JP2015534564A - 脱髄障害の治療のための併用療法および使用 - Google Patents

脱髄障害の治療のための併用療法および使用 Download PDF

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Abstract

ヒト対象において炎症状態を改善しながら、髄鞘形成、髄鞘再生、オリゴデンドロサイト数、または神経軸索保護のうちの１つ以上を強化するための方法および組成物が開示される。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物は、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）および免疫調節剤を組み合わせて含む。したがって、本明細書に記載される方法、組成物、およびキットは、ＣＮＳ脱髄疾患を治療するために有用であり得る。【選択図】図８

Description

関連出願
本出願は、２０１２年１０月９日に出願された米国仮特許出願第６１／７１１，６３８号の利益を主張し、その内容は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
多発性硬化症（ＭＳ）は、髄鞘の破壊につながる炎症の再発性病巣を特徴とする脳および脊髄の炎症性疾患である。多くの領域では、神経線維も損傷を受ける。ＭＳ患者における炎症活性は、疾患の初期段階で最高になる傾向がある。
新興のデータは、不可逆的な軸索喪失が、ＭＳの過程で早期に起こることを実証する。切断軸索は、中枢神経系（ＣＮＳ）内で再生することができないため、したがって、ＭＳ病変形成を抑制することを目的とした早期の治療が重要である。早ければ疾患発症時に、軸索は、活性炎症を伴う病変において切断される（Ｔｒａｐｐ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３３８：２７８−２８５、Ｂｊａｒｔｍａｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｌ １４：２７１−２７８、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｒａｉｎ １２０：３９３−３９９）。脱髄の程度は、炎症の程度および炎症性環境への脱髄した軸索の曝露、ならびに非炎症性メディエーターに関連している（Ｔｒａｐｐ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３３８：２７８−２８５、Ｋｏｒｎｅｋ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５７：２６７−２７６、Ｂｉｔｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｂｒａｉｎ １２３：１１７４−１１８３）。脱髄病巣には、髄鞘再生障害を伴うオリゴデンドロサイトの破壊も存在する（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ ６１：５３９−５４６、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４６：１６５−１７３）。オリゴデンドロサイトの喪失は、髄鞘再生する能力の低減につながり、ニューロンおよび軸索を支持する栄養因子の喪失をもたらし得る（Ｂｊａｒｔｍａｒ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ ２８：３８３−３９５）。
Ｔｒａｐｐ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ（１９９８）３３８：２７８〜２８５ Ｂｊａｒｔｍａｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｌ（２００１）１４：２７１〜２７８ Ｆｅｒｇｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ（１９９７）１２０：３９３〜３９９
多発性硬化症（ＭＳ）等のＣＮＳ脱髄疾患のための現在承認されている治療法は、主に免疫調節性であり、典型的に、ＣＮＳの修復には直接影響を有しない。オリゴデンドロサイトによるある程度の軸索髄鞘再生は、ＭＳの経過中の早期に行われるが、ＣＮＳを修復する能力は最終的に失敗し、不可逆的な組織損傷および疾患関連障害の増加につながる。したがって、ＭＳ等のＣＮＳ脱髄疾患において髄鞘再生および神経軸索保護を強化する、追加の治療法が必要である。
本発明は、対象、例えば、ヒト（例えば、ヒトＭＳ患者）における炎症状態を改善しながら、対象における髄鞘形成、髄鞘再生、オリゴデンドロサイト数、または神経軸索保護のうちの１つ以上を強化するための方法および組成物を、少なくとも一部提供する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物は、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）と、免疫調節剤と、を組み合わせて含む。他の実施形態において、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）を使用して、視神経の炎症状態、例えば、視神経炎（例えば、急性視神経炎（ＡＯＮ）を治療することができる。したがって、本明細書に記載される方法、組成物、およびキットは、ＣＮＳ障害、例えば、ＣＮＳ脱髄疾患を治療するために有用であり得る。
したがって、一態様において、本発明は、髄鞘形成、髄鞘再生、オリゴデンドロサイト数、または神経軸索保護のうちの１つ以上を、対象（例えば、それを必要とする対象）において、強化する方法を特徴とする。この方法は、髄鞘形成、髄鞘再生、オリゴデンドロサイト数、または神経軸索保護のうちの１つ以上を強化するのに十分な量の修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）および免疫調節剤を対象に投与することを含む。
関連する態様において、本発明は、ＣＮＳ障害、例えば、ＣＮＳ脱髄疾患（例えば、多発性硬化症）を、対象において（例えば、治療を必要とする対象において）治療する方法を特徴とする。この方法は、障害に関連する１つ以上の症状を低減するのに十分な量の修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）および免疫調節剤を対象に投与し、それによってその障害を治療することを含む。ある特定の実施形態において、前述の治療は、対象において、疾患に関連する１つ以上の症状を低減すること、および／または障害の再発もしくは悪化を低減、遅延、もしくは防止することを含む。
別の態様において、本発明は、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）と、免疫調節剤、例えば、本明細書に記載される薬剤と、を含むキットを特徴とする。任意に、このキットは、ラベル付きである、および／またはＣＮＳ障害、例えば、ＣＮＳ脱髄疾患を治療する際に使用するための指示を含む。
さらに別の態様において、本発明は、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）および／または免疫調節剤、例えば、本明細書に記載される薬剤を含む、パッケージ化された組成物（例えば、パッケージ化された薬学的組成物）を特徴とする。任意に、このパッケージ化された組成物は、ラベル付きである、および／またはＣＮＳ障害、例えば、ＣＮＳ脱髄疾患を治療する際に、修復剤および免疫調節剤を組み合わせて使用するための指示を含む。ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストおよび／または免疫調節剤は、任意の投与経路、例えば、末梢投与（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、硝子体内、髄腔内、または経口投与）に適した形態とすることができる。投与経路は、使用される組成物に応じて、同じであり得るか、または異なり得る。一実施形態において、パッケージ化された薬学的組成物は、静脈内投与に適した形態または調製物でＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト（例えば、ＬＩＮＧＯ−１に対する抗体）を含む。別の実施形態において、パッケージ化包装された薬学的組成物は、筋肉内投与に適した形態または調製物で免疫調節剤（例えば、インターフェロン）を含む。１つ以上の薬剤を、パッケージ化された薬学的組成物に含めることができる。
さらに別の態様において、本発明は、視神経の炎症状態、例えば、視神経炎（例えば、急性視神経炎（ＡＯＮ）を、対象（例えば、治療を必要とする対象）において治療する方法を特徴とする。この方法は、状態に関連する１つ以上の症状を低減するのに十分な量の修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）を対象に投与し、それによって障害を治療することを含む。ある特定の実施形態において、前述の治療は、対象において、状態もしくは疾患に関連する１つ以上の症状を低減すること、および／または障害の再発もしくは悪化を低減、遅延、もしくは防止することを含む。
前述の方法、組成物、およびキットのうちのいずれかの追加の実施形態、特徴、または改善は、次のとおりである。
ＣＮＳ障害およびＣＮＳ脱髄疾患
ＣＮＳ障害（例えば、ＣＮＳ脱髄疾患）は、脱髄、髄鞘形成不全、軸索損傷、軸索面積もしくは軸方向拡散性の喪失、またはニューロン対合／接続性の喪失、および／またはオリゴデンドロサイトもしくはニューロン細胞の機能不全もしくは死滅のうちの１つ以上に関連する、任意の状態、疾患、障害、または損傷であり得る。ある特定の実施形態において、ＣＮＳ障害は、軸索の髄鞘への損傷を引き起こすことによって神経系に影響を与える。他の実施形態において、ＣＮＳ障害は、例えば、脳および脊髄内の軸索伸長または神経突起伸長のＮｏｇｏ受容体−１（ＮｇＲ１−）媒介性阻害を含む。他の実施形態において、ＣＮＳ障害は、１つ以上の炎症性成分を有する。例示的なＣＮＳ障害としては、限定されないが、ＣＮＳ脱髄疾患、ＣＮＳ損傷、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、糖尿病性神経障害、脳卒中、特発性炎症性脱髄疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、視神経炎（例えば、急性視神経炎）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、大脳白質萎縮症、ビタミンＢ１２欠乏症、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）、脳脊髄炎（ＥＰＬ）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、橋中心髄鞘崩壊症（ＣＰＭ）、ウォーラー変性、副腎白質ジストロフィー、アレキサンダー病、ペリツェウスメルツバッハー病（ＰＭＺ）、外傷性緑内障、脳室周囲白質軟化症（ＰＶＬ）、本態性振戦、白質脳卒中、または横断性脊髄炎が挙げられる。ＣＮＳ脱髄疾患は、前述の障害のうちの１つ以上から選択され得る。一実施形態において、ＣＮＳ脱髄疾患は、多発性硬化症である。他の実施形態において、ＣＮＳ脱髄疾患は、視神経炎、例えば、急性視神経炎である。
修復剤
ある特定の実施形態において、修復剤は、髄鞘形成もしくは髄鞘再生を強化する、神経軸索保護を強化する、軸索伸長を増加させる、ニューロン発芽を増加させる、および／またはオリゴデンドロサイト数を（例えば、オリゴデンドロサイトの生存もしくは分化のうちの１つ以上を増加させることによって）促進する、のうちの１つ以上を引き起こす。
一実施形態において、修復剤は、ＬＲＲおよびＩｇドメインを含む、Ｎｏｇｏ受容体相互作用タンパク質のアンタゴニストである（「ＬＩＮＧＯ」、例えば、ＬＩＮＧＯ−１）。以前はＳｐ３５と呼ばれていたＬＩＮＧＯ−１は、ニューロンおよびオリゴデンドロサイト内の成体ＣＮＳにおいて選択的に発現される細胞表面糖タンパク質であり、オリゴデンドロサイトの分化、髄鞘形成、および髄鞘再生の負の調節因子として機能すると考えられている。したがって、ＬＩＮＧＯ−１の拮抗作用は、例えば、オリゴデンドロサイトによる軸索の髄鞘形成または髄鞘再生を、強化することができ、ＣＮＳ内の神経軸索保護を強化することができる。ＬＩＮＧＯ−１は、２００６年７月７日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６２７１号、２００４年３月１７日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８３２３号、２００５年６月２４日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２８８１号、および２００８年１月９日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０００３１６号に記載されており、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一実施形態において、修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１の発現または活性を阻害または低減する。
一実施形態において、修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＮｇＲ１、ｐ７５、およびＬＩＮＧＯ−１、ならびに／またはＮｇＲ１、ＴＡＪ（ＴＲＯＹ）、およびＬＩＮＧＯ−１の複合体（例えば、機能的シグナル伝達複合体）の形成および／または活性を阻害または低減する。別の実施形態において、修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＮｇＲ１へのＬＩＮＧＯ−１結合を阻害または低減する。
一実施形態において、修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１のアンタゴニストは、抗体分子である。一実施形態において、抗体分子は、ＮｇＲ１、ｐ７５、およびＬＩＮＧＯ−１、ならびに／またはＮｇＲ１、ＴＡＪ（ＴＲＯＹ）、およびＬＩＮＧＯ−１の複合体（例えば、機能的シグナル伝達複合体）の形成および／または活性を低減する。一実施形態において、抗体分子は、複合体の成分のうちの少なくとも１つ（例えば、ＮｇＲ１、ｐ７５、およびＬＩＮＧＯ−１、ならびに／またはＮｇＲ１、ＴＡＪ（ＴＲＯＹ）、およびＬＩＮＧＯ−１のうちの少なくとも１つ）に結合し、機能的シグナル伝達を阻害または低減する。
一実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ、例えば、ヒトＬＩＮＧＯに結合する。別の実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１に結合する。抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、哺乳類（例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１（もしくはその機能的変異体））に結合する、モノクローナルもしくは単一特異性抗体、またはその抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ断片、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、二価もしくは二重特異性抗体またはその断片、その単一ドメイン変異体）であり得る。一実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１に対するモノクローナル抗体である。典型的に、抗体分子は、ヒトＬＩＮＧＯ−１（もしくはその機能的断片、例えば、本明細書に記載される抗体断片）に対するヒト、ヒト化、ＣＤＲ移植、キメラ、ラクダ、またはインビトロ生成された抗体である。典型的に、抗体は、ＬＩＮＧＯ−１の１つ以上の活性（例えば、本明細書に記載されるＬＩＮＧＯ−１の１つ以上の生物活性）を阻害、低減、または中和する。
抗体分子は、完全長であることができる（例えば、少なくとも１つ、および典型的に２つの完全重鎖、ならびに少なくとも１つ、および典型的に２つの完全軽鎖を含むことができる）、または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ断片、または単一ドメイン抗体もしくはその断片）を含むことができる。さらに他の実施形態において、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される、重鎖定常領域を有する。別の実施形態において、抗体分子は、例えば、κまたはλの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。抗体分子のフレームワーク領域または定常領域は、抗体の特性を修飾するように（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうちの１つ以上を増減させるように）改変、例えば、変異され得る。一実施形態において、抗体分子のフレームワークまたは定常領域は、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうちの１つ以上を減少させるように改変、例えば、変異される。一実施形態において、抗体分子のフレームワーク領域は、抗体グリコシル化、エフェクター細胞、および／または補体機能を低減するように修飾される。一実施形態において、抗体分子は、アグリコシルフレームワークを含む。
別の実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１に結合し、免疫グロブリンＧサブクラス１（ＩｇＧ１）である。ある特定の実施形態において、抗体分子は、野生型ＩｇＧ１と比較してエフェクター細胞および補体機能を低減するように修飾される。一実施形態において、抗体分子は、アグリコシル（ＩｇＧ１）フレームワークを含む。
ある特定の実施形態において、抗体分子は、いずれも参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０５８，４０６号および米国特許第８，１２８，９２６号に記載される、参照モノクローナル抗体Ｌｉ６２もしくはＬｉ８１と同じ、または実質的に同じＬＩＮＧＯ−１エピトープに特異的に結合する。実施形態において、抗体分子は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域が、表３に示されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、表３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一、またはＬｉ６２もしくはＬｉ８１の免疫グロブリン重鎖のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列）から選択される、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態において、抗体分子は、配列番号４もしくは配列番号８、または配列番号１７〜４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６、７、および８のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、ＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３、および３０のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、ＶＨを含む。
他の実施形態において、抗体分子は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域が、表４に示されるポリペプチド配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、表４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一、またはＬｉ６２もしくはＬｉ８１の免疫グロブリン軽鎖のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列）から選択される、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、ＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０、１１、および１２のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、ＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６、７、および８のアミノ酸を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＶＨ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＶＬ、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３、および３０のアミノ酸を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＶＨ、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０、１１、および１２のアミノ酸を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＶＬ、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む。
他の実施形態において、抗体分子は、配列番号１、５、および５３〜８５、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号１、５、および５３〜８５と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）からなる群から選択されるＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号６６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号６６と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＨを含む。
さらに他の実施形態において、抗体分子は、表４に示される配列番号９および１３、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、表４に示される前述の配列番号９および１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）からなる群から選択されるＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号９と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＨと、配列番号１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＬと、を含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号６６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号６６と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＨと、配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号９と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＶＬと、を含む。
別の実施形態において、抗体分子は、次のとおり、配列番号２７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、下に示される重鎖を含む：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＡＹＥＭＫＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶ
ＩＧＰＳＧＧＦＴＦＹ ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＴＥＧ
ＤＮＤＡＦＤＩＷＧＱ ＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳ ＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡ ＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴ ＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹ
ＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮ ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ ＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰ ＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩ
ＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴ ＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳ ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ ＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳ ＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤ
ＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥ ＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶ ＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴ ＫＰＲＥＥＱＹＮＳＡ
ＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬ ＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹ ＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰ ＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡ ＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹ
ＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴ ＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶ ＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶ ＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮ ＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤ
ＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫ ＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱ ＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨ ＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫ ＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２７５）。
他の実施形態において、抗体分子は、次のとおり、配列番号２７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、下に示される軽鎖を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴ ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ ＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳ ＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤ
ＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱ ＲＳＮＷＰＭＹＴＦＧ
ＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴ ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴ ＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ ＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫ
ＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫ ＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨ ＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ
ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦ ＮＲＧＥＣ（配列番号２７６）。
別の実施形態において、修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１のアンタゴニストは、可溶性ＬＩＮＧＯ分子、例えば、ＬＩＮＧＯ−１分子（例えば、ＬＩＮＧＯ−１の断片）、または可溶型のＬＩＮＧＯ−１複合体の成分（例えば、可溶型のＮｇＲ１、ｐ７５、もしくはＴＡＪ（ＴＲＯＹ））である。
可溶型のＬＩＮＧＯまたは複合体成分は、単独で使用され得るか、または第２の部分、例えば、免疫グロブリンＦｃドメイン、血清アルブミン、ペグ化、ＧＳＴ、Ｌｅｘ−Ａ、ＭＢＰポリペプチド配列、または抗体（例えば、二重特異性もしくは多重特異性抗体）に（例えば、化学的結合、遺伝子もしくはポリペプチド融合、非共有結合性会合、またはその他によって）機能的に連結され得る。融合タンパク質は、追加として、第１の部分、例えば、可溶型のＬＩＮＧＯ−１または複合体成分を、第２の部分に結合するリンカー配列を含む。他の実施形態において、追加のアミノ酸配列を融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加して、発現、立体柔軟性、検出、および／または単離もしくは精製を容易にすることができる。例えば、可溶型のＬＩＮＧＯ−１または複合体成分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む、種々のアイソタイプの重鎖定常領域に融合され得る。典型的に、融合タンパク質は、ＬＩＮＧＯの細胞外ドメインまたは複合体成分（もしくはそれに相同性の配列）を含むことができ、例えば、ヒト免疫グロブリンＦｃ鎖、例えば、ヒトＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはヒトＩｇＧ２、またはその変異型）に融合される。Ｆｃ配列は、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体結合、および／または補体活性を低減するために、１つ以上のアミノ酸において変異されることができる。
別の実施形態において、１つ以上の修復剤が、組み合わせて添加される。例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストを、別の髄鞘再生剤と組み合わせて添加することができる。
免疫調節剤
本明細書に記載される方法、キット、および組成物は、１つ以上の免疫調節剤を含むことができる。ある特定の実施形態において、免疫調節剤は、
ＩＦＮ−β１分子、
グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマー、例えば、グラチラマー（例えば、Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、
α−４インテグリンに対する抗体またはその断片、例えば、ナタリズマブ（例えば、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））、
アントラセンジオン分子、例えば、ミトキサントロン（例えば、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、
フィンゴリモド、例えば、ＦＴＹ７２０（例えば、Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標））、
フマル酸ジメチル、例えば、経口フマル酸ジメチル（例えば、Ｔｅｃｆｉｄｅｒａ（登録商標））、
Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体、例えば、ダクリズマブ、
ＣＤ５２に対する抗体、例えば、アレムツズマブ（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ）、
ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、レフルノミドまたはその活性代謝物、例えば、テリフルノミド（例えば、ＡＵＢＡＧＩＯ）、
ＣＤ２０に対する抗体、例えば、オクレリズマブ、
例えば、国際公開第２０１２／１０９１０８号に記載される、スフィンゴシン１−リン酸（Ｓ１Ｐ）調節剤、または
コルチコステロイド、のうちの１つ以上から選択される。
一実施形態において、免疫調節剤は、ＩＦＮ−β１分子である。ＩＦＮ−β１分子は、ＩＦＮ−β１ａまたはＩＦＮ−β１ｂポリペプチド、その変異体、相同体、断片、またはペグ化変異体のうちの１つ以上から選択され得る。
一実施形態において、ＩＦＮ−β１分子が、ＩＦＮ−β１ａ分子、ＩＦＮ−β１ｂ分子、またはＩＦＮ−β１ａ分子もしくはＩＦＮ−β１ｂ分子のペグ化変異体から選択されるＩＦＮβ剤を含む。
一実施形態において、ＩＦＮβ１分子は、ＩＦＮ−β１ａ剤（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｒｅｂｉｆ（登録商標））である。別の実施形態において、ＩＦＮβ１分子は、ＩＮＦ−β１ｂ剤（例えば、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）、またはＥｘｔａｖｉａ（登録商標））である。
一実施形態において、免疫調節剤は、グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマー、例えば、グラチラマー（例えば、Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））である。
一実施形態において、免疫調節剤は、α−４インテグリンに対する抗体またはその断片（例えば、ナタリズマブ（例えば、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））である。
さらに他の実施形態において、免疫調節剤は、アントラセンジオン分子（例えば、ミトキサントロン（例えば、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））である。
さらに別の実施形態において、免疫調節剤は、フィンゴリモド（例えば、ＦＴＹ７２０、例えば、Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標））である。
一実施形態において、免疫調節剤は、フマル酸ジメチル（例えば、経口フマル酸ジメチル（例えば、ＢＧ−１２））である。
他の実施形態において、免疫調節剤は、Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体（例えば、ダクリズマブ）である。
他の実施形態において、免疫調節剤は、ＣＤ２０に対する抗体、例えば、オクレリズマブである。
他の実施形態において、免疫調節剤は、コルチコステロイド、例えば、メチルプレドニゾロン（例えば、高用量のコルチコステロイド、例えば、メチルプレドニゾロン）である。
ある特定の実施形態において、この方法は、とりわけ、抗うつ薬、鎮痛薬、抗振戦剤等の１つ以上の症状管理療法の使用をさらに含む。
修復剤（例えば、本明細書に記載される１つ以上の修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）と、免疫調節剤（例えば、本明細書に記載される１つ以上の免疫調節剤）との任意の組み合わせが、本明細書に記載される方法、キット、および組成物に使用され得る。例えば、修復剤は、グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマー、例えば、グラチラマーと組み合わせることができる。他の実施形態において、修復剤は、α−４インテグリンに対する抗体またはその断片、例えば、ナタリズマブと組み合わせることができる。さらに別の実施形態において、修復剤は、アントラセンジオン分子、例えば、ミトキサントロンと組み合わせることができる。さらに別の実施形態において、修復剤は、フィンゴリモド、例えば、ＦＴＹ７２０と組み合わせることができる。さらに別の実施形態において、修復剤は、フマル酸ジメチル、例えば、経口フマル酸ジメチルと組み合わせることができる。他の実施形態において、修復剤は、Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体、例えば、ダクリズマブと組み合わせることができる。さらに別の実施形態において、修復剤は、ＣＤ５２に対する抗体、例えば、アレムツズマブと組み合わせることができる。さらに別の実施形態において、修復剤は、ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、テリフルノミドと組み合わせることができる。別の実施形態において、修復剤は、ＣＤ２０に対する抗体、例えば、オクレリズマブと組み合わせることができる。別の実施形態において、修復剤は、コルチコステロイド、例えば、メチルプレドニゾロンと組み合わせることができる。一実施形態において、修復剤は、Ｓ１Ｐ調節剤と組み合わせることができる。
他の実施形態において、修復剤は、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の免疫調節剤、例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の本明細書に記載される免疫調節剤と組み合わされる。例示的な一実施形態において、ＬＩＮＧＯアンタゴニスト、ＩＦＮ−β１分子、およびコルチコステロイドの組み合わせが使用される。他の実施形態において、ＬＩＮＧＯアンタゴニスト、ＩＦＮ−β１分子、およびグルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマー、例えば、グラチラマーの組み合わせが使用される。さらに他の実施形態において、ＬＩＮＧＯアンタゴニスト、ＩＦＮ−β１分子、およびα−４インテグリンに対する抗体またはその断片、例えば、ナタリズマブの組み合わせが使用される。
本明細書に記載される方法、キット、および組成物のある特定の実施形態において、修復剤は、ＬＩＮＧＯ−１に対する抗体分子、例えば、本明細書に記載される抗ＬＩＮＧＯ抗体であり、免疫抑制剤は、ＩＦＮ−β１分子、例えば、本明細書に記載されるＩＦＮ−β１分子である。
併用療法および投与のタイミング
修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）および本明細書に記載される免疫調節剤の組み合わせは、任意の順序で、例えば、本明細書に記載されるとおり、同時に、または連続して投与することができる。一実施形態において、修復剤および免疫調節剤は、同時に投与される。別の実施形態において、修復剤および免疫調節剤は、連続して投与される。例えば、修復剤および免疫調節剤の投与は、互いに少なくとも一部または完全に重複し得る。
ある特定の実施形態において、修復剤および免疫調節剤の投与の開始は、同時に起こる。他の実施形態において、免疫調節剤は、修復剤で治療を開始する前に投与される。さらに他の実施形態において、修復剤は、免疫調節剤で治療を開始する前に投与される。別の実施形態において、免疫調節剤の投与は、修復剤の投与の中止後も継続する。他の実施形態において、修復剤の投与は、免疫調節剤の投与の中止後も継続する。他の実施形態において、修復剤の投与は、断続的に継続するが（例えば、３ヶ月もしくは６ヶ月もしくは１２ヶ月ごとに２ヶ月もしくは３ヶ月間、または１〜２年ごとに３〜６ヶ月間）、免疫調節剤は、継続的に付与される。
ある特定の実施形態において、修復剤は、ＬＩＮＧＯ−１に対する抗体分子であり、静脈内、皮下、または筋肉内に投与される。一実施形態において、抗体分子は、静脈内に投与される。そのような実施形態において、抗体分子は、約１〜１００ｍｇ／ｋｇ（典型的に、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、抗体分子は、ＩＶ注入により１週間、２週間、３週間、４週間、または５週間ごとに１回投与される。
ある特定の実施形態において、免疫調節剤は、ＩＦＮ−β１分子であり、静脈内、皮下、または筋肉内に投与される。例えば、ＩＦＮ−β１分子は、
（ｉ）筋肉内注射により２０〜４５マイクログラム（例えば、３０マイクログラム）で、例えば、週１回、
（ｉｉ）皮下注射により２０〜３０マイクログラム（例えば、２２マイクログラム）で、例えば、週３回、または４０〜５０マイクログラム（例えば、４４マイクログラム）で、例えば、週１回、
（ｉｉｉ）筋肉内に１０〜５０μｇの量で、例えば、週３回、または５〜１０日ごと、例えば、週１回、あるいは
（ｉｖ）皮下注射により２００〜６００μｇ（例えば、２５０〜５００μｇ）の量で、例えば、隔日、のうちの１つ以上で投与され得る。一実施形態において、ＩＦＮ−β１分子は、インターフェロンβ−１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）、またはＥｘｔａｖｉａ（登録商標））である。
他の実施形態において、修復剤は、ＬＩＮＧＯ−１に対する抗体分子であり、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇで投与されるＩＶ注入により４週間ごとに１回投与される。
免疫調節剤、ＩＦＮ−β１は、
（ｉ）筋肉内注射により２０〜４５マイクログラム（例えば、３０マイクログラム）で、例えば、週１回、
（ｉｉ）皮下注射により２０〜３０マイクログラム（例えば、２２マイクログラム）で、例えば、週３回、または４０〜５０マイクログラム（例えば、４４マイクログラム）で、例えば、週１回、あるいは
（ｉｉｉ）筋肉内に１０〜５０μｇの量で、例えば、週３回、または５〜１０日ごと、例えば、週１回、のうちの１つ以上で投与される。
対象
本明細書に開示される方法、組成物、およびキットのうちのいずれかの場合、治療される対象は、例えば、本明細書に記載される、ＣＮＳ障害もしくはＣＮＳ脱髄疾患を有するか、または有する危険性がある対象（例えば、ヒト）である。
一実施形態において、対象（例えば、ヒト）は、ＭＳを有するか、または有する危険性がある。ＭＳを有する対象は、治療の任意の段階であり得る。ある特定の実施形態において、ＭＳを有する対象は、良性ＭＳ、ＲＲＭＳ（例えば、静止性ＲＲＭＳ、活動性ＲＲＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）もしくは二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、臨床的に孤立した症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＣＩＳ））、または臨床的に定義されたＭＳ（ＣＤＭＳ）のうちの１つ以上を有するヒトから選択される。一実施形態において、対象は無症候性である。他の実施形態において、対象は、臨床的に孤立した症候群（ＣＩＳ）または臨床的に定義されたＭＳ（ＣＤＭＳ）を有するもの等の１つ以上のＭＳ様症状を有する。他の実施形態において、対象は、１つ以上のＭＳ再発（例えば、急性視神経炎、横断性脊髄炎、脳幹症候群）を有する。
一実施形態において、対象は、再発型のＭＳ（例えば、ＲＲＭＳまたは再発ＳＰＭＳ）を有する。一実施形態において、対象は、ＲＲＭＳを有し、例えば、ガドリニウム（Ｇｄ）強化、または磁気共鳴撮像（例えば、脳もしくは脊髄ＭＲＩ）上で新しいおよび／または拡大したＴ２／ＦＬＡＩＲ病変の発達によって示される、１つ以上の進行中の臨床憎悪および／または無症状活動を有する。別の実施形態において、対象は、ＳＰＭＳを有し、例えば、ガドリニウム（Ｇｄ）強化、または磁気共鳴撮像（例えば、脳もしくは脊髄ＭＲＩ）上で新しいおよび／または拡大したＴ２／ＦＬＡＩＲ病変の発達によって示される、１つ以上の進行中の臨床憎悪および／または無症状活動を有する。一実施形態において、対象は、活動型のＭＳ、例えば、活動性ＲＲＭＳを有する。他の実施形態において、ＭＳ対象は、少なくとも１つの新たに発達した病変を有する。他の実施形態において、ＭＳ対象は、少なくとも１つの既存の病変を有する。一実施形態において、対象は、ＲＲＭＳを有し、１つ以上の新たに発達した病変もしくは既存の病変、またはそれらの組み合わせを有する。他の実施形態において、対象は、１．５〜７のベースラインＥＤＳＳスコアを有する。
一実施形態において、対象は、ＭＳ療法（本明細書に記載される薬剤の単剤療法または併用療法）の投与前のＭＳ患者（例えば、ＲＲＭＳまたはＳＰＭＳを有する患者）である。一実施形態において、対象は、新たに診断された、もしくは未診断のＲＲＭＳもしくはＳＰＭＰＳ患者、または放射線学的に孤立した症候群を有する対象である。別の実施形態において、対象は、本明細書に記載されるＭＳ療法（本明細書に記載される薬剤の単剤療法または併用療法）の投与後のＭＳ患者（例えば、ＲＲＭＳ患者）である。他の実施形態において、対象は、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、１年、またはそれ以上のＭＳ療法の投与後のＭＳ患者である。
対象の監視
本明細書に開示される方法の代替として、またはそれと組み合わせて、ＣＮＳ障害またはＣＮＳ脱髄疾患の進行を評価、診断、および／または監視する方法が開示される。この方法は、ＣＮＳ障害もしくはＣＮＳ脱髄疾患を有するか、またはその障害を発症する危険性のある対象（例えば、患者、患者群、もしくは患者集団）を評価することを含む。一実施形態において、対象は、（ｉ）神経機能のアセスメント（例えば、ＥＤＳＳ）および／または（ｉｉ）身体機能のアセスメントを用いて評価される。例えば、身体機能のアセスメントは、歩行機能（例えば、短距離および／もしくは長距離歩行機能）のアセスメントを、単独で、または上肢および／もしくは下肢機能のアセスメントと組み合わせて含むことができる。
ある特定の実施形態において、対象は、
神経学的検査を行うこと、
拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）での対象の状態を取得すること、
多発性硬化症機能性複合（ＭＳＦＣ）での対象の状態を取得すること、
例えば、ＭＲＩを用いて評価される、対象の病変状態を検出すること、
上肢および／もしくは下肢機能の測定を取得すること、
歩行機能（例えば、短距離歩行機能）（例えば、２５フィートの時限ウォーク（Ｔ２５ＦＷ））、または長距離歩行機能（例えば、６分間歩行テスト（６ＭＷ）の測定を取得すること、
認知機能の測定を取得すること（例えば、ＭＳ−ＣＯＧ）、または
視覚機能のアセスメントを取得すること、のうちの１つ以上によって評価される。
一実施形態において、上肢機能の測定は、９ホールペグテスト（９ＨＰ）を使用して取得される。
他の実施形態において、短距離歩行機能の測定は、２５フィートの時限歩行（Ｔ２５ＦＷ）を使用して取得される。
他の実施形態において、長距離歩行機能の測定は、６分間歩行テスト（６ＭＷ）を使用して取得される。
ある特定の実施形態において、四肢および／または歩行機能の測定の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、またはそれ以上の増加は、対象における疾患の進行、例えば、症状および／または障害の着実な悪化を示し、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、またはそれ以上の減少は、対象における改善された転帰（例えば、疾患進行の減少もしくは改善された状態）を示す。
ある特定の実施形態において、対象は、神経機能のアセスメント、例えば、ＥＤＳＳを用いて評価される。いくつかの実施形態において、ＥＤＳＳは、神経機能のアセスメント、歩行機能のアセスメント、または両方を含む。一実施形態において、ＥＤＳＳスコアは、ＥＤＳＳ機能システム（ＦＳ）に対する１つ以上のスコアの組み合わせ（例えば、視覚、脳幹、小脳、運動、感覚、膀胱／腸または認知システムから選択されるＥＤＳＳ ＦＳに対する１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つ全ての個別のスコア）に基づいて計算される。他の実施形態において、ＥＤＳＳは、歩行のスコアを含む。一実施形態において、ＥＤＳＳは、無制限歩行、例えば、所定の距離（例えば、５００、３００、２００、もしくは１００メートル以上、または２００もしくは１００メートル未満の距離）に対して援助または休憩なし、片側援助、両側援助、本質的または完全に車いすに制限される、あるいは本質的または完全にベッドに制限される、のうちの１つ以上（または全て）のアセスメントを含む対象の歩行の決定を含む。
一実施形態において、視覚機能のアセスメントは、例えば、低コントラスト文字視力（ＬＣＬＡ）、視覚機能アンケート（ＶＦＱ）、機能的視力コントラストテスト（ＦＡＣＴ）、ＶＥＰ（例えば、ＭａｃＫａｙ，ＡＭ（２００８）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．４９（１）：４３８−４１に記載される）、光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）のうちの１つ以上によって取得され、それらのうちのいくつかは、例えば、Ｂａｌｃｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ７４ Ｓｕｐｐｌ ３：Ｓ１６−２３、Ｂｏｃｋ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｂｒ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．９６（１）：６２−７）に記載されている。
さらに他の実施形態において、認知機能の測定は、学習テスト、記憶テスト、および／または注意／処理速度テストの評価を含む。例えば、認知機能の測定は、聴覚記憶、言語学習、および／または視覚情報の記憶（例えば、選択式回想テスト（ＳＲＴ））；聴覚／言語記憶を評価するためのテスト（例えば、カリフォルニア言語学習テスト第二版（ＣＶＬＴ２））、レイ聴覚言語学習テスト（ＲＡＶＬＴ）；視覚／空間記憶を評価するためのテスト（例えば、簡単な視空間記憶テスト改訂版（ＢＶＭＴＲ））；処理速度認知テスト、例えば、定速聴覚連続付加検査（ＰＡＳＡＴ）、数字符合照合検査（ＳＤＭＴ）；ＭＳＮＱ−情報、ＭＳＮＱ−主題、および／またはＳＦ−３６）のうちの１つ以上の評価を含むことができる。一実施形態において、認知機能の測定は、ＳＤＭＴ、ＰＡＳＡＴ−３および−３、ＳＲＴ−合計学習（ＳＲＴ−ＴＬ）、ＳＲＴ遅延想起（ＳＲＴ−ＤＲ）、ならびにＢＶＭＴＲ遅延想起（ＢＶＭＴＲ−ＤＲ）を含む、ＭＳ認知エンドポイントの複合を使用して行われる（例えば、Ｃａｄａｖｉｄ ｅｔ ａｌ，，２９ｔｈ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ ＭＳ（ＥＣＴＲＩＭＳ），２−５ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３に記載されるＭＳ−ＣＯＧ）。
ある特定の実施形態において、対象の病変状態は、磁気共鳴撮像を使用して評価される。一実施形態において、磁気共鳴撮像は、磁気転写および／または拡散テンソル撮像を含む。
ある特定の実施形態において、対象における改善は、
ａ．６．０以下のベースラインスコアから１．０ポイント以上のＥＤＳＳの減少、
ｂ．Ｔ２５ＦＷのベースラインから１５％以上の改善、
ｃ．９ＨＰＴのベースラインから１５％以上の改善、または
ｄ．ＰＡＳＡＴのベースラインから１５％以上の改善、のうちの１つ以上によって定義される。
他の実施形態において、この方法は、次のうちの１つ以上をさらに含む。
（ｉ）対象を、治療法、例えば、本明細書に記載される治療法が必要であると特定する、
（ｉｉ）対象を、治療法、例えば、本明細書に記載される治療法に対する応答増加または応答減少を有すると特定する、
（ｉｉｉ）対象を、安定である、機能もしくは能力の改善を示す（例えば、疾患非進行者である）、または機能もしくは能力の低下を示す（例えば、疾患進行者である）と特定する、
（ｉｖ）対象を診断および／または予後診断する。
本明細書に記載される方法におけるステップ（例えば、修復剤および免疫調節剤の投与（「投与ステップ」）、ならびに対象監視および／または評価（「評価ステップ」）は、任意の順序で行うことができる。一実施形態において、投与ステップは、評価ステップの前に起こる。別の実施形態において、評価ステップは、投与ステップの前に起こる。
別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって広く理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものに類似または相当する方法および材料を、本発明の実践または試験で使用することができるが、好適な方法および材料が以下に記載される。本明細書において言及される全ての出版物、特許出願、特許、および他の参照文献は、参照によりそれら全体が組み込まれる。加えて、材料、方法、および実施例は単なる例示であり、限定的であることは意図されない。
本発明の他の特性および利点は、詳細な説明、図面、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のマウスモデルにおける視神経軸索密度の定量化のための関心領域（ＲＯＩ）の選択を示す。 図２Ａはビヒクルまたは抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で治療したＥＡＥマウスの生存曲線を示す折れ線グラフである。図２Ｂはビヒクルまたは抗ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストで治療したＥＡＥマウスにおける完全な対麻痺の発達を示す折れ線グラフである。 図３Ａ〜３ＦはマウスＥＡＥにおける冠状視神経拡散撮像の画像を含む。拡散方向は、小さな矢印で示されている。右視神経の位置は、大きな矢印で示されている。図３Ａは、Ｔ２強調ローカライザー走査の画像である。図３Ｂは、視神経に垂直な拡散強調画像の画像である。図３Ｃは、視神経に平行な拡散強調走査の画像である。図３Ｄは、視神経に垂直な拡散強調画像の画像である。図３Ｅは、図３Ｂの視神経画像の拡大である。図３Ｆは、図３Ｄの視神経画像の拡大である。 マウスＥＡＥにおける拡散テンソル撮像（ＤＴＩ）によって分析された視神経の完全性を示す棒グラフである。 ビヒクルもしくは抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で治療したＥＡＥマウス、または健康なマウスにおける視神経の組織学的分析を示す。 ビヒクルもしくは抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で治療したＥＡＥマウス、または健康なマウスにおける視神経の軸索喪失の測定を示す。図６は、視神経面積の測定値（μｍ２）、平均中心軸索面積（μｍ２）、総中心軸索数、総末梢軸索数、総中心軸索原形質面積（μｍ２）、および総末梢軸索原形質面積（μｍ２）を含む。 次の処置の後（治療群（Ｖｅｈ＋対照抗体）、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体、およびＭＰ＋抗ＬＩＮＧＯ−１抗体）、それぞれ抗βＩＩＩチューブリン染色およびＤＡＰＩによって検出された視神経の切片の組織学的分析を示す。 示された治療群における軸索セグメント数／領域を反映する棒グラフである。抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体治療群（Ｖｅｈ＋抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体）は、５倍高い軸索数を示し、抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体治療が軸索喪失を防止したことを示唆する（図８）。併用治療群（ＭＰ＋抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体）は、対照治療群（Ｖｅｈ＋対照抗体と比較して、軸索数の８倍の増加を示した。
ＭＳ等の炎症性脱髄ＣＮＳ疾患は、若年成人における非外傷性神経障害の一般的な原因である。ＭＳの現在承認されている治療法は、主に免疫調節され、ＣＮＳの修復に検出可能な直接効果を有しない。例えば、再発性ＭＳを有する患者に対する現在の標準治療は、再発の頻度と重症度、および再発に関連する身体障害の蓄積を低減するため、ならびに例えば、うつ病、膀胱機能不全、または歩行障害に対して、必要に応じて種々の対症療法を提供するための免疫調節薬の使用を含む。いくつかの免疫調節薬は、再発性ＭＳに現在利用可能であり、限定されないが、インターフェロンβの異なる調製物（筋肉内［ＩＭ］［Ａｖｏｎｅｘ］または皮下［ＳＣ］［Ｒｅｂｉｆ（登録商標）］に付与されるインターフェロンβ−１ａ、インターフェロンβ−１ｂ［Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）／Ｅｘｔａｖｉａ（登録商標）］）、酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））、およびフィンゴリモド（Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標））が挙げられる。短期のコルチコステロイドが時折付与され、成功する場合と、そうでない場合がある。ミトキサントロンおよびシクロホスファミド等の化学療法剤は、重度の再発性ＭＳの場合に使用されることがある。オリゴデンドロサイトによるある程度の軸索髄鞘再生は、ＭＳの経過中の早期に行われるが、ＣＮＳを内因的に修復する能力は失敗する場合が多く、不可逆的な組織損傷および疾患関連障害の増加につながる。
いくつかの前臨床研究は、毒性損傷（キュプリゾン）（Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，６５：３０４−１５）、化学損傷（リゾホスファチジルコリン［ＬＰＣ］）、および炎症性（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質−実験的自己免疫性脳脊髄炎［ＭＯＧ−ＥＡＥ］）（Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ Ｍｅｄ，１３：１２２８−３３）脱髄、および毒性（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン［ＭＰＴＰ］）ニューロン損傷（Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，１０４：１４４３０−５）、外傷性／高血圧視神経損傷（Ｆｕ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，４９：９７５−８５）、および脊髄損傷（Ｊｉ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３３：３１１−２０、Ｊｉ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３９：２５８−６７、Ｌｖ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔ，１７：２７０−８）の動物モデルにおいて、ＣＮＳ髄鞘再生および神経軸索保護を強化することにおけるＬＩＮＧＯ−１拮抗作用の役割を実証した。したがって、ＬＩＮＧＯ−１を抗ＬＩＮＧＯ−１抗体と拮抗させることは、ＣＮＳ内で髄鞘再生および神経軸索保護を強化することができる。抗ＬＩＮＧＯ−１抗体は、末梢投与の後、軸索およびオリゴデンドロサイトの両方においてＬＩＮＧＯ−１を遮断するのに十分な濃度でＣＮＳに到達することができる。これは、次に、ＭＳ患者の脳内に通常存在するオリゴデンドロサイト前駆細胞（ＯＰＣ）の分化を介して、髄鞘再生を促進することができる。
軸索およびニューロンにおける抗ＬＩＮＧＯ−１抗体のＬＩＮＧＯ−１への結合は、ＣＮＳ内のＮｏｇｏ６６受容体−１（ＮｇＲ１）／ｐ７５／ＬＩＮＧＯ−１受容体複合体上のミエリン片によるシグナル伝達の遮断を介して、神経軸索保護を提供することもできる。ＭＳにおける軸索修復／神経突起再生の失敗は、損傷した軸索内のＮｇＲ１／ｐ７５／ＬＩＮＧＯ−１複合体およびＮｇＲ１／ＴＲＯＹ／ＬＩＮＧＯ−１複合体上のミエリン片のシグナル伝達に少なくとも一部起因し得ることが提案された（Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，７：２２１−８）。ＮｇＲ１受容体複合体上のシグナル伝達は、軸索再生だけでなく（Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，３２：１０５−１１）、神経軸索損傷後のニューロン生存にも干渉し得る（Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，７：２２１−８、Ｆｕ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，４９：９７５−８５、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，２８：７２７−３５）。
理論に束縛されるものではないが、新たに発達した病変は、より優れた軸索の保存およびより低いグリア性瘢痕からの干渉に少なくとも一部起因して、より容易に修復および髄鞘再生され得ると考えられている（Ｊａｓｍｉｎ ａｎｄ Ｏｈａｒａ（２００２）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔｓ ８（３）：１９８−２０３、Ｖｉｃｋ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ ９ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ９３−１０３）。しかしながら、既存の病変に対するＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストの修復効果が生じる可能性もある。例えば、既存の病変における抗ＬＩＮＧＯ−１抗体治療の有効性は、（１）ＯＰＣが、慢性脱髄ＭＳ病変において見出されるという所見、（２）慢性脱髄脳病変が髄鞘再生される能力を示す動物実験、および（３）確立された脱髄病変における（例えば、キュプリゾンモデルにおける）ＬＩＮＧＯ−１遮断による髄鞘再生の強化を示す研究によって支持される。
したがって、ＬＩＮＧＯ−１の抗ＬＩＮＧＯ−１抗体との拮抗作用は、ＭＳおよび急性視神経炎等のＣＮＳ脱髄疾患において、髄鞘再生および神経軸索保護を強化することができ、神経機能および障害に対応する有益な効果を有する、改善されたＣＮＳ修復につながる。抗ＬＩＮＧＯ−１抗体は、ＭＳ病因の炎症性成分に対する検出可能な免疫調節効果を有していないため、免疫調節剤との同時投与が望ましい。したがって、免疫調節剤、例えば、ＩＦＮ−β剤、例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）と修復剤、例えば、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体との併用治療が開示される。
本発明は、対象における炎症状態を改善しながら、対象、例えば、ヒト（例えば、ヒトＭＳ患者）における髄鞘形成、髄鞘再生、オリゴデンドロサイト数、または神経軸索保護のうちの１つ以上を強化するための方法、組成物、およびキットを、少なくとも一部提供する。本明細書に記載されるそのような方法、組成物、およびキットは、ＣＮＳ障害、例えば、ＣＮＳ脱髄疾患を治療するために有用である。したがって、方法、組成物、およびキットは、本明細書に記載されるとおり、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）と、免疫調節剤とを組み合わせて含む。
他の実施形態において、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）を使用して、視神経の炎症状態、例えば、視神経炎（例えば、急性視神経炎（ＡＯＮ）を治療することができる。したがって、視神経の炎症状態、例えば、視神経炎（例えば、ＡＯＮ）を治療するための修復剤を含む、方法および組成物も開示される。
「修復剤」という用語は、本明細書で使用されるとき、実質的な（例えば、検出可能な）免疫調節効果を有することなく、髄鞘形成、髄鞘再生を強化する、神経軸索保護を強化する、軸索伸長を増加させる、ニューロン発芽を増加させる、および／またはオリゴデンドロサイト数を（例えば、オリゴデンドロサイトの生存もしくは分化のうちの１つ以上を増加させることによって）促進する、のうちの１つ以上を引き起こす任意の薬剤を含む。一実施形態において、修復剤は、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト、例えば、本明細書に記載されるＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストである。
本発明の種々の態様は、以下の小節においてさらに詳細に記載される。
定義
本明細書で使用されるとき、次の用語のそれぞれは、この節においてそれに関連付けられた意味を有する。
本明細書で使用されるとき、冠詞「１つ（ａ）」および「１つ（ａｎ）」は、冠詞の文法上の目的語のうちの１つまたは複数（例えば、少なくとも１つ）を指す。
文脈上、別段の明確な指示がない限り、「または」という用語は、本明細書において「および／または」を意味するように使用され、それと交換可能に使用される。
「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。
「約」および「およそ」は、一般に測定の性質または精度を考慮して、測定される量に対する許容できる誤差の程度を意味する。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的に１０％以内、より典型的に５％以内である。
「取得する」または「取得すること」は、この用語が本明細書で使用されるとき、結果を「直接取得する」または「間接的に取得する」ことによって、所望の結果、例えば、値、例えば、数値を入手すること、決定すること、または評価することを指す。「直接取得する」とは、結果、例えば、値を得るためにプロセスを行うこと（例えば、テスト、例えば、上肢および／もしくは下肢機能、ならびに／または歩行機能の測定を行うこと）を意味する。「間接的に取得する」とは、結果、例えば、値を別の当事者またはソース（例えば、値を直接取得した第三者臨床医もしくは医療専門家）から受け取ることを指す。
「ＣＮＳ障害」（例えば、「ＣＮＳ脱髄疾患」）は、脱髄、髄鞘形成不全、軸索損傷、および／またはオリゴデンドロサイトもしくはニューロン細胞の機能不全もしくは死滅、あるいはニューロン対合／接続性の喪失のうちの１つ以上に関連する任意の疾患、障害、または損傷であり得る。ある特定の実施形態において、ＣＮＳ障害は、軸索の髄鞘への損傷を引き起こすことによって神経系に影響を与える。他の実施形態において、ＣＮＳ障害は、例えば、脳および脊髄内の軸索伸長または神経突起伸長のＮｏｇｏ受容体−１（ＮｇＲ１−）媒介性阻害を含む。他の実施形態において、ＣＮＳ障害は、１つ以上の炎症性成分を有する。一実施形態において、ＣＮＳ障害（例えば、ＣＮＳ脱髄疾患）は、多発性硬化症である。ＣＮＳ障害（例えば、ＣＮＳ脱髄疾患）は、疾患または障害の少なくとも１つの症状が、低減、緩和、終了、遅延、または防止される場合、「治療」、「阻害」、または「低減」される。
本明細書で使用されるとき、多発性硬化症は、疾患の再帰または再発が低減、減速、遅延、または防止される場合、「治療」、「阻害」、または「低減」される。対象における疾患状態を決定するのを助けるために使用することができる多発性硬化症の例示的な臨床症状としては、例えば、うずき、しびれ、筋力低下、バランスの喪失、かすみ目または複視、不明瞭な発語、突然発症麻痺、協調不全、認知困難、疲労、熱感度、痙縮、めまい、振戦、歩行異常、言語／嚥下障害、および撮像技術、例えば、ＭＲＩによって評価された病変の範囲を挙げることができる。ＭＳの臨床兆候は、例えば、神経学的検査および長距離歩行に基づいて、ＥＤＳＳ評価システムを使用して、日常的に分類され、標準化される。尺度の下端（１〜５．５）について、１フルステップの減少は、効果的なＭＳ治療を示すが（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：５７３−７９，１９９４）、１フルステップの増加は、疾患の進行または悪化（例えば、憎悪）を示す。尺度の上端（５〜７）について、半分のポイントは、典型的に改善（低減）または悪化（増加）を示す。
本明細書で使用されるとき、「拡大障害状態尺度」または「ＥＤＳＳ」は、医療行為におけるその慣習的意味を有することが意図される。ＥＤＳＳは、ＭＳを分類し、標準化するために頻繁に使用される評価システムである。許容されるスコアは、０（正常）から１０（ＭＳによる死亡）の範囲である。典型的に、約４〜６のＥＤＳＳスコアを有する患者は、中度の障害（例えば、限られた歩行能力）を有するが、約７または８のＥＤＳＳスコアを有する患者は、重度の障害を有する（例えば、車いすが必要となる）。より具体的には、１〜３の範囲のＥＤＳＳスコアは、完全に歩行可能であるが、１つ以上の機能的システムにおけるいくつかの兆候を有するＭＳ患者を指す。３〜４．５より高い範囲のＥＤＳＳスコアは、中度から比較的重度の障害を示す。５〜５．５のＥＤＳＳスコアは、完全な日常活動を損なうか、または妨げる障害を指す。６〜６．５のＥＤＳＳスコアは、歩くために断続的〜一定、または片側〜両側の一定援助（杖、松葉杖、または装具）を必要とするＭＳ患者を指す。７〜７．５のＥＤＳＳスコアは、ＭＳ患者が補助付きでも５メートルを超えて歩くことができず、本質的に車いすに制限されることを意味する。８〜８．５のＥＤＳＳスコアは、ベッドに制約される患者を指す。９〜１０のＥＤＳＳスコアは、ＭＳ患者が寝たきりであり、ＭＳに起因する死に至るまで、徐々に効果的に意思疎通を図ること、または食べて飲み込むことができなくなることを意味する。
本明細書で使用されるとき、「疾患の進行」は、対象における１つ以上の症状および／または障害の悪化の測定（例えば、１つ以上の測定）を含む。ある特定の実施形態において、持続時間が比較的短い再発とは対照的に、疾患の進行は、経時的な１つ以上の症状および／または障害の着実な悪化として評価される。ある特定の実施形態において、疾患の進行は、再発型のＭＳ（例えば、ＲＲＭＳ）または進行型のＭＳ（例えば、一次もしくは二次進行性多発性硬化症（それぞれＰＰＭＳもしくはＳＰＭＳ）を有する対象、あるいは進行性−再発性ＭＳ（ＰＲＭＳ）を有する対象において評価される。
ある特定の実施形態において、疾患の進行の評価は、上肢機能の測定（例えば、９ＨＰアセスメント）を含む。代替として、または組み合わせて、疾患の進行は、下肢機能の測定を含む。代替として、または組み合わせて、疾患の進行は、歩行機能、例えば、短距離歩行機能の測定（例えば、Ｔ２５ＦＷ）を含む。代替として、または組み合わせて、疾患の進行は、歩行機能、例えば、長距離歩行機能の測定（例えば、６分間歩行テスト）を含む。一実施形態において、疾患の進行は、ＥＤＳＳ歩行機能以外の歩行機能の測定を含む。一実施形態において、疾患の進行は、上肢機能の測定（例えば、９ＨＰアセスメント）および歩行機能、例えば、短距離歩行機能の測定（例えば、Ｔ２５ＦＷ）を含む。一実施形態において、疾患の進行は、上肢機能の測定（例えば、９ＨＰアセスメント）および下肢機能の測定を含む。一実施形態において、疾患の進行は、上肢機能の測定（例えば、９ＨＰアセスメント）、下肢機能の測定、および歩行機能の測定、例えば、短距離歩行機能（例えば、Ｔ２５ＦＷ）もしくは長距離歩行機能（例えば、時限（例えば、６分間）歩行テスト（例えば、６ＭＷＴ））を含む。一実施形態において、Ｔ２５ＦＷ、６ＭＷＴ、および９ＨＰアセスメントのうちの１つ、２つ、または組み合わせを使用して、疾患進行値を取得することができる。歩行機能（例えば、短距離歩行機能（例えば、Ｔ２５ＦＷ）もしくは長距離歩行機能（例えば、時限（例えば、６分間）歩行テスト（例えば、６ＭＷＴ））、および／または上肢機能の測定（例えば、９ＨＰアセスメント）を、ＥＤＳＳと組み合わせてさらに使用して、ＭＳ、例えば、進行型のＭＳを評価することができる。
一実施形態において、進行者は、次の基準のうちの少なくとも１つ、２つ、または全てを反映した疾患進行値を有する対象である。
ａ．Ｔ２５ＦＷにおいて確認された進行：少なくとも３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月離れた第２の時点で確認された２５フィートの歩行に要する時間が、ベースライン歩行の少なくとも１５％または２０％増加した。
ｂ．時限（例えば、６分間）歩行テスト（例えば、６ＭＷＴ）において確認された進行：少なくとも３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月離れた第２の時点で確認された歩行に要する時間が、ベースライン歩行の少なくとも１５％または２０％増加した。
ｃ．９ＨＰにおいて確認された進行：少なくとも３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月離れた第２の時点で確認された９ホールペグに要する時間が、ベースラインで要した時間の少なくとも１５％または２０％増加した。９ＨＰにおける進行は、いずれかの手で起こり得るが、同じ手で確認する必要がある。および／または
ｄ．ＥＤＳＳにおいて確認された進行：
（ｉ）ＥＤＳＳ総スコアの変化が、神経学的機能の変化（例えば、神経系の１つ以上の変化）を評価することによって決定される（もしくは主に決定される）場合、ＥＤＳＳ総スコアが、ベースラインから少なくとも１ポイント増加する、および／または
（ｉｉ）ＥＤＳＳ総スコアの変化が、歩行機能の変化によって決定される（または主に決定される）場合、ＥＤＳＳ総スコアが、ベースラインから少なくとも０．５ポイント増加した、
（ｉ）または（ｉｉ）のうちのいずれか、または両方が、少なくとも３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月離れて（典型的に、少なくとも６ヶ月離れて）第２の検査で確認される場合。
前述のテストのためのベースライン値（例えば、Ｔ２５ＦＷ、６ＭＷＴ、ＥＤＳＳ、または９ＨＰ）は、最良ベースライン値または平均ベースライン値を使用して決定され得る。
治療に対する「応答性」、「応答すること」、およびこの用語の他の形態は、本明細書で使用されるとき、記載される治療法での治療に対する対象の反応を指す。例として、ＭＳ対象は、その対象における多発性硬化症の少なくとも１つの症状（例えば、疾患の悪化）が、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上低減するか、または遅延される場合、治療法に応答する。別の例において、ＭＳ対象は、その対象における多発性硬化症の少なくとも１つの症状が、任意の適切な測定によって、例えば、上肢もしくは下肢機能の測定、歩行機能の測定、または拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）の評価のうちの１つ以上によって決定されるように、約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれ以上低減する場合、治療法に応答する。別の例において、ＭＳ対象は、その対象が増加した進行までの時間を有する場合、治療法での治療に応答する。いくつかの方法を使用して、患者が、本明細書に記載されるように、本明細書に記載されるアセスメントを含む治療に応答するかどうかを決定することができる。
ある特定の実施形態において、対象における改善は、
ａ．６．０以下のベースラインスコアから１．０ポイント以上のＥＤＳＳの減少、
ｂ．Ｔ２５ＦＷのベースラインから１５％以上の改善、
ｃ．９ＨＰＴのベースラインから１５％以上の改善、または
ｄ．ＰＡＳＡＴのベースラインから１５％以上の改善、のうちの１つ以上によって定義される。
「不応答者」または「進行者」は、治療法（例えば、本明細書に記載される治療法）に応答して、対象における多発性硬化症の少なくとも１つの症状または障害が、任意の適切な測定、例えば、上肢もしくは下肢機能の測定、歩行機能の測定、認知機能の測定、または拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）のアセスメントのうちの１つ以上によって決定されるように、約５％未満低減する場合の対象、例えば、ＭＳ患者を指す。
本明細書に開示される方法、組成物、およびキットは、指定の配列、またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、またはそれ以上同一の配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列の文脈において、「実質的に同一」という用語は、第１および第２のアミノ酸配列が、共通の構造ドメインおよび／または共通の機能活性を有することができるように、第２のアミノ酸配列内の整列アミノ酸残基とｉ）同一であるか、またはｉｉ）その保存的置換である、十分な数または最小数のアミノ酸残基を含む第１のアミノ酸を指すように使用される。例えば、本明細書に記載される配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含むアミノ酸配列は、実質的に同一と呼ばれる。
ヌクレオチド配列の文脈において、「実質的に同一」という用語は、第１および第２のヌクレオチド配列が、共通の機能活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造ポリペプチドドメインもしくは共通の機能ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列内の整列ヌクレオチドと同一である、十分な数または最小数のヌクレオチドを含む、第１の核酸配列を指すように本明細書では使用される。例えば、ヌクレオチド配列は、本明細書に記載される配列に対して、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列は、実質的に同一と呼ばれる。
配列間の相同性または配列同一性（これらの用語は、本明細書において交換可能に使用される）の計算は、次のように行われる。
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性（％）を決定するために、配列は、最適な比較目的で整列される（例えば、最適アラインメントのために第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、非相同性配列は、比較目的で無視することができる）。好ましい実施形態において、比較目的で整列された参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、およびさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドを次に比較する。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められているとき、分子はその位置で同一である（本明細書で使用されるとき、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」に相当する）。
２つの配列間の同一性（％）は、配列によって共有される同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適アラインメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮する。
配列の比較および２つの配列間の同一性（％）の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間の同一性（％）は、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重量および１、２、３、４、５、または６の長さ重量のいずれかを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれている、ニードルマンおよびブンシュ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間の同一性（％）は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクスおよび４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重量および１、２、３、４、５、または６の長さ重量を使用して決定される。特に好ましいパラメータのセット（および特記しない限り使用されるべきであるもの）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ拡張ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を有する、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２採点マトリクスである。
２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性（％）は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを使用し、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用して決定することができる。
本明細書に記載される核酸およびタンパク質配列を「クエリー配列」として使用して、公的データベースに対する検索を実行し、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて行い、本発明のＢＭＰ−１０／ＢＭＰ−１０受容体核酸（配列番号１）分子に相同性のヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行い、本発明のＢＭＰ−１０／ＢＭＰ−１０受容体（配列番号１）タンパク質分子に相同性のアミノ配列を得ることができる。比較目的でギャップ付きアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されるように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用するとき、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照されたい。
ポリペプチドの断片、誘導体、類似体、または変異体、およびそれらの任意の組み合わせも含まれる。「断片」、「変異体」、「誘導体」、および「類似体」という用語は、対応する天然ポリペプチドの特性の少なくとも一部を保持する任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドの断片は、タンパク質分解断片ならびに欠失断片を含む。ポリペプチドの変異体は、上記の断片、およびアミノ酸の置換、欠失、または挿入に起因する改変アミノ酸配列を有するポリペプチドも含む。変異体は、天然に存在し得るか、または非天然に存在し得る。非天然に存在する変異体は、当該技術分野において周知の突然変異誘発技法を使用して産生され得る。変異体ポリペプチドは、保存または非保存アミノ酸の置換、欠失、または付加を含むことができる。
「機能的変異体」という用語は、天然に存在する配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、または実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされ、天然に存在する配列の１つ以上の活性を有することができる、ポリペプチドを指す。
ポリペプチドの誘導体は、天然ポリペプチドでは見出されない追加の特徴を呈するように改変されたポリペプチドである。例としては、融合タンパク質が挙げられる。
「保存アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。
本発明の種々の態様は、下記でさらに詳細に説明される。追加の定義は、本明細書全体で記載されている。
修復剤
本明細書に記載される方法、組成物、およびキットは、修復剤（例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト）および免疫調節剤の組み合わせを含む。一実施形態において、修復剤は、ＬＲＲおよびＩｇドメインを含むＮｏｇｏ受容体相互作用タンパク質のアンタゴニストである（「ＬＩＮＧＯ」、例えば、ＬＩＮＧＯ−１）。例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１の発現または活性を阻害または低減することができる。一実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＮｇＲ１、ｐ７５、およびＬＩＮＧＯ−１、ならびに／またはＮｇＲ１、ＴＡＪ（ＴＲＯＹ）、およびＬＩＮＧＯ−１の複合体（例えば、機能的シグナル伝達複合体）の形成および／または活性を阻害または低減する。別の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＮｇＲ１へのＬＩＮＧＯ−１結合を阻害または低減する。
ＬＩＮＧＯ−１およびＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト
以前はＳｐ３５と呼ばれていたＬＩＮＧＯ−１は、ニューロンおよびオリゴデンドロサイトの成体ＣＮＳにおいて選択的に発現される細胞表面糖タンパク質である。ＬＩＮＧＯ−１は、３つの他のパラログ、ＬＩＮＧＯ−２（ＧＩ：１２３０９６３０、タンパク質同一性６１％）、ＬＩＮＧＯ−３（ＧＩ：２３３４２６１５、同一性５６％）、およびＬＩＮＧＯ−４（ＧＩ：２１２１１７５２、同一性４４％）を含むタンパク質ファミリーのメンバーである。ＬＩＮＧＯ−１は、９９．５％の同一性を共有するヒトおよびマウスの相同分子種で進化的に高度に保存される。ノーザンブロット分析によって、ＬＩＮＧＯ−１は、ヒト脳において高度に発現されることが見出され、非ニューロン組織内で検出可能ではなかった（Ｂａｒｒｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３４：５１９−３８、Ｃａｒｉｍ−Ｔｏｄｄ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｅｕｒ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１８：３１６７−８２、Ｌｌｏｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｄｅｖ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，６８：５２１−４１、Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，７：２２１−８、Ｏｋａｆｕｊｉ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ Ｐａｔｔｅｒｎｓ，６：５７−６２、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，４０４：６１−６、Ｓｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎｅｕｒｏｎ，４５：３５３−９）。ＬＩＮＧＯ−１は、２００６年７月７日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６２７１号、２００４年３月１７日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８３２３号、２００５年６月２４日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２８８１号、および２００８年１月９日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０００３１６号に記載されており、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＬＩＮＧＯ−１は、オリゴデンドロサイト前駆細胞（ＯＰＣ）およびニューロンの両方において選択的に発現される。ＬＩＮＧＯ−１は、オリゴデンドロサイト分化、髄鞘形成、および髄鞘再生の負の調節因子として機能し、オリゴデンドロサイトによる軸索の髄鞘形成を防止する（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２７：２２０−５、Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，８：７４５−５１、Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｉｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ４０（１０）：１９７１−８、Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，６５：３０４−１５）。ＬＩＮＧＯ−１の軸索およびニューロン発現は、損傷後に増加する（Ｊｉ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３３：３１１−２０）。ＬＩＮＧＯ−１の発現は、オリゴデンドロサイトによる軸索の髄鞘形成を防止する。いくつかの前臨床研究は、毒性損傷（キュプリゾン）（Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，６５：３０４−１５）、化学損傷（リゾホスファチジルコリン［ＬＰＣ］）、および炎症性（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質−実験的自己免疫性脳脊髄炎［ＭＯＧ−ＥＡＥ］）（Ｍｉ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ Ｍｅｄ，１３：１２２８−３３）脱髄、および毒性（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン［ＭＰＴＰ］）ニューロン損傷（Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，１０４：１４４３０−５）、外傷性／高血圧視神経損傷（Ｆｕ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，４９：９７５−８５）、および脊髄損傷（Ｊｉ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３３：３１１−２０、Ｊｉ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３９：２５８−６７、Ｌｖ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔ，１７：２７０−８）の動物モデルにおいて、ＣＮＳ髄鞘再生および神経軸索保護を強化するＬＩＮＧＯ−１拮抗作用の可能性を実証した。髄鞘再生および神経軸索保護は、軸索およびオリゴデンドロサイト内のＬＩＮＧＯ−１の阻害によって引き起こされたＣＮＳにおいて、ＮｇＲ１受容体複合体上のミエリン片および／または硫酸化プロテオグリカンによるシグナル伝達の遮断を介して提供され得る。これは、次に、ＭＳ患者の脳内に通常存在するオリゴデンドロサイト前駆細胞（ＯＰＣ）の分化を介して、髄鞘再生を促進し得る。したがって、ＬＩＮＧＯ−１の拮抗作用は、例えば、オリゴデンドロサイトによる軸索の髄鞘形成または髄鞘再生を強化することができ、ＣＮＳ、および例えば、多発性硬化症（ＭＳ）および急性視神経炎等のＣＮＳ脱髄疾患において、神経軸索保護を強化することができ、改善されたＣＮＳ修復につながる。
ＬＩＮＧＯ−１は、ＬＲＲＮ６、ＬＲＲＮ６Ａ、ＦＬＪ１４５９４、ＬＥＲＮ１、ＭＧＣ１７４２２、およびＵＮＱ２０１という名称でも当該技術分野において周知である。ヒト全長野生型ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドは、１４個のロイシンに富む反復（Ｎ末端およびＣ末端キャップを含む）、Ｉｇドメイン、膜貫通領域、および細胞質ドメインからなるＬＲＲドメインを含む。細胞質ドメインは、標準的なチロシンリン酸化部位を含む。加えて、天然に存在するＬＩＮＧＯ−１タンパク質は、シグナル配列、ＬＲＲ−Ｃ末端ドメイン（ＬＲＲＣＴ）とＩｇドメインとの間の短塩基性領域、およびＩｇドメインと細胞質ドメインとの間の膜貫通領域を含む。ヒトＬＩＮＧＯ−１遺伝子（配列番号５２）は、６つの追加のアミノ酸、すなわち、ＭＱＶＳＫＲ（配列番号８７）が、ＬＩＮＧＯ−１シグナル配列のＮ末端に存在してもしなくてもよいように、代替翻訳開始コドンを含む。表２は、本明細書において配列番号５１として提示されるＬＩＮＧＯ−１アミノ酸配列に基づいて、アミノ酸残基数に従って、ＬＩＮＧＯ−１ドメインおよび他の領域を列挙する。ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ国際公開第２００４／０８５６４８号においてより詳細に特徴付けられる。
ＬＩＮＧＯ−１の組織分布および発生的発現は、ヒトおよびラットにおいて研究されてきた。ＬＩＮＧＯ−１の生態は、実験動物（ラット）モデルにおいて研究されてきた。ノーザンブロットおよび免疫組織化学的染色によって決定されるように、ラットＬＩＮＧＯ−１の発現は、ニューロンおよびオリゴデンドロサイトに局在化される。ラットＬＩＮＧＯ−１のｍＲＮＡ発現レベルは、発生的に調節され、出生直後、すなわち、生後約１日にピークとなる。ラット脊髄切断損傷モデルにおいて、ＬＩＮＧＯ−１は、ＲＴ−ＰＣＲによって決定されるように、損傷部位で上方調節される。Ｍｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７：２２１−２２８（２００４）を参照されたい。
ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドの種々の構造ドメインおよび機能ドメインを含むアミノ酸の文脈において、「約」という用語は、具体的に列挙される値と、いくつかの（例えば、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、もしくは１個の）アミノ酸だけ大きいか、または小さい値と、を含む。表２に列挙されるこれらのドメインの位置は、コンピューターグラフィックによって予測されているため、当業者であれば、ドメインを構成するアミノ酸残基が、ドメインを定義するために使用される基準に応じて、わずかに（例えば、約１〜１５残基だけ）変化し得ることを理解するであろう。
完全長の野生型ＬＩＮＧＯ−１は、ＮｇＲ１に結合する。ＰＣＴ国際公開第２００４／０８５６４８号を参照されたい。ＬＩＮＧＯ−１は、オリゴデンドロサイト内で発現され、ＬＩＮＧＯ−１タンパク質は、軸索のオリゴデンドロサイト媒介性髄鞘形成の調節に関与している。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００６／０００９３８８ Ａ１号を参照されたい。
完全長ＬＩＮＧＯ−１分子のヌクレオチド配列は、次のとおりである。
ＡＴＧＣＴＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＴＧＡＧＧＡＧＣＡＴＧＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧ ＧＣＡＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＡＧＴＧＣＴＧＴＣＡＧＧＣＴＣＧＧＣＣＡ ＣＧＧＧＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＣＴＧＣＧＡＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＣＡＧＧＡＣＣＧＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧ ＴＧＣＣＡＣＣＧＣＡＡＧＣＧＣＴＴＴＧＴＧＧＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＣＡＣＣＧＡＧＡＣ ＧＣＧＣＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＡＧＧＣＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧ ＡＧＴＴＣＧＣＣＡＧＣＴＴＣＣＣＧＣＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＣＡＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣ ＧＴＧＡＧＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＡＡＣＡＡＣＣＴＣＴＴＣＡＡＣＣＴＣＣＧＧＡＣ ＧＣＴＧＧＧＴＣＴＣＣＧＣＡＧＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＣＡＴＣＣＣＧＣＴＡＧＧＣＧＴＣＴＴＣＡ ＣＴＧＧＣＣＴＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＧＣＧＡＧＡＡＣＡＡＧＡＴＴＧＴＴ ＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＣＴＡＣＡＴＧＴＴＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＣＣＴＣＡＡＧＴＣＡＣＴＧＧＡ ＧＧＴＴＧＧＣＧＡＣＡＡＴＧＡＣＣＴＣＧＴＣＴＡＣＡＴＣＴＣＴＣＡＣＣＧＣＧＣＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＣ ＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＣＧＣＴＧＧＡＧＡＡＡＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴＣ ＣＣＣＡＣＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＴＣＣＣＡＣＣＴＧＣＡＣＧＧＣＣＴＣＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＧＧＣＴＣＣＧ ＧＣＡＣＣＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＴＣＣＧＧＧＡＣＴＡＣＴＣＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＡＣＣ ＧＡＣＴＣＡＡＧＧＴＣＴＴＧＧＡＧＡＴＣＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＡＣＣＡＴＧＡＣＡ ＣＣＣＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＡＣＧＧＣＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＡＣＡＣＴＧ ＣＡＡＴＣＴＧＡＣＣＧＣＴＧＴＧＣＣＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＧＴＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＧＴＣＴＡＴＣＴＣＣ ＧＣＴＴＣＣＴＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＴＴＧＡＧＧＧＣＴＣＣＡＴＧ ＴＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＧＣＧＧＧＣＡＧＣＴ ＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＴＴＣＣＧＣＧＧＣＣＴＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＣＧＣＧＴＧＣ ＴＣＡＡＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＡＣ ＴＣＧＧＴＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＣＡＣＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＣＡＡＣＣＣＧＣＴＧＧＣＣＴＧ ＣＧＡＣＴＧＴＣＧＧＣＴＣＣＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴＣＣＧＧＣＧＣＣＧＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡ ＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＣＡＣＧＴＧＣＧＣＣＡＣＧＣＣＣＧＡＧＴＴＴＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＧＡＧ ＴＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＴＧＴＧＣＴＡＣＴＧＣＣＣＡＡＣＴＡＣＴＴＣＡＣＣＴＧＣＣＧＣＣＧ ＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＣＧＧＧＡＣＣＧＣＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＡＧＧＴＧＴＴＴＧＴＧＧＡＣＧＡＧＧＧＣＣ ＡＣＡＣＧＧＴＧＣＡＧＴＴＴＧＴＧＴＧＣＣＧＧＧＣＣＧＡＴＧＧＣＧＡＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＡＴＣ ＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＧＴＣＴＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＧ ＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＣＧＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＧＣＴＡＣＧＣＣＣＡＧＧＴＡＣ ＡＧＧＡＣＡＡＣＧＧＣＡＣＧＴＡＣＣＴＧＴＧＣＡＴＣＧＣＧＧＣＣＡＡＣＧＣＧＧＧＣＧＧＣＡＡＣＧＡＣ ＴＣＣＡＴＧＣＣＣＧＣＣＣＡＣＣＴＧＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＧＣＴＡＣＴＣＧＣＣＣＧＡＣＴＧＧＣＣＣＣＡ ＴＣＡＧＣＣＣＡＡＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＧＣＴＴＴＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＡＧＣＣＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＧ ＡＧＧＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＣＧＣＧＣＣＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＴＣＣＣＣＴＴＣＧＡＣＡＴＣＡＡＧＡＣＣ ＣＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＴＣＴＴＴＣＣＴＧＧＧＣＧＴＣＧＴＣＣＴ ＣＴＴＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＴＴＴＣＴＣＴＧＧＡＧＣＣＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＡ ＡＧＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＴＡＴＧＴＧＣＣＣＣＧＡＡＡＧＴＣＧＧＡＣＧＣＡＧＧＣＡＴＣ ＡＧＣＴＣＣＧＣＣＧＡＣＧＣＧＣＣＣＣＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＡＴＧＡＡＧＡＴＧＡＴＡＴＧＡ。（配列番号５２）
完全長ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドのポリペプチド配列は、次のとおりである。
ＭＬＡＧＧＶＲＳＭＰＳＰＬＬＡＣＷＱＰＩＬＬＬＶＬＧＳＶＬＳＧＳＡＴＧＣＰＰＲＣＥＣＳＡＱＤＲＡＶＬ ＣＨＲＫＲＦＶＡＶＰＥＧＩＰＴＥＴＲＬＬＤＬＧＫＮＲＩＫＴＬＮＱＤＥＦＡＳＦＰＨＬＥＥＬＥＬＮＥＮＩ ＶＳＡＶＥＰＧＡＦＮＮＬＦＮＬＲＴＬＧＬＲＳＮＲＬＫＬＩＰＬＧＶＦＴＧＬＳＮＬＴＫＬＤＩＳＥＮＫＩＶ ＩＬＬＤＹＭＦＱＤＬＹＮＬＫＳＬＥＶＧＤＮＤＬＶＹＩＳＨＲＡＦＳＧＬＮＳＬＥＱＬＴＬＥＫＣＮＬＴＳＩ ＰＴＥＡＬＳＨＬＨＧＬＩＶＬＲＬＲＨＬＮＩＮＡＩＲＤＹＳＦＫＲＬＹＲＬＫＶＬＥＩＳＨＷＰＹＬＤＴＭＴ ＰＮＣＬＹＧＬＮＬＴＳＬＳＩＴＨＣＮＬＴＡＶＰＹＬＡＶＲＨＬＶＹＬＲＦＬＮＬＳＹＮＰＩＳＴＩＥＧＳＭ ＬＨＥＬＬＲＬＱＥＩＱＬＶＧＧＱＬＡＶＶＥＰＹＡＦＲＧＬＮＹＬＲＶＬＮＶＳＧＮＱＬＴＴＬＥＥＳＶＦＨ ＳＶＧＮＬＥＴＬＩＬＤＳＮＰＬＡＣＤＣＲＬＬＷＶＦＲＲＲＷＲＬＮＦＮＲＱＱＰＴＣＡＴＰＥＦＶＱＧＫＥ ＦＫＤＦＰＤＶＬＬＰＮＹＦＴＣＲＲＡＲＩＲＤＲＫＡＱＱＶＦＶＤＥＧＨＴＶＱＦＶＣＲＡＤＧＤＰＰＰＡＩ ＬＷＬＳＰＲＫＨＬＶＳＡＫＳＮＧＲＬＴＶＦＰＤＧＴＬＥＶＲＹＡＱＶＱＤＮＧＴＹＬＣＩＡＡＮＡＧＧＮＤ ＳＭＰＡＨＬＨＶＲＳＹＳＰＤＷＰＨＱＰＮＫＴＦＡＦＩＳＮＱＰＧＥＧＥＡＮＳＴＲＡＴＶＰＦＰＦＤＩＫＴ ＬＩＩＡＴＴＭＧＦＩＳＦＬＧＶＶＬＦＣＬＶＬＬＦＬＷＳＲＧＫＧＮＴＫＨＮＩＥＩＥＹＶＰＲＫＳＤＡＧＩ ＳＳＡＤＡＰＲＫＦＮＭＫＭＩ。（配列番号５１）
抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子
ある特定の実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ、例えば、ヒトＬＩＮＧＯに結合する。別の実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１に結合する。一実施形態において、抗体分子は、単離、精製、または組換えられる。「単離された」ポリペプチドまたはそのフラグメント、変異体、もしくは誘導体は、その天然環境にはないポリペプチドを意図する。特定レベルの精製は不要である。例えば、単離されたポリペプチドは、その天然または自然環境から除去することができる。任意の好適な技法によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製された天然または組換えポリペプチドの場合と同様に、宿主細胞中で発現された組換え的に産生されたポリペプチドおよびタンパク質は、本発明の目的のために単離されていると考えられる。
本明細書で使用されるとき、「抗体分子」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を指す。抗体分子という用語は、例えば、完全長抗体、成熟抗体、断片、例えば、抗体の抗原結合断片、本明細書に開示される抗体の誘導体、類似体、または変異体、およびそれらの任意の組み合わせを含む。
「断片」、「変異体」、「誘導体」、および「類似体」という用語は、ＬＩＮＧＯ−１抗体分子または抗体ポリペプチドについて言及するとき、対応する天然抗体またはポリペプチドの抗原結合特性の少なくとも一部を保持する任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドの断片は、本明細書の他の箇所で論じられる特定の抗体断片に加えて、タンパク質分解断片、ならびに欠失断片を含む。ＬＩＮＧＯ−１抗体および抗体ポリペプチドの変異体は、上記の断片と、アミノ酸置換、欠失、または挿入に起因して改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドも含む。変異体は、天然に存在し得るか、または非天然に存在し得る。非天然に存在する変異体は、当該技術分野において周知の突然変異誘発技法を使用して産生され得る。変異体ポリペプチドは、保存的または非保存的アミノ酸の置換、欠失、または付加を含むことができる。ＬＩＮＧＯ−１抗体分子および抗体ポリペプチドの誘導体は、天然ポリペプチドでは見出されない追加の特徴を呈するように改変されたポリペプチドである。例としては、融合タンパク質が挙げられる。
本明細書で使用されるとき、ＬＩＮＧＯ−１抗体分子または抗体ポリペプチドの「誘導体」は、官能側基の反応によって化学的に誘導体化された１つ以上の残基を有する対象ポリペプチドを指す。２０個の標準アミノ酸のうちの１つ以上の天然に存在するアミノ酸誘導体を含むペプチドも、「誘導体」として含まれる。例えば、４−ヒドロキシプロリンは、プロリンに置き換えることができ、５−ヒドロキシリジンは、リジンに置き換えることができ、３−メチルヒスチジンは、ヒスチジンに置き換えることができ、ホモセリンは、セリンに置き換えることができ、オルニチンは、リジンに置き換えることができる。
例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列と（本明細書ではＶＨとして省略される）、軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＬとして省略される）と、を含むことができる。別の例において、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列と、２つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列とを含み、それによって２つの抗原結合部位、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ′、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二重特異性）、ならびに全抗体もしくは組換えＤＮＡ技術を用いてデノボ合成されたものの修飾によって産生され得る、キメラ（例えば、ヒト化）抗体を含む。これらの機能的抗体断片は、それらそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体断片は、限定されないが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む抗体の任意のクラス、ならびに抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）に由来し得る。抗体分子は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、ヒト、ヒト化、ＣＤＲ移植、またはインビトロ生成された抗体でもあり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有することができる。抗体は、例えば、κまたはλから選択される軽鎖を有することもできる。
抗原結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ′）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片、（ｖｉ）ラクダまたはラクダ化可変ドメイン、（ｖｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３）を参照、（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に周知の従来技法を使用して得られ、断片は、無傷の抗体の場合と同じ方法で実用性についてスクリーニングされる。
抗体分子は、単一ドメイン抗体でもあり得る。単一ドメイン抗体は、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である、抗体を含むことができる。例としては、重鎖抗体、軽鎖を天然に欠いている抗体、従来の４本鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、および抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場が挙げられるが、これらに限定されない。単一ドメイン抗体は、当該技術分野における任意のものであっても、または任意の将来的な単一ドメイン抗体であってもよい。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含むが、これらに限定されない任意の種に由来し得る。本発明の一態様において、単一ドメイン抗体は、魚に見出される免疫グロブリンの可変領域に由来することができ、例えば、サメの血清中に見出される新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる、免疫グロブリンアイソタイプに由来するもの等であり得る。ＮＡＲの可変領域に由来する単一ドメイン抗体（「ＩｇＮＡＲ」）を産生する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号およびＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１４：２９０１−２９０９に記載されている。本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠いている重鎖抗体として知られる、天然に存在する単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は、例えば、国際公開第９４０４６７８号に開示されている。明確さの理由で、軽鎖を天然に欠いている重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、それを４つの鎖免疫グロブリンの従来のＶＨから区別するために、本明細書においてＶＨＨまたはナノボディとして知られる。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科の種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、およびグアナコにおいて産生される抗体に由来し得る。ラクダ科以外の他の種は、軽鎖を天然に欠いている重鎖抗体を産生することもあり、そのようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
ＶＨよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称される、より保存された領域と共に散在する、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と称される、超可変性の領域に細分することができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、多くの方法によって正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、およびＯｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ′ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義を参照。一般的に、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。一般的に、特に指示がない限り、次の定義、重鎖可変ドメインのＣＤＲ１のＡｂＭ定義、および他のＣＤＲにはＫａｂａｔ定義が使用される。さらに、ＫａｂａｔまたはＡｂＭ ＣＤＲに関して記載される本発明の実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａの超可変ループを使用して実施することもできる。各ＶＨおよびＶＬは、典型的に、アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順序、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。
本明細書で使用されるとき、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列の全部または一部を含んでよい。例えば、配列は、１つ、２つ、もしくはそれ以上のＮ末端またはＣ末端アミノ酸を含んでも含まなくてもよく、あるいはタンパク質構造の形成と適合する他の改変を含んでもよい。
「抗原結合部位」という用語は、ＬＩＮＧＯ−１に結合する界面、またはそのエピトープを形成する決定基を含む抗体分子の部分を指す。タンパク質（またはタンパク質模倣体）に関して、抗原結合部位は、典型的には、ＬＩＮＧＯ−１に結合する界面を形成する（少なくとも４つのアミノ酸またはアミノ酸模倣物の）１つ以上のループを含む。典型的に、抗体分子の抗原結合部位は、少なくとも１つもしくは２つのＣＤＲ、またはより典型的には、少なくとも３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、本明細書で使用されるとき、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え方法）によって作製することができる。
「効果的にヒト」のタンパク質は、中和抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を誘発しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、例えば、抗体分子が、例えば、慢性または再発性疾患状態の治療において反復して投与される場合、多くの状況において問題となり得る。ＨＡＭＡ応答は、血清からの抗体クリアランスの増加に起因して（例えば、Ｓａｌｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３２：１８０−１９０（１９９０））、および潜在的アレルギー反応にも起因して（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，５：５１１７−５１２３（１９８６））、反復抗体投与を潜在的に無効にする可能性がある。
ある特定の実施形態において、抗体分子は、モノクローナルもしくは単一特異性抗体、またはＬＩＮＧＯ−１、例えば、哺乳類（例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１（もしくはその機能的変異体））に結合するその抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ断片、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、二価もしくは二重特異性抗体またはその断片、その単一ドメイン変異体）であり得る。一実施形態において、抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１、例えば、ヒトＬＩＮＧＯ−１に対するモノクローナル抗体である。典型的に、抗体分子は、ヒトＬＩＮＧＯ−１（またはその機能的断片、例えば、本明細書に記載される抗体断片）に対するヒト、ヒト化、ＣＤＲ移植、キメラ、ラクダ、またはインビトロ生成された抗体である。典型的に、抗体は、ＬＩＮＧＯ−１の１つ以上の活性（例えば、本明細書に記載されるＬＩＮＧＯ−１の１つ以上の生物活性）を、阻害、低減、または中和する。
ある特定の実施形態において、抗体分子は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０５８，４０６号に記載される、参照モノクローナル抗体Ｌｉ６２もしくはＬｉ８１と同じ、または実質的に同じＬＩＮＧＯ−１エピトープに特異的に結合する。例示的な抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、米国特許第８，０５８，４０６号に記載されている。一実施形態において、抗体分子は、Ｌｉ６２、Ｌｉ８１の少なくとも抗原結合ドメインを含む。本明細書で使用されるとき、「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原上のエピトープ（例えば、ＬＩＮＧＯ−１のエピトープ）に特異的に結合する部位を含む。抗体の抗原結合ドメインは、典型的に、免疫グロブリン重鎖可変領域の少なくとも一部分および免疫グロブリン軽鎖可変領域の少なくとも一部分を含む。これらの可変領域によって形成された結合部位は、抗体の特異性を決定する。
他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、Ｌｉ６２またはＬｉ８１がＬＩＮＧＯ−１に結合するのを競合的に阻害する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、特定のＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド断片またはドメインに特異的または優先的に結合する。そのようなＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド断片としては、配列番号５１のアミノ酸３４〜５３２、３４〜４１７、３４〜４２５、３４〜４９３、６６〜５３２、６６〜４１７、６６〜４２６、６６〜４９３、６６〜５３２、４１７〜５３２、４１７〜４２５（ＬＩＮＧＯ−１塩基性領域）、４１７〜４９３、４１７〜５３２、４１９〜４９３（ＬＩＮＧＯ−１１ｇ領域）、もしくは４２５〜５３２を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、あるいは配列番号５１のアミノ酸３４〜５３２、３４〜４１７、３４〜４２５、３４〜４９３、６６〜５３２、６６〜４１７、６６〜４２６、６６〜４９３、６６〜５３２、４１７〜５３２、４１７〜４２５（ＬＩＮＧＯ−１塩基性領域）、４１７〜４９３、４１７〜５３２、４１９〜４９３（ＬＩＮＧＯ−１１ｇ領域）、もしくは４２５〜５３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一のＬＩＮＧＯ−１変異体ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１の１つ以上のロイシンに富む反復（ＬＲＲ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ペプチド断片に特異的または優先的に結合する。そのような断片としては、例えば、配列番号５１のアミノ酸６６〜８９、６６〜１１３、６６〜１３７、９０〜１１３、１１４〜１３７、１３８〜１６１、１６２〜１８５、１８６〜２０９、２１０〜２３３、２３４〜２５７、２５８〜２８１、２８２〜３０５、３０６〜３２９、または３３０〜３５３を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片が挙げられる。配列番号５１のアミノ酸６６〜８９、６６〜１１３、９０〜１１３、１１４〜１３７、１３８〜１６１、１６２〜１８５、１８６〜２０９、２１０〜２３３、２３４〜２５７、２５８〜２８１、２８２〜３０５、３０６〜３２９、または３３０〜３５３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一の変異体ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドの対応する断片も企図される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１のＬＲＲに隣接する１つ以上のシステインに富む領域を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。そのような断片としては、例えば、配列番号５１のアミノ酸３４〜６４（Ｎ末端ＬＲＲ隣接領域（ＬＲＲＮＴ））を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなる断片、または配列番号５１のアミノ酸３６３〜４１６を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなる断片（Ｃ末端ＬＲＲ隣接領域（ＬＲＲＣＴ））、アミノ酸が挙げられる。配列番号５１のアミノ酸３４〜６４および３６３〜４１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一の変異体ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドの対応する断片も企図される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸４１〜５２５、配列番号５１の４０〜５２６、配列番号５１の３９〜５２７、配列番号５１の３８〜５２８、配列番号５１の３７〜５２９、配列番号５１の３６〜５３０、配列番号５１の３５〜５３１、配列番号５１の３４〜５３１、配列番号５１の４６〜５２０、配列番号５１の４５〜５２１、配列番号５１の４４〜５２２、配列番号５１の４３〜５２３、配列番号５１の４２〜５２４を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸１〜３３、配列番号５１の１〜３５、配列番号５１の３４〜６４、配列番号５１の３６〜６４、配列番号５１の６６〜８９、配列番号５１の９０〜１１３、配列番号５１の１１４〜１３７、配列番号５１の１３８〜１６１、配列番号５１の１６２〜１８５、配列番号５１の１８６〜２０９、配列番号５１の２１０〜２３３、配列番号５１の２３４〜２５７、配列番号５１の２５８〜２８１、配列番号５１の２８２〜３０５、配列番号５１の３０６〜３２９、配列番号５１の３３０〜３５３、配列番号５１の３６３〜４１６、配列番号５１の４１７〜４２４、配列番号５１の４１９〜４９３、配列番号５１の４９４〜５５１を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸１〜３３、配列番号５１の１〜３５、配列番号５１の１〜６４、配列番号５１の１〜８９、配列番号５１の１〜１１３、配列番号５１の１〜１３７、配列番号５１の１〜１６１、配列番号５１の１〜１８５、配列番号５１の１〜２０９、配列番号５１の１〜２３３、配列番号５１の１〜２５７、配列番号５１の１〜２８１、配列番号５１の１〜３０５、配列番号５１の１〜３２９、配列番号５１の１〜３５３、配列番号５１の１〜４１６、配列番号５１の１〜４２４、配列番号５１の１〜４９３、配列番号５１の１〜５５１、配列番号５１の１〜５３１、および配列番号５１の１〜５３２を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸３４〜６４、配列番号５１の３４〜８９、配列番号５１の３４〜１１３、配列番号５１の３４〜１３７、配列番号５１の３４〜１６１、配列番号５１の３４〜１８５、配列番号５１の３４〜２０９、配列番号５１の３４〜２３３、配列番号５１の３４〜２５７、配列番号５１の３４〜２８１、配列番号５１の３４〜３０５、配列番号５１の３４〜３２９、配列番号５１の３４〜３５３、配列番号５１の３４〜４１６、配列番号３４〜４２４、配列番号５１の３４〜４９３、および配列番号５１の３４〜５５１を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸３４〜５３０、配列番号５１の３４〜５３１、配列番号５１の３４〜５３２、配列番号５１の３４〜５３３、配列番号５１の３４〜５３４、配列番号５１の３４〜５３５、配列番号５１の３４〜５３６、配列番号５１の３４〜５３７、配列番号５１の３４〜５３８、配列番号５１の３４〜５３９、配列番号５１の３０〜５３２、配列番号５１の３１〜５３２、配列番号５１の３２〜５３２、配列番号５１の３３〜５３２、配列番号５１の３４〜５３２、配列番号５１の３５〜５３２、配列番号５１の３６〜５３２、配列番号５１の３０〜５３１、配列番号５１の３１〜５３１、配列番号５１の３２〜５３１、配列番号５１の３３〜５３１、配列番号５１の３４〜５３１、配列番号５１の３５〜５３１、および配列番号５１の３６〜５３１を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸３６〜６４、配列番号５１の３６〜８９、配列番号５１の３６〜１１３、配列番号５１の３６〜１３７、配列番号５１の３６〜１６１、配列番号５１の３６〜１８５、配列番号５１の３６〜２０９、配列番号５１の３６〜２３３、配列番号５１の３６〜２５７、配列番号５１の３６〜２８１、配列番号５１の３６〜３０５、配列番号５１の３６〜３２９、配列番号５１の３６〜３５３、配列番号５１の３６〜４１６、配列番号５１の３６〜４２４、配列番号５１の３６〜４９３、および配列番号５１の３６〜５５１を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸３６〜５３０、配列番号５１の３６〜５３１、配列番号５１の３６〜５３２、配列番号５１の３６〜５３３、配列番号５１の３６〜５３４、配列番号５１の３６〜５３５、配列番号５１の３６〜５３６、配列番号５１の３６〜５３７、配列番号５１の３６〜５３８、および配列番号５１の３６〜５３９を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５１のアミノ酸４１７〜４９３、配列番号５１の４１７〜４９４、配列番号５１の４１７〜４９５、配列番号５１の４１７〜４９６、配列番号５１の４１７〜４９７、配列番号５１の４１７〜４９８、配列番号５１の４１７〜４９９、配列番号５１の４１７〜５００、配列番号５１の４１７〜４９２、配列番号５１の４１７〜４９１、配列番号５１の４１２〜４９３、配列番号５１の４１３〜４９３、配列番号５１の４１４〜４９３、配列番号５１の４１５〜４９３、配列番号５１の４１６〜４９３、配列番号５１の４１１〜４９３、配列番号５１の４１０〜４９３、配列番号５１の４１０〜４９４、配列番号５１の４１１〜４９４、配列番号５１の４１２〜４９４、配列番号５１の４１３〜４９４、配列番号５１の４１４〜４９４、配列番号５１の４１５〜４９４、配列番号５１の４１６〜４９４、配列番号５１の４１７〜４９４、および配列番号５１の４１８〜４９４を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１のＩｇドメインのペプチドを含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはそのようなポリペプチドの断片、変異体、もしくは誘導体に特異的または優先的に結合する。具体的に、次のポリペプチド配列、ＩＴＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号８８）、ＡＣＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号８９）、ＶＣＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号９０）、およびＳＰＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号９１）を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなり、式中、Ｘ１が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン、またはアスパラギンであり、Ｘ２が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン、またはアスパラギンであり、Ｘ３が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン、またはアスパラギンである、ポリペプチド。例えば、ある特定の抗体分子が結合できるＬＩＮＧＯ−１ペプチド断片としては、次のポリペプチド配列：ＳＰＲＫＨ（配列番号９２）、ＳＰＲＫＫ（配列番号９３）、ＳＰＲＫＲ（配列番号９４）、ＳＰＫＫＨ（配列番号９５）、ＳＰＨＫＨ（配列番号９６）、ＳＰＲＲＨ（配列番号９７）、ＳＰＲＨＨ（配列番号９８）、ＳＰＲＲＲ（配列番号９９）、ＳＰＨＨＨ（配列番号１００）、ＳＰＫＫＫ（配列番号１０１）、ＬＳＰＲＫＨ（配列番号１０２）、ＬＳＰＲＫＫ（配列番号１０３）、ＬＳＰＲＫＲ（配列番号１０４）、ＬＳＰＫＫＨ（配列番号１０５）、ＬＳＰＨＫＨ（配列番号１０６）、ＬＳＰＲＲＨ（配列番号１０７）、ＬＳＰＲＨＨ（配列番号１０８）、ＬＳＰＲＲＲ（配列番号１０９）、ＬＳＰＨＨＨ（配列番号１１０）、ＬＳＰＫＫＫ（配列番号１１１）、ＷＬＳＰＲＫＨ（配列番号１１２）、ＷＬＳＰＲＫＫ（配列番号１１３）、ＷＬＳＰＲＫＲ（配列番号１１４）、ＷＬＳＰＫＫＨ（配列番号１１５）、ＷＬＳＰＨＫＨ（配列番号１１６）、ＷＬＳＰＲＲＨ（配列番号１１７）、ＷＬＳＰＲＨＨ（配列番号１１８）、ＷＬＳＰＲＲＲ（配列番号１１９）、ＷＬＳＰＨＨＨ（配列番号１２０）、ＷＬＳＰＫＫＫ（配列番号１２１）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる断片が挙げられる。これらのＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドは、ＬＩＮＧＯ−１のＩｇドメイン内に塩基性「ＲＫＨループ」（アルギニン−リジン−ヒスチジンアミノ酸４５６〜４５８）を含む。塩基性トリペプチドを含む追加のＬＩＮＧＯ−１ペプチドは、ＩＴＰＫＲＲ（配列番号１２２）、ＡＣＨＨＫ（配列番号１２３）、およびＶＣＨＨＫ（配列番号１２４）である。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１のＩｇドメインのペプチドを含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはそのようなポリペプチドの断片、変異体、もしくは誘導体に特異的または優先的に結合する。具体的に、次のポリペプチド配列、Ｘ４Ｘ５ＲＫＨ（配列番号１２５）、Ｘ４Ｘ５ＲＲＲ（配列番号１２６）、Ｘ４Ｘ５ＫＫＫ（配列番号１２７）、Ｘ４Ｘ５ＨＨＨ（配列番号１２８）、Ｘ４Ｘ５ＲＫＫ（配列番号１２９）、Ｘ４Ｘ５ＲＫＲ（配列番号１３０）、Ｘ４Ｘ５ＫＫＨ（配列番号１３１）、Ｘ４Ｘ５ＨＫＨ（配列番号１３２）、Ｘ４Ｘ５ＲＲＨ（配列番号１３３）、およびＸ４Ｘ５ＲＨＨ（配列番号１３４）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、式中、Ｘ４が、任意のアミノ酸であり、Ｘ５が、任意のアミノ酸である、ペプチド。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１のＩｇドメインのペプチドを含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはそのようなポリペプチドの断片、変異体、もしくは誘導体に特異的または優先的に結合する。具体的に、次のポリペプチド配列：ＩＴＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１３５）、ＡＣＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１３６）、ＶＣＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１３７）、およびＳＰＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号１３８）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、式中、Ｘ６が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン、またはアスパラギンであり、Ｘ７が、任意のアミノ酸であり、Ｘ８が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン、またはアスパラギンである、ポリペプチド。例えば、次のポリペプチド配列、ＳＰＲＬＨ（配列番号１３９）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチド。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１のＩｇドメイン内にアミノ酸４５２〜４５８を含むペプチドを含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはその誘導体に特異的または優先的に結合し、アミノ酸４５２は、トリプトファンまたはフェニルアラニン残基である。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１の塩基性ドメインのペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドに特異的または優先的に結合する。具体的に、次のポリペプチド配列：ＲＲＡＲＩＲＤＲＫ（配列番号１４０）、ＫＫＶＫＶＫＥＫＲ（配列番号１４１）、ＲＲＬＲＬＲＤＲＫ（配列番号１４２）、ＲＲＧＲＧＲＤＲＫ（配列番号１４３）、およびＲＲＩＲＡＲＤＲＫ（配列番号１４４）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるペプチド。
追加の例示的な可溶性ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドおよび本発明の抗体または抗体断片を産生するためにこれらの分子を得るための方法および材料は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８３２３号に見出され得る。
抗体を作製する方法は、当技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。シグナル配列を含まない完全長ＬＩＮＧＯ−１、またはその種々の断片に対する抗体が産生されると、抗体または抗原結合断片が結合するＬＩＮＧＯ−１のアミノ酸またはエピトープの決定は、本明細書に記載されるエピトープマッピングプロトコル、ならびに当該技術分野において周知の方法（例えば、″Ｃｈａｐｔｅｒ １１−Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，″Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｖ．２ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９６）に記載される二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ）によって決定することができる。追加のエピトープマッピングプロトコルは、Ｍｏｒｒｉｓ，Ｇ．Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）に見出すことができ、いずれも参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。エピトープマッピングは、市販の手段（すなわち、ＰｒｏｔｏＰＲＯＢＥ，Ｉｎｃ．（ウィスコンシン州ミルウォーキー））によって行うこともできる。
追加として、ＬＩＮＧＯ−１の任意の部分に結合する産生された抗体は、次に、ＬＩＮＧＯ−１のアンタゴニストとして作用し、したがって、神経突起伸長、ニューロンおよびオリゴデンドロサイトの生存、増殖および分化を促進するだけでなく、髄鞘形成を促進するそれらの能力についてスクリーニングすることができる。抗体は、例えば、実施例１１もしくは１２等の本明細書に記載される方法、または参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる、２００８年１月９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０００３１６号および２００６年７月７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６２７１号に記載されているような方法を使用することによって、オリゴデンドロサイト／ニューロン生存についてスクリーニングすることができる。追加として、抗体は、例えば、実施例２、６、９、１０、１１、もしくは１３等の本明細書に記載される方法、またはＰＣＴ／ＵＳ２００８／０００３１６号およびＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６２７１号に記載されるような方法を使用することによって、髄鞘形成を促進するそれらの能力についてスクリーニングすることができる。最後に、抗体は、例えば、実施例４もしくは５等の本明細書に記載される方法、またはＰＣＴ／ＵＳ２００８／０００３１６号および／もしくはＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６２７１号に記載されるような、本明細書に記載する方法を使用することによって、オリゴデンドロサイトの増殖および分化、ならびに神経突起伸長を促進するそれらの能力についてスクリーニングすることができる。本発明の抗体の他のアンタゴニスト機能は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０５８，４０６号の実施例に記載される他のアッセイを使用して試験することができる。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープに特異的または優先的に結合し、エピトープは、配列番号５の少なくとも約４〜５個のアミノ酸、配列番号５の少なくとも７個、少なくとも９個、または少なくとも約１５個〜約３０個のアミノ酸を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。記載される配列番号５１の所与のエピトープのアミノ酸は、連続または線形であり得るが、そうである必要はない。ある特定の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープは、細胞の表面に発現されるか、または例えば、ＩｇＧ Ｆｃ領域に融合される可溶性断片としてＬＩＮＧＯ−１の細胞外ドメインによって形成される非線形エピトープを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。したがって、ある特定の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープは、配列番号５１の少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、約１５個〜約３０個、または少なくとも１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、もしくは１００個の連続もしくは非連続アミノ酸を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、非連続アミノ酸は、タンパク質の折り畳みを通じてエピトープを形成する。
他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープに特異的または優先的に結合し、エピトープは、上記の配列番号５１の１個、２個、３個、４個、５個、６個、またはそれ以上の連続または非連続アミノ酸に加えて、タンパク質を修飾する追加の部分を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、例えば、炭水化物部分は、ＬＩＮＧＯ−１抗体が、修飾された標的タンパク質に対して、タンパク質の未修飾バージョンに対するよりも高い親和性で結合するように含まれ得る。代替として、ＬＩＮＧＯ−１抗体は、標的タンパク質の未修飾バージョンに全く結合しない。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、前述の参照モノクローナル抗体に対するＫＤ未満の解離定数（ＫＤ）を特徴とする親和性で、ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドもしくはその断片、またはＬＩＮＧＯ−１変異体ポリペプチドに特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープ、または上記の断片もしくは変異体に特異的または優先的に結合する、すなわち、未関連またはランダムエピトープに結合するよりも容易にそのようなエピトープに結合する；ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープ、または上記の断片もしくは変異体に優先的に結合する、すなわち、関連、同様、相同、または類似のエピトープに結合するよりも容易にそのようなエピトープに結合する；それ自体がＬＩＮＧＯ−１のある特定のエピトープ、または上記の断片もしくは変異体に特異的または優先的に結合する、参照抗体の結合を競合的に阻害する；あるいは約５×１０−２Ｍ、約１０−２Ｍ、約５×１０−３Ｍ、約１０−３Ｍ、約５×１０−４Ｍ、約１０−４Ｍ、約５×１０−５Ｍ、約１０−５Ｍ、約５×１０−６Ｍ、約１０−６Ｍ、約５×１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ、約５×１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ、約５×１０−１０Ｍ、約１０−１０１Ｍ、約５×１０−１１Ｍ、約１０−１１Ｍ、約５×１０−１２Ｍ、約１０−１２Ｍ、約５×１０−１３Ｍ、約１０−１３Ｍ、約５×１０−１４Ｍ、約１０−１４Ｍ、約５×１０−１５Ｍ、約１０−１５Ｍ未満の解離定数ＫＤを特徴とする親和性で、ＬＩＮＧＯ−１の少なくとも１つのエピトープ、または上記断片もしくは変異体に結合する。特定の態様において、抗体またはその断片は、マウスＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドまたはその断片に比較して、ヒトＬＩＮＧＯ−１ポリペプチドまたはその断片に優先的に結合する。
他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、毎秒５×１０−２、毎秒１０−２、毎秒５×１０−３、または毎秒１０−３以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはその断片もしくは変異体に結合する。代替として、本発明の抗体、その抗原結合断片、変異体、または誘導体は、毎秒５×１０−４、毎秒１０−４、毎秒５×１０−５、または毎秒１０−５、毎秒５×１０−６、毎秒１０−６、毎秒５×１０−７、または毎秒１０−７以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはその断片もしくは変異体に結合する。
他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、毎秒１０３Ｍ−１、毎秒５×１０３Ｍ−１、毎秒１０４Ｍ−１、毎秒５×１０４Ｍ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で、ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはその断片もしくは変異体に結合する。代替として、抗体分子は、毎秒１０５Ｍ−１、毎秒５×１０５Ｍ−１、毎秒１０６Ｍ−１、毎秒５×１０６Ｍ−１、または毎秒１０７Ｍ−１、５×１０７Ｍ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で、ＬＩＮＧＯ−１ポリペプチド、またはその断片もしくは変異体に結合する。
他の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１活性のアンタゴニストである。ある特定の実施形態において、例えば、アンタゴニストＬＩＮＧＯ−１抗体のＬＩＮＧＯ−１への結合は、ニューロンに発現されるとき、ミエリン会合神経突起伸長の阻害またはニューロン細胞死を遮断する。他の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１抗体のＬＩＮＧＯ−１への結合は、オリゴデンドロサイトに発現されるとき、オリゴデンドロサイトの増殖もしくは分化の阻害を遮断するか、またはＣＮＳニューロンの脱髄もしくは髄鞘形成不全を遮断する。
ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の修飾形態は、当該技術分野において周知の技法を使用して、全前駆体または親抗体から作製することができる。例示的な技法は、本明細書においてより詳細に論じられる。
ある特定の実施形態において、抗体分子は、組換え的に産生され得る、例えば、ファージ提示法によって、またはコンビナトリアル手法によって産生され得る。抗ＬＩＮＧＯ−１抗体を生成するためのファージ提示法およびコンビナトリアル手法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号、Ｋａｎｇらの国際公開第９２／１８６１９号、Ｄｏｗｅｒらの国際公開第９１／１７２７１号、Ｗｉｎｔｅｒらの国際公開第９２／２０７９１号、Ｍａｒｋｌａｎｄらの国際公開第９２／１５６７９号、Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇらの国際公開第９３／０１２８８号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの国際公開第９２／０１０４７号、Ｇａｒｒａｒｄらの国際公開第９２／０９６９０号、Ｌａｄｎｅｒらの国際公開第９０／０２８０９号、Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０−１３７２、Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１−８５、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１、Ｇｒｉｆｆｔｈｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５−７３４、Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６：８８９−８９６、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８、Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ ８９：３５７６−３５８０、Ｇａｒｒａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３−１３７７、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９：４１３３−４１３７、およびＢａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ ８８：７９７８−７９８２に記載され、それら全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
一実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体は、完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝的に操作されたマウス内で作製された抗体）、または非ヒト抗体、例えば、齧歯類（マウスもしくはラット）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体である。非ヒト抗体は、齧歯類（マウスまたはラット抗体）であり得る。齧歯類抗体を産生する方法は、当該分野において周知である。
ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を担持する遺伝子導入マウスを使用し生成することができる。目的の抗原で免疫化されたこれらの遺伝子導入マウスからの脾細胞を使用して、ヒトタンパク質からのエピトープに対して特異的な親和性を有するヒトｍＡｂを分泌する、ハイブリドーマを産生する（例えば、Ｗｏｏｄらの国際出願国際公開第９１／００９０６号、ＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらのＰＣＴ国際公開第９１／１０７４１号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの国際出願国際公開第９２／０３９１８号、Ｋａｙらの国際出願第９２／０３９１７号、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．１９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９、Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．１９９４ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．１９９４ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．１９９３ Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３−４０、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．１９９３ ＰＮＡＳ ９０：３７２０−３７２４、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．１９９１ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３−１３２６を参照）。
抗ＬＩＮＧＯ−１抗体は、可変領域またはその一部、例えば、ＣＤＲが非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成されるものであり得る。キメラ、ＣＤＲ移植、およびヒト化抗体は、本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウス、において生成され、次に例えば、ヒトにおける抗原性を減少させるように可変フレームワークまたは定常領域内で修飾された抗体は、本発明の範囲内である。
キメラ抗体は、当該技術分野において周知の組換えＤＮＡ技法によって産生することができる。例えば、マウス（または他の種）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子は、マウスＦｃをコードする領域を除去するように制限酵素で消化され、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の相当部分は置換される（Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの国際特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号、Ａｋｉｒａらの欧州特許出願第１８４，１８７号、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．の欧州特許出願第１７１，４９６号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎらの欧州特許出願第１７３，４９４号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒらの国際出願国際公開第８６／０１５３３号、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙらの欧州特許出願第１２５，０２３号、Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３）、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：３４３９−３４４３、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：２１４−２１８、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５、Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４４９、およびＳｈａｗ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照）。
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体は、ドナーＣＤＲと置き換えられた（重およびまたは軽免疫グロブリン鎖の）少なくとも１つまたは２つであるが、一般的に３つ全ての受容体ＣＤＲを有する。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分と置き換えられ得るか、またはＣＤＲの一部だけが非ヒトＣＤＲと置き換えられ得る。ヒト化抗体をＬＩＮＧＯ−１またはその断片に結合するために必要な数のＣＤＲを置き換えるだけでよい。
抗体は、当該分野において周知の方法によってヒト化することができる。ヒト化抗体は、ヒトＦｖ可変領域からの相当配列との抗原結合には直接関与しない、Ｆｖ可変領域の配列を置換することによって生成することができる。ヒト化抗体を生成するための一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７，ｂｙ Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、ならびにＱｕｅｅｎらの米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、および同第５，６９３，７６２号によって提供され、それら全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ヒト化またはＣＤＲ移植抗体は、免疫グロブリン鎖のうちの１つ、２つ、または全てのＣＤＲが置換され得る、ＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって産生することができる。例えば、全ての内容が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ ｅｔ ａｌ．１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４、Ｂｅｉｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．１９８８ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０、Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用され得るＣＤＲ移植法について説明しており（１９８７年３月２６日に出願された英国特許出願第ＧＢ２１８８６３８Ａ号、Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号）、その内容は、参照により明示的に組み込まれる。
特定のアミノ酸が置換、欠失、または付加されたヒト化抗体も本発明の範囲内である。ヒト化抗体は、例えば、抗原への結合を改善するように、フレームワーク領域内にアミノ酸置換を有することができる。例えば、ヒト化抗体は、ドナーのフレームワークの残基またはレシピエントのフレームワーク残基以外の別のアミノ酸と同一のフレームワーク残基を有する。そのような抗体を生成するために、ヒト化免疫グロブリン鎖の選択された少数のアクセプターフレームワーク残基を、対応するドナーアミノ酸で置き換えることができる。置換の好ましい位置は、ＣＤＲに隣接するか、またはＣＤＲと相互作用することができるアミノ酸残基を含む（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照）。ドナーからのアミノ酸を選択するための基準は、米国特許第５，５８５，０８９号、例えば、同第５，５８５，０８９号の１２〜１６段、例えば、同第５，５８５，０８９号の１２〜１６段に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。抗体をヒト化するための他の技法は、１９９２年１２月２３日に公開されたＰａｄｌａｎらの欧州特許公開第ＥＰ５１９５９６ Ａ１号に記載されている。
抗ＬＩＮＧＯ−１抗体は、一本鎖抗体であり得る。一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）は、操作されてよい（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８８０：２６３−８０、およびＲｅｉｔｅｒ，Ｙ．（１９９６）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２：２４５−５２を参照）。一本鎖抗体は、同じ標的ＬＩＮＧＯ−１タンパク質の異なるエピトープに対して特異性を有する多価抗体を生成するために、二量体化または多量体化することができる。
さらに他の実施形態において、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。別の実施形態において、抗体分子は、例えば、κまたはλの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の特性を修飾するように（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうちの１つ以上を増減させるように）改変、例えば、変異されることができる。一実施形態において、抗体は、エフェクター機能を有し、補体を固定することができる。他の実施形態において、抗体は、エフェクター細胞を動員しないか、または補体を固定しない。別の実施形態において、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低いか、またはない。例えば、それは、Ｆｃ受容体への結合を支持しない、アイソタイプまたはサブタイプ、断片またはその他の変異体であり、例えば、変異誘発または欠失されたＦｃ受容体結合領域を有する。
ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、１つ以上のエフェクター機能を媒介する定常領域を含むことができる。例えば、抗体定常領域への補体のＣ１成分の結合は、補体系を活性化することができる。補体の活性化は、細胞病原体のオプソニン化および溶解において重要である。補体の活性化は、炎症応答も刺激し、自己免疫過敏症にも関与し得る。さらに、抗体は、細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する抗体Ｆｃ領域上にＦｃ受容体結合部位を有する、Ｆｃ領域を介して種々の細胞上の受容体に結合する。ＩｇＧ（γ受容体）、ＩｇＥ（ε受容体）、ＩｇＡ（α受容体）、およびＩｇＭ（μ受容体）を含む、異なるクラスの抗体に特異的な多数のＦｃ受容体がある。細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体で被覆された粒子の貪食および破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体で被覆された標的細胞の溶解（本明細書において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、またはＡＤＣＣとも称される）、炎症メディエーターの放出、免疫グロブリン産生の胎盤通過および制御を含む、多数の重要かつ多様な生物学的応答を誘発する。
ある特定の実施形態において、ほぼ同じ免疫原性の全体の未改変抗体と比較して、エフェクター機能の低減、非共有で二量体化する能力、腫瘍の部位で局在する能力の増加、血清半減期の低減、または血清半減期の増加等の所望の生化学的特徴を提供するように、定常領域ドメインの１つ以上の少なくとも一部分が欠失された、または他の方法で改変された抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子。例えば、本明細書に記載される診断および治療方法において使用するためのある特定の抗体は、免疫グロブリン重鎖と同様のポリペプチド鎖を含むが、１つ以上の重鎖ドメインの少なくとも一部を欠くドメイン欠失抗体である。例えば、ある特定の抗体において、修飾された抗体の定常領域の１つの全体ドメインが欠失され、例えば、ＣＨ２ドメインの全てまたは一部が欠失される。
ある特定のＬＩＮＧＯ−１抗体分子において、Ｆｃ部分は、当技術分野で周知の技法を使用して、エフェクター機能を減少させるように突然変異させることができる。例えば、定常領域ドメインの（点突然変異または他の手段による）欠失または不活性化は、循環修飾抗体のＦｃ受容体結合を低減することができ、それによって腫瘍局在化を増加させる。他の例において、本発明と一致する定常領域の修飾は、補体結合を抑え、したがって共役細胞毒素の血清半減期および非特異的会合を低減するということがあり得る。定常領域のさらに他の修飾を使用して、増加した抗原特異性または抗体柔軟性に起因する局在化の強化を可能にする、ジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を修飾することができる。得られた生理学的プロファイル、生物学的利用能、および腫瘍局在化、生体分布、および血清半減期等の修飾の他の生化学的効果は、過度の実験を行うことなく周知の免疫学的技法を使用して、容易に測定および定量することができる。
例示的な抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、重鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、または重鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも２つが、表３に記載される、Ｌｉ６２またはＬｉ８１の参照重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３アミノ酸配列、またはその変異体と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。代替として、ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域は、表３に記載される、Ｌｉ６２またはＬｉ８１の参照重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、またはその変異体と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である。したがって、本実施形態によれば、本発明の重鎖可変領域は、表３に示されるポリペプチド配列に関連するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３ポリペプチド配列を有する。ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、表３に記載されるＶＨポリペプチド、もしくはその断片、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
別の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含み、少なくともＣＤＲ３領域は、配列番号４、８、および１７〜４９からなる群から選択される参照ＣＤＲ３配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一である。さらなる実施形態において、ＣＤＲ３領域は、配列番号４、８、および１７〜４９からなる群から選択される参照ＣＤＲ３配列と同一である。なおもさらなる実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域が、それぞれ配列２および３のＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であり、ＣＤＲ３領域が、配列番号４および１７〜３４からなる群から選択されるＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一である、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域が、それぞれ配列６および７のＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であり、ＣＤＲ３領域が、配列番号８および３５〜４９からなる群から選択されるＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一である、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。
別の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域が、表３に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３群と同一のポリペプチド配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合するＶＨポリペプチドを含む。
さらなる実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号１、５、および５３〜８５から選択される参照ＶＨポリペプチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のＶＨポリペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。特定の一実施形態において、ＶＨポリペプチドは、配列番号４、８、および１７〜４９からなる群から選択されるＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号１、５、および５３〜８５からなる群から選択されるＶＨポリペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、ＶＨポリペプチドを含む抗体または抗原結合断片は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合する。
別の態様において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号１または配列番号５のアミノ酸を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態において、ＶＨを含む抗体または抗原結合断片は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合する。ある特定の実施形態において、ＶＨを含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなる抗体、またはその抗原結合断片は、表３に記載されるＬｉ６２、Ｌｉ８１、またはその変異体と同じエピトープに特異的または優先的に結合するか、あるいはそのようなモノクローナル抗体がＬＩＮＧＯ−１に結合するのを競合的に阻害する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、次のアミノ酸：Ｗ５０、Ｐ５３、Ｉ５７、および／またはＷ１０４のうちの１つ以上の置換を除いて、配列番号１４６のポリペプチドと同一の免疫グロブリン重鎖を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｗ５０は、Ｈ、Ｆ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｉ、またはＤ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｐ５３は、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＧ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｉ５７は、Ｇ、Ｍ、Ｎ、Ｈ、Ｌ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｓ、Ｐ、Ｖ、またはＴ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｗ１０４は、Ｖ、Ｈ、Ｓ、Ｑ、Ｍ、Ｌ、Ｔ、またはＩ残基と置換される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、アミノ酸Ｐ５３の置換を除いて、配列番号５のポリペプチドと同一の免疫グロブリン重鎖可変領域を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｐ５３は、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＧ残基と置換される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、次のアミノ酸：Ｗ５０、Ｐ５３、Ｉ５７、および／またはＷ１０４のうちの１つ以上の置換を除いて、配列番号１のポリペプチドと同一の免疫グロブリン重鎖可変領域を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｗ５０は、Ｈ、Ｆ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｉ、またはＤ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｐ５３は、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＧ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｉ５７は、Ｇ、Ｍ、Ｎ、Ｈ、Ｌ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｓ、Ｐ、Ｖ、またはＴ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｗ１０４は、Ｖ、Ｈ、Ｓ、Ｑ、Ｍ、Ｌ、Ｔ、またはＩ残基と置換される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、次のアミノ酸：Ｗ５０、Ｐ５３、Ｉ５７、および／またはＷ１０４のうちの１つ以上の置換を除いて、配列番号６６のポリペプチドと同一の免疫グロブリン重鎖可変領域を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｗ５０は、Ｈ、Ｆ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｉ、またはＤ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｐ５３は、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＧ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｉ５７は、Ｇ、Ｍ、Ｎ、Ｈ、Ｌ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｓ、Ｐ、Ｖ、またはＴ残基と置換される。いくつかの実施形態において、Ｗ１０４は、Ｖ、Ｈ、Ｓ、Ｑ、Ｍ、Ｌ、Ｔ、またはＩ残基と置換される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、上記のＶＨポリペプチドのうちの１つ以上を含み表３に記載されるＬｉ６２、Ｌｉ８１、またはその変異体と同じエピトープに特異的または優先的に結合するか、またはそのような抗体がＬＩＮＧＯ−１に結合するのを競合的に阻害することができる。
別の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、または軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも２つが、本明細書に開示されるモノクローナルＬＩＮＧＯ−１抗体からの参照重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。代替として、ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域は、本明細書に開示されるモノクローナルＬＩＮＧＯ−１抗体からの参照軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である。したがって、本実施形態によれば、抗体分子の軽鎖可変領域は、表４に示されるポリペプチドに関連するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３ポリペプチド配列を有する。ある特定の実施形態において、ＶＬポリペプチドを含む抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合する。
別の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域が、表４に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３群と同一のポリペプチド配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、ＶＬポリペプチドを含む抗体または抗原結合断片は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合する。
さらなる実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、表４に示される、配列番号９または配列番号１３から選択される参照ＶＬポリペプチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のＶＬポリペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合するＶＬポリペプチドを含むことを含む。別の態様において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、表４に示される、配列番号９または配列番号１３から選択されるＶＬポリペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、ＶＬポリペプチドを含む抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、アミノ酸Ｗ９４の置換を除いて、配列番号１４５のポリペプチドと同一の免疫グロブリン軽鎖から本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｗ９４は、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｖ、またはＳ残基と置換される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、アミノ酸Ｗ９４の置換を除いて、配列番号５のポリペプチドと同一の免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｗ９４は、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｖ、またはＳ残基と置換される。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、上記のＶＬポリペプチドのうちの１つ以上を含むか、それから本質的になるか、もしくはそれからなるポリペプチドを含みＬｉ６２またはＬｉ８１と同じエピトープに特異的または優先的に結合するか、あるいはそのようなモノクローナル抗体がＬＩＮＧＯ−１に結合するのを競合的に阻害する。
他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、ｉ）配列番号１または配列番号５３〜７０および配列番号９、ならびにｉｉｉ）配列番号５または配列番号７１〜８５および配列番号１３からなる群から選択される、表３に示されるＶＨポリペプチド、および表４に示されるＶＬポリペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、下の配列番号８６に示される抗体重鎖、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＡＹＥＭＫＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶ ＩＧＰＳＧＧＦＴＦＹＡＤＩＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＥ ＧＤＮＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＩＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＩＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫ ＰＫＤＴＬＩＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ ＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＩＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ ＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＩＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴ ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＩＱＫＳＬＳ ＬＳＰＧ（配列番号８６）
他の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、抗体重鎖のアグリコシル化バージョンを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。例えば、Ｌｉ８１のアグリコシル化バージョンは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２００８年１月９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０００３１６号、および米国特許第８，１２８，９２６号に記載されている。Ｌｉ８１抗体のアグリコシル化バージョンは、Ｌｉ８１重鎖配列内の単一アミノ酸を（ＴをＡに）変えることによって創出された。Ｌｉ８１重鎖のアグリコシル化バージョンの配列（配列番号５０）を以下に示す。単一アミノ酸の変化は、太字でマークされ、下線が引かれている：
抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、配列番号５０または８６のアミノ酸を含む参照ポリペプチドと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一の重鎖を含む。ある特定の実施形態において、重鎖を含む抗体または抗原結合断片は、ＬＩＮＧＯ−１に特異的または優先的に結合する。
一実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、エフェクター機能を低減するようにアグリコシル免疫グロブリンＧサブクラス１（ＩｇＧ１）フレームワークに操作された完全ヒト抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体である（本明細書では抗ＬＩＮＧＯ−１抗体１とも称される。ＬＩＮＧＯ−１ノックアウトマウスの組織学的および機能的評価が行われ、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体１のインビボ薬理活性が、脱髄のいくつかの動物モデルにおいて実証された。抗ＬＩＮＧＯ−１抗体１は、結合特性、生物活性、および薬理活性の評価に基づいて、インビトロおよびインビボで特徴付けられている。これらの研究の結果は、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体１が、表１に記載される次の特徴を有することを示す。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６、７、および８のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３、および３０のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＨを含む。
別の実施形態において、抗体分子は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＬを含む。
別の実施形態において、抗体分子は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１０、１１、および１２のアミノ酸、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号６、７、および８のアミノ酸を含むＶＨと、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１４、１５、および１６のアミノ酸を含むＶＬ、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む。
一実施形態において、抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２、３、および３０のアミノ酸を含むＶＨと、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域が、それぞれ配列番号１０、１１、および１２のアミノ酸を含むＶＬ、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号６６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号６６と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＨを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号９と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、ＶＬを含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むＶＨと、配列番号１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むＶＬと、を含む。
一実施形態において、抗体分子は、配列番号６６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号６６と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むＶＨと、配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、前述の配列番号９と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含むＶＬと、を含む。
別の実施形態において、抗体分子は、次のとおり、配列番号２７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、下に示される重鎖を含む。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ ＡＹＥＭＫＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶ
ＩＧＰＳＧＧＦＴＦＹ ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＴＥＧ
ＤＮＤＡＦＤＩＷＧＱ ＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳ ＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡ ＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴ ＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹ
ＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮ ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴ ＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ ＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰ ＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩ
ＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴ ＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳ ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ ＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳ ＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤ
ＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶ ＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥ ＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶ ＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴ ＫＰＲＥＥＱＹＮＳＡ
ＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬ ＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹ ＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰ ＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡ ＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹ
ＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴ ＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶ ＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶ ＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮ ＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤ
ＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫ ＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱ ＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨ ＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫ ＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２７５）。
他の実施形態において、抗体分子は、次のとおり、配列番号２７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列）を含む、下に示される軽鎖を含む。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴ ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ ＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳ ＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤ
ＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱ ＲＳＮＷＰＭＹＴＦＧ
ＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴ ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴ ＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ ＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫ
ＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫ ＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨ ＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ
ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦ ＮＲＧＥＣ（配列番号２７６）。
上記のポリペプチドのうちのいずれかは、追加のポリペプチド、例えば、コードされたポリペプチドの分泌を指令するシグナルペプチド、本明細書に記載される抗体定常領域、または本明細書に記載される他の異種ポリペプチドをさらに含み得る。追加として、本発明のポリペプチドは、他の箇所に記載されるポリペプチド断片を含む。追加として、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載される、融合ポリペプチド、Ｆａｂ断片、および他の誘導体を含む。
また、本明細書の他の箇所でより詳細に説明されるように、本発明は、上記のポリペプチドを含む組成物を含む。
本明細書に開示されるＬＩＮＧＯ−１抗体ポリペプチドは、それらが誘導される天然に存在する結合ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも当業者によって理解されるであろう。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は類似していてもよく、例えば、出発配列に対してある特定の同一性（％）を有し、例えば、出発配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であり得る。
さらに、「非必須」アミノ酸領域における保存的置換または変化につながる、ヌクレオチドまたはアミノ酸の置換、欠失、または挿入を行うことができる。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、１つ以上の個別のアミノ酸の置換、挿入、または欠失、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはそれ以上の個別のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を除いて、出発配列と同一であり得る。ある特定の実施形態において、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、出発物質に対して、１〜５、１〜１０、１〜１５、または１〜２０の個別のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を有する。
可溶性ＬＩＮＧＯアンタゴニストおよび融合タンパク質
別の実施形態において、修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１のアンタゴニストは、可溶性ＬＩＮＧＯ分子、例えば、ＬＩＮＧＯ−１分子（例えば、ＬＩＮＧＯ−１の断片）、または可溶性形態のＬＩＮＧＯ−１複合体の成分（例えば、可溶性形態のＮｇＲ１、ｐ７５、またはＴＡＪ（ＴＲＯＹ））である。
ある特定の実施形態において、可溶性ＬＩＮＧＯ分子、またはＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、アミノ酸配列または通常は抗体と関連しない１つ以上の部分を含む。例示的な修飾は、以下でより詳細に説明される。例えば、本発明の一本鎖Ｆｖ抗体断片は、柔軟なリンカー配列を含むことができるか、または機能的部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、または標識）を付加するように修飾することができる。
本明細書に記載される、抗体分子、可溶型のＬＩＮＧＯ−１、または複合体成分は、単独で使用することができるか、または第２の部分、異種部分、例えば、異種ポリペプチドに（例えば、化学的結合、遺伝子もしくはポリペプチド融合、非共有会合またはその他によって）機能的に連結することができる。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに適用される「異種」という用語は、ある部分が、自然界で天然に連結されていないことを意味する。例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、それが比較される実体の残りのものとは別個の実態に由来する。例えば、本明細書で使用されるとき、ＬＩＮＧＯ−１抗体分子に融合される「異種ポリペプチド」は、同じ種の非免疫グロブリンポリペプチド、または異なる種の免疫グロブリンもしくは非免疫グロブリンポリペプチドに由来する。
例示的な異種部分としては、限定されないが、免疫グロブリンＦｃドメイン、血清アルブミン、ペグ化、ＧＳＴ、Ｌｅｘ−Ａ、およびＭＢＰポリペプチド配列が挙げられる。融合タンパク質は、第１の部分例えば、抗体分子、可溶型のＬＩＮＧＯ−１または複合体成分を、第２の部分に結合するリンカー配列を追加として含むことができる。他の実施形態において、追加のアミノ酸配列は、発現、立体的柔軟性、検出および／もしくは単離、または精製を容易にするために、融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加することができる。例えば、可溶型のＬＩＮＧＯ−１または複合体成分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む種々のアイソタイプの重鎖定常領域に融合されることができる。
本明細書に記載される抗体分子および可溶性または融合タンパク質は、特に抗体（例えば、二重特異性もしくは多重特異性抗体）等の１つ以上の他の分子実体に（例えば、化学的結合、遺伝子融合、非共有結合性会合、またはその他によって）機能的に連結されることができる。
一実施形態において、融合タンパク質は、ＬＩＮＧＯの細胞外ドメインまたは複合体成分（もしくはそれに相同性の配列）を含み、例えば、ヒト免疫グロブリンＦｃ鎖、例えば、ヒトＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはヒトＩｇＧ２、またはその変異型）に融合される。Ｆｃ配列は、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体結合、および／または補体活性を低減するために、１つ以上のアミノ酸において変異され得る。
ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、融合タンパク質を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり得る。この文脈において、融合タンパク質は、例えば、少なくとも１つの標的結合部位、および少なくとも１つの異種部分を有する免疫グロブリン抗原結合ドメインを含む、キメラ分子である。アミノ酸配列は、通常、融合ポリペプチドに一緒にされる別個のタンパク質に存在し得るか、またはそれらは通常、同じタンパク質に存在し得るが、融合ポリペプチドにおいて新しい配置で置かれる。融合タンパク質は、例えば、化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを創出し、翻訳することによって、創出することができる。
核酸分子／組換え発現
ポリペプチドのうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、宿主細胞、およびベクター、例えば、本明細書に記載される修復剤および免疫調節剤も本発明に包含される。
例示的な一実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、または重鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも２つが、表３に記載される、Ｌｉ６２もしくはＬｉ８１またはその変異体の参照重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする核酸を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、単離されたポリヌクレオチドが提供される。代替として、ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域は、表３に記載されるＬｉ６２もしくはＬｉ８１またはその変異体の参照重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である。したがって、本実施形態によれば、本発明の重鎖可変領域は、表３に示されるポリペプチド配列に関連するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３ポリペプチド配列を有する。
別の実施形態において、軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも１つ、または軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの少なくとも２つが、本明細書に開示されるモノクローナルＬＩＮＧＯ−１抗体からの参照軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする核酸を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、単離されたポリヌクレオチドが提供される。代替として、ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域は、本明細書に開示されるモノクローナルＬＩＮＧＯ−１抗体からの参照軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一である。したがって、本実施形態によれば、本発明の軽鎖可変領域は、表４に示されるポリペプチド配列に関連するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３ポリペプチド配列を有する。
上記のポリペプチドのうちのいずれかは、追加の核酸、例えば、コードされたポリペプチドの分泌を指令するシグナルペプチド、本明細書に記載される抗体定常領域、または本明細書に記載される他の異種ポリペプチドをコードする核酸をさらに含み得る。
上記のポリヌクレオチドの１つ以上を含むポリヌクレオチドを含む組成物も開示される。一実施形態において、組成物は、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドを含み、前述の第１のポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるＶＨポリペプチドをコードし、前述の第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるＶＬポリペプチドをコードする。
他の箇所に記載されるように、本発明のポリヌクレオチドの断片も開示される。追加として、本明細書に記載される融合ポリヌクレオチド、Ｆａｂ断片、および他の誘導体をコードするポリヌクレオチドも、本発明によって企図される。
ポリヌクレオチドは、当該分野において周知の任意の方法によって産生または製造することができる。例えば、抗体のヌクレオチド配列が周知である場合、抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９４）に記載のように）、つまり簡潔には、抗体をコードする配列の部分を含む重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび結紮、ならびに次にＰＣＲによる結紮オリゴヌクレオチドの増幅を伴う。
本明細書に記載されるポリペプチドの組換え発現は、例えば、ＬＩＮＧＯ−１に結合する抗体分子は、ポリペプチド、例えば、抗体分子をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。抗体分子をコードするポリヌクレオチド、または抗体の重鎖もしくは軽鎖またはその部分（好ましくは、重鎖もしくは軽鎖可変ドメインを含む）が得られると、当該技術分野において周知の技法を使用し、組換えＤＮＡ技術によって抗体分子の産生のためのベクターが産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードするポリペプチドを含むポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を調製するための方法は、本明細書および米国特許第８，０５８，４０６号に記載され、その内容が参照によりそれら全体が組み込まれる。
当業者に周知の方法を使用して、抗体コード配列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含む、発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロの組換えＤＮＡ技法、合成技法、およびインビボ遺伝子組換えが挙げられる。本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子、またはその重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン）をコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターは、プロモーターに作動可能に連結される。そのようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、ＰＣＴ国際公開第８６／０５８０７号、ＰＣＴ国際公開第８９／０１０３６号、および米国特許第５，１２２，４６４号を参照）、抗体の可変ドメインは、重鎖または軽鎖全体の発現のためにそのようなベクターにクローン化され得る。
宿主細胞は、２つの発現ベクター、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクター、および軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターで共トランスフェクトされ得る。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択可能なマーカーを含み得る。代替として、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードする単一ベクターが使用されてもよい。そのような状況において、軽鎖は、過剰な有毒遊離重鎖を避けるために重鎖の前に有利に置かれる（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２（１９８６）、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７（１９８０））。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含んでよい。
「ベクター」または「発現ベクター」という用語は、本明細書において、宿主細胞に導入し、そこで所望の遺伝子を発現させるためのビヒクルとして用いられるベクターを意味するように使用される。当業者に周知のように、そのようなベクターは、プラスミド、ファージ、ウイルス、およびレトロウイルスからなる群から容易に選択することができる。一般に、本発明に適合するベクターは、選択マーカーと、所望の遺伝子のクローン化を容易にする適切な制限部位と、真核または原核細胞に進入し、および／または複製する能力とを含む。
本発明の目的のために、多数の発現ベクター系を用いることができる。例えば、１つのクラスのベクターは、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ、ＭＭＴＶ、もしくはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウイルス等の動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素を利用する。他のものは、内部リボソーム結合部位を有するポリシストロン系の使用を伴う。追加として、ＤＮＡをそれらの染色体に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって選択することができる。マーカーは、栄養要求性宿主に対する原栄養、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅等の重金属に対する抵抗性を提供することができる。選択可能なマーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接連結することができるか、または同時形質転換によって同じ細胞に導入されるか、のいずれかであり得る。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加の要素も必要であり得る。これらの要素は、シグナル配列、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルを含むことができる。
一実施形態において、クローン化可変領域遺伝子は、上述されるような重鎖および軽鎖定常領域遺伝子（好ましくは、ヒト）合成体と共に、発現ベクターに挿入される。一実施形態において、これは、ＮＥＯＳＰＬＡ（米国特許第６，１５９，７３０号）と称される、Ｂｉｏｇｅｎ ＩＤＥＣ，Ｉｎｃ．の独自の発現ベクターを使用して行われる。このベクターは、サイトメガロウイルスプロモーター／エンハンサー、マウスβグロビン主要プロモーター、ＳＶ４０複製起点、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼエクソン１およびエクソン２、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、およびリーダー配列を含む。このベクターは、可変および定常領域遺伝子の組み込みの際に、抗体の非常に高いレベルの発現、ＣＨＯ細胞内のトランスフェクションに続いて、培地およびメトトレキサート増幅を含むＧ４１８における選択をもたらすことが見出された。当然のことながら、真核細胞において発現を誘発することができる任意の発現ベクターは、本発明で使用することができる。好適なベクターの例としては、限定されないが、プラスミドｐｃＤＮＡ３、ｐＨＣＭＶ／Ｚｅｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＥＦ１／Ｈｉｓ、ｐＩＮＤ／ＧＳ、ｐＲｃ／ＨＣＭＶ２、ｐＳＶ４０／Ｚｅｏ２、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＨＣＭＶ、ｐＵＢ６／Ｖ５−Ｈｉｓ、ｐＶＡＸ１、およびｐＺｅｏＳＶ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州サンディエゴから入手可能）、ならびにプラスミドｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソンから入手可能）が挙げられる。一般に、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の場合好適に高いレベルで発現するものについて形質転換された多数の細胞をスクリーニングすることは、例えば、ロボットシステムによって実施することができる日常的な実験である。ベクター系は、米国特許第５，７３６，１３７号および同第５，６５８，５７０号にも教示され、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。この系は、高い発現レベル、例えば、＞３０ｐｇ／細胞／日を提供する。他の例示的なベクター系は、例えば、米国特許第６，４１３，７７７号に開示されている。
他の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、２００２年１１月１８日に出願され、その全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００３−０１５７６４１ Ａ１号に開示されるもの等の多シストロン性構築体を使用して発現され得る。これらの新規の発現系において、抗体の重鎖および軽鎖等の目的の複数の遺伝子産物は、単一の多シストロン性構築体から産生され得る。これらの系は、真核生物宿主細胞中の結合ポリペプチドの比較的高いレベルを提供するために、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を有利に使用する。適合するＩＲＥＳ配列は、米国特許第６，１９３，９８０号に開示されており、これも本明細書に組み込まれる。当業者は、そのような発現系を使用して、本出願において開示される完全範囲のポリペプチドを効果的に産生することができる。
より一般的に、ポリペプチドの単量体サブユニット、例えば、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子をコードするベクターまたはＤＮＡ配列が調製されると、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入され得る。宿主細胞へのプラスミドの導入は、当業者に公知の種々の技法によって達成することができる。これらは、限定されないが、トランスフェクション（電気泳動および電気穿孔を含む）、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エンベロープＤＮＡとの細胞融合、マイクロインジェクション、および無傷ウイルスによる感染を含む。Ｒｉｄｇｗａｙ，Ａ．Ａ．Ｇ．″Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ″Ｖｅｃｔｏｒｓ，Ｒｏｄｒｉｑｕｅｚ ａｎｄ Ｄｅｎｈａｒｄｔ，Ｅｄｓ．，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ２４．２，ｐｐ．４７０−４７２（１９８８）を参照されたい。典型的に、宿主へのプラスミド導入は電気穿孔による。発現構築体を保有する宿主細胞を、軽鎖および重鎖の産生に適切な条件下で増殖させ、重鎖および／または軽鎖タンパク質合成についてアッセイする。例示的なアッセイ技法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または蛍光活性化細胞ソーター分析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学等が挙げられる。
発現ベクターは、従来技法によって宿主細胞に移され、次にトランスフェクトされた細胞は、本明細書に記載される方法において使用するためにポリペプチドを産生する従来技法によって培養される。したがって、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体、またはその重鎖もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む。二本鎖抗体の発現のための好ましい実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、内容が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０５８，４０６号に詳述されるように、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞において共発現され得る。
本明細書で使用されるとき、「宿主細胞」は、組換えＤＮＡ技法を使用して構築され、少なくとも１つの異種性遺伝子をコードするベクターを包含する、細胞を指す。組換え宿主からの抗体の単離のためのプロセスの説明において、「細胞」および「細胞培養」という用語は、それが別途明確に指定されない限り、抗体の源を示すために交換可能に使用される。言い換えれば、「細胞」からのポリペプチドの回収は、遠沈させた全細胞から、または培地および懸濁細胞の両方を含む細胞培養からのいずれかを意味し得る。
多様な宿主−発現ベクター系を利用して、本明細書に記載される方法において使用するためのポリペプチド、例えば、抗体分子を発現させることができる。これらは、限定されないが、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはポリペプチドコード配列を含むコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌、枯草菌）；抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ））；ポリペプチドコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染させた、または抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは、哺乳類細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む、組換え発現構築体を包含する哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＬＫ、２９３、３Ｔ３細胞）等の微生物を含む。特に全組換え抗体分子の発現の場合、典型的に大腸菌等の細菌細胞、より典型的に真核細胞が、組換えポリペプチドまたは抗体分子の発現に使用される。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳類細胞は、ヒトサイトメガロウイルスからの主要な中間早期遺伝子プロモーター要素等のベクターと併せて、ポリペプチド抗体の有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ４５：１０１（１９８６）、Ｃｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２（１９９０））。
タンパク質発現に使用される宿主細胞株は、多くの場合、哺乳類起源であり、当業者は、その中で発現される所望の遺伝子産物に最適な特定の宿主細胞株を優先的に決定する能力があると考えられる。例示的な宿主細胞株としては、限定されないが、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）、ＤＧ４４、およびＤＵＸＢ１１（チャイニーズハムスター卵巣株、ＤＨＦＲマイナス）、ＨＥＬＡ（ヒト子宮頸癌）、ＣＶＩ（サル腎臓株）、ＣＯＳ（ＳＶ４０ Ｔ抗原を有するＣＶＩの誘導体）、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ（ベビーハムスター腎臓）、ＭＤＣＫ、２９３、Ｗ１３８、Ｒ１６１０（チャイニーズハムスター線維芽細胞）、ＢＡＬＢＣ／３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、ＨＡＫ（ハムスター腎臓株）、ＳＰ２／Ｏ（マウス骨髄腫）、Ｐ３．ｔｉｍｅｓ．６３−Ａｇ３．６５３（マウス骨髄腫）、ＢＦＡ−１ｃＢＰＴ（ウシ内皮細胞）、ＲＡＪＩ（ヒトリンパ球）、および２９３（ヒト腎臓）が挙げられる。宿主細胞株は、典型的に、商業サービス、米国培養細胞系統保存機関から、または公開された文献から入手可能である。
さらに、挿入配列の発現を調節するか、または所望される特定の様式で遺伝子産物を修飾および処理する、宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）および処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後処理および修飾のための特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現される外来タンパク質の正しい修飾および処理を確実にするように選択することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写、グリコシル化、およびリン酸化の適切な処理のための細胞機構を有する、真核宿主細胞を使用することができる。
組換えタンパク質の長期間の高収率産生のために、安定な発現が好ましい。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞株を操作することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用するよりも、宿主細胞は、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）、および選択可能なマーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入後、操作された細胞を富化培地中で１〜２日間増殖させることができ、次いで選択培地に切り替える。組換えプラスミド中の選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がそれらの染色体にプラスミドを安定的に組み込み、順に細胞株にクローン化し、拡張することができる巣を形成するように増殖するのを許す。この方法は、抗体分子を安定的に発現する細胞株を操作するために有利に使用することができる。
ＣＨＯ細胞が特に好ましい。ある特定の実施形態において、抗体分子は、ヒトＬＩＮＧＯ−１タンパク質に特異的なＩｇＧ１−ａｇｌｙ重軽鎖構造遺伝子を含む発現ベクターで安定的に形質転換されたＣＨＯ細胞内で発現される。小胞体関連シグナルペプチダーゼによって翻訳後に除去される天然のヒトκ軽鎖のシグナルペプチドおよびヒトヒト重鎖シグナルペプチドを使用して、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の直接分泌に使用することができる。抗体分子は、培地から精製し、液体として配合することができる。抗体分子は、鎖間ジスルフィド結合によって結合された２つの重鎖および２つの軽鎖からなり得る。一実施形態において、無傷の抗体分子の質量は、約１４４．４ｋＤａである。
単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ２２：８１７ １９８０）遺伝子を含むが、これらに限定されない多数の選択系を、それぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞に用いることができる。また、抗代謝物耐性を、次の遺伝子の選択基準として使用することができる：メトトレキセートに対する耐性を付与する、ｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７（１９８０）、Ｏ′Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７（１９８１））、ミコフェノール酸に対する耐性を付与する、ｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２（１９８１））、アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与する、ｎｅｏ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５）、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２（１９９３）、およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）、ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５（Ｍａｙ，１９９３）、およびヒグロマイシンに対する耐性を付与する、ｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８４）。使用することができる組換えＤＮＡ技術の分野において一般に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、およびＣｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｌｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１（１９８１）に記載され、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
追加の方法およびポリペプチド、例えば、抗体の宿主系の発現、産生、および／または精製は、その内容が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０５８，４０６号に開示されている。
核酸アンタゴニスト
ある特定の実施形態において、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストは、ＬＩＮＧＯ−１をコードする核酸の発現を阻害する。そのようなＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストの例としては、核酸分子、例えば、アンチセンス分子、リボザイム、ＲＮＡｉ二本鎖分子、三重らせん分子、ＬＩＮＧＯ−１、または転写調節領域をコードする核酸にハイブリダイズする、およびＬＩＮＧＯ−１のｍＲＮＡ発現を遮断もしくは低減するマイクロＲＮＡ分子が挙げられる。
「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補性の、例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補性、またはｍＲＮＡ配列に相補性のヌクレオチド配列を含むことができる。アンチセンス核酸は、全ＬＩＮＧ−１コード鎖に対して、またはその一部のみに相補性であり得る。別の実施形態において、アンチセンス核酸分子は、ヌクレオチド配列をコードするＬＩＮＧＯ−１のコード鎖の「非コード領域」（例えば、５′および３′未翻訳領域）に対してアンチセンスである。アンチセンス剤は、例えば、約８個〜約８０個の核酸塩基（すなわち、約８個〜約８０個のヌクレオチド）、例えば、約８個〜約５０個の核酸塩基、または約１２個〜約３０個の核酸塩基を含むことができる。アンチセンス化合物は、リボザイム、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、および標的核酸にハイブリダイズし、その発現を調節する他の短い触媒ＲＮＡもしくは触媒オリゴヌクレオチドを含む。アンチセンス化合物は、標的遺伝子中の配列に相補性である少なくとも一続きの８個の連続した核酸塩基を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズ可能であるために、その標的核酸配列と１００％相補性である必要はない。標的へのオリゴヌクレオチドの結合が、標的分子の正常な機能を妨害して有用性の喪失を引き起こすとき、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズ可能であり、特異的結合が望まれる条件下で、すなわち、インビボアッセイもしくは治療的処置の場合、生理学的条件下で、またはインビトロアッセイの場合には、アッセイが実施される条件下で、非標的へのオリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性がある。例示的なアンチセンス化合物としては、標的核酸、例えば、ＬＩＮＧＯ−１をコードするｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズする、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列が挙げられる。相補性領域は、約８個〜約８０個の核酸塩基に対して拡張することができる。化合物は、当技術分野において知られている１つ以上の修飾核酸塩基を含むことができる。核酸薬剤の説明は入手可能である。例えば、米国特許第４，９８７，０７１号、同第５，１１６，７４２号、および同第５，０９３，２４６号、Ｗｏｏｌｆ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）；８９：７３０５−９、Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ ａｎｄ Ｇｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３４：５８５−５９、Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４、Ｈｅｌｅｎｅ（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６、およびＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照されたい。
ｓｉＲＮＡは、任意に突出を含む、小二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。例えば、ｓｉＲＮＡの重複領域は、約１８〜２５ヌクレオチド長、例えば、約１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチド長である。典型的に、ｓｉＲＮＡ配列は、標的ｍＲＮＡに正確に相補性である。特にｄｓＲＮＡおよびｓｉＲＮＡを使用して、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）における遺伝子発現を鎮めることができる。ｓｉＲＮＡは、２９塩基対の幹および２ヌクレオチド３′突出を有する、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）も含む。例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：６４９９−６５０３、Ｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：１４４２８−１４４３３、Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ．４１１：４９４−８、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：９９４２−９９４７、Ｓｉｏｌａｓ ｅｔ ａｌ．（２００５），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（２）：２２７−３１、第２００４００８６８８４号、米国特許出願公開第２００３０１６６２８２号、同第２００３０１４３２０４号、同第２００４００３８２７８号、および同第２００３０２２４４３２号を参照されたい。
さらに別の実施形態において、核酸分子は、リボザイムである。ＬＩＮＧＯ−１コード核酸に対して特異性を有するリボザイムは、ＬＩＮＧＯ−１ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列に相補性の１つ以上の配列と、ｍＲＮＡ切断に関与する周知の触媒配列を有する配列と、を含むことができる（米国特許第５，０９３，２４６号、またはＨａｓｅｌｈｏｆｆ ａｎｄ Ｇｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１、Ｃｅｃｈらの米国特許第４，９８７，０７１号、およびＣｅｃｈらの米国特許第５，１１６，７４２号、Ｂａｒｔｅｌ，Ｄ．ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１１−１４１８を参照されたい）。
一実施形態において、核酸分子は、マイクロＲＮＡ分子である。ＬＩＮＧＯ−１コード核酸に対して特異性を有するマイクロＲＮＡは、翻訳抑制または標的分解を介して遺伝子サイレンシングをもたらし得る、ＬＩＮＧＯ−１ｍＲＮＡのヌクレオチド配列に相補性の１つ以上の配列を含むことができる（Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ（２００９）Ｃｅｌｌ １３６（２）：２１５−３３、Ｋｕｓｅｎｄａ Ｂ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｍｅｄ Ｐａｐ Ｍｅｄ Ｆａｃ Ｕｎｉｖ Ｐａｌａｃｋｙ Ｏｌｏｍｏｕｃ Ｃｚｅｃｈ Ｒｅｐｕｂ １５０（２）：２０５−１５を参照）。
ＬＩＮＧＯ−１遺伝子発現は、ＬＩＮＧＯ−１の調節領域（例えば、ＬＩＮＧＯ−１プロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補性のヌクレオチド配列を標的として標的細胞内のＬＩＮＧＯ−１遺伝子の転写を防止する三重らせん構造を形成することによって阻害され得る。一般的に、Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４、Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６、およびＭａｈｅｒ，Ｌ．Ｊ．（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照されたい。三重らせん形成のために標的とすることができる潜在的な配列は、いわゆる「スイッチバック」核酸分子を創出することによって増加させることができる。
ＬＩＮＧＯ−１核酸分子は、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション、または可溶性を改善するために、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で修飾することができる。修飾を加えた合成オリゴヌクレオチドの非限定例については、Ｔｏｕｌｍe（２００１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９：１７、およびＦａｒｉａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９：４０−４４、Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４：５−２３）を参照されたい。
免疫調節剤
いくつかの免疫調節薬は、現在、患者における多発性硬化症の経過を修正するために使用される。そのような薬剤としては、限定されないが、ＩＦＮ−β１分子、グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマー、例えば、グラチラマー；α−４インテグリンに対する抗体またはその断片、例えば、ナタリズマブ；アントラセンジオン分子、例えば、ミトキサントロン；フィンゴリモド、例えば、ＦＴＹ７２０；フマル酸ジメチル、例えば、経口フマル酸ジメチル；Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体、例えば、ダクリズマブ；ＣＤ５２に対する抗体、例えば、アレムツズマブ；ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、テリフルノミド（例えば、ＣＤ２０に対する抗体、例えば、オクレリズマブ；およびコルチコステロイドが挙げられる。本明細書に開示される修復剤は、これらの薬剤のうちのいずれかと組み合わせて使用することができる。
例示的な免疫調節剤は、次のようにより詳細に記載されている。
ＩＦＮβ剤（βインターフェロン）
ＭＳに対する１つの周知の治療法は、インターフェロンβを用いた治療を含む。インターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルス、細菌、寄生虫、および腫瘍細胞等の外来物質による惹起に応答して、ほとんどの動物の免疫系の細胞によって産生される天然のタンパク質である。インターフェロンは、サイトカインとして知られる糖タンパク質の大きなクラスに属する。インターフェロンβは、１６５個のアミノ酸を有する。インターフェロンαおよびβは、Ｔ細胞およびＢ細胞、マクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞、骨芽細胞およびその他を含む、多くの細胞型によって産生され、マクロファージおよびＮＫ細胞の両方を刺激する。インターフェロンγは、免疫および炎症応答の調節に関与する。これは、活性化Ｔ細胞およびＴｈ１細胞によって産生される。
いくつかの異なる種類のインターフェロンは、現在、ヒトでの使用が承認されている。インターフェロンα（インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、およびインターフェロンアルファコン−１形態を含む）は、Ｃ型肝炎の治療として米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された。現在、ＦＤＡが承認した種類のインターフェロンβが２つある。インターフェロンβ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））は、ヒトにおいて天然に見出されたインターフェロンβと同じであり、インターフェロンβ１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標））は、インターフェロンβ１ａとはある点で異なり、それがシステイン残基の代わりにセリン残基を１７位に含有することを含む。インターフェロンβの他の用途は、ＡＩＤＳ、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、急性Ｃ型肝炎（非Ａ、非Ｂ）、カポジ肉腫、悪性黒色腫、有毛細胞白血病、および転移性腎細胞癌の治療を含んでいた。
ＩＦＮβ剤は、全身的を含む（例えば、経口、非経口、皮下、静脈内、直腸内、筋肉内、硝子体内、腹腔内、鼻腔内、経皮、または吸入もしくは腔内導入によって）、当該技術分野において周知の任意の方法によって対象に投与することができる。典型的に、ＩＦＮβ剤は、皮下または筋肉内に投与される。
ＩＦＮβ剤は、本明細書に記載される方法を使用して、「応答者」であると決定された対象を治療するために使用することができる。一実施形態において、ＩＦＮβ剤は、単剤療法として使用されるが（すなわち、単剤「疾患修飾療法」として）、治療計画は、抗うつ剤、鎮痛剤、抗振戦剤等の「症状管理療法」の使用をさらに含むことができる。一実施形態において、ＩＦＮβ剤は、ＩＦＮβ−１Ａ剤（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｒｅｂｉｆ（登録商標））である。別の実施形態において、ＩＮＦβ剤は、ＩＮＦβ−１Ｂ剤（例えば、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）、Ｅｘｔａｖｉａ（登録商標））である。
インターフェロンβ−１ａであるＡｖｏｎｅｘ（登録商標）は、身体障害の蓄積を緩徐化し、臨床的増悪の頻度を減少させるために、本明細書に記載される方法を使用して、応答者であると決定された再発型のＭＳを有する患者の治療に適応される。Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（インターフェロンβ−１ａ）は、約２２，５００ダルトンの推定分子量を有する１６６個のアミノ酸糖タンパク質である。これは、ヒトインターフェロンβ遺伝子が導入された遺伝子操作されたチャイニーズハムスター卵巣細胞を使用し、組換えＤＮＡ技術によって産生される。Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）のアミノ酸配列は、天然のヒトインターフェロンβのものと同一である。Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（インターフェロンβ−１ａ）の推奨投与量は、３０ｍｃｇであり、週１回筋肉内に注射される。Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）は、３０ｍｃｇの凍結乾燥粉末のバイアルとして、または３０ｍｃｇの充填済みシリンジとして市販されている。
インターフェロンβ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））は、ヒトにおいて天然に見出されるインターフェロンβと同一である（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）すなわち、インターフェロンβ１ａ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ受託番号Ｐ０１５７４およびｇｉ：５０５９３０１６）。インターフェロンβの配列は、次のとおりである：
ＭＴＮＫＣＬＬＱＩＡＬＬＬＣＦＳＴＴＡＬＳＭＳＹＮＬＬＧＦＬＱＲＳＳＮＦＱＣＱＫＬＬＷＱＬＮＧＲＬＥＹＣＬＫＤＲＭ ＮＦＤＩＰＥＥＩＫＱＬＱＱＦＱＫＥＤＡＡＬＴＩＹＥＭＬＱＮＩＦＡＩＦＲＱＤＳＳＳＴＧＷＮＥＴＩＶＥＮＬＬＡＮＶＹＨＱＩＮ ＨＬＫＴＶＬＥＥＫＬＥＫＥＤＦＴＲＧＫＬＭＳＳＬＨＬＫＲＹＹＧＲＩＬＨＹＬＫＡＫＥＹＳＨＣＡＷＴＩＶＲＶＥＩＬＲＮＦ ＹＦＩＮＲＬＴＧＹＬＲＮ（配列番号２７５）。
Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）を作製するための方法は、当該分野において周知である。
本明細書に記載される方法を使用して特定された応答者の治療は、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）の生物活性と実質的に同様のものを有する組成物（例えば、ＩＦＮβ１ａ分子）が、同様の方法で投与されたとき、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）での治療と同様の治療の成功を可能にすることをさらに企図する。そのような他の組成物としては、例えば、実質的に同様の生物活性を有する、他のインターフェロンおよび断片、その類似体、相同体、誘導体、および天然の変異体が挙げられる。一実施形態において、ＩＮＦβ剤は、１つ以上の薬物動態学的特性を増加させるように修飾される。例えば、ＩＮＦβ剤は、ペグ化部分を含むように、修飾型のインターフェロン１ａであり得る。ペグ化形態のインターフェロンβ１ａは、例えば、Ｂａｋｅｒ，Ｄ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １７（１）：１７９−８８、Ａｒｄｕｉｎｉ，ＲＭ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ ３４（２）：２２９−４２、Ｐｅｐｉｎｓｋｙ，ＲＢ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２９７（３）：１０５９−６６、Ｂａｋｅｒ，Ｄ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ ３０（１０）：７７７−８５に記載されている（それら全ては、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれ、ＰＥＧ部分、例えば、２０ｋＤａ ｍＰＥＧ−Ｏ−２−メチルプロピオンアルデヒド部分を含むように、そのＮ末端αアミノ酸において修飾されたヒトインターフェロンβ１ａについて説明する）。ペグ化型のＩＦＮβ１ａは、例えば、注射可能な投与経路によって（例えば、皮下）投与され得る。
Ｒｅｂｉｆ（登録商標）もインターフェロンβ−１ａ剤であるが、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）、およびＥｘｔａｖｉａ（登録商標）は、インターフェロンβ−１ｂ剤である。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）およびＢｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）の両方は、皮下注射による投与のために配合される。
投与するＩＦＮβ剤の投与量は、当業者によって決定されることができ、使用される特定のインターフェロンβ剤に基づいて投与する、臨床的に許容される量を含むことができる。例えば、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）は、典型的に、筋肉内注射によって週１回３０マイクログラムで投与される。インターフェロンβ１ａの他の形態、特にＲＥＢＩＦ（登録商標）は、例えば、皮下注射によって週３回２２マイクログラム、または週１回４４マイクログラムで投与される。インターフェロンβ１Ａは、例えば、１０〜５０μｇの量で筋肉内に投与することができる。例えば、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）は、５日〜１０日ごと、例えば、週１回投与することができるが、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）は、週３回投与することができる。
抗ＶＬＡ４抗体（例えば、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））
抗ＶＬＡ４抗体（例えば、ナタリズマブ）は、血液から中枢神経系への白血球の移行を阻害する。これらの抗体は、活性化Ｔ細胞および他の単核白血球の表面上のＶＬＡ−４（α４β１とも呼ばれる）に結合する。これらは、Ｔ細胞および内皮細胞間の接着を破壊することができ、したがって、内皮を通過し、実質への単核白血球の移行を防止することができる。その結果、前炎症性サイトカインのレベルを低減することもできる。ナタリズマブは、再発寛解型多発性硬化症および再発二次進行型多発性硬化症を有する患者における脳病変および臨床的再発の数、ならびに障害の蓄積を減少させることができる。
ナタリズマブおよび関連するＶＬＡ−４結合抗体は、例えば、米国特許第５，８４０，２９９号に記載されている。モノクローナル抗体２１．６およびＨＰ１／２は、ＶＬＡ−４に結合する例示的なマウスモノクローナル抗体である。ナタリズマブは、ヒト化バージョンのマウスモノクローナル抗体２１．６である（例えば、米国特許第５，８４０，２９９号を参照）。ヒト化バージョンのＨＰ１／２も記載されている（例えば、米国特許第６，６０２，５０３号を参照）。いくつかの追加のＶＬＡ−４結合モノクローナル抗体、例えば、ＨＰ２／１、ＨＰ２／４、Ｌ２５、およびＰ４Ｃ２は、例えば、米国特許第６，６０２，５０３号、Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ ｅｔ ａｌ，（１９８６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６：１３４３−１３４９、Ｈｅｍｌｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９８７）Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２：１１４７８−１１４８５、Ｉｓｓｅｋｕｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：１０９（ＴＡ−２ ｍａｂ）、Ｐｕｌｉｄｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１０２４１−１０２４５、および米国特許第５，８８８，５０７号）に記載されている。前述の刊行物の内容（抗体組成物、投与量、投与および産生方法を含む）は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
フマル酸ジメチル（Ｔｅｃｆｉｄｅｒａ（登録商標））
フマル酸ジメチル、ＤＭＦ、（Ｔｅｃｆｉｄｅｒａ（登録商標））は、フマル酸エステルである。ＤＭＦは、血液脳障壁を通る白血球の通過を減少させ、抗酸化経路の活性化によって、具体的にはＮｒｆ−２経路の活性化によって、神経保護効果を発揮すると考えられる（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｉｎｔ ＭＳ Ｊｏｕｒｎａｌ １５：１２−１８）。研究は、ＢＧ−１２（登録商標）が、ＣＮＳに対する炎症性細胞の活性および影響を低減し、ＣＮＳ細胞内で直接細胞保護応答を誘発する可能性を有することも示唆している。これらの効果は、ＭＳ病態生理学において役割を果たす毒性、炎症、および酸化ストレスを軽減するＣＮＳ細胞の能力を増強することができる。
酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））
Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）（酢酸グラチラマー）は、合成ポリペプチドの酢酸塩、具体的に、４つの天然に存在するアミノ酸：Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アラニン、Ｌ−チロシン、およびＬ−リジンからなる（Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３１７：４０８−４１４）。Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）は、ミエリン塩基性タンパク質と構造類似性を示し、Ｔヘルパー細胞１型応答をＴヘルパー細胞２型応答にシフトすることによって、免疫調節因子として機能すると考えられる（Ｄｕｄａ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０５：９６７−９７６、Ｎｉｃｈｏｌａｓ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：２５５−２７４）。
ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）、アントラセンジオン分子）
ミトキサントロンは、アントラセンジオン分子（１，４−ジヒドロキシ−５，８−ビス［２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）エチルアミノ］−アントラセン−９，１０−ジオン）、およびＤＮＡ合成および細胞修復を妨害するＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤である。これは、癌およびＭＳを治療するために使用される。ミトキサントロンを使用して、二次進行型ＭＳ、進行型再発性ＭＳ、および進行した再発寛解型ＭＳを含む、いくつかの形態の進行したＭＳを治療する。例えば、ミトキサントロンは、二次進行型ＭＳの進行を減速し、再発寛解型ＭＳと進行性再発性ＭＳとの間の時間を延長することにおいて効果的である（Ｆｏｘ Ｅ（２００６）Ｃｌｉｎ Ｔｈｅｒ ２８（４）：４６１−７４）。
フィンゴリモド（Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標）、スフィンゴシン１−リン酸受容体モジュレーター）
フィンゴリモドは、ＭＳを治療するために承認された免疫調節薬である。これは、再発寛解型多発性硬化症における再発率を半分以上低減したが、重篤な副作用を有する場合がある。フィンゴリモドは、リンパ節のリンパ球を隔離し、これが、ＭＳにおける自己免疫応答のために、それらが中枢神経系に移動することを防ぐ、スフィンゴシン１−リン酸受容体モジュレーターである。
Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体（ダクリズマブ、Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標））
Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体、例えば、ダクリズマブは、本明細書に開示される方法および組成物において使用することができる。ダクリズマブは、Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する治療的ヒト化モノクローナル抗体である。ダクリズマブは、インターフェロンで制御されていない多発性硬化症を有する患者において、病変を低減すること、および臨床スコアを改善することにおいて効果的であった（Ｒｏｓｅ ＪＷｅｔ ａｌ．（２００７）．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６９（８）：７８５−７８９）。
ＣＤ５２に対する抗体、例えば、アレムツズマブ
ＣＤ５２に対する抗体、例えば、アレムツズマブ（現在、Ｌｅｍｔｒａｄａ（登録商標）としてさらに開発中）は、幹細胞上ではないが、成熟リンパ球の表面上に存在するタンパク質である、ＣＤ５２に結合する。第ＩＩＩ相研究は、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）を有する患者の治療において、アレムツズマブをＲｅｂｉｆ（登録商標）（高用量皮下インターフェロンβ−１ａ）と比較して肯定的な結果を報告した。アレムツズマブは、欧州において承認されている。
ＣＤ２０に対する抗体、例えば、オクレリズマブ
ＣＤ２０に対する抗体、例えば、オクレリズマブ、リツキシマブ、オファツムマブは、成熟Ｂリンパ球を標的とする。再発寛解型ＭＳにおけるリツキシマブおよびオクレリズマブの第２相臨床研究は、プラセボと比較して、脳病変によって測定された（例えば、ＭＲＩ走査によって測定された）疾患活性および再発率において統計的に有意な低減を示した。
ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、テリフルノミド
ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、テリフルノミドは、ピリミジン合成を阻害する。テリフルノミド（またはＡ７７ １７２６としても知られる）は、レフルノミドの活性代謝産物である。テリフルノミドは、ＭＳの疾患プロセスを駆動すると考えられている、活性化Ｔ細胞を含む、急速に分裂する細胞を阻害する。テリフルノミドは、ＭＳを治療するための薬として臨床試験で調査した。（Ｖｏｌｌｍｅｒ ＥＭＳ Ｎｅｗｓ（Ｍａｙ ２８、２００９））。
ステロイド
ステロイド、例えば、コルチコステロイド、およびＡＣＴＨ剤を使用して、再発寛解型ＭＳまたは二次進行型ＭＳにおける急性再発を治療することができる。そのような薬剤としては、限定されないが、Ｄｅｐｏ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）、およびＡｃｔｈａｒ（登録商標）が挙げられる。
前述の免疫調節剤のうちの１つ以上は、以下でより詳細に説明され、ＩＦＮ−ｂおよび抗ＬＩＮＧＯ−１抗体療法の組み合わせによって例示されるように、修復剤と組み合わせて使用することができる。
治療方法
ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニスト等の修復剤は、軸索再生、および通常はＣＮＳニューロン内で起こる樹状分岐のＮｇＲ１媒介性阻害を軽減することができる。これは、軸索修復または神経突起発芽が、ＣＮＳ損傷後の脳または脊髄で必要とされる状況で有益である。部分的または完全な破砕または断絶を含む脊髄損傷は、軸索修復が必要であるが、通常はＮｇＲ１経路の操作により阻害される状況を例示する。軸索伸長および／または神経突起が脳内で発芽することが有益であり得る疾患または障害の例としては、脳卒中、多発性硬化症（ＭＳ）、および多発性硬化症、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）、脳脊髄炎（ＥＰＬ）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、橋中心髄鞘崩壊症（ＣＰＭ）、脊髄炎光学系（ＮＭＯ）、副腎白質ジストロフィー、、アレキサンダー病、ペリツェウスメルツバッハー病（ＰＭＺ）、脳室周囲白質軟化症（ＰＶＬ）、球様細胞白質萎縮症（クラッベ病）およびウォーラー変性、視神経炎（例えば、急性視神経炎）、横断性脊髄炎、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、脊髄損傷、外傷性脳損傷、放射線照射後の傷害、化学療法の神経学的合併症、脳卒中、神経障害、急性虚血性視神経神経障害、ビタミンＢ１２欠乏症、孤立したビタミンＥ欠乏症候群、ＡＲ、バッセン−コンツヴァイク症候群、マルキアファーヴァ−ビニャミ症候群、異染性白質萎縮症、三叉神経痛、ベル麻痺、脊髄損傷、外傷性緑内障、本態性振戦、浸透圧低ナトリウム血症、および神経細胞死に関連する全ての神経疾患等の他の神経変性疾患または障害が挙げられるが、これらに限定されない。
ＬＩＮＧＯ−１は、オリゴデンドロサイト内で発現され、稀突起神経膠細胞生物学に寄与する。ＬＩＮＧＯ−１ポリヌクレオチドの可溶性誘導体（例えば、ＲＮＡｉ）、ならびにＬＩＮＧＯ−１に特異的に結合するある特定の抗体は、オリゴデンドロサイト内のＬＩＮＧＯ−１機能に対するアンタゴニストとして作用することができ、オリゴデンドロサイトの増殖、分化、および生存を促進し、ニューロンの髄鞘形成をインビトロおよびインビボで促進する。これは、脱髄および髄鞘形成不全を伴う疾患または状態を治療または予防するために有益であり得る。オリゴデンドロサイトの増殖、分化、および生存、ならびに／または髄鞘形成または髄鞘再生が有益である疾患または障害の例としては、多発性硬化症（ＭＳ）、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）、脳脊髄炎（ＥＰＬ）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、橋中心髄鞘崩壊症（ＣＰＭ）、副腎白質ジストロフィー、脊髄炎光学系（ＮＭＯ）、アレキサンダー病、ペリツェウスメルツバッハー病（ＰＭＺ）、球様細胞白質萎縮症（クラッベ病）、ウォーラー変性、視神経炎（例えば、急性視神経炎）、脳室周囲白質軟化症（ＰＶＬ）、横断性脊髄炎、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、脊髄損傷、外傷性脳損傷、放射線照射後の傷害、化学療法の神経学的合併症、脳卒中、急性虚血性視神経症、ビタミンＢ１２欠乏症、孤立したビタミンＥ欠乏症候群、ＡＲ、バッセン−コンツヴァイク症候群、マルキアファーヴァ−ビニャミ症候群、異染性白質萎縮症、三叉神経痛、外傷性緑内障、浸透圧低ナトリウム血症、およびベル麻痺が挙げられる。
したがって、ＣＮＳ内のニューロン増殖の阻害に関連する脊髄損傷、疾患または障害、オリゴデンドロサイトの増殖または分化の阻害に関連する疾患、または障害、およびそのような損傷または疾患に罹患しているか、またはそのような疾患にかかる素因のある対象におけるＣＮＳニューロンの脱髄または髄鞘形成不全を伴う疾患を治療するための方法が開示される。この方法は、有効量の修復剤、例えば、ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストを、単独で、または免疫調節剤と組み合わせて対象に投与することを含む。
一実施形態において、修復剤は、単独で、または組み合わせて、視神経の炎症状態（例えば、視神経炎、例えば、急性視神経炎（ＡＯＮ））のうちの１つ以上の症状を低減する。ＡＯＮは、多くの場合、多発性硬化症で起こる視神経の炎症性疾患である。ＡＯＮは、視神経に対する炎症性損傷によって引き起こされ、視神経および軸索を被覆する髄鞘への浮腫、炎症、および損傷に起因する視力低下を提示する。ＡＯＮの結果として、網膜神経線維層および網膜神経節細胞層の著しい喪失がある。ＡＯＮの現在の治療は、浮腫の回復を固定する高用量のコルチコステロイドでの静脈内治療に限定されているが、中枢神経系（ＣＮＳ）髄鞘再生を促進しないか、またはＣＮＳ炎症性脱髄から神経軸索保護を提供しない。したがって、本明細書に開示される修復剤は、視神経のそのような炎症を治療するために、単独で、または組み合わせて使用することができる。
「治療する」、「治療」、およびこの語の他の形態は、疾患の進行を妨げるため、寛解を誘導するため、対象の予想される生存期間を延長するため、および／または医学的介入（例えば、入院）の必要性を低減するために、単独で、または１つ以上の症状管理剤と組み合わせて、併用療法を対象、例えば、ＭＳ患者に投与することを指す。そのような対象において、治療は、しびれ、刺痛、筋力低下等の１つ以上の症状を阻害または低減すること、再発率または重症度を低減すること、硬化性病変の大きさまたは数を低減すること、新たな病変の発生を阻害または遅延させること、生存を延長するか、または無増悪生存期間および／もしくは改善された生活の質を延長することを含み得るが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、特に断りのない限り、「防止する」、「防止すること」、および「防止」という用語は、対象が再発を罹患し始める前に起こる作用、および／または疾患の重症度を阻害もしくは低減する作用を企図する。
本明細書で使用されるとき、特に指定のない限り、「管理する」、「管理すること」、および「管理」という用語は、既に疾患を患っている対象における疾患症状の進行を防止すること、および／または疾患を患っている対象が寛解状態に留まる期間を延長することを包含する。この用語は、疾患の閾値、発症、および／または継続期間を調節すること、または患者が疾患に応答する方法を変えることを包含する。
本明細書で使用されるとき、特に指定のない限り、化合物の「治療上有効な量」は、疾患の治療もしくは管理において治療上の利益を提供するか、または疾患に関連する１つ以上の症状を遅延もしくは最小化するのに十分な量である。治療上有効な量の化合物は、疾患の治療または管理において治療上の利益を提供する、単独または他の治療薬と組み合わせた治療薬の量を意味する。「治療上有効な量」という用語は、治療法全体を改善するか、疾患の症状もしくは原因を低減もしくは回避するか、または別の治療剤の治療効力を強化する量を包含することができる。
本明細書で使用されるとき、特に指定のない限り、「予防上有効な量」の化合物は、疾患の再発もしくは疾患に関連する１つ以上の症状を予防するのに十分な量、またはその再発を防止するのに十分な量である。予防上有効な量の化合物は、疾患再発の予防において予防上の利益を提供する化合物の、単独または他の治療剤と組み合わせての量を意味する。「予防上有効な量」という用語は、全体的な予防を改善する、または別の予防剤の予防効力を強化する量を包含することができる。
本明細書で使用されるとき、「患者」または「対象」という用語は、典型的に、ヒト（すなわち、任意の年齢群の男性もしくは女性、例えば、小児患者（例えば、幼児、子供、青年）または成人患者（例えば、若年成人、中年成人、もしくは老年成人）または霊長類等の他の哺乳類（例えば、カニクイザル、アカゲザル）、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、および／またはイヌ等の商業的に関連する哺乳類、治療、観察、および／または実験の対象となるか、もしくは対象であったものを指す。この用語が化合物または薬物の投与と組み合わせて使用されると、患者は、治療、観察、および／またはその化合物もしくは薬物の投与の対象である。
ＭＳの治療
多発性硬化症（ＭＳ）は、軸索および髄鞘の炎症および喪失を特徴とする中枢神経系疾患である。
ＭＳを有する対象は、Ｐｏｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１３：２２７によって定義されるように、臨床的に確実なＭＳの診断を確立する臨床基準によって特定することができる。つまり簡潔には、臨床的に明確なＭＳを有する個体は、２回の発作、ならびに２つの病変の臨床的証拠、または１つの病変の臨床的証拠と別の別個の病変の臨床関連領域的証拠のいずれかを有していた。明確なＭＳは、２回の発作の証拠および脳脊髄液中のＩｇＧのオリゴクローナルバンドによって、または１回の発作、２つの病変の臨床的証拠および脳脊髄液中のＩｇＧのオリゴクローナルバンドの組み合わせによって診断することもできる。マクドナルド基準を使用して、ＭＳを診断するために使用することもできる（ＭｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐａｎｅｌ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ ５０：１２１−１２７）、Ｐｏｌｍａｎ，ＣＨ ｅｔ ａｌ．（２００５ Ｄｅｃ）．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：２００５ ｒｅｖｉｓｉｏｎｓ ｔｏ ｔｈｅ″ＭｃＤｏｎａｌｄ Ｃｒｉｔｅｒｉａ″Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ５８（６）：８４０−６、Ｐｏｌｍａｎ，Ｃ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．６９（２）：２９２−３０２）。マクドナルド基準は、複数の臨床発作の非存在下でＭＳの診断に使用される、経時的なＣＮＳ障害のＭＲＩ証拠の使用を含む。マクドナルド基準へのさらなる更新（Ｐｏｌｍａｎら、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２０１１）は、特徴的なＭＲＩ病変の発見に基づいて、最初のＣＮＳ脱髄エピソード時のＭＳの診断を可能にする。多発性硬化症の有効な治療は、いくつかの異なる方法で評価することができる。以下のパラメータは、治療の有効性を評価するために使用することができる。２つの典型的な基準としては、ＥＤＳＳ（拡張障害状態尺度）、およびＭＲＩ（磁気共鳴撮像）上の増悪の外観が挙げられる。
増悪は、ＭＳに帰属し、適切で新たな神経学的異常を伴う新たな症状の出現として定義される。加えて、増悪は少なくとも２４時間持続し、少なくとも３０日間、安定または改善が先行しなければならない。つまり簡潔には、患者には、臨床医によって標準的な神経学的検査がなされる。増悪は、例えば、スクリプス神経評価尺度（Ｓｉｐｅ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ３４：１３６８）のような神経学的評価尺度の変化、ＥＤＳＳに従い、または患者が報告した転帰（例えば、ＭＳＷＳ−１２）によって、軽度、中度、または重度である。無増悪患者の年間増悪率および割合が決定される。
これらの測定のうちのいずれかについて、治療群とプラセボ群との間で、無増悪または無再発患者の割合または比率に統計的に有意な差がある場合、治療法は、臨床的測定を使用して有効であるとみなすことができる。加えて、第１の増悪までの時間、ならびに憎悪期間および重症度を測定してもよい。この点において、治療法としての有効性の測定は、対照群と比較して、治療群の最初の増悪までの時間または期間および重症度における統計的に有意な差である。１年、１８ヶ月、２０ヶ月、または２４ヶ月を超える無増悪または無再発期間は、特に注目に値する。臨床測定は、１年および２年間隔の再発率と、３ヶ月または６ヶ月間持続するＥＤＳＳの１．０単位のベースラインからの悪化までの時間を含む、ＥＤＳＳの変化とを含む。カプラン−マイヤー曲線で、障害の持続的進行の遅延は、有効性を示す。他の基準は、ＭＲＩ上のＴ２画像の面積および体積の変化、ならびにガドリニウム強調画像によって決定される病変の数および体積を含む。
ＭＲＩを使用して、ガドリニウム−ＤＴＰＡ−強調撮像（ＭｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：１４，１９９４）を用いて活性病変を測定するか、Ｔ２加重技法を用いて病変の位置および程度を測定することができる。つまり簡潔には、ベースラインＭＲＩが得られる。その後の各研究に同じ画像面および患者位置を使用する。位置決めおよび撮像シーケンスは、病変検出を最大化し、病変の追跡を容易にするように選択することができる。同じ位置決めと撮像シーケンスは、その後の研究で使用することができる。ＭＳ病変の存在、位置、および程度は、放射線科医によって決定することができる。病変の領域は、輪郭を描き、スライスごとに集計して総病変領域にすることができる。新たな病変の証拠、活性病変の出現率、および病変面積の変化率（％）の３つの分析を行うことができる（Ｐａｔｙｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ４３：６６５）。治療による改善は、ベースラインと比較した個別の患者における、またはプラセボ群に対する治療群における統計学的に有意な改善によって確立することができる。
本明細書に記載される方法で治療することができる、または症状管理療法を使用して管理することができる、多発性硬化症に関連する例示的な症状としては、視神経炎、視力低下、複視、眼振、眼の測定障害、核間眼筋麻痺、動きと音閃光、求心性瞳孔欠陥、不全麻痺、単不全麻痺、対麻痺、片麻痺、四肢不全麻痺、麻痺、対麻痺、片麻痺、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ）、四肢麻痺（ｑｕａｄｒａｐｌｅｇｉａ）、痙縮、構音障害、筋萎縮、痙攣、引きつり、低張、クローヌス、ミオクローヌス、ミオキミア、下肢静止不能症候群、下垂足、機能不全の反射神経、感覚異常、知覚麻痺、神経痛、神経障害性および神経因性疼痛、レルミット、固有受容性機能障害、三叉神経痛、運動失調、企図振戦、測定障害、前庭運動失調、めまい、言語失行症、ジストニア、拮抗運動反復不全、頻尿、膀胱痙縮、弛緩性膀胱、利尿筋−括約筋協調不全、勃起不全、無オルガスム症、不感症、便秘、糞便切迫、便失禁、うつ病、認知機能障害、認知症、気分のむら、情緒不安定、多幸感、双極性症候群、不安症、失語症、発語障害、疲労、ウートホフの症状、胃食道逆流、および睡眠障害が挙げられる。
ＭＳの各例は、提示およびそれに続く経過のいくつかのパターンのうちのいずれかを示す。最も一般的に、ＭＳは最初にそれ自体が一連の発作として現れ、症状が不可解に軽減するにつれて完全または部分的寛解が続き、安定期間の後、後に元に戻る。これは、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）と呼ばれている。一次進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）は、明確な寛解のない緩やかな臨床的低下を特徴とするが、一時的な定常または症状のわずかな軽減があり得る。二次進行性ＭＳ（ＳＰＭＳ）は、再発寛解の経過で始まり、再発とは無関係に進行性経過が続く。まれに、患者は、疾患が断続的な急性発作によって中断された進行性経路をとる、進行性再発（ＰＲＭＳ）経過を有する場合がある。ＰＰＭＳ、ＳＰＭＳ、およびＰＲＭＳは、一緒に集約されて慢性進行性ＭＳと呼ばれることがある。
少数の患者は、重大な障害または疾患発症直後の死亡さえもたらす、急速かつ絶え間ない減退として定義される悪性ＭＳを経験する。この減退は、治療計画において早期に治療に応答する患者の可能性を決定すること、および患者が応答する可能性が最も高い薬剤に切り替えることによって、停止または減速され得る。
併用療法
本発明は、脱髄障害、例えば、ＭＳの治療に対する、免疫調節剤、例えば、ＩＦＮ−β剤、例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、および修復剤、例えば、抗ＬＩＮＧＯ−抗体の複合投与を開示する。
薬剤、例えば、それらの薬剤を含む薬学的組成物は、１つ以上の他の追加療法または治療薬と同時に、その前、またはその後に投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量および／または時間スケジュールで投与することができる。この組み合わせで利用される追加の治療薬は、単一組成物で一緒に投与され得るか、または異なる組成物で別々に投与され得ることがさらに理解されるであろう。計画に用いる特定の組合せは、薬学的組成物と、追加の治療上活性な薬剤との適合性、および／または達成される所望の治療効果を考慮する。一般に、組み合わせて利用される追加の治療薬は、それらが個別に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが期待される。いくつかの実施形態において、組み合わせて利用されるレベルは、個別に利用されるレベルよりも低くなる。
疾患を有する対象の修復剤での治療は、１つ以上の免疫調節剤と組み合わせることができる。例示的な免疫調節剤は、本明細書に記載され、限定されないが、ＩＦＮ−β１分子、グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマー、例えば、グラチラマー；α−４インテグリンに対する抗体またはその断片、例えば、ナタリズマブ；アントラセンジオン分子、例えば、ミトキサントロン；フィンゴリモド、例えば、ＦＴＹ７２０；フマル酸ジメチル、例えば、経口フマル酸ジメチル；Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体、例えば、ダクリズマブ；ＣＤ５２に対する抗体、例えば、アレムツズマブ；ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、テリフルノミド、コルチコステロイド、および抗ＣＤ２０抗体、例えば、オクレリズマブが挙げられる。
一実施形態において、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）および抗ＬＩＮＧＯ−１抗体療法の組み合わせが投与される。ある特定の実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体は、週１回のＡｖｏｎｅｘ（登録商標）の筋肉内（ＩＭ）注射に加えて、静脈内（ＩＶ）注入により約４週間ごと（±約５日間）に１回投与することができる。抗ＬＩＮＧＯ−１抗体治療用量は、週１回のＡｖｏｎｅｘ（登録商標）ＩＭ注射と同時に、３ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇのＩＶ注入を含むことができる。
一実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体の４週間ごとに１回の３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ注入が選択された。この計画は、脊髄リゾレシチンモデルにおけるラット血清ＥＣ５０（約０．１％の脳浸透に調整）に類似した平均血清濃度の平均をもたらすことが予想される。追加の投与計画、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇを投与することもできる。これら２つの投与計画は、それぞれラット血清ＥＣ９０（約０．１％の脳浸透に対して調整）よりも約１．２倍および３．７倍高い平均血清濃度の平均をもたらすことが予想される。
ある特定の実施形態において、免疫調節剤は、ＩＦＮ−β１分子であり、静脈内、皮下、または筋肉内に投与される。例えば、ＩＦＮ−β１分子は、
（ｉ）筋肉内注射により２０〜４５マイクログラム（例えば、３０マイクログラム）で、例えば、週１回、
（ｉｉ）皮下注射により２０〜３０マイクログラム（例えば、２２マイクログラム）で、例えば、週３回、または４０〜５０マイクログラム（例えば、４４マイクログラム）で、例えば、週３回、または
（ｉｉｉ）筋肉内に１０〜５０μｇの量で、例えば、週３回、または５〜１０日ごと、例えば、週１回、のうちの１つ以上で投与することができる。
一実施形態において、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）は、筋肉内注射により３０マイクログラムで週１回投与される。該当する場合、滴定の後、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）は、当該分野で周知の投与量および投与スケジュールに従って、ＩＭ注射により投与することができる。
一実施形態において、ＩＦＮ−β剤、例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）は、注射器具、例えば、自動注射器具またはペンにより投与される。
一実施形態において、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、５０ｍｇ／ｍＬ ＢＩＩＢ０３３（本明細書では、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＶＬを有する抗体分子とも称される）、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、１６０ｍＭのＬ−アルギニン塩酸塩（ｐＨ６．５）、および０．０３％（体積当たりの重量）ポリソルベート８０を含む、液体薬品として提供される。抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子は、生理食塩水希釈後のＩＶ注入により投与することができる。
一実施形態において、免疫調節剤は、ＩＭ注射のための無菌透明液として配合される、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）である。充填済みガラスシリンジ中各０．５ｍＬのＡｖｏｎｅｘは、３０ｍｃｇのインターフェロンβ−１ａを含む。他の成分は、酢酸ナトリウム三水和物、氷酢酸、塩酸アルギニン、およびポリソルベート２０を注射用水中にｐＨ約４．８で含む。免疫調節剤、例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）は、任意の好適な手段、例えば、ペンまたは他の器具により投与することができる。
症状管理
本明細書に記載される併用療法での対象の治療は、多くの場合、ＭＳを有する対象の症状管理に使用される以下の治療薬のうちの１つ以上と組み合わせることができる：Ｔｅｇｒｅｔｏｌ（登録商標）（カルバマゼピン）、Ｅｐｉｔｏｌ（登録商標）（カルバマゼピン）、Ａｔｒｅｔｏｌ（登録商標）（カルバマゼピン）、Ｃａｒｂａｔｒｏｌ（登録商標）（カルバマゼピン）、Ｎｅｕｒｏｎｔｉｎ（登録商標）（ガバペンチン）、Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標）（トピラメート）、Ｚｏｎｅｇｒａｎ（登録商標）（ゾニサミド）、Ｄｉｌａｎｔｉｎ（登録商標）（フェニトイン）、Ｎｏｒｐｒａｍｉｎ（登録商標）（デシプラミン）、Ｅｌａｖｉｌ（登録商標）（アミトリプチリン）、Ｔｏｆｒａｎｉｌ（登録商標）（イミプラミン）、Ｉｍａｖａｔｅ（登録商標）（イミプラミン）、Ｊａｎｉｍｉｎｅ（登録商標）（イミプラミン）、Ｓｉｎｅｑｕａｎ（登録商標）（ドキセピン）、Ａｄａｐｉｎ（登録商標）（ドキセピン）、Ｔｒｉａｄａｐｉｎ（登録商標）（ドキセピン）、Ｚｏｎａｌｏｎ（登録商標）（ドキセピン）、Ｖｉｖａｃｔｉｌ（登録商標）（プロトリプチリン）、Ｍａｒｉｎｏｌ（登録商標）（合成カンナビノイド）、Ｔｒｅｎｔａｌ（登録商標）（ペントキシフィリン）、Ｎｅｕｒｏｆｅｎ（登録商標）（イブプロフェン）、アスピリン、アセトアミノフェン、Ａｔａｒａｘ（登録商標）（ヒドロキシジン）、Ｐｒｏｚａｃ（登録商標）（フルオキセチン）、Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標）（セルトラリン）、Ｌｕｓｔｒａｌ（登録商標）（セルトラリン）、エフェクサーＸＲ（登録商標）（ベンラファキシン）、Ｃｅｌｅｘａ（登録商標）（シタロプラム）、パキシル（登録商標）、Ｓｅｒｏｘａｔ（登録商標）、Ｄｅｓｙｒｅｌ（登録商標）（トラゾドン）、Ｔｒｉａｌｏｄｉｎｅ（登録商標）（トラゾドン）、Ｐａｍｅｌｏｒ（登録商標）（ノルトリプチリン）、Ａｖｅｎｔｙｌ（登録商標）（イミプラミン）、Ｐｒｏｔｈｉａｄｅｎ（登録商標）（ドチエピン）、Ｇａｍａｎｉｌ（登録商標）（ロフェプラミン）、Ｐａｒｎａｔｅ（登録商標）（トラニルシプロミン）、Ｍａｎｅｒｉｘ（登録商標）（モクロベミド）、Ａｕｒｏｒｉｘ（登録商標）（モクロベミド）、ウェルブトリンＳＲ（登録商標）（ブプロピオン）、Ａｍｆｅｂｕｔａｍｏｎｅ（登録商標）（ブプロピオン）、Ｓｅｒｚｏｎｅ（登録商標）（ネファゾドン）、Ｒｅｍｅｒｏｎ（登録商標）（ミルタザピン）、Ａｍｂｉｅｎ（登録商標）（ゾルピデム）、Ｘａｎａｘ（登録商標）（アルプラゾラム）、Ｒｅｓｔｏｒｉｌ（登録商標）（テマゼパム）、Ｖａｌｉｕｍ（登録商標）（ジアゼパム）、ＢｕＳｐａｒ（登録商標）（ブスピロン）、Ｓｙｍｍｅｔｒｅｌ（登録商標）（アマンタジン）、Ｃｙｌｅｒｔ（登録商標）（ペモリン）、Ｐｒｏｖｉｇｉｌ（登録商標）（モダフィニル）、ＤｉｔｒｏｐａｎＸＬ（登録商標）（オキシブチニン）、ＤＤＡＶＰ（登録商標）（デスモプレシン、バソプレシン）、Ｄｅｔｒｏｌ（登録商標）（トルテロジン）、Ｕｒｅｃｈｏｌｉｎｅ（登録商標）（ベタン）、Ｄｉｂｅｎｚｙｌｉｎｅ（登録商標）（フェノキシベンザミン）、ハイトリン（登録商標）（テラゾシン）、Ｐｒｏ−Ｂａｎｔｈｉｎｅ（登録商標）（プロパンテリン）、Ｕｒｉｓｐａｓ（登録商標）（ヒヨスチアミン）、Ｃｙｓｔｏｐａｓ（登録商標）（ヒヨスチアミン）、Ｌｉｏｒｅｓａｌ（登録商標）（バクロフェン）、Ｈｉｐｒｅｘ（登録商標）（メテナミン）、Ｍａｎｄｅｌａｍｉｎｅ（登録商標）（メテンアミン）、Ｍａｃｒｏｄａｎｔｉｎ（登録商標）（ニトロフラントイン）、Ｐｙｒｉｄｉｕｍ（登録商標）（フェナゾピリジン）、Ｃｉｐｒｏ（登録商標）（シプロフロキサシン）、Ｄｕｌｃｏｌａｘ（登録商標）（ビサコジル）、Ｂｉｓａｃｏｌａｘ（登録商標）（ビサコジル）、Ｓａｎｉ−Ｓｕｐｐ（登録商標）（グリセリン）、Ｍｅｔａｍｕｃｉｌ（登録商標）（オオバコ親水性粘漿薬）、Ｆｌｅｅｔ Ｅｎｅｍａ（登録商標）（リン酸ナトリウム）、Ｃｏｌａｃｅ（登録商標）（ドキュセート）、Ｔｈｅｒｅｖａｃ Ｐｌｕｓ（登録商標）、Ｋｌｏｎｏｐｉｎ（登録商標）（クロナゼパム）、Ｒｉｖｏｔｒｉｌ（登録商標）（クロナゼパム）、Ｄａｎｔｒｉｕｍ（登録商標）（ダントロレンナトリウム）、Ｃａｔａｐｒｅｓ（登録商標）（クロニジン）、Ｂｏｔｏｘ（登録商標）（ボツリヌス毒素）、Ｎｅｕｒｏｂｌｏｃ（登録商標）（ボツリヌス毒素）、Ｚａｎａｆｌｅｘ（登録商標）（チザニジン）、Ｓｉｒｄａｌｕｄ（登録商標）（チザニジン）、Ｍｙｓｏｌｉｎｅ（登録商標）（プリミドン）、Ｄｉａｍｏｘ（登録商標）（アセトゾラミド）、Ｓｉｎｅｍｅｔ（登録商標）（レボドパ、カルビドパ）、Ｌａｎｉａｚｉｄ（登録商標）（イソニアジド）、Ｎｙｄｒａｚｉｄ（登録商標）（イソニアジド）、Ａｎｔｉｖｅｒｔ（登録商標）（メクリジン）、Ｂｏｎａｍｉｎｅ（登録商標）（メクリジン）、Ｄｒａｍａｍｉｎｅ（登録商標）（ジメンヒドリナート）、Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）（プロクロルペラジン）、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍ（登録商標）（スコポラミン）、Ｂｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）（ジフェンヒドラミン）、Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（登録商標）（アレムツズマブ）、Ｆａｍｐｒｉｄｉｎｅ（登録商標）（４−アミノピリジン）、Ｇａｍｍａｇａｒｄ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、Ｇａｍｍａｒ−ＩＶ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、Ｇａｍｉｍｕｎｅ Ｎ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、Ｉｖｅｅｇａｍ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、Ｐａｎｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、Ｓａｎｄｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、Ｖｅｎｏｂｌｏｇｕｌｉｎ（登録商標）（ＩＶ免疫グロブリン）、プレガバリン、ジコノチド、ＢａｄｏｆｅｎとＡｎｅｒｇｉＸ−ＭＳ（登録商標）。
Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）および抗ＬＩＮＧＯ−１抗体の併用療法の評価のための臨床試験／アセスメント
任意の対象における治療の有効性エンドポイントは、当技術分野において周知の試験およびアセスメントを使用して評価することができる。例えば、ＲＲＭＳ患者の場合、対象は、ＥＤＳＳを使用して対象の状態を取得することによって評価され得る。対象が進行型のＭＳ、例えば、ＳＰＭＳまたはＰＰＭＳを有する他の実施形態において、対象は、ＥＤＳＳを使用する対象の状態の取得に加えて、上肢および／または下肢機能の測定、および／または歩行機能、例えば、短距離歩行機能の測定を得ることによって評価され得る。ある特定の実施形態において、下肢歩行機能のアセスメント（例えば、２５フィートの時限歩行（Ｔ２５ＦＷ））、および／または上肢機能のアセスメント（例えば、９ホールペグテスト（９ＨＰ））を行うことができる。
評価することができる追加の例示的な有効性エンドポイントは、次のうちの１つ以上を含む。
有効性エンドポイント
例示的な主要エンドポイント
対象は、拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）、時限２５フィート歩行（Ｔ２５ＦＷ）、９ホールペグテスト（９ＨＰＴ）、および（３秒）定速聴覚連続付加検査（ＰＡＳＡＴ）を含む複合エンドポイントによって測定される、治療による神経生理学および／または認知機能の確認された改善について評価することができる。神経生理学および／または認知機能の改善は、次のうちの少なくとも１つとして定義することができる：
ａ）６．０以下のベースラインスコアから１．０ポイント以上のＥＤＳＳの減少（減少は３ヶ月以上持続する）、
ｂ）Ｔ２５ＦＷのベースラインから１５％以上の改善（改善は３カ月以上持続する）、
ｃ）９ＨＰＴのベースラインから１５％以上の改善（改善は３カ月以上持続する）、および
ｄ）ＰＡＳＡＴのベースラインから１５％以上の改善（改善は３カ月以上持続する）。
例示的な二次エンドポイント
ＥＤＳＳ、Ｔ２５ＦＷ、９ＨＰＴ、およびＰＡＳＡＴの複合エンドポイントによって測定されるように、神経身体的機能および／または認知機能および／または障害治療の確認された悪化について、対象を評価することができる。障害の進行または神経身体的機能および／または認知機能の悪化は、次のうちの少なくとも１つとして定義することができる：
ａ）５．５以下のベースラインスコアから１．０ポイント以上のＥＤＳＳの増加または６．０のベースラインスコアから０．５ポイント以上の増加（増加は３ヶ月以上持続する）、
ｂ）Ｔ２５ＦＷのベースラインから１５％以上の悪化（悪化は３カ月以上持続する）、
ｃ）９ＨＰＴのベースラインから１５％以上の悪化（悪化は３カ月以上持続する）、および
ｄ）ＰＡＳＡＴのベースラインから１５％以上の悪化（悪化は３カ月以上持続する）。
追加の臨床有効性エンドポイント
ある特定の実施形態において、対象は、
ａ）処理速度（ＰＡＳＡＴおよび数字符合照合検査［ＳＤＭＴ］）の２つのテスト、ならびに記憶および学習の２つのテスト（言語記憶については選択式回想テスト［ＳＲＴ］および視覚記憶については簡単な視空間記憶テスト改訂版［ＢＶＭＴ−Ｒ］）を含む、ＭＳ認知複合エンドポイントによって測定される認知機能のベースラインからの変化、
ｂ）スクリプス神経学的評価尺度（ＳＮＲＳ）によって決定される臨床的再発の重症度、および／または
ｃ）６分間歩行（６ＭＷ）歩行時間のベースラインから１０％以上（例えば、１５％以上、２０％以上、３０％以上）の悪化（悪化は３カ月以上持続する）、を含む追加の臨床的測定を使用して評価することができる。
例示的なＭＲＩ有効性エンドポイント
新規および既存の病変の両方を用いて、局限性および拡散レベルでの修復の測定に焦点を当てた脳ＭＲＩの分析は、次のうちの１つ以上を含むことができる。
（ｉ）新たな脳病変の分析：
ａ）増減磁化伝達比（ＭＴＲ）を用いる、Ｇｄ病変体積率（％）、
ｂ）測定単位として対象当たりの病変を用いる、正常に見える白質（ＮＡＷＭ）に対して、発症からの新たなＧｄ病変平均ＭＴＲの変化、
ｃ）測定単位として対象を用いる、ＭＴＲが正常値（新たなＭＴＲ病変）を下回って低下する走査当たりのボクセルについて、発症からのＭＴＲシグナルの変化、
ｄ）測定単位として対象を用いる、新たなＧｄ病変の発症からの放射状拡散の変化、
ｅ）測定単位として対象を用いる、ＭＴＲが正常値（新たなＭＴＲ病変）を下回って低下する走査当たりのボクセルについて、発症からの放射状拡散の変化、または
ｆ）発症から少なくとも６ヶ月後にまだ目に見えるＴ１低強度として定義される慢性ブラックホールを用いる、新たなＧｄ脳病変から慢性ブラックホールへの変換率（％）。
（ｉｉ）既存の脳病変（ベースライン走査において存在する病変）の分析：
ａ．異常なＴ１体積について、ベースラインからのＭＴＲの変化、
ｂ．異常なＴ２体積について、ベースラインからのＭＴＲの変化、
ｃ．Ｔ１低強度と関連しない異常なＴ２体積について、ベースラインからのＭＴＲの変化、
ｄ．異常なＴ１体積について、ベースラインからの拡散テンソル撮像（ＤＴＩ）の変化、
ｅ．異常なＴ２体積について、ベースラインからのＤＴＩの変化、または
ｆ．Ｔ１低強度と関連しない異常なＴ２体積について、ベースラインからのＤＴＩの変化。
（ｉｉｉ）拡散脳ＭＲＩ指標の分析：
ａ）脳体積の変化率（％）、
ｂ）大脳皮質脳体積のベースラインからの変化、
ｃ）視床体積のベースラインからの変化、または
ｄ）全脳放射状拡散率のベースラインからの変化。
例示的な患者が報告した転帰（ＰＲＯ）の有効性エンドポイント
ある特定の実施形態において、対象は、次のうちの１つ以上を含む、患者が報告した転帰によって評価することができる：
ａ）１２項目多発性硬化症歩行尺度（ＭＳＷＳ−１２）。
ｂ）ＡＢＩＬＨＡＮＤ ５６項目アンケート。
ｃ）２９項目多発性硬化症影響尺度（ＭＳＩＳ−２９）。
ｄ）簡易（３６）健康調査（ＳＦ−３６）。
ｅ）ＭＳＮＱ情報提供者およびＭＳＮＱ患者
有効性エンドポイント分析
一般的な分析方法
要約統計量が提示され得る。連続エンドポイントの場合、要約統計量は、一般的に、無作為化もしくは投与された対象の数、またはデータ、平均値、標準偏差、中央値、および範囲を有する対象の数を含み得る。カテゴリーエンドポイントの場合、要約統計量は、一般的に、無作為化もしくは投与された対象の数、データを有する対象の数、または各カテゴリーのデータを有する対象の割合（％）を含み得る。
主要エンドポイント分析
主要有効性エンドポイントは、複合エンドポイント（ＥＤＳＳ、Ｔ２５ＦＷ、９ＨＰＴ、またはＰＡＳＡＴ）の構成要素のうちの１つ以上において確認された臨床的改善を有する対象の割合（％）を含むことができる。確認された改善者の割合（％）は、治療群によって提示することができ、データをロジスティック回帰モデルによって分析することができる。改善が確認されるまでの時間は、コックス比例ハザードモデルを用いて分析してもよい。ベースラインＥＤＳＳ、Ｔ２５ＦＷ、９ＨＰＴ（利き手および非利き手の両方）、ＰＡＳＡＴ、および層別因子は、ロジスティック回帰およびコックスモデルの両方に共変量として含まれ得る。２つのベースラインＥＤＳＳ評価が実行される場合、より高いＥＤＳＳスコアを分析に使用することができる。ＭＲＩ活性は、潜在的な共変量と同様に調査することができる。
二次エンドポイント分析
二次有効性エンドポイントは、複合エンドポイント（ＥＤＳＳ、Ｔ２５ＦＷ、９ＨＰＴ、またはＰＡＳＡＴ）の構成要素のうちの１つ以上において確認された臨床的悪化を有する対象の割合（％）を含むことができる。確認された悪化者の割合（％）は、治療群によって提示することができ、データをロジスティック回帰モデルによって分析することができる。悪化が確認されるまでの時間は、コックス比例ハザードモデルを用いて分析してもよい。ベースラインＥＤＳＳ、Ｔ２５ＦＷ、９ＨＰＴ（利き手および非利き手の両方）、ＰＡＳＡＴ、および層別因子は、ロジスティック回帰およびコックスモデルの両方に共変量として含まれ得る。２つのベースラインＥＤＳＳ評価が実行される場合、より高いＥＤＳＳスコアを分析に使用することができる。ＭＲＩの活動は、潜在的な共変量と同様に調査されてもよい。
探索的エンドポイント分析
探索的エンドポイントは、臨床指標、ＭＲＩ指標、およびＰＲＯ変数を含むことができる。それらは、カテゴリー変数のための連続変数または頻度分布の要約統計量を提示することによって要約することができる。使用される統計的手法は、変数の性質に依存する。バイナリ変数は、ロジスティック回帰モデルを用いて分析することができ、連続変数は、対応するベースラインおよび層別因子を調整する、共分散モデルの分析を用いて分析することができる。事象までの時間変数は、コックス比例ハザード回帰モデルを使用し、対応するベースラインおよび層別因子を調整することによって分析することができる。カウント変数は、負の二項回帰モデルまたはウィルコクソン順位和検定によって分析することができる。
歩行アセスメント
Ｔ２５ＦＷ
Ｔ２５ＦＷは、２５フィートの時限歩行である。Ｔ２５Ｗは、短距離の定量的歩行能力の測定であり、ほとんどが障害の重い、例えば、ＥＤＳＳステップ６〜６．５の対象に対して悪化に応答する。これは、下肢機能の定量的測定として使用することができる。概して、患者は、明確に表示された２５フィートのコースの一端に向けられ、可能な限り迅速に、しかし安全に２５フィートを歩くよう指示される。このタスクは、患者に同じ距離を歩いて戻らせることによって、即時に再度行うことができる。Ｔ２５ＦＷを行っているとき、患者は補助器具を使用してもよい。試験を完了するために、通常、３分の時間制限が使用される。患者が５分間の休息期間後にＴ２５Ｗの試行２を完了することができない場合、または患者が３分以内に試行を完了できない場合は、試験を中止する。
９ＨＰ
９ＨＰは、９ホールペグテストである。これは、ＥＤＳＳまたはＴ２５ＦＷによって測定されない上肢（例えば、腕および手）機能の臨床的に重要な側面を捉える、定量的測定である。ＥＤＳＳおよびＴ２５ＦＷとは異なり、９ＨＰは、広いＥＤＳＳ範囲にわたって応答する。概して、患者は、手のみを使用して９個のペグを一度に１個ずつ拾い上げ、穴の全てが埋まるまで、可能な限り迅速にペグボード上の穴にペグを入れるように求められる。次に患者は、休止なしに、ペグを一度に１個ずつ取り除き、それらを可能な限り迅速に容器に戻さなければならない。利き手および非利き手の両方を２回試験する（利き手の２連続試験、直後に非利き手の２連続試験）。試験を完了するために、通常、５分の時間制限が使用される。患者が５分以内に９ＨＰの１試行を完了することができない場合は、試験を中止し、患者が５分以内に自身の利き手で試行を完了できない場合、通常、患者は、非利き手での試行に移るよう指示される。
６ＭＷ
６分間歩行テスト（６ＭＷ）を使用して、歩行距離を評価する。概して、患者は、６分間の身体介助なしで可能な最高速度で歩くように求められ、距離が測定される。補助器具を使用することができるが、テスト間で一貫性が維持され、文書化されるべきである。患者は、可能であれば連続的に歩行すべきであるが、患者は、テスト中に減速して停止または休息することができる。
ＳＮＲＳ
スクリプス神経学的評価尺度（ＳＮＲＳ）は、精神作用および気分；目および関連脳神経、例えば、視力、視野、眼球運動、眼振；下脳神経；各四肢運動機能、例えば、右上、左上、右下、左下；深部腱反射、例えば、上肢、下肢；バビンスキー兆候、例えば、左側、右側；各四肢における感覚機能、例えば、右上、左上、右下、左下；小脳兆候、例えば、上肢、下肢；ならびに歩行体幹バランス、例えば、自律神経機能障害の特別なカテゴリー、例えば、膀胱機能障害、性機能障害を含む、いくつかのパラメータを測定する。
ＥＤＳＳ
上述のように、ＥＤＳＳは、ＭＳにおいて頻繁に発生する症状を中心に標準化された神経学的検査に基づいている。ＥＤＳＳは、７つの機能系、視覚的、脳幹、ピラミッド、小脳、感覚、腸／膀胱および脳を、神経学的検査によって評価する。さらに、ＥＤＳＳは、歩行範囲のアセスメントも含む。機能系スコアおよび歩行範囲に基づいて、ＥＤＳＳステップが決定される。ＥＤＳＳの範囲は、０から１０まで１９ステップを含み、ＥＤＳＳステップ０は、完全に正常な検査に対応し、ＥＤＳＳステップ１０は、ＭＳに起因する死亡に対応する。０〜４のＥＤＳＳ評価の場合、尺度は、主に個別のＦＳのスコアに依存する。４を超える評価の場合、ＥＤＳＳは、主に歩行の能力および範囲によって決定される。
患者が報告した転帰のアセスメント
ＭＳＷＳ−１２
多発性硬化症歩行尺度−１２（ＭＳＷＳ−１２）テストは、歩行能力の自己評価測定である。テストは、リッカート型応答を有する１２の質問を含み、歩行に対するＭＳの影響を記載する。質問は、３０名のＭＳ患者のインタビュー、専門家の意見、および文献レビューから生成された。
ＡＢＩＬＨＡＮＤ ５６項目アンケート
ＡＢＩＬＨＡＮＤ ５６項目アンケートは、摂食、身支度、または管理タスク等の日常的なタスクを行う際の問題の患者経験を測定するように設計された手作業能力の測定である。ＡＢＩＬＨＡＮＤは、５６項目の公平かつ両手の活動を含み、患者は、４つのレベル尺度：０＝不可能、１＝非常に困難、２＝困難、３＝容易で判断するように求められる。
ＭＳＩＳ−２９
多発性硬化症影響尺度２９（ＭＳＩＳ−２９）は、ＭＳの身体的および心理学的パラメータを測定する、２９項目の自己報告評価尺度である。項目のうちの３つは、限られた能力に対応し、残りの２６項目は、疾患の症状または結果によって影響されることに関連する。２０項目は、身体機能に言及する。応答は、１から５の５ポイントリッカート尺度範囲を使用する。
ＳＦ−３６
簡易３６（ＳＦ−３６）テストは、全体的な健康関連の生活の質を測定する。ＳＦ−３６は、患者が、一般的に医師からの介入なしに、またはほとんどなしに完了することができる、構造化された自己報告アンケートである。ＳＦ−３６に対する単一の全体スコアはないが、代わりに８つの下位尺度および２つの要約スコアを生成する。８つの下位尺度は、身体機能、身体的問題に起因する役割制限、体痛、一般的な健康認識、活力、社会機能、情緒的問題に起因する役割制限、および精神保健を含む。２つの要約スコアは、身体的構成要素の要約および精神保健構成要素の要約を含む。
認知テストのアセスメント
いくつかの認知テスト装置を使用して、次のように複合パラメータの値を決定することができる。
数字符合照合検査（ＳＤＭＴ）
ＳＤＭＴは、参照キーに基づいて特定の数字を所与の幾何学図形と対合させるために、対象に９０秒が与えられる、処理速度および作業記憶を評価する検査である。長年ウェクスラー知能尺度に含まれていた、数字符号またはコーディングタスク検査にならってモデル化されている（例えば、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７４）Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ−Ｒｅｖｉｓｅｄ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８１）ＷＡＩＳ−Ｒ Ｍａｎｕａｌ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。一部の患者が手先の器用さを有するという制限を認識し、Ｒａｏらは、口頭応答のみを含むようにＳＤＭＴを修正した（Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４１：６８５−６９１）。本発明で選択されたこの口頭ＳＤＭＴにおいて、処理される数字および符号を含む、８．５×１１インチのシートが参加者に提示される。最上段の刺激は、９個の符号を含み、それぞれがキーにおいて一桁の数字と対合される。ページの残りの部分は、これらの符号の疑似ランダム化配列を有し、参加者のタスクは、可能な限り迅速に符号のそれぞれに関連付けられた数字を口頭で応答することである。スコアは、９０秒の時間枠内に対象によって成された（１１０のうちの）正しい一致の総数である。
良好な試験−再試験信頼性（ｒ＝０．９３〜０．９７、ｐ＜０．００１）は、ＭＳ対象において確立された（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １２：５４９−５５８、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １４：９４０−９４６）。ＭＳ患者と正常対照とを区別するため（ｄ＝１．０〜１．５、ｐ＜０．００１）（例えば、Ｄｅｌｏｉｒｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ＆Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ７６：５１９−５２６、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １２：５４９−５５８、Ｈｏｕｔｃｈｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６９：１１３−１２３、Ｓｔｒｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １５：１０７７−１０８４、Ｐａｒｍｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｉｎｔ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌ Ｓｏｃ １６：６−１６を参照）およびＲＲＭＳ患者とＳＰＭＳ患者とを区別するため（ｄ＝０．８、ｐ＜０．００１）（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６３：１３０１−１３０６を参照）の良好な弁別妥当性も確認された。さらに、性能と脳ＭＲＩとの相関も文書化されている（例えば、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １３：７２２−７３０、Ｈｏｕｔｃｈｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６９：１１３−１２３、Ｔｅｋｏｋ−Ｋｉｌｉｃ ｅｔ ａｌ．（２００７）ＮｅｕｒｏＩｍａｇｅ ３６：１２９４−１３００を参照）。
定速聴覚連続付加検査（ＰＡＳＡＴ）
振とうから回復している患者を評価するためにＧｒｏｎｗａｌｌらによって最初に開発されたＰＡＳＡＴは、患者に一連のテープに録音された６１桁を監視しながら、その直前の数字にそれぞれ連続する数字を付加することを求める（Ｇｒｏｎｗａｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｐｅｒｃｅｐｔｕａｌ ａｎｄ Ｍｏｔｏｒ Ｓｋｉｌｌｓ ４４：３６７−３７３）。ＰＡＳＡＴは、急速な情報処理および２つのタスクに対する注意の同時割り当ての両方、ならびに適度に完全な計算能力を必要とする。その元の形式で、ＰＡＳＡＴは、４つの刺激間間隔（２．４秒、２．０秒、１．６秒、１．２秒）で行った。刺激間間隔の数および提示速度は、ＭＳ患者に使用するために、Ｒａｏらによって後に３．０秒および２．０秒に修正された（Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｒｉｅｆ，Ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ Ｂａｔｔｅｒｙ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｓｔｓ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４１：６８５−６９１、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４１：６９２−６９６）。
この後者のバージョンの試験はＭＳ機能性複合（ＭＳＦＣ）およびＭＡＣＦＩＭＳバッテリーの構成要素として選択された（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｓｔ １６：３８１−３９７）。ＭＳ集団における試験−再試験信頼度は、ｒ＝０．７８〜０．９３の範囲である（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １６：２２８−２３７、Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １６：２２８−２３７）。ＭＳ患者と正常対照とを区別するため（ｄ＝０．５〜０．７、ｐ＜０．００１〜０．３４）（Ｄｅｌｏｉｒｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ ＆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ７６：５１９−５２６、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １２：５４９−５５８、Ｈｏｕｔｃｈｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ６９：１１３−１２３、Ｓｔｒｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９） Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ１５：１０７７−１０８４、Ｐａｒｍｅｎｔｅｒｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｉｎｔ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌ Ｓｏｃ １６：６−１６、Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １６：２２８−２３７）、およびＲＲＭＳ患者とＳＰＭＳ患者とを区別するため（ｄ＝０．５、ｐ＜０．００２）（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６３：１３０１−１３０６）の良好な弁別妥当性が確認された。目的のＰＡＳＡＴスコアは、各提示速度での正しい応答の総数である。ＰＡＳＡＴのＲａｏ版の２つの代替形態が利用可能であり（ＰＡＳＡＴ３″およびＰＡＳＡＴ２″）、本発明において選択した。ＰＡＳＡＴ３″において、刺激は３秒ごとに提示され、ＰＡＳＡＴ２″では、刺激は２秒ごとに提示される。
選択式回想テスト（ＳＲＴ）
ＳＲＴは、前向性健忘症の領域において研究を行ったＢｕｓｃｈｋｅらによって最初に開発された（Ｂｕｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．（１９７４）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２４：１０１９−１０２５を参照）。各連続学習試行において全体の単語リストを思い出すように患者に求めるのではなく、実験者は、各連続学習試行で思い出されなかった単語のみを繰り返した。後に、何人かの記憶研究者が、テストの規範的データおよび代替形態を開発した。元のバージョンは、１５単語および１２回の学習試行を使用するテスト形式に基づいていたことに留意されたい。そのような投与は、困難で時間がかかるため、より短い形態のＳＲＴに多くの関心が集まっている。ＭＳ研究において広く使用される投与手順は、Ｒａｏらによって開発された６回試行形態である（例えば、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｒｉｅｆ，Ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ Ｂａｔｔｅｒｙ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｓｔｓ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４１：６８５−６９１、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４１：６９２−６９６を参照）。この６回試行形式は、本発明において利用される。多数の異なるバージョンのＳＲＴ単語リストが存在する。ハネーおよびレビンの成人向け単語リスト、テスト形式１および３が、本発明において利用される（Ｈａｎｎａｙ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌ．７：２５１−２６３）。ＳＲＴの弁別妥当性は、いくつかの研究において確立され、ＭＳ対象と正常対照とを区別するＳＲＴは、ｄ＝０．６からｄ＝１．０である（例えば、Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｒｉｅｆ，Ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ Ｂａｔｔｅｒｙ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｓｔｓ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｄｅｌｏｉｒｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ＆Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ７６：５１９−５２６、Ｓｔｒｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １５：１０７７−１０８４を参照）。ＳＲＴ所見は、脳ＭＲＩにおいて見られる心室肥大と関連付けられ得ることも示された（Ｒ２＝０．１４、ｐ＝０．０５）（Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６０：１７９３−１７９８）。
簡単な視空間記憶テスト−改訂版（ＢＶＭＴ−Ｒ）
ＢＶＭＴ−Ｒは、ウェクスラー記憶尺度からの視覚再生サブテストに沿って、相当する代替形態の視覚記憶テストを開発する初期努力に基づいている（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ ３：３７−５１、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｓｔ ９：１１−１６、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ｍｅｍｏｒｙ Ｓｃａｌｅ−Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｍａｎｕａｌ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。当初、ＢＶＭＴは、６つの視覚デザインの１ページの提示に対して単一暴露のみを含んでいた。改訂版は、刺激に対する３回の１０秒間曝露を含む（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｒｉｅｆ Ｖｉｓｕｏｓｐａｔｉａｌ Ｍｅｍｏｒｙ Ｔｅｓｔ−Ｒｅｖｉｓｅｄ：Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ Ｍａｎｕａｌ．Ｏｄｅｓｓａ，Ｆｌｏｒｉｄａ：Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ８：１４５−１５３）。各暴露の後、対象は、白紙に鉛筆を使用してマトリクスを再現するように求められる。正確性および位置について、厳格な採点基準がある。２５分の遅延の後、患者は、別の暴露なしに再度情報を再現するように求められる。最後に、はい／いいえ認識タスクが提示される。ＢＶＭＴ−Ｒは、ｒ＝０．８５からｒ＝０．９１の範囲の試験−再試験信頼度を伴う優れた再現性（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ８：１４５−１５３、Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １１：７２７−７３６）、ならびにＭＳ対象と正常対照対象との間の良好な弁別妥当性（ｄ＝０．９、ｐ＜０）（Ｓｔｒｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １５：１０７７−１０８４；Ｐａｒｍｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｉｎｔ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌ Ｓｏｃ １６：６−１６）およびＲＲＭＳ患者とＳＰＭＳ患者との間の良好な弁別妥当性（ｄ＝０．６、ｐ＜０．００１）（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６３：１３０１−１３０６）を有する。ＢＶＭＴ−Ｒ性能と脳ＭＲＩ所見との間の相関の形で、予測妥当性も確立されている。さらに、テストの全６形態が等しく困難であることを示す広範囲の研究がある。本発明の目的の変数は、総学習および遅延想起のスコアである。
本発明は、以下の実施例によりさらに説明されるが、限定するものとして見なされてはならない。本出願全体を通じて引用される、全ての参考文献、図面、配列表、特許、および公開済み特許出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
例証
（実施例１）
ＬＩＮＧＯ−１拮抗作用は、マウスにおけるＭＯＧ−ＥＡＥから罹患率および死亡率を低減し、炎症した視神経において軸索保護を促進する。
急性視神経炎（ＡＯＮ）は、多くの場合、多発性硬化症で起こる視神経の炎症性疾患である。ＡＯＮは、視神経に対する炎症性損傷によって引き起こされ、視神経および軸索を被覆する髄鞘への浮腫、炎症、および損傷に起因する視力低下を提示する。ＡＯＮの結果として、多くの場合、網膜神経線維層および網膜神経節細胞層の著しい喪失がある。ＡＯＮの現在の治療は、浮腫の回復を固定する高用量のコルチコステロイドでの静脈内治療に限定されているが、中枢神経系（ＣＮＳ）髄鞘再生を促進しないか、またはＣＮＳ炎症性脱髄から神経軸索保護を提供しない。
視神経炎の研究のための動物モデルは、ラットおよびマウスの実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを含み、ＥＡＥの誘導が、視神経炎の発症をもたらす。本実施例において、ＬＩＮＧＯ−１拮抗作用の効果は、ＥＡＥマウスモデルを使用して分析した。つまり簡潔には、ＥＡＥは、８〜１２週齢のＣ５７ＢＬ／６雄および雌マウスにおいて、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）に乳化された１２５μｇのＭＯＧ３５〜５５と共に、尾基底部の両脇腹への２５０μＬの皮下注射に続いて、直後および３日後にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中３００ｎｇの百日咳毒素の静脈内注射により誘導された。運動系障害に対する有効性は、０〜７の範囲のＥＡＥ重症度スコアを使用して測定した。
それぞれ１４匹のマウスの２つの別個のコホートを、１０ｍｇ／ｋｇの拮抗性抗ＬＩＮＧＯ−１マウス抗体または対照モノクローナル抗体の腹腔内注射で盲検的に処置した（１コホート当たりの治療群当たりＮ＝７）。ＥＡＥ誘導後６日目から開始して３日ごと、および臨床疾患の発症前の４回の異なる時点で（６日目、９日目、１２日目、および１５日目）マウスを処置した。マウスをＥＡＥ疾患ピークで屠殺した。
Ｂｒｕｋｅｒ ４，７Ｔ ＭＲＩシステムで拡散テンソル撮像（ＤＴＩ）を使用して、ＥＡＥ疾患ピークに一度、視神経を撮像した。ＭＲＩ画像は、次のパラメータを用いて取得した：ＴＲ１秒、ＴＥ３０ｍｓ、Δ１０ｍｓ、８ ＮＥＸ、スライス厚０．５ｍｍ、視野２×２ｃｍ２、データマトリクス２５６×１２８。１つの平行および１つの垂直拡散感作勾配配向に対してＢ値の０ｓ／ｍｍ２（非拡散加重画像）および７００ｓ／ｍｍ２を用いた（Ｗｕ，Ｂｕｔｚｋｕｅｖｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ ３７：１３１３８−１１４７）。
ＭＲＩ分析の後直ちに、マウスをペントバルビタールで安楽死させ、ＰＢＳで灌流し、０．１Ｍ ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定し、視神経を除去して、２．５％グルタルアルデヒドおよび０．１Ｍカコジル酸ナトリウム緩衝液を含む４％ ＰＦＡ溶液中で後固定し、電子顕微鏡用に処理した。全前交叉断面視神経画像を、拡大率１０倍および１００倍で撮影し、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ＣＳ３ソフトウェア（Ａｄｏｂｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）上でマージした。それぞれ約３６００μｍ２を測定する、周辺４つ、および中心１つの５つの前交叉断面視神経ＲＯＩ（関心領域）を分析のために選択した（図１）。画像Ｐｒｏ Ｐｌｕｓソフトウェア（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用して分析を行い、各ＲＯＩで特定された軸索それぞれの軸索数、軸索面積、および軸索原形質面積を評価した。神経の周辺部が、炎症性浸潤の大部分を含んでいた。重度に浸潤した周辺領域および中枢神経領域は、各神経について別個に評価した。
抗ＬＩＮＧＯ抗体で処置したマウスにおいて、ＥＡＥによる死亡は観察されなかったが、５／１４プラセボで処置したマウスは、ＥＡＥの重症度に起因して安楽死させる必要があった（図２Ａ）。加えて、プラセボで処置したマウスと比較して（７／１４マウス）、著しく低い割合の抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で処置したマウスが、完全な後肢麻痺（対麻痺）（グレード５の疾患重症度）に達した（４／１４マウス）（図２Ｂ）。
誘導後１６〜１７日目のＥＡＥ重症度のピークにおいて、１６匹の生存する対照で処置したマウスおよび１８匹の生存する抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で処置したマウスに対して、視神経拡散ＭＲＩ走査を行った。視神経ＲＯＩ画像は、前交叉レベルで視神経の中心に１０ボクセルを含んでいた。拡散テンソル撮像（ＤＴＩ）は、対照で処置したマウス（平均１、１８３、標準偏差３６ミリ秒）よりも抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で処置したマウス（平均１、４００、標準偏差２７ミリ秒）において、長軸（長手方向、軸方向、または平行拡散性、またはλＩＩ）に平行して、著しく高い見かけの拡散計数（ＡＤＣ）値を示した（図３、図４）。対照的に、視神経長軸に垂直なＡＤＣ値に治療群による差はなかった（半径方向または垂直拡散性またはλ）（抗ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストで処置したマウスにおいて４１５±１９ミリ秒、対して対照で処置したマウスでは４０３±２５ミリ秒）（図３、図４）。
検査された各視神経について、５つのＲＯＩにおける中枢および末梢軸索面積、軸索数、および軸索原形質断面積の評価を比較のために表にした（図５、図６）。１条件当たり１９個のＥＡＥ神経および５個の健康な神経を分析した。結果は、中心または末梢とでＲＯＩにおける総視神経面積または軸索数に差がなかったことを示した（図５、図６）。しかしながら、中枢視神経ＲＯＩにおける個別の軸索面積（軸索健康の測定）は、抗ＬＩＮＧＯ−１抗体で処置したマウスと比較して、対照で処置したマウスにおいて１３％低かった（図５、図６）。全体として、ＬＩＮＧＯ−１拮抗作用は、マウスにおいてＭＯＧ−ＥＡＥによる罹患率および死亡率を低減し、軸索面積の喪失を低減すること、および軸索拡散性の喪失を低減することによって、炎症した視神経内の軸索保護を促進した。要約すると、ＭＯＧ−ＥＡＥにおいて組織学的に、かつＭＲＩによって視神経への損傷が見られたが、ＬＩＮＧＯ−１の遮断によって低減されるように思われた。
（実施例２）
コルチコステロイド治療と組み合わせてのＬＩＮＧＯ−１拮抗作用は、ラットＥＡＥモデルにおけるＬＩＮＧＯ−１拮抗作用単独と比較して、軸索保護の増加をもたらす。
急性視神経炎（ＡＯＮ）は、多くの場合、多発性硬化症で起こる視神経の炎症性疾患である。ＡＯＮは、視神経に対する炎症性損傷によって引き起こされ、視神経および軸索を被覆する髄鞘への浮腫、炎症、および損傷に起因する視力低下を提示する。ＡＯＮの結果として、網膜神経線維層および網膜神経節細胞層の著しい喪失がある。ＡＯＮの現在の治療は、浮腫の回復を固定する高用量のコルチコステロイドでの静脈内治療に限定されているが、中枢神経系（ＣＮＳ）髄鞘再生を促進しないか、またはＣＮＳ炎症性脱髄から神経軸索保護を提供しない。
視神経炎の研究のための動物モデルは、ラットおよびマウスの実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを含み、ＥＡＥの誘導が、視神経炎の発症をもたらす。本実施例では、ＥＡＥラットモデルを使用して、ＬＩＮＧＯ−１拮抗作用単独、およびコルチコステロイド治療との組み合わせでの効果を分析した。つまり簡潔には、８〜１０週齢の雌ブラウンノルウェー（ＢＮ）ラットを、イソフルランの吸入により麻酔し、４００μｇの熱不活性化結核菌を含む完全フロイントアジュバントで（１：１）乳化された生理食塩水中１００μｇのｒＭＯＧ１−１２５を含む、総量２００μＬの接種源を尾基底部に皮内注射した。
臨床症状の発症の後（ＥＡＥ誘導後１５日〜１６日）、生理食塩水中３０ｍｇ／ｋｇ／日のメチルプレドニゾロン（ＭＰ）または生理食塩水単独（Ｖｅｈ）で静脈内に３日間連続してラットを処置した。ＭＰ注射の２日目に、６ｍｇ／ｋｇの抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体または対照抗体のいずれかをラットに付与し、３週間に１回腹腔内に投与した。合計４つの異なる治療群（１）対照治療群（Ｖｅｈ＋対照抗体（Ａｂ））、（２）ＭＰ治療群（ＭＰ＋対照抗体）、（３）抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体治療群（Ｖｅｈ＋抗ＬＩＮＧ−１モノクローナル抗体）、および（４）併用治療群（ＭＰ＋抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体）があった。
最後の処置から１週間後（症状の発症後４週間およびＥＡＥ誘導後６週間）、ラットをＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で灌流し、視神経（ＯＮ）の低温槽ミクロトーム切片を、抗βＩＩＩチューブリン抗体で染色して、ＤＡＰＩを用いて軸索病態を分析し、蛍光顕微鏡により倍率４０倍で可視化した。軸索定量化のために、視神経当たり３つの異なる切片を分析し、治療群当たり３〜５匹の動物を計数した。
図（図７）に示されるように、対照治療群（Ｖｅｈ＋対照抗体）の視神経の切片において、抗βＩＩＩチューブリン染色により軸索喪失が検出され、深刻な軸索喪失を示唆した。ＤＡＰＩ染色によって示されるように、これらの領域に炎症性浸潤も観察された（図７）。軸索の数は、ＭＰ治療群（ＭＰ＋対照抗体）においてわずかに高かった（ｐ値＝有意でない）（図８）。抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体治療群（Ｖｅｈ＋抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体）は、５倍高い軸索数を示し、抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体による処置が、軸索喪失を防止したことを示唆する（図８）。併用治療群（ＭＰ＋抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体）は、対照治療群（Ｖｅｈ＋対照抗体）と比較して、軸索数の８倍の増加を示し、抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体等の抗ＬＩＮＧＯ−１アンタゴニストと、高用量コルチコステロイドとの併用治療が、相乗効果を有し得ることを示唆した（図８）。
全体的に、ＬＩＮＧＯ−１拮抗作用は、ラットＥＡＥにおいて視神経内の軸索喪失を低減した。軸索保護は、高用量静脈内メチルプレドニゾロンで３日間、毎日の処置で見られなかったが、抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体処置は、炎症性脱髄において軸索保護をもたらし、また抗ＬＩＮＧＯ−１モノクローナル抗体と高用量ＩＶメチルプレドニゾロンとの併用治療は、さらに優れた軸索保護をもたらした。
つまり簡潔には、モノクローナル抗ＬＩＮＧＯ−１抗体によるＬＩＮＧＯ−１遮断は、ラットＭＯＧ−ＥＡＥにおいて軸索喪失を低減し、ラットＭＯＧ−ＥＡＥにおけるＬＩＮＧＯ−１遮断の神経保護効果は、高用量ステロイドによる抗炎症治療の存在下または非存在下で見られた
参照による組み込み
本出願全体を通じて引用される、全ての参考文献、図面、配列表、特許、および公開済み特許出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に述べられる全ての出版物、特許、および特許出願は、各個別出版物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれるように特異的かつ個別に示されたかのように、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、本明細書における任意の定義を含む本出願が優先する。
任意のポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列も参照によりそれら全体が組み込まれ、ゲノム研究機関（ＴＩＧＲ）によりｔｉｇｒ．ｏｒｇにおいてワールドワイドウェブ上で維持されるもの、および／または国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）によりｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにおいてワールドワイドウェブ上で維持されるもの等の公共データベースにおけるエントリに相関する受託番号を参照する。
等価物
当業者であれば、ほんの日常的な実験を使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多数の等価物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような等価物は、包含されることが意図される。

Claims (65)

  1. 多発性硬化症または視神経の炎症状態から選択されるＣＮＳ脱髄疾患の治療を必要とする対象において、それを治療する方法であって、前記方法が、前記ＣＮＳ脱髄疾患を治療するのに十分な量の抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子および免疫抑制剤を前記対象に投与することを含み、前記免疫抑制剤が、
    ＩＦＮ−β１分子、
    コルチコステロイド、
    グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシンのポリマーまたはグラチラマー、
    α−４インテグリンに対する抗体もしくはその断片またはナタリズマブ、
    アントラセンジオン分子またはミトキサントロン、
    フィンゴリモドもしくはＦＴＹ７２０、または他のＳＩＰ１機能調節因子、
    フマル酸ジメチル、
    Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のαサブユニットに対する抗体またはダクリズマブ、
    ＣＤ５２に対する抗体またはアレムツズマブ、
    ＣＤ２０に対する抗体、あるいは
    ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼの阻害剤またはテリフルノミド
    のうちの１つ以上から選択され、それによって前記ＣＮＳ脱髄疾患を治療する、方法。
  2. 前記ＣＮＳ脱髄疾患が、多発性硬化症である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記視神経の炎症状態が、視神経炎である、請求項１に記載の方法。
  4. 前記視神経炎が、急性視神経炎である、請求項３に記載の方法。
  5. 多発性硬化症または視神経炎の治療を必要とする対象において、それを治療する方法であって、前記多発性硬化症または視神経炎を治療するのに十分な量の抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子およびＩＦＮ−β１分子を、前記対象に投与することを含む、方法。
  6. 多発性硬化症または視神経炎の治療を必要とする対象において、それを治療する方法であって、前記多発性硬化症または視神経炎を治療するのに十分な量の抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子およびコルチコステロイドを、前記対象に投与することを含む、方法。
  7. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、髄鞘形成を強化する、神経軸索保護を強化する、オリゴデンドロサイトの分化および生存を促進する、シナプス数もしくはシナプス効率を強化する、または伝導速度を加速させる、のうちの１つ以上を引き起こす、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
  8. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、ヒトＬＩＮＧＯ−１に対するモノクローナル抗体である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
  9. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、ヒトＬＩＮＧＯ−１に対するヒト、ヒト化、ＣＤＲ移植、またはインビトロ生成された抗体である、請求項８に記載の方法。
  10. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、免疫グロブリンＧサブクラス１（ＩｇＧ１）である、請求項８または９のいずれかに記載の方法。
  11. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、アグリコシル（ＩｇＧ１）フレームワークを含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
  12. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、野生型ＩｇＧ１と比較してエフェクター細胞および補体機能を低減するように修飾される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
  13. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号６、７、もしくは８、または配列番号２、３、もしくは３０のアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一の配列を含む、重鎖可変ドメインのうちの１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
  14. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号１４、１５、もしくは１６、または配列番号１０、１１、もしくは１２のアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一の配列を含む、軽鎖可変ドメインのうちの１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
  15. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号５もしくは配列番号６６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む、重鎖可変ドメインを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
  16. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号１３もしくは配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む、軽鎖可変ドメインを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
  17. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号２７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む重鎖と、配列番号２７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む軽鎖とを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
  18. 前記ＩＦＮ−β１分子が、ＩＦＮ−β１ａまたはＩＦＮ−β１ｂポリペプチド、その変異体、相同体、断片、またはペグ化変異体のうちの１つ以上を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  19. 前記ＩＦＮ−β１分子が、ＩＦＮ−β１ａ分子、ＩＦＮ−β１ｂ分子、またはＩＦＮ−β１ａ分子もしくはＩＦＮ−β１ｂ分子のペグ化変異体から選択されるＩＦＮβ剤を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  20. 前記ＩＦＮ−β１ａ分子が、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）またはＲｅｂｉｆ（登録商標）であり、ＩＦＮβ−１ｂ分子が、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）またはＢｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）またはＥｘｔａｖｉａ（登録商標）である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号５または配列番号６６の前記アミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１３または配列番号９の前記アミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、を含み、前記免疫抑制剤が、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）である、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
  22. 前記対象が、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、一次進行型ＭＳ、二次進行型ＭＳ、臨床的に孤立した症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＣＩＳ））、臨床的に定義されたＭＳ（ＣＤＭＳ）、または良性ＭＳのうちの１つを有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
  23. 前記対象が、１つ以上の新たに発達した病変を有する、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記対象が、１つ以上の既存の病変を有する、請求項２２に記載の方法。
  25. 前記対象が、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）を有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
  26. 前記対象が、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）を有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
  27. 前記対象が、活動性疾患を有する患者である、請求項２５または２６に記載の方法。
  28. 前記治療するステップが、前記疾患に関連する１つ以上の症状を低減すること、または前記対象において、障害の再発もしくは悪化を低減、遅延、もしくは防止することを含む、請求項１〜２７のいずれかに記載の方法。
  29. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子および前記免疫抑制剤が、同時に投与される、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  30. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子および前記免疫抑制剤が、連続して投与される、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  31. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子および前記免疫抑制剤の前記投与が、互いに一部重複する、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  32. 前記免疫抑制剤および前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の前記投与の開始が、同時に起こる、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  33. 前記免疫抑制剤が、前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子で治療を開始する前に投与される、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  34. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、前記免疫抑制剤で治療を開始する前に投与される、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  35. 前記免疫抑制剤の投与が、前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の投与の中止後も継続する、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  36. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子の投与が、前記免疫抑制剤の投与の中止後も継続する、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
  37. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、ＬＩＮＧＯ−１に対する抗体分子であり、静脈内、皮下、硝子体内、髄腔内、または筋肉内に投与される、請求項１〜３６のいずれかに記載の方法。
  38. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、静脈内に投与される、請求項４０に記載の方法。
  39. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、１〜１００ｍｇ／ｋｇで投与される、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
  40. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇで投与される、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
  41. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、ＩＶ注入により１週間、２週間、３週間、４週間、または５週間ごとに１回投与される、請求項１〜４０のいずれかに記載の方法。
  42. 前記免疫抑制剤が、ＩＦＮ−β１分子が、静脈内、皮下、または筋肉内に投与される、請求項１〜４１のいずれかに記載の方法。
  43. 請求項４２に記載の方法であって、
    前記ＩＦＮ−β１分子が、
    （ｉ）筋肉内注射により２０〜４５マイクログラムで週１回、
    （ｉｉ）皮下注射により２０〜３０マイクログラムで週３回、もしくは４０〜５０マイクログラムで週３回、または
    （ｉｉｉ）筋肉内に１０〜５０μｇの量で週３回、もしくは５〜１０日ごとに週１回、のうちの１つ以上で投与される、方法。
  44. 請求項１〜４３のいずれかに記載の方法であって、
    前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇで投与されるＩＶ注入により４週間ごとに１回投与され、
    前記免疫抑制剤が、ＩＦＮ−β１であり、
    （ｉ）筋肉内注射により２０〜４５マイクログラムで週１回
    （ｉｉ）皮下注射により２０〜３０マイクログラムで週１回もしくは週３回、または４０〜５０マイクログラムで週１回もしくは週３回、あるいは
    （ｉｉｉ）筋肉内に１０〜５０μｇの量で、例えば、週３回、もしくは５〜１０日ごと、のうちの１つ以上で投与される、方法。
  45. 請求項１〜４４のいずれかに記載の方法であって、
    前記対象が、
    神経学的検査を行うこと、
    拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）での前記対象の状態を取得すること、
    多発性硬化症機能性複合（ＭＳＦＣ）での前記対象の状態を取得すること、
    前記対象の病変状態を検出すること、
    上肢および／もしくは下肢機能の測定を取得すること、
    短距離歩行機能の測定を取得すること、
    長距離歩行機能の測定を取得すること、
    認知機能の測定を取得すること、または
    視覚機能の測定を取得すること、のうちの１つ以上によって評価されているか、またはそれを評価されているところである、方法。
  46. 請求項１〜４４のいずれかに記載の方法であって、
    ＭＳＦＣでの前記対象の状態を取得すること、
    神経学的検査を行うこと、
    拡大障害状態尺度（ＥＤＳＳ）での前記対象の状態を取得すること、
    前記対象の病変状態を検出すること、
    上肢および／もしくは下肢機能の測定を取得すること、
    短距離歩行機能の測定を取得すること、
    長距離歩行機能の測定を取得すること、
    認知機能の測定を取得すること、または
    視覚機能の測定を取得すること、のうちの１つ以上をさらに含む、方法。
  47. 前記上肢機能の測定が、９ホールペグテスト（９ＨＰ）を用いて取得される、請求項４５または４６に記載の方法。
  48. 前記短距離歩行機能の測定が、２５フィートの時限歩行（Ｔ２５ＦＷ）を用いて取得される、請求項４５または４６に記載の方法。
  49. 前記認知機能の測定が、学習テスト、記憶テスト、および／または注意／処理速度テストの評価を含む、請求項４５または４６に記載の方法。
  50. 前記対象が、ＥＤＳＳ評価と、短距離歩行機能、長距離歩行機能、上肢機能、または下肢機能の評価のうちの１つ、２つ、３つ、または全てから選択される歩行機能の評価とを用いて評価される、請求項１〜４４のいずれかに記載の方法。
  51. 四肢および／または歩行機能の測定の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、またはそれ以上の増加が、前記対象における疾患の進行を示し、四肢および／または歩行機能の測定の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、またはそれ以上の減少が、前記対象における改善された転帰を示す、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記認知機能の測定が、聴覚記憶、言語学習、および／または言語情報の記憶のうちの１つ以上の評価（例えば、選択式回想テスト（ＳＲＴ））；聴覚／言語記憶を評価するためのテスト（例えば、カリフォルニア言語学習テスト第二版（ＣＶＬＴ２））、レイ聴覚言語学習テスト（ＲＡＶＬＴ）；視覚／空間記憶を評価するためのテスト（例えば、簡単な視空間記憶テスト改訂版（ＢＶＭＴＲ））；認知テスト、例えば、ＰＡＳＡＴ、ＳＤＭＴ；ならびに患者が報告した転帰測定（例えば、ＭＳＷＳ−１２、ＭＳＩＳ−２９、ＡＢＩＬＨＡＮＤ、ＭＳＮＱ、および／またはＳＦ−３６）を含む、請求項４９に記載の方法。
  53. 前記認知機能の測定が、ＳＤＭＴ、ＰＡＳＡＴ−３および−３、ＳＲＴ−合計学習（ＳＲＴ−ＴＬ）、ＳＲＴ遅延想起（ＳＲＴ−ＤＲ）、ならびにＢＶＭＴＲ遅延想起（ＢＶＭＴＲ−ＤＲ）を含む、ＭＳ認知エンドポイントの複合を用いて行われる、請求項４５または４６のいずれかに記載の方法。
  54. 前記認知機能の測定が、ＭＳ−ＣＯＧを含む、請求項５３に記載の方法。
  55. 請求項４５〜５４のいずれかに記載の方法であって、
    前記対象における改善が、
    ａ．６．０以下のベースラインスコアから１．０ポイント以上のＥＤＳＳの減少、
    ｂ．Ｔ２５ＦＷのベースラインから１５％以上の改善、
    ｃ．９ＨＰＴのベースラインから１５％以上の改善、または
    ｄ．ＰＡＳＡＴのベースラインから１５％以上の改善、のうちの１つ以上によって定義される、方法。
  56. 前記対象の病変状態が、磁気共鳴撮像を用いて評価される、請求項４５〜５４のいずれかに記載の方法。
  57. 前記磁気共鳴撮像が、磁気転写および拡散テンソル撮像を含む、請求項５６に記載の方法。
  58. ヒトＬＩＮＧＯ−１に対する抗体分子およびＩＦＮ−β１分子を、多発性硬化症または視神経の炎症状態を治療する際に使用するための指示とともに含む、キット。
  59. ヒトＬＩＮＧＯ−１に対する抗体分子およびＩＦＮ−β１分子を、多発性硬化症または視神経の炎症状態を治療する際に使用するための指示とともに含む、パッケージ化された組成物。
  60. 急性視神経炎の治療を必要とする対象において、それを治療する方法であって、前記急性視神経炎を治療するのに十分な量の抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子を前記対象に投与することを含む、方法。
  61. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号６、７、もしくは８、または配列番号２、３、もしくは３０のアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一の配列を含む、重鎖可変ドメインのうちの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記抗ＬＩＮＧＯ−１抗体分子が、配列番号１４、１５、もしくは１６、または配列番号１０、１１、もしくは１２のアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一の配列を含む、軽鎖可変ドメインのうちの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む、請求項６０に記載の方法。
  63. 前記抗体分子が、配列番号５もしくは配列番号６６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む、重鎖可変ドメインを含む、請求項６０に記載の方法。
  64. 前記抗体分子が、配列番号１３もしくは配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む、軽鎖可変ドメインを含む、請求項６０に記載の方法。
  65. 前記抗体分子が、配列番号２７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む重鎖と、配列番号２７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む軽鎖と、を含む、請求項６０に記載の方法。

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