JP2013541508A - 種子処理のための組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
驚くべきことに、本発明者は、種子処理のための組成物中への植物種子結合タンパク質の組込みが、上記の技術的な問題を解決することができることを見出した。種子結合タンパク質、好ましくは、種子に特異的に結合している抗原結合タンパク質が、種子処理のための組成物中に含まれると、これにより、種子にとって有益な植物増強剤に強力かつ特異的に結合し、一方、依然として、種子とその環境との間の相互作用を可能にして、自然の発芽プロセスを妨げるのを可能な限り減らすことができる組成物をもたらす。
本発明の第1の態様は、植物種子結合タンパク質を含む、種子処理のための組成物である。
−湿潤および分散のための添加剤、例として、ポリアクリレート、ポリウレタン等、
−増粘剤、例として、天然のガム(キサンタンガム、アラビアゴム、ガッチガム等)、寒天、アルギン酸塩、キチン、ペクチン等、
−着色剤および効果顔料、例として、染料、光沢剤、および真珠光沢顔料を含めた、顔料、
−泡消剤、例として、ポリエチレングリコール、グリセリン、鉱油系泡抑止剤、シリコーン系泡抑止剤等、
−接着剤、例として、アルキレンオキシドのランダムコポリマーおよびブロックコポリマー、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、メチルセルロース、パラフィンろう、蜜ろう等、
−固体の担体、例として、カオリン、タルク、珪藻土、方解石等、
−溶媒、例として、水、芳香族炭化水素(例えば、キシレン、ナフタレン)、脂肪族炭化水素、アルコール、植物油等
をさらに含むことができる。
(a)植物種子を種子伝染性および/もしくは土壌伝染性の病原体から保護する;ならびに/または
(b)処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物を害虫および/もしくは病気によって引き起こされる損傷から保護するならびに/または
(c)植物種子ならびに/または処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物を雑草および/もしくはその他の望まれない植物によって引き起こされる損傷から保護するならびに/または
(d)処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物の収穫高を増強する
方法である。
(i)動物を植物細胞壁構成成分の複合混合物で免疫化するステップ、および
(ii)多糖に富む植物抽出物に結合する抗原結合タンパク質を選択するステップ;および
(iii)(ペクチン)多糖に特異的に結合する抗原結合タンパク質に関してスクリーニングするステップ
を含む、多糖、好ましくはペクチン多糖に特異的に結合する抗原結合タンパク質を生成するための方法が提供される。
図1は、スペクトル画像解析およびリニアアンミキシングを備える共焦点顕微鏡によって画像化された天然アラビドプシス(Arabidopsis)種子へのVHH結合の図である。種子の自己蛍光およびAlexa488スペクトルは記録され、異なる偽色に帰属された。種子はVHH 6D7とインキュベートされ、結合VHHは抗ヒスチジン/Alexa488コンジュゲート抗体で検出された。種子へのVHHの特異的結合シグナルだけが示される。
図2は、リンゴ皮の損傷部位へのVHH結合を示す図である。リンゴ皮のディスクは、穿孔器を用いて作製され、種々のVHHとインキュベートされた。結合VHHは、Alexa488蛍光色素に直接コンジュゲートされたモノクローナルマウス抗ヒスチジン抗体とのインキュベーションによって検出された。
図3は、ジャガイモ葉穿孔へのVHH 6D7(A)、7A5(B)、7A7(C)、7E9(D)結合および小麦葉条片へのVHH 6D7(E)結合を示す図である。葉穿孔は穿孔器を用いて作製され、VHHとインキュベートされた。条片は小麦葉から切断され、VHHとインキュベートされた。結合VHHは抗ヒスチジン/Alexa488コンジュゲート抗体とのインキュベーションによって検出された。VHHは葉穿孔または葉小片に、主に創傷組織の部位に強く結合していることが認められた。
図4は、ニトロセルロース上に配置されたウシ血清アルブミン(BSA)−コンジュゲートオリゴ糖36個(各アレイのカラムA−D)および多糖45個(各アレイのカラムE−I)を含有するアレイ上でのVHHの結合プロファイルを示す図である。各試料はアレイ上のスポット4個(2種の濃度を2回ずつ)によって表される。アレイは、選択されたVHH 5μg/mlで探索され、結合VHHは二次抗ヒスチジンおよび三次酵素−コンジュゲート抗体で検出された。強い結合シグナルが、主にエステル化の程度が低いペクチン上で観察され、ホモガラクツロナンエピトープへの結合を示している。
E1 ライムペクチン、DE 11%
F1 ライムペクチン、DE 43%
G1 ライムペクチン、DE 0%
H1 ライムペクチン、DE 16%
I2 富RGIIペクチン(赤ワイン)
I3 種子粘液(アラビドプシス)
H4 RGI#5(ジャガイモ)
図5は、マイクロカプセルの作物種子への結合を示す図である。米(A)、小麦(B)およびトウロコシ(C)の種子は、蛍光マイクロカプセルに結合した種子結合VHHとインキュベートされた。VHHを含まないマイクロカプセルは、対照条件として各作物種子について示される。
図6は、リンゴ皮の損傷部位および損傷したジャガイモ植物葉表面へのマイクロカプセルの結合を示す図である。リンゴ皮およびジャガイモ葉のディスクは、蛍光マイクロカプセルに結合した種子および創傷組織結合VHHとインキュベートされた。マイクロカプセルは、果実の損傷部位または植物の創傷組織に優先的に結合した。
VHHの生成および選択
ジャガイモ葉破砕物または小麦葉破砕物でのラマの免疫化
表面露出植物材料に対する免疫応答を発生させる目的で、ラマをジャガイモ葉破砕物または小麦葉破砕物で次のとおり免疫化した:ジャガイモ植物(ソラナム・ツベロサム(Solanum tuberosum)変種デシリー(Desiree))または小麦植物(トリチカム・エスチバム(Triticum aestivum)変種ボルド(Boldus))由来の葉破砕物を葉を液体窒素中で凍結するステップおよび微粉末が得られるまで前記葉を乳鉢および乳棒で破砕するステップによって調製した。ブラッドフォードタンパク質アッセイを総タンパク質濃度を決定するために用いた。一定分量を作製し、−80℃保存し、懸濁液を免疫化に用いた。
植物細胞壁構成成分に富むジャガイモ葉抽出物をジャガイモ植物茎から条片に切除されたクチクラおよび接着表皮から調製した。植物細胞壁構成成分に富む小麦葉抽出物を小麦鞘葉から条片に切除されたクチクラおよび接着表皮から調製した。ペクチン多糖に富む抽出物をCDTAを用いて抽出した(Moller et al.,2007)。条片を液体窒素中で凍結し、微粉末が得られるまで乳鉢および乳棒で挽いた。ペクチン多糖に富む抽出物を、挽いた材料1g当たり10mlの50mM CDTA pH6.5を用いて微粉末を再懸濁し、4℃で30分間回転撹拌((head−over−head rotation))することによって調製した。抽出物および不溶性材料をフィルターに適合するシリンジを用いて分離した。抽出物は微量遠心分離機での20,000g、5分間の遠心分離によってさらに澄ませた。
VHHの特徴付け
単一位置結合ELISA − 単一位置結合ELISAを植物抽出物に結合するクローンを同定するために用いた。ELISA用にVHH含有抽出物を次のとおり調製した。1ウェル当たり100μlの2×TY、2%グルコース、100μg/mlアンピシリンを含む96ウェルプレートをマスタープレートから播種し、37℃で一晩増殖させた。1ウェル当たり25μlの一晩培養物を1ウェル当たり1mlの2×TY、0.1%グルコース、100μg/mlアンピシリンを含む新たな96ウェルディープウェルプレートに播種するために用いた。振盪インキュベーター中での37℃、3時間の増殖後、IPTGを最終濃度1mMまで添加し、組換えVHHが4時間の追加的インキュベーション中に産生された。細胞を3,000g、20分間の遠心分離によって遠沈し、−20℃で一晩保存した。細胞ペレットを融解し、短くボルテックスし、1ウェル当たり125μlの室温PBSを添加した。細胞を室温、15分間、ELISA振盪プラットホームで再懸濁した。プレートを3,000gで20分間遠心分離し、1ウェル当たり100μlのVHH含有抽出物をポリプロピレン96ウェルプレート(Nunc)に移し、さらなる使用まで−20℃で保存した。
植物種子へのVHH結合
未処理作物種子へのVHHの結合 − VHH抗体断片の多種多様な作物種子への結合をトウモロコシ、トマト、米および小麦の種子を用いて調査した。トマト、米および小麦の種子は、PBS中1%BSA中に2.5−5μg/mlヘキサヒスチジンタグVHHを含有する溶液中で4回反復でインキュベートし、96ウェル0.45μmディープウェル濾過プレート(Millipore)で1時間、ELISA振盪プラットホーム上で穏やかに揺らしてインキュベートした。対照条件は、無関係の非種子結合VHHでのインキュベーションおよびVHHを含有しないインキュベーションを含んだ。非結合VHHを含む溶液は、濾過プレートセットアップ(Millipore)を用いて除いた。結合VHHをPBS中1%BSA中のモノクローナルマウス抗ヒスチジン抗体(Abd Serotec)およびPBS中1%BSA中のアルカリホスファターゼでコンジュゲートしたウサギ抗マウスIgG全分子抗体(RaM/AP)(Sigma)での連続的インキュベーションで検出した。各抗体インキュベーションの間に5回の連続的洗浄を実施した。洗浄は、PBSでELISA振盪プラットホーム上で穏やかに揺らすインキュベーションによって実施した。洗浄溶液は濾過プレートセットアップを用いて除いた。pNPP二ナトリウム六水和物基質(Sigma)を各ウェルに添加し、基質の色が明確に可視化されるまで反応させた(5−25分間)。基質を濾過プレートセットアップを用いて回収し、405nmでの吸光度を測定し、種子結合VHHのシグナルをブランク種子および無関係の対照VHHで処理した種子での基質の色と比較した。米、小麦およびトマトなどの作物種子への明確で再現可能なVHH結合が観察された、すなわちVHH 7A7および12C3(表1を参照されたい。)。
創傷植物組織へのVHHの結合
損傷したリンゴ皮へのVHHの結合 − 損傷したリンゴ皮ディスクへのVHHの結合を調査した。未処理リンゴ皮のディスクをリンゴ皮を穿孔器で穿孔するステップによって調製した。一連のリンゴ皮ディスクをリンゴ皮ディスクの外側表面に切り込みを作るステップによって意図的に傷つけた。損傷したリンゴ皮への各抗体の結合を対照としての未処理リンゴ皮との比較で各抗体について別々のインキュベーションにおいて調査した。リンゴ皮ディスクをPBSを含むマルチウェルプレートのウェルに上下を逆に置いた。PBSをウェルから除去し、新鮮PBSを各ウェルに添加した。この洗浄サイクルを2回繰り返した。PBS中1%BSA中に5μg/ml VHHを含有する溶液を皮ディスクに添加し、60−90分間インキュベートした。未結合VHHをPBSで5回洗浄するステップによって除去した。結合VHHはAlexa−488蛍光色素(Abd Serotec)に直接コンジュゲートしたモノクローナルマウス抗ヒスチジン抗体とのPBS中1%BSA中での1時間のインキュベーションで検出した。未結合抗体をPBSで5回洗浄するステップによって除去した。リンゴ皮ディスクをペトリ皿に置き、マクロズーム顕微鏡系(Nikon)で顕微鏡によって分析した。VHH 6D7およびVHH 7A7などいくつかのVHHでは、リンゴ皮ディスクの主に損傷領域への結合が認められた(図2)。
ELISAでの多糖に富む植物抽出物へのVHHの結合
ELISAでのさまざまな植物種抽出物および大豆可溶性多糖へのVHH結合 − ジャガイモ植物(ソラナム・ツベロサム変種デシリー)、小麦植物(トリチカム・エスチバム変種ボルド)、ドクムギ植物(ロリウム・ペレンネ(Lolium perenne))、エンドウ豆植物(ピサム・サチバム(Pisum sativum))、イヌホオズキ植物(ソラナム・ニグラム(Solanum nigrum))由来植物葉抽出物へのおよび大豆可溶性多糖へのVHH結合をELISAで分析した。細胞壁多糖に富んだ全葉抽出物をCDTAを用いて抽出した(Moller et al.,2007)。葉を液体窒素中で凍結し、微粉末が得られるまで乳鉢および乳棒で破砕した。細胞壁多糖に富んだ抽出物を挽いた材料1g当たり10mlの50mM CDTA pH6.5を用い、4℃で30分間回転撹拌して微粉末を再懸濁することによって調製した。抽出物および不溶性材料をフィルターに適合するシリンジを用いて分離した。抽出物は微量遠心分離機で20,000g、5分間の遠心分離によってさらに澄ませた。粗大豆可溶性多糖をNakamura et al.(2002)によって記載された方法により抽出し、次いで50mM CDTA緩衝液pH6.5中に溶解した。ELISAプレートをPBS中30倍希釈CDTA抽出物で4℃、一晩コートした。翌日室温で1時間コーティングを継続した。プレートをPBS/0.05%Tween−20で3回洗浄し、PBS中5%スキムミルクで1−2時間ブロックした。精製VHHの5μg/ml希釈物を1%MPBS/0.05%−Tween−20中に調製した。抗体希釈物を植物抽出物でコートしたプレートに移し、VHHを1時間、室温で結合させた。結合VHHを1%MPBS/0.05%−Tween−20中のモノクローナルマウス抗ヒスチジン抗体(Abd Serotec)およびアルカリホスファターゼでコンジュゲートしたウサギ抗マウスIgG全分子抗体(RaM/AP)(Sigma)での連続的インキュベーションで検出した。未結合抗体を各抗体インキュベーション後にPBS/0.05%Tween−20で3回洗浄するステップによって除去した。プレートを追加的にPBSで2回洗浄し、pNPP二ナトリウム六水和物基質(Sigma)100μlを各ウェルに添加した。405nmでの吸光度を測定した(表2を参照されたい。)。VHHは、ジャガイモ、小麦、ドクムギ、エンドウ豆、イネ科草および大豆可溶性多糖抽出物へのさまざまな特異性を有する結合を明確に示す。大豆については、CDTA可溶性ペクチン画分がラムノガラクツロナンおよびキシロガラクツロナンから構成されており、ホモガラクツロナンでは構成されないことが記載されている(Huisman et al.,2001)。本ELISA設定では、特徴付けられていない粗抽出物が用いられていることから、さまざまな試料への結合は定性的に評価され、異なる抽出物間の直接比較はなされなかった。
ELISAでの植物細胞壁構成成分へのVHH結合
ELISAでのペクチン多糖へのVHH結合 − さまざまなペクチン種への精製VHHのアレイの結合をELISAで分析した。ELISAプレート(Maxisorp、Nunc)を1ウェル当たり100μlのPBS中の100μg/ml 70−75%エステル化リンゴペクチン(Sigma)、柑橘類果実由来≧80%エステル化ペクチン、柑橘類果実由来20−34%エステル化ペクチン(Sigma)または陰性対照としてのアラビアゴム(Sigma)でコートした。プレートを4℃で一晩コートし、コーティングは翌日室温で1時間継続した。プレートをPBS/0.05%Tween−20で3回洗浄し、PBS中5%スキムミルクで1時間ブロックした。精製VHHを1%MPBS/0.05%−Tween中に3μg/mlに希釈し、ペクチンコートプレートに添加し、VHHを1時間、室温で結合させた。結合VHHを1%MPBS/0.05%−Tween−20中のモノクローナルマウス抗ヒスチジン抗体(Abd Serotec)およびアルカリホスファターゼをコンジュゲートしたウサギ抗マウスIgG全分子抗体(RaM/AP)(Sigma)での連続的インキュベーションで検出した。未結合抗体を各抗体インキュベーション後にPBS/0.05%Tween−20で3回洗浄するステップによって除去した。プレートを追加的にPBSで2回洗浄し、pNPP二ナトリウム六水和物基質(Sigma)100μlを各ウェルに添加した。405nmでの吸光度を測定し、結合を得た結合プロファイルを全てのクローンに関して比較した(表3Aを参照されたい。)。多様で異なる結合パターンがさまざまなVHHに関して観察された。
オリゴ糖および多糖アレイ上のVHHの結合
VHHでのオリゴ糖および多糖のアレイの探索 − 植物特異的オリゴ糖および多糖のアレイを、選択されたVHHによるエピトープ分類結合のさらなる解明のために用いた。ウシ血清アルブミン(BSA)コンジュゲートオリゴ糖36個および多糖45個をニトロセルロース上に配置した。アレイ上で各試料はスポット4個(2種の濃度を2回ずつ)によって表される。オリゴ糖および多糖のアレイは、選択されたVHHの5μg/mlで探索され、結合VHHは二次抗ヒスチジンおよび三次アルカリホスファターゼ−コンジュゲート抗体で検出した。個々のアレイの写真を撮り、さまざまなVHHインキュベーションについてヒートマップを記録した(図4)。結合データは、異なるエステル化の程度を有する(スポットG1、E1、H1、F1についてそれぞれ0%、11%、16%、43%)ライムペクチン試料に全てのVHHが結合したことからそれらが高度に特異的なペクチン結合剤であることを示した。純度が低いラムノガラクツロナンII試料(スポットI2)への結合は、この試料中に存在するペクチンドメインによっておそらく生じた。選択されたVHHがメチルエステル化の程度が低いペクチンに優先的に結合することは、ホモガラクツロナン(HG)エピトープへの結合を示唆している。興味深いことにVHH結合パターンは、同じアレイで検査された周知の従来の抗体結合パターン(すなわちJIM5(Knox et al.,1990;Willats et al.,2000;Clausen et al.,2003)、JIM7(Knox et al.,1990;Willats et al.,2000;Clausen et al.,2003)、JIM8(Pennell et al.,1991)、JIM13(Knox et al.,1991;Yates,1996)、LM10(McCartney et al.,2005)、LM15(Marcus et al.,2008)、LM18(Verhertbruggen et al.,2009)、LM19(Verhertbruggen et al.,2009)、LM20(Verhertbruggen et al.,2009))とは異なっていた。
マイクロカプセルに結合したVHHの植物種子への結合
VHH機能化ポリウレアマイクロカプセルを生成する目的で、ベンジルベンゾエート中1.5%Uvitex OB(Ciba)のコア、および表面に露出するカルボキシル基のために取り込まれたリシンを含むシェルを有するマイクロカプセルにVHHを結合させた。ベンジルベンゾエート中1.5%Uvitex OBのコアは、マイクロカプセルの蛍光可視化のために用いられる。マイクロカプセルの産生後、マイクロカプセルを水で洗浄し水中にカプセル懸濁物として保存する。VHHの結合の前に、96ウェルディープウェル濾過プレート(Millipore)および真空マニホールド(Millipore)を用いてマイクロカプセルをMES/NaCl緩衝液(0.1M MES/0.5M NaCl pH6)で洗浄した。VHHのパネルをMES/NaCl緩衝液に透析し、最終濃度10−70μMまで添加し、マイクロカプセルと15−30分間インキュベートした。1−エチル−3−[3−ジメチルアミノプロピル]カルボジイミドハイドロクロリド(EDC)(Pierce)をMES/NaCl緩衝液に溶解し、最終濃度50mMまで迅速に添加した。VHHを室温、2時間の継続的撹拌を伴うインキュベーションによって結合させた。結合反応は、グリシンまたはTris緩衝液pH7.5を最終濃度100mMまで添加するステップおよび室温、30分間のインキュベーションによって停止させた。非結合VHHをディープウェル回収プレートを用いる濾過プレートセットアップを用いて回収した。マイクロカプセルをPBSで3回洗浄し、PBS中に再懸濁し、使用まで4℃で保存した。マイクロカプセルがペクチン結合VHHの結合によって機能化されたことを実証するために、マイクロカプセルのアラビドプシス・タリアナ種子への結合実験を実施した。この目的のために種子を、VHH結合マイクロカプセルと、ブランクマイクロカプセルとまたはマイクロカプセルを含ませずにインキュベートした。マイクロカプセルの種子への結合を顕微鏡的および蛍光定量的に分析した。簡潔には、アラビドプシス・タリアナ種子1ウェル当たり4個をポリプロピレン96ウエルプレート(Nunc)のウェルに入れた。各条件は、1ウェル当たり種子4個で4ウェルからなる4回反復で実施した。マイクロカプセルおよそ3.8E+04個を含むマイクロカプセル懸濁液25μlを各ウェルに添加し、ELISA振盪プラットホームで室温、1時間インキュベートした。マイクロカプセルを再懸濁する慎重なピペッティングによって未結合マイクロカプセルを種子から洗浄除去し、上清を廃棄した。PBSでの洗浄を3回実施した。結合したマイクロカプセルを有する種子を18ウェルμスライド(lbidi)に移し、落射蛍光を用いて顕微鏡的に分析した。Uvitex OBをエタノールを用いて結合マイクロカプセルから遊離させ、上清を回収し、蛍光を測定した。種子だけを含むウェルから放出された蛍光をブランクマイクロカプセルとインキュベートした種子を含むウェルおよびVHH 6D7と結合したマイクロカプセルとインキュベートした種子を含むウェルと比較した。平均蛍光測定値(標準偏差)は種子とVHH 6D7を有するマイクロカプセルとを含むウェル、種子とブランクマイクロカプセルとを含むウェルおよび種子だけを含むウェルについてそれぞれ30441(±12934)、8722(±4024)および1784(±238)であり、本発明によるVHHが植物種子にマイクロカプセルを結合させるために用いられうること、および本発明によるVHHを有さないマイクロカプセルとの比較において植物種子に保持されるマイクロカプセル内容物の量をこの結合が実質的に増加させることを実証している。
マイクロカプセルに結合されたVHHの損傷果実および創傷植物組織への結合
リンゴ皮ディスクでの結合アッセイをVHH機能化マイクロカプセルの損傷果実への結合を調査するために用いた。ジャガイモ葉ディスクでの結合アッセイをVHH機能化マイクロカプセルの創傷植物組織への結合を調査するために用いた。未処理リンゴ皮のディスクを、リンゴ皮を穿孔器で穿孔するステップによって調製した。一連のリンゴ皮ディスクをリンゴ皮ディスクの外側表面に切り込みを作るステップによって意図的に傷つけた。未処理ジャガイモ葉(変種デシリー)のディスクを穿孔器で葉を穿孔するステップによって調製した。一連のジャガイモ葉ディスクをジャガイモ葉ディスクの上側表面に切り込みを作るステップによって意図的に傷つけた。さまざまな結合VHHを有するマイクロカプセルの結合を、各条件について別々のインキュベーションにおいて調査した。リンゴ皮ディスクまたはジャガイモ葉ディスクをマルチウェルプレートのウェルに上を向けて置いた。Uvitex OBを含有するマイクロカプセルを適切な密度で0.05%Tween−20を含むPBS中の1%スキムミルク中に希釈した。マイクロカプセルをリンゴ皮およびジャガイモ葉のディスクに添加し、1時間、マイクロカプセルを定着および結合させた。未結合マイクロカプセルを0.05%Tween−20を含むPBSで洗浄するステップによって除去した。リンゴ皮およびジャガイモ葉のディスクを結合マイクロカプセルについてマクロズーム顕微鏡系(Nikon)上で分析した。DAPIフィルターをUvitex OBマイクロカプセルを可視化するために用いた。VHH結合マイクロカプセルに対する対照は、VHHが結合されていないブランクマイクロカプセルおよび無関係なVHHが結合されたマイクロカプセルを含む。Uvitex OBマイクロカプセルでのリンゴ皮およびジャガイモ葉のディスク結合アッセイの結果に基づいて、本発明のVHHのいくつか(例えばVHH 6D7)が、マイクロカプセルを果実の損傷部位または植物上の創傷組織に特異的に結合および保持させることが可能であると証明されたことが見出された(図6)。
Claims (49)
- 植物種子結合タンパク質を含む、種子処理のための組成物。
- 植物種子結合タンパク質が、植物増強剤を植物種子に結合させることが可能である、請求項1に記載の種子処理のための組成物。
- 植物種子結合タンパク質が、担体を植物種子上に結合させることが可能である、請求項1に記載の種子処理のための組成物。
- 植物種子結合タンパク質が抗原結合タンパク質である、請求項1から3のいずれかに記載の種子処理のための組成物。
- 抗原結合タンパク質が植物細胞壁構成成分に結合する、請求項4に記載の種子処理のための組成物。
- 植物細胞壁構成成分が多糖である、請求項5に記載の種子処理のための組成物。
- 多糖が構造多糖である、請求項6に記載の種子処理のための組成物。
- 多糖がヘテロ多糖である、請求項6または7に記載の種子処理のための組成物。
- 多糖がペクチンである、請求項6、7または8に記載の種子処理のための組成物。
- ペクチンが低エステル化ホモガラクツロナン(homogalacturan)を含む、請求項9に記載の種子処理のための組成物。
- 抗原結合タンパク質が、4つのフレームワーク領域および3つの相補性領域、またはこれらの機能性断片のいずれかを含むアミノ酸配列を含む、請求項4から10のいずれかに記載の種子処理のための組成物。
- 抗原結合タンパク質がラクダ科抗体から得られる、請求項11に記載の種子処理のための組成物。
- 抗原結合タンパク質がVHH配列を含む、請求項4から12のいずれかに記載の種子処理のための組成物。
- VHHが、配列番号1から配列番号11からなる群から選択される配列を含む、請求項13に記載の種子処理のための組成物。
- 植物種子が作物種子である、請求項1から14のいずれかに記載の種子処理のための組成物。
- 作物が、トウモロコシ、小麦、モロコシ、ライ麦、大豆、米、綿、セイヨウアブラナ、ヒマワリ、サトウダイコン、ジャガイモ、野菜、花、芝草および飼料草からなる群から選択される、請求項15に記載の種子処理のための組成物。
- 植物種子を処理するための方法であって、(1)請求項1から16のいずれかに記載の種子処理のための組成物を調製するステップ、および(2)前記組成物を植物種子に適用するステップを含む、方法。
- 4つのフレームワーク領域および3つの相補性領域、またはこれらの機能性断片のいずれかを含むアミノ酸配列を含む少なくとも1つの抗原結合タンパク質を含む種子処理のための組成物を用いて処理された植物種子。
- 請求項1から16のいずれかに記載の組成物を用いて処理された植物種子。
- 組成物が、植物種子および/または新生実生(emergent seedling)を種子伝染性および/または土壌伝染性の病原体から保護する、請求項18から19に記載の植物種子。
- 組成物が、処理された種子からおよび/または処理された種子に非常に近いところで生長する植物を、害虫および/または病気により引き起こされる損傷から保護する、請求項18から19に記載の植物種子。
- 組成物が、植物種子、ならびに/または処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物を、雑草ならびに/またはその他の望まれない植物により引き起こされる損傷から保護する、請求項18から19に記載の植物種子。
- 組成物が、処理された種子からおよび/または処理された種子に非常に近いところで生長する植物の収穫高を増強する、請求項18から19に記載の植物種子。
- 植物種子が作物種子である、請求項18から23のいずれかに記載の植物種子。
- 作物が、トウモロコシ、小麦、モロコシ、ライ麦、大豆、米、綿、セイヨウアブラナ、ヒマワリ、サトウダイコン、ジャガイモ、野菜、花、芝草および飼料草からなる群から選択される、請求項24に記載の植物種子。
- (i)種子を、請求項1から16のいずれかに記載の組成物を用いて処理するステップ、および(ii)処理された種子を播種するステップを含む方法であって、前記組成物が、
(a)植物種子および/もしくは新生実生を種子伝染性および/もしくは土壌伝染性の病原体から保護し、ならびに/または
(b)処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物を、害虫および/もしくは病気により引き起こされる損傷から保護し、ならびに/または
(c)植物種子、ならびに/または処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物を、雑草ならびに/またはその他の望まれない植物により引き起こされる損傷から保護し、ならびに/または
(d)処理された種子からおよび/もしくは処理された種子に非常に近いところで生長する植物の収穫高を増強する、
方法。 - 4つのフレームワーク領域および3つの相補性領域、またはこれらの機能性断片のいずれかを含む抗原結合タンパク質である、種子結合タンパク質。
- 抗原結合タンパク質がVHH配列を含む、請求項27に記載の種子結合タンパク質。
- VHHが、配列番号1から配列番号11からなる群から選択される配列を含む、請求項28に記載の種子結合タンパク質。
- 植物細胞壁構成成分に結合する、請求項27から29のいずれかに記載の種子結合タンパク質。
- 植物細胞壁構成成分が多糖である、請求項30に記載の種子結合タンパク質。
- 多糖が構造多糖である、請求項31に記載の種子結合タンパク質。
- 多糖がヘテロ多糖である、請求項31から32のいずれかに記載の種子結合タンパク質。
- 多糖がペクチンである、請求項31から33のいずれかに記載の種子結合タンパク質。
- ペクチンが低エステル化ホモガラクツロナン(homogalacturan)である、請求項34に記載の種子結合タンパク質。
- 多糖が溶液中にある、請求項31から35のいずれかに記載の種子結合タンパク質。
- 多糖が固体表面中に含まれる、請求項31から35のいずれかに記載の種子結合タンパク質。
- 多糖が野菜材料中に含まれる、請求項31から35のいずれかに記載の種子結合タンパク質。
- 植物増強剤を植物種子に結合させるための、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質の使用。
- 試料中の多糖の存在および/または濃度を決定するための、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質の使用。
- 試料から多糖を精製するための、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質の使用。
- 少なくとも1つの、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質を含む、農薬組成物。
- 1つもしくは複数の多糖の検出および/または1つもしくは複数の多糖の濃度の決定のためのキットであって、少なくとも1つの、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質を含む、キット。
- 1つもしくは複数の多糖の検出および/または1つもしくは複数の多糖の濃度の決定のためのバイオセンサーであって、少なくとも1つの、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質を含む、バイオセンサー。
- 化合物を植物種子に結合させることが可能である標的化剤であって、少なくとも1つの、請求項27から38のいずれかに記載の種子結合タンパク質を含む、標的化剤。
- 植物増強剤を植物または植物の部分に結合させるための、請求項45に記載の標的化剤の使用。
- 植物細胞壁構成成分を改変するための、請求項45に記載の標的化剤の使用。
- 請求項45に記載の標的化剤を含む、農薬組成物。
- 種子処理のための組成物である、請求項48に記載の農薬組成物。
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