JP2015527337A - 上皮増殖因子を含む小胞及びその組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、上皮増殖因子(EGF)、カチオン性界面活性剤及びコレステロール又はその誘導体を含むことを特徴とする小胞を提供する。本発明の一実施形態において、カチオン性界面活性剤は第四級アンモニウム型である。
最初に、大気圧及び温度(Tw=35℃)でコレステロール12mg及びDPPC24mgのエタノール(1.2mL)溶液を容量6mlの高圧反応器に導入する。圧縮CO2を添加して、モル分率XCO2=0.7、作動圧PW=10MPaになるまでこの溶液の体積を膨張させる。おおよそ60分間、10MPa及び35℃でこのシステムを撹拌下に置き、完全な均質化及び熱平衡に到達させる。最後に、この膨張させた有機溶液を、所望の濃度(15μM〜40μM)のEGF水溶液24mL中で作動圧から大気圧に減圧させる。この最終段階において、体積膨張溶液を押し下げ、減圧中の反応器内の作動圧を一定に保つために、10MPaのN2流をプランジャーとして用いる。続いて、小胞を密封容器に移し、使用するまで5±3℃で保存する。
最初に、コレステロール76mgのエタノール(2.88mL)溶液を、大気圧及び運転温度(Tw=35℃)で容量6mlの高圧反応器に導入する。圧縮CO2を添加して、モル分率XCO2=0.7、作動圧PW=10MPaになるまでこの溶液の体積を膨張させる。完全な均質化及び熱平衡に到達させるために、このシステムを約60分間、10MPa及び35℃で静置する。最後に、この膨張させた有機溶液を、所望の濃度(1〜40μM)のEGFを含むCTABのmQ水(C=2.83mg/mL)溶液24mL中で作動圧から大気圧に減圧させる。この最終段階において、コレステロールのエタノール溶液を押し、減圧中の反応器内の作動圧を一定に保つために、10MPaのN2流をプランジャーとして用いる。続いて、小胞を密封容器に移し、使用するまで5±3℃で保存する。
例2の方法と同様な方法で、本例においては2.61mg/mLの濃度のセトリミド水溶液を用いてこれらの小胞を合成した。1μM〜40μMの濃度でEGFが組み込まれたセトリミド:コレステロール(1:1)小胞が得られた。物理的外観、平均サイズ及びゼータ電位の結果を表3に示し、粒径分布は図2Bにおいて、見ることができ、cryo-TEMによるサイズ及び形態は図3Bに示す。表3において見られるように、すべての製剤は安定であり、平均サイズ及びPDI値は小さかった。平均サイズ、粒径分布及びゼータ電位はDLSによって測定した。すべての製剤のゼータ電位は正であり、+30mVをはるかに超えていた。これによって、長期安定性の増加が予測される。図2Bは、粒度分布が高度に均一であり、それらの平均直径が200nmを超えないことを示している。図3Bは、cryo-TEMによって、単膜構造を有する回転楕円面形状が優勢であることを示している。これらの種々の小胞製剤は、薬学的観点から、これらの小胞製剤を極めて魅力的なものにする特性を有している。
例2の方法と同様な方法で、この例においては、一方でコレステロール81.46mgのエタノール(2.88mL)溶液を用い、他方では所望の濃度のEGF及びBKC3.0mg/mLの水溶液を用いてこれらの小胞を合成した。濃度5μMのEGFが組み込まれたBKC:コレステロール(1:1)小胞が得られた。物理的外観、平均サイズ及びゼータ電位の結果を表4に示す。これらの小胞製剤は安定であり、比較的小さい平均サイズ及びPDIを有することを観察することができる。平均サイズ、粒径分布及びゼータ電位はDLSによって測定した。さらにまた、組成物中に第四級アンモニウム型のカチオン性界面活性剤を含む前記の小胞製剤と同様に、これらの製剤は+30mVよりもはるかに高い正のゼータ電位値を有しており、これによって優れた長期安定性が予測される。図3Cは、cryo-TEMによって行われた小胞形態試験によって、単膜構造を有する回転楕円面形状が優勢であることを示している。これらの小胞は、薬学的視点からそれらを極めて魅力的なものにする特徴もまた有している。
例2の方法と同様な方法で、本例においては、水溶液中にタンパク質BSAを用いてこれらの小胞を合成した。0.37μMの濃度(25μg/mLに相当する)でBSAを組み込んだCTAB:コレステロール(1:1)小胞が得られた。物理的外観、平均サイズ及びゼータ電位の結果を表5に示す。これらの小胞製剤は安定であり、比較的小さい平均サイズ及びPDIを有していることがわかる。平均サイズ、粒径分布及びゼータ電位はDLSによって測定した。これらの製剤もまた+30mVをはるかに超える正のゼータ電位値を有しており、これによって優れた長期安定性が予測される。
小胞へのEGF組み込み効率を測定する目的で、遊離EGF小胞を分離するために超遠心分離法を用いた。評価される種々の小胞懸濁液から1.0mLを採取し、バイアルに入れ、4℃で60分間、高速(100,000x g)で遠心分離した。続いて、固相酵素免疫検定法(ELISA)によって上清におけるタンパク質含量(遊離EGF)を測定した(Vazquez et al.,Biotecnol.Apl.1990,7:42-49)。小胞へのEGF組み込み効率を以下の式に従って決定した:
結果を表6に示す。DPPC:コレステロール組成物(例1で得られた)、CTAB:コレステロール組成物(例2で得られた)及びセトリミド:コレステロール組成物(例3で得られた)での小胞へのEGF組み込み効率の結果を示す。EGF濃度(EGF:コレステロール比)の効果もまた評価した。QUAT:コレステロールシステムにおいて、広範囲のEGF濃度(EGF:コレステロール比)に関して、高いEGF-組み込み効率値(ほぼ100%)を観察することができた。しかしながら、DPPC:コレステロールシステムへのEGF組み込み効率の結果は極めて低かった。なぜなら、最も高いEGF濃度に対しても、組み込みの最大効率は10%を超えなかったからである。
EGF小胞の合成に使用される方法論の頑健性及び再現性を試験するために、違う日に製造したEGF:コレステロールの5μM:1M及び15μM:1M組成物のいくつかのバッチにおいて、平均粒度、PDI、ゼータ電位及びEGF組み込み効率を測定した。得られた結果を表7及び8に示す。平均粒度、PDI及びゼータ電位はDLSによって測定した。EGF組み込み効率は、例6の記載に従って測定した。
例2と同様にして、50倍のスケールで小胞を合成した。最初に、コレステロール3.8gのエタノール(144mL)溶液を、大気圧及び運転温度(Tw=35℃)で容量300mlの高圧反応器に導入する。圧縮CO2を添加して、モル分率XCO2=0.7、作動圧PW=10MPaになるまでこの溶液の体積を膨張させる。完全な均質化及び熱平衡に到達させるために、このシステムを約60分間、10MPa及び35℃で静置する。最後に、この膨張させた有機溶液を、所望の濃度(5及び12μM)のEGFを含むCTABのmQ水(C=2.83mg/mL)溶液1200mL中で作動圧から大気圧に減圧させる。この最終段階において、コレステロールのエタノール溶液を押し、減圧中の反応器内の作動圧を一定に保つために、10MPaのN2流をプランジャーとして用いる。続いて、小胞を密封容器に移し、使用するまで5±3℃で保存する。
例1〜3の記載に従って製造されたEGF小胞の生物活性を、細胞増殖アッセイ(Mire-Sluis and Page, J. Immunol. Methods 1995, 187: 191-199).を用いて測定した。本例においては、遊離EGF、EGFリポソーム及び種々の小胞を含むEGFの、マウス線維芽細胞A31 $3T3株の細胞増殖を促進する能力を評価した。試料の吸光度が、National Institute for Biological Standards and Control(NIBSC、英国)によって提供されている国際標準物質EGF91/550に対して前もってキャリブレーションした常用標準物質の曲線内に収まるようにして、試験細胞に直接的に小胞懸濁液の適切な希釈液を接触させることによって、種々の小胞懸濁液の生物活性を評価した。
に従って、生物活性結果から種々の製剤の比活性を算出した。生物活性は、記載されているアッセイによって測定され、タンパク質濃度は、種々の小胞製剤における等価なEGF濃度の名目値(mg/mL)によって与えられる。
本発明の例2及び3と同様に製造した、QUAT:コレステロール(1:1)を含むEGF小胞組成物を用いた。この実験は、組み込まれたEGFのプロテアーゼに対する安定性を保護するQUAT:コレステロール小胞の能力を評価するために行った。慢性創傷、例えば糖尿病性足潰瘍は、それを治療するために用いられる薬物のバイオアベイラビリティーに影響を及ぼしうるタンパク質分解環境を有することが知られている(Bennett and Schultz, Am. J. Surg. 1993, 166: 74-81)。
残存EGF(%)=トリプシンインキュベーション後のEGF濃度(μg/ml)*100/トリプシンインキュベーション前のEGF濃度(μg/ml)
を用いて算出した。
QUAT:コレステロールを含む小胞懸濁液が抗菌活性を示すかどうかを決定するためにそれらを評価した。寒天希釈法(Manual of Clinical Microbiology. 6th ed. Washington, DC: ASM; 1995)を用いてこの活性を測定した。寒天平板培地におけるウェルの技術を用いて、グラム陽性菌(バチルス・ズブチリス(Bacillus subtilis)、スタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus))、グラム陰性菌(E.コリ(E.coli)、プロテウス・ミラビリス(Proteus mirabilis))及び真菌(カンジダ・アルビカンス、アスペルギルス・ニガー)に対して種々の懸濁液の有効性をアッセイした。これらの微生物は、微生物コレクションBCCM/LMG(ベルギー)によって同定され、提供された。細菌は、Tryptone Soy Broth(Oxoid社)中、37℃で終夜培養し、真菌は、Sabouraud Dextrose Broth(Oxoid社)中、28℃で72時間インキュベートした。これらの懸濁液を接種物として用いた。細菌108コロニー形成単位/ml又は真菌104胞子/mlを含む懸濁液100μlを用いる最終接種物を、それぞれTryptone Soy Broth及びSabouraud Dextrose Agar(Oxoid社)プレート上に塗布した。試験される種々の小胞懸濁液のそれぞれでディスク(直径6mm)を含侵させた。細菌及び真菌の陽性対照として、それぞれシプロフロキサシン及びフルコナゾール(100μg/ml)を用いた。可視増殖に必要なインキュベーション時間に応じて、細菌では37℃で24時間、真菌では28℃で72時間、アッセイプレートをインキュベートした。
EGF等価物濃度25μg/mLを有する、例2と同様に得られた、5μM:1MのEGF:コレステロール組成物を含むCTAB:コレステロール(1:1)小胞懸濁液を、pH7.2の10mMリン酸ナトリウム緩衝液でEGF等価物濃度15μg/mLに希釈した。この最終溶液はまた、グリセロール17%(v/v)、エタノール10%(v/v)、ブチルヒドロキシトルエン(BHT)0.02%(w/v)、メチルパラベン0.18%(w/v)及びプロピルパラベン0.02%(w/v)を含む。得られた分散系を、0.2μm酢酸セルロース滅菌フィルターで濾過し、窒素雰囲気下でガラスバイアルに分注した。
EGF等価物濃度25μg/mLを有する、例3と同様に得られた、5μM:1MのEGF:コレステロールを含むセトリミド:コレステロール(1:1)小胞懸濁液組成物を、等価物濃度15μg/mLに記希釈した。この製剤は、pH7.2の10mMトリス-HCl緩衝液を含み、最終濃度1.25%(w/v)のカルボマー(Carbopol940)、3%(w/v)のグリセロール及び20mMのL-メチオニンを含む。さらにまた、この製剤は、BHT0.02%(w/v)を含み、抗菌剤防腐剤としてメチルパラベン0.18%(w/v)及びプロピルパラベン0.02%(w/v)を含む。
EGF等価物濃度25μg/mLを含む、例4と同様に得られた、5μM:1MのEGF:コレステロールを含むBKC:コレステロール(1:1)小胞懸濁液組成物を、接線流限外濾過装置Sartocon Slice $200のセルに導入した。小胞の限外濾過のために、孔径30kDaのHydrosart(登録商標)膜を有するカセットを用いた。濃縮・透析濾過プロセスは25±3℃の温度で行い、カセットの入口の最大圧力低下を4バールに維持した。このプロセス中、懸濁液を5倍濃縮した(EGFの最終等価物濃度125μg/mL)。この濃度段階の後、小胞をpH7.2の10mMリン酸ナトリウム緩衝液で希釈し、EGFの等価物濃度75μg/mLにした。この製剤はまた、L-メチオニン20mM及びBHT0.02%(w/v)を含む。得られた懸濁液を0.2μm滅菌フィルターで濾過し、窒素雰囲気下でガラスバイアルに分注した。
実験方法論
以下に記載されている製剤の薬理学的有効性を評価するために、ラットの背部に全厚の慢性潰瘍の実験モデルを発症させた。体重250〜270グラムのスプラーグ・ドーリー・ラットを無作為に割り付けて、それぞれ動物10匹からなる7実験群を作成し、これらを用いた。ラットをケタミン/キシラジンの組み合わせで腹腔内麻酔し、ラットの背部を広範囲に脱毛した。直径8mm、全厚が上筋膜までのスペアの2つの対称的な両側の後肩甲潰瘍を作成した。治癒を停止させ、特徴的な慢性変化を誘導するために、ただちに最初の3日間、1日1回、湿布でトリアムシノロンアセトニドの投与を開始した。7日後、治癒過程の中断及び潰瘍の慢性化は、肉芽組織の非存在及び上皮縁部の肥大によって確証された。この時点から、下記のように試験治療薬の投与を開始した:
群1:無治療(生理食塩水)。この群は、残りの群の取扱い及び操作と同じ条件に供した。滅菌生理食塩水は噴霧型で投与した。
群2:無負荷DPPC-コレステロールリポソーム、
群3:無負荷CTAB-コレステロール小胞、
群4:無負荷セトリミドコレステロール小胞、
群5:EGFを25μg/mlの濃度で負荷したDPPC-コレステロールリポソーム、
群6.EGFを25μg/mlで負荷したCTAB-コレステロール小胞、
群7.EGFを25μg/mlで負荷したセトリミド-コレステロール小胞。
汚染された潰瘍を排除する必要はなかった。従って、6実験群のそれぞれに20病変を用いた。簡潔に言えば、EGF小胞のすべての製剤は、EGF遊離小胞群(ブランク)、25μg/mlでEGFを負荷したリポソーム及び生理食塩水で処理した実験対照群と比較して、全体的な治癒過程を顕著に刺激した事が確証された。報告したデータは、種々の回数行った2つの独立した研究の平均に相当する。比較を行うために、マン・ホィットニーのU検定及びスチューデントt検定を用いた。すべてのパラメータは正規分布の基準を満足した。試験したパラメータ及び結果を表11に示す。
臨床例において、University of Texasスケールに従えば、治療された病変の大部分は、切断術を必要とする確率が90%を超えていた。治療薬は局所投与された。
これらの患者は、長期発症のI型又はII型糖尿病を有し、インスリン、スルホニル尿素又は経口血糖降下剤としてビグアナイド剤の投与を受けていた。これらの患者は、瘢痕化が少ない個人歴を有するが、彼らの一部は事前の対側切断術を受けていた。すべての治療された下肢損傷は、虚血性又は神経障害性糖尿病性足に相当していた。全体として、病変は慢性、複合及び不応性として分類された。病変の発症期間は、1ヶ月未満から7か月の範囲であった。治療された病変のサイズは、20〜80平方センチメートルの範囲であった。一部の病変の深さは、骨膜まで巻き込んでいた。解剖学的な視点からは、治療された病変は、側部、踵骨及び/又は中足骨領域に存在していた。すべての患者は、麻酔下での切除術、非経口抗生物質療法が必要な限りは、病院加療によって最初の治療を受けさせた。治癒又は上皮移動の根拠を伴う全肉芽創によって、治療及び投薬のために、患者を外来患者レジメン及び隔日の経過観察に供した。完全な上皮形成後に、各患者に、治癒後の12ヶ月間の観察を行った。この目的のために、再燃率の評価、有害反応の記載及び患者の一般状態の評価を行った。表12は局所治療を受けた患者コホートの人口統計学的及び疫学的特徴を示す。
患者JLG。男性、56歳、インスリンでコントロールされており、任意の他の臨床的に発症した糖尿病合併症はなかった。虚血性要素を伴う進展した前頭葉病変を有しており、これは中足切断術後に2年間持続している。抗菌剤及びオゾン療法の2年間の実施後に、肉芽形成及び上皮形成プロセスは見られなかった。創面切除及び縁部の刺激を実施した後、GF:CTAB:コレステロール小胞を含む例12に記載の局所スプレー製剤を用いて、隔日に治療を開始した。8週間の治療で、病変の完全な上皮形成が達成された。結果を図6に示す。
臨床例において、University of Texasスケールに従えば、治療された病変の大部分は、切断術を必要とする確率が90%を超えていた。治療薬は浸潤によって投与された。治療された患者の一般的特徴は、例16に記載の患者と一致していた。
患者HCJQ。虚血性、遠位脈拍なし、膝窩セクターが閉塞される。病変は第5足趾の側部切断術残存底であり、露出した被膜及び腱が明確に虚血性壊死を示している。この病変はワグナースケールに従ってグレードIVに分類された。そのサイズは、10x4センチメートルであった。切断術の6日目に、臨床的に切断術残存底にアトニー及びチアノーゼが見られ、すべての全身的及び局所薬理学的にもかかわらず、このようにして5日間経過してきたことが見出されたとき、この治療が決定された。浸潤は、局所微小環境の改善及び肉芽形成組織の発達の促進を期待して、壊死材料の外科的創面切除後に開始した。このことは、5番目の浸潤後に初めて観察された。この患者には、合計12の浸潤セッションを行った。この治療は、生産性で出血性の肉芽組織の存在が好ましい。強い求心性の上皮移動が観察されたが、縁部の注目に値する縮小はなかった。治療開始の38日後には、病変は完全に上皮でふさがり、移植の必要性はなかった。急性又は遅延した有害反応は認められなかった。12ヶ月目において、病変に局所再発が見られない。
臨床例において、University of Texasスケールに従えば、治療された病変の大部分は、切断術を必要とする確率が90%を超えていた。治療薬は局所及び浸潤経路の併用によって投与された。治療された患者の一般的特徴は、例16に記載の患者と一致していた。
患者AFG。長期の糖尿病歴及び治療薬に対するアドヒアランス不良歴を有する男性。この患者は、遠位脈拍の非存在を伴う膝窩動脈閉塞性パターンを示す。病変は、汚染され、急速に進行して踵骨領域のすべての軟部組織を壊死させるフリクテンのようにふるまう。最初の外科治療中に軟部組織が除去される。5日後に、骨材料の壊滅をもたらす他の手術が必要である。強い多価抗生物質療法を決定し、最初の手術の20日後に、EGF小胞による浸潤治療を開始する。毎日の治療セッション及び最初の2週間の局所治療を決定する。これに続いて、続く8週間、縁部及び創傷表面に、例3に従って製造したEGF:セトリミド:コレステロール小胞を含む例13に記載の局所ゲル製剤を用いて隔日に治療を行う。治療10週間後、病変は上皮で完全にふさがれた。
体重250〜280グラムの雄のスプラーグ・ドーリー・ラットを用いた。リポ多糖(LPS)-ザイモサンの組み合わせの気管内滴下によって、全身麻酔(ケタミン/キシラジン)下で肺損傷を誘導した。その後直ちに、それぞれ動物12匹からなる3つの実験群に動物を無作為に割り付けた。
群A:生理食塩水で治療した。
群B:生理食塩水中25μg/ml/kgの濃度のEGFのスプレーで治療した。
群C:EGF25μg/mlの等価物濃度を有する例4に記載のコレステロール:BKC:EGF小胞を用い、群Bと同様に投与して治療した。
症例の記述:患者AGJ、男性、75歳、病理学的病歴なし、腹部外傷を負って、敗血症ショックを発症した。ARDSは経時的な合併症として発症し、呼吸困難及び酸素療法難治性チアノーゼを含む換気困難、低飽和度(11mm Hg)並びに血液のpH変化を引き起こす。放射線画像は、両肺の実質における綿羊毛スポットを示している。正の終末呼気圧力及び他のルーチン薬物での治療を開始することを決定した。急性滲出期の肺実質を保護するために、例4に記載のコレステロール:BKC:EGF小胞を、毎日2回、医療用酸素1リットル当たりEGFの200μg等価物の用量で投与する。これらの処置は、患者の正常への好ましい進行性経時変化を可能にし、線維化性肺胞炎相を予防した。治療3日目に、陽圧換気を一時停止にすることができ、5日目に、綿様画像は完全に透き通った。
これは、数回の大腸内視鏡検査及び生検を実施した後の、遠位潰瘍性大腸炎診断を受けた患者8名のコホートである。患者には特別な治療食をとらせ、アザルフィジン又はスルファサラジンを用いる薬理学的治療を受けさせた。このコホートは、12ヶ月間を超えて臨床的に進行中であり、コルチコイドを含むすべての薬理学的介入に難治性のままであったため、例3に記載のコレステロール:セトリミド:EGF小胞の弱い浣腸剤投与による思いやりのある治療を評価する。このために、容量20mlの、EGF等価物濃度50μg/mlの生理食塩水中のコレステロール:セトリミド:EGF小胞を投与する。毎晩睡眠時間前に、左側部褥瘡に浣腸剤を投与した。他の以前の医療処置に関連する浣腸剤の開始7日後に、下血、痛み及び一般的全身性倦怠が皆無になった。治療10日後に大腸内視鏡検査を行い、粘膜炎の実質的低下、大部分の病変の治癒及びSt.Mark’s indexの減少が検出される。開始21日後に治療を停止し、大腸内視鏡検査を再度行い、コレステロール:セトリミド:EGF小胞を含む浣腸剤での治療によってもたらされた治癒効果及び炎症の減少を確認した。治療開始21日目で8名の患者から採取した生検は、陰窩炎の消失を示した。
患者QED。男性、32歳、骨髄移植後にシクロホスファミド及びブスルファン療法の結果として膀胱及び尿路下部に出血性粘膜炎を発症した。血尿及び実質的タンパク尿(400mg/24時間)での72時間後に、一般の医療処置と共に、EGF150μg/mLの等価物濃度で例2と同様に製造したコレステロール:CTAB:EGF小胞を含む生理的食塩水の輸液を患者に投与した。最初の24時間の終わりに、尿中に痕跡量の赤血球及びタンパク尿170mg/24時間が検出されたのみであった。
これらの小胞は、例2の小胞と同様に合成したが、本例においては、一方では、β-シトステロール77.71mgのエタノール(2.88mL)溶液を用い、他方ではCTAB2.83mg/mL及び所望の濃度のEGF水溶液を用いた。EGFが濃度5μMで組み込まれたCTAB:β-シトステロール(1:1)小胞を得た。物理的外観、平均サイズ及びゼータ電位の結果を表17に示す。この小胞製剤は安定であり、比較的小さい平均サイズ及びPDIを有していることが観察できる。平均サイズ、粒径分布及びゼータ電位はDLSによって測定した。さらにまた、組成物中に第四級アンモニウム型のカチオン性界面活性剤を含む前記例中に示した小胞製剤と同様に、この小胞製剤は、+30mVよりもずっと高い正のゼータ電位値を有しており、これによって、この小胞製剤の優れた長期安定性が予測される。図3Dは、cryo-TEMで試験された小胞形態に関して、単膜構造を有する回転楕円面形状が優勢であることを示している。これらの小胞はまた、薬学的視点からこれらの小胞製剤を極めて魅力的なものにしている特徴を有している。
Claims (29)
- 上皮増殖因子(EGF)、カチオン性界面活性剤及びコレステロール又はその誘導体を含む小胞。
- カチオン性界面活性剤が第四級アンモニウム型である、請求項1に記載の小胞。
- 第四級アンモニウム型のカチオン性界面活性剤が、臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB)、セトリミド及び塩化ベンザルコニウム(BKC)からなる群から選択される界面活性剤である、請求項2に記載の小胞。
- カチオン性界面活性剤とコレステロール又はその誘導体との間のモル比が10M:1M〜1M:5Mの範囲であり、EGFとコレステロール又はその誘導体との間のモル比が0.5μM:1M〜100μM:1Mの範囲である、請求項1〜3のいずれかに一項に記載の小胞。
- 単膜構造及び25〜500nm、好ましくは50〜300nmのおおよその平均サイズを有する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の小胞。
- EGFが小胞二重層に組み込まれる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の小胞。
- 圧縮流体(CF)技術によって得られる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の小胞。
- CF技術が、
a) EGF及びカチオン性界面活性剤の水溶液の調製、
b) CFで膨張させた有機溶媒中へのコレステロール又はその誘導体の溶解、
c) 段階a)から得られた溶液中での段階b)から得られた溶液の減圧による小胞の合成、
を備えるプロセスを含む、請求項7に記載の小胞。 - カチオン性界面活性剤が第四級アンモニウム型である、請求項8に記載の小胞。
- EGF、カチオン性界面活性剤及びコレステロール又はその誘導体を含む小胞の製造方法であって、
a) EGF及びカチオン性界面活性剤の水溶液の調製、
b) CFで膨張させた有機溶媒中へのコレステロール又はその誘導体の溶解、
c) 段階a)から得られた溶液中での段階b)から得られた溶液の減圧による小胞の合成、
を含むことを特徴とする方法。 - カチオン性界面活性剤が第四級アンモニウム型である、請求項10に記載のプロセス。
- 段階b)の有機溶媒が一価アルコール、多価アルコール、ケトン、エチレンジアミン、アセトニトリル、酢酸エチル及びそれらの混合物からなる群から選択される溶媒である、請求項10に記載のプロセス。
- CFが二酸化炭素、エタン、プロパン、ハイドロクロロフルオロカーボン及びハイドロフルオロカーボンの中から選択される化合物である、請求項10に記載のプロセス。
- CFと有機溶媒の量の比がCFのおおよそのモル分率0.3〜0.95、好ましくは0.5〜0.8に相当する、請求項10〜13のいずれか一項に記載のプロセス。
- CF中へのコレステロール又はその誘導体の溶解が、おおよその圧力1〜30MPa及びおおよその温度約10〜70℃、好ましくは10〜50℃の反応器中で行われる、請求項10〜13のいずれか一項に記載のプロセス。
- EGFが、その臨界ミセル濃度より高い濃度でカチオン性界面活性剤を含む水溶液に溶解される、請求項10〜15のいずれか一項に記載のプロセス。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の小胞及び少なくとも1つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
- 全身、病変内、経粘膜、局所、経皮、眼内経路か又は吸入製剤で投与することができる、請求項17に記載の組成物。
- 医薬の製造のための、請求項1〜9のいずれか一項に記載の小胞の使用。
- 医薬が、末梢軟部組織の複合創傷を治療するために用いられる、請求項19に記載の使用。
- 複合創傷が糖尿病性足潰瘍である、請求項20に記載の使用。
- 複合創傷が静脈性潰瘍、褥瘡性潰瘍又は熱傷である、請求項20に記載の使用。
- 医薬が成人呼吸窮迫の治療のために用いられる、請求項19に記載の使用。
- 医薬が消化管病変の治療のために用いられる、請求項19に記載の使用。
- 医薬が粘膜炎、潰瘍性大腸炎、十二指腸潰瘍又は遠位大腸炎の治療のために用いられる、請求項24に記載の使用。
- 医薬が眼病変の治療のために用いられる、請求項19に記載の使用。
- 請求項1〜9のいずれか一項に記載の小胞及び少なくとも1つの賦形剤を含む化粧品。
- 化粧品の製造のための、請求項1〜9のいずれか一項に記載の小胞の使用。
- 化粧品が皮膚の老化及び加齢を予防するための製品である、請求項28に記載の使用。
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