JP2014500289A - アイソフォーム濃縮抗体調製物及びこれを得る方法 - Google Patents
アイソフォーム濃縮抗体調製物及びこれを得る方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014500289A JP2014500289A JP2013545269A JP2013545269A JP2014500289A JP 2014500289 A JP2014500289 A JP 2014500289A JP 2013545269 A JP2013545269 A JP 2013545269A JP 2013545269 A JP2013545269 A JP 2013545269A JP 2014500289 A JP2014500289 A JP 2014500289A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- solution
- conductivity
- cation exchange
- exchange chromatography
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 title claims abstract description 51
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 title claims abstract description 51
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 63
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 92
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims abstract description 49
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 38
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 110
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 66
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 37
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 37
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 33
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 25
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 claims description 13
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 10
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 10
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 6
- 238000012437 strong cation exchange chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000002305 strong-anion-exchange chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 5
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 63
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 38
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 35
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 29
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 27
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 16
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 16
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 15
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 7
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 7
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000012607 strong cation exchange resin Substances 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 4
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 4
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 4
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 3
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 3
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 3
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- -1 sulfopropyl Chemical group 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- WZYRMLAWNVOIEX-MOJAZDJTSA-N (2s)-2-[(2r,3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyacetaldehyde Chemical compound O=C[C@@H](O)[C@@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O WZYRMLAWNVOIEX-MOJAZDJTSA-N 0.000 description 2
- DCQFFOLNJVGHLW-UHFFFAOYSA-N 4'-Me ether-Punctatin+ Natural products O1C(O)C(O)C2OCC1C2O DCQFFOLNJVGHLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022014 Angiopoietin-1 receptor Human genes 0.000 description 2
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 239000004010 HER dimerization inhibitor Substances 0.000 description 2
- 101000753291 Homo sapiens Angiopoietin-1 receptor Proteins 0.000 description 2
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- WZYRMLAWNVOIEX-UHFFFAOYSA-N cinnamtannin B-2 Natural products O=CC(O)C1OCC(O)C1O WZYRMLAWNVOIEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 1,4a-dimethyl-7-propan-2-yl-2,3,4,4b,5,6,10,10a-octahydrophenanthrene-1-carboxylic acid Chemical compound C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 102100038778 Amphiregulin Human genes 0.000 description 1
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100481403 Bos taurus TIE1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 description 1
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 1
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026005 Central nervous system vascular disease Diseases 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101100314281 Danio rerio trappc11 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100036723 Discoidin domain-containing receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010049959 Discoidins Proteins 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000012545 EGF-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050002150 EGF-like domains Proteins 0.000 description 1
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055191 EphA3 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055179 EphA4 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055182 EphA5 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055207 EphA6 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055153 EphA7 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055155 EphA8 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010055334 EphB2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100030322 Ephrin type-A receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100030324 Ephrin type-A receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100021616 Ephrin type-A receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100021605 Ephrin type-A receptor 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100021606 Ephrin type-A receptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100021601 Ephrin type-A receptor 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100030779 Ephrin type-B receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100031968 Ephrin type-B receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100031982 Ephrin type-B receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100031983 Ephrin type-B receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100031984 Ephrin type-B receptor 6 Human genes 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036725 Epithelial discoidin domain-containing receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710131668 Epithelial discoidin domain-containing receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 101100480905 Escherichia phage P1 tec gene Proteins 0.000 description 1
- 101150017750 FGFRL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150040897 Fgr gene Proteins 0.000 description 1
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100027844 Fibroblast growth factor receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100026149 Fibroblast growth factor receptor-like 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101100165850 Homo sapiens CA9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000929429 Homo sapiens Discoidin domain-containing receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 1
- 101000938354 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001064150 Homo sapiens Ephrin type-B receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001064458 Homo sapiens Ephrin type-B receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001064451 Homo sapiens Ephrin type-B receptor 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000917134 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 description 1
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000686031 Homo sapiens Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Proteins 0.000 description 1
- 101000579425 Homo sapiens Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret Proteins 0.000 description 1
- 101000727826 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase RYK Proteins 0.000 description 1
- 101001103033 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000016844 Immunoglobulin-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050006430 Immunoglobulin-like domains Proteins 0.000 description 1
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100027754 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Human genes 0.000 description 1
- 101710087603 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100405128 Mus musculus Nr4a3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100480907 Mus musculus Tec gene Proteins 0.000 description 1
- 101000807562 Mus musculus Tyrosine-protein kinase receptor UFO Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100381429 Oryza sativa subsp. japonica BADH2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 102100023347 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Human genes 0.000 description 1
- 102100028286 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret Human genes 0.000 description 1
- 108700003853 RON Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000006747 Transforming Growth Factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100029759 Tyrosine-protein kinase RYK Human genes 0.000 description 1
- 102100039616 Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N alpha-L-Fucp-(1->2)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-D-Galp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)[C@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](CO)OC(O)[C@@H]3O)O)O[C@@H]2CO)O[C@H]2[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O2)O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025222 central nervous system infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003574 free electron Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 150000002433 hydrophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000012500 ion exchange media Substances 0.000 description 1
- JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N m-aminophenylboronic acid Chemical compound NC1=CC=CC(B(O)O)=C1 JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol Chemical compound CNC(O)(O)O FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000026267 regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3015—Breast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本明細書では、（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加するステップと、（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持されるステップと、（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加して抗体調製物を得るステップ、を有する、抗体調製物を生産する方法が報告され、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１０％以下で上回る。
Description
強カチオン交換クロマトグラフィー材上でのステップ溶出法を有する抗体調製物を得る方法を報告する。
様々な方法が公知であり、タンパク質精製に広く使用され、例えば微生物タンパク質を用いたアフィニティークロマトグラフィー（例えばＡタンパク質やＧタンパク質アフィニティークロマトグラフィー）、イオン交換クロマトグラフィー（例えばカチオン交換（カルボキシメチル樹脂）、アニオン交換（アミノエチル樹脂）及びミックスモード交換）、チオフィリック吸着（例えばベータ-メルカプトエタノール及び他のＳＨリガンドを用いる）、疎水性相互作用又は芳香族吸着クロマトグラフィー（例えばフェニルセファロース、アザ-アレノフィリック樹脂又はｍ-アミノフェニルボロン酸を用いる）、金属キレートアフィニティークロマトグラフィー（例えばＮｉ(ＩＩ)-及びＣｕ(ＩＩ)-アフィニティー材を用いる）、分子ふるいクロマトグラフィー及び電気泳動法（ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動など）（Vijayalakshmi, M.A., Appl. Biochem. Biotech. 75 (1998) 93-102）がある。
薬学的抗体の産業的な精製、特にクロマトグラフィープロセスの開発、操作及び実証がBiotechnol Gen. Eng. Rev. 18 (2001) 301-327誌でFahrner, R.L.らによって報告されている。Follman, D.K. and Fahrner, R.L. (J. Chrom. A 1024 (2004) 79-85) は、タンパク質Ａなしの３つのクロマトグラフィーのステップを用いる抗体精製プロセスの因子スクリーニングを報告している。高電荷密度をもつイオン交換媒体による細胞培地の上澄み液からのヒトモノクローナル抗体のキャプチャーがNecina, R., ら (Biotechnol. and Bioeng. 60 (1998) 689-698) に報告されている。イオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質精製が国際公開第99/057134号に報告されている。国際公開第2004/076485号では、タンパク質Ａとイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製が報告されている。米国特許第5,429,746号では抗体精製が報告されている。タンパク質精製が国際公開第2003/066662号に報告されている。
国際公開第2006/125599号では、抗体精製法が報告されている。タンパク質Ａとイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製が国際公開第2004/076485号に報告されている。
抗体アイソフォームのクロマトグラフィーによる分離及び／又は濃縮は、カチオン交換クロマトグラフィー材の移動相の導電率が適度に増加することで可能であることが見いだされている。必要とされる導電率の増加は高くて５０％、すなわち、第２溶液の導電率は第１溶液の導電率の１０１％から１５０％である。
したがって、ここで報告される一態様は、抗体調製物を提供する方法であって、方法は、
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し抗体調製物を得る工程
を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし５０％以下で上回る。
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し抗体調製物を得る工程
を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし５０％以下で上回る。
一実施態様では、第２溶液の導電率は第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし２０％以下で上回る。
一実施態様では、第２溶液の導電率は第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし１５％以下で上回る。
一実施態様では、第２溶液の導電率は第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし１０％以下で上回る。
一実施態様では、工程（ａ）の溶液と工程（ｂ）の溶液の導電率は同じである。一実施態様では、抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液は、第１導電率を有し、第１溶液も同じ（第１）導電率を有する。
一実施態様では、カチオン交換クロマトグラフィー材は、膨張性マトリックスを有する。一実施態様では、膨張性マトリックスはアガロースである。
一実施態様では、カチオン交換クロマトグラフィー材は強カチオン交換クロマトグラフィー材である。一実施態様では、強カチオン交換クロマトグラフィー材はスルホプロピル-カチオン交換クロマトグラフィー材である。
一実施態様では、第１溶液は１ステップで第２溶液に変更される。一実施態様では、１ステップは第１溶液１００ｖｏｌ％から第２溶液１００ｖｏｌ％への変更である。
一実施態様では、第１溶液は第２溶液に直線グラジエントで変更される。一実施態様では、直線グラジエントは約３０カラムボリュームである。一実施態様では、直線グラジエントは約２０カラムボリュームである。
一実施態様では、第１溶液は２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
一実施態様では、第２溶液は２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと５ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
一実施態様では、第１溶液は２５ｍＭのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンと１０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
一実施態様では、第２溶液は２５ｍＭのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンと７０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
一実施態様では、第２溶液は２５ｍＭのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンと４５ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
一実施態様では、第１及び第２溶液は水溶液である。
一実施態様では、抗体は抗ＨＥＲ２抗体である。一実施態様では、抗ＨＥＲ２抗体は抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ又は抗ＨＥＲ２抗体ペルツズマブである。一実施態様では、抗ＨＥＲ２抗体はヒト化抗ＨＥＲ２抗体である。
ここでは別の態様として、ここで報告される方法により得られる抗体調製物が報告される。一実施態様では、抗体は抗ＨＥＲ２抗体である。
ここで報告される別の態様は、抗体調製物を生産する方法であって、
（ａ）抗体をコードする核酸を有する哺乳動物細胞を培養し、抗体を細胞又は培地から回収する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程により抗体を精製する工程を有し、この少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程が、
（ｉ）カチオン交換クロマトグラフィー材に抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液を添加する工程と、
（ｉｉ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｉｉｉ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し抗体調製物を生産する工程を有し、
第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし１０％以下で上回る。
（ａ）抗体をコードする核酸を有する哺乳動物細胞を培養し、抗体を細胞又は培地から回収する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程により抗体を精製する工程を有し、この少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程が、
（ｉ）カチオン交換クロマトグラフィー材に抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液を添加する工程と、
（ｉｉ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｉｉｉ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し抗体調製物を生産する工程を有し、
第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を少なくとも１％ただし１０％以下で上回る。
ここに報告される全態様の一実施態様では、第１溶液が４ｍＳ／ｃｍから５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
ここでは、（ｉ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、（ｉｉ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、（ｉｉｉ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加して抗体調製物を得る工程を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を５０％以下で上回る、抗体調製物を得る方法が報告される。
一般に、組換えにより生産されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ＢＨＫ、Ｓｐ２／０、ＣＨＯ又はＨＥＫ細胞などの産生細胞の培養上澄み液から回収される。これに付随して、他のタンパク化合物並びに別の抗体アイソフォームも回収される。抗体アイソフォームは、糖鎖付加パターン、重鎖Ｃ末端側リジンの不均一性、及びアスパラギン又はグルタミンアミノ酸残基の部分的脱アミノ化といった軽微な構造上の特徴が違うだけである。
一般的なクロマトグラフィー法を使用して、抗体をカチオン交換クロマトグラフィーカラム／材から単一の（対称の）ピークで回収する（例えば実施例６と図５を参照）。
カチオン交換クロマトグラフィー法を用いて抗体アイソフォームを濃縮又は部分的に違いに分離できることが今や知られている。分離／濃縮は、特に微細な勾配を有するグラジエントを用いて、ｐＨグラジエントや塩グラジエントを用いる結合・溶出クロマトグラフィー法で得られる。
抗体調製物中の抗体アイソフォームの濃縮が、移動相の適度な導電率の増加を有するカラムクロマトグラフィーにより可能であることが知られている。
一実施態様では、導電率の増加は５０％以下、すなわち導電率は１００％から少なくとも１０１％まで、高くて１５０％の増加、すなわち始めの第１レベルから第２レベルへと高くなり、抗体を溶出させる。
一実施態様では、導電率の増加は１０％以下、すなわち導電率は１００％から少なくとも１０１％まで、高くて１１０％の増加、すなわち始めの第１レベルから第２レベルへと高くなり、抗体を溶出させる。
カチオン交換クロマトグラフィー材のマトリックスは膨張性マトリックスでなければならないことが知られている。
一実施態様では、マトリックスは架橋結合した糖類である。一実施態様では、糖類は多糖類である。一実施態様では、多糖類はアガロースすなわちグリコシド結合のＤ-ガラクトースと３,６-無水-Ｌ-ガラクトースからなる多糖である。
増加は１ステップの形態でありうる。従って、増加は、溶出溶液の完全な変更、すなわち１００％の第１緩衝液から１００％の第２（＝溶出）緩衝液により行ってよい。
増加は直線グラジエントの形態でありうる。従って、増加は、溶出溶液の直線的変更、すなわち１００％の第１緩衝液から５０〜１００％の第２（＝溶出）緩衝液により行ってよい。
一実施態様では、第１溶液は第２溶液に直線グラジエントで変更される。一実施態様では、直線グラジエントは約５０カラムボリュームである。一実施態様では、直線グラジエントは約３０カラムボリュームである。一実施態様では、直線グラジエントは約２０カラムボリュームである。
一般的なクロマトグラフィー法とそれらの用途は当業者には既知である。例えばHeftmann, E., (編), Chromatography, 5版, Part A: Fundamentals and Techniques, Elsevier Science Publishing Company, New York, (1992); Deyl, Z., (編) Advanced Chromatographic and Electromigration Methods in Biosciences, vol. 60, Elsevier Science BV, Amsterdam, The Netherlands, (1998); Poole, C.F., and Poole, S.K., Chromatography Today, Elsevier Science Publishing Company, New York, (1991); Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer Verlag, (1982); Sambrook, J.ら, (編), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989); 又はAusubel, F.M.ら, (編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York, (1998) を参照されたい。
以下の表には、一般的に使用される一部の緩衝液の導電率を参照として記載する。
［表］
［表］
「に添加する」という用語は、溶液をクロマトグラフィー材と接触させる部分的工程を意味する。この用語は、（ａ）溶液を、クロマトグラフィー材が充填されたクロマトグラフィー装置に添加すること、又は（ｂ）クロマトグラフィー材を溶液に加えることのいずれかを意味する。（ａ）の場合は溶液が装置を通過し、クロマトグラフィー材と溶液中に含有される物質の相互作用を可能にする。例えばｐＨ、導電率、塩濃度、温度及び／又は流量などの条件により、溶液の物質によってはクロマトグラフィー材と結合できるものもあれば、クロマトグラフィー材から回収されるものもある。溶液中に残存するか又はクロマトグラフィー材から回収された物質は、フロースルー中に認められる。「フロースルー」とは、装置通過後に得られる溶液を指し、添加された溶液か、又はカラムの洗浄に使用されるか若しくはクロマトグラフィー材に結合した物質を溶出させる緩衝液のいずれかでよい。一実施態様では、装置はカラム又はカセットである。（ｂ）の場合、クロマトグラフィー材は、例えば固体として溶液（例えば精製を目的とする物質を含有）に添加してクロマトグラフィー材と溶液中の物質の相互作用を可能にしうる。相互作用後、クロマトグラフィー材は例えば濾過により回収され、クロマトグラフィー材に結合した物質も一緒に溶液から回収されるが、クロマトグラフィー材に結合しなかった物質は溶液中に残存する。
「結合・溶出モード」という用語は、クロマトグラフィーの工程の操作モードを意味し、精製を目的とする物質を含有する溶液がクロマトグラフィー材に添加されると、目的とする物質がクロマトグラフィー材に結合する。こうして目的とする物質はクロマトグラフィー材上に留まるが、目的としない物質はフロースルー又は上澄み液と一緒に除去される。目的とする物質は後に第２工程でクロマトグラフィー材から溶出溶液と一緒に回収される。一実施態様では、ここに報告される方法が結合・溶出モードで操作される。
ここに報告される方法で使用される溶液は、未精製か緩衝された溶液である。「緩衝液」は、溶解した緩衝剤により、酸性又は塩基性の物質の添加又は放出によるｐＨの変化をなくした溶液である。このような特性をもつ任意の緩衝剤が使用されうる。一般に、薬学的に許容可能な緩衝剤が使用される。一実施態様では、緩衝液は、リン酸及び／又はその塩からなるリン酸緩衝液、酢酸とその塩からなる酢酸緩衝液、クエン酸及び／又はその塩からなるクエン酸緩衝液、モルホリン緩衝液、２-(Ｎ-モルホリノ)エタンスルホン緩衝液、ヒスチジン緩衝液、グリシン緩衝液又はトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン（トリス（ＴＲＩＳ））緩衝液からなる群より選ばれる。別の実施態様では、緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、又はヒスチジン緩衝液からなる群より選ばれる。緩衝液は、例えば塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、クエン酸ナトリウム又はクエン酸カリウムなどの追加の塩を含みうる。
「グラジエント溶出」及び「グラジエント溶出法」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、溶出すなわちクロマトグラフィー材からの結合化合物の回収をもたらす溶液の導電率が連続的に変更すなわち上げ下げされる、すなわち、溶出をもたらす物質の１％又は２％以内の濃度変更の小さなステップの連続で濃度を変更させる方法を意味する。この「連続的溶出」では、例えばｐＨ、イオン強度、塩濃度及びクロマトグラフィーのフローなどの１または複数の条件を直線的、指数的又は漸近的に変更させてよい。一実施態様では、変更は直線的である。
「ステップ溶出」という用語は、例えば溶出すなわちクロマトグラフィー材からの結合化合物の回収をもたらす物質の濃度を一度にすなわちある値／レベルから別の値／レベルに直接上昇または降下させる方法を意味する。この「ステップ溶出」では、例えばｐＨ、イオン強度、塩濃度及びクロマトグラフィーのフローなどの１または複数の条件を、第１の値例えば開始値から第２の値例えば最終値に一度に変えてよい。このように、条件は、直線的変更と比べて増分的すなわちステップ的に変更される。
「イオン交換クロマトグラフィー材」という用語は、非移動性の高分子量のマトリックスであり、イオン交換クロマトグラフィーの固定相として使用される共有結合した電荷を帯びた置換基を有する。全体的に電荷を中性にするため、共有結合していないカウンターイオンはそこに結合される。「イオン交換クロマトグラフィー材」は、その共有結合していないカウンターイオンを周囲の溶液の同様に電荷を帯びたイオンと交換する能力がある。交換可能なイオンの電荷により、「イオン交換樹脂」はカチオン交換樹脂又はアニオン交換樹脂を意味する。電荷を帯びた基（置換基）の性質により、「イオン交換樹脂」は、例えばカチオン交換樹脂の場合は、スルホン酸樹脂（Ｓ）、スルホプロピル樹脂（ＳＰ）又はカルボキシメチル樹脂（ＣＭ）を意味する。
イオン交換材、すなわち固定相の様々な種類が多数の企業から様々な名称で入手可能であり、例えば、カチオン交換材Ｂｉｏ−Ｒｅｘ（登録商標）（例えばタイプ70）、Ｃｈｅｌｅｘ（登録商標）（例えばタイプ100）、Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ（登録商標）（例えばタイプCM, High S, 25 S)、ＡＧ（登録商標）（例えばタイプ50W, MP）が全てBioRad Laboratories社から入手可能、ＷＣＸ ２がCiphergen社から入手可能、Ｄｏｗｅｘ（登録商標）ＭＡＣ−３からDowケミカル社から入手可能、ムスタングＣ及びムスタングＳがPall Corporationから入手可能、セルロースＣＭ（例えばタイプ23, 52）、ハイパーＤ、パーティスフィアがWhatman plc.社から入手可能、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＩＲＣ（例えばタイプ76, 747, 748）、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＧＴ ７３、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）（例えばタイプSP, CM, 650M）が全てTosoh Bioscience GmbHより入手可能、ＣＭ １５００及びＣＭ ３０００がBioChrom Labs社から入手可能、ＳＰ−セファロースＴＭ、ＣＭ−ＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭがＧＥヘルスケア社より入手可能、Ｐｏｒｏｓ樹脂がPerSeptive Biosystems社より入手可能、Ａｓａｈｉｐａｋ ＥＳ（例えばタイプ502C）、ＣＸｐａｋ Ｐ、ＩＥＣ ＣＭ（例えばタイプ825, 2825, 5025, LG）、ＩＥＣ ＳＰ（例えばタイプ420N, 825）、ＩＥＣ ＱＡ（例えばタイプLG, 825）がShoko America Inc.より入手可能、５０Ｗカチオン交換樹脂がEichrom Technologies Incより入手可能、などがある。一実施態様では、Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ（登録商標）Ｈｉｇｈ Ｓ若しくは２５Ｓ、ＭａｃｒｏＣａｐ ＳＰ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）ＳＰ ６５０Ｍ、Ｓｏｕｒｃｅ Ｓ、ＳＰセファロース、ＰＯＬＹＣＡＴ Ａ、Ｍｏｎｏ Ｓ又はＨｉｇｈｓｃｒｅｅｎ ＳＰなどのカチオン交換材は強カチオン交換材である。
当業者には、例えばポリペプチドのアミノ酸配列を、このアミノ酸配列をコードする対応の核酸配列に変換する手順及び方法は公知である。従って、核酸は、それぞれヌクレオチドからなる核酸配列と、それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列により特徴づけられる。
本明細書内で使用される「結合に適した条件下で」という用語及び文法的に同等の用語は、例えば抗体アイソフォームなどの目的とする物質が、固体相、例えばイオン交換材と接触させられるとこれに結合することを示す。これは、目的とする物質が必ずしも１００％結合されることは意味しないが、目的とする物質の事実上１００％が、すなわち目的とする物質の少なくとも５０％が、好ましくは目的とする物質の少なくとも７５％が、目的とする物質の８５％が、より好ましくは目的とする物質の少なくとも９５％が、固定相に結合される。
「治療用抗体」という用語は、ヒト治療用の承認を受けるために臨床試験される抗体であり、疾患治療のために個体に投与されうる。一実施態様では、抗体は治療用抗体である。別の実施態様では、治療用抗体は、モノクローナル抗体である。さらに別の実施態様では、治療用抗体は、ヒト抗体遺伝子座で形質転換された大型類人猿又は動物から得るか、ヒトモノクローナル抗体又はヒト化モノクローナル抗体である。一実施態様では、治療用抗体はヒトモノクローナル抗体である。さらに別の実施態様では、治療用抗体モノクローナルはヒト化抗体である。治療用抗体は、腫瘍性疾患（例えば非ホジキンリンパ腫、乳癌及び結腸直腸癌を含む血液系腫瘍や固形腫瘍）、免疫性疾患、中枢神経疾患、血管性疾患又は感染性疾患などの様々な疾患の治療に広く使用されている。このような抗体は、一実施態様では、ＡＬＫ、接着関連キナーゼ受容体（例えばAxl）、ＥＲＢＢ受容体（例えばEGFR, ERBB2, ERBB3, ERBB4)、エリスロポエチン産生肝細胞（EPH）受容体（例えばEphA1; EphA2, EphA3, EphA4, EphA5, EphA6, EphA7, EphA8, EphB1, EphB2, EphB3, EphB4, EphB5, EphB6）、繊維芽細胞成長因子（FGF）受容体（例えばFGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FGFR5）、Ｆｇｒ、ＩＧＦ１Ｒ、インスリン受容体、ＬＴＫ、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＭＵＳＫ、血小板由来成長因子（PDGF）受容体（例えばPDGFR-A, PDGFR-B)、RET、ROR1、ROR2、ROS、RYK、血管内皮成長因子（VEGF）受容体（例えばVEGFR1/FLT1, VEGFR2/FLK1, VEGF3）、免疫グロブリン様とＥＧＦ様ドメインを有するチロシンキナーゼ（TIE）受容体（例えばTIE-1, TIE-2/TEK)、Ｔｅｃ、ＴＹＲＯ１０、インスリン様成長因子（IGF）受容体（例えばINS-R, IGF-IR, IR-R）、ジスコイジンドメイン（DD）受容体（例えばDDR1, DDR2)、ｃ-Ｍｅｔの受容体（MET）、recepteur d'origine nantais （RON、マクロファージ刺激１受容体としても知られる）、Ｆｌｔ３（フィン関連キナーゼ３）、コロニー刺激因子１
（CSF1）受容体、ｃ-ｋｉｔの受容体（KIT又はSCFR）、インスリン受容体関連（IRR）受容体、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ３３、ＣＤ５２、Ｇ２５０、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＣＤ５６、ＣＥＡ、ルイスＹ抗原又はＩＬ-６受容体に対する。
（CSF1）受容体、ｃ-ｋｉｔの受容体（KIT又はSCFR）、インスリン受容体関連（IRR）受容体、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ３３、ＣＤ５２、Ｇ２５０、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＣＤ５６、ＣＥＡ、ルイスＹ抗原又はＩＬ-６受容体に対する。
「抗体」という用語は、全抗体と抗体断片を含む様々な態様の抗体構造を包含する。ここで報告される抗体は、一実施態様ではヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体又はＴ細胞抗原枯渇抗体である。抗体の遺伝子操作は、例えばMorrison, S.L.ら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; 米国特許第5,202,238号及び米国特許第5,204,244号；Riechmann, L.ら, Nature 332 (1988) 323-327; Neuberger, M.S.ら, Nature 314 (1985) 268-270; Lonberg, N., Nat. Biotechnol. 23 (2005) 1117-1125に記述されている。重鎖定常領域のアミノ酸配列により、抗体は次のクラスに分類される：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ。これらのクラスの一部はさらに以下のサブクラス（アイソタイプ）、すなわちＩｇＧはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４に、又はＩｇＡはＩｇＡ１とＩｇＡ２に分けられる。抗体が属する免疫グロブリンのクラスによると、重鎖定常領域はそれぞれα（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）及びμ（ＩｇＭ）と呼ばれる。「ヒトＩｇＧ１クラスの抗体」という用語は、定常領域のアミノ酸配列がヒトＩｇＧ１由来である抗体を指す。この用語はヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体及び抗体コンジュゲートを含む。
非ヒト（例えば齧歯類）抗体の「ヒト化」形態とは、非ヒト抗体及びヒト抗体由来の部分的な配列を有するキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体はヒト抗体（レシピエント抗体）由来であり、超可変領域の残基が、所望の特異性と親和性を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種の超可変領域（ドナー抗体）の残基で置き換えられている。ヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている例もある。また、ヒト化抗体は、さらなる修飾、例えばレシピエント抗体にもドナー抗体にも見られないアミノ酸残基を有しうる。このような修飾により、このようなレシピエント又はドナー抗体の、親配列と相同性はあるものの同一ではないバリアントが生じる。これらの修飾は、抗体の働きをさらに正確にするため行われる。
一般に、ヒト化抗体は少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインを実質的に含み、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒトドナー抗体の超可変ループに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒトレシピエント抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、典型的にはヒト抗体の定常領域の少なくとも一部分を含んでよい。
非ヒト抗体のヒト化の方法が当分野で記述されている。一実施態様では、ヒト化抗体は、非ヒト源由来の１または複数のアミノ酸残基が導入されている。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば「移入」残基と呼ばれ、典型的には「移入」可変ドメインから取られる。ヒト化は、基本的にはウインターらの方法に従い超可変領域の配列を対応する非ヒト抗体の配列で置き換えることでなされ得る。従って、このような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ない部分が対応する非ヒト種の配列で置き換えられている。実際には、ヒト化抗体は典型的にはヒト抗体であり、一部の超可変領域残基とおそらくは一部のフレームワーク領域残基が齧歯類か非ヒト霊長類抗体の類似部位由来の残基で置き換えられている。
「モノクローナル抗体」という用語はここでは実質的に均質な抗体集団から得られた抗体、すなわち少量で存在しうる自然に生じる変異を除き集団を構成する個々の抗体が同一である抗体を意味する。モノクローナル抗体は特異性が高く、１つの抗原部位に対する。さらに、異なる抗原部位（決定基又はエピトープ）に対する別々の抗体を含むポリクローナル抗体調製物と違って、各モノクローナル抗体は抗原の１つの抗原部位に対する。特異性に加えてモノクローナル抗体が有利であるのは、他の抗体に汚染されず合成されうることである。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体の特徴を示すのであって、何らかの特別な方法で抗体を生産する必要があると解釈されるものではない。
「キメラ抗体」という用語は通常、組換えＤＮＡ手法により調製される、第１の種由来の可変ドメインすなわち結合領域と、別の第２のソース又は種由来の定常領域の少なくとも一部分を有する抗体を意味する。
抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体の鎖をコードする核酸配列に適切な修飾を導入することにより、又はペプチド合成により、調製されうる。このような修飾は、例えば、インターフェロンのアミノ酸配列内の残基の欠失及び／又は挿入及び／又は置換を含む。親抗体と同じく抗原結合特性を有するのであれば、欠失、挿入及び置換を任意組み合わせて最終的なコンストラクトを作ってよい。
一般的なアミノ酸置換を表１の「好ましい置換」の項目に示す。より実質的な変更を以下の表の「例示的置換」の項目に記載し、詳細はアミノ酸側鎖のクラスに関連して後述する。アミノ酸置換は抗体の鎖に導入してもよく、その産物は親抗体の生物学的活性を保持するかスクリーニングされる。
［表］
［表］
アミノ酸は側鎖の共通の特性により分類されうる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の方向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の方向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非一般的な置換は、これらのクラスの１のメンバーを別のクラスと交換することを伴いうる。
Hudziak, R.M.ら, Mol. Cell. Biol. 9 (1989) 1165-1172は、ヒト乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３を使用することを特徴とするＨＥＲ２抗体のパネルの作製について記述している。抗体曝露後のＳＫ−ＢＲ−３細胞の類似細胞の増殖は、７２時間後単層のクリスタルバイオレット染色により決定された。このアッセイを使用して、細胞増殖を５６％阻害した４Ｄ５と呼ばれる抗体により最大の阻害が得られた。このアッセイではパネルの他の抗体による細胞増殖の減少の程度はより低かった。抗体４Ｄ５はまた、ＨＥＲ-２を過剰発現する乳癌腫瘍細胞株を、ＴＮＦ-αの細胞毒性効果に対し感作させることが見いだされた（米国特許第5,677,171号も参照のこと）。Hudziak, R.M.らに論じられるＨＥＲ２抗体はまた、Fendly, B.M.ら, Cancer Research 50 (1990) 1550-1558; Kotts, C.E.ら, In Vitro 26 (1990) 59A; Sarup, J.C.ら, Growth Regulation 1 (1991) 72-82; Shepard, H.M.ら, J. Clin. Immunol. 11 (1991) 117-127; Kumar, R.ら, Mol. Cell. Biol. 11 (1991) 979-986; Lewis, G.D.ら, Cancer Immunol. Immunother. 37 (1993) 255-263; Pietras, R.J.ら, Oncogene 9 (1994) 1829-1838; Vitetta, E.S.ら, Cancer Research 54 (1994) 5301-5309; Sliwkowski, M.X.ら, J. Biol. Chem. 269 (1994) 14661-14665; Scott, G.K.ら, J. Biol. Chem. 266 (1991) 14300-14305; D'souza, B.ら, Proc. Natl. Acad. Sci. 91 (1994) 7202-7206; Lewis, G.D.ら, Cancer Research 56 (1996) 1457-1465; 及びSchaefer, G.ら, Oncogene 15 (1997) 1385-1394でも特徴づけられている。
組換えヒト化バージョンのマウスＨＥＲ２抗体４Ｄ５（huMAb4D5-8, rhuMab HER2, トラスツズマブ又はハーセプチン（登録商標）；米国特許第5,821,337号参照）は、広範な抗癌治療を以前に受けている、ＨＥＲ２を過剰発現する転移性乳癌患者において臨床的に活性がある（Baselga, J.ら, J. Clin. Oncol. 14 (1996) 737-744）。トラスツズマブは、ＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する腫瘍を有する転移性乳癌患者の治療のために、１９９８年９月２５日食品医薬品局より販売承認を取得した。
米国特許第5,821,337号の表３に記載のｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ハーセプチン（登録商標））を含むヒト化抗ＥｒｂＢ２抗体は本明細書に参照として明白に組み込まれ、ヒト化５２０Ｃ９（国際公開第93/21319号）と国際公開第01/000245号に記載のヒト化２Ｃ４抗体は本明細書に参照として明白に組み込まれる。
様々な特性をもつ他のＨＥＲ２がTagliabue, E.ら, Int. J. Cancer 47 (1991) 933-937; McKenzie, S.J.ら, Oncogene 4 (1989) 543-548; Maier, L.A.ら, Cancer Res. 51 (1991) 5361-5369; Bacus, S.S.ら, Molecular Carcinogenesis 3 (1990) 350-362; Stancovski, I.ら, PNAS USA 88 (1991) 8691-8695; Bacus, S.S.ら, Cancer Research 52 (1992) 2580-2589; Xu, F.ら, Int. J. Cancer 53 (1993) 401-408; 国際公開第94/00136号; Kasprzyk, P.G.ら, Cancer Research 52 (1992) 2771-2776; Hancock, M.C.ら, Cancer Res. 51 (1991) 4575-4580; Shawver, L.K.ら, Cancer Res. 54 (1994) 1367-1373; Arteaga, C.L.ら, Cancer Res. 54 (1994) 3758-3765; Harwerth, I.M.ら, J. Biol. Chem. 267 (1992) 15160-15167; 米国特許第5,783,186号; 及び Klapper, L.N.ら, Oncogene 14 (1997) 2099-2109に記載されている。
ペルツズマブ（例えば国際公開第01/000245号参照）は、ＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）として知られる最初の新クラスの薬剤である。ペルツズマブはＨＥＲ２の二量体化ドメインに結合してＨＥＲ２が活性な二量体受容体複合体を形成する能力を阻害するので、最終的に細胞成長と分割をもたらす下流のシグナルカスケードが阻害される（Franklin, M.C., Cancer Cell 5 (2004) 317-328参照）。ペルツズマブは、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに対する完全ヒト化組換えモノクローナル抗体である。ペルツズマブがヒト上皮細胞のＨＥＲ２に結合すると、ＨＥＲ２が他のＨＥＲファミリーメンバー（EGFR、HER3、HER4を含む）と結合しての複合体の形成及びおそらくＨＥＲ２のホモ二量体化も阻害される。複合体の形成を阻害することで、ペルツズマブは、成長刺激効果並びにＨＥＲ１、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４のリガンド（ＥＧＦ、ＴＧＦα、アンフィレグリン及びヘレグリン）に活性化される細胞生存シグナルを阻止する。ペルツズマブの別名は２Ｃ４である。ペルツズマブは、ヒトＩｇＧ１（Ｋ）フレームワーク配列に基づく完全ヒト化組換えモノクローナル抗体である。ペルツズマブは、２つの重鎖（４４９残基）と２つの軽鎖（２１４残基）で構成される。トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））と比べ、ペルツズマブは軽鎖で１２アミノ酸が異なり、ＩｇＧ１重鎖で２９アミノ酸が異なる。
「疎水性」という用語は、主要な又は全ての分子間作用がファンデルワース相互作用により主に特徴づけられる化合物を意味する。この文脈での「主に」という用語は、基本的には、親水性の化合物もまた可能であることを意味し、各分析物の化学的及び／又は物理的性質の一般的な特徴にとってあまり重要ではない。本発明の文脈での「疎水性」の反語は、「親水性」という用語であり、水素結合により特徴づけられる強い極性及び／又はプロトン性の特徴を有する化合物を指す。一実施態様では、イオン交換クロマトグラフィー剤のマトリックスは疎水性マトリックスである。
「プロトン性」という用語は、プロトン（単数又は複数）を有する及び／又は放出する及び／又は水素結合（単数又は複数）を形成する特性を意味し、例えば水、アルコール、アミンなどがある。分子からのプロトン放出は、当業者には解離としても知られる。もっとも単純なプロトン性溶媒は水であり、プロトンとヒドロキシルイオンに単純に解離する。公知のプロトン性溶媒は例えばアルコール類であり、一般にプロトンの放出は、以前のヒドロキシル基の負に帯電した酸素原子から離れるヒドロキシル基で生じるが、これは電気的陰性の酸素原子は結果として生じる負電荷を安定させることができるからである。カルボン酸でも、カルボキシル官能からのプロトンの放出が例えば特定の溶液中で溶解されるような特定の物質との化学的反応をもたらさないのであれば、プロトン性溶媒とみなされうる。プロトン性溶媒の他の群としては、アミノ基中に「プロトン」厳密には水素原子及びフリーな電子対を対応する窒素原子に有して水素結合を形成するアミン類がある。
「移動相」という用語は、クロマトグラフィーカラムから分析物を溶出するのに適した水及び／又は水性バッファー及び有機溶媒の任意の混合物を指す。「溶出」又は「溶出する」という用語は、本発明の文脈では当業者に知られるとおりの意味を有し、流体が浸透した固体又は吸着剤すなわち物質（単数又は複数）が吸着されたカラム剤の吸着物質（単数又は複数）の溶解又は任意で除去を意味する。
「吸着」という用語は、流体すなわち移動相の物質が、流体がある物質とともに形成する境界相に累積することを指し、境界相はその表面に物質を吸着することができる。この吸着により、特定の表面に吸着された物質が累積する。表面に物質を累積させることができる物質は、しばしば吸着剤と呼ばれ、吸着される物質は吸着物と呼ばれる。吸着という用語は、表面への累積後、累積物が吸着固体や累遺体の内部に浸透することも意味する「吸収」という用語と通常は区別して使われる。一般に、吸着は、物質、通常は分子が吸着剤の表面に接着し、各表面に累積する物理的プロセスである。この接着を担う力は、化学的結合よりも物理的力であると考えられているので、吸着は、当分野では、物理的な吸着すなわち物理吸着としても知られているが、必ずしも物質が表面に化学結合することを排除するものではない。物質が表面に吸着するのに必要な物理的力は、多くの場合はファンデルワース力、ロンドン力又は双極子／双極子相互作用であり、例えば水素結合や双極子誘導双極子相互作用などがあり、これらの用語は上述のように使用されるか、吸着の文脈で通常使用されるものである。
（カラム）クロマトグラフィーでは、通常溶媒は溶出液すなわち溶出剤として使用され、溶出される物質（単数又は複数）が少なくとも十分に溶解可能である。
「膨張性マトリックス」は、三次元ネットワークの形成において互いに化学的又は物理的に結合したモノマーを基本とする任意の膨張性ポリマーゲルである。化学的結合性は結合形成により達成されるが、膨張性マトリックスの物理的構造は、ポリマーの各セグメントの単一の領域間の静電的、疎水的及又は双極子／双極子相互作用に基づきうる。「膨張性マトリックス」は、一実施態様では、三次元ネットワークが化学的結合形成を通じて得られるポリマーゲルを意味する。ネットワーク自体は、１または複数の異なる成分からなりうる。適切な溶媒の存在下、ネットワークは、各溶媒が取込み体積の平衡体積が得られるまで三次元ネットワークに同時に取り込まれて膨張する。ネットワークが膨張した状態を表す別の用語としてゲルが知られ、非膨張状態はゲル化剤（gelator）として知られる。本発明の文脈では、膨張性マトリックスは、ゲル化剤という用語の意味も包含する。
「膨張性マトリックス」という用語は、親水性であるが水不溶性の、溶媒としての水の存在下で膨張するポリマーのみを意味する。膨張性マトリックスの水に対する親和性は、ポリマーネットワークの救済（salvation）とエントロピー効果による。水以外にも純粋な親水性有機溶媒、例えばメタノール、エタノール及びジメチルホルムアミド並びに可変量でこれらの有機溶媒をそれぞれ含む水性溶液も、膨張性マトリックスの膨張をもたらし、ここで親水性という用語は上述のとおり理解される。従って、膨張性マトリックスとは、ネットワークに水を取り込んで膨張するゲルに限定されず、親水性の有機溶媒及び／又はその水性溶液及び／又は可変成分の混合物の存在下で膨張するゲルも含む。
膨張性マトリックスを含む文脈において、架橋結合は非常に重要である。なぜなら、架橋結合によって三次元構造がもたらされ、マトリックスが膨張する挙動を可能にする空洞が形成されるからである。さらに、架橋結合の程度は、得られる膨張性マトリックスの孔のサイズを左右する。
したがって、ここで報告される一態様は、抗体調製物中の抗体アイソフォームを濃縮する方法であって、
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームが濃縮された抗体調製物を得る工程
を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を５０％以下で上回る。
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームが濃縮された抗体調製物を得る工程
を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を５０％以下で上回る。
一実施態様は、抗体調製物中の抗体アイソフォームを濃縮する方法であって、
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームが濃縮された抗体調製物を得る工程
を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１０％以下で上回る。
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームが濃縮された抗体調製物を得る工程
を有し、第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１０％以下で上回る。
工程（ａ）の溶液は、一実施態様では工程（ｂ）の溶液と同じ導電率を有する。
「抗体アイソフォーム」という用語は、同じ抗体の別のアイソフォームに対しわずかに異なる抗体のバージョンを意味する。「同じ抗体」とは、特定のアイソフォームの修飾（単数又は複数）を除いて同じアミノ酸配列を有する抗体である。抗体をコードする配列の転写又は翻訳の途中で抗体の異なる形態が生じることや、細胞からの抗体のプロセシング及び分泌から、生成、形成及び保存中の分解から生じる差異もある。抗体アイソフォームは、アミノ酸配列、多量体化、糖鎖付加及び他の翻訳後の修飾において異なりうる。「グリコフォーム」とは、様々なバージョンのグリコタンパク質に翻訳後修飾により異なる多糖類が結合したアイソフォームである。抗体の重鎖Ｃ末端側のリジン残基のプロセシングもまた、抗体構造の多様性の原因となりうる。
抗体調製物中の抗体アイソフォームは、カチオン交換カラムクロマトグラフィー法を用いて濃縮又は部分的分離も可能であることが見いだされている。これは、直線的又はステップの、ｐＨ又は塩グラジエントを用いる結合・溶出クロマトグラフィー法を用いてクロマトグラフィー材から抗体を回収することで得られうる。この方法は、わずかな勾配、すなわち開始値の５０％以下、特に開始値の１０％以下の相対的なｐＨ値の変化又は導電率の増加を有するグラジエントを使用すると特に有効である。異なる抗体アイソフォームは、少なくともセミ分離（semi-detached）ピークとして対応するクロマトグラム中に目視できるので、抗体調製物のアイソフォーム組成は、クロマトグラムの各ピークにまたがる選択され組み合わされた溶出断片に基づき調節可能である。
詳細には、抗体調製物中の抗体アイソフォームの濃縮は、カチオン交換クロマトグラフィー材に添加される移動相の導電率の適切な増加により得られうることがわかっている。
「抗体調製物」という用語は、同じ抗体の異なるアイソフォームを含む混合物を意味する。
図１では、２０ｖｏｌ％の溶出バッファーから６０ｖｏｌ％の溶出バッファーの直線グラジエントを用いたカラムクロマトグラフィー分離の溶出クロマトグラムを示す（洗浄バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含み、溶出バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと１００ｍＭの塩化ナトリウムを含む）。抗体アイソフォームが単一のピークで回収されていることがわかる。単一のプレピークが見られる。
図２では、２４ｖｏｌ％の溶出バッファーのステップグラジエントを用いたカラムクロマトグラフィー分離の溶出クロマトグラムを示す（洗浄バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含み、溶出バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと１００ｍＭの塩化ナトリウムを含む）。抗体アイソフォームがセミ分離ピークで回収されていることがわかる。
図３では、１５ｖｏｌ％の溶出バッファーのステップグラジエントを用いたカラムクロマトグラフィー分離の溶出クロマトグラムを示す（洗浄バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含み、溶出バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと８０ｍＭの塩化ナトリウムを含む）。抗体アイソフォームが２つのセミ分離ピークで回収されていることがわかり、最初のピークはプレピークを示している。
図４では、１００ｖｏｌ％の溶出バッファーのステップグラジエントを用いたカラムクロマトグラフィー分離の溶出クロマトグラムを示す（洗浄バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含み、溶出バッファーは２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと５ｍＭの塩化ナトリウムを含む）。抗体アイソフォームが３つのセミ分離ピークで回収されていることがわかる。
図５は、導電率が１００％から１５９％に増加された、シングルステップの溶出法を用いたカラムクロマトグラフィー分離の溶出クロマトグラム。抗体は単一ピークとして回収されていることがわかる。
図６では、１００ｖｏｌ％の第１バッファー溶液から６０ｖｏｌ％の第２バッファー溶液の直線グラジエントを用いたカラムクロマトグラフィー分離の溶出クロマトグラムを示す（第１バッファーは２５ｍＭのＴＲＩＳと１０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、第２バッファーは２５ｍＭのＴＲＩＳと７０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、いずれのバッファーもｐＨ値は７．４）。抗体アイソフォームが３ピークで回収されていることがわかる。
一実施態様では、導電率は５０％以下の増加、すなわち導電率は１５０％以下まで増加する。従って、第２溶液の導電率は第１溶液の導電率の１０１％から１５０％である。増加はシングルステップ又は直線グラジエントの形態でありうる。増加は、溶出溶液の完全な変更、すなわち第１（＝洗浄）溶液１００％から第２（＝溶出）溶液１００％への変更により実施されうる。
一実施態様では、導電率は１０％以下の増加、すなわち導電率は１１０％以下まで増加する。従って、第２溶液の導電率は第１溶液の導電率の１０１％から１１０％である。増加はシングルステップ又は直線グラジエントの形態でありうる。増加は、溶出溶液の完全な変更、すなわち第１（＝洗浄）溶液１００％から第２（＝溶出）溶液１００％への変更により実施されうる。
一実施態様では、直線グラジエントは、それぞれ異なる勾配を有する３つのグラジエントを含む。
一実施態様では、第１直線グラジエントは１８から２０カラムボリュームであり、第２直線グラジエントは２から４カラムボリュームであり、第３直線グラジエントは６から８カラムボリュームである。一実施態様では、第１直線グラジエント第１溶液の導電率の約１１５％まで、第２直線グラジエントは第１溶液の導電率の約１３７％まで、第３直線グラジエントは第１溶液の導電率の約１５０％までである。
カチオン交換クロマトグラフィー材のマトリックスは、膨張性マトリックスでなければならないこともわかっている。一実施態様では、マトリックスは架橋結合した糖類である。さらに別の実施態様では、糖類は多糖類である。別の実施態様では、多糖類はアガロースすなわちグリコシド結合のＤ-ガラクトースと３,６-無水-Ｌ-ガラクトースからなる多糖である。
したがって、ここで報告される別の態様は、抗体調製物を生産する方法であって、
（ａ）抗体をコードする核酸を有する哺乳動物細胞を培養し、抗体を細胞又は培地から回収する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程により抗体を精製する工程を有し、この少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程が、
（ｉ）カチオン交換クロマトグラフィー材に抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液を添加する工程と、
（ｉｉ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｉｉｉ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加して抗体調製物を生産する工程を有し、
これにより第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１０％以下で上回る。
（ａ）抗体をコードする核酸を有する哺乳動物細胞を培養し、抗体を細胞又は培地から回収する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程により抗体を精製する工程を有し、この少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程が、
（ｉ）カチオン交換クロマトグラフィー材に抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液を添加する工程と、
（ｉｉ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームとカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｉｉｉ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加して抗体調製物を生産する工程を有し、
これにより第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１０％以下で上回る。
一実施態様では、方法は、大量生産の方法である。別の実施態様では、大量とは１ｇ以上の抗体調製物である。
以下の実施例と図は本発明の理解を助けるために提供され、本発明の真の範囲は請求項に記載される。本発明の精神から逸脱することなく記載の手順に変更を加えうることが理解される。
材料と方法
ここで報告される、方法で使用されうる例示的免疫グロブリンは、国際公開第92/022653号、国際公開第99/057134号、国際公開第97/04801号、米国特許第5,677,171号及び米国特許第5,821,337号（参照により本明細書に組み込まれる）に報告されている抗ＨＥＲ２抗体である。
分析的分子ふるいクロマトグラフィー:
樹脂：ＴＳＫ ３０００（Tosohaas）
カラム：３００×７．８ｍｍ
流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
緩衝液：２５０ｍＭ塩化カリウムを含む２００ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ７．０に調節
波長：２２０ｎｍ
分析的ＩＥ−ＨＰＬＣ
樹脂：Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃＴＭ ＷＣＸ−１０ 分析グレード
カラム：４×２５０ｍｍ
流量：０．８ｍｌ／ｍｉｎ
バッファーＡ：１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に調節
バッファーＢ：１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に調節及び０．１Ｍ塩化ナトリウムを添加
開始条件：８５ｖｏｌ％バッファーＡと１５ｖｏｌ％バッファーＢ
グラジエント：５５ｖｏｌ％バッファーＢまで９カラムボリューム
検出波長：２１４ｎｍ
試料の量：５０μｇ
ここで報告される、方法で使用されうる例示的免疫グロブリンは、国際公開第92/022653号、国際公開第99/057134号、国際公開第97/04801号、米国特許第5,677,171号及び米国特許第5,821,337号（参照により本明細書に組み込まれる）に報告されている抗ＨＥＲ２抗体である。
分析的分子ふるいクロマトグラフィー:
樹脂：ＴＳＫ ３０００（Tosohaas）
カラム：３００×７．８ｍｍ
流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
緩衝液：２５０ｍＭ塩化カリウムを含む２００ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ７．０に調節
波長：２２０ｎｍ
分析的ＩＥ−ＨＰＬＣ
樹脂：Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃＴＭ ＷＣＸ−１０ 分析グレード
カラム：４×２５０ｍｍ
流量：０．８ｍｌ／ｍｉｎ
バッファーＡ：１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に調節
バッファーＢ：１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に調節及び０．１Ｍ塩化ナトリウムを添加
開始条件：８５ｖｏｌ％バッファーＡと１５ｖｏｌ％バッファーＢ
グラジエント：５５ｖｏｌ％バッファーＢまで９カラムボリューム
検出波長：２１４ｎｍ
試料の量：５０μｇ
試料とカルボキシペプチダーゼＢを試料バッファーを用いて最終濃度１ｍｇ／ｍｌまで希釈する。希釈した試料溶液に１％（ｗ／ｗ）の希釈カルボキシペプチダーゼ溶液を加える。
実施例１
６０ｖｏｌ％溶出バッファーまでの組合せグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上でのクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーンＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び１００ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
ステップと直線グラジエントの組合せ
２０％溶出バッファーまでステップ、その後は６０％溶出バッファーまで直線グラジエント
６０ｖｏｌ％溶出バッファーまでの組合せグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上でのクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーンＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び１００ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
ステップと直線グラジエントの組合せ
２０％溶出バッファーまでステップ、その後は６０％溶出バッファーまで直線グラジエント
溶出クロマトグラムを図１に示す。抗体アイソフォームが単一のピークで回収できることがわかる。わずかなプレピークが見られる。
実施例２
２４ｖｏｌ％溶出バッファーまでのステップグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーンＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び１００ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
シングルステップグラジエント
２４％溶出バッファーまでステップ、２０カラムボリュームで溶出
２４ｖｏｌ％溶出バッファーまでのステップグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーンＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び１００ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
シングルステップグラジエント
２４％溶出バッファーまでステップ、２０カラムボリュームで溶出
溶出クロマトグラムを図２に示す。抗体アイソフォームがセミ分離ピークで回収できることがわかる。
実施例３
１５ｖｏｌ％溶出バッファーまでのステップグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーン ＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び８０ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
シングルステップグラジエント
１５％溶出バッファーまでステップ、２０カラムボリューム
１５ｖｏｌ％溶出バッファーまでのステップグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーン ＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び８０ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
シングルステップグラジエント
１５％溶出バッファーまでステップ、２０カラムボリューム
溶出クロマトグラムを図３に示す。抗体アイソフォームは２つのセミ分離ピークで回収できることがわかり、最初のピークはプレピークを示している。
実施例４
１００ｖｏｌ％溶出バッファーまでのステップグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーンＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び５ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
シングルステップ
１００％溶出バッファーまでシングルステップ、２０カラムボリュームで溶出
１００ｖｏｌ％溶出バッファーまでのステップグラジエント溶出、ＳＰ−セファロース上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ハイスクリーンＳＰ−セファロース
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
ローディング：１ｇタンパク質／ｌクロマトグラフィー材
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節及び５ｍＭ塩化ナトリウムを添加
溶出法：
シングルステップ
１００％溶出バッファーまでシングルステップ、２０カラムボリュームで溶出
溶出クロマトグラムを図４に示す。抗体アイソフォームが３つのセミ分離ピークで回収できることがわかる。
実施例５
１００ｖｏｌ％溶出バッファーまでのｐＨグラジエント溶出、モノＳ強カチオン交換樹脂上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：モノＳ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に調節
溶出法：
グラジエント溶出
０％から１００％溶出バッファー
１００ｖｏｌ％溶出バッファーまでのｐＨグラジエント溶出、モノＳ強カチオン交換樹脂上のクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：モノＳ
平衡：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
洗浄：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．２に調節
溶出：５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に調節
溶出法：
グラジエント溶出
０％から１００％溶出バッファー
アイソフォームは３つのセミ分離ピークとして回収できる。
実施例６
比較例−強カチオン交換樹脂（ＳＰ−セファロース）を用いての、モノクローナル抗ＨＥＲ-２抗体のクロマトグラフィーによる分離（国際公開第99/57134号）
強カチオン交換樹脂のＳＰ−セファロース上でのカチオン交換クロマトグラフィーを用いたモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体（ハーセプチン（登録商標））の精製を行った。標準的条件下、すなわち、例えば塩化ナトリウムを用いたステップ溶出では、抗体のモノマー形態と凝集形態の分離は得られなかった（図５）。
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ＳＰ−セファロース
流量：１６０ｃｍ／ｈ
平衡：２５ｍＭ２-モルホリノエタンスルホン酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．６に調節
ローディング：最高２０ｇタンパク質／Ｌゲルマトリックス
洗浄：２５ｍＭ２-モルホリノエタンスルホン酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．６に調節
溶出：２５ｍＭ２-モルホリノエタンスルホン酸、９５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．６に調節
比較例−強カチオン交換樹脂（ＳＰ−セファロース）を用いての、モノクローナル抗ＨＥＲ-２抗体のクロマトグラフィーによる分離（国際公開第99/57134号）
強カチオン交換樹脂のＳＰ−セファロース上でのカチオン交換クロマトグラフィーを用いたモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体（ハーセプチン（登録商標））の精製を行った。標準的条件下、すなわち、例えば塩化ナトリウムを用いたステップ溶出では、抗体のモノマー形態と凝集形態の分離は得られなかった（図５）。
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ＳＰ−セファロース
流量：１６０ｃｍ／ｈ
平衡：２５ｍＭ２-モルホリノエタンスルホン酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．６に調節
ローディング：最高２０ｇタンパク質／Ｌゲルマトリックス
洗浄：２５ｍＭ２-モルホリノエタンスルホン酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．６に調節
溶出：２５ｍＭ２-モルホリノエタンスルホン酸、９５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．６に調節
モノクローナル抗ＨＥＲ-２抗体を、タンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィーを用いて第１ステップで精製した。タンパク質Ａカラムからの溶出は酸性条件下で行う（１０ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ値３．０±０．５）。濾過工程の前に、抗体を含む画分のｐＨ値を濃縮トリ-ヒドロキシメチル-アミノ-メタン（トリス）バッファーでｐＨ５．６に調節する。タンパク質Ａ溶出液は、タンパク質濃度５ｍｇ／ｍｌから１５ｍｇ／ｍｌの溶液であり、クエン酸ナトリウムで希釈される。
調整したタンパク質Ａ溶出液を、強カチオン交換樹脂（ＳＰ−セファロース）を含むクロマトグラフィーカラムに添加した。流量１６０ｃｍ／ｈでのローディング工程後、カラムを平衡バッファー（１０カラムボリューム）で洗浄した。結合した免疫グロブリンをシングルステップ溶出法を用いて溶出することで、ｐＨ値は一定に保たれ、導電率は塩化ナトリウム濃度の（ステップワイズの）増加で変動された。溶液クロマトグラムを図５に示す。
モノマー形態と凝集形態の分離は得られなかった。
実施例７
６０ｖｏｌ％溶出バッファーまでのグラジエント溶出を用いるＳｏｕｒｃｅＴＭ１５Ｓ上でのクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ＳｏｕｒｃｅＴＭ１５Ｓ
カラムボリューム：１．１４ｌ
流量：１００ｃｍ／ｈ
平衡：２５ｍＭトリス、１０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４に調節
ローディング：０．８８ｇタンパク質／１クロマトグラフィー材
洗浄：２５ｍＭトリス、１０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４に調節
溶出：２５ｍＭトリス、７０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４に調節
溶出法：
グラジエント
３３ｖｏｌ％溶出バッファーまで１９カラムボリューム
５０ｖｏｌ％溶出バッファーまで３カラムボリューム
６０ｖｏｌ％溶出バッファーまで７カラムボリューム
６０ｖｏｌ％溶出バッファーまでのグラジエント溶出を用いるＳｏｕｒｃｅＴＭ１５Ｓ上でのクロマトグラフィー
クロマトグラフィー条件：
樹脂：ＳｏｕｒｃｅＴＭ１５Ｓ
カラムボリューム：１．１４ｌ
流量：１００ｃｍ／ｈ
平衡：２５ｍＭトリス、１０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４に調節
ローディング：０．８８ｇタンパク質／１クロマトグラフィー材
洗浄：２５ｍＭトリス、１０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４に調節
溶出：２５ｍＭトリス、７０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４に調節
溶出法：
グラジエント
３３ｖｏｌ％溶出バッファーまで１９カラムボリューム
５０ｖｏｌ％溶出バッファーまで３カラムボリューム
６０ｖｏｌ％溶出バッファーまで７カラムボリューム
溶出クロマトグラムを図６に示す。抗体アイソフォームが明白なピークで回収できることがわかる。
Claims (16)
- 抗体調製物を生産する方法であって、
（ａ）抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加する工程と、
（ｂ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームのカチオン交換クロマトグラフィー材への吸着が維持される工程と、
（ｃ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加して抗体調製物を得る工程、を有し、
第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を５０％以下で上回る、方法。 - 抗体調製物を生産する方法であって、
（ａ）抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養し、抗体を細胞又は培地から回収する工程と、
（ｂ）少なくとも１つのカラムクロマトグラフィーの工程により抗体を精製する工程、を有し、該少なくとも１つのクロマトグラフィーの工程が、
（ｉ）カチオン交換クロマトグラフィー材に抗体の様々なアイソフォームを含む緩衝液を添加する工程と、
（ｉｉ）第１導電率を有する第１溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加し、抗体アイソフォームのカチオン交換クロマトグラフィー材との結合が維持される工程と、
（ｉｉｉ）第２導電率を有する第２溶液をカチオン交換クロマトグラフィー材に添加して抗体調製物を生産する工程、を有し、
第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を５０％以下で上回る、方法。 - 第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１５％以下で上回ることを特徴とする、請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
- 第２溶液の導電率が第１溶液の導電率を１０％以下で上回ることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
- カチオン交換クロマトグラフィー材が膨張性マトリックスを有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
- 膨張性マトリックスがアガロースであることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
- カチオン交換クロマトグラフィー材が強カチオン交換クロマトグラフィー材であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 強カチオン交換クロマトグラフィー材がスルホプロピル-カチオン交換クロマトグラフィー材であることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
- 第１溶液が第２溶液にシングルステップ又は直線グラジエントで変更されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
- シングルステップが１００ｖｏｌ％の第１溶液から１００ｖｏｌ％の第２溶液への変更であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
- 第１溶液が２０ｍＭクエン酸ナトリウム及び１０ｍＭ塩化ナトリウム、又は２５ｍＭトリス及び１０ｍＭ塩化ナトリウムを含むことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
- 第２溶液が２０ｍＭクエン酸ナトリウム及び５ｍＭ塩化ナトリウム、又は２５ｍＭトリス及び７０ｍＭ塩化ナトリウムを含むことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
- 抗体が抗ＨＥＲ２抗体であることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
- 抗ＨＥＲ２抗体が抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ又は抗ＨＥＲ２抗体ペルツズマブであることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
- 第１溶液の導電率が４ｍＳ／ｃｍから５ｍＳ／ｃｍであることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
- 請求項１〜１５のいずれか１項の方法により得られる抗ＨＥＲ２抗体。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10196287 | 2010-12-21 | ||
| EP10196287.6 | 2010-12-21 | ||
| PCT/EP2011/073245 WO2012084829A1 (en) | 2010-12-21 | 2011-12-19 | Isoform enriched antibody preparation and method for obtaining it |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014500289A true JP2014500289A (ja) | 2014-01-09 |
| JP5838221B2 JP5838221B2 (ja) | 2016-01-06 |
Family
ID=43799680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013545269A Active JP5838221B2 (ja) | 2010-12-21 | 2011-12-19 | アイソフォーム濃縮抗体調製物及びこれを得る方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20140162317A1 (ja) |
| EP (1) | EP2655412B1 (ja) |
| JP (1) | JP5838221B2 (ja) |
| KR (1) | KR101574864B1 (ja) |
| CN (1) | CN103380144B (ja) |
| BR (1) | BR112013012422A2 (ja) |
| CA (1) | CA2820095C (ja) |
| HK (1) | HK1186484A1 (ja) |
| MX (1) | MX357821B (ja) |
| RU (1) | RU2586515C2 (ja) |
| WO (1) | WO2012084829A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019504060A (ja) * | 2016-01-08 | 2019-02-14 | オンコバイオロジクス，インコーポレイティド | モノクローナル抗体のアイソフォームを分離するための方法 |
| JP2021006540A (ja) * | 2014-09-10 | 2021-01-21 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | ガラクトース操作型免疫グロブリン１抗体 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8911964B2 (en) | 2006-09-13 | 2014-12-16 | Abbvie Inc. | Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody |
| SG10201510384UA (en) | 2006-09-13 | 2016-01-28 | Abbvie Inc | Cell culture improvements |
| WO2010048192A2 (en) | 2008-10-20 | 2010-04-29 | Abbott Laboratories | Viral inactivation during purification of antibodies |
| MX2011004200A (es) | 2008-10-20 | 2011-05-24 | Abbott Lab | Aislamento y purificacion de anticuerpos usando la cromatografia de afinidad de proteina a. |
| US9810670B2 (en) | 2012-11-15 | 2017-11-07 | Genentech, Inc. | Ionic strength-mediated pH gradient ion exchange chromatography |
| WO2015064971A1 (ko) * | 2013-10-30 | 2015-05-07 | (주)셀트리온 | 양이온 교환 크로마토그래피를 이용한 항체의 아형 분리 방법 |
| WO2015083853A1 (ko) * | 2013-12-05 | 2015-06-11 | 한화케미칼 주식회사 | 이성질 항체의 함량 조절을 통한 항체 제조 방법 |
| TWI679209B (zh) * | 2017-04-14 | 2019-12-11 | 南韓商Ｃｊ醫藥健康股份有限公司 | 使用陽離子交換層析法純化同功抗體之方法 |
| CN115728433A (zh) * | 2021-08-27 | 2023-03-03 | 联邦生物科技(珠海横琴)有限公司 | IgG4型单克隆抗体电荷异质性的离子交换色谱检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005538176A (ja) * | 2002-09-11 | 2005-12-15 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | タンパク質精製 |
| JP2007525412A (ja) * | 2003-02-28 | 2007-09-06 | ロンザ・バイオロジクス・ピーエルシー | プロテインａおよびイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製 |
| JP2008542218A (ja) * | 2005-05-25 | 2008-11-27 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 抗体の精製法 |
| WO2009058812A1 (en) * | 2007-10-30 | 2009-05-07 | Genentech, Inc. | Antibody purification by cation exchange chromatography |
| JP2013500244A (ja) * | 2009-07-24 | 2013-01-07 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗体製造の最適化 |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5202238A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-13 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
| US5204244A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-20 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
| WO1989006692A1 (en) | 1988-01-12 | 1989-07-27 | Genentech, Inc. | Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function |
| LU91067I2 (fr) | 1991-06-14 | 2004-04-02 | Genentech Inc | Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines |
| WO1993021319A1 (en) | 1992-04-08 | 1993-10-28 | Cetus Oncology Corporation | HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES |
| JPH08504172A (ja) | 1992-06-30 | 1996-05-07 | オンコロジクス，インコーポレイティド | 抗−ｅｒｂＢ−２モノクロナール抗体の組み合わせ物及び使用方法 |
| US5429746A (en) | 1994-02-22 | 1995-07-04 | Smith Kline Beecham Corporation | Antibody purification |
| SI2275119T1 (sl) | 1995-07-27 | 2013-12-31 | Genentech, Inc. | Stabilna izotonična liofilizirana proteinska formulacija |
| US5783186A (en) | 1995-12-05 | 1998-07-21 | Amgen Inc. | Antibody-induced apoptosis |
| DK1308456T3 (da) | 1998-05-06 | 2007-12-27 | Genentech Inc | Antistofoprensning ved ionbytterkromatografi |
| IL146954A0 (en) | 1999-06-25 | 2002-08-14 | Genentech Inc | HUMANIZED ANTI-ErbB2 ANTIBODIES AND TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
| AU2003210802B2 (en) | 2002-02-05 | 2009-09-10 | Genentech Inc. | Protein purification |
| AU2004215653B2 (en) | 2003-02-28 | 2011-03-17 | Lonza Biologics Plc. | Antibody purification by protein A and ion exchange chromatography |
| KR101243425B1 (ko) * | 2004-10-21 | 2013-03-13 | 지이 헬스케어 바이오-사이언시스 에이비 | 항체의 정제 방법 |
| NZ562949A (en) * | 2005-04-11 | 2009-05-31 | Medarex Inc | Protein purification using HCIC and ion exchange chromatography |
| KR20150006085A (ko) * | 2006-04-05 | 2015-01-15 | 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 | 항체 정제 |
| MX2009002014A (es) * | 2006-08-28 | 2009-03-09 | Ares Trading Sa | Proceso para la purificacion de proteinas que contienen fc. |
| EP2114984A2 (en) * | 2007-01-17 | 2009-11-11 | Merck Serono S.A. | Process for the purification of fc-containing proteins |
| CA2726823A1 (en) | 2008-06-03 | 2009-12-10 | Patrys Limited | Process for purification of antibodies |
-
2011
- 2011-12-19 JP JP2013545269A patent/JP5838221B2/ja active Active
- 2011-12-19 RU RU2013132405/10A patent/RU2586515C2/ru active
- 2011-12-19 CN CN201180061353.7A patent/CN103380144B/zh active Active
- 2011-12-19 US US13/994,673 patent/US20140162317A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-19 BR BR112013012422A patent/BR112013012422A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-12-19 MX MX2013007095A patent/MX357821B/es active IP Right Grant
- 2011-12-19 CA CA2820095A patent/CA2820095C/en active Active
- 2011-12-19 WO PCT/EP2011/073245 patent/WO2012084829A1/en active Application Filing
- 2011-12-19 EP EP11802372.0A patent/EP2655412B1/en not_active Revoked
- 2011-12-19 KR KR1020137018847A patent/KR101574864B1/ko active IP Right Grant
-
2013
- 2013-12-18 HK HK13114018.4A patent/HK1186484A1/zh unknown
-
2015
- 2015-11-06 US US14/934,866 patent/US10087237B2/en active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005538176A (ja) * | 2002-09-11 | 2005-12-15 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | タンパク質精製 |
| JP2007525412A (ja) * | 2003-02-28 | 2007-09-06 | ロンザ・バイオロジクス・ピーエルシー | プロテインａおよびイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製 |
| JP2008542218A (ja) * | 2005-05-25 | 2008-11-27 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 抗体の精製法 |
| WO2009058812A1 (en) * | 2007-10-30 | 2009-05-07 | Genentech, Inc. | Antibody purification by cation exchange chromatography |
| JP2013500244A (ja) * | 2009-07-24 | 2013-01-07 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗体製造の最適化 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, vol. 639, JPN6014047993, 1993, pages 41 - 49, ISSN: 0003172171 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021006540A (ja) * | 2014-09-10 | 2021-01-21 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | ガラクトース操作型免疫グロブリン１抗体 |
| JP2019504060A (ja) * | 2016-01-08 | 2019-02-14 | オンコバイオロジクス，インコーポレイティド | モノクローナル抗体のアイソフォームを分離するための方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US10087237B2 (en) | 2018-10-02 |
| US20170066814A1 (en) | 2017-03-09 |
| CA2820095C (en) | 2019-02-26 |
| CN103380144A (zh) | 2013-10-30 |
| MX2013007095A (es) | 2013-07-29 |
| BR112013012422A2 (pt) | 2016-08-30 |
| EP2655412A1 (en) | 2013-10-30 |
| HK1186484A1 (zh) | 2014-03-14 |
| KR20130114209A (ko) | 2013-10-16 |
| RU2586515C2 (ru) | 2016-06-10 |
| JP5838221B2 (ja) | 2016-01-06 |
| RU2013132405A (ru) | 2015-01-27 |
| US20140162317A1 (en) | 2014-06-12 |
| KR101574864B1 (ko) | 2015-12-11 |
| EP2655412B1 (en) | 2018-01-17 |
| CN103380144B (zh) | 2016-03-02 |
| MX357821B (es) | 2018-07-25 |
| WO2012084829A1 (en) | 2012-06-28 |
| CA2820095A1 (en) | 2012-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5838221B2 (ja) | アイソフォーム濃縮抗体調製物及びこれを得る方法 | |
| US10239951B2 (en) | Bispecific HER2 and HER3 antigen binding constructs | |
| JP5681482B2 (ja) | 二重特異性抗体およびその作製方法 | |
| JP6273326B2 (ja) | 移動相の調整によって、ポリペプチド単量体、凝集物およびフラグメントを分離するための選択性を向上させた、イオン交換クロマトグラフィー | |
| JP2022525478A (ja) | クローディン６二重特異性抗体 | |
| Akbari et al. | New insights into affinity proteins for HER2-targeted therapy: Beyond trastuzumab | |
| EP3878861A1 (en) | Cl and/or ch1 mutated antibodies for drug conjugation | |
| AU2020318112C1 (en) | Polypeptide complex for conjugation and use thereof | |
| TW202417506A (zh) | 標靶egfr之雙抗原決定四價抗體 | |
| CA3219950A1 (en) | Purification method of antibody composition |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A529 | Written submission of copy of amendment under article 34 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A529 Effective date: 20130819 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130820 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141111 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150209 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150511 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20151013 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20151109 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5838221 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |