KR102257645B1 - 탈수초성 질환의 치료를 위한 복합 요법 및 용도 - Google Patents

탈수초성 질환의 치료를 위한 복합 요법 및 용도 Download PDF

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Abstract

인간 개체에서 염증성 병태를 완화시키면서, 수초화, 재수초화, 희소돌기아교세포 숫자, 또는 신경축삭돌기 보호 중에서 하나 또는 그 이상을 향상시키기 위한 방법 및 조성물이 개시된다. 일정한 구체예에서, 본원에서 설명된 방법 및 조성물은 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제를 조합하여 포함한다. 따라서, 본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트는 CNS 탈수초성 질환을 치료하는데 유용할 수 있다.

Description

탈수초성 질환의 치료를 위한 복합 요법 및 용도{COMBINATION THERAPIES AND USES FOR TREATMENT OF DEMYELINATING DISORDERS}
관련 출원
본 출원은 2012년 10월 9일자 제출된 미국 가출원 제61/711,638호에 우선권을 주장하고, 이의 내용은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
다발성 경화증 (MS)은 미엘린초의 파괴를 초래하는 염증의 재발성 병소에 의해 특징되는 뇌와 척수의 염증성 질환이다. 많은 영역에서, 신경 섬유 역시 손상된다. MS 환자에서 염증 활성은 질환의 초기 단계에서 최고인 경향이 있다.
최근의 자료들은 비가역적 축삭돌기의 손실이 MS 과정 초기에 발생한다고 증명하였다. 횡단 축삭돌기는 중추 신경계 (CNS)에서 재생에 실패하고, 따라서, MS 병변 형성 억제를 목표로 하는 초기 치료가 중요하다. 빠르게는 질환 개시에서, 축삭돌기는 활성 염증이 있는 병변에서 절단된다 (Trapp et al.(1998) N Engl J Med 338: 278-285; Bjartmar et al.(2001) Curr Opin Neurol 14: 271-278; Ferguson et al.(1997) Brain 120: 393-399). 탈수초화 정도는 비염증성 매개인자뿐만 아니라 염증성 환경에 대한 탈수초화된 축삭돌기의 노출 및 염증 정도와 관련된다 (Trapp et al.(1998) N Engl J Med 338: 278-285; Kornek et al.(2000) Am J Pathol 157: 267-276; Bitsch et al.(2000) Brain 123: 1174-1183). 탈수초화 병변에서 재수초화가 손상된 희소돌기아교세포의 파괴도 존재한다 (Peterson et al.(2002) J Neuropathol Exp Neurol 61: 539-546; Chang et al.(2002) N Engl J Med 346: 165-173). 희소돌기아교세포의 손실은 재수초화 능력의 감소를 초래하고 뉴런 및 축삭돌기를 지원하는 영양 인자의 손실을 일으킬 수도 있다 (Bjartmar et al.(1999) J Neurocytol 28: 383-395).
CNS 탈수초성 질환, 예를 들면, 다발성 경화증 (MS)에 대해 현재 승인된 요법은 주로 면역조정성이고, 그리고 전형적으로, CNS 수복에 대한 직접적인 효과가 없다. 희소돌기아교세포에 의한 축삭돌기 재수초화가 어느 정도 MS 과정 동안 초기에 발생하지만, CNS를 수복하는 능력은 결국 실패하고, 비가역적인 조직 손상이 야기되고 질환 관련 장애가 증가된다. 따라서, CNS 탈수초성 질환, 예를 들면, MS에서 재수초화 및 신경축삭돌기 보호를 향상시키는 추가적인 요법이 요구되고 있다.
발명의 요약
본 발명은 최소한 부분적으로, 개체에서 염증성 병변을 완화시키면서, 개체, 예를 들면, 인간 (가령, 인간 MS 환자)에서 수초화, 재수초화, 희소돌기아교세포 숫자, 또는 신경축삭돌기 보호 중에서 하나 또는 그 이상을 향상시키기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 일정한 구체예에서, 본원에서 설명된 방법 및 조성물은 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제를 조합하여 포함한다. 다른 구체예에서, 치유제 (가령, LINGO-1 길항제)는 시신경의 염증성 병태, 예를 들면, 시신경염 (가령, 급성 시신경염 (AON))을 치료하는데 이용될 수 있다. 따라서, 본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트는 CNS 장애, 예를 들면, CNS 탈수초성 질환을 치료하는데 유용할 수 있다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 개체 (가령, 치료가 필요한 개체)에서, 수초화, 재수초화, 희소돌기아교세포 숫자, 또는 신경축삭돌기 보호 중에서 하나 또는 그 이상을 향상시키는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 수초화, 재수초화, 희소돌기아교세포 숫자, 또는 신경축삭돌기 보호 중에서 하나 또는 그 이상을 향상시키는데 충분한 양으로, 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 개체 (가령, 치료가 필요한 개체)에서, CNS 장애, 예를 들면, CNS 탈수초성 질환 (가령, 다발성 경화증)을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 질환과 관련된 하나 또는 그 이상의 증상을 감소시키기에 충분한 양으로 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제를 개체에게 투여하고, 따라서 질환을 치료하는 단계를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 치료는 개체에서, 질환과 연관된 하나 또는 그 이상의 증상 감소; 및/또는 재발, 또는 장애 악화의 감소, 지연 또는 예방을 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제, 예를 들면, 본원에서 설명된 작용제를 포함하는 키트를 특징으로 한다. 임의선택적으로, 키트는 CNS 장애, 예를 들면, CNS 탈수초성 질환을 치료하는데 이용하기 위한 이용설명서가 표지되고 및/또는 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및/또는 면역조정제, 예를 들면, 본원에서 설명된 작용제를 포함하는 포장 조성물 (가령, 포장된 약학 조성물)을 특징으로 한다. 임의선택적으로, 포장 조성물은 CNS 장애, 예를 들면, CNS 탈수초성 질환을 치료하는데 있어 치유제 및 면역조정제의 조합으로 이용을 위한 이용설명서가 표지되고 및/또는 포함된다. LINGO-1 길항제 및/또는 면역조정제는 임의의 투여 경로, 예를 들면, 말초 투여 (가령, 정맥내, 피하, 근육내, 유리체내, 척수강내, 또는 경구 투여)에 적합한 형태일 수 있다. 투여 경로는 이용되는 조성물에 따라서 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 한 구체예에서, 포장 약학 조성물은 정맥내 투여에 적합한 형태 또는 조제물에서 LINGO-1 길항제 (가령, LINGO-1에 대한 항체)를 포함한다. 다른 구체예에서, 포장 약학 조성물은 근육내 투여에 적합한 형태 또는 조제물에서 면역조정제 (가령, 인터페론)를 포함한다. 하나 또는 그 이상의 작용제가 포장 약학 조성물에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 개체 (가령, 치료가 필요한 개체)에서, 시신경의 염증성 병태, 예를 들면, 시신경염 (가령, 급성 시신경염 (AON))을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 병태와 연관된 하나 또는 그 이상의 증상을 감소시키기에 충분한 양으로 치유제 (가령, LINGO-1 길항제)를 개체에게 투여하여 질환을 치료하는 단계를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 치료는 개체에서, 병태 또는 질환과 연관된 하나 또는 그 이상의 증상 감소; 및/또는 재발, 또는 장애 악화 감소, 지연 또는 예방을 포함한다.
임의의 전술한 방법, 조성물 및 키트의 추가적인 구체예, 특징 또는 개선점은 다음과 같다.
CNS 장애 및 CNS 탈수초성 질환
CNS 장애 (가령, CNS 탈수초성 질환)은 탈수초화, 이상수초형성, 축삭돌기 손상, 축삭돌기 영역 또는 축삭돌기 확산성의 손실, 또는 뉴런 시냅시스/연결성의 손실, 및/또는 희소돌기아교세포 또는 신경 세포의 기능이상 또는 사멸 중에서 하나 또는 그 이상과 연관된 임의의 병태, 질환, 장애 또는 손상일 수 있다. 일정한 구체예에서, CNS 장애는 축삭돌기의 미엘린초에 손상을 초래하여 신경계에 영향을 미친다. 다른 구체예에서, CNS 장애는 예로서, 뇌 및 척수에서 축삭돌기 연장 또는 신경돌기 연장의 Nogo 수용체-1 (NgR1-) 매개된 저해를 포함한다. 다른 구체예에서, CNS 장애는 하나 또는 그 이상의 염증성 성분을 포함한다. 예시적인 CNS 장애는 제한 없이, CNS 탈수초성 질환, CNS 손상, 근위축성 축삭 경화증 (ALS), 헌팅턴병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 당뇨성 신경병증, 뇌졸중, 특발성 염증성 탈수초성 질환, 다발성 경화증 (MS), 시신경염 (가령, 급성 시신경염), 시신경척수염 (NMO), 백질이영양증, 비타민 B12 결핍증, 진행성 다초점 백질뇌증 (PML), 뇌척수염 (EPL), 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 중추 뇌교 수초용해 (CPM), 월러 변성, 부신백질이영양증, 알렉산더 질환, 펠리제우스 메리츠바하 질환 (PMZ), 외상성 녹내장, 백질연화증 (PVL), 수전증, 백질 뇌졸중, 또는 횡단성 척수염을 포함한다. CNS 탈수초성 질환은 상기 언급한 질환 중에서 하나 또는 그 이상에서 선택될 수 있다. 한 구체예에서, CNS 탈수초성 질환은 다발성 경화증이다. 다른 구체예에서, CNS 탈수초성 질환은 시신경염, 예를 들면, 급성 시신경염이다.
치유제
일정한 구체예에서, 치유제는 수초화 또는 재수초화 증강, 신경축삭돌기 보호 증강, 축삭돌기 확장 증가, 신경 발아 증가, 및/또는 희소돌기아교세포 숫자 증진 중에서 하나 또는 그 이상을 야기한다 (가령, 희소돌기아교세포의 생존 또는 분화 중에서 하나 또는 그 이상을 증가시킴으로써).
한 구체예에서, 치유제는 LRR 및 Ig 도메인-내포 Nogo 수용체-상호작용 단백질 ("LINGO", 예를 들면, LINGO-1)의 길항제이다. 이전에 Sp35라고 불렸던, LINGO-1은 희소돌기아교세포 분화, 수초화 및 재수초화의 음성 조절인자로서 기능하는 것으로 여겨지는, 뉴런 및 희소돌기아교세포 내에 성체 CNS에서 선택적으로 발현되는 세포 표면 당단백질이다. 따라서, LINGO-1의 길항작용은 예로서, 희소돌기아교세포에 의한 수초화 또는 재수초화를 향상시키고, 그리고 CNS에서 신경축삭돌기 보호를 향상시킬 수 있다. LINGO-1은 2006년 7월 7일자 제출된 국제 특허 출원 PCT/US2006/026271, 2004년 3월 17일자 제출된 PCT/US2004/008323, 2005년 6월 24일자 제출된 PCT/US2005/022881, 그리고 2008년 1월 9일자 제출된 PCT/US2008/000316에서 설명되었고, 이들은 각각 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
한 구체예에서, 치유제, 예를 들면, LINGO-1 길항제는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1의 발현 또는 활성을 저해하거나 또는 감소시킨다.
한 구체예에서, 치유제, 예를 들면, LINGO-1 길항제는 NgR1, p75, 그리고 LINGO-1; 및/또는 NgR1, TAJ (TROY), 그리고 LINGO-1의 복합체 (가령, 기능성 신호전달 복합체)의 형성 및/또는 활성을 저해하거나 또는 감소시킨다. 다른 구체예에서, 치유제, 예를 들면, LINGO-1 길항제는 NgR1에 대한 LINGO-1의 결합을 감소시키거나 또는 저해시킨다.
한 구체예에서, 치유제, 예를 들면, LINGO-1의 길항제는 항체 분자이다. 한 구체예에서, 항체 분자는 NgR1, p75, 그리고 LINGO-1; 및/또는 NgR1, TAJ (TROY), 그리고 LINGO-1의 복합체 (가령, 기능성 신호전달 복합체)의 형성 및/또는 활성을 감소시킨다. 한 구체예에서, 항체 분자는 복합체의 성분 중에서 최소한 하나 (가령, NgR1, p75, 그리고 LINGO-1 중에서 최소한 하나; 및/또는 NgR1, TAJ (TROY), 그리고 LINGO-1 중에서 최소한 하나)에 결합하고, 기능성 신호전달을 저해하거나 또는 감소시킨다.
한 구체예에서, 항체 분자는 LINGO, 예를 들면, 인간 LINGO에 결합한다. 다른 구체예에서, 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1에 결합한다. 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 포유류 LINGO-1 (가령, 인간 LINGO-1 (또는 이의 기능적 변이체))에 결합하는 단일클론 또는 단일 특이성 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 (가령, Fab, F(ab')2, Fv, 단일 사슬 Fv 단편, 단일 도메인 항체, 디아바디 (dAb), 2가 또는 이중특이적 항체 또는 이의 단편, 이의 단일 도메인 변이체)이다. 한 구체예에서, 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1에 대한 단일클론 항체이다. 전형적으로, 항체 분자는 인간 LINGO-1에 대한 인간, 인간화, CDR-합체된, 키메라, 낙타과, 또는 시험관내 생성된 항체 (또는 이의 기능적 단편, 예를 들면, 본원에서 설명된 항체 단편)이다. 전형적으로, 항체는 LINGO-1의 하나 또는 그 이상의 활성 (가령, 본원에서 설명된 LINGO-1의 하나 또는 그 이상의 생물학적 활성)을 저해하거나, 감소시키거나 또는 중화시킨다.
항체 분자는 전장 (가령, 최소한 1개 및 전형적으로, 2개의 완전한 중쇄, 그리고 최소한 1개 및 전형적으로 2개의 완전한 경쇄를 포함할 수 있음)이거나, 또는 항원 결합 단편 (가령, Fab, F(ab')2, Fv, 단일 사슬 Fv 단편, 또는 단일 도메인 항체 또는 이의 단편)을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항체 분자는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 그리고 IgE의 중쇄 불변 영역; 특히 예로서, IgG1, IgG2, IgG3, 그리고 IgG4의 (가령, 인간) 중쇄 불변 영역에서 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 다른 구체예에서, 항체 분자는 예로서, 카파 또는 람다의 (가령, 인간) 경쇄 불변 영역에서 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 항체 분자의 프레임워크 영역 또는 불변 영역은 예로서, 항체의 특성을 변경 (가령, Fc 수용체 결합, 항체 당화, 시스테인 잔기 수, 작동체 세포 기능, 및/또는 보체 기능 중 하나 또는 그 이상의 증가 또는 감소)하기 위해서 변화, 예를 들면, 돌연변이될 수 있다. 한 구체예에서, 항체 분자의 프레임워크 또는 불변 영역은 예로서, Fc 수용체 결합, 항체 당화, 시스테인 잔기 수, 작동체 세포 기능, 및/또는 보체 기능 중에서 하나 또는 그 이상을 감소시키기 위해 변화, 예를 들면, 돌연변이된다. 한 구체예에서, 항체 분자의 프레임워크 영역은 항체 당화, 작동체 세포 및/또는 보체 기능을 감소시키기 위해 변형된다. 한 구체예에서, 항체 분자는 비당화 프레임워크를 포함한다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1에 결합하고, 면역글로불린 G 하위부류 1 (IgG1)이다. 일정한 구체예에서, 항체 분자는 야생형 IgG1과 비교하여 작동체 세포 및 보체 기능이 감소하도록 변형된다. 한 구체예에서, 항체 분자는 비당화 (IgG1) 프레임워크를 포함한다.
일정한 구체예에서, 항체 분자는 본원에서 전체적으로 참조로서 편입되는 미국 특허 제8,058,406호 및 미국 특허 제8,128,926호에 설명된, 기준 단일클론 항체 Li62 또는 Li81과 동일하거나, 또는 실제적으로 동일한 LINGO-1 에피토프에 특이적으로 결합한다. 한 구체예에서, 항체 분자는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되고, 여기서 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 표 3에 개시된 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 표 3에 개시된 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열; 또는 Li62 또는 Li81의 면역글로불린 중쇄의 VH CDR1, CDR2와 CDR3과 최소한 80%, 85%, 90, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)에서 선택된다.
일부 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 4 또는 서열 번호: 8 또는 서열 번호: 17 내지 49 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH CDR1, CDR2와 CDR3이 각각 서열 번호: 6, 7과 8의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH CDR1, CDR2와 CDR3이 각각 서열 번호: 2, 3과 30의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH를 포함한다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 표 4에 개시된 폴리펩티드 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 표 4에 개시된 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하거나, 또는 Li62 또는 Li81의 면역글로불린 경쇄의 VL CDR1, CDR2와 CDR3 영역과 최소한 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)에서 선택된다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VL을 포함하고, 여기서 VL CDR1, CDR2와 CDR3은 각각 서열 번호: 14, 15와 16의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VL을 포함하고, 여기서 VL CDR1, CDR2와 CDR3은 각각 서열 번호: 10, 11과 12의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH CDR1, CDR2와 CDR3은 각각 서열 번호: 6, 7과 8의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되고, 그리고 VL CDR1, CDR2와 CDR3은 각각 서열 번호: 14, 15와 16의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH CDR1, CDR2와 CDR3은 각각 서열 번호: 2, 3과 30의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되고, 그리고 VL CDR1, CDR2와 CDR3은 각각 서열 번호: 10, 11과 12의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 1, 5, 그리고 53-85, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 1, 5 및 53-85와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)로 구성된 군에서 선택된 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 5의 아미노산 서열 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 5와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 66의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 66과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH를 포함한다.
또 다른 구체예에서, 항체 분자는 표 4에 개시된 바와 같은, 서열 번호: 9 및 13, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 표 4에 개시된 바와 같은, 상기 서열 번호: 9 및 13과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)로 구성된 군에서 선택된 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 13의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 13과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 9의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 9와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 5의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 5와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH; 그리고 서열 번호: 13의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 13과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 66의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 66과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VH; 그리고 서열 번호: 9의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 9와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 VL을 포함한다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 다음과 같은, 서열 번호: 275의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는, 이하에 도시한 바와 같은 중쇄를 포함한다:
Figure 112015044182874-pct00001
다른 구체예에서, 항체 분자는 다음과 같은, 서열 번호: 276의 아미노산, 또는 이것과 실제적으로 동일한 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는, 하기에 도시한 바와 같은 경쇄를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다:
Figure 112015044182874-pct00002
다른 구체예에서, 치유제, 예를 들면, LINGO-1의 길항제는 가용성 LINGO 분자, 예를 들면, LINGO-1 분자 (가령, LINGO-1의 단편), 또는 LINGO-1 복합체의 성분의 가용성 형태 (가령, NgR1, p75, 또는 TAJ (TROY)의 가용성 형태)이다.
LINGO 또는 복합체 성분의 가용성 형태는 제2 모이어티, 예를 들면, 면역글로불린 Fc 도메인, 혈청 알부민, PEG화, GST, Lex-A, MBP 폴리펩티드 서열, 또는 항체 (가령, 이중특이적 또는 다중특이적 항체)에 기능적으로 연결되거나 (가령, 화학적 커플링, 유전적 또는 폴리펩티드 융합, 비공유 결합 등에 의해) 또는 단독으로 이용될 수 있다. 융합 단백질은 부가적으로, 제1 모이어티, 예를 들면, LINGO-1 또는 복합체 성분의 가용성 형태를 제2 모이어티에 연결시키는 링커 서열을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 부가적인 아미노산 서열은 발현, 입체 유연성, 검출 및/또는 단리 또는 정제가 용이하도록 융합 단백질의 N 말단 또는 C 말단에 부가될 수 있다. 가령, LINGO-1 또는 복합체 성분의 가용성 형태는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 그리고 IgE를 비롯한 다양한 아이소타입의 중쇄 불변 영역에 융합될 수 있다. 전형적으로, 융합 단백질은 LINGO 또는 복합체 성분 (또는 이의 상동성 서열)의 세포외 도메인을 포함할 수 있고, 그리고 예로서, 인간 면역글로불린 Fc 사슬, 예를 들면, 인간 IgG (가령, 인간 IgG1 또는 인간 IgG2, 또는 이의 돌연변이 형태)에 융합된다. Fc 서열은 작동체 세포 기능, Fc 수용체 결합 및/또는 보체 활성을 감소시키기 위해 하나 또는 그 이상의 아미노산에서 돌연변이될 수 있다.
다른 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 치유제가 조합으로 부가된다. 가령, LINGO-1 길항제는 다른 재수초화 작용제와 조합으로 부가될 수 있다.
면역조정제
본원에서 설명된 방법, 키트 및 조성물은 하나 또는 그 이상의 면역조정제를 포함할 수 있다. 일정한 구체예에서, 면역 조정제는
IFN-β1 분자;
글루탐산, 리신, 알라닌 및 티로신의 중합체, 예를 들면, 글라티라머 (가령, Copaxone®);
알파-4 인테그린에 대한 항체 또는 이의 단편, 예를 들면, 나탈리주맙 (가령, Tysabri®);
안트라센디온 분자, 예를 들면, 미톡산트론 (가령, Novantrone®);
핀골리모드, 예를 들면, FTY720 (가령, Gilenya®);
디메틸 푸마르산염, 예를 들면, 경구 디메틸 푸마르산염 (가령, Tecfidera®);
T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체, 예를 들면, 다클리주맙;
CD52에 대한 항체, 예를 들면, 알렘투주맙 (가령, CAMPATH);
디히드로오로테이트 탈수소효소의 저해제, 예를 들면, 레플루노미드 또는 이의 활성 대사산물, 예를 들면, 테리플루노미드 (가령, AUBAGIO);
CD20에 대한 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙;
예로서, WO 2012/109108에 설명된, 스핑고신 1-포스페이트 (S1P) 조정제; 또는
코르티코스테로이드 중에서 하나 또는 그 이상에서 선택된다.
한 구체예에서, 면역조정제는 IFN-β1 분자이다. IFN-β1 분자는 IFN-β1a 또는 IFN-β1b 폴리펩티드, 이의 변이체, 동족체, 단편 또는 PEG화 변이체 중에서 하나 또는 그 이상에서 선택될 수 있다.
한 구체예에서, IFN-β1 분자는 IFN-β1a 분자, IFN-β1b 분자, 또는 IFN-β1a 분자 또는 IFN-β1b 분자의 PEG화 변이체에서 선택된 IFNβ 작용제를 포함한다.
한 구체예에서, IFNβ1 분자는 IFN-β1a 작용제 (가령, Avonex®, Rebif®)이다. 다른 구체예에서, IFNβ1 분자는 INF-β1b 작용제 (가령, Betaseron®, Betaferon® 또는 Extavia®)이다.
한 구체예에서, 면역조정제는 글루탐산, 리신, 알라닌 및 티로신의 중합체, 예를 들면, 글라티라머 (가령, Copaxone®)이다.
한 구체예에서, 면역조정제는 알파-4 인테그린에 대한 항체 또는 이의 단편 (가령, 나탈리주맙 (가령, Tysabri®))이다.
또 다른 구체예에서, 면역조정제는 안트라센디온 분자 (가령, 미톡산트론 (가령, Novantrone®))이다.
또 다른 구체예에서, 면역조정제는 핀골리모드 (가령, FTY720; 예를 들면, Gilenya®)이다.
한 구체예에서, 면역조정제는 디메틸 푸마르산염 (가령, 경구 디메틸 푸마르산염 (가령, BG-12))이다.
다른 구체예에서, 면역조정제는 T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체 (가령, 다클리주맙)이다.
다른 구체예에서, 면역조정제는 CD20에 대한 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙이다.
다른 구체예에서, 면역조정제는 코르티코스테로이드, 예를 들면, 메틸프레드니솔론 (가령, 고용량 코르티코스테로이드, 예를 들면, 메틸프레드니솔론)이다.
일정한 구체예에서, 상기 방법은 하나 또는 그 이상의 증상 관리 요법, 예를 들면, 그 중에서도 특히 항우울제, 진통제, 항떨림제 등의 이용을 더욱 포함한다.
치유제 (가령, 본원에서 설명된 하나 또는 그 이상의 치유제, 예를 들면, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제 (가령, 본원에서 설명된 하나 또는 그 이상의 면역조정제)의 임의의 조합이 본원에서 설명된 방법, 키트 및 조성물에서 이용될 수 있다. 가령, 치유제는 글루탐산, 리신, 알라닌 및 티로신의 중합체, 예를 들면, 글라티라머와 조합될 수 있다. 다른 구체예에서, 치유제는 알파-4 인테그린에 대한 항체 또는 이의 단편, 예를 들면, 나탈리주맙과 조합될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치유제는 안트라센디온 분자, 예를 들면, 미톡산트론과 조합될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치유제는 핀골리모드, 예를 들면, FTY720과 조합될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치유제는 디메틸 푸마르산염, 예를 들면, 경구 디메틸 푸마르산염과 조합될 수 있다. 다른 구체예에서, 치유제는 T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체, 예를 들면, 다클리주맙과 조합될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치유제는 CD52에 대한 항체, 예를 들면, 알렘투주맙과 조합될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치유제는 디히드로오로테이트 탈수소효소의 저해제, 예를 들면, 테리플루노미드와 조합될 수 있다. 다른 구체예에서, 치유제는 CD20에 대한 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙과 조합될 수 있다. 다른 구체예에서, 치유제는 코르티코스테로이드, 예를 들면, 메틸프레드니솔론과 조합될 수 있다. 한 구체예에서, 치유제는 S1P 조정제와 조합될 수 있다.
다른 구체예에서, 치유제는 2, 3, 4개 또는 그 이상의 면역조정제, 예를 들면, 본원에서 설명된 면역조정제 중에서 2, 3, 4개 또는 그 이상과 조합된다. 예시적인 구체예에서, LINGO 길항제, IFN-β1 분자 및 코르티코스테로이드의 조합이 이용된다. 다른 구체예에서, LINGO 길항제, IFN-β1 분자 및 글루탐산, 리신, 알라닌 및 티로신의 중합체, 예를 들면, 글라티라머의 조합이 이용된다. 또 다른 구체예에서, LINGO 길항제, IFN-β1 분자 및 알파-4 인테그린에 대한 항체 또는 이의 단편, 예를 들면, 나탈리주맙의 조합이 이용된다.
본원에서 설명된 방법, 키트 및 조성물의 일정한 구체예에서, 치유제는 LINGO-1에 대한 항체 분자, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같은 항-LINGO 항체이고, 면역억제제는 IFN-β1 분자, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같은 IFN-β1 분자이다.
복합 요법 및 투여 시기
본원에서 설명된 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제의 조합은 임의의 순서, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같이 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 치유제 및 면역조정제는 동시에 투여된다. 다른 구체예에서, 치유제 및 면역조정제는 순차적으로 투여된다. 가령, 치유제 및 면역조정제의 투여는 최소한 부분적으로 또는 완전하게, 서로 중첩될 수 있다.
일정한 구체예에서, 면역조정제 및 치유제의 투여 개시는 동시에 일어난다. 다른 구체예에서, 면역조정제는 치유제로 치료를 개시하기 전에 투여된다. 또 다른 구체예에서, 치유제는 면역조정제로 치료를 개시하기 전에 투여된다. 다른 구체예에서, 면역조정제의 투여는 치유제의 투여 중지 후 계속된다. 다른 구체예에서, 치유제의 투여는 면역조정제의 투여 중지 후 계속된다. 다른 구체예에서, 치유제의 투여는 간헐적으로 (가령, 3 또는 6 또는 12개월 마다 2 또는 3개월 동안, 또는 1-2년 마다 3-6개월 동안) 계속되는 반면, 면역조정제는 연속적으로 제공된다.
일정한 구체예에서, 치유제는 LINGO-1에 대한 항체 분자이고 정맥내, 피하 또는 근육내 투여된다. 한 구체예에서, 항체 분자는 정맥내 투여된다. 이런 구체예에서, 항체 분자는 약 1 내지 100 mg/kg (전형적으로, 약 3 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 50 mg/kg 또는 약 100 mg/kg)이 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 분자는 IV 주입을 통해서 1주, 2주, 3주, 4주 또는 5주 마다 1회 투여된다.
일정한 구체예에서, 면역조정제는 IFN-β1 분자이고 정맥내, 피하 또는 근육내 투여된다. 가령, IFN-β1 분자는
(i) 예로서, 근육내 주사를 통해 주 1회 20-45 ㎍ (가령, 30 ㎍);
(ii) 예로서, 피하 주사를 통해 주 3회 20-30 ㎍ (가령, 22 ㎍), 또는 주 1회 40-50 ㎍ (가령, 44 ㎍); 또는
(iii) 예로서, 근육내로 주 3회, 또는 5일 내지 10일 마다, 예를 들면, 주 1회 10-50 ㎍의 양; 또는
(iv) 예로서, 피하 주사를 통해 2일 마다, 200-600 ㎍ (가령, 250-500㎍)의 양 중에서 하나 또는 그 이상으로 투여될 수 있다. 한 구체예에서, IFN-β1 분자는 인터페론 β-1b (Betaseron®, Betaferon®, 또는 Extavia®)이다.
다른 구체예에서, 치유제는 LINGO-1에 대한 항체 분자이고 IV 주입을 통해서 4주 마다 1회, 약 3 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 30 mg/kg, 50 mg/kg 또는 약 100 mg/kg의 투여량으로 투여되고; 그리고
면역조정제는 IFN-β1이고
(i) 예로서, 근육내 주사를 통해 주 1회 20-45 ㎍ (가령, 30 ㎍);
(ii) 예로서, 피하 주사를 통해 주 3회 20-30 ㎍ (가령, 22 ㎍), 또는 주 1회 40-50 ㎍ (가령, 44 ㎍); 또는
(iii) 예로서, 근육내로 주 3회 또는 5일 내지 10일 마다, 예를 들면, 주 1회 10-50 ㎍의 양 중에서 하나 또는 그 이상으로 투여된다.
개체
본원에 개시된 임의의 방법, 조성물 및 키트에서, 치료되는 개체는 예로서, 본원에서 설명된 바와 같은 CNS 장애 또는 CNS 탈수초성 질환을 앓거나 또는 앓을 위험에 처해있는 개체 (가령, 인간)이다.
한 구체예에서, 개체 (가령, 인간)은 MS를 앓거나, 또는 앓을 위험에 처해있다. MS를 앓는 개체는 임의의 치료 단계에 있을 수 있다. 일정한 구체예에서, MS를 앓는 개체는 양성 MS, RRMS (가령, 휴지성 RRMS, 활성 RRMS), 원발성 진행형 MS (PPMS), 또는 속발성 진행형 MS (SPMS), 임상적 독립 증후군 (CIS), 또는 임상적 확진 MS (CDMS) 중에서 하나 또는 그 이상을 앓는 인간에서 선택된다. 한 구체예에서, 개체는 무증상이다. 다른 구체예에서, 개체는 하나 또는 그 이상의 MS 유사 증상, 예를 들면, 임상적 독립 증후군 (CIS) 또는 임상적 확진 MS (CDMS)를 갖는 증상을 앓는다. 다른 구체예에서, 개체는 하나 또는 그 이상의 MS 재발 (가령, 급성 시신경염, 횡단성 척수염, 뇌간 증후군)을 갖는다.
한 구체예에서, 개체는 MS의 재발 형태 (가령, RRMS 또는 재발성 SPMS)을 앓는다. 한 구체예에서, 개체는 RRMS를 앓고, 그리고 예로서, 자기 공명 영상법 (가령, 뇌 또는 척수 MRI) 상에서 가돌리늄 (Gd) 증강 또는 신규 및/또는 확장된 T2/FLAIR 병변의 발생에 의해 나타나는 바와 같이, 하나 또는 그 이상의 진행성 임상적 악화 및/또는 준임상적 활성을 갖는다. 다른 구체예에서, 개체는 SPMS를 앓고, 그리고 자기 공명 영상법 (가령, 뇌 또는 척수 MRI) 상에서 가돌리늄 (Gd) 증강 또는 신규 및/또는 확장된 T2/FLAIR 병변의 발생에 의해 나타나는 바와 같이, 하나 또는 그 이상의 진행형 임상적 악화 및/또는 준임상적 활성을 갖는다. 한 구체예에서, 개체는 MS의 활성 형태, 예를 들면, 활성 RRMS를 앓는다. 다른 구체예에서, MS 개체는 최소한 하나의 새로 발생된 병변을 갖는다. 다른 구체예에서, MS 개체는 최소한 하나의 이미 존재하는 병변을 갖는다. 한 구체예에서, 개체는 RRMS를 앓고, 그리고 하나 또는 그 이상의 새로 발생되거나 또는 이미 존재하는 병변, 또는 이들의 조합을 갖는다. 다른 구체예에서, 개체는 1.5 내지 7의 기준 EDSS 점수를 갖는다.
한 구체예에서, 개체는 MS 요법 (본원에서 설명된 작용제의 단일요법 또는 복합 요법)의 투여 전에 MS 환자 (가령, RRMS 또는 SPMS를 앓는 환자)이다. 한 구체예에서, 개체는 새롭게 진단되거나 또는 미진단된 RRMS 또는 SPMS 환자이거나 또는 방사선으로 확인된 증후군을 갖는 개체이다. 다른 구체예에서, 개체는 본원에서 설명된 MS 요법 (본원에서 설명된 작용제의 단일요법 또는 복합 요법)의 투여 후 MS 환자 (가령, RRMS 환자)이다. 다른 구체예에서, 개체는 1주, 2주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 6개월, 1년 또는 그 이상 동안 MS 요법의 투여 후 MS 환자이다.
개체 모니터링
본원에 개시된 방법과 다르게, 또는 조합으로, CNS 장애 또는 CNS 탈수초성 질환의 진행을 평가, 진단, 및/또는 모니터링하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 CNS 장애 또는 CNS 탈수초성 질환을 앓거나, 또는 이러한 질병이 발병할 위험에 처해있는 개체 (가령, 환자, 환자 군 또는 환자 개체군)을 평가하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 개체는 (i) 신경학적 기능 (가령, EDSS)의 사정; 및/또는 (ii) 신체 기능의 사정을 이용하여 평가된다. 가령, 신체 기능의 사정은 상지 및/또는 하지 기능의 사정과 조합으로 또는 단독으로, 보행 기능 (가령, 단거리 및/또는 장거리 보행 기능)의 사정을 포함할 수 있다.
일정한 구체예에서, 개체는
신경학적 조사 수행;
확장성 장애 상태 척도 (EDSS)에서 개체의 상태 획득;
다발성 경화증 기능적 복합척도 (MSFC)에서 개체의 상태 획득;
예로서, MRI를 이용하여 사정된 바와 같이, 개체의 병변 상태 획득;
상지 및/또는 하지 기능의 척도 획득;
보행 기능 (가령, 단거리 보행 기능) (가령, 25 피트의 일정시한 보행 (T25FW)); 또는 장거리 보행 기능 (가령, 6분 보행 검사 (6MW))의 척도 획득;
인지 기능의 척도 (가령, MS-COG) 획득; 또는
시기능의 척도 획득 중에서 하나 또는 그 이상에 의해 평가된다.
한 구체예에서, 상지 기능의 척도는 9홀 페그 검사 (9HP)을 이용하여 획득된다.
다른 구체예에서, 단거리 보행 기능의 척도는 25 피트의 일정시한 보행 (T25FW)을 이용하여 획득된다.
다른 구체예에서, 장거리 보행 기능의 척도는 6분 보행 검사 (6MW)을 이용하여 획득된다.
일정한 구체예에서, 상하지 및/또는 보행 기능의 척도에서 최소한 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 이상의 증가는 개체에서 질환 진행, 예를 들면, 증상 및/또는 장애의 꾸준한 악화를 의미하고, 그리고 상하지 및/또는 보행 기능의 척도에서 최소한 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 이상의 감소는 개체에서 향상된 결과 (가령, 질환 진행의 감소 또는 향상된 병태)를 의미한다.
일정한 구체예에서, 개체는 신경학적 기능, 예를 들면, EDSS의 사정을 이용하여 평가된다. 일부 구체예에서, EDSS는 신경학적 기능의 사정, 보행 기능의 사정, 또는 둘 모두를 포함한다. 한 구체예에서, EDSS 점수는 EDSS 기능적 시스템 (FS)에 대한 하나 또는 그 이상의 점수 (시각, 뇌간, 소뇌, 운동, 감각, 방광/장 또는 인지계에서 선택된 EDSS FS에 대한 1, 2, 3, 4, 6, 또는 모든 7가지 개별 점수)의 조합에 기초하여 계산된다. 다른 구체예에서, EDSS는 보행에 대한 점수를 포함한다. 한 구체예에서, EDSS는 예로서, 보조 없이 또는 예정 거리 (가령, 500, 300, 200 또는 100 미터보다 크거나 또는 이와 동등한, 또는 200 또는 100 미터보다 작은 거리) 동안 휴식 없이, 미제한적 보행; 단측 보조; 양측 보조; 본질적으로 또는 완전하게 휠체어에 국한; 또는 본질적으로 또는 완전하게 침대에 국한 중에서 하나 또는 그 이상 (또는 전체)의 사정을 포함하는 개체의 보행 측정을 포함한다.
한 구체예에서, 시기능의 사정은 예로서, 저대비 문자 명확성 (LCLA), 시기능 질문지 (VFQ), 기능적 명확성 대비 검사 (FACT), VEP (예로서, MacKay, AM(2008) Invest Ophthalmol Vis Sci. 49(1):438-41에서 설명됨), 광간섭 단층촬영술 (OCT) 중에서 하나 또는 그 이상에 의해 획득되고, 이들 중에서 일부는 예로서, Balcer et al.(2010) Neurology 74 Suppl 3:S16-23; Bock, M. et al.(2012) Br J Ophthalmol. 96(1):62-7)에서 설명된다.
또 다른 구체예에서, 인지 기능의 척도는 학습 검사, 기억력 검사 및/또는 주의력/처리 속도 검사의 평가를 포함한다. 가령, 인지 기능의 척도는 청각 기억, 언어 학습 및/또는 시각 정보 기억 (가령, 선택적 회상 검사 (SRT)); 청각/언어 기억 평가 검사 (가령, 캘리포니아 언어 학습 검사 교정판 (CVLT2)), 레이 청각 언어 학습 검사 (RAVLT); 시/공간 기억 평가 검사 (가령, 간편 시공간 기억력 검사 개정판 (BVMTR)); 처리 속도 인지 검사, 예를 들면, 페이스 청각 연속 부가 검사 (PASAT, Paced Auditory Serial Addition Test), 부호 숫자 모델리티 검사 (SDMT, Symbol Digit Modalities Test); MSNQ-정보, MSNQ-개체, 및/또는 SF-36 중에서 하나 또는 그 이상의 평가를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 인지 기능의 척도는 SDMT, PASAT-3 및 -3, SRT-총괄 학습 (SRT-TL), SRT 지연 회상 (SRT-DR), 그리고 BVMTR 지연 회상 (BVMTR-DR) (가령, Cadavid et al, 29th Congress European Committee for Treatment and Research in MS(ECTRIMS), 2-5 October 2013에서 설명된 바와 같은 MS-COG)을 포함하는 MS 인지 종결점의 복합척도를 이용하여 수행된다.
일정한 구체예에서, 개체의 병변 상태는 자기 공명 영상법을 이용하여 평가된다. 한 구체예에서, 자기 공명 영상법은 자기 전자 및/또는 확산성 텐서 영상법을 포함한다.
일정한 구체예에서, 개체의 향상은
a. ≤6.0의 기준 점수로부터 EDSS에서 ≥1.0 포인트 감소;
b. T25FW에서 기준선으로부터 ≥15% 향상;
c. 9HPT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상; 또는
d. PASAT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상 중에서 하나 또는 그 이상에 의해 규정된다.
다른 구체예에서, 상기 방법은 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 더욱 포함한다:
(i) 요법, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같은 요법이 필요한지에 대해 개체를 확인하는 단계;
(ii) 요법, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같은 요법에 대한 반응이 증가되거나 또는 감소되는지에 대해 개체를 확인하는 단계;
(iii) 기능 또는 능력에서 향상을 보이는지 (가령, 질환 비진행자인지), 또는 기능 또는 능력에서 감퇴를 보이는지 (가령, 질환 진행자인지)에 대해 개체를 확인하는 단계;
(iv) 개체를 진단 및/또는 예측하는 단계.
본원에서 설명된 방법에서 단계 (가령, 치유제 및 면역조정제의 투여 ("투여 단계"), 그리고 개체 모니터링 및/또는 평가 ("평가 단계")는 임의의 순서로 수행될 수 있다. 한 구체예에서, 투여 단계는 평가 단계 전에 일어난다. 다른 구체예에서, 평가 단계는 투여 단계 전에 일어난다.
달리 정의되지 않으면, 본원에서 이용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 설명된 것들과 유사하거나 또는 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 검사에서 이용될 수 있지만, 적절한 방법 및 재료가 이하에 기술된다. 본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 그리고 다른 참고문헌은 전체적으로 참조로서 편입된다. 또한, 이들 재료, 방법과 실례는 단지 예시이며 제한하려는 의도는 없다.
본 발명의 다른 특징과 장점은 상세한 설명, 도면, 그리고 청구항으로부터 자명할 것이다.
도 1은 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE)의 생쥐 모델에서 시신경 축삭돌기 밀도의 정량을 위한 목적 영역 (ROI) 선택부를 도시한다.
도 2A는 운반제 또는 항-LINGO-1 항체로 처리된 EAE 생쥐의 생존 곡선을 도시하는 선 그래프이다. 도 2B는 운반제 또는 항-LINGO-1 길항제로 처리된 EAE 생쥐에서 완전한 하반신 마비의 발병을 도시하는 선 그래프이다.
도 3A-3F는 생쥐 EAE에서 두정 시신경 확산 영상법의 영상을 포함한다. 확산 방향은 작은 화살표에 의해 지시된다. 우측 시신경 위치는 큰 화살표에 의해 지시된다. 도 3A는 T2 편중 로컬라이저 스캔의 영상이다. 도 3B는 시신경에 직각인 확산 편중 영상의 영상이다. 도 3C는 시신경에 평행한 확산 편중 스캔의 영상이다. 도 3D는 시신경에 직각인 확산 편중 영상의 영상이다. 도 3E는 도 3B의 시신경 영상의 확대부이다. 도 3F는 도 3D의 시신경 영상의 확대부이다.
도 4는 생쥐 EAE에서 확산성 텐서 영상법 (DTI)에 의해 분석된 시신경 보존성을 도시하는 막대그래프이다.
도 5는 운반제 또는 항-LINGO-1 항체로 처리된 EAE 생쥐 또는 건강한 생쥐에서 시신경의 조직학적 분석을 도시한다.
도 6은 운반제 또는 항-LINGO-1 항체로 처리된 EAE 생쥐 또는 건강한 생쥐에서 시신경 내에 축삭돌기 손실의 측정을 도시한다. 도 6은 시신경 면적 (㎛2), 평균 중심 축삭돌기 면적 (㎛2), 총 중심 축삭돌기 계측치, 총 말초 축삭돌기 계측치, 총 중추 축삭원형질 면적 (㎛2), 그리고 총 말초 축삭원형질 면적 (㎛2)의 측정을 포함한다.
도 7은 다음 처리 후, 각각 항-βIII 튜불린 염색 및 DAPI에 의해 검출된 시신경 단면의 조직학적 분석을 도시한다: 처리 군 (운반제 + 대조 항체), 메틸프레드니솔론 (MP), 항-LINGO-1 항체, 그리고 MP + 항-LINGO-1 항체.
도 8은 표시된 처리 군에서 축삭 절편 계측치/시야를 반영하는 막대그래프이다. 항-LINGO-1 단일클론 항체 처리 군 (운반제 + 항-LINGO-1 단일클론 항체)은 5배 높은 축삭돌기 수치를 보였는데, 이것은 항-LINGO-1 단일클론 항체 처리가 축삭돌기 손실을 예방한다는 것을 시사한다 (도 8). 복합 처리 군 (MP + 항-LINGO-1 단일클론 항체)은 대조 처리 군 (운반제 + 대조 항체)과 비교하여 축삭돌기 수치에서 8배 증가를 보였다.
발명의 상세한 설명
염증성 탈수초성 CNS 질환, 예를 들면, MS는 어린 성체에서 비외상성 신경학적 장애의 공통 원인이다. MS에 대한 현재 승인된 요법은 일차적으로 면역조정성이고, 그리고 CNS 수복에 대한 검출가능한 직접적인 효과를 갖지 않는다. 가령, 재발성 MS를 앓는 환자에 대한 간호의 현재 표준은 재발의 빈도와 심각도 및 재발-관련된 신체 장애의 축적을 감소시키고, 그리고 예로서 우울증, 방광 기능장애, 또는 보행 장애에 대한 필요에 따른 다양한 증상 치료를 제공하기 위한 면역조정성 약물의 이용을 포함한다. 인터페론 β (근육내 [IM] [Avonex] 또는 피하 [SC] [Rebif®] 제공된 인터페론 β-1a, 인터페론 β-1b [Betaseron/Betaferon®/Extavia®]), 글라티라머 아세트산염 (Copaxone®), 나탈리주맙 (Tysabri®), 그리고 핀골리모드 (Gilenya®)의 상이한 조제물이 포함되지만 이들에 한정되지 않는, 재발성 MS에 대한 여러 면역조정성 약물이 현재 가용하다. 코르티코스테로이드의 짧은 코스는 때때로, 엇갈린 성공이 제공된다. 화학요법제, 예를 들면, 미톡산트론 및 시클로포스파미드는 때때로, 심각한 재발성 MS의 사례에서 이용된다. 비록 희소돌기아교세포에 의한 어느 정도의 축삭돌기 재수초화가 MS의 코스 동안 초기에 발생하긴 하지만, CNS를 내생적으로 수복하는 능력이 종종 실패하고, 비가역성 조직 손상 및 질환-관련된 장애에서 증가를 야기한다.
여러 전임상 연구는 독성 손상 (Mi et al. (2009) Ann Neurology, 65: 304-15), 화학적 손상 (리소포스파티딜콜린 [LPC]), 그리고 염증성 탈수초화 (미엘린 희소돌기아교세포 당단백질- 실험적 자가면역 뇌척수염 [MOG-EAE]) [Mi et al. (2007) Nat Med, 13: 1228-33); 그리고 독성 (1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 [MPTP]) 뉴런 손상 (Inoue et al. (2007) Proc Natl Acad Sci, 104: 14430-5), 외상성/고혈압성 시신경 손상 (Fu et al. (2008) Invest Opthalmol Vis Sci, 49: 975-85) 및 척수 손상 (Ji et al. (2006) Mol Cell Neurosci, 33: 311-20; Ji et al. (2008) Mol Cell Neurosci, 39: 258-67; Lv et al. (2010) Neuroimmunomodulat, 17: 270-8)의 동물 모델 (Cuprizone)에서 CNS 재수초화 및 신경축삭돌기 보호를 증강하는데 있어서 LINGO-1 길항작용에 대한 역할을 증명하였다. 따라서, 항-LINGO-1 항체로 LINGO-1을 길항하는 것은 CNS에서 재수초화 및 신경축삭돌기 보호를 증강할 수 있다. 항-LINGO-1 항체는 말초 투여 후 축삭돌기 및 희소돌기아교세포 둘 모두에서 LINGO-1을 차단하는데 충분한 농도로 CNS에 도달할 수 있다. 이것은 차례로, MS 환자의 뇌에서 정상적으로 존재하는 희소돌기아교세포 전구체 세포 (OPC)의 분화를 통해 재수초화를 증진할 수 있다.
축삭돌기 및 뉴런에서 LINGO-1에 항-LINGO-1 항체의 결합 역시 CNS 내에 Nogo66 수용체-1(NgR1)/p75/LINGO-1 수용체 복합체 상에서 미엘린 조직파편에 의한 신호전달의 차단을 통해 신경축삭돌기 보호를 제공할 수 있다. MS에서 축삭돌기 수복/신경돌기 재생의 실패는 최소한 부분적으로, 손상된 축삭돌기 내에 NgR1/p75/LINGO-1 복합체 및 NgR1/TROY/LINGO-1 복합체 상에서 미엘린 조직파편의 신호전달에 기인하는 것으로 제안되었다 (Mi et al. (2004) Nat Neurosci, 7: 221-8). NgR1 수용체 복합체 상에서 신호전달은 축삭돌기 재생 (Yamashita et al. (2005) Mol Neurobiol, 32: 105-11)뿐만 아니라, 신경축삭돌기 손상 이후에 뉴런 생존 (Mi et al. (2004) Nat Neurosci, 7: 221-8; Fu et al. (2008) Invest Opthalmol Vis Sci, 49: 975-85; Zhao et al. (2008) Cell Mol Neurobiol, 28: 727-35)을 간섭할 수 있다.
이론에 한정됨 없이, 새로 발생된 병변은 최소한 부분적으로, 축삭돌기의 더욱 큰 보존 및 신경교 반흔으로부터 더욱 적은 간섭으로 인해, 더욱 쉽게 수복하고 재수초화할 수 있는 것으로 생각된다 (Jasmin and Ohara (2002) Neuroscientists 8(3):198-203; Vick et al. (1992) J. Neurotrauma 9 Suppl 1:S93-103). 하지만, 기존 병변에 대한 LINGO-1 길항제의 치유 효과 역시 발생할 수 있다. 가령, 기존 병변에서 항-LINGO-1 항체 치료의 효능은 (1) OPC가 만성적으로 탈수초화된 MS 병변에서 발견된다는 조사 결과, (2) 만성적으로 탈수초화된 뇌 병변의 재수초화되는 능력을 보여주는 동물 연구, 그리고 (3) 확립된 탈수초화된 병변 (가령, Cuprizone 모델)에서 LINGO-1 차단에 의한 재수초화의 증강을 보여주는 연구에 의해 뒷받침된다.
따라서, 항-LINGO-1 항체로 LINGO-1의 길항작용은 CNS 탈수초성 질환, 예를 들면, MS 및 급성 시신경염에서 재수초화 및 신경축삭돌기 보호를 증강하고, 신경학적 기능 및 장애에 대한 상응하는 유익한 효과로 향상된 CNS 수복을 야기할 수 있다. 항-LINGO-1 항체가 MS 병인의 염증성 성분에 대한 검출가능한 면역조정성 효과를 갖지 않기 때문에, 면역조정제와의 동시 투여가 바람직하다. 이런 이유로, 면역조정제, 예를 들면, IFN-β 작용제, 예를 들면, Avonex®; 그리고 치유제, 예를 들면, 항-LINGO-1 항체의 조합 치료가 개시된다. 본 발명은 최소한 부분적으로, 개체에서 염증성 병태를 개선하면서, 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 증강하기 위한 방법, 조성물 및 키트를 제공한다: 개체, 예를 들면, 인간 (가령, 인간 MS 환자)에서 수초화, 재수초화, 희소돌기아교세포 숫자, 또는 신경축삭돌기 보호. 본원에서 설명된 이런 방법, 조성물 및 키트는 CNS 장애, 예를 들면, CNS 탈수초성 질환을 치료하는데 유용하다. 따라서, 방법, 조성물 및 키트는 본원에서 설명된 바와 같이, 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제를 조합하여 포함한다.
다른 구체예에서, 치유제 (가령, LINGO-1 길항제)는 시신경의 염증성 병태, 예를 들면, 시신경염 (가령, 급성 시신경염 (AON))을 치료하는데 이용될 수 있다. 따라서 시신경의 염증성 병태, 예를 들면, 시신경염 (가령, AON)을 치료하기 위한 치유제를 포함하는 방법 및 조성물이 또한 개시된다.
용어 "치유제"는 본원에서 이용된 바와 같이, 실제적인 (가령, 검출가능한) 면역조정성 효과를 갖지 않으면서, 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 유발하는 임의의 작용제를 포함한다: 수초화 또는 재수초화 증강, 신경축삭돌기 보호 증강, 축삭돌기 확장 증가, 신경 발아 증가, 및/또는 희소돌기아교세포 숫자 증진 (가령, 희소돌기아교세포의 생존 또는 분화 중에서 하나 또는 그 이상을 증가시킴으로써). 한 구체예에서, 치유제는 LINGO-1 길항제, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같은 LINGO-1 길항제이다.
본 발명의 다양한 양상은 다음 하위섹션에서 더욱 상세하게 설명된다.
정의
본원에서 이용된 바와 같이, 다음 용어 각각은 본 섹션에서 이와 연관된 의미를 갖는다.
본원에서 이용된 바와 같이, 단수 관사 ("a" 및 "an")는 관사의 문법적 대상 중에서 하나 또는 하나 이상 (가령, 최소한 하나)을 지칭한다.
용어 "또는"은 문맥에서 명확하게 달리 지시되지 않으면, 용어 "및/또는"을 의미하기 위해 본원에서 이용되고, 그리고 상기 용어와 교체가능하게 이용된다.
용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 본원에서 교체가능하게 이용된다.
"약" 및 "대략"은 계량의 성격 또는 정밀도를 고려하여 계량된 양에 대한 오차의 허용되는 정도를 일반적으로 의미할 것이다. 오차의 예시적인 정도는 제공된 값 또는 값의 범위의 20 퍼센트 (%), 전형적으로 10%, 그리고 더욱 전형적으로, 5%의 범위 안에 있다.
용어 "획득하다" 또는 "획득하는"은 본원에서 이용된 바와 같이, 결과를 "직접적으로 획득"함으로써 또는 "간접적으로 획득"함으로써, 원하는 결과, 예를 들면, 값, 예를 들면, 수치 값의 소유를 획득하거나, 이를 결정하거나, 또는 이를 평가하는 것을 지칭한다. "직접적으로 획득"은 결과, 예를 들면, 값을 획득하기 위한 과정을 수행하는 (가령, 검사, 예를 들면, 상지 및/또는 하지 기능, 및/또는 보행 기능의 척도를 수행하는) 것을 의미한다. "간접적으로 획득"은 결과, 예를 들면, 값을 다른 관계자 또는 출처 (가령, 값을 직접적으로 획득한 삼자 임상의 또는 건강 전문가)로부터 받는 것을 지칭한다.
"CNS 장애" (가령, "CNS 탈수초성 질환")은 다음 중에서 하나 또는 그 이상과 연관된 임의의 질환, 장애 또는 손상일 수 있다: 탈수초화, 수초형성장애, 축삭돌기 손상, 및/또는 희소돌기아교세포 또는 뉴런 세포의 기능장애 또는 사멸, 또는 뉴런 시냅시스/연결성의 상실. 일정한 구체예에서, CNS 장애는 축삭돌기의 미엘린초에 손상을 유발함으로써 신경계에 영향을 준다. 다른 구체예에서, CNS 장애는 예로서, 뇌와 척수에서 축삭돌기 확장 또는 신경돌기 확장의 Nogo 수용체-1 (NgR1-) 매개된 저해를 포함한다. 다른 구체예에서, CNS 장애는 하나 또는 그 이상의 염증성 성분을 갖는다. 한 구체예에서, CNS 장애 (가령, CNS 탈수초성 질환)은 다발성 경화증이다. CNS 장애 (가령, CNS 탈수초성 질환)은 상기 질환 또는 장애의 최소한 하나의 증상이 감소되거나, 경감되거나, 종결되거나, 지연되거나, 또는 예방되면, "치료," "저해" 또는 "감소"된다.
본원에서 이용된 바와 같이, 다발성 경화증은 상기 질환의 재발생 또는 재발이 감소되거나, 지연되거나, 지체되거나, 또는 예방되면, "치료," "저해" 또는 "감소"된다. 개체에서 질환 상태를 결정하는 것을 보조하는데 이용될 수 있는 다발성 경화증의 예시적인 임상적 증상은 예로서, 자통, 저림, 근육 쇠약, 균형의 상실, 흐릿한 시야 또는 복시, 불분명 발음, 돌연 발병 마비, 부조정 절름발이, 인지 어려움, 피로, 열 감수성, 경련성, 현기증, 진전, 보행 비정상, 언어 능력/삼키기 어려움, 그리고 영상화 기술, 예를 들면, MRI에 의해 사정된 병변의 정도를 포함할 수 있다. MS의 임상 징후는 예로서, 신경학적 검사 및 장거리 보행에 기초된 EDSS 순위평가 시스템을 이용하여 일과적으로 분류되고 표준화된다. 상기 척도의 하단 (1-5.5)의 경우에, 한 번에 완전한 걸음의 감소는 효과적인 MS 치료를 지시하고 (Kurtzke, Ann. Neurol. 36:573-79, 1994), 반면 한 번에 완전한 걸음의 증가는 질환의 진행 또는 악화 (가령, 악화)를 지시할 것이다. 상기 척도의 상단 (5-7)의 경우에, 절반 포인트는 향상 (감소) 또는 악화 (증가)를 전형적으로 지시하다 .
본원에서 이용된 바와 같이, "확장성 장애 상태 척도" 또는 "EDSS"는 의학적 실시에서 관례적인 의미를 갖는 것으로 의도된다. EDSS는 MS를 분류하고 표준화하는데 빈번하게 이용되는 순위평가 시스템이다. 인정되는 점수는 0 (정상) 내지 10 (MS로 인한 사망)의 범위에서 변한다. 전형적으로, 약 4-6의 EDSS 점수를 갖는 환자는 중등도 장애 (가령, 제한된 보행 능력)을 가질 것이고, 반면 약 7 또는 8의 EDSS 점수를 갖는 환자는 심각한 장애를 가질 것이다 (가령, 휠체어를 필요로 할 것이다). 더욱 특정하게는, 1-3의 범위에서 EDSS 점수는 완전히 보행성이지만, 하나 또는 그 이상의 기능적 시스템에서 일부 징후를 갖는 MS 환자를 지칭한다; 3 내지 4.5보다 더욱 높은 범위에서 EDSS 점수는 중등도 내지 상대적으로 심각한 장애를 보여준다; 5 내지 5.5의 EDSS 점수는 완전한 일상 활동을 손상시키거나 또는 불가능하게 하는 장애를 지칭한다; 6 내지 6.5의 EDSS 점수는 보행하기 위해 간헐적인 내지 일정한, 또는 편측성 내지 양측성의 일정한 도움 (지팡이, 목발 또는 고정기)을 필요로 하는 MS 환자를 지칭한다; 7 내지 7.5의 EDSS 점수는 MS 환자가 부축을 받아도 5 미터 이상 보행할 수 없고, 그리고 휠체어에 본질적으로 국한된다는 것을 의미한다; 8 내지 8.5의 EDSS 점수는 병상에 국한된 환자를 지칭한다; 그리고 9 내지 10의 EDSS 점수는 MS 환자가 병상에 국한되고, 그리고 MS로 인해 사망할 때까지, 점진적으로 효과적으로 의사소통하거나 또는 먹고 삼킬 수 없게 된다는 것을 의미한다.
본원에서 이용된 바와 같이, "질환 진행"은 개체에서 하나 또는 그 이상의 증상 및/또는 장애의 악화의 척도 (가령, 하나 또는 그 이상의 척도)를 포함한다. 일정한 구체예에서, 질환 진행은 지속 시간에서 상대적으로 짧은 재발과는 대조적으로, 시간의 흐름에서 하나 또는 그 이상의 증상 및/또는 장애의 꾸준한 악화로서 평가된다. 일정한 구체예에서, 질환 진행은 재발 형태의 MS (가령, RRMS) 또는 진행 형태의 MS를 앓는 개체 (가령, 원발성 또는 속발성 진행형 다발성 경화증 (PPMS 또는 SPMS, 각각)을 앓는 개체, 또는 진행성 재발형 MS (PRMS)를 앓는 개체)에서 평가된다.
일정한 구체예에서, 질환 진행의 평가는 상지 기능의 척도 (가령, 9 HP 사정)를 포함한다. 대안으로 또는 조합으로, 질환 진행은 하지 기능의 척도를 포함한다. 대안으로 또는 조합으로, 질환 진행은 보행 기능, 예를 들면, 단거리 보행 기능의 척도 (가령, T25FW)를 포함한다. 대안으로 또는 조합으로, 질환 진행은 보행 기능, 예를 들면, 더욱 긴 거리 보행 기능 (가령, 6-분 보행 검사)의 척도를 포함한다. 한 구체예에서, 질환 진행은 EDSS 보행 기능 이외의 보행 기능의 척도를 포함한다. 한 구체예에서, 질환 진행은 상지 기능의 척도 (가령, 9 HP 사정) 및 보행 기능의 척도, 예를 들면, 단거리 보행 기능 (가령, T25FW)을 포함한다. 한 구체예에서, 질환 진행은 상지 기능의 척도 (가령, 9 HP 사정) 및 하지 기능의 척도를 포함한다. 한 구체예에서, 질환 진행은 상지 기능의 척도 (가령, 9 HP 사정), 하지 기능의 척도, 그리고 보행 기능의 척도, 예를 들면, 단거리 보행 기능 (가령, T25FW) 및/또는 더욱 긴 거리 보행 기능 (가령, 일정시한 (가령, 6-분) 보행 검사 (가령, 6MWT))을 포함한다. 한 구체예에서, T25FW, 6MWT 및 9 HP 사정 중에서 1개, 2개 또는 조합이 질환 진행 값을 획득하는데 이용될 수 있다. 보행 기능의 척도 (가령, 단거리 보행 기능 (가령, T25FW) 또는 더욱 긴 거리 보행 기능 (가령, 일정시한 (가령, 6-분) 보행 검사 (가령, 6MWT)) 및/또는 상지 기능의 척도 (가령, 9 HP 사정))는 MS, 예를 들면, 진행 형태의 MS를 평가하기 위해 EDSS와 조합으로 더욱 이용될 수 있다.
한 구체예에서, 진행자는 다음 규준 중에서 최소한 1개, 2개 또는 전부를 반영하는 질환 진행 값을 소유하는 개체이다:
a. T25FW에서 확증된 진행: 최소한 3, 4, 5, 또는 6 개월 떨어진 두 번째 시점에서 확증된, 기준선 보행의 최소한 15% 또는 20% 증가된 25-풋워크를 위해 소요된 시간;
b. 일정시한 (가령, 6-분) 보행 검사 (가령, 6MWT)에서 확증된 진행: 최소한 3, 4, 5, 또는 6 개월 떨어진 두 번째 시점에서 확증된, 기준선 보행의 최소한 15% 또는 20% 증가된 보행을 위해 소요된 시간;
c. 9 HP에서 확증된 진행: 최소한 3, 4, 5, 또는 6 개월 떨어진 두 번째 시점에서 확증된, 기준선에서 소요된 시간의 최소한 15% 또는 20% 증가된 9-구멍 페그를 위해 소요된 시간. 9 HP에서 진행은 어느 한쪽 손에서 일어날 수 있지만, 동일한 손에서 확증되어야 할 것이다; 및/또는
d. EDSS에서 확증된 진행:
(i) EDSS 전체 점수에서 변화가 신경학적 기능에서 변화 (가령, 신경계에서 하나 또는 그 이상의 변화)를 평가함으로써 결정되면 (또는 일차적으로 결정되면), 기준선으로부터 최소한 1 포인트 증가된 EDSS 전체 점수; 및/또는
(ii) EDSS 전체 점수에서 변화가 보행 기능에서 변화에 의해 결정되면 (또는 일차적으로 결정되면), 기준선으로부터 최소한 0.5 포인트 증가된 EDSS 전체 점수,
(i) 또는 (ii) 중에서 한쪽 또는 양쪽이 최소한 3, 4, 5 또는 6 개월 떨어진 (전형적으로, 최소한 6 개월 떨어진) 두 번째 검사에서 확증되면.
전술한 검사 (가령, T25FW, 6MWT, EDSS, 또는 9 HP)에 대한 기준선 값은 최선 기준선 값 또는 평균 기준선 값을 이용하여 결정될 수 있다.
치료에 대한 "반응성" 내지 "반응하다", 그리고 이러한 용어의 다른 형태는 본원에서 이용된 바와 같이, 설명된 바와 같은 요법으로 치료에 대한 개체의 반응을 지칭한다. 실례로서, MS 개체는 개체에서 다발성 경화증의 최소한 하나의 증상 (가령, 질환 악화)이 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 감소되거나 또는 지연되면, 요법에 반응한다. 다른 실례에서, MS 개체는 개체에서 다발성 경화증의 최소한 하나의 증상이 임의의 적절한 척도, 예를 들면, 다음 중에서 하나 또는 그 이상: 상지 또는 하지 기능의 척도, 보행 기능의 척도, 또는 확장성 장애 상태 척도 (EDSS)의 사정에 의해 결정될 때 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 그 이상 감소되면, 요법에 반응한다. 다른 실례에서, MS 개체는 개체가 진행까지 증가된 시간을 가지면, 요법으로 치료에 반응한다. 본원에서 진술된 바와 같이, 본원에서 설명된 사정을 비롯한 여러 방법이 환자가 치료에 반응하는 지를 결정하는데 이용될 수 있다.
일정한 구체예에서, 개체에서 향상은 다음 중에서 하나 또는 그 이상에 의해 규정된다:
a. ≤6.0의 기준 점수로부터 EDSS에서 ≥1.0 포인트 감소;
b. T25FW에서 기준선으로부터 ≥15% 향상;
c. 9HPT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상; 또는
d. PASAT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상
"무반응자" 또는 "진행자"는 요법 (가령, 본원에서 설명된 요법)에 응하여, 개체에서 다발성 경화증의 최소한 하나의 증상 또는 장애가 임의의 적절한 척도, 예를 들면, 다음 중에서 하나 또는 그 이상에 의해 결정될 때, 약 5%보다 적게 감소되면 개체, 예를 들면, MS 환자를 지칭한다: 상지 또는 하지 기능의 척도, 보행 기능의 척도, 인지 기능의 척도, 또는 확장성 장애 상태 척도 (EDSS)의 사정.
본원에서 개시된 방법, 조성물 및 키트는 특정된 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 또는 유사한 서열, 예를 들면, 특정된 서열에 최소한 85%, 90%, 95% 또는 그 이상 동일한 서열을 갖는 폴리펩티드 및 핵산을 포괄한다. 아미노산 서열의 문맥에서, 용어 "실제적으로 동일한"은 첫 번째와 두 번째 아미노산 서열이 공통 구조적 도메인 및/또는 공통 기능적 활성을 가질 수 있도록, i) 두 번째 아미노산 서열과 동일하고, 또는 ii) 두 번째 아미노산 서열에서 정렬된 아미노산 잔기의 보존성 치환인 충분한 또는 최소 숫자의 아미노산 잔기를 내포하는 첫 번째 아미노산을 지칭하기 위해 본원에서 이용된다. 가령, 본원에서 설명된 서열에 최소한 약 85%, 90%. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 공통 구조적 도메인을 내포하는 아미노산 서열은 실제적으로 동일한 것으로 명명된다.
뉴클레오티드 서열의 문맥에서, 용어 "실제적으로 동일한"는 첫 번째와 두 번째 뉴클레오티드 서열이 공통 기능적 활성을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하거나, 또는 공통 구조적 폴리펩티드 도메인 또는 공통 기능적 폴리펩티드 활성을 인코딩하도록, 두 번째 핵산 서열에서 정렬된 뉴클레오티드와 동일한 충분한 또는 최소 숫자의 뉴클레오티드를 내포하는 첫 번째 핵산 서열을 지칭하기 위해 본원에서 이용된다. 가령, 본원에서 설명된 서열에 최소한 약 85%, 90%. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열은 실제적으로 동일한 것으로 명명된다.
서열 사이에 상동성 또는 서열 동일성 (이들 용어는 본원에서 교체가능하게 이용된다)의 계산은 하기와 같이 수행된다.
2개의 아미노산 서열, 또는 2개의 핵산 서열의 퍼센트 동일성을 결정하기 위해, 이들 서열은 최적 비교 목적을 위해 정렬된다 (가령, 최적 정렬을 위해 첫 번째와 두 번째 아미노산 또는 핵산 서열 중에서 한쪽 또는 양쪽에서 간극이 도입될 수 있고, 그리고 비상동성 서열은 비교 목적을 위해 무시될 수 있다). 바람직한 구체예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 참고 서열의 길이는 참고 서열의 길이의 최소한 30%, 바람직하게는 최소한 40%, 더욱 바람직하게는 최소한 50%, 60%, 그리고 이보다 더욱 바람직하게는 최소한 70%, 80%, 90%, 100%이다. 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드는 이후 비교된다. 첫 번째 서열에서 위치가 두 번째 서열에서 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유될 때, 이들 분자는 상기 위치에서 동일하다 (본원에서 이용된 바와 같이 아미노산 또는 핵산 "동일성"은 아미노산 또는 핵산 "상동성"과 동등하다).
두 서열 사이에 퍼센트 동일성은 간극의 숫자, 그리고 이들 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 각 간극의 길이를 고려하여, 이들 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 숫자의 함수이다.
서열의 비교 및 두 서열 사이에 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 이용하여 달성될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 2개의 아미노산 서열 사이에 퍼센트 동일성은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 그리고 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 간극 중량 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 중량을 이용하여, GCG 소프트웨어 패키지 (http://www.gcg.com에서 가용함)에서 GAP 프로그램 내로 통합된 Needleman 및 Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48:444-453) 알고리즘을 이용하여 결정된다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 2개의 뉴클레오티드 서열 사이에 퍼센트 동일성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70, 또는 80의 간극 중량 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 중량을 이용하여, GCG 소프트웨어 패키지 (http://www.gcg.com에서 가용함)에서 GAP 프로그램을 이용하여 결정된다. 파라미터의 특히 바람직한 세트 (및 달리 명시되지 않으면 이용되어야 하는 것)는 12의 간극 페널티, 4의 간극 확장 페널티, 그리고 5의 프레임시프트 간극 페널티를 갖는 Blossum 62 채점 매트릭스이다.
두 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이에 퍼센트 동일성은 PAM120 중량 잔기 표, 12의 간극 길이 페널티 및 4의 간극 페널티를 이용하여, ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내로 통합된 E. Meyers 및 W. Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17)의 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다.
본원에서 설명된 핵산 및 단백질 서열은 공공 데이터베이스에 대한 검색을 수행하여 예로서, 다른 패밀리 구성원 또는 관련된 서열을 확인하기 위한 "조회 서열"로서 이용될 수 있다. 이런 검색은 Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10의 NBLAST와 XBLAST 프로그램 (버전 2.0)을 이용하여 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 본 발명의 BMP-10/BMP-10 수용체 핵산 (서열 번호:1) 분자에 뉴클레오티드 서열 상동성을 획득하기 위해 NBLAST 프로그램, 점수 = 100, 단어 길이 = 12로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본 발명의 BMP-10/BMP-10 수용체 (서열 번호:1) 단백질 분자에 상동한 아미노산 서열을 획득하기 위해 XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 단어 길이 = 3으로 수행될 수 있다. 비교 목적을 위한 갭트 정렬을 획득하기 위해, 갭트 BLAST가 Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402에서 설명된 바와 같이 활용될 수 있다. BLAST와 갭트 BLAST 프로그램을 활용할 때, 개별 프로그램 (가령, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터가 이용될 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov 참조.
폴리펩티드의 단편, 유도체, 유사체, 또는 변이체, 그리고 이들의 임의의 조합 역시 포함된다. 용어 "단편," "변이체," "유도체" 및 "유사체"는 상응하는 선천적 폴리펩티드의 성질의 최소한 일부를 유지하는 임의의 폴리펩티드를 포함한다. 폴리펩티드의 단편은 단백분해 단편뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다. 폴리펩티드의 변이체는 앞서 설명된 바와 같은 단편, 그리고 또한, 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입으로 인해 변경된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 변이체는 자연적으로 또는 비자연적으로 발생할 수 있다. 비자연적으로 발생하는 변이체는 공지된 돌연변이유발 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 변이체 폴리펩티드는 보존성 또는 비보존성 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다.
용어 "기능적 변이체"는 자연적으로 발생하는 서열에 실제적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나, 또는 실제적으로 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되고, 그리고 자연적으로 발생하는 서열의 하나 또는 그 이상의 활성을 가질 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다.
폴리펩티드의 유도체는 선천적 폴리펩티드 상에서 발견되지 않는 추가 특질을 전시하기 위해 변경된 폴리펩티드이다. 실례는 융합 단백질을 포함한다.
"보존성 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당분야에서 규정되었다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (가령, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (가령, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄 (가령, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (가령, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄 (가령, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (가령, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다.
본 발명의 다양한 양상은 하기에서 더욱 상세하게 설명된다. 추가 정의는 명세서 전반에서 명시된다.
치유제
본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트는 치유제 (가령, LINGO-1 길항제) 및 면역조정제의 조합을 포함한다. 한 구체예에서, 치유제는 LRR 및 Ig 도메인-내포, Nogo 수용체-상호작용 단백질 ("LINGO," 예를 들면, LINGO-1)의 길항제이다. 가령, LINGO-1 길항제는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1의 발현 또는 활성을 저해하거나 또는 감소시킬 수 있다. 한 구체예에서, LINGO-1 길항제는 NgR1, p75, 그리고 LINGO-1; 및/또는 NgR1, TAJ (TROY), 그리고 LINGO-1의 복합체 (가령, 기능적 신호전달 복합체)의 형성 및/또는 활성을 저해하거나 또는 감소시킨다. 다른 구체예에서, LINGO-1 길항제는 NgR1에 LINGO-1 결합을 저해하거나 또는 감소시킨다.
LINGO-1과 LINGO-1 길항제
Sp35로 이전에 불렸던 LINGO-1은 뉴런 및 희소돌기아교세포 내에 성체 CNS에서 선별적으로 발현되는 세포 표면 당단백질이다. LINGO-1은 3개의 다른 파라로그를 포함하는 단백질 패밀리의 구성원이다: LINGO-2 (GI: 12309630, 61% 단백질 동일성), LINGO-3 (GI: 23342615, 56% 동일성) 및 LINGO-4 (GI: 21211752, 44% 동일성). LINGO-1은 진화적으로 고도로 보존되는데, 인간과 생쥐 오르토로그가 99.5% 동일성을 공유한다. 노던 블롯 분석에 의해, LINGO-1은 인간 뇌에서 고도로 발현되는 것으로 밝혀졌고 비신경 조직에서 검출되지 않았다 (Barrette et al. (2007) Mol Cell Neurosci, 34: 519-38; Carim-Todd et al. (2003) Eur Journal Neurosci, 18: 3167-82; Llorens et al. (2008) Dev Neurobiol, 68: 521-41; Mi et al. (2004) Nat Neurosci, 7: 221-8; Okafuji et al. (2005) Gene Expr Patterns, 6: 57-62; Park et al. (2006) Neurosci Lett, 404: 61-6; Shao et al. (2005) Neuron, 45: 353-9). LINGO-1은 2006년 7월 7일자 제출된 국제 특허 출원 PCT/US2006/026271, 2004년 3월 17일자 제출된 PCT/US2004/008323, 2005년 6월 24일자 제출된 PCT/US2005/022881, 그리고 2008년 1월 9일자 제출된 PCT/US2008/000316에서 상세하게 설명되었고, 이들은 각각 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
LINGO-1은 희소돌기아교세포 전구체 세포 (OPCs)와 뉴런 둘 모두에서 선별적으로 발현된다. LINGO-1은 희소돌기아교세포 분화 수초화, 그리고 재수초화의 음성 조절인자로서 기능한다; 희소돌기아교세포에 의한 축삭돌기의 수초화를 예방한다 (Lee et al. (2007) J Neurosci, 27: 220-5; Mi et al. (2005) Nat Neurosci, 8: 745-51; Mi et al. (2008) Int Journal Biochem Cell Biol 40(10):1971-8; Mi et al. (2009) Ann Neurology, 65: 304-15). LINGO-1의 축삭돌기와 뉴런 발현은 손상 후 증가한다 (Ji et al. (2006) Mol Cell Neurosci, 33: 311-20). LINGO-1 발현은 희소돌기아교세포에 의한 축삭돌기의 수초화를 예방한다. 여러 전임상 연구는 독성 (Cuprizone) (Mi et al. (2009) Ann Neurology, 65: 304-15), 화학적 손상 (리소포스파티딜콜린 [LPC]), 그리고 염증성 (미엘린 희소돌기아교세포 당단백질- 실험적 자가면역 뇌척수염 [MOG-EAE]) [Mi et al. (2007) Nat Med, 13: 1228-33) 탈수초화; 그리고 독성 (1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 [MPTP]) 뉴런 손상 (Inoue et al. (2007) Proc Natl Acad Sci, 104: 14430-5), 외상성/고혈압성 시신경 손상 (Fu et al. (2008) Invest Opthalmol Vis Sci, 49: 975-85) 및 척수 손상 (Ji et al. (2006) Mol Cell Neurosci, 33: 311-20; Ji et al. (2008) Mol Cell Neurosci, 39: 258-67; Lv et al. (2010) Neuroimmunomodulat, 17: 270-8)의 동물 모델에서 CNS 재수초화 및 신경축삭돌기 보호를 증강하는 LINGO-1 길항작용에 대한 잠재력을 증명하였다. 재수초화 및 신경축삭돌기 보호는 축삭돌기 및 희소돌기아교세포에서 LINGO-1의 저해에 의해 유발된 CNS에서 NgR1 수용체 복합체 상에서 미엘린 조직파편 및/또는 황산화된 프로테오글리칸에 의한 신호전달의 차단을 통해 제공될 수 있다. 이것은 차례로, MS 환자의 뇌에서 정상적으로 존재하는 희소돌기아교세포 전구체 세포 (OPCs)의 분화를 통해 재수초화를 증진할 수 있다. 따라서, LINGO-1의 길항작용은 예로서, 희소돌기아교세포에 의한 축삭돌기의 수초화 또는 재수초화를 증강할 수 있고, 그리고 CNS 및 예로서, CNS 탈수초성 질환, 예를 들면, 다발성 경화증 (MS) 및 급성 시신경염에서 신경축삭돌기 보호를 증강하여 향상된 CNS 수복을 야기할 수 있다.
LINGO-1은 또한, LRRN6, LRRN6A, FLJ14594, LERN1, MGC17422 및 UNQ201의 이름으로 당분야에서 알려져 있다. 인간, 전장 야생형 LINGO-1 폴리펩티드는 14개 류신-풍부한 반복 (N- 및 C-말단 캡 포함)으로 구성되는 LRR 도메인, Ig 도메인, 막경유 영역, 그리고 세포질 도메인을 내포한다. 세포질 도메인은 정준 티로신 인산화 부위를 내포한다. 이에 더하여, 자연적으로 발생하는 LINGO-1 단백질은 신호 서열, LRR-C-말단 도메인 (LRRCT)과 Ig 도메인 사이에 짧은 염기성 영역, 그리고 Ig 도메인과 세포질 도메인 사이에 막경유 영역을 내포한다. 인간 LINGO-1 유전자 (서열 번호:52)는 대안적 번역 출발 코돈을 내포하고, 따라서 6개의 추가 아미노산, 다시 말하면, MQVSKR (서열 번호:87)이 LINGO-1 신호 서열의 N-말단에서 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 표 2는 본원에서 서열 번호: 51로서 제공된 LINGO-1 아미노산 서열에 기초하여, 아미노산 잔기 번호에 따라, LINGO-1 도메인 및 다른 영역을 열거한다. LINGO-1 폴리펩티드는 PCT 공개 번호 WO 2004/085648에서 더욱 상세하게 특징되고, 이것은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
Figure 112015044182874-pct00003

LINGO-1의 조직 분포 및 발달 발현이 인간과 쥐에서 조사되었다. LINGO-1 생물학은 실험동물 (쥐) 모델에서 조사되었다. 쥐 LINGO-1의 발현은 노던 블롯 및 면역조직화학 염색에 의해 결정될 때, 뉴런 및 희소돌기아교세포에 국지화된다. 쥐 LINGO-1 mRNA 발현 수준은 발달적으로 조절되고, 출생 직후에, 다시 말하면, ca. 산후 1 일에 정점에 이른다. 쥐 척수 횡절단 손상 모델에서, LINGO-1은 RT-PCR에 의해 결정될 때, 손상 부위에서 상향조절된다. Mi et al. Nature Neurosci. 7:221-228 (2004) 참조.
LINGO-1 폴리펩티드의 다양한 구조적 및 기능적 도메인을 포함하는 아미노산의 문맥에서, 용어 "약"은 특히 언급된 값 및 여러 (가령, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개) 아미노산에 의해 더욱 큰 또는 더욱 작은 값을 포함한다. 표 2에서 열거된 바와 같이 이들 도메인의 위치가 컴퓨터 그래픽에 의해 예측되었기 때문에, 당업자는 도메인을 구성하는 아미노산 잔기가 도메인을 규정하는데 이용된 규준에 따라 약간 (가령, 약 1 내지 15개 잔기에 의해) 변할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
전장, 야생형 LINGO-1은 NgR1에 결합한다. PCT 공개 번호 WO 2004/085648을 참조한다. LINGO-1은 희소돌기아교세포에서 발현되고, 그리고 LINGO-1 단백질은 축삭돌기의 희소돌기아교세포-매개된 수초화의 조절에 관련된다. 미국 특허 공개 번호 2006/0009388 A1을 참조하고, 이것은 전체적으로 본원에서 참조로서 편입된다.
전장 LINGO-1 분자에 대한 뉴클레오티드 서열은 다음과 같다:
ATGCTGGCGGGGGGCGTGAGGAGCATGCCCAGCCCCCTCCTGGCCTGCTG GCAGCCCATCCTCCTGCTGGTGCTGGGCTCAGTGCTGTCAGGCTCGGCCA CGGGCTGCCCGCCCCGCTGCGAGTGCTCCGCCCAGGACCGCGCTGTGCTG TGCCACCGCAAGCGCTTTGTGGCAGTCCCCGAGGGCATCCCCACCGAGAC GCGCCTGCTGGACCTAGGCAAGAACCGCATCAAAACGCTCAACCAGGACG AGTTCGCCAGCTTCCCGCACCTGGAGGAGCTGGAGCTCAACGAGAACATC GTGAGCGCCGTGGAGCCCGGCGCCTTCAACAACCTCTTCAACCTCCGGAC GCTGGGTCTCCGCAGCAACCGCCTGAAGCTCATCCCGCTAGGCGTCTTCA CTGGCCTCAGCAACCTGACCAAGCTGGACATCAGCGAGAACAAGATTGTT ATCCTGCTGGACTACATGTTTCAGGACCTGTACAACCTCAAGTCACTGGA GGTTGGCGACAATGACCTCGTCTACATCTCTCACCGCGCCTTCAGCGGCC TCAACAGCCTGGAGCAGCTGACGCTGGAGAAATGCAACCTGACCTCCATC CCCACCGAGGCGCTGTCCCACCTGCACGGCCTCATCGTCCTGAGGCTCCG GCACCTCAACATCAATGCCATCCGGGACTACTCCTTCAAGAGGCTCTACC GACTCAAGGTCTTGGAGATCTCCCACTGGCCCTACTTGGACACCATGACA CCCAACTGCCTCTACGGCCTCAACCTGACGTCCCTGTCCATCACACACTG CAATCTGACCGCTGTGCCCTACCTGGCCGTCCGCCACCTAGTCTATCTCC GCTTCCTCAACCTCTCCTACAACCCCATCAGCACCATTGAGGGCTCCATG TTGCATGAGCTGCTCCGGCTGCAGGAGATCCAGCTGGTGGGCGGGCAGCT GGCCGTGGTGGAGCCCTATGCCTTCCGCGGCCTCAACTACCTGCGCGTGC TCAATGTCTCTGGCAACCAGCTGACCACACTGGAGGAATCAGTCTTCCAC TCGGTGGGCAACCTGGAGACACTCATCCTGGACTCCAACCCGCTGGCCTG CGACTGTCGGCTCCTGTGGGTGTTCCGGCGCCGCTGGCGGCTCAACTTCA ACCGGCAGCAGCCCACGTGCGCCACGCCCGAGTTTGTCCAGGGCAAGGAG TTCAAGGACTTCCCTGATGTGCTACTGCCCAACTACTTCACCTGCCGCCG CGCCCGCATCCGGGACCGCAAGGCCCAGCAGGTGTTTGTGGACGAGGGCC ACACGGTGCAGTTTGTGTGCCGGGCCGATGGCGACCCGCCGCCCGCCATC CTCTGGCTCTCACCCCGAAAGCACCTGGTCTCAGCCAAGAGCAATGGGCG GCTCACAGTCTTCCCTGATGGCACGCTGGAGGTGCGCTACGCCCAGGTAC AGGACAACGGCACGTACCTGTGCATCGCGGCCAACGCGGGCGGCAACGAC TCCATGCCCGCCCACCTGCATGTGCGCAGCTACTCGCCCGACTGGCCCCA TCAGCCCAACAAGACCTTCGCTTTCATCTCCAACCAGCCGGGCGAGGGAG AGGCCAACAGCACCCGCGCCACTGTGCCTTTCCCCTTCGACATCAAGACC CTCATCATCGCCACCACCATGGGCTTCATCTCTTTCCTGGGCGTCGTCCT CTTCTGCCTGGTGCTGCTGTTTCTCTGGAGCCGGGGCAAGGGCAACACAA AGCACAACATCGAGATCGAGTATGTGCCCCGAAAGTCGGACGCAGGCATC AGCTCCGCCGACGCGCCCCGCAAGTTCAACATGAAGATGATATGA. (서열 번호: 52)
전장 LINGO-1 폴리펩티드에 대한 폴리펩티드 서열은 다음과 같다: MLAGGVRSMPSPLLACWQPILLLVLGSVLSGSATGCPPRCECSAQDRAVL CHRKRFVAVPEGIPTETRLLDLGKNRIKTLNQDEFASFPHLEELELNENI VSAVEPGAFNNLFNLRTLGLRSNRLKLIPLGVFTGLSNLTKLDISENKIV ILLDYMFQDLYNLKSLEVGDNDLVYISHRAFSGLNSLEQLTLEKCNLTSI PTEALSHLHGLIVLRLRHLNINAIRDYSFKRLYRLKVLEISHWPYLDTMT PNCLYGLNLTSLSITHCNLTAVPYLAVRHLVYLRFLNLSYNPISTIEGSM LHELLRLQEIQLVGGQLAVVEPYAFRGLNYLRVLNVSGNQLTTLEESVFH SVGNLETLILDSNPLACDCRLLWVFRRRWRLNFNRQQPTCATPEFVQGKE FKDFPDVLLPNYFTCRRARIRDRKAQQVFVDEGHTVQFVCRADGDPPPAI LWLSPRKHLVSAKSNGRLTVFPDGTLEVRYAQVQDNGTYLCIAANAGGND SMPAHLHVRSYSPDWPHQPNKTFAFISNQPGEGEANSTRATVPFPFDIKT LIIATTMGFISFLGVVLFCLVLLFLWSRGKGNTKHNIEIEYVPRKSDAGI
SSADAPRKFNMKMI. (서열 번호: 51)
항-LINGO-1 항체 분자
일정한 구체예에서 항체 분자는 LINGO, 예를 들면, 인간 LINGO에 결합한다. 다른 구체예에서, 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1에 결합한다. 한 구체예에서, 항체 분자는 단리되거나, 정제되거나 또는 재조합이다. "단리된" 폴리펩티드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체는 자연 환경에 있지 않은 폴리펩티드인 것으로 의도된다. 특정 수준의 정제가 필요하지는 않다. 가령, 단리된 폴리펩티드는 선천적 또는 자연 환경으로부터 이전될 수 있다. 숙주 세포에서 발현된 재조합적으로 생산된 폴리펩티드와 단백질은 임의의 적절한 기술에 의해 분리되거나, 분획되거나, 또는 부분적으로 또는 실제적으로 정제된 선천적 또는 재조합 폴리펩티드가 그러한 것처럼, 본 발명의 목적을 위해 단리된 것으로 고려된다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "항체 분자"는 최소한 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 지칭한다. 용어 항체 분자는 예로서, 전장 항체, 성숙 항체, 항체의 단편, 예를 들면, 본원에서 개시된 항체의 항원 결합 단편, 유도체, 유사체, 또는 변이체, 그리고 이들의 임의의 조합을 포함한다.
용어 "단편," "변이체," "유도체" 및 "유사체"는 LINGO-1 항체 분자 또는 항체 폴리펩티드를 지칭할 때, 상응하는 선천적 항체 또는 폴리펩티드의 항원 결합 성질 중에서 최소한 일부를 유지하는 임의의 폴리펩티드를 포함한다. 폴리펩티드의 단편은 본원의 다른 곳에서 논의된 특이적 항체 단편에 더하여, 단백분해 단편뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다. LINGO-1 항체 및 항체 폴리펩티드의 변이체는 앞서 설명된 바와 같은 단편, 그리고 또한, 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입으로 인해 변경된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 변이체는 자연적으로 또는 비자연적으로 발생할 수 있다. 비자연적으로 발생하는 변이체는 공지된 돌연변이유발 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 변이체 폴리펩티드는 보존성 또는 비보존성 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다. LINGO-1 항체 분자 및 항체 폴리펩티드의 유도체는 선천적 폴리펩티드 상에서 발견되지 않는 추가 특질을 전시하기 위해 변경된 폴리펩티드이다. 실례는 융합 단백질을 포함한다.
본원에서 이용된 바와 같이 LINGO-1 항체 분자 또는 항체 폴리펩티드의 "유도체"는 기능적 측기의 반응에 의해 화학적으로 유도체화된 하나 또는 그 이상의 잔기를 갖는 개별 폴리펩티드를 지칭한다. 20개 표준 아미노산 중에서 하나 또는 그 이상의 자연적으로 발생하는 아미노산 유도체를 내포하는 펩티드 역시 "유도체"로서 포함된다. 가령, 4-히드록시프롤린이 프롤린을 대신할 수 있다; 5-히드록실리신이 리신을 대신할 수 있다; 3-메틸히스티딘이 히스티딘을 대신할 수 있다; 호모세린이 세린을 대신할 수 있다; 그리고 오르니틴이 리신을 대신할 수 있다.
가령, 항체 분자는 무거운 (H) 사슬 가변 도메인 서열 (본원에서 VH로서 약칭됨), 그리고 가벼운 (L) 사슬 가변 도메인 서열 (본원에서 VL로서 약칭됨)을 포함할 수 있다. 다른 실례에서, 항체 분자는 2개의 무거운 (H) 사슬 가변 도메인 서열 및 2개의 가벼운 (L) 사슬 가변 도메인 서열을 포함하고, 따라서 2개의 항원 결합 부위, 예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, 단일 사슬 항체 (가령, scFv), 단일 가변 도메인 항체, 디아바디 (Dab) (이가 및 이중특이적), 그리고 전체 항체 또는 재조합 DNA 기술을 이용하여 데노보 합성된 것들의 변형에 의해 생산될 수 있는 키메라 (가령, 인간화) 항체를 형성한다. 이들 기능적 항체 단편은 그들의 개별 항원 또는 수용체와 선별적으로 결합하는 능력을 유지한다. 항체 및 항체 단편은 IgG, IgA, IgM, IgD, 그리고 IgE가 포함되지만 이들에 한정되지 않는 임의의 부류의 항체, 그리고 항체의 임의의 하위부류 (가령, IgG1, IgG2, IgG3, 그리고 IgG4)로부터 유래될 수 있다. 항체 분자는 단일클론 또는 다중클론일 수 있다. 항체는 또한, 인간, 인간화, CDR-합체된, 또는 시험관내 산출된 항체일 수 있다. 항체는 예로서, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4에서 선택된 중쇄 불변 영역을 가질 수 있다. 항체는 또한, 예로서 카파 또는 람다에서 선택된 경쇄를 가질 수 있다.
항원 결합 단편의 실례는 다음을 포함한다: (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성되는 일가 단편, Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편, F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성되는 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL과 VH 도메인으로 구성되는 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 구성되는 디아바디 (dAb) 단편; (vi) 낙타 또는 낙타화 가변 도메인; (vii) 단일 사슬 Fv (scFv), 가령, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 그리고 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)을 참조한다; (viii) 단일 도메인 항체. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 전통적인 기술을 이용하여 획득되고, 그리고 이들 단편은 무손상 항체에서와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
항체 분자는 또한 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 상보성 결정 영역이 단일 도메인 폴리펩티드의 부분인 항체를 포함할 수 있다. 실례에는 중쇄 항체, 경쇄를 자연적으로 결여하는 항체, 전통적인 4-사슬 항체로부터 유래된 단일 도메인 항체, 가공된 항체 및 항체로부터 유래된 것들 이외의 단일 도메인 골격이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 단일 도메인 항체는 당분야, 또는 임의의 장래 단일 도메인 항체 중에서 한 가지일 수 있다. 단일 도메인 항체는 생쥐, 인간, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼, 그리고 소가 포함되지만 이들에 한정되지 않는 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 한 양상에서, 단일 도메인 항체는 어류에서 발견된 면역글로불린의 가변 영역으로부터 유래될 수 있다, 예를 들면, 예로서, 상어의 혈청에서 발견된 노벨 항원 수용체 (NAR)로서 알려져 있는 면역글로불린 아이소타입으로부터 유래된다. NAR의 가변 영역으로부터 유래된 단일 도메인 항체 ("IgNARs")를 생산하는 방법은 WO 03/014161 및 Streltsov (2005) Protein Sci. 14:2901-2909에서 설명된다. 본 발명의 다른 양상에 따라, 단일 도메인 항체는 경쇄를 결여하는 중쇄 항체로서 알려져 있는 자연적으로 발생하는 단일 도메인 항체이다. 이런 단일 도메인 항체는 예로서, WO 9404678에서 개시된다. 명료함을 위해, 경쇄를 자연적으로 결여하는 중쇄 항체로부터 유래된 이러한 가변 도메인은 본원에서, 이를 4개 사슬 면역글로불린의 전통적인 VH와 구별하기 위해 VHH 또는 나노바디로서 알려져 있다. 이런 VHH 분자는 낙타과 (Camelidae) 종, 예를 들면, 낙타, 라마, 단봉낙타, 알파카 및 구아나코에서 조성된 항체로부터 유래될 수 있다. 낙타과 (Camelidae) 이외에 다른 종이 경쇄를 자연적으로 결여하는 중쇄 항체를 생산할 수 있다; 이런 VHH는 본 발명의 범위 내에 있다.
VH와 VL 영역은 "프레임워크 영역" (FR)으로 명명된, 더욱 보존된 영역에 산재된 "상보성 결정 영역" (CDR)으로 명명된 초가변성의 영역으로 세분될 수 있다. 프레임워크 영역과 CDR의 정도는 다수의 방법 (참조: Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917); 그리고 Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 이용된 AbM 정의에 의해 정확하게 규정되었다. 전반적으로, 예로서 Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)를 참조한다. 일반적으로, 구체적으로 지시되지 않으면, 다음 정의가 이용된다: 중쇄 가변 도메인의 CDR1의 AbM 정의 및 다른 CDR에 대한 Kabat 정의. 이에 더하여, Kabat 또는 AbM CDR에 대하여 설명된 본 발명의 구체예는 또한, Chothia 초가변 루프를 이용하여 실행될 수 있다. 각 VH와 VL은 전형적으로, 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 다음 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
본원에서 이용된 바와 같이, "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 가령, 서열은 자연적으로 발생하는 가변 도메인의 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 가령, 서열은 1개, 2개 또는 그 이상의 N- 또는 C-말단 아미노산을 포함하거나 포함하지 않을 수 있고, 또는 단백질 구조의 형성과 양립하는 다른 변경을 포함할 수 있다.
용어 "항원 결합 부위"는 LINGO-1, 또는 이의 에피토프에 결합하는 경계면을 형성하는 결정인자를 포함하는 항체 분자의 부분을 지칭한다. 단백질 (또는 단백질 모방체)에 대하여, 항원 결합 부위는 전형적으로, LINGO-1에 결합하는 경계면을 형성하는 하나 또는 그 이상의 루프 (최소한 4개의 아미노산 또는 아미노산 모방체의)를 포함한다. 전형적으로, 항체 분자의 항원 결합 부위는 최소한 1개 또는 2개의 CDR, 또는 더욱 전형적으로 최소한 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함한다.
용어 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"은 본원에서 이용된 바와 같이, 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제조물을 지칭한다. 단일클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성과 친화성을 전시한다. 단일클론 항체는 하이브리도마 기법에 의해 또는 하이브리도마 기법을 이용하지 않는 방법 (가령, 재조합 방법)에 의해 만들어질 수 있다.
"효과적으로 인간" 단백질은 중화 항체 반응, 예를 들면, 인간 항뮤린 항체 (HAMA) 반응을 유발하지 않는 단백질이다. HAMA는 다수의 환경에서, 예를 들면, 예로서 만성 또는 재발성 질환 상태의 치료에서 항체 분자가 반복적으로 투여되면, 문제가 될 수 있다. HAMA 반응은 혈청으로부터 증가된 항체 청소 (가령, Saleh et al., Cancer Immunol. Immunother., 32:180-190 (1990)을 참조한다) 및 잠재적인 알레르기 반응 (가령, LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)을 참조한다) 때문에, 반복된 항체 투여를 잠재적으로 무효하게 만들 수 있다 .
일정한 구체예에서, 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 포유류 (가령, 인간 LINGO-1 (또는 이의 기능적 변이체))에 결합하는 단일클론 또는 단일 특이성 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 (가령, Fab, F(ab')2, Fv, 단일 사슬 Fv 단편, 단일 도메인 항체, 디아바디 (dAb), 이가 또는 이중특이적 항체 또는 이의 단편, 이의 단일 도메인 변이체)일 수 있다. 한 구체예에서, 항체 분자는 LINGO-1, 예를 들면, 인간 LINGO-1에 대한 단일클론 항체이다. 전형적으로, 항체 분자는 인간 LINGO-1 (또는 이의 기능적 단편, 예를 들면, 본원에서 설명된 바와 같은 항체 단편)에 대한 인간, 인간화, CDR-합체된, 키메라, 낙타, 또는 시험관내 산출된 항체이다. 전형적으로, 상기 항체는 LINGO-1의 하나 또는 그 이상의 활성 (가령, 본원에서 설명된 바와 같은 LINGO-1의 하나 또는 그 이상의 생물학적 활성)을 저해하거나, 감소시키거나 또는 중화시킨다.
일정한 구체예에서, 상기 항체 분자는 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된 미국 특허 번호 8,058,406에서 설명된 참고 단일클론 항체 Li62 또는 Li81과 동일한, 또는 실제적으로 동일한 LINGO-1 에피토프에 특이적으로 결합한다. 예시적인 항-LINGO-1 항체 분자는 미국 특허 번호 8,058,406에서 설명된다. 한 구체예에서, 항체 분자는 Li62, Li81의 최소한 항원 결합 도메인을 포함한다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "항원 결합 도메인"은 항원 상에서 에피토프 (가령, LINGO-1의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 부위를 포함한다. 항체의 항원 결합 도메인은 면역글로불린 중쇄 가변 영역의 최소한 일부분 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역의 최소한 일부분을 전형적으로 포함한다. 이들 가변 영역에 의해 형성된 결합 부위는 항체의 특이성을 결정한다.
다른 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 Li62 또는 Li81이 LINGO-1에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 특정 LINGO-1 폴리펩티드 단편 또는 도메인에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 이런 LINGO-1 폴리펩티드 단편에는 서열 번호:51의 아미노산 34 내지 532; 34 내지 417; 34 내지 425; 34 내지 493; 66 내지 532; 66 내지 417; 66 내지 426; 66 내지 493; 66 내지 532; 417 내지 532; 417 내지 425 (LINGO-1 염기성 영역); 417 내지 493; 417 내지 532; 419 내지 493 (LINGO-11 g 영역); 또는 425 내지 532를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 폴리펩티드; 또는 서열 번호:51의 아미노산 34 내지 532; 34 내지 417; 34 내지 425; 34 내지 493; 66 내지 532; 66 내지 417; 66 내지 426; 66 내지 493; 66 내지 532; 417 내지 532; 417 내지 425 (LINGO-1 염기성 영역); 417 내지 493; 417 내지 532; 419 내지 493 (LINGO-11 g 영역); 또는 425 내지 532와 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 LINGO-1 변이체 폴리펩티드가 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 하나 또는 그 이상의 류신-풍부한-반복 (LRR)을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 펩티드 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 이런 단편은 예로서, 서열 번호:51의 아미노산 66 내지 89; 66 내지 113; 66 내지 137; 90 내지 113; 114 내지 137; 138 내지 161; 162 내지 185; 186 내지 209; 210 내지 233; 234 내지 257; 258 내지 281; 282 내지 305; 306 내지 329; 또는 330 내지 353을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편을 포함한다. 서열 번호:51의 아미노산 66 내지 89; 66 내지 113; 90 내지 113; 114 내지 137; 138 내지 161; 162 내지 185; 186 내지 209; 210 내지 233; 234 내지 257; 258 내지 281; 282 내지 305; 306 내지 329; 또는 330 내지 353과 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 변이체 LINGO-1 폴리펩티드의 상응하는 단편 또한 예기된다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 LRR에 접하는 하나 또는 그 이상의 시스테인 풍부한 영역을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 이런 단편은 예로서, 서열 번호:51의 아미노산 34 내지 64 (N-말단 LRR 측면 영역 (LRRNT))을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편, 또는 서열 번호:51의 아미노산 363 내지 416 (C-말단 LRR 측면 영역 (LRRCT))을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편을 포함한다. 서열 번호:51의 아미노산 34 내지 64 및 363 내지 416과 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 변이체 LINGO-1 폴리펩티드의 상응하는 단편 또한 예기된다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 41 내지 525; 서열 번호:51의 40 내지 526; 서열 번호:51의 39 내지 527; 서열 번호:51의 38 내지 528; 서열 번호:51의 37 내지 529; 서열 번호:51의 36 내지 530; 서열 번호:51의 35 내지 531; 서열 번호:51의 34 내지 531; 서열 번호:51의 46 내지 520; 서열 번호:51의 45 내지 521; 서열 번호:51의 44 내지 522; 서열 번호:51의 43 내지 523; 그리고 서열 번호:51의 42 내지 524를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 1 내지 33; 서열 번호:51의 1 내지 35; 서열 번호:51의 34 내지 64; 서열 번호:51의 36 내지 64; 서열 번호:51의 66 내지 89; 서열 번호:51의 90 내지 113; 서열 번호:51의 114 내지 137; 서열 번호:51의 138 내지 161; 서열 번호:51의 162 내지 185; 서열 번호:51의 186 내지 209; 서열 번호:51의 210 내지 233; 서열 번호:51의 234 내지 257; 서열 번호:51의 258 내지 281; 서열 번호:51의 282 내지 305; 서열 번호:51의 306 내지 329; 서열 번호:51의 330 내지 353; 서열 번호:51의 363 내지 416; 서열 번호:51의 417 내지 424; 서열 번호:51의 419 내지 493; 그리고 서열 번호:51의 494 내지 551을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 1 내지 33; 서열 번호:51의 1 내지 35; 서열 번호:51의 1 내지 64; 서열 번호:51의 1 내지 89; 서열 번호:51의 1 내지 113; 서열 번호:51의 1 내지 137; 서열 번호:51의 1 내지 161; 서열 번호:51의 1 내지 185; 서열 번호:51의 1 내지 209; 서열 번호:51의 1 내지 233; 서열 번호:51의 1 내지 257; 서열 번호:51의 1 내지 281; 서열 번호:51의 1 내지 305; 서열 번호:51의 1 내지 329; 서열 번호:51의 1 내지 353; 서열 번호:51의 1 내지 416; 서열 번호:51의 1 내지 424; 서열 번호:51의 1 내지 493; 서열 번호:51의 1 내지 551; 서열 번호:51의 1 내지 531 및 서열 번호:51의 1 내지 532를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 34 내지 64; 서열 번호:51의 34 내지 89; 서열 번호:51의 34 내지 113; 서열 번호:51의 34 내지 137; 서열 번호:51의 34 내지 161; 서열 번호:51의 34 내지 185; 서열 번호:51의 34 내지 209; 서열 번호:51의 34 내지 233; 서열 번호:51의 34 내지 257; 서열 번호:51의 34 내지 281; 서열 번호:51의 34 내지 305; 서열 번호:51의 34 내지 329; 서열 번호:51의 34 내지 353; 서열 번호:51의 34 내지 416; 서열 번호:51의 34 내지 424; 서열 번호:51의 34 내지 493; 그리고 서열 번호:51의 34 내지 551을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 34 내지 530; 서열 번호:51의 34 내지 531; 서열 번호:51의 34 내지 532; 서열 번호:51의 34 내지 533; 서열 번호:51의 34 내지 534; 서열 번호:51의 34 내지 535; 서열 번호:51의 34 내지 536; 서열 번호:51의 34 내지 537; 서열 번호:51의 34 내지 538; 서열 번호:51의 34 내지 539; 서열 번호:51의 30 내지 532; 서열 번호:51의 31 내지 532; 서열 번호:51의 32 내지 532; 서열 번호:51의 33 내지 532; 서열 번호:51의 34 내지 532; 서열 번호:51의 35 내지 532; 서열 번호:51의 36 내지 532; 서열 번호:51의 30 내지 531; 서열 번호:51의 31 내지 531; 서열 번호:51의 32 내지 531; 서열 번호:51의 33 내지 531; 서열 번호:51의 34 내지 531; 서열 번호:51의 35 내지 531; 그리고 서열 번호:51의 36 내지 531을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 36 내지 64; 서열 번호:51의 36 내지 89; 서열 번호:51의 36 내지 113; 서열 번호:51의 36 내지 137; 서열 번호:51의 36 내지 161; 서열 번호:51의 36 내지 185; 서열 번호:51의 36 내지 209; 서열 번호:51의 36 내지 233; 서열 번호:51의 36 내지 257; 서열 번호:51의 36 내지 281; 서열 번호:51의 36 내지 305; 서열 번호:51의 36 내지 329; 서열 번호:51의 36 내지 353; 서열 번호:51의 36 내지 416; 서열 번호:51의 36 내지 424; 서열 번호:51의 36 내지 493; 그리고 서열 번호:51의 36 내지 551을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 36 내지 530; 서열 번호:51의 36 내지 531; 서열 번호:51의 36 내지 532; 서열 번호:51의 36 내지 533; 서열 번호:51의 36 내지 534; 서열 번호:51의 36 내지 535; 서열 번호:51의 36 내지 536; 서열 번호:51의 36 내지 537; 서열 번호:51의 36 내지 538; 그리고 서열 번호:51의 36 내지 539를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:51의 아미노산 417 내지 493; 서열 번호:51의 417 내지 494; 서열 번호:51의 417 내지 495; 서열 번호:51의 417 내지 496; 서열 번호:51의 417 내지 497; 서열 번호:51의 417 내지 498; 서열 번호:51의 417 내지 499; 서열 번호:51의 417 내지 500; 서열 번호:51의 417 내지 492; 서열 번호:51의 417 내지 491; 서열 번호:51의 412 내지 493; 서열 번호:51의 413 내지 493; 서열 번호:51의 414 내지 493; 서열 번호:51의 415 내지 493; 서열 번호:51의 416 내지 493; 서열 번호:51의 411 내지 493; 서열 번호:51의 410 내지 493; 서열 번호:51의 410 내지 494; 서열 번호:51의 411 내지 494; 서열 번호:51의 412 내지 494; 서열 번호:51의 413 내지 494; 서열 번호:51의 414 내지 494; 서열 번호:51의 415 내지 494; 서열 번호:51의 416 내지 494; 서열 번호:51의 417 내지 494; 그리고 서열 번호:51의 418 내지 494를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 Ig 도메인의 펩티드를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 폴리펩티드 또는 이런 폴리펩티드의 단편, 변이체, 또는 유도체에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 구체적으로, 다음 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 폴리펩티드: ITX1X2X3 (서열 번호:88), ACX1X2X3 (서열 번호:89), VCX1X2X3 (서열 번호:90) 및 SPX1X2X3 (서열 번호:91), 여기서 X1은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루타민, 또는 아스파라긴이고, X2는 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루타민, 또는 아스파라긴이고, 그리고 X3은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루타민, 또는 아스파라긴이다. 가령, 일정한 항체 분자가 결합할 수 있는 LINGO-1 펩티드 단편은 다음 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 단편을 포함한다: SPRKH (서열 번호:92), SPRKK (서열 번호:93), SPRKR (서열 번호:94), SPKKH (서열 번호:95), SPHKH (서열 번호:96), SPRRH (서열 번호:97), SPRHH (서열 번호:98), SPRRR (서열 번호:99), SPHHH (서열 번호:100), SPKKK (서열 번호:101), LSPRKH (서열 번호:102), LSPRKK (서열 번호:103), LSPRKR (서열 번호:104), LSPKKH (서열 번호:105), LSPHKH (서열 번호:106), LSPRRH (서열 번호:107), LSPRHH (서열 번호:108), LSPRRR (서열 번호:109), LSPHHH (서열 번호:110), LSPKKK (서열 번호:111), WLSPRKH (서열 번호:112), WLSPRKK (서열 번호:113), WLSPRKR (서열 번호:114), WLSPKKH (서열 번호:115), WLSPHKH (서열 번호:116), WLSPRRH (서열 번호:117), WLSPRHH (서열 번호:118), WLSPRRR (서열 번호:119), WLSPHHH (서열 번호:120), WLSPKKK (서열 번호:121). 이들 LINGO-1 폴리펩티드는 LINGO-1의 Ig 도메인 내에 염기성 "RKH 루프" (아르기닌-리신-히스티딘 아미노산 456-458)를 포함한다. 염기성 트리펩티드를 포함하는 추가 LINGO-1 펩티드는 ITPKRR (서열 번호:122), ACHHK (서열 번호:123) 및 VCHHK (서열 번호:124)이다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 Ig 도메인의 펩티드를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 폴리펩티드 또는 이런 폴리펩티드의 단편, 변이체, 또는 유도체에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 구체적으로, 다음 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 펩티드: X4X5RKH (서열 번호:125), X4X5RRR (서열 번호:126), X4X5KKK (서열 번호:127), X4X5HHH (서열 번호:128), X4X5RKK (서열 번호:129), X4X5RKR (서열 번호:130), X4X5KKH (서열 번호:131), X4X5HKH (서열 번호:132), X4X5RRH (서열 번호:133) 및 X4X5RHH (서열 번호:134), 여기서 X4는 임의의 아미노산이고 X5는 임의의 아미노산이다.
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 Ig 도메인의 펩티드를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 폴리펩티드 또는 이런 폴리펩티드의 단편, 변이체, 또는 유도체에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 구체적으로, 다음 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 폴리펩티드: ITX6X7X8 (서열 번호:135), ACX6X7X8 (서열 번호:136), VCX6X7X8 (서열 번호:137) 및 SPX6X7X8 (서열 번호:138), 여기서 X6은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루타민, 또는 아스파라긴이고, X7은 임의의 아미노산이고, 그리고 X8은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루타민, 또는 아스파라긴이다. 가령, 다음 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드: SPRLH (서열 번호:139).
일정한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 Ig 도메인에서 아미노산 452-458을 내포하는 펩티드를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 폴리펩티드, 또는 이의 유도체에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하고, 여기서 아미노산 452는 트립토판 또는 페닐알라닌 잔기이다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 염기성 도메인의 펩티드를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 LINGO-1 폴리펩티드에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 구체적으로, 다음 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되는 펩티드: RRARIRDRK (서열 번호:140), KKVKVKEKR (서열 번호:141), RRLRLRDRK (서열 번호:142), RRGRGRDRK (서열 번호:143) 및 RRIRARDRK (서열 번호:144).
본 발명의 항체 또는 항체 단편을 생산하기 위한 이들 분자를 획득하기 위한 추가 예시적인 가용성 LINGO-1 폴리펩티드 및 방법 및 물질은 예로서, 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된 국제 특허 출원 번호 PCT/US2004/008323에서 발견될 수 있다.
항체를 만드는 방법은 당분야에서 공지되고 본원에서 설명된다. 일단 신호 서열이 없는 전장 LINGO-1의 다양한 단편에 대한, 또는 상기 전장 LINGO-1에 대한 항체가 생산되면, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 LINGO-1의 어떤 아미노산, 또는 에피토프에 결합하는 지를 결정하는 것은 본원에서 설명된 바와 같은 에피토프 지도화 프로토콜뿐만 아니라 당분야에서 공지된 방법 (가령, "Chapter 11--Immunology," Current Protocols in Molecular Biology, Ed. Ausubel et al., v.2, John Wiley & Sons, Inc. (1996)에서 설명된 바와 같은 이중 항체-샌드위치 ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 추가 에피토프 지도화 프로토콜은 Morris, G. Epitope Mapping Protocols, New Jersey: Humana Press (1996)에서 발견될 수 있고, 이들 둘 모두 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다. 에피토프 지도화는 또한, 상업적으로 가용한 수단 (즉, ProtoPROBE, Inc. (Milwaukee, Wis.))에 의해 수행될 수 있다.
부가적으로, LINGO-1의 임의의 부분에 결합하는 생산된 항체는 이후, LINGO-1의 길항제로서 기능하고, 따라서 신경돌기 생장, 뉴런과 희소돌기아교세포 생존, 증식과 분화를 증진할 뿐만 아니라 수초화를 증진하는 그들의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다. 항체는 예로서, 본원에서, 예를 들면, 실시예 11 또는 12에서 설명된 방법, 또는 본원에서 전체적으로 참조로서 편입되는 2008년 1월 9일자 제출된 PCT/US2008/000316 및 2006년 7월 7일자 제출된 PCT/US2006/026271에서 설명된 바와 같은 방법을 이용함으로써, 희소돌기아교세포/뉴런 생존에 대해 스크리닝될 수 있다. 부가적으로, 항체는 예로서, 본원에서, 예를 들면, 실시예 2, 6, 9, 10, 11 또는 13에서 설명된 방법, 또는 PCT/US2008/000316 및/또는 PCT/US2006/026271에서 설명된 바와 같은 방법을 이용함으로써, 수초화를 증진하는 그들의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다. 최종적으로, 항체는 예로서, 본원에서, 예를 들면, 실시예 4 또는 5에서 설명된 방법, 또는 PCT/US2008/000316 및/또는 PCT/US2006/026271에서 설명된 바와 같은 방법을 이용함으로써, 희소돌기아교세포 증식과 분화뿐만 아니라 신경돌기 생장을 증진하는 그들의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다. 본 발명의 항체의 다른 길항제 기능은 본원에서 참조로서 편입된 US 8,058,406의 실시예에서 설명된 바와 같은 다른 검정을 이용하여 검사될 수 있다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 최소한 하나의 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하고, 여기서 상기 에피토프는 서열 번호:5의 최소한 약 4 내지 5개 아미노산, 최소한 7개, 최소한 9개, 또는 서열 번호:5의 최소한 약 15 내지 약 30개 아미노산을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성된다. 설명된 바와 같은 서열 번호:51의 소정의 에피토프의 아미노산은 인접하거나 또는 선형일 수 있지만, 반드시 그러할 필요는 없다. 일정한 구체예에서, LINGO-1의 최소한 하나의 에피토프는 세포의 표면 상에서 또는 가용성 단편으로서 발현된 LINGO-1의 세포외 도메인에 의해 형성된, 예를 들면, IgG Fc 영역에 융합된 비-선형 에피토프를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다. 따라서, 일정한 구체예에서 LINGO-1의 최소한 하나의 에피토프는 서열 번호:51의 최소한 4, 최소한 5, 최소한 6, 최소한 7, 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 15, 최소한 20, 최소한 25, 약 15 내지 약 30, 또는 최소한 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100개의 인접한 또는 비인접한 아미노산을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되고, 여기서 비인접한 아미노산은 단백질 접힘을 통해 에피토프를 형성한다.
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1의 최소한 하나의 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하고, 여기서 상기 에피토프는 앞서 설명된 바와 같은 서열 번호:51의 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 이상의 인접한 또는 비인접한 아미노산을 추가로 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성되고, 그리고 LINGO-1 항체가 단백질의 변형되지 않은 이형에서보다 변형된 표적 단백질에 더욱 높은 친화성으로 결합하도록, 단백질을 변경하는 추가 모이어티, 예를 들면, 탄수화물 모이어티가 포함될 수 있다. 대안으로, LINGO-1 항체는 표적 단백질의 변형되지 않은 이형에 전혀 결합하지 않는다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 상기 참고 단일클론 항체에 대한 KD보다 적은 해리 상수 (KD)에 의해 특징되는 친화성으로, LINGO-1 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 LINGO-1 변이체 폴리펩티드에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 앞서 설명된 LINGO-1 또는 단편 또는 변이체의 최소한 하나의 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다, 다시 말하면, 관련 없는, 또는 무작위 에피토프에 결합하는 것보다 더욱 쉽게 이런 에피토프에 결합한다; 앞서 설명된 LINGO-1 또는 단편 또는 변이체의 최소한 하나의 에피토프에 우선적으로 결합한다, 다시 말하면, 관련된, 유사한, 상동한, 또는 비슷한 에피토프에 결합하는 것보다 더욱 쉽게 이런 에피토프에 결합한다; 앞서 설명된 LINGO-1 또는 단편 또는 변이체의 일정한 에피토프에 그 자체가 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 참고 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다; 또는 약 5 x 10-2 M, 약 10-2 M, 약 5 x 10-3 M, 약 10-3 M, 약 5 x 10-4 M, 약 10-4 M, 약 5 x 10-5 M, 약 10-5 M, 약 5 x 10-6 M, 약 10-6 M, 약 5 x 10-7 M, 약 10-7 M, 약 5 x 10-8 M, 약 10-8 M, 약 5 x 10-9 M, 약 10-9 M, 약 5 x 10-10 M, 약 10-101 M, 약 5 x 10-11 M, 약 10-11 M, 약 5 x 10-12 M, 약 10-12 M, 약 5 x 10-13 M, 약 10-13 M, 약 5 x 10-14 M, 약 10-14 M, 약 5 x 10-15 M, 약 10-15 M보다 적은 해리 상수 KD에 의해 특징되는 친화성으로, 앞서 설명된 LINGO-1 또는 단편 또는 변이체의 최소한 하나의 에피토프에 결합한다. 특정 양상에서, 항체 또는 이의 단편은 뮤린 LINGO-1 폴리펩티드 또는 이의 단편에 비하여, 인간 LINGO-1 폴리펩티드 또는 이의 단편에 우선적으로 결합한다.
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 5 x 10-2 sec-1, 10-2 sec-1, 5 x 10-3 sec-1 또는 10-3 sec-1보다 적거나 또는 이와 동등한 오프 레이트 (k(off))로, LINGO-1 폴리펩티드 또는 이들의 단편 또는 변이체에 결합한다. 대안으로, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 5 x 10-4 sec1, 10-4 sec1, 5 x 10-5 sec1, 또는 10-5 sec1, 5 x 10-6 sec1, 10-6 sec1, 5 x 10-7 sec1 또는 10-7 sec1보다 적거나 또는 이와 동등한 오프 레이트 (k(off))로, LINGO-1 폴리펩티드 또는 이들의 단편 또는 변이체에 결합한다.
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 103 M-1 sec-1, 5 x 103 M-1 sec-1, 104 M-1 sec-1, 5 x 104 M-1 sec-1보다 크거나 이와 동등한 온 레이트 (k(on))로, LINGO-1 폴리펩티드 또는 이들의 단편 또는 변이체에 결합한다. 대안으로, 항체 분자는 105 M-1 sec-1, 5 x 105 M-1 sec-1, 106 M-1 sec-1, 5 x 106 M-1 sec-1, 또는 107 M-1 sec-1, 5 x 107 M-1 sec-1보다 크거나 이와 동등한 온 레이트 (k(on))로, LINGO-1 폴리펩티드 또는 이들의 단편 또는 변이체에 결합한다.
다른 구체예에서, LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1 활성의 길항제이다. 일정한 구체예에서, 예로서, 뉴런 상에서 발현된 LINGO-1에 길항제 LINGO-1 항체의 결합은 미엘린-연관된 신경돌기 생장 저해 또는 뉴런 세포 사멸을 차단한다. 다른 구체예에서, 희소돌기아교세포 상에서 발현된 LINGO-1에 LINGO-1 항체의 결합은 희소돌기아교세포 성장 또는 분화의 저해를 차단하거나, 또는 CNS 뉴런의 탈수초화 또는 수초형성장애를 차단한다.
변형된 형태의 LINGO-1 항체 분자는 당분야에서 공지된 기술을 이용하여 전체 전구체 또는 부모 항체로부터 만들어질 수 있다. 예시적인 기술은 본원에서 더욱 상세하게 논의된다.
일정한 구체예에서, 항체 분자는 재조합적으로 생산될 수 있다, 예를 들면, 파지 전시에 의해 또는 조합 방법에 의해 생산될 수 있다. 항- LINGO-1 항체를 산출하기 위한 파지 전시 및 조합 방법은 당분야에서 공지된다 (가령, Ladner et al. 미국 특허 번호 5,223,409; Kang et al. 국제 공개 번호 WO 92/18619; Dower et al. 국제 공개 번호 WO 91/17271; Winter et al. 국제 공개 WO 92/20791; Markland et al. 국제 공개 번호 WO 92/15679; Breitling et al. 국제 공개 WO 93/01288; McCafferty et al. 국제 공개 번호 WO 92/01047; Garrard et al. 국제 공개 번호 WO 92/09690; Ladner et al. 국제 공개 번호 WO 90/02809; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; 그리고 Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982에서 설명된 바와 같음, 이들 모두의 내용은 본원에서 참조로서 편입된다).
한 구체예에서, 항- LINGO-1 항체는 완전한 인간 항체 (가령, 인간 면역글로불린 서열로부터 항체를 생산하도록 유전적으로 조작된 생쥐에서 만들어진 항체), 또는 비-인간 항체, 예를 들면, 설치류 (생쥐 또는 쥐), 염소, 영장류 (가령, 원숭이), 낙타 항체이다. 비-인간 항체는 설치류 (생쥐 또는 쥐 항체)일 수 있다. 설치류 항체를 생산하는 방법은 당분야에서 공지된다.
인간 단일클론 항체는 생쥐 시스템 보다는 인간 면역글로불린 유전자를 운반하는 유전자도입 생쥐를 이용하여 산출될 수 있다. 관심되는 항원으로 면역화된 이들 유전자도입 생쥐로부터 비장세포는 인간 단백질로부터 에피토프에 대한 특정한 친화성을 갖는 인간 mAb를 분비하는 하이브리도마를 생산하는데 이용된다 (가령, Wood et al. 국제 출원 WO 91/00906, Kucherlapati et al. PCT 공개 WO 91/10741; Lonberg et al. 국제 출원 WO 92/03918; Kay et al. 국제 출원 92/03917; Lonberg, N. et al. 1994 Nature 368:856-859; Green, L.L. et al. 1994 Nature Genet. 7:13-21; Morrison, S.L. et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855; Bruggeman et al. 1993 Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. 1993 PNAS 90:3720-3724; Bruggeman et al. 1991 Eur J Immunol 21:1323-1326을 참조한다).
항- LINGO-1 항체는 가변 영역, 또는 이의 부분, 예를 들면, CDR이 비-인간 생물체, 예를 들면, 쥐 또는 생쥐에서 산출되는 것일 수 있다. 키메라, CDR-합체된, 그리고 인간화 항체는 본 발명의 범위 안에 있다. 비-인간 생물체, 예를 들면, 쥐 또는 생쥐에서 산출되고, 그리고 이후, 인간에서 항원성을 감소시키기 위해 예로서, 가변 프레임워크 또는 불변 영역에서 변형된 항체는 본 발명의 범위 안에 있다.
키메라 항체는 당분야에서 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 가령, 뮤린 (또는 다른 종) 단일클론 항체 분자의 Fc 불변 영역을 인코딩하는 유전자는 뮤린 Fc를 인코딩하는 영역을 제거하기 위해 제한 효소로 소화되고, 그리고 인간 Fc 불변 영역을 인코딩하는 유전자의 동등한 부분이 치환된다 (참조: Robinson et al., 국제 특허 공개 PCT/US86/02269; Akira, et al., 유럽 특허 출원 184,187; Taniguchi, M., 유럽 특허 출원 171,496; Morrison et al., 유럽 특허 출원 173,494; Neuberger et al., 국제 출원 WO 86/01533; Cabilly et al. 미국 특허 번호 4,816,567; Cabilly et al., 유럽 특허 출원 125,023; Better et al. (1988 Science 240:1041-1043); Liu et al. (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Canc. Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449; 그리고 Shaw et al., 1988, J. Natl Cancer Inst. 80:1553-1559).
인간화 또는 CDR-합체된 항체는 최소한 1개 또는 2개, 하지만 일반적으로 3개 모두의 수용자 CDR (무거운 및 또는 가벼운 면역글로불린 사슬 중에서)이 공여자 CDR으로 대체될 것이다. 이러한 항체는 비-인간 CDR 중에서 최소한 일부로 대체될 수 있거나 또는 이들 CDR 중에서 단지 일부만 비-인간 CDR로 대체될 수 있다. LINGO-1 또는 이의 단편에 인간화 항체의 결합을 위해 필요한 숫자의 CDR을 대체하는 것이 단지 필요하다.
항체는 당분야에서 공지된 방법에 의해 인간화될 수 있다. 인간화 항체는 항원 결합에 직접적으로 관련되지 않는 Fv 가변 영역의 서열을 인간 Fv 가변 영역으로부터 동등한 서열로 대체함으로써 산출될 수 있다. 인간화 항체를 산출하기 위한 일반적인 방법은 Morrison, S. L., 1985, Science 229:1202-1207, Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214, 그리고 Queen et al. US 5,585,089, US 5,693,761 및 US 5,693,762에 의해 제공되고, 이들 모두의 내용은 본원에 참조로서 편입된다. 인간화 또는 CDR-합체된 항체는 CDR-합체 또는 CDR 치환에 의해 생산될 수 있고, 여기서 면역글로불린 사슬의 1개, 2개, 또는 모든 CDR이 대체될 수 있다. 가령, 미국 특허 5,225,539; Jones et al. 1986 Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239:1534; Beidler et al. 1988 J. Immunol. 141:4053-4060; Winter US 5,225,539를 참조하고, 이들 모두의 내용은 본원에 명확히 참조로서 편입된다. Winter는 본 발명의 인간화 항체를 제조하는데 이용될 수 있는 CDR-합체 방법을 설명하고 (1987년 3월 26일자 제출된 영국 특허 출원 GB 2188638A; Winter US 5,225,539), 이의 내용은 명확히 참조로서 편입된다.
특정한 아미노산이 치환되거나, 결실되거나 또는 부가된 인간화 항체 역시 본 발명의 범위 안에 있다. 인간화 항체는 예로서, 항원에 결합을 향상시키기 위해, 프레임워크 영역에서 아미노산 치환을 가질 수 있다. 가령, 인간화 항체는 수용자 프레임워크 잔기 이외에 공여자 프레임워크 잔기 또는 다른 아미노산과 동일한 프레임워크 잔기를 가질 것이다. 이런 항체를 산출하기 위해, 인간화 면역글로불린 사슬의 선별된, 작은 숫자의 수용기 프레임워크 잔기가 상응하는 공여자 아미노산에 의해 대체될 수 있다. 치환의 바람직한 위치는 CDR에 인접한, 또는 CDR과 상호작용할 수 있는 아미노산 잔기를 포함한다 (가령, US 5,585,089를 참조한다). 공여자로부터 아미노산을 선별하기 위한 규준은 US 5,585,089에서, 예를 들면, US 5,585,089의 칼럼 12-16, 예를 들면, US 5,585,089의 칼럼 12-16에서 설명되고, 이들의 내용은 본원에서 참조로서 편입된다. 항체를 인간화하기 위한 다른 기술은 1992년 12월 23일자 공개된 Padlan et al. EP 519596 A1에서 설명된다.
항- LINGO-1 항체는 단일 사슬 항체일 수 있다. 단일 사슬 항체 (scFV)는 가공될 수 있다 (가령, Colcher, D. et al. (1999) Ann N Y Acad Sci 880:263-80; 그리고 Reiter, Y. (1996) Clin Cancer Res 2:245-52를 참조한다). 단일 사슬 항체는 동일한 표적 LINGO-1 단백질의 상이한 에피토프에 대해 특이성을 갖는 다가 항체를 산출하기 위해 이합화되거나 또는 다합체화될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 항체 분자는 예로서, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 그리고 IgE의 중쇄 불변 영역에서 선택된; 특히, 예로서 IgG1, IgG2, IgG3, 그리고 IgG4의 (가령, 인간) 중쇄 불변 영역에서 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 다른 구체예에서, 항체 분자는 예로서, 카파 또는 람다의 (가령, 인간) 경쇄 불변 영역에서 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 불변 영역은 항체의 성질을 변경하기 위해 (가령, 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 증가 또는 감소시키기 위해: Fc 수용체 결합, 항체 당화, 시스테인 잔기의 숫자, 작동체 세포 기능, 및/또는 보체 기능), 변경될 수 있다, 예를 들면, 돌연변이될 수 있다. 한 구체예에서 항체는 작동체 기능을 갖고; 그리고 보체를 고정시킬 수 있다. 다른 구체예에서 항체는 작동체 세포를 동원하거나; 또는 보체를 고정시키지 않는다. 다른 구체예에서, 항체는 Fc 수용체에 결합하는 감소된 능력 또는 능력 없음을 갖는다. 가령, 이것은 아이소타입 또는 아형, 단편 또는 다른 돌연변이체이고, 이것은 Fc 수용체에 결합을 지원하지 않는다, 예를 들면, 이것은 돌연변이화된 또는 결실된 Fc 수용체 결합 영역을 갖는다.
LINGO-1 항체 분자는 하나 또는 그 이상의 작동체 기능을 매개하는 불변 영역을 포함할 수 있다. 가령, 항체 불변 영역에 보체의 C1 성분의 결합은 보체계를 활성화시킬 수 있다. 보체의 활성화는 세포 병원체의 옵소닌화와 용해에서 중요하다. 보체의 활성화는 또한, 염증 반응을 자극하고, 그리고 자가면역 과민성에도 관련될 수 있다. 게다가, 항체는 다양한 세포 상에서 Fc 영역을 거쳐 수용체에 결합하는데, 항체 Fc 영역 상에서 Fc 수용체 결합 부위가 세포 상에서 Fc 수용체 (FcR)에 결합한다. IgG (감마 수용체), IgE (엡실론 수용체), IgA (알파 수용체) 및 IgM (뮤 수용체)를 비롯하여, 항체의 상이한 부류에 특이적인 다수의 Fc 수용체가 존재한다. 세포 표면 상에서 Fc 수용체에 항체의 결합은 항체-코팅된 입자의 탐식과 파괴, 면역 복합체의 청소, 킬러 세포에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 용해 (또한 본원에서 항체-의존성 세포-매개된 세포독성, 또는 ADCC으로 지칭됨), 염증성 매개인자의 방출, 태반 전달 및 면역글로불린 생산의 제어를 비롯한 다수의 중요하고 다양한 생물학적 반응을 촉발한다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 불변 영역 도메인 중에서 하나 또는 그 이상의 최소한 일부가 원하는 생화학적 특징, 예를 들면, 대략 동일한 면역원성의 완전한, 변경되지 않은 항체와 비교할 때, 감소된 작동체 기능, 비공유적으로 이합체화하는 능력, 종양의 부위에서 국지화하는 증가된 능력, 감소된 혈청 반감기, 또는 증가된 혈청 반감기를 제공하기 위해 결실되거나 또는 만약 그렇지 않으면 변경되었다. 가령, 본원에서 설명된 진단과 치료 방법에서 이용을 위한 일정한 항체는 면역글로불린 중쇄와 유사한 폴리펩티드 사슬을 포함하지만, 하나 또는 그 이상의 중쇄 도메인 중에서 최소한 일부를 결여하는 도메인 결실된 항체이다. 가령, 일정한 항체에서, 변형된 항체의 불변 영역의 한 전체 도메인이 결실될 것이다, 예를 들면, CH2 도메인 중에서 전부 또는 일부가 결실될 것이다.
일정한 LINGO-1 항체 분자에서, Fc 부분은 작동체 기능을 감소시키기 위해, 당분야에서 공지된 기술을 이용하여 돌연변이될 수 있다. 가령, 불변 영역 도메인의 결실 또는 불활성화 (점 돌연변이 또는 다른 수단을 통해)는 순환하는 변형된 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시키고, 따라서 종양 국지화를 증가시킬 수 있다. 다른 경우에 본 발명과 일치하는 불변 영역 변형은 보체 결합을 완화하고, 따라서 접합된 세포독소의 혈청 반감기 및 비특이적 연관을 감소시킬 지도 모른다. 불변 영역의 또 다른 변형은 증가된 항원 특이적 또는 항체 유연성으로 인해 증강된 국지화를 허용하는 이황화 연쇄 또는 올리고사카라이드 모이어티를 변경하는데 이용될 수 있다. 결과의 생리학적 프로필, 생체이용률, 그리고 이들 변형의 다른 생화학적 효과, 예를 들면, 종양 국지화, 생체분포 및 혈청 반감기는 과도한 실험 없이 널리 공지된 면역학적 기술을 이용하여, 쉽게 계량되고 정량될 수 있다.
예시적인 항-LINGO-1 항체 분자
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되고, 여기서 상기 중쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 하나, 또는 상기 중쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 2개는 표 3에서 설명된 바와 같은 Li62 또는 Li81 또는 이의 변이체의 참고 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 대안으로, VH의 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 표 3에서 설명된 바와 같은 Li62 또는 Li81 또는 이의 변이체의 참고 중쇄 CDR1, CDR2와 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 따라서, 이러한 구체예에 따라 본 발명의 중쇄 가변 영역은 표 3에서 도시된 폴리펩티드 서열에 관련된 CDR1, CDR2 또는 CDR3 폴리펩티드 서열을 갖는다. 일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 표 3에서 설명된 바와 같은 VH 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 거기에 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다.
[표 3]
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Figure 112015044182874-pct00005
Figure 112015044182874-pct00006
Figure 112015044182874-pct00007
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 최소한 CDR3 영역은 서열 번호: 4, 8 및 17-49로 구성된 군에서 선택되는 참고 CDR3 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 추가의 구체예에서, CDR3 영역은 서열 번호: 4, 8 및 17-49로 구성된 군에서 선택되는 참고 CDR3 서열과 동일하다. 다른 추가의 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서, CDR1과 CDR2 영역은 각각, 서열 번호: 2와 3의 CDR1과 CDR2 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일하고, 그리고 CDR3 영역은 서열 번호: 4 및 17-34로 구성된 군에서 선택되는 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일하다. 다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 CDR1과 CDR2 영역은 각각, 서열 번호: 6과 7의 CDR1과 CDR2 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일하고, 그리고 CDR3 영역은 서열 번호: 8 및 35-49로 구성된 군에서 선택되는 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일하다.
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 표 3에서 도시된 CDR1, CDR2와 CDR3 군과 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는다. 일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 VH 폴리펩티드를 포함한다.
추가의 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 서열 번호: 1, 5 및 53-85에서 선택되는 참고 VH 폴리펩티드 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 95% 또는 100% 동일한 VH 폴리펩티드를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 구체예에서, VH 폴리펩티드는 서열 번호: 4, 8 및 17-49로 구성된 군에서 선택되는 CDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 서열 번호: 1, 5 및 53-85로 구성된 군에서 선택되는 VH 폴리펩티드를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 VH 폴리펩티드를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편은 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
다른 양상에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 5의 아미노산을 포함하는 VH를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 VH를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편은 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 일정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 3에서 설명된 바와 같이 Li62, Li81 또는 이의 변이체와 동일한 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 VH를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되거나, 또는 이런 단일클론 항체가 LINGO-1에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해할 것이다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 다음 아미노산: W50, P53, I57 및/또는 W104 중에서 하나 또는 그 이상의 대체를 제외하고 서열 번호:146의 폴리펩티드와 동일한 면역글로불린 중쇄를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, W50은 H, F, L, M, G, I, 또는 D 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, P53은 L, S, T, W, 또는 G 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, I57은 G, M, N, H, L, F, W, Y, S, P, V 또는 T 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, W104는 V, H, S, Q, M, L, T, 또는 I 잔기로 대체된다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 아미노산 P53의 대체를 제외하고 서열 번호:5의 폴리펩티드와 동일한 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, P53은 L, S, T, W, 또는 G 잔기로 대체된다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 다음 아미노산: W50, P53, I57 및/또는 W104 중에서 하나 또는 그 이상의 대체를 제외하고 서열 번호:1의 폴리펩티드와 동일한 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, W50은 H, F, L, M, G, I, 또는 D 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, P53은 L, S, T, W, 또는 G 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, I57은 G, M, N, H, L, F, W, Y, S, P, V 또는 T 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, W104는 V, H, S, Q, M, L, T, 또는 I 잔기로 대체된다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 다음 아미노산: W50, P53, I57 및/또는 W104 중에서 하나 또는 그 이상의 대체를 제외하고 서열 번호:66의 폴리펩티드와 동일한 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, W50은 H, F, L, M, G, I, 또는 D 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, P53은 L, S, T, W, 또는 G 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, I57은 G, M, N, H, L, F, W, Y, S, P, V 또는 T 잔기로 대체된다. 일부 구체예에서, W104는 V, H, S, Q, M, L, T, 또는 I 잔기로 대체된다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 표 3에서 설명된 바와 같은 Li62, Li81 또는 이의 변이체와 동일한 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 앞서 설명된 VH 폴리펩티드 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하거나, 또는 이런 항체가 LINGO-1에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해할 수 있다.
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 하나 또는 경쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 2개는 본원에서 개시된 단일클론 LINGO-1 항체로부터 참고 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 대안으로, VL의 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 본원에서 개시된 단일클론 LINGO-1 항체로부터 참고 경쇄 CDR1, CDR2와 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 따라서, 이러한 구체예에 따라 상기 항체 분자의 경쇄 가변 영역은 표 4에서 도시된 폴리펩티드에 관련된 CDR1, CDR2와 CDR3 폴리펩티드 서열을 갖는다. 일정한 구체예에서, 상기 VL 폴리펩티드를 포함하는 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
[표 4]
Figure 112015044182874-pct00008

다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 표 4에서 도시된 CDR1, CDR2와 CDR3 군과 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는다. 일정한 구체예에서, 상기 VL 폴리펩티드를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편은 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
추가의 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 표 4에서 도시된, 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 13에서 선택되는 참고 VL 폴리펩티드 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 VL 폴리펩티드를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 VL 폴리펩티드를 포함하는 펩티드를 포함하는 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 다른 양상에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 표 4에서 도시된, 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 13에서 선택되는 VL 폴리펩티드를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 VL 폴리펩티드를 포함하는 항-LINGO-1 항체 분자는 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 아미노산 W94의 대체를 제외하고 서열 번호:145의 폴리펩티드와 동일한 면역글로불린 경쇄로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, W94는 A, D, L, N, G, Q, V, 또는 S 잔기로 대체된다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 아미노산 W94의 대체를 제외하고 서열 번호:5의 폴리펩티드와 동일한 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, W94는 A, D, L, N, G, Q, V, 또는 S 잔기로 대체된다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 Li62 또는 Li81과 동일한 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 앞서 설명된 VL 폴리펩티드 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되는 폴리펩티드를 포함하거나, 또는 이런 단일클론 항체가 LINGO-1에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해할 것이다.
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 표 3에 나타나 있는 바와 같은 VH 폴리펩티드, 그리고 i) 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 53-70 및 서열 번호: 9; 그리고 iii) 서열 번호: 5 또는 서열 번호: 71-85 및 서열 번호: 13으로 구성된 군에서 선택되는, 표 4에 나타나 있는 바와 같은 VL 폴리펩티드를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 또는 이들로 구성된다.
일부 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 하기 서열 번호:86에 나타나 있는 바와 같은 항체 중쇄, 또는 거기에 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다.
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSAYEMKWVRQAPGKGLEWVSV IGPSGGFTFYADISVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATE GDNDAFDIWGQGTTVTVSSASTKGPISVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTIVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLIMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDIWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSIDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTIQKSLS LSPG (서열 번호:86)
다른 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 항체 중쇄의 비당화된 이형을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성된다. 가령, Li81의 비당화된 이형은 2008년 1월 9일자 제출된 PCT/US2008/000316 및 US 8,128,926에서 설명되고, 이들은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다. Li81 항체의 비당화된 이형은 Li81 중쇄 서열에서 단일 아미노산 (T에서 A)을 변화시킴으로써 창출되었다. Li81 중쇄의 비당화된 이형의 서열 (서열 번호:50)은 하기에 도시된다. 단일 아미노산 변화는 굵게 표시되고 밑줄 그어진다: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSAYEMKWVRQAPGKGLEWVSV IGPSGGFTFYADISVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATE GDNDAFDIWGQGTTVTVSSASTKGPISVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTIVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLIMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNS A YRVVSVLTVLHQDIWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSIDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTIQKSLS LSPG. (서열 번호: 50)
항-LINGO-1 항체 분자는 서열 번호:50 또는 86의 아미노산을 포함하는 참고 폴리펩티드와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 중쇄를 포함한다. 일정한 구체예에서, 상기 중쇄를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편은 LINGO-1에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 작동체 기능을 감소시키기 위해 비당화 면역글로불린 G 하위부류 1 (IgG1) 프레임워크로 가공된 완전히 인간 항-LINGO-1 단일클론 항체 (또한 본원에서 항-LINGO-1 항체 1로서 지칭됨)이다. LINGO-1 녹아웃 생쥐의 조직학적 및 기능적 평가가 수행되었고, 그리고 항-LINGO-1 항체 1의 생체내 약리학적 활성이 탈수초화의 여러 동물 모델에서 증명되었다. 항-LINGO-1 항체 1은 결합 특징, 생물학적 활성, 그리고 약리학적 활성의 평가에 기초하여 시험관내에서 및 생체내에서 특징화되었다. 이들 연구의 결과는 항-LINGO-1 항체 1이 표 1에서 설명된 다음 특징을 갖는다는 것을 지시한다.
Figure 112015044182874-pct00009

한 구체예에서, 항체 분자는 VH CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 6, 7과 8의 아미노산, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 2, 3과 30의 아미노산, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH를 포함한다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 VL CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 14, 15와 16의 아미노산, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VL을 포함한다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 VL CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 10, 11과 12의 아미노산, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 6, 7과 8의 아미노산을 포함하는 VH; 그리고 VL CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 14, 15와 16의 아미노산을 포함하는 VL; 또는 이들과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이들과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 VH CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 2, 3과 30의 아미노산을 포함하는 VH; 그리고 VL CDR1, CDR2와 CDR3이 각각, 서열 번호: 10, 11과 12의 아미노산을 포함하는 VL; 또는 이들과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 이들과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호: 5의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 5와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호:66의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 66과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH를 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호:13의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 13과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호:9의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 9와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호:5의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 5와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH; 그리고 서열 번호: 13의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 13과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 분자는 서열 번호:66의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 66과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VH; 그리고 서열 번호: 9의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 아미노산 서열 (가령, 상기 서열 번호: 9와 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는 VL을 포함한다.
다른 구체예에서, 항체 분자는 하기와 같은 서열 번호: 275의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는, 하기에 나타나 있는 바와 같은 중쇄를 포함한다:
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS AYEMKWVRQA PGKGLEWVSV
IGPSGGFTFY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCATEG
DNDAFDIWGQ GTTVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY
FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI
CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD
TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNSA
YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY
TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD
SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPG (서열 번호: 275).
다른 구체예에서, 항체 분자는 하기와 같은 서열 번호: 276의 아미노산 서열, 또는 이것과 실제적으로 동일한 서열 (가령, 이것과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열)을 포함하는, 하기에 나타나 있는 바와 같은 경쇄를 포함한다:
DIQMTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD
ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPMYTFG
QGTKLEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT ASVVCLLNNF YPREAKVQWK
VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL TLSKADYEKH KVYACEVTHQ
GLSSPVTKSF NRGEC (서열 번호: 276).
앞서 설명된 임의의 폴리펩티드는 추가 폴리펩티드, 예를 들면, 인코딩된 폴리펩티드의 분비를 주동하는 신호 펩티드, 본원에서 설명된 바와 같은 항체 불변 영역, 또는 본원에서 설명된 바와 같은 다른 이종유래 폴리펩티드를 더욱 포함할 수 있다. 부가적으로, 본 발명의 폴리펩티드는 다른 곳에서 설명된 바와 같은 폴리펩티드 단편을 포함한다. 부가적으로 본 발명의 폴리펩티드는 본원에서 설명된 바와 같이, 융합 폴리펩티드, Fab 단편, 그리고 다른 유도체를 포함한다.
또한, 본원의 다른 곳에서 더욱 상세하게 설명된 바와 같이, 본 발명은 앞서 설명된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 포함한다.
본원에서 개시된 바와 같은 LINGO-1 항체 폴리펩티드는 이들 폴리펩티드가 그들이 유래된 자연적으로 발생하는 결합 폴리펩티드로부터 아미노산 서열에서 변하도록 변형될 수 있는 것으로 당업자에 의해 또한 이해될 것이다. 가령, 지정된 단백질로부터 유래된 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 출발 서열과 유사할 수 있다, 예를 들면, 출발 서열에 일정한 퍼센트 동일성을 갖는다, 예를 들면, 이것은 출발 서열과 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일할 수 있다.
게다가, "비필수적인" 아미노산 영역에서 보존성 치환 또는 변화를 야기하는 뉴클레오티드 또는 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입이 만들어질 수 있다. 가령, 지정된 단백질로부터 유래된 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 하나 또는 그 이상의 개별 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20개 또는 그 이상의 개별 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 제외하고 출발 서열과 동일할 수 있다. 일정한 구체예에서, 지정된 단백질로부터 유래된 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 출발 서열에 비하여 1 내지 5개, 1 내지 10개, 1 내지 15개, 또는 1 내지 20개의 개별 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 갖는다.
가용성 LINGO 길항제 및 융합 단백질
다른 구체예에서, 치유제, 예를 들면, LINGO-1의 길항제는 가용성 LINGO 분자, 예를 들면, LINGO-1 분자 (가령, LINGO-1의 단편), 또는 LINGO-1 복합체의 성분의 가용성 형태 (가령, NgR1, p75, 또는 TAJ (TROY)의 가용성 형태)이다.
일정한 구체예에서, 가용성 LINGO 분자 또는 LINGO-1 항체 분자는 항체와 정상적으로 연관되지 않는 아미노산 서열 또는 하나 또는 그 이상의 모이어티를 포함한다. 예시적인 변형은 아래에 더욱 상세하게 설명된다. 가령, 본 발명의 단일 사슬 fv 항체 단편은 유연한 링커 서열을 포함할 수 있거나, 또는 기능적 모이어티 (가령, PEG, 약물, 독소, 또는 라벨)를 부가하기 위해 변형될 수 있다.
본원에서 설명된 바와 같은 항체 분자, LINGO-1의 가용성 형태, 또는 복합체 성분은 단독으로 이용되거나 또는 두 번째 모이어티, 이종유래 모이어티, 예를 들면, 이종유래 폴리펩티드에 기능적으로 연결될 수 있다 (가령, 화학적 커플링, 유전자 또는 폴리펩티드 융합, 비공유 연관 또는 기타 등등에 의해). 용어 "이종유래"는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드에 적용될 때, 이것이 자연에서 자연적으로 연결되지 않는 부분을 의미한다. 가령, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 비교되는 실체의 나머지의 것으로부터 상이한 실체로부터 유래된다. 가령, 본원에서 이용된 바와 같이, LINGO-1 항체 분자에 융합되는 "이종유래 폴리펩티드"는 동일한 종의 비-면역글로불린 폴리펩티드, 또는 상이한 종의 면역글로불린 또는 비면역글로불린 폴리펩티드로부터 유래된다.
예시적인 이종유래 모이어티에는 면역글로불린 Fc 도메인, 혈청 알부민, PEG화, GST, Lex-A 및 MBP 폴리펩티드 서열이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 융합 단백질은 첫 번째 모이어티, 예를 들면, 항체 분자, LINGO-1의 가용성 형태 또는 복합체 성분을 두 번째 모이어티에 연결하는 링커 서열을 부가적으로 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 발현, 입체 유연성, 검출 및/또는 단리 또는 정제를 용이하게 하기 위해, 추가 아미노산 서열이 융합 단백질의 N- 또는 C-말단에 부가될 수 있다. 가령, LINGO-1의 가용성 형태 또는 복합체 성분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 그리고 IgE를 비롯한 다양한 아이소타입의 중쇄 불변 영역에 융합될 수 있다.
본원에서 설명된 항체 분자 및 가용성 또는 융합 단백질은 하나 또는 그 이상의 다른 분자 실체, 예를 들면, 그 중에서도 특히 항체 (가령, 이중특이적 또는 다중특이적 항체)에 기능적으로 연결될 수 있는 것으로 이해되어야 한다 (가령, 화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유 연관 또는 기타 등등에 의해).
한 구체예에서, 융합 단백질은 LINGO의 세포외 도메인 또는 복합체 성분 (또는 이것과 상동성 서열)을 포함하고, 그리고 예로서, 인간 면역글로불린 Fc 사슬, 예를 들면, 인간 IgG (가령, 인간 IgG1 또는 인간 IgG2, 또는 이의 돌연변이된 형태)에 융합된다. Fc 서열은 작동체 세포 기능, Fc 수용체 결합 및/또는 보체 활성을 감소시키기 위해, 하나 또는 그 이상의 아미노산에서 돌연변이될 수 있다.
일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 융합 단백질을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성될 수 있다. 융합 단백질은 이러한 문맥에서, 예로서, 최소한 하나의 표적 결합 부위를 갖는 면역글로불린 항원 결합 도메인, 그리고 최소한 하나의 이종유래 부분을 포함하는 키메라 분자이다. 아미노산 서열은 융합 폴리펩티드에서 합쳐지는 별개의 단백질에서 정상적으로 존재할 수 있고, 또는 이들은 동일한 단백질에 정상적으로 존재하지만 융합 폴리펩티드 내에 새로운 배열에 배치된다. 융합 단백질은 예로서, 화학적 합성에 의해, 또는 펩티드 영역이 원하는 관계에서 인코딩되는 폴리뉴클레오티드를 창출하고 번역함으로써 창출될 수 있다.
핵산 분자/재조합 발현
본원에서 설명된 임의의 폴리펩티드, 예를 들면, 치유제 및 면역조절제를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자, 숙주 세포 및 벡터 역시 본 발명에 의해 포괄된다.
한 예시적인 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 (VH)을 인코딩하는 핵산을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 단리된 폴리뉴클레오티드가 제공되고, 여기서 중쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 하나 또는 중쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 2개는 표 3에서 설명된 바와 같은 Li62 또는 Li81 또는 이의 변이체의 참고 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 대안으로, 상기 VH의 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 표 3에서 설명된 바와 같은 Li62 또는 Li81 또는 이의 변이체의 참고 중쇄 CDR1, CDR2와 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 따라서, 이러한 구체예에 따라, 본 발명의 중쇄 가변 영역은 표 3에서 도시된 폴리펩티드 서열에 관련된 CDR1, CDR2 또는 CDR3 폴리펩티드 서열을 갖는다.
다른 예시적인 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 (VL)을 인코딩하는 핵산을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 이것으로 구성되는 단리된 폴리뉴클레오티드가 제공되고, 여기서 경쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 하나 또는 경쇄 가변 영역의 CDR 중에서 최소한 2개는 본원에서 개시된 단일클론 LINGO-1 항체로부터 참고 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 대안으로, 상기 VL의 CDR1, CDR2와 CDR3 영역은 본원에서 개시된 단일클론 LINGO-1 항체로부터 참고 경쇄 CDR1, CDR2와 CDR3 아미노산 서열과 최소한 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하다. 따라서, 한 구체예에 따라, 본 발명의 경쇄 가변 영역은 표 4에서 도시된 폴리펩티드 서열에 관련된 CDR1, CDR2 또는 CDR3 폴리펩티드 서열을 갖는다.
앞서 설명된 임의의 폴리뉴클레오티드는 예로서, 인코딩된 폴리펩티드의 분비를 주동하는 신호 펩티드, 본원에서 설명된 바와 같은 항체 불변 영역, 또는 본원에서 설명된 바와 같은 다른 이종유래 폴리펩티드를 인코딩하는 추가 핵산을 더욱 포함할 수 있다.
앞서 설명된 폴리뉴클레오티드 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물 역시 개시된다. 한 구체예에서, 조성물은 첫 번째 폴리뉴클레오티드 및 두 번째 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 상기 첫 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에서 설명된 바와 같은 VH 폴리펩티드를 인코딩하고, 그리고 상기 두 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에서 설명된 바와 같은 VL 폴리펩티드를 인코딩한다.
다른 곳에서 설명된 바와 같은, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 단편 역시 개시된다. 부가적으로, 본원에서 설명된 바와 같은 융합 폴리뉴클레오티드, Fab 단편, 그리고 다른 유도체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 역시 본 발명에 의해 예기된다.
이들 폴리뉴클레오티드는 당분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 생산되거나 또는 제조될 수 있다. 가령, 항체의 뉴클레오티드 서열이 알려져 있으면, 상기 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있는데 (가령, Kutmeier et al., BioTechniques 17:242 (1994)에서 설명된 바와 같이), 이것은 간단히 말하면, 상기 항체를 인코딩하는 서열의 부분을 내포하는 중복 올리고뉴클레오티드의 합성, 이들 올리고뉴클레오티드의 어닐링과 결찰, 그리고 이후, PCR에 의한 결찰된 올리고뉴클레오티드의 증폭을 수반한다.
본원에서 설명된 폴리펩티드의 재조합 발현, 예를 들면, LINGO-1에 결합하는 항체 분자는 상기 폴리펩티드, 예를 들면, 항체 분자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 내포하는 발현 벡터의 작제를 필요로 한다. 일단 항체 분자 또는 항체의 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 부분 (바람직하게는, 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 내포)이 획득되면, 항체 분자의 생산을 위한 벡터는 당분야에서 공지된 기술을 이용하여 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 폴리펩티드 인코딩 뉴클레오티드 서열을 내포하는 폴리뉴클레오티드를 발현함으로써 단백질을 제조하기 위한 방법은 본원에서 및 US 8,058,406에서 설명되고, 이들의 내용은 전체적으로 참조로서 편입된다.
당업자에게 공지된 방법이 항체 코딩 서열 및 적절한 전사와 번역 제어 신호를 내포하는 발현 벡터를 작제하는데 이용될 수 있다. 이들 방법은 예로서, 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술, 그리고 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 복제가능한 벡터는 프로모터에 작동가능하게 연결된 본원에서 설명된 폴리펩티드 (가령, 항-LINGO-1 항체 분자, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 이런 벡터는 항체 분자의 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고 (가령, PCT 공개 WO 86/05807; PCT 공개 WO 89/01036; 그리고 미국 특허 번호 5,122,464를 참조한다), 그리고 항체의 가변 도메인은 전체 중쇄 또는 경쇄의 발현을 위해 이런 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
숙주 세포는 2개의 발현 벡터로 공동형질감염될 수 있는데, 첫 번째 벡터는 중쇄 유래된 폴리펩티드를 인코딩하고, 그리고 두 번째 벡터는 경쇄 유래된 폴리펩티드를 인코딩한다. 이들 두 벡터는 중쇄와 경쇄 폴리펩티드의 동등한 발현을 할 수 있게 하는 동일한 선별가능 마커를 내포할 수 있다. 대안으로, 중쇄와 경쇄 폴리펩티드 둘 모두를 인코딩하는 단일 벡터가 이용될 수 있다. 이런 환경에서, 경쇄는 유리하게는, 과잉의 독성 유리 중쇄를 방지하기 위해 중쇄 앞에 배치된다 (Proudfoot, Nature 322:52 (1986); Kohler, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197 (1980)). 중쇄와 경쇄에 대한 코딩 서열은 cDNA 또는 유전체학 DNA를 포함할 수 있다.
용어 "벡터" 또는 "발현 벡터"는 원하는 유전자를 숙주 세포 내로 도입하고 이를 발현하기 위한 운반제로서 이용된 벡터를 의미하기 위해 본원에서 이용된다. 당업자에게 공지된 바와 같이, 이런 벡터는 플라스미드, 파지, 바이러스 및 레트로바이러스로 구성된 군에서 쉽게 선택될 수 있다. 일반적으로, 본 발명과 양립하는 벡터는 선별 마커, 원하는 유전자의 클로닝을 용이하게 하는 적절한 제한 부위, 그리고 진핵 또는 원핵 세포에 들어가고 및/또는 여기에서 복제하는 능력을 포함할 것이다.
본 발명을 위해, 무수한 발현 벡터 시스템이 이용될 수 있다. 가령, 벡터의 한 가지 부류는 동물 바이러스, 예를 들면, 소 유두종 바이러스, 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 우두 바이러스, 배큘로바이러스, 레트로바이러스 (RSV, MMTV 또는 MOMLV) 또는 SV40 바이러스로부터 유래되는 DNA 요소를 활용한다. 다른 것들은 내부 리보솜 결합 부위를 갖는 폴리시스트론성 시스템의 이용을 수반한다. 부가적으로, DNA를 자신의 염색체 내로 통합하는 세포는 형질감염된 숙주 세포의 선별을 허용하는 하나 또는 그 이상의 마커를 도입함으로써 선별될 수 있다. 마커는 영양요구성 숙주에 기본유기영양, 살생물제 내성 (가령, 항생제) 또는 중금속, 예를 들면, 구리에 내성을 제공할 수 있다. 선별가능 마커 유전자는 발현되거나, 또는 공동형질전환에 의해 동일한 세포 내로 도입되는 DNA 서열에 직접적으로 연결될 수 있다. mRNA의 최적 합성을 위해 추가 요소가 또한 필요할 수 있다. 이들 요소는 신호 서열, 스플라이스 신호뿐만 아니라 전사 프로모터, 인핸서, 그리고 종결 신호를 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 클로닝된 가변 영역 유전자는 앞서 논의된 바와 같이 합성된 중쇄와 경쇄 불변 영역 유전자 (바람직하게는, 인간)와 함께 발현 벡터 내로 삽입된다. 한 구체예에서, 이것은 NEOSPLA (미국 특허 번호 6,159,730)로서 지칭되는, Biogen IDEC, Inc.의 소유 발현 벡터를 이용하여 달성된다. 이러한 벡터는 시토메갈로바이러스 프로모터/인핸서, 생쥐 베타 글로빈 주요 프로모터, SV40 복제 기점, 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 서열, 네오마이신 인산전달효소 엑손 1과 엑손 2, 디히드로폴레이트 환원효소 유전자 및 리더 서열을 내포한다. 이러한 벡터는 가변과 불변 영역 유전자의 함입, CHO 세포에서 형질감염, 그 이후에 G418 내포 배지에서 선별 및 메토트렉사트 증폭 시에, 항체의 매우 높은 수준 발현을 유발하는 것으로 밝혀졌다. 당연히, 진핵 세포에서 발현을 유도할 수 있는 임의의 발현 벡터가 본 발명에서 이용될 수 있다. 적합한 벡터의 실례에는 플라스미드 pcDNA3, pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEF1/His, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Zeo2, pTRACER-HCMV, pUB6/V5-His, pVAX1, 그리고 pZeoSV2 (Invitrogen, San Diego, Calif.로부터 구입가능), 그리고 플라스미드 pCI (Promega, Madison, Wis.로부터 구입가능)이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 일반적으로, 적절하게 높은 수준의 면역글로불린 중쇄와 경쇄를 발현하는 것들에 대해 많은 숫자의 형질전환된 세포를 스크리닝하는 것은 예로서, 로봇 시스템에 의해 수행될 수 있는 일과적인 실험이다. 벡터 시스템은 또한, 미국 특허 번호 5,736,137 및 5,658,570에서 교시되는데, 이들은 각각 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다. 이러한 시스템은 높은 발현 수준, 예를 들면, >30 pg/세포/일을 제공한다. 다른 예시적인 벡터 시스템은 예로서, 미국 특허 번호 6,413,777에서 개시된다.
다른 구체예에서, LINGO-1 항체 분자는 폴리시스트론성 구조체, 예를 들면, 2002년 11월 18일자 제출되고 본원에서 전체적으로 편입되는 미국 특허 출원 공개 번호 2003-0157641 A1에서 개시된 것들을 이용하여 발현될 수 있다. 이들 신규한 발현 시스템에서, 관심되는 복수의 유전자 산물, 예를 들면, 항체의 중쇄와 경쇄는 단일 폴리시스트론성 구조체로부터 생산될 수 있다. 이들 시스템은 유리하게는, 진핵 숙주 세포에서 상대적으로 높은 수준의 결합 폴리펩티드를 제공하기 위해 내부 리보솜 유입 부위 (IRES)를 이용한다. 양립성 IRES 서열은 본원에서 또한 편입되는 미국 특허 번호 6,193,980에서 개시된다. 당업자는 이런 발현 시스템이 본 출원에서 개시된 전체 범위의 폴리펩티드를 효과적으로 생산하는데 이용될 수 있다는 것을 인지할 것이다.
더욱 일반적으로, 일단 폴리펩티드, 예를 들면, 항-LINGO-1 항체 분자의 단위체 아단위를 인코딩하는 벡터 또는 DNA 서열이 제조되면, 발현 벡터는 적절한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 숙주 세포 내로 플라스미드의 도입은 당업자에게 널리 공지된 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 이들에는 형질감염 (전기영동 및 전기천공 포함), 원형질체 융합, 인산칼슘 침전, 외피 DNA와 세포 융합, 현미주입, 그리고 무손상 바이러스로 감염이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. Ridgway, A. A. G. "Mammalian Expression Vectors" Vectors, Rodriguez and Denhardt, Eds., Butterworths, Boston, Mass., Chapter 24.2, pp. 470-472 (1988)를 참조한다. 전형적으로, 숙주 내로 플라스미드 도입은 전기천공에 의한다. 발현 구조체를 품는 숙주 세포는 경쇄 및 중쇄의 생산에 적절한 조건 하에 성장되고, 그리고 중쇄 및/또는 경쇄 단백질 합성에 대해 검정된다. 예시적인 검정 기술은 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA), 방사면역검정 (RIA), 또는 형광-활성화된 세포 분류기 분석 (FACS), 면역조직화학 등을 포함한다.
발현 벡터는 전통적인 기술에 의해 숙주 세포로 이전되고, 그리고 형질감염된 세포는 이후, 본원에서 설명된 방법에서 이용을 위한 폴리펩티드를 생산하기 위해 전통적인 기술에 의해 배양된다. 따라서, 본 발명은 이종유래 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 발명의 항체, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 내포하는 숙주 세포를 포함한다. 이중-사슬 항체의 발현을 위한 바람직한 구체예에서, 중쇄와 경쇄 둘 모두를 인코딩하는 벡터는 US 8,058,406에서 상술된 바와 같이, 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포에서 공동발현될 수 있고, 이의 내용은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
본원에서 이용된 바와 같이, "숙주 세포"는 재조합 DNA 기술을 이용하여 작제되고 최소한 하나의 이종유래 유전자를 인코딩하는 벡터를 품는 세포를 지칭한다. 재조합 숙주로부터 항체의 단리를 위한 과정의 설명에서, 용어 "세포" 및 "세포 배양"은 달리 명확하게 특정되지 않으면, 항체의 공급원을 표시하기 위해 교체가능하게 이용된다. 다시 말하면, 이들 "세포"로부터 폴리펩티드의 회수는 스핀다운된 전체 세포로부터, 또는 배지와 현탁된 세포 둘 모두를 내포하는 세포 배양액으로부터를 의미할 수 있다.
다양한 숙주-발현 벡터 시스템이 본원에서 설명된 방법에서 이용을 위한 폴리펩티드, 예를 들면, 항체 분자를 발현하는데 활용될 수 있다. 이들에는 미생물, 예를 들면, 폴리펩티드 코딩 서열을 내포하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 세균 (가령, 대장균 (E. coli), 바실러스 서브틸리스 (B. subtilis)); 항체 코딩 서열을 내포하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모 (가령, 사카로미세스 (Saccharomyces), 피치아 (Pichia)); 폴리펩티드 코딩 서열을 내포하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (가령, 배큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 항체 코딩 서열을 내포하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (가령, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 또는 항체 코딩 서열을 내포하는 재조합 플라스미드 발현 벡터 (가령, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 포유류 세포의 유전체 (가령, 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유류 바이러스 (가령, 아데노바이러스 후기 프로모터; 우두 바이러스 7.5 K 프로모터)로부터 유래된 프로모터를 내포하는 재조합 발현 구조체를 품는 포유류 세포 시스템 (가령, COS, CHO, BLK, 293, 3T3 세포)이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위해 전형적으로, 세균 세포, 예를 들면, 대장균 (Escherichia coli), 그리고 더욱 전형적으로, 진핵 세포가 재조합 폴리펩티드 또는 항체 분자의 발현에 이용된다. 가령, 벡터, 예를 들면, 인간 시토메갈로바이러스로부터 주요 중간 초기 유전자 프로모터 원소와 함께 포유류 세포, 예를 들면, 중국 햄스터 난소 세포 (CHO)가 폴리펩티드 항체에 대한 효과적인 발현 시스템이다 (Foecking et al., Gene 45:101 (1986); Cockett et al., Bio/Technology 8:2 (1990)).
단백질 발현에 이용된 숙주 세포주는 종종 포유류 기원이다; 당업자는 그 안에 발현되는 원하는 유전자 산물에 최적으로 적합한 특정 숙주 세포주를 우선적으로 결정하는 능력이 있는 것으로 믿어진다. 예시적인 숙주 세포주에는 CHO (중국 햄스터 난소), DG44 및 DUXB11 (중국 햄스터 난소 라인, DHFR 마이너스), HELA (인간 경부 암종), CVI (원숭이 신장 라인), COS (SV40 T 항원을 갖는 CVI의 유도체), VERY, BHK (아기 햄스터 신장), MDCK, 293, W138, R1610 (중국 햄스터 섬유모세포) BALBC/3T3 (생쥐 섬유모세포), HAK (햄스터 신장 라인), SP2/O (생쥐 골수종), P3.times.63-Ag3,653 (생쥐 골수종), BFA-1c1BPT (소 내피 세포), RAJI (인간 림프구) 및 293 (인간 신장)이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 숙주 세포주는 전형적으로, 상업적인 서비스, American Tissue Culture Collection 또는 공개된 문헌으로부터 가용하다.
이에 더하여, 삽입된 서열의 발현을 조정하거나, 또는 유전자 산물을 원하는 특정한 방식으로 변경하고 처리하는 숙주 세포 균주가 선택될 수 있다. 단백질 산물의 이런 변형 (가령, 당화) 및 처리 (가령, 개열)는 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역후 처리와 변형을 위한 특징적이고 특정한 기전을 갖는다. 발현된 이종 단백질의 정확한 변형과 처리를 담보하기 위해 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 선택될 수 있다. 이를 위해, 일차 전사체의 적절한 처리, 당화, 그리고 유전자 산물의 인산화를 위한 세포 기구를 소유하는 진핵 숙주 세포가 이용될 수 있다.
재조합 단백질의 장기간, 높은-수율 생산을 위해, 안정된 발현이 바람직하다. 가령, 항체 분자를 안정되게 발현하는 세포주는 가공될 수 있다. 바이러스 복제 기점을 내포하는 발현 벡터를 이용하기 보다는, 숙주 세포는 적절한 발현 제어 요소 (가령, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위 등)에 의해 제어된 DNA, 그리고 선별가능 마커로 형질전환될 수 있다. 외래 DNA의 도입 이후에, 가공된 세포는 강화 배지에서 1-2일 동안 성장하도록 허용될 수 있고, 그리고 이후 선별가능 배지로 전환된다. 재조합 플라스미드 내에 선별가능 마커는 선별에 내성을 부여하고, 그리고 세포가 플라스미드를 그들의 염색체 내로 안정되게 통합하고 성장하여 초점을 형성하도록 허용하고, 이들은 차례로, 클로닝되고 세포주로 확대될 수 있다. 이러한 방법은 유리하게는, 항체 분자를 안정되게 발현하는 세포주를 정교하게 설계하는데 이용될 수 있다.
CHO 세포가 특히 바람직하다. 일정한 구체예에서, 항체 분자는 인간 LINGO-1 단백질에 특정한 IgG1-agly 중쇄 경쇄 구조 유전자를 내포하는 발현 벡터로 안정되게 형질감염된 CHO 세포에서 발현된다. 소포체-연관된 신호 펩티드분해효소에 의해 번역후 제거되는 선천적 인간 카파 경쇄 신호 펩티드 및 인간 중쇄 신호 펩티드는 항-LINGO-1 항체 분자의 분비를 주동하는데 이용될 수 있다. 항체 분자는 배지로부터 정제되고 액체로서 조제될 수 있다. 항체 분자는 사슬간 이황화 결합에 의해 연결된 2개 중쇄 및 2개 경쇄로 구성될 수 있다. 한 구체예에서, 무손상 항체 분자의 질량은 대략 144.4 kDa이다.
단순 헤르페스 바이러스 티미딘 키나아제 (Wigler et al., Cell 11:223 (1977)), 하이포크산틴-구아닌 포스포리보실전달효소 (Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202 (1992)), 그리고 아데닌 포스포리보실전달효소 (Lowy et al., Cell 22:817 1980) 유전자가 포함되지만 이들에 한정되지 않는 다수의 선별 시스템이 각각, tk-, hgprt- 또는 aprt-세포에서 이용될 수 있다. 또한, 대사길항물질 내성이 다음 유전자에 대한 선별의 기초로서 이용될 수 있다: 메토트렉사트에 내성을 부여하는 dhfr (Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA 77:357 (1980); O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527 (1981)); 미코페놀산에 내성을 부여하는 gpt (Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981)); 아미노글리코시드 G-418에 내성을 부여하는 neo (Clinical Pharmacy 12:488-505; Wu and Wu, Biotherapy 3:87-95 (1991); Tolstoshev, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596 (1993); Mulligan, Science 260:926-932 (1993); 그리고 Morgan and Anderson, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217 (1993); TIB TECH 11(5):155-215 (May, 1993)); 그리고 히그로마이신에 내성을 부여하는 hygro (Santerre et al., Gene 30:147 (1984). 이용될 수 있는 재조합 DNA 기술의 당분야에서 통상적으로 공지된 방법은 Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); 그리고 Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds), Current Prolocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol. 150:1 (1981)에서 설명되고, 이들은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
폴리펩티드, 예를 들면, 항체의 추가 방법 및 숙주 시스템 발현, 생산 및/또는 정제는 US 8,058,406에서 개시되고, 이의 내용은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
핵산 길항제
일정한 구체예에서, LINGO-1 길항제는 LINGO-1을 인코딩하는 핵산의 발현을 저해한다. 이런 LINGO-1 길항제의 실례는 핵산 분자, 예를 들면, 안티센스 분자, 리보자임, RNAi 이중 가닥 분자, 삼중 나선 분자, LINGO-1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 마이크로RNA 분자, 또는 전사 조절 영역을 포함하고, 그리고 LINGO-1의 mRNA 발현을 차단하거나 또는 감소시킨다.
"안티센스" 핵산은 단백질을 인코딩하는 "센스" 핵산에 상보적인, 예를 들면, 이중 가닥 cDNA 분자의 코딩 가닥에 상보적인 또는 mRNA 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 안티센스 핵산은 전체 LINGO-1 코딩 가닥에, 또는 단지 이의 일부에 상보적일 수 있다. 다른 구체예에서, 안티센스 핵산 분자는 LINGO-1을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 코딩 가닥의 "비코딩 영역" (가령, 5' 및 3' 비번역 영역)에 안티센스이다. 안티센스 작용제는 예로서, 약 8 내지 약 80개 핵염기 (즉, 약 8 내지 약 80개 뉴클레오티드), 예를 들면, 약 8 내지 약 50개 핵염기, 또는 약 12 내지 약 30개 핵염기를 포함할 수 있다. 안티센스 화합물은 리보자임, 외부 유도 서열 (EGS) 올리고뉴클레오티드 (올리고자임), 그리고 표적 핵산에 혼성화하고 이의 발현을 조정하는 다른 짧은 촉매성 RNA 또는 촉매성 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 안티센스 화합물은 표적 유전자에서 서열에 상보적인 최소한 8개 연속 핵염기의 스트레치를 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 특이적으로 혼성화가능하기 위해 표적 핵산 서열에 100% 상보적일 필요는 없다. 올리고뉴클레오티드는 표적에 올리고뉴클레오티드의 결합이 표적 분자의 정상적인 기능을 간섭하여 유용성의 상실을 유발하고, 그리고 특이적 결합이 요망되는 조건 하에, 다시 말하면, 생체내 검정 또는 치료적 처치의 경우에 생리학적 조건 하에, 또는 시험관내 검정의 경우에, 상기 검정이 수행되는 조건 하에, 비표적 서열에 올리고뉴클레오티드의 비특이적 결합을 방지할 만큼 충분한 정도의 상보성이 있을 때, 특이적으로 혼성화가능하다. 예시적인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 예를 들면, LINGO-1을 인코딩하는 mRNA에 특이적으로 혼성화하는 DNA 또는 RNA 서열을 포함한다. 상보성 영역은 약 8 내지 약 80 핵염기 사이에서 확장할 수 있다. 화합물은 하나 또는 그 이상의 변형된 핵염기를 포함할 수 있고, 이것은 당분야에서 공지된다. 핵산 작용제의 설명이 가용하다. 가령, 미국 특허 번호 4,987,071;. 5,116,742; 그리고 5,093,246; Woolf et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA; Antisense RNA and DNA, D.A. Melton, Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988); 89:7305-9; Haselhoff and Gerlach (1988) Nature 334:585-59; Helene, C. (1991) Anticancer Drug Des. 6:569-84; Helene (1992) Ann. N.Y. Acad. Sci. 660:27-36; 그리고 Maher (1992) Bioassays 14:807-15를 참조한다.
siRNA는 오버행을 임의선택적으로 포함하는 작은 이중 가닥 RNA (dsRNAs)이다. 가령, siRNA의 이중나선 영역은 길이에서 약 18 내지 25개 뉴클레오티드, 예를 들면, 길이에서 약 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개 뉴클레오티드이다. 전형적으로, siRNA 서열은 표적 mRNA에 정확하게 상보적이다. dsRNA 및 siRNA는 특히, 포유류 세포 (가령, 인간 세포)에서 유전자 발현을 침묵시키는데 이용될 수 있다. siRNA는 또한, 29-염기-쌍 줄기 및 2-뉴클레오티드 3' 오버행을 갖는 짧은 헤어핀 RNA (shRNAs)를 포함한다. 가령, Clemens et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:6499-6503; Billy et al. (2001) Proc. Natl. Sci. USA 98:14428-14433; Elbashir et al. (2001) Nature. 411:494-8; Yang et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:9942-9947; Siolas et al. (2005), Nat. Biotechnol. 23(2):227-31; 20040086884; U.S. 20030166282; 20030143204; 20040038278; 그리고 20030224432를 참조한다.
또 다른 구체예에서, 핵산 분자는 리보자임이다. LINGO-1-인코딩 핵산에 대한 특이성을 갖는 리보자임은 LINGO-1 mRNA의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 하나 또는 그 이상의 서열, 그리고 mRNA 개열을 책임지는 공지된 촉매성 서열을 갖는 서열을 포함할 수 있다 (참조: 미국 특허 번호 5,093,246 또는 Haselhoff and Gerlach (1988) Nature 334:585-591; Cech et al. 미국 특허 번호 4,987,071; 그리고 Cech et al. 미국 특허 번호 5,116,742; Bartel, D. and Szostak, J.W. (1993) Science 261:1411-1418).
한 구체예에서, 핵산 분자는 마이크로RNA 분자이다. LINGO-1-인코딩 핵산에 특이성을 갖는 마이크로RNA는 LINGO-1 mRNA의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 하나 또는 그 이상의 서열을 포함할 수 있고, 이것은 번역 억제 또는 표적 분해를 통해 유전자 침묵을 유발할 수 있다 (참조: Bartel DP (2009) Cell 136 (2): 215-33; Kusenda B, et al. (2006) Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub 150 (2): 205-15).
LINGO-1 유전자 발현은 LINGO-1의 조절 영역 (가령, LINGO-1 프로모터 및/또는 인핸서)에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 표적으로 하고 표적 세포에서 LINGO-1 유전자의 전사를 예방하는 삼중 나선 구조를 형성함으로써 저해될 수 있다. 전반적으로, Helene, C. (1991) Anticancer Drug Des. 6:569-84; Helene, C. (1992) Ann. N.Y. Acad. Sci. 660:27-36; 그리고 Maher, L.J. (1992) Bioassays 14:807-15를 참조한다. 삼중 나선 형성을 위해 표적화될 수 있는 잠재적 서열은 이른바 "스위치백" 핵산 분자를 창출함으로써 증가될 수 있다.
LINGO-1 핵산 분자는 예로서, 상기 분자의 안정성, 혼성화, 또는 용해도를 향상시키기 위해 염기 모이어티, 당 모이어티 또는 인산염 중추에서 변형될 수 있다. 변형을 갖는 합성 올리고뉴클레오티드의 무제한적 실례를 위해, Toulm
Figure 112015044182874-pct00010
(2001) Nature Biotech . 19:17 및 Faria et al . (2001) Nature Biotech . 19:40-44; Hyrup B. et al. (1996) Bioorganic & Medicinal Chemistry 4: 5-23)를 참조한다.
면역조정제
환자에서 다발성 경화증의 코스를 변경하기 위해 여러 면역조정제가 현재 이용된다. 이런 작용제에는 IFN-β1 분자; 글루탐산, 리신, 알라닌 및 티로신의 중합체, 예를 들면, 글라티라머; 알파-4 인테그린에 대한 항체 또는 이의 단편, 예를 들면, 나탈리주맙; 안트라센디온 분자, 예를 들면, 미톡산트론; 핀골리모드, 예를 들면, FTY720; 디메틸 푸마르산염, 예를 들면, 경구 디메틸 푸마르산염; T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체, 예를 들면, 다클리주맙; CD52에 대한 항체, 예를 들면, 알렘투주맙; 디히드로오로테이트 탈수소효소의 저해제, 예를 들면, 테리플루노미드 (가령, CD20에 대한 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙; 그리고 코르티코스테로이드가 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 본원에서 개시된 치유제는 이들 작용제 중에서 한 가지와 조합으로 이용될 수 있다.
예시적인 면역조정제는 하기와 같이 더욱 상세하게 설명된다.
IFNβ 작용제 (베타 인터페론)
MS에 대한 한 가지 공지된 요법은 인터페론 베타로 치료를 포함한다. 인터페론 (IFNs)은 외래 병원체, 예를 들면, 바이러스, 세균, 기생충 및 종양 세포에 의한 도전에 응하여 대부분의 동물의 면역계의 세포에 의해 생산되는 자연 단백질이다. 인터페론은 사이토킨으로서 알려져 있는 큰 부류의 당단백질에 속한다. 인터페론 베타는 165개 아미노산을 갖는다. 인터페론 알파와 베타는 T-세포와 B-세포, 대식세포, 섬유모세포, 내피 세포, 조골세포 등을 비롯한 많은 세포 유형에 의해 생산되고, 그리고 대식세포와 NK 세포 둘 모두를 자극한다. 인터페론 감마는 면역 및 염증 반응의 조절에 관련된다. 이것은 활성화된 T-세포 및 Th1 세포에 의해 생산된다.
여러 상이한 유형의 인터페론이 현재, 인간에서 이용을 위해 승인된다. 인터페론 알파 (인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 그리고 인터페론 알파콘-1의 형태 포함)는 C형 간염에 대한 치료제로서 미국 식품의약국 (FDA)에 의해 승인되었다. 현재, 인터페론 베타의 2가지 FDA-승인된 유형이 있다. 인터페론 베타 1a (Avonex®)는 인간에서 자연적으로 발견된 인터페론 베타와 동일하고, 그리고 인터페론 베타 1b (Betaseron®)는 위치 17에서 시스테인 잔기 대신에 세린 잔기를 내포하는 것을 비롯하여, 인간에서 자연적으로 발견된 인터페론 베타 1a와 일정한 방식에서 상이하다. 인터페론 베타의 다른 용도는 AIDS, 피부 T-세포 림프종, 급성 간염 C (비-A, 비-B), 카포시 육종, 악성 흑색종, 모양 세포성 백혈병, 그리고 전이성 신장 세포 암종의 치료를 포함하였다.
IFNβ 작용제는 전신적으로 (가령, 경구, 비경구, 피하, 정맥내, 직장, 근육내, 유리체내, 복강내, 비내, 경피, 또는 흡입 또는 강내 설치에 의해)를 비롯하여, 당분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 개체에 투여될 수 있다. 전형적으로, IFNβ 작용제는 피하, 또는 근육내 투여된다.
IFNβ 작용제는 본원에서 설명된 방법을 이용하여, "반응자"인 것으로 결정된 개체를 치료하는데 이용될 수 있다. 한 구체예에서, IFNβ 작용제는 단일요법 (즉, 단일 "질환 변경 요법")으로서 이용되고, 하지만 이러한 치료 섭생은 "증상 관리 요법", 예를 들면, 항우울제, 진통제, 항떨림제 등의 이용을 더욱 포함할 수 있다. 한 구체예에서, IFNβ 작용제는 IFNβ-1A 작용제 (가령, Avonex®, Rebif®)이다. 다른 구체예에서, INFβ 작용제는 INFβ-1B 작용제 (가령, Betaseron®, Betaferon®, Extavia®)이다.
인터페론 β-1a인 Avonex®는 신체 장애의 축적을 늦추고 임상적 악화의 빈도를 감소시키기 위해 본원에서 설명된 방법을 이용하여 반응자인 것으로 결정된 재발 형태의 MS를 갖는 환자의 치료를 위해 처방된다. Avonex® (인터페론 베타-1a)는 대략 22,500 달톤의 예측된 분자량을 갖는 166개 아미노산 당단백질이다. 이것은 인간 인터페론 베타 유전자가 도입된 유전적으로 조작된 중국 햄스터 난소 세포를 이용한 재조합 DNA 기술에 의해 생산된다. Avonex®의 아미노산 서열은 자연 인간 인터페론 베타와 동일하다. Avonex® (인터페론 베타-1a)의 권장된 용량은 주 1회 근육내 주사된 30 mcg이다. Avonex®는 통상적으로, 30 mcg 냉동건조된 분말 바이알로서 또는 30 mcg 미리 충전된 주사기로서 가용하다.
인터페론 베타 1a (Avonex®)는 인간에서 자연적으로 발견된 인터페론 베타 (AVONEX®, 즉, 인터페론 베타 Ia (SwissProt 수탁 번호 P01574 및 gi:50593016)와 동일하다. 인터페론 베타의 서열은 다음과 같다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRM NFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQIN HLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN (서열 번호: 275).
Avonex®를 만들기 위한 방법은 당분야에서 공지된다.
본원에서 설명된 방법을 이용하여 확인된 반응자의 치료는 AVONEX®의 것과 실제적으로 유사한 생물학적 활성을 갖는 조성물 (가령, IFN 베타 1 a 분자)이 유사한 방식으로 투여될 때 AVONEX®로 치료와 유사한 성공적인 치료를 허용할 것으로 더욱 예기한다. 이런 다른 조성물은 예로서, 실제적으로 유사한 생물학적 활성을 갖는 다른 인터페론 및 이들의 단편, 유사체, 동족체, 유도체, 그리고 자연 변이체를 포함한다. 한 구체예에서, INFβ 작용제는 하나 또는 그 이상의 약동학적 성질을 증가시키기 위해 변형된다. 가령, INFβ 작용제는 PEG화된 모이어티를 포함하는 변형된 형태의 인터페론 1a일 수 있다. 인터페론 베타 1a의 PEG화된 형태는 예로서, Baker, D.P. et al. (2006) Bioconjug Chem 17(1):179-88; Arduini, RM et al. (2004) Protein Expr Purif 34(2):229-42; Pepinsky, RB et al. (2001) J. Pharmacol. Exp. Ther. 297(3):1059-66; Baker, D.P. et al. (2010) J Interferon Cytokine Res 30(10):777-85에서 설명된다 (이들 모두 본원에서 전체적으로 참조로서 편입되고, 그리고 PEG 모이어티, 예를 들면, 20 kDa mPEG-O-2-메틸프로피온알데히드 모이어티를 포함하도록 N-말단 알파 아미노산에서 변형된 인간 인터페론 베타 1a를 설명한다). PEG화된 형태의 IFN 베타 1a는 예로서, 주사가능 투여 루트 (가령, 피하)에 의해 투여될 수 있다.
Rebif® 역시 인터페론 β-1a 작용제이고, 반면 Betaseron®, Betaferon®, 그리고 Extavia®는 인터페론 β-1b 작용제이다. Rebif®와 Betaseron® 둘 모두 피하 주사에 의한 투여를 위해 조제된다.
IFNβ 작용제의 투여량은 당업자에 의해 결정될 수 있고, 그리고 이용된 특정한 인터페론-베타 작용제에 기초하여 임상적으로 허용되는 투여량을 포함한다. 가령, AVONEX®는 전형적으로, 근육내 주사에 의해 주 1회 30 마이크로그램에서 투여된다. 다른 형태의 인터페론 베타 1a, 구체적으로 REBIF®는 예로서, 피하 주사에 의해 주 3회 22 마이크로그램 또는 주 1회 44 마이크로그램에서 투여된다. 인터페론 베타- 1A는 예로서, 10 내지 50 ㎍의 양으로 근육내 투여될 수 있다. 가령, AVONEX®는 5 내지 10일 마다, 예를 들면, 주 1회 투여될 수 있고, 반면 Rebif®는 주 3회 투여될 수 있다.
항-VLA4 항체 (가령, 나탈리주맙 (Tysabri®))
항-VLA4 항체 (가령, 나탈리주맙)는 혈액에서 중추신경계로 백혈구의 이주를 저해한다. 이들 항체는 활성화된 T-세포 및 다른 단핵 백혈구의 표면 상에서 VLA-4 (일명, α4βl)에 결합한다. 이들은 T-세포 및 내피 세포 사이에 부착을 교란시킬 수 있고, 그리고 따라서, 내피를 교차하여 및 실질 내로 단핵 백혈구의 이주를 예방한다. 결과적으로, 친염증성 사이토킨의 수준 역시 감소될 수 있다. 나탈리주맙은 재발 이완성 다발성 경화증 및 재발성 속발성 진행형 다발성 경화증을 앓는 환자에서 뇌 병변의 숫자 및 장애의 임상적 재발과 축적을 감소시킬 수 있다.
나탈리주맙 및 관련된 VLA-4 결합 항체는 예로서, 미국 특허 번호 5,840,299에서 설명된다. 단일클론 항체 21.6 및 HP1/2는 VLA-4에 결합하는 예시적인 뮤린 단일클론 항체이다. 나탈리주맙은 뮤린 단일클론 항체 21.6의 인간화 이형이다 (가령, 미국 특허 번호 5,840,299를 참조한다). HP 1/2의 인간화 이형 역시 설명되었다 (가령, 미국 특허 번호 6,602,503을 참조한다). 여러 추가 VLA-4 결합 단일클론 항체, 예를 들면, HP2/1, HP2/4, L25 및 P4C2는 예로서, 미국 특허 번호 6,602,503; Sanchez-Madrid et al, (1986) Eur. J. Immunol 16:1343-1349; Hemler et al, (1987) J Biol. Chem. 2:11478-11485; Issekutz et al. (1991) J Immunol 147: 109 (TA-2 mab); Pulido et al. (1991) J Biol. Chem. 266: 10241-10245; 그리고 미국 특허 번호 5,888,507에서 설명된다. 전술한 간행물의 내용 (항체 조성물, 용량, 투여 방법 및 생산 방법 포함)은 본원에서 전체적으로 참조로서 편입된다.
디메틸 푸마르산염 (Tecfidera®)
디메틸 푸마르산염, DMF (Tecfidera®)는 푸마르산 에스테르이다. DMF는 혈액 뇌 장벽을 통해 백혈구 계대를 감소시키고, 그리고 항산화성 경로의 활성화에 의해, 구체적으로 Nrf-2 경로의 활성화를 통해 신경보호 효과를 발휘하는 것으로 생각된다 (Lee et al. (2008) Int MS Journal 15: 12-18). 연구는 또한, BG-12®가 염증 세포의 활성 및 CNS에 대한 이들의 충격을 감소시키고, 그리고 CNS 세포에서 직접적인 세포보호 반응을 유도하는 잠재력을 갖는다는 것을 암시한다. 이들 효과는 MS 병태생리학에서 일정한 역할을 하는 독성 염증성 및 산화 스트레스를 경감하는 CNS 세포의 능력을 증강할 수 있다.
글라티라머 아세트산염 (Copaxone®)
Copaxone® (글라티라머 아세트산염)는 합성 폴리펩티드, 구체적으로 4개의 자연적으로 발생하는 아미노산: L-글루탐산, L-알라닌, L-티로신, 그리고 L-리신의 아세트산염 염으로 구성된다 (Bornstein et al. (1987) N Engl J Med. 317: 408-414). Copaxone®는 미엘린 염기성 단백질에 구조적 유사성을 전시하고, 그리고 T 보조 세포 유형 1 반응을 T 보조 세포 유형 2 반응으로 이동시킴으로써 면역 조절인자로서 기능하는 것으로 생각된다 (Duda et al. (2000) J Clin Invest 105: 967-976; Nicholas et al. (2011) Drug Design, Development, and Therapy 5: 255-274).
미톡산트론 (Novantrone®, 안트라센디온 분자)
미톡산트론은 안트라센디온 분자 (1,4-디히드록시-5,8-비스[2-(2-히드록시에틸아미노) 에틸아미노]-안트라센-9,10-디온) 및 유형 II 국소이성화효소 저해제인데, 이것은 세포의 DNA 합성과 수복을 교란한다. 이것은 암 및 MS를 치료하는데 이용된다. 미톡산트론은 속발성 진행형 MS, 진행성 재발성 MS, 그리고 진행된 재발 이완성 MS를 비롯하여, 여러 형태의 진행된 MS를 치료하는데 이용된다.
가령, 미톡산트론은 속발성 진행형 MS의 진행을 지연시키고, 그리고 재발 이완성 MS에서 재발 및 진행성 재발성 MS 사이에 시간을 연장하는데 효과적이다 (Fox E (2006) Clin Ther 28 (4): 461-74).
핀골리모드 (Gilenya®; 스핑고신 1-인산염 수용체 조절인자)
핀골리모드는 MS를 치료하기 위해 승인된 면역제어 약물이다. 이것은 재발 이완성 다발성 경화증에서 재발율을 절반 이상 감소시켰지만, 심각한 역효과를 가질 수도 있다. 핀골리모드는 스핑고신 1-인산염 수용체 조절인자인데, 이것은 림프절에서 림프구를 격리하여, 이들이 MS에서 자가면역 반응을 위해 중추신경계로 이동하는 것을 예방한다.
T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체 (다클리주맙; Zenapax®)
T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체, 예를 들면, 다클리주맙이 본원에서 개시된 방법과 조성물에서 이용될 수 있다. 다클리주맙은 T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 치료적 인간화 단일클론 항체이다. 다클리주맙은 인터페론으로 제어되지 않는 다발성 경화증을 앓는 환자에서 병변을 감소시키고 임상적 점수를 향상시키는데 효과적이었다 (Rose JW et al. (2007). Neurology 69 (8): 785-789).
CD52에 대한 항체, 예를 들면, 알렘투주맙
CD52에 대한 항체, 예를 들면, 알렘투주맙 (현재 Lemtrada®로서 더욱 개발 중에 있음)은 줄기 세포 상에는 존재하지 않고, 성숙 림프구의 표면 상에 존재하는 단백질인 CD52에 결합한다. 3 단계 연구는 재발 이완성 MS (RRMS)를 앓는 환자의 치료에서 알렘투주맙을 Rebif® (고분량 피하 인터페론 베타-1a)와 비교하는 긍정적인 결과를 보고하였다. 알렘투주맙은 유럽에서 승인되었다.
CD20에 대한 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙
CD20에 대한 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙, 리툭시맙, 오파투무맙은 성숙 B 림프구를 표적으로 한다. 재발 이완성 MS에서 리툭시맙 및 오크렐리주맙의 2 단계 임상적 연구는 위약과 비교하여 뇌 병변에 의해 계량된 질환 활성 (가령, MRI 스캔에 의해 계량된) 및 재발율에서 통계학적으로 유의한 감소를 증명하였다.
디히드로오로테이트 탈수소효소의 저해제, 예를 들면, 테리플루노미드
디히드로오로테이트 탈수소효소의 저해제, 예를 들면, 테리플루노미드는 피리미딘 합성을 저해한다. 테리플루노미드 (또한, A77 1726으로서 알려져 있음)는 레플루노미드의 활성 대사산물이다. 테리플루노미드는 MS에서 질환 과정을 주동하는 것으로 생각되는 활성화된 T 세포를 비롯한 급속히 분열하는 세포를 저해한다. 테리플루노미드는 MS를 치료하기 위한 약제로서 임상 시험 동안 조사되었다. (Vollmer EMS News (May 28, 2009)).
스테로이드
스테로이드, 예를 들면, 코르티코스테로이드, 그리고 ACTH 작용제는 재발 이완성 MS 또는 속발성 진행형 MS에서 급성 재발을 치료하는데 이용될 수 있다. 이런 작용제에는 Depo-Medrol®, Solu-Medrol®, Deltasone®, Delta-Cortef®, Medrol®, Decadron®, 그리고 Acthar®가 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
전술한 면역조정제 중에서 하나 또는 그 이상은 하기에 더욱 상세하게 설명되고 IFN-b 및 항-LINGO-1 항체 요법의 조합에 의해 예시되는 바와 같이, 본원에서 개시된 치유제와 조합으로 이용될 수 있다.
치료 방법
치유제, 예를 들면, LINGO-1 길항제는 CNS 뉴런에서 정상적으로 발생하는 축삭돌기 재생 및 수상돌기 분지의 NgR1-매개된 저해를 완화할 수 있다. 이것은 CNS 손상 이후에 뇌 또는 척수에서 축삭돌기 수복 또는 신경돌기 발아가 필요한 상황에서 유익하다. 부분적인 또는 완전한 압좌 또는 단절을 비롯한 척수 손상은 축삭돌기 수복이 필요하지만 NgR1 경로의 작동을 통해 정상적으로 저해되는 환경을 예시한다. 뇌에서 축삭돌기 확장 및/또는 신경돌기 발아가 유익할 수 있는 질환 또는 장애의 실례에는 뇌졸중, 다발성 경화증 (MS), 그리고 다른 신경변성 질환 또는 장애, 예를 들면, 다발성 경화증, 진행성 다초점 백질뇌증 (PML), 뇌척수염 (EPL), 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 중추 뇌교 수초용해 (CPM), 시신경척수염 (NMO), 부신백질이영양증, 알렉산더 질환, 펠리제우스 메리츠바하 질환 (PMZ), 백질연화증 (PVL), 구형체 세포 류코영양장애 (크라베병) 및 윌러 변성, 시신경염 (가령, 급성 시신경염), 횡단성 척수염, 근위축성 축삭 경화증 (ALS), 헌팅턴병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 방사선치료후 손상, 화학요법의 신경학적 합병증, 뇌졸중, 신경병증, 급성 허혈 시신경병증, 비타민 B12 결핍, 독립된 비타민 E 결핍 증후군, AR, 바센-코르츠바이크 증후군, 마키아파바 비그나미 증후군, 이염색백색질장애, 삼차 신경통, 안면 신경 마비, 척수 손상, 외상성 녹내장, 수전증, 삼투성 저나트륨혈증, 그리고 뉴런 세포 사멸에 관련된 모든 신경학적 질환이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
LINGO-1은 희소돌기아교세포에서 발현되고, 그리고 희소돌기아교세포 생물학에 기여한다. LINGO-1의 가용성 유도체, 폴리뉴클레오티드 (가령, RNAi)뿐만 아니라 LINGO-1에 특이적으로 결합하는 일정한 항체는 희소돌기아교세포에서 LINGO-1 기능에 대한 길항제로서 기능하고, 희소돌기아교세포의 증식, 분화와 생존을 증진하고, 그리고 시험관내와 생체내에서 뉴런의 수초화를 증진할 수 있다. 이것은 탈수초화 및 수초형성장애를 수반하는 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하는데 유익할 수 있다. 희소돌기아교세포 증식, 분화와 생존, 및/또는 수초화 또는 재수초화가 유익한 질환 또는 장애의 실례는 다발성 경화증 (MS), 진행성 다초점 백질뇌증 (PML), 뇌척수염 (EPL), 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 중추 뇌교 수초용해 (CPM), 부신백질이영양증, 시신경척수염 (NMO), 알렉산더 질환, 펠리제우스 메리츠바하 질환 (PMZ), 구형체 세포 류코영양장애 (크라베병), 윌러 변성, 시신경염 (가령, 급성 시신경염), 백질연화증 (PVL), 횡단성 척수염, 근위축성 축삭 경화증 (ALS), 헌팅턴병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 방사선치료후 손상, 화학요법의 신경학적 합병증, 뇌졸중, 급성 허혈 시신경병증, 비타민 B12 결핍, 독립된 비타민 E 결핍 증후군, AR, 바센-코르츠바이크 증후군, 마키아파바 비그나미 증후군, 이염색백색질장애, 삼차 신경통, 외상성 녹내장, 삼투성 저나트륨혈증 및 안면 신경 마비를 포함한다.
따라서, 척수 손상, CNS에서 뉴런 성장의 저해와 연관된 질환 또는 장애, 희소돌기아교세포 성장 또는 분화의 저해와 연관된 질환 또는 장애, 그리고 CNS 뉴런의 탈수초화 또는 수초형성장애를 수반하는 질환을 이런 손상 또는 질환으로 고통받거나 또는 이런 질환에 걸릴 성향이 있는 개체에서 치료하기 위한 방법이 개시된다. 이들 방법은 단독으로 또는 면역조정제와 조합으로, 치유제, 예를 들면, LINGO-1 길항제의 효과량을 개체에 투여하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 치유제는 단독으로 또는 조합으로, 시신경의 염증성 병태 (가령, 시신경염, 예를 들면, 급성 시신경염 (AON))의 하나 또는 그 이상의 증상을 감소시킨다. AON은 다발성 경화증에서 종종 발생하는 시신경의 염증성 질환이다. AON은 시신경에 대한 염증성 손상에 의해 유발되고, 그리고 시신경과 축삭돌기를 덮는 미엘린초에 대한 부종, 염증과 손상으로 인해 시각 손실을 나타낸다. AON의 결과로서, 망막 신경 섬유층 및 망막신경절 세포층의 유의미한 손실이 나타난다. AON의 현재 치료는 부종의 해소에 집중하지만, 중추신경계 (CNS) 재수초화를 증진하거나 또는 CNS 염증성 탈수초화로부터 신경축삭돌기 보호를 제공하지 못하는 고분량 코르티코스테로이드로 정맥내 치료에 한정된다. 따라서 본원에서 개시된 치유제는 시신경의 이런 염증을 치료하기 위해, 단독으로 또는 조합으로 이용될 수 있다.
"치료하다," "치료," 및 이러한 단어의 다른 형태는 질환 진행을 방해하고, 관해를 유도하고, 개체의 예상된 생존 기간을 확장하고 및 또는 의학적 개입 (가령, 입원)에 대한 필요를 감소시키기 위해, 단독으로 또는 하나 또는 그 이상의 증상 관리 작용제와 조합으로, 개체, 예를 들면, MS 환자에 복합 요법의 투여를 지칭한다. 이들 개체에서, 치료는 하나 또는 그 이상의 증상, 예를 들면, 저림, 자통, 근육 쇠약을 저해하거나 또는 감소시키고; 재발율 또는 심각도를 감소시키고, 경화성 병변의 크기 또는 숫자를 감소시키고; 새로운 병변의 발달을 저해하거나 또는 지연시키고; 생존을 연장하거나, 또는 진행 없는 생존을 연장하고, 및/또는 삶의 질을 증강하는 것을 포함할 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
본원에서 이용된 바와 같이, 달리 명시되지 않으면, 용어 "예방하다," "예방하는" 및 "예방"은 개체가 재발을 겪기 시작하기 전에 발생하고 및/또는 질환의 심각도를 저해하거나 또는 감소시키는 작용을 예기한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 그리고 달리 명시되지 않으면, 용어 "관리하다," "관리하는" 및 "관리"는 질환을 이미 겪은 개체에서 질환 증상의 진행을 예방하고, 및/또는 질환을 겪었던 개체가 관해 상태로 남아있는 시간을 늘리는 것을 포괄한다. 이들 용어는 질환의 역치, 발달 및/또는 지속 시간을 조정하거나, 또는 환자가 질환에 반응하는 방식을 변화시키는 것을 포괄한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 그리고 달리 명시되지 않으면, 화합물의 "치료 효과량"은 질환의 치료 또는 관리에서 치료적 이익을 제공하거나, 또는 질환과 연관된 하나 또는 그 이상의 증상을 지연시키거나 또는 최소화하는데 충분한 양이다. 화합물의 치료 효과량은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합으로, 질환의 치료 또는 관리에서 치료적 이익을 제공하는 치료제의 양을 의미한다. 용어 "치료 효과량"은 전반적인 요법을 향상시키거나, 질환의 증상 또는 원인을 감소 또는 방지하거나, 또는 다른 치료제의 치료적 효능을 증강하는 양을 포괄할 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 그리고 달리 명시되지 않으면, 화합물의 "예방적 효과량"은 질환, 또는 상기 질환과 연관된 하나 또는 그 이상의 증상의 재발을 예방하거나, 또는 이의 반복을 예방하는데 충분한 양이다. 화합물의 예방적 효과량은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합으로, 질환 재발의 예방에서 예방적 이익을 제공하는 화합물의 양을 의미한다. 용어 "예방적 효과량"은 전반적인 예방을 향상시키거나 또는 다른 예방적 작용제의 예방적 효능을 증강하는 양을 포괄할 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "환자" 또는 "개체"는 전형적으로, 인간 (즉, 임의의 연령 군의 남성 또는 여성, 예를 들면, 소아 환자 (가령, 영아, 아동, 청소년) 또는 성인 환자 (가령, 어린 성인, 중년 성인 또는 노인) 또는 다른 포유동물, 예를 들면, 영장류 (가령, 시노몰구스 원숭이, 붉은털 원숭이); 상업적으로 유관한 포유동물, 예를 들면, 소, 돼지, 말, 양, 염소, 고양이, 및/또는 개를 지칭한다; 이는 치료, 관찰, 및/또는 실험의 대상이 되거나 또는 되고 있다. 상기 용어가 화합물 또는 약물의 투여와 함께 이용될 때, 환자는 상기 화합물 또는 약물의 치료, 관찰, 및/또는 투여의 대상이 된다.
Ms의 치료
다발성 경화증 (MS)은 축삭돌기와 미엘린초의 염증과 손실에 의해 특징되는 중추신경계 질환이다.
MS를 앓는 개체는 Poser et al. (1983) Ann. Neurol. 13:227에 의해 규정된 바와 같은 임상적 확진 MS의 진단을 확립하는 임상적 규준에 의해 확인될 수 있다. 간단히 말하면, 임상적 확진 MS를 앓는 개체는 2번의 발작 및 두 병변의 임상적 증거 또는 한 병변의 임상적 증거 중에서 어느 한쪽 및 다른, 별개의 병변의 임상증상부속 증거를 가졌다. 확진 MS는 또한, 2번의 발작 및 뇌척수액에서 IgG의 올리고클론 띠의 증거에 의해 또는 발작, 두 병변의 임상적 증거 및 뇌척수액에서 IgG의 올리고클론 띠의 조합에 의해 진단될 수 있다. McDonald 규준 역시 MS를 진단하는데 이용될 수 있다. (McDonald et al. (2001) Recommended diagnostic criteria for Multiple sclerosis: guidelines from the International Panel on the Diagnosis of Multiple Sclerosis, Ann Neurol 50:121-127); Polman, CH et al. (2005 Dec). Diagnostic criteria for multiple sclerosis: 2005 revisions to the "McDonald Criteria" Annals of Neurology 58 (6): 840-6; Polman, C.H. et al. (2011) Ann. Neurol. 69(2):292-302). McDonald 규준은 복수의 임상적 발작의 부재에서, MS의 진단에서 이용되는 시간의 흐름에서 CNS 장애의 MRI 증거의 이용을 포함한다. McDonald 규준에 추가 갱신 (Polman et al, Annals of Neurology 2011)은 특징적인 MRI 병변의 발견에 기초하여 첫 번째 CNS 탈수초성 에피소드의 시점에서 MS의 진단을 허용한다. 다발성 경화증의 효과적인 치료는 여러 상이한 방식으로 평가될 수 있다. 다음 파라미터가 치료의 유용성을 측정하는데 이용될 수 있다. 2가지 예시적인 규준은 EDSS (확장성 장애 상태 척도), 그리고 MRI (자기 공명 영상법)에서 악화의 출현을 포함한다.
악화는 MS에 기인하고 적절한 새로운 신경학적 이상을 동반하는 새로운 증상의 출현으로서 규정된다. 이에 더하여, 악화는 최소한 24 시간 지속되고, 그리고 최소한 30 일 동안 안정성 또는 향상이 선행되어야 한다. 간단히 말하면, 환자는 임상의에 의해 표준 신경학적 검사가 제공된다. 악화는 신경학적 순위평가 척도, 예를 들면, Scripps 신경학적 순위평가 척도 (Sipe et al. (1984) Neurology 34:1368); EDSS; 또는 환자 보고된 결과 (가령, MSWS-12)에서 변화에 따라 경등도, 중등도, 또는 중증도이다. 연간 악화 비율 및 악화 없는 환자의 비율이 결정된다.
요법은 이들 척도 중에서 어느 한쪽에 대한 처리 군 및 위약 군 사이에 악화 없는 또는 재발 없는 환자의 정도 또는 비율에서 통계학적으로 유의한 차이가 있으면, 임상적 척도를 이용하여 효과적인 것으로 간주될 수 있다. 이에 더하여, 첫 번째 악화까지 시간과 악화 지속 시간 및 심각도 역시 계량될 수 있다. 이점에 관해서 요법으로서 유용성의 척도는 대조 군과 비교하여 처리 군에서 첫 번째 악화까지 시간 또는 지속 시간 및 심각도에서 통계학적으로 유의한 차이이다. 1 년, 18 개월, 20, 또는 24 개월보다 큰 악화 없는 또는 재발 없는 기간은 특히 주목할 만한하다. 임상적 척도는 1과 2-년 간격에서 재발율, 그리고 3 또는 6 개월 동안 존속하는 EDSS에서 1.0 단위의 기준선으로부터 악화까지 시간을 비롯하여, EDSS에서 변화를 포함한다. 카플란 마이어 곡선에서, 장애의 지속된 진행에서 지연은 효능을 증명한다. 다른 규준은 MRI에서 T2 이미지의 구역과 부피에서 변화, 그리고 가돌리늄 조영증강 영상에 의해 결정된 병변의 숫자와 부피를 포함한다.
MRI는 가돌리늄-DTPA-증강된 영상화 (McDonald et al., Ann. Neurol. 36:14, 1994)를 이용하여 활성 병변, 또는 T2-편중된 기술을 이용하여 병변의 위치와 정도를 계량하는데 이용될 수 있다. 간단히 말하면, 기준선 MRI가 획득된다. 동일한 영상화 평면 및 환자 자세가 각 차후 연구에 이용된다. 위치결정 및 영상 연쇄는 병변 검출을 최대화하고 병변 추적을 용이하게 하도록 선택될 수 있다. 동일한 위치결정 및 영상화 순서가 차후 연구에서 이용될 수 있다. MS 병변의 존재, 위치와 정도는 방사선과의사에 의해 결정될 수 있다. 병변의 구역은 전체 병변 구역에 대해 조각조각으로 개설되고 개괄될 수 있다. 3가지 분석이 완료될 수 있다: 새로운 병변의 증거, 활성 병변의 출현의 비율, 그리고 병변 구역에서 백분율 변화 (Paty et al., (1993) Neurology 43:665). 요법으로 인한 향상은 기준선과 비교하여 개별 환자에서 또는 위약 군과 대비하여 처리 군에서 통계학적으로 유의한 향상에 의해 확립될 수 있다.
본원에서 설명된 방법으로 치료되거나 또는 증상 관리 요법을 이용하여 관리될 수 있는, 다발성 경화증과 연관된 예시적인 증상은 다음을 포함한다: 시신경염, 감소된 시력, 복시, 안진, 눈겨냥이상증, 핵간 안근마비, 움직임과 소리 섬광시, 구심성 신경동공 결손, 부전마비, 단불완전마비, 대부전마비, 편측부전마비, 사지부전마비, 하반신마비, 편마비, 사지마비, 사지마비, 경련성, 구음장애, 근위축, 연축, 경련, 저혈압증, 클로누스, 간대성 근경련, 근파동, 하지 불안 증후군, 수족, 기능장애성 반사, 감각이상, 마취, 신경통, 신경병성 및 신경성 통증, 레미떼 징후, 고유감각 기능장애, 삼차 신경통, 운동실조, 활동 떨림, 겨냥이상증, 전정성 운동실조, 현기증, 언어능력 실조, 디스토니아, 상반운동반복장애, 빈번한 배뇨, 경련성 방광, 이완 방광, 배뇨근 괄약근 협동장애, 발기 장애, 성감이상증, 불감증, 변비, 대변 절박증, 배변 실금, 우울증, 인지 기능장애, 치매, 기분 격변, 감정적 불안정성, 도취감, 양극성 장애, 불안, 실어증, 부전실어증, 피로, 우토프 징후, 위식도역류, 그리고 수면 장애.
MS의 각 사례는 표현의 여러 패턴 중에서 한 가지 및 차후 코스를 전시한다. 가장 흔하게는, MS는 먼저, 일련의 발작, 그 이후에 완전한 또는 부분적인 관해로서 자신을 현성하는데, 증상이 불가사의하게 줄어들고, 차후에 일정한 기간의 안정 후 복귀한다. 이것은 재발 이완성 MS (RRMS)로 불린다. 원발성 진행형 MS (PPMS)는 비록 증상으로부터 일시적인 고원부 또는 경미한 경감이 있을 수 있지만, 특유한 관해가 없는 점진적인 임상적 쇠퇴에 의해 특징된다. 속발성 진행형 MS (SPMS)는 재발 이완성 코스로 시작하고, 그 이후에 재발과 독립적으로 후기 진행성 코스가 이어진다. 드물게는, 환자는 진행성 재발형 (PRMS) 코스를 가질 수도 있는데, 여기서 상기 질환은 간헐적 급성 발작이 간간이 끼어드는 진행성 통로를 취한다. PPMS, SPMS, 그리고 PRMS는 때때로, 함께 분류되고 만성 진행형 MS로 불린다.
소수의 환자는 유의미한 장애 또는 심지어 질환 시작 직후에 사망을 유발하는 신속하고 끈질긴 쇠퇴로서 규정되는 악성 MS를 경험한다. 이러한 감퇴는 치료 섭생에서 초기에 요법에 반응하는 환자의 가능성을 결정하고, 그리고 상기 환자를 그들이 반응하는 가장 높은 가능성을 갖는 작용제로 전환함으로써, 정지되거나 또는 감속될 수 있다.
복합 요법
본 발명은 탈수초성 질환, 예를 들면, MS의 치료를 위해, 면역조정제, 예를 들면, IFN-β 작용제, 예를 들면, Avonex®; 그리고 치유제, 예를 들면, 항-LINGO-1 항체의 합동된 투여를 개시한다.
작용제, 예를 들면, 이들 작용제를 포함하는 제약학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 다른 추가 요법 또는 치료제와 동시에, 이들에 앞서, 또는 이들 다음에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각 작용제는 상기 작용제에 대해 결정된 분량에서 및/또는 시간 일정에서 투여될 수 있다. 이러한 조합에서 활용된 추가 치료제는 단일 조성물에서 함께 투여되거나 또는 상이한 조성물에서 개별적으로 투여될 수 있는 것으로 더욱 인지될 것이다. 섭생에서 이용하는 특정 조합은 제약학적 조성물과 추가 치료적으로 활성제의 양립성 및/또는 달성되기 원하는 치료적 효과를 고려할 것이다. 일반적으로, 조합으로 활용된 추가 치료제는 그들이 개별적으로 활용되는 수준을 초과하지 않는 수준에서 활용될 것으로 예상된다. 일부 구체예에서, 조합으로 활용된 수준은 개별적으로 활용된 수준보다 더욱 낮을 것이다.
질환을 앓는 개체의 치유제로 치료는 하나 또는 그 이상의 면역조정제와 합동될 수 있다. 예시적인 면역조정제는 본원에서 설명되고, 여기에는 IFN-β1 분자; 글루탐산, 리신, 알라닌 및 티로신의 중합체, 예를 들면, 글라티라머; 알파-4 인테그린에 대한 항체 또는 이의 단편, 예를 들면, 나탈리주맙; 안트라센디온 분자, 예를 들면, 미톡산트론; 핀골리모드, 예를 들면, FTY720; 디메틸 푸마르산염, 예를 들면, 경구 디메틸 푸마르산염; T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 항체, 예를 들면, 다클리주맙; CD52에 대한 항체, 예를 들면, 알렘투주맙; 디히드로오로테이트 탈수소효소의 저해제, 예를 들면, 테리플루노미드; 코르티코스테로이드; 그리고 항-CD20 항체, 예를 들면, 오크렐리주맙이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
한 구체예에서, Avonex® 및 항-LINGO-1 항체 요법의 조합이 투여된다. 일정한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체는 주 1회 Avonex® 근육내 (IM) 주사에 더하여, 약 4주 (플러스 또는 마이너스 약 5일)마다 1회 정맥내 (IV) 주입에 의해 투여될 수 있다. 항-LINGO-1 항체 치료 분량은 다음을 포함할 수 있다: 주 1회 Avonex® IM 주사와 동시에, 3 mg/kg; 또는 10 mg/kg; 또는 30 mg/kg; 또는 50 mg/kg 또는 100 mg/kg의 IV 주입.
한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체의 4주 마다 1회 3 mg/kg IV 주입이 선택되었다. 이러한 섭생은 척수 리소레시틴 모델에서 쥐 혈청 EC50 (~0.1% 뇌 침투를 위해 조정됨)와 유사한 평균 혈청 농도를 산출할 것으로 예상된다. 추가 투약 섭생, 10 mg/kg 및 30 mg/kg 역시 투여될 수 있다. 이들 2가지 투약 섭생은 각각, 쥐 혈청 EC90 (~0.1% 뇌 침투를 위해 조정됨)보다 대략 1.2-배 및 3.7-배 높은 평균 혈청 농도를 산출할 것으로 예상된다.
일정한 구체예에서, 면역조정제는 IFN-β1 분자이고, 그리고 정맥내, 피하 또는 근육내 투여된다. 가령, IFN-β1 분자는 다음 중에서 하나 또는 그 이상에서 투여될 수 있다:
(i) 예로서, 근육내 주사에 의해 주 1회 20-45 마이크로그램 (가령, 30 마이크로그램);
(ii) 예로서, 피하 주사에 의해 주 3회 20-30 마이크로그램 (가령, 22 마이크로그램), 또는 주 3회 40-50 마이크로그램 (가령, 44 마이크로그램); 또는
(iii) 예로서, 근육내로 주 3회, 또는 5일 내지 10일 마다, 예를 들면, 주 1회 10 내지 50 ㎍의 양으로.
한 구체예에서, Avonex®는 근육내 주사에 의해 주 1회 30 마이크로그램으로 투여된다. 적용가능할 때 적정 이후에, Avonex®는 당분야에서 공지된 용량 및 투여 일정에 따라, IM 주사에 의해 투여될 수 있다.
한 구체예에서, IFN-β 작용제, 예를 들면, Avonex®는 주사 장치, 예를 들면, 자동주사 장치 또는 펜에 의해 투여된다.
한 구체예에서, 항-LINGO-1 항체 분자는 50 mg/mL BIIB033 (또한 본원에서, 서열 번호: 275의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 276의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 항체 분자로서 지칭됨), 10 mM 구연산나트륨, 160 mM L-아르기닌 염산염 (pH 6.5), 그리고 0.03% (체적당 중량) 폴리소르베이트 80을 내포하는 액체 약물 산물로서 공급된다. 항-LINGO-1 항체 분자는 식염수 희석 이후에, IV 주입에 의해 투여될 수 있다.
한 구체예에서, 면역조정제는 Avonex®이고, 이것은 IM 주사를 위한 무균 투명한 액체로서 조제된다. 미리 충전된 유리 주사기에서 각 0.5 mL의 Avonex는 30 mcg의 인터페론 β-1a를 내포한다. 다른 성분은 대략 4.8의 pH에서 주사용수에서 아세트산나트륨 삼수화물, 빙초산, 아르기닌 염산염, 그리고 폴리소르베이트 20을 포함한다. 면역조정제, 예를 들면, Avonex®는 임의의 적절한 수단, 예를 들면, 펜 또는 다른 장치에 의해 투여될 수 있다.
증상 관리
본원에서 설명된 복합 요법으로 개체의 치료는 MS를 앓는 개체의 증상 관리에서 종종 이용되는 다음 요법 중에서 하나 또는 그 이상과 합동될 수 있다: Tegretol® (카르바마제핀), Epitol® (카르바마제핀), Atretol® (카르바마제핀), Carbatrol® (카르바마제핀), Neurontin® (가바펜틴), Topamax® (토피라메이트), Zonegran® (조니사미드), Dilantin® (페니토인), Norpramin® (데시프라민), Elavil® (아미트립틸린), Tofranil® (이미프라민), Imavate® (이미프라민), Janimine® (이미프라민), Sinequan® (독세핀), Adapin® (독세핀), Triadapin® (독세핀), Zonalon® (독세핀), Vivactil® (프로트립틸린), Marinol® (합성 칸나비노이드), Trental® (펜톡시필린), Neurofen® (이부프로펜), 아스피린, 아세트아미노펜, Atarax® (히드록시진), Prozac® (플루옥세틴), Zoloft® (세르트랄린), Lustral® (세르트랄린), Effexor XR® (벤라팍신), Celexa® (시탈로프람), Paxil®, Seroxat®, Desyrel® (트라조돈), Trialodine® (트라조돈), Pamelor® (노르트리프틸린), Aventyl® (이미프라민), Prothiaden® (도티에핀), Gamanil® (로페프라민), Parnate® (트라닐시프로민), Manerix® (모클로베미드), Aurorix® (모클로베미드), Wellbutrin SR® (부프로피온), Amfebutamone® (부프로피온), Serzone® (네파조돈), Remeron® (미르타자핀), Ambien® (졸피뎀), Xanax® (알프라졸람), Restoril® (테마제팜), 발륨 (디아제팜), BuSpar® (부스피론), Symmetrel® (아만타딘), Cylert® (페몰린), Provigil® (모다피닐), Ditropan XL® (옥시부티닌), DDAVP® (데스모프레신, 바소프레신), Detrol® (톨테로딘), Urecholine® (베탄), Dibenzyline® (페녹시벤자민), Hytrin® (테라조신), Pro-Banthine® (프로판텔린), Urispas® (히오시아민), Cystopas® (히오시아민), Lioresal® (바클로펜), Hiprex® (메테나민), Mandelamine® (메테나민), Macrodantin® (니트로푸란토인), Pyridium® (페나조피리딘), Cipro® (시프로플록사신), Dulcolax® (비사코딜), Bisacolax® (비사코딜), Sani-Supp® (글리세린), Metamucil® (사일륨 친수성 뮤실로이드), Fleet Enema® (인산나트륨), Colace® (도쿠세이트), Therevac Plus®, Klonopin® (클로나제팜), Rivotril® (클로나제팜), Dantrium® (단트롤렌 나트륨), Catapres® (클로니딘), Botox® (보툴리눔 독소), Neurobloc® (보툴리눔 독소), Zanaflex® (티자니딘), Sirdalud® (티자니딘), Mysoline® (프리미돈), Diamox® (아세토졸라미드), Sinemet® (레보도파, 카르비도파), Laniazid® (이소니아지드), Nydrazid® (이소니아지드), Antivert® (메클리진), Bonamine® (메클리진), Dramamine® (디멘히드리네이트), Compazine® (프로클로르페라진), Transderm® (스코폴라민), Benadryl® (디펜히드라민), Antegren® (나탈리주맙), Campath-1H® (알렘투주맙), Fampridine® (4-아미노피리딘), Gammagard® (IV 면역글로불린), Gammar-IV® (IV 면역글로불린), Gamimune N® (IV 면역글로불린), Iveegam® (IV 면역글로불린), Panglobulin® (IV 면역글로불린), Sandoglobulin® (IV 면역글로불린), Venoblogulin® (IV 면역글로불린), 프레가발린, 지코노티드, 바도펜 및 AnergiX-MS®.
조합 Avonex® 및 항-LINGO-1 항체 요법의 평가를 위한 임상적 검사/사정
임의의 개체에서 요법의 효능 종결점은 당분야에서 공지된 검사와 사정을 이용하여 평가될 수 있다. 가령, RRMS 환자의 경우, 개체는 EDSS를 이용하여 개체의 상태를 획득함으로써 평가될 수 있다. 개체가 진행 형태의 MS, 예를 들면, SPMS 또는 PPMS를 앓는 다른 구체예에서, 상기 개체는 EDSS를 이용하여 개체의 상태를 획득하는 것에 더하여, 상지 및/또는 하지 기능의 척도, 및/또는 보행 기능, 예를 들면, 단거리 보행 기능의 척도를 획득함으로써 평가될 수 있다. 일정한 구체예에서, 하지 보행 기능 (가령, 25 피트의 일정시한 보행 (T25FW))의 사정, 및/또는 상지 기능 (가령, 9 구멍 페그 검사 (9 HP))의 사정이 수행될 수 있다.
평가될 수 있는 추가 예시적인 효능 종결점은 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 포함한다.
효능 종결점
예시적인 일차 종결점
개체는 확장성 장애 상태 척도 (EDSS), 일정시한 25-풋워크 (T25FW), 9-구멍 페그 검사 (9HPT), 그리고 (3-초) 페이스 청각 연속 부가 검사 (PASAT)를 포함하는 복합 종결점에 의해 계량될 때 치료 동안 신경물리학적 및/또는 인지 기능의 확증된 향상에 대해 평가될 수 있다. 신경물리학적 및/또는 인지 기능에서 향상은 다음 중에서 최소한 1가지로서 규정될 수 있다:
a) ≤6.0의 기준 점수로부터 EDSS에서 ≥1.0 포인트 감소 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 감소);
b) T25FW에서 기준선으로부터 ≥15% 향상 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 향상);
c) 9HPT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 향상); 그리고
d) PASAT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 향상).
예시적인 이차 종결점
개체는 EDSS, T25FW, 9HPT, 그리고 PASAT의 복합 종결점에 의해 계량될 때 신경물리학적 및/또는 인지 기능 및/또는 장애 치료의 확증된 악화에 대해 평가될 수 있다. 신경물리학적 및/또는 인지 기능의 장애의 진행 또는 악화는 다음 중에서 최소한 1가지로서 규정된다:
a) ≤5.5의 기준 점수로부터 EDSS에서 ≥1.0 포인트 증가 또는 6.0에 동등한 기준 점수로부터 ≥0.5 포인트 증가 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 증가);
b) T25FW에서 기준선으로부터 ≥15% 악화 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 악화);
c) 9HPT에서 기준선으로부터 ≥15% 악화 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 악화); 그리고
d) PASAT에서 기준선으로부터 ≥15% 악화 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 악화).
추가 임상 효능 종결점
일정한 구체예에서, 개체는 다음을 비롯한 추가 임상적 척도를 이용하여 평가될 수 있다:
a) 처리 속도의 2가지 검사 (PASAT 및 부호 숫자 모델리티 검사 [SDMT]) 및 기억과 학습의 2가지 검사 (언어 기억의 경우에 선택적 회상 검사 [SRT] 및 시각 기억의 경우에 짧은 시공간 기억력 검사-개정판 [BVMT-R])를 포함하는 MS 인지 복합 종결점에 의해 계량될 때 인지 기능에서 기준선으로부터 변화;
b) Scripps 신경학적 순위평가 척도 (SNRS)에 의해 결정될 때 임상적 재발의 심각도; 및/또는
c) 6분 보행 (6 MW) 보행 시간에서 기준선으로부터 ≥10% (가령, ≥15%, ≥20%, ≥30%) 악화 (3 개월 또는 그 이상 동안 지속된 악화).
예시적인 MRI 효능 종결점
새로운 병변과 기존 병변 둘 모두에서 초점 수준과 미만성 수준에서 수복의 척도에 집중된 뇌 MRI의 분석은 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다:
(i) 새로운 뇌 병변의 분석:
a) 증가된 및 감소된 자화 전달 비율 (MTR)에서 백분율 Gd 병변 부피;
b) 척도의 단위로서, 개체당 병변에서 정상적으로 보이는 백색질 (NAWM)에 비하여 새로운 Gd 병변 평균 MTR에서 시작으로부터 변화;
c) 척도의 단위로서, 개체에서 MTR이 정상치 아래로 하락하는 스캔당 복셀에 대한 MTR 신호에서 시작으로부터 변화 (새로운 MTR 병변);
d) 척도의 단위로서, 개체에서 새로운 Gd 병변 방사 확산성에서 시작으로부터 변화;
e) 척도의 단위로서, 개체에서 MTR이 정상치 아래로 하락하는 스캔당 복셀에 대한 방사 확산성에서 시작으로부터 변화 (새로운 MTR 병변); 또는
f) 새로운 Gd 뇌 병변에서 만성 흑색 구멍으로 전환 백분율, 여기서 만성 흑색 구멍은 시작으로부터 최소한 6 개월 후 여전히 가시적인 T1 저신호강도로서 규정된다.
(ii) 기존 뇌 병변 (기준선 스캔에서 존재하는 병변)의 분석:
a. 비정상적인 T1 부피에 대한 기준선으로부터 MTR에서 변화;
b. 비정상적인 T2 부피에 대한 기준선으로부터 MTR에서 변화;
c. T1 저신호강도와 연관되지 않은 비정상적인 T2 부피에 대한 기준선으로부터 MTR에서 변화;
d. 비정상적인 T1 부피에 대한 기준선으로부터 확산성 텐서 영상법 (DTI)에서 변화;
e. 비정상적인 T2 부피에 대한 기준선으로부터 DTI에서 변화; 또는
f. T1 저신호강도와 연관되지 않은 비정상적인 T2 부피에 대한 기준선으로부터 DTI에서 변화.
(iii) 미만성 뇌 MRI 메트릭스의 분석:
a) 백분율 뇌 부피 변화;
b) 대뇌 피질 뇌 부피에서 기준선으로부터 변화;
c) 시상 부피에서 기준선으로부터 변화; 또는
d) 전뇌 방사 확산성에서 기준선으로부터 변화.
예시적인 환자-보고된 결과 (PROs) 효능 종결점
일정한 구체예에서, 개체는 다음 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하는 환자 보고된 결과에 의해 평가될 수 있다:
a) 12-문항 다발성 경화증 보행 척도 (MSWS-12).
b) ABILHAND 56-문항 설문지.
c) 29-문항 다발성 경화증 충격 척도 (MSIS-29).
d) 짧은 형태 (36) 건강 조사 (SF-36).
e) MSNQ-정보제공자 및 MSNQ-환자
효능 종결점 분석
분석의 일반적인 방법
요약 통계가 제시될 수 있다. 연속 종결점의 경우에, 요약 통계는 일반적으로, 다음을 포함할 수 있다: 무작위화된 또는 투약된 개체의 숫자; 또는 데이터, 평균, SD, 중앙, 그리고 범위를 갖는 개체의 숫자. 범주 종결점의 경우에, 요약 통계는 일반적으로, 다음을 포함할 수 있다: 무작위화된 또는 투약된 개체의 숫자; 데이터를 갖는 개체의 숫자, 또는 각 범주에서 데이터를 갖는 개체의 퍼센트.
일차 종결점 분석
일차 효능 종결점은 복합 종결점의 성분 (EDSS, T25FW, 9HPT, 또는 PASAT) 중에서 1가지 또는 그 이상에서 확증된 임상적 향상을 갖는 개체의 백분율을 포함할 수 있다. 확증된 향상자의 백분율은 처리 군에 의해 제공될 수 있고, 그리고 데이터는 로지스틱 회귀 모델에 의해 분석될 수 있다. 확증된 향상까지 시간은 Cox 비례 위험 모형을 이용하여 분석될 수 있다. 기준선 EDSS, T25FW, 9HPT (지배적인 및 비지배적인 손 둘 모두), PASAT, 그리고 층화 인자는 공변량으로서 로지스틱 회귀 및 Cox 모델 둘 모두 내에 포함될 수 있다. 2가지 기준선 EDSS 사정이 수행되면, 더욱 높은 EDSS 점수가 분석을 위해 이용될 수 있다. MRI 활성 역시 잠재력 공변량으로서 탐구될 수 있다.
이차 종결점 분석
이차 효능 종결점은 복합 종결점의 성분 (EDSS, T25FW, 9HPT, 또는 PASAT) 중에서 1가지 또는 그 이상에서 확증된 임상적 악화를 갖는 개체의 백분율을 포함할 수 있다. 확증된 악화자의 백분율은 처리 군에 의해 제공될 수 있고, 그리고 데이터는 로지스틱 회귀 모델에 의해 분석될 수 있다. 확증된 악화까지 시간은 Cox 비례 위험 모형을 이용하여 분석될 수 있다. 기준선 EDSS, T25FW, 9HPT (지배적인 및 비지배적인 손 둘 모두), PASAT, 그리고 층화 인자는 공변량으로서 로지스틱 회귀 및 Cox 모델 둘 모두 내에 포함될 수 있다. 2가지 기준선 EDSS 사정이 수행되면, 더욱 높은 EDSS 점수가 분석을 위해 이용될 수 있다. MRI 활성 역시 잠재력 공변량으로서 탐구될 수 있다.
탐구적인 종결점 분석
탐구적인 종결점은 임상적 메트릭스, MRI 메트릭스, 그리고 PRO 변수를 포함할 수 있다. 이들은 연속 변수의 경우에 요약 통계 또는 범주 변수의 경우에 도수 분포를 제시함으로써 요약될 수 있다. 이용된 통계학적 방법은 변수의 성격에 의존할 것이다. 이진수 변수는 로지스틱 회귀 모델을 이용함으로써 분석될 수 있다; 연속 변수는 공분산 모델의 분석을 이용하여, 상응하는 기준선 및 층화 인자를 조정함으로써 분석될 수 있다. 이벤트까지 시간 변수는 Cox 비례 위험 회귀 모델을 이용하여, 상응하는 기준선 및 층화 인자를 조정함으로써 분석될 수 있다. 계측치 변수는 음성 이항식 회귀 모델 또는 Wilcoxon 순위 합계 검사에 의해 분석될 수 있다.
보행 사정
T25FW
T25FW는 25 피트의 일정시한 보행이다. T25W는 주로 장애가 심한, 예를 들면, EDSS 단계 6-6.5의 개체에 대한 악화에 반응하는, 단거리에서 정량적 보행 능력의 척도이다. 이것은 하지 기능의 정량적 척도로서 이용될 수 있다. 대체로, 환자는 명확하게 표지화된 25-풋 코스의 한쪽 끝으로 유도되고 가능한 빨리, 하지만 안전하게 25 피트를 걷도록 지시된다. 이러한 과제는 환자에게 동일한 거리를 반대로 걷도록 함으로써 다시 한 번 즉시 실시될 수 있다. 환자는 T25W를 완결할 때, 보조 장치를 이용할 수도 있다. 검사를 완결하는데 3 분의 시간 한계가 통상적으로 이용된다. 환자가 5 분 안정 기간 후 T25W의 시행 2를 완결할 수 없거나, 또는 환자가 3 분 이내에 시행을 완결할 수 없으면, 검사가 중단된다.
9HP
9 HP는 9-구멍 페그 검사이다. 이것은 EDSS 또는 T25FW에 의해 계량되지 않는 상지 (가령, 팔 및 손) 기능의 임상적으로 중요한 양상을 포착하는 정량적 척도이다. EDSS와 T25FW와 달리, 9HP는 넓은 EDSS 범위 전역에서 반응성이다. 대체로, 환자는 그들의 손만을 이용하여 9개 페그를 하나씩 뽑고, 그리고 이들 페그를 모든 구멍이 채워질 때까지 가능한 빨리 페그 판 위에 구멍 내로 집어넣도록 요구된다. 환자는 이후, 지체 없이, 페그를 하나씩 제거하고 이들을 가능한 빨리 용기에 되돌려 놓아야 한다. 지배적인 손 및 비지배적인 손 둘 모두 2회 검사된다 (지배적인 손의 2회 연속 시행, 그 직후에 비지배적인 손의 2회 연속 시행). 검사를 완결하는데 5 분의 시간 한계가 통상적으로 이용된다. 환자가 5 분 내에 9 HP 검사의 1회 시행을 완결할 수 없으면, 검사는 중단된다; 환자가 5 분 이내에 자신의 지배적인 손으로 시행을 완결할 수 없으면, 환자는 통상적으로, 비지배적인 손을 이용한 시행으로 옮기도록 지시된다.
6MW
6분 보행 검사 (6 MW)는 보행 거리를 사정하는데 이용된다. 대체로, 환자는 6분 동안 물리적 보조 없이 가능한 가장 빠른 속도로 걷도록 요구되고, 그리고 거리가 계량된다. 보조 장치가 이용될 수 있지만, 검사별로 일관되게 유지되고 방증되어야 하다. 환자는 가능하면, 연속적으로 걸어야 하지만, 환자는 검사 동안 속도를 늦추어 멈추거나 휴식할 수 있다.
SNRS
Scripps 신경학적 순위평가 척도 (SNRS)는 정신작용 및 기분; 눈 및 관련된 뇌신경, 예를 들면, 시력, 시야, 눈 움직임, 안진; 아래쪽 뇌신경; 각 사지, 예를 들면, 우상측, 좌상측, 우하측, 좌하측에서 운동 기능; 심부 힘줄 반사, 예를 들면, 상지, 하지; 바빈스키 징후, 예를 들면, 왼쪽, 오른쪽; 각 사지, 예를 들면, 우상측, 좌상측, 우하측, 좌하측에서 감각 기능; 소뇌 징후, 예를 들면, 상지, 하지; 그리고 보행 걸음걸이 균형, 예를 들면, 생리자율신경 기능장애, 예를 들면, 방광 기능장애, 성기능장애에 대한 특수한 범주를 비롯한 여러 파라미터를 계량한다.
EDSS
앞서 설명된 바와 같이, EDSS는 MS에서 빈번하게 발생하는 증상에 집중하는 표준화된 신경학적 검사에 기초된다. EDSS는 신경학적 검사를 통해, 7가지 기능적 시스템: 시각, 뇌간, 추체, 소뇌, 감각, 장/방광 및 대뇌를 사정한다. 이에 더하여, EDSS는 또한, 보행 범위의 사정을 포함한다. 기능적 시스템 점수 및 보행 범위에 기초하여, EDSS 단계가 결정된다. EDSS의 범위는 0에서부터 10까지 19 단계를 포함하는데, EDSS 단계 0은 완전하게 정상적인 검사에 상응하고, 그리고 EDSS 단계 10은 MS로 인한 사망에 상응한다. 0 내지 4 사이에서 EDSS 순위평가의 경우에, 상기 척도는 주로, 개별 FS의 점수에 의존한다. 4 초과의 순위평가의 경우에, EDSS는 보행의 능력과 범위에 의해 일차적으로 결정된다.
환자 보고된 결과 사정
MSWS-12
다발성 경화증 보행 척도-12 (MSWS-12) 검사는 보행 능력의 자가 평가된 척도이다. 상기 검사는 보행에 대한 MS의 충격을 설명하는, Likert-유형 반응과 관련된 12가지 문항을 내포한다. 이들 문항은 30 MS 환자 면담, 전문가 견해, 그리고 문헌 검토로부터 산출되었다.
ABILHAND 56-문항 설문지
ABILHAND 56-문항 설문지는 일상 과제, 예를 들면, 영양공급, 드레싱, 또는 관리 과제를 수행함에 있어서 문제의 환자 경험을 계량하도록 설계된 수동 능력의 척도이다. ABILHAND는 56가지 선입견 없는 양수 활동을 내포하는데, 환자는 4-수준 척도에서 이들을 판단하도록 요구된다: 0 = 불가능한, 1 = 매우 어려운, 2 = 어려운, 3 = 쉬운.
MSIS-29
다발성 경화증 충격 척도 29 (MSIS-29)는 MS의 물리적 및 심리학적 파라미터를 계량하는 29 문항 자가 보고 순위평가 척도이다. 이들 문항 중에서 3개는 제한된 능력을 다루고, 그리고 나머지 26개 문항은 질환의 증상 또는 결과에 의해 충격을 받은 것에 관련된다. 이들 문항 중에서 20개는 신체적 기능을 언급한다. 반응은 1에서부터 5까지 5 포인트 Likert 척도 범위를 이용한다.
SF-36
짧은 형태 36 (SF-36) 검사는 삶의 전반적인 건강 관련된 질을 계량한다. SF-36은 환자가 주치의로부터 거의 또는 전혀 개입 없이 일반적으로 완결할 수 있는 구조화된, 자가 보고 설문지이다. SF-36에 대한 단일한 전반적인 점수는 없고, 그 대신에 이것은 8개 하위척도 및 2개 요약 점수를 산출한다. 8개 하위척도는 신체적 기능, 신체적 문제로 인한 역할 한계, 육체적 통증, 전반적인 건강 지각, 생명력, 사회적 기능, 감정적 문제로 인한 역할 한계, 그리고 정신적 건강을 포함한다. 2개 요약 점수는 물리적 성분 요약 및 정신적 건강 성분 요약을 포함한다.
인지 검사 사정
여러 인지 검사 기기가 하기와 같이, 복합 파라미터의 값을 결정하는데 이용될 수 있다.
부호 숫자 모델리티 검사 (SDMT)
SDMT는 개체가 특정한 숫자를 참고 열쇠에 기초된 소정의 기하학적 도면과 짝짓기하는데 90초가 제공되는, 처리 속도 및 작업 기억을 평가하는 검사이다. 이것은 숫자 부호 또는 코딩 과제 검사를 본떠 모형화되는데, 이들은 여러 해 동안 Wechsler 지능 척도 내에 포함되었다 (가령, Wechsler et al. (1974) Manual for the Wechsler Intelligence Scale for Children-Revised. New York: Psychological Corporation; Wechsler et al. (1981) WAIS-R Manual. New York: Psychological Corporation). 일부 환자가 손재주에 대해 갖는 한계를 인식하고, Rao 및 동료들은 구술 반응만을 포함하도록 SDMT를 변형하였다 (Rao et al. (1991) Neurology 41: 685-691). 본 발명에서 선택된 이러한 구술 SDMT에서, 참가자는 처리되는 숫자 및 부호를 내포하는 8.5 x 11 인치 시트가 제공된다. 자극의 위쪽 열은 9개 부호를 포함하는데, 이들 각각은 열쇠에서 단일 숫자와 짝짓기된다. 상기 페이지의 나머지 부분은 이들 부호의 가성-무작위화된 서열을 갖고, 그리고 참가자의 과제는 가능한 빨리 각 부호와 연관된 숫자를 구두로 응답하는 것이다. 점수는 90초 시간 프레임 내에 개체에 의해 만들어진 정확한 정합의 총수 (110개 중에서)이다.
우수한 검사-재검사 신뢰도 (r = 0.93 - 0.97, p < .001)가 MS 개체에서 확립되었다 (Benedict et al. (2006) Journal of the International Neuropsychological Society 12: 549-558; Benedict et al. (2008) Multiple Sclerosis 14: 940-946). MS 환자 및 정상적인 대조를 식별하기 위한 우수한 차별적 타당성 (d= 1.0 - 1.5, p < .001) (가령, Deloire et al. (2005) Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry 76: 519-526; Benedict et al. (2006) Journal of the International Neuropsychological Society 12: 549-558; Houtchens et al. (2007) Neurology 69: 113-123; Strober et al. (2009) Multiple Sclerosis 15: 1077-1084; Parmenter et al. (2010) J Int Neuropsychol Soc 16: 6-16을 참조한다), 그리고 RRMS 환자 및 SPMS 환자를 식별하기 위한 우수한 차별적 타당성 (d= 0.8, p < 0.001) (참조: Benedict et al. (2006) Archives of Neurology 63: 1301-1306) 역시 확증되었다. 이에 더하여, 성과 및 뇌 MRI 사이에 상관 역시 방증되었다 (가령, Benedict et al. (2007) Multiple Sclerosis 13: 722-730; Houtchens et al. (2007) Neurology 69: 113-123; Tekok-Kilic et al. (2007) NeuroImage 36: 1294-1300을 참조한다).
페이스 연속 부가 검사 (PASAT)
진탕증으로부터 환자 회복을 사정하기 위해 Gronwall 등에 의해 최초 개발된 PASAT는 각 연속 숫자를 이것에 바로 선행하는 숫자에 추가하면서, 환자에게 일련의 61개 녹음된 숫자를 모니터하도록 요구한다 (Gronwall et al. (1977) Perceptual and Motor Skills 44: 367-373). PASAT는 신속한 정보처리 및 2가지 과제에 집중력의 동시 할당 둘 모두 뿐만 아니라 합리적으로 무손상 계산 능력을 필요로 한다. 본래 형식에서, PASAT는 4가지 자극간 간격 (2.4초, 2.0초, 1.6초, 그리고 1.2초)에서 실행되었다. 자극간 간격의 숫자 및 표현 비율은 MS 환자에서 이용을 위해, Rao 및 동료들에 의해 3.0초 및 2.0초로 차후에 변경되었다 (Rao et al. (1991) A Manual for the Brief, Repeatable Battery of Neuropsychological Tests in Multiple Sclerosis: National Multiple Sclerosis Society; Rao et al. (1991) Neuropsychological Screening Battery for Multiple Sclerosis: National Multiple Sclerosis Society; Rao et al. (1991) Neurology 41: 685-691; Rao et al. (1991) Neurology 41: 692-696).
상기 검사의 이러한 후자 버전은 MS 기능적 복합척도 (MSFC) 및 MACFIMS 종합검사의 구성요소인 것으로 선별되었다 (Benedict et al. (2002) Clinical Neuropsychologist 16: 381-397). MS 개체군에서 검사-재검사 신뢰도는 r= 0.78 내지 0.93의 범위에서 변한다 (Benedict et al. (2006) Journal of the International Neuropsychological Society 16: 228-237; Drake et al. (2010) Multiple Sclerosis 16: 228-237). MS 환자 및 정상적인 대조를 식별하기 위한 우수한 차별적 타당성 (d= 0.5 - 0.7, p < 0.001 내지 0.34) (Deloire et al. (2005) Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry 76: 519-526; Benedict et al. (2006) Journal of the International Neuropsychological Society 12: 549-558; Houtchens et al. (2007) Neurology 69: 113-123; Strober et al. (2009) Multiple Sclerosis 15: 1077-1084; Parmenter et al. (2010) J Int Neuropsychol Soc 16: 6-16; Drake et al. (2010) Multiple Sclerosis 16: 228-237), 그리고 RRMS 환자 및 SPMS 환자를 식별하기 위한 우수한 차별적 타당성 (d= 0.5, p < 0.002) (Benedict et al. (2006) Archives of Neurology 63: 1301-1306)이 확증되었다. 관심되는 PASAT 점수는 각 표현 비율에서 정확한 반응의 총수이다. PASAT의 Rao 버전의 2가지 대안적 형태가 가용하고 (PASAT 3" 및 PASAT 2") 본 발명에서 선택되었다. PASAT 3"에서, 자극은 3초 마다 제공되고, 반면 PASAT 2"에서, 자극은 2초 마다 제공된다.
선택적 회상 검사 (SRT)
SRT는 선행성 기억상실의 분야에서 연구를 수행한 Buschke 등 (참조: Buschke et al. (1974) Neurology 24: 1019-1025)에 의해 최초 개발되었다. 환자에게 각 연속적인 학습 시행에서 전체 단어 목록을 회상하도록 요구하기 보다는, 실험자는 각 연속적인 학습 시행에서 회상되지 않은 단어만을 반복하였다. 차후에, 여러 기억 조사관은 검사에 대한 규범적인 데이터, 그리고 대안적 형태를 개발하였다. 주목할 점은, 본래 버전이 15개 단어 및 12회 학습 시행을 이용한 검사의 형태에 기초되었다는 것이다. 이런 실행은 고되고 시간 소모적이고, 그리고 이런 이유로, 더욱 짧은 형태의 SRT가 많은 관심을 받고 있다. MS 연구에서 폭넓게 이용되는 실행 절차는 Rao 등 (가령, Rao et al. (1991) A Manual for the Brief, Repeatable Battery of Neuropsychological Tests in Multiple Sclerosis: National Multiple Sclerosis Society; Rao et al. (1991) Neuropsychological Screening Battery for Multiple Sclerosis: National Multiple Sclerosis Society; Rao et al. (1991) Neurology 41: 685-691; Rao et al. (1991) Neurology 41: 692-696을 참조한다)에 의해 개발된 6-시행 형태이다. 이러한 6-시행 형식이 본 발명에서 활용된다. SRT 단어 목록의 다수의 상이한 버전이 존재한다. 성인을 위한 Hannay와 Levin의 단어 목록, 검사 형태 1과 3이 본 발명에서 활용된다 (Hannay et al . (1985) J Clin Exp Neuropsychol . 7: 251-263). SRT의 차별적 타당성이 여러 연구에서 확립되었는데, SRT는 MS 개체 및 정상적인 대조를 식별한다 d = 0.6 내지 d= 1.0 (가령, Rao et al . (1991) A Manual for the Brief, Repeatable Battery of Neuropsychological Tests in Multiple Sclerosis: National Multiple Sclerosis Society; Deloire et al. (2005) Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry 76: 519-526; Strober et al. (2009) Multiple Sclerosis 15: 1077-1084를 참조한다). SRT 조사 결과는 뇌 MRI에서 관찰된 바와 같이 심실 확장과 연관될 수 있는 것으로 또한 밝혀졌다 (R2 = 0.14; p=0.05) (Christodoulou et al. (2003) Neurology 60: 1793-1798).
간편 시공간 기억력 검사 개정판 (BVMT-R)
BVMT-R은 웩슬러 기억 척도로부터 시각 재생 하위검사의 라인을 따라서, 동등한 대안적 형태 시각 기억 검사를 개발하기 위한 초기 노력에 기초된다 (Benedict et al. (1993) Neuropsychological Rehabilitation 3: 37-51; Benedict et al. (1995) Clinical Neuropsychologist 9: 11-16; Wechsler et al. (1987) Wechsler Memory Scale-Revised Manual. New York: Psychological Corporation). 초기에, BVMT는 6가지 시각 설계의 1-페이지 표현에 단지 단일 노출만을 포함하였다. 개정판은 상기 자극에 3번의 10-초 노출을 포함한다 (Benedict et al. (1997) Brief Visuospatial Memory Test - Revised: Professional Manual. Odessa, Florida: Psychological Assessment Resources, Inc.; Benedict et al. (1996) Psychological Assessment 8: 145-153). 각 노출 후, 개체는 연필을 이용하여 종이의 빈 시트 상에 매트릭스를 재현하도록 요구된다. 정확도 및 위치에 대한 엄격한 채점 규준이 있다. 25 분 지연 후, 환자는 다른 노출 없이 상기 정보를 다시 한 번 재현하도록 요구된다. 최종적으로 예/아니오 인식 과제가 제공된다. BVMT-R은 우수한 재현성을 갖고, 검사-재검사 신뢰도가 r=0.85 내지 r=.91의 범위에서 변하고 (Benedict et al. (1996) Psychological Assessment 8: 145-153; Benedict et al. (2005) Journal of the International Neuropsychological Society 11: 727-736); 뿐만 아니라 MS 개체 및 정상적인 대조 개체 사이에 우수한 차별적 타당성 (d= 0.9, p<0.) (Strober et al. (2009) Multiple Sclerosis 15: 1077-1084; Parmenter et al. (2010) J Int Neuropsychol Soc 16: 6-16), 그리고 RRMS 환자 및 SPMS 환자 사이에 우수한 차별적 타당성 (d=0.6, p<0.001) (Benedict et al. (2006) Archives of Neurology 63: 1301-1306)을 갖는다. BVMT-R 성과 및 뇌 MRI 조사 결과 사이에 상관의 형태에서 예측적 타당성 역시 확립되었다. 게다가, 상기 검사의 6가지 형태 모두 동등하게 어렵다는 것을 증명하는 광범위한 연구가 있다. 본 발명에서 관심되는 변수는 총괄 학습 및 지연 회상 점수이다.
본 발명은 다음 실시예에 의해 더욱 예시되는데, 이들은 한정하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 출원 전역에서 인용된 모든 참고문헌, 도면, 서열 목록, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 본원에 참조로서 편입된다.
실시예
실시예 1 . LINGO-1 길항작용은 생쥐에서 MOG-EAE로부터 이환율 및 사망률을 감소시키고, 그리고 염증이 생긴 시신경에서 축삭돌기 보호를 증진한다.
급성 시신경염 (AON)은 다발성 경화증에서 종종 발생하는 시신경의 염증성 질환이다. AON은 시신경에 대한 염증성 손상에 의해 유발되고, 그리고 시신경과 축삭돌기를 덮는 미엘린초에 대한 부종, 염증과 손상으로 인해 시각 손실을 나타낸다. AON의 결과로서, 망막 신경 섬유층 및 망막신경절 세포층의 유의미한 손실이 종종 나타난다. AON의 현재 치료는 부종의 해소에 집중하지만, 중추신경계 (CNS) 재수초화를 증진하거나 또는 CNS 염증성 탈수초화로부터 신경축삭돌기 보호를 제공하지 못하는 고분량 코르티코스테로이드로 정맥내 치료에 한정된다.
시신경염의 연구를 위한 동물 모델은 쥐와 생쥐 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE) 모델을 포함한다; 여기서 EAE 유도는 시신경 신경염의 발달을 유발한다. 본 실시예에서, LINGO-1 길항작용의 효과가 EAE 생쥐 모델을 이용하여 분석되었다. 간단히 말하면, EAE는 완전한 프로인드 어쥬번트 (CFA)에서 유화된 125 ㎍의 MOG 35-55로 꼬리 기부에서 양쪽 옆구리 내로 250 μl의 피하 주사에 의해, 그 이후에 직후 및 3일 후 인산염 완충된 식염수 (PBS)에서 300 ng 백일해 독소의 정맥내 주사에 의해 8-12 주령의 C57BL/6 수컷과 암컷 생쥐에서 유도되었다. 운동 시스템 장애에 대한 효능은 0-7의 범위에서 EAE 심각도 점수를 이용하여 계량되었다.
각각 14마리 생쥐의 2개 별개의 코호트는 10 mg/kg의 길항성 항-LINGO-1 생쥐 항체 또는 대조 단일클론 항체 (코호트 마다 처리 군당 N=7)의 복강내 주사로 맹검 처리되었다. 생쥐는 EAE 유도 후 6 일자에 시작하여 3일 마다, 그리고 임상적 질환의 시작에 앞서 4가지 상이한 때에 처리되었다 (6, 9, 12, 그리고 15일자). 생쥐는 EAE-질환 피크에서 희생되었다.
시신경은 Bruker 4.7T MRI 시스템에서 확산성 텐서 영상법 (DTI)을 이용하여 EAE-질환 피크에서 1회 영상화되었다. MRI 이미지는 다음 파라미터에서 획득되었다: 1 s의 TR, 30 ms의 TE, 10 ms의 △, 8 NEX, 절편 두께 0.5 mm, 시야 2x2 cm2, 데이터 매트릭스 256x128. 1개의 평행 및 1개의 직각 확산 감작화 구배 방향에 대한 0s/mm2 (비-확산 편중된 이미지) 및 700 s/mm2의 B 값 (Wu, Butzkueven et al. (2007) Neuroimage 37: 13138-1147)이 이용되었다.
MRI 분석 직후에, 생쥐는 펜토바르비탈로 안락사되고, PBS로 관류되고, 0.1M PBS에서 4% 파라포름알데히드 (PFA)로 고정되고, 그리고 시신경이 제거되고, 2.5% 글루타르알데히드 및 0.1M 나트륨 카코딜염산 완충액을 내포하는 4% PFA 용액에서 후속 고정되고, 전자 검경을 위해 처리되었다. 전체 시신경교차부앞 횡단면 시신경 이미지는 10X와 100X 배율에서 촬영되고 Photoshop CS3 소프트웨어 (Adobe Systems Incorporated, San Jose, CA, USA)에서 합병되었다. 5개 시신경교차부앞 횡단면 시신경 ROI (관심되는 영역)가 분석을 위해 선택되었는데 (4개 말초 및 1개 중추), 이들은 각각 대략 3600 μm2의 치수를 갖는다 (도 1). 분석은 각 ROI 상에서 각 확인된 축삭돌기의 축삭돌기 숫자, 축삭돌기 구역, 그리고 축삭원형질 구역을 사정하기 위해, 이미지 Pro Plus 소프트웨어 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA)를 이용하여 수행되었다. 신경의 주변은 다수의 염증성 침윤물을 내포하였다. 심하게 침윤된 말초 구역 및 중추 신경 구역은 각 신경에 대해 개별적으로 사정되었다.
항-LINGO 항체 처리된 생쥐에서는 EAE 사망이 관찰되지 않고, 반면 5/14 위약 처리된 생쥐는 EAE 심각도로 인해 안락사되어야 했다 (도2A). 이에 더하여, 항-LINGO-1 항체 처리된 생쥐의 훨씬 낮은 비율 (4/14 생쥐)이 위약-처리된 생쥐 (7/14 생쥐)와 비교하여 완전한 뒷다리 마비 (하반신마비) (등급 5 질환 심각도)에 도달하였다 (도2B).
시신경 확산 MRI 스캔은 유도 후 16-17 일자에 피크 EAE 심각도에서, 16마리 생존 대조-처리된 생쥐 및 18마리 생존 항-LINGO-1 항체 처리된 생쥐에서 수행되었다. 시신경 ROI 이미지는 시신경교차부앞 수준에서 시신경의 중심에서 10개 복셀을 포함하였다. 확산성 텐서 영상법 (DTI)은 대조-처리된 생쥐 (평균 1,183, SD 36 msec)에서보다 항-LINGO-1 항체 처리된 생쥐 (평균 1,400, SD 27 msec)에서 장축과 평형하게 (종적, 축, 또는 평행 확산성 또는 λII) 훨씬 높은 겉보기 확산 계수 (ADC) 값을 보여주었다 (도 3, 도 4). 대조적으로, 시신경 장축에 직각인 (방사상 또는 직각 확산성 또는 λ) ADC 값에서는 처리 군에 의한 차이가 없었다 (대조 처리된 생쥐에서 403 ± 25msec와 대비하여 항-LINGO-1 길항제 처리된 생쥐에서 415 ± 19msec) (도 3, 도 4).
조사된 각 시신경에 대한 5 ROI에서 중추와 말초 축삭돌기 구역, 축삭돌기 계측치, 그리고 축삭원형질 횡단면 구역의 사정은 비교를 위해 도표화되었다 (도 5; 도 6). 조건 마다 19개 EAE 신경 및 5개 건강한 신경이 분석되었다. 결과는 중추 또는 말초에서 ROI 내에 전체 시신경 구역 또는 축삭돌기의 숫자에서 차이가 없다는 것을 보여주었다 (도 5; 도 6). 하지만, 중심 시신경 ROI 내에 개별 축삭돌기 구역 (축삭돌기 건강의 척도)은 항-LINGO-1 항체 처리된 생쥐에 비하여 대조-처리된 생쥐에서 13% 낮았다 (도 5; 도 6). 전반적으로, LINGO-1 길항작용은 생쥐에서 MOG-EAE로부터 이환율 및 사망률을 감소시키고; 그리고 축삭돌기 구역의 손실을 감소시키고 축 확산성의 손실을 감소시킴으로써, 염증이 생긴 시신경에서 축삭돌기 보호를 증진하였다. 요약하면, 시신경에 대한 손상이 MOG-EAE에서 조직학적으로 및 MRI에 의해 확인되었고, 그리고 이것은 LINGO-1 차단에 의해 감소되는 것으로 보였다.
실시예 2. 코르티코스테로이드 치료와 조합으로 LINGO-1 길항작용은 쥐 EAE 모델에서, LINGO-1 길항작용 단독과 비교하여 증가된 축삭돌기 보호를 제공한다.
급성 시신경염 (AON)은 다발성 경화증에서 종종 발생하는 시신경의 염증성 질환이다. AON은 시신경에 대한 염증성 손상에 의해 유발되고, 그리고 시신경과 축삭돌기를 덮는 미엘린초에 대한 부종, 염증과 손상으로 인해 시각 손실을 나타낸다. AON의 결과로서, 망막 신경 섬유층 및 망막신경절 세포층의 유의미한 손실이 나타난다. AON의 현재 치료는 부종의 해소에 집중하지만, 중추신경계 (CNS) 재수초화를 증진하거나 또는 CNS 염증성 탈수초화로부터 신경축삭돌기 보호를 제공하지 못하는 고분량 코르티코스테로이드로 정맥내 치료에 한정된다.
시신경염의 연구를 위한 동물 모델은 쥐와 생쥐 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE) 모델을 포함한다; 여기서 EAE 유도는 시신경 신경염의 발달을 유발한다. 본 실시예에서, 단독으로 및 코르티코스테로이드 치료와 조합으로 LINGO-1 길항작용의 효과가 EAE 쥐 모델을 이용하여 분석되었다. 간단히 말하면, 8 내지 10 주령 암컷 Brown Norway (BN) 쥐는 이소푸루란의 흡입에 의해 마취되고, 그리고 400 ㎍ 열 불활성화된 미코박테리움 결핵을 내포하는 완전한 프로인드 어쥬번트로 유화된 (1:1) 식염수에서 100 ㎍ rMOG1-125를 내포하는, 200 μl의 총 체적의 접종물로 꼬리의 기부에서 피내 주사되었다.
임상적 증상의 시작 후 (EAE 유도 후 15-16 일자), 쥐는 3 연속일 동안, 식염수에서 30 mg/kg/일의 메틸프레드니솔론 (MP) 또는 식염수 단독 (운반제)으로 정맥내 처리되었다. MP 주사의 두 번째 일자에, 쥐는 3주 동안 주 1회 복강내 투여된 6 mg/kg의 항-LINGO-1 단일클론 항체 또는 대조 항체가 제공되었다. 총 4개의 상이한 처리 군이 있었다: (1) 대조 처리 군 (운반제 + 대조 항체 (Ab)); (2) MP 처리 군 (MP + 대조 항체); (3) 항-LINGO-1 단일클론 항체 처리 군 (운반제 + 항-LINGO-1 단일클론 항체); 그리고 (4) 조합 처리 군 (MP + 항-LINGO-1 단일클론 항체).
최종 치료 후 1 주 (증상의 시작 후 4 주 및 EAE 유도 후 6 주)에, 이들 쥐는 PBS에서 4% 파라포름알데히드 (PFA)로 관류되고, 그리고 시신경 (ONs)의 저온조 마이크로톰 절편은 DAPI를 이용하여 축삭돌기 병리를 분석하기 위해 항-βIII 튜불린 항체로 염색되고 40X 배율에서 형광 검경에 의해 가시화되었다. 축삭돌기 정량을 위해, 시신경 마다 3개의 상이한 절편이 분석되었고, 그리고 처리 군 마다 3-5마리 동물이 계수되었다.
도면 (도 7)에 나타나 있는 바와 같이, 축삭돌기 손실이 항-βIII 튜불린 염색에 의해 대조 처리 군 (운반제 + 대조 항체)의 시신경의 절편에서 검출되었는데, 이것은 심각한 축삭돌기 손실을 암시하였다. DAPI 염색에 의해 나타나 있는 바와 같이 이들 구역에서 염증성 침윤 또한 관찰되었다 (도 7). 축삭돌기의 숫자는 MP 처리 군 (MP + 대조 항체)에서 약간 더 높았다 (p 값 = 유의하지 않음) (도 8). 항-LINGO-1 단일클론 항체 처리 군 (운반제 + 항-LINGO-1 단일클론 항체)은 5-배 높은 축삭돌기 숫자를 보였는데, 이것은 항-LINGO-1 단일클론 항체 치료가 축삭돌기 손실을 예방한다는 것을 암시하였다 (도 8). 조합 처리 군 (MP + 항-LINGO-1 단일클론 항체)은 대조 처리 군 (운반제 + 대조 항체)과 비교하여 축삭돌기 숫자에서 8-배 증가를 보여주었다; 이것은 항-LINGO-1 길항제, 예를 들면, 항-LINGO-1 단일클론 항체와 고분량 코르티코스테로이드의 조합 치료가 상승 효과를 가질 수 있다는 암시한다 (도 8).
전반적으로, LINGO-1 길항작용은 쥐 EAE에서 시신경에서 축삭돌기 손실을 감소시켰다. 축삭돌기 보호는 고분량 정맥내 메틸프레드니솔론으로 3일 동안 매일 치료에서 관찰되지 않는 반면, 항-LINGO-1 단일클론 항체 치료는 염증성 탈수초화에서 축삭돌기 보호를 유발하였다; 그리고 항-LINGO-1 단일클론 항체와 고분량 IV 메틸프레드니솔론의 조합 치료는 훨씬 큰 축삭돌기 보호를 유발하였다.
요약하면, 단일클론 항-LINGO-1 항체로 LINGO-1 차단은 쥐 MOG-EAE에서 축삭돌기 손실을 감소시켰다; 그리고 쥐 MOG-EAE에서 LINGO-1 차단의 신경보호 효과는 고분량 스테로이드로 항염증성 치료의 존재 또는 부재에서 관찰되었다.
참고에 의한 편입
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공공 데이터베이스, 예를 들면, tigr.org의 월드와이드웹에서 Institute for Genomic Research (TIGR)에 의해 및/또는 ncbi.nlm.nih.gov의 월드와이드웹에서 National Center for Biotechnology Information (NCBI)에 의해 관리되는 것들에서 기입에 상관하는 수탁 번호를 참조하는 임의의 폴리뉴클레오티드와 폴리펩티드 서열 역시 전체적으로 참조로서 편입된다.
등가물
당업자는 단지 일과적인 실험을 이용하여, 본원에서 설명된 발명의 특정한 구체예에 대한 많은 등가물을 인식하거나, 또는 확인할 수 있을 것이다. 이런 등가물은 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Cadavid, Diego Mi, Sha <120> COMBINATION THERAPIES AND USES FOR TREATMENT OF DEMYELINATING DISORDERS <130> B2047-7090WO <150> 61/711638 <151> 2012-10-09 <160> 276 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> VH sequence of Li62 antibody <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ile Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly His Asn Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> VH CDR1 sequence of Li62 antibody <400> 2 Ile Tyr Pro Met Phe 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> 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sequence of Li62 variant F01 antibody <400> 59 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ile Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Arg Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Pro Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 60 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> VH sequence of Li62 variant F02 antibody <400> 60 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ile Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 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F10 antibody <400> 62 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ile Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ser His Ile Asp Arg Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 63 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> VH sequence of Li62 variant G08 antibody <400> 63 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ile Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser 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Phe Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Glu Gly Asp Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 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88 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 88 Ile Thr Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 89 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 89 Ala Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 90 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 90 Val Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 91 Ser Pro Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 92 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 92 Ser Pro Arg Lys His 1 5 <210> 93 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 93 Ser Pro Arg Lys Lys 1 5 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 94 Ser Pro Arg Lys Arg 1 5 <210> 95 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 95 Ser Pro Lys Lys His 1 5 <210> 96 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 96 Ser Pro His Lys His 1 5 <210> 97 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 97 Ser Pro Arg Arg His 1 5 <210> 98 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 98 Ser Pro Arg His His 1 5 <210> 99 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 99 Ser Pro Arg Arg Arg 1 5 <210> 100 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 100 Ser Pro His His His 1 5 <210> 101 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 101 Ser Pro Lys Lys Lys 1 5 <210> 102 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 102 Leu Ser Pro Arg Lys His 1 5 <210> 103 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 103 Leu Ser Pro Arg Lys Lys 1 5 <210> 104 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 104 Leu Ser Pro Arg Lys Arg 1 5 <210> 105 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 105 Leu Ser Pro Lys Lys His 1 5 <210> 106 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 106 Leu Ser Pro His Lys His 1 5 <210> 107 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 107 Leu Ser Pro Arg Arg His 1 5 <210> 108 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 108 Leu Ser Pro Arg His His 1 5 <210> 109 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 109 Leu Ser Pro Arg Arg Arg 1 5 <210> 110 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 110 Leu Ser Pro His His His 1 5 <210> 111 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 111 Leu Ser Pro Lys Lys Lys 1 5 <210> 112 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 112 Trp Leu Ser Pro Arg Lys His 1 5 <210> 113 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 113 Trp Leu Ser Pro Arg Lys Lys 1 5 <210> 114 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 114 Trp Leu Ser Pro Arg Lys Arg 1 5 <210> 115 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 115 Trp Leu Ser Pro Lys Lys His 1 5 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 116 Trp Leu Ser Pro His Lys His 1 5 <210> 117 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 117 Trp Leu Ser Pro Arg Arg His 1 5 <210> 118 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 118 Trp Leu Ser Pro Arg His His 1 5 <210> 119 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 119 Trp Leu Ser Pro Arg Arg Arg 1 5 <210> 120 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 120 Trp Leu Ser Pro His His His 1 5 <210> 121 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 121 Trp Leu Ser Pro Lys Lys Lys 1 5 <210> 122 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 122 Ile Thr Pro Lys Arg Arg 1 5 <210> 123 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 123 Ala Cys His His Lys 1 5 <210> 124 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 124 Val Cys His His Lys 1 5 <210> 125 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 125 Xaa Xaa Arg Lys His 1 5 <210> 126 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 126 Xaa Xaa Arg Arg Arg 1 5 <210> 127 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 127 Xaa Xaa Lys Lys Lys 1 5 <210> 128 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 128 Xaa Xaa His His His 1 5 <210> 129 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 129 Xaa Xaa Arg Lys Lys 1 5 <210> 130 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 130 Xaa Xaa Arg Lys Arg 1 5 <210> 131 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 131 Xaa Xaa Lys Lys His 1 5 <210> 132 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 132 Xaa Xaa His Lys His 1 5 <210> 133 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 133 Xaa Xaa Arg Arg His 1 5 <210> 134 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 134 Xaa Xaa Arg His His 1 5 <210> 135 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 135 Ile Thr Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 136 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 136 Ala Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 137 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 137 Val Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 138 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X can be lysine, arginine, histidine, glutamine, asparagine <400> 138 Ser Pro Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 139 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 139 Ser Pro Arg Leu His 1 5 <210> 140 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 140 Arg Arg Ala Arg Ile Arg Asp Arg Lys 1 5 <210> 141 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 141 Lys Lys Val Lys Val Lys Glu Lys Arg 1 5 <210> 142 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 142 Arg Arg Leu Arg Leu Arg Asp Arg Lys 1 5 <210> 143 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 143 Arg Arg Gly Arg Gly Arg Asp Arg Lys 1 5 <210> 144 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> LINGO-1 polypeptide <400> 144 Arg Arg Ile Arg Ala Arg Asp Arg Lys 1 5 <210> 145 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Li33 Fab' light chain <400> 145 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Lys Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 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Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Asp Trp Tyr Leu Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 268 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Li113 VH Variant <400> 268 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Trp Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Asp Trp Tyr Leu Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 269 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Li113 VH Variant <400> 269 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 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100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 271 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Li113 VH Variant <400> 271 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Asp Trp Tyr Leu Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 272 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Li113 VH Variant <400> 272 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Val Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Asp Trp Tyr Leu Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 273 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Li113 VH Variant <400> 273 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Pro Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Thr Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Asp Trp Tyr Leu Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 274 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial 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Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Glu Gly Asp Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 276 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Li113 VH Variant <400> 276 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Met 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (71)

  1. CNS 탈수초성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 항-LINGO-1 항체 및 코르티코스테로이드를 포함하는, 치료가 필요한 개체에서 다발성 경화증 또는 시신경의 염증성 병태에서 선택되는 CNS 탈수초성 질환의 치료를 위한 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, CNS 탈수초성 질환은 다발성 경화증인 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 시신경의 염증성 병태는 시신경염인 약학 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 시신경염은 급성 시신경염인 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 수초화 향상, 신경축삭돌기 보호 증강, 희소돌기아교세포의 분화와 생존 촉진, 시냅스 숫자 또는 시냅스 효율 향상, 또는 전도 속도 가속화 중 하나 이상을 유발하는 것인 약학 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 인간 LINGO-1에 대한 단일클론 항체인 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 인간 LINGO-1에 대한 인간, 인간화, CDR-합체된, 또는 시험관내-생성된 항체인 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 면역글로불린 G 하위부류 1(IgG1)인 약학 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 비당화 IgG1 프레임워크를 포함하는 것인 약학 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 야생형 IgG1과 비교하여 작동체 세포 및 보체 기능을 감소시키도록 변형된 것인 약학 조성물.
  11. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 VH 상보성 결정 영역(CDR)1, VH CDR2 및 VH CDR3를 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함하고, VH CDR1은 서열 번호: 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, VH CDR2는 서열 번호: 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, VH CDR3은 서열 번호: 8에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, 항-LINGO-1 항체는 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3를 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, VL CDR1은 서열 번호: 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR2는 서열 번호: 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR3은 서열 번호: 16에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 약학 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 항-LINGO-1 항체의 VH는 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, 항-LINGO-1 항체의 VL은 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 것인 약학 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 서열 번호: 275의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호: 276의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 약학 조성물.
  14. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 개체는 재발 완화성 다발성 경화증(RRMS), 원발성 진행형 MS, 속발성 진행형 MS, 임상적 독립 증후군(CIS), 임상적 확진 MS(CDMS), 또는 양성 MS 중 하나를 갖는 것인 약학 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 개체는 하나 이상의 새롭게 발생된 병변을 갖는 것인 약학 조성물.
  16. 제14항에 있어서, 개체는 하나 이상의 기존 병변을 갖는 것인 약학 조성물.
  17. 제14항에 있어서, 개체는 재발 완화성 다발성 경화증(RRMS)을 갖는 것인 약학 조성물.
  18. 제14항에 있어서, 개체는 속발성 진행형 MS(SPMS)를 갖는 것인 약학 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 개체는 활성 질환을 갖는 환자인 약학 조성물.
  20. 제1항에 있어서, 상기 치료는 개체에서 질환과 연관된 하나 이상의 증상 감소; 또는 재발 또는 장애의 악화의 감소, 지연 또는 예방을 포함하는 것인 약학 조성물.
  21. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체 및 코르티코스테로이드는 동시에 투여되는 것인 약학 조성물.
  22. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체 및 코르티코스테로이드는 순차적으로 투여되는 것인 약학 조성물.
  23. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체 및 코르티코스테로이드의 투여는 서로 부분적으로 중첩되는 것인 약학 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 코르티코스테로이드 및 항-LINGO-1 항체의 투여 개시는 동시에 일어나는 것인 약학 조성물.
  25. 제1항에 있어서, 코르티코스테로이드는 항-LINGO-1 항체로 치료를 개시하기 전에 투여되는 것인 약학 조성물.
  26. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 코르티코스테로이드로 치료를 개시하기 전에 투여되는 것인 약학 조성물.
  27. 제1항에 있어서, 코르티코스테로이드의 투여는 항-LINGO-1 항체의 투여 중단 후에 계속되는 것인 약학 조성물.
  28. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체의 투여는 코르티코스테로이드의 투여 중단 후에 계속되는 것인 약학 조성물.
  29. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 정맥내, 피하, 유리체내, 척수강내 또는 근육내 투여되는 것인 약학 조성물.
  30. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 정맥내 투여되는 것인 약학 조성물.
  31. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 1 내지 100 mg/kg으로 투여되는 것인 약학 조성물.
  32. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 50 mg/kg, 또는 100 mg/kg으로 투여되는 것인 약학 조성물.
  33. 제1항에 있어서, 항-LINGO-1 항체는 1주, 2주, 3주, 4주 또는 5주마다 1회 IV 주입을 통해 투여되는 것인 약학 조성물.
  34. 제1항에 있어서, 개체는
    신경학적 조사 수행;
    확장성 장애 상태 척도(EDSS)에서 개체의 상태 획득;
    다발성 경화증 기능적 복합척도(MSFC)에서 개체의 상태 획득;
    개체 병변 상태 검출;
    상지, 하지 또는 둘 모두의 기능의 척도 획득;
    단거리 보행 기능의 척도 획득;
    장거리 보행 기능의 척도 획득;
    인지 기능의 척도 획득; 또는
    시기능의 척도 획득
    중에서 하나 이상에 의해 평가되었거나 또는 평가되는 것인 약학 조성물.
  35. 제1항에 있어서, 치료가
    MSFC에서 개체의 상태 획득;
    신경학적 조사 수행;
    확장성 장애 상태 척도(EDSS)에서 개체의 상태 획득;
    개체의 병변 상태 검출;
    상지, 하지 또는 둘 모두의 기능의 척도 획득;
    단거리 보행 기능의 척도 획득;
    장거리 보행 기능의 척도 획득;
    인지 기능의 척도 획득; 또는
    시기능의 척도 획득
    중에서 하나 이상을 더 포함하는 것인 약학 조성물.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 상지 기능의 척도는 9홀 페그 검사(9HP)를 이용하여 획득되는 것인 약학 조성물.
  37. 제34항 또는 제35항에 있어서, 단거리 보행 기능의 척도는 25 피트 일정시한 보행(T25FW)을 이용하여 획득되는 것인 약학 조성물.
  38. 제34항 또는 제35항에 있어서, 인지 기능의 척도는 학습 검사, 기억력 검사또는 주의력 또는 처리 속도 검사의 평가를 포함하는 것인 약학 조성물.
  39. 제1항에 있어서, 개체는 단거리 보행 기능, 장거리 보행 기능, 상지 기능 또는 하지 기능의 평가 중 1개, 2개, 3개 또는 전체에서 선택되는 보행 기능의 평가 및 EDSS 평가를 이용하여 평가되는 것인 약학 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 사지 또는 보행 기능의 척도의 최소한 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 이상의 증가는 개체에서 질환 진행을 의미하고; 사지 또는 보행 기능의 척도의 최소한 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 이상의 감소는 개체에서 향상된 결과를 의미하는 것인 약학 조성물.
  41. 제38항에 있어서, 인지 기능의 척도는 청각 기억, 언어 학습 또는 언어 정보 기억; 청각 또는 언어 기억 평가 검사, 레이 청각 언어 학습 검사(RAVLT); 시각 또는 공간 기억 평가 검사; 인지 검사; 및 환자 기록 결과 측정 중 하나 이상의 평가를 포함하는 것인 약학 조성물.
  42. 제34항 또는 제35항에 있어서, 인지 기능의 척도는 SDMT, PASAT-3 및 -3, SRT-총괄 학습(SRT-TL), SRT 지연 회상(SRT-DR), 및 BVMTR 지연 회상(BVMTR-DR)을 포함하는 MS 인지 종결점의 복합척도를 이용하여 수행되는 것인 약학 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 인지 기능의 척도는 MS-COG를 포함하는 것인 약학 조성물.
  44. 제34항에 있어서, 개체의 향상은
    a. ≤6.0의 기준 점수로부터 EDSS에서 ≥1.0 포인트 감소;
    b. T25FW에서 기준선으로부터 ≥15% 향상;
    c. 9HPT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상; 또는
    d. PASAT에서 기준선으로부터 ≥15% 향상
    중 하나 이상에 의해 규정되는 것인 약학 조성물.
  45. 제34항에 있어서, 개체의 병변 상태는 자기 공명 영상법을 이용하여 평가되는 것인 약학 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 자기 공명 영상법은 자기 전사 및 확산성 텐서 영상법을 포함하는 것인 약학 조성물.
  47. 제18항에 있어서, 개체는 활성 질환을 갖는 환자인 약학 조성물.
  48. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 코르티코스테로이드는 메틸프레드니솔론인 약학 조성물.
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