CN1942161B

CN1942161B - 通过施用髓鞘再生药物用于脱髓鞘疾病和麻痹的组合物和治疗

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Publication number: CN1942161B
Application number: CN2004800080890A
Authority: CN
Inventors: S·J·卡利克; M·A·普莱斯; A·W·康拉迪; F·S·格兰特; C·M·塞姆科; D·德雷森; E·梅塞尔史密斯; S·弗里德曼; T·耶德诺克
Original assignee: Elan Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Elan Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2003-01-24
Filing date: 2004-01-26
Publication date: 2012-05-30
Anticipated expiration: 2024-01-26
Also published as: UA88604C2; ZA200505869B; CN1942161A

Abstract

本申请提供在需要其的对象中抑制脱髓鞘、促进髓鞘再生和/或治疗麻痹的方法和组合物。优选地，当其以有效抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生的量施用给患者时，所述的组合物包括免疫球蛋白(例如抗体，抗体片段，和重组产生的抗体或片段)、多肽(例如整连蛋白的配体蛋白质的可溶形式)和小分子。所述的组合物和方法还可以采用其他以往用于减轻与脱髓鞘有关的病症和疾病的抗炎药。

Description

通过施用髓鞘再生药物用于脱髓鞘疾病和麻痹的组合物和治疗

技术领域

本发明一般地涉及可用于治疗患者中的脱髓鞘疾病和病症和/或减轻麻痹的组合物、化合物。

背景技术

炎症是血管化组织对感染或损伤的响应并且受到白细胞粘附血管的内皮细胞及其浸润到周围组织内的影响。在正常炎症中，浸润的白细胞释放有毒介质来杀死侵入的生物，吞噬碎片和死亡细胞，并且在组织修复和免疫反应中发挥作用。然而，在病理性炎症中，浸润的白细胞过度响应且可引起严重或致死的损害。参见例如，Hickey，Psychoneuroimmunology II(Academic Press 1990)。

整联蛋白是一个涉及细胞粘附、免疫细胞迁移和激活的细胞表面糖蛋白的家族。α-4整联蛋白是通过除嗜中性白细胞之外的所有循环白细胞表达的，并且与β-1(β₁)或β-7(β₇)整联蛋白亚基结合形成异二聚受体；α-4 β-1(α₄β₁)和α-4β-7(a₄β₇)两者在白细胞穿过血管内皮的迁移中发挥作用(Springer等，细胞1994，76：301-14；Butcher等，Science 1996，272：60-6)并且贡献于实质内细胞的激活和存活(Damle等，J.Immunol.1993；151：2368-79；Koopman等，J.Immunol.1994，152：3760-7；Leussink等，Acta Neuropathol，2002，103：131-136)。α₄β₁主要表达在淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞、嗜碱性细胞和嗜曙红细胞上。

α-4β-1(也称作极迟抗原-4，VLA-4)，结合血管细胞粘附分子-1(Lobb等，J.Clin.Invest.1994，94：1722-8)，它通过血管内皮表达在慢性炎症的许多位点(Bevilacqua等，1993，Annu.Rev.Immunol.11：767-804；Postigo等1993 Res.Immunol.144：723-35)。α4β₁具有其他配体，包括纤连蛋白和其他细胞外基质(ECM)组分。

α-4β-7二聚体与粘膜地址素细胞粘附分子(MAdCAM-1)，并且介导淋巴细胞向肠内的归巢(Farstad等，1997 Am.J.Pathol.150：187-99；Issekutz，1991 J.Immunol.147：4178-84)。MAdCAM-1在血管内皮上的表达在患有炎性肠道疾病(IBD)的患者肠道内的炎症位点处有所增高(Briskin等，1997 Am.J.Pathol.151：97-110)。

粘附分子例如α-4整联蛋白是治疗剂的潜在靶向。譬如，α-4整联蛋白是其亚基的VLA-4受体因其与位于脑内皮细胞上的配体之间的相互作用而成为重要靶向。由脑部炎症导致的疾病和病症具有特别严重的后果。在另一实例中，α-4β-7整联蛋白二聚体是重要靶向，因为它参与淋巴细胞的归巢和胃肠道内的病理性炎症。

α-4β-1整联蛋白表达在活化淋巴细胞和单核细胞的细胞外表面上，它已经牵涉到急性炎脑部损害的发病机理和多发性硬化(MS)有关的血脑屏障(BBB)打破中(Coles等，1999 Ann.Neurol.46(3)：296-304)。抗α-4整联蛋白的试剂已经经过体外和体内两种抗炎潜能的测试。参见Yednock等，Nature 1992，356：63-66；Bendig等的美国专利5,840,299，授权于1998年11月24日，和Thorsett的美国专利6,001,809等，授权于1999年12月14日。体内试验证实，α-4整联蛋白抗体阻断淋巴细胞向脑内皮细胞的附着。测试α-4整联蛋白抗体对患有人工诱发条件刺激的多发性硬化的动物，实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)的影响的实验已经证实，抗-α-4整联蛋白抗体在动物中预防脑部的炎症和继发的麻痹。总之，这些试验确定了抗-α-4整联蛋白抗体成为有效治疗多发性硬化和其他炎性疾病和障碍的潜在治疗剂。

至今为止，不曾公开过抑制或预防脱髓鞘的疗法采用促进髓鞘再生的单独药物。例如，多发性硬化影响人类健康且比其他脱髓鞘疾病耗费更多成本以维持健康。目前没有有效的治疗适合于MS。它是一种主要折磨年轻人(即，平均年龄30岁)的疾病并且发病率为每1,000个个体中有1例。实验性自身免疫脑脊髓炎是用于研究MS的重要动物模型。然而，与EAE不同，MS是原因不明的自身免疫疾病。疾病进程的特征在于免疫细胞流入中枢神经系统，这最终导致水肿，脱髓鞘，轴索损伤和丧失。

人们需要并始终寻找新的化合物、组合物和利用这些化合物和组合物抑制脱髓鞘、促进髓鞘再生(髓鞘再生)和/或治疗与脱髓鞘有关的麻痹的方法来治疗疾病例如MS，以及其他与炎症有关的脱髓鞘疾病。

发明概述

基于上述内容，需要治疗这些疾病的新组合物和方法，它们应有效治疗或抑制这些疾病，使患者可以获得长生存期和更好的生活质量。

本发明人涉及促进哺乳动物中神经细胞的髓鞘再生作用的方法，该方法包括给该哺乳动物施用髓鞘再生有效量的髓鞘再生药物。优选地，本发明方法中的哺乳动物是人类，并且该人类患有脱髓鞘细胞的病症。

按照本发明脱髓鞘细胞的病症包括多发性硬化，先天性代谢障碍，存在异常髓鞘形成的神经病，药物诱发的脱髓鞘，放射诱发的脱髓鞘，遗传性脱髓鞘病症，朊病毒诱发的脱髓鞘病症，脑炎诱发的脱髓鞘，或者脊柱损伤。优选该病症是多发性硬化。

本发明进一步涉及含有治疗有效量的髓鞘再生药物的组合物，当施用给需要其的对象时它预防脱髓鞘和/或促进髓鞘再生。

在本发明的方法和组合物中，所述髓鞘再生药物可以是抗体，抗体的免疫活性片段，化合物，或其联合。抗体或其免疫活性片段优选是那他珠单抗(natalizumab)(Antegree

)或其免疫活性片段。

在本发明的方法和组合物中，该髓鞘再生药物可以是式I，IA，IB，IC，II，IIA，或IIB的小化合物。该化合物优选是下式IB的化合物

其中：

Ar¹选自芳基，取代的芳基，杂芳基，和取代的杂芳基；

Ar²选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基；

R¹²选自烷基，取代的烷基，环烷基，和取代的环烷基或者R¹²和R¹³与和R¹²相连的氮原子及和R¹³相连的碳原子一起构成与和R¹²相连的氮原子及和R¹³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R¹³选自氢，烷基，和取代的烷基，或R¹²和R¹³与和R¹²相连的氮原子及和R¹³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R¹⁴选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，和取代的芳基；

R¹⁵选自烷基，和取代的烷基，或R¹⁵和R¹⁶与其相连的氮原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R¹⁶选自烷基和取代的烷基或R¹⁵和R¹⁶与其相连的氮原子一起构成杂环或取代的杂环基团；和

Y选自-O-，-NR¹⁰⁰-，和-CH₂-，其中R¹⁰⁰是氢或烷基；

及其药学可接受盐。

在另一实施方式中，所述化合物优选是下式IC的化合物

其中R^x是羟基或C_1-5烷氧基及其药学可接受盐。优选地，该化合物是N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯。

在另一实施方式中，该化合物优选是下式IIB的化合物

其中：

Ar³¹选自芳基，取代的芳基，杂芳基，和取代的杂芳基；

R³²选自烷基，取代的烷基，环烷基，和取代的环烷基或者R³²和R³³ 与和R³²相连的氮原子及和R³³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R³³选自氢，烷基，和取代的烷基，或者R³²和R³³与和R³²相连的氮原子及和R³³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R³⁴选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，和取代的芳基；和

R³⁷是芳基，杂芳基，取代的芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，芳氧基，取代的芳氧基，芳烷氧基，取代的芳烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基；

及其药学可接受盐。

在又一实施方式中，该化合物是N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基]-4-硫脯氨酰基(thiaprolyl)]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯。

本发明还涉及含有治疗有效量的式I，IA，IB，IC，II，IIA，或IIB的化合物及其药学可接受盐的药物组合物。优选地，该化合物是式IB，IC，或IIB的化合物。在一优选实施方式中，该化合物是N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯。

本发明的髓鞘再生药物可以单独给药或与其他髓鞘再生药物、抗-α-4-药物或抗炎药联合给药。本发明进一步涉及含有药学可接受载体和治疗有效量的本发明所述髓鞘再生药物的药物组合物。本发明的药物组合物可以进一步含有一种或多种其他药物，包括其他髓鞘再生药物，抗-α-4-药物，或抗炎药。

本发明的组合物可以通过不同的给药方式给药，包括口服，非肠道(例如，皮下，硬膜下，静脉内，肌肉内，鞘内，腹膜内，脑内，动脉内，或病灶内途径的给药)，局部，定位(例如，外科施用或外科栓剂)，直肠，和肺(例如，气雾剂，吸入，或散剂)。

本发明的另一方面提供包括联合治疗，其中包括治疗有效量的髓鞘再生药物和治疗有效量的抗炎药。抗炎药包括但不限于促肾上腺素皮质激素(ACTH)，皮质类固醇(例如，强的松，甲基强的松龙，地塞米松皮质醇，可的松，氟氢可的松，强的松龙，6ω-甲基强的松龙，去炎松，和倍他米松)，干扰素(例如，干扰素β-1b和干扰素β-1a)，Copaxone^_)或非甾体抗炎药(例如，阿司匹林，水杨酸钠，胆碱三水杨酸镁，双水杨酸酯，二氟尼柳，柳氮磺胺吡啶，偶氮水杨酸，对氨基酚衍生物，吲哚，茚乙酸，杂芳基乙酸，邻氨基苯甲酸，烯醇酸，烷酮类，二芳基取代的呋喃类，二芳基取代的吡唑类，吲哚乙酸类，和磺酰基苯胺)。该髓鞘再生药物可以选自任何式I，IA，IB，IC，II，IIA，或IIB的化合物。或者，该髓鞘再生药物可以是VLA-4或其免疫活性片段的抗体或结合VLA-4并由此防止它结合同类配体的多肽。

所述联合疗法可以用于治疗患有多发性硬化、先天性代谢障碍、存在异常髓鞘形成的神经病、药物诱发的脱髓鞘、放射诱发的脱髓鞘、遗传性脱髓鞘病症、朊病毒诱发的脱髓鞘病症、脑炎诱发的脱髓鞘或者脊柱损伤的对象。

本发明的另一方面提供式I，IA，IB，IC，II，IIA或IIB的化合物在制备在需要其的对象中用于治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。优选地，该化合物是式IB，IC或IIB的化合物。在一优选实施方式中，该化合物是N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯。

本发明的另一方面中，提供一种在患有脱髓鞘疾病的对象中逆转麻痹的方法，该方法包括给该对象施用有效量的髓鞘再生药物以抑制脊柱中免疫细胞的淋巴细胞浸润以促进脊柱内神经细胞的髓鞘再生并由此在需要其的对象中治疗麻痹。本发明的另一方面提供髓鞘再生药物在制备用于治疗需要其的对象中的脱髓鞘疾病或用于治疗患有脱髓鞘疾病的对象中的麻痹的药物中的应用。

本发明的这些和其他目的、优点和特征在本领域技术人员阅读了方法和制剂的详情之后变得清楚，下文进行更加完整的说明。

附图简述

附图1A.N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理过程中慢性实验性自身免疫脑脊髓炎的持续逆转。在雌性健康豚鼠中经过颈真皮内注射0.6mL均化同源CNS组织和完全弗氏佐剂(CFA)的1∶1混合物，和10mg/mL的灭活M.tuberculosis诱发EAE。免疫后第40天开始，动物接受盐水(n＝20，0.5mL/ 天)或者N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯(n＝25，30mg/kg，2x/天)达10、20、30或40天。在处理期间，用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物的平均临床评分值明显低于盐水对照组(p＜0.001，Mann Whitney等级合计试验)。此外，在持续N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯给药过程中未观察到副作用，并且没有观察到先前使用抗体时出现的逃避治疗。

附图1B.撤去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后回归至临床上活动疾病。用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理30天后，5只动物继续保持10天同时不施用所述小分子。一旦撤除N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后，动物回归到疾病的临床进程。第70天至第80天之间，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理后动物的平均临床评分值明显高于整个治疗期间接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物的平均临床评分值(p＜0.05，Mann Whitney等级总和试验)。

附图2.持续性N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理过程中的病理恢复。A，C，E，G，I和K组对象是酸性媒染(solochrome)-R-花青(SCR)染色的脊柱切片(放大率40X)。B，D，F，H，J和L组对象显示高放大率(250X)的苏木精-曙红(H-E)染色切片，其取自相应SCR染色照片的背内侧。取自正常豚鼠的切片(2A)显示出既无炎症也无脱髓鞘，(2B)组对象也如此，对应于H-E切片。在免疫后第40天，未接受处理的动物显示出广泛性脑脊膜炎症和大的脱髓鞘的背内侧(dorso-medial)蚀斑(2C)。浸润细胞在该区域内的密度(2D)大大高于图2中。即使在该疾病后期，在免疫后第60天，盐水处理的动物具有大面积软膜下的脱髓鞘(2E)，并且具有非常高的细胞浸润密度(2F)。相反，接受20天的N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物具有极小面积的脱髓鞘(2G)，并且在病灶区域内细胞浸润的密度非常低(2H)。2I代表的动物接受40天的盐水处理。事实上整个切片都被浸润和脱髓鞘，包括某些区域的灰质的侵害。虽然2J中的细胞浸润自免疫后第60天开始减少(参见2F)，但仍然大大高于2B中观察到的正常水平。然而，在经40天的N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理之后，几乎没有脑脊膜和血管外周炎症，并且髓鞘质表面上完整(2K)。细胞浸润(2L)几乎与正常动物(2B)中的相同。

附图3.慢性EAE在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理过程中减轻的病理性异常。动物接受盐水(n＝20)或N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯(n＝25)共10、20、30或40天。此外，一小组动物接受30天的N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯，并且随后在试验的剩余10天内撤去该处理(N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯组后)。处死后，脑和脊柱在福尔马林中固定并嵌在石蜡中。5μm切片用苏木精-曙红(EI-E)或酸性媒染-R-花青染色，并且基于下面四个种类各自中的评估盲分为4位病理学评分：(3A)脑脊膜炎症，(3B)血管四周浸润，(3C)脑炎，和(3D)脱髓鞘。注意，非EAE动物在所有分类中具有0的评分值。在处理期间，接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物在四类的各类中具有比盐水处理动物明显降低的平均病理学评分值(p＜0.001，双向ANOVA)。当撤去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯且动物在无处理下继续保持10天后，全部四类中的平均加和病理学评分值回归到明显高于持续接受所述小分子处理的动物(p＜0.05，Kruskal Wallis ANOVA或用SNK试验分级)。

附图4.用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理下减少的脊柱浸润。计算代表性区域内的浸润细胞的平均数，所述代表性区域选自覆盖整个脊柱的12个饼形区域(参见方法)。EAE的诱导出现的细胞浸润比非EAE动物的明显增高(5，p＜0.05；Kruskal Wallis ANOVA或用采用SNK试验分级)。N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物在10、20、30或40天的疗程后脊柱内的细胞少于被盐水处理的动物(，p＜0.001，双向ANOVA)。此外，用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理20、30或40天的动物具有明显低于对照(d40)EAE动物的细胞数(#；p＜0.05，Kruskal Wallis ANOVA，基于SNK试验的等级)。撤去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后，继续维持10天但不使用所述小分子的动物的平均细胞数明显高于持续接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物(p＜0.05，Kruskal Wallis ANOVA基于SNK试验的等级)。

附图5.用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理下炎症细胞因子的表达减少。将一片腰部脊柱迅速冷冻在液氮中且按照常规处理提取RNA用于定量PCR分析。尽管在非EAE动物中检测到可忽略的细胞因子细胞因子RNA水平，但在40只患有CNS的对照动物评估IL-2(B)，IL-10(C)和MCP-1(A)的表达。盐水处理的动物在整个试验过程中具有增高水平的炎症细胞因子，接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物被证实其表达明显减少，与临床和病理学复原相吻合。在撤去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯和CNS的再浸润之后，IL-2，IL-10和MCP-1的表达在此升高至与那些盐水处理动物中相当的水平。

附图6.淋巴细胞上α₄整联蛋白的表达。免疫后第80天，从非EAE动物、盐水处理的动物、N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物和撤去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后持续10天的动物收集肝素化血样。使样本暴露在α4整联蛋白的抗体下，随后用流式细胞计数器检验，通过光散射门控不同的细胞群。N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯对动物的处理引起循环中β4整联蛋白明淋巴细胞比盐水处理的动物大大增加。这些结果指示出α-4表达细胞的数目。当所述化合物存在时盐水对照处理的动物中存在更多的α-4表达细胞。X轴代表α-4表达；y轴代表通过FACS评估的细胞数。

附图7.免疫后第80天时α4整联蛋白在循环中的淋巴细胞和单核细胞上表达。免疫后第80天从各组动物守节肝素化血样，暴露于α4整联蛋白的抗体，并且通过流式细胞计数法分类。A组对象证实，采用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的处理引起循环中α4整联蛋白明淋巴细胞的百分率明显大于非EAE和盐水处理的动物，这提示了活化外周淋巴细胞在该抑制剂的存在下无法进入CNS。与这种观点相吻合的时，循环中这些细胞的百分率在撤去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后回归到盐水处理的水平并且CNS炎症恢复为B组对象所示的情况。β4整联蛋白在循环性单核细胞上的一般表达在各种EAE动物中均有所增加，尽管没有可识别的亚群。这种单核细胞α4整联蛋白表达的增加不受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的影响，这提示该抑制剂不影响外周免疫反应。

附图8.在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物中观察到的阴影蚀斑。图像8A-F是得自处理组内各动物的代表性酸性媒染-R-花青染色的脊柱切片。(8A)低倍图像(40x)显示了脊柱内脱髓鞘的程度。(8B)对照动物在″第0天″中脱髓鞘病灶的高倍图像(100x)(第0天是疾病诱导后至少测定的40天，其中动物达到2或更高的临床评分值)显示出稠密的细胞浸润和含有吞噬髓鞘碎片的泡沫巨噬细胞(箭头)。(8C)接受20天盐水处理的动物的病灶完全缺少髓鞘质(250x)。(8D)相反，接受20天的N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物呈现出弥散性蓝色染色覆盖在蚀斑上的病灶(250x)。(8E)在载体处理40天后脊柱中明显出现严重的脱髓鞘(100x)。(8F)然而，40天的N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯疗法后，大多数病灶显示出清晰的髓鞘苍白(100x)。

附图9.半薄和EM切片证实N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的髓鞘再生作用。9A、9B和9C组对象用甲苯胺蓝半薄切片显示(均为400x)。9D、9E和9F组对象显示相同动物的代表性EM切片(9D和9E，1100x；9F，1300x)。(图9A和9D)正常髓鞘质。(9B和9E)盐水处理的第30天。一些小的管径轴突具有髓鞘质变薄的鞘(t)，处于完全脱髓鞘(d)和正常髓鞘质(n)之间。一些轴突经历着华勒氏变性(箭头)。这种情况中，在正常的表观髓鞘质内观察到变性轴突(箭头，9B)。电子显微镜证实不存在包裹在大管径轴突四周的髓鞘质(9E)。(9C和9F)第30天N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理。在接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物中，处于图像左侧(n)的正常表观髓鞘质的区域相邻于相似管径的髓鞘质变薄轴突的广大区域(t)。髓鞘质变薄的轴突的区域更加大且由大管径轴突组成(9C)。EM证实在大直径轴突的四周存在多层薄髓鞘质，这表明髓鞘再生(9F)。

附图10.N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯增加了脊柱内髓鞘再生的发生率和面前(10A)。病灶的数量显示，髓鞘质苍白表示为各动物的12个脊柱横切片平均值这病灶总数的百分比。N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙(黑色棒)与盐水处理的动物(白色棒)相比提高了髓鞘再生的发生率，并且在阴影蚀斑的频率与N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理和之间存在时间依赖性的增高关系。(10B)陈述测定髓鞘再生程度的方法。描绘脊柱切片内所有病灶的形状，并且计算轮廓内的面积。还描绘显示髓鞘质苍白(pallor)的病灶得到各动物髓鞘再生的总面积，并且髓鞘再生的程度表示为总病灶面积的百分比。(10C-F)各散射图沿x轴表示总的病灶面积，并且沿y轴表示髓鞘质苍白显示病灶的百分比。盐水处理的动物的病灶(白色符号)证实几乎没有髓鞘再生。相反，经过20、30或40天的N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理后，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物中的病灶(黑色符号)证实髓鞘再生程度的变化性(0-100％)。棒图中平均百分比面积表示在各散射图的右方(盐水，白色棒；N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯，黑色棒)。在20、30或40天的疗法之后，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯处理的动物具有明显高于处理10天后或者所有盐水对照(＜10％)的髓鞘再生百分比(50％)。

附图11A和11B.分别是小鼠21.6轻链可变区的DNA和氨基酸序列。

附图12A和12B分别是小鼠21.6重链可变区的DNA和氨基酸序列。

附图13.小鼠和改形人21.6轻链可变区的氨基酸序列的对比。构成CDR回路结构的Chothia规范序列组成部分的氨基酸残基用星号标记。RE1表示kauzrebRE1轻链的V_L的FRs和CDRs。La和Lb是改形人21.6V_L 区的两个译本。La的FRs中不同于RE1序列中的那些残基加下划线。Lb中，只显示出构架区内不同于RE1的那些残基。

附图14.小鼠和改形人21.6重链可变区的氨基酸序列的对比。构成CDR回路结果的Chothia规范序列的组成部分的氨基酸残基用星号标记。2*CL表示来自人21/28′CL抗体的VH区的FRs和CDRs。Ha，Hb，和Hc是改形人21.6V_H区的三个译本。Ha的FRs中不同于21/28′CL序列的那些残基加下划线。Hb和Hc中，只表示出构架区只不同于21/28′CL的那些残基。

附图15A和15B.改形人21.6轻链可变区的第一个译本(″a″)的cDNA和氨基酸序列。

附图16A和16B.改形人21.6重链可变区的第一个译本(″a″)的cDNA和氨基酸序列。

附图17A和17B。附图17A是得自用来设计改形人21.6轻链可变区的亚组5的小鼠卡巴V_L区的109个氨基酸的长序列。附图17B是得自用来设计改形人21.6轻链可变区的亚组1的人V_L区的114个氨基酸的长序列。该序列进一步在下表10中描述。

附图18A和18B。图18A是得自用来设计改形人21.6重链可变区的亚组2c的小鼠V_H区的125个氨基酸的长共有序列。附图18R是得自用来设计改形人21.6重链可变区的亚组1的人V_H区的129个氨基酸的长共有序列。该序列进一步在下表11中描述。

发明详述

在说明本发明的方法和治疗剂之前，应理解本发明不受所述具体方法和治疗剂的限定，显然，因为其可以变化。还应理解，本文使用术语的目的仅在于描述具体实施方式，而不起限定作用，因为本发明的范围仅由所附的权利要求书来限定。

虽然提供了数值的范围，但应理解所述范围的上限和下限之间的各个中间值，除非另外说明至下限单位的十分之一，和所述范围内任何其他公开或中间的数值均属于本发明范围内。这些较小范围的上下限可以独立地包含在所述范围值的较小的、具体排除的界限内。当所述范围包括一个或两个界限时，排除了两个界限之一的那些范围也属于本发明。还考虑落入所述范围内的任意数值。

除非另外说明，本文所述的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然任何类似或等同于本文所述的方法和物质也可以用于本发明的实施或试验中，但在此描述优选方法和物质。本文提及的所有文献在此引入作为参考以公开和描述与所引用文献有关的方法和/或物质。

1.缩写和定义

根据详细的说明，采用下列缩写和定义。须注意，在此使用的单数形式″一个″和″该″包括复数形式，除非文中明确另外指出。所以，例如所谓″一种抗体″包括多种此类抗体，所谓″该剂量″包括参考一个或多个剂量及本领域技术人员已知的等效剂量，等等。

提供本文中讨论的文献仅仅涉及其在本申请申请日之前的内容。不能解释为承认本发明凭借其先于这些文献的优先发明授权，所提供文献的日前可能不同于实际出版日前，可能需要单独核实。

1.1.缩写

本文使用下列缩写。

AC 酸神经酰胺

AcOH 乙酸

ACTH 促肾上腺素皮质激素

ADEM 急性播散性脑脊髓炎

ALD 肾上腺白质应用不良(肾上腺白质营养不良)

AMN 肾上腺脊髓神经病

aq或aq. 含水

BBB 血脑屏障

bd 宽二重峰

bm 宽多重峰

Bn 苄基

Boc 叔丁氧基羰基

Boc₂O 二碳酸二叔丁酯

BOP 苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸盐

bs 宽单重峰

C 免疫球蛋白的恒定区

CACH 具有中枢神经系统低髓鞘形成的儿童期共济失调

CADASIL 具有皮质下梗塞和脑白质病(leukoencephalopathy)

的脑常染色体显性动脉病

Cbz 苄酯基

cDNA 互补脱氧核苷酸

CDR 互补决定区

CDR¹ 互补决定区1

CDR2 互补决定区2

CDR3 互补决定区3

CFA 完全弗氏佐剂

CHCl3 氯仿

CH₂Cl2 二氯甲烷

CIDP 慢性免疫脱髓鞘多神经病

CJD Creutzfeld-Jakob病

CNS 中枢神经系统

(COCl)₂ 草酰氯

COX-2 环加氧酶-2

CS Cockayne综合症

CSF 集落刺激因子

CTX 脑腱性黄瘤病

d 二重峰

DBU 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯

DCC 1，3-二环己基碳二亚胺

dd 成双的二重峰

DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶

DME 乙二醇二甲醚

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

DNA 脱氧核苷酸

dt 成双的三重峰

EAE 实验性自身免疫脑脊髓炎

EBNA2 Epstein-Barr病毒核抗原2

ECM 细胞外基质

EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

EDTA 乙二胺四乙酸盐

ELAMS 内皮粘附分子

EM 电子显微镜

Et3N 三乙胺

Et2O 乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

Eq或eq. 当量

FACS 荧光激活的细胞分选机

Fmoc N-(9-芴基甲氧基羰基)

FmocONSu N-(9-戊基甲氧基羰基)-琥珀酰胺

FR 构架区

FR¹ 构架区1

FR2 构架区2

FR3 构架区3

g 克

GA 格拉替美乙酸酯

GALOP 步态障碍，自身抗体，晚期的，发作，多神经病

GM-CSF 粒细胞单核细胞集落刺激因子

GSD Gerstmanm-Straussler疾病

h或hr 小时

H 免疫球蛋白的重链

HAMA 人抗-小鼠抗体

HBr 氢溴酸

HCl 盐酸

H-E 苏木精-曙红

hexA 氨基己糖苷酶A

HIC 疏水性作用色谱

HIG 人免疫球蛋白

HMSNIV 遗传性运动和感觉神经病IV(也称作遗传性共济失

调性多发性神经炎样病)

H2O 水

HOBT 1-羟基苯并三唑水合物

HUVEC 人脐血管内皮细胞

ICAM-1 细胞间粘附分子1

Ig 免疫球蛋白

IgG 免疫球蛋白G

IgM 免疫球蛋白M

IL 白介素

IL-1 白介素-1

IL-2 白介素-2

IL-8 白介素-8

K2CO3 碳酸钾

L 免疫球蛋白的轻链

LFA-1 淋巴细胞功能有关的抗原1-(也称作β2整联蛋白，

CD11a/CD18和α_Lβ₂)

m 多重峰

MAbs 单克隆抗体

Mac-1 α_Mβ₂整联蛋白(也称作CD11b/CD18)

MAdCAM-1 粘膜地址素细胞粘附分子

MALDI/TOFMS 基质辅助性激光解吸电离/飞行时间质谱

MBP 髓鞘质碱性蛋白

MCP-1 单核细胞趋化蛋白1

MeOH 甲醇

MES 2-(N-吗啉代)乙磺酸

mg 毫克

MgSO₄ 硫酸镁

min. 分钟

MIP-1α 巨噬细胞炎症蛋白1α

MIP-1β 巨噬细胞炎症蛋白1β

mL 毫升

MLD 异染性脑白质营养不良

mm 毫米

mM 毫克分子

mmol 毫摩尔

MOG 髓鞘质-少突神经胶质细胞糖蛋白

mp 熔点

MS 多发性硬化

N 正常

NaCl 氯化钠

Na₂CO₃ 碳酸钠

NaHCO₃ 碳酸氢钠

NaOEt 乙醇钠

NaOH 氢氧化钠

NH₄Cl 氯化铵

NMM N-甲基吗啉

NSAID 非甾族抗炎药

PCR 聚合酶链反应

PEG 聚乙二醇

Phe L-苯基丙氨酸

PKU 苯丙酮酸尿

PLP 蛋白脂质蛋白质

PMSF 苯基甲基磺酰氟

POEMS 多神经病，organomegal，y内分泌病，M-蛋白质

和皮肤改变

Pro L-脯氨酸

PRP 朊病毒有关的蛋白质

psi 磅/平方英寸

PtO₂ 氧化铂

q 四重峰

quint. 五重峰

RANTES 活化后可调节的、正常T-细胞表达并分泌的趋化

因子(也称作小诱导细胞因子A5)

RNA 核苷酸

rt 室温

RT-PCR 逆转录聚合酶链反应

s 单峰

SAMIs 选择性粘附分子抑制剂

sat或sat. 饱和的

scFv 单链Fv片段

SCR 酸性媒染-R-花青

SDS 十二烷基硫酸钠

SDS-PAGE 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳

SP-MS 继发性进行性多发性硬化

t 三重峰

t-BuOH 叔丁醇

TFA 三氟乙酸

TGF-β 肿瘤生长因子β

THF 氢呋喃

TLC或tlc 薄层色谱

TNF 肿瘤坏死因子

TNF-α 肿瘤坏死因子α

TNF-β 肿瘤坏死因子β

Ts 甲苯磺酰基

TsCl 搅拌磺酰氯

TsOH 甲苯磺酸

UV 紫外

VCAM-1 血管细胞粘附分子1

VH 可变结构域的重链

VL 可变结构域的轻链

VLA-4 极迟抗原4(也称作α-4β-1)

μL 微升

_ 苯基

1.2.定义

有关20个天然氨基酸的所需习惯用法(IMMUNOLOGY-ASYNTHESIS(2nded.，E.S.Golub Ia.R.Gren，eds.，Sinauer Associates，Sunderland，Mass.，1991))。20个普通氨基酸、非天然氨基酸例如α，α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其他非常规氨基酸的立体异构体(例如，D-氨基酸)也可以成为本发明多肽的适当组成。非常规氨基酸的实例包括：4-羟基脯氨酸，γ-羧基谷氨酸，ε-N，N，N-三甲基赖氨酸，ε-N-乙酰基赖氨酸，O-磷酸丝氨酸，N-乙酰基丝氨酸，N-甲酰基蛋氨酸，3-甲基组氨酸，5-羟基赖氨酸，ω-N-甲基精氨酸，和其他类似的氨基酸和亚氨酸(例如，4-羟基脯氨酸)。此外，氨基酸可以通过糖基化、磷酸化等进行改性。

在本发明使用的多肽符号中，根据标准用法和常规，左手方向为氨基末端方向且右手方向为羧基末端方向。同样地，除非另外说明，单链聚多核苷酸序列的左手端为5′端；双链多核苷酸序列的左手方向是指5′方向。初生态RNA转录本的自5′向3′增加的方向是指转录方向，DNA链上具有与RNA相同的序列且5′对应RNA转录本的5′端的序列区称作″上游序列″；DNA链上具有与RNA相同的序列且3′对应RNA转录本的3′端的序列区称作″下游序列″。

短语″多核苷酸序列″是指自5′向3′端读取的脱氧核苷酸或核苷酸碱基的单或双链。包括自复制质粒、DNA或RNA的传染性聚合物和无功能DNA或RNA。

下列术语用于描述两个或多个多核苷酸之间的序列关系：″参照序列″，″比较窗″，″序列同一性″，″序列同一性的百分比″，和″实质同一性″。″参照序列″是用作序列比较基础的规定序列；参照序列可以是较大序列的一个子集，例如，是序列目录中给出的全长DNA或基因序列的一个节段，例如附图11或12的多核苷酸序列，或可以含有完全DNA或基因序列。通常，参照序列的长度为至少20个核苷酸，该长度经常为至少25核苷酸，并且该长度经常为至少50核苷酸。因为两个多核苷酸可以各自(1)在两个多核苷酸之间含有相似的序列(即，完全多核苷酸序列的一部分)，和(2)可以进一步在两个多核苷酸之间含有趋异的序列，所以，一般通过比较两个多核苷酸对于“比较窗”的序列来识别和比较局部区域的序列相似性来实现两个(或多个)多核苷酸之间的序列比较。在此使用的″比较窗″是指至少20个相邻核苷酸位置的概念节段，其中多核苷酸序列可以与至少20个相邻核苷酸的参照序列进行比较，并且比较窗中一部分的多核苷酸序列在两条序列的最佳顺序中与参照序列(它不包括增加或缺失)相比可以包括20％或更少的增加或缺失(即，缺口)。相对比较窗的序列最佳顺序可以通过下列方法来进行：Smith & 水man，Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同源性算法，或者通过Needleman &Wunsch，J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源性排列算法，通过Pearson &Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)85：2444(1988)的相似性寻找方法(其全文在此引入作为参考)，通过这些算法的计算机化算法(GAP，BESTFIT，FASTA，和TFASTA在Wisconsin Genetics Software PackageRelease 7.0，Genetics Computer Group，575Science Dr.，Mad异n，Wis.中)，或通过检验法，并且选择出通过不同方法产生的最佳顺序(即，得到与比较窗最高百分比的序列相似性)。术语″序列同一性″是指两个多核苷酸序列在比较窗上是相同的(即，基于核苷酸至核苷酸的基础)。术语″序列同一性的百分比″的计算是通过比较两条最佳顺序序列的比较窗，测定两条序列的核酸碱基(例如，A，T，C，G，U，或I)相同的位置数目，从而得到匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中位置的总数(即，比较窗的大小)，并且将结果乘以100得到序列同一性的百分比。在此使用的术语″实质同一性″代表多核苷酸序列的特性，其中该多核苷酸含有与对照序列相比在至少20个核苷酸位置的比较窗上具有至少85％的序列同一性，优选至少90-95％的序列同一性，更通常为至少99％序列同一性的序列，经常相对于至少25-50个核苷酸的比较窗而言，其中序列同一性的百分比的计算是通过比较参照序列和多核苷酸序列，该多核苷酸序列可能包括缺失或增加，这种缺少或增加共占该参照序列的比较窗的20％或更少。参照序列可以是较大序列的子集。

在用于多肽时，术语″序列同一性″是指在相应位置共享相同氨基酸的肽。术语″序列相似性″是指在相应位置具有相同或相似氨基酸的肽(即，保守取代)。术语″实质同一性″是指，当最佳排列时，例如通过利用缺省缺口重量编程GAP或BESTFIT，两条肽序列共享至少80％序列同一性，优选至少90％序列同一性，更优选至少95％序列同一性或更高(例如，99％序列同一性)。优选地，不相同的残基位置是被保守氨基酸取代所区别。术语″实质相似性″是指两条肽序列共享响应百分比的序列相似性。

在此使用的术语″是指相似性″是指任意多肽，其序列存在变更致使该多肽中的一个或多个氨基酸被功能上等同的氨基酸取代，由此产生不影响或者较小影响该多肽的结合性质的变化。例如，序列中一个或多个氨基酸残基可以被相似极性或相似大小的另一种氨基酸取代。

术语″基本上纯的″是指一种物质种类是占优势存在的物种(即，基于摩尔计，它比组合物中其他各物种更加丰富)，并且优选所述的基本上纯的部分是指一种其中该物种占全部现存大分子物种的至少约50％的组合物(基于摩尔计)。通常，基本上纯的组合物应占该组合物中现存全部大分子物种的约80-90％以上。最优选，物种被提纯至基本同质(利用常规检测法检测不出该组合物质存在污染物)，其中该组合物基本上由一种大分子物种组成。

出于将氨基酸取代划分为保守或非保守的目的，将氨基酸如下分组：组I(疏水性侧链)：正亮氨酸，met，ala，val，leu，ile；组II(中性亲水性侧链)：cys，ser，thr；组III(酸性侧链)：asp，glu；组IV(碱性侧链)：asn，gln，his，lys，arg；组V(残基影响链取向)：gly，pro；和组VI(芳族侧链)：trp，tyr，phe。保守取代包括同类氨基酸之间的取代。非保守取代包括上述一类氨基酸的一员对另一类氨基酸成员的交换。

免疫球蛋白的成熟重链和轻链的可变区的被分别称作Hx和Lxx，其中″x″是按照Kabat等，SEQUENCES OF PROTEINS OFIMMUNOLOGICAL INTEREST(National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987)和(1991))(此后总称为″Kabat″，其全文引入作为参考)的方案规定该氨基酸位置的数字。Kabat列出各亚类的抗体的许多氨基酸序列，并且列出该亚类中各残基位置正最常出现的氨基酸。Kabat采用一种将余数赋值给所列序列中各氨基酸的方法，并且这种余数赋值的方法已经成为该领域的标准。Kabat的方案可扩展到不属于概述中的其他抗体，这是通过将所述的抗体比对Kabat中的共有序列之一。Kabat编号梯形的使用很容易鉴定不同抗体中等位的氨基酸。例如，处于人抗体的L50位的氨基酸占据小鼠抗体的氨基酸位L50的等效位置。

术语″试剂″或″药物″用于代表结合配体受体的生物活性分子。例如，抗体或其与VLA-4受体或VCAM-1发生免疫反应的片段可以用于在对象中以统计学意义的量促进髓鞘再生和/或减轻麻痹。可以结合细胞表面受体的肽，或拟肽物或有关化合物，也可以考虑，并且可以通过本领域已知方法合成制备。其他与所述VLA-4受体的试剂或本领域技术人员熟知的也可以加以考虑。

在此使用的″髓鞘再生药物″是指任何在对象中以统计学意义的量促进髓鞘再生和/或减轻麻痹的药物。优选地，这样的药物包括免疫球蛋白(例如，抗体，抗体片段，和重组生成的抗体或片段)，多肽(例如，整联蛋白的配体蛋白的可溶形式)和小分子，当以有效量施用时其抑制患者中的脱髓鞘和/或促进髓鞘再生。当给患者施用有效量时这也导致麻痹的减轻。这些药物可以选自抗-α4整联蛋白药物(优选抗-α₄β₁拮抗剂)和抗-VCAM-1药物。然而，根据本发明，所述的抗-α4整联蛋白和抗-VCAM-1药物只包括那些当以有效量给药时抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生和/或减轻麻痹的药物。

在此使用的术语″抗-α-4整联蛋白药物″是指特异性结合整联蛋白的任何药物，其含有α-4亚基冰抑制所述整联蛋白的活性。术语″整联蛋白拮抗剂″包括任何抑制含α-4亚基整联蛋白与整联蛋白配体和/或受体结合的药物。优选地，该整联蛋白拮抗剂抑制所述α-4β-1二聚体与其cognate配体结合。此类拮抗剂可以包括抗-整联蛋白抗体或含抗体同系物的蛋白质，以及其他分子例如整联蛋白的配体蛋白的可溶形式。含α-4亚基整联蛋白的配体蛋白的可溶形式包括可溶的VCAM-1，VCAM-1融合蛋白，或双功能VCAM-1/Ig融合蛋白。例如，整联蛋白配体或其片段的可溶形式可以结合整联蛋白一起给药，并且优选竞争细胞上的整联蛋白结合位点，由此产生类似于施用拮抗剂例如抗-整联蛋白(例如，VLA-4)抗体的效果。特别是，结合配体但不引发整联蛋白依赖性信号的可溶性整联蛋白突变体也属于本发明的范围内。

所谓″natalizumab″或″Antegren^_″是指抗美国专利5,840,299和6,033,665中一般性描述的VLA-4的人源化抗体，其全文在此引入作为参考。本发明还考虑其他VLA-4特异性的抗体。此类髓鞘再生抗体和免疫球蛋白包括但不限于美国专利6,602,503和6,551,593中所述的那些免疫球蛋白，公开的美国申请号20020197233(Relton等)和本文中所述的那些免疫球蛋白。

在此使用的术语″功效″在长期给药方案中是指特定处理方案的有效性。功效可以基于疾病的过程对于本发明药物产生反应的改变来测定。例如，在MS的治疗中，功效可以通过复发-缓解性MS中复发频率，和利用方法如MRI来检测中枢神经系统中是否存在新病灶来测定。

在此使用的术语″成功″在长期治疗方案中是指特定治疗方案的有效性。这包括功效的平衡、毒性(例如，副作用和制剂或剂量单位的患者耐受性)，患者依从性，等等。对于长时间给药方案，除了″成功的″必须平衡患者意愿和功效的不同方面以得到最良好的患者结果。

在此使用的术语″特异性结合″或″特异结合″是指特异结合对的一员对不是其特异结合配偶体的分子不具有显著结合作用的情形(例如，对其结合配偶体的亲和力为约1000x或更高)。在本发明中，小化合物，例如N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯，不是α-4整联蛋白或含α-4整联蛋白的受体的其他多肽没有显著的结合作用。例如，本发明方法中使用的结合α-4整联蛋白且结合亲和力大于0.3nM的小化合物被称作特异性结合α-4整联蛋白。

在此使用的术语″引起免疫反应″和″引发宿主免疫反应″是指当将本发明的药物引入到对象中该对象对含α-4整联蛋白的受体产生免疫应答。对象中的免疫应当可以通过与α-4整联蛋白受体的血清反应性来描述特征，该反应性是未处理对象的至少2倍，更优选是未处理对象的反应性的3倍，并且特别优选是未处理对象的反应性的至少4倍，并且利用约1∶100的血清稀释度测定血清免疫反应性。

术语″药学可接受载体或赋形剂″是指构成制剂的一部分且仅仅起载体作用的化合物，即其本身不具有生物活性。药学可接受载体或赋形剂一般安全，无毒且既无生物作用也无不利影响。说明书和权利要求书中使用的药学可接受载体或赋形剂包括一种或一种以上的此类载体。

在此使用的术语″治疗″和″处理″等一般是指获得所需药理和生理效果。更具体地，本文所述的用于治疗患有脱髓鞘疾病或病症的试剂具有一种或多种下列作用：(1)防止脱髓鞘；(2)抑制脱髓鞘；(3)促进髓鞘再生；(4)减慢阻断麻痹；和(5)减轻/逆转麻痹。所以，所述的作用可以是预防性的，也就是预防或部分预防所述疾病、症状或其病症和/或可以是治疗性的，也就是部分或完全治愈所述疾病、病症、、症状或依赖于被治疗病症或疾病的疾病导致的副作用。在此使用的术语″处理″覆盖了哺乳动物，特别是人体中疾病的任何治疗，和包括：(a)在可能有患病趋势但还未被诊断患病的对象中预防该疾病发生；(b)抑制该疾病，即，停止其_化；或(c)减轻该疾病，即，引起该疾病和/或其症状或病症的消退。本发明涉及治疗患有与病理性炎症有关的疾病的患者。本发明涉及预防、抑制或减轻长期病理性炎症和脱髓鞘导致的副作用和/或由长期对生物系统中存在的不适当炎症的生理反应引起的副作用。

所谓″治疗有效量″是指本发明公开的药物、试剂或试剂的联合在施用给哺乳动物时足以以统计学意义亮促进哺乳动物细胞的髓鞘再生和/或减轻动物中的麻痹的量。

所谓术语″髓鞘再生有效量”是指药物、试剂或组合物有效抑制脱髓鞘和/或促进对象中的髓鞘再生和/或减轻麻痹的量。该”髓鞘再生有效量″应根据化合物或组合物，被治疗的具体疾病及其严重性，被治疗哺乳动物的年龄、重量等而变化。

所谓″长期给药″是指本发明的药物、试剂或联合疗法以一定量和周期性给药，获得下列一种或多种效果：(1)在患有脱髓鞘疾病或病症的对象中减轻麻痹，(2)停止患有脱髓鞘疾病或病症中的麻痹的进程；(3)促进患有脱髓鞘疾病或病症的对象中的髓鞘再生；和(4)防止患有脱髓鞘疾病或病症的对象中的脱髓鞘。给药优选每周二次，每周一次，每月一次，或者每隔一月一次，但可以每天给药。更优选该治疗每周一次或每月一次并且给药长达6个月至数年或患者的余生，这依赖于被治疗的疾病或病症。

其他与式I，IA，IB，IC，II，IIA，和IIB的化合物有关的定义如本文定义。

2.发明的一般方面

本发明是基于长期施用新兴种类的、称作选择性粘附分子抑制剂(SAMIs)的新化合物可以促进髓鞘再生的方式适当控制炎症反应的惊奇结果。现有抑制剂无法提供对炎症反应和疾病持续发展的控制。本发明人证实的是，一类的小化合物，优选例举的式I和II的化合物，优选式IB、IC和IIB的化合物，可有效治疗此类病理性炎症。这些小化合物可以采用长期给药方案或短期给药方案施用。然而，该长期给药方案优选优选能够维持对病理性炎症的抑制。所以，为了实现本发明的一些更加重要的优点，髓鞘再生药物的水平需要保持多月或数年。

一般地说，本发明的方法不包括任何特定的给药方式，因为给药方式依赖于活性剂的形式和为施用该活性剂开发的制剂。给药的方式包括口服，非肠道(例如，皮下，硬膜下，静脉内，肌肉内，鞘内，腹膜内，脑内，动脉内，或病灶内途径的给药)，局部，定位(例如，外科使用或外科栓剂)，直肠，和肺(例如，气雾剂，吸入，或散剂)。优选地，给药的途径为非肠道途径。给药的途径基于施用的组合物(例如，静脉内施用的免疫球蛋白与口服施用的小化合物)，靶向组织(例如，鞘内靶向给药到脊柱损伤的位点)，等等，本领域普通技术理解。

另外，髓鞘再生药物可以与其他化合物或组合物联合用于治疗、改善或减轻与脱髓鞘病症或疾病有关的症状。此外，本发明公开的化合物可以单独给药或者与其他药物联合给药，例如其他髓鞘再生药物，包括抗体和其免疫活性片段(例如，natalizumab)。当联合给药时，小化合物可以在和这些制剂或组合物在同一制剂中给药，或者在单独的制剂中给药。当联合给药时，该髓鞘再生药物抗体一般在和所述小化合物髓鞘再生药物、其他化合物和组合物分开的制剂中给药。当联合给药时，所述的髓鞘再生药物可以在其他化合物和组合物之前、之后或并行给药以治疗、改善或减轻症状。本发明的一般概念涉及将相对恒定量的活性剂在数月或数年期间引入到患者的循环系统中。髓鞘再生药物的这种长期给药是一种能够适当控制病理性炎症、使其在一段时期内保持恒定水平的给药。通过使活性剂的治疗水平保持一段时期，患者中的病理性炎症可以得到长时间抑制。

在非常特定的意义上，本发明涉及使人体患者中含α-4整联蛋白二聚体的受体饱和水平达到并保持在约65％-100％的范围内，更优选75％- 100％，并且特别更优选在80-100％。这些受体饱和水平长时间维持在这样的水平(例如，在6个月或类似的期间内)，从而持续抑制病理性炎症。

通常，该髓鞘再生药物可以选自特异性结合α-4-整联蛋白的药物或特异性结合α-4-整联蛋白。例如，本发明的方法中使用的小化合物可以选自对α-4-整联蛋白具有0.3-3nM的结合亲和力的化合物。另外，也可以选择抗体例如natalizumab，其对α-4-整联蛋白具有约0.2-约0.4nM的结合亲和力。

在本发明的另一方面，本发明所述的化合物和组合物可以在例如多发性硬化的情况下，用于抑制免疫细胞自血液向中枢神经系统迁移，或者向导致炎症诱发的髓鞘质破坏的区域迁移。优选地，这些药物或试剂以抑制脱髓鞘且进一步可促进髓鞘再生的方式抑制免疫细胞迁移。所述的药物或试剂还可以预防先天性代谢障碍中中枢神经系统的脱髓鞘并促进髓鞘再生，先天性代谢障碍中浸润的免疫细胞影响髓鞘质鞘的发育，主要是在CNS中。该试剂还优选在施用给患有由脱髓鞘疾病或病症诱发的麻痹的对象时减轻麻痹。

3.治疗的适应症

通过本发明公开的组合物、化合物和方法治疗的炎性疾病一般包括与脱髓鞘有关的病症。在组织学上，髓鞘质异常或者或是脱髓鞘，或是髓鞘形成障碍。脱髓鞘是指髓鞘质的破坏。髓鞘形成障碍是指由于少突神经胶质细胞的功能障碍造成髓鞘质的形成或维持缺损。优选地，本发明所述的组合物和方法被考虑用于治疗与脱髓鞘有关的疾病和病症且协助髓鞘再生。可被治疗的其他疾病或病症包括脑膜炎，脑炎，以及脊柱损伤和炎症反应后果造成的诱发脱髓鞘的病症。本发明所述的化合物、组合物和方法不涉及其中存在例如导致不适当髓鞘质形成(例如髓鞘形成障碍)的遗传缺陷的疾病和病症。

本发明公开的组合物、化合物和鸡尾酒混合物被考虑应用于活资料与脱髓鞘有关的病症和疾病。涉及脱髓鞘的疾病和病症包括，但不限于，多发性硬化，先天性代谢障碍(例如，苯基酮尿症，Tay-Sachs病，Niemann-Pick病，Gaucher氏病，Hurler氏综合症，Krabbe氏病和其他脑白质营养不良)，具有遗传髓鞘形成的神经病(例如，Guillai Barre，慢性免疫脱髓鞘多神经病(CIDP)，多灶性CIDP，抗-MAG综合征，GALOP综合征，抗-硫脂抗体综合征，抗-GM2抗体综合征，POEMS综合征，神经束膜炎，IgM抗-GD1b抗体综合征)，药物有关的脱髓鞘(例如，氯喹、FK506、心舒宁、普鲁卡因酰胺和齐美利定给药引起的)，其他遗传性脱髓鞘病症(例如，碳水化合物缺陷性糖蛋白，Cockayne氏综合征，先天性髓鞘形成低下，先天性肌肉营养不良，Farber氏疾病，Marinesco-Sjogren综合征，异染性脑白质营养不良，Pelizaeus-Merzbacher病，雷弗素姆氏病，朊病毒有关的病症，和Salla病)和其他脱髓鞘病症(例如，脑膜炎，脑炎或脊柱损伤)或疾病。

有许多不同的疾病模型可以用来体内研究这些疾病。例如，动物模型包括但不限于：

表1

3.1.多发性硬化

最常见的脱髓鞘疾病是多发性硬化，单向许多其他代谢和炎症障碍导致缺损或异常的髓鞘形成。MS是慢性神经病，它出现在成年早期且在大多数情况中发展为严重劳动能力丧失。仅在美国就有约350,000例的MS。除创伤外，MS是中年早期最常见的神经性劳动能力丧失的病因。

MS的起因仍然有待确定。MS的特征在于慢性炎症，脱髓鞘和神经胶质增生(瘢痕形成)。脱髓鞘可对轴索传导产生负作用或正作用。正传导异常包括减慢的轴索传导，在高频而不是低频段的脉冲存在下出现的可变传导阻断或完全传导阻断。正传导异常包括异位脉冲的产生，自发地或机械应激后和脱髓鞘外显子之间的异常串扰。

已经观察到T细胞反应性拮抗髓鞘质蛋白，或者髓鞘质碱性蛋白(MBP)或髓鞘质蛋白脂质蛋白质(PLP)在实验性变应性脑脊髓炎中介导CNS炎症实验性变应性脑脊髓炎。还观察到患者具有升高水平的CNS免疫球蛋白(Ig)。另一可能是在MS中观察到的某些组织损伤是由活化T细胞、巨噬细胞或星形胶质细胞的细胞因子产物介导的。

如今，80％被诊断患有MS的患者在疾病发作后幸存20年。控制MS的疗法包括(1)以改变所述疾病过程为目标的治疗，包括急性_化的治疗和直接长期抑制该疾病；(2)对MS症状的治疗；(3)医学并发症的预防和治疗，和(4)对继发性个人和社会问题的掌控。

MS的发作可能是显著的，或者是温和的，从而不使患者去寻求医学注意。最常见的症状包括一个或多个肢体的虚弱，由视神经炎引起的视力模糊，感觉失调，复视和共济失调。疾病的过程可以分为三个常规种类：(1)复发性MS，(2)慢性进行性MS，和(3)非活动性MS。复发性MS的特征在于神经机能障碍的复发性发作。MS发作通常随着数天至数周的时间发展且随后可完全、部分或无法恢复。发作后的恢复一般发生在症状的高峰后的数周至数约内，尽管某些恢复很少可持续2或更多年。

慢性进行性MS逐渐造成进行性_化并且没有稳定或缓解的时期。在患有复发性MS病史的患者中发展为这种形式，虽然只占患者的20％，但不会再回到复发。急性复发也可以出现在进行性过程中。

第三种形式是非活动性MS。非活动性MS的特征在于可变数值的固定神经缺损。大多数患有非活动性MS的患者存在复发性MS的早期病史。

疾病过程还依赖于患者的年龄。例如，良好的预后因素包括早期发作(不包括儿童期)，复发过程和发作后5年丧失残存的劳动能力。相反地，不良预后与发作的高龄(即，40岁或更年长)和进行性过程有关。

这些变量是相互依赖的，因为慢性进行性MS倾向于在复发性MS的高龄时开始。慢性进行性MS导致的劳动能力丧失通常是由于患者中进行性截瘫或四肢麻痹(麻痹)。在本发明的一个方面，优选在患者处于缓解阶段而不是该疾病的复发介导时治疗该患者。

促肾上腺皮质激素或口服皮质类固醇(例如，口服强的松或静脉内甲基强的松龙)的短期使用只是用于治疗患有急性_化的MS的患者的特定治疗措施。

对MS的较新疗法包括用干扰素β-1b，干扰素β-1a，和Copaxone^_(以前称作共聚物1)治疗。这三种药物已经被证实可明显降低该疾病的复发率。这些药物是自我肌肉内或皮下给药的。然而，现有治疗用药程式无一抑制脱髓鞘，能够单独促进或允许自发性髓鞘再生或减轻麻痹。本发明的一个方面考虑用本发明所述的药物单独或与其他标准治疗用药程式联合治疗MS。

3.2.先天性代谢障碍

先天性代谢障碍包括苯基酮尿症(PKU)和其他氨基酸尿，Tay-Sachs疾病，Niemann-Pick疾病，Gaucher氏疾病，Hurler氏综合征，Krabbe氏疾病和其他影响鞘发育的脑白质营养不良，下文着将更详细地加以描述。

PKU是由苯基丙氨酸羟基酶缺乏引起的新陈代谢的遗传错误。这种酶的损失导致精神发育迟缓，器官损伤，异常体位并且在母系PKU的情况中，可能严重危害妊娠。已经在小鼠中发现了研究PKU的模型。优选被鉴定患有PKU的婴儿持续采用无苯丙氨酸或低苯丙氨酸饮食。本发明的一个方面是将此类饮食与本发明公开的化合物和组合物组合用于预防脱髓鞘和髓鞘再生化PKU损伤的细胞。

经典Tay-Sachs疾病发生在6月龄的对象中且实际上在5岁时导致该对象死亡。该疾病由于缺乏氨基己糖苷酶A(hex A)，它时降解脑和神经细胞中某些脂肪物质所必需的。这些物种在该酶缺乏下蓄积丙造成对神经细胞的破坏。hex A酶缺乏的另一形式发生在生命晚期且称作hex A缺乏的不成熟、慢性和成年发作形式。症状磷酸盐经典Tay-Sachs疾病的特征症状。这也是该酶缺乏的成年发作形式。目前没有对这种疾病/缺损的治愈或治疗，只能对胎儿进行该疾病的子宫内测试的预防性措施。所以，本发明公开的化合物和组合物可以有效改善或预防细胞的破坏。

Niemann-Pick疾病分为三类：急性婴儿型，B型很少见的、慢性非神经型，并且C型在生物活性和遗传上上该疾病的不同形式。在正常个体中，细胞胆固醇进入到脂质体内进行加工，随后将其释放。从患有Niemann-Pick的对象采集的细胞已被证实欠缺从脂质体释放胆固醇。这导致胆固醇在脂质体内的过度建成，带来加工错误。发现NPC1具有类似于其他蛋白质的甾醇感觉区，这提示了它甾条件胆固醇输送量中发挥作用。对于A和C型形式的Neumann-Pick没有确定成功的疗法。对于C型，推荐患者采用低胆固醇饮食。所以，本发明公开的化合物和组合物可以有效改善或预防细胞的破坏。

Gaucher氏疾病是一种由基因突变引起的遗传性疾病。通常，该基因负责机体降解脂肪、葡糖脑苷脂所需的葡糖脑苷脂酶。在患有Gaucher氏疾病的患者中，基团不能适当产生这种酶且无法降解脂肪。如同Tay-Sachs疾病，Gaucher氏疾病被认为在来自东欧(Ashkenazi)的犹太人的后裔中更为常见，尽管任何人种的个体都可以感染这种病。在Ashkenazi犹太种群中，Gaucher氏疾病是最常见的遗传疾病，并且发病率为每450人中有1人发病。在一般性公众中，Gaucher氏疾病在100,000人中感染约1人。

在1991年，酶代替疗法成为Gaucher氏疾病的第一种有效疗法。该疗法由静脉内施用改性形式的葡糖脑苷脂酶组成。可以考虑本发明公开的组合物和化合物可以单独使用或更优选与葡糖脑苷脂酶联合给药来治疗感染对象中的该疾病。

Hurler氏综合征，也称作I型粘多糖代谢病，是一类重叠疾病。这些遗传性疾病通常都存在成纤维细胞中粘多糖蓄积。该疾病是遗传学上可分辩的。成纤维细胞和骨髓的移植似乎没有帮助，因此本发明公开的化合物和组合物用于改善疾病的严重性和所需的进程。本发明公开的化合物和组合物可以施用给对象以改善疾病的进程和/或严重性。

Krabbe氏疾病(也称作球样细胞脑白质营养不良)是一种由半乳糖苷神经酰胺酶(或半乳糖脑苷脂酶)缺乏导致的常染色体隐性疾病，该酶是一种分解代谢髓鞘质的一种注意脂质组分的溶酶体酶。据估计在法国其发病率为1∶150,000新生儿。该疾病造成中枢和外周神经系统的脱髓鞘。发作一般出现在生命的第一个5粘期间且该疾病迅速发展，但少年、青年和成人的发作形式也已有报道，并且进程的速率更加易变。诊断是基于酶试验建立的(半乳糖苷神经酰胺酶缺乏)。有数种天然动物模型(小鼠，狗，猴子)。Krabbe氏疾病，如同所有的脑白质营养不良，没有已知的治愈或有效治疗。本发明的一个实施方式是施用本发明公开的组合物和化合物来治疗或改善Krabbe氏疾病和其他脑白质营养不良。

脑白质营养不良是一组影响脑、脊柱和外周神经的遗传学决定的进行性障碍。它们包括肾上腺脑白质营养不良(ALD)，肾上腺骨髓神经病(adrenomyelo神经病)(AMN)，Aicardi-Goutiers综合征，Alexander氏病，CACH(即，儿童共济失调伴随神经系统髓鞘形成低下或消失性白质病)，CADASIL(即，脑常染色体显性动脉病伴随皮质下梗塞和脑白质病(leukoencephalopathy))，Canavan疾病(海绵体变性)，脑腱性黄瘤病(CTX)，Krabbe氏疾病(如上所述)，异染性白质营养不良(MLD)，新生儿肾上腺白质营养不良，卵巢白质营养不良综合征，Pelizaeus-Merzbacher疾病(X-有关的痉挛性截瘫)，Refsum氏疾病，van der Knaap综合征(空泡性脑白质营养不良伴随皮质下囊肿)和Zellweger综合征。无一上述疾病能够使其独立治愈的有效治疗。所以，需要治疗或减轻这些疾病的症状的措施，例如通过使用本发明公开的组合物和化合物。

3.3.具有异常髓鞘形成的神经病

患者中存在多种导致脱髓鞘的慢性免疫多神经病。疾病的发作年龄在不同条件下有所不同。对于这些疾病现有标准疗法并且可以与本发明公开的组合物和化合物联合。或者，本发明公开的组合物和化合物可以单独使用。现有的标准疗法包括下列：

表2

神经病	临床特征	治疗
			慢性免疫性脱髓鞘多神经病(CIDP)	在1-80岁期间发作特征为虚弱，感觉丧失，和神经肥大	T-细胞免疫抑制采用强的松，环孢菌素A或甲氨蝶呤，HIG，更换血浆
多灶性CIDP	28-58期间岁发作且特征在于不对称性虚弱，感觉丧失伴随缓慢进行的或复发-缓解的过程	采用强的松的T细胞免疫抑制人免疫球蛋白(HIG)
			多灶性运动神经病(MMN)	25-70岁期间发作且男性是女性的2倍。特征包括虚弱，肌肉萎缩，肌纤维自发性收缩和在1-30岁间发展的痛性痉挛	HIG B细胞免疫抑制并且更换血浆环磷酰胺 Rituxan
具有IgM结合髓鞘质相关性糖蛋白的神经病	通常在50岁时发作并且特征在于感觉丧失 (100％)，虚弱，增益障碍，缓慢进行的震颤，	B细胞免疫抑制更换血浆环孢菌素 Rituxan α-干扰素克拉立平或氟达拉滨
			GALOP综合征(步态失调，自身抗体，晚期的，发作，多神经病)	步态失调伴随多神经病	HIG 更换血浆环磷酰胺
POEMS综合征(多神经病，Organomegaly，内分泌病，M-蛋白和皮肤改变)，也称作Grow-Fukase 综合征和Takatsuki病	在27-80岁期间发作伴随虚弱，感觉丧失，腱反射减小或丧失以和其他特征。	用放射治疗骨硬化病灶。用化疗治疗扩散性病灶(美法仑和强的松)

3.4.药物和放射诱发的脱髓鞘

某些药物和放射可以在对象中引起脱髓鞘。导致脱髓鞘的药物包括但不限于氯喹，FK506，心舒宁，普鲁卡因酰胺，和齐美利定。

放射也可以引起脱髓鞘。由于放射造成的中枢神经系统(CNS)毒性被确信为由下列引起(1)损害血管结构，(2)少突神经胶质细胞-2星形细胞祖先和成熟少突神经胶质细胞的缺失，(3)海马、小脑和皮质中神经干细胞群的缺失，和细胞因子表达的扩散性变化。大多数损害是由某些癌症治疗期间采用的放疗造成的。参见Belka等，2001 Br.J.Cancer 85：1233-9的综述。然而，放射接触也可以是宇航员以及暴露在放射性物种下的活动的一个问题(Hopewell，1994 Adv.Space Res.14：433-42)。

接受药物或者偶然或事故性暴露在放射下的患者可以通过本发明公开的一种化合物或组合物的给药而受益，从而预防脱髓鞘或促进髓鞘再生。

3.5.涉及脱髓鞘的遗传性病症

其他导致脱髓鞘的遗传性综合征/疾病包括Cockayne氏综合征，先天性髓鞘形成低下，Farber氏病，异染性脑白质营养不良，Peliszaeus-Merzbacher疾病，Refsum，朊病毒有关的病症和Salla疾病。

Cockayne氏综合征(CS)是一种罕见的遗传障碍，患该病的人对阳光敏感，身材矮小且具有早老的外表。在典型类型的Cockayne氏综合征(I型)中，症状是进行性的且通常在1岁后变得明显。早期发作或先天形式的Cockayne氏综合征(II型)在初生时就清晰可见。有趣的是，与其他DNA修复性疾病不同，Cockayne氏综合征与癌症无关。CS是一种多系统疾病，它引起躯体和脑部的深度生长衰退以及进行性_病质，视网膜、耳蜗和神经变性，和脑白质营养不良和脱髓鞘神经病但不加重癌症。在暴露在UV(例如，日光)后，患有Cockayne氏综合征的对象可不再进行转录偶合的修复。目前已经鉴定出在Cockayne氏综合征，CSA和CSB中缺乏两种基因。在染色体5上发现了CSA基因。这两种基因编码与转录机构的组分和DNA修复蛋白质相互反应的蛋白质。

目前，没有确认对于患有这种疾病的患者来说治愈或有效的疗法。所以，本发明的一个方面是用本发明公开的化合物和组合物制备这种疾病的疗法。

先天性髓鞘形成低下有多种名称，包括先天性髓鞘形成障碍性神经病，先天性髓鞘形成低下多神经病，先天性髓鞘形成低下(Onion Bulb)多神经病，先天性髓鞘形成低下神经病，髓鞘形成低下引起的先天性神经病，髓鞘形成低下性神经病和CHN。在人体最常见的遗传疾病中，遗传性外周神经病是一种复杂、临床上和遗传上异质类的障碍，它造成外周神经的进行性变质。先天性髓鞘形成低下是一类疾病中的一员。该类疾病包括伴随压迫性麻痹倾向的遗传性神经病，Charcot-Marie-Tooth疾病，Dejerine-Sottas综合征，和先天性髓鞘形成低下神经病。对于任何此类疾病还没有已知的治愈和有效疗法。

Farber氏病具有多个名称，包括：Farber脂肪肉芽肿病，神经酰胺酶缺乏，酸性神经酰胺酶缺乏，AC缺乏，N-酰基鞘氨醇脱酰基酶缺乏，和N-酰基鞘氨醇氨基水解酶。正如某些名称所揭示的，该疾病由于酸性神经酰胺酶的缺乏而发生(也称作N-酰基鞘氨醇氨基水解酶，ASAH)。该酶的缺失导致神经元和神经胶质细胞肿非磺化选项粘多糖的蓄积。患有该病的患者通常在2岁之前死亡。

异染性脑白质营养不良(MLD)是一种芳基硫酸酯酶A的缺乏引起的遗传疾病。该是称作脑白质应用不良遗传性疾病组的一员，此类疾病影响髓鞘质鞘的生长。存在三种形式的MLD：婴儿晚期、少年和成年型。在最常见的婴儿晚期型中，症状的发作是自6个月至2岁之间开始。婴儿在出生时通常是健康的，但实际上预先丧失了增益能力(gainedabilities)。症状包括张力减退(低肌肉紧张度)，语言异常，精神能力的丧失，视觉缺失，僵化(即，失控的肌肉紧度)，大笑，减弱的吞咽，麻痹，和痴呆。少年型的症状始于4-14岁，并且包括减弱的学校表现，精神衰退，共济失调，癫痫发作，和痴呆。在成年型中，自16岁后开始的症状可以包括减弱的专心，抑郁，精神病性障碍，共济失调，震颤，和痴呆。癫痫发作可以出现在成年型中，但在其他形式中少见。在所有三种形式中，精神衰退通常是第一指征。

Peliszaeus-Merzbacher疾病(也称作产期嗜苏丹脑白质营养不良)是一种X-有关的遗传疾病，它引起蛋白脂质蛋白质的异常。该异常造成婴儿死亡，通常在1岁之前。对于该疾病没有已知的治疗或治愈方法。

Refsum疾病(也称作植烷酸氧化酶缺乏，遗传性共济失调型多发性神经炎样病或遗传性运动和感觉神经病IV，HMSN IV)是有基因的突变造成的，该基因编码植烷酰基-CoA羟化酶(PAHX或PHYH)。主要临床特征是色素沉着性视网膜炎(retinitis pigmentosa)，慢性多神经病和小脑指征。植烷酸，一种罕见的支链脂肪酸(3，7，11，15-四甲基-十六烷酸)蓄积在患有该病的患者的组织和体液中并且由于缺乏PAHX而无法新陈代谢。去血浆法每月进行1次或2次，从而有效从基团中除去该酸并且允许解除限制植烷酸摄入的饮食控制。

朊病毒有关的病症包括Gerstmann-Straussler疾病(GSD)，Creutzfeldt-Jakob疾病(CJD)，家族性严重失眠和朊病毒蛋白质的异常同工型可以在这些疾病以及库鲁症和瘙痒症(绵羊中发现的一种疾病)中充当传染剂。术语朊病毒衍生自″蛋白传染剂″(Prusiner，Scierace 216：136-44，1982)。存在朊病毒有关蛋白质的蛋白分解性裂解(PRP)，它得到淀粉样肽，这些肽聚合为不溶性原纤维。

Salla疾病和其他类型的sialurias是涉及唾液酸储存问题的疾病。它们是常染色体隐性神经变性疾病，它可以是严重婴儿型(即，ISSD)或在芬兰流行的缓慢进行性成年型(即，Salla疾病)。主要症状是张力减退，小脑共济失调和精神迟缓。这些病症和疾病也被考虑需要减轻或改善治疗。

3.6.其他脱髓鞘病症

其他导致脱髓鞘的病症包括感染后脑炎(也称作急性传播性脑脊髓炎，ADEM)，脑膜炎和脊柱的损伤。本发明公开的组合物和化合物也考虑用于治疗这些其他脱髓鞘病症。

4.髓鞘再生药物

根据本发明，所述的髓鞘再生药物可以选自特异性结合α-4-整联蛋白。不同类型的具有结合和抑制α-4整联蛋白的药物可以是髓鞘再生药物并且由此可以用于本发明的实施中。许多这样的α-4-整联蛋白拮抗剂业已被识别和特征描述，具体药物如下所述。这些α-4-整联蛋白拮抗剂可以进行髓鞘再生活性的筛选。具体而言，这些药物可以包括小化合物和多肽(例如，免疫球蛋白)两者。在本文内容的教导下，本领域技术人员应能够鉴定出以生物学上模拟或类似于具体所述药物抑制脱髓鞘和/ 或促进髓鞘再生和/或减轻麻痹的方式有能力抑制含α-4整联蛋白二聚体的其他药物。本发明包括此类药物的长期给药。还考虑包括药物的组合，另外提供有关所述小化合物以外的药物的探讨。

4.1.化合物

已经鉴定多种化合物可作为药物，它通过结合VLA-4和VCAM-1进行干扰。当以有效量施用给患者时，这些化合物中的某些抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生和/或减轻麻痹。本发明的化合物包括下文部分4.1.1中的式I，IA，IB，IC，II，IIA和IIB的化合物。

4.1.1.式I和式II的化合物

一方面，可以用作髓鞘再生药物的化合物是下式I定义的化合物。这些化合物具有对VLA-4的结合亲和力，用IC₅₀表示为约15μM或更小(按照下列实施例A所述方法测定)并用作髓鞘再生药物：

其中

R¹选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，杂芳基和取代的杂芳基；

R²选自氢，烷基，环烷基，取代的环烷基，环烯基，取代的环烯基，杂环，取代的杂环，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，并且R¹和R²与R²连接的氮原子和R¹连接的SO₂基团一起可以构成杂环或取代的杂环基；

R³选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环和，当R²未与R¹ 构成杂环基团时，R²和R³与R²结合的氮原子和R³结合的碳原子一起可以构成杂环或取代的杂环基团；

R⁵是-(CH₂)_x-Ar-R^5’，其中R^5’选自-O-Z-NR⁸R^8′和-O-Z-R^8″，其中R⁸和R^8′独立地选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，并且其中R⁸和R^8′相连构成杂环或取代的杂环，R^8″选自杂环和取代的杂环，并且Z选自-C(O)-和-SO₂-；

Ar是芳基，杂芳基，取代的芳基或取代的杂芳基；

X是1-4的整数；

Q是-C(X)NR⁷-，其中R⁷选自氢和烷基；和X选自氧和硫；

及其药学可接受盐。

在另一实施方式中，所述化合物可以作为体内转化(例如，水解，代谢，等)为上式I的化合物的前药。在此类实施方式的优选实施例中，式I的化合物的羧酸基团被修饰为体内转化为羧酸基团(包括其盐)的基团。在特别优选的实施方式中，此类前药用式IA的化合物表示：

其中：

R²选自氢，烷基，环烷基，取代的环烷基，环烯基，取代的环烯基，杂环，取代的杂环，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，并且R¹和R²与R²连接的氮原子和R¹连接的SO₂基团一起可以构成杂环或取代的杂环基团；

R³选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环和，当R²未与R¹ 构成杂环基团时，R²和R³与R连接的氮原子和R³连接的碳原子一起可以构成杂环或取代的杂环基团；

R⁵是-(CH₂)_x-Ar-R⁵′，其中R⁵′选自-O-Z-NR⁸R^8′和-O-Z-R⁸″，其中R⁸ 和R^8′独立地选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，和其中R⁸和R^8′相连构成杂环或取代的杂环，R^8″选自杂环和取代的杂环基团，和Z选自-C(O)-和-SO₂-基团；

Ar是芳基，杂芳基，取代的芳基或取代的杂芳基；

x是1-4的整数；

R⁶选自4-二氧代-四氢呋喃-3-基(3，4-烯醇)，氨基，烷氧基，取代的烷氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，-O-(N-琥珀酰亚氨基)，-NH-金刚烷基，-Q-胆甾-5-烯-3-β-基，-NHOY其中Y是氢，烷基，取代的烷基，芳基和取代的芳基，-NH(CH₂)_pCOOY其中p是1-8的整数和Y定义如上，-OCH₂NR⁹R¹其中R⁹选自-C(O)-芳基和-C(O)-取代的芳基并且R¹⁰选自氢和-CH₂COOR¹¹，其中R¹¹是烷基，并且-NHSO₂Z′其中Z′是烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环；

Q是-C(X)NR⁷-，其中R⁷选自氢和烷基；和X选自氧和硫；

及其药学可接受盐

并且条件如下

(A)当R¹和R²与R¹悬垂的SO₂和R²悬垂的氮一起构成糖精-2-基，R³ 是-CH₃，R⁵是p-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基和Q是-C(O)NH-时，则R⁶不是-OC(CH₃)₃；

(B)当R¹时p-甲基苯基，R²和R³与R²悬垂的氮原子和R³形成的碳原子一起构成衍生自D-脯氨酸的吡咯烷基环，R⁵是衍生自D-苯基丙氨酸的p-[(4-甲基哌嗪-1-基)NC(O)O-]苄基和Q是-C(O)NH-时，则R⁶不是-OC(CH₃)₃；

(C)当R¹是嘧啶-2-基，R²和R³与R²结合的氮原子和R³结合的碳原子一起构成吡咯烷基环，R⁵是p-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基和Q是-C(O)NH-时，则R⁶不是-OC(CH₃)₃；和

(D)当R¹是p-甲基苯基，R²和R³与R²悬垂的氮原子和R³结合的碳原子一起构成(2S)-哌嗪-2-羰基环；R⁵是p-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基和Q是-C(O)NH-时，则R⁶不是-OC(CH₃)₃。

上式I和IA的化合物的详细描述和这些化合物的制备方法和反应条件公开U.S.S.N.09/126,958(1998年7月31日提交并授权为美国专利6,489,300)，其全文在此引入作为参考。

优选地，在上式I和IA的化合物中，R¹选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，杂芳基和取代的杂芳基。更优选R¹选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基。

在上式I和IA的化合物中，优选R¹选自苯基，4-甲基苯基，4-叔丁基苯基，2，4，6-三甲基苯基，2-氟苯基，3-氟苯基，4-氟苯基，2，4-二氟苯基，3，4-二氟苯基，3，5-二氟苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-氯苯基，3，4-二氯苯基，3，5-二氯苯基，3-氯-4-氟苯基，4-溴苯基，2-甲氧基苯基，3-甲氧基苯基，4-甲氧基苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-叔丁氧基苯基，4-(3′-二甲基氨基-正丙氧基)-苯基，2-羧基苯基，2-(甲氧基羰基)苯基，4-(H₂NC(O)-)苯基，4-(H₂NC(S)-)苯基，4-氰基苯基，4-三氟甲基苯基，4-三氟甲氧基苯基，3，5-二-(三氟甲基)苯基，4-硝基苯基，4-氨基苯基，4-(CH₃C(O)NH-)苯基，4-(PhNHC(O)NH-)苯基，4-脒基苯基，4-甲基脒基苯基，4-(CH₃SC(＝NH)-)苯基，4-氯-3-(H₂NS(O)₂-)苯基，1-萘基，2-萘基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，嘧啶-2-基，喹啉-8-基，2-(三氟乙酰基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-7-基，吗啉-4-基，2-噻酚基，5-氯-2-噻酚基，2，5-二氯-4-噻酚基，1-N-甲基咪唑基-4-基，1-N-甲基吡唑基-3-基，1-N-甲基吡唑基-4-基，1-N-丁基吡唑基-4-基，1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑基-4-基，1-N-甲基-5-甲基-3-氯吡唑基-4-基，2-噻唑基和5-甲基-1，3，4-噻二唑基-2-基。

优选地，在上式I和IA的化合物中，R²选自甲基，苄基，-(CH₂)₂-2-噻酚基，和-(CH₂)₂-_。

在一优选实施方式中，R²和R³在上式I和IA的化合物中与取代基R² 相连的氮原子和取代基R³相连的碳原子一起构成杂环基团或取代的环内含有1-2个碳原子的4-6员环的杂环基团，所述的杂原子选自氮，氧和硫，该环选择性地被1-2个选自氟，甲基，羟基，氧代(＝O)，氨基，苯基，苯硫基，苄硫基，(硫代吗啉-4-基)C(O)O-，CH₃S(O)₂-和CH₃S(O)₂O-的取代基取代，或者可以稠合为另一环，例如苯基或环烷基环，得到环内具有1-2个杂原子的10-14个环原子的稠合环杂环，所述的杂原子选自氮，氧和硫。此类杂环环包括氮杂环丁烷基(例如，L-氮杂环丁烷基)，噻唑烷基(例如，L-噻唑烷基)，哌啶基(例如，L-哌啶基)，哌嗪基(例如，L-哌嗪基)，二氢吲哚基(例如，L-2，3-二氢吲哚-2-基)，四氢喹啉基(例如，L-1，2，3，4-四氢喹啉-2-基)，硫代吗啉基(例如，L-硫代吗啉-3-基)，吡咯烷基(例如，L-吡咯烷基)，取代的吡咯烷基例如4-羟基吡咯烷基(例如，4-α-(或β-羟基-L-吡咯烷基)，4-氧代吡咯烷基(例如，4-氧代-L-吡咯烷基)，4-氟吡咯烷基(例如，4-α-(或β-)氟-L-吡咯烷基)，4，4-二氟吡咯烷基(例如，4，4-二氟-L-吡咯烷基)，4-(硫代吗啉-4-基C(O)-O-)吡咯烷基(例如，4-α-(或β-)-(硫代吗啉-4-基C(O)-O-)-L-吡咯烷基，4-(CH₃S(O)₂O-)吡咯烷基(例如，4-α-(或β-)(CH₃S(O)₂O-)-L-吡咯烷基，3-苯基吡咯烷基(例如，3-α-(或β-)苯基-L-吡咯烷基)，3-苯硫基吡咯烷基(例如，3-α-(或β-)-苯硫基-L-吡咯烷基)，4-氨基吡咯烷基(例如，4-α-(或β-)氨基-L-吡咯烷基)，3-甲氧基吡咯烷基(例如，3-α-(或β-)甲氧基-L-吡咯烷基)，4，4-二甲基吡咯烷基，取代的哌嗪基例如4-N-Cbz-哌嗪基和4-(CH₃S(O)₂-)哌嗪基，取代的噻唑烷基例如5，5-二甲基噻唑烷-4-基，1，1-二氧代-噻唑烷基(例如，L-1，1-二氧代-噻唑烷-2-基)，取代的1，1-二氧代-噻唑烷基例如L-1，1-二氧代-5，5-二甲基噻唑烷-2-基，1，1-二氧代硫代吗啉基(例如，L-1，1-二氧代-硫代吗啉-3-基)等。

在上式I和IA的化合物中，Q优选是-C(O)NH-或-C(S)NH-。

在上式I和IA的化合物中，Ar优选是芳基或取代的芳基和，甚至更优选是苯基或取代的苯基。优选地，x是1。

在上式I和IA的化合物中，R⁵优选选自被下列基团取代得到的所有可能的异构体：

3-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基，

4-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基，

4-[(哌啶-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(哌啶-4′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(1′-甲基哌啶-4′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-羟基哌啶-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-甲酰氧基哌啶-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-乙氧基羰基哌啶-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-羧基哌啶-1′-基)C(O)-O-]苄基，

4-[(3′-羟基甲基哌啶-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-羟基甲基哌啶-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-苯基-1′-Boc-哌啶-4′-基)-C(O)O-]苄基，

4-[(4′-哌啶酮-1′-基亚乙基缩酮)C(O)O-]苄基，

4-[(哌嗪-4′-基)-C(O)O-]苄基，

4-[(1′-Boc-哌嗪-4′-基)-C(O)O-]苄基，

4-[(4′-甲基哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-甲基高哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(2-羟基乙基)哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-苯基哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(吡啶-2-基)哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(4-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(嘧啶-2-基)哌嗪-1′-基)C(O)-O-]苄基，

4-[(4′-乙酰基哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(苯基C(O)-)哌嗪-1′-基)C(O)-O-]苄基，

4-[(4′-(吡啶-4-基C(O)-)哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(苯基NHC(O)-)哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-(苯基NHC(S)-)哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(4′-甲磺酰基哌嗪-1′-基-C(O)O-)苄基，

4-[(4′-三氟甲磺酰基哌嗪-1′-基-C(O)O-)苄基，

4-[(吗啉-4′-基)C(O)O-]苄基，

3-硝基-4-[(吗啉-4′-基)-C(O)O-]苄基，

4-[(硫代吗啉-4′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(硫代吗啉-4′-基砜)-C(O)O-]苄基(或者命名为4-[(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基)-C(O)O-]苄基)，

4-[(吡咯烷-1′-基)C(O)-O-]苄基，

4-[(2′-甲基吡咯烷-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(2′-(甲氧基羰基)吡咯烷-1′-基)C(O)O-]苄基，

4-[(2′-(羟基甲基)吡咯烷-1′-基)C(O)-O-]苄基，

4-[(2′-(N，N-二甲基氨基)乙基)(CH₃)NC(O)-O-]苄基，

4-[(2′-(N-甲基-N-甲苯-4-磺酰基氨基)乙基)(CH₃)N-C(O)O-]苄基，

4-[(2′-(吗啉-4′-基)乙基)(CH₃)NC(O)O-]苄基，

4-[(2′-(羟基)乙基)(CH₃)NC(O)O-]苄基，

4-[二(2′-(羟基)乙基)NC(O)O-]苄基，

4-[(2′-(甲酰氧基)乙基)(CH₃)NC(O)O-]苄基，

4-[(CH₃OC(O)CH₂)HNC(O)O-]苄基，

4-[2′-(苯基NHC(O)O-)乙基-]HNC(O)O-]苄基，

3-氯-4-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基，

3-氯-4-[(4′-甲基哌嗪-1′-基)C(O)O-]苄基，

3-氯-4-[(4′-(吡啶-2-基)哌嗪-1′-基)C(O)-O-]苄基，

3-氯-4-[(硫代吗啉-4′-基)C(O)-O-]苄基，和

3-氟-4-[(CH₃)₂NC(O)O-]苄基。

在式IA的化合物中，R⁶优选2，4-二氧代-四氢呋喃-3-基(3，4-烯醇)，甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，叔丁氧基，环戊氧基，环丙基甲氧基，新戊氧基，2-α-异丙基-4-β-甲基环己基，2-β-异丙基-4-β-甲基环己基，2-甲氧基苯氧基，2-(吗啉-4-基)乙氧基，-O(CH₂CH₂O)₂CH₃，2-(苯氧基)乙氧基，-OCH₂C(CH₃)₂NHBoc，-NH₂，苄氧基，-NHCH₂COOH，-NHCH₂CH₂COOH，-NH-金刚烷基，-NHSO₂-p-CH₃-_，-NHCH₂CH₂COOCH₂CH₃，-NHOY′其中Y′是氢，甲基，异丙基或苄基，O-(N-琥珀酰亚氨基)，-O-胆甾-5-烯-3-β-基，-QCH₂-OC(O)C(CH₃)₃，-O(CH₂)zNHC(O)W其中z是1或2且W选自吡啶-3-基，N-甲基吡啶基和N-甲基-1，4-二氢-吡啶-3-基，-NR″C(O)-R′其中R′是芳基，杂芳基或杂环和R″是氢或-CH₂C(O)OCH₂CH₃。

特别更优选地，R⁶在式IA的化合物中选自：甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，叔丁氧基，环戊氧基，环丙基甲氧基，新戊氧基，2-α-异丙基-4-β-甲基环己基，2-β-异丙基-4-β-甲基环己基，2-甲氧基苯氧基，2-(吗啉-4-基)乙氧基，-O(CH₂CH₂O)₂CH₃，2-(苯氧基)乙氧基，-OCH₂C(CH₃)₂NHBoc，和苄氧基。

在上式I和IA的范围内优选的化合物包括例如：

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸正丁基酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸环戊酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸正丁基酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸环戊酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(α-甲苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(α-甲苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1-叔丁基羰氧基-4-苯基哌啶-4-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(α-甲苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(哌嗪-2-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(α-甲苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸N-金刚烷基酰胺

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酰基甘氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰氧基)苯基丙氨酸甲酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(哌嗪-2-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-苄氧基羰基哌嗪-2-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

2-(糖精-2-基)丙酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-D-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基) 苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸新戊酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸新戊酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

2-(糖精-2-基)丙酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

2-(糖精-2-基)丙酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(嘧啶-2-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲磺酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)-3-硝基苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基-2-(叔丁基)甘氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

3-[N-(甲苯-4-磺酰基)-N-甲基氨基]-1-[1-叔丁氧基羰基-2-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基乙基]氮杂环丁-2-酮

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(嘧啶-2-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

3-[N-(甲苯-4-磺酰基)-N-甲基氨基]-1-[1-羧基-2-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基乙基]氮杂环丁-2-酮

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(2，5-二氯噻吩-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-乙酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-叔丁基苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(吡啶-2-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(2-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-乙酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基)羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基)羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-乙酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-甲磺酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-苯基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

2-(糖精-2-基)丙酰基-L-4-(4′-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-甲磺酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸(N-叔丁氧基羰基-2-氨基-2-甲基丙基)酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-乙酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-羟基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2′-(吗啉-4′-基)乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5] 癸-8-基)羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

M-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2′-羟基乙基)-N-甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(4′-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基羰氧基)-L-苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2′-甲酰氧基乙基)-N甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2′-羟基乙基)-N-甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(甲氧基羰基甲基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-甲氧基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-甲氧基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-氧代脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-trans-4-羟基脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(吗啉待-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(吗啉代-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(2-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-叔丁基苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(2，5-二氯噻吩-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-氧代-硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-氧代-硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸

N-(吡啶-2-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(吡啶-2-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(吡啶-2-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，5-二氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，4-二氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，5-二氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3，4-二氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3-甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2-甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，4-二甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，4-二氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(3-氨-4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(2，5-二氯噻吩-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(8-喹啉磺酰基)-L-脯氨酰基-1-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(8-喹啉磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(8-喹啉磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(8-喹啉磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-苯基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-(乙氧基羰基)哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3-磺酰胺基-4-氯-苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-氧代硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(1-氧代硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙基酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙基酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸环丙基甲酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸甲酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸环丙基甲酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2-甲氧基苯基酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸正丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸正丙酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙酰氧基甲酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(4′-(2′-氨基乙基)吗啉代)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[4-(羧基)哌啶-1-基羰氧基]苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-双-(2-羟基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[3-(羟基甲基)哌啶-1-基羰氧基]苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-三氟甲磺酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-(N-苯基脲)苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(2-三氟乙酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉-7-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(吡啶-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(吡啶-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2二甲基氨基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫丙基-L-4-(N-甲基-N-(2二甲基氨基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2′-吡啶基)-哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2′-吡啶基)-哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基) 苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-苯基氨基甲酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-苯基氨基甲酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-n-丁基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吡啶-4-基羰基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-氧代脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-trans-4-羟基脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-氧代脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[3-(羟基甲基)哌啶-1-基羰氧基]苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4，4-二氟)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4，4-二氟)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-苯甲酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-脒基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸甲酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-氧代脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-羟基脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-苯甲酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-脒基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸甲酯

N-(3-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[N-甲基-N-(2-(N′-甲基-N′-甲苯磺酰基-氨基)乙基)氨基甲酰基氧基]苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[N-(2-(N′-苯基氨基羰氧基)乙基)氨基甲酰基氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-4-(trahs-羟基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-4-(trans-羟基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-脒基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

哌嗪-1，4-二羧酸二-{4-[(2S)-2-叔丁氧基羰基-2-((4R)-5，5-二甲基-3-(甲苯-4-磺酰基)噻唑烷-4-甲酰氨基)乙基]苯基}酯

哌嗪-1，4-二羧酸二-4-[(2S)-2-羧基-2-((4R)-5，5二甲基-3-(甲苯-4-磺酰基)噻唑烷-4-甲酰氨基)乙基]苯基}酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(吡嗪-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(2-羟基甲基吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(2-羟基甲基吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

哌嗪-1，4-二羧酸二-{4-[(2S)-2-异丙氧基羰基-2-((2R)-1-(甲苯-4-磺酰基)吡咯烷e-2-甲酰氨基)乙基]苯酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-嘧啶)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氟-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-甲磺酰基吡嗪-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-[2-(1，1-二氧代-2，3-二氢-3，3-二甲基-1，2-苯并异噻唑-2-基)乙酰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-[2-(N-2，10-樟脑磺内酰胺基)乙酰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-[2-(N-2，10-樟脑磺内酰胺基)乙酰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-[2-(N-2，10-樟脑磺内酰胺基)乙酰基]-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-溴苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-溴苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

哌嗪-1，4-二羧酸二-{4-[(2S)-2-叔丁氧基羰基-2-((2R)-1-(甲苯-4-磺酰基)吡咯烷e-2-甲酰氨基)乙基]苯基}酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-氧代)脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-氧代)脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-丙基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-溴苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(N-苯基硫代羰基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(4-＜RTI甲基高哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

哌嗪-1，4-二羧酸二-{4-[(2S)-2-羧基-2-((2R)-1-(甲苯-4-磺酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙基]苯基}酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-甲磺酰氧基)丙基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氨基羰基苯磺酰基)-L-丙基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氨基羰基苯磺酰基)-L-丙基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-脒基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸乙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(4-甲基高哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-甲磺酰基吡嗪-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-(甲磺酰氧基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(甲磺酰基)-N-苄基甘氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-溴苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4.-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2-苯氧基乙基酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(3-氯-1，5-二甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(5-三氟甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

及其药学可接受盐以及其中一个酯被选自甲酯、乙酯、正丙酯、异丙酯、正丁酯、异丁酯、仲丁酯、叔丁酯和新戊酯的另一种酯代表的上述酯化合物。

式I、IA和IB的范围内更优选的化合物包括例如：

N-(α-甲苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N甲基异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸乙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4.-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基羰氧基苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基-2-(叔丁基)甘氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪- 1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

3-[N-(甲苯-4-磺酰基)-N-甲基氨基]-1-[1-叔丁氧基羰基-2-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基乙基]氮杂环丁-2-酮

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯

N-(甲苯-4.-磺酰基)-L-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙基酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-羟基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-N-(2-(吗啉-4′-基)乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基)羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2′-羟基乙基)-N-甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2-甲酰氧基乙基)-N-甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(吗啉代-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(3-氯-4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫代脯氨酰基-L-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(8-喹啉磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(2，4-二氟苯fulfonyl)-L-(1-氧代硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

叔丁酯N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙基酯

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二-(2-羟基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[3-(羟基甲基)哌啶-1-基羰氧基] 苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-(N-苯基脲)苯磺酰基)-L-丙基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2′吡啶基)-哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-正丁基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基) 苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4，4-二氟)丙基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-4-(trans-羟基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-4-(trahs-羟基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(2羟基甲基吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氟-4-(NN二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-Z-羰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁基酯

N-(4-溴苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-(N-苯基硫羰基)哌嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯

N-(4-氟苯磺酰基)噻唑烷基-2-羰基-L-4-(4-甲基高哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-(甲磺酰氧基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氨基羰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(4-氨基羰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(4-脒基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4.-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-溴苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-4-(4-(2吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N′二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

N-(1-甲基咪唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧基)苯基丙氨酸2-苯氧基乙酯

及其药学可接受盐。

上式I和IA的优选化合物包括下表3中给出的那些：

在式I和IA的化合物的优选实施方式中，所述的化合物由下式IB定义：

其中：

Ar¹选自芳基，取代的芳基，杂芳基，和取代的杂芳基；

Ar²选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基；

R¹²选自烷基，取代的烷基，环烷基，和取代的环烷基或者R¹²和R¹³ 与R¹²相连的氮原子和R¹³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R¹³选自氢，烷基和取代的烷基，或R¹²和R¹³与R¹²相连的氮原子和R¹³ 相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R¹⁶选自烷基和取代的烷基或者R¹⁵和R¹⁶与其相连的氮原子一起构成杂环或取代的杂环基团；和

Y选自-O-，-NR¹⁰⁰-，和-CH₂-其中R¹⁰⁰是氢或烷基；

及其药学可接受盐。

优选地，上式IB的化合物中，R¹²是烷基，取代的烷基，或R¹²和R¹³ 与R¹²相连的氮原子和R¹³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团。优选地，在上式IB的化合物中，R¹⁴是氢或烷基。

优选地，在上IB的化合物中，Ar¹选自苯基，4-甲基苯基，4-叔丁基苯基，2，4，6-三甲基苯基，2-氟苯基，3-氟苯基，4-氟苯基，2，4-二氟苯基，3，4-二氟苯基，3，5-二氟苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-氯苯基， 3，4-二氯苯基，3，5-二氯苯基，3-氯-4-氟苯基，4-溴苯基，2-甲氧基苯基，3-甲氧基苯基，4-甲氧基苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-叔丁氧基苯基，4-(3′-二甲基氨基-n-丙氧基)-苯基，2-羧基苯基，2-(甲氧基羰基)苯基，4-(H₂NC(O)-)苯基，4-(H₂NC(S)-)苯基，4-氰基苯基，4-三氟甲基苯基，4-三氟甲氧基苯基，3，5-二-(三氟甲基)苯基，4-硝基苯基，4-氨基苯基，4-(CH₃C(O)NH-)苯基，4-(PhNHC(O)NH-)苯基，4-脒基苯基，4-甲基脒基苯基，4-[CH₃SC(＝NH)-]苯基，4-氯-3-[H₂NS(O)₂-]苯基，1-萘基，2-萘基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，嘧啶-2-基，喹啉-8-基，2-(三氟乙酰基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-7-基，2-噻酚基，5-氯-2-噻酚基，2，5-二氯-4.-噻酚基，1-N-甲基咪唑基-4-基，1-N-甲基吡唑基-3-基，1-N-甲基吡唑基-4-基，1-N-丁基吡唑基-4-基，1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑基-4-基，1-N-甲基-5-甲基-3-氯吡唑基-4-基，2-噻唑基和5-甲基-1，3，4-噻二唑基-2-基。

优选地，在上式IB的化合物中，R¹²和R¹³与R¹²相连的氮原子和R¹³ 相连的碳原子一起构成下式的杂环或取代的杂环：

其中

X选自-S-，-SO-，-SO₂，和选择性取代的-CH₂-；

m是0-12的整数；

n是0-2的整数；和

R′选自烷基，取代的烷基，和氨基。

优选地，m是1，X是-S-或-CH₂-，R′是烷基或取代的烷基。

甚至更优选，R¹²和R¹³与R¹²相连的氮原子和R¹³相连的碳原子一起构成选自下列的杂环或取代的杂环：氮杂环丁烷基，噻唑烷基，哌啶基，哌嗪基，硫代吗啉基，吡咯烷基，4-羟基吡咯烷基，4-氧代吡咯烷基，4-氟吡咯烷基，4，4-二氟吡咯烷基，4-(硫代吗啉-4-基C(O)O-)吡咯烷基，4-[CH₃S(O)₂O-]吡咯烷基，3-苯基吡咯烷基，3-苯硫基吡咯烷基，4-氨基吡咯烷基，3-甲氧基吡咯烷基，4，4二甲基吡咯烷基，4-N-Cbz-哌嗪基，4-[CH₃S(O)₂-]哌嗪基，噻唑烷-3-基，5，5-二甲基-噻唑烷-3-基，5，5-二甲基噻唑烷-4-基，1，1-二氧代噻唑烷基，1，1-二氧代-5，5-二甲基噻唑烷-2-基和1，1-二氧代硫代吗啉基。

优选地，在上式IB的化合物中，Ar²选自苯基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基和4-吡啶-2-酮基。

优选地，在式IB中，Y上-O-，并且当Y是-O-时，基团-OC(O)NR¹⁵R¹⁶优选选自：(CH₃)₂NC(O)O-，(哌啶-1-基)C(O)O-，(4-羟基哌啶-1-基)C(O)O-，(4-甲酰氧基哌啶-1-基)C(O)O-，(4-乙氧基羰基哌啶-1-基)C(O)-O-，(4-羧基哌啶-1-基)C(O)O-，(3-羟基甲基哌啶-1-基)C(O)-O-，(4-羟基甲基哌啶-1-基)C(O)O-，(4-哌啶酮-1-基亚乙基缩酮)C(O)O-，(哌嗪-1-基)-C(O)O-，(1-Boc-哌嗪-4-基)-C(O)-O-，(4-甲基哌嗪-1-基)C(O)-O-，(4-甲基高哌嗪-1-基)C(O)O-，(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)C(O)-O-，(4-苯基哌嗪-1-基)C(O)-O-，(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1]-基)C(O)O-，(4-(4-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)C(O)O-，(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)C(O)-O-，(4-乙酰基哌嗪-1-基)C(O)-O-，(4-(苯基C(O)-哌嗪-1-基)C(O)O-，(4-(吡啶-4′-基C(O)-)哌嗪-1-基)C(O)O-，(4-(苯基NHC(O)-)哌嗪-1-基)C(O)O-，(4-(苯基NHC(S)-)哌嗪-1-基)C(O)-O-，(4-甲磺酰基哌嗪-1-基-C(O)O-，(4-三氟甲磺酰基哌嗪-1-基-C(O)O-，(吗啉-4-基)C(O)-O-，(硫代吗啉-4-基)C(O)O-，(硫代吗啉-4′-基砜)-C(O)O-，(吡咯烷-1-基)C(O)O-，(2-甲基吡咯烷-1-基)C(O)-O-，(2-(甲氧基羰基)吡咯烷-1-基)C(O)O-，(2-(羟基甲基)吡咯烷-1-基)C(O)-O-，(2-(N，N-二甲基氨基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，(2-(N-甲基-N-甲苯-4-磺酰基氨基)乙基)(CH₃)N-C(O)O-，(2-(吗啉-4-基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，(2-(羟基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，二(2-(羟基)乙基)NC(O)-O-，(2-(甲酰氧基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，(CH₃OC(O)CH₂)HNC(O)O-，和2-[(苯基NHC(O)-O-)乙基-]HNC(O)-O-。

在一优选实施方式中，所述化合物由下式IC定义：

另一方面，可用作髓鞘再生药物的化合物是下式II定义的化合物。这些化合物对于VLA-4具有亲和力，该亲和力用约15μM或更小的IC₅₀ 表示(按照下面实施例A所述方法测定)并且用作髓鞘再生药物：

其中：

R²¹选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，杂芳基和取代的杂芳基；

R²²选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，环烯基，取代的环烯基，杂环，取代的杂环，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，和R²¹和R²²与R²²相连的氮原子和R²¹相连的R²²一起可以构成杂环或取代的杂环基团；

R²³选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环并且其中R²² 和R²³与R²²相连的氮原子和R²³相连的碳原子一起可以构成饱和杂环基团或饱和取代杂环基团，条件是当被一取代时，该饱和取代杂环基上的取代基不是羧基；

Q是-C(X)NR⁷-其中R⁷选自氢和烷基；

X选自氧和硫；和

R²⁵是-CH₂Ar²²-R²⁵，其中Ar²²是芳基或杂芳基且R²⁵选自芳基，杂芳基，取代的芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，芳氧基，取代的芳氧基，芳烷氧基，取代的芳烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环-O-，取代的杂环-O-，杂芳烷氧基，和取代的杂芳烷氧基；及其药学可接受盐。

在另一实施方式中，本发明的化合物还可以作为体内转化为上式II的化合物(例如，水解，代谢等)的前药提供。在此类实施方式的优选实施方式中，式II的化合物中的羧酸被修饰为乙酯体内转化为所述羧酸(包括其盐)的基团。在特别优选的实施方式中，此类前药由式IIA的化合物表示：

其中

R²²选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，环烯基，取代的环烯基，杂环，取代的杂环，芳基，取代的芳基，杂芳基，和取代的杂芳基，并且R²¹和R²²与R²²相连的氮原子和R²¹相连的SO₂一起可以构成杂环或取代的杂环基团；

R²³选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，和取代的杂环，并且R²² 和R²³与R²²相连的氮原子和R²³相连的碳原子一起可以构成饱和杂环基团或饱和取代杂环基团，条件是当被一取代时，该饱和取代杂环基团上的取代基不是羧基；

R²⁵是-CH₂Ar²²-R²⁵，其中Ar²²是芳基或杂芳基且R²⁵选自芳基，杂芳基，取代的芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，芳氧基，取代的芳氧基，芳烷氧基，取代的芳烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环-O-，取代的杂环-O-，杂芳烷氧基，和取代的杂芳烷氧基；

R²⁶选自2，4-二氧代-四氢呋喃-3-基(3，4-烯醇)，氨基，烷氧基，取代的烷氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，-O-(N-琥珀酰亚氨基)，-NH-金刚烷基，-O-胆甾-5-烯-3-β-基，-NHOY其中Y是氢，烷基，取代的烷基，芳基，和取代的芳基，-NH(CH₂)_pCOOY其中p是1-8的整数且Y定义如上，-OCH₂NR²⁹R³⁰其中R²⁹选自-C(O)-芳基和-C(O)-取代芳基且R³¹ 选自氢和-CH₂COOR³¹，其中R³¹是烷基，和-NHSO₂Z′其中Z′是烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环或取代的杂环；

Q是-C(X)NR⁷-其中R⁷选自氢和烷基；和

X选自氧和硫；及其药学可接受盐。

有关上式II和IIA的化合物进一步说明和制备这些化合物的过程和反应条件公开在U.S.S.N.s 09/127,346(1998年7月31日提交)，09/688,820(连续申请，200年10月17日提交和授权为美国专利6,583,139)和10/382,988(连续申请，2003年3月7日提交)，所有这些的全文在此引入作为参考。

优选地，在上式II和IIA的化合物中，R²¹选自烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，杂芳基和取代的杂芳基。更优选R²¹选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基。

特别更优选地，在上式II和IIA的化合物中，R²¹选自4-甲基苯基，4-氯苯基，1-萘基，2-萘基，4-甲氧基苯基，苯基，2，4，6-三甲基苯基，2-(甲氧基羰基)苯基，2-羧基苯基，3，5-二氯苯基，4-三氟甲基苯基，3，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-(CH₃C(O)-NH-)苯基，4-三氟甲氧基苯基，4-氰基苯基，3，5-二-(三氟甲基)苯基，4-叔丁基苯基，4-叔丁氧基苯基，4-硝基苯基，2-噻酚基，1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑基-4-基，1-N-甲基咪唑基-4-基，4-溴苯基，4-脒基苯基，4-甲基脒基苯基，4-[CH₃SC(＝NH)]苯基，5-氯-2-噻酚基，2，5-二氯-4-噻酚基，1-N-甲基-4-吡唑基，2-噻唑基，5-甲基-1，3，4-噻二唑基-2-基，4-[H₂NC(S)]苯基，4-氨基苯基，4-氟苯基，2-氟苯基，3-氟苯基，3，5-二氟苯基，吡啶-3-基，嘧啶-2-基，4-(3′-二甲基氨基-n-丙氧基)-苯基，和1-甲基吡唑基-4-基。

优选地，在上式II和IIA的化合物中，R²²是氢，甲基，苯基，苄基， -(CH₂)₂-2-噻酚基，和-(CH₂)₂-_。

在另一优选实施方式中，上式II和IIA的化合物中的R²²和R²³，和上式IIB的化合物中的R³²和R³³，与R²²或R²²相连的氮原子和R²³或R³³相连的碳原子一起构成饱和杂环基团或饱和取代杂环基团，条件是当被一取代时，饱和取代杂环基团上的取代基不是羧基。

在上式II和IIA的化合物中，Q优选是-C(O)NH-或-C(S)NH-。

在上式II和IIA的化合物中，R²⁵优选选自被下列基团取代的所有可能的异构体：4-(2-羧基苯氧基)苄基，4-(苄氧基)苄基，4-[(1-甲基哌啶-4-基)-O-]苄基，4-(咪唑啉-2-酮-1-基)苄基，和4-(3-甲酰基咪唑啉-2-酮-1-基)苄基。

在式IIA的化合物中，R²⁶优选为2，4-二氧代-四氢呋喃-3-基(3，4-烯醇)，甲氧基，乙氧基，异丙氧基，正丁氧基，叔丁氧基，环戊氧基，新戊氧基，2-α-异-丙基-4-β-甲基环己基，2-β-异丙基-4-β-甲基环己基，-NH₂，苄氧基，-NHCH₂COOH，-NHCH₂CH₂COOH，-NH-金刚烷基，-NHCH₂CH₂COOCH₂CH₃，-NHSO₂-p-CH₃-_，-NHOR⁸其中R⁸是氢，甲基，异-丙基或苄基，O-(N-琥珀酰亚胺基)，-O-胆甾-5-烯-3-β-基，-OCH₂-OC(O)C(CH₃)₃，-O(CH₂)₂zNHC(O)W其中z是1或2且W选自吡啶-3-基，N-甲基吡啶基，和N-甲基-1，4-二氢-吡啶-3-基，-NR″C(O)-R′其中R′是芳基，杂芳基或杂环和R″是氢或-CH₂C(O)OCH₂CH₃。

在上式II和IIA的范围内优选的化合物包括例如下列：

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(α-甲基苄氧基)-L-苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(2-羧基苯氧基)-L-苯基丙氨酸

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-O-(苄基)-L-酪氨酸

及其药学可接受盐。

上式II和IIA的化合物包括下表4中给出的那些

在上式II和IIA的优选化合物中，该化合物由下式IIB定义：

其中：

Ar³¹选自芳基，取代的芳基，杂芳基，和取代的杂芳基；

R³²选自烷基，取代的烷基，环烷基和取代的环烷基，或R³²和R³³与R³²相连的氮原子和R³³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

R³³选自氢，烷基和取代的烷基，和R³²和R³³与R³²相连的氮原子和R³³ 相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团；

及其药学可接受盐。

优选地，在上式IIB的化合物中，R³²是烷基，取代的烷基，或R³²和R³³与R³²相连的氮原子和R³³相连的碳原子一起构成杂环或取代的杂环基团和

R³⁴是氢或烷基。

优选地，在上式IIB的化合物中，R³⁷是芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，或取代的杂环。在优选实施方式中，R³⁷是取代的芳基，其中该芳基被1-3个当量选自烷基和烷氧基的取代基取代。在一优选实施方式中，R³⁷是取代的杂芳基其中该杂芳基被1-3个独立选自烷基、烷氧基和氧代的取代基取代。在另一优选实施方式中R³⁷是取代的芳基或杂芳基，其中该芳基或杂芳基是2，6-二-取代的。在又一优选实施方式中R³⁷是2，6-二-取代的芳基，其中该取代基独立地选自烷基和烷氧基。在另一优选实施方式中R³⁷是2，6-二-取代的杂芳基其中该取代基独立地选自烷基、氧代和烷氧基。在又一优选实施方式中，R³⁷选自2，6-二烷氧基芳基，2，6-二烷氧基杂芳基，2-烷基-6-烷氧基芳基，2-烷基-6-烷氧基杂芳基，2-氧代-6-烷氧基杂芳基，2-氧代-6-烷基杂芳基，和选择性取代的咪唑啉-2，4-二酮-3-基。

优选地，在上式IIB的化合物中，Ar³¹选自4-甲基苯基，4-氯苯基，1-萘基，2-萘基，4-甲氧基苯基，苯基，2，4，6-三甲基苯基，2-(甲氧基羰基)苯基，2-羧基苯基，3，5-二氯苯基，4-三氟甲基苯基，3，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-(CH₃C(O)NH-)苯基，4-三氟甲氧基苯基，4-氰基苯基，3，5-二-(三氟甲基)苯基，4-叔丁基苯基，4-叔丁氧基苯基，4-硝基苯基，2-噻酚基，1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑基-4-基，1-N-甲基咪唑基-4-基，4-溴苯基，4-脒基苯基，4-甲基脒基苯基，4-[CH₃SC(＝NH)]苯基，5-氯-2-噻酚基，2，5-二氯-4-噻酚基，1-N-甲基-4-吡唑基，2-噻唑基，5-甲基-1，3，4-噻二唑基-2-基，4-[H₂NC(S)]苯基，4-氨基苯基，4-氟苯基，2-氟苯基，3-氟苯基，3，5-二氟苯基，吡啶-3-基，嘧啶-2-基，4-(3′-二甲基氨基-正丙氧基)-苯基，和1-甲基吡唑基-4-基。

当描述本发明的化合物、组合物和方法时，下列术语具有下列含义，除非另外说明。

定义

在此使用的，″酰基″是指H-C(O)-，烷基-C(O)-，取代的烷基-C(O)-，链烯基-C(O)-，取代链烯基-C(O)-，链炔基-C(O)-，取代链炔基-C(O)-环烷基-C(O)-，取代的环烷基-C(O)-，芳基-C(O)-，取代的芳基-C(O)-，杂芳基-C(O)-，取代的杂芳基-C(O)，杂环-C(O)-，和取代的杂环-C(O)-，其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″酰基氨基″是指-C(O)NRR，其中各R独立地选自氢，烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，芳基，取代的芳基，环烷基，取代的环烷基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环和其中各R与氮原子一起连接构成杂环或取代的杂环环，其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″酰氧基″是指烷基-C(O)-O-，取代的烷基-C(Q)O-，链烯基-C(O)O-，取代链烯基-C(O)-O-，链炔基-C(O)-O-，取代链炔基-C(O)-O-，芳基-C(O)O-，取代的芳基-C(O)O-，环烷基-C(O)-O-，取代的环烷基-C(O)O-，杂芳基-C(O)-O-，取代的杂芳基-C(O)-O-，杂环-C(O)-O-，和取代的杂环-C(O)O-其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″链烯氧基″是指″链烯基-O-″。

″取代的链烯氧基″是指″取代链烯基-O-″。

″链烯基″是指优选具有2-10个碳原子和更优选2-6个碳原子并且具有1个和优选1-2个链烯基不饱和的位点的链烯基。

″取代链烯基″是指具有1-5个独立选自下列的取代基的链烯基：烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卤素，羟基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代杂环，取代的硫代杂环，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，羰氧基(oxycarbonyl)氨基，氧硫代羰基(oxythiocarbonyl)氨基，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，- NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有独立选自下列不同取代基的不对称二取代胺类：烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、杂芳基、取代杂芳基、杂环和取代杂环和具有被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻的氨基的取代链烯基或被下列基团取代的链烯基/取代链烯基：-SO₂-烷基，-SO₂-取代的烷基，-SO₂-链烯基，-SO₂-取代的链烯基，-SO₂-环烷基，-SO₂-取代的环烷基，-SO₂-芳基，-SO₂-取代的芳基，-SO₂-杂芳基，-SO₂-取代的杂芳基，-SO₂-杂环，-SO₂-取代的杂环和-SO₂NRR其中R是氢或烷基。

优选地，所述取代基独立地选自烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，酰氧基，氨基，取代的氨基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，羧基，羧基酯，氰基，环烷基，取代的环烷基，环烷氧基，取代的环烷氧基，卤素，杂芳基，取代的杂芳基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环，取代的杂环，羟基，硝基，和氧羰基氨基。

″烷氧基″是指基团″烷基-O-″，其包括例如，甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异-丙氧基，n-丁氧基，叔丁氧基，仲丁氧基，n-戊氧基，n-己氧基，1，2-二甲基丁氧基，等。

″取代的烷氧基″是指″取代的烷基-O-″

″烷基″是指优选具有1-10个碳原子且更优选具有1-6个碳原子的烷基。该术语例如是例如甲基，叔丁基，正庚基，辛基等。

″取代的烷基″是指1-10个碳原子、具有1-5个独立选自下列的取代基的烷基：烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，氰基，卤素，羟基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代杂环，取代的硫代杂环，杂芳基，取代的芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有独立选自下列的不同取代基的不对称二取代胺类：烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、杂芳基、取代杂芳基、杂环、取代杂环的和具有被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻的氨基的取代烷基或被下列基团取代的烷基/取代烷基：-SO₂-烷基，-SO₂-取代的烷基，-SO₂-链烯基，-SO₂-取代的链烯基，-SO₂-环烷基，-SO₂-取代的环烷基，-SO₂-芳基，-SO₂-取代的芳基，-SO₂-杂芳基，-SO₂-取代的杂芳基，-SO₂-杂环，-SO₂-取代的杂环和-SO₂NRR其中R是氢或烷基。

″亚烷基″是指具有1-10个碳原子和更优选1-6个碳原子的直链和支链二价烷基。该数量例如例如亚甲基(-CH₂-)，1，6-亚庚基，1，8-亚辛基，亚乙基(-CH₂CH₂-)，亚丙基异构体(例如，-CH₂CH₂CH₂-和-CH(CH₃)CH₂-)等。

″取代的亚烷基″是指具有1-5个独立选自下列的取代基的亚烷基：烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卤素，羟基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代杂环，取代的硫代杂环，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有独立选自下列的不同取代基的不对称二取代胺类：烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、杂芳基、取代杂芳基、杂环和取代杂环和具有被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻的氨基的取代链烯基或被下列基团取代的链烯基/取代链烯基：-SO₂-烷基，-SO₂-取代的烷基，-SO₂-链烯基，-SO₂-取代的链烯基，-SO₂-环烷基，-SO₂-取代的环烷基，-SO₂-芳基，-SO₂-取代的芳基，-SO₂-杂芳基，-SO₂-取代的杂芳基，-SO₂-杂环，-SO₂-取代的杂环和-SO₂NRR其中R是氢或烷基。

″链炔基″是指优选具有2-10个碳原子和更优选3-6个碳原子且具有至少1个和优选具有1-2个位点的炔基不饱和度的链炔基。

″取代链炔基″是指具有1-5个独立选自下列取代基的链炔基：烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卤素，羟基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代杂环，取代的硫代杂环，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有独立选自下列的不同取代基的不对称二取代胺类：烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、杂芳基、取代杂芳基、杂环和取代杂环和具有被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻的氨基的取代链炔基或被下列基团取代的链炔基/取代链炔基：-SO₂-烷基，-SO₂-取代的烷基，-SO₂-链烯基，-SO₂-取代的链烯基，-SO₂- 环烷基，-SO₂-取代的环烷基，-SO₂-芳基，-SO₂-取代的芳基，-SO₂-杂芳基，-SO₂-取代的杂芳基，-SO₂-杂环，-SO₂-取代的杂环和-SO₂NRR其中R是氢或烷基。

″脒基″是指基团H₂NC(＝NH)-和术语″烷基脒基″是指具有1-3个烷基的化合物(例如，烷基HNC(＝NH)-)。

″氨基″是指基团-NH₂。

″取代的氨基″是指基团-NRR，其中各R独立地选自氢，烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，和取代的杂环，条件是R不同时为氢；或其中R可以与氮原子一起构成杂环或取代的杂环环。

″氨基酰基″是指基团-NRC(O)烷基，-NRC(O)取代的烷基，-NRC(O)环烷基，-NRC(O)取代的环烷基，-NRC(O)链烯基，-NRC(O)取代的链烯基，-NRC(O)链炔基，-NRC(O)取代链炔基，-NRC(O)芳基，-NRC(O)取代的芳基，-NRC(O)杂芳基，-NRC(O)取代的杂芳基，-NRC(O)杂环，和-NRC(O)取代的杂环其中R是氢或烷基和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″氨基羰基氨基″是指-NRC(O)NRR，-NRC(O)NR-烷基，-NRC(O)NR-取代的烷基，-NRC(O)NR-链烯基，-NRC(O)NR-取代链烯基，-NRC(O)NR-链炔基，-NRC(O)NR-取代链炔基，-NRC(O)NR-芳基，-NRC(O)NR-取代的芳基，-NRC(O)NR-环烷基，-NRC(O)NR-取代的环烷基，-NRC(O)NR-杂芳基，和-NRC(O)NR-取代的杂芳基，-NRC(O)NR-杂环，和-NRC(O)NR-取代的杂环其中各R独立地是氢、烷基或其中各R与氮原子一起构成杂环或取代的杂环环并且其中氨基之一被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″氨基羰氧基″是指-NRC(O)O-烷基，-NRC(O)-O-取代的烷基，-NRC(O)O-链烯基，-NRC(O)O-取代链烯基，-NRC(O)-Q-链炔基，-NRC(O)-O-取代链炔基，-NRC(O)-O-环烷基，-NRC(O)-O-取代的环烷基，-NRC(O)-O-芳基，-NRC(O)-O-取代的芳基，-NRC(O)-O-杂芳基， -NRC(O)O-取代的杂芳基，-NRC(O)O-杂环，和-NRC(O)-O-取代的杂环其中R是氢或烷基和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″氨基硫代羰基氨基″是指-NRC(S)NRR，-NRC(S)NR-烷基，-NRC(S)NR-取代的烷基，-NRC(S)NR-链烯基，-NRC(S)NR-取代链烯基，-NRC(S)NR-链炔基，-NRC(S)NR-取代链炔基，-NRC(S)NR-芳基，-NRC(S)NR-取代的芳基，-NRC(S)NR-环烷基，-NRC(S)NR-取代的环烷基，-NRC(S)NR-杂芳基，和-NRC(S)NR-取代的杂芳基，-NRC(S)NR-杂环，和-NRC(S)NR-取代的杂环其中各R独立地是氢，烷基或其中各R与氮原子一起构成杂环或取代的杂环环并且氨基之一被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″芳基″是指6-14个碳原子的具有单环(例如，苯基)或多个稠合的不饱和芳族碳环，其中稠合环可以是或可以不是芳族(例如，2-苯并_唑啉酮，2H-1，4-_嗪-3(4H)-酮-7-基等)，条件是连接点经过芳环原子。优选的芳基包括苯基、萘基和5，6，7，8-四氢萘-2-基。

″取代的芳基″是指被1-3个选自下列的取代基取代的芳基：羟基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代的烷基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基，氨基酰基，氨基羰氧基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，羧基酰胺基，氰基，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂环，取代的硫代杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，卤素，硝基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-S(O)₂-烷基，-S(O)₂-取代的烷基，-S(O)₂-环烷基，-S(O)₂-取代的环烷基，-S(O)₂-链烯基，-S(O)₂-取代链烯基，-S(O)₂-芳基，-S(O)₂-取代的芳基，-S(O)₂-杂芳基，-S(O)₂-取代的杂芳基，-S(O)₂-杂环，-S(O)₂-取代的杂环，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR where R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有选自下列的不同取代基的不对称二取代胺：烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环和取代芳基上的氨基被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻或被-SO₂NRR其中R是氢或烷基取代。

优选的取代基选自羟基，酰基，酰基氨基，酰氧基，烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，链烯基，取代链烯基，氨基，取代的氨基，氨基酰基，氨基羰氧基，氨基羰基氨基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，羧基，羧基酯，氰基，环烷基，取代的环烷基，卤素，硝基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，和氧羰基氨基。

″芳氧基″是指芳基-O-，其包括例如苯氧基，萘氧基等。

″取代的芳氧基″是指取代的芳基-O-。

″芳氧基芳基″是指基团-芳基-O-芳基。

″取代的芳氧基芳基″是指在1或2个芳环上被1-3个选自下列的取代基取代的芳氧基芳基：羟基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基，氨基酰基，氨基羰氧基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，羧基酰胺基，氰基，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂环，取代的硫代杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，卤素，硝基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-S(O)₂-烷基，-S(O)₂-取代的烷基，-S(O)₂-环烷基，-S(O)₂-取代的环烷基，-S(O)₂-链烯基，-S(O)₂-取代链烯基，-S(O)₂-芳基，-S(O)₂-取代的芳基，-S(O)₂-杂芳基，-S(O)₂-取代的杂芳基，-S(O)₂-杂环，-S(O)₂-取代的杂环，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有选自下列的不同取代基的不对称二取代胺：烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环并且取代芳基上的氨基被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻或被-SO₂NRR其中R是氢或烷基取代。

″芳烷氧基″是指芳基-亚烷基-O-。

″取代的芳烷氧基″是指取代的芳基-亚烷基-O-。

″羧基″是指-COOH及其药学可接受盐。

″羧基酯″是指-C(O)O-烷基-C(O)O-取代的烷基，-C(O)O-链烯基， -C(O)O-取代链烯基，-C(O)-O-芳基，-C(O)O-取代的芳基，-C(O)O-环烷基，-C(O)O-取代的环烷基，-C(O)O-杂芳基，-C(O)O-取代的杂芳基，-C(O)O-杂环，和-C(O)-O-取代的杂环。

″环烯基″是指3-8个碳原子的具有一个环的环状烯基。

″环烷氧基″是指-O-环烷基。

″取代的环烷氧基″是指-O-取代的环烷基。

″环烷基″是指3-12个碳原子的具有一个或多个稠合环的环烷基，例如，金刚烷基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环辛基等。优选″环烷基″是指3-8个碳原子的具有一个环的环状烷基。

″取代的环烷基″和″取代的环烯基″是指优选3-8个碳原子的具有1-5个独立选自下列的取代基的环烷基或环烯基：氧代(＝O)，硫代(＝S)，烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卤素，羟基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代杂环，取代的硫代杂环，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有选自下列的不同取代基的不对称二取代胺：烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环和具有被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻的氨基的取代链炔基或被下列基团取代的链炔基/取代链炔基：-SO₂-烷基，-SO₂-取代的烷基，-SO₂-链烯基，-SO₂-取代链烯基，-SO₂-环烷基，-SO₂-取代的环烷基，-SO₂-芳基，-SO₂-取代的芳基，-SO₂-杂芳基，-SO₂-取代的杂芳基，-SO₂-杂环，-SO₂-取代的杂环和-SO₂NRR其中R是氢或烷基。

优选的取代基选自：氧代(＝O)，硫代(＝S)，烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，酰氧基，氨基，取代的氨基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，羧基，羧基酯，氰基，环烷基，取代的环烷基，环烷氧基，取代的环烷氧基，卤素，杂芳基，取代的杂芳基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环，取代的杂环，羟基，硝基，和氧羰基氨基。

″胍基″是指-NRC(＝NR)NRR，-NRC(＝NR)NR-烷基，-NRC(＝NR)NR-取代的烷基，-NRC(＝NR)NR-链烯基，-NRC(＝NR)NR-取代链烯基，-NRC(＝NR)NR-链炔基，-NRC(＝NR)NR-取代链炔基，-NRC(＝NR)NR-芳基，-NRC(＝NR)NR-取代的芳基，-NRC(＝NR)NR-环烷基，-NRC(＝NR)NR-杂芳基，-NRC(＝NR)NR-取代的杂芳基，-NRC(＝NR)NR-杂环，和-NRC(＝NR)NR-取代的杂环其中各R独立地是氢和烷基并且氨基之一被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″胍基砜″是指基团-NRC(＝NR)NRSO₂-烷基，-NRC(＝NR)NRSO₂-取代的烷基，-NRC(＝NR)NRSO₂-链烯基，-NRC(＝NR)NRSO₂-取代的链烯基，-NRC(＝NR)NRSO₂-链炔基，-NRC(＝NR)NRSO₂-取代链炔基，-NRC(＝NR)NRSO₂-芳基，-NRC(＝NR)NRSO₂-取代的芳基，-NRC(＝NR)NRSO₂-环烷基，-NRC(＝NR)NRSO₂-取代的环烷基，-NRC(＝NR)NRSO₂-杂芳基，和-NRC(＝NR)NRSO₂-取代的杂芳基，-NRC(＝NR)NRSO₂-杂环，和-NRC(＝NR)NRSO₂-取代的杂环其中各R独立地是氢和烷基和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″卤代″或″卤素″是指氟，氯，溴和碘并且优选是氟，氯或溴。

″杂芳基″是指环内具有2-10个碳原子和1-4个杂原子的芳族碳环基团，其中该杂原子选自氧、氮和硫或其氧化物。该杂芳基可以具有单环(例如，吡啶基或呋喃基)或多个稠合环(例如，吲嗪基或苯并噻酚基)，其中一个或多个的稠合环可以是或可以不是芳香的，条件是连接点经过芳环原子。此外，杂芳基的杂原子可以被氧化，即，构成吡啶N-氧化物或1，1-二氧代-1，2，5-噻二唑等。此外，该环的碳原子可以被氧代(＝O)取代。优选的杂芳基包括吡啶基，吡咯基，吲哚基，呋喃基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，1-氧代-1，2，5-噻二唑基和1，1-二氧代-1，2，5-噻二唑基。

″取代的杂芳基″是指被1-3个选自希腊的取代基取代的杂芳基：羟基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基，氨基酰基，氨基羰氧基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，羰氧基酰胺基，氰基，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂环，取代的硫代杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，卤素，硝基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-S(O)₂-烷基，-S(O)₂-取代的烷基，-S(O)₂-环烷基，-S(O)₂-取代的环烷基，-S(O)₂-链烯基，-S(O)₂-取代链烯基，-S(O)₂-芳基，-S(O)₂-取代的芳基，-S(O)₂-杂芳基，-S(O)₂-取代的杂芳基，-S(O)₂-杂环，-S(O)₂-取代的杂环，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，- NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有选自下列的不同取代基的不对称二取代胺：烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环和取代芳基上的氨基被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻或被-SO₂NRR取代，其中R是氢或烷基。

优选该取代基选自取代芳基中优选定义的那些。

″杂芳氧基″是指基团-O-杂芳基并且″取代的杂芳氧基″是指-O-取代的杂芳基。

″杂芳烷氧基″是指杂芳基-亚烷基-O-。

″取代的杂芳烷氧基″是指取代的杂芳基-亚烷基-O-。

″杂环″或″杂环″是指具有单环或多个稠合环的环内含1-10个碳原子和1-4个碳原子的饱和或不饱和基团，其中杂原子选自氮、硫或氧，在稠合环系中，一个或多个环可以是芳基或杂芳基。

″取代的杂环″是指被1-3个选自下列的取代基取代的杂环：氧代(＝O)，硫代(＝S)，烷氧基，取代的烷氧基，酰基，酰基氨基，硫代羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫代脒基，氨基酰基，氨基羰基氨基，氨基硫代羰基氨基，氨基羰氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卤素，羟基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-环烷基，羧基-取代的环烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基杂芳基，羧基-取代的杂芳基，羧基杂环，羧基-取代的杂环，环烷基，取代的环烷基，胍基，胍基砜，硫醇，硫代烷基，取代的硫代烷基，硫代芳基，取代的硫代芳基，硫代环烷基，取代的硫代环烷基，硫代杂芳基，取代的硫代杂芳基，硫代杂环，取代的硫代杂环，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，环烷氧基，取代的环烷氧基，杂芳氧基，取代的杂芳氧基，-C(O)O-芳基-C(O)O-取代的芳基，杂环氧基，取代的杂环氧基，氧羰基氨基，氧硫代羰基氨基，-OS(O)₂-烷基，-OS(O)₂-取代的烷基，-OS(O)₂-芳基，-OS(O)₂-取代的芳基，-OS(O)₂-杂芳基，-OS(O)₂-取代的杂芳基，-OS(O)₂-杂环，-OS(O)₂-取代的杂环，-OSO₂-NRR其中R是氢或烷基，-NRS(O)₂-烷基，-NRS(O)₂-取代的烷基，-NRS(O)₂-芳基，-NRS(O)₂-取代的芳基，-NRS(O)₂-杂芳基，-NRS(O)₂-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-杂环，-NRS(O)₂-取代的杂环，-NRS(O)₂-NR-烷基，-NRS(O)₂-NR-取代的烷基，-NRS(O)₂-NR-芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的芳基，-NRS(O)₂-NR-杂芳基，-NRS(O)₂-NR-取代的杂芳基，-NRS(O)₂-NR-杂环，-NRS(O)₂-NR-取代的杂环其中R是氢或烷基，一-和二-烷基氨基，一-和二-(取代的烷基)氨基，一-和二-芳基氨基，一-和二-取代的芳基氨基，一-和二-杂芳基氨基，一-和二-取代的杂芳基氨基，一-和二-杂环氨基，一-和二-取代的杂环氨基，具有选自下列的不同取代基的不对称二取代胺：烷基，取代的烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环和具有被常规封阻基团例如Boc、Cbz、甲酰基等封阻的氨基的取代链炔基或被下列取代基取代的链炔基/取代链炔基：-SO₂-烷基，-SO₂-取代的烷基，-SO₂-链烯基，-SO₂-取代链烯基，-SO₂-环烷基，-SO₂-取代的环烷基，-SO₂-芳基，-SO₂-取代的芳基，-SO₂-杂芳基，-SO₂-取代的杂芳基，-SO₂-杂环，-SO₂-取代的杂环和-SO₂NRR其中R是氢或烷基。

优选地，该取代基选自定义取代的环烷基中的优选取代基。

杂环和杂芳基的实例包括，但不限于，氮杂环丁烷，吡咯，咪唑，吡唑，吡啶，吡嗪，嘧啶，哒嗪，吲嗪，异吲哚，吲哚，二氢吲哚，吲唑，嘌呤，喹嗪，异喹啉，喹啉，酞嗪，萘基吡啶，喹喔啉，喹唑啉，噌啉，蝶啶，咔唑，咔啉，菲啶，吖啶，菲咯啉，异噻唑，吩嗪，异_唑，吩唑嗪，吩噻嗪，咪唑烷，咪唑啉，哌啶，哌嗪，哌啶，吲哚啉，邻苯二甲酸亚胺，1，2，3，4-四氢异喹啉，4，5，6，7-四氢苯并[b]噻吩，噻唑，噻唑烷，噻吩，苯并[b]噻吩，吗啉代，吗啉基，硫代吗啉代，硫代吗啉基(也称作硫吗啉基)，哌啶基，吡咯烷，四氢呋喃基等。

″杂环氧基″是指-O-杂环和″取代的杂环氧基″是指-O-取代的杂环。

″N，N-二甲基氨基甲酰基氧基″是指-OC(O)N-(CH₃)₂。

″氧代″是指(＝O)。

″氧代亚烷基″是指-OCH₂CHR^d-其中R^d是烷基。

″氧羰基氨基″是指-OC(O)NH₂，-OC(O)-NRR，-OC(O)NR-烷基，-OC(O)NR-取代的烷基，-OC(O)NR-链烯基，-OC(O)NR-取代链烯基，-OC(O)NR-链炔基，-OC(O)-NR-取代的链炔基，-OC(O)NR-环烷基，-OC(O)NR-取代的环烷基，-OC(O)NR-芳基，-OC(O)NR-取代的芳基，-OC(O)NR-杂芳基，-OC(O)NR-取代的杂芳基，-OC(O)NR-杂环，和-OC(O)NR-取代的杂环其中R是氢，烷基或其中各R与氮原子一起构成杂环或取代的杂环环和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″氧硫代羰基氨基″是指-OC(S)NH₂，-OC(S)NRR，-OC(S)NR-烷基，-OC(S)NR-取代的烷基，-OC(S)NR-链烯基，-OC(S)NR-取代的链烯基，-OC(S)NR-链炔基，-OC(S)NR-取代的链炔基，-OC(S)NR-环烷基，-OC(S)NR-取代的环烷基，-OC(S)NR-芳基，-OC(S)NR-取代的芳基，-OC(S)NR-杂芳基，-OC(S)NR-取代的杂芳基，-OC(S)NR-杂环，和-OC(S)NR-取代的杂环其中R是氢，烷基或其中各R与氮原子一起构成杂环或取代的杂环环和其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″硫代烷基″是指-S-烷基。

″取代的硫代烷基″是指-S-取代的烷基。

″硫代脒基″是指RSC(＝NH)-其中R是氢或烷基。

″硫代芳基″是指-S-芳基并且″取代的硫代芳基″是指-S-取代的芳基。

″硫代羰基氨基″是指-C(S)NRR其中各R选自氢，烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，芳基，取代的芳基，环烷基，取代的环烷基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环和其中各R与氮原子一起构成杂环或取代的杂环环其中烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，链炔基，取代链炔基，环烷基，取代的环烷基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环和取代的杂环如本文定义。

″硫代环烷基″是指-S-环烷基。

″取代的硫代环烷基″是指-S-取代的环烷基。

″硫代杂芳基″是指-S-杂芳基并且″取代的硫代杂芳基″是指-S-取代的杂芳基。

″硫代杂环″是指-S-杂环并且″取代的硫代杂环″是指-S-取代的杂环。

″硫醇″是指-SH。

″选择性取代″是指所述基团可以是未取代的或者所述基团可以被取代。

″药学可接受盐″是指保持本发明化合物的生物有效性和性质并且在生物学上或其他方面不是不利的盐。在许多情况下，本发明的化合物由于其中氨基和/或羧基的存在而能够形成酸和/或碱盐。

药学可接受碱加成盐可以由无机和有机碱制成、由无机碱衍生的盐包括，只是举例，钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。衍生自有机碱的盐包括，但不限于，伯、仲和叔胺类的盐，例如烷基胺类，二烷基胺类，三烷基胺类，取代的烷基胺类，二(取代的烷基)胺类，三(取代的烷基)胺类，链烯基胺类，二链烯基胺类，三链烯基胺类，取代链烯基胺类，二(取代链烯基)胺类，三(取代链烯基)胺类，环烷基胺类，二(环烷基)胺类，三(环烷基)胺类，取代的环烷基胺类，二取代的环烷基胺，三取代的环烷基胺类，环烯基胺类，二(环烯基)胺类，三(环烯基)胺类，取代的环烯基胺类，二取代的环烯基胺，三取代的环烯基胺类，芳基胺类，二芳基胺类，三芳基胺类，杂芳基胺类，二杂芳基胺类，三杂芳基胺类，杂环胺类，二杂环胺类，三杂环胺类，混和二-和三-胺类其中胺上的取代基中至少两个不相同且选自烷基，取代的烷基，链烯基，取代链烯基，环烷基，取代的环烷基，环烯基，取代的环烯基，芳基，杂芳基，杂环等。还包括其中氨基氮上的2和3个取代基构成杂环和杂芳基的胺类。

适当胺类的实例包括，只是举例，异丙基胺，三甲基胺，二乙胺，三(异-丙基)胺，三(正丙基)胺，乙醇胺，2-二甲基氨基异常，氨基丁三醇，赖氨酸，精氨酸，组氨酸，咖啡因，普鲁卡因，hydrabamine，胆碱，甜菜碱，乙二胺，葡糖胺，N-烷基葡糖胺类，可可碱，嘌呤类，哌嗪，哌啶，吗啉，N-乙基哌啶等。还应当理解其他羧酸衍生物也适用于本发明的实施，例如，羧酸酰胺类，包括羧酸酰胺类，低级烷基羧酰胺类，二烷基羧酰胺类等。

药学可接受酸加成盐可以由无机和有机酸制成。衍生自无机酸的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生自有机酸的盐包括乙酸、丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

术语″药学可接受阳离子″是指药学可接受盐的阳离子。

化合物的制备

本发明的化合物可很容易地从可获得的起始原料、利用下列通用夫妇会过程来制成。应理解虽然给出了典型或优选的过程条件(即，反应温度，时间，反应物的摩尔比，溶剂，压力，等等)，也可以采用其他条件，除非另外说明。最佳反应条件可以根据所用的特定反应物或溶剂而改变，但本领域技术人员提供常规最佳化程序可以测定这些条件。

此外，本领域技术人员应理解，常规保护基可以是需要的，以防止某些官能团发生不希望的反应。适合不同官能团的保护基和适合特别官能团的保护和脱保护的条件是本领域熟知的。例如，多种保护基公开在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis，第二版，Wiley，New York，1991，及其引用的参考文献中。

此外，本发明的化合物一般含有一个或多个手性中心。所以，如果需要，这样的化合物可以制备或分离为纯净的立体异构体，即，成为单独的对映异构体或非对映异构体，或成为富集立体异构体的混合物混合物。所有此类立体异构体(和富集的混合物)包括在本发明的范围内，除非另外说明。纯净的立体异构体(或附加的混合物)可以利用，例如，本领域熟知的旋光性起始原料或立体选择性试剂来制备。或者，此类化合物的外消旋混合物可以利用，例如，手性柱色谱、手性拆分试剂等等来分离。

按照下列化合物的制备方法，R¹，R²，R³，R⁵，R⁶和R⁷按照本文中对式I，IA，II和IIA的定义。此外，根据下列化合物的制备方法，R¹等同于：

对于式IB在此定义为Ar¹，

对于式II和IIA在此定义为R²¹，和

对于式IIB在此定义为Ar²¹；

R²等同于：

对于式IB在此定义为R¹²，

对于式II和IIA在此定义为R²²，和

对于式IIB在此定义为R³²；

R²等同于：

对于式IB在此定义为R¹³，

对于式II和IIA在此定义为R²³，和

对于式IIB在此定义为R³³；

R⁵等同于：

对于式II和IIA在此定义为R²⁵；和

R⁶等同于：

对于式I和II在此定义为OH，

对于式IB在此定义为OR¹⁴，

对于式IIA在此定义为R²⁶，和

对于式IIB在此定义为OR³⁴。

在一优选的合成方法中，式I，IA，II和IIA的化合物，其中Q式-C(O)NR⁷-，和式IB，IC，和IIB的化合物的制备通过首先偶联式III的氨基酸：

与式IV的磺酰氯：

生成式V的N-磺酰基氨基酸：

该反应通常通过式III的氨基酸与至少一当量，优选约1.1至约2当量的磺酰氯IV在惰性稀释剂例如二氯甲烷等中反应来实施。通常，该反应在约-70℃-约40℃的反应温度下进行约1至约24小时。优选地，此反应在适当碱的存在下进行以清除反应过程中产生的酸。适宜的碱包括，例如，叔胺类，例如三乙胺，二异丙基乙胺，N-甲基吗啉等。或者，该反应可以在Schotten-Baumann-型条件下采用含水碱如氢氧化钠等作为所述碱来完成。当该反应完成后，所得N-磺酰基氨基酸V通过常规方法回收，常规方法包括中和、萃取、沉淀、色谱、过滤等。

上述反应中使用的式III的氨基酸或者是已知的化合物，或者是可以由已知化合物通过常规合成过程制备的化合物。适合该反应使用的氨基酸的实例包括，但不限于，L-脯氨酸，trans-4-羟基-L-脯氨酸，cis-4-羟基-L-脯氨酸，trans-3-苯基-L-脯氨酸，cis-3-苯基-L-脯氨酸，L-(2-甲基)脯氨酸，L-2-哌啶酸，L-氮杂环丁烷-2-羧酸，L-吲哚啉-2-羧酸，L-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸，L-噻唑烷-4-羧酸，L-(5，5-二甲基)噻唑烷-4-羧酸，L-硫吗啉-3-羧酸，甘氨酸，2-叔丁基甘氨酸，D，L-苯基甘氨酸，L-丙氨酸，α-甲基丙氨酸，N-甲基-L-苯基丙氨酸，L-二苯基丙氨酸，肌氨酸，D，L-苯基肌氨酸，L-天门冬氨酸-叔丁酯，L-谷氨酸γ-叔丁酯，L-(O-苄基)丝氨酸，1-氨基环丙烷羧酸，1-氨基环丁烷羧酸，1-氨基环戊烷羧酸(环亮氨酸)1-氨基环己烷羧酸，L-丝氨酸等。如果需要，式III的氨基酸的相应羧酸酯，例如甲酯，乙酯等，可以用于与磺酰氯IV的上述反应中。随后采用常规试剂和条件水解羧酸的酯基，即，用碱金属氢氧化物在惰性稀释剂例如甲醇/水中处理，此后得到N-磺酰基氨基酸V。

同样地，上述反应中使用的式IV的磺酰氯或者是已知的化合物，或者水可以由已知化合物通过常规合成过程制备的化合物。此类化合物通常由相应的磺酸，即从式R¹-SO₃H的化合物，利用三氯化磷和无氯化磷制成。该反应一般通过磺酸与约2-5摩尔当量的三氯化磷和无氯化磷单纯或在惰性溶剂如二氯甲烷中，在约0℃至约80℃下接触约1至约48小时来实施，得到所述的磺酰氯。另外，式IV的磺酰氯可以由相应的硫醇化合物，即从式R¹-SH的化合物，通过用氯(Cl₂)和水在常规反应条件下处理该硫醇来完成。

适合上述反应使用的磺酰氯的实例包括，但不限于，甲磺酰氯，2-丙烷磺酰氯，1-丁烷磺酰氯，苯磺酰氯，1-萘磺酰氯，2-萘磺酰氯，p- 甲苯磺酰氯，α-甲苯磺酰氯，4-乙酰氨基苯磺酰氯，4-脒基苯磺酰氯，4-叔丁基苯磺酰氯，4-溴苯磺酰氯，2-羧基苯磺酰氯，4-氰基苯磺酰氯，3，4-二氯苯磺酰氯，3，5-二氯苯磺酰氯，3，4-二甲氧基苯磺酰氯，3，5-双三氟甲基苯磺酰氯，4-氟苯磺酰氯，4-甲氧基苯磺酰氯，2-甲氧基羰基苯磺酰氯，4-甲基酰胺基苯磺酰氯，4-硝基苯磺酰氯，4-硫代酰胺基苯磺酰氯，4-三氟甲基苯磺酰氯，4-三氟甲氧基苯磺酰氯，2，4，6-三甲基苯磺酰氯，2-苯基乙磺酰氯，2-噻吩磺酰氯，5-氯-2-噻吩磺酰氯，2，5-二氯-4-噻吩磺酰氯，2-噻唑磺酰氯，2-甲基-4-噻唑磺酰氯，1-甲基-4-咪唑磺酰氯，1-甲基-4-吡唑磺酰氯，5-氯-1，3-二甲基-4-吡唑磺酰氯，3-吡啶磺酰氯，2-嘧啶磺酰氯等。如果需要，磺酰氟、磺酰溴或磺酸酐在上述反应中可以用来代替磺酰氯生成式V的N-磺酰基氨基酸。

式V的中间体N-磺酰基氨基酸也可以通过式VI的磺酰氨：

与式L(R³)CHCOOR^Y的羧酸衍生物反应来制备，其中L是离去基团，例如氯，溴，碘，甲磺酸酯，甲苯磺酸酯等，和氢或烷基。该反应通常通过磺酰胺VI与至少一当量，优选1.1-2当量的羧酸衍生物，在适当碱如三乙胺的存在下，在惰性稀释剂如DMF中，在约24℃至约37℃下接触约0.5至约4小时。该反应进一步由Zuckermann等在J.Am.Chem.Soc.，1992，114，10646-10647中加以描述。该反应优选使用的羧酸衍生物是α-氯和α-溴代羧酸酯，例如溴代乙酸叔丁酯等。当采该反应中用羧酸酯时，该酯基随后采用常规过程水解得到式V的N-磺酰基氨基酸。

本发明的化合物随后通过偶联中间体式V的N-磺酰基氨基酸和式VII的氨基酸衍生物来制备：

该偶联反应一般采用公知的偶联剂例如碳二亚胺类，BOP试剂(苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸盐)等来实施。适当的碳二亚胺类包括，例如，二环己基碳二亚胺(DCC)，1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)等。如果需要，也可以使用聚合物支持形式的碳二亚胺偶联剂，包括，例如，那些公开在Tetrahedrorn Letters，34(48)7685(1993)中的。此外，公知的偶联助催化剂，例如N-羟基琥珀酰亚胺，1-羟基苯并三唑等，可以用于促进该偶联反应。

该偶联反应一般通过N-磺酰基氨基酸V与约1至约2当量的偶联剂和至少1独立，优选约1至约1.2当量的氨基酸衍生物VII在惰性稀释剂如二氯甲烷，氯仿，乙腈，四氢呋喃，N，N-二甲基甲酰胺等中接触来完成。通常，该反应在约0℃至约37℃的温度下进行约12至约24小时。当反应完成后，本发明的化合物通过常规方法回收，包括中和，萃取，沉淀，色谱，过滤等。

或者，N-磺酰基氨基酸V可以转化为酰卤化物并且该酰卤化物与氨基酸衍生物VII偶联得到本发明的化合物。V的酰卤化物可以通过V与无机酰卤化物接触，例如芽硫酰氯，三氯化磷，三溴化磷或五氯化磷来制备，或优选地，与草酰氯在常规条件下反应。通常，该反应采用约1-5摩尔当量无机酰卤化物或草酰氯，单纯或在惰性溶剂如二氯甲烷或四氯化碳中，在约0℃-约80℃的温度范围内进行约1至约48小时。该反应还可以使用催化剂如DMF。

N-磺酰基氨基酸V的酰卤化物随后与至少1当量，优选约1.1至约1.5当量，的氨基酸衍生物VII在惰性稀释剂如二氯甲烷中，在约-70℃至约40℃的温度范围内接触约1至约24小时。优选地，该反应在适当碱的存在下进行除去反应过程中产生的酸。适宜的碱包括，例如，叔胺类，例如三乙胺，二异丙基乙胺，N-甲基吗啉等。另外，该反应在Schotten-Baumann-型条件下采用含水碱，例如氢氧化钠等实施。当反应完成后，本发明的化合物通过常规方法进行回收，包括中和，萃取，沉淀，色谱，过滤，等。

另外，本发明的化合物的制备可以首先形成式VIII的二氨基酸衍生物：

式VIII的二氨基酸衍生物可以很容易利用常规氨基酸偶联技术和试剂、通过偶联式III的氨基酸和式VII的氨基酸衍生物来制备，所述偶联试剂例如碳二亚胺类，BOP试剂等，如上所述。二氨基酸VIII此后可以用式IV的磺酰氯并且采用上述_化成方法磺化得到本发明的化合物。

上述反应中使用的式VII的氨基酸衍生物或者是已知的化合物，或者是可以由已知化合物通过常规合成过程制备的化合物。例如，式VII的氨基酸衍生物可以通过用烷基或取代的烷基卤化物、将市售2-乙酰氨基丙二酸二乙酯(Aldrich，Milwaukee，Wisconsin，USA)。该反应一般通过将2-乙酰氨基丙二酸二乙酯用至少1当量的乙醇钠和至少1当量的烷基或取代烷基卤化物在回流乙醇中处理约6至约12小时来实施。所得C-烷基化的丙二酸酯此后通过在盐酸水溶液中回流约6至约12小时实施脱乙酰基化，水解并脱羧基，得到所述氨基酸，通常是其盐酸盐。

适合上述反应的式VII氨基酸衍生物的实例包括，但不限于，L-酪氨酸甲酯，L-3，5-二碘代酪氨酸甲酯，L-3-碘代酪氨酸甲酯，β-(4-羟基-萘-1-基)-L-丙氨酸甲酯，(3-(6-羟基-萘-2-基)-L-丙氨酸甲酯，等等。显然，如果需要，也可以采用上述化合物的其他酯或酰胺。

为了易于合成，本发明的化合物一般被制成酯，即，其中R⁶是烷氧基或取代的烷氧基等。如果需要，该酯基可以利用常规条件和试剂水解得到相应的羧酸。通常，该反应通过用至少1当量的碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾，在惰性稀释剂如甲醇或混甲醇和水的化合物中，在约0℃至约24℃的温度范围内处理该酯约1至约10小时来实现。另外，苄酯可以用钯催化剂，例如碳载钯氢解脱除。

如果需要，利用上述常规偶联试剂和条件，所得羧酸可以偶联于胺类例如β-丙氨酸乙酯，羟胺类例如羟胺和N-羟基琥珀酰亚胺，烷氧基胺类和取代的烷氧基胺类如O-甲基羟基胺和O-苄基羟基胺等。

本领域技术人员应清除，存在于任何本发明化合物的取代基上的其他官能团可很容易地在利用熟知的合成过程进行上述偶联反应之前或之后加以修饰或衍生化。例如，本发明化合物或其中间体的取代基上的硝基可以很容易地通过在钯催化剂，例如碳载钯的存在下氢化来还原，得到相应的氨基。该反应一般在约20℃至约50℃的温度下在惰性稀释剂如甲醇中进行约6至约24小时。在例如R³取代基上带有硝基的化合物可以制备，例如，使用4-硝基苯基丙氨酸衍生物等按照上述偶联反应制备。

同样地，吡啶基可以在铂催化剂，例如氧化铂的存在下，在酸性稀释剂中氢化得到相应的吡啶基类似物。通常，该反应通过用氢在约20psi至约60psi，优选约40psi的压力下，在催化剂的存在下在约20℃至约50℃的温度和酸性稀释剂如甲醇和盐水水溶液的化合物中，处理该吡啶化合物约2至约24小时来实施。具有吡啶基的化合物可很容易通过在上述偶联反应中使用，例如，β-(2-吡啶基)-，β-(3-吡啶基)-或β-(4-吡啶基)-L-丙氨酸衍生物来制备。

另外，当本发明的化合物或其中间体的取代基含有伯或仲氨基时，该氨基可以进一步在上述偶联反应之前或之后衍生得到，例如，酰胺类，磺酰胺类，脲类，硫脲类，氨基甲酸酯类，仲胺或叔胺类等。在取代基上带有伯氨基的化合物可以，例如通过还原上述相应硝基化合物来制备。或者，此类化合物可以在上述偶联反应中利用衍生自赖氨酸，4-氨基苯基丙氨酸等的式VII的氨基酸衍生物来制备。

譬如，具有含伯或仲氨基的取代基的本发明化合物或其中间体可以很容易地利用常规酰化试剂和条件实施N-酰化得到相应的酰胺。该酰化反应一般是通过将该氨基化合物用至少1当量，优选约1.1至约1.2当量的羧酸在偶联剂如碳二亚胺、BOP试剂(苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-六氟磷酸盐)等的存在下，在惰性稀释剂如二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺等中，在0℃至约37℃的温度下处理约4至约24小时来完成。优选地，使用助催化剂，例如N-羟基琥珀酰亚胺，1-羟基苯并三唑等，来促进该酰化反应。适合该反应使用的羧酸的实例包括，但不限于，N-叔丁氧基羰基甘氨酸，N-叔丁氧基羰基-L-苯基丙氨酸，N-叔丁氧基羰基-L-天门冬氨酸苄酯，苯甲酸，N-叔丁氧基羰基六氢异烟酸，N-甲基六氢异烟酸，N-叔丁氧基羰基3-哌啶甲酸，N-叔丁氧基羰基-L-四氢异喹啉-3-羧酸，N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酸等。

或者，本发明的含有伯或仲氨基的化合物或其中间体可以用酰卤化物或者羧酸酐N-酰化生成相应的酰胺。该反应一般通过使所述氨基化合物与至少1当量，优选约1.1至约1.2当量的酰卤化物或羧酸酐在惰性稀释剂例如二氯甲烷中，在约-70℃至约40℃的温度下接触约1至约24小时来实施。如果需要，酰化催化剂例如4-(N，N-二甲基氨基)吡啶可以用来催化该酰化反应。该酰化反应优选在适当碱的存在下进行以除去反应过程中生成的酸。适宜的碱包括，例如，叔胺类，例如三乙胺，二异丙基乙胺，N-甲基吗啉等。或者，该反应可以在Schotten-Baumann-型条件下利用含水碱，例如氢氧化钠等来实施。

适合该反应的酰卤化物和羧酸酐的实例包括，但不限于，2-甲基丙酰氯，三甲基乙酰氯，苯基乙酰氯，苯甲酰氯，2-溴苯甲酰氯，2-甲基苯甲酰氯，2-三氟甲基苯甲酰氯，异烟酰氯，烟酰氯，哌啶甲酰氯，乙酸酐，琥珀酸酐等。氨基甲酰氯类，例如N，N-二甲基氨基甲酰氯，N，N-二乙基氨基甲酰氯等，也可以用于该反应中得到脲。同样地，二碳酸酯s，例如碳酸二叔丁酯，可以用于得到氨基甲酸酯。

以类似方式，本发明的含有伯或仲氨基的化合物或其中间体可以用磺酰卤化物和磺酸酐N-磺化生成磺酰胺。适用于该反应的磺酰卤化物和磺酸酐包括，但不限于，甲磺酰氯，氯代甲磺酰氯，p-甲苯磺酰氯，三氟甲磺酸酐等。同样地，氨基磺酰氯类，例如二甲基氨基磺酰氯，可以用于得到磺酰胺类(例如，＞N-SO₂-N＜)。

此外，本发明的化合物或其中间体的取代基上存在的伯或仲氨基可以与异氰酸酯或硫异氰酸酯反应分别生成脲或硫脲。该反应隐通过使所述氨基化合物与至少1当量，优选约1.1至约1.2当量的异氰酸酯或硫异氰酸酯在惰性稀释剂如甲苯等中，在约24℃至约37℃的温度下接触约12至约24小时来实施。该反应使用的异氰酸酯和硫异氰酸酯是可商购的或者可以自商购的化合物利用已知的合成方法来制备。例如，异氰酸酯和硫异氰酸酯很容易通过适当胺与碳酰氯或二氯硫化碳反应来制备。适合该反应的异氰酸酯和硫异氰酸酯的实例包括，但不限于，异氰酸乙酯，异氰酸丙酯，异氰酸4-氰基苯酯，异氰酸3-甲氧基苯酯，异氰酸2-苯基乙酯，硫代异氰酸甲酯，硫代异氰酸乙酯，硫代异氰酸2-苯基乙酯，卤代异氰酸3-苯基丙酯，硫代异氰酸3-(N，N-二乙基氨基)丙酯，硫代异氰酸苯酯，硫代异氰酸苄酯，硫代异氰酸3-吡啶基酯，月桂酸异硫氰酸酯(异构体L)，等。

此外，当本发明的化合物或其中间体含有伯或仲氨基，该氨基可以用醛类或酮类还原性烷基化得到仲或叔氨基。该反应一般通过使该氨基化合物与至少1当量，优选约1.1至约1.5当量的醛或酮和至少1当量的基于该氨基化合物计的金属氢化物还原剂如硼氢化钠，在惰性稀释剂如甲醇、四氢呋喃、其混合物等中，在约0℃至约50℃的温度下接触约1至约72小时来实施。适合该反应的醛和酮包括，例如，苯甲醛，4-氯代苯甲醛，戊醛等。

以类似方式，当本发明的化合物或其中间体带有含羟基的取代基时，该羟基可以在上述偶联反应之前或之后进一步修饰或衍生得到，例如，醚，氨基甲酸酯等。式I和II的在R⁵取代基上带有羟基的化合物，例如可以在上述反应中使用衍生自酪氨酸等的式VII的氨基酸衍生物来制备。

例如，具有含羟基的取代基的本发明化合物或其中间体可以很容易地O-烷基化生成醚。这种O-烷基化反应一般通过使羟基化合物与适当的碱金属或碱土金属碱如碳酸钾，在惰性稀释剂如丙酮，2-丁酮等中接触来实施，生成羟基的碱金属或碱土金属盐。这种盐一般不分离，而可以就地与至少1当量的烷基或取代的烷基卤化物或磺酸酯，例如烷基氯化物、溴化物、碘化物、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯反应，生成醚。通常，该反应在约60℃至约150℃的温度下C进行约24至约72小时。优选地，当该反应使用烷基氯化物或溴化物时将催化量的碘化钠或钾加入到反应混合物中。

适合该反应使用的烷基或取代的烷基卤化物和磺酸酯的实例包括，但不限于，溴代乙酸叔丁酯，N-叔丁基氯代乙酰胺，1-溴乙基苯，α-溴苯基乙酸乙酯，2-(N-乙基-N-苯基氨基)乙基氯，2-(N，N-乙基氨基)乙氯，2-(N，N-二异丙基氨基)乙基氯，2-(N，N-二苄基氨基)乙基氯，3-(N，N-乙基氨基)丙基氯，3-(N-苄基-N-甲基氨基)丙基氯，N-(2-氯乙基)吗啉，2-(六亚甲基亚氨基)乙基氯，3-(N-甲基哌嗪)丙基氯，1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪，2-(4-羟基-4-苯基哌啶)乙基氯，N-叔丁氧基羰基-3-哌啶甲基甲苯磺酸酯等。

或者，本发明的化合物或其中间体的取代基上存在的羟基可以利用Mitsunobu反应O-烷基化。在该反应中，醇，例如3-(N，N-二甲基氨基)-1-丙醇等，与约1.0至约1.3当量的三苯基膦和约1.0至约1.3当量的偶氮二羧酸二乙酯在惰性稀释剂如四氢呋喃中，在约-10℃至约5℃的温度下反应约0.25至约1小时。此后加入约1.0至约1.3当量的羟基化合物，例如N-叔丁基酪氨酸甲酯，并且将该反应混合物在约0℃至约30℃的温度下搅拌约2至约48小时，得到O-烷基化产物。

以类似方式，含有芳基羟基的本发明的化合物或其中间体可以与芳基碘化物反应得到二芳基醚。通常，该反应通过用适当的碱如氢化钠，在惰性稀释剂如二甲苯中在约-25℃至约10℃的温度下进行来得到羟基的碱金属盐。该盐随后与约1.1至约1.5当量的溴化亚铜二甲基硫化物复合物在约10℃至约30℃的温度范围内处理约0.5至约2.0小时，进而用约1.1至约1.5当量的芳基碘化物处理，例如2-碘代苯甲酸钠等反应。该反应进而被加热至至约70℃至约150℃达约2至约24小时，单独二芳基醚。

此外，含羟基的化合物也可很容易地衍生得到氨基甲酸酯。在制备氨基甲酸酯的另一方法中，本发明的羟基化合物或其中间体与约1.0至约1.2当量的4-硝基苯基氯甲酸酯在惰性稀释剂如二氯甲烷中，在约-25℃至约0℃的温度下接触约0.5至约2.0小时。所得碳酸酯用过量的，优选约2至约5当量的三烷基胺如三乙胺处理约0.5至2小时，此后用约1.0至约1.5当量的伯或仲胺处理得到氨基甲酸酯。适用于该反应仲的胺类的实例包括，但不限于，哌嗪，1-甲基哌嗪，1-乙酰基哌嗪，吗啉，卤代吗啉，吡咯烷，哌啶等。

或者，在制备氨基甲酸酯的另一方法中，含羟基的化合物与约1.0至约1.5当量的氨基甲酰氯在惰性稀释剂如二氯甲烷中，在约25℃至约70℃的温度下接触约2至约72小时。通常，该反应在适当碱的存在下进行以清除反应过程中产生的酸。适宜的碱包括，例如，叔胺类，例如三乙胺，二异丙基乙胺，N-甲基吗啉等。此外，优选将至少1当量(基于该羟基化合物计)的4-(N，N-二甲基氨基)吡啶加入到该反应混合物中以促进该反应。适合该反应的氨基甲酰氯的实例包括，例如，二甲基氨基甲酰氯，二乙基氨基甲酰氯等。

另外，当本发明的化合物或其中间体含有伯或仲羟基时，此类羟基可以很容易地转化为离去基团并置换生成，例如胺类，硫化物和氟化物。例如，4-羟基-L-脯氨酸的衍生物可以经过衍生羟基的亲核性置换反应转化为相应的4-氨基、4-硫代或4-氟-L-脯氨酸衍生物。通常，当这些反应中使用手性化合物时，衍生化羟基连接的碳原子上的立体化学一般发生反转。

这些反应的实施一般首先通过将该羟基化合物用至少1当量的磺酰氯，例如p-甲苯磺酰氯等在吡啶中处理，使羟基转化为离去基团，例如甲苯磺酸酯。该反应一般在约0℃至约70℃的温度下进行约1至约48小时。所得甲苯磺酸酯可以活人的用叠氮化钠置换，例如使该甲苯磺酸酯与至少1当量的叠氮化钠在惰性稀释剂如N，N-二甲基甲酰胺和水的混合物中，在约0℃至约37℃的温度下接触约1至约12小时得到相应的叠氮基化合物。该叠氮基随后可以还原，例如，通过用碳载钯催化剂氢化生成氨基(-NH₂)化合物。

同样地，甲苯磺酸酯基可以很容易地用硫醇置换生成硫化物。该反应一般通过使搅拌磺酸酯与至少1当量的硫醇如苯硫酚，在适当碱如1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)的存在下，在惰性稀释剂如N，N-二甲基甲酰胺中，在约0℃至约37℃的温度下接触约1至约12小时得到硫化物。此外，甲苯磺酸酯用吗啉代三氟化硫在惰性稀释剂如二氯甲烷中，在约0℃至约37℃的温度下处理约12至约24小时生成相应的氟化合物。

此外，具有含碘代芳基的取代基的本发明化合物或其中间体，例如当式I或II的R⁵是(4-碘代苯基)甲基时，可以很容易地在上述偶联反应之前或之后转化为联芳基化合物。通常，该反应通过将碘代芳基化合物用约1.1至约2当量的芳基碘化锌，例如2-(甲氧基羰基)苯基碘化锌，在钯催化剂如四(三苯基膦)钯的存在下，在惰性稀释剂如四氢呋喃中，在约24℃至约30℃的温度下处理直至该反应达到完全来实施。该反应进一步公开在例如Rieke的J.Org.Chem.1991，56，1445中。

在某些情况中，本发明的化合物或其中间体可以含有带有一个或多个硫原子的取代基上。该硫原子应存在，例如，当上述反应中使用的式III的氨基酸衍生自L-噻唑烷-4-羧酸、L-(5，5-二甲基)噻唑烷-4-羧酸、L-硫吗啉-3-羧酸等时。当存在时，该硫原子可以在上述偶联反应之前或之后利用常规试剂和反应条件生成亚砜或砜化合物。适合将硫化物氧化为亚砜的试剂包括，例如，过氧化氢，3-氯过氧苯甲酸(MCPBA)，高碘酸钠等。该氧化反应一般通过使硫化物化合物与约0.95至约1.1当量的氧化试剂在在惰性稀释剂，例如二氯甲烷，在约-50℃至约75℃的温度下接触约1至约24小时来实施。所得亚砜可以此后进一步通过使该亚砜与至少1附加当量的氧化剂，例如过氧化物、MCPBA、高锰酸钾等接触将其氧化为相应的砜。或者，该砜可以通过使硫化物与至少2当量，和优选过滤的氧化剂接触来直接制成。该反应详细公开在March″AdvanceedOrganic Chemstry″，4thEd.，pp.1202-1202，Wiley Publishers，(1992)。

如上所述，本发明的具有不是氢的R取代基的化合物可以用式III的N-取代氨基酸，例如肌氨酸、N-甲基-L-苯基丙氨酸等，按照上述偶联反应中制成。或者，此类化合物可以通过式I或V的磺酰胺(其中R²式氢)的N-烷基化反应、利用常规合成过程来制备。通常，该N-烷基化反应通过使该磺酰胺与至少1当量，优选1.1-2当量的烷基或取代的烷基卤化物在适当碱如碳酸钾的存在下，在惰性稀释剂如丙酮、2-丁酮等中，在约25℃至约70℃的温度下接触约2至约48小时来实施。适合该反应使用的烷基或取代烷基卤化物包括，但不限于，碘甲烷等。

此外，其中R²是氢和R¹是2-烷氧基羰基芳基的式I或V的磺酰胺可以分子内环化形成1，2-苯并异噻唑-3-酮衍生物或其类似物。该反应一般通过将磺酰胺如N-(2-甲氧基羰基苯基磺酰基)甘氨酸-L-苯基丙氨酸苄酯用约1.0-1.5当量的适当碱如碱金属氢化物，在惰性稀释剂如四氢呋喃中，在约0℃至约30℃的温度下处理约2至约48小时得到环化的1，2-苯并异三唑-3-酮衍生物来实施。

最后，其中Q是-C(S)NR⁷-的式I或II的化合物在上述合成方法中用氨基硫羰酸衍生物代替氨基酸来制成。此类氨基硫羰酸衍生物可以通过Shalaky等在J.Org.Chemy.，61：9045-9048(1996)和Brain等，J.Org.Chem.，62：3808-3809(1997)和其中引用的参考文献所述方法制备。

4.1.2.所述化合物的药物制剂

通常，本发明的化合物是以治疗有效量、通过这些化合物的可接受给药方式来施用。所述的化合物可以通过多种途径给药，包括，但不限于，口服，非肠道(例如，皮下，硬膜下，静脉内，肌肉内，鞘内，腹膜内，脑内，动脉内，或病灶内的给药途径)，局部，鼻内，局部(例如，外科应用或外科栓剂)，直肠，和肺(例如，气雾剂，吸入剂，或散剂)。所以，这些化合物作为可注射和口服组合物两者是有效的。该化合物可以通过输注或者快速浓注连续给药。优选地，所述的化合物通过非肠道途径给药。更优选地，所述化合物通过静脉内途径给药。此类组合物是以制药领域中熟知的方式制备。

本发明的化合物，即活性成分的精确量，应依赖于多个因素，例如疾病的严重性，即与脱髓鞘有关的病症或疾病或与被治疗的脱髓鞘有关的麻痹，该对象的年龄和相对健康情况，所用化合物的效价，给药的途径和形式，和其他因素。

此类化合物的毒性和治疗功效可以通过标准药学方法在细胞培养物或实验动物中测定，例如，测定LD₅₀(该群体的50％的致死剂量)和ED₅₀(该其他的50％的有效剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比例为治疗指数且可以表示为比例LD₅₀/ED₅₀。优选具有大治疗指数的化合物。

从细胞培养试验和动物研究得到的数据可以配制一定范围的人体用剂量。此类化合物的剂量适宜处于循环浓度的范围内，该范围包括ED₅₀ 并且毒性很小或没有毒性。该剂量可以在该范围内根据所用剂型和给药途径而变化。对于本发明方法中使用化合物，治疗有效剂量首先可以从细胞培养试验进行膀胱。根据细胞培养测定，剂量可以在动物模型中配制达到包括IC₅₀在内的循环血浆浓度范围(即，试验化合物达到症状半数最大抑制作用时的浓度)。此类新兴可以用于更精确地测定人体中的有效剂量。血浆水平可以如通过高效液体色谱测定。本发明的化合物的有效血液水平优选大于或等于10ng/ml。

施用给患者的药物组合物的量应根据给药的物种、给药的目的例如预防或治疗，患者状态、给药的方式等改变。在治疗应用中，组合物以足以治愈或者至少部分阻止该疾病的症状及其并发症的量施用给已患病的患者。足以完成这种目的的量定义为″治疗有效剂量″。此用途的有效量应依赖于被治疗的疾病状况，并且主治医生的判断应依赖于多种因素例如炎症的严重性，年龄，患者的体重和全身状况等。

给予患者的组合物是上述的药物组合物形式。这些组合物利用通过常规灭菌技术灭菌，或者可以灭菌过滤。所得水溶液可以包装或冷冻干燥，冷冻干燥制剂在给药之前与灭菌水载体混和。化合物制剂的pH一般应介于3-11，更优选5-9和首选7-8。应理解，某些上述赋形剂、载体或稳定剂的使用导致药物盐的形成。

活性化合物在宽剂量范围内有效并且一般以药学或治疗有效量给药。本发明的化合物的治疗剂量根据，例如治疗的特定用途、该化合物的给药方式、患者的健康和状况和主治医师的判断而改变。例如，对于静脉内给药，剂量一般应在约20μg至约50μg/kg体重，优选约100μg至约300μg/kg体重的范围内。适合鼻内给药的剂量范围一般是约0.1μg-1mg/kg体重。有效剂量可以外推自在体外或动物模型试验体系中得到的剂量-反应曲线。通常，医生应施用所述的化合物直至该剂量达到希望的效果。

当作为药物使用时，本发明的化合物经常以药物组合物的形式给药。本发明还包括药物组合物，它含有活性成分，一种或多种本发明的上述化合物，结合的一种或多种药学可接受载体或赋形剂。使用的赋形剂一般是适合人体对象或其他哺乳动物给药的赋形剂。在制备本发明的组合物，活性成分通常与赋形剂混和，用赋形剂稀释或封闭在载体内，它可以是胶囊、小药囊、纸或其他容器中。当该赋形剂充当稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体物质，它充当活性成分的赋形剂、载体或介质。所以，所述的组合物可以是片剂、丸剂、散剂、锭剂、小药囊、囊片剂、酏剂、栓剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体或液体介质)、含有例如至多10重量％的活性化合物的软膏、软和硬明胶胶囊，栓剂，灭菌可注射溶液和灭菌包装散剂的形式。

在制备制剂时，可能需要在与其他组分混和之前研磨活性化合物达到适当粒度。如果活性化合物基本上不溶，通常研磨至小于200目的粒度。如果活性化合物基本上可溶于水的，粒度一般通过研磨进行调整，达到在制剂至基本上均匀的分布，例如约40目。

适当赋形剂的一些实例包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，淀粉类，阿拉伯胶，磷酸钙，藻酸盐，黄芪胶，明胶，硅酸钙，微晶纤维素，减压下吡咯烷酮，纤维素，灭菌水，糖浆，和甲基纤维素。制剂可以另外含有：润滑剂例如滑石粉，硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化和助悬剂；防腐剂例如甲基-和丙基羟基苯甲酸酯；甜味剂；和矫味剂。本发明的组合物可以进行通过本领域已知的方法配制为给患者施用后使活性成分快速、长时间或延迟释放。

药物组合物及其动物剂型酯的活性化合物的量因此可以根据特定应用、引入的方式、具体化合物的硝基和所需浓度而变化和广泛调整。术语″单位剂型″是指物理上离散的单元，它适合作为人体对象和其他哺乳动物的单位剂量，各单元含有计算产生预期治疗效果的预定量的活性物质，以及适当的药学赋形剂。

治疗活性化合物的浓度可以在约1mg/ml-1g/ml的范围内改变。优选地，所述化合物可以在适当惰性载体酯配制用于非肠道给药，例如灭菌生理盐水溶液。例如，化合物在载体溶液酯的浓度一般在约1-100mg/ml之间。给药的剂量应根据给药途径来决定。优选的给药途径包括非肠道或静脉内给药。

治疗有效剂量是有效地使脱髓鞘明显减少且髓鞘再生显著增加的剂量。优选地，该量足以在对象中产生统计学意义量的髓鞘再生。例如，为了制备固体组合物例如片剂，将主要的活性成分与药学赋形剂混和形成含有本发明化合物的均匀混合物的固体制剂组合物。当提及这些制剂组合物是均匀的时，是指活性成分平衡地分散在整个组合物中，使该组合物可以容易地平等再分为有效单位剂型，例如片剂、烷基和胶囊。该固体制剂随后再分为上述类型的含有例如，0.1至约500mg本发明活性成分的单位剂型。

本发明的片剂或丸剂可以被包衣或化合得到提供延长作用的优点的剂型。例如，片剂或丸剂可以含有内剂型组分和外剂型组分，后者是前者外部的包封形式。两种组分可以通过肠溶层分开，它发挥在胃内抵抗崩解的作用并且允许内部组分完整通过进入到十二指肠或延迟释放。许多物种可以用于这样的肠溶层或包衣，此类物种包括多种多元酸和多元酸和例如紫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的混合物。

其中可以掺混本发明的新组合物的鲸口服或注射给药的液体形式包括水溶液，适当矫味的糖浆剂，水或油混悬剂，和含有可食用油的矫味乳剂例如玉米油、棉籽油、椰子油或花生油，以及酏剂和类似药学载体。

吸入和吹入用的组合物包括存在于药学可接受、水或戊基溶剂或其混合物中的溶液剂和混悬剂，和散剂。该液体或固体组合物可以含有上述适当的药学可接受赋形剂。该组合物可以通过口服或鼻呼吸途径给药来达到局部或系统性作用。在优选药学可接受溶剂中的组合物可以用惰性气体喷雾。喷雾溶液可以直接从喷雾装置吸入，或者该喷雾装置可以连接在面具塞上，或间歇性正压呼吸机。溶液剂、混悬剂或散剂组合物可以给药，优选经口服或经鼻自装置给药，该装置以适当方式输送制剂。

本发明的化合物可以以缓释形式给药。含水制剂的适当实例包括含有蛋白质的固体肾上腺聚合物的半渗性基质，该基质是有形物品的形式，例如，薄膜或微囊。缓释基质的实例包括聚酯，水凝胶(例如，如Langer 等，J.Biomed.Mater.Res.15：167-277(1981)和Langer，Chem.Tech.12：98-105(1982)所述的聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烷氧基))，聚交酯(美国专利3,773,919)，L-谷氨酸和γL-谷氨酸乙酯的共聚物(Sidman等，Biopolymers 22：547-556，1983)，非降解性乙烯乙酸乙酯(Langer等，如上)，可降解乳酸-羟乙酸共聚物例如LUPRONDEPOTTM(即，由乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)，和聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。

本发明的化合物可以以缓释形式给药，例如储库注射剂，植入制剂，或渗透泵，它可以以允许活性成分缓释的方式配制。缓释制剂的植入物是本领域熟知的。植入物可以用非生物降解性聚合物配制为，包括但不限于，微球，胶块，所述聚合物例如是乳酸和/或羟乙酸的聚合物，形成宿主良好耐受的可蚀性聚合物。该植入物被置于接近蛋白质沉积的位置(例如，the site of formation of与神经变性疾病有关的淀粉样蛋白质沉积的形成位置)，从而该位置的活性剂的浓度高于机体的其他位置。

下列制剂实施例举例说明本发明的药物组合物。

制剂实施例1

制备含有下列组分的硬明胶胶囊：

质量

组分 (mg/个胶囊)

活性组分 30.0

淀粉 305.0

硬脂酸镁 5.0

将上述组分混和并以340mg的亮填充到硬明胶胶囊中。

制剂实施例2

采用下列组分制备片剂：

质量

组分 (mg/胶囊)

活性组分 25.0

纤维素，微晶 200.0

胶体二氧化硅 10.0

硬脂酸 5.0

混和组分并压缩为片剂，每片重量为240mg。

制剂实施例3

制备含有下列组分的干粉吸入制剂：

组分重量％

活性组分 5

乳糖 95

活性混合物与乳糖混和且将该混合物加入到干粉吸入器械中。

制剂实施例4

制备如下的各自含有30mg活性组分的片剂：

组分质量(mg/胶囊)

活性组分 30.0mg

淀粉 45.0mg

微晶纤维素 35.0mg

聚乙烯吡咯烷酮(10％的水溶液) 4.0mg

羧基甲基淀粉钠 4.5mg

硬脂酸镁 0.5mg

滑石粉 1.0mg

总量 120mg

使活性组分、淀粉和纤维素通过20号目U.S.筛并彻底混和。将聚乙烯吡咯烷酮的溶液与所得粉末混和，随后通过16目U.S.筛。

由此制备的颗粒在50-60℃下干燥且通过16目U.S.筛。羧基甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石预先通过30号目U.S.筛，随后加入到上述颗粒，混和后，在压片机上压缩得到各重150mg的片剂。

制剂实施例5

各含有40mg药物的胶囊制备如下：

组分质量(mg/胶囊)

活性组分 40.0mg

淀粉 109.0mg

硬脂酸镁 1.0mg

总量 150.0mg

将活性组分、纤维素、淀粉、硬脂酸镁混和，通过20号目U.S.筛，并且以150mg的量填充到硬明胶胶囊中。

制剂实施例6

各含有25mg活性组分的栓剂制备如下：

组分量

活性组分 25mg

饱和脂肪酸甘油酯至2,000mg

使活性组分通过60号目U.S.筛且悬浮在预先用最少必需加入融化的饱和脂肪酸甘油酯中。将混合物随后倾入标称2.0g容量的栓剂模具内且令其冷却。

制剂实施例7

各含有50mg药物/5.0ml剂量的栓剂制备如下：

组分用量

活性组分 50.0mg

黄原胶 4.0mg

羧基甲基纤维素钠(11％)

微晶纤维素(89％) 50.0mg

蔗糖 1.75g

苯甲酸钠 10.0mg

矫味剂和着色剂 q.v.

纯水至5.0ml

将药物、蔗糖和黄原胶混和，通过10号目U.S.筛，并且随后与预先制备的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠在水至的溶液混和。苯甲酸钠、矫味剂和着色剂用一些水稀释并加入且搅拌。此后加入足够的水达到所需体积。

制剂实施例8

各含有15mg活性组分的硬明胶胶囊制备如下：

组分用量

活性组分 15.0mg

淀粉 407.0mg

硬脂酸镁 3.0mg

总量 425.0mg

将活性组分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混和，通过20号目U.S.筛，并且以560mg的量填充到硬明胶胶囊中。

制剂实施例9

静脉内制剂可以制备如下：

组分用量

活性组分 250.0mg

等渗盐水 1000ml

治疗性化合物的组合物一般被治愈具有灭菌入口的容器内，例如带有塞子的静脉内溶液袋或瓶，该噻唑可以用皮下注射针头或类似尖锐工具刺穿。

制剂实施例10

局部制剂可以制备如下：

组分质量

活性组分 1-10g

乳化蜡 30g

液体石蜡 20g

白色软石蜡至100g

加入白色软石蜡。掺混液体石蜡和乳化蜡并且搅拌直至溶解。加入活性组分并持续搅拌直至分散为止。使该混合物冷却直至为固体。

本发明的方法至使用的另一优选制剂采用透皮给药装置(″贴剂″)。该透皮贴剂可以用来以控制量连续或间断地输注本发明的化合物。透皮贴剂的构造和在药剂的输送中应用是本领域熟知的。参见，例如，美国专利5,023,252，授权给1991年7月11日，在此引入作为参考。此类贴剂可以构成连续的、脉动的和按需的药剂输送。

当希望或需要将药物组合物引入到脑部时可以采用直接或间接放置技术。直接技术通常包括将药物输送导管放置到宿主的心室中以绕过血脑屏障。一种用于转运生物因子至机体的特定解剖区域的可植入给药体系公开在美国专利5,011,472中，其在此引入作为参考。

一般优选间接技术，该技术通常包括通过将亲水性药物转化为脂溶性药物来配制组合物来达到药物的潜伏。潜伏化一般是通过将药物上存在的羟基、羰基、硫酸根和伯氨基封阻以使该药物更加脂溶性并易于转运通过血脑屏障。或者，亲水性药物的输送可以通过动脉内输注高渗溶液来增加，该溶液可以短暂地打开性血脑屏障。

按照本发明的一个方面，所得化合物可以单独给药，作为化合物与髓鞘再生和/或抗-α-4-抗体联合或与抗炎药联合的联合形式，其一般用于治疗与脱髓鞘有关的病症和疾病。当联合给药时，所述的小化合物可以在与这些其他化合物或组合物相同的制剂中给药，或者在单独的制剂中给药。当联合给药时，所述的髓鞘再生药物可以在其他化合物和组合物给药之前、之后或并行地给药。

本发明的药物组合物适用于多种给药体系。适用于本发明的制剂参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mace Publishing Company，Philadelphia，PA，17th ed.(1985)。

为了提高血清半衰期，所述混和物可以被包封，引入到脂质体的腔内，制备成胶体，或采用其他常规技术来延长化合物的半衰期。许多方法可被用来制备脂质体，例如，Szoka等在美国专利Nos.4,235,871、4,501,728和4,837,028中所述的，其分别引入作为参考。

聚合物偶联物

本发明的化合物可以配制并作为聚合物偶联物给药。聚合物偶联物可具有优于非偶联聚合物的优点，例如改进的溶解度和稳定性。

因此，单一聚合物分子可以用于与本发明的化合物偶联，尽管也可以考虑将一个以上的聚合物分子相连。偶联的本发明化合物在体内和非体内用途中都可以应用。此外，应理解，如果适合于最终的用途，所述的偶联聚合物可以采用任何其他基团、部分，或者其他偶联类型。譬如，在一些用途中可以共价结合聚合物官能团，由此产生抗LTV降解性，或者抗氧剂，或者赋予该聚合物其他性质或者特性。作为另一实例，在某些应用中可以适宜地官能化该聚合物使其具有反应性且确保它交联于药物分子并且改进整个偶联材料的多种性质或者特征。所以，该聚合物可以具有任何官能性、重复基团、键或其他不有损于偶联本发明组合物的化合物在其预期目的上的功效的组成结构。

可用来获得这些特性的示例聚合物如上所述，以及公开在PCTWO01/54690(to Zheng等)，其全文在此引入作为参考。该聚合物可以偶联于本发明的化合物(优选经连接部分相连)形成在人体酶作用下不会明显断裂的稳定键。通常，所谓不可″明显″断裂的键是要求，不超过约20％的与聚合物以及和该聚合物连接的本发明化合物相连的键会在24小时内断裂，这可通过本领域的标准技术测定，包括但不限于，高压液体色谱(HPLC)。

本发明的化合物最优选经所述聚合物上的末端反应基团偶联，尽管偶联反应也可以是非末端反应基团的分支。具有反应基团的聚合物在此称作″活化聚合物″。该反应基团选择性地与本发明化合物上的反应基团反应。活化聚合物发生反应，从而本发明的化合物上任何可利用的官能团均可以进行连接。本发明化合物的氨基、碳、游离羧基、适当活化的羰基、羟基、胍基、氧化碳水化和物部分、氨基、碳和巯基(如果可利用的话)可以用作连接位置。

通常，根据浓度，每摩尔的本发明化合物使用约1.0-约10摩尔的活化聚合物。最终量是在反应程度最大化且产物的非特定修饰最小化之间的平衡，同时，确定保持最佳活性的化学性质，而且同时使本发明化合物的半寿期最佳化。适宜地，保持至少约50％的本发明化合物的生物活性，并且首选保持100％。

该反应可以通过任何适当的本领域用于使生物活性物质与惰性聚合物反应的已知方法来进行。通常，该方法包括制备活化聚合物且此后使本发明的化合物与该活化聚合物，由此制得适合配制的可溶性化合物。这种修饰反应可以通过数种方法来进行，其可以包括一个或多个步骤。本申请涉及的此类聚合物质适宜在室温下可溶于水。此类聚合物的非限定实例包括聚环氧烷均聚物，例如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇，聚氧乙烯化多元醇，其共聚物及其嵌段共聚物，条件是保持该嵌段共聚物的水溶性。

在本发明的优选实践中，C1-C4烷基聚亚烷基二醇的聚亚烷基二醇残基优选聚乙二醇(PEG)，或此类热潮的聚(氧化)亚烷基二醇残基适宜掺杂在感兴趣的聚合物体系中。所以，与本发明化合物相连的聚合物可以是聚乙二醇(PEG)的均聚物或是聚氧乙烯化多元醇，只要在所有情形中该聚合物在室温下可溶于水。此类聚合物的非限定实例包括聚环氧烷均聚物，例如PEG或聚丙二醇，聚氧乙烯化二元醇，其共聚物和其嵌段共聚物，条件是保持该嵌段共聚物的水溶性。

聚氧乙烯化多元醇的实例包括，但不限于，聚氧乙烯化甘油，聚氧乙烯化山梨糖醇，聚氧乙烯化葡萄糖，或类似物质。聚氧乙烯化甘油的甘油骨架与例如动物和人体中天然甘油一-、二-和三酯中的骨架相同。由此，这种支化不一定在体内被视为外来试剂。

本领域的普通技术人员应认识到，上述目录仅仅举例说明且考虑到所有具有本发明所述性质的聚合物材料。聚合物不移动具有任何特定分子量，氮优选分子量介于约300-100,000，更优选10,000-40,000。特别是，等于或大于20,000的分子量可最有效地防止产物在肾脏中过滤造成的损失。

聚乙二醇(PEG)和有关聚环氧烷(PAO′s)在本领域中已知作为制备药物的有效辅剂。参见实例，PCT WO 93/24476。PEG也已经被偶联于蛋白质、肽和酶以提高水溶性和体内循环寿期并且降低抗原性。参见，例如，U.S.专利5,298,643和5,321,095(两者均属于Greenwald等)。PCTWO 93/24476公开了使用酯键将有机分子共价结合于水溶性聚乙二醇。由此，本发明的化合物适宜作为聚乙二醇(PEG)衍生物给药。

因此，本发明的化合物或偶联物可以含有一个或多个共价连接的聚乙二醇(PEG)取代基。证实此类偶联物比缺少聚乙二醇取代基的化合物相比，具有改进的血清半衰期。不受任何理论的限制，改进的血清半衰期被认为与所述化合物结构上共价偶联的至少一个聚乙二醇实体有关系。

术语″PEG″是指包含多个氧化烯单位的聚合物。此类聚合物选择性地一-端封一个优选自下列的取代基：烷基，芳基，取代的烷基和取代的芳基。此类聚合物包括那些二氨基封端的聚环氧烷聚合物，它们在本领域中已知为Jeffamines_。另外，此类聚合物可以选择性地含有一个或多个非氧化烯单位，例如市售的聚[二(乙二醇)己二酸酯，聚[二(乙二醇)邻苯二甲酸酯二醇，等等。

所谓PEG衍生物是指聚乙二醇聚合物，其中聚乙二醇本身的一个或两个末端羟基被修饰。适当修饰的实例包括包括一个或两个羟基被其他官能团代替，它可以是被保护的或者未保护，被低分子量配体代替，或被另一大分子或聚合物代替。聚乙二醇中末端羟基的修饰可以通过使该聚乙二醇与含有补入官能团的化合物反应来实现，包括能够与聚乙二醇的羟基发生反应的官能团。本发明的化合物的PEG衍生物可以含有一个或多个通过连接基团共价连接的聚乙二醇(PEG)取代基。

″连接基团″或″连接体″是指使本发明的非PEG取代的化合物与一个或多个PEG基团共价连接在一起的一个或多个基团。各连接体可以是手性或非手性，直链，支链或环状的并且在其原子内容上是同素或异素的(例如，只含有碳原子的连接体或含有碳原子以及一个或多个存在于连接体上的杂原子的连接体。

PEG基团利用常规化学技术与连接体共价相连，使PEG基团与连接体之间存在共价键。由此，该连接体可以共价连接于其他非PEG取代的本发明化合物。获得这种键的反应化学是本领域熟知的。该反应化学包括该连接体、本发明的非PEG嵌段化合物和PEG基团上的引入官能团的使用。优选地，连接体上的引入官能团是相对于PEG基团上可利用来键合的官能团或者可以引入到PEG基团上达到键合目的的官能团进行选择。而且，此类补入的官能团是本领域熟知的。

所述的聚合物具有约100-100,000的分子量；优选约1,000-50,000；更优选约10,000-40,000。

5.免疫球蛋白

在一具体实施方式中，本发明的药物是免疫球蛋白，当将其施用给患者时可以抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生和/或减轻麻痹。这些免疫球蛋白可以选自选择性结合α-4整连蛋白或含α-4整连蛋白的二聚体例如α-4β-1的免疫球蛋白，或结合VCAM-1的免疫球蛋白。优选地，所述免疫球蛋白结合α-4β-1并抑制α-4β-1活性。该免疫球蛋白优选是抗体或其片段。

所谓″抗体″是指包括完全免疫球蛋白例如IgG1(或任意IgG亚类)或IgM，或衍生自抗体的抑制剂，例如natalizumab(Antegren^_)。

所谓″抗体同系物″是指包括经二硫键相连的免疫球蛋白轻链和重链组成的完整抗体。术语″抗体同系物″还包括含有一个或多个选自免疫球蛋白轻链、免疫球蛋白重链和其能够与一种或多种抗原结合的抗原结合片段的多肽的蛋白质(即，整连蛋白或整连蛋白配体)。由一个以上多肽组成的抗体同系物的组成多肽可以选择性地二硫键连接或共价交联。所以，″抗体同系物″包括IgA，IgG，IgE，IgD，IgM型的免疫球蛋白(及其亚型，例如，IgG1)，其中免疫球蛋白的轻链可以是κ或λ类的。″抗体同系物″还包括完整抗体的具有抗原结合特异性的部分，例如Fab片段，Fab′片段，F(ab′)₂片段，Fv片段，scFv片段，其重链和轻链单体或二聚体或混合物。

当本发明的药物是抗体，单克隆抗体是优选的抗体。与多克隆抗体制剂形成对照，多克隆通常包括针对不同表位的不同抗体，而各单克隆抗体只针对抗原上的单一表位。单克隆抗体的第二个优点在于，它们通过不被其他免疫球蛋白污染的方式合成，例如，通过噬菌体展示或从杂交瘤分离。

虽然本发明包括多克隆和单克隆抗体两者作为本发明的药物，由于其高特异性优选单克隆抗体，并且因此本发明主要讨论单克隆抗体。

″天然抗体和免疫球蛋白″常常是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链组成。各轻链经共价二硫键与重链相连，并且二氯甲烷的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链之间变化。各重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。各重链在一个末端具有可变结构域(VH)，其跟随多个恒定结构域。各轻链在一端具有一个可变结构域(VL)并在另一端具有一个恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且该轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。人们相信特别氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间构成界面(Clothia等，1985，J.Mol.Biol.，186：651-63；Novotny等，1985，Pnoc.Natl.Acacl.Sci.USA，82：4592-6)。

此外，其他抗体可以利用所属技术领域中采用的技术来鉴定。例如，本发明的单克隆抗体可以用噬菌体展示技术制备。随后分离抗体片段，其有选择地结合α-4整连蛋白或含α-4整连蛋白的二聚体。经噬菌体展示制备此类抗体的例举优选方法公开在美国专利6,225,447；6,180,336；6,172,197；6,140,471；5,969,108；5,885,793；5,872,215；5,871,907；5,858,657；5,837,242；5,733,743和5,565,332中。

″变体″抗体在此是指经过增加、缺失和/或替代母体序列中的一个或多个氨基酸序列使其氨基酸序列不同于“母体”抗体氨基酸序列的免疫球蛋白分子。母体抗体或免疫球蛋白可以是多克隆抗体，单克隆抗体，人源化抗体，灵长源化抗体或任何抗体片段。在优选实施方式中，该变体在母体抗体的一个或多个高变区中包含一个或多个氨基酸置换。例如，该变体可以在母体抗体的一个或多个高变区内包含至少一个置换，例如约1-约10，和优选约2-约5个。

通常，该变体具有至少75％氨基酸序列与母体抗体重或轻链可变结构域序列相同的氨基酸序列，更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，和最优选至少95％。有关这种序列的同一性或同源性在此定义为候选序列中与母体抗体残基相同的氨基酸残基的百分比，在对齐序列和引入缺口后(如果必要的话)获得最大百分比的序列同一性。无N-末端、C-末端或内扩展、缺少或插入到该抗体序列内应解释为影响序列的同一性或同源性。变体保留结合受体的能力且优选具有优于母体抗体的性质。例如，该变体可以具有较强的结合亲和力，增高的活化受体的能量等等。为了分析这些性质，应当比较变体的Fab形态和母体抗体的Fab形态或者比较变体的全长形态和母体抗体的全长形态。特别感兴趣的变体抗体是一种当与其母体抗体比较时生物活性增高至少约10倍，优选至少约20倍，和最优选至少约50倍的变体抗体。″母体″抗体在此是由用于制备该变体的氨基酸序列编码的抗体。优选地，该母体抗体具有人构架区并且具有人抗体恒定区。例如，该母体抗体可以是人源化或人的抗体。″分离的″抗体是已经鉴定并从其天然环境的组成中分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组分是干扰该抗体的诊断或治疗应用的物质，并且可以包括酶，激素，和其他蛋白或非蛋白溶质。在优选实施方式中，该抗体被纯化(1)通过Lowry法测定抗体大于95重量％，并且最优选大于99重量％，(2)使用转杯式测序仪，达到足以获得N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)利用考马斯蓝或者优选银来剂在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE达到同质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为至少一个天然环境要素不存在了。然而，通常分离的抗体应通过至少一个纯化步骤制成。

5.1.单克隆抗体

单克隆抗体也可以用常规杂交瘤法或基因工程制备。这些方法广泛应用于制备杂交细胞系，它们可以分泌高水平的抗多种特异性抗原的单克隆抗体，并且还可以用来生产本发明的单克隆抗体。例如，小鼠(例如，Balb/c小鼠)可以通过腹膜内注射用抗原性α-4表位进行免疫。经过足够允许免疫应答的时间后，处死该小鼠且取出脾细胞，并且利用本领域熟知的技术与骨髓瘤细胞融合。所得融合细胞，杂交瘤，随后在选择性培养基中生长，并且存活的细胞在限制稀释条件下在该培养基中生长。克隆和再克隆后，可以分离分泌抗体(例如，IgG或IgM类和IgG1亚类)的杂交瘤，该抗体选择性结合靶位，α-4或含α-4整连蛋白的二聚体。为了生产人用的特定药物，分离的单克隆可以随后用来生产嵌合和人源化抗体。也可以制备抗肽的抗体。此类抗肽抗体被制备为对抗α-4整连蛋白的肽。

术语″嵌合″，当涉及本发明的药物时，是指该药物包括具有不同结构和/或不同来源的两种或多种蛋白质的连接键(化学交联或共价或其他类型)。因此，嵌合α-4整连蛋白拮抗剂包括一个是α-4整连蛋白拮抗剂的部分或片段和另一不是α-4整连蛋白拮抗剂的部分。

″嵌合″蛋白的种类是″融合″的，或″融合蛋白″是指两个或多个蛋白或其片段经其肽主链的共线、共价连接，最优选经过编码那些蛋白质的多核苷酸分子的基因表达。由此，优选的融合蛋白是包含与对于髓鞘再生抗体来说非原始(即，它衍生自另一免疫球蛋白或多肽)的第二部分共价相连的髓鞘再生抗体或其片段的嵌合蛋白。本发明的优选融合蛋白可以包括保持抗原结合特异性的完整抗体的部分。例如，Fab片段，Fab′片段，F(ab′)₂片段，Fv片段，scFv片段，重链单体或二聚体，轻链单体或二聚体，由一条重链和一条轻链组成的二聚体，等等。

最优选的融合蛋白是嵌合的并且包含融合或者连接于免疫球蛋白轻链、重链或两者的全部或部分的铰链区和恒定区。由此，本发明特征在于一种分子，其包括：(1)髓鞘再生部分，(2)第二肽，例如，一种提高髓鞘再生部分的溶解度或体内寿命的肽，如，免疫球蛋白大家族或其片段或部分的一员，例如，IgG的部分或片段，例如，人IgG1重链恒定区，例如，CH₂，CH₃，和铰链区。特别是，″髓鞘再生部分/Ig融合″是含有本发明的生物活性髓鞘再生部分的蛋白质。髓鞘再生药物的一种是″整连蛋白/Fc融合″，它是含有与至少一部分的免疫球蛋白的恒定结构相连的本发明的髓鞘再生免疫球蛋白的蛋白质。优选的Fc融合包含本发明的与含重免疫球蛋白的C末端结构域的看透片段相连接的髓鞘再生免疫球蛋白。

术语″融合蛋白″也是指经单-或杂-官能分子与不是髓鞘再生部分的第二部分化学连接的髓鞘再生部分(得到″嵌合″分子)并且重新由下述纯化蛋白制备。所以，与重组连接相反，化学连接的是融合蛋白的嵌合分子的一个实例包括含有：(1)α-4整连蛋白亚基靶向部分，例如，能够在VLA-4携带细胞的表面上结合VLA-4)的VCAM-1部分；(2)提高靶向部分的溶解度或体内寿命的第二分子，例如，聚亚烷基二醇聚合物例如聚乙二醇(PEG)。α-4靶向部分可以是任何天然α-4配体或其片段，例如，VCAM-1肽或类似保守取代的氨基酸序列。

嵌合、灵长源化^_和人源化抗体可以由非人抗体制备，并且可以具有与制备它们的抗体相同或相似的结合亲和力。可以采用为制备嵌合抗体开发的通过从适当抗原特异性的小鼠抗体分子剪接基因和由例如适当生物活性的人抗体分子剪接基因的技术(Morrison等，1984 Proc.Natl.Acad.Sci.81：6851；Neuberger等，1984 Nature 312：604；Takeda等，1985 Nature 314：452)，此类抗体属于本发明的范围内。例如，编码小鼠单克隆抗体的可变(V)区的核酸可以与编码人恒定(C)区的核酸相连，例如，IgG1或IgG4。所得抗体由此是杂交种，一般具有来自非人抗体的抗原结合结构域和来自人抗体的C或效应器结构域。

人源化抗体是主要来源于人抗体(接纳体抗体)的具有可变区的抗体，但它具有基本上来源于非人抗体(供体抗体)的互补性决定区。参见，例如，Queen等，1989 Proc.Natl Acad.Sci.USA 86：10029-33；WO90/07861；和美国专利6,054,297；5,693,761；5,585,089；5,530,101和 5,224,539。这些抗体的恒定区通常也来源于人抗体。人可变结构域通常选自与所需非人可变区结合结构域具有高度同源性的人抗体。重链和轻链可变残基可以衍生自相同抗体，或不同的人抗体。此外，该序列可以选择若干人抗体的共有区，例如WO 92/22653所述。

基于预测构象和抗原结合性质选自人可变区内的特定氨基酸进行替代。这可以利用技术例如计算机模拟、行为预测和氨基酸在可变区内某些位置的结合性质，和替代效果的观测来测定。例如，当氨基酸在非人可变区和人可变区之间不同时，该人可变区可以改变以反映非人可变区的氨基酸组成。在此描述人源化抗-α-4抗体的数个实例。

所谓″人源化抗体同系物″是指抗体同系物，通过重组DNA技术来生产，其中人免疫球蛋白轻链或重链的一些或全部的不是结合抗原必需的氨基酸可以被来自于非人哺乳动物免疫球蛋白轻链或重链的氨基酸替代。″人抗体同系物″是抗体同系物，其中免疫球蛋白轻链或重链的全部氨基酸(无论它们是否是抗原结合所必需的)衍生自人源。

在一个具体实施方式中，本发明的长期给药方案中使用的抗体是美国专利5,840,299中所述的人源化抗体，其在此引入作为抗体。

在另一实施方式中，含人抗体基因的转基因小鼠可以用抗原性α-4结构免疫并且杂交瘤技术可以用来生产选择性结合α-4的人抗体。

嵌合、人和/或人源化抗体可以通过重组表达来制备，例如，表达在人杂交瘤(Cole等，Monoclonal Antibodies和Cancer Therapy，Alan R.Liss，p.77(1985))中，骨髓瘤细胞中或在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中。或者，抗体编码序列可以掺杂在适合引入动物的基因组内由此制备转基因动物的运载体内。一个实例是在转基因动物的奶中制备抗体，例如牛。参见例如，美国专利5,849,992和5,304,489。适合的转基因包括具有来自哺乳动物腺体特异基因的启动子和/或增强子的转基因，例如酪蛋白和p-乳球蛋白。

5.1.1.人源化和灵长源化抗体

在本发明的一个实施方式中，提供对VLA-4的α-4亚基特异的人源化(和灵长源化_)免疫球蛋白(或抗体)，当以有效量给药时它抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生和/或减轻麻痹。人源化和灵长源化抗体是动物(通常为哺乳动物)来源的已经利用遗传工程技术改性的抗体。该技术用来用 juman序列替换恒定区和/或可变区构架序列，并且保留了该抗体的原始抗原特异性。人源化和灵长源化_抗体通常衍生自对人抗原具有特异性(例如，人VCAM-1或人VLA-4)的啮齿动物(例如，小鼠和仓鼠)的抗体。通过改形该供体抗体(动物的抗体，针对该抗体给予抗原)以具有抗体出于治疗目给药的动物的序列，在抗体给药后将减小动物的宿主反应。只有Fc区或除互补决定区(CDRs)之外的全部可以用接纳体结构域替代，其中该接纳体为动物，改形的抗体是针对该动物给药(例如，哺乳动物例如人体，家畜，农用动物等)。

优选当以有效量施用给患者时抑制脱髓鞘作用的与VLA-4的α-4亚基结合的抗体。更优选那些当以有效量施用给患者在对象中引起髓鞘再生和/或减轻麻痹的抗体，其中该对象是患有脱髓鞘疾病或症状。

通常，鼠科抗体的CDRs移植到人抗体中的相应区域上，因为它是小鼠(或任何其他动物抗体)抗体的区域的CDRs(即，三条抗体重链，三条轻链)，其结合特异性抗原。通过遗传工程达到CDRs的移植，由此CDRDNA序列通过克隆鼠科重链和轻链可变(V)区基因节段来测定，并且随后通过直接诱变转移到相应的人V区。在该方法的最后阶段，增加所需同位型的人恒定区基因节段(通常为γI对应CH和κ对应CL)并且使人源化重链和轻链基因共同表达在哺乳动物细胞中以生产可溶人源化抗体。

这些CDRs向人抗体的转移赋予该抗体原始鼠科抗体的抗原结合性质。鼠科抗体中6个CDRs结构上堆积在V区″构架″区。CDR-接枝成功的原因在于小鼠和人抗体之间的构架区可能具有非常相似的3-D结构以及对于CDRS来说相似的结合点，由此CDRs可以交换。此类人源化抗体同系物可以制备，例如在Jones等，1986，Nature 321：522-5；Riechmann等7 19887 Nature 332：323-7；Queen等，1989，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 86：10029；和Orlandi等，1989，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 86：3833中所述。

然而，构架区内的某些氨基酸被认为与CDRs相互作用且影响整体抗原结合亲和力。CDRs由鼠科抗体的直接转移来制备没有任何人V区构架的改性的重组人源化抗体常常造成结合亲和力的部分或完全丧失。在若干情况中，为了获得结合活性改变接纳体抗体(例如，人抗体)构架区内的残基似乎是决定性的。

Queen等在1989(如上)和WO 90/07861(Protein Design Labs)中已经描述了在接纳体抗体的构架区内含有修饰残基的人源化抗体的制备，这是通过将鼠科MAb(抗-Tac)的CDRs与人免疫球蛋白构架和恒定区合并。一种解决结合亲和力丧失问题且无需人V区构架残基的任何修饰的方法包括两个关健步骤。首先，通过对与原始鼠科抗体的最佳蛋白序列同源性的计算机分析来选择人V构架区。第二步，鼠科V区的三级结构用计算机模拟以便使与鼠科CDRs相互作用的构架氨基酸残基显形。这些鼠科氨基酸残基随后重叠与同系人构架。详细内容参见美国专利5,693,762；5,693,761；5,585,089；和5,530,101(Protein Design Labs)。

本发明中所用的某些含α-4亚基整连蛋白拮抗剂包括具有B表位特异性的嵌合和人源化重组抗体同系物(即，完整免疫球蛋白及其部分)，其已经在美国专利5,932,214(MAbHP1/2)中制备并公开。制备嵌合(小鼠可变-人恒定)和人源化抗-整连蛋白抗体同系物的起始原料可以是上述的鼠科单克隆抗-整连蛋白抗体，市售单克隆抗-整连蛋白抗体(例如，HP2/1，Amae International，Inc.，Westbrook，Me)。

其他优选的人源化抗-VLA-4抗体同系物由Athena Neurosciences，Inc.公开在PCT/US95/01219(Jul.27，1995)，美国专利5,840,299和6,033,665中。5,932,214，5,840,299和6,033,665专利的全文内容在此引入作为参考。

这些人源化抗-VLA-4抗体含有人源化轻链和人源化重链。该人源化轻链含有来自小鼠21.6免疫球蛋白轻链的相应互补决定区的氨基酸序列的三个互补决定区(CDRI，CDR²和CDR³)，和来自人κ轻链可变区构架序列的可变区构架，除了至少一个位置被小鼠21.6免疫球蛋白轻链可变区构架的等位中存在的相同氨基酸占据之外。该人源化重链含有具有来自小鼠21.6免疫球蛋白重链的相应互补决定区的氨基酸序列的三个互补决定区(CDRI，CDR²和CDR³)，和来自人重链可变区构架序列的可变区构架，除了至少一个位置上氨基酸位置被小鼠21.6免疫球蛋白重链可变区构架的等位中存在的相同氨基酸占据之外。参见美国专利5,840,299和6,033,665。

分离的α-4整连蛋白拮抗剂的片段(例如，上述抗体同系物的片段)还可以通过重组方法、通过蛋白水解设计，或通过化学合成利用本领域技术人员已知的方法来有效制成。在重组法中，多肽的内部或末端片段可以通过从编码分离的刺猬(hedgehog)多肽的DNA序列的一端(对于末端片段来说)或两个末端(对于内部片段来说)除去一个或多个核苷酸来得到。诱变的DNA的表达产生多肽片段。某些内切核酸酶的设计也可以产生DNAs，它编码一组片段。编码蛋白质片段的DNAs还可以通过随机剪切、限制酶切消化或其组合方法来生产。蛋白片段可以直接由完整蛋白生产。肽可以在蛋白水解酶作用下特异性断裂，包括，但不限于纤溶酶，凝血酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶，或胃蛋白酶。这些酶各自对它所攻击的肽键的类型具有特异性。胰蛋白酶催化其中羰基来自碱性氨基酸的肽键水解，通常是精氨酸或赖氨酸。胃蛋白酶和糜蛋白酶催化其中来自芳族氨基酸的肽键的水解，例如色氨酸，酪氨酸，和苯丙氨酸。另一组的裂解蛋白片段是通过在对蛋白水解酶敏感的位点预防性裂解而产生的。例如，赖氨酸的ε-氨基酸基团与β-三氟硫代乙酸乙酯在温和碱性溶液中反应得到封阻的氨基酸残基，其相邻肽键不再对胰蛋白酶的水解作用敏感。蛋白质可以被改性以产生对蛋白水解酶敏感的肽键。譬如，半胱氨酸残基与β-卤代乙胺的烷基化反应生成在胰蛋白酶作用下水解的肽键(Lindley，1956，Nature 178：647)。此外，可以使用在特定参见裂解肽链的化学试剂。例如，溴化氰在蛋氨酸残基裂解肽(Gross等.，1961，J.Arn.Claerya.Soc.83：1510)。所以，通过用不同改性剂的组合、蛋白水解酶和/或化学试剂处理蛋白质，该蛋白质可以被分为预期长度的片段切无重叠的片段，或分为预期长度的重叠片段。

5.1.1.1.Natalizumab和有关人源化抗体

本发明提供一种单独或联合使用特异性结合VLA-4配体的人源化免疫球蛋白赖促进髓鞘再生的方法。这种处理方法和药物中所用的一种优选抗体包括授权给Elan Pharmaceuticals的美国专利5,840,299中所述的那些，其全文在此引入作为参考。另一方面考虑使用这些抗体的在体内评估具有髓鞘再生活性的片段。

所述的人源化抗体含有人源化轻链和人源化重链。一方面，该人源化轻链可以含有三个具有来自小鼠21-6免疫球蛋白轻链的相应互补决定区的氨基酸序列的互补决定区(即，CDR¹，CDR²和CDR³)，和来自人κ轻链可变区构架序列的可变区构架，除了至少一个位置选自由L45、L49、L58和L69位组成的第一组之外，其中该氨基酸位置被小鼠21.6免疫球蛋白轻链可变区构架的等位中存在的相同氨基酸占据。

人源化重链含有三个具有来自小鼠21-6免疫球蛋白重链的相应互补决定区的氨基酸序列的互补决定区(即，CDR¹，CDR²和CDR³)，和来自人重链可变区构架序列的可变区构架，除了至少一个位置选自H27、H28、H29、H30、H44、H71位组成的一个组之外，其中该氨基酸位置被小鼠21-6免疫球蛋白重链可变区构架的等位中存在的相同氨基酸占据。免疫球蛋白特异性结合VLA-4并且亲和力下限为约10⁷M^-1和上限是小鼠21-6免疫球蛋白的亲和力的约5倍。

通常，该人源化轻链和重链可变区构架分别来自RE1和21/28′CL可变区构架序列。当该人源化轻链可变区构架来自RE1时，至少两个构架氨基酸被替代。一个氨基酸来自上面所述的第一组的位置。另一氨基酸来自L104、L105和L107位的第三组。该位置被来自人免疫球蛋白的κ轻链而不是RE1的等位中存在的相同氨基酸占据。

一些人源化免疫球蛋白具有成熟轻链可变区序列称作La和Lb，或成熟重链可变区序列称作Ha，Hb或Hc(图13)。优选的人源化免疫球蛋白包括具有La轻链和Ha、Hb或Hc重链的那些(图14)。

该人源化免疫球蛋白具有主要来自人免疫球蛋白(称作接纳体免疫球蛋白)的可变构架区和主要来自称作mu MAb 21.6的小鼠免疫球蛋白(称作供体免疫球蛋白)的互补决定区。如果存在的话，恒定区也主要来自人免疫球蛋白。该人源化抗体对于VLA-4具有结合亲和力，该结合亲和力至少为10⁷、10⁸、10⁹和10¹⁰M^-1。通常，该人源化抗体对于VLA-4的结合亲和力的上限是mu MAb 21.6的3或5的因数内(约10⁹M^-1)。通常，结合亲和力的下限也是mu MAb 21.6的3或5的因数内。

人源化抗体可以制备，例如，采用小鼠MAb 21.6单克隆抗体。制备人源化抗体的起始原料是mu MAb 21.6。该抗体的分离和性质如美国专利6,033,655所述(授权给Elan Pharmaceuticals，Inc.)，其全文在此引入作为参考。简单而言，mu MAb 21.6对VLA-4的α-4亚基呈特异性切已经证明抑制人淋巴细胞结合用肿瘤坏死因子刺激的大鼠脑细胞的组织培养物。从N-末端至C-末端，轻链和重链两者包含结构域FR¹，CDR¹，FR²，CDR²，FR³，CDR³和FR⁴。氨基酸对各个结构域的配位按照Kabat的编序惯例。

下步涉及选择人抗体来补给构架残基。将小鼠CDRs置换到人可变结构域构架内最可能达到其正确空间定向的保留，如果该人可变结构域构架采取提供CDRs的小鼠可变构架相同或相似构象的话。这就顺利得到来自人抗体的人可变结构域，其构架序列与衍生出CDRs的鼠科可变构架结构域具有高度的序列同一性。重链和轻链的可变构架区可以衍生自相同或不同的人抗体序列。该人抗体序列可以是天然人抗体的序列或者可以是数种人抗体的共有序列。参见Kettleborough等.，ProteinEngineering 4：773(1991)；Kolbinger等，Protein Engineering 6：971(1993)。

适合的人抗体序列通过小鼠可变区的氨基酸序列与已知人抗体的序列的计算机比对来鉴定。该比对方法单独针对重链和轻链进行，但原理彼此类似。这种比对揭示了mu 21.6轻链与亚型κ1的人轻链具有最高的序列同一性；mu 21.6重链与亚型I的人重链具有最高的序列同一性，如Kabat定义，上文所述。所以，轻和重链的人构架区经常衍生自这些亚型的人抗体，或衍生自此类亚型的共有序列。优选的与来自mu MAb 21.6的相应区具有最高序列同一性的轻链和重链人可变区分别来源于抗体RE1和21/28′CL。

此后采用计算机模拟来进一步提高人源化抗体的结合其关连抗原的性能。具有人可变构架区的鼠科CDR区的非天然并列可以导致非自然构象约束，它导致结合亲和力的丧失，除非用某些氨基酸残基的置换加以校正。置换所选择的氨基酸残基部分是通过计算机模拟来决定的。获得免疫球蛋白分子的三维图像的计算机硬件和软件被广泛应用。通常，分子模型是从免疫球蛋白链或其结构域的已解决结构开始生成。被模拟的链与解决三维结构的链或结构域对比氨基酸序列相似性，并且选择具有最高序列相似性的链或结构域作为分子模型的构造的起点。例如，对于mu MAb 21.6的轻链，模拟该构架区，CDR¹和CDR²区的起点，是人轻链RE1。对于CDR³区，起点是来自不同人抗体HyHEL-5的轻链的CDR³ 区。改进该解决的起始结构被改性，从而允许被模拟的免疫球蛋白链或结构域中的实际氨基酸与起始结构中的氨基酸之间存在差异。改性的结构随后装配成复合免疫球蛋白。最后，通过能量最小化并检验所有原子彼此在适当距离内且键长和键角处于化学上可接受限度内来使模型精细化。

如上文所述，本发明的人源化抗体包含主要来源于人免疫球蛋白的可变构架区和主要来源于称作mu MAb 21.6的小鼠免疫球蛋白的互补决定区。在鉴定mu MAb 21.6的互补决定区(CDRs)和适当人接纳体免疫球蛋白之后，下步是测定哪些来自这些组成的残基(如果有的话)应当被取代，从而最佳化所得人源化抗体的性质。通常，人氨基酸残基被鼠科的置换应当最小化，因为鼠科残基的引入增加了抗体在人体中引发HAMA反应的危险性。对用于置换的氨基酸的选择是基于其对CDR构象和/或结合抗原的可能影响。这种可能性影响的调查是通过模拟、特定位置的氨基酸的特征的试验，或对置换和有别特定氨基酸的影响的经验观察来进行。

当氨基酸在mu MAb 21.6可变构架区和等效人可变构架区之间不同时，该人构架氨基酸通常应当被等效小鼠氨基酸置换，如果合理预期该氨基酸：

(1)非共价地直接结合抗原(例如，在mu MAb 21.6的位置L49、L69的氨基酸)，

(2)与CDR区相邻，Chothia等在上文中提出的另一定义下是CDR区的一部分，或与CDR区相互作用(例如，在CDR区的约3_内)(例如，在mu MAb 21.6的位置L45、L58、H27、H28、H29、H30和H71的氨基酸)，或

(3)沉淀在VL-VH界面(例如，mu MAb 21.6的位置H44的氨基酸)。

置换的其他候选物是在该位置常用于人免疫球蛋白的接纳体人构架氨基酸(例如，mu MAb 21.6的位置L104，L105和L107处的氨基酸)。这些氨基酸可以被来自更典型人免疫球蛋白的等位的氨基酸置换。或者，当该氨基酸在等位上是人免疫球蛋白的典型时，来自小鼠MAb 21.6中等位的氨基酸可以引入到人构架区内。

通常，希望所有或大多数氨基酸的置换满足上述标准。然而偶尔地，有关是否一个特定氨基酸符合上述标准也存在一些模糊，并且产生其他变体免疫球蛋白，之一具有特定的置换，其余没有。人源化抗体常常在下列至少1、2或3个位置，并且更常见有4个位置处，包含人轻链构架残基被相应mu MAb 21.6残基的置换：L45，L49，L58和L69。该人源化抗体也常常在至少1、2、3、4或5个并且有时在6个下列位置含有人重链构架残基的置换：H27，H28，H29，H30，H44和H71。选择性地，H36也可以被置换。在优选实施方式中当该人轻链接纳体免疫球蛋白为RE1时，该轻链还在下列至少1或2个，和更常见3个位置含有置换：L104， L105和L107。这些位置被来自具有更典型氨基酸残基的人免疫球蛋白的等位的氨基酸置换。适合置换的氨基酸如图13和14所示。

通常人源化抗体中的CDR区基本上相同，并且更常见地，与mu MAb21.6抗体中的相应CDR区相同。然而有时，希望改变CDR区中的一个残基。例如，实施例4鉴定了mu MAb 21.6 CDR³和VCAM-1配体之间的氨基酸相似性。观察结构提示，通过重新设计重链CDR³区来装配VCAM-1更加接近可提高人源化抗体的结合亲和力。所以，来自CDR³结构域的一个或多个氨基酸可以被来自VCAM-1结合结构域的氨酸置换。虽然不经常希望，但有时可以进行CDR残基的一个或多个保守氨基酸置换，同时对所得人源化免疫球蛋白的结合亲和力没有可感知的影响。

除上述特异性氨基酸置换外，人源化免疫球蛋白的构架区通常基本上相同，并且经常与衍生它们的人抗体的构架区相同。显然，构架区中的许多氨基酸对抗体的特异性或亲和力很少或没有直接影响。所以，构架残基的许多单个保守置换可以被接受而没有对所得人源化免疫球蛋白的特异性和亲和力产生可感知影响。然而，通常这种置换是不希望的。

可变区的产生。已经概念上选择CDR和人源化免疫球蛋白的构架组成后，许多方法可以用来生产所述的免疫球蛋白。因为代码的退化，许多核酸序列将编码各个免疫球蛋白氨基酸序列。所需的核酸序列可以通过从头固相DNA合成法或通过PCR诱变早已制备的所需多核苷酸的变体来生产。低聚核苷酸-介导的诱变是一种制备靶向多肽DNA的置换、缺失和插入变体的优选方法。参见Adelman等，DNA 2：183(1983)。简单而言，靶向多肽DNA是通过杂交低聚核苷酸来改变的，该低级核苷酸表面所需突变得到单链DNA模板。杂交后，DNA聚合酶用于合成掺杂在该低级核苷酸引物的模板的整个第二互补链，并且编码靶向多肽DNA中的选定改变。

恒定区的选择。按照上述方法生产的人源化抗体的可变节段通常连接于至少一部分的免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的。人恒定区DNA序列可以按照公知方法、有多种人细胞分离出来，单优选无限增殖化B-细胞(参见Kabat等.，上文，和WO 87/02671)(其全文分别在此引入作为参考)。通常，该抗体含轻链和重链两者的恒定区。重链恒定区经常包括CH₁，铰链，CH₂，CH₃，和CH₄区。

人源化抗体包括具有所以类型恒定区的抗体，包括IgM，IgG，IgD， IgA和IgE，和任何同种型，包括IgG1，IgG2，IgG3和IgG4。当希望该人源化抗体具有细胞毒性活性时，该恒定结构域经常是补体固定的恒定结构域并且类型一般是IgG1。当这样的细胞毒性活性是所不希望的时，该恒定结构域可以是IgG2类。该人源化抗体可以含有来自一种以上类型或同种型的序列。

5.1.1.2.其他抗-VLA-4抗体

其他抗-VLA-4抗体包括但不限于HP1/2，HP-2/1，HP2/4，L25，和P4C2。这些抗体还可以以有效量给药以在患者中抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生和/或减轻麻痹，本领域技术人员按照本文中讨论的和本领域公知的内容将很容易理解。

通常，小鼠中产生的单克隆抗体随后人源化，从而避免在注射小鼠抗体的人对象中产生人抗-小鼠抗体(HAMA)的免疫反应。这会由于CDR接枝或改形产生。所以，抗体一般首先是经过CDR接枝或改形变为人源化的第一小鼠单克隆抗体，如上述针对21.6抗体所讨论的。

具体的，该人源化抗体对VLA-4具有特异性并具备促进髓鞘再生、预防脱髓鞘和/或减轻麻痹的性能。这些抗体衍生自至少一个或多个可变结构域的互补决定区(CDRs)衍生自供体非人抗-VLA-4抗体的来源(例如，通常为小鼠)，并且其中可以或可以不发生接纳体抗体重链和/或轻链可变构架区的微小变化以保留供体抗体的结合特异性。

优选地，CDR-接枝的重链可变结构域的抗原结合区含有对应于位置31-35(CDR¹)、50-65(CDR²)和95-102(CDR³)的CDRs。在一个优选实施方式中，该重链进一步在构架位置27-30(Kabat编号)包括非人残基。该重链可以进一步在构架位置75(Kabat编号)包括非人残基。该重链可以进一步在构架位置77-79或66-67和69-71或84-85或38和40或24(Kabat编号)包括非人残基。优选地，CDR-接枝的轻链可变结构域的抗原结合区含有对应于位置24-34(CDR¹)、50-56(CDR²)和89-97(CDR³)的CDRs。在一优选实施方式中，该轻链进一步在构架位置60和67(Kabat编号)包括非人残基。这些残基命名根据Kabat编号法(Kabat等.，5^th ed.4vol.序列S OF蛋白S OF IMMUNOLOGICAL INTEREST，U.S.Department ofHealth人Services，NIH，USA(1991))编号。

小鼠抗体HP1/2的合成和人源化。HP1/2是另一种直接抗VLA-4的抗体。制备这种抗体用于人对象中的人源化变型的方法在此说明并且进一步在授权给Biogen，Inc的美国专利6,602,503中有描述，其全文在此引入作为参考。人源化抗体的序列提供如下。HP1/2V_H DNA序列和其翻译氨基酸序列是：

5′-gtc aaa ctg cag cag tct ggg gca gag ctt gtg aag cca ggg gcc tca48

N-Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

gtc aag ttg ttc tgc aca gct tct ggc ttc aac att aaa gac acc tat96

Val Lys Leu Phe Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr

20 25 30

atg cac tgg gtg aag cag agg cct caa cag ggc ctg gag tgg att gga144

Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gln Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

agg att gat cct gcg agt ggc gat act aaa tat gac ccg aag ttc cag192

Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

50 55 60

gtc aag gcc act att aca gcg gac acg tcc tcc aac aca gcc tgg ctg240

Val Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Trp Leu

65 70 75 80

cag ctc agc agc ctg aca tct gag gac act gcc gtc tac tac tgt gca288

Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

gac gga atg tgg gta tca acg gga tat gct ctg gac ttc tgg ggc caa336

Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp Phe Trp Gly Gln

100 105 110

ggg acc acg gtc acc gtctcc tca-3′360

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser-C

115 120

HP 1/2V_H两个序列和IIC族的共有序列之间的比较揭示，只有稀有残基位于氨基酸位置80、98和121(即，Kabat编号的79，94和121)。尽管Tyr-80是亚组IIC中的不变量，但其他序列化鼠科VH区在此位置具有其他芳族氨基酸，无一具有Trp。大多数的人和鼠科V_HS在在Kabat位置94具有精氨酸残基。Asp-94在HP1/2V_H中的存在非常少见；只有一个报道实例是在此位置的带负电残基。Kabat位置113处的脯氨酸也罕见，但在CDRs的构象中似乎不重要，因为它与CDRs距离甚远。组成CDR¹ 的氨基酸已经在三个其他序列化鼠科VH区中发现。然而，CDR²和CDR³ 是HP1/2所独有的并且未在任何其他报导的鼠科V_H中发现。

HP 1/2VK DNA序列及其翻译氨基酸序列如下：

5′-agt att gtg atg acc cag act ccc aaa ttc ctg ctt gtt tca gca gga48

N-Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

gac agg gtt acc ata acc tgc aag gcc agt cag agt gtg act aat gat96

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp

20 25 30

gta gct tgg tac caa cag aag cca ggg cag tct cct aaa ctg ctg ata144

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

tat tat gca tcc aat cgc tac act gga gtc cct gat cgc ttc act ggc192

Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

agt gga tat ggg acg gat ttc act ttc acc atc agc act gtg cag gct240

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala

65 70 75 80

gaa gac ctg gca gtt tat ttc tgt cag cag gat tat agc tct ccg tac288

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Tyr

85 90 95

acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gag atc-3′318

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile-C

100 105

HP1/2V_K是Kabat家族V(Kabat等.，5^th ed.，4vol.，SEQUENCES OFPROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST，U.S.Department ofHealth人Services(1991))的一员且没有稀有残基。CDR1和CDR³的氨基酸是独有的。组成CDR²的氨基酸已经在一种其他鼠科V_K中有报导。

CDR-接枝抗-VLA-4抗体的设计。为了设计CDR-接枝的抗-VLA-4抗体，必须测定鼠科HP1/2的哪个残基含有轻链和重链的CDRs。不可变构架序列之间高变性的三个区被发现位于轻链和重链两者上(Wu和Kabat，J.Exp.Med.132：211-250(1970)；Kabat等，(1991))。在大多数情况中，这些高变区对应于CDR，但可能向远处扩展。鼠科HP1/2的CDRs按照Kabat等，(1991)所述、通过与其他V_H和V_K序列对比来阐明。鼠科HP1/2V_H的CDRs被鉴定且对应于在人源化V_H序列中鉴定的残基如下所述：

CDR¹ AA₃₁-AA₃₅

CDR² AA₅₀-AA₆₆

CDR³ AA₉₉-AA₁₁₀

这些分别对应于Kabat编号的AA31-AA35，AA50-AA65，和AA95-AA102。鼠科HP1/2V_K的CDRs被鉴定且对应于在人源化V_K序列中定义的残基，如下所示：

CDR¹ AA₂₄-AA₃₄

CDR² AA₅₀-AA₅₅

CDR³ AA₈₉-AA₉₇

这些对应于Kabat编号的相同编号氨基酸。所以，只有V_K的边界，而非V_H，CDRs对应于Kabat CDR残基。选择接受HP1/2(供体)CDRs的人构架对于重链和轻链来说分别是NEWM和RE1。NEWM和RE1的序列已经由Kabat等公开，(1991)。

人源化HP1/2抗体的人源化重链可变区的DNA和对应氨基酸序列是：

5′-atg gac tgg acc tgg agg gtc ttc tgc ttg ctg gct gta gca cca ggt48

N-Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

gcc cac tcc cag gtc caa ctg cag gag tcc ggt gct gaa gtt gtt aaa96

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Val Val Lys

20 25 30

ccg ggt tcc tcc gtt aaa ctg tcc tgc aaa gct tcc ggt ttc aac atc144

Pro Gly Ser Ver Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

aaa gac acc tac atg cac tgg gtt aaa cag cgt ccg ggt cag ggt ctg192

Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

gaa tgg atc ggt cgt atc gac ccg gct tcc ggt gac acc aaa tac gac240

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp

65 70 75 80

ccg aaa ttc cag gtt aaa gct acc atc acc gct gac gaa tcc acc tcc288

Pro Lys Phe Gln Val Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser

85 90 95

acc gct tac ctg gaa ctg tcc tcc ctg cgt tcc gaa gac acc gct gtt336

Thr Ala Tyr Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

tac tac tgc gct gac ggt atg tgg gtt tcc acc ggt tac gct ctg gac384

Tyr Tyr Cys Ala Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp

115 120 125

ttc tgg ggt cag ggt acc acg gtc acc gtc tcc tca ggt gag tcc-3′

Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser-C

130 135 140

人源化HP 1/2抗体的人源化轻链可变区的DNA和对应氨基酸序列：

5′-atg ggt tgg tcc tgc atc atc ctg ttc ctg gtt gct acc gct acc ggt48

N-Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

gtt cac tcc atc gtt atg acc cag tcc ccg gac tcc ctg gct gtt tcc96

Val His Ser Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser

20 25 30

ctg ggt gaa cgt gtt acc atc aac tgc aaa gct tcc cag tcc gtt acc144

Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr

35 40 45

aac gac gtt gct tgg tac cag cag aaa ccg ggt cag tcc ccg aaa ctg192

Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu

50 55 60

ctg atc tac tac gct tcc aac cgt tac acc ggt gtt ccg gac cgt ttc240

Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe

65 70 75 80

tcc ggt tcc ggt tac ggt acc gac ttc acc ttc acc atc tcc tcc gtt288

Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val

85 90 95

cag gct gaa gac gtt gct gtt tac tac tgc cag cag gac tac tcc tcc336

Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser

100 105 110

ccg tac acc ttc ggt ggt ggt acc aaa ctg gag atc taa ggatcctc-3′383

Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile-C

115 120

除了上述人源化HP1/2抗体轻链和重链以外，其他接纳体重链和轻链区还可以用于供体HP1/2区的插入。所有下列构造含有Ser-75(Kabat编号)。STAW构造进一步包含位置77的Gln成为Thr，位置78的Phe成为Ala，并且位置79的Ser成为Trp(Kabat编号)。该V_H DNA序列及其翻译氨基酸序列如下所述：

5′-atg gac tgg acc tgg agg gtc ttc tgc ttg ctg gct gta gca cca ggt48

N-Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

gcc cac tcc cag gtc caa ctg cag gag agc ggt cca ggt ctt gtg aga96

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg

20 25 30

cct agc cag acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tct ggc ttc aac att144

Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

aaa gac acc tat atg cac tgg gtg aga cag cca cct gga cga ggt ctt192

Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu

50 55 60

gag tgg att gga agg att gat cct gcg agt ggc gat act aaa tat gac240

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp

65 70 75 80

ccg aag ttc cag gtc aga gtg aca atg ctg gta gac acc agc agc aac288

Pro Lys Phe Gln Val Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Ser Asn

85 90 95

aca gcc tgg ctg aga ctc agc agc gtg aca gcc gcc gac acc gcg gtc336

Thr Ala Trp Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val

100 105 110

tat tat tgt gca gac gga atg tgg gta tca acg gga tat gct ctg gac384

Tyr Tyr Cys Ala Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp

115 120 125

ttc tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca ggt gag tcc-3′429

Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser-C

130 135 140

KAITAS构造具有Arg对Lys(位置66)，Val对Ala(位置67)，Met对[le(位置69)，Leu对Thr(位置70)和Val对Ala(位置71)(Kabat编号)的附加变化。该KAITAS V_H DNA序列及其翻译氨基酸序列如下所述：

5′-atg gac tgg acc tgg agg gtc ttc tgc ttg ctg gct gta gca cca ggt48

N-Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

gcc cac tcc cag gtc caa ctg cag gag agc ggt cca ggt ctt gtg aga96

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg

20 25 30

cct agc cag acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tct ggc ttc aac att144

Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

aaa gac acc tat atg cac tgg gtg aga cag cca cct gga cga ggt ctt192

Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu

50 55 60

gag tgg att gga agg att gat cct gcg agt ggc gat act aaa tat gac240

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp

65 70 75 80

ccg aag ttc cag gtc aaa gcg aca att acg gca gac acc agc agc aac288

Pro Lys Phe Gln Val Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn

85 90 95

cag ttc agc ctg aga ctc agc agc gtg aca gcc gcc gac acc gcg gtc336

Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val

100 105 110

tat tat tgt gca gac gga atg tgg gta tca acg gga tat gct ctg gac384

Tyr Tyr Cys Ala Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp

115 120 125

ttc tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca ggt gag tcc-3′429

Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser-C

130 135 140

SSE构造包括Ala对Ser(位置84)和Ala对Glu(位置85)(Kabat编号)的附加变化。SSE V_H DNA序列及其翻译氨基酸序列如下所述：

5′-cag gtc caa ctg cag gag agc ggt cca ggt ctt gtg aga cct agc cag48

N-Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln

1 5 10 15

acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tct ggc ttc aac att aaa gac acc96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

tat atg cac tgg gtg aga cag cca cct gga cga ggt ctt gag tgg att144

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

gga agg att gat cct gcg agt ggc gat act aaa tat gac ccg aag ttc192

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

cag gtc aga gtg aca atg ctg gta gac acc agc agc aac cag ttc agc240

Gln Val Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Ser Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

ctg aga ctc agc agc gtg aca tct gag gac acc gcg gtc tat tat tgt288

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gca gac gga atg tgg gta tca acg gga tat gct ctg gac ttc tgg ggc336

Ala Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp Phe Trp Gly

100 105 110

caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca ggt gag tcc-3′372

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser-C

115 120

KRS构造包含Arg对Lys(位置38)和Pro对Arg(位置40)(Kabat编号)的附加变化。KRS V_H DNA序列及其翻译氨基酸序列如下所述：

5′-atg gac tgg acc tgg agg gtc ttc tgc ttg ctg gct gta gca cca ggt48

N-Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

gcc cac tcc cag gtc caa ctg cag gag agc ggt cca ggt ctt gtg aga96

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg

20 25 30

cct agc cag acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tct ggc ttc aac att144

Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

aaa gac acc tat atg cac tgg gtg aaa cag cga cct gga cga ggt ctt192

Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu

50 55 60

gag tgg att gga agg att gat cct gcg agt ggc gat act aaa tat gac240

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp

65 70 75 80

ccg aag ttc cag gtc aga gtg aca atg ctg gta gac acc agc agc aac288

Pro Lys Phe Gln Val Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Ser Asn

85 90 95

cag ttc agc ctg aga ctc agc agc gtg aca gcc gcc gac acc gcg gtc336

Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val

100 105 110

tat tat tgt gca gac gga atg tgg gta tca acg gga tat gct ctg gac384

Tyr Tyr Cys Ala Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp

115 120 125

ttc tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca ggt gag tcc-3′429

Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser-C

130 135 140

AS构造包含改变位置24的Val至Ala(Kabat编号)。AS V_H DNA序列及其翻译氨基酸序列是：

5′-atg gac tgg acc tgg agg gtc ttc tgc ttg ctg gct gta gca cca ggt48

N-Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

gcc cac tcc cag gtc caa ctg cag gag agc ggt cca ggt ctt gtg aga96

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg

20 25 30

cct agc cag acc ctg agc ctg acc tgc acc gcg tct ggc ttc aac att144

Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

aaa gac acc tat atg cac tgg gtg aga cag cca cct gga cga ggt ctt192

Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu

50 55 60

gag tgg att gga agg att gat cct gcg agt ggc gat act aaa tat gac240

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asp

65 70 75 80

ccg aag ttc cag gtc aga gtg aca atg ctg gta gac acc agc agc aac288

Pro Lys Phe Gln Val Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Ser Asn

85 90 95

cag ttc agc ctg aga ctc agc agc gtg aca gcc gcc gac acc gcg gtc336

Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val

100 105 110

tat tat tgt gca gac gga atg tgg gta tca acg gga tat gct ctg gac384

Tyr Tyr Cys Ala Asp Gly Met Trp Val Ser Thr Gly Tyr Ala Leu Asp

115 120 125

ttc tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca ggt gag tcc-3′429

Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser-C

130 135 140

该人源化轻链一般需要少许改性，若有的话。然而，在人源化抗-VLA-4抗体的制备中，数种经验变化可以提供该抗原对其培养的免疫活性。例如，鼠科轻链具有Ser突变的人源化重链的效价比鼠科HP1/2降低约2.5倍。具有人源化轻链的相同人源化重链效价降低4倍。

人源化V_K构造(VK1)包括在位置60的Ser至Asp置换，和位置67的Ser置换Tyr。该DNA序列及其翻译氨基酸序列如下所述：

5′-atg ggt tgg tcc tgc atc atc ctg ttc ctg gtt gct acc gct acc ggt48

N-Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

gtt cac tcc gac atc cag ctg acc cag agc cca agc agc ctg agc gcc96

Val His Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

20 25 30

agc gtg ggt gac aga gtg acc atc acc tgt aag gcc agt cag agt gtg144

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val

35 40 45

act aat gat gta gct tgg tac cag cag aag cca ggt aag gct cca aag192

Thr Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys

50 55 60

ctg ctg atc tac tat gca tcc aat cgc tac act ggt gtg cca agc aga240

Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg

65 70 75 80

ttc agc ggt agc ggt agc ggt acc gac ttc acc ttc acc atc agc agc288

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser

85 90 95

ctc cag cca gag gac atc gcc acc tac tac tgc cag cag gat tat agc336

Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser

100 105 110

tct ccg tac acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgt aagtg-3′386

Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Lys-C

115 120 125

另一VK构造(即，VK2)具有复原原始RE1构架的DQMDY序列。DNA和相应氨基酸序列如下所述：

5′-atg ggt tgg tcc tgc atc atc ctg ttc ctg gtt gct acc gct acc ggt48

N-Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

gtc cac tcc agc atc gtg atg acc cag agc cca agc agc ctg agc gcc96

Val His Ser Ser Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

20 25 30

agc gtg ggt gac aga gtg acc atc acc tgt aag gcc agt cag agt gtg144

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val

35 40 45

actaat gat gta gcttgg tac cag cag aag cca ggt aag gct cca aag192

Thr Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys

50 55 60

ctg ctg atc tac tat gca tcc aat cgc tac act ggt gtg cca gat aga240

Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg

65 70 75 80

ttc agc ggt agc ggt tat ggt acc gac ttc acc ttc acc atc agc agc288

Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser

85 90 95

ctc cag cca gag gac atc gcc acc tac tac tgc cag cag gat tat agc336

Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser

100 105 110

tct ccg tac acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgt aagtg-3′386

Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Lys-C

115 120 125

第三V_K构造是VK3，它在氨基末端具有SVM对DQM和两个其他残基变化。该DNA和相应氨基酸序列是：

5′-atg ggt tgg tcc tgc atc atc ctg ttc ctg gtt gct acc gct acc ggt48

N-Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

gtc cac tcc gac atc cag atg acc cag agc cca agc agc ctg agc gcc96

Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

20 25 30

agc gtg ggt gac aga gtg acc atc acc tgt aag gcc agt cag agt gtg144

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val

35 40 45

act aat gat gta gct tgg tac cag cag aag cca ggt aag gct cca aag192

Thr Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys

50 55 60

ctg ctg atc tac tat gca tcc aat cgc tac act ggt gtg cca gat aga240

Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg

65 70 75 80

ttc agc ggt agc ggt tat ggt acc gac ttc acc ttc acc atc agc agc288

Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser

85 90 95

ctc cag cca gag gac atc gcc acc tac tac tgc cag cag gat tat agc336

Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser

100 105 110

tct ccg tac acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgt aagtg-3′386

Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Lys-C

有关如何分别制备这些轻链和重链序列的详情由美国专利6,602,503提供，鉴于所有目的其全文在此引入作为参考。上述轻链和重链的不同组合可以本领域已知的计算机模拟技术来制备。

本领域已知识别和结合α-4整连蛋白的其他抗原。这些包括但不限于GG5/3(Keszthelyi等，Neurology47(4)：1053-1059(1996))，FW3-218-1(ATCC No.：HB-261；一种抗绵羊α4整连蛋白的IgG2b抗体)，和R¹-2(ATCC No.：HB-227；Rattus norvegicus开发的IgG2b抗体)。无论该抗体是否在小鼠或其他动物中开发，各个序列可以基于本领域已知的技术并借助于计算机模拟技术进行基因工程化由此使其人源化。此后可以在本文所述的体外和体内试验的基础上对抗-α-4整连蛋白人源化抗体进行其促进髓鞘再生和/或抑制脱髓鞘和/或减轻麻痹的性能评估。

5.2.抗体片段

在用于治疗涉及脱髓鞘的疾病和病症中还考虑抗体的结合抗-α-4或VCAM-1由此抑制VLA-4和VCAM-1相互作用的抗体片段。抗体片段包括Fab，F(ab′)₂，scFv和Fv片段，它们可以应用于本发明公开的组合物中。

此外使用的术语″Fab片段″是指含有单一抗原结合区的部分抗体分子，它由该分子的重链和轻链两者的一部分构成。

在此使用的术语″F(ab′)₂片段″是指含有两个抗原结合区的部分抗体分子，并且它由该分子的轻链和一部分的重链构成。

在此使用的术语″Fv片段″是指参与抗原识别和结合的抗体分子的组成部分。

在此使用的术语″scFv″是指单链Fv(scFv)片段。这些scFv片段是重组抗体衍生物，其仅由通过柔性连接体连接的抗体重链和轻链的可变结构域构成。scFv抗体片段包含抗体的V_H和V_L结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链中。通常，该Fv多肽进一步在V_H和V_L结构域之间包含多肽连接体，它们确保scFv形成抗原结合所需的结构。有关scFv的综述参见Pluckthun在The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies，vol.113，269-315(Rosenburg和Mooreeds.，Springer-Verlag，New York1994)中的内容。

抗体片段中还包括diabodies。术语″diabodies″是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段在同一相同多肽链(V_H-V_L)内包含与轻链可变结构域(V_L)相连的重链可变结构域(V_H)。通过使用非常短的连接体使同一链上的两个结构域配对，该结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。Diabodies更全面地描述在例如，EP404,097；WO93/11161；和Hollinger等，1993 Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-8.中。

抗体片段还包括线性抗体。短语″线性抗体″当在本申请全文中使用时是指在，例如，Zapata等，1995 Protein Eng.8(10)：1057-62中所述的抗体。简单而言，这些抗体包括一对串联Fd节段(V_H-C_Hl-V_H-C_Hl)，它构成一对抗原结合区。线性抗体抗原是双特异性或单特异性。

抗体的木瓜蛋白酶消化作用产生两个相同抗原结合片段，称作″Fab″片段，各自具有一个抗原结合位点，和残基″Fc″片段，其名称反映出其容易结晶的性能。胃蛋白酶处理得到具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab′)₂片段。

数种小鼠抗-VLA-4单克隆抗体早已被公开。参见，例如，美国专利6,602,503，6,033,665，和5,840,299，本文将进一步讨论并且其全文在此引入作为参考；Sanchez-Madrid等，1986，Eur.J.Immunol.16：1343-9；Hemler等.，1987，J.Biol.Chem.262：11478-85；Pulido等，1991，J.Biol.Chem.，266：10241-45；Issekutz等，1991，J.Immunol.，147：109(TA-2MAb))。这些抗VLA-4单克隆抗体和其他能够识别VLA-4的α和/或β链的抗VLA-4抗体(例如，美国专利5,888,507-Biogen，Inc.和引入作为参考)将适用于本发明的治疗方法中。优选识别VLA-4α-4链表位参与结合VCAM-1和纤连蛋白配体的抗VLA-4抗体(即，可以在一个位点结合VLA-4参与配体识别并阻断VCAM-1和纤连蛋白结合的抗体)。这种抗体被定义为B表位特异性抗体(B1或B2)(Pulido等.，1991，上文)并且也是本发明的抗-VLA-4抗体。

VLA-4的完全人单克隆抗体同系物是另一种优选的结合药物，它可以在本发明的方法中阻断或覆盖VLA-4配体。在其完整形式中它们可以用体外抗原接触的人脾细胞制备，通过Boerner等，1991，J.Immunol.，147：86-95中所述的方法。或者，它们可以按照Persson等.，1991，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，88：2432-36所述方法通过所有组成成分克隆制备，或者通过Huang等，1991，J.Immunol.Meth.，141：227-236所述方法制备。美国专利5,798,230(Aug.25，1998，″Process for thepreparation of human monoclonal antibodies和their use″)描述了从人B细胞制备人单克隆抗体。按照这种方法，人的产抗体B细胞是通过用Epstein-Barr病毒或其衍生物感染来达到无限增殖化，它表达Epstein-Barr病毒核抗原2(EBNA2)。EBNA2功能随即被截断，该功能是无限增殖化所需要的，由此提高抗体生产。其他方法是本领域已知的。

制备完全人抗体的另一方法，参见，例如，美国专利5,789,650，它描述了能够产生具有失活内源性免疫球蛋白基因的异源抗体的转基因非人动物。内源性免疫球蛋白基因被反义多核苷酸和/或内源性免疫球蛋白的抗血清抑制。异源性抗体通过免疫球蛋白基因编码，该基因一般无法在非人动物物种的基因组中发现。将非重排人免疫球蛋白重链的含一个或多个转基因序列引入到非人动物中，由此形成能够功能上重排转基因免疫球蛋白序列并产生编码人免疫球蛋白基因的不同同种型抗体的所有组成成分的转基因动物。B-细胞中产生这种异源性人抗体，此后它被无限增殖化，例如通过与无限增殖化细胞系如骨髓瘤融合或者通过其他技术处理这样的B细胞以保持产生单克隆、异源性、完全人抗体同系物的细胞系。大型非免疫人噬菌体展示文库也可以用来分离高亲和力的抗体，利用标准噬菌体技术可以开发人治疗药。

在制备纯″嵌合抗体″(即，其中整体恒定区和整体可变区衍生自不同的来源)的早期方法之后，EP 0239400(Winter等)描述了一种新方法，其中抗体由于一个物种变为另一物质致使其互补决定区(CDRs)(在指定可变区内)置换而改变。该方法可以用于来，例如，用另一来自鼠科可变区结构域的CDRs置换来自人重链和轻链Ig可变区结构域的CDRs。这些改变了的Ig可变区随后可以与人Ig恒定区结合产生抗体，除了置换的鼠科CDR之外它在组成上全部是人的。人们推测这种CDR-置换的抗体在人体中可比纯嵌合抗体更不易引起免疫反应，因为CDR-置换的抗体含有非常少的非人组成。这种经过CDR″接枝″的人源化单克隆抗体的方法称作″改形″(Riechmann等，1988，Nature 332：323-7；和Verhoeyen等.，1988，Science 239：1534-6)。

5.3.抗体纯化

当采用重组技术时，抗体可以在细胞内、周质间隙中产生，或者直

接分泌到介质中。如果细胞内产生抗体，作为第一步，通过例如离心或超滤除去特定碎片，或者宿主细胞或细胞溶解片段。

Carter等，Biol/Technology 10：163-7(1992)描述一种分离抗体的方法，该抗体被分泌到大肠杆菌的周质间隙内。简单而言，使细胞浆在醋酸钠(pH 3.5)、EDTA和苯基甲基磺酰氟(PMSF)的存在下融化约30分钟。细胞碎片可以通过离心除去。在抗体分泌到介质中的情况下，该表达体系的上清液一般首先用市售的蛋白质浓缩过滤器浓缩，例如，Amicon或Millipore Pellicon超滤单位。蛋白酶抑制剂例如PMSF可以加入到上述任意步骤中以阻止蛋白水解，并且可以加入抗生素以防止外来污染物的生长。

由细胞制备的抗体组合物适宜在进行LPHIC之前经过至少一个提纯步骤。适当的提纯步骤的实例包括羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析和亲和色谱，亲和色谱是优选的提纯技术。蛋白A作为亲和配体的适合性依赖于抗体中提供的免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白质A可以用于纯化基于人γ1，γ2，或γ4重链的抗体(Lindmark等，1983J.Imraunol.Meth.62：1-13)。蛋白G被推荐用于所有小鼠同种型和人γ3(Guss等.，1986 EMBO J.5：1567-75)。与亲和配体相连的基质最常见是琼脂糖，但其他基质也可以使用。机械上稳定的基质例如控制多孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯允许流量比琼脂糖更快且处理时间更短。当抗体含有CH₃结构域时，BakerbondABXTM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，N.J.)用于纯化。其他蛋白纯化的技术例如在离子交换柱上分馏、乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶色谱、肝素SEPHAROSE^TM上的色谱、阴离子或阳离子交换树脂上的色谱(例如聚天门冬氨酸柱)、色谱聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀法也可以根据回收的抗体来采用。

经过初级提纯步骤后，使含有感兴趣的抗体和污染物的混合物经历LPHIC。通常，纯化的抗体组合物应存在于前面纯化步骤的缓冲液中。然而，可能需要在LPHIC步骤之前向抗体组合物中加入缓冲剂。可以使用多种缓冲剂并可通过常规试验进行选择。含有被纯化抗体和至少一种污染物在负载缓冲液中的pH用酸或碱调整至约2.5-4.5的pH，这依赖于起始pH。优选地，负载缓冲液具有低盐浓度(即，小于约0.25M盐)。

该化合物加载在HIC柱上。HIC柱一般含有基础基质(例如，交联琼脂糖或合成共聚物材料)，该基础基质和疏水性配体(例如，烷基或芳基) 偶联。优选的HIC柱含有带有苯基的琼脂糖树脂(例如，苯基SEPHAROSE柱)。许多HIC柱可以商购。实例包括，但不限于，具有低或高取代的苯基SEPHAROSE 6 FASTFLOW^TM柱(Pharmacia LKBBiotechnology，AB，Sweden)；苯基SEPHAROSE^TM高效柱(PharmaciaLKB Biotechnology，AB，Sweden)；辛基SEPHAROSE^TM高效柱(Pharmacia LKB Biotechnology，AB，Sweden)；FRACTOGEL^TM EMD丙基或FRACTOGEL^TM EMD苯基柱(E.Merck，Germany)；MACRO-PREP^TM甲基或MACRO-PREP^TM叔丁基支持体(Bio-Rad，California)；WP HI-丙基(C3)^TM柱(J.T.Baker，New Jersey)；和TOYOPEARL^TM醚、苯基或丁基柱(TosoHaas，PA)。

抗体从柱中用洗脱缓冲剂洗脱出来，洗脱缓冲剂一般和负载缓冲剂相同。洗脱缓冲剂可以利用常规试验进行选择。洗脱缓冲剂的pH介于约2.5-4.5之间并且具有低盐浓度(即，小于约0.25M盐)。已经发现不一定使用盐梯度液来洗脱感兴趣的抗体；通过分级回收流液中所需产物，它与柱结合不明显。

LPHIC步骤提供一种将正确折叠和二硫键抗体与不希望的污染物(例如，错误相关的轻和重链片段)分开的途径。特别是，该方法提供一种基本上除去此处所特有的杂质的方式，该杂质是由于正确折叠抗体片段的轻链和重链无法经过二硫键缔合。

纯化蛋白的诊断或治疗制剂可以通过使抗体组合物提供为生理可接受载体的形式来制备，其实例如下。

为了从HIC柱除去污染物(例如，未折叠抗体和错误相关的轻和重片段)以使该HIC柱再利用，含有脲的组合物(例如，6.0M脲，1％MES缓冲剂pH 6.0，4mM硫酸铵)可以经该柱流动。其他方法是本领域已知的。

5.4.免疫球蛋白制剂

具有预期治疗效果的抗体和免疫球蛋可以存在于生理可接受载体中给予对象。所述的抗体可以以多种途径给药，包括但不限于非肠道给药，包括皮下、硬膜下、静脉内、肌肉内、鞘内、腹膜内、脑内、动脉内或病灶内途径的给药，局部给药(例如，外用涂敷或外用栓剂)，和肺部给药(例如，气雾剂，吸入，或散剂)和如下文所述。

根据引入的方式，所述的免疫球蛋白可以以不同方式配制。治疗活性免疫球蛋白在制剂(即，足以抑制脱髓鞘和/或促进髓鞘再生的制剂)中的浓度可以在约1mg/ml-1g/ml内改变。优选地，当给予需要其的对象时，该免疫球蛋白组合物在对象中达到约10ng/ml或更高的免疫球蛋白血液水平。

优选地，该免疫球蛋白在适当惰性载体中配制用于非肠道给药，例如灭菌生理盐水溶液。例如，免疫球蛋白在载体溶液中的浓度一般在约1-100mg/ml。给药的剂量是由给药途径决定的。优选的给药途径包括非肠道或静脉内给药。

对于非肠道给药，本发明的抗体可以作为可注射剂量的所述物质在生理可接受稀释剂和药学可接受载体中的溶液或混悬液给药，它可以是灭菌液体例如水和由，其中加入或部加入表面活性剂并且其他药学制剂是石油、动物、植物或合成来源的，例如，花生油，豆油，和矿物油。通常，二醇例如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体，特别是可注射溶液。本发明的抗体可以以储库注射或植入制剂的形式给药，其可以以这样允许活性成分缓释的方式进行配制。一种优选的组合物含有5mg/mL的单克隆抗体，在由50mM L-组氨酸，150mM NaCl组成的缓冲水溶液中配制，用HCl调至pH 6.0。

治疗有效剂量是指有效达到显著减少脱髓鞘且明显增加髓鞘再生的剂量。优选地，该量足以在对象中产生统计学意义量的髓鞘再生。

根据本发明的重要特征，识别和结合VLA-4的免疫球蛋白可以单独给药，或与抗炎药物联合给药，它通常用来治疗与脱髓鞘有关的病症和疾病。抗炎药可以在所述免疫球蛋白给药之前、同时或之后给药。

治疗有效量的髓鞘再生抗体或免疫球蛋白，例如natalizumab，可以通过与已知抗体的已建立有效剂量的比较，并且考虑natalizumab在体内和体外模型中获得的数据来进行估计。优选该数据来自脱髓鞘研究的抑制作用。本领域技术人员懂得，剂量的调整可能是必要的，这归因于免疫球蛋白的变性或代谢、系统性对局部的传输，以及年龄、体重、全身健康、性别、饮食、给药时间、药物的相互作用和给予该免疫球蛋白的对象病症的严重性。可以进行这种调整并且本领域技术人员通过常规试验决定适当的剂量。

所述免疫球蛋白的治疗制剂为了储存通过将具有预期纯度水平的免疫球蛋白与选择性生理可接受载体、赋形剂或稳定剂混和制成(Remington′s Pharmaceutical Sciences，16^th ed.，A.Osol，Ed.，1980和更新版本)，成为冷冻干燥饼或水溶液的形式。可接受免疫球蛋白载体、赋形剂或稳定剂是在所用剂量和浓度下对于接受者来说无毒、非治疗性和/或无免疫原性，并且包括缓冲剂例如磷酸盐，柠檬酸盐，和其他有机酸；抗氧剂包括抗坏血酸；低分子量(小于10个残基)多肽；蛋白，例如血清白蛋白，明胶，或免疫球蛋白；亲水性聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸，谷酰胺，天门冬酰胺，精氨酸或赖氨酸；单糖类，二糖类，和其他碳水化和物包括葡萄糖，甘露糖，或糊精；螯合剂例如EDTA；糖醇例如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子例如钠；和/或非离子表面活性剂例如吐温，Pluronics或聚乙二醇(PEG)。

载体分子的特殊实例包括但不限于糖胺聚糖(例如，硫酸肝素)，透明质酸，硫酸角质素，硫酸软骨素4，硫酸软骨素6，硫酸类肝素和硫酸表皮素(dermatin)，基底膜聚糖和戊聚硫酸盐。

含有免疫球蛋白的药物组合物如果需要还可以包括，药学可接受、无毒载体或稀释剂，它们是动物或人给药的药物组合物配制中常用的载体。对稀释剂进行选择应不影响组合物的生物活性。实例包括但不限于蒸馏水，磷酸盐缓冲的生理盐水，林格氏溶液，葡萄糖溶液，和Hank氏溶液。

本发明的药物可以配制为注射制剂，这是通过将它们溶解、悬浮或乳化在水或非水溶剂中，例如植物或其他类似的油，合成脂肪酸甘油酯，高级脂肪酸的酯或丙二醇。该制剂还可以含有常规添加剂，例如增溶剂，等渗试剂，助悬剂，乳化剂，稳定剂和防腐剂。

该免疫球蛋白还可以以气雾剂制剂应用经吸入或肺部传送给药。本发明的药物可以配制到加压可接受抛射剂中，例如二氯二氟甲烷，丙烷，氮气等。

该免疫球蛋白还可以捕集到制成的微囊内，例如，通过凝聚技术或通过界面聚合技术(例如，羟甲基纤维素或明胶微囊和聚甲基丙烯酸甲酯微囊)，胶体药物给药体系中(例如，脂质体，白蛋白微球，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或大分子乳剂中。这些技术公开在Rernington′sPharrnaceutical Sciences，如上。

用于体内给药的免疫球蛋白必须经过灭菌。这很容易在冷冻干燥和重构之前或之后通过过滤法、经灭菌滤膜来完成。免疫球蛋白一般应以冷冻干燥形式储存或储存在溶液中。

治疗性免疫球蛋白组合物一般置于具有灭菌存取端口的容器内，例如静脉内溶液用袋或带有塞子的瓶子，该塞子可以透过皮下注射针头或类似形状的仪器。

缓释制剂的适当实例包括含蛋白的固体疏水性聚合物的半渗透基质，该基质是有形物品的形式，例如，膜或微囊。缓释基质的实例包括聚酯，水凝胶(例如，Langer等.，J.Biomed.Mater.Res.15：167-277(1981)和Langer，Chem.Tech.12：98-105(1982)所述的聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯醇))，聚交酯(美国专利3,773,919)，L-谷氨酸和γL-谷氨酸乙酯的共聚物(Sidman等，Biopolymers 22：547-556，1983)，非降解乙烯基乙酸乙烯酯(Langer等.，如上)，可降解乳酸-羟乙酸共聚物例如LUPRONDEPOT^TM(即，乳酸-羟乙酸共聚物和乙酸leuprolide组成的可注射微球)，和聚D-(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。

虽然聚合物例如乙烯基乙酸乙烯酯和乳酸-羟乙酸能够在约100天内释放分子，某些水凝胶可在较短时间内释放蛋白。当包囊的抗体在体内保留长时间时，它们可变性或聚集，这是与水分在37℃下接触的结果，导致生物活性的损失和免疫原性的潜在改变。可以根据涉及的机理针对免疫球蛋白稳定化设计合理的策略。例如，如果发现聚集机理是由于硫-二硫键交替发生导致分子内S-S键的形成，则稳定化作用可以通过修饰巯基残基、从酸性溶液冷冻干燥、控制水分含量、利用适当添加剂，开发特定聚合物基质组合物等来达到。

缓释免疫球蛋白组合物还包括脂质体捕集的免疫球蛋白。含免疫球蛋白的脂质体通过本身已知的方法制备。参见，例如，Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688-92(1985)；Hwang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030-4(1980)；美国专利4,485,045；4,544,545；6,139,869；和6,027,726。通常，脂质体是小的(约200-约800埃)单层型，其中脂质含量比胆固醇高约30mole％(mol.％)；选择的比例调整至免疫球蛋白疗法最佳。

本发明的免疫球蛋白可以以缓释形式给药，例如储库注射剂，植入制剂，渗透泵，它可以以允许活性成分缓释的方式配制。缓释制剂的植入剂是本领域已知的。植入物用生物可降解或非生物可降解聚合物配制为微球、软膏板等，例如，乳酸和/或羟乙酸的聚合物形成一种宿主耐受良好的可靠聚合物。该植入物被放置在接近蛋白质沉积的位点(例如，与神经变性疾病有关的淀粉样蛋白沉积的形成位点)，由此使活性成分的局部浓度在该位点处高于机体的其他位置。

此外，预防脱髓鞘和/或诱发髓鞘再生的免疫球蛋白可以通过施用编码整个或部分抗体的聚核苷酸(例如，单链Fv)来提供给对象。该聚核苷酸在适当载体中施用给对象，从而允许该免疫球蛋白在该对象中以治疗有效量表达。

免疫球蛋白的典型日剂量是约1μg/kg至约10mg/kg或更高，这取决于在此提及的多种因素。通常，临床医生应给予免疫球蛋白直至剂量达到获得所需效果。该疗法的过程很容易通过常规试验来监测。

″稳定的″抗体或抗体片段制剂是指在储存时其中的蛋白质基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。本领域中许多测定蛋白质稳定性的分析技术可以利用并在例如Peptid和Protein DrugDelivery，247-301，(Vincent Lee Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.1991)和A.Jones，Adv.Drug Delivery Rev).10：29-90(1993)中评述。稳定性可以在选定稳定和选定时间周期内进行测定。优选地，该制剂在室温下(约30℃)或在40℃下稳定至少1个月和/或在约2-8℃下稳定至少1年，至少约2年。而且，该制剂优选在冷冻(至例如，-70℃)并融化制剂之后保持稳定。

如果药物制剂在颜色和/或澄清度的观察试验中，或者通过UV光散射法或通过尺寸排阻色谱测定后证实没有聚集、沉淀和/或变性的迹象，则蛋白质在药物制剂中″保持其物理稳定性″。

如果在指定时间内化学稳定性仍然保持该蛋白质如下定义的生物活性时，则蛋白质在药物制剂中″保持其化学稳定性″。化学稳定性通过检测和定量分析蛋白质的化学改变形式来进行评估。化学变化可以包括大小改变(例如，剪断)，它可以尺寸排阻色谱、SDS-PAGE和/或矩阵辅助的激光解吸附电离作用(matrix-assisted laser desorption ionization)/时间至射程(time-of-flight)质谱(MALDI/TOF MS)来测定，例如，其他类型的化学变化包括电荷变化(例如，脱酰胺化的结果)，它可以通过例如离子交换色谱进行评估。

如果免疫球蛋白的生物活性在指定时间时是该药物制剂在制备时通过抗原结合试验测定法获得的生物活性的约10％(试验的误差范围内)内时，则免疫球蛋白在该药物制剂中″保持其生物活性″。

5.5.免疫球蛋白组合物的给药途径

如上所述，上面讨论的药物组合物可以给药用于预防和/或治疗性处理多发性硬化或其他脱髓鞘相关性疾病。在治疗性应用中，组合物以促进髓鞘再生有效量施用给被怀疑或已经患有例如多发性硬化的患者。足以达到这种目的的量定义为治疗-或药学-有效剂量。

药物组合物将通过非肠道、局部、静脉内、口服给药，或皮下、肌肉内局部给药，例如气雾剂或经皮给药，用于预防和/或治疗性处理。尽管本发明的蛋白性物质可以在口服给药(p.o.)经过肠道后幸存下来，但优选通过皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌肉内(i.m.)、腹膜内给予储库注射剂；或通过植入制剂给药。

所述的药物组合物可以以不同的单位剂型给药，这依赖于给药的方法。例如，适合口服给药的单位剂型包括散剂、片剂、丸剂、胶凝剂和锭剂。

本发明的组合物用于治疗上述病症的有效剂量，应根据许多因素而变化，包括给药的方式，靶向位点，患者的生理状态，和其他给予的药物。所以，治疗剂量需要调整至最佳安全性和功效。这些组合物可以采取与其他治疗性药物相似的方式给予哺乳动物用于兽用或者给予人体用于临床，即，在生理可接受的载体中。通常，给药剂量应在约0.0001-100mg/kg的范围内，并且更经常为0.01-0.5mg/kg的宿主体重。

在优选处理方案中，该抗体通过静脉内输注或者皮下注射、以1-5mg抗体/千克患者体重的剂量给药。该剂量是以2-8周的时间间隔重复。在此范围内，优选的处理方案是以四周的时间间隔给予3mg抗体/千克体重。

6.药物联合

如上所述，上述药物或药物组合不曾被确定作为终止脱髓鞘疾病中神经功能的进行性丧失。一些抑制免疫介导的炎症的药物已经存在并且也可以减少多发性硬化的复发率。用于治疗与多发性硬化有关的症状和脱髓鞘有关的病症和疾病的这些药物和其他药物也被考虑用于与本发明的化合物和组合物联合使用。对一种或多种用来与本发明的化合物和组合物以鸡尾酒形式和/或联合使用的药物的选择依赖于对疾病的控制。例如，在MS中，疾病控制可以分为两组：(1)为停止该疾病过程设计的处理，和(2)症状的控制。不同的药物联合可以用于种类(D)。例如，本发明的化合物和组合物可以与免疫抑制剂一起给药以进一步抑制免疫细胞的流入和脱髓鞘作用。例如，可以使用免疫抑制剂，如皮质类固醇。

髓鞘再生药物(例如，抗-α-4整连蛋白抗体，小化合物化合物α-4整连蛋白拮抗剂等)可以与其他化合物或组合物组合用于治疗、改善或减轻预干脱髓鞘病症或疾病有关的症状。

其他用于治疗、改善或减轻预干脱髓鞘病症或疾病(包括多发性硬化)有关的症状的药物，包括但不限于：肌肉松弛剂(例如，安定，环苯扎林，氯硝西泮，可乐定，扑米酮，等等)，抗胆碱能药物(例如，普鲁本辛，双环胺，等等)，中枢神经系统兴奋剂(例如，苯异妥英)，非甾族抗炎药(NSAIDs例如布洛芬，萘普生和酮洛芬)，干扰素类，免疫球蛋白，glatiramer(Copaxone_)，米托蒽醌(Novantrone_)，米索前列醇，肿瘤坏死因子-α抑制剂(例如，pirfenidone，infliximab等等)和皮质类固醇(例如，糖皮质类固醇和盐皮质类固醇)。

治疗多发性硬化的常规药物包括干扰素β-lb(Betaseron_)，干扰素β-la(Avonex_)，高剂量干扰素β-la(Rebif_)，格拉替美(Copaxone_)，免疫球蛋白，米托蒽醌(Novantrone_)，皮质类固醇(例如，泼尼松，甲泼尼龙，地塞米松等等)。

其他皮质类固醇也可以使用并且包括但不限于氢化可的松，可的松，氟氢可的松，泼尼松龙，6α-甲泼尼龙，去炎松，和倍他米松。

与本发明化合物和组合物联合的药物的剂型应根据该对象和联合使用的药物而改变。例如，干扰素通常给药如下：干扰素β-la(Avonex_)每周给予1次300μg；干扰素β-la以约22μg或44μg每周给药3次；和干扰素β-lb(Betaseron_)以250μg隔天给药(Durelli等.，Lancet 359：1453-60，2002)。通常，该干扰素给药用于逆转或缓解多发性硬化。所以，与本发明的髓鞘再生药物联合，干扰素的优选范围包括约0.1μg-约250gg且更优选约0.5μg-约50μg，这取决于与本发明所述其他髓鞘再生化合物和组合物联合给药的药物的给药方式。

本发明考虑的非甾族抗炎药(NSAIDs)包括但不限于非选择性COX 抑制剂和选择性COX-2抑制剂。非选择性COX抑制剂包括但不限于水杨酸衍生物(例如，阿司匹林，水杨酸钠，三水杨酸胆碱镁，双水杨酸酯，二氟尼柳，柳氮磺胺吡啶，和olsalazine)，对氨基酚衍生物(例如，对乙酰氨基酚)，吲哚和茚乙酸类(例如，托美丁，双氯芬酸，和酮力克)，杂芳基乙酸类(例如，阿布洛芬(abuprofen)，萘普生，氟比洛芬，酮洛芬，fenprofen，和奥沙普秦)，邻氨基苯甲酸或fenamates(例如，甲芬那酸和甲氯芬那酸)，烯醇酸类(例如，昔康类如吡罗昔康和美洛昔康)，和烷酮类(例如，萘丁美酮)。选择性COX-2抑制剂包括二芳基取代的呋喃类(例如，洛非考昔(rofecoxib))，二芳基取代的吡唑类(例如，赛利考昔(celecoxib))，吲哚乙酸类(例如，依托度酸)，和磺酰苯胺类(例如，尼美舒利)。NS经常与干扰素联合给药以减小患者常经受的流感样症状，例如，Avonexo。常规NS包括萘普生，布洛芬和酮洛芬。醋氨酚也常施用给患者。参见，Reess等，2002 Mult.Scler.8：15-8。

格拉替美乙酸酯(GA，Copaxone_)是一种合成分子，它抑制髓磷脂碱性蛋白质-反应性T细胞的激活并诱导T-细胞所有组成成分，特征是抗炎效果。此外，格拉替美可以进入中枢神经系统(CNS)，而干扰素-β无法如此(Dhib-Jalbut，2002 Neurology 58：S3-9；Weinstock-Guttman等，2000 Drugs 59：401-10)。

米托蒽醌是蒽二酮合成药物，已经证实它有效治疗继发性进行星多发性硬化(SP-MS)。然而，这种药物的使用也受到其蓄积性心脏毒性的限制(Weinstock-Guttman等，2000)。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可能是脱髓鞘中的关键细胞因子(Walker等，2001 Mult.Scler.7：305-12)。所以，拮抗TNF-α功能或抑制其合成的药物的应用可以与本发明公开的药物和化合物联合使用。这可以包括抗-TNF-α抗体(例如，infliximab)以及药物例如吡非尼酮。吡非尼酮是非肽药物，已经证实它减少TNF-α的合成并阻断TNF-α的受体。Id。

在大多数脱髓鞘病症和疾病中长期起支柱作用的是ACTH、糖皮质激素和肾上腺素激素。这些药物利用其抗水肿和抗炎作用。ACTH一般以80U、在500mL的5％葡萄糖和水中经静脉内施用给对象6-8小时共3填。也可以每12小时40U/ml肌肉内给予40U的剂量共7填，并且随后剂量每3天有所降低。参见，S.Hauser，″Multiple sclerosis和otherdemyelinating diseases，″在Garrison中的Principles of Internal Medicine 2287-95(13^th ed.，Isselbacher等，ed.1994)。甲泼尼龙通常在500ml D5W中缓慢给药约6小时，优选在清晨给药。常规剂量包括1000mg/天共3天，500mg/天共3天和250mg/天共3天.Id.。也常常施用甲泼尼龙-强的松的组合。通常，1000mg的静脉内甲泼尼龙给药3天，随后口服强的松1mg/kg/天达14天。由此，为了与本发明公开的化合物和组合物联合使用，根据需要，甾族化合物可以以约1-约1000mg/kg的量给药约1-14天。

脱髓鞘病症例如MS中的副作用是疲劳和认知功能减弱。药物例如金刚烷胺盐酸盐和苯异妥英常常用来治疗与MS有关的疲劳(Geisler等，1996 Arch.Neurol.53：185-8)。

此类联合疗法的益处在于可以减小某些药物常常遇到的纲类特异性和药物特异性副作用。干扰素-β的纲特异性包括注射后2-6小时出现发热，寒战，肌痛，关节痛和其他流感样症状，并且通常在注射后24小时消失。有时干扰素-β也诱发暂时性beta also已有MS症状的_化。药物特异性的副作用包括干扰素β-1b的注射位置反应。这些副作用的控制可以通过调整给药的剂量和时间、规定适当的对乙酰氨基酚、非甾族抗炎药(NSAIDs)和甾族的适当组合物。参见，Munschauer等，1997 Clin.Ther.19：883-93。

所以，可以减少特定药物的给药量的药物组合可以减小患者遭受的不良副作用。

当联合给药时，小的化合物髓鞘再生药物可以采取与所述其他化合物或组合物在同一制剂或单独制剂给药。当联合给药时，所述的髓鞘再生免疫球蛋白一般与其他化合物和组合物以单独制剂给药。当联合给药时，所述的髓鞘再生药物在其他化合物和组合物给药之前、之后或者并行给药用于治疗、改善或减轻症状。

7.长期给药剂量方案

本发明的长期治疗方案提供α-4整连蛋白药物(例如，小分子或免疫球蛋白)处于保持足够受体饱和的水平从而在需要其的患者中抑制病理性炎症。本发明的方法需要每两周给药1次或者每两个月给药1次，并且反复的给药持续至少6个月的时间，并且更优选持续1年或更长时间。本发明的方法包括使含有α-4整连蛋白(例如，VLA-4)的二聚体在人体患者中的受体饱和水平达到和保持在月65％-100％的范围内，更优选75％- 100％，和甚至更优选80-100％。这些受体饱和水平长时间保持在这样的水平(例如，约6给药或类似的时间)从而持续抑制病理性炎症。

在一个具体实施方式中，所述髓鞘再生药物是抗体，优选人源化或人抗体，并且给药是以月为基础。在另一具体实施方式中，所述的髓鞘再生药物是定义如上的式I、IA、IB、IC、II、IIA或IIB的化合物。监测受体饱和的水平可以判断给药方案的功效，并且测定生理标志一般证实该给药分；方案的成功。作为一种确认，监测抗体的血清水平可以鉴定抗体的清除率并测定半寿期对治疗功效的潜在影响。

对于用本发明的药物的处理，剂量范围为约0.0001-100mg/kg，和更经常为0.01-5mg/kg的宿主体重。例如剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重。剂量和频率根据药物在患者中的半寿期变化。给药的剂量和频率可以根据该处理是否是预防性还是治疗性的而变化。对于免疫球蛋白的给药，每个给药注射一般为2.0-8.0μg/kg剂量。对于化合物的给药，每个给药注射一般为1.0-50.0mg/kg剂量。按照本文的教导，通过从患者获得液体样本可以监测有效剂量。因此，用本领域熟知的方法采集血清和脑脊液样本且测定整连蛋白受体饱和度。理想地，在初次给药之前采集样本，随后采样并在每次处理之前和/或之后测定。

作为另一种包括反复独立给药的长期给药，所述的髓鞘再生药物可以作为缓释制剂施用，提供一种使受体饱和的水平保持在足以抑制炎症的剂量。例如，采用控释体系在本发明的范围内内长时间施用髓鞘再生药物。适当控释剂型的探讨可以参见Lesczek Krowczynski，EATENDED-RELEASEDOSAGEFORMS，1987(CRC Press，Inc.)。

不同控释技术覆盖了非常广泛的药物剂型。控释技术包括，但不限于物理体系和化学体系。物理体系包括，但不限于，具有控速膜的储库体系，例如微囊封法，大囊封法，和膜体系；没有控速膜的储库体系，例如中空纤维，超微孔纤维素三乙酸酯，和多孔聚合物和泡沫；单层体系，包括那些物理上溶于非孔的、聚合性或弹性基质(例如，非侵蚀性、侵蚀性、环保试剂准许的，和可降解的)中的体系，和物理上分散在非孔的、聚合性或弹性基质(例如，非侵蚀性、侵蚀性、环保试剂准许的，和可降解的)中的物质；层压结构，包括化学上类似于或不同于外部控制层的储库层；和其他物理方法，例如渗透泵，或吸附到离子交换树脂上。

化学体系包括，但不限于，聚合物基质的侵蚀(例如，多相或同相侵蚀)，或聚合物基质的生物侵蚀(例如，多相的，或同相的)。有关控释体系种类的其他探讨可以参见Agis F.Kydonieus，CONTROLLEDRELEASE TECHNOLOGIES：METHODS，THEORIZANDAPPLICATIONS，1980(CRC Press，Inc.)。

本发明的方法可以用来治疗患有涉及或由病理性炎症引起的疾病的患者，或者用于预防预防性处理处于特定疾病危险下的患者。预防性处理相对于治疗性处理所需的剂量方案可以有所变化，并且需要为特定应用和被治疗的疾病而设计。

在某些方法中，两种或多种(例如，具有不同结合特异性的单克隆抗体，本发明公开的单克隆抗体和化合物)可以并行给药，其中各药物的给药剂量落入所述的范围内。还可以考虑联合疗法，其中所述的药物可以连续施用给患者并且所需时间间隔是给药的时期。时间间隔还可以是不规则的，这通过测定受体饱和水平或者通过监测疾病进程的其他标记。

本领域技术人员很容易理解，剂量水平可以作为特定药物、症状严重性和对象对副作用的敏感性的函数而变化。一些特定药物比其他更有效。本领域技术人员很容易通过许多方式测定出指定药物的优选剂量。一种优选方式是测定指定药物的生理效价。

在预防性应用中，所述药物组合物以足以消除或者降低该危险性或者延迟疾病发作的两长时间施用给对特定疾病敏感或者处于该特定疾病危险下的患者。该用量内定义为预防有效剂量。在患有缓解的多发性硬化的患者中，可以通过NMR影像法评估危险性，或者在某些情况中，通过观察患者的先兆指征来测定。

对于上述病症的治疗，本发明的组合物的有效剂量方案可以根据多种不同因素而改变，包括给药的方式，靶向部位，患者的生理状态，和施用的其他药物。所以，治疗剂量需要滴定到最佳安全性和功效。通常，剂量方案的每次给药范围在约0.0001-约100mg/kg，经常为约0.01-约50，和更常为约0.1-约30mg/kg的宿主体重。

本发明的髓鞘再生药物可以与有效量的其他治疗药物一起用于对抗急性和慢性炎症。此类药物包括粘附分子的其他拮抗剂(例如，其他整连蛋白，选择蛋白，和免疫球蛋白(Ig)总科成员(参见Springer， Nature(1990)346：425-433；OsborN-(1990)Cell 62：3；和Hynes(1992)Cell9：11))。整连蛋白是杂二聚体跨膜糖蛋白，它由α链(120-180kDa)和β链(90-110kDa)组成，一般具有短的胞质结构域。例如，三种重要的整连蛋白，LFA-1，Mac-1和P150，95，具有不同的α亚基，称作CD11a，CD11b和CD11c，和一个共有β亚基，称作CD18。LFA-1(α_Lβ₂表达在淋巴细胞、粒细胞和单核细胞上，并且主要结合Ig-家族成员抗衡受体(称作ICAM-1)和有关配体。ICAM-1表达在许多细胞上，包括白细胞和内皮细胞，并且在血管内皮上在细胞因子例如TNF和IL-1的作用下上调。Mac-1(α_Mβ₂)分布在嗜中性白细胞和单核细胞上，并且也结合ICAM-1。第三β₂整连蛋白，P150，95(α_Xβ₂)也材嗜中性白细胞和单核细胞上被发现。选择蛋白由L-选择蛋白、E-选择蛋白和P-选择蛋白组成。

可以与所述髓鞘再生药物联合使用的其他抗炎药物包括细胞因子的抗体和其他拮抗剂，所述细胞因子例如白介素IL-1至IL-13，肿瘤坏死因子α和β(TNF-α和TNF-β)，干扰素α，β和γ，肿瘤生长因子β(TGF-β)，集落刺激因子(CSF)和粒细胞单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)。其他抗炎药物包括趋化因子的抗体和其他拮抗剂，趋化因子例如MCP-1，MIP-1α，MIP-1β，RANTES，exotaxin和IL-8。其他抗炎药物包括NS，甾族化合物和其他炎症的小分子抑制剂。

联合疗法中给药的时间选择和顺序、制剂、给药的途径和药物的有效浓度按照上述针对抗α-4整连蛋白的人源化抗体、抗α-4整连蛋白的小化合物和药物组合物的内容。

8.试验试剂

试剂可以在体外和体内测试。现有许多体外模型来测试一种试剂是否结合α-4亚基，因此本领域是公知的。测试试剂是否在体内具有促进髓鞘再生并抑制脱髓鞘的活性的试验可以利用实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)动物模型进行。EAE是中枢神经系统的炎性病症并且类似于多发性硬化(Paterson，在TEXTBOOK OF IMMUNOPATHOLOGY，eds.Miescherand Mueller-Eberhard，179-213，Grune和StrattoN，N.Y.1976)。

EAE在大鼠中可通过单层腹膜内注射对髓鞘碱性蛋白质特异性的CD4-阳性T细胞克隆来诱发。炎症在4-12小鼠内开始，内源性单核细胞和淋巴细胞浸润到脑干和脊柱的发炎脉管内，4和5天时导致尾部和下肢的麻痹。

EAE脑的切片可以用于测试其支持白细胞附着的性能，这可以利用例如，Stamper和Woodruff，J.Exp.Med.144：828-833(1976)所述的体外结合试验。抗白细胞附着受体的试剂可以在实施例4所述的体外切片试验中测试其抑制活性。如表12和13所示，U937细胞(人单核细胞系)的附着几乎完全被抗人VLA-4整连蛋白的抗体所阻断。髓鞘再生抗体比抗其他附着分子的抗体产生明显增高的阻断效果。

令人惊奇地，选择性抑制α4整连蛋白的纤连蛋白结合活性的抗体(P4G9和HP 1/7)增强U937附着于EAE脉管。这些结果提示α4整连蛋白的纤连蛋白结合活性不直接参与体外U937对EAE脉管的附着。表12和13还证明拮抗许多其他白细胞附着受体的抗体对于U937或淋巴细胞结合EAE脉管没有影响。

描述了利用上述α₄β₁试剂得到的体外结果，这些抗体对于EAE进程的影响也可以通过测定延迟麻痹的发作或者减轻麻痹的严重性来进行体内测试。实施例4提供了一种本发明抗体，HP2/1的保护性作用。

有效抑制白细胞结合脑内皮细胞并由此潜在抑制脱髓鞘或促进髓鞘再生的其他试剂可以利用附着试验进行鉴定。例如采用HP2/1或N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫唑脯氨酰胺基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯作为对照，可以筛选其他抗体或试剂的抑制淋巴细胞结合已知α₄β₁整连蛋白的配体的性能。若干其他试剂可以鉴定抑制以VLA-4白细胞表面受体的α4亚基为靶向的附着作用。

本发明方法和组合物中使用的单克隆抗体包括例如美国专利6,033,665中讨论的HP2/1，TY21.6，TY21.12，和L25，其全文在此引入作为参考。这些抗体与VLA-4的α链反应并阻断与VCAM-1、纤连蛋白和发炎脑内皮细胞结合，但不影响β₁整连蛋白家族的其他成员的活性。

还可以使用选择性对抗VLA-4/VCAM-1靶向反应的其他试剂。例如，与组合有β1链的VCAM-1结合结构域VLA-4(α₄)相互反应的、阻断淋巴细胞迁移到炎症部位，例如多发性硬化的脑部的抗体可以用来促进髓鞘再生。这种试剂将不影响基质相互(β₁整连蛋白的所有成员介导的)，也不影响正常肠内免疫性(α₄β₇介导)。这种和其他试剂的产生是本领域技术人员熟知的。

9.实施例

给出下列实施例，目的在于为本领域普通技术人员提供如何制备和应用本发明的完整内容和说明，而不是限定本发明人的发明范围，也不代表下列试验是已经进行的全部或仅有试验。已经努力确保有关所有数字(例如量，温度等)的准确度，但一些试验误差和偏差应该予以考虑。除非另外说明，份数是指重量份，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，并且压力是或接近大气压。

9.1.化合物的合成

在下列实施例中，如果缩写没有被定义，它具有已被普遍接受的含义。此外，所有温度为摄氏度(除非另外说明)。下列方法用于制备下面所述的化合物。

方法1

N-对甲苯磺酰化法

适当氨基酸的N-对甲苯磺酰化是通过Cupps，Boutin和Rapoport J.Org Chem.1985，50，3972的方法进行。

方法2

甲酯制备方法

氨基酸甲酯是利用Brenner和Huber Helv.Chim.Acta 1953，36，1109的方法制备。

方法3

BOP偶联法

预期的二肽酯是通过适当N-保护的氨基酸(1当量)与适当氨基酸酯或氨基酸酯盐酸盐(1当量)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸盐[BOP](2.0当量)、三乙胺(1.1当量)和DMF的反应来制备。将该反应混合物室温下搅拌过夜。粗产物快速色谱纯化得到二肽酯。

方法4

氢化方法I

氢化作用是利用10％碳载钯(10重量％)在甲醇中30psi下过夜来完成。该混合物经硅藻土垫过滤且浓缩滤液得到所需氨基化合物。

方法5

水解方法I

向适当酯的冰冷(0℃)THF/H₂O溶液(2∶1，5-10mL)加入LiOH(或NaOH)(0.95当量)。温度保持在0℃且该反应在1-3小时内完成。反应混合物用乙酸乙酯萃取且水相经冷冻干燥得到所需羧酸盐。

方法6

酯水解法II

向适当酯的冰冷(0℃)THF/H₂O溶液(2∶1，5-10mL)中加入LiOH(1.1当量)。温度保持在0℃且该反应在1-3小时内完成。浓缩该反应混合物且残余物溶于H₂O，同时pH用含水HCl调至2-3。产物用乙酸乙酯萃取且合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤和浓缩得到所需酸。

方法7

酯水解方法III

将适当酯溶解在二_烷/H₂O(1∶1)中并加入0.9当量的0.5N NaOH。将该反应搅拌3-16小时且随后浓缩。将所得残余物溶解在H₂O水并用乙酸乙酯萃取。水相经冷冻干燥得到所需羧酸钠盐。

方法8

磺酰化方法I

向溶于二氯甲烷(25ml)且冷却至-78℃的适当被保护氨基苯基丙氨酸类似物(11.2mmol)中加入所需磺酰氯(12mmol)，随后滴加吡啶(2ml)。使该反应升至室温并搅拌48小时。反应溶液被转移到装有二氯甲烷(100mL)的250mL分液漏斗中且用1N HCl(50mL×3)、盐水(50mL)和水(100mL)萃取。干燥有机相(MgSO₄)且浓缩溶剂得到所需产物。

方法9

还原性胺化法

Tos-Pro-p-NH₂-Phe与适当醛的还原性胺化法利用乙酸、三乙酰氧基硼氢化钠、二氯甲烷来进行并且合并的混合物在室温下搅拌过夜。粗产物通过快速色谱纯化。

方法10

BOC脱除方法

0℃下无水盐酸(HCl)气体被吹入经适当Boc-氨基酸酯的甲醇溶液中达15分钟且该反应混合物被搅拌3小时。浓缩该反应得到一种浆液并溶于Et₂O且再浓缩。重复该方法，将所得固体置于高真空下过夜。

方法11

叔丁酯水解法I

将叔丁酯溶解在CH₂Cl₂中且用TFA处理。该反应进行1-3小时，此时该反应混合物被浓缩且将残余物溶解在H₂O中并冷冻干燥得到所需酸。

方法12

EDC偶联法I

向(5-20mL)N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酸(1当量)的CH₂Cl₂溶液，混和适当的氨基酸酯盐酸盐(1当量)、N-甲基吗啉(1.1-2.2当量)和1-羟基苯并三唑(2当量)，置于冰浴中并加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1.1当量)。使该反应升至室温并搅拌过夜。将该反应混合物倾入H₂O且有机相用饱和NaHCO₃、盐水洗涤，干燥(MgSO₄或Na₂SO₄)，过滤且浓缩。粗产物通过柱色谱纯化。

方法13

EDC偶联方法II

向适当N-保护的氨基酸(1当量)的DMF溶液(5-20mL)中，混和适当的氨基酸酯盐酸盐(1当量)、Et₃N(1.1当量)和1-羟基苯并三唑(2当量)，置于冰浴中且加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1.1当量)。使该反应升至室温并搅拌过夜。该反应混合物在EtOAc和H₂O之间分配且有机相用0.2N柠檬酸、H₂O、饱和NaHCO₃、盐水洗涤，干燥(MgSO₄或Na₂SO₄)，过滤并浓缩。粗产物通过柱色谱或制备TLC纯化。

方法14

磺酰化方法II

将适当磺酰氯溶解在CH₂Cl₂中且置于冰浴内。加入L-Pro-L-Phe-OMe HCl(1当量)和Et₃N-(1.1当量)且使该反应升至室温并在氮气氛下搅拌过夜。将该反应混合物浓缩且残余物在EtOAc和H₂O之间分配，有机相用饱和NaHCO₃、盐水洗涤，干燥(MgSO₄或Na₂SO₄)，过滤且浓缩。粗产物通过柱色谱或制备TLC纯化。

方法15

磺酰化方法III

向L-Pro-L-4-(3-二甲基氨基丙氧基)-Phe-OMe[利用方法10所述方法制备](1当量)在CH₂Cl₂中的溶液内加入Et₃N-(5当量)，随后加入适当的磺酰氯(1.1当量)。使该反应升至室温并在氮气氛下搅拌过夜。浓缩该混合物，溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO₃和0.2N柠檬酸洗涤。水相用固体NaHCO₃调至碱性且产物用EtOAc萃取。有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄或Na₂SO₄)，过滤且浓缩。粗的甲酯通过制备TLC纯化。相应酸利用方法7所述方法制备。

方法16

氢化方法II

向二氢唑酮的甲醇(10-15mL)溶液中加入NaOAc(1当量)和10％Pd/C。将该混合物置于40psi H₂的氢化器内。8-16小时后，该反应混合物经硅藻土垫过滤并浓缩滤液得到脱氢二肽甲酯。将该酯溶解在二_烷/H₂O(5-10mL)中，向其中加入0.5N NaOH(1.05当量)。搅拌1-3小时后，浓缩该反应混合物并将残余物溶解在H₂O中且用EtOAc洗涤。水相用0.2NHCl调至酸性且产物用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤(1×5mL)，干燥(MgSO₄或Na₂SO₄)，过滤和浓缩得到酸，它是非对映异构体的约1∶1混合物。

方法17

叔丁酯水解方法II

将叔丁酯溶解在CH₂Cl₂(5mL)中并用TFA(5mL)处理。该反应进行1-3小时，此时该反应混合物被浓缩且将残余物溶解在H₂O中并浓缩。将残余物再溶解在H₂O中并冷冻干燥得到所需产物。

实施例1

乙酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO)：δ＝8.33(d，1H)，7.70(d，2H)，7.41(d，2H)，7.24(d，2H)，7.00(d，2H)，4.52-4.44(m，1H)，4.09-4.00(m，3H)，3.53(bs，2H)，3.38-3.31(m，3H)，3.11-3.01(m，3H)，2.39(s，3H)，2.32(bs，4H)，2.19(s，3H)，1.61-1.50(m，3H)，1.43-1.38(m，1PI)，1.13(t，3H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO)：δ＝171.1，171.1，153.9，149.8，143.6，134.1，133.9，130.0，129.8，127.4，121.5，61.2，60.7，54.2，54.1，53.3，49.0，45.7，44.0，43.4，35.8，30.5，23.8，21.0，14.0。

实施例2

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸乙酯的合成

向反应瓶中混和7.00g(15.2mmol，1.0eq)Ts-Pro-Tyr(H)-Oet和1.86g(15.2mmol，1.0eq)DMAP。随后加入二氯甲烷(50mL)、三乙胺(2.12mL--1.54g，15.2mmol，1.0eq)和二甲基氨基甲酰氯(1.68mL--1.96g，18.2mmol，1.2eq)。将瓶子盖紧，并且涡旋该反应溶液得到均匀溶液。此后将该反应溶液加热至40℃。48小时后，所得无色溶液的TLC指示转化完全。反应溶液的处理如下：将50mL EtOAc和50mL己烷加至该反应混合物，并且用3×50mL洗涤，将0.5mL己烷加入到该反应混合物，并且用3×50mL 0.5M柠檬酸，2×50mL水，2×50mL 10％K₂CO₃和1×50mL饱和NaCl洗涤。用MgSO₄干燥。过滤。蒸发得到8.00g(99％)的标题化合物，其为澄清油，它经放置后固化。由5∶3∶2庚烷/EtOAc/CH₂Cl₂重结晶。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO)：δ＝8.32(d，1H)，7.70(d，2H)，7.41(d，2H)，7.23(d，2H)，7.00(d，2H)，4.52-4.44(m，1H)，4.09-4.02(m，3H)，3.37-3.31(m，1H)，3.11-2.96(m，3H)，3.00(s，3H)，2.87(s，3H)，2.39(s，3H)，1.61-1.50(m，3H)，1.43-1.38(m，1H)，1.13(t，3H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO)：δ＝171.1，171.1，154.0，150.0，143.6，133.9，133.9，130.0，129.8，127.4，121.5，61.2，60.6，53.3，49.0，36.3，36.1，35.8，30.5，23.8，21.0，14.0。

实施例3

异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.72(d，2H)，7.36(d，1H)，7.33(d，2H)，7.16(d，2H)，7.03(d，2H)，5.07(Sept.，1H)，4.78(dt，1H)，4.08-4.05(m，1H)，3.67(bs，2H)，3.57(bs，2H)，3.41-3.35(m，1H)，3.24(dd，1H)，3.15-3.07(m，1H)，3.04(dd，1H)，3.46-2.43(m，7H)，2.34(s，3H)，2.05-2.02(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.9，170.4，153.6，150.5，144.3，133.2，133.1，130.2，130.0，127.9，121.7，69.5，62.2，54.7，53.4，49.6，46.1，44.3，43.7，37.2，29.7，24.1，21.6，21.6，21.4。

实施例4

叔丁酯的合成

混和41.2g(84.34mmol，1.0eq)Ts-Pro-Tyr(H)-OtBu和17.0g(84.34mmol，1.0eq)4-硝基苯基氯甲酸酯。加入700mL CH₂Cl₂。用隔膜封盖。连接上N₂管线。将烧瓶浸入到4∶1水/EtOH+干冰浆液中，并且搅拌冷却至-15℃。在5分钟内加入29.38mL(21.33g，210.81mmol，2.5eq)Et₃N 同时搅拌。在-10至-15℃下搅拌1小时。约3分钟内加入9.35mL(8.45g，84.34mmol，1.0eq)N-甲基哌嗪。搅拌过夜且升至室温。用700mL己烷稀释。反复用10％K₂CO₃洗涤，直至水层看不见黄色(4-硝基苯酚)为止。用饱和NaCl洗涤。用无水MgSO₄干燥。过滤。蒸发。溶解在500mL EtOH中，并且蒸发，除去Et₃N。重复1次。溶解在400mL EtOH中，并且加入600mL水同时搅拌，沉淀出固体或油。如果是油，剧烈搅拌至固化。过滤分离出固体。重复溶解、沉淀和过滤1次。用水漂洗除去痕量的黄色。高真空至恒定重量得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.72(d，2H)，7.33(d，3H)，7.17(d，2H)，7.02(d，2H)，4.71(q，1H)，4.09-4.06(m，1H)，3.67(bs，2H)，3.57(bs，2H)，3.41-3.34(m，1H)，3.22(dd，1H)，3.16-3.09(m，1H)，3.03(dd，1H)，2.46-2.43(m，7H)，2.34(s，3H)，2.05-2.02(m，1H)，1.57-1.43(m，3H)，1.47(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.8，169.9，153.6，150.4，144.3，133.4，133.1，130.3，130.0，127.9，121.6，82.6，62.3，54.5，53.8，49.6，46.1，44.3，43.7，37.3，29.7，27.8，24.1，21.4。

实施例5

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨

酸的合成

本标题化合物是由实施例1的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.74(d，2H)，7.42(d，2H)，7.26(d，2H)，7.04(d，2H)，4.58-4.54(m，1H)，4.16-4.12(m，1H)，3.70(bs，2H)3.53(bs，2H)，3.43-3.31(m，1H)，3.26-3.13(m，7H)，2.82(s，3H)，2.43(s，3H)，1.98-1.94(m，1H)，1.76-1.51(m，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝175.7，173.6，154.8，151.6，146.1，136.3，134.8，131.9，131.3，129.1，122.7，63.6，55.9，53.9，50.7，43.5，37.6，31.3，25.5，21.5。

实施例6

酸正丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO：δ＝8.31(d，1H)，7.70(d，2H)，7.41(d，2H)，7.23(d，2H)，6.99(d，2H)，4.53-4.46(m，1H)，4.10-4.01(m，1H)，3.63-3.30(m，1H)，3.10-2.96(m，3H)，3.00(s，3H)，2.88(s，3H)，2.39(s，3H)，1.59-1.30(m，6H)，1.33-1.20(m，2H)，0.85(t，3H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO：δ＝171.4，171.3，154.2，150.2，143.7，134.0，130.1，130.0，127.6，121.7，64.3，61.2，59.2，53.4，49.0，36.2，36.0，35.8，30.0，23.8，21.0，18.5，13.5。

实施例7

酸环戊基酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并替换适当起始原料来制成：

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO：δ＝8.27(d，1H)，7.70(d，2H)，7.41(d，2H)，7.22(d，2H)，6.99(d，2H)，5.04(bs，1H)，4.48-4.40(m，1H)，4.08-4.05(m，1H)，3.34-3.30(m，1H)，3.09-2.95(m，3H)，3.00(s，3H)，2.88(s，3H)，2.39(s，3H)，1.76-1.74(m，2H)，1.57-1.40(m，10H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO：δ＝171.3，171.0，154.2，150.2，432.7，134.1，130.1，130.0，127.6，121.6，77.4，61.2，53.4，49.0，36.2，36.1，35.7，32.0，30.5，23.8，23.2，21.0。

实施例8

酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO：δ＝8.18(d，1H)，7.71(d，2H)，7.41(d，2H)，7.23(d，2H)，6.99(d，2H)，4.42-4.38(m，1H)，4.10-4.07(m，1H)，3.37-3.30(m，1H)，3.09-2.95(m，3H)，3.00(s，3H)，2.88(s，3H)，2.39(s，3H)，1.58-1.50(m，3H)，1.40-1.30(m，1H)，1.36(s，9H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO：δ＝71.1，170.3，154.2，150.2，143.8，134.2，134.1，130.2，130.0，127.6，121.6，81.0，61.3，53.8，49.0，36.3，36.0，35.9，30.5，27.5，23.8，21.0。

实施例9

酸的合成

本标题化合物是由实施例2的产物利用方法7所述的方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO：δ＝8.13(d，1H)，7.70(d，2H)，7.41(d，2H)，7.23(d，2H)，6.99(d，2H)，4.51-4.44(m，1H)，4.11-4.09(m，1H)，3.40-3.34(m，2H)，3.11-2.94(m，3H)，3.00(s，3H)，2.87(s，3H)，2.39(s，3H)，1.59-1.36(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO：δ＝172.7，171.2，153.6，150.2，143.8，134.3，134.0，130.2，130.0，127.6，121.6，61.3，53.2，49.0，36.3，36.1，35.9，30.4，23.8，21.0。

实施例10

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸乙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.74(m，2H)，7.70-7.36(m，4H)，7.24-7.14(m，3H)，6.93-4.90(m，1H)，4.78-4.27(m，3H)，4.05-3.55(m，.5H)，3.48-3.43(m，.5H)，3.37-3.30(m，3H)，3.02-3.08(bs，3H)，2.99(bs，3H)，2.45(s，1.5H)，2.43(s，1.5H)，2.12(m，1H)，198，1.80(m，.5M)， 1.62-1.44(m，2.5H)，1.29(t，1.5H)，1.24(t，1.5H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.1，171.0，170.9，154.9，154.8，151.8，151.6，144.4，144.3，137.6，137.1，133.1，132.9，130.0，129.9，129.5，129.2，127.9，127.9，126.5，126.1，122.9，122.7，120.7，120.5。

实施例11

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙基酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，2H)，7.35(d，2H)，7.22(d，2H)，7.01(m，3H)，5.05(m，1H)，4.85(m，1H)，4.57(d，1H)，4.38(d，1H)，3.86(s，1H)，3.19-3.00(m，2H)，3.09(s，3H)，3.01(s，3H)，2.45(s，3H)，1.24(t，6H)，1.16(s，3H)，1.09(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.3，168.4，154.9，150.6，144.8，132.9，132.8，130.3，130.0，128.2，121.7，73.4，69.5，54.5，53.2，50.4，37.7，36.5，36.3，29.0，23.8，21.5，21.4。

实施例12

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.75(d，2H)，7.34(d，2H)，7.23(d，2H)，7.05-6.98(m，3H)，4.76(m，1H)，4.56(d，1H)，4.40(d，1H)，3.85(s，1H)，3.09-3.00(m，8H)，2.44(s，3H)，1.43(s，3H)，1.16(s，3H)，1.09(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.8，168.3，154.9，150.6，144.8，133.2，132.9，130.4，130.0，128.2，121.6，82.6，73.4，54.6，53.8，50.4，37.8，36.5，36.3，29.0，27.7，23.8，21.5。

实施例13

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例11的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，2H)，7.35(d，2H)，7.25(d，2H)，7.14(d，1H)，7.02(d，2H)，5.17(br s，1H)，4.89(m，1H)，4.56(d，1H)，4.40(d，1H)，3.90(s，1H)，3.30-3.00(m，8H)，2.43(s，3H)，1.09(s，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝172.7，169.3，155.2，150.6，144.9，133.1，132.7，130.5，130.1，128.1，121.9，73.3，54.5，53.3，50.5，36.9，36.6，36.4，29.0，23.7，21.5。

实施例14

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

L-硫吗啉-5-羧酸是通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，517-525)的方法制备。N-(甲苯-4-磺酰基)-L-硫吗啉-5-羧酸利用方法1所述方法制备并且随后与叔丁基酪氨酸在DMF中、于BOP和NMM的存在下偶联，水处理和快速色谱之后得到N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[硫吗啉-3-羰基]-L-4-苯基丙氨酸叔丁酯。

4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)基团的形成是按照上述实施例2并且硫吗啉代基团成为1，1-二氧代-硫吗啉代基团的氧化作用是按照Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，522)所述方法进行。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.68(d，2H)，7.37(d，2H)，7.08(m，4H)，6.73(d，1H)，5.11(m，1H)，4.62(m，1H)，4.23(m，1H)，4.00(m，1H)，3.82(m，1H)，3.14(s，3H)，3.03(s，3H)，2.80(m，5H)，2.44(s，3H)，1.48(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.3，169.9，164.4，145.6，135.4，132.6，130.8，130.4，127.3，121.9，83.0，56.1，53.8，49.4，48.7，44.5，42.0，36.9，36.6，36.4，27.8，21.5。

实施例15

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例14的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.77(d，2H)，7.40(d，2H)，7.22(d，2H)，7.00(d，2H)，5.19(m，1H)，4.65(m，1H)，4.30(m，1H)，3.95(m，1H)，3.61(m，1H)，3.20(m，5H)，3.09(s，3H)，2.97(s，3H)，2.43(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.1，168.0，157.0，152.0，146.4，137.7，135.3，131.7，131.6，128.8，123.0，57.1，54.8，51.1，50.9，48.0，47.7，43.2，37.4，36.8，36.7，21.5。

实施例16

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰

氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.74(d，2H)，7.33(d，2H)，7.25(d，2H)，7.20-7.00(m，3H)，4.74(m，1H)，4.55(d，1H)，4.38(d，1H)，3.83(s，1H)，3.66(br m，2H)，3.57(br m，2H)，3.08-3.05(m，2H)，2.45-2.42(m，7H)，2.33(s，3H)，1.42(s，9H)，1.15(s，3H)，1.08(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.7，168.2，153.6，150.3，144.7，133.3，132.7，130.4，129.9，128.1，121.5，82.6，73.4，54.5，53.7，50.4，46.0，44.2，43.6，37.7，28.9，27.7，23.8，21.4。

实施例17

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例16的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.31(d，1H)，7.72(d，2H)，7.42-7.35(m，4H)，7.08(d，2H)，4.90-4.68(m，1H)，4.64-4.61(m，1H)，4.47-4.44(m，1H)，4.01(s，1H)，3.36-3.32(br m，4H)，3.27-3.25(m，1H)，3.22-3.10(m，1H)，2.94(s，3H)，2.43(s，3H)，1.14(s，3H)，1.07(s，3H)。

实施例18

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸

异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.66(d，2H)，7.34(d，2H)，7.18(d，2H)，7.07(d，2H)，6.98(d，1H)，5.03(m，1H)，4.81(m，1H)，3.69(d，1H)，3.49(d，1H)，3.08(m，2H)，3.04(s，3H)，2.99(s，3H)，2.63(s，3H)，2.43(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝167.4，154.9，150.8，144.4，132.6，130.2，130.1，127.7，122.0，110.9，69.5，57.3，53.9，53.0，37.1，36.6，21.6，21.4。

实施例19

叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.67(d，2H)，7.34(d，2H)，7.19(d，2H)，7.03(d，2H)，6.98(d，1H)，4.76(m，1H)，3.67(q，1H)，3.06(m，2H)，3.16(s，3H)，2.99(s，3H)，2.64(s，3H)，2.43(s，3H)，1.42(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，137.2，154.9，150.7，144.3，133.2，132.9，130.3，130.0，127.7，121.9，82.6，83.9，53.3，37.2，36.6，36.4，27.9，21.4。

实施例20

的合成

本标题化合物是由实施例18的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.41(d，2H)，7.10(d，2H)，6.98(d，2H)，6.75(d，2H)，4.42(m，1H)，3.43(m，2H)，3.04(m，2H)，2.80(s，3H)，2.69(s，3H)，2.33(s，3H)，2.14(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝174.2，170.2，156.9，151.9，145.6，135.5，135.2，131.4，131.1，128.9，123.0，54.6，54.0，37.4，36.8，36.7，21.4。

实施例21

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基氧基)苯基丙

氨酸叔丁基酯的合成

用二甲基氨基磺酰氯代替二甲基氨基甲酰氯，并且按照实施例2的制备所述方法，得到该标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.72(d，2H)，7.34(d，2H)，7.21(s，4H)，4.69(m，1H)，4.04(m，1H)，3.4(m，1H)，3.24(m，3H)，2.96(s，6H)，2.42(s，3H)，2.02(m，1H)，1.45(m，13H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝166.3，165.3，144.8，140.0，130.9，126.4，125.6，123.5，117.3，95.5，78.3，57.8，49.2，45.2，34.2，32.9，25.0，23.4，19.7，17.13。

实施例22

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基磺酰氧基)苯基丙氨

酸的合成

本标题化合物是由实施例21的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.73(d，2H)，7.41(d，2H)，7.38(d，2H)，7.22(d，2H)，4.69(m，1H)，4.11(m，1H)，3.41(m，2H)，3.19(m，2H)，2.94(s，6H)，2.41(s，3A)，1.78(m，1H)，1.61(m，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.3，174.0，150.8，145.9，137.3，135.1，132.1，131.2，129.1，123.1，63.3，54.6，50.6，39.1，37.5，31.6，25.3，21.5。

实施例23

N-(甲苯-4-磺酰基)-肌氨酰基-L-(4-吗啉氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基

酯的合成

在Ts-Pro-Tyr(H)-O-叔丁基酯的制备中用肌氨酸代替L-脯氨酸和用4-吗啉羰基氯代替二甲基氨基甲酰氯，并且按照实施例2的制备所述方法，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.61(d，2H)，7.28(d，2H)，7.16(d，2H)，7.02(d，2H)，4.69(m，1H)，3.67(m，8H)，3.58(m，1H)，3.48(m，1H)，3.06(m，2H)，2.59(s，3H)，2.36(s，3H)，1.26(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：6169.7，167.1，153.5，150.1，144.1，133.1，133.0，133.0，130.1，129.8，127.4，121.6，82.6，66.3，53.6，53.1，44.5，43.7，36.9，36.4，27.6，21.2。

实施例24

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例23的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.30(d，2H)，7.02(d，2H)，6.88(d，2H)，6.67(d，2H)，4.33(m，1H)，3.32(m，3H)，3.25(m，2H)，3.12(m，3H)，2.89(m，1H)，2.70(m，3H)，2.22(s，3H)，2.03(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.2，170.3，155.6，151.7，145.6，135.8，135.2，131.5，131.1，128.9，123.0，67.5，54.6，54.0，37.4，36.8，21.5。

实施例25

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(吗啉-4-基羰氧

基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

用4-吗啉羰基氯代替二甲基氨基甲酰氯，并且按照实施例2和14的制备所述方法，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，1H)，7.68(d，1H)，7.37(m，2H)，7.14(m，2H)，7.05(m，1H)，6.97(d，1H)，6.80(d，0.5H)，6.57(d，0.5H)，5.09(m，0.5H)，4.91(m，0.5H)，4.75(m，0.5H)，4.62(m，0.5H)，4.25(m，0.5H)，4.09(m，2H)，3.79(m，4H)，3.65(m，4H)，2.91(s，3H)，2.44(s，3H)，1.69(s，4H)，1.44(s，5H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.0，169.8，164.8，164.4，153.7，150.4，145.6，145.4，135.4，135.3，132.9，130.8，130.7，130.5，130.4，127.5，127.2，122.1，121.8，83.01，82.8，66.4，56.1，56.1，53.7，53.6，49.5，49.3，48.6，44.7，43.9，42.0，41.6，36.9，36.3，27.8，21.5。

实施例26

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)硫吗啉-3-羰基]-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例25的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.67(m，2H)，7.32(m，2H)，7.08(m，2H)，6.93(m，2H)，5.09(m，1H)，4.54(m，1H)，4.19(m，0.5H)，4.02(m，0.5H)，3.81(m，0.5H)，3.66(m，8H)，2.99(m，7H)，2.32(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.0，168.0，155.7，151.9，151.8，146.6，146.4，137.5，135.5，135.3，131.7，131.6，131.6，128.8，123.3，122.9，67.6，57.3，57.1，54.8，51.1，50.9，50.6，46.0，45.3，45.2，43.0，37.4，37.0，21.5。

实施例27

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝7.87-7.83(m，2H)，7.26-7.13(m，5H)， 4.74-4.69(m，1H)，4.05(m，1H)，3.36(m，1H)，3.24-3.17(m，1H)，3.11-3.01(m，4H)，2.97(s，3H)，2.05-2.02(m，1H)，1.60-1.47(m，3H)，1.46(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.6，170.0，165.7，154.9，150.6，133.2，132.4，130.7，130.2，121.7，116.7，82.7，62.3，53.7，49.6，37.2，36.6，36.4，29.9，27.9，24.2。

实施例28

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔

丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.17(d，1H)，7.59(d，2H)，7.26(d，2H)，7.13(d，2H)，7.00(d，2H)，4.66(m，1H)，3.60(m，6H)，3.04(m，2H)，2.56(s，3H)，2.40(m，7H)，2.34(s，3H)，1.41(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.7，167.0，153.4，150.2，144.0，133.0，132.9，130.1，129.8，127.4，121.6，82.2，54.3，53.5，53.1，45.8，44.2，43.5，36.9，27.6，21.2。

实施例29

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二

甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯

实施例12的产物通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994， 48，517-525)的方法氧化，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.73(d，2H)，7.36(d，2H)，7.21(d，2H)，7.06-6.95(m，3H)，4.79(m，1H)，4.38(dd，2H)，4.10(s，1H)，3.18-2.95(m，8H)，2.43(s，3H)，1.45(s，9H)，1.33(s，3H)，1.08(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.8，166.2，154.9，120.7，145.8，133.0，131.9，130.2，128.5，121.9，82.9，68.0，60.9，59.3，53.9，37.5，36.6，36.3，27.7，21.6，19.3，18.5。

实施例30

N-(1-甲基咪唑基-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例106的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NE(CDCl₃)：δ＝8.07(d，1H)，7.75(s，1H)，7.71(s，1H)，7.25(d，2H)，7.01(d，2H)，4.71-4.66(m，1H)，4.28-4.24(m，1H)，3.77(s，3H)，3.42-3.05(m，3H)，3.09(s，3H)，2.96(s，3H)，1.84-1.69(m，2H)，1.61-1.54(m，2H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝174.4，174.1，156.9，151.9，141.8，137.7，135.6，131.6，127.6，122.9，63.7，54.7，50.8，37.4，36.8，36.7，34.3，31.6，25.4。

制备实施例A

2-(邻磺酰苯甲酰亚胺-2-基)丙酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基

丙氨酸叔丁酯的合成

N-(苯并异噻唑酮)-L-丙氨酰基-L-酪氨酸叔丁基酯的制备首先通过将氢化钠(洗涤除去矿物油)在THF中冷冻至0℃，并且滴加N-(2-甲氧基羰基)磺酰基-L-丙氨酸-L-酪氨酸叔丁基酯在THF中的溶液。该反应在0℃下搅拌1小时且随后在室温下保持2小时。该反应混合物用EtOAc和0.2NHCl萃取，合并的EtOAc层依次用0.2NHCl、饱和NaHCO₃和饱和NaCl洗涤。有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶色谱过滤得到N-(苯并异噻唑酮)-L-丙氨酰基-L-酪氨酸叔丁基酯。

随后标题化合物按照实施例2所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)(非对映异构体的1∶1混合物)δ＝8.15(m，2H)；8.5(m，3H)；7.20(m，2H)；6.95(m，2H)；4.75(m，1H)；4.30(m，1H)；3.05(s，3H)；2.95(m，2H)；2.90(s，3H)；1.75和1.65(双d，3H)；1.30和1.35(双s，9H)。

实施例31

甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例29的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.75(m，3H)，7.29(m，4H)，7.08(d，2H)，4.95(m，1H)，4.46-4.20(m，3H)，3.17(s，3H)，3.30-3.10(m，2H)，3.02(s，3H)，2.43(s，3H)，1.15(s，3H)，0.88(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝127.2，167.5，155.8，150.3，145.4，133.6，132.6，130.8，130.2，128.3，121.9，67.9，65.8，60.8，53.9，36.8，36.6，35.8，21.6，18.8，15.0。

实施例32

酸的合成

本标题化合物是由实施例27的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝7.88-7.84(m，2H)，7.54(d，1H)，7.26-7.18(m，4H)，7.01(d，2H)，6.92(s，3H)，4.88-4.83(m，1H)，4.14-4.11(m，1H)，3.39-3.29(m，2H)，3.13(m，2H)，3.00(s，3H)，2.99(s，3H)，1.92-1.89(m，1H)，1.59-1.43(m，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.1，172.4，165.6，155.5，150.4，133.2，131.9，130.6，130.3，121.8，116.6，61.9，53.1，49.6，36.6，36.3，30.2，23.9。

实施例33

N-(甲苯-4-磺酰基)-D-脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基丙氨酸叔丁

基酯的合成

NMR数据如下：

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝7.72(d，2H)，7.33(d，3H)，7.17(d，2H)，7.02(d，2H)，4.71(q，1H)，4.09-4.06(m，1H)，3.67(bs，2H)，3.57(bs，2H)， 3.41-3.34(m，1H)，3.22(dd，1H)，3.16-3.09(m，1H)，3.03(dd，1H)，2.46-2.43(m，7H)，2.05-2.02(m，1H)，1.57-1.43(m，3H)，1.47(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.8，169.9，153.6，150.4，144.3，133.4，133.1，130.3，130.0，127.9，121.6，82.6，62.3，54.5，53.8，49.6，46.1，44.3，43.7，37.3，29.7，27.8，24.1，21.4。

实施例34

N-(甲苯-4-磺酰基)-N-甲基-L-丙氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯

基丙氨酸叔丁基酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.68(d，2H)，7.31(d，2H)，7.17(d，2H)，7.04(d，2H)，6.86(d，1H)，4.65(m，1H)，4.47(q，1H)，3.71-3.53(m，4H)，3.24-2.92(m，2H)，2.50-2.40(m，10H)，2.35(s，3H)，1.45(s，9H)，0.92(d，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.1，169.9，153.6，150.4，143.9，135.6，133.3，130.2，129.9，127.2，121.8，82.4，55.4，54.6，53.6，46.0，44.2，43.7，37.2，29.6，27.8，21.4，11.5。

实施例35

N-(4-硝基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.38-8.34(m，2H)，8.05-8.00(m，2H)，7.16-2.12(m，2H)，7.03-6.94(m，3H)，4.74-4.68(m，1H)，4.15-4.14(m，1H)，3.41-3.32(m，1H)，3，23-3.14(m，2H)，3.08(s，3H)，3.03(m，1H)，2.98(s，3H)，2.05(m，1H)，1.66-1.48(m，3H)，1.47(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，169.9，154.8，150.6，150.4，142.4，132.9，130.2，129.0，124.5，121.6，82.7，62.2，53.4，49.4，37.0，36.5， 36.2，30.1，27.7，24.1。

实施例36

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-[(1，1-二氧代)-硫吗啉-3-羰基]-L-4-(NN-二甲基氨基

磺酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例21的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.73(d，1H)，7.67(d，1H)，7.35(m，2H)，7.27(m，2H)，6.88(d，1H)，6.66(d，1H)，5.08(m，0.5H)，4.97(m，0.5H)，4.71(m，0.5H)，4.61(m，0.5H)，4.25(m，0.5H)，4.03(m，1H)，3.21-3.04(m，4H)，2.89(s，3H)，2.83(s，3H)，2.78(m，3H)，2.42(s，3H)，1.44(s，4.5H)，1.38(s，4.5H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.8，169.6，164.9，164.5，149.3，149.1，145.6，145.4，135.4，135.0，134.6，130.9，130.6，130.5，127.4，127.2，122.0，121.8，83.0，83.0，56.0，53.7，49.2，49.1，48.5，41.9，41.4，38.6，36.8，36.2，27.7，21.5。

实施例37

N-(甲苯-4-磺酰基肌氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁

酯的合成

用硫代吗啉代替N-甲基哌嗪，并且按照实施例4的制备方法，得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.65(d，2H)，7.33(d，2H)，7.20(d，2H)，7.04(d，2H)，4.76(m，1H)，3.89(m，4H)，3.68(d，1H)，3.48(d，1H)，3.10(m，2H)，2.66(m，7H)，2.41(s，3H)，1.43(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.9，167.2，153.5，150.3，144.3，133.1，130.3，130.0，127.6，121.8，82.5，53.8，53.3，47.0，36.4，37.2，36.6，27.8，27.3，27.0，21.4。

实施例38

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯

基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例34的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.65(d，2H)，7.34(d，2H)，7.27(d，2H)，7.09(d，2H)，4.64-4.50(m，2H)，4.48-4.23(m，2H)，3.60-2.96(m，8H)，2.92(s，3H)，2.55(s，3H)，2.40(s，3H)，0.93(d，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝174.3，173.1，154.9，151.6，145.5，137.0，136.1，131.6，131.2，128.5，123.1，56.4，54.8，54.0，43.8，37.3，30.2，21.5，13.2。

实施例39

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例81的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝8.03(m，1H)，7.73(d，2H)，7.41(d，2H)，7.28(d，2H)，7.08(d，2H)，4.70-4.65(m，1H)，4.12-4.00(m，5H)，3.38-3.36(m，1H)，3.31-3.06(m，7H)，2.43(s，3H)，1.77-1.48(m，5H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝168.4，159.1，130.0，129.1，125.6，125.1，123.0，116.9，57.2，48.8，46.3，44.5，31.5，25.6，19.3，15.4。

实施例40

的合成

本标题化合物是由实施例82的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.73(d，2H)，7.41(d，2H)，7.27(d，2H)，7.04(d，2H)，4.68-4.65(m，1H)，4.10-4.07(m，1H)，3.90(t，2H)，3.77(t，2H)，3.38-3.11(m，4H)，2.66(m，4H)，2.43(s，3H)，1.80-1.48(m，5H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝168.4，168.2，149.4，145.7，139.8，129.7，129.0，125.6，125.1，123.1，116.9，57.2，48.8，44.6，42.1，36.0，31.4， 25.7，22.1，21.8，19.3，15.4。

实施例41

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(异哌啶甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例80的产物利用方法11所述方法制备.

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝8.08(m，1H)，7.73(d，2H)，7.41(d，2H)，7.27(d，2H)，7.03(d，2H)，4.71(m，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.61(t，2H)，3.47-3.38(m，3H)，3.31-3.11(m，4H)，2.43(s，3H)，1.77-1.47(m，10H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝168.3，168.1，158.8，149.6，145.9，139.8，129.5，129.0，125.6，125.1，123.1，116.9，57.2，48.6，44.6，40.6，40.1，36.0，31.4，25.7，20.9，20.6，19.3。

实施例42

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸的

合成

本标题化合物是由实施例83的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝8.08(m，1H)，7.73(d，2H)，7.41(d，2H)，7.04(d，2H)，7.27(d，2H)，4.72-4.68(m，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.57-3.53(t，2H)，3.43-3.28(m，3H)，3.25-3.06(m，4H)，2.43(s，3H)，1.99-1.80(m，4H)，1.78-1.49(m，5H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝168.2，158.3，149.2，145.8，139.8，129.4，129.1，125.6，125.1，123.1，116.9，57.2，48.7，44.5，41.5，31.4，25.7，20.6，19.8，19.3，15.4。

实施例43

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸的合

成

本标题化合物是由实施例108的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.73(d，2H)，7.41(d，2H)，7.27(d，2H)，7.04(d，2H)，4.95-4.93(m，1H)，4.10-4.07(m，1H)，3.71-3.65(m，6H)，3.50(t，2H)，3.40-3.10(m，4H)，2.43(s，3H)，1.78-1.48(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝168.4，168.2，149.6，145.7，139.8，129.1，125.6，125.1，123.1，116.8，61.5，57.2，44.5，36.0，31.4，25.6，19.3，15.4。

实施例44

新戊基酯的合成

将异丙醇钛(0.3当量)加入到Tos-Pro-Tyr乙酯(1当量)和过量的新戊醇中。氩气氛下将该混合物加热回流过夜。减压下除去过量的新戊醇且残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)得到新戊基酯，其为白色固体(0.9g，85％)。本标题化合物按照实施例4所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ＝8.29(d，1H，J＝7.91Hz)；7.68(d，2H，J＝8.45Hz)；7.40(d，2H，J＝8.34Hz)；7.24(d，2H，J＝8.57Hz)；7.00(d，2H，J＝8.57Hz)；4.56(m，1H)；4.07(m，1H)；3.73(s，2H)；3.55(br s，2H)；3.40(m，3H)；3.10(m，3H)；2.40(s，3H)；2.35(br s，4H)；2.20(s，3H)；1.55(m，3H)；1.37(m，1H)；0.85(s，9H)。

实施例45

酸新戊基酯的合成

将异丙醇钛(0.3当量)加入到Tos-Pro-Tyr乙酯(1当量)和过量的新戊醇中。氩气氛下将该混合物加热回流过夜。减压下除去过量的新戊醇且残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)得到新戊基酯，其为白色固体(0.9g，85％)。本标题化合物按照实施例2所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ＝8.28(d，1H，J＝8.13Hz)；7.68(d，2H，J＝8.4Hz)；7.40(d，2H，J＝7.9Hz)；7.23(d，2H，J＝8.56Hz)，6.99(d，2H，J＝8.35Hz)；4.57(m，3H)；2.40(s，3H)；1.55(m，3H)；1.38(m， 1H)；0.85(s，9H)。

实施例46

2-(邻磺酰苯甲酰亚胺-2-基)丙酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙

氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照制备实施例A和实施例4所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)(非对映异构体的1∶1混合物)δ＝8.31(m，1H)；8.26(m，1H)；8.03(m，3H)；7.20(m，2H)；7.00(m，2H)；4.73(m，1H)；4.30(m，1H)；3.58(br s，2H)；3.40(brs，2H)；3.02(m，1H)；2.95(m，1H)；2.35(br s，4H)；2.20(s，3H)；2.75和2.65(双d，3H)；1.35和1.32(双s，9H)。

实施例47

2-(邻磺酰苯甲酰亚胺-2-基)丙酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸的合成

本标题化合物是由制备实施例A的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)(非对映异构体的1∶1混合物)δ＝12.75(br s，1H)；8.28(m，2H)；8.05(m，3H)；7.20(m，2H)；7.00和9.95(双d，2H)；4.75(m，1H)；4.40(m，1H)；3.10(m，1H)；3.05(s，3H)；2.95(m，1H)；2.90(s，3H)；2.75和2.60(双d，3H)。

实施例48

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-N-甲基丙氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.68(d，2H)，7.31(d，2H)，7.17(d，2H)，7.04(d，2H)，6.87(d，2H)，4.67(m，1H)，4.48(q，1H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，3.14-2.92(m，2H)，2.46(s，3H)，2.43(s，3H)，1.45(s，9H)，0.92(d， 3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.2，169.9，154.9，150.6，143.9，135.6，133.2，130.2，130.0，127.3，121.9，82.5，55.5，53.7，37.2，36.6，36.4，29.7，27.8，21.4，11.5。

实施例49

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯

基丙氨酸叔丁酯的合成

L-硫吗啉-3-羧酸是通过Larsson和Carlson(Acta Chmica Scan.1994，48，517-525)的方法制备。N-(甲苯-4-磺酰基)-L-硫吗啉-3-羧酸利用方法1中所述方法制备。本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.69(d，2H)，7.31(d，2H)，7.16(d，2H)，6.98(d，2H)，6.86(d，1H)，4.71(m，1H)，4.62(m，1H)，3.94(m，1H)，3.31(m，1H)，3.09(m，4H)，2.98(s，3H)，2.67(m，1H)，2.50(m，1H)，2.40(s，3H)，2.31(m，1H)，2.10(m，1H)，1.49(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.9，167.4，154.8，150.6，144.2，136.8，132.8，130.4，130.2，127.3，121.8，82.6，55.2，54.0，43.3，36.5，36.3，27.8，25.2，24.6，21.4。

实施例50

N-(甲苯-4-磺酰基)肌氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基

丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例121的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.67(d，2H)，7.40(d，2H)，7.27(d，2H)，7.09(d，2H)，4.61(m，1H)，4.12(m，2H)，3.99(m，2H)，3.60(m，2H)，3.23(m，8H)，2.58(s，3H)，2.42(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.2，170.3，155.0，151.6，145.6，136.1，135.2，131.5，131.1，128.9，123.0，54.6，54.0，52.4，52.2，44.4，44.0，37.4，36.8，21.4。

实施例51

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物是由实施例49的产物按照Larsson和Carlson(ActaChemica Scan.1994，48，522)所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，2H)，7.37(d，2H)，7.08(d，2H)，6.98(d，2H)，6.56(d，1H)，4.95(m，1H)，4.62(m，1H)，3.99(m，2H)，3.25(m，1H)，3.07(s，3H)，2.97(m，8H)，2.44(s，3H)，1.48(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，164.8，154.9，150.7，145.4，135.3，132.6，130.7，130.3，127.5，122.3，82.8，56.1，53.6，49.5，48.6，41.6，36.6，36.4，27.9，21.6。

实施例52

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)

苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例71的制备所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.75(d，2H)，7.36(d，2H)，7.12(d，2H)，6.98(d，2H)，6.58(d，1H)，4.93(m，1H)，4.63(m，1H)，4.09(m，2H)，3.72(m，4H)，3.63(m，2H)，3.51(m，2H)，3.24(m，1H)，2.96(m，4H)，2.43(s，3H)，1.46(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，164.8，153.7，150.4，145.4，135.2，132.9，130.7，130.4，127.5，122.1，82.9，66.4，56.1，53.6，49.4，48.5，44.7，43.9，41.6，36.3，27.8，21.6。

实施例53

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例48的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.68(d，2H)，7.31(d，2H)，7.20(d，2H)，7.11-7.04(m，3H)，6.35(br s，1H)，4.81(m，1H)，4.52(q，1H)，3.35-2.98(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，2.45(s，3H)，2.43(s，3H)，0.91(d，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.7，170.8，155.2，150.6，144.0，135.4，133.2，130.2，130.0，127.3，122.1，55.5，53.2，36.6，36.5，36.4，29.8，21.4，11.6。

实施例54

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯

基丙氨酸叔丁基酯的合成

L-硫吗啉-3-羧酸是通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，517-525)的方法制备。N-(甲苯-4-磺酰基)-L-硫吗啉-3-羧酸利用方法1所述方法制备。本标题化合物是按照实施例2的方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.87-7.82(m，2H)，7.20(t，2H)，7.16(d，2H)，7.00(d，2H)，6.76(d，1H)，4.74(t，1H)，4.65(q，1H)，3.92(d，1H)，3.32(dd，1H)，3.17-3.00(m，2H)，3.09(s，3H)，2.99(s，3H)，2.76-2.66(m，1H)，2.62(dd，1H)，2.46(dt，1H)，2.22(d，1H)，1.49(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，167.2，165.5，154.8，150.7，135.8，132.7，130.5，130.1，121.9，116.9，82.8，55.3，53.9，43.4，36.6，36.4，36.3，27.9，25.8，25.0。

实施例55

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基基氨基

甲酰氧)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物是由实施例54的产物按照Larsson和Carlson(ActaChemica Scan.1994，48，522)所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.92-7.88(m，2H)，7.24(t，2H)，7.09(d，2H)，6.97(d，2H)，6.41(d，1H)，4.96(d，1H)，4.62(d，1H)，4.03(d，1H)，3.26(dd，1H)，3.13-2.92(m，6H)，3.09(s，3H)，2.97(s，3H)，1.49(s， 9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.1，165.9，164.5，154.9，150.7，134.0，132.4，130.5，130.4，122.2，117.3，83.0，56.1，53.4，50.0，49.1，41.7，36.6，36.3，36.1，27.9。

实施例56

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸叔丁基酯的合成

N-苄基-L-脯氨酸与L-酪氨酸叔丁基酯利用方法12所述方法偶联。N-苄基-L-脯氨酰基-L-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)]苯基丙氨酸叔丁基酯是按照实施例2所述方法制成。L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯是由上述反应的产物、利用方法4所述方法制备。本标题化合物采用制备3-吡啶磺酰氯(参见Crowell等，J.Med.Chem.，1989，32，2436-2442)的方法和最后反应的产物而制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝9.95(d，1H)，8.83(dd，1H)，8.14-8.10(m，1H)，7.51-7.47(m，1H)，7.16-7.13(m，3H)，7.02-6.99(m，2H)，4.72-4.69(m，1H)，4.09-4.06(m，1H)，3.41-3.39(m，1H)，3.23-3.17(m，1H)，3.13-2.98(m，1H)，3.07(s，3H)，2.97(s，3H)，2.04(m，1H)，1.59-1.47(m，3H)，1.45(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.1，169.9，154.8，153.9，150.5，148.4，135.5，133.0，130.1，123.9，121.6，82.6，52.2，53.6，49.5，37.1，36.5，36.3，29.9，27.8，24.0。

制备实施例B

N-(嘧啶-2-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸叔丁基酯的合成

本标题化合物是通过取代2-嘧啶磺酰氯(参见Skulnick等，J.Med.Chem.，1997，40，1149-1164)并按照实施例56的制备方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.28(d，2H)，7.39(d，1H)，7.02(d，2H)，6.88(d，2H)，6.54(m，1H)，4.76-4.69(m，1H)，4.57-4.55(m，1H)，3.64(m，1H)， 3.55-3.52(m，1H)，3.09-3.03(m，1H)，3.08(s，3H)，2.99-2.95(m，1H)，2.98(s，3H)，2.32(m，1H)，2.01-1.97(m，3H)，1.37(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝172.1，170.4，160.6，157.7，154.8，150.3，133.0，130.1，121.3，110.5，82.0，60.7，53.3，47.5，37.1，36.5，36.3，28.9，27.7，24.1。

实施例57

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例35的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.36(d，2H)，8.02(d，2H)，7.42(d，1H)，7.20(d，2H)，7.01(d，2H)，4.86(m，1H)，4.18-4.15(m，1H)，3.46-3.43(m，1H)，3.32-3.26(m，1H)，3.19-3.11(m，2H)，3.09(s，3H)，3.01(s，3H)，1.91(m，1H)，1.65-1.54(m，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝172.9，171.7，155.5，150.4，150.4，142.1，133.2，130.5，129.1，124.6，121.8，61.9，52.9，49.6，36.6，36.3，36.3，30.6，24.1。

实施例58

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸叔丁基酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.94(d，2H)，7.82(d，2H)，7.13(d，2H)，7.05-6.99(m，3H)，4.71-4.66(m，1H)，4.12-4.09(m，1H)，3.36-3.35(m，1H)，3.22-3.11(m，2H)，3.07(s，3H)，3.06-3.01(m，1H)，2.97(s，3H)，2.05(m，1H)，1.63-1.37(m，3H)，1.46(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.1，169.9，154.8，150.6，140.8，133.1，132.9，130.2，128.4，121.7，117.1，116.9，82.7，62.2，53.4，49.4，37.0，36.5，36.3，30.1，27.8，24.1。

实施例59

磺酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例36的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.79(m，2H)，7.44(m，2H)，7.27(m，2H)，7.17(m，2H)，5.21(m，1H)，4.64(m，1H)，4.14(m，1H)，3.61(m，2H)，3.24(m，2H)，3.08(m，2H)，2.89(s，6H)，2.80(m，2H)，2.43(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝173.9，168.1，168.0，150.8，150.8，146.7，146.5，137.6，137.5，137.1，136.9，132.2，132.1，131.7，131.6，128.8，123.3，123.1，57.3，54.8，51.0，50.8，50.5，47.9，47.8，43.2，43.0，39.0，39.0，37.4，37.0，21.5。

实施例60

甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例51的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.79(d，2H)，7.43(d，2H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，5.21(m，1H)，4.65(m，1H)，4.12(m，1H)，3.75(m，1H)，3.29(m，3H)，3.08(s，3H)，3.00(m，1H)，3.00(m，1H)，2.97(s，3H)，2.80(m，3H)，2.44(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝165.1，159.0，147.9，143.1，137.6，128.6，126.1，122.7，122.6，119.8，114.3，48.3，45.8，41.6，34.0，28.0，27.8，27.7，12.5。

实施例61

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物是由本文实施例制备的N-(甲苯-4-磺酰基)-L-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯、按照Larsson 和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，522)所述方法来制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.77(d，2H)，7.38(d，2H)，7.18(m，3H)，7.09(d，2H)，4.83-4.57(m，3.H)，3.77-3.60(m，2H)，3.36-3.23(m，1H)，3.15-3.00(m，7H)，2.85-2.73(m，1H)，2.46(s，3H)，1.50(s，9H)。

实施例62

酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.96(d，2H)，7.80(d，2H)，7.26-7.13(m，3H)，7.01(d，2H)，4.72-4.70(m，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.40-3.37(m，1H)，3.25-3.10(m，2H)，3.07(s，3H)，3.04-3.02(m，1H)，2.98(s，3H)，2.06(m，1H)，2.06-2.04(m，1H)，1.61-1.52(m，3H)，1.46(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.3，169.9，154.9，150.6，139.9，134.9，133.1，130.2，128.4，126.5，121.7，82.7，62.3，5.35，49.6，37.2，36.6，36.3，30.0，27.824.1。

实施例63

N-(1-甲基吡唑基-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例117的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.84(br s，1H)，7.93(s，1H)，7.79(s，1H)，7.68-7.65(m，1H)，7.18(d，2H)，6.99(d，2H)，4.88-4.81(m，1H)，4.08-4.06(m，1H)，3.92(s，3H)，3.45-3.40(m，1H)，3.34-3.27(m，1H)，3.11-3.01(m，5H)，2.97(s，3H)，1.82(m，1H)，1.66-1.57(m，2H)，1.45(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.1，172.9，159.1，158.6，150.4，138.8，133.4，133.2，130.3，121.9，117.3，62.0，53.1，49.7，39.4，36.6，36.5， 36.4，30.4，23.9。

实施例64

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例61的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.34(d，1H)，7.70(d，2H)，7.33(d，2H)，7.14(d，2H)，7.01(d，2H)，5.07(m，1H)，4.93(m，1H)，4.43(d，1H)，4.01(d，1H)，3.68(m，1H)，3.37(m，1H)，3.17(s，3H)，3.14(m，1H)，3.09(s，3H)，2.54(m，1H)，2.43(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.5，166.4，156.4，150.5，145.5，134.2，134.1，131.4，130.3，128.1，121.8，64.3，59.2，53.7，50.5，36.9，36.5，35.8，21.6.

实施例65

N-(4-氟苯磺酰基)-L-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例84的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.83(m，2H)，7.73(d，1H)，7.16(m，4H)，6.99(d，2H)，5.57(br s，1H)，4.87(m，1H)，4.76(m，1H)，4.53(d，1H)，4.10(d，1H)，3.34(m，1H)，3.22(d，2H)，3.12(s，3H)，3.04(s，3H)，2.43(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝172.1，168.7，155.7，150.5，133.6，133.1，130.8，130.7，121.7，116.9，116.6，65.3，53.3，51.3，36.8，36.4，36.1，33.4。

实施例66

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的制备

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.91(m，2H)，7.26(m，4H)，7.02(d，2H)，6.96(d，1H)，4.75(m，1H)，4.55(d，1H)，4.42(d，1H)，3.86(s，1H)，3.08(s，3H)，3.05(m，2H)，3.00(s，3H)，1.43(s，9H)，1.17(s，3H)，1.16(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.9，168.1，167.6，164.2，154.9，150.6，133.1，132.2，131.0，130.9，130.4，121.7，116.9，116.6，82.7，73.5，54.7，53.7，50.5，37.8，36.6，36.4，29.1，27.8，23.8。

实施例67

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(1，1-二氧代硫代吗

啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例68的制备所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.91-7.87(111，2H)，7.27-7.25(m，2H)，7.15(d，2H)，6.51(d，1H)，4.93-4.90(m，1H)，4.64-4.58(m，1H)，4.14-3.99(m，7H)，3.28-2.90(m，10H)，1.47(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.1，167.6，164.5，153.1，149.8，133.9，133.4，130.7，130.5，121.7，117.4，117.1，83.1，56.1，53.4，51.6，49.9，48.9，43.1，41.6，36.2，27.8。

实施例68

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(1，1-二氧代硫代吗

啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

用硫代吗啉代替N-甲基哌嗪，并且按照实施例4的制备方法和通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，522)的方法氧化硫代吗啉代环中的硫得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.75(d，2H)，7.35(d，2H)，7.17(d，2H)，6.99(d，2H)，6.65(d，1H)，4.92-4.90(m，1H)，4.63-4.60(m，1H)，4.15-3.95(m，7H)，3.30-3.23(m，1H)，3.14(t，4H)，3.07-2.80(m，6H)，2.45(s，3H)， 1.48(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.9，164.8，153.1，149.8，145.5，135.1，133.6，130.7，127.5，121.8，82.9，60.3，56.1，53.7，51.8，49.3，48.4，43.1，42.7，41.5，36.3，27.8，21.5。

实施例69

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔

丁酯的合成

本标题化合物按照实施例37的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.88-7.83(m，2H)，7.26-7.15(m，5H)，7.01(d，2H)，4.74-4.67(m，1H)，4.08-4.05(m，1H)，3.91-3.80(m，4H)，3.41-3.35(m，1H)，3.24-3.00(m，3H)，2.70-2.65(t，4H)，2.06-2.04(m，1H).1.60-1.46(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.5，169.8，153.4，150.2，133.5，130.7，130.5，130.3，121.6，116.8，116.5，82.6，62.2，53.6，49.6，47.0，46.4，37.2，29：8，27.8，27.3，27.0，24.1。

实施例70

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)-硫脯氨酰基-L-4-(N7N-二甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例66的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.90(m，2H)，7.30-7.14(m，5H)，7.02(d，2H)，5.83(br s，1H)，4.90(m，1H)，4.57(d，1H)，4.40(d，1H)，3.96(s，1H)，3.09(s，3H)，3.28-3.02(m，2H)，3.00(s，3H)，1.13(s，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.2，169.2，164.2，163.9，155.3，150.6，133.1，132.0，131.0，130.9，130.6，122.0，117.0，116.7，73.3，54.6，53.3，50.5，37.0，36.7，36.4，29.0，23.7。

实施例71

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(吗啉-4-基羰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

用4-吗啉氨基甲酰氯代替二甲基氨基甲酰氯，并且按照实施例2的制备方法，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.91-7.87(m，2H)，7.26-7.20(m，2H)，7.11(d，2H)，6.98(d，2H)，6.43(d，1H)，4.95-4.92(m，1H)，4.62-4.60(m，1H)，4.05-4.00(m，2H)，3.74(t，4H)，3.66-3.52(m，4H)，3.30-2.92(m，6H)，1.48(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.1，164.5，150.4，134.6，132.7，130.5，122.0，117.4，117.1，83.1，66.5，56.1，53.4，49.9，49.0，44.7，44.0，41.6，36.2，27.8。

实施例72

N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.89(d，2H)，7.35(d，2H)，7.25-7.13(m，3H)，7.01(d，2H)，4.70(m，1H)，4.09-4.06(m，1H)，3.39-3.36(m，1H)，3.24-3.01(m，5H)，2.98(s，3H)，2.05(m，1H)，1.62-1.47(m，3H)，1.46(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.4，169.9，154.9，152.7，150.6，134.6，113.2，130.2，130.1，121.7，120.2，82.7，62.2，53.6，49.6，37.2，36.6，36.3，29.9，27.8，24.1。

实施例73

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

按照实施例2的制备方法并且按照Larsson和Carlson(Acta ChemicaScan.1994，48，522)所述方法氧化硫代吗啉代环中的硫得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.70(d，2H)，7.31(d，2H)，7.04(d，2H)，6.93(d，2H)，6.59(d，1H)，5.01(m，2H)，4.65(m，1H)，4.01(d，1H)，3.90(d，1H)，3.25(m，1H)，3.00(s，3H)，2.82(m，8H)，2.37(s，3H)，1.22(s，3H)，1.20(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.3，165.0，154.6，150.5，145.1，135.2，132.3，130.4，130.0，127.2，122.1，69.5，55.9，53.1，49.1，48.5，41.4，36.3，36.1，35.9，21.4。

实施例74

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲

基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物是由实施例66的产物按照Larsson和Carlson(ActaChemica Scan.1994，48，522)所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.88(m，2H)，7.24(m，4H)，7.05(d，2H)，6.95(d，1H)，4.80(m，1H)，4.40(m，2H)，4.10(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.10(s，3H)，3.01(s，3H)，1.47(s，9H)，1.36(s，3H)，1.11(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.8，168.6，166.0，154.5，150.8，139.7，133.0，131.5，131.4，130.3，122.0，117.1，116.8，83.0，68.0，60.9，59.3，53.8，37.4，36.6，36.4，27.8，18.9，18.8。

实施例75

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代-5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲

基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物是由实施例11的产物按照Larsson和Carlson(ActaChemica Scan.1994，48，522)所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.75(d，2H)，7.38(d，2H)，7.21(d，2H)，7.03(m，3H)，5.08(m，1H)，4.89(m，1H)，4.38(m，2H)，4.10(s，1H)，3.22-3.04(m，2H)，3.10(s，3H)，3.00(s，3H)，2.43(s，3H)，1.26(m，9H)，1.09(s， 3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.3，166.3，150.8，145.9，132.8，131.9，130.3，128.6，122.0，69.8，68.0，60.9，59.4，53.4，37.4，36.6，36.4，21.6，21.5，19.2，18.6。

实施例76

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例74的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.7，167.9，137.3，164.5，155.9，150.4，133.6，131.8，131.3，131.2，130.8，121.9，117.1，116.8，67.8，60.9，59.9，53.8，36.8，36.6，36.0，19.1，19.0。

实施例77

酸的合成

本标题化合物是由制备实施例B的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.45(br m，2H)，8.22(br s，1H)，7.55(d，1H)，7.11(d，2H)，6.95(d，2H)，6.81(m，1H)，4.80-4.74(m，2H)，3.70(m，1H)，3.55(m，1H)，3.20-3.08(m，4H)，2.98(s，3H)，2.89-2.76(m，1H)，2.13-1.96(m，3H)，1.60(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝190.0，173.6，171.0，155.2，153.9，150.6，133.2，130.1，121.9，110.3，62.0，55.1，48.2，36.6，36.6，36.3，30.2，23.4。

实施例78

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基

羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

按照实施例4的制备方法且通过Larsson和Carlson(Acta ChemisaScan.1994，48，522)氧化硫吗啉代环中的硫得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，2H)，7.37(d，2H)，7.12(d，2H)，6.96(d，2H)，6.57(d，1H)，4.95(m，1H)，4.62(m，1H)，4.03(m，2H)，3.67(m，4H)，3.25(m，1H)，2，89(m，4H)，2.45(m，6H)，2.35(s，3H)，1.48(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，164.8，153.7，150.5，145.4，135.3，132.8，130.7，130.4，127.5，122.2，82.9，56.2，54.6，54.5，53.6，49.5，48.6，46.0，44.2，43.7，41.6，36.3，27.9，21.6。

实施例79

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例85的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝4.98，(m，1H)，4.90(m，1H)，4.44(d，1H)，4.03(d，1H)，3.67(m，1H)，3.37(m，1H)，3.25-3.02(m，1H)，3.20(s，3H)，3.11(s，3H)，2.68(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.7，167.9，166.3，164.4，157.0，156.4，150.5，139.6，134.0，133.1，131.3，131.1，130.9，121.9，117.2，116.9，64.1，58.8，53.7，50.6，36.9，36.5，35.6。

实施例80

的合成

用哌嗪代替N-甲基哌嗪，并且按照实施例4的制备方法，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝7.70(d，2H)，7.32-7.26(m，2H)，7.14(d，2H)，7.01(d，2H)，4.72-4.68(m，1H)，4.07-4.05(m，1H)，3.60-3.49(m，4H)，3.37-3.31(m，1H)，3.22-2.98(m，3H)，2.42(s，3H)，2.02(m，2H)，1.61-1.55(m，6H)，1.50-1.45(m，13H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝177.3，170.7，169.8，150.6，144.3，133.1， 130.1，129.9，127.9，121.6，110.8，82.5，62.2，57.2，53.7，49.5，44.9，37.2，29.7，27.8，25.7，24.1，21.4。

实施例81

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)苯

基丙氨酸叔丁基酯的合成

实施例82的化合物通过Larsson和Carlson(Acta ChemicaScan.1994，48，517-525)的方法制备，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.69(d，2H)，7.33-7.29(m，3H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.71-4.66(m，1H)，4.13-4.04(m，5H)，3.37-3.32(m，1H)，3.21-3.00(m，7H)，2.41(s，3H)，2.05-2.01(m，1H)，1.52-1.44(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.7，169.7，149.8，144.3，134.4，133.3，130，6，130.0，127.9，121.4，82.7，62.4，54.0，52.1，49.7，43.2，37.6，29.7，28.1，24.4，21.7。

实施例82

叔丁酯的合成

用硫代吗啉代替N-甲基哌嗪，并且按照实施例4的制备方法，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝7.70(d，2H)，7.31-7.26(m，2H)，7.16(d，2H)，7.00(d，2H)，4.72-4.66(m，1H)，4.07-4.04(m，1H)，3.89-3.79(m，4H)，3.37-3.32(m，1H)，3.22-2.99(m，3H)，2.67(t，4H)，2.42(s，3H)，2.02(m，2H)，1.50-1.45(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝177.2，170.7，169.8，153.5，150.2，144.3，133.6，132.9，130.3，129.9，127.9，121.5，82.5，62.4，53.7，49.5，47.0，46.4，37.2，29.6，27.8，27.3，24.1，21.4。

实施例83

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吡咯烷-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔

丁基酯的合成

用吡咯烷羰基氯代替二甲基羰基氯，并且按照实施例2的制备方法，得到标题化合物，其为白色固体。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.71(d，2H)，7.32(d，2H)，7.15(d，2H)，7.04(d，2H)，4.73-4.67(m，1H)，4.07-4.04(m，1H)，3.53(t，2H)，3.45(t，2H)，3.36-3.32(m，1H)，3.24-2.98(m，3H)，2.42(s，3H)，2.03-1.88(m，5H)，1.75(s，1H)，1.52(1.24(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.7，169.8，153.1，150.4，144.3，133.1，130.1，129.9，127.9，121.6，110.8，99.8，82.5，62.2，53.7，49.5，46.3，37.2，29.7，27.8，25.6，24.8，24.0，21.4。

实施例84

氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.87(m，2H)，7.28-7.13(m，5H)，7.02(d，2H)，4.70-4.60(m，2H)，4.58(d，1H)，4.06(d，1H)，3.38-3.01(m，3H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，2.58(m，1H)，1.47(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.7，167.8，154.9，150.7，132.7，130.9，130.7，130.4，121.8，117.1，116.8，82.9，65.1，53.9，51.4，36.8，36.6，36.4，33.1，27.9。

实施例85

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物是由实施例84的产物按照Larsson和Carlson(ActaChemica Scan.1994，48，517-525)所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.90(m，2H)，7.30-7.04(m，7H)，4.83-4.58(m，3H)，3.66(m，2H)，3.32-3.24(m，1H)，3.09-2.85(m，2H)，3.10(s，3H)， 3.01(s，3H)，1.50(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.1，169.8，168.0，165.6，154.9，150.9，132.6，131.1，131.0，130.3，122.3，117.3，117.0，83.2，62.8，57.8，53.9，49.0，36.8，36.6，36.4，27.9。

实施例86

N-(2，5-二氯噻吩-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.14(d，2H)，7.09(s，1H)，7.07(d，1H)，7.01(d，2H)，4.73-4.66(m，1H)，4.32-4.28(m，1H)，3.42-3.17(m，3H)，3.08(s，3H)，3.06-3.01(m，1H)，2.98(s，3H)，2.17-2.04(m，1H)，1.84-1.60(m，2H)，1.60-1.46(m，1H)，1.45(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.2，169.9，154.9，150.6，133.4，133.1，131.2，130.2，127.9，127.0，121.7，82.7，62.2，53.6，49.3，37.2，36.6，36.4，30.1，27.8，24.2。

实施例87

N-(4-乙酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯

基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝8.58(s，1H)，7.70-7.67(m，4H)，7.32(d，1H)，7.14(d，2H)，7.01(d，2H)，4.68(m，1H)，3.99(m，1H)，3.37-3.34(m，1H)，3.23-3.16(m，1H)，3.11-3.01(m，1H)，3.08(s，3H)，2.98(s，3H)，2.13(s，3H)，1.97-1.94(m，1H)，1.55-1.47(m，3H)，1.44(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝171.1，169.9，169.4，155.0，150.6，143.3，133.3，130.2，130.0，128.9，121.7，119.4，82.7，62.2，53.8，49.6，37.2，36.6，36.4，29.9，27.8，24.4，24.1。

实施例88

N-(4-叔丁基苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例72的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.81(d，2H)，7.59(d，2H)，7.07(d，2H)，6.97(d，2H)，6.46(d，1H)，4.95(m，1H)，4.62(m，1H)，4.06(m，2H)，3.23(m，1H)，3.07(m，4H)，2.97(m，4H)，2.81(m，4H)，1.55(s，9H)，1.37(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，164.9，158.2，154.8，150.6，135.0，132.6，130.2，127.4，126.9，122.2，82.7，56.1，53.5，49.7，48.8，41.5，36.5，36.3，36.1，35.2，30.8，27.8。

实施例89

酸的合成

本标题化合物是由实施例56的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝8.95(s，1H)，8.83(d，1H)，8.28-8.24(m，1H)，7.73-7.69(m，1H)，7.30(d，2H)，7.05(d，2H)，4.68-4.63(m，1H)，4.29-4.25(m，1H)，3.47-3.41(m，1H)，3.38-3.22(m，2H)，3.09(s，3H)，3.06-3.02(m，1H)，2.96(s，3H)，1.92-1.66(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.2，173.9，160.6，160.0，156.9，152.9，152.0，147.9，139.1，136.9，135.7，131.6，126.5，123.1，63.1，54.8，50.4，37.5，36.8，36.7，32.2，25.5。

实施例90

N-(2-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

L-硫吗啉-3-羧酸是通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan. 1994，48，517-525)的方法制备。N-(2-氟苯-4磺酰基)-L-硫吗啉-3-羧酸按照方法1所述方法制备。本标题化合物按照上述方法利用适当起始原料制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.92(m，1H)，7.69(m，1H)，7.34(m，2H)，7.16(m，2H)，6.99(m，2H)，6.60(d，1H)，5.01(m，1H)，4.64(m，1H)，4.03(m，2H)，3.29(m，1H)，3.06(m，6H)，2.90(m，7H)，1.49(d，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝169.9，164.8，160.3，156.9，154.9，150.7，136.6，136.4，132.7，131.0，130.3，128.8，126.4，126.2，125.1，122.2，118.1，117.8，82.7，56.3，56.7，50.2，49.5，41.8，36.5，36.3，27.8。

实施例91

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，lV-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

L-硫吗啉-5-羧酸是通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，517-525)的方法制备。N-(3-氟苯-4-磺酰基)-L-硫吗啉-5-羧酸利用方法1所述方法制成。本标题化合物按照上述方法利用适当起始原料制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.66(m，1H)，7.58(m，2H)，7.34(m，1H)，7.07(d，1H)，6.92(d，1H)，6.42(d，1H)，5.00(m，1H)，4.58(m，1H)，4.02(m，2H)，3.22(m，1H)，3.05(s，3H)，2.98(m，6H)，1.45(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，164.5，164.4，161.0，154.9，150.6，140.3，140.2，132.5，131.9，131.8，130.2，123.2，123.1，122.2，121.4，121.2，115.0，114.7，82.9，56.1，53.4，49.9，49.1，41.7，36.5，36.3，36.0，27.8。

实施例92

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

L-硫吗啉-5-羧酸是通过Larsson和Carlson(Acta Chemica Scan.1994，48，517-525)的方法制备。N-(2，4-二氟苯-4-磺酰基)-L-硫吗啉-5- 羧酸采用方法1所述方法制成。本标题化合物按照上述方法利用适当起始原料制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.93(m，1H)，7.15(m，2H)，7.04(m，4H)，6.53(d，1H)，4.97(m，1H)，4.64(m，1H)，4.05(m，2H)，3.21(m，3H)，3.17(s，3H)，2.97(m，SH)，1.43(s，9H)。

¹³3C NMR(CDCl₃)：δ＝170.0，164.6，154.9，150.7，132.6，132.6，130.3，122.6，122.1，112.6，112.3，107.0，106.7，106.3，82.8，56.3，53.5，50.5，49.8，42.0，36.5，36.3，27.8。

实施例93

N-(4-乙酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧基)苯基

丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例87的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝8.05(d，1H)，7.78(m，4H)，7.26(d，2H)，7.02(d，2H)，4.94(m，1H)，4.72-4.67(m，1H)，4.13-4.09(m，1H)，3.40-3.36(m，1H)，3.30-3.05(m，3H)，3.08(s，3H)，2.97(s，3H)，2.15(s，3H)，1.81-1.51(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.3，174.2，172.3，156.9，152.0，144.9，135.5，132.4，131.6，130.2，122.9，120.7，63.2，54.7，50.6，37.5，36.8，36.7，31.7，25.4，24.0。

实施例94

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例72的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.93(d，2H)，7.48(d，2H)，7.28(d，2H)，7.03(d，2H)，4.72-4.68(m，1H)，4.17-4.13(m，1H)，3.45-3.42(m，1H)，3.28-3.11(m，2H)，3.14-3.07(m，1H)，3.09(s，3H)，2.97(s，3H)，1.85-1.69(m，3H)，1.59(m，1H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.2，174.1，157.0，153.9，152.0，137.3，135.6，131.7，131.5，123.0，122.5，121.8，63.1，54.7，50.6，37.4，36.8，36.6，31.9，25.4。

实施例95

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.90(m，2H)，7.22(m，4H)，7.00(m，3H)，5.08(m，1H)，4.84(m，1H)，4.56(d，1H)，4.42(d，1H)，3.88(s，1H)，3.15-2.99(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.26-1.16(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.4，168.2，167.5，164.1，154.9，150.7，132.8，132.2，132.1，131.0，130.8，130.3，121.8，116.9，116.6，73.5，69.6，54.6，53.2，50.5，37.6，36.6，36.3，29.1，23.8，21.6，21.5。

实施例96

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例58的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝8.14(d，1H)，7.94-7.89(m，4H)，7.29(d，2H)，7.03(d，2H)，4.70-4.66(m，1H)，4.21-4.17(m，1H)，3.47-3.40(m，1H)，3.31-3.21(m，2H)，3.11-3.04(m，1H)，3.09(s，3H)，2.97(s，3H)，1.87-1.72(m，3H)，1.70-1.61(m，1H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.2，173.9，157.0，152.0，142.9，135.7，134.5，131.7，129.7，123.0，118.6，111.8，63.0，54.7，50.5，37.4，36.8，36.7，32.0，25.4。

实施例97

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，V-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例98的制备所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，1H)，7.75(d，1H)，7.35(d，1H)，7.34(d，1H)，7.33(d，1H)，7.20(d，1H)，7.10(d，1H)，7.03(d，1H)，6.91(d，0.5H)，6.08(d，0.5H)，4.86(ddd，0.5H)，4.77(q，0.5H)，3.61-3.47(m，2H)，3.27-3.02(m，3H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，2.45(s，1.5H)，2.43(s，1.5H)，1.75-1.68(m，0.5H)，1.61-1.51(m，0.5H)，1.45(s，4.5H)，1.40(s，4.5H)，1.48-1.25(m，3H)；0.95(s，1.5H)，0.80(s，1.5H)；0.61(s，1.5H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.4，170.1，170.0，169.6，155.0，154.9，150.7，150.6，144.3，144.2，133.4，133.1，132.8，132.6，130.7，130.2，129.9，129.8，128.0，121.8，121.7，82.6，82.2，71.5，71.2，53.6，52.7，47.3，47.2，42.7，42.5，38.2，38.1，37.7，37.5，36.6，36.3，27.8，27.8，27.2，23.4，23.2，21.5。

实施例98

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

3，3-二甲基脯氨酸(参见Sharma和Lubell，J.Org.Chem.1996，61，202-209)按照方法1所述方法进行N-甲苯磺酰化。本标题化合物按照实施例2的制备所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.76(d，1H)，7.74(d，1H)，7.36(d，1H)，7.33(d，2H)，7.19(d，1H)，7.10(d，1H)，7.03(d，1H)，6.91(d，0.5H)，6.89(d，0.5H)，5.06(sept.，0.5H)，4.96(sept.，0.5H)，4.98-4.83(m，1H)，3.59-3.48(m，2H)，3.31-3.03(m，3H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，2.45(s，1.5H)，2.43(s，1.5H)，1.75-1.66(m，0.5)，1.62-1.52(m，0.5H)，1.34-1.22(m，3H)，1.27(s，1.5H)，1.25(s，1.5H)，1.22(s，1.5H)，1.20(s，1.5H)，0.95(s，1.5H)，0.78(s，1.5H)，0.60(s，1.5H)，0.57(s，1.5H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.8，170.6，170.0，169.7，154.9，150.8，150.6，144.4，144.2，133.2，132.5，132.5，130.7，130.2，129.9，129.8，128.0，122.0，121.8，71.5，17.2，69.5，69.3，53.0，52.2，47.3，47.2， 42.8，42.5，38.2，38.1，37.6，37.2，36.6，36.3，27.1，23.4，23.2，21.6，21.6，21.5，21.5。

通过上述方法制备的其他化合物包括实施例99-137中得到的下表II中所示的那些化合物。此外，表II中的实施例101、109、111、117、132和137举例如下：

实施例101

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)-L-苯基丙

氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃)₂SO：δ＝8.28(d，1H)，7.70(d，2H)，7.41(d，2H)，7.23(d，2H)，6.99(d，2H)，4.86(sept，1H)，4.47(m，1H)，4.40(m，1H)，4.10(m，1H)，4.07(m，1H)，3.38(m，1H)，3.30(m，1H)，3.09(m，3H)，2.95(s，3H)，3.00(s，3H)，2.88(s，3H)，2.39(s，3H)，1.63(m，3H)，1.51(m，3H)，1.44(m，1H)，1.39(m，1H)，1.16(d，3H)，1.11(d，3H)。

¹³C NMR(CD₃)₂SO：δ＝171.3，170.8，154.2，150.2，143.7，134.1，130.2，130，127.6，121.6，68.2，61.2，53.5，49，36.3，36.1，35.7，30.5，23.8，21.4，21.4，21 。

实施例109

N-(苄基磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例111的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

MS(FAB)(M+H)⁺550。

计算值：C₂₅H₃₁N₃O₇S₂；C，54.62；H，5.68；N 7.64。

实测值：C 54.51；H 5.60；N 7.63。

实施例111

基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并通过替换适当起始原料而制成。

物理数据如下：

MS[M+H]⁺550

计算值：C₂₉H₃₉N₃O₇S₂；C，57.52；H，6.45；N，6.94。

实测值：C，57.32；H，6.52；N，6.81。

实施例117

N-(甲基-吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯

基丙氨酸叔丁酯的合成

取代N-甲基-吡唑磺酰氯(参见Dickson，US 3,665,009(May 23，1972)并且按照实施例56的制备方法，得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.83(s，1H)，7.76(s，1H)，7.26(m，1H)，7.15(m，2H)，7.00(m，2H)，4.69(m，1H)，3.95(m，1H)，3.93(s，3H)，3.38(m，1H)，3.23-3.11(m，1H)，3.10-2.99(m，4H)，2.99(s，3H)，2.05(m，1H)，1.66-1.46(m，3H)，1.44(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.7，169.9，154.9，150.6，138.9，133.2，132.5，130.2，121.7，117.9，82.6，62.4，53.7，49.7，39.6，37.7，36.6，36.4，29.9，27.9，24.2。

实施例132

N-(4-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(1，1-二氧代硫代吗啉-4-基羰氧基)-

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

用硫吗啉代替N-甲基哌嗪，并且按照实施例4和14的制备方法，得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.87-7.82(m，2H)，7.28-7.17(m，5H)，7.01(d，2H)，4.71-4.69(m，1H)，4.14-4.05(m，5H)，3.39-3.36(m，1H)，3.23-3.01(m，7H)，2.05-2.03(m，1H)，1.58-1.44(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝170.4，169.8，153.0，149.7，134.2，130.6，130.5，121.3，116.8，116.5，82.6，62.1，53.6，51.8，49.5，43.1，42.7， 37.2，29.7，27.8，24.2。

实施例137

N-(甲基-吡唑-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰氧基)-苯

基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例117的制备所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.83(s，1H)，7.76(s，1H)，7.27(d，1H)，7.13(d，2H)，7.01(d，2H)，5.06-5.02(m，1H)，4.80-4.73(m，1H)，3.97-3.94(m，1H)，3.93(s，3H)，3.44-3.37(m，1H)，3.25-3.19(m，1H)，3.09-3.00(m，5H)，2.97(s，3H)，2.06-2.02(m，1H)，1.66-1.48(m，3H)，1.23(d，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.8，170.5，154.9，150.6，138.9，132.9，32.5，130.2，121.7，117.8，69.5，62.3，53.2，49.7，39.6，37.1，36.6，36.3，29.9，24.1，21.6，21.5。

通过上述方法制备的其他化合物包括下列：

实施例138

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

N-甲基吡唑磺酰氯的制备是通过将N-甲基吡唑加入到冰冷的(0℃)氯磺酸。使该反应混合物升至室温且随后在N₂流下加热至00℃过夜。此后将该反应混合物冷却至室温且冷冻至0℃。向该溶液加入亚硫酰氯(2.5eq.)，室温下搅拌该反应30分钟，此后升至70℃达2小时。该反应冷却至室温且随后在冰浴内滤器。将水和冰缓慢加入到反应混合物中沉淀出白色固体，通过过滤收集该固体。所需的磺酰氯用冷水和己烷洗涤。本标题化合物此后按照实施例2的制备所列的方法通过替换适当起始原料来制成，mp：169-170℃。

实施例139

基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例138的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.94(s，1H)；7.79(s，1H)；7.25(d，2H，J＝8.8Hz)；7.0(d，2H，J＝8.8Hz)；5.15(br s，1H)；4.80(m，1H)；4.54(d，1H，J＝9.HHz)；4.39(d，1H，J＝9.3Hz)；3.93(s，3H)；3.88(s，1H)；3.23-3.02(m，2HO；3.07(s，3H)；2.98(s，3H)；1.27(s，3H)；1.14(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：173.86，169.05，155.23，150.47，139.21，133.59，133.15，130.53，121.84，117.57，73，58，54，71，53.75，50.42，39.60，37.18，36.60，36.36，35.11，28.97，23.95。

实施例140

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-

基)羰氧基)苯基丙氨酸乙酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS(+ESI)：630[M+H]⁺

计算值C₃₁H₃₉N₃O₉S·0.2CH₂Cl₂：C，57.94；H，6.14；N，6.50。

实测值：C，57.73；H，5.90；N，6.47。

实施例141

基)羰氧基)苯基丙氨酸的合成

实施例140的产物利用方法5所述方法水解，但用甲醇作为溶剂且该反应在25℃下进行24小时。此后蒸发溶剂，残余物溶于H₂O，用二氯甲烷洗涤且冷冻干燥得到标题化合物。

物理数据如下：

MS(+ESI)：619[M+H]⁺。

计算值C₂₉H₃₅N₃O₉SLi·1.5H₂O：C，53.37；H，6.02；N，6.44。

实测值：C，53.40；H，5.58；N，6.48。

实施例142

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-乙酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙

氨酸的合成

实施例127的产物利用方法5所述方法水解，但用甲醇作为溶剂且该反应在25℃下进行24小时。此后蒸发溶剂，残余物溶于H₂O，用二氯甲烷洗涤且冷冻干燥得到标题化合物。

物理数据如下：

MS(+ESI)：587[M+H]⁺

计算值C₂₈H₃₃N₄O₈SLi·3H₂O：C，52.01；H，6.08；N，8.66。

实测值：C，52.03；H，5.36；N，8.04。

实施例143

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-甲烷磺酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯

基丙氨酸的合成

实施例128的产物利用实施例142所述方法水解。

物理数据如下：

MS(+ESI)：623[M+H]⁺

计算值C₂₇H₃₃N₄O₉S₂Li·2H₂O：C，48.79；H，5.61；N，8.43。

实测值：C，48.66；H，5.14；N，8.04。

实施例144

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-苯基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨

酸的合成

标题化合物的乙酯按照实施例4所述方法通过替换适当起始原料来制成。该乙酯随后利用实施例142所述方法水解。

物理数据如下：

MS(-ESI)：619[M-H]-

计算值C₃₂H₃₆N₄O₇SLi·2H₂O：C，58.00；H，5.93；N，8.45。

实测值：C，57.65；H，5.49；N，8.13。

实施例145

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁

酯的合成

将实施例125的产物(0.7g，1mmol)溶解在二氯甲烷(9mL)中。将该溶液冷却至0℃并且加入三氟乙酸(1.0mL)，所得澄清溶液搅拌4小时。该反应溶液此后用附加二氯甲烷(50mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(3×50mL)，干燥(K₂CO₃)且汽提溶剂得到白色固体(0.465g)。该物质的快速色谱(9∶1 CH₂Cl₂∶EtOH)得到澄清油，将其用己烷洗涤数次得到白色固体(0.289g，48％)。

物理数据如下：

MS(+ESI)：601.7[M+1]⁺。

计算值C₃₀H₄₀N₄O₇S·0.25CH₂Cl₂：C，58.42；H，6.56；N，9.01。

实测值：C，58.79；H，6.51；N，8.74。

实施例146

2-(邻磺酰苯甲酰亚胺-2-基)丙酰基-L-4-(4′-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例46的产物利用方法11所述方法制备，mp ＝117-122℃(同时起泡)。

物理数据如下：

计算值C₂₅H₂₈N₄O₈S·1.5H₂O：C，52.53；H，5.47；N，9.80。

实测值：C，52：26；H，5.36；N，9.23。

实施例147

基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例128的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS(+ESI)：696[M+NH₄]⁺

计算值C₃₁H₄₂N₄O₉S₂·0.5CH₂Cl₂：C，51.62；H，6.00；N，7.76

实测值：C，51.55；H，6.21；N，7.60。

实施例148

酸(N-叔丁氧基羰基-2-氨基-2-甲基丙基)酯的合成

将(BOC)₂O(96mg，0.44mmol)加入到实施例9的产物(200mg，0.4mmol.)、N-Boc-2-氨基-2-甲基-1-丙醇(965mg，0.5mmol)和催化量的DMAP在含吡啶(50μl)的THF(92mL)中的溶液内。该化合物在室温和氩气下搅拌48小时。将该化合物倾入1N HCl且用乙酸乙酯萃取。洗涤有机相(1N HCl)，干燥(MgSO₄)并且该溶液在减压下除去。残余物通过快速色谱纯化(EtOAc∶己烷2∶1)得到所需化合物，其为无定形白色泡沫(150mg.，55％)。

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺为675

MS(+ESI)：[M+NH₄]⁺为692(100％)

实施例149

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸2-(吗啉-4-基)乙酯的合成

本标题化合物按照实施例148所列方法通过用2-吗啉代乙醇代替N-Boc-2-氨基-2-甲基-1-丙醇而制成。

物理数据如下：

计算值C₃₀H₄₀N₄O₈S·0.5H₂O：C，57.58；H，6.60；N，8.95。

实测值：C，57.26；H，6.29；N，8.82。

实施例150

氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例127的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS(+ESI)：660.4[M+NH₄]⁺。

计算值C₃₂H₄₂N₄O₈S·0.15CH₂Cl₂：C，58.91；H，6.50；N，8.55。

实测值：C，58.64；H，6.36；N，8.40。

实施例151

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-羟基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法通过用4-哌啶醇代替N-甲基哌嗪而制成。

物理数据如下：

计算值C₃₁H₄₁N₃O₈S·0.6H₂O·0.22EtOAc：C，59.28；H，6.86；N，6.51

实测值：C，58.92；H，6.37；N，6.47。

实施例152

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2-(吗啉-4′-基)乙基)氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法通过用4-(2-氨基乙基)吗啉代替N-甲基哌嗪而制成。

物理数据如下：

计算值C₃₂H₄₄N₄O₈S·0.25H₂O：C，59.20；H，6.91；N，8.63

实测值：C，59.01；H，6.54；N，8.38。

实施例153

基)羰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法通过替换适当起始原料而制成。

物理数据如下：

MS(-ESI)：656[M-H]^-。

计算值C₃₃H₄₃N₃O₉S·0.1CH₂Cl₂：C，59.67；H，6.54；N，6.31。

实测值：C，59.83；H，6.63；N，6.66。

实施例154

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2-羟基乙基)-N-甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法用2-(甲基氨基)乙醇代替N-甲基哌嗪来制备。

物理数据如下：

计算值C₂₉H₃₉N₃O₈S·0.5H₂O：C，58.18；H，6.73；N，7.02。

实测值：C，57.95；H，6.5；N，6.9。

实施例155

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-甲酰氧基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙

氨酸的合成

本标题化合物通过用甲酸过夜处理实施例151的产物同时搅拌来制成。得到本标题化合物，其为白色泡沫(130mg.，94％)，此后除去过量甲酸。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHZ)δ12.8(s，1H)；8.23(s，1H)；8.09(d，1H)；7.69(d，2H)，7.4(d，2H)；7.23(d，2H)，7.02(d，2H)；5.00(m，1H)；4.45(m，1H)；4.10(m，1H)；3.6-3.8(br，2H)；3.4(br s，1H)；3.25(m， 2H)；3.10(m，2H)；2.95(m，1H)；2.35(s，3H)；1.95(m，2H)；1.56-1.75(m，5H)；1.4(m，1H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2950，1720，1680，1510，1430，1325，1250，1150，1010，650，75，540。

MS((+)ESI，m/z(％))605(100[M+NH，1⁺)。

计算值C₂₈H₃₃N₃O₉S·0.66H₂O：C，56.09；H，5.77；N，7.01。

实测值：C，56.14；H，5.83；N，6.78。

实施例156

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-羟基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙氨

酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法通过替换适当起始原料而制成，mp.64-67℃(同时起泡)。

物理数据如下：

计算值C₃₀H₃₉N₃O₈S·0.75H₂O·0.1EtOAc：C，58.51；H，6.67；N，6.73。

实测值：C，58.55；H，6.09；N，6.78。

实施例157

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基羰氧基)苯

基丙氨酸叔丁基酯的合成

该碳酸酯是通过Tos-Pro-Tyr-叔丁基酯用4-硝基苯基氯甲酸酯处理，随后加入N-(2-羟基乙基)哌嗪(三乙胺，二氯甲烷，冷冻至0℃，随后室温下搅拌过夜)。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶，95∶5EtOAc∶EtOH)得到白色固体，mp.158-160℃.(0.387g，58％)。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHZ)δ8.15(d，1H，J＝7.90Hz)；7.70(d，2H，J＝6.59Hz)；7.40(d，2H，J＝7.90Hz)；7.23(d，2H，J＝8.56Hz)；7.00(d，2H，J＝8.56Hz)；4.42(m，1H)；4.38(m，1H)；4.08(m，1H)；3.51(m，4H)；3.34(m，3H)；3.09(m，1H)；2.99(m，2H)；2.43(m，6H)；2.39(s，3H)；1.59(m，3H)；1.39(m，1H)；1.35(s，9H)。

IR(KBr，cm^-1)3505，3400，2990，2930，2890，1730，1700，1670， 1510，1430，1350，1220，1200，1160，670，590，545。

MS((-)ESI，m/z(％))643(98[M-NH₄])。

计算值C₃₂H₄₄N₄O₈S：C，59.61；H，6.88；N，8.69

实测值：C，59.06；H，6.95；N，8.43。

实施例158

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2-甲酰氧基乙基)-N-甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是通过用甲酸过夜处理实施例154的产物而制成。得到本标题化合物，其为白色泡沫(110mg.，77％)，随后除去过量甲酸。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ12.8(s，1H)；8.25(d，1H)；8.08(d，1H)；7.69(d，2H)，7.40(d，2H)；7.22(d，2H)，6.98(dd，2H)；4.47(m，1H)；4.35(m，1H)；4.27(m，1H)；4.10(m，1H)；3.65(m，1H)；3.55(m，1H)；2.85-3.15(重叠m，7H)；2.40(s，3H)；1.55(m，3H)；1.40(m，1H)。

IR(KBr，cm^-1)3420，2910，1725，1510，1400，1340，1270，1150，675，590，550。

MS((+)ESI，m/z(％))579(100[M+NH，1⁺)。

计算值C₂₆H₃₁N₃O₉S·0.66H₂O：C，54.45；H，5.68；N，7.33

实测值：C，54.41；H，5.60；N，7.24。

实施例159

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(2′-羟基乙基)-N-甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法通过替换适当起始原料而制成，mp.49-52℃。

物理数据如下：

计算值C₂₅H₃₇N₃O₅S·0.5H₂O：C，57.52；H，6.55；N，7.19。

实测值：C，57.56；H，6.38；N，7.14。

实施例160

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(N-(甲氧基羰基甲基)氨基甲酰氧基)苯

基丙氨酸叔丁酯的合成

该碳酸酯是通过用4-硝基苯基氯甲酸酯处理Tos-Pro-Tyr-叔丁基酯，随后将加入甘氨酸甲酯(三乙胺，二氯甲烷，冷冻至0℃，随后室温下搅拌过夜)。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶，3∶2 EtOAc∶己烷)得到白色泡沫(0.640g，35％)。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ8.15(d，1H，J＝8.12Hz)；8.12(d，2H，J＝6.15Hz)；7.73(d，2H，J＝8.34Hz)；7.40(d，2H，J＝7.90Hz)；7.24(d，2H，J＝8.56Hz)；6.98(d，2H，J＝8.34Hz)；4.25(m，1H)；4.07(m，1H)；3.83(d，2H，J＝6.15Hz)；3.64(s，3H)；3.32(m，1H)；3.02(m，3H)；2.39(s，3H)；1.56(m，3H)；1.41(m，1H)；1.35(s，9H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2990，1745，1680，1500，1370，1350，1200，1160，670，600。

MS((+)ESI，m/z(％))621(100[M+NH₄]⁺)。

计算值C₂₉H₃₇N₃O₉S：c，57.70；H，6.18；N，6.96。

实测值：C，57.63；H，6.11；N，6.74。

实施例161

N-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例138所述方法通过替换适当起始原料而制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.91(s，1H)，7.81(s，1H)，7.21(d，2H，J＝8.2Hz)，7.03(m，3H)；5.03(m，1H)，4.84(m，1H)，4.55(d，1H)，4.42(d，1H)，3.96(s，3H)，3.83(s，1H)，3.18-3.01(m，2H)，3.10(s，3H)，3.01(s，3H)，1.28(s，3H)，1.24(m，6H)，1.17(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.43，166.31，154.92，150.68，132.91，132.88，130.34，121.78，117.69，73.76，69.61，54，79，53.2，50.52，39.61，37.62，36.58，36.35，28.96，24.02，21.57，21.49。

实施例162

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-甲氧基哌啶-1-基羰氧基)苯基丙

氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例156所述方法通过替换适当起始原料而制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(DSMO-d₆，400MHz)δ8.10(d，1H)；7.72(d，2H)；7.41(d，2H)；7.24(d，2H)；7.02(d，2H)；4.92(m，1H)；4.45(m，1H)；4.10(m，1H)；3.8(br s，1H)；3.65(br s，1H)；3.40(M，2H)；3.25(s，3H)；2.95-3.15(重叠m，5H)；2.40(s，3H)；1.85(br，2H)；1.4-1.6(m，6H)；1.18(d，3H)；1.12(d，3H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2950，1720，1520，1425，1340，1210，1160，1100，625，590，540。

MS((+)ESI，m/z(％))633[M+NH]⁺)。

实施例163

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例162的产物利用方法5所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ12.8(s，1H)；8.10(d，1H)；7.72(d，2H)；7.41(d，2H)；7.24(d，2H)；7.02(d，2H)；4.45(m，1H)；4.10(m，1H)；3.8(br s，1H)；3.65(br s，1H)；3.40(m，2H)；3.25(s，3H)；2.95-3.15(重叠m，5H)；2.40(s，3H)；1.85(br，2H)；1.4-1.6(m，6H)。

MS((-)ESI，m/z(％))572(100[M-H]^-)。

计算值C₂₈H₃₅N₃O₈S·0.33EtOAc.1H₂O：C，56.73；H，6.44；N，6.77。

实测值：C，56.96；H，6.01；N，6.76。

实施例164

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-氧代脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯

基丙氨酸叔丁酯的合成

将二氯甲烷(7mL)冷却至-60℃(氯仿/干冰浴)。加入草酰氯(0.15mL)。实施例165的产物(870mg)和干燥DMSO(0.26mL)溶解在甲烷(8mL)且缓慢加入到上述溶液中。干燥条件下将该反应在-60℃下搅拌30分钟。加入三乙胺(1.05mL)。5分钟后，撤去干冰浴。该反应在室温下搅拌1小时。真空蒸发溶剂。将乙酸乙酯(30mL)加入到该残余物。该混合物用柠檬酸溶液(5％，2×30mL)和饱和NaHCO₃溶液(2×30mL)洗涤；并且最后用盐水洗涤。该溶液用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂，并且该残余物在硅胶柱上洗脱得到440mg的所需产物，mp：78-80℃。

实施例165

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-trans-4-羟基脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

在冰浴中0℃下将N-(甲苯-4-磺酰基)-L-trans-4-羟基脯氨酰基-L-4-(羟基)苯基丙氨酸叔丁基酯(1.60g)和二甲基氨基甲酰氯(0.30mL)溶解在DMF中。将碳酸钾粉(2.03g)加入到该溶液。5分钟后撤去冰浴。该反应在室温下搅拌6小时。过滤固体。将乙酸乙酯(40mL)加入到该溶液。该溶液用柠檬酸溶液洗涤(5％，40mL)2次，和用饱和NaHCO₃溶液(40mL)洗涤1次。该溶液随后用盐水洗涤并用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂得到1.07g的标题化合物，mp：170-172℃。

实施例166

N-(3-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸叔丁基酯的合成

冰浴中0℃下将N-(3-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(羟基)苯基丙氨酸叔丁酯(700mg)和二甲基氨基甲酰氯(0.2mL)溶解在DMF(15mL)。将碳酸钾粉(1.375g)加入到该溶液。5分钟后撤去冰浴。该反应在室温下搅拌6小时。过滤固体。将乙酸乙酯(20mL)加入到该溶液。该溶液用柠檬酸溶液(5％，30mL，2x)和饱和NaHCO₃溶液洗涤。该溶液随后用盐水洗涤且用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂得到890mg的标题化合物，mp：107-109℃。

实施例167

N-(吗啉代-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸叔丁基酯的合成

N-(吗啉代-磺酰基)-L-脯氨酸利用Cheeseright等，J Chem.Soc.Perkin Trans.1 1994，12，1595-1600所述方法制备。标题化合物按照实施例2的制备方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.13(d，2H)，7.03(d，2H)，6.92(d，1H)，4.71(q，1H)，4.25(t，1H)，3.67(t，4H)，3.39(dt，1H)，3.28-3.19(m，1H)，3.23(t，4H)，3.18(dd，1H)，3.08(dd，1H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，2.16-2.08(m，2H)，1.98-1.86(m，1H)，1.78-1.66(m，1H)，1.45(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ171.2，170.4，154.8，150.7，132.9，130.3，121.7，82.7，66.3，62.6，53.3，49.6，46.2，37.0，36.6，36.3，30.5，27.8，24.7。

实施例168

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例167的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.04(d，1H)，7.25(d，2H)，7.01(d，2H)，4.71-4.64(m，1H)，4.22(dd，1H)，3.62-3.50(m，4H)，3.43-3.31(m，2H)，3.24(dd，1H)，3.11(t，4H)，3.09(s，3H)，3.03(dd，1H)，2.97(s，3H)，2.22-2.11(m，1H)，1.98-1.80(m，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.65，174.58，174.00，156.60，151.70，135.30，131.20，122.70，67.10，63.10，54.59，54.50，50.6，47.10，37.10，36.50，36.40，32.0，25.60。

实施例169

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基

氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例14和117的制备所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.93(s，1H)，7.80(s，1H)，7.12(d，2H)，6.98(d，2H)，6.44(d，1HOHH)，4.95(m，1H)，4.66(m，1H)，4.04(m，2H)，3.98(s，3H)，3.19(m，2H)，3.06(m，6H)，2.98(m，4H)，1.42(m，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.58，164.75，154.91，150.75，139.33，132.73，132.43，130.43，122.18，119.66，83.07，56.02，53.23，50.03，49.03，41.49，39.63，36.56，36.31，36.16，27.87。

实施例170

酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例90的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.90(m，1H)，7.72(m，1H)，7.56(d，1H)，7.37(m，2H)，7.20(d，2H)，7.07(d，2H)，5.18(m，1H)，4.59(m，1H)，4.26(m，1H)，3.76(m，2H)，3.36(m，1H)，3.21(m，2H)，3.08(m，6H)，2.96(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ173.85，168.04，162.06，158.69，156.92，152.06，137.69，135.05，131.83，131.59，129.77，128.44，128.26，126.21，123.17，119.04，118.75，57.04，54.99，52.08，51.66，43.36，37.24，36.83，36.66。

实施例171

基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例92的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.88(m，1/2H)，8.14(m，1/2H)，7.90(m，1H)，7.64(m，1H)，7.20(m，2H)，7.10(m，1H)，7.03(m，2H)，5.16(m，1H)，4.63(m，1H)，4.28(m，1H)，3.75(m，2H)，3.41(m，1H)，3.15(m，5H)，3.02(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ173.91，168.04，156.93，152.05，135.15，133.81，133.67，131.60，123.13，113.48，113.18，107.38，107.02，57.02，55.02， 52.29，51.84，43.45，37.34，36.83，36.66。

实施例172

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例49的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.67(d，2H)，7.32(d，2H)，7.21(d，2H)，7.10(d，1H)，7.00(d，2H)，5.40(bs，1H)，4.85(m，2H)，3.95(m，1H)，3.41(m，1H)，3.07(m，6H)，2.98(m，4H)，2.62(m，1H)，2.41(m，5H)，2.13(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ173.40，168.49，155.26，144.44，136.88，132.95，130.51，130.30，127.28，122.08，55.34，53.45，43.43，36.62，36.38，35.85，25.25，24.54，21.43。

实施例173

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基-硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例56的制备所述方法通过替换适当起始原料而制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ9.13(m，1H)，8.90(m，1H)，8.19(m，1H)，7.56(m，1H)，7.23(d，2H)，7.04(d，2H)，6.93(d，1H)，5.07(m，1H)，4.85(m，1H)，4.62(d，1H)，4.48(d，1H)，3.92(s，1H)，3.20-3.05(m，2H)，3.12(s，3H)，3.03(s，3H)，1.32-1.16(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.30，167.75，154.19，150.67，148.59，135.72，132.94，132.72，130.27，123.91，121.78，73.62，69.64，54.69，53.12，50.48，37.50，36.53，36.29，29.05，23.73，21.54，21.46。

实施例174

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例91的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.68(m，3H)，7.44(m，1H)，7.20(m，2H)，7.01(m，2H)，5.21(m，1H)，4.60(m，1H)，4.20(m，1H)，3.75(m，1H)，3.43(m，1H)，3.21(m，3H)，3.02(m，4H)，2.96(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ173.98，167.98，165.89，162.56，156.94，152.06，142.70，142.61，135.11，133.30，133.19，131.57，124.71，123.25，122.21，121.93，116.05，115.71，57.27，54.87，54.79，51.29，51.06，43.24，37.11，36.83。

实施例175

氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例169的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.11(s，1H)，7.83(s，1H)，7.36(d，1H)，7.24(d，2H)，7.02(d，2H)，5.16(m，1H)，4.69(m，1H)，4.19(m，1H)，3.90(s，3H)，3.81(m，2H)，3.33(m，3H)，3.10(s，3H)，3.02(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.07，168.11，156.93，152.08，140.12，135.05，134.90，131.67，123.28，121.82，57.33，54.77，50.83，50.64，42.94，39.80，37.02，36.84，36.76。

实施例176

基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例88的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.70(d，2H)，7.53(d，2H)，7.04(d，2H)，6.87(d，2H)，5.09(m，1H)，4.48(m，1H)，3.99(m，1H)，3.60(m，1H)，2.90(m，5H)，2.80(m，5H)，1.15(s，9H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ173.95，168.09，159.33，156.88，152.09，137.52，135.03，131.54，128.68，128.15，123.32，57.27，54.81，50.75，43.04， 36.97，36.82，36.65，36.16，31.35。

实施例177

N-(甲苯-4-磺酰基)-(3，3-二甲基)脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例97的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.77(d，1H)，7.75(d，1H)，7.42-7.33(m，3.5H)，7.27(d，1H)，7.19(d，0.5H)，7.10(d，1H)，7.03(d，1H)，5.07-5.00(m，0.5H)，4.94-4.87(m，0.5)，3.67(d，1H)，3.58-3.52(m，1H)，3.35-3.25(m，1H)，3.19-3.08(m，2H)，3.11(s，3H)，3.02(s，3H)，2.45(s，1.5H)，2.43(s，1.5H)，1.70-1.57(m，1H)，1.34-1.27(m，1H)，0.94(s，1.5H)，0.75(s，1.5H)，0.54(s，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ174.6，174.4，171.8，171.4，155.7，150.5，150.4，144.5，144.4，133.5，132.6，130.9，130.6，130.0，129.9，128.0，127.9，122.2，122.0，71.2，70.9，53.3，52.2，47.3，47.1，43.0，42.7，38.1，37.9，36.6，36.4，27.0，26.8，23.3，23.0。

实施例178

N-(2，5-二氯噻酚-3-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例86的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.10(d，1H)，7.25(d，2H)，7.20(s，1H)，7.0(d，2H)，4.65(m，1H)，4.35(m，1H)，3.55-3.35(m，2H)，3.30-3.20(m，2H)，3.15-3.00(m，4H)，2.95(s，3H)，2.05-1.80(m，2H)，1.80-1.65(m，2H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.2，173.9，156.9，151.9，135.9，135.5，132.3，131.6，128.9，128.6，122.9，63.1，54.8，54.7，50.3，37.4，36.8，36.7，32.1，25.5。

实施例179

N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基

丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例180的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.78(d，2H)，7.27(d，2H)，7.09(d，2H)，7.02(d，2H)，4.71-4.67(m，1H)，4.10-4.06(m，1H)，3.88(s，3H)，3.41-3.31(m，1H)，3.28-3.07(m，6H)，2.97(s，3H)，1.81-1.50(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ168.3，168.2，159.2，150.9，145.9，129.5，125.6，125.3，123.5，116.9，109.6，57.2，50.2，48.7，44.6，31.4，30.8，30.6，25.7，19.3。

实施例180

丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物是按照实施例2所述方法通过期货适当起始原料而制备。

NMR数据如下：

¹HNMR(CDCl₃)：δ7.76(d，2H)，7.34(d，1H)，7.14(d，2H)，7.03-6.97(m，4H)，5.08-5.04(m，1H)，4.77(m，1H)，4.05-4.03(m，1H)，3.86(s，3H)，3.37-3.34(m，1H)，3.26-3.19(m，1H)，3.10-3.01(m，4H)，2.98(s，3H)，2.02(m，1H)，1.56-1.46(m，3H)，1.25(d，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.8，170.3，163.4，154.8，150.5，132.9，130.1，129.9，127.6，121.6，114.3，69.4，62.1，55.4，53.2，49.5，37.1，36.5，36.2，29.7，24.0，21.5，21.4。

实施例181

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-氧代-硫代吗啉-3-羰基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二

甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例182的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.90(m，1H)，7.78(m，2H)，7.40(m，2H)，7.26(m，2H)，7.03(m，2H)，5.14(m，1H)，4.64(m，2H)，3.81(m，1H)，3.71(m，2H)，3.19(m，1H)，3.14(m，3H)，3.02(m，4H)，2.84(m，1H)， 2.60(m，1H)，2.42(m，4H)，2.21(m，1H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.22，173.93，169.59，156.88，152.08，152.05，146.44，146.26，137.75，137.63，135.61，134.96，131.79，131.64，131.55，131.39，128.75，128.66，123.35，123.06，57.03，54.88，54.66，51.64，42.69，42.51，40.34，37.12，36.83，36.66，32.76，21.51。

实施例182

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-氧代-硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例49的制备所述方法制成。硫代吗啉基团氧化为1-氧代-硫代吗啉基团是按照Larsson和Carlson(Acta Chemica.Scan.1994，48，517-525)所述方法。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.72(m，2H)，7.69(m，2H)，7.31(m，2H)，7.11(m，2H)，7.07(m，2H)，6.96(m，2H)，4.79(m，1H)，4.54(m，1H)，3.80(m，4H)，3.04(4H)，2.92(m，3H)，2.64(m，1H)，2.43(m，4H)，1.44(s，3H)，1.36(s，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ169.8，166.5，166.，3154.6，150.5，150.4，144.9，144.4，135.7，135.3，132.8，130.5，130.1，29.9，127.4，126.9，122.1，121.4，82.6，82.2，55.6，53.9，53.1，50.6，48.1，47.8，41.7，40.5，38.3，36.4，36.1，31.1，27.5，21.2。

实施例183

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.72-7.60(m，2H)，7.87-7.37(m，1H)，7.13-7.11(m，3H)，7.01(d，2H)，5.08-5.04(m，1H)，4.81-4.74(m，1H)，4.09-4.06(m，1H)，3.39-3.35(m，1H)，3.26-3.19(m，1H)，3.12-2.97(m，8H)，2.06-2.03(m，1H)，1.66-1.57(m，3H)，1.26(d，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.50，170.40，154.90，153.60，150.70，150.30，133.30，132.90，130.10，125.00，121.80，121.80，118.50，112.80，69.60，62.20，53.20，49.60，37.10，36.60，36.30，30.10，24.20，21.59，21.56。

实施例184

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例183的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.10(d，1H)，7.84-7.77(m，1H)，7.69-7.65(m，1H)，7.53-7.45(m，1H)，7.28(d，2H)，7.02(d，2H)，4.72-4.68(m，1H)，4.19-4.16(m，1H)，3.43-3.39(m，1H)，3.31-3.21(m，2H)，3.13-3.05(m，4H)，2.97(s，3H)，1.86-1.61(m，4H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.2，174.1，164.7，156.9，154.9，152.0，151.6，135.8，135.6，131.6，129.7，122.9，119.7，118.8，63.1，54.7，50.5，37.4，36.8，36.6，31.9，25.5。

实施例185

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例92的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.71(m，2H)，7.33(m，1H)，7.07(d，2H)，6.91(d，2H)，6.36(d，1H)，4.95(m，1H)，4.61(m，1H)，4.03(m，2H)，3.16(m，2H)，3.13(m，4H)，3.07(m，1H)，2.93(s，9H)，1.43(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.07，169.45，164.42，155.06，155.44，154.81，152.21，152.17，150.58，148.81，148.64，134.90，134.85，132.41，130.29，124.82，124.71，124.66，121.97，119.07，118.76，117.52，117.23，82.92，55.98，53.20，50.10，49.40，41.76，36.41，36.16，35.99，27.64。

实施例186

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例185的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ6.22(m，1H)，6.03(m，1H)，5.84(m，1H)，5.58(m，2H)，5.38(m，2H)，3.33(m，1H)，3.01(m，1H)，2.57(m，1H)，2.14(m，1H)，1.91(m，1H)，1.66(m，3H)，1.44(s，3H)，1.35(m，3H)，1.32(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ173.97，167.89，156.94，153.53，152.07，150.00，137.48，135.17，131.63，126.54，126.43，123.20，120.21，119.96，118.84，118.57，57.25，54.82，51.29，49.86，43.29，37.21，36.85，36.67。

实施例187

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-(硫代吗啉-4-基羰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例82的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.64(d，2H)，7.33(d，2H)，7.25(d，2H)，7.08-6.97(m，3H)，4.76(m，1H)，4.57(d，1H)，4.38(d，1H)，3.83(s，1H)，3.95-3.78(m，4H)，3.09(m，2H)，2.69(m，4H)，2.43(s，3H)，1.44(s，9H)，1.16(s，3H)，1.08(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ169.78，168.36，153.53，150.28，144.84，133.53，132.76，130.51，130.03，128.19，121.58，82.69，73.42，54.56，53.78，50.46，47.05，46.40，37.80，29.06，27.76，27.37，27.04，23.86，21.52。

实施例188

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例187的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.77(d，2H)，7.37(d，2H)，7.28(d，2H)，7.22(d， 1H)，7.03(d，2H)，5.35(brs，1H)，4.91(m，1H)，4.60(d，1H)，4.39(d，1H)，3.91(s，1H)，3.96-3.28(m，4H)，3.30-3.07(m，2H)，2.67(m，4H)，2.45(s，3H)，1.10(s，3H)，1.08(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ173.09，169.45，153.81，150.28，145.02，133.42，132.61，130.60，130.12，128.13，121.86，73.28，54.51，53.31，50.48，47.08，46.47，36.97，28.97，27.35，27.03，23.70，21.52。

实施例189

基甲酰氧基)苯基丙氨酸乙酯的合成

本标题化合物按照实施例117的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.89(s，1H)，7.81(s，1H)，7.19(d，2H)，7.00(m，3H)，4.87(m，1H)，4.54(d，1H)，4.42(d，1H)，4.18(q，2H)，3.95(s，3H)，3.81(s，1H)，3.11(111，2H)，3.08(s，3H)，2.99(s，3H)，1.30(s，3H)，1.25(t，3H)，1.16(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.98，168.34，154.91，150.71，139.62，132.88，130.28，121.85，117.71，73.77，61.66，54.80，53.16，50.53，39.64，37.63，36.60，36.36，28.98，24.00，13.92。

实施例190

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例191的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ9.09(s，1H)，8.82(m，1H)，8.20(m，1H)，7.56(m，1H)，7.23(d，2H)，7.07(d，1H)，5.58(brs，1H)，4.83(m，1h)，4.56(m，2H)，4.07(s，1H)，3.14(m，2H)，3.07(s，3H)，2.99(s，3H)，1.26(s，3H)，1.18(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ173.04，168.29，155.16，153.39，150.60，147.96，136.43，133.91，133.06，130.66，130.50，124.65，122.14，121.91，73.43， 54.58，53.21，50.38，37.18，36.64，36.38，29.25，23.64。

实施例191

氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例56的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺593

计算值C₂₇H₃₆N₄O₇S₂·0.5H₂O：C，53.88；H，6.07；N，9.27。

实测值：C，53.98；H，6.07；N，9.27。

实施例192

N-(吡啶-2-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸异丙酯的合成

替换为2-吡啶磺酰氯(参见Corey等，J.Org.Chem.1989，54，389-393)并且按照实施例56的制备方法，得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.59(d，1H)，8.00-7.89(m，2H)，7.78(d，1H)，7.53-7.49(m，1H)，7.16(d，2H)，7.01(d，2H)，5.05-4.99(m，1H)，4.85-4.78(m，1H)，4.60-4.57(m，1H)，3.44-3.35(m，2H)，3.25-3.19(m，1H)，3.07(s，3H)，3.06-3.01(m，1H)，2.97(s，3H)，2.19-2.13(m，1H)，1.88-1.71(m，2H)，1.55(m，1H)，1.22-1.19(m，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.90，170.30，156.20，154.80，150.50，150.00，138.00，133.10，130.10，127.00，123.40，121.60，69.20，62.80，53.30，49.60，37.20，36.40，36.20，29.80，24.30，21.42，21.40。

实施例193

酸的合成

本标题化合物是由实施例192的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.67(d，1H)，8.27(d，1H)，8.07-8.02(m，1H)，7.96-7.91(m，1H)，7.65-7.61(m，1H)，7.27(d，2H)，7.01(d，2H)，4.72-4.69(m，1H)，4.58-4.54(m，1H)，3.44-3.37(m，2H)，3.28-3.24(m，1H)，3.13-3.05(m，4H)，2.96(s，3H)，1.94-1.89(m，2H)，1.70-1.63(m，2H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.5，174.4，174.2，157.7，156.9，151.9，139.9，135.6，131.6，128.8，124.7，122.9，64.1，54.8，54.7，50.9，37.5，36.8，36.7，31.9，25.6。

实施例194

N-(吡啶-2-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例192的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成.

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.64-8.62(m，1H)，7.98-7.92(m，2H)，7.56-7.51(m，1H)，7.28-7.21(m，3H)，7.01(d，2H)，5.01-4.97(m，1H)，4.88-4.85(m，2H)，4.80(d，1H)，4.63(d，1H)，4.19(s，1H)，3.11-3.07(m，5H)，2.98(s，3H)，1.28(s，3H)，1.26-1.18(m，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.4，155.5，154.9，150.7，150.4，138.2，133.0，130.4，127.5，123.5，121.8，73.5，69.5，54.7，53.3，51.0，37.6，36.6，36.4，29.3，23.9，21.52，21.50。

实施例195

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例194的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.70-8.69(m，1H)，8.07-8.01(m，1H)，7.92-7.89(m，1H)，7.67-7.63(m，1H)，4.77-4.67(m，3H)，4.30(s，1H)，3.23-3.06(m，5H)，2.97(s，3H)，1.27-1.18(m，6H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.1，171.2，157.0，151.9，151.6，139.9， 135.7，131.8，131.7，129.0，124.6，122.9，74.3，61.6，55.7，54.9，51.9，37.6，36.8，36.7，30.1，24.9。

实施例196

基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例49的制备所述方法通过替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.67(d，2H)，7.30(d，2H)，7.12(d，2H)，6.97(d，2H)，6.86(d，1H)，5.05(m，1H)，4.70(m，2H)，3.90(m，1H)，3.31(m，1H)，3.06(m，4H)，2.97(s，3H)，2.68(m，1H)，2.50(m，1H)，2.44(s，3H)，2.29(m，1H)，2.13(m，1H)，1.24(s，3H)，1.22(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.35，167.55，155.00，150.61，144.20，136.80，132.51，130.24，130.14，127.20，121.82，69.48，55.14，53.55，43.26，36.43，36.16，25.21；24.56，21.48，21.31。

实施例197

N-(3-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.68(d，1H)，7.61-7.52(m，2H)，7.36(dt，1H)，7.21(d，2H)，7.02(d，2H)，6.94(d，1H)，5.05(sept，1H)，4.85(q，1H)，4.59(d，1H)，4.41(d，1H)，3.88(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.23(d，3H)，1.16(s，3H)，1.12(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.1，162.6，154.9，150.7，137.9，132.8，131.3，130.4，123.9，121.8，121.0，115.4，73.5，69.6，54.5，53.2，50.5，37.6，36.6，36.3，29.0，23.7，21.6，21.5。

实施例198

N-(2-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.92-7.87(m，1H)，7.67-7.59(m，1H)，7.33-7.24(m，2H)，7.21(d，2H)，7.03(d，2H)，6.93(d，1H)，5.03(Sept，1H)，4.83(q，1H)，4.67(d，1H)，4.63(d，1H)，4.03(s，1H)，3.16-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.31(s，3H)，124(d，3H)，1.22(d，3H)，1.19(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.1，159.2，154.9，150.7，136.0，132.9，132.0，130.3，124.6，121.8，117.6，73.3，69.6，54.8，53.2，50.3，37.6，36.6，36.3，29.1，23.9，21.6，21.5。

实施例199

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.77-7.71(m，1H)，7.70-7.65(m，1H)，7.40-7.31(m，1H)，7.20(d，2H)，7.02(d，2H)，6.87(d，1H)，5.05(Sept，1H)，4.88-4.82(m，1H)，4.55(d，1H)，4.44(d，1H)，3.91(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.23(d，3H)，1.23(s，3H)，1.18(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.4，167.9，154.9，150.7，133.1，132.7，130.4，124.4，121.8，118.5，118.0，73.6，69.7，54.6，53.1，50.5，37.6，36.6，36.3，29.2，23.7，21.6，21.5。

实施例200

N-(3，5-二氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

实施例201

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.94-7.86(m，1H)，7.20(d，2H)，7.03(d，2H)，7.02-6.95(m，2H)，6.88(d，1H)，5.03(Sept，1H)，4.82(q，1H)，4.67(d，1H)，4.61(d，1H)，4.01(s，1H)，3.16-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.36(s，3H)，1.23(d，3H)，1.21(d，3H)，1.20(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，167.9，154.9，150.7，133.7，132.8，130.3，121.8，112.1，106.1，73.4，69.6，54.9，53.2，50.4，37.6，36.6，36.3，29.1，23.9，21.6，21.5。

实施例202

N-(4-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.82(d，2H)，7.53(d，2H)，7.21(d，2H)，7.02(d，2H)，6.93(d，1H)，5.05(Sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.55(d，1H)，4.41(d，1H)，3.87(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.23(d，3H)，1.16(s，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.1，154.9，150.7，140.4，134.5，132.8，130.4，129.7，129.5，121.8，73.5，69.6，54.6，53.1，50.5，37.6，36.6，36.3，29.1，23.8，21.6，21.0。

实施例203

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.88(t，1H)，7.78-7.75(m，1H)，7.64-7.61(m，1H)，7.51(t，1H)，7.21(d，2H)，7.02(d，2H)，6.92(d，1H)，5.05(sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.58(d，1H)，4.40(d，1H)，3.88(s，1H)，3.18-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.23(d，3H)，1.16(s，3H)，1.14(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.0，154.9，150.7，137.7，135.7，133.9，132.8，130.7，130.3，127.9，126.2，121.8，73.6，69.96，54.5，53.2，50.5，37.6，36.6，36.3，29.1，23.7，21.6，21.5。

实施例204

N-(2-氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.08(dd，1H)，7.54-7.52(m，2H)，7.45-7.39(m，1H)，7.19(d，2H)，7.02(d，2H)，6.79(d，1H)，5.00(sept，1H)，4.78(d， 1H)，4.75-4.68(m，1H)，4.69(d，1H)，4.19(s，1H)，3.09(s，3H)，3.06(d，2H)，3.00(s，3H)，1.38(s，3H)，1.23(s，3H)，1.23(d，3H)，1.19(d，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.1，154.9，150.7，135.6，134.4，132.8，132.7，132.4，130.3，127.3，121.8，73.3，69.5，54.7，53.3，50.4，37.6，36.6，36.3，29.6，23.7，21.6，21.5。

实施例205

N-(3，4-二氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.97(d，1H)，7.70(dd，1H)，7.63(d，1H)，7.20(d，2H)，7.02(d，2H)，6.86(d，1H)，5.05(sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.55(d，1H)，4.43(d，1H)，3.92(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.26(d，3H)，1.22(d，3H)，1.23(s，3H)，1.18(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，167.9，154.9，150.7，138.7，136.1，134.2，132.7，131.4，130.3，129.8，127.1，121.8，73.6，69.7，54.6，53.1，50.5，37.5，36.6，36.3，29.2，23.7，21.6，21.5。

实施例206

N-(3，5-二氯苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.76(d，2H)，7.62(t，1H)，7.20(d，2H)，7.03(d，2H)，6.85(d，1H)，5.05(sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.57(d，1H)，4.42(d，1H)，3.92(s，1H)，3.18-3.04(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.23(d，3H)，1.27(s，3H)，1.18(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，167.8，154.9，150.7，139.1，136.5，133.7，132.7，130.3，126.2，121.8，73.7，69.7，54.6，53.1，50.5，37.5，36.6，36.3，29.2，23.7，21.6，21.5。

实施例207

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.85(m，1H)，7.76(m，1H)，7.63(m，1H)，7.53(m，1H)，7.06(d，2H)，6.96(d，2H)，6.37(m，1H)，5.01(m，1H)，4.62(m，1H)，4.01(m，2H)，3.26(m，1H)，3.06(s，3H)，2.96(m，7H)，1.49(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.0，164.5，154.9，150.6，140.0，136.1，134.2，132.5，131.3，130.2，127.4，125.5，122.2，82.8，56.0，53.3，49.9，49.2，41.7，36.5，36.3，36.0，27.8。

实施例208

N-(3，4-二氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.91(m，1H)，7.66(m，2H)，7.06(d，2H)，6.94(d，2H)，6.33(m，1H)，4.98(m，1H)，4.60(m，1H)，3.49(m，3H)，3.12(m，2H)，3.04(s，3H)，3.00(m，2H)，2.94(s，3H)，1.44(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.0，164.3，154.8，150.6，138.8，137.9，134.3，132.4132.0，130.3，129.2，126.4，122.1，83.0，55.5，53.1，50.2，49.5，41.8，36.5，36.2，36.0，27.7。

实施例209

N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.81(d，2H)，7.22(d，2H)，7.06-6.99(m，5H)，5.04(sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.56(d，1H)，4.39(d)，3.88(s，3H)，3.83(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.22(d，3H)，1.15(s，3H)，1.12(s，3H)。

¹³C，NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.5，163.8，154.9，150.7，132.9，130.4，130.3，127.4，121.7，114.5，73.5，69.5，55.6，54.6，53.2，50.5，37.7，36.6，36.3，29.1，23.9，21.6，21.5。

实施例210

N-(3-甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.47-7.45(m，2H)，7.37-7.36(m，1H)，7.21(d，2H)，7.19-7.15(m，1H)，7.04-6.98(m，3H)，5.04(sept，1H)，4.88-4.82(m，1H)，4.58(d，1H)，4.40(d，1H)，3.89(s，1H)，3.87(s，3H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.23(d，3H)，1.15(s，3H)，1.08(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.3，160.2，154.9，150.7，136.9，132.9，130.5，130.4，121.7，120.2，120.0，112.6，73.4，69.6，55.7，54.5，53.2，50.4，37.7，36.6，36.3，29.1，23.7，21.6，21.5。

实施例211

N-(2-甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.92(dd，1H)，7.54(dd，1H)，7.21(d，2H)，7.07-7.00(m，4H)，6.96(d，1H)，5.01(sept，1H)，4.83-4.76(m，1H)，4.73(d，1H)，4.61(d，1H)，4.17(s，1H)，3.93(s，3H)，3.14-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.36(s，3H)，1.22(d，3H)，1.21(s，3H)，1.19(d，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.7，157.7，154.9，150.6，135.4，133.0，132.5，130.3，125.2，121.7，120.5，112.6，73.3，69.5，56.0，54.8，53.3，50.4，37.7，36.6，36.3，29.2，24.1，21.6，21.5。

实施例212

N-(3，4-二甲氧基苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基

氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.50(dd，1H)，7.31(d，1H)，7.21(d，2H)，7.05-7.01(m，3H)，6.97(d，1H)，5.04(sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.56(d，1H)，4.40(d，1H)，3.95(s，3H)，3.94(s，3H)，3.89(s，1H)，3.17-3.03(m，2H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.25(d，3H)，1.22(d，3H)，1.16(s，3H)，1.14(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.5，154.9，153.5，150.7，149.4，132.9，130.4，127.6，122.3，121.7，110.6，110.3，73.5，69.6，56.3，56.1，54.6，53.2，50.5，37.7，36.6，36.3，29.2，23.8，21.6，21.5。

实施例213

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.89(m，1H)，7.16(m，2H)，6.97(m，4H)，6.77(d，1H)，4.72(m，1H)，4.60(m，1H)，3.92(m，1H)，3.29(m，1H)，3.09(m，5H)，2.93(s，3H)，2.70(m，2H)，2.55(m，1H)，2.10(m，1H)，1.42(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.0，168.0，167.7，137.1，164.4，164.3，161.1，160.9，157.7，157.5，154.8，150.5，132.7，132.6，132.4，130.4，124.0，123.8，121.7，112.2，111.9，106.5，106.1，105.8，82.6，55.4，53.9，43.5，36.4，36.2，27.7，26.8，25.5。

实施例214

N-(3，4-二氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例208的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.04(m，1H)，7.68(m，2H)，7.52(m，1H)，7.21(d，2H)，7.02(d，2H)，5.22(m，1H)，4.63(m，1H)，4.22(m，1H)，3.71(m，1H)，3.57(m，1H)，3.30(m，3H)，3.08(s，3H)，3.02(m，3H)，2.97(s，3H)。

¹³CNMR(CD₃OD)：δ174.0，168.0，156.9，152.1，140.7，139.3，135.2，133.2，131.6，130.7，128.3，123.2，57.2，54.9，54.6，51.7，51.4，43.3，37.3，36.9，36.7。

实施例215

N-(3-氯苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例207的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.94(m，1H)，7.77(m，2H)，7.58(m，1H)，7.46(d，1H)，7.19(d，2H)，7.07(d，2H)，5.23(m，1H)，4.63(m，1H)，4.20(m，1H)，3.71(m，1H)，3.43(m，1H)，3.26(m，4H)，3.17(s，3H)，2.95(m，5H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ168.0，152.1，142.5，136.8，135.0，132.7， 131.6，128.6，1.27.1，123.3，57.2，54.9，51.4，51.2，43.2，37.2，36.8，36.7。

实施例216

N-(3-氯-4-氟苯磺酰基)-L-(1，1-二氧代硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.93(d)，7.90(m)，7.29(s)，7.27(d)，7.04(d)，4.60(m)，4.46(d)，3.90-3.40(m)，3.10(s)，2.98(s)，1.43(s)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ171.5，166.5，156.9，151.9，135.2，131.3，129.9，127.9，127.8，123.1，117.8，117.5，101.4，83.7，57.9，56.0，42.9，37.3，36.9，36.7，28.1。

实施例217

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例49和117所述方法来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR：(CDCl₃)：δ7.77.(s)，7.63(s)，7.08(d)，6.93(d)，6.76(d)，6.71(d)，5.50.(d)，5.22(s)，4.82(t)，4.61(q)，3.83(s)，3.25(dt)，3.04(m)，2.90(s)，2.05(dd)，1.34(s)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ169.3，166.8，154.7，150.4，138.4，132.4，132.2，130.2，121.4，118.3，105.4，82.5，55.2，53.6，53.3，39.5，38.3，36.6，36.3，36.1，27.6，23.5。

实施例218

N-(3，4-二氟苯磺酰基)-L-(硫吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ7.88(m，1H)，7.70(m，1H)，7.57(m，1H)，7.23(d，2H)，7.03(d，2H)，6.83(d，1H)，5.63(dd，1H)，5.07(t，1H)，4.58(m，1H)，3.22-3.00(m，3H)，3.09(s，3H)，2.98(s，3H)，2.07(dd，1H)，1.44(s，9H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ171.3，169.3，156.9，152.0，135.0，131.6，126.5，122.9，120.2，119.9，119.4，118.7，118.4，106.4，83.6，56.5，55.6，37.1，36.8，36.6，28.1，25.2。

实施例219

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫代脯氨酰基-L-(硫代吗啉-4-基羰氧

基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ9.09(s，1H)，8.88(m，1H)，8.16(m，1H)，7.50(m，1H)，7.22(d，2H)，7.01(d，2H)，6.91(d，1H)，5.05(m，1H)，4.85(m，1H)，4.60(d，1H)，4.46(d，1H)，3.89(s，1H)，3.93-3.83(m，4H)，3.11(m，2H)，2.69(m，4H)，1.29-1.16(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，167.8，154.3，153.5，150.4，148.7，135.8，133.1，132.9，130.4，124.0，121.8，73.7，69.7，54.7，53.2，50.5，47.1，46.4，37.6，29.1，27.4，27.0，23.8，21.6，21.5。

实施例220

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例218的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.89(s，1H)，7.57-7.46(m，2H)，7.35(d，1H)，7.32-7.22(m，1H)，7.09(d，2H)，6.91(d，2H)，6.64(d，1H)，5.50(d，1H)，4.89(s，1H)，4.88-4.79(m，1H)，3.17-3.02(m，3H)，3.02(s，3H)，2.93(s，3H)，1.75(dd，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ173.6，167.7，155.5，152.0，151.8，150.1，148.4，132.8，130.4，124.6，121.5，118.7，118.5，117.5，117.3，117.1，106.9，54.9，53.0，36.4，36.2，36.0，23.4。

实施例221

N-(2，5-二氯噻吩-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基

氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.18(d，2H)，7.11(s，1H)，7.00(d，2H)，6.87(d，1H)，5.03-4.99(m，1H)，4.84-4.81(m，1H)，4.65-4.56(m，2H)，4.07(s，1H)，3.10-3.01(m，5H)，2.98(s，3H)，1.37(s，3H)，1.22(s，3H)，1.21(s，3H)，1.18(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：6170.3，167.7，154.9，150.7，132.9，132.8，131.9，130.3，128.0，127.0，121.8，73.4，69.6，54.8，53.2，50.5，37.5，36.6，36.3，29.1，23.8，21.6，21.5。

实施例222

N-(甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基

羰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.89(s，1H)，7.80(s，1H)，7.21(d，2H)，7.01(m，3H)，5.03(m，1H)，4.83(m，1H)，4.54(d，1H)，4.40(d，1H)，3.95(s，3H)，3.86(m，4H)，3.80(s，1H)，3.09(m，2H)，2.68(m，4H)，1.28(s，3H)，1.22(m，6H)，1.16(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：6170.4，168.3，153.5，150.4，139.3，133.3，132.9，130.4，121.7，117.6，73.8，69.7，54.8，53.2，50.5，47.1，46.439.6，37.6，29.0，27.4，27.1，24.0，21.6，21.5。

实施例223

N-(8-喹啉磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ9.01-8.99(m，1H)，8.56-8.53(m，1H)，8.27-8.23(m，1H)，8.07-8.04(m，1H)，7.66-7.61(m，2H)，7.55-7.51(m，1H)，7.17(d，2H)，7.01(d，2H)，5.27-5.23(m，1H)，5.07-4.98(m，1H)，4.84-4.76(m，1H)，3.34-3.20(m，3H)，3.06-2.98(m，4H)，2.97(s，3H)，2.15-2.09(m，1H)，1.64-1.51(m，3H)，1.23(d，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ172.0，170.5，154.9，151.5，150.6，143.9，136.8，135.6，134.9，134.1，133.3，130.2，129.2，125.6，122.3，121.7，69.3，62.8，53.5，48.7，37.3，36.5，36.3，29.7，24.3，21.6，21.6。

实施例224

N-(8-喹啉磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲-酰氧基)苯基丙氨

酸的合成

本标题化合物是由实施例223的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ9.03-9.01(m，1H)，8.49-8.42(m，2H)，8.23-8.20(m，1H)，8.09-8.07(m，1H)，7.73-7.61(m，2H)，7.25(d，2H)，7.00(d，2H)，5.30-5.27(m，1H)，4.73-4.69(m，1H)，3.38-3.21(m，3H)，3.09-3.02(m，4H)，2.95(s，3H)，1.86(m，1H)，1.78-1.73(m，1H)，1.58-1.50(m，2H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ175.3，174.2，164.7，156.9，152.9，145.2，138.5，136.9，135.8，135.6，131.6，130.9，126.9，123.8，122.9，63.9，54.7，50.0，37.5，36.8，36.7，31.6，25.5。

实施例225

N-(8-喹啉磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ9.05-9.03(m，1H)，8.53-8.49(m，1H)，8.26-8.22(m，1H)，8.08-8.05(m，1H)，7.65-7.60(m，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.19(d，2H)，7.06(d，1H)，7.00(d，2H)，5.17(d，1H)，4.94(m，1H)，7.74-4.78(m，2H)，4.66(s，1H)，3.08-2.99(m，8H)，1.20-1.16(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.2，168.9，154.9，151.5，150.6，144.2，136.7，134.4，134.4，133.1，130.3，129.2，125.5，122.3，121.7，73.2，69.3，54.8，53.3，50.6，37.6，36.6，36.3，29.2，24.1，21.5，21.4。

实施例226

N-(8-喹啉磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例225的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ9.06-9.04(m，1H)，8.45-8.39(m，2H)，8.23-8.14(m，1H)，7.72-7.61(m，2H)，7.32(d，2H)，7.03(d，2H)，5.12(d，1H)，4.87(d，1H)，4.69-4.64(m，2H)，3.28-3.02(m，5H)，2.98(s，2H)，1.18(s，3H)，1.08(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.1，171.8，157.1，152.9，152.0，145.5，138.4，137.3，135.8，135.6，135.1，131.8，130.9，126.8，123.8，122.9，73.7，55.9，54.8，51.7，37.6，36.8，36.7，30.2，25.0。

实施例227

N-(3-磺酰胺基-4-氯-苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.45(d，1H)，7.91(d，1H)，7.67(d，1H)，7.13(d，2H)，7.06(d，1H)，7.01(d，2H)，5.90(brs，2H)，5.06-5.02(m，1H)，4.79-4.72(m，1H)，4.14-4.10(m，1H)，3.42-3.39(m，1H)，3.25-3.14(m， 2H)，3.07(s，3H)，3.04-2.97(m，1H)，2.96(s，3H)，1.98-1.96(m，1H)，1.72-1.62(m，3H)，1.28-1.25(m，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.8，170.7，155.1，150.6，141.4，136.9，136.1，132.9，132.8，131.9，130.3，128.7，121.9，69.8，62.1，53.3，49.6，36.9，36.6，36.4，30.4，24.3，21.6，21.6。

实施例228

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(1-氧代硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例182的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.77(d，2H)，7.72(d，2H)，7.33(m，2H)，7.20(m，2H)，7.12(d，2H)，7.01(m，2H)，5.10(m，1H)，5.01(m，1H)，4.84(m，1H)，4.75(m，1H)，3.80(m，3H)，3.05(m，4H)，2.96(m，3H)，2.74(m，1H)，2.42(m，4H)，1.30-1.20(m，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.6，170.4，166.8，166.7，154.9，150.7，150.6，145.1，144.8，135.8，135.5，132.7，130.6，130.4，130.3，130.0，127.7，127.1，122.4，121.8，69.8，69.4，55.8，53.7，52.9，50.8，48.2，47.9，42.0，41.2，38.4，36.6，36.5，36.3，31.2，21.5，21.5。

实施例229

N-(2，4-二氟苯磺酰基)-L-(1-氧代硫代吗啉-3-羰基)-L-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.91(m，1H)，7.30(m，2H)，6.97(m，4H)，4.71(m，1H)，4.55(m，1H)，3.90(m，2H)，3.77(m，1H)，3.11(m，4H)，2.85(m，3H)，2.80(m，1H)，2.60(m，2H)，1.46(s，9H)，1.39(s，9H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.0，168.0，167.9，166.4，166.2，164.6，164.4，162.7，161.4，161.2，157.9，157.8，154.8，150.6，150.4，132.8，132.5， 132.4，130.9，130.4，130.1，123.3，123.1，122.2，121.6，121.1，122.6，122.2，111.9，106.6，106.3，105.9，82.8，82.3，55.8，54.1，53.2，51.6，49.2，48.7，43.1，42.3，38.7，36.5，36.2，31.8，27.7。

实施例230

基甲酰氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙基酯的合成

将实施例161的产物(1g.，0.72mmol)溶解在新戊醇中(5mL)。加入异丙醇钛(IV)(260mg.，0.9mmol)并且在惰性气氛和100℃下加热48小时。减压下除去过量新戊醇并且该残余物通过快速柱色谱纯化(硅胶，1％MeOH在CHCl₃中)得到标题化合物，其为白色固体(1.02g，97％)。

物理数据如下：

MS.(+)ESI[M+H]⁺ 610；[M+NH₄]⁺ 627(100％)。

计算值C₂₉H₃₉N₅O₇S：C，53.18；H，6.45；N，11.49。

实测值：C，53.46；H，6.38；N，11.06。

实施例231

氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙基酯的合成

实施例173的产物按照实施例230的制备所述方法进行酯交换反应。该化合物通过快速柱色谱纯化(硅胶，1％MeOH在CHCl₃中)，随后由乙酸乙酯重结晶得到标题化合物，其为白色固体(720mg，47％)。

物理数据如下：

计算值C₂₈H₃₈N₄O₇S₂：C，55.43；H，6.31；N，9.23。

实测值：C，55.37；H，6.32；N，9.22。

实施例232

基甲酰氧基)苯基丙氨酸环丙基甲酯的合成

实施例161的产物按照实施例230的制备所述方法进行酯交换反应。得到标题化含物，其为白色固体，随后通过快速柱色谱纯化(硅胶，1％MeOH在CHCl₃中)，(860mg，70％)。

物理数据如下：

计算值C₂₆H₃₅N₅O₇S₂：C，52.6；H，5.94；N，11.8。

实测值：C，52.49；H，5.93；N，11.62。

实施例233

基甲酰氧基)苯基丙氨酸甲酯的合成

本标题化合物按照实施例161的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS(+)ESI[M+H]⁺554；[M+NH₄]⁺571(100％)。

计算值C₂₃H₃₁N₅O₇S₂·0.2EtOAc：C，50.04；H，5.75；N，12.26。

实测值：C，50.12；H，5.69；N，12.19。

实施例234

N-(吡啶-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧

基)苯基丙氨酸乙酯的合成

实施例173的产物按照实施例230的制备所述方法进行酯交换反应。该化合物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2％MeOH在CHCl₃中)，随后由乙酸乙酯重结晶得到标题化合物，其为白色固体(1.2g，61％)。

物理数据如下：

计算值C₂₅H₃₂N₄O₇S₂：C，53.18；H，5.71；N，9.92。

实测值：C，53.14；H，5.72；N，9.57。

实施例235

氧基)苯基丙氨酸环丙基甲酯的合成

实施例173的产物按照实施例230的制备所述方法进行酯交换反应。该化合物通过快速柱色谱纯化(硅胶，2％MeOH在CHCl₃中)并且由EtOAc/己烷(1g，65％)。

物理数据如下：

计算值C₂₇H₃₄N₄O₄S₂：C，54.9；H，5.8；N，9.48。

实测值：C，54.77；H，5.65；N，9.46。

实施例236

基甲酰氧基)苯基丙氨酸2-甲氧基苯基酯的合成

向实施例139的化合物(1.79g，3.31mmol)、2-甲氧基-苯酚(0.45g，3.64mmol)和BOP(1.61g，3.64mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液内0℃下加入三乙胺(0.7mL，4.97mmol)。该反应混合物随后缓慢升温至25℃同时在氩气下搅拌24小时。加入100mL饱和盐水中止该反应且用EtOAc萃取。有机萃取液依次用2N HCl(3次)、饱和碳酸氢钠(3x)和饱和盐水(2x)洗涤，用MgSO₄干燥，并且蒸发得到2.1g的粗产物。快速色谱(洗脱剂：96-4二氯甲烷∶EtOAc)得到1.85g的白色固体，将其用己烷研制得到1.68g(79％)的白色晶体，mp 72-75℃。

物理数据如下：

计算值C₂₉H₃₅N₅O₈S₂：C，59.94；H，5.46；N，10.85。

实测值：C，53.45；H，5.62；N，10.31。

实施例237

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸)正丁酯的合成

实施例139的化合物(2g)在正丁醇(50mL)中的溶液在冰冷却下用HCl气体饱和。将该混合物室温下搅拌36小时，真空蒸发72小时至几乎变干，随后在5％NaHCO₃和氯仿之间分配。干燥有机层且真空蒸发得到900mg的标题化合物。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺ 596。

实施例238

基甲酰氧基)苯基丙氨酸正丙基酯的合成

N-(1-甲基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸(2g)在2-丙醇(50mL)中的溶液在冰冷上用 HCl气体饱和。将该混合物室温下搅拌36小时，真空蒸发至几乎变干，随后在5％NaHCO₃和氯仿之间分配。干燥有机层且真空蒸发得到1500mg的标题化合物。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺582。

实施例239

基甲酰氧基)苯基丙氨酸2，2-二甲基丙酰氧基甲酯的合成

将碘化钾(324mg)一次加入实施例139的化合物(1.08g)、新戊酸氯甲酯(294mg)和粉状K₂CO₃(222mg)在DMF(5mL)中的混合物内。该反应混合物在室温下搅拌过夜，在水(12mL)和乙酸乙酯(60mL)之间分配。分离的有机层用冰冷的0.1N硫代硫酸钠、水和盐水洗涤，随后用MgSO₄干燥，过滤和真空蒸发得到750mg的标题化合物。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺654。

实施例240

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-苯基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸

叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例4所述方法通过替换适当起始原料而制成。得到白色固体，mp.60-65℃。

物理数据如下：

MS(+ESI)694.3[M+NH₄]⁺。

计算值C₃₆H₄₄N₄O₇S·0.5C₄H₈O₂：C，63，31；H，6.71；N，7.77。

实测值：C，63.12；H，6.58；N，7.69。

实施例241

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4′-(乙氧基羰基)哌啶-1-基羰氧基)苯

基丙氨酸叔丁基酯的合成

该氨基甲酸酯通过用4-硝基苯基氯甲酸酯处理Tos-Pro-Tyr-叔丁基酯来制备，随后加入六氢异盐酸乙酯(三乙胺，二氯甲烷，冷冻至0℃C，随后室温下搅拌过夜)。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶，95∶5 EtoAc∶Et₃N)得到白色固体.(.78g，39％)。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.15(d，1H，J＝7.68Hz)；7.70(d，2H，J＝8.34Hz)；7.40(d，2H，J＝7.90Hz)；7.22(d，2H，J＝8.56Hz)；7.00(d，2H；J＝8.56Hz)；4.37(m，1H)，4.07(q，2H，J＝7.14，14.08Hz)；4.03(m，2H)；3.90(m，1H)；3.34(m，1H)；3.09(m，2H)；3.00(m，3H)；2.59(m，1H)；2.39(s，3H)；1.87(m，2H)；1.58(m，5H)；1.41(m，1H)；1.35(s，9H)；1.18(t，3H，7.14Hz)。

IR(KBr，cm^-1)：3410，2990，2950，1725，1680，1510，1430，1355，1220，1200，1170，1000，675，595。

MS((+)ESI，m/z(％))689(100[M+NH₄]⁺)；691(37[M+NH₄]⁺)。

计算值C₃₄H₄₅N₃O₉S：C，60.79；H，6.75；N，6.25。

实测值：C，60.59；H，6.67；N，6.22。

实施例242

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-(4′-(2′-氨基乙基)吗啉代)氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例152的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ12.75(s，1H)；8.08(d，1H)；7.68(d，2H)；7.60(t，1H)；7.39(d，2H)；7.21(d，2H)；6.97(d，2H)；4.46(m，1H)；4.08(m，1H)；3.56(m，4H)；3.26(m，3H)；3.09(m，2H)；2.94(m，1H)；2.49(s，6H)；2.48(s，3H)；1.5(m，3H)；1.38(m，1H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2975，1725，1650，1500，1350，1150，650，575，550。

MS((-)ESI，m/z(％))587(100[M-H]⁺)。

计算值C₂₈H₃₆N₄O₈S.HCOOH.0.5H₂O：C，54.11；H，6.11；N，8.70。

实测值：C，53.96；H，6.02；N，8.68。

实施例243

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[4-(羧基)哌啶-1-基羰氧基苯基丙氨

酸的合成

本标题化合物是由实施例241的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ12.50(bs，2H)，8.08(d，1H，J＝7.90Hz)；7.69(d，2H，J＝8.34Hz)；7.39(d，2H，J＝7.90Hz)；7.22(D，2H，J＝.8.56Hz)；6.99(d，2H，J＝8.56Hz)；4.46(m，1H)；4.09(m，1H)；4.00(m，1H)；3.90(m，1H)；3.30(m，1H)；3.09(m，3H)；2.95(m，2H)；2.49(m，1H)；2.38(s，3H)；1.86(m，2H)；1.36-1.61(m，6H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2960，1720，1535，1430，1350，1200，1160，670，590，550。

MS((+)ESI，m/z(％))605(100[M+NH₄]⁺)。

计算值C₂₈H₃₃N₃O₈SH₂O：C，55.53；H，5.65；N，6.94。

实测值：C，55.23；H，5.82；N，6.59。

实施例244

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-双-(2-羟基乙基)氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸异丙酯的合成

该氨基甲酸酯是通过用4-硝基苯基氯甲酸酯处理Tos-Pro-Tyr-iPr酯来制备，随后加入二乙醇胺(三乙胺，二氯甲烷，冷冻至0℃，室温下搅拌过夜)。粗产物经过快速色谱纯化(硅胶，98∶2 EtOAc∶EtOH)得到白色泡沫.(0.180g，28％)。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.26(d，1H，J＝7.90Hz)；7.69(d，2H，J＝8.12Hz)；7.40(d，2H，J＝8.12Hz)；7.23(D，2H，J＝8.56Hz)；6.99(d，2H，J＝8.56Hz)；4.87(m，1H)；4.83(t，1H，J＝5.49Hz)；4.76(t，1H，J＝5.49Hz)；4.42(m，1H)；4.08(m，1H)；3.58(m，2H)；3.51(m，2H)；3.44(m，2H)；3.34(m，3H)；2.99-3.09(m，3H)；2.39(s，3H)；1.59(m，3H)；1.41(m，1H)；1.16(d，3H，J＝6.15Hz)；1.12(d，3H，J＝6.15Hz)。

IR(KBr，cm^-1)3420，2940，1725，1535，1670，1520，1460，1410，1350，1220，1160，1110，670，600，550。

MS((+)ESI，m/z(％))606(15[M+H]⁺)；623(100[M+NH₂]⁺)。

计算值C₂₉H₃₉N₃O₉SH₂O：C，56.66；H，6.56；N，6.84。

实测值：C，56.66；H，6.41；N，6.72。

实施例245

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[3-(羟基甲基)哌啶-1-基羰氧基]苯基

丙氨酸异丙酯的合成

该氨基甲酸酯通过用4-硝基苯基氯甲酸酯处理Tos-Pro-Tyr-iPr酯来制备，随后加入3-哌啶甲醇(三乙胺，二氯甲烷，冷冻至0℃，室温下搅拌过夜)。粗产物经快速色谱纯化(硅胶，3∶2EtOAc∶Hex)得到白色泡沫(0.519g，67％)。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.26(d，1H，J＝7.90Hz)；7.69(d，2H，J＝8.12Hz)；7.40(d，2H，J＝8.12Hz)；7.22(d，2H，J＝S.56Hz1；6.98(d，2H，J＝8.34Hz)；4.85(M，1H)；4.57(bs，1H)；4.42(m，1H)；3.99-4.09(m，3H)；3.85(m，1H)；3.31(m，1H)；3.22(m，1H)；2.91-3.10(m，4H)；2.80(m，1H)；2.55(m，1H)；2.39(s，3H)；1.51-1.72(m，6H)；1.42(m，2H)；1.16(d，3H，J＝6.15Hz)；1.11(d，3H)，J＝6.15Hz)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2990，2940，2880，1725，1520，1430，1350，1220，1165，1100，660，600，550。

MS((-)ESI，m/z(％))614(30[M-H])。

计算值C₃₁H₄₁N₃O₈S：C，60.47；H，6.71；N，6.82。

实测值：C，59.83；H，6.61；N，6.59。

实施例246

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-三氟甲烷磺酰基哌嗪-1-基羰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例128所述方法并替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS(+ESI)：733[M+H]⁺.

计算值C₃₁H₃₉F₃N₄O₉S₂.0.10C₄H₈O₂：C，50.20；H，5.40；N，7.55。

实测值：C，50.25；H，5.46；N，7.07。

实施例247

N-(4-(N-苯基脲)苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸叔丁酯的合成

实施例107(250mg，0.51mmol)、异氰酸苯基酯(62mg，0.56mmol)和三乙胺(76，L，0.56mmol)的混合物在氩气下加热回流。回流持续过夜。减压下除去溶剂且该残余物经快速色谱纯化(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶1，此后用EtOAc)短短的标题化合物，其为米色泡沫(160mg，46％)，mp 112-115℃。

物理数据如下：

MS(+ESI)[M+NH₄]⁺697(100％)。

实施例248

N-(2-三氟乙酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉-7-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二

甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例2所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.70-7.66(m，2H)，7.35-7.30(m，1H)，7.27-7.21(m，1H)，7.14-7.10(m，2H)，7.01(d，2H)，5.09-4.95(m，1H)，4.89-4.75(m，2H)，4.14-4.07(m，1H)，3.93-3.85(m，2H)，3.35-3.20(m，2H)，3.13-2.97(m，9H)，2.05-2.01(m，1H)，1.63(1.50(m，3H)，1.20(d，6H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.7，170.6，170.5，156.3，155.8，154.9，150.6，140.1，139.2，135.1，135.1，13.2，133.0，133.0，132.9，130.2，130.1，129.9，126.9，126.4，126.3，125.8，121.7，118.3，114.5，69.6，62.1，62.0，53.2，49.6，46.6，46.5，45.1，42.7，40.9，37.1，36.6，36.3，30.1，30.0，29.2，27.8，24.2，24.2，21.6，21.6。

实施例249

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

替换为N-甲基吡唑-3-磺酰氯(参见欧洲专利申请，095925)并按照实施例56的制备方法，得到标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.45(d，1H)，7.21(d，2H)，7.09(d，1H)，7.01(d，2H)，6.71(d，1H)，5.03-4.98(m，1H)，4.87-4.84(m，1H)，4.60-4.59(m，2H)，4.05(s，1H)，3.97(s，3H)，3.12-3.01(m，5H)，2.98(s，3H)，1.22-1.15(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，168.3，154.9，150.7，146.7，133.0，131.9，130.3，121.7，108.9，73.5，69.5，54.7，53.3，50.7，39.9，37.7，36.6，36.3，28.8，24.1，21.5，21.50。

实施例250

N-(1-甲基吡唑-3-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例249的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ8.25(d，1H)，7.76(d，1H)，7.32(d，2H)，7.01(d，2H)，6.70(d，1H)，4.74-4.71(m，1H)，4.68(d，1H)，4.56(d，1H)，4.12(s，1H)，3.97(s，3H)，3.24-3.07(m，5H)，2.97(s，3H)，1.14(s，3H)，1.13(s，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.1，171.4，157.0，151.9，148.2，135.7，134.2，131.8，122.9，109.6，74.4，55.6，55.0，51.5，40.0，37.6，36.8，36.7，29.6，24.8。

实施例251

N-(吡啶-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例56的制备所述方法而制成，其中4-吡啶磺酰氯N-氧化物用于代替3-吡啶磺酰氯(参见Marsais及其同事，J.Org.Chem.1987，52，1133-1136)。N-氧化物的脱氧反应采用Aoyagi及其同事，Synthesis 1997，891.的方法完成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.89-8.87(m，2H)，7.72-7.70(m，2H)，7.19(d，2H)，7.01(d，2H)，6.79(d，1H)，5.05-5.01(m，1H)，4.85-4.82(m，1H)， 458(d，1H)，4.45(d，1H)，3.91(s，1H)，3.11-3.02(m，5H)，2.99(s，3H)，1.28-1.16(m，12H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.3，167.7，154.9，151.5，150.7，144.2，132.7，130.3，121.8，120.9，73.6，69.7，54.6，53.，50.4，37.5，36.6，36.3，29.1，23.6，21.6，21.5。

实施例252

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例251的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)δ8.78(d，2H)，7.42(d，1H)，7.69(d，2H)，7.35(d，2H)，7.06(d，2H)，4.69-4.61(m，3H)，4.16(s，1H)，3.25-3.19(m，1H)，3.13-3.05(m，4H)，2.97(s，3H)，1.25(s，6H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ174.1，170.5，157.0，152.2，152.0，147.2，135.8，131.8，123.1，122.7，73.9，55.6，54.9，54.4，37.5，36.8，36.7，30.1，24.8。

实施例253

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基

氨基乙基)氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

将起始酸(500mg)、(2S)-2-氨基-3-{4-[(2-二甲基氨基乙基)-甲基氨基甲酰基氧基]苯基}丙酸叔丁酯(730mg)、HOBt(235mg)和4-甲基吗啉(0.87mL)在DMF(10mL)中的溶液在冰浴中0℃下搅拌。将1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(360mg)加入到该溶液内。10分钟后撤去冰浴。该反应在室温下搅拌3小时。加入乙酸乙酯(20mg)。该溶液用饱和NaHCO₃溶液(30mL)洗涤2次，此后用盐水洗涤。该溶液用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂，并且该残余物在硅胶上经快速层析得到385mg的标题化合物。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺663。

实施例254

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例253的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺617。

实施例255

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)噻丙基-L-4-(N-甲基-N-(2-二甲基氨基

乙基)氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例253的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺607。

实施例256

甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例254的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+H]⁺561。

实施例257

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氨-4-(4-甲基哌嗪-1-基

羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp：64-67℃。

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺699。

计算值C₃₁H₄₀ClFN₄O₇S₂H₂O：C，51.90；H，5.9；N，7.8。

实测值：C，51.53；H，5.50；N，7.62。

实施例259

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基

甲酰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例258的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

MS：[M+1]603。

计算值C₂₄H₂₇FN₃O₇S₂：C，49.02；H，4.63；N，7.15。

实测值：C，49.25；H，4.89；N，6.73。

实施例260

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(硫代吗啉-4-基羰

氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例82的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.111-114℃。

物理数据如下：

MS：+ESI[M+NH₄]⁺719。

计算值C₃₀H₃₇ClFN₃O₇S：C，50.02；H，5.46；N，5.8。

实测值：C，50.23；H，5.10；N，5.50。

实施例261

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例82的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.77-81℃。

物理数据如下：

MS：[M+NH₄]⁺705。

计算值C₂₉H₃₅ClFN₃O₇S₃：C，50.61；H，5.13；N，6.1。

实测值：C，50.33；H，5.07；N，5.94。

实施例262

甲酰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.65-69℃。

物理数据如下：

MS：[M+NH₄]⁺647。

计算值C₂₇H₃₃ClFN₃O₇S₂：C，51.46；H，5.28；N，6.4。

实测值：C，51.29；H，5.19；N，6.50。

实施例263

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨

基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.68-72℃。

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺626。

计算值C₂₈H₃₆ClN₃O₇S₂：C，53.77；H，5.80；N，6.71。

实测值：C，53.26；H，5.8；N，6.63。

实施例264

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基

羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯的合成

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺685。

计算值C₃₀H₃₈ClN₄O₇：C，52.59；H，5.59；N，8.18。

实测值：C，52.09；H，5.48；N，7.77。

实施例265

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-3-氯-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)]苯

基丙氨酸异丙酯的合成

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺580。

计算值C₂₇H₃₄ClN₃O₇S 0.5H₂O：C，55.04；H，6.00；N，7.13。

实测值：C，55.06；H，5.71；N，6.93。

实施例266

N-(4-氟苯磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-3-氯-4-(4-(2′-吡啶基)-哌

嗪-l-基羰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯的合成

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺748。

计算值C₃₄H₃₉C1FN₅O₇S₂：C，54.57；H，5.25；N，9.3。

实测值：C，54.26；H，5.10；N，9.07。

实施例267

嗪-1-基羰氧基)]苯基丙氨酸叔丁酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.80-86℃。

物理数据如下：

MS：[M+H]⁺762。

计算值C₃₅H₄₁ClFN₅O₇S₂：C，55.14；H，5.42；N，9.19。

实测值：C，54.67；H，5.40；N，8.69。

实施例268

氨酸异丙酯的合成

物理数据如下：

计算值C₂₆H₃₂N₄O₉S：C，54.16；H，5.59；N，9.72。

实测值：C，53.69；H，5.24；N，9.52。

实施例269

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-吡咯基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨

酸异丙酯的合成

本标题化合物是由实施例268的产物利用方法4所述方法制备。

数据如下：

计算值C₂₆H₃₄N₄O₇S：C，57.13；H，6.27；N，10.25。

实测值：C，56.30；H，6.12；N，10.05。

实施例270

异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例82的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

物理数据如下：

计算值C₂₉H₃₇N₃O₇S₂：C，57.69；H，6.18；N，6.96。

实测值：C，57.36；H，5.99；N，6.76。

实施例271

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(4-苯基氨基甲酰基哌嗪-1-基羰氧基)

苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例的制备所述方法并替换适当起始原料来制成.

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.62(s，1H)；8.11(d，1H)；7.73(d，2H)；7.45(m，4H)；7.26(m，3H)；7.04(m，2H)；6.95(m，1H)；6.25(d，1H)；4.90(m，1H)；4.50(m，1H)；4.11(m，1H)；3.6(br，4H)；3.4(br，4H)；3.10(m，2H)；3.00(m，1H)；2.40(s，3H)；1.60(m，3H)；1.40(m，1H)；1.18(d，3H)；1.12(d，3H)。

IR(KBr，cm^-1)3400-3500(br)，2950，2900，1725，1650，1540，1450，1240，1210，1000，760，675，580，540。

MS((+)ESI，m/z(％))706(100[M+H]⁺)。

计算值C₃₆H₄₃N₅O₈S.0.35EtOAc：C，60.98；H，6.27；N，9.51。

实测值：C，50.31；H，6.16；N，9.33。

实施例272

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例271的产物利用方法7所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ12.8(s，1H)；8.62(s，1H)；8.11(d，1H)；7.73(d，2H)，7.45(m，4H)；7.26(m，3H)；7.04(m，2H)；6.95(m，1H)；6.25(d，1H)；4.50(m，1H)；4.11(m，1H)；3.6(br，4H)；3.4(br，4H)；3.10(m，2H)；3.00(m，1H)；2.40(s，3H)；1.60(m，3H)；1.40(m，1H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，1725，1650，1540，1450，1240，1210，1000，760，675，580，540。

MS((-)ESI，m/z(％))662(100[M-H]⁺)。

实施例273

N-(1-正-丁基吡唑-4-磺酰基)-L-(5，5-二甲基)硫脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲

基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例137的制备所述方法并替换适当起始原料来制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.89(s，1H)，7.83(s，1H)，7.21(d，2H)，7.06(d，1H)，7.02(d，2H)，5.04(sept，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.57(d，1H)，4.41(d，1H)，4.16(t，2H)，3.78(s，1H)，3.14(dd，1H)，3.06(dd，1H)，3.09(s，3H)，3.00(s，3H)，1.85(pent，2H)，1.36-1.23(m，2H)，1.27(s，3H)，1.24(d，3H)，1.21(d，3H)，1.16(s，3H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ170.4，168.3，154.9，150.7，139.2，131.8，130.3，121.8，117.0，73.8，69.6，54.8，53.2，52.7，50.6，37.7，36.6，36.3，31.8，28.9，24.0，21.6，21.5，19.4，13.3。

实施例274

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(吡啶-4-基羰基)哌嗪-1-基羰氧基)苯

基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.69(dd，2H)，8.28(d，1H)；7.71(d，2H)；7.43(111，4H)；7.26(d，2H)；7.04(d，2H)；4.86(m，1H)；4.42(m，1H)；4.05(m，1H)；3.4-3.8(brm，9H)；3.05(m，3H)；2.40(s，3H)；1.60(m，3H)；1.40(m，1H)；1.18(d，3H)；1.15(d，3H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，1725，1650，1510，1200，1160，1100，1010，650，600，550。

MS((+)ESI，m/z(％))692(100[M+H]⁺)。

计算值C₃₅H₄₁N₅O₉S.0.75H₂O：C，59.60；H，6.07；N，9.93

实测值：C，59.45；H，5.86；N，9.88。

实施例275

基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例4的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

MS[(-)ESI][M-H])516。

实施例276

氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例165的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

MS[(-)ESI][M-H])518

实施例277

氨酸异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例2的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.166-167℃。

实施例278

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例107的产物利用方法11所述方法制备。

物理数据如下：

计算值C₂₃H₂₈N₄O₇S：C，47.34；H，4.84；N，9.60。

实测值：C，47.57；H，5.20；N，8.75。

实施例279

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-氧代脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基

丙氨酸叔丁基酯的合成

将乙腈(3mL)冷却至-40℃(CH₃CN/干冰)。加入草酰氯(0.10mL)。将N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-羟基脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯(300mg)和干燥DMSO(.008mL)溶解在乙腈(4mL)中且加入到上述溶液中。干燥条件下将该反应在-40℃下搅拌半小时。取三乙胺(0.33mL)加入到该溶液。5分钟后撤去干冰浴。室温下搅拌该反应1小时。真空蒸发溶剂，并且加入乙酸乙酯(15mL)。该混合物用水(3x)洗涤，随后用盐水洗涤。该溶液用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂，并且该残余物在硅胶柱上洗脱得到150mg的标题化合物，mp.84-85℃。

实施例280

丙氨酸的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.84-85℃。

实施例281

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4，4-二氟)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)

苯基丙氨酸异丙酯的合成

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+NH₄]⁺599。

实施例282

苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例281的产物利用方法7所述方法制备。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+NH₄]557。

实施例283

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-(4-苯甲酰基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙

氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.27(d，1H)；7.69(d，2H)；7.45(m，7H)；7.249d，2H)；7.02(d，2H)；4.86(m，1H)；4.42(m，1H)；4.07(m，1H)；3.65(br s，4H)；3.45(br s，4H)；3.35(m，1H)；3.05(m，3H)；2.38(s，3H)；1.60(m，3H)；1.40(m，1H)；1.18(d，3H)；1.11(d，3H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，1725，1675，1625，1510，1425，1350，1250，1175，1110，1010，700，660，590，550。

MS((+)ESI，m/z(％))708(100[M+NH₂])。

计算值C₃₆H₄₂N₄O₈S.0.5H₂O：C，61.79；H，6.19；N，8.01。

实测值：C，61.64；H，6.10；N，7.72。

实施例284

N-(1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰基)-L-吡咯基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰基氧

基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

该氨基甲酸酯通过用4-硝基苯基氯甲酸酯处理1-甲基咪唑-4-磺酰基-Pro-Try-iPr酯，随后加入二甲基胺(三乙胺，二氯甲烷，0C，室温下搅拌过夜.)来制成。该粗产物经快速色谱纯化(硅胶，95∶3∶2EtOAc∶EtOH∶Et₃N)，随后由EtOAc重结晶。得到白色固体，mp162-164℃(8.7g，66％)。

物理数据如下：

计算值C₂₄H₃₃N₅O₇S：C，53.82；H，6.21；N，13.08。

实测值：C，53.47；H，6.13；N，12.96。

实施例286

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-

4-基羰氧基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例285的产物利用方法11所述方法制备，mp.116-118℃。

实施例287

N-(4-氰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸

异丙酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.70-71℃。

实施例288

N-(4-酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基

丙氨酸甲酯的合成

使甲醇(干燥)冷却至0℃。将HCl吹入该溶液达15分钟使该溶液饱和。加入实施例277且在0℃下搅拌该反应混合物30分钟，随后室温下搅拌24小时。蒸发溶剂。加入存在于甲醇中的NH₃(2M，5mL)。室温下搅拌该反应24小时。蒸发溶剂。该残余物通过反相HPLC在CH₃CN∶H₂O(20∶80)中纯化。在12.45分钟的保留时间时，分离出产物且冷冻干燥得到本标题化合物。

NMR数据如下：

¹H NMR(在DMSO中)多重峰位于1.47-1.55ppm(1H)，1.63-1.72ppm(3H′s)，单峰位于2.87ppm(3H′s)，单峰位于3.02ppm(3H′s)，多重峰位于3.05-3.10ppm(2H′s)，多重峰位于3.17-3.22ppm(1H)，多重峰位于3.37-3.42ppm(1H)，单峰位于3.62ppm(3H′s)，多重峰位于4.21-4.23ppm(1H)，四重峰位于4.48-4.56ppm(1H)，双峰位于7.00-7.03ppm(2H′s)，双峰位于7.23-7.26ppm(2H′s)，宽峰位于7.20-7.50ppm，双峰位于8.02-8.03ppm(4H′s)，双峰位于8.48-8.52ppm(1H)。

实施例289

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-羟基脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙

氨酸叔丁基酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法并替换适当起始原料来制成，mp.80-82℃。

实施例290

氨酸的合成

将N-(甲苯-4-磺酰基)-L-4-羟基脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯(160mg)溶解在甲酸(7mL)中。该反应在室温下搅拌6小时。蒸发溶剂且该残余物用反相HPLC在20∶80 CH₃CN/水中纯化。在5.85分钟的保留时间时，得到50mg的该标题化合物，mp.170-172℃。

实施例291

氨酸的合成

本标题化合物是由实施例283的产物利用方法11所述方法制备。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ12.8(s，1H)；8.27(d，1H)；7.69(d，2H)；7.45(m，7H)；7.24(d，2H)；7.02(d，2H)；4.42(m，1H)；4.07(m，1H)；3.65(br s，4H)；3.45(br s，4H)；3.35(m，1H)；3.05(m，3H)；2.38(s，3H)；1.60(m，3H)；1.40(m，1H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，1725，1675，1625，1510，1425，1350，1260， 1175，1110，1010，700，660，590，550。

MS((+)ESI，m/z(％))666(100[M+NH₄]⁺)。

计算值C₃₃H₃₆N₄O₈S.0.66H₂O：C，60.00；H，5.69；N，8.48

实测值：C，60.36；H，5.70；N，7.81。

实施例292

N-(4-酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨

酸甲酯的合成

本标题化合物按照实施例287和288的制备所述方法制成。

物理数据如下：

MS：[(+)ESI][M+H]604。

实施例293

N-(3-氟苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基羰氧基)苯基丙氨酸的合

成

本标题化合物是由实施例166的产物利用方法11所述方法制备，mp.82-83C。

实施例294

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[N-甲基-N-(2-(N-甲基-N′-甲苯磺酰

基-氨基)乙基)氨基甲酰氧基]苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ8.27(d，1H)；7.71(d，2H)；7.69(d，2H)；7.40(m，4H)；7.24(d，2H)；6.99(d，2H)；4.86(m，1H)；4.43(m，1H)；4.06(m，1H)；3.51(m，1H)；3.2-3.35(m，3H)；2.9-3.2(重叠m，7H)；2.67(d，3H)；2.38(s，6H)；1.60(m，3H)；1.40(m，1H)；1.20(d，3H)；1.15(d，3H)。

IR(KBr，cm^-1)3400，2975，2950，1725，1680，1510，1450，1400，1280，1225，1150，1110，800，730，675，575，550。

MS((+)ESI，m/z(％))760(100[M+NH₄]⁺)。

计算值C₃₆H₄₆N₄O₉S₂：C，58.20；H，6.24；N，7.54。

实测值：C，57.90；H，6.30；N，7.34。

实施例295

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-[N-(2-(N′-苯基氨基羰氧基)乙基)氨

基甲酰氧基)]苯基丙氨酸异丙酯的合成

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ9.67(s，1H)；8.27(d，1H)；7.72(d，2H)；7.47(d，2H)；7.42(d，2H)；7.24(m，4H)；6.98(m，3H)；4.87(m，1h)；4.45(m，1H)；4.18(m，2H)；4.05(m，1H)；3.4(m，3H)；3.05(m，3H)2.40(s，3H)；1.6(m，3H)；1.40(m，1H)；1.2(d，3H)；1.15(d，3H)。

IR(K：Br，cm^-1)3350，2950，1725，1675，1600，1550，1500，1325，1200，1150，1100，650，575，525。

MS((+)ESI，m/z(％))698(100[M+NH₄]⁺)。

计算值C₃₄H₄₀N₄O₉S.0.21EtOAc.0.5H₂O：C，59.08；H，6.07；N，7.91。

实测值：C，59.08；H，6.02；N，7.80。

实施例296

N-(4-氟苯磺酰基)-L-4-(trans-羟基)脯氨酰基-L4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸异丙酯的合成

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+NH₄]583。

实施例297

N-(4-氟苯磺酰基)-L-4-(trans-羟基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰

氧基)苯基丙氨酸叔丁酯的合成

物理数据如下：

MS：[(+)ESI]，[M+NH₄]597。

实施例298

丙氨酸的合成

本标题化合物是由实施例288的产物利用方法5所述方法制备，mp.130-132℃。

实施例299

哌嗪-1，4-二羧酸二{4-[(2S)-2-叔丁氧基羰基-2-((4R)-5，5-二甲基-3-(甲苯-

4-磺酰基)噻唑烷-4-甲酰胺基)乙基]苯基}酯的合成

本标题化合物按照实施例4的制备所述方法制备，除了使用0.5当量的哌嗪之外。

物理数据如下：

计算值C₅₈H₇₄N₆O₁₄S₄；C，57.69；H，6.18；N，6.96。

实测值：C，58.01；H，6.07；N，6.68。

实施例300

哌嗪-1，4-二羧酸二-{4-[(2S)-2-羧基-2-((4R)-5，5-二甲基-3-(甲苯-4-磺酰基)

噻唑烷-4-甲酰胺基)乙基]苯基}酯的合成

本标题化合物是通过用甲酸水解实施例299的二叔丁酯来制成，得到白色泡沫(300mg，定量)。

物理数据如下：

计算值C₅₀H₅₈N₆O₁₄S₄：C，54.83；H，5.34；N，7.67

实测值：C，55.10；H，5.57；N，7.37。

通过上述方法制备的式I和Ia的其他化合物包括下表5中的实施例301-370。

此外，表5中实施例319、324、325、332、333、334、335和349举例如下：

实施例319

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)

苯基丙氨酸的合成

将起始的N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯(300mg)溶解在甲酸(15mL)中。将该反应在室温下搅拌72小时。蒸发溶剂且该残余物用反相HPLC、20-80％CH₃CN/水纯化。在10.75分钟的保留时间时，得到82mg的该标题化合物，mp：128-130℃.

实施例324

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-氧代)脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯

基丙氨酸的合成

将起始的N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-氧代)脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯(130mg)溶解在甲酸(7mL)中。该反应在室温下搅拌6小时。真空蒸发溶剂得到150mg的所需产物，mp：111-112℃。

实施例325

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-氧代)脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)

苯基丙氨酸的合成

将起始的N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-氧代)脯氨酰基-L-4-(4-甲基哌嗪-1-基羰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯(150mg)溶解在甲酸(7mL)。该反应在室温下搅拌6小时。真空蒸发溶剂，和该残余物用反相HPLC、20-80％CH₃CN/水纯化。保留时间是10.34分钟。将产物冷冻干燥得到82mg的标题化合物，mp：99-101℃。

实施例332

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-甲磺酰氧基)脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲

酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯的合成

0℃下和冰浴中，将起始的N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-羟基)脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁酯(300mg)和甲基磺酰氯溶解在THF(7mL)中。加入三乙胺(0.21mL)。10分钟后撤去冰浴。该反应混合物在室温下搅拌24小时。加入乙酸乙酯(20mL)。该混合物用柠檬酸(5％，20mL，2x)洗涤，并且用饱和NaHCO₃溶液(20mL)洗涤，随后用盐水洗涤。该溶液用MgSO₄干燥。蒸发溶剂，并且该残余物在硅胶柱洗脱。真空蒸发溶剂得到300mg的所需产物，mp：73-74℃。

实施例333

N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基

丙氨酸的合成

将起始的N-(4-氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸甲酯(300mg)和LiOH溶液(2M，0.6mL)加入到甲醇(6mL)。该反应在室温下搅拌7小时。真空蒸发溶剂，和该残余物用反相HPLC、20-80％CH₃CN/水纯化。保留时间为12.11分钟时，得到27mg的预期产物，mp：130-132℃。

实施例334

N-(4-氨基羰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基

丙氨酸的合成

将起始的N-(4-氨基羰基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸甲酯(300mg)和LiOH溶液(2M，0.5mL)加入到甲醇(6mL)。将该反应在室温下搅拌8小时。真空蒸发溶剂，并且该残余物用反相HPLC、20-80％CH₃CN/水纯化。保留时间为12.69分钟时，得到20mg的所需产物，mp：123-125℃。

实施例335

N-(4-酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙

氨酸的合成

将起始的N-(4-酰氨基苯磺酰基)-L-脯氨酰基-L-4-(硫代吗啉-4-基羰氧基)苯基丙氨酸甲酯(300mg)和LiOH溶液(2M，0.5mL)加入到甲醇(6mL)。将该反应在室温下搅拌8小时。真空蒸发溶剂，并且该残余物用反相HPLC、20-80％CH₃CN/水纯化。保留时间为11.78分钟时，得到25mg的所需产物，mp：123-125℃。

实施例349

酰氧基)苯基丙氨酸的合成

将起始的N-(甲苯-4-磺酰基)-L-(4-甲磺酰氧基)脯氨酰基-L-4-(N，N-甲基氨基甲酰氧基)苯基丙氨酸叔丁基酯(200mg)溶解在甲酸(5mL)中。该反应在室温下搅拌6小时。真空蒸发溶剂得到所需产物(195mg)，mp：83-84℃。

实施例371

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(α-甲基苄氧基)-L-苯基丙氨酸的合

成

室温下将N-(甲苯-4-磺酰基)-L脯氨酰基-L-酪氨酸甲酯(785mg，1.89mmol)溶解在DMF(20mL)中。向其中加入K₂CO₃(1.1eq，281mg)和1-溴乙基苯(1.1eq，284μL)。将该反应在室温下搅拌12小时。加入乙酸乙酯(100mL)，有机层用盐水洗涤数次(5×50mL)。有机层用MgSO₄干燥。过滤和减压下蒸发溶剂后，得到油。粗产物通过在硅胶上洗脱纯化(EtOAc/己烷(1∶4))。分离所需产物，收率为32％(330mg，0.6mmol)。随后在MeOH∶H₂O(1∶1)(15mL)中用NaOH(1.1eq，27mg)处理4小时将该甲酯(330mg.0.6mmol)转化为相应的酸4小时。加入EtOAc和水。收集水层且用1N HCl酸化至pH2.5，再用EtOAc萃取。有机层用MgSO₄干燥。过滤和减压下蒸发溶剂之后，分离处定量收率的泡沫。

NMR数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ＝7.71(bd，2H)，7.34(m，7H)，7.20(m，1H)，7.01(m，2H)，6.80(d，2H，J＝8.37Hz)，5.27(m，1H)，4.75(m，1H)，4.04(m，1H)，3.23-2.93(m，4H)，2.42(s，3H)，1.85(m，1H)，1.60(d，3H，J＝6.09Hz)，1.36-1.26(m，3H)。

¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ＝174.74，172.22，157.53，145.00， 143.77，133.42，130.76，130.58，129.14，128.60，128.48，127.94，126.15，116.57，76.39，62.73，53.90，50.09，37.09，25.07，24.52，22.17。

质谱：(FAB)537(M+H)。

实施例372

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(2-羧基苯氧基)-L-苯基丙氨酸的合成

0℃下将N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-L-酪氨酸甲酯(2.14g，5.16mmol)加入到60％在油中(1.1eq.，228mg)的氢化钠在二甲苯(50mL)中的混悬液内。将该反应混合物搅拌5分钟且加入溴化亚铜二甲基硫化物复合物(1.4eq.，1.48g)。该反应混合物在23℃下搅拌0.5小时。向其中加入2-碘代苯甲酸钠(1.5eq.，8.06mmol)，并且将该反应混合物回流12小时。加入EtOAc(100mL)，有机层用NH₄Cl、10％HCl和盐水洗涤，随后用MgSO₄干燥。粗物质在柱色谱(硅胶)上用CHCl₃∶MeOH(9∶1)洗脱，并且分离出油。该酸通过用NaOH(1.1eq)室温下在MeOH∶H₂O(1∶1)中处理4小时来制成。分离该而酸，其为泡沫状物质。

NMR数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ＝7.71(m，2H)，7.29(m，4H)，7.19(m，4H)，6.72(m，1H)，4.84(m，1H)，4.13(m，1H)，3.39(m，1H)，3.11(m，3H)，2.43(s，3H)，1.89(m，1H)，1.48(m，3H).

¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ＝172.67，157.84，155.89，155.04，145.17，133.61，133.19，133.08，131.69，131.02，130.64，128.42，127.87，124.24，120.04，119.61，116.12，62.81，50.31，37.28，30.69，24.81，22.15。

质谱：(FAB)553(M+H)。

实施例373

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-O-(苄基)-L-酪氨酸的合成

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-Pro-OH用(COCl)₂和DMF在CH₂Cl₂处理，蒸发后得到N-(甲苯-4-磺酰基)-L-Pro-Cl.该产物用L-Tyr(Bn)-OH和NaOH在THF和H₂O中处理，酸化、萃取、用MgSO₄干燥和蒸发后得到本标题化合物，其为澄清油。

NMR数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz)：δ＝8.04(d，J＝8.2，1H)，7.70(d，J＝8.1，2H)，7.42-7.21(m，6H)，7.15(d，J＝8.5，2H)，6.90(d，J＝8.5，2H)，5.04(s，2H)，4.49-4.42(m，1H)，4.13-4.09(m，1H)，3.33-3.27(m，2H)，3.10-2.89(m，3H)，2.38(s，3H)，1.60-1.35(m，4H)。

¹³C NMR(DMSO-d₆，75MHz)：δ＝172.63，170.8，157.0，143.6，137.2，133.8，130.3，129.8，129.4，128.9，128.4，127.6，125.3，114.4，69.1，61.3，53.4，49.0，35.8，30.4，23.8，21.0。

质谱：(+FAB，3-硝基苄醇)523(M+H)。

实施例374

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(1-H，2-氧代-3-甲基四氢嘧啶-1-基)-

L-苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由相应叔丁基酯利用方法11所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ＝7.73(d，2H)，7.58(d，1H)，7.34(d，2H)，7.21(d，2H)，7.17(d，2H)，4.79(q，1H)，4.15-4.11(m，1H)，3.68-3.63(m，2H)，3.48-3.39(m，3H)，3.27(dd，1H)，3.17(dd，1H)，3.15-3.07(m，1H)，2.99(s，3H)，2.43(s，3H)，2.16-2.08(m，2H)，2.00-1.98(m，1H)。

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.4，172.2，164.2，156.4，144.4，142.5，134.1，133.0，130.2，130.0，127.9，126.2，62.1，53.4，49.5，48.9，47.9，36.5；35.9，30.2，24.2，22.0，21.4。

实施例375

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-(2-甲氧基苯基)-L-苯基丙氨酸的合成

本标题化合物是由相应叔丁基酯利用方法11所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CD₃OD)：δ＝7.70(m，2H)，7.36(m，4H)，7.22(m，4H)，6.98(m，2H)，4.75(m，1H)，4.10(m，1H)，3.71(s，3H)，3.29(m，2H)，3.11(m，2H)，2.39(s，3H)，1.75(m，1H)，1.53(m，3H)。

¹³C NMR(CD₃OD)：δ＝174.4，174.2，158.1，145.9，138.9，136.7， 135.1，131.2，130.9，130.8，130.2，129.9，129.1，122.0，112.6，63.3，55.9，54.6，50.5，37.9，31.5，25.2，21.4。

实施例376

本标题化合物是由相应叔丁基酯利用方法11所述方法制成。

NMR数据如下：

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.41(d，1H)，8.21(s，1H)，8.03(d，1H)，7.98(s，1H)，7.74(d，2H)，7.39(d，1H)，7.33(d，2H)，4.72-4.68(m，1H)，4.17-4.13(m，1H)，3.54-3.34(m，3H)，3.20-3.12(m，1H)，2.82(s，6H)m2.43(s，3H)，2.09-2.04(m，1H)，1.79-1.59(m，3H).

¹³C NMR(CDCl₃)：δ＝173.7，171.8，154.5，147.2，144.4，137.8，135.5，133.2，130.1，127.9，126.4，62.2，53.0，49.5，38.5，36.0，30.3，24.4，21.4。

实施例377

N-(甲苯-4-磺酰基)-L-吡咯基-4-(2，4，5-三氧代-3-(3-氯苯基)-四氢咪唑-1-

基)-L-苯基丙氨酸苄基酯的合成

该化合物通过用草酰氯在二氯甲烷中处理N-(甲苯-4-磺酰基)-L-脯氨酰基-4-[(3-氯苯基脲基)-四氢咪唑-1-基]-L-苯基丙氨酸异丙酯而制成。粗产物经快速色谱纯化(硅胶，3∶2 Hex∶EtOAc)得到白色固体(0.410g，50％)。

MS((+)ESI，m/z(％)746(100[M+H]⁺)(746/7481Cl)。

实施例378

N-(苯基-磺酰基)-D-脯氨酰基-L-4-(2，6-二甲氧基苯基)苯基丙氨酸的合

成

本标题化合物是通过将2，6-二甲氧基苯基硼酸和4′-碘代苯基丙氨酸衍生物偶联来制成，得到二甲氧基联苯基丙氨酸类化合物，例如本标题化合物，上述偶联按照Hagamn等，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，2001；11(20)：2709-2713；Kamenecka等，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，2002；12(16)：2205-2208；和Doherty 等，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2003；13(11)：1891-1895所述方法进行。

实施例379

N-(3，5-二氯苯基-磺酰基)-D-脯氨酰基-L-4-[4-(甲基羰基氨基丁基)-2，5-

二氧代-咪唑啉-l-基]苯基丙氨酸的合成

本标题化合物按照WO01/54690所述方法制备。

实施例380

N-(2，6-二氯苯基-羰基)-L-4-(2，6-二甲氧基苯基)苯基丙氨酸的合成

本标题化合物通过偶联2，6-二甲氧基苯基硼酸和4′-碘代苯基丙氨酸衍生物来制成，得到二甲氧基联苯基丙氨酸类化合物例如本标题化合物，上述偶联采用WO 99/36393和Sircar等，Bioorganic & MedicinalChemistry，2002；10(6)：2051-2066.，所述方法进行。

实施例381

N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基

羰基]-L-酪氨酸异丙酯的合成

3-吡啶磺酰氯

该标题化合物的游离碱可以由3-吡啶磺酸(Aldrich)通过：Corey等，J.Org.Chem.1989，54(2)：389公开的方法制成。或者，该标题化合物的盐酸盐可以由3-吡啶磺酸(Aldrich)通过：Crowell等，J.Med.Chem.1989，32(11)：2436；Karaman等，J.Am.Chem.Soc.1992，114(12)：4889公开的方法制备。L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酸

本标题化合物可以由L-青霉胺(Aldrich)通过：Samanen等，J.Med.Chem.1989，32(2)：466；Nagasawa等，J.Med.Chem.1984，27(5)：591所公开的方法制备。

N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酸

pH＝7.4缓冲液是通过将磷酸氢二钠(43.2g，0.304mol)和磷酸二氢钠(11.8g，0.0870mol)溶解在H₂O中使体积达到1.0L来制成。搅拌的同时，向L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酸(25.4g，0.157mol)在700mL pH＝7.4缓冲液中的0℃溶液内加入3-吡啶磺酰氯(28.0g，0.157mol)在300mL CH₂Cl₂中的溶液。将该混合物搅拌24小时同时升至室温，并且加入3M H₂SO₄酸化至pH＝2，沉淀出黄色固体。该黄色固体通过过滤两相进行分离，分离出CH₂Cl₂层并蒸发得到另外的黄色固体。合并的黄色固体在700mL H₂O中搅拌1小时，溶解有关的戊基盐，并且再次通过过滤分离。合并两个水层且用EtOAc(3×500mL)萃取。EtOAc层用盐水洗涤，用硫酸钠处理，过滤和蒸发得到附加黄色固体。合并所有部分的黄色固体得到36.1g(76％)N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酸。

N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基-L-酪氨酸异丙酯

将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(4.83g，0.0253mol)在0℃下加入到N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酸(6.37g，0.0211mol)、L-酪氨酸异丙酯盐酸盐(5.48g，0.0211mol)、1-羟基苯并三唑(5.69g，0.0421mol)和4-甲基吗啉(2.32mL，2.13g，0.0211mol)溶于125mL DMF中的溶液内。将该混合物搅拌16小时同时升至室温，加入200mL EtOAc和200mL H₂O。振摇该混合物，分离水层，并且有机层用0.2M柠檬酸(2×100mL)、H₂O(2×100mL)、饱和NaHCO₃(2×100mL)、H₂O(2×100mL)和盐水(2×100mL)洗涤。有机层用硫酸钠处理，过滤和蒸发得到9.40g(86％)N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-L-酪氨酸异丙酯，其为黄色泡沫。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ9.08(bs，1H)，8.86(bs，1H)，8.16(dt，Jd＝8.1Hz，Jt＝2.0Hz，1H)，7.51(dd，J＝8.0Hz，J＝4.6)，7.07(d，J＝8.1Hz，2H)，6.87(d，J＝8.1Hz，1H)，6.74(d，J＝8.1Hz，2H)，5.96(bs，1H)，5.06(sept，J＝6.3，1H)，4.83(dt，Jd＝6.0Hz，Jt＝7.8Hz，1H)，4.57(d，J＝9.3Hz，1H)，4.46(d，J＝9.3Hz，1H)，3.91(s，1H)，3.09(dd，J＝14.1Hz，J＝5.4Hz，1H)，2.98(dd，J＝14.1Hz，J＝7.5Hz，1H)，1.25(t，J＝6.6Hz，6H)，1.18(s，3H)，1.13(s，3H).¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ170.5，168.0，155.2，154.2，148.6，135.9，130.7，127.6，124.1，115.5，105.5，73.7，69.7，54.7，53.4，50.5，37.5，29.2，23.7，21.62，21.55。N-[N-3-(吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯

将N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-L-酪氨酸异丙酯(1.51g，2.89mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(0.58g，2.89mmol)溶解在40mL CH₂Cl₂中，并且将该溶液搅拌15分钟同时在4∶1H₂O/EtOH和干冰的浆液中冷却至-15℃。向该溶液加入Et₃N-(1.00mL，0.73g，7.23mol)并且搅拌2分钟，并且该溶液在-15℃下搅拌1小时。将所得混悬液C加入1-甲基哌嗪(0.32mL，0.289g，2.89mmol)同时搅拌1分钟，将该混合物搅拌16小时同时升至室温。该混合物用40mL己烷稀释，并且用10％(w/v)K₂CO₃(4×50mL)洗涤直至水层中黄色消失(4-硝基苯酚)。有机层用盐水(75ml)洗涤，用硫酸钠处理，过滤和蒸发得到浅黄色残余物。该残余物通过色谱在硅胶上用70∶25∶5 CH₂Cl₂/EtOAc/EtOH洗脱得到1.53g(84％)N-[N-(3-吡啶基磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯，其为无色泡沫。¹H NMR(CDCl3，300MHz)δ9.09(d，J＝2.1Hz，1H)，8.87(dd，J＝4.9Hz，J＝1.6Hz，1H)，8.16(dt，Jd＝8.4Hz，Jt＝2.0Hz，1H)，7.51(dd，J＝8.2Hz，J＝4.9Hz，1H)，7.21(d，J＝8.4Hz，2H)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H)，6.89(d，J＝7.8Hz，1H)，5.05(sept，J＝6.4Hz，1H)，4.84(q，J＝7.0Hz，1H)，6.59(d，J＝9.9Hz，1H)，4.47(d，J＝9.9Hz，1H)，3.90(s，1H)，3.67(bs，2H)，3.58(bs，2H)，3.18-3.03(m，2H)，2.45(t，J＝10.2Hz，4H)，2.34(s，3H)，1：26(d，J＝6.0Hz，3H)，1.23(d，J＝6.6Hz，3H)，1.20(s，3H)，1.17(s，3H)。¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ170.4，167.8，154.3，153.7，150.6，148.7，135.8，133.1，133.0，130.4，133.0，121.8，73.7，69.7，54.8，54.6，54.5，50.5，46.1，44.3，43.8，37.6，29.1，23.8，21.6，21.5。

9.2体外和体内试剂的筛选

实施例A

测定候选化合物与VLA-4结合的体外测定法

使用体外测定法来评价候选化合物与α₄β₁整联蛋白的结合。在该测定法中结合的化合物可用于通过常规测定法(例如竞争性测定法)测定生物学样品中的VCAM-1水平。该测定法在IC₅₀值方面的灵敏度低至约1nM。

α₄β₁整联蛋白的活性是通过可溶性VCAM-1与Jurkat细胞(例如美国典型培养物保藏号TIB152、TIB153和CRL8163)的相互作用来测定的，所述Jurkat细胞是一种能表达高水平α₄β₁整联蛋白的人T-细胞系。VCAM-1与细胞表面以α₄β₁整联蛋白依赖性的方式相互作用(Yednock，等J.Biol.Chem.，1995，270：28740)。

重组可溶性VCAM-1是作为嵌合融合蛋白表达的，该融合蛋白在N-末端包含7个细胞外VCAM-1结构域，在C-末端包含人IgG1重链恒定区。按照上文中Yednock的方法制备和纯化VCAM-1融合蛋白。

Jurkat细胞按照上文中Yednock的方法，在补充有10％胎牛血清、青霉素、链霉素和谷氨酰胺的RPMI1640中培养。

将Jurkat细胞与1.5mM MnCl₂和5μg/mL15/7抗体在冰上孵育30分钟。Mn⁺²可以激活受体以增强配体结合，15/7是识别激活的/配体占据的α₄β₁整联蛋白构象的单克隆抗体并能使分子固定在该构象，由此稳定了VCAM-1/α₄β₁整联蛋白相互作用。Yednock等，同上。在该测定中可以使用其它研究人员制备的类似于15/7抗体的抗体(Luque等，1996，J.Biol.Chem.271：11067)。

然后将细胞与使用标准5-点连续稀释法稀释的浓度介于66μM至0.01μM之间的不同浓度的候选化合物一起保温30分钟。然后向Jurkat细胞中加入15μL可溶性重组VCAM-1融合蛋白，并在冰上保温30分钟(Yednock等，同上)。

然后将细胞洗涤2次，并以1∶200的比例重悬在PE-结合的山羊F(ab’)2抗-鼠IgG Fc(Immunotech，Westbrook，ME)中，并在冰上于黑暗条件下孵育30分钟。将细胞洗涤2次，并按照上文Yednock等人的方法用标准荧光激活细胞分选仪(“FACS”)分析。

IC₅₀低于约15μM的化合物对α₄β₁具有结合亲和力。

当在该测定中测试时，实施例1-381的化合物(或酯化合物的对应羧酸，如前体药物)均具有15μM或更低的IC₅₀

实施例B

用于测定候选化合物与α₄β₁结合的体外饱和测定法

以下描述的是测定在实验型自身免疫性脑脊髓炎(“EAE”)模型(在下一实施例中描述)或其它体内模型中表现出活性所需的化合物血浆水平的体外测定法。

将对数生长期的Jurkat细胞洗涤，并悬浮在含有20μg/ml15/7抗体(在上一实施例中描述的)的标准动物血浆中。

将Jurkat细胞稀释到(2倍稀释)含有使用标准12-点连续稀释法(标准曲线)稀释的浓度介于66μM-0.01μM之间的不同浓度已知候选化合物的标准血浆样本中，或者稀释到得自用候选化合物治疗的动物外周血液的血浆样本中。

然后将细胞在室温孵育30分钟，用含有2％胎牛血清和1mM氯化钙以及1mM氯化镁的磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)(测定培养基)洗涤以除去未结合的15/7抗体。

然后将细胞以1∶200的比例暴露于藻红蛋白-结合的山羊F(ab’)₂ 抗-鼠IgG Fc(Immunotech，Westbrook，ME)，并在4℃于黑暗中孵育30分钟，其中该山羊F(ab’)₂抗-鼠IgGFc已经事先通过与得自实验动物的5％血清共培养而吸附。

用测定培养基将细胞洗涤2次，然后重新悬浮在测定培养基中。然后按照Yednock等人在J.Biol.Chem.，1995，270：28740中描述的方法，用标准荧光激活细胞分选仪(“FACS”)分析。

然后将数据按照荧光-对-剂量的方式作图，例如以标准剂量-反应方式作图。在该曲线顶部平台得出的剂量代表在体内模型中获得效力所需的水平。

该测定还可用于确定将其它整联蛋白，例如α₉β₁整联蛋白-与α₄ β₁最相关的整联蛋白(Palmer等，1993，J.Cell Bio.，123：1289)的结合位点饱和所需的血浆水平。

因此，可使用用编码α₉整联蛋白的cDNA(Yokosaki等，1994，J.Biol.Chem.，269：26691)转染的人结肠癌细胞系，SW480(ATTC#CCL228)代替Jurkat细胞来进行上述测定，以测定α₉ β₁整联蛋白的结合。可使用表达其它α和β₁亚单位的SW480细胞作为对照。

使用该测定法，对于在该测定法中所测试的本发明化合物，已建立为在体内模型中获得α₄β₁和α₉β₁效力的所需血浆水平。

因此，本发明另一方面涉及治疗哺乳动物患者中由α₉β₁介导的疾病的方法，所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的本发明化合物。本发明化合物优选以上所述药物组合物的形式给药。有效的日剂量将取决于患者的年龄、体重以及可由临床医师轻易确定的患者的身体状况等因素。然而，在优选的实施方案中，本发明化合物以约20-500μg/kg/天的剂量给药。

实施例1

实验性变应性脑脊髓炎使用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代

脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的临床反转

用作多发性硬化动物模型的实验性变应性脑脊髓炎是用实验方法诱导的、细胞-介导的、中枢神经系统(CNS)的自身免疫炎症疾病。虽然偶尔观察到多核细胞，浸润通常由淋巴细胞和巨噬细胞组成(Traugott等.1985 Cell.Immunol.91：240-54；Traugott等.1986Cell.Immunol.99：395-410)。EAE在易感动物中通过用完全弗氏佐剂(CFA)中均质化的CNS抗原注射而主动诱导。EAE也可通过来自主动免疫动物的激活的髓磷脂-特定T细胞而被动传递(Paterson，1960，J.Exp.Med.111：119-36)。疾病易感性不仅取决于所用的诱导抗原核动物种类，还受动物的年龄、性别和商业来源的影响(Tsunoda等.，1996，J.Neuropath.Exp.Neurol.55：673-86)。

就如在MS中，临床EAE可以多个不同形式显示。在一些模型中动物显现随后自然恢复的急性的、单相的病症。然而在其他模型中，动物将显现慢性的复发疾病，以带有间歇周期性痊愈的复发性临床发作为特征(Tsunoda等.，1996)。EAE的慢性渐进形式可在成年的Hartley豚鼠中通过用佐剂中纯粹的CNS免疫而诱导(Wisniewski等.，1983，J.Neuropath.&Exp.Neurol.42：243-55；Karlik等.，1986 Neurology 36：1112-4；Karlik等.，1993，Magn.Reson.Med.30：326-31)，其中该动物呈现没有周期性痊愈或症状缓解的临床症状的渐进_化。组织学上，脱髓鞘作用的大量融合血小板伴随持续的单核CNS浸透。

材料&方法：EAE的动物和诱导。雌性Hartley豚鼠(Charles RiverCanada，St.Constant，Quebec)在受控制的光照条件下喂养且允许随意进食和饮水。在50个动物中(200-250g)通过0.6mL均匀的、同源的CNS组织和完全弗氏佐剂1∶1的混合物与另外的10mg/mL结核分枝杆菌(Difco)的颈、皮内注射诱导EAE。动物通过使用4-点临床等级的盲测进行日常评价，等级如下：0＝没有反常；0.5＝超过连续一天的体重减轻；1＝共济失调和不良的翻正反射；2＝下肢局部麻痹、小便失禁、便秘；3＝瘫痪；4＝终端瘫痪。

治疗体系。N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯是一种以高亲合力结合人和豚鼠4整联蛋白(抑制细胞粘附VCAM的IC₅₀＝1nm)的小分子。动物疾病在免疫后40天认为是慢性的。且由此治疗周期从该时间开始，持续10、20、30或40天。动物每天两次接受0.5mL盐(用于N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的赋形剂；n＝20)或者30mg/kgN-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯(n＝25)。用该剂量体系，始终维持N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的受体饱和水平(＞10nm)。一个亚组的动物接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯30天，随后撤消治疗且另外喂养10天(n＝5)。所有的治疗在皮下给药。

动物处死和组织学分析。未经处理的、慢性EAE动物(n＝5)连同非-EAE对照(n＝5))在40天处死。伴随每个10-天的间隔治疗，每个组处死5个动物(0.25mL戊巴比妥钠)，收集血样用于FACS分析(见下文)，脑和脊髓解剖和切片。使用三个脊柱切片，对应于脊索的腰、胸和颈区域。脑切为五个横切面。前三个近端的切片结合成整体，而后两个末梢切片为另一个整体。组织固定在10％福尔马林中且包埋在石蜡中。五纳米切片用苏木精-曙红(H-E)或砂罗铬-R-花青(SCR)染色且通过在四种类型的每个中的盲测评估：(1)脑膜炎症，(2)血管周的浸润，(3)脑炎或(4)脊髓炎和脱髓鞘(表6)。联合病理评价代表了每个动物中所有5个CNS切片的总体评价(超出可能的20个)。

表6：病理评分等级

M：脑脊膜中的炎症反应

0：无变化

1：通过单核细胞的血管周和/或脑膜浸润，涉及1-3血管

2：涉及4-6-血管

3：涉及6+血管

4：涉及几乎所有或所有血管的脑脊膜的致密浸润

P：实质性的血管周浸润

0：无变化

1：在Virchow-Robin区中1-3实质性的血管浸润

2：涉及4-6血管

3：涉及6+血管

4：涉及几乎所有或所有血管

E：脑炎或脊髓炎

0：没有神经实质细胞的侵入；小神经胶质或炎性细胞侵入神经实质细胞

1：一些离散细胞

2：通过来自一些血管周套细胞的侵入

3：涉及大面积的神经实质细胞

4：几乎整个切片被浸润

D：脱髓鞘、髓鞘再生和髓磷脂碎片

0：无脱髓鞘

1：软膜下脱髓鞘或髓磷脂碎片的单个病灶

2：一些脱髓鞘的小的病灶

3：一个脱髓鞘的大融合区

4：一些脱髓鞘的大融合区

为了在脊髓中定量所观察到的异常，用HLE染色的切片被分成12个样本饼状区。在每个区中，使用Sigma Scan Pro图像分析软件(SPSSInc.)计算0.12mm²视野内细胞的数目，在总计12个区中的细胞联合平均数对整个脊索进行计算(每个动物36个视野)。应当注意的是因计算所有的细胞核，细胞数目可能包括除浸润之外的神经元和胶质细胞。因此在非-EAE动物中的细胞计数作为基线。

定量反转录-PCR：IL-2、IL-10、MCP-1。使用S.N.A.P.^TM(简单的核酸制备)总RNA分离试剂盒(Invitrogen)按照厂商的说明书从30mg冷冻的豚鼠脊髓分离RNA，改进包括在S.N.A.P.柱另外的纯化前有第二个DNAse处理步骤。通过加入第二个DNAse处理步骤，我们发现样品和用反转录阴性对照RT-PCR测定法确定的测定法中均检测不到DNA污染。

针对IL-2、IL-10和MCP-1的引物/探针序列和浓度连同用于每个基因的标准RNA在表7中给出。RT-PCR使用ABI PRISM^_7700序列检测系统三个一组进行。50μl反应体系包含由6.67％甘油(Amresco)；5.5mM MgCl；300μM dATP、dCTP、dGTP和dUTP；100nM探针；1.25单位的AmpliTaq Gold^_DNA聚合酶(AppliedBiosystems)；1×TaqMan^_Buffer A(TaqMan^_PCR Core reagents kit，Applied Biosystems)，20单位的RNase抑制剂(Roche)；1.25单位的鼠白血病病毒MuLV)反转录酶(Applied Biosystems)组成的反应缓冲液中10至800ng总RNA以及上述浓度的引物和探针。RNA的反转录在48℃进行30min，随后在95℃变性10min。PCR在95℃15秒，随后60℃1分钟进行40个热循环。每个平板包括使用表7中列出的标准RNA的标准曲线以及两个另外的对照样品：1)所有平板使用的阳性对照RNA样品，2)无-模板的对照(NTC)。

表7：脊髓中平均的细胞计数

对于所有显示的数据，标准曲线的相关系数大于0.990。三个一组样品的可变系数小于0.2。由于用于标准曲线的RNA为包含靶信息恒定但未知量的RNA的非均匀混合物，计算的数目是相对的。

FACS分析。在免疫后的第80天，从非-EAE动物、盐-处理动物、N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗的动物以及N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯撤消10天的动物收集肝素化血样。所有步骤中所有样品维持在4℃。150

μl样品暴露于一抗30分钟，洗涤两次，随后与PE-偶联的羊抗-鼠IgGFc在5％豚鼠血清(Beckman Coulter#num；PNEM0551)存在下孵育。红细胞用Becton-Dickinson溶细胞素溶液裂解且样品在FACScan流式细胞仪上(Becton Dickinson，Mountain View，CA)通过光照散射控制不同细胞群体而检验。

统计分析。使用SigmaStat v2软件(SPSS Inc.)进行统计分析。使用Mann Whitney秩和检验评价临床等级，而用双向方差分析评价病理等级。使用Kruskal-Wallis方差分析比较定量异常的等级。在所有情况下，p＜0.05认为是显著的。对脊髓中的平均细胞计数执行线性回归。

结果：临床反转。动物在免疫后第9天开始呈现疾病的临床征象，且持续到40天。就此，疾病被认为是慢性的。治疗周期开始于第40天且维持至少10天至最多40天。虽然接受盐的动物直到实验结束都呈现持续的临床特征，用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗的动物在初步处理的2-3天开始呈现临床反转(FIG.1A)。在治疗开始前已确定为临床等级2的一些动物中，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯反转局部麻痹，且该动物在整个治疗周期中(即，反转至临床等级1)都能使用其后肢。取决于治疗的持续时间，一些先前呈现病征的动物在接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后显现完全健康。治疗周期的过程结束后，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基4-硫代脯氨酰基]-O-[L--甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯-治疗的动物的平均临床等级比那些盐-处理的动物显著下降(p＜0.001，Mann Whitney秩和检验)。

N-N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯-治疗组中，集中在免疫后第54天有小的短暂提高(图1A)。两个动物在临床症状的程度上呈现适度的波动；其从完全没有临床征象(等级0)波动至非常轻微的共济失调(等级1)。然而，如我们先前观察的针对α₄整联蛋白的抗体，没有动物逃脱治疗，其中该动物总之由于豚鼠对鼠科动物或人源化抗体的排斥反应而终止对治疗的应答。用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-1-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-1-酪氨酸异丙酯治疗动物延长的时间周期并没有产生其他问题(如注射部位炎症)。在动物的一个亚组中，施予N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯30天，随后除去且动物在试验的最后10天维持用盐水注射。一旦撤消N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯，临床进展回复，类似于那些治疗周期持续接受盐的动物的临床病程(图1B)。在免疫后70和80天间，后-N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯-治疗的动物的平均临床等级显著大于那些在整个治疗周期接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物(p＜0.05，Mann Whitney秩和检验)。总之，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯成功地给药至40天而没有任何不良副作用，且其维持与慢性渐进EAE有关的临床缺陷的反转。

结果：病理异常的反转。在H-E和SCR染色的脑和脊柱切片上评估病理异常。图2中，左板为SCR染色的切片，其染上髓磷脂蓝(×40)。右板为高倍放大(×250)的，相对于SCR照片(图2)取自背部中间区域的H-E染色的切片。呈现在图2板A和B中的切片取自正常的豚鼠，且不呈现炎症和脱髓鞘。在免疫后40天，慢性动物具有大范围的脑膜和血管周炎症，以及一个或多个大的软膜下脱髓鞘的血小板(图2C)。浸润细胞的密度明显增加(图2D)。所观察到的病理异常随着疾病发展变得更加极端。在免疫后60天，接受20天盐处理的对照动物产生严重的脑膜浸润、大面积的脊髓炎和脱髓鞘病灶(图2E、F)。在免疫后80天，几乎整个的脊柱切片受到浸润和脱髓鞘，包括灰质的一些区域的侵入(图2I、J)。相反，在免疫后60天那些接受20天N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗的动物具有更小的脱髓鞘区，并且只有少量的脑膜和血管周细胞侵入(图2G、H。在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗40天后，病理恢复更加稳定；动物几乎不呈现脑膜和血管周浸润，且髓磷脂完整无损(图2K、L)。

通过盲测评价每个动物的总共五个单元，且联合的病理等级代表了来自每四种类型中(脑膜炎症、血管周浸润、脊髓炎和脱髓鞘；图3)所有五个切片的总等级。治疗周期的进程结束后，接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基4-硫代脯氨酰基]-O-[L--甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯-治疗的动物在所有四种类型中呈现相对于盐-处理动物平均临床等级的显著降低(p＜0.001，双向方差分析)。当除去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯，且动物维持额外的无治疗的10天，在所有四种类型中平均联合的病理等级比在治疗周期期间持续接受该小分子的动物显著高(图3；p＜0.05，对SNK测试等级的Kruskal Wallis方差分析)。

结果：病理异常的定量。上述定性评价的病理反转在脊髓中定量证实。对来自腰、胸和颈脊索的H-E染色切片上0.12mm²区域的12个样本计算细胞平均数，而联合检验整个脊髓(图4)。所有未经处理的EAE动物比非-EAE动物具有明显更高的细胞数目，表明正如所料，在疾病期间细胞浸润增强(p＜0.001，双向方差分析)。相对于盐-处理的动物，在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗仅仅10天后观察到细胞数目的明显减少，且在治疗的20、30和40天一直维持(p＜0.001，双向方差分析)。此外，用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯经20、30或40天治疗的动物的平均细胞数相比那些慢性对照动物显著降低p＜0.05，对SNK测试等级的Kruskal Wallis方差分析)，而在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗40天后，脊髓中的平均细胞数与非--EAE动物没有不同。这些平均数的线性回归证实在脊髓中炎性细胞的逐渐损失(r²＝0.90)。根据该直线斜率，我们可以计算8细胞/mm²/天的细胞损失率。在除去N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基4-硫代脯氨酰基]-O-[L--甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯后，在以盐维持额外的10天的动物中，再一次观察到平均细胞数的显著增加(p＜0.05，对SNK测试等级的方差分析)。

结果：定量PCR。在脊髓的腰椎切片上进行定量PCR以评价IL-2、IL-10和MCP-1的水平，且结果符合所述的病理反转。在盐-处理的动物中，IL-2值在整个疾病慢性期中提高。相反，接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物几乎没有可检测到的IL-2RNA。随着N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的撤消，脊髓中IL-2值回到相当于盐-处理动物的水平。IL-10和MCP-1观察到类似的结果。治疗期间细胞因子RNA水平的显著减少很明显，随后在抑制剂去除后回到高的水平(图5)。

结果：FACS分析。如通过FACS分析确定的，相比盐-处理的动物，EAE动物用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基4-硫代脯氨酰基]-O-[L--甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的治疗引起循环系统中白淋巴细胞α₄整联蛋白百分比的很大增加。这些结果提示通过外周免疫激活的T细胞在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯存在时不能进入CNS，而在循环系统中累积(图6和7A)。与该提示一致，当去除N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯时，循环系统中白淋巴细胞α₄整联蛋白的百分比回复到盐-处理的水平且CNS炎症恢复(图7A)。低和高单核细胞α₄整联蛋白没有可辨别的亚群；然而，EAE动物中循环单核细胞上α₄整联蛋白的常规表达提高(图7B)。该提高不受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的影响，进一步提示外周免疫反应不被治疗所抑制。

实施例2

慢性EAE中伴随α₄整联蛋白延长抑制的自发髓鞘再生

研究通过抑制α-4β-1(α₄β₁)整联蛋白(VLA-4)单元而阻断免疫细胞流入中枢神经系统的模型以确定在实验性的自身免疫脑脊髓炎中是否炎性细胞的存在抑制自发的髓磷脂修复作用。用α₄β₁特异性抑制剂N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯(Piraino等.，J.Neuroimmunol.2002，131：147-159)在EAE的早期、脱髓鞘阶段治疗瘫痪的豚鼠，我们发现：(1)87％血小板在治疗40天后有髓鞘再生的迹象；(2)髓磷脂修复作用发生在50％的总病变区域；以及(3)50％的动物恢复运动机能。在赋形剂处理的动物中没有显著的修复作用或运动机能的获得。这些结果显示在无靶髓磷脂修复作用时，CNS炎症的延长性抑制可促进自发髓鞘再生的进程。

方法

动物和疾病的诱导。雌性Hartley豚鼠(200-250g，Charles River Canada，St.Constant，Quebec)在受控制的光照和温度条件下喂养且允许随意进食食物和水。通过0.6mL均匀的、同源的CNS组织和完全弗氏佐剂(Difco，Detroit，MI)1∶1的混合物与另外的10mg/mL结核分枝杆菌(Difco)的颈、皮内注射诱导EAE。动物在第9天开始呈现疾病的临床征象，且至免疫后40天认为是慢性的。动物称重且通过使用4-点临床等级的盲测进行日常评价，等级如下：0＝没有反常；0.5-超过连续一天的体重减轻；1-共济失调和不良的翻正反射；2-下肢局部麻痹、小便失禁、便秘；3-瘫痪；以及4-终端瘫痪。

治疗标准。基于疾病的严重程度选择动物用于治疗，根据两个标准：(1)动物已处于疾病的慢性期(即，免疫后至少40天)；以及(2)动物在治疗周期开始前已达到2的临床等级(即，下肢局部麻痹)。以该慢性渐进的EAE模型以前的经验，95％临床等级为2的慢性动物在脊髓中呈现中等的至严重的脱髓鞘，从一些脱髓鞘的小病灶至一个或多个大的融合血小板。在治疗周期开始前坚持该标准优化了髓磷脂损失的潜力。

治疗体系。满足两治疗标准的动物以10、20、30或40天的间隔治疗。N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-a4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-a4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯是一种以高亲合力结合人和豚鼠α₄整联蛋白(100％血清存在时对细胞粘附至高密度VCAM的IC₅₀＝1-10nm)的小分子(分子量～500Da)。在治疗周期期间动物每天两次接受盐(n＝16)或N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯(30mg/kg，n＝12)。用该剂量体系，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯(＞10nm)的受体-饱和水平一直得到维持。两种治疗经皮下施予。另外，一动物群在接受临床等级2的时期内被处死而作为基线″d0″对照。

组织采集和过程。随着处死(0.25mL戊巴比妥钠)，动物被放血，以及CNS被解剖和切片。使用三个脊髓切片，对应于脊索的腰、胸和颈区域。组织固定在10％福尔马林中且包埋在石蜡中。5μm横截-切片用一种定性髓磷脂染剂，砂罗铬-R-花青染色，且通过光学显微术检验以显示脱髓鞘(没有蓝染)和髓鞘再生(在病灶中月白染色区)的迹象。

每一腰、胸和颈切片，来自末端的脊髓5mm片4℃固定在2.5％中。来自每个横截面中心的0.5mm片随后平分为背部和腹部部分。这些切片后-固定在锇酸中且包埋入环氧树脂。一个用甲苯胺蓝染色的微米横截切片通过光学显微术检验以显示脱髓鞘和髓鞘再生的迹象。包含病灶的区域进一步切片用于电子显微镜检查，且薄切片用高锰酸钾和乙醇乙酸双氧铀染色，在Philips EM 300显微镜上检验。

组织学分析。使用改进的来自McGavem等.，J.Neurosci.Res.1999，58：492-504的方法定量脊髓病状。使用NikonCoolpix 995数字照相机以40×放大率获取每个动物的平均12个横截-切片的图像。使用Sigma Scan Pro图像分析软件(SPSSInc.)计算每个横截切片中的(任意单元)病灶面积和髓鞘再生病灶面积的总数。总计这些面积以得到对整个脊髓的整体判断，且髓鞘再生面积表示为总病灶面积的百分比。

结果和讨论。研究的主要目的是确定扩大免疫细胞迁移入CNS的抑制是否会允许已有的脊髓病灶中自发的髓鞘再生。该EAE豚鼠模型伴随免疫作用在整个CNS匀浆呈现非-缓解的、进行性的疾病(Wisniewski等.，J.Neuropath.Exp.Neurol.1983，42：243-255；Karlik等.，1986，Neurology36：1112-4；Karlik等.，1993，Magn.Res.Med.30：326-331)。急性瘫痪在约10天后开始，而显著的脱髓鞘在20天(Karlik等.，1986，Neurology 36：1112-4；Karlik等.，1993，Magn.Res.Med.30：326-331)。40天后，呈现完全双下肢瘫痪动物的95％在整个脑干和脊髓产生中等的至严重的脱髓鞘。有必要注意的是处于该疾病阶段的动物未曾_化或缓解，也不自然恢复。在目前的研究中，当动物达到该阶段-免疫后至少40天和呈现完全双下肢瘫痪(临床等级2)才启动治疗。随后动物接受α₄β₁整联蛋白的小分子抑制剂N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯或赋形剂(盐)10、20、30或40天的间期。图8显示砂罗铬-R-花青染色脊髓切片的典型的光学显微照片(图8A-F)。在对照组(治疗第“0”天)，每个动物中大范围的脱髓鞘是很明显的；病灶一般缺乏完整的髓磷脂，表现出密集的免疫细胞浸润以及在其前边缘包含被吞噬髓磷脂碎片的泡沫状巨噬细胞(图8A、8B)。在最短的治疗间期中(10天)，盐-处理和N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]- O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯-治疗的动物在脊髓中持续呈现大面积的脱髓鞘，以及髓磷脂灰白的最小迹象。相反，在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗20天后，许多病灶呈现扩散的月白染色，类似于传统所述的在MS病人中指示髓鞘再生的血小板阴影(图8D)。在盐对照动物内的血小板仍然缺少髓磷脂(FIG.8C)。在治疗的40天，在两个试验组间观察到在整个髓磷脂出现方面的显著差异。在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗动物的大多数病灶呈现血小板阴影(图8F)，而在对照动物中的病灶几乎没有呈现，即使有，也是蓝染的(图8E)。

为更好地定义组织学形态的变化，组织样品用更高的分辨率，通过光学和电子显微镜(EM)检验(图9)。在30-天的盐-处理动物中，甲苯胺蓝-染色的半薄切片显现正常髓磷脂的区域(图9A)，以及严重脱髓鞘和轴突损失的区域(图9B)。该两个区域间小的过渡区域包含相对小尺寸的薄的有髓轴突(图9B)，其可代表试图修复的最近的脱髓鞘轴突。还有经受华勒氏变性轴突的频繁迹象，其在病灶内和正常有髓鞘的区域内。在接受N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的动物中(图9C)，细的有髓轴突的区域大大地膨胀，且该轴突倾向于变为更大的尺寸，表明一种更普通的修复应答常常遍及该病灶区域。电子显微镜证实了该观测。大尺寸轴突周围髓磷脂的厚覆盖物，其代表″正常的″紧密髓磷脂，呈现在图9D中。在接受盐治疗40天的动物中，病灶区域显现微量髓磷脂，其中大的轴突是完全脱髓鞘的(图9E)。相反，用N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的治疗导致大尺寸轴突周围多个薄的髓磷脂层出现，其代表一种髓鞘再生的状态(图9F)。因此，看来N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的延长给药允许在慢性渐进EAE动物的脊髓中自发的髓鞘再生。

为了定量N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的效果，测定了显示髓鞘再生迹象的血小板的百分比。呈现月白髓磷脂病灶的数目除以取自每个动物整个长度脊髓的横截切片的病灶总数(图10)(关于该方法，参见 Warrington等.，2000，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 97：6820-5)。在盐治疗20、30和40天后，呈现髓鞘再生血小板的平均百分比在10和20％之间；这些动物中髓磷脂月白的发生随着时间没有显著的变化(图10A)。相反，在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯给药20天后，脊髓中血小板阴影的频率比盐-治疗的动物增加，达到68％；30和40天后发生率分别为77％和87％(p＜0.001，用Tukey检验的双向方差分析)。这些值比那些治疗起始时(第0天和10天)的明显更高(p＜0.05，用Tukey检验的双向方差分析)，表明该化合物以时间-依赖的方式提高了髓鞘再生的发生率。由于呈现髓鞘再生迹象的血小板百分比在过了第20天并不显著提高，看来髓鞘再生是在治疗的第10天和20天间以同步的方式大量开始的(图10A)。

脊髓中髓鞘再生血小板的总体程度也被测定。图10B显示在腹面灰质前角中带有大的脱髓鞘病灶的典型脊髓切片。对每个动物通过在其所有脊髓切片内示踪所有病灶以及加和该面积而测定整个病灶面积。同样地，通过示踪髓磷脂月白的区域而测定整个髓鞘再生的面积。图10C-F对整个病灶面积对髓鞘再生的百分比作图。在盐-治疗的动物中，平均变化幅度2和11％之间，病灶极少显示任何的修复迹象，且在整个40-天治疗期间没有显著差异(图10C-F)。相反，在N-[N-(3-吡啶磺酰基)-1-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-1-酪氨酸异丙酯治疗20、30或40天后，所确定的大多数病灶在大多数病灶(髓鞘再生的平均面积约50％)中呈现2至100％不同程度的髓鞘再生(图10D-5)。(p＜0.001，用Tukey检验的双向方差分析)。因此虽然在整个40-天治疗期间所有动物中病灶很明显，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯提高了髓鞘再生的发生率和百分比。此外，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯-治疗动物中髓鞘再生的迹象与所观察到的运动机能的恢复相一致。治疗起点为临床等级2，其标志完全的双下肢瘫痪。在50％N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯治疗的动物中，瘫痪反转为临床等级1，表明那些动物恢复了其后肢的有效应用(p＜0.05，Mann.Whitney秩和检验)。在对照动物中未观察到机能恢复。

自发的髓鞘再生，根据定义，指在无特定设计用于刺激髓鞘再生的治疗的介入时的髓磷脂修复作用(Miller等.，1995，Microsc.Res.Tech.32：230-245)。自发的修复作用充分记载于涉及急性中毒损伤，如用亚环己基酰肼(cuprizone)、溶血卵磷脂或溴化乙锭的脱髓鞘动物模型中(Dubois-Dalcq等.，1990，Bioessays12：569-576)，以及在病毒性脑炎模型中(Miller等.，1995，Microsc.Res.Tech.32：230-245)或在广泛的免疫抑制或免疫细胞缺失的模型中(Rodriguez等.，1992，Neural.42：348-57；以及Murray等.2001，Brain 124：1403-16)。在这种情况下髓鞘再生可在几个星期内完成。N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯是一种g干扰α₄β₁整联蛋白对免疫细胞活性的小分子，且设计作为疾病-限制性的试剂以预防炎性细胞、脑的浸润，而不是作为直接促进髓磷脂修复作用的试剂(Piraino等.，2002，J.Neuroimmunol.131：147-159)。由于该CP-EAE的豚鼠模型是一种一般不呈现修复作用的非-阵发性疾病，疾病-限制性的试剂能单独促进自发的髓鞘再生的发现是很有意义的。这些结果表明炎症性的环境自身抑制或压制正常的修复机理，且可最终导致其耗尽。虽然在盐-治疗的动物中有显微镜可见的髓鞘再生的迹象，它并未达到显著性水平，且未曾伴随临床的症状缓解。因此，看来N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯通过抑制免疫细胞浸润防止了最新形成的髓磷脂的侵袭且允许修复。

CNS受诱导的髓鞘再生实际上通过许多方式，包括髓磷脂糖脂、CNS-特异的抗血清、纯化的免疫球蛋白(Warrington等.，2001，J.AllergyClin.immunol.108：121-5)，或生长因子(Yao等.，1995，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 92：6190-4)的给药(Raine等.，1978，Acta.Neuropathol.(Berl).4343-53；Traugott等.，1982，J.Neurol.Sci.56：65-73)而实现。最近还表明血清-来源的人单克隆抗体(IgM)能通过少突神经胶质细胞的直接刺激明显促进髓鞘再生(Warrington等.，2000，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 97：6820-6825；Bieber等.，2002，Glia 37：241-9；Mitsunaga等.，2002，FASEB J.16：1325-1327)。缺陷型模型中胚胎和成体神经干细胞的移植均导致少突神经胶质细胞的产生和新的髓磷脂合成(Halfpenny等.，2002，Lancet Neurol.1：31-40)。虽然这些研究已表明CNS能修复，但有必要注意的是那些治疗性诱导的髓鞘再生没有终止进行中的疾病。例如，Notch通路最近在MS中暗示作为髓鞘形成的抑制剂，反映了少突神经胶质细胞、胶质细胞和正在进行的炎症间的相互作用(Jolm等.，2002，Nat.Med.8：1115-21)。在例如MS的炎症性病症中，CNS仍然是易受侵袭的。

髓鞘再生抗体，如natalizumab，在EAE中通过抑制另外的新炎症细胞的连续流入而反转疾病病状。已经进入CNS的细胞通过正常的凋亡机制清除(Hyduk等.，1998，J.Neuropath.Exp.Neural.57：602-614)。与所观察到的一致，已证实随着增加的治疗持续时间，N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯逐渐降低免疫细胞的浸润以及与其相关的炎症介质Piraino等.，2002，J.Neuroimmununol.131：147-159)。在复发MS的对照试验中，natalizumab证实超过6个月时期的治疗相比用安慰剂治疗的患者引起更少的炎症性脑病灶和更少的复发。试验期间很好地耐受了治疗，且在natalizumab-治疗的病人中有改善的状态良好的感觉(Miller等.，2003，New Engl.J.Med.348：15-23)。因此，如抗-α₄整联蛋白抗体治疗的试剂和如N-[N-(3-吡啶磺酰基)-L-3，3-二甲基-4-硫代脯氨酰基]-O-[1-甲基哌嗪-4-基羰基]-L-酪氨酸异丙酯的化合物在MS中不仅充当疾病-限制因素，而且用作允许CNS修复的试剂。

虽然本发明以其特定的实施方案进行了描述，但本领域技术人员应该理解可进行多种改进且可在不背离本发明真实精神和范围下用等价形式替代。此外，对于本发明目的、精神和范围，可进行许多修饰以适应具体的情况、材料、物质组成、过程、工序或步骤。所有上述修饰试图包括在本发明范围内。

实施例3

人源化21.6抗体的构建

通过将小鼠21.6VL和VH区的与人恒定工的PCR克隆的cDNA连接起来来构建嵌合型轻链和重链。用特定设计的PCR引物对小鼠cDNA序列的5′-和3′-端进行修饰。设计与编码引导序列的开始部分的DNA 杂交的5′-端PCR引物(表8)，来产生进行有效翻译的必要的DNA序列(Kozak，J.Mol.Biol.196：947-950(1987))，和用来产生将其克隆到表达载体内的HindIII限制性位点。设计引物的3′-端(表8)，该引物可与编码J区的DNA序列进行杂交，来产生与恒定区进行连接的必要的DNA序列，和用来产生将其克隆到表达载体内的BamHI位点。PCR扩增产物用HindIII和BamHI进行消化，将其克隆到pUC19载体，并进行测序以确定在PCR扩增过程中没有错误发生。将适宜的小鼠21.6可变区亚克隆到哺乳动物细胞表达载体内，该载体或者含有人κ或者含有γ-1恒定区。

表8

构建嵌合21.6抗体的PCR引物
	A.轻链可变区 1.用于5’-端重建的引物(37聚体) 5′C AGA AAG CTT GCC GCC ACC ATG AGA CCG TCT ATT CAG 3′ HindIII Kozak M R P S I Q 保守性序列 2.用于3’-端重建的引物(35聚体) 5′CC GAG GAT CCA CTC ACG TTT GAT TTC CAG CTT GGT 3′ BamHI 剪接供体位点
B.重链可变区 1.用于5’-端重建的引物(37聚体) 5′C AGA AAG CTT GCC GCC ACC ATG AAA TGC AGC TGG GTC 3′ HindIII Kozak M K C S W V 保守性序列 2.用于3’-端重建的引物(33聚体) 5′CC GAG GAT CCA CTC ACC TGA GGA GAC GGT GAC T 3′ BamHI 剪接供体位点

小鼠21.6可变区结构的模拟。已建立小鼠21.6抗体的V_L和V_H区的分子模型。该模型是在运行UNIX操作系统，使用分子模拟包QUANTA的Silicon Graphics IRIS 4D工作站建立的(PolygenCorp.，USA)。小鼠21.6VL区的FRs的结构基于已分析过的人Bence-Jones免疫球蛋白REI的结构(Epp等.，Biochemi stry 14：4943-4952(1975))。小鼠21.6V_H区的FRs的结构基于已分析过的小鼠抗体Gloop2的结构。保留下相同的残基，不相同的残基在QUANTA内用易化措施进行替代。小鼠21.6V_L区的CDR¹和CDR²被鉴定为分别属于标准(canonical)结构组1和组2.(Chothiat等.，J.Mol.Biol.196：901-917)。既然REI的CDR¹和CDR²属于相同的标准组，在REI的CDR¹和CDR² 的结构上构建小鼠21.6V_L的CDR¹和CDR²模型。小鼠的21.6V_L区的CDR³看来不与VL区的CDR³的任何标准结构组相对应。然而对数据库的检索提示，小鼠21.6V_L区的CDR³与小鼠HyHEL-5V_L区的CDR³ 相似(Sheriff等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：8075-8079(1987))。因此，小鼠21.6V_L区的CDR³的模型在小鼠HyHEL-5V_L区的CDR³结构上构建。小鼠21.6V_H区的CDR¹和CDR²被鉴定为分别属于标准结构组1和组2。小鼠21.6V_H区的CDR¹模型在Gloop2V_H区的CDR¹ 上建立，Gloop2VH区与V_H区的CDR¹的标准组1的成员非常相似。小鼠21.6V_H区的CDR²模型在小鼠HyHEL-5的CDR²上建立(Sheriff等.，上文所述)，小鼠HyHEL-5的CDR²也是V_H区CDR²的标准2组的成员。对V_H区的CDR³来说，没有标准结构。然而，小鼠21.6V_H 区的CDR³与小鼠R¹9.9V_H区的CDR³相似(Lascombe等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：607-611(1989))，其模型通过在这个CDR³ 上去掉在小鼠R¹9.9V_H区的CDR³环顶端的额外的丝氨酸残基，并通过退火和精加工该缺口而建立。为减小不利的原子接触，并使范德华力和静电相互作用达最佳状态，用在QUANTA内实施的CHARMM潜能(Brooks等，J.Comp.Chem.4：187-217(1983)使模型最后形成最后世代并使成分连接能量最小化。

改型的人21.6可变区的设计-框架序列的同源性人抗体的选择。已通过氨基酸序列的比较鉴定出表现出与小鼠21.6的可变区具有很高一致性百分数的人可变区。表10和表11将小鼠21.6可变区与所有已知的小鼠可变区，与所有已知的人可变区做了比较。小鼠21.6V_L区被鉴定为属于被上述Kabat等所定义的小鼠κV_L区。个别小鼠κV_L区具有与小鼠21.6κV_L区93.4％的同一性(38C13V′CL和PC613′CL)。小鼠21.6V_L区与如前面Kabat等所定义的亚组1的人κV_L区最相似。个别人κV_L区被鉴定出具有与小鼠21.6κV_L区72.4％的同一性。来自一个最相似的人可变区，REI的框架(FRs)被用于改型人21.6V_L 区的设计。小鼠21.6V_H区被鉴定为属于前面Kabat等所定义的小鼠V_H区亚组2c。个别小鼠重链可变区被鉴定为具有与小鼠21.6V_H区93.3％的同一性(17.2.25′CL和87.92.6′CL)。小鼠21.6VH区与如前面Kabat等所定义的亚组1的人VH区最相似。个别人VH区被鉴定为与小鼠21.6V_H区具有64.7％的同一性。来自一个最相似的人可变区，21/28′CL的FRs被用于改型人21.6V_H区的设计。

框架内的氨基酸残基的取代。

(A)轻链。对改型人21.6V_L区的设计程序的下一步就是将来自小鼠21.6V_L区的CDRs同来自人REI(Palm等.，Physiol.Chem.356：167-191(1975))的FRs连接起来。在第一形式的改型人21.6V_L区(La)中，在人FRs中发生了几个变化(表10，图13)。在FR4的104位，105位、和107位，来自REI的氨基酸被来自另一个人κ轻链的更典型的人J区氨基酸所取代(Riechmann等.，Nature 332：323-327(1988))。

在FR²的45位，在REI内正常存在的赖氨酸变为在小鼠21.6V_L 区发现的组氨酸。认为在这个位置的氨基酸残基在支持小鼠21.6V_L区的CDR²环中是重要的。

在FR²的49位，在REI内正常存在的酪氨基变为在小鼠21.6V_L 区的该位发现的组氨基。小鼠21.6V_L区的该位的组氨酸在模型中被观察到位于结合位点的中部，且可能在抗体-抗原结合过程中与抗原发生直接接触。

在FR³的58位，在REI内正常存在的缬氨酸变为在小鼠21.6V_L 区的该位发现的异亮氨酸。认为该位的氨基酸残基在支持小鼠21.6V_L 区的CDR²噜噗中是重要的。

在FR³的69位，在REI内正常存在的苏氨酸变为在小鼠21.6V_L 区的该位发现的精氨酸。小鼠21.6V_L区的该位的精氨酸在模型中被观察到定位于接近CDR¹噜噗，且可能在抗体-抗原结合过程中与抗原发生直接接触。

改型人21.6V_L区的第二种形式(称为Lb)被设计成除在REI的RR²的49位不发生变化外，含有与上述相同的替代。(图13)。

(B)重链。对改型人21.6V_H区的设计的下一步就是将来自小鼠21.6V_H区的CDRs与来自21/28′CL的FRs连接起来(Dersimonian等.，J.Immunol.139：2496-2501(1987))。在第一形式的改型的人21.6V区(Ha)中，在人框架区进行了5个改变(表11，图14)。在人FRs内的这5个变化是在27位、28位、29位、30位和71位。

在FR¹的27位、28位、29位和30位，在人21/28′CL在的氨基酸变为在小鼠21.6V_H区的这些位置发现的氨基酸。虽然这些位置被指定为位于FR¹(如前面所述，Kabat等)，26位至30位是结构噜噗部分，形成了VH区的CDR¹噜噗。因此，这些位置的氨基酸可能直接参与了与抗原的结合。实际上，37至30位的氨基酸是如上述Chothia等所定义的V_H区的CDR¹的标准结构部分。

在FR³的71位，存于在人21/28′CL内的精氨酸变为在小鼠21.6V_H区的该位发现的丙氨酸。71位是如上述Chathia等所定义的V_H 区CDR²的标准结构部分。在小鼠21.6可变区的模型中，看来71位的丙氨酸是支持V_H区CDR²噜噗的重要位置。在该位的精氨酸替换成丙氨酸很可能破坏CDR²噜噗的安置。

含有上面所述的Ha形的5个变化的改型的人21.6V_H区的第二种形式(Hb)，在FR²中还增加了一个另外的变化。

在FR²的44位，在人21/28′CL内存在的精氨酸变为在小鼠21.6V_H区的该位发现的甘氨酸。基于已公开的V_L-V_H区的折叠(Packing)信息和基于小鼠21.6可变区模型，认为在44位的氨基酸残基在V_L-V_H 的折叠中是很重要的(如上所述，Chothia等)。

将改型人21.6V区的Hc形设计成使CDR³看起来与人VCAM-1更相似。小鼠21.6抗体和人VCAM-1均能与α₄β₁整合蛋白质结合。抗体的V_H区的CDR³噜噗是6个CDR噜噗中最具多样性的，且一般来讲是抗体-抗原相互作用中抗体的最重要的成份(Chothia等，如前所述；Hoogenboom & Winter，J.Mol.Biol.227：381-388(1992)；Barbas等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：4457-4461(1992))。在小鼠21.6V_H区的CDR³和人VCAM-1的86～94位氨基酸之间，特别是在CDR³噜噗内的YGN(酪氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列和VCAM-1内的FGN(苯丙氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列之间进行了一些序列相似性的鉴定。认为这些序列与在各种细胞粘附事件中的重要的RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列有关(Main等，Cell71：671-678(1992))。因此，在CDR³ 的98位，在小鼠21.6V_H区存在的酪氨酸变为在人VCAM-1的序列中发现的苯丙氨酸。

也考虑了在FR²的36位的可能的取代。在小鼠的21.6V_H链中，在FR²的36位含有不常见的半胱氨酸残基。在有关的小鼠和人序列中，FR²中该位置通常是色氨酸。虽然半胱氨酸残基在抗体的构象中经常是重要的，小鼠的21.6可变区模型并未提示该半胱氨酸残基直接或间接地参与了抗原的结合，因此，存在于人21/28′CL V_H区的RF2内的色氨酸在三种形式的人源化21.6抗体中被保留下来而未做取代。

改型人21.6抗体的构建。改型人21.6V_L区的第一形式(resh21.6VLa)基本上是按Daugherty等在Nucleic.Acids Res.19：2471-2476(1991)所述的以重叠PCR片段来构建的。将上文所述改造的并插入pUC19中的小鼠21.6V_L区用作模板。合成了4对引物，APCR¹-V1a1，v1a2-v1a3，V1a4-v1a5和v1a6-v1a7。(表9)。邻接对的引物至少重叠21个碱基。APCR¹引物与pUC19载体互补。在含有10mM Tris-Hcl(pH8.3)，50mMKcl，200μM dNTPs和1.5mM MgCl₂的50μl的PCR缓冲液中，将适当的引物对(0.2μM)与10ng的模板DNA、1单位的AmpliTaq DNA聚合酶(Perkin Elmer Cetus)混合。每个反应进行25次循环。在94℃起始解链5分钟后，反应以94℃1分钟，55℃1分钟，和72℃2分钟循环，且最后在72℃进一步温育10分钟。在引物退火和延伸步骤之间的持续时间为2.5分钟。用苯酚抽提和乙醇沉淀从第一轮中的四个反应(A、B、C和D)所得的产物。

表9

用于改型的人21.6可变区构建的PCR引物

A.轻链可变区 1.合成“a”形式的引物 21.6VLa1(39聚体)： 5’GAT GGT GAC TCT ATC TCC TAC AGA TGC AGA CAG TGA GGA 3′ 21.6VLa2(32聚体)： 5’CTG TAG GAG ATA GAG TCA CCA TCA CTT GCA AG 3′ 21.6VLa3(39聚体)(SEQ.IDNO：24)： 5’AGG AGC TTT TCC AGG TGT CTG TTG GTA CCA AGC CAT ATA 3′ 21.6VLa4(41聚体)： 5’ACC AAC AGA CAC CTG GAA AAG CTC CTA GGC TGC TCA TAC AT 3′ 21.6VLa5(40聚体)： 5’GCA GGC TGC TGA TGG TGA AAG TAT AAT CTC TCC CAG ACC C 3′ 21.6VLa6(42聚体)： 5’ACT TTC ACC ATC AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT ATT GCA ACT 3′ 21.6VLa7(59聚体)： 5’CCG AGG ATC CAC TCA CGT TTG ATT TCC ACC TTG GTG CCT TGA CCG AAC GTC CAC AGA TT 3’ 2.合成“b”形的引物 21.6VLb1(33聚体)：将H-49变成Y-49 5’GGA AAA GCT CCT AGG CTG CTC ATA TAT TAC ACA 3′ 21.6VLb2(38聚体)：将ACC-101变成ACA-101以破坏StyI位点 5’CCG AGG ATC CAC TCA CGT TTG ATT TCC ACC TTT GTG CC 3′

B.重链可变区 1.合成“a”形的引物 21.6VHal(51聚体)： 5′AAC CCA GTG TAT ATA GGT GTC TTT AAT GTT GAA ACC GCT AGC TTT ACA GCT 3′ 21.6VHa2(67聚体)： 5′AAA GAC ACC TAT ATA CAC TGG GTT AGA CAG GCC CCT GGC CAA AGG CTG GAG TGG ATG GGA AGG ATT G 3′ 21.6VHa3(26聚体)： 5′GAC CCG GCC CTG GAA CTT CGG GTC AT 3′ 21.6VHa4(66聚体)： 5′GAC CCG AAG TTC CAG GGC CGG GTC ACC ATC ACC GCA GAC ACC TCT GCC AGC ACC GCC TAC ATG GAA 3′ 21.6VHa5(64聚体)： 5′CCA TAG CAT AGA CCC CGT AGT TAC CAT AAT ATC CCT CTC TGG CGC AGT AGT AGA TGC AGT GTC 3′ 21.6Vha6(63聚体)： 5′GGT AAC TAC GGG GTC TAT GCT ATG GAC TAC TGG GGT CAA GGA ACC CTT GTC ACC GTC TCC TCA 3′ 2.合成“b”形的引物 21.6VHb(37聚体)：将R-44变成G-44 5’CCA GGG CCG GGT CAC CAT CAC CAG AGA CAC CTC TGC C 3’ 3.合成“c”形的引物 21.6VHc(27聚体)：将Y98变成F-98 5′CAG GCC CCT GGC CAA GGG CTG GAG TGG 3′

C.轻链和重链可变区与pUC19载体DNA的侧翼杂交的引物APCR¹(17聚体，正向引物) 5′TAC GCA AAC CGC CTC TC 3′ APCR4(18聚体，反向引物) 5′GAG TGC ACC ATA TGC GGT 3′

在PCR反应的第二轮将PCR产物A和B、C和D连接起来。将PCR产物A和B、C和D(每种50ng)加入50μlPCR反应液中(如上所述)，除了将退火温度升至60℃外，按上面所描述的进行20个循环的扩增。这些反应的产物称之为E和F。所用的PCR引物对分别为APCR¹-v1a3和v1a4-v1a7。用苯酚抽提和乙醇沉淀PCR产物E和F，通过其自身的互补性在两步-PCR反应中使之在第三轮PCR反应中组装，两步-PCR反应用APCR¹和v1a7作末端引物。完全组装的片段代表包括引导序列的完整的改型人21.6VL区，用HindIII和BamHI消化之，并将其克隆到pUC19中以便测序。具有正确序列的克隆被指定为resh21.6Vla。

通过Kamman等在Nucl.Acids.Res.17：5404(1989)的方法，对第一形式的改型人21.6V_L区(La)进行较小的修饰，用PCR引物来构建改型人21.6V_L区的第二形式(Lb)。合成了两套引物(表9)。每个PCR反应基本上是在上面所述的同样条件下进行的。在第一PCR反应中，用诱变引物21.6VLb2来破坏StyI位点(苏氨酸-ACC-97变成苏氨酸-ACA-97)，以产生resh21.6VLa2。然后，在第二PCR反应中，诱变引物21.6VLb1(组氨酸-49变成酪氨酸-49)和PUC-esh21.6Vla2一起用作模板DNA。用StyI和BamHI切PCR产物，并将之亚克隆到PUC-resh21.6VLa2中，用同样的限制性酶裂解之。具有正确序列的克隆被指定为pUC-resh21.6VLb。

用所述的构建“a”形改型人21.6V_H区的同样的PCR方法来构建“a”形改型人21.6V_H区(表9)。将编码“g”形改型人425V_H区(如前所述，Kettleborough等.，上文所述)和“b”形改型人AUK12-20V_H区的HindIII-BamHI DNA片段亚克隆到pUC19载体中，分别产生出pUC-resh425g和pUC-reshAUK12-20b。(AUK12-20的“b”形衍生于如Kettleborough等所描述的片段V_Ha425的诱变，且编码氨基酸序列：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSYYIHWVRQAPGQGLEWVGYIDPFNGGTSYNQKFKGKVTMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGN-RFAYWGQGTLVTVSS(空白间隔区将FR和CDR区分开)。

pUC-resh425g和pUC-reshAUK12-20b质粒，及含有修饰后用于构建嵌合型21.6重链的小鼠21.6V_H区的pUC载体(pUC-chim21.6V_H)，在以后的PCR反应中用作模板DNA。设计和合成了用于“a”形改型人21.6V_H区的PCR引物(表6)。用pUC-reshAUK12-20b作DNA模板和APCR¹-val1作为引物对来获得PCR产物A(图9)。用pUC-chim21.6V_H做DNA模板，用vha2-vha3和vha6-APCR4分别作PCR引物对，得到了PCR产物B和D。最后，用pUC-resh425g作DNA模板和vLa4-vLa5作PCR引物对，得到了PCR产物C。将最终的PCR产物的HindIII-BamHI片段亚克隆到pUC19中从便测序。具有正确DNA序列的克隆被指定为pUC-resh21.6VHa。第一形式的改型21.6可变区的DNA和氨基酸序列示于图15。

用上面描述的构建“b”形改型人21.6V_L区的基本相同的方法构建剩下的其它形式的改型人21.6V_H区。合成了两套引物(表6)。对第二形(Hb)和第三形(Hc)来说，在PCR反应中分别使用诱变引物21.6VHb(精氨酸-44变成甘氨酸-44)和21.6VHc(酪氨酸-98变成苯丙氨酸-98)，而同时用pUC-resh21.6VHa作模板DNA。用限制酶切PCR产物，并分别将其MscI-BamHI和PstI-BamHI片段亚克隆到pUC载体pUC-21.6VHa中，来产生pUC-resh21.6VHb和pUC-resh21.6VHc。

用与用来构建第一形式的改型人21.6V_H区(La)相似的方法来构建第一形式的改型人21.6V_L区(La)。然而，在这种情况下，PCR引物与三种不同的模板DNA一起使用；三种模板是已被改造成的表达嵌合的21.6重链的小鼠21.6V_H区、“g”形的人源化425V_H区(如前所述，Kettleborough等)和“b”形的人源化AUK12-20V_H区(表9)。第一形式的人源化21.6重链可变区的DNA和氨基酸序列被示于图16。对第一形式的人源化21.6V_H区(Ha)用PCR引物做较少的修饰，可构建第二和第三形的人源化21.6V_H区(Hb和Hc)(表9)。

表10

说明：(Kabat)根据如前所述的Kabat等的编号；(#)用于分子模拟的序列号；(小鼠21.6)来自小鼠21.6抗体的V_L区的氨基酸序列；(小鼠κ5)来自亚组5的小鼠κV_L区的保守序列(Kabat等，如前所述)；(人κ1)来自亚组1的人V_L区的保守序列(Kabat等，如前所述)；(人REI)人V_L区的氨基酸序列(Palm等.，Physiol.Chem.356：167-191(1975))；(RHV_L21.6)改型人抗体的21.6V_L区的L1形的氨基酸序列；(^*)CDR噜噗的标准结构部分的残基(Chothia等，如前所述)；(下划线的)人FRs中氨基酸残基被改变了的残基。

表11

说明：(Kabat)根据如前所述的Kabat等的编号；(#)用于分子模拟的序列号；(小鼠21.6)来自小鼠21.6抗体的V_H区的氨基酸序列；(小鼠2c)来自亚组2c的小鼠VH区的一致性序列(Kabat等，如前所述)；(人1)来自亚组1的人V_H区的一致性序列(Kabat等，如前所述)；(人21/28′CL)人V_H区的氨基酸序列(Dersimonian等.，J.Immunol.，139：2496-2501(1987))；(RHV_H21.6)改型的人21.6V_H区H1形的氨基酸序列；(^*)CDR噜噗的标准结构部分的残基(Chothia等，如前所述)；(下划线的)人FRs中氨基酸残基被改变了的残基。

实施例4

脑炎的EAE模型

A.脑切片中结合炎症内皮的淋巴细胞的体外分析。按照Yednock等.，Nature 356：63-66(1992)描述的方法，在患病第5天(尾部/下肢瘫痪为第1天)从EAE大鼠除去脑。快速冷冻脑、切片，且用淋巴样细胞悬液覆盖(如上述用于肿块注射脑的方法)。大鼠EAE脑中人U937细胞选择性结合炎症血管。U937细胞用抗-VLA-4抗体，HP2/1的预处理完全抑制了其在EAE脑邻近切片中与炎症血管的结合。

如表12所示，EAE脑中人U937细胞与炎症血管的结合由抗VLA-4(抗-α₄，HP2/1；和抗-β₂，AIIB2)试剂，而不是由抗许多其他的粘连受体的抗体抑制。选择性抑制VLA-4粘连蛋白(FN)-结合活性的两抗体并不影响U937与EAE血管(P4G9和HP1/7)的结合。表13表明新分离的人淋巴细胞和单核细胞以及新分离的大鼠和小鼠淋巴细胞与炎症血管的结合也由抗VLA-4的抗体选择性地抑制。该测定法如上所述进行且使用对照细胞群体定量该结合程度。

表12

表13：新分离白细胞或单核细胞的治疗

B.抗-VLA-4抗体体内给药的效果：抗-VLA4给药于大鼠(腹腔给药)以确定抗体对EAE进展的效果。对于下面的表14，每个实验中，T细胞克隆在第0天给药。在第2天，动物接受PBS、纯化的抗-α₄ 整联蛋白的指示量，或者纯化的对照抗体的指示量的腹腔内注射。所有抗体为小鼠IgG₁。疾病以完全的尾部或尾部和下肢瘫痪划定。在发展疾病的动物中，瘫痪在第4或第5天开始，在第5或第6天达到最大，且随后稳定减少。两个另外的实验得到类似的结果。当在第3、4和7天(第3天是抗体给药后的一天且是最早的瘫痪发作的前一天)测量时在HP2/1-治疗的和PBS的对照动物中白血细胞的循环水平和差异量是难以区分的。HP2/1的批量购自AMAC；OPC购自Sigma；X-1和OX-7购自Bioproducts for Science。

第6天，对来自试验2和3的一些患病的EAE和健康的抗-α₄整联蛋白-治疗的EAE大鼠除去脑。来自患病的EAE动物脑中有大范围的浸润，而在用抗-α₄整联蛋白治疗的EAE大鼠中检测不到白细胞。

表14

实施例5

另外的VLA-4抗体的产生

免疫和筛选方案。TY21.6和21.12针对人B细胞系，Ramos(获自ATCC)。均匀分布于弗氏完全佐剂中的10⁷Ramos细胞注射入Balb/c小鼠中(腹腔给药)。十四天后，动物用另外的10⁷Ramos细胞注射(均匀分布于弗氏不完全佐剂中，腹腔给药)。又过了14天后，动物用2×10⁶ 存活的Ramos细胞注射(静脉给药)。最后的注射三天后，除去脾，分离脾细胞，与SP/2骨髓瘤融合，且接种于约2,000个孔中。筛选悬液抑制人B细胞系Ramos与VCAM-1转染的L-细胞结合的能力。利用标准技术产生VCAM-1转染的L细胞：通过PCR分离VCAM-1cDNA；基于公开的序列合成引物且从TNF-刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离模板RNA。分离的cDNA转染入小鼠L细胞且分离表达高水平VCAM-1信息的克隆。对于粘附试验，VCAM-1L细胞接种于96孔平板直至达到汇合。U937细胞用PKH26荧光标记(ZynaxisCell Science，Inc.，Malvern，Pa.)，用杂交瘤悬液冰上预处理30分钟(200,000细胞/样品)，且加至单独的VCAM-1孔中。室温下进行粘附30分钟，随后漂洗孔至除去非结合细胞，且剩下的细胞用40μl0.1％的Triton裂解。在Pandex平板该数器上分析20μl提取物以确定荧光程度(即，结合细胞的数目)。结合的程度通过荧光与和每孔细胞进量总数(即，200,000U937细胞)相关的荧光的百分比来确定。两个单独的杂交瘤作为Ramos与VCAM-1结合有效的阻断剂而被鉴定，且稳定作为克隆。抗体指定为TY21.6和TY21.12。

由于抗体沉淀来自细胞表面-标记的人淋巴细胞裂解产物的两个蛋白质带，可以确定两抗体均与α₄整联蛋白反应。这些蛋白质分子量为150和130kD，各自对应于α₄和β₁整联蛋白链的已知分子量。同样的带在平行样品中通过市场上可买到的、很好-表征的抗人α₄整联蛋白抗体(HP2/1抗体)沉淀。未检测到其他的蛋白质带。这些结果提示21.6和21.12与α₄β₁复合物反应。

TY21.6和21.12抗体进一步利用通过间接免疫荧光染色细胞的标准方法，通过FACS分析而表征。两抗体均与人B细胞系，JY(其表达α₄整联蛋白，但是仅有低水平的β₁)反应。两抗体不与人K562细胞或人嗜中性白细胞(其表达β₁但α₄整联蛋白水平非常低)反应。最终，两抗体与用人α₄β₁(利用人T细胞系Jurkat为模板RNA，如上所述生产VCAM-1转染的L细胞)转染的小鼠L细胞而不是用对照转染的L细胞反应。HP2/1具有同样的反应模式，其中很好的-表征的抗β₁整联蛋白抗体(AIIB2)不与JY反应，但与K562和嗜中性白细胞反应。因此，TY21.6和TY21.12选择性地与α₄整联蛋白反应。

B.TY21.6、TY21.12和L25的功能特征。所有三种抗体，TY21.6、TY21.12和L-25(Clayberger等.，J.Immunol.138：1510-1514(1987))，有效地抑制人淋巴细胞与TNF-刺激的大鼠脑EC的结合。最初的大鼠脑EC，或大鼠脑EC克隆(如上所述的)接种到96孔组织培养皿上。一些孔中的EC用TNF刺激(如上所述)4-24小时。Jurkat、U937或Ramos细胞用荧光标记(如上所述)，用指示抗体预处理，随后加至单个孔中(200,000细胞/孔；一式三份孔/抗体治疗)。如上所述进行VCAM-196-孔结合试验以确定结合程度。结果概括在表15中。

表15

如表16所示，发现所有三种抗体也抑制人淋巴细胞与VCAM-1转染的L细胞的结合(如上所述测定)。

表16

如表17所示，在EAE脑切片中，所有三种抗体抑制细胞与炎症血管的结合(如上所述进行测定)。

表17

一些抗α₄整联蛋白的抗体(例如HP2/4；Pulido等.，J.Biol.Chem.266：10241-10245(1991))诱导淋巴细胞自-凝集。对该凝集的基础缺乏了解。在同样的报告中，报道L25诱导淋巴细胞凝集。然而，我们没能再现那些观测。在我们这方面，当直接与HP2/4比较时L25、TY21.6和21.12并不诱导细胞凝集。通过在96孔组织培养皿孔中混合100,000U937细胞和抗体悬液(最终稀释1∶5)而诱导凝集(100μl终体积/孔)。凝集进行30分钟至4小时，且与无-抗体对照相比，用任意的+/-等级评定系统鉴定为肉眼可见的。结果显示在表18中。

表18

一些抗α₄整联蛋白的抗体抑制由抗-α₄整联蛋白抗体HP2/4诱导的凝集。HP2/1、TY21.6和TY21.12阻断HP2/4诱导的细胞凝集，而L25没有。除了在凝集-诱导抗体，HP2/4(HP2/4杂交瘤悬液终浓度为1∶20)加入前用封闭抗体(悬液稀释1∶5或5g/mL纯化的抗体)冰上预处理U937细胞30分钟外，如上进行测定。

表19

对于VCAM-1，α₄β₁整联蛋白介导细胞与FN的CS-1结构域的结合。一些抗α₄整联蛋白的抗体抑制FN结合，如L25、TY21.6和TY21.12的情况一样；所有的三种抗体与HP2/1一样有效。该测定按照上文Pulido等.，(1991)所述进行。结果概括在表20中。

表20

该申请要求分别于2003年1月24日和2003年9月24日提交的美国临时申请No.60/442,713和60/500,316的优先权。其中引用的上述申请以及所有参考文献、公布的专利，和出版的专利申请中的所有内容此处整体引用作为参考。

参考文献

下列文献、专利和专利申请在本申请中作为上标号引用：

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²⁹Kogan，等，美国专利5,510,332，授权于1996年4月23日

³⁰国家专利申请WO 96/01644

上述文献、专利和专利申请的全文在此引入作为参考，达到和各篇文献、专利或专利申请的全文具体且单独引入作为参考说明时相同的程度。

Claims

1.髓鞘再生药物以促进哺乳动物中神经细胞的髓鞘再生的量在制备用于治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用，其中该药物是抗体或者其免疫活性片段。

2.权利要求1的应用，其中该哺乳动物是人体。

3.权利要求2的应用，其中该人体患有细胞脱髓鞘的病症，并且其中该病症是多发性硬化，先天性代谢障碍，存在异常髓鞘形成的神经病，药物诱发的脱髓鞘，放射诱发的脱髓鞘，遗传性脱髓鞘病症，朊病毒诱发的脱髓鞘病症，脑炎诱发的脱髓鞘，或者脊柱损伤。

4.权利要求3的应用，其中该人体患有多发性硬化。

5.权利要求1-4中任一项的应用，其中该抗体是单克隆抗体或单克隆抗体的免疫活性片段。

6.权利要求5的应用，其中该单克隆抗体是嵌合抗体，人抗体，基因工程化抗体，或二元特异性抗体。

7.权利要求6的应用，其中该嵌合抗体是人源化或灵长化的。

8.权利要求1-4中任一项的应用，其中该抗体或其免疫活性片段结合α-4β-1整联蛋白。

9.权利要求8的应用，其中该抗体是人源化抗体或其免疫活性片段。

10.权利要求9的应用，其中该人源化抗体是那他珠单抗或其免疫活性片段。

11.权利要求10的应用，其中那他珠单抗通过静脉内或皮下给药。

12.权利要求1-4中任一项的应用，其中所述抗体的免疫活性片段是Fab，scFv，或F(ab’)₂。

13.权利要求10的应用，其中药物长时间施用给需要其的哺乳动物。

14.权利要求11的应用，其中那他珠单抗通过静脉内施用给哺乳动物，并且其中这种给药导致那他珠单抗在该哺乳动物中的有效血液水平为至少1ng/ml。

15.权利要求14的应用，其中那他珠单抗的有效血液水平为1ng/ml。

16.权利要求1的应用，其中该髓鞘再生药物是长期给药。

17.权利要求1的应用，其中所述髓鞘再生药物的长期给药是每周1次或每月1次持续至少1年。

18.权利要求1-4中任一项的应用，其中抗炎药与所述髓鞘再生药物联合施用给哺乳动物。

19.权利要求17的应用，其中该抗炎药是干扰素，醋酸格拉替美，或非甾体抗炎药。

20.权利要求19的应用，其中干扰素是干扰素β-1b或干扰素β-la。

21.髓鞘再生药物以足以抑制脊柱中免疫细胞的淋巴细胞浸润促进脊柱内神经细胞的髓鞘再生并由此治疗需要其的对象中麻痹的量在制备用于减轻该对象中的麻痹的药物中的应用。

22.权利要求21的应用，其中伴随麻痹的对象患有多发性硬化，先天性代谢障碍，存在异常髓鞘形成的神经病，药物诱发的脱髓鞘，放射诱发的脱髓鞘，遗传性脱髓鞘病症，朊病毒诱发的脱髓鞘病症，脑炎诱发的脱髓鞘，或者脊柱损伤。

23.权利要求21或22中任一项的应用，其中该对象为人体。

24.权利要求21的应用，进一步包括与抗炎药联合给药。

25.权利要求21的应用，其中该髓鞘再生药物是抗-VLA-4-抗体。

26.权利要求21的应用，其中该抗-VLA-4-抗体结合α-4β-1整联蛋白。

27.权利要求26的应用，其中该抗-VLA-4-抗体是单克隆抗体。

28.权利要求27的应用，其中该单克隆抗体是嵌合抗体，人抗体，基因工程化抗体，或二元特异性抗体。

29.权利要求28的应用，其中该嵌合抗体是人源化或灵长化的。

30.权利要求29的应用，其中该人源化抗体是那他珠单抗。

31.权利要求21的应用，其中该髓鞘再生药物长期施用给需要其的对象。

32.权利要求31的应用，其中髓鞘再生的长期给药每周1次或每月1次进行至少12个月。

33.权利要求24的应用，其中该抗炎药是干扰素。

34.权利要求33的应用，其中该干扰素是干扰素β-1b或干扰素β-1a。