JP2016108295A - サンパクソウ、キョウオウ及びオンジの複合抽出物を含む、肥満の予防又は治療用薬学組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウの各粉砕物を下記表1の割合で混合して30gの混合物を取得し、前記混合物を熱水抽出、温水抽出及びエタノール抽出方法に各々適用してそれぞれの該当抽出物を得た。前期取得した各抽出物を濾過して液状成分を得て、得られた液状成分を凍結乾燥して粉末状の抽出物(熱水抽出物、温水抽出物及びエタノール抽出物)を得た。前記粉末状の抽出物を蒸留水に100mg/mLの濃度で溶解させて、以後の実験で試料として用いた。この際、前記熱水抽出は前記混合物に生水1リットルを加えて100mLになるまで加熱して行い、前記温水抽出は前記混合物に蒸留水300mLを加えて38℃に保持しながら24時間抽出して行い、前記エタノール抽出は前記混合物に25%エタノール300mLを加えて38℃に保持しながら24時間抽出して行った。
米国ATCC社から入手した3T3−L1細胞を10%ウシ血清(Bovine Serum, BS, Gibco)及び1%ペニシリン−ストレプトマイシンが含まれるDMEM(Dulbcco's Modified Eagle's Medium, Lonza)培地に接種し、37℃及び5%CO2の条件で培養し、次いで3〜4日間隔で継代培養して脂肪前駆細胞を得た。
実施例2の結果から、in vitroにおいて脂肪蓄積抑制効果と細胞安全性の面でサンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウのエタノール抽出物が優れた効果を示すことが確認されたので、前記エタノール抽出物がin vivo条件でも有効か否かを確認した。このために、前記エタノール抽出方法で取得した個別抽出物と複合抽出物をマウスに摂食させながら飼育し、飼育したマウスの体重、食餌摂取量及び脂肪重量を測定し、肝臓組織と腎臓組織を比較分析した。
5週齢の雄C57BL/6Nマウスを170匹購入して1週間順応させ、その後60%高脂肪食餌(high fat diet, HFD)を5週間摂食させて飼育し、次いで飼育したマウスを10匹ずつ17の群に分け、互いに異なる試験物質を含むそれぞれ異なる条件の飼料を摂食させてさらに6週間飼育した(表3)。この際、ポジティブ対照群は公知の肥満治療剤であるゼニカルを投与した群とし、複合抽出物は正常食餌群(1X)と過剰食餌群(4X)に分けて投与した。また、飼育室温度は22±1℃に保持し、湿度は50±5%に保持し、明暗は12時間間隔で調節し、10%高脂肪食餌と60%高脂肪食餌は、中央実験動物社から購入して与えた。
実施例3−1で飼育した17種の実験群マウスの体重を測定し、比較分析した(図4)。図4に示すように、正常対照群と最も近いレベルで体重が減少した実験群は実験群9(オンジ−4X群)であることが確認され、その次に体重が減少した実験群は実験群15(KIOM−2012Ob(2)−4X群)及び17(KIOM−2012Ob(3)−4X群)であることが確認された。それ以外の実験群のマウスもまたネガティブ対照群より低いレベルを示し、概して体重減少効果を示すことが分かった。
実施例3−1で飼育した17種の実験群マウスの食餌摂取量を測定し、比較分析した(図5)。図5に示すように、各実験群毎に食餌摂取量に多少差があったが、実験群9(オンジ−4X群)を除いては有意な差は示さなかった。
実施例3−1で飼育した17種の実験群マウスを5時間絶食させ、マウスが摂取した飼料を全て消化するように誘導し、前記各マウスを頸椎脱臼法で犠牲にし、次いで各マウスから腹部脂肪及び皮下脂肪を摘出した。前述したように摘出した腹部脂肪と皮下脂肪を生理食塩水で洗浄し、濾過紙を通して水分を除去し、次いでそれら脂肪の総重量を測定し、比較分析した(図6)。図6に示すように、実験群9(オンジ−4X群)及び実験群15(KIOM−2012Ob(2)−4X群)はネガティブ対照群に比べて有意に脂肪重量が減少したことが確認された。また、同レベルの複合抽出物を投与した実験群12(KIOM−2012Ob(1)−1X群)、実験群14(KIOM−2012Ob(2)−1X群)及び実験群16(KIOM−2012Ob(3)−1X群)を比較すると、実験群14、16及び12の順に脂肪重量が増加し、実験群13(KIOM−2012Ob(1)−4X群)、実験群15(KIOM−2012Ob(2)−4X群)及び実験群17(KIOM−2012Ob(3)−4X群)を比較すると、実験群15、17及び13の順に脂肪重量が増加することが確認された。よって、前述した各複合抽出物に含まれるサンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウの含量を鑑みると、前記複合抽出物の脂肪増加抑制効果に最も大きな影響を及ぼす成分はオンジであり、その次がキョウオウであり、セキショウは脂肪増加抑制効果に寄与するところが最も少ないと分析された。
実施例3−4で犠牲にしたマウスから肝臓組織を摘出し、それをホルマリンで固定して病理学的分析を行い、肝臓組織に含まれる微小水疱性脂肪腫レベル及び慢性炎症レベルを比較分析した(図7)。図7のAに示すように、肝臓組織に含まれる微小水疱性脂肪腫は、ネガティブ対照群に比べて、オンジ抽出物(実験群8及び9)と複合抽出物(実験群12〜17)を投与した場合にいずれも低い値であり、肝臓組織に含まれる微小水疱性脂肪腫レベルが有意に減少することが確認された。
実施例3−4で犠牲にしたマウスから腎臓組織を摘出し、それをホルマリンで固定した後、病理学的分析を行い、腎臓組織に含まれる慢性炎症レベルを比較分析した(図8)。図8に示すように、腎臓組織の慢性炎症レベルは、全ての実験群でネガティブ対照群はもとより正常対照群より高いレベであり、その中でも、オンジ抽出物(実験群9)を投与したマウスが比較的高いレベルである。それに対して、複合抽出物(実験群12〜17)を投与したマウスではオンジ抽出物を投与したマウスと同等又は低いレベルを示した。
実施例3−4の結果から、前記複合抽出物に含まれる成分のうち脂肪増加抑制効果に寄与するところが最も少ないと分析されたので、セキショウを除いてサンパクソウ、キョウオウ及びオンジのみからなる試料から抽出された複合抽出物が肥満抑制効果を示すか否かを確認した。
粉砕したサンパクソウ、キョウオウ及びオンジを必ず含み、セキショウ及びクローバーは選択的に含む混合物を取得し(表4)、前記混合物に25%エタノール300mLを加え、38℃に保持しながら24時間抽出することによりそれぞれの複合抽出物を得た。前述したように得られた各抽出物を濾過して液状成分を得て、得られた液状成分を凍結乾燥して粉末状の抽出物を得た。前記粉末状の抽出物を蒸留水に100mg/mLの濃度で溶解させて後の実験で試料として用いた。
5週齢の雄C57BL/6Nマウスを126匹購入して1週間順応させ、その後マウスを9匹ずつ14の群に分け、60%高脂肪食餌(HFD)と異なる試験物質を含むそれぞれ異なる条件の飼料を摂食させて8週間飼育した(表5)。この際、飼育室温度は22±1℃に保持し、湿度は50±5%に保持し、明暗は12時間間隔で調節し、賦形剤としては生理食塩水を用いた。
実施例4−2で飼育した14種の実験群マウスの体重を測定し、比較分析した(図9)。図9に示すように、全ての実験群(実験群27〜34)の体重がネガティブ対照群の体重より低いレベルであり、正常対照群と最も近いレベルで体重が減少する実験群は実験群34(KSL)であり、次いで実験群28(K 300)、実験群30(KS 300)、実験群33(KCL)、実験群29(KS 150)、実験群27(K 150)、実験群31(KC 150)、実験群32(KC 300)の順であることが確認された。
実施例4−2で飼育した14種の実験群マウスの食餌摂取量を測定し、比較分析した(図10)。図10に示すように、各実験群毎に食餌摂取量に多少差があったが有意な差はなかった。
実施例4−2で飼育した14種の実験群マウスを5時間絶食させ、マウスが摂取した飼料を全て消化するように誘導し、前記各マウスを頸椎脱臼法で犠牲にし、次いで各マウスから腹部生殖器脂肪、腸間膜脂肪及び皮下脂肪を摘出した。前述したように摘出した腹部生殖器脂肪、腸間膜脂肪及び皮下脂肪を生理食塩水で洗浄し、濾過紙を通して水分を除去し、次いでそれら脂肪の各重量及び総重量を測定し、比較分析した(図11a〜11d)。
胃から分泌され、空腹ホルモン(hunger hormone)として知られるグレリンレベルを、実施例4−2で飼育した14種の実験群マウスを対象に、活性型グレリン(activated ghrelin)、デスアシルグレリン(desacyl-ghrelin)及びグレリンの比率(ghrelin ratio)に細分化して評価した。
実施例4−2で飼育した14種の実験群マウスを対象に血漿中のレプチンレベルを評価した。
実施例4−2で飼育した14種の実験群マウスを対象に、公知の方法に従い血中中性脂肪、総コレステロール、LDLコレステロール、HDLコレステロール、血糖、クレアチニン、尿素、LDH、ALP、GPT、GOTなどの血中成分のレベルを評価した(図14a〜14k)。
Claims (17)
- サンパクソウ、キョウオウ及びオンジの複合抽出物又はその分画物を含む肥満の予防又は治療用薬学組成物。
- 前記複合抽出物は、サンパクソウ、キョウオウ及びオンジが1:0.2〜1:0.2〜1(w/w/w)の割合で混合した試料の抽出物である請求項1に記載の薬学組成物。
- サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウの複合抽出物又はその分画物を含む肥満の予防又は治療用薬学組成物。
- 前記複合抽出物は、サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウが1:0.2〜1:0.2〜1:0.2〜1(w/w/w/w)の割合で混合した試料の抽出物である請求項3に記載の薬学組成物。
- 前記複合抽出物は、25%エタノール(EtOH)を用いて取得したものである請求項1又は3に記載の薬学組成物
- 前記分画物は、前記複合抽出物を溶媒分画法、限外濾過分画法、クロマトグラフィー分画法及びそれらの組み合わせからなる群から選択される方法に適用して取得した分画物である請求項1又は3に記載の薬学組成物。
- サンパクソウ、キョウオウ及びオンジの複合抽出物又はその分画物を含む肥満の予防又は改善用食品組成物。
- 前記複合抽出物は、サンパクソウ、キョウオウ及びオンジが、1:0.2〜1:0.2〜1(w/w/w)の割合で混合した試料の抽出物である請求項7に記載の組成物。
- サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウの複合抽出物又はその分画物を含む肥満の予防又は改善用食品組成物。
- 前記複合抽出物は、サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウが1:0.2〜1:0.2〜1:0.2〜1(w/w/w/w)の割合で混合した試料の抽出物である請求項9に記載の食品組成物。
- 前記複合抽出物は、25%エタノール(EtOH)を用いて取得するものである請求項7又は9に記載の食品組成物。
- 前記分画物は、前記複合抽出物を溶媒分画法、限外濾過分画法、クロマトグラフィー分画法及びそれらの組み合わせからなる群から選択される方法に適用して取得した分画物である請求項7又は9に記載の食品組成物。
- サンパクソウ、キョウオウ及びオンジを含む試料を水、C1〜C4のアルコール又はそれらの混合溶媒で抽出して抽出物を取得する段階を含む、サンパクソウ、キョウオウ及びオンジの複合抽出物の製造方法。
- 前記試料は、サンパクソウ、キョウオウ及びオンジを1:0.2〜1:0.2〜1(w/w/w)の割合で含むものである請求項13に記載の製造方法。
- サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウを含む試料を水、C1〜C4のアルコール又はそれらの混合溶媒で抽出して抽出物を取得する段階を含む、サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウの複合抽出物の製造方法。
- 前記試料は、サンパクソウ、キョウオウ、オンジ及びセキショウを1:0.2〜1:0.2〜1:0.2〜1(w/w/w/w)の割合で含むものである請求項15に記載の方法。
- 請求項1から6のいずれか一項の薬学組成物を、ヒトを除いた個体に投与する段階を含む、肥満の治療方法。
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