JP2020523005A - アルビカノールおよび/またはドリメノールの製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本明細書では、アルビカノール、ドリメノールならびに関連化合物および誘導体を製造する生化学的方法であって、新規ポリペプチドの使用を含む、方法が提供される。
テルペンは、ほとんどの生物(微生物、動植物)で見られる。これらの化合物は、イソプレン単位と呼ばれる5つの炭素単位で構成されており、それらの構造に存在するこれらの単位の数によって分類される。したがって、モノテルペン、セスキテルペンおよびジテルペンは、それぞれ、10個、15個および20個の炭素原子を含むテルペンである。例えば、セスキテルペンは、植物界で広く見られる。多くのセスキテルペン分子は、風味および香りの特性、ならびに化粧品、薬用および抗菌効果で知られている。多数のエスキテルペン炭化水素およびセスキテルペノイドが同定されている。化学合成の手法が開発されてきたが、依然として複雑であり、必ずしも費用対効果が高いとは限らない。
本明細書では、ドリマンセスキテルペンの製造方法であって、
a.非環式ファルネシル二リン酸(FPP)前駆体を、ハロ酸デハロゲナーゼ(HAD)様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドと接触させて、ドリマンセスキテルペンを産生する工程であって、ここで、ポリペプチドが、
i.配列番号53(DDxx(D/E))に記載のクラスIテルペンシンターゼ様モチーフ;および
ii.配列番号56(DxD(T/S)T)に記載のクラスIIテルペンシンターゼ様モチーフ
を含む、工程;および
b.任意で、ドリマンセスキテルペンまたはドリマンセスキテルペンを含む混合物を単離する工程
を含む、製造方法が提供される。
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配;および
b.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
c.配列番号56、配列番号57または配列番号58に記載の配列
を含む。
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63のアミノ酸配列を含むか;または
b.i.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
ii.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
iii.配列番号56、配列番号57または配列番号58に記載の配列
を含む。
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29または配列番号32と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
b.配列番号54(DD(K/Q/R)(L/I/T)(D/E))の配列、および
c.配列番号57(D(V/M/L/F)DTTS)の配列
を含み;かつ
ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールである。
a.配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
b.配列番号55の配列、および
c.配列番号58の配列
を含み;かつ
ドリマンセスキテルペンは、ドリメノールである。
a.配列番号1または配列番号5と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
b.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
c.配列番号56、配列番号57または配列番号48に記載の配列
を含む、単離されたポリペプチドも提供される。
a.請求項13または14記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか;または
b.配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8もしくは配列番号68またはそれらの逆相補的配列と、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか;または
c.ストリンジェントな条件下で配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8または配列番号68にハイブリダイズするヌクレオチド分子を含むか;または
d.配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8、配列番号10、配列番号11、配列番号13、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号19、配列番号21、配列番号22、配列番号24、配列番号25、配列番号27、配列番号28、配列番号30、配列番号31、配列番号33、配列番号34、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、配列番号42、配列番号43、配列番号45、配列番号46、配列番号48、配列番号49、配列番号51、配列番号52、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69もしくは配列番号70またはそれらの逆相補的配列を含む、単離された核酸分子が提供される。
bp 塩基対
kb キロベース
DNA デオキシリボ核酸
cDNA 相補DNA
DTT ジチオトレイトール
FPP ファルネシル二リン酸
GC ガスクロマトグラフ
HAD ハロ酸デハロゲナーゼ
IPTG イソプロピル−D−チオガラクト−ピラノシド
LB 溶原ブロス
MS 質量分析計/質量分析
MVA メバロン酸
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
RNA リボ核酸
mRNA メッセンジャーリボ核酸
miRNA マイクロRNA
siRNA 低分子干渉RNA
rRNA リボソームRNA
tRNA トランスファーRNA
「ポリペプチド」という用語は、連続的に重合したアミノ酸残基、例えば、少なくとも15残基、少なくとも30残基、少なくとも50残基のアミノ酸配列を意味する。本明細書のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、酵素またはその断片またはその変異体であるアミノ酸配列を含む。
本明細書では、配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8または配列番号68のヌクレオチド配列と、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8、配列番号10、配列番号11、配列番号13、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号19、配列番号21、配列番号22、配列番号24、配列番号25、配列番号27、配列番号28、配列番号30、配列番号31、配列番号33、配列番号34、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、配列番号42、配列番号43、配列番号45、配列番号46、配列番号48、配列番号49、配列番号51、配列番号52、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69もしくは配列番号70またはそれらの逆相補的配列を含む核酸分子が提供される。
配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50もしくは配列番号63のアミノ酸配列を含む二官能性テルペンシンターゼまたはそれらの機能的断片をコードし、FPP前駆体由来の細胞内でドリマンセスキテルペンの産生を触媒する。さらなる実施形態では、ドリマンセスキテルペンは、アルビカノールおよび/またはドリメノールを含む。
配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35または配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63のアミノ酸配列を含む、ポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。
実施例1
微生物培養ならびにDNAおよびRNA抽出
ドリマンセスキテルペノイドは、自然界に広く分布している(JansenおよびGroot, 2004年, Nat. Prod. Rep., 21, 449〜477)。ドリマンセスキテルペノイドファミリーの化合物には、図1に示すドリマン炭素骨格を有するセスキテルペン構造が含まれている。例えば、よく見られるドリマンセスキテルペンは、ドリメノールおよびアルビカノール(図1)、ならびに酸化、還元、アシル化、アルキル化または転位などの酵素反応によりドリメノールおよびアルビカノールから誘導される化合物である。ドリマンセスキテルペノイドファミリーは、ドリマンセスキテルペンが別の生合成経路に由来する分子に結合された化合物も含む(JansenおよびGroot, 2004年, Nat. Prod. Rep., 21, 449〜477)。
ゲノムおよびトランスクリプトームのシーケンシング
ゲノムDNAを、ペア読み取りプロトコル(Illumina)を使用して配列決定した。ライブラリを、250〜350bpの挿入サイズを選択するために準備した。HiSeq 2500 Illuminaシーケンサーでシーケンシングを実行した。読み取りの長さは125塩基であった。ATCC−12212およびATCC−64430について、それぞれ、合計2130万および3040万のペア読み取り(クラスター)を配列決定した。
ドリマンセスキテルペンシンターゼの同定
クエリ配列として既知のセスキテルペンシンターゼのアミノ酸配列を用いたtBlastn検索(Altschulら, 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403〜410)を使用して、6および10の推定セスキテルペンシンターゼ配列を、それぞれ、ヒトクチタケおよびエブリコで同定した。ゲノムコンティグ上のRNAシーケンシング読み取りのマッピングを使用して、特にイントロ−エクソンジャンクションの局在化のために、配列を手動で修正した。次に、対応するcDNAを最適な大腸菌発現のためにコドン最適化し、合成し、発現プラスミド(pJ401、ATUM、ニューアーク、カリフォルニア州)にクローニングした。機能発現大腸菌細胞および酵素特性解析アッセイは、セスキテルペンシンターゼ活性を示したが、FPPからのアルビカノールの形成は明らかにしなかった。
CvTps1およびLoTps1の異種発現および特性評価
CvTps1およびLoTps1のコード配列を制御し、ゲノムコンティグに対するRNAシーケンシング読み取りのマッピングを使用して、イントロン−エクソン接合部の予測を改善した。得られたcDNAのコード配列をコドン最適化し、pJ401大腸菌発現プラスミド(pJ401、ATUM、ニューアーク、カリフォルニア州)にクローン化した。
他の生物におけるCvTps1およびLoTps1に相同な配列の検索。 CvTps1 およびLoTps1 のアミノ酸配列を使用して、公共データベースに存在する他の生物の相同配列を検索した。CvTps1およびLoTps1と相同性を示す配列について、国立生物工学情報センター(NCBI, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)のタンパク質データベースで検索するために、最初にブラスト検索アプローチ(Altschulら, 1990年, J. Mol. Biol. 215, 403-410)を使用した。取得されたアミノ酸を、次に、実施例3に記載したCvTps1およびLoTps1の特徴の存在について分析した。さらなる分析および酵素活性の特性評価のために15個の配列をすべて真菌種から選択した:オバ・リブロサ(Obba rivulosa)由来のNCBIアクセッションOCH93767.1、白色腐朽菌由来のNCBIアクセッションEMD37666.1、アスペルギルス・テレウス由来のNCBIアクセッションXP_001217376.1、アスペルギルス・アクレアタス(Aspergillus aculeatus)由来のNCBIアクセッションOJJ98394.1、アスペルギルス・ウダガワエ(Aspergillus udagawae)由来のNCBIアクセッションGAO87501.1、カワラタケ(Trametes versicolor)由来のNCBIアクセッションXP_008034151.1、マツノオオウズラタケ(Dichomitus squalens)由来のNCBIアクセッションXP_007369631.1、アスペルギルス・アスタス(Aspergillus ustus)由来のNCBIアクセッションKIA75676.1、ニホンコウジカビ由来のNCBIアクセッションXP_001820867.2、アスペルギルス・カリドウスツス(Aspergillus calidoustus)由来のNCBIアクセッションCEN60542.1、ヘテロバシディオン・イレギュラー(Heterobasidion irregulare)由来のNCBIアクセッションXP_009547469.1、スキゾポラ・パラドキサ(Schizopora paradoxa)由来のNCBIアクセッションKLO09124.1、アスペルギルス・ベルシコロル(Aspergillus versicolor)由来のNCBIアクセッションOJI95797.1。
他の真菌ヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼの機能的な特性評価。
実施例5に記載された15個の新しい推定シンターゼをコードするcDNAをコドン最適化し、pJ401大腸菌発現プラスミド(pJ401、ATUM、ニューアーク、カリフォルニア州)にクローン化した。実施例4に記載の手順に従って、ファルネシル二リン酸(FPP)を過剰産生するように設計された大腸菌細胞で、酵素を機能的に特性評価した。
インビトロアッセイ。
組換えテルペンシンターゼを含む粗タンパク質抽出物を、KRX大腸菌細胞(Promega)またはBL21 Star(商標)(DE3)大腸菌(ThermoFisher)を使用して調製する。発現プラスミドで形質転換された細胞の単一コロニーを使用して、5mlのLB培地に接種する。37℃で5〜6時間インキュベートした後、培養物を25℃のインキュベーターに移し、平衡化のために1時間放置する。次に、タンパク質の発現を、1mMのIPTGの添加により誘導し、培養物を、25℃で一晩インキュベートする。翌日、細胞を遠心分離により収集し、0.1容量の50mM MOPSO pH7(3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(シグマ−アルドリッチ)、10%のグリセロールに再懸濁し、超音波処理により溶解する。抽出物を、遠心分離(20,000gで30分)により透明にし、可溶性タンパク質を含む上清を、さらなる実験に使用する。
テルペンシンターゼおよびホスファターゼの共発現。Shinohara Y.ら, 2016, Sci Rep. 6, 32865には、ドリマンテルペンシンターゼ(AstC、NCBIアクセッションXP_001822013.2)が記載されている。このシンターゼは、二リン酸部分に結合したドリマンセキテルペンを産生する。遊離ドリマンセスキテルペンを産生するには、AstC酵素を、ホスファターゼ活性を有する酵素と組み合わせなければならない。この刊行物には、AstCによって産生されるドリマン二リン酸のリン酸部分の連続的切断を触媒する2つのホスファターゼAstIおよびAstK(XP_001822007.1およびXP_003189903.1)も記載されている。
XP_006461126.1の機能的な特性評価
マッシュルーム由来のNCBIアクセッション番号XP_006461126.1を、実施例5に記載の方法を使用して選択した。XP006461126.1アミノ酸(配列番号63)は、それぞれ、CvTps1およびLoTps1アミノ酸配列と48.9%および48.1%の同一性を共有した。XP_006461126.1は、位置278と271との間にあるクラスIIテルペンシンターゼ様モチーフ(DLDT)(配列番号56の一部)および位置167から171までにあるクラスIテルペンシンターゼ様モチーフ(DDKLE)(配列番号55の一部)を含む。アミノ酸は、N末端領域にハロ酸デハロゲナーゼ様ヒドロラーゼスーパーファミリーの特徴的なモチーフも含む。
真菌ヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼを使用するサッカロミセス・セレビシエ細胞におけるインビボでのドリマンセスキテルペンの産生
異なるヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼを、サッカロミセス・セレビシエ細胞におけるドリマンセスキテルペンの産生について評価した。
XP_007369631.1、NCBIアクセッション番号XP_007369631.1、マツノオオウズラタケ由来XP_006461126、NCBIアクセッション番号XP_006461126、マッシュルーム由来
LoTps1、配列番号5、エブリコ由来
EMD37666.1、NCBIアクセッションEMD37666.1、白色腐朽菌由来
XP_001217376.1、NCBIアクセッション番号XP_001217376.1、アスペルギルス・テレウス由来
異なるシンターゼをコードするcDNAのコドン使用頻度を、サッカロミセス・セレビシエでの最適な発現のために変更した(配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70)。
断片a:プライマー5’−AGGTGCAGTTCGCGTGCAATTATAACGTCGTGGCAACTGTTATCAGTCGTACCGCGCCATTCGACTACGTCGTAAGGCC−3’(配列番号71)および5’−TCGTGGTCAAGGCGTGCAATTCTCAACACGAGAGTGATTCTTCGGCGTTGTTGCTGACCATCGACGGTCGAGGAGAACTT−3’(配列番号72)を使用し、テンプレートとしてプラスミドpESC−LEU(Agilent Technologies、カリフォルニア州、米国)を用いて、PCRにより構築された、LEU2酵母マーカー;
断片b:プライマー5’−TGGTCAGCAACAACGCCGAAGAATCACTCTCGTGTTGAGAATTGCACGCCTTGACCACGACACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAG−3’(配列番号73)および5’−AACGCGTACCCTAAGTACGGCACCACAGTGACTATGCAGTCCGCACTTTGCCAATGCCAAAAATGTGCGCGGAACCCCTA−3’(配列番号74)を使用し、テンプレートとしてプラスミドpESC−URAを用いて、PCRにより構築された、AmpR大腸菌マーカー;
断片c:プライマー5’−TTGGCATTGGCAAAGTGCGGACTGCATAGTCACTGTGGTGCCGTACTTAGGGTACGCGTTCCTGAACGAAGCATCTGTGCTTCA−3’(配列番号75)および5’−CCGAGATGCCAAAGGATAGGTGCTATGTTGATGACTACGACACAGAACTGCGGGTGACATAATGATAGCATTGAAGGATGAGACT−3’(配列番号76)を使用し、テンプレートとしてpESC−URAを用いて、PCRにより得られた、酵母の複製起点;
断片d:プライマー5’−ATGTCACCCGCAGTTCTGTGTCGTAGTCATCAACATAGCACCTATCCTTTGGCATCTCGGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGG−3’(配列番号77)および5’−CTCAGATGTACGGTGATCGCCACCATGTGACGGAAGCTATCCTGACAGTGTAGCAAGTGCTGAGCGTCAGACCCCGTAGAA−3’(配列番号78)を使用し、テンプレートとしてプラスミドpESC−URAを用いて、PCRにより得られた、大腸菌の複製起点、および
断片e:断片「d」の最後の60ヌクレオチド、酵母遺伝子PGK1の停止コドンの200ヌクレオチド下流、試験されるヒドロラーゼ様二官能性セスキテルペンシンターゼコード配列の1つ、サッカロミセス・セレビシエでの発現のために最適化されたコドン、GAL1のプロモーター、および断片「a」の始まりに対応する60ヌクレオチドで構成される断片。これらの断片を、DNA合成(ATUM、ニューアーク、カリフォルニア州)によって取得した。
CvTps1
配列番号1−CvTps1タンパク質
MTTIHRRHTTLILDLGDVLFRWSPKTETAIPPRQLKEILTSVTWFEYERGQISQTECYERCAAEFKVDPLVIAEAFKQARESLRPNKAFIALIRELRHQMHGDLTVLALSNISLPDYEYIMSLSSDWATVFNRVFPSALVGERKPHLGCYRKVISEMSLEPQTTVFVDDKLDNVASARSLGMHGIVFDNEANVFRQLRNIFGNPVSRGQGYLRKHAGKLESSTDNGLTFEENFTQLIIYEVTQDRSLITLSECPRTWNFFRGQPLFSESFPDDVDTTSVALTVLQPDRALVDSILDQMLEYVDADGIMQTYFDSSRPRIDPFVCVNVLSLFYANGRGRELPHTLEWVYEVLLHRAYHGGSRYYLSPDCFLFFMSRLLKRANDSALQARFRPLFMERVKERVGAAGDSMDLAFRILAAATIGVHCPQDLERLAAAQCEDGGWDMCWFYAFGSTGIKAGNRGLTTALAVAAIRTALGRPPSPSPSNISSSSKLDAPNSFLGIPRPTSPIRFGELFRSWRKNKPTAKSQ
CATCCCGCCTTTTGAGCATGGCACACAAACAGCCTTTAAGGAGCTCCTTGGTTGCCTAGTCATGCCTCCACCTGCCCCCTCCTCACTCATCCCCTCGCATCCTAAAACATGACCACGATTCACCGTCGGCACACCACTCTCATCTTGGACCTCGGCGACGTCCTCTTCCGCTGGTCACCAAAGACCGAGACCGCCATCCCCCCTCGGCAGCTTAAGGAGATACTTACCTCCGTCACCTGGTTCGAGTACGAACGAGGCCAGATATCCCAAACAGAATGTTACGAACGATGCGCTGCAGAATTCAAAGTCGACCCCTTAGTGATCGCTGAAGCCTTCAAGCAAGCTCGCGAGTCATTACGGCCCAACAAAGCGTTCATCGCCTTGATTCGCGAACTTCGCCATCAAATGCATGGAGACCTCACGGTCCTCGCCCTTTCCAACATTTCCCTCCCCGATTACGAATATATCATGTCTCTGAGCTCGGATTGGGCAACCGTCTTCAATCGCGTATTCCCTTCTGCACTTGTTGGCGAGCGAAAACCCCATCTGGGGTGCTACCGCAAGGTCATTTCGGAGATGAGCTTGGAACCCCAGACAACCGTATTTGTCGATGATAAGCTAGACAACGTCGCCTCTGCTCGCTCACTTGGCATGCACGGCATCGTATTCGACAACGAAGCCAATGTCTTCCGGCAACTGCGCAATATCTTCGGGAATCCGGTTAGCCGCGGTCAAGGCTATCTTCGCAAGCATGCCGGAAAGCTTGAGTCTTCTACCGACAATGGCTTGACCTTTGAGGAGAACTTCACCCAGCTCATCATCTACGAGGTGACACAAGACAGGAGTCTCATCACGCTCTCAGAATGTCCCCGTACCTGGAATTTCTTTCGAGGTCAACCGCTCTTCTCGGAGTCTTTCCCGGATGATGTGGACACAACATCCGTGGCATTGACAGTACTACAACCCGATAGAGCGCTCGTTGATTCTATTCTAGACCAAATGCTTGAATATGTTGACGCCGACGGCATCATGCAGACATACTTCGACAGCTCGCGACCACGCATAGACCCTTTTGTTTGCGTCAATGTGCTTTCTCTGTTCTACGCAAACGGCCGGGGTCGGGAGCTCCCTCACACACTGGAGTGGGTCTATGAAGTACTCCTGCATCGCGCCTACCATGGAGGCTCACGTTACTACCTATCACCGGACTGCTTTTTATTCTTCATGAGCCGCTTGCTCAAGCGCGCCAACGACTCGGCCCTCCAGGCTCGGTTCCGCCCACTGTTCATGGAGAGAGTGAAAGAACGAGTAGGGGCAGCCGGAGACTCAATGGACCTGGCCTTCCGCATCCTCGCCGCGGCTACCATTGGCGTCCATTGCCCCCAAGATCTAGAAAGATTGGCCGCCGCGCAATGCGAGGACGGTGGATGGGACATGTGCTGGTTCTACGCGTTCGGGTCGACAGGTATCAAGGCGGGCAACCGCGGCCTCACCACGGCCCTTGCCGTCGCAGCTATACGAACCGCCCTCGGGCGCCCCCCCTCTCCCAGCCCCTCCAACATCTCGTCGTCGTCGAAGCTCGACGCTCCCAACAGCTTCTTGGGCATCCCGCGCCCAACCAGCCCCATTCGCTTTGGCGAACTTTTCCGTTCCTGGCGAAAGAACAAACCGACCGCAAAATCTCAATGAATCTCAGGTTCTCGTGCTCTCGTGCTATCTTCGTACTTATGCTACTCGACATTACCCGTCGCTGTCTACAATGATACGGGTACTTTGATGAAACTGTAGATGTATTTGTATCATATTGACCTCCATCCATAGTCACCTAGCTACTGTTCGTGTTATCACCTGTTGCTGTTATATGATACAAGATGCCCAAACGAGAATGTAGAAATGTTCCGTACACTTGTGTACCTGTGATGAAGCTACATAGGCCTTCAATCGATCACTTGGTCC
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配列番号5−LoTps1タンパク質
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ATGGTCCGCGCACTCATCCTCGATCTCGGCGATGTCCTCTTCAACTGGGACGCGCCTGCGTCCACCCCCATTTCACGCAAGACCCTCGGCCAGATGCTGCATAGTGAGATCTGGGGTGAGTATGAACGTGGCCATTTGACAGAAGACGAGGCATACAACGCACTCGCGAAGCGGTATTCCTGCGAGGCCAAGGATGTCGCACATACCTTTGTCCTGGCACGAGAATCGCTGCGGCTCGACACGAAATTCAAAACGTTTCTGCAGACTCTAAAGCAGAATGCCAACGGCTCCCTTCGTGTCTATGGCATGTCGAATATATCGAAACCGGATTTCGAAGTCCTGCTGGGCAAGGCCGATGACTGGACTCTGTTTGACAAGATCTTCCCCTCTGGCCATGTCGGTATGCGCAAGCCAGATCTTGCCTTCTTCCGCTATGTGCTCAAGGACATTTCAACGCCTGTCGAGGATGTGGTGTTTGTTGACGATAACCTGGACAACGTGACGAGTGCTCGGTCTCTGGGCATGCGCAGCGTCCTCTTTCATAAGAAAGACGAGGTCCAGCGACAGCTCACCAACATCTTTGGCAGCCCTGCTGAGCGGGGCTTGGAGTATCTCTCCGCCAACAAGACGAATCTGCAGAGTGCTACCACGACAGATATCCCAATCCAGGATAACTTTGGCCAACTTCTGATTCTCGAGGCCACTGAAGACCCATCGCTGGTCCGCATGGAGCCCGGTAAGCGAACCTGGAATTTCTTCATCGGTTCTCCATCCCTCACAACCGACACCTTCCCCGACGATCTCGACACCACATCCCTTGCCCTCTCCATCGTACCCACAAGCCCCGACGTCGTCAACTCGGTCATCGACGAGATTATCAGCCGTCGCGACAAGGACGGTATCGTCCCGACTTACTTCGACAACACCCGCCCCCGCGTGGACCCAATCGTCTGCGTAAACGTCCTCTCCATGTTCGCAAAGTACGGCCGCGAGCACGACCTCCCCGCAACAGTTGCGTGGGTCCGCGACGTCTTGTATCATCGAGCATACCTCGGCGGAACACGGTACTACGGGTCAGCTGAGGCCTTCCTCTTCTTCTTCACTCGCTTCGTTCGCAACCTCCGACCGGGAACTCTCAAGCAGGATCTACACGCATTGCTATCAGAGCGCGTGCGCGAGCGACTCAATACCCCCGTCGACGCACTCGCCCTGTCAATGCGCATCCAGGCCTGTCATGCGCTGGGCTTTGACGCCCCCGCAGACATTGCGACGCTCATCACAATGCAGGACGAGGACGGCGGGTGGCCGGCAGCCGTCATCTACAAGTACGGGGCCGGGGGGTTGGGGATCACGAACCGGGGTGTTTCGACTGCGTTTGCCGTAAAGGCGATTACAGGGTCGCCCGTGAAGACTGAAACCAACATAGGCGGCGATGGAGCTCGCGCTGTCTCGGCCATGTCCTCCTTGGAGGCGAGGAGGCTACAGCCGATCTCGTCGGTTGGGGACTGGGTGCGGTTTATCATTGCGTCGTTGCATGTCCATCTGGCTTGGCTTTGGAATGTTTTGCTTTTGAGCAAGGTTGTTTGA
ATGGTTCGTGCGTTGATTTTGGATTTGGGTGATGTGTTGTTTAATTGGGACGCCCCTGCAAGCACTCCGATCAGCCGTAAGACCCTGGGCCAGATGCTGCATTCCGAGATTTGGGGTGAGTATGAGCGTGGTCACCTGACCGAAGATGAAGCGTACAACGCGCTGGCAAAGCGCTACAGCTGCGAGGCAAAAGACGTGGCGCATACTTTTGTTTTGGCGCGTGAAAGCCTGCGCCTGGATACCAAGTTTAAGACTTTTCTGCAGACCCTGAAACAGAACGCGAACGGCTCGCTGCGTGTTTATGGTATGTCCAATATCAGCAAACCGGATTTTGAAGTGCTGCTGGGTAAAGCTGACGACTGGACCTTGTTCGACAAGATCTTCCCGAGCGGTCATGTCGGTATGCGCAAACCGGACCTGGCTTTCTTTCGTTACGTGCTGAAAGACATCAGCACCCCGGTTGAGGATGTTGTGTTTGTTGACGATAACCTGGATAATGTGACGTCTGCCCGTTCCCTGGGTATGCGTAGCGTCCTGTTCCACAAAAAAGACGAAGTCCAACGTCAGCTGACCAACATTTTCGGTAGCCCTGCTGAGCGCGGTCTGGAGTATCTGTCCGCGAACAAGACCAATCTGCAAAGCGCAACCACCACCGACATCCCTATCCAAGACAACTTTGGTCAATTACTGATTCTGGAAGCCACCGAAGATCCGAGCCTGGTACGCATGGAACCGGGCAAGCGTACCTGGAATTTCTTCATTGGCTCTCCGAGCCTGACGACGGATACCTTCCCGGATGACCTGGACACGACGAGCCTCGCACTGTCCATCGTGCCGACCAGCCCAGATGTTGTTAATAGCGTGATCGATGAGATCATCAGCCGTCGCGACAAGGACGGTATTGTGCCGACGTACTTTGATAACACGCGCCCGCGTGTGGACCCGATTGTTTGTGTTAACGTTCTGTCTATGTTCGCGAAATATGGCCGTGAGCACGATCTGCCGGCGACGGTCGCGTGGGTCCGCGACGTCCTCTATCATCGCGCATACCTGGGTGGCACCAGATACTACGGTAGCGCGGAAGCCTTCCTTTTCTTCTTTACGCGCTTTGTGCGTAATCTGCGTCCGGGCACGCTGAAACAAGATCTGCACGCGTTGCTGAGCGAGCGTGTCCGTGAGCGCCTGAATACCCCGGTGGATGCGCTGGCGCTGAGCATGCGCATTCAGGCTTGCCACGCACTGGGCTTTGACGCCCCAGCTGACATCGCGACGCTGATTACCATGCAAGATGAAGATGGTGGCTGGCCGGCGGCAGTTATCTACAAATATGGTGCGGGTGGCCTGGGCATTACGAACCGTGGTGTGTCCACGGCATTCGCGGTGAAGGCAATCACGGGTAGCCCGGTTAAAACCGAAACCAACATCGGCGGCGACGGTGCCCGTGCAGTGTCGGCCATGAGCAGCCTGGAAGCCCGTCGTTTGCAGCCGATTTCTAGCGTCGGCGACTGGGTCCGTTTCATCATCGCATCACTGCACGTCCACCTGGCGTGGCTGTGGAATGTCCTGCTGCTGAGCAAAGTCGTTTAA
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ATGTCCATGATACCCAGATGCTCGAATCTCATCCTCGACATCGGGGATGTTCTCTTCACATGGTCTCCGAAGACGTCCACTTCGATCTCCCCCCGCACCATGAAGAGCATACTGTCATCGACGACCTGGCACCAATACGAGACCGGGCACATTTCACAGGGCGACTGCTACCGCCTCATAGGCAACCAGTTCTCCATCGATCCTCAGGAAGTCGGACTTGCATTCCAACAAGCTCGGGACTCATTGCAGCCTAATGTTGACTTCATTCACTTCATCCGCGCCCTCAAGGCGGAATCACACGGGACGCTGCGCGTCTTCGCTATGTCCAACATCTCTCAGCCCGATTACGCAGTTCTTCGGACTAAGGACGCCGACTGGGCCGTTTTTGACGATATATTCACGTCTGCAGATGCTGGGGTTCGAAAGCCACACCTTGGGTTCTACAAGTTGGTACTCGGAAAGATCGGCGCCGATCCAAACGATACCGTCTTCGTCGATGACAAGGGGGACAATGTCCTCTCTGCACGGTCTCTCGGCCTTCATGGAATCGTCTTTGACAGTATGGACAACGTCAAGCGAGCCCTGCGCTACTTGATCAGCGACCCCATACGGCGAGGACGAGAGTTTCTCCAAGCGCGAGCCGGCCATTTGGAGTCGGAGACCAATACGGGCATCGAAATCGGTGATAATTTTGCCCAGCTCCTTATTCTCGAGGCCACGAAGGATAGGACACTCGTCAATTATATGGACCATCCGAACAAATGGAATTTCTTCCGAGATCAACCGCTCCTCACAACGGAGGAGTTCCCTTTCGATCTCGATACGACATCTATTGGAACGCTTGCGACGCAGCGCGATGATGGGACTGCCAATCTAGTAATGGATGAGATGCTTCAGTACCGTGATGAGGATGGCATAATACAAACATATTTCGATCATGAACGACCGAGGATAGATCCCATCGTCTGTGTCAACGTCTTGAGCCTTTTCTACTCCCGGGGTCGTGGTTCGGAGCTAGCACCGACACTAGAGTGGGTGCGTGGTGTCCTCAAGCACCGCGCGTATCTCGATGGAACGCGATACTACGAGACAGGCGAATGCTTCCTTTTCTTCCTCAGCCGGCTCTTGCAATCAACCAAGGACGCCGCCTTGCACGCATCGTTGAAATCTTTGTTCGCCGAACGGGTCAAGGAGCGCATAGGGGCACCAGGGGACGCGCTGGCGCTGGCGATGCGTATACTGGCATGCGCAGCAGTGGGCGTGCGGGACGAGATCGATCTTCGATCACTATTACCTCTGCAGTGCGAGGATGGGGGGTGGGAGGCAGGCTGGGTGTACAAGTATGGGTCTTCGGGAGTCAAGATCGGCAATCGTGGCCTCACGACTGCGCTTGCGCTCAATGCCATCGAGGCTGTGGAGGGACGTCGCACGAGGCCGAAGTCGGGTAAGATCAGCCGAGTCAGCCGTCATTCTGAGGTCGCAGCAGCGCCACGGTCTTCCACCAGCAGTCATCGTTCTAATCGCTCGATCTCAAGGACATTCCAGGCGTACTTCAAGGCGTCGTGGACATCGATGAAACAGGTGGCCGTGGCGTGA
ATGAGCATGATTCCACGTTGTAGCAATCTGATTCTCGACATCGGTGATGTGTTGTTTACGTGGAGCCCGAAAACCAGCACCAGCATTAGCCCGCGTACCATGAAATCTATCCTGAGCTCTACCACCTGGCATCAATATGAGACTGGCCACATCAGCCAGGGTGATTGCTACCGCCTGATCGGTAATCAGTTCTCCATCGACCCGCAAGAGGTCGGTTTGGCCTTCCAGCAAGCCAGAGACAGCCTGCAACCGAATGTTGATTTCATCCATTTCATTCGTGCCCTGAAAGCTGAGTCGCACGGCACCCTGCGCGTTTTTGCGATGAGCAATATCAGCCAACCTGACTATGCAGTCCTGCGTACGAAAGACGCGGACTGGGCTGTTTTTGATGATATCTTCACGAGCGCGGATGCTGGTGTTCGTAAACCGCACCTGGGTTTTTATAAACTGGTCTTAGGCAAGATTGGCGCGGACCCTAACGACACCGTTTTTGTGGATGATAAGGGTGACAACGTCCTCTCTGCACGTTCCCTGGGTCTGCACGGTATCGTTTTTGATTCAATGGACAACGTGAAGCGCGCACTGCGCTACCTGATTAGCGACCCGATCCGCCGCGGCCGTGAATTTCTGCAGGCCCGTGCGGGTCACCTGGAGTCCGAAACGAACACGGGTATTGAGATTGGTGATAATTTCGCGCAATTGCTGATCCTGGAAGCGACCAAAGATCGTACTCTGGTGAACTACATGGACCACCCGAACAAGTGGAACTTCTTCCGTGACCAGCCGCTGCTGACCACCGAAGAATTTCCGTTCGACCTGGACACGACCAGCATTGGCACGCTGGCCACCCAACGTGACGATGGTACGGCGAATCTGGTAATGGACGAAATGTTGCAGTATCGTGACGAAGATGGCATCATTCAGACCTATTTCGATCATGAGCGCCCGCGTATTGATCCGATTGTTTGTGTGAATGTGCTGTCTCTGTTCTACAGCCGTGGCCGTGGCTCTGAGTTGGCGCCGACGCTGGAATGGGTGCGCGGTGTGTTGAAACATCGTGCGTACCTGGATGGTACGCGTTATTACGAGACTGGTGAGTGTTTCCTGTTTTTCCTGAGCCGTCTGCTGCAGAGCACCAAAGACGCAGCCCTGCACGCGAGCCTGAAGTCCCTGTTTGCAGAGCGTGTTAAAGAGCGCATCGGTGCGCCGGGCGATGCTCTGGCGCTGGCTATGCGCATCCTGGCGTGCGCCGCTGTTGGTGTGCGCGATGAAATTGATTTGCGTAGCCTGCTGCCGCTGCAATGCGAAGATGGCGGCTGGGAAGCGGGCTGGGTCTACAAATACGGCAGCAGCGGTGTGAAGATTGGCAATCGCGGTCTTACCACGGCGCTGGCATTGAATGCTATCGAAGCCGTTGAGGGCCGTCGCACCCGCCCAAAGTCCGGTAAGATCAGCCGTGTTAGCCGTCATAGCGAAGTCGCAGCGGCACCGCGTTCCTCGACGAGCAGCCACCGTAGCAACCGTAGCATTAGCCGCACCTTCCAGGCATATTTTAAAGCGAGCTGGACCAGCATGAAACAAGTCGCAGTGGCGTAA
配列番号47−KLO09124.1タンパク質
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ATGTCGATTCACGGTTCTTCTATGTCCTCCTATTCCTCGACTGTGCCGTCAATGACTTCCTCTCCCGCGTCCACTTCTACTCCGTCGTCTCCTGCATCGTCGATCCATGAGATTGGTCCTGTCCCAGAAGCTCGACGAAAGGGACAGTGCAACGCGCTGATCTTCGACCTCGGAGACGTCCTCTTCACCTGGTCGGCAGAGACTAAGACCACCATTTCCCCGAAACTCCTGAAAAAGATCCTTAACTCCTTAACATGGTTCGAATACGAGAAGGGAAACATCGGGGAGCAGGAGGCGTATGACGCAGTCGCAAAGGAGTTTGGCGTCCCGTCGTCCGAGGTCGGGGCCGCTTTCCAGTGCGCGCGCGATTCGCTACAGAGCAATCCCCGCCTCGTCTCGCTCATCCGTGAGCTGAAGTCGCAATATGATCTCAAGGTGTACGCCATGTCCAACATCTCTGCGCCGGACTGGGAAGTCCTAAGGACGAAGGCGACCCCTGAGGAGTGGGCAATGTTTGACCGCGTCTTCACGAGCGCGGCCGCGCGCGAGCGTAAGCCAAACCTCGGATTCTACAGACAGGTTGTTGAGGCGACCGGCGTCGACCCCGCTCGCTCCGTGTTCGTCGACGATAAACTCGACAATGTCATCTCTGCGCGTTCAGTCGGATTAAATGCGATCATCTTCGACTCATTTGAGAACGTCGCCCGGCAGCTCAAAAACTATGTCGCTGATCCTATCGGACGGGCGGAGGCGTGGTTGCGCGATAACGCAAAGAAGATGTTGTCAATTACGGATGCCGGGGTGGTCGTATACGAGAATTTCGGCCAGATGCTGATCTTGGAGGCAACAGGCGATAGGTCGCTTGTGGACTACGTCGAGTACCCTCGTCTCTTCAACTTCTTCCAAGGCAATGGCGTCTTTACGACCGAGTCATTCCCTTGCGACCTTGATTCGACTTCCATCGGCTTAACCGTCACGAACCACGTCGATGAGAAAACAAGGCACAGCGTCATGGATGAGATGCTGACCTACAAAAATGAGGATGGTATCATTGCGACTTACTTTGATGCCACGCGTCCCCGAATTGACCCCGTCGTCTGCGCCAATGTCTTGACGTTCTTCTACAAGAACGGCCGAGGGGAGGAGCTCAATGAAACACTTGACTGGGTCTACGACATCCTCCTTCATCGCGCGTACCTCGATGGCACACGCTATTATTTCGGCTCAGACACCTTCCTCTTCTTCCTTTCTCGACTTCTCTCCGAATCGCCATCCGTTTACGCCCGTTTCGCTCCGGTGTTCCAGGAGAGAGTCAAGGAGCGCATGGGGGCGACGGGAGATGCGATGTCCCTTGCGATGCGCATCATCGCGGCCGCAACTGTCAAGATCCAAGACCGAGTCGACTGCGACGCTCTGCTGCAGACGCAGGAAGACGACGGTGGATTCCCGATAGGTTGGATGTACAAGTACGGGGCGACCGGGATGCTTCTGGGTAACAAGGGCTTGTCGACAGCTCTGGCAATCCAAGCTATCAAAGCGGTCGAATCTTTCCCTTGA
GGATCCAAGCTTAAGGAGGTAAAAAATGTCGATTCACGGTAGCAGCATGTCGTCTTATAGCAGCACGGTTCCATCTATGACTAGCAGCCCGGCTTCCACGAGCACGCCGTCCAGCCCGGCCAGCAGCATCCACGAAATCGGCCCGGTCCCTGAGGCGCGTCGCAAGGGCCAATGCAATGCACTGATCTTCGACCTGGGTGATGTTCTGTTTACCTGGAGCGCAGAAACCAAGACCACGATCAGCCCGAAGCTGCTGAAAAAGATTCTGAACAGCTTGACCTGGTTTGAGTATGAGAAAGGCAACATCGGTGAACAAGAAGCCTATGACGCCGTTGCGAAAGAGTTCGGTGTGCCGAGCTCTGAGGTTGGCGCTGCGTTTCAATGTGCGCGTGACTCCCTGCAAAGCAATCCGCGTTTGGTTAGCCTGATTCGTGAGCTGAAGTCCCAGTACGACCTGAAAGTGTACGCTATGAGCAATATTAGCGCGCCAGACTGGGAAGTGCTGCGTACTAAAGCGACCCCGGAAGAGTGGGCAATGTTCGATCGTGTCTTTACTTCTGCGGCGGCGCGTGAGCGTAAGCCGAACTTGGGCTTTTACCGCCAAGTCGTGGAAGCAACCGGTGTCGATCCGGCGCGTAGCGTTTTCGTCGATGATAAACTGGACAATGTGATCAGCGCGCGCTCTGTCGGTCTGAACGCTATTATCTTCGACTCCTTCGAAAACGTCGCCCGTCAGCTGAAGAATTACGTCGCAGACCCGATTGGTCGCGCTGAGGCGTGGCTGCGCGACAACGCAAAGAAAATGCTGAGCATCACCGATGCGGGTGTTGTGGTTTACGAGAATTTTGGCCAGATGCTGATCCTGGAAGCTACCGGTGACCGTAGCCTGGTGGACTATGTGGAGTATCCGCGCCTCTTTAACTTCTTCCAGGGTAACGGCGTTTTTACGACCGAGAGCTTTCCATGCGATCTGGACAGCACCAGCATCGGTCTGACTGTGACCAATCATGTGGACGAAAAGACTCGCCACAGCGTCATGGACGAAATGCTGACCTACAAAAATGAAGATGGTATTATTGCGACGTACTTTGACGCGACGCGCCCGCGCATTGACCCTGTTGTCTGTGCCAATGTTCTGACCTTCTTCTACAAAAACGGTCGTGGTGAAGAATTGAACGAAACCCTGGATTGGGTGTACGACATTCTGCTGCATCGCGCGTATCTGGACGGTACGCGTTATTATTTCGGCTCCGATACGTTCCTGTTTTTCCTGAGCCGTCTGCTGAGCGAGTCTCCGAGCGTTTACGCGCGTTTTGCCCCGGTGTTTCAAGAGCGCGTGAAAGAGCGTATGGGCGCGACCGGTGATGCGATGAGCCTGGCCATGCGTATCATTGCAGCAGCAACCGTAAAGATCCAGGATCGTGTGGATTGCGACGCACTGTTGCAGACCCAAGAAGATGATGGCGGTTTCCCGATTGGTTGGATGTACAAATATGGTGCGACCGGTATGTTGCTGGGCAACAAAGGCCTGAGCACGGCCCTGGCGATCCAGGCAATTAAAGCCGTCGAGTCGTTCCCGTAAGGTACCATATATGAATTCATTAATCTCGAG
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ATGGGTTCCACCAAGGCTCTTGTTGTTGACTTTGGGAATGTTTTGTGTACCTGGACACCACCCAGGGAGTTATCCATCCCGCCCAAGAAGCTGAAACAAATCATGTCTTCTGACATTTGGCTCGACTATGAACGGGGTATCTATAAGTCGGAGGACGAGTGCTACTTGGCGGTTGCAACTCGCTTCGGCGTCTCTCCCAGCGACCTCTCCTCGGTGATGAAAAAGGCCCGCGAGAGCCTGCAACCAAACACCGCAACCCTGAATCATCTGTCTCATCTCAAAAAGACCCAGCCTGGCCTCAGGATATACGGTTTGACCAACACCCCTCTCCCAGAACAAAGCAGTGTACGATCCATCGCCCAGGAATGGCCTATCTTCGACCATATCTACATATCAGGCATCCTCGGAATGCGCAAGCCGGACATTGGCTGCTACAGGCTGGTGCTGCGAAAGATTGGGCTTCCAGCGGAGTCCGTGGTCTTCATTGATGATTCACCCGAGAACATCCTGGCCGCGCAGTCACTGGGAGTACACAGCATACTGTTCCAAAGCCACGACCAGCTCTCTCGTCAGCTTGGCAATGTGCTGGGTGATCCAATCCAGCGGGGCCATAACTTCCTACTCTCGAACGCAAAGCAAATGAATAGTACGACCGACAAGGGAGTTATTATCCGGGACAACTTTGCGCAACTGCTGATCATCGAGCTGACGCAGAACCCAGACCTTGTGGCGTTAGAAACATGGGACCGTACCTGGAATTTTTTTATTGGACCTCCACAATTGACAACTGAAAGCTTTCCCAATGATCTTGACACTACCTCCATCGCTCTCTCGGTTCTTCCGGTTGACAAAGAAGTGGTATGGTCTGTGATGGACGAGATGCTAACGTTTACCAATGCGGATGGGATTTTTATGACCTATTTCGACCGATCACGCCCTCGAGTTGATCCGGTAGTTTGCACCAATGTCCTGAATCTTTTCTGCATGCATGGACGGGAAAGCGAAGTTGCAGCCACATTTGACTGGGTGCTGGACGTTCTTCGAAATTCGGCCTATTTATCAGGATCCAGATACTATTCTTCGCCTGATTGCTTTCTATACTTTCTTTCACGGCTGAGCTGTGTGGTCCGAGACGGCACGCGACGCAGGGAGCTCAAGTCACTGTTGAAACAACAAGTGAGCCAGCGTATTGGCGCTGATGGTGATTCCGTCTCTCTCGCCACTAGGCTACTTGCATCGAACATTTTAGGAATCACAAATGGCCGTGATCGCTCCAGGCTTCTTGCTCTGCAGGAAACTGACGGTGGATGGCCTGCTGGGTGGGTTTATAAATTCGGAAGCTCGGGGGTACAGATTGGCAATCGGGGGCTCAGTACAGCCTTGGCGTTAAAATCAATTGAGCGTCAGAAGGGGCCTGTTGAGGCGATATCCAGTGAGCCAGAAGCGTGGTGGCCATCCCTCAGGCTTGACCGACTTCTCAACGTTTGGCCTTTCATCGACTGGAAGGGATATTCGCCGAGTTGA
ATGGGTTCTACGAAAGCGTTGGTTGTTGATTTTGGTAATGTTCTGTGCACTTGGACGCCACCACGTGAATTGTCCATCCCGCCGAAGAAACTGAAGCAAATCATGAGCAGCGACATTTGGCTGGACTATGAGCGTGGTATCTACAAATCGGAAGATGAGTGCTACCTGGCAGTTGCGACGCGCTTTGGTGTCAGCCCGTCCGACCTGAGCTCCGTTATGAAAAAAGCCCGTGAGAGCCTGCAGCCGAATACCGCAACGCTGAACCACTTGAGCCATCTGAAGAAAACCCAGCCTGGCCTTCGTATCTACGGCCTGACGAACACCCCGTTGCCGGAACAGAGCTCAGTCCGTAGCATTGCGCAGGAATGGCCGATTTTTGACCACATCTACATTAGCGGCATCTTGGGTATGCGCAAACCGGATATTGGTTGTTACCGTCTGGTTCTGCGTAAGATCGGTCTGCCAGCGGAGTCCGTCGTATTCATCGACGACAGCCCGGAGAACATTCTGGCAGCTCAATCGTTGGGTGTCCATAGCATCCTGTTCCAGTCCCACGATCAGCTGAGCCGTCAGCTGGGCAATGTGCTGGGTGATCCGATTCAGCGCGGTCACAACTTCCTCCTGTCCAACGCGAAGCAAATGAACAGCACCACCGATAAGGGTGTGATTATCCGCGACAACTTCGCCCAGCTGCTGATTATTGAGCTGACCCAAAATCCGGATCTGGTTGCGCTGGAGACTTGGGACCGTACGTGGAATTTCTTTATTGGTCCGCCGCAACTGACCACCGAGAGCTTTCCGAACGACCTGGACACCACGAGCATTGCCCTGAGCGTGTTGCCGGTGGATAAAGAAGTCGTTTGGTCTGTGATGGATGAGATGCTGACCTTCACCAACGCAGACGGCATCTTCATGACCTATTTCGATCGTAGCCGTCCGCGTGTTGACCCGGTCGTTTGTACCAATGTCCTGAATCTGTTTTGCATGCATGGTCGCGAGAGCGAAGTGGCCGCGACGTTCGACTGGGTGCTGGACGTGCTGCGCAACAGCGCGTACCTGAGCGGTTCCCGTTATTACAGCAGCCCGGATTGTTTTCTGTATTTCCTGTCTCGTCTGAGCTGCGTCGTCCGTGATGGCACGCGTCGTCGTGAACTGAAAAGCCTGCTGAAGCAACAAGTTTCTCAACGTATCGGCGCTGACGGTGATTCCGTCAGCCTGGCCACCCGTTTGCTGGCGAGCAACATCCTGGGCATTACTAACGGTCGTGACCGCAGCCGTCTGCTGGCATTGCAAGAAACCGATGGTGGCTGGCCTGCAGGCTGGGTCTATAAGTTTGGTAGCAGCGGCGTGCAAATTGGCAATCGCGGTCTGAGCACCGCGCTGGCTCTGAAGTCTATCGAGCGCCAGAAAGGTCCGGTGGAAGCAATCAGCAGCGAGCCGGAAGCGTGGTGGCCTAGCTTACGCTTGGACCGCTTGCTGAATGTTTGGCCATTTATCGACTGGAAGGGCTACTCCCCGAGCTAA
配列番号53
DDxx(D/E)、ここで、位置3のxはK、N、R、SまたはQであり、位置4のxはL、I、G、PまたはTである
配列番号54
DD(K/Q/R)(L/I/T)(D/E)NV
配列番号55
DD(N/K/S/Q)(L/G/P)(D/E)N(V/I)
配列番号56
DxD(T/S)T、ここで、位置2のxは、V、M、FまたはLである
配列番号57
D(V/M/L/F)DTTS
配列番号58
D(V/M/L)D(T/S)TS
配列番号59
SxxWxxYExG、ここで、xは、任意のアミノ酸である
配列番号60
NFxQx(I/L)IxE、ここで、xは、任意のアミノ酸である
配列番号61
(D/E)(G/E)Ixx(T/V)YFDxxRxRxDPxVxxNVL
配列番号62
QxxDGx(W/F)
配列番号63−XP_006461126.1タンパク質
MAPPQRPFTAIVFDIGDVLFQWSATTKTSISPKTLRSILNCPTWFDYERGRLAENACYAAISQEFNVNPDEVRDAFSQARDSLQANHDFISLIRELKAQANGRLRVYAMSNISLPDWEVLRMKPADWDIFDHVFTSGAVGERKPNLAFYRHVIAATDLQPHQTIFVDDKLENVLSARSLGFTGIVFDEPSEVKRALRNLIGDPVQRGGEFLVRNAGKLGSITRTTAKHESIPLDENFAQLLILEITGNRALVNLVEHPQTWNFFQGKGQLTTEEFPFDLDTTSLGLTILKRSREIADSVMDEMLEYVDPDGIIQTYFDHRRPRFDPVVCVNALSLFYAYGRGEQLRSTLTWVHEVLLNRAYLDGTRYYETAECFLYFMSRLLATSGDPDLHSLLKPLLKERVQERIGADGDSLALAMRILACDFVGIRDEVDLRTLLTLQCEDGGWEVGWMYKYGSSGISIGNRGLATALAIKAVDTMFQPQIRFSESPTDTLVENAIHKRRPSFSEKFLGKRPRSGSFRKPLQWILQGSKLRKSVEIGS
ATGGCTCCGCCTCAGCGACCCTTTACTGCGATTGTCTTTGACATCGGGGATGTTCTATTCCAATGGTCTGCAACCACCAAAACCTCTATCTCACCAAAGACACTCCGCTCTATTCTCAACTGTCCGACATGGTTTGACTATGAACGTGGACGCCTGGCAGAAAACGCTTGTTATGCCGCTATCTCACAAGAATTCAACGTCAACCCAGACGAAGTTCGCGACGCTTTCAGCCAAGCGCGCGACTCTCTCCAAGCAAACCACGACTTCATCAGTCTCATCCGTGAGCTGAAGGCACAAGCAAATGGTCGTTTACGTGTGTACGCCATGTCGAACATATCTCTTCCTGATTGGGAAGTGCTGCGGATGAAACCTGCTGATTGGGATATTTTCGACCACGTCTTCACATCCGGTGCGGTTGGGGAACGCAAGCCCAATCTCGCCTTTTATCGCCATGTTATCGCGGCCACCGATCTGCAGCCTCATCAGACAATATTTGTTGACGATAAGCTGGAGAATGTTCTCTCAGCACGTTCCCTCGGGTTCACAGGCATCGTGTTTGACGAGCCCTCCGAGGTCAAACGTGCGCTTCGTAACCTCATTGGGGATCCTGTTCAACGAGGAGGTGAATTCTTGGTTCGGAATGCCGGAAAGCTTGGCTCTATCACAAGGACTACTGCAAAGCACGAGTCAATCCCCCTCGACGAGAATTTTGCTCAGCTTCTTATTCTCGAGATAACGGGGAACAGGTGCGTTAGCTTCTTGTAGGGTCTTCTGTCGTAATACTAAATTTTTTCTGGTGTTTAGGGCTTTGGTCAACCTCGTTGAGCATCCTCAAACGTGGAATTTCTTCCAAGGTGCGCTGCTAAAATAAACATCCAGTTGCGTTTCGAAGCTCATTGTGGGCGTCCCGTCACAGGCAAGGGCCAGCTGACAACAGAAGAATTTCCATTCGATCTCGATACAACTTCTCTTGGTCTCACGATCCTCAAGCGAAGCAGGGAAATCGCCGATTCAGTCATGGATGAAATGCTGGAGTATGTCGATCCTGATGGTATCATTCAGGCAAGTTTCATTTATCGGCTTGAGAAAATAAAGACAAAAACGTTCTGATGGGGGGATGTTTCTAGACGTATTTCGATCATCGGAGACCACGTTTTGATCCAGTCGTGTGTGTCAATGCATTAAGCCTCTTCTATGCTTACGGCCGCGGGGAGCAACTGCGGTCGACTTTGACATGGGTACATGAAGTCCTTCTCAATCGAGCCTACTTGGATGGCACACGGTACTACGAAACAGCCGAATGCTTCCTCTATTTCATGAGCCGACTTCTCGCCACTTCAGGCGACCCTGACCTTCACTCCCTTCTTAAACCTCTTCTCAAAGAACGGGTGCAAGAACGCATTGGAGCTGATGGAGACTCTCTTGCACTCGCAATGCGTATTCTCGCCTGTGATTTCGTCGGAATCAGAGATGAAGTGGATTTACGCACACTTCTGACTTTGCAATGTGAAGATGGAGGTTGGGAAGTGGGTTGGATGTACAAGTATGGATCTTCCGGTATCAGTATCGGAAATCGTGGACTGGCCACCGCGCTCGCTATCAAGGCCGTCGACACGATGTTTCAACCCCAAATTCGGTTCTCTGAATCACCCACAGATACTTTGGTTGAAAACGCTATCCACAAACGCCGTCCCTCATTTTCCGAAAAATTCCTCGGCAAACGTCCTCGCAGCGGATCGTTCAGGAAACCTTTACAGTGGATACTGCAAGGTTCCAAGCTTCGCAAATCTGTCGAAATAGGAAGCTAA
ATGGCACCACCGCAACGTCCGTTCACTGCAATTGTTTTCGATATTGGCGATGTTTTGTTCCAATGGTCTGCGACCACGAAAACCAGCATTAGCCCGAAAACCCTGCGCAGCATTCTGAATTGTCCGACCTGGTTTGATTATGAGCGCGGCCGTCTGGCGGAAAATGCGTGTTACGCTGCGATCAGCCAAGAATTTAACGTCAACCCGGACGAAGTTCGCGACGCCTTCAGCCAAGCGCGCGACAGCCTGCAGGCGAATCACGACTTCATCAGCCTGATTCGTGAGCTGAAAGCTCAGGCGAACGGTCGTCTGCGTGTCTACGCCATGTCTAATATCAGCCTGCCGGATTGGGAAGTCCTGCGTATGAAGCCAGCCGATTGGGACATCTTTGACCATGTATTTACCAGCGGTGCGGTGGGTGAGCGCAAGCCGAACCTGGCCTTTTATCGTCACGTCATCGCGGCCACGGATCTGCAGCCGCACCAGACGATCTTCGTGGATGACAAACTGGAAAACGTGCTGTCTGCGCGCTCGCTGGGCTTCACGGGTATCGTGTTCGACGAGCCAAGCGAAGTCAAACGTGCGCTGCGTAATCTGATCGGCGACCCGGTGCAGCGTGGTGGCGAGTTCCTGGTTCGTAATGCTGGCAAACTGGGTTCTATCACCCGTACGACCGCAAAACATGAGAGCATCCCGCTGGATGAGAATTTTGCACAACTGTTGATTCTGGAAATTACTGGTAACCGCGCACTGGTCAATCTGGTTGAGCACCCGCAGACGTGGAACTTCTTCCAGGGTAAGGGCCAGCTGACGACCGAAGAATTTCCTTTTGACCTGGATACGACGAGCCTGGGTCTGACGATCCTGAAGCGTAGCCGCGAGATTGCCGACTCCGTCATGGACGAAATGTTGGAATACGTGGACCCTGACGGCATCATTCAGACCTACTTCGATCATCGTCGCCCGCGCTTTGACCCGGTTGTTTGCGTTAATGCCCTGAGCCTGTTCTATGCATACGGCCGTGGTGAGCAACTGCGTTCCACCTTGACCTGGGTGCACGAAGTTCTGTTGAACCGTGCGTATTTGGATGGTACGCGTTACTATGAAACGGCCGAGTGCTTTCTGTATTTCATGTCCCGTCTGCTGGCAACCAGCGGTGACCCGGATCTGCATTCCCTGCTGAAGCCGTTGCTGAAGGAACGCGTGCAAGAGCGCATCGGCGCTGACGGTGACAGCCTGGCGCTGGCGATGCGCATTTTGGCATGTGATTTTGTTGGCATCCGTGATGAAGTGGATCTGCGTACCCTGCTGACCTTACAGTGCGAGGATGGCGGTTGGGAAGTGGGCTGGATGTACAAATACGGTAGCAGCGGTATTAGCATTGGTAACCGTGGTCTGGCAACCGCATTGGCGATCAAAGCTGTTGACACCATGTTTCAACCGCAAATCCGTTTCAGCGAGAGCCCGACCGACACTCTGGTGGAGAACGCGATTCACAAGCGCCGCCCGAGCTTTTCAGAGAAATTTTTAGGTAAGCGTCCGCGTTCCGGTTCGTTCCGTAAACCGCTGCAATGGATTCTGCAGGGCAGCAAGCTGCGCAAGAGCGTCGAGATCGGTAGCTAA
配列番号66−XP_007369631.1サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたcDNA
ATGGCTTCTATCCACAGAAGATACACTACTTTGATCTTGGACTTGGGTGACGTTTTGTTCAGATGGTCTCCAAAGACTGAAACTGCTATCCCACCACAACAATTGAAGGACATCTTGTCTTCTGTTACTTGGTTCGAATACGAAAGAGGTAGATTGTCTCAAGAAGCTTGTTACGAAAGATGTGCTGAAGAATTCAAGATCGAAGCTTCTGTTATCGCTGAAGCTTTCAAGCAAGCTAGAGGTTCTTTGAGACCAAACGAAGAATTCATCGCTTTGATCAGAGACTTGAGAAGAGAAATGCACGGTGACTTGACTGTTTTGGCTTTGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTACGAATACATCATGTCTTTGTCTTCTGACTGGACTACTGTTTTCGACAGAGTTTTCCCATCTGCTTTGGTTGGTGAAAGAAAGCCACACTTGGGTTGTTACAGAAAGGTTATCTCTGAAATGAACTTGGAACCACAAACTACTGTTTTCGTTGACGACAAGTTGGACAACGTTGCTTCTGCTAGATCTTTGGGTATGCACGGTATCGTTTTCGACAACCAAGCTAACGTTTTCAGACAATTGAGAAACATCTTCGGTGACCCAATCAGAAGAGGTCAAGAATACTTGAGAGGTCACGCTGGTAAGTTGGAATCTTCTACTGACAACGGTTTGATCTTCGAAGAAAACTTCACTCAATTGATCATCTACGAATTGACTCAAGACAGAACTTTGATCTCTTTGTCTGAATGTCCAAGAACTTGGAACTTCTTCAGAGGTGAACCATTGTTCTCTGAAACTTTCCCAGACGACGTTGACACTACTTCTGTTGCTTTGACTGTTTTGCAACCAGACAGAGCTTTGGTTAACTCTGTTTTGGACGAAATGTTGGAATACGTTGACGCTGACGGTATCATGCAAACTTACTTCGACAGATCTAGACCAAGAATGGACCCATTCGTTTGTGTTAACGTTTTGTCTTTGTTCTACGAAAACGGTAGAGGTCACGAATTGCCAAGAACTTTGGACTGGGTTTACGAAGTTTTGTTGCACAGAGCTTACCACGGTGGTTCTAGATACTACTTGTCTCCAGACTGTTTCTTGTTCTTCATGTCTAGATTGTTGAAGAGAGCTGACGACCCAGCTGTTCAAGCTAGATTGAGACCATTGTTCGTTGAAAGAGTTAACGAAAGAGTTGGTGCTGCTGGTGACTCTATGGACTTGGCTTTCAGAATCTTGGCTGCTGCTTCTGTTGGTGTTCAATGTCCAAGAGACTTGGAAAGATTGACTGCTGGTCAATGTGACGACGGTGGTTGGGACTTGTGTTGGTTCTACGTTTTCGGTTCTACTGGTGTTAAGGCTGGTAACAGAGGTTTGACTACTGCTTTGGCTGTTACTGCTATCCAAACTGCTATCGGTAGACCACCATCTCCATCTCCATCTGCTGCTTCTTCTTCTTTCAGACCATCTTCTCCATACAAGTTCTTGGGTATCTCTAGACCAGCTTCTCCAATCAGATTCGGTGACTTGTTGAGACCATGGAGAAAGATGTCTAGATCTAACTTGAAGTCTCAATAA
配列番号67−XP_006461126サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたcDNA
ATGGCTCCACCACAAAGACCATTCACTGCTATCGTTTTCGACATCGGTGACGTTTTGTTCCAATGGTCTGCTACTACTAAGACTTCTATCTCTCCAAAGACTTTGAGATCTATCTTGAACTGTCCAACTTGGTTCGACTACGAAAGAGGTAGATTGGCTGAAAACGCTTGTTACGCTGCTATCTCTCAAGAATTCAACGTTAACCCAGACGAAGTTAGAGACGCTTTCTCTCAAGCTAGAGACTCTTTGCAAGCTAACCACGACTTCATCTCTTTGATCAGAGAATTGAAGGCTCAAGCTAACGGTAGATTGAGAGTTTACGCTATGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTGGGAAGTTTTGAGAATGAAGCCAGCTGACTGGGACATCTTCGACCACGTTTTCACTTCTGGTGCTGTTGGTGAAAGAAAGCCAAACTTGGCTTTCTACAGACACGTTATCGCTGCTACTGACTTGCAACCACACCAAACTATCTTCGTTGACGACAAGTTGGAAAACGTTTTGTCTGCTAGATCTTTGGGTTTCACTGGTATCGTTTTCGACGAACCATCTGAAGTTAAGAGAGCTTTGAGAAACTTGATCGGTGACCCAGTTCAAAGAGGTGGTGAATTCTTGGTTAGAAACGCTGGTAAGTTGGGTTCTATCACTAGAACTACTGCTAAGCACGAATCTATCCCATTGGACGAAAACTTCGCTCAATTGTTGATCTTGGAAATCACTGGTAACAGAGCTTTGGTTAACTTGGTTGAACACCCACAAACTTGGAACTTCTTCCAAGGTAAGGGTCAATTGACTACTGAAGAATTCCCATTCGACTTGGACACTACTTCTTTGGGTTTGACTATCTTGAAGAGATCTAGAGAAATCGCTGACTCTGTTATGGACGAAATGTTGGAATACGTTGACCCAGACGGTATCATCCAAACTTACTTCGACCACAGAAGACCAAGATTCGACCCAGTTGTTTGTGTTAACGCTTTGTCTTTGTTCTACGCTTACGGTAGAGGTGAACAATTGAGATCTACTTTGACTTGGGTTCACGAAGTTTTGTTGCACAGAGCTTACTTGGACGGTACTAGATACTACGAAACTGCTGAATGTTTCTTGTACTTCATGTCTAGATTGTTGGCTACTTCTGGTGACCCAGACTTGCACTCTTTGTTGAAGCCATTGTTGAAGGAAAGAGTTCAAGAAAGAATCGGTGCTGACGGTGACTCTTTGGCTTTGGCTATGAGAATCTTGGCTTGTGACTTCGTTGGTATCAGAGACGAAGTTGACTTGAGAACTTTGTTGACTTTGCAATGTGAAGACGGTGGTTGGGAAGTTGGTTGGATGTACAAGTACGGTTCTTCTGGTATCTCTATCGGTAACAGAGGTTTGGCTACTGCTTTGGCTATCAAGGCTGTTGACACTATGTTCCAACCACAAATCAGATTCTCTGAATCTCCAACTGACACTTTGGTTGAAAACGCTATCCACAAGAGAAGACCATCTTTCTCTGAAAAGTTCTTGGGTAAGAGACCAAGATCTGGTTCTTTCAGAAAGCCATTGCAATGGATCTTGCAAGGTTCTAAGTTGAGAAAGTCTGTTGAAATCGGTTCTTAA
配列番号68−LoTps1サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたcDNA
ATGTACACTGCTTTGATCTTGGACTTGGGTGACGTTTTGTTCTCTTGGTCTTCTACTACTAACACTACTATCCCACCAAGACAATTGAAGGAAATCTTGTCTTCTCCAGCTTGGTTCGAATACGAAAGAGGTAGAATCACTCAAGCTGAATGTTACGAAAGAGTTTCTGCTGAATTCTCTTTGGACGCTACTGCTGTTGCTGAAGCTTTCAGACAAGCTAGAGACTCTTTGAGACCAAACGACAAGTTCTTGACTTTGATCAGAGAATTGAGACAACAATCTCACGGTGAATTGACTGTTTTGGCTTTGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTACGAATTCATCATGGCTTTGGACTCTAAGTGGACTTCTGTTTTCGACAGAGTTTTCCCATCTGCTTTGGTTGGTGAAAGAAAGCCACACTTGGGTGCTTTCAGACAAGTTTTGTCTGAAATGAACTTGGACCCACACACTACTGTTTTCGTTGACGACAAGTTGGACAACGTTGTTTCTGCTAGATCTTTGGGTATGCACGGTGTTGTTTTCGACTCTCAAGACAACGTTTTCAGAATGTTGAGAAACATCTTCGGTGACCCAATCCACAGAGGTAGAGACTACTTGAGACAACACGCTGGTAGATTGGAAACTTCTACTGACGCTGGTGTTGTTTTCGAAGAAAACTTCACTCAATTGATCATCTACGAATTGACTAACGACAAGTCTTTGATCACTACTTCTAACTGTGCTAGAACTTGGAACTTCTTCAGAGGTAAGCCATTGTTCTCTGCTTCTTTCCCAGACGACATGGACACTACTTCTGTTGCTTTGACTGTTTTGAGATTGGACCACGCTTTGGTTAACTCTGTTTTGGACGAAATGTTGAAGTACGTTGACGCTGACGGTATCATGCAAACTTACTTCGACCACACTAGACCAAGAATGGACCCATTCGTTTGTGTTAACGTTTTGTCTTTGTTCCACGAACAAGGTAGAGGTCACGAATTGCCAAACACTTTGGAATGGGTTCACGAAGTTTTGTTGCACAGAGCTTACATCGGTGGTTCTAGATACTACTTGTCTGCTGACTGTTTCTTGTTCTTCATGTCTAGATTGTTGCAAAGAATCACTGACCCATCTGTTTTGGGTAGATTCAGACCATTGTTCATCGAAAGAGTTAGAGAAAGAGTTGGTGCTACTGGTGACTCTATCGACTTGGCTTTCAGAATCATCGCTGCTTCTACTGTTGGTATCCAATGTCCAAGAGACTTGGAATCTTTGTTGGCTGCTCAATGTGAAGACGGTGGTTGGGACTTGTGTTGGTTCTACCAATACGGTTCTACTGGTGTTAAGGCTGGTAACAGAGGTTTGACTACTGCTTTGGCTATCAAGGCTATCGACTCTGCTATCGCTAGACCACCATCTCCAGCTTTGTCTGTTGCTTCTTCTTCTAAGTCTGAAATCCCAAAGCCAATCCAAAGATCTTTGAGACCATTGTCTCCAAGAAGATTCGGTGGTTTCTTGATGCCATGGAGAAGATCTCAAAGAAACGGTGTTGCTGTTTCTTCTTAA
配列番号69−EMD37666.1サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたcDNA
ATGTCTGCTGCTGCTCAATACACTACTTTGATCTTGGACTTGGGTGACGTTTTGTTCACTTGGTCTCCAAAGACTAAGACTTCTATCCCACCAAGAACTTTGAAGGAAATCTTGAACTCTGCTACTTGGTACGAATACGAAAGAGGTAGAATCTCTCAAGACGAATGTTACGAAAGAGTTGGTACTGAATTCGGTATCGCTCCATCTGAAATCGACAACGCTTTCAAGCAAGCTAGAGACTCTATGGAATCTAACGACGAATTGATCGCTTTGGTTAGAGAATTGAAGACTCAATTGGACGGTGAATTGTTGGTTTTCGCTTTGTCTAACATCTCTTTGCCAGACTACGAATACGTTTTGACTAAGCCAGCTGACTGGTCTATCTTCGACAAGGTTTTCCCATCTGCTTTGGTTGGTGAAAGAAAGCCACACTTGGGTGTTTACAAGCACGTTATCGCTGAAACTGGTATCGACCCAAGAACTACTGTTTTCGTTGACGACAAGATCGACAACGTTTTGTCTGCTAGATCTGTTGGTATGCACGGTATCGTTTTCGAAAAGCAAGAAGACGTTATGAGAGCTTTGAGAAACATCTTCGGTGACCCAGTTAGAAGAGGTAGAGAATACTTGAGAAGAAACGCTATGAGATTGGAATCTGTTACTGACCACGGTGTTGCTTTCGGTGAAAACTTCACTCAATTGTTGATCTTGGAATTGACTAACGACCCATCTTTGGTTACTTTGCCAGACAGACCAAGAACTTGGAACTTCTTCAGAGGTAACGGTGGTAGACCATCTAAGCCATTGTTCTCTGAAGCTTTCCCAGACGACTTGGACACTACTTCTTTGGCTTTGACTGTTTTGCAAAGAGACCCAGGTGTTATCTCTTCTGTTATGGACGAAATGTTGAACTACAGAGACCCAGACGGTATCATGCAAACTTACTTCGACGACGGTAGACAAAGATTGGACCCATTCGTTAACGTTAACGTTTTGACTTTCTTCTACACTAACGGTAGAGGTCACGAATTGGACCAATGTTTGACTTGGGTTAGAGAAGTTTTGTTGTACAGAGCTTACTTGGGTGGTTCTAGATACTACCCATCTGCTGACTGTTTCTTGTACTTCATCTCTAGATTGTTCGCTTGTACTAACGACCCAGTTTTGCACCACCAATTGAAGCCATTGTTCGTTGAAAGAGTTCAAGAACAAATCGGTGTTGAAGGTGACGCTTTGGAATTGGCTTTCAGATTGTTGGTTTGTGCTTCTTTGGACGTTCAAAACGCTATCGACATGAGAAGATTGTTGGAAATGCAATGTGAAGACGGTGGTTGGGAAGGTGGTAACTTGTACAGATTCGGTACTACTGGTTTGAAGGTTACTAACAGAGGTTTGACTACTGCTGCTGCTGTTCAAGCTATCGAAGCTTCTCAAAGAAGACCACCATCTCCATCTCCATCTGTTGAATCTACTAAGTCTCCAATCACTCCAGTTACTCCAATGTTGGAAGTTCCATCTTTGGGTTTGTCTATCTCTAGACCATCTTCTCCATTGTTGGGTTACTTCAGATTGCCATGGAAGAAGTCTGCTGAAGTTCACTAA
配列番号70−XP_001217376.1サッカロミセス・セレビシエの発現のために最適化されたcDNA
ATGGCTATCACTAAGGGTCCAGTTAAGGCTTTGATCTTGGACTTCTCTAACGTTTTGTGTTCTTGGAAGCCACCATCTAACGTTGCTGTTCCACCACAAATCTTGAAGATGATCATGTCTTCTGACATCTGGCACGACTACGAATGTGGTAGATACTCTAGAGAAGACTGTTACGCTAGAGTTGCTGACAGATTCCACATCTCTGCTGCTGACATGGAAGACACTTTGAAGCAAGCTAGAAAGTCTTTGCAAGTTCACCACGAAACTTTGTTGTTCATCCAACAAGTTAAGAAGGACGCTGGTGGTGAATTGATGGTTTGTGGTATGACTAACACTCCAAGACCAGAACAAGACGTTATGCACTCTATCAACGCTGAATACCCAGTTTTCGACAGAATCTACATCTCTGGTTTGATGGGTATGAGAAAGCCATCTATCTGTTTCTACCAAAGAGTTATGGAAGAAATCGGTTTGTCTGGTGACGCTATCATGTTCATCGACGACAAGTTGGAAAACGTTATCGCTGCTCAATCTGTTGGTATCAGAGGTGTTTTGTTCCAATCTCAACAAGACTTGAGAAGAGTTGTTTTGAACTTCTTGGGTGACCCAGTTCACAGAGGTTTGCAATTCTTGGCTGCTAACGCTAAGAAGATGGACTCTGTTACTAACACTGGTGACACTATCCAAGACAACTTCGCTCAATTGTTGATCTTGGAATTGGCTCAAGACAGAGAATTGGTTAAGTTGCAAGCTGGTAAGAGAACTTGGAACTACTTCATCGGTCCACCAAAGTTGACTACTGCTACTTTCCCAGACGACATGGACACTACTTCTATGGCTTTGTCTGTTTTGCCAGTTGCTGAAGACGTTGTTTCTTCTGTTTTGGACGAAATGTTGAAGTTCGTTACTGACGACGGTATCTTCATGACTTACTTCGACTCTTCTAGACCAAGAGTTGACCCAGTTGTTTGTATCAACGTTTTGGGTGTTTTCTGTAGACACAACAGAGAAAGAGACGTTTTGCCAACTTTCCACTGGATCAGAGACATCTTGATCAACAGAGCTTACTTGTCTGGTACTAGATACTACCCATCTCCAGACTTGTTCTTGTTCTTCTTGGCTAGATTGTGTTTGGCTGTTAGAAACCAATCTTTGAGAGAACAATTGGTTTTGCCATTGGTTGACAGATTGAGAGAAAGAGTTGGTGCTCCAGGTGAAGCTGTTTCTTTGGCTGCTAGAATCTTGGCTTGTAGATCTTTCGGTATCGACTCTGCTAGAGACATGGACTCTTTGAGAGGTAAGCAATGTGAAGACGGTGGTTGGCCAGTTGAATGGGTTTACAGATTCGCTTCTTTCGGTTTGAACGTTGGTAACAGAGGTTTGGCTACTGCTTTCGCTGTTAGAGCTTTGGAATCTCCATACGGTGAATCTGCTGTTAAGGTTATGAGAAGAATCGTTTAA
配列番号71−断片「a」の構築のためのプライマー(LEU2酵母マーカー)
AGGTGCAGTTCGCGTGCAATTATAACGTCGTGGCAACTGTTATCAGTCGTACCGCGCCATTCGACTACGTCGTAAGGCC
TCGTGGTCAAGGCGTGCAATTCTCAACACGAGAGTGATTCTTCGGCGTTGTTGCTGACCATCGACGGTCGAGGAGAACTT
TGGTCAGCAACAACGCCGAAGAATCACTCTCGTGTTGAGAATTGCACGCCTTGACCACGACACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAG
AACGCGTACCCTAAGTACGGCACCACAGTGACTATGCAGTCCGCACTTTGCCAATGCCAAAAATGTGCGCGGAACCCCTA
TTGGCATTGGCAAAGTGCGGACTGCATAGTCACTGTGGTGCCGTACTTAGGGTACGCGTTCCTGAACGAAGCATCTGTGCTTCA
CCGAGATGCCAAAGGATAGGTGCTATGTTGATGACTACGACACAGAACTGCGGGTGACATAATGATAGCATTGAAGGATGAGACT
ATGTCACCCGCAGTTCTGTGTCGTAGTCATCAACATAGCACCTATCCTTTGGCATCTCGGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGG
CTCAGATGTACGGTGATCGCCACCATGTGACGGAAGCTATCCTGACAGTGTAGCAAGTGCTGAGCGTCAGACCCCGTAGAA
Claims (27)
- ドリマンセスキテルペンの製造方法であって、
a.非環式ファルネシル二リン酸(FPP)前駆体を、ハロ酸デハロゲナーゼ(HAD)様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドと接触させて、ドリマンセスキテルペンを産生する工程であって、ここで、前記ポリペプチドが、
i.配列番号53(DDxx(D/E))に記載のクラスIテルペンシンターゼ様モチーフ;および
ii.配列番号56(DxD(T/S)T)に記載のクラスIIテルペンシンターゼ様モチーフ
を含む、工程;ならびに
b.任意で、前記ドリマンセスキテルペンまたは前記ドリマンセスキテルペンを含む混合物を単離する工程
を含む、方法。 - 前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールおよび/またはドリメノールを含む、請求項1記載の方法。
- 前記二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドが、
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配;および
b.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
c.配列番号56、配列番号57または配列番号58に記載の配列
を含む、請求項1記載の方法。 - 二官能性テルペンシンターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸で宿主細胞または非ヒト宿主生物を形質転換することを含み、ここで、前記ポリペプチドが、
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63のアミノ酸配列を含むか;または
b.i.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
ii.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
iii.配列番号56、配列番号57または配列番号58に記載の配列
を含む、請求項1から3までのいずれか1項記載の方法。 - FPPを産生することが可能な非ヒト宿主生物または宿主細胞を培養し、形質転換して、ハロ酸デハロゲナーゼ(HAD)様ヒドロラーゼドメインを含むポリペプチドを、前記ポリペプチドの産生を可能にする条件下で発現することをさらに含み、ここで、前記ポリペプチドは、
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63のアミノ酸配列を含むか;または
b.i.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29、配列番号32、配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
ii.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
iii.配列番号56、配列番号57または配列番号58に記載の配列
を含む、請求項1から4までのいずれか1項記載の方法。 - 前記ポリペプチドが、配列番号59、配列番号60、配列番号61および/または配列番号62に記載の1つ以上の保存されたモチーフを含む、請求項3から5までのいずれか1項記載の方法。
- 前記ドリマンセスキテルペンまたは前記ドリマンセスキテルペンを含む混合物を単離する、請求項1から6までのいずれか1項記載の方法。
- 前記ドリマンセスキテルペンを、少なくとも1種の酵素と接触させてドリマンセスキテルペン誘導体を産生することを含む、請求項1から7までのいずれか1項記載の方法。
- 前記ドリマンセスキテルペンを、化学合成または生化学合成を使用してドリマンセスキテルペン誘導体に変換することを含む、請求項1から8までのいずれか1項記載の方法。
- 前記クラスIテルペンシンターゼ様モチーフが、配列番号54(DD(K/Q/R)(L/I/T)(D/E))を含み、前記クラスIIテルペンシンターゼ様モチーフが、配列番号57(D(V/M/L)DTT)を含み、かつ前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールである、請求項1から7までのいずれか1項記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、
a.配列番号1、配列番号5、配列番号9、配列番号12、配列番号15、配列番号17、配列番号20、配列番号23、配列番号26、配列番号29または配列番号32と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
b.配列番号54(DD(K/Q/R)(L/I/T)(D/E))の配列、および
c.配列番号57(D(V/M/L/F)DTTS)の配列
を含み、かつ
前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールである、請求項1から9までのいずれか1項記載の方法。 - 前記ポリペプチドが、
a.配列番号35、配列番号38、配列番号41、配列番号44、配列番号47、配列番号50または配列番号63と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列、および
b.配列番号55の配列、および
c.配列番号58の配列
を含み;かつ
前記ドリマンセスキテルペンが、ドリメノールである、請求項1から7までのいずれか1項記載の方法。 - ハロ酸デハロゲナーゼ(HAD)様ヒドロラーゼドメインを含み、かつ二官能性テルペンシンターゼ活性を有する単離されたポリペプチドであって、配列番号1または配列番号5のアミノ酸配列を含むかまたは
a.配列番号1または配列番号5と、少なくとも40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
b.配列番号53、配列番号54または配列番号55に記載の配列;および
c.配列番号56、配列番号57または配列番号48に記載の配列
を含む、単離されたポリペプチド。 - 前記ポリペプチドが、配列番号59、配列番号60、配列番号61および/または配列番号62に記載の1つ以上の保存されたモチーフをさらに含む、請求項13記載の単離されたポリペプチド。
- a.請求項13または14記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか;または
b.配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8もしくは配列番号68またはそれらの逆相補的配列と、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか;または
c.ストリンジェントな条件下で配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8または配列番号68にハイブリダイズするヌクレオチド分子を含むか;または
d.配列番号3、配列番号4、配列番号7、配列番号8、配列番号10、配列番号11、配列番号13、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号19、配列番号21、配列番号22、配列番号24、配列番号25、配列番号27、配列番号28、配列番号30、配列番号31、配列番号33、配列番号34、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、配列番号42、配列番号43、配列番号45、配列番号46、配列番号48、配列番号49、配列番号51、配列番号52、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69もしくは配列番号70またはそれらの逆相補的配列を含む、単離された核酸分子。 - a.請求項15記載の核酸分子;または
b.請求項13または14記載のポリペプチドをコードする核酸
を含む、ベクター。 - 前記ベクターが、原核生物ベクター、ウイルスベクターまたは真核生物ベクターである、請求項16記載のベクター。
- 前記ベクターが、発現ベクターである、請求項16または17記載のベクター。
- a.請求項15記載の単離された核酸;または
b.請求項16から18までのいずれか1項記載のベクター
を含む、宿主細胞または非ヒト宿主生物。 - 前記細胞が、原核細胞である、請求項5または6記載の方法。
- 前記原核細胞が、細菌細胞である、請求項20記載の方法。
- 前記細菌細胞が、大腸菌である、請求項21記載の方法。
- 前記細胞が、真核細胞である、請求項5または6記載の方法。
- 前記真核細胞が、酵母細胞または植物細胞である、請求項23記載の方法。
- 前記酵母細胞が、サッカロミセス・セレビシエである、請求項24記載の方法。
- ドリマンセスキテルペンまたはドリマンセスキテルペンおよび1種以上のテルペンを含む混合物を産生するための請求項13または14記載のポリペプチドの使用。
- 前記ドリマンセスキテルペンが、アルビカノールである、請求項26記載のポリペプチドの使用。
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