JP5867586B2 - 炭化水素合成酵素遺伝子及びその利用 - Google Patents
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Description
(b)配列番号3〜32及び65〜170のうちいずれか1つの偶数番号に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加したアミノ酸配列からなり、アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する活性を有するタンパク質
(c)配列番号3〜32及び65〜170のうちいずれか1つの偶数番号に記載のアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する活性を有するタンパク質
(d)配列番号3〜32及び65〜170のうちいずれか1つの奇数番号に記載の塩基配列の相補鎖からなるポリヌクレオチドの少なくとも一部に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質であって、アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する活性を有するタンパク質
(4)上記配列番号3〜32のうちいずれか1つの偶数番号は配列番号6又は12であり、上記配列番号3〜32のうちいずれか1つの奇数番号は配列番号5又は11であることを特徴とする(3)記載の遺伝子。
本実施例では、アルカン合成能を有する微生物であるKlebsiella sp. NBRC100048株のゲノム配列を定法に従って解析し、このゲノム配列情報に基づいて配列番号1に示したモチーフ配列を有するタンパク質をコードする10種類の遺伝子を特定した。本実施例で特定した10種類の遺伝子についてgene01〜10と命名し、その機能を推定した。これら10種類の遺伝子について推定した機能及び配列に関する情報を表4にまとめた。
本実施例では、実施例1で炭化水素合成活性に優れたタンパク質をコードする遺伝子として特徴づけられたgene02を用いてin vitroにおけるアルカン合成を試みた。
本実施例では、実施例1で特定されたgene04によりコードされるタンパク質を精製し、精製したタンパク質を用いてin vitroにおけるアルカン合成を試みた。
本実施例では、実施例1で炭化水素合成活性に優れたタンパク質をコードする遺伝子として特徴づけられたgene02を酵母で発現させ、アルカン合成を試みた。
本実施例では、様々な生物種由来のアルカン合成酵素遺伝子についてアルカン合成能を評価した。
Claims (4)
- 下記(a)〜(c)のいずれかの、アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する活性を有するタンパク質と、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)又は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)からなる補酵素と、上記タンパク質における上記活性の基質となる、炭素数6〜21の鎖状構造アルデヒド化合物とを共存させ、当該アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する、炭化水素の製造方法。
(a)配列番号6、12、26、66、72、76、80、90、92、94、98、112、116、122及び144のうちいずれか1つに記載のアミノ酸配列からなるタンパク質
(b)配列番号6、12、26、66、72、76、80、90、92、94、98、112、116、122及び144のうちいずれか1つに記載のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、炭素数6〜21の鎖状構造アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する活性を有するタンパク質
(c)配列番号5、11、25、65、71、75、79、89、91、93、97、111、115、121及び143のうちいずれか1つに記載の塩基配列の相補鎖からなるポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質であって、炭素数6〜21の鎖状構造アルデヒド化合物から炭素数が1つ少ない炭化水素を合成する活性を有するタンパク質 - 上記タンパク質をコードする遺伝子を導入してなる形質転換体を、上記アルデヒド化合物を含む溶液にて培養することで、上記タンパク質と上記補酵素と上記アルデヒド化合物とを共存させることを特徴とする請求項1記載の炭化水素の製造方法。
- 上記タンパク質をコードする遺伝子を導入してなる形質転換体より抽出した酵素液を、上記アルデヒド化合物を含む溶液と混合することで、上記タンパク質と上記補酵素と上記アルデヒド化合物とを共存させることを特徴とする請求項1記載の炭化水素の製造方法。
- 上記タンパク質をコードする遺伝子を導入してなる形質転換体から単離した上記タンパク質を、上記アルデヒド化合物及び上記補酵素を含む溶液に混合することで、上記タンパク質と上記補酵素と上記アルデヒド化合物とを共存させることを特徴とする請求項1記載の炭化水素の製造方法。
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