JP2014001170A - 分泌型ＩｇＡ誘導剤、及びその分泌型ＩｇＡ誘導剤を含む飲食品 - Google Patents

Abstract

【課題】分泌型ＩｇＡの産生量を増加させる効果を有する新規な分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を提供すること。
【解決手段】本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤は、アホエンを有効成分とすることを特徴とする。前記アホエンはニンニクから抽出されると好ましい。本発明の飲食品は、上記の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を含むことを特徴とする。
【選択図】なし

Description

本発明は、分泌型ＩｇＡ誘導剤、及びその分泌型ＩｇＡ誘導剤を含む飲食品に関する。

人類は食物を通して、多種多様な抗原やウイルスなどを体内へ取り入れている。体内に取り入れられた抗原やウイルスは、様々な感染症、炎症性腸疾患、あるいはアレルギー疾患を引き起こす原因になる。様々な感染症や疾患を防ぐために、人類は腸管に達した各種抗原やウイルスなどが体内に取り込まれるのを防御する機構を備えている。防御する機構は腸管免疫と呼ばれる。腸管免疫は、腸管粘膜表面に点在するパイエル板（Ｐａｙｅｒ’ｓ ｐａｔｃｈ）から分泌された分泌型ＩｇＡが、抗原やウイルスを捕捉して、糞便として体外へ排出することによって生体内へ抗原やウイルスが侵入することを防ぐ機構である。この機構において、分泌型ＩｇＡが、腸管粘膜等の粘膜面に十分に産生誘導されていると腸管免疫はより活性化されることになる。

分泌型ＩｇＡの産生誘導作用のあるものとして、例えば、特開２００３−１５５２４９号公報には、シイタケ菌糸体抽出物を含むＩｇＡ産生促進剤が報告されている（特許文献１）。また、特開２０１２−２５６９１号公報には、ごぼう由来抽出物を有効成分とするＩｇＡ産生促進剤が報告されている（特許文献２）。また、特開２０１２−８７１０２号公報には、大豆などの穀物をテンペ菌により発酵させて得られた組成物であるテンペを有効成分として含有するＩｇＡ産生促進剤が報告されている（特許文献３）。特許文献１〜特許文献３のＩｇＡ産生促進剤を、それぞれラットに投与することによって、ラットの糞中の分泌型ＩｇＡ量が増加することが示されている。

特開２００３−１５５２４９号公報 特開２０１２−２５６９１号公報 特開２０１２−８７１０２号公報

従来、特許文献１〜特許文献３に記載のＩｇＡ産生促進剤のような種々のＩｇＡ産生促進剤が報告されている。しかしながら、抗原やウイルスを起因とした様々な感染症や疾患は、近年益々増加しており、これら感染症や疾患を防ぐためには、従来のＩｇＡ産生促進剤とは別に、分泌型ＩｇＡの産生量を増加させる効果を有する新規な分泌型ＩｇＡ産生誘導剤の開発が依然として望まれていた。本発明は、分泌型ＩｇＡの産生量を増加させる効果を有する新規な分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を提供することを目的とする。

本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤は、アホエンを有効成分とすることを特徴とする。
本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤は、アホエンを有効成分とすることによって、分泌型ＩｇＡの産生量を高くする効果を奏する。

さらに、発明者の知る限りではアホエンの副作用についての報告例もないことから、アホエンは、人体への安全性が高い物質である。したがって、本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を長期的に連続して使用しても人体への安全性が高く、副作用の心配をせず使用することができる。

アホエン（Ａｊｏｅｎｅ）は、［Ｅ,Ｚ］‐４,５,９‐トリチアドデカ‐１,６,１１−トリエン‐９‐オキシド（［Ｅ,Ｚ］‐４,５,９‐ｔｒｉｔｈｉａｄｏｄｅｃａ‐１,６,１１‐ｔｒｉｅｎｅ‐９‐ｏｘｉｄｅ）のことである。アホエンには、シス型（Ｚ−アホエン）とトランス型（Ｅ−アホエン）の２つの幾何異性体が存在する。本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤には、シス型又はトランス型のアホエンを使用しても良いし、シス型及びトランス型のアホエンの混合物を使用しても良い。また、アホエンは天然物から公知の方法を利用して得られたアホエンであってもよいし、化学合成等によって合成されたアホエンであってもよい。

本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤は、アホエンを有効成分とするものであれば、具体的な形態については特に限定されない。例えば、アホエンのみを単独の成分とするものであってもよく、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、コーティング剤等を含有させてもよい。他にも、希釈剤、緩衝剤、懸濁剤、乳化剤等、医薬品の製造技術分野において通常使用しうる添加剤を含有させてもよい。また、必要に応じて他の薬剤を調合してもよい。

賦形剤としては、特に限定されないが、例えば、白糖、乳糖、マンニトール、グルコース等の糖類、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、コメデンプン等のデンプン類、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等を挙げることができる。

結合剤としては、特に限定されないが、例えば、キトサン、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、グアーガム、アラビアゴム、寒天等の多糖類、トラガント、ゼラチン、グルテン等の天然高分子類、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセテート、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、酢酸ビニル樹脂等の合成高分子等を挙げることができる。

崩壊剤としては、特に限定されないが、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、コメデンプン、部分α化デンプン等のデンプン類等を挙げることができる。

潤沢剤としては、特に限定されないが、例えば、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、コロイダルシリカ、含水二酸化ケイ素、ワックス類、硬化油等を挙げることができる。

コーティング剤としては、特に限定されないが、例えば、ジメチルアミノエチルメタアクリレート・メタアクリル酸共重合体、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アクリル酸エチル・メタアクリル酸共重合体、アクリル酸エチル・メタアクリル酸メチル・メタアクリル酸塩化トリメチルアンモニウムエチル共重合体、エチルセルロース等の水不溶性高分子、メタアクリル酸・アクリル酸エチル共重合体、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート等の腸溶性高分子、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の水溶性高分子等を挙げることができる。

また、投与形態は限定されることはなく、例えば、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤などの形態で経口投与されるものであってもよいし、注射剤等の非経口投与されるものであってもよい。

本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤において、アホエンはニンニクから抽出されると好ましい。
アホエンがニンニクから抽出されることにより、本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤は、分泌型ＩｇＡの産生量を一層高くする効果を奏する。

さらに、アホエンがニンニクから抽出される場合には、ニンニクが長年食料として使用されていることから、長期的に連続して使用しても人体への安全性が一層高い。したがって、本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を副作用の心配をせず使用することができる。

アホエンは、ニンニクから公知の方法を使用して抽出することができる。例えば、特許第２６８０２５２号に記載と同様の方法を使用して、ニンニクからアホエンを含有した油溶性成分を得た後、物質の精製に一般的に用いられる液体分配や液体クロマトグラフィーなどの公知の方法を使用して油溶性成分からアホエンを抽出することができる。また、特公平６−４３３２３に記載と同様の方法を使用して、ニンニクをアルコール等の有機溶媒中において酸性加温条件下で加工することによって、アホエンを生成蓄積したニンニク組成物を得た後、物質の精製に一般的に用いられる液体分配や液体クロマトグラフィーなどの公知の方法を使用してニンニク組成物からアホエンを抽出することができる。

なお、アホエンをニンニクから抽出する際に、液体分配や液体クロマトグラフィーなどによる精製過程は必須ではない。また、本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤は、アホエンをニンニクから抽出する際に得られたアホエン以外の成分を不純物として含んでいてもよい。

本発明の飲食品は、上記記載の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を含むことを特徴とする。
このような飲食品には、上記記載の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤が含まれている。したがって、このような飲食品は、分泌型ＩｇＡの産生量を高くする効果が高い。また、ニンニクから抽出されたアホエンを使用する場合には、安全性を一層高くすることができる。

飲食品としては、上記記載の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を直接任意の食品に加えた物や、香料等の添加剤と混合して、粉末状、顆粒状、塊状等の任意の形態の固形食品や飲料食品とした物等が挙げられる。

また、任意の賦形剤、結合剤、希釈剤等を混合して、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、飲料等の任意の形態の健康食品とした物等も挙げられる。

次に、本発明の実施形態について一例を挙げて説明する。但し、本発明はこれら実施形態になんら限定されるものではない。
１．分泌型ＩｇＡ産生誘導剤の製造
アホエンは公知の方法（特許２６８０２５２号）に従って調製した。まず、生ニンニク（ホワイト６片）１ｋｇに水３００ｇを加え、フードプロセッサー（Ｃｕｉｓｉｎａｒｔ社製、ＤＬＣ−Ｘ ＰＬＵＳ型）を用いて粉砕し、ナイロンろ過布を使用して手で絞り、８００ｇの搾汁を得た。これに中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）（日清オイリオ製、スコレー）８００ｇを加えて、ホモミキサー（特殊機化工業株式会社製、Ｍ型）を用いて混合し、その後、３７℃にて２４時間保持し、アホエン含有油脂を得た。

このアホエン含有油脂から、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて次に記載のように分離・精製することによってアホエンを得た。アホエン含有油脂を遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）して沈殿物を除き、上清をシリカゲル（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｑ６３）カラム（５０×３ｃｍ）を使用して各成分に分離することによって、４００ｍｇのアホエンを抽出した。

得られたアホエンをＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、高速液体クロマトグラフィー）で分析した。測定条件は以下に示す通りである。
測定機器：ＵＶ−ＶＩＳ検出器：ＳＰＤ―６Ａ（（株）島津製作所），カラムオーブン：ＣＴＯ−６Ａ（（株）島津製作所），ポンプ：ＬＣ−６Ａ（（株）島津製作所），カラム：ＳＵＰＥＬＣＯＳＩＬ ＬＣ−Ｓｉ 内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（スペルコジャパン株式会社製），サンプル注入量：２０μＬ，流量：２．０ｍＬ／ｍｉｎ，ＵＶ−ＶＩＳ検出器設定波長：２４０ｎｍ，カラムオーブン設定温度：３３℃，溶出溶媒：ヘキサン：２−プロパノール＝９５：５（Ｖ／Ｖ）
分析の結果、得られたアホエンは、純度９９．４％以上のＺ‐アホエン、純度９８．９％以上のＥ‐アホエンであることが確認できた。

得られたＺ−アホエンについて、０．１８μｇのＺ−アホエンを０．１ｍＬの０．５％ＣＭＣ・Ｎａ（Ｃａｒｂｏｘｙ ｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｓｏｄｉｕｍ）水溶液に混和することによって分泌型ＩｇＡ産生誘導剤１を得た。また、０．５４μｇのＺ−アホエンを０．１ｍＬの０．５％ＣＭＣ・Ｎａ水溶液に混和することによって分泌型ＩｇＡ産生誘導剤２を得た。

また、得られたＥ−アホエンについて、０．１８μｇのＥ−アホエンを０．１ｍＬの０．５％ＣＭＣ・Ｎａ水溶液に混和することによって分泌型ＩｇＡ産生誘導剤３を得た。また、０．５４μｇのＥ−アホエンを０．１ｍＬの０．５％ＣＭＣ・Ｎａ水溶液に混和することによって分泌型ＩｇＡ産生誘導剤４を得た。
２．分泌型ＩｇＡ産生誘導剤の評価
分泌型ＩｇＡ産生誘導剤１〜４について分泌型ＩｇＡ産生誘導作用を試験した。試験方法は次のとおりとした。
（ｉ）試験用サンプルの調製
生後６週令のＩＣＲ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）マウス雄性を１週間固形飼料（日本クレア製 ＣＥ−２）で予備飼育した後、平均体重が均等になるように群分けした。ある群のＩＣＲマウスに対して、分泌型ＩｇＡ産生誘導剤１を投与した。飼料および水は自由摂取とした。分泌型ＩｇＡ産生誘導剤１を投与したマウスの排泄から２４時間以内の糞便を採取した後、予備凍結を経て、凍結乾燥を行った。乾燥糞便に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を０．１ｇ／ｍｌ濃度となるように加え、ホモジナイザーにより均質化した。その後、遠心分離（８０００ｒｐｍ×２０分、５℃）し、上清を試験用サンプルＡとした。なお、分泌型ＩｇＡ産生誘導剤２〜４をそれぞれ投与した場合も上記と同様に試験用サンプルを調製し、それぞれをサンプルＢ、サンプルＣ、サンプルＤとした。また、Ｚ−アホエン、Ｅ−アホエンのいずれのアホエンも含まれていない０．５％ＣＭＣ・Ｎａ水溶液のみを０．１ｍＬ投与した場合においても、上記と同様に試験用サンプルを調製し、対照群とした。
（ｉｉ）分泌型ＩｇＡ濃度の測定
分泌型ＩｇＡ濃度の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＩｇＡ ＥＬＩＳＡ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ製）を用い、そのプロトコールに従って行った。

プロトコールに従った測定方法について次に説明する。
ヤギ抗マウスＩｇＡ抗体を１次抗体として、各ウェルに注入した後、一晩コーティング処理を行った。翌日、各ウェルを、０．０５％ｔｗｅｅｎ２０を含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ,０．１４Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）（洗浄液Ａ）で５回洗浄し、各ウェルに１％ＢＳＡを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，０．１４Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）を加え、２５℃で３０分間ブロッキングした。適当な濃度に希釈した試験用サンプルＡ〜Ｄ、対照群のそれぞれとマウスＩｇＡ抗体の標準品を、１％ＢＳＡ，０．０５％ｔｗｅｅｎ２０を含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ,０．１４Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）で希釈した。各ウェルを５回洗浄液Ａで洗浄後、サンプルＡ〜Ｄ、対照群のそれぞれと、マウスＩｇＡ抗体の標準品とを加えて２５℃で１時間保持した。その後、各ウェルを洗浄液Ａで５回洗浄後、ＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ：西洋ワサビ由来ペルオキシダーゼ）標識したヤギ抗マウスＩｇＡ抗体を各ウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。各ウェルを５回洗浄後、ＯＰＤ（ｏ−Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ：オルト−フェニレンジアミン）発色液（ナカライテスク製）を加えアルミホイルで遮光しながら２５℃で３０分間反応させた。その後０．１８Ｍ Ｈ₂ＳＯ₄を１００μｌ加えて反応を停止し、反応液の４５０ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーにより測定した。
（ｉｉｉ）ＩＣＲマウス糞便中の分泌型ＩｇＡ濃度（ｍｇ／ｇ 糞便）の測定結果
上記（ｉｉ）に記載の測定方法によって、試験開始時（０週間）から４週間の期間、１週間ごとにサンプルＡ〜Ｄ、対照群のＩＣＲマウス糞便中の分泌型ＩｇＡ濃度（ｍｇ／ｇ 糞便）を測定した。その結果を表１に示す。

表１に示すように、サンプルＢ及びサンプルＤは、試験開始２週間後、マウスの糞便中の分泌型ＩｇＡ濃度が対照群に対して有意に増加することが明らかとなった。また、サンプルＡ及びサンプルＣは、試験開始から４週間後、分泌型ＩｇＡ濃度が対照群に対して有意に増加することが明らかとなった。

したがって、分泌型ＩｇＡ産生誘導剤１〜４を使用することよって、分泌型ＩｇＡ濃度を向上させることができることが明らかとなった。
３．本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を含む飲食品
本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を、直接任意の食品に添加することができる。また、任意の賦形剤、結合剤、希釈剤と混合して、粉末、顆粒、カプセル剤、飲料等の形態の健康食品に加工することもできる。

本発明の飲食品は、本発明の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を含むので、これらを含まない飲食品と比較して、分泌型ＩｇＡの産生量を高くする効果が高い。
尚、本発明は前記実施の形態になんら限定されるものではなく、本発明を逸脱しない範囲において種々の態様で実施しうることはいうまでもない。

Claims (3)

1. アホエンを有効成分とすることを特徴とする分泌型ＩｇＡ産生誘導剤。
2. 前記アホエンはニンニクから抽出されることを特徴とする、請求項１に記載の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤。
3. 請求項１又は請求項２に記載の分泌型ＩｇＡ産生誘導剤を含むことを特徴とする、飲食品。