JP2014159407A - 高純度を有する２−［４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの製造方法 - Google Patents

高純度を有する２−［４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの製造方法 Download PDF

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Abstract

【課題】医薬として使用するための、高純度の２−［４−（３−又は２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド化合物の提供。
【解決手段】Ｃ１−Ｃ５低級アルカノールから選択される有機溶媒を、還元反応過程の実質的な部分の間、Ｓｃｈｉｆｆ塩基の懸濁液となることを可能にする適切な量で用いて、Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体２−［４−（３−および２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミドを水素化ホウ素ナトリウムおよび水素化ホウ素カリウムから選択される還元剤で還元することにより製造される、下記式Ｉａ又はＩｂの化合物。
Figure 2014159407

【選択図】なし

Description

本発明は、（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド、即ちサフィナミド（Ｉａ）、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド、即ちラルフィナミド（Ｉｂ）、
Figure 2014159407
それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉ’ｃ）、（Ｉ’ｄ）、および塩のラセミ混合物（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）および（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）から選択される２−［４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド化合物を、高収率であると同時に非常に高いエナンチオマー純度および化学純度で製造する新規方法に関する。
本方法はこれらの大量生産にも非常に有用である。
サフィナミド（ＮＷ−１０１５，ＦＣＥ−２６７４３Ａ，ＰＮＵ−１５１７７４Ｅ）はナトリウムチャネル遮断薬、カルシウムチャネルモジュレーター、モノアミノオキシダーゼＢ（ＭＡＯ−Ｂ）阻害剤、グルタミン酸放出阻害剤及びトーパミン代謝モジュレーターである。
サフィナミドはＣＮＳ障害、特に癲癇、パーキンソン病、アルツハイマー病、鬱病、不穏下肢症候群及び偏頭痛の治療に有用である（国際公開第９０／１４３３４号、国際公開第２００４／０８９３５３号、国際公開第２００５／１０２３００号、国際公開第２００４／０６２６５５号）。
ラルフィナミド（ＮＷ−１０２９，ＦＣＥ−２６７４２Ａ，ＰＮＵ−０１５４３３９Ｅ）は慢性疼痛と神経因性疼痛を含む疼痛症状、偏頭痛、双極性障害、鬱病、心臓血管障害、炎症性障害、尿生殖器障害、代謝障害及び胃腸障害の治療に有用なナトリウムチャネル遮断薬である（国際公開第９９／３５１２５号、国際公開第２００３／０２０２７３号、国際公開第２００４／０６２６５５号、国際公開第２００５／０１８６２７号、国際公開第２００５／０７０４０５号、国際公開第２００５／１０２３００号）。
特に、サフィナミドは、国際公開第９０／１４３３４号に具体的に記載される。サフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、およびこれらの医薬的に許容される酸との塩、ならびに抗てんかん剤、抗パーキンソン病剤、神経保護剤、抗鬱薬、鎮痙剤および／または睡眠剤として有効な薬学的組成物を製造するためのこれらの使用が、国際公開第９０／１４３３４号で具体的に特許請求されている。
ラルフィナミドは、国際公開第９０／１４３３４号に具体的に記載される。ラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、およびこれらの医薬的に許容される酸との塩、ならびに抗てんかん剤、抗パーキンソン病剤、神経保護剤、抗鬱薬、鎮痙剤および／または睡眠剤として有効な薬学的組成物を製造するためのこれらの使用が、国際公開第９０／１４３３４号の特許請求の範囲に含まれている。
さらに、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩の、鎮痛薬としての使用が国際公開第９９／０３５１２５号で特許請求されている。
国際公開第２００６／０２７０５２号Ａ２は、ナトリウムまたはカルシウムチャネル機構が病理学的役割を果たす病状（疼痛、偏頭痛、身体系全体に影響を及ぼす炎症過程、皮膚および関連組織に影響を及ぼす障害、呼吸器系の障害、免疫系および内分泌系の障害、胃腸障害および尿生殖器障害など）の選択的治療のための、ラルフィナミドのＲ−エナンチオマー即ち、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）単体、およびこの医薬的に許容される酸との塩の、選択的ナトリウムおよびカルシウムチャネルモジュレーターとしての使用を具体的に開示して特許請求している。使用においては、上記化合物の治療活性は、どのようなＭＡＯ阻害的副作用も実質的に含まないか、ＭＡＯ阻害的副作用を示したとしても顕著に減少したものである。
従来技術に記載されている方法によるサフィナミドとラルフィナミドの大規模調製物は２種類の望ましくない不純物としてそれぞれ（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）及び（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）：
Figure 2014159407
 とそれらの塩、特にそれぞれのメタンスルホン酸塩（ＩＩｅ）及び（ＩＩｄ）を含有していることが今回判明した。
同じ状況が、従来技術の方法によるサフィナミドおよびラルフィナミドそれぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩、特にメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）、（Ｉ’ｄ）、および塩それぞれのラセミ混合物（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）および（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）の製造でも起こり、結果として上記に同定される不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、および（ＩＩｄ）それぞれのＲ異性体（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、（ＩＩ’ｃ）、および（ＩＩ’ｄ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）、（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）、および（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）が混入する。
上記の不純物はチトクロームＰ４５０系の酵素に非常に強い毒性を示すことがわかっているため、この事実は特に問題である。
薬剤候補の多くは望ましくない不純物に起因するヒト代謝への予想外の影響又は毒性により臨床試験に失敗しており、従って、初期前臨床段階でこのような不純物を除去することが重要であり、極めて望ましい。
前臨床段階では、薬剤代謝酵素との相互作用、細胞毒性、代謝安定性及びプロファイリング、膜浸透性、固有クリアランス並びにヒトｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ関連遺伝子（ＨＥＲＧ）チャネル遮断等の非常に十分に確立された一連のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して新規化合物の「薬剤適性」を評価することができる。
チトクロームＰ４５０（ＣＹＰ４５０）系は薬剤、発癌物質及び環境汚染物質を含む親油性生体異物の代謝の主要酵素系である。ＣＹＰ４５０は多くの組織に存在するが、肝臓に最高濃度で存在するヘム含有膜結合多酵素系である。ヒト肝臓には、１５〜２０種類の異なる生体異物代謝性ＣＹＰ４５０種が存在すると推定される。これまでに、１４種類を上回るＣＹＰ遺伝子ファミリーが哺乳動物で同定されている。高い相同性が存在するにも拘わらず、広範な研究の結果、各ＣＹＰファミリー及びサブファミリーは生体異物代謝において異なる役割をもつことが判明した。ＣＹＰ１、ＣＹＰ２及びＣＹＰ３の３種類のＣＹＰファミリーがヒト肝ミクロソームＣＹＰの約７０％を占め、そのうちＣＹＰ３が約３０％を占める。これらのＣＹＰは大半の市販薬の代謝に最も大きく関与している。
ＣＹＰ１ファミリーはＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２及びＣＹＰ１Ｂ１等の数個のメンバーを含み、アセトアミノフェン、クロミプラミン及びイミプラミンの代謝に関与している。
ＣＹＰ２ファミリーはＣＹＰ２Ａ、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｃ、ＣＹＰ２Ｄ及びＣＹＰ２Ｅ等の数個のサブファミリーを含む。ＣＹＰ２Ｃサブファミリーは少なくとも７個のメンバーを含む。ＣＹＰ２Ｃ９はイブプロフェン、ジクロフェナク、トルブタミド及びトラセミドの代謝に関与している。ＣＹＰ２Ｃ１９はジアゼパムとオメプラゾールの代謝の主要アイソザイムである。ＣＹＰ２Ｄ６は抗鬱薬、心臓血管薬及び抗精神病薬を含む市販薬剤の３０％以上の代謝に関与していることが分かっている。
ＣＹＰ３ファミリーでは、３種類のアイソフォームがヒト肝臓で同定されている。ヒトＣＹＰ３Ａ４は薬剤代謝における最も重要なアイソフォームであるとして認められている。今日までに、ＣＹＰ３Ａ４により触媒される代謝は市販薬剤の約５０％の主要な排泄経路である。
ＣＹＰ３Ａ４とＣＹＰ２Ｄ６はいずれも薬剤代謝における重要性により、薬剤間相互作用に関与していることが多く、数種類の臨床使用されている化合物がそれぞれケトコナゾール、テルフェナジン、エリスロマイシン、ミコナゾール、プロプラノロール及びキニジン等のこれらのＣＹＰ４５０アイソフォームの強力な阻害剤として同定されている。このため、これらの薬剤の使用は明白に制限される。
非抗不整脈薬の作用の副作用は医薬産業と保健行政当局にとって薬理安全性の大問題であるため、突然死も問題になっている。近年では、突然死の報告により少なくとも５品目の超大型新薬（アステミゾール、セルチンドール、テルフェナジン、シサプリド、グレパフロキサシン）が市場から撤退している。「ｔｏｒｓａｄｅｓ ｄｅ ｐｏｉｎｔｅｓ」は自然に心室細動に悪化して突然死の原因となり得る多形性心室頻拍であるが、いずれの場合も、心電図におけるＱＴ間隔の延長を特徴とする心筋再分極異常であるＱＴ延長症候群（ＬＱＴＳ）がその素因とみなされている。先天性ＬＱＴＳはナトリウムチャネルと２種類の異なるカリウムチャネルである急速活性化遅延整流カリウムチャネル（ＩＫｒ）及び緩徐活性化遅延整流カリウムチャネル（ＩＫｓ）の欠損をもたらす数箇所の可能な突然変異に起因すると考えられる。重要な点として、薬剤暴露に関連する心筋活動電位持続時間の延長（後天性ＬＱＴＳ）のほぼ全症例は心筋内のＩＫｒ電流の遮断という同一の特定メカニズムに起因すると考えられる。ＱＴ間隔の終点の第３相再分極の要因であるこの電流は各サブユニットがＨＥＲＧによりコードされる四量体チャネルを流れる。ＨＥＲＧ Ｋ＋チャネルの遮断は薬剤誘発性ＱＴ延長の主原因であると広く認められているので、この望ましくない副作用をもつ化合物の早期検出は医薬産業における重要な課題となっている。
薬剤代謝酵素、特にＣＹＰ４５０酵素の強力な阻害剤であると共にＨＥＲＧチャネル遮断性をもつ化合物は毒性である確率が高く、その開発を早期に停止する必要がある。
表１に示すように、不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、ならびにそれぞれのラセミ体（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）は、メタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）、（ＩＩ’ｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩ’ｄ）、ならびに塩それぞれのラセミ体（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）および（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）とすると、マイクロモルおよびそれ以下の範囲でＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９およびＨＥＲＧ電流を強く阻害し、上記不純物含量が０．０３重量％未満の高純度サフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）および高純度ラルフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）と比較して細胞毒性が高い。
Figure 2014159407
表２は、上記不純物含量が０．０３重量％未満の高純度サフィナミドメタンスルホン酸塩および高純度ラルフィナミドメタンスルホン酸塩の試料を用いた場合と、同じ高純度サフィナミドメタンスルホン酸塩および高純度ラルフィナミドメタンスルホン酸塩の試料にそれぞれの不純物（ＩＩｃ）および（ＩＩｄ）を０．３重量％添加して用いた場合を比較する、チトクロームＣＹＰ３Ａ４の阻害についての比較結果（ＩＣ５０）を示す。
０．３％の不純物ＩＩｃ及びＩＩｄを高純度サフィナミド及びラルフィナミドメタンスルホン酸塩に加えると、どちらの場合もＣＹＰ３Ａ４のＩＣ５０の著しい低下が観察され、不純物が酵素活性の強い阻害の一因であることが分かる。
Figure 2014159407
表３に示すように、不純物（ＩＩｃ）は３ｍｇ／ｋｇ ｉｐからマウス最大電気ショック（ＭＥＳ）試験における死亡率を増加させ、薬理活性即ち痙攣からの保護は認められなくなる。
Figure 2014159407
表４は最大電気ショック試験（ＭＥＳ）で１０及び２０ｍｇ／ｋｇを経口投与した場合の不純物ＩＩｄが同一用量のラルフィナミドメタンスルホン酸塩に比較してマウスを痙攣から保護しないことを報告する。
Figure 2014159407
これらのデータ全てを基にすると、国際公開第９０／１４３３４号およびＰｅｖａｒｅｌｌｏらのＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，１９９８，４１，５７９−５９０に記載の方法、または国際公開第２００６／０２７０５２号に記載の方法により合成された、サフィナミド、ラルフィナミド、これらのＲ−異性体、およびそれぞれのラセミ混合物の、それぞれの中に望ましくない量で存在する不純物（ＩＩｃ）、（ＩＩ’ｃ）、（ＩＩｄ）、および（ＩＩ’ｄ）、ならびにそれぞれのラセミ混合物（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）および（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで望ましくない特徴（細胞毒性、ＣＹＰ４５０のあるアイソフォームの強力な阻害、ＨＥＲＧチャネル遮断、および癲癇の「ｉｎ ｖｉｖｏ」モデルにおける保護活性の不在など）を幾つか示す。
ＣＹＰの重要な側面の１つは異なる集団群間の変動である。薬剤代謝の変動は臨床試験で非常に重要である。ＣＹＰ３Ａ４とＣＹＰ２Ｄ６の酵素活性は異なる民族集団間で著しく相違し、同一民族集団でも個体間で著しく相違する。個体間のＣＹＰ活性の差は各アイソザイムにより著しく異なる。各個体のＣＹＰ発現レベルの相違により薬剤代謝も変動する可能性がある。更に重要な点として、多形の結果として酵素活性の増減したＣＹＰ酵素が生じ、薬剤代謝の変動につながる可能性もある。ＣＹＰ２Ｄ６多形は薬剤代謝で詳しく研究されている事項である。臨床試験では、最初に抗高血圧薬と抗癲癇薬の代謝で個体間の顕著な変動が認められた。欠損ＣＹＰ２Ｄ６対立遺伝子を保有する個体ではＣＹＰ２Ｄ６で代謝された薬剤の排泄が遅い。代謝の遅い個体は低代謝能群（ＰＭ）に分類され、代謝のよい個体は高代謝能群（ＥＭ）と呼ばれ、異なる人種に由来する集団におけるＰＭ表現型の発生率は異なり、白人では約５〜１０％がＰＭ表現型であるが、アジア人は１％に過ぎない。臨床関連で重要な別の多形アイソフォームはＣＹＰ２Ｃ１９である。
これらの点を考慮すると、ＣＹＰ４５０アイソフォームに干渉しない（阻害も誘導もしない）化合物は臨床医療で薬剤間相互作用の危険が非常に低く、医師が簡単且つ安全に処方することができる。
特に、ＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉しない薬剤は低代謝能群（ＰＭ）に分類される個体の治療処置又は前記チトクロームと相互作用することが分かっている他の薬剤（例えばケトコナゾール、テルフェナジン、エリスロマイシン、ミコナゾール、プロプラノロール及びキニジン）及び／又はＨＥＲＧチャネル遮断性をもつことが分かっている他の薬剤を同時に投与している患者の治療処置に特に指定される。
一般臨床医療によると、サフィナミド及びラルフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ及びＩｄ）は通常、これを必要とする患者に一日数回に分けて長期間投与される。これは特に治療する疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病及び不穏下肢症候群（サフィナミドの場合）や、慢性もしくは神経因性疼痛、心臓血管障害又は炎症性障害（ラルフィナミドの場合）である治療用途の場合に該当する。１日用量は特定症状と患者の必要により異なるが、サフィナミドメタンスルホン酸塩の１日用量は通常１０ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日とすることができ、ラルフィナミドメタンスルホン酸塩の１日用量は通常１０ｍｇ／日〜１ｇ／日とすることができる。これらの条件下で上記に報告したデータを考慮すると、サフィナミド及びラルフィナミド又はその塩の医薬製剤中の不純物（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）又はその塩、特にメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の濃度をできるだけ低く維持することが強く推奨され、いずれの場合もそれぞれサフィナミド及びラルフィナミド又はその塩、特にメタンスルホン酸塩の量に対して０．０３％未満、好ましくは０．０１重量％とする。
サフィナミドおよびラルフィナミドのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩にも、それぞれの不純物（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩に関して同様な考察が当てはまる。
国際公開第９０／１４３３４号 国際公開第２００４／０８９３５３号 国際公開第２００５／１０２３００号 国際公開第２００４／０６２６５５号 国際公開第９９／０３５１２５号 国際公開第２００３／０２０２７３号 国際公開第２００５／０１８６２７号 国際公開第２００５／０７０４０５号 国際公開第２００６／０２７０５２号
Ｐｅｖａｒｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，１９９８，４１，５７９−５９０
本発明者らが行った調査と実験研究により、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩は、従来技術の方法により製造すると、０．０３重量％を上回る量で、それぞれの不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、不純物それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ａ）および（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、（（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩ’ｃ）、および（ＩＩ’ｄ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）および（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）など）を含有していることが判明した。従って、上記生成物は広範囲で安全な治療用途には不適切である。特に、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）または（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を含有する医薬製剤が、それぞれの不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、これらのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を、上記治療活性物質に対して０．０３重量％以上、好ましくは０．０１重量％以上含有する場合、この医薬製剤は、上記のような特定の患者の群において医薬として不適切である。
特に、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）もしくは（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を含有する医薬製剤が、それぞれの不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、不純物それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を、上記活性物質に対して０．０３重量％以上、好ましくは０．０１重量％以上含有する場合、この医薬製剤は、低代謝能群（ＰＭ）に分類される個体またはＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉することが既知である他の薬物の付随が想定されている（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｌｙ ａｓｓｕｍｉｎｇ）個体を含む患者集団を広く治療するのに用いるには不適切である。
本明細書および特許請求の範囲において、上記範囲の値は、特に指定しない限り、「活性物質」の重量パーセント比、即ち治療活性物質（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）の有効含量に対する、測定した毒物活性不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）の有効含量の比を表すものとする。
本明細書および特許請求の範囲において、「高純度（ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ）」、「高純度（ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｄｅｇｒｅｅ）」、「化学的に高純度」、「高純度な」などの表現は、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を示す場合には、生成物がサフィナミド（Ｉａ）、ラルフィナミド（Ｉｂ）、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を９８．５パーセント（ＨＰＬＣ法により面積％として評価）以上含有し、生成物中のそれぞれの不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩の含量は、ＨＰＬＣ法で測定して０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満（「活性物質」に対して）であることを特定する。
その他の不純物は、ほとんど検出されないが、市販の３−フルオロベンジルクロリドおよび２−フルオロベンジルクロリドそれぞれに混入している極少量のベンジル、２−および４−フルオロベンジルクロリド、ならびに３−および４−フルオロベンジルクロリドに由来する。３−フルオロベンジルクロリドおよび２−フルオロベンジルクロリドは、化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、（Ｉａ、Ｉ’ａ）、および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩を製造するためのそれぞれの中間体４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）および４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の合成に用いるものである。
同様に、上記の用語「高純度（ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ）」、「高純度（ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｄｅｇｒｅｅ）」、「化学的に高純度」、「高純度な」は、４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド中間体（ＩＶａ）および（ＩＶｂ）を示す場合には、生成物が上記の化合物それぞれを９８．５パーセント（ＧＣ法により面積％として評価）以上含有し、生成物中のジベンジル化不純物（ＶＩａ）または（ＶＩｂ）それぞれの含量は０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満（ＧＣ法により評価）であることを特定する。
本発明に記載される方法では、不純物を著しく低減することにより、高い化学純度と安全性の高い生体プロファイルをもつ生成物が得られる。
本発明に記載される方法に従って、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩、特にメタンスルホン酸塩が、高収率であると同時に高純度で得られ、それぞれの不純物である（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）、（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）、不純物それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ａ）および（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩、特にメタンスルホン酸塩（「ジベンジル化誘導体」と総称する。）の含量は、「活性物質」に対して０．０３％未満、好ましくは０．０１％（重量）未満である。
本発明のさらなる目的は、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を、医薬として安全に用いるのに適した高純度で提供すること、特に式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、これらのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、例えばメタンスルホン酸との塩であるそれぞれのジベンジル誘導体含量０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満（「活性物質」に対して）で提供することである。
本発明の別の目的は、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を活性剤として含み、それぞれのジベンジル誘導体（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、これらのＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ａ）および（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、例えばメタンスルホン酸との塩の含量が、０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満（「活性物質」に対して）である、薬学的配合物を提供することである。
より詳細には、本発明の好適な実施形態に従って、本明細書中に開示される方法により、ＣＹＰ４５０系のチトクローム、特にＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９に干渉せず、ならびにＨＥＲＧチャネル遮断性を示さない条件下で、それぞれ（ｉ）癲癇、パーキンソン病、アルツハイマー病、うつ病、不穏下肢症候群疼痛、および偏頭痛、または（ｉｉ）慢性疼痛および神経因性疼痛を含む疼痛症状、偏頭痛、双極性障害、うつ病、心臓血管障害、炎症性障害、尿生殖器障害、代謝障害、および胃腸障害を治療するための、高純度の（ｉ）サフィナミド、このＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）、これらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩、または高純度の（ｉｉ）ラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー（Ｉ’ｂ）、これらのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を含有する医薬の製造が可能になる。
さらに、本発明のさらに好適な実施形態に従って、本明細書中に開示される方法により、ＣＹＰ４５０系のチトクローム、特にＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９に干渉せず、ならびにＨＥＲＧチャネル遮断性を示さない条件下で、ナトリウムおよび／またはカルシウムチャネル機構が国際公開第２００６／０２７０５２号で特定される病理学的役割を果たす病状（疼痛、偏頭痛、身体系全体に影響を及ぼす炎症過程、皮膚および関連組織に影響を及ぼす障害、呼吸器系の障害、免疫系および内分泌系の障害、胃腸障害、および尿生殖器障害など）を選択的に（即ち、患者に投与される活性物質の治療活性がどのようなＭＡＯ阻害的副作用も実質的に含まないか、ＭＡＯ阻害的副作用を示したとしても顕著に減少したものである。）治療するための、高純度のラルフィナミドＲ−エナンチオマー単体、またはこの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を含有する医薬の製造が可能になる。
従って、本発明の方法により、低代謝能群（ＰＭ）に分類される患者またはＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉することが既知であるおよび／またはＨＥＲＧチャネル遮断性を有することが既知である他の薬物の付随が想定されている患者で、上記の障害を治療するのに適した、サフィナミド、このＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）、ラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物、（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を含有する薬学的配合物の製造が可能になる。
これらの新規薬学的配合物は全て、サフィナミドおよびラルフィナミドに関する薬理毒性学的知見を応用することによっても、当分野で利用可能な方法に従って調製したこれらの活性剤を用いることによっても、示唆も達成もされていなかった。
上記の薬学的配合物は、上記の高純度を有するサフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の他に、さらなる活性剤を１種類以上場合により含んでもよい。
例えば、パーキンソン病または不穏下肢症候群の補助療法に有用な新規薬学的配合物は、本発明の方法に従って得られた、上記高純度を有するサフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の他にパーキンソン病の補助活性剤（国際公開第２００４／０８９３５３号および国際公開第２００５／１０２３００号に記載されるもの、好ましくはドーパミンアゴニストおよび／またはレボドパおよび／またはカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤など）を１種類以上含んでもよい。
さらなる例として、慢性疼痛および神経因性疼痛を含む疼痛症状ならびに偏頭痛を治療するのに有用な本発明による新規薬学的配合物は、本発明の方法に従って調製された、上記高純度を有するラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の他に、さらなる活性剤（ガバペンチンおよびプレガバリン、またはＥＰ１４２３１６８に記載される通りのこれらの医薬的に許容される塩など）を場合により含有してもよい。
同様に、国際公開第２００６／０２７０５２号によるとナトリウムおよび／またはカルシウムチャネル機構が病理学的役割を果たしている病状（疼痛、偏頭痛、身体系全体に影響を及ぼす炎症過程、皮膚および関連組織に影響を及ぼす障害、呼吸器系の障害、免疫系および内分泌系の障害、胃腸障害および尿生殖器障害など）の選択的治療のための、ナトリウムおよび／またはカルシウムチャネルモジュレーターとして選択的に活性な医薬として有用である本発明による新規薬学的配合物は、さらなる活性剤を場合により含有してもよい。例えば、疼痛症状を治療する薬学的配合物は、本発明の方法に従って得られた、上記高純度を有するラルフィナミド（Ｉ’ｂ）のＲ−エナンチオマー単体またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の他に、ガバペンチンまたはガバペンチン関連作用剤を含有してもよい。
本発明による高純度サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を含有する薬学的組成物は、当分野で既知の従来手順により（例えば、活性化合物を薬学的治療上不活性な有機および／または無機キャリヤー材料と混合することにより）、製造することができる。本発明の組成物は、例えば溶液、懸濁液、エマルションなどの液体でもよいし、例えば錠剤、トローチ、カプセル、パッチなどの固体でもよい。
本発明の組成物の製造に有用な適切な医薬治療用として不活性な有機及び／又は無機キャリヤー材料としては、例えば水、ゼラチン、アラビアガム、ラクトース、澱粉、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルキレングリコール、シクロデキストリン等が挙げられる。本発明の医薬組成物は滅菌処理することができ、活性成分以外に、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤又は乳化剤（例えばパラフィン油）、モノオレイン酸マンニド、浸透圧調整用塩、緩衝液等の当業者に周知の他の成分を添加してもよい。
本発明のさらなる目的は、ＣＮＳ障害、特に癲癇、パーキンソン病、アルツハイマー病、および不穏下肢症候群の治療法を提供することであり、この方法は、この治療を必要とする患者に、それぞれのジベンジル誘導体（ＩＩａ）、（ＩＩ’ａ）、これらのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の含量が（「活性物質」に対して）０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満である高純度サフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を有効量で投与することを含む。上記方法は、この治療を必要とする患者に、上記の通りの高純度サフィナミド、このＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）、これらのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）、またはこれらの塩の有効量を、国際公開第２００４／０８９３５３号に記載されるようなパーキンソン病活性剤（例えば、ドーパミンアゴニストおよび／またはレボドパおよび／またはカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤）１種類以上と場合により組み合わせて投与することによりパーキンソン病又は不穏下肢症候群を治療することを含む。
さらに、本発明のさらなる目的は、慢性疼痛および神経因性疼痛を含む疼痛症状、偏頭痛、双極性障害、うつ病、心臓血管障害、炎症性障害、尿生殖器障害、代謝障害、および胃腸障害の治療法を提供することであり、この方法は、この治療を必要とする患者に、それぞれのジベンジル誘導体（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ｂ）、これらのラセミ混合物（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の含量が（「活性物質」に対して）０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満である高純度ラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を有効量で投与することを含む。上記方法は、高純度ラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、またはこれらの塩を、ガバペンチンまたはプレガバリンと場合により組み合わせて用いて、慢性疼痛および神経因性疼痛を含む疼痛症状ならびに偏頭痛を治療することを含む。
さらに、本発明のさらなる目的は、ナトリウムまたはカルシウムチャネル機構が病理学的役割を果たす病状（疼痛、偏頭痛、身体系全体に影響を及ぼす炎症過程、皮膚および関連組織に影響を及ぼす障害、呼吸器系の障害、免疫系および内分泌系の障害、胃腸障害、および尿生殖器障害など）を選択的に治療する方法を提供することであり、この方法においては上記化合物の治療活性がどのようなＭＡＯ阻害的副作用も実質的に含まないか、ＭＡＯ阻害的副作用を示したとしても顕著に減少したものであり、この方法は、この治療を必要とする患者に、不純物（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩の含量が０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満であるラルフィナミドＲ−エナンチオマー単体、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩、好ましくはメタンスルホン酸との塩を治療上有効量で、場合によりさらなる活性剤（例えば、疼痛症状の治療の場合、ガバペンチンまたはガバペンチン関連物質）と組み合わせて投与することを含む。
上記の治療法は、上記記載の疾患の患者で低代謝能群（ＰＭ）に分類される患者またはＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉することが既知である他の薬物の付随が想定されている患者に特に有用である。
本明細書および特許請求の範囲において、「治療」または「治療する」という用語は、予防、軽減、治癒を含む。
従来技術
国際公開第９０／１４３３４号及びＰｅｖａｒｅｌｌｏらの論文Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９−５９０には、
ａ）対応する４−ヒドロキシベンズアルデヒドを適切な塩化ベンジルでＯ−ベンジル化することにより中間体４−ベンジルオキシベンズアルデヒドを合成する段階と、
ｂ）下式：
Figure 2014159407
 （式中、Ｒは特に３−Ｆ及び２−Ｆを表し；Ｒ１は特に水素を表し；Ｒ２は特に水素を表し；Ｒ３は特にＣＨ３を表し；Ｒ４及びＲ５はいずれも特に水素を表す）に模式的に示すように、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを還元剤として使用してα−アミノアミドを４−ベンジルオキシベンズアルデヒドで還元アルキル化する段階を含むベンジルオキシ−ベンジルアミノ−アルカンアミドの３段階製造法が記載されている。
特に、サフィナミド及びラルフィナミド製造に関する限り、還元アルキル化は下式：
Figure 2014159407
 に示すようにそれぞれ４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド及び４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドによるＬ−アラニンアミドの還元アルキル化である。
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（Ｐｅｖａｒｅｌｌｏら），１９９８，４１，５７９−５９０には、対応する（フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドから出発してそれぞれサフィナミド及びラルフィナミドメタンスルホン酸塩を収率４５％及び６０％で製造したことが報告されている。
国際公開第９０／１４３３４号と及び上記論文に記載されている方法は同一であり、イミノアルキル化と還元を同一反応器で実施するワンポット系を提供している。Ｌ−アラニンアミド塩酸塩とシアノ水素化ホウ素ナトリウムとメタノールと粉末状モレキュラーシーブの混合物に適切なアルデヒドを一度に加えるものである。
（還元アルキル化による数種のα−ベンジルアミノアミド誘導体の合成について記載している）Ｐｅｖａｒｅｌｌｏら，Ｏｒｇ．Ｐｒｅｐ．Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．１９９６，２８，１７９−１８３によると、イミニウムイオンはアルデヒドカルボニル基よりもシアノ水素化ホウ素ナトリウムと反応し易いので、対応するイミンの代わりにイミニウムイオンを形成するためにはα−アミノアミドを塩酸塩として使用することが重要である。
上記著者らによると、このワンポット法はシッフ塩基ラセミ化の問題がなくなると思われ、モレキュラーシーブにより反応速度が上げる（但し収率は低い）。
シアノ水素化ホウ素ナトリウムが、好ましい薬剤として利用されると主張しているが、この選択はその反応性と選択性が低く（Ｒｅｖｉｅｗ“Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｙａｎｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ−Ａ Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ａｇｅｎｔ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐｓ”−ＣＦ．Ｌａｎｅ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９７５，１３２−１４６参照）、プロトン化シッフ塩基と出発材料であるアルデヒドを区別できないためであると思われる。
Ｐｅｖａｒｅｌｌｏらの論文に記載されている合成はカラムクロマトグラフィーにより生成物を単離した後、酸処理により対応する塩に変換する。サフィナミド及びラルフィナミドの両者及び／又はそれらの塩のエナンチオマー及び／又は化学純度に関する情報は全く提供されていない。
従来技術に記載されている方法には多数の欠点があり、このため大規模で応用するのに制限がある。以下に上記欠点の例を幾つか挙げる。
シアン化物およびシアノ誘導体の形成；
物理的に変化し易く、また高価である、粉末状モレキュラーシーブの使用；
一般に７０％未満の収率；
反応生成物の純度の低さと精製の難しさ；
還元アルキル化反応での大量の溶媒の使用（１モルあたり約５Ｌから７Ｌ）、その結果最終反応混合物中の最終生成物の濃度が下がること（約４から６重量／容量％）；
化学合成による活性剤の大規模製造が関与する場合には煩雑で高価な単離法であるとみなされるカラムクロマトグラフィーによる反応生成物の単離。
国際公開第２００６／０２７０５２号に記載される（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）の製造手順は、乾燥メタノール中モレキュラーシーブの存在下で、（Ｒ）−アラニンアミド塩酸塩を４−（２−フルオロベンキシル（ｂｅｎｘｙｌ）オキシ）ベンズアルデヒド（この反応体の純度に関するデータは与えられていない。）およびトリエチルアミンと４時間反応させて得られる生成物の、水素化ホウ素ナトリウムによる還元に基づく。得られる最終化合物の純度に関するデータは与えられていない。この場合も同様に、大規模製造に応用した場合、手順の欠点として、粉末状またはペレット状モレキュラーシーブの使用、溶媒の大量使用、および、精製操作にもかかわらず、最終生成物（Ｉ’ｂ）中に望ましくない不純物（ＩＩ’ｂ）が０．０３重量％を超える量で存在すること（これによりＣＹＰ４５０系のチトクロームと干渉するため、この方法で得られた活性物質（Ｉ’ｂ）は副作用の危険性なく、または低い危険性で治療に用いるには不適切となっている。）がある。国際公開第２００６／０２７０５２号に記載の方法の最終生成物の純度が低く収率も低い（３０％から３２％、モル濃度）ことは、この明細書中に記載される規模の異なる方法での複数の再現により示されている。そうした方法の代表例が本明細書の実施例２３．３である。
国際公開第２００６／０２７０５２号に開示される方法が本発明の方法と区別される主要な特徴の１つであり、従来方法の顕著な低収率の原因となっていることが判明しているものは、この方法で用いられる有機溶媒（メタノール）の量が、Ｓｃｈｉｆｆ塩基のモル量に対して、Ｓｃｈｉｆｆ塩基１モルあたり約５Ｌのオーダーの量であることである。こうした条件が最終生成物で、Ｓｃｈｉｆｆ塩基とこの前駆体（同じ出発アルデヒド、このアセタール、およびアミノアセタールなど）の平衡に関与する種に由来する望ましくない不純物の増加を引き起こすことが今回発見された。
本明細書に従う説明例は、従来技術に記載される方法に従って得られた生成物が、不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、（ＩＩ’ｃ）、（ＩＩ’ｄ）（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）、（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）、または（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）を、それぞれの治療上活性物質である（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ、（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、（Ｉ’ｃ）、（Ｉ’ｄ）、（Ｉａ、Ｉ’ａ）、（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）、または（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）に対して０．０３重量％を超える量で含有することを裏付ける。また、最終生成物サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩に存在するこうした不純物を、溶媒からの結晶化またはクロマトグラフィーに基づく既知の精製方法（いずれにしろ収率の低下を暗示する。）を用いて除去することが難しいことが示された。
本発明の目的は、（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（サフィナミド、Ｉａ）、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド、Ｉｂ）
Figure 2014159407
それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、ならびにこれらの医薬的に許容される酸との塩から選択される、高純度２−［４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド化合物の製造法を提供することであり、この方法では、サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）もしくは（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩は、それぞれの不純物、（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）、（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）、
Figure 2014159407
それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ａ）または（ＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）または（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、または医薬的に許容される酸との塩の含量が、０．０３％未満、好ましくは０．０１％（重量）であり、４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとＬ−アラニンアミドまたはＤ−アラニンアミドまたはこれらのラセミ混合物とのイミノアルキル化反応により得られる、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）のＳｃｈｉｆｆ塩基中間体、
Figure 2014159407
それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩＩ’ａ）または（ＩＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩＩａ、ＩＩＩ’ａ）または（ＩＩＩｂ、ＩＩＩ’ｂ）を、イミノアルキル化反応完了後、（Ｃ１−Ｃ５）低級アルカノールまたはこれらの混合物から選択される場合により少量の水を含む所定量の有機溶媒中、水素化ホウ素ナトリウムおよび水素化ホウ素カリウムから選択される還元剤で還元し、還元中の有機溶媒対Ｓｃｈｉｆｆ塩基の比は、還元反応過程の実質的な部分の間、Ｓｃｈｉｆｆ塩基懸濁液からＳｃｈｉｆｆ塩基の同有機溶媒の飽和溶液になって存在することを可能とするもので、Ｓｃｈｉｆｆ塩基１モルあたり０．５Ｌから３．０Ｌ、好ましくは０．７Ｌから２．５Ｌ、より好ましくは０．８Ｌから２．０Ｌの範囲であることを特徴とする。この方法によりサフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）または（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）または（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）が遊離塩基形で得られ、この遊離塩基は場合により医薬的に許容される酸との塩に変換される。
本発明の好適な実施形態に従って、この方法はさらに、Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩ’ａ）、（ＩＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩＩａ、ＩＩＩ’ａ）または（ＩＩＩｂ、ＩＩＩ’ｂ）の生成に用いた４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質における、３−（３−または２−フルオロベンジル）−４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド不純物の含量が０．０３重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満であることを特徴とする。
本明細書中および特許請求の範囲に示される通りの式（ＩＩＩａ）および式（ＩＩＩｂ）は、Ｅ配置およびＺ配置の両方でＳｃｈｉｆｆ塩基中間体を確定する。
本発明の好適な実施形態に従って、本発明の対象とする方法は、以下の３工程を含む：
ａ）４−ヒドロキシベンズアルデヒドを、一般式、３−または２−Ｆ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｙ（Ｖａ）または（Ｖｂ）（式中、Ｙは脱離基（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳＯ２ＣＨ３など）である。）の誘導体でＯ−ベンジル化して高純度４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質を調製する；このＯ−ベンジル化は、Ｏ−アルキル化の選択性が非常に高い条件下で行われて、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドまたは４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを高純度で生成する；
ｂ）モレキュラーシーブを全く用いることなく、４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質を、塩基または塩の形のＬ−アラニンアミド、Ｄ−アラニンアミド、またはこのラセミ混合物と縮合させることにより、Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体の形成を完了させる；
ｃ）後処理と結晶後に、それぞれ高収率であると同時に上記に定義される化学純度でもってサフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、またはそれぞれのラセミ混合物を得るため、還元反応過程の実質的な部分の間、（Ｃ１−Ｃ５）アルカノールから選択される有機溶媒が、Ｓｃｈｉｆｆ塩基に対して、Ｓｃｈｉｆｆ塩基が固体の形とこの溶媒の飽和溶液とで同時に存在する（即ちこの有機溶媒によるＳｃｈｉｆｆ塩基懸濁液）を可能にするのに適切な比で存在する下で、水素化ホウ素ナトリウムおよび水素化ホウ素カリウムから選択される還元系でＳｃｈｉｆｆ塩基を処理する；および、場合により、慣用塩形成手順によりこれらの医薬的に許容される酸との塩を調製する。
医薬的に許容される酸は、例えば、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸（ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｃ）、グリコール酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、およびサリチル酸から選択される。
４（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質の合成
既知の方法に従って、４−ヒドロキシベンズアルデヒドを塩基性媒体中でベンジル化することにより、本発明によるサフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、およびそれぞれのラセミ混合物の合成にそれぞれ用いられるＳｃｈｉｆｆ塩基中間体（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩ’ａ）、（ＩＩＩ’ｂ）、およびそれぞれのラセミ混合物（ＩＩＩａ、ＩＩＩ’ａ）および（ＩＩＩｂ、ＩＩＩ’ｂ）の調製に必要な、（フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質を得る。アンビデントな求核剤であるフェノール塩のベンジル化により２種類の異なる生成物、即ち所望のＯ−アルキル化誘導体と望ましくないＣ−アルキル化誘導体が得られる。
従来技術に従って４−ヒドロキシベンズアルデヒドを３−フルオロベンジルクロリドでフルオロベンジル化すると、主生成物として４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）が得られると共に、４−ヒドロキシベンズアルデヒドの４位ヒドロキシ基と３位炭素原子の両者のアルキル化に由来する３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）も得られる。下記スキーム：
Figure 2014159407
Ｌ−またはＤ−アラニンアミドまたはこのラセミ混合物による４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドのイミノアルキル化により形成されたＳｃｈｉｆｆ塩基の還元は、アルデヒド出発物質がジアルキル化不純物を含有する場合、以下のスキームに示す通り、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）または（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）の最終生成物も、遊離塩基のジアルキル誘導体（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）または（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）であるか、酸と塩を形成した化合物（好ましくはメタンスルホン酸と）（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩ’ｃ）、（ＩＩ’ｄ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）または（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）であるかにかかわらず、それぞれのジアルキル化合物で汚染されたものとなる。スキームは、サフィナミドおよびラルフィナミドにそれぞれ関連したジベンジル化不純物（ＩＩｃ）と（ＩＩｄ）の生成を示す。
Figure 2014159407
それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ｃ）、（ＩＩ’ｄ）およびそれぞれのラセミ混合物も同様に生成する。メタンスルホン酸が好ましいが、他の医薬的に許容される酸（例えば、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸およびサリチル酸）も使用できる。
モノアルキル化誘導体（サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、およびそれぞれのラセミ混合物）とこれに対応するジアルキル化不純物は、同様な化学的・物理的性質を持つため、サフィナミドおよびラルフィナミドを従来の方法で精製するのは難しい。
さらに、既知のベンジル化方法、その中でもフルオロベンジル化には、さらに以下の欠点がある。
１）溶媒として低級アルコールを使用すること；塩基性条件下では、この溶媒（例えばメタノール）はこれ自体が求核試薬として作用し、３−または２−フルオロベンジルクロリドと共にある一定量のメチルフルオロベンジルエーテルを生じる可能性がある；
２）アルコール性反応溶媒を反応混合物から除去した後にしか最終生成物を水非混和性有機溶媒で抽出することができないこと。
上記従来技術の方法を使用することにより、不純物（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）または（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）の含量が０．０３％（重量）未満である式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ｂ）または（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）の最終生成物を得るためには、中間体４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）または４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）を徹底的に精製して式（ＶＩａ）および（ＶＩｂ）のそれぞれの不純物含量を低減する必要があることが今回判明した。
前記精製は反応生成物を結晶化することにより実施すること好ましく、粗化合物（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）の不活性有機溶媒溶液に混和性不活性有機非溶媒を加えることにより実施することがより好ましい。不活性有機溶媒は芳香族炭化水素から選択することが好ましく、トルエンがより好ましい。混和性不活性有機非溶媒は低級脂肪族炭化水素から選択することが好ましく、ｎ−ヘキサンがより好ましい。別の結晶化法としては、上記化合物（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）を高温溶媒（例えば還流下のシクロヘキサン又はジ（Ｃ３−Ｃ４）アルキルエーテル、例えばジイソプロピルエーテル）に溶かした後、溶液を室温、好ましくは１０〜１５℃に冷却する方法が挙げられ、純化合物（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）の純結晶を加えることにより結晶化を誘導することが最も好ましい。
本発明の１つの態様に従って、式（Ｖａ）または（Ｖｂ）のアルキル化剤（以下のスキームを参照、スキーム中、Ｆ原子は、２位または３位にあり、Ｙは脱離基（例えば、、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳＯ２ＣＨ３、ＯＳＯ２Ｃ６Ｈ４−ｐＣＨ３など）である。）と４−ヒドロキシベンズアルデヒドとの反応を相間移動条件下で行うことにより、Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体の調製に必要な４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質が得られる。この条件下、対応する４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドが、好ましくは結晶化後、高収率であると同時に非常に低いＣ，Ｏ−ビス−アルキル化不純物濃度で得られる。
Figure 2014159407
相間移動条件下の４−ヒドロキシベンズアルデヒドのこの新規フルオロベンジル化は、試薬と相間移動触媒を有機液相に溶かし、固相を無機塩基又は（場合により４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒドと無機塩基自体からｉｎ ｓｉｔｕ生成された）４−ヒドロキシベンズアルデヒド塩から構成した固／液系と、無機塩基を水相に溶かした液／有機液／水系のいずれでも実施することができる。
好ましい系は固／液系であり、無機塩基はＮａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＫＯＨ、およびＮａＯＨから選択することが好ましい。
反応で使用される有機溶媒は液／液系及び固／液系のいずれの場合もジアルキルエーテル（例えばジ−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、エチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル）又は芳香族炭化水素（例えばトルエン、エチルベンゼン、イソプロピルベンゼン及びキシレン）とすることができる。これらの全溶媒は蒸留により容易に回収することができる。
利用する相間移動触媒は第４級アンモニウム又はホスホニウム塩とすることができ、例えばテトラブチルアンモニウムブロミド、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ヘキサデシルトリブチルホスホニウムブロミド、トリカプリルメチルアンモニウムクロリド（Ａｌｉｑｕａｔ）、メチルトリアルキル（Ｃ８−Ｃ１０）アンモニウムクロリド（Ａｄｏｇｅｎ）が挙げられ、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミドが好ましい。
例えばＰＥＧ−２００（ＣＡＳ２５３２２−６８−３）又はＰＥＧ−４００（ＣＡＳ２５３２２−６８−３）等の低分子量ポリエチレングリコールも相間移動触媒として使用することができる。
相間移動触媒の使用量は４−ヒドロキシベンズアルデヒド１モル当たり０．０２〜１モル、好ましくは４−ヒドロキシベンズアルデヒド１モル当たり０．１〜１モルであり、これらの条件下ではＣ，Ｏ−ビス−フルオロベンジル化不純物の量を０．３％未満、好ましくは０．０１重量％以下にすることができる。
式（Ｖ）のアルキル化剤と４−ヒドロキシベンズアルデヒドの比は０．６〜１．５であり、０．９〜１．１が好ましい。
反応温度は６０℃〜１６０℃であり、８０℃〜１２０℃が好ましい。
反応時間は一般に４〜８時間とする。
反応収率は非常に高く、一般に９０％を上回る。
上記反応条件下で反応生産性即ち反応混合物中の反応生成物の濃度は非常に高く、一般に２５（重量／容量）％以上である。
４−（３−または２−ベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとＬ−アラニンアミドまたはＤ−アラニンアミドまたはこれらのラセミ混合物およびこれらの塩との反応により形成されたＳＣＨＩＦＦ塩基の還元による、サフィナミドおよびラルフィナミド、これらのＲ−エナンチオマー、およびそれぞれのラセミ混合物の合成
本発明の目的であるこの方法は、以下の２工程を含む：
ａ）Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体の完全な形成
ｂ）水素化ホウ素ナトリウムおよび水素化ホウ素カリウムから選択される還元剤によるＳｃｈｉｆｆ塩基の還元
この２工程は、Ｓｃｈｉｆｆ塩基の単離を行う行わないのいずれでも、同一反応器中で連続して実行することができ（ワンポット反応）、いずれの場合も高収率である。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体の形成は、４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとＬ−アラニンアミド、Ｄ−アラニンアミド、またはこれらのラセミ混合物、またはこれらの酸との塩、好ましくは無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、メタンスルホン酸など）との塩（「アラニンアミド化合物」）との縮合を含む。アラニンアミドのＬ−またはＤ−エナンチオマーの代わりにラセミ体を用いると、４−（３−または２−ベンジルオキシ）ベンジルアミノプロパンアミドのラセミ混合物が得られる。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基を単離する場合、この形成に適用される実験条件は、高収率であると同時に高純度である析出物の形でＳｃｈｉｆｆ塩基を単離して得ることを可能にするものである。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基の調製は、有機プロトン性溶媒中で適切に行われるが、有機プロトン性溶媒は、試薬および生成物に対して不活性でなければならず、イミン二重結合の還元条件にも不活性でなければならない。同じ反応媒体中で連続して還元工程を行うことが望ましい場合、適した溶媒とは、例えば、（Ｃ１−Ｃ５）低級アルカノール、好ましくはメタノール、エタノール、およびイソプロパノールである。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体の形成は完了させなければならず、これはその後の還元工程で高収率を達成することに関連した要因である。本発明のプロセスを行う方法に従って、４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとＬ−アラニンアミド、Ｄ−アラニンアミド、またはこのラセミ混合物との縮合反応から得られるＳｃｈｉｆｆ塩基中間体（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）
Figure 2014159407
それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩＩ’ａ）または（ＩＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物を単離し、それからイミン二重結合の還元を実施する。
または、イミノ化合物中間体（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩＩ’ａ）または（ＩＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩＩａ、ＩＩＩ’ａ）または（ＩＩＩｂ、ＩＩＩ’ｂ）の反応溶媒への析出を起こさせ、それから上記イミノ誘導体中間体を含有する懸濁液を還元工程にかけるような条件下で操作することにより、イミノアルキル化反応を完了することを選ぶこともできる。
Ｌ−アラニンアミド、Ｄ−アラニンアミド、またはこれらのラセミ混合物（塩基または塩）と４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの比は、１：１が可能であるが、有利には、アラニンアミド化合物を１０％過剰にすることも可能である。
アラニンアミド化合物は、遊離の塩基として、またはこの酸付加塩としてのいずれで導入されてもよい。好ましくは、アラニンアミド化合物は塩として、より好ましくは塩酸塩として、化学量論的量の塩基、好ましくは第三級アミン（例えばトリエチルアミン、またはジイソプロピルエチルアミンなど）と共に反応混合物に導入される。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基の調製における反応温度は、０℃から６０℃、好ましくは２０℃から３０℃の間である。
反応時間は、通常１時間から１５時間、好ましくは２時間から６時間の間である。
ある条件下、Ｄ−またはＬ−アラニンアミドを遊離塩基として用い、イミノアルキル化反応時間が８時間を超える場合、得られるＳｃｈｉｆｆ塩基は、キラル中心でラセミ化を起こす可能性がある。このことは、Ｓｃｈｉｆｆ塩基がイミノアルキル化反応中に結晶化しない場合には特にそうである。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基を、水素化ホウ素ナトリウムおよび水素化ホウ素カリウムから選択される還元剤で還元するのは、Ｓｃｈｉｆｆ塩基形成が完了してからのみである：完了前に還元を開始すると、二次反応が深刻になり、ときには優勢となって、収率および純度が低下する。こうした二次反応の１つで、より深刻なものは、選択の（フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドのカルボニル基の還元によるベンジルアルコールの形成を引き起こす。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基形成は、当分野で既知の分析方法により、例えば母液のＧＣ定量分析により、完了まで制御下に置くことができる。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基の還元は、本発明の方法の中で最も重要な工程であり、この実施は幾つかの特定条件を必要とする。
水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素カリウム還元剤は、Ｓｃｈｉｆｆ塩基に対して０．５から１．４の範囲の分子量で用いられる。
水素化ホウ素ナトリウムは、この商業的利用可能性とコストを考えると用いるのに好ましい。反応は通常溶媒中で行われるが、この溶媒は、アラニンアミドとの縮合反応が完了した後にＳｃｈｉｆｆ塩基が懸濁液の形で存在する溶媒と同じものが可能である。このような場合、（Ｃ１−Ｃ５）低級アルカノール（メタノール、エタノール、１−プロパノール、および２−プロパノールなど、好ましくはメタノール）が、反応溶媒として、通常用いられる。または、反応媒体からＳｃｈｉｆｆ塩基を単離する場合（例えば濾過または遠心分離により）、単離したＳｃｈｉｆｆ塩基生成物を、場合により水少量（好ましくは、有機溶媒の量に対して１．５重量％未満）を含む所定量の有機溶媒、好ましくはプロトン性有機溶媒、例えば低級（Ｃ１−Ｃ５）アルカノール、好ましくはメタノールなど、またはプロトン性有機溶媒の混合物に加える。
４−（３−または２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとアラニンアミド化合物との縮合反応を、後者を酸との塩として反応混合物に導入することにより行う場合は、ｐＨ値を７から９の間に調整するために塩基（水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、第三級（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアミン、ピロリジン、４−メチルモルホリンなど）を適量加える。イミノアルキル化反応の終了時に反応混合物のｐＨ値がこの範囲より下がってしまっていたら、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素カリウム還元剤のどのような添加も行う前にｐＨをこの値に戻すために、Ｓｃｈｉｆｆ塩基を含有する反応混合物にこれら塩基をさらに適量加える。
水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素カリウム還元剤は、通常、反応過程の間制御された条件下、固形（粉末または微細結晶など）のものを何回かに小分けして（通常は１５から２０回に分けて）Ｓｃｈｉｆｆ塩基と反応溶媒の混合物に加える。
または、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素カリウムは、水酸化ナトリウム（通常、水素化ホウ素ナトリウムに対して水酸化ナトリウム約１５重量％）または水酸化カリウムを加えて安定化したメタノール溶液の形で、反応混合物に少しずつ、または滴下して加える。
Ｓｃｈｉｆｆ塩基還元を行う好適な方法に従って、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素カリウムの安定メタノール溶液を、Ｓｃｈｉｆｆ塩基および所定量の反応溶媒、好ましくはメタノールを含有する反応混合物に、１５から２５回に分けて加えるか、１から２時間かけて滴下する。
選択した溶媒に飽和するまで溶解しているＳｃｈｉｆｆ塩基と固形のＳｃｈｉｆｆ塩基の両方が同時に存在し、溶媒相外のＳｃｈｉｆｆ塩基の量が最大になるような溶媒対Ｓｃｈｉｆｆ塩基の比である条件下で還元工程を行うために、用いる溶媒の量は、適切に選択しなければならない。
従って、還元工程で用いられる有機溶媒の合計量は、Ｓｃｈｉｆｆ塩基１モルあたり０．５Ｌから３．０Ｌ、好ましくは０．７Ｌから２．５Ｌ、より好ましくは０．８Ｌから２．０Ｌの範囲が可能である。このような条件下、還元工程が進行している反応媒体中に存在するＳｃｈｉｆｆ塩基の相当部分は、反応過程の実質的な部分において、固形である。このような条件下、最終生成物の生産性は非常に高く、このことは工業規模の生産において経済的に好影響を及ぼす。
還元工程にかけられる反応混合物のｐＨは、アルデヒドとアラニンアミド（ａｌａｍｉｎａｍｉｄｅ）誘導体との縮合にアラニンアミドの塩が用いられた場合、必要であれば、塩基（水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、第三級（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアミン、ピロリジン、４−メチルモルホリンなど）を適切な量で加えることにより、７から９、好ましくは８から８．５の間の値に調整される（ｐＨメーターを用いて直接反応混合物で測定する。）。
還元工程中の反応温度は、−１０℃から３０℃、好ましくは５℃から１５℃の間に維持される。
還元時間は、用いる溶媒、温度、濃度などによって、０．５から５時間と変えることができる。全ての要因は、当業者に周知である。
還元剤として水素化ホウ素ナトリウムを用い、溶媒としてメタノールをＳｃｈｉｆｆ塩基１モルあたり０．８Ｌから２．０Ｌの割合で用い、５℃から１０℃の間の温度で、約３時間反応を行うと最適な結果が得られる。
反応が終了したら、反応溶媒を減圧下で蒸留し、残渣を水非混和性有機溶媒に溶解して、水で洗うことにより無機塩を除去する。
反応生成物が溶解している有機溶媒を蒸留して除去することにより、最終的な粗生成物、即ちサフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、またはそれぞれのラセミ混合物を回収する。
それから、粗サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー、またはそれぞれのラセミ混合物を、結晶化により精製する。結晶化は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、（Ｉａ、Ｉ’ａ）、または（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）の粗化合物それぞれを不活性有機溶媒に溶解した溶液に、混和性不活性有機非溶媒を加えることにより行うことができる。有機不活性溶媒は、好ましくは芳香族炭化水素（ベンゼン、トルエン、ジメチルベンゼン、およびエチルベンゼンなど）および酢酸低級アルキルエステルから選択され、より好ましくは、酢酸エチルである。混和性不活性有機非溶媒は、好ましくは低級脂肪族炭化水素（ヘキサンおよびヘプタンなど）およびシクロヘキサンから選択され、より好ましくはｎ−ヘキサンである。
または、結晶化は、最終的な粗生成物を熱有機溶媒（好ましくはトルエンまたはシクロヘキサン）に溶解し、それから溶液を室温に冷却して、純粋な生成物を濾過して回収することにより行う。
次に公知方法により塩基を所望塩に変換し、特に医薬用医薬製剤へのその後の製剤化に適した物理的／化学的性質（安定性、粒度、流動性等）をもつメタンスルホン酸塩に変換する。
（実施例１）
相間移動触媒反応による精製４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
２−フルオロベンジルクロリド（６．０ｋｇ，４１．５０ｍｏｌ）と４−ヒドロキシベンズアルデヒド（４．７ｋｇ，３８．３３ｍｏｌ）と炭酸カリウム（５．２ｋｇ，３７．３３ｍｏｌ）とテトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド（０．４９ｋｇ，１．４６ｍｏｌ）をトルエン（１１．４ｋｇ）に加えた混合物を窒素下で撹拌しながら還流温度までゆっくりと加熱し、６時間還流する。
次に溶液を室圧で濃縮し、トルエン３．６ｋｇを加えて留去し、この手順をもう一度繰り返す。
次に不均一混合物を室温まで冷却し、固形分を濾別する。次に残留溶媒を減圧除去し、油性残渣にトルエン１．４ｋｇを加える。混合物を約３０〜３５℃まで加熱し、純４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド数グラムをシード添加する。
不均一混合物を３０〜３５℃で３０分間撹拌した後、この温度で３０分間ｎ−ヘキサン（１１ｋｇ）を加える。
０〜５℃まで冷却し、この温度で更に１時間撹拌後、固形分を濾取し、減圧乾燥し、ｍ．ｐ．５６．７℃（ＤＳＣ，５℃／分）の４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド８．０ｋｇ（８９％収率）を得る。
ｍ．ｐ．５６．７℃（ＤＳＣ，５℃／分）、ＧＣ純度９８．２（面積％，実施例２４Ａ参照）及びＧＣ（実施例２４Ｂ参照）により測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量が０．０１重量％の４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド６６．８ｇ（９０％）が得られる。
（＊）本実施例および以下の実施例で報告する収率は特に指定しない限り、モル収率である。
１．１ 結晶化による４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）のさらなる精製
実施例１に記載の手順に従って調製した生成物１ｋｇを、還流下撹拌しながら、ジイソプロピルエーテル２ｋｇに溶解する。
溶液を１０から１５分間で５０から５５℃まで冷却し、高純度４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド５ｇ（ＧＣ純度９９．９面積％；実施例２４Ａを参照、（ＶＩｂ）含量は０．００５％未満）を種結晶として添加する。
懸濁液を４５〜６０分間で１０〜１５℃まで冷却し、更に１時間撹拌する。
最後に沈殿を濾取し、冷ジイソプロピルエーテル（０．２Ｋｇ）で洗浄し、減圧乾燥し、ＧＣ純度９９．８（面積％，実施例２４Ａ参照）及び実施例２４Ｂに従ってＧＣにより測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量が０．００５重量％の４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド０．９３ｋｇを得る。
１．２ 各種触媒を用いた相間移動触媒反応（ＰＴＣ）による４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
３種類の異なる相間移動触媒を用いた以外は実施例１と同一手順に従い、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．３９ｇ）を２−フルオロベンジルクロリドでアルキル化することにより、４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを調製する。
結果を以下の表５にまとめる。
Figure 2014159407
 ＊Ａｌｉｑｕａｔ３３６：トリカプリルメチルアンモニウムクロリド
＊＊％（ＶＩｂ）：３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの含量（ＧＣ：重量％）実施例２４Ｂ。
＊＊＊生成物を実施例１．１の手順に従ってさらに精製して、不純物（ＶＩｂ）の含量を０．０３重量％未満に減らしてもよい（実施例２４Ｂを参照）。
１．３ キシレン中での相間移動触媒反応（ＰＴＣ）による４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
トルエンの代わりにキシレンを溶媒として使用した以外は実施例１と同一手順に従って４−ヒドロキシベンズアルデヒド（４７ｇ）を２−フルオロベンジルクロリドと反応させることにより、ＧＣ（実施例２４Ｂ参照）により測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量が０．０２重量％の４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを８７．２％収率で製造する。
１．４ 水酸化カリウムを塩基として用いた相間移動触媒反応による４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
炭酸カリウムの代わりに水酸化カリウム（１０８．６ｇ）を使用した以外は実施例１と同一手順に従って４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２１ｇ）を２−フルオロベンジルクロリドと反応させることにより、ＧＣ（実施例２４Ｂ参照）により測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量が０．４９重量％の４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを８８％収率で製造する。
この生成物を実施例１．１に従って結晶化によりさらに精製し、不純物（ＶＩｂ）の含量を０．０３重量％未満に減らす（実施例２４Ｂを参照）。
１．５ ２−フルオロベンジルブロミドを用いた相間移動触媒反応による４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
実施例１と同一手順に従って４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１６１ｇ）を２−フルオロベンジルクロリドの代わりに２−フルオロベンジルブロミドと反応させることにより、ＧＣ（実施例２４Ｂ参照）により測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量が０．０６重量％の４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを８９．２％収率で製造する。
この生成物を実施例１．１に従って結晶化によりさらに精製し、不純物（ＶＩｂ）の含量を０．０３重量％未満に減らす（実施例２４Ｂを参照）。
１．６ イソプロパノール中での４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
反応器に、イソプロパノール（２０６ｋｇ）、炭酸カリウム（２９．４ｋｇ、０．２１ｋｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１１．４ｋｇ、０．０６８ｋｍｏｌ）、および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２６ｋｇ、０．２１ｋｍｏｌ）を投入する。混合物を、２０から２５℃で１５分間撹拌する。次に、２−フルオロベンジルクロリド（３３ｋｇ、０．２３ｋｍｏｌ）を加える。混合物を加熱して３時間還流撹拌する。
溶媒を減圧除去して残量７０ｌにする。
シクロヘキサン（７０ｋｇ）および水（９５ｋｇ）を加え、混合物を５０℃に加熱し、この温度で３０分間撹拌する。撹拌を止めて相を分離させる。
有機相を５０℃で水（４８Ｋｇ）で洗う。分離した有機相を減圧濃縮して残量６０ｌにする。
不均一混合物を約２時間で２０℃に冷却し、この温度で３０分間撹拌する。
混合物を遠心分離して、固体をシクロヘキサンで洗う。
濡れている固体を減圧下で乾燥させて、標記生成物を得る：４０．２ｋｇ（０．１８ｋｍｏｌ）；収率８２％、ＧＣ純度９９．８７（面積％、実施例２４Ａを参照）、および実施例２４Ｂに従ってＧＣにより測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量０．０６３重量％。
この生成物を実施例１．１に従って結晶化によりさらに精製し、不純物（ＶＩｂ）の含量を０．０３重量％未満に減らす（実施例２４Ｂを参照）。
１．７ エタノール中での４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
反応器に、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（３０．３ｇ、２４８ｍｍｏｌ）、エタノール（４００ｍＬ）、２−フルオロベンジルクロリド（２８．９２ｇ；１９８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１０３．８ｇ、７５１ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１．３４ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を投入する。窒素雰囲気下、混合物を加熱して還流撹拌し、この状態を５時間維持する。
混合物を室温まで冷却し、酢酸エチルで抽出して２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液で洗う（３×３００ｍＬ）。
溶媒を減圧でエバポレートし、標記化合物を、黄色油状物（４０．７５ｇ）として得る。この生成物はＧＣ純度９１．７７（面積％、実施例２４Ａを参照）および実施例２４Ｂに従って測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量０．３４６重量％を有する。
この生成物を実施例１．１に従って結晶化によりさらに精製し、不純物（ＶＩｂ）の含量を０．０３重量％未満に減らす（実施例２４Ｂを参照）。
（実施例２）
高純度（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）の調製（ワンポット反応）
ａ）反応器にメタノール（２５Ｌ）およびＬ−アラニンアミド塩酸塩（２．０ｋｇ）を撹拌しながら仕込み、混合物を２３℃で１５分間撹拌する（ｐＨ値３．８）。次に、トリエチルアミン（１．６５ｋｇ）および実施例１．１に従って調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（３．３２ｋｇ）を、先に調製してｐＨ値を８．３に調整した溶液に加える。混合物を２５℃で３時間撹拌し（不均一混合物のｐＨは８）、撹拌しながら８℃に冷却する。水素化ホウ素ナトリウム（０．５３ｋｇ）を２０回に小分けして撹拌しながら３時間で混合物に加え、さらに３０分撹拌を続ける。反応混合物を４０℃で減圧濃縮して残渣（５．２Ｌ）を得る。窒素雰囲気下撹拌しながら、トルエン（１３．９ｋｇ）および水（２３．０Ｌ）を反応混合物に加える。混合物を６０℃まで加熱し、撹拌しながら３０分間この温度に保つ。相を分離した後、６０℃で、有機相を水（６．４Ｌ）で洗い、この水は廃棄する。有機相を２時間で１８℃に冷却し、この状態を１時間維持する。
不均一混合物を濾過し、固体をトルエン（３×１．０Ｌ）で洗い、減圧下約４０℃で乾燥させて、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド、Ｉｂ）３．９６Ｋｇを得る：実施例２５Ａの方法に従って測定したＨＰＬＣ純度９９．４（面積％）、および実施例２５Ｂの方法に従ってＨＰＬＣにより測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００５重量％未満。
ｂ）水素化ホウ素ナトリウムを、メタノール（水素化ホウ素ナトリウム１グラムあたりメタノール約５．８ｇ）と３０％水酸化ナトリウム（水素化ホウ素ナトリウム１グラムあたり３０％水酸化ナトリウム約０．５ｇ）の混合物にあらかじめ溶解し、温度を８℃に保ちながら約３０分でＳｃｈｉｆｆ塩基混合物に滴下することを除いては、上記と同一条件下で反応を行う。
得られる生成物は、実施例２５Ａに従って測定したＨＰＬＣ純度が９９．５％であり、実施例２５Ｂに従ってＨＰＬＣにより測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化不純物含量が０．００５重量％未満である。
ｃ）室温で撹拌しながら、無水トリエチルアミン（１９．８ｋｇ、０．２０ｋｍｏｌ）をメタノール（２７５Ｌ）とＬ−アラニンアミド塩酸塩（２４．４ｋｇ、０．２０ｋｍｏｌ）の混合物に加える。
この混合物に、実施例１．６で調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（４０．０ｋｇ、０．１７ｋｍｏｌ）を約２０分で加え、反応混合物を２５℃で３時間撹拌し、それからすぐ温度を８℃に下げる（混合物Ａ）。
第二の反応器に、メタノール（５０ｌ）および水酸化ナトリウム３０％水溶液（３．２ｋｇ）を入れて０から５℃で混合する。この混合物に、０から５℃で、水素化ホウ素ナトリウム粉末（６．６ｋｇ、０．１７ｋｍｏｌ）を小分けして加える。窒素下、混合物を０から５℃で２時間撹拌する（混合物Ｂ）。
窒素下撹拌しながら、温度を８℃に保ちながら約４時間で、上記反応混合物Ａに混合物Ｂを加える。
反応混合物を減圧濃縮して残量７０ｌにする。窒素下撹拌しながら、残渣にトルエン（１７０ｋｇ）および水（２８０ｋｇ）を加え、混合物を６０から６５℃に加熱する。
有機相を分離して水（７０ｋｇ）を加え、２相混合物を６０から６５℃で撹拌する。
有機相を分離して、徐々に２０℃まで冷却する。
混合物を遠心分離して、固体をトルエンで洗い、減圧下乾燥後、標記生成物を得る（４８．４Ｋｇ、０．１６ｋｍｏｌ）、収率：９２％。
生成物のＨＰＬＣ純度は９９．８７（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量は、０．００５重量％未満である（実施例２５Ｂを参照）；ｍ．ｐ．１０９．５℃（キャピラリー）。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドのエナンチオマー組成はＳ−エナンチオマー１００％（面積％、実施例２６Ａを参照）である。
（実施例３）
高純度（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）の調製
実施例２ａに記載したように製造するラルフィナミド（２．８ｋｇ，９．２６ｍｏｌ）を２−イソプロパノール（１９．５ｋｇ）に溶かし、不活性雰囲気下で撹拌下に６５〜７０℃に維持する。
活性炭（１５０ｇ）処理と濾過後に、溶液に純ラルフィナミドメタンスルホン酸塩をシード添加し、５０〜５５℃の温度で撹拌下にメタンスルホン酸（９００ｇ，９．３６ｍｏｌ）を３０分間加える。次に懸濁液を２時間で１５〜２０℃まで冷却し、撹拌を更に１時間続ける。最後に固形分を濾取し、減圧乾燥し、ラルフィナミドメタンスルホン酸塩３．４６ｋｇ（９４．０％収率）を得る。
得られた生成物のＨＰＬＣ純度は９９．７（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％（実施例２５Ｂ参照）であり、ＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．２４０．９℃である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は９９．９（面積％，実施例２６Ａ参照）である。
ｂ）実施例２ｂ）に記載した通りに調製したラルフィナミド（２．８ｋｇ、９．２６ｍｏｌ）を、上記の手順によりこのメタンスルホン酸塩に変換する。収率は９５．８％である。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．６（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％未満（実施例２５Ｂを参照）である；ＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．２４０．６℃。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は９９．８超（面積％、実施例２６Ａ参照）である。
ｃ）２−プロパノール（３８５ｋｇ）と実施例２ｃ）で調製した（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド、４８．１ｋｇ、０．１６ｋｍｏｌ）の混合物を、撹拌しながら６０℃に加熱し、透明な溶液となるまでこの状態を維持する。
６０℃で、溶液に無水メタンスルホン酸をゆっくりと加える。
不均一混合物を２０℃に冷却し、この温度で２時間撹拌する。
混合物を遠心分離し、固体を２−プロパノールで洗い、減圧下乾燥させて、標記生成物６１ｋｇ（０．１５ｋｍｏｌ）を得る；収率９６％；ＨＰＬＣ純度９９．８３（面積％、実施例２５Ａを参照）を有しＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩を０．００５重量％未満（実施例２５Ｂを参照）含む；ｍ．ｐ．２３７℃（キャピラリー）。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー組成はＳ−エナンチオマー１００％（面積％、実施例２６Ａを参照）である。
（実施例４）
Ｌ−アラニンアミド塩基を用いた高純度（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）の調製（ワンポット反応）
ａ）（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）
ナトリウムメチラート等モル量をＬ−アラニンアミド塩酸塩（３０ｇ）のエタノール（３５１ｍＬ）溶液に加えてＬ−アラニンアミド遊離塩基を調製する。窒素下室温で、混合物を３０分間撹拌する。固体を濾過し、溶媒を減圧下完全に除去してＬ−アラニンアミド２１．１ｇを得る。
丸底フラスコ中、Ｌ−アラニンアミド２１．１ｇをメタノール３２０ｇ（約４０５ｍＬ）に溶解する。
２０℃で約１５分後、実施例１．１に従って調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド４８．８ｇを加え、混合物を室温で２０時間撹拌する。
混合物を８±２℃に冷却し、温度を８±２℃に維持しながら、混合物に固体のＮａＢＨ４８ｇを小分けして加える。
反応混合物を少なくとも１２時間撹拌し、それから最小量まで濃縮する。
トルエン（２４８ｍＬ）および水（３５５ｍＬ）を加え、二相混合物を７０℃で撹拌し、それから有機層を分離する。
７０℃で、有機溶液を水（７０ｍＬ）で洗い、それから室温に冷却して懸濁液を得る。懸濁液をろ過してトルエンで洗う。
固体を減圧下４０℃で乾燥させ、標記生成物４７．７ｇ（収率７４．４％）を白色粉末として得る。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９５．８５（面積％、実施例２５Ａを参照）でありＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量は０．００５重量％未満（実施例２５Ｂを参照）である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドのＲ／Ｓエナンチオマー比は、５２．５／４７．５（面積％、実施例２６Ａを参照）である。
イミノアルキル化反応過程をさらに続ける（ｃｏｎｔｒｏｌ）と、この工程中にラセミ化が生じることがわかる。
ｂ）（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）
丸底フラスコに、２−プロパノール１２９．５ｇおよび工程ａ）の生成物１６．５ｇを入れて、完全に溶解するまで撹拌しながら７０±３℃に加熱する。
温度を７０±３℃に保ちながら、メタンスルホン酸５．２ｇを滴下する。７０±３℃で３０分間撹拌した後、混合物をゆっくりと２０±３℃に冷却し、それから１時間撹拌する。
生成物を濾過し、２−プロパノールで洗い、減圧下４０℃で乾燥させて、標記生成物１９．４ｇを白色粉末として得る。
収率：９２％；ＨＰＬＣ純度９９．７４（面積％、実施例２５Ａを参照）を有し、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩を０．００５重量％（実施例２５Ｂを参照）含む。こうして得られた（Ｒ，Ｓ）ラルフィナミドは、キラルＨＰＬＣカラムによりＳ：Ｒ＝５３．８：４７．０（面積％、実施例２６Ａを参照）のエナンチオマー混合物であることがわかる。
（実施例５）
高純度（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）の調製（ワンポット反応）
ａ）（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）
反応器にメタノール（２８Ｌ）およびＤ−アラニンアミド塩酸塩（２．１ｋｇ）を撹拌しながら仕込み、混合物を２３℃で１５分間撹拌する。次に、トリエチルアミン（１．６５ｋｇ）および実施例１．１に従って調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（３．３０ｋｇ）を、先に調製した溶液に加える。混合物を２５℃で３時間撹拌し、撹拌しながら８℃に冷却する。水素化ホウ素ナトリウム（０．５０ｋｇ）を小分けして３時間で撹拌しながら加え、混合物をさらに３０分間撹拌する。反応混合物を４０℃で減圧濃縮して残渣（５．０Ｌ）を得て、それから窒素下撹拌しながら、トルエン（１４ｋｇ）および水（２５．０Ｌ）を反応混合物に加える。混合物を６０℃まで加熱し、撹拌しながら３０分間この温度に保つ。相を分離した後、６０℃で、有機相を水（７．０Ｌ）で洗い、この水は廃棄する。有機相を２時間で１８℃に冷却し、この状態を１時間維持する。
不均一混合物を濾過し、固体をトルエン（３×１．２Ｌ）で洗い、減圧下約４０℃で乾燥させて、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）３．９０Ｋｇを得る：実施例２５Ａの方法に従って測定したＨＰＬＣ純度９９．９（面積％）、および実施例２５Ｂの方法に従ってＨＰＬＣにより測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００５重量％未満。
ｂ）（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）
上記実施例５ａ）に従って得られたラルフィナミドＲ−エナンチオマーを実施例３ａと同一の手順に従ってメタンスルホン酸塩に変換する。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．９（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％未満（実施例２５Ｂを参照）である；ＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．２４１．０℃。
キラルＨＰＬＣカラムで測定した（Ｉ’ｄ）のエナンチオマー純度は９９．９超（面積％、実施例２６Ｂを参照）である。
（実施例６）
Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩｂ）を単離する、高純度（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）の調製
ａ）（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩｂ）
実施例１．１の通りに調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（６０．０ｇ、０．２６ｍｏｌ）、とＬ−アラニンアミド塩酸塩（３５．７ｇ、０．２９ｍｏｌ）をメタノール（２８０ｍＬ）に加えた懸濁液に、窒素雰囲気下撹拌しながら室温で、トリエチルアミン（２９．１ｇ、０．２９ｍｏｌ）を加える。さらに１時間撹拌を続ける。
溶液に（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド数ｍｇを種結晶として加え、温度を５から１０℃に下げて撹拌を２時間続ける。
固体を濾過して集め、０℃でメタノールで洗う。
減圧下で乾燥させて、標記化合物を収率９０％で得る：ｍ．ｐ．１２２℃（キャピラリー）。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：１．４６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ３）；３．９１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ−ＣＯ）；５，１７（２Ｈ，ｓ，Ｏ−ＣＨ２）；７，０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８，９Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ２とオルトにある芳香族Ｈ）；７．０９（１Ｈ，ｄｄｄ，ＪＨ−Ｆ＝９，７８Ｈｚ，Ｊｏｒｔｏ＝８，５５Ｈｚ，Ｊｍｅｔａ＝１，２３Ｈｚ，Ｆとオルトにある芳香族Ｈ）；７，１５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊｏｒｔｏ＝７，３５Ｈｚ，Ｊｍｅｔａ＝１，２３Ｈｚ，Ｆとパラにある芳香族Ｈ）；７，２７−７，４０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ２とパラにある芳香族Ｈ）；７，４８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊｏｒｔｏ＝ＪＨ−Ｆ＝７，３５Ｈｚ，Ｊｍｅｔａ＝１，５３Ｈｚ，ＣＨ２とオルトにある芳香族Ｈ）；７，７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８，９Ｈｚ，ＣＨ＝Ｎとオルトにある芳香族Ｈ）；８，１７（１Ｈ，ｓ，Ｃ＝Ｎ）
１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，７５．４ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ｐｐｍ）：２１．４（ＣＨ３）；６３．８（ＯＣＨ２）；６８．４（Ｈ２ＮＣＯＣＨ）；１１５．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２．４Ｈｚ，芳香族ＣＨ），１１５．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２０．７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２３．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１４．４Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２４．５（ｂｄ，芳香族ＣＨ）；１２９．０（第四級芳香族Ｃ）；１２９．８（ｂｄ，芳香族ＣＨ）；１３０．１（ｂｄ，２芳香族ＣＨ）；１６０．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４６．４Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１６１．１（芳香族Ｃ−Ｏ）；１６１．１（Ｃ＝Ｎ）；１７６．９（ＣＯＮＨ２）
ｂ）（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）
上記の通り調製した（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩｂ）（３０ｇ）とメタノール（１８０ｍＬ）の混合物を撹拌しながら２から５℃に冷却する。温度を５℃未満に保ちながら、調製した冷混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（３．８ｇ）を１８回に分けて９０分で少しずつ加える。それから混合物を５℃でさらに１０分間撹拌する。反応混合物を減圧濃縮し、実施例２に記載される通りに後処理して、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド、Ｉｂ）２８．７５ｇ（収率９５％）を得る：実施例２５Ａの方法に従って測定したＨＰＬＣ純度９９．５（面積％）、および実施例２５Ｂの方法に従ってＨＰＬＣにより測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００５重量％未満。
ｃ）（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）
上記実施例６ｂ）に記載される通りに得られたラルフィナミドを、実施例３に記載される通りにメタンスルホン酸と反応させ、メタンスルホン酸塩（Ｉｄ）を収率９５％で得る。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．９（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％未満（実施例２５Ｂを参照）である；ＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．２４０．６℃。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は９９．９超（面積％、実施例２６Ａを参照）である。
（実施例７）
Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩ’ｂ）を単離する、高純度（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）の調製
ａ）（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩ’ｂ）
実施例１．１の通りに調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（６０．０ｇ、０．２６ｍｏｌ）とＤ−アラニンアミド塩酸塩（３５．７ｇ、０．２９ｍｏｌ）をメタノール（２８０ｍＬ）に加えて懸濁液とし、窒素雰囲気下撹拌しながら室温で、これにトリエチルアミン（２９．１ｇ、０．２９ｍｏｌ）を加える。さらに１時間撹拌を続ける。
次に、溶液に、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド数ｍｇを種結晶として加え、温度を５から１０℃に下げて撹拌を２時間続ける。
固体を濾過して集め、０℃でメタノールで洗う。
固体を減圧下で乾燥させて、標記化合物を収率９１％で得る；ｍ．ｐ．１２１℃（キャピラリー）。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：１．４６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ３）；３．９１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ−ＣＯ）；５，１７（２Ｈ，ｓ，Ｏ−ＣＨ２）；７，０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８，９Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ２とオルトにある芳香族Ｈ）；７．０９（１Ｈ，ｄｄｄ，ＪＨ−Ｆ＝９，７８Ｈｚ，Ｊｏｒｔｏ＝８，５５Ｈｚ，Ｊｍｅｔａ＝１，２３Ｈｚ，Ｆとオルトにある芳香族Ｈ）；７，１５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊｏｒｔｏ＝７，３５Ｈｚ，Ｊｍｅｔａ＝１，２３Ｈｚ，Ｆとパラにある芳香族Ｈ）；７，２７−７，４０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ２とパラにある芳香族Ｈ）；７，４８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊｏｒｔｏ＝ＪＨ−Ｆ＝７，３５Ｈｚ，Ｊｍｅｔａ＝１，５３Ｈｚ，ＣＨ２とオルトにある芳香族）；７，７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８，９Ｈｚ，ＣＨ＝Ｎとオルトにある芳香族Ｈ）；８，１７（１Ｈ，ｓ，Ｃ＝Ｎ）
１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，７５．４ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ｐｐｍ）：２１．４（ＣＨ３）；６３．８（ＯＣＨ２）；６８．４（Ｈ２ＮＣＯＣＨ）；１１５．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２．４Ｈｚ，芳香族ＣＨ），１１５．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２０．７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２３．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１４．４Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２４．５（ｂｄ，芳香族ＣＨ）；１２９．０（第四級芳香族Ｃ）；１２９．８（ｂｄ，芳香族ＣＨ）；１３０．１（ｂｄ，２芳香族ＣＨ）；１６０．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４６．４Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１６１．１（芳香族Ｃ−Ｏ）；１６１．１（Ｃ＝Ｎ）；１７６．９（ＣＯＮＨ２）
ｂ）（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩ’ｂ）（３０ｇ）とメタノール（１８０ｍＬ）の混合物を撹拌しながら２から５℃に冷却する。温度を５℃未満に保ちながら、調製した冷混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（３．８ｇ）を２０回に小分けして９０分で加える。それから混合物を５℃でさらに１０分間撹拌する。反応混合物を減圧濃縮し、実施例２に記載される通りに後処理して、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）２８．４４ｇ（収率９４％）を得る；実施例２５Ａの方法に従って測定したＨＰＬＣ純度９９．８（面積％）、および実施例２５Ｂの方法に従ってＨＰＬＣにより測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００５重量％未満。
ｃ）（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）の調製
上記実施例７ｂに従って得られるラルフィナミドのＲ−エナンチオマーを、実施例３ａに記載される通りにメタンスルホン酸と反応させ、メタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）を収率９５％で得る。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．９（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％未満である（実施例２５Ｂを参照）；ＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．２４０．６℃。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したラルフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は９９．８超（面積％、実施例２６Ｂを参照）である。
（実施例７Ａ）
（Ｒ，Ｓ）２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）
ａ）２５０ｍＬガラス反応器にメタノール（５４ｍＬ）および（Ｒ，Ｓ）アラニンアミド塩酸塩（１０．０９ｇ、８２ｍｍｏｌ）を仕込み、２５℃で無水トリエチルアミン（１１．３６ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を滴下する。
実施例１．６で調製した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１５．９９ｇ、６９ｍｍｏｌ）を約１０分で加え、混合物を２５℃で１２時間撹拌する（混合物Ａ）。
第二の反応器（５０ｍＬ）中、メタノール（２０ｍＬ）および水酸化ナトリウム３０％水溶液（１．３ｇ）を撹拌して混合し、温度を０．６℃に下げる。１℃で、溶液に、水素化ホウ素ナトリウム粉末（２．６１ｇ、６９ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。窒素下１℃で、混合物を２時間撹拌する（混合物Ｂ）。
窒素下撹拌して温度を１０℃に保ちながら、上記の混合物Ａに混合物Ｂを約３０分で加える。
反応混合物を１０℃で３０分間撹拌し、減圧濃縮して残量２０ｍＬにする。窒素下撹拌しながら、残渣にトルエン（７０ｍＬ）および水（１２０ｍＬ）を加え、混合物を６０から６５℃に加熱する。
有機相を分離して水（２０ｍＬ）を加え、混合物を６０から６５℃で撹拌する。
有機相を分離して約７℃まで徐々に冷却し、３時間この状態に保つ。
混合物を濾過し、固体をトルエン（３×５ｍＬ）で洗って減圧下で乾燥させて、（Ｒ，Ｓ）２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（１３．５９ｇ）を得る；収率６５．２％。
生成物のＨＰＬＣ純度は９７．７３％（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量は０．０２０重量％（実施例２５Ｂを参照）である。
このようにして得られる（Ｒ，Ｓ）ラルフィナミドは、キラルＨＰＬＣカラムによりＳ：Ｒ＝５２．３：４７．７（面積％、実施例２６Ａを参照）のエナンチオマー混合物であることがわかる。
ｂ）２−プロパノール（１０２ｍＬ）と実施例７ａ）で調製した（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（１０ｇ、３３ｍｍｏｌ）の混合物を撹拌しながら７０℃に加熱し、透明な溶液になるまでこの状態に保つ。
６０℃で、この溶液に、無水メタンスルホン酸（３．１８ｇ；２．１５ｍＬ）をゆっくりと加える。
不均一混合物を２０℃に冷却し、この温度で２時間撹拌する。
混合物を遠心分離し、固体を２−プロパノールで洗って減圧下乾燥させて、標記生成物１０．７７ｇを得る；
収率９２％；ＨＰＬＣ純度９９．５０（面積％、実施例２５Ａを参照）を有し、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩を０．００９重量％（実施例２５Ｂを参照）含む。
このようにして得られる（Ｒ，Ｓ）ラルフィナミドは、キラルＨＰＬＣカラムによりＳ：Ｒ＝５２．８：４７．２（面積％、実施例２６Ａを参照）のエナンチオマー混合物であることがわかる。
［α］２５ Ｄ（ｃ２％、メタノール中）：０．０４７３
（実施例８）
（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｄ）の調製
ａ）３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）
５Ｌ丸底フラスコに、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２９３ｇ、２．４０７ｍｏｌ）、炭酸カリウム（３１５．８５ｇ、２．２８７ｍｏｌ）、トルエン（９００ｍＬ）、および２−フルオロベンジルクロリド（１３９２ｇ、９．６２８ｍｏｌ）を順番に加える。
撹拌しながら、反応混合物に水（１５０ｍＬ）を加える。
混合物を急速に加熱して還流させ、この状態に３日間保つ。
ＧＣ分析により、３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）が３．２重量％（実施例２４Ｂを参照）存在することが明らかとなる。
混合物を６０℃に冷却し、撹拌しながら水（１０００ｍＬ）を加える。相を分離させる。有機相をブライン（５００ｍＬ）で洗う。それから溶媒を、それ以上溶媒が出てこなくなるまで、３５℃で減圧（１０ｍｍＨｇ）蒸留する。
残渣を３ｍｍＨｇで蒸留して１８０から２２０℃の画分を集める。蒸留残渣を冷却してＣＨ２ＣＩ２に溶解し、溶媒を減圧除去して残渣を得る。ＧＣ純度は８９％であるが、原料のアルデヒドは０．５％である。
ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５を用いたシリカゲルクロマトグラフィーによりＧＣ純度９９％超（面積％；ＧＣ条件は実施例２４Ｂを参照）である生成物（１５．７ｇ）を得る。生成物のｍ．ｐ．７１℃（キャピラリー）。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：４．０６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）；５．２３（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２）；６．９５−７．４０（９Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）；７．６７（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，Ｃ＝ＯおよびＣＨ２とオルトにある芳香族Ｈ）；７．７６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝２．１Ｈｚ，Ｊ２＝８．３Ｈｚ，Ｃ＝Ｏおよび芳香族ＣＨとオルトにある芳香族Ｈ）；９．８４（１Ｈ，ｓ，ＣＨＯ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，７５．４ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ｐｐｍ）：２９．２（ＣＨ２）；６４．１（ＯＣＨ２）；１１１．４（芳香族ＣＨ）；１１５．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２．０Ｈｚ，芳香族ＣＨ），１１５．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１．１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２３．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１４．２Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２４．１（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２．６Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２４．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝３．２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２６．６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１５．５Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２８．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝８．１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２９．６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６．２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２９．６（第四級芳香族Ｃ）；１３０．０（第四級芳香族Ｃ）；１３０．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝８．３Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３１．１（芳香族ＣＨ）；１３１．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝４．１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３１．８（芳香族ＣＨ）；１６０．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４６．８Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１６１．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５．１Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１６１．３（第四級芳香族Ｃ）；１９１．１（ＣＨＯ）。
ｂ）（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）
３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（３．５６ｇ，０．０１０５ｍｏｌ）を５０ｍＬフラスコに加え、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩（１．２ｇ，０．０１１９ｍｏｌ）のメタノール溶液１７ｍＬに撹拌下にトリエチルアミン（１．４８ｇ，０．０１１９ｍｏｌ）を注意深く加えることにより予め調製した溶液を室温で加える。
この反応混合物を室温で１時間撹拌し（対応するイミンの析出が生じる。）、それから混合物を０．１８Ｌオートクレーブに移して湿った（５０％Ｈ２Ｏ）Ｐｔ／Ｃ５％０．３４ｇを加える。
オートクレーブ中の空気を窒素でパージし、それから水素を５．０ｂａｒで導入する。
３５℃で反応を３から５時間実施する。
室温まで冷却し、触媒を濾過して除去した後、溶媒を減圧蒸留して約６．５ｇの残渣を得る。この残渣に、水（２２ｍＬ）を加え、撹拌しながら少なくとも２時間この温度に保つ。
得られる結晶を濾過して水で洗う。標記化合物を収率８３％（０．００８７２ｍｏｌ）で得る；ｍ．ｐ．１６１℃（キャピラリー）。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：１．３２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ３）；１．９７（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）；３．２２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ−ＣＯ）；３．６７（２Ｈ，ＡＢｑ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，ＮＣＨ２のジアステレオトピックＨ）；４．０３（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）；５．１２（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２）；５．９８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２）；６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊｏｒｔｈｏ＝８．３Ｈｚ，ＣＨ２ＮＨおよび芳香族ＣＨとオルトにある芳香族Ｈ）；６．９５−７．４０（１０Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，７５．４ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ｐｐｍ）：１９．６（ＣＨ３）；２９．２（ＣＨ２）；５２．０（ＮＨＣＨ２）；５７．７（Ｈ２ＮＣＯＣＨ）；６３．８（ＯＣＨ２）；１１１．７（芳香族ＣＨ）；１１５．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１．９Ｈｚ，芳香族ＣＨ），１１５．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１．３Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝３．５Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２４．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２．９Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２４．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１４．４Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２７．５（芳香族ＣＨ）；１２７．６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１５．０Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２７．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７．５Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２８．８（第四級芳香族Ｃ）；１２９．０−１３０．０（ｍ，２芳香族ＣＨ）；１３０．５（芳香族ＣＨ）；１３１．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝４．６Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３１．８（第四級芳香族Ｃ）；１５５．６（第四級芳香族Ｃ）；１６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５．８Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１６１．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４４．６Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１７８．２（ＣＯＮＨ２）。
ｃ）（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｄ）
０．２Ｌガラス反応器中、（Ｓ）−３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド塩基３．５９ｇ（０．００８７２ｍｏｌ）を２−プロパノール４０．０ｍＬに溶解させる。溶液を撹拌しながら５５から６０℃に加熱し、この温度に１時間保つ。この溶液に、メタンスルホン酸（０．００８８１ｍｏｌ）を１５分で加え、温度を９０分で２０℃に下げる。一晩後、固体を濾過して集め、減圧下５０℃で乾燥させ、それからメタノールから結晶化させて（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩を収率８９％で得る；ｍ．ｐ．１９０℃（キャピラリー）。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ３ＣＨ）；２．３３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３ＳＯ３）；３．５０−４．２０（５Ｈ，ｍ，ＣＨ−ＣＯ，ＣＨ２，ＮＣＨ２のジアステレオトピックＨ）；５．１９（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２）；６．９５−８．００（１１Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）；９．０２（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２ ＋）。
１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６，７５．４ＭＨｚ，２９８Ｋ）δ（ｐｐｍ）：１６．５（ＣＨ３）；２８．８（ＣＨ２）；４８．６（ＮＨＣＨ２）；５４．９（Ｈ２ＮＣＯＣＨ）；６４．３（ＯＣＨ２）；１１２．８（芳香族ＣＨ）；１１５．０−１１７．０（２芳香族ＣＨ）；１２４．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１４．４Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２４．４（第四級芳香族Ｃ）；１２４．８（芳香族ＣＨ）；１２５．０（芳香族ＣＨ）；１２７．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１６．１Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１２８．６（第四級芳香族Ｃ）；１２８．８（芳香族ＣＨ）；１２９．０−１３３．０（ｍ，５芳香族ＣＨ）；１５６．９（第四級芳香族Ｃ）；１６０．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５．２Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１６０．９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４３．５Ｈｚ，第四級芳香族Ｃ）；１７１．１（ＣＯＮＨ２）。
ｄ）（ＩＩｄ）を０．１３重量％含有するラルフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）の分取ＨＰＬＣによる単離
（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）をメタンスルホン酸塩（ＩＩｄ）として０．１３重量％含有するＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９，方法Ａに従って製造するサフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）２００ｇからも（ＩＩｂ）のサンプル（１００ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより単離する。
キラルカラムでのＨＰＬＣ分析（実施例２７Ｃを参照）は、Ｓエナンチオマー（ＲＴ７．３）対Ｒエナンチオマー（ＲＴ７．６）の比が９９．５／０．５を超えることを示す。分離は、以下のスキームに従って、２段階で実施する（ステージ１およびステージ２）：
Figure 2014159407
ステージ１
第１段階の目的はＩＩｂ／ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）含量の多い粗生成物を単離することである。
分取ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。
分取ＨＰＬＣ条件：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００（往復ポンプ、低圧ミキサー付きグラジエントコントローラー）
Ｒａｄｉａｌ Ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅ Ｐｒｅｐ ＬＣ Ｂａｓｅ（Ｗａｔｅｒｓ）
Ｊａｓｃｏ ７１２５可変波長ＵＶ検出器，ｏ．ｐ．０．２ｍｍ
Ｍｅｒｋ Ｄ２０００プリンター−プロッター
カラム：Ｄｅｌｔａ Ｐａｋ Ｃ１８，１５μｍ，４０ｘｌ００ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）。
溶離液Ａ：７０／３０，水／アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
溶離液Ｂ：３０／７０，水／アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
流速：２７．０ｍｌ／分
勾配：４０分間，１００％Ａ一定→１分間で１００％Ｂ
検出：ＵＶ２２７ｎｍ
注入：水５０ｍｌ中５ｇ（ポンプ入口側配管Ｄによる）
ステージ２
この段階はＴＦＡをＩＩｂ／ＴＦＡから除去し、ＩＩｂを更に精製するために必要である。
以下の分取ＨＰＬＣ条件を使用してＩＩｂ／ＴＦＡをクロマトグラフィー精製する。
画分４及び５を合わせ、アセトニトリルが完全に除去されるまで４０℃で減圧蒸発させる。残留水溶液を４℃の冷蔵庫に保存する。不溶分を濾過により単離し、室温で減圧乾燥し、ＩＩｂ（１００ｍｇ；ＨＰＬＣ純度１００％）を得る。
分取ＨＰＬＣ条件：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００（往復ポンプ、低圧ミキサー付きグラジエントコントローラー）
Ｊａｓｃｏ ７１２５可変波長ＵＶ検出器，ｏ．ｐ．０．２ｍｍ
Ｍｅｒｋ Ｄ２０００プリンター−プロッター
カラム：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ １８，７μｍ，２０ｘ２５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）
溶離液Ａ：７０／３０，水／アセトニトリル
溶離液Ｂ：３０／７０，水／アセトニトリル
流速：１５．０ｍｌ／分
勾配：２０分間，１００％Ａ一定→１分間で１００％Ｂ
検出：ＵＶ２２７ｎｍ
注入：不純物「ＩＩａ／ＴＦＡ」溶液５０ｍｌ（ポンプ入口側配管Ｄによる）
（実施例９）
（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｄ）の調製
ａ）３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）
標記化合物を実施例８ａ）に従って調製する。
ｂ）（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド
実施例８ｂ）の手順に従って、実施例９ａ）の通りに調製した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）をＤ−アラニンアミド塩酸塩と反応させることにより、標記化合物を調製する。
ｃ）（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｄ）
実施例８ｃ）に記載されるのと同一の手順により、工程ｂ）で得られた（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドを標記化合物に変換する。
１Ｈ−ＮＭＲデータ、１３Ｃ−ＮＭＲデータに基づき、（ＩＩ’ｄ）の構造をこのようにして得られたメタンスルホン酸塩に割り当てる。１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル、およびｍ．ｐ．１９０℃（キャピラリー）は、Ｓ−エナンチオマー（ＩＩｄ）のものと完全に一致する（実施例８ｃを参照）。
キラルカラムでのＨＰＬＣ分析（実施例２７Ｃを参照）は、Ｒ−エナンチオマー（ＲＴ７．６）対Ｓ−エナンチオマー（ＲＴ７．３）の比が９９．５／０．５を超えることを示す。
（実施例９Ａ）
（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）の調製
上記の実施例８ａ）に従って調製した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）（５．ｇ）、と（Ｒ，Ｓ）アラニンアミド塩酸塩から、実施例８ｂ）にある手順どおりに、（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドを調製する。
実施例９ｃ）に記載される手順により、生成物をメタンスルホン酸塩に変換する。この塩は（ＶＩｂ）から収率７０％で得られる。
分光分析データはＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ｄ）のものと完全に一致する（実施例９ｃを参照）。
キラルカラムでのＨＰＬＣ分析（実施例２７Ｃを参照）は、Ｒ−エナンチオマー（ＲＴ７．６）とＳ−エナンチオマー（ＲＴ７．３）の比が１：１であることを示す。
［α］２５ Ｄ（ｃ１％、メタノール中）０℃
（実施例１０）
精製した４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）の調製
ａ）４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．２８ｋｇ、１８．６８ｍｏｌ）、炭酸カリウム、（２．８４ｋｇ、２０．５４ｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（０．３３ｋｇ、１．９８ｍｏｌ）をエタノール（２１．０ｋｇ）に加えた混合物に、撹拌しながら室温で、３−フルオロベンジルクロリド（２．７０ｋｇ、１８．６８ｍｏｌ）を加える。
混合物を徐々に加熱して還流させ、それからこの温度に６時間保つ。
それから反応混合物を２５℃に冷却し、懸濁液を濾過して固体をエタノール（１．５ｋｇ）で洗う。エタノール液を１つにまとめ、それから減圧濃縮して約６．０ｋｇの残渣を得る。
この残渣に、トルエン（１０ｋｇ）および水（２．５ｋｇ）を加え、溶媒混合物を３０分間激しく撹拌し、水相を分離した後、有機層を減圧下乾固するまでエバポレートして粗４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを得る。
この生成物をトルエン（３ｋｇ）に溶解して、２０から２５℃で撹拌しながらそこに４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを種結晶として加え、次にｎ−ヘキサン（６．０ｋｇ）を４５分かけて加え、混合物を撹拌しながら０℃に冷却する。
３時間後、固体を濾過してｎ−ヘキサン（２．０ｋｇ）で洗う。乾燥させて、所望の生成物３．９５ｋｇ（収率９２．０％）を得る；ガスクロマトグラフィー純度９９．８（面積％、実施例２４Ａを参照）、およびＧ．Ｃ．で測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．０１重量％（面積％、実施例２４Ｂを参照）；ＤＳＣ５℃／分によるｍ．ｐ．４３．１℃。
標記化合物のさらなる調製を以下の通り行った：
ｂ）１０Ｌ反応器に、２−プロパノール（５．５１ｋｇ）、炭酸カリウム（７９３ｇ、５．７４ｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（３０５ｇ、１．８４ｍｏｌ）、および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（７００ｇ、５．７４ｍｏｌ）を投入する。混合物を２０から２５℃で１５分間撹拌する。
滴下ロートを用いて、３−フルオロベンジルクロリド（８７１ｇ、６．０３ｍｏｌ）を約２０分で反応器に投入する。
混合物を３時間撹拌しながら加熱還流する。
その後、混合物を約５０℃に冷却し、方法制御のためにサンプル採取する。
溶媒を減圧除去して残量を約１．８ｌにする。
シクロヘキサン（１．８４ｋｇ）および水（２．５ｋｇ）を加え、それから混合物を６５±３℃に加熱し、この温度で３０分間撹拌する。撹拌を止めて２０分間置いて相を分離させる。水相を廃棄する。
有機相に水（１．３１ｋｇ）を加え、二相混合物を６５±３℃で３０分間撹拌する。２０分間置いて相を分離させる。水相を廃棄し、４０から５５℃の温度で有機相を減圧濃縮して体積約３ｌとする。
混合物を約３０℃に冷却し、種結晶を加え、この温度で３０分間撹拌する。
混合物を２０±２℃に冷却し、この温度で少なくとも３時間撹拌する。
生成物を吸引濾過して、固体をシクロヘキサン（３×１５０ｇ）で洗う。
濡れた固体（１．５ｋｇ）を１００ｍｂａｒ未満の圧力下２０から２５℃で１２時間乾燥させて１．１７ｋｇ（５．０９ｍｏｌ）を得る；収率８８％；ガスクロマトグラフィー純度９９．４３（面積％、実施例２４Ａを参照）、およびＧ．Ｃ．で測定した（面積％、実施例２４Ｂを参照）３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）の含量０．０６３重量％。実施例１１．１に記載される手順に従って、この生成物をさらに精製して、ＧＣで測定した（実施例２４Ｂを参照）不純物（ＶＩａ）含量が０．０１重量％である生成物を得る。
（実施例１１）
相間移動触媒反応による４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）の調製
３−フルオロベンジルクロリド（１０ｋｇ、６９．１６ｍｏｌ）、４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（７．８ｋｇ、６３．８８ｍｏｌ）、炭酸カリウム（９．４６ｋｇ、６８．４４ｍｏｌ）、およびテトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド（１．０３ｋｇ、３．７２ｍｏｌ）をトルエン（３０．０ｋｇ）に加えた混合物を、窒素雰囲気下撹拌しながら、ゆっくりと還流温度にし、それから７時間還流させる。
溶液を室内圧力で濃縮し、それからトルエン６ｋｇを加えて留去する。この手順をもう一度繰り返す。
それから、不均一混合物を室温に冷却して固体を濾別する。濾液の溶媒を減圧除去して、油状残渣にトルエン２．６ｋｇを加える。
混合物を２０から２５℃で撹拌して、純粋な４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド数グラムを種結晶として加え、次に２０から２５℃に保ちながら撹拌した混合物にｎ−ヘキサン（１８ｋｇ）を４５分で加える。
３から６℃に冷却し、この温度でさらに１時間撹拌した後、固体を濾過して集め、減圧下乾燥して１３．５ｋｇを得る；収率８６．３％、ＧＣ純度９９．８（面積％、実施例２４Ａを参照）、および３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．０１重量％（実施例２４Ｂを参照）。
１１．１ ４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）の結晶化によるさらなる精製
実施例１０ｂ）に従って調製した４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド１ｋｇを、還流撹拌しながらジイソプロピルエーテル２ｋｇに溶解させる。
溶液を１０から１５分で５０から５５℃に冷却し、純粋な４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド数グラムを種結晶として加える。
懸濁液を４５から６０分で１０から１５℃に冷却し、さらに１時間撹拌する。
最後に析出物を濾過して集め、冷ジイソプロピルエーテル（０．２ｋｇ）で洗い、減圧下乾燥して、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド０．９０ｋｇを得る：ＧＣ純度９９．９（面積％、実施例２４Ａを参照）、およびＧＣで測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．０１重量％（実施例２４Ｂを参照）。
１１．２ ３−フルオロベンジルブロミドを用いた相間移動触媒反応による４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）の調製
実施例１１と同一の手順に従って、ただし３−フルオロベンジルクロリドの代わりに３−フルオロベンジルブロミドを用いて、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２６．５２ｇ）を３−フルオロベンジルブロミドと反応させることにより、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを収率８７．０％で調製する：ＧＣで測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．０５重量％（実施例２４Ｂを参照）。
そうして得られる４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを実施例１１．１に従って精製し、標記生成物を収率９５．０％で得る：ＧＣで測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．０１重量％（実施例２４Ｂを参照）。
１１．３ ３−フルオロベンジルメタンスルホン酸塩を用いた相間移動触媒反応による４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）の調製
実施例１１と同一の手順に従って、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１５．６ｇ）を、３−フルオロベンジルクロリドの代わりに３−フルオロベンジルメタンスルホン酸塩と反応させて、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを収率９７．５％で調製する：ＧＣで測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）含量０．４５重量％（実施例２４Ｂを参照）。この生成物を、実施例１１．１の手順に従ってさらに精製し、不純物（ＶＩａ）含量を０．０１重量％に減らす。
（実施例１２）
高純度（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の調製（ワンポット反応）
ａ）（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）の調製
機械撹拌器、温度計、還流冷却管を備えた２ｌ四つ口丸底フラスコに、窒素流下、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩（１２４．６ｇ、０．４９ｍｏｌ）およびメタノール（８４０ｍＬ）を投入し、２０℃で１５分間撹拌する。トリエチルアミン（４９．５ｇ、０．４９ｍｏｌ）を、温度が３０℃を超えないような速度で加える。混合物を１０分間撹拌し、すぐに実施例１０ｂ）で調製した固体の４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１００ｇ）を約３０分で少しずつ加える。２０℃で３時間撹拌した後、混合物を５℃に冷却し、固体のＮａＢＨ４（１６．４ｇ、０．４４ｍｏｌ）を１０回に分けて注意しながら１．５時間かけて加える。加え終わったら、混合物を５℃で３０分間撹拌する。混合物を減圧濃縮して体積１００から１５０ｍＬにする。
残渣に、トルエン（５５０ｍＬ）および水（７５０ｍＬ）を加え、温度を７５℃に上げる。３０分間撹拌後、相を分離させ、有機相を水（１４０ｍＬ）で洗う。相を分離した後、有機相を６８℃に冷却し、種結晶を加え、この温度で１時間撹拌する。混合物を約２時間で２０℃に冷却し、この温度で２時間撹拌する。固体を濾過して単離し、トルエン（２×４０ｍＬ）で洗い、減圧下乾燥して白色固体１１８ｇを得る；収率９０％。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．９５（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量は０．００８重量％（実施例２５Ｂを参照）である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したサフィナミドのエナンチオマー純度は１００％（面積％、実施例２７Ａを参照）である。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）（Ｂｒｕｋｅｒ Ａ Ｖ３００）δ（４．７ｐｐｍのＨ２Ｏに対するｐｐｍ）：１．４３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ３）；２．６６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３ＳＯ３Ｈ）；３．８７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ−２）；３．９７（２Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２ＮＲ）；４．８９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＯＲ）；６．８８および７．２３（４Ｈ，ＡＡ’ＸＸ’芳香族ｐ−二置換系；６．９０÷７．２２（４Ｈ，芳香族Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δｐｐｍ：１５．６８（ＣＨ３）；３８．２７（ＣＨ３ＳＯ３Ｈ）；４８．９９（ＣＨ２ＮＲ）；５４．８１（ＣＨ）；６９．００（ＯＣＨ２）；１１４．１５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１４．７６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２０Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１５．３８（芳香族ＣＨ）；１２３．０６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２３．２４；１３０．２９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３１．５４（芳香族ＣＨ）；１３８．７６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１５８．５２；１６２．８９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５Ｈｚ，Ｃ−Ｆ）；１７１．９２（ＣＯ）
ａ１）代替手順として、固体のＮａＢＨ４の代わりにＮａＢＨ４メタノール溶液を用いて還元を行う。
窒素下撹拌しながら０から５℃で、ＮａＢＨ４（１６．４ｇ）をメタノール（１２０ｍＬ）とＮａＯＨ３０％水溶液（５．８ｍＬ）の混合物に加えることにより、ＮａＢＨ４メタノール溶液を調製する。
機械撹拌器、温度計、還流冷却管を備えた２ｌ四つ口丸底フラスコに、窒素流下、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩（１２４．６ｇ、０．４９ｍｏｌ）およびメタノール（７２０ｍＬ）を投入し、２０℃で１５分間撹拌する。トリエチルアミン（４９．５ｇ、０．４９ｍｏｌ）を、温度が３０℃を超えないような速度で加える。混合物を１０分間撹拌し、すぐに実施例１０ｂ））で調製した固体の４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１００ｇ）を約３０分で少しずつ加える。２０℃で３時間撹拌後、混合物を５℃に冷却し、先に調製したＮａＢＨ４溶液を滴下ロートから注意して１．５時間かけて加える。加え終わったら、混合物を５℃で３０分間撹拌する。混合物を減圧濃縮して体積１００から１５０ｍＬにする。
残渣に、トルエン（５５０ｍＬ）および水（７５０ｍＬ）を加え、温度を７５℃に上げる。３０分間撹拌後、相を分離させ、有機相を水（１４０ｍＬ）で洗う。相を分離した後、有機相を６８℃に冷却し、種結晶を加え、この温度で１時間撹拌する。混合物を約２時間で２０℃に冷却し、この温度で２時間撹拌する。固体を濾過して単離し、トルエン（２×４０ｍＬ）で洗い、減圧下４０℃で乾燥して白色固体１１６ｇを得る；収率８８．５％。
生成物のＨＰＬＣ純度は１００．０％（面積％、実施例２５Ａを参照）でありＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量は０．００９重量％（実施例２５Ｂを参照）である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したサフィナミドのエナンチオマー純度は１００％（面積％、実施例２７Ａを参照）である。
ｂ）（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（２０ｇ、６６ｍｍｏｌ、実施例１２ａで調製）と酢酸エチル（５１０ｇ）の混合物を、撹拌しながら６５℃まで加熱し、透明な溶液となるまでこの状態を保つ。５５℃に予め冷却した溶液に、４０分でメタンスルホン酸（７ｇ、７２．６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を３時間で徐々に２０℃に冷却し、２０℃に２時間保つ。不均一混合物を濾過し、固体を減圧下４０℃で乾燥して標記化合物２６．１ｇを白色固体として得る（収率９９％）。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．９４％（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％（実施例２５Ｂを参照）である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したサフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は１００％（面積％、実施例２７Ａを参照）である。
ｂ１）実施例１２ａ１）に従って調製した（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（２０ｇ、６６ｍｍｏｌ）を、実施例１２ｂ）にある手順を用いてメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）に変換し、標記化合物２６．２ｇを得る（収率９９％）。
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．９５％（面積％、実施例２５Ａを参照であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００５重量％（実施例２５Ｂを参照）である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したサフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は１００％（面積％、実施例２７Ａを参照）である。
（実施例１３）
高純度（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の調製
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを実施例１１に従って調製する以外は実施例１２ａ１）と同一の手順に従い、そうして得られる（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドをメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）に変換して、標記生成物を収率８７％で調製する：実施例２５Ａの方法に従って測定した純度９９．７（面積％）、および実施例２５Ｂの方法に従って測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化不純物（ＩＩａ）含量０．００５重量％。
（実施例１４）
Ｌ−アラニンアミド塩基を用いた高純度（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）の調製（ワンポット反応）
ａ）（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ、Ｉ’ａ）
機械撹拌器、温度計を備えた１Ｌ四つ口丸底フラスコに、窒素流下、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩（５９ｇ、０．４７ｍｏｌ）およびエタノール（６９０ｍＬ）を入れて、混合物を２０±３℃で２０分間撹拌する。ナトリウムメチラートの３０％メタノール溶液（８３．９ｇ、０．４７ｍｏｌ）を、約１５分で加える。混合物を２０±３℃で１時間撹拌する。固体（ＮａＣｌ）を濾別し、透明な溶液を減圧濃縮する。
残渣をメタノール（６４０ｇ、約８００ｍＬ）に取り、４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンズアルデヒド（９６．５ｇ、０．４２ｍｏｌ、実施例１０ｂで調製）を３０分かけて少しずつ加える。室温で２０時間撹拌後、透明な溶液を５±２℃に冷却して、固体のＮａＢＨ４（１５．８ｇ、０．４２ｍｏｌ）を、温度を１０℃未満に保ちながら１．５時間かけて少しずつ注意して加える。加え終わったら、混合物を５±２℃で３０分間撹拌する。混合物を減圧濃縮して体積１００から１５０ｍＬにする。
残渣に、トルエン（５５０ｍＬ）および水（７５０ｍＬ）を加え、温度を７５±２℃に上げる。３０分間撹拌後、相を分離させ、有機相を水（１４０ｍＬ）で洗う。相を分離した後、有機相を６８±２℃に冷却し、種結晶を加え、この温度で１時間撹拌する。混合物を約２時間で２０℃に冷却し、この温度で２時間撹拌する。固体を吸引濾過して単離し、トルエン（２×４０ｍＬ）で洗う。
濡れた固体を減圧下４０℃で乾燥して、（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド７０ｇを得る：収率６５％、ＨＰＬＣ純度９９．８８（面積％、実施例２５Ａを参照）、およびＨＰＬＣで測定した（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００８重量％（実施例２５Ｂを参照）。
実施例２７Ａに従ったキラルＨＰＬＣカラムでの生成物の分析から、得られる化合物のＲ：Ｓ比が５２：４８であるとわかる。
イミノアルキル化反応過程のさらなる実施（ｃｏｎｔｒｏｌ）はこのイミノアルキル化工程の間にラセミ化が生じることを示す。
ｂ）（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）
実施例１４ａ）に従って調製した化合物を、実施例４ｂ）と同一の手順に従ってメタンスルホン酸塩に変換する：収率８５．０％、ＨＰＬＣ純度９９．８（実施例２５Ａを参照）。
ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した不純物（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）の含量は０．００５重量％未満である。
（実施例１５）
Ｄ−アラニンアミド塩酸塩を用いた高純度（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）の調製（ワンポット反応）
ａ）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ａ）
Ｌ−アラニンアミド塩酸塩をＤ−アラニンアミド塩酸塩に変えて、実施例１２ａ１）に従って化合物を調製し、（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドを得る：収率９１％、ＨＰＬＣ純度９９．８（面積％、実施例２５Ａを参照）、およびＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００５重量％。
ｂ）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）
実施例１５ａ）に従って調製したサフィナミドのＲ−エナンチオマーを、実施例１２ｂと同一の手順に従ってメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）に変換する：収率９２．０％、ＨＰＬＣ純度９９．９％（実施例２５Ａを参照）。
ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した不純物（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｃ）含量は０．００５重量％未満である。標記化合物のＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．は２１６．８℃である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したエナンチオマー純度は、９９．９超である（面積％、実施例２７Ｂを参照）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）（Ｂｒｕｋｅｒ Ａ Ｖ３００）δ（４．７ｐｐｍでのＨ２Ｏに対するｐｐｍ）：１．４３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ３）；２．６６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３ＳＯ３Ｈ）；３．８７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ−２）；３．９７（２Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２ＮＲ）；４．８９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＯＲ）；６．８８および７．２３（４Ｈ，ＡＡ’ＸＸ’芳香族ｐ−二置換系）；６．９０÷７．２２（４Ｈ，芳香族Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δｐｐｍ：１５．６８（ＣＨ３）；３８．２７（ＣＨ３ＳＯ３Ｈ）；４８．９９（ＣＨ２ＮＲ）；５４．８１（ＣＨ）；６９．００（ＯＣＨ２）；１１４．１５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１４．７６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２０Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１５．３８（芳香族ＣＨ）；１２３．０６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２３．２４；１３０．２９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３１．５４（芳香族ＣＨ）；１３８．７６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１５８．５２；１６２．８９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５Ｈｚ，Ｃ−Ｆ）；１７１．９２（ＣＯＮＨ２）
この実施例１５の化合物のさらなる調製を以下の通りに行った：
ａ１）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ａ）
丸底フラスコ中、Ｄ−アラニンアミド（ａｌａｎｉｎａｍｍｉｄｅ）塩酸塩１２．２ｇをメタノール１６６．８ｍＬに溶解し、温度を３０℃未満に保ちながら、これに順番にトリエチルアミン９．９ｇ、次いで４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド２０ｇを加える。混合物を室温で３時間撹拌し、それから８±２℃で冷却し、温度を約８℃に保ちながら固体のＮａＢＨ４３．３ｇを加えた。
反応物を少なくとも１時間撹拌し、最小量に濃縮し、それからトルエン（１１０ｍＬ）および水（１５２ｍＬ）を加えた。
二相混合物を７０℃で撹拌し、有機層を分離して７０℃で水（３０ｍＬ）で洗う。
得られる溶液を室温まで冷却し、ろ過してトルエンで洗う。
固体を減圧下４０℃で乾燥し、標記生成物２２．６ｇを白色粉末として得る（収率８６．１％）
［α］２５ Ｄ（ｃ２％、メタノール中）：＋１０．６３°
３００ＭＨｚ １Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．５５−７．４８（１Ｈ，ｍ），７．３７−７．３０（５Ｈ，ｍ）７．２６−７．１９（１Ｈ，ｍ）７．０２−７．０１（３Ｈ，ｍ）５．１９（２Ｈ，ｓ），３．７０（１Ｈ，ｄ），３．５７−５．５３（１Ｈ，ｄ），３．１０−３．０４（１Ｈ，ｑ），１．２１−１．１９（３Ｈ，ｄ）。
ｂ１）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）
丸底フラスコに、２−プロパノール６５ｇと上記工程ａ１）に従って調製した化合物８．２５ｇを加え、完全な溶液となるまで撹拌しながら７０℃で加熱する。
温度を７０±３℃に保ちながら、メタンスルホン酸２．６ｇを滴下する。
７０℃で３０分間撹拌後、混合物をゆっくりと２０℃に冷却し、それから１時間撹拌する。
生成物を濾過し、イソプロパノールで洗い、減圧下４０℃で乾燥して、標記生成物１０ｇを白色固体として得る（収率９２％）、ｍ．ｐ．２１８．４℃（キャピラリー）；［α］２５ Ｄ（ｃ２％、メタノール中）：＋０．６°
得られる生成物のＨＰＬＣ純度は９９．８８％（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、Ｃ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量は０．００６重量％（実施例２５Ｂを参照）である；ｍ．ｐ．２１８．４℃（キャピラリー）。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したＲ−サフィナミドメタンスルホン酸塩のエナンチオマー純度は１００％（面積％、実施例２７Ｂを参照）である。
３００ＭＨｚ １Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．９７（１Ｈ，ｂｓ），７．７０（１Ｈ，ｂｓ），７．５６−７．４７（３Ｈ，ｍ），７．３８−７．３４（２Ｈ，ｍ），７．２７−７．２１（１Ｈ，ｄｔ），７．１７−７．１５（２Ｈ，ｄ），５．２５（２Ｈ．ｓ），４．１０（２Ｈ，ｂｓ），３．８１−３．７９（１Ｈ，ｑ），２．３９（３Ｈ，ｓ），１．５０−１．４８（３Ｈ，ｄ）。
（実施例１６）
Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩａ）を単離する、高純度（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の調製
ａ）（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩａ）
実施例１０に記載したように製造する４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１９２．０ｇ，０．８３ｍｏｌ）とＬ−アラニンアミド塩酸塩（１１４．２ｇ，０．９３ｍｏｌ）のメタノール（９６０ｍＬ）懸濁液に窒素雰囲気下で室温にて撹拌下にトリエチルアミン（９３．１２ｇ，０．９３ｍｏｌ）を加える。撹拌を更に１時間続ける。
次に溶液に（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド数グラムをシード添加し、温度を５〜１０℃まで下げ、撹拌を３時間続ける。
固形分を濾取し、２℃のメタノールで洗浄する。
減圧乾燥後、ＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．１１２．０℃の標記化合物１９０．４ｇ（７６．０％収率）が得られる。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δ（２．５５ｐｐｍのＴＭＳ；３．３５ｐｐｍのＤＭＳＯ溶媒に対するｐｐｍ）：１．３１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ３）；３．８６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ−２）；５．１８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＯＲ）；７．０８及び７．７９（４Ｈ，ＡＡ’ＸＸ’ｐ−ジ置換芳香族系）；７．１０−７．５０（４Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）；８．２７（１Ｈ，ｓ，ＣＨ＝ＮＲ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（Ｂｒｕｋｅｎ ＡＶ３００）δ（ｐｐｍ）：２０．５（ＣＨ３）；６７．６（ＣＨ）；６８．４（ＯＣＨ２）；１１４．１及び１１４．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１４．５及び１１４．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１４．８（芳香族ＣＨ）；１２３．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２９．０及び１２９．９（芳香族ＣＨ）；１３０．４及び１３０．５（ｄ，ＪＣＦ＝７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３９．６及び１３９．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６Ｈｚ，四重線芳香族Ｃ）；１６０．２；１６０．５及び１６３．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５Ｈｚ，Ｃ−Ｆ）；１６０．６（ＣＨ＝Ｎ）；１７４．８（ＣＯ）。
［α］２５ Ｄ（ｃ１％、クロロホルム中）：＋６８．１°
ｂ）（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）
実施例１６ａ）に記載される通りに調製した（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩａ）（１５０ｇ）とメタノール（９００ｍＬ）の混合物を、撹拌しながら２から５℃に冷却する。温度を５℃未満に保ちながら、この冷混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（１９．０ｇ）を、２時間で少しずつ加える。それから混合物を５℃でさらに２０分間撹拌する。反応混合物を減圧濃縮し、実施例２に記載される通りに後処理して、（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）１３５ｇを得る（収率８９．２％）：ＨＰＬＣ純度９８．８（面積％、実施例２５Ａの方法に従って測定）、および実施例２５Ｂの方法に従ってＨＰＬＣにより測定したＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド含量０．００５重量％。
ｃ）（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）
実施例１６ｂ）に従って調製したサフィナミドを、実施例１２ｂ）と同一の手順に従ってメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）に変換する：収率９４．０％、ＨＰＬＣ純度９９．９％（実施例２５Ａを参照）。
ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した不純物（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）含量は０．００５重量％未満である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したエナンチオマー純度は、９９．９超（面積％、実施例２７Ａを参照）である。
（実施例１７）
Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩ’ａ）を単離する、高純度（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ｓｏｌｆｏｎａｔｅ）（Ｉ’ｃ）の調製
ａ）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩ’ａ）
機械撹拌器、温度計、還流冷却管を備えた２５０ｍＬ四つ口丸底フラスコに、窒素流下、Ｄ−アラニンアミド塩酸塩（６．１ｇ）およびメタノール（８０ｍＬ）を投入し、２０℃で１５分間撹拌する。トリエチルアミン（５ｇ）を、温度が３０℃を超えないような速度で加える。混合物を１０分間撹拌し、すぐに固体の４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０ｇ、実施例１０ｂ）を約３０分で少しずつ加える。２０℃で３時間撹拌後、混合物を５℃に冷却する。この温度で３時間撹拌後、固体をろ過し、予め冷却したメタノール少量で洗う。濡れた固体を減圧下２５℃で１２時間乾燥させ、標記化合物６．４ｇを白色固体として得る：収率４６．４％；ｍ．ｐ１１１．９。
［α］Ｄ＝−６７．９°（ｃ＝１、クロロホルム中）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δ（２．５５ｐｐｍのＴＭＳに対するｐｐｍ；３．３５ｐｐｍのＤＭＳＯ溶媒）：１．３１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ３）；３．８６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ−２）；５．１８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＯＲ）；７．０８および７．７９（４Ｈ，ＡＡ’ＸＸ’ｐ−二置換芳香族系）；７．１０−７．５０（４Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）；８．２７（１Ｈ，ｓ，ＣＨ＝ＮＲ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（Ｂｒｕｋｅｎ ＡＶ３００）δ（ｐｐｍ）：２０．５（ＣＨ３）；６７．６（ＣＨ）；６８．４（ＯＣＨ２）；１１４．１ｅ１１４．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ，芳香族）ＣＨ；１１４．５ｅ１１４．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ；芳香族ＣＨ）；１１４．８（芳香族ＣＨ）；１２３．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２９．０および１２９．９（芳香族ＣＨ）；１３０．４および１３０．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３９．６および１３９．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６Ｈｚ，芳香族第四級Ｃ）；１６０．２；１６０．５および１６３．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４５Ｈｚ，Ｃ−Ｆ）；１６０．６（ＣＨ＝Ｎ）；１７４．８（ＣＯ）
ｂ）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ａ）
実施例１６ｂ）の手順を用いて、ただし実施例１７ａ）で調製した（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジリデンアミノ］プロパンアミド（ＩＩＩ’ａ）をこのエナンチオマー（ＩＩＩａ）の代わりに用いて、化合物を調製する。
ｃ）（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）
実施例１７ｂ）に従って調製した（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドを、実施例１２ｂと同一の手順に従ってメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）に変換する：収率９２％。
ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した不純物（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｃ）含量は、０．００５重量％未満である。標記化合物のＤＳＣ（５℃／分）によるｍ．ｐ．は２１６．８℃である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したエナンチオマー純度は、９９．９超（面積％、実施例２７Ｂを参照）である。
（実施例１７Ａ）
（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）
ａ）１０００ｍＬグラス反応器に、メタノール（８０ｍＬ）および（Ｒ，Ｓ）−アラニンアミド塩酸塩（１５．１４ｇ、１２３ｍｍｏｌ）を投入し、２５℃で無水トリエチルアミン（１７．０４ｍＬ、１４４ｍｍｏｌ）を滴下する。
実施例１０ｂ）で調製した４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（２３．９９ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）を約１０分で加え、混合物を２５℃で１０時間撹拌する（混合物Ａ）。
第二の反応器（１００ｍＬ）中、メタノール（３０ｍＬ）と水酸化ナトリウム３０％水溶液（１．３ｇ）を撹拌して混合し、温度を０から６℃に下げる。溶液に、１℃で、水素化ホウ素ナトリウム粉末（３．９２ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。窒素下１から２℃で、混合物を２時間撹拌する（混合物Ｂ）。
窒素下撹拌しながら、温度を５から１０℃に保ちつつ上記の混合物Ａに混合物Ｂを約３０分で加える。
反応混合物を５から１０℃で３０分間撹拌し、減圧濃縮して残量２０ｍＬにする。窒素下撹拌しながら、残渣にトルエン（１２０ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を加え、混合物を６０から６５℃まで加熱する。
有機相を分離して水（３０ｍＬ）を加え、混合物を６０から６５℃で撹拌する。
有機相を分離して、約７℃まで徐々に冷却し、この状態に３時間保つ。
混合物をろ過し、固体をトルエン（３×１０ｍＬ）で洗って減圧下乾燥して、（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（２１．４０ｇ）を得る。
ｂ）２−プロパノール（６５ｇ）および実施例１７Ａａ）で調製した（Ｒ，Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（８．２ｇ）を反応器に投入する。
混合物を撹拌しながら７０℃に加熱し、透明な溶液が得られるまでこの状態に保つ。
この溶液に、７０℃で、無水メタンスルホン酸（２．６ｇ）をゆっくりと加える。
不均一混合物を２０℃に冷却し、この温度で少なくとも２時間撹拌する。
混合物を遠心分離し、固体をイソプロパノールで洗って減圧下乾燥して、標記生成物９．４ｇを得る：収率８６．４％、ＨＰＬＣ純度９９．９（面積％、実施例２５Ａを参照）、およびＣ，Ｏ−ジアルキル化（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量０．００５重量％未満（実施例２５Ｂを参照）。
このようにして得られる（Ｒ，Ｓ）サフィナミドは、キラルＨＰＬＣカラムによりＳ：Ｒ＝５０．３０：４９．７０（面積％、実施例２７Ａを参照）のエナンチオマー混合物であることがわかる。
（実施例１８）
（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）の調製
ａ）３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）
窒素雰囲気下に維持する４Ｌ丸底フラスコに４−ヒドロキシベンズアルデヒド（４００ｇ，３．２８ｍｏｌ）と炭酸カリウム（４５３ｇ，３．２８ｍｏｌ）とトルエン（２Ｌ）と３−フルオロベンジルクロリド（１４００ｇ，９．６８ｍｏｌ）を順に加え、混合物を５日間還流撹拌する。この時点でＧＣ分析によると、反応混合物は４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドと３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを９１．４：８．６（面積／面積，実施例２４Ａ参照）の比で含有していることがわかる。
反応混合物を室温まで冷却する後、撹拌下に水２Ｌを加える。有機相を分離し、溶媒が消失するまで溶媒を３５℃で減圧（２０ｍｍＨｇ）蒸留する。次に圧力を３ｍｍＨｇまで下げ、外部温度を３００℃まで上げ、２５５℃〜２６５℃で蒸留する画分（４０．６ｇ）を集める。
ＧＣ分析によると、標記化合物のモノアルキル化誘導体（ＩＶａ）に対するＣ，Ｏ−ジベンジル化誘導体（ＶＩａ）面積／面積比は９９．６：０．４（面積／面積，実施例２４Ｂ参照）である。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：４．０５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）；５．１３（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２）；６．８５−７．４０（９Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）；７．７３−７．７９（２Ｈ，ｍ，Ｃ＝Ｏに対してオルト位の芳香族Ｈ）；９．８８（ｓ，ＣＨＯ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δ（ｐｐｍ）：３６．１（ＣＨ２）；６９．４（ＣＨ２Ｏ）；１１１．４（芳香族ＣＨ）；１１２．９及び１１３．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２０Ｈｚ，芳香族ＣＨ），１１３．９及び１１４．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１４．９及び１１５．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１５．７及び１１５．９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２２．６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝３Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２４．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝３Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２９．６及び１２９．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝８Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，四重線芳香族Ｃ）；１２９．９（四重線芳香族Ｃ）；１３０．０（四重線芳香族Ｃ）；１３０．１及び１３０．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３１．２（芳香族ＣＨ）；１３１．５（芳香族ＣＨ）；１３８．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，四重線芳香族Ｃ）；１４２．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ，四重線芳香族Ｃ）；１６１．０，１６１．２及び１６４．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４０，オーバーラップする２本のＣ−Ｆ）；１９０．８（ＣＨＯ）。
ｂ）（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）
３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（３５．６ｇ，０．１０５ｍｏｌ）を５００ｍＬフラスコに加え、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩（１４．８ｇ，０．１１９ｍｏｌ）のメタノール溶液１７０ｍＬに撹拌下にトリエチルアミン（１２ｇ，０．１１９ｍｏｌ）を注意深く加えることにより予め調製した溶液を室温で加える。
この反応混合物を１時間室温で撹拌する後、１．８Ｌオートクレーブに移し、含水（５０％Ｈ２Ｏ）Ｐｔ／Ｃ５％３．４ｇを加える。
オートクレーブから空気を窒素パージした後、水素を５．０バールで導入する。
３５℃の温度で反応を３〜５時間実施する。
室温まで冷却して触媒を濾別後、約６５ｇの残渣が得られるまで溶媒を減圧留去する。この残渣に酢酸エチル（３４０ｍＬ）と水（２５０ｍＬ）の混合物を加え、明白な２相が得られるまで不均一混合物を４０℃まで昇温し、撹拌せずにこの温度に維持する。２相を分離し、約５０ｇの残渣が得られるまで有機相を減圧蒸留する。
この残渣を酢酸エチル２２０ｍＬに溶かし、外部温度４０℃で溶媒を減圧留去する。この操作を２回繰返し、標記化合物を固体残渣として得る（４２．４ｇ）。
ｃ）（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）
２Ｌガラス反応器中、実施例１８ｂで調製した（Ｓ）−３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド４２．４ｇ（０．１０３ｍｏｌ）を、酢酸エチル９５０ｍＬに溶解させる。溶液を撹拌しながら５０から５５℃に加熱し、この温度に１時間保つ。この溶液に、メタンスルホン酸１４．５ｇ（０．１５ｍｏｌ）を２０分で加え、温度を９０分で２０℃に下げる。３０分後、固体を濾過して集め、減圧下５０℃で乾燥させ、メタノールから結晶化（メタノール：生成物は重量で１：５）させて、エナンチオマーとして純粋な（実施例２７Ｄを参照）（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩２５．１ｇを得る：ｍ．ｐ．１８７℃（キャピラリー）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δ（ＴＭＳに対するｐｐｍ）：１．４４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ３）；２．３５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３ＳＯ３）；３．８１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ−２），３．９９（２Ｈ，ｂｓ，ベンジルＣＨ２）；４．０２（２Ｈ，ＡＢ系，ＣＨ２Ｎ−）；５．１７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＯＲ）；６．９８−７．６３（１１Ｈ，ｍ，芳香族Ｈ）；７．６２及び７．７５（２Ｈ，ｂｓ，アミドＮＨ２）；９．０２（２Ｈ，ｂｒｏａｄ，ＮＨ２ ＋）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３００）δ（ｐｐｍ）：１５．９（ＣＨ３）；３５．５（ＣＨ２）；３９．７（ＣＨ３ＳＯ３Ｈ）；４８．１（ＣＨ２ＮＲ）；５４．４（ＣＨ）；６８．４（ＯＣＨ２）；１１２．２（芳香族ＣＨ）；１１２．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１３．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１４．５（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１１５．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１２３．２（芳香族ＣＨ）；１２３．８；１２４．６（芳香族ＣＨ）；１２８．７及び１３０．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３０．０４（芳香族ＣＨ）；１３０．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６Ｈｚ，芳香族ＣＨ）；１３２．６（芳香族ＣＨ）；１３９．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ）；１４３．４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝７Ｈｚ）；１５８．１，１６０．５及び１６３．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４０，Ｃ−Ｆ）；１６０．６及び１６３．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２４０，Ｃ−Ｆ）；１７０．５（ＣＯＮＨ２）。
ｄ）（ＩＩｃ）を０．１２重量％含有するサフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の分取ＨＰＬＣによる（ＩＩａ）の単離
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９，Ｍｅｔｈｏｄ Ａに従って調製したサフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）は、不純物（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）をメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）として０．１２重量％含有する。このサフィナミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）２００ｇから、上記（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）のサンプル（９０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣによって単離することも行う。
分離は下記スキームに従って２段階（ステージ１およびステージ２）で実施する。
Figure 2014159407
ステージ１
第１段階の目的はＩＩａ／ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）含量の多い粗生成物を単離することである。
分取ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。
分取ＨＰＬＣ条件：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００（往復ポンプ、低圧ミキサー付きグラジエントコントローラー）
Ｒａｄｉａｌ Ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅ Ｐｒｅｐ ＬＣ Ｂａｓｅ（Ｗａｔｅｒｓ）
Ｊａｓｃｏ ７１２５可変波長ＵＶ検出器，ｏ．ｐ．０．２ｍｍ
Ｍｅｒｋ Ｄ２０００プリンター−プロッター
カラム：Ｄｅｌｔａ Ｐａｋ Ｃ１８，１５μｍ，４０ｘｌ００ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）。
溶離液Ａ：７０／３０，水／アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
溶離液Ｂ：３０／７０，水／アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
流速：２７．０ｍｌ／分
勾配：４０分間，１００％Ａ一定→１分間で１００％Ｂ
検出：ＵＶ２２７ｎｍ
注入：水５０ｍｌ中５ｇ（ポンプ入口側配管Ｄによる）
ステージ２
この段階はＴＦＡをＩＩａ／ＴＦＡから除去し、ＩＩａを更に精製するために必要である。
以下の分取ＨＰＬＣ条件を使用してＩＩａ／ＴＦＡをクロマトグラフィー精製する。
画分４及び５を合わせ、アセトニトリルが完全に除去されるまで４０℃で減圧蒸発させる。残留水溶液を４℃の冷蔵庫に保存する。不溶分を濾過により単離し、室温で減圧乾燥し、ＩＩａ（９０ｍｇ；ＨＰＬＣ純度１００％）を得る。
分取ＨＰＬＣ条件：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００（往復ポンプ、低圧ミキサー付きグラジエントコントローラー）
Ｊａｓｃｏ ７１２５可変波長ＵＶ検出器，ｏ．ｐ．０．２ｍｍ
Ｍｅｒｋ Ｄ２０００プリンター−プロッター
カラム：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ １８，７μｍ，２０ｘ２５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）
溶離液Ａ：７０／３０，水／アセトニトリル
溶離液Ｂ：３０／７０，水／アセトニトリル
流速：１５．０ｍｌ／分
勾配：２０分間，１００％Ａ一定→１分間で１００％Ｂ
検出：ＵＶ２２７ｎｍ
注入：不純物「ＩＩａ／ＴＦＡ」溶液５０ｍｌ（ポンプ入口側配管Ｄによる）
（実施例１９）
（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｃ）の調製
上記化合物の遊離塩基を、実施例１８ｂと同一の手順に従って、ただしＬ−アラニンアミド塩酸塩の代わりにＤ−アラニンアミド塩酸塩を用いて調製する。
実施例１８ｃ）の手順に従って、（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドをメタンスルホン酸塩に変換する。
こうして、（ＩＩ’ｃ）を３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）から収率５０％で得る。
１Ｈ−ＮＭＲデータ、１３Ｃ−ＮＭＲデータに基づき、（ＩＩ’ｃ）の構造をこのようにして得られるメタンスルホン酸塩に割り当てる。１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル、およびｍ．ｐ．１９６℃（キャピラリー）は、Ｓ−エナンチオマー（ＩＩｃ）のものと完全に一致する（実施例１８ｃを参照）。
（実施例１９Ａ）
（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）の調製
実施例１８ａ）で調製した２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとラセミ体のアラニンアミド塩酸塩から、実施例１８ｂ）にある手順に従って、標記化合物を収率７５％で調製する。
こうして得られた（Ｒ，Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドを、実施例１８ｃ）にある手順によりメタンスルホン酸塩に変換する。収率８８％。
キラルカラムでのＨＰＬＣ分析（実施例２７Ｄを参照）は、生成物のラセミ性と完全に一致する。
（実施例２０）
不純物３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）を１重量％含有する４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）からの（Ｓ）−２−［４−３−フルオロベンジルオキシ］ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の調製
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０ｇ；ＧＣ純度９８．８、面積％）に、３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド１％を加え、実施例１２ａ）と同一の手順に従って、混合物を（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドに変換する。収率は９０％で、不純物（ＩＩａ）含量は０．８８重量％（実施例２５Ｂを参照）。
実施例１２ｂ）と同一の手順に従って、遊離塩基である（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）を対応するメタンスルホン酸塩に変換してメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）を得る：収率９６％、ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した不純物（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）含量０．７２重量％。
（実施例２１）
不純物（ＩＩｃ）をドープした（Ｓ）−２−［４−３−フルオロベンジルオキシ］ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の結晶化
異なる５種類の溶媒系を用い、還流温度で溶解させて室温に冷却することにより、実施例２０で調製したサフィナミドメタンスルホン酸塩のサンプルを結晶化させる。
結果を以下の表６にまとめる。
Figure 2014159407
（実施例２２）
従来技術に記載された方法による（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）メタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の調製
２２．１ ４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）の調製
２２．１．ａ）ＵＳ６，３３５，３５４Ｂ２の実施例１ａの手順
ＵＳ６，３３５，３５４Ｂ２の実施例１ａに記載の手順により４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）を製造する。
即ち、３−フルオロベンジルクロリド（２．８６ｇ，１９．８０ｍｍｏｌ）と４−ヒドロキシベンズアルデヒド（３．０３ｇ，２４．８０ｍｍｏｌ）とＫ２ＣＯ３（１０．３０ｇ，７４．５０ｍｍｏｌ）とＮａＩ（１３７．１ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）とエタノール（４０ｍＬ）の混合物を７０分間で還流温度まで加熱し、還流温度に４時間１５分間維持する。
反応混合物のワークアップ後、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを黄色油状物として９５％収率で単離する。
生成物はＧＣ純度９７．６（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＧＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）含量０．１４重量％である。
２２．１．ｂ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２７，４，１９７９の手順
Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２７，４，１９７９に報告されている手順により４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）を製造する。
即ち、３−フルオロベンジルクロリド（１４．５ｇ，１００ｍｍｏｌ）を４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２．２ｇ，１００ｍｍｏｌ）とＮａＯＨ（４．０ｇ，１００ｍｍｏｌ）のエタノール（１００ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下で撹拌下に加える。
混合物を２５分間で還流温度まで徐々に加熱し、還流温度で６時間２０分間撹拌する。反応混合物を濾過する後、減圧濃縮し、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（２３．４３ｇ）を黄色固体残渣として得る。ジクロロメタン（２５０ｍＬ）を残渣に加え、不溶分を濾過し、得られる溶液を減圧濃縮し、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを黄色固体として８０．４％収率で得る。生成物はＧＣ純度９１．６（面積％，実施例２４Ａ参照）であり、ＧＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）含量０．１３重量％である。
２２．２ （Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）およびこのメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）の調製
２２．２．ａ）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９，ｍｅｔｈｏｄ Ａの手順
実施例２２．１ａ．に記載したように製造する４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０ｍｍｏｌ）とＬ−アラニンアミド塩酸塩（１．３７ｇ，１１ｍｍｏｌ）を反応させる後にＮａＢＨ３ＣＮ（０．５０ｇ，８ｍｍｏｌ）で還元することにより（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）を製造する。反応混合物のワークアップとフラッシュクロマトグラフィーによる精製後、（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドが白色固体として６８．７％収率で単離される。生成物はＨＰＬＣ純度９６．２（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）含量０．１５重量％（実施例２５Ｂ参照）である。
（Ｓ）−２［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（１．５０ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）と酢酸エチル（４０．２ｍＬ）の混合物を、透明な溶液になるまで５０℃に加熱する。撹拌しながら、溶液に、メタンスルホン酸（０．５３ｇ、５．５１ｍｍｏｌ）を１５分で加え、得られる不均一混合物を、撹拌しながら９０分で２０℃に冷却する。２０℃で３０分後、固体を濾過して集め、酢酸エチル（６ｍＬ）で洗い、減圧下５０℃で１５時間乾燥させて（Ｓ）−２［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）を白色固体として得る（収率９６．１％）。生成物は、ＨＰＬＣ純度が９８．６（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）含量が０．１０重量％である。
２２．２．ｂ）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９，ｍｅｔｈｏｄ Ａの手順
実施例２２．２．ａ．に記載したように製造する４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０ｍｍｏｌ）とＬ−アラニンアミド塩酸塩（１．３７ｇ，１１ｍｍｏｌ）を反応させる後にＮａＢＨ３ＣＮ（０．５０ｇ，８ｍｍｏｌ）で還元することにより、実施例２２．１．ｂに従って（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）を製造する。
（Ｓ）−２［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）は白色固体として６６．５％収率で得られる。生成物はＨＰＬＣ純度８８．５（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＨＰＬＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）含量０．０６４重量％である。実施例２２．２．ａに従ってメタンスルホン酸で処理することにより、（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）を対応するメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）に８８．９％収率で変換する。生成物はＨＰＬＣ純度９７．７（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＨＰＬＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｃ）含量０．０５重量％である。
（実施例２３）
従来技術に記載される方法による（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド、Ｉｂ）メタンスルホン酸塩（Ｉｄ）およびＲ−エナンチオマー（Ｉ’ｄ）の調製
２３．１ ４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の調製
２３．１．ａ）ＵＳ６，３３５，３５４Ｂ２の実施例１ａの手順
実施例２２．１．ａ）に従い、２−フルオロベンジルクロリド（１４．３ｇ，９８ｍｍｏｌ）と４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１５．１ｇ，１２３ｍｍｏｌ）とＫ２ＣＯ３（５１ｇ，３６９ｍｍｏｌ）とＮａＩ（５００ｍｇ，３．３ｍｍｏｌ）とエタノール７５ｍＬから４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）を製造する。
混合物を１２時間還流温度に維持する。反応混合物のワークアップ後、（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドが黄色油状物として７５％収率で得られる。生成物はＧＣ純度９４．２１（面積％，実施例２４Ａ参照）であり、Ｇ．Ｃ．（実施例２４Ｂ参照）により測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．３９重量％である。
２３．１．ｂ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２７，４，１９７９の手順
実施例２２．１．ｂに従い、２−フルオロベンジルクロリド（１８．０ｇ，１２３ｍｍｏｌ）と４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１５．３ｇ，１２５ｍｍｏｌ）とＮａＯＨ（５．０ｇ，１２ｍｍｏｌ）とエタノール（１２５ｍＬ）から４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）を製造する。
混合物を２５分間で還流温度まで加熱し、撹拌下で還流温度に１２時間維持する。
反応混合物を実施例２２．１．ｂに従ってワークアップ後、４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドが黄色固体として９０，０％収率で得られる。生成物はＧＣ純度９０．４（面積％，実施例２４Ａ参照）であり、Ｇ．Ｃ．（実施例２４Ｂ参照）により測定した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量０．１４重量％である。
２３．２ （Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）およびこのメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）の調製
２３．２．ａ）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９，ｍｅｔｈｏｄ Ａの手順
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０ｍｍｏｌ，実施例２３．１ａに記載したように製造）を使用した以外は実施例２２．２．ａの手順に従い、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）を製造する。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドは白色固体として６７．３％収率で得られる。生成物はＨＰＬＣ純度８６．７（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＨＰＬＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）含量０．２２重量％である。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（１．５０ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）とプロパン−２−オール（１０．５ｍＬ）の混合物を５０℃まで加熱し、透明な溶液が得られるまでこの温度に維持する。撹拌下にメタンスルホン酸（０．４８ｇ，５．０１ｍｍｏｌ）を１５分間加える。
次に不均一混合物を撹拌下に２時間で２０℃まで冷却する。２０℃で１時間後に固形分を濾取し、減圧乾燥し、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩を白色固体として８９．１％収率で得る。生成物はＨＰＬＣ純度９６．９（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＨＰＬＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩｄ）含量０．１４重量％である。
２３．２．ｂ）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，４１，５７９，ｍｅｔｈｏｄ Ａの手順
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの代わりに４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０ｍｍｏｌ，実施例２３．１．ｂに従って製造）を使用することにより、実施例２２．２．ｂに従って（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）を製造する。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドは白色固体として５８．８％収率で得られる。生成物はＨＰＬＣ純度８３．８（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＨＰＬＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）含量０．１５重量％である。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）を対応するメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）に白色固体として８９．４％収率で変換する。生成物はＨＰＬＣ純度９５．２（面積％，実施例２５Ａ参照）であり、ＨＰＬＣ（実施例２５Ｂ参照）により測定した（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量０．１１重量％である。
２３．３ 特許出願、国際公開第２００６／０２７０５２号の手順による（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）およびこのメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）の調製
ａ）２５０ｍＬガラス反応器に、窒素下撹拌しながら室温で、無水メタノール（１０９ｍＬ、水０．０１％含有）（混合物ｐＨ＝７．３０）、Ｄ−アラニンアミド（ａｌａｎｉｍａｍｉｄｅ）塩酸塩（３ｇ；２４ｍｍｏｌ）（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ａ３６１３６８２１）（混合物ｐＨ＝３．９８）、トリエチルアミン（２．４３ｇ；２４ｍｍｏｌ）、４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（５．０６ｇ、２２ｍｍｏｌ、実施例（２３．１ａ）に記載の通りに調製、ＧＣ純度９４．２１（面積％、実施例２４Ａを参照）およびＧ．Ｃで測定（実施例２４Ｂを参照）した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．３９％）（混合物ｐＨ＝８．６０）、および３Åモレキュラーシーブ（２．１９ｇ）を入れていく。混合物を４０℃まで加熱し、この温度で４時間撹拌する。それから反応温度を１０℃に下げて（混合物ｐＨ８．２４）、水素化ホウ素ナトリウム（０．４２ｇ、１１ｍｍｏｌ）を１５分で少しずつ加える。反応混合物を撹拌しながら室温まで昇温させ、室温でさらに６時間撹拌する。反応混合物をろ過し、減圧下乾固するまでエバポレートする。残渣を６０℃の水（８０ｍＬ）およびトルエン（７０ｍＬ）に取り、有機相を分離して水（８０ｍＬ）を加える。二相混合物を撹拌しながら６０℃に温める。有機相を分離して水（８０ｍＬ）を加える。二相混合物を撹拌しながら６０℃に温める。６０℃で、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。水相を１つにまとめる（溶液Ａ、約２４０ｍＬ）。トルエン混合物を濾過し、溶液を徐々に１０℃に冷却する。窒素下１０℃で３時間、混合物の撹拌を続ける。混合物をろ過し、固体を冷（１０℃）トルエン（１０ｍＬ）で洗い、減圧下室温で乾燥させて（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）２．１３ｇ（７．１ｍｍｏｌ；収率３２％）を白色結晶として得る。
生成物は、ＨＰＬＣ純度が９８．００（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩ’ｂ）含量が０．１５重量％である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したエナンチオマー比Ｒ：Ｓ＝９９．６：０．４（面積％、実施例２６Ｂを参照）。
トルエン母液とトルエン洗液を１つにまとめて、ロータリーエバポレーターで溶液を減圧濃縮し、黄色残渣（１．９７ｇ）を得る。
残渣をメタノール（３０ｍＬ）に溶解し、溶液中に存在する既知の化学種について、ＨＰＬＣにより、外部標準に対して定量的に測定する（実施例２５Ａを参照）：
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）（０．８１ｇ；２．７ｍｍｏｌ）；
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（０．１６ｇ；０．７ｍｍｏｌ）；
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアルコール（０．５３ｇ：２．２ｍｍｏｌ）；
その他定量できない不純物である。
（Ｉ’ｂ）ＨＰＬＣ純度は２８．６５％（面積％、実施例２５Ａを参照）である。
ロータリーエバポレーターで水溶液Ａを減圧濃縮し残渣を得る。残渣をメタノール（３０ｍＬ）に懸濁させ、ろ過し、溶媒を減圧下エバポレートして残渣（４．５ｇ）を得る。この残渣をメタノール（３０ｍＬ）に溶解し、溶液中に存在する既知の化学種について、ＨＰＬＣにより、外部標準に対して定量的に測定する（実施例２５Ａを参照）：
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）（０．６９ｇ；２．３ｍｍｏｌ）；
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（０．０７ｇ；０．３ｍｍｏｌ）；
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアルコール（０．０６ｇ：０．２ｍｍｏｌ）；
その他定量できない不純物である。
（Ｉ’ｂ）ＨＰＬＣ純度は５３．８７％（面積％、実施例２５Ａを参照）である。
上記の通り、生成した（Ｉ’ｂ）の合計量は３．６３ｇ；１２．１ｍｍｏｌ；収率５５％である。物質収支は、投入した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの約９０％になる。
ｂ）（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（１．２８ｇ；４ｍｍｏｌ）（純度９８．００％、工程ａ）に従って調製、（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩ’ｂ）含量０．１５重量％）を酢酸エチル（２１ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌しながらこの溶液に、メタンスルホン酸（０．２７ｍＬ）の酢酸エチル（５ｍＬ）溶液を滴下する。１時間後、白色結晶を濾過して単離し、酢酸エチル（３ｍＬ）で洗い、減圧下乾燥させて、標記化合物１．４０ｇ（収率８６％）を得る。
この生成物は、ＨＰＬＣ純度が９９．２５（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｄ）含量が０．０７重量％である。
上記の調製を下記の通りさらに大きな規模で繰り返した：
ａ１）５０Ｌガラス反応器に、窒素下室温で撹拌しながら、乾燥メタノール２１．４３Ｌ（水０．０１％含有）、Ｄ−アラニンアミド塩酸塩（５８９．９ｇ；４．７２ｍｏｌ）、トリエチルアミン（４７７．８ｇ；４．７２ｍｏｌ）、４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０００ｇ、４．３３ｍｏｌ、実施例２３．１ａ）に記載の通りに調製、ＧＣ純度９３．２０（面積％、実施例２４Ａを参照）およびＧＣで測定（実施例２４Ｂを参照）した３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド含量０．４３％）、および３Åモレキュラーシーブ（４３０．６２ｇ）を入れていく。混合物を４０℃に加熱し、この温度で４時間撹拌する。それから反応温度を１０℃に下げて、水素化ホウ素ナトリウム（８２．５８ｇ、２．１６ｍｏｌ）を３０分で少しずつ加える。反応混合物を撹拌しながら室温まで昇温させ、２０±２℃でさらに６時間撹拌する。反応混合物をろ過し、減圧下乾固するまでエバポレートする。残渣を６０℃の水（１６Ｌ）およびトルエン（１４Ｌ）に取り、有機相を分離して水（１６Ｌ）を加える。２相混合物を撹拌しながら６０±２℃に温める。有機相を分離して水（１６Ｌ）を加える。２相混合物を撹拌しながら６０±２℃に温める。減圧下約６０℃で、有機相を共沸蒸留により乾燥させる。水相を１つにまとめる（溶液Ａ、約５０Ｌ）。トルエン溶液を徐々に１０℃に冷却する。混合物を窒素下１０±２℃で４時間撹拌する。混合物を濾過し、ケーキを冷（１０℃）トルエン（２Ｌ）で洗い、減圧下室温で乾燥させて、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）３９３．３ｇ（１．３１ｍｏｌ；収率３０．３％）を白色固体として得る。
この生成物は、ＨＰＬＣ純度が９７．７０（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩ’ｂ）含量が０．１６重量％である。
キラルＨＰＬＣカラムで測定したエナンチオマー比Ｒ：Ｓ＝９９．５：０．５（面積％、実施例２６Ｂを参照）。
ｂ１）工程ａ１）に従って調製した（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド３９３．３ｇ（１．３１ｍｏｌ、ＧＣ純度９７．７０（面積％、実施例２４Ａを参照）およびＣＧで測定（実施例２４Ｂを参照）した（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩ’ｂ）含量０．１６重量％）を酢酸エチル（６．５Ｌ）に溶解し、撹拌しながら室温で、この溶液にメタンスルホン酸（８３ｍＬ）の酢酸エチル（１．５Ｌ）溶液を加える。１時間後、白色結晶を濾過して単離し、酢酸エチル（３ｍＬ）で洗い、減圧下乾燥させて標記化合物４２０．１ｇ（収率８４％）を得る。
この生成物は、ＨＰＬＣ純度が９９．１５（面積％、実施例２５Ａを参照）であり、ＨＰＬＣで測定（実施例２５Ｂを参照）した（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩（ＩＩ’ｄ）含量が０．０８重量％である。
上記のデータは、国際公開第２００６／０２７０５２号に開示される方法で最終生成物として回収されない化合物（Ｉ’ｂ）の量（上記の工程ａ）の下を参照）を考慮に入れたとしても、この収率は化合物（Ｉ’ｂ）の工業規模での製造には満足いくものではないことを示す。
（実施例２４Ａ）
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）および４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）の純度のＧＣ測定。
試験調製物
サンプル約１００ｍｇを塩化メチレン１０ｍｌに溶かす。
クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィー手順は下記条件を使用することにより実施する。
−長さ６０ｍ及び内径０．３２ｍｍの溶融シリカキャピラリーカラムＲＴＸ３５（３５％ジフェニル−６５％ジメチルポリシロキサン）、膜厚＝０．２５μｍ；
−キャリヤーガスとして圧力１５０ｋＰａのヘリウムガス；
−スプリット流速２５ｍｌ／分；
−インジェクター温度２９０℃；
−検出器（ＦＩＤ）温度２９０℃；
以下の温度プログラムを使用する。
Figure 2014159407
手順
試験調製物１μｌを注入する。クロマトグラムを記録し、面積百分率計算により生成物純度を計算する。
不純物同定
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）：
保持時間：
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド保持時間は約１７である。
４−ヒドロキシベンズアルデヒド相対保持時間は約０．５２である。
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間は約０．９８である。
４−（４−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間は約１．０１である。
４−ベンジルオキシベンズアルデヒド相対保持時間は約１．０２である。
３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間は約１．７８である。
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）：
保持時間：
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド保持時間は約１７である。
４−ヒドロキシベンズアルデヒド相対保持時間は約０．５３である。
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間は約１．０２である。
４−（４−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間は約１．０３である。
４−ベンジルオキシベンズアルデヒド相対保持時間は約１．０４である。
３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間は約１．８１である。
（実施例２４Ｂ）
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶｂ）中の３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩｂ）含量および４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶａ）中の３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＶＩａ）含量のＧＣ測定
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドについて検討した公知近縁物質は３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとし、４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドについては３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドを検討する。以下の条件に従って測定を行う。
内部標準溶液
塩化メチレン中濃度１．５ｍｇ／ｍｌの３，４，５−トリメトキシベンズアルデヒド溶液を調製する（ＩＳ）。
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドにおける３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド測定用参照溶液：
３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド参照標準約２０ｍｇと４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド参照標準２０ｍｇを２０ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、この溶液５００μＬを５ｍＬ容量フラスコに移し、ＩＳ溶液５００μＬを加え、希釈剤で定容に希釈し、３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド及び４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド約１００μｇ／ｍＬ（約０．１０％に対応）を含有する溶液を得る。
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドにおける３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド測定用参照溶液：
３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド参照標準約２０ｍｇと４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド参照標準２０ｍｇを２０ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、この溶液５００μＬを５ｍＬ容量フラスコに移し、ＩＳ溶液５００μＬを加え、希釈剤で定容に希釈し、３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド及び４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド約１００μｇ／ｍＬ（約０．１０％に対応）を含有する溶液を得る。
試験溶液：
試験生成物約５００ｍｇを５ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、ＩＳ溶液５００μＬを加え、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、約１００ｍｇ／ｍＬの既知濃度の溶液を得る。
クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィー手順は以下の条件で実施する：
カラム：溶融シリカキャピラリーカラムＲＴＸ３５（３５％ジフェニル−６５％ジメチルポリシロキサン）、長さ６０ｍ、内径０．３２ｍｍ、膜厚０．２５μｍ；
圧力１５０ｋＰａのキャリヤー（ヘリウム）；
スプリット流速２５ｍＬ／分；
インジェクター温度２９０℃；
検出器（ＦＩＤ）温度２９０℃；
温度プログラム：０〜５分は１５０℃恒温、５〜１１分は速度１５℃／分で１５０℃から２４０℃まで直線上昇、１１〜１９分は２４０℃恒温、１９〜２１分は速度３０℃／分で２４０℃から２９０℃まで直線上昇、２１〜４０分は２９０℃恒温；
希釈剤：塩化メチレン；
注入容量１μＬ。
手順：
ブランク（希釈剤）、参照溶液、試験溶液を注入し、クロマトグラムを記録する。
４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド保持時間が約１８分であり；
３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間が約１．７であるか、又は
４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド保持時間が約１８分であり；
３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド相対保持時間が約１．７であることを参照クロマトグラムで確認する。
３，４，５−トリメトキシベンズアルデヒド（ＩＳ）相対保持時間は約０．７である。
試験した４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドにおける３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド又は試験した４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドにおける３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの含量百分率を内部標準計算により計算する。
（３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドと３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドの定量限界（ＬＯＱ）値は０．００５重量％である。検討する両者不純物の検出限界（ＬＯＤ）値は０．００２５重量％である。
（実施例２５Ａ）
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（サフィナミド）（Ｉａ）とそのメタンスルホン酸塩（Ｉｃ）、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）とそのメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）の純度のＨＰＬＣ測定
以下のクロマトグラフィー手順は生成物の遊離塩基形態（Ｉａ，Ｉｂ）及びメタンスルホン酸塩（Ｉｃ，Ｉｄ）の両者に適している。
希釈剤
移動相
試験溶液
生成物約２５ｍｇを２５ｍｌ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、約１．０ｍｇ／ｍｌの既知濃度の溶液を得る。
クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィー手順は下記条件を使用することにより実施する。
−カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ８，１５０ｘ４．６ｍｍ，５μｍ；
−検出：ＵＶ ２２０ｎｍ；
−カラム温度：３０℃；
−移動相：４０％溶媒Ａ＋１０％溶媒Ｂ＋５０％溶媒Ｃに１．０ｇ／ｌオクタンスルホン酸ナトリウムを添加；
溶媒Ａ：緩衝液＝０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４；
溶媒Ｂ：アセトニトリル；
溶媒Ｃ：メタノール；
−アイソクラティック溶出，試験時間：６０分；
−流速：１．０ｍｌ／分；
−注入容量：１０μｌ。
手順
試験溶液を注入し、クロマトグラムを記録し、生成物純度を面積百分率計算により計算する。
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（サフィナミド）及び近縁不純物同定
保持時間：
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド保持時間は約５．５分である。
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロピオン酸相対保持時間は約０．７３である。
（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド相対保持時間は約４．０８である。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド）及び近縁不純物同定
保持時間：
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド保持時間は約５．５分である。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロピオン酸相対保持時間は約０．７３である。
（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド相対保持時間は約４．０８である。
Ｒ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、（Ｉ’ｃ）、（Ｉ’ｄ）およびそれぞれのラセミ混合物中のＣ，Ｏ−ジベンジル化不純物（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、（ＩＩ’ｃ）、（ＩＩ’ｄ）およびそれぞれのラセミ混合物の測定のため、同一の手順および参照値を用いる。
（実施例２５Ｂ）
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基Ｉｂ及びメタンスルホン酸塩Ｉｄ）における（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基ＩＩｂ及びメタンスルホン酸塩ＩＩｄ）と（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基Ｉａ及びメタンスルホン酸塩Ｉｃ）における（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基ＩＩａ及びメタンスルホン酸塩ＩＩｃ）のＨＰＬＣ測定
以下の条件に従い、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）サンプルにおける（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）と（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）サンプルにおける（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）の測定を実施する。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドにおける（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド測定用参照溶液：
（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準約３０ｍｇと（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド参照標準２０ｍｇを５０ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、この溶液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第１回希釈）し、この希釈液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第２回希釈）、２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（約０．１２％）約１．２０μｇ／ｍＬと（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩約１．００μｇ／ｍＬ（約０．１０％）を含有する溶液を得る。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩における（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩測定用参照溶液：
（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準約３０ｍｇと（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準２０ｍｇを５０ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、この溶液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第１回希釈）し、この希釈液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第２回希釈）、２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（メタンスルホン酸塩として約０．１５％）約１．２０μｇ／ｍＬと（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩約１．００μｇ／ｍＬ（約０．１０％）を含有する溶液を得る。
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドにおける（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド測定用参照溶液：
（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド参照標準約２４ｍｇと（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド参照標準２０ｍｇを５０ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、この溶液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第１回希釈）し、この希釈液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第２回希釈）、２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（約０．１２％）約１．２０μｇ／ｍＬと（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩約１．００μｇ／ｍＬ（約０．１０％）を含有する溶液を得る。
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩における（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩測定用参照溶液：
（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド参照標準約２４ｍｇと（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準２０ｍｇを５０ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、この溶液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第１回希釈）し、この希釈液１．０ｍＬを希釈剤で２０ｍＬまで希釈し（第２回希釈）、２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（メタンスルホン酸塩として約０．１５％）約１．２０μｇ／ｍＬと（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩約１．００μｇ／ｍＬ（約０．１０％）を含有する溶液を得る。
試験溶液：
試験生成物約２５ｍｇを２５ｍＬ容量フラスコで正確に計量し、希釈剤で定容に溶解及び希釈し、約１．０ｍｇ／ｍＬの既知濃度の溶液を得る。
クロマトグラフィー条件：
クロマトグラフィー手順は下記条件を使用することにより実施する。
−カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｉｍｍｅｔｒｙ Ｃ８ １５０ｘ４．６ｍｍ，５μｍ、又は同等装置；
−カラム温度：３０℃；
−移動相：４０％溶媒Ａ：１０％溶媒Ｂ：５０％溶媒Ｃの混合物に１ｇ／ｌオクタンスルホン酸ナトリウムを添加；
溶媒Ａ：緩衝液０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４；
溶媒Ｂ：アセトニトリル；
溶媒Ｃ：メタノール；
−アイソクラティック溶出；
−試験時間：６０分；
−流速：１．０ｍＬ／分；
−検出：ＵＶ ２２０ｎｍ；
−注入容量：１００μｌ；
−希釈剤：移動相。
手順：
ブランク（希釈剤）、参照溶液、試験溶液を注入し、クロマトグラムを記録する。
参照クロマトグラムで以下のシステム適合性パラメーターを確認する：
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド保持時間が約５．２分であり；
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドピークのＵＳＰテーリングが０．８〜１．５であり；
（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド相対保持時間が約５．１であるか、又は
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド保持時間が約５．５分であり；
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドピークのＵＳＰテーリングが０．８〜１．５であり；
（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド相対保持時間が約４．１である。
システム適合性が得られるように移動相を調節する。
試験した（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）サンプルにおける（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）と試験した（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）サンプルにおける（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基及びメタンスルホン酸塩）の含量百分率を外部標準計算により計算する。
対応する（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド及び（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドにおける（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド及び（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの定量限界（ＬＯＱ）値は０．００４重量％である。対応する（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩及び（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩における（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩及び（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の定量限界（ＬＯＱ）値は０．００５重量％である。検討する全不純物の検出限界値は０．００１重量％である。
（実施例２６Ａ）
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉｂ）およびこのメタンスルホン酸塩（Ｉｄ）のエナンチオマー純度のＨＰＬＣ測定
サンプルのエナンチオマー純度をＨＰＬＣにより評価する。測定は以下の条件に従って実施する：
標準溶液１：
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準約５．３ｍｇを移動相２５ｍＬに溶解。
標準溶液２：
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準約８．０ｍｇと０．２ｍＬの標準溶液１を移動相５０ｍＬに溶解。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の濃度に対する（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の濃度は、計算上約０．５％である。
試験溶液１および２：
試験生成物約８．０ｍｇを移動相５０ｍＬに溶解したものを２本調製する。
クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＷＨ ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、内径５μｍ；
カラム温度：４５℃；
移動相：０．２５ｍＭのＣｕＳＯ４（ＣｕＳＯ４約４０ｍｇを正確に計量し、水１０００ｍＬに溶かす）／ＭｅＯＨ ６０／４０；
均一濃度溶出；
流速：１．０ｍＬ／分；
検出：ＵＶ２３０ｎｍ；
注入体積：１０μＬ；
実行時間：１５分。
手順：
ブランク（移動相）を１回、標準溶液２を２回、試験溶液１および２を１回分析して、以下を確認する。
標準溶液の注入については、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の面積百分率について参照標準測定百分率（ＲＳＤ％）が２．０％未満であること；
標準溶液とサンプル溶液の両者については、注入ごとに主ピーク面積百分率が平均値±０．１％に含まれること。
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量（面積％）を２回の測定の平均として計算する。
保持時間：
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの保持時間は約５．７分である。
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの相対保持時間は約１．７である。
対応するラセミ（Ｒ，Ｓ）化合物（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）および（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）のＳ異性体比を測定するのにもこの方法を用いる。
（実施例２６Ｂ）
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）およびこのメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｄ）のエナンチオマー純度のＨＰＬＣ測定
サンプルのエナンチオマー純度をＨＰＬＣにより評価する。測定は以下の条件に従って実施する：
標準溶液１：
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩参照標準約５．３ｍｇを移動相２５ｍＬに溶解。
標準溶液２：
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩約８．０ｍｇと０．２ｍＬの標準溶液１を移動相５０ｍＬに溶解。
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の濃度に対する（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の濃度は、計算上約０．５％である。
試験溶液１および２：
試験生成物約８．０ｍｇを移動相５０ｍＬに溶解したものを２本調製する。
クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＷＨ ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、内径５μｍ；
カラム温度：４５℃；
移動相：０．２５ｍＭのＣｕＳＯ４（ＣｕＳＯ４約４０ｍｇを正確に計量し、水１０００ｍＬに溶かす）／ＭｅＯＨ ６０／４０；
均一濃度溶出；
流速：１．０ｍＬ／分；
検出：ＵＶ２３０ｎｍ；
注入体積：１０μＬ；
実行時間：１５分。
手順：
ブランク（移動相）を１回、標準溶液２を２回、試験溶液１および２を１回分析して、以下を確認する。
標準溶液の注入については、（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩の面積パーセントについてＲＳＤ％が２．０％未満であること；
標準溶液とサンプル溶液の両者については、注入ごとに主ピーク面積百分率が平均値±０．１％に含まれること。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドメタンスルホン酸塩含量（面積％）を２回の測定の平均として計算する。
保持時間：
（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの保持時間は約９．６９分である。
（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの相対保持時間は約０．５８である。
対応するラセミ（Ｒ，Ｓ）化合物（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）および（Ｉｄ、Ｉ’ｄ）のＲ異性体比を測定するのにもこの方法を用いる。
（実施例２４Ａ）
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉａ）およびこのメタンスルホン酸塩（ｌｃ）のエナンチオマー純度のＨＰＬＣ測定
サンプルのエナンチオマー純度をＨＰＬＣにより評価する。測定は以下の条件に従って実施する。
試験溶液：
試験サンプル約１０ｍｇを移動相１０ｍＬに溶解。
クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＷＨ ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、内径１０μｍ；
カラム温度：５０℃；
移動相：０．２５ｍＭのＣｕＳＯ４；
均一濃度溶出；
流速：１．０ｍＬ／分；
検出：ＵＶ２００ｎｍ；
注入体積：１０μＬ；
実行時間：３０分。
手順：
試験溶液を注入し、エナンチオマーピーク応答を面積パーセントとして計算する。
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの保持時間は約９．２分である。
（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの相対保持時間は約１．９である。
対応するラセミ（Ｒ，Ｓ）化合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）のＳ異性体比を測定するのにもこの方法を用いる。
（実施例２７Ｂ）
（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ａ）およびこのメタンスルホン酸塩（Ｉ’ｃ）のエナンチオマー純度のＨＰＬＣ測定
サンプルのエナンチオマー純度をＨＰＬＣにより評価する。測定は以下の条件に従って実施する。
試験溶液：
試験サンプル約１０ｍｇを移動相１０ｍＬに溶解。
クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＷＨ ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、内径１０μｍ；
カラム温度：５０℃；
移動相：０．２５ｍＭのＣｕＳＯ４；
均一濃度溶出；
流速：１．０ｍＬ／分；
検出：ＵＶ２００ｎｍ；
注入体積：１０μｌ；
実行時間：３０分。
手順：
試験溶液を注入し、エナンチオマーピーク応答を面積パーセントとして計算する。
（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの保持時間は約１７．４８分である。
（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドの相対保持時間は約０．５６である。
対応するラセミ（Ｒ，Ｓ）化合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）および（Ｉｃ、Ｉ’ｃ）のＲ異性体比を測定するのにもこの方法を用いる。
（実施例２７Ｃ）
（Ｓ）および（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基ｌＩｂ、およびメタンスルホン酸塩ＩＩｄ）のエナンチオマー純度のＨＰＬＣ測定
試験溶液
２０ｍＬメスフラスコ中、正確に計量した試験物質約２０．０ｍｇを移動相に溶解し希釈して２０ｍＬにする。
クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィー手順は以下を用いて実施する：
カラム：
ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ−Ｈ ２５ｃｍ×４．６ｍｍ
移動相：
８０％溶媒Ａ：ｎ−ヘキサン
２０％溶媒Ｂ：ｎ−エタノール
０．３％ジエチルアミン（ＤＥＡ）
流速：
０．８ｍＬ／分
検出：
ＵＶ２４０ｎｍ
注入体積：
１０μＬ
実行時間：
２０分
手順
試料溶液を注入してクロマトグラムを記録する。
エナンチオマーの割合を面積％として計算する
エナンチオマーＳ：ＲＴ＝７．２９８
エナンチオマーＲ：ＲＴ＝７．６１７
ＲＴ比＝１．０４
対応するラセミ化合物（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）および（ＩＩｄ、ＩＩ’ｄ）のＳ／Ｒ異性体比を測定するのにもこの方法を用いる。
（実施例２７Ｄ）
（Ｓ）および（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（遊離塩基ＩＩａ、およびメタンスルホン酸塩ｌＩｃ）のエナンチオマー純度のＨＰＬＣ測定
試験溶液
２０ｍＬメスフラスコ中、正確に計量した試験物質約２０．０ｍｇを移動相に溶解し希釈して２０ｍＬにする。
クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィー手順は以下を用いて実施する：
カラム：
ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ−Ｈ ２５ｃｍ×４．６ｍｍ
移動相：
８０％溶媒Ａ：ｎ−ヘキサン
２０％溶媒Ｂ：ｎ−エタノール
０．３％ジエチルアミン（ＤＥＡ）
流速：
０．８ｍＬ／分
検出：
ＵＶ２４０ｎｍ
注入体積：
１０μＬ
実行時間：
２０分
手順
試料溶液を注入してクロマトグラムを記録する。
エナンチオマーの割合を面積％として計算する
エナンチオマーＳ：ＲＴ＝８．２１１
エナンチオマーＲ：ＲＴ＝８．７１４
ＲＴ比＝１．０６１
対応するラセミ化合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）および（ＩＩｃ、ＩＩ’ｃ）のＳ／Ｒ異性体比を測定するのにもこの方法を用いる。
（実施例２８）
チトクロームＰ４５０アッセイ
ＣＹＰ代謝後に蛍光発光する特異的基質を使用して薬剤代謝に関与する最も重要な５種類のチトクロームＰ４５０アイソフォーム（ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ２Ｃ９，ＣＹＰ２Ｃ１９，ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ３Ａ４）の阻害を測定した（Ｇｅｎｔｅｓｔ Ｋｉｔアッセイ）。
インキュベーション／ＮＡＤＰＨ再生用緩衝液を加える９６ウェルプレートで化合物を試験した。特異的ヒト組換えアイソザイム及び基質を加え、３７℃でＣＹＰ１Ａ２／ＣＥＣは１５分間、ＣＹＰ２Ｅ１／ＭＦＣは４０分間、ＣＹＰ２Ｃ９／ＭＦＣは４５分間、その他のＣＹＰ４５０は３０分間インキュベートした。
特異的基質としては、
３−シアノ−７−エトキシクマリン（ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ１Ａ２）、
７−メトキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＣＹＰ２Ｃ９）、
３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｎ−メチルアミノ）エチル］−７−メトキシ−４−メチルクマリン（ＣＹＰ２Ｄ６）、
ベンジルフェニルクマリン（ＣＹＰ３Ａ４）を使用する。
適切な発光／励起波長に設定したＶｉｃｔｏｒプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でプレートを読み取り、ＩＣ５０（酵素活性を５０％阻害する濃度）を測定した。結果を表１及び２に報告する。
（実施例２９）
ヒト神経芽細胞腫細胞株ＳＨ−ＳＹ−５Ｙにおける細胞毒性アッセイ
ゼロ時点において、９６ウェルプレートでＤＭＥＭ増殖培地＋１０％熱不活化ＦＢＳ＋２ｍＭ １−グルタミン＋１００Ｕ／ｍＬ−１００μｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシンに細胞１．１０４個／ｃｍ２を播種した。
サブコンフルエント増殖期で７２時間後に培地を除去し、神経細胞培養用基礎培地１８０μｌ＋２ｍＭ １−グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｏｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で試験化合物（２０μｌ，少なくとも５種類の濃度で３回ずつ）の存在下又は不在下に細胞を２４時間３７℃でインキュベートした。
インキュベーション後にＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ色素（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（ＴＭ）Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ，Ｐｒｏｍｅｇａ）２０μｌを細胞培養液に直接加える。
４時間後に、Ｔｅｃａｎ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーを使用して５３０ｎｍ励起及び５９５ｎｍ発光波長の蛍光を測定することにより細胞毒性を評価する。
処理前後に、Ｉｍａｇｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ，５．１）に連動させたＯｌｙｍｐｕｓ ＩＸ７０倒立型光学顕微鏡により培養液を顕微鏡モニターし、細胞形態を評価する。
死亡率の５０％を誘発する濃度として結果を表１に報告する。
（実施例３０）
トランスフェクトしたＣＨＯ細胞株におけるＨＥＲＧ電流
組換えＨＥＲＧチャネルを安定に発現するＣＨＯ細胞でＨＥＲＧ電流の阻害を試験した。
ＨＥＲＧ電流に及ぼす試験化合物の効果を評価するために、細胞を−８０Ｍｖでクランプし、０ｍＶまで５秒間脱分極してＨＥＲＧ電流を活性化させ、−５０ｍＶまで５秒間再分極してＨＥＲＧテール電流を不活性化させる。この手順を周波数０．０６Ｈｚで反復した。試験化合物暴露前後に再分極による電流振幅（ＨＥＲＧテール電流）を測定した。
外液潅流時間後に測定したＨＥＲＧテール電流振幅と試験化合物潅流時間後（定常状態効果に達したとき）に測定したＨＥＲＧテール電流の振幅差を対照ＨＥＲＧテール電流で割った値として電流阻害を計算した。
薬剤濃度に対する緊張遮断をプロットすることにより薬剤濃度−阻害曲線を得る。ロジスティック式：ｙ＝Ａ２＋（Ａ１−Ａ２）／［１＋（ｘ／ＩＣ５０）ｐ］に従って用量応答曲線を緊張遮断データにフィットさせる。Ａ１及びＡ２は０及び１００％電流阻害に対応する固定値０及び１であり、ｘは薬剤濃度であり、ＩＣ５０は５０％電流阻害を生じる薬剤濃度であり、ｐは対応する勾配係数である。結果を表１に報告する。
（実施例３１）
マウスにおける最大電気ショック試験（ＭＥＳ）
最大電気ショック試験（ＭＥＳ）は齧歯類モデルにおける抗癲癇薬のスクリーニングで広く使用されている。
動物及び装置：体重２５ｇの雄性ＣＤ１マウスを使用する。Ｗｈｉｔｅら（Ｗｈｉｔｅ Ｈ．Ｓ．，Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｊ．Ｈ．，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｍ．Ｒ．，Ｓｗｉｎｙａｒｄ Ｅ．Ａ．，ａｎｄ Ｗｏｌｆ Ｈ．Ｈ．Ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ Ｄｒｕｇｓ（１９９５）４ｔｈ ｅｄ．：９９−１１０，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）により記載されている手順に従った。Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ電気痙攣発生器（Ｍｏｄｅｌ ＥＣＴ ＵＮＩＴ ７８０１）を使用し、対照動物の少なくとも９７％で後肢緊張伸展応答を発生するために十分な電気刺激を与えた。刺激はクリップ電極を通してマウスの耳内に与えた（パルス時間０．４ｍｓの８０Ｈｚパルス列で０．７秒間４０ｍＡショック）。ＭＥＳ誘導の１５〜６０分前に腹腔内又は経口投与した化合物の急性効果を試験し、ビヒクル対照群と比較した。各群１０匹ずつ試験した。発作の後肢緊張伸展成分の完全な抑制を抗痙攣活性の指標とみなした。
本発明の化合物は用量３〜３０ｍｇ／ｋｇで経口又は腹腔内投与した。
結果を表３及び４に保護の％として表す。

Claims (20)

  1. 医薬として使用するための、高純度２−［４−（３−又は２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド化合物であって、式（Ｉａ）の（Ｓ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（サフィナミド）、式（Ｉｂ）の（Ｓ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ラルフィナミド）
    Figure 2014159407
     それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）および（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ，Ｉ’ａ）および（Ｉｂ，Ｉ’ｂ）およびこの医薬として許容される酸との塩から選択され、
    ここで、サフィナミド（Ｉａ）、ラルフィナミド（Ｉｂ）、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）もしくは（Ｉ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ，Ｉ’ａ）および（Ｉｂ，Ｉ’ｂ）またはこれらの医薬として許容される酸との塩は、０．０３％（重量）未満である、それぞれの不純物、（Ｓ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩａ）、（Ｓ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）−ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩｂ）、
    Figure 2014159407
     それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩ’ｂ）、またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）またはこの医薬として許容される酸との塩の含有量を有し、
    前記化合物は、
    式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）のＳｃｈｉｆｆ塩基中間体
    Figure 2014159407
     それぞれのＲ−エナンチオマー（ＩＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩＩ’ｂ）又はそれぞれのラセミ混合物（ＩＩＩａ、ＩＩＩ’ａ）若しくは（ＩＩＩｂ、ＩＩＩ’ｂ）が、（ｉ）いずれのモレキュラーシーブの添加無しに、（Ｃ１−Ｃ５）低級アルカノールから選択される溶媒中、必要に応じて少量の水と共に、温度２０℃から３０℃において、同溶媒中のＳｃｈｉｆｆ塩基の飽和溶液中にＳｃｈｉｆｆ塩基の懸濁液が形成されるようなアルデヒドに対する溶媒の量の溶媒中、４−（３−又は２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒドとＬ−アラニンアミド又はＤ−アラニンアミド、又はそれらのラセミ混合物とのイミノアルキル化によって得られ、ならびに（ｉｉ）イミノアルキル化反応完了後に、所定量の（Ｃ１−Ｃ５）低級アルカノール又はこれらの混合物から選択される有機溶媒中で、必要に応じて少量の水と共に、水素化ホウ素ナトリウム及び水素化ホウ素カリウムから選択される還元剤との還元反応にかけられ、ここで、有機溶媒対Ｓｃｈｉｆｆ塩基との比は、還元反応工程の十分な部分の間、同有機溶媒におけるＳｃｈｉｆｆ塩基の飽和溶液中へのＳｃｈｉｆｆ塩基の懸濁物の形成及び存在を許し、ならびにＳｃｈｉｆｆ塩基の各モル当たり０．５Ｌから３．０Ｌの範囲にあることを特徴とし、さらに、Ｓｃｈｉｆｆ塩基中間体（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩ’ａ）、（ＩＩＩ’ｂ）またはそれぞれのラセミ混合物（ＩＩＩａ、ＩＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩＩｂ、ＩＩＩ’ｂ）に供される４−（３−又は２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド出発物質が０．０３％未満の３−（３−又は２−フルオロベンジル）−４−（３−又は２−フルオロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド不純物含有量を有することを特徴とし、これにより、サフィナミド（Ｉａ）、ラルフィナミド（Ｉｂ）、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）もしくは（Ｉ’ｂ）またはそれぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）若しくは（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）は遊離塩基形態で得られ、ならびに必要に応じて該遊離塩基形態をこの医薬として許容される酸との塩に転換することを特徴とする方法によって得られる、化合物。
  2. 医薬的に許容される酸との塩はメタンスルホン酸との塩であり、それぞれの不純物である式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはメタンスルホン酸との塩の含量は０．０１重量％未満である、医薬として使用するための請求項１に記載の高純度サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）、（Ｉ’ｂ）、およびそれぞれのラセミ混合物、または医薬的に許容される酸との塩。
  3. ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９からなる群より選択されるＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉せず、ならびにＨＥＲＧチャネル遮断性を示さない条件下でそれぞれ（ｉ）癲癇、パーキンソン病、アルツハイマー病、うつ病、不穏下肢症候群、疼痛、および偏頭痛、（ｉｉ）慢性疼痛および神経因性疼痛を含む疼痛症状、偏頭痛、双極性障害、うつ病、心臓血管障害、炎症性障害、尿生殖器障害、代謝障害、および胃腸障害の治療用医薬として使用するための、請求項１および２のいずれか一項に記載の高純度（ｉ）サフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、もしくはこれらの医薬的に許容される酸との塩、または高純度（ｉｉ）ラルフィナミド、このＲ−エナンチオマー、これらのラセミ混合物、もしくはこれらの医薬的に許容される酸との塩。
  4. 低代謝能群（ＰＭ）に分類される患者で前記請求項３に記載の障害を治療する、またはＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉することが既知であるおよび／またはＨＥＲＧチャネル遮断性を有することが既知である他の薬物の付随が想定されている患者の治療用医薬として使用するための、請求項３に記載の高純度サフィナミド、サフィナミドＲ−エナンチオマー、ラルフィナミド、ラルフィナミドＲ−エナンチオマー、それぞれのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩。
  5. 疼痛、偏頭痛、身体系全体に影響を及ぼす炎症過程、皮膚および関連組織に影響を及ぼす障害、呼吸器系の障害、免疫系および内分泌系の障害、胃腸障害、並びに尿生殖器障害からなる群より選択されるナトリウムおよび／またはカルシウムチャネル機構が病理学的役割を果たす病状のいずれかを患っている患者で、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９からなる群より選択されるＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉せず、ならびにＨＥＲＧチャネル遮断性を示さない条件下で、該病状の選択的治療用医薬として使用するための、式（ＩＩ’ｂ）の不純物またはこの医薬的に許容される酸との塩が０．０３％（重量）未満である高純度ラルフィナミドＲ−エナンチオマー単体またはこの医薬的に許容される酸との塩。
  6. 低代謝能群（ＰＭ）に分類される患者で前記請求項５に記載の障害を治療する、またはＣＹＰ４５０系のチトクロームに干渉することが既知であるおよび／またはＨＥＲＧチャネル遮断性を有することが既知である他の薬物の付随が想定されている患者の治療用医薬として使用するための、請求項５に記載の高純度ラルフィナミドＲ−エナンチオマー単体またはこの医薬的に許容される酸との塩。
  7. 請求項１に記載の方法によって得られる高純度サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）もしくは（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）もしくは（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を含有する薬学的配合物であって、それぞれの不純物である式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩の含量が０．０３％（重量）未満である、薬学的配合物。
  8. それぞれの不純物である式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩の含量が０．０３％（重量）未満である、高純度サフィナミド、ラルフィナミド、それぞれのＲ−エナンチオマー（Ｉ’ａ）もしくは（Ｉ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（Ｉａ、Ｉ’ａ）もしくは（Ｉｂ、Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩に加えて、１種類以上のさらなる活性剤を含有する、請求項７に記載の薬学的配合物。
  9. さらなる活性剤は、ドーパミンアゴニストおよび／またはレボドパおよび／またはカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤である、請求項８に記載の高純度サフィナミドまたはこの医薬的に許容される酸との塩を含有する薬学的配合物。
  10. さらなる活性剤はレボドパである請求項９に記載の薬学的配合物。
  11. さらなる活性剤は、ガバペンチンまたはプレガバリンまたはこの医薬的に許容される酸付加塩である、請求項８に記載の高純度ラルフィナミドまたはこの医薬的に許容される酸との塩を含有する薬学的配合物。
  12. 不純物（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（ＩＩ’ｂ）またはこの医薬的に許容される酸との塩の含量が０．０３％（重量）未満である高純度ラルフィナミドエナンチオマー単体、（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩を、任意にさらなる活性剤と合わせて含有する、疼痛、偏頭痛、身体系全体に影響を及ぼす炎症過程、皮膚および関連組織に影響を及ぼす障害、呼吸器系の障害、免疫系および内分泌系の障害、胃腸障害、および尿生殖器障害からなる群より選択されるナトリウムおよび／またはカルシウムチャネル機構が病理学的役割を果たす病状の選択的治療用医薬として使用するための請求項７に記載の薬学的配合物。
  13. ガバペンチンおよびガバペンチン関連物質から選択されるさらなる活性剤を任意に含有することができる、慢性疼痛および神経因性疼痛を含む疼痛症状の治療用医薬として使用するための請求項１２に記載の薬学的配合物。
  14. 医薬的に許容される酸がメタンスルホン酸であり、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩ’ａ）、（ＩＩ’ｂ）、それぞれのラセミ混合物（ＩＩａ、ＩＩ’ａ）もしくは（ＩＩｂ、ＩＩ’ｂ）、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩である不純物の含量が０．０１％（重量）未満である、請求項７〜１３のいずれか一項に記載の薬学的配合物。
  15. 不純物（Ｒ）−２−［３−（３−フルオロベンジル）−４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドまたはこの医薬的に許容される酸との塩の含量が、０．０３％（重量）未満である、高純度サフィナミドＲ−エナンチオマー、（Ｒ）−２−［４−（３−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ａ）、またはこの医薬的に許容される酸との塩。
  16. 不純物（Ｒ）−２−［３−（２−フルオロベンジル）−４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミドまたはこの医薬的に許容される酸との塩の含量が、０．０３％（重量）未満である、高純度ラルフィナミドＲ−エナンチオマー（Ｒ）−２−［４−（２−フルオロベンジルオキシ）ベンジルアミノ］プロパンアミド（Ｉ’ｂ）またはこの医薬的に許容される酸との塩。
  17. ドーパミンアゴニストおよび／またはレボドパおよび／またはカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤である１種類以上のパーキンソン病活性剤と併用してパーキンソン病の治療用医薬として使用するための請求項３に記載の高純度サフィナミド、サフィナミドＲ−エナンチオマー、それらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩。
  18. レボドパと併用してパーキンソン病の治療用医薬として使用するための請求項１７に記載の高純度サフィナミドまたはこれらの医薬的に許容される酸との塩。
  19. ガバペンチンまたはプレガバリンと併用して疼痛状態の治療用医薬として使用するための、請求項３に記載の高純度ラルフィナミド、そのＲ−エナンチオマー、それらのラセミ混合物、またはこれらの医薬的に許容される酸との塩。
  20. 治療活性が、いずれのＭＡＯ阻害的副作用も実質的に有さないか、または顕著に減少したＭＡＯ阻害的副作用を示す、請求項５および６のいずれか一項に記載の医薬として使用するための請求項１６に記載の高純度ラルフィナミドＲ−エナンチオマーまたはこの医薬的に許容される酸との塩。
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