JP2015520234A - 動脈硬化性血管疾患を処置する方法および組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む医薬組成物によって、動脈硬化性血管疾患を処置するための方法と組成物を提供する。【選択図】図５

Description

（相互参照）
本出願は、２０１２年６月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／６６３，４９５号の利益を主張し、この文献は引用により全体として本明細書に組み込まれる。

アテローム性動脈硬化（動脈硬化性血管疾患またはＡＳＶＤとしても知られている）は、コレステロールなどの脂肪質の蓄積の結果、動脈壁が厚くなる疾病である。アテローム性動脈硬化は、動脈血管に影響を及ぼす症候群であり、ほとんどはマクロファージ白血球の蓄積によって引き起こされ、そして、機能的な高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）（ａｐｏＡ−１ Ｍｉｌａｎｏを参照）によりマクロファージから脂質とコレステロールが適切に除去されることなく、低密度リポタンパク質（コレステロールとトリグリセリドを運ぶ血漿タンパク質）によって助長される、動脈壁の慢性的な炎症反応である。これは一般に、動脈の硬化または毛状物付着（ｆｕｒｒｉｎｇ）とも呼ばれる。アテローム性動脈硬化は動脈内での多くのプラークの形成によって引き起こされる。アテローム性動脈硬化は動脈樹全体に影響を与えるが、ほとんどの場合、冠状動脈、腎動脈、大腿動脈、大脳動脈、および、頚動脈のような高血圧血管に大きく影響する。

動脈硬化病変または動脈硬化プラークは２つの広義なカテゴリー：安定と不安定（脆弱とも呼ばれる）に分けられる。動脈硬化病変の病理生物学は非常に複雑であるが、一般に、無症性の傾向がある安定した動脈硬化プラークは、細胞外マトリックスと平滑筋細胞に富んでいる。その一方で、不安定なプラークはマクロファージと泡沫細胞に富んでおり、動脈内腔（線維性被膜としても知られている）から病変を分離する細胞外マトリックスが通常弱く、破裂する傾向にある。線維性被膜の破裂は、コラーゲンのような血栓形成材料を循環に晒し、最終的に内腔で血栓形成を引き起こす。形成後、腔内の血栓は動脈を完全に閉塞することがある（すなわち冠状動脈閉塞症）が、血栓はしばしば剥がれ、循環に入り、最終的に、小さな下流の分枝を閉塞し、血栓塞栓症を引き起こす（すなわち、脳卒中は頚動脈での血栓形成によってしばしば引き起こされる）。血栓塞栓症とは別に、慢性的に拡大する動脈硬化病変は、内腔の完全な閉塞を引き起こしかねない。興味深いことに、内腔の狭窄が非常に重篤であるため下流の組織への血液の供給が足りなくなって虚血が引き起こされるまで、慢性的に拡大する病変はたいてい無症性である。

血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）は、間葉系起源の細胞の主たるマイトジェンおよび化学誘引物質として機能する。ＰＤＧＦファミリーのメンバーは、胚発生の間に重要な役割を果たし、成人の場合、結合組織の維持に貢献する。ＰＤＧＦシグナル伝達の規制緩和は、アテローム性動脈硬化、肺高血圧症、および、臓器繊維症に関連付けられている。

１つの態様において、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む、治療上有効な量の組成物を、被験体に投与することを含む、アテローム性動脈硬化の処置が本明細書で提供される。

別の態様において、被験体に投与することを含むので、被験体の血管系内の１つ以上の動脈硬化病変の形成または進行を阻害する方法が本明細書で提供され、該方法は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を、必要としている被験体に投与する工程を含む。

別の態様において、被験体の炎症関連の動脈硬化性血管疾患を予防するまたは処置する方法が本明細書で提供され、該方法は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を、被験体に投与する工程を含む。

別の態様において、被験体のＣ−反応性タンパク質を減らす方法が本明細書で提供され、該方法は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を、被験体に投与する工程を含む。

＜参照による組み込み＞
本明細書で言及されるすべての公開物、特許、および、特許出願は、それぞれの個々の公開物、特許、または、特許出願が参照により具体的かつ個別に組み込まれると意図されるのと同程度まで、参照によって本明細書に組み込まれる。

本発明の新規な特徴は、とりわけ添付の特許請求の範囲で説明される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が用いられる実施形態を説明する以下の詳細な説明と、以下の添付図面とを引用することによって得られるであろう。

マウス血管（ＨＳＩＮＧ−ＣＨＵＮ ＣＨＵＮＧ、２００８年の学位論文、表題「Ｎｏｖｅｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｎｔｒｏｄｉａ ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ ｏｎ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｏｔｉｄ ｎｅｏｉｎｔｉｍａ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ」）の断面図を例証する。 Ａ−Ｂは、ＭＴＴアッセイ（２Ａ）およびＬＤＨアッセイ（２Ｂ）によって、平滑筋細胞（Ａ７ｒ５）上において、異なる濃度での典型的な組成物１の細胞毒性効果の例証的な結果を示している。 異なる濃度でＰＤＧＦで処置された平滑筋細胞（Ａ７ｒ５）の増殖を阻害する典型的な組成物１の例証的な結果を示す。 異なる濃度で典型的な組成物１に晒された、ＰＤＧＦにより刺激された平滑筋細胞移動の２４時間の検査の例証的な結果を提供する。＊３０ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦと比較して、Ｐ＜０．０５ ４００倍の顕微鏡下での典型的な組成物１の処置後の内側域中の頚動脈の病理学的分析の例証的な結果を示す。 ４００倍の顕微鏡下での典型的な組成物１の処置後の新生内膜領域中の頚動脈の病理学的分析の例証的な結果を示す。 典型的な組成物１の処置を用いた動脈硬化病変の例証的な評価を示す。 顕微鏡下での、普通食および高脂肪食が与えられたＡｐｏＥマウスの大動脈の例証的な病理学的分析を示す。 典型的な組成物１の処置を施したまたは施していないＡｐｏＥマウスの血清コレステロール値の例証的な評価を示す。

アテローム性動脈硬化が症状を発症させると、狭心症のような症状の中には処置できるものがある。非薬学的な手段は通常、禁煙や定期的な運動といった第１の処置方法である。これらの方法がうまくいかない場合に、薬は通常、心疾患を処置する次のステップであり、改善が見られると、長期間にわたって次第に最も有効な方法になっていく。アテローム性動脈硬化（または動脈硬化性血管疾患）向けの共通の薬は、スタチンと呼ばれる薬物群を含んでいる。これらには比較的少ない短期的または長期的な望ましくない副作用がある。本発明の組成物（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む）は、いくつかの実施形態では、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む天然物の抽出により得られ、合併症および／または副作用を減少させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＳａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物を、被験体（例えば、ヒト）に投与することによる、アテローム性動脈硬化の処置のための方法が本明細書で提供される。組成物は、アテローム性動脈硬化またはそれに関連する症状の治療を受けている被験体に治療効果を与える（実施例１−９を参照）。

いくつかの実施形態では、アテローム性動脈硬化の処置のための方法が提供され、該方法は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を、被験体に投与する工程を含む。

いくつかの実施形態では、該方法の組成物は、ＰＤＧＦで刺激された平滑筋細胞の増殖または移動を阻害する。いくつかの実施形態では、アテローム性動脈硬化は、冠動脈疾患、動脈瘤、動脈硬化症、心筋梗塞、塞栓症、脳卒中、血栓症、狭心症、血管プラーク炎症、血管プラーク破裂、川崎病、石灰化、または炎症に関係している。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。実施例２−９を参照する。

いくつかの実施形態では、組成物（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む）は、治療上有効な量の組成物を得ることができる任意の手段によって調製される。例えば、その成分は植物の任意の部分から、乾燥したまたは浸潤した形態で、液体または固体の形態での抽出によって、凍結乾燥または凍結乾燥することなく、調製される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種のそれぞれから成分を抽出することによって調製される。

いくつかの実施形態では、組成物はＰＤＧＦで刺激された平滑筋細胞の増殖または移動を阻害する。いくつかの実施形態において、組成物は新生内膜形成を減少させた。いくつかの実施形態では、組成物は、被験体の血管系内の１つ以上の動脈硬化病変の形成または進行を阻害する。いくつかの実施形態では、組成物は、被験体の炎症関連の動脈硬化性血管疾患を予防するまたは処置する。いくつかの実施形態では、組成物は注入によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は経口で投与される。特定の実施形態では、被験体はヒトである。

非限定的な代表的な組成物が以下に例証される。例えば、組成物１は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属（例えば、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ）からの少なくとも１つの種、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属（例えば、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ）からの少なくとも１つの種、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属（例えば、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ）からの少なくとも１つの種の水分抽出により調製される。いくつかの実施形態では、水性溶媒は加熱されてもよい。いくつかの実施形態では、水性溶媒は酸性であってもよい。いくつかの実施形態では、水性溶媒は塩基性であってもよい。いくつかの実施形態では、水性溶媒は中性であってもよい。例えば、代表的な組成物１は、水性溶媒抽出物から単離される。特定の実施形態において、水性溶媒は水である。特定の実施形態において、水性溶媒は加熱される。

他の実施形態では、本発明の組成物は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属（例えば、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ）からの少なくとも１つの種、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属（例えば、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ）からの少なくとも１つの種、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属（例えば、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ）からの少なくとも１つの種の有機溶媒抽出物から調製される。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノールなど）、エステル（例えば、酢酸メチル、酢酸エチルなど）、アルカン（例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンなど）、ハロゲン化アルカン（例えば、クロロメタン、クロロエタン、クロロホルム、塩化メチレンなど）などから選択される。例えば、代表的な組成物１は、有機溶媒抽出物から単離される。特定の実施形態において、有機溶媒はアルコールである。特定の実施形態において、アルコールはエタノールである。

いくつかの実施形態では、組成物は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の約１重量％〜約９９重量％、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の約１重量％〜約９９％、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の約１重量％〜約９９重量％を含む。

いくつかの実施形態において、血管系は心臓の動脈を含む。特定の実施形態では、血管系は大動脈を含む。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、動脈硬化病変の形成または進行を阻害する治療効果を有する。実施例８を参照する。

いくつかの実施形態において、被験体の炎症関連の動脈硬化性血管疾患を予防するまたは処置する方法が提供され、該方法は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を、被験体に投与する工程を含む。

いくつかの実施形態において、被験体のＣ−反応性タンパク質を減らす方法が提供され、該方法は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を、被験体に投与する工程を含む。

（特定の薬学および医学用語）
特に明記しない限り、明細書と請求項を含む本出願で用いられている以下の用語は、下記の定義を備える。明細書および添付の請求項内で用いられる通り、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その文脈が他に明確に指示していない限り、複数の指示対象を含む。特に指示がない限り、質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＣＬ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、および薬理学の従来の方法が使用される。本出願において、「または」、或いは「および」の使用は特に明記しない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」といった他の形態と同じく、制限はない。本明細書で使用された段落の表題は、組織化する目的だけのためで、記載された主題を制限すると解釈されるものではない。

製剤、組成物、または、成分に関する「許容可能な」との用語は、本明細書で使用されるように、処置されている被験体の一般的な健康に対して持続的な悪影響がないことを意味する。

Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属は、ヒバマタ目（Ｆｕｃａｌｅｓ）の茶色（褐藻類の綱）の大型藻類（ｍａｃｒｏａｌｇａ）（海草）の属である。多くの種は世界の温和で熱帯の海の至る所に分布しており、一般に浅瀬や珊瑚礁を住処としている。しかしながら、この属はそのプランクトン様の（浮遊）種が最もよく知られているかもしれない。この属のこの種のいくつか（例えば、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ）には薬効特性があり、台湾では伝統薬として使用されている。いくつかの実施形態では、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属の種は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｐａｌｌｉｄｕｍ Ａｇ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ Ｓｅｔｃｈなどからなる群から選択される。

Ｌｏｎｉｃｅｒａ属、特に、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅとしても知られている。日本語ではスイカズラ、中国語ではＪｉｎｙｉｎｈｕａ）は、中国（中国の北部および東部と台湾）、日本、および韓国を含む東アジア原産のｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅの１種である。Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅの花は、中国の伝統的な医学では高い薬用効果があり、抗菌性・抗炎症の特性を有すると考えられている。この処方を使用する従来の効能は、熱、頭痛、咳、喉の渇き、および咽喉痛を含んでいる。いくつかの実施形態では、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属の種は、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｐｅｒｉｃｌｙｍｅｎｕｍ、および、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓからなる群から選択される。

Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属（サラシナショウマまたはコホッシュ）は、北半球の温帯地方原産の、キンポウゲ科に属する、顕花植物の１２−１８の種の間の属である。Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ、とりわけ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ（根茎のＣｉｍｉｃｉｆｕｇａｅ科）は、刺激性の甘い風味で、天然の状態ではわずかに冷たく、肺、脾臓、および胃の経路に作用する。いくつかの実施形態では、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属の種は、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ Ｓｉｍｐｌｅｘ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｈｅｒａｃｌｅｉｆｏｌｉａ、Ｋｏｍ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｄａｈｕｒｉｃａ（Ｔｕｒｃｚ．）Ｍａｘｉｍ、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｒａｃｅｍｏｓａ（Ｌ．）Ｎｕｔｔからなる群から選択される。

「担体」との用語は、本明細書で使用されるように、細胞または組織に本発明の組成物を組み込むことを容易にする、比較的無毒な化学組成物または薬剤を指す。

「同時投与」などの用語は、本明細書で使用されるように、一人の患者への選択された治療薬の投与を含むことを意味しており、同じまたは異なる投与経路によって、あるいは、同じまたは異なる時間に、薬剤が投与される処置レジメンを含むように意図されている。

「希釈剤」との用語は、送達前に所望の本発明の組成物を希釈するために使用される化学組成物を指す。希釈剤は、より安定した環境を提供できることから、組成物を安定させるために使用することもできる。（ｐＨを制御または維持することもできる）緩衝液中に溶解した塩は、限定されないが、リン酸緩衝生理食塩溶液を含む、当該技術分野における希釈剤として利用される。

「有効な量」または「治療上有効な量」との用語は、本明細書で使用されるように、処置されている疾患または疾病の症状の１以上をある程度和らげる、本明細書で提供される投与される薬剤または組成物の十分な量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、または原因が減少および／または軽減され得るか、あるいは、生物系の任意の他の所望の変化がもたらされ得る。例えば、治療用の「有効な量」は、疾患の症状を臨床的に有意に減少させるために必要とされる、本明細書で開示される本発明の組成物を含む組成物の量である。任意の固体における適切な「有効な」量は、用量増加試験などの技術を使用して定められてもよい。

「増強する（ｅｎｈａｎｎｃｅ）」または「増強すること（ｅｎｈａｎｃｉｎｇ）」との用語は、本明細書で使用されるように、効力または持続時間のいずれかにおいて、所望の効果を増加または延長させることを意味する。従って、治療薬の効果を増強することに関して、用語「増強すること」は、効力または持続時間のいずれかで、系に対する他の治療薬の効果を増加または延長させる能力を指す。「増強させる有効な量」は、本明細書で使用されるように、所望の系において別の治療薬の効果を増強するのに十分な量を指す。

「薬学的な組み合わせ（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」との用語は、本明細書で使用されるように、２以上の活性成分の混合または組み合わせから生じる生成物を意味し、活性成分の固定されたおよび固定されない組み合わせの両方を含む。「固定された組み合わせ」との用語は、活性成分、例えば、本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）と助剤（ｃｏ−ａｇｅｎｔ）が、単一の実体または投与量の形態で両方とも患者に同時に投与されることを意味する。「固定されない組み合わせ」との用語は、活性成分、例えば、本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）と助剤が、特定の介入時間制限なく、同時に、平行して、または、連続して、別の実体として患者に投与されることを意味し、このような投与は、患者の身体に有効なレベルの２つの組成物を提供する。後者の用語はまた、カクテル療法、例えば、３以上の活性成分の投与にも当てはまる。

「Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分」との用語は、湿ったまたは乾燥した部分、抽出物、凍結乾燥生成物などの植物部分の任意の部分または成分を指す。

「Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分」との用語は、湿ったまたは乾燥した部分、抽出物、凍結乾燥生成物などの植物部分の任意の部分または成分を指す。

「Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分」との用語は、湿ったまたは乾燥した部分、抽出物、凍結乾燥生成物などの植物部分の任意の部分または成分を指す。

「医薬組成物」との用語は、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または、賦形剤などの他の化学成分と、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）との混合物を指す。医薬組成物は、有機体に対する代表的な本発明の化合物の投与を容易にする。代表的な本発明の組成物を投与する多くの技術は、限定されないが、静脈内、経口、エアロゾル、非経口、経眼、経肺、および、局所的な投与を含む当該技術に存在する。

「被験体」または「患者」との用語は、哺乳動物を含む。哺乳動物の例は、限定されないが、哺乳動物の分類の任意のメンバーを含んでいる：ヒト、チンパンジーのようなヒト以外の霊長類、および、他の類人猿およびサル類；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタのような家畜；ウサギ、イヌ、および、ネコのような家庭動物；ラット、マウスおよびモルモットのようなげっ歯類などを含む実験動物。１つの実施形態において、哺乳動物はヒトである。

「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」との用語は、本明細書で使用されるように、疾患または疾病の少なくとも１つの症状を軽減、緩和、または改善すること、さらなる症状を予防すること、疾患または疾病を抑制すること、例えば、疾患または疾病の進行を停止すること、疾患または疾病を和らげること、疾患または疾病を退行させること、疾患または疾病によって引き起こされる状態を和らげること、または、予防的および／または治療的に疾患または疾病の症状を止めることを含む。

（投与経路）
適切な投与経路は、経口投与、静脈内投与、直腸投与、エアロゾル投与、非経口投与、経眼投与、経肺投与、経粘膜投与、経皮投与、膣内投与、経耳投与、経鼻投与、および、局所投与を含むが、これらに限定されない。さらに、ほんの一例ではあるが、非経口送達は、くも膜下腔内、直接脳室内、腹腔内、リンパ内、および、鼻腔内の注入だけでなく、筋肉内、皮下、静脈内、髄内の注入も含む。

特定の実施形態において、本明細書に記載される代表的な本明細書の組成物は、しばしばデポ製剤または持続放出性製剤として、例えば、臓器への本発明の組成物の直接的な注入を介して、全身よりもむしろ局所に投与される。具体的な実施形態において、長期間作用型製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内に）または筋肉内注射により投与される。さらに、他の実施形態において、薬は標的とする薬送達系において、例えば、臓器特異的抗体（ｏｒｇａｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）で覆われたリポソームにおいて送達される。このような実施形態において、リポソームは、臓器を標的とし、臓器によって選択的に取り込まれる。さらに他の実施形態において、本明細書に記載されるような代表的な本明細書の組成物は、急速放出製剤の形態、徐放製剤の形態、または、中間放出製剤の形態で提供される。さらに他の実施形態において、本明細書に記載される代表的な本発明の組成物は、局所的に投与される。

いくつかの実施形態では、典型的な本発明の組成物は、非経口または静脈内に投与される。他の実施形態では、代表的な本発明の組成物は、注入によって投与される。いくつかの実施形態では、代表的な本発明の組成物は、経口で投与される。

（医薬組成物／製剤）
いくつかの実施形態において、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物が提供される。

例えば、組成物１は、少なくとも３つの薬草成分、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属（例えば、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ）からの少なくとも１つの種、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属（例えば、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．）からの少なくとも１つの種、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属（Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ（Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ）からの少なくとも１つの種を含む。いくつかの実施形態では、組成物１は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌの成分を含む。

いくつかの実施形態において、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物を含む医薬組成物が提供される。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、医薬組成物へと調剤される。具体的な実施形態において、医薬組成物は、活性な組成物を薬学的に使用可能な製剤へと処理するのを容易にする賦形剤および助剤を含む１以上の生理学的に許容可能な担体を用いて、従来の方式で処方される。適切な製剤は、選択される投与の経路に依存する。薬学的に許容可能なあらゆる技術、担体、および、賦形剤は、本明細書に記載の医薬組成物を処方するのに適したものとして使用される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ （Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．： Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ， Ｊｏｈｎ Ｅ．， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎ， Ｈ．Ａ． ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ， Ｌ．， Ｅｄｓ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．， １９８０；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ １９９９）。

本明細書では、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）と、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤、または担体とを含む医薬組成物が提供される。特定の実施形態では、記載された組成物は、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）が併用療法のように他の活性成分と混合された医薬組成物として投与される。本明細書に含まれるものは、下の区分およびこの開示の至る所にある併用療法で説明される、活性分子（ａｃｔｉｖｅｓ）の全ての組み合わせである。特定の実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）を含んでいる。

医薬組成物は、本明細書で使用されるように、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または、賦形剤などの他の化学成分と、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）との混合物を指す。特定の実施形態において、医薬組成物は、有機体に対する代表的な本発明の組成物の投与を容易にする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される治療または使用の方法を実施することで、治療上有効な量の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）は、治療される疾患または疾病を抱える哺乳動物に対して医薬組成物として投与される。特定の実施形態において、哺乳動物はヒトである。特定の実施形態において、治療上有効な量は、被験体の疾患の重症度、年齢、および、相対的な健康状態、使用される代表的な本発明の組成物の効力、および、他の要因に依存して変化する。本明細書に記載される組成物は、単独で、または、混合物の成分としての１以上の治療薬と組み合わせて使用される。

１つの実施形態では、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）は、水溶液で調剤される。特定の実施形態において、その水溶液は、ほんの一例であるが、ハンクス溶液、リンガー溶液、または、生理的食塩水などの生理的に適合する緩衝液から選択される。他の実施形態では、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）は、経粘膜投与のために調剤される。特定の実施形態において、経粘膜製剤は、浸透すべきバリアにとって適切な浸透剤を含む。本明細書に記載の組成物が他の非経口注入のために調剤されるまた別の実施形態において、適切な製剤は水溶性または非水溶性の溶液を含む。特定の実施形態において、そのような溶液は、生理学的に適合する緩衝液および／または賦形剤を含む。

別の実施形態において、本明細書に記載の組成物は経口投与のために処方される。典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）を含む本明細書に記載される組成物は、例えば、薬学的に許容可能な担体または賦形剤と活性な組成物を組み合わせることによって調剤される。様々な実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、ほんの一例として、錠剤、粉剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、エリキシル剤、スラリー剤、懸濁剤などを含む経口剤形で調剤される。

特定の実施形態において、経口で使用する医薬調製物は、１以上の固体の賦形剤を、本明細書に記載される１以上の組成物と混合することによって、随意に、結果として得られた混合物を任意に粉砕することによって、および、錠剤または糖衣錠コア（ｄｒａｇｅｅ ｃｏｒｅｓ）を得るために、必要に応じて、適切な助剤を添加した後に、顆粒の混合物を処理することによって、得られる。適切な賦形剤は、特に、ラクトーゼ、ショ糖、マンニトール、または、ソルビトールを含む砂糖などの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロースなどのセルロース調製物；または、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰまたはポビドン）またはリン酸カルシウムなどのそれ以外のもの、である。具体的な実施形態において、崩壊剤は任意に加えられる。崩壊剤は、ほんの一例ではあるが、架橋クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸あるいはアルギン酸ナトリウムなどのそれらの塩を含む。

１つの実施形態において、糖衣錠コアや錠剤などの剤形には、１以上の適切なコーティングが与えられる。具体的な実施形態において、濃縮した糖液は、剤形をコーティングするために用いられる。糖液は、ほんの一例ではあるが、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または、二酸化チタン、ラッカー溶液、および、適切な有機溶媒、または、混合溶媒などのさらなる成分を任意に含む。染料および／または色素は同様に、同定目的のため、コーティングに任意に加えられる。さらに、染料および／または色素は、活性な本発明の組成物の投与量の異なる組み合わせを特徴づけるために、随意に利用される。

特定の実施形態において、本明細書に記載される治療上有効な量の組成物の少なくとも１つは、他の経口剤形に調剤される。経口剤形は、ゼラチン製の押し出しカプセル剤と、ゼラチン製の密封された軟カプセル剤、および、グリセロールやソルビトールなどの可塑剤を含む。具体的な実施態様において、押し出しカプセル剤は、１以上の充填剤との混合物中に活性成分を含む。充填剤は、ほんの一例ではあるが、ラクトース、デンプンなどの結合剤、および／または、タルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および、任意に安定剤を含む。他の実施形態において、軟カプセル剤は、適切な液体中に溶解したまたは懸濁した代表的な本発明の組成物を含む。適切な液体は、ほんの一例ではあるが、１以上の脂肪油、流動パラフィン、または、液体ポリエチレングリコールを含む。加えて、安定剤が任意に加えられる。

他の実施形態において、本明細書に記載されている治療上有効な量の組成物の少なくとも１つは、口腔投与または舌下投与のために処方される。口腔投与または舌下投与に適した製剤は、ほんの一例ではあるが、錠剤、ロゼンジ剤、または、ゲル剤を含む。さらに他の実施態様において、本明細書に記載されている組成物は、ボーラス注入または持続注入に適した製剤を含む、非経口注入のために処方される。具体的な実施形態において、注入用製剤は、単位剤形で（例えばアンプルで）、または複数回用量容器で提供される。保存剤は任意に注入製剤に加えられる。また別の実施形態において、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の医薬組成物は、油性または水性のビヒクル中の無菌の懸濁液、溶液、または、エマルジョンとして非経口注入に適した形態で調剤される。非経口注入製剤は、懸濁剤、安定剤、および／または、分散剤などの処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を任意に含む。具体的な実施形態において、非経口投与のための医薬製剤は、水溶性形態の活性な組成物の水溶液を含む。さらなる実施形態において、活性な組成物の懸濁剤は、適切な油性の注入懸濁剤として調製される。本明細書に記載されている医薬組成物で使用される適切な親油性溶媒またはビヒクルは、ほんの一例ではあるが、ごま油などの脂肪油、または、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、あるいは、リポソームを含む。１つの具体的な実施形態において、水性注入懸濁剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、または、デキストランのような懸濁剤の粘度を増加させる物質を含む。随意に、懸濁剤は、高濃縮溶液の調製を可能にするため、組成物の溶解度を増加させる適切な安定剤または薬剤を任意に含む。代替的に、他の実施形態において、活性成分は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、発熱物質を含まない滅菌水とともに構成するための粉末形態である。

１つの態様において、組成物（すなわち、本明細書に記載される組成物）は、本明細書に記載された、または、当該技術で知られている、非経口注射のための溶液として調製され、自動注射で投与される。米国特許第４，０３１，８９３号、５，３５８，４８９号、５，５４０，６６４号、５，６６５，０７１号、５，６９５，４７２号、および、ＷＯ／２００５／０８７２９７号（それぞれ、開示のために参照することで本明細書に組み込まれる）で開示されている自動注射器が知られている。一般に、自動注射器はすべて、注入される典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）を含む大量の溶液を包含する。一般に、自動注射器は、溶液を維持するための容器（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）を含み、該容器は、薬物を届けるための注射針との流体連通しており、さらに、自動的に注射針を展開させて、患者に注射針を挿入し、患者へ投与量を送達するための機構とも流体連通している。典型的な注射器は、１ｍＬ溶液当たり、０．５ｍｇ〜５０ｍｇの典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の濃度で、約０．３ｍＬ、０．６ｍＬ、１．０ｍＬ、または、適切な量の溶液を提供する。それぞれの注射器は、代表的な本発明の組成物を１回分だけ送達することができる。

さらに他の実施形態において、組成物（すなわち、本明細書に記載される組成物）は、局所的に投与される。本明細書に記載される組成物は、溶液、懸濁液、ローション剤、ゲル剤、ペースト剤、薬用スティック、バーム、クリーム、または、軟膏などの局所投与が可能な様々な組成物へと処方される。そのような医薬組成物は、可溶化剤、安定剤、等張増強剤、緩衝剤、および、保存剤を任意に含む。

さらに他の実施形態において、組成物（すなわち、本明細書に記載される組成物）は、経皮投与のために処方される。具体的な実施形態において、経皮製剤は、経皮送達装置および経皮送達パッチを利用し、ポリマーまたは粘着剤の中で溶解および／または分散した親油性エマルションまたは緩衝水溶液であってもよい。様々な実施形態において、このようなパッチは、医薬品の連続送達、パルス送達、または、オンデマンド送達に合わせて構築される。さらなる実施形態では、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の経皮送達は、イオン導入パッチなどによって達成される。特定の実施形態では、経皮パッチは、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の制御送達を提供する。具体的な実施形態において、吸収速度は、律速膜（ｒａｔｅ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を使用することで、または、代表的な本発明の組成物をポリマーマトリックスもしくはゲルに閉じ込めることで、低下する。代替的な実施形態において、吸収促進剤は、吸収性を高めるために使用される。吸収促進剤または担体は、皮膚を介する通過を補助する、薬学的に許容可能な吸収性溶媒を含む。例えば、１つの実施形態において、経皮装置は、裏当て部材、随意に担体を含む代表的な本発明の組成物を入れる容器、随意に長時間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚に代表的な本発明の組成物を送達するための律速バリア、および、皮膚に装置を固定する手段を含む、包帯の形態である。

本明細書に記載の経皮製剤は、当該技術分野で記載された様々な装置を用いて投与される。例えば、そのような装置は、限定されないが、米国特許第３，５９８，１２２号、米国特許第３，５９８，１２３号、米国特許第３，７１０，７９５号、米国特許第３，７３１，６８３号、米国特許第３，７４２，９５１号、米国特許第３，８１４，０９７号、米国特許第３，９２１，６３６号、米国特許第３，９７２，９９５号、米国特許第３，９９３，０７２号、米国特許第３，９９３，０７３号、米国特許第３，９９６，９３４号、米国特許第４，０３１，８９４号、米国特許第４，０６０，０８４号、米国特許第４，０６９，３０７号、米国特許第４，０７７，４０７号、米国特許第４，２０１，２１１号、米国特許第４，２３０，１０５号、米国特許第４，２９２，２９９号、米国特許第４，２９２，３０３号、米国特許第５，３３６，１６８号、米国特許第５，６６５，３７８号、米国特許第５，８３７，２８０号、米国特許第５，８６９，０９０号、米国特許第６，９２３，９８３号、米国特許第６，９２９，８０１号、および、米国特許第６，９４６，１４４号を含む。

本明細書に記載の経皮剤形は、当該技術分野では従来技術である、特定の薬学的に許容可能な賦形剤を組み込んでもよい。１つの実施形態において、本明細書に記載される経皮製剤は、少なくとも３つの成分：（１）典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の製剤；（２）浸透促進剤；および、（３）水性のアジュバントを含む。加えて、経皮製剤は、限定されないが、ゲル化剤、クリーム、および、軟膏基剤などの追加成分を含む。いくつかの実施形態において、経皮製剤は、吸収を促進するとともに皮膚から経皮製剤が剥がれ落ちることを防ぐために、織られた裏地または不織布裏地さらに含む。他の実施形態において、本明細書に記載の経皮製剤は、肌への拡散を促進するために飽和状態または過飽和状態を維持することが可能である。

他の実施形態において、組成物（すなわち、本明細書に記載される組成物）は、吸入による投与のために処方される。吸入による投与に適した様々な形態は、エアロゾル、ミスト、または粉末を含むが、これら限定されない。典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の医薬組成物は、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガス）を用いて、加圧パックまたは噴霧器からのエアゾールスプレーのような形態で、都合よく送達される。具体的な実施形態において、加圧されたエアロゾルの用量単位は、計量された量を送達するために、バルブを提供することによって決定される。特定の実施形態において、ほんの一例として、吸入器または散布器で使用されるゼラチンなどのカプセル剤および薬包は、代表的な本発明の組成物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との混合粉末を含むように処方される。

経鼻製剤は当該技術で知られており、例えば、米国特許第４，４７６，１１６号、５，１１６，８１７号、および、第６，３９１，４５２号（それぞれ参照により具体的に本明細書に組み込まれる）に述べられている。典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）を含むとともに、上記の技術および当該技術において周知の他の技術によって調製される製剤は、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、フルオロカーボン、および／または、当該技術で知られている他の可溶化剤または分散剤を用いて、食塩水中の溶液として調製される。例えば、Ａｎｓｅｌ, Ｈ. Ｃ. ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ Ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ, Ｓｉｘｔｈ Ｅｄ. （１９９５）を参照する。好ましくは、これらの組成物と製剤は、適切な無毒の薬学的に許容可能な成分を用いて調製される。これらの成分は、当該技術分野では標準的な参考文献であるＲＥＭＩＮＧＴＯＮ ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ, ２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ, ２００５などのソースで見られる。適切な担体の選択は、望ましい経鼻剤形（例えば、溶液、懸濁液、軟膏剤、または、ゲル剤）の正確な性質に大きく依存する。経鼻剤形は一般に、活性成分の他に大量の水を含有している。ｐＨ調節剤、乳化剤または分散剤、保存剤、界面活性剤、ゲル化剤、または、緩衝剤および他の安定剤、ならびに、可溶化剤などの少量の他の成分も存在してもよい。好ましくは、経鼻剤形は鼻の分泌物と等張でなければならない。

吸入による投与に関して、本明細書に記載される組成物は、エアロゾル、ミスト、または、粉末の形態であってもよい。本明細書に記載される医薬組成物は、適切な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはその他の適切なガスを使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾルスプレーのような形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投与単位は、測定された量を送達するための弁を提供することによって決定されてもよい。ほんの一例として、吸入器または散布器で使用されるゼラチンなどのカプセル剤および薬包は、本明細書に記載される代表的な本発明の組成物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との混合粉末を含むように処方される。

さらなる他の実施形態において、組成物（すなわち、本明細書に記載されるの組成物）は、ポリビニルピロリドン、ＰＥＧなどの合成ポリマーだけでなく、ココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐薬用基剤を含む、浣腸剤、直腸用ゲル剤、直腸用気泡剤、直腸用エアロゾル、坐薬、ゼリー状坐薬、または停留浣腸剤などの直腸用組成物で処方される。組成物の坐薬形態において、限定されないが、脂肪酸グリセリドの混合物などの低融点ワックスは、随意にココアバターと組み合わされて最初に融解する。

特定の実施形態において、医薬組成物は、活性な組成物を薬学的に使用できる調製物へと処理するのを容易にする賦形剤および助剤を含む１以上の生理的に許容可能な担体を用いる任意の従来の様式で処方される。適切な製剤は、選択される投与の経路に依存する。あらゆる薬学的に許容可能な技術、担体、および、賦形剤は、適切に、かつ、当該技術分野で理解されているように、随意に使用される。典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）を含む医薬組成物は、従来のやり方で、ほんの一例として、従来の混合、溶解、造粒、ドラジェ製造、ゲル状化、乳化、カプセル化、封入、または、圧縮のプロセスによって、製造されてもよい。

医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤、および、活性成分として本明細書に記載されている少なくとも１つの代表的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載の薬草組成物）を含む。さらに、医薬組成物は、保存剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調整する塩、緩衝剤、および／または他の治療上有効な物質などの、他の医薬品または治療剤、担体、アジュバントを随意に含む。

本明細書に記載されている代表的な本発明の組成物を含む組成物の調製方法は、固体、半固体、または液体を形成するために、本発明の組成物を１以上の不活性な薬学的に許容可能な賦形剤または担体と共に処方する工程を含む。固形組成物は、粉剤、錠剤、分散性顆粒、カプセル剤、カシェ剤、および坐薬を含むが、これらに限定されない。液体組成物は、代表的な本発明の組成物が溶解した溶液、代表的な本発明の組成物を含むエマルション、または、本明細書に開示された代表的な本発明の組成物を含むリポソーム、ミセル、またはナノ粒子を含有する溶液を含む。半固形組成物は、ゲル剤、懸濁剤、およびクリームを含むが、これらに限定されない。本明細書に記載されている医薬組成物の形態は、液体溶液または懸濁液、使用前に液体に溶解もしくは懸濁することに適した固形形態、またはエマルションを含む。これらの組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの微量の非毒性補助物質を任意に含む。

いくつかの実施形態において、代表的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載される本発明の薬草組成物）を少なくとも含む医薬組成物は、例示的に、薬剤が溶液、懸濁液、またはその両方で存在する液体の形態を取る。一般的に組成物が溶液または懸濁液として投与されると、薬剤の第一の部分は溶液中に存在し、薬剤の第二の部分は液体マトリックス中の懸濁液中に粒子形態で存在する。いくつかの実施形態において、液体組成物はゲル製剤を含む。他の実施形態において、液体組成物は水性である。

特定の実施形態において、医薬品の水性懸濁液は、懸濁剤として１以上のポリマーを含む。ポリマーは、セルロースポリマー、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの水溶性ポリマーと、架橋カルボキシル含有ポリマーなどの非水溶性ポリマーを含む。本明細書に記載されている特定の医薬組成物は、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリカルボフィル、アクリル酸／アクリル酸ブチルコポリマー、アルギン酸ナトリウム、および、デキストランから選択される粘膜付着性ポリマーを含む。

医薬組成物はさらに、典型的な本発明の組成物（すなわち、本明細書に記載の薬草組成物）の溶解性を助けるために可溶化剤を随意に含む。「可溶化剤」という用語は、一般的に、薬剤のミセル溶液または真性溶液をもたらす薬剤を含む。特定の許容可能な非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０は可溶化剤として役立ち、眼科用として許容可能なグリコール、ポリグリコール、例えばポリエチレングリコール４００、およびグリコールエーテルも役立つ。

さらに、医薬組成物は、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、および塩酸のような酸を含む、１以上のｐＨ調節剤または緩衝薬；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、および、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基；および、クエン酸塩／ブドウ糖、炭酸水素ナトリウム、および、塩化アンモニウムのような緩衝液、を随意に含む。このような酸、塩基、および緩衝液は、組成物のｐＨを許容可能な範囲で維持することに必要とされる量で含まれる。

さらに、医薬組成物は、組成物の重量モル浸透圧を許容可能な範囲にするために必要とされる量の１以上の塩を随意に含む。このような塩は、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、またはアンモニウムカチオンおよび塩化物アニオン、クエン酸塩アニオン、アスコルビン酸塩アニオン、ほう酸塩アニオン、リン酸塩アニオン、重炭酸塩アニオン、硫酸塩アニオン、チオ硫酸塩アニオン又は亜硫酸水素塩アニオンを有するものを含み、適切な塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、および、硫酸アンモニウムを含む。

他の医薬組成物は、微生物の活性を阻害する１以上の保存剤を随意に含む。適切な保存剤は、メルフェン（ｍｅｒｆｅｎ）とチオマーサルなどの水銀含有物質；安定した二酸化塩素；および、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアミン、および、塩化セチルピリジウムなどの四級アンモニウム組成物を含む。

さらなる他の医薬組成物は、物理的安定性を強化するために、または、他の目的のために、１以上の界面活性剤を含む。安定した非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリド、および、例えば、ポリオキシエチレン（６０）水素化ヒマシ油等の植物油、および、例えば、オクトキシノール１０、オクトキシノール４０等のポリオキシエチレンアルキルエーテルとアルキルフェニルエーテルである。

さらなる他の医薬組成物は、必要に応じて、化学安定性を強化する１以上の抗酸化剤を含んでもよい。適切な抗酸化剤は、ほんの一例ではあるが、アスコルビン酸および二亜硫酸ナトリウムを含む。

特定の実施形態において、薬学的な水性懸濁液組成物は、単回用量用の再密閉できない容器に入れられる。あるいは、複数回用量用の再密閉できる容器が使用され、この場合は、組成物中に保存剤を含めることが一般的である。

代替的な実施形態において、疎水性の医薬組成物のための他の送達系が利用される。リポソームおよびエマルションは、本明細書中で送達用ビヒクルまたは担体の例である。特定の実施形態において、Ｎ−メチルピロリドンなどの有機溶媒も利用される。さらなる実施形態において、本明細書に記載される組成物は、治療薬剤を含む固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスなど、持続放出系を用いて送達される。様々な持続放出物質が本明細書で役立つ。いくつかの実施形態において、持続放出カプセル剤は、数時間から２４時間までの間、組成物を放出する。治療試薬の化学的性質と生物学的安定性に依存して、タンパク質を安定化させる追加の方策が利用されてもよい。

特定の実施形態において、本明細書に記載されている製剤は、１以上の抗酸化剤、金属キレート剤、チオール含有組成物、および／または、他の一般的な安定剤を含む。これら安定剤の例としては、限定されないが、（ａ）約０．５％ｗ／ｖ乃至約２％ｗ／ｖのグリセロール、（ｂ）約０．１％ｗ／ｖ乃至約１％ｗ／ｖのメチオニン、（ｃ）約０．１％ｗ／ｖ乃至約２％ｗ／ｖのモノチオグリセロール、（ｄ）約１ｍＭ乃至約１０ｍＭのＥＤＴＡ、（ｅ）約０．０１％ｗ／ｖ乃至約２％ｗ／ｖのアスコルビン酸、（ｆ）約０．００３％ｗ／ｖ乃至約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０、（ｇ）約０．００１％ｗ／ｖ乃至約０．０５％ｗ／ｖのポリソルベート２０、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）硫酸デキストラン、（ｋ）シクロデキストリン、（ｌ）ペントサンポリサルフェートおよび他のヘパリン類似物質、（ｍ）マグネシウムと亜鉛などの二価カチオン；または、（ｎ）それらの組み合わせが挙げられる。

（併用療法）
一般に、本明細書に記載されている組成物は、併用治療が採用されて他の薬剤が同じ医薬組成物で投与される必要のない実施形態において、および、いくつかの実施形態によっては、異なる物理的かつ化学的特性を有していることから、異なる経路によって投与される。いくつかの実施形態において、初回の投与は、確立された手順に従って行われ、その後、観察された効果、投与量、投与方法、および、投与時間に基づいて、熟練した臨床医によって修正される。

いくつかの実施形態では、薬物が処置の組み合わせにおいて使用される場合、治療上有効な量は変動する。併用処置は、さらに、患者の臨床管理を助けるために様々な時点で開始および停止される定期的処置も含む。本明細書に記載されている併用治療に関して、同時投与される組成物の投与量は、併用される薬の種類、利用される特定の薬物、処置される疾患、障害、または疾病などによって異なる。

いくつかの実施形態において、緩和が求められる疾病を処置、予防、または改善する投与レジメンは、様々な要因に従って修正されることを理解されたい。これらの要因は、年齢、体重、被検体の性別、食事および病状と同様に被検体が苦しむ障害も含む。したがって、他の実施形態では、実際に採用された投与レジメンは大きく異なり、それ故、本明細書で述べられた投与レジメンから逸脱する。

アテローム性動脈硬化の処置に適切な他の薬剤と、組成物（すなわち、本明細書に記載される、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む組成物）の組み合わせが包含されることを意図している。いくつかの実施形態では、アテローム性動脈硬化の処置に適切な薬剤の例としては、限定されないが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、その組み合わせなどのスタチン；モテクサフィンルテチウムなどの光感受性物質；ＭＫ−０５２４Ａ（ナイアシンＥＲおよびラロピプラント）；ＡＣ３０５６などの酸化防止剤；ステロイドなどの抗炎症剤、アスピリン、イブプロフェン、および、ナプロキセンなどの非ステロイド抗炎症薬、および、他のＣＯＸ−２インヒビターなど；パクチミべなどのＡＣＡＴ阻害剤など；または、前述のものの任意の誘導体関連薬剤が挙げられる。

組成物と本明細書に記載のアテローム性動脈硬化の処置に適切な他の薬剤の組み合わせは、いくつかの実施形態において、他の薬剤を用いる追加の治療および処置レジメンを摂生を包含する。そのような追加の治療および処置レジメンは、いくつかの実施形態では、アテローム性動脈硬化の処置のための別の薬剤を含むことができる。代替的に、追加の治療および処置レジメンは、他の実施形態では、アテローム性動脈硬化に関連した付随する疾病、または、併用治療における上記のような薬剤からの副作用を処置するために用いられる別の薬剤を含む。さらなる実施形態では、アジュバントまたはエンハンサーは、本明細書に記載される併用治療と共に投与される。

いくつかの実施形態において、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む治療上有効な量の組成物と、１つ以上のスタチンとを含むアテローム性動脈硬化の処置のための組成物が提供される。

実施例１．典型的な組成物の調製
植物（例えば、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ）の植物部分１００グラムをフラスコに入れた。適切な量の水とアルコール（７０−１００％のアルコール溶液）をフラスコに加え、少なくとも１時間２０−２５°Ｃで撹拌した。その溶液をフィルタと０．４５μｍの膜を介してろ過し、ろ液を抽出物として集めた。その抽出物をさらなる検査に用いた。典型的な組成物１をこの方法から調製した。

さらに、本発明の組成物（代表的な組成物１を含む）を、以下の手順などに従っても調製してよい。植物（例えば、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ）の植物部分を集め、清浄し、洗浄し、小さく切って、一晩４０°Ｃでオーブンで乾燥させた。乾燥した材料をミキサーを使って粉砕し、熱かいアルコールと冷たいアルコール（１：１０ｖ／ｖ）で３回、および、温水と冷水で、あるいは、クロロホルムとアルコールの混合物で、３回抽出する。アセトンなどの他の溶媒を抽出の媒体として使用してもよい。これは、液状マトリックス（溶媒）を用いて、拡散により固体のマトリックス（植物組織）から可溶性成分を分離するように設計されたプロセスである。アルコール、水、クロロホルム、およびアセトンは、活性な成分を抽出する際に高収量で精製された。抽出は数回行う。蓄えた抽出物を４０°Ｃで真空乾燥させ、使用するまで保存しておく。

既知の他の薬草抽出または採取方法は、典型的な組成物を調製するのに適している。

実施例２．ラット平滑筋細胞モデル
材料と方法
Ａ７ｒ５細胞株（ラットの大動脈平滑筋細胞）を、Bioresource Collection and Research Center（台湾）から購入した。

２．１ ＭＴＴアッセイ
ＭＴＴアッセイを用いて、細胞増殖、生存細胞のパーセント、および、細胞毒性を決定する。ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ）−２−イル］２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）ブロミド）は、黄色の色素であり、生細胞に吸収され、ミトコンドリア中のコハク酸塩テトラゾリウム還元酵素によって紫色がかった青いホルマザン結晶に還元される。したがって、ホルマザン形成を用いて、細胞の生存率を評価し決定することができる。可溶化溶液（通常、ジメチルスルホキシド、酸性のエタノール溶液、または、希塩酸中の洗浄力のあるドデシル硫酸ナトリウムの溶液のいずれか）を加えて、不溶性の紫のホルマザン生成物を溶解させて有色の溶液にする。この有色の溶液の吸光度は、分光光度計で特定の波長（通常、５００〜６００ｎｍ）で測定することによって数量化することができる。生存細胞が多ければ多いほど、吸光度は高くなる。

生細胞の割合（％）＝実験群のＯＤ値÷対照群のＯＤ値×１００％

手順

１．細胞の付着：２×１０^４細胞／ｍｌ／ウェルのＡ７ｒ５細胞を、２４−ウェルプレートに播種し、２４時間３７°Ｃでインキュベートした。

２．投薬：５００ｕｌ／ウェルの異なる濃度の組成物１を、２０時間、１％ＦＢＳ／ＤＭＥＭを含有している培地で前処理した。ＤＭＥＭを除去して、１％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中のＰＤＧＦを、２４時間３７°Ｃで加えて、インキュベートした。

３．ＭＴＴアッセイ：その後、暗環境で、プレートのそれぞれのウェルに、５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴを５０ｕｌ／ウェル加えて、３時間反応させた。それぞれの反応混合物に５００ｕｌ／ウェルのＤＭＳＯを加えて、５分間振動させた。細胞の生存率は、ＥＬＩＳＡリーダーによって、５７０ｎｍの波長での吸収の測定に基づいて計算された。

２．２ 乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性アッセイ
細胞には豊富な乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）がある。細胞が健康な場合、ＬＤＨは細胞膜を自由に通過することはできない。しかしながら、細胞が急速に膨張してその生理的な機構を停止させるアポトーシスまたは壊死のいずれかの結果として生じる細胞膜の整合性が失われると、ＬＤＨは周囲の周囲媒体に放出される。培地のＬＤＨ活性は死細胞の数に正比例する。細胞の生存率は、４９２ｎｍの波長で比色法を使用することにより吸光度を検知するために定量的に測定することができる。吸光度の変化は、ＬＤＨが、付随するＮＡＤＨの生成によりピルビン酸塩への乳酸塩の変換を触媒するという事実から来る。ＮＡＤＨは、ジアホラーゼおよびテトラゾリウム塩ＩＮＴがある状態では、赤いホルマザン生成物のジアホラーゼにより触媒された生成を促すために使用される。現在の実験は、培地ＬＤＨ定量化アッセイを行うために、細胞毒性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を利用する。

手順

１．細胞の付着：２×１０^４細胞／ｍｌ／ウェルのＡ７ｒ５を、２４−ウェルプレートに播種し、２４時間３７°Ｃでインキュベートした。

２．投薬：５００ｕｌ／ウェルの異なる濃度の組成物１を、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭを含有する培地で調剤し、２４時間インキュベートした。それぞれのウェルの培地を、４００×ｇで５分間、遠心分離機にかけ、その上澄み（５０μｌ）を別の９６のウェルプレートに移した。

３．ＬＤＨアッセイ：５０μｌの基質を混合した溶液を加えて、暗やみで３０分間、室温下で反応させた。５０μｌの停止液を加えて反応を終了させた。４９０ｎｍの波長でＥＬＩＳＡリーダーによって吸光度を測定した。

２．３ 創傷引っかき検査（ｗｏｕｎｄ ｓｃｒａｔｃｈｉｎｇ ｔｅｓｔ）
手順

１．Ａ７ｒ５細胞（５×１０^６細胞／ｍｌ）を、６つのウェルの細胞培養プレートに播種し、３７°Ｃで一晩インキュベートした。

２．１×ＰＢＳを用いてウェル２回洗浄した。１％ＦＢＳを含有しているＤＭＥＭ培地中の異なる濃度の組成物１を加えて、２０時間、前処理した。

３．無菌の２００μｌピペットチップによって十字の無細胞空間を作って、１×ＰＢＳで２度洗浄した。

４．ＰＢＳを除去した後、１％ＦＢＳを含有しているＤＭＥＭ培地中の２ｍｌのＰＤＧＦを加えた。ＰＤＧＦを加えてからそれぞれ０、６、１２、および２４時間後に、顕微鏡によって細胞を撮影した。

実施例３．ラットのアテローム性動脈硬化モデル
３．１ 頚動脈結紮モデル
動脈は心臓から血液を運んでいく血管である。頚動脈は、頭部、頚部、および脳に血液を供給する血管である。１つの頚動脈は頚部の各横側の位置にある。右総頸動脈は腕頭動脈から分岐して、頚部の右側に行きつく。左総頸動脈は大動脈から分岐し、頚部の左側に行きつく。それぞれの頚動脈は、甲状腺の上部付近で内部と外部の血管に分岐する。Ｈｓｉｎｇ−Ｃｈｕｎ Ｃｈｕｎｇ（学位論文、２００８年、南台湾大学）によって記載されるようにモデルを適用させて、マウスの左総頸動脈で頚動脈結紮を行うことで、新生内膜の肥大を引き起こした。

この実験は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒから購入した約２５ｇの体重の生後８週のＣ５７ＢＬ／６Ｊのオスのマウスを使用した。これらのマウスを、エアコンの付いた部屋（１８−２６°Ｃおよび３０％−７０％湿度）で、１２時間暗い／１２時間明るいサイクルの下、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｅｎｔｅｒのＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ｃｅｎｔｅｒで維持した。

１．動物に手術の３日前に経口栄養補給によって組成物１を与え、経口栄養補給によって２８日間組成物１を連続的に与えた。

２．生後８週（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｂ６））のオスのマウスにペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ体重）で麻酔をかけた。左総頸動脈を、頚動脈の分岐のすぐ近くにある部位で６番の絹縫合糸によって２度結紮した。

３．縫合後、動物に組成物１を与えた。それぞれの群の８−１０匹のマウスを屠殺した。頚動脈の組織および血液からのサンプルを集めて、さらに詳しく分析するまで適切に保存した。この分析は、処置群と対照群の比較分析を含んでいた。

３．２ ラット・アテローム性動脈硬化モデル−ＡｐｏＥノックアウト・マウス
Ａｐｏ ＫＯマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入して、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒで維持した。実験はＮａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｅｎｔｅｒのＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ｃｅｎｔｅｒで行なった。生後８週のＡｐｏＥ ＫＯマウスに、ＯｐｅｎＳｏｕｒｃｅの食餌（４０％の脂質、０．５％のコレステロール）を与える三日前に予防の薬物処置を施し、屠殺するまで経口栄養補給によって連続的に食餌を与えた。実験のあいだ、血清を頬から集め、血清中のコレステロール、Ｃ反応タンパク質（ＣＲＰ）、および、ＲＯＳ含有率の値を測定した。

実施例４．コレステロールアッセイキットによる血清コレステロールの測定
標準化したコレステロールサンプルの調製

手順

１．希釈した５０μｌのコレステロール標準物質または５０μｌの適切に希釈した血清を加えた。

２．５０μｌの新たに調製したアッセイカクテルを加えた：
ａ．４７４５μｌのアッセイ緩衝液
ｂ．１５０μｌのコレステロール検出器
ｃ．５０μｌのＨＲＰ
ｄ．５０μｌのコレステロール・オキシダーゼ
ｅ．５μｌのコレステロール・エステラーゼ

３．暗やみの中で３０分間３７°Ｃでインキュベートした。

４．蛍光検出器による蛍光測定（励起：ＯＤ５３０−５８０ｎｍ； 放射：５８５−５９５ｎｍ）

実施例５：酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によるＣ反応タンパク質分析
まず、２００μｌ／ウェルのブロッキング緩衝液を９６−ウェルのＥＬＩＳＡプレートに加え、室温で１時間インキュベートした。１００μｌ／ウェルの希釈した血清サンプルを加えて、室温で２時間インキュベートした。その後、１００μｌ／ウェルの検出抗体を加えて、室温で１時間インキュベートした。上記のそれぞれのインキュベーション工程の完了後に、ウェルを、４００μｌ／ウェルの０．０５ＰＢＳＴ（洗浄用緩衝液）で６回洗浄した。最後に、１００μｌ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を加えて、暗いなかで１５分間インキュベートし、５０μｌの停止液を加ええてインキュベーションを終了させた。それぞれのウェルの吸光度を、ＥＬＩＳＡリーダーによって４５０ｎｍで読みとった。

実施例６：組織形態学
生きている動物から切り分けた組織を約２４時間、１０％のホルマリン溶液中ですぐに固定させ、その後、自動組織プロセッサー（Ｔｉｓｓｕｅ−ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（日本））を用いて脱水した。サンプルを、分散コンソール（ｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ ｃｏｎｓｏｌｅ）（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ（アメリカ））により行なわれた、完全に溶解したパラフィンに埋め込んだ。その後、サンプルを４°Ｃで１５分間冷やして凝固させた。パラフィンブロックを５μｍの厚さの単離細胞層へと分けられた。パラフィン切片を温水槽に入れ、パラフィン切片を引き揚げてスライド・ガラス上に置いた。スライドを３０分間７５°Ｃでオーブンで焼いて、パラフィンを溶解させた。脱パラフィンするために、スライドを１０分間キシレンに入れ、その後、１０分間１００％のエタノールに浸した。再水和工程は、その後、スライドを９５％、８５％、および、７０％のエタノールに１０秒間入れ、その後、５分間流水ですすぐことによって行われた。薄片を２分間ヘマトキシリン液（Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ Ｃｏ．（米国））に浸し、１分間流水で洗浄し、その後、１秒間酸性のアルコール（１Ｌの７０％エタノール中の１ｍｌの濃縮ＨＣｌ）に浸した。スライドを１秒間アンモニア水に漬け、次に、１０分間水で洗浄した。スライドを９０秒間エオジン液でインキュベートし、７０％、８０％、９０％、および１００％のエタノールで脱水し、その後、空気乾燥させた。スライドを組織学的なマウンティング培地（ｍａｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｄｉａ）（Ｈｉｓｔｏｍｏｕｎｔ Ｃｏ．（米国））を用いて乗せた。結紮により怪我をしたマウスの頚動脈の内側と新生内膜の肥大を、光学顕微鏡によって調べた。

実施例７：血管の測定
材料

以下の材料を用いた。
１．Ｏｌｙｍｐｕｓの倒立位相差顕微鏡
２．ＣＤＦ ４８０イメージングキャプチャーシステム
３．Ｍｅｔａ Ｉｍａｇｉｎｇシリーズ５．０

結紮の後のマウスの血管領域の測定が図１に示される。ＥＥＬ＝外弾性板；ＩＥＬ＝内弾性板；内側域（ｍｅｄｉａｌ ａｒｅａ）＝ＥＥＬによって定義された領域−ＩＥＬによって定義された領域；新内膜領域＝ＩＥＬによって定義された領域−内腔領域；Ｎ／Ｍ比率＝新内膜領域／内側域。

実施例８：データ評価および統計的分析
実験のデータを平均±Ｓ．Ｅとして示した。Ｎはそれぞれの群の動物の数を表す。データはクラスカル・ワリス検定によって分析された。多因子と多群のデータをＡＮＯＶＡによって分析した。統計的分析はすべてＳＰＳＳ １２．０（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ. Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＩＩ）を使用する。＜０．０５のＰ値は、統計的に有意であると考えられた。

結果
８．１ 組成物１は平滑筋細胞に対して細胞毒性を示さない。
平滑筋細胞に対する組成物１の潜在的な細胞毒性を試験した。異なる濃度（０μｍ／ｍｌ−５０μｍ／ｍｌの範囲）の組成物１を、Ａ７ｒ５細胞培養液に個別に加え、２４時間インキュベートして細胞の生存率と細胞毒性調べた。図２のＡ／Ｂで示されるように、平滑筋細胞（Ａ７ｒ５）に対する異なる濃度の組成物１の細胞毒性効果は、ＭＴＴアッセイ（図２のＡ）とＬＤＨアッセイ（図２のＢ）によって測定した。これらの結果は、細胞精製が薬物療法によって影響されなかったことと、細胞毒性が観察されなかったことを示した。

８．２ 組成物１は、適切な濃度でＰＤＧＦによって刺激された平滑筋細胞の増殖を有効に阻害する。
平滑筋細胞（Ａ７ｒ５細胞）増殖に対する組成物１の効果を調べた。異なる濃度（５μｍ／ｍｌ−５０μｍ／ｍｌの範囲）の組成物１を、Ａ７ｒ５細胞培養液に加えた。２０時間インキュベートした後、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）を加え、２４時間インキュベートして、平滑筋細胞の増殖を刺激した。平滑筋細胞の増殖に対する薬物の効果は、ＭＴＴアッセイと創傷引っかき検査によって観察された。

ＭＴＴアッセイの結果は、組成物１がＰＤＧＦによって刺激された平滑筋細胞の増殖を有意に阻害したことを示した。図３で示されるように、ＭＴＴアッセイの結果は、ＰＤＧＦによる２４時間のインキュベーション後、平滑筋細胞の増殖は、組成物１（５０μｍ／ｍｌ）の処置群において、約５０％効果的に減少したことを実証した。

８．３ 組成物１は適切な濃度でＰＤＧＦによって刺激された平滑筋細胞移動を有効に阻害する。
平滑筋細胞（Ａ７ｒ５細胞）の移動時の組成物１の阻害を、ＰＤＧＦによって刺激された細胞移動距離を測定することによって、創傷引っかき検査で調べた。組成物１の処置を伴わないＰＤＧＦにより刺激された細胞培養を、陽性対照として使用した。結果は、ＰＤＧＦによって引き起こされた平滑筋細胞の移動が用量依存的に組成物１によって阻害されたことを示す。図４に示されるように、組成物１（５０μｍ／ｍｌ）による処置は、平滑筋細胞の移動の約５０％の減少を示している。

８．４ 組成物１は、頚動脈結紮によりマウスの新内膜形成を効果的に減少させた。
手術の３日前に、マウスに組成物１（０．６ｋｇ／ｋｇ体重）を経口栄養補給により与え、その後、新生内膜の肥大が頚動脈結紮によって引き起こされた。マウスを２８日間連続して処置して新内膜形成に対する組成物１の効果を調べた。頚動脈結紮の効果を検討するために、図５と図６でそれぞれ示されるように、ヘマトキシリンとエオジンの染色を行い、結紮後の頚動脈の内側領域と新内膜領域の肥大を調べた。この処置の効能は、内腔領域、新内膜領域、内側領域、および、新内膜／内側比率（Ｎ／Ｍ比）に基づいて評価された。図７に示されるように、平均のＮ／Ｍ比は、対照マウスで３．０よりも高かった。しかしながら、平均のＮ／Ｍ比率は、組成物１で処置したマウスで１．０まで低下した。新内膜形成の減少は統計的に有意であった（ｐ＜０．００１）。

８．５ 高脂肪食が与えられたＡｐｏ ＫＯマウスの大動脈弓での組成物１の処置
図８で示されるように、大動脈弓の脂肪線条およびコレステロール沈着、泡沫細胞の形成、平滑筋細胞の移動、および、不安定な線維性プラークの形成が、高脂肪食が与えられたａｐｏＥ−欠乏マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景）で観察された。血中コレステロール、Ｃ反応タンパク質、および、ＲＯＳ含有物の量を、高脂肪食を与えて組成物１（０．６ｋｇ／ｋｇ体重）を経口栄養補給により与えたａｐｏＥ−欠乏マウスで測定した。

ＡｐｏＥ ＫＯマウスは肝臓病変の評価を受けた。図９に示されるように、血液中のコレステロール濃度の評価は、組成物１によるコレステロール含有量の減少が統計的に有意であった（ｐ＝０．００２）ことを示した。

実施例９．アテローム性動脈硬化の処置における組成物１の効能と安全性の評価
主要評価項目：
８週後の新内膜形成の変化［時間枠：基準からの、および、処置の８週間の後の変化］

二次評価項目：
用量増加（有害事象と重篤な有害事象）における組成物１の安全性を測定する。時間枠は１年である。

基準
組み入れ基準：少なくとも２つの関連する心臓病のリスク要因を含む一次予防の文脈において、少なくとも３か月間診断されたＩＩａ型またはＩＩｂ型の一次性高コレステロール血症を示し、および、（ｉ）すべての脂質低下療法を「未処置」であるか、または、（ｉｉ）スタチンによって処置された（過去８週間に進行中の処置または止めた処置）被験体

治療群
組成物１：実験的。治療介入：薬物：組成物１

割り当てられた治療介入
薬物：組成物１．剤形：１００ｍｇのカプセルを１日につき２回×２８日サイクル（最大で１年間の連続的な処置）

結果は、組成物１を摂取する患者が新内膜形成の低下を示すことを示している。組成物１を受け取る患者には、アテローム性動脈硬化に関連した症状が少ないか、あるいは、そのような症状がない。したがって、本発明の組成物はアテローム性動脈硬化の処置に対する有望な候補である。

実施例１０：非経口製剤
注入による投与に適した非経口の医薬組成物を調製するために、本明細書に記載の組成物１００ｍｇを、ＤＭＳＯに溶解させ、その後、０．９％の無菌の食塩水１０ｍＬと混合する。その混合物を注射による投与に適した投与単位財形に組み込む。

実施例１１：経口製剤
経口送達向けの医薬組成物を調製するために、１００ｍｇの典型的な組成物１を１００ｍｇのトウモロコシ油と混合する。その混合物を、経口投与に適したカプセル中の経口投与単位に組み込む。

いくつかの例においては、本明細書に記載の組成物１を１００ｍｇ、デンプン７５０ｍｇと混合する。その混合物を、経口投与に適した、例えばハードゼラチンカプセルなどの経口投与単位に組み込む。

実施例１２：舌下（ハードロゼンジ）製剤
ハードロゼンジなどの頬側送達向けの医薬組成物を調製するために、１００ｍｇの本明細書に記載の組成物１を、混ぜ合わせた４２０ｍｇの粉砂糖と、１．６ｍＬのライト・コーンシロップと、２．４ｍＬの蒸留水と、０．４２ｍＬのミント抽出物と混合する。その混合物を穏やかに混ぜ合わせ、型に注いで、頬側投与に適した錠剤を形成する。

実施例１３：吸入組成物
吸入送達のための医薬組成物を調製するために、２０ｍｇの本明細書に記載の組成物１を、５０ｍｇの無水クエン酸と１００ｍＬの０．９％塩化ナトリウム溶液と混合する。その混合物を、吸入投与に適した、例えば噴霧器などの吸入送達単位に組み込む。

実施例１４：直腸ゲル製剤
直腸送達向けの医薬組成物を調製するために、１００ｍｇの本明細書に記載の組成物１を、２．５ｇのメチルセルロース（１５００ｍＰａ）、１００ｍｇのメチルパラペン、５ｇのグリセリン、および、１００ｍＬの精製水と混合する。結果として生じたゲル混合物を、その後、直腸投与に適した、例えば、シリンジのような直腸送達単位に組み込む。

実施例１５：局所ゲル組成物
医薬品の局所的なゲル組成物を調製するために、１００ｍｇの本明細書に記載された組成物１を、１．７５ｇのヒドロキシプロピルセルロース、１０ｍＬのプロピレングリコール、１０ｍＬのイソプロピルミリステート、および、１００ｍＬの精製されたアルコールＵＳＰと混合する。その結果生じたゲル混合物を、その後、直腸投与に適した、例えば、チューブのような容器に組み込む。

本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され記載されているが、このような実施形態はほんの一例として提供されることが当業者には明らかとなるであろう。多くの変更、変化および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者の心に思い浮かぶであろう。当然のことながら、本明細書に記載される発明の実施形態に対する様々な代替物が本発明を実行するために用いられてもよい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。

Claims (20)

1. Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分を含む、医薬組成物。
2. 前記医薬組成物が、ＰＤＧＦで刺激された平滑筋細胞の増殖または移動を阻害する、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記医薬組成物は新生内膜形成を減少させる、請求項１に記載の医薬組成物。
4. アテローム性動脈硬化は、冠動脈疾患、動脈瘤、動脈硬化症、心筋梗塞、塞栓症、脳卒中、血栓症、狭心症、血管プラーク炎症、血管プラーク破裂、川崎病、石灰化、または炎症に関連付けられる、請求項１に記載の医薬組成物。
5. 前記医薬組成物は、被験体の血管系内の１つ以上の動脈硬化病変の形成または進行を阻害する、請求項１に記載の医薬組成物。
6. 血管系は心臓の動脈を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
7. 血管系は大動脈を含む、請求項６に記載の医薬組成物。
8. 前記医薬組成物は、被験体の炎症関連の動脈硬化性血管疾患を予防するまたは処置する、請求項１に記載の医薬組成物。
9. 前記医薬組成物は、被験体のコレステロールを減少させる、請求項１に記載の医薬組成物。
10. 前記医薬組成物は、非経口または静脈内で投与される、請求項１乃至９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
11. 前記医薬組成物は注入によって投与される、請求項１乃至９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
12. 前記医薬組成物は経口で投与される、請求項１乃至９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
13. 前記被験体はヒトである、請求項１乃至１２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
14. Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属の種は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｐａｌｌｉｄｕｍ Ａｇ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ Ｓｅｔｃｈなどからなる群から選択される、請求項１乃至１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
15. Ｌｏｎｉｃｅｒａ属の種は、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｐｅｒｉｃｌｙｍｅｎｕｍ、および、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓからなる群から選択される、請求項１乃至１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
16. Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属の種は、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ Ｓｉｍｐｌｅｘ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｈｅｒａｃｌｅｉｆｏｌｉａ、Ｋｏｍ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｄａｈｕｒｉｃａ（Ｔｕｒｃｚ．）Ｍａｘｉｍ、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｒａｃｅｍｏｓａ（Ｌ．）Ｎｕｔｔからなる群から選択される、請求項１乃至１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
17. 前記医薬組成物は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ属からの少なくとも１つの種の成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ属からの少なくとも１つの種の成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ属からの少なくとも１つの種の成分の抽出物を含む、請求項１乃至１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
18. 抽出物は有機溶媒または水性溶媒による抽出によって生成される、請求項１７に記載の医薬組成物。
19. 前記医薬組成物は、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ Ａｇの成分、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂの成分、および、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｆｏｅｔｉｄａ，Ｌ．ｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｒｅｇｅｌの成分を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
20. 請求項１の治療上有効な量の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、アテローム性動脈硬化を処置する方法。