CN104523668B - 高纯度的2-[4-(3-或2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺类及其用途 - Google Patents
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Abstract
获得具有高纯度、特别是具有二苄基衍生物杂质低于0.03％、优选低于0.01％重量的治疗活性的2‑[4‑(3‑和2‑(氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺类及其与药学可接受的酸形成的盐的方法。通过下列步骤进行该方法：使用选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原剂在适量的选自C1‑C5低级链烷醇的有机溶剂中使希夫碱中间体2‑[4‑(3‑和2‑氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺类进行还原反应，使得在还原反应的大部分过程中形成和存在所述希夫碱进入所述希夫碱在同一有机溶剂的饱和溶液中的悬浮液。
Description
本申请是中国专利申请号200880120328X(PCT/EP2008/066559)，申请日2008年12月1日，发明名称为“具有高纯度的2-[4-(3-或2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺类的生产方法”的分案申请。
发明背景
本发明涉及高收率和极高对映体和化学纯度的2-[4-(3-或2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺化合物，选自(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺，即沙非酰胺(Ia)、(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺，即拉非酰胺(Ib)、各自的R-对映体(I′a)和(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐、(Ic)、(Id)、(I′c)、(I′d)及其外消旋混合物(Ic,I′c)和(Id,I′d)的新生产方法，
沙非酰胺(Ia):3-F
拉非酰胺(Ib):2-F
该方法还非常适用于其大量生产。
沙非酰胺(NW-1015,FCE-26743A,PNU-151774E)为钠通道阻滞剂、钙通道调节剂、单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂、谷氨酸盐释放抑制剂和多巴胺代谢调节剂。
沙非酰胺用于治疗CNS病症，特别是癫痫症、帕金森病、阿尔茨 海默病、抑郁症、多动腿综合征和偏头痛(WO 90/14334、WO2004/089353、WO 2005/102300和WO 2004/062655)。
拉非酰胺(NW-1029,FCE-26742A,PNU-0154339E)为用于治疗疼痛疾患的钠通道阻滞剂，包括慢性疼痛和神经性疼痛、偏头痛，双相型障碍、抑郁症、心血管疾病、炎症、泌尿生殖疾病、代谢性疾病和胃肠道病症(WO 99/35125、WO 03/020273、WO 2004/062655、WO2005/018627、WO 2005/070405、WO 2005/102300)。
特别地，沙非酰胺特别描述在WO 90/14334中。WO 90/14334中特别请求保护沙非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物及其与药学可接受的酸形成的盐及其在制备具有作为抗癫痫药、抗帕金森药、神经保护药、抗抑郁药、解痉挛药和/或安眠剂活性的药物组合物中的应用。
拉非酰胺特别描述在WO 90/14334中。WO 90/14334的权利要求包含了拉非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物及其药学可接受的酸形成的盐及其在制备具有作为抗癫痫药、抗帕金森药、神经保护药、抗抑郁药、解痉挛药和/或安眠剂活性的药物组合物中的应用。
此外，WO 99/035125请求保护沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体、各自的外消旋混合物及其药学可接受的酸形成的盐作为止痛药的应用。
WO 2006/027052 A2特别公开和请求保护了拉非酰胺的单一R-对映体即(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐作为选择性钠和钙通道调节剂在选择性治疗病理性病变(pathological affection)中的应用，其中钠或钙机制起病理学作用，包括疼痛、偏头痛、侵害全部身体系统的炎症性过程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖器病症，其中所述化合物的治疗活性基本上不含任何MAO抑制副作用或显示显著减少的MAO抑制副作用。
目前已经发现根据现有技术中所述方法大规模制备沙非酰胺和拉非酰胺包含两种不需要的杂质，即分别为(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)和(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄 氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)及其盐，特别是相应的甲磺酸盐(IIc)和(IId)。
相同情况发生在现有技术分别制备沙非酰胺和拉非酰胺的R-对映体(I′a)和(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐、(I′c)、(I′d)和各自的外消旋混合物(Ic,I′c)和(Id,I′d)、特别是甲磺酸盐，导致它们被上述鉴定的杂质(IIa)、(IIb)、(IIc)和(IId)的各自的R异构体(II′a)、(II′b)、(II′c)和(II′d)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)、(IIb,II′b)、(IIc,II′c)和(IId,II′d)污染。
这一事实特别具有关联性，因为发现上述杂质显示对细胞色素P450系统的酶的极高毒性。
许多药物候选物因不需要的杂质对人体代谢的无法预料的影响或毒性而在临床试验中失败，且由此在早期临床前期中消除这类杂质是重要的并且非常需要。
在临床前期水平上，可以使用充分确立的体外一系列试验评价新化合物的“可药用性”，例如与药物-代谢酶的相互作用，细胞毒性，代谢稳定性和分布型，膜渗透性，固有清除率和人体乙醚-a-go-go-相关基因(HERG)通道阻滞等。
P450(CYP 450)系统是用于亲脂性异源物质，包括药物，致癌物和环境污染物代谢的主要酶系统。CYP 450为含血红素的膜结合多酶系统，它存在于许多组织中，但以最高水平存在于肝中。在人体肝脏中，据估计有15－20种不同的代谢异源物质的CYP 450形式。迄今为止， 在哺乳动物中已经鉴定了超过十四种CYP基因家族。尽管存在高度同源性，但是广泛研究已经揭示出每一CYP家族和亚族在异源物质代谢方面均具有不同作用。三种CYP家族CYP1、CYP2和CYP3占人肝微粒体CYPs的约70％，其中CYP3约占30％。这些CYPs主要负责大部分市售药物代谢。
CYP1家族包含几个成员，包括CYP1A1、CYP1A2和CYP1B1，并且它们涉及对乙酰氨基酚、氯米帕明和丙咪嗪的代谢。
CYP2家族包含几个亚族，包括CYP2A、CYP2B、CYP2C、CYP2D和CYP2E。CYP2C亚族包含至少七个成员。CYP2C9负责布洛芬、双氯芬酸、甲苯磺丁脲和托拉塞米的代谢。CYP2C19为代谢地西泮和奥美拉唑的主要同工酶。已经证实CYP2D6负责市场上超过30％的药物代谢，包括抗抑郁药和心血管药和抗精神病药。
在CYP3家族中，已经在人体肝脏中鉴定了三个亚型。已经将人CYP3A4识别为药物代谢中最重要性的亚型。迄今为止，CYP3A4催化的代谢为接近50％市售药物的主要消除途径。
CYP3A4和CYP2D6因其在药物代谢中的重要性而通常涉及药物-药物相互作用，并且已经将几种临床使用的化合物鉴定为这些CYP 450亚型的有效抑制剂，例如分别为酮康唑、特非那定、红霉素、咪康唑、心得安和奎尼丁。这对这些药物的应用施加了明显的限制。
另一个问题，在于猝死作为非抗心律失常药作用的副作用，是制药工业和健康管理机构所面对的主要药理学安全性关注。近年来，因猝死的报道已经从市场上撤回了至少五种重量级药物(阿司咪唑，舍吲哚，特非那定，西沙必利，格帕沙星)。在所有情况中，特征在于心电图中QT间期延长的长QT综合征(LQTS)，即心肌复极化异常意味着“扭转性室速”的易感因素，即可能自发退化成心室颤动并且导致猝死的多形性室性心动过速。可以将先天性LQTS追朔回几种导致钠通道和两个不同钾通道缺陷的可能的突变：快速活化的延迟整流(IKr)和缓慢活化的延迟整流(IKs)。重要的是，实际上可以将涉及药物接触的心脏动作电位的延长期限(获得性LQTS)追朔至一种具体的机制：心脏中IKr电流阻滞。这种电流，即QT间期结束时3期复极化的主要贡献者由四聚化孔传导，其中各亚单位由HERG编码。由于将HERG K+通道阻滞广泛视为药物-诱导的QT延长的主要原因，所以早期检测具有这种不需要的副作用的化合物成为制药工业中的重要目的。
对药物代谢酶，特别是CYP 450酶具有强抑制和HERG通道阻滞作用的化合物具有毒性的高度可能性并且必须使它们的开发在早期终止。
正如表1中所示，作为甲磺酸盐(IIc)、(II′c)、(IId)、(II′d)和各自的外消旋物(IIc,II′c)和(IId,II′d)的杂质(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)和各自的外消旋物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)强烈抑制微-和亚微-摩尔范围的CYP3A4、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和HERG电流并且与具有高纯度的含有上述杂质低于0.03％重量的沙非酰胺甲磺酸盐(Ic)和拉非酰胺甲磺酸盐(Id)相比具有高度细胞毒性。
表1
表2表示使用包含低于0.03％重量上述杂质的高纯度沙非酰胺和 拉非酰胺甲磺酸盐样品与分别搀杂0.3％重量杂质(IIc)和(IId)的高纯度沙非酰胺和拉非酰胺的相同样品的细胞色素CYP3A4抑制的对比结果(IC50)。
当0.3％重量的杂质(IIc)和(IId)被添加到高纯度沙非酰胺和拉非酰胺甲磺酸盐中时，在两种情况中均观察到对CYP3A4的IC50显著下降，这意味着杂质促成了对酶活性的强烈抑制。
表2
正如表3中所示，从3mg/kg ip开始，杂质(IIc)增加小鼠最大电休克(MES)试验中的死亡率，无任何药理学活性，即防止惊厥的作用。
表3
表4中报道了在10和20mg/kg p.o.给予时，与相同剂量的拉非酰胺甲磺酸盐相比，在最大电休克(MES)试验中的杂质(IId)不会防止小鼠惊厥。
表4
基于所有这些数据，分别使用WO 90/14334和Pevarello等在J.Med.Chem,1998,41,579-590或在WO2006/027052中所述方法合成的沙非酰胺、拉非酰胺、其R-异构体和各自的外消旋混合物中所存在的不需要量的杂质(IIc)、(II′c)、(IId)和(II′d)和各自的外消旋混合物(IIc,II′c)和(IId,II′d)在体外表现出一定的不期望的特征，例如细胞毒性、对CYP 450某些亚型的强抑制作用、HERG通道阻滞和在“体内”癫痫模型的中无保护活性。
CYP的重要方面之一在于在不同群体组中的变化。在药物代谢中的变化在临床研究中具有极大的重要性。已经在不同人种群之间且甚至在相同族群中的不同个体中在CYP3A4和CYP2D6酶活性中显示出酶活性的显著变化。在个体中CYP活性的差异根据不同同工酶而显著改变。不同个体CYP表达水平的改变在药物代谢方面产生变化。更重要的是，多态现象还可以产生具有导致药物代谢变化的较低或较高酶活性的CYP酶变体。CYP2D6的多态现象为药物代谢中得到充分研究的课题。在临床研究中，首先在抗高血压药和抗癫痫药代谢中发现了个体之间的显著变化。CYP2D6代谢的药物的消除在携带缺陷型CYP2D6等位基因的那些个体中较为缓慢。将具有缓慢代谢的个体分类为弱代谢者(PM)，而催化感受态个体称作快代谢者(EM)：PM表型在不同种族来源的群体中的发生率可变：约5－10％的白种人具有PM表型，而亚洲人群中仅有1％。CYP2C19为另一种具有临床意义的重要多态亚型。
考虑到这些观察结果，不干扰CYP450亚型(既不抑制，也不诱导) 的化合物在临床实践中具有极低的药物间相互作用风险并且可以使临 床医师简化和安全地开据处方。
特别地，特别指明不干扰CYP450系统细胞色素的药物用于治疗性 处置被分类为弱代谢者(PM)的个体或用于治疗性处置同时服用其他药 物的患者，而已知这些患者服用的其他药物，例如酮康唑、特非那定、 红霉素、咪康唑、心得安和奎尼丁与所述的细胞色素发生相互作用， 和/或已知它们具有HERG通道阻断特性。
根据通常的临床实践，通常对有此需要的患者以再分成若干每日 剂量的方式长期给予沙非酰胺和拉非酰胺甲磺酸盐(Ic)和(Id)。它具 体应用于治疗性应用的情况，其中所治疗的疾病为：帕金森病，阿尔 茨海默病和多动腿综合征(就应用沙非酰胺而言)或慢性或神经性疼 痛，心血管疾病或炎性疾病(就应用拉非酰胺而言)。尽管每日剂量根 据患者的具体情况和需要的不同而可以改变，但是沙非酰胺甲磺酸盐 的每日剂量通常在10mg/天－800mg/天，而拉非酰胺甲磺酸盐的每 日剂量通常在10mg/天－1g/天。在这些条件下并且考虑到上述报道 的数据，高度适当地保持杂质(IIa)和(IIb)或其盐，特别是甲磺酸盐(IIc)和(IId)的水平在沙非酰胺和拉非酰胺或其盐的药物剂型中尽可 能地低，在任何情况下在沙非酰胺和拉非酰胺或其盐，特别是甲磺酸 盐的量上分别低于0.03％，优选低于0.01％重量。
就各自的杂质(II′a)、(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a) 和(IIb,II′b)及其与药学可接受的酸形成的盐而言，相同的考虑适用 于沙非酰胺和拉非酰胺(I′a)和(I′b)的R-对映体、各自的外消旋混合 物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐。
本发明人进行的研究和实验研究已经证实根据现有技术方法制备 的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体、各自的外消旋混合物或其 与药学可接受的酸形成的盐包含高于0.03％重量的量的各自的杂质 (IIa)、(IIb)、其R-对映体(II′a)和(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa, II′a)和(IIb,II′b)或其与药学可接受酸形成的盐(例如(IIc)、(IId)、(II′c)和(II′d)或各自的外消旋混合物(IIc,II′c)和(IId,II′d))。 因此，上述产物不适合于广泛和安全的治疗应用。特别地，包含沙非 酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)、各自的外消旋混合 物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或与药学可接受酸形成的盐的药物制剂不适合 于用作如上所述特定组患者的药物，其中各自的杂质(IIa)、(IIb)、 (II′a)、(II′b)、其外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)或其与药 学可接受的酸形成的盐的含量不低于上述活性物质的0.03％，优选不 低于0.01％重量。
特别地，包含沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)、 各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或与药学可接受酸形成的盐 的药物制剂不适用于治疗性处置包括被分类为弱代谢者(PM)或同时服 用已知干扰CYP 450系统细胞色素的其他药物的那些广泛患者群体， 其中各自的杂质(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量不低 于上述活性物质的0.03％，优选不低于0.01％重量。
在本说明书和权利要求中，除非另作陈述，否则上文所示限度的 值指定为表示重量百分比的“活性物质”，即测定的治疗活性物质(Ia)、 (Ib)、(I′a)、(I′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b) 的有效含量中的毒物学活性杂质(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)或各自 的外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)的有效含量。
在本说明书和权利要求中表述例如“高纯度(high purity)”/、“高纯度(highPurity degree)”、“高化学纯度(high chemical purity)”、“高纯(highly pure)”等在指沙非酰胺、拉非酰胺各自的R-对映体、各自的外消旋混合物或其与药学可接受的酸形成的盐时确定产物包含不低于98.5％(通过HPLC方法评价为面积百分比)的沙非酰胺(Ia)、拉非酰胺(Ib)、各自的R-对映体(I′a)和(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐，其中通过HPLC方法测定各自的杂质(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)、 各自的外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量(称作“活性物质”)。
几乎不能检测到的其他杂质衍生自极少量分别包含在商购3-氟苄基氯和2-氟苄基氯中的苄基、2-和4-氟苄基氯和3-和4-氟苄基氯，所述的商购3-氟苄基氯和2-氟苄基氯分别用于合成分别制备化合物(Ia)、(Ib)、(I′a)、(I′b)(Ia,I′a)和(Ib,I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)和4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)中间体。
类似地，上述术语“高纯度(high purity)”、“高纯度(high Purity degree)”、“高化学纯度(high chemical purity)”、“高纯(highly pure)”等在指4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛中间体(IVa)和(IVb)时确定产物包含不低于98,5％(通过GC方法评价为面积百分比)的上述各化合物，其中相应二-苄化杂质(VIa)或(VIb)的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量(通过GC方法评价)。
通过有力减少杂质的本发明中所述的方法产生了具有高化学纯度和更安全的生物学特性的产物。
根据本发明中所述的方法，获得具有高收率和高纯度的沙非酰胺(Ia)、拉非酰胺(Ib)、各自的R-对映体(I′a)和(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸，特别是与甲磺酸形成的盐，其中各自的杂质(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(IIa)、(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(IIb)、各自的R-对映体(II′a)和(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)及其与药学可接受的酸，特别是与甲磺酸形成的盐(一般称作“二苄基衍生物”)的含量低于0.03％、优选0.01％(重量)，称作“活性物质”。
本发明的另一个目的在于提供具有高纯度的且因其安全性而适合于用作药物的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体、相应外消旋化合物或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐，特别是式(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)、其外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b) 或其与药学可接受的酸例如甲磺酸形成的盐的相应二苄基衍生物的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量(称作“活性物质”)。
本发明的另一个目的在于提供包含沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)和(I′b)、相应外消旋化合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐的药物制剂，其中相应二苄基衍生物(IIa)、(IIb)、其R-对映体(II′a)和(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸，例如甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量(称作“活性物质”)。
更具体地说，根据本发明的优选实施方案，本文公开的方法能够生产包含高纯度如下成分的药物：(i)沙非酰胺、其R-对映体(I′a)其外消旋混合物或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐或(ii)拉非酰胺、其R-对映体(I′b),其外消旋混合物(IIa,II′a)和(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐，该药物制剂在不干扰CYP450系统的细胞色素、特别是CYP3A4、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9且不显示HERG通道阻断特性的条件下分别用于治疗：(i)癫痫症、帕金森病、阿尔茨海默病、抑郁症、多动腿综合征疼痛和偏头痛；或(ii)疼痛疾病，包括慢性和神经性疼痛、偏头痛、双相型障碍、抑郁症、心血管疾病、炎症、泌尿生殖器疾病、代谢性疾病和胃肠道病症。
此外，根据本发明另一个优选的实施方案，本文公开的方法能够制备包含高纯度拉非酰胺的单一R-对映体或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐的药物，其在不干扰CYP450系统的细胞色素、特别是CYP3A4、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9且不显示HERG通道阻断特性的条件下用于选择性(即其中对患者给予的活性物质的治疗活性基本上不含任何MAO抑制副作用或显示MAO抑制副作用显著减少)治疗病理性病变，其中钠或钙机制起WO 2006/027052 A2中鉴定的病理学作用，例如疼痛、偏头痛、侵害全部身体系统的炎症性过程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖器病症。
因此，本发明的方法能够制备包含沙非酰胺、其R-对映体(I′a)、 拉非酰胺、其R-对映体(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸的盐的药物制剂，其适合于治疗在被分类为弱代谢者(PM)的患者或用于治疗推定同时服用已知干扰CYP 450系统细胞色素和/或已知具有HERG通道阻断特性的其他药物的患者中的上述疾病。
所有这些新药物制剂既没有被暗示、也没有通过应用有关沙非酰 胺和拉非酰胺的药理学-毒理学知识、或通过使用本领域可利用方法制 备的这些活性剂得到。
上述药物制剂除包含具有上述高纯度的沙非酰胺、拉非酰胺、各 自的R-对映体、各自的外消旋混合物或其与药学可接受的酸、优选甲 磺酸形成的盐外还可以任选包含一种或多种其他活性剂。
例如，用于辅助治疗帕金森病或多动腿综合征的新的药物制剂除 包含沙非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物或其与药学上可接受的 酸、优选甲磺酸形成的盐外，还可以包含一种或多种帕金森病辅助活 性剂，例如WO 2004/089353和WO 2005/102300中所述这样的活性剂， 优选多巴胺激动药和/或左旋多巴和/或儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT) 抑制剂，它们根据本发明方法得到并且具有上述高纯度。
作为另一个实例，用于治疗疼痛疾患，包括慢性疼痛和神经性疼 痛和偏头痛的本发明新的药物制剂除包含拉非酰胺、其R-对映体、外 消旋混合物或其与药学上可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐外，还可 以任选包含另一种活性剂，例如EP 1423168中所述的加巴喷丁和普瑞 巴林或其药学可接受的盐，它们据本发明方法得到并且具有上述高纯 度。
类似地，本发明新的药物制剂可以任选包含另外的活性剂，该药 物制剂用作具有作为钠和/或钙通道调节剂的选择性活性的药物，用于 选择性治疗病理性病变，其中钠或钙通道机制起根据WO 2006/027052 A2的病理学作用，例如疼痛、偏头痛、侵害全部身体系统的炎症性过 程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统 疾病、胃肠道和泌尿生殖器病症。例如，用于治疗疼痛疾病的药物制 剂除包含拉非酰胺的单一R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸、优选 甲磺酸形成的盐外还可以包含加巴喷丁或加巴喷丁相关活性剂，它们 根据本发明方法得到并且具有上述高纯度。
可以通过本领域公知的常规方法，例如通过混合活性化合物与药 学、治疗上惰性有机和/或无机载体物质制备包含本发明的高纯度沙非 酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体、各自的外消旋混合物或其与药学 可接受的酸形成的盐的药物组合物。本发明的组合物可以是液体形式， 例如溶液、悬浮液、乳剂形式；或固体形式，例如片剂、药片、胶囊、 贴剂。
用于制备本发明组合物的合适的药学、治疗上地惰性有机和/或无 机载体物质包括，例如水、明胶、阿拉伯树胶、乳糖、淀粉、纤维素、 硬脂酸镁、滑石粉、植物油、聚亚烷基二醇类、环糊精等。可以将本 发明的药物组合物灭菌并且这些药物组合物除包含活性成分外，还可 以进一步包含本领域技术人员众所周知的成分，例如防腐剂、稳定剂、 湿润剂或乳化剂，例如石蜡油，一油酸二缩甘露醇酯、调节渗透压的 盐，缓冲剂等。
本发明的另一个目的在于提供治疗CNS病症，特别是癫痫症、帕 金森病、阿尔茨海默病和多动腿综合征的方法，包括对有此需要的患 者给予有效量的高纯度沙非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物或其 与药学上可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐，它们具有的二苄基衍生 物(IIa)、(II′a)、其外消旋混合物(IIa,II′a)或其与药学可接受的酸、 优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量(称作“活 性物质”)。该方法包括通过对有此需要的患者给予有效量的上述高纯 度沙非酰胺、其R-对映体(I′a)、其外消旋混合物(Ia,I′a)或其盐、 任选联用一种或多种如WO 2004/089353中所述的帕金森病活性剂治疗 帕金森病或多动腿综合征，所述的帕金森病活性剂，例如为多巴胺激 动药/或左旋多巴和/或儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂。
此外，本发明的另一个目的在于提供治疗疼痛疾患，包括慢性疼 痛和神经性疼痛，偏头痛、双相性精神障碍、抑郁症、心血管疾病、 炎症、泌尿生殖疾病、代谢性疾病和胃肠道病症的方法，包括对有此 需要的患者给予有效量的高纯度拉非酰胺、其R-对映体、其外消旋混 合物或其与药学上可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐，它们具有的二 苄基衍生物(IIb)、(II′b)、其外消旋混合物(IIb,II′b)或其与药学上 可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％ 重量(称作“活性物质”)。
上述方法包括治疗疼痛疾患，包括慢性疼痛、神经性疼痛和偏头 痛，该方法使用高纯度的拉非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物或 其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐、任选联用加巴喷丁或普 瑞巴林。
另外，本发明的另一个目的在于提供选择性治疗病理性病变的方 法，其中钠或钙通道机制起病理学作用，包括疼痛、偏头痛、侵害全 部身体系统的炎症性过程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾 病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖病症，其中所述化合 物的治疗活性基本上不含任何MAO抑制副作用或显示MAO抑制副作用 显著减少，该方法包括对有此需要的患者给予治疗有效量的拉非酰胺 的单一R-对映体(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺或其与药学 可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐，它具有的杂质(R)-2-[3-(2-氟苄 基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(II′b)或其与药学可接受的酸、优 选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)、任选联 用另外的活性剂，例如就治疗疼痛疾病而言联用加巴喷丁或加巴喷丁 相关物质。
上述治疗方法特别用于被上述疾病侵害的患者，他们被分类为弱 代谢者(PM)或同时服用其他已知干扰CYP 450系统的细胞色素的药物 的患者。
在本说明书和权利要求中术语“治疗(treatment)”或“治疗 (treating)”包括预防、缓解和治愈。
现有技术
在WO 90/14334和Pevarello等人在J.Med.Chem.,1998,41,579-590中的论文中，描述了制备苄氧基-苄氨基-烷酰胺类的两步法:
a)通过用适宜苄基氯类使相应4-羟基苯甲醛类O-苄化合成中间体4-苄氧基苯甲醛类；
b)如下文合成路线所示用4-苄氧基-苯甲醛类、使用氰基硼氢化钠或硼氢化钠作为还原剂使α-氨基-酰胺类进行还原烷基化；
其中R表示取代基中的3-F和2-F；R1表示取代基中的氢；R2表示取代基中的氢；R3表示取代基中的CH3；R4和R5表示取代基中的氢。
特别地，只要涉及沙非酰胺和拉非酰胺(rafinamide)制备，则还原烷基化是如下所示分别用4-(3-氟苄氧基)苯甲醛和4-(2-氟苄氧基)苯甲醛对L-丙氨酰胺还原烷基化，
R＝3-F-苄氧基＝沙非酰胺(Ia)
R＝2-F-苄氧基＝拉非酰胺(Ib)
在J.Med.Chem.(Pevarello等人),1998,41,579-590中，报道了以相应(氟苄氧基)苯甲醛类为原料制备沙非酰胺和拉非酰胺甲磺酸盐的收率分别为45％和60％。
WO 90/14334和上述引述的论文中所述的方法相同并且提供了单罐系统，其中亚氨基烷基化和还原在同一反应器中进行。均同时向L-丙氨酰胺盐酸盐、氰基硼氢化钠、甲醇和粉状分子筛混合物中加入适宜的醛。
根据Pevarello等人在Org.Prep.Proc.Int.1996,28,179-183(其中描述了通过还原烷基化合成一些α-苄氨基酰胺衍生物)中所述，α-氨基酰胺作为盐酸盐的应用对形成亚氨
(iminium)离子替代相应的亚胺而言是重要的，因为亚氨
离子比醛羰基更容易与氰基硼氢化钠反应。
根据上述作者所述，单罐方法看起来可避免希夫碱外消旋化问题且分子筛加速反应(不过收率差)。
要求氰基硼氢化物是优选使用的试剂且看起来这种选择是因其选择性所致(参见Review“Sodium Cyanoborohydride-A Highly Selective Reducing Agent for OrganicFunctional Groups”-C.F.Lane,Synthesis 1975,132-146)，这使得它能够在质子化希夫碱与原料醛之间区分。
Pevarello等人在论文中所述的合成提供了通过柱色谱法分离产物，然后通过用酸处理转化成相应的盐。未提供有关沙非酰胺和拉非酰胺和/或其盐的对映体和/或化学纯度的信息。
现有技术中所述的方法存在许多缺陷，它们限制了这种方法的大规模应用；下文列出了所述缺陷的一些实例：
-形成氰化物和氰基衍生物；
-使用了物理上可变和昂贵的粉状分子筛；
-收率一般低于70％；
-反应产物纯度低且难以纯化；
-在还原烷基化反应中应用大量溶剂(约5L－7L/摩尔)，导致最终反应混合物中的终产物浓度低(约4-6％重量/体积)；
-在涉及通过化学合成大规模活性剂制剂时，通过柱色谱法分离反应产物被视为麻烦和昂贵的纯化方法
WO 2006/027052 A2中所述的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)的制备方法基于使用硼氢化钠对(R)-丙氨酰胺盐酸盐与4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(无有关得到反应剂纯度的数据)和三乙胺在干甲醇中、在分子筛的存在下反应4小时生成的产物进行还原。未得到有关得到的最终化合物纯度的数据。此外，就此而言，该方法在应用于大规模制备时的缺陷在于使用了粉末或颗粒状分子筛、使用了大量溶剂，且尽管使用了纯化操作，但是终产物(I′b)中存在高于0.03％重量的量的不期望的杂质(II′b)，这使得通过该方法得到的活性物质(I′b)因干扰CYP 450系统的细胞色素不适合于无副作用或低副作用风险的治疗应用。WO 2006/027052中公开的方法的终产物的低纯度和低收率(30％-32％,摩尔)已经通过对其中所述的几种的不同规模方法的再现得以证实，其有代表性的实例描述在该申请的实施例23.3中。
主要特征之一在于将WO 2006/027052中公开的方法与本发明方法区别开来，并且已经发现，负责所述现有技术方法的明显低收率在于在所述方法中使用的相对于希夫碱摩尔量的有机溶剂(甲醇)的量约为5L/摩尔希夫碱。目前已经发现这些条件导致由涉及希夫碱与其前体例如相同原料醛、其缩醛类和氨基乙缩醛类之间的平衡的种类衍生的终产物中的不期望的杂质增加。
本说明书下文中的示例性实施例中证实，根据现有技术中所述方法获得的产物包含相对于各自的治疗活性物质(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id),(I′a)、(I′b)、(I′c)、(I′d)、(Ia,I′a)、(Ib,I′b)、(Ic,I′c)或(Id,I′d)而言高于0.03％重量的杂质(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(II′a)、(II′b)、(II′c)、(II′d)(IIa,II′a)、(IIb,II′b)、(IIc,II′c)或(IId,II′d)。此外，已经证实难以通过使用基于从溶剂中结晶或色谱法的通常公知的纯化方法从终产物沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体、各自的外消旋混合物或其与药学可接受的酸形成的盐中消除所述杂质，在任何情况下这均意味着收率降低。
发明概述
本发明的目的是制备高纯度2-[4-(3-或2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺化合物，选自(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺、Ia)、(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺,Ib)、
沙非酰胺(Ia):3-F
拉非酰胺(Ib):2-F
各自的R-对映体(I′a)和(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐的方法，其中沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐具有各自的杂质(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)、(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)、
各自的R-对映体(II′a)或(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)，其特征在于通过4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与L-丙氨酰胺或D-丙氨酰胺或其外消旋混合物的亚氨基烷基化反应得到希夫碱中间体式(IIIa)、(IIIb)、
(IIIa):3-F
(IIIb):2-F
各自的R-对映体(III′a)或(III′b)或各自的外消旋混合物(IIIa,III′a)或(IIIb,III′b)，在亚氨基烷基化反应完成后，使用还原剂在选择用量的有机溶剂中对上述物质进行还原反应，所述还原剂选自硼氢化钠和硼氢化钾，所述有机溶剂选自(C1-C5)低级链烷醇类或其混合物，任选含少量水，其中有机溶剂与希夫碱之比使得能够在大部分还原反应过程中形成和存在希夫碱的悬浮液，其为所述希夫碱进入所述希夫碱的相同有机溶剂的饱和溶液中的悬浮液，并且在0.5L－3.0L、优选0.7L－2.5L、最优选0.8L－2.0L/摩尔希夫碱，由此得到游离碱形式的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)或(Ib,I′b)，并且任选将所述游离碱形式转化成其与药学可接受的酸形成的盐。
根据本发明的优选实施方案，该方法的特征还在于用于生成希夫碱中间体(IIIa)、(IIIb)、(III′a)、(III′b)或各自的外消旋混合物(IIIa,III′a)或(IIIb,III′b)的所使用4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料具有的3-(3-或2-氟苄基)-4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛杂质含量低于0.03％、优选低于0.01％重量。
本说明书和权利要求中表示的式(IIIa)和(IIIb)鉴定了E和Z构型的希夫碱中间体。
根据本发明的优选实施方案，本发明方法的目的包括如下三步：a)通过用以下通式3-或2-F-C6H4-CH2-Y(Va)或(Vb)的衍生物对4-羟基苯甲醛进行O-苄化制备高纯原料4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料，其中Y是离去基(Cl、Br、I、OSO2CH3等)；这种O-苄化在对O-烷基化具有高度选择性的条件下进行并且得到高纯度的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛或4-(2-氟苄氧基)苯甲醛；
b)通过使4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料与L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物缩合完全形成碱或盐形式的希夫碱中间体，其中不使用任何分子筛；
c)用选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原系统、在选自(C1-C5)链烷醇类的与希夫碱适宜比例的有机溶剂存在下处理希夫碱，在大部分还原反应过程中允许同时存在固体形式的希夫碱和希夫碱进入所述溶剂的饱和溶液(即进入在所述有机溶剂的希夫碱的饱和溶液中的希夫碱的悬浮液)，以便在后处理和结晶后分别得到极高收率和上述定义的化学纯度的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体或各自的外消旋混合物，且任选通过常规成盐方法使用药学可接受的酸制备其盐。
药学可接受的盐，例如选自硝酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、草酸、丙二酸、苹果酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸和水杨酸。
4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料的合成
根据公知方法，通过在碱性介质中使4-羟基苯甲醛苄化得到制备希夫碱中间体(IIIa)、(IIIb)、(III′a)、(III′b)和各自的外消旋混合物(IIIa,III′a)和(IIIb,III′b)所必需的(氟苄氧基)苯甲醛类原料，它们分别用于合成本发明的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体和各自的外消旋混合物。两性亲核物质的苯酚盐的苄化得到两种不同产物即期望的O-烷基化衍生物和不期望的C-烷基化衍生物。
实际上发现根据现有技术进行的使用3-氟苄基氯使4-羟基苯甲醛氟苄基化得到作为主要产物的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)与衍生自4-羟基苯甲醛4位上的羟基和3位上的碳原子的烷基化的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)。根据下列反应路线在使用2-氟苄基氯使4-羟基苯甲醛氟苄基化中发生同样的情况：
(Va1):3-F (VIa):3-F
(Vb1):2-F (VIb):2-F
使用含二-烷基化杂质的醛原料使4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与L-或D-丙氨酰胺或其外消旋混合物亚氨基烷基化形成的希夫碱还原得到式(Ia)、(Ib)、(I′a)、(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)或(Ib,I′b)终产物，其也为不纯的各自的二-烷基化化合物，即二-苄基衍生物(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)，无论是作为游离碱(IIa)或(IIb)还是作为成盐化合物，优选与甲磺酸成盐(IIc)、(IId)、(II′c)、(II′d)或各自的外消旋混合物(IIc,II′c)或(IId,II′d)，正如下列反应路线中所示，其显示了生产分别涉及沙非酰胺和拉非酰胺的二苄化杂质(IIc)和(IId)。
(VIa):3-F (IIc):3-F
(VIb):2-F (IId):2-F
根据类似方式生产各自的R-对映体(II′c)、(II′d)和各自的外消 旋混合物。其他药学可接受的酸，例如硝酸，盐酸，氢溴酸，硫酸，高氯酸，磷酸，甲磺酸，对甲苯磺酸，乙酸，三氟乙酸，丙酸，乙醇酸，乳酸，草酸，丙二酸，苹果酸，马来酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸和水杨酸可以用于替代优选的甲磺酸。
一-烷基化衍生物(沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体和各自的外消旋混合物)和相应的二-烷基化杂质具有类似的化学-物理特性并且这使得使用传统方法难以纯化沙非酰胺和拉非酰胺。
此外，公知苄化方法和其中的氟苄基化存在这些额外的缺陷：
1)使用低级醇作为溶剂；在碱性条件下，溶剂，例如甲醇自身可以作为亲核试剂起作用并且与3-或2-氟苄基氯得到一定量的甲基-氟苄基-醚；
2)使用与水不混溶的有机溶剂萃取终产物仅可能在从反应混合物中除去醇反应溶剂后进行。
目前已经发现为了通过使用上述现有技术的方法获得式(Ia)、(Ib)、(I′a)、(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′b)或(Ib,I′b)的终产物，其中杂质(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)低于0.03％(重量)，有必要彻底纯化中间体4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)或4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)中间体，以便减少式(VIa)和(VIb)各自的杂质的含量。
所述纯化优选通过使反应产物结晶，更优选通过向粗化合物(IVa)或(IVb)在惰性有机溶剂中的溶液中加入易混溶的惰性有机非溶剂进行。有机惰性溶剂优选自芳族烃类，且更优选为甲苯。易混溶的有机非溶剂优选自低级脂族烃类，更优选为正己烷。额外的结晶操作在于将上述化合物(IVa)或(IVb)溶入在回流状态下的热溶剂，例如环己烷或二(C3-C4)烷基醚，例如二异丙基醚，然后在室温，优选在10-15℃，最优选通过添加纯化合物(IVa)或(IVb)的纯晶体诱发结晶冷却该溶液
根据本发明的一个方面，通过式(Va)或(Vb)的烷基化试剂(参见下文的反应路线，其中F原子位于2或3位上且Y为离去基，例如Cl、Br、I、OSO2CH3、OSO2C6H4-pCH3等)与4-羟基苯甲醛之间的反应在相转 移条件下进行得到用于制备希夫碱中间体所必需的4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料。在所述条件下，得到高收率和极低水平C,O-双-烷基化杂质的相应4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛类，优选在结晶后得到。
溶剂/碱
催化剂
(Va):3-F (IVa):3-F
(Vb):2-F (IVb):2-F
这种在相转移条件下的4-羟基苯甲醛的新氟苄基化可以在固体/液体系统中进行，其中在液体有机相中溶解试剂和相转移催化剂，并且固相由无机碱或4-羟基苯甲醛盐构成(可能在原位由4-羟基-苯甲醛和无机碱自身生成)，并且在液/液有机/水系统中，无机碱被溶于水相。
优选的系统为固体/液体系统，其中无机碱优选自Na2CO3、K2CO3、KOH和NaOH。
就液/液系统和还是固/液体系统而言，在反应中使用的有机溶剂可以为二烷基醚类，例如二-叔-丁基醚，乙基-叔-丁基醚，或芳族烃类，例如甲苯，乙苯，异丙基苯和二甲苯。所有这些溶剂均易于通过蒸馏回收。
所用的相转移催化剂可以为季铵或磷
盐，例如溴化四丁基铵，溴化十四烷基三甲基铵，溴化十六烷基三丁基膦，氯化三辛基甲基铵(Aliquat)，氯化甲基三烷基(C8-C10)铵(Adogen)，溴化十四烷基三甲基铵为一种优选的。
此外，可以将低分子量聚乙二醇类用作相转移催化剂，例如PEG-200(CAS 25322-68-3)或PEG-400(CAS 25322-68-3)。
所用的相转移催化剂的量在0.02-1mol/摩尔4-羟基苯甲醛，优 选0.1-1mol/摩尔4-羟基苯甲醛，在这些条件下，C,O-双-氟苄基化杂质的量结果为低于0.03％，优选等于0.01％或0.01％以下重量。
式(V)的烷化剂与4-羟基苯甲醛之比包括0.6－1.5，优选的一种在0.9－1.1。
反应温度包括60℃－160℃，优选的间隔在80℃－120℃。
反应时间一般包括4－8小时。
反应收率极高，一般高于90％。
反应收率，即反应产物在反应混合物中的浓度在所述反应条件下极高，通常大于或等于25％(重量/体积)。
通过还原4-(3-或2-苄氧基)苯甲醛与L-丙氨酰胺或D-丙氨酰胺或其外消旋混合物及其盐反应形成的希夫碱合成对映体和各自的外消旋混合物
本发明方法的目的包括两步：
a)完全形成希夫碱中间体；
b)用选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原剂还原希夫碱。
这两步在同一反应器(单罐反应)中连续进行，其中分离或不分离希夫碱，两种情况中均获得高收率。
希夫碱中间体的形成包括4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物或其盐与酸(“丙氨酰胺化合物”)、优选无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、甲磺酸等缩合。当使用外消旋丙氨酰胺替代其L-或D-对映体时得到4-(3-或2-苄氧基)苄氨基丙酰胺的外消旋混合物。
就分离希夫碱而言，用于其形成的实验条件能够获得高收率和极纯形式的沉淀形式的分离的希夫碱。
希夫碱的制备适合于在有机质子溶剂中进行，该溶剂对试剂和产物而言必须是惰性的并且对亚氨双键的还原条件而言也是惰性的。如果需要在同一反应介质中进行连续还原步骤那么适宜的溶剂是例如(C1-C5)低级链烷醇，优选甲醇，乙醇和异丙醇。
希夫碱中间体的形成必须是完全的并且这是在随后的还原步骤中具有高收率的相关因素。根据实施本发明方法的方法，分离4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物之间的缩合反应得到的希夫碱中间体(IIIa)或(IIIb)、
(IIIa):3-F
(IIIb):2-F
各自的R-对映体(III′a)或(III′b)或各自的外消旋混合物，然后进行亚氨双键还原。
或者，可以通过在产生中间体亚氨基化合物(IIIa)、(IIIb)、各自的R-对映体(III′a)或(III′b)或各自的外消旋混合物(IIIa,III′a)或(IIIb,III′b)沉淀进入反应溶剂这种条件下操作、然后对包含所述中间体亚氨基衍生物的悬浮液进行还原步骤有利于亚氨基烷基化反应的完成。
L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物(碱或盐)与4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛之比可以为1:1，而且可以有利地使用10％过量的丙氨酰胺化合物。
丙氨酰胺化合物可以作为游离碱或作为其酸加成盐导入。优选将其作为盐，最优选作为盐酸盐与化学计算量的碱，优选叔胺，例如三乙胺或二异丙基乙胺导入反应混合物。
制备希夫碱中的反应温度包括0℃－60℃，优选20℃－30℃。
反应时间通常包括1小时－15小时，优选2小时－6小时。
在一些条件下，当D-或L-丙氨酰胺作为游离碱使用并且亚氨基烷 基化反应时间超过8小时，得到的希夫碱可以在手性中心上进行外消旋化。这种情况在希夫碱在亚氨基烷基化反应过程中不结晶时特别确切。
使用选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原剂还原希夫碱仅在希夫碱完全形成时开始：如果在此之前开始，则继发反应就变得重要，有时就变得常见，其中收率和纯度损耗。更重要的是这些继发反应之一因选择的(氟苄氧基)苯甲醛的羰基被还原而导致形成苄型醇类。
希夫碱完全形成可以在本领域公知的分析方法控制下得到维持，例如通过母液的GC定量分析。
希夫碱的还原是本发明方法中最重要的步骤，并且其操作需要一些特定的条件。
硼氢化钠或硼化钾还原剂的使用摩尔量相对于希夫碱而言在0.5－1.4。
根据其商品可利用性和成本优选使用硼氢化钠。反应通常在溶剂中进行，溶剂可以是相同的溶剂，其中在与丙氨酰胺的缩合反应完成后，希夫碱以悬浮液形式存在。在这种情况中(C1-C5)低级链烷醇例如甲醇、乙醇、1-丙醇和2-丙醇，优选甲醇通常用作反应溶剂。或者，当从反应介质中分离希夫碱时(例如通过过滤或离心)，将分离的希夫碱产物加入到选择量的有机溶剂、优选质子有机溶剂例如低级(C1-C5)链烷醇，优选甲醇或所述质子有机溶剂的混合物中，任选存在少量水(相对于有机溶剂的量而言优选低于1.5重量％)。
如果4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与丙氨酰胺化合物的缩合反应通过将后者作为与酸形成的盐导入反应混合物进行，则添加适量的碱例如氢氧化钠或氢氧化钾、叔(C1-C4)烷基胺类、吡咯烷、4-甲基吗啉等，以将pH值调节至7－9。如果在亚氨基烷基化反应结束时，反应混合物的pH值已经低于该区间，则再向包含希夫碱的反应混合物中加入适量的上述碱，以将pH再调节至高于上述值，然后任意添加硼氢化钠或硼氢化钾还原剂。
通常将固体形式的硼氢化钠或硼氢化钾还原剂再分成几部分(通 常15－20部分)加入到希夫碱和反应溶剂的混合物中，例如在反应过程中受控条件下是粉末或微细结晶。
或者，分部分或通过以通过添加氢氧化钠(相对于硼氢化钠而言通常约15重量％氢氧化钠)或氢氧化钾稳定的甲醇溶液形式滴入反应混合物加入硼氢化钠或硼氢化钾。
根据进行希夫碱还原的优选方法，分15－25部分或通过在1－2小时过程中向包含希夫碱和选择量的反应溶剂优选甲醇的反应混合物滴加来加入稳定的硼氢化钠或硼氢化钾甲醇溶液。
为了在一定条件下进行还原步骤，其中选择溶剂与希夫碱之比允许同时存在希夫碱进入所述溶剂的饱和溶液和固体形式的希夫碱，其中溶剂相外部的希夫碱量最大，所用溶剂的量必需要适当选择。
因此，用于还原步骤的有机溶剂的总量可以在0.5L－3.0L、优选0.7L－2.5L、最优选0.8L－2.0L/摩尔希夫碱。在这些条件下，进行还原步骤的反应介质中存在的大部分希夫碱在大部分反应过程中是固体形式。在这些条件下，终产物的产量极高并且这对工业化规模生产具有积极的经济影响。
如果需要，在醛与丙氨酰胺衍生物之间的缩合反应使用其盐进行时，通过添加适量碱例如氢氧化钠或氢氧化钾、叔(C1-C4)烷基胺类、吡咯烷、4-甲基吗啉等将还原步骤中经历的反应混合物pH值调节至7－9、优选8－8.5(直接通过pH计对反应混合物测定)。
将还原步骤过程中的反应温度维持在-10℃－30℃、优选5℃－15℃。
根据使用的溶剂、温度、浓度等的不同，还原时间可以在0.5－5小时之间改变，所有因素均是本领域技术人员众所周知的。
使用约3小时的反应时间，使用硼氢化钠作为还原剂，甲醇作为溶剂，根据0.8L－2.0L/摩尔量的希夫碱的比例，在5℃－10℃的温度下得到了最佳结果。
在反应结束时，减压蒸馏反应溶剂，将残余物溶于与水不混溶的有机溶剂并且通过用水洗涤除去无机盐。
通过蒸馏除去其中溶解反应产物的有机溶剂回收最终的粗产物即沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体或各自的外消旋混合物。
然后通过结晶纯化粗的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体或各自的外消旋混合物。可通过向相应相应式(Ia)、(Ib)、(I′a)、(I′b)、(Ia,I′a)或(Ib,I′b)的各自的粗化合物在惰性有机溶剂中的溶液中加入易混溶的惰性有机非溶剂进行结晶。有机惰性溶剂优选自芳族烃类，例如苯，甲苯，二甲苯和乙苯以及乙酸低级烷基酯类，且更优选为乙酸乙酯。易混溶的惰性有机非溶剂优选自低级脂族烃类，例如己烷和庚烷和环己烷，更优选正己烷。
或者，通过将最终的粗产物溶于热有机溶剂中的溶液，优选甲苯或环己烷、然后在室温冷却该溶液，通过过滤回收纯产物进行结晶。
然后根据公知方法将碱转化成所需的盐，特别是将它们转化成甲磺酸盐，它具有适合于随后配制成用作药物的药物制剂的物理/化学特性(稳定性，粒度测量性，流动性等)。
实施例1
通过相转移催化制备纯化的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
在搅拌下和氮气气氛中使2-氟苄基氯(6.0kg,41.50mol)、4-羟基-苯甲醛(4.7kg,38.33mol)、碳酸钾(5.2kg,37.33mol)和溴化十四烷基三甲基铵(0.49kg,1.46mol)在甲苯(11.4kg)中的混合物缓慢达到回流温度并且回流6h。
然后在大气压下浓缩该溶液，加入3.6kg甲苯并且蒸馏出来且再次重复该操作。
然后将该不均匀混合物冷却至室温并且通过过滤除去固体。随后在减压下除去残留溶剂并且向油状残余物中加入1.4kg甲苯。将该混合物加热至约30-35℃并且接种几克纯的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛。
将该不均匀混合物在30-35℃下搅拌30min且然后在30-35℃ 下、在30分钟内向该混合物中在保持搅拌下加入正-己烷(11kg)。
在冷却至0-5℃并且在该温度下再搅拌1小时后通过过滤收集固体且在减压下干燥而得到：8.0kg(89％收率)4-(2-氟苄氧基)苯甲醛；m.p.56.7℃(DSC,5℃/min)，具有的GC纯度是98.2(面积％,参见实施例24A)；通过GC测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)含量是0.01％重量(参见实施例24B)。
(*)如果没有特别说明，那么将在本文和下列实施例中报道的收率指定为摩尔收率。
1.1 通过结晶进一步纯化4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
在回流和搅拌下将根据实施例1中所述操作制备的1千克产物溶于2kg二异丙基醚。
将该溶液在10-15min内冷却至50-55℃并且接种5g高纯的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(GC纯度99.9面积％；参见实施例24A,且(VIb)含量低于0.005％)。
将该悬浮液在45-60min过程至冷却至10-15℃并且再搅拌1小时。
最终通过过滤收集沉淀，用冷的二异丙基醚(0.2Kg)洗涤并且在减压下干燥而得到0.93kg具有99.8GC纯度(面积％,参见实施例24A)和通过GC，根据实施例24B测定的0.005％重量的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)含量的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛。
1.2 使用不同催化剂，通过相转移催化(PTC)制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
根据实施例1的相同操作，通过使用2-氟苄基氯使4-羟基苯甲醛(0.39g)烷基化，但使用三种不同的相转移催化剂制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛。
将结果报道在下表5中。
表5
*Aliquat 336:氯化三辛基甲基铵
**％(VIb):3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(GC:％重量)实施例24B的含量。
***可以根据实施例1.1方法进一步纯化产物以使杂质(VIb)含量低于0.03％重量(参见实施例24B)。
1.3 通过在二甲苯中的相转移催化(PTC)制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
根据实施例1的相同操作，通过使4-羟基苯甲醛(47g)与2-氟苄基氯反应，但使用二甲苯作为溶剂替代甲苯制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛，其中收率为87.2％，且通过GC测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛含量为0.02％重量(参见实施例24B)。
1.4 通过相转移催化，使用氢氧化钾作为碱制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
根据实施例1的相同操作，通过使4-羟基苯甲醛(121g)与2-氟苄基氯反应，但使用氢氧化钾替代(108.6g)碳酸钾制备4-(2-氟苄氧基) 苯甲醛，其中收率为88％，且通过GC测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛含量为0.49％重量(参见实施例24B)。
可以通过实施例1.1的结晶进一步纯化该产物，以使杂质(VIb)的含量低于0.03％重量(参见实施例24B)。
1.5 通过相转移催化，使用2-氟苄基溴制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
根据实施例1的相同操作，通过使4-羟基苯甲醛(161g)与2-氟苄基溴而不是2-氟苄基氯反应制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛，其中收率为89.2％，且通过GC测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)含量为0.06％重量(参见实施例24B)。
可以通过实施例1.1的结晶进一步纯化该产物，以使杂质(VIb)的含量低于0.03％重量(参见实施例24B)。
1.6 在异丙醇中制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
在反应器中加入异丙醇(206kg)、碳酸钾(29.4kg,0.21kmol)、碘化钾(11.4kg,0.068kmol)和4-羟基苯甲醛(26kg,0.21kmol)。将该混合物在20-25℃搅拌15min。然后加入2-氟苄基氯(33kg,0.23kmol)。将该混合物在回流和搅拌下加热3小时。
在真空下除去溶剂至70l残留体积。
加入环己烷(70kg)和水(95kg)，将该混合物加热至50℃，在该温度下搅拌30min。停止搅拌，使各相分离。
在50℃用水(48Kg)洗涤有机相。真空浓缩分离的有机相至60l残留体积。
在约2小时内将不均匀混合物冷却至20℃，在该温度下搅拌30min。
离心该混合物，用环己烷洗涤固体。
真空干燥湿固体，得到标题产物:
40.2kg(0.18kmol)；收率:82％，GC纯度99.87(面积％,参见实施例24A)，通过GC，根据实施例24B测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)含量是0.063％重量。
可以通过实施例1.1的结晶进一步纯化该产物，以使杂质(VIb)的含量低于0.03％重量(参见实施例24B)。
1.7 在乙醇中制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
在反应器中加入4-羟基苯甲醛(30.3g,248mmol)、乙醇(400mL)、2-氟苄基氯(28.92g；198mmol)、碳酸钾(103.8g,751mmol)、碘化钾(1.34g,0.05mmol)。将该混合物在搅拌下和氮气气氛中加热至回流，保持在这些条件下5小时。
将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，用2M氢氧化钠水溶液(3x 300mL)洗涤。
真空蒸发溶剂，得到标题化合物，为黄色油状物(40.75g)，具有GC的纯度是91.77(面积％,参见实施例24A)，根据实施例24B测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)含量是0.346％重量。
通过实施例1.1的结晶进一步纯化该产物，以使杂质(VIb)的含量低于0.03％重量(参见实施例24B)。
实施例2
高纯度(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)的制备(单罐反应)
a)在搅拌下给反应器加载甲醇(25L)和L-丙氨酰胺盐酸盐(2.0kg)，将该混合物在23℃搅拌15min(pH值3.8)；然后向上述制备的调整至pH值8.3的溶液中加入三乙胺(1.65kg)和根据实施例1.1制备的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(3.32kg)。将该混合物在25℃搅拌3小时(不均匀混合物的pH 8)，在搅拌下冷却至8℃。加入硼氢化钠(0.53kg)，在3hrs内将再分成的20个小部分在搅拌下加入到该混合物中，再维持30min。在40℃真空浓缩该反应混合物，直到得到残余物(5.2L)为止。在搅拌下和氮气气氛中向该反应混合物加入甲苯(13.9kg)和水(23.0L)。将该混合物加热至60℃，在搅拌下保持在该温度30min。相分离后，在60℃用水(6.4L)洗涤有机相，弃去水相。将有机相在2小时内冷却至18℃，在这些条件下保持1小时。
过滤不均匀混合物，用甲苯(3x 1.0L)洗涤固体，在约40℃真空干燥，得到3.96Kg(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺,Ib)，根据实施例25A方法测定的具有的HPLC纯度是99.4(面积％)；且根据实施例25B方法，通过HPLC测定的C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺含量低于0.005％重量。
b)反应在与如上所述相同的条件下进行，但预先将硼氢化钠溶于甲醇(约5.8g甲醇/克硼氢化钠)和30％氢氧化钠(约0.5g 30％氢氧化钠/克硼氢化钠)的混合物，然后在约30min内滴入至希夫碱掺合物，保持温度在8℃。
得到的产物具有根据实施例25A测定的99.5％的HPLC纯度，且通过实施例25B的HPLC测定的C,O-二烷基化杂质的含量低于0.005％重量。
c)在室温和搅拌下将无水三乙胺(19.8kg,0.20kmol)加入到甲醇(275L)和L-丙氨酰胺盐酸盐(24.4kg,0.20kmol)的混合物中。
在约20min内将实施例1.6制备的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(40.0kg,0.17kmol)加入到上述混合物中，将该反应混合物在25℃搅拌3小时，此时温度降至8℃(混合物A)。
在第二个反应器中，将溶于水(3.2kg)的甲醇(50l)和氢氧化钠30％在0-5℃混合。在0-5℃向上述混合物中分部分加入硼氢化钠粉末(6.6kg,0.17kmol)。将该混合物在0-5℃，在氮气气氛中搅拌2小时(混合物B)。
在约4小时内，在搅拌下和氮气气氛中将混合物B加入到上述反应混合物A中，保持温度在8℃。
真空浓缩反应混合物至70l残留体积。在搅拌下和氮气气氛中将甲苯(170kg)和水(280kg)加入到残余物中，将该混合物加热至60-65℃。
分离有机相，加入水(70kg)，将两相混合物在60-65℃搅拌。
分离有机相，分批冷却至20℃。
离心该混合物，用甲苯洗涤固体，在减压干燥后得到标题产物(48.4Kg,0.16kmol),收率:92％。
产物的HPLC纯度是99.87(面积％,参见实施例25A)且C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺的含量低于0.005％重量(参见实施例25B)；m.p.109.5℃(毛细管)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺对映体组合物由100％的S-对映体组成(面积％,参见实施例26A)。
实施例3
高纯度(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Id)的制备
a)将如实施例2a)中所述制备的拉非酰胺(2.8kg，9.26mol)溶于2-丙醇(19.5kg)，保持在65-70℃下并且惰性气体中搅拌。
在用活性炭(150g)处理和过滤后，给该溶液接种纯的拉非酰胺甲磺酸盐并且在30min内和50-55℃下搅拌加入甲磺酸(900g，9.36 mol)。然后在2小时内将该悬浮液冷却至15-20℃，再持续搅拌1小时。最终通过过滤收集固体，减压干燥，得到3.46kg(94.0％收率)的拉非酰胺甲磺酸盐。
得到产物的HPLC纯度为99.7(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量为0.005％重量(参见实施例25B)；通过DSC的m.p.240.9℃(5℃/min)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺甲磺酸盐对映体纯度高于99.9(面积％,参见实施例26A)。
b)通过上述操作将如实施例2b)所述制备的拉非酰胺(2.8kg,9.26mol)转化成其甲磺酸盐。收率是95.8％。
得到产物的HPLC纯度是99.6(面积％,参见实施例25A)，且C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量低于0.005％重量(参见实施例25B)；通过DSC测定m.p.240.6℃(5℃/min)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺甲磺酸盐对映体纯度高于99.8(面积％,参见实施例26A)。
c)将实施例2c)中制备的2-丙醇(385kg)和(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺,48.1kg,0.16kmol)的混合物在搅拌下加热至60℃，保持在这些条件下直到得到澄清溶液为止。
在60℃将无水甲磺酸缓慢加入到该溶液中。
将不均匀混合物冷却至20℃，且在该温度搅拌2小时。
离心该混合物，用2-丙醇洗涤固体，真空干燥后得到61kg(0.15kmol)标题产物；收率96％；具有HPLC纯度99.83(面积％,参见实施例25A)，且C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐低于0.005％重量(参见实施例25B)；m.p.237℃(毛细管)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺甲磺酸盐对映体组合物由100％的S-对映体组成(面积％,参见实施例26A)。
实施例4
通过使用L-丙氨酰胺碱制备高纯度的(R,S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺 甲磺酸盐(Id,I′d)(单罐反应)
a)(R,S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib,I′b)
通过将等摩尔量的甲醇钠加入到L-丙氨酰胺盐酸盐(30g)在乙醇(351mL)中的溶液中制备L-丙氨酰胺游离碱。将该混合物在室温下、在氮气气氛中搅拌30min。过滤固体，真空下完全除去溶剂，得到21.1g L-丙氨酰胺。
在圆底烧瓶中，将21.1g L-丙氨酰胺溶于320g(约405mL)甲醇。
15min后，在20℃，加入根据实施例1.1制备的48.8g 4-(2-氟苄氧基)苯甲醛，且将该混合物在室温搅拌20小时。
将该混合物冷却至8±2℃，向该混合物中分批加入8g固体NaBH4，保持温度在8±2℃。
将该反应混合物搅拌至少12小时，然后浓缩至最小体积。
加入甲苯(248mL)和水(355mL)，将双相混合物在70℃搅拌，然后分离有机层。
在70℃用水(70mL)洗涤有机溶液，然后室温冷却，得到悬浮液，过滤并用甲苯洗涤。
在40℃，真空中干燥固体，得到47.7g(74.4％收率)标题产物，为白色粉末。
得到产物的HPLC纯度是95.85(面积％,参见实施例25A)，C,O- 二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺的含量低于0.005％重量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺的R/S对映体比是52.5/47.5(面积％,参见实施例26A)。
亚氨基烷基化反应过程的另一个对照组显示在该步骤中发生外消旋化。
b)(R,S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Id,I′d)
在圆底烧瓶中，加入129.5g 2-丙醇和16.5g来自步骤a)的产物，在70±3℃、在搅拌下加热至得到完全溶液。
保持温度在70±3℃，滴加5.2g甲磺酸。在70±3℃搅拌30min后，将该混合物缓慢冷却至20±3℃，然后搅拌1小时。
过滤产物，用2-丙醇洗涤，在40℃真空干燥，得到19.4g标题产物，为白色粉末。
收率:92％；具有HPLC纯度99.74(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(R,S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量低于0.005％重量(参见实施例25B)。由此得到的(R,S)拉非酰胺显示是对映体混合物，通过手性HPLC柱测定S:R＝53.8:47.0(面积％,参见实施例26A)。
实施例5
高纯度(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′d)的制备(单罐反应)
a)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)
在搅拌下向反应器加载甲醇(28L)和D-丙氨酰胺盐酸盐(2.1kg)，将该混合物在23℃搅拌15min；然后向上述制备的溶液中加入 三乙胺(1.65kg)和根据实施例1.1制备的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(3.30kg)。将该混合物在25℃搅拌3小时，在搅拌下冷却至8℃。在搅拌下3小时内分小部分加入硼氢化钠(0.50kg)，且将该混合物再搅拌30min。在40℃真空浓缩该反应混合物，直到得到残余物(5.0L)为止。然后在搅拌下，在氮气气氛中向该反应混合物中加入甲苯(14kg)和水(25.0L)。将该混合物加热至60℃，在搅拌下保持该温度30min。相分离后，在60℃用水(7.0L)洗涤有机相，且弃去水。在2小时内将有机相冷却至18℃，保持在这些条件下1小时。
过滤不均匀混合物，用甲苯(3x 1.2L)洗涤固体，且在约40℃下、在真空中干燥，得到3.90Kg(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)，根据实施例25A方法测定的具有的HPLC纯度是99.9(面积％)，通过HPLC，根据实施例25B方法测定的C,O-二烷基化(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺含量低于0.005％重量。
b)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′d)
通过与实施例3a相同的操作将上述实施例5a)得到的拉非酰胺的R-对映体转化成甲磺酸盐。
得到的产物的HPLC纯度是99.9(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量低于0.005％重量(参见实施例25B)；通过DSC测定的m.p.241.0℃(5℃/min)。
使用手性HPLC柱测定的(I′d)对映体纯度高于99.9(面积％,参见实施例26B)。
实施例6
高纯度(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Id)的制备与中间体希
夫碱(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III b)的分离
a)(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(IIIb)
在室温，在搅拌下，在氮气气氛中向如实施例1.1制备的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(60.0g,0.26mol)和L-丙氨酰胺盐酸盐(35.7g,0.29mol)在甲醇(280mL)中的悬浮液中加入三乙胺(29.1g,0.29mol)。再维持搅拌1小时。
然后给该溶液接种几mg(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺，使温度降至5-10℃，持续搅拌2小时。
通过过滤收集固体，在0℃用甲醇洗涤。
在减压干燥后，得到标题化合物，m.p.122℃(毛细管)，90％收率。
1H-NMR:(CDCl3,300MHz,298K)δ(ppm,相对于TMS而言):1.46(3H,d,J＝7.0Hz,CH3)；3.91(1H,q,J＝7.0Hz,CH-CO)；5,17(2H,s,O-CH2)；7,02(2H,d,J＝8,9Hz芳族H与O-CH2邻位)；7.09(1H,ddd,JH-F＝9,78Hz J邻＝8,55Hz J间＝1,23Hz芳族H与F邻位)；7,15(1H,dt,J邻＝7,35Hz J间＝1,23Hz芳族H与F对位)；7,27-7,40(1H,m,芳族H与CH2对位)；7,48(1H,dt,J邻＝JH-F＝7,35Hz J间＝1,53Hz芳族H，与CH2邻位)；7,71(2H,d,J＝8,9Hz芳族H与CH＝N邻位)；8,17(1H,s,C＝N)
13C-NMR:(CDC13,75.4MHz,298K)δ(ppm):21.4(CH3)；63.8(OCH2)；68.4(H2NCOCH)；115.0(d,JC-F＝22.4Hz,芳族CH),115.5(d,JC-F＝20.7Hz,芳族CH)；123.7(d,JC-F＝14.4Hz,季芳族C)；124.5(bd,芳族CH)；129.0(季芳族C)；129.8(bd,芳族CH)；130.1(bd,2芳族CH)；160.5(d,JC-F＝246.4Hz,季芳族C)；161.1(芳族C-O)；161.1(C＝N)；176.9(CONH2)
b)(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)
将如上所述制备的(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(IIIb)(30g)和甲醇(180mL)的混合物在搅拌下冷却至2-5℃。在90min内分18个小部分将硼氢化钠(3.8g)加入到上述制备的冷混合物中，保持温度低于5℃。然后将该混合物在5℃再搅拌10min。真空浓缩该反应混合物，如实施例2中所述进行后处理，得到28.75g(95％收率)(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺,Ib)，其根据实施例25A方法测定的HPLC纯度是99.5(面积％)，且根据实施例25B方法通过HPLC测定的C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺含量低于0.005％重量。
c)(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Id)
使如上述实施例6b)所述得到的拉非酰胺如实施例3中所述与甲磺酸反应，得到甲磺酸盐(Id)，收率为95％。
得到产物的HPLC纯度是99.9(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐含量低于0.005％重量(参见实施例25B)；通过DSC测定的m.p.240.6℃(5℃/min)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺甲磺酸盐的对映体纯度高于99.9(面积％,参见实施例26A)。
实施例7
高纯度(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′d)的制备与中间体希 夫碱(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′b)的分离
a)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′b)
在室温下，在搅拌下，在氮气气氛中向如实施例1.1制备的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(60.0g,0.26mol)和D-丙氨酰胺盐酸盐(35.7g, 0.29mol)在甲醇(280mL)中的悬浮液中加入三乙胺(29.1g,0.29mol)。再维持搅拌1小时。
然后给该溶液接种几mg(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺，使温度降至5-10℃和持续搅拌2小时。
通过过滤收集固体，在0℃用甲醇洗涤。
减压干燥后，得到标题化合物，收率为91％，具有的m.p.121℃(毛细管)。
1H-NMR:(CDCl3,300MHz,298K)δ(ppm,相对于TMS而言):1.46(3H,d,J＝7.0Hz,CH3)；3.91(1H,q,J＝7.0Hz,CH-CO)；5,17(2H,s,O-CH2)；7,02(2H,d,J＝8,9Hz芳族H与O-CH2邻位)；7.09(1H,ddd,JH-F＝9,78Hz J邻＝8,55Hz J间＝1,23Hz芳族H与F邻位)；7,15(1H,dt,J邻＝7,35Hz J间＝1,23Hz芳族H与F对位)；7,27-7,40(1H,m,芳族H与CH2对位)；7,48(1H,dt,J邻＝JH-F＝7,35Hz J间＝1,53Hz芳族H与CH2邻位)；7,71(2H,d,J＝8,9Hz芳族H与CH＝N邻位)；8,17(1H,s,C＝N)
13C-NMR:(CDC13,75.4MHz,298K)δ(ppm):21.4(CH3)；63.8(OCH2)；68.4(H2NCOCH)；115.0(d,JC-F＝22.4Hz,芳族CH),115.5(d,JC-F＝20.7Hz,芳族CH)；123.7(d,JC-F＝14.4Hz,季芳族C)；124.5(bd,芳族CH)；129.0(季芳族C)；129.8(bd,芳族CH)；130.1(bd,2芳族CH)；160.5(d,JC-F＝246.4Hz,季芳族C)；161.1(芳族C-O)；161.1(C＝N)；176.9(CONH2)
b)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)
将(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′b)(30g)和甲醇(180mL)的混合物在搅拌下冷却至2-5℃。在90min内分20个小部分将硼氢化钠(3.8g)加入到上述制备的冷混合物中，保持温度低于5℃。然后将该混合物在5℃再搅拌10min。真空浓缩该反应混合物，如实施例2中所述进行后处理，得到28.44g(94％收率的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)，其具有的根据实施例25A方法测定的HPLC纯度是99.8(面积％)，且通过HPLC，根据实施例25B方法测定的C,O-二烷基化(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺的含量低于0.005％重量。
c)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′d)的制备
使根据上述实施例7b)所述得到的拉非酰胺的R-对映体如实施例3a中所述与甲磺酸反应，得到甲磺酸盐(I′d)，收率为95％。
得到产物的HPLC纯度是99.9(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量低于0.005％重量(参见实施例25B)；通过DSC测定的m.p.240.6℃(5℃/min)。
使用手性HPLC柱测定的拉非酰胺甲磺酸盐的对映体纯度高于99.8(面积％,参见实施例26B)。
实施例7A
(R,S)2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Id,I′d)
a)将甲醇(54mL)和(R,S)丙氨酰胺盐酸盐(10.09g,82mmol)加入到250mL玻璃反应器中，在25℃滴加无水三乙胺(11.36mL,96mmol)。
在约10min内加入实施例1.6制备的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(15.99g,69mmol)，将该混合物在25℃搅拌12小时(混合物A)。
在第二个反应器(50mL)中，在搅拌下在水(1.3g)中混合甲醇(20mL)和氢氧化钠30％，使温度降至0.6℃。在1℃将硼氢化钠粉末(2.61g,69mmol)分部分加入到该溶液中。将该混合物在1℃，在氮气气氛中搅拌2小时(混合物B)。
在约30min内，在搅拌下，在氮气气氛中将混合物B加入到上述混合物A中，保持温度在10℃。
将该反应混合物在10℃搅拌30min，真空浓缩至20mL残留体积。在搅拌下，在氮气气氛中将甲苯(70mL)和水(120mL)加入到残余物中，且将该混合物加热至60-65℃。
分离有机相，加入水(20mL)，且将该混合物在60-65℃搅拌。
分离有机相，逐步地冷却至约7℃，保持这些条件3小时。
过滤该混合物，用甲苯(3x5mL)洗涤固体，减压干燥后，得到(R,S)2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(13.59g)；65.2％收率。
产物的HPLC纯度是97.73％(面积％,参见实施例25A)，且C,O-二烷基化(R,S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺的含量是0.020％重量(参见实施例25B)。
通过手性HPLC柱显示由此得到的(R,S)拉非酰胺是对映体混合物S:R＝52.3:47.7(面积％,参见实施例26A)。
b)在搅拌下将实施例7a)制备的2-丙醇(102mL)和(R,S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(10g,33mmol)的混合物加热至70℃，保持这些条件直到得到澄清溶液为止。
在60℃向上述溶液中缓慢加入无水甲磺酸(3.18g；2.15mL)。
将不均匀混合物冷却至20℃，在该温度搅拌2小时。
离心该混合物，用2-丙醇洗涤固体，真空干燥后，得到10.77g标题产物；
92％收率；具有HPLC纯度99.50(面积％,参见实施例25A)和0.009％重量的C,O-二烷基化(R,S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(参见实施例25B)。
通过手性HPLC柱显示由此得到的(R,S)拉非酰胺是对映体混合物，S:R＝52.8:47.2(面积％,参见实施例26A)。
[α]25 D(c 2％甲醇溶液):0.0473
实施例8
(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IId)的制备
a)3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)
在5L圆底烧瓶中依次加入4-羟基苯甲醛(293g,2.407mol)、碳酸钾(315.85g,2.287mol)、甲苯(900mL)和2-氟苄基氯(1392g,9.628mol)。
在搅拌下将水(150mL)加入到反应混合物中。
将该混合物快速加热至回流，保持在该条件下3天。
GC分析揭示出存在3.2％重量(参见实施例24B)的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)。
将该混合物冷却至60℃，在搅拌下加入水(1000mL)。
分离各层。用盐水(500mL)洗涤有机相；然后在35℃减压(10mmHg)蒸馏溶剂至不再有溶剂通过。
在3mmHg蒸馏残余物，在180-220℃收集级分。将冷蒸馏残余物溶于CH2Cl2，真空除去溶剂。得到残余物。GC纯度是89％，而原料醛是0.5％。
使用己烷:乙酸乙酯＝95:5的硅胶色谱法得到产物(15.7g)，其具有的GC纯度高于99％(面积％；就GC条件而言，参见实施例24B)。产物具有m.p.71℃(毛细管)。
1H-NMR:(CDCl3,300MHz,298K)δ(ppm,相对于TMS而言):4.06(2H,s,CH2)；5.23(2H,s,OCH2)；6.95-7.40(9H,m,芳族H)；7.67(1H,bd,J＝0.9Hz,芳族H与C＝O和CH2邻位)；7.76(1H,dd,J1＝2.1Hz,J2＝8.3Hz,芳族H与C＝O和芳族CH邻位)；9.84(1H,s,CHO)。
13C-NMR:(CDC13,75.4MHz,298K)δ(ppm):29.2(CH2)；64.1(OCH2)；111.4(芳族CH)；115.4(d,JC-F＝22.0Hz,芳族CH),115.5(d,JC-F＝21.1Hz,芳族CH)；123.3(d,JC-F＝14.2Hz,季芳族C)；124.1(d,JC-F＝2.6Hz,芳族CH)；124.5(d,JC-F＝3.2Hz,芳族CH)；126.6(d,JC-F＝15.5Hz,季芳族C)；128.2(d,JC-F＝8.1Hz,芳族CH)；129.6(d,JC-F＝6.2Hz,芳族CH)；129.6(季芳族C)；130.0(季芳族C)；130.2(d,JC-F＝8.3Hz,芳族CH)；131.1(芳族CH)；131.3(d,JC-F＝4.1Hz,芳族CH)；131.8(芳族CH)；160.5(d,JC-F＝246.8Hz,季芳族C)；161.2(d,JC-F＝245.1Hz,季芳族C)；161.3(季芳族C)；191.1(CHO)。
b)(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)
在室温向50mL烧瓶中的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(3.56g,0.0105mol)中加入上述通过在搅拌下谨慎添加三乙胺(1.2g,0.0119mol)到17mL L-丙氨酰胺盐酸盐的甲醇溶液(1.48g,0.0119mol)制备的溶液。
将该反应混合物在室温搅拌1小时(相应亚胺发生沉淀)，然后将其转入0.18L高压釜，将0.34g湿(50％H2O)Pt/C 5％加入到该混合物中。
用氮气净化高压釜的空气，然后在5.0巴导入氢气。
反应在35℃的温度进行3-5小时。
在冷却至室温和通过过滤除去催化剂后，减压蒸馏出溶剂，直到得到约6.5g残余物为止。向该残余物中加入水(22mL)，在搅拌下保持该温度至少2小时。
过滤得到的晶体，用水洗涤。得到标题化合物，收率为83％(0.00872mol)；m.p.161℃(毛细管)。
1H-NMR:(CDCl3,300MHz,298K)δ(ppm,相对于TMS而言): 1.32(3H,d,J＝6.7Hz,CH3)；1.97(1H,bs,NH)；3.22(1H,q,J＝6.7Hz,CH-CO)；3.67(2H,ABq,J＝12.8Hz,NCH2的非对映异位H)；4.03(2H,s,CH2)；5.12(2H,s,OCH2)；5.98(1H,bs,NH2)；6.89(1H,d,J邻＝8.3Hz,芳族H与CH2NH和芳族CH邻位)；6.95-7.40(10H,m,芳族H)。
13C-NMR:(CDC13,75.4MHz,298K)δ(ppm):19.6(CH3)；29.2(CH2)；52.0(NHCH2)；57.7(H2NCOCH)；63.8(OCH2)；111.7(芳族CH)；115.2(d,JC-F＝21.9Hz,芳族CH),115.3(d,JC-F＝21.3Hz,芳族CH)；124.0(d,JC-F＝3.5Hz,芳族CH)；124.3(d,JC-F＝2.9Hz,芳族CH)；124.3(d,JC-F＝14.4Hz,季芳族C)；127.5(芳族CH)；127.6(d,JC-F＝15.0Hz,季芳族C)；127.8(d,JC-F＝7.5Hz,芳族CH)；128.8(季芳族C)；129.0-130.0(m,2芳族CH)；130.5(芳族CH)；131.3(d,JC-F＝4.6Hz,芳族CH)；131.8(季芳族C)；155.6(季芳族C)；160.4(d,JC-F＝245.8Hz,季芳族C)；161.2(d,JC-F＝244.6Hz,季芳族C)；178.2(CONH2)。
c)(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IId)
在0.2L玻璃反应器中将3.59g(0.00872mol)(S)-3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺碱溶于40.0mL 2-丙醇。在55-60℃、在搅拌下加热该溶液，保持该温度1小时。在15min内向该溶液中加入甲磺酸(0.00881mol)，使温度在90min降至20℃。在一夜后，通过过滤收集固体，在50℃减压干燥，然后从甲醇中结晶，得到(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐，89％收率；m.p.190℃(毛细管)。
1H-NMR:(DMSO-d6,300MHz,298K)δ(ppm,相对于TMS而言):1.42(3H,d,J＝6.8Hz,CH 3CH)；2.33(3H,s,CH3SO3)；3.50-4.20(5H, m,CH-CO,CH2,NCH2的非对映异位H)；5.19(2H,s,OCH2)；6.95-8.00(11H,m,芳族H)；9.02(2H,bs,NH2 +)。
13C-NMR:(DMSO-d6,75.4MHz,298K)δ(ppm):16.5(CH3)；28.8(CH2)；48.6(NHCH2)；54.9(H2NCOCH)；64.3(OCH2)；112.8(芳族CH)；115.0-117.0(2芳族CH)；124.2(d,JC-F＝14.4Hz,季芳族C)；124.4(季芳族C)；124.8(芳族CH)；125.0(芳族CH)；127.3(d,JC-F＝16.1Hz,季芳族C)；128.6(季芳族C)；128.8(芳族CH)；129.0-133.0(m,5芳族CH)；156.9(季芳族C)；160.8(d,JC-F＝245.2Hz,季芳族C)；160.9(d,JC-F＝243.5Hz,季芳族C)；171.1(CONH2)。
d)通过包含0.13％重量(IId)的拉非酰胺甲磺酸盐(Id)的制备型HPLC分离(IIb)
还通过制备型HPLC，从200g根据J.Med.Chem.,1998,41,579,方法A制备的拉非酰胺甲磺酸盐(Id)中分离了(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)样品(100mg)，其包含0.13％重量所述作为甲磺酸盐(IId)的杂质(IIb)。
手性柱的HPLC分析(参见实施例27C)显示S对映体(RT 7.3)与R对映体RT 7.6)之比高于99.5/0.5。
根据下列反应路线进行2阶段分离(阶段1和阶段2)：
阶段1
第一个阶段的范围是分离IIb/TFA(三氟乙酸)中富含的粗产物。下文报道了制备型HPLC条件：
制备型HPLC条件:
仪器：Waters Delta Prep 4000(往复泵,具有低压混合器的梯度控制器)
Radial Compression Module Prep LC Base(Waters)
Jasco 7125UV-可变检测器,o.p.0.2mm
Merk D2000打印机-绘图仪
柱: Delta Pak C18,15μm,40x100mm(Waters)
洗脱液A: 70/30,水/乙腈+0.1％TFA
洗脱液B: 30/70,水/乙腈+0.1％TFA
流速: 27.0mL/min
梯度: 40min,等度100％A,然后在1min内达到100％B
检测: UV 227nm
注射: 50mL水中5g(通过泵入口管线D)
阶段2
需要在该阶段从IIb/TFA消除TFA，以进一步纯化(IIb)。
使用如下给出的制备型HPLC条件进行IIb/TFA色谱。
共同合并级分4和5，在40℃真空蒸发，直到完全除去乙腈为止。将残留水溶液保持在4℃冷藏箱内。通过过滤分离不溶物，在室温真空干燥，得到(IIb)(100mg；HPLC纯度100％)。
制备型HPLC条件:
仪器：Waters Delta Prep 4000(往复泵,具有低压混合器的梯度控制器)
Jasco 7125UV-可变检测器,o.p.0.2mm
Merk D2000打印机-绘图仪
柱: Symmetry C18,7μm,20x250mm(Waters)
洗脱液A: 70/30,水/乙腈
洗脱液B: 30/70,水/乙腈
流速: 15.0mL/min
梯度: 20min,等度100％A，然后在10min内达到100％B，
检测: UV 227nm
注射: 50mL杂质“IIa/TFA”溶液(通过泵入口管线D)
实施例9
(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′d)的制备
a)3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)
根据实施例8a)制备标题化合物。
b)(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺
通过如实施例9a)制备的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)与D-丙氨酰胺盐酸盐根据实施例8b)的方法反应制备标题化合物。
c)(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′d)
通过与实施例8c)中所述相同的操作将步骤b)中得到的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺转化成标题化合物。
基于1H-NMR、13C-NMR数据，将结构(II′d)指定为由此得到的甲磺酸盐。1H-NMR、13C-NMR光谱和m.p.190℃(毛细管)与S-对映体(IId)的那些完全一致(参见实施例8c)。
使用手性柱的HPLC分析(参见实施例27C)显示R-对映体(RT 7.6)与S-对映体(RT7.3)之比高于99.5/0.5。
实施例9A
(R,S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IId,II′d) 的制备
由根据上述实施例8a)制备的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)(5.g)和根据实施例8b)操作得到的(R,S)丙氨酰胺盐酸盐制备(R,S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺。
通过实施例9c)所述的操作将产物转化成甲磺酸盐。从(VIb)得到盐，收率为70％。
光谱数据与R-对映体(II′d)的那些完全一致(参见实施例9c)。
使用手性柱的HPLC分析(参见实施例27C)显示1:1的R-对映体(RT 7.6)与S-对映体(RT 7.3)之比。
[α]25 D(c 1％的甲醇溶液)0℃
实施例10
纯化4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)的制备
a)在室温，在搅拌下向4-羟基苯甲醛(2.28kg,18.68mol)、碳酸钾(2.84kg,20.54mol)、碘化钾(0.33kg,1.98mol)在乙醇(21.0kg)中的混合物中加入3-氟苄基氯(2.70kg,18.68mol)。
将该混合物逐步地加热至回流，然后保持在该温度下6小时。
然后将该反应混合物冷却至25℃，过滤悬浮液，用乙醇(1.5kg)洗涤固体；合并乙醇溶液，然后减压浓缩，直到得到约6.0kg残余物为止。
向该残余物中加入甲苯(10kg)和水(2.5kg)，将溶剂混合物剧烈搅拌30min，分离水相后，将有机层减压蒸发至干，得到粗4-(3-氟苄氧基)苯甲醛。
在20-25℃，在搅拌下向溶于甲苯(3kg)的该产物中加入4-(3-氟苄氧基)苯甲醛晶种，然后在45min内加入正-己烷(6.0kg)，将该混合物在搅拌下冷却至0℃。
3小时后，过滤固体，用正-己烷(2.0kg)洗涤。干燥后，得到3.95kg(92.0％收率)期望的产物，气相色谱纯度是99.8(面积％,参见实施例24A)且通过G.C.测定3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.01％重量(面积％,参见实施例24B)；通过DSC测定m.p.43.1℃5℃/min。
另外，如下制备标题化合物：
b)在10L反应器中加入2-丙醇(5.51kg)、碳酸钾(793g,5.74mol)、碘化钾(305g,1.84mol)和4-羟基苯甲醛(700g,5.74mol)。将该混合物在20-25℃搅拌15min。
借助于滴液漏斗在约20min内在反应器中加入3-氟苄基氯(871g,6.03mol)。
将该混合物在搅拌下回流加热3小时。
然后将该混合物冷却至约50℃，取样用于方法对照。
真空除去溶剂，直到体积达到约1.8l。
加入环己烷(1.84kg)和水(2.5kg)，然后将该混合物加热至65±3℃，在该温度下搅拌30min。终止搅拌，使各相分离20min；弃去水相。
向有机相中加入水(1.31kg)，将双相混合物在65±3℃搅拌30min。使各向分离20min。弃去水相，在包含40－55℃的温度真空浓缩有机相至体积约为3l。
将该混合物冷却至约30℃，接种，在该温度下搅拌30min。
将该混合物冷却至20±2℃，在该温度搅拌至少3小时。
在抽吸中过滤产物，用环己烷(3x 150g)洗涤固体。
将湿固体(1.5kg)在20-25℃，在低于100mbar压力下干燥12小时，得到1.17kg(5.09mol)；收率为88％，气相色谱纯度是99.43(面积％,参见实施例24A)，通过G.C.测定的含量是0.063％重量(面积％,参见实施例24B)的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)。根据实施例11.1所述的操作进一步纯化该产物，得到产物，其中通过GC测定的杂质(VIa)的含量是0.01％重量(参见实施例24B)。
实施例11
4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)通过相转移催化的制备
使3-氟苄基氯(10kg,69.16mol)、4-羟基-苯甲醛(7.8kg,63.88mol)、碳酸钾(9.46kg,68.44mol)和溴化十四烷基三甲基铵(1.03kg,3.72mol)在甲苯(30.0kg)中的混合物在搅拌下，在氮气气氛中缓慢达到回流温度，然后回流7小时。
在室温浓缩该溶液，然后加入6kg甲苯，蒸馏出来，将该方法再重复一次。
然后将不均匀混合物冷却至室温，通过过滤除去固体。减压除去残留溶剂，然后将2.6kg甲苯加入到油状残余物中。
将该混合物在20-25℃搅拌，接种几克纯的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，然后在45min内将正-己烷(18kg)加入到搅拌的保持在20-25℃的混合物中。
冷却至3-6℃并且在该温度再搅拌1小时后，通过过滤收集固体，减压干燥，得到13.5kg，收率为86.3％、GC纯度99.8(面积％,参见实施例24A)和3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛含量为0.01％重量(参见实施例24B)。
11.1 通过结晶进一步纯化4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)
在回流和搅拌下将根据实施例10b)制备的1千克4-(3-氟苄氧基)苯甲醛溶于2kg二异丙基醚。
在10-15min内将该溶液冷却至50-55℃，接种几克纯的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛。
在45-60min过程中将该悬浮液冷却至10-15℃，再搅拌1小时。
最终通过过滤收集沉淀，用冷二异丙基醚(0.2kg)洗涤，减压干燥，得到0.90kg 4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，具有的GC纯度是99.9(面积％,参见实施例24A)，通过GC测定的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛的含量是0.01％重量(参见实施例24B)。
11.2 通过相转移催化使用3-氟苄基溴制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)
根据与实施例11相同的操作，通过使4-羟基苯甲醛(26.52g)与3-氟苄基溴反应，但使用3-氟苄基溴而不是3-氟苄基氯制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，收率为87.0％，通过GC测定的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.05％重量(参见实施例24B)。
根据实施例11.1纯化由此得到的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，得到标题产物，收率为95.0％，通过GC测定的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.01％重量(参见实施例24B)。
11.3 通过相转移催化，使用3-氟苄基甲磺酸盐制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)
根据与实施例11相同的操作，通过使4-羟基苯甲醛(15.6g)与3-氟苄基甲磺酸盐而不是3-氟苄基氯反应制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，收率为97.5％，通过GC测定的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.45％重量(参见实施例24B)。根据实施例11.1的操作进一步纯化该产物以将杂质(VIa)的含量降至0.01％重量。
实施例12
高纯度(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)的制备(单罐反应)
a)(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)的制备
在安装了机械搅拌器、温度计、回流冷凝器的2l四颈圆底烧瓶中，在氮气流中加入L-丙氨酰胺盐酸盐(124.6g,0.49mol)和甲醇(840mL)，在20℃搅拌15min。以保持温度低于30℃这样的速率加入三乙胺(49.5g,0.49mol)，将该混合物搅拌10min，此时在约30 min内分批加入实施例10b)制备的固体4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(100g)。在20℃搅拌3小时后，将该混合物冷却至5℃，在1.5小时期限内分10部分谨慎加入固体NaBH4(16.4g,0.44mol)。在添加结束时，将该混合物在5℃搅拌30min。减压浓缩该混合物至100-150mL体积。
向残余物中加入甲苯(550mL)和水(750mL)，使温度升至75℃。搅拌30min后，分离各相，用水(140mL)洗涤有机相。相分离后，将有机相冷却至68℃，接种，在该温度搅拌1小时。将该混合物在约2小时内冷却至20℃，在该温度搅拌2小时。通过过滤分离固体，用甲苯(2x40mL)洗涤，真空干燥至得到118g白色固体；收率为90％。
得到产物的HPLC纯度是99.95(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺含量是0.008％重量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的沙非酰胺对映体纯度是100％(面积％,参见实施例27A)。
1H-NMR(D2O)(Bruker A V300)δ(ppm,相对于H2O而言，在4.7ppm):1.43(3H,d,J＝7Hz,CH3)；2.66(3H,s,CH3SO3H)；3.87(1H,q,J＝7Hz,H-2)；3.97(2H,bs,CH2NR)；4.89(2H,s,CH2OR)；6.88和7.23(4H,AA′XX′芳族对-二取代的系统；6.90÷7.22(4H,芳族H)
13C-NMR(D2O)(Bruker AV300)δppm:15.68(CH3)；38.27(CH3SO3H)；48.99(CH2NR)；54.81(CH)；69.00(OCH2)；114.15(d,JC-F＝21Hz,芳族CH)；114.76(d,JC-F＝20Hz,芳族CH)；115.38(芳族CH)；123.06(d,JC-F＝24Hz,芳族CH)；123.24；130.29(d,JC-F＝6Hz,芳族CH)；131.54(芳族CH)；138.76(d,JC-F＝7Hz,芳族CH)；158.52；162.89(d,JC-F＝245Hz,C-F)；171.92(CO)
a1)作为可替代选择的操作，通过使用NaBH4甲醇溶液而不是固体NaBH4进行还原。
通过在搅拌下，在氮气气氛中、在0-5℃下将NaBH4(16.4g)添加到醇(120mL)和NaOH 30％水溶液(5.8mL)的混合物中制备NaBH4的甲醇溶液。
在安装了机械搅拌器、温度计、回流冷凝器的2l四颈圆底烧瓶中，在氮气流中加入L-丙氨酰胺盐酸盐(124.6g,0.49mol)和甲醇(720mL)，在20℃搅拌15min。以保持温度低于30℃这样的速率加入三乙胺(49.5g,0.49mol)将该混合物搅拌10min，此时在约30min内分批加入实施例10b)制备的固体4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(100g)。在20℃搅拌3小时后，将该混合物冷却至5℃，在1.5小时期限内通过滴液漏斗谨慎加入预先制备的NaBH4溶液。在添加结束时，将该混合物在5℃搅拌30min。减压浓缩该混合物至100-150mL体积。
向残余物中加入甲苯(550mL)和水(750mL)，使温度升至75℃。搅拌30min后，分离各相，用水(140mL)洗涤有机相。相分离后，将有机相冷却至68℃，接种，在该温度搅拌1小时。将该混合物在约2小时内冷却至20℃，在该温度搅拌2小时。通过过滤分离固体，用甲苯(2x40mL)洗涤，在40℃真空干燥：116g白色固体,收率为88.5％。
该产物的HPLC纯度是100.0％(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺含量是0.009％重量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的沙非酰胺对映体纯度是100％(面积％,参见实施例27A)。
b)(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)
在搅拌下将实施例12a)制备的(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(20g,66mmol)和乙酸乙酯(510g)的混合物加热至65℃，保 持在这些条件下直到得到澄清溶液为止。在40min内向预冷却至55℃的所述溶液中加入甲磺酸(7g,72.6mmol)。将该混合物在3小时内分批冷却至20℃，保持在20℃2小时。过滤不均匀混合物，在40℃减压干燥固体，得到26.1g标题化合物，为白色粉末(99％收率)。
得到的产物的HPLC纯度是99,94％(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量是0.005％重量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的沙非酰胺甲磺酸盐对映体纯度是100％(面积％,参见实施例27A)。
b1)通过使用实施例12b)指定的操作将根据实施例12a1)制备的(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(20g,66mmol)转化成甲磺酸盐(Ic)，得到26.2g标题化合物，收率为99％。
得到的产物的HPLC纯度是99.95％(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的含量是0.005％重量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的沙非酰胺甲磺酸盐对映体纯度是100％(面积％,参见实施例27A)。
实施例13
高纯度(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)的制备
通过与实施例12a1)相同的操作制备标题产物，收率为87％，但根据实施例11制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，将由此得到的(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺转化成甲磺酸盐(Ic)，其具有根据实施例25A方法测定的99.7(面积％)纯度，通过实施例25B测定的C,O-二烷基化杂质(IIa)的含量是0.005％重量。
实施例14
通过使用L-丙氨酰胺碱制备高纯度(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲 磺酸盐(Ic,I′c)(单罐反应)
a)(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia,I′a)
在安装了机械搅拌器、温度计的1L四颈圆底烧瓶中，在氮气流中加入L-丙氨酰胺盐酸盐(59g,0.47mol)和乙醇(690mL)，将该混合物在20±3℃搅拌20min。在约15min内加入30％甲醇钠的甲醇溶液(83.9g,0.47mol)。将该混合物在20±3℃搅拌1小时，过滤出固体(NaCl)，减压浓缩澄清溶液。
将残余物溶于甲醇(640g,约800mL)，在30min期限内分部分加入4-(3-氟苄氧基)-苯甲醛(96.5g,0.42mol,在实施例10b中制备)。在室温搅拌20小时后，将澄清溶液冷却至5±2℃，在1.5小时期限内分部分谨慎加入NaBH4(15.8g,0.42mol)，保持温度低于10℃。在添加结束时，将该混合物在5±2℃搅拌30min。减压浓缩该混合物至100-150mL体积。
向残余物中加入甲苯(550mL)和水(750mL)，使温度升至75±2℃。在搅拌30min后，分离各相，用水(140mL)洗涤有机相。相分离后，将有机相冷却至68±2℃，接种，在该温度搅拌1小时。将该混合物在约2小时内冷却至20℃，在该温度搅拌2小时。在抽吸中通过过滤收集固体，用甲苯(2x40mL)洗涤。
在40℃真空中干燥湿固体12小时，得到70g(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺，收率为65％，具有的HPLC纯度是99.88(面积％,参见实施例25A)，通过HPLC测定的(R,S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺的含量是0.008％重量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱，根据实施例27A对产物的分析显示得到的化合 物具有52:48的R:S比。
亚氨基烷基化反应过程的另一个对照显示在所述亚氨基烷基化步骤过程中发生外消旋化。
b)(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic,I′c)
通过与实施例4b)相同的操作将根据实施例14a)制备的化合物转化成甲磺酸盐，收率为85,0％，HPLC纯度是99.8(参见实施例25A)。
通过HPLC测定的杂质(R,S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc,II′c)的含量(参见实施例25B)低于0.005％重量。
实施例15
通过使用D-丙氨酰胺盐酸盐制备高纯度的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰 胺甲磺酸盐(I′c)(单罐反应)
a)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′a)
根据实施例12a1)通过用D-丙氨酰胺盐酸盐取代L-丙氨酰胺盐酸盐制备该化合物，得到(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺，收率为91％，具有的HPLC纯度是99.8(面积％,参见实施例25A)，通过HPLC测定的(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺的含量是0.005％重量(参见实施例25B)。
b)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′c)
通过与实施例12b相同的操作将根据实施例15a)制备的沙非酰胺R-对映体转化成甲磺酸盐(I′c)，收率为92.0％,HPLC纯度99.9％(参见实施例25A)。
通过HPLC测定的杂质(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄 氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′c)含量(参见实施例25B)低于0.005％重量。标题化合物具有通过DSC(5℃/min)测定的m.p.216.8℃。
使用手性HPLC柱测定的对映体纯度高于99.9(面积％,参见实施例27B)。
1H-NMR(D2O)(Bruker A V300)δ(ppm,相对于H2O而言，在4.7ppm):1.43(3H,d,J＝7Hz,CH3)；2.66(3H,s,CH3SO3H)；3.87(1H,q,J＝7Hz,H-2)；3.97(2H,bs,CH2NR)；4.89(2H,s,CH2OR)；6.88和7.23(4H,AA′XX′芳族对-二取代的系统；6.90÷7.22(4H,芳族H)
13C-NMR(D2O)(Bruker AV300)δppm:15.68(CH3)；38.27(CH3SO3H)；48.99(CH2NR)；54.81(CH)；69.00(OCH2)；114.15(d,JC-F＝21Hz,芳族CH)；114.76(d,JC-F＝20Hz,芳族CH)；115.38(芳族CH)；123.06(d,JC-F＝24Hz,芳族CH)；123.24；130.29(d,JC-F＝6Hz,芳族CH)；131.54(芳族CH)；138.76(d,JC-F＝7Hz,芳族CH)；158.52；162.89(d,JC-F＝245Hz,C-F)；171.92(CONH2)
还按如下制备了这种实施例15的化合物：
a1)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′a)
在圆底烧瓶中将12.2g D-丙氨酰胺盐酸盐溶于166.8mL甲醇，依次加入9.9g三乙胺，同时保持温度低于30℃，然后加入20g 4-(3-氟苄氧基)苯甲醛。将该混合物在室温搅拌3小时，然后在8±2℃冷却，加入3.3g固体NaBH4，保持温度在约8℃。
将该反应体系搅拌至少1小时，浓缩至最小体积，然后加入甲苯(110mL)和水(152mL)。
将双相混合物在70℃搅拌，分离有机层，在70℃用水(30mL)洗 涤。
将得到的溶液冷却至室温，过滤，用甲苯洗涤。
在40℃真空干燥固体，得到22.6g标题产物，为白色粉末(86.1％收率)
[α]25 D(c在甲醇中2％):+10.63°
300MHz 1H-NMR(DMSO-d6):7.55-7.48(1H,m),7.37-7.30(5H,m)7.26-7.19(1H,m)7.02-7.01(3H,m)5.19(2H,s),3.70(1H,d),3.57-5.53(1H,d),3.10-3.04(1H,q),1.21-1.19(3H,d)。
b1)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′c)
在圆底烧瓶中加入65g 2-丙醇和根据上述步骤a1)制备的8.25g化合物，在70℃，在搅拌下加热至得到完全溶液为止。
保持温度在70±3℃，滴加2.6g甲磺酸。
在70℃搅拌30min后，将该混合物缓慢冷却至20℃，然后搅拌1小时。
过滤产物，用异丙醇洗涤，在40℃真空干燥，得到10g标题产物，为白色粉末(92％收率)
m.p.218.4℃(毛细管)；[α]25 D(c在甲醇中2％):+0.6°
得到的产物的HPLC纯度是99,88％(面积％,参见实施例25A)，C,O-二烷基化(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐含量是0.006％重量(参见实施例25B)；m.p.218.4℃(毛细管)。
使用手性HPLC柱测定的R-沙非酰胺甲磺酸盐的对映体纯度是100％(面积％,参见实施例27B)。
300MHz 1H-NMR(DMSO-d6):7.97(1H,bs),7.70(1H,bs),7.56-7.47(3H,m),7.38-7.34(2H,m),7.27-7.21(1H,dt),7.17-7.15(2H,d),5.25(2H.s),4.10(2H,bs),3.81-3.79(1H,q),2.39(3H,s),1.50-1.48(3H,d)。
实施例16
高纯度(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)的制备与中间体希
夫碱(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(IIIa)的分离
a)(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(IIIa)
在室温，在搅拌下，在氮气气氛中向如实施例10制备的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(192.0g 0.83mol)和L-丙氨酰胺盐酸盐(114.2g,0.93mol)在甲醇(960mL)中的悬浮液中加入三乙胺(93.12g,0.93mol)。再维持搅拌2小时。
然后给该溶液接种几毫克(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺，使温度降至5-10℃，持续搅拌3小时。
通过过滤收集固体，在2℃用甲醇洗涤。
减压干燥后，得到190.4g(76.0％收率)标题化合物，通过DSC(5℃/min)测定的m.p.112.0℃。
1H-NMR(DMSO-d6)(Bruker AV300)δ(ppm,相对于TMS而言，在2.55ppm；DMSO溶剂，在3.35ppm):1.31(3H,d,J＝7Hz,CH3)；3.86(1H,q,J＝7Hz,H-2)；5.18(2H,s,CH2OR)；7.08和7.79(4H,AA′XX′对-二取代的芳族系统)；7.10-7.50(4H,m,芳族H)；8.27(1H,s,CH＝NR)。
13C-NMR(DMSO-d6)(Bruken AV300)δ(ppm):20.5(CH3)；67.6(CH)；68.4(OCH2)；114.1e 114.4(d,JC-F＝21Hz,芳族)CH；114.5e 114.8(d,JC-F＝21Hz；芳族CH；114.8(芳族CH)；123.5(d,JC-F＝2Hz,芳族CH)；129.0和129.9(芳族CH)；130.4和130.5(d,JCF＝7Hz,芳族CH)；139.6和139.7(d,JC-F＝6Hz芳族季C)；160.2；160.5 和163.8(d,JC-F＝245Hz C-F)；160.6(CH＝N)；174.8(CO)
[α]25 D(c在氯仿中1％):+68.1°
b)(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)
将如实施例16a)所述制备的(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III a)(150g)和甲醇(900mL)的混合物在搅拌下冷却至2-5℃。在2小时内将硼氢化钠(19.0g)分小部分加入到预先制备的冷混合物中，保持温度低于5℃。然后将该混合物在5℃再搅拌20min。真空浓缩该反应混合物，如实施例2所述后处理，得到135g(89.2％收率)(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)，其具有的HPLC纯度是98.8(根据实施例25A方法测定的面积％和通过HPLC、根据实施例25B方法测定的0.005％重量的C,O-二烷基化(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺含量。
c)(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)
通过与实施例12b)相同的操作将根据实施例16b)制备的沙非酰胺转化成甲磺酸盐(Ic)，收率为94.0％，HPLC纯度99.9％(参见实施例25A)。
通过HPLC测定的杂质(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc)含量(参见实施例25B)低于0.005％重量。
使用手性HPLC柱测定的对映体纯度高于99.9(面积％,参见实施例27A)。
实施例17
高纯度(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′c)的制备与中间体希 夫碱(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′a)的分离
a)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′a)
在250mL安装了机械搅拌器、温度计、回流冷凝器的四颈圆底烧瓶中且氮气气流中，加入D-丙氨酰胺盐酸盐(6.1g)和甲醇(80mL)，在20℃搅拌15min。以温度保持低于30℃的这种速率加入三乙胺(5g)。将该混合物搅拌10min，此时在约30min内分批加入固体4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(10g,实施例10b)。在20℃搅拌3小时后，将该混合物冷却至5℃。在该温度搅拌3小时后，过滤固体，用少量预先冷却的甲醇洗涤。在25℃真空干燥湿固体12小时，得到6.4g标题化合物，为白色固体，收率为46.4％；m.p 111.9。
[α]D＝-67.9°(在氯仿中c＝1)
1H-NMR(DMSO-d6)(Bruker AV300)δ(ppm,相对于TMS而言在2.55ppm；DMSO溶剂，在3.35ppm):1.31(3H,d,J＝7Hz,CH3)；3.86(1H,q,J＝7Hz,H-2)；5.18(2H,s,CH2OR)；7.08和7.79(4H,AA′XX′对-二取代的芳族系统)；7.10-7.50(4H,m,芳族H)；8.27(1H,s,CH＝NR)。
13C-NMR(DMSO-d6)(Bruken AV300)δ(ppm):20.5(CH3)；67.6(CH)；68.4(OCH2)；114.1e 114.4(d,JC-F＝21Hz,芳族H；114.5e 114.8(d,JC-F＝21Hz；芳族CH；114.8(芳族CH)；123.5(d,JC-F＝2Hz,芳族CH)；129.0和129.9(芳族CH)；130.4和130.5(d,JCF＝7Hz,芳族CH)；139.6和139.7(d,JC-F＝6Hz芳族季C)；160.2；160.5和163.8(d,JC-F＝245Hz C-F)；160.6(CH＝N)；174.8(CO)
b)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′a)
通过实施例16b)操作制备该化合物，但使用实施例17a)制备的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′a)而不是其对映体(IIIa)。
c)(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(I′c)
通过与实施例12b相同的操作将根据实施例17b)制备的(R)-2[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺转化成甲磺酸盐(I′c)，收率为92％。
通过HPLC测定的杂质(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′c)含量(参见实施例25B)低于0.005％重量。标题化合物具有通过DSC(5℃/min)测定的m.p.216.8℃。
使用手性HPLC柱测定的对映体纯度高于99.9(面积％,参见实施例27B)。
实施例17A
(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺
甲磺酸盐(Ic,I′c)
a)将甲醇(80mL)和(R,S)-丙氨酰胺盐酸盐(15.14g,123mmol)加入到1000mL玻璃反应器中，在25℃滴加无水三乙胺(17.04mL,144mmol)。
在约10min内加入实施例10b)制备的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(23.99g,103.5mmol)，将该混合物在25℃搅拌10小时(混合物A)。
在第二个反应器中(100mL)，在搅拌下混合甲醇(30mL)和30％氢氧化钠水溶液(1.3g)，使温度降至0-6℃。在1℃将硼氢化钠粉末(3.92g,103.5mmol)分部分加入到该溶液中。将该混合物在1-2℃、在氮气中搅拌2小时(混合物B)。
在搅拌下，在氮气中，在约30min内将混合物B加入到上述混合物A中，保持温度在5-10℃。
将该反应混合物在5-10℃搅拌30min，真空浓缩至20mL残留体积。在搅拌下，在氮气中将甲苯(120mL)和水(100mL)加入到残余物中，将该混合物加热至60-65℃。
分离有机相，加入水(30mL)，将该化合物在60-65℃搅拌。
分离有机相，逐步地冷却至约7℃，保持在这些条件下3小时。
过滤该混合物，用甲苯(3x10mL)洗涤固体，减压干燥后得到(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(21.40g)。
b)在反应器中加入2-丙醇(65g)和实施例17A a)制备的(R,S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(8.2g)。
将该混合物在搅拌下加热至70℃，保持在这些条件下，直到得到澄清溶液为止。
在70℃将无水甲磺酸(2.6g)缓慢加入到上述溶液中。
将不均匀混合物冷却至20℃，在该温度下搅拌至少2小时。
离心该混合物，用异丙醇洗涤固体，真空干燥后得到9.4g标题产物，收率为86.4％，具有HPLC纯度99.9(面积％,参见实施例25A)和低于0.005％重量的C,O-二烷基化(R,S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(参见实施例25B)。
通过手性HPLC柱显示由此得到的(R,S)沙非酰胺是S:R＝50.30:49.70(面积％,参见实施例27A)的对映体混合物。
实施例18
制备(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc)
a)3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)
在4L圆底烧瓶中，在氮气气氛中，依次加入4-羟基-苯甲醛(400g,3.28mol)、碳酸钾(453g,3.28mol)、甲苯(2L)和3-氟苄基氯(1400g,9.68mol)，将该混合物在搅拌下回流5天。此时，GC分析揭示出该反应混合物包含91.4:8.6之比的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛和3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(面积/面积,参见实施例24A)。
将该反应混合物冷却至室温，然后在搅拌下加入2L水。在搅拌下加入水。分离有机相，在35℃减压(20mmHg)蒸馏溶剂，直到不再有溶剂通过。然后使压力降至3mmHg，使外部温度升至300℃，收集255℃－265℃蒸馏的级分(40.6g)。
GC分析显示C,O-二苄化衍生物(VIa)与一烷基化(IVa)的面积/面积比是99.6:0.4(面积,就GC条件而言,参见实施例24B)。
1H-NMR(CDCl3)(Bruker AV300)δ(ppm,相对于TMS而言):4.05(2H,s,CH2)；5.13(2H,s,OCH2)；6.85-7.40(9H,m,芳族H)；7.73-7.79(2H,m,芳族H与C＝O邻位)；9.88(s,CHO)。
13C-NMR(CDCl3)(Bruker AV300)δ(ppm):36.1(CH2)；69.4(CH2O)；111.4(芳族CH)；112.9和113.2(d,JC-F＝20Hz,芳族CH),113.9和114.2(d,JC-F＝22Hz,芳族CH)；114.9和115.0(d,JC-F＝21Hz,芳族CH；115.7e 115.9(d,JC-F＝25Hz芳族CH)；122.6(d,JC-F＝3Hz,芳族CH)；124.4(d,JC-F＝3Hz,芳族CH)；129.6和129.8(d,JC-F＝8Hz,芳族CH)；(d,JC-F＝7Hz,季芳族C)；129.9(C季芳族C)；130.0(季芳族C)；130.1和130.2(d,JC-F 7Hz,CH芳族)；131.2(芳族CH)；131.5(芳族CH)；138.3(d,JC-F＝7Hz,季芳族C)；142.3(d,JC-F＝7Hz,季芳族C)；161.0,161.2和164.4(d,JC-F＝240,2C-F重叠)；190.8(CHO)。
b)(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)
在室温向在500mL烧瓶中的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(35.6g,0.105mol)中加入预先在搅拌下谨慎将三乙胺(12g,0.119mol)加入到170mL L-丙氨酰胺盐酸盐(14.8g,0.119mol)甲醇溶液中制备的溶液。
将该反应混合物在室温搅拌1小时，然后将其转入1.8L高压釜，向该混合物中加入3.4g湿(50％H2O)Pt/C 5％。
用氮气净化高压釜的空气，然后在5.0巴导入氢气。
反应在35℃的温度进行3-5小时。
在冷却至室温和通过过滤除去催化剂后，减压蒸馏出溶剂，直到得到约65g残余物为止。向该残余物中加入乙酸乙酯(340mL)和水(250mL)的混合物，将不均匀混合物温至40℃，在搅拌下保持该温度，直到得到澄清的两相为止。分离两相，减压蒸馏有机相，直到得到约50g残余物为止。
将该残余物溶于220mL乙酸乙酯，减压蒸馏出溶剂、外部温度是40℃。将该操作重复两次，得到标题化合物，为固体残余物(42.4g)。
c)(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc)
在2L玻璃反应器中将实施例18b制备的42.4g(0.103mol)(S)-3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺溶于950mL乙酸乙酯。将该溶液在50-55℃，在搅拌下加热，在该温度下保持1小时。在20min内向该溶液中加入14.5g(0.15mol)甲磺酸，使温度在90min内降至20℃。30min后，通过过滤收集固体，在50℃减压干燥，然后从甲醇(甲醇:产物1:5重量)结晶，得到25.1g对映体纯的(参见实施例27D)(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐,m.p.187℃(毛细管)。
1H-NMR(DMSO-d6)(Bruker AV300)δ(ppm,相对于TMS而言):1.44(3H,d,J＝7Hz,CH3)；2,35(3H,s,CH3SO3)；3,81(1H,q,J＝7Hz,H-2),3.99(2H,bs,CH2苄型)；4.02(2H,AB系统,CH2N-)；5.17(2H,s,CH2OR)；6.98-7.63(11H,m,芳族H)；7.62和7.75(2H,bs,NH2酰胺)；9.02(2H,宽,NH2+).
13C-NMR(DMSO-d6)(Bruker AV300)δ(ppm):15.9(CH3)；35.5(CH2)；39.7(CH3SO3H)；48.1(CH2NR)；54.4(CH)；68.4(OCH2)；112.2(芳族CH)；112.7(d,JC-F＝22Hz,芳族CH)；113.8(d,JC-F＝22Hz,芳族CH)；114.5(d,JC-F＝22Hz,芳族CH)；115.2(d,JC-F＝22Hz,芳族CH)；123.2(芳族CH)；123.8；124.6(芳族CH)；128.7和130.0(d,JHC-F＝6Hz,芳族CH)；130.04(芳族CH)；130.3(d,JC-F＝6Hz,芳族CH)；132.6(芳族CH)；139.8(d,JC-F＝7Hz)；143.4(d,JC-F＝7Hz)；158.1,160.5和163.7(d,JC-F＝240,C-F)；160.6和163.8(d,JC-F＝240,C-F)；170.5(CONH2)。
d)通过制备型HPLC对包含0.12％重量(IIc)的沙非酰胺甲磺酸盐(Ic)的(IIa)的分离
还通过制备HPLC从200g根据J.Med.Chem.,1998,41,579,方法A制备的沙非酰胺甲磺酸盐(Ic)中分离了(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)样品(90mg)，其包含0.12％重量的所述杂质(IIa)，为甲磺酸盐(IIc)。
根据如下反应路线进行两阶段分离(阶段1和阶段2)：
阶段1
第一阶段的范围在于分离富含在IIa/TFA(三氟乙酸)中的粗产物。
将制备型HPLC条件报道如下：
制备型HPLC条件:
仪器:Waters Delta Prep 4000(往复泵,具有低压混合器的梯度控制器)
Radial Compression Module Prep LC碱(Waters)
Jasco 7125UV-可变检测器,o.p.0.2mm
Merk D2000打印机-绘图仪
柱: Del ta Pak C18,15μm,40x100mm(Waters)
洗脱液A: 70/30,水/乙腈+0.1％TFA
洗脱液B: 30/70,水/乙腈+0.1％TFA
流速: 27.0mL/min
梯度: 40min,等度100％A,然后在1分钟内100％B
检测: UV 227nm
注射: 在50ml水中5g(通过泵入口管线D)
阶段2
需要在该阶段从IIa/TFA中消除TFA，以进一步纯化(IIa)。
使用如下给出的制备型HPLC条件进行IIa/TFA色谱。
共同合并级分4和5，在40℃真空蒸发，直到完全除去乙腈为止。将残留水溶液保持在4℃冷藏箱内。通过过滤分离不溶物，在室温真空干燥，得到(IIa)(90mg；HPLC纯度100％)。
制备型HPLC条件:
仪器：Waters Delta Prep 4000(往复泵,具有低压混合器的梯度控制器)
Jasco 7125UV-可变检测器,o.p.0.2mm
Merk D2000打印机-绘图仪
柱: Symmetry C18,7μm,20x250mm(Waters)
洗脱液A: 70/30,水/乙腈
洗脱液B: 30/70,水/乙腈
流速: 15.0mL/min
梯度: 20min,等度100％A,然后在10分钟内100％B
检测: UV 227nm
注射: 50mL杂质“IIa/TFA”溶液(通过泵入口管线D)
实施例19
(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′c)的制备
根据实施例18b相同的操作、但使用D-丙氨酰胺盐酸盐而不是L-丙氨酰胺盐酸盐制备上述化合物的游离碱。
根据实施例18c)的操作将(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺转化成其甲磺酸盐。
由此以3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)为原料得到(II′c)，收率为50％。
基于1H-NMR、13C-NMR数据将结构(II′c)指定为由此得到的甲磺酸盐。1H-NMR、13C-NMR光谱和m.p.196℃(毛细管)与S-对映体(IIc)的那些完全一致(参见实施例18c)。
实施例19A
(R,S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc,II′c) 的制备
通过实施例18b)中指定的操作，由实施例18a)制备的2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛和外消旋丙氨酰胺盐酸盐制备标题化合物，产率为75％。
通过实施例18c)中指定的操作将由此得到的(R,S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺转化成88％收率的其甲磺酸盐。
使用手性柱的HPLC分析(参见实施例27D)与产物的外消旋性质完全一致。
实施例20
由污染了1％重量杂质3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)的4-(3-氟苄
氧基)苯甲醛(IVa)制备(S)-2-[4-3-氟苄氧基]苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)
向4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(10g；GC纯度98.8,面积％)中加入1％3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，通过与实施例12a)相同的方法将该混合物转化成(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺。收率是90％，杂质(IIa)的含量是0.88％重量(参见实施例25B)。
通过与实施例12b)相同的方法将游离碱(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)转化成相应的甲磺酸盐，得到甲磺酸盐(Ic)，96％收率，通过HPLC测定的杂质(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc)含量是0.72％重量(参见实施例25B)。
实施例21
掺杂了杂质(IIc)的(S)-2-[4-3-氟苄氧基]苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)的结晶
通过使用5种不同溶剂系统、通过在回流温度溶解和在室温冷却使实施例20制备的沙非酰胺甲磺酸盐样品结晶。
将结果报道在下表6中。
表6
(*)根据实施例25B评价％(w/w)。
实施例22
根据现有技术中所述的方法制备(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)甲
磺酸盐(Ic)
22.1 4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)的制备
22.1.a)US 6,335,354B2实施例1a的方法
通过US 6,335,354 B2的实施例1a中所述的操作制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)。
因此，将3-氟苄基氯(2.86g,19.80mmol)4-羟基苯甲醛(3.03g，24.80mmol)，K2CO3(10.30g，74.50mmol)，NaI(137.1mg，0.91mmol)和乙醇(40mL)的混合物在70分钟内加热至回流并且保持在回流温度下4小时和15min。
在后处理该反应混合物后，分离4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，为黄色油状物，95％收率。
该产物具有的GC纯度为97.6(面积％，参见实施例25A)，且通过GC测定的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)含量为0.14％重量(参见实施例25B)。
22.1.b)J.Agric.Food Chem,27,4,1979的方法
通过J.Agric.Food Chem，27，4，1979中报道的方法制备4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)。
因此，在搅拌下和氮气气氛中向4-羟基苯甲醛(12.2g，100mmol)和NaOH(4.0g，100mmol)在乙醇(100mL)中的溶液中加入3-氟苄基氯(14.5g，100mmol)。
将该混合物在25min内分批加热至并且在回流温度下搅拌6小时和20分钟。过滤该反应混合物且然后在减压下浓缩至得到4-(3-氟- 苄氧基)苯甲醛(23.43g)，为黄色固体残余物。向该残余物中加入二氯甲烷(250mL)，过滤不溶性物质并且在减压下浓缩所得溶液而得到4-(3-氟苄氧基)苯甲醛，为黄色固体，80.4％收率。
该产物具有的GC纯度为91.6(面积％,参见实施例24A)，且通过GC测定的3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)含量为0.13％重量(参见实施例25B)。
22.2 (S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)和其甲磺酸盐(Ic)的制备
22.2.a)J.Med.Chem.,1998,41,579的方法,方法A
通过使如实施例22.1a)中所述制备的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(10mmol)和L-丙氨酰胺盐酸盐(1.37g，11mmol)反应，随后使用NaBH3CN(0.50g，8mmol)进行还原制备(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)。在后处理该反应混合物并且通过快速色谱法纯化后，分离(S)-2[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺，为白色固体，收率68.7％。该产物具有的HPLC纯度为96.2(面积％,参见实施例25A)，且(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)含量为0.15％重量(参见实施例25B)。
将(S)-2[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(1.50g，4.96mmol)和乙酸乙酯(40.2mL)的混合物加热至50℃，直到获得澄清溶液。在搅拌下和15min内向该溶液中加入甲磺酸(0.53g，5.51mmol)并且在搅拌下和90分钟内将所得不均匀混合物冷却至20℃。在20℃下30分钟后，通过过滤收集固体，用乙酸乙酯(6mL)洗涤并且在50℃和减压下干燥15hrs，得到(S)-2[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(Ic)，为白色固体，收率96.1％。该产物具有的HPLC纯度为98.6(面积％，参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc)含量为0.10％重量(参见实施例25B)。
22.2.b)J.Med.Chem.,1998,41,579的方法,方法A
按照实施例22.2.a)，由如实施例22.1.b)中所述制备的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(10mmol)和L-丙氨酰胺盐酸盐(1.37g，11mmol)，随后使用NaBH3CN(0.50g，8mmol)还原制备(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)。
得到(S)-2[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)，为白色固体，收率66.5％。该产物具有的HPLC纯度为88.5(面积％,参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)含量为0.064％重量(参见实施例25B)。按照实施例22.2.a)，通过用甲磺酸处理将(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia)转化成相应的甲磺酸盐(Ic)，收率88.9％。该产物具有的HPLC纯度为97.7(面积％，参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IIc)含量为0.05％重量(参见实施例25B)。
实施例23
根据现有技术中所述的方法制备(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰 胺,Ib)甲磺酸盐(Id)及其R-对映体(I′d)
23.1 4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)的制备
23.1.a)US 6,335,354B2实施例1a的方法
按照实施例22.1.a)，由2-氟苄基氯(14.3g，98mmol)、4-羟基苯甲醛(15.1g，123mmol)、K2CO3(51g，369mmol)、NaI(500mg，3.3mmol)乙醇75mL制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)。
将该混合物保持在回流12hrs。后处理反应混合物后，得到(2-氟苄氧基)苯甲醛，75％收率，为黄色油状物。产物具有GC的纯度是94.21(面积％,参见实施例24A)，通过G.C.测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.39％重量(参见实施例24B)。
23.1.b)J.Agric.Food Chem,27,4,1979的方法
按照实施例22.1.b)，由2-氟苄基氯(18.0g，123mmol)、4-羟基-苯甲醛(15.3g，125mmol)、NaOH(5.0g，12mmol)和乙醇(125mL)制备4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)。
将该混合物在25min内加热至回流并且在搅拌下保持在回流温度下12小时。
在按照实施例22.1.b)后处理该反应混合物后，得到4-(2-氟苄氧基)苯甲醛，为黄色固体，收率90,0％。该产物具有的GC纯度为90.4(面积％，参见实施例24A)，且通过G.C.测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)含量为0.14％重量(参见实施例24B)。
23.2 (S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)和其甲磺酸盐盐(Id)的制备
23.2.a)J.Med.Chem,1998,41,579的方法,方法A
按照实施例22.2.a)的方法，通过使用4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(10mmol，如实施例23.1a)中所述制备)而不是4-(3-氟苄氧基)苯甲醛制备(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)。
得到(S)-2[4-(2-氟苄氧基)(苯亚甲基氨基)]丙酰胺，收率67.3％，为白色固体。该产物具有的HPLC纯度为86.7(面积％，参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)含量为0.22％重量(参见实施例25B)。
将(S)-2[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(1.50g，4.96mmol)和丙-2-醇(10.5mL)的混合物加热至50℃并且保持在该温度下，直到获得澄清溶液。在搅拌下和15min内加入甲磺酸(0.48g，5.01mmol)。
然后在搅拌下和2小时内将该不均匀混合物冷却至20℃。在20℃下1小时后，通过过滤收集固体，减压干燥，得到(S)-2[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐，为白色固体，收率89.1％。该产物具有的HPLC纯度为96.9(面积％，参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(IId)含量为0.14％重量(参见实施例25B)。
23.2.b)J.Med.Chem.1998,41,579的方法,方法A
按照实施例22.2.b)，通过使用4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(10mmol，按照实施例23.1.b制备)而不是4-(3-氟苄氧基)苯甲醛制备(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)。
获得(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺，为白色固体，收率58.8％。该产物具有的HPLC纯度为83.8(面积％，参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)含量为0.15％重量(参见实施例25B)。
将(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)转化成相应的甲磺酸盐(Id)，收率89.4％，为白色固体。该产物具有的HPLC纯度为95.2(面积％，参见实施例25A)，且通过HPLC测定的(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐含量为0.11％重量(参见实施例25B)。
23.3.根据专利申请WO 2006/027052的方法制备(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)和其甲磺酸盐盐(I′d)
a)在250mL玻璃反应器中在搅拌下、在氮气气氛中、在室温下加入包含0.01％水(混合物pH＝7.30)、D-丙氨酰胺盐酸盐(3g；24mmol)(Nova Biochem A36136821)(混合物pH＝3.98)、三乙胺(2.43g；24mmol)、如所述实施例(23.1a)制备GC纯度94.21(面积％,参见实施例24A)和通过G.C测定的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.39％重量的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(5.06g,22mmol)(混合物pH＝8.60)；参见实施例24B和3A°分子筛(2.19g)的干甲醇109mL)。将该混合物加热至40℃，在该温度搅拌4h。然后使反应温度降至10℃(混合物pH 8.24)，在15min内分批加入硼氢化钠(0.42g,11 mmol)。将该反应混合物温至室温，同时在室温再搅拌6小时。过滤该反应混合物，真空蒸发至干。在60℃将残余物溶于水(80mL)和甲苯(70mL)，分离有机相，加入水(80mL)。在搅拌下将两相混合物温至60℃。分离有机相，加入水(80mL)。在搅拌下将两相混合物温至60℃。在60℃用无水硫酸钠干燥有机相。共同合并水相(溶液A,约240mL)。过滤甲苯混合物，将该溶液分批冷却至10℃。将该混合物保持在搅拌下和氮气气氛中、在10℃下3小时。过滤该混合物，用(10℃)甲苯(10mL)冷洗涤固体，在室温真空干燥，得到2.13g(7.1mmol；32％收率)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)，为白色晶体。
该产物具有98.00(面积％,参见实施例25A)HPLC纯度和通过HPLC测定的0.15％重量的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(II′b)含量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的对映体比R:S＝99.6:0.4(面积％,参见实施例26B)。
固体合并甲苯母液和甲苯洗涤液，真空、在旋转蒸发器中浓缩该溶液，得到黄色残余物(1.97g)。
将残余物溶于甲醇(30mL)，与外标对比通过HPLC定量测定存在于溶液中的已知种类(参见实施例25A):
(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)(0.81g；2.7mmol)；
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(0.16g；0.7mmol)；
4-(2-氟苄氧基)苄醇(0.53g:2.2mmol)
和其他未定量的杂质.
(I′b)HPLC纯度是28.65％(面积％,参见实施例25A)
在旋转转发器中、在真空中蒸发水溶液A至得到残余物。将残余物混悬于甲醇(30mL)，过滤，真空蒸发溶剂，得到残余物(4.5g)。将残余物溶于甲醇(30mL)，与外标对比通过HPLC定量测定存在于溶液中的已知种类(参见实施例25A):
(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)(0.69g；2.3mmol)；
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(0.07g；0.3mmol)；
4-(2-氟苄氧基)苄醇(0.06g:0.2mmol)
和其他未定量的杂质。
(I′b)HPLC纯度是53.87％(面积％,参见实施例25A)。
如上所述，产生的(I′b)总量是3.63g；12.1mmol；55％收率。物料平衡约占添加的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛的90％。
b)在室温、在搅拌下向(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺 (1.28g；4mmol)(纯度98.00％,根据步骤a得到)、(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(II′b)含量0.15％重量在乙酸乙酯(21mL)中的溶液中滴加甲磺酸(0.27mL)的乙酸乙酯(5mL)溶液。1小时后，通过过滤收集白色晶体，用乙酸乙酯(3mL)洗涤，真空干燥，得到1.40g(86％收率)标题化合物。
产物具有HPLC的纯度是99.25(面积％,参见实施例25A)和通过HPLC测定的0.07％重量的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′d)含量(参见实施例25B)。
如下大规模重复上述制备：
a1)在50L玻璃反应器中在搅拌下，在氮气气氛中，在室温下加入包含0.01％水、D-丙氨酰胺盐酸盐(589.9g；4.72mol)、三乙胺(477.8g；4.72mol)、如实施例23.1a)所述制备GC纯度93.20(面积％,参见实施例24A)和通过GC测定3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛含量是0.43％重量的(参见实施例24B)的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(1000g,4.33mol)和3A°分子筛(430.62g)的干甲醇21.43L。将该混合物加热至40℃，在该温度搅拌4小时。然后使反应温度降至10℃，在30min内分批加入硼氢化钠(82.58g,2.16mol)。将该反应混合物温至室温，同时在20±2℃再搅拌6小时。过滤该反应混合物，真空蒸发至干。在60℃将残余物溶于水(16L)和甲苯(14L)，分离有机相，加入水(16L)。在搅拌下将两相混合物温至60℃±2。通过在约60℃，在真空中共沸蒸馏干燥有机相。共同合并水相(溶液A,约50L)。将甲苯溶液分批冷却至10℃。将该混合物保持在搅拌下、在氮气气氛中、在10℃±2下4小时。过滤该混合物，用冷(10℃)甲苯(2L)洗涤滤饼，在室温展开干燥，得到393.3g(1.31mol；30.3％收率)(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)，为白色固体。
该产物具有97.70(面积％,参见实施例25A)HPLC纯度和通过HPLC测定的0.16％重量的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(II′b)含量(参见实施例25B)。
使用手性HPLC柱测定的对映体比R:S＝99.5:0.5(面积％,参见实施例26B)。
b1)在室温、在搅拌下向根据步骤a1)得到具有GC纯度97.70(面积％,参见实施例24A)和通过CG测定的0.16％重量的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(II′b)含量(参见实施例24B)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺393.3g(1.31mol)在乙酸乙酯(6.5L)中的溶液中滴加甲磺酸(83mL)的乙酸乙酯(1.5L)溶液。1小时后，通过过滤收集白色晶体，用乙酸乙酯(3mL)洗涤，真空干燥，得到420.1g(84％收率)标题化合物。
该产物具有99.15(面积％,参见实施例25A)HPLC纯度和通过HPLC测定的0.08％重量的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(II′d)含量(参见实施例25B)。
上述数据显示，即使考虑到未作为终产物从公开方法WO2006/027052(参见上述步骤a下))中回收的化合物(I′b)的量，收率也不满足化合物(I′b)的工业化规模生产。
实施例24A
4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)和4-(2-氟苄氧基)苯甲醛纯度(IVb)的GC测定。
测试制品
将约100mg样品溶于10ml二氯甲烷。
色谱条件
通过使用如下条件与如下温度程序进行色谱操作：
-60m长和0.32mm内径的熔融石英毛细管柱。RTX 35(35％二苯基-65％二甲基聚硅氧烷)薄膜厚度＝0.25μm；
-在150kPa压力下作为载气的氦；
-25ml/min的分流；
-注射温度290℃；
-检测器(FID)温度290℃；
| 时间(min) | 温度(℃) | 速率(℃/min) | 注解 |
| 0-5 | 150 | - | 等温线 |
| 5-11 | 150→240 | 15 | 线性梯度 |
| 11-19 | 240 | - | 等温线 |
| 19-20.7 | 240→290 | 30 | 线性梯度 |
| 20.7-40 | 290 | - | 等温线 |
方法
注射1μl测试制品。记录色谱图并且根据面积百分比计算来计算产物纯度。
杂质鉴定
4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa):
保留时间:
4-(3-氟苄氧基)苯甲醛保留时间约为17。
4-羟基苯甲醛相对保留时间约为0.52。
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为0.98。
4-(4-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.01。
4-苄氧基苯甲醛相对保留时间约为1.02。
3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.78。
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb):
保留时间:
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛保留时间约为17。
4-羟基苯甲醛相对保留时间约为0.53。
4-(3-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.02。
4-(4-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.03。
4-苄氧基苯甲醛相对保留时间约为1.04。
3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.81。
实施例24B
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)中3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(VIb)和4-
(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)中3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(VIa)含量的GC测定
考虑到4-(2-氟苄氧基)苯甲醛的已知相关物质为3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛并且对4-(3-氟苄氧基)苯甲醛而言为3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛。根据下列条件进行测定：
内标溶液
制备具有在二氯甲烷中1.5mg/ml浓度的3,4,5-三甲氧基苯甲醛溶液(IS)。
用于4-(2-氟苄氧基)苯甲醛中3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛测定的参比
溶液:
将约20mg 3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛参比标准品和20mg 4-(2-氟苄氧基)苯甲醛参比标准品精确称入20mL容量瓶，溶解并且使用稀释剂稀释至体积；将500μL该溶液转入5mL容量瓶，加入500μL IS溶液并且使用稀释剂稀释至体积而得到含约100μg/mL(相当于约0.10％)3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛和4-(2-氟苄氧基)苯甲醛的溶液。
用于4-(3-氟苄氧基)苯甲醛中3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛测定的参比
溶液:
将约20mg 3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛参比标准品和20mg 4-(3-氟苄氧基)苯甲醛参比标准品精确称入20mL容量瓶，溶解并且使用稀释剂稀释至体积；将500μL该溶液转入5mL容量瓶，并且加入500μL IS溶液并且使用稀释剂稀释至体积而得到含约100μg/mL(相当于约0.10％)3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛和4-(3-氟苄氧基)苯甲醛的溶液。
测试溶液:
将约500mg测试产物精确称入5mL容量瓶，并且加入500μL IS溶液并且使用稀释剂稀释至体积而得到具有约100mg/mL已知浓度的溶液。
色谱条件:
通过使用如下条件进行色谱操作：
-柱:熔融石英毛细管柱RTX 35(35％二苯基-65％二甲基聚硅氧烷)60m长，0.32mmI.D.，薄膜厚度0.25μm；
-在150kPa压力下的载体(氦)；
-分流25mL/min；
-注射温度290℃；
-检测器(FID)温度290℃；
-温度程序:在150℃等温线0-5min，从150℃到240℃以15℃/min的速率线性5-11min，在240℃等温线11-19min，从240℃到290℃以30℃/min的速率线性19-21min，在290℃等温线21-40min；
-稀释剂:二氯甲烷
-注射体积1μL。
方法:
注射空白液(稀释剂)、参比溶液、测试溶液氢记录色谱图。
在参比色谱图这验证了:
4-(2-氟苄氧基)苯甲醛保留时间约为18min；
3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.7
或
4-(3-氟苄氧基)苯甲醛保留时间约为18min；
3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛相对保留时间约为1.7
3,4,5-三甲氧基苯甲醛(IS)相对保留时间约为0.7
通过内标计算计算检验的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛中3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛或检验的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛中3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛的百分比含量。
(3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛和3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苯甲醛的定量限(LOQ)的值是0.005％重量。均被视为杂质的两者的检测限(LOD)值是0.0025％重量。
实施例25A
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia,)、其甲磺酸盐(Ic)、(S)-2-[4-(2-氟
苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib,)和其甲磺酸盐(Id)的纯度测定.
下列色谱方法适合于产物的游离碱形式(Ia)和(Ib)和甲磺酸盐(Ic)和(Id)。
稀释剂
流动相。
测试溶液
将约25mg产物精确称量入25mL容量瓶，溶解并且用稀释剂稀释至体积，得到检验已知浓度约为1.0mg/mL的溶液。
色谱条件
通过使用下列条件进行色谱方法:
-柱:Waters Symmetry C8,150x4.6mm,5μm大小；
-检测:UV 220nm；
-柱温:30℃
-流动相:包含1.0g/L辛磺酸钠的40％溶剂A+10％溶剂B+50％溶剂C；
溶剂A:缓冲溶液＝KH2PO40.05M；
溶剂B:乙腈；
溶剂C:甲醇；
-等度洗脱,运行时间:60min；
-流速:1.0mL/min；
-注射体积:10μL。
方法
注射测试溶液，记录色谱图并且通过面积百分比计算甲酸产物纯度。
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺)和相关杂质鉴定
保留时间:
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为5.5min。
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酸相对保留时间约为0.73。
(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为4.08。
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺)和相关杂质鉴定
保留时间:
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为5.5min。
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酸相对保留时间约为0.73。
(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为4.08。
相同方法和参比值用于测定R-对映体(I′a)、(I′b)、(I′c)、(I′d)和各自的外消旋混合物的纯度。
实施例25B
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱Ib和甲磺酸盐Id)中(S)-2-[3-
(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱IIb和甲磺酸盐IId)和(S)-2-[4-(3-
氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱Ia和甲磺酸盐Ic)中(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧
基)苄氨基]丙酰胺(游离碱IIa和甲磺酸盐IIc)的HPLC测定
根据下列条件测定(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐)样品中的(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐)和(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐)样品中的(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐):
用于(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺中(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄
氧基)苄氨基]丙酰胺测定的参比溶液:
将约30mg(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品和20mg(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺参比标准品精确称量入50mL容量瓶，溶解并且用稀释剂稀释至体积；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第一次稀释)；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第二次稀释)；得到包含约1.20μg/mL2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(约0.12％)和约1.00μg/mL(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(约0.10％)的溶液。
用于(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐中(S)-2-[3-(2-氟苄基)-
4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐测定的参比溶液:
将约30mg(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品和20mg(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品精确称量入50mL容量瓶，溶解并且用稀释剂稀释至体积；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第一次稀释)；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第二次稀释)；得到包含约1.20μg/mL 2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(作为甲磺酸盐约0.15％)和约1.00μg/mL(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(约0.10％)的溶液。
用于(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺中(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄
氧基)苄氨基]丙酰胺测定的参比溶液:
将约24mg(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺参比标准品和20mg(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺参比标准品精确称量入50mL容量瓶，溶解并且用稀释剂稀释至体积；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第一次稀释)；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第二次稀释)；得到包含约1.20μg/mL 2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(约0.12％)和约1.00μg/mL(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(约0.10％)的溶液。
用于(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐中(S)-2-[3-(3-氟苄基)-
4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐测定的参比溶液:
将约24mg(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺参比标准品和20mg(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品精确称量入50mL容量瓶，溶解并且用稀释剂稀释至体积；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第一次稀释)；用稀释剂将1.0mL该溶液稀释至20mL(第二次稀释)；得到包含约1.20μg/mL2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(作为甲磺酸盐约0.15％)和约1.00μg/mL(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐(约0.10％)的溶液。
测试溶液:
精确称量约25mg测试产物在25mL容量瓶中，溶解并且用稀释剂稀释至体积，得到具有已知浓度约为1.0mg/mL的溶液。
色谱条件:
通过使用下列条件进行色谱方法:
-柱:Waters Simmetry C8150x 4.6mm,5μm大小或等效物
-柱温:30℃
-流动相:包含1g/L辛磺酸钠的40％溶剂A:10％溶剂B:50％溶剂C的混合物，
溶剂A:缓冲溶液0.05M KH2PO4；
溶剂B:乙腈；
溶剂C:甲醇；
-等度洗脱；
-运行时间:60min；
-流速:1.0mL/min；
-检测:UV 220nm；
-注射体积:100μL；
-稀释剂:流动相
方法:
注射空白液(稀释剂)、参比溶液、测试溶液并且记录色谱图。
在参比色谱图验证了下列系统适合性参数:
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为5.2min；
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺峰USP的谱尾在0.8－1.5；
(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为5.1。
或
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为5.5min；
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺峰的USP谱尾在0.8－1.5；
(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为4.1。
调整流动相以得到系统适合性。
通过外标计算计算检验的(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐)样品中S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺
(游离碱和甲磺酸盐)和检验的(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐)样品中(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱和甲磺酸盐)的百分比含量。
相应(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺和(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺中(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺和(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺的定量限(LOQ)值是0.004％重量。
相应(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐和(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐中(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐和(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的定量限(LOQ)值是0.005％重量。所有考虑的杂质的检测限的值是0.001％重量。
相同方法和参比值用于测定R-对映体(I′a)、(I′b)、(I′c)、(I′d)和各自的外消旋混合物中C,O-二苄化杂质(II′a)、(II′b)、(II′c)、(II′d)和各自的外消旋混合物。
实施例26A
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ib)及其甲磺酸盐(Id)的HPLC对映体纯
度测定
通过HPLC评价样品的对映体纯度。根据下列条件进行测定:
标准溶液1:
将约5.3mg(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标 准品溶于25mL流动相。
标准溶液2:
将约8.0mg(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品和0.2mL标准溶液1溶于50mL流动相。
相对于(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐浓度计算的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的浓度约为0.5％。
测试溶液1和2:
一式两份，将约8.0mg测试产物溶于50mL流动相。
色谱条件:
-柱:Chiralpak WH 250mm x 4.6mm,I.D.5μm；
-柱温:45℃；
流动相:0.25mM CuSO4(将约40mg CuSO4精确称量入1000mL水)/MeOH 60/40；
等度洗脱；
-流速:1.0mL/min；
-检测:UV 230nm；
-注射体积:10μL；
-运行时间:15min.
方法:
分析空白(流动相)一次、标准溶液2两次、测试溶液1和2一次并且验证:
-就标准注射液而言，(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐面积百分比的参比标准品测定百分比RSD％小于2.0％；
-就标准品和样品溶液而言，每次注射均包括平均值±0.1％的主峰面积百分比。
将(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐含量(面积百分比)计算为两次测定的平均值。
保留时间:
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为5.7min。(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为1.7。
该方法还用于测定相应外消旋(R,S)化合物(Ib,I′b)和(Id,I′d)的S-异构体比。
实施例26B
(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)及其甲磺酸盐(I′d)的HPLC对映体 纯度测定
通过HPLC评价样品的对映体纯度。根据下列条件进行测定:
标准溶液1:
将约5.3mg(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品溶于25mL动相。
标准溶液2:
将约8.0mg(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐参比标准品和0.2mL标准溶液1溶于50mL流动相。
相对于(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐浓度计算的(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐的浓度约为0.5％。
测试溶液1和2:
一式两份，将约8.0mg测试产物溶于50mL流动相。
色谱条件:
-柱:Chiralpak WH 250mm x 4.6mm,I.D.5μm；
-柱温:45℃；
流动相:0.25mM CuSO4(将约40mg CuSO4精确称量入1000mL水)/MeOH 60/40；
等度洗脱；
-流速:1.0mL/min；
-检测:UV 230nm；
-注射体积:10μL；
-运行时间:15min.
方法:
分析空白(流动相)一次，标准溶液2两次，测试溶液1和2一次并且验证:
-就标准注射液而言，(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐面积百分比RSD％小于2.0％；
-就标准品和样品溶液而言，每次注射均包括平均值±0.1％的主峰面积百分比。
将(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐含量(面积百分比)计算为两次测定的平均值。
保留时间:
(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为9,69min.
(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为0.58。
该方法还用于测定相应外消旋(R,S)化合物(Ib,I′b)和(Id,I′d)的R异构体比。
实施例27A
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(Ia,)其甲磺酸盐(Ic)的HPLC对映体纯度
测定
通过HPLC评价样品的对映体纯度。根据下列条件进行测定:
测试溶液:
将约10mg测试样品溶于10mL流动相。
色谱条件:
-柱:Chiralpak WH 250mm x 4.6mm,I.D.10μm；
-柱温:50℃；
流动相:0.25mM CuSO4
等度洗脱；
-流速:1.0mL/min；
-检测:UV 200nm；
-注射体积:10μL；
-运行时间:30min.
方法:
注射测试溶液并且将对映体百分比计算为面积％。
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为9.2min。
(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为1.9。
该方法还用于测定相应外消旋(R,S)化合物(Ia,I′a)和(Ic,I′c)的S-异构体比。
实施例27B
(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′a)和其甲磺酸盐(I′c)的HPLC对映体 纯度测定
通过评价样品的对映体纯度。根据下列条件进行测定:
测试溶液:
将约10mg测试样品溶于10mL流动相。
色谱条件:
-柱:Chiralpak WH 250mm x 4.6mm,I.D.10μm；
-柱温:50℃；
流动相:0.25mM CuSO4
等度洗脱；
-流速:1.0mL/min；
-检测:UV 200nm；
-注射体积:10μL；
-运行时间:30min.
方法:
注射测试溶液并且将对映体百分比计算为面积％。
(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺保留时间约为17.48min。
(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺相对保留时间约为0.56。该方法还用于测定相应外消旋(R,S)化合物(Ia,I′a)和(Ic,I′c)的R异构体比。
实施例27C
(S)和(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱IIb和甲磺
酸盐IId)的HPLC对映体纯度测定
测试溶液
在20mL容量瓶中精密称重约20.0mg检验物质，溶解并且用流动相稀释至体积。
色谱条件：
使用如下条件进行色谱方法:
柱:
CHIRALPAK AD-H 25cm x 4.6mm
流动相:
80％溶剂A:正-己烷
20％溶剂B:正-乙醇
0.3％二乙胺(DEA)
流速:
0.8mL/min
检测:
在240nm的UV
注射体积:
10μL
运行时间:
20min
方法
注射样品溶液并且记录色谱图。
将对映体百分比计算为面积％
对映体S:RT＝7.298
对映体R:RT＝7.617
RT比＝1.04
该方法还用于测定相应外消旋化合物(IIb,II′b)和(IId,II′d)的S/R异构体比。
实施例27D
(S)和(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(游离碱IIa和甲磺
酸盐IIc)的HPLC对映体纯度测定
测试溶液
在20mL容量瓶中精密称重约20.0mg检验物质，溶解并且用流动相稀释至体积。
色谱条件
使用如下条件进行色谱方法:
柱:
CHIRALPAK AD-H 25cm x 4.6mm
流动相:
80％溶剂A:正-己烷
20％溶剂B:正-乙醇
0.3％二乙胺(DEA)
流速:
0.8mL/min
检测:
在240nm的UV
注射体积:
10μL
运行时间:
20min
方法
注射样品溶液并且记录色谱图。
将对映体百分比计算为面积％
对映体S:RT＝8.211
对映体R:RT＝8.714
RT比＝1.061
该方法还用于测定相应外消旋化合物(IIa,II′a)和(IIc,II′c)的R/S异构体比。
实施例28
细胞色素P450测定
使用在CYP代谢时变成荧光(Gentest Kit测定法)的特异性底物测定涉及药物代谢的五种最重要细胞色素P450同种型(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)的抑制。
在含孵育/NADPH再生缓冲液的96-孔平板中测试化合物。加入特异性人重组同工酶和底物并且在37℃下就CYP1A2/CEC而言孵育15分钟，就CYP2E1/MFC而言孵育40分钟，就CYP2C9/MFC而言孵育45分钟并且就其他CYP450而言孵育30分钟。
特异性底物如下：3-氰基-7-乙氧基香豆素(CYP2C19和CYP1A2),
7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素(CYP2C9)，3[2(N,N-二乙基-N-甲氨基)乙基]-7-甲氧基-4-香豆素(CYP2D6)，苄基苯基香豆素(CYP3A4)。
用Victor平板读出器(Perkin Elmer)在适当发射/激发波长处读取平板并且测定IC50(抑制50％酶活性的浓度)。将结果报道在表1和2中。
实施例29
人神经母细胞瘤细胞系SH-SY-5Y中的细胞毒性测定
在0时，将细胞以1.104/cm2接种在96孔平板的DMEM生长培养基+10％热灭活的FBS+2mM l-谷氨酰胺+100U/mL-100μg/mL青霉 素/链霉素中。
在亚融合生长期时72小时后，除去培养基并且将细胞在37℃下和含或不含测试化合物(20μl，至少5个浓度，一式三份)的180μl神经基础培养基+2mM l-谷氨酰胺(LifeTechonologies)中孵育24小时。
在孵育结束时，将20μl Alamar Blue染料(AlamarBlueTM Assay Kit，Promega)直接加入到细胞培养基中。
4小时后，通过使用Tecan Spectrafluor平板读出器测定在530nm激发和595nm发射时的荧光评价细胞毒性。
在处理前和结束时，用与图像分析仪(Image Pro Plus，5.1)配对的Olympus IX70倒置光学显微镜以显微方式监测培养物以便评价细胞形态。
将结果在表1中表示为诱导50％死亡率的浓度。
实施例30
转染CHO细胞系中的HERG电流
测试在稳定表达重组HERG通道的CHO细胞中的HERG电流抑制。
为了评价测试化合物对HERG电流的作用，在-80mV下固定细胞，去极化至0mV 5秒，从而激活HERG电流并且在5秒过程中复极化至-50mV，以使HERG尾电流失活。以0.06Hz的频率重复该操作。在接触测试化合物前和之后测定复极化(HERG尾电流)时的电流振幅。
将电流抑制率计算为在外部浴灌注期结束时测定的HERG尾电流振幅与在测试化合物灌注期(达到稳态自由时)结束时测定的HERG尾电流振幅之差除以对照组HERG尾电流。
通过绘制紧张性阻滞与药物浓度的示意图获得药物浓度-抑制曲线。根据逻辑方程使剂量-响应曲线与紧张性阻滞数据拟合：y＝A2+(A1-A2)/[1+(x/IC50)p]。A1和A2为相当于0和100％电流抑制率的0和1值，x为药物浓度，IC50为导致50％电流抑制率的药物浓度，且p为相应的斜率因子。将结果报道在表1中。
实施例31
小鼠的最大电休克试验(MES)
最大电休克试验(MES)常用于在啮齿动物模型中筛选抗癫痫药。
动物和设备：使用体重为25g的雄性CD1小鼠。遵循White等人(White H.S.,Woodhead J.H.,Franklin M.R.,Swinyard E.A.，和Wolf H.H.Antiepileptic Drugs(1995)第4版:99-110,Raven Press,Ltd.,New York)所述的方法。使用Ugo Basile电惊厥发生器(Model ECT UNIT 7801)递送足以在至少97％对照组动物中产生后肢紧张性伸肌应答的电刺激。通过夹钳电极经耳部在小鼠中递送刺激(0.7秒40mA电击，其中脉冲串80Hz，具有的脉冲持续时间为0.4ms)。检验在MES诱导前15-60分钟通过腹膜内或口服给予的化合物的急性作用并且与载体对照组比较。每组研究10只小鼠。将癫痫发作的后肢紧张性伸肌部分的完全抑制视为抗惊厥活性的证据。
以3-30mg/kg的剂量通过口服或腹膜内给予本发明的化合物。
在表3和4中将结果表示为预防％。
本发明涉及如下的发明。
1.制备高纯度式(Ia)的2-[4-(3-或2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺化合物的方法，所述化合物选自式Ia的(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺)、式(Ib)的(S)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺)
沙非酰胺(Ia):3-F
拉非酰胺(Ib):2-F
各自的R-对映体(I′a)和(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)及其与药学可接受的酸形成的盐，其中沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐具有各自的杂质(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)、(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)、
各自的R-对映体(II′a)或(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)，其特征在于式(IIIa)、(IIIb)、
(IIIa):3-F
(IIIb):2-F
各自的R-对映体(III′a)或(III′b)或各自的外消旋混合物(IIIa,III′a)或(IIIb,III′b)的希夫碱中间体通过4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与L-丙氨酰胺或D-丙氨酰胺或其外消旋混合物的亚氨基烷基化反应得到，在该亚氨基烷基化反应完成后，与选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原剂在选择量的选自C1-C5低级链烷醇类或其混合物的有机溶剂中，任选含有少量水中进行还原反应，其中所述有机溶剂与所述希 夫碱之比使得在还原反应的大部分过程中形成和存在所述希夫碱进入同一有机溶剂的所述希夫碱饱和溶液中的悬浮液，并且范围在0.5L－3.0L、优选0.7L－2.5L、最优选0.8L－2.0L/每摩尔希夫碱，其中得到游离碱形式的沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)或(Ib,I′b)，任选所述游离碱形式被药学可接受的酸转化成其盐。
2.项1的方法，其特征还在于用于制备希夫碱中间体(IIIa)、(IIIb)、(III′a)、(III′b)或各自的外消旋混合物(IIIa,III′a)或(IIIb,III′b)的4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料具有低于0.03％、优选低于0.01％重量的3-(3-或2-氟苄基)-4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛杂质含量。
3.如项1和2任一项的方法，其中所述还原剂是硼氢化钠且所述有机溶剂选自甲醇、乙醇和2-丙醇，且优选甲醇，任选存在少量的水。
4.如项1－3任一项的方法，其中在任意加成硼氢化钠或硼氢化钾之前将反应混合物的pH调整至7－9。
5.如项1－4任一项的方法，其中所述还原剂相对于所述希夫碱中间体的摩尔量之比在0.5－1.4。
6.如项1－5任一项的方法，其中所述还原反应温度在-10℃－30℃、优选5℃－15℃。
7.如项1－6任一项的方法，其中所述药学可接受的酸是甲磺酸。
8.如项1－7任一项的方法，其中通过下列步骤制备式(IIIa)、(IIIb)、(III′a)、(III′b)或各自的外消旋混合物的希夫碱中间体：在有机溶剂的存在下，用L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物使4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)或4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)
(IVa):3-F(IVb):2-F
进行亚氨基烷基化，所述有机溶剂选自(C1-C5)低级链烷醇类，所述有机溶剂的用量相对于所述醛(IVa)或(IVb)能够形成所述希夫碱在同一溶剂中所述希夫碱的饱和溶液中的悬浮液。
9.项8的方法，其中在碱的存在下，L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物作为其酸加成盐使用，所述碱的用量足以使L-丙氨酰胺、D-丙氨酰胺或其外消旋混合物从其盐中游离。
10.如项1－9任一项的方法，其中所述希夫碱中间体与所述还原剂进行的还原反应在下述反应条件下在同一反应混合物上进行，该反应混合物由亚氨基烷基化反应完成而产生的，所述反应条件引起所述希夫碱中间体沉淀由得到所述中间体在同一反应溶剂中的悬浮液。
11.如项1－9任一项的方法，其中在进行与所述还原剂的还原反应前分离由亚氨基烷基化反应完成而产生的所述希夫碱中间体。
12.如项1－11任一项的方法，其中在反应过程中将硼氢化钠或硼氢化钾分批、优选再分成小部分以固体形式或通过添加氢氧化钠或氢氧化钾的稳定的甲醇溶液的形式加入到所述希夫碱和所述反应溶剂的混合物中。
13.项1－12任一项的方法，其中用于制备希夫碱中间体(IIIa)(IIIb)、(III′a)、(III′b)或各自的外消旋混合物的4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)或4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)原料是通过分别用3-氟苄基或2-氟苄基烷基化试剂(Va)或(Vb)使4-羟基苯甲醛烷基化制备的，
(Va):3-F
(Vb):2-F
其中Y是离去基包括Cl、Br、I、OSO2CH3和OSO2-C6H4-pCH3，该反应在碱的存在下进行，并且任选进行结晶，然后用于连续反应步骤，得到4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料(IVa)或(IVb)，其中3-(3-或2-氟苄基)-4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛杂质的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量。
14.如项13的方法，其中Y是Cl。
15.如项13和14任一项的方法，其中通过将惰性有机非溶剂加入到4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)或4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)在惰性有机溶剂中的溶液中进行所述结晶。
16.如项15的方法，其中惰性有机非溶剂选自低级脂族烃类且惰性有机溶剂选自芳族烃类。
17.如项16的方法，其中低级脂族烃是正己烷且芳族烃是甲苯。
18.如项13的方法，其中通过将4-(3-氟苄氧基)苯甲醛(IVa)或4-(2-氟苄氧基)苯甲醛(IVb)在回流下溶于热溶剂，优选环己烷或二(C3-C4)烷基醚，最优选二异丙基醚，然后在室温，优选在10-15℃冷却该溶液进行结晶。
19.如项13－18任一项的方法，其中烷基化反应在相转移条件下进行。
20.如项19的方法，其中在相转移条件下进行的烷基化在固/液体系统中进行，其中将试剂和相转移催化剂溶于液体有机相，且固相由无机碱或4-羟基苯甲醛与所述无机碱形成的盐构成。
21.如项19的方法，其中在相转移条件下进行的烷基化在液/液体系统中进行，其中将式(Va)或(Vb)的烷基化试剂3-氟苄基或2-氟苄基衍生物溶于液体有机相，并且将4-羟基苯甲醛作为与无机碱形成的盐溶于水相。
22.如项19－21任一项的方法，其中相转移催化剂选自季铵、磷 
盐和低分子量聚乙二醇类。
23.如项22的方法，其中相转移催化剂的使用量在0.02－1摩尔/摩尔4-羟基苯甲醛。
24.如项23的方法，其中相转移催化剂的量在0.1－1摩尔/摩尔4-羟基苯甲醛。
25.如项20－24任一项的方法，其中液体有机相的有机溶剂选自二烷基醚类和芳族烃类。
26.如项20－25任一项的方法，其中式(Va)或(Vb)的烷基化试剂与4-羟基苯甲醛的摩尔比为0.6－1.5。
27.如项20－26任一项的方法，其中温度为60℃－160℃。
28.如项20－27任一项的方法，其中无机碱选自Na2CO3、K2CO3、NaOH和KOH，温度在80℃－120℃，且式(Va)或(Vb)的烷化剂与4-羟基苯甲醛之比为0.9－1.1。
29.如项1－28任一项的方法，其中沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)和(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐具有各自的杂质(S)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIa)、(S)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(IIb)、
各自的R-对映体(II′a)或(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％，优选低于0.01％(重量)，其中与药学可接受的酸形成的盐是与甲磺酸形成的盐。
30.如项29的方法，其中药学可接受的酸是甲磺酸且式(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b) 的各自的杂质作为与甲磺酸形成的盐的含量低于0.01％(重量)。
31.分离的希夫碱(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′a)或(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)亚苄氨基]丙酰胺(III′b)。
32.根据项1－30任一项的方法得到的高纯度沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)、(I′b)或各自的外消旋混合物(Ia,I′a)或(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐，用作药物，其中式(IIa)、(IIb)、(II′a)或(II′b)或各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的各自的杂质的含量低于0.03％，优选低于0.01％(重量)。
33.项32的高纯度沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)、(I′b)和各自的外消旋混合物或其与药学可接受的酸形成的盐，用作药物，其中与药学可接受的酸形成的盐是与甲磺酸形成的盐，且式(IIa)、(IIb)、(II′a)(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与甲磺酸形成的盐的各自的杂质的含量低于0.01％重量。
34.根据项1－30任一项的方法得到的高纯度(i)沙非酰胺、其R-对映体，其外消旋混合物或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐，或(ii)拉非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐在制备药物中的应用，其中式(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的各自的杂质含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)，所述药物在不干扰CYP450系统的细胞色素，特别是CYP3A4、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9并且不显示HERG通道阻断特性的条件下，分别用于治疗如下疾病：(i)癫痫症、帕金森病、阿尔茨海默病、抑郁症、多动腿综合征、疼痛和偏头痛；(ii)疼痛疾病，包括慢性疼痛和神经性疼痛、偏头痛，双相型障碍、抑郁症、心血管疾病、炎症、泌尿生殖器疾病、代谢性疾病和胃肠道病症。
35.项34的高纯度沙非酰胺、沙非酰胺的R-对映体、拉非酰胺、拉非酰胺的R-对映体、各自的外消旋混合物或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗被分类 为弱代谢者(PM)的患者的在所述项33中指定的病症或所述药物用于治疗性处置同时服用其它药物的患者的疾病，所述其他药物已知干扰CYP450系统的细胞色素和/或已知具有HERG通道阻断特性。
36.高纯度拉非酰胺的单一R-对映体或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐在制备药物中的应用，其中式(II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的杂质低于0.03％，优选低于0.01％(重量)，所述药物在不干扰CYP450系统的细胞色素，特别是CYP3A4、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9并且不显示HERG通道阻断特性的条件下用于选择性治疗患者的病理性病变，其中钠和/或钙通道机制起病理学作用，例如疼痛、偏头痛、侵害全部身体系统的炎症性过程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖病症，所述患者患有所述病症的任意种。
37.项36的高纯度拉非酰胺的单一R-对映体或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗被分类为弱代谢者(PM)的患者的在所述项36中或所述药物用于治疗性处置同时服用其它药物的患者的疾病，所述其他药物已知干扰CYP450系统的细胞色素和/或已知具有HERG通道阻断特性。
38.药物制剂，包含根据项1－30任一项的方法得到的高纯度沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)或(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐，其中式(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的各自的杂质的含量低于0.03％，优选低于0.01％(重量)。
39.项38的药物制剂，除包含高纯度沙非酰胺、拉非酰胺、各自的R-对映体(I′a)或(I′b)、各自的外消旋混合物(Ia,I′a)或(Ib,I′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐外，还包含一种或多种其他活性剂，其中式(IIa)、(IIb)、(II′a)、(II′b)、各自的外消旋混合物(IIa,II′a)或(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的各自的杂质的含量低于0.03％，优选低于0.01％(重量)。
40.项39的包含高纯度沙非酰胺或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的药物制剂，，其中其他活性剂是多巴胺激动药和/或左旋多巴和/或儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂，优选左旋多巴。
41.项39的包含高纯度拉非酰胺或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐的药物制剂，其中其他活性剂是加巴喷丁或普瑞巴林或其药学可接受的酸加成盐。
42.药物制剂，用于选择性治疗其中钠和/或钙通道机制起病理学作用的病理性病变，例如疼痛、偏头痛、侵害全部身体系统的炎症性过程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖器病症，该制剂包含：高纯度的拉非酰胺的单一对映体(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐，其具有杂质(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(II′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)，任选与另外的活性剂联用。
43.项42的组合物或其与甲磺酸形成的盐，用于治疗疼痛疾病，包括慢性疼痛和神经性疼痛，该组合物可以任选包含另外的选自加巴喷丁和加巴喷丁相关物质的活性剂。
44.高纯度沙非酰胺的R-对映体(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′a)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐，其中杂质(R)-2-[3-(3-氟苄氧基)-4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)。
45.高纯度拉非酰胺R-对映体(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(I′b)或其与药学可接受的酸、优选甲磺酸形成的盐，其中杂质(R)-2-[3-(2-氟苄氧基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)。
46.治疗患者的CNS病症，特别是癫痫症、帕金森病、阿尔茨海默 病、抑郁症、多动腿综合征、疼痛和偏头痛的方法，所述患者患有任意所述病症，该方法包括对有此需要的患者给予有效量的根据项1－30任一项制备的高纯度沙非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐，其具有各自的二苄基衍生物(IIa)、(II′a),其外消旋混合物(IIa,II′a)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％，优选低于0.01％重量。
47.治疗患者的疼痛疾病的方法，所述疼痛疾病包括慢性疼痛和神经性疼痛、偏头痛，双相型障碍、抑郁症、心血管疾病、炎症、泌尿生殖器疾病、代谢性疾病和胃肠道病症，所述患者患有任意所述病症，该方法包括对有此需要的患者给予有效量的根据项1－30任一项制备的高纯度拉非酰胺、其R-对映体、其外消旋混合物或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐，其具有二苄基衍生物(IIb)、(II′b)、其外消旋混合物(IIb,II′b)或其与药学可接受的酸，优选甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％重量。
48.选择性治疗患者的病理性病变的方法，在所述病理性病变中，钠和/或钙通道机制起病理学作用，例如疼痛、偏头痛、侵害全部身体系统的炎症性过程、侵害皮肤和相关组织的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖器病症，所述患者患有任意所述病症，所述治疗在其中治疗活性基本上不含任何MAO抑制副作用或显示显著减少的MAO抑制副作用的条件下进行，该方法包括对有此需要的患者给予治疗有效量的根据项1－30任一项制备的拉非酰胺的单一R-对映体(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺或其与药学可接受的酸形成的盐，优选与甲磺酸形成的盐，其具有杂质(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐、优选与甲磺酸形成的盐的含量低于0.03％、优选低于0.01％(重量)。
49.如项46－48任一项的方法，其中所述患者被分类为弱代谢者(PM)或同时服用其它药物的患者，所述其他药物已知干扰CYP450系统的细胞色素。
Claims (24)
1.(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中沙非酰胺R-对映体(I′a)、拉非酰胺R-对映体(I′b)、或其与药学可接受的酸形成的盐具有各自的杂质(R)-2-[3-(3-氟苄基)-4-(3-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(II′a)、(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)-苄氨基]丙酰胺(II′b)、或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％重量，并通过如下的方法获得，该方法的特征在于式(III′a)或(III′b)的希夫碱中间体
(i)通过4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛与D-丙氨酰胺的亚氨基烷基化反应得到，其中不添加任何分子筛，该反应在选自C1-C5低级链烷醇类的溶剂中、在20℃－30℃的温度下进行，这种溶剂相对于所述醛的量能够形成所述希夫碱在所述希夫碱的同一溶剂的饱和溶液中的悬浮液；和
(ii)在该亚氨基烷基化反应完成后，与选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原剂在选择量的选自C1-C5低级链烷醇类或其混合物的有机溶剂中，任选含有少量的水，进行还原反应，其中所述有机溶剂与所述希夫碱之比范围在0.5L－3.0L/摩尔希夫碱；
(iii)该方法的特征还在于用于制备希夫碱中间体(III′a)、(III′b)的4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛原料具有的3-(3-或2-氟苄基)-4-(3-或2-氟苄氧基)苯甲醛杂质的含量低于0.03％重量，
由此得到游离碱形式的沙非酰胺R-对映体(I′a)、拉非酰胺R-对映体(I′b)，任选所述游离碱形式用药学可接受的酸转化成其盐；
其中所述(a)沙非酰胺R-对映体用于治疗患者的如下疾病(a)：(a)癫痫症、帕金森病、阿尔茨海默病、抑郁症、多动腿综合征、疼痛和偏头痛；和所述(b)拉非酰胺R-对映体用于治疗患者的如下疾病(b)：(b)疼痛疾病、偏头痛、双相型障碍、抑郁症、心血管疾病、炎症、泌尿生殖器疾病、代谢性疾病和胃肠道病症，
其中，所述患者为被分类为弱代谢者(PM)的患者、或同时服用其他药物的患者，所述其他药物已知干扰CYP450系统的细胞色素和/或已知具有HERG通道阻断特性。
2.根据权利要求1的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中各自的杂质式(II′a)、(II′b)、或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.01％重量。
3.根据权利要求1的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中药学可接受的酸是甲磺酸。
4.根据权利要求1的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其为沙非酰胺R-对映体(I′a)，或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，所述药物与一种或者多种帕金森病活性剂联合用于治疗帕金森疾病，所述一种或者多种帕金森病活性剂是多巴胺激动药和/或左旋多巴和/或儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂。
5.根据权利要求4的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，所述药物与左旋多巴联合用于治疗帕金森病。
6.根据权利要求1的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其为拉非酰胺R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，所述药物与加巴喷丁或普瑞巴林联合用于治疗疼痛疾病。
7.根据权利要求5的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中所述药学可接受的酸是甲磺酸。
8.根据权利要求6的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中所述药学可接受的酸是甲磺酸。
9.根据权利要求1的(a)式(I′a)的(R)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(沙非酰胺R-对映体)、或者(b)式(I′b)的(R)-2-[4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(拉非酰胺R-对映体)、或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中所述疼痛疾病选自慢性疼痛和神经性疼痛。
10.高纯度拉非酰胺的R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐在制备药物中的应用，其中杂质式(II′b)的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺或其与药学可接受的酸形成的盐低于0.03％重量，所述药物用于选择性治疗患者的病理性病变，其中钠和/或钙通道机制起病理学作用，所述病变选自疼痛、偏头痛、炎性疾病、侵害皮肤的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖病症，并且
其中，所述患者被分类为弱代谢者(PM)或、同时服用其他药物的患者，所述其他药物已知干扰CYP450系统的细胞色素和/或已知具有HERG通道阻断特性，
所述拉非酰胺的R-对映体(I’b)或其与药学可接受的酸形成的盐通过如下的方法获得，该方法的特征在于式(III′b)的希夫碱中间体(i)通过4-(2-氟苄氧基)苯甲醛与D-丙氨酰胺的亚氨基烷基化反应得到，其中不添加任何分子筛，该反应在选自C1-C5低级链烷醇类的溶剂中、在20℃－30℃的温度下进行，这种溶剂相对于所述醛的量能够形成所述希夫碱在所述希夫碱的同一溶剂的饱和溶液中的悬浮液；和
(ii)在该亚氨基烷基化反应完成后，与选自硼氢化钠和硼氢化钾的还原剂在选择量的选自C1-C5低级链烷醇类或其混合物的有机溶剂中，任选含有少量的水，进行还原反应，其中所述有机溶剂与所述希夫碱之比范围在0.5L－3.0L/摩尔希夫碱；
(iii)该方法的特征还在于用于制备希夫碱中间体(III′b)的4-(2-氟苄氧基)苯甲醛原料具有的3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苯甲醛杂质的含量低于0.03％重量，
由此得到游离碱形式的拉非酰胺R-对映体(I′b)，任选所述游离碱形式用药学可接受的酸转化成其盐。
11.根据权利要求10的高纯度拉非酰胺的R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的应用，其中杂质式(II′b)的(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.01％重量。
12.根据权利要求10的高纯度拉非酰胺的R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的应用，其中药学可接受的酸是甲磺酸。
13.药物制剂，其包含根据权利要求1定义的方法获得的高纯度的沙非酰胺R-对映体(I′a)、拉非酰胺R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐，其中各自的杂质式(II′a)、(II′b)，或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％重量。
14.根据权利要求13的药物制剂，其中各自的杂质式(II′a)、(II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.01％重量。
15.根据权利要求13的药物制剂，其中所述药学可接受的酸是甲磺酸。
16.根据权利要求13-15任一项的药物制剂，除包含高纯度沙非酰胺R-对映体(I′a)、拉非酰胺R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐之外，还包含一种或多种其他活性剂。
17.根据权利要求16的药物制剂，其包含高纯度沙非酰胺R-对映体(I′a)或其与药学可接受的酸形成的盐和作为其他活性剂的多巴胺激动药和/或左旋多巴和/或儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂。
18.根据权利要求17的药物制剂,其中药学可接受的酸是甲磺酸，杂质式(II’a)或其与药学可接受的甲磺酸形成的盐的含量低于0.01％(重量),并且其他活性剂是左旋多巴。
19.权利要求16的药物制剂，其包含高纯度拉非酰胺R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的和作为其他活性剂的加巴喷丁或普瑞巴林或其药学可接受的酸加成盐。
20.根据权利要求13的药物制剂，其包含：高纯度的拉非酰胺的R-对映体(I′b)或其与药学可接受的酸形成的盐，其具有杂质(R)-2-[3-(2-氟苄基)-4-(2-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺(II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.03％(重量)，任选与另外的活性剂联合用于在患者中治疗其中钠和/或钙通道机制起病理学作用的病理性病变，所述病变选自疼痛、偏头痛、炎性疾病、侵害皮肤的疾病、呼吸系统疾病、免疫和内分泌系统疾病、胃肠道和泌尿生殖器病症，
其中，所述患者为被分类为弱代谢者(PM)、或同时服用其他药物的患者，所述其他药物已知干扰CYP 450系统的细胞色素和/或已知具有HERG通道阻断特性。
21.根据权利要求20的药物制剂，其中杂质(II′b)或其与药学可接受的酸形成的盐的含量低于0.01％重量。
22.根据权利要求20的药物制剂，其中所述药学可接受的酸是甲磺酸。
23.权利要求20-22任一项的药物制剂，用作治疗疼痛疾病的药物，与选自加巴喷丁和普瑞巴林的另外的活性剂联用。
24.权利要求23的药物制剂，其中所述疼痛选自慢性疼痛和神经性疼痛。
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