в течение 3 ч. 1,1'-Карбонилдиимидазол (7,21 г, 44,48 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч, а затем нагревают с обратным холодильником в течение 72 ч. Реакционную смесь охлаждают до 22°С и затем приливают к воде (150 мл) и МТБЭ (200 мл). Органический слой отделяют, и водный слой промывают МТВЕ (2 х 100 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают с получением остатка. Остаток очищают с помощью флэшхроматографии на силикагеле с элюированием смесью метиленхлорид/этилацетат (1/1) с получением

- 19 027880 указанного в заголовке соединения в виде белого пенистого твердого вещества (10,5 г, 60%). ЭР/МС (т/е): 328,0 (М+1).

Пример получения 11. Х-[(4аК,7а8)-7а-(5-Ацетамидо-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]оксазин-2-ил]бензамид

Способ А

Схема 3, стадия I.. подстадии 2а и Ь (нейтрализация, образование тиомочевины и циклизация): триэтиламин (1,90 мл, 13,6 ммоль) добавляют к раствору гидрохлорида Х-[3-[(38,48)-3-амино-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]-4-фторфенил]ацетамида (4,00 г, 12,4 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) при 5°С в атмосфере азота. После перемешивания в течение 30 мин добавляют по каплям бензоилизотиоцианат (1,76 мл, 13,0 ммоль). Полученную смесь перемешивают при 5°С в течение 1 ч. Добавляют триметилсилилхлорид (1,73 мл, 13,6 ммоль) и ДМСО (968 мкл, 13,6 ммоль), и смесь перемешивают при 5°С в течение 2 ч. Реакционную смесь вливают в водный раствор двухосновного фосфата калия (20%, 150 мл) для доведения рН до 7-8, и перемешивают в течение 30 мин. Добавляют этилацетат (50 мл), и смесь фильтруют через диатомовую землю. Органический слой отделяют, и водный слой экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтраты упаривают при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом смеси этилацетат/гексан от 60 до 90% с получением указанного в заголовке соединения (3,50 г, 68,0%) в виде белого твердого вещества. ЭР/МС (т/ζ): 416 (М+1).

Пример получения 11, способ В

Схема 3, стадия I., подстадии 2а и Ь (нейтрализация, образование Ν-карбамоилбензамида и циклизация): смесь гидрохлорида ^[3-[(33,43)-3-амино-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]-4фторфенил]ацетамида (12 г, 37,19 ммоль), триэтиламина (5,7 мл, 41 ммоль) и фенил-^бензоилкарбамата (9,9 г, 41 ммоль) растворяют в ТГФ (240 мл), и смесь нагревают при 70°С в течение 2 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры и экстрагируют этилацетатом (500 мл), промывают водой (250 мл), рассолом (250 мл), сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха с получением промежуточного соединения тиомочевина. (ЖХ-МС (т/ζ): 434 (М+Н)). Неочищенное вещество растворяют в дихлорметане (240 мл) и охлаждают до -78°С. Добавляют трифторид диэтиламиносеры (5,9 мл, 45 ммоль), убирают охлаждающую баню с сухим льдом, и смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры, и перемешивают 1 ч. Смесь разбавляют дихлорметаном (500 мл) и промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (250 мл). Смесь фильтруют через диатомовую землю, и промывают рассолом (250 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом дихлорметана и метанола от 99:1 до 95:5. Очистку повторяют на смешанных фракциях с получением указанного в заголовке соединения (13,5 г, 87%). ЖХ-МС (т/ζ): 415,8 (М+Н).

Пример получения 12. (4аК,7аЗ)-7а-(5-Амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4й] [ 1,3]тиазин-2-амин

Способ А

Схема 2, стадия К, подстадия 1 (снятие защиты): раствор ^[(4аК,7аЗ)-7а-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]тиазин-2-ил]бензамида (2,36 г, 3,15 ммоль), гидрохлорида о-метилгидроксиламина (1,50 г, 17,6 ммоль) и пиридина (1,50 мл, 18,6 ммоль) в этаноле (30 мл) нагревают до 50°С в течение 16 ч. Затем добавляют концентрированную хлористо-водородную кислоту (6,00 мл, 79,2 ммоль), и нагревание продолжают в течение дополнительных 24 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом от 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (0/10) до 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (1/10) с получением указанного в заголовке соединения (800 мг, 89%). ЭР/МС (т/е): 286,0 (М+1).

Способ В

Схема 2, стадия К, подстадия 1 (снятие защиты): раствор ^[(4аК,7аЗ)-7а-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]тиазин-2-ил]бензамида (1,20 г, 2,50 ммоль), гидрохлори- 20 027880 да о-метилгидроксиламина (1,50 г, 23,5 ммоль) и пиридина (2,00 мл, 24,7 ммоль) в этаноле (25 мл) нагревают до 50°С в течение 18 ч. Затем реакционную смесь очищают с помощью 8СХ колонки с использованием метанола с последующим использованием 7 М раствора аммиака в метаноле в качестве элюента с получением остатка. Остаток растворяют в этаноле (15 мл) и хлористо-водородной кислоте (3,00 мл, 39,6 ммоль), и нагревают при 50°С в течение 23 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью 8СХ колонки метанолом с последующим использованием 7 М раствора аммиака в метаноле с получением указанного в заголовке соединения (640 мг, 90%). ЭР/МС (т/е): 286,0 (М+1).

Пример получения 12, способ С

Раствор К-[(4аК,7а8)-7а-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]тиазин-2-ил]бензамида (2,15 г, 2,49 ммоль), гидроксида лития (179 мг, 7,47 ммоль) в метаноле (25 мл) нагревают до 50°С в течение 16 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, и растворитель выпаривают. Остаток разбавляют этилацетатом (15 мл) и водой (20 мл) и добавляют 2 М водный раствор лимонной кислоты для доведения рН до 1. Водный слой отделяют и нейтрализуют водным раствором 50% №-ЮН мас./мас. до рН 10. Реакционную смесь промывают этилацетатом (2x15 мл), и органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия и фильтруют. Фильтрат упаривают с получением указанного в заголовке соединения (850 мг, 89%). Неочищенное вещество используют без дальнейшей очистки. ЭР/МС (т/е): 286,0 (М+1).

Пример получения 13

К-[3-[(4аК,7а8)-2-Амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]ацетамид

Способ А р

н

Схема 3, стадия М, подстадия 1 (снятие защиты): К-[(4аК,7а8)-7а-(5-ацетамидо-2-фторфенил)-4афтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]оксазин-2-ил]бензамид (3,50 г, 8,43 ммоль) добавляют к раствору гидроксида лития (225 мг, 9,27 ммоль) в метаноле (35 мл), и смесь перемешивают при 40°С в течение 18 ч. Растворитель выпаривают, и остаток распределяют между этилацетатом (50 мл) и водой (30 мл). Водный слой экстрагируют этилацетатом, и органические слои объединяют. Органический раствор промывают водной хлористо-водородной кислотой (0,1 М, 50 мл). Затем водный слой обрабатывают водным раствором гидроксида натрия (2,0 М) до рН 10 и дважды экстрагируют этилацетатом (2 х 50 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтраты упаривают при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,9 г, 72%) в виде белой пены. ЭР/МС (т/ζ): 312(М+1).

Пример получения 13, способ В

Схема 3, стадия Ν, подстадии 2а и 2Ь (нейтрализация и циклизация): раствор гидрохлорида N-[3[(38,48)-3-амино-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]-4-фторфенил]ацетамида (8 г, 24,8 ммоль) в ТГФ (80 мл) обрабатывают [бензоил(феноксикарбонил)амино]калием (7,62, 27,3 ммоль), и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель выпаривают. Остаток распределяют в воде (50 мл) и этилацетате (100 мл), и водный слой отбрасывают. Органический слой промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат упаривают, и остаток сушат под вакуумом до постоянной массы. Неочищенное вещество растворяют в метиленхлориде (120 мл) и затем охлаждают до -35°С в атмосфере азота. Добавляют трифторид диэтиламиносеры (3,94 мл, 29,75 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру -35°С. Смесь перемешивают 1 час при этой температуре, и затем нагревают до 22°С в течение 2 ч. Реакционную смесь приливают к водному раствору двухосновного фосфата калия (200 мл) и метиленхорида (50 мл). Органический слой отделяют, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат упаривают, и сушат в вакууме до постоянной массы. Это неочищенное вещество растворяют в метаноле (80 мл), и добавляют гидроксид лития (783 мг, 32,2 ммоль). Смесь нагревают при 50°С в течение 16 ч. Метанол выпаривают, и остаток приливают к воде (50 мл) и этилацетату (100 мл). Органический слой отделяют, и водный слой промывают дополнительным количеством этилацетата (100 мл). Органические слои объединяют и промывают хлористо-водородной кислотой 0,5 М (2 х 30 мл). Водные слои объединяют, и добавляют гидроксид натрия для доведения рН до 10, и водную смесь экстрагируют этилацетатом (2 х 50 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат упаривают досуха, и остаток сушат в вакууме до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (5,5 г; 71% общий выход трех стадий). ЭР/МС (т/ζ): 312(М+1).

Пример получения 14. (4аК,7а8)-7а-(5-Амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-б]

- 21 027880 [1,3] оксазин-2-амин

Схема 3, стадия М, подстадия 1 (снятие защиты): Ы-[3-[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4-б][1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]ацетамид (800 мг, 2,57 ммоль) добавляют к водной хлористо-водородной кислоте (1,0 М, 10 мл), и полученный раствор нагревают при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до 22°С и промывают этилацетатом (5 мл). Водный слой отделяют и обрабатывают водным раствором гидроксида натрия (1,0 М) до рН 10, и экстрагируют этилацетатом (2x5 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтраты упаривают при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (650 мг, 2,34 ммоль). ЭР/МС (т/ζ): 270 (М+1).

Пример получения 14, способ В

Схема 3, стадия Ν, подстадии 2а и Ь (нейтрализация и циклизация): триэтиламин (0,32 мл, 2,3 ммоль) добавляют к раствору гидрохлорида ^[3-[(33,43)-3-амино-4-фтор-4-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]-4-фторфенил]ацетамида (600 мг, 1,85 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрируют. Этилацетат (10 мл) добавляют к остатку, и полученную смесь нагревают до 40°С в течение 10 мин. Смесь фильтруют, и фильтрат концентрируют и добавляют в сосуд объемом 40 мл с завинчивающейся пробкой. Добавляют абсолютный этанол (12 мл) и цианогенбромид (305 мг, 2,79 ммоль), и смесь нагревают до 120°С в течение 4 ч. Растворитель выпаривают досуха. Добавляют воду (20 мл) и водную хлористо-водородную кислоту (1,0 М, 20 мл). Полученную смесь промывают этилацетатом (40 мл). Водный слой обрабатывают концентрированной водной хлористо-водородной кислотой (3,2 мл) и перемешивают при 50°С в течение 48 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры и водным раствором гидроксида натрия (2,0 М) доводят рН до щелочного значения. Затем смесь экстрагируют этилацетатом (200 мл). Органический слой промывают рассолом (100 мл) и сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью флэшхроматографии на силикагеле с элюированием градиентом от 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (98:2) до 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (90:10) с получением указанного в заголовке соединения (175 мг, 35%) в виде белого твердого вещества. ЭР/МС (т/ζ): 270 (М+1).

Пример получения 14, способ С ^[3-[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]ацетамид (17 г, 54,6 ммоль) добавляют к водной хлористо-водородной кислоте (1,0 М, 218 мл), и полученный раствор нагревают при 90°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до 5°С, и добавляют водный раствор гидроксида натрия 50% мас./мас. для доведения рН до 10. Смесь промывают этилацетатом (3 х 100 мл). Органические слои отделяют, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтраты упаривают при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (13,4 г, 91%). ЭР/МС (т/ζ): 270 (М+1).

Пример получения 15. ^[3-[(4аК,7аЗ)-2-Амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-<1][1,3]оксазин7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид

Схема 3, стадия М, подстадия 2, или стадия Ν, подстадия 3 (амидирование): диметилформамид (20 мкл, 0,26 ммоль) и оксалилхлорид (162 мкл, 1,87 ммоль) добавляют к суспензии 5-цианопиридин-2карбоновой кислоты (310 мг, 2,00 ммоль) в ацетонитриле (10 мл), и перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 10 мин. Затем эту смесь добавляют в виде одной порции к раствору (4аК,7аЗ)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]оксазин-2-амина(500 мг, 1,86 ммоль) в этаноле (5 мл) и воде (5 мл), имевшему температуру 50°С, и поддерживают температуру при 50°С. Реакционную смесь перемешивают в течение примерно 10 мин и гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Затем смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением остатка, который очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом МеОН в дихлорметане от 0 до 10% и дополнительно дважды очищают с использованием градиента 7 М раствора аммиака в смеси метанол/ди- 22 027880 хлорметан (5/95) с получением указанного в заголовке соединения (470 мг, 63%). ЭР/МС (т/ζ): 400 (М+1).

Пример получения 15, способ В К раствору (4аК,7аδ)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7дигидро-4Н-фуро[3,4-д][1,3]оксазин-2-амина (11,6 г, 41,8 ммоль) в смеси воды (81 мл) и этанола (116 мл), добавляют водную хлористо-водородную кислоту (41,7 мл, 41,7 ммоль). Добавляют гидрохлорид 1(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (8,41 г, 43,8 ммоль) и 5-цианопиридин-2-карбоновую кислоту (6,5 г, 43,8 ммоль) в виде одной порции, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляют дополнительное количество гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (10 мг, 52,16 мкмоль), и смесь перемешивают в течение 30 мин. Реакционную смесь нагревают при 50°С, и расстворяют все твердые вещества. 1 М водный раствор гидроксида натрия (45,97 мл, 45,97 ммоль) добавляют по каплям, поддерживая температуру 50°С и доводя рН до 11. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, и белое твердое вещество собирают фильтрованием и промывают водой. Твердое вещество сушат под вакуумом до постоянной массы и затем очищают с помощью хроматографии на силикагеле с элюированием смесью метиленхлорид/метанол (95: 5) с получением указанного в заголовке соединения (7,5 г, 45%) в виде белого твердого вещества. ЭР/МС (т/ζ): 400 (М+1).

Пример получения 16. N-[3-[(4аК,7аδ)-2-Амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-ά][1,3]оксазин7а-ил]-4-фторфенил]-5-хлорпиразин-2-карбоксамид

Схема 3, стадия М, подстадия 2, или стадия Ν, подстадия 3 (амидирование): смесь 5-хлорпиразин-2карбоновой кислоты (1,53 г, 9,66 ммоль) в ацетонитриле (15 мл, 283 ммоль) обрабатывают ДМФА (115 мкл, 1,49 ммоль) и оксалилхлоридом (970 мкл, 11,1 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 20 мин. В отдельную колбу добавляют (4аК,7аδ)-7а-(5-амино-2фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-д][1,3]оксазин-2-амин (2,00 г, 7,43 ммоль), этанол (7,4 мл), воду (7,4 мл), и смесь нагревают при 50°С. К раствору, полученному ранее, добавляют хлорангидрид, и реакционную смесь перемешивают при 50°С в течение 20 мин. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, разбавляют этилацетатом (200 мл) и промывают водой (40 мл) и насыщенным водным раствором №НСО₃ (40 мл).

Промывные воды объединяют и экстрагируют этилацетатом (100 мл). Объединенные органические слои сушат (Nа2δО4), и растворитель удаляют под вакуумом с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием этилацетатом с получением указанного в заголовке продукта (2,85 г, 94%). ЭР/МС (т/е): 410 (М+1)

Пример получения 17. 5-(Циклопропилметокси)пиразин-2-карбоновая кислота

Раствор 5-хлорпиразин-2-карбоновой кислоты (1,00 г, 6,31 ммоль), циклопропилкарбинол (1,00 мл, 12,4 ммоль) и трет-бутоксид калия (2,00 г, 17,8 ммоль) в диметилформамиде (20,0 мл) нагревают при 100°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, гасят 1 М хлористоводородной кислотой. Смесь экстрагируют этилацетатом и смесью изопропиловый спирт/хлороформ (1/10), сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,10 г, 90%) в виде сероватого твердого вещества. Эту кислоту используют непосредственно без дополнительной очистки.

Пример получения 18. Метил-5-(циклопропокси)пиразин-2-карбоксилат

О

Циклопропанол (542 мкл, 8,69 ммоль) добавляют к суспензии метил-5-хлорпиразин-2-карбоновой кислоты (1,0 г, 5,79 ммоль) и карбоната калия (1,60 г, 11,59 ммоль) в диметилформамиде (11,6 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 15 ч при комнатной температуре, затем в течение 24 ч при 50°С. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом (3 раза). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением коричневого масла. Неочищенный продукт очищают с

- 23 027880 помощью хроматографии на силикагеле с элюированием смесью этилацетат/гексан от 0:100 до 35:65 с получением указанного в заголовке соединения (610 мг, 54%). ЭР/МС (т/е): 195,0 (М+1).

Пример получения 19. 5-(Циклопропокси)пиразин-2-карбоновая кислота О

Гидроксид лития (264 мг, 6,28 ммоль) добавляют к раствору метил-5-(циклопропокси)пиразин-2карбоксилата (610 мг, 3,14 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) и воде (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 50°С, охлаждают до комнатной температуры, разбавляют водой, медленно добавляя 1 М НС1, доводят рН до 2, и экстрагируют дихлорметаном (4 раза). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (550 мг, 97%). ЭР/МС (т/е): 181,0 (М+1).

Пример получения 20. 5-(Оксетан-2-илметокси)пиразин-2-карбоновая кислота

Во флакон для обработки микроволновым излучением добавляют 5-хлоропиразин-2-карбоновую кислоту (100,0 мг, 0,631 ммоль), диметилформамид (5 мл), оксетан-2-илметанол (83,4 мг, 0,946 ммоль) и трет-бутоксид калия (176,9 мг, 1,58 ммоль). Наблюдают небольшое выделение тепла. После 1 мин при комнатной температуре флакон герметично закрывают, и смесь нагревают при 120°С в течение 30 мин под воздействием микроволнового излучения. Затем реакционную смесь гасят водным КН₄С1, и растворитель выпаривают при пониженном давлении. Полученный остаток измельчают в порошок в 2пропаноле. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества кремового цвета (0,294 г, 99%), и используют без дальнейшей очистки. ЭР/МС (т/е): 211,0 (М+1), 208,8 (М-Н).

Пример получения 21. 5-(2,2-Дифторэтокси)пиразин-2-карбоновая кислота

трет-Бутоксид калия (4,25 г, 37,84 ммоль) добавляют к раствору 5-хлорпиразин-2-карбоной кислоты (1,00 г, 6,31 ммоль) и дифторэтанола (2,59 г, 31,54 ммоль) в ДМФА (20 мл), и смесь нагревают при 100°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, и перемешивают в течение ночи в атмосфере азота. Реакцию гасят 1 М НС1 (30 мл) и экстрагируют этилацетатом (3 раза). Объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом метанола в дихлорметане от 0,5 до 10% и подвергают азеотропной дистилляции с ксилолами для удаления остаточного количества ДМФА с получением указанного в заголовке продукта (1,18 г, 91%). ЭР/МС (т/е): 205,0 (М+1).

Следующие соединения в таблице 1 получают способом, по существу, аналогичным способу, описанному в примере получения 21, используя соответствующий спирт.

Таблица 1

№ примера получения	Химическое название	Структура	ЭР/МС (т/ζ) (М+1)
22	5 -(2-Метоксиэтокси)пиразин-2карбоновая кислота	О	199,0
23	5-Этоксипиразин-2-карбоновая кислота	X О ΖΜ о	169,0
24	5-Пропоксипиразин-2-карбоновая кислота	X о о	183,0

- 24 027880

25	5-(2,2,3,3- Тетрафторпропокси)пиразин-2карбоновая кислота	О р <ν^οη р^ХрсДьГ	255,0
26	5-(2,2-Дифторпропокси)пиразин2-карбоновая кислота	О	219,0
27	5-[(2,2- Дифторциклопропил)метокси] пи разин-2-карбоновая кислота	р £ /он	231,0

Пример получения 28. Метил-5-(2,2,3,3-тетрафторпропокси)пиридин-2-карбоксилат о

Метил-5-гидроксипиридин-2-карбоксилат (0,903 г, 5,90 ммоль) суспендируют в ацетоне (7 мл) и ДМФА (7 мл). 325 меш карбоната калия (2,44 г, 17,69 ммоль) добавляют в виде одной порции и перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч в атмосфере азота. 2,2,3,3-Тетрафторпропил трифторметансульфонат (2,02 г, 7,67 ммоль) добавляют по каплям, и смесь перемешивают в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и насыщенным ΝΗ₄Ο и экстрагируют этилацетатом (3 раза). Объединенные органические экстракты промывают рассолом, сушат над №₂8О₄, фильтруют и растворитель удаляют под вакуумом. Неочищенный продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом этилацетата в дихлорметане 0-20% с получением указанного в заголовке соединения (1,047 г, 66%). ЭР/МС (т/е): 268,0 (М+1).

Пример получения 29. 5-(2,2,3,3-Тетрафторпропокси)пиридин-2-карбоновая кислота

Гидроксид лития (469 мг, 19,6 ммоль) добавляют к раствору метил-5- (2,2,3,3-тетрафторпропокси)пиридин-2-карбоксилата (1,047 мг, 3,92 ммоль) в ТГФ (7 мл) и воде (7 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 60°С, охлаждают до комнатной температуры, гасят 1 М НС1 (20 мл), разбавляют рассолом и экстрагируют дихлорметаном (3 раза). Органические слои объединяют, сушат над Μ§δΟ₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (921 мг, 93%). ЭР/МС (т/е): 254,0 (М+1).

Пример получения 30. Этил-5-(2,2-дифторэтокси)-3-фторпиридин-2-карбоксилат

Этил-3,5-дифторпиридин-2-карбоксилат (0,98 г, 5,24 ммоль) растворяют в ацетонитриле (20 мл). Добавляют дифторэтанол (430 мкл, 6,81 ммоль) с последующим добавлением карбоната калия (1,83 г, 13,09 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней, затем фильтруют, и фильтрат концентрируют. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом смеси этилацетат/гексаны 0-25-50% с получением указанного в заголовке соединения (242 мг, 18%). ЭР/МС (т/е): 250,0 (М+1).

Пример получения 31. 5-(2,2-Дифторэтокси)-3-фторпиридин-2-карбоновая кислота

Гидроксид натрия (2 Μ В воде, 2,43 мл, 4,86 ммоль) добавляют к раствору этил-5-(2,2-дифтоэтокси)3-фторпиридин-2-карбоксилата (242 мг, 0,97 ммоль) в ТГФ (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 дней. Реакцию гасят добавлением 4 М НС1 в диоксане (1,25 мл, 5 ммоль), и раствор концентрируют с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (493

- 25 027880 мг, 229%). ЭР/МС (т/е): 222,0 (М+1).

Пример получения 32. 2-Хлор-3-фтор-5-(2,2,3,3-тетрафторпропокси)пиридин

6-Хлор-5-фторпиридин-3-ол (300 мг, 2,03 ммоль) растворяют в ДМФА (10 мл). Добавляют карбонат калия (562 мг, 4,07 ммоль) с последующим добавлением 2,2,3,3-тетрафторпропилтрифторметансульфоната (591 мг, 2,24 ммоль) (для приготовления этого реагента см. ϋδ 2013/143900, пример 1). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч, после чего выдерживают при комнатной температуре в течение 4 дней. Реакционную смесь разбавляют водным раствором ΝαΗΟΟ₃ и этилацетатом. Слои разделяют, и водный слой экстрагируют этилацетатом (2 х). Объединенные органические слои промывают рассолом и концентрируют. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле с использованием градиента смеси этилацетат/гексаны 0-10% с получением указанного в заголовке соединения (440 мг, 83%). ЭР/МС (т/е): 262,0 (М+1).

Пример получения 33. Метил-3-фтор-5-(2,2,3,3-тетрафторпропокси)пиридин-2-карбоксилат

2-Хлор-3-фтор-5-(2,2,3,3-тетрафторпропокси)пиридин (440 мг, 1,68 ммоль) добавляют к автоклаву Рагг, содержащему ацетат палладия(П) (0,04 г, 0,18 ммоль) и 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (0,12 г, 0,21 ммоль). Добавляют ацетонитрил (9 мл) с последующим добавлением метанола (6 мл). Добавляют триэтиламин (0,6 мл, 4,3 ммоль), и автоклав герметично закрывают, продувают Ν₂, продувают СО и затем создают давление СО 0,69 МПа и нагревают при 100°С в течение 18 ч. Раствор концентрируют с получением неочищенного продукта, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле с использованием градиента смеси этилацетат/гексаны 0-25% с получением указанного в заголовке соединения (430 мг, 90%). ЭР/МС (т/е): 286,0 (М+1).

Пример получения 34. 3-Фтор-5-(2,2,3,3-тетрафторпропокси)пиридин-2-карбоновая кислота

Гидроксид натрия (2 М в воде, 2 мл, 4,0 ммоль) добавляют к раствору метил-3-фтор-5-(2,2,3,3тетрафторпропокси)пиридин-2-карбоксилата (430 мг, 0,151 ммоль) в ТГФ (15 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакцию гасят добавлением 4 М НС1 в диоксане (1,25 мл, 5 ммоль), и раствор концентрируют с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (476 мг, 99%). ЭР/МС (т/е): 222,0 (М+1).

Пример получения 35. (1-Фторциклопропил)метанол

Раствор 1-фтор-циклопропанкарбоновой кислоты (0,78 г, 7,49 ммоль) в ТГФ (8 мл) с температурой 0°С обрабатывают по каплям 1 М комплексом борантетрагидрофурана (8,99 мл, 8,99 ммоль) в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в атмосфере азота в течение 18 мин. Добавляют дополнительное количество 1 М комплекса борантетрагидрофурана (3,75 мл, 3,75 ммоль), и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч. Реакцию гасят водой (наблюдается экзотермический эффект) с последующим добавлением 1 н. НС1 (25 мл). Смесь экстрагируют этилацетатом и разделяют. Водный слой экстрагируют этилацетатом (2 раза), и органические слои объединяют. Объединенные органические слои сушат (Мд8О₄), фильтруют и растворитель удаляют под вакуумом с получением указанного в заголовке продукта (0,848 г, 100%).

Пример получения 36. 5-(2,2,2-Трифторэтокси)пиразин-2-карбоновая кислота

К раствору метил-5-хлорпиразин-2-карбоксилата (25 г, 144,87 ммоль) в ДМФА (250 мл) в атмосфере азота добавляют карбонат цезия (47,2 г, 144,8 ммоль) и 2,2,2-трифторэтанол (15,7 мл, 217,3 ммоль).

- 26 027880

Реакционную смесь перемешивают 72 ч при комнатной температуре. Смесь вливают в воду (1 л), и бледно-коричневое твердое вещество собирают фильтрованием. Твердое вещество промывают водой и сушат под вакуумом до постоянной массы. Сухое неочищенное вещество дважды перекристаллизовывают из смеси воды (200 мл) и изопропилового спирта (40 мл) с получением промежуточного соединения метил5-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-карбоксилат (15 г, 93 %) в виде бледно-кремового твердого вещества, и его используют без дальнейшей очистки. Раствор промежуточного соединения метил-5-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-карбоксилат (5 г, 21,17 ммоль) в метаноле (50 мл) и 1 М водный раствор гидроксида натрия (42,3 мл, 42,3 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляют хлористо-водородную кислоту 35% мас./мас. для доведения рН до 2. Метанол выпаривают, и бледнокремовое твердое вещество выделяют фильтрованием. Твердое вещество промывают водой и сушат под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (3 г, 51%). ЭР/МС (т/ζ): 223,1 (М+1).

Пример получения 37. 5-(2,2,2-Трифторэтокси)пиридин-2-карбоновая кислота О

К раствору метил-5-гидроксипиридин-2-карбоксилата (10,1 г, 65,95 ммоль) и карбоната цезия (42,9 г, 131,9 ммоль) в ДМФА (1 л) добавляют раствор 2,2,2-трифторэтилтрифторметансульфоната (22,96 г, 98,93 ммоль) в 20 мл ДМФА в течение 2 ч. Реакционную смесь перемешивают 4 ч при комнатной температуре, а затем вливают в воду (1 л) и перемешивают дополнительно в течение 1 ч. Коричневое твердое вещество собирают фильтрованием и промывают дополнительным количеством воды. Твердое вещество сушат до постоянной массы с получением промежуточного соединения (10,3 г, 66%) метил-5-(2,2,2трифторэтокси)пиридин-2-карбоксилат, который используют без дальнейшей очистки. К раствору метил5-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-карбоксилата (4,5 г, 19,1 ммоль) в метаноле (45 мл) добавляют 1 М раствор гидроксида натрия (38,2 мл, 38,2 ммоль), и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Значение рН реакционной смеси доводят НС1 35% мас./мас. до 1, а затем полученное твердое вещество выделяют фильтрованием. Твердое вещество промывают водой и затем сушат под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (3 г, 70%). ЭР/МС (т/ζ): 222,1 (М+1).

Пример получения 38. [Бензоил(феноксикарбонил)амино]калий

1,5 М раствор трет-Бутоксид калия (113,8 мл, 182 ммоль) добавляют к раствору бензамида (20,36 г, 168 ммоль), дифенилкарбоната (30 г, 140 ммоль) в тетрагидрофуране (450 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при 20°С. Бледно-розовое твердое вещество собирают фильтрованием, и сушат при пониженном давлении до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (29 г; 74%). ¹Н ЯМР (300,16 МГц, сГ-ДМСО) δ 7,88-7,85 (т, 2Н), 7,55-7,40 (т, 3Н), 7,15-7,10 (т, 2Н), 6,77-6,67 (т, 3Н).

Пример 1

Гидрохлорид Ы-[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-фторпиридин-2-карбоксамида

Схема 2, стадия К, подстадия 2 (амидирование): оксалилхлорид (180 мкл, 2,07 ммоль) добавляют к раствору диметилформамида (180 мкл, 2,33 ммоль) в ацетонитриле (10 мл), и полученную реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин. К полученному раствору добавляют 5-фторпиридин-2-карбоновую кислоту (300 мг, 2,13 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивают в течение дополнительных 40 мин, а затем 5,0 мл этого раствора удаляют с помощью шприца и добавляют по каплям к раствору (4аК,7аЗ)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-2-амина (330 мг, 1,04 ммоль) в этаноле (6,0 мл) и воде (6,0 мл) при 50 °С. Полученный раствор нагревают при 50 °С в течение 50 мин, после чего очищают с помощью ЗСХ колонок (метанол, затем 7 М раствор аммиака в метаноле) с получением остатка, который снова очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием от 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (0/10) до 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (1/10) с получением остатка, который дополнительно очищают путем ВЭЖХ с использованием колонки С18 с высоким разрешением (Аа1ег§ Х-Впс1уе ΟΒΏ 30 х 75 мм,

- 27 027880 размер частиц 5 мкм) с элюированием градиентом ацетонитрила в (10 мМ водном растворе бикарбоната аммония с 5% метанолом) 15-40%. Элюент, содержащий продукт, концентрируют при пониженном давлении до ~ 100 мл и затем лиофилизируют с получением белого остатка в виде свободного основания целевого продукта. Это вещество растворяют в 2 мл смеси дихлорметан/метанол (1/1) и обрабатывают 1 М НС1 в эфире (360 мкл, 0,36 ммоль). Образец концентрируют с получением указанного в заголовке соединения (177 мг, 38%). ЭР/МС (т/е): 409,0 (М+1).

Пример 2

Гидрохлорид А[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-метоксипиразин-2-карбоксамида

Схема 2, стадия К (образование амида): оксалилхлорид (127 мкл, 1,46 ммоль) добавляют к суспензии 5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты (225 мг, 1,46 ммоль) и диметилформамида (113 мкл, 1,46 ммоль) в ацетонитриле (6 мл). Полученную реакционную смесь перемешивают в течение 90 мин. Этот раствор добавляют по каплям к раствору (4аК,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4-4][1,3]тиазин-2-амина (320 мг, 1,12 ммоль) в этаноле (5,5 мл) и воде (5,5 мл) при 50°С. Полученный раствор нагревают при 50°С в течение 5 ч. Реакционную смесь вливают в делительную воронку, содержащую 200 мл ΝπΙΙ('Ό₃ (водн.). Образец экстрагируют дихлорметаном (3 х 200 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом и концентрируют. Неочищенный продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием от 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (0/10) до 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (1/10). Это вещество дополнительно очищают с помощью обращенно-фазовой хроматографии с использованием 150 г колонки С18 с высоким разрешением и с элюированием градиентом ΑСN в 10 мМ (водном растворе бикарбоната аммония с 5% МеОН) 5-60%. Элюент, содержащий продукт, выделяют и экстрагируют раствором хлороформ :изопропанол в соотношении 4:1 (3 х 50 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом, сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют с получением свободного основания целевого соединения. Это вещество растворяют в дихлорметане (15 мл) и обрабатывают 4 М НС1 в диоксане (900 мкл, 3,6 ммоль). Образец концентрируют с получением указанного в заголовке соединения (160 мг, 31,2%). ЭР/МС (т/е): 422,0 (М+1).

Пример 3

Гидрохлорид А[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида

Схема 2, стадия К (образование амида): оксалилхлорид (60,0 мкл, 692 мкмоль) добавляют к раствору диметилформамида (60,0 мкл, 776 мкмоль) в ацетонитриле (4,0 мл), и полученную реакционную смесь перемешивают в течение 16 мин. К полученному раствору добавляют 5-цианопиридин-2-карбоновую кислоту (106 мг, 715 мкмоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 33 мин, и 2,0 мл этого раствора удаляют с помощью шприца и добавляют по каплям к раствору (4аК,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-2-амина (110 мг, 347 мкмоль) в этаноле (2,0 мл) и воде (2,0 мл) при 50°С. Полученный раствор нагревают при 50°С в течение 44 мин с последующей очисткой с помощью 8СХ колонки (от метанола до 7 М раствора аммиака в метаноле) с получением остатка, который снова очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием от 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (0/10) до 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (1/10) с получением остатка в виде свободного основания целевого продукта (120 мг, 83%). Это вещество растворяют в 5 мл смеси дихлорметан/метанол (1/1) и обрабатывают 1 М НС1 в эфире (300 мкл, 0,30 ммоль). Образец концентрируют с получением указанного в заголовке соединения (128 мг, 81,6%). ЭР/МС (т/е): 416,1 (М+1).

Пример 4

А[3-[(4аК,7а8)-2-Амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5(оксетан-2-илметокси)пиразин-2-карбоксамид

- 28 027880

Раствор циклического ангидрида 1-пропанфосфоновой кислоты 50 мас.% в этилацетате (8,90 мкл, 1,50 ммоль) добавляют во флакон для обработки микроволновым излучением, содержащий смесь (4аК,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-д][1,3]тиазин-2-амина (81,2 мг, 0,285 ммоль), 5-(оксетан-2-илметокси)пиразин-2-карбоновой кислоты (140 мг, 0,300 ммоль) и безводного дихлорметана (10 мл). Флакон для обработки микроволновым излучением герметично закрывают, и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь распределяют между водой и дихлорметаном, и слои разделяют с помощью картриджа для разделения фаз. Органические слои объединяют, и растворитель выпаривают при пониженном давлении. Полученное масло растворяют в метаноле, фильтруют и очищают с помощью препаративной ВЭЖХ (РНепотепех Оетт1 10 мкм 50x150 мм С-18) (СН₃СЫ и вода с 10 мМ бикарбоната аммония, СН₃СЫ от 10 до 100% в течение 10 мин при 120 мл/мин) (1 впрыскивание). Фракции, содержащие продукт, концентрируют досуха в течение ночи в центробежном испарителе с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (40 мг, 28%). ЭР/МС (т/е): 478,2 (М+1).

Следующие соединения в табл. 2 получают способом, по существу аналогичным способу, описанному в примерах 1-3, используя для реакции образования амида соответствующим образом замещенную карбоновую кислоту. Каждый из примеров, показанных в примерах 1-3 и в табл. 2, может быть получен в виде свободного основания или в виде фармацевтически приемлемой соли, такой как гидрохлорид, как описано в примере 3.

Таблица 2

№ примера получе- ния	Химическое название	Структура	ЭР/МС (т/ζ) (М+1)
5	Гидрохлорид N-[3- [(4аК,7а8)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с11 [ 1,3] тиазин-7а-ил] -4фторфенил]-5хлорпиридин-2карбоксамида	Р НС|	425,0
6	Гидрохлорид N-[3[(4аК, 7а8) -2-Амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4с11 [ 1,3] тиазин-7а-ил] -4фторфенил]-3,5дифторпиридин-2карбоксамида	Р 'Ύ'Ν ? νη2 ,χ/Ч'	427,0
7	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с11 [ 1,3] тиазин-7а-ил] -4фторфенил]-1(дифторметил)пиразол -3-карбоксамида	Р °ΗΡχ НС1 : N^N42 чч ν-ν Р	430,0

- 29 027880

8	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с11 [ 1,3] тиазин-7а-ил] -4фторфенил] -3 -хлор-5 цианопиридин-2карбоксамида	Р	450,0
о=( о А о ζ	°11 ;Ν ΝΗ2 щХХ Н
	Гидрохлорид N-[3-		Р
	[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-		о^рз НС1
9	фуро[3,4- с11 [ 1,3] тиазин-7а-ил] -4фторфенил]-5-метил-	АТХ4	Ξ Ν г ΝΗ2 ,Α	406,0
	пиразин-2- карбоксамида		Η
	Гидрохлорид N-[3-		Ρ
	[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-		о^рз НС1 Χ-Ά Μ ΑΑ μ и
10	фуро[3,4- б|| 1.3|тиаэин-7а-ил|-4-	// α^Ν	ζ ΙΝ Ι\Ι И 2	426,0
	фторфенил]-5- пиримидин-2- карбоксамида	Η
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-	сХН НС1
11	фуро[3,4- б][1,3]тиазин-7а-ил]-4- фторфенил]-5- хлортиазол-2-	А	ά	431,0
	карбоксамида	/ С1
	Гидрохлорид N-[3-		Ρ /'-4''''8 НС1
	[(4аК,7а5)-2-амино-4а-		0 I ι
	фтор-5,7-дигидро-4Н-		: Ν^ΝΗ,
12	фуро[3,4-	с		460,0
	б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-	аУ	υ
	фторфенил]-5-
	(трифторметил)пирази	Η
	н-2-карбоксамида	Р3С N
	Г идрохлорид Ν-[3 [(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-		ΓΧ НС1 αν νη2
13	фуро[3,4-	о <		409,0
	б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-	АтЛ/
	фторфенил]-2,5-
	диметилоксазол-4-	ъА н
	карбоксамида
	Г идрохлорид Ν-[3 [(4аК,7а5)-2-амино-4а-		Αΐ”
	фтор-5,7-дигидро-4Н-		αν νη2
14	фуро[3,4- б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-		ί,Α	433,0
	фторфенил]-5-	Г т	Η
	циклопропилпиразин-
	2-карбоксамид
	Г идрохлорид Ν-[3 -		ρ
	[(4аК,7а8)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4-		<?ΧΗ2α
15	б][1,3]тиазин-7а-ил]-4- фторфенил]-5- (циклопропилметокси)		Д.А I Η	463,0
	пиразин-2- карбоксамида
	Г идрохлорид Ν-[3 [(4аК,7а8)-2-амино-4а-		НС1 ^Ν^ΝΗ2
	фтор-5,7-дигидро-4Н-		π [Γί
16	фуро[3,4-			521,0
	б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 -(2,2,3,3 -		Η
	тетрафторпропокси)пи	Р )
	ридин-2-карбоксамида	“П -п · к “П
	Г идрохлорид Ν-[3 [(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-		сХН НС1
17	фуро[3,4- б][1,3]тиазин-7а-ил]-4- фторфенил]-5-циано-3-	с/	;Α'	434,0
	фторпиридин-2-	.АА	Η
	карбоксамида

- 30 027880

18	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5(циклопропокси)пираз ин-2-карбоксамида	НС1 ХХн2 уХХ ох н А	449,0
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-	Р 0/-р5 НС1 ХХн2
19	фтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-	уд'	489,0
	фторфенил]-5-(2,2,2-	ХД н
	трифторэтокси)пириди
	н-2-карбоксамида	Р3С^
	Гидрохлорид N-[3-	Р °ΧΧΐНС|
	[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-
20	фтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(2,2,2трифторэтокси)пирази	ДА сХХ А	490,2
	н-2-карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-	Р НС1 ил,
21	фуро[3,4- ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-циано-3-	ДА	430,0
	метилпиридин-2-	XX н
	карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-	оХ? ХхХн2
22	фуро[3,4-	о АДА	536,0
	ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-
	этоксипиразин-2-	. X N Н НС1
	карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Н-	оХ? νΧΝ^ΝΗ2
23	фуро[3,4-	О XX	450,0
	ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-	ΐ X
	фторфенил]-5-	νΧ+'Χ
	пропоксипиразин-2-	1 м Н
	карбоксамида	ο^ΑΑΊ ηοι
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-	<χι
	фтор-5,7-дигидро-4Н-	Ξ Ν ΝΗ2
24	фуро[3,4- ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-	ίί XX нс| гА	422,2
	метоксипиримидин-2-	0ΧΝ
	карбоксамида	I
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-	оХ?
	фтор-5,7-дигидро-4Н-	Ξ Ν ΝΗ2
25	фуро[3,4-	II XX	439,0
	ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-	А -Х м ΑχΧ НС1
	фторфенил] -З-фтор-5 -	н
	метоксипиридин-2-	0ΑΛ
	карбоксамида	1
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7аЗ)-2-амино-4а-	XX,
	фтор-5,7-дигидро-4Н-
	фуро[3,4-	ХА нс|
26	ά] [ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-	507,2
	фторфенил1 -З-фтор-5 -	АА н
	(2,2,2-
	трифторэтокси)пириди	X
	н-2-карбоксамида

- 31 027880

27	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с1| [ 1,3]тиазин-7а-ил] -4фторфенил] -З-фтор-5 - (2,2,3,3- те!рафторпропокси)пи ридин-2-карбоксамида	0^ А Р^Р	а	Р Υ^νΧνΗ2 чЛХ нс|	539,0
28	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с1| [ 1,3]тиазин-7а-ил] -4фторфенил]-5-(2,2дифторэтокси)пиразин -2-карбоксамида	Р^О- Р	у	нс,	472,1
29	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с1| [ 1,3]тиазин-7а-ил] -4фторфенил]-5-(2метоксиэтокси)пириди н-2-карбоксамида			Р л ХУ НС1 Н	465,2
30	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- с1| [ 1,3]тиазин-7а-ил] -4фторфенил] -5 -(2метоксиэтокси)пирази н-2-карбоксамида		/'	Р /А ’	466,0
31	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил] -5 -(2,2,3,3 те!рафторпропокси)пи разин-2-карбоксамида	Р	г	«ГН /А”	522,2
32	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-[(2,2дифторциклопропил)м етокси] пиразин-2карбоксамида		X	οχΗ НС,	498,2
33	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а5)-2-амино-4афтор-5,7-дигидро-4Нфуро[3,4- б][1,3]тиазин-7а-ил]-4- фторфенил]-5-(2,2- дифторпропокси)пираз ин-2-карбоксамида	>Г0'	О	°2Г1 λ ύ НС1	486,2

Пример 34. Гидрохлорид ^[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4] [1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида

Способ А

Свободное основание ^[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]оксазин-7аил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид (458 мг, 1,15 ммоль, полученное в примере получения

- 32 027880

15) растворяют в дихлорметане (3 мл) и метаноле (3 мл). Добавляют хлористо-водородную кислоту (4 М В 1,4-диоксане, 380 мкл, 1,52 ммоль). Раствор упаривают досуха с получением указанного в заголовке соединения (380 мг, 76%) в виде бледно-желтого твердого вещества. ЭР/МС (т/ζ): 400 (М+1).

Пример 34, способ В

К раствору ^[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида (9,1 г, 22,7 ммоль) в метаноле (182 мл) добавляют 1,2 М раствор хлористого водорода в изопропиловом спирте (18,9 мл, 22,7 ммоль). Смесь перемешивают в течение 15 мин. Растворитель выпаривают с получением указанного в заголовке соединения в виде белого кристаллического твердого вещества (9,8 г, 99%). ЭР/МС (т/ζ): 400 (М+1).

Пример 35. Гидрохлорид ^[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]оксазин7а-ил]-4-фторфенил]-5-циано-3-фторпиридин-2-карбоксамида г

Схема 3, стадия М, подстадия 2 (амидирование): диметилформамид (10 мкл, 0,14 ммоль) и оксалилхлорид (119 мкл, 1,38 ммоль) добавляют к ацетонитрилу (3,7 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Добавляют 5-циано-3-фторпиридин-2-карбоновую кислоту (213 мг, 1,28 ммоль), и смесь перемешивают еще в течение 10 мин. Затем эту смесь в виде одной порции добавляют к раствору (4аК,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]оксазин-2-амина (247 мг, 0,917 ммоль) в этаноле (3,7 мл) и воде (3,7 мл), нагретому до 55°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч, а затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток разбавляют этилацетатом, промывают */₂ насыщенного раствора бикарбоната натрия. Водный слой экстрагируют этилацетатом, и объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением остатка, который очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием градиентом от 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (1/99) до 7 М раствора аммиака в смеси метанол/дихлорметан (10/90) с получением указанного в заголовке соединения в виде свободного основания (328 мг, 0,786 ммоль). Свободное основание растворяют в дихлорметане (5 мл) и метаноле (0,2 мл), и обрабатывают хлористо-водородной кислотой (1 М в диэтиловом эфире, 865 мкл, 0,865 ммоль) и концентрируют при пониженном давлении. Диэтиловый эфир (3 мл) добавляют к остатку и концентрируют, и это повторяют еще раз с получением указанного в заголовке соединения (349 мг, 0,769 ммоль, 83,8%). ЭР/МС (т/ζ): 418,0 (М+1).

Следующие соединения, представленные в табл. 3, получают способом, по существу аналогичным способу, описанному в примере 35, используя в реакции образования амида соответствующим образом замещенную карбоновую кислоту. Кроме того, соль НС1 получают из соответствующего свободного основания способом, аналогичным способу, описанному в примере 35.

Таблица 3

№ примера получе- ния	Химическое название	Структура	ЭР/МС (т/ζ) (М+1)
36	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4с1][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 хлорпиридин-2карбоксамида (соответствующее свободное основание получают в примере получения 16)	Р	409,1

- 33 027880

37	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,44][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 метоксипиразин-2карбоксамида	0х4 гг 1	Р	406,0
° 1	о Ан2 НС1
о г	Ξ Ν:
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-		г\	Р	0
	4а-фтор-5,7-дигидро-		и
38	4Н-фуро[3,4- 4][1,3]оксазин-7а-	Λ	0 ίί II	= 14	р ПП2		393,1
	ил] -4-фторфенил] -5 -			НС1
	фторпиридин-2-	Аи	н
	карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3-				р
	[(4аК,7а8)-2-амино-				4^ о
	4а-фтор-5,7-дигидро-			0
	4Н-фуро[3,4-				АА - [Ζ	χνη2
39	4][1,3]оксазин-7а-		с	1 ίί			414,1
	ил] -4-фторфенил] -5 -			хкг		НС1
	циано-3-	[	¥	14
	метилпиридин-2-	Ν(Τ
	карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3-				Р
	[(4аК,7а8)-2-амино-			о	0
	4а-фтор-5,7-дигидро-				= νΑ	·ΝΗ2
	4Н-фуро[3,4-		о
40	4][1,3]оксазин-7а-		А	ЩА		НС1	473,4
	ил] -4-фторфенил] -5 -	г	''
	(2,2,2-	сХ
	трифторэтокси)пири дин-2-карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-			о	Р	0
	4а-фтор-5,7-дигидро-					¥н2
	4Н-фуро[3,4-			0		Р 2
41	4][1,3]оксазин-7а-		N	λ X		НС1	474,4
	ил] -4-фторфенил] -5 -		Г ¥	н
	(2,2,2-	О'	АХ
	трифторэтокси)пираз	Р3С^
	ин-2-карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3-			р
	[(4аК,7а8)-2-амино- 4а-фтор-5,7-дигидро-		с/		''о
	4Н-фуро[3,4-			Ξ^1	\ι νη2
42	4][1,3]оксазин-7а-						434,1
	ил] -4-фторфенил] -3 -		А'		НГ.1
	хлор-5-	X
	цианопиридин-2-		Ά,
	карбоксамида
	Гидрохлорид N-[3-				р
	[(4аК,7а8)-2-амино-
	4а-фтор-5,7-дигидро-			0
43	4Н-фуро[3,4-					'ΝΗ2	443,0
4][1,3]оксазин-7а-		0
	ил] -4-фторфенил] -	^νΆ·	* Μ<ζΖ4		НС1
	3,5 -дихлорпиридин-	( Υ	14
	2-карбоксамида	сг	С1
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-			о'	Р	0
	4а-фтор-5,7-дигидро-					/ΝΗ2
	4Н-фуро[3,4-			0		. г
44	4][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 -		X X		АА	НС1	506,1
	(2,2,3,3-	0'
	тетрафторпропокси)	Л)
	пиразин-2-
	карбоксамида	рАр
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино-			о'	Р	0
	4а-фтор-5,7-дигидро-					¥н2
	4Н-фуро[3,4-			0	ί/^С	, г
45	4][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 -				АА	НС1	505,2
	(2,2,3,3-	0’
	тетрафторпропокси)	Л)
	пиридин-2-	1
	карбоксамида	Р^Р

- 34 027880

46	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4ά] [1,3] оксазин-7 аил] -4-фторфенил] -5 (2- метоксие1Ноху)пираз ин-2-карбоксамида	Р ζ°	450,2
	Гидрохлорид N-[3-		Р
	[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро-		оАК
	4Н-фуро[3,4-		= N N Н2
47	ά][ 1,3] оксазин-7 а-		ίί	423,0
	ил] -4-фторфенил] -3 -	.Ν г* ЭС	НС|
	фтор-5-	ηΧΛ	Н
	метоксипиридин-2-	I	Р
	карбоксамида	1
	Гидрохлорид N-[3-		Р
	[(4аК_,7а8)-2-амино-		/ЙльКиг
48	4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4ά][ 1,3] оксазин-7 а-	А	лдХс,	434,2
	ил] -4-фторфенил] -5 пропоксипиразин-2-	1	н
	карбоксамида	Г
	Гидрохлорид N-[3-		Р °СХХк
	[ (4аК,7а8)-2-амино-
	4а-фтор-5,7-дигидро-		= N р N Н2
	4Н-фуро[3,4-		0 ΙιΥ и Η 1
49	ά][ 1,3] оксазин-7 а-	НС1	449,0
	ил] -4-фторфенил] -5 -		ί н
	(2-	о I
	метоксиэтокси)пири дин-2-карбоксамида	ζ°
	Гидрохлорид N-[3-		Р
	[(4аК,7а8)-2-амино-
	4а-фтор-5,7-дигидро-
50	4Н-фуро[3,4-		Η ίΧΤ	420,0
с1][1,3]оксазин-7а-		НС|
	ил] -4-фторфенил] -5 -	н
	этоксипиразин-2-
	карбоксамид
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро-		Р
51	4Н-фуро[3,4- с1][1,3]оксазин-7а-		491,1
	ил] -4-фторфенил] -3 -	г	г к
	фтор-5-(2,2,2-		^Р
	трифторэтокси)пири дин-2-карбоксамида	А Р
	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро-		^Αν^νη2
52	4Н-фуро[3,4- с1][1,3]оксазин-7а-		Λ ХУ нс1 || н	523,0
ил] -4-фторфенил] -3 -
	фтор-5-(2,2,3,3-		'ж
	тетрафторпропокси)
	пиридина-	1
	карбоксамида	Р^Р
	Гидрохлорид N-[3-		Р
	[(4аК,7а8)-2-амино- 4а-фтор-5,7-дигидро-		оАэ Ч----7Х., к,,,
53	4Н-фуро[3,4- с1][1,3]оксазин-7а-		г N N Н2 л ХУ нс.	456,0
	ил] -4-фторфенил] -5 -	г
	(2,2- дифторэтокси)пираз		N н
	ин-2-карбоксамида	Р

- 35 027880

54	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,44][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 [(2,2- дифторциклопропил) метокси]пиразин-2- карбоксамида	У	Р Д НС1 2 н	482,1
55	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,44][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 (2,2- дифторпропокси)пир азин-2-карбоксамида	Р	нс|	470,0
56	Гидрохлорид N-[3[(4аК,7а8)-2-амино4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,44][1,3]оксазин-7аил] -4-фторфенил] -5 (2,2-дифторэтокси)3-фторпиридин-2карбоксамида	“П А о	Р '-'ί'Ν+ΝΗ, НС| н ХР	473,1

Пример 57. Гидрохлорид ^[3-[(4аК,7а8)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й] [1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-[(1-фторциклопропил)метокси]пиразин-2-карбоксамида

^[3-[(4аК,7а8)-2-Амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5хлорпиразин-2-карбоксамид (110 мг, 268 мкмоль), (1-фторциклопропил)метанол (73 мг, 805 мкмоль) и карбонат калия (111 мг, 805,31 мкмоль) объединяют во флаконе для обработки микроволновым излучением. Добавляют ацетонитрил (3 мл), и реакционную смесь нагревают при 150°С в течение 1,5 ч в реакторе для обработки микроволновым излучением. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают насыщенным водным раствором №НСО₃ и водой. Объединенные водные слои дважды экстрагируют этилацетатом, сушат над Мд8О₄, и растворитель удаляют под вакуумом с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с градиентным элюированием 0-3% (7 н. NΗ₃-метанол) в дихлорметане с получением свободного основания указанного в заголовке продукта (37 мг, 30%). Свободное основание растворяют в дихлорметане (2 мл) и обрабатывают хлористо-водородной кислотой (1 М в диэтиловом эфире, 80 мкл, 80 мкмоль) и концентрируют при пониженном давлении с получением указанного в заголовке продукта (39 мг, 29%). ЭР/МС (т/е): 464 (М+1).

Следующее соединение, показанное в табл. 4, получают способом, по существу, аналогичному способу, описанному в примере 57, с использованием 2-фторпроп-2-ен-1-ола. Кроме того, получают соль НС1 из соответствующего свободного основания способом, аналогичным способу, описанному в примере 35.

Таблица 4

№ прим ера полу- чения	Химическое название	Структура	ЭР/МС (ш/ζ) (М+1)
58	Гидрохлорид М-[3-[(4аК,7а8)2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4-с1] [1,3] оксазин7 а-ил] -4-фторфенил] -5-(2фтораллилокси)пиразин-2карбоксамида	Р 0 ιίι НС1 1 ί Η ο+-Ν V Ρ	450,0

- 36 027880

Методики тестирования ίη νίίΐΌ

Для проведения ферментативных и клеточных тестов ίη νίίΐΌ, тестируемые соединения разводят в ДМСО, получая исходный раствор с концентрацией 10 мМ. Перед проведением ферментативных и клеточных тестов ίη νίίΐΌ указанный исходный раствор последовательно разводят в ДМСО для получения кривой разбавления из 10 точек с конечными концентрациями соединений в диапазоне от 10 мкМ до 0,05 нМ в 96-луночном круглодонном планшете.

Тесты на ингибирование протеазы ίη уйго

Экспрессия и очистка йиВАСЕ1 :Рс

Человеческий ВАСЕ1 (номер в ΟеηΒаηк: АР190725) клонируют из полной кДНК головного мозга путем ПЦР с обратной транскрипцией (КТ-РСК). Последовательности нуклеотидов, соответствующие последовательностям аминокислот № 1 -460 встраивают в кДНК, кодирующую полипептид человеческого Σ§Οι (Рс) (Уаееаг е! а1., 8с1Спсс, 286, 735-742 (1999)). Данный гибридный белок из ВАСЕ1(1-460) и человеческого Рс, названный йиВАСЕ1:Рс, встраивают в вектор р!В02. Человеческий ВАСЕ1(1-460):Рс (ниВАСЕ1:Рс) транзиентно экспрессируют в клетках НЕК293. 250 мкг кДНК каждой из конструкций смешивают с реагентом Риделе 6 и добавляют к 1 литру клеток НЕК293. Через четыре дня после трансфекции кондиционированную среду собирают для очистки. йиВАСЕ1:РС очищают хроматографией на белке А (Рго!ет А). Фермент хранят при -80°С в виде небольших аликвот. См. Υаηд, е! а1., I. №игосйет1е!гу, 91(6) 1249-59 (2004).

Тестирование ВАСЕ1 методом РКЕТ

Готовят последовательные разбавления тестируемых соединений описанным выше способом. Соединения дополнительно разводят в 20 раз в буферном растворе КН₂РО₄. 10 мкл каждого из разведений добавляют в каждую лунку в рядах с А до Н на соответствующем планшете из черного пластика, обеспечивающем низкое связывание белка и содержащем реакционную смесь (25 мкл 50 мМ КН₂РО₄, рН 4,6, 1 мМ ΤΚΡΓΟΝ® Х-100, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 15 мкМ субстрата для РКЕТ) (см. Υаηд, е! а1., I. №игосЬет1е!гу, 91(6) 1249-59 (2004)). Содержимое планшета тщательно перемешивают в течение 10 мин на встряхивателе планшетов. Для инициации реакции 15 мкл 200 пМ раствора человеческого ВАСЕ1(1-460):Рс (см. Уаееег, е! а1., 8с1спсс, 286, 735-741 (1999)) в буфере на основе КН₂РО₄ добавляют в планшет, содержащий субстрат и тестируемые соединения. После краткого перемешивания на встряхивателе планшетов регистрируют относительную флуоресценцию смеси в нулевой момент времени при длине волны возбуждения 355 нм и длине волны испускания 460 нм. Реакционный планшет накрывают алюминиевой фольгой и выдерживают в темном увлажняемом термостате при комнатной температуре в течение от 16 до 24 ч. По окончании инкубации регистрируют относительную флуоресценцию, используя те же параметры возбуждения и испускания, что и в нулевой момент времени. Разность относительной флуоресценции в нулевой момент времени и в момент окончания инкубации отражает активность ВАСЕ1 при обработке тестируемым соединением. Строят график зависимости разности относительного поглощения от концентрации ингибитора и аппроксимируют его четырехпараметрическим логистическим уравнением для получения величин ΡС5₀. Мау, е! а1., 1оита1 о£ Nеи^οес^еηсе, 31, 1650716516 (2011).

Соединения из приведенных в настоящем описании примеров 1-58 протестированы аналогично вышеприведенному описанию, и они показали ΡС5₀ в отношении ВАСЕ1 ниже примерно 1 мкМ, причем активность соединений из примеров 1, 2, 3, 34 и 57 оказалась такой, как показано в табл. 5.

Таблица 5

№ примера	ВАСЕ1 1С50(нМ)
1	15,6 (+ 3,78, п=14)
2	13,2(+2,70, п=7)
3	6,66 (+ 0,538, п=4)
34	45,0 (± 13,0, п=5)
57	25,7(+2,12, п=2)

Среднее ± СОС; СОС = стандартная ошибка среднего

Приведенные данные показывают, что соединения из примеров 1-58 ингибируют ферментативную активность очищенного рекомбинантного ВАСЕ1 ίη νίΐ+о.

Тестирование на первичных нейронах, экспрессирующих РЭАРР Также проводят подтверждающий клеточный тест с использованием первичных культур нейронов, полученных из эмбрионов трансгенных мышей, несущих РЭАРР (Мау, е! а1., 1оита1 о£ Nеи^οес^еηсе, 31, 16507-16516 (2011)). Первичные кортикальные нейроны получают из трансгенных по РЭАРР эмбрионов на 16 день эмбрионального развития и культивируют в 96-луночных планшетах (15 х 10⁴ клеток на планшет в ЭМЕМ/Р12 (1:1) с добавкой 10% РВ8). После 2 суток культивирования ίη νίΐ+о, культуральную среду заменяют на бессывороточную ЭМЕМ/Р12 (1:1), содержащую добавку В27 и 2 мкМ (конечная концентрация) Ага-С (81дта, С1768). На 5 сутки ίη νί!ΐΌ нейроны инкубируют при 37°С в течение 24 ч в присутствии или отсутствии требуемых концентраций ингибиторов (разведенных в ДМСО). По окончании инкубирования анализируют наличие бета-секретазной активности в кондиционированной среде, например, путем определения Айе!а 1-40 и 142 с помощью специфичных систем для сэндвичного ИФА. При измерении этих специфических изоформ

- 37 027880

АЬе1а, в качестве захватывающего антитела для АЬе1а 1-40 используют моноклон 203, а моноклон 21Р12 - в качестве захватывающего антитела для АЬе1а 1-42. В качестве репортерных антител в системах ИФА как для АЬе1а 1-40, так и для АЬе1а 1-42 используют биотинилированные 3Ό6 (описание антител см. в ΙοΗπδοη-№οοά, е1 а1., Ргос. N11. Асай. ЗсЁ ИЗА 94, 1550-1555 (1997)). Концентрация АЬе1а, высвобожденного в кондиционируемую среду после обработки соединением, соответствует активности ВАСЕ1 при данных условиях. Кривую ингибирования строят по 10 точкам и аппроксимируют четырехпараметрическим логистическим уравнением с получением величин 1С₅₀ для эффекта снижения количества АЬе1а. Следующие приведенные в качестве примеров соединения при тестировании описанным выше образом проявляют следующую активность в снижении количества АЬе1а, приведенную ниже:

Таблица 6

Пример	1С50 (нМ) по данным ИФА в отношении АЬе1а(1-40) из нейронов с РИАРР	1С50 (нМ) по данным ИФА в отношении АЬе1а (1-42) из нейронов с РИАРР
1	83,3 (+ 36,3, п=4)	76,8 (+ 44,8, п=4)
2	29,5 (+ 18,4, п=3)	21,9(+ 11,7, п=2)
3	20,2 (± 2,32, п=4)	16,3 (± 11,3, п=4)
34	49,9 (± 5,61, п=3)	36,5 (±7,41,п=3)
57	186	182

Среднее ± СОС; СОС = стандартная ошибка среднего

Приведенные данные показывают, что соединения из таблицы 6 ингибируют выработку АЬе1а в цельных клетках.

Ингибирование бета-секретазы ίη νίνο

Для проверки ингибирования бета-секретазной активности ίη νίνο после обработки тестируемыми соединениями можно использовать различных модельных животных, включая мышей, морских свинок, собак и обезьян. Животные, используемые в настоящем изобретении, могут относиться к дикому типу, могут быть трансгенными или генетически нокаутированными. Например, для анализа ингибирования выработки АЬе1а и δАРРЬе1а ίη νίνο в присутствии ингибирующих соединений применимы мышиная модель РИАРР, полученная в соответствии с описанием в Οатеδ е1 а1., №1иге 373, 523-527 (1995), и другие нетрансгенные или генетически нокаутированные животные. Обычно двухмесячным трансгенным по РИАРР мышам, генетически нокаутированным мышам, или нетрансгенным животным вводят соединения, смешанные с носителями, такими как кукурузное масло, бета-циклодекстран, фосфатные буферы, РНАКМАЗОЬУЕ®, или другими подходящими носителями, посредством перорального, подкожного, внутривенного, кормового или иного пути введения. Спустя от одного до 24 ч после введения соединения животных умерщвляют и удаляют им головной мозг для анализа на АЬе1а 1-х. Используемый в настоящем описании термин АЬе1а 1-х относится к сумме разновидностей АЬе1а, начинающихся с остатка 1 и оканчивающихся на С-конце остатком с номером более 28. Указанный анализ позволяет определить большинство разновидностей АЬе1а и часто называется тотальным АЬе1а. Уровни пептидов тотального АЬе1а (АЬе1а 1-х) измеряют посредством сэндвичного ИФА, используя моноклон 266 в качестве захватывающего антитела и биотинилированный 3И6 в качестве репортерного антитела. См. Мау, е1 а1., 1^1^1 ο£ Νβυιοδύβ^β, 31, 16507-16516 (2011).

Для изучения непосредственных эффектов осуществляют введение соединения или подходящего носителя и животных умерщвляют спустя 3 ч после введения. У выбранных животных забирают мозговую ткань и анализируют на присутствие АЬе1а 1-х. При многократной дозировке можно также проанализировать ткани головного мозга более возрастных трансгенных по АРР мышей на количество бетаамилоидных бляшек после обработки соединением.

У животных (трансгенных по РИАРР или другому АРР или нетрансгенные мыши), которым вводили ингибирующее соединение, может быть показано снижение содержания АЬе1а в тканях головного мозга по сравнению с контрольными животными, получившими носитель, или с контролем в нулевой момент времени. Например, спустя 3 ч после перорального введения дозы 30 мг/кг соединения из примера 1 молодым самкам мышей, трансгенных по РИАРР, уровни пептидов АЬе1а 1-х снижаются приблизительно на 37% в гиппокампе и приблизительно на 48% в коре головного мозга, р<0,01, в сравнении с мышами, обработанными носителем. В случае соединения из примера 2 введение пероральной дозы 10 мг/кг молодым самкам мышей, трансгенных по РИАРР, спустя 3 ч после введения приводит к снижению уровней пептидов АЬе1а 1-х приблизительно на 40% в гиппокампе и приблизительно на 45% в коре головного мозга, р<0,01, в сравнении с мышами, обработанными носителем. При введении молодым самкам мышей, трансгенных по РИАРР, пероральной дозы соединения из примера 2, составляющей 30 мг/кг, уровни пептидов тотальным АЬе1а 1-х спустя 3 ч после введения снижаются приблизительно на 52% в гиппокампе и приблизительно на 54% в коре головного мозга, р<0,01, в сравнении с мышами, обработанными носителем. В случае соединения из примера 3, введение пероральной дозы 10 мг/кг молодым самкам мышей, трансгенных по РИАРР, спустя 3 ч после введения приводит к снижению уровней пептидов АЬе1а 1-х приблизительно на 34% в гиппокампе и приблизительно на 46% в коре головного мозга, р<0,01, в сравнении с мышами, обработанными носителем. В случае соединения из примера 34,

- 38 027880 спустя 3 ч после перорального введения дозы в 10 мг/кг соединения из примера 34 молодым самкам мышей, трансгенных по ΡΌΆΡΡ, уровни пептидов ЛЬе1а 1-х снижаются приблизительно на 26% в гиппокампе, р<0,05, и приблизительно на 36% и 24% в коре головного мозга при п=2 и р<0,01, в сравнении с мышами, обработанными носителем.

Учитывая активность соединений из примеров 1, 2, 3 и 34 в отношении фермента ВАСЕ ίη νίίτο, представленные эффекты снижения уровня ЛЬе1а согласуются с ингибированием ВАСЕ ίη νίνο и дополнительно демонстрируют проникновение соединений из примеров 1, 2, 3 и 34 в ЦНС.

Данные исследования показывают, что соединения согласно настоящему изобретению ингибируют ВАСЕ и, следовательно, являются подходящими для уменьшения уровней ЛЬе1а.

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   К¹ представляет собой Н, Р, С1, СУ, ОСН₃, ОСН₂СН₂ОСН₃,

   Р . , , Ыуок- , _щи ^р^о4р Р : г ρ : р

   К² представляет собой Н, Р, С1 или СН₃;

   К³ представляет собой Н, Р, С1, СН₃, СР₃, С₁-С₃ алкокси, ОСН₂СН₂ОСН₃,

   К⁴ представляет собой Н, Р, С1 или ОСН₃;

   или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 2. Соединение или соль по п.1 в (цис)-конфигурации
3. 3. Соединение или соль по п.1 или 2, где А представляет собой

   - 39 027880
4. 4. Соединение или соль по любому из пп.1-3, где А представляет собой
5. 5. Соединение или соль по любому из пп.1-4, где А представляет собой

   Соединение или соль по любому из пп.1-5, где А представляет собой

   7,

   Соединение или соль по любому из пп.1-4, где К³ представляет собой ОСН₃, СН₂СР₃,
6. 8. Соединение или соль по любому из пп.1-4 или 7, где К³ представляет собой ОСН₃.
7. 9. Соединение или соль по любому из пп.1-8, где Ζ представляет собой О.
8. 10. Соединение или соль по любому из пп. 1-8, где Ζ представляет собой 3.
9. 11. Соединение или соль по п.1, представляющее собой ^[3-[(4аК,7а3)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]оксазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид.
10. 12. Соединение по п.11, которое представляет собой ^[3-[(4аК,7а3)-2-амино-4а-фтор-5,7-дигидро4Н-фуро[3,4-4] [1,3] оксазин-7 а-ил] -4-фторфенил] -5 -цианопиридин-2-карбоксамид.
11. 13. Способ лечения болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-12 или его фармацевтически приемлемой соли.
12. 14. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 в терапии заболеваний и расстройств, связанных с β-амилоидным пептидом.
13. 15. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 для лечения болезни Альцгеймера.
14. 16. Фармацевтическая композиция для лечения болезни Альцгеймера, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-12 совместно с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами.
15. 17. Применение соединения по любому из пп.1-12 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.