JP2014517687A - 有用な特徴を有する植物および関連する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2011年9月28日に出願され、その開示内容全体が参考として本明細書で援用される米国特許仮出願第61/540236号の米国特許法第35部門119条(e)の下での利益、および2011年5月2日に出願され、その開示内容全体が参考として本明細書で援用される米国特許仮出願第61/481519号の米国特許法第35部門119条(e)の下での利益を主張する。
サイズが75,938バイト(オペレーティングシステムMSウインドウズで測定)であり、2012年5月1日に作製された、「46589_103289_SEQ_LST.txt」という名称のファイルに含まれる配列表は、本明細書と同時期に電子申請(米国特許商標局EFS−Webファイリングシステムを使用)によって提出され、その開示内容全体が参考として本明細書で援用される。
本発明は、エネルギー省(DE−FG02−07ER15564およびDE−FG02−10ER16189)および全米科学財団(IOS0820668およびIOS1126935)からの交付金を受けて政府支援で行われた。政府は本発明に対して一定の権利を有する。
MSH1遺伝子は、陸生植物の遺伝子構造において少なくとも2つの重大な変化を受けたMutSホモログを表す(Abdelnoor et al. 2003)。MutSは、ミスマッチ修復および相同的組換えの抑制に関与する原核細胞遺伝子である。直接的タンパク質−DNA相互作用のモデルと一致して、MSH1は、DNA結合ドメイン(ドメインI)およびATPaseドメイン(ドメインV)をコード化するだけでなく、その発生の初期に遺伝子融合を受けて、カルボキシ末端GIY−YIG型エンドヌクレアーゼドメイン(ドメインVI)を獲得した(Abdelnoor et al. 2006)。タンパク質はさらに、ドメインII、III、およびIVも獲得し、全ての陸生植物間でよく保存されているようである。遺伝子構造のこの複雑さは、MSH1が植物において新規機能を獲得したことを示唆する。多くのMutSホモログは真核系で特徴づけられるが、MSH1の異常な特性を示すことが判明している陸生植物外の遺伝子はない。
有用な特徴を示す植物を産生するための方法、有用な特徴を付与することができる植物における1以上の改変された染色体座を同定するための方法、有用な特徴を付与することができる修飾された染色体座を含む植物、有用な特徴を示す植物、細胞、葉、茎、花および種子を含むそれらの植物の部分を得るための方法、植物および植物の部分、ならびに飼料または粗びき粉などの加工産物をはじめとするそれらの植物および植物の部分の産物を使用する方法が、本明細書中で提供される。
本明細書の一部に組み入れられ、本明細書の一部を形成する添付の図面は、本発明のある実施形態を説明する。
I.定義
本明細書中で用いられる場合、「染色体修飾」という語句は:a)「改変された染色体座(複数可)」;b)「突然変異した染色体座(複数可)」および「染色体突然変異(複数可)」;またはc)トランス遺伝子のいずれかを指す。
有用な特徴を示す植物をもたらす遺伝性および後成的および/または遺伝的変異を導入するための方法が、これらの方法によって得られる植物、植物種子、植物の部分、植物細胞、および加工植物産物とともに提供される。ある実施形態において、本発明によって提供される方法を使用して、変種植物または非ハイブリッド植物に後成的および/または遺伝的変異を導入することができ、その結果、有用な特徴が得られ、また有用な特徴によって付与される利点を示す、有する、または他の方法で反映する有用な植物、種子を含むがこれに限定されない植物の部分、植物細胞、および加工植物産物が得られる。他の実施形態において、これによって提供される方法を使用して、ハイブリダイゼーションも受けやすい植物に後成的および/または遺伝的変異を導入することができる。
一般的に、後成的および/または遺伝的変異植物を導入するための本発明によって提供される方法は、単にMSH1発現が変異を導入するために十分な時間抑制されることを必要とする。このように、さまざまなMSH1抑制方法を用いて、本発明によって提供される方法を実施することができ、その方法は特定の抑制技術に限定されない。
植物におけるMSH1の抑制と、それに続いて子孫植物の回収をもたらす様々な方法であって、MSH1機能が回復される方法が本明細書中で提供される。ある実施形態において、MSH1阻害トランス遺伝子の発現を下方調節することにより、またはMSH1阻害トランス遺伝子をトランスポーゼースで除去することによって、そのような子孫植物を回収することができる。本明細書中で提供される方法のある実施形態では、MSH1が標的植物または植物細胞において抑制され、MSH1を発現する子孫植物が伝統的な遺伝的技術によって回収される。例示的非限定的一実施形態において、子孫植物は、MSH1分離を提供するトランス遺伝子についてヘテロ接合性である植物を自家受粉させることによって得られる。そのようなヘテロ接合性植物の自家受粉(または植物細胞から再生されるヘテロ接合性植物の自家受粉)は、子孫植物個体群のサブセットから分離するためのトランス遺伝子を提供する。内因性MSH1遺伝子(すなわち、msh1植物)における劣性突然変異の使用によってMSH1が抑制される場合、msh1/msh1植物を、さらに別の例示的非限定的実施形態において、MSH1植物と交配、次いで自家受粉させて、機能的野生型MSH1対立遺伝子についてホモ接合性である子孫植物を得ることができる。他の実施形態では、MSH1が標的植物または植物細胞において抑制され、MSH1を発現する子孫植物が分子遺伝的技術によって回復される。そのような分子遺伝的技術の非限定的例示的実施形態としては:i)プロモータの活性に必要な誘導剤の撤収もしくはそのプロモータのリプレッサの導入による調節されたプロモータの制御下でのMSH1抑制トランス遺伝子の下方調節;または、ii)トランスポーゼース認識部位に隣接したMSH1抑制トランス遺伝子の、そのトランス遺伝子の除去をもたらす同族トランスポーゼースへの暴露が挙げられる。
有用な特徴を付与することができる改変された染色体座をさらに、有用な特徴を示さない参照植物およびMSH1抑制を受けた親植物または植物細胞から得られた試験植物の適切な比較分析を実施し、改変された座または改変された座を含む植物のいずれかを得ることによって、同定し、選択することができる。さまざまな参照植物および試験植物をそのような比較および選択で使用できることが予想される。ある実施形態において、有用な特徴を示さない参照植物としては:a)野生型植物;b)所定の植物系の植物の所定のF2個体群内の植物の異なる亜個体群(ここで、F2個体群は図6で示される方法で得られる任意の適用可能な植物型または異種である);c)野生型表現型を示すF1個体群(ここで、F1個体群は、図6で示される方法で得られる任意の適用可能な植物型または異種である);および/または、d)それらの親植物または植物細胞においてMSH1の抑制の前の試験植物の親植物または親細胞に対して同質遺伝的である植物(すなわち、参照植物は、試験植物を得るために後にMSH1抑制を受けた植物または植物細胞と同質遺伝的である)のいずれかが挙げられるが、これに限定されるものではない。ある実施形態において、有用な特徴を示す試験植物としては:a)有用な特徴を示し、トランス遺伝子媒介MSH1抑制を受けた親植物もしくは植物細胞から誘導された任意の非トランスジェニック分離個体、b)有用な特徴を示す所定の植物系の植物の所定のF2個体群内の植物の異なる亜個体群(ここで、F2個体群は図6で示される方法で得られる任意の適用可能な植物型または異種である);(c)有用な特徴を示す(a)もしくは(b)の植物から得られる任意の子孫植物;またはd)有用な特徴を示すMSH1抑制を受けた植物もしくは植物細胞、のいずれかが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
有用な特徴を付与することができるさまざまな染色体修飾を植物中鵜に導入するための方法、ならびに植物、植物部分、およびそれらの植物部分の産物も本明細書中で提供される。MSH1の抑制によって誘導された染色体改変および/または染色体突然変異は、本明細書中で記載されるようにして特定することができる。いったん特定されると、染色体改変、染色体突然変異、またはMSH1の抑制によって誘導される染色体改変および/もしくは染色体突然変異と同じ遺伝的効果を提供するトランス遺伝子を含むが、これらに限定されない染色体修飾を宿主植物に導入して、所望の特徴を示す植物を得ることができる。これに関連して、「同じ遺伝的効果」とは、MSH1抑制を受け、有用な特徴を示す植物で観察されるものと類似している1以上の内因性植物遺伝子の発現の増加および/または減少を提供する、導入された染色体修飾を意味する。MSH1抑制を受け、遺伝子の発現の減少および有用な特徴の両方を示す植物において内因性遺伝子がメチル化されているある実施形態において、遺伝子の発現の減少および有用な特徴ももたらす他の植物中の染色体修飾が提供される。MSH1抑制を受け、その遺伝子の発現の増加および有用な特徴の両方を示す植物において内因性遺伝子が脱メチル化されたある実施形態において、当該遺伝子の発現の増加および当該有用な特徴をもたらす他の植物における染色体修飾が提供される。
本明細書中で提供される方法によって得られる植物系は、さまざまな有用な特徴について、さまざまな技術を使用することによってスクリーニングすることができ、選択することができる。本明細書中で提供される特定の実施形態では、MSH1発現が抑制された植物と他の植物との異系交配から得られる個々の子孫植物系を所望の有用な特徴についてスクリーニングし、選択する。
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を証明するために含まれる。以下の実施例で開示されている技術は、本発明の実施において十分機能する本発明者によって発見された技術であり、したがって、その実施のための好ましい様式を構成するとみなすことができることは当業者には理解される。しかしながら、開示され、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく依然として同様の結果を得る特定の実施形態でなすことができる多くの変更を、当業者は本開示を考慮して理解するはずである。
トマトおよびタバコにおいてMSH1の抑制をもたらすベクターを次のようにして構築した。MSH1タンパク質のアミノ酸配列651〜870をコード化するセグメントを、プライマー配列TOM−CD1F(5−CGCAGGTATCACGAGGCAAGTGCTAAGG−3;配列番号11)およびTOM−CD1R(5−ATCCCCAAACAGCCAATTTCGTCCAGGATCCCCAAACAGCCAATTTCGTCC AGG−3;配列番号12)を使用することによってトマトEST配列(配列番号5)から誘導し、イントロン配列を挟んで順方向および逆方向でクローンした。ベースベクターであるpUCRNAi−イントロンはシロイヌナズナ小型核リボタンパク質の第2のイントロン(At4g02840;配列番号13)を有する。CaMV35Sプロモータおよび転写ターミネーターは、構築およびネオマイシンホスホトランスフェラーゼII(nptII)レポーター遺伝子の発現を調節し、そして挿入物は右縁および左縁組み込み配列に隣接している。アグロバクテリウム・ツメファシエンス株C58Cl/pMP90(28)を、タバコ(Horsch RB, et al.(1985) Science 227: 1229−1231)およびトマト(McCormick et al. 1986) Plant Cell Rep 5:81−84)での形質転換に使用した。
5つの植物種:ダイズ(Glycine max(L.) Merr)、トマト(Solanum lycopersicum L)、タバコ(Nicotiana tabacum L.)、キビ(Pennisetum glaucum (L.)R. Br.)およびソルガム(Sorghum bicolor (L.)Moench)でRNAiの使用により遺伝子組換えで抑制されたMSH1発現。いずれの場合にも、細胞質雄性不稔、斑入りの証拠および改変された葉緑体発生、低下成長速度および矮化、改変された開花期または隠花性、増大した分枝、低下フラボノイド生合成およびアントシアニンの欠乏、増大した病原体感受性、ならびに改変された葉形態(図1を参照のこと)をはじめとする類似した変化が観察された。斑入り、矮化、およびミトコンドリアDNA再配列は、それぞれ図2、3、および4で示されるようにMSH1抑制を受けた様々な植物でも観察される。生理学的に、植物は、ATPの減少およびROSレベルの上昇、ミトコンドリア運動性の低下、マイトファジーの増加、ストレス応答経路の発現、ならびに改変されたサイトカイニンおよびGA代謝(図5中のROSデータ)を示す。
非トランスジェニック高矮化、遅延型開花、斑入りTX430ソルガム植物を、RNA干渉(RNAi)によってMSH1発現を阻害するトランス遺伝子についてヘテロ接合性であった親Tx430ソルガム植物からの子孫植物の分離個体群から得た。Tx430は、MSH1発現を阻害するトランス遺伝子を含むトランスジェニックソルガム植物を得るために使用されるもとの遺伝子型であった。この非トランスジェニック、高矮化、遅延型開花、斑入りTX430ソルガム植物の、花粉親として同質遺伝型TX430野生型による交配によって、野生型F1表現型を得、これはもとの矮化、遅延型開花または斑入り表現型の証拠を示さなかった(図6)。本発明者等はRNAiで誘発される変化はオルガネラであり、表現型の母性伝播を推測していたため、これは意外な結果であった。野生型ゲノムの導入はもとのRNAiで誘発される効果を中和した。これらのF1植物の自家受粉によって誘導されるF2個体群は量的変動(VQ)と称される表現型の広域分布をもたらし、その一部を第2表に記載する。SAS PROC MIXEDを第2表におけるすべての分析について使用した。各特徴をモデルにおける固定効果で分析し、系中の異質分散を仮定し、推定値の標準誤差とともに評価した。均質分散モデルに対する異質分散モデルのカイ二乗試験を実施した。有意なカイ二乗値は、系分散間の統計的に有意な差を示す。少ない割合(約1/50植物)は矮化、斑入り表現型を示し、約50%は起こり得るミトコンドリア遺伝子病変として細胞質雄性不稔を示し(Hanson and Bentolila, 2004)、個体群の大部分は、地上の生バイオマス質量および乾燥質量バイオマス、穂の質量、ならびに他の有用な農学的特性において重要な量的変動を示す。これらのデータで特に興味深いのは、いくつかの特徴についていずれかの親より優れた個体群内で観察される能力である。もとの交雑種はTX430×TX430(袋をかけた穂で温室内で作成)であるから、多様性の範囲は核遺伝的変異で合理的に説明することができない。
これらの実験では、劣性msh1突然変異を分離によって除去した。劣性msh1/msh1コロンビア生態型親をまず花粉供与体としての野生型コロンビア生態型植物と交配して(Col−0msh1×Col−0wt)、msh1/MSH1植物のF1個体群を得た。F1子孫を(自家受粉させて、msh1座について分離するF2個体群を得る。MSH1/MSH1F2子孫は、F2個体群から選択され、自家受粉させて、選択されたMSH1/MSH1F2親のMSH1/MSH1F3子孫を得た。
図6および実施例3で記載するようなMSH1抑制を受けた親Tx430ソルガム植物由来のソルガム植物のF2個体群を草高(図8)、穂の質量(図9)、および穀粒収量(図10)における変異について、個体群における個々の植物についての値を比較することによって分析した。
有用な表現型を示さない参照植物および有用な特徴に関連する改変された染色体座を含む試験植物における低分子RNAプロフィールおよびDNAメチル化状態の比較を用いて、改変された染色体座を特定することができる。さまざまな植物に一般化することができるそのような比較をする方法をこの実施例で提供する。
MSH1 RNAi由来の表現型変異体×野生型を交配することによって誘導されるF2個体群で出現する定量的表現型変異を利用することが可能である。MSH1抑制を受けたさまざまなソルガム個体群および本明細書中で記載される対照ソルガム植物における遺伝率および量的変動を測定して、有用な特徴を付与する染色体改変を特定することができる。ある実施形態において、これらの方法は、SNP発現および検出におけるソルガムショットガンシーケンシング実験によって特定される亜硫酸水素塩由来DNA SNP多型性の使用の使用を必要とする可能性がある。ソルガムゲノムは約1628cMであり、本発明者等は約1SNP/10cM(センチモルガン)のSNPマーカー密度を目標とする。したがって、QTL分析についての163Me−C部位が、5つの試料種(すなわち、(1)野生型、(2)大幅に低下した成長速度および遅延型開花を示すトランスジェニックMSH1ノックダウン植物、(3)改変された成長表現型を保持する非トランスジェニック分離個体、(4)F1植物(図(6)で示されるとおり、および(5)量的変動を示す選択されたF2植物(図6))までの全ゲノム分析におけるそれらの差次的メチル化に基づいて、ソルガムゲノム全体にわたって10cMの等間隔で選択される。
Mshl抑制を使用して、表現型および後成的変異を誘導し、作物種Sorghum bicolor (L.) Moenchおよびモデル植物Arabidopsis thaliana (L.) Heynhにおいて誘導された表現型を選択した。
誘導されたエピ−F4ファミリーはMSH1−dr表現型の証拠を示さなかった(不図示)。
シロイヌナズナCol−0およびmsh1突然変異体系をシロイヌナズナストックセンターから入手し、メトロミックス中12時間日光を当て、22℃で成長させた。MSH1−エピ系は、MSH1−dr系を野生型植物と交配することによって誘導した。シロイヌナズナ植物バイオマスおよびロゼット直径を4週令植物で測定した。シロイヌナズナ開花期を最初に目に見える花芽が出現した日として測定した。半相補性交雑種に関して、ミトコンドリア1(AOX−MSH1)およびプラスチド(SSU−MSH1)相補ホモ接合性系をコロンビア−0野生型植物と交配した。各F1植物をトランス遺伝子および野生型MSH1対立遺伝子について遺伝子型を同定し、別々に収集した。AOX−MSH1×Col−0からの3つのF2ファミリーおよびSSU−MSH1×Col−0からの2つのF2ファミリーを成長パラメータについて評価した。すべてのファミリーを同じ条件下で成長させ、バイオマス、ロゼット直径および開花期を測定した。両側スチューデントt試験を使用してp値を算出した。
2010年および2011年の夏の間、F2ファミリーをリンカーン市ネブラスカ大学のハブロック試験場にて天水条件下、2つの野外実験で成長させた。実験を不完備型ブロックデザインで用意し、2010年の実験は15ブロックからなる1ブロックあたり30エントリー(30×15アルファ格子)の1つの複製から構成されていた。個々の系を列あたり1穂、長さ5m、列間隔0.75m列間隔の列区画で植え付けた。F3種子を個々の植物から収穫した。
2010および2011年の野外実験で、記録したソルガム表現型特徴には、草高(PH)、すなわち地面から穂先まで(cm)、穂の長さ(PL)、すなわち穂の基底部から先端まで(cm)、生穂の質量および乾燥した穂の質量(FPWおよびDPW)(g)、生バイオマスおよび乾燥バイオマス収量(FBYおよびDBY)(g)、ならびに総穀粒収量(NGY)(g)が含まれていた。PH、PL、FPW、DPWおよびNGYの試料サイズは、列あたりの列内植物が5から10までランダムに変化した。自家受粉させるために開花前に健常な形の良い頭部に袋をかけ、生理的成熟後に収穫し、この時にFPWを測定した。試料を80°Fで30日間乾燥した後、DPWおよびNGYを測定した。バイオマス試料は3植物試料から構成され、袋に詰め、切断した後秤量して、FBWを得た。植物はランダムな列内選択であり、DBWのために試料を160°Fで15日間完全に乾燥した。
ソルガム材料中のMSH1−RNAiトランス遺伝子の存在についてのPCRアッセイは第S7表に記載したプライマーを使用した。反応条件は:95℃で5分、95℃で30秒、55℃で1分、72℃で2分を30サイクル;最後の延長期間は72℃で10分であった。正の対照および負の対照をそれぞれ確認されたトランスジェニック系および野生型Tx430から含めた。
Col−0およびエピ−F3植物から製造したシロイヌナズナゲノムDNA(約15ug)を200bp〜600bpのピーク範囲まで音波処理し、フェノール/クロロホルム精製し、エタノール沈殿させた。音波処理されたDNA(約12ug)をマングビーンヌクレアーゼ(New England Biolabs)で処理し、フェノール/クロロホルム抽出し、エタノール沈殿させた。マングビーンヌクレアーゼ処理されたゲノムDNA(約3ug)を末端修復し、Illumina Genomic DNA Samples Prep Kit(Illumina, San Diego CA)で3’末端アデニル化した。アデニル化DNAフラグメントを次いでメチル化アダプタ(Illumina, San Diego, CA)にライゲートした。試料を次いでカラム精製し、アガロース中で分画した。280bp〜400bpのフラクションをQIAquick Gel Purificationキット(Qiagen, Valencia, CA)でゲル精製した。さらに3ugのマングビーンヌクレアーゼ処理されたゲノムDNAを使用して、処理を繰り返し、2つのフラクションをプールし、MethylEasy Xceedキット(Human Genetic Signatures Pty Ltd, North Ryde, Australia)を使用して製造業者の指示にしたがって亜硫酸水素ナトリウム処理に付した。3つの独立ライブラリPCR濃縮を、インプットテンプレートとして合計30ul硫酸水素塩で処理されたDNAから10ulを用いて実施した。PCR反応混合物は10ulのDNA、5ulの10×pfuTurbo Cx緩衝液、0.7ulのPE1.0プライマー、0.7ulのPE2.0プライマー、0.5ulのdNTP(25mM)、lulのPfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase(Stratagene, Santa Clara, CA)、および合計50ulにするための水であった。PCRパラメータは2分間950Cであり、続いて950Cで30秒、650Cで30秒および720Cで1分、次いで720C で5分を12サイクルであった。PCR産物をカラム精製し、各PCR反応からの等しい容積を合わせてプールして、10nMの最終濃度にした。
製造業者の指示にしたがってMethylEasy Xceedを使用して、シロイヌナズナゲノムDNAを亜硫酸水素塩処理した。第S7表に記載したプライマーを使用してPCRを実施し、PCR産物をクローンし(Topo TAクローニングキット、Invitrogen)、DNA配列決定した。配列アラインメントは、T−Coffee多重配列アラインメントサーバーを使用して実施した(C Notredame, et al., J Mol Biol. 302:205−217 , 2000)。
Bismark(F Krueger, SR Andrews. Bioinformatics 27:1571−1572 (2011)を使用してFastqファイルをTAIR10参照ゲノムと整列させ、これを使用して、シトシンのメチル化状態を決定した。リードの最初の50ヌクレオチドで1つのミスマッチが許容された。Bismarkはゲノムの位置に対して独自にマッピング可能なリードのみを保持する。
TAIR10アノテーション(インターネットftpサイト"ftp.arabidopsis.org/home/tair/Genes/TAIR10_genome_release/ TAIR10_gff3"で入手可能)を使用して、遺伝子コーディング領域、5’−UTR、3’−UTR、イントロン、偽遺伝子、非コーディングRNA、転位性因子遺伝子、および遺伝子間領域におけるDMCまたは非特異的メチル化シトシンのカウントを測定した。遺伝子間領域は、任意のアノテーション特性に対応しない領域と定義された。
Claims (43)
- 有用な特徴を示す植物を産生するための方法であって:
a.第1親植物または植物細胞における1つ以上のMSH1遺伝子の発現を抑制するステップ;
b.ステップ(a)の親植物、ステップ(a)の前記親植物の子孫、ステップ(a)の前記植物細胞から得られる植物、またはステップ(a)の前記植物細胞から得られる植物の子孫を、MSH1が抑制されていない第2の植物と異系交配するステップ;
c.ステップ(b)の前記異系交配から得られる子孫植物の個体群を少なくとも1つの有用な特徴についてスクリーニングするステップであって、子孫植物の前記個体群の一部がMSH1を発現するステップ;および、
d.MSH1を発現する前記特徴を含む子孫植物を選択するステップであって、前記特徴が遺伝性かつ可逆的であるステップ
を含む、方法。 - 前記特徴が、1以上の改変された染色体座と関連する、請求項1記載の方法。
- 有用な特徴を示す植物を産生するための方法であって:
a.第1親植物または植物細胞における1つ以上のMSH1遺伝子の発現を抑制するステップ;
b.ステップ(a)の前記親植物、ステップ(a)の前記親植物の子孫、ステップ(a)の前記植物細胞から得られる植物、またはステップ(a)の前記植物細胞から得られる植物の子孫を、MSH1が抑制されていない第2の植物と異系交配するステップ;
c.ステップ(b)の前記異系交配から得られる子孫植物の個体群を少なくとも1つの有用な特徴についてスクリーニングするステップであって、子孫植物の前記個体群の一部がMSH1を発現するステップ;および、
d.MSH1を発現する前記特徴を含む子孫植物を選択するステップであって、前記特徴が1以上の突然変異した染色体座と関連するステップ
を含む、方法。 - 前記方法が:i)ステップ(d)の自家受粉させた子孫植物、ii)ステップ(d)の異系交配させた子孫植物、または、iii)ステップ(d)の自家受粉させた子孫植物および異系交配させた子孫植物の両方から種子を産生するステップをさらに含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記方法が、前記種子または前記種子から成長させた植物を前記特徴の存在について分析するステップをさらに含む、請求項4記載の方法。
- 前記第1親植物または植物細胞が、MSH1の発現を抑制することができるトランス遺伝子を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記トランス遺伝子が、阻害的低分子RNA(siRNA)、ミクロRNA(miRNA)、共抑制センスRNA、および/またはアンチセンスRNAを産生することによってMSH1の発現を抑制するトランス遺伝子の群から選択される、請求項6記載の方法。
- 前記第1親植物または植物細胞が、雌性植物を異なる雄性植物と交配することによって得られ、前記雌性または雄性植物の少なくとも1つが、前記1つ以上の親植物の内因性MSH1遺伝子の発現を抑制するトランス遺伝子を含み、前記植物が前記トランス遺伝子の導入前に同質遺伝的近交系であった、請求項1または2記載の方法。
- 前記第1親植物または植物細胞が、前記第1親植物または植物細胞におけるMSH1の抑制前に前記第2親植物と同質遺伝的であった、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記特徴が、収穫高、雄性不稔、隠花性、生物ストレス、および非生物的ストレスからなる群から選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記特徴が、前記子孫植物のミトコンドリアにおける準化学量論的移動(SSS)に起因しない、請求項10記載の方法。
- 前記特徴が雄性不稔であり、前記子孫植物のミトコンドリアにおける準化学量論的移動(SSS)に起因しない、請求項10記載の方法。
- ステップ(d)における前記子孫植物またはその子孫が、MSH1発現の抑制を受けていないがそれ以外では第1親植物または植物細胞と同質遺伝的であった植物と比較して、前記特徴の改善を示す、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物が作物である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記作物が、トウモロコシ、ダイズ、綿、キャノーラ、小麦、米、トマト、タバコ、キビ、およびソルガムからなる群から選択される、請求項14記載の方法。
- 前記作物がソルガムである、請求項15記載の方法。
- 前記特徴が、穂の長さ、穂の質量、乾燥バイオマス、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項16記載の方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法によって産生される植物であって、前記植物が、MSH1発現の抑制を受けていないがそれ以外は前記第1親植物または植物細胞に対して同質遺伝的であった植物と比較して、少なくとも1つの有用な特徴の改善を示す、植物。
- 前記植物が近交系である、請求項18記載の植物。
- 種子またはそれから得られる植物が少なくとも1つの有用な特徴の改善を示す、請求項18記載の植物から得られる種子。
- MSH1抑制によって誘導され、かつ有用な特徴の改善と関連した1以上の染色体座の1以上の改変を含む検出可能な量の染色体DNAを含む、請求項18記載の植物から、またはそれ由来の種子からの加工産物。
- 前記産物が、油、粗挽き粉、リント、外皮、または圧搾ケーキである、請求項21記載の加工産物。
- 多くの種子を産生する方法であって、請求項18記載の植物の個体群を自家受粉させるステップ、およびそれから種子を収穫するステップを含み、収穫された種子またはそれから得られた植物が、少なくとも1つの有用な特徴において改善を示す、方法。
- 有用な特徴を付与することができる植物における1以上の改変された染色体座を同定するための方法であって:
a)前記有用な特徴を示さない参照植物における1以上の染色体領域を、前記有用な特徴を示す試験植物における1以上の対応する染色体領域と比較するステップであって、前記試験植物がMSH1を発現し、MSH1が抑制された親植物または植物細胞から得られたステップ;および、
b)前記参照植物中に存在せず、前記有用な特徴と関連する前記試験植物中に存在する1以上の改変された染色体座について選択するステップ
を含む、方法。 - 前記改変された染色体座が、染色体DNAメチル化状態、染色体座と関連したヒストンタンパク質の翻訳後修飾、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項24記載の方法。
- 前記選択が、前記改変された染色体座を含む植物もしくは子孫植物を単離すること、または前記改変された染色体座と関連する核酸を得ることを含む、請求項24記載の方法。
- 前記参照植物および前記試験植物がどちらも、MSH1が抑制された親植物または植物細胞から得られる子孫植物の個体群から得られる、請求項24記載の方法。
- 前記参照植物および前記親植物または植物細胞の両方が、前記親植物または植物細胞におけるMSH1の抑制前に同質遺伝的であった、請求項24記載の方法。
- 前記有用な特徴が、収穫高、雄性不稔、隠花性、生物ストレス耐性、非生物的ストレス耐性、増大した耐倒伏性、増大した成長速度、増大したバイオマス、増大した分げつ、増大した分枝、遅延型開花期、および遅延型老化からなる群から選択される、請求項24〜28のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項24〜28のいずれか1項に記載の方法によって同定される植物の改変された染色体座。
- 請求項30記載の改変された染色体座を含む植物。
- 有用な特徴を示す植物を産生するための方法であって:
a.有用な特徴に関連する染色体修飾を植物に導入するステップであって、前記染色体修飾が、前記有用な特徴と関連するMSH1抑制によって誘導される改変された染色体座、前記有用な特徴と関連するMSH1抑制によって誘導される改変された染色体座と同じ遺伝的効果を提供するトランス遺伝子、または前記有用な特徴と関連するMSH1抑制によって誘導される改変された染色体座と同じ遺伝的効果を提供する染色体突然変異を含む、ステップ;および、
b.前記染色体修飾を含み、前記有用な特徴を示す植物について選択するステップ
を含む、方法。 - 前記方法が:i)ステップ(b)の前記選択された植物の自家受粉させた子孫植物、ii)ステップ(b)の前記選択された植物の異系交配させた子孫植物、または、iii)ステップ(b)の前記選択された植物の自家受粉させた子孫植物および異系交配させた子孫植物の両方から種子を産生するステップをさらに含む、請求項32記載の方法。
- 前記染色体修飾が改変された染色体座を含み、前記植物が、前記改変された染色体座と関連する、染色体DNAメチル化状態、染色体座と関連したヒストンタンパク質の翻訳後修飾、またはそれらの任意の組み合わせの存在について分析することによって選択される、請求項32記載の方法。
- 前記染色体修飾が、前記トランス遺伝子または前記染色体突然変異を含み、前記植物が、前記トランス遺伝子または前記染色体突然変異の存在について分析することによって選択される、請求項32記載の方法。
- 前記植物が、前記有用な特徴の存在について分析することにより選択される、請求項32記載の方法。
- 前記染色体修飾が改変された染色体座を含み、前記改変された染色体座が、染色体DNAメチル化状態、染色体座と関連したヒストンタンパク質の翻訳後修飾、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項32記載の方法。
- 前記改変された染色体座が、遺伝子の発現における減少を含む遺伝的効果を有し、前記染色体修飾が、前記遺伝子の発現における減少を提供するトランス遺伝子または染色体突然変異を含む、請求項32記載の方法。
- 前記トランス遺伝子が、阻害的低分子RNA(siRNA)、ミクロRNA(miRNA)、共抑制センスRNA、および/または前記遺伝子に対するアンチセンスRNAを産生することによって、前記遺伝子の発現を低減する、請求項38記載の方法。
- 前記改変された染色体座が、遺伝子の発現の増加を含む遺伝的効果を有し、前記染色体修飾が前記遺伝子の発現の増加をもたらすトランス遺伝子または染色体突然変異を含む、請求項32記載の方法。
- 前記有用な特徴が、収穫高、雄性不稔、隠花性、生物ストレス耐性、および非生物的ストレス耐性からなる群から選択される、請求項32〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 前記有用な特徴が、増大した耐倒伏性、増大した成長速度、増大したバイオマス、増大した分げつ、増大した分枝、遅延型開花期、および遅延型老化からなる群から選択される、請求項32〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項32〜40のいずれか1項に記載の方法によって作製される植物。
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