JP2014117282A - 小胞内のポリヌクレオチドを含む乳がん診断用組成物及びキット、並びにそれを利用した乳がん診断方法 - Google Patents
小胞内のポリヌクレオチドを含む乳がん診断用組成物及びキット、並びにそれを利用した乳がん診断方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014117282A JP2014117282A JP2013261775A JP2013261775A JP2014117282A JP 2014117282 A JP2014117282 A JP 2014117282A JP 2013261775 A JP2013261775 A JP 2013261775A JP 2013261775 A JP2013261775 A JP 2013261775A JP 2014117282 A JP2014117282 A JP 2014117282A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hsa
- mir
- integrin
- breast cancer
- microrna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
【解決手段】乳がん診断用組成物及びキット、それを利用した乳がん診断方法及び乳がん診断に必要な情報を得る方法に係り、該組成物またはキットは、小胞内のhsa−miR−126、hsa−miR−23a、hsa−miR−24、hsa−miR−19b、hsa−miR−103、hsa−miR−142−3p、hsa−miR−144、hsa−miR−15a、hsa−miR−185、hsa−miR−93及びhsa−miR−30cからなる群から選択されるマイクロRNA(miRNA)、または前記マイクロRNAの断片と、同一または相補的な配列を有する一つ以上のポリヌクレオチドを含む。
【選択図】図2A
Description
(1)乳がん関連マイクロベシクルの表面タンパク質マーカーのスクリーニング
乳がんではない良性腫瘍患者(非乳がん患者)20人と、乳がん患者(乳がん、第2ステージ内腔(luminal)B型)22人から、8ml〜10mlの血液をBDバキュテイナ(Vacutainer(登録商標))プラスプラスチック全血チューブへ採取した。それぞれの血液試料を、4℃で1,300xgで10分間遠心分離して血漿を得て、その後に使用する前まで−80℃で保管した。使用前、血漿を溶かし、約4℃で約3,000xgで5分間遠心分離し、血漿内脂質及び細胞残余物を除去し、上澄み液を下記実験に使用した。
それぞれの良性腫瘍保有者及び乳がん患者から得られたされたCD83、ERBB2またはFASLタンパク質発現マイクロベシクルの量を確認するために、抗CD83抗体、抗ERBB2抗体または抗FASL抗体が接合された免疫ビーズを使用して、実施例1(1)の血漿からマイクロベシクルを分離し、分離したマイクロベシクルの量を、CD9タンパク質(マイクロベシクルマーカー)に特異的に結合する抗CD9抗体(ノバスバイオロジカルズ(Novus Biologicals))を使用して免疫ブロッティングで確認した。
実施例1(2)に記載されているように、抗CD83抗体が接合された免疫ビーズを使用して、血漿からマイクロベシクルを分離し、マイクロベシクルから、miRNeasyミニキット(キアゲン(Qiagen))を使用して、メーカーのプロトコルに従ってマイクロRNAを分離した。
実施例1(2)及び実施例(3)に記載されているように、マイクロベシクルの表面タンパク質CD83及びマイクロRNAの量を利用して、乳がんを診断する場合、予測正確性、AUC(area under the curve;曲線下面積)及びp値計算し、それを表2に示した。良性患者群20人と、乳がん患者群22人から収得した試料を使用した。予測正確性(予測正確度)は、乳がんまたは良性腫瘍を有する患者であるとの推定と、乳がんまたは良性腫瘍を有する患者であるとの事実とがどの程度一致するかということを意味する。また、AUCが0.8以上である場合、特に優秀な効果を提供するとみなされる。
(1)得られたマイクロベシクル中のインテグリンβタンパク質の定量及び受信者操作特性(receiver operating characteristics;ROC)分析
実施例1(2)に記載されているように、血漿から分離されたマイクロベシクルをLDSローディングバッファー(インビロジェン)に再懸濁し、100℃で10分間加熱し、免疫ビーズに結合されたマイクロベシクルを溶解させた。マイクロベシクルの溶解物を電気泳動し、抗CD83抗体、抗ERBB2抗体または抗FASL抗体と接合された免疫ビーズに結合したマイクロベシクルのタンパク質を分析した。
定量的RT−PCRを用いて実施例1(3)で得られたCp値と、抗CD83抗体が接合された免疫ビーズを使用して分離されたマイクロベシクルを免疫ブロッティングにより実施例2(1)で得たインテグリンβ測定バンド強度とを変数として、ロジスティック回帰分析を行い、インテグリンβのAUCと、マイクロRNAのAUCとの組み合わせを得た。
Claims (20)
- (a)小胞内のhsa−miR−126、hsa−miR−23a、hsa−miR−24、hsa−miR−19b、hsa−miR−103、hsa−miR−142−3p、hsa−miR−144、hsa−miR−15a、hsa−miR−185、hsa−miR−93及びhsa−miR−30cからなる群から選択されるマイクロRNA(miRNA)または前記マイクロRNAの断片と、同一または相補的な配列を有する一つ以上のポリヌクレオチドと、
(b)下記(i)〜(iii)のいずれか1つ以上と、を含む乳がん診断用組成物;
(i)前記小胞に特異的に結合する物質、(ii)前記小胞の脂質二重層に入り込むことができる物質、(iii)インテグリンタンパク質またはその断片に対して特異的に結合することができる物質。 - 前記小胞は、マイクロベシクルまたはエキソソームである、請求項1に記載の組成物。
- 前記小胞に特異的に結合する物質は、前記小胞の表面タンパク質、脂質または糖に結合する物質である、請求項1または2に記載の組成物。
- 前記表面タンパク質は、CD83、CD9、EpCAM、カベオリン、FasL、HLA−DRA、CD36、CD63、CD81、MUC1、ERBB4、GPER、ERBB2、MLANA、AMHR2、またはこれらの組み合わせである、請求項3に記載の組成物。
- 前記小胞の脂質二重層に入り込むことができる物質は、親油性モイエティ、両親媒性モイエティ、両性イオンモイエティ、またはこれらの組み合わせを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記インテグリンタンパク質は、インテグリンαサブユニット、インテグリンβサブユニット、またはこれらの組み合わせを含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記インテグリンタンパク質は、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD49f、インテグリンα8(ITGA8)、インテグリンα9(ITGA9)、インテグリンα10(ITGA10)、インテグリンα11(ITGA11)、CD11D、CD103、CD11a、CD11b、CD51、CD41、CD11c、CD29、CD18、CD61、CD104、インテグリンβ5(ITGB5)、インテグリンβ6(ITGB6)、インテグリンβ7(ITGB7)及びインテグリンβ8(ITGB8)からなる群から選択されるポリペプチドを含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組成物。
- hsa−miR−126は、配列番号:1のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−23aは、配列番号:2のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−24は、配列番号:3のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−19bは、配列番号:4のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−103は、配列番号:5のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−142−3pは、配列番号:6のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−144は、配列番号:7のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−15aは、配列番号:8のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−185は、配列番号:9のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−93は、配列番号:10のヌクレオチド配列を含み、及び
hsa−miR−30cは、配列番号:11のヌクレオチド配列を含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組成物。 - 下記段階を含む乳がん診断方法:
被験体から得られた小胞を含む生物学的試料を提供する段階と、
前記生物学的試料に含有されたマイクロRNA(miRNA)の量を測定する段階であり、該マイクロRNAは、hsa−miR−126、hsa−miR−23a、hsa−miR−24、hsa−miR−19b、hsa−miR−103、hsa−miR−142−3p、hsa−miR−144、hsa−miR−15a、hsa−miR−185、hsa−miR−93及びhsa−miR−30cからなる群から選択されるいずれか一つ以上である段階と、
測定されたマイクロRNAの量を対照群と比較する段階と、
前記生物学的試料由来のマイクロRNAの量の、対照群との比較に基づいて、乳がん診断を提供する段階であり、前記乳がん診断を提供する段階は、前記生物学的試料由来のマイクロRNAの測定量が、対照群由来のマイクロRNAの測定量より多いか、または少ないかを決定し、
対照群に比べ、前記生物学的試料由来のマイクロRNAの増加した量は、前記被験体が乳がんである指標であり、該対照群が乳がんではないか若しくは良性の乳腺腫瘍を有する被験体からの生物学的試料由来のマイクロRNAの量であり、または、
対照群に比べ、前記生物学的試料由来のマイクロRNAの減少した量は、前記被験体が乳がんではないという指標であり、該対照群が乳がんを有する被験体からの生物学的試料由来のマイクロRNAの量である方法。 - 対照群に比べ、前記生物学的試料由来のマイクロRNAの増加または減少した量は、0.5Cp値以上の増加または減少である、請求項9に記載の方法。
- 前記生物学的試料は、尿、粘液、唾液、涙、血液、血漿、血清、痰、脊髄液、胸水、乳頭吸引物、リンパ液、気道液、腸液、泌尿生殖管液、母乳、精液、脳脊髄液、気管系内体液、腹水、嚢胞性腫瘍体液、羊水液、またはこれらの組み合わせである、請求項9または10に記載の方法。
- 前記小胞は、マイクロベシクルまたはエキソソームである、請求項9〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記生物学的試料を提供する段階は、生物学的試料から小胞を分離し、前記生物学的試料として該小胞を提供する段階であり、
該生物学的試料から小胞を分離する段階は、前記小胞に特異的に結合する物質、または前記小胞の脂質二重層に入り込む物質を、前記小胞とインキュベーションさせる段階を含む、請求項9〜12のいずれか1項に記載の方法。 - 前記小胞に特異的に結合する物質は、前記小胞の表面タンパク質、脂質若しくは糖に結合する物質、または乳がん患者由来小胞に特異的に結合することができる物質である、請求項13に記載の方法。
- 前記表面タンパク質は、CD83、CD9、EpCAM、カベオリン、FasL、HLA−DRA、CD36、CD63、CD81、MUC1、ERBB4、GPER、ERBB2、MLANA、AMHR2、またはこれらの組み合わせである、請求項14に記載の方法。
- 前記小胞の脂質二重層に入り込む物質は、親油性モイエティ、両親媒性モイエティ、両性イオンモイエティ、またはこれらの組み合わせを含む物質である、請求項13〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記生物学的試料中のインテグリンタンパク質の量を測定する段階と、
前記インテグリンタンパク質の量と、対照群のインテグリンタンパク質の測定量とを比較する段階と、をさらに含み、
対照群に比べ、前記生物学的試料由来のマイクロRNA及びインテグリンタンパク質の増加した量は、前記被験体が乳がんである指標であり、該対照群が乳がんではないか若しくは良性の乳腺腫瘍を有する被験体からの生物学的試料由来のマイクロRNA及びインテグリンの量であり、または、
対照群に比べ、前記生物学的試料由来のマイクロRNA及びインテグリンタンパク質の減少した量は、前記被験体が乳がんではないという指標であり、該対照群は、乳がんを有する被験体からの生物学的試料由来のマイクロRNA及びインテグリンの量である、請求項9〜16のいずれか1項に記載の方法。 - 前記インテグリンタンパク質は、インテグリンαサブユニット、インテグリンβサブユニット、またはこれらの組み合わせを含む、請求項17に記載の方法。
- 前記インテグリンタンパク質は、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD49f、インテグリンα8(ITGA8)、インテグリンα9(ITGA9)、インテグリンα10(ITGA10)、インテグリンα11(ITGA11)、CD11D、CD103、CD11a、CD11b、CD51、CD41、CD11c、CD29、CD18、CD61、CD104、インテグリンβ5(ITGB5)、インテグリンβ6(ITGB6)、インテグリンβ7(ITGB7)及びインテグリンβ8(ITGB8)からなる群から選択されるポリペプチドを含む、請求項17または18に記載の方法。
- hsa−miR−126は、配列番号:1のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−23aは、配列番号:2のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−24は、配列番号:3のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−19bは、配列番号:4のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−103は、配列番号:5のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−142−3pは、配列番号:6のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−144は、配列番号:7のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−15aは、配列番号:8のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−185は、配列番号:9のヌクレオチド配列を含み、
hsa−miR−93は、配列番号:10のヌクレオチド配列を含み、及び
hsa−miR−30cは、配列番号:11のヌクレオチド配列を含む、請求項9〜19のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2012-0148873 | 2012-12-18 | ||
KR20120148873 | 2012-12-18 | ||
KR10-2013-0041965 | 2013-04-17 | ||
KR1020130041965A KR20140079255A (ko) | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 소포 중 폴리뉴클레오티드를 포함하는 유방암 진단용 조성물 및 키트, 및 이를 이용한 유방암 진단 방법 |
KR1020130082465A KR20150007878A (ko) | 2013-07-12 | 2013-07-12 | 소포 중 폴리뉴클레오티드 및 인테그린 단백질의 용도 |
KR10-2013-0082465 | 2013-07-12 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014117282A true JP2014117282A (ja) | 2014-06-30 |
JP6441567B2 JP6441567B2 (ja) | 2018-12-19 |
Family
ID=51172697
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013261775A Expired - Fee Related JP6441567B2 (ja) | 2012-12-18 | 2013-12-18 | 小胞内のポリヌクレオチドを含む乳がん診断用組成物及びキット、並びにそれを利用した乳がん診断方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6441567B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017067706A (ja) * | 2015-10-01 | 2017-04-06 | 国立大学法人名古屋大学 | 腎疾患診断のためのエクソソーム回収法 |
WO2019117257A1 (ja) | 2017-12-13 | 2019-06-20 | 国立大学法人広島大学 | 乳がんの検出を補助する方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008500837A (ja) * | 2004-05-28 | 2008-01-17 | アンビオン インコーポレーティッド | マイクロrnaに関与する方法および組成物 |
JP2010538653A (ja) * | 2007-09-14 | 2010-12-16 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション | ヒト末梢血微小胞におけるmiRNAの発現およびその使用 |
WO2010151133A1 (en) * | 2009-06-25 | 2010-12-29 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Methods for establishing and predicting resistance to endocrine therapy using an mirna profile |
WO2012024543A1 (en) * | 2010-08-18 | 2012-02-23 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings | Circulating biomarkers for disease |
JP2012242394A (ja) * | 2011-05-17 | 2012-12-10 | Samsung Electronics Co Ltd | 標的物質検出用キット及びこれを利用した標的物質検出方法 |
WO2012170711A1 (en) * | 2011-06-07 | 2012-12-13 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L | Circulating biomarkers for cancer |
-
2013
- 2013-12-18 JP JP2013261775A patent/JP6441567B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008500837A (ja) * | 2004-05-28 | 2008-01-17 | アンビオン インコーポレーティッド | マイクロrnaに関与する方法および組成物 |
JP2010538653A (ja) * | 2007-09-14 | 2010-12-16 | ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション | ヒト末梢血微小胞におけるmiRNAの発現およびその使用 |
WO2010151133A1 (en) * | 2009-06-25 | 2010-12-29 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Methods for establishing and predicting resistance to endocrine therapy using an mirna profile |
WO2012024543A1 (en) * | 2010-08-18 | 2012-02-23 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings | Circulating biomarkers for disease |
JP2012242394A (ja) * | 2011-05-17 | 2012-12-10 | Samsung Electronics Co Ltd | 標的物質検出用キット及びこれを利用した標的物質検出方法 |
WO2012170711A1 (en) * | 2011-06-07 | 2012-12-13 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L | Circulating biomarkers for cancer |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017067706A (ja) * | 2015-10-01 | 2017-04-06 | 国立大学法人名古屋大学 | 腎疾患診断のためのエクソソーム回収法 |
WO2019117257A1 (ja) | 2017-12-13 | 2019-06-20 | 国立大学法人広島大学 | 乳がんの検出を補助する方法 |
JPWO2019117257A1 (ja) * | 2017-12-13 | 2020-12-24 | 国立大学法人広島大学 | 乳がんの検出を補助する方法 |
JP7298913B2 (ja) | 2017-12-13 | 2023-06-27 | 国立大学法人広島大学 | 乳がんの検出を補助する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6441567B2 (ja) | 2018-12-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9828645B2 (en) | Composition and kit for diagnosing breast cancer including polynucleotide within vesicle, and method of diagnosing breast cancer using the same | |
US20090291438A1 (en) | Methods for Analysis of Extracelluar RNA Species | |
CN103782174A (zh) | 用于癌症的循环生物标志物 | |
CN103797131A (zh) | 生物标志物组合物和方法 | |
CN103874770A (zh) | 生物标志物组合物和方法 | |
US20130323740A1 (en) | Direct blood assay for detection of circulating microrna in cancer patients | |
CN111826466A (zh) | 乙型肝炎感染患者或携带者外泌体miRNA分子标志物组合及筛查试剂盒 | |
KR20140079255A (ko) | 소포 중 폴리뉴클레오티드를 포함하는 유방암 진단용 조성물 및 키트, 및 이를 이용한 유방암 진단 방법 | |
JP6441567B2 (ja) | 小胞内のポリヌクレオチドを含む乳がん診断用組成物及びキット、並びにそれを利用した乳がん診断方法 | |
CN113151455B (zh) | 外泌体miR-181b-5p在食管鳞癌诊断和治疗中的应用 | |
JP6608424B2 (ja) | 前癌性結腸直腸ポリープおよび結腸直腸癌を特定するための方法およびキット | |
KR20150007878A (ko) | 소포 중 폴리뉴클레오티드 및 인테그린 단백질의 용도 | |
Martinez-Dominguez et al. | Current Technologies for RNA-Directed Liquid Diagnostics. Cancers 2021, 13, 5060 | |
ES2961524T3 (es) | Método para diagnosticar cáncer de mama | |
US20240115660A1 (en) | Soluble trem2 protein and uses thereof | |
Huang et al. | Circulating Tumor DNA in Lymphoma | |
KR20230126529A (ko) | 췌장암 진단을 위한 세포외 소포체 유래 miRNA 유전자 바이오마커 및 이의 용도 | |
Boudna et al. | Investigation of long non-coding RNAs in extracellular vesicles from low-volume blood serum specimens of colorectal cancer patients | |
CN117363731A (zh) | 血清外泌体circRNA在非小细胞肺癌早期诊断或检测试剂中的应用 | |
KR20240058548A (ko) | 유방암 진단 또는 재발 예측을 위한 세포외 소포체 유래 miRNA 유전자 바이오마커 및 이의 용도 | |
CN115011602A (zh) | 一种用于诊断急性呼吸窘迫综合征的circRNA标志物及检测试剂和试剂盒 | |
CN114958859A (zh) | 一种用于诊断急性呼吸窘迫综合征的circRNA标志物及诊断试剂 | |
WO2021198303A1 (en) | New method of prostate cancer diagnosis | |
CN117025773A (zh) | 一种用于小细胞肺癌铂类耐药诊断的标志物及其应用 | |
JP2022514598A (ja) | マイクロrnaを用いた胃癌の診断方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161130 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170913 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170926 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171226 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20180529 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180926 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20181005 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181023 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181122 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6441567 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |