JP2016094385A - コラーゲン結合領域と副甲状腺ホルモンとの融合タンパク - Google Patents
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Abstract
【解決手段】コラーゲン結合領域と連結したPTHおよびPTHrPの活性アゴニスト又はアンタゴニストの断片を含むバクテリア由来のコラーゲン結合性融合タンパク。融合タンパクを哺乳動物に投与する工程を含む骨成長促進、毛髪成長、ガンの骨転移の予防、骨髄幹細胞移植に伴う免疫系再構築の促進、自己移植用幹細胞収集のための骨髄幹細胞の可動化の促進、及び腎性骨形成異常症腎性骨形成異常症の治療方法。非ペプチド性PTH/PTHrP受容体アゴニスト又はアンタゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチドの断片よりなる薬剤。
【選択図】図3
Description
骨粗しょう症 は、時間の経過とともに骨組織が細くなり骨密度が減少することにより特徴付けられる骨の疾患であり、老年者に広く蔓延している。National Osteoporosis Foundation は、2020 年までに約1,400万人のアメリカ人が骨粗しょう症を患うと推定している。さらに追加の 1,800万人が低骨密度または骨減少症に罹患するとしている。骨粗しょう症は人体が十分な量の骨を形成できないか、古い骨を再吸収しすぎるか、またはその両方により惹起される。
本願に開示される一実施例は、PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチドの断片を含む組成物または生物活性物質を含む。本発明者らは、Clostridium histofyticum より得られるコラーゲナーゼであるCoIHのコラーゲン結合領域(CBD)に融合した PTHの活性アゴニスト断片であるPTHの1-33残基を含む融合タンパクを構築した。本発明者らは、上記融合タンパクが、in vivoでのマウスにおける骨成長促進作用において、全身的に投与した場合においてさえ、PTH(1-34)よりも高い活性を示すことを見出した。例えば骨折箇所への局所投与では、有効性の差はさらに大きいことが期待される。
別の実施例は、哺乳動物に(b) PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストに連結した(a)コラーゲン結合性ポリペプチド断片を投与することを含む哺乳動物の毛髪の成長を促進する方法を提供する。
別の実施例は、組成物の投与前、投与中、投与後に哺乳動物がその組織に接するインプラントの移植を受け、さらに前記組成物の投与ステップが、前記インプラント周辺の組織成長の促進に有効である、(b) PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結した(a)コラーゲン結合性ポリペプチド断片を投与することを含む哺乳動物の移植部位周辺の組織成長を促進する方法を提供する。
本発明の開示には、生物活性物質、およびPTH/PTHrP 受容体アゴニストまたはアンタゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片を含む融合タンパクを含む組成物が含まれる。好適な実施例では、前記組成物は前記PTH/PTHrP アゴニストまたはアンタゴニストがポリペプチド断片であり、融合タンパク中で前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 およびPTH/PTHrP ポリペプチド断片 はともに連結している融合タンパクである。しかしPTH/PTHrP アゴニストまたはアンタゴニスト部分は、非ペプチド性アゴニストまたはアンタゴニストであってもよい。
実施例 1
PTH-コラーゲン結合領域融合タンパクの発現
PTH-CBD 融合タンパクを発現するプラスミドを、前記PTH-CBD をコーディングするシーケンス をpGEX-5X-l (GE Lifesciences) に挿入することによって構築した。前記生成されたプラスミドの前記シーケンス は、SEQ ID NO:3である。 SEQ ID NO: 3のヌクレオチド 258から1409 は、PTH-CBD 融合タンパクにそのC-末端で融合したグルタチオン-S-転移酵素 (GST) を含む 融合タンパク をエンコードしている。SEQ ID NO: 4 は、エンコードされたGST-PTH-CBD 融合タンパク全体である。 222-225残基は、血液凝固因子Xa プロテアーゼ認識部位であるIEGR (SEQ ID NO: 5) である。SEQ ID NO: 4の 226-383残基は、SEQ ID NO: 1 に対応し、前記PTH- CBD 融合タンパクである。血液凝固因子Xaは、前記 SEQ ID NO:4のアミノ酸残基の225 番目のArgの後の位置を開裂させ、前記PTH-CBD 融合タンパクである、SEQ ID NO: 1を遊離させる。SEQ ID NO: 1 の1-33残基は、前記PTHの N-末端33 残基である。38-158残基は、前記 Clostridium histolyticum のCoIH コラーゲナーゼ のコラーゲン結合性領域 (CBD) である。前記融合タンパクの前記CBDは、CoIH (SEQ ID NO:6)の901-1021残基に相当する。 SEQ ID NO: 1の 34-37残基はリンカー断片である。
前記PTH-CBD 融合タンパクのコラーゲンへの結合の実証
5mg の不溶性タイプ Iコラーゲン (C-9879; Sigma) を、0.22 μm 低結合性DURAPORE 膜 (Millipore、マサチュセッツ州ベッドフォード: Bedford、 MA) と共にULTRA FREEミクロ遠心器具に加え、ミクロ遠心チューブ内に入れた (カタログ番号:UFCSOGVOO-Millipore) 。 特に断らない限りすべての実験操作は室温で行われた。前記コラーゲン繊維を膨潤させるため、コラーゲン 結合緩衝液 (200 μL) (50 mM トリス塩酸緩衝液、 pH 7.5、 5 mM CaCl2) を加えた。30分間インキュベートした後、前記チューブを15,000 x g で15 分間遠心分離した。ローター内の前記チューブ の方向を変えて遠心分離を繰り返した。
前記コラーゲンの沈殿物を、100 pmol の 融合タンパクを含む60 μL のコラーゲン結合緩衝液 に再懸濁し、30 分間インキュベートした。その後、前記器具を介して前記混合物を15,000 x g で15 分間遠心分離した。前記コラーゲンに結合したタンパクは、前記コラーゲンとともに前記フィルター上に保持された。コラーゲンに結合しなかったタンパクは、前記フィルターを通過して濾液に入る。前記濾液は濾液 SDS-PAGEで分析された。
このことにより、両方の融合タンパクがコラーゲンに結合したことが示される。
PTH-CBD 融合タンパクのin vitro 生物活性
ヒトPTHlRを安定的にトランスフェクトした LLCPK細胞であるHKrK-B7細胞は、マサチューセッツ総合病院内分泌部門の Tom Gardellaより親切に提供された。前記細胞は参考文献 (7) に記載されている。 HKrK-B7 細胞を90 %密集まで24 穴プレート内で成長させた。一般的に播種の後2から3 日目で成長は達成された。前記カルチャー培地はDMEM (L-glutamine入り) + 10%ウシ胎仔血清(FBS) である。
PTH-CBD 融合タンパクのin vivo 活性
5から8 週齢の 13から18 グラムの健常メスC57BL/6J マウスを、前記Jackson Laboratory (バー・ハーバー、メイン州:Bar Harbor、 ME、 アメリカ合衆国) から購入し、Ochsner Clinic Foundation の動物施設のケージ内で標準条件下に飼育した。実験に先立ち動物に2週間の馴化期間を維持した。ベースラインの全身DEXA (dual emission x-ray absorptiometry) 測定を、以下のようにマウスへの適用に適応させたHologic QDR -1000 plus装置を用い各動物に対して2回ずつ行った。超高解像度モード (線間隔0.03950 cm および解像度0.03749 cm) を使用した。前記動物をペンタバルビツールで麻酔し、DEXA スキャンのために腹臥位に配置した。骨の無機質密度(BMD) を、動物の腰椎領域をカバーする8 x 16 画素ボックス内で決定した。 各単独画素の縦縞についてBMDを測定しピーク値を決定した。各マウスについて2回測定して、その測定値を比較することによりこの技術の妥当性を確実化した。
Group A (8 動物):ビークル
Group B (6 動物):ヒトPTH(1-34) 80 μg/kg
Group C (6 動物): PTH-PKD-CBD (SEQ ID NO:2) 546 μg/kg
Group D (6 動物) : PTH-CBD (SEQ ID NO: 1) 344 μg/kg
In Vivo でのPTH-CBD の月一回投与
週一回のPTH-CBD投与が骨無機質密度増加に対して有効であるという上記の勇気付ける結果により、次いで本発明者らはこの融合タンパクの月一回の投与での有効性を試験した。マウスは PTH-CBD (344 μg/kg/一回あたり)、 PTH (80 μg/kg/一回あたり) またはビークル単独の、それぞれ実施例 4で述べた緩衝液の溶液を月に一回腹腔内 注射された。
各群は10 匹のマウス を含む。 骨の無機質密度(BMD) は2ヶ月ごとに実施例 4 で述べたDEXA により測定した。DEXA 測定と前記週一回投与の実施例で述べた切除組織の測定との相互関係から、DEXA 測定を絶対骨無機質密度に相関づけた。BMDの2ヵ月後との連続測定により、4ヶ月の処置後に、月一回のPTH-CBD投与がBMDの有意な増加を引き起こしたことが示され、増加は6ヶ月の処置中維持された (図8) (p<0.01、図8中 ** で示される) 。驚くべきことではないが、月一回のPTH(1-34) 投与は、骨無機質密度に影響しなかった。6ヵ月後 (図8中、矢印で示される) に PTH-CBDの投与を中止し、動物をPTH (1-34) の週一回投与群に2週間組み込んだ。2ヵ月後のBMD測定 は、 (前記ビークル 対照群での加齢により見込まれるBMDの減少にもかかわらず) PTH-CBD投与後に獲得された骨無機質密度が維持されたことを示し、および 前記 PTH (1-34) の一日一回投与群ではBMD の増加が引き起こされ、その増加は前記PTH-CBD 群に近づいたが達しなかった。
前記実施例 4のデータとともに、これらのデータは、月一回の PTH-CBD 投与が、骨無機質密度促進において少なくとも一日一回のPTH注射と同等の有効性を有することを示した。重要なことには、各注射の前記PTH-CBD薬量は、前記一日一回のPTH(1-34)の 薬量と等しいモル数であり、このように合計投与薬量としては、実際には前記 PTH(1-34)の1/30であることである。前記データは、月一回より長い間隔での投薬が有効である可能性、および治療終了後に、PTH-CBDの前記BMD への効果がPTH(1-34)の効果よりもより長期間持続することを示唆する。
3および 6ヶ月に一回のPTH-CBD in Vivo 投与
月一回のPTH-CBD投与が骨無機質密度増加に対して有効であるという上記の勇気付ける結果により、次いで本発明者らはこの融合タンパクの3ヶ月または6ヶ月に一回の投与の有効性を試験した。マウスは PTH-CBD (344 μg/kg/一回) (図の9CBD-PTH-6)、PTH (344 μg/kg/一回あたり、0ヶ月および3ヶ月目) (図の9CBD-PTH-6)、 PTH(1-34) (80 μg/kg/薬量 一日一回2週間)またはビークル単独(1回)のそれぞれ実施例 4で述べた緩衝液の溶液を腹腔内注射された。各群は11匹のマウス を含む。骨の無機質密度(BMD) は3ヶ月目とその後は毎月DEXA により測定した。DEXA 測定と前記週一回投与の実施例で述べた切除組織の測定との相互関係から、DEXA 測定を絶対骨無機質密度に相関づけた。本研究は進行中であり、データは5ヶ月目の時点まで得られている。
前記データ 実施例4 および 5のデータとともに、これらのデータは、維持的な骨無機質密度増加を促進 するのに単回投与のPTH-CBDで十分であることを示した。重要なことには、各注射の前記PTH-CBD薬量は、前記一日一回のPTH(1-34)の 薬量と等しいモル数であり、このように現時点でデータが得られている前記5ヶ月の研究期間中にわたる合計投与薬量としては、実際には前記 PTH(1-34)の1/14であることである。本研究者らはさらに7ヶ月間に渡り研究データの収集を継続する予定である。前記データは、治療終了後に、PTH-CBDの前記BMD への効果がPTH(1-34)の効果よりもより長期間持続することを示唆する。
準備的薬量 および 時間的応答の研究
大体のPTH-CBD前記最適薬量を決定するために、2 から 8,000 μg /kgの範囲の前記融合タンパクをマウスに皮下に単回投与し、4週間ごとに20週目まで前記マウスのBMD をDEXA により試験した。前記最大薬量では、BMD は4週および12週の間減少した後に増加した。このように一時的な異化作用があり、その後に同化作用が起きているように考えられる。実施例4および5で用いられた前記薬量の344 μg /kg をまたぐ、中間的な薬量である40-400 μg/kgでは、最初の8週間にわたり最大の同化作用を持つように考えられた。試験された最低の薬量である 2 μg /kg では、最初の16週間にわたり、より少ない同化作用を持つように考えられた(図11)。
毛髪成長促進へのPHT-CBD の使用
遺伝的および化学療法後の脱毛の動物モデルにおいて、PTH アゴニストおよび アンタゴニストが髪の成長を調節するという報告がある (8、9)。本発明者らは、シクロホスファミドによる化学療法により誘発された脱毛において、PTH-CBD が皮下投与後に毛髪の成長パターンを変化させることができるか試験した。
材料および方法:
健常メスC57BL/6J マウス(実施例4と同じ)を、150 mg/kgシクロホスファミド で、毎月一回3ヶ月にわたり処置した。前記化学療法剤は毛髪の減少および黒色から白色の毛髪の色変化を引き起こした。本発明者らは追加的に背中の一点を剃毛した。前記毛髪を除去された点に、本発明者らはPTH-CBD 320 mg/kgを皮下注射により投与した。本発明者らは、さらにPTH/PTHrP 受容体アンタゴニストを含むCBD 融合タンパク (SEQ ID NO:9) も注射した。この融合タンパクは、スロンビン開裂シーケンスである (Leu-Va1-Pro-Arg-Gly-Ser、 SEQ ID NO: 12) を、前記融合タンパク SEQ ID NO:1のGST および PTH(1-33) 断片の間に挿入して作成した。その結果生成されたGST-PTH- CBD 融合タンパクは、スロンビンにより、スロンビン開裂シーケンスである前記Arg および GIy 残基の間で開裂され、Gly-Ser-PTH-CBD 融合タンパク、SEQ ID NO 9を遊離させた。
前記PTH-CBD により処理された動物は、前記毛髪を取り除いた点でより急速な毛髪 の再成長を示し、さらに前記PTH-CBD 注射部位から離れた部位においてさえ、前記化学療法誘発の毛髪減少および色変化の両方を逆転させた (図12)。 PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストを含むCBD 融合タンパク も予備実験で試験された。しかし前記アンタゴニスト融合タンパクは、注射部位に桃の産毛のような毛髪を 生やしたのみで、および前記PTH-CBD アゴニスト融合タンパクのように良好には作用しなかった (結果は示されていない)。前記アンタゴニスト融合タンパクは、ビークル対照群よりは多くの毛髪 を生やさせた(結果は示されていない) 。
PTH-CBD は、化学療法誘発の脱毛症を逆転させ、および前記効果は注射部位に制限されなかった。
免疫再構築促進へのPHT-CBD の使用
メスC57B1/6 マウスを 10 Gy の放射線で照射した(放射線源は137Cs )。 24時間後にマウスにドナーのB6.SJL マウスよりの2 x 105の骨髄単核細胞 (BMMNC) を注射した。前記BMMNC投与直前に、前記受容マウスに生理食塩水 (ビークル対照)、344 μg/kgのPTH-CBD (SEQ ID NO: 1)、または80 μg/kgの PTH(1-34)を注射した。
骨髄幹細胞可動化促進へのPTH-CBD の使用
6から8週齢のオスC57BL/6 マウスに80 μg/kg PTH (1-34) または44 μg/kg PTH-CBD (SEQ ID NO: 1) または生理食塩水 (ビークル 対照) を皮下注射により単回投与した。14日後に前記マウス より末梢血を採取し、c-KIT/Sca-1 細胞量を蛍光標識細胞分取法 (fluorescence activated cell sorting: FACS) により決定した (21)。PTH-CBD が、単回投与のPTH (1-34) よりも、c-KIT/Sca-1による二重陽性細胞を増加させることが示された。
乳ガン骨転移の予防または治療へのCBD-PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト融合タンパクの使用
一日一回注射で投与した場合PTH(1-34) は、数多くの動物種および骨粗しょう症の女性での骨成長を促進する。しかしながら輸液による PTH の連続投与は (すなわち副甲状腺腺腫) は骨の減少をもたらす。
実験方法:
13〜18gの 3〜5週齢のヌードマウス22匹を入手する。前記動物の初期体重を一般的健康状態とともに記録する。実験に先立ち動物に2週間の馴化期間を維持する (最終的に5-8週齢) 。 Bioluminescent/Fluorescent Imager (Xenogen Biosciences、クランバリー、ニュージャージー州: Cranbury、 NJ) 全身イメージング装置を用いて、イソフルレン麻酔後に各動物のベースラインのイメージを測定する。その後、ホタルのルシフェラーゼを発現するプラスミドを安定に組み込んだMCF-7 細胞を動物に注射により単回投与する(23、 24)。前記注射後およびその後は週一回のベースで動物の再イメージングを行い、骨転移をモニターする。
Group 1:動物11匹は、ビークル腹腔内投与を一回受ける。
Group 2:動物11匹は、344 μg/kg のPTH (7-33)-CBD (SEQ ID NO: 10) の腹腔内投与を一回受ける。
前記実験期間中、動物は、一週間に一回体重を測定し、なにか疾患兆候があるかを検出するために検査する。全身イメージングは、前記転移病巣の数、および各病巣からの蛍光の発光強度を決定するために解析される。
PTH (7-33)-CBDを注射されたマウスでは、対照のビークル投与マウスに比べて、より少ない骨転移病巣の発症、および、より遅い骨転移病巣の成長が期待される。
CBD-PTH/PTHrP受容体アンタゴニスト融合タンパク の腎性骨形成異常症の予防または治療への使用
腎性骨形成異常症は、腎臓が適正水準の血中カルシウム および リンを維持できない場合に起こる骨の疾患である。この疾患は腎臓病患者では共通の問題であり、および 90 %の透析患者に影響する。腎性骨形成異常症 は、慢性腎臓病患者の骨折の主原因である。本研究では、本発明者らはPTH-CBD アンタゴニスト・ペプチドが腎性骨形成異常症を治療または予防する能力を有することを示す。モデル動物は、腎性骨形成異常症を誘発するために高リン食を与えられたメスのマウスである。
13〜18gの 3〜5週齢の健常なメス通常C57BL/6J マウスを入手する。前記動物の初期体重を一般的健康状態とともに記録する。実験に先立ち動物に2週間の馴化期間を維持する (最終的に5-8週齢)。
Group 1:動物11匹は、腹腔内ビークルを一回投与される。
Group 2:動物11匹は、344 μg/kg のPTH (7-33)-CBD (SEQ ID NO: 10) を腹腔内に一回投与 される。
前記実験期間中、一週間に一回動物の体重を測定し、なにか疾患兆候があるかを検出するために検査する。骨の無機質密度測定は、各時点でANOVAにより解析される。各血液サンプルのアルカリ性ホスファターゼおよびカルシウム値を測定し、および各時点でANOVA により解析する。
PTH(7-33)-CBDを注射される前記動物の全ての測定で、対照のビークル投与マウス群に比較して、骨の無機質密度の増加または減少の遅延の応答が生じることが期待される。PTH(7-33)-CBD注射マウス では、対照のビークル投与マウス群に比較して、さらに骨梁の成長または骨梁の損失の遅延が示されることが期待される。
SEQ ID NO:1 TH-CBD 融合タンパク
SEQ ID NO: 2 TH-PKD-CBD 融合タンパク
SEQ ID NO: 3 ベクターにより発現されるPTH-CBD 融合タンパク前駆体
SEQ ID NO: 4 ベクターにより発現されるGST-PTH-CBD 融合タンパク
SEQ ID NO: 5 血液凝固因子Xa認識シーケンス
SEQ ID NO: 6 CoIH コラゲナーゼ
SEQ ID N0:7 PTH
SEQ ID NO: 8 PTHrP
SEQ ID NO: 9 PTH 受容体アンタゴニストおよびCBD 融合タンパク
SEQ ID NO: 10 PTH(7-33)-CBD 融合タンパク
SEQ ID NO: 11 *PTH/PTHrP アンタゴニスト Gly-Ser-PTH(1-33)
SEQ ID NO: 12 スロンビン認識シーケンス
1. Broadus AE et al. 1988. N. Engl. J. Med. 319:556-563.
2. Thiede MA et al. 1988. Proc. Natl. Acad. ScL USA 85:4605-4609.
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4. Schilli, MB et al. 1997. J. Invest. Dermatol. 108:928-932.
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6. Yoshihara, K. et al. 1994. J. Bacteriol. 176:6489-6496.
7. Jonsson KB, John MR, Gensure RC, Gardella TJ, Juppner H. 2001. tuberoinfundibular peptide 39 binds to the parathyroid hormone (PTH)/PTH-related peptide receptor but functions as an antagonist. Endocrinology 142(2):704-9.
7. Jonsson KB, John MR, Gensure RC, Gardella TJ, Juppner H. 2001. Tuberoinfundibular peptide 39 binds to the parathyroid hormone (PTH)/PTH-related peptide receptor, but functions as an antagonist. Endocrinology 142(2):704-9.
8. Schilli MB, Ray S, Paus R, Obit-Tabot E, Holick MF. 1997. Control of hair growth with parthyroid hormone (7-34). J. Invest. Dermatol. 108:928-932.
9. Peters EM, Foitzik K, Paus R, Ray S, Holick MF. 2001. A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist. J Invest Dermatol. 117(2): 173-8.
10. Ballen K. 2007. Targeting the stem cell niche: squeezing blood from bones. Bone Marrow Transplantation 39:655-660.
11. Ballen K. et al. 2007. Phase I trial of parathyroid hormone to facilitate stem cell mobilization. Biology of Blood and Marrow Transplantation 13:838-843.
12. Calvi LM et al. 2003. Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche. Nature 425:841-846.
13. Wuthrich RP, Martin D, Bilezikian JP. 2007. The role of calcimimetics in treatment of hyperparathyroidism. Eur. J. Clin. Invest. 37:915-922.
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16. Henderson MA, Danks JA et al. 2006. Parathyroid hormone-related protein localization in breast cancers predicts improved prognosis. Cancer Res. 66:2250-56.
17. Saito H, Tsunenari T et al. 2005. Humanized monoclonal antibody against parathyroid hormone-related protein suppresses osteolytic bone metastasis of human breast cancer cells derived from MD A-MB-231. Anticancer Res. 25:3817 '-23. Erratum in 26:445.
18. Hoare SR, Usdin TB. 2002. Specificity and stability of a new PTHl receptor antagonist, mouse TIP(7-39). Peptides 23:989-98.
19. Rickard DJ et al. 2007. Intermittent treatment with parathyroid hormone as well as a non-peptide small molecule agonist of the PTHl receptor inhibits adipocyte differentiation in human bone marrow stromal cells. Bone 39:1361-1372.
20. McDonald IM et al. 2007. Discovery and characterization of novel, potent, non- peptide parathyroid hormone receptor antagonists. J. Med Chem. 50:4789-4792.
21. Stokman G et al. 2008. Enhanced mobilization of bone marrow cells does not ameliorate renal fibrosis. Nephrol. Dial. Transplant 23:483-491.
22. Abraham M et al. 2007. Enhanced unique pattern of hematopoietic cell mobilization induced by the CXCR4 antagonist 4F-benzoyl-TN 14003. Stem cells 25:2158-2166.
23. Caceres G et al. 2003. Determination of chemotherapeutic activity in vivo by luminescent imaging of luciferase-transfected human tumors. Anticancer Drugs 14:569- 74.
24. Jenkins DE et al. 2005. Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice. Breast Cancer Research 7:R444-R454.
25. Compston JE. 2007. Skeletal actions of intermittent parathyroid hormone: effects on bone remodelling and structure. Bone 40(6): 1447-52.
26. Fox J, Miller MA, Newman MK, Recker RR, Turner CH, Smith SY. 2007. Effects of daily treatment with parathyroid hormone 1-84 for 16 months on density, architecture and biomechanical properties of cortical bone in adult ovariectomized rhesus monkeys. Bone 41(3):321-30.
27. Zhou H, Iida-Klein A, Lu SS, Ducayen-Knowles M,Levine LR, Dempster DW, Lindsay R. 2003. Anabolic action of parathyroid hormone on cortical and cancellous bone differs between axial and appendicular skeletal sites in mice. Bone 32(5): 513-20.
28. Zaruba MM, Huber BC, Brunner S, Deindl E, David R, Fischer R, Assmann G, Herbach N, Grundmann S, Wanke R, Mueller-Hoecker J, Franz WM. 2008. Parathyroid hormone treatment after myocardial infarction promotes cardiac repair by enhanced neovascularization and cell survival. Cardiovasc Res. 77(4):722-31.
29. Schl[upsilon]ter KD, Schreckenberg R, Wenzel S. 2008. Stem cell mobilization versus stem cell homing: potential role for parathyroid hormone? Cardiovasc Res. 77(4):612-3.
30. Ishikawa et al., アメリカ合衆国公開特許出願第20040053368.
31. Goldberg et al., 国際特許出願WO 2005/082941.
32. Ishikawa T, Eguchi M, Wada M, Iwami Y, Tono K, Iwaguro H, Masuda H, Tamaki T, Asahara T. 2006. Establishment of a Functionally Active Collagen-Binding Vascular Endothelial Growth Factor Fusion Protein In Situ. Arterioscler Thromb Vase Biol.
33. Ishikawa T, Terai H, Yamamoto T, Harada K, Kitajima T. 2003. Delivery of a growth factor fusion protein having collagen-binding activity to wound tissues. Artif Organs. 27(2): 147-54.
34. Crine et al., アメリカ合衆国公開特許出願第20060014687.
上記全ての特許、特許文献およびその他の参考文献は引用によりその全体が本願に包含される。
1. Broadus AE et al. 1988. N. Engl. J. Med. 319:556-563.
2. Thiede MA et al. 1988. Proc. Natl. Acad. ScL USA 85:4605-4609.
3. Orloff,JJ et al. 1994. Endocrine Rev. 15:40-60.
4. Schilli, MB et al. 1997. J. Invest. Dermatol. 108:928-932.
5. Matsushita, O. et al. 1999. J. Bacteriol. 181:923-933.
6. Yoshihara, K. et al. 1994. J. Bacteriol. 176:6489-6496.
7. Jonsson KB, John MR, Gensure RC, Gardella TJ, Juppner H. 2001. tuberoinfundibular peptide 39 binds to the parathyroid hormone (PTH)/PTH-related peptide receptor but functions as an antagonist. Endocrinology 142(2):704-9.
7. Jonsson KB, John MR, Gensure RC, Gardella TJ, Juppner H. 2001. Tuberoinfundibular peptide 39 binds to the parathyroid hormone (PTH)/PTH-related peptide receptor, but functions as an antagonist. Endocrinology 142(2):704-9.
8. Schilli MB, Ray S, Paus R, Obit-Tabot E, Holick MF. 1997. Control of hair growth with parthyroid hormone (7-34). J. Invest. Dermatol. 108:928-932.
9. Peters EM, Foitzik K, Paus R, Ray S, Holick MF. 2001. A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist. J Invest Dermatol. 117(2): 173-8.
10. Ballen K. 2007. Targeting the stem cell niche: squeezing blood from bones. Bone Marrow Transplantation 39:655-660.
11. Ballen K. et al. 2007. Phase I trial of parathyroid hormone to facilitate stem cell mobilization. Biology of Blood and Marrow Transplantation 13:838-843.
12. Calvi LM et al. 2003. Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche. Nature 425:841-846.
13. Wuthrich RP, Martin D, Bilezikian JP. 2007. The role of calcimimetics in treatment of hyperparathyroidism. Eur. J. Clin. Invest. 37:915-922.
14. Dolgos S. et al. 2008. Determinants of bone mass in end-stage renal failure patients at the time of kidney transplantation. Clin. Transplant, epub ahead of print.
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16. Henderson MA, Danks JA et al. 2006. Parathyroid hormone-related protein localization in breast cancers predicts improved prognosis. Cancer Res. 66:2250-56.17. Saito H, Tsunenari T et al. 2005. Humanized monoclonal antibody against parathyroid hormone-related protein suppresses osteolytic bone metastasis of human breast cancer cells derived from MD A-MB-231. Anticancer Res. 25:3817 '-23. Erratum in 26:445.
18. Hoare SR, Usdin TB. 2002. Specificity and stability of a new PTHl receptor antagonist, mouse TIP(7-39). Peptides 23:989-98.
19. Rickard DJ et al. 2007. Intermittent treatment with parathyroid hormone as well as a non-peptide small molecule agonist of the PTHl receptor inhibits adipocyte differentiation in human bone marrow stromal cells. Bone 39:1361-1372.
20. McDonald IM et al. 2007. Discovery and characterization of novel, potent, non- peptide parathyroid hormone receptor antagonists. J. Med Chem. 50:4789-4792.
21. Stokman G et al. 2008. Enhanced mobilization of bone marrow cells does not ameliorate renal fibrosis. Nephrol. Dial. Transplant 23:483-491.
22. Abraham M et al. 2007. Enhanced unique pattern of hematopoietic cell mobilization induced by the CXCR4 antagonist 4F-benzoyl-TN 14003. Stem cells 25:2158-2166.
23. Caceres G et al. 2003. Determination of chemotherapeutic activity in vivo by luminescent imaging of luciferase-transfected human tumors. Anticancer Drugs 14:569- 74.
24. Jenkins DE et al. 2005. Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice. Breast Cancer Research 7:R444-R454.
25. Compston JE. 2007. Skeletal actions of intermittent parathyroid hormone: effects on bone remodelling and structure. Bone 40(6): 1447-52.
26. Fox J, Miller MA, Newman MK, Recker RR, Turner CH, Smith SY. 2007. Effects of daily treatment with parathyroid hormone 1-84 for 16 months on density, architecture and biomechanical properties of cortical bone in adult ovariectomized rhesus monkeys. Bone 41(3):321-30.
27. Zhou H, Iida-Klein A, Lu SS, Ducayen-Knowles M,Levine LR, Dempster DW, Lindsay R. 2003. Anabolic action of parathyroid hormone on cortical and cancellous bone differs between axial and appendicular skeletal sites in mice. Bone 32(5): 513-20.
28. Zaruba MM, Huber BC, Brunner S, Deindl E, David R, Fischer R, Assmann G, Herbach N, Grundmann S, Wanke R, Mueller-Hoecker J, Franz WM. 2008. Parathyroid hormone treatment after myocardial infarction promotes cardiac repair by enhanced neovascularization and cell survival. Cardiovasc Res. 77(4):722-31.
29. Schl[upsilon]ter KD, Schreckenberg R, Wenzel S. 2008. Stem cell mobilization versus stem cell homing: potential role for parathyroid hormone? Cardiovasc Res. 77(4):612-3.
30. Ishikawa et al., アメリカ合衆国公開特許出願第20040053368.
31. Goldberg et al., 国際特許出願WO 2005/082941.
32. Ishikawa T, Eguchi M, Wada M, Iwami Y, Tono K, Iwaguro H, Masuda H, Tamaki T, Asahara T. 2006. Establishment of a Functionally Active Collagen-Binding Vascular Endothelial Growth Factor Fusion Protein In Situ. Arterioscler Thromb Vase Biol.
33. Ishikawa T, Terai H, Yamamoto T, Harada K, Kitajima T. 2003. Delivery of a growth factor fusion protein having collagen-binding activity to wound tissues. Artif Organs. 27(2): 147-54.
34. Crine et al., アメリカ合衆国公開特許出願第20060014687.
上記全ての特許、特許文献およびその他の参考文献は引用によりその全体が本願に包含される。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔1〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物であって、前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がバクテリア由来のコラーゲン結合性ポリペプチド断片であることを特徴とする組成物。
〔2〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物であって、前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がコラーゲナーゼ由来のコラーゲン結合性ポリペプチド断片であることを特徴とする組成物。
〔3〕マウスに8週間の期間にわたり、一週間に一回ビークルとともにPTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を腹腔内投与したときの、ビークル単独投与の場合と比較した骨の無機質密度増大が、等モルのPTH/PTHrP 受容体アゴニストよりなる組成物を投与したときの、前記ビークル単独の投与の場合と比較した骨の無機質密度増大に対して少なくとも50%以上大きいことを特徴とする組成物。
〔4〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがポリペプチド断片である、前記〔1〕から〔3〕の一つに記載される組成物。
〔5〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アゴニスト・ポリペプチド断片が化学的に架橋結合された前記〔4〕記載の組成物 。
〔6〕コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アゴニスト・ポリペプチド断片が融合タンパクのポリペプチドの一部分である前記〔4〕記載の組成物。
〔7〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストが非ペプチドである前記〔1〕から〔3〕の一つに記載される組成物。
〔8〕マウスに8週間の期間にわたり一週間に一回ビークルとともに前記組成物を腹腔内に投与したときの、前記ビークル単独投与の場合と比較した骨の無機質密度増大が、等モルのPTH (1-34) よりなる組成物による前記ビークル単独の投与と比較した骨の無機質密度増大に対して少なくとも50%以上大きいことを特徴とする前記〔1〕から〔7〕のうち一つに記載される組成物。
〔9〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 がClostridium コラーゲナーゼの 断片 である前記〔1〕から〔8〕の一つに記載の組成物。
〔10〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がSEQ ID NO:1の38-158残基よりなるか、SEQ ID NO:1の38-158残基の少なくとも8個の連続するアミノ酸残基の断片からなる前記〔1〕から〔9〕の一つに記載の組成物。
〔11〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片が少なくともSEQ ID NO: 1の38-158残基と 90% 相同である前記〔1〕から〔9〕の一つに記載の組成物。
〔12〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストが、副甲状腺ホルモン (PTH) ポリペプチド断片であるか、または副甲状腺ホルモン関連ペプチド (PTHrP) ポリペプチド断片である、前記〔1〕から〔11〕の一つに記載される組成物。
〔13〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがSEQ DD NO: 1の1-33残基よりなる前記〔1〕から〔12〕の一つに記載される組成物。
〔14〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがPTH (SEQ ID NO:7) よりなる前記〔1〕から〔12〕の一つに記載される組成物。
〔15〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがSEQ ID NO: 1の1-14残基よりなる前記〔1〕から〔12〕のうちの一つに記載される組成物。
〔16〕前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがSEQ ID NO: 7の 1-34残基よりなるか、またはSEQ ID NO: 7の 1-34残基の少なくとも8個の連続するアミノ酸残基の断片からなる前記〔1〕から〔12〕の一つに記載の組成物。
〔17〕前記2つのポリペプチド断片の各々がN-末端およびC-末端を有し、前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片の前記N-末端が、直接またはリンカーのポリペプチド断片を介して、前記PTH/PTHrP アゴニスト・ポリペプチド断片のC-末端に連結される前記〔4〕から〔6〕および 8から16 の一つに記載の組成物。
〔18〕PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物。
〔19〕前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが、ポリペプチド断片である前記〔18〕記載の組成物。
〔20〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト・ポリペプチド断片が互いに化学的に架橋結合された前記〔19〕記載の組成物。
〔21〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト・ポリペプチド断片 が、融合タンパクのポリペプチドの一部である前記〔19〕記載の組成物。
〔22〕前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが非ペプチド性である態様 18記載の組成物。
〔23〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 がSEQ ID NO: 1の 38-158残基よりなるか、またはSEQ IDNO:1 の38-158残基の少なくとも8 個の連続するアミノ酸の断片よりなる前記〔18〕から〔22〕のうちの一つに記載の組成物。
〔24〕前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がSEQ IDNO: 1 の38-158残基と少なくとも90% 相同である、前記〔18〕から〔22〕のうち一つに記載の組成物。
〔25〕前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト が 副甲状腺ホルモン (PTH) または 副甲状腺ホルモン関連ペプチド (PTHrP) のポリペプチド断片からなる前記〔18〕から〔24〕のうちの一つに記載の組成物。
〔26〕前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが、SEQ ID NO: 7の7-34残基からなるか、またはSEQ ID NO: 7の7-34残基のうちの少なくとも8個の連続する アミノ酸の断片からなる前記〔18〕から〔25〕のうちの一つに記載の組成物。
〔27〕前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが、 SEQ ID NO: 7の7-14残基からなる前記〔18〕から〔25〕のうちの一つに記載の組成物。
〔28〕哺乳動物に前記〔1〕から〔17〕のうち一つに記載の前記組成物を投与することよりなる前記哺乳動物の骨成長を促進する方法。
〔29〕前記組成物 を前記哺乳動物に投与することが、骨梁の無機質密度または 皮質骨の無機質密度または 骨梁の無機質量または皮質骨の無機質量を増加させる態様 28記載の方法。
〔30〕前記組成物が、前記哺乳動物 の骨成長を所望する部位に局所投与される前記〔28〕または〔29〕に記載の方法。
〔31〕前記組成物が整形外科用 インプラントとともに投与される前記〔28〕-30のうち一つに記載の方法。
〔32〕前記組成物が注射により投与される前記〔28〕-31のうちの一つに記載の方法。
〔33〕約5未満のpHの水溶液として前記組成物 が投与される前記〔32〕記載の方法。
〔34〕哺乳動物に前記〔1〕-27のうちの一つに記載される組成物を投与することよりなる前記哺乳動物の毛髪の成長を促進する方法。
〔35〕哺乳動物に前記哺乳動物の毛髪の成長を所望する局所に前記組成物を投与する前記〔34〕記載の方法。
〔36〕前記投与が皮下または皮内注射により行われる前記〔34〕または〔35〕記載の方法。
〔37〕前記哺乳動物が化学療法誘発性の脱毛症に罹患している前記〔34〕-36のうち一つに記載の方法。
〔38〕前記〔1〕から〔17〕のうちの一つに記載の組成物を前記哺乳動物に投与し、前記組成物の投与ステップ前、投与ステップ中または投与ステップ後に、前記哺乳動物がその組織に接するインプラントを受け、および前記組成物の投与ステップが前記インプラント周辺の組織の促進に有効である哺乳動物のインプラント周辺の組織の成長を促進する方法。
〔39〕前記組成物の投与ステップが、前記哺乳動物の組織に接するようにインプラントを配置し、前記インプラントが前記組成物を含有することよりなる前記〔38〕記載の方法。
〔40〕前記インプラントが歯科用インプラントである前記〔38〕または〔39〕記載の方法。
〔41〕前記インプラント が無傷の骨、骨セメント、ヒドロキシアパタイトまたは脱ミネラル骨である前記〔38〕から〔40〕のうちの一つに記載の方法。
〔42〕前記インプラントが骨芽細胞を有する前記〔38〕から〔41〕のうちの一つに記載の方法。
〔43〕前記インプラントの主成分が金属、プラスチック、またはセラミックである前記〔38〕記載の方法。
〔44〕組織が軟骨、骨または皮膚である前記〔38〕記載の方法。
〔45〕前記〔1〕から〔17〕のうち一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記組成物の投与ステップ前、投与ステップ中、または投与ステップ後に、前記哺乳動物が骨髄幹細胞の投与を受けることよりなる、前記哺乳動物の免疫再構築を促進する方法。
〔46〕前記〔1〕から〔17〕のうち一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記融合タンパクが前記哺乳動物の循環血液中の幹細胞数を増加させることよりなる、哺乳動物の骨髄 幹細胞の可動化 を促進する方法。
〔47〕前記組成物の投与ステップ後に、前記哺乳動物の血液より幹細胞を収集することをさらに含む前記〔46〕記載の方法。
〔48〕前記〔18〕から〔27〕のうちの一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記哺乳動物は腎性骨形成異常症または腎臓疾患に罹患し、および前記組成物 は前記哺乳動物の骨量減少を低減させることよりなる前記哺乳動物の腎性骨形成異常症を治療または予防する方法。
〔49〕前記〔18〕から〔27〕のうちの一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記哺乳動物のガンの骨転移の発症率を低減させるか、または骨の転移ガンの成長を遅延させるために有効な前記組成物の薬量が投与されることよりなる哺乳動物のガンの骨転移の治療または予防法。
〔50〕哺乳動物が心筋梗塞を発症後に、前記〔1〕から〔17〕のうちの一つに記載の組成物を哺乳動物に投与することよりなる哺乳動物の心筋梗塞治療法。
〔51〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物の骨成長を促進する方法。
〔52〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物毛髪の成長 を促進する方法。
〔53〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物のインプラント周辺の組織の成長を促進する方法。
〔54〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物の免疫再構築を促進する方法。
〔55〕PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物の骨髄 幹細胞の可動化を促進する方法。
〔56〕前記〔1〕から〔27〕のうちの一つに記載された組成物を使用する医学的治療法。
〔57〕哺乳動物において、骨成長、毛髪の成長、インプラント周辺の組織の成長、骨髄幹細胞の投与を受けた哺乳動物の免疫再構築、または骨髄 幹細胞の可動化に有効な薬剤を調製することよりなる、前記〔1〕から〔17〕のうちの一つに記載された組成物の使用法。
〔58〕哺乳動物 において心筋梗塞を治療するのに有効な薬剤を調製することよりなる前記〔1〕から〔17〕のうちの一つに記載された組成物の使用法。
〔59〕哺乳動物の腎性骨形成異常症の治療、ガンの骨転移の発症率の低減、骨の転移ガンの成長の遅延、または毛髪の成長促進に有効な薬剤を調製することよりなる前記〔18〕から〔27〕のうちの一つに記載された組成物の使用法。
〔60〕哺乳動物において、骨成長、 毛髪の成長、インプラント周辺の組織の成長、骨髄幹細胞の投与を受けた哺乳動物の免疫再構築、または骨髄 幹細胞の可動化に有効な薬剤を調製することよりなる、PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結されたコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物の使用法。
Claims (60)
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物であって、前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がバクテリア由来のコラーゲン結合性ポリペプチド断片であることを特徴とする組成物。
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物であって、前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がコラーゲナーゼ由来のコラーゲン結合性ポリペプチド断片であることを特徴とする組成物。
- マウスに8週間の期間にわたり、一週間に一回ビークルとともにPTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を腹腔内投与したときの、ビークル単独投与の場合と比較した骨の無機質密度増大が、等モルのPTH/PTHrP 受容体アゴニストよりなる組成物を投与したときの、前記ビークル単独の投与の場合と比較した骨の無機質密度増大に対して少なくとも50%以上大きいことを特徴とする組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがポリペプチド断片である、請求項1から3の一つに記載される組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アゴニスト・ポリペプチド断片が化学的に架橋結合された請求項4記載の組成物 。
- コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アゴニスト・ポリペプチド断片が融合タンパクのポリペプチドの一部分である請求項4記載の組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストが非ペプチドである請求項1から3の一つに記載される組成物。
- マウスに8週間の期間にわたり一週間に一回ビークルとともに前記組成物を腹腔内に投与したときの、前記ビークル単独投与の場合と比較した骨の無機質密度増大が、等モルのPTH (1-34) よりなる組成物による前記ビークル単独の投与と比較した骨の無機質密度増大に対して少なくとも50%以上大きいことを特徴とする請求項1から7のうち一つに記載される組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 がClostridium コラーゲナーゼの 断片 である請求項1から8の一つに記載の組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がSEQ ID NO:1の38-158残基よりなるか、SEQ ID NO:1の38-158残基の少なくとも8個の連続するアミノ酸残基の断片からなる請求項1から9の一つに記載の組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片が少なくともSEQ ID NO: 1の38-158残基と 90% 相同である請求項1から9の一つに記載の組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストが、副甲状腺ホルモン (PTH) ポリペプチド断片であるか、または副甲状腺ホルモン関連ペプチド (PTHrP) ポリペプチド断片である、請求項1から11の一つに記載される組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがSEQ DD NO: 1の1-33残基よりなる請求項1から12の一つに記載される組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがPTH (SEQ ID NO:7) よりなる請求項1から12の一つに記載される組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがSEQ ID NO: 1の1-14残基よりなる請求項1から12のうちの一つに記載される組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アゴニストがSEQ ID NO: 7の 1-34残基よりなるか、またはSEQ ID NO: 7の 1-34残基の少なくとも8個の連続するアミノ酸残基の断片からなる請求項1から12の一つに記載の組成物。
- 前記2つのポリペプチド断片の各々がN-末端およびC-末端を有し、前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片の前記N-末端が、直接またはリンカーのポリペプチド断片を介して、前記PTH/PTHrP アゴニスト・ポリペプチド断片のC-末端に連結される請求項4から6および 8から16 の一つに記載の組成物。
- PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが、ポリペプチド断片である請求項18記載の組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト・ポリペプチド断片が互いに化学的に架橋結合された請求項19記載の組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 および前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト・ポリペプチド断片 が、融合タンパクのポリペプチドの一部である請求項19記載の組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが非ペプチド性である請求項 18記載の組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片 がSEQ ID NO: 1の 38-158残基よりなるか、またはSEQ IDNO:1 の38-158残基の少なくとも8 個の連続するアミノ酸の断片よりなる請求項18から22のうちの一つに記載の組成物。
- 前記コラーゲン結合性ポリペプチド断片がSEQ IDNO: 1 の38-158残基と少なくとも90% 相同である、請求項18から22のうち一つに記載の組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニスト が 副甲状腺ホルモン (PTH) または 副甲状腺ホルモン関連ペプチド (PTHrP) のポリペプチド断片からなる請求項18から24のうちの一つに記載の組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが、SEQ ID NO: 7の7-34残基からなるか、またはSEQ ID NO: 7の7-34残基のうちの少なくとも8個の連続する アミノ酸の断片からなる請求項18から25のうちの一つに記載の組成物。
- 前記PTH/PTHrP 受容体アンタゴニストが、 SEQ ID NO: 7の7-14残基からなる請求項18から25のうちの一つに記載の組成物。
- 哺乳動物に請求項1から17のうち一つに記載の前記組成物を投与することよりなる前記哺乳動物の骨成長を促進する方法。
- 前記組成物 を前記哺乳動物に投与することが、骨梁の無機質密度または 皮質骨の無機質密度または 骨梁の無機質量または皮質骨の無機質量を増加させる請求項 28記載の方法。
- 前記組成物が、前記哺乳動物 の骨成長を所望する部位に局所投与される請求項28または29に記載の方法。
- 前記組成物が整形外科用 インプラントとともに投与される請求項28-30のうち一つに記載の方法。
- 前記組成物が注射により投与される請求項28-31のうちの一つに記載の方法。
- 約5未満のpHの水溶液として前記組成物 が投与される請求項32記載の方法。
- 哺乳動物に請求項1-27のうちの一つに記載される組成物を投与することよりなる前記哺乳動物の毛髪の成長を促進する方法。
- 哺乳動物に前記哺乳動物の毛髪の成長を所望する局所に前記組成物を投与する請求項34記載の方法。
- 前記投与が皮下または皮内注射により行われる請求項34または35記載の方法。
- 前記哺乳動物が化学療法誘発性の脱毛症に罹患している請求項34-36のうち一つに記載の方法。
- 請求項1から17のうちの一つに記載の組成物を前記哺乳動物に投与し、前記組成物の投与ステップ前、投与ステップ中または投与ステップ後に、前記哺乳動物がその組織に接するインプラントを受け、および前記組成物の投与ステップが前記インプラント周辺の組織の促進に有効である哺乳動物のインプラント周辺の組織の成長を促進する方法。
- 前記組成物の投与ステップが、前記哺乳動物の組織に接するようにインプラントを配置し、前記インプラントが前記組成物を含有することよりなる請求項38記載の方法。
- 前記インプラントが歯科用インプラントである請求項38または39記載の方法。
- 前記インプラント が無傷の骨、骨セメント、ヒドロキシアパタイトまたは脱ミネラル骨である請求項38から40のうちの一つに記載の方法。
- 前記インプラントが骨芽細胞を有する請求項38から41のうちの一つに記載の方法。
- 前記インプラントの主成分が金属、プラスチック、またはセラミックである請求項38記載の方法。
- 組織が軟骨、骨または皮膚である請求項38記載の方法。
- 請求項1から17のうち一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記組成物の投与ステップ前、投与ステップ中、または投与ステップ後に、前記哺乳動物が骨髄幹細胞の投与を受けることよりなる、前記哺乳動物の免疫再構築を促進する方法。
- 請求項1から17のうち一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記融合タンパクが前記哺乳動物の循環血液中の幹細胞数を増加させることよりなる、哺乳動物の骨髄 幹細胞の可動化 を促進する方法。
- 前記組成物の投与ステップ後に、前記哺乳動物の血液より幹細胞を収集することをさらに含む請求項46記載の方法。
- 請求項18から27のうちの一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記哺乳動物は腎性骨形成異常症または腎臓疾患に罹患し、および前記組成物 は前記哺乳動物の骨量減少を低減させることよりなる前記哺乳動物の腎性骨形成異常症を治療または予防する方法。
- 請求項18から27のうちの一つに記載の組成物を哺乳動物に投与し、前記哺乳動物のガンの骨転移の発症率を低減させるか、または骨の転移ガンの成長を遅延させるために有効な前記組成物の薬量が投与されることよりなる哺乳動物のガンの骨転移の治療または予防法。
- 哺乳動物が心筋梗塞を発症後に、請求項1から17のうちの一つに記載の組成物を哺乳動物に投与することよりなる哺乳動物の心筋梗塞治療法。
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物の骨成長を促進する方法。
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物毛髪の成長 を促進する方法。
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物のインプラント周辺の組織の成長を促進する方法。
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物の免疫再構築を促進する方法。
- PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結したコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物を哺乳動物に投与することよりなる前記哺乳動物の骨髄 幹細胞の可動化を促進する方法。
- 請求項1から27のうちの一つに記載された組成物を使用する医学的治療法。
- 哺乳動物において、骨成長、毛髪の成長、インプラント周辺の組織の成長、骨髄幹細胞の投与を受けた哺乳動物の免疫再構築、または骨髄 幹細胞の可動化に有効な薬剤を調製することよりなる、請求項1から17のうちの一つに記載された組成物の使用法。
- 哺乳動物 において心筋梗塞を治療するのに有効な薬剤を調製することよりなる請求項1から17のうちの一つに記載された組成物の使用法。
- 哺乳動物の腎性骨形成異常症の治療、ガンの骨転移の発症率の低減、骨の転移ガンの成長の遅延、または毛髪の成長促進に有効な薬剤を調製することよりなる請求項18から27のうちの一つに記載された組成物の使用法。
- 哺乳動物において、骨成長、 毛髪の成長、インプラント周辺の組織の成長、骨髄幹細胞の投与を受けた哺乳動物の免疫再構築、または骨髄 幹細胞の可動化に有効な薬剤を調製することよりなる、PTH/PTHrP 受容体アゴニストに連結されたコラーゲン結合性ポリペプチド断片よりなる組成物の使用法。
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