JP2015110609A - アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 - Google Patents
アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015110609A JP2015110609A JP2015005626A JP2015005626A JP2015110609A JP 2015110609 A JP2015110609 A JP 2015110609A JP 2015005626 A JP2015005626 A JP 2015005626A JP 2015005626 A JP2015005626 A JP 2015005626A JP 2015110609 A JP2015110609 A JP 2015110609A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vegf
- cancer
- tumor
- subject
- specific antagonist
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Abstract
【解決手段】VEGF特異的アンタゴニストを投与することによる、良性、前癌性又は非転移性の癌が浸潤性ないしは転移性の癌になるのが妨げられる癌療法、又は有効量の該アンタゴニストを患者に投与することにより腫瘍サイズが低減し、腫瘍の完全な切除が可能となるネオアジュバント(術前補助)癌療法、さらに腫瘍の完全な切除の後に、該アンタゴニストの有効量を患者に投与し微小転移性癌の増殖が妨げられる術後アジュバント(補助)治療。
【選択図】なし
Description
癌治療の現在の方法は比較的非選択性であり、一般に癌がより悪性な段階に進行した後に腫瘍を標的とするものである。手術は患部組織を取り除き、放射線療法は固形腫瘍を縮小し、そして、化学療法は急速に分裂する細胞を殺す。特に、化学療法は多くの副作用を生じ、場合によっては与えられうる用量を制限するほど重症となるため、有効と思われる薬剤でも使用が妨げられる。さらに、癌は化学療法剤に耐性となることが多い。初期の段階又は良性腫瘍の治療は、悪性又は転移の状態への進行を予防し、それによって癌に伴う羅病率および死亡率を低減することが望ましい。
したがって、術後アジュバント(補助)治療は、残存する微小転移性癌細胞が再定着し抵抗性になる前にこれらの細胞を取り除くために手術の補助的な武器として重要となっている。過去の数十年間にわたって、アジュバント療法の進歩は概して高まっており、様々な化学療法剤が盛んに用いられている。多くの化学療法投薬計画は、肺、胸部および結腸直腸の癌などの初期段階の主な癌の徴候を有する患者を補助的に治療する際に臨床的有用性を示している。Strauss et al. J Clin Oncol 22:7019 (2004);International Adjuvant Lung Cancer Trial Collaboration Group N Engl J Med 350:351-60 (2004)。Moertel et al. Ann Intern Med 122:321-6 (1995);IMPACT Lancet 345:939-44 (1995);Citron et al. J Clin Oncol 21:1431-9 (2003)。
主な根治手術の前に施される補助治療であるネオアジュバント(術前補助)療法は、癌療法の他の重要な一部として浮かび上がっている。根治手術の前にネオアジュバント処置を行う利点がいくつかある。第一に、腫瘍体積、腹水および胸水の浸出が減少するために、手術前の患者の一般状態を向上することが促されうる。第二に、腫瘍体積が減少することによって、手術範囲が減少し患者の臓器およびその機能が保護されうる。これは、例えば乳癌患者にとって特に貴重である。また、腫瘍体積が減少することによって手術が不可能な腫瘍の手術が可能となりうる。最後に、ネオアジュバント療法は、手術によって完全に腫瘍を除去する可能性を向上させ、これによって生存を向上させうる。過去10年にわたって、乳癌、頭頸部癌、直腸癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、食道および胃癌および前立腺癌などの癌を有する患者を治療するために、様々な化学療法剤や放射線を用いたネオアジュバント療法について多くの臨床試験が行われている。概要については、Tanvetyanon et al., Southern Med. J. 98:338-344 (2005)を参照。
血管新生は、血管内皮細胞が増殖して、切り取って、既存の血管性網状組織から新規な血管を形成するように再編成する重要な細胞性の現象である。血管供給の発達は正常な増殖過程にも病理学的な増殖過程にも必須のものであるというやむを得ない証拠がある。酸素と養分の送達だけでなく、代謝産物の除去は、多細胞生物に生じるほとんどの増殖過程において律速段階を表す。
正常および異常な血管新生の両方の重要なポジティブ調節因子の一つは、血管内皮性増殖因子(VEGF)−Aである。VEGF−Aは、VEGF−B、VEGF−C、VEGF−D、VEGF−E、VEGF−FおよびPlGFを含む遺伝子ファミリーの一つである。VEGF−Aは、2つの高親和性レセプターチロシンキナーゼであるVEGFR-1(Flt-1)およびVEGFR-2(Flk-1/KDR)にまず結合し、その後、VEGF−Aの血管内皮細胞分裂シグナル伝達の主な伝達物質となる。さらに、ニューロピリン−1は、ヘパリン-結合VEGF−Aアイソフォームのレセプターとして同定されており、血管の発達において役割を果たしうる。
病的状態において血管新生の主な調節因子としてVEGFが認識されたことにより、病理学的血管新生を伴う状態においてVEGF活性を遮断するという試みが生じている。
VEGF発現は大多数の悪性腫瘍において上方制御されており、VEGFの過剰発現は、多くの固形腫瘍の進行した段階又は予後不良と相関している。したがって、VEGFシグナル伝達経路を阻害する分子が、病理学的血管新生が強調される比較的進行した固形腫瘍の治療のために用いられている。
他の態様では、本発明は、被検体のステージ0、ステージI、又はステージIIの胃腸腫瘍を治療するために十分な量と時間でVEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与することを含む、被検体のステージ0、ステージI、又はステージIIの胃腸腫瘍の治療方法を特徴とする。胃腸腫瘍は、肛門癌、結腸直腸癌、直腸癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、肝癌、膵癌および小腸の癌を含む胃腸系のステージ0、ステージI、又はステージIIの癌のいずれかでありうる。一実施態様では、胃腸腫瘍は、ステージ0(例えば高いグレードの腺腫)又はステージIの腫瘍である。一実施態様では、被検体は、胃腸腫瘍を治療するための切除をまだ経ていない。
上記方法のある実施態様では、被検体は、50歳以上のヒトであるか、遺伝性の癌症候群を有するか、又は、大腸癌又はポリープの家族歴を有する。遺伝性の胃腸癌の非限定的な例には、家族性大腸ポリープ症(FAP)、ガードナー症候群、膵癌および遺伝性非ポリープ症結腸直腸癌(HNPCC)が含まれる。ある実施態様では、被検体は、結腸内視術を既に行っていてもよいし、行っていなくてもよい。一実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストは、FAPを有する被検体の腺腫性結腸直腸ポリープ症の数を低減するための時間と量で投与される。
一実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストは単独療法である。他の実施態様では、被検体は、例えば抗癌療法を用いて腫瘍について既に治療されている。ある例では、抗癌療法は手術である。他の実施態様では、被検体は、VEGF特異的アンタゴニストの投与の前、最中(例えば、同時)、又は後に更なる抗癌療法にて更に治療されうる。抗癌療法の例には、手術、放射線療法(放射線治療)、生物療法、免疫療法、化学療法又はこれら療法の組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
上記それぞれの態様は、癌の再発について被検体をモニタリングすることを更に含みうる。
また、本発明には、手術の前にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を被検体に投与し、その後手術を行うことによって癌が切除されることを含む、手術可能な癌を有する被検体の治療方法が含まれる。一実施態様では、前記方法は、癌の再発を予防するために、手術後にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を前記被検体に投与する工程をさらに含む。
他の態様では、本発明は、VEGF特異的アンタゴニストの有効量を被検体に投与することを含み、この投与によって腫瘍サイズが低減し腫瘍の完全な切除が可能となる、切除不可能な腫瘍を有する被検体における腫瘍サイズを低減する方法を含む。一実施態様では、前記方法は、腫瘍の完全な切除の後に、被検体にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を投与することを更に含む。
一態様では、方法は、a) 各周期が、所定の間隔で、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの有効量と、少なくとも一つの化学療法剤を被検体に投与することを含む、複数の治療周期を含む第一段階とb) 各周期が、所定の間隔で、いずれの化学療法剤も伴わずに、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの有効量を被検体に投与することを含む、複数の維持周期を含む第二段階とを含み、このとき、組み合わせた第一および第二の段階は、最初の術後治療の後、少なくとも1年の間継続される。一実施態様では、第一段階は、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブと第一化学療法投薬が投与される第一の複数の治療周期の後に、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブと第二化学療法投薬が投与される第二の複数の治療周期を含む。治療される癌が乳癌である場合、例えば、第一化学療法投薬はドキソルビシンとシクロホスファミドを含み、第二化学療法投薬はパクリタキセルを含む。
上記各々の態様の更なる実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストは、局所的に、又は、全身的に(例えば、経口又は静脈内に)投与される。一実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストによる治療は、患者が、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年および12年からなる群から選択される期間の間、癌がなくなるまでの間の長期にわたる。
他の実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストによる治療は、更なる抗癌療法、例えば限定するものではないが、手術、放射線療法、化学療法、鑑別療法、生物療法、免疫療法、血管新生インヒビターおよび抗増殖性化合物と組み合わされる。また、VEGF特異的アンタゴニストによる治療は、上記の種類の治療的投薬のいずれか組合せも含んでもよい。さらに、細胞障害性剤、抗血管形成剤および抗増殖性剤が、VEGF特異的アンタゴニストと組み合わせて用いられてもよい。一実施態様では、抗癌療法は化学療法である。例えば、化学療法剤は、例えば、アルキル化剤、アンチメタボライ、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体および関連するインヒビター、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、L-アスパラギナーゼ、トポイソメラーゼインヒビター、インターフェロン、プラチナ配位複合体、アントラセンジオン置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、副腎皮質ステロイド、プロゲスチン、エストロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、抗アンドロゲン物質、性腺刺激ホルモン放出ホルモンなどから選択される。いくつかの態様では、化学療法剤およびVEGF特異的アンタゴニストが同時に投与される。
本発明の方法は、初期腫瘍を治療および予防することによって、進行した癌に伴う罹病率および死亡率の減少を生じさせるより進行した段階への進行を妨げる際に特に有益である。また、本発明の方法は、腫瘍の再発、又は腫瘍、例えば初期腫瘍の除去の後に存続する休止中の腫瘍の再増殖を予防する際に、又は微小転移性癌の発症ないしは増殖を低減又は予防する際にも有益である。
本発明の方法には、癌は、固形腫瘍、例えば例として、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、肺癌、腎臓細胞癌、神経膠腫(例えば未分化星状細胞腫、未分化オリゴ星状細胞腫、未分化乏突起細胞腫、多形性神経膠芽腫)、腎臓癌、前立腺癌、肝癌、膵癌、軟組織肉腫、カルチノイドカルチノーマ、頭頸部癌、メラノーマおよび卵巣癌であってもよい。一実施態様では、癌は胃腸癌である。
また、本発明の方法は、癌又は腫瘍の再発について被検体をモニターすることを含みうる。
本発明の他の特徴や利点は、以下の詳細な説明、図面、および特許請求の範囲から明らかであろう。
I.定義
本明細書中で用いる「VEGF」又は「VEGF-A」なる用語は、Leung等 Science, 246:1306 (1989)、およびHouck等 Mol. Endocrin., 5:1806 (1991)によって記載されているように、165アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子と、関連した121-、145-、189-、および206-アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子、並びにそれらの天然に生じる対立遺伝子型およびプロセシング型を意味する。VEGF−Aは、VEGF−B、VEGF−C、VEGF−D、VEGF−E、VEGF−FおよびPlGFを含む遺伝子ファミリの一部である。VEGF−Aは主に、VEGFR−1(Flt−1)およびVEGFR−2(Flk−1/KDR)の2つの高親和性レセプターチロシンキナーゼに結合し、後者はVEGF−Aの血管内皮細胞分裂促進シグナルの主な伝達物質である。さらに、ニューロピリン−1は、ヘパリン-結合VEGF−Aアイソフォームのレセプターとして同定されており、血管の発達に役割がありうる。また、「VEGF」又は「VEGF−A」なる用語は、マウス、ラット又は霊長類などの非ヒト動物種由来のVEGFも意味する。特定の種由来のVEGFは、ヒトVEGFはhVEGF、マウスVEGFはmVEGFなどの用語で表されることが多い。また、「VEGF」なる用語は、165アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子のアミノ酸8〜109、又は1〜109を含むポリペプチドの切断型又は断片を指すために用いられる。そのようなVEGF型を指すときは、本明細書では、例えば、「VEGF(8−109)」、「VEGF(1−109)」又は「VEGF165」と表す。「切断した(切断型の)」天然のVEGFのアミノ酸位置は、天然のVEGF配列に示される数で示す。例えば、切断型の天然VEGFのアミノ酸位置17(メチオニン)は、天然のVEGF中の位置17(メチオニン)でもある。切断型の天然VEGFは、KDRに対して結合親和を有しFlt−1レセプターは天然のVEGFと同程度である。
「天然配列」ポリペプチドは、天然由来の対応するポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含んでなる。よって、天然配列ポリペプチドは任意の哺乳動物からの天然に生じるポリペプチドのアミノ酸配列を有し得る。このような天然配列ポリペプチドは、自然から単離することもできるし、あるいは組換え又は合成手段により生産することもできる。「天然配列」ポリペプチドという用語は特にポリペプチドの天然に生じる切断型又は分泌型(例えば細胞外ドメイン配列)、ポリペプチドの天然に生じる変異体型(例えば、選択的スプライシング型)および天然に生じる対立遺伝子変異体を包含する。
ポリペプチド「変異体」は天然配列ポリペプチドと少なくとも約80%のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのような変異体には、例えば一又は複数のアミノ酸残基が、ポリペプチドのN末端又はC末端に付加され、又は欠失されているポリペプチドが含まれる。通常は、変異体は天然配列ポリペプチドと少なくともおよそ80%のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくともおよそ90%のアミノ酸配列同一性、又はさらにより好ましくは少なくともおよそ95%のアミノ酸配列同一性を有する。
「VEGF特異的アンタゴニスト」は、本明細書中のセクションIII以降に記載されている。
「抗体」という用語は最も広義に使用され、モノクローナル抗体(完全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、およびそれらが所望の生物活性を示す限り抗体断片が特に包含される。
特に断らない限りは、本明細書全体を通して「多価抗体」という表現は3又はそれ以上の抗原結合部位を含む抗体を指すために使用される。例えば、多価抗体は3又はそれ以上の抗原結合部位を持つように遺伝子操作されたもので、一般には天然配列IgM又はIgA抗体ではない。
「単鎖Fv」又は「scFv」抗体断片は抗体のVHおよびVLドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。通常、FvポリペプチドはVHおよびVLドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーはscFvが抗原結合にとって望ましい構造を形成するのを可能にする。scFvのレビューに関しては、Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol.113, RosenburgおよびMoore編, Springer-Verlag, New York, 269-315頁(1994)を参照。
「線状抗体」なる表現はZapata等, Protein Eng., 8(10):1057-1062頁(1995)に記載されている抗体を指す。つまり、これらの抗体は相補性の軽鎖ポリペプチドと共に一対の抗原結合領域を形成する、一対のタンデムFdセグメント(VH−CH1−VH−CH1)を含む。線状抗体は二重特異性又は単一特異性であり得る。
ここで、モノクローナル抗体は、重鎖および/又は軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、あるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同性があり、鎖の残りの部分が他の種由来の抗体、あるいは他の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同である「キメラ」抗体(免疫グロブリン)、並びにそれが所望の生物的活性を有する限りこのような抗体の断片を特に含む(米国特許第4816567号;およびMorrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855(1984))。
指定された抗体の「生物学的特性」を有する抗体は同じ抗原に結合する他の抗体とは区別されるその抗体の生物学的特性の一又は複数を保有するものである。
対象の抗体が結合する抗原上のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)に記載のものなどの常套的な交差遮断(cross-blocking)アッセイを行ってもよい。
「断片」とは、好ましくは、参照核酸分子又はポリペプチドの全体の長さの少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%又はそれ以上を含むポリペプチド又は核酸分子の一部を意味する。断片は、10、20、30、40、50、60、70、80、90、又は100、200、300、400、500、600又はそれ以上のヌクレオチド、ないしは10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、190、200アミノ酸又はそれ以上を含みうる。
「治療的有効量」なる用語は、哺乳類の疾病や疾患を治療又は予防するためのVEGF特異的アンタゴニストの量に相当する。前癌性、良性又は初期の腫瘍の場合、治療的有効量のVEGF特異的アンタゴニストにより、癌細胞の数が減少、原発性腫瘍の大きさを小さく、癌細胞の周辺器官への浸潤を阻害(すなわち、ある程度に遅く、好ましくは止める)、腫瘍の転移を阻害(すなわち、ある程度に遅く、好ましくは止める)、腫瘍の成長をある程度阻害、および/又は疾患に関連する一又は複数の症状をある程度緩和しうる。休止状態又は微小転移性癌の腫瘍を治療するために、治療的有効量のVEGF特異的アンタゴニストにより、微小転移性癌の数又は増殖を低減、休止中の腫瘍の成長を低減又は予防、又は、(例えば、手術、放射線療法又は化学療法などの抗癌療法を用いた)治療又は除去の後の腫瘍の再発を低減又は予防しうる。ある程度、薬剤は、成長を妨げおよび/又は現存の癌細胞を殺すことが可能で、細胞分裂停止性および/又は細胞障害性である。癌治療では、インビボにおける有効性は、生存期間、病状の進行時間(TTP)、応答速度(RR)、応答の持続期間、寛解の期間、および/又は生活の質を評価することにより測定されうる。有効量は、無病生存率(DFS)を向上させ得、全生存率(OS)を向上させ得、再発の可能性を減少させ得、再発までの時間を延長させ得、遠隔再発(すなわち原発性部位の外側の再発)までの時間を延長させ得、癌を治癒させ得、癌(例えば、癌特異的な調査を使用して測定される)の症状を向上させ得、二次原発性癌などの出現を低減させうる。
「手術可能な」癌は原発性臓器に限局しており手術に適する癌である。
「無病生存率(DFS)」は、治療の開始から又は初期診断から一定期間、例えばおよそ1年、およそ2年、およそ3年、およそ4年、およそ5年、およそ10年などの間癌を再発せずに生存している患者を指す。本発明の一態様では、DFSは包括解析(intent-to-treat)の原則に従って分析される。つまり、患者は割り当てられた治療を基礎として評価される。DFSの分析に用いる事象には、癌の限局性、領域および遠位的な再発、二次的な癌の発症、および既往(例えば乳癌の再発又は二番目の原発性癌)のない患者における全死因死亡が含まれうる。
「全生存率」は、治療の開始から又は初期診断から一定期間、例えばおよそ1年、およそ2年、およそ3年、およそ4年、およそ5年、およそ10年などの間生存している患者を指す。本発明の根底となる研究では、生存率分析のために使用した事象は、全死因死亡であった。
「延長生存率」は、未処置の患者と比較して(すなわち、VEGF抗体などのVEGF特異的アンタゴニストにて処置されていない患者と比較して)、又はコントロール処置プロトコール、例えばパクリタキセルなどの化学療法剤のみによる処置と比較して、処置した患者においてDFSおよび/又はOSが増加していることを意味する。生存率は、処置開始後又は最初に診断された後、少なくともおよそ6か月、又は少なくともおよそ1年、又は少なくともおよそ2年、又は少なくともおよそ3年、又は少なくともおよそ4年、又は少なくともおよそ5年、又は少なくともおよそ10年などの間モニターされる。
「同時に」なる用語は、投与の時間の少なくとも一部がオーバーラップしている、2以上の治療薬の投与を指すために本明細書中で用いられる。したがって、同時投与には、一又は複数の薬剤の投与が一又は複数の他の薬剤の投与をやめた後に続く場合の投薬計画が包含される。
「単独療法」は、治療期間の経過中に癌又は腫瘍の治療のために単剤しか含まない治療的投薬計画を意味する。VEGF特異的アンタゴニストを用いた単独療法は、VEGF特異的アンタゴニストがその治療期間の間に更なる抗癌療法がない状態で投与されることを意味する。
「維持療法」とは、疾患再発又は進行の可能性を低減するために施される治療的投薬計画を意味する。維持療法は、被検体の寿命まで延長された時間を含む任意の長さの時間に提供されてもよい。維持療法は、最初の療法の後又は、最初ないしは更なる療法と共に提供されてもよい。維持療法のために使用する用量は変化してもよく、他の種の療法に使用する用量と比較して、減少した用量を包含しうる。
本明細書中の「アジュバント(補助)療法」は、手術後に施される治療を指し、疾患の再発のリスクを低減するために、残存する疾患の所見が検出されないものとする。アジュバント療法の目的は、癌の再発を予防することによって、癌関連の死亡の機会を低減することである。
本明細書中の「標準的な治療の」化学療法は、特定の癌を治療するために通常使用する化学療法剤を指す。
「根治手術」は、医学界で用いられる用語として用いる。根治手術には、例えば、肉眼で認められる腫瘍のすべてが除去又は切除されるものを含む、腫瘍が除去又は切除される手順、手術その他のものが包含される。根治手術には、例えば、腫瘍の完全ないしは治療上の切除又は完全な全体の切除が含まれる。根治手術には、一又は複数の段階で生じる手順が含まれ、例えば一又は複数の手術又は他の手順が腫瘍の切除前に行われる複数の段階の手術手順が含まれる。根治手術には、関連する臓器、一部の臓器および組織、並びに周辺臓器、例としてリンパ節、臓器の一部又は組織を含む腫瘍を除去ないしは切除するための手順が含まれる。
「前癌性」なる用語は、典型的に癌に進行する又は癌に発達する症状ないし成長を指す。「前癌性の」成長は、細胞周期調節、細胞性増殖又は分化のマーカーによって測定されうる、異常な細胞周期調節、増殖又は分化によって特徴が示される細胞を有する。
「形成異常」は、組織、臓器又は細胞の任意の異常な成長ないしは発達を意味する。好ましくは、形成異常は高いグレードであるか、前癌性である。
「転移」とは、その原発性部位から体の他の場所への癌の蔓延を意味する。癌細胞は、原発性腫瘍から切り離れ、リンパ管および血管へ浸透し、血流を循環し、身体の至る所の正常組織の離れた病巣で成長しうる(転移)。転移は局所又は遠位でありうる。転移は経時的な過程であり、原発性腫瘍から切り離れ、血流を駆けめぐり、遠位部位に止まる腫瘍細胞に付随するものである。新たな部位で、細胞は、血液供給を確立し、成長して生命を脅かす体積を形成しうる。腫瘍細胞内の刺激性分子および阻害性分子の経路はこの作用を制御するものであり、腫瘍細胞と遠位部位の宿主細胞との間の相互作用も有意である。
「非転移性」とは、良性である癌、又は原発部位に止まり、リンパ管や血管系ないしは原発部位以外の組織に浸透しない癌を意味する。一般的に、非転移性癌は、ステージ0、I又はIIの癌、場合によってステージIIIの癌のいずれかの癌である。
「ステージ0」、「ステージI」、「ステージII」、「ステージIII」又は「ステージIV」との腫瘍又は癌の呼称は、当分野で公知の総合段階分類法(Overall Stage Grouping)又はローマ数字段階付け法(Roman Numeral Staging methods)を用いた腫瘍又は癌の分類を表す。癌の実際のステージは癌の種類に依存するが、一般には、ステージ0の癌はインサイツの病巣にあり、ステージIの癌は小さく限局した腫瘍であり、ステージIIおよびIIIの癌は局所のリンパ節の併発を示す局所的に進行した腫瘍であり、ステージIVの癌は転移性癌を表す。各種類の腫瘍に特異的なステージは臨床医に公知である。
「原発性腫瘍」又は「原発性癌」は元の癌を意味し、被検体の身体の他の組織、臓器又は部位に位置する転移性病巣を意味しない。
「良性腫瘍」又は「良性癌」は、元の部位に限局したままである腫瘍を意味し、遠位の部位への浸潤、侵入又は転移の能力を有さない。
本明細書中の「癌再発」は、治療の後に癌が回復することを指し、原発性臓器での癌の回復だけでなく、癌が原発性臓器以外で回復する遠位性再発も包含する。
「腫瘍休止」は、腫瘍細胞が存在するが、腫瘍進行は臨床上見られない、持続性の不活発状態を意味する。休止腫瘍はスクリーニング又は診断用試験において検出されるかもしれないし、されないかもしれない。
「腫瘍量」は、体内の癌細胞の数、腫瘍のサイズ、又は癌の量を意味する。また、腫瘍量(tumor burden)は腫瘍負荷(tumor load)とも称される。
「腫瘍数」は腫瘍の数を意味する。
被検体の「集団」は、例えば臨床試験において、又は癌ネオアジュバント療法などの特定の症状についてFDA承認に従って腫瘍学者によって観察される癌を有する被検体の集団を指す。一実施態様では、集団は、少なくとも3000の被検体を含む。
「抗癌療法」なる用語は、癌を治療する際に有用な療法を指す。抗癌治療剤の例には、限定するものではないが、例えば、手術、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞障害剤、放射線療法に用いる薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン薬剤、および癌を治療するための他の薬剤、例として、抗HER-2抗体、抗CD20抗体、上皮性増殖因子レセプター(EGFR)アンタゴニスト(例えばチロシンキナーゼインヒビター)、HER1/EGFRインヒビター(例えばエルロチニブ(TarcevaTM)、血小板由来増殖因子インヒビター(例えばGleevecTM(メシル酸イマチニブ))、COX-2インヒビター(例えばセレコキシブ)、インターフェロン、サイトカイン、以下の標的ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR−β、BlyS、APRIL、BCMA又はVEGFレセプター(一又は複数)、TRAIL/Apo2および他の生理活性かつ有機化学的薬剤などの一又は複数に結合するアンタゴニスト(例えば中和抗体)が含まれる。また、その組合せが本発明に包含される。
「低減又は阻害」は、全体の好ましくは20%以上、より好ましくは、50%以上、そして最も好ましくは75%、85%、90%、95%、又はそれ以上の減少を引き起こす能力。低減又は阻害は、治療する疾患の症状、転移性癌又は微小転移性癌の存在ないしはサイズ、原発性腫瘍のサイズ、休止腫瘍の存在ないしはサイズ、又は血管新生疾患の血管のサイズないしは数を指しうる。
「核酸オリゴマー」とは、連鎖群によって共に連結される、少なくとも8核酸塩基、好ましくは少なくとも12、最も好ましくは少なくとも16塩基の鎖を含む化合物を意味する。この定義には、修飾および非修飾の非天然および天然のオリゴヌクレオチド、並びにプロテイン核酸(Protein Nucleic Acid)、ロックド核酸およびアラビノ核酸(arabinonucleic acid)などのオリゴヌクレオチド模倣体が含まれる。多くの核酸塩基および連鎖群が本発明の核酸塩基オリゴマーに用いられ得、米国特許公開20030114412(例として公報の27−45段落を参照)および同20030114407(例として公報の35−52段落を参照)に記載のものが含まれる。これら公報は出典明記によって本明細書に援用される。また、核酸塩基オリゴマーは翻訳開始部位および終止部位を標的としてもよい。ある実施態様では、アンチセンス核酸塩基オリゴマーはおよそ8〜30ヌクレオチドを含む。また、アンチセンス核酸塩基オリゴマーは、VEGF mRNA又はDNAに相補的である少なくとも40、60、85、120又はそれ以上の連続したヌクレオチドを含んでもよいし、完全長mRNA又は遺伝子と同じ長さでもよい。
「静脈内ボーラス」又は「静脈内圧力(intravenous push)」なる用語は、動物又はヒトに静脈に薬剤を投与して、およそ15分未満、好ましくは5分未満で身体が薬剤を受け取ることを意味する。
「皮下投与」なる用語は、動物又はヒト患者の皮下、好ましくは皮膚と皮下組織の間の嚢内に、薬剤貯蔵物から相対的にゆっくりと、持続的に運搬されることによる薬剤の導入を意味する。
「皮下ボーラス」なる用語は、動物又はヒト患者の皮下への薬剤の投与であって、ボーラス薬剤運搬(ドラッグデリバリー)は好ましくはおよそ15分未満、より好ましくは5分未満、最も好ましくは60秒未満である。好ましくは、投与は皮膚と皮下組織の間の嚢内であり、その嚢は例えば皮膚をつまんだり引き上げたりして皮下組織を除去することによって作ったものである。
本発明は、良性、前癌性又は非転移性の腫瘍を有する被検体を治療するための、休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体を治療するための、又は癌を有しているないしは癌を発症するリスクにある被検体を治療するための、VEGF特異的アンタゴニストの使用を特徴とする。例えば、VEGFを阻害するための2つの独立した手法、すなわち、VEGF−AおよびVEGF−Aの遺伝的欠失をターゲティングするモノクローナル抗体(mAb)による単独療法を用いて、本発明者等は、初期腸管腺腫形成のApcmin/+マウスモデルを用いて、VEGFシグナル伝達を阻害すると腫瘍成長が十分停止され、腸管腺腫モデルに長期生存の利点が生じることを示した。また、本発明者等は、VEGF−Aを標的とするモノクローナル抗体(mAb)を用いて、VEGF−Aの阻害は、多発性内分泌腫瘍症1型(MEN1)のマウスモデルにおいて過剰なホルモン分泌を低くするため、および下垂体腺腫成長を阻害するために十分であることを示した。さらに、本発明者等は、マウス膵島腫瘍モデル(RIP−TβAg)およびVEGF−Aを標的とするモノクローナル抗体(mAb)を用いて、VEGFの阻害によって腫瘍血管新生が劇的に減少し、手術又は化学療法剤を用いた細胞切除後の治療として用いると腫瘍の再成長が抑制されることを示した。本発明は、ネオアジュバントおよびアジュバント環境におけるVEGFアンタゴニストの使用も特徴とする。
VEGF特異的アンタゴニストは、VEGFへの結合、VEGF発現レベルの低減、又はVEGF生物学的活性、例えば一又は複数のVEGFレセプターへのVEGFの結合およびVEGFが媒介する血管新生および内皮細胞生存又は増殖の中和、遮断、阻害、無効、低減ないしは干渉が可能である分子(ペプチジル又は非ペプチジル)を指す。好ましくは、VEGF特異的アンタゴニストは、VEGFの発現レベル又は生物学的活性を少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%又はそれ以上低減するか又は阻害する。VEGF特異的アンタゴニストによって阻害されるVEGFは、VEGFアイソフォーム又は複数のVEGFアイソフォーム、例えばVEGF(8−109)、VEGF(1−109)、VEGF165、VEGF121、VEGF145、VEGF189又はVEGF206であることが望ましい。
本発明の方法で有用なVEGF特異的アンタゴニストには、VEGFを特異的に結合するペプチジルないしは非ペプチジル化合物、例として、抗VEGF抗体およびその抗原結合性断片、VEGFポリペプチドのアンタゴニスト変異体、又はVEGFに特異的に結合するその断片、およびVEGFに特異的に結合して一又は複数のレセプター(例えば、可溶性VEGFレセプタータンパク質、又はそのVEGF結合断片、又はキメラVEGFレセプター)、融合タンパク質(例えば、VEGF−Trap(Regeneron))、およびVEGF121-ゲロニン(Peregrine)が含まれる。また、VEGF特異的アンタゴニストには、VEGFポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも断片に相補的なアンチセンス核酸塩基オリゴマー、VEGFポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも断片に相補的な小RNA、VEGFを標的とするリボザイム、VEGFに対するペプチボディ、およびVEGFアプタマーが包含される。
本発明の方法に有用である抗VEGF抗体には、VEGFに対して十分な親和性と特異性を有して結合し、VEGFの生物学的活性を低減ないし阻害することができる任意の抗体又はその抗原結合断片が含まれる。抗VEGF抗体は、通常、他のVEGFホモログ、例えばVEGF−B又はVEGF−Cにも他の増殖因子、例えばPlGF、PDGF又はbFGFにも結合しない。
本発明のある実施態様では、抗VEGF抗体には、限定するものではないが、ハイブリドーマATCC HB 10709から生成されるモノクローナル抗VEGF抗体A4.6.1と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体、Presta et al. (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599に従って生成される組み換えヒト化抗VEGFモノクローナル抗体、例としてベバシズマブ(BV;アバスチン(登録商標))として知られる抗体が含まれる。ベバシズマブには、ヒトVEGFのそのレセプターへの結合をブロックするマウス抗hVEGFモノクローナル抗体A.4.6.1からの、変異したヒトIgG1フレームワーク領域および抗原結合性相補性決定領域が含まれる。大部分のフレームワーク領域を含む、ベバシズマブのアミノ酸配列のおよそ93%は、ヒトIgG1由来であり、配列のおよそ7%はマウス抗体A4.6.1由来である。ベバシズマブは、およそ149000ダルトンの分子質量を有し、グリコシル化される。ベバシズマブおよび他のヒト化抗VEGF抗体は、2005年2月26日発行の米国特許第6884879号にさらに記述される。抗体の更なる例には、限定するものではないが、PCT出願公開番号WO2005/012359に記載されるように、G6又はB20系列抗体(例えば、G6−31、B20−4.1)が含まれる。更なる抗体については、米国特許第7060269号、同第6582959号、同第6703020号;同第6342219号;同第6054297号;国際公開98/45332;国際公開96/30046;国際公開94/10202;欧州特許第0666868号B1;米国特許出願公開番号2006009360、同20050186208、同20030206899、同20030190317、同20030203409および同20050112126;およびPopkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)を参照のこと。本発明に用いられうる抗体の他の例には、残基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K101、E103およびC104を含むかあるいは、残基F17、Y21、Q22、Y25、D63、I83およびQ89を含むヒトVEGF上の機能的エピトープに結合するものが含まれる。
本発明に係るB20系列抗体は、PCT出願公開番号WO2005/012359の図27−29のいずれか一に記載の一連のB20抗体又はB20由来抗体から得られる抗VEGF抗体である。一実施態様では、B20系列抗体は、残基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K101、E103およびC104を含むヒトVEGF上の機能的エピトープに結合する。
2つの最も良好に特徴付けられたVEGFレセプターは、VEGFR1(別名Flt−1)およびVEGFR2(別名マウスホモログのKDRおよびFLK−1)である。各々のVEGFファミリメンバーの各々のレセプターの特異性は変化するが、VEGF−AはFlt−1およびKDRに結合する。完全長Flt−1レセプターは、7つのIgドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼ活性を有する細胞内ドメインを有する細胞外ドメインを含む。細胞外ドメインはVEGFの結合に関与しており、細胞内ドメインはシグナル伝達に関与している。
VEGFに特異的に結合するVEGFレセプター分子又はその断片は、VEGFタンパク質に結合して補足し、それによってシグナル伝達を妨げるための本発明の方法に用いられうる。ある実施態様では、VEGFレセプター分子又はそのVEGF結合断片は、可溶型、例えばsFlt−1である。レセプターの可溶型は、VEGFに結合して標的細胞の表面上に存在する天然のレセプターへのその結合を妨げることによって、VEGFタンパク質の生物活性に対して阻害作用を及ぼす。また、VEGFレセプター融合タンパク質も包含され、その例を後述する。
本発明の可溶性VEGFレセプタータンパク質又はキメラVEGFレセプタータンパク質には、膜貫通ドメインを介して細胞の表面に固定されていないVEGFレセプタータンパク質が含まれる。また、キメラレセプタータンパク質を含むVEGFレセプター可溶型は、VEGFに結合してVEGFを不活性化することができるが、膜貫通領域を含んでおらず、したがって一般に、この分子が発現される細胞の細胞膜に結合したものとならない。
リボザイムは、RNAの特異的切断を触媒できる酵素的RNA分子である。リボザイムは、相補的標的RNAへの配列特異的ハイブリダイゼーション、次いでヌクレオチド鎖切断的開裂により作用する。潜在的RNA標的内の特異的リボザイム切断部位は、既知の技術で同定できる。更なる詳細は、例えば、Rossi, Current Biology 4: 469-471 (1994)およびPCT公報、国際公開97/33551を参照のこと。
VEGF発現を標的とするある例示的なリボザイムはAngiozymeTMである。(例として米国特許出願公開番号20060035278を参照のこと)。
アプタマーは、VEGFポリペプチドなどの標的分子に特異的に結合する立体構造を形成する核酸分子である。アプタマーの生成および治療的使用は、従来技術において十分に確立されている。例として米国特許第5475096号参照。VEGFアプタマーはペグ化された修飾オリゴヌクレオチドであり、細胞外VEGFに結合できるように三次元高次構造をとっている。年齢関連性黄斑変性を治療するためにVEGFを標的とする治療的に有用なアプタマーの一例はペガプタニブ(MacugenTM, Eyetech, New York)である。アプタマーについての更なる情報は、米国特許出願公開番号20060148748に見られる。
ペプチボディは、免疫グロブリン分子の断片又は一部をコードするアミノ酸配列に連結されたペプチド配列である。ポリペプチドは、特異的な結合のためのいずれかの方法、限定するものではないがファージディスプレイ技術などによって選択されるランダム化配列から得られうる。一実施態様では、選択されたポリペプチドは、免疫グロブリンのFc部分をコードするアミノ酸配列に連結されてもよい。VEGFに特異的に結合して、VEGFをアンタゴナイズするペプチボディもまた、本発明の方法に有用である。
また、本発明の方法は、アンチセンス核酸塩基オリゴマーおよび小RNAを含むVEGF特異的アンタゴニスト性核酸分子の使用を特徴とする。
一実施態様では、本発明は、VEGF RNAに向けられたアンチセンス核酸塩基オリゴマーの使用を特徴とする。相補的核酸配列(センス鎖又はコード鎖)に結合することによって、アンチセンス核酸塩基オリゴマーは、おそらくRNアーゼHによるRNA鎖の酵素的切断によりタンパク質発現を阻害することができる。
本発明の方法および組成物に特に有用なアンチセンス核酸塩基オリゴマーの一例は、モルフォリノオリゴマーである。モルフォリノは、核酸分子内の特定の配列への他の分子の接触をブロックするために用いられる。それらは、リボ核酸(RNA)の小さい(〜25塩基)領域に対する他の分子の接触をブロックすることができる。モルフォリノは、ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴの頭文字であるPMOと時に称される。
モルフォリノは、RNA内の標的配列を「立体的にブロックする」又はRNA内の標的配列に結合して、さもなくばRNAと相互作用するかもしれない分子をブロックすることによって作用する。完全に非天然の主鎖を有するために、モルフォリノは、細胞性タンパク質によって認識されない。ヌクレアーゼはモルフォリノを分解せず、モルフォリノはtoll様レセプターを活性化しないので、これらは先天性の免疫応答、例として、インターフェロンシステム又はNF−κB媒介性炎症応答を活性化しない。また、モルフォリノは、DNAのメチル化を修飾することが知られていない。したがって、VEGFの発現レベル又は生物活性を低減又は阻害しうるVEGFのいずれかの部位に向けられたモルフォリノは、本発明の方法および組成物に特に有用である。
あるいは、siRNAは、RNAのインビトロ転写のための標準的な手順およびdsRNAアニーリング手順、例えばElbashir et al. (Genes & Dev. 15: 188-200, 2001)、Girard et al. (Nature 442:199-202 (2006))、Aravin et al. (Nature 442:203-207 (2006))、Grivna et al. (Genes Dev. 20: 1709-1714 (2006)))およびLau et al. (Science 313:363-367 (2006))に記載の手順を用いて調製されうる。
Yu et al. (Proc. Natl. Acad. Sci USA, 99:6047-6052, 2002)又はPaddison et al. (Genes & Dev, 16:948-958, 2002)に記載される、短いヘアピンRNA(shRNA)もまた、本発明の方法で使われてもよい。shNAは、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方が単一のRNA分子内に包含され、ヌクレオチド(3以上)のループによって連結されるように、設計される。shRNAは、上記および上掲のYu et al.に記載される標準的なインビトロT7転写合成を用いて合成され、精製されうる。shRNAは、また、細胞内に形質移入され、shRNAのインビボ発現に用いられうるマウスU6プロモーター配列を有する発現ベクター内にサブクローニングされうる。
血管新生のVEGFの役割に関しては多くの情報があるにもかかわらず、良性、前癌又は非転移性の癌における、又はアジュバントないしはネオアジュバント環境におけるVEGFの役割についてはほとんど知られていない。本発明者等は、VEGF特異的アンタゴニストが良性、前癌性又は非転移性の癌の治療のため、休止中の腫瘍又は微小転移性癌の治療のため、腫瘍再発又は再成長の防止のため、又は、癌を発達させるリスクがある被検体における癌の治療又は予防のために用いられうることを発見した。また、VEGF特異的アンタゴニストは、非転移性の癌を有する被検体の治療のたの、根治手術の後の、又は被検体の手術可能な癌の外科的手術の前に治療が施される手術可能な癌を有する被検体の治療のための、アジュバント療法に用いられうる。医療的な適用については以下のように療法、防止、ネオアジュバント療法およびアジュバント療法に分けられるが、これらの分類は必ずしも相互に排他的ではないことは当業者に明らかであろう。
癌なる用語は、前癌性の増殖、良性腫瘍、悪性腫瘍および休止中の腫瘍を含むがこれに限らず、用語癌は、一まとまりの増殖性疾患を包含する。良性腫瘍は、起源の部位に限局化されたままであり、遠位部位に浸潤、侵入又は転移する能力を有していない。悪性腫瘍は、周辺の他の組織に侵入して、障害を与える。また、それらは、起源の部位から切り離れる能力を獲得し、通常はリンパ節が配置されるリンパ系や血流を介して身体の他の部位に拡がりうる(転移する)。休止中の腫瘍は、腫瘍細胞が存在する静止腫瘍であるが、腫瘍の発達は臨床的に見られない。
原発性腫瘍は、それらが起こる組織の種類によって分類され、転移性腫瘍は、癌細胞が由来する組織の種類によって分類される。時間とともに、悪性腫瘍の細胞は、より異常になり、正常細胞のようではなくなる。癌細胞にみられるこの変化は、腫瘍グレードと呼ばれており、癌細胞は、十分に分化されている(低グレード)、中程度に分化されている、ほとんど分化されていない、又は、未分化である(高グレード)と表される。十分に分化した細胞はで全く正常な見かけであり、起源の正常細胞のようである。未分化な細胞は、細胞の起源を決定することがもはや不可能であるほど異常となっている細胞である。
癌を段階付けするために、対癌米国合同委員会はまず、TNM分類システムを使用して、癌、特に固形腫瘍に文字分類を付す。癌は、文字T(腫瘍サイズ)、N(触診可能な節)および/又はM(転移)で示される。T1、T2、T3およびT4は、原発性病巣のサイズの増加を表し、N0、N1、N2、N3は、次第に進行する節の併発を示し、そして、M0およびM1は、遠位転移の有無を反映する。
NCIのサーベイランス、疫学および最終結果プログラム(End Results Program)(SEEG)などの多くの癌レジストリは略式の段階付けを用いる。このシステムは全種類の癌に用いられる。癌の症例を5の主なカテゴリーに分類する。
インサイツ(In situ)は、発生した細胞の層にだけ存在する初期癌である。
限局(Localized)は、発生した臓器に限局しており、拡散の所見が見られない癌である。
局所(Regional)は、近くのリンパ節又は器官および組織に起源の(原発性)部位を越えて蔓延した癌である。
遠位(Distant)は、原発性部位から遠位器官又は遠位リンパ節まで蔓延した癌である。
未知(Unknown)は、段階を表すために十分な情報がない症例を表すために用いる。
一実施態様では、本発明の方法は、腺腫として知られる良性上皮細胞腫瘍の治療のために用いられる。腺腫は腺性起源を有する良性腫瘍である。腺腫は一般的に分泌のために使用する上皮細胞に由来する。上皮細胞は身体の至る所に配置するが、このような細胞のサブセットだけが分泌に使われる。分泌に使われる上皮細胞は腺と呼ばれる特異的な身体の部分を作る。腺は、汗、唾液、母乳、粘液およびホルモン類を含むがこれらに限らず体の多くの物質を形成する仕事を有する。腺腫は、体内のほとんどの腺細胞から形成されうる。
腺腫は、悪性又は癌性の腫瘍と同じように形成されうる。腺腫は、良性であり、他の器官又は組織へと転移しないか又は拡がらない。ほとんどの腺腫が良性のままであるにもかかわらず、腺腫の中には悪性腫瘍に発達するものもあり、発達が起こると、新しい悪性の腺腫は腺癌と呼ばれる。例えば、大腸および直腸の癌は、腺腫又はポリープとして生じ、後に腺癌に発達し得、気管支の腺腫は、肺癌に発達しうる。
しばしば、腺腫は、発達する器官又は腺組織に顕著な影響を及ぼす。しばしば、腺腫は過剰なレベルのホルモン類を分泌する。これが生じると、この作用は罹患者に非常に不快なものとなりうる。場合によって、この作用は生命を脅かすものとなりうる。しかしながら、腺腫の中には明らかな作用のないまま発達するものもある。
腺腫に関連した症状は変化に富む。例えば、線維腺腫と呼ばれる胸部腺腫は、一般的に症状を引き起こさず、罹患者はそれを検出することができないほど小さいかもしれない。しかしながら、他の胸部腺腫は触知できるほど十分に大きいかもしれない。それに反して、肺腺腫は、熱、悪寒、息切れおよび血の混じった咳を引き起こしうる。
腺腫は、血液および尿の試料の採取、超音波画像、コンピューター断層装置(CT)スキャニングおよび磁気共鳴画像(MRI)を含む様々な技術を使用して診断される。一般的に、生検は、腫瘍が良性であるか悪性であるかを決定するために使用される。本発明の方法は、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、腺腫の治療、腺腫再発の治療ないしは予防のために、又は腺腫に関連する危険因子のいずれかを有する被検体における腺腫の予防のために特に有用である。
他の実施態様では、本発明の方法は、良性、前癌性、非転移性、又は休止中の胃腸腫瘍、又は胃腸腫瘍からの微小転移性癌の治療のために用いられる。これには、任意のステージ0、I又はIIの腫瘍;一般的に胃腸癌に先行するか又は胃腸癌に発達する任意の腫瘍又は状態;そして、起源の部位に限局したままで、遠位部位に浸潤、侵入ないしは転移していない任意の胃腸腫瘍が含まれる。任意のポリープ、腺腫、腫瘍、又は消化系、特に食道、胃、肝臓、胆道(胆嚢、胆管、ファーター膨大部)、腸、膵臓、大腸、直腸および肛門の癌が胃腸腫瘍に包含される。以下、これらの詳細について説明する。
肛門癌は、肛門管又は肛門部端の悪性腫瘍である。肛門癌は、肛門部の形成異常としてしばしば始まる。肛門部の形成異常は、異常な変化があるが、周囲組織への浸潤の徴候を示さない肛門の細胞からなる。肛門部の形成異常の最も重症型は、細胞が癌細胞のように見えるが正常細胞が存在する領域を越えて侵入していないインサイツのカルチノーマ(細胞腫)と称される。時間につれて、形成異常は最終的に、細胞が侵襲性になり、転移する能力を獲得するか、又は身体の他の部位へ切り離れるように変化する。肛門部の形成異常は、肛門部の上皮内腫瘍形成(AIN)と称されることが多い。肛門癌が蔓延する場合、通常、周囲組織への直接の侵入又はリンパ系を介するものである。起こりうるが、血液による肛門癌の蔓延はあまり一般的ではない。
いくつかの因子が肛門癌と関係している。最も重要なことに、ヒト乳頭腫ウイルス(HPV)による感染は、肛門癌に関連があることが示されており、子宮頸癌および頭頸部の癌を含むいくつかの他の癌と関係している。他の性感染ウイルスであるヒト免疫不全ウイルス(HIV)は肛門癌との関連があり、HIVに感染している個体はHPVによる感染の危険が高い。肛門癌は肛門癌へ進歩する前に肛門部の形成異常としてまず始まるようであるので、AINの既往歴を有する患者は肛門癌を発達させる危険が高い。さらに、良性肛門部の状態、例えば肛門部の瘻孔、裂肛、肛門周囲膿瘍又は痔核を有する患者では肛門癌の割合が高いようである。
本発明の方法は、初期肛門癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、肛門癌再発の治療ないしは予防のために、又は肛門癌に関連する危険因子のいずれかを有する被検体における肛門癌の予防のために特に有用である。
大腸(colon)は、腸(large intestine)で最も長い部分であり、結腸(large bowel)としても知られる。大腸癌は、西洋諸国において、男性および女性の両方で、癌で共通して3番目に多いタイプである。発病はアフリカ系アメリカ人において最も高く、大腸癌で死ぬ確率も高い。大腸癌のリスクは50歳以降に実質的に上昇するが、毎年、それより若い人たちの多くにも報告されている。一般に、大腸および直腸癌は合わせて分類され、関係している同じ危険因子を有する。大腸癌、ポリープ又は遺伝性の大腸癌症候群(例えばFAPおよびHNPCC)の既往歴又は家族歴を有する個体だけでなく潰瘍性大腸炎又はクローン病患者もすべてリスクが高く、一般の集団よりも若い時期にスクリーニングされる必要がある。大腸癌を有する一等親血縁者(親、兄弟又は子)を有する者は、罹患親類を有しない者の2〜3倍の癌発症リスクを有する。
大腸癌は、臨床医に知られている様々な技術を使用して診断されうる。初期にはいずれの症状も伴わないことが多いので、スクリーニング試験は、初期の大腸癌(例えばポリープ又は腺腫)を診断するために最も有効な方法である。一般に、ポリープは腫瘍に成長し、出血したり大腸を閉塞したりして症状を引き起こす。これらの症状には、直腸からの出血、排便後の便ないしはトイレへの出血、便の形状の変化(すなわち細線化)、腹部の痙攣痛、および排便が起こらない時の排便感などがある。間欠的に出血しうる腫瘍およびポリープでは、血液は、糞便潜血検査(FOBT)と呼ばれる試験によって、便試料において検出されうる。FOBTのみでは、およそ24%の癌を発見するのみである。軟性S字結腸鏡検査又は結腸内視術もまた、結腸直腸癌を診断するために用いられうる。
ステージ0(インサイツのカルチノーマとも称される)−癌は大腸壁の最も外側部分に限局される。
ステージI−癌は大腸壁の第二および第三の層へと拡がっているが、外側の大腸壁以外には拡がっていない。これは、デュークスA大腸癌とも称される。
ステージII−癌は大腸壁を越えて拡がっているが、いずれのリンパ節にも浸潤していない(リンパ節は感染および疾患に対向する際に働く小器官である)。これは、デュークスB大腸癌とも称される。
ステージIII−癌は大腸壁を越えてリンパ節にも拡がっているが、身体の他の領域までは拡がっていない。これは、デュークスC大腸癌とも称される。
ステージIV−癌は身体の他の領域(すなわち肝臓および肺)に拡がっている。これは、デュークスD大腸癌とも称される。
本発明の方法は、初期大腸直腸癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、結腸直腸癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような結腸直腸癌の危険因子のいずれかを有する被検体における結腸直腸癌の予防のために特に有用である。
食道は、喉と胃を連結する筋肉の管である。大多数の食道癌は、食道の内壁(粘膜)から発達し、食道の残りを構成する筋肉又は軟骨細胞からは発達しない。食道の内壁は、喉から胃につれて変化している点でいくらか特有なものである。上方の(近位の)食道では、食道の内壁は喉の内壁と似ており、扁平細胞からなる。したがって、癌がこの領域で発達すると、この癌は通常扁平上皮癌である。下方の(遠位の)食道では、より共通した種類の癌は、腺癌と呼ばれている。
浸潤癌に加えて、患者は、インサイツのカルチノーマと称される前癌性の病変と診断されることが多い。これらの前癌性病変は、扁平上皮癌又は腺癌の発達の前に観察されうる。インサイツのカルチノーマは、食道の内壁がより深い組織へ浸潤しないで、癌性の変化と類似の変化を起こす場合に、インサイツのカルチノーマが生じる。したがって、細胞自体は癌に似た資質を有するが、浸潤は生じず、蔓延する危険もない。癌そのものの前駆体であると思われる他の種の病変は、バレット食道と呼ばれており、以降に詳細に説明する。
これは、通常、下部食道の腺癌のリスクにある患者群と対比される。扁平上皮癌と比較した場合、腺癌は以前はあまり一般的でない疾患であった。しかしながら、最近では扁平上皮癌よりより一般的になっている。腺癌は一般に、バレット食道の環境において起こると考えられており、このバレット食道とは食道の通常の内壁が胃に似ている内壁に置き換わっている状態である。バレット食道は内視鏡検査によって診断され、この光ファイバーカメラは食道の中を見るため、および疑わしい領域を生検するために用いられる。バレット食道は、下部食道が胃酸に慢性的に曝されていることによって生じると考えられている。この曝露は、胃食道逆流疾患(GERD)患者において起こり、これによって、食物による又は睡眠中の夜間の、胸やけ、膨満感、食欲不振又は胃痛の症状を患者に引き起こす。慢性GERD患者は、バレット食道を発達させるリスクがあり、それによって、食道の腺癌を発症するリスクが高い。
本発明の方法は、初期食道癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、食道癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような食道癌の危険因子のいずれかを有する被検体における食道癌の予防のために特に有用である。
胆嚢は、胆汁を格納して、濃縮する小さい西洋梨状の器官である。胆嚢および肝臓は肝管によってつながっている。胆嚢の原発性癌は、毎年米国ではおよそ6000人の成人に罹患している。これの癌の多くは腺癌であり、顕微鏡下の腫瘍細胞の出現に応じて、小突起、結節および管などのサブタイプがある。あまり一般的でないサブタイプには扁平細胞、印環細胞、および腺扁平(腺棘細胞腫)が含まれる。
胆嚢癌は高齢の患者に見られることが多く、診断時の年齢の正中値は62〜66年となる。女性に生じることが多く、女性:男性の比率はおよそ3:1である。
胆石、高いエストロゲンレベル、タバコ喫煙、アルコール、肥満および女性と関係しているが、胆嚢癌の原因は不明である。また、炎症性腸疾患(潰瘍性大腸炎およびクローン病)患者は、おそらく肝外胆道癌を発症する確率が10倍である。
一般に、胆嚢癌は、一般的な肝・胆道系疾患を示唆する血液の様々な物質の異常なレベルを調査するために代謝化学および肝機能パネルを含む実験室的試験、および詳細な既往歴および身体検査により診断される。尿検査は、通常、これら物質のいくつかの尿中レベルを評価するために行われる。超音波、MRI、胆管造影およびCTスキャンのような更なる技術もまた、用いられてもよい。
本発明の方法は、初期胆嚢癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、胆嚢癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような胆嚢癌の危険因子のいずれかを有する被検体における胆嚢癌の予防のために特に有用である。
胃癌は胃の癌である。米国では、胃癌は現在14番目に一般的な癌として分類される。40歳以前に胃癌を見ることはまれであり、その発病はその後年齢と共に増加する。
90%以上の胃癌は胃の内壁から生ずる。この内壁は腺を有するため、それから生じる癌は腺腫と称され、もっと進行した場合には腺癌と称される。胃に生じうる他の癌(リンパ組織から生じるリンパ腫、筋組織から生じる平滑筋肉腫、腺のない内壁から生じる扁平細胞カルチノーマ)があるが、その大多数は腺癌である。
また、研究により、ヘリコバクターピロリ感染が胃癌と関連づけられた。H.ピロリは幽門胃潰瘍および慢性萎縮性胃炎と関係しており、これにより、H.ピロリに感染した患者において胃癌の発症が高いことが説明されうる。しかしながら、胃癌の発達におけるH.ピロリの正確な役割は不明なままである。
様々な試験を用いて、二倍のコントラストバリウムラジオグラフ(「上部GI」又は「バリウム嚥下」と称する)および上部内視鏡検査を含む胃癌を正確に識別する。CTスキャン、PETスキャンおよび腹腔鏡検査を含む他の手順が、胃癌の診断のために用いられる。
本発明の方法は、初期胃癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、胃癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような胃癌の危険因子のいずれかを有する被検体における胃癌の予防のために特に有用である。
多くの良性肝腫瘍がある。血管腫は、肝臓の最も一般的な良性腫瘍であり、肝臓内で良性の血液の充満した腫瘍が形成する場合に生じる。他の良性腫瘍には、腺腫および局所性の結節性過形成が含まれる。これらの腫瘍は周囲組織を侵襲しないし転移もしないが、X線撮影画像上で良性と悪性の腫瘍の相違を識別することは難しいことが多い。
肝細胞から生じる癌である肝細胞癌(HCC)は、最も一般的な種類の原発性肝癌であって、すべての肝癌の約70%を占める。肝臓内で胆管から生じる癌は、胆管細胞癌として知られており、すべての肝癌の10〜20%を示す。これらの癌は、肝臓内の胆管から生じるか(肝内胆管癌として知られる)、又は肝臓以外から引き起こすならば胆管内から生じうる(肝外胆管癌として知られる)。まれに他のタイプの癌が肝臓内で起こりうる。これらには、血管肉腫(悪性の血液充満腫瘍)および、肝芽腫(非常に若い子供において発症するまれな癌)などがある。
肝癌と関係している多くの危険因子がある。米国では、肝癌の最も一般的な危険因子は肝硬変である。C型肝炎ウイルス(HCV)の慢性感染もまた、米国の肝癌の一般的な原因である。世界的には、他の危険因子、例えばB型肝炎ウイルス(HBV)の慢性感染およびアフラトキシンB1食品汚染が、より一般的である。
さらに、肝癌が疑われるときに、超音波、CTスキャン、MRI、アンジオグラフィ、フルオロデオキシグルコース-ポジトロン放出断層撮影(FDG-PET)、生検および探索ラポラトミー(exploratory laporatomy)を行って肝癌を更に診断および段階付けする。
本発明の方法は、初期肝癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、肝癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような肝癌の危険因子のいずれかを有する被検体における肝癌の予防のために特に有用である。
膵臓は、胃および脊椎との間の、腹部内の深くに位置する、西洋梨状の腺で長さおよそ6インチである。3つの部位があり、最も広い部分は頭部と呼ばれ、中間の部位は体部であり、薄い端は尾部と呼ばれている。膵臓はインスリンを含むホルモン類を作る役割を担い、血糖値および酵素の制御を支えており、この酵素類は食物の消化のために腸によって使われる。これらの酵素は膵臓内の管を介して輸送され、酵素を胃に運ぶ総胆管に流れ込む。膵癌の発病は、60から80歳の間で最も高く、40歳未満の人々には滅多に見られない。男性と女性に等しく観察されるが、近年では女性の割合が上昇しており、これは女性の喫煙率が上がっているからかもしれない。タバコ喫煙者は、2〜3倍膵癌を発症しやすい。母、父又は兄弟が疾患に罹った場合、そのリスクは3倍になる。胸部又は大腸の癌の家族歴もリスクが上がる。このリスクの増加は、癌を引き起こしている遺伝子の遺伝された突然変異による。この疾患の実際の原因、知られていないが、遺伝性遺伝子の変化および環境曝露によって生じる変化の組み合わせの結果であると考えられる。
医師が患者が膵癌にかかっているかもしれないと思うときに、超音波、CTスキャンおよび内視鏡検査を用いて癌を診断して段階付けする。膵癌患者の中には、高いレベルの炭水化物抗原19−9(CA19−9)を有する者もいる。高いレベルを有する患者では、他の試験と組み合わせて診断を確認する際、そして、治療の間に疾患をモニターする際に有用である。治療中、定期的にレベルを調べ、癌が安定しているか悪くなっているかを調べることができる。
本発明の方法は、初期肝癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、肝癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような肝癌の危険因子のいずれかを有する被検体における肝癌の予防のために特に有用である。
小腸(small intestine)としても知られる小腸(small bowel)は、胃と結腸(colon)と称される大腸(large bowel)とを連結する消化管の一部である。小腸には3つの異なる部位がある。1)十二指腸、2)空腸、および3)回腸。驚くべきことに、残りの消化管と比較して小腸は驚くほど長い長さにもかかわらず、小腸癌は非常にまれである。これには、腸で始まった癌、又は他の身体の部位から広まってきた癌が含まれる。具体的には、小腸癌は、米国で診断されたすべての腸癌の5%未満、そして、すべての癌のおよそ0.5%を占めている。
ほとんどの小腸癌の原因は不明である。しかしながら、小腸癌を発症する可能性を増やしうるいくつかの危険因子となりうるものがある。いくつかの例として、クローン病、脂肪便症疾患、ポイツ・ジェガーズ症候群、および腸管ポリープ症などがある。
顕微鏡下の所見および起源の細胞によって、小腸癌には4つの主要なタイプがある。腺癌は最も一般的なタイプである。典型的に、腸の内壁又は内部の層において始まって、通常十二指腸に起こる。二つ目のタイプは肉腫であり、代表的なサブタイプは平滑筋肉腫であり、この平滑筋肉腫は小腸の筋肉壁において始まって、通常回腸に起こる。三つ目のタイプはカルチノイドであり、小腸の特定のホルモン産生細胞において始まって、通常回腸、時に虫垂(そ大腸の第一部位である)で起こる。四つ目のタイプはリンパ腫であり、小腸のリンパ組織において始まって、通常空腸に起こる。リンパ腫の最も代表的なサブタイプは非ホジキンリンパ腫である。小腸癌のまれなサブタイプは消化管間質腫瘍であり、小腸のいずれかの部位で生じうる。
小腸の癌は、通常、完全な臨床既往歴、身体検査および便試料、内視鏡検査又は結腸内視術、バリウムC線、CTスキャン、超音波又は他のX線を使用して診断される。
本発明の方法は、初期の小腸癌の治療のために、例えば休止中の腫瘍又は微小転移性癌を有する被検体における、小腸癌再発の治療ないしは予防のために、又は上記のような小腸の癌の危険因子のいずれかを有する被検体における小腸の癌の予防のために特に有用である。
本発明の更なる態様では、本発明者等は、VEGF特異的アンタゴニストが良性、前癌性又は早い段階の癌の治療のために、又は、腫瘍再発の治療又は防止のために使われうるということを発見した。この方法を用いて癌その物を治療するか、又は転移性ないしは侵襲性の段階又はより高いグレードないしはステージへの癌の進行を予防することができる。例えば、本発明の方法は、ステージI又はより高い段階の腫瘍への進行を予防するために、ステージ0の癌又はポリープを有する被検体を治療するために用いられうる。同様に、ステージIIの癌を有する患者では、この方法は、ステージIII又はステージIVの癌への癌の進行を予防するために用いてもよい。
また、VEGF特異的アンタゴニストは、腫瘍の再発を予防するために用いてもよい。例えば、腫瘍が同定され、治療された場合(例えば、化学療法により又は外科的に取り除かれる)、VEGF特異的アンタゴニストは、局所的な結腸直腸腫瘍の再発又は結腸直腸腫瘍の転移を予防するために用いてもよい。腫瘍の再発の予防のために、VEGF特異的アンタゴニストは、例えば、休止中の腫瘍又は微小転移性癌を治療するため、又は休止中の腫瘍又は微小転移性癌の成長又は再成長を予防するために用いてもよい。この場合、これらの腫瘍は臨床上検出されるかもしれないし、検出されないかもしれない。
また、本発明者等は、VEGF特異的アンタゴニストが、癌に罹ったことがない被検体、又は癌を発症するリスクにある被検体において癌を予防するために用いられうることを発見した。癌と関係していることが知られている様々な危険因子があり、それらの多くを上記している。例示的な危険因子には、加齢(すなわち、50歳以上)、癌の家族歴、HPV、HIV、HBVおよびHCVによるウイルス感染、経口避妊薬使用、肝硬変、潰瘍性大腸炎、バレット食道、H.ピロリ感染およびポリープ又は形成異常の存在が含まれる。さらに、遺伝性癌症候群を有することが知られている被検体は、癌を発症する危険があると考えられる。このような症候群の非限定的な例には、APC、HNPCC、ガードナー症候群、およびMEN1が含まれる。癌を発症する更なる危険因子は、臨床評価に応じて決定され得、ホルモン類又は血液タンパク質、例えばPSA(前立腺癌) CA−125(卵巣癌)、AFP(肝癌)、DCP(肝癌)およびCA19−9(膵癌)のレベルの上昇などがある。
本発明は、被検体、例えばヒト患者の手術可能な癌の外科的除去の前のネオアジュバント療法であって、、患者(例えば、ここで患者は、腫瘍および/又は癌と診断されている)にVEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体の有効量を投与することを含む方法を提供する。場合によって、VEGF特異的アンタゴニストは、少なくとも一の化学療法剤と組み合わせて投与される。また、癌の再発を予防するために手術後に被検体にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を投与する更なる工程は、本明細書に記載のネオアジュバント療法によって使用されてもよい。手術後に被検体にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を投与する更なる工程を含む方法では、本明細書に記載のいずれかのアジュバント法が用いられてもよい。
例えば、一方法は、以下の工程を含む被検体の癌を治療することを含む。a) 各治療周期が、所定の間隔で、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの有効量と、場合によって少なくとも一つの化学療法剤を被検体に投与することを含む、複数の治療周期を含む第一段階、b) 癌が取り除かれる根治手術、そして、場合によって、c) 各維持周期が、所定の間隔で、いずれの化学療法剤も伴わずに、又はいずれかの化学療法剤と共に、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの有効量を被検体に投与することを含む、複数の維持周期を含む第二段階。
ある例では、ネオアジュバント療法はDFS又はOSを延ばすために投与され、このときDFS又はOSは抗体の最初の投与のおよそ2〜5年後に評価される。ある実施態様では、被検体のDFS又はOSは、治療の開始、又は最初の診断のおよそ3〜5年、およそ4〜5年、又は少なくともおよそ4、又は少なくともおよそ5年後に評価される。典型的に、VEGF特異的アンタゴニストは、VEGF抗体、例えばベバシズマブである。
VEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体は、被検体、例えばヒト患者に、公知の方法、例えばボーラスとしてないしはある期間にわたって連続的な注入による静脈内投与に従って、又は、筋肉内、腹膜内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄膜下、経口、局所的、又は吸入の経路によって投与される。抗体の静脈内投与が好ましい。
通常、化学療法剤は、投与される場合、公知の用量で投与されるか、又は抗代謝性化学療法剤の投与に帰因するネガティブな副作用ないし薬剤の組合せ作用に従って、場合によって、低い用量で投与される。このような化学療法剤の調製および投薬計画は、製造業者の指示に従って用いられるか、技術者によって、経験的に決定されうる。化学療法剤がパクリタキセルである場合、好ましくは、毎週(例えば80mg/m2で)又は3週間ごと(例えば175mg/m2又は135mg/m2で)に投与される。好適なドセタキセル用量には、60mg/m2、70mg/m2、75mg/m2、100mg/m2(3週間ごと);又は、35mg/m2又は40mg/m2(毎週)が含まれる。
アンスラサイクリン(例えばドキソルビシン又はエピルビシン)が被検体に投与される場合、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの投与の前および/又は後に投与されるのが好ましい。しかしながら、循環器系毒性を低減した、変性アンスラサイクリン、例としてリポソームドキソルビシン(TLC D-99(MYOCET(登録商標))、ペグ化リポソームドキソルビシン(CAELYX(登録商標))、又はエピルビシンをVEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブと組み合わせてもよい。
上記の治療内容に加えて、患者は、放射線療法を受けてもよい。
本発明のある実施態様では、投与されたVEGF抗体は、インタクトな、ネイキッド抗体である。しかしながら、VEGF抗体は細胞障害性剤とコンジュゲートされてもよい。ある実施態様では、コンジュゲートされた抗体および/又は結合する抗原が細胞によって内部移行され、その結果結合する癌細胞を殺す該コンジュゲートの治療効果が増す。一実施態様では、細胞障害性剤は癌細胞内の核酸を標的とするか、又は核酸を干渉する。このような細胞障害性剤の例には、メイタンシノイド、カリケアマイシン、RNA分解酵素およびDNAエンドヌクレアーゼなどがある。
本発明は、根治手術の後に、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体を非転移性の癌を有する被検体に投与することを含むアジュバント療法の方法を提供する。
例えば、一方法は、以下の工程を含みうる。a) 各治療周期が、所定の間隔で、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの有効量と、場合によって少なくとも一つの化学療法剤を被検体に投与することを含む、複数の治療周期を含む第一段階、そして、b) 各維持周期が、所定の間隔で、いずれの化学療法剤も伴わずに、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブの有効量を被検体に投与することを含む、複数の維持周期を含む第二段階、このとき組み合わせた第一および第二の段階は最初の術後治療後少なくとも1年間継続する。一実施態様では、第一段階は、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブと第一化学療法投薬計画が投与される第一の複数の治療周期の後に、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブと第二化学療法投薬計画が投与される第二の複数の治療周期を含む。
ある例では、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体は、無病生存率(DFS)又は全生存率(OS)を延長させるためのある量で投与され、このときDFS又はOSは抗体の最初の投与のおよそ2〜5年後に評価される。ある実施態様では、被検体のDFS又はOSは、治療の開始又は最初の診断の、およそ3〜5年、およそ4〜5年、又は少なくともおよそ4又は少なくともおよそ5年後に評価される。
VEGF特異的アンタゴニストは単剤として投与されてもよい。他の実施態様では、患者は、VEGF特異的アンタゴニストと一又は複数の化学療法剤との組合せにより治療される。いくつかの実施態様では、少なくとも一の化学療法剤はタキソイドである。併用投与には、異なる製剤又は単一の薬物製剤を用いて同時投与ないしは同時的な投与、および何れかの順序での連続投与が含まれ、このとき場合によって、両方(又はすべて)の活性薬剤が同時にそれらの生物活性を示す期間があることが好ましい。ゆえに、化学療法剤は、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体の投与の前か後に投与されてもよい。この実施態様では、化学療法剤の少なくとも一の投与とVEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体の少なくとも一の投与との間の経過時間は、好ましくはおよそ1か月以下および最も好ましくはおよそ2週間以下である。あるいは、化学療法剤とVEGF抗体は、単一の製剤又は異なる製剤で同時に患者に投与される。化学療法剤(例えばタキソイド)とVEGF抗体(例えばベバシズマブ)の組合せによる治療により、相乗的、又はより大きな付加的な治療的利点を患者にもたらしうる。
アンスラサイクリン(例えばドキソルビシン又はエピルビシン)が被検体に投与される場合、アンスラサイクリン/シクロホスファミドの併用が手術後であってVEGF抗体とタキソイドの投与の前に被検体に投与された以下の実施例に開示されるプロトコールなどにおいて、VEGF抗体の投与の前および/又は後に投与されるのが好ましい。しかしながら、循環器系毒性を低減した、変性アンスラサイクリン、例としてリポソームドキソルビシン(TLC D-99(MYOCET(登録商標))、ペグ化リポソームドキソルビシン(CAELYX(登録商標))、又はエピルビシンをVEGF抗体と組み合わせてもよい。
本明細書中の本発明は、根治手術の後に、VEGF特異的アンタゴニスト、例えばVEGF抗体の有効量と少なくとも一の化学療法剤とを被検体に投与することと、被検体の少なくともおよそ80%(好ましくは少なくともおよそ85%)においておよそ4年後に疾患の再発が起こっていないことを確認するために、4年又はそれ以上の後に被検体を評価することを含む、非転移性の癌を有するヒト被検体集団における非転移性の癌の治癒方法を提供する。集団は、3000以上のヒト被験体を含んでいてもよい。
本発明はさらに、根治手術の後に、有効量のベバシズマブと少なくとも一の化学療法剤とを被検体に投与することを含む、非転移性の癌を有するヒト被検体集団において疾患再発の可能性を低減する方法であって、このとき疾患再発の可能性が、タキソイドのみによって治療された被検体と比較して3年で少なくともおよそ50%低減している方法に関する。
VEGF抗体と組み合わされてもよい他の治療薬には、他のVEGFアンタゴニスト又はVEGFレセプターアンタゴニスト、例えば第二の抗VEGF抗体、VEGF変異体、可溶性VEGFレセプター断片、VEGF又はVEGFRをブロックすることができるアプタマー、中和抗VEGFR抗体、VEGFRチロシンキナーゼのインヒビターおよびこれらいずれかの組み合わせのいずれか一又は複数が含まれる。本発明の抗体による組み合わせ腫瘍療法のために有用な他の治療的薬剤には、腫瘍増殖に伴う他の因子、例として、EGFR、ErbB2(Her2としても知られる)、ErbB3、ErbB4又はTNFのアンタゴニストが含まれる。ある例示的な実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストの組成物は、抗ErbB2抗体、又はその断片ないしはその誘導体(例えばハーセプチン(登録商標)抗体)を含まない。ある実施態様では、抗VEGF抗体は、VEGFレセプター、FGFレセプター、EGFレセプターおよびPDGFレセプターなどの一又は複数のチロシンキナーゼレセプターを標的とする小分子レセプターチロシンキナーゼインヒビター(RTKI)と組み合わせて用いられうる。多くの治療的小分子RTKIは、当分野で公知であり、バタラニブ(PTK787)、エルロチニブ(TARCEVA(登録商標))、OSI−7904、ZD6474(ZACTIMA(登録商標))、ZD6126(ANG453)、ZD1839、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、セマキシニブ(SU5416)、AMG706、AG013736、イマチニブ(GLEEVEC(登録商標))、MLN−518、CEP-701、PKC−412、ラパチニブ(GSK572016)、VELCADE(登録商標)、AZD2171、ソラフェニブ(NEXAVAR(登録商標))、XL880およびCHIR−265が含まれるが、これらに限定されるものではない。
上記の治療内容に加えて、患者は、放射線療法を受けてもよい。
ある実施態様では、投与されたVEGF抗体は、インタクトな、ネイキッド抗体である。しかしながら、VEGF抗体は細胞障害性剤とコンジュゲートされてもよい。ある実施態様では、コンジュゲートされた抗体および/又は結合する抗原が細胞によって内部移行され、その結果結合する癌細胞を殺す該コンジュゲートの治療効果が増す。一実施態様では、細胞障害性剤は癌細胞内の核酸を標的とするか、又は核酸を干渉する。このような細胞障害性剤の例には、メイタンシノイド、カリケアマイシン、RNA分解酵素およびDNAエンドヌクレアーゼなどがある。
VEGF特異的アンタゴニスト組成物は、医学的実用性に合わせた様式で調製し、1回分に分けて、投与される。ここで考慮する要因は、治療する特定の疾患、治療する特定の被検体、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の運搬部位、投与の方法、投与の日程計画、および医師が知る他の因子を含む。投与されるVEGF特異的アンタゴニストの「治療上有効量」は、このようなことを考慮して調整され、良性、前癌性又は初期の癌を予防、改善、又は治療、又は安定化させるために、又は例えば、ネオアジュバント又はアジュバント環境において、腫瘍、休止中の腫瘍、又は微小転移性癌の発生又は再発を治療又は予防するために必要な最少量である。VEGF特異的アンタゴニストは必ずではないが場合によって、癌ないしは癌を発症するリスクを予防又は治療するために現在用いられる一又は複数の薬剤とともに製剤化される。他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するVEGF特異的アンタゴニストの量、疾患又は治療の種類、および上記の他の因子によって決まる。これらは、一般的に、ここに記載されるものと同じ用量および投与経路で、又はここに記載される用量のおよそ1〜99%で、用いられる。
ある例では、ベバシズマブはVEGF特異的アンタゴニストである。ベバシズマブは、4ml又は16mlのベバシズマブ(25mg/ml)を送達するために、100mgおよび400mgの防腐剤を含まない、使い捨てのバイアルで治療的使用のために供給される。100mgの生成物は、240mgのα,α-トレハロース無水和物、23.2mgのリン酸ナトリウム(一塩基性、一水和物)、4.8mgのリン酸ナトリウム(二塩基性、無水)、1.6mgのポリソルベート20および注入用の水、USPに製剤化される。400mgの生成物は、960mgのα,α-トレハロース無水和物、92.8mgのリン酸ナトリウム(一塩基性、一水和物)、19.2mgのリン酸ナトリウム(二塩基性、無水)、6.4mgのポリソルベート20および注入用の水、USPに製剤化される。
通常、良性、前癌性又は初期の癌の緩和ないしは治療又は癌(良性又は悪性)のアジュバントないしはネオアジュバント療法は、癌と関係する一又は複数の症状又は医学的な問題を少なくすることを伴う。薬剤の治療上有効量により、腫瘍の癌細胞数を(例えば、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%又はそれ以上)低減すること、腫瘍のサイズを低減すること、腫瘍量を低減すること、末梢器官への癌細胞浸潤を阻害する(すなわち、ある程度低減するかおよび/又は停止する)こと、腫瘍の脈管密度を低減すること、腫瘍転移を阻害すること、腫瘍成長又は腫瘍細胞増殖を低減するか又は阻害すること、休止中の腫瘍の成長を低減するか又は予防すること、微小転移性癌の成長又は増殖を低減するか又は予防すること、(例えばアジュバント療法において)治療ないしは除去後の腫瘍の再増殖を低減するか又は予防すること、良性、前癌性又は非転移性の腫瘍ないしは悪性腫瘍に罹りやすい、又は診断された被検体のDFS又はOSを増やす又は延ばすこと、(例えばネオアジュバント療法において)手術が可能になるまで腫瘍のサイズを低減すること、および/又は癌関連の症状の一又は複数をある程度軽減すること、の一又はいずれかの組み合わせを達成することができる。いくつかの更なる実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストは、被検体の癌の発生又は再発を予防するために用いられうる。ある例では、癌再発の防止は、疾患再発が集団の少なくともおよそ80%で生じなかったことを確認するために、およそ4年後に被検体集団において評価される。他の例では、疾患再発の予防はおよそ3年に評価され、このとき疾患再発が、化学療法剤単独により治療された被検体と比較して少なくともおよそ50%低減している。
一実施態様では、本発明は、良性、前癌性又は非転移性の腫瘍に罹りやすい又は診断された被検体の生存期間を延ばすために用いられうる。生存期間は、薬剤の第一投与から死までの時間と定められる。また、生存期間は、治療群対対照群の層別化した危険率(HR)で測定することができ、それは治療の間の患者の死のリスクを表す。
さらに他の実施態様では、本発明の治療は、癌に罹りやすい又は癌と診断された被検体、例えばヒト患者であって、様々な抗癌療法によって治療されている集団において有意に応答速度を増加する。応答速度は、治療に反応した治療された患者のパーセンテージとして定められる。一態様では、VEGF特異的アンタゴニストおよび手術、放射線療法、又は一又は複数の化学療法剤を用いた本発明の組合せ治療は、手術、放射線療法又は化学療法のみで治療された群と比較して、治療された患者群において応答速度を有意に上げ、その増加は0.005未満のカイ二乗p値を有する。
癌の治療の治療的有効性の更なる測定値は、米国特許出願公開番号20050186208において記述される。
場合によって、しかし、好ましくは、製剤は、薬学的に許容可能な塩、一般的に、例えば塩化ナトリウムを、好ましくは生理的濃度で含有する。場合によって、本発明の製剤は、薬学的に許容可能な防腐剤を含有してもよい。いくつかの実施態様では、保存の濃度は、0.1から2.0%、一般的にv/vの範囲である。好適な防腐剤には製薬の分野で知られているものが含まれる。ベンジルアルコール、フェノール、m−クレゾール、メチルパラベンおよびプロピルパラベンは、防腐剤の例である。場合によって、本発明の製剤は、0.005〜0.02%の濃度で、薬学的に許容可能な界面活性剤を含んでもよい。
活性成分はまた、コロイド性薬物デリバリーシステム(例えば、リポソーム、アルブミンマイクロカプセル、ミクロエマルション、ナノ−粒子、およびナノカプセルなど)又はマクロエマルション中、例えば、それぞれ、コアセルベーション法又は界面重合法によって製造された、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−(メチルメタシラート)(poly-(methylmethacylate) マイクロカプセルに取込むことができる。このような技術は、上掲のRemington's Pharmaceutical Sciencesにおいて開示される。
例えば、VEGF特異的アンタゴニストが抗体である場合、抗体は、非経口的、皮下、腹膜内、肺内、鼻腔内、局所の免疫抑制性治療のために所望するならば、病巣内の投与を含む、任意の適切な手段によって投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹膜内、又は皮下の投与が含まれる。さらに、抗体は、特に抗体の用量を低減したパルス注入によって最適に投与される。好ましくは、投薬は、投与が短期であるか長期であるかにある程度依存して、注射、最も好ましくは静脈内又は皮下注射によってなされる。
あるいは、VEGF特異的アンタゴニストをコードする核酸配列を含有する阻害性核酸分子又はポリヌクレオチドは、被検体の適切な細胞に送達されてもよい。ある実施態様では、核酸は、腫瘍そのものに対するものであってもよい。
核酸は、使用されるベクターに適切な任意の手段によって細胞に導入されてもよい。多くのこのような方法は当分野で周知である(上掲のSambrook et al.、およびWatson et al., Recombinant DNA, Chapter 12, 2d edition, Scientific American Books, 1992)。遺伝子運搬の方法の例には、リポソームが媒介する形質移入、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム/DEAEデキストラン方法、遺伝子銃、およびマイクロインジェクションが含まれる。
また、本発明は、本発明の2以上のVEGF特異的アンタゴニストの組み合わせ、又は少なくとも一のVEGF特異的アンタゴニストと一又は複数の付加的抗癌療法との組み合わせの使用を特徴とする。抗癌療法の例としては、手術、放射線療法(照射療法)、生物療法、免疫療法、化学療法又はこれらの療法の組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらに、細胞障害性剤、抗血管形成および抗増殖性の薬剤が、VEGF特異的アンタゴニストと組み合わせて用いられてもよい。
ある例では、VEGF特異的アンタゴニストは、根治手術後の非転移性癌の治療のためのアジュバント療法として使われる。この例では、VEGF特異的アンタゴニストは、少なくとも一の付加的化学療法剤の有無にかかわらず提供されてもよい。
他の例では、VEGF特異的アンタゴニストは、手術の前に手術可能な癌の治療のためのネオアジュバント療法として使われる。この例では、VEGF特異的アンタゴニストは、少なくとも一の付加的化学療法剤の有無にかかわらず手術の前に提供されてもよい。
また、本明細書中の製剤は、治療される特定の徴候の必要に応じて、一よりも多い活性な化合物、好ましくは互いに悪影響を与えない相補的活性を有するものを含有してもよい。例えば、一製剤中に、EGFR、VEGF(例えばVEGF上の異なるエピトープに結合する抗体)、VEGFR又はErbB2(例えばハーセプチン(登録商標))に結合する抗体をさらに提供することが望ましい。ある例示的な実施態様では、VEGF特異的アンタゴニストのための組成物は、抗ErbB2抗体又はその断片ないしはその誘導体(例えばハーセプチン(登録商標)抗体)を含まない。あるいは、又は、さらに、組成物は、細胞障害性剤、サイトカイン、増殖阻害性剤および/又は小分子VEGFRアンタゴニストを含んでもよい。このような分子は、意図する目的のために有効である量で、組み合わされて適切に存在する。
VEGF特異的アンタゴニストは、単独で、又は、他の抗癌治療的化合物と組み合わせて、キットとして包装されてもよいキットは、患者への単位用量の投与を支援する任意選択成分、例えば粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用シリンジ、カスタマイズされたIV運搬システム、吸入器などを含んでもよい。さらに、単位用量キットは、組成物の調製および投与のための指示を含んでもよい。キットは、一患者のための1回使用の単位用量、特定の患者のための複数回使用として製造されてもよいし(一定用量で、又は、このとき個々の化合物が治療進行につれて効力が変化しうる)、又は、キットは、複数の患者への投与に適する複数用量を含んでもよい(「ばら包装」)。キット構成成分は、カートン、ブリスター包装、瓶、チューブなどに積められてもよい。
本発明の他の一実施態様では、上記の疾患の治療のために有用な材料を含有している製造品が提供される。製造品は、容器と、ラベルと、パッケージ挿入物とを具備する。適切な容器には、例えば瓶、バイアル、注射器などが含まれる。容器はガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成される。容器は、状態の治療に有効な組成物を保持し、無菌のアクセスポートを有してもよい(例えば、容器は、皮下注射針で穿孔可能なストッパを有する静脈注射用溶液のバッグ又はバイアルでもよい)。組成物中の少なくとも一の活性薬剤は、抗VEGF抗体である。容器上又は容器に添付されたラベルは、組成物が選択の症状を治療するために用いられることを示す。製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えばリン酸緩衝生理食塩水、リンガー液およびデキストロース溶液を含む第二の容器を更に具備してもよい。さらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業上および使用者の見地から望ましい他の材料を含んでもよい。さらに、製造品は、例えば、組成物が他の組成物と組み合わされて用いるべきではないという警告、又は抗VEGF抗体組成物のみを又は抗癌組成物と組み合わせて患者に投与するように組成物の使用者に指示することを含む、使用のための指示を有するパッケージ挿入物を具備する。「使用のための指示」なる用語は、適用治療、医薬、治療、治療計画などについての示唆を、例えばパッケージ挿入物の形態ないしは他の書面の販促用材料の形態で書面などの任意の手段で提供することを意味する。
以下のハイブリドーマ細胞株は、ブダペスト条約の規定の下に、American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USAに寄託されている。
抗体名称 ATCC番号 寄託日
A4.6.1 ATCC HB−10709 1991年3月29日
家族性腺腫性ポリポーシス(FAP)および大多数の散発性結腸直腸癌の症候群はAPC遺伝子の突然変異によって生じる。FAP患者は、上部胃腸(GI)管の腫瘍および類線維腫を含む、結腸外の腫瘍に加えて、下部胃腸(GI)管に数百から数千もの腺腫ポリープを発達させる。コドン850のヘテロ接合性切断対立遺伝子を有するApcmin/+マウスは、生殖細胞系APC突然変異をもつFAP患者のポリープ症のいくつかの特徴を呈する(Moser et al., Science 247:322-324 (1990)、Su et al., Science 256:668-670 (1992))。Apcmin/+マウスでの腫瘍形成の発生は早期成体期であり、一般的にこの動物は、C57BL/6遺伝的背景において60〜150の腸管ポリープを発達させる。腫瘍発達によりマウスの寿命が重度に損なわれ、通常5か月齢のごろに貧血症および/又は低タンパク血症で死に至る(Moser et al., Science 247:322-324 (1990))。FAPを有するヒトが一般的に結腸腺腫を発達させるのに対して、Apcmin/+マウスは、理由は完全に理解されてはいないが、小腸に大多数のポリープを発達させる。これらのポリープは、直径1〜2mmのサイズに達し、より大きなポリープ(直径最高4mm)が低い頻度で生じる。まれ、一般に1動物あたり0〜3の結腸腺腫のみが観察される。
異種移植片のモデルは天然の環境での腫瘍の発達を繰り返さないので、異種移植片の腫瘍成長のメカニズムを調査することにいくつかの制限がある。天然に生じる、遺伝的に罹患しやすい非悪性腫瘍モデルに対する抗血管形成療法の効果を調べるために、本発明者等は腸管腺腫のApcmin/+モデルを調べた。以下の実施例では、例示的なVEGF特異的アンタゴニストである抗VEGF−A mAbによる短期および長期の治療の後、並びに腸管上皮細胞のCre−LoxP技術によるVEGF−Aの遺伝子欠失の後に、Apcmin/+マウスの腫瘍表現型を分析した。
後述する実験のために、Apcmin/+マウス(保存番号002020、5)、および12.4KbVilCreマウス(保存番号004586、これ以降VillinCre、Madison et al., J. Biol. Chem. 277:33275-33283 (2002))をThe Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)から得た。VEGFlox/loxマウス(これ以降VEGFlox)は既に公開されている(Gerber et al., Development 126:1149-1159 (1999))。マウスは、バリア設備のマイクロアイソレーターケージに収容し、適宜餌を与えた。動物および実験プロトコールの維持は、連邦規制に従って行い、Institutional Animal Care and Use Committeeの承認を得た。
Apcmin/+マウスにおける腸管腫瘍のVEGF−Aの発現パターンを調査するために、本発明者等は、14週齢のマウスの腺腫に対してインサイツハイブリダイゼーションを行った。これらの実験のために、インサイツハイブリダイゼーションは先に述べられているように(Ferrara et al., Am. J. Pathol. 162:1881-1893 (2003))行った。簡単にいうと、中性に緩衝したホルマリンにて固定して、脱水して、パラフィン包埋した腸管組織切片を脱パラフィン化して、水和させて、20μg/mlのプロテイナーゼKにて37℃で15分間かけて脱タンパク質(deproteination)した。[33P]UTP標識したセンスおよびアンチセンスのリボプローブを55℃で終夜をかけてハイブリダイズさせ、その後0.1×標準的クエン酸塩類にて55℃で2時間かけて高ストリンジェンシー洗浄を行った。乾燥したスライドガラスをコダックBioMax MRオートラジオグラフフィルム(Eastman Kodak Co., Rochester, NY)に室温で3日間露光させ、その後NTB2核飛跡乳剤(nuclear track emulsion)(Eastman Kodak Co.)に浸漬させ、乾燥剤を含む密封したプラスチック性のスライドボックス中で4℃で28日間かけて露光し、反応させて、(ヘマトキシリンエオシン)H&Eにて対比染色した。先に述べられているように(Ferrara et al., Am. J. Pathol. 162:1881-1893 (2003))、VEGF−Aプローブを調製した。VEGF−Aプローブ長はNM_031836のヌクレオチド297−645に対応する349ヌクレオチドとした。上方プライマー配列は、5'- CAA CGT CAC TAT GCA GAT CAT GCG(配列番号:1)であり、下方プライマー配列は、5'- GGT CTA GTT CCC GAA ACC CTG AG(配列番号:2)とした。
これらのインサイツハイブリダイゼーション実験では、VEGF−A発現は、正常な腸管絨突起上皮と比較して様々な強度で上皮細胞に観察されたのに対して、腺腫の間質細胞、並びに正常な絨毛の間質において局所性の顕著なシグナルが観察された(図1A−F)。
抗VEGF−A療法がマウスの良性腸管腫瘍の腫瘍量を低減するのに有効であるか否かを決定するために、本発明者等は、免疫応答を誘発する可能性を低くするために、マウス−ヒトキメラ形式の抗VEGF−A mAb G6−31にてApcmin/+マウスを治療した。抗VEGF−A mAb G6−31は、記載されているように(Liang et al., J. Biol. Chem. 281:951-961 (2006))、ヒトFabファージライブラリから得た。マウスの長期投与に適切な抗体を生成するために、可変ドメインを、マウスIgG2a定常ドメインに融合した。mAb G6−31(Liang et al., J. Biol. Chem. 281:951-961 (2006))又はアイソタイプ一致コントロールマウスIgG2a(抗GP120)、いずれも5mg/kgの用量を、PBSにて90〜140μl体積にして、週に1回腹膜内投与した。処置は、3週、6週、最高1年間、又はマウスが瀕死とわかるまで続けた。各群につき5〜14匹のマウスの処置は91±3日齢に開始した。
本発明者等は、マウスおよびヒトのVEGF−Aの両方を潜在的にブロックする能力を有するので、mAb G6−31を選択した(Liang et al., J. Biol. Chem. 281:951-961 (2006))。これは、マウスでなくヒトのVEGF−Aを阻害する、よく特徴付けられた抗VEGF mAb A.4.6.1と異なっている(Gerber et al., Cancer Res. 60: 6253-6258 (2000)、Liang et al., J. Biol. Chem. 281:951-961 (2006))。腫瘍量に対するmAb G6−31の短期効果を評価するために、1コホートにつき10匹のマウスの処置を13週齢に開始し、3〜6週間続けた。処置開始時の腫瘍表現型を決定するために、13週齢時(0日目)に12匹のマウスの無処置コントロール群を分析した。
mAb G6−31による3および6週間の処置の後の腫瘍量の顕著な減少は、腺腫数の減少とは対照的に、腺腫サイズの減少によるものであった。コントロールIgGによる3週間の処置の後の平均腫瘍数は116±9(±SEM)であったのに対して、mAb G6−31投与後の平均腫瘍数は107±11であった(p<0.28)。コントロールIgGによる6週間の処置の後の平均腫瘍数は120±11であったのに対して、mAb G6−31投与後の平均腫瘍数は100±10であった(p<0.09)。0日目に、マウスは平均100±9腫瘍であった。
3又は6週間の処置の間、腺腫の増殖が抗VEGF−A処置を逃れたという所見はなく、コントロールIgGにて処置したマウスの腫瘍の広域なサイズ分布(図2B、上から2番目と4番目のグラフ)と比較して、mAb G6−31にて治療したマウスの腫瘍は、より狭いサイズ分布であった(図2B、中段および下段のグラフ)。コントロールIgGを3週間投与したマウスの平均ポリープ直径は1.28mmであり、mAb G6−31は0.85mmであったのに対して(p<9.2×10−117)、コントロールIgGを6週間投与したマウスの平均ポリープ直径は1.64mmであり、mAb G6−31は0.86mmであった(p<2.7×10−214)。0日目の平均腫瘍直径は0.97mmであった。
さらに、抗VEGF−A mAb G6−31は、すべての小腸領域の腺腫増殖を抑制することに有効であった。3週間および6週間の処置の後には、コントロールIgG処置と比較して、mAb G6−31処置により有意に低い平均腫瘍直径が観察された(図2D)。さらに、mAb G6−31にて処置されたマウスの第一腸管区画における平均腺腫直径は、0日目にマウスに観察されたものよりも有意に減少していた(図2Dの二重アスタリスク)。結腸腺腫の平均腫瘍直径の減少は統計的な有意差には達しなかった(図2D)。mAb G6−31にて3週間処置されたマウスの大腸ポリープの平均直径は1.3±0.3mm(±SEM)であったのに対して、コントロールIgGにて処置したマウスの平均直径は2.5±0.4mmであった(p<0.064)。mAb G6−31による6週間の治療の後の大腸腫瘍の平均直径は2.2±0.3mmであり、コントロールIgG投与の後には2.6±0.3mmであった(p<0.37)。
次に、本発明者等は、Apcmin/+モデルにおいて小腸上皮供給源のVEGF−Aの腺腫への発達に対する寄与を分析することを目的とした。この目的のために、VEGF−AがCre/loxP技術によって腸管上皮細胞において条件付きで欠失されているマウス(VEGFlox;ビリン−Creマウス)と交配させた13週齢のApcmin/+マウスにおいて、上記の通りに、腫瘍直径および数を評価した。Apcmin/+;ビリン−CreおよびApcmin/+;VEGFlox;ビリン−Creマウスは、13週齢時に分析した。
アクチン結合タンパク質および分化した吸収性の細胞の刷子縁の主要な構造成分であるビリン(Villin)の発現は、腸管の後腸内胚葉の胚発生の間に生じ、それ以後は小腸および大腸の内胚葉全体にわたって拡がる(Braunstein et al., Dev. Dyn. 224: 90-102 (2002)、Ezzell et al., Development 106:407-419 (1989)、Maunoury et al., EMBO J. 7:3321-3329 (1988)、およびMaunoury et al., Development 115:717-728 (1992))。成体では、ビリン分布は、腺窩(crypts)の未成熟増殖性細胞では中程度の尖端極性(apical polarization)で、および小腸の絨毛の内側を覆っている十分に分化した細胞の刷子縁では強い極性で散在している(Robine et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 82: 8488-8492 (1985))。ビリンプロモーターによって作動されるCreリコンビナーゼ(ビリン−Cre)の発現は、腺窩から絨毛尖端および大腸を経て十二指腸までの腸管上皮のすべての細胞におけるビリン遺伝子の発現パターンを繰り返し、既に特徴付けられている(Madison et al., J. Biol. Chem. 277:33275-33283 (2002))。
これらのデータは、大腸を経て十二指腸、および腺窩から絨毛尖端のすべての腸管上皮細胞においてVEGF−Aが欠失すると腫瘍成長が有意に阻害されるが、抗VEGF−A抗体の全身投与により生じる程度と比較してその程度は低いことを示す。ゆえに、これらのデータは、VEGF−Aの上皮以外の供与源がApcmin/+マウスの腸管の腺腫の成長に関与することを示唆する。
腫瘍成長阻害において抗VEGF−A処置が有効であるとして、本発明者等は、mAb G6−31による処置がApcmin/+マウスに長期の利益を与えるか否かを調べることを試みた。この目的のために、mAb G6−31又はコントロールIgGの投与は、最高52週又はマウスが瀕死と認められるまで続けた。興味深いことに、mAb G6−31処置により、コントロールIgGによる24週からmAb G6−31による33.6週までの生存中央値が増加した(ログランクp<2.4×10−3)(図2F)。
mAb G6−31にて処置された4匹のマウスの腫瘍表現型は、32、51、64又は66週齢で安楽死させて分析した(それぞれmAb G6−31による処置の19、38、51又は53週後)。表1に示すように、平均腫瘍直径は、19週齢マウスで観察される直径に近似したレベルのままであった(コントロールIgGにより6週間処理したマウスでは1.64mm)。同様に、腫瘍数は、13週齢マウスの数と同程度のままであった(0日目のマウス群は59−161腸管腺腫、平均100であった)。組織学的解析において平面切片を採取した15(マウス1−4に識別された数の合計)のうちの3の結腸腺腫(表1の各マウス2、3および4の1匹)は、悪性転換を示さなかった。
一般的な所見として、mAb G6−31にて処置されたApcmin/+マウスは、コントロールIgGにて処置したマウスよりかなり敏感であり、応答性があるようであった。さらに、Moser et al (Moser et al., Science 247:322-324 (1990))によって最初に報告された進行性貧血症を示唆する青白い足は、mAb G6−31にて処置された動物ではなくコントロールIgGにて処置された動物において、定期的に観察された。この所見と一致して、コントロールIgGを投与したApcmin/+マウスの平均総血清タンパクおよび血清アルブミン濃度が減少していたのに対して、総タンパクおよびアルブミンレベルはmAb G6−31にて処置したマウスでは正常範囲内であった(表2)。
3週間又は6週間の処置の後に処置に関連する体重の違いはないが、コントロールIgGによって処置したマウスでは平均脾臓質量が有意に増加していた(p<2.3×10−3)。コントロールIgGの3週間の投与の後、このマウスは0.26g、又は体重の1.17%の平均脾臓質量を有していたが、mAb G6−31にて3週間処置したマウスでは平均脾臓質量が0.11g(体重の0.49%)であった。コントロールIgGにて処置したマウスの平均脾臓質量の増加は骨髄外造血(腸管出血に続発するこの場合では代償的な赤血球形成であるEMH)と一致しており、これは脾臓の組織学的試験によって確認された。コントロールIgGにて6週間処置した10匹中10匹のマウスが顕著なEMHを示したのに対して、mAb G6−31にて処置した2匹のマウスは中程度のEMHであり、5匹は軽度のEMHであり、3匹は脾臓に特徴的な変化がなかった。mAb G6−31にて18〜53週間処置された5匹のうち4匹のマウスは脾臓の軽度〜広範囲なEMHと診断された。
mAb G6−31にて短期に処置されたマウスの脾臓においてEMHがより低い程度であることは、抗VEGF−A療法が腸管出血を低減することに対して有益な効果を有することを示唆する。
高親和性抗VEGF−A mAb G6−31を投与することに関連した潜在的な毒性を調べるために、短期(3〜6週間)および長期(18〜53)の処置後に膵臓、肝臓および腎臓を組織学的に分析した。組織学的分析のために、Notox固定の腸管組織を脱水し、パラフィンに包埋し、切断して、標準的なプロトコールに従って組織学的分析のためにH&Eにて染色した。
3〜6週間処置した動物では有意な毒性は見られなかった。mAb G6−31による長期処置の後、5匹のうち5匹のマウスが、様々な(軽度〜重度の)広汎性包括的糸球体硬化症と、膵臓の中程度の間質浮腫(低タンパク血症を反映する)を示した。これらの所見は、mAb G6−31の長期投与から生じる既に観察された毒性と一致している。重要なことに、増加した生存中央値によって反映される健康の全体の改善が副作用を上回るものであった。
抗VEGF−A mAb G6−31による処置の後のApcmin/+マウスにおける腸管ポリープの特徴をさらに表すために、肉眼での分析および上記の通りに組織学的分析を行った。mAb G6−31にて処置されたポリープの全体の形態は、コントロールIgGにて処置されたポリープのものとは顕著に異なった(図3A−B)。一般的にコントロールIgGを投与したマウスの腫瘍が相対的に破壊されておらず、滑らかな表面を有しているのに対して、mAb G6−31にて処置された動物の腫瘍は、それらの表面上に深い陥入を有して現れた。組織学的分析により、mAb G6−31およびコントロールIgGにて処置したマウスの腫瘍が管状腺腫であることが明らかとなった(図3C−F)。コントロールIgGにて処置されたマウスの腺腫は、顕著な絨毛内上皮性増殖を有しており、垂直および横方向に拡がり、典型的に、基部から内腔表面へ2倍より大きく拡がった。ごく小さい線維性の間質があった。mAb G6−31にて処置されたマウスの腺腫は、絨毛内上皮細胞が少なく、内腔表面上の面積が小さく、浅く、かつ隣接する絨毛が少ないという特徴を有していた。両処置群の結腸ポリープの組織学的分析は、大量の血管結合組織間質と様々な量(100%以下)の形成異常上皮を有するpendunculatedされた管状腺腫を示した。
mAb G6−31による増殖阻害が主要なシグナル伝達経路の分子パートの発現レベルの変化に付随して起こるか否かを試験するために、ウエスタンブロット分析を行った。mAb G6−31およびコントロール抗体にて治療したマウスの空腸腺腫および正常な隣接粘膜をメスで採取して、RIPA溶解バッファのOMNI TH115ホモジナイザーにて、機械的に均質にした。使用する一次抗体は、p38 MAPK、リン光体−p38 MAPK、p42/p44 MAPK、リン光体−p42/p44 MAPK、PTEN、Akt、リン光体−Akt、およびリン光体−GSK3α/βに対するウサギポリクローナル(すべて1:1000、Cell Signaling, Danvers, MA)とした。使用する二次抗体は西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート抗ウサギであった(1:5000、Chemicon)。
試験される多くの分子の発現レベルがmAb G6−31による処置によっても不変であったのに対して、4つのうち3つの腫瘍試料におけるホスホ−p38 MAPKレベルが正常な粘膜に見られるレベルへ適切に回復したことが観察された(図3L;p−p38、T5−T8をN5−N8と比較する)。
VEGF−AがVEGFR-2シグナル伝達による血管内皮細胞の分裂促進因子であることが知られているので、本発明者等は、抗CD31抗体による厚い組織切片の免疫組織化学染色によって、Mab G6−31およびコントロールIgGによって処置したマウスにおける腫瘍血管網状組織を調べた(図4A−B)。共焦点顕微鏡撮像のために、マウスは、イソフルラン麻酔下で1%パラホルムアルデヒド(PFA)を含むPBSにて灌流固定し、腸管をフィルター紙の上に平らに拡げ、その後4%PFAにて固定して、30%スクロースを含むPBSに4℃で終夜浸し、その後O.C.T.に包埋して、ドライアイスにて凍結した。凍結切片は、80μmに切断し、4%PFAに10分間かけて固定し、0.2%トリトン-X-100を含むPBSにて透過処理し、0.2%トリトン-X-100を含むPBSの5%の正常ヤギ血清にて30分間ブロックした。一次抗体を含むブロックバッファにて終夜、二次抗体とともに5〜6時間インキュベートし、PBSにて洗浄し、ヘキスト33342(0.5mg/ml;Sigma, St. Louis, MO)にて対比染色した。使用する一次抗体は、CD31に対するハムスターモノクローナル(1:500、Chemicon, Temecula, CA)、Eカドヘリンに対するラットモノクローナル(1:2500、Zymed, South San Francisco, CA)、および平滑筋アクチンに対するCy3コンジュゲートマウスモノクローナル(1:1000、Sigma)とした。使用する二次抗体は、Cy5コンジュゲート抗アルメニアンハムスター(1:500、Jackson Immunoresearch, Cambridgeshire, UK)、およびALEXA 488コンジュゲート抗ラット(1:500、Molecular Probes, Eugene, OR)とした。
血管密度の定量化は、mAb G6−31にて治療したマウスの腫瘍の血管性構成成分が、コントロールIgGにて処置したマウスに見られるものと比較して減少したことを示した(図4C)。コントロールIgGの3週間の投与の後に、平均腫瘍血管領域密度が23.2%であったのに対して、mAb G6−31の投与の後では、18.6%まで減少した。コントロールIgGにて6週間処置した腫瘍の平均血管領域は25.5%であったのに対して、mAb G6−31にて処置したマウスの腫瘍の平均血管領域密度は19.7%であった。
本発明者等は、良性の腸管腫瘍形成のVEGF−Aの役割を調査するために、Apcmin/+マウスを用いた。第一に、実験は、強力な増殖を経ている定着した腸管腺腫に対する短期および長期の抗VEGF−A処置の効果を測定するように設定した。本発明者等は、抗VEGF−A mAb G6−31による処置により腫瘍量が有意に低下し、Apcmin/+マウスの生存率が延長したことを示した。
Apcmin/+マウスの腫瘍量に対する、食餌と非ステロイド性抗炎症剤(NSAID)を含む化学抗癌剤の効果について、様々な研究が行われている(Corpet et al., Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 12:391-400 (2003)に概説される)。この最新版はhttp://corpet.net/minにある。これらの研究の多くは腫瘍数の有意な減少を報告している。COX−1およびCOX−2を標的とするピロキシカムおよびスリンダクなどのNSAIDは、Apcmin/+マウスの腫瘍形成を抑制する際(Boolbol et al., Cancer Res. 56: 2556-2560 (1996)、Chiu et al., Cancer Res. 57: 4267-4273 (1997)、Hansen-Petrik et al., Cancer Lett. 175:157-163 (2002)、Ritland et al., Carcinogenesis 20:51-58 (1999))、加えてセレコキシブ(Jacoby et al., Cancer Res. 60: 5040-5044 (2000))およびA−285969 (Wagenaar-Miller et al., Br. J. Cancer 88:1445-1452 (2003))などのCOX−2インヒビターを選択するために、最も強力な薬剤の一つであった。また、併用療法は腫瘍数を少なくするために成功裏に用いられている。Torrance等は、スリンダクと組み合わせて特定の上皮性増殖因子レセプターインヒビターであるEKI−785を利用して、腫瘍数のほぼすべての除去を示した(Torrance et al., Nat. Med. 6: 1024-1028 (2000))。同様に、化学療法剤であるラルチトレキセド(RTX)と5−フルオロウラシル(FU)の併用効果により、Apcmin/+腫瘍数が有意に(37%)減少した(Murphy et al., Cancer Biol. Ther. 3:1169-1176 (2004))。近年では、レセプターチロシンキナーゼ(RTK)インヒビターAZD2171の短期投与は、Apcmin/+モデルの腫瘍量の減少を示した(Goodlad et al., Carcinogenesis 27:2133-2139 (2006))。彼らは、AZD2171による処置の早期開始(6週間目)により腫瘍数を減少させることができるのに対して、その後の介入(10週間目)では腫瘍サイズを低減するのみであることに注目した(上掲のGoodlad et al.)。しかしながら、この処置は血管密度に対して作用を示さなかった(上掲のGoodlad et al)。AZD2171は、VEGFR1、2および3を含むがこれらに限らずいくつかのRTKを阻害する(Wedge et al., Cancer Res. 65: 4389-4400 (2005))。
本発明者等の研究は最終的に、VEGF−AのターゲッティングがApcmin/+モデルにおいて重大な治療効果を達成するために十分であることを示す。Mab G6−31による全身性VEGF−A阻害を、Apcmin/+;VEGFlox;ビリン−Creマウスにおける腸管上皮区画のVEGF−Aの遺伝子欠失と比較すると、上皮細胞だけでなく、VEGF−Aの他の細胞供与源もApcmin/+腺腫増殖において重要な役割を果たしていることが示唆される。VEGF−Aのこれらの更なる供与源には潜在的に、単核細胞(Sunayama et al., Carcinogenesis 23:1351-1359 (2002))および間質線維芽細胞(Seno et al., Cancer Res. 62: 506-511 (2002)、(Williams et al., J. Clin. Invest. 105:1589-1594 (2000))が含まれる。本発明者等のインサイツの分析は、腺腫および正常な絨毛内の上皮以外でのVEGF−A発現が示され、この所見を裏付けるものである。
VEGF−Aの阻害によって1mmより小さい腺腫の有意な蓄積が観察されたことは、Apcdelta716モデルにおいて見られたように(Seno et al., Cancer Res. 62: 506-511 2002))、Apcmin/+マウスの腸管腺腫において、一般に腫瘍発達のためと考えられるよりも早くに、血管形成スイッチが起こりうることを示唆する。
本発明者等の研究の重要で予想外の結論は、単一の血管形成因子をターゲットとする抗血管形成単独療法は、腫瘍増殖を抑制するのに非常に有効であり、生存利益を得うることである。これは、このような治療の主な利益は、化学療法剤の伝達を容易にするために腫瘍血管を「正常化する」ことであるという、悪性腫瘍の研究から主に集積された見解とは対照的であるようである(Jain et al., Nat. Med. 7: 987-989 (2001))。突然変異を獲得し、潜在的に治療耐性を生じる良性腫瘍の可能性を低減することが、少なくともある程度、この相違の説明となりうると、考えられる。したがって、本発明者等のデータは、化学療法剤を必要としない、良性腫瘍の手術以外の治療手段を提唱する。
多発性内分泌腫瘍症(MEN)は、2以上の内分泌腺を伴う腫瘍の発症を特徴とする疾患である。患者は、副甲状腺、膵島細胞および下垂体前葉において腫瘍が併発した場合に、MEN1型(MEN1)と分類される。通常タンパク質meninの切断ないしは欠如が生じる、MEN1遺伝子の突然変異が疾患の基礎をなすことを発見した(Pannett et al., Endocr. Relat. Cancer 6:449-473 (1999)に概説される)。残りの対立遺伝子の欠失も頻繁に腫瘍に起こるという所見と併せて、(Bystrom et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 87:1968-1972 (1990)、Debelenko et al., Cancer Res. 57: 2238-2243 (1997)、Larsson et al., Nature 332:85-87 (1988))、MEN1は腫瘍サプレッサー遺伝子として分類されている。MEN1は主に常染色体優性疾患として遺伝するのに対して、MEN1遺伝子のデノボ突然変異はMEN1の散発性症例の原因と考えられている。
meninの機能のほとんどは未知のままである。偏在して発現する、主に核610-アミノ酸タンパク質は、上述した経路のタンパク質部位とインビトロで相互作用することによって、転写調節、DNAプロセシングと修復、および細胞骨格組織に関与することが示唆されている(Agarwal et al., Horm. Metab. Res. 37: 369-374 (2005)に概説される)。しかしながら、今まで同定されたいずれのタンパク質相互作用をもってしてもMEN1の腫瘍原性が説明されない。
相同組み換えにより、マウス遺伝子Men1のエキソン3−8が欠失のための標的とされた(Crabtree et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:1118-1123 (2001))。9か月齢までに、ヘテロ接合体Men1マウスは、副甲状腺腫の更なる一般的な所見を有する膵島病変を発達させることが報告された。膵島、副甲状腺、甲状腺、副腎皮質および下垂体のより大きな、より多くの腫瘍は、16か月齢までに観察され(Crabtree et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 98:1118-1123 (2001))、ヒトの疾患に著しく類似した特徴を示す。
後述する実験のために、Men1+/−マウス(保存番号004066)をThe Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)から、Balb/cヌードマウスをCharles River Laboratories Inc. (Wilmington, MA)から得た。実験的な混合129−FVBバックグラウンドのMen1+/−雌マウスは、Men1+/−雄と雌を交雑させることによって得た。マウスは、バリア設備のマイクロアイソレーターケージに収容し、適宜餌を与えた。動物および実験プロトコールの維持は、連邦規制に従って行い、Institutional Animal Care and Use Committeeの承認を得た。
抗VEGF−A療法が下垂体腺腫の増殖の阻害において有効か否かを調べるために、125の11−13か月齢のMen1+/−雌マウスに対してMRIを行い、下垂体腺腫を有するマウスを同定した。腫瘍をもつマウスに対して14および28日後に再度画像処理を行い、腺腫の増殖速度を定着させた。試験開始時に1日に12.4%の平均腫瘍増殖と15.58±4.0mm3(±SEM)の平均腫瘍体積を有する9匹のマウスのコホートにはコントロールIgGを、試験開始時に1日に10.2%の平均腫瘍増殖と16.70±5.7mm3(±SEM)の平均腫瘍体積を有する8匹のマウスのコホートには抗VEGF−A mAb G6−31を、67日間、又はマウスの瀕死を認識するまで投与した。mAb G6−31およびコントロールIgG抗体による処置のために、5mg/kgの抗VEGF mAb G6−31(Liang et al., J. Biol. Chem. 281:951-961 (2005))又はアイソタイプ一致コントロールIgG(抗GP120)を100〜200μlPBS体積で、週に1回投与した。下垂体腺腫インサイツに有する8匹(mAb G6−31)又は9匹(コントロールIgG)のMen1+/−マウスの投与は、13.5−14.5か月齢時に開始し、67日間又はマウスの瀕死を認識するまで続けた。皮下下垂体腺腫移植を有する23匹(コントロールIgG)又は35匹(mAb G6−31)のBalb/cヌードマウスの処置は、移植の4か月後に開始し、35日間、又は、マウスの瀕死を認識するまで、あるいは腫瘍体積が3000mm3の体積に達するまで続けた。
39日の処置時に、コントロールIgG処置群と比較して、mAb G6−31処置群において平均下垂体腫瘍体積の統計学的に有意な減少が観察された(図5A)。試験のエンドポイント(67日)時に、mAb G6−31処置により平均腫瘍体積が72%に減少、又は3.7分の1減少し、これは統計学的に有意であった(p値は0.016未満)。ほとんど(9のうち6匹)のコントロールIgG処置Men1+/−腫瘍は処置期間にわたってずっと強く増殖したのに対して、8のうちの7匹のmAb G6−31処置下垂体腺腫の増殖が有意に減速した(図5B)。4匹のコントロールIgG処置マウスと、3匹のmAb G6−31処置マウスは病気のために試験のエンドポイント前に安楽死させた。ここに処置25日目の撮像前の1匹のコントロールIgG処置マウスも含む。腫瘍倍加のない生存がmAb G6−31処置群において有意に増加した(ログランクp<0.019)ことから(図5C)、コントロールIgGにて処置したマウスと比較して、下垂体腫瘍増殖の阻害によりこれらマウスの健康が改善されたことが示唆される。mAb G6−31処置群の2匹のマウスの腫瘍体積は、治療の67日目までに2倍にならなかった。
Men1+/−下垂体腺腫移植モデルに対する抗VEGF−A抗体治療の有効性を試験するために、以下の手順に従って、6〜8週齢の雌Balb/cヌードマウスの側腹部に皮下腫瘍を定着させた。これらの実験のために、Men1+/−マウスから単一のインサイツ下垂体腺腫を摘出し、およそ1mm3切片に切り、、BDマトリゲル基質ベースメントメンブラン(BD, Bedford, MA)と混合し、Balb/cヌードマウスの背面の側腹部に、200μlの体積で皮下接種した。4か月後に、単一の皮下腫瘍(およそ900mm3の体積)を摘出し、切り、マトリゲルと混合して、上記のように接種し、下垂体腺腫移植をもつマウスのコホートを確立した。
皮下下垂体腺腫移植の腫瘍サイズは、最大の腫瘍直径とそれに垂直な直径を採取することによって、カリパスツール(Fred V. Fowler Co. Inc., Newton, MA)にて測定した。腫瘍体積は以下の式を使用して算出した。V=πab2/6(a=最大腫瘍直径、b=垂直な直径)。
これらのデータにより、Men1のヘテロ接合性によって生じやすくなった、皮下下垂体腺腫移植同様に下垂体腺腫の増殖の阻害における抗VEGF−A mAb G6−31の有効性が確認された。
下垂体組織におけるVEGF−A、VEGFR−1およびVEGFR−2の発現レベルを調べるため、そしてその発現レベルがmAb G6−31処置によって変化するか否かを試験するために、本発明者等は、5つのコントロールIgG処置(平均体積96.2±8.7mm3)と5つのmAb G6−31処置(35.2±4.0mm3)のインサイツ下垂体腺腫とともに、5つの月齢が一致する小さい未処置(9.7±2.9mm3)の下垂体腺腫、4つのMen1+/−マウスの月齢が一致する正常な下垂体、および8つの月齢が一致する野生型下垂体腺腫試料において、VEGF−A、VEGFR−1およびVEGFR−2の相対的な発現の平均を比較した。また、VEGF−A、VEGFR−1およびVEGFR−2の発現を、5つのコントロールIgG処置(平均体積2063±205mm3)と5つのmAb G6−31処置(577±45mm3)の下垂体腺腫移植から調べた。
これらの実験のために、総DNAのないRNAを、製造業者のプロトコールに従って、RNeasyキット(Qiagen, Hilden, Germany)にてフラッシュ凍結下垂体腺腫又は正常な下垂体から調製した。ワンステップ定量的RT−PCRを、SuperScript III Platinum One-Step qRT-PCRキット(Invitrogen, Carlsbad, CA)、100ngの総RNA、45nMの各PCRプライマー、および12.5nMのタックマンプローブを含め、50μlの総体積で行った。対象の遺伝子の発現を検出するために、以下のタックマン遺伝子発現アッセイプライマーとプローブとの混合物(Applied Biosystems, Foster City, CA)を用いた。VEGF−A(アッセイID:Mm00437304_m1)、VEGFR−1(アッセイID:Mm00438980_m1)およびVEGFR−2(アッセイID:Mm00440099_m1)。GAPDH発現は社内施設において合成されたプライマーとタックマンプローブを使用して検出した。(フォワードプライマー配列:ATGTTCCAGT ATGACTCCAC TCACG(配列番号:3);リバースプライマー配列:GAAGACACCA GTAGACTCCA CGACA(配列番号:4);タックマンプローブ配列:AAGCCCATCA CCATCTTCCA GGAGCGAGA(配列番号:5))。
とりわけ、コントロールIgG処置下垂体腺腫、小さい未処理腫瘍、および野生型ないしはMen1+/−マウスの正常な下垂体と比較して、インサイツのmAb G6−31処置腺腫において、VEGF−Aの平均相対発現が有意に上昇していた(図6)。VEGF−A発現は、両皮下腫瘍移植片試料において同等に高かった。mAb G6−31処置腫瘍のVEGF−A転写産物の観察されたレベルの高さは、mAb G6−31によるVEGF−Aの全身的な隔離に対する代償性のメカニズムの結果である可能性がある。しかしながら、高いVEGF−Aは腫瘍増殖を制御するためには十分でないようであった。
VEGFR−1の平均相対発現が異なる組織試料内で適度に変化しないようであるのに対して、腫瘍移植片、小さい未処理の腫瘍、又は野生型ないしはMen1+/−マウスの正常な下垂体に見られる発現と比較して、コントロールIgGないしはmAb G6−31にて処置したインサイツの腫瘍試料では、VEGFR−2の平均相対発現が低くなっているようであった(図6)。
MRIを前記のように用いて、一週おきに動物を撮像することによって処置期間中ずっとインサイツの下垂体腺腫の成長を追跡調査した。処置開始の9、39および67日後に得た、1匹のコントロールIgG処置Men1+/−マウスおよび1匹のmAb G6−31処置Men1+/−マウスの代表的な腺腫を用いた脳の冠状切片のグラフを図7に示す。
Men1+/−下垂体腺腫がmAb G6−31およびコントロールIgGにて処置したマウスにおいて組織学的に類似していた(図8A−B)。これらの実験のために、ホルマリン固定組織は、脱水し、パラフィンに包埋し、切断し、そして標準的なプロトコールに従って組織学的分析のためにヘマトキシリン−エオシン(H&E)にて染色した。一般的に、腫瘍細胞は、小さく(直径10ミクロン以下)、高い核/細胞質比率を有し、有糸分裂が活発であることが多く、10の625ミクロン直径野につき最高40の有糸分裂の形態がある。腫瘍は視覚上固形又は嚢胞状であり、多発性の内皮細胞が並ぶ管、急性の出血性領域(フィブリンないしは細胞の編成がない、内皮以外が並ぶ空隙の完全な赤血球)、および点在したヘモジデリン含有マクロファージを有し、これは出血前歴に一致している。多様な単細胞壊死とごく小さい線維形成があった。腫瘍血管は不規則な間隔を有し、典型的には5〜10ミクロンの直径であるが、稀に50ミクロンの大きさのものがあり、腫瘍以外の血管周囲間質細胞はほとんどない。
コントロールIgG処置腫瘍とmAb G6−31処置腫瘍の間の血管パターンは、汎内皮細胞(panendothelial cell)マーカー抗体MECA-32による間接的な免疫組織化学染色によって観察された(図8C−D)。これらの実験のために 、 ホルマリン固定し、 パラフィン包埋した組織切片を脱パラフィン化して、内在性ペルオキシダーゼ活性の反応停止とアビジンおよびビオチン(Vector, Burlingame, CA)のブロックを行った。切片は、3%BSAを含み10%正常ウサギ血清を含むPBSにて30分かけてブロックした。次いで、組織切片は、一次抗体とともに60分間、ビオチン化した二次抗体とともに30分間インキュベートし、ABC試薬(Vector, Burlingame, CA)にて30分間インキュベートし、その後Metal Enhanced DAB (Pierce, Rockford, IL)にて5分間インキュベートした。次いで、切片をマイヤーのヘマトキシリンにて対比染色した。使用する一次抗体は、0.10μg/mlのヤギ抗マウスプロラクチン(R&D systems, Minneapolis, MN)と2μg/mlのラット抗マウス汎内皮細胞抗原、クローンMECA32(BD Biosciences, San Jose, CA)とした。使用する二次抗体は、7.5μg/mlのビオチン化したウサギ抗ヤギ(Vector, Burlingame, CA)と、2.5μg/mlのビオチン化したウサギ抗ラット(Vector, Burlingame, CA)とした。汎内皮細胞抗原染色は、Target Retrieval(Dako, Carpenteria, CA)による99℃、20分間の前処置を必要とした。他の全ての工程は室温で行った。
処置したMen1+/−マウスでは、下垂体腫瘍に加えて、膵島腫瘍が識別されることが多く、試験のエンドポイント時に膵島腫瘍を組織学的に分析した。膵島腫瘍(切断平面の105μm2より大きいものとして定義される)は、有意な出血も壊死もなく、典型的に固形であった。抗VEGF−A Mab G6−31にて処置した6匹の動物の腫瘍(n=32腫瘍)は、コントロールIgGにて処置した5匹の動物の腫瘍(n=45腫瘍;p値=0.026)の平均してたった39%の領域であった。コントロールIgGにて処置した膵臓腺腫(図8E−F)は、一般により大きく(切断平面の最高7.0mm)、mAb G6−31処置腺腫よりも多く血管を有するようである(切断平面の最大5.0mmの腫瘍直径)。コントロールIgGにて処置した7匹のマウスのうち4匹では、膵島腫瘍は、拡張し、血液を満たした、薄壁の、直径300μm以下の内皮細胞が並んだ空隙を含んでいたのに対して、mAb G6−31処置マウスの膵臓腺腫は顕著な血管分布を欠くことが多かった(図8G−H)。mAb G6−31にて処置した8匹のマウスのうち1匹の膵臓腫瘍は、拡張した血管を示した。ヘモジデリンを含むマクロファージはいずれの処置によっても膵臓腫瘍から間欠的に観察された。これは、膵島出血を示唆するものである。
皮下下垂体腺腫移植の組織構造はインサイツの下垂体腫瘍の組織構造と同程度であったことから、離れた部位で内分泌腫瘍増殖が成功裏に反復発生したことを示す。
MEN1患者のおよそ60パーセントの下垂体腺腫は、プロラクチン(PRL)を、25%未満は成長ホルモン(GH)を、5%は副腎皮質刺激ホルモンを分泌する(ACTH, Trump et al., QJM 89:653-669 (1996))。Men1+/−マウスの下垂体腺腫がプロラクチンを分泌するか否かを調べるために、コントロールIgGおよびmAb G6−31にて処置したインサイツの下垂体腺腫、並びに下垂体腫瘍移植片に対して、抗PRL抗体にて免疫組織化学的染色を行った。6つうちの6つのコントロールIgGと5つのうちの5つのmAb G6−31の処置下垂体腺腫は、細胞のおよそ50〜95%にプロラクチン特異的なポジティブ染色を示すので、これらの腺腫をプロラクチン産生細胞腫と定めた(図9A−9B)。この結果と一致して、Crabtree等は、Men1TSM/+下垂体腫瘍が免疫組織化学的染色においてPRLポジティブであったことを報告した(Crabtree et al., Proc. Natl. Sci USA 98:1118-1123 (2001))。プロラクチン染色は、いずれの処置によっても下垂体腺腫移植片でもポジティブであった(図9C−9D)。これらの腫瘍からの機能的プロラクチン分泌と一致して、移植された下垂体腺腫を有する雌マウスの乳房組織は常に、コントロールIgGおよび抗VEGF−Aの処置動物の両方において中程度〜著しい乳汁の変化を示した(図9E、F)。
免疫組織化学的染色によって評価されるように、11のうち6の未処理原発性下垂体腺腫は成長ホルモンについて局所的かつ弱いポジティブを示したのに対して、4つのうちの1の移植下垂体腺腫のみが局所的かつ弱い染色を示しただけであった(図14B)。G6−31およびコントロールIgGにて処置したインサイツの下垂体腺腫に、成長ホルモンの発現があった(図6C、D)。正常な下垂体前葉は、細胞の20〜30%以下に強い反応を示した。(図14A)。
Men1+/−マウスから試験したすべてのコントロールIgGとすべてのmAb G6−31の処置下垂体腺腫が、免疫組織化学的分析によりプロラクチンについてポジティブであったので、本発明者等は、血清PRLレベルがMen1+/−下垂体腺腫保持マウスにおいて上昇しているか否かを調べた。この目的を達成するために、本発明者等は始めに、46匹の未処置のMen1+/−雌マウスを下垂体腺腫状態と血清PRLレベルについて、そして5匹の野生型同腹仔コントロールを血清PRLレベルについて分析した。血清プロラクチン量は、National Hormone & Peptide Program at Harbor UCLA (Torrance, CA)にて分析した。
これらマウスの月齢の範囲は、15.6〜10.5か月、平均13.3月齢であった。野生型マウスの平均血清PRLレベルは43.8±25.3(±SEM)ng/mlであった。46のうちの27匹のMen1+/−マウスは、MRI分析では検出可能な下垂体腫瘍を有していなかった。これらマウスの平均血清PRLレベルは69.0±24.6ng/mlであった。10匹のマウス群は、平均体積1.7±0.6mm3の小さな下垂体腫瘍を有していた。これらマウスの血清PRLレベルは平均188.7±61.9ng/mlに上昇していた。大きな下垂体腺腫(平均体積83.1±23.8mm3)を有した9匹のマウスは、平均13239.8±3466.5ng/mlの血清PRLであった。これらのデータから、Men1+/−マウスの血清PRLレベルと下垂体腺腫体積との間にポジティブな相関がある(ピアソンの相関係数R=0.94)(図10A)ことが確認され、このことから、血清PRLレベルは、下垂体腺腫状態の推測をはっきりさせる際の診断用ツールとして有用であることが示唆される。
上記のデータが、抗VEGF−A抗体処置により腫瘍を有するMen1+/−マウスのPRLの血清レベルが低下することを示すので、本発明者等はさらに、Balb/cヌードマウスにおける皮下下垂体腺腫移植片についてこれを調べた。治療開始時(1日目)と試験のエンドポイント時(35日目)に採取した、23匹のコントロールIgGと35匹のmAb G6−31の処置マウス起源の試料から、血清PRLを測定した。1日目の平均血清PRLが2つの処置群の間で同程度であったのに対して、35日目ではmAb G6−31処置群は血清PRLレベルを有意に低下させた(それぞれ図10CおよびD)。
MEN1プロラクチン産生細胞腫の現在の治療には内科治療又は選択的な脳下垂体除去の後に放射線療法を含むので、mAb G6−31の処置により腫瘍増殖の顕著な阻害とともにPRL血清レベルが低くなったことを示す本発明者等のデータは、MEN1患者に新規な治療となりうる手段を提供するものである。
血清インスリンレベルがMen1+/−マウスにおいて上昇したか否かを試験するために、コントロールIgGにて処置した6匹の絶食していないマウスと、mAb G6−31にて処置した6匹の絶食していないマウスからの血清試料を分析したところ、組織学的分析ではすべてに膵臓病変が同定された。また、製造業者の指示に従って、高感受性マウスインスリンELISAキット(Mercodia, Uppsala, Sweden)を用いて、5匹の絶食していない月齢が一致した野生型マウスからの血清インスリンレベルを分析した。治療との相関は観察されなかったが、平均血清インスリンは、野生型マウス(1.4±0.7ng/ml(±SEM))と比較して、Men1+/−マウス(コントロールIgG、3.8±2.6ng/ml;mAb G6−31、3.7±2.4ng/ml)において著しく上昇していた。
本発明者等のデータは、VEGF−Aに対するモノクローナル抗体による処置が腫瘍増殖阻害に十分であることが示されたので、VEGF−AがMEN1のマウスモデルにおいて良性下垂体腺腫の増殖に必要であることを示す。
入手可能な文献に基づくと、mAb G6−31の観察された抗腫瘍作用の多くは、VEGFR−2依存性血管新生の抑制によって媒介される可能性がある(Wise et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 96: 3071-3076 (1999)および、Zachary et al., Cardiovasc. Res. 49: 568-581 (2001))。大きな下垂体腺腫におけるVEGFR−2mRNAの相対的な平均発現は抗VEGF−A処置の影響を有意に受けなかったのに対して(図6)、MECA−32の免疫組織化学的染色は、Mab G6−31によって処置した下垂体腫瘍および膵臓腫瘍において血管分布が非常に有意に減少した(およそ50%の減少)ことを示した。抗VEGF−Aにて処置した腫瘍増殖における対応する減少は、下垂体腺腫および膵臓腺腫の両方に見られた。また、正常な膵島における血管密度は抗VEGF−A処置によって有意に減少したが、その変化の大きさ(コントロールIgG処置の25%の減少)は膵臓腺腫において観察される減少よりも小さかった。
Mab G6−31にて処置した腫瘍において観察されたVEGF−A転写産物のレベルの高さは、Mab G6−31によるVEGF−Aの全身的な隔離に対する代償性のメカニズムの結果である可能性がある。しかしながら、このようなVEGF−Aの上昇は腫瘍増殖を制御するために十分ではなかったようである。
抗VEGF−A mAb G6−31処置による単独療法が、腺腫増殖を効果的に阻害することによってMen1+/−マウスの腫瘍量を有意に低下させたことを示したことに加えて、本発明者等は、血清プロラクチンレベルも低下することを示した。したがって、本発明者等のデータは、内分泌の良性腫瘍の手術以外の治療の可能性とともに、化学療法剤を使用することなく疾患の進行を停止させることを提唱する。あるいは、このようなVEGF−Aブロックは薬物と組み合わされてもよい。例えば、プロラクチンを分泌している腺腫では、VEGF−Aアンタゴニストはドーパミンアゴニストと組み合わされてもよい。
様々なステージの腫瘍増殖における抗VEGF療法の役割をさらに理解するために、本発明者等は、RIP−TβAgを含む多くの臨床前腫瘍モデルを調べた。RIP-TβAg(Exelixis, Inc.)は、SV40ラージT抗原(TAg)の導入遺伝子発現によって制御されるマウス膵島腫瘍モデルの調整バージョン(conditional version)である(膵臓のβ-細胞を標的としており、TAgはp53とRbの両方を結合することによって強力なオンコジーンとして機能する)。RIP−TβAgは、先に述べられているRIP−TAgモデルと表現型が類似している(Hanahan, Nature 315:115-122 (1985);Bergers et al., Science 284 (808-811), 1999)。本発明者等は、このモデルが、およそ5週目に、VEGFシグナル伝達や「血管形成スイッチ」(すなわち、新規の血管形成の過程の開始)の活性を含む、一連の増悪ステージを経て進行することを明らかにした。10週までに小さい腫瘍が形成され、これは悪性変換の始まりと一致する。12週までに大きな、侵襲性のカルチノーマが形成する。ゆえに、10週齢前に、マウスの細胞増殖が悪性であるか又は転移性であるかは認識されない。10〜12週齢の期間には、一般に浸潤性の癌の形成が含まれる。
抗VEGF抗体によって9週齢の動物を処置すると(「インターベンション」実験)、腫瘍血管新生が劇的に減少した(図11)。11週齢の動物を処置すると(「退縮実験」)、腫瘍血管分布と増殖が減少した(図12A)。しかしながら、インターベンション実験とは対照的に、腫瘍増殖の減少は一時的にしか検出されず、生存率への影響はなかった(図12B)。これらの研究は、初期腫瘍が、進行した腫瘍と比較して、抗VEGF標的治療法により影響を受けることを示した。
手術は、「血管形成プログラム」を再活性化させ、指数関数的腫瘍増殖を促す可能性を有する、腫瘍細胞や休止微小転移性小結節を取り残しうる。
本発明者等は、抗VEGF療法と同時に又は連続して、腫瘍をサイトリデュース(cytoreduce)する強力な化学療法剤を投薬した後、抗VEGFモノクローナル抗体による維持療法を行うことによって、モデル腫瘍休止状態にマウス遺伝的腫瘍およびヒト異種移植片を用いた。ゆえに、本発明者等は、腫瘍が、例として場合によっては標的とした抗VEGF療法を含む処置に難治性、再発性ないしは抵抗性である腫瘍に形成ないしは再形成された後に腫瘍を追跡するというよりも、むしろ腫瘍の再発を予防するためにマウスを処置している。図13は、ドセタキセルは腫瘍量を軽減する際に非常に有効であるが、休止中の細胞はおよそ2か月後に再び成長するという所見を示す。しかしながら、たとえ大きくてしっかりと定着した腫瘍の増殖にほとんど作用しなくても、抗VEGFによる同時処置により腫瘍の再成長が抑制される。更なるデータは、長期にわたる抗VEGF療法も、タキサン又はゲムシタビンによるサイトリダクション(cytoreduction)の後に腫瘍の再増殖を抑制することを示す。これらの結果は、休止中の腫瘍ないしは微小転移性癌の増殖ないしは再増殖を効果的にブロックするために抗VEGFが用いられうることを示す。これらの所見は、血管新生が肉眼で見える腫瘍の形成に関連する急速なクローン増殖の必要条件であるという事実と矛盾しないものであり、腫瘍の始めの治療の後および、新規な腫瘍の形成、休止中の腫瘍、悪性腫瘍又は微小転移性癌の再活性化の前の、腫瘍休止の維持および腫瘍再増殖の抑制におけるVEGF特異的アンタゴニスト(例えばG6又はB20系列の抗体を含むがこれらに限定しない抗VEGF抗体)の使用の裏付けとなるものである。
本実施例は、触診可能かつ手術可能な乳癌を有する患者のネオアジュバント療法におけるベバシズマブの使用を例示する。
ネオアジュバント化学療法は、局所的に進行したかないしは潜在的に手術可能な大きな乳癌の治療において広く使われている。ランダム化試験は、ネオアジュバント化学療法が乳房切除の必要性を低くし(これによって胸部を保存する)、アジュバント化学療法と同程度の全体生存率となることを示した。Powles et al., J. Clin. Oncol. 13:547-52 (1995);Fisher et al., J. Clin. Oncol. 16:2672-85 (1998)。
本療法の一次目的は、触診可能かつ手術可能な乳癌を有する患者の化学療法にベバシズマブを加えることによって、臨床上の利点を向上することである。具体的には、ネオアジュバント療法の臨床有効性の一次測定値のうちの1つは、病理学的完全寛解(pCR)率でありうる。他の測定値には、奏効率(OR)、臨床完全寛解率(cCR)、疾患のない生存期間(DFS)および全生存期間(OS)が含まれる。さらに、治療の副作用は、例えば、外科的な合併症率、毒性および心機能に対する副作用によってモニターされてもよい。特定の遺伝子発現又は他のバイオマーカーの活性もまた、治療に対する応答のマーカーとして使われてもよい。
病理学的完全寛解(pCR)が、治療有効性の予後のマーカーとして使われている。pCRは、手術時のネオアジュバント療法後に腫瘍の組織学的所見が残存していないことを示す。研究は、pCRを達成している患者の生存率が著しく改善されたことを示唆した。しかしながら、病理学的寛解を段階分けするための標準的な方法はなく、pCRが有効性の代理マーカーとして用いられうるか否かについては意見が分かれている。
治療投薬計画には、化学療法とVEGF特異的アンタゴニスト、例えばベバシズマブが含まれる。場合によって、更なる治療的薬剤(一又は複数)が、同様に投薬計画に用いられてもよい。典型的に、特定の癌の種類(例えば標準的な療法投薬計画)のために共通して用いられる化学療法投薬計画は、ベバシズマブと組み合わせて使われる。例えば、乳癌をネオアジュバント的に治療するために、ドセタキセル、パクリタキセル又はドキソルビシン/シクロホスファミド(AC)投薬計画が、ベバシズマブと組み合わされて使われてもよい。あるいは、ドセタキセルベース又はパクリタキセルベースの投薬計画およびAC投薬計画が、ベバシズマブと組み合わされた化学療法剤として連続して使われてもよい。非小細胞肺癌を治療するために、シスプラチン(単独で又は、他の化学薬剤、例えばゲムシタビン、ドセタキセル又はビノレルビンと組み合わされて)が、ベバシズマブと組み合わされて一次化学薬剤として用いられうる。結腸直腸癌を治療するために、一方では、5−FUベースの投薬計画(例えばFOLFOX)が、ベバシズマブと組み合わされて使われてもよい。
抗VEGF治療と関係する副作用(AE)もまた、厳密にモニターされ、管理されなければならない。以前の研究から公知である主なAEには、高血圧、タンパク尿症、出血、血栓塞栓性現象、胃腸穿孔/瘻孔および創傷治癒合併症などがある。高血圧のような特定のAEは医薬によって管理されうる。AEが重篤で管理不可能である場合、治療はやめなければならない。
本実施例は、切除した癌を有する患者のアジュバント療法における化学療法と組み合わせたベバシズマブの使用を例示する。
ベバシズマブによるアジュバント療法に適切な患者は、予め決めた判定基準およびガイドラインに基づいて選択され、この判定基準およびガイドラインは治療下にある特定の癌に応じて変わる。例えば、患者は、平均寿命、年齢、癌の既往、血液学的/肝機能および心機能、生活習慣、治療履歴、生殖の状況および計画、および精神学的状態ないしは常習的状態に基づいて選択されてもよい。さらに重要なことに、患者は、アジュバント治療の前に癌を完全に切除されていなければならない。切除術の認められた種類は特定の腫瘍の種類に依存する。また、患者の癌の代表的な十分な病理学素材は、初期のステージの分析、および有効性測定のために有用でなければならない。治療時に、手術したばかりでなければならないが、患者は手術から完全に回復していなければならない。例えば、患者は、手術後3〜6週間以上かつ8〜12週間未満にアジュバント治療を始めなければならない。
特定の癌の種類(例えば標準的な療法投薬計画)に共通して使用される化学療法投薬計画が、ベバシズマブと組み合わされて使われる。例えば、乳癌のアジュバント療法のために、ドセタキセル、パクリタキセル又はドキソルビシン/シクロホスファミド(AC)投薬計画が、ベバシズマブと組み合わされて使われてもよい。あるいは、ドセタキセルベース又はパクリタキセルベースの投薬計画およびAC投薬計画が、ベバシズマブと組み合わされた化学療法剤として連続して使われてもよい。非小細胞肺癌を治療するために、シスプラチン(単独で又は、他の化学薬剤、例えばゲムシタビン、ドセタキセル又はビノレルビンと組み合わされて)が、ベバシズマブと組み合わされて一次化学薬剤として用いられうる。結腸直腸癌を治療するために、一方では、5−FUベースの投薬計画(例えばFOLFOX)が、ベバシズマブと組み合わされて使われてもよい。
抗VEGF治療と関係する副作用(AE)は、厳密にモニターされ、管理されなければならない。以前の研究から公知である主なAEには、高血圧、タンパク尿症、出血、血栓塞栓性現象、胃腸穿孔/瘻孔および創傷治癒合併症などがある。高血圧のような特定のAEは医薬によって管理されうる。AEが重篤で管理不可能である場合、治療はやめなければならない。
前述の記載から、多様な使用および条件に合わせるために本明細書に記載の本発明に変更および修飾がなされることは明らかであろう。このような実施態様もまた、以下の特許請求の範囲内である。
本明細書中に引用したすべての出版物、特許出願および特許文献、例えば2006年12月19日に出願の米国仮特許出願第60/870741号;2006年12月19日に出願の第60/870745号;2006年12月27日に出願の第60/877267号;2007年3月22日に出願の第60/919638号;2007年7月5日に出願の第60/958384号;および2007年11月20日に出願の第60/989397号は、あたかも各々独立した出版物、特許又は特許出願が特別にかつ個別に出典明記によって援用されているのと同程度に出典明記によって本明細書中に援用される。
Claims (38)
- 被検体の良性、前癌性又は非転移性の癌の治療方法であって、有効量のVEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与することを含む方法。
- 前記のVEGF特異的アンタゴニストの投与によって、前記の良性、前癌性又は非転移性の癌が浸潤性ないしは転移性の癌になるのが妨げられる、請求項1に記載の方法。
- 前記良性、前癌性又は非転移性の癌がステージ0、ステージI又はステージIIの癌である、請求項1に記載の方法。
- 前記のVEGF特異的アンタゴニストの投与によって、前記の良性、前癌性又は非転移性の癌がステージIII又はステージIVの癌に進行するのが妨げられる、請求項3に記載の方法。
- 前記のVEGF特異的アンタゴニストの投与により腫瘍サイズが低減する、請求項1に記載の方法。
- 癌、ポリープ又は遺伝性癌症候群の家族歴を有する被検体の治療方法であって、該被検体の良性、前癌性又は非転移性の癌の発症ないしは再発を予防するために有効な量のVEGF特異的アンタゴニストを該被検体に投与することを含む方法。
- 前記方法により、臨床的に検出可能な癌を有したことがない被検体又は良性癌しか有したことのない被検体における前記良性、前癌性又は非転移性の癌の発症又は再発が妨げられる、請求項6に記載の方法。
- 切除不能な腫瘍を有する被検体の腫瘍サイズを低減する方法であって、有効量のVEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与することを含み、該VEGF特異的アンタゴニストの投与により腫瘍サイズが低減し、それによって腫瘍の完全な切除が可能となる、方法。
- 腫瘍の完全な切除の後に、VEGF特異的アンタゴニストの有効量を前記被検体に投与する工程をさらに含む、請求項8に記載の方法。
- 手術可能な癌を有する被検体の治療方法であって、手術の前にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を被検体に投与し、手術を行うことによって癌が切除されることを含む、方法。
- 癌の再発を予防するために、手術後にVEGF特異的アンタゴニストの有効量を前記被検体に投与する工程をさらに含む、請求項10に記載の方法。
- 前記のVEGF特異的アンタゴニストの投与により微小転移性癌の増殖が妨げられる、請求項9又は11に記載の方法。
- VEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与することを含む、手術可能な癌を有する被検体のネオアジュバント療法の方法。
- 被検体における癌の再発の予防方法であって、VEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与することを含み、該投与によって該被検体の癌の再発が妨げられる、方法。
- 被検体における癌再発の可能性を低減する方法であって、VEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与することを含み、該投与によって該被検体における癌の再発の可能性が低減される、方法。
- 前記のVEGF特異的アンタゴニストの投与により、臨床的に検出可能な腫瘍又はその転移の発生の可能性が妨げられるか又は低減される、請求項14又は15に記載の方法。
- 被検体がVEGF特異的アンタゴニストの投与の工程の前に根治手術を受けている、請求項14又は15に記載の方法。
- VEGF特異的アンタゴニストが単独療法である、請求項1、6、8、10、13、14、15および17の何れか一に記載の方法。
- 被検体が既に抗癌治療により治療されている、請求項1、6、8、10、13、14、15、17および18の何れか一に記載の方法。
- 前記抗癌療法が抗血管形成療法を含む、請求項19に記載の方法。
- 腫瘍を取り除き、その後にVEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与する工程を含む、被検体における腫瘍の再増殖の予防方法。
- 腫瘍を取り除き、その後にVEGF特異的アンタゴニストを被検体に投与する工程を含む、腫瘍を有する被検体における癌の再発の予防方法。
- 腫瘍の除去とVEGF特異的アンタゴニストの投与との間に、2週間より長い期間をさらに含む、請求項21又は22に記載の方法。
- 期間が2週間を超え、1年未満である、請求項23に記載の方法。
- 腫瘍の除去とVEGF特異的アンタゴニストの投与との間に、28日の期間をさらに含む、請求項21又は22に記載の方法。
- 腫瘍の除去とVEGF特異的アンタゴニストの投与との間に、手術切開が完全に治癒するか又は傷の裂開の危険性が低くなるために十分な時間である期間をさらに含む、請求項21又は22に記載の方法。
- VEGF特異的アンタゴニストが単独療法である、請求項21又は22に記載の方法。
- 前記癌の再発について被検体をモニタリングすることを更に含む、請求項1、6、8、10、13、14、15、18および22の何れか一に記載の方法。
- 癌又は腫瘍が、胃腸、結腸直腸、胸部、卵巣、肺又は腎臓である、請求項1、6、8、10、13、14、15、18、21および22の何れか一に記載の方法。
- 更なる抗癌療法を投与することを更に含む、請求項1、6、8、10、13、14、15、18、21および22の何れか一に記載の方法。
- 前記更なる抗癌療法が化学療法である、請求項30に記載の方法。
- 前記のVEGF特異的アンタゴニストが、VEGFに特異的に結合するポリペプチド、リボザイム、ペプチボディ、アンチセンス核酸塩基オリゴマー、小RNA分子およびアプタマーからなる群から選択される、請求項1、6、8、10、13、14、15、18、21および22の何れか一に記載の方法。
- 前記のVEGFに特異的に結合するポリペプチドが、可溶性VEGFレセプタータンパク質、ないしはそのVEGF結合断片、又はキメラVEGFレセプタータンパク質である、請求項32に記載の方法。
- 前記キメラVEGFレセプタータンパク質がFlt−1/Fc、KDR/Fc又はFlt/KDR/Fcである、請求項33に記載の方法。
- 前記のVEGFに特異的に結合するポリペプチドが抗VEGF抗体ないしはその抗原結合断片である、請求項32に記載の方法。
- 前記抗VEGF抗体がモノクローナル抗体である、請求項35に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体がキメラ、ヒト化、又は完全ヒト抗体である、請求項36に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体がベバシズマブである、請求項37に記載の方法。
Applications Claiming Priority (12)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US87074106P | 2006-12-19 | 2006-12-19 | |
US87074506P | 2006-12-19 | 2006-12-19 | |
US60/870,741 | 2006-12-19 | ||
US60/870,745 | 2006-12-19 | ||
US87726706P | 2006-12-27 | 2006-12-27 | |
US60/877,267 | 2006-12-27 | ||
US91963807P | 2007-03-22 | 2007-03-22 | |
US60/919,638 | 2007-03-22 | ||
US95838407P | 2007-07-05 | 2007-07-05 | |
US60/958,384 | 2007-07-05 | ||
US98939707P | 2007-11-20 | 2007-11-20 | |
US60/989,397 | 2007-11-20 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013104923A Division JP2013189452A (ja) | 2006-12-19 | 2013-05-17 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017199344A Division JP2018052939A (ja) | 2006-12-19 | 2017-10-13 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015110609A true JP2015110609A (ja) | 2015-06-18 |
Family
ID=39323719
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009543152A Pending JP2010513566A (ja) | 2006-12-19 | 2007-12-18 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
JP2013104923A Pending JP2013189452A (ja) | 2006-12-19 | 2013-05-17 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
JP2015005626A Withdrawn JP2015110609A (ja) | 2006-12-19 | 2015-01-15 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
JP2017199344A Pending JP2018052939A (ja) | 2006-12-19 | 2017-10-13 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009543152A Pending JP2010513566A (ja) | 2006-12-19 | 2007-12-18 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
JP2013104923A Pending JP2013189452A (ja) | 2006-12-19 | 2013-05-17 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017199344A Pending JP2018052939A (ja) | 2006-12-19 | 2017-10-13 | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US20080248033A1 (ja) |
EP (2) | EP2101807B1 (ja) |
JP (4) | JP2010513566A (ja) |
KR (5) | KR20140148491A (ja) |
CN (1) | CN103143017A (ja) |
AR (1) | AR064458A1 (ja) |
AU (1) | AU2007333735A1 (ja) |
BR (1) | BRPI0720552A2 (ja) |
CA (1) | CA2671734A1 (ja) |
CO (1) | CO6210829A2 (ja) |
CR (1) | CR10940A (ja) |
DK (1) | DK2101807T3 (ja) |
EC (1) | ECSP099523A (ja) |
ES (1) | ES2582656T3 (ja) |
HK (1) | HK1133210A1 (ja) |
HU (1) | HUE029445T2 (ja) |
IL (1) | IL238913A0 (ja) |
MA (1) | MA31150B1 (ja) |
MX (1) | MX2009006779A (ja) |
MY (1) | MY183404A (ja) |
NO (1) | NO20092604L (ja) |
NZ (1) | NZ578472A (ja) |
PL (1) | PL2101807T3 (ja) |
RU (1) | RU2013129450A (ja) |
SG (2) | SG10201503407WA (ja) |
SI (1) | SI2101807T1 (ja) |
TW (2) | TW200831538A (ja) |
WO (1) | WO2008077077A2 (ja) |
Families Citing this family (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ME02371B (me) * | 2006-09-29 | 2016-06-20 | Oncomed Pharm Inc | Sastojci i postupci za dijagnstikovanje i tretman raka |
TWI580694B (zh) | 2007-11-30 | 2017-05-01 | 建南德克公司 | 抗-vegf抗體 |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
KR101671886B1 (ko) | 2008-06-25 | 2016-11-04 | 에스바테크 - 어 노바티스 컴파니 엘엘씨 | Vegf를 억제하는 안정하고 가용성인 항체 |
US8268314B2 (en) * | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
JP6041489B2 (ja) * | 2008-11-22 | 2016-12-07 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 乳癌の治療のための化学療法と併用した抗vegf抗体の使用 |
EP2393513B1 (en) * | 2009-02-06 | 2016-10-19 | The General Hospital Corporation | Methods of treating vascular lesions |
RU2598248C2 (ru) | 2009-04-02 | 2016-09-20 | Роше Гликарт Аг | Полиспецифичные антитела, включающие антитела полной длины и одноцепочечные фрагменты fab |
AU2010234031B2 (en) | 2009-04-07 | 2015-10-01 | Roche Glycart Ag | Trivalent, bispecific antibodies |
CN102458467A (zh) * | 2009-04-20 | 2012-05-16 | 健泰科生物技术公司 | 辅助癌症疗法 |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
SG179196A1 (en) | 2009-09-16 | 2012-04-27 | Genentech Inc | Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof |
JP5965318B2 (ja) | 2009-10-16 | 2016-08-03 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Dll4アンタゴニストおよび降圧剤の治療的併用およびそれらによる治療の方法 |
US9387211B2 (en) | 2010-02-01 | 2016-07-12 | Cedars-Sinai Medical Center | Methods for treatment of Cushing'S disease and hypercortisolism using gefitinib |
US20120308567A1 (en) * | 2010-02-01 | 2012-12-06 | Cedars-Sinai Medical Center | Use of tyrosine kinase inhibitors for treatment of prolactinoma |
MX360640B (es) | 2010-03-01 | 2018-11-09 | Tau Therapeutics Llc Star | Diagnosis e imagenologia de cancer. |
AR080794A1 (es) | 2010-03-26 | 2012-05-09 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos bivalentes biespecificos anti- vegf/ anti-ang-2 |
AR080793A1 (es) | 2010-03-26 | 2012-05-09 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos biespecificos |
WO2012009705A1 (en) | 2010-07-15 | 2012-01-19 | Zyngenia, Inc. | Ang-2 binding complexes and uses thereof |
MX339427B (es) * | 2010-07-19 | 2016-05-25 | Hoffmann La Roche | Biomarcadores de plasma de sangre para terapias de combinacion con bevacizumab para tratamiento de cancer pancreatico. |
WO2012025530A1 (en) | 2010-08-24 | 2012-03-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment |
US8551479B2 (en) | 2010-09-10 | 2013-10-08 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating melanoma |
JP5766296B2 (ja) | 2010-12-23 | 2015-08-19 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用 |
BR112013019975A2 (pt) | 2011-02-28 | 2017-08-01 | Hoffmann La Roche | proteínas de ligação de antígeno, composição farmacêutica, uso de uma proteína de ligação de antígeno, método para o tratamento de um paciente e método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira" |
EP2681240B1 (en) | 2011-02-28 | 2017-08-16 | F. Hoffmann-La Roche AG | Monovalent antigen binding proteins |
WO2012135624A1 (en) * | 2011-04-01 | 2012-10-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Treatment of colon cancer using complement inhibitors |
WO2012151574A1 (en) | 2011-05-05 | 2012-11-08 | Duke University | Methods of developing a prognosis for pancreatic cancer and predicting responsiveness to cancer therapeutics |
WO2012162561A2 (en) | 2011-05-24 | 2012-11-29 | Zyngenia, Inc. | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
WO2013039859A1 (en) * | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Gray Lloyd S | Antagonists of products of the hs.459642 unigene cluster for the inhibition of proliferation, development or differentiation of stem cells including cancer stem cells |
EP3485903B1 (en) | 2011-09-23 | 2022-11-16 | Mereo BioPharma 5, Inc. | Vegf/dll4 binding agents and uses thereof |
WO2013085973A1 (en) * | 2011-12-05 | 2013-06-13 | Subhransu Ray | Treatment for angiogenic disorders |
KR20140127854A (ko) | 2012-02-10 | 2014-11-04 | 제넨테크, 인크. | 단일-쇄 항체 및 다른 이종다량체 |
BR112014028368A2 (pt) | 2012-06-27 | 2017-11-14 | Hoffmann La Roche | método de produção de conjugado de região fc de anticorpo, conjugado de região fc de anticorpo e formulação farmacêutica |
CA2871880A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for selection and production of tailor-made highly selective and multi-specific targeting entities containing at least two different binding entities and uses thereof |
MA37794B1 (fr) | 2012-07-13 | 2017-07-31 | Roche Glycart Ag | Anticorps bispécifiques anti-vegf/anti-ang-2 et leur utilisation dans le cadre du traitement de pathologies vasculaires oculaires |
JP6371294B2 (ja) | 2012-10-31 | 2018-08-08 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Dll4アンタゴニストによる処置の方法およびモニタリング |
EP2925887B1 (en) | 2012-12-03 | 2018-03-07 | Koninklijke Philips N.V. | Predictive outcome assessment for chemotherapy with neoadjuvant bevacizumab |
CN105451767B (zh) | 2013-03-15 | 2019-10-18 | 泽恩格尼亚股份有限公司 | 多价和单价多特异性复合物及其用途 |
WO2015052230A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies |
ES2808153T3 (es) | 2014-10-31 | 2021-02-25 | Mereo Biopharma 5 Inc | Terapia de combinación para tratamiento de enfermedad |
PL3227332T3 (pl) | 2014-12-03 | 2020-06-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Wielospecyficzne przeciwciała |
WO2017053705A1 (en) | 2015-09-23 | 2017-03-30 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treatment of cancer |
CN108603876A (zh) * | 2015-12-30 | 2018-09-28 | 维森盖特有限公司 | 用于自动检测和监测发育异常和施用化学预防的系统和方法 |
US11499973B2 (en) | 2016-05-17 | 2022-11-15 | Duke University | Methods of predicting responsiveness of a cancer to a VEGF targeting agent and methods of prognosing and treating cancer |
CN111936171A (zh) | 2017-12-19 | 2020-11-13 | 阿库斯股份有限公司 | Aav介导的治疗性抗体到内耳的递送 |
US11026649B2 (en) * | 2018-06-25 | 2021-06-08 | Siemens Medical Solutions Usa, Inc. | Method and system for determining tumor burden in medical images |
CN113454109A (zh) * | 2019-02-18 | 2021-09-28 | 新加坡科技研究局 | 膜结合Flt-1诱饵及其用途 |
CA3139162A1 (en) * | 2019-05-17 | 2020-11-26 | Cancer Prevention Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating familial adenomatous polyposis |
CN112773852A (zh) * | 2021-03-16 | 2021-05-11 | 宁夏医科大学 | 一种对细胞有保护作用的中草药组合物的制备工艺 |
CN113512589B (zh) * | 2021-07-14 | 2023-03-10 | 复旦大学附属中山医院 | Prune1基因检测在多发性骨髓瘤患者预后中的应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001072587A (ja) * | 1999-07-01 | 2001-03-21 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | Vegf受容体拮抗剤 |
JP2002543093A (ja) * | 1999-04-28 | 2002-12-17 | ボード オブ リージェンツ, ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | Vegfの選択的阻害による癌処置のための組成物および方法 |
WO2005000900A1 (en) * | 2003-05-30 | 2005-01-06 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-vegf antibodies |
WO2005012359A2 (en) * | 2003-08-01 | 2005-02-10 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
Family Cites Families (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4675187A (en) | 1983-05-16 | 1987-06-23 | Bristol-Myers Company | BBM-1675, a new antibiotic complex |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
WO1989006692A1 (en) | 1988-01-12 | 1989-07-27 | Genentech, Inc. | Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
EP0533838B1 (en) | 1990-06-11 | 1997-12-03 | NeXstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligands |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
ES2246502T3 (es) | 1990-08-29 | 2006-02-16 | Genpharm International, Inc. | Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos. |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
EP0564531B1 (en) | 1990-12-03 | 1998-03-25 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with altered binding properties |
US20030206899A1 (en) | 1991-03-29 | 2003-11-06 | Genentech, Inc. | Vascular endothelial cell growth factor antagonists |
US6582959B2 (en) | 1991-03-29 | 2003-06-24 | Genentech, Inc. | Antibodies to vascular endothelial cell growth factor |
WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
CA2122732C (en) | 1991-11-25 | 2008-04-08 | Marc D. Whitlow | Multivalent antigen-binding proteins |
ATE348110T1 (de) | 1992-10-28 | 2007-01-15 | Genentech Inc | Hvegf rezeptor als vegf antagonist |
US5635388A (en) | 1994-04-04 | 1997-06-03 | Genentech, Inc. | Agonist antibodies against the flk2/flt3 receptor and uses thereof |
IL117645A (en) | 1995-03-30 | 2005-08-31 | Genentech Inc | Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration |
US5739277A (en) | 1995-04-14 | 1998-04-14 | Genentech Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
WO1997033551A2 (en) | 1996-03-15 | 1997-09-18 | Millennium Pharmaceuticals | Compositions and methods for the diagnosis, prevention, and treatment of neoplastic cell growth and proliferation |
US6100071A (en) | 1996-05-07 | 2000-08-08 | Genentech, Inc. | Receptors as novel inhibitors of vascular endothelial growth factor activity and processes for their production |
US6884879B1 (en) | 1997-04-07 | 2005-04-26 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF antibodies |
ES2236634T3 (es) | 1997-04-07 | 2005-07-16 | Genentech, Inc. | Anticuerpos anti-vegf. |
US20020032315A1 (en) | 1997-08-06 | 2002-03-14 | Manuel Baca | Anti-vegf antibodies |
KR100794454B1 (ko) | 1997-04-07 | 2008-01-16 | 제넨테크, 인크. | 항-vegf 항체 |
US20030114407A1 (en) | 2001-12-06 | 2003-06-19 | Monia Brett P. | Antisense modulation of G protein-coupled receptor ETBR-LP-2 expression |
EP2364997A3 (en) | 1999-01-15 | 2012-07-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
US6703020B1 (en) | 1999-04-28 | 2004-03-09 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF |
DE60042021D1 (de) | 1999-07-29 | 2009-05-28 | Gilead Sciences Inc | Nukleinsäureliganden für den hepatozytischen wachstumsfaktor/dispersionsfaktor (hgf/sf) und seines c-met rezeptors |
ATE337403T1 (de) | 1999-12-24 | 2006-09-15 | Genentech Inc | Verfahren und verbindungen zur verlängerung der halbwertzeiten bei der ausscheidung von biowirksamen verbindungen |
US7342016B2 (en) * | 2000-08-30 | 2008-03-11 | Schering Corporation | Farnesyl protein transferase inhibitors as antitumor agents |
ES2727425T3 (es) | 2000-12-12 | 2019-10-16 | Medimmune Llc | Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas |
EP1636593B9 (en) | 2003-06-06 | 2009-12-16 | Genentech, Inc. | Modulating the interaction between hgf beta chain and c-met |
US20050044853A1 (en) * | 2003-09-02 | 2005-03-03 | Kazutora Yoshino | Ecology system |
US7354580B2 (en) * | 2004-06-10 | 2008-04-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of administering and using VEGF inhibitors for the treatment of human cancer |
US20060009360A1 (en) | 2004-06-25 | 2006-01-12 | Robert Pifer | New adjuvant composition |
ES2339789T3 (es) * | 2004-07-20 | 2010-05-25 | Genentech, Inc. | Inhibidores de proteina 4 de tipo angiopoyetina, combinaciones y su utilizacion. |
-
2007
- 2007-12-18 TW TW096148476A patent/TW200831538A/zh unknown
- 2007-12-18 SG SG10201503407WA patent/SG10201503407WA/en unknown
- 2007-12-18 KR KR1020147032041A patent/KR20140148491A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-12-18 SG SG2011080801A patent/SG176448A1/en unknown
- 2007-12-18 HU HUE07869456A patent/HUE029445T2/en unknown
- 2007-12-18 CN CN2012100915514A patent/CN103143017A/zh active Pending
- 2007-12-18 KR KR1020137007960A patent/KR20130060309A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-12-18 SI SI200731805A patent/SI2101807T1/sl unknown
- 2007-12-18 DK DK07869456.9T patent/DK2101807T3/en active
- 2007-12-18 KR KR1020147002744A patent/KR20140031996A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-12-18 BR BRPI0720552-0A2A patent/BRPI0720552A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2007-12-18 MX MX2009006779A patent/MX2009006779A/es unknown
- 2007-12-18 KR KR1020157021564A patent/KR20150097813A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-12-18 NZ NZ578472A patent/NZ578472A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-12-18 MY MYPI20092394A patent/MY183404A/en unknown
- 2007-12-18 US US12/002,605 patent/US20080248033A1/en not_active Abandoned
- 2007-12-18 TW TW103140661A patent/TWI577695B/zh not_active IP Right Cessation
- 2007-12-18 PL PL07869456.9T patent/PL2101807T3/pl unknown
- 2007-12-18 EP EP07869456.9A patent/EP2101807B1/en not_active Not-in-force
- 2007-12-18 JP JP2009543152A patent/JP2010513566A/ja active Pending
- 2007-12-18 AU AU2007333735A patent/AU2007333735A1/en not_active Abandoned
- 2007-12-18 KR KR1020097014282A patent/KR20090097188A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-12-18 EP EP16164548.6A patent/EP3095455A1/en not_active Withdrawn
- 2007-12-18 CA CA002671734A patent/CA2671734A1/en not_active Abandoned
- 2007-12-18 WO PCT/US2007/088000 patent/WO2008077077A2/en active Application Filing
- 2007-12-18 ES ES07869456.9T patent/ES2582656T3/es active Active
- 2007-12-19 AR ARP070105735A patent/AR064458A1/es unknown
-
2009
- 2009-07-08 NO NO20092604A patent/NO20092604L/no not_active Application Discontinuation
- 2009-07-09 MA MA32085A patent/MA31150B1/fr unknown
- 2009-07-17 CR CR10940A patent/CR10940A/es unknown
- 2009-07-17 CO CO09074843A patent/CO6210829A2/es not_active Application Discontinuation
- 2009-07-17 EC EC2009009523A patent/ECSP099523A/es unknown
-
2010
- 2010-01-27 HK HK10100860.5A patent/HK1133210A1/zh not_active IP Right Cessation
- 2010-06-29 US US12/826,001 patent/US20110052576A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-02-22 US US13/402,645 patent/US20120148584A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-05-17 JP JP2013104923A patent/JP2013189452A/ja active Pending
- 2013-06-27 RU RU2013129450/15A patent/RU2013129450A/ru not_active Application Discontinuation
- 2013-07-26 US US13/952,259 patent/US20140178363A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-01-15 JP JP2015005626A patent/JP2015110609A/ja not_active Withdrawn
- 2015-05-20 IL IL238913A patent/IL238913A0/en unknown
- 2015-06-26 US US14/752,284 patent/US20160108116A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-08-15 US US15/677,804 patent/US20180208647A1/en not_active Abandoned
- 2017-10-13 JP JP2017199344A patent/JP2018052939A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002543093A (ja) * | 1999-04-28 | 2002-12-17 | ボード オブ リージェンツ, ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | Vegfの選択的阻害による癌処置のための組成物および方法 |
JP2001072587A (ja) * | 1999-07-01 | 2001-03-21 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | Vegf受容体拮抗剤 |
WO2005000900A1 (en) * | 2003-05-30 | 2005-01-06 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-vegf antibodies |
WO2005012359A2 (en) * | 2003-08-01 | 2005-02-10 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
ALFEREZ,D. ET AL: "Inhibition of VEGFR reduces polyp burden in a mouse model of intestinal cancer", GASTROENTEROLOGY, vol. 130, no. 4, JPN6012060137, April 2006 (2006-04-01), pages 417, ISSN: 0003230517 * |
CANCER CELL, vol. 1, JPN6016034892, 2002, pages 193 - 202, ISSN: 0003397554 * |
ELLIS LEE M, JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY, vol. V23 N22, JPN5010000185, 1 August 2005 (2005-08-01), pages 4853 - 4855, ISSN: 0003230516 * |
GRUENBERGER THOMAS, JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY, vol. V24 N16, JPN5010000184, 1 June 2006 (2006-06-01), pages 2592 - 2593, ISSN: 0003230515 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2018052939A (ja) | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 | |
US10617755B2 (en) | Combination therapy for the treatment of glioblastoma | |
JP6184733B2 (ja) | 卵巣癌の治療のための抗血管新生治療 | |
US20150224191A1 (en) | Combination Treatment with VEGF-C Antagonists | |
JP2012524083A (ja) | アジュバント癌治療 | |
AU2014201795B2 (en) | VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors | |
AU2016213830A1 (en) | VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors | |
CN101646450A (zh) | 用于辅助和新辅助疗法以及早期肿瘤的治疗的vegf特异性拮抗剂 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160112 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160328 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160426 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160712 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160913 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20161129 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170131 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170313 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170613 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171013 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20171023 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20171228 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181207 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20190417 |