JP2015226476A - 組換え微生物及び当該組換え微生物を用いた物質製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
れており、これらを利用してアルカンやアルデヒドを製造する方法が開示されている。
もに大腸菌を形質転換したことが開示されている。
おらず、脂肪酸アシルCoAを基質とした還元反応で生成するアルデヒド、当該アルデヒド
を基質として生成するアルコールや炭化水素の生産性が低いといった問題があった。
れた活性を示すアシルCoAリダクターゼを導入した組換え微生物及び当該組換え微生物を
用いた物質製造方法を提供することを目的とする。
成するに至った。
号3)[39-48aa] VxQxxxLxxIYxPYTFxxGRFDNxNxxxLxxxMxxxExxxFxFDVxxxxWxDYIxNVHIPGLxxxVxKG(配列番号4)を含む共通配列を有する、アシルCoAリダクターゼをコードする核酸を宿主微生物に導入してなる組換え微生物。
を特徴とする(1)記載の組換え微生物。
(a)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のうちいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質
(b)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかのアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質
(配列番号11)[0-1aa]IE(D/E)NLL(A/T)QKM(K/R)E(I/M)GLERA(R/K)RYGWQDTYVFTKAMGEMMIDKLR(G/D)DIPVV(V/I)(M/I)RPSVIEST(F/L)SEPFPGWMEGNRMMDP(I/V)VL(C/W)YGKGQLTGFLVDPNGVLDVVPADMVVNATLAAMA(R/K)HG(V/M)(S/N/I)QK(P/A)DINVYQIASSVVNPL(V/A)FQDL(A/T)RLLYEHYSSSP(C/F)IDS(K/M)GRPIQVP(L/I)MK(L/F)FSS(T/S)EEFSGHLWRD(A/V)I(Q/N)K(R/S)G(L/I)T(A/S)(V/M)ASSK(G/A)KMSQKLEN(M/I)CRKSVEQAKYLA(N/K)IVEPYTFYGGRFDNSNTQRLME(S/I)MSE(K/E)EK(R/T)EF(G/D)FDVK(S/G)IDW(N/T)DYITNVHIPGLRR(H/Y)VMKGRGM(G/S)(S/N)Q(配列番
号12)を含むことを特徴とする(1)記載の組換え微生物。
を特徴とする(1)記載の組換え微生物。
(a)配列番号14、16及び18のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質
(b)配列番号14、16及び18のいずれかのアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質
(a)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のうちいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質
(b)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかのアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質
活性を示すアシルCoAリダクターゼを発現することから、脂肪酸アシルCoAをアシルCoAリ
ダクターゼにて還元した脂肪族アルデヒド、当該脂肪族アルデヒドからの脂肪族アルコール及び炭化水素の生産性に優れる。
本発明に係る組換え微生物は、特定の共通配列を有するアシルCoAリダクターゼをコー
ドする核酸を導入したものである。本発明にかかる組換え微生物は、当該アシルCoAリダ
クターゼを発現することで、脂肪酸とCoAとのチオエステル化合物であるアシルCoA(脂肪酸アシルCoAと称する場合もある)を還元してアルデヒド化合物を高生産できるといった
特徴を有する。生産されたアルデヒド化合物は、当該微生物内の代謝反応により酸化されアルコールとなるか、炭化水素合成活性を有する酵素により炭化水素合成の基質として使用される。したがって、本発明に係る組換え微生物は、当該アシルCoAリダクターゼを発
現することでアルデヒド化合物を高生産できるといった特徴に加え、当該アルデヒド化合物に基づくアルコールを高生産する、及び/又は当該アルデヒド化合物に基づく炭化水素
を高生産するといった特徴を有する。
基・糖・リン酸ジエステル部に化学修飾を加えた核酸分子などの人工核酸を含む意味である。また、アシルCoAリダクターゼをコードする核酸としては、ゲノムに存在する発現調
節領域及びコーディング領域を含む領域、及びゲノムに存在するコーディング領域のみからなる領域の両者を含む意味である。
に近縁の誘導体や縮合体を含め、多糖・オリゴ糖(少糖)・二糖・単糖も含む意味である。単糖の具体的な例としては、グルコース(ブドウ糖)、フルクトース(果糖)、ガラクトース、マンノース、キシロース、キシルロース、リボース、エリトロース、トレオース、エリトルロース、グリセルアルデヒド、ジヒドロキシアセトンなどが挙げられ、二糖の具体的な例としては、スクロース(サッカロース・蔗糖)、ラクトース(乳糖)、マルトース(麦芽糖)、トレハロース、セロビオースなどが挙げられる。
上述したアシルCoAリダクターゼにおいて共通配列とは、一例として、以下のアミノ酸
配列:GxGxxxFLxxKxxxxxGxTGFLxKVxIEKILRTxPxVxKxxxxIKAxxxxxAxxRLxxxxxxxxxFxxLxxxxGxxYxxFxxxKLxPxxGxxxxxxxGxxxxxxxxxAxxVDxxxNSAANTTFxERYDxAxxxNTxGxxxxMxxAxxxxxLKLFLxxSTAYVNGQxQGxxxExPF(26-57aa)GLxRAxxxGWQDTYVFTKAMGEMxxxxxRxxxPVxxxRPSVIESTxxxPFPGWMEGxRMMDPxxLxYGKGQLxGFxxDPxGVxDVVPADMVVNATLAxxAxHG(9-18aa)YxxxSSxxNPLxFxxLxxxxxxHxxxxPxxDxxGxPIxVxxM(39-48aa)VxQxxxLxxIYxPYTFxxGRFDNxNxxxLxxxMxxxExxxFxFDVxxxxWxDYIxNVHIPGLxxxVxKGである(共通配列1)。
において、-で連結した2つの数値とaaからなる表記は、その位置が任意のアミノ酸から
なる配列であり、その配列が当該2つの数値で挟まれる範囲のアミノ酸残基数からなることを示している。なお、本明細書に記載するアミノ酸配列については、この表記方法を採用する。
個の任意のアミノ酸残基、配列番号3のアミノ酸配列、39〜48個の任意のアミノ酸残基及び配列番号4のアミノ酸配列がこの順で連結したアミノ酸配列であると言い換えることができる。
るアミノ酸配列である。言い換えると、上述した共通配列1を有するアシルCoAリダクタ
ーゼは、共通配列1を有しないアシルCoAリダクターゼと比較して、アシルCoAを基質としてアルデヒド化合物を合成する活性が高いと言える。上述した共通配列1は、アシルCoA
を基質としてアルデヒド化合物を合成する活性が高いアシルCoAリダクターゼ群を、アシ
ルCoAを基質としてアルデヒド化合物を合成する活性の無い或いは低いアシルCoAリダクターゼから区別できる明確な区別基準となる配列である。
のアシルCoAリダクターゼを挙げることができる。
えば、Fragaria vesca (woodland strawberry)由来の遺伝子ID:101311020で特定される
遺伝子、Glycine max (soybean)由来の遺伝子ID:100776505で特定される遺伝子、Glycine max (soybean)由来の遺伝子ID:100801815で特定される遺伝子、Populus trichocarpa (black cottonwood)由来の遺伝子ID:POPTR_576417で特定される遺伝子、Vitis vinifera (wine grape)由来の遺伝子ID:100245182で特定される遺伝子、Cicer arietinum (chickpea) 由来の遺伝子ID:101510781で特定される遺伝子、Solanum lycopersicum (tomato)
由来の遺伝子ID:101262598で特定される遺伝子、Cucumis sativus (cucumber)由来の遺
伝子ID:101212401で特定される遺伝子、Brachypodium distachyon由来の遺伝子ID:100845156で特定される遺伝子、Setaria italica (foxtail millet)由来の遺伝子ID:101779750で特定される遺伝子、Sorghum bicolor (sorghum)由来の遺伝子ID:SORBI_01g046030で特定される遺伝子及びOryza sativa japonica (Japanese rice)由来の遺伝子ID:Os03t0167600-01で特定される遺伝子を挙げることができる。
る)を用いてアラインメント解析した結果を図2−1〜2−3に示す。解析に用いたバージョンおよび各種パラメーターを以下に示す。
-Pairwise Alignment Parameters
--Alignment Type, Slow
--Slow Pairwise Alignment Options
---Protein Weight Matrix, Gonnet
---Gap Open, 10
---Gap Extension, 0.1
Multiple Sequence Alignment Parameters
-Protein Weight Matrix, Gonnet
-Gap Open, 10
-Gap Extension, 0.20
-Gap Distances, 5
-No End Gaps, no
-Iteration, none
-Numiter, 1
-Clustering, NJ
Output Options
-Format, Aln w/numbers
-Order, Aligned
通配列1を有することが理解できる。なお、図2−1〜2−3に示すように、上述した共通配列1は、表1に示した複数のアシルCoAリダクターゼのアミノ酸配列において完全に
一致するアミノ酸残基を抜き出し、その他のアミノ酸残基を任意のアミノ酸(Xと表記)
とした配列である。
、アミノ酸配列間において完全に一致しないものの、類似するアミノ酸残基を含むことがわかる。したがって、上述した共通配列1に代えて、これら類似するアミノ酸残基を含む共通配列2を定義することができる。すなわち、表1に示した複数のアシルCoAリダクタ
ーゼにおける共通配列2とは、表1に示した複数のアシルCoAリダクターゼのアミノ酸配
列において完全に一致するアミノ酸残基と、アミノ酸配列間において完全に一致しないものの、類似するアミノ酸残基とを含むアミノ酸配列である。
って示した表記は、その位置が当該複数のアミノ酸のうちいずれかのアミノ酸であることを示している。
アミノ酸残基、配列番号7のアミノ酸配列、18〜26個の任意のアミノ酸残基及び配列番号8のアミノ酸配列がこの順で連結したアミノ酸配列であると言い換えることができる。
別するアミノ酸配列であるといえる。
酸・ペプチド・タンパク質 5.1アミノ酸、監修:市川厚、監訳:福岡伸一、発行者:曽
根良介、発行所:(株)化学同人、ISBN4-7598-0944 -9)でも記載されているように、アミノ酸は同様の性質(化学的性質や物理的大きさ)を持つ側鎖に従って分類される事がよく知られる。また、タンパク質の活性を保持したまま、所定のグループに分類されるアミノ酸残基間における分子進化上の置換が頻度高く起こることがよく知られる。この考えを基に、参考文献(2): Henikoff S., Henikoff J.G., Amino-acid substitution matrices from protein blocks, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 10915-10919 (1992)中の、Fig.2でアミノ酸残基の置換変異のスコアマトリックス(BLOSUM)が提唱され、広く使用され
ている。参考文献(2)では、側鎖の化学的性質が似たもの同士のアミノ酸置換は、タンパ
ク質全体に与える構造や機能変化が少なくなると言う知見に基づくものである。上記参考文献(1)及び(2)によれば、マルチプルアラインメントで考慮するアミノ酸の側鎖のグループは、化学的性質や物理的大きさなどの指標を基にして考えることができる。これは、参考文献(2)に開示されたスコアマトリックス(BLOSUM)において、スコアの0以上の値を持つアミノ酸、好ましくは1以上の値を持つアミノ酸のグループとして示される。代表的な
グループとしては、下記の8つが上げられる。その他の細かいグループ分けは、当該スコアの値の0以上同士のアミノ酸グループ、好ましくは1以上同士のアミノ酸グループ、さらに好ましくは2以上のアミノ酸グループであれば良い。
このグループは、上記参考文献(1)で示された中性非極性アミノ酸のうち、脂肪属性の
疎水性側鎖をもつアミノ酸のグループであり、V(Val、バリン)、L(Leu、ロイシン)、I(Ile、イソロイシン)及びM(Met、メチオニン)から構成される。参考文献(1)による中性非極
性アミノ酸と分類されるもののうちFGACWPは以下理由で、この「脂肪族疎水性アミノ酸グループ」には含めない。G(Gly、グリシン)やA(Ala、アラニン)はメチル基以下の大きさで非極性の効果が弱いからである。C(Cys、システイン)はS-S結合に重要な役目を担う場合
があり、また、酸素原子や窒素原子と水素結合を形成する特性があるからである。F(Phe
、フェニルアラニン)やW(Trp、トリプトファン)は側鎖がとりわけ大きな分子量をもち、
かつ、芳香族の効果が強いからである。P(Pro、プロリン)はイミノ酸効果が強く、ポリペプチドの主鎖の角度を固定してしまうからである。
このグループは、中性極性アミノ酸のうちヒドロキシメチレン基を側鎖に持つアミノ酸のグループであり、S(Ser、セリン)とT(Thr、スレオニン)から構成される。SとTの側鎖に存在する水酸基は、糖の結合部位であるため、あるポリペプチド(タンパク質)が特定の活性を持つために重要な部位である場合が多い。
このグループは、酸性であるカルボキシル基を側鎖に持つアミノ酸のグループであり、D(Asp、アスパラギン酸)とE(Glu、グルタミン酸)から構成される。
このグループは、塩基性アミノ酸のグループであり、K(Lys、リジン)とR(Arg、アルギ
ニン)から構成される。これらKとRは、pHの広い範囲で正に帯電し塩基性の性質をもつ。
一方、塩基性アミノ酸に分類されるH(His、ヒスチジン)はpH7においてほとんどイオン化されないので、このグループには分類されない。
このグループは、全てα位の炭素元素に側鎖としてメチレン基が結合しその先に極性基を有すると言う特徴を持つ。非極性基であるメチレン基の物理的大きさが酷似している特徴を持ち、N(Asn、アスパラギン、極性基はアミド基)、D(Asp、アスパラギン酸、極性基
はカルボキシル基)とH(His、ヒスチジン、極性基はイミダゾール基)から成る。
このグループは、全てα位の炭素元素に側鎖としてジメチレン基以上の直鎖炭化水素が結合しその先に極性基を有すると言う特徴を持つ。非極性基であるジメチレン基の物理的大きさが酷似している特徴を持つ。E(Glu、グルタミン酸、極性基はカルボキシル基)、K(Lys、リジン、極性基はアミノ基)、Q(Gln、グルタミン、極性基はアミド基)、R(Arg、ア
ルギニン、極性基はイミノ基とアミノ基)から成る。
このグループには、側鎖にベンゼン核を持つ芳香族アミノ酸であり、芳香族特有の化学的性質を特徴とする。F(Phe、フェニルアラニン)、Y(Tyr、チロシン)、W(Trp、トリプト
ファン)から成る。
このグループには、側鎖に環状構造を持つと同時に極性も持つアミノ酸で、H(H、ヒス
チジン、環状構造と極性基は共にイミダゾール基)、Y(Tyr、チロシン、環状構造はベンゼン核で極性基は水酸基)から成る。
伝学研究所のDDBJで使用できる)を用いてアラインメント解析した結果を図3に示す(解析に用いたバージョンおよび各種パラメーターは上記の通りである)。
似したアミノ酸配列を有していることが分かる。これら3つのアシルCoAリダクターゼを
特徴付けるアミノ酸配列として共通配列3を定義することができる。共通配列3:MDAGSLVLSQNGKSQA(E/D)I(L/V)VKDLVPY(D/G)G(P/T)T(0-2aa)TLIG(V/L)ED(0-1aa)GIGIVKFL(G/R)GKKFFITGATGFLAKV(F/L)IEKILRTEPDVGKMY(L/I)LIKAKN(K/N)Q(A/V)AMERLQ(N/K)EIINT(E/Q)LFRCL(Q/R)(E/Q)IHGKSYQAFMLSKLVP(V/I)VG(N/D)ICE(H/T)NLGLDE(G/D)(I/L)S(D/N)VIA(E/D)EVDV(I/F)VNSAANTTFDERYDTAININT(I/R)GP(O/S)RLM(N/A)IAKKCKKLKLFLHVSTAYVNGQ(R/K)QGRIMERPFSIG(E/D)CIAREK(YL)IS(E/G)V(S/P)PKYLPTLDIE(G/N)EIN(L/M)V(S/L)(N/K)(Y/N)KG(D/N)(0-1 aa)IE(D/E)NLL(A/T)QKM(K/R)E(I/M)GLERA(R/K)RYGWQDTYVFTKAMGEMMIDKLR(G/D)DIPVV(V/I)(M/I)RPSVIEST(F/L)SEPFPGWMEGNRMMDP(I/V)VL(C/W)YGKGQLTGFLVDPNGVLDVVPADMVVNATLAAMA(R/K)HG(V/M)(S/N/I)QK(P/A)DINVYQIASSVVNPL(V/A)FQDL(A/T)RLLYEHYSSSP(C/F)IDS(K/M)GRPIQVP(L/I)MK(L/F)FSS(T/S)EEFSGHLWRD(A/V)I(Q/N)K(R/S)G(L/I)T(A/S)(V/M)ASSK(G/A)KMSQKLEN(M/I)CRKSVEQAKYLA(N/K)IVEPYTFYGGRFDNSNTQRLME(S/I)MSE(K/E)EK(R/T)EF(G/D)FDVK(S/G)IDW(N/T)DYITNVHIPGLRR(H/Y)VMKGRGM(G/S)(S/N)Q
ルCoAリダクターゼ及びアシルCoAを基質としてアルデヒド化合物を合成する活性の無い或いは低いアシルCoAリダクターゼと区別するアミノ酸配列であるといえる。
すると、アシルCoAを還元してアルデヒド化合物を更に高生産でき、当該アルデヒド化合
物に基づくアルコールを更に高生産する、及び/又は当該アルデヒド化合物に基づく炭化
水素を更に高生産できるといった特徴を示すこととなる。
、上述した共通配列1、2又は3を有する、アシルCoAリダクターゼをコードするもので
あれば、特に限定されない。言い換えると、当該核酸としては、表1に列挙した具体的なアシルCoAリダクターゼ遺伝子に限定されず、表1に挙げた植物種と異なる植物種由来の
アシルCoAリダクターゼをコードする核酸も含まれる。例えば、GenBank等のデータベースに配列データが格納されていない植物由来であって、共通配列1、2又は3を有する、アシルCoAリダクターゼをコードする核酸も使用することができる。
ように配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかに示したアミノ酸配列を含むタンパク質を挙げることができる。特に、アシルCoAリダクターゼとしては、配列番号14、16及び18のいずれかに示したアミ
ノ酸配列を含むタンパク質であることが好ましい。
ように具体的な配列番号で特定されるアシルCoAリダクターゼをコードする核酸に限定さ
れず、上述した共通配列1、2又は3を有するアシルCoAリダクターゼをコードする核酸
であれば如何なる核酸も使用することができる。アシルCoAリダクターゼをコードする核
酸とは、当該核酸がコードするタンパク質がアシルCoAを還元してアルデヒド化合物を生
成する活性を有することを意味する。
するか否か、若しくは当該タンパク質をコードする核酸が共通配列1、2又は3を有するタンパク質をコードするか否かは、当該タンパク質のアミノ酸配列若しくは当該核酸がコードするアミノ酸配列を共通配列1、2又は3に示すアミノ酸配列と比較することで容易に判別することができる。
8、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかに示したアミノ酸配列において1又は複数個のアミノ酸配列が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列を含み、且つ、共通配列1、2又は3を有し、アシルCoAリダクターゼ活性を有す
るタンパク質をコードするものであっても良い。ここで、複数個のアミノ酸としては、例えば、1から20個、好ましくは1から10個、より好ましくは1から7個、さらに好ましくは1個から5個、特に好ましくは1個から3個を意味する。なお、アミノ酸の欠失、置換若しくは付加は、上記アシルCoAリダクターゼをコードする核酸の塩基配列を、当該
技術分野で公知の手法によって改変することによって行うことができる。塩基配列に変異を導入するには、Kunkel法またはGapped duplex法等の公知手法又はこれに準ずる方法に
より行うことができ、例えば部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キット(例えばMutant-KやMutant-G(何れも商品名、TAKARA Bio社製))等を用いて、あるいはLA PCR in vitro Mutagenesisシリーズキット(商品名、TAKARA Bio社製)を用いて変異が導
入される。また、変異導入方法としては、EMS(エチルメタンスルホン酸)、5-ブロモウ
ラシル、2-アミノプリン、ヒドロキシルアミン、N-メチル-N’-ニトロ-Nニトロソグアニ
ジン、その他の発ガン性化合物に代表されるような化学的変異剤を使用する方法でも良いし、X線、アルファ線、ベータ線、ガンマ線、イオンビームに代表されるような放射線処
理や紫外線処理による方法でも良い。
4、26、28、30、32、34及び36のいずれかに示したアミノ酸配列に対する類似度(Similarity)又は同一性(identity)が例えば70%以上、好ましくは80%以上、より好ましくは90%以上、最も好ましくは95%以上であるアミノ酸配列を有し、且つ、共通配列1、2又は3を有し、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質をコー
ドするものであっても良い。類似度及び同一性の値は、BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)プログラムを実装したコンピュータプログラム及び遺伝子配列情報を格納したデータベースを用いてデフォルトの設定で求められる値を意味する。
場合には、対象となる植物から核酸を抽出し、配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかに示したアミノ酸配列をコードする核酸に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸を単離することで同定することができる。ここで、ストリンジェントな条件とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。例えば、45℃、6×SSC(塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム)でのハイブリダイゼーション、その後の50〜65℃、0.2〜1×SSC、0.1%SDSでの洗浄が挙げられ、或いはそのような条件として
、65〜70℃、1×SSCでのハイブリダイゼーション、その後の65〜70℃、0.3×SSCでの洗浄を挙げることができる。ハイブリダイゼーションは、J. Sambrook et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory(1989)に記載さ
れている方法等、従来公知の方法で行うことができる。
3を有するものとして定義した。しかし、本発明において使用できるアシルCoAリダクタ
ーゼは、この共通配列1、2又は3を有するタンパク質に限定されない。
16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかに示したアミノ酸配列において1又は複数個のアミノ酸配列が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列を含み、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質をコードするも
のであっても良い。ここで、複数個のアミノ酸としては、例えば、1から20個、好ましくは1から10個、より好ましくは1から7個、さらに好ましくは1個から5個、特に好ましくは1個から3個を意味する。なお、アミノ酸の欠失、置換若しくは付加は、上記アシルCoAリダクターゼをコードする核酸の塩基配列を、当該技術分野で公知の手法によっ
て改変することによって行うことができる。塩基配列に変異を導入する方法は上述した方法を適宜適用することができる。
22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかに示したアミノ酸配列に対する類似度(Similarity)又は同一性(identity)が例えば70%以上、好ましくは80%以上、より好ましくは90%以上、最も好ましくは95%以上であるアミノ酸配列を有し、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質をコードするものであっても良い。
類似度及び同一性の値は、上述した方法により求めることができる。
、22、24、26、28、30、32、34及び36のアミノ酸配列をコードする核酸に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるタンパク質であって、アシルCoAリダクターゼを有するタンパク質をコードするものであって
も良い。ここで、ストリンジェントな条件とは、上述したものと同様である。
いるかは、該核酸を適当なプロモーターとターミネーター等の間に組み込んだ発現ベクターを作製し、この発現ベクターを用いて適当な宿主を形質転換し、発現するタンパク質のアシルCoAリダクターゼ活性を測定すればよい。ここでアシルCoAリダクターゼ活性を測定するには、上記形質転換体を炭素源を含む培地にて培養し、合成されたアルデヒド化合物又はアルデヒド化合物に由来するアルコールをガスクロマトグラフィー/質量分析装置等
によりにより測定すればよい。なお、形質転換体を培養する際には、培地にアシルCoAを
添加しても良い。
以上で説明したアシルCoAリダクターゼをコードする核酸は、適当な発現ベクターに組
み込まれ、宿主微生物に導入される。ここで、宿主微生物としては、アシルCoAリダクタ
ーゼを発現できる微生物であれば特に限定されるものではない。宿主としては、例えば、エッシェリヒア・コリ(Escherichia coli)などのエッシェリヒア属、コリネバクテリウ
ム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)などのコリネ菌、バチルス・ズブチリス(Bacillus subtilis)などのバチルス属、シュードモナス・プチダ(Pseudomonas putida)
などのシュードモナス属、リゾビウム・メリロティ(Rhizobium meliloti)などのリゾビウム属に属する細菌が挙げられ、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、シゾサッカロマイセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)などの酵母、糸状菌などを含む真菌が挙げられる。
えばバチルス・ズブチリス168株などが挙げられる。
ものではない。例えばカルシウムイオンを用いる方法[Cohen, S.N.,et al.:Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 69:2110-2114 (1972)]、エレクトロポレーション法などが挙げられる
。
なプロモーターを使用する。このようなプロモーターとしては、特に限定されないが、例えばグリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子(TDH3)のプロモーター、3-ホ
スホグリセレートキナーゼ遺伝子(PGK1)のプロモーター、高浸透圧応答7遺伝子(HOR7)のプロモーターなどが利用可能である。なかでもピルビン酸脱炭酸酵素遺伝子(PDC1)のプロモーターが下流の目的遺伝子を高発現させる能力が高いために好ましい。その他にも、gal1プロモーター、gal10プロモーター、ヒートショックタンパク質プロモーター、MFα1プロモーター、PHO5プロモーター、GAPプロモーター、ADHプロモーター、AOX1プロモーターなどを使用することで、下流の遺伝子を強発現させることができる。
施可能であるが、これに限定されない。
基質とした炭化水素合成能を有する微生物に導入されることが好ましい。この場合、上述したアシルCoAリダクターゼを発現する組換え微生物は、アルデヒド化合物から炭化水素
を高生産することができる。例えば上述した微生物に対して、デカルボニラーゼ活性を有する酵素(脱CO酵素)をコードする核酸を導入することによって、アルデヒド化合物から炭化水素を合成する能力を有する組換え微生物を製造することができる。このように得られた組換え微生物或いは本来的にデカルボニラーゼ活性を有する微生物を宿主として、上述したアシルCoAリダクターゼを導入することで、非常に高収率で炭化水素を合成するこ
とができる。
微細藻類シュードコリシスチス・エリプソイディア(Pseudochoricystis ellipsoidea)
や、シュードコリシスチス(Pseudochoricystis)属或いはコリシスチス(Choricystis)属に属する炭化水素生産能を有する微細藻類を培養することで、培養物から炭化水素を採取する方法が開示されている。これらの生物からデカルボニラーゼ活性を有する酵素をコードする核酸を単離して使用することができる。特開2010-528627号公報に開示されたア
ルデヒドをアルカンに転換する遺伝子、特表2011-520455号公報に開示されたSynechococcus elongatus由来のアルカン合成酵素遺伝子やアルデヒド合成酵素遺伝子を利用することもできる。さらにまた、特開平09-322780号公報に開示されたアラビドプシス・サリアナ
由来の脂肪アルデヒドデカルボニラーゼ活性に関与するタンパク質をコードする遺伝子を利用することもできる。
有する酵素をコードする炭化水素合成遺伝子が開示されている。WO2013/129393に開示さ
れた炭化水素合成酵素遺伝子を利用することで、上述したような炭化水素の高生産が可能となる。
ル基等を挙げることができる。また、分岐としては、クロロメチル基、アセチル基、2-ピリジル基、ヒドロキシフェニル基、アミノアセチル基、メトキシ基、フェノキシ基、メチルチオ基、フェニルチオ基等を挙げることができる。さらに、合成対象の炭化水素は飽和炭化水素(アルカン)でもよいし、不飽和炭化水素(アルケン及びアルキン)でもよい。
本発明に係る組換え微生物は、上述したように、アシルCoAを基質としてアルデヒド化
合物を合成する活性に優れている。したがって、本発明に係る組換え微生物を利用することによって、アルデヒド化合物、アルデヒド化合物から合成されるアルコール及び炭化水素からなる群から選ばれる少なくとも1種の化合物を製造することができる。
成できる。
本実施例では、ラン藻(ノストク・パンクチフォルム(Nostoc punctiform))由来のアルデヒドデカルボニラーゼ遺伝子(遺伝子ID:Npun R1711)を有する発現ベクターと、種
々の植物由来のアシルCoAリダクターゼ遺伝子を有する発現ベクターとを大腸菌に導入し
、得られた組換え大腸菌におけるアルカン生産能を評価した。本実施例で使用したアシルCoAリダクターゼ遺伝子を表2に纏めた。
ーゼ遺伝子はデータベースに格納された塩基配列情報に基づいて人工的に合成した。アルデヒドデカルボニラーゼ遺伝子(遺伝子ID:Npun R1711)の塩基配列及びアミノ酸配列を
配列番号67及び68に示した。
ゼ遺伝子を人工合成する際、5’末端にはNdeI認識配列を含むTACCATGGGCATACATATGGCCATCATAACGGTTCTGGCAAATATTCTGAAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAAGGAGATATACG(配列番号69)を、3’末端にはXhoI認識配列を含むTAATTAACCTAGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCCCTCGAGTCCGGCCGCATGCGGCCGCAT(配列番号70)を付加した。
ルテックスで懸濁した。これを遠心分離(10,000rpm、1分、室温)し、この上清をGC/MS
分析に供した。GC/MS分析の条件を表3に示した。
株に関するGC/MS分析のチャートを図7に示した。図5及び6に示した定量結果を表4に
纏めた。
てアシルCoAを還元してアルデヒド化合物を生成する活性を有するアシルCoAリダクターゼをコードしていることが示された。
定される遺伝子、Glycine max (soybean)由来の遺伝子ID:100801815で特定される遺伝子、Populus trichocarpa (black cottonwood)由来の遺伝子ID:POPTR_576417で特定される遺伝子、Vitis vinifera (wine grape)由来の遺伝子ID:100245182で特定される遺伝子、Cicer arietinum (chickpea) 由来の遺伝子ID:101510781で特定される遺伝子、Solanum lycopersicum (tomato)由来の遺伝子ID:101262598で特定される遺伝子、Cucumis sativus (cucumber)由来の遺伝子ID:101212401で特定される遺伝子、Brachypodium distachyon由来の遺伝子ID:100845156で特定される遺伝子、Setaria italica (foxtail millet)由
来の遺伝子ID:101779750で特定される遺伝子、Sorghum bicolor (sorghum)由来の遺伝子ID:SORBI_01g046030で特定される遺伝子及びOryza sativa japonica (Japanese rice)由来の遺伝子ID:Os03t0167600-01で特定される遺伝子は、宿主微生物においてアシルCoAを還元してアルデヒド化合物を生成する活性を有するアシルCoAリダクターゼをコードして
いることが示された。なお、共通配列1及び2は、これら12種類の遺伝子によりコードされるアシルCoAリダクターゼを特徴付ける配列である。
された。なお、共通配列3は、これら3種類の遺伝子によりコードされるアシルCoAリダ
クターゼを特徴付ける配列である。
Claims (16)
- 以下のアミノ酸配列:GxGxxxFLxxKxxxxxGxTGFLxKVxIEKILRTxPxVxKxxxxIKAxxxxxAxxRLxxxxxxxxxFxxLxxxxGxxYxxFxxxKLxPxxGxxxxxxxGxxxxxxxxxAxxVDxxxNSAANTTFxERYDxAxxxNTxGxxxxMxxAxxxxxLKLFLxxSTAYVNGQxQGxxxExPF(配列番号1)[26-57aa]GLxRAxxxGWQDTYVFTKAMGEMxxxxxRxxxPVxxxRPSVIESTxxxPFPGWMEGxRMMDPxxLxYGKGQLxGFxxDPxGVxDVVPADMVVNATLAxxAxHG(配列番号2)[9-18aa]YxxxSSxxNPLxFxxLxxxxxxHxxxxPxxDxxGxPIxVxxM(配列番号3
)[39-48aa] VxQxxxLxxIYxPYTFxxGRFDNxNxxxLxxxMxxxExxxFxFDVxxxxWxDYIxNVHIPGLxxxVxKG(配列番号4)を含む共通配列を有する、アシルCoAリダクターゼをコードする核酸を宿主微生物に導入してなる組換え微生物。 - 上記共通配列は、以下のアミノ酸配列:G(I/L)G(I/V)xxFLx(G/A)Kx(F/L)x(I/V)(T/S)G(A/G)TGFL(A/G)KV(L/F)IEKILRTxP(D/N)V(G/N)K(I/M)(Y/F)x(L/V)IKA(K/E)xx(E/Q/D)(A/V)AxxRLx(N/I/K)(E/D)(I/V)(I/V/L)(N/D)(A/T)(E/Q/D)(V/L/I)Fx(O/G/R)L(Q/R/K)x(A/I/V/T)(Y/H)G(K/N/E)(S/D/Y/G)Y(Q/H/M/S/D)xF(M/V/I/A)(L/A/I)(S/A/R/N/K)KL(V/I)P(V/I)(A/L/V)Gx(V/I)(C/R)(G/E/D)x(S/N/D)(L/I/V)Gxxx(D/G/E)x(A/S)xx(I/M)Ax(E/R/D/Q)VD(V/I)(I/F/V)(V/I)NSAANTTF(D/H)ERYD(I/T/V)Ax(D/N)(I/V)NTxG(P/T)x(H/R/N)(L/I)Mx(F/I)A(K/H/Q)x(C/F)x(K/R/N)LKLFL(Q/H)(V/I)STAYVNGQ(R/K/T)QG(R/V/L)(I/V)(M/L)E(K/R)PFxx(G/E)(D/E/L)x(I/V)(A/R/E/I)x(E/D)(配列番号5)[17-48aa]GL(E/Q)RAxxxGWQDTYVFTKAMGEM(V/M)(I/V)(D/N)x(M/L)R(G/D)(E/D)(I/L/V)PV(V/A)x(I/M)RPSVIESTxx(E/D)PFPGWMEG(N/S)RMMDP(I/V)(V/I)L(Y/O/W)YGKGQL(T/S)GF(V/L)(A/V)DP(N/Y/E/D)GV(L/I)DVVPADMVVNATLA(A/S)(M/I)A(R/K/W)HG(配列番号6)[8-17aa](V/I)Y(Q/H)x(A/T/S)SS(V/T/A)(V/A)NPL(I/V/D/A)Fx(D/R/E)Lx(S/R/D/K/T)(H/L/M/F)(F/L)xxHxx(S/R/G)(S/O)PxxDxxG(N/R/Q/T)PIxV(P/S)xM(K/R/S)(L/F)(F/L)x(S/T)(T/I/M/V/S)(E/D)x(F/L)(S/A)x(H/Y)(L/V/I)(W/E)(R/I)(D/Y)(A/V)xx(R/K)(S/R/C/A)(配列番号7)[18-26aa](K/R)(S/T)V(K/E)Q(A/T/L)(K/T/V)(Y/H)L(A/G)xIYxPYTF(Y/F)(G/P/N)GRFDN(S/G)N(T/V)(Q/E)xL(M/L/I/F)xxM(O/S/T)(E/A/K/V/P)(E/K/A/N)E(K/R)xxFxFDVx(S/N/G)(I/L/V)(D/E)WxDYI(S/T)NVHIPGL(R/K)(R/K)(H/Y)V(M/L)KG(配列番号8)を含むことを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
- 上記アシルCoAリダクターゼは、以下の(a)又は(b)のタンパク質であることを特
徴とする請求項1記載の組換え微生物。
(a)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のうちいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質
(b)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかのアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質 - 上記共通配列は、以下のアミノ酸配列:MDAGSLVLSQNGKSQA(E/D)I(L/V)VKDLVPY(D/G)G(P/T)T(配列番号9)[0-2aa]TLIG(V/L)ED(配列番号10)[0-1aa]GIGIVKFL(G/R)GKKFFITGATGFLAKV(F/L)IEKILRTEPDVGKMY(L/I)LIKAKN(K/N)Q(A/V)AMERLQ(N/K)EIINT(E/Q)LFRCL(Q/R)(E/Q)IHGKSYQAFMLSKLVP(V/I)VG(N/D)ICE(H/T)NLGLDE(G/D)(I/L)S(D/N)VIA(E/D)EVDV(I/F)VNSAANTTFDERYDTAININT(I/R)GP(O/S)RLM(N/A)IAKKCKKLKLFLHVSTAYVNGQ(R/K)QGRIMERPFSIG(E/D)CIAREK(YL)IS(E/G)V(S/P)PKYLPTLDIE(G/N)EIN(L/M)V(S/L)(N/K)(Y/N)KG(D/N)(配
列番号11)[0-1aa]IE(D/E)NLL(A/T)QKM(K/R)E(I/M)GLERA(R/K)RYGWQDTYVFTKAMGEMMIDKLR(G/D)DIPVV(V/I)(M/I)RPSVIEST(F/L)SEPFPGWMEGNRMMDP(I/V)VL(C/W)YGKGQLTGFLVDPNGVLDVVPADMVVNATLAAMA(R/K)HG(V/M)(S/N/I)QK(P/A)DINVYQIASSVVNPL(V/A)FQDL(A/T)RLLYEHYSSSP(C/F)IDS(K/M)GRPIQVP(L/I)MK(L/F)FSS(T/S)EEFSGHLWRD(A/V)I(Q/N)K(R/S)G(L/I)T(A/S)(V/M)ASSK(G/A)KMSQKLEN(M/I)CRKSVEQAKYLA(N/K)IVEPYTFYGGRFDNSNTQRLME(S/I)MSE(K/E)EK(R/T)EF(G/D)FDVK(S/G)IDW(N/T)DYITNVHIPGLRR(H/Y)VMKGRGM(G/S)(S/N)Q(配列番号1
2)を含むことを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。 - 上記アシルCoAリダクターゼは、以下の(a)又は(b)のタンパク質であることを特
徴とする請求項1記載の組換え微生物。
(a)配列番号14、16及び18のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質
(b)配列番号14、16及び18のいずれかのアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質 - 上記宿主微生物が大腸菌、コリネ菌及び酵母からなる群から選ばれる微生物であることを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
- アルデヒドを基質として炭化水素を合成するアルデヒドデカルボニラーゼ活性を有することを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
- 上記宿主微生物は、アルデヒドを基質として炭化水素を合成するアルデヒドデカルボニラーゼをコードする核酸を有することを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
- 炭素数13〜15の炭素鎖を有する炭化水素を生成することを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
- 以下(a)又は(b)のタンパク質をコードする核酸を宿主微生物に導入してなる組換え微生物。
(a)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のうちいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質
(b)配列番号14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34及び36のいずれかのアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アシルCoAリダクターゼ活性を有するタンパク質 - 上記宿主微生物が大腸菌、コリネ菌及び酵母からなる群から選ばれる微生物であることを特徴とする請求項10記載の組換え微生物。
- アルデヒドを基質として炭化水素を合成するアルデヒドデカルボニラーゼ活性を有することを特徴とする請求項10記載の組換え微生物。
- 上記宿主微生物は、アルデヒドを基質として炭化水素を合成するアルデヒドデカルボニラーゼをコードする核酸を有することを特徴とする請求項10記載の組換え微生物。
- 炭素数13〜15の炭素鎖を有する炭化水素を生成することを特徴とする請求項10記載の組換え微生物。
- 請求項1乃至14いずれか一項記載の組換え微生物を炭素源を含む培地にて培養する工程と、培養後の組換え微生物内から目的物質を回収する工程とを含む物質製造方法。
- 上記目的物質は、脂肪族アルデヒド、当該脂肪族アルコール及び炭化水素からなる群から選ばれる少なくとも1種であることを特徴とする請求項15記載の物質製造方法。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011067105A (ja) * | 2009-09-24 | 2011-04-07 | Mitsui Chemicals Inc | 微生物由来アルデヒドデヒドロゲナーゼによる不飽和脂肪族アルデヒドの分解方法 |
JP2011520455A (ja) * | 2008-05-16 | 2011-07-21 | エルエス9・インコーポレイテッド | 炭化水素を製造するための方法および組成物 |
JP2013528057A (ja) * | 2010-06-10 | 2013-07-08 | コリア アドバンスド インスティチュート オブ サイエンス アンド テクノロジィ | 炭化水素生成能を有する変異微生物及びこれを利用した炭化水素の製造方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002223788A (ja) | 2001-01-31 | 2002-08-13 | Kao Corp | アルコールの製造方法 |
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ES2703775T3 (es) | 2008-03-05 | 2019-03-12 | Genomatica Inc | Organismos productores de alcoholes primarios |
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AU2009327490A1 (en) | 2008-12-16 | 2011-07-28 | Genomatica, Inc. | Microorganisms and methods for conversion of syngas and other carbon sources to useful products |
CN102719467A (zh) * | 2012-07-09 | 2012-10-10 | 武汉大学 | 一种利用脂肪酰acp还原酶生物合成脂肪醇的方法 |
-
2014
- 2014-05-30 JP JP2014112538A patent/JP6189793B2/ja not_active Expired - Fee Related
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- 2015-05-20 US US14/716,973 patent/US10377993B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2015-05-28 BR BR102015012461A patent/BR102015012461A2/pt not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011520455A (ja) * | 2008-05-16 | 2011-07-21 | エルエス9・インコーポレイテッド | 炭化水素を製造するための方法および組成物 |
JP2011522525A (ja) * | 2008-05-16 | 2011-08-04 | エルエス9・インコーポレイテッド | 炭化水素を製造するための方法および組成物 |
JP2011067105A (ja) * | 2009-09-24 | 2011-04-07 | Mitsui Chemicals Inc | 微生物由来アルデヒドデヒドロゲナーゼによる不飽和脂肪族アルデヒドの分解方法 |
JP2013528057A (ja) * | 2010-06-10 | 2013-07-08 | コリア アドバンスド インスティチュート オブ サイエンス アンド テクノロジィ | 炭化水素生成能を有する変異微生物及びこれを利用した炭化水素の製造方法 |
Non-Patent Citations (13)
Title |
---|
DAN CLOSE, ET AL.: "8-41: Biohydrocarbon fuel production in Saccharomyces cerevisiae using a synthetic production pathwa", 35TH SYMPOSIUM ON BIOTECHNOLOGY FOR FUELS AND CHEMICALS, JPN6016027773, 30 April 2013 (2013-04-30), ISSN: 0003362459 * |
DATABASE GENBANK,[ONLINE],ACCESSION NO. CBI29968, <HTTP://WWW.NCBI.NLM.NIH.GOV/PROTEIN/297739786?, JPN6016027762, ISSN: 0003362452 * |
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J. PLANT PHYSIOL., vol. 166, JPN6016027755, 2009, pages 787 - 796, ISSN: 0003362447 * |
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