JP2014533927A - 分化を促進する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
用語「ユビキチン特異的ペプチダーゼ1」、「脱ユビキチン化酵素1」、および「USP1」とは本明細書では、天然配列USP1ポリペプチド、ポリペプチドバリアントならびに天然配列ポリペプチドおよびポリペプチドバリアントの断片のことである(これらは本明細書でさらに定義される)。本明細書に記載されるUSPポリペプチドは、ヒト組織型からもしくは別の供給源からなどの種々の供給源から単離される、または組換えもしくは合成的方法により調製されるポリペプチドであってもよい。
100×分数X/Y
XはAとBのそのプログラムアライメントにおいて配列アライメントプログラムALIGN−2により同一マッチとしてスコアー化されたアミノ酸残基の数であり、YはBにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合、Bに対するAの%アミノ酸配列同一性はAに対するBの%アミノ酸配列同一性と等しくならないことは認識されるであろう。他の方法で特に記述されていなければ、本明細書で使用されるすべての%アミノ酸配列同一性値は、ALIGN−2コンピュータプログラムを使用するすぐ前のパラグラフに記載されている通りに得られる。
USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストを利用する方法が本明細書で提供される。例えば、細胞を有効量のUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストに接触させることを含む、細胞の細胞運命の変化を促進する方法が本明細書で提供される。細胞を有効量のUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストに接触させることを含む、細胞周期停止を誘導する方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、細胞は幹細胞運命(例えば、間葉幹細胞運命)を有する細胞である。
本明細書に記載される方法において有用なUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニスト(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニスト(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)は、抗体、結合ペプチド、結合小分子、またはポリヌクレオチドである。
一態様では、USP1、UAF1、および/またはID(例えば、ID1、ID2、またはID3)に結合する単離された抗体が本明細書で提供される。上記実施形態のいずれにおいても、抗体はヒト化されている。
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGVIFPSNNVYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCASMGAFDSWGPGTLVTVSSG(配列番号42)を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ID3抗体は、
AVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQSVWNNNWLSWFQQKPGQPPKLLIYETSKLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGGYWTTSDNNVFGGGTEVVVK(配列番号43)を含む可変軽鎖配列および/または
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNVYIHWVRQAPGKGLEWIGYISDGDTARYATWAKGRFTISKTSSTTVNLKMTSLTTEDTATYFCARQGFNIWGPGTLVTVSL(配列番号44)を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ID3抗体は、
AVLTQTPSPVSAAVGGTVTSCQSSQSVYNNNWLSWFQQKSGQPPKLLIYETSKLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTIIDVQCDDAATYYCLGGYWTTSDNNIFGGGTEVVVK(配列番号45)を含む可変軽鎖配列および/または
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYIHWVRQAPGKALEWIGYISDGGTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARQGFNIWGPGTLVTVSL(配列番号46)を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ID3抗体は、
AVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQSVWNNNWLSWFQQKPGQPPKLLIYETSKLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGGYWTTSDNNVFGGGTEVVVK(配列番号47)を含む可変軽鎖配列および/または
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNVYIHWVRQAPGKGLEWIGYISDGDTARYATWAKGRFTISKTSSTTVNLKMTSLTTEDTATYFCARQGFNIWGPGTLVTVSL(配列番号48)を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ID3抗体は、
AVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVYNNNWLSWFQQKSGQPPKLLIYETSKLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTIIDVQCDDAATYYCLGGYWSTSDNNIFGGGTEVVVK(配列番号49)を含む可変軽鎖配列および/または
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYIHWVRQAPGKALEWIGYISDGGTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARQGFNIWGPGTLVTVSL(配列番号50)
を含む可変重鎖配列を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は解離定数(Kd)≦1μMを有する。一実施形態では、Kdは、以下のアッセイにより説明される対象の抗体のFabバージョンおよびその抗原を用いて実施される放射標識された抗原結合アッセイ(RIA)により測定される。抗原に対するFabの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定シリーズの存在下でFabを最小濃度の(125I)−標識抗原で平衡にし、次に結合抗原を抗Fab被覆プレートで捕捉することにより測定される(例えば、Chenら、J.Mol.Biol.293:865〜881(1999)参照)。前記アッセイの条件を確立するため、MICROTITER(登録商標)マルチウェルプレート(Thermo Scientific)は、50mMの炭酸ナトリウム(pH9.6)中5μg/mlの捕捉抗Fab抗体(Cappel Labs)で一晩被覆され、それに続いて室温(およそ23℃)で2から5時間、PBS中2%(w/v)ウシ血清アルブミンでブロックされる。非吸着性プレート(Nunc#269620)では、100pMまたは26pMの(125I)−抗原は対象のFabの段階希釈を用いて混合される(例えば、Prestaら、Cancer Res.57:4593〜4599(1997)における抗VEGF抗体、Fab−12の評価と一致する)。次に、対象のFabは一晩インキュベートされるが、インキュベーションは平衡に達していることを確実にするためにさらに長い期間(例えば、約65時間)続いてもよい。その後、前記混合物は室温でのインキュベーション(例えば、1時間)のために捕捉プレートに移される。次に、溶液は取り除かれ、プレートはPBS中0.1%のポリソルベート20(TWEEN−20(登録商標))で8回洗浄される。プレートが乾燥すると、150μl/ウェルのシンチラント(MICROSCINT−20(商標);Packard)が添加され、プレートは10分間TOPCOUNT(商標)ガンマカウンター(Packard)上で計測される。最大結合の20%以下を与えるそれぞれのFabの濃度が、競合結合アッセイにおいて使用するために選択される。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は抗体断片である。抗体断片には、Fab、Fab’、Fab’−SH、F(ab’)2、FvおよびscFv断片ならびに下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある種の抗体断片の概説については、Hudsonら、Nat.Med.9:129〜134(2003)を参照されたい。scFv断片の概説については、例えば、Pluckthun、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies、第113巻、RosenburgおよびMoore編、(Springer−Verlag、New York)、269〜315ページ(1994)を参照されたい。WO93/16185;ならびに米国特許第5,571,894号および米国特許第5,587,458号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含みインビボ半減期が増大しているFabおよびF(ab’)2断片の考察については、米国特許第5,869,046号を参照されたい。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体はキメラ抗体である。ある種のキメラ抗体は、例えば、米国特許第4,816,567号およびMorrisonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、81:6851〜6855(1984)に記載されている。一例では、キメラ抗体は非ヒト可変領域(例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類由来の可変領域)およびヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変えられている「クラス転換された」抗体である。キメラ抗体にはその抗原結合断片が含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は当技術分野で公知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は一般的には、van Dijkおよびvan de Winkel、Curr.Opin.Pharmacol.5:368〜74(2001)ならびにLonberg、Curr.Opin.Immunol.20:450〜459(2008)に記載されている。
本発明の抗体は、1種または複数の所望の活性を有する抗体を求めてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離しうる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し所望の結合特徴を有する抗体を求めてそのようなライブラリーをスクリーニングするための種々の方法は当技術分野では公知である。そのような方法は、Hoogenboomら、Methods in Molecular Biology 178:1〜37(O’Brienら編、Human Press、Totowa、NJ、2001)で概説されており、例えば、McCaffertyら、Nature 348:552〜554;Clacksonら、Nature 352:624〜628(1991);Marksら、J.Mol.Biol.222:581〜597(1992);MarksおよびBradbury、Methods in Molecular Biology 248:161〜175(Lo編 Human Press、Totowa、NJ、2003);Sidhuら、J.Mol.Biol.338(2):299〜310(2004);Leeら、J.Mol.Biol.340(5):1073〜1093(2004);Fellouse、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467〜12472(2004);ならびにLeeら、J.Immunol.Methods 284(1−2):119〜132(2004)にさらに記載されている。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は多特異的抗体、例えば、二重特異的抗体である。多特異的抗体は、少なくとも2つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の1つはUSP1またはID(例えば、ID1、ID2、またはID3)に対してであり、もう1つは他の任意の抗原に対してである。ある特定の実施形態では、二重特異的抗体はUSP1またはID(例えば、ID1、ID2、またはID3)の2つの異なるエピトープに結合しうる。二重特異的抗体を使用して、細胞傷害性薬剤をUSP1および/またはID(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)を発現する細胞に局在化させてもよい。二重特異的抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
a)グリコシル化バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加するまたは減少するように変化させる。抗体へのグリコシル化部位の付加または削除は、1つまたは複数のグリコシル化部位が作り出されるまたは取り除かれるようにアミノ酸配列を変化させることにより都合よく実現しうる。
ある特定の実施形態では、1つまたは複数のアミノ酸改変を本明細書に提供される抗体のFc領域に導入し、それによりFc領域バリアントを産生しうる。前記Fc領域バリアントは、1つまたは複数のアミノ酸位にアミノ酸改変(例えば、置換)を含むヒトFc領域配列(例えば、ヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4Fc領域)を含みうる。
ある特定の実施形態では、抗体の1つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、「チオMAb」を作り出すのが望ましいことがある。特定の実施形態では、置換される残基は抗体の接触可能部位に存在する。さらに本明細書で説明されるように、それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基はそれにより抗体の接触可能部位に置かれ、この基を使用して抗体を、薬物部分またはリンカー薬物部分などの他の部分にコンジュゲートさせて、免疫コンジュゲートを作り出しうる。ある特定の実施形態では、以下の残基:軽鎖のV205(Kabat番号付け);重鎖のA118(EU番号付け);および重鎖Fc領域のS400(EU番号付け)のうちの任意の1つまたは複数をシステインで置換しうる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第7,521,541号に記載される通りに産生しうる。
化学療法剤もしくは薬物、増殖阻害剤、毒素(例えば、細菌、真菌、植物または動物起源のタンパク質毒素、酵素的に活性な毒素またはその断片)または放射性同位体などの1つまたは複数の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされた本明細書の抗USP1抗体および/または抗ID抗体(例えば、抗ID1抗体、抗ID2抗体、または抗ID3抗体)を含む免疫コンジュゲートが本明細書でさらに提供される。
結合ポリペプチドは、本明細書に記載されるUSP1、UAF1、および/またはID(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)に好ましくは特異的に結合するポリペプチドである。結合ポリペプチドは、既知のポリペプチド合成法を使用して化学的に合成してもよいし、または組換え技術を使用して調製し精製してもよい。結合ポリペプチドは通常、少なくとも約5アミノ酸長、または少なくとも約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または100アミノ酸長もしくはそれよりも長く、そのような結合ポリペプチドは、本明細書に記載される標的、USP1、UAF1、および/またはID(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)に好ましくは特異的に結合することができる。結合ポリペプチドは、周知の技法を使用する必要以上の実験をせずに同定しうる。この点に関して、ポリペプチド標的に特異的に結合することができる結合ポリペプチドを求めてポリペプチドライブラリーをスクリーニングするための技法は当技術分野では周知であることは知られている(例えば、米国特許第5,556,762号、米国特許第5,750,373号、米国特許第4,708,871号、米国特許第4,833,092号、米国特許第5,223,409号、米国特許第5,403,484号、米国特許第5,571,689号、米国特許第5,663,143号;PCT出願番号WO84/03506およびWO84/03564;Geysenら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.、81:3998〜4002(1984);Geysenら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.、82:178〜182(1985);Geysenら、in Synthetic Peptides as Antigens、130〜149(1986);Geysenら、J.Immunol.Meth.、102:259〜274(1987);Schoofsら、J.Immunol.、140:611〜616(1988)、Cwirla,S.E.ら、(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA、87:6378;Lowman,H.B.ら、(1991)Biochemistry、30:10832;Clackson,T.ら、(1991)Nature、352:624;Marks,J.D.ら、(1991)、J.Mol.Biol.、222:581;Kang,A.S.ら、(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA、88:8363、およびSmith,G.P.(1991)Current Opin.Biotechnol.、2:668参照)。
を含む。
USP1アンタゴニスト、UAF1および/またはIDアンタゴニスト(例えば、ID1アンタゴニスト、ID2アンタゴニスト、および/またはID3アンタゴニスト)として使用するための結合小分子が本明細書に提供される。
を含む一般構造を有し、R1、R2、R3、R4、およびR5は同じでも異なっていてもよく、H、低級アルキル(C1〜C4)、C1〜C4アルコキシル、シクロアルキル、アリール、または複素環式環構造を含む。
ポリヌクレオチドアンタゴニストが本明細書で提供される。ポリヌクレオチドはアンチセンス核酸および/またはリボザイムでもよい。アンチセンス核酸は、USP1遺伝子、UAF1遺伝子、および/またはID遺伝子(例えば、ID1、ID2および/またはID3)のRNA転写物の少なくとも一部に相補的な配列を含む。しかし、絶対的相補性は、好ましいが、必要ではない。本明細書で言及される「RNAの少なくとも一部に相補的な」配列とは、前記RNAとハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができるのに十分な相補性を有する配列を意味し、二本鎖USP1、UAF1および/またはIDアンチセンス核酸の場合、したがって、二重鎖DNAの一本鎖を試験することができ、または三重鎖形成をアッセイしうる。ハイブリダイズする能力は、アンチセンス核酸の相補性の程度と長さの両方に依拠することになる。一般に、ハイブリダイズしている核酸が大きいほど、核酸はUSP1、UAF1および/またはID RNAとそれだけ多くの塩基ミスマッチを含有するが、それでも安定な二重鎖(または、場合によっては、三重鎖)を形成しうる。当業者であれば、ハイブリダイズした複合体の融点を決定する標準法の使用によりミスマッチの許容可能な程度を確認することができる。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体および/または結合ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントが想定されている。例えば、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を改善するのが望ましいことがある。抗体および/または結合ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、適切な改変を抗体および/または結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列中に導入することにより、またはペプチド合成により調製しうる。そのような改変には、例えば、抗体および/または結合ポリペプチドのアミノ酸配列からの残基の欠失、および/または内への残基の挿入および/または残基の置換が含まれる。最終構築物が所望の特徴、例えば、標的結合性を有するのであれば、欠失、挿入、および置換のどんな組み合わせでも行って最終構築物に到達することができる。
(1)疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile
(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln
(3)酸性:Asp、Glu
(4)塩基性:His、Lys、Arg
(5)鎖配向に影響を与える残基:Gly、Pro
(6)芳香族:Trp、Tyr、Phe
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および/または結合ポリペプチドは、当技術分野では公知であり容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変することができる。抗体および/または結合ポリペプチドの誘導化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的例には、ポリエチレングリコール(PEG)、エチレングリコール/プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−1,3−ジオキソラン、ポリ−1,3,6−トリオキサン、エチレン/無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸(ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか)、デキストランまたはポリ(n−ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキサイド/エチレンオキサイドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール(例えば、グリセロール)、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物。エチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のおかげで製造に有利でありうる。前記ポリマーはいかなる分子量でもよく、分岐していることも分岐していないこともある。抗体に結合しているポリマーの数は変動してもよく、1つよりも多いポリマーが結合している場合、前記ポリマーは同じまたは異なる分子であることが可能である。一般に、誘導化のために使用されるポリマーの数および/または種類は、改善される抗体および/または結合ポリペプチドの特定の特性または機能、抗体誘導体および/または結合ポリペプチド誘導体が限定された条件下の治療において使用されるのかどうか、等を含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定することができる。
抗体および/または結合ポリペプチドは、例えば、米国特許第4,816,567号に記載されている組換え法および組成物を使用して産生しうる。一実施形態では、抗USP1抗体、抗UAF1抗体または抗ID抗体(例えば、抗ID1抗体、抗ID2抗体、または抗ID3抗体)をコードする単離された核酸。そのような核酸は抗体のVLを含むアミノ酸配列および/またはVHを含むアミノ酸配列(例えば、抗体の軽鎖および/または重鎖)をコードしうる。追加の実施形態では、抗体および/または結合ポリペプチドをコードするそのような核酸を含む1つまたは複数のベクター(例えば、発現ベクター)が提供される。追加の実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一そのような実施形態では、宿主細胞は、(1)抗体のVLを含むアミノ酸配列および抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または(2)抗体のVLを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一のベクターおよび抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二のベクターを含む(例えば、これらのベクターで形質転換されている)。一実施形態では、宿主細胞は真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞またはリンパ球細胞(例えば、Y0、NS0、Sp20細胞)である。一実施形態では、抗USP1抗体、抗UAF1抗体および/もしく抗ID抗体(例えば、抗ID1抗体、抗ID2抗体、または抗ID3抗体)などの抗体ならびに/または結合ポリペプチドを作製する方法であって、抗体および/または結合ポリペプチドの発現に適した条件下で、上に提供される抗体および/または結合ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、場合により、宿主細胞(または宿主細胞培養培地)から抗体および/またはポリペプチドを回収することを含む方法が提供される。
抗体、結合ポリペプチド、および/または小分子を作製するための技法は上に記載されている。抗USP1抗体、抗UAF1抗体および/または抗ID抗体(例えば、抗ID1抗体、抗ID2抗体、または抗ID3抗体)などの抗体をさらに選択してもよく、ならびに本明細書に提供される結合ポリペプチド、および/または結合小分子を、当技術分野で公知の種々のアッセイにより、同定する、これらを求めてスクリーニングする、またはその物理的/化学的特性および/または生物活性について特徴付けてもよい。
一態様では、本発明の抗体は、例えば、ELISA、ウェスタンブロット、等などの公知の方法によりその抗原結合活性について試験される。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗USP1抗体、抗UAF1抗体、および/または抗ID抗体(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)のいずれも、生体試料中のUSP1、UAF1、および/またはID(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)の存在を検出するのに有用である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗USP1結合ポリペプチド、抗UAF1結合ポリペプチド、および/または抗ID結合ポリペプチド(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)のいずれも、生体試料中のUSP1、UAF1、および/またはID(例えば、ID1、ID2、および/またはID3)の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用される用語「検出する」は定量的または定性的検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は細胞または骨などの組織を含む。
本明細書に記載されるUSP1アンタゴニスト、UAF1および/またはIDアンタゴニスト(例えば、ID1アンタゴニスト、ID2アンタゴニスト、および/またはID3アンタゴニスト)の薬学的製剤は、所望の純度を有するそのような抗体を1つまたは複数の随意の薬学的に許容される担体と混合することにより、凍結乾燥剤または水溶液の形態で調製される。いくつかの実施形態では、USP1アンタゴニストおよび/またはIDアンタゴニスト(例えば、ID1アンタゴニスト、ID2アンタゴニスト、またはID3アンタゴニスト)は結合小分子、抗体、結合ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである。薬学的に許容される担体は一般に、用いられる投与量および濃度ではレシピエントには無毒であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などのバッファー;アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤;保存剤(例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム;塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール;メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3−ペンタノール;およびm−クレゾール);低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質;ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸;グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物;EDTAなどのキレート剤;ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖;ナトリウムなどの塩形成対イオン;金属複合体(例えば、Zn−タンパク質複合体);ならびに/またはポリエチレングリコール(PEG)などの非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。例となる薬学的に許容される担体は、本明細書ではさらに、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質(sHASEGP)、例えば、rHuPH20(HYLENEX(登録商標)、Baxter International,Inc.)などの可溶性PH−20ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質性薬分散剤が含まれる。rHuPH20を含む、ある種の例となるsHASEGPおよび使用方法は、米国特許出願公開第2005/0260186号および米国特許出願公開第2006/0104968号に記載されている。一態様では、sHASEGPは、コンドロイチナーゼなどの1つまたは複数の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
本発明の別の態様では、上記障害の治療、予防および/または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。製品は、容器および容器上のまたはこれに付属するラベルもしくは添付文書を含む。適切な容器には、例えば、ビン、バイアル、注射器、IV溶液袋、等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成しうる。容器には、状態を治療する、予防するおよび/または診断するのに単独で効果的なまたはこれに効果的な別の組成物と組み合わされる組成物が入っており、無菌アクセスポートを有していてもよい(例えば、容器は静脈注射液袋または皮下注射針により突き刺し可能な栓付のバイアルでもよい)。組成物中の少なくとも1つの活性薬剤は本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が最適の状態を治療するのに使用されることを表示している。さらに、製品は、(a)USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニストおよび/またはIDアンタゴニスト(例えば、ID1アンタゴニスト、ID2アンタゴニスト、またはID3アンタゴニスト)を含む組成物がそこに含有されている第1の容器、ならびに(b)追加の細胞傷害性または他の方法での治療薬を含む組成物がそこに含有されている第2の容器を含んでいてもよい。本発明のこの実施形態における製品は、組成物を使用して特定の状態を治療することができることを表示する添付文書をさらに含んでいてもよい。その代わりに、またはそれに加えて、製品は、注射用の静菌水(BWFI)、リン酸緩衝食塩水、リンガー液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容されるバッファーを含む第2(または第3)の容器をさらに含んでいてもよい。製品は、他のバッファー、希釈剤、充填剤、針、および注射器を含む、商業的および使用者の立場から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
細胞系および培養条件
ヒト細胞系、143B、293T、HOS、MG−63、SAOS−2、SJSA、およびU2−OS(ATCC)は、10%FBS(Sigma)、10ユニット/mlペニシリン、および10μg/mlストレプトマイシン(Gibco)を含むDMEMにおいて維持された。原発性ヒト骨芽細胞(PromoCell)は原発性骨芽細胞培地(PromoCell)に広げられ、上記の通りに補充されたDMEMにおいて継代された。正常骨髄由来の原発性ヒト間葉幹細胞(Lonza)は間葉幹細胞増殖培地(Lonza)で継代された。骨分化研究のため、hMSCは、100ng/mL BMP−9(R&D Systems)を補充された骨分化培地(Lonza)で培養された。原発性ヒト骨肉腫は、CytoMix、LLCから、およびCooperative Human Tissue Networkから入手した。原発性骨芽細胞は、継代2〜3で使用され、RT−PCRにより評価した場合、アルカリホスファターゼ、アラザリンレッド反応性、および骨芽細胞特異的転写物OsterixおよびOsteonectinの発現により確認された。マウスNIH−3T3(ATCC)は補充されたDMEMにおいて培養された。野生型およびUSP1-/-DT−40細胞はK.Patelから寄贈され、7%FBSおよび3%ニワトリ血清を含むRPMI(Gibco)において培養された。MG−132(Calbiochem)は10μMで使用された。シクロヘキシミド(Sigma)は25μg/mlで使用された。
USP1および変異USP1 C90Sを含むヒトデユビキチナーゼのcDNAは合成され(Blue Heron Biotechnology)、インフレームC末端FlagエピトープのあるまたはなしでpRK2001にクローニングされた。shRNA−抵抗性USP1はコドン保存部位特異的変異誘発により作製された。ID1、ID2、およびID3はジャーカット(Jurkat)由来cDNAから増幅され、C末端FlagエピトープのあるインフレームでpRK2001にクローニングされた。WDR48は発現ベクター(Origene)から増幅され、pRK2001にサブクローニングされた。HAユビキチンをコードするプラスミドは記載されている(Wertzら、Nature 430、694、2004)。切断型マウスMHCクラスIH−2Kk発現ベクターであるpMACSは、Miltenyi Biotec.から入手した。ウイルス発現研究のために、ID2およびUSP1バリアントは、レトロウイルスベクターpQCXIP(Clontech)またはレンチウイルスベクターpHUSH.Lenti.Puro(David Davis、Genentech、BMC Biotechnol.2007 Sep26;7:61)にクローニングされた。
U2−OS、HOS、SJSA、SAOS、またはMG−63細胞は10〜25%コンフルエンスまで増殖され、FuGENE6(Sigma)を使用してマーカープラスミドpMACSと組み合わせて指示されたプラスミドをトランスフェクトさせた。トランスフェクト細胞は、MACSセレクトH−2Kkマイクロビーズ(Miltenyi Biotec)で選別された。RNAは、培養されたまたは選別されトランスフェクト細胞からQiagen RNeasy Miniキットで抽出された。タンパク質は、プロテアーゼ阻害剤カクテルIならびにホスファターゼ阻害剤カクテル1および2(Calbiochem)を補充されたNP−40バッファー(1%NP−40、120mM NaCl、50mM Tris、pH=7.4、1mM EDTA)中での溶解により抽出された。ライセートは解析に先立って、15,000×Gで10分間の遠心分離により澄ませた。タンパク質含有量はBCAタンパク質アッセイ(Thermo Scientific)により正規化された。二重shRNA/siRNA実験では、細胞はFugeneによりDNA発現ベクターをトランスフェクトされ、それに続いて、ヌクレオフェクション溶液V(Lonza)中プログラムX−001でのヌクレオフェクションにより、対照siRNA(センス−5’−AAUUCUCCGAACGUGUCACGU−3’(配列番号20))またはsiRNAターゲティングp21(5’−CGATGGAACTTCGACTTTGTT−3’(配列番号21))をトランスフェクトされた。DT−40細胞は、ヌクレオフェクション溶液T(Lonza)中プログラムB−023でのヌクレオフェクションによりトランスフェクトされた。
ラットモノクローナル抗体はヒトUSP1またはWDR48のC末端100アミノ酸に対して産生されて、モノクローナルUSP1抗体5E10およびWDR48抗体9F10を産生した。ID1、ID2、ID3、E47、およびp53(Santa Cruz Biotechnology)、GAPDH(Assay Designs)、Flag、HA、チューブリン、およびアクチン(Sigma)、p21WAF1/CIP1(Cell Signaling)、E−カドヘリンおよびN−カドヘリン(BD Transduction Labs)、ならびにフィブロネクチン(Calbiochem)は商業的供給源から入手した。免疫沈降は、指示された抗体およびプロテインA/Gアガロースビーズ(Pierce)を用いて10μMのMG−132の存在下で実施された。タンパク質抽出物はBis−Trisゲル(Invitrogen)上で分離され、免疫ブロット解析のために0.2μMニトロセルロース膜(Invitrogen)に移された。
RNAはQiagen RNEasy RNA単離キットを使用して抽出された。USP1(5’:5’−GCCACTCAGCCAAGGCGACTG−3’(配列番号22);3’:5’−CAGAATGCCTCATACTGTCCATCTCTATGC−3’(配列番号23))、ID1(5’:5’−GAGCTGGTGCCCACCCTGC−3’(配列番号24);3’:5’−GATCGTCCGCAGGAACGCAT−3’(配列番号25))、ID2(5’:5’−CAAGAAGGTGAGCAAGATGGAAATCCT−3’(配列番号26);3’:5’−ACAGTGCTTTGCTGTCATTTGACATTAACTC−3’(配列番号27))、ID3(5’:5’−GAGCCGCTGAGCTTGCTGGA−3’(配列番号28);3’:5’−ATGACAAGTTCCGGAGTGAGCTCG−3’(配列番号29))、p21(5’:5’−CTTGGCCTGCCCAAGCTCTACCTTCCCACG−3’(配列番号30);3’:5’−GGGCTTCCTCTTGGAGAAGATCAGCCGGCG−3’(配列番号31))、Runx2(5’:5’−ATGGGACTGTGGTTACTGTCATGGCGGG−3’(配列番号32);3’:5’−CTGGGTTCCCGAGGTCCATCTACTGTAACTTTAATTGC−3’(配列番号33))、Osterix(5’:5’−CTCTCCATCTGCCTGGCTCCTTGGGAC−3’(配列番号34);3’:5’−CCTCAGGCTATGCTAATGATTACCCTCCCTTTTCCC−3’(配列番号35))、Osteonectin(5’:5’−GCACCATGAGGGCCTGGATCTTCTTTCTCC−3’(配列番号36);3’:5’−GGTTCTGGCAGGGATTTTCCGCCACC−3’(配列番号37))またはβ−アクチン(5’:5’−GTCGACAACGGCTCCGGC−3’(配列番号38);3’:5’−GGTGTGGTGCCAGATTTTCT−3’(配列番号39))をターゲティングするDNAオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、QuantiTect SYBR Green RT−PCRシステム(Qiagen)を用いてそれぞれの遺伝子から増幅させ、ABI 7500 Real TimePCRシステム(Applied Biosystems)でサーモサイクラーにかけた。データはSequence Detection Software v1.4(Applied Biosystems)で解析された。β−アクチンmRNAレベルを使用してUSP1およびID mRNAレベルを正規化し、負荷および試料誤差を補正した。
ホルマリン固定、パラフィン包埋組織切片をスライドに載せ、脱パラフィンし、dH20で再水和した。抗原を回収するため、試料は99℃で20分間、Target Retrieval Solution(Dako)中でインキュベートされ、20分間で74℃まで冷却された。内在性ペルオキシダーゼ、アビジン、ビオチン、および免疫グロブリンはAvidin/Biotin Blocking Kitバッファー(Vector Labs)中でのインキュベーションによりクエンチされ、続いてRTで30分間、3%BSA中でインキュベートされた。クエンチングに続いて、試料はRTで60分間、一次抗体でインキュベートされ、Dako洗浄バッファーで2回すすがれ、30分間Vectastain Kit(Vector Labs)バッファー中でインキュベートされた。染色はPeroxidase Substrate Buffer(Pierce)中でインキュベートすることにより視覚化された。試料はMayer’s Hematoxylinで対比染色され、撮像に先立ってカバーガラスに載せられた。RT=室温。
細胞周期解析は、FITC−コンジュゲートH−2Kk抗体(Miltenyi Biotec)で染色し、続いて70%エタノール固定およびRNAse A(Sigma)を用いたヨウ化プロピジウムでのDNA標識化により実施された(Krishanら、J.Cell Biol.66:188、1975)。FITC+細胞のDNA含有量は、FACSCaliburフローサイトメター(BD Biosciences)を使用して評価された。データはFlowJo v8.7.3ソフトウェア(Tree Star,Inc.)を用いて解析された。細胞周期パーセンタイルはFlowJo細胞周期プラットホームを用いて定量された。
記載された通りにベクターを安定的に形質導入されたU2−OS細胞は、チャンバースライド上でコンフルエンスまで増殖され、3μg/mlのドキシサイクリン(Clontech)で14日間処理され、PBS中1%PFAに固定され、E−カドヘリン−FITC、N−カドヘリン(BD transduction laboratories)、またはフィブロネクチン(Calbiochem)で探索された。非連結抗体はヤギ抗マウスFITC(Southern Biotech Associates)で検出された。カバーガラスはProLong Gold封入剤(Invitrogen)をマウントされた。
293T細胞は記載の通りにトランスフェクトされ、10μMのMG−132および10mMのN−エチルマレイミド(Sigma)を補充されたNP−40バッファー中での溶解に先立って10μMのMG−132で処理された。澄んだライセートは1%SDSで解離され、95℃で5分間煮沸し、次にM2−アガロース抗Flagビーズ(Sigma)を用いた免疫沈降に先立って溶解バッファーに1対20で希釈された。ユビキチンレベルはHA抗体を用いた免疫ブロットにより評価された。
293T細胞は、別々のバッチで、USP1−Flag、USP1−C90S−FlagまたはID2−FlagおよびHA−ユビキチンをトランスフェクトされた。ユビキチン化ID2−Flagは、SDS煮沸ライセートから上記の通りに免疫沈降された。USP1およびUSP1 C90Sは、NP−40溶解バッファー中での溶解に続いてFlag M2−アガロースビーズで免疫沈降された。すべての試料は、500μg/mlの3×Flagペプチド(Sigma)でビーズから溶出された。試料は脱ユビキチン化バッファー(20mMのHEPES、20mMのNaCl、100μg/mlのBSA、500μMのEDTA、1mMのDTT、pH=8.3)中で組み換えられ、室温で指示された時間インキュベートされた。ユビキチンレベルはHA抗体を用いた免疫ブロットにより評価された。
U2−OS、HOS、またはSAOS細胞は以下の通りにpRS shUSP1またはshCTLを3回トランスフェクトされ、細胞は最初、shUSP1またはshCTLをトランスフェクトされ、2日間培養され、3日間ピューロマイシンで選択された。細胞はpMACSおよびshUSP1またはshCTLをトランスフェクトされ、2日間培養され、抗H−2Kkビーズソート(Miltenyi)により選別され、1日間培養され、連続してshUSP1またはshCTLを再トランスフェクトされた。細胞はさらに3日間培養され、骨芽細胞およびhMSCマーカーは、フローサイトメトリー、リアルタイムRT−PCR、およびALPアッセイにより評価された。143B細胞はpTRIPZベースの誘導性USP1または対照shRNAベクターを形質導入され、ピューロマイシン耐性細胞は継代された。
細胞ライセートはプロテアソーム阻害剤を用いてNP−40バッファーで産生されたが、ホスファターゼ阻害剤はなく、タンパク質含有量について正規化された。ライセートは、クリアー底96ウェルプレートにおいてp−ニトロフェノールホスファターゼ基質系溶液(Sigma)に添加され、室温で0.5〜20時間インキュベートされた。既知量の4−ニトロフェノール(Sigma)の希釈シリーズは基準として使用された。活性は、SpectraMax 190分光光度計(Molecular Devices)付のOD吸光度測定により405nmで定量され、SoftMax Pro v5.3ソフトウェア(MDS Analytical Technologies)で解析された。データは、タンパク質入力および反応時間について正規化された。
8ウェルチャンバースライド上に蒔かれた分化hMSCは、氷冷70%エタノールで30分間固定され、脱イオン水で洗浄され、0.2%アリザリンレッド染色(Ricca Chemical)、pH6.4中で30分間インキュベートされた。染色に続いて、細胞は脱イオン水で2回すすがれ、画像が得られた。
マウス3T3線維芽細胞は、USP1−Flag、USP1−C90S−Flag、ID2−Flag、または空対照発現ベクターを形質導入され、2日間の発現に続いて、1%寒天ベッド上に0.5%低融点寒天と一緒にFBSおよびペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEMに蒔かれた。細胞は21日間インキュベートされ、8以上の細胞のコロニーは目視検査によりスコアー化された。USP1形質転換試料由来の形質転換コロニーは寒天から回収され、継代され、軟寒天に再播種されて形質転換を確かめた。すべての継代された試料において強いコロニー増殖が観察された(データは示されていない)。
8週齢メスNCrヌードマウス(Taconic Laboratories、Hudson、NY)またはC.B−17SCID.bgマウス(Charles Rivers Laboratories、Hollister、CA)は、容積100μlのHBSS中1×106マウス3T3線維芽細胞(USP1、USP1−C90S、ID−2、またはベクター対照を形質導入されている)を右後部横腹に皮下注射された。マウスは、腫瘍定着および増殖ならびに体重変化についてモニターされた。所与の群内のマウスが平均腫瘍量2000mm3を達成するおよび/または接種後40日に達すると、マウスは安楽死され解剖されて、腫瘍形成の存在または非存在を確かめた。
USP1遺伝子標的C57BL/6マウスES細胞は、Knockout Mouse Project(KOMP)Repository(Davis、CA)から入手した。条件付き対立遺伝子はES細胞では、胚盤胞注入に先立ってCreリコンビナーゼを用いたエレクトロポレーションにより除去されていた。
d12.5マウス子、受胎18.5日後の胚仔、またはその解剖された大腿骨は、以下のパラメータ:x線チューブエネルギーレベル=大腿で70kVもしくはホールマウスで45kV、またはx線チューブエネルギーレベル=45kV、電流=177μA、積分時間=300ミリ秒、大腿骨では1000プロジェクションを用いたμCT40(SCANCO Medical、Basserdorf、Switzerland)x線マイクロコンピュータ処理トモグラフィシステムで撮像された。軸位像は、大腿骨分析では12μmまたは胎仔/子では30μmの等方性解像度で得られた。ヒドロキシアパタイト(HA)ファントムを使用して、x線吸収を骨塩量(BMD)に較正した。マイクロコンピュータ処理トモグラフィスキャンはAnalyze(AnalyzeDirect Inc.、Lenexa、KS、USA)で解析された。最大値投影およびサジタル平面における3Dサーフィスレンダリングは試料ごとに作成された。スキャン設定に基づいて、収縮−膨脹(erosion−dilation)が続く閾値を適用して、軟組織由来のミネラル化骨格を分割した。
ホルマリン固定パラフィン包埋P12マウス大腿骨由来のスライドに載せた5μmの切片が調製され、製造業者の使用説明書に従って387A酸ホスファターゼ白血球(TRAP)キットを用いるTRAP染色(SIGMA)に供された。列挙研究では、TRAP陽性破骨細胞は10のフィールドで計測された。
羊水がE18.5マウスから収集され、デオキシピリジノリンはELISA(TSZ ELISA)により検出され、クレアチニンは製造業者のプロトコールの通りに比色化学アッセイ(R&D Systems)により検出された。
IDタンパク質を安定化するデユビキチナーゼ(DUB)を同定するため、C末端Flagエピトープを有する94のヒトDUBが293T細胞において過剰発現され、ウェスタンブロットにより内在性ID2存在量が評価された(オンラインで入手可能な表S1参照)。293T細胞は、プロテアソーム阻害剤MG−132での処理後にID2が蓄積するので、ID2をプロテアソーム依存的に劣化させる(図2A)。内在性ID2を増加させるDUBは、USP36、USP33、SENP3、SENP5、USP37、OTUD5、USP9Y、USP45、およびUSP1であった(図2A)。ID2発現を増加させる間接的機構を排除するため、ID2相互作用DUB USP1およびUSP33に焦点を合わせた(図2B)。しかし、USP1と違って、USP33はID2に対する脱ユビキチン化活性を欠いていた(データは示されていない)。
USP1がIDタンパク質を脱ユビキチン化する生物学的状況を同定するために、USP1発現パターンが解析された。健康なおよび疾患ヒト組織のマイクロアレイ解析により、骨肉腫腫瘍が健康なまたは骨関節炎骨生検よりも多くのUSP1 mRNAを発現することが明らかにされた(図3A)。原発性ヒト骨肉腫生検の別々のセットのウェスタンブロッティングにより、USP1が、3つの正常な原発性ヒト骨芽細胞試料と比べた場合、14の骨肉腫のうちの7つで上昇していることが分かった(図3B)。驚くべきことに、これらの原発性ヒト腫瘍試料におけるID2タンパク質存在量はUSP1存在量とよく相関していた。1つの異常な試料はUSP1を豊富に含有していたがID2はほとんどなく(図3B、レーン6)、これはおそらくUSP1のコファクターWDR48の発現が不十分だったためである。別の試料は豊富なID2を含有していたがUSP1はほとんどなく(図3B、レーン16)、これはID2ユビキチン化の減少をまたは他のDUBが活性であることを反映している可能性がある。
ヒト骨肉腫細胞系におけるおよび原発性骨芽細胞におけるUSP1存在量およびID2安定性も評価された(図5A)。U2−OS骨肉腫細胞では、USP1は上昇しており、正常に不安定なID2は安定していた(図5Aおよび5B)。2つの異なるUSP1 shRNAでのUSP1ノックダウンにより、ID1、ID2、およびID3は減少したが、ID4に対しては何の効果もなかった(図4A)。ID1、ID2、およびID3 mRNAは減少しておらず、IDタンパク質存在量の低下の理由として転写の減少は除外された(図7I)。USP1ノックダウン特異性は、ID1、ID2、およびID3を基本レベルにまで回復させるshRNA抵抗性USP1で確かめられた。USP1触媒活性は、shRNA抵抗性USP1 C90SではIDタンパク質レベルを回復しなかったので、ID安定性には不可欠であった。類似の結果が、骨肉腫細胞系、HOS、SAOS、およびSJSAにおいて観察された(図5C)。USP1ノックダウンはMG−63骨肉腫細胞においてID2存在量に影響を与えなかったが、これはおそらくこれらの細胞がWDR48をほとんど発現しないからである(図5C)。MG−63細胞におけるUSP1活性を制限するWDR48欠損と一致して、異所性WDR48はID2を増加させた(図5D)。
骨肉腫細胞におけるUSP1欠損および増大したbHLH転写活性の一つの潜在的結果はbHLH調節CDKIp21が誘導されることである。実際、p21は、対照shRNAがトランスフェクトされた細胞と比べてUSP1 shRNAがトランスフェクトされたU2−OS細胞では増加していた(図6A)。shRNA抵抗性野生型USP1はp21を対照細胞において観察されるレベルにまで減少させたが、USP1 C90Sは減少させることはなく、この設定におけるノックダウン特異性が確認された。CDKN1Aの周知の誘導因子である腫瘍抑制p53は、USP1ノックダウンにより増加することはなく、増大したp21はp53非依存性であったことが示唆される。
USP1の非存在下におけるID分解がp21誘導を引き起こすとすれば、IDタンパク質のノックダウンはUSP1ノックダウンをフェノコピーするはずである。ID1〜3のshRNAノックダウンは個々にはp21レベルを変えないが、ID1、ID2、およびID3のノックダウンを組み合わせるとUSP1ノックダウンに類似してp21を増加させた(図7H)。IDおよびUSP1欠損細胞も匹敵するレベルのCDKN1A mRNAを発現した(図7I)。これらの所見と一致して、ID欠損はUSP1欠損に類似して細胞周期停止を引き起こし(図S3JおよびS3K)、これはp21ノックダウンにより救済された(図6Dおよび6E)。
骨肉腫は、骨芽細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞の無秩序な塊からなる不均一な腫瘍である。これらの腫瘍は、これらの分化系列すべてを生じることができる間葉幹細胞集団から発生すると考えられている(Tangら、2008)。したがって、骨肉腫細胞系は、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)などの古典的骨芽細胞マーカーを発現することができない(Luoら、2008)。骨肉腫細胞系は、CD90、CD105、およびCD106を含む、間葉幹細胞に特徴的な表面マーカーも発現する(Di Fioreら、2009)。幹細胞維持および分化の調節においてIDが果たしている役割に照らして、骨肉腫におけるUSP1またはIDノックダウンのどちらかによる骨芽細胞分化の始動が調べられた。USP1またはID shRNAをトランスフェクトされたU2−OS細胞は対照細胞と比べて発現するCD105、CD106、およびCD90は少なかったが、すべての細胞が同等量の無関係な表面マーカーCD144を発現した(図9A)。類似の結果はHOS、SJSA、およびSAOS細胞系について観察された。USP1またはIDノックダウンは骨芽細胞RUNX2、OSTERIX、およびOSTEONECTINの発現も増加させ(図9B)、ALP活性を増大させた(図9C)。U2−OS細胞におけるUSP1ノックダウンに続くEカドヘリン発現の増加ならびにNカドヘリンおよびフィブロネクチンの減少により、骨肉腫の悪性状態に伴う間葉移行への上皮の逆戻りが示された(図8Aおよび8B)(Thieryら、2009)。まとめると、これらのデータにより、骨肉腫におけるUSP1によるIDタンパク質安定化が正常な骨原性分化プログラムをブロックしていることが示唆される。
次に、IDのUSP1安定化が正常な間葉幹細胞維持に寄与するかどうかが決定された。USP1は原発性hMSCで発現されるが、細胞が骨芽細胞分化に有利な条件下で培養されると着実に低下した(図10A)。以前の研究(Pengら、2003)と一致して、ID1およびID2は一過性に誘導されるがその後同様に低下した。ID3は検出されなかった(データは示されていない)。これらのデータは、誤制御されたID発現が骨原性分化を阻害することを示す研究(Pengら、2004)と合わせて、USP1過剰発現がhMSC分化を妨害するのかどうかに関する調査を促した。USP1を過剰発現し骨原性分化培地で培養されたhMSCは異常に高いレベルのID1およびID2を発現し(図10B)、低いALP活性を示し(図10C)、RUNX2、OSTERIX、およびOSTEONECTINの最小の誘導を示し(図10D)、骨芽細胞活性の古典的マーカーであるミネラル沈着を明らかにするアリザリンレッドでの染色は不十分であった(図10E)。これらのデータにより、USP1を過剰発現しているhMSCは分化しなかったことが暗示される。類似の分化欠損はID2を過剰発現しているhMSCで観察されたが、USP1 C90Sを過剰発現しているhMSCは対象細胞と同様に分化した。したがって、USP1の触媒活性は必要であり、ID安定化だけで骨原性分化を阻害するのに十分であった。
間葉幹細胞分化を阻害し骨肉種細胞系の増殖を持続するUSP1の能力は、USP1が細胞形質転換を促進する可能性を示唆していた。NIH 3T3細胞は、空ベクター、ID2、USP1、またはUSP1 C90Sを安定的に形質導入された。野生型USP1はID1〜3の発現を増加させ(図11A)、発癌性形質転換の古典的特徴である(HanahanおよびWeinberg、2000)軟寒天における足場非依存性細胞増殖を引き起こした(図11B)。これとは対照的に、空ベクターまたはUSP1 C90Sを形質導入された細胞は軟寒天では十分には増殖しなかった(図11Bおよび11C)。興味深いことに、USP1はID2よりも大きく数が多いコロニーを産生し(図11C)、複数のIDタンパク質の安定化はID2過剰発現単独よりも形質転換性である場合があることが示唆される。
USP1過剰発現は間葉前駆体の骨芽細胞分化を損なうが、USP1消失は骨肉腫細胞の骨芽細胞分化を引き起こしたので、正常な骨発生の調節におけるUSP1の役割はUSP1遺伝子標的マウスを用いて評価された。P12 USP1-/-マウスは頭蓋および長骨の骨形成に欠損のある骨減少性であった(図12A)。未発育真性肋骨がおそらくUSP1-/-子の致死性チアノーゼ呼吸不全の一因である(Kimら、2009)。USP1-/-新生仔およびE18.5胎仔における骨塩量および容積は野生型同腹仔よりもはるかに少なかった(図12Bおよび12Cならびに図13Bおよび13C)。FANCD2−欠損マウスもPCNA−欠損マウスも出生時致死を示さず(Parmarら、2010;Roaら、2008)、USP1欠損に関連する出生時致死の主因としてこれらUSP1基質の不安定化は排除される。
これらの実験により、USP1がID1、ID2、およびID3を脱ユビキチン化し安定化する結果、その存在量が増加することが明らかにされている。意義深いことに、原発性骨肉腫腫瘍のサブセットにおける上昇したUSP1タンパク質およびmRNAは増加したIDタンパク質レベルと相関していた。骨肉腫細胞におけるUSP1ノックダウンにより、IDタンパク質脱安定化、サイクリン依存性キナーゼインヒビター(CDKI)p21をコードするCDKNIAのp53非依存性誘導、および細胞周期停止が引き起こされた。さらに、間葉幹細胞マーカーの発現が減少し、骨原性分化が再開された。これらのデータは、骨肉腫が、急性前骨髄球性白血病と同様に、分化療法を受け入れられる可能性があることを示唆している(Soignetら、1998)。USP1ノックダウンとは対照的に、原発性ヒト間葉幹細胞(hMSC)におけるUSP1過剰発現はIDタンパク質蓄積を引き起こし、正常な分化を妨げた。実際、USP1は間葉細胞系において形質転換を促進した。最後に、遺伝子標的マウスにおけるUSP1の消失により、重篤な骨減少症が引き起こされ、これは間葉系統におけるUSP1の役割と一貫している。これらの結果により、USP1は発癌能を有しており、正常な間葉幹細胞関与および分化の破壊を通じて腫瘍形成を促進することが強く示唆される。
ID2を安定化することができるDUBを求めるスクリーニングにより(図2)、USP1とUSP33の両方が同定されたが、USP33はID2を脱ユビキチン化することはできなかった(データは示されていない)。ID2に結合するUSP33はプロテアソームによるID2認識を妨げ、その分解を防いだ。スクリーニングにおいてID2発現を増強した他のDUBはID2と相互作用するとは思われず、ID2存在量に間接的に影響を及ぼすにちがいない。これらのDUBはID遺伝子発現を上方調節し、ユビキチンコンジュゲーション機構を妨げ、または他の方法でプロテアソーム機能を損なっている可能性がある。例えば、USP9Xは、転写因子SMAD4を脱ユビキチン化し安定化することによりID2遺伝子発現を上方調節している可能性がある(Dupontら、2009)。
USP1によるIDタンパク質安定化は、骨肉腫においてbHLH依存性p21発現を妨害することが明らかになった(図4および図S3)。したがって、USP1過剰発現は、複数のCDKIのp53非依存性上方調節により特徴付けられる正常な骨芽細胞分化を撹乱する(Funatoら、2001;Kennerら、2004;Matsumotoら、1998;Yanら、1997;Zhangら、1997)。骨肉腫においてはCDKI機能が損なわれることが多く、プロモーターメチル化に起因する遺伝子不活性化(Ohら、2006)と同じように、CDKN2A/p16INK4aおよびCDKN2B/p15INK4b遺伝子欠失がよく起こる(Millerら、1996;Nielsenら、1998)。これとは対照的に、CDKIの標的であるCDK4は、遺伝子増幅により骨肉腫では過剰発現されることが多い(Ozakiら、2003)。p21のID媒介転写抑圧は、骨肉腫における追加の発癌機構を表している。
これらのデータは、正常な骨原性発生におけるIDタンパク質も意味づける。間葉幹細胞におけるID2またはUSP1過剰発現は骨分化を阻害し、間葉幹細胞特長の保持を促進した(図10)。これらの発見は、間葉分化におけるIDタンパク質の役割を記載している最近の研究を支持している(Pengら、2004)。興味深いことに、Id1/Id3化合物ヘテロ接合変異体マウスは頭蓋骨欠損および減少した骨芽細胞増生を示し(Maedaら、2004)、間葉増殖欠損を示唆している。追加のId2欠損が早期致死性によりこの表現型を悪化させるのかどうかは分かっていない。Id遺伝子欠失を間葉系統に制限すれば情報価値があることが判明する可能性がある。
USP1(配列番号1)
mpgvipsesn glsrgspskk nrlslkffqk ketkraldft dsqeneealkdeanqk dkgnckedsl asyelicslq sliisveqlq asfllnpeky tdelatqprr llntlrelnp myegylqhda qevlqcilgn iqetcqllkk eevknvaelp tkveeiphpk eemnginsie mdsmrhsedf keklpkgngk rksdtefgnm kkkvklskeh qsleenqrqt rskrkatsdt lesppkiipk yisenesprp sqkksrvkin wlksatkqps ilskfcslgk ittnqgvkgq skenecdpee dlgkcesdnt tngcglespg ntvtpvnvne vkpinkgeeq igfelveklf qgqlvlrtrc leceslterr edfqdisvpv qedelskvee sseispepkt emktlrwais qfasverivg edkyfcench hyteaersll fdkmpeviti hlkcfaasgl efdcygggls kintplltpl klsleewstk ptndsyglfa vvmhsgitis sghytasvkv tdlnsleldk gnfvvdqmce igkpeplnee eargvvenyn deevsirvgg ntqpskvlnk knveaigllg gqkskadyel ynkasnpdkv astafaenrn setsdttgth esdrnkessd qtginisgfe nkisyvvqsl keyegkwllf ddsevkvtee kdflnslsps tsptstpyll fykkl
UAF(配列番号40)
maahhrqnta grrkvqvsyv irdevekynr ngvnalqldp alnrlftagr dsiiriwsvn qhkqdpyias mehhtdwvnd ivlccngktl isassdttvk vwnahkgfcm stlrthkdyv kalayakdke lvasagldrq iflwdvntlt altasnntvt tsslsgnkds iyslamnqlg tiivsgstek vlrvwdprtc aklmklkght dnvkalllnr dgtqclsgss dgtirlwslg qqrciatyrv hdegvwalqv ndafthvysg grdrkiyctd lrnpdirvli ceekapvlkm eldrsadppp aiwvattkst vnkwtlkgih nfrasgdydn dctnpitplc tqpdqvikgg asiiqchiln dkrhiltkdt nnnvaywdvl kackvedlgk vdfedeikkr fkmvyvpnwf svdlktgmlt itldesdcfa awvsakdagf sspdgsdpkl nlgglllqal leywprthvn pmdeeenevn hvngeqenrv qkgngyfqvp phtpvifgea ggrtlfrllc rdsggetesm llnetvpqwv iditvdknmp kfnkipfylq phassgaktl kkdrlsasdm lqvrkvmehv yekiinldne sqttsssnne kpgeqekeed iavlaeekie llcqdqvldp nmdlrtvkhf iwksggdltl hyrqkst
ID1アイソフォームa(配列番号2)
mkvasgstat aaagpscalk agktasgage vvrclseqsv aisrcaggag arlpalldeq qvnvllydmn gcysrlkelv ptlpqnrkvs kveilqhvid yirdlqleln sesevgtpgg rglpvrapls tlngeisalt aeaacvpadd rilcr
ID1アイソフォームb(配列番号3)
mkvasgstat aaagpscalk agktasgage vvrclseqsv aisrcaggag arlpalldeq qvnvllydmn gcysrlkelv ptlpqnrkvs kveilqhvid yirdlqleln sesevgtpgg rglpvrapls tlngeisalt aevrsrsdh
ID2(配列番号4)
mkafspvrsv rknslsdhsl gisrsktpvd dpmsllynmn dcysklkelv psipqnkkvs kmeilqhvid yildlqiald shptivslhh qrpgqnqasr tplttlntdi silslqasef pselmsndsk alcg
ID3(配列番号5)
mkalspvrgc yeavcclser slaiargrgk gpaaeeplsl lddmnhcysr lrelvpgvpr gtqlsqveil qrvidyildl qvvlaepapg ppdgphlpiq taeltpelvi sndkrsfch
参考文献の部分的一覧表
Bounpheng, M.A. et al. (1999). FASEB J. 13, 2257-2264.
Ciarapica, R.. et al. (2009). Oncogene 28, 1881-1891.
Cohn, M.A. et al. (2007). Mol. Cell 28, 786-797.
D’Andrea, A.D. (2010). N. Engl. J. Med. 362, 1909-1919.
Di Fiore, R.. et al. (2009). J. Cell. Physiol. 219, 301-313.
Dupont, S. et al. (2009). Cell 136, 123-135.
Friend, S.H. et al. (1986). Nature 323, 643-646.
Funato, N.et al. (2001). Mol. Cell. Biol. 21, 7416-7428.
Hanahan, D., and Weinberg, R.A. (2000). Cell 100, 57-70.
Huang, T.T. et al. (2006). Nat. Cell Biol. 8, 339-347.
Iavarone, A.et al. (1994). Genes Dev. 8, 1270-1284.
Kastan, M.B. et al. (1991). Cancer Res. 51, 6304-6311.
Kenner, L. et al. (2004). J. Cell Biol. 164, 613-623.
Kim, D. et al. (1999). Mol. Cell. Biol. 19, 8240-8253.
Kim, J.M. et al. (2009). Dev. Cell 16, 314-320.
Lasorella, A. et al. (2000). Nature 407, 592-598.
Lasorella, A. et al. (2001). Oncogene 20, 8326-8333.
Lasorella, A. et al. (2006). Nature 442, 471-474.
Lassar, A.B. et al. (1991). Cell 66, 305-315.
Luo, X. et al. (2008). Lab. Invest. 88, 1264-1277.
Lyden, D. et al. (1999). Nature 401, 670-677.
Maeda, Y. et al.. (2004). J. Cell. Biochem. 93, 337-344.
Massari, M.E., and Murre, C. (2000). Mol. Cell. Biol. 20, 429-440.
Matsumoto, T. et al. (1998). Cancer Lett. 129, 61-68.
Miller, C.W. et al. (1996). Cancer Genet. Cytogenet. 86, 136-142.
Nielsen, G.P. et al. (1998). Am. J. Pathol. 153, 159-163.
Nijman, S.M. et al. (2005). Mol. Cell 17, 331-339.
Nishimori, H. et al. (2002). Oncogene 21, 8302-8309.
Oestergaard, V.H. et al. (2007). Mol. Cell 28, 798-809.
Oh, J.H. et al. (2006). Clin. Orthop. Relat. Res. 442, 216-222.
Ozaki, T. et al. (2003). Cancer Genet. Cytogenet. 140, 145-152.
Palombella, V.J. et al. (1994). Cell 78, 773-785.
Parmar, K. et al. (2010). Stem Cells 28, 1186-1195.
Peng, Y. et al. (2003). J. Cell. Biochem. 90, 1149-1165.
Peng, Y. et al. (2004). J. Biol. Chem. 279, 32941-32949.
Perk, J. et al. (2005). Nat. Rev. Cancer 5, 603-614.
Polyak, K.. et al. (1996). Genes Dev. 10, 1945-1952.
Prabhu, S. et al. (1997). Mol. Cell. Biol. 17, 5888-5896.
Roa, S. et al. (2008). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105, 16248-16253.
Rogakou, E.P. et al. (1999). J. Cell Biol. 146, 905-916.
Sharff, K.A. et al. (2009). J. Biol. Chem. 284, 649-659.
Soignet, S.L. et al. (1998). N. Engl. J. Med. 339, 1341-1348.
Stock, C. et al. (2000). Genes Chromosomes Cancer 28, 329-336.
Suh, J.H. et al. (2008). Biochem. Biophys. Res. Commun. 367, 97-102.
Tang, N. et al. (2008). Clin. Orthop. Relat. Res. 466, 2114-2130.
Thiery, J.P. et al. (2009). Cell 139, 871-890.
Tupler, R. et al. (2001). Nature 409, 832-833.
Weintraub, H. et al. (1994). Genes Dev. 8, 2203-2211.
Yan, Y. et al. (1997). Genes Dev. 11, 973-983.
Yokota, Y., and Mori, S. (2002). J. Cell. Physiol. 190, 21-28.
Zhang, P. et al. (1997). Nature 387, 151-158.
Claims (39)
- 細胞運命の変化を促進するUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストをスクリーニングするおよび/または同定する方法において、基準細胞の細胞運命である基準細胞運命(i)を、USP1候補アンタゴニスト、UAF1候補アンタゴニスト、および/またはID候補アンタゴニストの存在下での基準細胞の細胞運命である候補細胞運命(ii)と比較し、USP1候補アンタゴニストがUSP1に結合し、UAF1候補アンタゴニストがUAF1に結合し、および/またはID候補アンタゴニストがIDに結合し、それによって基準細胞運命と候補細胞運命の間の細胞運命の違いがUSP1候補アンタゴニストおよび/またはID候補アンタゴニストを細胞運命の変化を促進するものと同定することを含む方法。
- USP1候補アンタゴニスト、UAF1候補アンタゴニスト、および/またはID候補アンタゴニストがUSP1候補アンタゴニストである、請求項1に記載の方法。
- USP1候補アンタゴニスト、UAF1候補アンタゴニスト、および/またはID候補アンタゴニストがID候補アンタゴニストである、請求項1に記載の方法。
- ID候補アンタゴニストが、ID1候補アンタゴニスト、ID2候補アンタゴニスト、および/またはID3候補アンタゴニストである、請求項3に記載の方法。
- USP1候補アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはID候補アンタゴニストがUAF1候補アンタゴニストである、請求項1に記載の方法。
- 基準細胞運命が幹細胞運命である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 幹細胞運命が間葉幹細胞運命である、請求項6に記載の方法。
- 候補細胞運命が、骨芽細胞運命、軟骨細胞運命、または脂肪細胞運命である、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 候補細胞運命が骨芽細胞運命である、請求項8に記載の方法。
- USP1候補アンタゴニスト、UAF1候補アンタゴニスト、および/またはID候補アンタゴニストが、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、またはポリヌクレオチドである、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞の細胞運命の変化を促進する方法において、細胞を有効量のUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストに接触させることを含む方法。
- 細胞周期停止を誘導する方法において、細胞を有効量のUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストに接触させることを含む方法。
- 細胞が幹細胞運命(例えば、間葉幹細胞運命)を有する細胞である、請求項11または12のいずれか一項に記載の方法。
- 疾患または障害を治療する方法において、個体に有効量のUSP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストを投与することを含む方法。
- 個体が、CD90、CD105、CD106、USP1、UAF1、およびID(例えば、ID1、ID2、またはID3)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)上昇した発現レベルに基づく治療について選択されるか、または個体が、CD90、CD105、CD106、USP1、UAF1、およびID(例えば、ID1、ID2、またはID3)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)低い発現レベルに基づく治療について選択されない、請求項14に記載の方法。
- 個体が、p21、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、SPP1/OSTEOPONTIN、BGLAP/OSTEOCALCIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)低い発現レベルに基づく治療について選択されるか、または個体が、p21、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、SPP1/OSTEOPONTIN、BGLAP/OSTEOCALCIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)上昇した発現レベルに基づく治療について選択されない、請求項14または15のいずれか一項に記載の方法。
- 個体が、p21、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、SPP1/OSTEOPONTIN、BGLAP/OSTEOCALCIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)上昇した発現レベルに基づく治療に(例えば、治療開始時、中、または前の時点から後の時点まで)応答性である可能性が高いか、または個体が、p21、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、SPP1/OSTEOPONTIN、BGLAP/OSTEOCALCIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)減少したまたは著しい変化のない発現レベルに基づく治療に(例えば、治療開始時、中、または前の時点から後の時点まで)応答性ではない可能性が高い、請求項14から16のいずれか一項に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストが細胞周期停止を誘導する、請求項14から17のいずれか一項に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストが細胞運命の変化を促進することができる、請求項14から18のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞運命の変化を促進することが、CD90、CD105、CD106、USP1、UAF1、およびID(例えば、ID1、ID2、またはID3)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて)減少した発現レベルにより示される、請求項11から13および19のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞運命の変化を促進することが、p21、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、SPP1/OSTEOPONTIN、BGLAP/OSTEOCALCIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子の上昇した発現レベルにより示される、請求項11から13および19または20のいずれか一項に記載の方法。
- 1つまたは複数の遺伝子の発現レベルが内部標準(例えば、CD144)と比べて上昇している、請求項21に記載の方法。
- 疾患または障害が幹細胞運命(例えば、間葉幹細胞運命)を有する細胞を含む、請求項14から22のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞がCD90、CD105、CD106、USP1、UAF1、およびID(例えば、ID1、ID2、またはID3)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子を発現する、請求項11から13および23のいずれか一項に記載の方法。
- 1つまたは複数の遺伝子の発現レベルが内部標準(例えば、CD144)と比べて上昇している、請求項19に記載の方法。
- 細胞がp21、RUNX2、OSTERIX、SPARC/OSTEONECTIN、SPP1/OSTEOPONTIN、BGLAP/OSTEOCALCIN、およびアルカリホスファターゼ(ALP)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子を著しく発現してはいない(例えば、内部標準(例えば、CD144)と比べて発現してはいないまたは低レベルで発現している)、請求項11から13および23から25のいずれか一項に記載の方法。
- 疾患または障害が、癌である、請求項14から26のいずれか一項に記載の方法。
- 癌が骨肉腫である、請求項27に記載の方法。
- 癌がCD90、CD105、CD106、USP1、UAF1、およびID(例えば、ID1、ID2、またはID3)からなる群から選択される1つまたは複数の遺伝子を発現する、請求項27または28に記載の方法。
- 1つまたは複数の遺伝子の発現レベルが内部標準(例えば、CD144)と比べて上昇している、請求項29に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストがUSP1アンタゴニストである、請求項1に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストがIDアンタゴニストである、請求項1に記載の方法。
- IDアンタゴニストが、ID1候補アンタゴニスト、ID2候補アンタゴニスト、および/またはID3アンタゴニストである、請求項3に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストがUAF1アンタゴニストである、請求項1に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストが、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、またはポリヌクレオチドである、請求項11から34のいずれか一項に記載の方法。
- USP1アンタゴニスト、UAF1アンタゴニスト、および/またはIDアンタゴニストが抗体である、請求項35に記載の方法。
- 抗体がモノクローナル抗体である、請求項36に記載の方法。
- 抗体がヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項1に記載の方法。
- 抗体が抗体断片であり、前記抗体断片がUSP1、UAF、および/またはIDに結合する、請求項1に記載の方法。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20190111845A (ko) * | 2018-03-23 | 2019-10-02 | 의료법인 성광의료재단 | 줄기세포의 노화 예측 또는 진단용 바이오 마커 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10130654B2 (en) * | 2011-05-24 | 2018-11-20 | Hangli Biosciences Co., Ltd. | Method of inducing osteogensis and promoting osseointegration around an implant |
EP3258923A4 (en) * | 2015-02-19 | 2019-01-16 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | METHODS AND SUBSTANCES FOR EVALUATING RESPONSE TO CHEMOTHERAPY AND TREATING CANCER |
US11413288B2 (en) | 2017-11-01 | 2022-08-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods of treating cancers |
CN111926018B (zh) * | 2020-09-04 | 2022-07-12 | 首都医科大学附属北京儿童医院 | 降低usp1表达的物质在制备治疗儿童t系急性淋巴细胞白血病的药物中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007149484A2 (en) * | 2006-06-20 | 2007-12-27 | Dana-Farber Cancer Institute | Inhibitors of usp1 deubiquitinating enzyme complex |
Family Cites Families (143)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4066694A (en) | 1971-02-09 | 1978-01-03 | Pfizer Inc. | 4-hydroxy-4-dedimethylamino-tetracyclines |
US4089900A (en) | 1967-09-13 | 1978-05-16 | Pfizer Inc. | Antimicrobial agents |
JPS548759B2 (ja) | 1973-03-06 | 1979-04-18 | ||
US4060605A (en) | 1973-09-28 | 1977-11-29 | Ankerfarm, S.P.A. | Water-soluble derivative of 6-deoxy-tetracyclines |
US3951962A (en) | 1973-11-14 | 1976-04-20 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel N-alkenyltetracycline derivatives |
US5589470A (en) | 1990-02-26 | 1996-12-31 | Trustees Of Tufts College | Reducing tetracycline resistance in living cells |
US5064821A (en) | 1982-11-18 | 1991-11-12 | Trustees Of Tufts College | Method and compositions for overcoming tetracycline resistance within living cells |
EP0138854B1 (en) | 1983-03-08 | 1992-11-04 | Chiron Mimotopes Pty. Ltd. | Antigenically active amino acid sequences |
NZ207394A (en) | 1983-03-08 | 1987-03-06 | Commw Serum Lab Commission | Detecting or determining sequence of amino acids |
WO1984003506A1 (en) | 1983-03-08 | 1984-09-13 | Commw Serum Lab Commission | Antigenically active amino acid sequences |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
DE3590766C2 (ja) | 1985-03-30 | 1991-01-10 | Marc Genf/Geneve Ch Ballivet | |
NZ215865A (en) | 1985-04-22 | 1988-10-28 | Commw Serum Lab Commission | Method of determining the active site of a receptor-binding analogue |
US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
US5763192A (en) | 1986-11-20 | 1998-06-09 | Ixsys, Incorporated | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2 Inc | Geänderte antikörper. |
HU198173B (en) | 1987-09-18 | 1989-08-28 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Process for producing doxycycline |
US5606040A (en) | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
US5770701A (en) | 1987-10-30 | 1998-06-23 | American Cyanamid Company | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
US5266684A (en) | 1988-05-02 | 1993-11-30 | The Reagents Of The University Of California | Peptide mixtures |
US5571689A (en) | 1988-06-16 | 1996-11-05 | Washington University | Method of N-acylating peptide and proteins with diheteroatom substituted analogs of myristic acid |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5663143A (en) | 1988-09-02 | 1997-09-02 | Dyax Corp. | Engineered human-derived kunitz domains that inhibit human neutrophil elastase |
AU634186B2 (en) | 1988-11-11 | 1993-02-18 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
CA2026147C (en) | 1989-10-25 | 2006-02-07 | Ravi J. Chari | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5498538A (en) | 1990-02-15 | 1996-03-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Totally synthetic affinity reagents |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
US5723286A (en) | 1990-06-20 | 1998-03-03 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening systems |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
US5770434A (en) | 1990-09-28 | 1998-06-23 | Ixsys Incorporated | Soluble peptides having constrained, secondary conformation in solution and method of making same |
DE69130831T2 (de) | 1990-11-21 | 1999-09-16 | Iterex Pharma Lp | Synthese äquimolarer mischungen vielzähliger oligomere, speziell oligopeptidmischungen |
DE69129154T2 (de) | 1990-12-03 | 1998-08-20 | Genentech Inc | Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
EP0590058B1 (en) | 1991-06-14 | 2003-11-26 | Genentech, Inc. | HUMANIZED Heregulin ANTIBODy |
GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
JP3951062B2 (ja) | 1991-09-19 | 2007-08-01 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 少なくとも遊離のチオールとして存在するシステインを有する抗体フラグメントの大腸菌での発現、2官能性F(ab’)2抗体の産生のための使用 |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
US5270170A (en) | 1991-10-16 | 1993-12-14 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening method |
WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
ATE419355T1 (de) | 1992-02-06 | 2009-01-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür |
DK0669836T3 (da) | 1992-11-13 | 1996-10-14 | Idec Pharma Corp | Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom |
US5635483A (en) | 1992-12-03 | 1997-06-03 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides |
US5780588A (en) | 1993-01-26 | 1998-07-14 | Arizona Board Of Regents | Elucidation and synthesis of selected pentapeptides |
EP0714409A1 (en) | 1993-06-16 | 1996-06-05 | Celltech Therapeutics Limited | Antibodies |
US5773001A (en) | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
WO1995034683A1 (en) | 1994-06-10 | 1995-12-21 | Symbiotech, Inc. | Method of detecting compounds utilizing genetically modified lambdoid bacteriophage |
US5627024A (en) | 1994-08-05 | 1997-05-06 | The Scripps Research Institute | Lambdoid bacteriophage vectors for expression and display of foreign proteins |
US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US5714586A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US5712374A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
WO1997005283A1 (en) | 1995-08-01 | 1997-02-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Id AS A DIAGNOSTIC MARKER IN TUMOR CELLS |
WO1997009446A1 (en) | 1995-09-07 | 1997-03-13 | Novo Nordisk A/S | Phage display for detergent enzyme activity |
GB9603256D0 (en) | 1996-02-16 | 1996-04-17 | Wellcome Found | Antibodies |
EP0904541B1 (en) | 1996-03-20 | 2004-10-06 | Dyax Corp. | PURIFICATION OF TISSUE PLASMINOGEN ACTIVATOR (tPA) |
AU734638B2 (en) | 1996-06-06 | 2001-06-21 | Lajolla Pharmaceutical Company | aPL immunoreactive peptides, conjugates thereof and methods of treatment for aPL antibody-mediated pathologies |
AU735015B2 (en) | 1996-06-10 | 2001-06-28 | Scripps Research Institute, The | Use of substrate subtraction libraries to distinguish enzyme specificities |
US5766905A (en) | 1996-06-14 | 1998-06-16 | Associated Universities Inc. | Cytoplasmic bacteriophage display system |
WO1998014277A1 (en) | 1996-10-04 | 1998-04-09 | Whatman, Inc. | Device and method for simultaneous multiple chemical syntheses |
DE69718341T2 (de) | 1996-10-08 | 2003-10-30 | Bisys B V U | Verfahren und mittel zur auswahl von peptiden und proteinen mit spezifischer affinität zu einem zielmolekül |
EP0938497B1 (en) | 1996-11-06 | 2007-02-28 | Genentech, Inc. | Constrained helical peptides and methods of making same |
IL119587A (en) | 1996-11-07 | 2000-12-06 | Univ Ramot | Method of preparing and for obtaining bimolecular interactions |
IL119586A (en) | 1996-11-07 | 2001-09-13 | Univ Ramot | Discontinuous library of a single biological unit and a method for its preparation |
US6171586B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
JP2002506353A (ja) | 1997-06-24 | 2002-02-26 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物 |
US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
ATE419009T1 (de) | 1997-10-31 | 2009-01-15 | Genentech Inc | Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen |
US6610833B1 (en) | 1997-11-24 | 2003-08-26 | The Institute For Human Genetics And Biochemistry | Monoclonal human natural antibodies |
PT1034298E (pt) | 1997-12-05 | 2012-02-03 | Scripps Research Inst | Humanização de anticorpo murino |
DE69937291T2 (de) | 1998-04-02 | 2008-07-10 | Genentech, Inc., South San Francisco | Antikörpervarianten und fragmente davon |
US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
DE69942021D1 (de) | 1998-04-20 | 2010-04-01 | Glycart Biotechnology Ag | Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität |
US6335155B1 (en) | 1998-06-26 | 2002-01-01 | Sunesis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for rapidly identifying small organic molecule ligands for binding to biological target molecules |
EP1117778A2 (en) * | 1998-10-02 | 2001-07-25 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Methods and compositions for inducing differentiation and apoptosis in cells that overexpress the notch protein |
JP4210806B2 (ja) * | 1998-10-26 | 2009-01-21 | 大塚製薬株式会社 | ユビキチン特異的プロテアーゼ遺伝子 |
EP1141708A1 (en) | 1998-12-28 | 2001-10-10 | Sunesis Pharmaceuticals Inc. | Identifying small organic molecule ligands for binding |
EP2386574A3 (en) | 1999-01-15 | 2012-06-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
DK2270147T4 (da) | 1999-04-09 | 2020-08-31 | Kyowa Kirin Co Ltd | Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle |
PT1222292E (pt) | 1999-10-04 | 2005-11-30 | Medicago Inc | Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto |
US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
AU7950400A (en) | 1999-10-19 | 2001-04-30 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Process for producing polypeptide |
AU784983B2 (en) | 1999-12-15 | 2006-08-17 | Genentech Inc. | Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes |
CA2395660A1 (en) | 1999-12-29 | 2001-07-12 | Immunogen, Inc. | Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use |
US20030023995A1 (en) | 2002-09-06 | 2003-01-30 | Robert Benezra | Inhibitor of differentiation knockout mammals and methods of use thereof |
WO2001066116A1 (en) | 2000-03-08 | 2001-09-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method for modulating tumor growth and metastasis of tumor cells |
JP2003531588A (ja) | 2000-04-11 | 2003-10-28 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 多価抗体とその用途 |
ES2651952T3 (es) | 2000-10-06 | 2018-01-30 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Células que producen unas composiciones de anticuerpo |
US7064191B2 (en) | 2000-10-06 | 2006-06-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for purifying antibody |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
JP3523245B1 (ja) | 2000-11-30 | 2004-04-26 | メダレックス,インコーポレーテッド | ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物 |
EP1423510A4 (en) | 2001-08-03 | 2005-06-01 | Glycart Biotechnology Ag | ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED CELL CYTOTOXICITY DEPENDENT OF ANTIBODIES |
KR100988949B1 (ko) | 2001-10-25 | 2010-10-20 | 제넨테크, 인크. | 당단백질 조성물 |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
EP1500400A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-10-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | MEDICAMENT WITH ANTIBODY COMPOSITION |
WO2003085107A1 (fr) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cellules à génome modifié |
EP1502603A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-12-13 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | AN ANTIBODY COMPOSITION CONTAINING MEDICAMENT FOR PATIENTS WITH Fc gamma RIIIa POLYMORPHISM |
EP1498491A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-12-13 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA |
EP1500698B1 (en) | 2002-04-09 | 2011-03-30 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in gdp-fucose transport |
AU2003236015A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Process for producing antibody composition |
CA2488441C (en) | 2002-06-03 | 2015-01-27 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
US20030022871A1 (en) | 2002-09-06 | 2003-01-30 | Robert Benezra | Method for modulating tumor growth and metastasis of tumor cells |
US7361740B2 (en) | 2002-10-15 | 2008-04-22 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
PT1572744E (pt) | 2002-12-16 | 2010-09-07 | Genentech Inc | Variantes de imunoglobulina e utilizações destas |
AU2004205631A1 (en) | 2003-01-16 | 2004-08-05 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
EP1688439A4 (en) | 2003-10-08 | 2007-12-19 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | HYBRID PROTEIN COMPOSITION |
EP1705251A4 (en) | 2003-10-09 | 2009-10-28 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE |
EP1692182B1 (en) | 2003-11-05 | 2010-04-07 | Roche Glycart AG | Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function |
PT2489364E (pt) | 2003-11-06 | 2015-04-16 | Seattle Genetics Inc | Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos |
WO2005053742A1 (ja) | 2003-12-04 | 2005-06-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 抗体組成物を含有する医薬 |
RU2386638C2 (ru) | 2004-03-31 | 2010-04-20 | Дженентек, Инк. | Гуманизированные анти-тфр-бета-антитела |
US7785903B2 (en) | 2004-04-09 | 2010-08-31 | Genentech, Inc. | Variable domain library and uses |
ES2403055T3 (es) | 2004-04-13 | 2013-05-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos anti-P-selectina |
AU2005258000B2 (en) * | 2004-06-21 | 2011-02-03 | Progenra Inc. | Diagnostic and screening methods and kits associated with proteolytic activity |
TWI380996B (zh) | 2004-09-17 | 2013-01-01 | Hoffmann La Roche | 抗ox40l抗體 |
DK1791565T3 (en) | 2004-09-23 | 2016-08-01 | Genentech Inc | Cysteingensplejsede antibodies and conjugates |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
US20070041944A1 (en) | 2005-05-05 | 2007-02-22 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Treating tumors by ENH dislocation of ID proteins |
US7517663B2 (en) | 2005-06-16 | 2009-04-14 | Biocheck, Inc. | Rabbit monoclonal antibody against Id1 protein |
EP1957531B1 (en) | 2005-11-07 | 2016-04-13 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences |
WO2007064919A2 (en) | 2005-12-02 | 2007-06-07 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
US7629131B2 (en) | 2006-01-27 | 2009-12-08 | Biocheck, Inc. | Rabbit monoclonal antibodies against mouse/human Id3 proteins |
EP2016101A2 (en) | 2006-05-09 | 2009-01-21 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with optimized scaffolds |
DK2059533T3 (da) | 2006-08-30 | 2013-02-25 | Genentech Inc | Multispecifikke antistoffer |
US20080226635A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-09-18 | Hans Koll | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
CN100592373C (zh) | 2007-05-25 | 2010-02-24 | 群康科技(深圳)有限公司 | 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法 |
WO2009059201A2 (en) | 2007-11-02 | 2009-05-07 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Id2 as a target in colorectal carcinoma |
CA2709847C (en) | 2008-01-07 | 2018-07-10 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
-
2012
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-
2014
- 2014-03-14 US US14/211,270 patent/US20140199327A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007149484A2 (en) * | 2006-06-20 | 2007-12-27 | Dana-Farber Cancer Institute | Inhibitors of usp1 deubiquitinating enzyme complex |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
CLIN. CANCER RES., vol. 16, no. 10, JPN6016023847, 2010, pages 2715 - 2728 * |
CURR. ORTHOP. PRACT., vol. 22, no. 4, JPN6017013102, 2011, pages 322 - 326 * |
NAT. REV. CANCER, vol. 9, no. 6, JPN6017013104, 2009, pages 400 - 414 * |
PHARMACOL. THERAP., vol. Vol.90, JPN6016023852, 2001, pages 105 - 156 * |
STEM CELLS, vol. Vol.28, JPN6016023844, 2010, pages 1186 - 1195 * |
Cited By (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20190111845A (ko) * | 2018-03-23 | 2019-10-02 | 의료법인 성광의료재단 | 줄기세포의 노화 예측 또는 진단용 바이오 마커 |
KR20210098917A (ko) * | 2018-03-23 | 2021-08-11 | 의료법인 성광의료재단 | 줄기세포의 노화 진단용 조성물 |
KR20210098923A (ko) * | 2018-03-23 | 2021-08-11 | 의료법인 성광의료재단 | Cops6의 발현량 측정을 이용한 줄기세포의 노화 예측 또는 진단을 위한 정보제공 방법 |
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