JP2015532301A - タンパク質の精製方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(i)ハプトグロビンおよびヘモペキシンの両方を含有する溶液を準備すること;
(ii)該溶液に硫酸アンモニウムを添加することによって該溶液からハプトグロビンを沈殿させること;
(iii)沈殿したハプトグロビンをヘモペキシンを含む該溶液から分離すること;および
(iv)1つまたは複数の工程でハプトグロビンおよび/またはヘモペキシンを別々に精製することを含む方法を提供する。
(i)ハプトグロビンおよびヘモペキシンの両方を含有する溶液を準備すること;
(ii)該溶液に硫酸アンモニウムを添加することによって該溶液からハプトグロビンを沈殿させること;
(iii)沈殿したハプトグロビンをヘモペキシンを含む該溶液から分離すること;および
(iv)1つまたは複数の工程でハプトグロビンおよび/またはヘモペキシンを別々に精製することを含む方法を提供する。
(i)ハプトグロビン溶液を得るために、沈殿したハプトグロビンを緩衝液に溶解すること;
(ii)ハプトグロビンが陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合するような条件下で、ハプトグロビン溶液を該樹脂に通過させること;
(iii)該樹脂からハプトグロビンを溶出すること;および
(iv)溶出したハプトグロビンを回収することが含まれる。
(i)ヘモペキシンを疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂に結合させる条件下で、ヘモペキシンを含有する溶液を該樹脂に通過させること;
(ii)工程(i)からの流出画分を収集すること;
(iii)工程(ii)の後で場合により該樹脂を洗浄し、流出洗浄画分を収集すること;
(iv)工程(ii)の後、および/または工程(iii)の後で該樹脂からヘモペキシンを溶出すること;および
(v)溶出したヘモペキシンを回収することを含む。
(i)ヘモペキシンを金属イオン親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させる条件下で、溶出ヘモペキシンを該樹脂に通過させること;
(ii)該樹脂からヘモペキシンを溶出すること;および
(iii)溶出したヘモペキシンを回収することが含まれる。
(a)ヘモペキシンを疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂に結合させる条件下で、ヘモペキシンを含有する溶液を該樹脂に通過させること;
(b)工程(a)からの流出画分を収集すること;
(c)工程(b)の後で場合により樹脂を洗浄し、流出洗浄画分を収集すること;
(d)トランスフェリンが陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合するような条件下で、工程(b)からの流出画分および/または工程(c)からの流出洗浄画分を該樹脂に通過させること;ならびに
(e)該樹脂からトランスフェリンを回収することを含む。
開始材料:ハプトグロビン、ヘモペキシンおよびトランスフェリンの精製のための開始材料として、コーン画分IV4沈殿物を使用した。(図1参照)。
Hx処理計画を図9に表示する。
Hp処理計画を図10に表示する。
オクチル洗浄画分にイオン交換クロマトグラフィーを実施する前に、硫酸アンモニウムをダイアフィルトレーションして、低イオン強度の緩衝液に交換した。このために、オクチル溶出液を濃縮し、溶出液体積当たり10体積のトリス50mM、pH7.0でダイアフィルトレーションした。濃縮およびダイアフィルトレーションは、30kD限外濾過膜を使用して実施した。
Claims (25)
- ハプトグロビンおよびヘモペキシンを、両タンパク質を含有する溶液から精製する方法であって:
(i)ハプトグロビンおよびヘモペキシンの両方を含有する溶液を準備すること;
(ii)硫酸アンモニウムを該溶液に添加することによって該溶液からハプトグロビンを沈殿させること;
(iii)沈殿したハプトグロビンをヘモペキシンを含む該溶液から分離すること;および
(iv)1つまたは複数の工程でハプトグロビンおよび/またはヘモペキシンを別々に精製することを含む前記方法。 - 溶液に硫酸アンモニウム約2.2Mから約2.5Mを添加することによって、該溶液からハプトグロビンを沈殿させることを含む、請求項1に記載の方法。
- 溶液に硫酸アンモニウム約2.4Mを添加することによって、該溶液からハプトグロビンを沈殿させることを含む、請求項2に記載の方法。
- 8以下のpHで溶液からハプトグロビンを沈殿させることを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 約6から約8の範囲内のpHで溶液からハプトグロビンを沈殿させることを含む、請求項4に記載の方法。
- 約7のpHで溶液からハプトグロビンを沈殿させることを含む、請求項5に記載の方法。
- ハプトグロビンおよびヘモペキシンの両方を含有する溶液がさらにトランスフェリンを含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 溶液がヒト血漿画分である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 溶液がコーン画分IVである、請求項8に記載の方法。
- 溶液がコーン画分IV4である、請求項9に記載の方法。
- (i)ハプトグロビン溶液を得るために、沈殿したハプトグロビンを緩衝液に溶解すること;
(ii)ハプトグロビンが陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合するような条件下で、ハプトグロビン溶液を該樹脂に通過させること;
(iii)該樹脂からハプトグロビンを溶出すること;および
(iv)溶出したハプトグロビンを回収することをさらに含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。 - 脂質を脂質除去剤に結合させる条件下で、ハプトグロビン溶液を該脂質除去剤に曝露する工程をさらに含む、請求項11に記載の方法。
- (i)ヘモペキシンを疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂に結合させる条件下で、ヘモペキシンを含有する溶液を該樹脂に通過させること;
(ii)工程(i)の流出画分を収集すること;
(iii)工程(ii)の後で場合により該樹脂を洗浄し、流出洗浄画分を収集すること;ならびに
(iv)工程(ii)の後および/または工程(iii)の後で該樹脂からヘモペキシンを溶出すること;ならびに
(v)溶出したヘモペキシンを回収することをさらに含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。 - (i)ヘモペキシンを金属イオン親和性クロマトグラフィー樹脂に結合させる条件下で、溶出したヘモペキシンを該樹脂に通過させること;
(ii)該樹脂からヘモペキシンを溶出すること;および
(iii)溶出したヘモペキシンを回収することをさらに含む、請求項13に記載の方法。 - (a)ヘモペキシンを疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂に結合させる条件下で、ヘモペキシンを含有する溶液を該樹脂に通過させること;
(b)工程(a)の流出画分を収集すること;
(c)工程(b)の後で場合により該樹脂を洗浄し、流出洗浄画分を収集すること;
(d)トランスフェリンが陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂に結合するような条件下で、工程(b)の流出画分および/または工程(c)の流出洗浄画分を該樹脂に通過させること;ならびに
(e)該樹脂からトランスフェリンを回収することをさらに含む、請求項7〜14のいずれか1項に記載の方法。 - 請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法によって回収したハプトグロビンを含む組成物。
- 請求項1〜10、13および14のいずれか1項に記載の方法によって回収したヘモペキシンを含む組成物。
- 請求項15に記載の方法によって回収したトランスフェリンを含む組成物。
- 請求項16〜18のいずれか1項に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む製剤。
- 溶血に関連した症状を治療する方法であって、請求項15〜17のいずれか1項に記載の組成物または請求項19に記載の製剤をそれらを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
- 症状が、溶血性貧血、輸血誘導性溶血、溶血性尿毒症症候群、自己免疫疾患、マラリア感染および熱傷からなる群から選択される、請求項20に記載の方法。
- 症状が、鎌状赤血球貧血、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、サラセミア、先天性赤血球異形成貧血および発作性夜間ヘモグロビン尿、全身性エリテマトーデスおよび慢性リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項20に記載の方法。
- 溶血に関連した症状を治療するための医薬品の製造における請求項16〜18のいずれか1項に記載の組成物または請求項19に記載の製剤の使用。
- 症状が、溶血性貧血、輸血誘導性溶血、溶血性尿毒症症候群、自己免疫疾患、マラリア感染および熱傷からなる群から選択される、請求項23に記載の使用。
- 症状が、鎌状赤血球貧血、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、サラセミア、先天性赤血球異形成貧血および発作性夜間ヘモグロビン尿、全身性エリテマトーデスおよび慢性リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項23に記載の使用。
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