JP2002510201A

JP2002510201A - 殺有害生物剤スクリーニング系

Info

Publication number: JP2002510201A
Application number: JP50148199A
Authority: JP
Inventors: ボウトザリス，ペーター
Original assignee: ノバルティスアクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1997-06-04
Filing date: 1998-06-02
Publication date: 2002-04-02
Also published as: EP0991942B1; AU745497B2; EP0991942A1; WO1998055860A1; AU8212198A; DE69827004D1; DE69827004T2; CA2291617A1; ES2229513T3; ATE279724T1

Abstract

(57)【要約】本発明は、植物栽培および殺有害生物剤スクリーニングの分野にある。特に、本発明は、殺有害生物剤スクリーニングプログラム内で無性繁殖植物を試験するための迅速且つ容易な系に関する。本発明はさらに、ある母植物からの植物を無性繁殖させ、そして所望の試験操作を実行するために必要なすべての素子を包含する迅速検定キットに関する。

Description

【発明の詳細な説明】殺有害生物剤スクリーニング系本発明は、植物栽培および殺有害生物剤スクリーニングの分野にある。特に、本発明は、殺有害生物剤スクリーニングプログラムにより無性繁殖植物を試験するための迅速且つ容易な系に関する。本発明はさらに、特定の母植物からの植物を無性繁殖させ、そして所望の試験操作を実行するために必要なすべての素子を包含する迅速検定キットに関する。現今、ほとんどの殺有害生物剤スクリーンは、植物種子から繁殖される全植物を用いて、または植物組織培養物質を用いて操作される。例えば、今日、農業に用いられるほとんどの一般的雑草制御技術は、除草剤による制御である。したがって、除草剤の分野では、雑草が除草剤に対して「耐性」であるか否か、または除草剤の性能に影響を及ぼす（低減する）何らかの「その他の」因子が関与するか否かを迅速に確定し得るための除草剤耐性に関して雑草植物をスクリーニングするのに利用可能な検定系を有する必要がある。このような「その他の」因子には、除草剤効力が低減されるように植物に影響を及ぼす環境条件が含まれ得る。除草剤性能における観察された低減が耐性特徴により引き起こされるかまたは前記のようなその他の因子に関係するかどうかを決定し得るためには、推定上「耐性」の雑草植物をかなり詳細に検査すべきである。その除草剤耐性状態に関して雑草を試験するために利用可能な技術の今日の状態は全く不十分で、時間を要する。今日利用可能な検定を以下に示す：（１）種子収集−目下、操作に「最も広範に」用いられる系。この系は、耐性であると想像される雑草からの種子を採集し、次に収集した種子から発芽させた植物（土壌を含有する鉢で生育）をスクリーニング（除草剤噴霧）することを包含する。この検定に関連した問題を以下に挙げる：（ａ）耐性であると推測される植物は直接試験されず、除草剤耐性特徴に関して遺伝的に異なるかもしれないそれらの子孫が試験される。（ｂ）除草剤に敏感（感受性）である種子も、除草剤適用後に発芽した植物から知らずに採集され、したがって試験結果を混乱させ得る。（ｃ）種子の休眠状態がしばしば問題である。少なくとも７０％の発芽が認められない場合には、発芽種子からの被験植物が耐性に関して全種子採集物を代表するか否かは分からない。（ｄ）雑草を試験するために要する時間は、種子が採集された数ヶ月後かかることがあり、したがって、農夫は次の時季の除草剤の予算を計画する前に雑草の耐性状態に関する答えを持っていない。（２）野外試験再噴霧−この系は主として、オーストラリアでの小規模除草剤野外試験である。それは、（除草剤耐性が疑われた後）その時季の内に野外で除草剤を用いる再噴霧計画により小規模除草剤野外試験を実施することを包含する。この試験に関連した問題を以下に挙げる：（ａ）試験は、結果に影響を及ぼし得る環境条件を施される。（ｂ）それらは仕事および時間集約的である。（ｃ）実験誤差が試験の実施および解釈に際して起こり得る。（ｄ）雑草成長段階は、より高い除草剤の割合でさえ遅すぎることがある。（３）寒天試験−本系では、ペトリ皿中の除草剤を含有する寒天上で種子を発芽させる。この試験に関連した問題、ならびに試験１に関連した問題を以下に挙げる：（ａ）どの除草剤でも本系に用い得るとは限らない。（ｂ）結果の解釈がしばしば難しい。試験１および２は、付随する欠点を有するけれども、野外操作と同様に噴霧する除草剤を利用する。さらに、野外採集雑草の除草剤耐性試験のための特定の生化学的または分子的技術を用いる、利用可能な試験がある。これらの試験は、使用可能な、装備の十分な実験室によっている。これらの試験を大規模除草剤耐性試験に適切でないものにするさらに別の欠点は、それらが１つの特定の耐性メカニズムに関して試験することである。しかしながら、遺伝的多様性のために、雑草（単一フィールド内でさえ）は、１つより多い除草剤耐性を付与するメカニズムを保有し得る。さらに、単一植物内でさえ、多数のメカニズムが存在し得る。したがって、一般に、除草剤耐性に関する雑草集団の試験は、まさに野外においてなされるように、除草剤を噴霧することによってのみ正確に実施し得る。これは、噴霧だけが、既知のおよびおそらくは未知の両方の除草剤耐性の考え得るすべてのメカニズムを説明するためである。同様の問題は、殺真菌剤および殺昆虫剤の分野でも広がっている。ここでは、作物または非作物植物により示される耐性表現型が耐性特徴によるものかまたは何らかの「その他の」因子により引き起こされたのかを決定するのがしばしば難しい。これは特に、特定の耐性特徴で形質転換されたトランスジェニック植物に当てはまる。この場合、観察された耐性表現型が真の形質転換体を示すと思われるか否かに関する迅速且つ信頼できる決定が、しばしば望ましい。さらに、殺有害生物剤で作物植物を処理すると、望ましくない植物の損傷を生じ得る。このような場合、観察された損傷が殺有害生物剤作用によって引き起こされたのか、あるいは作物植物の性能に影響を及ぼす何らかの「その他の因子」、例えば殺有害生物剤製剤の汚染または植物傷害性物質を含有する土壌等が含まれていたのかを知ることは非常に望ましい。前記に略記した問題を考慮して、信頼できる結果をもたらすが、しかし当業界で今日利用可能な系の多数の欠点には遭遇せず、したがって殺有害生物剤スクリーニングプログラム内で適切に用いることができる試験計画のための迅速且つ容易な系を提供することが本発明の主な目的の１つである。この目的は、意外にも、当業界で周知の技術を適用することにより満たすことができた。したがって、以下の：（ａ）母植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物からの子孫植物（単数または複数）を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｂ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｃ）子孫植物の成長をモニターする工程から成る子孫植物を試験するための試験系を提供することが本発明の主な目的である。本発明の好ましい実施態様では、繁殖工程は、以下の：（ａ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、母植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物から短いセグメント、好ましくは多量の活発に分裂中の細胞を含有する領域、最も好ましくは分裂組織細胞を包含する領域を切断し；（ｂ）前記の切断セグメントを適切な固定物質に移し；そして（ｃ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記の転移セグメントを全体の且つ形態的に正常な植物に再生させることにより成し遂げられる。本発明のさらに別の好ましい実施態様では、切断植物セグメントは短い根および新条断片を包含する。本発明の試験系は、好ましくは高スループットフォーマット内で用いられる。本発明はさらに、以下の：（ａ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、母植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記のセグメントを既知の濃度（単数または複数）の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；（ｃ）そのように処理した植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｄ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記の移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｅ）子孫植物の成長をモニターすることから成る試験系を包含する。本発明のさらに別の目的は、さらなる検査のために殺有害生物剤での処理後に興味深い特徴または特性を示す植物を救済する方法であって、以下の：（ａ）処理済み母植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物からの子孫植物（単数または複数）を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｂ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｃ）子孫植物の成長をモニターする工程から成る方法を提供することが本発明のさらに別の目的である。本発明の好ましい実施態様では、繁殖工程は、以下の：（ａ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、処理済み母植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記の切断セグメントを適切な固定物質に移し；そして（ｃ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記の転移セグメントを全体の且つ形態的に正常な植物に再生させることにより成し遂げられる。本発明はさらに、以下の：（ａ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、処理済み母植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記のセグメントを既知の濃度（単数または複数）の殺有害生物剤含有溶液、好ましくは除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される殺有害生物剤を含有する溶液中に浸し；（ｃ）そのように処理した植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｄ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記の移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｅ）子孫植物の成長をモニターする工程から成る方法を包含する。植物に観察される耐性表現型が耐性特徴によるものであるかまたはその他の因子により引き起こされたものかを確定するための方法であって、以下の：（ａ）表現型的耐性植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物を採集し；（ｂ）前記の植物からの子孫植物（単数または複数）を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｃ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｄ）子孫植物の成長をモニターする工程、あるいは（ａ）表現型的耐性植物、好ましくはトランスジェニック植物、しかし特に雑草または作物植物を採集し；（ｂ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、前記の植物から短いセグメントを切断し；（ｃ）前記のセグメントを既知の濃度（単数または複数）の殺有害生物剤含有溶液、好ましくは除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される殺有害生物剤を含有する溶液中に浸し；（ｄ）そのように処理した植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｅ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記の移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｆ）子孫植物の成長をモニターする工程から成る方法も、本発明に包含される。さらなる検査のために殺有害生物剤で処理後に興味深い特徴または特性を示す植物を救済するための本明細書中に記載したような試験系の使用も、本発明に包含される。さらに、植物に観察される耐性表現型が耐性特徴によるものであるかまたはその他の因子により引き起こされたものかを確定するための本発明の試験系の使用も、本発明に包含される。本発明のさらに別の実施態様は、本発明の試験系を実行するために必要なすべての用具を包含するすぐに使用できるフォーマットの試験キットを包含する。特に、本発明は、母植物から無性繁殖させた子孫植物を試験するための迅速且つ容易な系を提供する。試験される子孫植物は、好ましくはセグメントが全体のおよび形態学的に正常な植物に直接再生し得る母植物から短いセグメントを切断することにより、母植物から無性繁殖される。本発明の範囲内で好ましいのは、多量の活発に分裂中の細胞を含有する領域を包含する植物セグメントである。特に好ましいのは、多量の分裂組織細胞を含有する１以上の領域を包含する植物セグメント、例えば短い根および茎を含む単子葉植物の基本セグメント、または短い地上節部分を包含する広葉（双子葉）植物のセグメントである。根茎植物では、根を含有する短い根茎セグメントを包含するセグメントが好ましい。全体植物を再生するために用いられるセグメントの最小サイズは、前記のセグメントに含入される分裂組織領域が、完全な且つ形態学的に正常な植物を再生するその能力を保持するに十分に完全であるようなサイズである。植物の再生および発育をスピードアップするためには、母植物から切り取った植物セグメントが短い根または新条断片をなお含有する場合には有利であることがある。植物からセグメントを切断するには特別な設備は必要ない。大体において、その目的にはあらゆる家庭用切断用具を用い得る。用具は、汚染の可能性を増大する、植物組織に対する重篤な損傷を回避できるように構成されるべきである。したがって、好ましいのは、清浄で鋭利な鋏あるいは鋭利なナイフまたはメスである。本発明に用いられる切断用具は、好ましくは、植物間の疾病伝染を最小限にするために例えば清浄な水道水または蒸留水ですすぐことにより、使用する前に清浄化する。そのようにして得られた植物セグメントを次に、適切な植物固定物質、例えば植物栽培に一般に用いられる培地、または植物移植片の発育および成長を維持する任意のその他の適切な植物固定物質に移す。培地を用いる場合、屋外汚染物質による培地の汚染を回避するよう用心すべきである。例えば、植物物質は、５％〜１０％クロロックス（Clorox）溶液で約５〜１０分間インキュベートし、好ましくはその後滅菌蒸留水で数回洗浄することにより、その使用前に表面滅菌され得る。例えばバーミキュライト、パーライトまたはプラスチックビーズのような不活性植物固定物質が用いられる場合、正常な植物の成長および発育を維持するために、植物発育および成長の支持および促進剤は、植物移植片が容易に入手できるような風に、植物に提供されるべきである。本発明の範囲内で用いられ得るすぐに使用できる栄養溶液は市販されており、植物栽培業者には周知である。例えば、完全な市販肥料の形態の栄養が、本発明の目的のために適合される。いかなる完全可溶性肥料またはＮ：Ｐ：Ｋ可溶性肥料も、実験の持続期間が滅多に１ヶ月より多くならないため、十分である。植物移植片の根および新条形成を刺激し、本発明の目的のために適切に用い得る植物促進剤は、当業者には周知であり、その例としては、例えば根および若枝刺激のために組織培養に広く用いられるホルモンである、ＧＡ３、ＮＡＡおよび６ＢＡＰが挙げられる。最も初期のそして最も便利な実施態様では、植物セグメントは任意に付加的肥料を含有し得るあらゆる一般的鉢植用土壌に、または野外の土壌にさえ移すことができる。実験は、スズメノテッポウ類（Alopecurus myosuroides）移植片が、バーミキュライト、砂およびローム中で等しく良好に成長したことを示した。野外土壌では、植物セグメントにとって必要な場合に潅厩することが必要であるだけで余分の肥料は必要でない。屋外汚染物質による汚染を回避するために、その使用前に土壌を滅菌することは有益である。これは、例えば加熱といった従来の手段を、好ましくは高圧と組合せて適用することによりすることができる。次に、全体的な且つ完全に発育した植物の再生を可能にする条件下で、植物移植片を栽培する。最適結果は、温度制御温室または成長小室内で標準化条件下で前記の移植片を栽培することにより得られるものである。標準化栽培条件は植物発育および成長をスピードアップするために好ましいが、しかし本発明の方法を操作するために先要であるとは限らない。植物栽培は、再生される移植片のための供給源として用いられる植物種によって、１２℃〜２８℃の範囲の温度で実行し得る。好ましいのは、１５℃〜２５℃の範囲の成長温度である。しかしながら、結果を得る速度が重要でない場合には、移植片は屋外でも育て得る。温度が低いということは、殺有害生物剤効果が遅くなるということを意味し、高温が一般的である場合には、適切な水分レベルが保持されねばならない。植物の栽培および再生の分野で経験を積んだ人は、使用する植物種によって、それぞれの植物種の特定の要件を満たすためには一般的表現で前記に略記した手法の特定の適合が必要であることを確実に認めるだろう。植物の規則正しい成長および発育を保証するために取られる特定の手段は、当業者には周知である。予め切り出された植物移植片から発育させた再生苗を次に、一般的に適用される任意の殺有害生物剤スクリーニングプログラムに組み入れ得る。本発明の系の簡易性および容易性のために、植物セグメントの切断とスクリーニングプログラムに組み入れられるようになる前記のセグメントから再生された植物の原則利用可能性との時間範囲は非常に短い。関与する植物種によって、それは約１日〜約１２週間、好ましくは５日〜約１０週間、さらに好ましくは約７日〜約５週間、そして最も好ましくは約９日〜約１４日である。再生植物に適用されるスクリーニング検定は、解答されるべき根元的質問によって変わり得る。質問が、例えば除草剤耐性問題に関する場合には、苗に噴霧プログラムを施す。前記の固定物質の１つの中におかれた苗を含有する鉢は、何ら予備手段を取る必要なく、試験される除草剤を用いて噴霧小室中で噴霧し得る。本発明の試験系内で試験され得る除草剤としては、２４−Ｄ、２４−ＤＢ、アセトクロール、アシフルオルフェン、アラクロール、アメトリン、アミドスルフロン、アミトロール、アトラジン、アジプロトリン、ＢＡＹＦＯＥ５０４３、ベンスルフロン、ベンタゾン、ビフェノックス、ブロモフェノキシム、ブロモキシニル、ブチレート、クロルブロムロン、クロリダゾン、クロリダゾーン、クロリムロン−エチル、クロルスルフロン、クロルトルロン、シノスルフロン、クレトジム、クロジナフォップ（任意にクロキントセットと組合せる）、クロマゾン、クロピラリッド、クロランスラム、シアナジン、シクロエート、シクロキシジム、デスメジファム、デスメトリン、ジカンバ、ジクロフォップ、ジフェンゾクアット、ジフルフェニカン、ジフルフェンゾピル、ジメタクロル、ジメタメトリン、ジメテンアミドおよびそのＳ−エナンチオマー、ジプロペルトリン、ジクアット、ジウロン、ＤＴＰＡＮａＦＥ、ＥＤＤＨＡＮａＦｅ、エンドタール、ＥＰＴＣ、エタルフラリン、エタメトスルフロン、エトフメセート、フェンクロリム、フェノキサプロップ、フラムプロップ、フルアジフォップ、フルメトスラム、フルオメツロン、フルオルクロリドン、フルオキシピル、フルチアセット−メチル、ホルメサフェン、グルフォシネート、グリフォセート、ハロスルフロン、ハロキシフォップ、イマザメタベンズ、イマザピル、イマザクイン、イマゼタピル、イオキシニル、イソプロツロン、カルブチレート、ラクトフェン、レナシル、リヌロン、ＭＣＰＡ、メタミトロン、メタベンズチアズロン、メトブロムロン、メトラクロールおよび任意にベノキサコルまたはオキシム緩和剤と組合せるそのＳ−エナンチオマー、メトスラム、メトクスロン、メトリブジン、メトリブジン、メトスルフロン−メチル、モリネート、ニコスルフロン、ノルフルラゾン、オキサベトリニル、オキサスルフロン、パラクアット、ペブレート、ペンジメタリン、フェンメジファム、ピクロラム、ピペロフォス、プレチラクロル、プリミスルフロン、プロジアミン、プロメトン、プロメトリン、プロパクロル、プロパニル、プロパキザフォップ、プロパジン、プロスルフロン、ピリデート、ピリチオバック、キンメラック、キザロフォップ、リムスルフロン、セトキシジム、シマジン、シメトリン、スルコトリオン、スルフォメツロン−メチル、スルフォセート、テブタム、テルバシル、テルブメトン、テルブメトン、テルブチルアジン、テルブトリン、チアザフルロン、チアザフルロン、チフェンスルフロン、トラルコキシジム、トリアルレート、トリアスルフロン、トリベヌロン−メチル、トリフルラリンおよびトリネキサパック−エチルが含まれるが、これらに限定されない。２以上の前記の除草剤の既知の混合物ならびにそれと緩和剤との既知の混合物も本発明の試験系に用い得ると解される。多数のこのような混合物は、特に特許文献から既知である。本発明の試験系はどの点においても除草剤領域に限定されないが、しかし殺昆虫剤および殺真菌剤耐性、病原体耐性等を含めた耐性に関して無性繁殖させた植物を試験するための迅速且つ信頼できるが必要である場合に用い得ると解すべきである。本発明の試験系が用いられる領域によって、前記の系をおそらくは適用し得る標的植物は変わり得る。除草剤領域では、主な焦点は、本明細書中に前記したような除草剤耐性症状に関して雑草植物を試験することにあると考えられる。本発明の試験系の範囲内で除草剤耐性に関して適切にスクリーニングされ得る雑草植物としては、Echinochloa crus-galli（イヌビエ）、Setaria vericillat a（ブリストリイフォックステイル）、Opuntia種（ウチワサボテン）、Bromus t ectorum（ダウニーブロム）、Festuca arundinacea（ウシノケグサ）、Digitali s purpurea（キツネノテブクロ）、Hordeum jubatum（フォックステイルオオムギ）、Setaria faberi（ジャイアントフォックステイル）、Setaria viridis（エノコログサ）、Digitaria sanguinalis（ヒメシバ）、Sorghastrum nutans（インディアングラス）、Sorghum halepense（セイバンモロコシ）、Polygonum a viculare（ミチヤナギ）、Polygonum persicaria（ハルタデ）、Alopecurus pra tensis（オオスズメノテッポウ）、Dactylis glomerata（カモガヤ）、Polygonu m pensylvanicum（ペンシルバニアタデ）、Thalspi arvens e（グンバイナズナ）、Amaranthus種（ヒユ）、Amaranthus spinosus（トゲヒユ）、Amaranthus blitoides（匍蔔性ヒユ）、Euphorbia種（匍蔔性トウダイグサ）、Agropyron repens（ヒメカモジグサ）、Amaranthus palmeri（アカネヒユ）、Agrostis alba（コヌカグサ）、Phalaris arundinacea（クサヨシ）、Juncus 種（イグサ）、Sorghum bicolor（シャッターモロコシ／野生モロコシ）、Bromu s inermis（コスズメノチャヒキ）、Digitaria ischaemum（スムーズクラブグラス）、Amaranthus hybridus（スムーズヒユ）、Amaranthus hybridus／retrofle xus（スムーズ／アカネヒユ）、Polygonum coccineum（湿地性タデ）、Panicum virgatum（スイッチグラス）、Amaranthus tuberculatus（トールウォーターヘンプ）、Campsis radicans（アメリカノウゼンカズラ）、Amaranthus albus（タンブルアカザ）、Hibiscus trionum（ベニスゼニアオイ）、Parthenocissus qui nquefolia（アメリカヅタ）、Lepidium virginicum（バージニアコショウソウ）、Calle palustirs（スイレン）、Ellisia nyctelea（ウォーターポッド）、Tri folium repense（シロツメクサ）、Polygonum convolvulus（ソバ）、Vitis種（ヤマブドウ）、Panicum miliaceum（ワイルドプロソミレット）、Panicum capil lare（キビ）、Setaria lutescens（イエローフォックステイル）、Cyperus esc ulentus（キイロハマスゲ）、Trifolium agrarium（キバナツメクサ）、Yucca g lauca（ユッカ）、Aegilops（タルホコムギ）種、Agropyron（カモジグサ）種、 Allium（ネギ）種、Alopecurus（スズメノテッポウ）種、Avena（カラスムギ）種、Briza（コバンソウ）種、Brachiaria（ブラキラリア）種、Bromus（キツネガヤ）種、Cynodon（キノドン）種、Cyperus（カヤツリグサ）種、Dactylis（ダクチリス）種、Danthonia（ダントニア）種、Datura（ダツラ）種、Digitaria（メヒシバ）種、 Echinochloa（ヒエ）種、Eleusine（オヒシバ）種、Ergrostis（カゼクサ）種、 Eriochioa（エリロキオア）種、Festuca（ウシノケグサ）種、Holcus（ホルクス）種、Hordeum（オオムギ）種、Juncus（イ）種、Lolium（ドクムギ）種、Panic um（キビ）種、Paspalum（パスパルム）種、Pennisetum（チカラシバ）種、Phal aris（クサヨシ）種、Phragmites（ヨシ）種、Poa（イチゴツナギ）種、Polypog on（ポリポゴン）種、Puccinellia（プッキネリア）種、Setaria（アワ）種、So rghum（モロコシ）種、Vulpia（ブルピア）種が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいのは、単子葉植物、例えばネギ種、カヤツリグサ種およびイグサ種、さらに好ましくはイネ科単子葉類、最も好ましくはカモジグサ種、スズメノテッポウ種、カラスムギ種、キツネガヤ種、ダクチリス（Dactylis）種、ヒメシバ種、ヒエ種、ウシノケグサ種、オオムギ種、ドクムギ種、キビ種、クサヨシ種、イチゴツナギ種、アワ種、モロコシ種、ブルピア種である。本発明により具体化されるのは、双子葉植物、好ましくは広葉（双子葉）植物、例えばヒユ種、アカザ種およびアトリプレックス種の使用である。本発明の試験系内で適切に用い得る第三群の植物は、根茎植物、例えばいくつかのPolygonum（ミチヤナギ）種である。本発明はどの点でも除草剤耐性に関する雑草植物のスクリーニングに限定されないということは強調されるべきである。野外または温室で観察された耐性症状が遺伝的に等しいかまたは少なくともほぼ等しい子孫植物において確証され得るか否かを確定するために、作物または非作物植物をスクリーニングするために利用可能な迅速且つ信頼できる試験系を有することが望ましい状況が十分に存在し得る。特定の疾病に対して耐性であることが知られている作物植物が予期せぬ疾病症状を示すといった反対の場合でさえ、観察された症状が耐性特徴の損失により引き起こされるか否か、あるいは植物の性能に影響を及ぼす（低減する）何らかの「その他の」因子が関与するか否かを確定するために利用可能な迅速且つ信頼できる試験系を有することが望ましい。本発明の方法を用いる場合、殺有害生物剤で処理後に興味深い特徴または特性を示す植物はさらなる検査のために救済され得る。分げつを形成する植物の場合、前記の分げつから救済される植物は、分げつが特定の特徴に関して遺伝的に等しいと推測されるために、遺伝的研究に用い得る。例えば、野外または温室で予期せぬ耐性特性を示すが、しかし病原性真菌または昆虫に対して特に耐性である作物または雑草植物であり得る植物が採集することができる。本明細書中に前記したように、それが全植物に直接再生され得るように、好ましくは前に採集された植物物質から短いセグメントを切断することにより、無性繁殖中の子孫植物によって、植物は採集物質から救済される。そのようにして得られた植物セグメントを次に、適切な固定物質に、好ましくは土壌に移して、全体の且つ形態学的に正常な植物に再生させる。次にこの植物はそれぞれの研究領域で一般に用いられるスクリーニングプログラムの１つに導入することができ、前記植物の性能をモニターする。観察された昆虫耐性の場合、前記のスクリーニングプログラムは昆虫給餌検定を含み得るが、一方観察された真菌耐性の場合は、そのようにして生成された植物は、異なる植物真菌病原体を示す１以上の胞子含有溶液を施される噴霧プログラムに組み入れられる。それぞれの検定における植物の性能によって、前に観察された耐性が耐性特徴によるものか、または本明細書中に前記したような何らかの「その他の」因子によるのかを直接確定し得る。本発明の試験系は、植物、好ましくは作物植物を殺有害生物剤で処理した後に観察された植物損傷が植物に適用された殺有害生物剤の作用により引き起こされたと思われるか、または何らかの「その他の」因子、例えば殺有害生物剤製剤の望ましくない除草剤による汚染、それが適用化合物により感受性になるように植物に影響を及ぼす悪環境条件、汚染土壌により引き起こされる残留作用等によるのかという質問に答えるために、適切に用い得る。その場合、本明細書に前記したように、それが全植物に直接再生できるように、子孫植物を無性繁殖させることにより、好ましくは、前に採集された植物物質から短いセグメントを切り出すことにより、植物は損傷植物から救済される。次に、そのようにして得られた植物セグメントを適切な固定物質に、しかし好ましくは土壌に移して、全体の且つ形態学的に正常な植物に再生させる。次にこの植物を噴霧プログラムに導入する。前記の固定物質の１つに入れた苗を含有するトレイは、予備的手段を何ら必要とせずに、噴霧小室中で試験されるそれぞれの殺有害生物剤を噴霧し得る。処理植物の性能は所定期間中モニターされ、得られた結果によって、観察された損傷作用が殺有害生物剤の作用により引き起こされたものかまたは何らかの「その他の」因子によるものかに関して、決定することができる。さらに、ここでは、前記の殺有害生物化合物を含有する溶液で植物を処理後の植物内の殺有害生物化合物の寿命を、迅速に確定できる。本明細書に前記したように、好ましくは全植物に直接再生できる予め処理した植物物質から短いセグメントを切断することにより、子孫植物を無性繁殖させることによって、植物は処理物質から救済される。次に、そのようにして得られた植物セグメントを適切な固定物質に、しかし好ましくは土壌に移して、全体の且つ形態学的に正常な植物に再生させる。次にこの植物を、それぞれの研究領域に一般に用いられる試験系の１つに導入し得る。殺昆虫剤化合物で処理されていた植物の場合、これは昆虫給餌検定であり得るが、一方、殺真菌剤化合物で処理されていた植物の場合には、そのようにして生成された子孫植物を、異なる植物真菌病原体を示す１以上の胞子含有溶液を施される噴霧プログラムに組み入れる。得られた結果によって、次に、殺有害生物化合物が子孫植物に留まったかまたはすでに不活性形態に転換されたかを確定し得る。本発明の試験系な遺伝子用い得る殺昆虫剤としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：アルジカーブ、アジンフォス−メチル、ベンフラカーブ、ビフェントリン、ブプロフェジン、カーボフラン、ジブチルアミノチオ、カータップ、クロルフルアズロン、クロルピリフォス、シフルトリン、λ−シハロトリン、α−シペルメトリン、ζ−シペルメトリン、δ−メトリン、ジフルベンズロン、エンドスルファン、エチオフェンカーブ、フェニトロチオン、フェノブカーブ、フェンバレレート、フォルモチオン、メチオカーブ、ヘプテノフォス、イミダクロプリッド、イソプロカーブ、メタミドフォス、メトミル、メビンフォス、パラチオン、パラチオン−メチル、フォスサロン、ピリミカーブ、プロポクスル、テフルベンズロン、テルブフォス、トリアザメート、アバメクチン、フェノブカーブ、テブフェノジド、フィプロニル、β−シフルトリン、シラフルオフェン、フェンピロキシメート、ピリダベン、フェナザキン、ピリプロキシフェン、ピリミジフェン、ニテンピラム、ＮＩ−２５、アセタミプリッド、アベルメクチンＢ₁（アバメクチン）、ＡＣ３０３６３０、アセファット、アクリナトリン、アラニカーブ、アルファメトリン、アミトラッツ、ＡＺ６０５４１、アジンフォスＡ、アジンフォスＭ、アゾシクロチン、ベンジオカーブ、ベンスルタップ、 βシフルトリン、ＢＰＭＣ、ブロフェンプロック、ブロモフォスＡ、ブフェンカーブ、ブトカーボキシン、ブチルピリダベン、カデュサフォス、カーバリル、カーボフェノ−チオン、クロエトカーブ、クロルエトキシフォス、クロルメフォス、シス−レス−メトリン、クロシトリン、クロフェンテジン、シアノフォス、シクロプロトリン、シヘキサチン、デメトンＭ、デメトンＳ、デメトン−Ｓ−メチル、ジクロフェンチオン、ジクリフォス、ジエチオン、ジメトアト、ジメチルビンフォス、ジオキサチオン、エディフェンフォス、エマメクチン、エスフェンバレラット、エチオン、エトフェンプロック、エトプロフォス、エトリムフォス、フェナミフォス、フェンブタチノキシド、フェノチオカーブ、フェンプロパトリン、フェンピラッド、フェンチオン、フルアジナム、フルシクロクスロン、フルシトリナット、フルフェノクスロン、フルフェンプロックス、フォノフォス、フォスチアザット、フブフェンプロックス、ＨＣＨ、ヘキサフルムロン、ヘキシチアゾックス、イプロベンフォス、イソフェンフォス、イソキサチオン、イベルメクチン、λ−シハロトリン、マラチオン、メカーバム、メスルフェンフォス、メタルデヒド、メトルカーブ、ミルベメクチン、モキシデクチン、ナレッド、ＮＣ１８４、オメトアト、オキサミル、オキシデメトンＭ、オキシデプロフォス、ペルメトリン、フェントアト、フォラット、フォスメット、フォキシム、ピリミフォスＭ、ピリミフォスＡ、プロメカーブ、プロパフォス、プロチオフォス、プロトアト、ピラクロフォス、ピラダ−フェンチオン、ピレスメトリン、ピレトラム、ＲＨ５９９２、サリチオン、セブフォス、スルフォテップ、スルプロフォス、テブフェンピラッド、テブピリムフォス、テフルトリン、テメフォス、テルバム、テトラクロル−ビンフォス、チアフェノックス、チオジカーブ、チオファノックス、チオナジン、トゥリンギエンシン、トラロメトリン、トリアルテン、トリアゾフォス、トリアズロン、トリクロルフォン、トリフルムロン、トリメタカーブ、バミドチオン、キシリルカーブ、ＹＩ５３０１／５３０２、ゼタメトリン、ＤＰＸ−ＭＰ０６２、ＲＨ−２４８５、Ｄ２３４１、またはＸＭＣ（３，５−キシリルメチルカルバメート）、アザメチフォス、クロルフェンビンフォス、シペルメトリン、シペルメトリン高−シス、シロマジン、ジアフェンチウロン、ジアジノン、ジクロルボス、ジクロトフォス、ジシクラニル、フェノキシカーブ、フルアズロン、フラチオカーブ、イサゾフォス、ジョドフェンフォス、キノプレン、ルフェヌロン、メタクリフォス、メチダチオン、モノクロトフォス、ホスファミドン、プロフェノフォス、ジオフェノラン、バチルス・トリンギエンシス・スタム（thuringiensis Stamm）ＧＣ９１またはＮＣＴＣ１１８２１から得られる物質、ピメトロジン、ブロモプロピレート、メトプレン、ジスルフロン、キナルフォス、τ−フルバリナット、チオシクラム、あるいはチオメトン。本発明の試験系内に用い得る殺真菌剤としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：フララキシル、メタラキシル、Ｒ−メタラキシル、ベンゾイルプロップエチル、ベナラキシル、オキサジキシル、フラムプロップメチル、オフルエース、ジフェノコナゾール、エタコナゾール、プロピコナゾール、ペンコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、エポキシコナゾール、テブコナゾール、ブロムコナゾール、フェンブコナゾール、シプロコナゾール、テトラコナゾール、メトコナゾール、フルシラゾール、ジニコナゾール、トリチコナゾール、ユニコナゾール、ミクロブタニル、フルキノコナゾール、クレソキシム−メチル、アゾキシストロビン、メトキシイミノ−｛２−［１−（３−トリフルオロメチル−フェニル） −エチリデンアミノオキシメチル］フェニル｝酢酸メチルエステル、アルジモルフ、トリデモルフ、ジメトモルフ、フェンプロピモルフ、フェンプロピジン、ブロモキシミル、カーボキシン、プロクロラズ、プトパルジテ、ジカンバ、フェンピクロニル、フルジオキソニル、ピメトロジン、ピリフェノックス、ピリプロキシフェン、フルアジナム、クロロタロニル、ピロキロン、バチルス・トリンギエンシス、カプタン、カプタフォール、フォルペット、マンコゼブ、マネブ、ジネブ、銅化合物、エチリモール、フェナリモール、ヌアリモール、シモキサニル、イマザリル、ピラゾフォス、チアベンダゾール、トリフォリン、トリシクラゾール、イプロジオン、カーボキシン、チラム、アシベンゾラール−ｓ−メチル、ファモキサドン、キノキシフェン、スピロキサミン、フェンヘキサミド。同様の方法で、その他の殺有害生物化合物、例えば軟体動物駆除剤、線虫駆除剤、ダニ駆除剤等で処理した植物を本発明の試験系内で試験し得る。本発明のさらに別の実施態様では、殺有害生物剤耐性特徴を含有するように遺伝子工学処理された植物は、本発明の方法内で適切に用い得る。例えば耐性表現型を示す耐性遺伝子で形質転換させた植物は救済され、さらに調べられ、それにより単数または複数の個々の植物が真に耐性であることが確証され得る。好ましくは植物に特定の耐性特徴を付与するために用いられる構造遺伝子は、病原体（例えば、植物性病原性真菌、細菌、ウイルス等）、除草剤（例えば、トリアジン、スルホニル尿素、イミダゾリノン、トリアゾールピリミジン、ビラフォス、グリオフォセート等）、殺真菌剤、殺昆虫剤または不利益な環境的影響（例えば、熱、寒冷、風、望ましくない土壌条件、水分、乾燥等）に対して植物を防御し得るタンパク質をコードするものである。本発明の範囲内では、植物病原体および寄生体の制御に関連した構造遺伝子を包含する形質転換植物の使用が特に好ましい。例えば、昆虫に対する耐性は、昆虫および／またはそれらの幼虫に対して毒性であるポリペプチド、例えばバチルス・トリンギエンシスの結晶タンパク質をコードする遺伝子により転移され得る。このような遺伝子は既知であり、例えば米国特許第4,865,981号および第4,996,155号、ＷＯ89/07605、欧州特許第213,318 号および第１８６，３７９号に記載されている。ＤＮＡ配列をコードする別の種類の植物性殺昆虫タンパク質は、ＷＯ９４／２１７９５号およびＷＯ９６／１００８３号に記載されている。プロテアーゼ阻害剤は、昆虫耐性を媒介する第二の種類のタンパク質である。プロテアーゼ阻害剤は、植物貯蔵構造の正常成分を生成し、このために、通常は液胞または「タンパク質体」に存在する。したがって、ダイズから単離され、精製されたバウマン−ビルク（Bowman-Birk）プロテアーゼ阻害剤は、テネブリオ（Tenebrio）属の幼虫の小腸プロテアーゼを阻害することが実証された（Birk他、1963）。ササゲ豆からのトリプシン阻害剤をコードする遺伝子は、ヒルダー（ Hilder）等（１９８７）により記載されている。本発明の範囲内では、任意のバチルス・トリンギエンシスの結晶タンパク質、植物タンパク質、プロテアーゼ阻害剤または任意のその他の殺昆虫タンパク質コードＤＮＡ配列を包含する植物は、その起源にかかわりなく、本発明の試験系内で用い得る（例えば、非植物起源のまたは純粋に合成起源の殺昆虫タンパク質）。この点については、植物病原体の細胞壁の分解をそれら自身で生じ得るか、またはその他の物質と組合せて、相乗的に、この工程を少なくとも援助し得る加水分解酵素について言及せねばならない。例えば、大多数の昆虫は、積層状に層にされたキチンミセルが基質中に埋め込まれるクチクラ骨格を有する。多数の植物病原性真菌、例えば担子菌類（黒穂病および錆病真菌）、子嚢菌類および不完全菌類（AltemariaおよびBipolaris、Ex erophilum turcicum、Colletotricum、GleocercosporaおよびCercosporaを含む）も、それらの菌糸および胞子構造の欠くことのできない成分としてキチンを含有する。キチナーゼは、in vitroで特定の病原体の菌糸体の成長を阻害し得る。キチナーゼを発現し得る植物の器官または組織は、したがって、構造的にまたは病原体による侵入に対する反応として、多数の異なる真菌による襲撃に対してそれ自体を防御し得る。病原体に対して植物がそれ自体を防御するメカニズムにおいて重要な役割を演じる別の酵素は、β−１，３−グルカナーゼである。 β−１，３−グルカナーゼ（ＧＬＢ）をコードする遺伝子で、好ましくは前記のキチン分解酵素の１つをコードする遺伝子と組合せて形質転換された植物は、したがって、好ましくは本発明の試験系に用いられる。本発明の範囲内で用い得る植物は、いわゆる分解性ペプチドをコードする遺伝子を包含するものも含む。最も広い意味での分解性ペプチドは、細胞膜を浸透し、溶解しまたは損傷する能力が酵素活性を基礎にした化合物、例えばリゾチームおよびホスホリパーゼであるとも理解されるべきである。種々の分解性ペプチドのアミノ酸配列は、以下の出版物に示されている：ＷＯ８９／１１２９１、ＷＯ８６／０４３５６、ＷＯ８８／０５８２６、米国特許第４，８１０，７７７号、ＷＯ８９／０４３７１。本発明の試験系内で有益に用いうるさらに別の植物は、例えばＷＯ９２／２０８０１に開示されたリン脂質輸送タンパク質をコードする遺伝子の種類を包含するものである。抗真菌表現型を示す植物は、病原関連タンパク質［ＰＲＰ］、例えばＰＲ−１Ａ、ＰＲ−１Ｂ、ＰＲ−１Ｃ、大きい方のＰＲ−Ｒ、小さい方のＰＲ−Ｒ、ＰＲ −Ｐ、ＰＲ−Ｑ、ＰＲ−２、ＰＲ−２’、ＰＲ−２”、ＰＲ−Ｎ、ＰＲ−Ｏ、ＰＲ−Ｏ’、ＰＲ−４、ＳＡＲ８．２ａ−ｅ、キュウリキチナーゼ／リゾチーム、キュウリ塩基性ペルオキシダーゼ、タバコ塩基性グルカナーゼおよびタバコ塩基性キチナーゼ／リゾチーム、タバコ酸性キチナーゼ／リゾチームをコードする種類の遺伝子で植物を形質転換することにより調製し得る。前記の遺伝子を包含するキメラ遺伝子構築物を含めた前記の遺伝子およびタンパク質の例は、欧州特許出願公開第３９２，２２５号に提示される。除草剤に対する耐性を仲介し得る遺伝子で形質転換されている植物のうち、グリフォセート耐性５−エノールピルビルシキメート−３−ホスフェートシンターゼ（ＥＰＳＰシンターゼ）［欧州特許出願公開第１１５，６７３号、欧州特許出願公開第４０９，８１５号］、アセトラクテートシンターゼ（ＡＬＳ）およびグルタミンシンターゼ（ＧＳ）に関する遺伝子、および除草剤ホスフィノトリシンに対する耐性を付与するストレプトミセス属からのｂａｒまたはＰＡＴ遺伝子［ White他（1990）「Nucl Acids Res」18:1062;Spencer他（1990）「Theor Appl G enet」79:625-631］を含有するものが好ましい。さらに好ましいのは、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（プロトックス）活性、アデニロスクシネートシンセターゼ活性およびアデニロスクシネートリアーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子で形質転換された植物である。本発明の方法は、選定マーカー遺伝子で形質転換された植物の耐性状態を立証し、前記のマーカーに関する耐性表現型を示すためにも用い得る。それぞれの選定作用物質の存在下で依然として成長し得る植物が救済され、そしてさらに検査され得るし、それにより単数または複数の個々の植物が真に耐性であることが確証される。本発明の範囲内で用い得る可能性のある植物は、植物形質転換に日常的に用いられる選定マーカー、例えばカナマイシンおよび関連抗生物質に対する耐性を付与するｎｐｔＩＩ遺伝子［Messing & Vierra（1982）「Gene」19,259-268;Beven 他（1983）「Nature」304,184-187］、抗生物質ヒグロマイシンに対する耐性を付与するｈｐｈ遺伝子［Blochinger & Diggelmann（1984）「Mol Cell Biol」4, 2929-2931］およびメトトレキセートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ遺伝子［B ourouis他（1983）「EMBO」J2（7）,1099-1104］の１つで形質転換されたものである。本発明の試験系は、主に全作物植物に適用し得る。好ましいのは、単子葉植物、特にイネ科の植物であり、その例としては、ドクムギ（Lolium）、トウモロコシ（Zea）、コムギ（Triticum）、ライコムギ（Tritcale）、モロコシ（Sorghum ）、サトウキビ（Saccharum）、キツネガヤ（Bromus）、イネ（Orygae）、カラスムギ（Avena）、オオムギ（Hordeum）、ライムギ（Secale）およびアワ（seta ria ）が挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましいのは、トウモロコシ、コムギ、オオムギ、モロコシ、ライムギ、カラスムギ、芝、コーン、スイートコーンおよびイネである。本発明の試験系は、双子葉植物にも適用し得る。このような植物、畑作物、野菜及び果実、例えば、ワタ、タバコ、テンサイ、アブラナ、トマト、コショウ、メロン、レタス、カリフラワー、ブロッコリー、キャベツ、メキャベツ、テンサイ、タマネギ、ニンジン、ニラネギ、キュウリ、タバコ、アルファルファ、ナス、ビート、ソラマメ、セロリ、チコリ、ササゲ、エンダイブ、ヒョウタン、アメリカホドイモ、パパイヤ、エンドウ、ピーナツ、パイナップル、ジャガイモ、ベニバナ、インゲンマメ、ホウレンソウ、ダイズ、カボチャ、ヒマワリ、スイカ等、ならびに観賞用作物、例えば、ホウセンカ、ベゴニア、ペチュニア、ペラルゴニウム、スミレ、シクラメン、バーベナ、ニチニチソウ、センジュギク、プリムラ、セントポーリア、カッコウアザミ、アマランサス、アンシリウム（Anthirrhinum）、オダマキ、キク、シネラリア、クローバー、コスモス、ササゲ、ダリア、チョウセンアサガオ、ヒエンソウ、ガーベラ、グラジオラス、グロキシニア、アマリリス、マツバギク、サルメンバナ、ヒャクニチソウ等が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の特定の実施態様では、茎移植片は、本明細書中に前記したように母植物から切断され、短時間内に、即ち好ましくは切断後約１時間未満の間に、例えば前記の移植片を既知の単数または複数の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸漬することにより、またはこのような溶液を移植片に噴霧することにより、移植片を殺有害生物剤で処理する。本発明のさらに別の実施態様では、母植物から切断された直後に移植片に噴霧するか、あるいは好ましくは先ず１日〜数日間成長させた後、噴霧する。そのように処理された移植片を、次に、適切な植物固定物質に移し、好ましくは土壌中に植えるかまたは寒天中に置いて、発育中の苗の生長をモニターする。その容易性および簡易性のために、本発明の試験系は、高スループットフォーマット内で用いるのに特に適している。本発明の方法を実施するために必要なすべての構成成分を包含するすぐに使用できる試験キットを提供することが本発明のさらに別の実施態様である。本発明の特定の実施態様では、このようなキットは地面から雑草を切り取るための切断用具、好ましくはナイフまたは鋭利な鋏、それらを入れるための袋、鉢、その中でそれらを成長させるための固定物質、好ましくは寒天、土、砂、バーミキュライトまたは前記の成分の１以上の混合物等を含有する試験管、噴霧するための殺有害生物剤含有溶液、噴霧用具および使用説明書を含有し得る。本発明のさらに別の実施態様では、試験キットは、噴霧用具の代わりに、既知の単数または複数の濃度の除草剤中に植物切断物を浸漬するための異なる濃度の殺有害生物剤を有する除草剤溶液（単数または複数）を含有する１以上の容器を含有し得る。キットは、本質的には、適切な固定物質、例えば寒天、土、バーミキュライトまたは前記の成分の１以上の混合物を含有する１以上の容器を組み入れることができるが、この場合、前記の固定物質はすでに、その中に均一に分布した異なる濃度の殺有害生物剤を有する殺有害生物剤溶液を含有する。次に、植物挿木を固定物質中に挿入して、感受性（Ｓ）および耐性（Ｒ）植物で成長をモニターし得る。実施例以下の実施例で、本発明の実施に際して用いられる材料と方法、ならびにその後の結果をさらに説明する。それらは本発明の説明のためであって、本発明を限定するものではない。実施例１バーミキュライト（VERMEX exfolliiertes（expandiertes）Vermiculit-VERMI CA AG）を含有し、市販の可溶性肥料から作製した栄養溶液［Hauert-Flory(r)3[HP-30],1g/L］（水溶性肥料）；Ｎ：Ｐ：Ｋ１．５：１：１．５；Hauert & Co.，3257 Grossaffoltern］で灌概する鉢に入れて、制御気候小室（日中２０℃／夜間１６℃、明時間１２時間、相対湿度６７％）中で成長中の６週齢のスズメノテッポウ類（A．myosuroides）植物から短い根および茎を含む基本セグメントを切り取る。ＨＰ−３栄養溶液を含有するバーミキュライトにセグメントを移植し、再び気候小室に入れる。移植後９日目に、噴霧小室中で以下の除草剤の１つをトレーに噴霧する：クロジナフォップ１５および３０ｇ／ｈａ、フェノキサプロップ２５および５０ｇ／ｈａ、セトキシジム１５０および３００ｇ／ｈａ、イソプロツロン５００および１０００ｇ／ｈａ、クロルトルロン５００および１０００ｇ／ｈａ。噴霧後３週間目に、死亡率（％）を査定する。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は既知の耐性生物型であり、Ｓは野生型（除草剤感受性）である。実施例２２つの耐性および１つの感受性スズメノテッポウ類（A．myosuroides）生物型からの種子を、温度調節温室中の滅菌鉢植え用ロームを含有する鉢に播いた。播種後４週目に、２〜３枚葉の出た植物に、下記の除草剤のうちの１つを噴霧する：クロジナフォップ１５および３０ｇ／ｈａ、フェノキサプロップ５０および８０ｇ／ｈａ、イソプロツロン２５０および１０００ｇ／ｈａo除草剤噴霧後１２日目に、損傷を記録し、短い根および茎を含む生存植物からの基本セグメントを切り取る。移植後１週間目に、下記の除草剤のうちの１つを噴霧する−クロジナフォップ２０および４０ｇ／ｈａ、フェノキサプロップ８０および１２０ｇ／ｈａ、イソプロツロン５００および１０００ｇ／ｈａ。除草剤噴霧後２週間目に、損傷を記録する（下記参照）。噴霧後３週目に除草剤損傷（％）を査定する。Ｒ１、Ｒ２は既知の耐性生物型であり、Ｓは野生型（除草剤感受性）である。実施例３英国の野外で成長している植物であるスズメノテッポウ類（A．myosuroides）およびカラスムギ類（Avena fatua）から、そして温室で成育中の除草剤耐性および感受性スズメノテッポウ類生物型から新条および短い根を含む基本セグメントを切り取って、温室中の滅菌ロームに植えた。移植後１０日目に、植物にクロジナフォップ（７．５、１５、３０ｇ／ｈａ）、フェノキサプロップ（１３．８、２７．５、５５ｇ／ｈａ）またはイソプロツロン（２５０、５００、１０００ｇ／ｈａ）を噴霧した。噴霧後１３日目に、除草剤損傷（％）を記録した。生物型１は、温室で生育した既知の野生型スズメノテッポウ類である。生物型２、３および７葉、耐性であることが確証されたスズメノテッポウ類である。生物型４は、耐性であることが報告された野外採集スズメノテッポウ類である。生物型５および６は、それぞれ耐性および野生型であることが報告された野外採集カラスムギ類である。実施例４双子葉雑草ヒユ（Amaranthus）およびアカザ（Chenopodium）の野外採集物を、挿木から再生する。野外に成育中のアカザ植物１２ｃｍを引き抜いて、根を水に入れた。茎を第一葉の上で切断し、第一節だけを残した。根のかなりの部分は、植物を引き抜いた際に地中に残った。根はそれ以上切り取らなかった。温室中の砂ロームを含有する１０ｃｍ鉢に挿木を移植する。野外からヒユ植物を直径１５ｃｍ掘り出した。茎を２節領域を含有する小部分に切断した。古い方の節部分を鉢（アカザの場合と同様）の中の土中に埋めて、若い方の節を露出させた。移植後２週間目に、両方の種からの挿木に関して、新規の成長が認められた。アカザ（５〜１５ｃｍ高）およびヒユ（２〜９ｃｍ高）。植物を、市販の５００ｍｌ噴霧瓶で５種類の濃度のクロルスルフロンのうちの１つを噴霧した。１鉢につき１０回の噴射を適用した。噴霧後３週目に、除草剤損傷パーセンテージを肉眼で査定した。結果は、除草剤濃度の増大に対する良好な用量反応が、双子葉類雑草でも達成され得ることを示す。実施例５耐性および感受性スズメノテッポウ類（A．myosuroides）生物型からの種子を、温室中の滅菌鉢植え用土を含有する鉢に播いた。播種後８週目に、短い根と茎を含む基本セグメント（挿木）を植物から切り取った。移植後１週目に、５〜１０ｃｍの長い新葉が成長した植物を、市販の５００ｍｌ噴霧瓶で下記の除草剤で処理した。１ｍｌ（市販の除草剤処方物）／リットル（水道水）から希釈液を作った。例えば、１ｘ（下記は１ｍｌ／リットル。これはシクロキシジムの市販処方物に関しては０．６１ｍＭのシクロキシジム）。１鉢につき５回の噴射を適用した。噴霧後２週目に、除草剤損傷パーセンテージを肉眼で査定した。実験は、除草剤耐性はこのような簡単な噴霧系を用いても検出できることを示した。実施例６若いオオムギ苗にキャビネット噴霧器に入れた被験化合物を噴霧したが、接種選択後１週間目に、うどん粉病症状は認められなかった（即ち、化合物は殺真菌剤である）。次に短い根と茎を含む植物からの基本セグメント（挿木）を切り取って、温室内の滅菌鉢植え用土を含有する鉢に移植した。移植後２週間目に、新規の葉の成長が認められた。植物を殺真菌剤で処理するものとしないものに分けた。再噴霧した植物は、低真菌感染を示したが、再噴霧しなかったものは非常に高い真菌感染を有した。これは、予備処理植物からの挿木が最初の試験後２週間目に接種した場合に残存活性を示さなかったことを示し、このことは、どの化合物も２週間後に植物中で活性を有さなかったことを示す。実施例７４つの耐性および１つの感受性スズメノテッポウ類（A．myosuroides）生物型からの種子を、温室中の滅菌鉢植え用土を含有する鉢に播いた。播種後８週目に、短い根と茎を含む挿木を切り取った。挿木を種々の濃度の除草剤フェノキサプロップのうちの１つに浸漬した後、直ちに滅菌鉢植え用土を含有する鉢に移植した。処理後２週間目に、除草剤損傷を肉眼で査定した。この実験は、耐性試験のために挿木に噴霧するだけでなく、除草剤中に浸漬するかまたは挿木をすでに除草剤を含有する培地中に挿入した場合の効力を強調する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年３月１０日（１９９９．３．１０）【補正内容】植物は救済され、さらに調べられ、それにより単数または複数の個々の植物が真に耐性であることが確証され得る。好ましくは植物に特定の耐性特徴を付与するために用いられる構造遺伝子は、病原体（例えば、植物性病原性真菌、細菌、ウイルス等）、除草剤（例えば、トリアジン、スルホニル尿素、イミダゾリノン、トリアゾールピリミジン、ビラフォス、グリオフォセート等）、殺真菌剤、殺昆虫剤または不利益な環境的影響（例えば、熱、寒冷、風、望ましくない土壌条件、水分、乾燥等）に対して植物を防御し得るタンパク質をコードするものである。本発明の範囲内では、植物病原体およひ寄生体の制御に関連した構造遺伝子を包含する形質転換植物の使用が特に好ましい。例えば、昆虫に対する耐性は、昆虫および／またはそれらの幼虫に対して毒性であるポリペプチド、例えばバチルス・トリンギエンシスの結晶タンパク質をコードする遺伝子により転移され得る。このような遺伝子は既知であり、例えば米国特許第4,865,981号および第4,996,155号、ＷＯ89/07605、欧州特許第213,318 号および第１８６，３７９号に記載されている。ＤＮＡ配列をコードする別の種類の植物性殺昆虫タンパク質は、ＷＯ９４／２１７９５号およびＷＯ９６／１００８３号に記載されている。プロテアーゼ阻害剤は、昆虫耐性を媒介する第二の種類のタンパク質である。プロテアーゼ阻害剤は、植物貯蔵構造の正常成分を生成し、このために、通常は液胞または「タンパク質体」に存在する。したがって、ダイズから単離され、精製されたバウマン−ビルク（Bowman-Birk）プロテアーゼ阻害剤は、テネブリオ（Tenebrio）属の幼虫の小腸プロテアーゼを阻害することが実証された［Birk他、（1963）「Biochim．Biophys．Acta」67:326-328］。ササゲ豆からのトリプシン阻害剤をコードする遺伝子は、ヒルダー（Hilder）等（１９８７）「Nature」330:160-163により記載されている。本発明の範囲内では、任意のバチルス・トリンギエンシスの結晶タンパク質、植物タンパク質、プロテアーゼ阻害剤または任意のその他の殺昆虫タンパク質コードＤＮＡ配列を包含する植物は、その起源にかかわりなく、本発明の試験系内で用い得る（例えば、非植物起源のまたは純粋に合成起源の殺昆虫タンパク質）。この点については、植物病原体の細胞壁の分解をそれら自身で生じ得るか、または請求の範囲１．以下の：（ａ）母植物からの子孫植物を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｂ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｃ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む子孫植物を試験する方法。２．繁殖工程が、以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、母植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記切断セグメントを適切な固定物質に移し；そして（ｃ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記転移セグメントを全体の且つ形態的に正常な植物に再生させることにより成し遂げられる請求項１に記載の方法。３．前記セグメントが多量の活発に分裂中の細胞を含有する領域を含む請求項２に記載の方法。４．前記領域が分裂組織細胞を含む請求項３に記載の方法。５．前記セグメントが短い根および新条断片を含む請求項３および４に記載の方法。６．固定物質が、以下の：（ａ）不活性物質、例えばバーミキュライト、パーライトまたはプラスチックビーズ；（ｂ）植物栽培に一般に適用される培地；または（ｃ）土壌である請求項２に記載の方法。７．前記試験系が高スルーアウトフォーマット内で用いられる前記請求項のいずれかに記載の方法。８．以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、母植物から短いセグメントを切断し； (ｂ)₁前記セグメントを既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；あるいは (ｂ)₂前記セグメントに既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液を噴霧し；（ｃ）そのように処理された植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｄ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｅ）子孫植物の成長をモニターすることを含む請求項１に記載の方法。９．さらなる検査のために殺有害生物剤で処理後に興味深い特徴または特性を示す植物を救済する方法であって、以下の：（ａ）処理済み母植物からの子孫植物を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｂ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｃ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む方法。１０．繁殖工程が、以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、処理済み母植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記切断セグメントを適切な固定物質に移し；そして（ｃ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記転移セグメントを全体の且つ形態的に正常な植物に再生させることにより成し遂げられる請求項９に記載の方法。１１．以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、処理済み母植物から短いセグメントを切断し； (ｂ)₁前記セグメントを既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；あるいは (ｂ)₂前記セグメントに既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液を噴霧し；（ｃ）そのように処理された植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｄ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｅ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む請求項９に記載の方法。１２．殺有害生物剤が除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される前記請求項のいずれかに記載の方法。１３．植物に観察される耐性表現型が耐性特徴によるものであるかまたはその他の因子により引き起こされたものかを確定するための方法であって、以下の：（ａ）表現型的耐性植物を採集し；（ｂ）前記植物からの子孫植物を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｃ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｄ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む方法。１４．以下の：（ａ）表現型的耐性植物を採集し；（ｂ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、前記植物から短いセグメントを切断し； (ｃ)₁前記のセグメントを既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；あるいは、 (ｃ)₂前記のセグメントに既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液を噴霧し；（ｄ）そのように処理した植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｅ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｆ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む請求項１３に記載の方法。１５．耐性表現型が殺有害生物剤で処理後に観察される請求項１３および１４に記載の方法。１６．殺有害生物剤が除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される請求項１５に記載の方法。１７．試験される植物が雑草植物である前記請求項のいずれかに記載の方法。１８．試験される植物が作物植物である前記請求項のいずれかに記載の方法。１９．試験される植物がトランスジェニック植物である前記請求項のいずれかに記載の方法。２０．さらなる検査のために殺有害生物剤で処理後に興味深い特徴または特性を示す植物を救済するための請求項１〜８のいずれかに記載の試験系の使用。２１．植物に観察される耐性表現型が耐性特徴によるものであるかまたはその他の因子により引き起こされたものかを確定するための請求項１〜８のいずれかに記載の試験系の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．以下の：（ａ）母植物からの子孫植物を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｂ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｃ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む子孫植物を試験するための試験系。２．繁殖工程が、以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、母植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記切断セグメントを適切な固定物質に移し；そして（ｃ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記転移セグメントを全体の且つ形態的に正常な植物に再生させることにより成し遂げられる請求項１に記載の試験系。３．前記セグメントが多量の活発に分裂中の細胞を含有する領域を含む請求項２に記載の試験系。４．前記領域が分裂組織細胞を含む請求項３に記載の試験系。５．前記セグメントが短い根および新条断片を含む請求項３および４に記載の試験系。６．固定物質が、以下の：（ａ）不活性物質、例えばバーミキュライト、パーライトまたはプラスチックビーズ；（ｂ）植物栽培に一般に適用される培地；または（ｃ）土壌である請求項２に記載の試験系。７．前記試験系が高スルーアウトフォーマット内で用いられる前記請求項のいずれかに記載の試験系。８．以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、母植物から短いセグメントを切断し； (ｂ)₁前記セグメントを既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；あるいは (ｂ)₂前記セグメントに既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液を噴霧し；（ｃ）そのように処理された植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｄ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｅ）子孫植物の成長をモニターすることを含む請求項１に記載の試験系。９．さらなる検査のために殺有害生物剤で処理後に興味深い特徴または特性を示す植物を救済する方法であって、以下の：（ａ）処理済み母植物からの子孫植物を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｂ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｃ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む方法。１０．繁殖工程が、以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、処理済み母植物から短いセグメントを切断し；（ｂ）前記切断セグメントを適切な固定物質に移し；そして（ｃ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記転移セグメントを全体の且つ形態的に正常な植物に再生させることにより成し遂げられる請求項９に記載の方法。１１．以下の：（ａ）前記セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、処理済み母植物から短いセグメントを切断し； (ｂ)₁前記セグメントを既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；あるいは (ｂ)₂前記セグメントに既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液を噴霧し；（ｃ）そのように処理された植物移植片を適切な固定物質に移し；（ｄ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｅ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む請求項９に記載の方法。１２．殺有害生物剤が除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される前記請求項のいずれかに記載の方法。１３．植物に観察される耐性表現型が耐性特徴によるものであるかまたはその他の因子により引き起こされたものかを確定するための方法であって、以下の：（ａ）表現型的耐性植物を採集し；（ｂ）前記植物からの子孫植物を、カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに無性繁殖させ；（ｃ）そのようにして得られた子孫植物を植物スクリーニングプログラムに組み入れ；そして（ｄ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む方法。１４．以下の：（ａ）表現型的耐性植物を採集し；（ｂ）セグメントが全体の且つ形態学的に正常な植物に直接再生し得るように、前記植物から短いセグメントを切断し； (ｃ)₁前記のセグメントを既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液中に浸し；あるいは、 (ｃ)₂前記のセグメントに既知の濃度の殺有害生物剤含有溶液を噴霧し；（ｄ）そのように処理した植物移植片を適切な固定物質に移し; （ｅ）カルス相を経ずに、あるいは細胞またはプロトプラスト培養を伴わずに、前記移植片を全体の且つ形態的に正常な植物に再生させ；そして（ｆ）子孫植物の成長をモニターする工程を含む請求項１３に記載の方法。１５．耐性表現型が殺有害生物剤で処理後に観察される請求項１３および１４に記載の方法。１６．殺有害生物剤が除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される請求項１５に記載の方法。１７．試験される植物が雑草植物である前記請求項のいずれかに記載の方法。１８．試験される植物が作物植物である前記請求項のいずれかに記載の方法。１９．試験される植物がトランスジェニック植物である前記請求項のいずれかに記載の方法。２０．さらなる検査のために殺有害生物剤で処理後に興味深い特徴または特性を示す植物を救済するための請求項１〜８のいずれかに記載の試験系の使用。２１．植物に観察される耐性表現型が耐性特徴によるものであるかまたはその他の因子により引き起こされたものかを確定するための請求項１〜８のいずれかに記載の試験系の使用。２２．請求項１〜８のいずれかに記載の試験系を実行するために必要なすべての用具を包含するすぐに使用できるフォーマットの試験キット。２３．以下の：（ａ）地面から雑草を切り取るための切断用具、好ましくはナイフまたは鋭利な鋏、それらを入れるための袋、鉢、その中でそれらを成長させるための固定物質、好ましくは寒天、土、砂、バーミキュライトまたは前記の成分の１以上の混合物等を含有する試験管、噴霧するための殺有害生物剤含有溶液、噴霧用具および使用説明書；（ｂ）地面から雑草を切り取るための切断用具、好ましくはナイフまたは鋭利な鋏、それらを入れるための袋、鉢、その中でそれらを成長させるための固定物質、好ましくは寒天、土、砂、バーミキュライトまたは前記の成分の１以上の混合物等を含有する試験管、既知の濃度の除草剤中に植物挿木を浸漬するための異なる濃度の殺有害生物剤を有する除草剤溶液を含有する１以上の容器および使用説明書；（ｃ）地面から雑草を切り取るための切断用具、好ましくはナイフまたは鋭利な鋏、それらを入れるための袋、鉢、適切な固定物質、例えば寒天、土、バーミキュライトまたは前記の成分の１以上の混合物を含有する１以上の容器を組み入れ、この場合、前記固定物質がすでに、その中に均一に分布した異なる濃度の殺有害生物剤を有する殺有害生物剤溶液を含有する容器、ならびに使用説明書を含む請求項２２に記載のすぐに使用できるフォーマットの試験キット。２４．殺有害生物剤が除草剤、殺昆虫剤および殺真菌剤から成る群から選択される前記請求項のいずれかに記載の試験キット。