JP2014014361A

JP2014014361A - インターロイキン−１０抗体

Info

Publication number: JP2014014361A
Application number: JP2013153356A
Authority: JP
Inventors: Leonard G Presta; ジー．プレスタレオナルド
Original assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2003-11-10
Filing date: 2013-07-24
Publication date: 2014-01-30
Also published as: US7662379B2; AU2004290044B2; EP1694705B1; AU2004290044A1; IL202681A; PL1694705T3; AR074780A2; AU2011200606A1; PT1694705E; CN102010471A; AU2011200606B2; SG155205A1; DK1694705T3; KR20120025618A; CA2812856A1; KR20060120093A; RS51180B; CA2545255C; NO20062672L; HRP20090517T1

Abstract

【課題】自己免疫疾患について、ヒトＩＬ−１０を認識し、かつ、その活性を調節するヒト化モノクローナル抗体を提供する。
【解決手段】本明細書中に提供される方法および組成物は、概してＩＬ−１０特異的抗体およびその使用に関する。より具体的には、ＩＬ−１０の生物学的活性の調節における（特に自己免疫疾患および病原体媒介性の免疫病理における）ヒト化ＩＬ−１０特異的抗体の組成物およびそのような抗体の使用方法。本発明は、特に自己免疫疾患について、ヒトＩＬ−１０を認識し、かつその活性を調節するヒト化モノクローナル抗体を提供する。このヒト化抗体は、現行の処置に付随する毒性および非特異性を伴わない、代替の治療の選択を提供する。
【選択図】図１Ａ

Description

本出願は、２００３年１１月１０日に出願された米国仮特許出願公開第６０／５１８，９９９号の利益を主張し、その全体は本明細書中で参考として援用される。

（発明の分野）
本発明は、概して、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）特異的抗体およびその使用に関する。具体的には、本発明は、特に自己免疫疾患において、ヒトＩＬ−１０を認識し、かつその活性を調節する、ヒト化抗体に関する。

（発明の背景）
当初は、サイトカイン合成阻害因子またはＣＳＩＦとして公知であった、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）は、造血細胞（特に免疫細胞）の強力な免疫調節因子である。活性化されたＴｈ２細胞、Ｂ細胞、ケラチノサイト、単球およびマクロファージのような細胞は、ＩＬ−１０を産生する。例えば、非特許文献１を参照のこと。ＩＬ−１０は、多くの細胞（Ｔ細胞、単球およびマクロファージが挙げられる）の活性化およびエフェクター機能を阻害する。特に、ＩＬ−１０は、Ｔｈ１細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、およびマクロファージのような細胞によるサイトカインの合成（例えば、ＩＬ−１、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦの合成）を阻害する。例えば、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７を参照のこと。

多様な病原体、特に細胞内病原体は、ＩＬ−１０産生を誘発し、免疫応答による病原体の効果的な除去を遅らせるか、または完全に停止させる。非特許文献１。例えば、ＨＩＶ、らい、または結核に罹患した患者由来の血液性リンパ球において、病原体で抗原投与した場合に、末梢血液性リンパ球は、代表的に、インビトロでアネルギー性、または非反応性である。しかしながら、これらにおけるＩＬ−１０による中和は、能動的なエフェクター応答（すなわちＴｈ１の反応性）がこれらの細胞内に存在することを証明した。したがって、病原体の感染力のある状態を促進するように、その病原体により、ＩＬ−１０が効果的に奪い取られることが考えられる。

ＩＬ−１０はまた、インビボにおける自己免疫と関連がある。自己免疫は、正常組織を標的とする自己抗体、自己反応性のＴ細胞、またはそれらの組み合わせの発達の結果として生じる。自己免疫疾患の一例は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身の結合組織が炎症を起こす、慢性のリューマチ性疾患である。外部の侵入物であるかのように正常体組織を攻撃する自己抗体は、特徴的な炎症をもたらす。正確な原因は充分に理解されていないが、それには遺伝的要素および環境的要素の両方があると、研究者は考えている。具体的には、Ｂ細胞の機能亢進および多様な自己抗体の存在が、ＳＬＥを特徴づける。代表的には、ＳＬＥに罹患した患者において、二本鎖ＤＮＡに反応性のＩｇＧ自己抗体（ＩｇＧ抗ｄｓＤＮＡａｂｓ）が亢進される。６０％と７０％との間のＳＬＥ患者が、ＩｇＧ抗ｄｓＤＮＡａｂｓを産生し、このうちの一部は腎毒性である。ＳＬＥは、男性よりも女性で十倍広まっており、顔面発疹から障害性かつ潜在的に生命に関わる臓器不全に及ぶ症状を伴う。いかなる年齢においても発病し得るが、若年成人において、最も頻発する。

多くの研究が、ＳＬＥに関連する病理学の点において、ＩＬ−１０の役割を支持する。例えば、代表的に、適切な刺激無しに、ＩＬ−１０は、細胞により産生されないが、ＳＬＥ患者由来のＢ細胞およびマクロファージのどちらも、インビトロにおいて高レベルのＩＬ−１０を自発的に産生する。非特許文献８。数件の研究において、研究者は、ＩＬ−１０の血清レベルと疾患活動性との間の相関を証明した。さらに、インビボおよびインビトロのどちらの研究も、ＩＬ−１０の遮断が、ＳＬＥの臨床的な発現を緩和し得ることを証明した。例えば、非特許文献９を参照のこと。

現在まで、ＳＬＥの発現の１つであるループス腎炎は、例えば、コルチコステロイドおよびシクロホスファミドのような免疫抑制剤治療の使用によって、処置されていた。効果的であるが、これらの治療は、非特異的であり、長期の治療を妨げる相当な毒性が存在する。したがって、特異的中和抗体は、残りの免疫応答ネットワークを無傷にしたまま、ＩＬ−１０の抑制効果の除去を可能にする、ＩＬ−１０の効果的な拮抗物質となり得る。

インビボでの治療剤としての抗体の使用における最も顕著な制限は、抗体の免疫抗原性である。ほとんどのモノクローナル抗体がげっ歯類由来だが、ヒトにおける繰り返しの使用は、治療抗体に対する免疫応答の発生をもたらす。そのような免疫応答は、治療効力の損失を最小に、かつ潜在の致死的なアナフィラキシー応答を最大にする結果となる。げっ歯類抗体の免疫抗原性を低減するための初期の取り組みは、マウス可変領域をヒト定常領域に融合させた、キメラ抗体の生成に関与した。非特許文献１０。しかしながら、ヒト可変領域およびマウス定常領域の混成物を注射されたマウスは、ヒト可変領域に対する強い抗−抗体応答を発現させ、このことは、このようなキメラ抗体におけるげっ歯類の全Ｆｖ領域の保有が依然として、患者における望ましくない免疫抗原性を生じ得ることを示唆する。

可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）ループは抗体分子の結合部位を含むと、一般的に考えられている。それゆえ、げっ歯類の配列をさらに最小限にするべく、げっ歯類のＣＤＲループをヒトフレームワークに移植すること（すなわち、ヒト化）が試みられた。非特許文献１１、非特許文献１２。しかしながら、ＣＤＲループの交換は、まだ、一様に、元の抗体と同様な結合特性を有する抗体を生じるとは限らない。ヒト化抗体でのフレームワーク残基（ＦＲ、ＣＤＲループの支持に関与する残基）における変更もまた、抗原への結合親和性の保持が必要とされる。非特許文献１３。多くのヒト化抗体構成物において、ＣＤＲ移植の使用およびフレームワーク残基の保存の使用が報告されたが、特定の配列が、所望の結合特性、および時には、所望の生物学的特性を有する抗体に帰着するかどうかを予測することは困難である。例えば、非特許文献１４、非特許文献１５、および非特許文献１６を参照のこと。さらに、大抵の先行する研究が、異なるヒト配列を動物の軽鎖可変配列および重鎖可変配列のために使用し、このような研究における予測された性質を疑わしいものにした。公知の抗体の配列が使用されたか、または、より代表的には、公知のＸ線構造を有する抗体（抗体ＮＥＷおよび抗体ＫＯＬ）の配列が使用された。例えば、非特許文献１１、非特許文献１２、および非特許文献１５を参照のこと。ほんのわずかのヒト化構成物について、正確な配列情報が報告された。

本発明は、特に、自己免疫疾患について、ヒトＩＬ−１０を認識し、かつ、その活性を調節するヒト化モノクローナル抗体を提供する。このヒト化抗体は、現行の処置に付随する毒性および非特異性を伴わない、代替の治療の選択を提供するはずである。

Ｍｏｏｒｅ等，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９３、１１：ｐ．１６５Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９８９、１７０：ｐ．２０８１−２０９５Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９１、１４６：ｐ．３４４４Ｈｓｕ等，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９２、４：ｐ．５６３Ｄ’Ａｎｄｒｅａ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９３、１７８：ｐ．１０４１ｄｅＷａａｌＭａｌｅｆｙｔ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９１、１７４：ｐ．９１５Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９１、１４７：ｐ．３８１５Ｌｌｏｒｅｎｔｅ等，ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．、１９９７、４０：ｐ．２４９−６０Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ａｍａｒｏ等，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９８、１１：ｐ．３９５−４０２Ｌｉｕ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８７、８４：ｐ．３４３９Ｊｏｎｅｓ等，Ｎａｔｕｒｅ、１９８６、３２１：ｐ．５２２Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８８、２３９：ｐ．１５３４Ｋａｂａｔ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９１、１４７：ｐ．１７０９Ｑｕｅｅｎ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９、８６：ｐ．１００２９Ｇｏｒｍａｎ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９１、８８：ｐ．４１８１Ｈｏｄｇｓｏｎ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１９９１、９：ｐ．４２１

（発明の要旨）
ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子またはその結合断片が、本明細書で提供され、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片であって、この領域または結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１、ＣＤＲ２には配列番号２、およびＣＤＲ３には配列番号３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド；ならびに、フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域、を含む、抗体軽鎖可変領域またはその結合断片；ならびに、少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片であって、この領域または結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号６、ＣＤＲ２には配列番号７、およびＣＤＲ３には配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド；ならびに、フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域、を含む、抗体重鎖可変領域またはその結合断片、を含む。抗体の軽鎖またはその結合断片が、配列番号４の可変領域を有するポリペプチドを含む抗体もまた、本明細書で提供される。特定の一実施形態において、この抗体軽鎖またはその結合断片は、配列番号５の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。特定の一実施形態において、この抗体重鎖またはその結合断片は、配列番号９の可変領域を有するポリペプチドを含む。別の特定の実施形態において、この抗体重鎖またはその結合断片は、配列番号１０の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。

ＩＬ−１０に結合するキメラ組換え抗体分子またはその結合断片が、本明細書でさらに提供され、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片であって、この領域または結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１、ＣＤＲ２には配列番号２、およびＣＤＲ３には配列番号３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体軽鎖可変領域またはその結合断片；ならびに、少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片であって、この領域または結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号６、ＣＤＲ２には配列番号７、およびＣＤＲ３には配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体重鎖可変領域またはその結合断片、を含む。

ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子またはその結合断片もまた、本明細書で提供され、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片であって、この鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１１、ＣＤＲ２には配列番号１２、およびＣＤＲ３には配列番号１３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド；ならびに、フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域、を含む、抗体軽鎖またはその結合断片；ならびに、少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片であって、この鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１５、ＣＤＲ２には配列番号１６、およびＣＤＲ３には配列番号１７からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド；ならびに、フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域、を含む、抗体重鎖またはその結合断片を含む。特定の一実施形態において、この抗体軽鎖またはその結合断片は、配列番号１４の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。さらに別の特定の実施形態において、この抗体重鎖またはその結合断片は、配列番号１８の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。

ＩＬ−１０に結合するキメラ組換え抗体分子またはその結合断片が、本明細書で、さらに提供され、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片であって、この鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１１、ＣＤＲ２には配列番号１２、およびＣＤＲ３には配列番号１３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体軽鎖またはその結合断片；ならびに、少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片であって、この鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１５、ＣＤＲ２には配列番号１６、およびＣＤＲ３には配列番号１７からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体重鎖またはその結合断片、を含む。

１つの実施形態において、上記抗体は、さらに重鎖定常領域を含み、この重鎖定常領域はγ１、γ２、γ３、もしくはγ４ヒト重鎖定常領域、または、この領域の改変体を含む。１つの実施形態において、上記抗体は、さらに軽鎖定常領域を含み、この軽鎖定常領域は、λまたはκヒト軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、これらの抗体の結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）からなる群から選択される抗体断片である。

ヒト被験体において免疫応答を抑制する方法が、本明細書でさらに提供され、この方法は、ＩＬ−１０の生物学的活性を遮断するのに有効な量のＩＬ−１０に特異的な抗体またはその結合断片を、免疫応答の抑制を必要とする被験体に投与する工程、を包含し、この抗体は、本明細書中で開示される抗体である。この方法により抑制される免疫応答は、体液性応答または細胞性応答である。１つの実施形態において、この方法により処置される被験体は、全身性エリテマトーデスに罹患している。別の実施形態において、被験体は免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＣ）に罹患している。さらに別の実施形態において、被験体はループス腎炎に罹患している。さらなる実施形態において、被験体はＨＩＶに罹患している。別の実施形態において、被験体はＣ型肝炎に罹患している。特定の一実施形態において、ヒト被験体における免疫応答を抑制する方法は、免疫応答の抑制を必要とする被験体に以下の（１）および（２）を投与する工程を包含する：（１）ＩＬ−１０の生物学的活性を遮断するのに有効な量の、ＩＬ−１０に特異的な抗体またはその結合断片（この抗体は、本明細書中で開示される抗体である）、および（２）免疫抑制剤。

組成物が、本明細書で提供され、この組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、抗体またはその結合断片（この抗体は、上記に開示される抗体のうちの１つである）を含む。

上に開示された抗体のポリペプチドをコードする単離された核酸が、本明細書でさらに提供される。発現ベクターもまた、本明細書で提供され、この発現ベクターは、このベクターを用いてトランスフェクトされた宿主細胞により認識される制御配列に、作動可能に連結された、単離された核酸配列を含む。宿主細胞が、本明細書で提供され、この宿主細胞は、単離された核酸配列を含むベクターを含む。ポリペプチドを生成する方法が、本明細書でさらに提供され、この方法は、このベクターを含む宿主細胞を、この核酸配列が発現される条件下で培養し、それによってこのポリペプチドを生成する工程、および、この宿主細胞から、このポリペプチドを回収する工程を包含する。

ＩＬ−１０に特異的な抗体をコードする単離された核酸配列が、本明細書で提供され、この核酸配列は、配列番号１９の核酸配列を有する軽鎖、および配列番号２０の核酸配列を有する重鎖、を含む。さらなる実施形態において、この軽鎖はＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ−５９２３であり、この重鎖はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５９２２である。

ＩＬ−１０に特異的な抗体をコードする単離された核酸配列が、本明細書で提供され、この核酸配列は、配列番号２１の核酸配列を有する軽鎖、および配列番号２２の核酸配列を有する重鎖、を含む。さらなる実施形態において、この軽鎖はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５９２７であり、この重鎖はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５９２６である。

上記核酸配列によってコードされる抗体の結合断片をコードする、単離された核酸配列が、本明細書でさらに提供される。１つの実施形態において、この結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、およびＦ（ａｂ’）_２からなる群から選択される抗体断片である。

ヒト化抗体について、受容体生殖細胞系配列を同定するための方法が、本明細書で提供され、この方法は、ａ）所望の生物学的活性を有する非ヒト抗体を同定する工程；ｂ）非ヒト抗体のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインのアミノ酸配列を決定する工程；ならびにｃ）非ヒト抗体の配列を、ヒト生殖細胞系配列の群と比較する工程であって、この比較は、以下の下位工程：１）非ヒトＶ_Ｈドメイン配列およびＶ_Ｌドメイン配列の配列に残基番号を割り当てる工程、２）この配列中のＣＤＲ領域およびＦＲ領域を線引きする工程、３）非ヒトおよびヒト生殖細胞系の配列が一致する、それぞれの残基位置での、所定のスコア数を割り当てる工程、および４）それぞれのヒト生殖細胞系配列について総スコアを生成するために、全残基スコアを総計する工程を包含する、工程；ならびにｄ）全残基スコアが最も高いヒト生殖細胞系配列を、受容体生殖細胞系配列と同定する工程を包含する。１つの実施形態において、この方法は、５）下位工程（４）の後に全残基スコアが一致する生殖細胞系配列に対し、非ヒトおよびヒト生殖細胞系の配列が一致し、下位工程（３）でスコア付けされなかった、それぞれの残基位置について、スコア数「１」を割り当てる工程；６）それぞれのヒト生殖細胞系配列について総スコアを生成するために、全残基スコアを総計する工程を、さらに包含する。特定の実施形態において、非ヒト抗体は、ＩＬ−
１０に特異的であり、かつＩＬ−１０の生物学的活性を阻害する。特定の実施形態において、スコア数が、Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域について、それぞれ表２および表３のように残基に割り当てられる。

上記方法により生成される抗体が、本明細書でさらに提供される。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子、または該抗体の結合断片であって、該抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片と、少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片とを含み、
該抗体軽鎖可変領域または結合断片は、ポリペプチドおよびフレームワーク領域を含み、該ポリペプチドは、ＣＤＲ１には配列番号１、ＣＤＲ２には配列番号２、およびＣＤＲ３には配列番号３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有し；該フレームワーク領域のアミノ酸配列は、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であり；
該抗体重鎖可変領域または結合断片は、ポリペプチドおよびフレームワーク領域を含み、該ポリペプチドは、ＣＤＲ１には配列番号６、ＣＤＲ２には配列番号７、およびＣＤＲ３には配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有し；該フレームワーク領域のアミノ酸配列は、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列である、抗体。
（項目２）
項目１に記載の抗体であって、さらに重鎖定常領域を含み、該重鎖定常領域がγ１、γ２、γ３、もしくはγ４ヒト重鎖定常領域、または該領域の改変体を含む、抗体。
（項目３）
項目１に記載の抗体であって、さらに軽鎖定常領域を含み、該軽鎖定常領域がλまたはκヒト軽鎖定常領域を含む、抗体。
（項目４）
項目１に記載の抗体であって、上記結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片である、抗体。
（項目５）
項目１に記載の抗体であって、上記抗体軽鎖またはその結合断片が、配列番号４の可変領域を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目６）
項目１に記載の抗体であって、上記抗体軽鎖またはその結合断片が、配列番号５の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目７）
項目１に記載の抗体であって、上記抗体重鎖またはその結合断片が、配列番号９の可変領域を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目８）
項目１に記載の抗体であって、上記抗体重鎖またはその結合断片が、配列番号１０の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目９）
ＩＬ−１０に結合する組換えキメラ抗体分子、または該抗体の結合断片であって、該抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片と、少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片とを含み、
該抗体軽鎖可変領域または結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１、ＣＤＲ２には配列番号２、およびＣＤＲ３には配列番号３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み；
該抗体重鎖可変領域または結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号６、ＣＤＲ２には配列番
号７、およびＣＤＲ３には配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目１０）
ＩＬ−１０に結合する組換えヒト化抗体分子、または該抗体の結合断片であって、該抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片と、少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片とを含み、
該抗体軽鎖またはその結合断片は、ポリペプチドおよびフレームワーク領域を含み、該ポリペプチドは、ＣＤＲ１には配列番号１１、ＣＤＲ２には配列番号１２、およびＣＤＲ３には配列番号１３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有し；該フレームワーク領域のアミノ酸配列は、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であり；
該抗体重鎖またはその結合断片は、ポリペプチドおよびフレームワーク領域を含み、該ポリペプチドは、ＣＤＲ１には配列番号１５、ＣＤＲ２には配列番号１６、およびＣＤＲ３には配列番号１７からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有し、該フレームワーク領域のアミノ酸配列は、全てもしくは実質的に全て、ヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列である、抗体。
（項目１１）
項目１０に記載の抗体であって、さらに重鎖定常領域を含み、該重鎖定常領域がγ１、γ２、γ３、もしくはγ４ヒト重鎖定常領域、または該領域の改変体を含む、抗体。
（項目１２）
項目１０に記載の抗体であって、さらに軽鎖定常領域を含み、該軽鎖定常領域がλまたはκヒト軽鎖定常領域を含む、抗体。
（項目１３）
項目１０に記載の抗体であって、上記結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片である、抗体。
（項目１４）
項目１０に記載の抗体であって、上記抗体軽鎖またはその結合断片が、配列番号１４の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目１５）
項目１０に記載の抗体であって、上記抗体重鎖またはその結合断片が、配列番号１８の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目１６）
ＩＬ−１０に結合する組換えキメラ抗体分子、または該抗体の結合断片であって、該抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片と、少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片とを含み、
該抗体軽鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１１、ＣＤＲ２には配列番号１２、およびＣＤＲ３には配列番号１３のアミノ酸配列のうち、少なくとも１つを有するポリペプチドを含み；
該抗体重鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１には配列番号１５、ＣＤＲ２には配列番号１６、およびＣＤＲ３には配列番号１７のアミノ酸配列のうち、少なくとも１つを有するポリペプチドを含む、抗体。
（項目１７）
ヒト被験体において免疫応答を抑制する方法であって、該方法は、ＩＬ−１０の生物学的活性を遮断するのに有効な量でＩＬ−１０に特異的な抗体または該抗体の結合断片を、免疫応答の抑制を必要とする被験体に投与する工程を包含し、ここで該抗体は、項目１または項目９に記載の抗体である、方法。
（項目１８）
項目１７に記載の方法であって、上記免疫応答は体液性応答である、方法。
（項目１９）
項目１７に記載の方法であって、上記被験体は、全身性エリテマトーデスに罹患している、方法。
（項目２０）
項目１７に記載の方法であって、上記被験体は、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＣ）に罹患している、方法。
（項目２１）
項目１７に記載の方法であって、上記被験体は、ループス腎炎に罹患している、方法。
（項目２２）
項目１７に記載の方法であって、上記被験体は、ＨＩＶに罹患している、方法。
（項目２３）
項目１７に記載の方法であって、上記被験体は、Ｃ型肝炎に罹患している、方法。
（項目２４）
項目１７に記載の方法であって、さらに、免疫抑制剤を投与する工程を包含する、方法。（項目２５）
ヒト被験体において免疫応答を抑制する方法であって、該方法は、ＩＬ−１０の生物学的活性を遮断するのに有効な量でＩＬ−１０に特異的な抗体、または該抗体の結合断片を、免疫応答の抑制を必要とする被験体に投与する工程を包含し、ここで該抗体は、項目１０または項目１６に記載の抗体である、方法。
（項目２６）
項目２５に記載の方法であって、上記免疫応答は、体液性応答である、方法。
（項目２７）
項目２５に記載の方法であって、上記被験体は、全身性エリテマトーデスに罹患している、方法。
（項目２８）
項目２５に記載の方法であって、上記被験体は、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＣ）に罹患している、方法。
（項目２９）
項目２５に記載の方法であって、上記被験体は、ループス腎炎に罹患している、方法。
（項目３０）
項目２５に記載の方法であって、上記被験体は、ＨＩＶに罹患している、方法。
（項目３１）
項目２５に記載の方法であって、上記被験体は、Ｃ型肝炎に罹患している、方法。
（項目３２）
項目２５に記載の方法であって、さらに、免疫抑制剤を投与する工程を包含する、方法。（項目３３）
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、抗体または該抗体の結合断片を含む組成物であって、ここで該抗体は、項目１または項目９に記載の抗体である、組成物。
（項目３４）
項目３３に記載の組成物であって、さらに免疫抑制剤を含む、組成物。
（項目３５）
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、抗体または該抗体の結合断片を含む組成物であって、ここで該抗体は、項目１０または項目１６に記載の抗体である、組成物。
（項目３６）
項目３５に記載の組成物であって、さらに免疫抑制剤を含む、組成物。
（項目３７）
項目１または項目９に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸。
（項目３８）
項目１０または項目１６に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸。
（項目３９）
発現ベクターであって、該発現ベクターは、該ベクターを用いてトランスフェクトされた宿主細胞により認識される制御配列に作動可能に連結される、項目３７に記載の核酸配列を含む、発現ベクター。
（項目４０）
項目３９に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目４１）
ポリペプチドを生成する方法であって、該方法は、項目４０に記載の宿主細胞を、上記核酸配列が発現される条件下で培養し、それによって該ポリペプチドを生成する工程、および、該宿主細胞から該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方法。
（項目４２）
発現ベクターであって、該発現ベクターは、該ベクターを用いてトランスフェクトされた宿主細胞により認識される制御配列に作動可能に連結される、項目３８に記載の核酸配列を含む、発現ベクター。
（項目４３）
項目４２に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目４４）
ポリペプチドを生成する方法であって、該方法は、項目４３に記載の宿主細胞を、上記核酸配列が発現される条件下で培養し、それによって該ポリペプチドを生成する工程、および、上記宿主細胞から該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方法。
（項目４５）
ＩＬ−１０に特異的な抗体をコードする単離された核酸配列であって、該核酸配列は、配列番号２１の核酸配列を有する軽鎖、および配列番号２２の核酸配列を有する重鎖を含む、核酸配列。
（項目４６）
項目４５に記載の核酸であって、上記軽鎖はＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ−５９２３であり、上記重鎖はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５９２２である、核酸。
（項目４７）
ＩＬ−１０に特異的な抗体をコードする単離された核酸配列であって、該核酸配列は、配列番号２３の核酸配列を有する軽鎖、および配列番号２４の核酸配列を有する重鎖を含む、核酸配列。
（項目４８）
項目４７に記載の核酸であって、上記軽鎖はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５９２７であり、および上記重鎖はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−５９２６である、核酸。
（項目４９）
項目４５に記載の核酸配列によってコードされる抗体の結合断片をコードする、単離された核酸配列。
（項目５０）
項目４７に記載の核酸配列によってコードされる抗体の結合断片をコードする、単離された核酸配列。
（項目５１）
項目４９または項目５０に記載の核酸であって、上記結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片である、核酸。
（項目５２）
ヒト化抗体について受容体生殖細胞系配列を同定するための方法であって、該方法は、
ａ）所望の生物学的活性を有する非ヒト抗体を同定する工程；
ｂ）該非ヒト抗体のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインのアミノ酸配列を決定する工程；ならびに
ｃ）該非ヒト抗体の配列を、ヒト生殖細胞系配列の群と比較する工程であって、該比較は、以下の下位工程：
１）該非ヒトＶ_Ｈドメイン配列およびＶ_Ｌドメイン配列の配列に残基番号を割り当てる工程、
２）該配列中のＣＤＲ領域およびＦＲ領域を線引きする工程、
３）該非ヒト配列および該ヒト生殖細胞系配列が一致した、それぞれの残基位置での、所定のスコア数を割り当てる工程、および
４）それぞれのヒト生殖細胞系配列について総スコアを生成するために、該残基スコアの全てを総計する工程を包含する、工程；ならびに
ｄ）全残基スコアが最も高い、該ヒト生殖細胞系配列を、該受容体生殖細胞系配列と同定する工程
を包含する、方法。
（項目５３）
項目５２に記載の方法であって、該方法はさらに、以下の下位工程：
ａ）上記下位工程（４）の後に全残基スコアが一致する生殖細胞系配列に対し、該非ヒト配列および該ヒト生殖細胞系配列が一致し、上記下位工程（３）でスコア付けされなかった、それぞれの残基位置について、スコア数「１」を割り当てる工程；
ｂ）それぞれのヒト生殖細胞系配列について総スコアを生成するために、該残基スコアの全てを総計する工程、を包含する、方法。
（項目５４）
項目５２に記載の方法であって、上記Ｖ_Ｈ領域は、表２のようにスコア付けされる、方法。
（項目５５）
項目５２に記載の方法であって、上記Ｖ_Ｌ領域は、表３のようにスコア付けされる、方法。
（項目５６）
項目５２に記載の方法であって、上記非ヒト抗体は、ＩＬ−１０に特異的であり、かつＩＬ−１０の生物学的活性を阻害する、方法。
（項目５７）
項目５２に記載の方法により生成される抗体。

図１Ａは、抗ヒトＩＬ−１０抗体である１２Ｇ８の可変軽鎖に関する、潜在的な受容体生殖細胞系配列に対しての、残基番号およびスコア数の割り当てを示す。図１Ｂは、抗ヒトＩＬ−１０抗体である１２Ｇ８の可変重鎖に関する、潜在的な受容体生殖細胞系配列に対しての、残基番号およびスコア数の割り当てを示す。図１Ｂは、抗ヒトＩＬ−１０抗体である１２Ｇ８の可変重鎖に関する、潜在的な受容体生殖細胞系配列に対しての、残基番号およびスコア数の割り当てを示す。図１Ｃは、抗ヒトＩＬ−１０抗体である１１Ｄ８の可変軽鎖に関する、潜在的な受容体生殖細胞系配列に対しての、残基番号およびスコア数の割り当てを示す。図１Ｄは、抗ヒトＩＬ−１０抗体である１１Ｄ８の可変重鎖に関する、潜在的な受容体生殖細胞系配列に対しての、残基番号およびスコア数の割り当てを示す。図１Ｄは、抗ヒトＩＬ−１０抗体である１１Ｄ８の可変重鎖に関する、潜在的な受容体生殖細胞系配列に対しての、残基番号およびスコア数の割り当てを示す。図２Ａは、実施例ＩＩＩに記載されるようにｉ．ｖ．投与された１２Ｇ８抗体についての、濃度−時間プロフィールである。図２Ｂは、実施例ＩＩＩに記載されるようにｓ．ｃ．投与された１２Ｇ８についての、濃度−時間プロフィールである。図３Ａは、ヒト化抗ＩＬ−１０抗体であるＳＣＨ７０８９８０の投与が、ＩＬ−１０トランスジェニックマウスにおいて、森林型熱帯リーシュマニア感染への耐性を与えることを示す。感染を、示された時間に、測径器を使って足蹠の腫脹を測定することにより、決定した。実施例ＶＩに記載されるように、１２Ｇ８抗体を投与した。図３Ｂは、ラット抗ＩＬ−１０抗体である１２Ｇ８の投与が、ＩＬ−１０トランスジェニックマウスにおいて、森林型熱帯リーシュマニア感染への耐性を与えることを示す。感染を、示された時間に、測径器を使って足蹠の腫脹を測定することにより、決定した。実施例ＶＩに記載されるように、１２Ｇ８抗体を投与した。

（発明の詳細な説明）
開示の明瞭さのためであって、限定のためではなく、発明の詳細な説明を続く小節に分割する。

（Ａ．定義）
他に定義されない限り、本明細書で使用される、全ての技術用語および科学用語は、本発明が所属する技術分野における当業者により、一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書で引用される、全ての特許、出願、公開された出願および他の刊行物は、それらの全体が、参考として援用される。この節で示される定義が、本明細書中で参考として援用される、特許、出願、公開された出願および他の刊行物で示される定義に反しても、その他に一致しない場合でも、本明細書中で参考として援用される定義より、この節で示される定義が優先する。

本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、「少なくとも１」または「１以上」を意味する。

本明細書で使用される用語「抗体」とは、所望の生物学的活性を示す任意の形態の抗体、またはその抗体の断片をいう。このように、これは、最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および、所望の生物学的活性を示す限りは抗体断片を含む。

本明細書で使用される場合、用語「ＩＬ−１０結合断片」または「その結合断片」は、ＩＬ−１０活性を阻害する生物学的活性を、依然として実質的に保持する、抗体の断片または誘導体を包含する。それゆえ、用語「抗体断片」またはＩＬ−１０結合断片とは、全長抗体の一部（一般的には、その抗体の抗原結合領域または可変領域）をいう。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃ−Ｆｖ）；ならびに、抗体断片から構成された多重特異性抗体、が挙げられる。代表的に、結合断片または誘導体は、抗体のＩＬ−１０阻害活性の少なくとも５０％を保持する。好ましくは、結合断片または誘導体は、抗体のＩＬ−１０阻害活性の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％を保持する。ＩＬ−１０結合断片は、抗体の生物学的活性を実質的に改変しない、保存的なアミノ酸置換を含み得ること、もまた意図される。

本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団（すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少数しか存在し得ない起こり得る天然に存在する変異を除いて同一である）から得られた抗体をいう。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原性エピトープに指向される。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体の調製物は、代表的に、異なるエピトープに指向する（または特異的な）多数の抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から取得されるような抗体の特性を示し、いかなる特別な方法による抗体の産生も必要としない、と解釈される。例えば、本発明にしたがって使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ等，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法により、作製されても、または、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）により、調製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ等，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ等，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用する、ファージ抗体ライブラリから単離され得る。

本明細書中のモノクローナル抗体は、特に、「キメラの」抗体（イムノグロブリン）を含み、その抗体の重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体か、または特定の抗体クラスもしくは特定の抗体サブクラスに属する抗体において対応する配列と一致するか、または相同であり、一方で残りの鎖が、別の種由来の抗体か、または別の抗体クラスもしくは別の抗体サブクラスに属する抗体において対応する配列と一致するか、または相同である。また、このような抗体の断片についても、これらが所望の生物学的活性を示す限り、同様である（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．ＡｃａｄＳｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１−６８５５（１９８４））。

本明細書で使用される場合、用語「単鎖Ｆｖ」抗体、または「ｓｃＦｖ」抗体は、単一のポリペプチド鎖中に存在する、抗体のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインを含む抗体断片をいう。一般的に、このＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間のポリペプチドリンカーを、さらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ＴＨＥＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹＯＦＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。

本明細書で使用される場合、用語「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、２つの抗原結合部位を持つ小型の抗体断片をいい、この断片は、同一のポリペプチド鎖（Ｖ_Ｈ−Ｖ_Ｌ）中で、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に結合される重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。同一鎖上で２つのドメイン間を組にさせるには短すぎるリンカーを使用することにより、このドメインは、別の鎖の相補的なドメインと組になることを強いられ、２つの抗原結合部位を作る。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）において、より十分に記載されている。

本明細書で使用される場合、用語「ヒト化抗体」は、ヒトの抗体のみならず非ヒト（例えば、マウス）の抗体由来の配列を含む、抗体の形態をいう。このような抗体は、非ヒトイムノグロブリン由来の最小の配列を含む、キメラ抗体である。一般的に、ヒト化抗体は、実質的に全ての、少なくとも１つ、および、代表的には２つの可変ドメインを含み、この可変ドメインにおいて、全てまたは実質的に全ての超可変ループが、非ヒトイムノグロブリンの超可変ループと一致し、そして全てまたは実質的に全てのＦＲ領域が、ヒトイムノグロブリン配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体は、また、必要に応じて、少なくともイムノグロブリン定常領域（Ｆｃ）（代表的には、ヒトイムノグロブリンのもの）の一部を含む。

本明細書で使用される場合、用語「超可変領域」は、抗原結合の原因となる、抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）および８９−９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける残基３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）および９５−１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ等，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，第５版ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、および／または、「超可変ループ」由来のアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）および９１−９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける残基２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。本明細書で使用される用語「フレームワーク」残基または「ＦＲ」残基は、本明細書でＣＤＲ残基と定義される超可変領域の残基以外の、これらの可変ドメインの残基をいう。

本明細書で使用される場合、用語「保存的置換」は、当業者に公知であるアミノ酸の置換をいい、一般的には、得られる分子の生物学的活性を変えることなくなされ得る。当業者は、一般にポリペプチドの非主要領域における単一のアミノ酸置換は、実質的に生物学的活性を改変しないことを認識する（例えば、Ｗａｔｓｏｎ等，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＧｅｎｅ，ＴｈｅＢｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ
Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（第４版１９８７）を参照のこと）。このような例示的な置換は、好ましくは、以下の表１に示されるものにしたがってなされる：

他の置換も、また許容され、経験的に決定されても公知の保存的置換と一致してもよい。

本明細書で使用される場合、用語「単離された核酸分子」は、抗体の核酸についての天然の供給源において、通常は、核酸分子の不純物と混在しており、そのうちの少なくとも１つから、同定および分離された核酸分子をいう。単離された核酸分子は、天然に見出される形態、または状況でのものとは、別のものである。それゆえ、単離された核酸分子は、天然の細胞に存在するような核酸分子とは区別される。しかしながら、単離された核酸分子は、通常、抗体を発現する細胞に含まれ、例えば、天然の細胞の染色体位置とは異なる染色体位置にある、核酸分子を含む。

「制御配列」という表現は、特定の宿主生物において、作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列をいう。原核生物に適する制御配列は、例えば、プロモーター、任意のオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが公知である。

別の核酸配列と機能的な関係に置かれたとき、核酸が「作動可能に連結される」。例えば、シグナルペプチドまたは分泌性のリーダーのためのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現されるのであれば、そのポリペプチドのためのＤＮＡと、作動可能に連結される；プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響するのであれば、コード配列と、作動可能に連結される；またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置されるのであれば、コード配列と、作動可能に連結される。一般的に、「作動可能に連結される」は、結合されたＤＮＡ配列が近接しており、そして分泌性のリーダーの場合、近接し、かつ読み取り枠が合うことを意味する。しかしながら、エンハンサーは近接する必要が無い。連結は、都合のよい制限酵素認識部位における連結反応により、達成される。そのような部位が存在しない場合、従来の方法にしたがって、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたは合成オリゴヌクレオチドリンカーが使用される。

本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養」という表現は、交換可能に使用され、全てのこのような名称は、子孫を含む。したがって、単語「形質転換体」および「形質転換された細胞」は、継代の回数に関わり無く、それ由来の初代の対象細胞および培養物を含む。故意の変異または偶然の変異に起因して、全ての子孫は、ＤＮＡ内容において、正確に一致し得ないこともまた、理解される。もとの形質転換された細胞において、同一の機能および同一の生物学的活性を有する変異体の子孫が含まれる。異なった名称が意図された場合、文脈から明らかである。

本明細書で使用される「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」は、例えば、米国特許第４，６８３，１９５号に記載されているように、微少量の核酸（ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）の特定の断片を増幅される手順または技術をいう。一般的に、オリゴヌクレオチドプライマーが設計され得るように、目的の領域の末端からか、または、それを越えての配列情報が、利用可能である必要がある。これらのプライマーは、増幅されるべきテンプレートの相手側の鎖と配列が、一致するか、または類似している。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅された材料の末端と一致し得る。ＰＣＲは、全ゲノムＤＮＡから、特定のＲＮＡ配列、特定のＤＮＡ配列を増幅するため、および全細胞ＲＮＡ、バクテリオファージ、またはプラスミド配列から転写されたｃＤＮＡを増幅するためなどに、使用され得る。一般的に、Ｍｕｌｌｉｓ等，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＳｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：２６３（１９８７）；Ｅｒｌｉｃｈ編，ＰＣＲ
ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（ＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）を参照のこと。本明細書で使用される場合、ＰＣＲは、核酸試験サンプルを増幅するための、核酸ポリメラーゼ反応の方法の１つの例であるがそれのみでないと考えられ、この方法は、核酸の特定の断片を増幅または生成するために、プライマーとして公知の核酸、および核酸ポリメラーゼの使用を含む。

本明細書で使用される場合、用語「生殖細胞系配列」は、再配列されていないイムノグロブリンＤＮＡ配列の配列をいう。再配列されていないイムノグロブリンの、任意の適切な供給源が使用され得る。

本明細書で使用される用語「免疫抑制剤」は、免疫応答を抑制または調節する、天然の薬剤または合成薬剤をいう。この免疫応答は、体液性応答または細胞性応答であり得る。

（Ｂ．ＩＬ−１０特異的抗体）
本明細書で開示される、組成物および方法は、特に免疫応答において、ＩＬ−１０活性の調節に関連する。具体的には、本明細書における組成物および方法は、サイトカインであるＩＬ−１０に対し特異的な抗体を使用する。ＩＬ−１０は、免疫応答に関与する様々な細胞型の増殖、分化、およびサイトカイン合成の調節を通して、Ｔ細胞およびＢ細胞の応答を調節する、強力なサイトカインである。特に、ＩＬ−１０産生は、しばしば、自己免疫疾患および病原体誘発性の免疫病理に関連する。それゆえ、ＩＬ−１０活性を調節および阻害する組成物、および、この組成物を用いる方法は、自己免疫疾患および関連する症状の進行および持続を改変し、病原体関連性の免疫病理を改善または軽減し得る。

ヒト化抗体を用いてＩＬ−１０活性を標的にすることは、数個の特有な利点を提供する。第一に、抗体を用いてＩＬ−１０を標的にすることは、残りの免疫応答を無傷にしたまま、ＩＬ−１０活性の特異的な抑制を可能にする。病原体誘発性の免疫病理の多くの事例において、ＩＬ−１０活性の低減または除去は、さらなる病理を伴わずに、病原体を除去する所望のエフェクター免疫応答を可能にするはずである。自己免疫性の患者に対しては、ＩＬ−１０活性の低減または除去は、その患者の免疫反応能を維持したまま、疾患および／またはその症状を、軽減または除去するはずである。第二に、ヒト化ＩＬ−１０抗体は、免疫抗原性のげっ歯類抗体に関する制限を回避する。ヒト配列の使用は、外因的に投与された抗体の免疫抗原性を無くし、治療上の投与を可能にする。

ヒト化抗体は、ヒト抗体のみならず非ヒト抗体由来の配列も含む。代表的には、ヒト化プロセスは、所望の生物学的活性を有する（すなわち、ＩＬ−１０活性を阻害する）非ヒト抗体の生成から開始する。一旦、適切な特性を有する非ヒト抗体が同定されれば、次に、非ヒト配列およびヒト配列を使用してハイブリッド配列を作り出すために、組換え方法が使用される。

（Ｃ．ＩＬ−１０特異的抗体の生成）
モノクローナル抗体の生成のために、任意の適切な方法が使用され得る。例えば、受容者は、ＩＬ−１０またはその断片を接種され得る。任意の適切な免疫処置方法が使用され得る。このような方法は、アジュバント、他の免疫刺激薬、反復した追加免疫処置、および１つ以上の免疫処置方法の使用を含み得る。

任意の適切なＩＬ−１０供給源が、本明細書で開示された組成物および方法に関する非ヒト抗体の生成のための免疫抗原として、使用され得る。このような形態としては、当該分野において公知である組換え方法、合成方法、化学分解法、または酵素分解法によって生成された総タンパク質、ペプチド、およびエピトープが挙げられるが、これらに限定されない。ＩＬ−１０は、２つの相互に貫入するポリペプチド鎖からなる、酸感受性、非共有結合性のホモ二量体である。サイトカインは、インターフェロンおよび造血性サイトカインに類似のαへリックスの束状構造を含む、十分に保存された配列を有する、１６０アミノ酸長である。ヒトＩＬ−１０およびマウスＩＬ−１０は、７３％のアミノ酸相同性を有し、ヒトＩＬ−１０はマウス細胞およびヒト細胞において活性を有する。ＩＬ−１０は、市販されているか、または周知の分子生物学的技術を使用して、作製され得る。ヒト、ブタオザル、マンガベイ、アカゲザル、ヨザル、キツネザル、マウス、ラット、モルモット、シリアンハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ等について、ＧｅｎｂａｎｋｃＤＮＡ配列が利用可能である。組換えヒトＩＬ−１０は、Ｎ−グリコシル化されていない、１７ｋＤａ〜１８ｋＤａのポリペプチドである。

抗体を生成するために、生物学的に活性のある抗体を生成するのに十分である、任意の形態の抗原が使用され得る。したがって、誘発抗原は、単一のエピトープ、複数のエピトープ、もしくは完全なタンパク質単独であっても、当該分野において公知である１つ以上の免疫抗原性促進剤との組み合わせであってもよい。誘発抗原は、単離された全長タンパク質、細胞表面タンパク質（例えば、抗原の少なくとも一部をトランスフェクトさせた細胞を免疫する）、または可溶性タンパク質（例えば、タンパク質の細胞外ドメイン部分のみを免疫する）であり得る。抗原は、遺伝子改変された細胞において、産生され得る。抗原をコードするＤＮＡは、ゲノムＤＮＡまたは非ゲノムＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）であり得、細胞外ドメインの少なくとも一部をコードする。本明細書で使用される場合、用語「部分」は、必要に応じて、目的の抗原の免疫抗原性エピトープを構成するための、最小数のアミノ酸または核酸をいう。目的の細胞の形質転換に適した、任意の遺伝子ベクターが使用され得、それは、アデノウイルスベクター、プラスミド、および非ウイルス性ベクター（例えば、陽イオン性脂質）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＩＬ−１０を阻害する、所望の生物学的な特性を有する抗体を誘発するために、任意の適切な方法が使用され得る。種々の哺乳類宿主（例えば、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒト等）から、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。そのようなモノクローナル抗体の調製についての技術に関する説明が、例えば、Ｓｔｉｔｅｓ等（編）ＢＡＳＩＣＡＮＤＣＬＩＮＩＣＡＬＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（第４版）ＬａｎｇｅＭｅｄｉｃａｌＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＬｏｓＡｌｔｏｓ，ＣＡおよびそこで引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬＣＳＨＰｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳＡＮＤＰＲＡＣＴＩＣＥ（第２版）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹに見出され得る。このように、モノクローナル抗体が、当該分野における通常の知識を有する研究者によく知られた様々な技術により、得られ得る。代表的に、所望の抗原で免疫された動物由来の脾臓細胞が、一般に、骨髄腫細胞との融合により、不死化される。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照のこと。不死化についての代替の方法としては、エプスタインバーウイルス、癌遺伝子、もしくはレトロウイルスを用いる形質転換か、または当該分野において公知の他の方法が挙げられる。Ｄｏｙｌｅ，等（編１９９４および定期的な増補）ＣＥＬＬＡＮＤＴＩＳＳＵＥＣＵＬＴＵＲＥ：ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＰＲＯＣＥＤＵＲＥＳ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹを参照のこと。抗原に対する所望の特異性および所望の親和性を有する抗体の産生のために、単一の不死化細胞から発生するコロニーがスクリーニングされ、そのような細胞により産生されたモノクローナル抗体の収量が、種々の技術（脊椎動物宿主の腹膜腔への注入が挙げられる）により、増大され得る。あるいは、例えば、Ｈｕｓｅ，等（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１に概説された一般的プロトコールに従って、ヒトＢ細胞由来のＤＮＡライブラリをスクリーニングすることにより、モノクローナル抗体またはその結合断片をコードするＤＮＡ配列を単離し得る。

他の適切な技術が、ファージベクターまたは類似のベクターにおける、抗体ライブラリの選別に関わる。例えば、Ｈｕｓｅ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１（１９８９）；およびＷａｒｄ等，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６（１９８９）を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体は、改変を伴って（例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体が挙げられる）か、または改変を伴わずに使用され得る。しばしば、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供する物質を、共有結合かまたは非共有結合させることにより、標識される。科学文献および特許文献どちらにおいても、種々さまざまの標識および結合技術が、公知であり、広範に報告されている。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、阻害因子、蛍光性の機能基、化学発光性の機能基、および磁性粒子等が挙げられる。このような標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。組換えイムノグロブリンもまた、生成され得る（Ｃａｂｉｌｌｙ米国特許第４，８１６，５６７号；およびＱｕｅｅｎ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３を参照のこと）か、または、トランスジェニックマウスにおいて生成され得る（Ｍｅｎｄｅｚ等（１９９７）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１５：１４６−１５６を参照のこと；Ａｂｇｅｎｉｘの技術およびＭｅｄａｒｅｘの技術もまた参照のこと）。

ＩＬ−１０の所定の断片に対する、抗体および結合組成物は、キャリアタンパク質と共に、ポリペプチドの複合物、断片、ペプチド、またはエピトープを用いる動物の免疫処置によりもたらされ得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞から、調製される。これらの抗体は、正常なＩＬ−１０または不完全なＩＬ−１０への結合についてスクリーニングされ得る。これらのモノクローナル抗体は通常ＥＬＩＳＡにより測定されて、通常は少なくとも約１μＭのＫ_ｄで、より通常には少なくとも約３００ｎＭのＫ_ｄで、代表的には少なくとも約３０ｎＭのＫ_ｄで、好ましくは少なくとも約１０ｎＭのＫ_ｄで、より好ましくは少なくとも約３ｎＭのＫ_ｄか、またはそれより良いＫ_ｄで、結合する。適切な非ヒト抗体は以下のＤ節に記載の生物学的アッセイを使用しても、また同定され得る。

（Ｃ．ＩＬ−１０特異的抗体のヒト化）
任意の適切な非ヒト抗体が、超可変領域についての供給源として、使用され得る。非ヒト抗体の供給源としては、マウス、イヌ、ウシ、および霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。大半の部分について、ヒト化抗体は、ヒトイムノグロブリン（受容側の抗体）であり、その受容側の超可変領域の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類のような非ヒト種（供与側の抗体）由来の超可変領域の残基により置き換えられている。いくつかの事例において、ヒトイムノグロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられている。その上、ヒト化抗体は、受容側の抗体または供与側の抗体において見出されない残基を含み得る。これらの改変は、所望の生物学的活性についての抗体の性能を、さらに洗練するためになされる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ等，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ等，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。

抗体を組換え操作するための方法は、例えば、Ｂｏｓｓ等（米国特許第４，８１６，３９７号）、Ｃａｂｉｌｌｙ等（米国特許第４，８１６，５６７号）、Ｌａｗ等（欧州特許出願公開第４３８３１０号）およびＷｉｎｔｅｒ（欧州特許出願公開第２３９４００号）により記載された。

ヒト化抗ＩＬ−１０抗体のアミノ酸配列の改変体は、ヒト化抗ＩＬ−１０抗体ＤＮＡへ適切なヌクレオチド交換を導入すること、またはペプチド合成により、調製される。このような改変体としては、例えば、ヒト化抗ＩＬ−１０Ｆ（ａｂ）（例えば、配列番号５および１０の）について示されるアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または、それらの残基への挿入、および／または、それらの残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせが、最終的な構造体が所望の特性を有するという条件で、その最終的な構造体に達するためになされる。アミノ酸交換はまた、ヒト化抗ＩＬ−１０抗体についての翻訳後のプロセスを変更し得る（例えば、グリコシル化部位の個数または位置を変更する）。

変異誘発に関して好ましい位置にある、ヒト化抗ＩＬ−１０抗体ポリペプチドの特定の残基または特定の領域を同定するための、有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１０８１−１０８５（１９８９）により記載されるように「アラニン走査変異誘発（ａｌａｎｉｎｅｓｃａｎｎｉｎｇｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）」と称される。ここで、標的残基のうちの一つの残基または標的残基の一群が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕのような荷電した残基）、それが、ＩＬ−１０抗原とアミノ酸との相互作用に影響するように、中性のアミノ酸または負に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）により置き換えられる。次いで置換に対して機能的に感受性を示すアミノ酸残基は、置換部位に、または置換部位の代わりに、さらなる改変体または他の改変体を導入することにより、洗練される。それゆえ、アミノ酸配列のバリエーションを導入する部位が規定されていても、変異の性質それ自体は、規定される必要は無い。例えば、所定の部位における変異の性能を分析するために、アラニン走査または無作為の変異誘発が、標的コドンまたは標的領域において実施され、そして発現されるヒト化抗ＩＬ−１０抗体改変体が、所望の活性について、スクリーニングされる。

アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基からポリペプチド（１００残基以上を含む）におよぶ、アミノ末端への融合、および／またはカルボキシル末端への融合、ならびに単一のアミノ酸残基または複数のアミノ酸残基の配列内部への挿入が挙げられる。末端への挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有するヒト化抗ＩＬ−１０抗体またはエピトープタグに融合された抗体が挙げられる。ヒト化抗ＩＬ−１０抗体分子についての他の挿入改変体としては、ヒト化抗ＩＬ−１０抗体のＮ末端またはＣ末端への、抗体の血清半減期を伸ばす酵素またはポリペプチドの融合が挙げられる。

別の型の改変体は、アミノ酸置換改変体である。これらの改変体は、除去されたヒト化抗ＩＬ−１０抗体分子における少なくとも１つのアミノ酸残基を有し、かつ、その場所に挿入された異なる残基を有する。置換性の変異誘発について、最大の目的とする部位としては、超可変ループが挙げられるが、ＦＲの改変もまた意図される。下記の方法における表２および表３は、改変され得る超可変領域の残基について、手引きを提供する。抗原結合に関与する、超可変領域の残基またはＦＲ残基は、一般的に、比較的保存的な様式により、置換される。

抗体についてのアミノ酸改変体の別の型は、抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。改変することは、抗体内に見出される炭水化物部分の１つ以上の削除、および／または抗体内に存在しないグリコシル化部位の１つ以上の付加を指す。抗体のグリコシル化は、代表的に、Ｎ連結かまたはＯ連結のいずれかである。Ｎ連結は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の連結をいう。トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここでＸはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的連結のための認識配列である。それゆえ、ポリペプチドにおける、これらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を生成する。Ｏ連結グリコシル化は、糖（Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロース）のうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸（最も一般的には、セリンまたはスレオニン）への連結をいうが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた、使用され得る。

抗体へのグリコシル化部位の付加は、１つ以上の上記のトリペプチド配列を含むようにアミノ酸配列を改変することにより、都合よく達成される（Ｎ連結グリコシル化部位について）。改変はまた、元の抗体の配列に対する、１つ以上のセリン残基またはスレオニン残基の付加、または置換によってもなされ得る（Ｏ連結グリコシル化部位について）。

ヒト化ＩＬ−１０特異的抗体のアミノ酸配列改変体をコードする核酸分子は、当該分野において公知の様々な方法により、調製される。これらの方法としては、天然の供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列改変体の場合）、あるいはヒト化抗ＩＬ−１０抗体の先に調製された改変体もしくは非改変型についての、オリゴヌクレオチド介在性（または、部位指向性）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、およびカセット式変異誘発による調製、が挙げられるが、これらに限定されない。

通常は、ヒト化抗ＩＬ−１０抗体のアミノ酸配列改変体は、もとのヒト化抗体の重鎖または軽鎖（例えば、配列番号５および配列番号１０のような）のいずれかのアミノ酸配列と、少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に関する同一性または相同性は、本明細書では、配列を並置し、必要な場合、最大の配列同一性パーセントを達成するように、ギャップを導入し、そしていかなる保存的置換も配列同一性の部分とみなさないとした後に、候補配列における、ヒト化抗ＩＬ−１０残基と一致するアミノ酸残基の割合と定義される。抗体配列へのＮ末端の伸長、Ｃ末端の伸長、もしくは内部の伸長、欠失、または挿入のいずれも、配列同一性または相同性に影響するとは解釈されない。

ヒト化抗体は、任意のイムノグロブリンクラス（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥが挙げられる）より選択され得る。好ましくは、抗体はＩｇＧ抗体である。任意のＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、およびＩｇＧ_４が挙げられる）が使用され得る。ＩｇＧアイソタイプの改変体もまた、意図される。ヒト化抗体は、１つより多いクラス、または、１つより多いアイソタイプ由来の配列を含み得る。所望の生物学的活性を生じるために必要な定常ドメイン配列の最適化は、下記の生物学的アッセイにおいて抗体をスクリーニングすることにより、容易に達成される。

同様に、いずれのクラスの軽鎖が、本明細書における組成物および方法において、使用され得る。具体的には、κ、λ、または、その改変体が、本発明の組成物および方法において有用である。

非ヒト抗体由来のＣＤＲ配列の、任意の適切な部分が使用され得る。ＣＤＲ配列は、そのＣＤＲ配列が、使用されるヒト抗体配列および非ヒト抗体配列と異なるように、少なくとも１残基の置換、挿入、または欠失により、変異誘発され得る。このような変異は最小であることが意図される。代表的には、ヒト化抗体残基のうち少なくとも７５％が、非ヒトＣＤＲ残基のヒト化抗体残基と一致し、より多くは９０％、最も好ましくは９５％を超えて一致する。

ヒト抗体由来のＦＲ配列の、任意の適切な部分が使用され得る。ＦＲ配列は、そのＦＲ配列が、使用されるヒト抗体配列および非ヒト抗体配列と異なるように、少なくとも１残基の置換、挿入、または欠失により、変異誘発され得る。このような変異は最小であることが意図される。代表的に、ヒト化抗体残基のうち少なくとも７５％が、ヒトＦＲ残基のヒト化抗体残基と一致し、より多くは９０％、最も好ましくは９５％を超えて一致する。

ＣＤＲ残基およびＦＲ残基が、Ｋａｂａｔによる標準配列の定義に従って、決定される。Ｋａｂａｔ等，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，ＢｅｔｈｅｓｄａＭｄ．（１９８７）。

ヒト化抗体のための、受容体生殖細胞系配列を同定するための方法が、本明細書で提供され、この方法は、ａ）所望の生物学的活性を有する非ヒト抗体を同定する工程；ｂ）非ヒト抗体のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインのアミノ酸配列を決定する工程；ならびにｃ）非ヒト抗体の配列を、ヒト生殖細胞系配列の群と比較する工程であり、この比較は、以下の下位工程：１）上記Ｋａｂａｔに従って、非ヒトＶ配列に残基番号を割り当てる工程、２）上記Ｋａｂａｔに従って、この配列中のＣＤＲ領域およびＦＲ領域を線引きする工程、３）非ヒトおよびヒト抗体生殖細胞系の配列が一致する、特定の残基位置での、所定のスコア数を割り当てる工程、および４）それぞれのヒト生殖細胞系配列について総スコアを生成するために、全残基スコアを総計する工程を包含する、工程；ならびにｄ）全残基スコアが最も高いヒト生殖細胞系配列を、受容体生殖細胞系配列と同定する工程を包含する。１つの実施形態において、この方法は、５）下位工程（４）の後に全残基スコアが一致する生殖細胞系配列に対し、非ヒトおよびヒト抗体生殖細胞系の配列が一致し、下位工程（３）でスコア付けされなかった、それぞれのＦＲ残基位置について、スコア数「１」を割り当てる下位工程；６）それぞれのヒト生殖細胞系配列について総スコアを生成するために、全残基スコアを総計する下位工程を、さらに包含する。特定の実施形態において、非ヒト抗体は、ＩＬ−１０に特異的であり、かつＩＬ−１０の生物学的活性を阻害する。上記方法により生成された抗体もまた、本明細書において提供される。

１つの実施形態において、以下の方法を使用して、ＩＬ−１０抗体がヒト化される。第一に、ＩＬ−１０抗体の非ヒトＶ_ＬドメインおよびＶ_Ｈドメインが、クローニングおよび配列決定され、アミノ酸配列が決定される。次に、非ヒトＶ_Ｈ配列が、５つのヒトＶ_Ｈ生殖細胞系アミノ酸配列の群と比較される。この５つの群は、下位群ＩＧＨＶ１および下位群ＩＧＨＶ４由来の１つの代表物、ならびに下位群ＩＧＨＶ３由来の３つの代表物を含む。Ｖ_Ｈ下位群は、Ｍ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８：１００−１１６（２００１）に記載されている。具体的には、５つの生殖細胞系配列との比較は、Ｋａｂａｔ番号付け方式に従った、非ヒトＶ_Ｈ配列に対する残基番号の割り当てから開始する。Ｋａｂａｔ等，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂ．９１−３２４２（第５版，１９９１）を参照のこと。次に、非ヒトＶ_Ｈ配列は、５つのヒト生殖細胞系配列のそれぞれと並置される。Ｖ遺伝子は、Ｖ_Ｈ残基１−９４しか含まないので、これらの残基のみがアラインメントで検討される。次に、この配列中の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）が線引きされる。Ｋａｂａｔ等，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂ．９１−３２４２（第５版，１９９１）、およびＣ．Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）に提供される定義の組み合わせに従って、ＣＤＲおよびＦＲが線引きされる。それゆえ、使用されるＣＤＲの定義は、Ｖ_ＨドメインのＣＤＲ１について残基２６〜３５、Ｖ_ＨドメインのＣＤＲ２について残基５０〜６５、およびＶ_ＨドメインのＣＤＲ３について残基９５〜１０２である。次の工程は、非ヒト配列およびヒト配列が一致する、同定された残基位置にスコア数を割り当てることを伴う。このスコア付けの一例が、以下の表２に示される。

＊Ｃ．Ｃｈｏｔｈｉａ等，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３，（１９８９）において、ＣＤＲ立体配座に影響すると記載される。

残基位置に、スコア数を割り当てられた後、全残基スコアが総計される。受容体生殖細胞系配列は、総スコアが最も高い配列である。２つ以上の生殖細胞系配列が同一のスコアを有する場合、次に、非ヒト配列およびヒト配列が以下の残基（１、３、５〜２３、２５、３６、３８、４０〜４３、４６、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９〜９０、および９２（最大４９））と一致する、それぞれの位置の総計に、１を加算する。再び、残基スコアが総計され、総スコアの最も高い配列が、受容体生殖細胞系配列である。それでもなお、２つ以上の生殖細胞系配列が同一のスコアを有する場合、いずれかの１つが、受容体生殖細胞系配列として使用され得る。

Ｖ_Ｌ配列が、Ｖ_Ｌのκサブクラスのメンバーである場合、ＩＬ−１０特異的抗体由来の非ヒトＶ_Ｌ配列が、４つのヒトＶ_Ｌκ生殖細胞系アミノ酸配列の群と比較される。４つの
配列は、４つの確立されたヒトＶ_Ｌ下位群（Ｖ．Ｂａｒｂｉｅ＆Ｍ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ１５：１７１−１８３（１９９８）およびＭ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ１８：１６１−１７４（２００１）に列挙されている）それぞれに由来する１つの代表物を含む。４つの配列はまた、Ｋａｂａｔ等，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂ．９１−３２４２，ｐｐ．１０３−１３０（第５版，１９９１）に列挙されている、４つの下位群に対応する。４つの生殖細胞系配列に対する、非ヒト配列の比較は、Ｋａｂａｔ等，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂ．９１−３２４２（第５版，１９９１）に従った、非ヒトＶ_Ｌ配列残基に対する残基番号の割り当てから開始する。次に、非ヒトＶ_Ｌ配列は、４つのヒト生殖細胞系配列のそれぞれと並置される。Ｖ遺伝子は、Ｖ_Ｌ残基１〜９５しか含まないので、これらの残基のみがアラインメントで検討される。次に、相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）が、この配列中において、線引きされる。Ｋａｂａｔ等，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂ．９１−３２４２（第５版，１９９１）、およびＣ．Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）に提供される定義の組み合わせに従って、ＣＤＲおよびＦＲが線引きされる。それゆえ、使用されるＣＤＲの定義は、Ｖ_ＬドメインのＣＤＲ１について残基２４〜３４、Ｖ_ＬドメインのＣＤＲ２について残基５０〜５６、およびＶ_ＬドメインのＣＤＲ３について残基８９〜９７である。次の工程は、非ヒト配列およびヒト配列が一致する、同定された残基位置にスコア数を割り当てることを伴う。このスコア付けの一例が、以下の表３に示される。

残基位置に、スコア数を割り当てられた後、全残基スコアが総計される。受容体生殖細胞系配列は、最も高い総スコアを有する配列である。２つ以上の生殖細胞系配列が同一のスコアを有する場合、次に、以下の残基（１、３、５−２３、３５、３７、３９−４２、５７、５９−６１、６３、６５−７０、７２−８６、および８８）について、非ヒト配列およびヒト配列が一致するそれぞれの位置に対して、総計に１を加算する。再び、残基スコアが総計され、総スコアの最も高い配列が、受容体生殖細胞系配列である。それでもなお、２つ以上の生殖細胞系配列が同一のスコアを有する場合、どちらかの１つが、受容体生殖細胞系配列として、使用され得る。

抗体の組換え生成のために、これをコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（このＤＮＡの増幅）ためか、または発現のために、複製可能なベクターに挿入される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順（例えば、抗体の重鎖および抗体の軽鎖をコードする遺伝子に、特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブの使用により）を使用することで、容易に、単離および配列決定される。多くのベクターが利用可能である。一般的に、ベクター構成要素としては、１つ以上の以下のもの：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列、が挙げられるが、これらに限定されない。

１つの実施形態において、この抗体は、ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子またはその結合断片であり、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片および少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片を含む。この抗体軽鎖可変領域またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１（ＫＴＳＱＮＩＦＥＮＬＡ）、ＣＤＲ２における配列番号２（ＮＡＳＰＬＱＡ）、およびＣＤＲ３における配列番号３（ＨＱＹＹＳＧＹＴ）からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。この抗体重鎖可変領域またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号６（ＧＦＴＦＳＤＹＨＭＡ）、ＣＤＲ２における配列番号７（ＳＩＴＬＤＡＴＹＴＹＹＲＤＳＶＲＧ）、およびＣＤＲ３における配列番号８（ＨＲＧＦＳＶＷＬＤＹ）からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。特定の実施形態において、この抗体軽鎖またはその結合断片は、配列番号４：

の可変領域を有するポリペプチドを含む。特定の一実施形態において、この抗体軽鎖またはその結合断片は、配列番号５の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。表４を参照のこと。特定の一実施形態において、この抗体重鎖またはその結合断片は、配列番号９：

の可変領域を有するポリペプチドを含む。別の特定の実施形態において、この抗体重鎖またはその結合断片は、配列番号１０の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。表５を参照のこと。

ヒト化１２Ｇ８軽鎖およびヒト化１２Ｇ８重鎖をコードする核酸配列を含むプラスミドが、それぞれ受託番号ＰＴＡ−５９２３および受託番号ＰＴＡ−５９２２として、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。

（表４ヒト化１２Ｇ８抗体の軽鎖についての全長配列）
配列番号５ヒト化１２Ｇ８抗体の全長アミノ酸配列
配列番号１９ヒト化１２Ｇ８抗体の全長核酸配列

（表５ヒト化１２Ｇ８抗体の重鎖についての全長配列）
配列番号１０ヒト化１２Ｇ８抗体の全長アミノ酸配列
配列番号２０ヒト化１２Ｇ８抗体の全長核酸配列

１つの実施形態において、抗体は、ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子またはその結合断片であり、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片および少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片を含む。この抗体軽鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１１（ＲＡＳＥＳＶＤＤＹＧＨＳＦＭＨ）、ＣＤＲ２における配列番号１２（ＲＡＳＴＬＥＳ）、およびＣＤＲ３における配列番号１３（ＱＱＧＮＥＤＰＷＴ）からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。この抗体重鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１５（ＧＦＳＬＴＮＹＧＶＨ）、ＣＤＲ２における配列番号１６（ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ）、およびＣＤＲ３における配列番号１７（ＮＲＧＹＤＶＹＦＤＹ）からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。特定の一実施形態において、この抗体軽鎖またはその結合断片は、配列番号１４の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。表６を参照のこと。さらに別の実施形態において、この抗体重鎖またはその結合断片は、配列番号１８の可変領域および定常領域を有するポリペプチドを含む。表７を参照のこと。

ヒト化１１Ｄ８重鎖およびヒト化１１Ｄ８軽鎖を含むプラスミドが、それぞれ受託番号ＰＴＡ−５９２６および受託番号ＰＴＡ−５９２７として、ＡＴＣＣに寄託された。

（表６ヒト化１１Ｄ８抗体の軽鎖についての全長配列）
配列番号１４ヒト化１１Ｄ８抗体の全長アミノ酸配列
配列番号２１ヒト化１１Ｄ８抗体の全長ヌクレオチド配列

（表７ヒト化１１Ｄ８抗体の重鎖についての全長配列）
配列番号１８ヒト化１１Ｄ８抗体の全長アミノ酸配列
配列番号２２ヒト化１１Ｄ８抗体の全長ヌクレオチド配列

１つの実施形態において、上記の抗体は、さらに重鎖定常領域を含み、この重鎖定常領域は、γ１、γ２、γ３、もしくはγ４ヒト重鎖定常領域、またはその改変体を含む。１つの実施形態において、上記抗体は、さらに軽鎖定常領域を含み、この軽鎖定常領域は、λまたはκヒト軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、これらの抗体の結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片である。

ＩＬ−１０に結合するキメラ組換え抗体分子またはその結合断片が、本明細書でさらに提供され、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片であって、この領域またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１、ＣＤＲ２における配列番号２、およびＣＤＲ３における配列番号３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体軽鎖可変領域またはその結合断片；ならびに、少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片であって、この領域またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号６、ＣＤＲ２における配列番号７、およびＣＤＲ３における配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体重鎖可変領域またはその結合断片を含む。

特定の実施形態において、キメラ組換え抗体分子は、配列番号２３に示される軽鎖および配列番号２４に示される重鎖を有する。表８を参照のこと。１２Ｇ８キメラ抗体軽鎖および１２Ｇ８キメラ抗体重鎖をコードする核酸が、それぞれ受託番号ＰＴＡ−５９２５および受託番号ＰＴＡ−５９２４として、ＡＴＣＣに寄託された。

（表８キメラ１２Ｇ８抗ヒトＩＬ−１０抗体の配列）

ＩＬ−１０に結合するキメラ組換え抗体分子またはその結合断片が、本明細書でさらに提供され、この抗体または結合断片は、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片であって、この鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１１、ＣＤＲ２における配列番号１２、およびＣＤＲ３における配列番号１３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体軽鎖またはその結合断片；ならびに、少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片であって、この鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１５、ＣＤＲ２における配列番号１６、およびＣＤＲ３における配列番号１７からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、抗体重鎖またはその結合断片を含む。

上記に開示された抗体のポリペプチドをコードする単離された核酸が、本明細書で、さらに提供される。発現ベクターもまた、本明細書で提供され、この発現ベクターは、このベクターを用いてトランスフェクトされた宿主細胞により認識される制御配列に、作動可能に連結された、単離された核酸配列を含む。宿主細胞が、本明細書で提供され、この宿主細胞は、単離された核酸配列を含むベクターを含む。ポリペプチドを生成する方法が、本明細書でさらに提供され、この方法は、このベクターを含む宿主細胞を、この核酸配列が発現される条件下で培養し、それによってこのポリペプチドを生成する工程、および、この宿主細胞からこのポリペプチドを回収する工程を包含する。

ＩＬ−１０に特異的な抗体をコードする単離された核酸配列が、本明細書で提供され、この核酸配列は、配列番号１９の核酸配列を有する軽鎖、および配列番号２０の核酸配列を有する重鎖、を含む。表４および表５を参照のこと。

ＩＬ−１０に特異的な抗体をコードする、単離された核酸配列が、本明細書で提供され、この核酸配列は、配列番号２１の核酸配列を有する軽鎖、および配列番号２２の核酸配列を有する重鎖、を含む。表６および表７を参照のこと。

上記の核酸配列にコードされた抗体の結合断片をコードする、単離された核酸配列が、本明細書でさらに提供される。１つの実施形態において、この結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片である。

本明細書の方法および組成物において、二重特異性抗体もまた、有用である。本明細書で使用される場合、用語「二重特異性抗体」とは、少なくとも２つの異なる抗原性エピトープに対する結合特異性を有する抗体（代表的には、モノクローナル抗体）をいう。１つの実施形態において、このエピトープは、同一の抗原由来である。別の実施形態において、このエピトープは、２つの異なる抗原由来である。二重特異性抗体作製についての方法は、当該分野において、公知である。例えば、二重特異性抗体は、２つのイムノグロブリン重鎖／軽鎖の対の共発現を使用して、組換え生成され得る。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ等，Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７−３９（１９８３）を参照のこと。あるいは、二重特異性抗体は、化学結合を使用して、調製され得る。例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ，等，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１（１９８５）を参照のこと。二重特異性抗体は、二重特異性抗体断片を含む。例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−４８（１９９３）、Ｇｒｕｂｅｒ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。

（Ｄ．ヒト化抗ＩＬ−１０抗体の生物学的活性）
ヒト化抗ＩＬ−１０抗体として望ましいと本明細書で同定された特性を有する抗体は、阻害性のインビトロ生物学的活性、または、適切な結合親和性に関して、スクリーニングされ得る。目的の抗体（例えば、サイトカイン受容体へのサイトカインの結合を遮断する抗体）により結合される、ヒトＩＬ−１０上のエピトープへ結合する抗体についてスクリーニングするために、ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＥｄＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄＬａｎｅ（１９８８）において記載されるような、慣用的な交差遮断（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイが実行され得る。あるいは、この抗体が目的のエピトープに結合するか否かを決定するために、例えば、Ｃｈａｍｐｅ等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４（１９９５）において記載されるようなエピトープマッピング（ｍａｐｐｉｎｇ）が実行され得る。標準スキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）分析を使用して、例えば、ヒトＩＬ−１０に対する抗体親和性が決定され得る。好ましいヒト化抗体は、約１×１０^−７以下のＫ_ｄ値；好ましくは、約１×１０^−８以下のＫ_ｄ値；より好ましくは、約１×１０^−９以下のＫ_ｄ値；および最も好ましくは、約２×１０^−１０以下のＫ_ｄ値で、ヒトＩＬ−１０に結合する抗体である。

本発明の組成物および方法において有用な抗体およびその断片は、生物学的に活性な抗体および断片である。本明細書で使用される場合、用語「生物学的に活性な」は、所望の抗原性エピトープに結合することができ、かつ、直接的または間接的に生物学的効果を発揮することのできる抗体または抗体断片をいう。代表的に、これらの効果は、ＩＬ−１０受容体へのＩＬ−１０の結合が失敗することに起因する。本明細書で使用される場合、用語「特異的」とは、標的抗原エピトープへの抗体の選択的な結合をいう。抗体は、所定のセットの条件下で、ＩＬ−１０への結合と、無関係の抗原または抗原混合物への結合とを比較することにより、結合の特異性について試験され得る。抗体が、無関係の抗原または抗原混合物へよりも、少なくとも１０倍多く、そして好ましくは５０倍多くＩＬ−１０へ結合する場合、その抗体は特異的であるとみなされる。

阻害性のＩＬ−１０特異的抗体は、任意の様式（例えば、ＩＬ−１、ＩＦＮ−γ、ＰＧＥ２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ、ＣＣケモカインおよびＣＸＣケモカインの産生、ならびにＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＣＤ５４、ＣＤ８０、およびＣＤ８６の細胞表面での発現が挙げられるが、これらに限定されない）でその生物学的活性を阻害し得る。ＩＬ−１０特異的抗体の生物学的活性は、任意の有用な方法により、測定され得る。例えば、米国特許第６，２３９，２６０号および米国特許第６，２０７，１５４号を参照のこと。１つの実施例において、マウス肥満細胞株（ＭＣ９／２）を使用した細胞増殖アッセイにおいて、生物学的活性が評価される。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−Ｓｎｉｐｅｓ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：５０７−１０（１９９１）を参照のこと。ＩＬ−１０は、この細胞株の増殖を刺激する。それゆえ、阻害性抗体が、増殖を低減するその能力により、同定され得る。ＭＣ９／２細胞株の増殖についてのＥＤ_５０は、代表的に、０．５−１．０ｎｇ／ｍＬである。抗体の非存在下、または、非結合性の抗体の存在下における細胞の増殖と比較して、抗体が細胞の増殖を阻害する場合、その抗体は、増殖に対して阻害性である。増殖は、任意の適切な方法を使用して、定量化され得る。代表的に、ＤＮＡへの放射性標識されたヌクレオチド（例えば、^３Ｈチミジン）の取り込みを評価することにより、増殖が決定される。別の実施形態において、ＡＴＰ発光により、増殖が決定される。本発明の組成物において有用な抗体は、好ましくはＩＬ−１０の生物学的活性の８０％を、より好ましくはＩＬ−１０の生物学的活性の９５％を、最も好ましくはＩＬ−１０の生物学的活性の９９％を阻害する。

（Ｅ．ヒト化抗ＩＬ−１０抗体の使用）
ヒト被験体における免疫応答を抑制する方法が、本明細書において提供され、この方法は、ＩＬ−１０の生物学的活性を遮断するのに有効な量のＩＬ−１０に特異的な抗体またはその結合断片を、免疫応答の抑制を必要とする被験体に投与する工程を包含する。ここで、この抗体は、ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子またはその結合断片であり、少なくとも１つの抗体軽鎖可変領域またはその結合断片および少なくとも１つの抗体重鎖可変領域またはその結合断片を含む。この抗体軽鎖可変領域またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１、ＣＤＲ２における配列番号２、およびＣＤＲ３における配列番号３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。この抗体重鎖可変領域またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号６、ＣＤＲ２における配列番号７、およびＣＤＲ３における配列番号８からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。

ヒト被験体における免疫応答を抑制する方法が、本明細書で、さらに提供され、この方法は、ＩＬ−１０の生物学的活性を遮断するのに有効量のＩＬ−１０に特異的な抗体またはその結合断片を、免疫応答の抑制を必要とする被験体に投与する工程を包含する。ここで、この抗体は、ＩＬ−１０に結合するヒト化組換え抗体分子またはその結合断片であり、少なくとも１つの抗体軽鎖またはその結合断片および少なくとも１つの抗体重鎖またはその結合断片を含む。この抗体軽鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１１、ＣＤＲ２における配列番号１２、およびＣＤＲ３における配列番号１３からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。この抗体重鎖またはその結合断片は、ＣＤＲ１における配列番号１５、ＣＤＲ２における配列番号１６、およびＣＤＲ３における配列番号１７からなる群から選択される、少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドと；フレームワーク領域であって、ここでこのフレームワーク領域のアミノ酸配列が、全てもしくは実質的に全てのヒトイムノグロブリンのアミノ酸配列であるフレームワーク領域とを含む。

これらの方法により抑制される免疫応答は、体液性応答または細胞性応答である。体液性応答の抑制または細胞性応答の抑制は、当該分野において周知の方法を使用して、決定され得る。例えば、高レベルの自己反応性抗体が関連する疾患（例えば、ＳＬＥ）において、処置前の血清レベルと比較した、この自己反応性抗体の血清レベルにおける低下は、体液性応答の抑制の指標である。同様に、細胞性免疫応答の抑制は、周知のインビトロ分析（例えば、増殖アッセイおよび細胞傷害アッセイ、または、例えばフローサイトメトリー分析による、末梢血リンパ球の活性化の表現型についての特徴づけ）を使用して、測定され得る。ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、最新版を参照のこと。１つの実施形態において、この方法により処置される被験体は、全身性エリテマトーデスに罹患している。別の実施形態において、被験体は免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＣ）に罹患している。さらに別の実施形態において、被験体はループス腎炎に罹患している。さらなる実施形態において、被験体はＨＩＶに罹患している。別の実施形態において、被験体はＣ型肝炎に罹患している。

組成物が、本明細書で提供され、この組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせた、抗体またはその結合断片（この抗体は、上記に開示された抗体のうちの１つである）を含む。

ＩＬ−１０特異的抗体による処置で利益を得るいかなる被験体も、本明細書で提供された組成物および方法を使用して処置され得る。いかなる被験体も、本明細書で提供された方法および組成物により、処置され得る。このような被験体は、自己免疫疾患もしくは自己免疫症状または病原体誘発性の免疫病理に罹患している哺乳類（好ましくは、ヒト）である。特定の一実施形態において、被験体はＳＬＥ、ループス腎炎、慢性関節リウマチ、ＩＴＣ、ＨＩＶまたはＣ型肝炎に罹患している。開示された方法および組成物の獣医学上の使用もまた意図される。

本明細書で使用される場合、「阻害する」または「処置する」もしくは「処置」は、自己免疫疾患または病原体誘発性の免疫病理に関連する症状の発症の延期、および／または、発症することが予想されるそのような症状の重症度の低減を含む。この用語は、現存する制御されていないか、または望まれていない自己免疫関連性の症状または病原体誘発性の免疫病理の症状を改善すること、さらなる症状を予防すること、および、そのような症状の根本的な原因を改善することまたは予防することを、さらに含む。したがって、この用語は、自己免疫もしくは病原体誘発性の免疫病理の疾患もしくは症状に罹患した脊椎動物の被験体に、または、そのような疾患もしくは症状が発症する可能性を有する脊椎動物の被験体に、有益な結果が与えられたことを示す。

本明細書で使用される用語「治療上の有効量」または「有効量」は、ＩＬ−１０特異的抗体が、単独でか、またはさらなる治療剤と組み合わせて、細胞、組織または被験体に投与された場合、自己免疫疾患または病原体誘発性の免疫病理に関連する疾患もしくは状態、あるいは疾患の進行を予防または改善するために効果的なＩＬ−１０特異的抗体の量を言及する。治療上の効果的な投与量は、症状の改善（例えば、関連する病状の処置、治癒、予防、または改善）または、そのような病状の処置、治癒、予防、もしくは改善の速度の増大をもたらすのに十分な化合物の量を、さらに言及する。活性成分の個体への単独投与が適用される場合、治療上の効果的な投与量は、その単独の成分を言及する。組み合わせが適用される場合、治療上の効果的な投与量は、連続的に組み合わせて投与されるか、または同時に組み合わせて投与されるかに関わらず、治療効果をもたらす、活性成分の組み合わせた量を言及する。

本発明において、有用な抗体（いかなる供給源由来（例えば、限定無しに、組換え供給源由来および非組換え供給源由来が挙げられる）であろうとも）は、種々の疾患を処置もしくは改善するための投与量で、その抗体単独でかまたは抗体が適切なキャリアもしくは適切な賦形剤と混合されている薬学的組成物において、必要とする被験体に投与され得る。このような組成物はまた、タンパク質およびキャリアに加えて、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、および当該分野において周知である他の物質を含み得る。用語「薬学的に受容可能」は、活性成分の生物学的活性についての有効性を妨害しない、非毒性物質を意味する。キャリアの特性は、投与経路に依存する。

本発明の薬学的組成物はまた、免疫抑制剤または免疫調節剤を含み得る。任意の適切な免疫抑制剤（例えば、抗炎症剤、コルチコステロイド、シクロスポリン、タクロリムス（すなわちＦＫ５０６）、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、インターフェロン、可溶性サイトカイン受容体（例えば、ｓＴＮＲＦおよびｓＩＬ−１Ｒ）、サイトカイン活性を中和する薬剤（例えば、インフリキシマブ、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ））、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスパガリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、サリドマイド、グラチラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）、アザチオプリン、レフルノマイド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、シクロホスファミド、およびメトトレキサート等が挙げられるが、これらに限定されない）が使用され得る。薬学的組成物はまた、光線療法および放射線のような治療様式と共に、使用され得る。

別の実施形態において、本明細書で提供された方法のアッセイを実行するために必要な試薬を含むキットが提供される。具体的には、１つ以上の容器を含む区分キット（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｋｉｔ）が、本明細書において提供され、ここで、第一の容器は、１つ以上のＩＬ−１０に特異的な抗体を含み、１つ以上の他の容器は、１つ以上の以下：再構成試薬、投与試薬、を含む。その容器はガラス、プラスティック、またはプラスティックもしくは紙の細片であり得る。１つの実施形態において、キットはまた、書面による取り扱い説明書を含む。

本明細書で提供された処置の方法または使用の方法の実施において、本明細書で提供された、治療上の効果的な抗体の量が、ＩＬ−１０に対する処置に適切な状態を有する哺乳動物に、投与される。抗体は、単独でか、または他の治療（例えば、他の免疫調節因子（例えば、サイトカイン）および他の免疫抑制剤等を使用する処置）と組み合わせてかのいずれかで、本明細書中の方法に従って投与され得る。１つ以上の生物学的に活性な薬剤が、共に投与される場合、本明細書で提供された抗体は、その生物学的に活性な薬剤と同時にか、または連続的にかのいずれかで、投与され得る。連続的に投与される場合、主治医は、生物学的に活性な薬剤と組み合わせて本発明のタンパク質を投与する、適切な順序を決める。

例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％に致死的である投与量）およびＥＤ_５０（集団の５０％に対し治療上有効な投与量）を測定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順により、単独でかまたは免疫抑制剤と組み合わせて投与される抗体組成物の毒性および治療上の有効性が定量され得る。毒性効果と治療有効性との間の投与量比が治療係数であり、治療係数はＬＤ_５０とＥＤ_５０との間の比として表現され得る。高い治療係数を示す抗体が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から取得されたデータは、ヒトでの使用のための投与量範囲の策定において、使用され得る。このような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をわずかしか有さないか全く有さない、ＥＤ_５０を含む循環量の範囲内である。投与量は、採用された投与形態および使用された投与経路に依存して、この範囲内を変動し得る。

本方法の抗体の処方および投与のための技術が、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，最新版において、見られ得る。投与形態は、特に重要ではない。適切な投与経路としては、例えば、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、または腸管投与；非経口送達（筋内注射、皮下注射、骨髄内注射、および髄腔内注射、脳室内直接注射、静脈注射、腹腔内注射、鼻腔内注射もしくは眼内注射が挙げられる）が挙げられる。薬学的組成物中に使用される抗体の投与、または本発明の方法の実施は、種々の従来の方法（例えば、経口摂取、吸入、局所塗布、または皮膚注射、皮下注射、腹腔内注射、非経口的注射、動脈注射もしくは静脈注射が挙げられる）で、実行され得る。患者への静脈投与が好ましい。

あるいは、多くの場合、徐放制処方または持続性処方において、例えば関節炎の関節または免疫病理により特徴づけられた病原体誘発性病変への抗体の直接注射によって、全身的な様式よりもむしろ、局所的な様式で、抗体を投与し得る。その上、例えば、組織特異的な抗体（例えば、関節炎の関節、または、免疫病理により特徴づけられた病原体誘発性の病変を標的とする）でコートされたリポソーム中の、標的化薬物送達系において、抗体を投与し得る。このリポソームは、罹患組織により、選択的に標的とされ、吸収される。

したがって、本方法にしたがう使用のための薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアを使用する従来の様式で処方され得、このキャリアは、活性化合物を薬学的に使用可能な調製物にするプロセスを促進する賦形剤および補助剤を含む。これらの薬学的組成物は、それ自体が公知である方法を用いて（例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、粉末化、乳化、被膜化、被包化（ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ）、または凍結乾燥プロセスにより）、製造され得る。適切な処方は、選択された投与経路に依存する。液体の形態で投与される場合、液体キャリア（例えば、水、石油、動物由来の油または植物由来の油（例えば、ピーナッツ油、鉱油、大豆油、もしくはゴマ油が挙げられる）あるいは合成油）が追加され得る。液体の形態の薬学的組成物は、さらに、生理食塩水、ブドウ糖溶液もしくは他の糖類溶液、またはグリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）を含み得る。液体の形態で投与される場合、薬学的組成物は、重量約０．５重量％から約９０重量％の本発明のタンパク質を含み、好ましくは約１重量％から約５０重量％の本発明のタンパク質を含む。

本明細書の方法の抗体の治療上の有効量が、静脈注射、皮膚注射または皮下注射により投与される場合、本発明のタンパク質は、発熱因子のない、非経口的に受容可能な水溶液の形態である。ｐＨ、等張性、および安定性等を当然考慮した上で、このような非経口的に受容可能なタンパク質溶液の調製は、当該分野の技術の範囲内である。静脈注射、皮膚注射または皮下注射のための好ましい薬学的組成物は、本発明のタンパク質に加えて、等張性ビヒクル（例えば、食塩注射液、リンガー液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖および食塩注射液、乳酸化リンガー液、または当該分野において公知の他のビヒクルが挙げられる）を含むべきである。本発明の薬学的組成物はまた、安定剤、保存剤、緩衝液、抗酸化剤、または当業者に公知の他の添加剤を含み得る。注射のために、本発明の薬剤は、水溶液中に、好ましくは生理的に適合性の緩衝液（例えば、ハンクス液、リンガー液、または生理食塩緩衝液が挙げられる）中に、処方され得る。経粘膜投与のために、その処方物中に、浸透されることを阻むのに適切な浸透剤が使用される。一般的に、このような浸透剤は、当該分野において公知である。

吸入による投与のために、本方法にしたがう使用のための抗体は、適切な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガスが挙げられる）を一緒に使用して、加圧された包みからなるエアロゾルスプレーの体裁の形態、または噴霧器の形態で、簡便に送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投与量単位は、計量された量を送達するバルブを提供することにより、決定され得る。吸入器または注入器での使用のためのカプセルおよび薬包（例えば、ゼラチン）は、化合物の粉末混合物および適切な粉末の基剤（例えば、ラクトースおよびデンプン）を含んで、処方され得る。この化合物は、注射による（例えば、ボーラス注射または連続的注入による）非経口投与のために、処方され得る。注射のための処方物は、さらなる保存剤と共に単位投与形態で（例えば、アンプル、または複数投与の容器で）提示され得る。この組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中で、懸濁液、溶液、または乳濁液といった形態を取り得、処方用の薬剤（例えば、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散化剤）を含み得る。

非経口投与のための薬用処方物としては、水溶性形態の活性化合物の水溶液が挙げられる。加えて、活性化合物の懸濁液は、適切な油性の注射用懸濁液として調製され得る。適切な親油性溶媒または親油性ビヒクルとしては、ゴマ油もしくは合成脂肪酸のような脂肪油、エチルオレイン酸塩もしくはトリグリセリドのようなエステル、またはリポソームが挙げられる。水性の注射用懸濁液は、懸濁液の粘性を増大させる物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、この懸濁液は、高濃度の溶液の調製を可能にさせるために、化合物の溶解度を増大させる、適切な安定剤または適切な薬剤を含み得る。あるいは、活性成分は、使用前の適切なビヒクル（例えば、発熱因子のない滅菌水）との構築のための、粉末形態であり得る。

本発明の薬学的組成物について開示された方法における有用な抗体の量は、処置される状態の性質および重症度、ならびに患者が経験している処置の前の性質に依存する。最終的に、主治医が本発明のタンパク質の量（このタンパク質で、個々の患者を処置する）を決定する。個々の患者の年齢、体重、および反応にしたがって、投与量が変動することが予想されるべきである。最初に、主治医は、低用量の本方法の抗体を投与し、患者の反応を観察する。その患者に対して、最適な治療上の効果が得られるまで、より高用量の本発明の抗体が投与され得、そのような時点において、投与量がさらには増加されない。本明細書における方法を実施するために使用される、種々の薬学的組成物は、体重１ｋｇあたり約０．０１μｇから体重１ｋｇあたり約１００ｍｇ（好ましくは、体重１ｋｇあたり約０．１μｇから体重１ｋｇあたり約１０ｍｇ、より好ましくは体重１ｋｇあたり約０．１μｇから体重１ｋｇあたり約１ｍｇ）の本発明の抗体を含むことが意図される。投与されるとき、本発明における使用のための治療用組成物は、もちろん、発熱因子のない生理的に受容可能な形態である。必要に応じて上記のような組成物にもまた含まれ得る、本発明の抗体以外の治療上有用な薬剤としては、代替的または追加的に、本発明の方法における組成物と共に、同時にまたは連続的に投与され得る。患者の状態を考慮して、個々の医師により、正確な処方、投与経路、および投与量が選択され得る。例えば、Ｆｉｎｇｌ等，ＴＨＥＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬＢＡＳＩＳＯＦＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ（最新版）を参照のこと。投与量および投与間隔は、所望の治療上の効果または最小有効濃度（ＭＥＣ）を維持するのに十分な活性成分の血漿レベルを提供するために、個別に調整され得る。ＭＥＣは、それぞれの化合物ごとに変動するが、インビトロでのデータ（例えば、本明細書で記載されたアッセイを使用して、生物学的活性の５０％−９０％の阻害を達成するために必要な濃度）から推定され得る。

本明細書で提供される抗体は、単独で投与され得るか、他の治療様式と組み合わせて投与され得る。本明細書で提供される抗体はまた、単独で投与され得るか、または、ＩＬ−１０活性の阻害因子として同定された他の抗体もしくは他の免疫抑制剤と組み合わせて、投与され得る。

自己免疫が関連するいかなる疾患も、本方法により処置され得る。好ましくは、ＩＬ−１０特異的抗体による処置の標的とされる自己免疫疾患は、異常なＩＬ−１０発現レベルおよび／または適切な細胞（すなわち、Ｔｈ１媒介性の）応答の欠如により、特徴づけられる。このような疾患としては、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＣ）、ループス腎炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。

病原体誘発性の免疫病理が関連する、いかなる疾患も、本方法により処置され得る。好ましくは、ＩＬ−１０特異的抗体による処置の標的とされる病原体誘発性の免疫病理は、異常なＩＬ−１０発現レベルおよび／または適切な細胞（すなわち、Ｔｈ１媒介性の）応答の欠如により、特徴づけられる。このような疾患としては、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎、内臓リーシュマニア症、マラリア、フィラリア症、らい、結核、カンジダ症、およびＭ．ａｖｉｕｍ感染が挙げられるが、これらに限定されない。

以下の実施例を参照して、本発明の広範な範囲が最も良く理解され、この実施例は、本発明を特定の実施形態に限定することを意図しない。

（実施例Ｉ．一般的な方法）
標準的な方法の一部が、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ，等（１９８２）ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ，ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，等（１９８９）ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，（第２版），ｖｏｌｓ．１−３，ＣＳＨＰｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ，等，ＢＩＯＬＯＧＹ，ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌ，等（１９８７および増補）ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋに記載または参照されている。タンパク質精製に関する方法としては、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，等（１９８７および定期的な増補）；ＭＥＴＨ．ＥＮＺＹＭＯＬ．，ｖｏｌ．１８２，におけるＤｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「ＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」および、このシリーズにおける他の巻；ならびにタンパク質精製用製品の使用に関するメーカーの文献、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，またはＢｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡを参照のこと。組換え技術との組合せが、適切な断片（例えば、ＦＬＡＧ配列、または、プロテアーゼで除去可能な配列を介して融合され得る同等のもの）との融合を可能にする。例えば、Ｓｅｔｌｏｗ（ｅｄ．）ＧＥＮＥＴＩＣＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ，ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＡＮＤＭＥＴＨＯＤＳ１２：８７−９８，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．におけるＨｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＰｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈＭｅｔａｌＣｈｅｌａｔｅＡｂｓｏｒｂｅｎｔ」；およびＣｒｏｗｅ，等（１９９２）ＱＩＡＥＸＰＲＥＳＳ：ＴＨＥＨＩＧＨＬＥＶＥＬＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ＆ＰＲＯＴＥＩＮＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳＹＳＴＥＭ，Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡを参照のこと。

コンピュータによる配列分析を、例えば、入手可能なソフトウェアプログラム（ＧＣＧ（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およびＧｅｎＢａｎｋ典拠のものが挙げられる）を使用して実行する。公共配列データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋなどの由来の）もまた使用した。

（実施例ＩＩ．抗ヒトＩＬ−１０抗体のヒト化）
ラット抗ヒトＩＬ−１０抗体（１２Ｇ８）のヒト化を、上記Ｃ節に記載されているように、実行した。図１は、調べられた生殖細胞系の配列と一致した残基の位置についての、残基番号の割当て、および相当するスコア数の指定を示している。１２Ｇ８抗ヒトＩＬ−１０抗体の１２Ｇ８軽鎖可変領域（図１Ａ）および重鎖可変領域（図１Ｂ）、ならびに１１Ｄ８抗ヒトＩＬ−１０抗体の軽鎖可変領域（図１Ｃ）および重鎖可変領域（図１Ｄ）についての予測を示している。

（実施例ＩＩＩ．１２Ｇ８（抗ヒトＩＬ−１０抗体）の薬物動態）
目的：マウスモデル内での１２Ｇ８抗体について、インビボ末端半減期および皮下の生物学的利用能に関する評価の取得。

抗体：抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、８％ショ糖、ｐＨ５．２５のビヒクル中で投与した。

マウス：Ｃｒｌ：ＣＤ−１（登録商標）（ＩＣＲ）ＢＲ雌マウスを、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより購入した。

実験計画：マウスに対し、静脈内（ｉ．ｖ．尾部側方の血管中）または皮下（ｓ．ｃ．頚部のうなじ、肩甲骨の間、または側腹の側方）に、抗体の単回ボーラス注射を受けさせた。抗体投与量としては、マウス毎に、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇであった。注射後２８日まで、マウスを観察した。この期間中、マウスを計量し、血清サンプルを取得した。１２Ｇ８（ＳＣＨ７０８９８０）グループ（グループ１−８）についての血清サンプルを、注射後０．５時間、１時間、３時間、６時間、１０時間、１６時間、１日、２日、３日、５日、７日、１０日、１４日、２１日、および２８日に、タイムポイント当たり５匹のマウスを使用して、取得した。ビヒクルグループ（グループ９）では、血清サンプルを、注射前、注射後１時間、１４日、または２１日のみに、タイムポイント当たり５匹のマウスを使用して、取得した。血清ＩＬ−１０レベルおよび血清１２Ｇ８抗体レベルを、特異的ＥＬＩＳＡを使用して、決定した。

（薬物動態パラメータの決定）
全てのパラメータを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎＰｒｏｖ４．０を使用して、推定または計算した。ノンコンパートメント解析（ｎｏｎｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌａｎａｌｙｓｅｓ）のために、Ｍｏｄｅｌ２００（ＳＣ）またはＭｏｄｅｌ２０１（ＩＶ）を使用した。入力データは、投与量で正規化したグループの相加平均濃度−時間データであった。入力した投与量は、グループ２−４およびグループ６−８に関して名目上の投与量であった。グループ１および５についての入力した投与量は、０．０１４ｍｇ／ｋｇであった。区画解析（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓ）のために、Ｍｏｄｅｌ３（ＳＣ）またはＭｏｄｅｌ７（ＩＶ）を使用した。入力データは、投与量で正規化した個々の動物の濃度−時間データであった。個々のデータポイントについて、全てのフィッティングが均一な重み付け（ｗｔ＝１）を使用した。入力した投与量は、グループ２−４およびグループ６−８に関して名目上の投与量であった。グループ１および５についての入力した投与量は、０．０１４ｍｇ／ｋｇであった。適合度を、目視検査、推定パラメータ／計算パラメータについてのＳＥの比較、残差、およびＡＩＣ＆ＳＢＣ規準を使用して、評価した。投与溶液の回収についての概要を、下記の表に示す。

（表９体重、投与量のレベル、および投与溶液の濃度についての概要（平均値±ＳＤ））

下記に示す表は、ｉ．ｖ．注射によって１２Ｇ８抗体を受容したグループについてのデータをまとめる。

（表１０ＩＶボーラス投与グループに関するノンコンパートメント法パラメータ）

（表１１ＩＶボーラス投与グループに関するコンパートメント法パラメータ）

下記に示す表は、ｓ．ｃ．注射によって１２Ｇ８抗体を受容したグループについてのデータをまとめる。

（表１２ＳＣボーラス投与グループに関するノンコンパートメント法パラメータ）

＊ＩＶＡＵＣを過小評価したため、生物学的利用能は高くあり得る。

（表１３ＳＣボーラス投与グループに関するコンパートメント法パラメータ）

種々の投与量および経路を使用した１２Ｇ８抗体についての濃度−時間プロフィールを図２に示す。

（結論）
最低の投与量レベルのものを除き、全てのグループにおいて、投与量は、名目上のものの２０％の範囲内であった。予想した濃度より低い濃度を、おそらく抗ＳＣＨ７０８９８０（ヒト化１２Ｇ８）抗体の存在のため、グループ７または８において注射後１０日より観察した。（Ａ）ＩＶボーラス薬物動態。半減期、クリアランスおよび分布容量は、他のＩｇＧ１モノクローナル抗体に見られる値を代表する。分布容量は、最小血管外分布を示唆する血清容量と、おおよそ等しいか、またはそれよりわずかに大きい。末期半減期（ｔｅｒｍｉｎａｌｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）は、１０日から１７日の範囲であった。ＡＵＣの増加量は、ほぼ投与量に比例し、試験した投与量の範囲にわたって、線形ＰＫであることを示唆した。（Ｂ）ＳＣボーラス薬物動態。最大濃度は、ほぼ投与量に比例し、また、投与後１−２日までに最大濃度に達し、試験した投与量の範囲にわたって、一貫した吸収速度および範囲であることを示唆した。ＡＵＣの増加量は、ほぼ投与量に比例し、線形ＰＫであることを示唆した。末期排出半減期は、８日から１４日の範囲であり、他のＩｇＧ１モノクローナル抗体と同様であった。絶対的生物学的利用能は高かった（範囲＝７０−１００％）が、ＩＶＡＵＣを過小評価したため、９０％より大きい生物学的利用能は高いものであり得る。

（実施例ＩＶ．ＫｉｎＥｘＡ技術を使用した、ヒト化抗ヒトＩＬ−１０抗体ＳＣＨ７０８９８０（１２Ｇ８）についての平衡解離定数（Ｋｄ）の測定）
ＫｉｎＥｘＡ３０００（ＳａｐｉｄｙｎｅＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＩｎｃ．）を使用して、ヒト化抗体ＳＣＨ７０８９８０についての平衡解離定数（Ｋｄ）を測定した。ＫｉｎＥｘＡは、抗体、抗原、および抗体−抗原複合体の混合物内の、複合体をなさない抗体の濃度の測定に基づく、ＫｉｎｅｔｉｃＥｘｃｌｕｓｉｏｎＡｓｓａｙ法の原理を使用する。上記混合物を、固相に固定した抗原に極めて短時間曝すことにより、遊離抗体の濃度を測定した。実際には、フローセルにおいて捕捉された、抗原でコートされた粒子に、溶液相の抗原−抗体混合物を流すことで、これを達成した。この機器で生成されたデータを、オーダーメイドのソフトウェアを使用して、分析した。平衡定数を、以下の前提に基づく数学理論を使用して、計算した：
１．結合は、平衡に関する可逆的結合の式に従う：
Ｋ_ｏｎ［Ａｂ］［Ａｇ］＝Ｋ_ｏｆｆ［ＡｂＡｇ］
２．抗体および抗原は、１：１で結合し、全抗体は、抗原−抗体混合物＋遊離抗体に等しい：
３．機器のシグナルは、遊離抗体濃度に直線的に相関する。

使用した材料：組換えヒトＩＬ−１０に対するモノクローナルヒト化抗体ＳＣＨ７０８９８０（ｈ１２Ｇ８）；組換えヒトＩＬ−１０（ｈＩＬ−１０）；組換えマウスＩＬ−１０（ｍＩＬ−１０），組換えイヌＩＬ−１０（ｃｙｎｏＩＬ−１０）；ＰＭＭＡ粒子，９８ミクロン（Ｓａｐｉｄｙｎｅ，カタログ番号４４０１９８）；ニュートラアビジン（Ｎｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ）（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号３１０００）；ＥＺ−リンクＴＦＰＰＥＯ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号２１２１９）；ビオチン化ｒｈＩＬ−１０；およびＣｙ５結合ヤギ抗ＨｕＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓカタログ番号１０９−１７５−０８８，ロット４９０６９）。

メーカーのプロトコールに従って、ＰＭＭＡ粒子をビオチン化ｒｈＩＬ５でコーティングした。ｒｈＩＬ５のビオチン化については、メーカーの推奨（Ｐｉｅｒｃｅｂｕｌｌｅｔｉｎ０８７４）に従い、ＥＺ−リンクＴＦＰＰＥＯ−ビオチンを使用した。全ての実験手順を、ＫｉｎＥｘＡ３０００マニュアルに従って、行った。

実験条件：全試行を二連で行った。ｈＩＬ−１０の試行については、以下の条件を使用した：
サンプル容量：１．５ｍｌ
サンプル流速：０．２５ｍｌ／分
標識容量：０．５ｍｌ
標識流速：０．２５ｍｌ／分
ｍＡｂ濃度：０．１ｎＭ
最大Ａｇ（ｈＩＬ−１０）濃度：４．０ｎＭ
最小Ａｇ（ｈＩＬ−１０）濃度：３．９１ｐＭ
抗原の２倍の段階希釈を調製し、一定の濃度の抗体と混合した。混合物を、室温（ＲＴ）で２時間インキュベートして、平衡化した。

ｍＩＬ−１０の試行について、以下の条件を使用した：
サンプル容量：０．５ｍｌ
サンプル流速：０．２５ｍｌ／分
標識容量：０．５ｍｌ
標識流速：０．２５ｍｌ／分
ｍＡｂ濃度：１ｎＭ
最大Ａｇ（ｍＩＬ−１０）濃度：５０ｎＭ
最小Ａｇ（ｍＩＬ−１０）濃度：４８．８ｐＭ
抗原の２倍の段階希釈を調製し、一定の濃度の抗体と混合した。混合物を、ＲＴで２時間インキュベートして、平衡化した。

ｃｙｎｏＩＬ−１０の試行について、以下の条件を使用した：
サンプル容量：２ｍｌ
サンプル流速：０．２５ｍｌ／分
標識容量：１ｍｌ
標識流速：０．２５ｍｌ／分
ｍＡｂ濃度：０．１ｎＭ
最大Ａｇ（ｍＩＬ−１０）濃度：５．０ｎＭ
最小Ａｇ（ｍＩＬ−１０）濃度：４．８８ｐＭ
抗原の２倍の段階希釈を調製し、一定の濃度の抗体と混合した。混合物を、ＲＴで２時間インキュベートして、平衡化した。

結果を以下の表に示す。

（表１４ＫｉｎＥｘＡ技術を使用した、１２Ｇ８抗体についての平衡解離定数（Ｋｄ））

（実施例Ｖ．異なる種由来の組換えＩＬ−１０への、抗ｈＩＬ−１０モノクローナル抗体およびｈＩＬ−１０−Ｒａを結合の測定するための競合的電気化学発光アッセイ（ＥＣＬＡ）の適用）
（技術の概要）
電気化学発光技術は、ＩＧＥＮ，Ｉｎｃ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）により開発され、本研究において使用されるＭシリーズＭ８／３８４分析器に、この技術が使われている。電気化学発光技術は、トリプロピルアミン（ｔｒｉｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｅ）（ＴＰＡ）の存在下、電圧の印加により電気化学発光を起こす、安定性のルテニウム金属キレート（Ｏｒｉ−ＴＡＧ）を利用する。常磁性ビーズ（直径数ミクロン）が固相として機能し、迅速なアッセイ動態を促進する。ビーズ／複合体を、フローセルを通して流し、磁力の適用により、電極にて捕捉する。電圧を印加し、その結果生じる電気化学発光を測定する。

（使用した材料）
９６ウェルポリプロピレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ，カタログ番号３３６５，ＦｉｓｈｅｒＳｃｉ．カタログ番号０７２００６９７）；０．１％ＢＳＡ，０．０５％ｔｗｅｅｎ２０，ＰＢＳ（ｐＨ７．５）のアッセイ緩衝液；常磁性ビーズ（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−Ｄｙｎａｂｅａｄ，Ｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．，カタログ番号１１００２９）；組換えヒトＩＬ−１０二量体（ｈＩＬ−１０−ｄｉｍｅｒ）；組換えヒトＩＬ−１０単量体（ｈＩＬ−１０−ｍｏｎｏ）；組換えマウスＩＬ−１０（ｍＩＬ−１０）；組換えイヌＩＬ−１０（ｃｙｎｏＩＬ−１０）；および組換えｈＩＬ−１０Ｒａ（ｈＩＬ−１０Ｒａ）：ＦＬＡＧタグ付タンパク質。製造メーカーのプロトコール（Ｏｒｉ−Ｔａｇ標識：ＩｇＧチャレンジ比８：１）に従い、Ｏｒｉ−Ｔａｇ−ＮＨＳエステル（Ｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．カタログ番号１１００３４）を使用して、Ｏｒｉ−Ｔａｇ標識抗ＦＬＡＧＭ２モノクローナル抗体を調製した。抗ＦｌａｇＭ２モノクローナル抗体を、Ｓｉｇｍａ（カタログ番号Ｆ３１６５）より購入した。ラット抗ｈＩｇＧモノクローナル抗体を使用して、Ｏｒｉ−Ｔａｇ標識抗ｈＩｇＧ１Ａ２モノクローナル抗体を上記のように調製した。ポリクローナルヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．ＰＡ，カタログ番号１１２−００５−１４３）から、Ｏｒｉ−Ｔａｇ標識抗ラットＩｇＧ抗体を上記のように調製した。メーカーの推奨（Ｐｉｅｒｃｅｂｕｌｌｅｔｉｎ０８７４）に従い、ＴＦＰ−ＰＥＯ−ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号２１２１９）を使用して、ビオチン化組換えヒトＩＬ−１０（ｈＩＬ−１０−ビオチン）を調製した。ラット抗ｈＩＬ−１０ｍＡｂ１２Ｇ８（ｒ１２Ｇ８）：ＪＥＳ３．１２Ｇ８およびヒト化抗ｈＩＬ−１０ｍＡｂ１２Ｇ８（ｈ１２Ｇ８−１）を、本明細書に記載のように、調製した。

（プロトコール）
第一のウェルにおいて３μｇ／ｍｌで開始して、全ての標識されていないＩＬ−１０調製物（ｍＩＬ−１０、ｃｙｎｏＩＬ−１０、ｈＩＬ−１０ｄｉｍｅｒ、ｈＩＬ−１０
ｍｏｎｏ）について、９６−ウェルマイクロタイタープレートで、５０μｌのアッセイ緩衝液における、１／３の段階希釈を作製した。全てのサンプルを二連で試行した。５０μｌのｈＩＬ−１０−ビオチン（濃度２５ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに加え、次にｈＩＬ−１０Ｒａ（５０μｌ、濃度１００ｎｇ／ｍｌ）または抗ｈＩＬ−１０ｍＡｂ（５０μｌ、濃度１０ｎｇ／ｍｌ）のいずれかを添加する。５０μｌのＯｒｉ−Ｔａｇ結合体化二次抗体を、各ウェルに、５００ｎｇ／ｍｌの濃度にて加えた。ｈＩＬ−１０Ｒａ、ｒ１２Ｇ８およびｈ１２Ｇ８に対して、以下のＯｒｉ−Ｔａｇ結合体を使用した：抗ＦＬＡＧＭ２−ＯｒｉＴａｇ、抗ラットＩｇＧ−ＯｒｉＴａｇ、および抗ｈＩｇＧ１Ａ２−ＯｒｉＴａｇ。最後に、各ウェルに対し、５０μｌのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−Ｄｙｎａｂｅａｄ（濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）を加えた。室温で、１時間のインキュベーション後、プレートを、ＭシリーズＭ８／３８４分析器で処理した。標識されていないＩＬ−１０調製物によるシグナルの阻害パーセントを、コントロールのサンプルと比較して計算した。データのプロットおよびＩＣ_５０の計算のために、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍＳｏｆｔｗａｒｅを使用した。

結果を下記の表に示す。

（表１５ＥＣＬＡを使用した、結合親和力の測定）

ラット１２Ｇ８抗体およびヒト化１２Ｇ８抗体（ＳＣＨ７０８９８０）の特性決定の結果を、下記の表にまとめる。

（表１６）

（実施例ＶＩ．インビボにおけるヒト化抗ヒトＩＬ−１０抗体の中和効果）
ＳＣＨ７０８９８０およびＪＥＳ３．１２Ｇ８のインビボ中和効果を、マウスにおける森林型熱帯リーシュマニアモデル内で評価した。このモデルでは、通常は寄生虫の感染に耐性であるＣＢ６Ｆ１マウスを、ＭＨＣクラスＩＩ分子のプロモーターに制御されるヒトＩＬ−１０導入遺伝子のヘテロ接合により、感受性にした。ＣＢ６Ｆ１マウスまたはＣＢ６Ｆ１−ｈｕＩＬ−１０Ｔｇマウスに対し、毎週ＳＣＨ７０８９８０またはＪＥＳ３．１２Ｇ８をｓ．ｃ．注射し、それは、１５×１０^６の定常期の森林型熱帯リーシュマニア寄生虫の足蹠へのｓ．ｃ．チャレンジの３日前に開始した。足蹠の腫れの毎週の測定により、疾患の進行をモニターした。図３は、ＳＣＨ７０８９８０（ヒト化１２Ｇ８）およびその母体となったラット１２Ｇ８どちらも、ＩＬ−１０の防御効果を、用量依存様式で中和したことを示す。

当業者に明白なように、本発明についての多くの改変およびバリエーションが、発明の趣旨または範囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書に記載されている特定の実施形態は、例示のみのために提供され、本発明は、添付の特許請求の範囲、および、そのような特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲、により限定されるべきである；本発明は、例示のために本明細書中に提示された特定の実施例により、限定されるべきではない。

上記刊行物または上記文書の引用は、これらのうちのいずれかが適切な先行技術であることの承認を意図するものではなく、これらの刊行物または文書の内容または日付についてのいかなる承認も構成しない。本明細書中で参照した米国特許および他の刊行物は、本明細書中で参考として援用される。

Claims

本明細書の一部に記載の発明。