EA010134B1 - Фармацевтические препараты, способы и схемы приема для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов - Google Patents

Фармацевтические препараты, способы и схемы приема для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов Download PDF

Info

Publication number
EA010134B1
EA010134B1 EA200600548A EA200600548A EA010134B1 EA 010134 B1 EA010134 B1 EA 010134B1 EA 200600548 A EA200600548 A EA 200600548A EA 200600548 A EA200600548 A EA 200600548A EA 010134 B1 EA010134 B1 EA 010134B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
pharmaceutical preparation
myapo
aro
complex
subject
Prior art date
Application number
EA200600548A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200600548A1 (ru
Inventor
Чарлз Л. Бисгайер
Венди В. Родригеса
Нарендра Д. Лалвани
Дэниел Хартман
Ян Йоханссон
Original Assignee
Эсперион Терапеутикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эсперион Терапеутикс, Инк. filed Critical Эсперион Терапеутикс, Инк.
Publication of EA200600548A1 publication Critical patent/EA200600548A1/ru
Publication of EA010134B1 publication Critical patent/EA010134B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

В изобретении предложены способы и препараты для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов. В способах по настоящему изобретению предложены безопасные и эффективные дозы комплекса аполипопротеин A-I Milano:фосфолипид для уменьшения и стабилизации атеросклеротической бляшки. Предложены также фармацевтические препараты комплексов Apo A-I Milano:фосфолипид. Ниже продемонстрирован сильный эффект однократной дозы ЕТС-216 в отношении неэтерифицированного холестерина сывороточного ЛПВП у нормальных мужчин-субъектов (ЕТС-216-001).

Description

В изобретении предложены новые препараты и способы лечения или предупреждения острых коронарных синдромов. В предпочтительном воплощении эти препараты представляют собой однократные дозы, которые имеют специфические значения рН, осмотического давления и чистоты. В предпочтительном способе препарат вводят раз в неделю, раз в месяц или раз в год в дозовом диапазоне от примерно 1 до примерно 100 мг/кг на введение. Кроме того, описаны дозы и схемы приема, а также конкретные заболевания, для которых предусмотрено использование этих доз или схем приема. В препаратах и способах используют комплекс аполипопротеин А-Ι Мйаио:фосфолипид.
Предшествующий уровень техники
Начиная с первой половины 20-го столетия, ведение и лечение инфаркта миокарда резко изменилось, перейдя от эры постельного режима и наблюдения к технологии, включающей гемодинамический мониторинг и баллонные катетеры, с повышенным вниманием к тромболитической терапии (Ап!тап апб Вгаип^а1б, Аси!е Муосагб1а1 1пТагсйоп ш Неай Э^еаке, А Тех!Ьоок о! Сагбюуакси1аг Мебюте, б411 ебйюп, уо1. 2, ВгаипетаИ е1 а1., ебк, 2001, А.В. Баипбегк Сотрапу, РЫ1абе1рЫа). Терапевтические подходы к лечению сердечно-сосудистых заболеваний чрезвычайно развились за последние 100 лет, что сопровождалось большим пониманием лежащей в их основе патологии.
Почти все инфаркты миокарда являются следствием коронарного атеросклероза, обычно с наложением коронарного тромбоза. Медленно образующиеся бляшки могут быть бессимптомными благодаря развитию коллатеральных сосудов. Однако атеросклеротические бляшки, особенно обогащенные липидами, склонны к внезапному разрыву. Разрыв бляшки и связанное с этим повреждение эндотелия приводят к высвобождению медиаторов, таких как тромбоксан А2, серотонин, аденозиндифосфат, тромбин, тромбоцит-активирующий фактор, тканевой фактор и свободные радикалы, происходящие из кислорода. Эти медиаторы стимулируют агрегацию тромбоцитов и механическую обструкцию, часто приводящие к тромбообразованию, которое препятствует кровотоку и кислородному снабжению. Постоянные и серьезные препятствия к поступлению кислорода в миокард могут привести к острому инфаркту миокарда (см. К.юи1о1 е! а1., 2002, С1гси1абоп 106:804, Т1тт1к, 2003, Неай 89: 1268-72).
Основой атеросклеротической фармакотерапии являлась длительная терапия с целью предупреждения или замедления развития атеросклероткческих бляшек, главным образом, путем сосредоточения на снижении ЛПНП (липопротеинов низкой плотности), или плохого холестерина, в качестве терапевтической конечной точки. Например, статиновая терапия в значительной степени способствовала улучшению состояния сердечно-сосудистой системы; однако, препятствием остаются такие неблагоприятные эффекты, как рабдомиолиз. Кроме того, статины мало подходят для острой ситуации, например для уменьшения уязвимой, нестабильной атеросклеротической бляшки во время ишемического эпизода. Лечение острого состояния преимущественно базировалось на тромболитических средствах (таких, как 4РА (тканевой активатор плазминогена)) и хирургическом вмешательстве, таком как чрескожная транслюминальная коронарная ангиопластика (ЧТКА) и аортокоронарное шунтирование (АКШ). Несмотря на то, что тромболитические средства обспечивают облегчение благодаря уменьшению или элиминации закупоривающего тромба, они не изменяют лежащую в основе патологию. Вмешательства, такие как ЧТКА, также сопровождаются риском и часто не годятся для пациентов, находящихся в острых состояниях. Поэтому современные фармакологические терапии мало помогают пациентам в том случае, если существует риск присутствия нестабильной бляшки (см. №\\1оп апб Кгаике 2002, А!йегокс1егок1к 83: 31-38).
ЛПВП терапия возникла как новый принцип лечения дислипидемии и атеросклероза (там же). Аполипопротеин А-Ι Мйапо (Аро А-Ι Мйапо) стал представлять интерес благодаря парадоксальному открытию того, что носители вариантной формы этого аполипопротеина имеют низкие уровни ЛЛВП (липопротеинов высокой плотности) (хорошего холестерина) и сниженный риск сердечно-сосудистого заболевания (см. БгапсексЫш е! а1., 1980, 1. С1ш. 1пуе§1. 66: 892-900, Ае1кдгаЬег е! а1., 1983, 1. Вю1. С1ет. 258: 2508-2513, БгапсексЫш е! а1., 1985, А1йегокс1егок1к 58: 159-174, БгапсексЫш е! а1., 1987, Айепокс1егок1к 7: 426-435). Было обнаружено, что гомодимеры Аро А-Ι Мйапо уменьшают утолщение интимы у кроликов, которых кормили холестерином (Ате11 е! а1., 1994, Сйси1а!юп, 90: 1935-41 и 8ота е! а1., 1995, Си. Кек. 76: 405-11). У мышей с дефицитом АроЕ атеросклеротические повреждения уменьшались как многократной низкой дозой, так и однократной высокой дозой комплексов Аро А-Ι Мйапо: липид (8йай е! а1., 1998, С1гси1айоп 97: 780-85 и 8НаН е! а1., 2001, С1гси1айоп 103: 3047-50). Регрессия бляшек у кроликов была также продемонстрирована с помощью однократных местных инфузий комплексов Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид в дозах 500 и 1000 мг белка на кролика (СЫека е! а1., 2002, Си. Кек. 90: 974-80). Повреждения, индуцированные в модели кроликов, включают в себя, в основном, макрофаги и не характеризуют более сложные повреждения у людей. Поэтому неясно, будут ли аналогичные схемы лечения эффективными для осложненных бляшек, обнаруженных при атеросклерозе у человека (Ь1 е! а1., 1999, Айепокс1ег. ТйготЬ Уакс. Вю1. 19: 378-383 и 8НаН е! а1., 2001, С1гси1айоп 103: 3047-50).
Однако, несмотря на лучшее понимание патофизиологии инфаркта миокарда и развитие ЛПВП терапии, все же желательны безопасные и эффективные дозы, режимы дозирования и фармацевтические препараты для профилактического и терапевтического применени Аро А-Ι Мйапо или комплексов Аро А-Ι Мйапо: липид у людей.
- 1 010134
Краткое описание сущности изобретения
В изобретении предложены способы и фармацевтические препараты для лечения и предупреждения сердечно-сосудистого заболевания или родственных расстройств, включающих атеросклероз, острые коронарные синдромы, ишемию, ишемическое реперфузионное повреждение, стенокардию и инфаркт миокарда, и уменьшения или стабилизации атеросклеротической бляшки, уменьшения бляшки в закупоренных сосудах и активации оттока холестерина. Таким образом, изобретение охватывает дозы и схемы приема для применения комплекса Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид и фармацевтических препаратов комплекса Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид для лечения или предупреждения сердечно-сосудистого заболевания или родственных расстройств, включающих атеросклероз, острые коронарные синдромы, ишемическое реперфузионное повреждение, стенокардию и инфаркт миокарда, и уменьшения или стабилизации атеросклеротической бляшки, уменьшения бляшки в закупоренных сосудах и активации оттока холестерина. Описанные в данном изобретении способ и препараты вызывают быстрое уменьшение или стабилизацию нестабильных атеросклеротических бляшек, которые в случае отсутствия лечения или лечения традиционными способами могут разрываться и приводить к ишемическим событиям, включающим острые коронарные синдромы.
Заявители определили, что экзогенно образующийся миметик ЛПВП, такой как Аро А-Ι Мйаио, предпочтительно такой как комплекс Аро А-Ι Мйаио:фосфолипид, предлагает уникальный подход к лечению и предупреждению сердечно-сосудистого заболевания или родственных расстройств, такие расстройства включают, но не ограничиваются ими, атеросклероз, острые коронарные синдромы, ишемию, ишемическое реперфузионное повреждение, стенокардию и инфаркт миокарда, или уменьшению или стабилизации атеросклеротической бляшки в суженных или закупоренных сосудах. Эти способы, включающие дозы и схемы приема, и фармацевтические препараты по изобретению составляют безопасное, эффективное и нехирургическое лечение, которое быстро активирует отток холестерина и мобилизацию из атеросклеротических бляшек. Активация быстрого оттока холестерина уменьшает объем атеромы в одном или более пораженных сосудах. Уменьшенные атеромы (масса бляшки дегенерированной утолщенной артериальной интимы, встречающейся в атеросклеротических сосудах) делают возможным увеличение кровотока и уменьшение риска ишемии, включая нестабильную стенокардию, инфаркты миокарда и острые коронарные синдромы.
До этого изобретения, которое предлагает фармацевтические препараты Аро А-Ι М и конкретные дозы для лечения и предупреждения сердечно-сосудистого заболевания, включая острые коронарные синдромы, атеросклероз, стенокардию, инфаркт миокарда и ишемическое реперфузионное повреждение, традиционная атеросклеротическая терапия была сосредоточена на снижении ЛПНП, или плохого холестерина, в качестве терапевтической конечной точки. Эти традиционные ЛННП терапии, например лечение статинами, могут потребовать нескольких месяцев лечения, прежде чем у субъекта снизятся уровни ЛПНП в сыворотке крови. При острых или прогрессирующих сердечно-сосудистых расстройствах традиционная терапия, в основном, базировалась на хирургическом вмешательстве, таком как чрескожная транслюминальная коронарная ангиопластика (ЧТКА) и аортокоронарное шунтирование (АКШ). Однако в экстренной ситуации хирургическое вмешательство часто противопоказано некоторым пациентам, в частности пациентам с общим плохим состоянием здоровья. Кроме того, в этих традиционных способах не предлагается нехирургического фармакологического лечения, эффективного в острой ситуации.
Более того, традиционные терапии сосредоточены на лечении симптомов сердечно-сосудистого заболевания и острых коронарных синдромов, особенно в системе кровообращения. Традиционные терапии, как описано выше и более подробно ниже, были сосредоточены на снижении холестерина ЛПНП, уменьшении образования кровяных сгустков и снижении кровяного давления, что не лечит или не предупреждает лежащую в основе причину сердечно-сосудистого заболевания и острых коронарных синдромов, стабилизации, уменьшении и модификации бляшки в сосудистой стенке.
Предложенные в данном изобретении фармацевтические препараты и способы, включая дозы и схемы приема, являются безопасными, эффективными и быстро действуют, уменьшая или стабилизируя атеросклеротическую бляшку. Описанные в данном изобретении дозы являются быстродействующими, что обеспечивает уменьшение атеросклеротической бляшки уже через несколько недель благодаря активации мобилизации холестерина. В некоторых воплощениях дозы, описанные в данном изобретении, могут быть использованы для лечения субъекта, страдающего острыми коронарными синдромами или расстройствами, связанными с ишемией или закупоркой сосудов. В некоторых воплощениях дозы, описанные в данном изобретении, могут быть использованы для предупреждения прогрессирования заболевания в том случае, если атеросклеротические бляшки представляют риск для субъекта. Прогрессирование заболевания, которое предупреждают, может подразумевать дополнительную закупорку сосуда или разрыв нестабильной атеросклеротической бляшки, который может привести к ишемическим состояниям, включающим острые коронарные синдромы и ишемическое реперфузионное повреждение.
Способы и фармацевтические препараты, предложенные в данном изобретении, являются настолько эффективными, что однократная доза 45 мг/кг может стимулировать мобилизацию холестерина из атеросклеротической бляшки. В некоторых воплощениях субъекту можно вводить однократную высокую дозу, например примерно 45 мг/кг, комплекса Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид или его фармацевтического препарата. В некоторых воплощениях одну или более высоких доз комплекса Аро А-Ι
- 2 010134
Мйапо: фосфолипид или его фармацевтического препарата можно вводить субъекту с последующим введением одной или более таких же доз (45 мг/кг) или меньших доз, например примерно 1, примерно 3, примерно 5, примерно 10 или примерно 15 мг/кг. Например, субъекту можно вводить две дозы 45 мг/кг, а затем дополнительные дозы 10 мг/кг. Кроме того, может быть использован альтернативный режим низкой дозы с последующей высокой дозой. Конечно, для острого болезненного состояния предпочтительно сначала использовать более высокие дозы. В некоторых воплощениях субъекта можно лечить с помощью комплекса Аро А-1 Мйапо:фосфолипид или его фармацевтического препарата 1 раз в неделю в течение нескольких недель, а затем периодически, например 2 раза в год, раз в год или каждые 2 года, как требуется для поддержания пациента и незакупоренных сосудов и для уменьшения риска разрыва бляшки и неблагоприятных сосудистых событий.
В некоторых воплощениях способы лечения или предупреждения острых коронарных синдромов включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, комплексов Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их фармацевтических препаратов примерно каждые сутки, примерно через сутки, примерно каждые 3 суток, примерно каждые 4 суток, примерно каждые 5 суток, примерно каждые 6 суток, примерно каждые 7 суток, примерно каждые 8-10 суток или примерно каждые 11-14 суток. В предпочтительном воплощении комплексы Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их фармацевтические препараты можно вводить примерно каждые 7 суток. В некоторых воплощениях введение комплексов Аро А-1 Мйапо:фосфолипид или их фармацевтических препаратов может представлять собой одноразовое введение. В некоторых воплощениях введение можно продолжать в течение примерно 1 недели, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7-12, примерно 13-24 или примерно 25-52 недель. В некоторых предпочтительных воплощениях введение комплексов Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их фармацевтических препаратов осуществляется примерно каждые 7 суток в течение примерно 5 недель. В некоторых воплощениях введение может быть прервано по прошествии, например, примерно 5 недель. Например, субъекта можно лечить 1 раз в неделю в течение примерно 5 недель, а затем лечить примерно 3-4 раза в течение следующего года. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты, описанные в данном изобретении, можно вводить субъекту прерывистым образом для поддержания проходимости сосуда. Например, дозу примерно 15 мг/кг можно вводить при введении фармацевтического препарата примерно каждые 10 суток в течение примерно 7 недель, а затем проводить лечение, например, спустя примерно 26 недель или спустя примерно 52 недели. Другие воплощения, включая схемы приема и применение способов в комбинации с традиционной лекарственной терапией и хирургическими вмешательствами, описаны в данном изобретении ниже.
В изобретении предложены фармацевтические препараты для введения аполипопротеина А-1 Мйапо (Аро А-1 Мйапо) для лечения или предупреждения острых коронарных синдромов и ишемического реперфузионного повреждения. В предпочтительном воплощении Аро А-1 Мйапо образует комплекс с липидом для способов, описанных в данном изобретении. Например, липид может представлять собой фосфолипид, предпочтительно 1-пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3-фосфохолин (также именуемый как 1-пальмитоил-2-олеоил-фосфатидилхолин или РОРС). В наиболее предпочтительном воплощении комплекс Аро А-1 Мйапо:РОРС может представлять собой фармацевтический препарат. В другом предпочтительном воплощении комплекс Аро А-1 Мйапо:фосфолипид или его фармацевтический препарат можно вводить субъекту, нуждающемуся в этом, в дозе от примерно 1 до примерно 100 мг белка/кг.
В некоторых воплощениях способы могут включать введение доз комплексов Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их инъецируемых или жидких фармацевтических препаратов для лечения острых коронарных синдромов. В предпочтительном воплощении комплексы Аро А-1 М:фосфолипид или их фармацевтические препараты можно вводить субъекту, нуждающемуся в этом, в дозе от примерно 1 до примерно 100 мг белка/кг. В некоторых воплощениях способ может включать лечение или предупреждение острых коронарных синдромов путем введения комплексов Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их фармацевтических препаратов посредством внутривенной инфузии. В некоторых воплощениях способы могут включать введение посредством внутривенной струйной инфузии (рикй 1п1и5юп). Под внутривенной струйной инфузией подразумевают, что Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или его фармацевтические препараты вводят внутривенно в течение короткого промежутка времени, например вплоть до 5 мин, например 2-5 мин. В некоторых воплощениях введение комплексов Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их фармацевтических препаратов может включать в себя длительную внутривенную инфузию. Под длительной внутривенной инфузией подразумевают, что комплексы Аро А-1 Мйапо: фосфолипид или их фармацевтические препараты вводят непрерывно в течение более длительного, чем 2-5 мин, периода времени, например от примерно 30 мин до примерно 3 ч. Длительные внутривенные инфузии можно осуществлять с помощью инфузионого насоса или устройства. В некоторых воплощениях введение Аро А-1 Мйапо: фосфолипида или его фармацевтических препаратов может представлять собой комбинацию длительных внутривенных инфузий и внутривенных струйных инфузий (болюсные дозы) комплексов Аро А-1 Мйапо: фосфолипид комплексов или их фармацевтических препаратов. Болюсные дозы можно вводить до, после или во время длительной инфузий. В некоторых воплощениях введение комплексов Аро А-1 Мйапо или липидных комплексов или их фармацевтических препаратов может осуществляться в комбинации с другими лекарствами, которые лечат или предупреждают сердечно-сосудистое заболевание, сопутствующие или соче
- 3 010134 танные заболевания или обеспечивают облегчение симптомов. Введение других лекарств может быть совместным или последовательным.
В способах предложена внутривенная инфузия фармацевтических препаратов, описанных в данном изобретении. Для инфузии может быть использован любой подходящий сосуд, включая периферические сосуды, такие как сосуды локтевой ямки руки или центральной линии грудной клетки. В предпочтительных воплощениях осуществляют инфузию фармацевтического препарата в подкожный латеральный или срединный сосуд локтевой ямки на руке субъекта.
В некоторых воплощениях способы могут включать введение фармацевтического препарата комплекса Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид в высоких или низких дозах или их комбинацию. Как описано в данном изобретении ниже, высокая доза фармацевтического препарата в течение короткого интервала дозирования может безопасно и эффективно уменьшать объем атеромы у субъектов с частично или полностью закупоренными сосудами. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат можно вводить до, во время или после хирургического вмешательства, такого как ЧТКА, чтобы разблокировать закупоренный сосуд. В некоторых воплощениях субъекту можно вводить одну или более прерывистых доз для поддержания проходимости ранее закупоренного сосуда (поддерживающая доза).
В этом изобретении предложен новый подход к лечению или предупреждению ишемического реперфузионного повреждения, а именно применение фармацевтических препаратов или доз комплекса Аро А-Ι Мйаио, описанного в данном изобретении, для лечения ишемической реперфузии. Дозы, полезные для этого лечения, включают дозы вплоть до 100 мг/кг комплекса Аро А-Ι Мйаио:фосфолипид, вводимого субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых воплощениях способы могут включать введение фармацевтической композиции комплекса Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид в дозе от примерно 1 до примерно 100 мг/кг массы тела субъекта. В конкретных воплощениях способы могут включать введение фармацевтической композиции комплекса Аро А-Ι Мйаио:фосфолипид в дозе от примерно 10 до примерно 50 мг/кг. В предпочтительном воплощении способы могут включать введение фармацевтической композиции комплекса Аро А-Ι Мйаио:фосфолипид в конкретной дозе примерно 15 мг/кг. В другом предпочтительном воплощении способы могут включать введение фармацевтической композиции комплекса Аро А-Ι Мйало: фосфолипид в конкретной дозе примерно 45 мг/кг. Изобретение также предпочтительно включает применение дозы 15 мг/кг отдельно или в комбинации с дозой 45 мг/кг. Аналогично, доза 45 мг/кг может быть использована отдельно или в комбинации с дозой 15 мг/кг для лечения или предупреждения ишемического реперфузионного повреждения.
Фармацевтический препарат, предложенный в данном изобретении, содержит комплекс Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид с подходящими значениями рН, осмоляльности, тоничности, чистоты и стерильности для безопасного введения субъекту. Фармацевтические препараты могут быть приготовлены для однократного, одноразового использования или могут быть приготовлены так, чтобы содержать противомикробные эксципиенты, как описано ниже, делающие фармацевтические препараты подходящими для многократных доз. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может находиться в стерильных предварительно заполненных шприцах или стерильных предварительно заполненных мешках, которые можно замораживать или охлаждать. В предпочтительных воплощениях комплекс Аро А-Ι Мйаио: липид представляет собой комплекс Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид. В более предпочтительных воплощениях комплекс Аро А-Ι Мйаио:фосфолипид представляет собой Аро А-Ι Мйапо:РОРС.
В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может находиться в порционных или дозированных упаковках. Как известно специалистам в данной области, порционная упаковка обеспечивает доставку субъекту однократной дозы лекарства. В способах по изобретению предложена порционная упаковка фармацевтического препарата, содержащая, например, 1050 мг Аро А-Ι Мйапо белка на упаковку. Например, 1050 мг Аро А-Ι Мйапо белка представляет собой количество, посредством которого субъекту массой 70 кг вводят 15 мг/кг Аро А-Ι Мйапо. Порция может представлять собой, например, стерильный флакон для одноразового применения, стерильный предварительно заполненный шприц, стерильные предварительно заполненные мешки (т.е. рщдуЬаскх) и т.п.
В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может представлять собой дозированную упаковку. Как известно специалистам в данной области, дозированная упаковка представляет собой удобную установленного размера, готовую для использования пациентом порцию, снабженную этикеткой для адресного распределения учреждениями и специалистами, обеспечивающими медицинское обслуживание. Дозированная упаковка содержит фармацевтический препарат в количестве, необходимом для типичного периода лечения и продолжительности для данного показания. В способах по изобретению предложена дозированная упаковка фармацевтического препарата, содержащего, например, комплекс Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид в количестве, достаточном для лечения взрослых мужчины или женщины среднего роста дозой 15 мг/кг Аро А-Ι Мйаио белка внутривенно 1 раз в неделю в течение 5 недель. Таким образом, дозированная упаковка, как она описана выше, будет иметь пять доз комплекса Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид (доступных во флаконе или предварительно заполненных шприцах). В одном воплощении дозированная упаковка может включать фармацевтический препарат, содержащий комплекс Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид в количестве, достаточном для лечения взрослых мужчины или женщины среднего роста дозой 15 или 45 мг/кг 1 раз в неделю в течение 6 недель. Специалистам в данной
- 4 010134 области будет понятно, что описанные в данном изобретении дозы основаны на массе тела субъекта.
Фармацевтические препараты могут снабжаться этикеткой и иметь сопровождающую аннотацию для идентификации препарата, содержащегося в упаковке, и другие сведения, полезные для учреждений и специалистов, обеспечивающих медицинское обслуживание, и субъектов при лечении острых коронарных синдромов, включая, но не ограничиваясь этим, инструкции по применению, дозу, интервал между приемами доз, продолжительность лечения, показания к применению, противопоказания, предупреждающие указания, меры предосторожности, инструкции по обороту и хранению и т. п.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показан сильный эффект однократной дозы ЕТС-216 на ИНВП сыворотки крови у нормальных мужчин;
на фиг. 2(А) показан электромеханический оттягивающий механизм ΐνϋδ визуализирующего катетера, начинающийся в дистальной фидуциарной ветви (участок С) и заканчивающийся в проксимальной ветви (участок А). Путь катетера показан на ангиограмме;
на фиг. 2(В) показан типичный поперечный срез сосуда, который получают через каждые 0,5 мм до тех пор, пока не будет достигнута проксимальная ветвь;
на фиг. 2(С) показан промежуточный поперечный срез сосуда;
на фиг. 2(Ό) показана дистальная ветвь в ΐνϋδ изображении;
на фиг. 3(А) показан поперечный срез для анализа;
на фиг. 3(В) показана наружная эластическая мембрана (ЕЕМ);
на фиг. 3(С) показана площадь просвета сосуда;
на фиг. 3(Ό) показан расчет максимальной толщины атеромы, измеренной путем вычитания площади поперечного сечения просвета сосуда из площади ЕЕМ;
на фиг. 4(А) представлено исходное изображение сосуда пациента перед приемом ЕТС-216;
на фиг. 4(В) представлено изображение сосуда пациента в конце исследования после приема ЕТС216. Площадь атеромы уменьшилась с 8,1 до 5,35 мм3 практически без изменения площади просвета;
на фиг. 5 представлен пример протокола, где изолированные сердца кроликов обрабатывали наполнителем или комплексом белок/липид по изобретению (ЕТС-216) до начала ишемии;
на фиг. 6 представлена креатинкиназная активность в коронарном венозном оттоке;
на фиг. 7 представлен мониторинг в реальном масштабе времени сердечной функции, полученной на изолированном сердце кролика, обработанном наполнителем и ЕТС-216, в аппарате Лангердорфа (БапдспбогГГ);
на фиг. 8 показаны временные изменения диастолического давления в левом желудочке (ΕνΟΡ) в изолированных сердцах кроликов до, во время и после 30 мин глобальной ишемии и 60 мин реперфузии;
на фиг. 9 показаны временные изменения конечного диастолического давления в левом желудочке (ΕνΕΌΡ) в изолированных сердцах кроликов до, во время и после 30 мин глобальной ишемии и 60 мин реперфузии;
на фиг. 10 показаны временные изменения коронарного перфузионного давления (СРР) в изолированных сердцах кроликов до, во время и после 30 мин глобальной ишемии и 60 мин реперфузии;
на фиг. 11 представлено содержание липидных гидропероксидов в тканевых гомогенатах из обработанных наполнителем и ЕТС-216 сердец кроликов, подвергнутых глобальной ишемии в течение 30 мин, а затем 60 мин реперфузии;
на фиг. 12 представлены электронно-микроскопические изображения образцов сердечной мышцы из сердец кроликов, обработанных наполнителем и ЕТС-216;
на фиг. 13 представлен дополнительный протокол настоящего изобретения, где одну предварительную обработку осуществляли до начала ишемии в группе срочного введения и две предварительные обработки осуществляли до начала ишемии в группе длительного введения;
на фиг. 14 представлен протокол определения размера инфаркта;
на фиг. 15 представлен процент инфаркта от площади риска, процент инфаркта левого желудочка и процент площади риска левого желудочка у кроликов, обработанных 1 раз (т.е. срочное лечение) или обработанных 2 раза (т.е. длительное лечение) ЕТС-216 (100 мг/кг) или эквивалентным объемом наполнителя;
на фиг. 16 представлен дополнительный протокол настоящего изобретения, где кроликов предварительно обрабатывали до начала ишемии либо наполнителем (группа 1), либо 10, 3 или 1 мг/кг ЕТС-216 (группа 2);
на фиг. 17 представлены процент инфаркта от площади риска, процент инфаркта левого желудочка и процент площади риска левого желудочка, которые определяли у кроликов, обработанных 1 раз (т.е. срочное лечение) 10, 3 или 1 мг/кг ЕТС-216 или эквивалентным объемом сахарозоманнитного наполнителя для каждой группы;
на фиг. 18 представлены временные изменения уровня неэтерифицированного холестерина липопротеинов;
на фиг. 19 представлен дополнительный протокол настоящего изобретения, где однократное введение наполнителя и ЕТС-216 осуществляли в течение последних 5 мин 30-минутного периода ишемии; и на фиг. 20 представлены процент инфаркта от площади риска, процент инфаркта левого желудочка и процент площади риска левого желудочка, определенные у кроликов.
Подробное описание изобретения
Определения
Используемые в данном описании следующие термины должны иметь следующее значение.
- 5 010134
Термины лечить, лечение или терапия относятся к способу облегчения или устранения заболевания, расстройства и/или его симптомов.
Термин терапевтически эффективное количество относится к такому количеству комплекса Аро А-Ι Мбапо или липидного комплекса или его фармацевтического препарата, которое достаточно для облегчения до некоторой степени одного или более симптомов состояния или расстройства, которое лечат.
Термины предупреждать, предупреждение или профилактика относятся к способу исключения приобретения субъектом заболевания, расстройства и/или его симптомов. В некоторых воплощениях термины предупреждать, предупреждение или профилактика относятся к способу уменьшения риска приобретения заболевания, расстройства и/или его симптомов.
Термин профилактически эффективное количество относится к такому количеству комплекса Аро А-Ι Мйаио или липидного комплекса или его фармацевтического препарата, которое достаточно для того, чтобы предупредить начало или рецидив одного или более симптомов состояния или расстройства, которое лечат.
Термин острые коронарные синдромы относится к ишемическим расстройствам, таким как нестабильная стенокардия, инфаркт миокарда с зубцом О и без зубца О. или как предложено в 9-м издании Международной классификации болезней (1п1ета!юиа1 С1а88гГ1еа!юи о! Эхвеазе, ΙΟΌ-9), замененном 10-м изданием (Ιί.Ό-10). Инфаркт миокарда может быть представлен на электрокардиограмме с подъемом или без подъема сегмента 8Т.
Термин ишемия относится к местной анемии в результате механически или биологически индуцированной, например посредством спазма, тромбоза, стеноза, обструкции (главным образом, артериального сужения или нарушения) кровоснабжения. Термин ишемия миокарда относится к недостаточному кровообращению в миокарде, обычно в результате заболевания коронарной артерии.
Термин ишемическая реперфузия относится к восстановлению в ткани повышенного количества крови, насыщенной кислородом.
Термин сердечно-сосудистые заболевания относится к заболеваниям сердца, кровеносных сосудов и кровообращения, таким как инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, атеросклероз, стенокардия, ишемическое реперфузионное повреждение и родственные расстройства.
Используемый в данном описании термин хирургическое вмешательство относится к мануальным, нефармакологическим или оперативным способам. Хирургическое вмешательство может осуществляться для диагностических, радиологических, профилактических или лечебных целей.
Термин нестабильная стенокардия относится к изменению частоты, тяжести или длительности симптомов хронической стабильной стенокардии, таких как боль в груди, которая может распространяться в челюсти и руки, или эпигастральная боль. Хроническая стабильная стенокардия представляет собой боль в груди, которая может распространяться в челюсти и руки субъекта и которая индуцируется физической нагрузкой, приемом пищи и/или стрессом и ослабляется в состоянии покоя без нового изменения частоты или силы активности, необходимой для продуцирования симптомов.
Термин фармацевтический препарат относится либо к композиции, содержащей Аро А-Ι Мйаио или комплекс Аро А-Ι Мйаио: липид и подходящий разбавитель, носитель, наполнитель или эксципиенты, подходящие для введения субъекту. Этот термин включает, но не ограничивается этим, пероральные, парентеральные композиции и композиции для местного применения, как описано ниже.
Термин примерно относится к сравнительному термину, обозначающему приближение плюс или минус 20% от номинальной величины, к которой оно относится. Для области этого описания этот уровень приближения является подходящим, если эта величина не указана специально как требующая более узкого диапазона.
Термин этикетка относится к изображению написанных, напечатанных или графических сведений непосредственно на контейнере для продукта, например написанных сведений, изображенных на флаконе, содержащем фармацевтически активный агент.
Термин этикетирование относится ко всем этикеткам и другим написанным, напечатанным или графическим сведениям на любом продукте или любом контейнере для него или обертке или, например, на вкладыше в упаковку, сопровождающем такой продукт, на видеолентах с инструкциями или цифровых видеодисках (ЭУЭ) с инструкциями, сопровождающих или связанных с контейнером для фармацевтически активного агента.
Способы лечения
В изобретении предложены способы и препараты для лечения или предупреждения острых коронарных синдромов, включая нестабильную стенокардию, инфаркт миокарда с подъемом сегмента 8Т и инфаркт миокарда без зубца О. Для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов заявителями были определены безопасные и эффективные дозы для фармацевтических препаратов, описанных в данном изобретении.
На основе современного понимания возникла система взглядов, которая изменила клинические картины, называемые теперь острыми коронарными синдромами (ОКС) (там же). Острые коронарные синдромы включают нестабильную стенокардию, инфаркт миокарда с зубцом О и без подъема сегмента 8Т и являются основной причиной заболеваемости и смертности, особенно в течение первых 24 ч после возникновения (8е1юеп11адеп е! а1., 2000, С1геи1а!юп 101: 598-603). ОКС представляет собой ишемический дискомфорт, который представлен на электрокардиографе подъемом без сегмента 8Т. Ишемия часто развивается в нестабильную стенокардию, инфаркт миокарда с зубцом О и без зубца О (АпЦпап апб Вгаинта1б,
- 6 010134
АсШе Муосагб1а1 ΙηΓαίΌΐίοη ίη Неай Э^еаке, А ТехФоок оГ Сагб1оуа8си1аг Мебюше, б411 ебШон νοί. 2, Вгаип^аИ е( а1., ебк, 2001, А.В. 8аш1бег5 Сошраиу, РЫ1абе1рЫа).
В способах и препаратах по изобретению предложен уникальный и эффективный подход к лечению атеросклероза и острых коронарных синдромов. В способах по изобретению комплексы Аро А-Ι МПано: фосфолипид или их фармацевтические препараты обеспечивают не облегчение симптомов, а нехирургическое лечение, которое отменяет патофизиологическую основу этого заболевания. В способах по изобретению предложено введение Аро А-Ι МПано, комплекса Аро А-Ι МПано: фосфолипид или их фармацевтических препаратов, обеспечивающих ДНВП терапию, которая стимулирует отток холестерина, обратный транспорт холестерина и уменьшает атеросклеротическую бляшку. Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что Аро А-Ι МПано, комплекс Аро А-Ι МПано: фосфолипид или их фармацевтические препараты имитируют функциональный ДНВП, который стимулирует отток холестерина и обратный транспорт холестерина, уменьшает объем атеромы и может стабилизировать атеросклеротическую бляшку.
В изобретении предложены способы лечения острых коронарных синдромов. В предпочтительных воплощениях комплексы Аро А-Ι МПано:фосфолипид или их фармацевтические препараты, как описано ниже, можно вводить в дозе от примерно 1 до примерно 100 мг белка/кг, предпочтительно в дозе от 1 до 50 мг белка/кг; наиболее предпочтительно 15 или 45 мг/кг. Заявители показали, что эти дозы являются безопасными, эффективными и хорошо переносятся субъектами, страдающими острыми коронарными синдромами, или с риском острых коронарных синдромов, как подробно описано в данном изобретении.
В изобретении предложены способы лечения или предупреждения острых коронарных синдромов, включая облегчение или улучшение признаков или симптомов острых коронарных синдромов. В некоторых воплощениях предложены способы лечения или уменьшения коронарного атеросклероза. В некоторых воплощениях предложены способы активации оттока холестерина из пораженных сосудов. В некоторых воплощениях предложены способы активации обратного транспорта холестерина. В одном воплощении предложены способы уменьшения объема атеромы в пораженном сосуде. В некоторых воплощениях пораженный сосуд представляет собой коронарную артерию. Как описано в данном изобретении, объем атеромы может быть определен с помощью внутрисосудистого ультразвука (Ινϋδ). В некоторых воплощениях предложены способы уменьшения общего объема бляшки в пораженном сосуде. В некоторых воплощениях предложены способы уменьшения средней максимальной толщины бляшки в пораженном сосуде. В некоторых воплощениях предложены способы уменьшения средней максимальной толщины атеромы. В некоторых воплощениях предложены способы уменьшения объема бляшки, по меньшей мере, площади бляшки, выраженной в процентах. В некоторых воплощениях предложены способы уменьшения наибольшей площади бляшки, выраженной в процентах. В некоторых воплощениях предложены способы увеличения среднего диаметра просвета артерии в пораженном коронарном сосуде. В некоторых воплощениях субъект, в отношении которого применяют способы и препараты по изобретению, может иметь уменьшенные ангиографические повреждения по сравнению с субъектами, в отношении которых не применяют способы и препараты по изобретению. В некоторых воплощениях предложены способы регрессии уже существующих повреждений. В некоторых воплощениях способы и фармацевтический препарат предложены для достижения проходимости закупоренного сосуда или поддержания проходимости закупоренного сосуда.
В некоторых воплощениях дозы комплекса Аро А-Ι МПано: фосфолипид от примерно 15 до примерно 45 мг/кг предложены для уменьшения среднего процентного объема атеромы на примерно 2, примерно 1 или примерно 0,05%. В некоторых воплощениях дозы комплекса Аро А-Ι Мбаш^осфолипид от примерно 15 до примерно 45 мг/кг предложены для уменьшения объема атеромы, составляющего примерно 20, примерно 15, примерно 10 или примерно 5 мм3. В некоторых воплощениях дозы комплекса Аро А-Ι МПано: фосфолипид от примерно 15 до примерно 45 мг/кг предложены для уменьшения средней максимальной толщины атеромы на величину от примерно -0,039 до -0,044 мм.
В одном воплощении предложены способы лечения острых коронарных синдромов у субъектов с признаками или симптомами острых коронарных синдромов. В одном воплощении субъекты могут иметь признаки и/или симптомы ишемии миокарда, например боль в груди, челюсти, руках или эпигастральной области, учащенное сердцебиение, одышку, потоотделение, тошноту и/или рвоту. В другом воплощении предложены способы лечения острых коронарных синдромов у субъектов, демонстрирующих признаки и симптомы острых коронарных синдромов в сочетании с изменениями в электрокардиограме (ЭКГ), такими как подъемы сегмента 8Т, изменения зубца Т, такие как инверсии, увеличениями креатинкиназной фракции, тропонина Ι или С-реактивного белка.
В одном воплощении предложены способы предупреждения острых коронарных синдромов у субъектов с риском развития острых коронарных синдромов. Такие субъекты могут включать в себя субъектов разных возрастов (например, 18-24, примерно 25, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно б0, примерно 70, примерно 80 или примерно 90 лет), субъектов с семейным анамнезом сердечно-сосудистого заболевания или генетической предрасположенностью к сердечно-сосудистому заболеванию, субъектов, у которых имеется диабет, гипертензия, множественное сосудистое заболевание или заболевание главных сосудов левой половины тела или у которых ранее имел место инфаркт миокарда.
Специалистам в данной области понятно, что фактическая доза препаратов по изобретению может
- 7 010134 варьировать в зависимости от роста, массы, возраста, тяжести заболевания субъекта, наличия сопутствующих медицинских состояний и т.п. Например, пожилого субъекта с нарушенной почечной или печеночной функцией можно лечить дозой комплекса Аро А-Ι МПа по: липид, которая находится в нижнем диапазоне доз около 1 мг/кг (например, 0,8 или 0,9 мг/кг). Субъекта с тяжелыми острыми коронарными синдромами, страдающего ожирением, с хорошей почечной и печеночной функцией можно лечить дозой комплекса Аро А-Ι МПапо: липид, которая находится, например, в верхнем диапазоне доз около 100 мг/кг (например, 120, 119, 118, 115 мг/кг и т.п.). Было показано, что дозировка препаратов, описанных в данном изобретении, является эффективной для достижения намеченной цели. Эти дозы достигают диапазона циркулирующих концентраций, которые включают эффективную дозу с приемлемым профилем риск/польза.
В изобретении предложены способы лечения или предупреждения острых коронарных синдромов с режимом введения доз, достаточным для лечения острых коронарных синдромов у субъекта, нуждающегося в таком лечении. В некоторых воплощениях комплекс Аро А-Ι М11апо:фосфолипид или его фармацевтический препарат, как описано ниже, можно вводить примерно каждые сутки, примерно через сутки, примерно каждые 3 суток, примерно каждые 4 суток, примерно каждые 5 суток, примерно каждые 6 суток, примерно каждые 7 суток, примерно каждые 8-10 суток или примерно каждые 11-14 суток. Этот период времени также упоминается как интервал между введением доз или интервал. В некоторых воплощениях интервал между введением доз может составлять каждый месяц, каждые 6, каждые 12, каждые 18 месяцев или каждые 24 месяца. В предпочтительных воплощениях Аро А-Ι МПапо. липидный комплекс или его фармацевтический препарат можно вводить примерно каждые 7 суток. В некоторых воплощениях введение комплексов Аро А-Ι МПапо:фосфолипид или их фармацевтических препаратов может представлять собой однократное введение. В некоторых воплощениях введение можно продолжать в течение примерно 1 недели, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7-12, примерно 13-24, примерно 52 недель или продолжать в течение жизни субъекта. Этот период времени также обозначается как продолжительность введения доз, продолжительность лечения или продолжительность. Таким образом, режим введения доз может представлять собой, например, фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι МПапо:фосфолипид, вводимый примерно каждые 7 суток в течение примерно 6 недель. В некоторых воплощениях введение доз может продолжаться с перерывами после примерно 52 недель. Например, субъекта можно лечить 1 раз в неделю в течение примерно 52 недель и затем лечить от примерно 3 до примерно 4 раз в течение следующего года. В некоторых предпочтительных воплощениях введение фармацевтического препарата, содержащего комплекс Аро А-Ι МПапо: фосфолипид, происходит примерно каждые 7 суток в течение примерно 5 недель. Другие режимы введения доз, в которых используют различные интервалы между введением доз и продолжительности, также входят в объем изобретения, как описано в данном изобретении.
Доза комплекса Аро А-Ι МПапо:фосфолипид или его фармацевтических препаратов может варьировать в течение периода лечения. Например, субъекта можно лечить дозой 45 мг/кг фармацевтического препарата комплекса Аро А-Ι МПапо: фосфолипид 1 раз в неделю в течение 3 недель, а затем лечить дозой 15 мг/кг фармацевтического препарата комплекса Аро А-Ι МПапо: фосфолипид 1 раз каждые 4 месяца или 1 раз в год на протяжении жизни субъекта. Такие периодические дозы можно вводить для поддержания проходимости сосуда. Периодические дозы на протяжении жизни субъекта для поддержания уменьшенного объема атеромы и увеличенного просвета сосуда входят в объем изобретения.
Способы и препараты по настоящему изобретению могут быть использованы в сочетании с хирургическим вмешательством, т.е. до, во время или после операции. Хирургическое вмешательство может включать в себя ангиопластику, внутрисосудистое ультразвуковое исследование, аортокоронарное шунтирование (АКШ), коронарную ангиографию, имплантацию сосудистых эндопротезов, чрескожное коронарное вмешательство (ЧКВ) и/или стабилизацию бляшек. В некоторых воплощениях предложены способы введения доз комплекса Аро А-Ι МПапо:фосфолипид или его фармацевтических препаратов до или после хирургического вмешательства для того, чтобы раскрыть закупоренный сосуд или уменьшить атеросклеротическую бляшку в сосуде. Хирургическое вмешательство относится к мануальным, нефармакологическим или оперативным способам, используемым для диагностики, визуализации (радиология), предупреждения или лечения заболевания или состояния. Например, внутрисосудистое ультразвуковое исследование (Ινϋδ) и коронарная ангиография представляют собой процедуры, которые могут обеспечить количественную оценку массы бляшки (диагностическая цель), ангиография может обеспечить изображения сосудов (радиологическая цель), а ангиопластика может раскрыть закупоренный сосуд (лечебная цель). Все они включены в качестве хирургических вмешательств, используемых в данном изобретении.
Аполипопротеин А-Ι МПапо
В одном аспекте настоящего изобретения предложены способы и препараты для лечения, уменьшения или предупреждения повреждения от острых коронарных синдромов путем введения препарата, содержащего Аро А-Ι МПапо. В некоторых воплощениях Аро А-Ι МПапо может образовывать комплекс с липидом.
Аро А-Ι МПапо человека представляет собой природный вариант Аро А-Ι (ХУсЬщаЬсг с1 а1., 1980, 1. СПп. БксЧ. 66: 901-907). В Аро А-Ι МПапо аминокислота аргинин (Атд173) заменена аминокислотой цистеин (Су§173). Поскольку Аро А-Ι МПапо содержит один остаток цистеина на полипептидную цепь, то он может существовать в мономерной, гомодимерной или гетеродимерной форме (см. патент США № 5876968,
- 8 010134 включенный в данное описание путем ссылки во всей его полноте). Эти формы являются химически взаимозаменяемыми, и термин Аро А-1 Мйаио не делает различий между этими формами. На уровне ДНК вариантная форма является результатом замены С на Т в генной последовательности, т.е. кодон ССС меняется на ТСС, разрешая трансляцию цистеина (Сук) вместо аргинина (Агд) в аминокислотном положении 173.
В некоторых воплощениях Аро А-Σ Мйаио может представлять собой вариант Аро А-Σ Мйаио или Аро А-1 Мйаио с консервативной заменой. Под консервативной заменой подразумевают, что некоторые аминокислотные остатки Аро А-1 Мйаио могут быть заменены другими аминокислотными остатками без существенного неблагоприятного воздействия на активность белка. Таким образом, в настоящем изобретении также рассматриваются измененные формы Аро А-1 Мйаио или формы с заменами, где по меньшей мере один определенный аминокислотный остаток в структуре заменен другим аминокислотным остатком. С целью определения консервативных аминокислотных замен аминокислоты могут быть удобно классифицированы на две основные категории - гидрофильную и гидрофобную - в зависимости, главным образом, от физико-химических характеристик аминокислотной боковой цепи. Эти две основные категории могут быть дополнительно классифицированы на подкатегории, которые более четко определяют характеристики аминокислотных боковых цепей. Например, класс гидрофильных аминокислот может быть дополнительно подразделен на кислые, основные и полярные аминокислоты. Класс гидрофобных аминокислот может быть дополнительно подразделен на неполярные и ароматические аминокислоты. Определения различных категорий аминокислот, которые определяют структуру (I), представляют собой следующее.
Гидрофильная аминокислота относится к аминокислоте, проявляющей гидрофобность меньше нуля согласно стандартизованной согласованной шкале гидрофобности Айзенберга (Е1кепЬегд е! а1., 1984, Σ. Мо1. Вю1. 179: 125-142). Генетически кодируемые гидрофильные аминокислоты включают в себя ТНг (Т), §ет (δ), Ηίκ (Η), С1и (Е), Аки (Ν), С1п (О), Акр (Ό), Бук (К) и Агд (В).
Кислая аминокислота относится к гидрофильной аминокислоте, имеющей величину рК для боковой цепи меньше 7. Кислые аминокислоты типично имеют отрицательно заряженные боковые цепи при физиологическом значении рН в результате потери иона водорода. Генетически кодируемые кислые аминокислоты включают в себя С1и (Е) и Акр (Ό).
Основная аминокислота относится к гидрофильной аминокислоте, имеющей величину рК для боковой цепи больше 7. Основные аминокислоты типично имеют положительно заряженные боковые цепи при физиологическом значении рН в результате ассоциации с ионом гидрония. Генетически кодируемые основные аминокислоты включают в себя Н1к (Н), Агд (В) и Бук (К).
Полярная аминокислота относится к гидрофильной аминокислоте, имеющий боковую цепь, которая при физиологическом значении рН является незаряженной, но которая имеет по меньшей мере одну связь, в которой пара электронов, общая для 2 атомов, удерживается ближе к одному из атомов. Генетически кодируемые полярные аминокислоты включают в себя Акп (Ν), С1п (О), 8ет (δ) и ТНг (Т).
Гидрофобная аминокислота относится к аминокислоте, проявляющей гидрофобность больше нуля согласно стандартизованной согласованной шкале гидрофобности Айзенберга (Е1кепЬегд, 1984, Σ. Мо1. Вю1. 179: 125-142). Генетически кодируемые гидрофобные аминокислоты включают в себя Рго (Р), 11е (I), РНе (Е), Уа1 (V), Беи (Б), Тгр (V), Ме! (М), А1а (А), С1у (С) и Туг (Υ).
Ароматическая аминокислота относится к гидрофобной аминокислоте с боковой цепью, имеющей по меньшей мере одно ароматическое или гетероароматическое кольцо. Ароматическое или гетероароматическое кольцо может содержать один или более чем один заместитель, такой как -ОН, -δΗ, -ΟΝ, -Е, -С1, -Вг, -I, -ΝΟ2, -ΝΟ, -ΝΗ2, -ΝΗΒ, -ΝΒΒ, -С(О)В, -С(О)ОН, -С(О)ОВ, -С(О)КИ2, -φ)ΝΗΒ, <(Ο)ΝΒΒ и т.п., где каждый В независимо представляет собой (С1-С6)алкил, замещенный (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкенил, замещенный (С1-С6)алкенил, (С1-С6)алкинил, замещенный (С1-С6)алкинил, (С5-С20)арил, замещенный (С5-С20)арил, (С6-С26)алкарил, замещенный (С6-С26)алкарил, 5-20-членный гетероарил, замещенный 5-20-членный гетероарил, 6-26-членный алкгетероарил или замещенный 6-26-членный алкгетероарил. Генетически кодируемые ароматические аминокислоты включают в себя РНе (Е), Туг (Υ) и Тгр (XV).
Неполярная аминокислота относится к гидрофобной аминокислоте, имеющей боковую цепь, которая является незаряженной при физиологическом значении рН и которая имеет связи, в которых пара электронов, общая для 2 атомов, обычно удерживается в равной степени каждым из 2 атомов (т.е. боковая цепь является неполярной). Генетически кодируемые неполярные аминокислоты включают в себя Беи (Б), ν81 (V), 11с (I), Ме! (М), С1у (С) и А1а (А).
Алифатическая аминокислота относится к гидрофобной аминокислоте, имеющей алифатическую углеводородную боковую цепь. Генетически кодируемые алифатические аминокислоты включают в себя А1а (А), ν81 (V), Беи (Б) и Йе (I).
Аминокислотный остаток Сук (С) является необычным в том смысле, что он может образовывать дисульфидные мостики с другими Сук (С) остатками или другими сульфанилсодержащими аминокислотами. Способность Сук (С) остатков (и других аминокислот с боковыми цепями, содержащими -δΗ) существовать в пептиде либо в восстановленной свободной -δΗ, либо окисленной, образующей дисульфидный мостик форме оказывает влияние на то, будут ли Сук (С) остатки иметь общий гидрофобный или гидрофильный характер в пептиде. Хотя Сук (С) проявляет гидрофобность 0,29 согласно стандартизованной согласованной шкале Айзенберга (Е1кепЬегд, 1984, выше), следует понимать, что для целей на
- 9 010134 стоящего изобретения Сук (С) классифицирована как полярная гидрофильная аминокислота, несмотря на общие классификации, приведенные выше.
Как будет понятно специалистам в данной области, определенные выше категории не являются взаимоисключающими. Так, аминокислоты, имеющие боковые цепи, проявляющие два или более физико-химических свойств, могут быть включены в различные категории. Например, аминокислотные боковые цепи, имеющие ароматические группировки, которые дополнительно замещены полярными заместителями, такие как Туг (Υ), могут проявлять как ароматические гидрофобные свойства, так и полярные или гидрофильные свойства, и поэтому могут быть включены как в ароматическую, так и в полярную категорию. Подходящая классификация любой аминокислоты будет очевидна специалистам в данной области, особенно в свете подробного описания, предложенного в данном изобретении. В некоторых воплощениях замещенная или измененная форма Аро А-Ι Мйаио не является Аро А-Ι.
Аро А-Ι Мйаио, используемый в изобретении, может быть получен из любого доступного источника. Например, Аро А-Ι Мйаио может быть рекомбинантным, синтетическим, полусинтетическим или очищенным Аро А-Ι Мйапо. В предпочтительном воплощении Аро А-Ι Мйаио может быть рекомбинантным белком (гАро А-Ι Мйаио), экспрессирующимся в дрожжах или Е. сой, как описано в патенте США № 5721114 и в европейских патентах ЕР 0469017 и ЕР 0267703, включенных в данное описание путем ссылки во всей их полноте. Способы получения Аро А-Ι Мйаио, используемые в изобретении, хорошо известны в данной области. Например, Аро А-Ι Мйаио может быть выделен из плазмы, например, путем центрифугирования в градиенте плотности с последующим осуществлением делипидизации липопротеина, восстановления, денатурации и гель-фильтрационной хроматографии, ионообменной хроматографии, гидрофобной, например фенилсефарозной, хроматографии с взаимодействием или иммуноаффинной хроматографии или получен синтетически, полусинтетически или с использованием методов рекомбинантных ДНК, известных специалистам в данной области, и последующей очистки, также хорошо известной специалистам в данной области (см., например, патенты США №№ 6107467, 6559284, 6423830, 6090921, 5834596, 5990081, 6506879, Ми1иде!а е! а1., 1998, 1. СйгошаЮдг. 798 (1-2): 83-90; Сйипд е! а1., 1980, 1. Ырй Век. 21 (3): 284-91; Сйеипд е! а1., 1987, 1. Ырй Век. 28 (8): 913-29; Регккои, е! а1., 1998, 1. СйгошаЮдг. 711: 97-109; патенты США №№ 5059528, 5834596, 5876968 и 5721114 и публикации РСТ АО 86/04920 и АО 87/02062).
Если Аро А-Ι Мйаио получают из природных источников, то он может быть получен из любого животного любого вида. В некоторых воплощениях Аро А-Ι Мйаио может иметь происхождение от млекопитающего. В некоторых воплощениях Аро А-Ι Мйаио может иметь происхождение от человека. В предпочтительных воплощениях изобретения Аро А-Ι Мйаио происходит от того же вида, что и субъект, которому вводят Аро А-Ι Мйаио. В предпочтительном воплощении Аро А-Ι Мйаио является рекомбинантным белком Аро А-Ι Мйаио (гАро А-Ι Мйаио).
Способы введения
Комплексы Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид или их фармацевтические препараты можно вводить любым подходящим путем, известным специалистам в данной области, который обеспечивает биодоступность в кровоток. Может быть использован любой путь введения, который обеспечивает терапевтически эффективное количество препаратов по изобретению. Путь введения может быть определен типом фармацевтического препарата. Например, инъецируемые препараты можно вводить парентерально, включая, но не ограничиваясь этим, внутривенные (в/в), внутримышечные (в/м), интрадермальные, подкожные (п/к), внутрикоронарные, внутриартериальные, перикардиальные, внутрисуставные и интраперитонеальные (и/п) инъекции (см., например, ВоЫикои е! а1., 1989, Ш: Рйагтасо!йегару: А Ра11юр11укю1ощс Арргоасй, 011.2, рр. 15-34, включенный в данное описание путем ссылки во всей его полноте).
В предпочтительном воплощении комплексы Аро А-Ι Мйаио: фосфолипид или их фармацевтические препараты можно вводить парентерально. В более предпочтительном воплощении парентеральное введение является внутривенным. Внутривенное введение может осуществляться в виде болюса, вводимого, например, в течение примерно 2-3 мин или путем длительной инфузии, например посредством насоса, в течение примерно 1 ч или непрерывного введения в течение примерно 24 ч. В предпочтительном воплощении инфузию можно осуществлять в течение от примерно 1 до примерно 3 ч.
В способах предложена внутривенная инфузия фармацевтических препаратов, описанных в данном изобретении. В качестве места для инфузии может быть выбран любой подходящий сосуд, включая периферические сосуды, такие как сосуды локтевой ямки руки или центральной линии грудной клетки. В предпочтительных воплощениях осуществляют инфузию фармацевтического препарата в подкожный латеральный или срединный сосуд в локтевой ямке на руке субъекта.
В некоторых воплощениях введение может осуществляться посредством механического насоса или устройства для доставки, например устройства для доставки в перикард (РегЭиСЕВ®) или аппарата искусственного кровобращения.
Липидные комплексы
В некоторых воплощениях способы по изобретению включают введение липидных комплексов Аро А-Ι Мйаио. В некоторых воплощениях изобретения предложены фармацевтические препараты комплексов Аро А-Ι Мйаио:фосфолипид. Эффективность может быть увеличена путем образования комплексов
- 10 010134 липидов с Аро А-Ι Мйапо. В типичном случае липид смешивают с Аро А-Ι Мйапо перед введением. Аро А-Ι Мйапо и липиды могут быть смешаны в водном растворе в подходящих соотношениях и могут быть подвергнуты комплексообразованию способами, известными в данной области, включая лиофилизацию, солюбилизацию с помощью детергента с последующим диализом, микрофлуидизацию, обработку ультразвуком и гомогенизацию. Выход комплексов можно оптимизировать, например, путем изменения давления, частоты ультразвука или концентрации детергента. Примером детергента, обычно используемого для получения комплексов Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид, является холат натрия.
В некоторых случаях для лечения или предупреждения острых коронарных синдромов предпочтительней вводить только Аро А-Ι Мйапо, по существу, не содержащий липидов. В предпочтительных воплощениях комплекс Аро А-Ι Мйапо:липид вводят субъекту, нуждающемуся в этом.
В одном воплощении комплекс Аро А-Ι Мйапо:фосфолипид комплекс может находиться в растворе с подходящим фармацевтическим разбавителем. В другом воплощении высушенные сублимацией или лиофилизированные препараты комплексов Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид могут быть гидратированы или разведены подходящим фармацевтическим разбавителем перед введением. В другом воплощении комплексы Аро А-Ι Мйапо: липид могут представлять собой замороженные препараты, которые оттаивают до получения однородного раствора перед тем, как вводить субъекту, нуждающемуся в этом.
Липид может представлять собой любой подходящий липид, известный специалистам в данной области. Могут быть использованы липиды, не содержащие фосфор, включая стеариламин, додециламин, ацетилпальмитат, (1,3)-О-маннозил-(1,3)диглицерид, аминофенилгликозид, 3-холестерил-6'-(гликозилтио) гексилэфирные гликолипиды, М-(2,3-ди(9-(2)-октадеценилокси))-проп-1-ил-М,М,М-триметиламмония хлорид и амиды жирных кислот. В предпочтительных воплощениях липид представляет собой фосфолипид.
Фосфолипид может быть получен из любого источника, известного специалистам в данной области. Например, фосфолипид может быть получен из коммерческих источников, природных источников или синтетическими или полусинтетическими способами, известными специалистам в данной области (Ме1'шсйик е! а1., 1987, Ааг. ВюкЫт. Ζ11. 59 (6): 75-7; Ме1'шсйик е! а1., 1987, икг. ВюкЫт. Ζ11. 59 (5): 6670; Ватекй е! а1., 1979, 1. Ат. Ой Сйет. §ое. 56 (5): 585-7; Ра!е1 апб 8рагго\у. 1978, 1. СЫота!одг. 150 (2): 542-7; Кайиее е! а1., 1983, 1. Ыр1б Век. 24 (10): 1398-403; 8ей1ие!ег е! а1., 2003, Огд. Ьей. 5 (3): 255-7; Ткнц е! а1., 2002, №рроп Уакшгдаки Ζηκκίιί 120 (1): 67Р-69Р).
В предпочтительных воплощениях липид может представлять собой фосфолипид. Фосфолипид может представлять собой любой фосфолипид, известный специалистам в данной области. Например, фосфолипид может представлять собой фосфолипид с небольшой алкильной цепью, фосфатидилхолин, яичный фосфатидилхолин, соевый фосфатидилхолин, дипальмитоилфосфатидилхолин, соевый фосфатидилглицерин, яичный фосфатидилглицерин, дистеароилфосфатидилглицерин, димиристоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилхолин, дилаурилфосфатидилхолин, 1-миристоил-2-пальмитоилфосфатидилхолин, 1-пальмитоил-2-миристоилфосфатидилхолин, 1-пальмитоил-2-стеароилфосфатидилхолин, 1-стеароил-2-пальмитоилфосфатидилхолин, диолеоилфосфатидилхолин, 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилхолин, 1-олеоил-2-пальмитилфосфатидилхолин, диолеоилфосфатидилэтаноламин, дилауроилфосфатидилглицерин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозит, фосфатидилглицерин, дифосфатидилглицерин, димиристоилфосфатидилглицерин, дипальмитоилфосфатидилглицерин, дистеароилфосфатидилглицерин, диолеоилфосфатидилглицерин, фосфатидную кислоту, димиристоилфосфатидную кислоту, дипальмитоилфосфатидную кислоту, димиристоилфосфатидилэтаноламин, дипальмитоилфосфатидилэтаноламин, димиристоилфосфатидилсерин, дипальмитоилфосфатидилсерин, фосфатидилсерин мозга, сфингомиелин, сфинголипиды, сфингомиелин мозга, дипальмитоилсфингомиелин, дистеароилсфингомиелин, галактоцереброзид, ганглиозиды, цереброзиды, фосфатидилглицерин, фосфатидную кислоту, лизолецитин, лизофосфатидилэтаноламин, цефалин, кардиолипин, дицетилфосфат, дистеароилфосфатидилэтаноламин и холестерин и его производные.
Фосфолипид может представлять собой также производное или аналог любого из вышеуказанных фосфолипидов. В некоторых воплощениях комплекс Аро А-Ι Мйапо:фосфолипид может содержать комбинации двух или более фосфолипидов.
В предпочтительных воплощениях в способах по изобретению предложено введение комплекса Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид. В более предпочтительном воплощении липид представляет собой фосфолипид, предпочтительно 1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилхолин (РОРС) или (1-пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3-фосфохолин). В еще более предпочтительном воплощении комплекс Аро А-Ι Мйапо: РОРС содержит соотношение Аро А-Ι Мйапо:РОРС примерно 1:1 по массе. В наиболее предпочтительном воплощении комплекс Аро А-Ι Мйапо:РОРС представляет собой фармацевтический препарат. Комплекс Аро А-Ι Мйапо:РОРС обозначается как ЕТС-216.
Комплекс, содержащий Аро А-Ι Мйапо и липид, может содержать любое количество липида, предпочтительно фосфолипида, и любое количество Аро А-Ι Мйапо, эффективное для лечения или предупреждения острых коронарных синдромов. В некоторых воплощениях Аро А-Ι Мйапо может содержать комплекс Аро А-Ι Мйапо и фосфолипида в соотношении примерно 1:1 по массе. Однако Аро А-Ι Мйапо может содержать комплексы с другими соотношениями фосфолипида к Аро А-Ι Мйапо, такими как примерно 100:1, примерно 10:1, примерно 5:1, примерно 3:1, примерно 2:1, примерно 1:1, примерно 1:2,
- 11 010134 примерно 1:3, примерно 1:5, примерно 1:10 и примерно 1:100 (масса белка/масса липида). Соотношение от примерно 1:0,5 до примерно 1:3 по массе (масса белка/масса липида), более предпочтительно соотношение от примерно 1:0,8 до примерно 1:1,2 (масса белка/масса липида) является предпочтительным для получения наиболее гомогенной популяции и для целей производства стабильных и воспроизводимых партий. В еще более предпочтительном воплощении соотношение Аро А-Ι Мйапо к фосфолипиду составляет 1:0,95 (масса белка/масса липида).
Дополнительные липиды, подходящие для применения в способах по изобретению, хорошо известны специалистам в данной области и указаны в многочисленных общеизвестных источниках, например МсСи1сйеоп'8 Ос1сгдсп15 апй Ети15|Псг5 и МсС’ШсйсопА Рипс1юпа1 Ма1спак, А11игсй РиЫщЫпд Со., Р|йдс\уоой. N.1., которые оба включены в данное описание путем ссылки. Обычно желательно, чтобы липиды были жидкокристаллическими при 37, 35 или 32°С. Липиды в жидкокристаллическом состоянии типично связывают холестерин более эффективно, чем липиды в гелеобразном состоянии. Поскольку субъекты типично имеют температуру тела примерно 37°С, то липиды, которые являются жидкокристаллическими при 37°С, обычно находятся в жидкокристаллическом состоянии во время лечения.
Получение липидных комплексов
Комплексы Аро А-Ι Мйапо: липид могут быть получены любым способом, известным специалисту в данной области. В некоторых случаях желательно смешивать липид и Аро А-Ι Мйапо перед введением. Липиды могут находиться в растворе или в форме липосом или эмульсий, образованных с использованием стандартных методик, таких как гомогенизация, обработка ультразвуком или экструзия. Обработку ультразвуком обычно осуществляют с помощью ультразвукового дезинтегратора, такого как ультразвуковой дезинтегратор Брансона (Вгапкоп), в ледяной бане. Типично суспензию подвергают нескольким циклам обработки ультразвуком. Экструзию можно осуществлять с помощью биомембраннх экструдеров, таких как Ырсх ВютстЬгапс Ехйийсг™ (Ырсх ВютстЬгапс Ехйийсг, 1пс. Уапсоиусг, Канада). Определенный размер пор в экструзионных фильтрах может приводить к образованию однослойных липосомных везикул определенных размеров. Липосомы могут быть также образованы путем экструзии через асимметричный керамический фильтр, такой как СсгаПо\у М1сго£й1сг™, коммерчески доступный от №г1оп Сотрапу, ХУогссЛсг Ма§8, или через поликарбонатный фильтр или другие типы полимеризованных материалов (т. е. пластмасс), известных специалистам в данной области.
Комплекс Аро А-Ι Мйапо: липид может быть получен в различных формах, включая, но не ограничиваясь этим, везикулы, липосомы или протеолипосомы. Для получения комплексов Аро А-Ι Мйапо: липид могут быть использованы различные способы, хорошо известные специалистам в данной области. Для приготовления липосом или протеолипосом можно использовать целый ряд доступных методов. Например, Аро А-Ι Мйапо можно обрабатывать ультразвуком (с использованием бани или ультразвукового аппарата с зондами) вместе с подходящим липидом с образованием липидных комплексов. В некоторых воплощениях Аро А-Ι Мйапо можно объединять с предварительно образованными липидными везикулами, полученными при спонтанном образовании комплекса аполипопротеина с липидом. В другом воплощении Аро А-Ι Мйапо можно получать также способом диализа с детергентом; например, смесь Аро А-Ι Мйапо, липида и детергента, такого как холат, может быть подвергнута диализу для того, чтобы удалить детергент, и восстановлена с образованием липидных комплексов (см., например, 1опа§ с! а1., 1986, Мс1йой§ ЕпхутоГ 128, 553-82).
В другом воплощении липидные комплексы могут быть получены путем совместной лиофилизации, как описано в патентах США №№ 6287590 и 6455088, содержания которых, таким образом, включены путем ссылки во всей их полноте. Другие способы раскрыты, например, в патентах США №№ 6004925, 6037323 и 6046166, включенных в данное описание путем ссылки во всей их полноте. Другие способы получения комплексов Аро А-Ι Мйапо: липид будут очевидны специалистам в данной области.
В предпочтительном воплощении липидные комплексы могут быть получены путем гомогенизации. В предпочтительных воплощениях производство комплексов Аро А-Ι Мйапо: липид начинается, когда рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо разбавляют водой для инъекции до концентрации 15 мг/мл в растворе. Фосфат натрия добавляют до конечной концентрации 9-15 мМ фосфата и для доведения рН до величины от примерно 7,0 до примерно 7,8. Маннит добавляют для достижения концентрации от примерно 0,8 до примерно 1% маннита (мас./об.). Затем добавляют РОРС для получения смеси димера Аро А-Ι Мйапо и РОРС в соотношении примерно 1:0,95 (масса белка/масса липида). Смесь перемешивают при 5000 об./мин в течение примерно 20 мин, используя подвесную пропеллерную мешалку и И11га Тиггах и поддерживая температуру от 37 до 43°С. Питающий сосуд перемешивают непрерывно при 300 об./мин, поддерживая температуру от 32 до 43°С с помощью последовательно расположенных теплообменников (АусШп, Мс.). Гомогенизацию в течение первых 30 мин осуществляют при 50 МПа (7250 фунт-сила на кв.дюйм) и после этого давление поддерживают при 80-120 МПа (11600-17400 фунт-сила на кв.дюйм) до тех пор, пока промежуточное тестирование с помощью гель-фильтрации не продемонстрирует % АИС (площадь под кривой) более 70% между белковыми стандартами. Комплексы могут быть также получены в виде препаратов 10, 11, 12, 13 и 14 мг/мл, где масса представляет собой массу белка.
Комбинированная терапия
Аро А-Ι Мйапо или липидные комплексы или их фармацевтические препараты могут быть исполь
- 12 010134 зованы в способах по настоящему изобретению раздельно или в комбинированной терапии с другими вмешательствами. Такие терапии включают, но не ограничиваются этим, одновременное или последовательное введение других лекарств.
В некоторых воплощениях способы и препараты по изобретению могут быть использованы в комбинации с другими лекарствами для достижения способов, предложенных в данном изобретении. Совместное введение другого лекарства может осуществляться для лечения, предупреждения или облегчения сопровождающих заболеваний, состояний, расстройств или симптомов, например вводимые противоаритмические лекарства лечат одновременно имеющуюся аритмию. В некоторых воплощениях предложены способы совместного введения лекарств для лечения или предупреждения боли, сопровождающей острые коронарные синдромы.
Как описано выше, традиционная терапия ишемических событий, включая инфаркт миокарда, стенокардию и острые коронарные синдромы, не нацелена на лежащую в основе патологию разорванных или нестабильных атеросклеротических бляшек. Например, субъект, имеющий сердечный дискомфорт в груди или другие ишемические симптомы, может быть подготовлен для срочного чрескожного коронарного вмешательства (ЧКВ) с помощью антикоагулянтов или антитромботических лекарств, таких как аспирин, клопидогрел, гепарин, эптифибатид или абциксимаб. Бета-адренергические блокаторы (β-блокаторы) можно вводить для уменьшения частоты сердечных сокращений. Введение ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента (ингибиторы АПФ) рекомендовано для субъектов, страдающих сопутствующей застойной сердечной недостаточностью (ЗСН) или дисфункцией левого желудочка (ЛЖ). Для субъектов, которые были реанимированы после внезапной сердечной смерти, рекомендуется введение амиодарона. Субъекта часто обеспечивают кислородом, обычно с помощью маски или назального катетера, и жизненные признаки тщательно контролируют, включая насыщение кислородом с помощью пульсовой оксиметрии. Для длительного лечения субъекту часто вводят статины (ингибиторы ГМГ-КоАредуктазы) для того, чтобы уменьшить уровни БЭС.
Например, Аро А-1 МИаио или липидный комплекс или его фармацевтический препарат можно вводить вместе с другими фармацевтически активными лекарствами, включающими, но не ограничивающимися этим, альфа/бета-адренергические антагонисты, антиадренергические агенты, альфа-1-адренергические антагонисты, бета-адренергические антагонисты, активаторы АМФ-киназы, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), антагонисты рецепторов ангиотензина II, блокаторы кальциевых каналов, противоаритмические агенты, вазодилататоры, нитраты, сосудосуживающие агенты, инотропные агенты, диуретики, антикоагулянты, антитромбоцитарные агенты, тромболитические агенты, противодиабетические агенты, антиоксиданты, противовоспалительные агенты, секвестранты желчных кислот, статины, ингибиторы белка-переносчика эфиров холестерина (СЕТР), агенты, снижающие уровень холестерина/регуляторы уровня липидов, лекарства, которые блокируют превращение арахидоновой кислоты, эстрогензамещающую терапию, аналоги жирных кислот, ингибиторы синтеза жирных кислот, фибраты, гистидин, производные никотиновой кислоты, агонисты или антагонисты рецептора, активируемого пероксисомальным пролифератором, ингибиторы окисления жирных кислот, талидомид или тиазолидиндионы (Эгидк Рас!к апб Сотрапкопк, обновляемые ежемесячно, 1апиагу 2003, \Уо11сгк К1ц^сг Сотрапу, §1. Бошк, МО; Р11У8Ю1ап8 Эскк РсГсгспсс (56-е издание, 2002) МсФса1 Есопоткк).
Другие лекарства отдельно или в комбинации, которые могут дополнять или усиливать полезные свойства Аро А-1 МИапо, липидных комплексов или их фармацевтических препаратов, включают, но не ограничиваются этим, альфа/бета-адренергические антагонисты (β-блокаторы), такие как карведиол (Согсд®); лабеталол НС1 (Ыогтобупс®); антиадренергические агенты, такие как гуанадрел (Ну1огс1®); гуанетидин (НтсНп®); резерпин, клонидин (Са!аргск® и Са!аргс8-ТТ§®); гуанфацин (Тспсх®); гуанабенз (\Уу1сп5ш'‘); метилдопу и метилдопат (А1ботс!®); альфа-1-адренергический антагонист, такой как доксазозин (Сагбига®); празозин (Мтргскк®); теразозин (НуРгп®) и фентоламин (ВсдИтс®); бета-адренергические антагонисты, такие как соталол (Вс1арасс АР® и Вйарасс®); тимолол (В1осабгсп®); пропранолол (1пбсга1ЬА® и 1пбсга1®); бетаксолол (Ксг1опс®); ацебутолол (8сс!га1®); атенолол (Тспогтт®); метопролол (Боргскког® и Торго1-ХЬ®); бизопролол (2сЬа!а®); картеолол (Сайго1®); эсмолол (Вгсу1Ь1ос®); налдолол (Согдагб®); пенбутолол (Бсуа!о1®) и пиндолол (У18ксп®); активаторы АМФ-киназы, такие как Е§Р 31015 (ЕТС-1001); Е§Р 31084, Е§Р 31085, Е§Р 15228, Е§Р 55016 и Е§Р 24232; гемкабен (ΡΌ 72953 и С1-1027) и МЕО1СА 16; ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), такие как хинаприл (АссиргИ®); беназеприл (Бо1сп8т'‘); каптоприл (Саро!сп®); эналаприл (Уако!сс®); рамиприл (АНасс®); фозиноприл (Мопоргй®); моэксиприл (Ишуакс®); лизиноприл (РпшуП® и 2сЧпТ); трандолаприл (Мау1к®), периндоприл (Ассоп®); и антагонисты рецепторов ангиотензина II, такие как кандесартан (А1асапб®); ирбесартан (Ауарго®); лозартан (Сохааг); валсартан (Оюуап®); телмисартан (МкагФк®); эпросартан (Тсус1ап®) и олмесартан (Всшсаг®); блокаторы кальциевых каналов, такие как нифедипин (Аба1а!®, Аба1а1 СС®, РгосагФа® и РгосагФа ХБ®); верапамил (Са1ап®, Са1ап§К®Соусга-Н§®, НорИпБР®1, Усгс1ап® и Усгс1апРМ®); дилтиазем (СагФхст‘, СагФ/стСЭ* и Пахас*); нимодипин (№то!ор®); амлодипин (Ыогуакс®); фелодипин (Р1спб11®); низолдипин (§и1аг®); бепридил (Уаксог®); исрадипин (ОупаС1гс®) и никардипин
- 13 010134 (Сагйепе®); противоаритмические агенты, такие как различные хинидины; прокаинамид (Ргопек!у1® и Ргосап®); лидокаин (Ху1осаше®); мексилитин (Мехйй®); токаинид (Топосагй®); флекаинид (ТатЬосог®); пропафенон (Ву1Нто1®), морицизин (Е111тохте‘); ибутилид (Соуей®); дизопирамид (Ыограсе®); бретилиум (Вге!у1о1®); амиодарон (Согйагопе®); аденозин (Айепосагй®); дофетилид (Т1кокуп®) и дигоксин (Ьапохш®); вазодилататоры, такие как диазоксид (Нурегйа! ГУ®); гидралазин (Аргекойпе®); фенолдопам (Сого1рат®); миноксидил (Ьопйеп®) и нитропруссид (№рпйе®); нитраты, такие как изосорбида динитрат (коШП® и 8огЬ1!га!е®); изосорбида мононитрат (Иийиг. кто® и Мопоке!®); нитроглицериновую пасту (№1го1®); различные нитроглицериновые пластыри; нитроглицерин 8Ь (№1гок!а!®), нитролингвальный спрей и нитроглицерин Ιν (Тпйй®); сосудосуживающие агенты, такие как норэпинефрин (Ьеуорйей®) и фенилэфрин (№о-8уперЬппе®); инотропные агенты, такие как амринон Дпосог®); дофамин (Шкорте®); добутамин (ПоЬийех®); эпинефрин (Айгепайп®); изопротеренол (киргеГ'), милринон (Рптасог®); диуретики, такие как спиронолактон (А1йас!опе®); торсемид Щетайех®); гидрофлуметиазид (Ошсагйт®); хлортиазид (ΌίιιπΓ); этакриновую кислоту (Ейеспп®); гидрохлортиазид (НуйгоОГОШЕ и М|сго/|йе*); амилорид (М1йатог®); хлорталидон (ТйаШопе® и НудгоЮп*); буметанид (Витех®); фуросемид (Ьаых®); индапамид (Ъо/о1®); метолазон (2агохо1уп®); триамтерен (Оугешит®) и комбинации триамтерена и гидрохлортиазида (Оуа/|йе* и Мах/|йе‘); антитромботические средства/антикоагулянты/антитромбоцитарные средства, такие как бивалирудин (Апдютах®); лепирудин (ВеДийап®); различные гепарины; данапароид (Огдагап®); различные низкомолекулярные гепарины; далтепарин (Егадтт®); энокзапарин (Ьоуепох®); тинзапарин ([пиоНер''); варфарин (Соитайш®); дикумарол (Пюоитаго1®); анизиндион (Мйайопе®); аспирин; аргатробан (Агда1гоЬап®); абциксимаб (Веорго®); эптифибатид (^1^111^®); тирофибан (Аддгайа!®); клопидогрел (Р1ау1х®); тиклопидин (Тюйй®); и дипиридамол (Регкапйпе®); тромболитики, такие как альтеплаза (Асйуаке®); активатор тканевого плазминогена (ТРА) (Асйуаке®); анистреплазу, АР8АС (Етшаке®); ретеплазу, гРА (Ве1ауакае®); стрептокиназу, 8К (8!гер1аке®); урокиназу (АЬЬокшаке®); противодиабетические агенты, такие как метформин (61исорйаде®); глипизид (61исо1го1®); хлорпропамид (П1аЬшеке®); ацетогексамид (Оуте1ог®); толазамид (Тойпаке®); глимеприд (Атагу1®); глибурид (П1аВе1а® и Мюгопаке®); акарбозу (Ргесоке®); миглитол (61уке!®); репафлинид (Ргапйт®); натеглинид (8!агйх®); розиглитазон (Ауапй1а®) и пиоглитазон (Ас!ок®); антиоксиданты и противовоспалительные агенты; секвестранты желчных кислот, такие как холестирамин (ЬоСйо1ек!®, РгеуаШе® и Оиекйап®); колестипол (Со1екйй®) и колесевелам (\Уе1с1юГ); статины (лекарства, которые ингибируют ГМК-КоА-редуктазу), такие как ровастатин (Сгек!ог®); флувастатин (Ьексо1®); аторвастатин (Ырйог®); ловастатин (Меуасог®); правастатин (Ргауаско1®) и симвастатин Щосог®); ингибиторы СЕТР; лекарства, которые блокируют превращение арахидоновой кислоты; эстрогензамещающую терапию; аналоги жирных кислот, такие как РО 72953, МЕОК.’А 16, Е8Р 24232, и Е8Р 31015; ингибиторы синтеза жирных кислот; ингибиторы синтеза жирных кислот; ингибиторы окисления жирных кислот, ранолазин (Вапеха®); фибраты, такие как клофибрат (А1гот1й-8®); гемфиброзил (Ьор1й®); капсулы микронизированного фенофибрата (Тпсог®); безафибрат и ципрофибрат; гистидин; производные никотиновой кислоты, такие как таблетки ниацина длительного высвобождения (№акрап®); агонисты или антагонисты рецептора, активируемого пероксисомальным пролифератором; талидомид (Тйа1от1й®) и соединения, описанные в патентах США № 6459003, 6506799 и публикациях заявок США № 20030022865, 20030018013, 20020077316 и 20030078239, содержания которых включены в данное описание путем ссылки во всей их полноте.
Другие лекарства отдельно или в комбинации, которые могут дополнять или усиливать полезные свойства Аро А-Ι Мйапо или липидных комплексов или их фармацевтических препаратов, включают, например, антипролиферативные лекарства, подобные паклитакселу и топотекану (ВгеНт е! а1., 2001, Вюс11ет1са1 Рйагтасо1оду, 61 (1): 119-127), и противовоспалительные лекарства, такие как стероидные и нестероидные противовоспалительные агенты (включающие ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2)). Фармацевтические препараты
В одном аспекте настоящего изобретения предложены препараты для лечения, уменьшения или предупреждения повреждения от острых коронарных синдромов путем введения фармацевтического препарата, содержащего Аро А-Ι Мйапо. В предпочтительных воплощениях Аро А-Ι Мйапо может находится в виде комплекса с липидом. В более предпочтительном воплощении Аро А-Ι Мйапо образует комплекс с РОРС.
Аро А-Ι Мйапо или его липидные комплексы можно вводить в форме фармацевтического препарата. Фармацевтический препарат, как описано в данном изобретении, включает добавление, например, приемлемого разбавителя, эксципиента, наполнителя или носителя. Как известно в данной области, добавление одного или более чем одного разбавителя, эксципиента, наполнителя или носителя делает препарат подходящим для введения субъекту и может обеспечивать другие предпочтительные свойства, такие как длительный срок хранения.
Фармацевтические препараты типично содержат фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. Могут быть использованы многие фармацевтически приемлемые носители или наполнители. В примере, описанном в данном изобретении, используют сахарозоманнит. В качестве фармацевтическо
- 14 010134 го носителя или наполнителя часто используют нормальный физиологический раствор. Другие подходящие носители или наполнители включают глюкозу, трегалозу, сахарозу, стерильную воду, забуференную воду, 0,45%-ный физиологический раствор (половина нормального физиологического раствора) и 0,3%ный глицин и могут дополнительно включать гликопротеины для улучшения стабильности, такие как альбумин. Эти препараты можно стерилизовать с помощью традиционных, хорошо известных методов стерилизации. Полученные водные растворы могут быть упакованы для применения или профильтрованы в асептических условиях и лиофилизированы (высушены сублимацией). Лиофилизированный препарат можно затем объединить со стерильным водным раствором перед введением.
Фармацевтические препараты могут также содержать фармацевтически приемлемые эксципиенты, которые требуется для того, чтобы приблизиться к физиологическим условиям, такие как агенты, регулирующие рН, и забуферивающие агенты, и агенты, регулирующие тоничность, например ацетат натрия, лактат натрия, хлорид натрия, хлорид калия и хлорид кальция. Для поддержания стерильности продукта, особенно фармацевтических препаратов, предназначенных для многодозового парентерального применения, могут быть добавлены противобактериальные агенты, например фенол, бензалкония хлорид или бензетония хлорид. В препаратах по изобретению также могут быть использованы суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты.
Фармацевтические препараты могут содержать аполипопротеин (Аро А-Ι Мйаио) в форме соли. Например, поскольку белки могут содержать кислотные и/или основные концы и/или боковые цепи, Аро А-Ι Мйаио может находиться в фармацевтических препаратах либо в виде свободных кислот или оснований, либо в виде фармацевтически приемлемых солей. Фармацевтически приемлемые соли могут включать подходящие кислоты, способные образовывать соли с Аро А-Ι Мйаио, включая, например, неорганические кислоты, такие как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, хлорная кислота, азотная кислота, тиоциановая кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.п.; и органические кислоты, такие как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, антраниловая кислота, коричная кислота, нафталинсульфоновая кислота, сульфаниловая кислота и т.п. Подходящие основания, способные образовывать соли с Аро А-Ι Мйаио, могут включать, например, неорганические основания, такие как гидроксид натрия, гидроксид аммония, гидроксид калия и т.п.; и органические основания, такие как моно-, ди- и триалкиламины (например, триэтиламин, диизопропиламин, метиламин, диметиламин и т.п.) и возможно замещенные этаноламины (например, этаноламин, диэтаноламин и т.п.).
Фармацевтический препарат может находиться в различных формах, подходящих для любого пути введения, включая, но не ограничиваясь этим, парентеральный, энтеральный, местный путь или ингаляцию. Парентеральное введение относится к любому пути введения, который осуществляется не через пищеварительный тракт, включая, но не ограничиваясь этим, введение путем инъекции (т.е. внутривенное, внутримышечное и т.п., как описано в данном изобретении). Энтеральное введение относится к любому пути введения с использованием пищеварительного тракта, пероральному или ректальному, включая, но не ограничиваясь этим, таблетки, капсулы, пероральные растворы, суспензии, спреи и т. п., как описано в данном изобретении. Для целей этой заявки энтеральное введение также относится к вагинальному пути введения. Местное введение относится к любому пути введения через кожу, включая, но не ограничиваясь этим, кремы, мази, гели и трансдермальные пластыри, как описано в данном изобретении (см. также Ветшдои'к Рйагтасеийса1 8с1еисе8, 18411 еййюи, Сеииаго с1 а1., еб§., Маск Рг1п(1пд Сотрапу, Еайои, Реиикукаша, 1990).
Парентеральные фармацевтические препараты по настоящему изобретению можно вводить путем инъекции, например в вену (внутривенно), артерию (внутриартериально), мышцу (внутримышечно), под кожу (подкожно или в депо препарате), в перикард, в коронарные артерии. Инъецируемые фармацевтические препараты могут представлять собой фармацевтически подходящий препарат для введения непосредственно в сердце, перикард или коронарные артерии. В предпочтительных воплощениях фармацевтические препараты вводят путем инфузии в периферический сосуд субъекта, например, на руке или в локтевой ямке.
Инъецируемые фармацевтические препараты могут представлять собой стерильные суспензии, растворы или эмульсии в водных или масляных наполнителях. Препараты для инъекции могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например в ампулах или многодозовых контейнерах, и могут содержать добавленные консерванты. Предпочтительными буферами для парентеральных фармацевтических препаратов являются фосфат, цитрат и ацетат.
В другом воплощении фармацевтический препарат может быть предложен в порошковой форме для разведения перед применением подходящим носителем, включая, но не ограничиваясь этим, стерильную апирогенную воду, физиологический раствор или декстрозу. Для этой цели Аро А-Ι Мйаио может быть лиофилизирован или совместно лиофилизирован с липидом, как описано выше, когда это целесообразно. В другом воплощении фармацевтические препараты могут доставляться в стандартных лекарственных формах и разводиться перед применением.
Для пролонгированной доставки фармацевтический препарат может быть предложен в виде депо препарата для введения путем имплантации, например подкожной, интрадермальной или внутримышеч
- 15 010134 ной инъекции. Так, например, фармацевтический препарат может быть приготовлен вместе с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в подходящем масле) или ионообменными смолами или в виде труднорастворимых производных; например в виде труднорастворимой солевой формы Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид.
В другом воплощении фармацевтический препарат представляет собой чрескожную систему доставки, изготовленную в виде липкого диска или пластыря, который медленно высвобождает активный ингредиент в процессе чрескожной абсорбции. В этом воплощении могут быть использованы усилители проницаемости для облегчения проникания Аро А-Ι Мйапо через кожу. В другом воплощении чрескожный фармацевтический препарат может дополнительно содержать нитроглицерин для применения у пациентов со стенокардией.
Для введения путем ингаляции фармацевтический препарат может доставляться с помощью аэрозольного спрея из упаковок, находящихся под давлением, или через небулайзер с использованием подходящего пропеллента, например дихлордифторметана, трихлордифторметана, дихлортетрафторэтана, диоксида углерода или другого подходящего газа. В случае аэрозоля, находящегося под давлением, единица дозирования может быть обеспечена путем снабжения клапаном для доставки дозированного количества, например в виде дозирующего ингалятора. Капсулы и картриджи, например, из желатина для применения в ингаляторе или инсуффляторе могут быть приготовлены таким образом, чтобы содержать порошковую смесь Аро А-Ι Мйапо и подходящего порошкового основания, такого как лактоза или крахмал.
Препараты, при желании, могут быть представлены в упаковке или раздаточном устройстве, которое может содержать одну или более чем одну стандартную лекарственную форму, содержащую фармацевтические препараты Аро А-Ι Мйапо. Упаковка, например блистерная упаковка, может содержать, например, металлическую или полимерную пленку. Упаковка или раздаточное устройство может иметь этикетку или инструкции для введения.
В некоторых воплощениях фармацевтический препарат Аро А-Ι М или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид может содержать концентрацию Аро А-Ι Мйапо, достаточную для лечения субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо:липид может содержать концентрацию Аро А-Ι Мйапо от примерно 5 до примерно 50 мг/мл. В предпочтительных воплощениях препараты могут содержать Аро А-Ι Мйапо в концентрации от примерно 10 до примерно 20 мг/мл. В более предпочтительном воплощении препараты могут содержать Аро А-Ι Мйапо в концентрации от примерно 13 до примерно 16 мг/мл. Концентрация Аро А-Ι Мйапо может быть определена любым подходящим методом, известным специалистам в данной области. В некоторых воплощениях концентрацию Аро А-Ι Мйапо определяют с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (8Е-НРБС).
В некоторых воплощениях фармацевтический препарат Аро А-Ι М или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид может содержать концентрацию липида, достаточную для образования комплексов с Аро А-Ι Мйапо. В некоторых воплощениях липид представляет собой фосфолипид. В предпочтительных воплощениях липид представляет собой РОРС. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид может содержать концентрацию РОРС от примерно 1 до примерно 50 мг/мл. В предпочтительных воплощениях препараты могут содержать РОРС в концентрации от примерно 5 до примерно 25 мг/мл. В более предпочтительном воплощении препараты могут содержать РОРС в концентрации от примерно 10 до примерно 20 мг/мл. В еще более предпочтительном воплощении препараты могут содержать РОРС в концентрации от примерно 11 до примерно 17 мг/мл. Концентрация РОРС может быть определена любым подходящим методом, известным специалистам в данной области. В некоторых воплощениях концентрацию РОРС определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
В предпочтительных воплощениях фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид может содержать сахарозу в количестве, достаточном для изготовления фармацевтически подходящего препарата Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 0,5 до примерно 20% сахарозы. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 3 до примерно 12% сахарозы. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 5 до примерно 7% сахарозы. В предпочтительных воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 6,0 до примерно 6,4% сахарозы. В наиболее предпочтительном воплощении фармацевтический препарат может содержать 6,2% сахарозы.
В предпочтительных воплощениях фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид может содержать маннит в количестве, достаточном для изготовления фармацевтически подходящего препарата Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 0,01 до примерно 5% маннита. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 0,1 до примерно 3% маннита. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 0,5 до примерно 2% сахарозы. В предпочтительных воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 0,8 до примерно 1% маннита. В наиболее предпочтительном воплощении фармацевтический препарат может содержать 0,9% маннита.
В некоторых воплощениях фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид может со
- 16 010134 держать буфер в количестве, достаточном для изготовления фармацевтически подходящего препарата Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо:липид. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать фосфатный буфер. В некоторых воплощениях концентрация буфера может составлять от примерно 3 до примерно 25 мМ. В некоторых воплощениях концентрация буфера может составлять от примерно 5 до примерно 20 мМ. В предпочтительных воплощениях концентрация буфера может составлять от примерно 8 до примерно 15 мМ. В некоторых воплощениях добавляют подходящий буфер для доведения рН фармацевтического препарата до диапазона, подходящего для введения субъекту. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может иметь рН от примерно 6,8 до примерно 7,8. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может иметь рН от примерно 7,0 до примерно 7,8. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут иметь рН от примерно 7,2 до примерно 7,5. В предпочтительных воплощениях фармацевтический препарат может иметь рН примерно 7,5.
В некоторых воплощениях фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид имеет осмоляльность, которая является подходящей для введения субъекту. В некоторых воплощениях осмоляльность препарата может составлять от примерно 200 до примерно 400 мОсм. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может иметь осмоляльность от примерно 220 до примерно 380 мОсм. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может иметь осмоляльность от примерно 260 до примерно 340 мОсм. В предпочтительных воплощениях фармацевтический препарат может иметь осмоляльность от примерно 280 до примерно 320 мОсм. В наиболее предпочтительном воплощении фармацевтический препарат может иметь осмоляльность примерно 290 мОсм.
Препараты по изобретению обеспечивают комплекс Аро А-Ι Мйапо: липид, имеющий чистоту, достаточную для введения субъекту. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может содержать Аро А-Ι Мйапо с чистотой примерно 98% или более, примерно 96% или более, примерно 95% или более, примерно 93% или более, примерно 91% или более или примерно 90% или более. В предпочтительном воплощении чистота Аро А-Ι Мйапо составляет примерно 90% или более. Чистота Аро А-Ι Мйапо может быть определена любым подходящим методом, известным специалистам в данной области. В некоторых воплощениях чистота Аро А-Ι Мйапо может быть определена с помощью эксклюзионной НРЬС.
Препараты по изобретению обеспечивают комплекс Аро А-Ι Мйапо:липид с РОРС, имеющим чистоту, достаточную для введения субъекту. В некоторых воплощениях фармацевтический препарат может содержать РОРС с чистотой примерно 98% или более, примерно 96% или более, примерно 95% или более, примерно 93% или более, примерно 91% или более или примерно 90% или более. В предпочтительном воплощении чистота РОРС составляет более примерно 90%. Чистота РОРС может быть определена любым подходящим методом, известным специалистам в данной области. В некоторых воплощениях чистота РОРС может быть определена с помощью НРЬС.
В некоторых предпочтительных воплощениях комплекс Аро А-Ι Мйапо: липид содержит количества липидного гидропероксида примерно 10% или ниже, примерно 8% или ниже, примерно 6% или ниже, примерно 4% или ниже, примерно 2% или ниже, примерно 1% или ниже детектируемых пределов, как определено с помощью анализа окисление двухвалентного железа/ксиленол оранжевый (Лапд, е! а1., 1992, Апа1. ВюсНет. 202: 384-389). В некоторых воплощениях комплекс Аро А-Ι М:РОРС имеет чистоту более 85% (измеренную как % от общей площади пика), как определено гель-проникающей хроматографией. В некоторых воплощениях препарат почти не содержит или вовсе не содержит эндотоксины. В предпочтительных воплощениях препарат имеет содержание эндотоксинов менее 0,04 ЭЕ (эндотоксиновая едница)/мг Аро А-Ι Мйапо.
В некоторых воплощениях в препарате количество частиц размером более 10 мкм может составлять менее примерно 6000 на флакон емкостью 50 мл, как определено с помощью обскурации света. В некоторых воплощениях количество частиц с размером более 25 мкм составляет менее примерно 600 на флакон емкостью 50 мл, как определено с помощью обскурации света.
В предпочтительном воплощении фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι Мйапо:липид получают путем разведения гАро А-Ι Мйапо водой для инъекции до концентрации 15 мг/мл в растворе. Добавляют фосфат натрия до конечной концентрации 9-15 мМ фосфата и для того, чтобы довести рН до величины от примерно 7,0 до примерно 7,8. Добавляют маннит для достижения концентрации от примерно 0,8 до примерно 1% маннит (мас./об.). Затем добавляют РОРС для достижения соотношения димера Аро А-Ι Мйапо к РОРС 1:0,95 (масса белка/масса липида). Смесь перемешивают при 5000 об./мин в течение примерно 20 мин, используя подвесную пропеллерную мешалку и И1!га Тиггах и поддерживая температуру от 37 до 43°С. В сосуде с сырьем осуществляют непрерывное перемешивание при 300 об./мин, поддерживая температуру от 32 до 43°С с помощью расположенных линейно теплообменников (Ауекйп, Ιπο.). Гомогенизацию в течение первых 30 мин осуществляют при 50 МПа (7250 фунт-сила на кв.дюйм) и после этого поддерживают давление при 80-120 МПа (11600-17400 фунт-сила на кв.дюйм) до тех пор, пока промежуточное тестирование посредством гель-проникающей хроматографии не продемонстрирует % АИС более примерно 70% между белковыми стандартами. Осмоляльность комплекса затем доводят путем добавления от 6,0 до 6,4% сахарозы. Фармацевтический препарат комплекса Аро А-Ι Мйаио:РОРС затем стерилизуют путем фильтрации через фильтры 0,22 мкм.
В другом предпочтительном воплощении фармацевтический препарат содержит от примерно 12 до
- 17 010134 примерно 18 мг/мл рекомбинантного Аро А-Ι Мйапо, от примерно 11 до примерно 17 мг/мл 1-пальмитоил-2-олеоил-8п-глицеро-3-фосфохолина при рН 7,4, 6,2% сахарозы и 0,9% маннита, имеет осмоляльность от примерно 280 до примерно 320 мОсм. Фармацевтический препарат может содержать гАро А-Ι М с чистотой примерно 90%, РОРС с чистотой примерно 97%. В одном воплощении ни одной примеси не может содержаться более примерно 2%.
Фармацевтический препарат можно хранить замороженным (от примерно -15 до примерно -25°С). В некоторых воплощениях препараты могут представлять собой холодные растворы, замороженные растворы или лиофилизированные растворы. Предпочтительно, чтобы такие препараты были оттаяны и нагреты до комнатной температуры перед введением субъекту. Для того, чтобы избежать денатурации белка, рекомендуется осторожное оттаивание и нагревание.
В другом предпочтительном воплощении препараты могут находиться в стерильных стеклянных флаконах объемом от примерно 2 до примерно 250 мл, предпочтительно от примерно 10 до примерно 100 мл, наиболее предпочтительно примерно 50 мл, содержащих фармацевтический препарат, содержащий комплекс Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут содержать от примерно 10 до примерно 15 мг/мл комплекса Аро А-Ι Мйапо:фосфолипид в конечном заполненном объеме от примерно 39 до 41 мл на флакон. Количество комплекса Аро А-Ι Мйапо:фосфолипид может составлять от примерно 500 до 750 мг во флаконе объемом 50 мл.
Фармацевтические препараты могут быть предназначены для однократного, одноразового применения или могут содержать противомикробные эксципиенты, как описано выше, что делает фармацевтические препараты подходящими для многократного применения, например флакон для многократного применения. В некоторых воплощениях фармацевтические препараты могут находиться в дозированных упаковках. Как известно специалистам в данной области, дозированная упаковка представляет собой удобную, установленного размера, готовую для использования пациентом порцию, снабженную этикеткой для адресного распределения учреждениями и специалистами, обеспечивающими медицинское обслуживание. Дозированная упаковка содержит фармацевтический препарат в количестве, необходимом для типичного интервала лечения и продолжительности для данного показания. В способах и препаратах по изобретению предложена дозированная упаковка фармацевтического препарата, содержащая, например, комплекс Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид в количестве, достаточном для лечения взрослых мужчины или женщины среднего роста дозой 15 мг/кг 1 раз в неделю в течение 5 недель. В одном воплощении дозированная упаковка может содержать фармацевтический препарат, содержащий комплекс Аро А-Ι Мйапо: фосфолипид в количестве, достаточном для лечения взрослого субъекта среднего роста дозой 45 мг/кг 1 раз в неделю в течение 6 недель. Специалистам в данной области будет очевидно, что дозы, описанные в данном изобретении, основаны на массе субъекта.
Фармацевтические препараты могут быть снабжены этикетками и имеют сопровождающую аннотацию для идентификации препарата, содержащегося в упаковке, и другие сведения, полезные для учреждений и специалистов, обеспечивающих медицинское обслуживание, и субъектов для лечения и предупреждения сердечно-сосудистых и сосудистых расстройств, острых коронарных синдромов, ишемических расстройств и для стабилизации бляшек, включая, но не ограничиваясь этим, инструкции по применению, дозу, интервал между приемом доз, продолжительность лечения, показания для применения, противопоказания, предостерегающие указания, меры предосторожности, инструкции по обороту и хранению и т.п.
В других воплощениях настоящего изобретения предложены наборы для лечения или предупреждения сердечно-сосудистых и сосудистых расстройств, острых коронарных синдромов, ишемических расстройств и для стабилизации бляшек. Эти наборы содержат одну или более чем одну эффективную дозу Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид или их фармацевтических препаратов вместе с этикеткой или инструкциями по применению Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид или их фармацевтических препаратов для лечения или предупреждения острых коронарных синдромов в соответствии со способами по изобретению. В некоторых воплощениях наборы могут содержать компоненты, полезные для осуществления способов, такие как устройства для доставки Аро А-Ι Мйапо или комплекса Аро А-Ι Мйапо: липид или их фармацевтических препаратов, и компоненты для безопасного размещения этих устройств, например определенный контейнер. В некоторых воплощениях наборы могут содержать Аро А-Ι Мйапо или комплекс Аро А-Ι Мйапо: липид или их фармацевтические препараты в предварительно заполненных шприцах, порционных или дозированных упаковках.
Примеры
Настоящее изобретение будет дополнительно объяснено путем ссылки на следующие неограничивающие примеры.
Пример 1. Переносимость ЕТС-216.
Этот пример демонстрирует безопасность и переносимость ЕТС-216 здоровыми волонтерами.
Двойное слепое плацебо-контролируемое исследование проводили для того, чтобы определить безопасность и переносимость Аро А-Ι Мйапо и фосфолипида. Аро А-Ι Мйапо был подвергнут комплексообразованию с фосфолипидом (РОРС) в соотношении 1:1 по массе и обозначен как ЕТС-216. Исследование оценивало безопасность и переносимость пяти повышающихся доз для однократной внутривенной инфузии ЕТС-216 у здоровых мужчин-волонтеров и двух различных доз у здоровых женщин-волонтеров.
- 18 010134
Перед исследованием от всех волонтеров было получено согласие, основанное на полученой информации.
здоровым волонтерам (субъектам) в возрасте от 18 до 50 лет вводили внутривенные дозы ЕТС216. Мужчинам вводили дозы вплоть до 100 мг/кг включительно. Женщинам вводили дозы вплоть до 50 мг/кг включительно. Пол субъекта, доза и скорость указаны в табл. 1 ниже.
Таблица 1
Доза (мг белка/кг массы тела) Количество субъектов Пол Скорость инфузии (мг/кг/мин)
0(плацебо) 3 Мужчина 1,67
0(плацебо) 2 Мужчина 1,25
5 3 Мужчина 1,67
15 3 Мужчина 1,67
50 3 Мужчина 1,67
75 3 Мужчина 1,25
100 3 Мужчина 1,25
0(плацебо) 1 Женщина 1,67
0(плацебо) 2 Женщина 0,83
15 3 Женщина 1,67
15 3 Женщина 0,83
50 3 Женщина 0,83
Мониторинг неблагоприятных событий включал клиническую лабораторную оценку, физическое обследование и основные показатели состояния организма. Субъектов наблюдали в течение 27 суток после введения доз.
из 32 субъектов в этом исследовании сообщили о неблагоприятных событиях, все из которых были от слабых до умеренных. Неблагоприятные события, которые имели место у 2 или более субъектов, рассматривали как возможно относящиеся к лечению изучаемым лекарством. Эти неблагоприятные события и число субъектов, переживающих эти неблагоприятные события, представляли собой люмфопению (11 субъектов), лейкоцитоз (10 субъектов), тошноту (6 субъектов), головную боль и диарею (4 субъекта), рвоту (3 субъекта) и абдоминальную боль и гипертриглицеридемию (2 субъекта). О большинстве возможно связанных неблагоприятных событий (желудочно-кишечных и лейкоцитарных расстройств) было сообщено после инфузии 50 или 100 мг/кг ЕТС-216 мужчинам. Два неблагоприятных события (гипопротеинемия и аномальная функция печени), которые наблюдались у субъектов, пролеченных плацебо, рассматривали как возможно имеющие отношение к лечению. Не было никаких смертельных случаев, тяжелых осложнений или отмены лечения из-за неблагоприятных событий.
Как показано на фиг. 1, сывороточные уровни неэтерифицированного холестерина ЛПВП у мужчин через 30 мин после однократной дозы ЕТС-216 увеличивались при дозах 15 мг/кг и более высоких дозах.
Титры антител к Аро А-1 Мйапо тестировали в сыворотке перед инфузией и вплоть до 27 суток после инфузии. Не было никакого существенного антительного ответа у какого-либо субъекта после однократного введения дозы.
Конечный период полувыведения приблизительно 100 ч поддерживает обоснование для осуществления первоначального многодозового исследования у людей с использованием 7-дневного режима введения доз.
Эти результаты показывают, что ЕТС-216 был безопасным и хорошо переносился при всех дозах и никаких серьезных неблагоприятных событий не наблюдалось.
Пример 2. Эффективность различных доз ЕТС-16 в отношении регрессии атеросклероза.
Этот пример демонстрирует эффективность доз ЕТС-216 15 и 45 мг/кг в регрессии коронарного атеросклероза у субъектов с острыми коронарными синдромами.
Это исследование было рандомизированным, двойным слепым, плацебо-контролируемым многодозовым исследованием для оценки эффективности и безопасности ЕТС-216 у субъектов с острыми коронарными синдромами, как определено с помощью внутрисосудистого ультразвукового исследования. Перед началом любой конкретной процедуры исследования все субъекты давали согласие, основанное на полученной информации, утвержденное Комиссией по биомедицинской этике (1п51йийопа1 Ρονίο\ν Воагб, 1КВ) каждого участвующего института.
Подходящими субъектами были те, у кого диагностировали острые коронарные синдромы (нестабильную стенокардию, инфаркт миокарда без зубца О или инфаркт миокарда с подъемом 8Т) не позднее 14 суток до скрининга и кому назначили коронарную ангиографию и/или чрескожное коронарное вмешательство (ЧКВ) и отложили процедуру на 24 ч. Субъектов, удовлетворяющих этим критериям, исклю
- 19 010134 чали из исследования в случае, если их процедуру считали срочной и/или считали, что она несет высокий риск сильных осложнений, что определялось лечащим врачом.
Первичная конечная точка эффективности представляла собой изменение (конец лечения минус предварительное лечение) процентного объема атеромы в 30-80 мм сегменте одной пораженной (визуализированной) коронарной артерии, определяемое с помощью внутрисосудистого ультразвукового исследования (Ινυδ). Положительный результат определяли как отрицательное изменение процентного объема атеромы с доверительными интервалами (ДИ), не включающими ноль.
Вторичные конечные точки эффективности представляли собой среднее изменение общего объема атеромы и средней максимальной толщины атеромы. Вторичные конечные точки эффективности устанавливали для Ινυδ и ангиографии. Что касается Ινυδ, то вторичные конечные точки эффективности представляли собой:
1) номинальное изменение (конец лечения минус предварительное лечение) общего объема бляшки, измеренного путем усреднения площадей бляшек для всех срезов анатомически сравнимых сегментов пораженной коронарной артерии;
2) номинальное изменение (конец лечения минус предварительное лечение) средней максимальной толщины бляшек для всех срезов анатомически сравнимых сегментов пораженной коронарной артерии;
3) объем наименее и наиболее пораженного сегмента:
а) номинальное изменение (конец лечения минус предварительное лечение) объема сегмента бляшки для 10 мм последовательных срезов от исходной величины, содержащей минимальную процентную площадь бляшки (определенную как наименее пораженный сегмент);
б) номинальное изменение (конец лечения минус предварительное лечение) объема сегмента бляшки для 10 мм последовательных срезов от исходной величины, содержащей наибольшую процентную площадь бляшки (определенную как наиболее пораженный сегмент).
Вторичные конечные точки эффективности для ангиографии представляли собой:
1) средний диаметр коронарного просвета во всех измеренных коронарных сегментах;
2) количество новых ангиографических повреждений в каждой подгруппе лечения;
3) долю субъектов с одним или более новыми ангиографическими коронарными повреждениями в конце лечения;
4) количество участков с уже имеющимся повреждением, демонстрирующим регрессию;
5) количество участков с уже имеющимся повреждением, демонстрирующим прогрессию;
6) долю субъектов, демонстрирующих регрессию в любом из уже имеющихся повреждений;
7) долю субъектов, демонстрирующих прогрессию или никакого изменения во всех уже имеющихся повреждениях;
8) долю субъектов, демонстрирующих регрессию или никакого изменения во всех уже имеющихся повреждениях.
Способы для Ινυδ анализировали, как описано ЫЦкеп в Ат. ί. Сагбю1. 87: 15А-20А, 2001, включенном в данное описание путем ссылки во всей его полноте. Кратко, оператор, отцифровавший Ινυδ видеоленту, просматривал в замедленном темпе и выбирал начало наиболее дистальной боковой ветви в качестве начальной точки для анализа, как показано на фиг. 2(А). Затем для анализа выбирали каждое 30-е изображение, представляя ряд поперечных сечений, расположенных на расстоянии точно 0,5 мм друг от друга. Конечное анализируемое поперечное сечение представляло собой наиболее проксимальное изображение в последовательности до появления левой основной коронарной артерии или устья правой коронарной артерии (проксимального фидуциарного участка), как показано на фиг. 2(Β)-2(Ό). Процедуру повторяли для дополнительной проверки с использованием идентичных опознавательных точек для гарантии того, что в обеих временных точках анализировали идентичный сегмент.
Осуществляли как прямые, так и производные Ινυδ измерения. Прямые Ινυδ измерения осуществляли в соответствии со стандартами Американского Колледжа Кардиологии и Европейского Общества Кардиологии (Мт!/ е! а1., 2001, ί. Ат. Со11. Сагбт1. 37: 1478-92, включенный в данное описание путем ссылки во всей его полноте). Используя изображение 1,62 Национального института здоровья США (ΝΙΗ) (общедоступные программы ΝΙΗ), оператор осуществлял процедуру калибровки путем измерения 1 мм знаков координатной сетки, кодируемых в Ινυδ изображении, с помощью сканера. Для каждого поперечного сечения оператор вручную выполнял планиметрию для выявления передних кромок просвета и границ наружной эластичной мембраны (фиг. 3(А)-3(Э)). Также непосредственно измеряли максимальную толщину атеромы. Точность и воспроизводимость этих способов ранее уже были описаны, демонстрируя, что после калибровки средние значения Ινυδ измерений площади поперечного сечения находились в пределах 0,5% реальных размеров точно нацеленных (ргесШоп-бгШеб) люцитных фантомов, вариьрующих по площади от 3,24 до 27,99 мм2 (ЗсНоепНадеп е! а1., 2003, I. Ат. 8ос. ЕсЬосагбюдг. 16: 277-84, включенный в данное описание путем ссылки во всей его полноте). Вариабельность результатов измерений между разными исследователями показала стандартное отклонение 2,9%.
Производные Ινυδ измерения включали расчет площади атеромы, определяемой как площадь наружной эластичной мембраны (ЕЕМ) минус площадь просвета сосуда. Поскольку изображения поперечных сечений были получены с 0,5 мм интервалами, общий объем атеромы можно было рассчитать, используя правило Симпсона, как среднюю площадь атеромы, умноженную на длину обратного образа в
- 20 010134 миллиметрах. Процентный объем атеромы вычисляли следующим образом: (Σ площадей атеромы/Σ ЕЕМ площадей)х100 (см., например, Νίδδοη с! а1., 2003, 1ΆΜΆ 290: 2292-2300). Анализ результатов коронарной ангиографии осуществляли в центральной лаборатории при Кливлендской клинике (С1ссс1апб Сйшс Гоипбайоп), используя стандартизованные методы, разработанные для уменьшения вариабельности измерений. Сравнение диаметра кончика ангиографического катетера с его известным размером использовали для калибровки системы. Ангиографическая конечная точка представляла собой изменение среднего диаметра просвета коронарной артерии от исходной величины к конечной величине.
субъектов были рандомизированы для получения 15 мг/кг ЕТС-216, 45 мг/кг ЕТС-216 или соответствующего объема плацебо каждые 7-е сутки (±1 сутки) с максимумом вплоть до пяти внутривенных доз. Субъектов рандомизировали для получения 15 мг/кг ЕТС-216, 45 мг/кг ЕТС-216 или плацебо в соотношении 2:2:1. 47 субъектов завершили это исследование.
Дозу 15 мг/кг вводили внутривенной инфузией в течение примерно 50 мин, а дозу 45 мг/кг вводили внутривенной инфузией в течение примерно 150 мин. Для некоторых субъектов скорость инфузии увеличивали из-за появления тошноты. Все внутривенные инфузии осуществляли периферически.
Субъектов контролировали с помощью клинических лабораторных параметров, включающих уровни антител на ЕТС-216, физическое обследование, основные показатели состояния организма, электрокардиограммы (ЭКГ) и частоту и интенсивность клинических неблагоприятных событий. Ангиографию и ΐνϋδ проводили на каждом пациенте дважды. От первой временной точки после завершения начального скринингового осмотра до второй проходило приблизительно 2 недели (±7 суток) после последней дозы исследуемого лекарства.
Положительные результаты были получены в отношении первичной конечной точки, как просуммировано в табл. 2 ниже. В комбинированной группе лечения (пациенты, которые получали либо дозу 15 мг/кг, либо дозу 45 мг/кг ЕТС-216) изменение среднего (стандартное отклонение, или СО) процентного объема атеромы составляло -1,06% (3,17%). Медиана составляла -0,81% (95% ДИ, от -1,53% до -0,34%; р=0,02 по сравнению с исходной величиной). Для группы плацебо среднее (СО) изменение составляло 0,14% (3,09%). Медиана составляла 0,03% (95% ДИ, от -1,11% до 1,43%; р=0,97 по сравнению с исходной величиной).
Таблица 2
Процентный объем атеромы в пораженном коронарном сегменте
Исходная зеличина В конце исследования Изменение от исходной величины
Группы лечения Кол-во субъектов Среднее (СО1) Медиана (ИКШ2) Среднее (СО) Медиана (ИКШ) Среднее (СО) Медиана (95% ДИ3) Р величина4
Плацебо 11 34,80 (8,44) 35,29 (от 26,99 до 39,81) 34,94 (9,74) 33,59 (от 27,07 до 41,09) 0,14 (3,09) 0,03 (от -1,11 до 1,43) 0,97
ЕТС-216 15 мг/кг 21 39,71 (7,04) 40,55 (от 34,16 до 44,97) 38,42 (6,5) 38,84 (от 32,78 до 42,87) -1,29 (3,48) -1,14 (от -2,24 до - 0,56) 0,03
ЕТС-215 45мг/кг 15 37,92 (7,83) 41,22 (от 31,92 до 44,10) 37,19 (7,71) 36,62 (от 32,81 до 44,02) -0,73 (2,75) -0,34 (от -01,21 до 0,43) 0,45
ЕТС-216 комбинированная 36 38,96 (7,32) 40,88 (от 34,01 до 44,53) 37,91 (6,95) 38,17 (от 32,79 до 43,53) -1,06 (3,17) -0,81 (от -1,53 до - 0,34) ОД?
1Стандартное отклонение.
2Интерквартальная широта.
3Доверительный интервал.
4Р величины для внутригруппового сравнения из рангового критерия Вилкоксона для попарных сравнений. Для межгруппового сравнения ЕТС-216, Аро А-Ι М11апо:РОРС комбинированный против плацебо из ковариационного анализа рангов изменения от исходной величины, со значением исходной величины в качестве ковариата, Р=0,29.
5Заданная первичная конечная точка эффективности.
Что касается вторичных конечных точек, то положительные результаты также были получены, как показано в табл. 3 ниже. По сравнению с исходной величиной среднее (СО) изменение общего объема атеромы в комбинированной группе лечения составляло -14,1 мм3 (39,5 мм3; медиана -13,3 мм3; 95% ДИ, от -20,7 до -7,2; р<0,001). Для группы плацебо соответствующее изменение составляло -2,9 мм3 (23,3 мм3).
- 21 010134
Медиана составляла -0,2 мм3 (23,3 мм3). Медиана составляла -0,2 мм3 (95% ДИ, от -8,б до 8,2; р=0,97). Среднее (СО) изменение максимальной толщины атеромы от исходной величины для комбинированной группы лечения составляло -0,042 мм (0,080 мм). Медиана составляла -0,035 мм (95% ДИ, от -0,058 до -0,020; р<0,002). Для группы плацебо соответствующее изменение составляло -0,008 мм (0,0б1 мм); медиана -0,009 (95% ДИ, от -0,035 до 0,02б; р=0,83). См. табл. 4 ниже.
Таблица 3
Общий объем атеромы в пораженном коронарном сегменте
Исходная величина, мм1 В конце исследования, мм3 Изменение от исходной
величины, мм3
Группы лечения Кол-во субъек- тов Среднее (СО) Медиана (МКД) Среднее (СО) Медиана (МКД) Среднее (СО) Медиана (95% ДИ3) Р величина'
Плацебо 11 172,6 (113,2) 149,0 (от 58,6 до 216,5) 169,8 (118,0) 145,1 (от 58,4 до 217,8) -2,9 (23,3) -0,2 (от-8,6 до 8,2) 0,97
ЕТС-216 15 мг/кг 21 295,5 (166,5) 279,7 (от 173,6 до 370,7) 280,4 (155,6) 265,5 (от 161,1 до 351,6) -15,1 (50,6) -15,0 (от -29,6 до - 4,9) 0,02
ЕТС-215 45 мг/кг 15 230,6 (156,7) 195,8 (от 90,9 до 332,9) 218,0 (145,6) 183,8 (от 89,4 до ЗИ.1) -12,6 (15,3) -12,0 (от -20,6 до - 2,9) 0,007
ЕТС-216 комбинированная 36 268,4 (163,5) 263,7(от 129,4 до 359,3) 254,4 (152,6) 244,8 (от 131,0 до .337,6) -14,1 (39,5) -13,3 (от -20,7 до - 7,2) <0,00 Г
'Р величины для внутригруппового сравнения из рангового критерия Вилкоксона для попарных сравнений. Для межгруппового сравнения ЕТС-21б, Аро А-Ι М|1ппо:РОРС комбинированный против плацебо из ковариационного анализа рангов изменения от исходной величины, со значением исходной величины в качестве ковариата, Р=0,18.
2Заданная вторичная конечная точка эффективности.
Таблица 4
Средняя максимальная толщина атеромы в пораженном коронарном сегменте
Исходная величина, мм В конце исследования, мм Изменение от исходной
величины, ММ
Группы лечения Кол-во субъектов Среднее (СО) Медиана (МКД) Среднее (СО) Группы лечения Среднее СО) Медиана (95% ДИТ Р величина1
Плацебо 11 0,649 (0,317) 0,683 (от 0,402 до 0,846) 0,641 (0,332) 0,584 (от 0,392 до 0,827) -0,008 (0,061) •0,009 (от -0,035 до 0,026) 0,83
ЕТС-216 15 мг/кг 21 0,815 (0,194) 0,830 (от 0,683 до 0,953) 0,771 (0,168) 0,824 (от 0,646 до 0,865) -0,044 (0,094) -0,049 (от -0,079 до -0,015) 0,03
ЕТС-215 4 5 мг/кг 15 0,738 (0,280) 0,792 (от 0,531 до 0,992) 0,699 (0,269) 0,758 (от 0,457 до 0,963) -0,039 (0,059) -0,029 (от -0,056 до -0,007) 0,02
ЕТС-216 комбинированная 36 0,783 (0,233) 0,816 (от 0,578 до 0,963) 0,741 (0,216) 0,814 (от 0,552 до 0,895) -0,042 (0,080) -0,035 (от -0,058 до -0,020) <0,001-
1Р величины для внутригруппового сравнения из рангового критерия Вилкоксона для попарных сравнений. Для межгруппового сравнения ЕТС-21б, Аро А-Ι МПагюЕОРС комбинированный против плацебо из ковариационного анализа рангов изменения от исходной величины, со значением исходной величины в качестве ковариата, Р=0,23.
2Заданная вторичная конечная точка эффективности.
- 22 010134
Результаты показали, что ЕТС-216 эффективно уменьшает размер бляшки. Статистически значимая регрессия атеросклероза была продемонстрирована в обеих группах лечения.
Пример 3. Ех у1уо Лангендорф (БапдепбогГГ).
Этот пример демонстрирует кардиопротективный эффект профилактического ЕТС-216 в подвергнутом реперфузии изолированном ишемизированном сердце кролика. В исследовании использовали самцов белых новозеландских кроликов, полученных из СНаг1ек В1уег, массой приблизительно 2-3 кг. Самец белого новозеландского кролика был выбран в качестве подходящей тест-системы для целей этого исследования. Изолированное ишемизированное, а затем подвергнутое реперфузии сердце кролика является моделью инфаркта миокарда у человека. После прибытия животным присваивали уникальные идентификационные номера.
Животных размещали в клетках из нержавеющей стали в соответствии с рекомендациями комиссии университета Мичигана по использованию и содержанию животных. Ветеринарная служба находится при Лаборатории медицины животных университета Мичигана. Университет Мичигана получил сертификат Американской ассоциации лиц по уходу за лабораторными животными, а программа использования животных соответствует стандартам, изложенным в Инструкции по содержанию и использованию лабораторных животных, ΟΗΒ\ν (ΜΗ) РиЬ1. №. 86-23.
ЕТС-216 представляет собой комплекс рекомбинантного аполипопротеина АЛ Мйапо и 1-пальмитоил-2-олеоил-фосфатидилхолина в соотношении 1:1 по массе. Исходные растворы ЕТС-216 содержали 14 мг белка/мл в буфере с сахарозой и маннитом. Поскольку сахарозоманнитный буфер был несовместим с буфером Кребса-Хензелейта, а также для того, чтобы контролировать любые независимые эффекты только маннита, ЕТС-216 диализовали, чтобы получить фоновый буфер, состоящий из 2% глюкозы в 4 мМ фосфате натрия, рН 7,4. ЕТС-216 разбавляли буфером Кребса-Хензелейта с получением концентрации лекарства 0,45 мг/мл. Аналогично разбавляли наполнитель.
Выбор дозы был основан на известных данных относительно доз, использованных в фазе I клинических испытаний на людях (Екрепоп) относительно безопасности однократных доз, где людям вводили дозы вплоть до 100 мг/кг ЕТС-216. Что касается исследований, описанных в этом протоколе, то концентрация 0,5 мг/мл приблизительно эквивалентна внутривенной дозе 25 мг/кг, вводимой человеку.
Эксперименты проводили, используя аппарат Лангендорфа для перфузии кроличьих сердец. Кроликов умерщвляли путем цервикальной дислокации и сердца быстро выделяли и соединяли с канюлей для перфузии через аорту. Перфузионная среда состояла из циркулирующего буфера Кребса-Хензелейта (рН 7,4, 37°С; ΚΗ), который подвергали непрерывному воздействию смеси 95% О2/5% СО2, и вводилась с постоянной скоростью 20-25 мл/мин. Сердца стимулировали на протяжении всего протокола посредством электродов, присоединенных к правому предсердию. Кардиостимулы передавались из лабораторного генератора прямоугольных волн (на 10% выше физиологической стимуляции, продолжительность 1 мс, Сгакк 588, Ошпеу. МА). Легочную артерию снабжали канюлей с системой трубок δ^1акΐ^сТМ для облегчения сбора вытекающей из легочной артерии жидкости, представляющей собой коронарный венозный возврат в коронарный синус. На верхнюю и нижнюю полые вены и легочные вены накладывали лигатуру для того, чтобы предотвратить потерю перфузата из других перерезанных сосудов. Дренаж левого желудочка, термисторный зонд и латексный баллончик вводили через левое предсердие и размещали в левом желудочке. Наполненный жидкостью латексный баллончик соединяли жесткой трубочкой с катетерным датчиком давления Миллера, позволяющим измерять давление, развивающееся в левом желудочке. Внутрижелудочковый баллончик расширяли с помощью дистиллированной воды для того, чтобы достичь в левом желудочке первоначальной исходной величины конечного диастолического давления приблизительно 10 мм рт.ст. (1,33 кПа). Коронарное перфузионное давление измеряли с помощью датчика давления, соединенного с боковой ветвью аортальной канюли. Поскольку скорость перфузии коронарной артерии поддерживали постоянной, то изменения перфузионного давления в коронарной артерии служили индикатором изменений сопротивления в коронарной артерии. Все гемодинамические параметры контролировали непрерывно, используя многоканальный самописец, такой как Сгакк Ро1удгарН 79Ό (Отпеу, МА), подключенный к системе сбора данных Ро1у\зе\\· δоΠ\νа^е Иа!а Асцшкйюп δукΐет. Сердца поддерживали при 37°С в течение всего эксперимента путем помещения сердца в двойную стеклянную камеру с регулируемой температурой и пропускания перфузионной среды через нагретый резервуар и систему доставки.
Для экспериментальных процедур использовали две группы обработки, как показано ниже.
Группа
Обработка
Ишемия и реперфузия
Ишемия и реперфузия
Тестируемое вещество Концентрация, мг/мл
Наполнитель 0
ЕТС-216 0,45
Сердца подвергали экспериментальной обработке, как показано на фиг. 5. Изолированные сердца стабилизировали в нормоксических (нормальный уровень кислорода) условиях в течение 20 мин перед тем, как индуцировать глобальную ишемию. В течение первых 10 мин этого периода сердца подвергали воздействию только буфера ΚΗ, а затем в течение еще 10 мин - буфера ΚΗ, содержащего либо наполни
- 23 010134 тель (группа 1), либо ЕТС-216 (группа 2). Затем сердца подвергали воздействию 30-минутного периода ишемии, а затем 60-минутного периода реперфузии буфером КН, содержащим наполнитель (группа 1) или ЕТС-216 (группа 2). Индукцию тотальной глобальной ишемии осуществляли путем прекращения потока перфузата в сердце, а реперфузию сердца осуществляли путем включения насоса с восстановлением первоначальной скорости потока.
Аликвоты вытекающей из легочной артерии жидкости собирали из сердец во всех группах при исходном уровне (перед ишемией), и сначала каждую минуту вплоть до 5 мин, и каждые 5 мин после этого в течение периода реперфузии. Вытекающие жидкости анализировали на концентрацию креатинкиназы (фиг. 6), являющуюся признаком тканевого повреждения. Креатинкиназа представляет собой цитозольный фермент, высвобождающийся из необратимо поврежденных клеток. Сердечные функции постоянно контролировали (фиг. 7).
Были определены конечные точки для сердца:
- электрокардиограма - скорость сердечных сокращений (электростимулированная) для того, чтобы определить наличие или отсутствие аритмий;
- давление, развивающееся в левом желудочке (фиг. 8) (данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего для указанного количества сердец в каждой группе);
- бР/б! для левого желудочка;
- конечное диастолическое давление в левом желудочке (фиг. 9) (данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего для указанного количества сердец в каждой группе);
- коронарное перфузионное давление (фиг. 10) (данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего для указанного количества сердец в каждой группе);
- сбор лимфатической дренажной жидкости для определения высвобождения тканевой креатинкиназы до и после реперфузии (фиг. 6).
После завершения экспериментального протокола биопсии из пяти сердец из каждой группы обработки сразу погружали в жидкий азот и хранили при -80°С для последующего анализа липидных гидропероксидов. Перед проведением анализа липидных пероксидов образцы гомогенатов нормализировали по содержанию белка (фиг. 11). В этом примере ЕТС-216 снижал сердечные липидные гидропероксиды на 46%.
После завершения указанного протокола два сердца из каждой группы подвергали перфузии в течение 3 мин 2,5%-ным глутаральдегидом и 1%-ным БаС13 в 0,1М натрий-калкодилатном буфере (рН 7,4). Осмофильный БаС13 в нормальных условиях удерживается в сосудистом компартменте, связанном с сосудистой стенкой, и служит индикатором целостности кровеносного сосуда. Просачивание БаС13 во внесосудистое пространство использовали для того, чтобы показать наличие сосудистого повреждения. Образцы ткани из миокарда левого желудочка выделяли и разрезали на сегменты со стороной приблизительно 1 мм. Эти образцы фиксировали в течение еще 2 ч при 4°С в вышеуказанном буфере. После этого образцы обезвоживали последовательно в этаноле и погружали в ЕМ Ьеб-812 (Е1ес1гоп Мюгоксору 8с1епсек, Р!, АакЫпд!оп, РА). Тканевые блоки разрезали с помощью ультрамикротома КеюНеП и помещали на медные сетки с формваровым покрытием для последующего окрашивания 4%-ным уранилацетатом. Срезы изучали с помощью электронного микроскопа РЫШрк СМ-10.
Трансмиссионную электронную микроскопию использовали для анализа образцов миокарда из каждой исследуемой группы. Изображения показывают, что структурные признаки саркомеров из сердец, обработанных наполнителем, выражены слабо и полосы сокращения присутствуют. Митохондрии являются заметно набухшими с разрушенными кристаллическими и осмофильными тельцами включений. В сердцах, обработанных ЕТС-216, саркомерная структура является относительно нормальной и митохондрии кажутся не поврежденными лишь с минимальным набуханием. Фактическое отсутствие полос сокращения заметно контрастирует с полосами сокращения, наблюдамыми в контрольных сердцах. Способность ЕТС-216 предупреждать некроз полос сокращения согласуется с наблюдением, что сердца, предварительно обработанные ЕТС-216, не демонстрировали увеличение БУЕБР после реперфузии. Как некроз полос сокращения, так и постоянное увеличение БУЕБР связаны с увеличением перегрузки внутриклеточным кальцием и необратимым повреждением клеток. Наличие миофибриллярного размывания Ζ-полос и разрушение миофибриллярной архитектуры указывают на значительное повреждение. Другое ожидаемое морфологическое повреждение включало разрушенные кристы и матрикс митохондрий, а также большие электронноплотные тельца в митохондриях. Кратность увеличения составляла 7900х на обеих микрофотографиях (фиг. 12).
Анализ концентраций креатинкиназы (фиг. 6) показал, что во время реперфузии имеет место быстрая фаза высвобождения фермента в венозный отток. Контрольные сердца (обработанные наполнителем) продемонстрировали заметное высвобождение креатинкиназы по сравнению с сердцами, обработанными ЕТС-216. Кроме того, сердца, обработанные ЕТС-216, продемонстрировали уменьшенное конечное диастолическое давление в левом желудочке (БУЕБР) (фиг. 7 и 9), повышенное развивающееся давление в левом желудочке (фиг. 8), уменьшенное перфузионное давление в коронарной артерии (фиг. 10) и уменьшенное количество липидных гидропероксидов (БНР) по сравнению с контрольными сердцами
- 24 010134 (фиг. 11). Кроме того, ЕТС-216 защищал против морфологических изменений в миокарде (фиг. 12). Эти результаты демонстрируют кардиопротективные эффекты ЕТС-216 при введении перед ишемическим событием.
Пример 4. Срочное и длительное введение в ЬАО (левая передняя нисходящая артерия) окклюдированное-реперфузированное сердце кролика в дозе 100 мг/кг.
Этот пример демонстрирует кардиопротективные эффекты ЕТС-216 в модели региональной ишемии миокарда и реперфузии ίίί у1уо. Самец белого новозеландского кролика был выбран в качестве подходящей тест-системы для целей этого исследования из-за отсутствия коллатерального кровоснабжения в его сердце, что, соответственно, делает излишним использование определений миокардиального кровотока. В этом исследовании использовали различные режимы введения доз в отдельных группах кроликов, которых подвергали 30-минутной региональной ишемии миокарда путем наложения лигатуры на коронарную артерию и реперфузии. Использовали две схемы введения доз. В первом протоколе ЕТС-216 тестировали при однократной предварительной обработке, при которой сердце подвергают воздействию 100 мг/кг агента непосредственно перед началом региональной ишемии, тогда как во втором протоколе применяли две предварительные обработки дозой 100 мг/кг (за 1 сутки и непосредственно) до начала региональной ишемии. Эти протоколы представлены на фиг. 13. Это исследование было сконцентрировано на эффектах ЕТС-216 как кардиопротективного агента в исследовании ίίί у1уо, в котором сердце кролика подвергали региональной ишемии миокарда в течение 30 мин, а затем реперфузии в течение, минимум, 4 ч. Этот пример демонстрирует, что ЕТС-216 является кардиопротективным агентом при введении после ишемического события.
Процедуры, используемые в этом исследовании, согласуются с рекомендациями комиссии университета Мичигана по использованию и содержанию животных. Ветеринарная служба находится при Лаборатории медицины животных университета Мичигана. Университет Мичигана получил сертификат Американской ассоциации лиц по уходу за лабораторными животными, а программа использования животных соответствует стандартам, изложенным в Инструкции по содержанию и использованию лабораторных животных, ΌΗΕ\ν (ΝΙΗ) РиЫ. Ио. 86-23.
В исследовании использовали самцов белых новозеландских кроликов, полученных из СНаг1с5 Кгуег, массой приблизительно 2-3 кг. После прибытия животным присваивали уникальные идентификационные номера. Кроликов подвергали анестезии смесью ксилазина (3,0 мг/кг) и кетамина (35 мг/кг) внутримышечно, а затем внутривенной инъекции пентобарбитала натрия (30 мг/кг). Анестезию поддерживали внутривенными инъекциями раствора пентобарбитала (30 мг/мл). Вставляли эндотрахеальную трубку с манжетой и животных подвергали искусственной вентиляци легких комнатным воздухом под положительным давлением. Правую яремную вену изолировали и вставляли канюлю для введения ЕТС216 или соответствующего объема наполнителя. Правую сонную артерию изолировали и оснащали датчиком давления в виде микронаконечника катетера МШагТМ, расположенного непосредственно выше аортальных клапанов для того, чтобы контролировать кровяное давление в аорте и получать первую производную пульсовых колебаний давления (бР/άΐ). Электрокардиограму в отведении ΙΙ контролировали в течение всего эксперимента. Осуществляли левую торакотомию и перикардиотомию с последующей идентификацией левой передней нисходящей (ΕΛΌ) коронарной артерии. Шелковую хирургическую нить (3,0; ЭекпаШ, Ра11 Кгуег, МА) пропускали сзади артерии и оба конца нити вставляли в короткую полиэтиленовую трубку. Понижение давления на полиэтиленовую трубку при распространении развивающегося напряжения на свободных концах нити сдавливает подстилающую коронарную артерию, что приводит к окклюзии сосуда и региональной ишемии миокарда. Окклюзию поддерживали в течение 30 мин, после чего напряжение на нити снимали и полиэтиленовую трубку извлекали, что делало возможным проведение реперфузии. Региональную ишемию миокарда подтверждали наличием участка в площади распределения окклюдированного сосуда и изменениями в электрокардиограмме, которые согласуются с наличием трансмуральной регионарной ишемии миокарда (подъем сегмента 8Т).
Определение основной конечной точки состояло из измерений размера инфаркта в виде процента от левого желудочка и в виде процента от площади риска (фиг. 14 и 15). В конце исследования кроликам, находящимся в состоянии анестезии, давали гепарин (1000 ед. внутривенно), после чего их подвергали эвтаназии. Сердце иссекали и затем подготавливали для перфузии через аорту в аппарате Лангендорфа буфером Кребса-Хензелейта при постоянном потоке 22-24 мл/мин. Сердца промывали буфером в течение 10 мин для того, чтобы гарантировать, что ткань была чистой. 45 мл 1%-ного раствора трифенилтетразолия хлорида (ТТС) в фосфатном буфере (рН 7,4) перфузировали через сердце. ТТС разграничивает неинфаркный миокард в зоне риска с помощью красно-коричневого цвета, который указывает на присутствие формазанового осадка, являющегося результатом восстановления ТТС коферментами, присутствующими в жизнеспособной ткани миокарда. Необратимо поврежденная ткань, испытывающая недостаток цитозольных дегидрогеназ, не способна образовывать формазановый осадок и выглядит бледножелтой. На левую переднюю нисходящую (ЬАВ) артерию накладывали лигатуру на участке, идентичном области, лигированной во время индукции региональной ишемии миокарда. Перфузионный насос останавливали и 2 мл 0,25%-ного раствора Эванса голубого медленно инъецировали через отверстие боковой ветви, соединенное с аортальной канюлей. Краситель пропускали через сердце в течение 10 с, чтобы
- 25 010134 обеспечить одинаковое распределение красителя. Присутствие Эванса голубого использовали для разграничения ткани левого желудочка, которая не была подвергнута региональной ишемии, от зоны риска. Сердце извлекали из перфузионного аппарата и разрезали на поперечные срезы под правыми углами к вертикальной оси. Правый желудочек, верхушку и предсердную ткань отбрасывали. Обе поверхности каждого поперечного среза копировали на чистые ацетатные листы. Изображения фотокопировали и увеличивали. Фотокопии сканировали и загружали в АПоЬе Р1ю1о81юр (АПоЬе 8ук!ешк Шс., 8еа!!1е, АА). Площади нормального левого желудочка (ИЬУ), участки без риска, площадь риска и инфаркта определяют путем вычисления количества пикселей, занимающих каждую площадь, с использованием программы АПоЬе Р1ю1о81юр. Общая площадь риска выражается в виде процента от левого желудочка. Размер инфаркта выражается в виде процента от площади риска (АВВ) (фиг. 14 и 15).
Показаны процент инфаркта от площади риска, процент инфаркта левого желудочка и процент площади риска левого желудочка у кроликов, обработанных 1 раз (т.е. срочная обработка) или обработанных 2 раза (т. е. длительная обработка) ЕТС-216 (100 мг/кг) или эквивалентным объемом наполнителя. Данные представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего для и=6 животных на группу. Звездочки на фиг. 14 указывают на значительное отличие от соответствующего контроля.
Были сделаны и другие определения конечной точки. На предельный размер инфаркта могут оказывать влияние увеличения или уменьшения в утилизации миокардиального кислорода. Две важные детерминанты компенсации миокардиального кислорода представляют собой частоту сердечных сокращений и нагрузку давлением. Произведение частоты на давление (частота сердечных сокращений х среднее артериальное кровяное давление) дает аппроксимацию изменения потребности сердца в миокардиальном кислороде. Поэтому произведение частота-давление вычисляли для того, чтобы определить, коррелировало ли наблюдаемое уменьшение размера инфаркта с изменением произведения частота-давление. Частоту сердечных сокращений и среднее аортальное давление контролировали постоянно на протяжении всего экспериментального протокола и данные использовали в исследовании каждой экспериментальной группы для расчета произведения частота-давление в конкретных временных точках.
Процент площади риска левого желудочка уменьшался в сердцах, обработанных ЕТС-216, по сравнению с контролями как в случае срочного, так и длительного введения, однако, результаты не были статистически значимыми. Процент инфаркта площади риска и процент инфаркта левого желудочка существенно уменьшались в сердцах, обработанных ЕТС-216, по сравнению с контролями как для срочного, так и для длительного введения. Эти результаты показывают, что ЕТС-216 является кардиопротективным и при срочном введении, и при длительном введении.
Можно сравнить креатинкиназную активность миокардиальной ткани в участках с риском и без риска. Принцип анализа основан на увеличении поглощения реакционной смеси при 340 нм в результате эквимолярного восстановления ΝΑΌ до ΝΑΌΗ. Скорость изменения поглощения прямо пропорциональна креатинкиназной активности. 1 единица определяется как количество фермента, которое продуцирует 1 мкмоль ЫАЭРН в минуту в условиях аналитической процедуры.
Миокардиальная ткань, подвергнутая продолжительному периоду лишения кровотока (ишемии) без реперфузии, будет подвергаться морфологическим изменениям, характеризующим некроз наряду с присутствием воспалительных клеток. Морфологическая картина клеточной гибели, индуцированной ишемией, отличается от картины, наблюдающейся в результате реперфузии. Последняя характеризуется полосами сокращения и обозначается как некроз полос сокращения. Сердечную ткань из каждой группы фиксировали и препарировали для исследования путем электронной микроскопии.
Ишемическое реперфузионное повреждение связано с накоплением воспалительных клеток, преимущественно нейтрофилов, в зоне риска. Миелопероксидаза (МРО) представляет собой фермент, присутствующий почти исключительно в нейтрофилах (Ьш е! а1., 1. РНагшасоР Ехр. Т1ег. 287: 527-537, 1998). Поэтому ожидают, что ткань из соответствующих участков сердца можно анализировать на активность МРО в качестве индикатора повреждения. Также ожидают, что вмешательство, способное уменьшить воспалительный ответ, будет связано с уменьшением активности МРО в реперфузированной зоне риска по сравнению с сердечной тканью из зоны риска у необработанных животных. Таким образом, процентное изменение активности МРО (зона риска/зона без риска) будет уменьшаться в сердцах, обработанных лекарствами, по сравнению с контрольными сердцами, обработанными наполнителем.
В конце эксперимента определяли активность тканевой миелопероксидазы (МРО) в предварительном, неконтролируемом, неутвержденном анализе. Образцы сердечной ткани получали из зоны риска и зоны без риска, и гомогенизировали в 0,5%-ном гексадецилтриметиламмония бромиде, и разводили в 50 мМ калий-фосфатном буфере, рН 6,0 (см. также Ьш е! а1., 1998, 1. РНагшасоР Ехр. Т1ег. 287: 527-537). Гомогенаты центрифугировали при 12500 д при 4°С в течение 30 мин. Супернатанты собирали и подвергали взаимодействию с 0,167 мг/мл ортодианизидина дигидрохлорида (81дша) и 0,0005% Н2О2 в 50 мМ калийфосфатном буфере, рН 6,0. Изменение поглощения измеряли спектрофотометрически при 460 нм. 1 единицу МРО определяли как количество фермента, гидролизующего 1 ммоль Н2О2/мин при 25°С. Результаты этого предварительного эксперимента, не представленные в данном описании, по-видимому, указывают на то, что не существуют никаких различий между сердцами, обработанными ЕТС-216 и наполнителем в
- 26 010134 плане ишемического реперфузионного повреждения, однако, эти результаты должны быть еще подтверждены, например, путем сравнения уровней МРО до ишемического реперфузионного повреждения.
Как показывает уменьшение процента инфаркта от площади риска и процента инфаркта левого желудочка, сердца, обработанные ЕТС-216, были защищены от ишемического реперфузионного повреждения. Кардиопротекция предоставлялась обоими дозовыми протоколами, а именно ЕТС-216, введенным в виде однократной дозы 100 мг/кг перед началом ишемии, или ЕТС-216, введенным двумя дозами 100 мг/кг, при этом одну дозу дают за сутки до ишемии, а вторую дозу дают непосредственно до ишемии.
Пример 5. Определение минимальной эффективной дозы для срочного введения в ЬАЭ окклюдированное-реперфузированное сердце кролика.
Этот пример демонстрирует профилактическую эффективность различных доз ЕТС-216, вводимых в качестве однократной предварительной обработки непосредственно перед началом региональной ишемии. Исследование в примере 2 было направлено на эффекты ЕТС-216 в качестве кардиопротективного агента в исследовании ш у1уо, в котором сердце кролика подвергали региональной ишемии миокарда в течение 30 мин, а затем реперфузии в течение, минимум, 4 ч. Использовали две схемы приема. В первом протоколе тестировали ЕТС-216 в виде однократной преварительной обработки, при которой системное кровообращение подвергали воздействию 100 мг/кг агента непосредственно перед началом региональной ишемии, тогда как во втором протоколе две преварительные обработки дозой 100 мг/кг осуществляли до начала региональной ишемии (за 1 сутки и непосредственно перед ишемией). Обе схемы показали, что и одна, и две обработки дозой 100 мг/кг ЕТС-216 являются кардиопротективными.
Поэтому ЕТС-216 тестировали в виде однократной преварительной обработки, при которой сердце подвергали воздействию однократных доз агента или эквивалентного объема наполнителя непосредственно перед началом региональной ишемии для того, чтобы определить эффекты в плане кардиопротекции. Сердца анализировали теми же способами, которые использовали в примере 2. Кроме того, этот протокол был разработан для того, чтобы найти минимальную эффективную дозу ЕТС-216 для обработки сердца кролика с целью защиты от ишемии.
Чтобы найти минимальную эффективную дозу ЕТС-216, использовали тот же протокол для срочной обработки (см. фиг. 13), при котором животные получали однократные обработки либо 10, 3 или 1 мг/кг ЕТС-216, либо эквивалентным объемом наполнителя, как показано на фиг. 16. Площадь риска (ААК) или ишемизированная зона, выраженная в виде процента от всего левого желудочка, для группы обработки дозой 10 мг/кг была аналогичной в контрольной группе и в группе обработки (фиг. 17).
У кроликов, обработанных 10 мг/кг ЕТС-216, развивались меньшие инфаркты (р<0,0005), выраженные в виде процента от ААК, по сравнению с кроликами, обработанными наполнителем (фиг. 18). Наблюдалось также уменьшение размера инфаркта миокарда (р<0,0001), когда данные выражали в виде процента от всего левого желудочка (фиг. 17).
Аналогичные результаты наблюдались с дозой 3 мг/кг. ААК, выраженная в виде процента от всего левого желудочка, была аналогичной в группах, обработанных ЕТС-216 и наполнителем (фиг. 17). У кроликов, обработанных 3 мг/кг ЕТС-216, развивались меньшие инфаркты (р<0,05), выраженные в виде процента от площади риска, по сравнению с кроликами, обработанными наполнителем (фиг. 17). Наблюдалось уменьшение размера инфаркта миокарда (р<0,05), когда данные выражали в виде процента от всего левого желудочка (фиг. 17).
Никаких значительных различий не было отмечено для дозы 1 мг/кг между ЕТС-216 и наполнителем в размере ААВ, выраженном в виде процента от левого желудочка (фиг. 17). При 1 мг/кг никаких значительных различий не было отмечено между группами в виде процента от ААК (фиг. 17) и в размере инфаркта миокарда, выраженном в виде процента от всего левого желудочка (фиг. 17).
Обобщение данных из каждой из четырех групп срочной обработки (т. е. 100, 10, 3 и 1 мг/кг) и их соответствующих контролей представлены на фиг. 17. ААВ инфаркта была аналогичной в каждой из четырех групп. Из четырех схем приема размер инфаркта, выраженный или в виде процента от площади риска, или в виде процента от левого желудочка, по сравнению с соответствующими контролями уменьшался дозами ЕТС-216 100, 10 и 3 мг/кг. В противоположность этому, размер инфаркта в группе животных, принимающих 1 мг/кг, не отличался от размера, наблюдаемого в соответствующей группе, обработанной наполнителем.
На фиг. 18 показаны примеры временных изменений уровня неэтерифицированного холестерина липопротеинов. Образцы крови получали от кроликов непосредственно перед и периодически после введения 1, 3, 10 или 100 мг/кг ЕТС-216 или наполнителя. Показаны профили неэтерифицированного холестерина, полученные в репрезентативных временных образцах сыворотки крови, где липопротеины сыворотки выделяли по размеру с помощью гель-фильтрационной хроматографии с постоянным анализом неэтерифицированного холестерина. Заметно повышение неэтерифицированного холестерина в холестерине высокой плотности через 45 мин после введения ЕТС-216, особенно при 100 мг/кг и в меньшей степени при 10 мг/кг, несмотря на фактическое отсутствие неэтерифицированного холестерина во внутривенно вводимом ЕТС-216 тест-агенте. Заметно также замедленное явное увеличение неэтерифицированного холестерина липопротеинов очень низкой плотности через 210 и 270 мин после введения либо 10, либо 100 мг/кг ЕТС-216. Заметно также, что изменения уровня неэтерифицированного холестерина ли
- 27 010134 попротеинов были не очевидными при лечебной дозе 3 мг/кг ЕТС-216 в анализируемых временных точках, однако, эта доза была кардиопротективной, как показано на фиг. 17.
Результаты показывают, что дозы 100, 10 и 3 мг/кг являются эффективными профилактическими дозами ЕТС-216.
Пример 6. ЕТС-216 предупреждает повреждение при ишемии-реперфузии при введении после начала БАЭ окклюзии в окклюдированном-реперфузированном сердце кролика.
Этот пример демонстрирует эффективность ЕТС-216 в предупреждении или уменьшении ишемического реперфузионного повреждения при введении после ишемического или окклюзионного события. Исследования в примерах 2 и 3 иллюстрируют профилактическую пользу обработки сердечной мышцы перед началом ишемии. Следовательно, для того, чтобы определить, может ли защитить ЕТС-216 сердечную мышцу после начала ишемии, БАЭ окклюдировали перед введением тест-агента или наполнителя. В этом протоколе тестировали ЕТС-216 при однократной обработке, при которой сердце подвергали воздействию 10 мг/кг агента или эквивалентного объема наполнителя, вводимого в течение последних 5 мин региональной ишемии и продолжающегося в течение первых 55 мин реперфузии (фиг. 19). ААК или ишемизированная зона, выраженная в виде процента от всего левого желудочка, для группы обработки дозой 10 мг/кг была аналогична в контрольной группе (фиг. 20). У кроликов, обработанных ЕТС-216, развивались меньшие инфаркты (р<0,001), выраженные в виде процента от ААК, по сравнению с кроликами, обработанными наполнителем (фиг. 20). Уменьшение размера инфаркта миокарда (р<0,0005) также наблюдали, когда эти данные были выражены в виде процента от всего левого желудочка (фиг. 20).
Этот пример демонстрирует, что однократная обработка, осуществляемая после ишемического события, смягчала или уменьшала ишемическое реперфузионное поврежедение.
Были описаны различные воплощения изобретения. Описание и примеры предназначены для иллюстрации изобретения, а не для его ограничения. Действительно, специалистам в данной области будет очевидно, что могут быть получены модификации для различных воплощений изобретения, описанных без отклонения от сущности изобретения или объема прилагаемой формулы изобретения, представленной ниже.
Все ссылки, приведенные в данном изобретении, включены таким образом путем ссылки во всей их полноте.

Claims (74)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ лечения острых коронарных синдромов у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение комплекса аполипопротеин А-Ι МПапо:1-пальмитоил-2-олеоил-5п-глицеро-3-фосфохолин (комплекс Аро АЛМ:РОРС) в дозе от примерно 1 до примерно 100 мг белка/кг, причем указанный способ облегчает расстройства, связанные с острым коронарным тромбозом.
2. Способ по п.1, где комплекс Аро А-БМ:РОРС вводят субъекту в дозе примерно 15 мг/кг.
3. Способ по п.1, где комплекс Аро А-БМ:РОРС вводят субъекту в дозе примерно 45 мг/кг.
4. Способ по п.1, где комплекс Аро А-БМ:РОРС вводят субъекту в дозе от примерно 15 до примерно 45 мг/кг.
5. Способ по п.1, где Аро А-Ι Мйапо представляет собой рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо.
6. Способ по п.1, где комплекс Аро А4М:РОРС состоит из аполипопротеина А-Ι Мйапо и 1пальмитоил-2-олеоил-8и-глицеро-3-фосфохолина в соотношении масса белка/масса липида примерно 1:1.
7. Способ по п.1, где комплекс Аро А-БМ:РОРС представляет собой стерильный жидкий фармацевтический препарат.
8. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят субъекту в дозе примерно 15 мг/кг.
9. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят субъекту в дозе примерно 45 мг/кг.
10. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят субъекту 1 раз в неделю в течение примерно 6, примерно 5, примерно 4, примерно 3, примерно 2 месяцев или примерно 1 месяца.
11. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят субъекту примерно каждые сутки в течение примерно 1 месяца.
12. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят субъекту примерно каждые 3 суток в течение периода времени от примерно 1 месяца до примерно 6 месяцев.
13. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят примерно каждые 10 суток в течение периода времени от примерно 1 месяца до примерно 6 месяцев.
14. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят примерно каждые 14 суток в течение периода времени от примерно 1 месяца до примерно 6 месяцев.
15. Способ по п.1, дополнительно включающий хирургическое вмешательство.
16. Способ по п.15, где хирургическое вмешательство включает в себя чрескожную транслюминальную коронарную ангиопластику или аортокоронарное шунтирование.
17. Способ по п.1, дополнительно включающий введение другого лекарства для лечения, предупреждения или облегчения заболеваний, расстройств, симптомов или боли, ассоциированных с острыми коронарными синдромами.
18. Способ по п.1, где процентный объем атеромы в пораженном сосуде субъекта уменьшается на величину от примерно -0,73 до примерно -1,29%.
19. Способ по п.1, где общий объем атеромы в пораженном сосуде субъекта уменьшается на величину от примерно -15,1 до примерно -12,6 мм3.
20. Способ по п.1, где средняя максимальная толщина атеромы в пораженном коронарном сегменте субъекта уменьшается на величину от примерно -0,039 до -0,044 мм.
21. Способ по п.7, где фармацевтический препарат вводят внутривенно.
22. Способ по п.21, где фармацевтический препарат вводят в течение примерно 1 ч.
23. Способ по п.21, где фармацевтический препарат вводят в течение примерно 3 ч.
24. Способ по п.7, где фармацевтический препарат содержит Аро А-Ι Мйапо, РОРС, сахарозоманнитный носитель и фосфатный буфер.
25. Способ по п.24, где сахарозоманнитный носитель состоит из сахарозы в количестве от примерно 6,0 до примерно 6,4% и маннита в количестве от примерно 0,8 до примерно 1%.
26. Способ по п.25, где сахарозоманнитный носитель состоит из примерно 6,2% сахарозы и примерно 0,9% маннита.
27. Способ по п.7, где фармацевтический препарат имеет рН от примерно 7,0 до примерно 7,8.
28. Способ по п.27, где рН составляет примерно 7,5.
- 28 010134
- 29 010134 мкм на 50 мл.
29. Способ по п.7, где фармацевтический препарат содержит от примерно 12 до примерно 18 мг/мл Аро А-Ι Мйапо.
30. Способ по п.7, где фармацевтический препарат содержит от примерно 11 до примерно 17 мг/мл РОРС.
31. Способ по п.7, где фармацевтический препарат содержит менее 6000 частиц размером более 10 мкм на 50 мл.
32 Способ по п.7, где фармацевтический препарат содержит менее 600 частиц размером более 25 мкм на 50 мл.
33. Способ по п.7, где фармацевтический препарат имеет осмоляльность от примерно 280 до примерно 320 мОсм.
34. Способ по п.33, где фармацевтический препарат имеет осмоляльность примерно 290 мОсм.
35. Способ уменьшения атеросклеротической бляшки у субъекта, нуждающегося в этом, включающий, по меньшей мере, однократное введение субъекту 45 мг/кг комплекса рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо:РОРС.
36. Способ по п.35, где комплекс рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо:РОРС вводят 1 раз в неделю, 1 раз в месяц или 1 раз в год.
37. Способ по п.35, где комплекс рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо:РОРС вводят 1 раз в неделю в течение примерно 3-5 недель.
38. Способ по п.35, дополнительно включающий, по меньшей мере, однократное введение субъекту дозы 15 мг/кг комплекса рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо:РОРС.
39. Способ по п.38, где комплекс вводят 1 раз в неделю, 1 раз в месяц или 1 раз в год.
40. Способ по п.35, где субъекта также лечат другим лекарством для лечения, предупреждения или облегчения заболеваний, расстройств, симптомов или боли, ассоциированных с острыми коронарными синдромами.
41. Способ по п.40, где лекарство представляет собой статин, β-блокатор, ингибитор АПФ (ангиотензин-превращающего фермента), антитромботическое средство, вазодилататор или их комбинацию.
42. Жидкий фармацевтический препарат, содержащий комплекс рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо или его вариант:1-пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3-фосфохолин в буфере, содержащем от примерно 6,0 до примерно 6,4% сахарозы, дополнительно содержащем от примерно 0,8 до примерно 1% маннита, имеющем рН от примерно 7,0 до примерно 7,8.
43. Фармацевтический препарат по п.42, содержащий примерно 6,2% сахарозы.
44. Фармацевтический препарат по п.42, содержащий примерно 0,9% маннита.
45. Фармацевтический препарат по п.42, где рН составляет примерно 7,5.
46. Фармацевтический препарат по п.42, где концентрация гАро А-Ι Мйапо составляет от примерно 12 до примерно 18 мг на мл указанного буфера.
47. Фармацевтический препарат, содержащий рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо или его вариант в виде комплекса с 1-пальмитоил-2-олеоил-кп-глицеро-3-фосфохолином и фосфатный буфер, имеющий рН от примерно 7,0 до примерно 7,8, содержащий 2% глюкозы и 4 мМ фосфата натрия.
48. Фармацевтический препарат по п.47, содержащий фосфатный буфер для достижения рН примерно 7,5.
49. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, где рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо представляет собой Аро А-Ι Мйапо с консервативными заменами.
50 мл.
50 мл.
50. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, где рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо и РОРС образуют комплекс рекомбинантный Аро А-Ι Мйапо:РОРС в соотношении 1:0,95 (масса белка/масса липида).
51. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, содержащий менее 6000 частиц размером более 10
52. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, содержащий менее 600 частиц размером более 25 мкм на 50 мл.
53. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, где осмоляльность составляет от примерно 280 до примерно 320 мОсм.
54. Фармацевтический препарат по п.53, где осмоляльность составляет примерно 290 мОсм.
55. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, который является стерильным.
56. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, который является замороженным.
57. Фармацевтический препарат по п.42 или 47, который находится в стерильном флаконе, стериль- ном предварительно заполненном мешке или предварительно заполненном шприце.
58. Лиофилизированный фармацевтический препарат, содержащий:
а) рекомбинантный Аро А-Ι Мйаио или его вариант в виде комплекса с 1-пальмитоил-2-олеоил-зиглицеро-3-фосфохолином;
б) от примерно 6,0 до примерно 6,4% сахарозы и
в) от примерно 0,8 до примерно 1% маннита.
59. Фармацевтический препарат по п.58, содержащий примерно 6,2% сахарозы.
60. Фармацевтический препарат по п.58, содержащий примерно 0,9% маннита.
61. Фармацевтический препарат по п.58, дополнительно содержащий буфер, который имеет рН примерно 7,5.
62. Фармацевтический препарат по п.58, где рекомбинантный Аро А-Ι Мйаио представляет собой
Аро А-Ι Мйаио с консервативными заменами.
63. Фармацевтический препарат по п.58, где концентрация РОРС составляет от примерно 11 до примерно 17 мг/мл.
64. Фармацевтический препарат по п.58, где рекомбинантный Аро А-Ι Мйаио и РОРС образуют комплекс рекомбинантный Аро А-Ι Мйаио:РОРС в соотношении 1:0,95 (масса белка/масса липида).
65. Фармацевтический препарат по п.58, содержащий менее 6000 частиц размером более 10 мкм на
66. Фармацевтический препарат по п.58, содержащий менее 600 частиц размером более 25 мкм на
67. Фармацевтический препарат по п.58, где осмоляльность составляет от примерно 280 до примерно 320 мОсм.
68. Фармацевтический препарат по п.67, где осмоляльность составляет примерно 290 мОсм.
69. Фармацевтический препарат по п.58, который является стерильным.
70. Фармацевтический препарат по п.58, который находится в стерильном флаконе, стерильном предварительно заполненном мешке или предварительно заполненном шприце.
71. Способ лечения ишемической реперфузии у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение комплекса аполипопротеин А-Ι Мйаио: 1-пальмитоил-2-олеоил-зи-глицеро-3-фосфохолин (комплекс Аро А4М:РОРС) в дозе примерно 15 мг белка/кг.
72. Способ лечения ишемической реперфузии у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение комплекса аполипопротеин А-Ι Мйаио: 1-пальмитоил-2-олеоил-зи-глицеро-3-фосфохолин (комплекс Аро А4М:РОРС) в дозе примерно 45 мг белка/кг.
73. Способ по пп.2, 8 или 71, дополнительно включающий введение 45 мг белка/кг.
74. Способ по пп.3, 9 или 72, дополнительно включающий введение 15 мг белка/кг.
Сильный эффект однократной дозы ЕТС-216 на неэтерифицированный холестерин ЛПВП сыворотки у здоровых мужчин (ЕТС-216-001)
Доза (мг/кг) До (-30 минут) 0 (Плацебо) лпонп лпнп л1|вп IX ! 5 к А 15 50 . - 75 кА. 100 АЖ
После (+30 минут) N2 субъекта ЛПВП лпонп лпнп . ж X 26 к А 1 5 • · . - ж 9 А- 13 А Ж ж 25
EA200600548A 2003-10-20 2004-10-19 Фармацевтические препараты, способы и схемы приема для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов EA010134B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51311603P 2003-10-20 2003-10-20
US51701603P 2003-11-03 2003-11-03
US57112904P 2004-05-14 2004-05-14
PCT/US2004/034800 WO2005041866A2 (en) 2003-10-20 2004-10-19 Pharmaceutical formulations, methods and dosing regimens for the treatment and prevention of acute coronary syndromes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200600548A1 EA200600548A1 (ru) 2006-10-27
EA010134B1 true EA010134B1 (ru) 2008-06-30

Family

ID=34557347

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200600548A EA010134B1 (ru) 2003-10-20 2004-10-19 Фармацевтические препараты, способы и схемы приема для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов

Country Status (24)

Country Link
US (2) US7435717B2 (ru)
EP (1) EP1677597B1 (ru)
JP (1) JP2007509157A (ru)
KR (3) KR20100101710A (ru)
AR (1) AR046126A1 (ru)
AU (2) AU2004284932A1 (ru)
CA (1) CA2542726C (ru)
CO (1) CO5690611A2 (ru)
CR (1) CR8352A (ru)
EA (1) EA010134B1 (ru)
EC (1) ECSP066516A (ru)
ES (1) ES2449719T3 (ru)
GE (1) GEP20094601B (ru)
HK (1) HK1093869A1 (ru)
IL (1) IL174301A (ru)
MA (1) MA28102A1 (ru)
MX (1) MXPA06004362A (ru)
NO (1) NO339456B1 (ru)
NZ (1) NZ545939A (ru)
OA (1) OA13272A (ru)
PA (1) PA8615301A1 (ru)
PE (1) PE20050438A1 (ru)
RS (1) RS20060273A (ru)
WO (1) WO2005041866A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2603076C9 (ru) * 2011-04-27 2017-02-03 Айсис Фармасьютикалс, Инк. Модулирование экспрессии аполипопротеина сiii (аросiii)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8246671B2 (en) 1999-08-09 2012-08-21 Cardiokinetix, Inc. Retrievable cardiac devices
US7674222B2 (en) 1999-08-09 2010-03-09 Cardiokinetix, Inc. Cardiac device and methods of use thereof
US8257428B2 (en) 1999-08-09 2012-09-04 Cardiokinetix, Inc. System for improving cardiac function
US8377114B2 (en) 1999-08-09 2013-02-19 Cardiokinetix, Inc. Sealing and filling ventricular partitioning devices to improve cardiac function
US10307147B2 (en) 1999-08-09 2019-06-04 Edwards Lifesciences Corporation System for improving cardiac function by sealing a partitioning membrane within a ventricle
US9694121B2 (en) 1999-08-09 2017-07-04 Cardiokinetix, Inc. Systems and methods for improving cardiac function
US8529430B2 (en) 2002-08-01 2013-09-10 Cardiokinetix, Inc. Therapeutic methods and devices following myocardial infarction
US9078660B2 (en) 2000-08-09 2015-07-14 Cardiokinetix, Inc. Devices and methods for delivering an endocardial device
US10064696B2 (en) 2000-08-09 2018-09-04 Edwards Lifesciences Corporation Devices and methods for delivering an endocardial device
US9332993B2 (en) 2004-08-05 2016-05-10 Cardiokinetix, Inc. Devices and methods for delivering an endocardial device
US9332992B2 (en) 2004-08-05 2016-05-10 Cardiokinetix, Inc. Method for making a laminar ventricular partitioning device
IL161110A0 (en) * 2001-09-28 2004-08-31 Esperion Therapeutics Inc Prevention and treatment of restenosis by local admistration of drug
US20040067873A1 (en) * 2002-05-17 2004-04-08 Dasseux Jean-Louis H. Method of treating dyslipidemic disorders
JP2007531537A (ja) * 2004-04-06 2007-11-08 セダーズ−シナイ　メディカル　センター アポリポタンパク質ａ−ｉおよびアポリポタンパク質ａ−ｉｍｉｌａｎｏをコードする組換えアデノ随伴ウイルスベクターによる血管疾患の予防および処置
AU2006271230A1 (en) * 2005-07-22 2007-01-25 Warner Chilcott Company, Llc Compositions for reducing the incidence of drug induced arrhythmia
WO2007130724A2 (en) * 2006-02-06 2007-11-15 Northwind Ventures Systems and methods for volume reduction
US20070254832A1 (en) * 2006-02-17 2007-11-01 Pressler Milton L Methods for the treatment of macular degeneration and related eye conditions
US20080009487A1 (en) * 2006-03-03 2008-01-10 Andrew Sternlicht Treatment of athersclerotic disease
DE102007006663A1 (de) * 2007-02-10 2008-08-21 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Transport von Arzneistoffen über die Blut-Hirn-Schranke mittels Apolipoproteinen
US8044021B2 (en) 2007-09-20 2011-10-25 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US7985727B1 (en) 2007-09-20 2011-07-26 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US9173890B2 (en) 2007-09-20 2015-11-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US7985728B1 (en) 2007-09-20 2011-07-26 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US8101565B2 (en) * 2007-09-20 2012-01-24 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US8986253B2 (en) 2008-01-25 2015-03-24 Tandem Diabetes Care, Inc. Two chamber pumps and related methods
US8408421B2 (en) 2008-09-16 2013-04-02 Tandem Diabetes Care, Inc. Flow regulating stopcocks and related methods
CA2737461A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Tandem Diabetes Care, Inc. Solute concentration measurement device and related methods
CA2752899A1 (en) * 2009-02-18 2010-08-26 Cormatrix Cardiovascular, Inc. Compositions and methods for preventing cardiac arrhythmia
EP2401587A2 (en) 2009-02-27 2012-01-04 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for determination of flow reservoir volume
US9250106B2 (en) 2009-02-27 2016-02-02 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for determination of flow reservoir volume
EP2405933A1 (en) * 2009-03-13 2012-01-18 Medtronic, Inc Method of treating heart failure
EP3284494A1 (en) 2009-07-30 2018-02-21 Tandem Diabetes Care, Inc. Portable infusion pump system
US10894098B2 (en) 2012-04-09 2021-01-19 Signablok, Inc. Methods and compositions for targeted imaging
US10525152B2 (en) 2009-10-09 2020-01-07 Signablok, Inc. Methods and compositions for targeted imaging
JP5875986B2 (ja) 2009-10-26 2016-03-02 カーディオキネティックス・インコーポレイテッドＣａｒｄｉｏｋｉｎｅｔｉｘ， Ｉｎｃ． 心室容積縮小
CN103118683B (zh) 2010-06-30 2015-08-19 杰特有限公司 重建高密度脂蛋白制剂及其生产方法
CA2807441A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing a lipid particle, the lipid particle itself and its use
CN103068368A (zh) 2010-08-30 2013-04-24 霍夫曼-拉罗奇有限公司 产生四连蛋白-载脂蛋白a-i脂质颗粒的方法，脂质颗粒本身及其应用
CA2807448A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Tetranectin-apolipoprotein a-i, lipid particles containing it and its use
SI2767546T1 (sl) 2011-02-07 2019-03-29 Cerenis Therapeutics Holding Sa Lipoproteinski kompleksi in izdelava ter uporaba le-teh
WO2012162392A1 (en) 2011-05-23 2012-11-29 Timothy Hla Endothelium protective materials and methods of use
KR20140054115A (ko) 2011-08-25 2014-05-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 단축 테트라넥틴-아포지단백질 a-i 융합 단백질, 그를 함유하는 지질 입자 및 그의 용도
KR20190084334A (ko) * 2011-12-21 2019-07-16 시에스엘 리미티드 아포지질단백질 제형을 위한 용량 용법
US9180242B2 (en) 2012-05-17 2015-11-10 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for multiple fluid transfer
US9555186B2 (en) 2012-06-05 2017-01-31 Tandem Diabetes Care, Inc. Infusion pump system with disposable cartridge having pressure venting and pressure feedback
US9610324B2 (en) 2012-07-11 2017-04-04 Esperion Therapeutics, Inc. Apolipoprotein mixtures
US9125943B2 (en) 2012-11-02 2015-09-08 Csl Limited Reconstituted HDL formulation
US9173998B2 (en) 2013-03-14 2015-11-03 Tandem Diabetes Care, Inc. System and method for detecting occlusions in an infusion pump
SG11201507287SA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Univ California Peptides having reduced toxicity that stimulate cholesterol efflux
JP6483676B2 (ja) * 2013-10-31 2019-03-13 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 針カニューレを備える注射デバイス
CN106852115A (zh) 2014-09-28 2017-06-13 卡迪欧凯尼迪克斯公司 用于治疗心功能不全的装置
GB2542064B (en) * 2015-01-20 2020-11-18 Univ California Unit aerosol doses for anticoagulation
MY187439A (en) * 2015-08-25 2021-09-22 Novo Nordisk As A medical injection device with a cleaning chamber
DE102018107407A1 (de) 2017-03-28 2018-10-04 Edwards Lifesciences Corporation Positionieren, einsetzen und zurückholen von implantierbaren vorrichtungen
JP6784973B2 (ja) * 2017-03-30 2020-11-18 国立研究開発法人産業技術総合研究所 単層カーボンナノチューブ

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2153353C2 (ru) * 1993-07-02 2000-07-27 Бакстер Аг Способ предотвращения и лечения ишемических приступов и возникающего от них реперфузионного повреждения
US20030109442A1 (en) * 2001-09-28 2003-06-12 Esperion Therapeutics, Inc. Prevention and treatment of restenosis by local administration of drug

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9103701D0 (sv) 1991-12-13 1991-12-13 Kabi Pharmacia Ab Apolipoprotein
US6306433B1 (en) * 1997-08-12 2001-10-23 Pharmacia Ab Method of preparing pharmaceutical compositions
US6287590B1 (en) * 1997-10-02 2001-09-11 Esperion Therapeutics, Inc. Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization
US20040067873A1 (en) * 2002-05-17 2004-04-08 Dasseux Jean-Louis H. Method of treating dyslipidemic disorders
WO2003097696A1 (en) * 2002-05-17 2003-11-27 Esperion Therapeutics, Inc. Methods and copositions for the treatment of ischemic reperfusion

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2153353C2 (ru) * 1993-07-02 2000-07-27 Бакстер Аг Способ предотвращения и лечения ишемических приступов и возникающего от них реперфузионного повреждения
US20030109442A1 (en) * 2001-09-28 2003-06-12 Esperion Therapeutics, Inc. Prevention and treatment of restenosis by local administration of drug

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHIESA G. et al. "Recombinant apolipoprotein A-I(Milano) infusion into rabbit carotid artery rapidly removes lipid form fatty streaks". Circ. Res. 2002 May 17; 90(9):974-80, referat, on-layn, naydeno iz Internet na www.pubmed.com., naydeno 15.08.2006, PMID:12016263 [PubMed - indexed for MEDLINE] *
D.M. ARONOV. Lechenie i profilaktika ateroskleroza. Moskva, Triada - X", 2000, str. 18-21 *
KAUL S. et al. "Intramural delivery of recombinant apolipoprotein A-IMilano/phospholipid complex (ETC-216) inhibits in-stent stenosis in porcine coronary arteries". Circulation. 2003 May 27; 107(20):2551-4. Epub. 2003 May 12, referat, on-layn, naydeno iz Internet na www.pubmed.com., naydeno 15.06.2006, PMID: 12742990 [PubMed - indexed for MEDLINE] *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2603076C9 (ru) * 2011-04-27 2017-02-03 Айсис Фармасьютикалс, Инк. Модулирование экспрессии аполипопротеина сiii (аросiii)

Also Published As

Publication number Publication date
OA13272A (en) 2007-01-31
CA2542726C (en) 2012-05-15
NZ545939A (en) 2008-08-29
KR20070110561A (ko) 2007-11-19
EP1677597A4 (en) 2011-08-24
ECSP066516A (es) 2006-11-24
EP1677597B1 (en) 2014-01-08
IL174301A0 (en) 2006-08-01
JP2007509157A (ja) 2007-04-12
CR8352A (es) 2007-03-02
US7435717B2 (en) 2008-10-14
KR20060080227A (ko) 2006-07-07
GEP20094601B (en) 2009-02-10
WO2005041866A3 (en) 2006-05-18
AU2004284932A1 (en) 2005-05-12
MA28102A1 (fr) 2006-08-01
HK1093869A1 (en) 2007-03-16
PE20050438A1 (es) 2005-06-14
US20080293633A1 (en) 2008-11-27
NO339456B1 (no) 2016-12-12
AR046126A1 (es) 2005-11-23
CO5690611A2 (es) 2006-10-31
NO20062110L (no) 2006-07-18
MXPA06004362A (es) 2006-09-04
AU2011202014A1 (en) 2011-05-26
KR20100101710A (ko) 2010-09-17
WO2005041866A2 (en) 2005-05-12
US20050142180A1 (en) 2005-06-30
EP1677597A2 (en) 2006-07-12
ES2449719T3 (es) 2014-03-20
EA200600548A1 (ru) 2006-10-27
PA8615301A1 (es) 2005-09-28
AU2011202014B2 (en) 2012-06-14
CA2542726A1 (en) 2005-05-12
RS20060273A (sr) 2008-09-29
IL174301A (en) 2013-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA010134B1 (ru) Фармацевтические препараты, способы и схемы приема для лечения и предупреждения острых коронарных синдромов
US11633462B2 (en) Pharmaceutical composition comprising plasminogen and uses thereof
US20090054331A1 (en) High temperature stable peptide formulation
JP2019517578A (ja) 異常な新生血管形成を伴う眼疾患を処置するためにニンテダニブを使用する組成物および方法
KR20190035776A (ko) 5-콜레스텐-3, 25-디올, 3-술페이트 (25hc3s) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 적어도 하나의 시클릭 올리고당을 포함하는 조성물
JP6251740B2 (ja) 上皮増殖因子を含む小胞及びその組成物
ES2906262T3 (es) Composiciones para el tratamiento de la autodigestión
Frenken et al. Identification of the component part in an epoetin alfa preparation that causes pain after subcutaneous injection
BR112013014642A2 (pt) produto farmacêutico, kit, uso, produtos, métodos e usos inovadores
US11963940B2 (en) Parenteral esmolol formulation
JP2011513496A (ja) アポイクオリン含有組成物及びその使用方法
US20210046025A1 (en) Injection for Protecting Ischemic Myocardium and Preparation Method thereof
US20070197442A1 (en) Methods for the Treatment of Macular Degeneration and Related Eye Conditions
CN1870894B (zh) 用于治疗和预防急性冠状动脉综合征的药物制剂、方法和给药方案
JP6153838B2 (ja) 血管透過性抑制剤
US20240016794A1 (en) Method for treating acute ischemic stroke
KR20050116125A (ko) 3,７­디아자비시클로〔３,３,１〕노난 화합물을 포함하는액상의 약제학적 제제 및 항-부정맥발작에 관련한 치료방법
JP2007224032A (ja) 黄斑変性症及び関連する眼の病気の治療方法
US20200000837A1 (en) Methods for Treating Ischemic Heart Disease by Targeting TRPV4

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU